ホーム > 特許ランキング > ＣＹＴＯＤＹＮ ＩＮＣ．
知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
特表2022-542524抗ＣＣＲ５受容体薬剤の投与を含むがんを処置または予防する方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-10-04
(54)【発明の名称】抗ＣＣＲ５受容体薬剤の投与を含むがんを処置または予防する方法
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20220927BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20220927BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20220927BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220927BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20220927BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20220927BHJP
A61K 35/12 20150101ALI20220927BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220927BHJP
A61P 13/08 20060101ALI20220927BHJP
A61P 15/00 20060101ALI20220927BHJP
A61K 31/439 20060101ALI20220927BHJP
A61K 31/506 20060101ALI20220927BHJP
A61K 31/499 20060101ALI20220927BHJP
A61K 31/444 20060101ALI20220927BHJP
A61K 31/351 20060101ALI20220927BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20220927BHJP
C12N 15/85 20060101ALI20220927BHJP
A61K 31/7088 20060101ALN20220927BHJP
C07K 16/28 20060101ALN20220927BHJP
C12N 5/10 20060101ALN20220927BHJP
C12N 1/15 20060101ALN20220927BHJP
C12N 1/19 20060101ALN20220927BHJP
C12N 1/21 20060101ALN20220927BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N
A61P35/04 ZNA
A61P1/00
A61P43/00 111
A61K39/395 U
A61K35/76
A61K48/00
A61K35/12
A61K45/00
A61P13/08
A61P15/00
A61K31/439
A61K31/506
A61K31/499
A61K31/444
A61K31/351
C12N15/13
C12N15/85 Z
A61K31/7088
C07K16/28
C12N5/10
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022506809
(86)(22)【出願日】2020-07-31
(85)【翻訳文提出日】2022-04-04
(86)【国際出願番号】 US2020044616
(87)【国際公開番号】W WO2021026028
(87)【国際公開日】2021-02-11
(31)【優先権主張番号】62/882,353
(32)【優先日】2019-08-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/047,693
(32)【優先日】2020-07-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】517057384
【氏名又は名称】サイトダイン インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＣＹＴＯＤＹＮ ＩＮＣ．
【住所又は居所原語表記】１１１１ Ｍａｉｎ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｓｕｉｔｅ ６６０， Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ， Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ９８６６０ Ｕ．Ｓ．Ａ．
(74)【代理人】
【識別番号】100102842
【弁理士】
【氏名又は名称】葛和 清司
(72)【発明者】
【氏名】バーガー，デニス
(72)【発明者】
【氏名】ケリー，スコット
【テーマコード（参考）】
4B065
4C084
4C085
4C086
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA01
4B065CA25
4B065CA44
4C084AA13
4C084AA17
4C084NA13
4C084NA14
4C084ZA66
4C084ZA81
4C084ZB26
4C084ZC75
4C085AA14
4C085BB31
4C085CC23
4C085EE01
4C086AA01
4C086AA02
4C086BA07
4C086BC17
4C086BC42
4C086CB05
4C086CB09
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA13
4C086NA14
4C086ZA66
4C086ZA81
4C086ZB26
4C086ZC75
4C087AA01
4C087BB63
4C087BB65
4C087BC83
4C087CA12
4C087NA13
4C087NA14
4C087ZA66
4C087ZA81
4C087ZB26
4C087ZC01
4C087ZC41
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA22
4H045EA23
4H045EA28
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、がんの処置または予防における、モノクローナル抗体レロンリマブまたはその結合断片などのＣＣＲ５受容体の競合阻害剤の使用に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
結腸がん転移を処置、阻害または予防する方法であって、それを必要とする対象に、（ａ）レロンリマブ抗体またはその結合断片；
（ｂ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸；
（ｃ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター；
（ｄ）（ｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片、（ｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸、あるいは（ｉｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター
を含む宿主細胞；あるいは
（ｅ）ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤
を含む抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤を、投与することを含む、前記方法。
【請求項2】
前記投与が、肺または肝臓の少なくとも１つへの結腸がんの転移減少をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
肺への転移が、５０％を超えて、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または８５％を超えて、減少する、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
肝臓への転移が、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、または５０％を超えて、減少する、請求項２に記載の方法。
【請求項5】
前記投与が、腫瘍に関連する血管新生を減少させる、請求項１に記載の方法。
【請求項6】
腫瘍栄養血管の総血管面積が、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、または６０％を超えて、減少する、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
腫瘍栄養血管の血管長密度が、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、または５０％を超えて、減少する、請求項５に記載の方法。
【請求項8】
腫瘍栄養血管の数が、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、または７０％を超えて、減少する、請求項５に記載の方法。
【請求項9】
より大きい血管の数が、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、または５０％を超えて、減少する、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
より小さい血管の数が、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、または７０％を超えて、減少する、請求項８に記載の方法。
【請求項11】
前記投与が、対象の末梢血中において、増加したレベルのＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞または低下したレベルのＣＤ４＋ＣＤ２５－細胞のいずれかをもたらす；あるいは、抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤が、ＣＤ４＋細胞におけるチロシンキナーゼリン酸化を変化させない、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
結腸がんを罹患している対象において転移負荷を減少させる方法であって、それを必要とする対象に、（ａ）レロンリマブ抗体またはその結合断片；
（ｂ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸；
（ｃ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター；
（ｄ）（ｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片、（ｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸、あるいは（ｉｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター
を含む宿主細胞；あるいは
（ｅ）ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、抗ＣＣＲ５結合剤
を含む抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤を、投与することを含む、前記方法。
【請求項13】
肺における転移負荷が、５０％を超えて、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または８５％を超えて、減少する、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
肝臓における転移負荷が、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、または５０％を超えて、減少する、請求項１２に記載の方法。
【請求項15】
結腸がんを罹患している対象において腫瘍に関連する血管新生を減少させる方法であって、それを必要とする対象に、（ａ）レロンリマブ抗体またはその結合断片；
（ｂ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸；
（ｃ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター；
（ｄ）（ｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片、（ｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸、あるいは（ｉｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター
を含む宿主細胞；あるいは
（ｅ）ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、抗ＣＣＲ５結合剤
を含む抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤を、投与することを含む、前記方法。
【請求項16】
腫瘍栄養血管の総血管面積が、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、または６０％を超えて、減少する、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
腫瘍栄養血管の血管長密度が、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、または５０％を超えて、減少する、請求項１５に記載の方法。
【請求項18】
腫瘍栄養血管の数が、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、または７０％を超えて、減少する、請求項１５に記載の方法。
【請求項19】
より大きい血管の数が、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、または５０％を超えて、減少する、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
より小さい血管の数が、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、または７０％を超えて、減少する、請求項１８に記載の方法。
【請求項21】
転移性結腸がんの処置、阻害または予防のための（ａ）レロンリマブ抗体またはその結合断片；
（ｂ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸；
（ｃ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター；
（ｄ）（ｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片、（ｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸、あるいは（ｉｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター
を含む宿主細胞；あるいは
（ｅ）ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、抗ＣＣＲ５結合剤
の使用。
【請求項22】
転移性がん病変の増殖を処置、阻害または予防する方法であって、それを必要とする対象に、ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、ＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項23】
競合阻害剤が、ＣＣＲ５細胞受容体のＥＣＬ－２ループに結合する、請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
競合阻害剤が、ＣＣＲ５細胞受容体への結合をＣＣＬ５と競合する、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項25】
競合阻害剤が、モノクローナル抗体ＰＡ１４、レロンリマブ、またはＣＣＲ５ｍＡｂ００４、あるいはそれらの結合断片を含む、請求項２２～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
競合阻害剤が、ＣＤ４＋細胞におけるチロシンキナーゼリン酸化を変化させない、請求項２２～２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項27】
ＣＣＲ５細胞受容体が、ＮＫ細胞上に存在する、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
ＣＣＲ５細胞受容体が、Ｂ細胞上に存在する、請求項２２～２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
転移性がんの拡散を予防する方法であって、それを必要とする対象に、（ａ）レロンリマブ抗体またはその結合断片；
（ｂ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸；
（ｃ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター；
（ｄ）（ｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片、（ｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸、あるいは（ｉｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター
を含む宿主細胞；あるいは
（ｅ）ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、抗ＣＣＲ５結合剤
を含む抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤を、投与することを含む、前記方法。
【請求項30】
抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤が、レロンリマブまたはその結合断片である、請求項２９に記載の方法。
【請求項31】
レロンリマブまたはその結合断片が、ｓｃＦｖを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
レロンリマブまたはその結合断片が、対象に投与される、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
レロンリマブまたはその結合断片を含む宿主細胞が、投与される、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項34】
がんが、乳がん、前立腺がん、結腸がん、黒色腫、胃がん、または卵巣がんのうちの１種である、請求項２２～３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項35】
がんが、乳がんである、請求項３４に記載の方法。
【請求項36】
がんが、前立腺がんである、請求項３４に記載の方法。
【請求項37】
がんが、結腸がんである、請求項３４に記載の方法。
【請求項38】
がんを予防することが、がんの増殖を遅らせることを含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項39】
がんを予防することが、腫瘍の形成を予防することを含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項40】
がんを予防することが、腫瘍の大きさを制限するまたは減少させることを含む、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項41】
対象に、細胞療法、化学療法薬剤、低分子、またはＣＣＲ５／ＣＣＬ５シグナル伝達阻害剤を投与することをさらに含む、請求項１～４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項42】
ＣＣＲ５／ＣＣＬ５シグナル伝達阻害剤が、マラビロク、ビクリビロク、アプラビロク、ＳＣＨ－Ｃ、ＴＡＫ－７７９、ＰＡ１４抗体、２Ｄ７抗体、ＲｏＡｂ１３抗体、ＲｏＡｂ１４抗体、または４５５２３抗体を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項43】
ＣＣＲ５細胞受容体が、ＮＫ細胞上に存在する、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項44】
ＣＣＲ５細胞受容体が、Ｂ細胞上に存在する、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項45】
がんを予防するために、ＮＫ細胞上またはＢ細胞上のいずれかに存在するＣＣＲ５受容体に抗ＣＣＲ５結合剤を標的化する方法。
【請求項46】
ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるチロシンキナーゼリン酸化を変化させない、ＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤を含む、がんの処置のための治療用組成物。
【請求項47】
追加的な細胞療法、化学療法薬剤、低分子、またはＣＣＲ５／ＣＣＬ５シグナル伝達阻害剤をさらに含む、請求項４６に記載のがんの処置のための治療用組成物。
【請求項48】
ＣＣＲ５細胞受容体が、ＮＫ細胞上に位置している、請求項４６に記載のがんの処置のための治療用組成物。
【請求項49】
ＣＣＲ５細胞受容体が、Ｂ細胞上に位置している、請求項４６に記載のがんの処置のための治療用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
配列表に関する記載
本願に関連する配列表は、書面の代わりにテキスト形式で提供され、これによって参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイル名は、230042_429WO_SEQUENCE_LISTING.txtである。このテキストファイルは、１５．１ＫＢで、２０２０年７月３０日に作成されており、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出されているものである。
本願に関連する配列表は、書面の代わりにテキスト形式で提供され、これによって参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイル名は、230042_429WO_SEQUENCE_LISTING.txtである。このテキストファイルは、１５．１ＫＢで、２０２０年７月３０日に作成されており、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出されているものである。
【0002】
背景
技術分野
本開示は、がんの処置または予防における、モノクローナル抗体レロンリマブ（leronlimab）などのＣＣＲ５受容体の競合阻害剤の使用に関する。
技術分野
本開示は、がんの処置または予防における、モノクローナル抗体レロンリマブ（leronlimab）などのＣＣＲ５受容体の競合阻害剤の使用に関する。
【背景技術】
【0003】
背景
炎症は、外傷、化学的または物理的損傷、自己免疫応答、感染性因子、がんなどに対する応答において生じ得る。炎症は、自然免疫の重要な構成要素であり、適応免疫のプライミングや免疫応答のエフェクター相に必要である。ケモカインなどの可溶性メディエーターは、炎症の様々な構成要素を活動させること、特に白血球の流入において重要な役割を果たすことが示されている。
ケモカインは、白血球、内皮細胞、線維芽細胞、上皮細胞、平滑筋、および実質細胞などを包含する、多くの種類の細胞に発現している受容体に結合する。ケモカインは、定常（basal）状態および炎症状態における細胞の動員および活性化を制御することにより、白血球生物学において重要な役割を果たしている。加えて、ケモカイン受容体は、他の細胞種においても発現しているため、ケモカインは、血管新生（angiogenesis）、組織および血管のリモデリング、病原体の除去、抗原提示、白血球の活性化および生存、慢性炎症、組織の修復/治癒、線維化、胚形成、腫瘍形成を包含する、多様な他の役割も担っている。
炎症は、外傷、化学的または物理的損傷、自己免疫応答、感染性因子、がんなどに対する応答において生じ得る。炎症は、自然免疫の重要な構成要素であり、適応免疫のプライミングや免疫応答のエフェクター相に必要である。ケモカインなどの可溶性メディエーターは、炎症の様々な構成要素を活動させること、特に白血球の流入において重要な役割を果たすことが示されている。
