特表 2022-542275 動物用パルボウイルス抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-09-30

(54)【発明の名称】動物用パルボウイルス抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20220922BHJP

   C07K 16/08 20060101ALI20220922BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20220922BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20220922BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20220922BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20220922BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220922BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20220922BHJP

   C12Q 1/70 20060101ALI20220922BHJP

   A61K 39/23 20060101ALI20220922BHJP

   A61P 31/20 20060101ALI20220922BHJP

   G01N 33/569 20060101ALI20220922BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/08 ZNA

C07K16/46

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

C12Q1/70

A61K39/23

A61P31/20

G01N33/569 L

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022505401

(86)(22)【出願日】2020-07-30

(85)【翻訳文提出日】2022-03-22

(86)【国際出願番号】 US2020044302

(87)【国際公開番号】W WO2021022067

(87)【国際公開日】2021-02-04

(31)【優先権主張番号】62/880,650

(32)【優先日】2019-07-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/968,970

(32)【優先日】2020-01-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/030,123

(32)【優先日】2020-05-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517299032

【氏名又は名称】キンドレッド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】チャン， ハンチュン

(72)【発明者】

【氏名】グェン， ラム

(72)【発明者】

【氏名】ラトクリフ， エレン

(72)【発明者】

【氏名】チン， リチャード

(72)【発明者】

【氏名】リー， シー ジアン

【テーマコード（参考）】

4B063

4B064

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B063QA01

4B063QA19

4B063QQ10

4B063QS33

4B063QX01

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B064DA13

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA43

4C085AA13

4C085AA14

4C085BA75

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG08

4H045AA11

4H045AA30

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA29

4H045EA53

4H045FA74

(57)【要約】

例えば、改善された発現特性を有する、イヌ及び／又はネコパルボウイルスに結合する、イヌ化、ネコ化、及びキメラ抗体を含む、パルボウイルス抗体に関する様々な実施態様が提供される。様々な実施態様では、パルボウイルス抗体は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／又はＣＤＣエフェクター機能を有する。様々な実施態様では、そのようなモノクローナルパルボウイルス抗体は、イヌ及びネコなどの対象におけるパルボウイルス感染を予防し及び／又は治療するための方法において使用できる。例えば、提供されるパルボウイルス抗体は、イヌ又はネコパルボウイルスでの感染に対する受動免疫を提供するために使用されうる。
【選択図】図３Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する単離された抗体であって、
（ａ）（ｉ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、及び（ｉｖ）配列番号：７若しくは配列番号：８のＨＣ－ＦＲ１配列；又は
（ｂ）（ｉ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、及び（ｉｖ）配列番号：４５若しくは配列番号：４６のＨＣ－ＦＲ１配列
を含む、抗体。

【請求項2】

イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する単離された抗体であって、
（ａ）（ｉ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｉｉｉ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｉｖ）配列番号：１６のＬＣ－ＦＲ１配列；又は
（ｂ）（ｉ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｉｉｉ）配列番号：５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｉｖ）配列番号：５５若しくは配列番号：５６のＬＣ－ＦＲ１配列
を含む、抗体。

【請求項3】

（ａ）の抗体が配列番号：１２のＨＣ－ＦＲ４配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体。

【請求項4】

（ｂ）の抗体が配列番号：４８のＨＣ－ＦＲ２配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体。

【請求項5】

（ｂ）の抗体が配列番号：５０のＨＣ－ＦＲ３配列を含む、請求項１又は請求項４に記載の単離された抗体。

【請求項6】

（ｂ）の抗体が配列番号：５９のＨＣ－ＦＲ３配列を含む、請求項２に記載の単離された抗体。

【請求項7】

（ｂ）の抗体が配列番号：６１のＨＣ－Ｆ４配列を含む、請求項２又は請求項６に記載の単離された抗体。

【請求項8】

イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する単離された抗体であって、
ａ）（ｉ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖、又は
ｂ）（ｉ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖
を含むイヌ化又はネコ化抗体である、抗体。

【請求項9】

イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する単離された抗体であって、
ａ）（ｉ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖、又は
ｂ）（ｉ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖
を含むイヌ化又はネコ化抗体である、抗体。

【請求項10】

イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する単離された抗体であって、
ａ）（ｉ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖、及び
ｂ）（ｉ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖
を含むイヌ化又はネコ化抗体である、抗体。

【請求項11】

イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する単離された抗体であって、
ａ）（ｉ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖、及び
ｂ）（ｉ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖
を含むイヌ化又はネコ化抗体である、抗体。

【請求項12】

抗体がキメラ抗体である、請求項１から１１の何れか一項に記載の抗体。

【請求項13】

抗体が、イヌ若しくはネコ定常重鎖領域又はイヌ若しくはネコ定常軽鎖領域を含む、請求項１から１２の何れか一項に記載の抗体。

【請求項14】

抗体が
（ａ）ＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－Ｃ、及びＩｇＧ－Ｄ定常領域から選択されるイヌ重鎖定常領域；又は
（ｂ）ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、及びＩｇＧ２ｂ定常領域から選択されるネコ重鎖定常領域
を含む、請求項１から１３の何れか一項に記載の抗体。

【請求項15】

抗体が、補体結合活性を有する野生型又はバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む、請求項１から１４の何れか一項に記載の抗体。

【請求項16】

抗体が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する野生型又はバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む、請求項１から１５の何れか一項に記載の抗体。

【請求項17】

抗体が、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する野生型又はバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む、請求項１から１６の何れか一項に記載の抗体。

【請求項18】

抗体が、
ａ）配列番号：９１の１０位に対応する位置にアスパラギン酸又はグルタミン酸；
ｂ）配列番号：９１の１０位にアスパラギン酸又はグルタミン酸；
ｃ）配列番号：９１の１０３位に対応する位置にアスパラギン酸又はグルタミン酸；
ｄ）配列番号：９１の１０３位にアスパラギン酸又はグルタミン酸；
ｅ）配列番号：９１の１０位及び／又は１０３位に対応する位置にアスパラギン酸又はグルタミン酸；
ｆ）配列番号：９１の１０位及び／又は１０３位にアスパラギン酸又はグルタミン酸；或いは
ｇ）配列番号：９２、配列番号：９３、配列番号：９４、配列番号：９５、配列番号：９６、配列番号：９７、配列番号：９８、又は配列番号：９９のアミノ酸配列
を含む、請求項１から１７の何れか一項に記載の抗体。

【請求項19】

抗体がイヌκ軽鎖定常領域又はネコκ軽鎖定常領域を含む、請求項１から１８の何れか一項に記載の抗体。

【請求項20】

抗体が、一又は複数のＮ－グリコシル化部位を有さないネコκ軽鎖定常領域を含む、請求項１から１９の何れか一項に記載の抗体。

【請求項21】

抗体が、配列番号：１、配列番号：２、及び／又は配列番号：３のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、請求項１から２０の何れか一項に記載の抗体。

【請求項22】

抗体が、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０^－６Ｍ未満、１×１０^－６Ｍ未満、５×１０^－７Ｍ未満、１×１０^－７Ｍ未満、５×１０^－８Ｍ未満、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満、５×１０^－１１Ｍ未満、１×１０^－１１Ｍ未満、５×１０^－１２Ｍ未満、１×１０^－１２Ｍ未満、５×１０^－１３Ｍ未満、又は１×１０^－１３Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する、請求項１から２１の何れか一項に記載の抗体。

【請求項23】

抗体が、免疫ブロット分析及び／又はバイオレイヤー干渉法によって決定されて、イヌパルボウイルス又はネコパルボウイルスに結合する、請求項１から２２の何れか一項に記載の抗体。

【請求項24】

２００μｇ／ｍＬの濃度の抗体が、少なくとも８０００、少なくとも１６０００、少なくとも３２０００の赤血球凝集抑制値を有する、請求項１から２３の何れか一項に記載の抗体。

【請求項25】

抗体がモノクローナル抗体である、請求項１から２４の何れか一項に記載の抗体。

【請求項26】

（ａ）配列番号：７、８、４５、若しくは４６の（ＨＣ－ＦＲ１）配列；（ｂ）配列番号：９、４７、若しくは４８のＨＣ－ＦＲ２配列；（ｃ）配列番号：１０、４９、若しくは５０のＨＣ－ＦＲ３配列；（ｄ）配列番号：１１、１２、若しくは５１のＨＣ－ＦＲ４配列；（ｅ）配列番号：１６、５５、若しくは５６の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ－ＦＲ１）配列；（ｆ）配列番号：１７若しくは５７のＬＣ－ＦＲ２配列；（ｇ）配列番号：１８、５８、若しくは５９のＬＣ－ＦＲ３配列；又は（ｈ）配列番号：１９、６０、若しくは６１のＬＣ－ＦＲ４配列のうちの一又は複数を含む、請求項１から２５の何れか一項に記載の抗体。

【請求項27】

抗体が、
（ａ）配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：８５、配列番号：８６、配列番号：４０、配列番号：６２、配列番号：６３、若しくは配列番号：８８の可変重鎖配列；及び／又は
（ｂ）配列番号：２２、配列番号：８７、配列番号：４１、配列番号：６４、配列番号：６５、若しくは配列番号：８９の可変軽鎖配列
を含む、請求項１から２６の何れか一項に記載の抗体。

【請求項28】

抗体が、
（ａ）配列番号：２０の可変重鎖配列と配列番号：２２の可変軽鎖配列；
（ｂ）配列番号：２１の可変重鎖配列と配列番号：２２の可変軽鎖配列；
（ｃ）配列番号：８５の可変重鎖配列と配列番号：８７の可変軽鎖配列；
（ｄ）配列番号：８６の可変重鎖配列と配列番号：８７の可変軽鎖配列；
（ｅ）配列番号：４０の可変重鎖配列と配列番号：４１の可変軽鎖配列；
（ｆ）配列番号：６２の可変重鎖配列と配列番号：６４若しくは配列番号：６５の可変軽鎖配列；
（ｇ）配列番号：６３の可変重鎖配列と配列番号：６４若しくは配列番号：６５の可変軽鎖配列；又は
（ｈ）配列番号：８８の可変重鎖配列と配列番号：８９の可変軽鎖配列
を含む、請求項１から２７の何れか一項に記載の抗体。

【請求項29】

抗体が、
（ａ）（ｉ）配列番号：２３、配列番号：２４、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：６６、配列番号：６７、若しくは配列番号：７９の重鎖配列；及び／又は（ｉｉ）配列番号：２５、配列番号：３９、配列番号：６８、配列番号：６９、若しくは配列番号：８０の軽鎖配列；又は
（ｂ）（ｉ）配列番号：３１、配列番号：４０、若しくは配列番号：７４の重鎖配列；及び／又は（ｉｉ）配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：４１、配列番号：７５、若しくは配列番号：７６の軽鎖配列
を含む、請求項１から２８の何れか一項に記載の抗体。

【請求項30】

抗体が、
（ａ）配列番号：２３若しくは配列番号：２４の重鎖配列と配列番号：２５の軽鎖配列；
（ｂ）配列番号：３１の重鎖配列と配列番号：３２若しくは配列番号：３３の軽鎖配列；
（ｃ）配列番号：３７若しくは配列番号３８の重鎖配列と配列番号：３９の軽鎖配列；
（ｄ）配列番号：６６若しくは配列番号：６７の重鎖配列と配列番号：６８若しくは配列番号：６９の軽鎖配列；
（ｅ）配列番号：６６の重鎖配列と配列番号：６８の軽鎖配列；
（ｆ）配列番号：６７の重鎖配列と配列番号：６９の軽鎖配列；
（ｇ）配列番号：７４の重鎖配列と配列番号：７５若しくは配列番号：７６の軽鎖配列；又は
（ｈ）配列番号：７９の重鎖配列と配列番号：８０の軽鎖配列
を含む、請求項１から２９の何れか一項に記載の抗体。

【請求項31】

抗体が、配列番号：２４の重鎖配列と配列番号：２５の軽鎖配列を含む、請求項１から３０の何れか一項に記載の抗体。

【請求項32】

請求項１から３１の何れか一項に記載の抗体をコードする単離された核酸。

【請求項33】

請求項３１に記載の核酸を含む宿主細胞。

【請求項34】

請求項３２の宿主細胞を培養することと、抗体を単離することとを含む、抗体を産生する方法。

【請求項35】

請求項１から３０の何れか一項に記載の一又は複数の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物。

【請求項36】

薬学的に許容される担体がリン酸緩衝生理食塩水である、請求項３４に記載の薬学的組成物。

【請求項37】

イヌ又はネコパルボウイルスに結合する治療有効量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含む、イヌ又はネコパルボウイルスでの感染に対して対象に受動免疫を提供する方法。

【請求項38】

モノクローナル抗体が、イヌ又はネコパルボウイルスへの曝露前に投与される、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

モノクローナル抗体が、イヌ又はネコパルボウイルスへの曝露後に投与される、請求項３７又は請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

モノクローナル抗体が、イヌ又はネコパルボウイルスでの感染後に投与される、請求項３７から３９の何れか一項に記載の方法。

【請求項41】

対象が、発熱、嘔吐、下痢、リンパ球減少症、及び敗血症から選択される少なくとも一の症状を示した後に、モノクローナル抗体が投与される、請求項３７から４０の何れか一項に記載の方法。

【請求項42】

例えば陽性のケージサイドＳＮＡＰ試験によって決定されて、イヌ又はネコパルボウイルスが糞便中に検出された後にモノクローナル抗体が投与される、請求項３７から４１の何れか一項に記載の方法。

【請求項43】

対象に以前にパルボウイルスワクチンが投与されている、請求項３７から４２の何れか一項に記載の方法。

【請求項44】

対象に以前にはパルボウイルスワクチンが投与されていない、請求項３７から４２の何れか一項に記載の方法。

【請求項45】

イヌ若しくはネコパルボウイルスに対する母性由来の抗体の欠如、又はイヌ若しくはネコパルボウイルスに対する抗体の受動伝達の失敗のため、対象が出生時に保護されていない、請求項３７から４４の何れか一項に記載の方法。

【請求項46】

対象が子飼いで、対象の母親が乳汁を産生しない、又は対象がパルボウイルスに対する抗体を産生することができない、請求項３７から４５の何れか一項に記載の方法。

【請求項47】

対象が、イヌ又はネコパルボウイルスで汚染された環境に住んでいる、請求項３７から４６の何れか一項に記載の方法。

【請求項48】

イヌ又はネコパルボウイルスに結合する治療有効量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含む、対象におけるイヌ又はネコパルボウイルス感染症を治療する方法。

【請求項49】

対象が、発熱、嘔吐、下痢、リンパ球減少症、及び敗血症から選択される少なくとも一の症状を示した後にモノクローナル抗体が投与される、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

例えば陽性のケージサイドＳＮＡＰ試験によって決定されて、イヌ又はネコパルボウイルスが糞便中に検出された後にモノクローナル抗体が投与される、請求項４８又は請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

対象に以前にパルボウイルスワクチンが投与されている、請求項４８から５０の何れか一項に記載の方法。

【請求項52】

対象に以前にはパルボウイルスワクチンが投与されていない、請求項４８から５０の何れか一項に記載の方法。

【請求項53】

対象が、イヌ又はネコパルボウイルスで汚染された環境に住んでいる、請求項４８から５２の何れか一項に記載の方法。

【請求項54】

対象がイヌ又はネコである、請求項４８から５３の何れか一項に記載の方法。

【請求項55】

対象がヒトである、請求項４８から５３の何れか一項に記載の方法。

【請求項56】

方法が、配列番号：１、配列番号：２、及び／又は配列番号：３のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する治療有効量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含む、請求項３７から５５の何れか一項に記載の方法。

【請求項57】

方法が、
（ａ）（ｉ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖；並びに
（ｂ）（ｉ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖
を含む治療有効量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含む、請求項３７から５６の何れか一項に記載の方法。

【請求項58】

方法が、請求項１から３１の何れか一項に記載の抗体又は請求項３５又は請求項３６に記載の薬学的組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、請求項３７から５７の何れか一項に記載の方法。

【請求項59】

抗体又は薬学的組成物が非経口的に投与される、請求項３７から５８の何れか一項に記載の方法。

【請求項60】

抗体又は薬学的組成物が、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑液中経路、くも膜下腔内経路、静脈内、又は吸入経路によって投与される、請求項３７から５９の何れか一項に記載の方法。

【請求項61】

抗体又は薬学的組成物が静脈内投与される、請求項３７から６０の何れか一項に記載の方法。

【請求項62】

抗体又は薬学的組成物が皮下投与される、請求項３７から６０の何れか一項に記載の方法。

【請求項63】

対象が、１週齢未満、２週齢未満、３週齢未満、４週齢未満、５週未満、６週齢未満、６週齢未満、７週齢未満、８週齢未満、９週齢未満、１０週齢未満、１１週齢未満、１２週齢未満、６か月齢未満、０から１２週齢、０から１０週齢、０から８週齢、０から６週齢、０から４週齢、０から２週齢、４から１２週齢、６から１２週齢、１０から１２週齢、４週から６か月齢、２か月から６か月齢、４か月から６か月齢、６か月から１歳、１３週齢を超え、又は１歳を超える、請求項３７から６２の何れか一項に記載の方法。

【請求項64】

対象が１３週齢以上である、請求項３７から６３の何れか一項に記載の方法。

【請求項65】

抗体が、１用量当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与される、請求項３７から６４の何れか一項に記載の方法。

【請求項66】

抗体が、１用量当たり５ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与される、請求項３７から６５の何れか一項に記載の方法。

【請求項67】

抗体又は薬学的組成物が単一用量として投与される、請求項３７から６６の何れか一項に記載の方法。

【請求項68】

抗体又は薬学的組成物が、少なくとも２週又は３週連続して週一回など、繰り返し投与される、請求項３７から６７の何れか一項に記載の方法。

【請求項69】

方法が、治療有効量の請求項１から３１の何れか一項に記載の二以上の異なる抗体を対象に投与することを含み、二以上の異なる抗体が同時に又は逐次的に投与され、場合によっては、二以上の異なる抗体の投与が一日以上離れている、請求項３７から６８の何れか一項に記載の方法。

【請求項70】

抗体又は薬学的組成物の投与前に赤血球凝集抑制アッセイによって決定されて、対象が２０未満の赤血球凝集抑制力価を有する、請求項３７から６９の何れか一項に記載の方法。

【請求項71】

抗体又は薬学的組成物の投与前に赤血球凝集抑制アッセイによって決定されて、対象がパルボウイルス力価陰性である、請求項３７から７０の何れか一項に記載の方法。

【請求項72】

抗体又は薬学的組成物の投与後、対象がイヌ又はネコパルボウイルスによる感染から生き延びる、請求項３７から７１の何れか一項に記載の方法。

【請求項73】

細胞のパルボウイルス感染を低下させる方法であって、抗体のパルボウイルスへの結合を許容する条件下で、請求項１から３１の何れか一項に記載の抗体又は請求項３５又は請求項３６に記載の薬学的組成物を細胞に曝露することを含む、方法。

【請求項74】

細胞がインビトロで抗体又は薬学的組成物に曝露される、請求項７３に記載の方法。

【請求項75】

細胞が、哺乳動物細胞、ヒト細胞、イヌ細胞、又はネコ細胞である、請求項７３又は請求項７４に記載の方法。

【請求項76】

対象からのサンプルにおけるパルボウイルス感染を検出するための方法であって、抗体のパルボウイルスへの結合を許容する条件下で、請求項１から３１の何れか一項に記載の抗体又は請求項３５若しくは請求項３６に記載の薬学的組成物とサンプルを接触させることと、抗体とサンプル中のパルボウイルスとの間に複合体が形成されるかどうかを検出することとを含む、方法。

【請求項77】

サンプルが、イヌ、ネコ、又はヒトから得られた生物学的サンプルである、請求項７６に記載の方法。

【請求項78】

ａ）配列番号：９１の１０位に対応する位置にアスパラギン酸若しくはグルタミン酸；
ｂ）配列番号：９１の１０位にアスパラギン酸若しくはグルタミン酸；
ｃ）配列番号：９１の１０３位に対応する位置にアスパラギン酸若しくはグルタミン酸；
ｄ）配列番号：９１の１０３位にアスパラギン酸若しくはグルタミン酸；
ｅ）配列番号：９１の１０位及び／又は１０３位に対応する位置にアスパラギン酸若しくはグルタミン酸；又は
ｆ）配列番号：９１の１０位及び／又は１０３位にアスパラギン酸若しくはグルタミン酸
を含む、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチド。

【請求項79】

請求項７８に記載のバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含むポリペプチド。

【請求項80】

配列番号：９２、配列番号：９３、配列番号：９４、配列番号：９５、配列番号：９６、配列番号：９７、配列番号：９８、又は配列番号：９９のアミノ酸配列を含むポリペプチド。

【請求項81】

請求項７８から８０の何れか一項に記載のポリペプチドをコードする単離された核酸。

【請求項82】

請求項８１に記載の核酸を含む宿主細胞。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

［関連出願との相互参照］
この出願は、各々があらゆる目的のためにその全体について出典明示によりここに援用される、２０１９年７月３０日出願の米国仮出願第６２／８８０６５０号、２０２０年１月３１日出願の米国仮出願第６２／９６８９７０号、及び２０２０年５月２６日出願の米国仮出願第６３／０３０１２３号の利益を主張する。

【0002】

［発明の分野］
この発明は、例えば、改善された組換え産生性並びにイヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスへの結合中和性を有する単離されたイヌパルボウイルス抗体、並びに例えば、イヌ又はネコパルボウイルスによる感染に対して受動免疫を提供し、及び／又はイヌ及びネコなどのコンパニオンアニマルにおけるパルボウイルス感染症を治療するために、前記抗体を使用する方法に関する。

【背景技術】

【0003】

イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）は、世界中でイヌに感染する最も重要な腸内ウイルスである^１。ＣＰＶビリオンは非エンベロープ型ＤＮＡウイルスである。ＣＰＶ－２ａ、ＣＰＶ－２ｂ、及びＣＰＶ－２ｃを含む、元のＣＰＶの複数の変異株がある。ＣＰＶ－２の変異株は、ほんの僅かなアミノ酸だけが互いに異なる^２。環境内に非常に残留性であるので、ＣＰＶは何か月も感染性を維持しうる。ＣＰＶは、直接及び間接の接触を介して広がる^３。口腔粘膜と接触すると、ＣＰＶは局所リンパ管内で複製を開始し、全身に広がる。４から１４日間の潜伏期間で、ＣＰＶは、骨髄、リンパ球及び腸陰窩上皮細胞を含む、体の急速に分裂する細胞を標的とする。

【0004】

臨床疾患は、発熱と鬱病、それに続く嘔吐、下痢（大量かつ血性）、リンパ球減少症、脱水症並びにかなり頻繁に続発性敗血症並びに死亡として顕在化する。死亡率は子犬において７０％を超える場合がある^３。感染は、移行抗体が衰え始めるので、離乳後の子犬において最も好発する。ワクチンは直ぐに入手でき、ＣＰＶ－２の全ての変異株から効果的に保護する。
適切なタイミングでのワクチン接種は保護的であるが、パルボウイルス感染は依然として問題である。感染しやすいイヌの主要集団には、母性由来の抗体が非防御レベルに減弱し、ワクチン接種がなされる前の易感染域にいる子犬が含まれる（図１を参照）。２４週齢未満の子犬は、ＣＰＶ疾患のリスクが最も高くなる。加えて、母性由来の抗体の受動伝達が失敗した子犬は、別の脆弱集団である。集団発生は、素朴な犬舎や避難所の集団でも発生し続けている。

【0005】

この時点までのＣＰＶ感染の治療は、大部分が支持的であった。治療には、典型的には、静脈内輸液、制吐薬、及び敗血症から保護するための広域スペクトル抗生物質が含まれる。抗ウイルス薬や過免疫血漿を含む様々な他の治療が試みられたが失敗している^４。入院が典型的には推奨されるが、多くの飼い主にとって法外な費用がかかり、安楽死させる決定につながりうる。ＣＰＶ感染症のイヌを入院させるには、厳格な隔離プロトコルが必要である。これは、獣医施設とスタッフにとってロジスティクス上の困難であることが分かっている^５。而して、予防及び治療処置に対する満たされていない医学的必要性が存在する。

【0006】

現在、特にＣＰＶのためにＵＳＤＡ又はＦＤＡが承認した治療法はない。ここに記載のパルボウイルスモノクローナル抗体は、ＣＰＶの重症度を低下させ又はＣＰＶに関連する罹患率及び死亡率を排除するために、活動性ＣＰＶ感染に罹患したイヌへの治療的介入として投与されるであろう。加えて、ここに記載のパルボウイルスモノクローナル抗体は、ＣＰＶ感染の発症を防ぐために、ＣＰＶ感染したイヌに曝露されたイヌの予防的処置剤として利用されるであろう。

【発明の概要】

【0007】

実施態様１． イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する単離された抗体であって、（ａ）（ｉ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、及び（ｉｖ）配列番号：７若しくは配列番号：８のＨＣ－ＦＲ１配列；又は（ｂ）（ｉ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、及び（ｉｖ）配列番号：４５若しくは配列番号：４６のＨＣ－ＦＲ１配列を含む、抗体。
実施態様２． イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する単離された抗体であって、（ａ）（ｉ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｉｉｉ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｉｖ）配列番号：１６のＬＣ－ＦＲ１配列；又は（ｂ）（ｉ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｉｉｉ）配列番号：５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｉｖ）配列番号：５５若しくは配列番号：５６のＬＣ－ＦＲ１配列を含む、抗体。
実施態様３． （ａ）の抗体が配列番号：１２のＨＣ－ＦＲ４配列を含む、実施態様１の単離された抗体。
実施態様４． （ｂ）の抗体が配列番号：４８のＨＣ－ＦＲ２配列を含む、実施態様１の単離された抗体。
実施態様５． （ｂ）の抗体が配列番号：５０のＨＣ－ＦＲ３配列を含む、実施態様１又は実施態様４の単離された抗体。
実施態様６． （ｂ）の抗体が配列番号：５９のＨＣ－ＦＲ３配列を含む、実施態様２の単離された抗体。
実施態様７． （ｂ）の抗体が配列番号：６１のＨＣ－Ｆ４配列を含む、実施態様２又は実施態様６の単離された抗体。
実施態様８． イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する単離された抗体であって、ａ）（ｉ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖、又はｂ）（ｉ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖を含むイヌ化又はネコ化抗体である、抗体。
実施態様９． イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する単離された抗体であって、ａ）（ｉ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖、又はｂ）（ｉ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖を含むイヌ化又はネコ化抗体である、抗体。
実施態様１０． イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する単離された抗体であって、ａ）（ｉ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖、及びｂ）（ｉ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖を含むイヌ化又はネコ化抗体である、抗体。
実施態様１１． イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する単離された抗体であって、ａ）（ｉ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖、及びｂ）（ｉ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖を含むイヌ化又はネコ化抗体である、抗体。
実施態様１２． 抗体がキメラ抗体である、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様１３． 抗体が、イヌ若しくはネコ定常重鎖領域又はイヌ若しくはネコ定常軽鎖領域を含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様１４． 抗体が
（ａ）ＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－Ｃ、及びＩｇＧ－Ｄ定常領域から選択されるイヌ重鎖定常領域；又は
（ｂ）ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、及びＩｇＧ２ｂ定常領域から選択されるネコ重鎖定常領域
を含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様１５． 抗体が、補体結合活性を有する野生型又はバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様１６． 抗体が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する野生型又はバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様１７． 抗体が、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する野生型又はバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様１８． 抗体が、ａ）配列番号：９１の１０位に対応する位置にアスパラギン酸又はグルタミン酸；ｂ）配列番号：９１の１０位にアスパラギン酸又はグルタミン酸；ｃ）配列番号：９１の１０３位に対応する位置にアスパラギン酸又はグルタミン酸；ｄ）配列番号：９１の１０３位にアスパラギン酸又はグルタミン酸；ｅ）配列番号：９１の１０位及び／又は１０３位に対応する位置にアスパラギン酸又はグルタミン酸；ｆ）配列番号：９１の１０位及び／又は１０３位にアスパラギン酸又はグルタミン酸；或いはｇ）配列番号：９２、配列番号：９３、配列番号：９４、配列番号：９５、配列番号：９６、配列番号：９７、配列番号：９８、又は配列番号：９９のアミノ酸配列を含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様１９． 抗体がイヌκ軽鎖定常領域又はネコκ軽鎖定常領域を含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様２０． 抗体が、一又は複数のＮ－グリコシル化部位を有さないネコκ軽鎖定常領域を含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様２１． 抗体が、配列番号：１、配列番号：２、及び／又は配列番号：３のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様２２． 抗体が、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０^－６Ｍ未満、１×１０^－６Ｍ未満、５×１０^－７Ｍ未満、１×１０^－７Ｍ未満、５×１０^－８Ｍ未満、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満、５×１０^－１１Ｍ未満、１×１０^－１１Ｍ未満、５×１０^－１２Ｍ未満、１×１０^－１２Ｍ未満、５×１０^－１３Ｍ未満、又は１×１０^－１３Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様２３． 抗体が、免疫ブロット分析及び／又はバイオレイヤー干渉法によって決定されて、イヌパルボウイルス又はネコパルボウイルスに結合する、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様２４． ２００μｇ／ｍＬの濃度の抗体が、少なくとも８０００、少なくとも１６０００、少なくとも３２０００の赤血球凝集抑制値を有する、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様２５． 抗体がモノクローナル抗体である、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様２６． （ａ）配列番号：７、８、４５、若しくは４６の（ＨＣ－ＦＲ１）配列；（ｂ）配列番号：９、４７、若しくは４８のＨＣ－ＦＲ２配列；（ｃ）配列番号：１０、４９、若しくは５０のＨＣ－ＦＲ３配列；（ｄ）配列番号：１１、１２、若しくは５１のＨＣ－ＦＲ４配列；（ｅ）配列番号：１６、５５、若しくは５６の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ－ＦＲ１）配列；（ｆ）配列番号：１７若しくは５７のＬＣ－ＦＲ２配列；（ｇ）配列番号：１８、５８、若しくは５９のＬＣ－ＦＲ３配列；又は（ｈ）配列番号：１９、６０、若しくは６１のＬＣ－ＦＲ４配列のうちの一又は複数を含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様２７． 抗体が、（ａ）配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：８５、配列番号：８６、配列番号：４０、配列番号：６２、配列番号：６３、若しくは配列番号：８８の可変重鎖配列；及び／又は（ｂ）配列番号：２２、配列番号：８７、配列番号：４１、配列番号：６４、配列番号：６５、若しくは配列番号：８９の可変軽鎖配列を含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様２８． 抗体が、（ａ）配列番号：２０の可変重鎖配列と配列番号：２２の可変軽鎖配列；（ｂ）配列番号：２１の可変重鎖配列と配列番号：２２の可変軽鎖配列；（ｃ）配列番号：８５の可変重鎖配列と配列番号：８７の可変軽鎖配列；（ｄ）配列番号：８６の可変重鎖配列と配列番号：８７の可変軽鎖配列；（ｅ）配列番号：４０の可変重鎖配列と配列番号：４１の可変軽鎖配列；（ｆ）配列番号：６２の可変重鎖配列と配列番号：６４若しくは配列番号：６５の可変軽鎖配列；（ｇ）配列番号：６３の可変重鎖配列と配列番号：６４若しくは配列番号：６５の可変軽鎖配列；又は（ｈ）配列番号：８８の可変重鎖配列と配列番号：８９の可変軽鎖配列を含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様２９． 抗体が、（ａ）（ｉ）配列番号：２３、配列番号：２４、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：６６、配列番号：６７、若しくは配列番号：７９の重鎖配列；及び／又は（ｉｉ）配列番号：２５、配列番号：３９、配列番号：６８、配列番号：６９、若しくは配列番号：８０の軽鎖配列；又は（ｂ）（ｉ）配列番号：３１、配列番号：４０、若しくは配列番号：７４の重鎖配列；及び／又は（ｉｉ）配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：４１、配列番号：７５、若しくは配列番号：７６の軽鎖配列を含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様３０． 抗体が、（ａ）配列番号：２３若しくは配列番号：２４の重鎖配列と配列番号：２５の軽鎖配列；（ｂ）配列番号：３１の重鎖配列と配列番号：３２若しくは配列番号：３３の軽鎖配列；（ｃ）配列番号：３７若しくは配列番号３８の重鎖配列と配列番号：３９の軽鎖配列；（ｄ）配列番号：６６若しくは配列番号：６７の重鎖配列と配列番号：６８若しくは配列番号：６９の軽鎖配列；（ｅ）配列番号：６６の重鎖配列と配列番号：６８の軽鎖配列；（ｆ）配列番号：６７の重鎖配列と配列番号：６９の軽鎖配列；（ｇ）配列番号：７４の重鎖配列と配列番号：７５若しくは配列番号：７６の軽鎖配列；又は（ｈ）配列番号：７９の重鎖配列と配列番号：８０の軽鎖配列を含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様３１． 抗体が、配列番号：２４の重鎖配列と配列番号：２５の軽鎖配列を含む、先の実施態様の何れか一の抗体。
実施態様３２． 先の実施態様の何れか一の抗体をコードする単離された核酸。
実施態様３３． 実施態様３１の核酸を含む宿主細胞。
実施態様３４． 実施態様３２の宿主細胞を培養することと、抗体を単離することとを含む、抗体を産生する方法。
実施態様３５． 実施態様１から３１の何れか一又は複数の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物。
実施態様３６． 薬学的に許容される担体がリン酸緩衝生理食塩水である、実施態様３５の薬学的組成物。
実施態様３７． イヌ又はネコパルボウイルスに結合する治療有効量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含む、イヌ又はネコパルボウイルスでの感染に対して対象に受動免疫を提供する方法。
実施態様３８． モノクローナル抗体が、イヌ又はネコパルボウイルスへの曝露前に投与される、実施態様３７の方法。
実施態様３９． モノクローナル抗体が、イヌ又はネコパルボウイルスへの曝露後に投与される、実施態様３７又は実施態様３８の方法。
実施態様４０． モノクローナル抗体が、イヌ又はネコパルボウイルスでの感染後に投与される、実施態様３７から３９の何れか一の方法。
実施態様４１． 対象が、発熱、嘔吐、下痢、リンパ球減少症、及び敗血症から選択される少なくとも一の症状を示した後に、モノクローナル抗体が投与される、実施態様３７から４０の何れか一の方法。
実施態様４２． 例えばケージサイドＳＮＡＰ試験の陽性によって決定されて、イヌ又はネコパルボウイルスが糞便中に検出された後にモノクローナル抗体が投与される、実施態様３７から４１の何れか一の方法。
実施態様４３． 対象に以前にパルボウイルスワクチンが投与されている、実施態様３７から４２の何れか一の方法。
実施態様４４． 対象に以前にはパルボウイルスワクチンが投与されていない、実施態様３７から４２の何れか一の方法。
実施態様４５． イヌ若しくはネコパルボウイルスに対する母性由来の抗体の欠如、又はイヌ若しくはネコパルボウイルスに対する抗体の受動伝達の失敗のため、対象が出生時に保護されていない、実施態様３７から４４の何れか一の方法。
実施態様４６． 対象が子飼い（hand-reared）で、対象の母親が乳汁を産生しない、又は対象がパルボウイルスに対する抗体を産生することができない、実施態様３７から４５の何れか一の方法。
実施態様４７． 対象が、イヌ又はネコパルボウイルスで汚染された環境に住んでいる、実施態様３７から４６の何れか一の方法。
実施態様４８． イヌ又はネコパルボウイルスに結合する治療有効量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含む、対象におけるイヌ又はネコパルボウイルス感染症を治療する方法。
実施態様４９． 対象が、発熱、嘔吐、下痢、リンパ球減少症、及び敗血症から選択される少なくとも一の症状を示した後にモノクローナル抗体が投与される、実施態様４８の方法。
実施態様５０． 例えばケージサイドＳＮＡＰ試験の陽性によって決定されて、イヌ又はネコパルボウイルスが糞便中に検出された後にモノクローナル抗体が投与される、実施態様４８又は実施態様４９の方法。
実施態様５１． 対象に以前にパルボウイルスワクチンが投与されている、実施態様４８から５０の何れか一の方法。
実施態様５２． 対象に以前にはパルボウイルスワクチンが投与されていない、実施態様４８から５０の何れか一の方法。
実施態様５３． 対象が、イヌ又はネコパルボウイルスで汚染された環境に住んでいる、実施態様４８から５２の何れか一の方法。
実施態様５４． 対象がイヌ又はネコである、実施態様４８から５３の何れか一の方法。
実施態様５５． 対象がヒトである、実施態様４８から５３の何れか一の方法。
実施態様５６． 方法が、配列番号：１、配列番号：２、及び／又は配列番号：３のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する治療有効量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含む、実施態様３７から５５の何れか一の方法。
実施態様５７． 方法が、（ａ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖；並びに（ｂ）（ｉ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号：５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖を含む治療有効量のモノクローナル抗体を対象に投与することを含む、実施態様３７から５６の何れか一の方法。
実施態様５８． 方法が、実施態様１から３１の何れか一の抗体又は実施態様３５又は実施態様３６の薬学的組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、実施態様３７から５７の何れか一の方法。
実施態様５９． 抗体又は薬学的組成物が非経口的に投与される、実施態様３７から５８の何れか一の方法。
実施態様６０． 抗体又は薬学的組成物が、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑液中経路、くも膜下腔内経路、静脈内、又は吸入経路によって投与される、実施態様３７から５９の何れか一の方法。
実施態様６１． 抗体又は薬学的組成物が静脈内投与される、実施態様３７から６０の何れか一の方法。
実施態様６２． 抗体又は薬学的組成物が皮下投与される、実施態様３７から６０の何れか一の方法。
実施態様６３． 対象が、１週齢未満、２週齢未満、３週齢未満、４週齢未満、５週未満、６週齢未満、６週齢未満、７週齢未満、８週齢未満、９週齢未満、１０週齢未満、１１週齢未満、１２週齢未満、６か月齢未満、０から１２週齢、０から１０週齢、０から８週齢、０から６週齢、０から４週齢、０から２週齢、４から１２週齢、６から１２週齢、１０から１２週齢、４週から６か月齢、２か月から６か月齢、４か月から６か月齢、６か月から１歳、１３週齢を超え、又は１歳を超える、実施態様３７から６２の何れか一の方法。
実施態様６４． 対象が１３週齢以上である、実施態様３７から６３の何れか一の方法。
実施態様６５． 抗体が、１用量当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与される、実施態様３７から６４の何れか一の方法。
実施態様６６． 抗体が、１用量当たり５ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与される、実施態様３７から６５の何れか一の方法。
実施態様６７． 抗体又は薬学的組成物が単一用量として投与される、実施態様３７から６６の何れか一の方法。
実施態様６８． 抗体又は薬学的組成物が、少なくとも２週又は３週連続して週一回など、繰り返し投与される、実施態様３７から６７の何れか一の方法。
実施態様６９． 方法が、治療有効量の実施態様１から３１の何れか一の二以上の異なる抗体を対象に投与することを含み、二以上の異なる抗体が同時に又は逐次的に投与され、場合によっては、二以上の異なる抗体の投与が一日以上離れている、実施態様３７から６８の何れか一の方法。
実施態様７０． 抗体又は薬学的組成物の投与前に赤血球凝集抑制アッセイによって決定されて、対象が２０未満の赤血球凝集抑制力価を有する、実施態様３７から６９の何れか一の方法。
実施態様７１． 抗体又は薬学的組成物の投与前に赤血球凝集抑制アッセイによって決定されて、対象がパルボウイルス力価陰性である、実施態様３７から７０の何れか一の方法。
実施態様７２． 抗体又は薬学的組成物の投与後、対象がイヌ又はネコパルボウイルスによる感染から生き延びる、実施態様３７から７１の何れか一の方法。
実施態様７３． 細胞のパルボウイルス感染を低下させる方法であって、抗体のパルボウイルスへの結合を許容する条件下で、実施態様１から３１の何れか一の抗体又は実施態様３５又は実施態様３６の薬学的組成物を細胞に曝露することを含む、方法。
実施態様７４． 細胞がインビトロで抗体又は薬学的組成物に曝露される、実施態様７３の方法。
実施態様７５． 細胞が、哺乳動物細胞、ヒト細胞、イヌ細胞、又はネコ細胞である、実施態様７３又は実施態様７４の方法。
実施態様７６． 対象からのサンプルにおけるパルボウイルス感染を検出するための方法であって、抗体のパルボウイルスへの結合を許容する条件下で、実施態様１から３１の何れか一の抗体又は実施態様３５又は実施態様３６の薬学的組成物とサンプルを接触させることと、抗体とサンプル中のパルボウイルスとの間に複合体が形成されるかどうかを検出することを含む、方法。
実施態様７７． サンプルが、イヌ、ネコ、又はヒトから得られた生物学的サンプルである、実施態様７６の方法。
実施態様７８． ａ）配列番号：９１の１０位に対応する位置にアスパラギン酸若しくはグルタミン酸；ｂ）配列番号：９１の１０位にアスパラギン酸若しくはグルタミン酸；ｃ）配列番号：９１の１０３位に対応する位置にアスパラギン酸若しくはグルタミン酸；ｄ）配列番号：９１の１０３位にアスパラギン酸若しくはグルタミン酸；ｅ）配列番号：９１の１０位及び／又は１０３位に対応する位置にアスパラギン酸若しくはグルタミン酸；又はｆ）配列番号：９１の１０位及び／又は１０３位にアスパラギン酸若しくはグルタミン酸を含む、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチド。
実施態様７９． 実施態様７８のバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含むポリペプチド。
実施態様８０． 配列番号：９２、配列番号：９３、配列番号：９４、配列番号：９５、配列番号：９６、配列番号：９７、配列番号：９８、又は配列番号：９９のアミノ酸配列を含むポリペプチド。
実施態様８１． 実施態様７８から８０の何れか一のポリペプチドをコードする単離された核酸。
実施態様８２． 実施態様８１の核酸を含む宿主細胞。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1】図１は、ＣＰＶに対する易感染域の図である。

【0009】

【図2】図２は、ＶＰ２に結合するＭａｂ Ａ ｖ２及びＭａｂ Ｂ ｖ２を示している。

【0010】

【図3A】図３Ａは、Ｍａｂ Ａ群のＨＩアッセイ力価を示している。

【0011】

【図3B】図３Ｂは、Ｍａｂ Ｂ群のＨＩアッセイ力価を示している。

【0012】

【図3C】図３Ｃは、Ｍａｂ Ａ及びＭａｂ Ｂ群の両方のＨＩアッセイ力価を示している。

【0013】

【図4A】図４Ａは、Ｍａｂ Ａ ｖ２の二相減衰速度を示している。

【0014】

【図4B】図４Ｂは、Ｍａｂ Ｂ ｖ２の二相減衰速度を示している。

【0015】

【図5】図５は、実施例１５のバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド配列及びイヌＣＤ１６の構造モデルを示している。

【所定の配列の説明】

【0016】

表１は、ここで参照される所定の配列のリストを提供する。

【0017】

【発明を実施するための形態】

【0018】

イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する抗体が提供される。イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する抗体を形成することができる抗体重鎖及び軽鎖もまた提供される。加えて、一又は複数の特定の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体、重鎖、及び軽鎖が提供される。イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに対する抗体をコードするポリヌクレオチドが提供される。イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに対する抗体を産生し又は精製する方法もまた提供される。イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに対する抗体を使用する、イヌ又はネコパルボウイルスでの感染に対する受動免疫を提供する方法及び／又はパルボウイルス感染の治療方法が提供される。

【0019】

読者の便宜のために、ここで使用される用語に次の定義が提供される。

【0020】

ここで使用される場合、Ｋｄなどの数値用語は、科学的測定に基づいて計算され、従って、適当な測定誤差の影響を受ける。場合によっては、数値用語は、最も近い有効数字に丸められた数値を含みうる。

【0021】

ここで使用される場合、「ａ」又は「ａｎ」は、別段の指定がない限り、「少なくとも一」又は「一又は複数」を意味する。ここで使用される場合、「又は」という用語は、特に明記しない限り、「及び／又は」を意味する。複数項に従属する請求項の文脈では、他の請求項を引用する際の「又は」の使用は、その代替の請求項のみを引用する。

【0022】

［例示的なパルボウイルス抗体］
パルボウイルスに対する新規抗体、例えば、イヌパルボウイルス及び／又はネコパルボウイルスに結合する抗体が提供される。ここに提供されるパルボウイルス抗体には、限定されないが、モノクローナル抗体、キメラ抗体、イヌ化抗体、及びネコ化抗体が含まれる。

【0023】

またここに提供されるのは、モノクローナルパルボウイルス抗体のアミノ酸配列である。例えば、Ｍａｂ Ａに対する可変重鎖ＣＤＲ（配列番号：４－６）、可変軽鎖ＣＤＲ（配列番号：１３－１５）、可変領域重鎖フレームワーク配列（配列番号：７及び８－１１）、及び可変領域軽鎖フレームワーク配列（配列番号１６－１９）が提供される。また提供されるのは、Ｍａｂ Ｂに対する可変重鎖ＣＤＲ（配列番号：４２－４４）、可変軽鎖ＣＤＲ（配列番号：５２－５４）、可変領域重鎖フレームワーク配列（配列番号：４５、４７、４９、及び５１）、及び可変領域軽鎖フレームワーク配列（配列番号：５５、５７、５８、及び６０）である。Ｍａｂ Ａの可変重鎖及び可変軽鎖のアミノ酸配列が提供される（それぞれ、配列番号：２０及び２２）。Ｍａｂ Ｂの可変重鎖及び可変軽鎖のアミノ酸配列が提供される（それぞれ、配列番号：６２及び６４）。

【0024】

加えて、バリアントＭａｂ Ａ及びＭａｂ Ｂ抗体のＣＤＲ、フレームワーク配列、可変重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列が提供される。Ｍａｂ Ａバリアント２（ｖ２）の可変重鎖ＣＤＲ（配列番号：４－６）、可変重鎖フレームワーク領域（配列番号：８－１０、及び１２）、可変重鎖（配列番号：２１）、可変軽鎖ＣＤＲ（配列番号：１３－１５）、可変軽鎖フレームワーク領域（配列番号１６－１９）、及び可変軽鎖（配列番号：２２）が提供される。Ｍａｂ Ｂバリアント２（ｖ２）の可変重鎖ＣＤＲ（配列番号：４２－４４）、可変重鎖フレームワーク領域（配列番号：４６、４８、５０、及び５１）、可変重鎖（配列番号：６３）、可変軽鎖ＣＤＲ（配列番号：５２－５４）、可変軽鎖フレームワーク領域（配列番号：５６、５７、５９、及び６１）、及び可変軽鎖（配列番号：６５）が提供される。

【0025】

ここにまた提供されるのは、Ｍａｂ Ａ、Ｍａｂ Ｂ、Ｍａｂ Ａ ｖ２、及びＭａｂ Ｂ ｖ２に由来するキメライヌ、キメラネコ、イヌ化、及びネコ化抗体である。幾つかの実施態様では、配列番号：３４－４１、８８、７７－８０、８８、及び８９などの、イヌ化及びネコ化Ｍａｂ Ａ、Ｍａｂ Ｂ、Ｍａｂ Ａ ｖ２、及びＭａｂ Ｂ ｖ２のアミノ酸配列が提供される。幾つかの実施態様では、配列番号：２３－２５、２８－３３、及び６６－７６などの、Ｍａｂ Ａ、Ｍａｂ Ｂ、Ｍａｂ Ａ ｖ２、及びＭａｂ Ｂ ｖ２に由来するキメラ抗体のアミノ酸配列が提供される。

【0026】

ここにおける「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、限定されないがモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性（例えば二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）及び三重特異性抗体）、及びそれらが所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、ＳｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディなど）を含む様々な抗体構造を包含する。イヌ、ネコ、及びウマ種は、多くの哺乳動物によって共有される異なる種類（クラス）の抗体を有している。