ケモカインは、白血球、内皮細胞、線維芽細胞、上皮細胞、平滑筋、および実質細胞などを包含する、多くの種類の細胞に発現している受容体に結合する。ケモカインは、定常（basal）状態および炎症状態における細胞の動員および活性化を制御することにより、白血球生物学において重要な役割を果たしている。加えて、ケモカイン受容体は、他の細胞種においても発現しているため、ケモカインは、血管新生（angiogenesis）、組織および血管のリモデリング、病原体の除去、抗原提示、白血球の活性化および生存、慢性炎症、組織の修復/治癒、線維化、胚形成、腫瘍形成を包含する、多様な他の役割も担っている。
【0004】
ＣＣＬ５（Ｃ－Ｃケモカインリガンド５）は、ランテス（regulated upon activation and normal T cell expressed and secreted)（ＲＡＮＴＥＳ）としても知られている炎症性ケモカインであり、これらの免疫学的メカニズムに重要な役割を果たす。ＣＣＬ５は、炎症部位へのＴ細胞遊走の主要な制御因子として作用し、損傷部位または感染部位へのＴ細胞の遊走を指図する。ＣＣＬ５はまた、Ｔ細胞の分化も制御している。ケモカインの多くの生物学的作用は、細胞表面上のケモカイン受容体との相互作用により媒介されている。本発明においては、ＣＣＬ５に最も関連する既知の受容体はＣＣＲ５受容体であるが、ＣＣＲ１およびＣＣＲ３もまたＣＣＬ５受容体として知られており、ＣＣＲ４およびＣＤ４４は補助受容体（auxiliary receptor）である。Tamamis et al., Elucidating a KeyAnti-HIV-1 and Cancer-Associated Axis: The Structure of CCL5 (Rantes) in Complex with CCR5, SCIENTIFIC REPORTS, 4: 5447 (2014)。
【0005】
炎症性ケモカインは、長い間、主に免疫および炎症の不可欠な「門番」としてみなされてきた。しかし、近年の研究は、例えば、がん細胞が正常なケモカインシステムを破壊して、これらの分子およびその受容体が、腫瘍促進の役割を発揮する全く異なる様式を有する腫瘍微小環境の重要な構成要素になることを示している。ＣＣＲ５受容体およびＣＣＬ５リガンドは、いくつかの血液学的悪性腫瘍、リンパ腫、および非常に多くの固形腫瘍において検出されているが、ＣＣＬ５リガンド／ＣＣＲ５受容体系の役割に関する広範な研究は、限られた数のがんでしか行われていない。Aldinucci et al., The Inflammatory chemokine CCL5 and Cancer Progression, MEDIATORS OF INFLAMMATION, vol.2014, article ID 292376, 12 pages。
【0006】
ＣＣＲ５受容体は、リンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞）、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞のサブセットにおいて発現するＣ－ＣケモカインＧタンパク質共役型受容体である。ＣＣＲ５受容体は、細胞の細胞膜を蛇行するように７回貫通している。細胞外部分は、ＣＣＲ５を標的とする抗体の潜在的な標的を提示しており、アミノ末端ドメイン（Ｎｔ）および３つの細胞外ループ（ＥＣＬ１、ＥＣＬ２、およびＥＣＬ３）を含む。ＣＣＲ５の細胞外部分は、４つのドメインにわたって分布しているわずか９０個のアミノ酸を含む。これらのドメインのうち最大のものは、ＮｔおよびＥＣＬ２であり、それぞれ約３０アミノ酸である。Olson et al., CCR5 Monoclonal Antibodies for HIV-1 Therapy, CURR.OPIN. HIV AIDS, March, 4(2): 104-111 (2009)。
【0007】
ＣＣＬ５リガンドとＣＣＲ５受容体との複合体の形成は、Ｇタンパク質のサブユニットを活性化する受容体の構造変化を引き起こして、シグナル伝達を誘導し、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、イノシトール三リン酸、細胞内カルシウム、およびチロシンキナーゼ活性化のレベル変化をもたらす。これらのシグナル伝達事象は、細胞の分極化、ならびに、食作用能、細胞生存および炎症促進性遺伝子の転写の増加をもたらす転写因子ＮＦ－ｋＢの移行を引き起こす。Ｇタンパク質依存性のシグナル伝達が生じた後は、ＣＣＬ５／ＣＣＲ５受容体複合体はエンドサイトーシスを介して内在化される。
【0008】
ＣＣＲ５との複合体におけるＣＣＬ５の完全な複合体構造が計算により導き出されている。ＣＣＬ５の１～１５残基部分は、ＣＣＲ５結合ポケットに挿入されており；ＣＣＬ５の１～６Ｎ末端ドメインは、ＣＣＲ５の膜貫通領域内に埋め込まれており；ならびに、ＣＣＬ５の７～１５残基部分は、大部分がＣＣＲ５のＮ末端ドメインおよび細胞外ループに取り囲まれていることが報告されている。ＣＣＬ５の残基Ａｌａ１６およびＡｒｇ１７、ならびに付加的残基である２４～５０残基部分は、ＣＣＲ５のＮ末端ドメイン上部および細胞外ループ境界部と相互作用する。さらに、ＣＣＬ５のアミノ末端の完全性は、受容体結合および細胞活性化に極めて重要であることが報告されている。さらに、ＣＣＬ５およびＨＩＶ－１は主としてほぼ同じＣＣＲ５残基と相互作用し、同じケモカイン受容体結合ポケットを共有することが報告されている。Tamamis et al., Elucidating a Key Anti-HIV-1 and Cancer-Associated Axis: The Structure of CCL5 (Rantes) in Complex with CCR5, SCIENTIFIC REPORTS, 4:5447 (2014)参照。また、ＣＣＬ５リガンドなどのケモカインは、主にＥＣＬ２を介してＣＣＲ５受容体に結合することも別途報告されている。Olson et al., CCR5 Monoclonal Antibodies for HIV-1 Therapy, CURR. OPIN., HIV AIDS, March, 4(2): 104-111 (2009)。
【0009】
いくつかの研究は、ＣＣＲ５シグナル伝達が抗腫瘍作用を有し、Ｔ細胞活性化のための共刺激分子として作用し、腫瘍微小環境へのＴ細胞走化性を増加させることを示している。Gao et al., CCL5 activation of CCR5 regulates cell metabolism to enhance proliferation of breast cancer cells, OPEN BIOL., 6: 160122 (2016); Gonzalez-Martin et al., CCR5 in cancer immunotherapy: More than an “attractive” receptor for T cells, ONCOIMMUNOLOGY, 1: 106-108 (2012)を参照。しかしながら、ＣＣＬ５／ＣＣＲ５系のシグナル伝達は、例えば、乳がんおよび前立腺といったある種のがんにおいて優先的に活性化されている場合があること、ならびに、かかるシグナル伝達が疾患の進行を促進することも、証拠により示唆されている。例えば、いくつかの研究により、がん細胞は、ＣＣＬ５、ＣＣＲ５、またはその両方を過剰発現しており、ラパマイシン（ｍＴＯＲ）のメカニズム的標的におけるＣＣＲ５シグナル伝達の作用を介してその増殖および成長に寄与しているであろうことが示されている。Gao et al., CCL5 activation of CCR5 regulates cell metabolism to enhance proliferation of breast cancer cells, OPEN BIOL., 6: 160122 (2016)を参照；また、Chow and Luster, Chemokines in Cancer, CANCER IMMUNOL. RES., 2(12): 1125-1131 (2014); Singh et al., Expression of CCR5 and its ligand CCL5 in pancreatic cancer (Abstract), J IMMUNOL, 196(1 Supplement): 51.3 (2016)も参照。
【0010】
加えて、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）および骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を包含する、いくつかの免疫抑制性免疫細胞は、ＣＣＲ５を発現していることから、それによりＣＣＲ５シグナル伝達が腫瘍増殖に寄与し得る別の経路が示唆されている。Mukaida, CCR5 antagonist, an ally to fight against metastatic colorectal cancer, TRANSLATIONAL CANCER RESEARCH, 5(Supp. 2): S309-S312 (2016)。さらに、腫瘍微小環境中のがん細胞は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞によるＣＣＬ５産生を利用して、腫瘍増殖および腫瘍細胞拡散の増加をもたらすことが報告されている。Halama et al., Tumoral Immune Cell Exploitation in Colorectal Cancer Metastases Can Be Targeted Effectively by Anti-CCR5 Therapy in Cancer Patients, CANCER CELL, 29: 587-601 (2016)。
【0011】
いくつかのがんの種類に関連して、ＣＣＬ５／ＣＣＲ５シグナル伝達を変化させるために抗ＣＣＲ５結合剤を用いた探索的な取り組みがなされてきた。Sicoli et al., CCR5 Receptor Antagonists Block Metastasis to Bone ofv-Src Oncogene-Transformed Metastatic Prostate Cancer Cell Lines, CANCER RES., 74(23): 7103-7114 (2014); Velasco-Velazquez et al., The CCL5/CCR5 Axis Promotes Metastasis In Basal Breast Cancer, ONCOIMMUNOLOGY, 2(4): e23660 (2013); Velasco-Velazquez et al., CCR5 Antagonist Blocks Metastasis of Basal Breast Cancer Cells, CANCER RES., 72(15): 3839-3850 (2012)。ＣＣＲ５／ＣＣＬ５受容体／リガンド系（すなわち、ＣＣＲ５受容体／ＣＣＬ５リガンド系）を阻害する、妨げる、遮断する、変化させる、または修飾する様々な化合物が存在する。これらの化合物の多くは、ＣＣＲ５受容体とも結合しおよびＣＣＬ５といくつかの結合共通性を共有することが知られている、ＨＩＶ－１の処置のために開発されてきた。かかる化合物には、例えば、レロンリマブ（細胞外）およびマラビロク（膜貫通）などの細胞外または細胞膜貫通ＣＣＲ５結合剤、ならびにビクリビロク、アプラビロク、ＳＣＨ－Ｃ、およびＴＡＫ－７７９などの他の化合物、ならびにＰＡ１４、２Ｄ７、ＲｏＡｂ１３、ＲｏＡｂ１４、４５５２３などの抗体等が包含される。
【0012】
例えば、レロンリマブ（ＰＲＯ１４０とも称される）を包含する最も強力な抗ウイルス性の抗ＣＣＲ５モノクローナル抗体は、ＣＣＲ５受容体アミノ酸残基と、ＥＬ２だけにおいてまたはＮｔ残基と共にＥＬ２において、結合することが見出されている。また、抗ＣＣＲ５モノクローナル抗体のＣＣＲ５受容体結合部位は、低分子ＣＣＲ５アンタゴニストのそれとは異なることも判明している。すなわち、マラビロクなどの市販の低分子ＣＣＲ５アンタゴニストは、膜貫通ヘリックスによって形成されている疎水性の空洞（すなわち、細胞外のＮｔ領域またはループ領域ではない）と結合する。第７番目の膜貫通領域のアミノ酸残基Ｅ２８３は、低分子に対する主要部位または相互作用として特異的に同定されており、マラビロクおよびビクリビロクは、ＣＣＲ５受容体アミノ酸の同一集団に結合することが見出されている。Olson et al., CCR5 Monoclonal Antibodies for HIV- 1 Therapy, CURR. OPIN. HIV AIDS, March, 4(2): 104-111 (2009)。しかしながら、ＣＣＬ５リガンドおよびマラビロクは、ＮｔおよびＥＣＬ２という２つの受容体部位を共有することによってＣＣＲ５受容体にドッキングすること、ならびに、合成ＣＣＬ５由来ペプチドも、ＣＣＲ５受容体を遮断するのに用いられ得ることも報告されている。Secchi et al., Combination of the CCL5 -Derived Peptide R4.0 with Different HIV-1 Blockers Reveals Wide Target Compatibility and Synergic Cobinding to CCR5, ANTIMICROB AGENTS CHEMOTHER., 58(10): 6215-6223 (2014)。
【0013】
場合によっては、免疫細胞の活性化に関連するＣＣＬ５の発現が、腫瘍微小環境中のがん細胞に利用されることがあり、マラビロクなどの阻害剤を用いたＣＣＲ５シグナル伝達の遮断が抗腫瘍作用を有する場合がある。ヒト結腸直腸がん肝転移の研究においては、浸潤縁のＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞がＣＣＬ５を発現しており、これが、Ｔ細胞の疲弊、腫瘍増殖、浸潤性腫瘍細胞の挙動、および腫瘍関連マクロファージによるマトリックスメタロプロテアーゼの産生増加と関連していた。Halama et al., Tumoral Immune Cell Exploitation in Colorectal Cancer Metastases Can Be Targeted Effectively by Anti-CCR5 Therapy in Cancer Patients, CANCER CELL, 29: 587-601 (2016)。マラビロクでのＣＣＬ５の阻害は、腫瘍関連マクロファージの再分極および腫瘍細胞死滅をもたらした。Halama et al. (2016)。
【0014】
しかしながら、ＣＣＲ５シグナル伝達の阻害が、免疫抑制作用を有する場合もある。マラビロクによるＣＣＲ５受容体遮断の、潜在的免疫学的メカニズムにおけるヒト活性化Ｔ細胞への作用について、in vitroでの研究が行われてきた。マラビロクによるＣＣＲ５の遮断は、ＣＣＬ５およびＣＣＬ２によって誘導されるＣＣＲ５およびＣＣＲ２の内在化プロセスを遮断することができるだけでなく、それらの同族リガンドに対するＴ細胞の走化性活性をもそれぞれ阻害し得ることが見出された。さらに、マラビロクを高用量で用いてＣＣＲ５を遮断することにより、ＴＮＦ－αおよびＩＦＮ－γの産生が低下する傾向がある。また、マラビロクのＣＣＲ５への作用は、一時的かつ可逆的であることも指摘されている。Yuan et al., In Vitro Immunological Effects of Blocking CCR5 on T Cells, INFLAMMATION, 38(2): 902-910 (2015)；Arberas et al., In vitro effects of the CCR5 inhibitor maraviroc on human T cell function, J. ANTIMICROB. CHEMOTHER., 68(3): 577-586 (2013)参照。
【0015】
ＣＣＲ５はまた、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）においても役割を果たしていると考えられている。ケモカイン受容体ＣＣＲ５は、マウスのＧＶＨＤ病態を媒介することが示されている。ヒト急性ＧＶＨＤ試料の皮膚における浸潤性リンパ球は、主にＣＣＲ５＋Ｔ細胞であることが報告されている。Lisa Palmer, George Sale, John Balogun, Dan Li, Dan Jones, Jeffrey Molldrem, Rainer Storb, Qing Ma, Chemokine Receptor CCR5 Mediates Allo-Immune Responses in Graft-vs-Host Disease, Biol Blood Marrow Transplant. 2010 March; 16(3): 311-319, doi: 10.1016/j.bbmt2009.12.002。また、ＣＣＲ５＋集団は、活性化エフェクターＴ細胞の表現型の特徴を示すことも見出されている。ＣＣＲ５の発現は、同種刺激の際に上方制御され、ＣＣＲ５＋細胞は、Ｔ細胞活性化マーカーの共発現に伴って増殖する。さらに、炎症性サイトカインＴＮＦα、ＩＬ－２またはＩＦＮ－γを産生する活性化Ｔ細胞は、ＣＣＲ５について陽性である。それゆえ、ＣＣＲ５は、ＧＶＨＤエフェクター細胞のマーカーであり、ＣＣＲ５＋Ｔ細胞は、ヒト急性ＧＶＨＤの病態において能動的に関わっている。
【0016】
腫瘍の進行に寄与するＣＣＲ５シグナル伝達の数多くの、時には矛盾する役割を考慮すると、意図していない副作用を誘発することがないまたは意図していない副作用の影響を減少させる、治療目的のための、ＣＣＲ５／ＣＣＬ５受容体／リガンド系を阻害する、弱める、妨げる、遮断する、変化させる、または修飾するために使用することができる、ＣＣＲ５受容体に対する競合阻害剤または使用方法への必要性が存在している。さらに、副作用がより少なくかつより重篤でない、より長く持続する、ならびに、投薬の必要性が低下することによる患者コンプライアンスの改善および（望ましくない副作用がより少ないことによる）患者経験の改善を促進する、ＣＣＲ５受容体に対するかかる競合阻害剤および使用方法への必要性がある（副作用は、競合阻害剤自体によって引き起こされる副作用を包含する）。ＣＣＬ５／ＣＣＲ５系を治療標的として用いる最適な治療様式は、特定の悪性疾患におけるＣＣＬ５およびＣＣＲ５の有害な関与を阻害する必要性、一方で、免疫における潜在的に有益な活性を保護する必要性という、相反する二つの要求に適合させる必要があるであろう。
【発明の概要】
【0017】
簡単な概要
モノクローナル抗体レロンリマブは、ＣＤ４＋Ｔ細胞に単独で添加された場合には、ｃＡＭＰレベルに影響を与えないが、ＣＣＬ５と一緒に投与された場合には、ｃＡＭＰレベルへのＣＣＬ５の作用を減弱させることがこれまでに示されている。国際公開第２０１６／２１０１３０号。同様に、レロンリマブ単独では、ＣＨＯ－Ｋ１細胞の走化性に影響を与えないが、レロンリマブはＣＣＬ５と一緒に投与された場合には、ＣＣＬ５により誘導される走化性を減少させる。国際公開第２０１６／２１０１３０号。これらの研究は、レロンリマブが、ＣＣＲ５に対してアゴニスト活性を有さないが、ＣＣＲ５への結合をＣＣＬ５と競合する阻害剤として作用することを示している。
モノクローナル抗体レロンリマブは、ＣＤ４＋Ｔ細胞に単独で添加された場合には、ｃＡＭＰレベルに影響を与えないが、ＣＣＬ５と一緒に投与された場合には、ｃＡＭＰレベルへのＣＣＬ５の作用を減弱させることがこれまでに示されている。国際公開第２０１６／２１０１３０号。同様に、レロンリマブ単独では、ＣＨＯ－Ｋ１細胞の走化性に影響を与えないが、レロンリマブはＣＣＬ５と一緒に投与された場合には、ＣＣＬ５により誘導される走化性を減少させる。国際公開第２０１６／２１０１３０号。これらの研究は、レロンリマブが、ＣＣＲ５に対してアゴニスト活性を有さないが、ＣＣＲ５への結合をＣＣＬ５と競合する阻害剤として作用することを示している。
【0018】
しかしながら、本開示においては、レロンリマブ単独では、in vitroで、Ｔ細胞のＣＣＲ５受容体シグナル伝達の下流にあるチロシンキナーゼリン酸化に影響を与えないこと、および、ＣＣＬ５によるかかるキナーゼリン酸化の阻害もしないことが示されている。これらの結果は、ＲＡＮＴＥＳに対するＣＣＲ５／ＣＣＬ５系の調節におけるレロンリマブの役割が、一貫していないという証拠、すなわち、レロンリマブは、これがなければＣＣＬ５／ＣＣＲ５結合から生じるであろう下流の活性の一部のみを遮断または阻害するという証拠を提供している。それゆえ、ＣＣＬ５競合結合阻害剤としてのレロンリマブの活性は、従来からＣＣＲ５／ＣＣＬ５系に関連しているとされた下流活性に関与するＣＣＬ５の能力に、複合的な（mixed）影響を与えることを示している。レロンリマブの役割およびその免疫調節作用のさらなる解明は、引き続く研究課題である。
【0019】
さらに、本開示においては、レロンリマブは、Ｔ細胞を欠損させたマウスモデルにおいて、腫瘍増殖の予防に予想外に有効であることが見出されており、このことは、レロンリマブがまた、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、またはその両方を介して、免疫応答を調節しおよび抗腫瘍作用を促進することを示している。したがって、非Ｔ細胞上、例えばＮＫ細胞上、Ｂ細胞上、またはその両方においてＣＣＲ５系に結合することにより誘発される活性を調節するレロンリマブの能力が判明した。また、重要なことに、レロンリマブは、非Ｔ細胞に対するその活性のみに基づき、マウスモデルにおける腫瘍増殖の予防に驚くほど有効であることが見出されており；それゆえ、このことは非Ｔ細胞治療アプローチを示唆している。
【0020】
本開示はさらに、ＣＣＲ５発現が、腫瘍増殖の加速に関連している一方で、レロンリマブが、ヒト化マウスにおいて、ｘＧＶＨＤ（異種移植片ＧＶＨＤ）の進行を遅らせるとともに、抗腫瘍活性を増大させることを示している。レロンリマブは、ＳＷ４８０腫瘍担持（tumor-bearing）マウスおよび非腫瘍担持マウスの両方において、ｘＧＶＨＤの発症を遅延させることが見出された。加えて、レロンリマブは、ヒト化マウスにおいて腫瘍の進行を効果的に遅延させ、その作用は８０日まで持続したが、非ヒト化マウスにおいては腫瘍増殖に対して何ら作用を有さないことが見出された。レロンリマブで処置した腫瘍担持ヒト化マウスから得られた末梢血の解析により、循環Ｔ細胞数の増加、ならびに、Ｂ細胞およびＮＫ細胞のパーセンテージの低下が示された。より詳細な解析により、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇの増加およびＣＤ４＋ＣＤ２５－Ｔｒｅｇの低下が示されているが、このことはレロンリマブによるＧＶＨＤの抑制に関連している可能性がある。
【0021】
本開示はまた、レロンリマブが、ＳＷ４８０ヒト結腸癌腫（colon carcinoma）細胞を移植したヒト化マウスにおいて転移負荷を減少させることをも立証している。転移性病変（二次部位病変と称される場合もある）における腫瘍阻害の程度は、原発性腫瘍の増殖阻害と比較して、驚くほどより顕著であった。腫瘍の新生血管形成（neoangiogenesis）は、腫瘍の増殖および転移に必要であるため、血管新生に対するレロンリマブの作用を評価した。レロンリマブは、腫瘍の血管新生を妨げることが見出されたが、このことは、観察された転移負荷の減少についてのメカニズムを示唆している。
【0022】
したがって、ある側面において、本開示は、がんおよび／またはＧＶＨＤの処置または予防における、モノクローナル抗体レロンリマブまたはその結合断片などの、ＣＣＲ５受容体の競合阻害剤の使用を対象としている。
【0023】
いくつかの態様において、本開示は、結腸がん転移を処置、阻害または予防する方法であって、それを必要とする対象に、
（ａ）レロンリマブ抗体またはその結合断片；（ｂ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸；（ｃ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター；（ｄ）（ｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片、（ｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸、あるいは（ｉｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクターを含む宿主細胞；あるいは（ｅ）ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤
を含む抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤を、投与することを含む、前記方法を提供する。
（ａ）レロンリマブ抗体またはその結合断片；（ｂ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸；（ｃ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター；（ｄ）（ｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片、（ｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸、あるいは（ｉｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクターを含む宿主細胞；あるいは（ｅ）ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤
を含む抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤を、投与することを含む、前記方法を提供する。
【0024】
いくつかの態様において、本開示は、結腸がんを罹患している対象において転移負荷を減少させる方法であって、それを必要とする対象に、（ａ）レロンリマブ抗体またはその結合断片；（ｂ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸；（ｃ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター；（ｄ）（ｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片、（ｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸、あるいは（ｉｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクターを含む宿主細胞；あるいは（ｅ）ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、抗ＣＣＲ５結合剤を含む抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤を、投与することを含む、前記方法を提供する。
【0025】
いくつかの態様において、本開示は、結腸がんを罹患している対象において腫瘍に関連する血管新生を減少させる方法であって、それを必要とする対象に、（ａ）レロンリマブ抗体またはその結合断片；（ｂ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸；（ｃ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター；（ｄ）（ｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片、（ｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸、あるいは（ｉｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクターを含む宿主細胞；あるいは（ｅ）ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、抗ＣＣＲ５結合剤を含む抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤を、投与することを含む、前記方法を提供する。
【0026】
いくつかの態様において、本開示は、転移性結腸がんの処置、阻害または予防のための、（ａ）レロンリマブ抗体またはその結合断片；（ｂ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸；（ｃ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター；（ｄ）（ｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片、（ｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸、あるいは（ｉｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクターを含む宿主細胞；あるいは（ｅ）ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤の使用を提供する。
【0027】
いくつかの態様において、本開示は、転移性がん病変の増殖を処置、阻害または予防する方法であって、それを必要とする対象に、ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、ＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤を投与することを含む、前記方法を提供する。
【0028】
いくつかの態様において、本開示は、転移性がんの拡散を予防する方法であって、それを必要とする対象に、（ａ）レロンリマブ抗体またはその結合断片；（ｂ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸；（ｃ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター；（ｄ）（ｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片、（ｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸、あるいは（ｉｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクターを含む宿主細胞；あるいは（ｅ）ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、抗ＣＣＲ５結合剤を含む抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤を、投与することを含む、前記方法を提供する。
【0029】
いくつかの態様において、本開示は、がんを予防するために、ＮＫ細胞上またはＢ細胞上のいずれかに存在するＣＣＲ５受容体に抗ＣＣＲ５結合剤を標的化する（targeting）方法を提供する
いくつかの態様において、本開示は、ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるチロシンキナーゼリン酸化を変化させない、ＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤を含む、がんの処置のための治療用組成物を提供する。
いくつかの態様において、本開示は、ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるチロシンキナーゼリン酸化を変化させない、ＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤を含む、がんの処置のための治療用組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0030】
【0031】
【0032】
【0033】
【0034】
【0035】
【0036】
【図13】図１３Ａ～１３Ｃは、ＣＣＲ５を発現するＦＡＣＳでソーティングされたＳＷ４８０結腸癌腫の増殖を表す。図１３Ａ。破片を除外するためのゲーティング（gating）（ＦＳＣ対ＳＳＣ）の後、７６．７０％の細胞がゲート１に包含されていた。図１３Ｂ。ゲート１からのＡＰＣ陽性細胞のヒストグラムであり、１０１－１０２ＡＰＣ間のインターバルゲート（interval gate）は、輝度が低い（dim）ＣＣＲ５陽性細胞を画定し（delineated）、２．５３－１．１４ＡＰＣのインターバルゲートは、輝度が高い（bright）ＣＣＲ５陽性細胞を画定した。図１３Ｃ。ソーティングされた細胞を、非照射ＮＳＧマウスの左体側（left flank）（輝度低、ＬＯ）および右体側（right flank）（輝度高、ＨＩ）に接種した（部位あたり２．５×１０５細胞）。したがって、各マウスは２個の腫瘍を担持しており、そのそれぞれの対照として機能した。ベースの（basal）増殖速度が表されており；処置は施されていない。
【0037】
【図14】図１４Ａおよび１４Ｂは、レロンリマブが、ヒト化ＳＷ４８０腫瘍担持マウスにおけるｘＧＶＨＤの発症を遅延させることを示す。亜致死照射された（sub-lethally irradiated）ＮＳＧマウスに、正常ヒトＢＭ（107 Ficoll-Hypaque精製単核細胞）を０日に接種した。図１４Ａは、マウスの平均体重を示す。図１４Ｂは、生存％を示す。処置群：ＩｇＧ－５週：ＩｇＧ２ｍｇ ｉ．ｐ．２回／週を３５日間の後、中止（非腫瘍担持）、Ｌｅｒ－５週：レロンリマブ２ｍｇ ｉｐ ２回／週を３５日間の後、中止（非腫瘍担持、ＩｇＧ－ｔｕｍ：ＩｇＧ２ｍｇ ｉｐ２回／週を継続、３５日にＳＷ４８０（２．５ｘ１０５細胞ｓ．ｃ．）接種、Ｌｅｒ－ｔｕｍ：レロンリマブ２ｍｇ ｉｐ２回／週を継続、３５日にＳＷ４８０接種、ｎ＝８マウス／群。
【0038】
【0039】
【図16】図１６は、末梢血Ｂ、Ｔ、およびＮＫ細胞に対するレロンリマブの作用を示す。亜致死照射されたＮＳＧマウスに、正常ヒトＢＭ単核細胞を接種した。処置群：ＩｇＧ－５週：ＩｇＧ２ｍｇ ｉ．ｐ．２回／週を３５日間の後、中止（非腫瘍担持）、Ｌｅｒ－５週：レロンリマブ２ｍｇ ｉｐ２回／週を３５日間の後、中止（非腫瘍担持）、ＩｇＧ－ｔｕｍ：ＩｇＧ２ｍｇ ｉｐ２回／週を継続、３５日にＳＷ４８０（２．５ｘ１０５細胞ｓ．ｃ．）を接種、Ｌｅｒ－ｔｕｍ：レロンリマブ２ｍｇ ｉｐ２回／週を継続、３５日にＳＷ４８０を接種、ｎ＝８マウス／群。末梢血は、６２日に解析した（ｈＣＤ４５＋でゲーティング）。有意なｐ値が示されている。
【0040】
【0041】
【0042】
【図19】図１９Ａおよび１９Ｂは、皮膚血管新生アッセイを示す。腫瘍が直径２ｍｍより大きく増殖するためには、新しい宿主血管が誘導されなければならない。ＳＷ４８０腫瘍細胞（２ｘ１０６）は、ヒト化ＮＳＧマウスの真皮（dermis）に、体積０．１ｍｌのＰＢＳ中の懸濁液で接種した。マウスは、２ｍｇのＩｇＧまたはレロンリマブの２回／週での皮内投与により処置した。１０日後にマウスを安楽死させ、接種部位を１２．５倍の倍率で写真撮影した。ＶＥＳＧＥＮソフトウェアを用いて、血管数、直径、分岐、血管世代数、およびネットワーク特性を解析した。ＶＥＳＧＥＮにより血管は分岐世代Ｇ１－Ｇ９へ割付される。ここでは、標本のＶＥＳＧＥＮ出力画像は、動脈終点領域についての、１０の連続的により小さい分岐世代（Ｇ１－Ｇ９）への血管分類を例示している。血管の分岐世代は、（１）血管径の減少および（２）ほぼ対称である血管分岐（すなわち親血管から分岐する次世代の血管径がほぼ等しい場合）により決定される。 図１９Ａは、顕微鏡写真および血管サイズ解析の結果を示す。図１９Ｂは、総血管面積、血管長密度、血管数、および腫瘍面積についての定量化データを示す。レロンリマブ処置マウスは、ＩｇＧ処置マウスと比較して、新生血管の形成（neo vessel formation）が２倍を超えて減少していたが、これは、総画素数、血管長密度、および血管の総数の減少によって証明されている。最も劇的であったのは、より大きな血管（世代１～３）と比較して、より小さな血管（世代４～９）の減少である。
【0043】
詳細な説明
本開示は、ＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤を投与することを含む、癌を処置または予防するための方法を提供する。いくつかの態様においては、競合阻害剤は、レロンリマブまたはその結合断片を含む。
本開示は、ＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤を投与することを含む、癌を処置または予防するための方法を提供する。いくつかの態様においては、競合阻害剤は、レロンリマブまたはその結合断片を含む。
【0044】
用語解説
本開示をより詳細に記載する前に、本明細書において用いられる特定の用語の定義を提供することは、その理解に有用であり得る。他に定義されていない限り、本明細書において用いられる全ての技術的および科学的用語は、この発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。追加的な定義は、本開示全体を通して記載される。
本開示をより詳細に記載する前に、本明細書において用いられる特定の用語の定義を提供することは、その理解に有用であり得る。他に定義されていない限り、本明細書において用いられる全ての技術的および科学的用語は、この発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。追加的な定義は、本開示全体を通して記載される。
【0045】
本記載において、全ての濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲は、特に示されていない限り、記載された範囲内の任意の整数値、および適切な場合にはその分数（整数の１０分の１および１００分の１など）を包含することが理解される。また、用量などの身体的特徴に関連している本明細書において記載されている全ての数の範囲は、特に指示されていない限り、記載された範囲内の任意の整数を包含することが理解される。本明細書において用いられている通り、用語「約」は、特に指示されていない限り、示された範囲、値、または構造の±２０％を意味する。
【0046】
本明細書において用いられる用語「ａ」および「ａｎ」は、「１以上」の列挙された構成要素に言及するものと理解されるべきである。選択肢（alternative）（例えば、「または」）の使用は、選択肢のいずれか一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせを意味すると理解されるべきである。
本明細書において用いられている通り、用語「包含する（include）」、「有する」、および「含む（comprise）」は、同義的に使用され、これらの用語およびその変化形は非限定的に解釈されることが意図される。
本明細書において用いられている通り、用語「包含する（include）」、「有する」、および「含む（comprise）」は、同義的に使用され、これらの用語およびその変化形は非限定的に解釈されることが意図される。
【0047】
用語「から本質的になる」は、クレームの範囲を、特定された物質または工程に、あるいはクレームに記載された発明の基本的特性に実質的に影響を与えないこれらのものに、限定する。例えば、タンパク質ドメイン、領域、またはモジュール（module）（例えば、結合ドメイン、ヒンジ領域、リンカーモジュール）あるいはタンパク質（１つ以上のドメイン、領域、またはモジュールを有し得る）は、ドメイン、領域、またはモジュールあるいはタンパク質のアミノ酸配列が、伸長、欠失、変異またはこれらの任意の組み合わせ（例えば、アミノ末端またはカルボキシ末端あるいはドメイン間のアミノ酸）を包含し、これらが、組み合わせて、ドメイン、領域、またはモジュールあるいはタンパク質の長さの、最大で２０％（例えば、最大で１５％、１０％、８％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％）に寄与し、ドメイン、領域、モジュール、またはタンパク質の活性（例えば、結合タンパク質の標的結合親和性）に実質的に影響を与えない（例えば、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％または１％以下など、５０％を超えて活性を減少させない）場合に、具体的なアミノ酸配列「から本質的になる」。
【0048】
本明細書において用いられている通り、「ケモカイン」は、白血球の活動を促進するサイトカインを意味する。ケモカインは、アミノ末端の２個のシステイン残基が直接的に隣接しているか、または１個のアミノ酸により隔てられているかに応じて、Ｃｙｓ－ＣｙｓまたはＣｙｓ－Ｘ－Ｃｙｓのいずれかとして特徴付けされる場合がある。これには、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳとしても知られている）、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、またはＳＤＦ－１等が包含されるが、これらに限定されない。ケモカインは、細胞表面受容体への結合を介してその作用を発揮する。
【0049】
本明細書において用いられている通り、「ケモカイン受容体」は、ケモカインと結合する７回膜貫通型細胞表面タンパク質の相同性ファミリーのメンバーを意味する。
本明細書において用いられている通り、「ＣＣＲ５」は、Ｃ－Ｃグループのケモカインのメンバーと結合するケモカイン受容体であり、そのアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号1705896で提供されるもの、および関連する多型バリアントを含む。
本明細書において用いられている通り、「ＣＣＲ５」は、Ｃ－Ｃグループのケモカインのメンバーと結合するケモカイン受容体であり、そのアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号1705896で提供されるもの、および関連する多型バリアントを含む。
【0050】
本明細書において用いられている通り、「抗体」は、２本の重鎖および２本の軽鎖を含み、抗原を認識する免疫グロブリン分子を意味する。免疫グロブリン分子は、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＭを包含するがこれらに限定されない、任意の一般的に知られているクラスまたはアイソタイプに由来していてもよい。ＩｇＧサブクラスもまた、当業者にはよく知られており、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を包含するが、これらに限定されない。これには、例として、天然に存在する抗体と天然に存在しない抗体の両方が包含される。具体的には、「抗体」には、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体、ならびに、その１価および２価の断片が包含される。さらに、「抗体」には、キメラ抗体、全合成抗体、一本鎖抗体、およびその断片が包含される。任意に、抗体は、検出可能なマーカーにより標識されていてもよい。検出可能なマーカーには、例えば、放射性または蛍光性マーカーが包含される。抗体は、ヒト抗体または非ヒト抗体であってもよい。非ヒト抗体は、ヒトにおける免疫原性を減少させるために、組換え法によりヒト化されていてもよい。抗体をヒト化する方法は、当業者に知られている。
【0051】
本明細書において用いられている通り、「モノクローナル抗体」は、「ｍＡｂ」とも呼ばれるが、その一次配列が本質的に同一であり、かつ同じ抗原特異性を示す抗体分子を記載するのに用いられる。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、トランスジェニック、または当業者に知られている他の技術によって産生され得る。
【0052】
本明細書において用いられている通り、「重鎖」は、１つの可変ドメイン（ＶＨ）および３つもしくは４つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４）から構成される抗体分子の大きいほうのポリペプチド、またはその断片を意味する。
本明細書において用いられている通り、「軽鎖」は、１つの可変ドメイン（ＶＬ）および１つの定常ドメイン（ＣＬ）から構成される抗体分子の小さいほうのポリペプチド、またはその断片を意味する。
本明細書において用いられている通り、「軽鎖」は、１つの可変ドメイン（ＶＬ）および１つの定常ドメイン（ＣＬ）から構成される抗体分子の小さいほうのポリペプチド、またはその断片を意味する。
【0053】
本明細書において用いられている通り、抗体の「結合断片」あるいは「抗原結合断片または部分」は、損なわれていない(intact)抗体により認識される抗原標的分子と結合する能力を有するまたは保持する、損なわれていない抗体の断片または部分に言及し、抗原結合断片（fragment antigen binding）（Ｆａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、組み換えＩｇＧ（ｒＩｇＧ）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を包含する一本鎖抗体断片、および単一ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ）断片を包含する。この用語は、細胞内抗体（intrabodies）、ペプチボディ（peptibodies）、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、およびヘテロ複合体（heteroconjugate）抗体、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、タンデムジｓｃＦｖ、およびタンデムトリｓｃＦｖなどの、免疫グロブリンの遺伝子操作されたまたはその他の方法で改変された形態を包含する。
【0054】
本明細書において用いられている通り、「Ｆａｂ」は、１本の軽鎖および重鎖の一部からなる免疫グロブリンの一価の抗原結合断片を意味する。簡単なパパイン消化または組換え法によって得ることができる。
本明細書において用いられている通り、「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、両方の軽鎖および両方の重鎖の一部からなる免疫グロブリンの２価の抗原結合断片を意味する。簡単なペプシン消化または組換え法によって得ることができる。
本明細書において用いられている通り、「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、両方の軽鎖および両方の重鎖の一部からなる免疫グロブリンの２価の抗原結合断片を意味する。簡単なペプシン消化または組換え法によって得ることができる。
【0055】
本明細書において用いられている通り、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」は、抗体の可変ドメインにおけるアミノ酸の高度可変配列を意味する。ＣＤＲおよびフレームワーク領域のナンバリングは、例えば、the Kabat, Chothia, EU, IMGT, and AHo numbering schemes（例えば、Kabat et al., “Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5th ed.; Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)); Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003; Honegger and Plueckthun, J. Mol. Bio. 309:657-670 (2001)参照）などの任意の既知の方法またはスキームにしたがって決定することができる。Antigen receptor Numbering And Receptor Classification（ANARCI）ソフトウェアツール（2016, Bioinformatics 15：298-300）を用いることにより、等価である残基位置は、アノテーションを付すことができ、異なる分子が比較される。したがって、１つのナンバリングスキームに従って本明細書で提供されている例示的な可変ドメイン（ＶＨまたはＶＬ）配列のＣＤＲの同定は、異なるナンバリングスキームを用いて決定された同じ可変ドメインのＣＤＲを含む抗体を排除するものではない。
【0056】
本明細書において用いられている通り、「ヒト化（humanized）」は、ＣＤＲ領域外のアミノ酸の一部、大部分、または全部が、ヒト免疫グロブリン分子由来の対応するアミノ酸で置換されている抗体を記載する。抗体のヒト化形態の一つの態様においては、ＣＤＲ領域外のアミノ酸の一部、大部分、または全部が、ヒト免疫グロブリン分子由来のアミノ酸で置換されているが、１つ以上のＣＤＲ領域内のアミノ酸の一部、大部分、または全部は変更されていない。アミノ酸の少量の付加、欠失、挿入、置換、または修飾は、それらが所定の抗原に結合する抗体の能力を損なわない限り、許容される。適切なヒト免疫グロブリン分子には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、およびＩｇＭ分子が包含されるであろう。「ヒト化」抗体は、元の抗体と同様の抗原特異性、例えば、本開示においてはＣＣＲ５と結合する能力、を保持するであろう。
【0057】
当業者は、主題発明のヒト化抗体をどのように作製するかを知っているであろう。様々な刊行物（そのうちのいくつかは参照により本願に組み込まれる）にも、ヒト化抗体をどのように作製するかが記載されている。例えば、米国特許明細書第４，８１６，５６７号に記載されている方法は、ある抗体の可変領域および別の抗体の定常領域を有するキメラ抗体の製造を含んでいる。米国特許第５，２２５，５３９号は、ヒト化抗体を製造するための別のアプローチを記載している。この特許は、ヒト化抗体が所望の標的を認識するが、ヒト対象の免疫システムによって有意に認識されないように、ある免疫グロブリンの可変領域のＣＤＲが異なる特異性を有する免疫グロブリンからのＣＤＲで置換されたヒト化抗体を製造するための組み換えＤＮＡ技術の使用を記載している。具体的には、ＣＤＲをフレームワークに移植するために、部位特異的変異導入が用いられている。
【0058】