【0027】

抗体という用語は、限定されないが、抗原に結合することができる断片、例えばＦｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ（単一ドメイン抗体）及び（Ｆａｂ’）２（化学的に結合したＦ（ａｂ’）２を含む）を含む。抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる、それぞれに単一の抗原結合部位がある二つの同一の抗原結合断片と、その名が容易に結晶化するその能力を反映している残りの「Ｆｃ」断片が生成される。ペプシン処理により、二つの抗原結合部位を有し、尚も抗原を架橋できるＦ（ａｂ’）２断片が生成される。抗体という用語はまた、限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、及びマウス、ヒト、カニクイザル、イヌ、ネコ、ウマなどの様々な種の抗体を含む。更に、ここに提供される全ての抗体コンストラクトに対して、他の生物由来の配列を有するバリアントもまた企図される。従って、抗体のマウス型が開示される場合、当業者には、マウス配列に基づく抗体をネコ、イヌ、ウマなどの配列に変換する方法が分かるであろう。抗体断片はまた、何れかの配向の単鎖ｓｃＦｖ、タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ、ダイアボディ、タンデムｔｒｉ－ｓｄｃＦｖ、ミニボディなどを含む。抗体断片はまた、ナノボディ（ｓｄＡｂ、軽鎖のない重鎖の可変ドメイン対などの単一の単量体ドメインを有する抗体）を含む。抗体断片は、幾つかの実施態様では特定の種であると言うことができる（例えば、マウスｓｃＦｖ又はイヌｓｃＦｖ）。これは、コンストラクト源ではなく、非ＣＤＲ領域の少なくとも一部の配列を示す。幾つかの実施態様では、抗体は、標識を含むか、又は第二の部分にコンジュゲートされる。

【0028】

「標識」及び「検出可能な標識」という用語は、特異的結合対のメンバー間の反応（例えば、結合）を検出可能にするために抗体又はその分析物に付着させた部分を意味する。特異的結合対の標識されたメンバーは、「検出可能に標識された」と呼ばれる。従って、「標識された結合タンパク質」という用語は、結合タンパク質の同定をもたらす標識が導入されたタンパク質を指す。幾つかの実施態様では、標識は、視覚的又は機器的手段、例えば、放射標識アミノ酸の取り込み又はマークされたアビジン（例えば、光学的又は比色法で検出できる蛍光マーカー又は酵素活性を含むストレプトアビジン）によって検出できるビオチニル部分のポリペプチドへの付着によって検出可能であるシグナルを生成しうる検出可能なマーカーである。ポリペプチドのための標識の例には、限定されないが、次のものが含まれる：放射性同位元素又は放射性核種（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１７７Ｌｕ、^１６６Ｈｏ、又は^１５３Ｓｍ）；色素原、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基；二次レポーター（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）によって認識される予め決められたポリペプチドエピトープ；及びガドリニウムキレートなどの磁性剤。イムノアッセイに一般的に用いられる標識の代表的な例には、光を生じる部分、例えばアクリジニウム化合物と、蛍光を生じる部分、例えばフルオレセインが含まれる。この点に関して、部分自体は検出可能に標識されていないが、更に別の部分との反応時に検出可能になる場合がある。

【0029】

「モノクローナル抗体」という用語は、抗体の実質的に均質な集団の抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在しうる可能な天然に生じる変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して産生されている。更に、典型的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して産生されている。而して、モノクローナル抗体のサンプルは、抗原上の同じエピトープに結合することができる。「モノクローナル」との修飾語は、実質的に均一な抗体集団から得られるという抗体の性質を示し、何らかの特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、モノクローナル抗体は、Kohler及びMilstein, 1975, Nature 256:495によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製されうるか、或いは米国特許第４８１６５６７号に記載されたような組換えＤＮＡ法によって作製されうる。モノクローナル抗体はまた、例えば、McCafferty等, 1990, Nature 348:552-554に記載された技術を使用して作製されたファージライブラリーから単離されうる。

【0030】

幾つかの実施態様では、モノクローナル抗体は、Ｍａｂ Ａ、Ｍａｂ Ａ ｖ２、Ｍａｂ Ｂ、又はＭａｂ Ｂ ｖ２である。

【0031】

「アミノ酸配列」は、ペプチド又はタンパク質中のアミノ酸残基の配列を意味する。「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために交換可能に使用され、最小の長さに限定されない。アミノ酸残基のそのようなポリマーは、天然又は非天然のアミノ酸残基を含み得、限定されないが、アミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、二量体、三量体、及び多量体を含む。完全長タンパク質とその断片の両方が定義に包含される。該用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化などを含む。更に、本開示の目的では、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対して欠失、付加、及び置換（一般に性質が保存的）などの修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的変異誘発などによる意図的なものである場合もあれば、タンパク質を産生する宿主の変異やＰＣＲ増幅によるエラーなどによる偶発的なものである場合もある。

【0032】

ここで使用される「パルボウイルス」は、任意の天然に生じるパルボウイルス又はパルボウイルスバリアントを指し、ＣＰＶ－２ａ、ＣＰＶ－２ｂ、及びＣＰＶ－２ｃなどのイヌパルボウイルス（ＣＰＶ）、及びネコパルボウイルス（汎白血球減少症ウイルス）を含む。

【0033】

ここで使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗原結合分子（例えば抗体、抗体断片、又は抗体結合領域を含むスカフォールドタンパク質）が結合する標的分子（例えば抗原、例えばタンパク質、核酸、糖又は脂質）の上の部位を意味する。エピトープは、アミノ酸、ポリペプチド又は糖側鎖等の分子の化学的に活性な表面グループを含むことが多く、特定の三次元構造特性並びに特定の荷電特性を有している。エピトープは、標的分子の近接した又は並置された非近接の残基（例えばアミノ酸、ヌクレオチド、糖、脂質部分）の両方から形成されうる。近接した残基（例えばアミノ酸、ヌクレオチド、糖、脂質部分）から形成されたエピトープは、典型的には変性溶媒への曝露で保持される一方、三次フォールディングによって形成されたエピトープは、典型的には変性溶媒での処理で失われる。エピトープは、限定されないが、少なくとも３残基、少なくとも５残基、又は８－１０残基（例えばアミノ酸又はヌクレオチド）を含みうる。幾つかの例では、エピトープ長は２０残基（例えばアミノ酸又はヌクレオチド）未満、１５残基未満又は１２残基未満である。二つの抗体は、それらが抗原に対して競合結合性を示す場合は、抗原内の同じエピトープに結合しうる。幾つかの実施態様では、エピトープは、抗原結合分子上のＣＤＲ残基に対する所定の最小距離で同定されうる。幾つかの実施態様では、エピトープは上記の距離によって同定され得、更に抗体残基と抗原残基との間の結合（例えば水素結合）に関与するその残基に限定される。エピトープは様々なスキャンによってまた同定することができ、例えばアラニン又はアルギニンスキャンは、抗原結合分子が相互作用しうる一又は複数の残基を示しうる。明示的に示されていない限り、エピトープとしての残基セットは、その他の残基を特定の抗体に対するエピトープの一部であることから排除しない。むしろ、そのようなセットの存在は、エピトープの最小シリーズ（又は種のセット）を表す。従って、幾つかの実施態様では、エピトープとして同定された残基セットは、抗原上のエピトープの残基の排他的なリストというより、抗原に関連する最小エピトープを表わす。

【0034】

幾つかの実施態様では、エピトープは、配列番号：１、配列番号：２、及び／又は配列番号：３のアミノ酸配列を含む。

【0035】

「ＣＤＲ」という用語は、当業者による少なくとも一つの識別法によって定義される相補性決定領域を意味する。幾つかの実施態様では、ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの組合せ、ＡｂＭ定義、接触定義、又はＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、若しくは接触定義の組合せの何れかに従って定義することができる。抗体内の様々なＣＤＲは、限定されないがＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含むその適切な番号及び鎖型によって表わすことができる。「ＣＤＲ」という用語は、ここでは超可変ループを含む「超可変領域」又はＨＶＲをまた包含するように使用される。

【0036】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、（ａ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；又は（ｃ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖を含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、（ａ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；又は（ｃ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖を含む。

【0037】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、（ａ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；又は（ｃ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖を含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、（ａ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；又は（ｃ）配列番号：５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖を含む。

【0038】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、（ａ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、又はＣＤＲ－Ｈ１の１、２、又は３のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されているそのバリアント；（ｂ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、又はＣＤＲ－Ｈ２の１、２、又は３のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されているそのバリアント；及び／又は（ｃ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、又はＣＤＲ－Ｈ３の１、２、又は３のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されているそのバリアントを含む重鎖を含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、（ａ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、又はＣＤＲ－Ｌ１の１、２、又は３のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されているそのバリアント；（ｂ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、又はＣＤＲ－Ｌ２の１、２、又は３のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されているそのバリアント；及び／又は（ｃ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、又はＣＤＲ－Ｌ３の１、２、又は３のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されているそのバリアントを含む軽鎖を含む。

【0039】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、（ａ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、又はＣＤＲ－Ｈ１の１、２、又は３のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されているそのバリアント；（ｂ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、又はＣＤＲ－Ｈ２の１、２、又は３のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されているそのバリアント；及び／又は（ｃ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、又はＣＤＲ－Ｈ３の１、２、又は３のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されているそのバリアントを含む重鎖を含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、（ａ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、又はＣＤＲ－Ｌ１の１、２、又は３のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されているそのバリアント；（ｂ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、又はＣＤＲ－Ｌ２の１、２、又は３のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されているそのバリアント；及び／又は（ｃ）配列番号：５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、又はＣＤＲ－Ｌ３の１、２、又は３のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されているそのバリアントを含む軽鎖を含む。

【0040】

ここで使用される「可変領域」という用語は、少なくとも三のＣＤＲを含む領域を意味する。幾つかの実施態様では、可変領域は三のＣＤＲと少なくとも一のフレームワーク領域（「ＦＲ」）を含む。「重鎖可変領域」又は「可変重鎖」という用語は交換可能に使用され、少なくとも三の重鎖ＣＤＲを含む領域を意味する。「軽鎖可変領域」又は「可変軽鎖」という用語は交換可能に使用され、少なくとも三の軽鎖ＣＤＲを含む領域を意味する。幾つかの実施態様では、可変重鎖又は可変軽鎖は少なくとも一のフレームワーク領域を含む。幾つかの実施態様では、抗体は、ＨＣ－ＦＲ１、ＨＣ－ＦＲ２、ＨＣ－ＦＲ３、及びＨＣ－ＦＲ４から選択される少なくとも一の重鎖フレームワーク領域を含む。幾つかの実施態様では、抗体は、ＬＣ－ＦＲ１、ＬＣ－ＦＲ２、ＬＣ－ＦＲ３、及びＬＣ－ＦＲ４から選択される少なくとも一の軽鎖フレームワーク領域を含む。フレームワーク領域は軽鎖ＣＤＲの間、又は重鎖ＣＤＲの間に並置されていてもよい。例えば、抗体は次の構造：（ＨＣ－ＦＲ１）－（ＣＤＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＣＤＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＣＤＲ－Ｈ３）－（ＨＣ－ＦＲ４）を有する可変重鎖を含みうる。抗体は次の構造：（ＣＤＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＣＤＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＣＤＲ－Ｈ３）を有する可変重鎖を含みうる。抗体は次の構造：（ＬＣ－ＦＲ１）－（ＣＤＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＣＤＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＣＤＲ－Ｌ３）－（ＬＣ－ＦＲ４）を有する可変軽鎖を含みうる。抗体は次の構造：（ＣＤＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＣＤＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＣＤＲ－Ｌ３）を有する可変軽鎖をまた含みうる。

【0041】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、（ａ）配列番号：７又は配列番号：８の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ－ＦＲ１）配列、（ｂ）配列番号：９のＨＣ－ＦＲ２配列、（ｃ）配列番号：１０のＨＣ－ＦＲ３配列、（ｄ）配列番号：１１又は配列番号：１２のＨＣ－ＦＲ４配列、（ｅ）配列番号：１６の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ－ＦＲ１）配列、（ｆ）配列番号：１７のＬＣ－ＦＲ２配列、（ｇ）配列番号：１８のＬＣ－ＦＲ３配列、又は（ｈ）配列番号：１９のＬＣ－ＦＲ４配列の一又は複数を含む。

【0042】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、（ａ）配列番号：４５又は配列番号：４６の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ－ＦＲ１）配列、（ｂ）配列番号：４７又は配列番号：４８のＨＣ－ＦＲ２配列、（ｃ）配列番号：４９又は配列番号：５０のＨＣ－ＦＲ３配列、（ｄ）配列番号：５１のＨＣ－ＦＲ４配列、（ｅ）配列番号：５５又は配列番号：５６の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ－ＦＲ１）配列、（ｆ）配列番号：５７のＬＣ－ＦＲ２配列、（ｇ）配列番号：５８又は配列番号：５９のＬＣ－ＦＲ３配列、又は（ｈ）配列番号：６０のＬＣ－ＦＲ４配列の一又は複数を含む。

【0043】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、配列番号：２２、配列番号：８７、配列番号：４１、配列番号：６４、配列番号：６５、配列番号：８９、配列番号：８２、又は配列番号：８４の可変軽鎖配列を含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：８５、配列番号：８６、配列番号：４０、配列番号：６２、配列番号：６３、配列番号：８８、配列番号：８１、又は配列番号：８３の可変重鎖配列を含む。

【0044】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、配列番号：２０の可変重鎖配列と配列番号：２２の可変軽鎖配列を含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、配列番号：２１の可変重鎖配列と配列番号：２２の可変軽鎖配列を含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、配列番号：８５の可変重鎖配列と配列番号：８７の可変軽鎖配列を含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、配列番号：８６の可変重鎖配列と配列番号：８７の可変軽鎖配列を含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、配列番号：４０の可変重鎖配列と配列番号：４１の可変軽鎖配列を含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、配列番号：６２の可変重鎖配列と配列番号：６４又は配列番号：６５の可変軽鎖配列を含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、配列番号：６３の可変重鎖配列と配列番号：６４又は配列番号：６５の可変軽鎖配列を含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、配列番号：８８の可変重鎖配列と配列番号：８９の可変軽鎖配列を含む。

【0045】

ここで使用される「定常領域」という用語は、少なくとも三の定常ドメインを含む領域を意味する。「重鎖定常領域」又は「定常重鎖」という用語は交換可能に用いられ、少なくとも三の重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む領域を意味する。非限定的な例示的重鎖定常領域には、γ、δ、α、ε、及びμが含まれる。各重鎖定常領域は、抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体はＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体はＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体はＩｇＡ抗体であり、μ定常領域を含む抗体はＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体はＩｇＥ抗体である。所定のアイソタイプはサブクラスに更に細分割することができる。例えば、ＩｇＧ抗体は、限定されないが、（γ_１定常領域を含む）ＩｇＧ１、（γ_２定常領域を含む）ＩｇＧ２、（γ_３定常領域を含む）ＩｇＧ３、及び（γ_４定常領域を含む）ＩｇＧ４抗体を含み；ＩｇＡ抗体は、限定されないが、（α_１定常領域を含む）ＩｇＡ１及び（α_２定常領域を含む）ＩｇＡ２抗体を含み；ＩｇＭ抗体は、限定されないが、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含む。「軽鎖定常領域」又は「定常軽鎖」という用語は交換可能に使用され、軽鎖定常ドメインＣＬを含む領域を意味する。非限定的な例示的軽鎖定常領域には、λ及びκが含まれる。ドメイン内の機能を変化させない欠失及び変化は、他に指定されない限り、「定常領域」という用語の範囲内に包含される。イヌ及びネコは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭ等の抗体クラスを有する。イヌＩｇＧ抗体クラスの中にはＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－Ｃ、及びＩｇＧ－Ｄがある。ネコＩｇＧ抗体クラスの中にはＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、及びＩｇＧ２ｂがある。

【0046】

「キメラ抗体」又は「キメラ」という用語は、重鎖又は軽鎖の一部が特定の供給源又は種に由来する一方、重鎖又は軽鎖の残りの少なくとも一部が異なる供給源又は種に由来する抗体を意味する。幾つかの実施態様では、キメラ抗体は、第一の種（例えばマウス、ラット、カニクイザル等々）からの少なくとも一の可変領域と第二の種（例えばヒト、イヌ、ネコ、ウマ等々）からの少なくとも一の定常領域を含む抗体を意味する。幾つかの実施態様では、キメラ抗体は少なくとも一のマウス可変領域と少なくとも一のイヌ定常領域を含む。幾つかの実施態様では、キメラ抗体は少なくとも一のマウス可変領域と少なくとも一のネコ定常領域を含む。幾つかの実施態様では、キメラ抗体の可変領域の全てが第一の種からのものであり、キメラ抗体の定常領域の全てが第二の種からのものである。幾つかの実施態様では、キメラ抗体はコンパニオンアニマルからの定常重鎖領域又は定常軽鎖領域を含む。幾つかの実施態様では、キメラ抗体はマウス可変重鎖及び軽鎖、並びにコンパニオンアニマルの定常重鎖及び軽鎖を含む。例えば、キメラ抗体はマウス可変重鎖及び軽鎖、並びにイヌ定常重鎖及び軽鎖を含み得；キメラ抗体はマウス可変重鎖及び軽鎖、並びにネコ定常重鎖及び軽鎖を含み得；或いはキメラ抗体はマウス可変重鎖及び軽鎖、並びにウマ定常重鎖及び軽鎖を含みうる。

【0047】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号：２３の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号：２５の軽鎖アミノ酸配列；若しくは（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列と（ｉｉ）のような軽鎖配列；（ｂ）（ｉ）配列番号：２４の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号：２５の軽鎖アミノ酸配列；若しくは（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列と（ｉｉ）のような軽鎖配列；（ｃ）（ｉ）配列番号：３１の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号：３２の軽鎖アミノ酸配列；若しくは（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列と（ｉｉ）のような軽鎖配列；（ｄ）（ｉ）配列番号：３１の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号：３３の軽鎖アミノ酸配列；若しくは（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列と（ｉｉ）のような軽鎖配列；（ｅ）（ｉ）配列番号：６６の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号：６８の軽鎖アミノ酸配列；若しくは（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列と（ｉｉ）のような軽鎖配列；（ｆ）（ｉ）配列番号：６７の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号：６９の軽鎖アミノ酸配列；若しくは（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列と（ｉｉ）のような軽鎖配列；（ｇ）（ｉ）配列番号：７４の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号：７５の軽鎖アミノ酸配列；若しくは（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列と（ｉｉ）のような軽鎖配列；又は（ｈ）（ｉ）配列番号：７４の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号：７５の軽鎖アミノ酸配列；若しくは（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列と（ｉｉ）のような軽鎖配列を含むキメラ抗体を含む。

【0048】

「イヌキメラ」、「キメライヌ」、又は「イヌキメラ抗体」は、イヌに由来する重鎖の一部又は軽鎖の一部を少なくとも有するキメラ抗体を意味する。「ネコキメラ」、「キメラネコ」、又は「ネコキメラ抗体」は、ネコに由来する重鎖の一部又は軽鎖の一部を少なくとも有するキメラ抗体を意味する。幾つかの実施態様では、イヌキメラ抗体は、マウス又はラット可変重鎖及び軽鎖、並びにイヌ定常重鎖及び軽鎖を含む。幾つかの実施態様では、ネコキメラ抗体は、マウス又はラット可変重鎖及び軽鎖、並びにネコ定常重鎖及び軽鎖を含む。

【0049】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、ＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－Ｃ、及びＩｇＧ－Ｄ定常領域から選択されるイヌ重鎖定常領域を含む。

【0050】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、及びＩｇＧ２ｂ定常領域から選択されるネコ重鎖定常領域を含む。

【0051】

「イヌ化抗体」は、非イヌ可変領域の一部における少なくとも一のアミノ酸がイヌ可変領域からの対応するアミノ酸で置き換えられている抗体を意味する。幾つかの実施態様では、イヌ化抗体は少なくとも一のイヌ定常領域（例えばγ定常領域、α定常領域、δ定常領域、ε定常領域、μ定常領域等々）又はその断片を含む。幾つかの実施態様では、イヌ化抗体は抗体断片、例えばＦａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）_２等である。「イヌ化」という用語は、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又は非イヌ免疫グロブリンの最小配列を含むその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、若しくは抗体の他の抗原結合配列）である非イヌ（例えばマウス）抗体の形態をまた示す。イヌ化抗体は、レシピエントのＣＤＲからの残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、又はウサギ等の非イヌ種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置換されたイヌ免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含みうる。ある場合には、イヌ免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非イヌ残基によって置き換えられる。更に、イヌ化抗体は、レシピエント抗体にも移入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見出されないが、抗体性能を更に改良し最適化するために含められる残基を含みうる。

【0052】

幾つかの実施態様では、ラット若しくはマウス可変重鎖又はラット若しくはマウス可変軽鎖の一部における少なくとも一のアミノ酸残基が、イヌ可変領域からの対応するアミノ酸で置き換えられている。幾つかの実施態様では、修飾された鎖が、イヌ定常重鎖又はイヌ定常軽鎖に融合される。

【0053】

「ネコ化抗体」は、非ネコ可変領域の一部における少なくとも一のアミノ酸がネコ可変領域からの対応するアミノ酸で置き換えられている抗体を意味する。幾つかの実施態様では、ネコ化抗体は少なくとも一のネコ定常領域（例えばγ定常領域、α定常領域、δ定常領域、ε定常領域、μ定常領域等々）又はその断片を含む。幾つかの実施態様では、ネコ化抗体はＦａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）_２等の抗体断片である。「ネコ化」という用語は、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又は非ネコ免疫グロブリンの最小配列を含むその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、若しくは抗体の他の抗原結合配列）である非ネコ（例えばマウス）抗体の形態をまた示す。ネコ化抗体は、レシピエントのＣＤＲからの残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、又はウサギ等の非ネコ種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置換されたネコ免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含みうる。ある場合には、ネコ免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ネコ残基によって置き換えられる。更に、ネコ化抗体は、レシピエント抗体にも移入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見出されないが、抗体性能を更に改良し最適化するために含められる残基を含みうる。

【0054】

幾つかの実施態様では、マウス可変重鎖又はマウス可変軽鎖の一部における少なくとも一のアミノ酸残基が、ネコ可変領域からの対応するアミノ酸で置き換えられている。幾つかの実施態様では、修飾された鎖が、ネコ定常重鎖又はイヌ定常軽鎖に融合される。

【0055】

「断片結晶化可能ポリペプチド」又は「Ｆｃポリペプチド」は、エフェクター分子及び細胞と相互作用する抗体分子の部分である。それは、免疫グロブリン重鎖のＣ末端部分を含む。ここで使用される場合、Ｆｃポリペプチドは、Ｆｃポリペプチド全体の一又は複数の生物学的活性を有するＦｃドメインの断片を含む。Ｆｃポリペプチドの「エフェクター機能」は、刺激に応答して任意の抗体によって全体的又は部分的に実施される作用又は活性であり、補体結合及び／又はＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）誘導及び／又はＡＤＣＰ（抗体依存性細胞食作用）を含みうる。

【0056】

幾つかの実施態様では、Ｆｃポリペプチドの生物学的活性は、ＦｃＲｎに結合する能力である。幾つかの実施態様では、Ｆｃポリペプチドの生物学的活性は、Ｃ１ｑに結合する能力である。幾つかの実施態様では、Ｆｃポリペプチドの生物学的活性は、ＣＤ１６に結合する能力である。幾つかの実施態様では、Ｆｃポリペプチドの生物学的活性は、プロテインＡに結合する能力である。

【0057】

「ＩｇＸ Ｆｃ」という用語は、Ｆｃ領域が特定の抗体アイソタイプ（例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ等々）に由来することを意味し、ここで「Ｘ」は抗体アイソタイプを意味する。従って、「ＩｇＧ Ｆｃ」はγ鎖のＦｃ領域を意味し、「ＩｇＡ Ｆｃ」はα鎖のＦｃ領域を意味し、「ＩｇＤ Ｆｃ」はδ鎖のＦｃ領域を意味し、「ＩｇＥ Ｆｃ」はε鎖のＦｃ領域を意味し、「ＩｇＭ Ｆｃ」はμ鎖のＦｃ領域を意味する等々である。幾つかの実施態様では、ＩｇＧ Ｆｃ領域はＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＬ１を含む。「ＩｇＸ－Ｎ－Ｆｃ」はＦｃ領域が抗体アイソタイプの特定のサブクラス（例えばイヌＩｇＧサブクラスＡ、Ｂ、Ｃ、若しくはＤ；又はネコＩｇＧサブクラス１、２ａ、若しくは２ｂ）に由来することを意味し、ここで「Ｎ」はサブクラスを意味する。幾つかの実施態様では、ＩｇＸ Ｆｃ又はＩｇＸ－Ｎ－Ｆｃ領域は、イヌ又はネコ等のコンパニオンアニマルに由来する。幾つかの実施態様では、ＩｇＧ Ｆｃ領域は、ＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－Ｃ、若しくはＩｇＧ－Ｄ等のイヌγ重鎖から単離される。幾つかの例では、ＩｇＧ Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、若しくはＩｇＧ２ｂ等のネコγ重鎖から単離される。ＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－Ｃ、若しくはＩｇＧ－ＤのＦｃ領域を含む抗体は、組換え産生系において高い発現レベルを提供しうる。

【0058】

「ＩｇＸ Ｆｃ」及び「ＩｇＸ Ｆｃポリペプチド」という用語は、他に示されない限り、野生型ＩｇＸ Ｆｃポリペプチド及びバリアントＩｇＸ Ｆｃポリペプチドを含む。

【0059】

幾つかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、コンパニオンアニマル種のバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含む。幾つかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、バリアントイヌＩｇＧ Ｆｃポリペプチド又はネコＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含む。幾つかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチド（例えば、バリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃポリペプチド、バリアントイヌＩｇＧ－Ｃ Ｆｃポリペプチド、又はバリアントイヌＩｇＧ－Ｄ Ｆｃポリペプチド、バリアントネコＩｇＧ１ａ Ｆｃポリペプチド、バリアントネコＩｇＧ１ｂ Ｆｃポリペプチド、又はバリアントネコＩｇＧ２ Ｆｃポリペプチド）は、参照（例えば、野生型）ポリペプチドが実質的に欠いている活性を有している。

【0060】

抗体は、その半減期を延長又は短縮するように改変されうる。より高用量の抗体を含む幾つかの実施態様では、より短い半減期が急性治療に望ましい場合がある。より低い用量の抗体を含む幾つかの実施態様では、より長い半減期が長期治療のために望ましい場合がある。例えば、以下で検討されるように、ＦｃＲｎ相互作用に影響を与えるＩｇＧ Ｆｃの変異が導入されうる。

【0061】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、補体結合活性（又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ））を有する野生型又はバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する野生型又はバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する野生型又はバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、補体結合活性及び／又はＡＤＣＣ活性及び／又はＡＤＣＰ活性を有する野生型又はバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む。ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、エフェクター機能を有するように、又は増強されたエフェクター機能を有するように改変されうる。

【0062】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、低ｐＨでイヌＦｃＲｎに結合する野生型又はバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルスは、Ｃ１ｑに結合する野生型又はバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルスは、ＣＤ１６に結合する野生型又はバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルスは、一又は複数の脱フコシル化グリカンを含むバリアントＩｇＧ Ｆｃを含む。

【0063】

幾つかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃ（例えば、バリアントイヌＩｇＧ Ｆｃポリペプチド又はバリアントネコＩｇＧ Ｆｃポリペプチド）は、参照ポリペプチドと比較して改変されたＦｃＲｎ結合親和性を有する。幾つかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃは、参照ポリペプチドと比較して、酸性ｐＨ（例えば、約５．０から約６．５の範囲のｐＨ、例えば、約５．０のｐＨ、約５．５のｐＨ、約６．０のｐＨ、又は約６．５のｐＨ）において増加したＦｃＲｎ結合親和性を有する。ＦｃＲｎ結合親和性が増加した例示的なバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、出典明示によりその全体がここに援用される国際公開第２０２０／０８２０４８号に開示されている。

【0064】

幾つかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃ（例えば、バリアントイヌＩｇＧ Ｆｃポリペプチド又はバリアントネコＩｇＧ Ｆｃポリペプチド）は、参照ポリペプチドと比較して改変されたＣ１ｑ結合親和性を有する。幾つかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃは、参照ポリペプチドと比較して、増加したＣ１ｑ結合親和性を有する。増加したＣ１ｑ結合親和性を有する例示的バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、出典明示によりその全体がここに援用される国際公開第２０２０／１３９９８４号（例えば、実施例２）に開示されている。

【0065】

幾つかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃ（例えば、バリアントイヌＩｇＧ Ｆｃポリペプチド又はバリアントネコＩｇＧ Ｆｃポリペプチド）は、参照ポリペプチドと比較して改変されたＣＤ１６結合親和性を有する。幾つかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃは、参照ポリペプチドと比較して、増加したＣＤ１６結合親和性を有する。増加したＣＤ１６結合親和性を有する例示的バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、出典明示によりその全体がここに援用される国際公開第２０２０／１３９９８４号（例えば、実施例２）に開示されている。

【0066】

幾つかの実施態様では、バリアントイヌＩｇＧ Ｆｃは、参照ポリペプチドと比較して増強されたＣＤ１６結合親和性を有する。幾つかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃは、ａ）配列番号：９１の１０位に対応する位置にアスパラギン酸又はグルタミン酸；ｂ）配列番号：９１の１０位にアスパラギン酸又はグルタミン酸；ｃ）配列番号：９１の１０３位に対応する位置にアスパラギン酸又はグルタミン酸；ｄ）配列番号：９１の１０３位にアスパラギン酸又はグルタミン酸；ｅ）配列番号：９１の１０位及び／又は１０３位に対応する位置にアスパラギン酸又はグルタミン酸；ｆ）配列番号：９１の１０位及び／又は１０３位にアスパラギン酸又はグルタミン酸を含む。幾つかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃは、配列番号：９２、配列番号：９３、配列番号：９４、配列番号：９５、配列番号：９６、配列番号：９７、配列番号：９８、又は配列番号：９９のアミノ酸配列を含む。

【0067】

幾つかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃ（例えば、バリアントイヌＩｇＧ Ｆｃポリペプチド又はバリアントネコＩｇＧ Ｆｃポリペプチド）は、参照ポリペプチドと比較して改変されたプロテインＡ結合親和性を有する。幾つかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃは、参照ポリペプチドと比較して、増加したプロテインＡ結合親和性を有する。増加したプロテインＡ結合親和性を有する例示的バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、出典明示によりその全体がここに援用される国際公開第２０２０／１３９９８４号（例えば、実施例２）に開示されている。

【0068】

「親和性」という用語は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の全体の強さを意味する。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に解離定数（Ｋ_Ｄ）で表すことができる。親和性は、例えば、イムノブロット、ＥＬＩＳＡ ＫＤ、ＫｉｎＥｘ Ａ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、又は表面プラズモン共鳴装置などの当該技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。

【0069】

「Ｋ_Ｄ」、「Ｋ_ｄ」、「Ｋｄ」又は「Ｋｄ値」という用語は、抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指すために交換可能に使用される。幾つかの実施態様では、抗体のＫ_Ｄは、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）システム（Pall ForteBio LLC, Fremont, CA）などのバイオセンサーをサプライヤーの説明書に従って使用するバイオレイヤー干渉アッセイを使用することによって測定される。簡単に説明すると、ビオチン化抗原がセンサー先端に結合され、抗体の結合が９０秒間モニターされ、解離が６００秒間モニターされる。希釈及び結合工程の緩衝液は、２０ｍＭのリン酸、１５０ｍＭのＮａＣｌ，ｐＨ７．２である。ドリフトを補正するために、緩衝液のみのブランク曲線が差し引かれる。データは、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析ソフトウェアを使用して２：１結合モデルに適合させて、結合速度定数（ｋ_ｏｎ）、解離速度定数（ｋ_ｏｆｆ）、及びＫ_ｄを決定する。平衡解離定数（Ｋ_ｄ）は、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎの比として計算される。「ｋｏｎ」という用語は、抗体が抗原に結合する際の速度定数を指し、「ｋｏｆｆ」という用語は、抗体が抗体／抗原複合体から解離する際の速度定数を指す。

【0070】

抗原又はエピトープへ「結合する」という用語は、当該技術分野でよく理解されている用語であり、そのような結合性を決定する方法もまた当該技術分野でよく知られている。分子は、それが特定の細胞又は物質に対して反応し、会合し、又は親和性を有し、反応、会合、又は親和性が、例えば、当該技術分野で知られている一又は複数の方法、例えばイムノブロット、ＥＬＩＳＡ ＫＤ、ＫｉｎＥｘ Ａ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、表面プラズモン共鳴装置などによって検出可能である場合、「結合性」を示すと言われる。

【0071】

「表面プラズモン共鳴」は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ^ＴＭシステム（BIAcore International AB, a GE Healthcare company, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することにより、リアルタイムの生体分子特異的相互作用の分析を可能にする光学現象を示す。更なる説明については、Jonsson等 (1993) Ann. Biol. Clin. 51: 19-26を参照のこと。

【0072】

「バイオレイヤー干渉法」は、バイオセンサー先端上の固定化タンパク質の層と内部参照層から反射した光の干渉パターンを分析する光学分析技術を指す。バイオセンサー先端に結合した分子の数の変化が、リアルタイムで測定できる干渉パターンのシフトを引き起こす。バイオレイヤー干渉法のための非限定的で例示的な装置は、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）システム (Pall ForteBio LLC)である。例えば、Abdiche等, 2008, Anal. Biochem. 377: 209-277を参照のこと。

【0073】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０^－６Ｍ未満、１×１０^－６Ｍ未満、５×１０^－７Ｍ未満、１×１０^－７Ｍ未満、５×１０^－８Ｍ未満、１×１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満、５×１０^－１１Ｍ未満、１×１０^－１１Ｍ未満、５×１０^－１２Ｍ未満、又は１×１０^－１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌパルボウイルス又はネコパルボウイルスに結合する。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０^－６Ｍと１×１０^－６Ｍの間、５×１０^－６Ｍと５×１０^－７Ｍの間、５×１０^－６Ｍと１×１０^－７Ｍの間、５×１０^－６Ｍと５×１０^－８Ｍの間、５×１０^－６Ｍと１×１０^－８Ｍの間、５×１０^－６Ｍと５×１０^－９Ｍの間、５×１０^－６Ｍと１×１０^－９Ｍの間、５×１０^－６Ｍと５×１０^－１０Ｍの間、５×１０^－６Ｍと１×１０^－１０Ｍの間、５×１０^－６Ｍと５×１０^－１１Ｍの間、５×１０^－６Ｍと１×１０^－１１Ｍの間、５×１０^－６Ｍと５×１０^－１２Ｍの間、５×１０^－６Ｍと１×１０^－１２Ｍの間、１×１０^－６Ｍと５×１０^－７Ｍの間、１×１０^－６Ｍと１×１０^－７Ｍの間、１×１０^－６Ｍと５×１０^－８Ｍの間、１×１０^－６Ｍと１×１０^－８Ｍの間、１×１０^－６Ｍと５×１０^－９Ｍの間、１×１０^－６Ｍと１×１０^－９Ｍの間、１×１０^－６Ｍと５×１０^－１０Ｍの間、１×１０^－６Ｍと１×１０^－１０Ｍの間、１×１０^－６Ｍと５×１０^－１１Ｍの間、１×１０^－６Ｍと１×１０^－１１Ｍの間、１×１０^－６Ｍと５×１０^－１２Ｍの間、１×１０^－６Ｍと１×１０^－１２Ｍの間、５×１０^－７Ｍと１×１０^－７Ｍの間、５×１０^－７Ｍと５×１０^－８Ｍの間、５×１０^－７Ｍと１×１０^－８Ｍの間、５×１０^－７Ｍと５×１０^－９Ｍの間、５×１０^－７Ｍと１×１０^－９Ｍの間、５×１０^－７Ｍと５×１０^－１０Ｍの間、５×１０^－７Ｍと１×１０^－１０Ｍの間、５×１０^－７Ｍと５×１０^－１１Ｍの間、５×１０^－７Ｍと１×１０^－１１Ｍの間、５×１０^－７Ｍと５×１０^－１２Ｍの間、５×１０^－７Ｍと１×１０^－１２Ｍの間、１×１０^－７Ｍと５×１０^－８Ｍの間、１×１０^－７Ｍと１×１０^－８Ｍの間、１×１０^－７Ｍと５×１０^－９Ｍの間、１×１０^－７Ｍと１×１０^－９Ｍの間、１×１０^－７Ｍと５×１０^－１０Ｍの間、１×１０^－７Ｍと１×１０^－１０Ｍの間、１×１０^－７Ｍと５×１０^－１１Ｍの間、１×１０^－７Ｍと１×１０^－１１Ｍの間、１×１０^－７Ｍと５×１０^－１２Ｍの間、１×１０^－７Ｍと１×１０^－１２Ｍの間、５×１０^－８Ｍと１×１０^－８Ｍの間、５×１０^－８Ｍと５×１０^－９Ｍの間、５×１０^－８Ｍと１×１０^－９Ｍの間、５×１０^－８Ｍと５×１０^－１０Ｍの間、５×１０^－８Ｍと１×１０^－１０Ｍの間、５×１０^－８Ｍと５×１０^－１１Ｍの間、５×１０^－８Ｍと１×１０^－１１Ｍの間、５×１０^－８Ｍと５×１０^－１２Ｍの間、５×１０^－８Ｍと１×１０^－１２Ｍの間、１×１０^－８Ｍと５×１０^－９Ｍの間、１×１０^－８Ｍと１×１０^－９Ｍの間、１×１０^－８Ｍと５×１０^－１０Ｍの間、１×１０^－８Ｍと１×１０^－１０Ｍの間、１×１０^－８Ｍと５×１０^－１１Ｍの間、１×１０^－８Ｍと１×１０^－１１Ｍの間、１×１０^－８Ｍと５×１０^－１２Ｍの間、１×１０^－８Ｍと１×１０^－１２Ｍの間、５×１０^－９Ｍと１×１０^－９Ｍの間、５×１０^－９Ｍと５×１０^－１０Ｍの間、５×１０^－９Ｍと１×１０^－１０Ｍの間、５×１０^－９Ｍと５×１０^－１１Ｍの間、５×１０^－９Ｍと１×１０^－１１Ｍの間、５×１０^－９Ｍと５×１０^－１２Ｍの間、５×１０^－９Ｍと１×１０^－１２Ｍの間、１×１０^－９Ｍと５×１０^－１０Ｍの間、１×１０^－９Ｍと１×１０^－１０Ｍの間、１×１０^－９Ｍと５×１０^－１１Ｍの間、１×１０^－９Ｍと１×１０^－１１Ｍの間、１×１０^－９Ｍと５×１０^－１２Ｍの間、１×１０^－９Ｍと１×１０^－１２Ｍの間、５×１０^－１０Ｍと１×１０^－１０Ｍの間、５×１０^－１０Ｍと５×１０^－１１Ｍの間、１×１０^－１０Ｍと５×１０^－１１Ｍの間、１×１０^－１０Ｍと１×１０^－１１Ｍの間、１×１０^－１０Ｍと５×１０^－１２Ｍの間、１×１０^－１０Ｍと１×１０^－１２Ｍの間、５×１０^－１１Ｍと１×１０^－１２Ｍの間、５×１０^－１１Ｍと５×１０^－１２Ｍの間、５×１０^－１１Ｍと１×１０^－１２Ｍの間、１×１０^－１１Ｍと５×１０^－１２Ｍの間、又は１×１０^－１１Ｍと１×１０^－１２Ｍの間のＫｄでイヌパルボウイルス又はネコパルボウイルスに結合する。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、イムノブロット分析によって決定されて、イヌパルボウイルス又はネコパルボウイルスに結合する。

【0074】

「野生型」は、天然に生じるポリペプチドの非変異型、又はその断片を指す。野生型ポリペプチドは組換えにより産生されてもよい。

【0075】

「バリアント」とは、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して最大パーセントの配列同一性を達成した後、如何なる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しないで、天然配列ポリペプチドと少なくとも約５０％のアミノ酸配列同一性を有する生物学的に活性なポリペプチドを意味する。そのようなバリアントには、例えば、ポリペプチドのＮ末端又はＣ末端に一又は複数のアミノ酸残基が付加され、欠失されているポリペプチドが含まれる。

【0076】

幾つかの実施態様では、バリアントは、異なるアミノ酸によって置換された少なくとも１、２、３、４、又は５のアミノ酸を有する。

【0077】

幾つかの実施態様では、バリアントは、配列を整列させ、必要に応じて最大パーセントの配列同一性を達成するためにギャップを導入した後、配列同一性の一部として保存的置換を考慮しないで、参照核酸分子又はポリペプチドと少なくとも約５０％の配列同一性を有する。そのようなバリアントには、例えば、ポリペプチドのＮ末端又はＣ末端に一又は複数のアミノ酸残基が付加され、欠失されているポリペプチドが含まれる。幾つかの実施態様では、バリアントは、参照核酸又はポリペプチドの配列と少なくとも約５０％の配列同一性、少なくとも約６０％の配列同一性、少なくとも約６５％の配列同一性、少なくとも約７０％の配列同一性、少なくとも約７５％の配列同一性、少なくとも約約８０％の配列同一性、少なくとも約８５％の配列同一性、少なくとも約９０％の配列同一性、少なくとも約９５％の配列同一性、少なくとも約９７％の配列同一性、少なくとも約９８％の配列同一性、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有する。

【0078】

ここで使用される場合、「ｎ位に対応する位置」（ここで、ｎは任意の数である）は、対象及び参照ポリペプチドのアミノ酸配列を整列させ、ギャップを導入した後、参照ポリペプチドのｎ位と整列する対象ポリペプチドのアミノ酸位置を指す。対象ポリペプチドの位置が参照ポリペプチドのｎ位に対応するかどうかの目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＣＬＵＳＴＡＬ ＯＭＥＧＡ、ＡＬＩＧＮ、又はＭＥＧＡＬＩＧＮ^ＴＭ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当該技術分野の技量の範囲内である様々な方法で達成することができる。当業者は、比較される二つの配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のパラメーターを含む、アラインメントのための適切なパラメーターを決定することができる。幾つかの実施態様では、対象ポリペプチド及び参照ポリペプチドは、異なる長さである。

【0079】

「点変異」は、単一のアミノ酸残基を含む変異である。変異は、アミノ酸の喪失、一アミノ酸残基の別のアミノ酸残基への置換、又は追加のアミノ酸残基の挿入でありうる。

【0080】

「アミノ酸置換」は、ポリペプチド中の一アミノ酸を別のアミノ酸で置換することを指す。幾つかの実施態様では、アミノ酸置換は保存的置換である。非限定的で例示的な保存的アミノ酸置換を表２に示す。アミノ酸置換は目的の分子に導入され得、生成物が所望の活性、例えば、抗原結合性の保持／改善、免疫原性の減少、又はＡＤＣＣ又はＣＤＣの改善又は薬物動態の増強についてスクリーニングされうる。

【0081】

【0082】

アミノ酸は、共通の側鎖特性に従ってグループ分けされうる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0083】

非保存的置換は、これらのクラスの一つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。

【0084】

「ベクター」という用語は、クローン化されたポリヌクレオチド又は宿主細胞内で増殖することができるポリヌクレオチドを含むように操作することができるポリヌクレオチドを記述するために使用される。ベクターは、次のエレメントの一又は複数を含みうる：複製起点、目的のポリペプチドの発現を調節する一又は複数の制御配列（例えば、プロモーター又はエンハンサーなど）、又は一若しくは複数の選択可能なマーカー遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子及び比色分析において使用できる遺伝子、例えば、βガラクトシダーゼなど）。「発現ベクター」という用語は、宿主細胞において目的のポリペプチドを発現させるために使用されるベクターを指す。

【0085】

「宿主細胞」は、ベクター又は単離ポリヌクレオチドのレシピエントでありうるか、又はレシピエントであった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞でありうる。例示的な真核細胞には、哺乳動物細胞、例えば霊長類又は非霊長類の動物細胞；真菌細胞、例えば酵母；植物細胞；及び昆虫細胞が含まれる。非限定的で例示的な哺乳動物細胞には、限定されないが、ＮＳ０細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、２９３細胞、及びＣＨＯ細胞、並びにそれらの派生体、例えば、２９３－６Ｅ、ＤＧ４４、ＣＨＯ－Ｓ、及びＣＨＯ－Ｋ細胞が含まれる。宿主細胞には単一の宿主細胞の子孫が含まれ、子孫は、自然の、偶発的、又は意図的な変異のために、必ずしも元の親細胞と（形態又はゲノムＤＮＡ相補鎖において）完全に同一であるとは限らない。宿主細胞は、ここに提供されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドでインビボでトランスフェクトされた細胞を含む。

【0086】

ここで使用される「単離された」という用語は、それが典型的には天然に見出されるか又は産生される成分の少なくとも幾つかから分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それが産生された細胞の成分の少なくとも幾つかから分離される場合、「単離された」と呼ばれる。ポリペプチドが発現後に細胞によって分泌される場合、ポリペプチドを含む上清を、それを産生した細胞から物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離する」ことと考えられる。同様に、ポリヌクレオチドは、それが典型的には自然界に見出されるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合はゲノムＤＮＡ又はミトコンドリアＤＮＡ）の一部ではないか、或いは例えばＲＮＡポリヌクレオチドの場合、それが産生された細胞の成分の少なくとも幾つかから分離される場合、「単離された」と呼ばれる。従って、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、「単離された」と呼ばれる場合がある。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、プロテインＡカラムクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、及びＣＨＴクロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーを使用して精製される。

【0087】

「低減させる」又は「阻害する」とは、参照と比較して、活性、機能、又は量を減少させ、低減させ、又は停止させることを意味する。幾つかの実施態様では、「低減させる」又は「阻害する」とは、２０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。幾つかの実施態様では、「低減させる」又は「阻害する」とは、５０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。幾つかの実施態様では、「低減させる」又は「阻害する」とは、７５％、８５％、９０％、９５％、又はそれ以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。幾つかの実施態様では、上記の量は、同じ期間にわたり対照用量（プラセボなど）と比較して、ある期間にわたって阻害され又は減少される。ここで使用される「参照」とは、比較目的で使用される任意のサンプル、標準、又はレベルを指す。参照は、健康な又は罹患していないサンプルから取得されうる。幾つかの例では、参照は、コンパニオンアニマルの非罹患又は未治療のサンプルから得られる。幾つかの例では、参照は、試験又は治療されている動物ではない特定の種の一又は複数の健康な動物から得られる。

【0088】

ここで使用される「実質的に低減された」という用語は、当業者が二つの値の差を、該値によって測定される生物学的特性の文脈において統計的に有意であるとみなすような、数値と参照数値との間の十分に高度な低減を意味する。幾つかの実施態様では、実質的に低減された数値は、参照値と比較しておよそ１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％の何れか一よりも多く低減される。

【0089】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、イヌ又はネコにおけるパルボウイルス力価を、赤血球凝集抑制（ＨＩ）アッセイ又はウイルス中和（ＶＮ）アッセイによって測定し、抗体の非存在下でのパルボウイルス力価と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は１００％減少させることができる。幾つかの実施態様では、パルボウイルス力価の低下は、１０％と１５％の間、１０％と２０％の間、１０％と２５％の間、１０％と３０％の間、１０％と３５％の間、１０％と４０％の間、１０％と４５％の間、１０％と５０％の間、１０％と６０％の間、１０％と７０％の間、１０％と８０％の間、１０％と９０％の間、１０％と１００％の間、１５％と２０％の間、１５％と２５％の間、１５％と３０％の間、１５％と３５％の間、１５％と４０％の間、１５％と４５％の間、１５％と５０％の間、１５％と６０％の間、１５％と７０％の間、１５％と８０％の間、１５％と９０％の間、１５％と１００％の間、２０％と２５％の間、２０％と３０％の間、２０％と３５％の間、２０％と４０％の間、２０％と４５％の間、２０％と５０％の間、２０％と６０％の間、２０％と７０％の間、２０％と８０％の間、２０％と９０％の間、２０％と１００％の間、２５％と３０％の間、２５％と３５％の間、２５％と４０％の間、２５％と４５％の間、２５％と５０％の間、２５％と６０％の間、２５％と７０％の間、２５％と８０％の間、２５％と９０％の間、２５％と１００％の間、３０％と３５％の間、３０％と４０％の間、３０％と４５％の間、３０％と５０％の間、３０％と６０％の間、３０％と７０％の間、３０％と８０％の間、３０％と９０％の間、３０％と１００％の間、３５％と４０％の間、３５％と４５％の間、３５％と５０％の間、３５％と６０％の間、３５％と７０％の間、３５％と８０％の間、３５％と９０％の間、３５％と１００％の間、４０％と４５％の間、４０％と５０％の間、４０％と６０％の間、４０％と７０％の間、４０％と８０％の間、４０％と９０％の間、４０％と１００％の間、４５％と５０％の間、４５％と６０％の間、４５％と７０％の間、４５％と８０％の間、４５％と９０％の間、４５％と１００％の間、５０％と６０％の間、５０％と７０％の間、５０％と８０％の間、５０％と９０％の間、５０％と１００％の間、６０％と７０％の間、６０％と８０％の間、６０％と９０％の間、６０％と１００％の間、７０％と８０％の間、７０％と９０％の間、７０％と１００％の間、８０％と９０％の間、８０％と１００％の間、又は９０％と１００％の間である。