抗体をヒト化するための他のアプローチは、米国特許第５，５８５，０８９号および第５，６９３，７６１号、ならびに国際公開第９０／０７８６１号において記載されており、これらには、ヒト化免疫グロブリンを製造するための方法が記載されている。これらは、ドナー（donor）免疫グロブリンからの１つ以上のＣＤＲおよび可能性のある付加アミノ酸、ならびにアクセプトする（accepting）ヒト免疫グロブリンからのフレームワーク領域を有する。これらの特許は、所望の抗原に対する抗体の親和性を増加させる方法を記載している。フレームワークにおけるいくつかのアミノ酸は、アクセプター（acceptor）よりもむしろドナーにおけるそれらの位置のアミノ酸と同じになるように選択される。具体的には、これらの特許は、マウスモノクローナル抗体のＣＤＲを、ヒト免疫グロブリンのフレームワークおよび定常領域と組み合わせることによる、受容体に結合するヒト化抗体の調製を記載している。ヒトのフレームワーク領域は、マウスの配列との相同性が最大になるように選択することができる。コンピュータモデルは、ＣＤＲまたは特異的抗原と相互作用する可能性のあるフレームワーク領域のアミノ酸を同定するのに用いることができ、次いで、これらの位置にマウスのアミノ酸を用いてヒト化抗体を創り出すことができる。
【0059】
上記の米国特許第５，５８５，０８９号および第５，６９３，７６１号、ならびに国際公開第９０／０７８６１号はまた、ヒト化抗体を設計するのに用いることができる、４つの可能性のある基準を提案している。第一の提案は、アクセプターについて、ヒト化されることになるドナー免疫グロブリンと著しく相同性の高い特定のヒト免疫グロブリンからのフレームワークの使用、または、多数のヒト抗体からの共通フレームワークの使用であった。第二の提案は、ヒト免疫グロブリンのフレームワークのアミノ酸が通常のものでなく（unusual）、その位置のドナーのアミノ酸がヒトの配列に典型的である場合には、アクセプターよりもむしろドナーのアミノ酸を選択してよい、ということであった。
【0060】
第三の提案は、ヒト化免疫グロブリン鎖の３つのＣＤＲに直接的に隣接する位置においては、アクセプターのアミノ酸よりもむしろドナーのアミノ酸を選択してよいということであった。第四の提案は、アミノ酸が、抗体の３次元モデルにおいてＣＤＲの３Ａ内に側鎖原子を有すると予測され、およびＣＤＲと相互作用することができると予測されるフレームワーク位置における、ドナーのアミノ酸残基を用いることであった。上記の方法は、当業者がヒト化抗体を作製するのに採用し得る方法のいくつかの例示に過ぎない。ヒト化抗体の結合の親和性および／または特異性は、Wu et al., J. MOL. BIOL., 284:151 (1999)ならびに米国特許第６，１６５，７９３号；第６，３６５，４０８号；および第６，４１３，７７４号に記載されている通り、進化工学（directed evolution）の方法を用いて増加させることができる。
【0061】
ヒト化抗体の可変領域は、ヒト免疫グロブリンの免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分に連結されていてもよい。一つの態様においては、ヒト化抗体は、軽鎖定常領域および重鎖定常領域の両方を含有する。重鎖定常領域は、通常、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、および、場合によってＣＨ４領域、を包含する。一つの態様においては、ヒト化抗体の定常領域は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプのものである。
【0062】
本明細書において開示されている抗体または結合断片は、標識化されていてもよく、または非標識化されていてもよい。非標識化抗体は、ヒト免疫グロブリン定常領域に特異的な抗体などの、ヒト化抗体に反応性の他の標識化抗体（二次抗体）と組み合わせて用いることができる。あるいは、抗体は直接的に標識化されてもよい。放射性核種、蛍光物質（fluor）、酵素、酵素基質、酵素補因子、酵素阻害剤、リガンド（特にハプテン）などの、幅広い様々な標識を採用することが可能である。数多くの種類のイムノアッセイが入手可能であり、ＣＣＲ５発現細胞の検出またはＣＣＲ５を発現することができる細胞におけるＣＣＲ５調節の検出のためのものは当業者によく知られている。
【0063】
本開示はまた、非誘導体化抗体断片よりも、血清半減期の増加、循環における平均滞留時間（ＭＲＴ）の増加、および／または血清クリアランス速度の減少をもたらす、有効なサイズまたは分子量を有する、抗体または抗体断片－ポリマー複合体（polymer conjugate）をも提供する。抗体断片－ポリマー複合体は、所望の抗体断片を不活性ポリマーで誘導体化することにより作製することができる。所望の見かけ上のサイズを有する複合体を提供する、または選択された事実上の分子量を有する、任意の不活性ポリマーが、本発明の抗体断片－ポリマー複合体の構築における使用に適していることが理解されるであろう。
【0064】
多くの不活性ポリマーは、医薬における使用に適している。例えば、Davis et al., Biomedical Polymers: Polymeric Materials and Pharmaceuticals for Biomedical Use, pp. 441-451 (1980)を参照。本明細書において開示されている抗体または抗体断片－ポリマー複合体には、非タンパク質性ポリマーが用いられる。非タンパク質性ポリマーは、通常、親水性合成ポリマー、すなわち、自然界においては他に見出されないポリマーである。しかしながら、自然界に存在するが、組換えまたはin vitroの方法によって製造されるポリマーもまた有用であり、自然の供給源から単離されるポリマーもまた同様である。
【0065】
親水性ポリビニルポリマーは、本発明の範囲に入り、例えば、ポリビニルアルコールおよびポリビニルピロリドンである。特に有用なのは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリアルキレンエーテル；ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、およびポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンとのブロックコポリマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）などのポリオキシアルキレン；ポリメタクリラート；カルボマー；糖モノマーであるＤ－マンノース、Ｄ－およびＬ－ガラクトース、フコース、フルクトース、Ｄ－キシロース、Ｌ－アラビノース、Ｄ－グルクロン酸、シアル酸、Ｄ－ガラクトロン酸、Ｄ－マンヌロン酸（例えば、ポリマンヌロン酸、またはアルギン酸）、Ｄ－グルコサミン、Ｄ－ガラクトサミン、Ｄ－グルコースならびにノイラミン酸を含む、分岐または非分岐多糖類（これには、ラクトース、アミロペクチン、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、アミロース、硫酸デキストラン、デキストラン、デキストリン、グリコーゲンなどのホモ多糖類およびヘテロ多糖類、または酸性ムコ多糖類の多糖サブユニット、例えば、ヒアルロン酸、ポリソルビトールおよびポリマンニトールなどの糖アルコールのポリマー、ヘパリン、あるいはヘパロンが包含される）である。
【0066】
架橋前のポリマーは、水溶性である必要はないものの、水溶性であることが好ましいが、最終的な複合体は水溶性でなければならない。好ましくは、複合体は、少なくとも約０．０１ｍｇ／ｍｌ、およびより好ましくは少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌ、およびさらにより好ましくは少なくとも約１ｍｇ／ｍｌの水溶性を示す。一つの態様においては、ポリマーは、複合体の形態では高度に免疫原性であってはならず、また、複合体が静脈内注入または注射の経路で投与されることを意図する場合には、それに適合しない粘性を有していてはならない。
【0067】
一つの態様において、ポリマーは、反応性である単一の基のみを含有する。これは、タンパク質分子の架橋を回避するのに役立つ。しかしながら、架橋を減少させるために反応条件を最大化すること、あるいは実質的に均質な誘導体を回収するためにゲルろ過またはイオン交換クロマトグラフィーによって反応生成物を精製することは、本発明の範囲内である。他の態様においては、ポリマーは、複数の抗体断片をポリマー骨格に連結する目的で、２種以上の反応性基を含有する。
【0068】
ゲルろ過またはイオン交換クロマトグラフィーは、実質的に均質な形態の所望の誘導体を回収するのに用いることができる。
ポリマーの分子量は、約５００，０００Ｄまでの範囲とすることができ、および好ましくは少なくとも約２０，０００Ｄ、または少なくとも約３０，０００Ｄ、または少なくとも約４０，０００Ｄである。選択される分子量は、達成すべき複合体の有効サイズ、ポリマーの性質（例えば、直鎖または分岐などの構造）および誘導体化の程度、すなわち抗体断片あたりのポリマー分子の数、ならびに抗体断片における１以上のポリマー付着部位に依存し得る。
ポリマーの分子量は、約５００，０００Ｄまでの範囲とすることができ、および好ましくは少なくとも約２０，０００Ｄ、または少なくとも約３０，０００Ｄ、または少なくとも約４０，０００Ｄである。選択される分子量は、達成すべき複合体の有効サイズ、ポリマーの性質（例えば、直鎖または分岐などの構造）および誘導体化の程度、すなわち抗体断片あたりのポリマー分子の数、ならびに抗体断片における１以上のポリマー付着部位に依存し得る。
【0069】
ポリマーは、ポリマーおよび連結される抗体断片の１個以上のアミノ酸残基と反応する多官能性架橋剤を介して、抗体断片に共有結合により連結させることができる。しかしながら、誘導体化されたポリマーを抗体断片と反応させることにより、ポリマーを直接的に架橋すること、あるいはその逆もまた本発明の範囲内である。
抗体断片における共有結合架橋部位には、Ｎ末端アミノ基、およびリジン残基に見出されるイプシロンアミノ基、ならびに他のアミノ基、イミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、水酸基、または他の親水性基が包含される。米国特許第６，４５８，３５５号に記載されている通り、ポリマーは、多官能性（通常は、二官能性）架橋剤を用いることなく、抗体断片に直接的に共有結合していてもよい。
抗体断片における共有結合架橋部位には、Ｎ末端アミノ基、およびリジン残基に見出されるイプシロンアミノ基、ならびに他のアミノ基、イミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、水酸基、または他の親水性基が包含される。米国特許第６，４５８，３５５号に記載されている通り、ポリマーは、多官能性（通常は、二官能性）架橋剤を用いることなく、抗体断片に直接的に共有結合していてもよい。
【0070】
かかるポリマーによる置換の程度は、抗体断片における反応部位の数、ポリマーの分子量、親水性、および他の特性、ならびに選択される特定の抗体断片の誘導体化部位に応じて変わるであろう。一般には、複合体は１～約１０のポリマー分子を含有するが、本発明の抗体断片に付着されるポリマー分子の数は、より多いこともまた、企図されている。所望の量の誘導体化は、時間、温度、および他の反応条件を変えて、置換の程度を変える実験マトリックスを用いることによって容易に達成され、その後、複合体のポリマー置換のレベルは、サイズ排除クロマトグラフィーまたは当該技術分野において知られている他の手段によって決定される。
【0071】
本発明の抗体断片を修飾するための官能基化ＰＥＧポリマーは、Shearwater Polymers, Inc.（ハンツビル、アラバマ州）から入手可能である。かかる市販のＰＥＧ誘導体は、アミノ－ＰＥＧ、ＰＥＧアミノ酸エステル、ＰＥＧ－ヒドラジド、ＰＥＧ－チオール、ＰＥＧ－コハク酸エステル、カルボキシメチル化ＰＥＧ、ＰＥＧ－プロピオン酸、ＰＥＧアミノ酸、ＰＥＧスクシンイミジルコハク酸、ＰＥＧスクシンイミジルプロピオン酸、カルボキシメチル化ＰＥＧのスクシンイミジルエステル、ＰＥＧのスクシンイミジルカーボナート、アミノ酸ＰＥＧのスクシンイミジルエステル、ＰＥＧ－オキシカルボニルイミダゾール、ＰＥＧ－ニトロフェニルカーボナート、ＰＥＧトレシラート（tresylate）、ＰＥＧ－グリシジルエーテル、ＰＥＧ－アルデヒド、ＰＥＧ－ビニルスルホン、ＰＥＧ－マレイミド、ＰＥＧ－オルトピリジルジスルフィド、ヘテロ官能基性ＰＥＧ、ＰＥＧビニル誘導体、ＰＥＧシランおよびＰＥＧホスホリドを包含するが、これらに限定されない。これらのＰＥＧ誘導体をカップリングさせるための反応条件は、タンパク質、所望のＰＥＧ化の程度、および利用するＰＥＧ誘導体に応じて変わるであろう。ＰＥＧ誘導体の選択に関与するいくつかの要因には、所望の付着ポイント（リジンまたはシステインＲ基など）、誘導体の加水分解安定性および反応性、連結の安定性、毒性および抗原性、分析への適性が包含される。任意の特定の誘導体の使用についての具体的な説明書は、製造業者から入手可能である。その複合体は、ゲルろ過またはイオン交換ＨＰＬＣによって未反応の出発物質から分離することができる。
【0072】
本明細書において用いられている通り、「抗ケモカイン受容体抗体」は、ケモカイン受容体上のエピトープを認識し、かつこれに結合する抗体を意味する。本明細書において用いられている通り、「抗ＣＣＲ５抗体」は、ＣＣＲ５ケモカイン受容体上のエピトープを認識し、かつこれに結合するモノクローナル抗体を意味する。
本明細書において用いられている通り、「エピトープ」は、抗体または他の化合物を結合させるための、表面を形成する１個以上の分子の一部を意味する。エピトープは、連続または非連続のアミノ酸、炭水化物、あるいは他の非ペプチジル部位またはオリゴマー特異的表面を含み得る。
本明細書において用いられている通り、「ポリペプチド」は、ペプチド結合によって連結されている２個以上のアミノ酸を意味する。
本明細書において用いられている通り、「エピトープ」は、抗体または他の化合物を結合させるための、表面を形成する１個以上の分子の一部を意味する。エピトープは、連続または非連続のアミノ酸、炭水化物、あるいは他の非ペプチジル部位またはオリゴマー特異的表面を含み得る。
本明細書において用いられている通り、「ポリペプチド」は、ペプチド結合によって連結されている２個以上のアミノ酸を意味する。
【0073】
本明細書において用いられている通り、「核酸分子」または「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡまたはＤＮＡの形態であってよく、これには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および合成ＤＮＡが包含される。核酸分子は、二本鎖であっても一本鎖であってもよく、一本鎖の場合には、コード鎖であっても非コード鎖（アンチセンス鎖）であってもよい。コード分子は、当該技術分野で既知のコード配列と同一のコード配列を有していてもよく、あるいは、遺伝子コードの重複性もしくは縮重性の結果として、またはスプライシングによって、同じポリペプチドをコードすることができる、異なるコード配列を有していてもよい。
【0074】
抗体または結合断片の「アナログ」には、保存的アミノ酸置換により抗体または結合断片と異なっている分子が包含される。アミノ酸置換を保存的または非保存的として分類する目的で、アミノ酸を以下のようにグループ化することができる：グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖の配向性に影響する残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；およびグループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は、同じクラスのアミノ酸間の置換を伴う。非保存的置換は、これらクラスのうちのあるクラスのメンバーを他のクラスのメンバーと交換することに相当する。
【0075】
遺伝子コードの縮重性のため、様々な核酸配列が本明細書において開示されるタンパク質またはポリペプチドをコードする。例えば、相同である核酸分子は、参照ヌクレオチド配列と少なくとも約９０％同一であるヌクレオチド配列を含み得る。より好ましくは、ヌクレオチド配列は、参照ヌクレオチド配列と少なくとも約９５％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一、または少なくとも約９９％同一である。相同性は、当業者によく知られている、様々な公開されているソフトウェアツールを用いて計算することができる。例示的なツールには、国立衛生研究所の国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のウェブサイトから入手可能なＢＬＡＳＴシステムが包含される。
【0076】
高度に相同であるヌクレオチド配列を同定する方法の１つは、核酸ハイブリダイゼーションを介するものである。それゆえ、相同である核酸分子は、高ストリンジェンシー（high stringency）条件下でハイブリダイズする。関連配列の同定はまた、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および関連核酸配列のクローニングに適した他の増幅技術を用いて達成することも可能である。好ましくは、ＰＣＲプライマーは、ＣＤＲなどの目的の核酸配列の一部を増幅するように選択される。
【0077】
本明細書において用いられている用語「高ストリンジェンシー条件」は、当技術分野でよく知られたパラメータに言及する。核酸ハイブリダイゼーションのパラメータは、かかる方法をまとめた参考文献、例えば、MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, J. Sambrook, et al., eds., Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989)、またはCURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, F. M. Ausubel, et al., eds., John Wiley & Sons, Inc., New Yorkに見出すことができる。高ストリンジェンシー条件の一例は、ハイブリダイゼーションバッファー（３．５×ＳＳＣ、０．０２％Ｆｉｃｏｌｌ、０．０２％ポリビニルピロリドン、０．０２％ウシ血清アルブミン、２．５ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＩＩ７）、０．５％ＳＤＳ、２ｍＭ ＥＤＴＡ）中で摂氏６５度でのハイブリダイゼーションである。ＳＳＣは、０．１５Ｍ塩化ナトリウム／０．０１５Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ７；ＳＤＳはドデシル硫酸ナトリウム；およびＥＤＴＡはエチレンジアミン四酢酸である。ハイブリダイゼーション後、核酸が転写された膜は、例えば、室温で２×ＳＳＣ、次いで、摂氏６８度までの温度で０．１～０．５×ＳＳＣ／０．１×ＳＤＳで洗浄する。
【0078】
本明細書において用いられている通り、用語「ベクター」は、別の核酸を運搬することができる核酸分子に言及する。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス、またはファージであってもよい。「発現ベクター」は、適切な環境に存在する場合に、ベクターが運ぶ１種以上の遺伝子によってコードされるタンパク質を発現させることができるベクターである。
【0079】
核酸配列は、その配列が発現制御配列と作動可能に連結された（すなわち、それが確実に機能するように配置された）後、宿主において発現され得る。これらの発現ベクターは、典型的には、エピソームとして、または宿主染色体ＤＮＡの一体となっている部分として、宿主生物において複製可能である。一般的に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞が検出できるようにするために、選択マーカー、例えばテトラサイクリンまたはネオマイシン、を含有するであろう。例えば、米国特許第４，７０４，３６２号（これは参照により本明細書に組み込まれる）参照。
【0080】
大腸菌は、本発明のＤＮＡ配列のクローニングに特に有用な原核生物宿主の１種である。使用に適した他の微生物宿主には、枯草菌などの桿菌、ならびに、サルモネラ、セラチア、および様々なシュードモナス属などの他の腸内細菌科が包含される。これらの原核生物宿主中で、発現ベクターを作製することも可能であり、かかるベクターは、典型的には、宿主細胞に適合した発現制御配列（例えば、複製起点）を含むであろう。加えて、ラクトースプロモーターシステム、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーターシステム、ベータ－ラクタマーゼプロモーターシステム、またはファージラムダからのプロモーターシステムなどの、任意の数の様々なよく知られているプロモーターが存在するであろう。プロモーターは、典型的には、任意にオペレーター配列により、発現を制御し、ならびに、転写および翻訳を開始および完了するためのリボソーム結合部位配列等を有することになるであろう。
【0081】
酵母などの他の微生物もまた、発現に有用であり得る。サッカロミセスは、好ましい宿主であり、所望に応じ、３－ホスホグリセリン酸キナーゼまたは他の解糖系酵素を包含するプロモーター、ならびに、複製起点、終結配列などの発現制御配列を有する、適したベクターを含む。
【0082】
微生物に加えて、哺乳動物組織細胞培養もまた、本発明のポリペプチドの発現および産生に用いることができる。Winnacker, From Genes to Clones, VCH Publishers, New York, N.Y. (1987)を参照。真核細胞が実際に好ましいのは、損なわれていない免疫グロブリンを分泌することができる数多くの適した宿主細胞株が当技術分野で開発されているからであるが、これには、ＣＨＯ細胞株、種々のＣＯＳ細胞株、ＨｅＬａ細胞、好ましくは骨髄腫細胞株等、および形質転換Ｂ細胞またはハイブリドーマが包含される。これらの細胞のための発現ベクターは、複製起点、プロモーター、エンハンサーなどの発現制御配列（Queen et al., IMMUNOL. REV., 89: 49-68 (1986)、これは参照により本明細書に組み込まれる）、ならびに、リボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、および転写終結配列などの必要なプロセシング情報部位を包含し得る。好ましい発現制御配列は、免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、アデノウイルス、サイトメガロウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。
【0083】
目的のＤＮＡセグメント（例えば、重鎖および軽鎖をコードする配列および発現制御配列）を含有するベクターは、細胞宿主の種類に応じて変わる、よく知られている方法によって宿主細胞内に導入することが可能である。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションは、一般的に原核生物細胞に利用されるのに対し、リン酸カルシウム処理またはエレクトロポレーションは、他の細胞宿主に用いられ得る。一般に、Maniatis et al., MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Press (1982)（これは参照により本明細書に組み込まれる）を参照。
【0084】
一度発現された後は、本発明の完全抗体、その二量体、各軽鎖および各重鎖、あるいは他の免疫グロブリン形態または結合断片は、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを包含する、当技術分野の標準的手法にしたがって精製することができる。一般に、R.Scopes, PROTEIN PURIFICATION, Springer-Verlag, New York (1982)を参照。医薬用途には、少なくとも均質性が約９０～９５％である実質的に純粋な免疫グロブリンが好ましく、および均質性が９８～９９％以上であるのが最も好ましい。所望に応じて一度部分的にまたは均質に精製された後は、ポリペプチドは次いで、治療的に（体外を包含する）またはアッセイ手法、免疫蛍光染色などを開発するおよび行う際に、用いることができる。一般に、IMMUNOLOGICAL METHODS、Vols．I and II, Lefkovits and Pernis, eds., Academic Press, New York, N.Y. (1979 and 1981)を参照。
【0085】
本明細書において用いられている通り、「阻害する」は、組成物の存在下で、その組成物なしで生じるであろう量と比較して、その量が減少することを意味する。
本明細書において用いられている用語「競合阻害剤」は、標的への結合について、参照分子と競合し、それによって参照分子の標的における作用を鈍化させる、阻害する、弱める、減少させる、または遮断する分子に言及する。例えば、レロンリマブは、ＣＣＲ５受容体に対するＣＣＬ５結合の競合阻害剤である。