【0090】

［例示的な薬学的組成物］
「薬学的製剤」及び「薬学的組成物」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効になることを可能にするような形態であり、製剤が投与される対象に対して容認できないほど毒性のある追加の成分を含まない調製物を指す。

【0091】

「薬学的に許容される担体」とは、対象への投与のための「薬学的組成物」を一緒に含む治療剤と共に使用するための、当該分野で一般的な非毒性固体、半固体、又は液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、製剤補助剤、又は担体を指す。薬学的に許容される担体は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、製剤の他の成分と適合性がある。薬学的に許容される担体は、用いられる製剤に適切である。薬学的に許容される担体の例には、アルミナ；ステアリン酸アルミニウム；レシチン；血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、イヌ又は他の動物アルブミン；緩衝液、例えばホスフェート、シトレート、トロメタミン又はＨＥＰＥＳ緩衝液；グリシン；ソルビン酸；ソルビン酸カリウム；飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物；水；塩又は電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、又は三ケイ酸マグネシウム；ポリビニルピロリドン、セルロース系物質；ポリエチレングリコール；スクロース；マンニトール；又はアルギニンを含むがこれに限定されないアミノ酸が含まれる。

【0092】

薬学的組成物は、凍結乾燥形態で保存することができる。従って、幾つかの実施態様では、調製方法は、凍結乾燥工程を含む。次に、凍結乾燥された組成物は、イヌ、ネコ、又はウマへの投与の前に、典型的には非経口投与に適した水性組成物として、再処方されうる。他の実施態様では、特に抗体が熱的及び酸化的変性に対して非常に安定である場合、薬学的組成物は、イヌ、ネコ、又はウマに直接又は適切な希釈で投与されうる液体として、すなわち水性組成物として保存されうる。凍結乾燥された組成物は、注射用滅菌水（ＷＦＩ）で再構成することができる。抗菌剤（例えば、ベンジルアルコールなどの静菌試薬）が含まれる場合がある。従って、本発明は、固体又は液体形態の薬学的組成物を提供する。

【0093】

薬学的組成物のｐＨは、投与される場合、約ｐＨ５から約ｐＨ８の範囲でありうる。本発明の組成物は、それらが治療目的で使用される場合、無菌である。無菌性は、除菌濾過膜（例えば、０．２ミクロン膜）による濾過を含む、当該技術分野で知られている幾つかの手段の何れかによって達成することができる。無菌性は、抗菌剤の有無にかかわらず維持されうる。

【0094】

幾つかの実施態様では、薬学的に許容される担体又は薬学的組成物は、５．０から６．２、５．０から６．０、又は５．３から５．７のｐＨを有する。幾つかの実施態様では、薬学的担体は、リン酸緩衝生理食塩水，ｐＨ７．２である。幾つかの実施態様では、薬学的担体は、５０ｍＭのクエン酸ナトリウムｐＨ７、１５０ｍＭのＮａＣｌである。

【0095】

幾つかの実施態様では、薬学的に許容される担体又は薬学的組成物は抗菌剤を含む。

【0096】

［抗体及び薬学的組成物の例示的使用］
本発明の抗体又は抗体を含む薬学的組成物は、パルボウイルスによる感染に対して受動免疫を提供するため、及び／又はパルボウイルス感染症を治療するために有用でありうる。ここで使用される場合、「パルボウイルス感染症」は、パルボウイルス感染に関連し、それによって引き起こされ、又はそれによって特徴付けられる状態を意味する。そのような状態には、限定されないが、ケージサイドＥＬＩＳＡ試験、赤血球凝集アッセイ（ＨＡ）、病理組織診断、ウイルス単離又はウイルス力価、又はＰＣＲによって確認された感染症が含まれる。パルボウイルスでの感染症には、しばしば、発熱、嘔吐、下痢、リンパ球減少症、脱水症、及び／又は続発性敗血症が含まれる。

【0097】

ここで使用される場合、「治療」は、有益な又は望ましい臨床結果を得るためのアプローチである。ここで使用される「治療」は、ヒト及びコンパニオンアニマル（例えば、イヌ又はネコ）を含む哺乳動物のような対象における疾患のための治療薬の任意の投与又は適用を包含する。この開示の目的では、有益な又は望ましい臨床結果には、限定されないが、以下の何れか一又は複数が含まれる：一又は複数の症状の緩和、死亡の予防、疾患の程度及び重症度の減少、疾患の拡大の予防又は遅延化、ウイルス排出の排除又は期間の短縮化、疾患の再発の予防又は遅延化、ウイルスの細胞傷害活性の予防又は減少、疾患進行の遅延化又は緩徐化、病状の改善、疾患又は疾患進行の阻害、疾患の臨床徴候の解決、疾患又はその進行の阻害又は緩徐化、その発生の抑止、及び寛解（部分又は完全）。また「治療」に包含されるものは、増殖性疾患の病理学的帰結の減少である。ここに提供される方法は、治療のこれらの態様の何れか一又は複数を企図している。上記と一致して、治療という用語は、障害の全ての態様の１００パーセントの除去を必要としない。

【0098】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体又はそれを含む薬学的組成物は、感染パルボウイルスに対する受動免疫を提供するため、及び／又はパルボウイルス感染を治療するために、ここの方法に従って利用されうる。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体又は薬学的組成物は、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ又はネコ）又はヒトなどの対象に投与されて、パルボウイルスでの感染に対する受動免疫を提供し、及び／又はパルボウイルス感染を治療する。

【0099】

物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの「治療上有効な量」は、治療される疾患のタイプ、疾患状態、個々の対象の免疫状態、遭遇した毒性ウイルス負荷、ウイルス血症の重症度と程度、疾患の重症度と経過、治療目的のタイプ、以前の治療法、臨床歴、以前の治療への反応、母性由来の抗体受動伝達状態、個々の動物の以前の免疫状態、主治医の裁量、対象の年齢、性別、及び体重、並びに対象において所望の応答を誘発する物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの能力などの要因に応じて変化しうる。治療上有効な量は、物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの毒性又は有害な効果よりも治療上有益な効果が上回る量でもある。治療上有効な量は、一又は複数回の投与で送達されうる。治療上有効な量とは、所望の治療又は予防結果を達成するために、必要な投薬量及び期間で有効な量を指す。

【0100】

幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体又はパルボウイルス抗体を含む薬学的組成物は、皮下投与、静脈内注入、又は筋肉内注射によって非経口的に投与される。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体又はパルボウイルス抗体を含む薬学的組成物は、単回用量又は複数回用量のボーラス注射として投与される。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体又はパルボウイルス抗体を含む薬学的組成物は、筋肉内、静脈内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、動脈内、関節滑液嚢内、くも膜下腔内、又は吸入経路によって投与される。

【0101】

ここに記載のパルボウイルス抗体は、１用量当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与されうる。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、１用量当たり０．５ｍｇ／ｋｇ体重から５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与されうる。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、１用量当たり０．１ｍｇ／ｋｇ体重から１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与されうる。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、１用量当たり０．１ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与されうる。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、１用量当たり１ｍｇ／ｋｇ体重から１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与されうる。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、１用量当たり０．５ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、１ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、５ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、１０ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、２０ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、５０ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、１ｍｇ／ｋｇ体重から１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、５ｍｇ／ｋｇ体重から１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、０．５ｍｇ／ｋｇ体重から１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から０．５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から０．１ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、又は５ｍｇ／ｋｇ体重から５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与されうる。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、０．５ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与されうる。

【0102】

パルボウイルス抗体又はパルボウイルス抗体を含む薬学的組成物は、ヒト又はコンパニオンアニマル（例えば、イヌ又はネコ）のような対象に単一用量として、一度に又は一連の治療にわたって投与されうる。例えば、パルボウイルス抗体又はパルボウイルス抗体を含む薬学的組成物は、少なくとも一回、一回より多く、少なくとも二回、少なくとも三回、少なくとも四回、又は少なくとも五回投与されうる。

【0103】

幾つかの実施態様では、用量は、少なくとも二週間又は三週間連続して週に一回投与され、幾つかの実施態様では、この治療サイクルは二回以上繰り返され、場合によっては一又は複数週の無治療期間が散在する。他の実施態様では、治療上有効な用量は、二から五日間連続して一日一回投与され、幾つかの実施態様では、この治療サイクルは、二回以上繰り返され、場合によっては、一又は複数の日又は週の無治療期間が散在する。

【0104】

幾つかの実施態様では、用量は、１週齢未満、２週齢未満、３週齢未満、４週齢未満、５週齢未満、６週齢未満、６週齢未満、７週齢未満、８週齢未満、９週齢未満、１０週齢未満、１１週齢未満、１２週齢未満、６か月齢未満、０から１２週齢の間、０から１０週齢の間、０から８週齢の間、０から６週齢の間、０から４週齢の間、０から２週齢の間、４から１２週齢の間、６から１２週齢の間、１０から１２週齢の間、４週齢から６か月齢の間、２か月齢から６か月齢の間、４か月齢から６か月齢の間、６か月齢から１歳の間、１３週齢を超え、又は１歳を超えるヒト又はコンパニオンアニマル（例えば、イヌ又はネコ）のような対象に投与される。

【0105】

パルボウイルス感染に対する受動免疫を提供するために、パルボウイルス抗体又はパルボウイルス抗体をコードする核酸を出生前及び／又は出生後の乳仔対象に送達することが有利である場合がある。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、ヒト又はコンパニオンアニマル（例えば、イヌ又はネコ）などの妊娠中又は授乳中の母体対象に投与される。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、妊娠中の対象の胎盤に投与される。

【0106】

幾つかの実施態様では、イヌ又はネコパルボウイルスによる感染に対して乳仔対象に受動免疫を提供する方法は、妊娠中又は授乳中の母体対象に、イヌ又はネコパルボウイルスに結合する治療的有効量のモノクローナル抗体を投与することを含む。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、妊娠中の対象の胎盤に投与される。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は、授乳中の対象に投与される。

【0107】

ここに提供されるのは、パルボウイルス感染の検出、診断、及びモニタリングのためにパルボウイルス抗体、ポリペプチド、及びポリヌクレオチドを使用する方法である。ここに提供されるのは、対象がパルボウイルス抗体療法に応答するかどうかを決定する方法である。幾つかの実施態様では、本方法は、ウイルス血清中和を含む。幾つかの実施態様では、本方法は、パルボウイルス抗体を使用して、対象がパルボウイルスを発現する細胞を有するかどうかを検出することを含む。幾つかの実施態様では、検出の方法は、サンプルを抗体、ポリペプチド、又はポリヌクレオチドと接触させ、結合のレベルが参照又は比較サンプル（対照など）のレベルと異なるかどうかを決定することを含む。幾つかの実施態様では、本方法は、ここに記載の抗体又はポリペプチドが対象にとって適切な治療剤であるかどうかを決定するために有用でありうる。

【0108】

幾つかの実施態様では、サンプルは生物学的サンプルである。「生物学的サンプル」という用語は、生体又は以前生体であったものからのある量の物質を意味する。幾つかの実施態様では、生物学的サンプルは、細胞残屑を含むスワブ、細胞又は細胞／組織可溶化物である。幾つかの実施態様では、生物学的サンプルは、限定されないが、血液（例えば、全血）、血漿、血清、尿、滑液、リンパ組織及び上皮細胞を含む。

【0109】

幾つかの実施態様では、細胞又は細胞／組織可溶化物をパルボウイルス抗体と接触させ、抗体と細胞の間の結合を決定する。試験細胞が同じ組織型の参照細胞と比較して結合活性を示す場合には、対象がパルボウイルス抗体での処置から恩恵を受けるであろうことが示されうる。幾つかの実施態様では、試験細胞は、対象、例えばヒト又はコンパニオンアニマル（例えば、イヌ又はネコ）の組織からのものである。

【0110】

特異的抗体－抗原結合を検出するための当該技術分野で知られている様々な方法を使用することができる。実施できる例示的なイムノアッセイには、蛍光分極イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、蛍光イムノアッセイ（ＦＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、比濁阻害イムノアッセイ（ＮＩＡ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、及びラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）が含まれる。指示薬部分、又は標識グループは、対象抗体に結合させることができ、アッセイ装置の入手可能性及び適合するイムノアッセイ手順によって決定されることが多い様々な方法の使用の必要性に合致するように選択される。適切な標識には、限定されはないが、放射性核種（例えば^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓ、^３Ｈ、又は^３２Ｐ）、酵素（例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、又はｂ－グラクトシダーゼ）、蛍光性部分又はタンパク質（例えばフルオレセイン、ローダミン、フィコエリスリン、ＧＦＰ、又はＢＦＰ）、又は発光部分（例えばＱｕａｎｔｕｍ Ｄｏｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．によって供給されるＱｄｏｔ^ＴＭナノ粒子）が含まれる。上記の様々なイムノアッセイを実施する際に使用される一般的な技術は、当業者に知られている。

【0111】

診断の目的では、抗体を含むポリペプチドは、限定しないが、放射性同位体、蛍光標識、及び当該分野で知られている様々な酵素－基質標識を含む検出可能な部分で標識することができる。標識を抗体にコンジュゲートさせる方法は当該技術分野で知られている。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体は標識される必要はなく、その存在は、第一のパルボウイルス抗体に結合する第二の標識化抗体を使用して検出することができる。幾つかの実施態様では、パルボウイルス抗体を、競合結合アッセイ、直接及び間接サンドイッチアッセイ、並びに免疫沈降アッセイ等の任意の既知のアッセイ法において用いることができる。Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987)。パルボウイルス抗体及びポリペプチドは、インビボイメージング等のインビボ診断アッセイにもまた用いることができる。一般に、抗体又はポリペプチドは、目的の細胞又は組織の位置がイムノシンチオグラフィーを使用して特定されうるように、放射性核種（例えば^１１１Ｉｎ、^９９Ｔｃ、^１４Ｃ、^１３１Ｉ、^１２５Ｉ、^３Ｈ、又はここに概略を示したものを含む任意の他の放射性核種標識）で標識される。抗体は当該技術分野で周知の手法を使用して病理学における染色試薬としても使用してもよい。

【0112】

幾つかの実施態様では、第一の抗体は診断用に使用され、第二の抗体は治療剤として使用される。幾つかの実施態様では、第一の抗体と第二の抗体は異なる。幾つかの実施態様では、第一の抗体と第二の抗体は別々のエピトープに結合することによって、両方とも同時に抗原に結合しうる。

【0113】

次の実施例は、開示の特定の態様を例示するものであり、決して開示を限定することを意図するものではない。

【実施例】

【0114】

実施例１
キメライヌ抗体Ｍａｂ Ａ及びＭａｂ Ｂの調製
８つの異なる中和モノクローナル抗体からの抗体断片と複合体を形成したイヌパルボウイルス及びネコパルボウイルスの構造解析が、Hafenstein S.等, J Virol. 2009 Jun, 83(11):5556-66において報告された。不完全なアミノ酸配列情報が、ラットＭａｂ Ｅ及びＭａｂ Ｆ Ｆａｂ断片について提供され、これはインビトロアッセイでイヌパルボウイルスの中和を示した。Ｍａｂ Ｅの可変重鎖及び可変軽鎖の不完全なアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：８１及び８２である。Ｍａｂ Ｆの可変重鎖及び可変軽鎖の不完全なアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：８３及び８４である。

【0115】

三次元タンパク質構造解析を実施して、Ｍａｂ Ｅ及びＭａｂ Ｆの重鎖及び軽鎖の両方について再デザインされた第一フレームワーク領域を構築した。Ｍａｂ Ａ及びＭａｂ Ｂと命名された再デザインされたモノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号：２０（Ｍａｂ Ａ重鎖）、配列番号：２２（Ｍａｂ Ａ軽鎖）、配列番号：６２（Ｍａｂ Ｂ重鎖）、及び配列番号：６４（Ｍａｂ Ｂ軽鎖）である。

【0116】

キメラ抗体をコードするＤＮＡ配列を、Ｍａｂ Ａ ＶＨ（配列番号：２０）及びＭａｂ Ｂ ＶＨ（配列番号：６２）のイヌ定常ＩｇＧ－Ｂ重鎖並びにＭａｂ Ａ ＶＬ（配列番号：２２）及びＭａｂ Ｂ ＬＣ（配列番号：６４）のイヌ定数κ軽鎖への融合体に対してデザインし、配列番号：２３（キメラＡ ＨＣ ＩｇＧ－Ｂ）、配列番号：６６（キメラＢ ＨＣ ＩｇＧ－Ｂ）、配列番号：２５（キメラＡ ＬＣ κ）、及び配列番号：６８（キメラＢ ＬＣ κ）を得た。重鎖及び軽鎖ヌクレオチド配列を化学的に合成し、哺乳動物宿主細胞へのトランスフェクションに適した発現ベクターに挿入した。重鎖及び軽鎖ベクター対を細胞にトランスフェクトして培養した後、ＣａｐｔｉｖＡ（登録商標）プロテインＡアフィニティー樹脂（Ｒｅｐｌｉｇｅｎ）を使用して培地から抗体をアフィニティー精製した。精製されたキメライヌＭａｂ Ａ及びＭａｂ Ｂ抗体を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析によって確認した（データは示さず）。

【0117】

Ｍａｂ Ａ ＶＨ（配列番号：２０）及びＭａｂ Ｂ ＶＨ（配列番号：６２）のイヌ定数ＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｃ、及びＩｇＧ－Ｄ重鎖への融合体に基づいて、キメラ抗体をまたデザインし、調製できる。

【0118】

実施例２
キメライヌ抗体Ｍａｂ Ａ及びＭａｂ Ｂ活性
精製されたキメライヌＭａｂ Ａ及びＭａｂ Ｂ（２００μｇ／ｍＬでＰＢＳ，ｐＨ７．２に処方）の両方を、赤血球凝集抑制（ＨＩ）アッセイを使用して抗イヌパルボウイルス活性を評価するために使用した。アッセイは、本質的にCarmichael等, Am J of Vet Res. 1980 May, 41 (5):784-91に記載されているようにウィスコンシン大学のコンパニオンアニマルワクチン及び免疫診断サービス研究所において実施した。ＣＰＶと共にインキュベートしたキメライヌＭａｂ Ａ及びキメライヌＭａｂ Ｂのサンプルの段階希釈液を調製した。次に、ブタ赤血球を加えた。イヌパルボウイルスは、ブタ赤血球の凝集を誘導する。キメライヌＭａｂ ＡとキメライヌＭａｂ Ｂの両方が凝集を防いだ。両方の抗体は４０９６０のＣＰＶ－２ｂ ＨＩをもたらしたが、無関係なイヌＩｇＧは＜２０のＨＩをもたらした。殆どのワクチン接種したイヌは、１２８０前後の抗体ＨＩを有していると理解される。

【0119】

更に、生ＣＰＶが細胞に感染し細胞を破壊するのを防ぐ抗体の活性を、ウイルス血清中和アッセイを使用して分析した。

【0120】

実施例３
キメライヌＭａｂ Ａ及びＭａｂ Ｂの発現の増強のためのバリアントＶＨ及びＶＬ配列
キメライヌＭａｂ Ａ及びＭａｂ Ｂは、一過性ＣＨＯＳ又は安定なＣＨＯＫ１細胞において一貫して不十分に発現された。発現レベルを高めるために、修飾に適したＶＨ及びＶＬアミノ酸残基を特定するために三次元タンパク質構造解析を実施した。ＶＨ及びＶＬに様々な変異を持つ複数のコンストラクトを作製した。イヌＩｇＧ－ＢとＶＨ及びＶＬバリアントの組合わせを有する抗体の発現レベルを試験した。

【0121】

増強された発現バリアントを、イヌパルボウイルスＨＩアッセイによってそれらの比活性について分析した。これらの実験では、試験した各抗体バリアントは、２００μｇ／ｍＬのＰＢＳ，ｐＨ７．２に処方した。キメライヌＭａｂ Ａ（配列番号：２３及び２５）及びキメライヌＭａｂ Ｂ（配列番号：６６及び６８）の両方が１０２４０のＣＰＶ－２ｂ ＨＩを示した。増強された発現バリアントのキメライヌＭａｂ Ａ ｖ２（配列番号：２４及び２５）及びキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２（配列番号：６７及び６９）は、同じＨＩ値１０２４０を維持したが、他のバリアントはより低い比活性を示した。

【0122】

実施例４
パルボウイルス感染アッセイ活性（ＳＶＮ）
生パルボウイルスが細胞に感染して細胞を破壊することを防ぐキメライヌＭａｂ Ａ ｖ２（配列番号：２４及び２５）及びキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２（配列番号：６７及び６９）の能力を決定するために、血清ウイルス中和（ＳＶＮ）アッセイを実施した。このアッセイでは、メイディン・ダービー・イヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞を増殖させた。抗体の段階希釈液を固定力価のパルボウイルスと混合した。次に、混合物を細胞と共にインキュベートした。インキュベーション後、細胞を顕微鏡で検査してウイルス細胞変性効果（ＣＰＥ）を特定した。読み取りは、パルボウイルスが細胞変性効果を引き起こすのを防ぐ限界に達した抗体サンプルの最終希釈度である。

【0123】

（１）４℃に保ち、（２）２００μｇ／ｍＬで７回の凍結融解サイクルに供した両方のキメライヌＭａｂ Ａ ｖ２が同じ活性を有していた：ＣＰＶ－２ｂに対するＳＶＮは３２０００で、ＣＰＶ２ｃに対するＳＶＮは８０００。

【0124】

実施例５
キメライヌＭａｂ Ａ ｖ２及びＭａｂ Ｂ ｖ２の安定性
２５ｍｇ／ｍＬでのキメライヌＭａｂ Ａ ｖ２（配列番号：２４及び２５）及び２０．５ｍｇ／ｍＬでのキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２（配列番号：６７及び６９）の安定性を試験した。キメライヌＭａｂ Ａ ｖ２及びキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２は、それぞれ約２５ｍｇ／ｍＬ及び約２０．５ｍｇ／ｍＬの濃度で、ＨＩアッセイにより同様の比活性を示す。

【0125】

ＣＨＯＫ１安定プールから産生し精製したキメライヌＭａｂ Ａ ｖ２及びキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２の両方は、ＰＢＳ，ｐＨ７．２中で２５ｍｇ／ｍＬに容易に濃縮でき、両方の抗体には溶解性の懸念がないことを示唆している。

【0126】

キメライヌＭａｂ Ａ ｖ２及びキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２は、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって評価して、中性ｐＨで、及びｐＨ４．１で１０時間保存した後、単量体（＞９９％）である。この分析では、抗体の単量体と凝集体を、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００システム、ＫＷ－Ｇガードカラムを備えたＳｈｏｄｅｘ ＫＷ８０３カラム（８ｍｍ×３００ｍｍ）、及び０．５ｍＬ／分の一定流量で２×ＰＢＳ ｐＨ７．２（２７０ｍＭのＮａＣｌ、５．４ｍＭのＫＣｌ、８．６ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、２．８ｍＭのＫＰＯ４）の移動相緩衝液を使用して、ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって分離した。カラムは、サイログロブリン、γ－グロブリン、卵白アルブミン、ミオグロビン、及びビタミンＢ１２で構成されるＢｉｏ Ｒａｄマーカー（カタログ番号１５１－１９０１）を使用してキャリブレーションした。

【0127】

（１）ＰＢＳ，ｐＨ７．２中２５ｍｇ／ｍＬで、及び（２）５０ｍＭのクエン酸ナトリウムｐＨ７、１５０ｍＭのＮａＣｌ中２５ｍｇ／ｍＬで様々な温度におけるキメライヌＭａｂ Ａ ｖ２のリアルタイム安定性を評価した。１０か月でのＨＰＬＣ－ＳＥＣの結果を表３にまとめる。

【0128】

【0129】

抗体を－７０℃での凍結と室温での解凍を伴う三回の凍結融解サイクルに供することにより、安定性をまた試験した。ＣＰＶ－２ｂ ＨＩ値とＣＰＶ－２ｃ ＨＩ値の両方に関して、何れの抗体でも活性の喪失は観察されなかった。

【0130】

抗体を－２０℃での凍結と室温での解凍を伴う７回の凍結融解サイクルに供することにより、安定性を更に試験した。両方の抗体は、ＨＩアッセイで測定した場合、完全な活性を維持した。

【0131】

示差走査蛍光（ＤＳＦ）を使用して、異なる製剤中、ある範囲のｐＨにわたる二つの抗体の熱安定性を分析した。異なる条件での各抗体の融解温度（Ｔｍ）を測定した。緩衝液と１２μｇの抗体を１×プロテインサーマルシフト色素（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ，カタログ番号４４６１１４６）と混合した。ＳｔｅｐＯｎｅリアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ，カタログ番号４３７６３５７）を用いて融解曲線を遂行した。製造元の説明書に従って、温度をランプ速度１％で２５℃から９９℃に上げた。データをプロテインサーマルシフト^ＴＭソフトウェアｖ１．０（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ，カタログ番号４４６６０３８）で解析し、タンパク質融解曲線の一次導関数をとって得られた最高値として計算して、Ｔｍを決定した。ＰＢＳ ｐＨ７．２を含む、試験した各製剤について、キメライヌＭａｂ Ａ ｖ２はキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２よりも有意により安定であった。

【0132】

実施例６
キメライヌ抗体Ｍａｂ Ａ ｖ２及びＭａｂ Ｂ ｖ２のＶＬＰ結合
パルボウイルスＶＬＰとのキメライヌＭａｂ Ａ ｖ２（配列番号：２４及び２５）及びキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２（配列番号：６７及び６９）の見かけの親和性を測定した。先ず、ビオチン化したキメライヌＭａｂ Ａ ｖ２及びキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２をストレプトアビジンセンサーチップに結合させた。次に、Ｍａｂ結合センサーチップへの組換えイヌパルボウイルスＣＰＶ２ｂカプシド（Ａｄｖａｎｃｅｄ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｃ Ｃａｔ＃８－ＣＰＶ）の結合性を評価した。

【0133】

キメライヌＭａｂ Ａ ｖ２及びキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２抗体は、それぞれ、治療活性に潜在的に十分な動態でイヌＣＰＶ ２ｂ ＶＬＰに対して親和性を示した。結合分析は、次のようにＯｃｔｅｔバイオセンサーを使用して実施した。簡単に説明すると、キメライヌＭａｂ Ａ ｖ２（配列番号：２４及び２５）及びキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２（配列番号：６７及び６９）をアミン化学によってビオチン化した。遊離の未反応ビオチンを、本格的な透析によって除去した。ビオチン化キメライヌＭａｂ Ａ ｖ２及びキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２を、ストレプトアビジンセンサーチップに捕捉した。Ｍａｂ Ａ ｖ２又はＭａｂ Ｂ ｖ２とイヌＣＰＶ ２ｂ ＶＬＰ（４０μｇ／ｍＬ）の何れかの会合を３００秒間モニターした。解離を３００秒間モニターした。ビオチン化された無関係のイヌＩｇＧ－Ｂを陰性対照として使用した。ＦｏｒｔｅＢｉｏ^ＴＭデータ解析ソフトウェアを使用してデータを１：１結合モデルに適合させ、ｋｏｎ、ｋｏｆｆ、及びＫｄを決定した。希釈及び全ての結合工程のための緩衝液は、２０ｍＭのリン酸、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．２であった。キメライヌＭａｂ Ａ ｖ２とＶＬＰ２ｂのＫｄは９．７８×１０^－１１Ｍであり、キメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２とＶＬＰ２ｂのＫｄは９．３８×１０^－１２Ｍであった（図２を参照）。

【0134】

実施例７
Ｍａｂ Ａ ｖ２及びＭａｂ Ｂ ｖ２のイヌ化
潜在的な免疫原性を低減するために、特に抗体Ａ又はＢの反復投与が必要な場合、Ｍａｂ Ａ ｖ２及びＢ ｖ２からのＶＨ及びＶＬをイヌ化に供した。多数のイヌ化されたＶＨ及びＶＬをデザインし、発現させ、精製した。ＣＰＶ２ｂ ＨＩアッセイを使用して、比活性に対して優れた発現体を選択した。イヌ化Ａ ＨＣ ｖ３ ＩｇＧ－Ｂ（配列番号：３７）及びイヌ化Ａ ＬＣ κ（配列番号：３９）並びにイヌ化Ａ ＨＣ ｖ４ ＩｇＧ－Ｂ（配列番号：３８）及びイヌ化Ａ ＬＣ κ（配列番号：３９）が、キメラＡ ＨＣ ＩｇＧ－Ｂ（配列番号：２３）及びキメラＡ ＬＣ κ（配列番号：２５）と比較して、並びにキメラＡ ＨＣ ｖ２ ＩｇＧ－Ｂ（配列番号：２４）及びキメラＡ ＬＣ κ（配列番号：２５）と比較して、十分な活性を維持した。イヌ化Ｂ ＨＣ ｖ３ ＩｇＧ－Ｂ（配列番号：７９）及びイヌ化Ｂ ＬＣ ｖ３ κ（配列番号：８０）は、キメラＢ ＨＣ ＩｇＧ－Ｂ（配列番号：６６）及びキメラＢ ＬＣ κ（配列番号：６８）と比較して、並びにキメラＢ ＨＣ ｖ２ ＩｇＧ－Ｂ（配列番号：６７）及びキメラＢ ＬＣ ｖ２ κ（配列番号：６９）と比較して、十分な活性を維持した。

【0135】

実施例８
ネコキメラＭａｂ Ａ及びＭａｂ Ｂ
キメライヌＭａｂ Ａ ｖ２（配列番号：２４及び２５）及びキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２（配列番号：６７及び６９）は、ネコパルボウイルスＨＩアッセイにおいて活性を示した。２００μｇ／ｍＬのキメライヌＭａｂ Ａ ｖ２は、２６２１４４のネコパルボウイルスＨＩを示し、２００μｇ／ｍｌのキメライヌＭａｂ Ｂ ｖ２は、１３１０７２のネコパルボウイルスＨＩを示した。

【0136】

従って、Ｍａｂ Ａ及びＭａｂ Ｂは、ネコパルボウイルス（汎白血球減少症ウイルス）の予防又は治療に使用することができる。更に、キメラネコＭａｂ Ａ可変重鎖及びネコＩｇＧ－１を、キメラネコＭａｂ Ａ可変軽鎖及びネコカッパ（配列番号：３１及び３２）と対になるようにデザインした。潜在的な不均一性を除去するために、グリコシル化部位を除去する変異を導入して、キメラネコＭａｂ Ａ－ＩｇＧ１を非グリコシル化カッパと対にすることができる（例えば、配列番号：３１及び３３）。

【0137】

更に、キメラネコＭａｂ Ｂ可変重鎖及びネコＩｇＧ－１を、キメラネコＭａｂ Ｂ可変軽鎖及びネコカッパ（配列番号：７４及び７５）と対になるようにデザインした。グリコシル化部位を除去する変異を導入して、キメラネコＭａｂ Ａ－ＩｇＧ１を非グリコシル化カッパと対にすることができる（例えば、配列番号：７４及び７６）。

【0138】

実施例９
子犬における安全性と薬力学
キメライヌＭａｂ Ａ（配列番号：２３及び２５）及びキメライヌＭａｂ Ｂ（配列番号：６６及び６８）モノクローナル抗体を使用して、インビボ研究を実施した。この研究の目的は、目的を持って飼育された、ワクチン未接種の健康な子犬において二種の抗体による処置後の、安全性、イヌパボウイルス－２（ＣＰＶ－２）力価に対するキメライヌＭａｂ Ａ及びキメライヌＭａｂ Ｂの効果、ウイルス中和、及び一価修飾生ワクチンへの応答を評価することであった。以下の表４の研究デザインのまとめを参照のこと。

【0139】

【0140】

無作為化後、子犬を二グループ（３Ｍａｂ Ａ（イヌＩＤ ＢＤＷ－８、ＤＥＷ－８、及びＤＦＷ－８）：３Ｍａｂ Ｂ（イヌＩＤ ＣＴＷ－８、ＣＷＷ－８、及びＤＨＷ－８））に割り当てた。子犬に、研究０日目に、それぞれの抗体を、毛刈りして準備した橈側皮静脈を介して単一の静脈内用量（５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。最初は８０以下の力価で子犬に一価ＣＰＶワクチンのＮｏｂｉｖａｃ １－Ｐｖ（Merck Animal Health, Kenilworth, NJ）を投与した。２回目の用量は最初の投与の２１日後に投与した。２回目の投与の約２１日後に子犬がセロコンバージョンしなかった場合は３回目の用量を投与した。

【0141】

子犬を、赤血球凝集抑制（ＨＩ）及びウイルス中和（ＶＮ）を使用して、合計１００日間モニターした。ＨＩは血清サンプル中の抗体量を定量化し、ＶＮは、生ウイルスが細胞に感染して破壊するのを防ぐ抗体の能力を決定するために利用される。子犬をまたＣＰＶワクチン接種後にセロコンバージョンしたかどうかを決定するために追跡した。

【0142】

全ての子犬は、Ｍａｂ Ａ又はＢ抗体の静脈内投与前の０日目に２０未満のＨＩ力価を有していることが検証された。Ｍａｂ Ａ又はＢの投与後の１日目のＨＩ力価は、２５６０と５１２０の間であった。力価を１００日間モニターして、抗体の分解を文書化し、血清半減期を評価した。

【0143】

個々の子犬の力価が１：４０まで低下し始めた３７日目に、ワクチン接種が、ワクチン接種のＣＰＶ－２の中和を評価するために施され始めた。Ｍａｂ Ａ又はＢ抗体は、子犬において様々なレベルで免疫化をブロックすることが文書化された。子犬にはスケジュール通りにワクチン接種のその後の投与を与え、応答を検証した。ワクチン接種のセロコンバージョンは、最終的に６匹の子犬のうち５匹で発生した。両グループの動物のＨＩアッセイ力価は、以下の表５、及び図３Ａ（Ｍａｂ Ａグループ）、図３Ｂ（Ｍａｂ Ｂグループ）、及び図３Ｃ（両方のグループを組み合わせたもの）に反映されている。

【0144】

時間の関数としてＨＩを使用して、高速分布及び低速相減衰を得るために、二相減衰動態を使用した。キメライヌＭａｂ Ａの半減期は１０．１日であり（図４Ａ）、キメライヌＭａｂ Ｂの半減期は８．６日であった（図４Ｂ）。血清ＶＮアッセイは、ＨＩ力価を写していた（以下の表６を参照）。半減期は母性由来の抗体とほぼ一致する。（Carmichael, LE, Joubert, JC and Pollock, RVH; “A Modified Live Canine Parvovirus Vaccine. II. Immune Response;” Cornell Vet, Volume 73, Pages 13-29; 1983）。

【0145】

この最初の薬力学的研究は、静脈内投与されたキメライヌＭａｂ Ａ（配列番号：２３及び２５）及びキメライヌＭａｂ Ｂ（配列番号：６６及び６８）が、投与後２４時間以内に２５６０と５１２０の間の初期抗体力価をもたらしたことを実証する。加えて、ＶＮはＨＩ力価に非常に厳密に従う。抗体のおおよその半減期は７日から１０日の間である。免疫の持続期間（すなわち、ＨＩ力価が８０以上に維持された持続期間）は、キメライヌＭａｂ Ａ又はキメライヌＭａｂ Ｂの一回の投与後３０～４２日の範囲であった。ワクチン接種での干渉は、抗体がワクチン接種ＣＰＶ－２を中和しなくなるほど十分に分解するまで可能性がある。キメライヌＭａｂ ＡとキメライヌＭａｂ Ｂは両方とも力価が高く、耐容性が良好で、有害事象や注射部位反応は報告されなかった。

【0146】

最初のＣＰＶワクチン接種は、潜在的にワクチンを中和する残留キメライヌＭａｂ Ａ又はＢ抗体のために、６匹中５匹の子犬においてセロコンバージョンをもたらさなかった。イヌＭａｂ Ａ又はキメライヌＭａｂ Ｂの両方によるワクチンウイルス複製の遮断は、インビトロ中和データとの最初のインビボ相関であった。その後、３匹の子犬が２回目のワクチン接種後にセロコンバージョンし、１匹が３回目のワクチン接種後にセロコンバージョンした。

【0147】

子犬のＣＷＷ－８に関して、５６日目のセロコンバージョンは、３７日目に投与されたワクチン接種の時間枠と相関しなかった。本研究において他の子犬から排出されたワクチンウイルスがＣＷＷ－８を曝露し、力価が２０未満になるとセロコンバージョンを引き起こしたと疑われる。

【0148】

【0149】

【0150】

実施例１０
予防と治療
このインビボ研究では、ＭａｂＡ ｖ２抗体を利用した。この研究の目的は、ＭａｂＡ ｖ２の将来の重要な研究においてイヌに曝露するために使用される生ＣＰＶ－２の用量を検証し、ＣＰＶ－２感染を予防する予防的処置としてとＣＰＶ－２感染のイヌの治療的処置としての両方の二つの適応症に対するＭａｂＡ ｖ２の概念実証を提供することであった。以下の表７の研究デザインのまとめを参照のこと。

【0151】

【0152】

１２匹のイヌを無作為化し、各グループに雄と雌を含む６グループの一つに割り当てた。グループ１－３には、３つの異なるウイルスログで必要とされる罹患率と死亡率を生成するために必要とされる用量を検証するために、生ＣＰＶ－２曝露だけを施された。グループ４及び５のイヌには、生ＣＰＶ－２ｂの接種前に、予防的処置としてＭａｂ Ａ ｖ２を投与した。グループ６のイヌには、曝露後にＭａｂ Ａ ｖ２が投与され、糞便ケージサイドＥＬＩＳＡ ＳＮＡＰ試験によってＣＰＶ－２感染の発生を確認した。ＣＰＶ－２接種曝露スケジュールについては、表８（下記）を参照のこと。

【0153】

【0154】

以下の表９に従って、グループ４及び５に、研究１日目にＭａｂＡ ｖ２を投与した。

【0155】

【0156】

各子犬がパルボウイルス感染を確認する糞便中のＣＰＶ－２を確かにするケージサイドＣＰＶ－２ ＥＬＩＳＡ試験での陽性になった後、グループ６に、研究７日目にＭａｂ Ａ ｖ２を投与した。以下の表１０を参照のこと。

【0157】

【0158】

この研究は、皮下投与されたＭａｂＡ ｖ２に関する最初の薬力学的データを提供した。グループ４のイヌに静脈内投与された用量は、予測されたようにＨＩ力価の瞬間的な上昇をもたらした。グループ５のイヌに皮下投与された用量は、２４時間にわたって同等の力価をもたらした。以下の表１１では、ＭａｂＡ ｖ２投与後のＨＩ力価ピークが達成されたタイミングで静脈内投与と皮下投与がどのように異なるかを見ることができる。

【0159】

以下の表１２に示されるように、ＭａｂＡ ｖ２の投与により、投与後２４時間（ＩＶ）及び４８時間（ＳＣ）以内にイヌにおいて循環抗体力価が生じた。高負荷の病原性曝露に直面して、保護的受動抗体力価が１６日間維持された。

【0160】

【0161】

【0162】

１日目に、グループ４及び５に、それぞれ、ＭａｂＡ ｖ２を静脈内又は皮下的に投与した。４日目に、６グループ全ての１２匹のイヌ全てに、表８の接種用量ごとに病原性ＣＰＶ－２を鼻腔内投与した。合計１４日間、一般的健康観察（ＧＨＯ）を記録するためにイヌを６時間ごとにモニターし、１２時間ごとに臨床スコア（検証済みシステム、Mohr等, 2003による）を文書化し、及び血液学検査、ＨＩ、及びＶＮ、並びに糞便赤血球凝集アッセイ（ＨＡ）のために血液の頻繁なサンプリングを行った。加えて、パルボウイルス感染がいつ存在していたかを評価するために陽性と判定されるまで、接種後毎日、全てのイヌにケージサイドＣＰＶ－２ ＥＬＩＳＡ試験を実施した。表１３は、研究中に観察されたＣＰＶ－２の臨床徴候をまとめたものである。

【0163】

【0164】

グループ３及び６のイヌ（１０^６個の生ＣＰＶ－２に曝露され、ＭａｂＡ ｖ２で事前に処置されていないイヌ）は、接種後３日目又は４日目にケージサイドＣＰＶ－２ ＥＬＩＳＡ試験で陽性を示した。グループ３（事実上対照グループ）の両方のイヌは、鬱病、嘔吐、血性下痢、進行性脱水症を含むパルボウイルス感染の深刻な古典的臨床徴候を発症し、瀕死になり、接種後７日までに安楽死させた。グループ６の両方のイヌは、生ＣＰＶ－２を接種してから３日後にケージサイドＣＰＶ－２ ＥＬＩＳＡ試験で陽性を示した。ケージサイドＣＰＶ－２ ＥＬＩＳＡ試験が陽性であることを確認した後、イヌを続いて５ｍｇ／ｋｇの静脈内Ｍａｂ Ａ ｖ２で処置した。イヌは追加の補助的又は支持的なケアを受けなかった。

【0165】

グループ３のイヌは、病気が悪化し続け、最終的に瀕死状態になり、人道的に安楽死させたが、グループ６のイヌは生存し、研究期間中に完全な臨床的回復を示した。グループ６のイヌはまたケージサイドＣＰＶ－２ ＥＬＩＳＡ試験で陰性に戻ったが、これはイヌがウイルス粒子を放出しなくなったことを示している。

【0166】

予防的処置としてＭａｂ Ａ ｖ２を投与されたグループ４及び５の全てのイヌは、生存しただけでなく、健康を維持した（例えば、ケージサイドＣＰＶ－２ ＥＬＩＳＡが陽性になったことはなく、パルボウイルス感染の臨床徴候を示したことはなかった）。

【0167】

予定された研究完了時の人道的安楽死後のグループ３－６の解剖学的病理組織診断を、人道的理由のために安楽死を早期に実施しない限り、実施した。グループ４及び５は、有意な病理学的変化を示さなかった。グループ６は胸腺のリンパ球枯渇を示したが、検査した他の臓器は正常であった。グループ３は、全てのリンパ器官のリンパ系枯渇、ＣＰＶ－２感染を示す軽度から重度の陰窩壊死を伴う中等度から重度の小腸絨毛萎縮／壊死を示した。

【0168】

この試験的概念実証研究では、Ｍａｂ Ａ ｖ２が予防的及び治療的介入として有望であることが実証された。予防群（ｎ＝４）の全てのイヌが、パルボウイルス感染を発症することはなく、臨床的に正常なままであった。パルボウイルスに感染したことが確認された治療群（ｎ＝２）の全てのイヌが、他の補助的又は支持的治療なしでＭａｂ Ａ ｖ２を投与された後、生存し、完全な臨床的回復を経験した。この研究ではまた、予防のためのＭａｂ Ａ ｖ２の皮下投与が実行可能な選択肢であることを検証した。最後に、この製剤は耐容性が高く、有害事象や注射部位反応はなかった。この概念実証研究において、曝露前のＭａｂ Ａ ｖ２の予防的投与により、子犬の１００％がＣＰＶ－２感染から保護された。加えて、ＣＰＶ感染確認後にＭａｂ Ａ ｖ２の治療的投与を受けた子犬の１００％が生き残り、回復した。

【0169】

実施例１１
治療的処置の中心的有効性研究
この中心的研究は、イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）疾患の治療剤としてのＭａｂ Ａ ｖ２の有効性を評価する。この研究の満足のいく完了と有効性の実証は、「この製剤は、イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）疾患に対する１３週齢以上のイヌの治療に有効であることが示された」というラベルの主張を裏付けうる。

【0170】

このＧＣＰ、無作為化、盲検化、プラセボ対照試験は、少なくとも７日間の順化期間の後、１４日間の長さである。合計２８匹のナイーブ、ＣＰＶ－２力価陰性のイヌ（０日目で１３週齢以下、任意の性別、体重１．５ｋｇ以上）が、表１４のように、二グループ（グループ１ではｎ＝２１匹のイヌ、グループ２ではｎ＝７匹）に３：１の比率での研究に無作為化される。

【0171】

順化中、イヌは、一般的な蠕虫及びコクシジウム感染を排除するために駆虫薬及び抗生物質を投与されながら、給餌、飼育及び取り扱い手順に順化される。

【0172】

ＣＰＶ－２ｂ曝露の日は０日目と見なされる。０日目に、グループ１及び２の全てのイヌに、約１×１０^６のＴＣＩＤ_５０の鼻腔内（ＩＮ）（約１ｍＬの容量；鼻孔当たり約０．５ｍＬ）用量で病原性ＣＰＶ－２ｂを投与する。糞便中にＣＰＶを検出した同じ日に（ケージサイドＣＰＶ ＳＮＡＰ試験が陽性）、各イヌに、ルアーロックシリンジを使用してアクセス可能な静脈（例えば、橈側皮）カテーテルに静脈内（ＩＶ）注射によりＭａｂ Ａ ｖ２又は対照製剤（Control Product）（ＣＰ；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））を投与する。Ｍａｂ Ａ ｖ２は、体重に基づいて５ｍｇ／ｋｇの単一用量で投与する。ＣＰのｐＨは７．２±０．２である。Ｍａｂ Ａ ｖ２Ｍａｂ Ａ ｖ２及びＣＰの用量は次のように計算される：
｛（ｋｇでの体重）×（５ｍｇ／ｋｇ）｝÷｛２５ｍｇ／ｍＬ｝＝注射されるｍＬでの容量

【0173】

表１５に概略が示された予定時間に、個々のイヌの健康状態を、身体検査（ＰＥ）、一般的健康観察（ＧＨＯ）、直腸温（ＲＴ）の測定、ケージサイドＣＰＶ ＳＮＰ試験、血清ＨＩ、糞便赤血球凝集アッセイ（ＨＡ）、血清生化学検査、及び血液学検査で、１４日間綿密にモニターする。

【0174】

主要有効性変数は、グループ１のイヌ対グループ２のイヌにおけるＣＰＶ感染による死亡の防止である。

【0175】

以下の表１４の処置グループを参照のこと。

【0176】

【0177】

無作為化 この研究では、二段階の無作為化が必要になる場合がある。最初の段階は、どの２８匹のイヌが研究に登録されるかを決定することである。次に、イヌを、グループ１及び２に対してそれぞれ３：１の比率で、可能であれば同腹仔に基づいてブロックサイズ４で無作為化する。無作為化は、シード番号を用いた無作為化選択方法を使用して、ＳＡＳ（バージョン９．４以降, SAS Institute, Cary NC）のＰＬＡＮ手順によって生成した乱数に基づく。
試験施設への到着後、イヌを到着順に２部屋のケージに入れ、同じ同腹仔／ブロックのイヌは可能であれば同じ部屋に留める。イヌは、感染したイヌから排出されたウイルスに二次的に曝露される可能性がある。両方の処置グループで類似レベルの二次ウイルス曝露を維持し、試験施設の人員への盲検化を維持するために、各部屋には両方の処置グループが含まれる。２８匹のイヌを選択した後、それらのケージに１から２８まで順に番号を付ける。同じ同腹仔のイヌは隣接するケージ番号であり、４匹の同腹仔が、部屋ごとに早い番号（例えば１－４、５－８など）を取る。一方の部屋にはケージ番号１－１２が含まれ、他方の部屋にはケージ番号１３－２８が含まれるべきである。イヌは無作為化リストのケージ番号順に登録する。

【0178】

研究盲検化 治験責任医師及び他の全ての試験施設人員（分配者及び投薬のためにイヌを拘束する指定された一人を除く）は、０日目の実際の処置グループの割り当てについての知識を持っていない。分配者及び投薬中にイヌを拘束するための指定された人員だけが、各イヌの実際の処置グループの割り当て（Ｍａｂ Ａ ｖ２又はＣＰ）にアクセスできる。分配者とイヌの拘束者／ホルダーは、何ら研究評価を実施しない。