本明細書において用いられている用語「競合阻害剤」は、標的への結合について、参照分子と競合し、それによって参照分子の標的における作用を鈍化させる、阻害する、弱める、減少させる、または遮断する分子に言及する。例えば、レロンリマブは、ＣＣＲ５受容体に対するＣＣＬ５結合の競合阻害剤である。
【0086】
本開示において用いられている「アゴニスト活性」は、分子による標的への結合に言及し、その結合は、標的を活性化させて応答を生成する。
本明細書において用いられている「ＣＣＬ５アゴニスト活性」は、ＣＣＬ５による活性化と一致する活性に言及する。
本開示において用いられている「アンタゴニスト活性」は、標的への分子による結合に言及し、その結合は、標的を活性化させて応答を生成せず、およびその結合は、１種以上のアゴニスト分子の作用を遮断する。
本明細書において用いられている「ＣＣＬ５アゴニスト活性」は、ＣＣＬ５による活性化と一致する活性に言及する。
本開示において用いられている「アンタゴニスト活性」は、標的への分子による結合に言及し、その結合は、標的を活性化させて応答を生成せず、およびその結合は、１種以上のアゴニスト分子の作用を遮断する。
【0087】
本明細書において用いられている通り、「対象」は、がんを罹患し得る動物または人工的に改変された動物を意味する。人工的に改変された動物には、ヒトの免疫システムを有するＳＣＩＤマウスが包含されるが、これに限定されない。動物には、マウス、ラット、イヌ、モルモット、フェレット、ウサギ、および霊長類が包含されるが、これらに限定されない。好ましい態様において、対象はヒトである。
本明細書において用いられている通り、「処置すること（treating）」は、所定の疾患または障害の進行を阻害する、遅らせる、止める、または逆転させることを意味する。好ましい態様において、「処置すること」は、疾患または障害の進行を逆転させることを意味する。いくつかの態様においては、処置することは、疾患または障害を除去する段階まで、疾患または障害の進行を逆転させることを包含する。
本明細書において用いられている通り、「処置すること（treating）」は、所定の疾患または障害の進行を阻害する、遅らせる、止める、または逆転させることを意味する。好ましい態様において、「処置すること」は、疾患または障害の進行を逆転させることを意味する。いくつかの態様においては、処置することは、疾患または障害を除去する段階まで、疾患または障害の進行を逆転させることを包含する。
【0088】
本明細書において用いられている通り、「予防すること（preventing）」は、疾患または障害が生じるのを予防すること；疾患または障害の発症または進行を遅延させること；あるいは疾患または障害の病態もしくは症状を減少させることに言及する。例えば、がんを予防することは、腫瘍の発生を予防すること、腫瘍の増殖を遅らせること、および腫瘍の発生を遅延させることを包含する。
本明細書において用いられている通り、「投与すること」は、当業者に知られている任意の方法を用いて達成されてもよくまたは行われてもよい。方法は、静脈内、筋肉内、または皮下手段を含み得る。
本明細書において用いられている通り、「有効用量」は、対象を処置するため、または対象ががんを発症するのを予防するために十分な数量を意味する。当業者は、簡単な滴定実験を行って、対象を処置するのに必要とされる量を決定することができる。
本明細書において用いられている通り、「投与すること」は、当業者に知られている任意の方法を用いて達成されてもよくまたは行われてもよい。方法は、静脈内、筋肉内、または皮下手段を含み得る。
本明細書において用いられている通り、「有効用量」は、対象を処置するため、または対象ががんを発症するのを予防するために十分な数量を意味する。当業者は、簡単な滴定実験を行って、対象を処置するのに必要とされる量を決定することができる。
【0089】
ＣＣＲ５アンタゴニスト
ある側面において、本開示は、ＣＣＲ５受容体を標的し、かつＣＣＬ５アゴニスト活性を提供することなくＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤として作用する、ＣＣＲ５アンタゴニストの使用に関する。
ある側面において、本開示は、ＣＣＲ５受容体を標的し、かつＣＣＬ５アゴニスト活性を提供することなくＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤として作用する、ＣＣＲ５アンタゴニストの使用に関する。
【0090】
一つの態様において、本開示は、がんを処置または予防することにおけるレロンリマブ抗体またはその結合断片の使用を提供する。レロンリマブ（本明細書においてはＰＲＯ１４０とも称される）は、米国特許第７，１２２，１８５号および第８，８２１，８７７号（これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているヒト化モノクローナル抗体である。レロンリマブは、ＣＤ４＋ＣＣＲ５＋細胞に対して作製されたマウスｍＡｂであるＰＡ１４のヒト化バージョンである。Olson et al., Differential Inhibition of Human Immunodeficiency Virus Type 1 Fusion, gp 120 Binding and CC-Chemokine Activity of Monoclonal Antibodies to CCR5, J. VIROL., 73: 4145-4155. (1999)。レロンリマブは、細胞表面に発現するＣＣＲ５に結合し、in vitroにおいておよびＨＩＶ－１感染のｈｕ－ＰＢＬ－ＳＣＩＤマウスモデルにおいて、ＣＣＲ５ケモカイン受容体活性に影響を及ぼさない濃度で、ＨＩＶ－１の侵入および複製を強力に阻害する。Olson et al., Differential Inhibition of Human Immunodeficiency Virus Type 1 Fusion, gp 120 Binding and CC-Chemokine Activity of Monoclonal Antibodies to CCR5, J. VIROL., 73: 4145-4155. (1999)；Trkola et al., Potent, Broad-Spectrum Inhibition of Human Immunodeficiency Virus Type 1 by the CCR5 Monoclonal Antibody PRO 140, J. VIROL., 75: 579-588 (2001)。
【0091】
ヒト化レロンリマブ抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸は、ＡＴＣＣに寄託されている。具体的には、それぞれpVK-HuPRO140、pVg4-HuPRO140 (mut B+D+I)、およびpVg4-HuPRO140 HG2として指定されるプラスミドは、ブダペスト条約の要件に従って、およびそれを満たして、ＡＴＣＣ（２０１０８ アメリカ合衆国、バージニア州、マナサス）に２００２年２月２２日、それぞれＡＴＣＣアクセッション番号PTA 4097、PTA 4099およびPTA 4098の下に寄託された。pVK-HuPRO140およびpVg4-HuPRO140 HG2として指定されるプラスミドは、それぞれレロンリマブの軽鎖および重鎖をコードしている。
【0092】
レロンリマブのＨＣＤＲ１～３およびＬＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１２～１４および９～１１に記載されている。レロンリマブのＶＨおよびＶＬの配列は、それぞれ、配列番号３のアミノ酸２０～１４１および配列番号１のアミノ酸２０～１３１に記載されている。レロンリマブの重鎖および軽鎖の配列は、それぞれ配列番号７および８に記載されている。
【0093】
一つの態様において、本明細書において開示されている方法は、レロンリマブと呼ばれるヒト化抗体、またはＣＣＲ５受容体への結合をレロンリマブと競合する抗体を投与することを含み、レロンリマブは、（ｉ）２つの軽鎖、ここで各軽鎖は、pVK:HuPRO140-VK（ＡＴＣＣ寄託指定PTA-4097）として指定されるプラスミドの発現生成物を含む、および（ｉｉ）２つの重鎖、ここで各重鎖は、pVg4：HuPRO140 HG2-VH（ＡＴＣＣ寄託指定PTA-4098）として指定されるプラスミド、またはpVg4：HuPRO140(mut B＋D＋I)-VH（ＡＴＣＣ寄託指定PTA-4099）として指定されるプラスミドのいずれかの発現生成物を含む、を含む。さらなる態様においては、レロンリマブは、抗体であるレロンリマブが結合するのと同じエピトープに結合する、ヒト化抗体またはヒト抗体である。別の態様においては、モノクローナル抗体は、レロンリマブと呼ばれるヒト化抗体である。
【0094】
いくつかの態様において、本開示は、配列番号１と少なくとも７０％同一、配列番号１と少なくとも７５％同一、配列番号１と少なくとも８０％同一、配列番号１と少なくとも８５％同一、配列番号１と少なくとも９０％同一、または配列番号１と少なくとも９５％同一である軽鎖可変領域（ＶＬ）を有する、抗ＣＣＲ５抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。いくつかの態様において、本開示は、配列番号１と７０％～１００％同一、配列番号１と７５％～１００％同一、配列番号１と８０％～１００％同一、配列番号１と８５％～１００％同一、配列番号１と９０％～１００％同一、配列番号１と９１％～１００％同一、または配列番号１と９５％～１００％同一である軽鎖可変抗体領域を有する、抗ＣＣＲ５抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。
【0095】
いくつかの態様において、本開示は、配列番号１のアミノ酸２０～１３１と少なくとも７０％同一、配列番号１のアミノ酸２０～１３１と少なくとも７５％同一、配列番号１のアミノ酸２０～１３１と少なくとも８０％同一、配列番号１のアミノ酸２０～１３１と少なくとも８５％同一、配列番号１のアミノ酸２０～１３１と少なくとも９０％同一、または配列番号１のアミノ酸２０～１３１と少なくとも９５％同一である軽鎖可変領域（ＶＬ）を有する、抗ＣＣＲ５抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。いくつかの態様において、本開示は、配列番号１のアミノ酸２０～１３１と７０％～１００％同一、配列番号１のアミノ酸２０～１３１と７５％～１００％同一、配列番号１のアミノ酸２０～１３１と８０％～１００％同一、配列番号１のアミノ酸２０～１３１と８５％～１００％同一、配列番号１のアミノ酸２０～１３１と９０％～１００％同一、配列番号１のアミノ酸２０～１３１と９１％～１００％同一、または配列番号１のアミノ酸２０～１３１と９５％～１００％同一である軽鎖可変抗体領域を有する、抗ＣＣＲ５抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。
【0096】
いくつかの態様において、本開示は、配列番号３と少なくとも７０％同一、配列番号３と少なくとも７５％同一、配列番号３と少なくとも８０％同一、配列番号３と少なくとも８５％同一、配列番号３と少なくとも９０％同一、または配列番号３と少なくとも９５％同一である重鎖可変領域（ＶＨ）を有する、抗ＣＣＲ５抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。いくつかの態様において、本開示は、配列番号３と７０％～１００％同一、配列番号３と７５％～１００％同一、配列番号３と８０％～１００％同一、配列番号３と８５％～１００％同一、配列番号３と９０％～１００％同一、配列番号３と９１％～１００％同一、または配列番号３と９５％～１００％同一である重鎖抗体可変領域を有する、抗ＣＣＲ５抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。
【0097】
いくつかの態様において、本開示は、配列番号３のアミノ酸２０～１４１と少なくとも７０％同一、配列番号３のアミノ酸２０～１４１と少なくとも７５％同一、配列番号３のアミノ酸２０～１４１と少なくとも８０％同一、配列番号３のアミノ酸２０～１４１と少なくとも８５％同一、配列番号３のアミノ酸２０～１４１と少なくとも９０％同一、または配列番号３のアミノ酸２０～１４１と少なくとも９５％同一である重鎖可変領域（ＶＨ）を有する、抗ＣＣＲ５抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。いくつかの態様において、本開示は、配列番号３のアミノ酸２０～１４１と７０％～１００％同一、配列番号３のアミノ酸２０～１４１と７５％～１００％同一、配列番号３のアミノ酸２０～１４１と８０％～１００％同一、配列番号３のアミノ酸２０～１４１と８５％～１００％同一、配列番号３のアミノ酸２０～１４１と９０％～１００％同一、配列番号３のアミノ酸２０～１４１と９１％～１００％同一、または配列番号３のアミノ酸２０～１４１と９５％～１００％同一である重鎖抗体可変領域を有する、抗ＣＣＲ５抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。
【0098】
いくつかの態様において、本開示は、配列番号５と少なくとも７０％同一、配列番号５と少なくとも７５％同一、配列番号５と少なくとも８０％同一、配列番号５と少なくとも８５％同一、配列番号５と少なくとも９０％同一、または配列番号５と少なくとも９５％同一である重鎖可変領域（ＶＨ）を有する抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供する。いくつかの態様において、本開示は、配列番号５と７０％～１００％同一、配列番号５と７５％～１００％同一、配列番号５と８０％～１００％同一、配列番号５と８５％～１００％同一、配列番号５と９０％～１００％同一、配列番号５と９１％～１００％同一、または配列番号５と９５％～１００％同一である重鎖可変抗体領域を有する抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供する。
【0099】
いくつかの態様において、本開示は、配列番号５のアミノ酸２０～１４１と少なくとも７０％同一、配列番号５のアミノ酸２０～１４１と少なくとも７５％同一、配列番号５のアミノ酸２０～１４１と少なくとも８０％同一、配列番号５のアミノ酸２０～１４１と少なくとも８５％同一、配列番号５のアミノ酸２０～１４１と少なくとも９０％同一、または配列番号５のアミノ酸２０～１４１と少なくとも９５％同一である重鎖可変領域（ＶＨ）を有する抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供する。いくつかの態様において、本開示は、配列番号５のアミノ酸２０～１４１と７０％～１００％同一、配列番号５のアミノ酸２０～１４１と７５％～１００％同一、配列番号５のアミノ酸２０～１４１と８０％～１００％同一、配列番号５のアミノ酸２０～１４１と８５％～１００％同一、配列番号５のアミノ酸２０～１４１と９０％～１００％同一、配列番号５のアミノ酸２０～１４１と９１％～１００％同一、または配列番号５のアミノ酸２０～１４１と９５％～１００％同一である重鎖可変抗体領域を有する抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供する。
【0100】
いくつかの態様において、本開示は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗ＣＣＲ５抗体またはその抗原結合断片の使用を提供し、ここで、ＶＨは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＶＨ－ＣＤＲ１）、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＶＨ－ＣＤＲ２）、および配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＶＨ－ＣＤＲ３）を含み；ならびに、ＶＬは、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＶＬ－ＣＤＲ１）、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＶＬ－ＣＤＲ２）、および配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＶＬ－ＣＤＲ３）を含む。
【0101】
いくつかのかかる態様においては、ＶＨは、配列番号３のアミノ酸配列または配列番号のアミノ酸２０～１４１と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する、アミノ酸配列を含み、およびＶＬは、配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１のアミノ酸２０～１３１と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する、アミノ酸配列を含み、ただしＶＨ－ＣＤＲ（配列番号１２～１４）およびＶＬ－ＣＤＲ（配列番号９～１１）のアミノ酸配列は変更されていない；あるいは、ＶＨは、配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５のアミノ酸２０～１４１と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、およびＶＬは、配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１のアミノ酸２０～１３１と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する、アミノ酸配列を含み、ただしＶＨ－ＣＤＲ（配列番号１２～１４）およびＶＬ－ＣＤＲ（配列番号９～１１）のアミノ酸配列は変更されていない。
【0102】
いくつかの態様において、本開示は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列または配列番号３のアミノ酸２０～１４１を含むＶＨ、および配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１のアミノ酸２０～１３１を含むＶＬ；あるいは（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５のアミノ酸２０～１４１を含むＶＨ、および配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１のアミノ酸２０～１３１を含むＶＬ、を含む、抗ＣＣＲ５抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。
【0103】
さらなる態様においては、本開示は、ＣＣＲ５ｍＡｂ００４として指定されるヒト抗体またはその結合断片の使用に関する。ＣＣＲ５ｍＡｂ００４は、Abgenix XenoMouse（登録商標）技術を用いて作製された完全ヒトｍＡｂであり、ＣＣＲ５を特異的に認識し、かつこれに特異的に結合する。Roschke et al., Characterization of a Panel of Novel Human Monoclonal Antibodies That Specifically Antagonize CCR5 and Block HIV Entry, 44th Annual Interscience CONFERENCE ON ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, Washington, D.C., Oct. 30-Nov. 2, 2004 (2004)；HGS Press Release, Human Genome Sciences Characterizes Panel of Novel Human Monoclonal Antibodies That Specifically Antagonize the CCR5 Receptor and Block HIV-1 Entry, Nov. 2, 2004 (2004)；HGS Press Release, Human Genome Sciences Begins Dosing of Patients in a Phase 1 Clinical Trial of CCR5 mAb in Patients Infected With HIV-1, Mar. 30, 2005 (2005)参照。
【0104】
一つの態様においては、本開示は、ＰＡ１４（ＡＴＣＣアクセッション番号HB-12610）として指定されるハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体ＰＡ１４、その結合断片、またはＣＣＲ５受容体への結合をモノクローナル抗体ＰＡ－１４と競合する抗体の、がんの処置または予防における使用に関する。
【0105】
本明細書において記載されている方法の一つ態様においては、抗体またはその結合断片は、抗体の軽鎖を含んでいる。別の態様においては、抗体またはその結合断片は、抗体の重鎖を含む。さらなる態様において、抗体またはその結合断片は、抗体のＦａｂ部分を含む。またさらなる態様において、抗体またはその結合断片は、抗体のＦ（ａｂ’）２部分を含む。追加的態様において、抗体またはその結合断片は、抗体のＦｄ部分を含む。別の態様においては、抗体またはその結合断片は、抗体のＦｖ部分を含む。さらなる態様において、抗体またはその結合断片は、抗体の可変ドメインを含む。またさらなる態様において、抗体またはその結合断片は、抗体の１つ以上のＣＤＲドメインを含む。また別の態様においては、抗体またはその結合断片は、抗体の６個のＣＤＲドメインを含む。
【0106】
いくつかの態様において、本開示は、Ｆｃ領域部分を含む抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供する。本明細書において用いられている通り、「Ｆｃ領域部分」は、抗体からのＦｃ断片（「結晶化可能断片」領域またはＦｃ領域）の重鎖定常領域セグメントに言及し、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４またはそれらの任意の組み合わせなどの、１つ以上の定常ドメインを包含し得る。いくつかの態様において、Ｆｃ領域部分は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＤ抗体のＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせ、あるいは、ＩｇＭまたはＩｇＥ抗体のＣＨ３およびＣＨ４ドメイン、およびそれらの任意の組み合わせを包含する。いくつかの態様において、ＣＨ２ＣＨ３またはＣＨ３ＣＨ４構造は、同じ抗体アイソタイプからのサブ領域ドメインを有し、および、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭなどのヒトのもの（例えば、ヒトＩｇＧ１からのＣＨ２ＣＨ３）である。
【0107】
背景として、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）、ＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）、および補体結合反応（complement fixation）などの抗体のエフェクター機能、Ｆｃ受容体（例えば、ＣＤ１６、ＣＤ３２、ＦｃＲｎ）への結合、Ｆｃ領域欠損ポリペプチドに対してin vivoでの半減期がより長いこと、プロテインＡ結合、ならびに、おそらく胎盤移行にも、関与している（Capon et al. Nature 337: 525, 1989参照）。いくつかの態様において、本開示の抗体または抗原結合断片におけるＦｃ領域部分は、これらのエフェクター機能の１つ以上を媒介することができる。いくつかの態様において、本開示の抗体または抗原結合断片におけるＦｃ領域部分は、正常なエフェクター機能を有するが、このことは、野生型ＩｇＧ１抗体と比較して、エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、半減期またはそれらの任意の組み合わせ）において２０％、１５％、１０％、５％、１％未満の差を有することを意味する。
【0108】
いくつかの態様において、本開示は、例えば、当該技術分野で知られているＦｃ領域部分における１個以上のアミノ酸の置換または欠失によって、これらのエフェクター機能のうちの１つ以上が増加しているＦｃ領域部分を含む、抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供する。エフェクター機能が増加している変異またはバリアントＦｃ領域部分を有する抗体または抗原結合断片は、抗体が、野生型Ｆｃ領域部分を有する抗体と比較して、ＦｃＲ結合、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、またはそれらの任意の組み合わせにおいて少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の増加を示すことを意味する。いくつかの態様において、変異またはバリアントＦｃ領域部分は、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、またはこれらの任意の組み合わせに対する結合の増加を示す。いくつかの態様において、本開示の抗体または抗原結合断片におけるＦｃ領域部分は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、半減期、またはその任意の組み合わせが増加している、バリアントＦｃ領域部分である。