【0179】

仕様 合計で少なくとも３０匹の目的を持って飼育された、ワクチン未接種のＣＰＶ－２血清陰性（ＨＩ＜２０）の健康なビーグル犬が調達される。イヌは、試験施設に到着すると、ＣＰＶ ＳＮＡＰ試験によってＣＰＶ陰性であることが確認される。研究登録には２８匹のイヌが含まれるが、スクリーニングと順化後にイヌの数が確実に満たされるように、更に２匹のイヌが購入される。理想的には、３０匹のイヌは、７匹の同腹仔で同腹仔当たり４匹と、別の同腹仔（部分的な同腹仔）から２匹のイヌで構成される。

【0180】

中心的な効力の決定 中心的な有効性シリアルは、後続のシリアルの放出効力を設定し、各シリアルは、放出に十分であると見なされるために、効力アッセイと比較して、中心的な有効性シリアルの効力であるかそれ以上である必要がある。効力アッセイのマスター参照を設定するために、参照モニタリングアッセイを使用して、中心的な有効性シリアルが試験される。試験は、試験犬に投与された最初の有効用量について、投与の０±７日目に行われる。

【0181】

［観察］

【0182】

身体検査（ＰＥ） 身体検査は、少なくとも－７、－１日目、Ｍａｂ Ａ ｖ２／ＣＰ投与日、１３日目、及び必要に応じて予定外の日に、試験施設の獣医師によって全てのイヌに対して実施される。身体検査には、水分補給状態やＢＷを含む全ての体組織の包括的な評価が含まれ、記録される。

【0183】

食物消費 一日１回、一般的健康観察（ＧＨＯ）と併せて、食物消費の定性的評価が行われる。観察された食物消費における全ての異常が記録される。

【0184】

一般的健康観察（ＧＨＯ）及び直腸温（ＲＴ）の測定 ＧＨＯは、試験施設の獣医師又はその被指名人によって、－７日目から－１日目までの順化期間中に少なくとも一日１回行われる。ＧＨＯは、０日目に始めて１２日目まで１２時間（±１時間）毎に行われる。０日目に始めて、各ＧＨＯと組み合わせて、華氏スケールの校正済み温度計を使用してＲＴもまた測定される。

【0185】

これらの４つのパラメータに関して特定のＧＨＯ情報が収集される。
・態度－正常、軽度から中等度の鬱病、重度の鬱病、又は虚脱状態又は瀕死状態として記録される
・食欲ー正常、自発的に少量を食べる、食物に興味がない、又は提供されないと記録される
・嘔吐－なし、軽度（１２時間に一回）、中程度（１２時間に２－５回）、又は重度（１２時間に６回以上）として記録される
・糞便－形の良い又はなし、軟らかい又はペースト状糞便、水様の非血性下痢、又は水様の血性下痢として記録される
ＧＨＯには、これら４つのパラメーターに加えて他の所見も含まれる場合がある。これらのパラメーターは、各観察期間で各イヌについて文書化される。

【0186】

ケージサイドＣＰＶ ＳＮＡＰ試験 ケージサイドＣＰＶ ＥＬＩＳＡ試験が、製造元の説明書に従ってＩＤＥＸＸ ＣＰＶ ＳＮＡＰ試験を使用して実施される。ベンダーから－７日目に到着すると、全てのイヌに対して予備的ＣＰＶ ＳＮＡＰ試験が実施され、イヌにアクティブなＣＰＶ感染がないことが確認される。その後のＣＰＶ ＳＮＡＰ試験は、－１日目から試験終了までの朝の一貫した時間に評価される。万が一、イヌがＣＰＶ ＳＮＡＰ試験で陽性と判定されず、従ってＭａｂ Ａ ｖ２／ＣＰを投与されなかった場合、そのイヌは有効性分析から除外される。

【0187】

血清ＣＰＶ－２赤血球凝集（ＨＩ）試験 全血サンプルが、全てのイヌから頸静脈、橈側皮静脈、又は外側伏在静脈を介して血清分離管に収集され（約１．５ｍＬ）、－７、０、３、４、６、８、１０、及び１３日目に血清に処理され、０日目のサンプルは病原性ＣＰＶ－２ｂに曝露される前に収集される。サンプルは予定外の安楽死の前にも収集される。サンプルは在庫管理され、検査室の治験医師までドライアイスでできるだけ早い機会に出荷される。サンプルは、出荷まで凍結状態（－６０℃以下）で保管される。データが記録される。

【0188】

糞便ＣＰＶ－２赤血球凝集アッセイ（ＨＡ）試験 バルク糞便サンプルが、０日目から研究終了まで各イヌから収集される。バルク糞便は各イヌから５０ｍＬチューブに集められ、個別に凍結され、ＣＰＶ ＳＮＡＰ試験結果を検証し、４つのＣＰＶ－２ｂ感染基準の一つを満たすために糞便ＨＡ試験のために保管される。結果の精度とサンプルサイズを最大にするために、ＨＡ試験の前に糞便サンプルを均質化する。糞便の収集、保管、及び輸送の手順は、検査室の治験医師の指示に従う。データが記録される。

【0189】

ＣＰＶ－２ｂ感染基準 ＣＰＶ感染の基準は、９ＣＦＲセクション１１３．３１７、（ｃ）、（３）、（ｉ）に準拠している。この規制は、アクティブなＣＰＶ感染の４つの基準を定める。有効なＣＰＶ－２ｂ曝露は、４つの基準のうち３つを引き起こし、又は７匹のＣＰ犬のうち少なくとも４匹で死亡に至るはずである。９ＣＦＲセクション１１３．３１７の定義によると、パルボウイルスの４つの基準は次の通りである：
・体温≧１０３．４°Ｆ
・曝露前の正常値の５０％以上のリンパ球減少
・糞便中の下痢、粘液及び／又は血
・糞便の１：５希釈で１：６４以上のレベルのウイルス性赤血球凝集素（又は同等の感度の試験）
これらの４つの基準は、直腸温（ＲＴ）、リンパ球数をモニターするための特定された間隔での血液学検査、及び糞便ＨＡを介して検証される結果で毎日実施されるＣＰＶ ＳＮＡＰ試験を含む、１２時間ごとのＧＨＯを介して全てのイヌで毎日モニターされる。曝露後、ＣＰＶ感染により死亡した何れかのグループのイヌは、ＣＰＶ感染による死亡と見なされる。瀕死と見なされ、救助条項によって安楽死させなければならないイヌもまたＣＰＶ感染による死亡と見なされる。

【0190】

臨床病理学（血液学及び臨床生化学） －７日目に、ベースラインの全血球数（ＣＢＣ）と生化学的側面を評価して、イヌが健康であり、既存の病状がないことが確認される。－１、０、３、４、５、６、７、８、１０及び１３日目に、血リンパ球数をモニターするＣＢＣのために採血される。サンプルは毎朝の一定の時間に収集され、記録される必要がある。血液学検査のために約０．５ｍＬの血液が収集され、臨床生化学検査のために、任意のアクセス可能な静脈（例えば、頸静脈、橈側皮静脈、又は側伏在静脈）を介して約１ｍＬの血液が収集される。全てのサンプルを分析してＣＢＣデータをリアルタイムで評価し、９ＣＦＲ１１３．３１７に基づくアクティブなＣＰＶと一致する４つの臨床徴候の一つであるリンパ球減少症が発生したかどうかを判断する。

【0191】

［有効性アウトカム］

【0192】

主要アウトカム 主要有効性変数は、ＣＰＶに誘発される死亡である。Ｍａｂ Ａ ｖ２及びＣＰグループの死亡率が計算される。Ｃｏｃｈｒａｎ－Ｍａｎｔｅｌ－Ｈａｅｎｓｚｅｌ法（ＳＡＳ，ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣａｒｙＮＣ、バージョン９．４以降のＦＲＥＱ手順）を使用して、層化変数として部屋を用いて、防止率（ＰＦ）と９５％信頼限界の下限を計算して、Ｍａｂ Ａ ｖ２グループをＣＰグループと比較する。データ（例えば、１００％Ｍａｂ Ａ ｖ２生存率）のためにＰＦを生成できず、結果が部屋間で均一である場合、層化変数として部屋を用いないで同じ分析が行われる。ＰＦの９５％信頼限界の下限が＞０であり、ＣＰグループの死亡率がＭａｂ Ａ ｖ２グループよりも高い場合、主要有効性エンドポイントが満たされる。Ｍａｂ Ａ ｖ２／ＣＰ犬の死亡率は、ＣＰＶ感染による死亡、又は瀕死と見なされ、救助条項によって安楽死させなければならないイヌとして定義される。万が一、イヌがＣＰＶ ＳＮＡＰ試験で陽性と判定されず、従ってＭａｂ Ａ ｖ２／ＣＰを投与されなかった場合、そのイヌは有効性分析から除外される。

【0193】

救助条項 個々のイヌが試験施設の獣医師によって瀕死状態にあると見なされた場合、彼らは救助条項によってそのイヌを研究から除外し、安楽死を選択することができる。人道的な理由で研究から除外されたイヌは、安楽死の理由がＣＰＶと無関係でない限り、「死亡率」として有効性評価に含められる。

【0194】

イベントのスケジュールを以下の表１５に提供する。

【0195】

【0196】

次は、イヌパルボウイルス曝露接種手順である：
１．曝露材料が投与される約１２時間前に食物を取り除く。水は引き続き利用できる。
２．曝露材料を超低温（－８０℃）冷凍庫から取り出し、使用の約１時間前に室温で解凍する。
３．取り扱いエラーの場合に備えてバックアップ用量を確保するために、５つの余分なアリコートを解凍する。
４．使用するまで曝露材料を湿った氷上に保持する。
５．シリンジ一用量で一度に１ｍＬのアリコート曝露材料を調製する。
６．鼻カニュラ付きのシリンジ（針なし）を使用して、各鼻孔に０．５ｍＬを投与する。
７．拘束は手作業による；鎮静剤は必要ない。
８．飼育係が、投薬中に鼻を僅かに上げた状態でイヌの頭を持ち上げる。
９．イヌが飲み込んで快適になるまで、各鼻孔の間に数秒の時間を置く。
１０．幾らかの曝露材料が鼻孔から排出される場合があることを予想のこと。
１１．投薬が完了したら、イヌＩＤ、日付及び時刻を動物曝露記録に記録する。
１２．投薬後直ぐに全てのイヌに食物を戻す。
１３．未使用の曝露材料を－８０℃の冷凍庫に戻し、「保持アリコート、日付」のラベルを付ける。
１４．研究終了までアリコートを保持し、検査室の治験医師に戻す。

【0197】

次は、バルク糞便収集手順である：
１．最も異常と思われる個々の糞便パイル（又はパイル片）を選択する。
２．別個の木製舌圧子を使用して、各個々のイヌから最大数グラムの糞便を収集するー一日１匹のイヌにつき一回収集。下痢の多い糞便はシリンジを使用して収集する必要がある場合がある。
３．糞便を５０ｍＬのコニカルプラスチック製遠心チューブに入れる。チューブは半分以下が満たされている必要がある。
４．イヌＩＤと日付のラベルを付ける。
５．日付と処置グループごとにグループ化して、プラスチック製の冷凍バッグに保管する。
６．検査室の治験医師に出荷されるまで、－８０℃で凍結する。
７．収集期間の終わりに、収集した全ての糞便をドライアイスで輸送し、一晩かけて検査室治験医師まで到達させる。

【0198】

実施例１２
予防の中心的有効性の研究
この中心的研究の目的は、イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）感染の臨床徴候を予防するための予防的治療としてのＭａｂ Ａ ｖ２の有効性を評価することである。

【0199】

この研究の満足のいく完了及び有効性の実証は、「この製剤は、イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）疾患に対する１３週齢以上の健康なイヌの受動免疫に有効であることが示された」というラベルの主張を裏付けうる。

【0200】

このＧＣＰ、無作為化、盲検化、プラセボ対照試験は、少なくとも７日間の順化期間の後、１４日間の長さである。合計２５匹のナイーブ、ＣＰＶ－２血清陰性（ＣＰＶ赤血球凝集抑制（ＨＩ）力価＜２０）のイヌが、表１６のように、二グループ（グループ１ではｎ＝２０匹のイヌ、グループ２ではｎ＝５匹）に無作為化される。イヌは、０日目に１３週齢以下で、性別を問わず、到着時の体重は１．５ｋｇ以上で、健康状態が良好であり、試験開始時に病気の臨床徴候はない。

【0201】

順化中、イヌは、一般的な蠕虫及びコクシジウム感染を排除するために駆虫薬及び抗生物質を投与されながら、給餌、飼育及び取り扱い手順に順化される。

【0202】

０日目に、全てのイヌに、割り当てられたＭａｂ Ａ ｖ２（グループ１）又は対照製剤［ＣＰ；グループ２；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）］を皮下（ＳＣ）注射により投与する。Ｍａｂ Ａ ｖ２は、体重に基づいて５ｍｇ／ｋｇの単一用量で投与する。ＣＰのｐＨは７．２±０．２で、グループ１に等しい容量で投与される。Ｍａｂ Ａ ｖ２及びＣＰの用量は次のように計算される：
｛（ｋｇでの体重）×（５ｍｇ／ｋｇ）｝÷｛２５ｍｇ／ｍＬ｝＝注射されるｍＬでの容量

【0203】

局所及び全身の安全性データが、０日目（処置後）から２日目まで収集される。３日目に、グループ１及び２の両方からの全てのイヌに、約１×１０^６ＴＣＩＤ_５０／ｍＬの用量で鼻腔内（ＩＮ）（鼻孔当たり約０．５ｍＬに等しい容量）に病原性ＣＰＶ－２ｂを投与する。

【0204】

表１７に概略が示された予定時間に、個々のイヌの健康状態を、身体検査（ＰＥ）、直腸温（ＲＴ）の測定、ケージサイドＣＰＶ－２ ＥＬＩＳＡ ＩＤＥＸＸ ＳＮＡＰ試験（ＣＰＶ ＳＮＡＰ試験）、血清赤血球凝集抑制アッセイ（ＨＩ）、糞便赤血球凝集アッセイ（ＨＡ）、及び血液学検査で、１４日間綿密にモニターする。

【0205】

主要有効性変数は、９ＣＦＲセクション１１３．３１７、（ｃ）、（３）、（ｉ）の基準によって定義されるグループ１のイヌにおけるＣＰＶ感染の予防である：
・体温≧１０３．４°Ｆ
・ＣＰＶ－２ｂ曝露前の正常値の５０％以上のリンパ球減少
・糞便中の下痢、粘液及び／又は血
・糞便の１：５希釈で１：６４以上のレベルのウイルス性赤血球凝集素（又は同等の感度の試験）

【0206】

グループ２（ＣＰ）犬の少なくとも８０％が、９ＣＦＲセクション１１３．３１７、（ｃ）、（３）、（ｉ）に概略が記載された４つの基準のうちの少なくとも３つを有し、かつ少なくとも１９匹のＭａｂ Ａ ｖ２で処置されたイヌが生きたままであり、４つの可能な臨床徴候の≦１を示すならば、有効性が実証される。

【0207】

以下の表１６の処置グループを参照のこと。

【0208】

【0209】

無作為化 この研究では、二段階の無作為化が必要になる場合がある。最初の段階は、どの２５匹のイヌが研究に登録されているかどうかを決定することである。次に、イヌを、グループ１及び２に対してそれぞれ４：１の比率でブロックサイズ５で無作為化する。無作為化は、シード番号を用いた無作為化選択方法を使用して、ＳＡＳ（バージョン９．４以降, SAS Institute, Cary NC）のＰＬＡＮ手順によって生成した乱数に基づく。
試験施設への到着後、イヌを到着順に２部屋のケージに入れ、同じ同腹仔／ブロックのイヌは可能であれば同じ部屋に留める。イヌは、感染したイヌから排出されたウイルスに二次的に曝露される可能性がある。両方の治療グループで類似レベルの二次ウイルス曝露を維持し、試験施設の人員への盲検化を維持するために、各部屋には両方の処置グループが含まれる。２５匹のイヌを選択した後、それらのケージに１から２５まで順に番号を付ける。同じ同腹仔のイヌは隣接するケージ番号であり、５匹の同腹仔が、部屋ごとに早い番号（例えば１－５、６－１０など）を取る。一方の部屋にはケージ番号１－１０が含まれ、他方の部屋にはケージ番号１１－２５が含まれるべきである。イヌは無作為化リストのケージ番号順に登録する。

【0210】

研究盲検化 治験責任医師及び他の全ての試験施設人員（分配者及び投薬のためにイヌを拘束する指定された一人を除く）は、０日目の実際の処置グループの割り当てについての知識を持っていない。分配者及び投薬中にイヌを拘束するための指定された人員だけが、各イヌの実際の処置グループの割り当て（Ｍａｂ Ａ ｖ２又はＣＰ）にアクセスできる。分配者とイヌの拘束者／ホルダーは、何ら研究評価を実施しない。

【0211】

仕様 合計で少なくとも２７匹の目的を持って飼育された、ワクチン未接種のＣＰＶ－２血清陰性（ＨＩ＜２０）の健康なビーグル犬が調達される。イヌは、試験施設に到着すると、ＣＰＶ ＳＮＡＰ試験によってＣＰＶ陰性であることが確認される。研究登録には２５のイヌが含まれるが、スクリーニングと順化後にイヌの数が確実に満たされるように、更に２匹のイヌが購入される。理想的には、２７匹のイヌは、５匹の同腹仔で同腹仔当たり５匹と、別の同腹仔（部分的な同腹仔）から２匹のイヌで構成される。

【0212】

［観察］

【0213】

身体検査（ＰＥ） 身体検査は、－７、０、３、１３日目、及び必要に応じて予定外の日に、試験施設の獣医師によって全てのイヌに対して実施される。身体検査には、水分補給状態やＢＷを含む、全ての体組織の包括的な評価が含まれる。

【0214】

食物消費 一日１回、一般的健康観察（ＧＨＯ）と併せて、食物消費の定性的評価が行われる。観察された食物消費における全ての異常が記録される。

【0215】

注射部位観察（ＩＳＯ） ＩＳＯは、１日目と２日目に一日１回、局所炎症の臨床徴候（例えば、紅斑、熱、腫れ）についてＭａｂ Ａ ｖ２／ＣＰの投与後４時間±１時間でなされる。反応サイズが記録される。観察された全ての異常が記録される。

【0216】

一般的健康観察（ＧＨＯ）及び直腸温（ＲＴ）の測定 ＧＨＯは、試験施設の獣医師又はその被指名人によって、－７日目から－１日目までの順化期間中に一日１回行われる。ＧＨＯは、０日目から１２日目まで１２時間（±１時間）ごとに又は予定外に行われる。０日目に始めて、各ＧＨＯと組み合わせて、華氏スケールの校正済み体温計を使用して直腸温（ＲＴ）もまた測定される。一般的健康観察には、限定されないが、一般的な身体的外見、食物又は水の消費量の異常、及び／又は嘔吐又は下痢の発生の観察が含まれる。異常な兆候のないイヌを含む全てのイヌの状態が文書化される。

【0217】

ケージサイドＣＰＶ ＥＬＩＳＡ（ＣＰＶ ＳＮＡＰ試験） ケージサイドＣＰＶ ＥＬＩＳＡ試験が、製造元の説明書に従ってＩＤＥＸＸ ＣＰＶ ＳＮＡＰ試験を使用して実施される。ベンダーから－７日目に到着すると、全てのイヌに対して予備的ＣＰＶ ＳＮＡＰ試験が実施され、イヌにアクティブなＣＰＶ感染がないことが確認される。その後のＣＰＶ ＳＮＡＰ試験は、０日目と３日目（病原性ＣＰＶ－２ｂの接種前）の朝の一貫した時間に評価され、その後、試験終了まで一日１回評価される。ＣＰＶ ＳＮＡＰ試験データが記録される。

【0218】

血清ＣＰＶ－２赤血球凝集（ＨＩ）試験 全血サンプルが、全てのイヌから頸静脈、橈側皮静脈、又は外側伏在静脈を介して血清分離管に収集され（約１．５ｍＬ）、－７、０、２、３、４、６、８、１０、及び１３日目の朝の一定の時間に血清に処理され、３日目のサンプルは病原性ＣＰＶ－２ｂが接種される前に収集される。サンプルは予定外の安楽死の前にも収集される。サンプルは在庫管理され、検査室の治験医師までドライアイスでできるだけ早い機会に出荷される。サンプルは、出荷まで凍結状態（－６０℃以下）で保管される。データが記録される。

【0219】

糞便ＣＰＶ－２赤血球凝集アッセイ（ＨＡ）試験 バルク糞便サンプルが、０日目と３日目から研究終了まで朝の一定の時間に各イヌから収集される。バルク糞便は各イヌから５０ｍＬチューブに集められ、個別に凍結され、ＣＰＶ ＳＮＡＰ試験結果を検証し、４つのＣＰＶ－２ｂ感染基準の一つを満たすために糞便ＨＡ試験のために保管される。結果の精度とサンプルサイズを最大にするために、ＨＡ試験の前に糞便サンプルを均質化する。糞便の収集、保管、及び輸送の手順は、検査室の治験医師の指示に従う。データが記録される。

【0220】

ＣＰＶ－２ｂ感染基準 ＣＰＶ感染の基準は、９ＣＦＲセクション１１３．３１７、（ｃ）、（３）、（ｉ）に準拠している。この規制は、アクティブなＣＰＶ感染の４つの基準を定める。有効なＣＰＶ－２ｂ曝露は、曝露対照犬の少なくとも８０％で４つの基準のうち３つを満たす必要がある。９ＣＦＲセクション１１３．３１７の定義によると、パルボウイルスの４つの基準は次の通りである：
・体温≧１０３．４°Ｆ
・曝露前の正常値の５０％以上のリンパ球減少
・糞便中の下痢、粘液及び／又は血
・糞便の１：５希釈で１：６４以上のレベルのウイルス性赤血球凝集素（又は同等の感度の試験）

【0221】

これらの４つの基準は、直腸温（ＲＴ）、リンパ球数をモニターするための特定された間隔での血液学検査、及び糞便ＨＡを介して検証される結果で毎日実施されるＣＰＶ ＳＮＡＰ試験を含む、１２時間ごとのＧＨＯを介して全てのイヌにおいて毎日モニターされる。

【0222】

臨床病理学（血液学及び臨床生化学） －７日目に、ベースラインの全血球数（ＣＢＣ）と生化学的側面を評価して、イヌが健康であり、既存の病状がないことを確認する。０、３、５、６、７、８、９、１０、及び１３日目に、ＣＢＣのために血液が収集され、血リンパ球がモニターされる。サンプルは毎朝の一定の時間に収集され、記録される。血液学検査のために約０．５ｍＬの血液が収集され、臨床生化学検査のために、任意のアクセス可能な静脈（例えば、頸静脈、橈側皮静脈、又は外側伏在静脈）を介して約１ｍＬの血液が収集される。全てのサンプルを分析してＣＢＣデータをリアルタイムで評価し、９ＣＦＲ１１３．３１７に基づくアクティブなＣＰＶと一致する４つの臨床徴候の一つであるリンパ球減少症が発生したかどうかを判断する。

【0223】

［有効性アウトカム］

【0224】

主要アウトカム 主要有効性変数は、９ＣＦＲセクション１１３．３１７、（ｃ）、（３）、（ｉ）の基準によって定義されているＣＰＶ感染の予防である：
・体温≧１０３．４°Ｆ
・ＣＰＶ－２ｂ曝露前の正常値の５０％以上のリンパ球減少（曝露前のー７、０及び３日目の平均）
・糞便中の下痢、粘液及び／又は血
・糞便の１：５希釈で１：６４以上のレベルのウイルス性赤血球凝集素（又は同等の感度の試験）
対照犬の８０％が９ＣＦＲ１１３．３１７に概略が記載されている４つの基準のうち３つを持ち、かつ少なくとも１９匹のＭａｂ Ａ ｖ２処置犬が生き続け、４つの可能な臨床徴候の≦１を示す場合に、有効性が確立される。

【0225】

第二アウトカム ＣＰＶ ＳＮＡＰ試験結果、血清ＨＩ力価、又はその他のパラメーターなどの二次的アウトカムが評価されうる。

【0226】

安全性アウトカム この中心的研究のイヌは、Ｍａｂ Ａ ｖ２中心的フィールド安全性研究で処置された必要な数のイヌに適用される。安全性評価は、０日目（処置後）から３日目までの全ての局所及び全身性有害事象（ＡＥ）の照合によって行われる。具体的には、イヌは、（毎日のＩＳＯによって）紅斑、熱及び腫れなどの注射部位反応と、Ｍａｂ Ａ ｖ２の投与後のアナフィラキシーを含む全身反応についてモニターされる。ＡＥデータは統計的に解析されないが、最終的な報告のために要約され、表にされる。

【0227】

重篤なＡＥ 重篤なＡＥとは、死亡に至り、生命を脅かし、持続的又は重大な障害／無能力、又は先天性異常又は先天性欠損症を引き起こすあらゆるＡＥである。治験責任医師は、重篤なＡＥの発生から２４時間以内に臨床開発マネージャーに通知する。

【0228】

イベントのスケジュールを以下の表１７に提供する。

【0229】

【0230】

次は、イヌパルボウイルス曝露接種手順である：
１．曝露材料が投与される約１２時間前に食物を取り除く。水は引き続き利用できる。
２．曝露材料を超低温（－８０℃）冷凍庫から取り出し、使用の約１時間前に室温で解凍する。
３．取り扱いエラーの場合に備えてバックアップ用量を確保するために、５つの余分なアリコートを解凍する。
４．使用するまで曝露材料を湿った氷上に保持する。
５．シリンジ一用量で一度に１ｍＬのアリコート曝露材料を調製する。
６．鼻カニュラ付きのシリンジ（針なし）を使用して、各鼻孔に０．５ｍＬを投与する。
７．拘束は手作業による；鎮静剤は必要ない。
８．飼育係が、投薬中に鼻を僅かに上げた状態でイヌの頭を持ち上げる。
９．イヌが飲み込んで快適になるまで、各鼻孔の間に数秒の時間を置く。
１０．幾らかの曝露材料が鼻孔から排出される場合があることを予想のこと。
１１．投薬が完了したら、イヌＩＤ、日付及び時刻を動物曝露記録に記録する。
１２．投薬後直ぐに全てのイヌに食物を戻す。
１３．未使用の曝露材料を－８０℃の冷凍庫に戻し、「保持アリコート、日付」のラベルを付ける。
１４．研究終了までアリコートを保持し、検査室の治験医師に戻す。

【0231】

次は、バルク糞便収集手順である：
１．最も異常と思われる個々の糞便パイル（又はパイル片）を選択する。
２．別個の木製舌圧子を使用して、各個々のイヌから最大数グラムの糞便を収集するー一日１匹のイヌにつき一回収集。下痢の多い糞便はシリンジを使用して収集する必要がある場合がある。
３．糞便を５０ｍＬのコニカルプラスチック製遠心チューブに入れる。チューブは半分以下が満たされている必要がある。
４．イヌＩＤと日付のラベルを付ける。
５．日付と処置グループごとにグループ化して、プラスチック製の冷凍バッグに保管する。
６．検査室の治験医師に出荷されるまで、－８０℃で凍結する。
７．収集期間の終わりに、収集した全ての糞便をドライアイスで輸送し、一晩かけて検査室治験医師まで到達させる。

【0232】

実施例１３
半減期の低下と抗体干渉の欠如
このインビボ研究は、インビボでのＭａｂ Ａ ｖ２の分解をモニターし、赤血球凝集抑制（ＨＩ）力価レベルがＣＰＶのワクチン株を中和するのに十分なままである持続期間を評価する。次の目的が取り上げられる：
・ 皮下（ＳＣ）投与後のＭａｂ Ａ ｖ２の半減期低下を特徴付ける
・ Ｍａｂ Ａ ｖ２がパルボウイルスに対する能動免疫を阻害しなくなる（抗体干渉の欠如、又はＬＯＡＩ）投与後の時間枠を決定する

【0233】

Ｍａｂ Ａ ｖ２の投与後のＨＩ力価の血清学的モニタリングは、分解半減期を特徴付けうる。ＬＯＡＩは、各グループ内のイヌの少なくとも８０％におけるワクチン投与後のパルボウイルスに対する能動免疫応答によって決定される。能動応答は、ＨＩによって決定されて１：８０希釈以上の抗体力価の達成を伴うベースラインの４倍の力価の増加（セロコンバージョン）として定義される。このレベルの抗体応答は、免疫研究のチャレンジによって示されるように、イヌパルボウイルスに対する免疫を提供する（Pollock及びCarmichael, JAVMA 1982 Jan 1;180(1):37-42）。

【0234】

第二に、安全性データが、処置後とＣＰＶ免疫化の前に収集され、これは、獣医療サービス覚書（ＶＳＭ）第８００．２０４号を満たすＵＳＤＡ－ＣＶＢによる３００犬の最小要件を満たすために必要とされるイヌの総数に寄与するために使用されうる。

【0235】

この研究の満足のいく完了とＣＰＶ免疫化に対するＬＯＡＩがいつ起こるかの実証は、次のことを述べる二つのラベルの主張を支持しうる：
・ 「この製剤は、イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）疾患の予防のために１３週齢以上の健康なイヌを受動免疫することが示されている。」
・ 「この製剤は、１３週齢以上のイヌのイヌパルボウイルス（ＣＰＶ）疾患の治療に有効であることが示されている。」

【0236】

以前の研究ＫＢ－０３０－ＰＫ－３０１を記述する、上記の実施例９において、Ｍａｂ Ａ ｖ２は、母性由来の抗体に非常によく似たワクチン性ＣＰＶを中和した。現在の研究は、予防的治療としてのＭａｂ Ａ ｖ２の投与後のＣＰＶワクチン接種のタイミングに関する情報を提供しうる。

【0237】

これは、健康なＣＰＶ血清陰性ビーグル犬で行われた無作為化された、非盲検化、オープンラベルＧＣＰ研究である。研究の長さは最大１１３日で、順化期間は７日である。順化中、イヌは給餌、飼育、取り扱いの手順に順化され；かつ、一般的な蠕虫及びコクシジウム感染症を排除するために駆虫薬と抗生物質薬を投与される。

【0238】

０日目に、５ｍｇ／ｋｇのＭａｂ Ａ ｖ２が、グループ１及び２の肩甲骨間領域にＳＣ投与される。グループ３及び４には、Ｍａｂ Ａ ｖ２は投与されない。０日目から４１日目まで、一般的健康観察（ＧＨＯ）、身体検査（ＰＥ）、注射部位観察（ＩＳＯ）が様々な時点で収集され、Ｍａｂ Ａ ｖ２に対する局所的及び全身的反応についてイヌがモニターされる。

【0239】

４２日目に、事前に割り当てた一つの一価ＣＰＶワクチンがグループ１及び３に投与され、事前に割り当てた別の一価ＣＰＶワクチンがグループ２及び４に投与される。ＨＩ力価のために血清を収集した後、４２日目に事前に割り当てた一価ＣＰＶワクチン（ワクチン１又はワクチン２の何れか）が各イヌに投与される。前回のワクチン接種後にワクチンのセロコンバージョンが実証されていない場合は、最初のワクチン接種の３週間後の６３日目にブースターワクチン接種（「２回目のＣＰＶワクチン」）が施される。２回目のＣＰＶワクチン後にワクチンのセロコンバージョンが実証されていない場合は、事前に割り当てられた一価ＣＰＶワクチンの３回目のブースター（「３回目のブースター」）が８４日目に投与される。個々のイヌによる研究終了は、セロコンバージョンを実証するＨＩ結果を受け取ったときに生じる。一部のイヌが９１日目のＨＩ力価の後にワクチン接種に対する免疫応答を開始しなかった場合、１０５日目に４回目で最後の一価ＣＰＶブースター（「４回目のブースター」）が投与される。Ｍａｂ Ａ ｖ２の分解をモニターする様々な時点とＣＰＶワクチン接種に対するＬＯＡＩが起こるときに血清赤血球凝集抑制（ＨＩ）力価が測定される。

【0240】

４３日目から研究終了まで、ＧＨＯ及びＰＥが、イヌの一般的健康状態をモニターするために様々な時点で収集される。

【0241】

研究において事前に割り当てられ、投与される二種の一価ＣＰＶワクチンは、次の通りである：
［ワクチン１］
登録名： Ｎｏｂｉｖａｃ（登録商標）イヌ１－ＰＶ
ワクチン： イヌパルボウイルス（改変した生）
剤形： 無菌注射液
試験用量： １ｍＬ（１用量）
投与経路： 皮下
製造元： Ｍｅｒｃｋ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ
包装： 製造元の包装ごとに個別のバイアル
保管条件： ２～７℃
利用可能単位： １バイアル
［ワクチン２］
登録名： Ｒｅｃｏｍｂｉｔｅｋ（登録商標）
ワクチン： イヌパルボウイルス（改変した生）
剤形： 無菌注射液
試験用量： １ｍＬ（１用量）
投与経路： 皮下
製造元： Ｍｅｒｉａｌ
包装： 製造元の包装ごとに個別のバイアル
保管条件： ２～７℃
利用可能単位： １バイアル

【0242】

以下の表１８の処置グループを参照のこと。

【0243】

【0244】

無作為化 イヌ（０日目で１３週齢以下、任意の性別、体重１．５ｋｇ以上）を、スポンサーの研究プログラマーが提供する無作為化リストを使用して、０日目又はそれ以前にグループ１から４に対して２：２：１：１の比率で無作為化する。処置は６匹のイヌの各ブロック内で無作為に割り当てる。無作為化は、シード番号を用いた無作為化選択方法を使用して、ＳＡＳ（SAS Institute, Cary NC, バージョン９．４以降）のＰＬＡＮ手順によって生成された乱数に基づく。

【0245】

［観察］

【0246】

身体検査（ＰＥ） ＰＥは、－７日目、０日目、研究終了日、及び必要に応じて予定外の日の全ての日に実施される。身体検査には、水分補給状態や体重（ＢＷ）を含む、全ての体組織の包括的な評価が含まれる。

【0247】

注射部位観察（ＩＳＯ） －３日目に、注射部位は０日目の投薬の準備のために毛刈りされる。投薬の前に、毛刈りされた注射部位は、炎症又は毛刈り傷がないものとして評価され記録される。０日目に始めて、注射部位は、限定されないが、紅斑、熱、及び腫れ（例えば、瘤）を含む局所注射部位反応について、１４日目まで一日１回評価される。反応のサイズが記録される。観察された注射部位の反応は、注射部位観察フォームに文書化され、有害事象（ＡＥ）として記録される。

【0248】

一般的健康観察（ＧＨＯ） ＧＨＯは、研究医師又は被指名人によって、－７日目から研究終了まで一日１回行われる。一般的健康観察には、限定されないが、一般的な身体的外見、食物又は水の消費量の異常、及び／又は嘔吐又は下痢の発生の観察が含まれる。異常な兆候のないイヌを含む全てのイヌの状態が、各観察期間における各イヌの一般的健康観察フォームに文書化される。ＰＥが行われる－７、０日目及び研究終了時には、ＰＥがＧＨＯに取って代わる。

【0249】

血清ＣＰＶ－２赤血球凝集（ＨＩ）試験 －７、０、１、７、１４、２１、２８、３５、４２、４９、５６、６３、７０、７７、８４、９１、９８、１０５、１１２日目に全血サンプルが、頸静脈、橈側皮静脈、又は外側伏在静脈を介して全てのイヌから収集され（約１．５ｍＬ）、血清分離管に入れられ、血清に処理される。ＨＩでセロコンバージョンが実証されている場合、その後の予定されたサンプリングは中止され、個々のイヌは研究を終了する。サンプルは、できるだけ早い機会に分析検査室に送られるまで、凍結状態（６０から－８０℃）で保管される。

【0250】

臨床病理学 －７日目に、ベースラインの全血球数（ＣＢＣ）と生化学的側面を評価して、イヌが健康であり、既存の病状がないことを確認する。血液学検査のために約０．５ｍＬの血液が収集され、臨床生化学検査のために頸静脈、橈側皮静脈、又は外側伏在静脈から約１ｍＬが収集される。

【0251】

有害事象（ＡＥ） ＡＥは、好ましくなく、予期されず、意図されず、かつ、製剤に関連すると考えられるかどうかに関係なく、動物用製剤の使用後に発生する、イヌのあらゆる所見として定義される。実験的処置が開始されると（Ｍａｂ Ａ ｖ２が投与される０日目）、異常なＧＨＯ、ＰＥ、又はＩＳＯはＡＥと見なされる。

【0252】

主要エンドポイント 各グループの主要エンドポイントは、０日目からグループ内のイヌの８０％以上が血清ＨＩ力価を介して一価ＣＰＶワクチン接種に対してＣＰＶセロコンバージョンを示したときまでの日数である。セロコンバージョンは、血清ＨＩ力価によって決定されて、１：８０希釈以上の抗体力価の達成を伴うベースラインに対する力価の４倍の増加として定義される。ワクチンに対する免疫応答を示したグループ当たりのイヌの数と、これが起こった研究日は、統計的には分析されないが、最終報告のために要約され、表にされる。

【0253】

以下の表１９のイベントのスケジュールを参照のこと。

【0254】

【0255】

実施例１４
健康なイヌにおける多施設の中心的安全性研究
このインビボのフィールド安全性研究は、ＭａｂＡ ｖ２の局所的及び全身的耐容性を評価する。個々のイヌは、注射部位の炎症（限定されないが、紅斑、熱及び／又は腫れを含む）及び全身反応（例えば、アナフィラキシー）について観察される。

【0256】

最低３００匹のイヌに、皮下（ＳＣ）（ｎ＝１５０）又は静脈内（ＩＶ）（ｎ＝１５０）経路の何れかによって、Ｍａｂ Ａ ｖ２が投与される。この研究中に収集された安全性データは、米国農務省獣医生物学センター（ＵＳＤＡ－ＣＶＢ）の中心的なフィールド安全性３００匹犬の要件を満たすことを目的としている。

【0257】

この研究の満足のいく完了と安全性の実証は、次を述べる二つのラベルの主張を裏付けうる：
・ 「この製剤は、イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）疾患の予防のために、１０週齢以上の健康なイヌの受動免疫に有効であることが示されている。」
・ 「この製剤は、１０週齢以上のイヌにおけるイヌパルボウイルス（ＣＰＶ）疾患の治療に有効であることが示されている。」

【0258】

これは、若い健康な目的をもって飼育されたイヌで行われた、無作為化、非盲検ＧＣＰフィールド安全性研究である。この研究は、各研究サイトで１６日間の長さである。任意の性別の少なくとも１００匹の最低年齢犬（≦１０週齢）と、任意の性別の少なくとも２００匹の最低年齢よりも高齢（＞１０週齢）のイヌが研究に登録される。

【0259】

除外基準 イヌ：
・ 現在、別の研究に登録されている。
・ 過去３０日以内に別の研究に登録されていた。
・ －２日目の９０日前までにキメラ生物製剤が投与された。
・ 研究手順に協力的ではない。
・ 研究期間中生存していることが合理的に期待されない。
・ ＩＳＯを混乱させうる既存の皮膚病状がある。
・ 重大な併存疾患を示唆する現在の病歴がある（例えば、多尿症、多飲症、多食症、嘔吐又は下痢、原因不明の体重減少など）。

【0260】

最小週齢のイヌは一つのサイト（Ridglan Farms (Mount Horeb, WI)）に置かれ、残りのイヌは３つの地理的地域の試験施設に分けられる。ジェネティクスを可能な限り多様化するために、三つの別々の地理的地域にある最低三つの試験施設と独自の飼育コロニーが使用される。各サイトで、イヌは、表２０に従って、グループ１、２、３、及び４に１：１：１：１で無作為化される。

【0261】

０日目に、全てのイヌに、ＳＣ又はＩＶの何れかでＭａｂ Ａ ｖ２が投与される。この研究では、Ｍａｂ Ａ ｖ２の二つの異なる事前ライセンスシリアル（ＰＬＳ）が投与される。各年齢グループと処置法グループ内で、イヌの約半分に無作為にＰＬＳ第１番が投与され、残りの半分に無作為にＰＬＳ第２番が投与される。

【0262】

用量体積は、０日目の体重（ＢＷ）に基づいてＥＤＣシステムによってｍＬで計算される。用量は、ＥＤＣシステムによって次のように計算される：
｛（ｋｇでの体重）×（５ｍｇ／ｋｇ）｝・｛ＴＢＤｍｇ／ｍＬ｝＝注射されるｍＬでの容量

【0263】

皮下用量は、肩甲骨間領域の皮下に投与される。静脈内投与は橈側皮静脈に投与される。

【0264】

表２０に概略が記載された予定時間に、個々のイヌの健康が、身体検査（ＰＥ）、注射部位観察（ＩＳＯ）、及び一般的健康観察（ＧＨＯ）を介して綿密にモニターされる。

【0265】

安全性評価は、全ての有害事象（ＡＥ）の照合によるものである。具体的には、イヌは、紅斑、熱又は腫れなどの注射部位反応（毎日のＩＳＯを介して）について、またアナフィラキシーを含む全身反応について、Ｍａｂ Ａ ｖ２の投与後にモニターされる。ＡＥデータは統計的には分析されないが、要約されて表にされる。

【0266】

以下の表２０の処置グループを参照のこと。

【0267】

【0268】

無作為化 適切な年齢のイヌを飼育している試験施設を見出すのは難しいため、約１００匹の最低年齢のイヌが一カ所から調達される。約２００匹の残りのイヌは、少なくとも三つの地理的地域の試験施設で分けられ、試験施設にできるだけ均等に分けられる。無作為化は、試験施設のサイトによって４匹のイヌを含むブロックに階層化される。各サイト内で、イヌはグループ１（ＰＬＳ第１番、ＳＣ）、２（ＰＬＳ第２番、ＳＣ）、３（ＰＬＳ第１番、ＩＶ）、及びグループ４（ＰＬＳ第２番、ＩＶ）に対して１：１：１：１の比で無作為化される。無作為化は、シード番号を用いた無作為化選択法を使用して、ＳＡＳのＰＬＡＮ手順（SAS Institute, Cary NC, バージョン9.4以降）によって生成された乱数に基づく。

【0269】

順化 この研究は、イヌが以前に食餌、収容、取り扱い手順などに順化していた試験施設で行われる。従って、イヌが登録基準を満たしていることを確認し、－２日目に注射部位を毛刈りするために、２日間のみの順化段階が実行される。

【0270】

身体検査（ＰＥ） ＰＥは、－２日目、０日目（投与前）、７日目、及び１４日目に現場の獣医師によって実施される。ＰＥには、全身外観と態度、耳、眼、口腔、粘膜、呼吸器、心臓血管、胃腸、神経学的、筋骨格系、外皮系及び泌尿生殖器系の主観評価が含まれる。ＶｅＤＤＲＡの低レベルの用語を利用して、特定のＰＥの異常が記述される。０日目以降に記録される異常（既存の状態と悪化する異常を除く）はＡＥと見なされる。

【0271】

注射部位観察（ＩＳＯ） －２日目に、注射部位は、０日目の投薬の準備のために毛刈りされる。処置前に、毛刈りされた注射部位は、炎症又はクリッパー傷がないとして評価され記録される。０日目に始めて１４日目まで、注射部位の位置が、限定されないが、紅斑、熱、腫れ（例えば、瘤）を含む局所注射部位反応について毎日一回評価される。反応のサイズが記録される。如何なる観察された注射部位反応もＡＥとして記録される。

【0272】

一般的健康観察（ＧＨＯ） ＧＨＯは、順化で始め研究終了まで毎日一回行われるが、一つの例外がある。ＰＥが実施される－２、０、７、及び１４日目では、ＰＥがＧＨＯに置き換わる。一般的健康観察には、限定されないが、一般的な身体的外見、食物又は水の消費量の異常、及び／又は嘔吐又は下痢の発生の観察が含まれる。ＶｅＤＤＲＡの低レベルの用語を利用して、特定の観察結果が記述される。異常な兆候のないイヌを含む全てのイヌの状態が文書化される。

【0273】

体重 ０日目に、ＢＷ（キログラム（ｋｇ）で記録）がキャリブレーションされた体重計を使用して測定され、記録される。イヌに餌を与えたり絶食させて体重が計られうる。体重は文書化される。

【0274】

安全性解析集団 安全性解析集団は、Ｍａｂ Ａ ｖ２を投与された全てのイヌで構成される。

【0275】

安全性アウトカム 安全性評価は、全てのＡＥの照合によって行われる。具体的には、イヌは、（毎日のＩＳＯによって）紅斑、熱又は腫れなどの注射部位反応と、Ｍａｂ Ａ ｖ２の投与後のアナフィラキシーを含む全身反応についてモニターされる。ＡＥデータは統計的に解析されないが、要約されて表にされる。

【0276】

有害事象（ＡＥ） ＡＥは、好ましくなく、予期されず、意図されず、かつ、製剤に関連すると考えられるかどうかに関係なく、動物用製剤の使用後に発生する、イヌのあらゆる所見として定義される。全てのＡＥは、低レベルのＶＥＤＤＲＡ用語を使用して文書化され記録される。

【0277】

重篤なＡＥ 致命的又は生命を脅かすか、又は医師の介入を必要とするＡＥ（例えば、イヌの健康状態が、イヌを安楽死させるべきか、医学的処置を受けさせるべきであると治験医師が判断するようなものである）。

【0278】

非重篤なＡＥ 医師の介入又は研究からのイヌの除外を必要とするほど重症ではないＡＥ。

【0279】

以下の表２１のイベントのスケジュールを参照のこと。

【0280】

【0281】

実施例１５
増強されたＡＤＣＣ活性のためのバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドの同定
イヌＣＤ１６及びイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃの構造モデルを、鋳型としてヒトＩｇＧ１ Ｆｃ／ＣＤ１６複合体（１ｅ４ｋ１．ｐｄｂ）の構造座標を使用して調製した。Sondermann P., “The 3.2-A Crystal Structure of the Human IgG1 Fc Fragment-Fc gammaRIII complex,” Nature 406(6793):267-73 (2000)を参照のこと。野生型イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ（配列番号：９１）とイヌＣＤ１６（配列番号：９０）の間で相互作用すると思われるアミノ酸残基を特定した。イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ配列番号：９１のＳｅｒ１０及びＩｌｅ１０３の両方が、イヌＣＤ１６配列番号：９０のＬｙｓ１４８に近接している。静電相互作用を得るために、イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ配列番号：９０のＳｅｒ１０及び／又はＩｌｅ１０３を酸性アミノ酸Ａｓｐ又はＧｌｕで置換して、イヌＣＤ１６配列番号：９０のＫ１４８に塩橋を導入することができる。Ｓｅｒ１０ＡｓｐとＬｙｓ１４８の間；Ｓｅｒ１０ＧｌｕとＬｙｓ１４８の間；Ｉｌｅ１０３ＡｓｐとＬｙｓ１４８の間；及びＩｌｅ１０３ＧｌｕとＬｙｓ１４８の間の距離はそれぞれ４Å未満である（図５）。増強されたＡＤＣＣ活性のための例示的なバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチド配列には、配列番号：９２、配列番号：９３、配列番号：９４、配列番号：９５、配列番号：９６、配列番号：９７、配列番号：９８、及び配列番号：９９が含まれる。このようなバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃポリペプチドを、野生型イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃの代わりに使用して、パルボウイルス感染細胞の死滅を増強することができる。

【0282】

参考文献：
１． S. Nandi, Manoj Kumar. Canine Parvovirus: Current Perspective. Indian J. Virol. 2010; 21(1):31-44。

【0283】

２． Carla Miranda, Gertrude Thompson. Canine parvovirus: the worldwide occurrence of antigenic variants. Journal of General Virology. 2016; 97, 2043-2057。

【0284】

３． Melissa Kennedy, Adesola Odunayo. Canine Parvovirus. Clinician’s Brief. 2017。

【0285】

４． Brindhalakshmi B, Mukhopadhyay HK, Antony PX, Thanislass J, Vijayalakshmi P, Mangadevi N. Isolation and molecular characterization of canine and feline parvovirus strains - an updated review. Journal of Dairy, Veterinary & Animal Research. 2016; 3(5):164-169。

【0286】

５． Emilee Venn, Karolina Preisner, Pedro Boscan, David Twedt, Lauren A. Sullivan. Evaluation of an outpatient protocol in the treatment of canine parvoviral enteritis. Journal of Veterinary Emergency and Critical Care. 2017; 27(1):52-65。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【配列表】

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【国際調査報告】