【0109】
Ｆｃ機能性を修飾する（例えば、改善する、減少させる、または取り除く）ためのアミノ酸修飾（例えば、置換）には、例えば、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ ＋ Ａ３２７Ｇ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３３３Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｐ２５７Ｉ／Ｑ３１１、Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ｇ２３６Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ ＋ Ｅ３１８Ａ／Ｋ３２０Ａ／Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、およびＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ変異が包含され、これらの変異は、InvivoGenにより出版された「Engineered Fc Regions」（2011）において要約されおよび注釈が付されているが、これはwww.invivogen.com/PDF/review/review-Engineered-Fc-Regions-invivogen.pdf?utm_source=review&utm_medium=pdf&utm_campaign=review&utm_content=Engineered-Fc-Regionsにおいてオンラインで入手でき、参照により本明細書に組み込まれる。
【0110】
いくつかの態様においては、本開示は、例えば、当該技術分野で知られているＦｃ領域部分における１個以上のアミノ酸の置換または欠失によって、これらのエフェクター機能の１つ以上が減少または欠損しているＦｃ領域部分を含む、抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供する。エフェクター機能が減少している変異またはバリアントＦｃ領域部分を有する抗体または抗原結合断片は、抗体が、野生型Ｆｃ領域部分を有する抗体と比較して、ＦｃＲ結合、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、またはそれらの任意の組み合わせにおいて少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の低下を示すことを意味する。
【0111】
いくつかの態様において、変異またはバリアントＦｃ領域部分は、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、またはこれらの任意の組み合わせに対する結合の低下を示す。いくつかの態様では、本開示の抗体または抗原結合断片におけるＦｃ領域部分は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、半減期、またはそれらの任意の組み合わせが減少している、バリアントＦｃ領域部分である。いくつかの態様において、Ｆｃ領域部分は、Kabatに記載のＥＵに従ってナンバリングされている、アミノ酸Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、ΔＧ２３６、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ｇ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、またはそれらの任意の組み合わせに対応する変異を含む、バリアントＩｇＧ１ Ｆｃ領域部分である。例えば、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域部分に導入されたアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩ受容体への結合を減少させ、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域部分に導入されたＡ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓは、Ｃ１ｑにより媒介される補体結合反応を減少させる。
【0112】
いくつかの態様において、本開示は、例えば、当該技術分野で知られているＦｃ領域部分における１個以上のアミノ酸の置換または欠失によって、これらのエフェクター機能の１つ以上が増加しているＦｃ領域部分を含む、抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供する。エフェクター機能が増加している変異またはバリアントＦｃ領域部分を有する抗体または抗原結合断片は、抗体が、野生型Ｆｃ領域部分を有する抗体と比較して、ＦｃＲ結合、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、またはそれらの任意の組み合わせにおいて少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の増加を示すことを意味する。いくつかの態様において、変異またはバリアントＦｃ領域部分は、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、またはこれらの任意の組み合わせに対する結合の増加を示す。いくつかの態様において、本開示の抗体または抗原結合断片におけるＦｃ領域部分は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、半減期、またはその任意の組み合わせが増加している、バリアントＦｃ領域部分である。
【0113】
いくつかの態様において、本開示は、グリコシル化されている抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供する。ＩｇＧサブタイプ抗体は、Ｆｃ領域部分のＣＨ２ドメインにおいてアミノ酸Ｎ２９７に保存されたグリコシル化部位を含有する。いくつかのかかる態様においては、本開示の抗体または抗原結合断片におけるＦｃ領域部分は、Kabatに記載のＥＵに従ってナンバリングされているＮ２９７を含む。いくつかの態様において、本開示は、Ｆｃ領域部分のＮ２９７におけるグリコシル化を変化させる変異を含む抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供し、任意に、グリコシル化を変化させる変異は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、またはＮ２９７Ｇを含む。いくつかの態様において、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、またはＮ２９７Ｇ変異を含む抗体またはその抗原結合断片は、１つ以上の低親和性ＦｃγＲとのＦｃ相互作用の減少、ＣＤＣの減少、ＡＤＣＣの減少、またはそれらの任意の組合せを示す。
【0114】
いくつかの態様において、本開示は、重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）を含む抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供し、ここで、ＨＣは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み；および、ＬＣは、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0115】
いくつかの態様において、本開示は、配列番号７のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含むＨＣ、および配列番号８のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含むＬＣを含む、抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供する。
いくつかの態様において、本開示は、ＣＨ２（またはその断片）、ＣＨ３（またはその断片）、またはＣＨ２およびＣＨ３を包含する、Ｆｃ領域またはその断片を含む抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供し、ここで、ＣＨ２、ＣＨ３、または両方は、いずれのアイソタイプであってもよく、それぞれ、対応する野生型ＣＨ２またはＣＨ３と比較して、アミノ酸置換または他の修飾を含有していてもよい。特定の態様においては、本開示のＦｃ領域は、会合して二量体を形成する２個のＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドを含む。
いくつかの態様において、本開示は、ＣＨ２（またはその断片）、ＣＨ３（またはその断片）、またはＣＨ２およびＣＨ３を包含する、Ｆｃ領域またはその断片を含む抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供し、ここで、ＣＨ２、ＣＨ３、または両方は、いずれのアイソタイプであってもよく、それぞれ、対応する野生型ＣＨ２またはＣＨ３と比較して、アミノ酸置換または他の修飾を含有していてもよい。特定の態様においては、本開示のＦｃ領域は、会合して二量体を形成する２個のＣＨ２－ＣＨ３ポリペプチドを含む。
【0116】
本明細書において用いられている通り、特に規定しない限り、例えば、ヒトＩｇＧ１重鎖の、定常領域におけるアミノ酸残基の位置は、ヒトＩｇＧ１の可変領域がKabatナンバリング規則に従って１２８アミノ酸残基で構成されていると仮定してナンバリングされる。次いで、ナンバリングされたヒトＩｇＧ１重鎖の定常領域は、他の免疫グロブリン重鎖の定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングの参照として用いられる。ヒトＩｇＧ１重鎖以外の免疫グロブリン重鎖の定常領域における目的のアミノ酸残基の位置は、目的のアミノ酸残基が並ぶ（align）ヒトＩｇＧ１重鎖のアミノ酸残基の位置である。ヒトＩｇＧ１重鎖の定常領域と他の免疫グロブリン重鎖の定常領域との間のアライメント（alignment）は、デフォルトパラメータを使用したClustal W法を用いるMegalign program（DNASTAR Inc.）などの、当技術分野において知られているソフトウェアプログラムを用いて行うことができる。本明細書において記載されているナンバリングシステムに従えば、例えば、ヒトＩｇＧ２ ＣＨ２領域は、他のＣＨ２領域と比較してそのアミノ末端付近にアミノ酸欠失を有する場合があるものの、ヒトＩｇＧ２ ＣＨ２の２９６に位置する「Ｎ」の位置は、この残基がヒトＩｇＧ１ ＣＨ２の２９７位における「Ｎ」に並ぶことから、依然として２９７位とみなされる。
【0117】
加えて、本開示は、典型的にはＦａｂ領域とＦｃ領域との間に位置するヒンジ配列（ただし、ヒンジの下部はＦｃ領域のアミノ末端部分を包含する場合がある）を含む抗ＣＣＲ５抗体の使用を提供する。背景として、免疫グロブリンのヒンジは、Ｆａｂ部分が空間において自由に動くことを可能にする柔軟なスペーサーとして作用する。定常領域とは対照的に、ヒンジは構造的に多様であり、免疫グロブリンのクラス間、さらにはサブクラス間でも、配列および長さの両方が変わる。
【0118】
例えば、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域は、十分に柔軟性があり、これは、Ｆａｂ断片がその対称軸の周りを回転し、２個の重鎖間ジスルフィド架橋のうちの１番目のものが中心となっている球の範囲内を動くことを可能にする。比較すると、ヒトＩｇＧ２ヒンジは、比較的短く、その柔軟性を制限する４個の重鎖間ジスルフィド架橋により安定化された硬いポリプロリンＩＩヘリックス（poly-proline double helix）を含有する。ヒトＩｇＧ３ヒンジは、その独特の伸長されたヒンジ領域（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍の長さ）により他のサブクラスとは異なっており、６２個のアミノ酸（２１個のプロリンおよび１１個のシステインを包含する）を含有し、柔軟性のないポリプロリンＩＩヘリックスを形成し、ならびにＦａｂ断片がＦｃ断片から比較的離れているためより大きい柔軟性を与える。ヒトのＩｇＧ４ヒンジは、ＩｇＧ１より短いがＩｇＧ２と同じ長さを有し、その柔軟性は、ＩｇＧ１のそれとＩｇＧ２のそれとの中間である。免疫グロブリンの構造および機能は、例えば、Harlow et al., Eds., Antibodies: A Laboratory Manual, Chapter 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1988)において概説されている。
【0119】
いくつかの態様において、本開示は、キメラである、ヒト化されている、またはヒトのものである、抗ＣＣＲ５抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。非ヒト（例えば、マウス）抗体のキメラおよびヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の配列を含有し得る、無傷の（全長）キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその抗原結合断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の標的結合サブドメインなど）であってもよい。一般に、ヒト化抗体またはその抗原結合断片において、ＣＤＲ領域の外側（例えば、フレームワーク（ＦＲ）領域）のアミノ酸の大部分または全部は、ヒト免疫グロブリン分子由来の対応するアミノ酸で置換されている。抗体のヒト化形態の一つの態様においては、ＣＤＲ領域の外側のアミノ酸の一部、大部分、または全部が、ヒト免疫グロブリン分子からのアミノ酸で置換されているが、１つ以上のＣＤＲ領域内のアミノ酸の一部、大部分、または全部は、変更されていない。アミノ酸の少量の付加、欠失、挿入、置換、または修飾は、所定の抗原と結合する抗体の能力を損なわない限り、許容される。ヒト化抗体はまた、ヒト免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含み得る。非ヒト抗体をヒト化することにおける使用に適したヒト免疫グロブリン分子には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、およびＩｇＭ分子が包含されるであろう。「ヒト化」抗体は、元の抗体と同様の抗原特異性、例えば、本開示においては、ＣＣＲ５と結合する能力を保持するであろう。
【0120】
使用の方法
一つの側面において、本開示は、結腸がん転移を処置、阻害または予防する方法であって、それを必要とする対象に、抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤を投与することを含む、前記方法を提供する。
一つの側面において、本開示は、結腸がん転移を処置、阻害または予防する方法であって、それを必要とする対象に、抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤を投与することを含む、前記方法を提供する。
【0121】
一つの態様において、本開示は、結腸がん転移を処置、阻害または予防する方法であって、それを必要とする対象に、（ａ）レロンリマブ抗体またはその結合断片；（ｂ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸；（ｃ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター；（ｄ）（ｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片、（ｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸、あるいは（ｉｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター、を含む宿主細胞；あるいは（ｅ）ＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤、を含む抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤を投与することを含む、前記方法を提供する。
【0122】
一つの態様において、投与は、肺または肝臓の少なくとも１つへの結腸がんの転移減少をもたらす。一つの態様において、肺への転移は、５０％を超えて、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または８５％を超えて、減少する。一つの態様において、肝臓への転移は、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、または５０％を超えて、減少する。
【0123】
一つの態様において、投与は、腫瘍に関連する血管新生を減少させる。一つの態様において、腫瘍栄養血管（vessels feeding a tumor）の総血管面積は、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、または６０％を超えて、減少する。一つの態様において、腫瘍栄養血管の血管長密度は、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、または５０％を超えて、減少する。一つの態様において、腫瘍栄養血管の数は、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、または７０％を超えて、減少する。一つの態様において、より大きい血管（larger vessels）の数は、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、または５０％を超えて、減少する。一つの態様において、より小さい血管（smaller vessels）の数は、４０％を超えて、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、または７０％を超えて、減少する。
【0124】
前述の態様のいずれかにおいては、投与が、対象の末梢血中において、増加したレベルのＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞または低下したレベルのＣＤ４＋ＣＤ２５－細胞のいずれかをもたらし得る。前述の態様のいずれかにおいて、抗ＣＣＲ５細胞受容体結合剤は、ＣＤ４＋細胞におけるチロシンキナーゼリン酸化を変化させなくてもよい。
【0125】
さらなる側面において、本開示は、がんを処置または予防する方法であって、それを必要とする対象に、それ自体はＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、ＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤を投与することを含む、前記方法を提供する。特定の態様において、がんを予防する方法が提供される。
【0126】
一つの態様において、本開示は、がんを予防する方法であって、それを必要とする対象に、それ自体はＣＣＬ５アゴニスト活性を有さない、ＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤を投与することを含み、ここで、競合阻害剤が、ＣＣＲ５細胞受容体のＥＣＬ－２ループに結合する、前記方法を提供する。さらなる態様において、競合阻害剤は、ＣＣＲ５細胞受容体への結合をＣＣＬ５と競合する。さらなる態様において、競合阻害剤は、モノクローナル抗体ＰＡ１４、レロンリマブ、またはＣＣＲ５ｍＡｂ００４、あるいはその結合断片を含む。さらなる態様において、競合阻害剤は、結合を、モノクローナル抗体ＰＡ１４、レロンリマブ、またはＣＣＲ５ｍＡｂ００４、あるいはその結合断片と競合する。
【0127】
一つの態様において、本開示は、がんを予防する方法であって、それを必要とする対象に、（ａ）レロンリマブ抗体またはその結合断片；（ｂ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸；（ｃ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター；あるいは（ｄ）（ｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片、（ｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸、あるいは（ｉｉｉ）レロンリマブ抗体またはその結合断片をコードする核酸を含むベクター、を含む宿主細胞、を投与することを含む、前記方法を提供する。前述の態様において、レロンリマブ抗体またはその結合断片は、例えば、レロンリマブモノクローナル抗体またはｓｃＦｖを含み得る。
【0128】
一つの態様において、本開示は、がんを予防する方法であって、それを必要とする対象に、レロンリマブ抗体またはその結合断片を投与することを含む、前記方法を提供する。
前述の態様のいずれかにおいて、がんは、例えば、乳がん、前立腺がん、結腸がん、黒色腫、胃がん、卵巣がん、肺（非小細胞）がん、膵臓がん、肉腫、または血液細胞がんであってもよい。特定の態様において、がんは、乳がんである。特定の態様において、がんは、前立腺がんである。別の特定の態様においては、癌は、結腸がんである。
前述の態様のいずれかにおいて、がんは、例えば、乳がん、前立腺がん、結腸がん、黒色腫、胃がん、卵巣がん、肺（非小細胞）がん、膵臓がん、肉腫、または血液細胞がんであってもよい。特定の態様において、がんは、乳がんである。特定の態様において、がんは、前立腺がんである。別の特定の態様においては、癌は、結腸がんである。
【0129】
前述の態様のいずれかにおいて、がんを予防することは、癌の増殖を遅らせること、腫瘍の形成を予防すること、あるいは腫瘍の増殖またはサイズを制限するまたは減少させることを含み得る。
一つの態様において、レロンリマブなどのＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤は、薬学的に許容し得る担体と共に投与される。薬学的に許容し得る担体は、当業者によく知られている。かかる薬学的に許容し得る担体には、水性または非水性溶液、懸濁液、およびエマルジョンが包含され得るが、これらに限定されない。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルなどの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。水性担体には、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョンまたは懸濁液、生理食塩水、緩衝液が包含される。非経口用ビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、Ｄ－グルコースリンゲル液（Ringer's dextrose）、ブドウ糖および塩化ナトリウム、加乳酸リンゲル液（lactated Ringer's）、または不揮発性油が包含される。静脈内投与用ビヒクルには、体液および栄養補給剤、Ｄ－グルコースリンゲル液をベースとしたものなどの電解質補給剤等が包含される。例えば、抗菌剤、酸化防止剤、キレート剤、不活性ガスなどの防腐剤および他の添加剤が含まれていてもよい。
一つの態様において、レロンリマブなどのＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤は、薬学的に許容し得る担体と共に投与される。薬学的に許容し得る担体は、当業者によく知られている。かかる薬学的に許容し得る担体には、水性または非水性溶液、懸濁液、およびエマルジョンが包含され得るが、これらに限定されない。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルなどの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。水性担体には、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョンまたは懸濁液、生理食塩水、緩衝液が包含される。非経口用ビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、Ｄ－グルコースリンゲル液（Ringer's dextrose）、ブドウ糖および塩化ナトリウム、加乳酸リンゲル液（lactated Ringer's）、または不揮発性油が包含される。静脈内投与用ビヒクルには、体液および栄養補給剤、Ｄ－グルコースリンゲル液をベースとしたものなどの電解質補給剤等が包含される。例えば、抗菌剤、酸化防止剤、キレート剤、不活性ガスなどの防腐剤および他の添加剤が含まれていてもよい。
【0130】
本発明の組成物の用量は、対象および用いられる特定の投与経路に応じて変わるであろう。投与量は、０．１～１００，０００μｇ／ｋｇの範囲とすることができる。組成物に基づいて、用量は、連続ポンプによる等、連続的に送達されてもよく、または定期的な間隔、例えば、１回以上の別々の機会、で送達されてもよい。特定の組成物の複数回の用量の所望の時間間隔は、当業者により過度の実験をすることなく決定され得る。
【0131】
本方法の一つの態様において、抗体またはその結合断片は、対象に複数回投与され、各投与は、対象に対して、抗体またはその結合断片を、体重ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～体重ｋｇ当たり５０ｍｇ送達する。別の態様においては、各投与は、対象に対して、抗体またはその結合断片を、体重ｋｇ当たり０．１ｍｇ～体重ｋｇ当たり１０ｍｇ送達する。またさらなる態様においては、各投与は、対象に対して、抗体またはその結合断片を、体重ｋｇ当たり０．５ｍｇ～体重ｋｇ当たり５ｍｇ送達する。別の態様において、各投与は、対象に対して、抗体またはその結合断片を、体重ｋｇ当たり１ｍｇ～体重ｋｇ当たり３ｍｇ送達する。別の態様において、各投与は、対象に対して、抗体またはその結合断片を、体重ｋｇ当たり約２ｍｇ送達する。好ましい一つの態様において、各投与は、１７５ｍｇ、３５０ｍｇ、５２５ｍｇ、７００ｍｇ、８７５ｍｇ、１０５０ｍｇ、１２２５ｍｇ、１４００ｍｇ、１５７５ｍｇ、１７５０ｍｇ、１９２５ｍｇ、または２１００ｍｇ用量のうちの１つを送達する。好ましい態様において、用量は、皮下注射として投与または自己投与され得る。別の好ましい態様においては、用量は、１７５ｍｇ／ｍＬの濃度で製剤化され得る。
【0132】
一つの態様において、抗体またはその結合断片は、複数回投与され、最初の投与は、その後の投与と、１週間未満の間隔で隔てられている。別の態様においては、最初の投与は、その後の投与と、少なくとも１週間の間隔で隔てられている。さらなる態様において、最初の投与は、その後の投与と、１週間の間隔で隔てられている。別の態様において、最初の投与は、その後の投与と、２～４週間の間隔で隔てられている。別の態様において、最初の投与は、その後の投与と、２週間の間隔で隔てられている。さらなる態様において、最初の投与は、その後の投与と、４週間の間隔で隔てられている。さらなる別の態様においては、抗体またはその結合断片は、複数回投与され、最初の投与は、その後の投与と、少なくとも１か月の間隔で隔てられている。
【0133】
さらなる態様において、抗体またはその結合断片は、静脈内注入を介して対象に投与される。別の態様においては、抗体またはその結合断片は、皮下注射を介して対象に投与される。別の実施形態では、抗体またはその結合断片は、筋肉内注射を介して対象に投与される。
【0134】
一つの態様において、前述の方法は、対象に、細胞療法、例えば、自己または同種異系免疫療法；低分子；化学療法薬剤；またはＣＣＲ５／ＣＣＬ５シグナル伝達阻害剤を投与することをさらに含み得る。一つの態様において、ＣＣＲ５／ＣＣＬ５シグナル伝達阻害剤が投与され、これは、マラビロク、ビクリビロク、アプラビロク、ＳＣＨ－Ｃ、ＴＡＫ－７７９、ＰＡ１４抗体、２Ｄ７抗体、ＲｏＡｂ１３抗体、ＲｏＡｂ１４抗体または４５５２３抗体を含む。
【0135】
一つの態様において、レロンリマブなどのＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤は、単独で、あるいは、細胞療法、例えば、自家または同種異系免疫療法；低分子；化学療法剤；または、マラビロク、ビクリビロク、アプラビロク、ＳＣＨ－Ｃ、ＴＡＫ－７７９、ＰＡ１４抗体、２Ｄ７抗体、ＲｏＡｂ１３抗体、ＲｏＡｂ１４抗体、もしくは４５５２３抗体などのＣＣＲ５／ＣＣＬ５シグナル伝達阻害剤などの、１種以上の他の治療分子または処置と組み合わせて、投与される。一つの態様において、本明細書において開示されている方法は、レロンリマブを、マラビロク、ビクリビロク、アプラビロク、ＳＣＨ－Ｃ、ＴＡＫ－７７９、ＰＡ１４抗体、２Ｄ７抗体、ＲｏＡｂ１３抗体、ＲｏＡｂ１４抗体、または４５５２３抗体と組み合わせて投与することを含む。
【0136】
一つの態様においては、レロンリマブなどのＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤は、例えば、チオテパおよびシクロホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなどのアルキルスルホナート；ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ（meturedopa）、およびウレドパ（uredopa）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチロールメラミンを包含するエチレンイミンおよびメチルメラミン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、およびウラシルマスタードなどの窒素マスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチンなどのニトロソ尿素；アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カルビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６-ジアゾ-５-オキソ-Ｌ-ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、クエラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、およびゾルビシンなどの抗生物質；メトトレキサートおよび５-フルオロウラシル（５-ＦＵ）などの代謝拮抗薬；
【0137】
デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、およびトリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６-メルカプトプリン、チアミプリン、およびチオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６-アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンおよび５-ＦＵなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、およびテストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、およびトリロスタンなどの抗副腎剤（anti-adrenal）；フォリン酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトレキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルミチン（elformithine）；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；
【0138】
ピラルビシン；ポドフィリン酸；２-エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’-トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシド（「Ａｒａ-Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキサン、例えば、パクリタキセル（タキソール（商標）、Bristol-Myers Squibb Oncology、ニュージャージー州、プリンストン）およびドセタキセル（タキソテール（商標）、Rhone-Poulenc Rorer、フランス、アントニー）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６-チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ-１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロン酸塩；ＣＰＴ-１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン；およびカペシタビン；ならびに、上記のいずれかの薬学的に許容し得る塩、酸または誘導体などの、１種以上の化学治療剤と組み合わせて投与される。
【0139】
本明細書において用いられている通り、「低分子」ＣＣＲ５受容体アンタゴニストは、例えば、ＣＣＲ５受容体に結合し、かつ該受容体の活性を阻害する有機低分子を包含する。一つの態様において、低分子は、１，５００ダルトン未満の分子量を有する。別の態様においては、低分子は、６００ダルトン未満の分子量を有する。
【0140】
一つの態様においては、レロンリマブなどのＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤は、ＳＣＨ－Ｃ（Strizki et al, PNAS，98．12718-12723 (2001)）；ＳＣＨ－Ｄ（ＳＣＨ４１７６７０；ビクリビロク）；ＵＫ－４２７，８５７（マラビロク；１－［（４，６－ジメチル－５－ピリミジニル）カルボニル］－４－［４－［２－メトキシ－１（Ｒ）－４－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル－３（Ｓ）－メチル－１－ピペラジニル－４－メチルピペラジン）；ＧＷ８７３１４０；ＴＡＫ－６５２；ＴＡＫ－７７９；ＡＭＤ０７０；ＡＤ１０１；１，３，４－三置換ピロリジン（Kim et al., BIOORG. MED. CHEM. LETT., 15：2129-2134（2005））；修飾４－ピペリジニル－２－フェニル－１－（フェニルスルホニルアミノ）－ブタン（Shah et al., BIOORG. MED．CHEM．LETT., 15：977-982（2005））；アニバミンＴＦＡ、オフィオボリンＣ、または１９，２０－エポキシシトカラシンＱ（Jayasuriya et al., J. NAT. PROD., 67: 1036-1038 (2004))；５－（ピペリジン－１－イル）－３－フェニル－ペンチルスルホン（Shankaran et al., BIOORG. MED．CHEM．LETT., 14：3589-3593（2004））；４－（ヘテロアリールピペリジン－１－イルメチル）－ピロリジン－１－イル－酢酸アンタゴニスト（Shankaran et al., BIOORG. MED．CHEM．LETT., 14：3419-3424（2004））；４－（ピラゾリル）ピペリジン側鎖を含有する薬剤（Shu et al., BIOORG. MED. CHEM．LETT., 14：947-52（2004）；Shen et al., BIOORG. MED. CHEM. LETT., 14：935-939（2004）；Shen et al., BIOORG. MED. CHEM. LETT., 14: 941-945 (2004))；
【0141】
３－（ピロリジン－１－イル）プロピオン酸類似体（Lynch et al., Org. Lett., 5: 2473-2475 (2003))；［２－（Ｒ）－［Ｎ－メチル－Ｎ－（１－（Ｒ）－３－（Ｓ）－（（４－（３－ベンジル－１－エチル－（１Ｈ）－ピラゾール－５－イル）ピペリジン－１－イル）メチル）－４－（Ｓ）－（３－フルオロフェニル）シクロペント－１－イル）アミノ］－３－メチルブタン酸（ＭＲＫ－１）］（Kumar et al., J. PHARMACOL. EXP．THER., 304: 1161-1171 (2003))；４－アミノヘテロ環置換ピペリジン側鎖を有する１，３，４－三置換ピロリジン（Willoughby et al., BIOORG. MED．CHEM. LETT., 13：427-431（2003）；Lynch et al., BIOORG. MED. CHEM. LETT., 12：3001-3004（2003）；Lynch et al., BIOORG. MED. CHEM. LETT., 13：119-123（2003）；Hale et al., BIOORG. MED. CHEM. LETT., 12：2997-3000（2002））；二環式イソオキサゾリジン（Lynch et al., BIOORG. MED. CHEM. LETT., 12: 677-679 (2002))；コンビナトリアル合成のＣＣＲ５アンタゴニスト（Willoughby et al, BIOORG. MED. CHEM. LETT., 11: 3137-41 (2001))；複素環含有化合物（Kim et al, BIOORG. MED. CHEM. LETT., 11: 3103-3106 (2001))；ヒダントイン含有アンタゴニスト(Kim et al, BIOORG. MED. CHEM. LETT., 11：3099-3102（2001））；
【0142】
１，３，４三置換ピロリジン（Hale et al., BIOORG. MED. CHEM．LETT., 11: 2741-2745 (2001));１－［Ｎ－（メチル）－Ｎ－（フェニルスルホニル）アミノ］－２－（フェニル）－４－（４－（Ｎ－（アルキル）－Ｎ－（ベンジルオキシカルボニル）アミノ）ピペリジン－１－イル）ブタン（Finke et al., BIOORG. MED．CHEM．LETT., 11: 2475-2479 (2001))；植物リッピア・アルバ（Lippia alva）からの化合物（Hedge et al., BIOORG. MED. CHEM. LETT., 12：5339-5342（2004））；ピペラジン系（piperazine-based）ＣＣＲ５拮抗薬（Tagat et al., J. MED. CHEM., 47: 2405-2408 (2004))；オキシミノ－ピペリジノ－ピペリジン系ＣＣＲ５アンタゴニスト(Palani et al., BIOORG. MED. CHEM．LETT., 13：709-712（2003））；ＳＣＨ３５１１２５の回転異性体（Palani et al., BIOORG. MED. CHEM. LETT., 13: 705-708 (2003))；ピペラジン系対称型ヘテロアリールカルボキサミド（McCombie et al., BIOORG. MED. CHEM. LETT., 13：567-571（2003））；オキシミノ－ピペリジノ－アミド（Palani et al., J. MED. CHEM., 45：3143-3160（2002））；Ｓｃｈ－３５１１２５およびＳｃｈ－３５０６３４（Este, CURR. OPIN. INVESTIG. DRUGS., 3：379-383（2002））；１－［（２，４－ジメチル－３－ピリジニル）カルボニル］－４－メチル－４－［３（Ｓ）－メチル－４－［１（Ｓ）－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］－１－ピペラジニル］－ピペリジンＮ１－オキシド（Ｓｃｈ－３５０６３４）（Tagat et al., J. MED. CHEM., 44：3343-3346（2001））；
【0143】
４－［（Ｚ）－（４－ブロモフェニル）－（エトキシイミノ）メチル］－１’－［（２，４－ジメチル－３－ピリジニル）カルボニル］－４’－メチル－１，４’－ビピペリジンＮ－オキシド（ＳＣＨ３５１１２５）（Palani et al., J.MED. CHEM., 44：3339-3342（2001））；２（Ｓ）－メチルピペラジン（Tagat et al., BIOORG. MED. CHEM. LETT., 11：2143-2146（2001））；ピペリジン－４－カルボキサミド誘導体（Imamura et al., BIOORG. MED.CHEM., 13：397-416, 2005）；スルホキシド骨格含有１－ベンザゼピン誘導体（Seto et al., BIOORG. MED. CHEM. LETT., 13: 363-386 (2005))；ピリジンＮ－オキシド骨格含有アニリド誘導体（Seto et al., CHEM. PHARM. BULL．(Tokyo), 52: 818-829 (2004))；３級アミン骨格含有１－ベンゾチエピン１，１－ジオキシドおよび１－ベンザゼピン誘導体（Seto et al., CHEM. PHARM．BULL．(Tokyo), 52: 577-590 (2004))；Ｎ－［３－（４－ベンジルピペリジン－１－イル）プロピル］－Ｎ，Ｎ’－ジフェニル尿素（Imamura eta l., BIOORG. MED．CHEM., 12: 2295-2306 (2004))；５－オキソピロリジン－３－カルボキサミド誘導体（Imamura et al., CHEM. PHARM. BULL．(Tokyo), 52：63-73（2004）；４級アンモニウム骨格を含むアニリド誘導体（Shiraishi et al., J.MED. CHEM., 43：2049-2063（2000））；ＡＫ６０２／ＯＮＯ４１２８／ＧＷ８７３１４０（Nakata et al., J. VIROL., 79：2087-2096（2005））；スピロジケトピペラジン誘導体（Maeda et al., J. BIOL. CHEM., 276: 35194-35200 (2001); Maeda et al., J. VIROL., 78: 8654-8662 (2004))；ならびに、選択的ＣＣＲ５アンタゴニスト (Thoma et al., J. MED. chem., 47: 1939-1955 (2004))などの、１種以上の低分子と組み合わせて投与される。
【0144】
一つの態様において、レロンリマブなどのＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤は、ＳＣＨ－Ｃ、ＳＣＨ－Ｄ（ＳＣＨ４１７６７０またはビクリビロク）、ＵＫ－４２７，８５７（マラビロク）、ＧＷ８７３１４０、ＴＡＫ－６５２、ＴＡＫ－７７９ ＡＭＤ０７０、またはＡＤ１０１のうちの１種以上と組み合わせて投与される。米国特許第８，８２１，８７７号参照。
【0145】
一つの態様において、レロンリマブなどのＣＣＲ５細胞受容体に対する競合阻害剤は、細胞療法、低分子、化学療法剤、またはＣＣＲ５／ＣＣＬ５シグナル伝達阻害剤などの、１種以上の他の治療分子または処置と組み合わせて投与される場合に、相乗作用を示す。２種以上の薬剤間の「相乗」は、薬剤の組み合わせた作用がそれらの相加作用よりも大きいことに言及する。薬剤間の相乗作用、相加作用、または拮抗作用は、併用係数（ＣＩ）法を用いた用量反応曲線の解析により定量化することができる。１より大きいＣＩ値は、拮抗作用を示し；１に等しいＣＩ値は、相加作用を示し；および１未満のＣＩ値は、相乗作用を示す。一つの態様において、相乗的相互作用のＣＩ値は、０．９未満である。別の態様においては、ＣＩ値は０．８未満である。別の態様においては、ＣＩ値は０．７未満である。
【0146】
例
例１
ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるキナーゼ活性化およびリン酸化に対するレロンリマブの作用
ＣＣＲ５は、ケモカインであるＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１βに応答して、細胞の活性化および輸送を媒介する、Ｇタンパク質共役型ケモカイン受容体（ＧＰＣＲ）である。ＣＣＲ５は、ＣＤ４＋ヘルパーＴ１、Ｔ細胞、単球由来マクロファージ、および末梢血樹状細胞において発現している。Bleul et al., The HIV coreceptors CXCR4 and CCR5 are differentially expressed and regulated on human T lymphocytes, PNAS 94(5): 1925-1930 (1997)；Loetscher et al., CCR5 is characteristic of Th1 lymphocytes, NATURE, 391(6665):344-345 (1998)；Lee et al., Quantification of CD4, CCR5, and CXCR4 levels on lymphocyte subsets, dendritic cells, and differentially conditioned monocyte-derived macrophages, PNAS 96(9): 5215-5220 (1999)。
例１
ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるキナーゼ活性化およびリン酸化に対するレロンリマブの作用
ＣＣＲ５は、ケモカインであるＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１βに応答して、細胞の活性化および輸送を媒介する、Ｇタンパク質共役型ケモカイン受容体（ＧＰＣＲ）である。ＣＣＲ５は、ＣＤ４＋ヘルパーＴ１、Ｔ細胞、単球由来マクロファージ、および末梢血樹状細胞において発現している。Bleul et al., The HIV coreceptors CXCR4 and CCR5 are differentially expressed and regulated on human T lymphocytes, PNAS 94(5): 1925-1930 (1997)；Loetscher et al., CCR5 is characteristic of Th1 lymphocytes, NATURE, 391(6665):344-345 (1998)；Lee et al., Quantification of CD4, CCR5, and CXCR4 levels on lymphocyte subsets, dendritic cells, and differentially conditioned monocyte-derived macrophages, PNAS 96(9): 5215-5220 (1999)。
【0147】
ＧＰＣＲに結合するケモカインは、細胞内のｃＡＭＰレベル、ホスホリパーゼおよびＰＩ３Ｋの活性化、ならびにチロシンキナーゼ活性を変化させる。Rodriguez-Frade et al., Similarities and Differences in RANTES-and (AOP)-RANTES-triggered Signals: Implications for Chemotaxis, THE JOURNAL OF CELL BIOLOGY, 144(4): 755-765 (1999)；Ward et al., Chemokines and T lymphocytes: More than an attraction, IMMUNITY, 9(1): 1-11 (1998)。ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、およびＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）によるＣＣＲ５結合は、同様の親和性および下流作用を伴って生じる。Ward et al., Chemokines and T lymphocytes: More than an attraction, IMMUNITY, 9(1): 1-11 (1998)。
【0148】
かかる作用の一つが、ＳＴＡＴ転写因子の活性化である。Mellado et al., Chemokine receptor homo-or heterodimerization activates distinct signaling pathways, THE EMBO JOURNAL, 20(10): 2497-2507 (2001)。ＣＣＲ５に結合するケモカインは、チロシンキナーゼ（ＴＫ）活性を刺激し、ならびに、ＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ３活性を促進し、これらは、Ｔ細胞におけるがん原遺伝子ｃ－ｆｏｓの発現に関わっている。
【0149】
モノクローナル抗体レロンリマブは、ＣＤ４＋Ｔ細胞に単独で添加された場合には、ｃＡＭＰレベルに影響を与えないが、ＣＣＬ５と一緒に投与された場合には、ｃＡＭＰレベルへのＣＣＬ５の作用を減弱させることがこれまでに示されている。国際公開第２０１６／２１０１３０号。同様に、レロンリマブ単独では、ＣＨＯ－Ｋ１細胞の走化性に影響を与えないが、レロンリマブはＣＣＬ５と一緒に投与された場合には、ＣＣＬ５により誘導される走化性を減少させる。国際公開第２０１６／２１０１３０号。これらの研究は、レロンリマブが、ＣＣＲ５に対してアゴニスト活性を有さないが、ＣＣＲ５への結合をＣＣＬ５と競合する阻害剤として作用することを示している。ＣＣＲ５は様々な生化学的経路に関与しているため、レロンリマブによるこれら経路の制御可能性を評価することは重要である。
【0150】
レロンリマブが、ＣＣＲ５作動（engagement）の下流で活性化されることが知られている別のシグナル伝達経路に対し、アンタゴニストまたはアゴニスト活性を有するかどうかをさらに検討するため、特定のチロシンキナーゼ活性化に対するレロンリマブの作用を評価した。
【0151】
（ａ）細胞株：３人の健康なドナーから血液を採取し、遠心分離して末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）が分離および単離するようにした。ＰＢＭＣをロイコアグルチニンＰＨＡ－Ｌ １μｇ／ｍＬで刺激した（２４ウェルプレート中、２Ｅ６細胞／ウェル）。ＰＨＡ株は、刺激後２４時間、およびＣＤ４＋ＣＣＲ５＋Ｔ細胞のＦＡＣＳ（７～１０日）まで１日おきに、ＩＬ－２ ３０Ｕ／ｍＬを用いて拡大させた。ＦＡＣＳソーティングは、抗ヒトＣＤ４－ｐｅｒｃｐ－Ｃｙ５．５ クローンＲＰＡ－Ｔ４、マウスＩｇＧ１κ、および抗ヒトＣＣＲ５－ＰＥ クローンＮＰ－６Ｇ４、マウスＩｇＧ１κを、それぞれ２５μｇ／ｍＬで用い、作用濃度（working concentration）０．１２５μｇ／ｍＬで行った。ＦＡＣＳでソーティングしたＣＤ４＋ＣＣＲ５＋Ｔ細胞は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８アゴニスト抗体を、含むまたは含まない、ＩＬ－２条件培地（３０ＵｍＬ）中で一晩培養した。
【0152】
（ｂ）方法：細胞株は、レロンリマブ（１μｇ／ｍＬ）への応答におけるチロシンキナーゼ（ＣＲＥＢ、ＥＲＫ、ＬＣＫ、ＶＡＳＰ、ＺＡＰ－７０）活性化についてアッセイを行った。加えて、フォルスコリン（「ＦＳＫ」；１０μＭ）およびＲＡＮＴＥＳ（０．１μＭ）に対するレロンリマブの作用も試験した。細胞は、３７℃で１５分間インキュベートし、次いで１６％ＰＦＡ１６μＬの添加により固定し、さらに２０分間ＲＴでインキュベートした。次いで細胞を、２％ウシ血清アルブミンおよび０．１％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００を含むリン酸緩衝生理食塩水中でブロッキング／透過化した。以下の通りのリン酸化キナーゼに対する蛍光タグ標識抗体：CREB-Alexa Fluor 488 tag, BD Cat #558435；ERK1/2-Alexa Fluor 488 tag, BD Cat #612592；LCK-PE tag, BD Cat #558552；VASP-FITC tag, Enzo Cat #ALX-804-240F-C100；およびZAP-70-Alexa Fluor 488 tag, BD Cat#558518、を用いて染色した。ＦＬ－１またはＦＬ－２チャンネルにおける蛍光強度は、BD FACScaliburフローサイトメーターを用いて測定した。蛍光強度中央値の集団シフトを使用して、細胞集団におけるリン酸化を定量化した。
【0153】
最初の実験では、ソーティングされていないＴ細胞をホルボール１２－ミリスタート１３－アセタート（ＰＭＡ）２５ｎＭに暴露して、これらの細胞において、確立されているフローに基づく（flow-based）方法を用いてＴＫリン酸化を評価することができるかどうかを試験した。ベースラインのリン酸化レベルは、未処理の抗体染色細胞（未処理）と未染色細胞（ＣＴＬ未染色）との間の蛍光強度中央値を比較することにより観察した。
【0154】
（ｃ）結果：ＰＭＡを用いた予備実験により、Ｔ細胞において、チロシンキナーゼ活性化がフローサイトメトリーを用いて定量化することができることが確認された。ＰＭＡ処理は、ＣＲＥＢおよびＥＲＫのリン酸化を増加させたが、ＶＡＳＰまたはＺＡＰ－７０のリン酸化は増加させなかった（図１）。ソーティングされたＣＤ４＋ＣＣＲ５＋Ｔ細胞はまた、蛍光強度中央値のヒストグラムにおけるシフトも示した（図２、ＬＣＫリン酸化に対するＲＡＮＴＥＳの作用を示している）。
【0155】
レロンリマブは、試験したキナーゼのタンパク質リン酸化を変化させず、アデニリルシクラーゼアゴニストであるフォルスコリンまたはＣＣＲ５アゴニストであるＲＡＮＴＥＳにより誘導されるリン酸化における変化を変化させなかった。レロンリマブ処理は、ＣＲＥＢ、ＥＲＫ、ＬＣＫ、ＶＡＳＰまたはＺＡＰ－７０の統計的に有意なリン酸化を生じさせなかった（図３）。フォルスコリン処理は、ＣＲＥＢのリン酸化を増加させ；レロンリマブによる前処理は、この応答を統計的に変化させなかった（図４）。同様に、ＲＡＮＴＥＳ処理は、リン酸化ＣＲＥＢを増加させたが、この応答は、レロンリマブ前処理により統計的に変化しなかった（図５）。レロンリマブはｃＡＭＰの形成または分解を変化させないというこれまでの知見と一致して、本試験は、レロンリマブがまた、ＣＲＥＢ、ＥＲＫ、ＬＣＫ、ＶＡＳＰ、またはＺＡＰ－７０の活性化をも有意に変化させないこと、および、レロンリマブが、フォルスコリンまたはＲＡＮＴＥＳによるこれらキナーゼの活性化を変化させないことを示している。それゆえ、レロンリマブは、ＣＤ４＋ＣＣＲ５＋濃縮（CD4+ CCR5+-enriched）Ｔ細胞におけるＣＣＲ５シグナル伝達およびｃＡＭＰ濃度を低下させるＣＣＲ５の能力を鈍化させるが、ここで試験したＴＫの活性に対しては明らかな作用を有さない。加えて、レロンリマブは、ベースのＴＫ活性化、またはｃＡＭＰ合成を刺激するアゴニストであるフォルスコリンによって誘導される応答を、変化させなかった。
【0156】
（ｄ）結論：この試験の結果は、レロンリマブが、ＣＤ４＋細胞株におけるキナーゼ活性化に対する直接的作用も、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＲ５アゴニスト）またはフォルスコリンによるかかるキナーゼのリン酸化を阻害する明らかな能力も、有さないことを示唆している。
【0157】
例２
レロンリマブは免疫不全マウスモデルにおいてがんを予防する
免疫不全マウスで増殖させたＳＷ４８０ヒト結腸癌腫のマウス異種移植モデルにおいて、レロンリマブヒト化モノクローナル抗体の抗腫瘍活性を評価した。レロンリマブは、in vitroではＴ細胞においてＣＣＬ５がチロシンキナーゼ活性化を調節する能力に影響を及ぼさなかったが（例１）、レロンリマブは、Ｔ細胞欠損マウスにおいて免疫調節作用を示し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞およびＢ細胞欠損マウスにおいては免疫調節作用を示さなかった。
レロンリマブは免疫不全マウスモデルにおいてがんを予防する
免疫不全マウスで増殖させたＳＷ４８０ヒト結腸癌腫のマウス異種移植モデルにおいて、レロンリマブヒト化モノクローナル抗体の抗腫瘍活性を評価した。レロンリマブは、in vitroではＴ細胞においてＣＣＬ５がチロシンキナーゼ活性化を調節する能力に影響を及ぼさなかったが（例１）、レロンリマブは、Ｔ細胞欠損マウスにおいて免疫調節作用を示し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞およびＢ細胞欠損マウスにおいては免疫調節作用を示さなかった。
【0158】
（ａ）方法：ＳＷ４８０ヒト結腸癌腫細胞（ＡＴＣＣ）を培地（ＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳ、抗生物質、抗真菌剤）中で拡大させ、雄性ＮＣｒ ｎｕ／ｎｕマウス（Taconic）、および雄性ＮＯＤ－ｓｃｉｄ－ＩＬ２Ｒｇ（ＮＳＧ）マウス（Jackson）の体側に皮下接種した（部位あたり２００万個、ｓ．ｃ．）。ＮＣｒ ｎｕ／ｎｕマウスおよびＮＳＧマウスの両方は、Ｔ細胞を欠損しており、これは、マウスの免疫システムが移植されたヒト結腸細胞を拒絶することを予防する。しかしながら、ＮＳＧマウスは、ＮＫ細胞およびＢ細胞も欠損している。マウスを無作為に割り当てて、週２回（月、木）、対照ヒトＩｇＧまたはレロンリマブをｉ．ｐ．で与えた。腫瘍の直径を測径器で週３回（月、水、金）測定し、長球の計算式を用いて腫瘍体積を算出した。マウスの体重は、週１回（水）測定した。
【0159】
レロンリマブの投与量は、Freireich et al., Quantitative comparison of toxicity of anticancer agents in mouse, rat, hamster, dog, monkey, and man, CANCER CHEMOTHER REP., 50:219-44 (1966)；およびthe National Cancer Institute Developmental Therapeutics Program http://dtp.nci.nih.govからの「Representative Surface Area to Weight Ratios (km) for Various Species」を用いて算出した。レロンリマブのヒト用量＝５．８ｍｇ／ｋｇから始まり、５．８ｍｇ／ｋｇ×１２（ヒトからマウスへの（man-to-mouse）換算係数）＝６９．６ｍｇ／ｋｇマウス用量；平均的マウス＝０．０２５ｋｇ、したがって、用量は６９．６ｍｇ／ｋｇ×０．０２５ｋｇ＝１．７４ｍｇ（マウス単回用量）である。これを２．０ｍｇに切り上げて「高用量」とした。「低用量」（０．２ｍｇ）も試験した。ヒト血清由来のＩｇＧ（＞９５％ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Sigma、I4506）を非特異的対照抗体として用いた。
試験は、表１に示されている通り、異なるマウス系統、薬物用量、および薬物スケジュールを用いて、４つのパートで行った。
試験は、表１に示されている通り、異なるマウス系統、薬物用量、および薬物スケジュールを用いて、４つのパートで行った。
【0160】
【表1】
【0161】
（ｂ）結果：結腸癌腫細胞をマウスに接種した直後に開始したレロンリマブの高用量での投与は、試験終了時の腫瘍体積の有意な減少をもたらしたが、接種３週間後に開始したレロンリマブの投与は、腫瘍体積の有意差とは関連していなかった。
レロンリマブの投与（パート１、週２回２ｍｇ ｉ．ｐ．）は、４２日までにＳＷ４８０の腫瘍体積の６２．８％減少をもたらした（ｐ＝０．０１４）（図６）。レロンリマブを与えられたマウスは、試験期間にわたって、正常な体重増加を示したが、非特異的ＩｇＧを与えられたマウスは、試験後半の間に体重が減少した（ｐ＝０．０４７）（図７）。
レロンリマブの投与（パート１、週２回２ｍｇ ｉ．ｐ．）は、４２日までにＳＷ４８０の腫瘍体積の６２．８％減少をもたらした（ｐ＝０．０１４）（図６）。レロンリマブを与えられたマウスは、試験期間にわたって、正常な体重増加を示したが、非特異的ＩｇＧを与えられたマウスは、試験後半の間に体重が減少した（ｐ＝０．０４７）（図７）。
【0162】
２１日に開始した、より大きな定着腫瘍（established tumor）（体積：対照－６８．５±４７．２５；レロンリマブ－４７．２５±３４．８９ｍｍ３）のレロンリマブによる処置（パート２、週２回２ｍｇ ｉ．ｐ．）は、腫瘍増殖の有意な阻害をもたらさなかった（ｐ＝０．７１９）（図８）。
減少した用量でのレロンリマブの投与（パート３、週２回０．２ｍｇ ｉ．ｐ．）は、４２日までにＳＷ４８０腫瘍体積の１８．３％減少を誘導したが、統計的有意には達しなかった（ｐ＝０．２７２）（図９）。試験後半における腫瘍進行の間、両群は同程度の体重減少を示した（ｐ＝０．７０８）（図１０）。
減少した用量でのレロンリマブの投与（パート３、週２回０．２ｍｇ ｉ．ｐ．）は、４２日までにＳＷ４８０腫瘍体積の１８．３％減少を誘導したが、統計的有意には達しなかった（ｐ＝０．２７２）（図９）。試験後半における腫瘍進行の間、両群は同程度の体重減少を示した（ｐ＝０．７０８）（図１０）。
【0163】
ヌードマウス（Ｔ細胞欠損）からより免疫抑制された宿主（ＮＳＧマウス、Ｔ、Ｂ、ＮＫ細胞欠損）への切り替えは、レロンリマブの抗腫瘍効果の喪失をもたらした。レロンリマブ群では、対照群と比較して腫瘍体積が３２％減少していたが、これは統計的有意には達しなかった（ｐ＝０．０７６）（図１１）。両処置群では、同程度の体重減少があった（ｐ＝０．６１）（図１２）。
結論：この試験の結果は、結腸癌腫細胞への曝露直後のレロンリマブ投与は、腫瘍の増殖を遅らせる、または阻害する傾向があることを示唆している。しかしながら、この作用は、投与量、結腸癌腫細胞への曝露とレロンリマブ投与との間の時間、ならびに、マウスモデルがＴ細胞を欠損しているか、またはＴ細胞、ＮＫ細胞およびＢ細胞を欠損しているかに依存していた。
結論：この試験の結果は、結腸癌腫細胞への曝露直後のレロンリマブ投与は、腫瘍の増殖を遅らせる、または阻害する傾向があることを示唆している。しかしながら、この作用は、投与量、結腸癌腫細胞への曝露とレロンリマブ投与との間の時間、ならびに、マウスモデルがＴ細胞を欠損しているか、またはＴ細胞、ＮＫ細胞およびＢ細胞を欠損しているかに依存していた。
【0164】
例３
レロンリマブはｘＧＶＨＤの発症を遅らせ、結腸がんのヒト化マウスモデルにおける抗腫瘍活性を増大させる
レロンリマブヒト化モノクローナル抗体の抗腫瘍活性を、ヒト化マウスで増殖させたＳＷ４８０ヒト結腸癌腫のマウス異種移植モデルにおいて評価した。
レロンリマブはｘＧＶＨＤの発症を遅らせ、結腸がんのヒト化マウスモデルにおける抗腫瘍活性を増大させる
レロンリマブヒト化モノクローナル抗体の抗腫瘍活性を、ヒト化マウスで増殖させたＳＷ４８０ヒト結腸癌腫のマウス異種移植モデルにおいて評価した。
【0165】
（ａ）ヒト化マウス：雄性の、ＮＯＤ ｓｃｉｄ ＩＬ－２受容体γノックアウトマウスとして一般に知られているＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ，Jackson Laboratory, Stock No.005557）は、使用時に６～８週齢であった。マウスは、Ｘ線源（Precision X-Rad 320、コネチカット州、ノースブランフォード）を介して２２５ｃＧｙの全身照射を受けた。Ｘ線照射の２４時間後、マウスにヒトＢＭ細胞を移植した。Cleveland Clinic Bone Marrow Transplant programにより利用されている逆流式（back-flushing）フィルターパックにより非同定ヒトドナー細胞を得た。新鮮な（非凍結）白血球を、Ficoll-Hypaque勾配遠心により精製し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で洗浄し、生存率を評価した（ViCell、Beckman Coulter、カリフォルニア州、ブレア）。ヒトＢＭ単核白血球を尾静脈側部に注射した（１０６個細胞／マウス）。
【0166】
（ｂ）方法：
異所性接種：ヒト白血球の移植の明確な証拠があった３５日に、マウスに、リポフェクタミンを用いてルシフェラーゼ－ｐｃＤＮＡ３（Addgene plasmid #18964 ;http://n2t.net/addgene :18964 ;RRID :Addgene_18964）を安定導入させたＳＷ４８０ヒト結腸癌腫細胞（ATCC、バージニア州、マナサス）２．５×１０５個を腹側に接種した。マウスは、ＧｖＨＤの臨床症状（体の姿勢、活動性、毛皮および皮膚の状態、体重減少）について、２回／週モニターした。末梢血は、伏在静脈の静脈穿刺（５０μＬ）（Ｋ－ＥＤＴＡチューブに採取）を利用して、週1回、移植についてモニターした。８１日には、半数を超えるマウスが＞１０％の体重減少、ＧｖＨＤの臨床症状を示し、実験的エンドポイントに達したとみなされた。
異所性接種：ヒト白血球の移植の明確な証拠があった３５日に、マウスに、リポフェクタミンを用いてルシフェラーゼ－ｐｃＤＮＡ３（Addgene plasmid #18964 ;http://n2t.net/addgene :18964 ;RRID :Addgene_18964）を安定導入させたＳＷ４８０ヒト結腸癌腫細胞（ATCC、バージニア州、マナサス）２．５×１０５個を腹側に接種した。マウスは、ＧｖＨＤの臨床症状（体の姿勢、活動性、毛皮および皮膚の状態、体重減少）について、２回／週モニターした。末梢血は、伏在静脈の静脈穿刺（５０μＬ）（Ｋ－ＥＤＴＡチューブに採取）を利用して、週1回、移植についてモニターした。８１日には、半数を超えるマウスが＞１０％の体重減少、ＧｖＨＤの臨床症状を示し、実験的エンドポイントに達したとみなされた。
【0167】
同所性接種：ケタミン－キシラジン麻酔下で、ベタジンスクラブおよび７０％エタノール拭き取り（×３）による皮膚準備の後、１０ｍｍの切開により盲腸を露出させた。３１ゲージの針を用い、盲腸の漿膜下にＳＷ４８０－ｌｕｃ細胞１０５個を１０μＬの体積で接種した。盲腸を腹腔に戻し、筋肉および皮膚を２重の縫合糸で閉じ、マウスを回復させた。
【0168】
安楽死：マウスは、制御勾配ＣＯ２吸入（Quietek、NextAdvance、ニューヨーク州、アベリルパーク）の後、頸椎脱臼して安楽死させ、腫瘍および臓器をハーベストした。
生物発光イメージング：転移を評価するため、マウスは、IVIS Spectrum In Vivo Imaging System（PerkinElmer、マサチューセッツ州、ウォルサム）を用いて解析した。ルシフェリン用量は、in vivoでのイメージングには３ｍｇ ｉ．ｐ．、摘出した肺および肝臓のin vitroでのイメージングには１５０μｇ／ｍＬであった。
生物発光イメージング：転移を評価するため、マウスは、IVIS Spectrum In Vivo Imaging System（PerkinElmer、マサチューセッツ州、ウォルサム）を用いて解析した。ルシフェリン用量は、in vivoでのイメージングには３ｍｇ ｉ．ｐ．、摘出した肺および肝臓のin vitroでのイメージングには１５０μｇ／ｍＬであった。
【0169】
レロンリマブ処置：マウスは、体重により各８匹ずつの対照群および処置群に無作為に割り当てた。レロンリマブは、週２回、２．０ｍｇ／マウスで腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。２．０ｍｇの用量は、急性ＧｖＨＤに対するヒト第２相臨床試験で使用された用量に近似するように算出された。ＨＩＶ陽性患者におけるこの用量の単回投与は、ＨＩＶ負荷を、１０倍を超えて減少させることが示されている。対照マウスには、同じ用量の比較で正常ヒトＩｇＧ（Sigma Aldrich、ミズーリ州、セントルイス）が与えられた。
【0170】
（ｃ）結果：ＣＣＲ５発現は腫瘍増殖の加速と関連している－ヒト化ヒト結腸異種移植マウスモデルにおけるレロンリマブの抗腫瘍作用および免疫調節作用が特徴付けられた。ＣＣＲ５が、この異種移植モデルにおける結腸がん進行の機能的に関連するマーカーであることを立証するため、ＳＷ４８０ヒト結腸癌腫細胞を、ＣＣＲ５発現の強度に従ってＦＡＣＳソーティングした（図１３Ａ）。上位および下位２０％の発現細胞を含有するプールを、（非照射）ＮＳＧマウスに接種するために用いた（図１３Ｂ）。ＣＣＲ５を最も強く発現する細胞（Ｈｉ）から始まった腫瘍は、最も低いＣＣＲ５発現を有する細胞（Ｌｏ）よりも、速く増殖する腫瘍を生成した、ｎ＝４、ｐ＝０．０１９（図１３Ｃ）。したがって、薬物処置がない場合には、ＣＣＲ５を多数発現する腫瘍細胞は、in vivoにおける増殖の優位性を示した。
【0171】
レロンリマブはｘＧＶＨＤの発症を遅らせる－ヒト化ＮＳＧマウスとの関連におけるＳＷ４８０腫瘍の挙動について検討した。ＮＳＧマウスは、２２５ｃＧｙの全身照射を行い、２４時間後に正常ヒトＢＭ単核球を接種して調製した。３週間以内に、ＩｇＧを与えられたマウスは、体重減少、体の姿勢、活動性、毛皮および皮膚の状態によって特徴付けられる異種移植片対宿主病（ｘＧＶＨＤ）の兆候を示し始めた（図１４Ａおよび図１４Ｂ）。非腫瘍担持マウスにおいて、Ａｂによってもたらされる抗ＧＶＨＤ活性の持続期間および持続性を決定するため、レロンリマブおよびＩｇＧ処置を５週で中止した。処置停止後、ＩｇＧ群およびレロンリマブ群の両方で全身症状が悪化した。ｘＧＶＨＤの兆候は、両方のレロンリマブ処置群で７週まで遅延した。体重減少は、両方の腫瘍担持群において、非腫瘍担持動物と比較して加速した。ＩｇＧと比較して、レロンリマブは、腫瘍担持マウスおよび非腫瘍担持の両方において、ｘＧＶＨＤの発症を遅延させた、ｐ＝０．００１。
【0172】
レロンリマブはヒト化マウスにおける抗腫瘍活性を増大させる－次いで、抗腫瘍活性に対するヒト化の作用を評価した。ヒト化ＮＳＧマウスでは、レロンリマブは、ＩｇＧ処置と比較して腫瘍の進行を効果的に遅延させ、その作用は８０日まで持続した（図１５）、ｐ＝０．００４。非ヒト化ＮＳＧマウスでは、腫瘍増殖に対するレロンリマブ処置の作用はＩｇＧ処置と差がなかったが（ｐ＝０．７８２）、このことは、抗ＳＷ４８０活性の媒介におけるヒトエフェクター細胞の重要性を示している。ＩｇＧ処置と組み合わせたヒト化は、初期の抗腫瘍作用をもたらし、これは最終的には６０日までに失われた。
【0173】
例４
レロンリマブは結腸がんのヒト化マウスモデルにおいて肺および肝臓転移病変の増殖速度を減少させる
レロンリマブヒト化モノクローナル抗体の抗転移活性を、ヒト化マウスで増殖させたＳＷ４８０ヒト結腸癌腫のマウス異種移植モデルにおいて評価した。
レロンリマブは結腸がんのヒト化マウスモデルにおいて肺および肝臓転移病変の増殖速度を減少させる
レロンリマブヒト化モノクローナル抗体の抗転移活性を、ヒト化マウスで増殖させたＳＷ４８０ヒト結腸癌腫のマウス異種移植モデルにおいて評価した。
【0174】
（ａ）方法：ヒト化マウスに、上記の通りにＳＷ４８０ヒト結腸癌腫細胞を同所性接種した。ルシフェラーゼ標識結腸癌腫細胞の盲腸漿膜下への同所性接種の１０日後、マウスに生物発光イメージングを施し、開始時の腫瘍体積が同等であることを確認した。４５日に、腹部において直径１５ｍｍを超えて測定される触診可能な腫瘍があり、両処置群におけるマウスの全身症状が悪化したため、試験を終了した。肝臓および肺を摘出し、ルシフェリン基質を含有する培地に入れた。
【0175】
（ｂ）結果：ＩｇＧ処置マウスおよびレロンリマブ処置マウスに移植された腫瘍によって放出された初期の発光シグナル（光子／秒、ｐ／ｓ）の間に有意差はなかった（ｐ＝０．０７４）（図１８Ａ）。肝臓転移負荷は、レロンリマブ処置マウスにおいて５９％低下したが、有意にまでは達しなかった（ｐ＝０．０６７）（図１８Ｂ）。肺転移負荷は、ＩｇＧ処置動物と比較して、レロンリマブ処置マウスで８７％低下した（ｐ＝０．０１２）（図１８Ｃ）。したがって、腫瘍阻害の程度は、原発性皮下腫瘍の増殖阻害と比較して、転移性病変においてより顕著であった。
【0176】
例５
レロンリマブは特定の免疫細胞の発現を増大させる
フローサイトメトリーを用いて、レロンリマブの抗腫瘍作用の媒介に関与する免疫細胞の種類を同定した。
（ａ）方法：末梢血（ＰＢ）試料をフローサイトメトリーにより解析した。赤血球を塩化アンモニウムにより溶解させ、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ／０．５ｍＭ ＥＤＴＡ／０．５％ＢＳＡ中において、４℃で１５分間、下記抗体：抗ヒトＣＤ３－ＦＩＴＣ（クローンＵＣＨＴ１、ＩＭ１２８１Ｕ）、抗ヒトＣＤ４５－ＰＣ７（クローンＪ．３３、ＩＭ３５４８Ｕ）、抗マウスＣＤ４５．１－ＦＩＴＣ（クローンＡ２０）、eBioscience（Thermo Fisher）、および抗ヒトＣＤ５６－ＰＥ（クローン５．１Ｈ１１）、BioLegendを用いて染色した。ヒトＣＤ４５、マウスＣＤ４５、およびヒトＣＤ３については、結果を総イベント数におけるパーセンテージとして表した。ヒトＣＤ５６については、結果を総イベント数におけるパーセンテージとして表した。免疫抑制細胞の解析には、True-Nuclear Human Treg Flow Kit（FoxP3 AlexaFluor 488/CD4 PE-Cy5/CD25 PE）をメーカーの説明書に従って用いた(BioLegend、カリフォルニア州、サンディエゴ)。試料は、Cytomics FC500 Flow Analyzer (Beckman/Coulter)で解析した。
レロンリマブは特定の免疫細胞の発現を増大させる
フローサイトメトリーを用いて、レロンリマブの抗腫瘍作用の媒介に関与する免疫細胞の種類を同定した。
（ａ）方法：末梢血（ＰＢ）試料をフローサイトメトリーにより解析した。赤血球を塩化アンモニウムにより溶解させ、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ／０．５ｍＭ ＥＤＴＡ／０．５％ＢＳＡ中において、４℃で１５分間、下記抗体：抗ヒトＣＤ３－ＦＩＴＣ（クローンＵＣＨＴ１、ＩＭ１２８１Ｕ）、抗ヒトＣＤ４５－ＰＣ７（クローンＪ．３３、ＩＭ３５４８Ｕ）、抗マウスＣＤ４５．１－ＦＩＴＣ（クローンＡ２０）、eBioscience（Thermo Fisher）、および抗ヒトＣＤ５６－ＰＥ（クローン５．１Ｈ１１）、BioLegendを用いて染色した。ヒトＣＤ４５、マウスＣＤ４５、およびヒトＣＤ３については、結果を総イベント数におけるパーセンテージとして表した。ヒトＣＤ５６については、結果を総イベント数におけるパーセンテージとして表した。免疫抑制細胞の解析には、True-Nuclear Human Treg Flow Kit（FoxP3 AlexaFluor 488/CD4 PE-Cy5/CD25 PE）をメーカーの説明書に従って用いた(BioLegend、カリフォルニア州、サンディエゴ)。試料は、Cytomics FC500 Flow Analyzer (Beckman/Coulter)で解析した。
【0177】
（ｂ）結果：ヒト化マウスからの末梢血は、免疫細胞組成の変化について解析した。非腫瘍担持マウスにおいて、レロンリマブは、循環ＮＫ細胞の２８．９％増加を誘導した（ｐ＝０．０１７）（図１６、左パネル）。腫瘍担持マウスにおいては、レロンリマブ処置は、循環Ｂ細胞の低下（４０．１％、ｐ＝０．０３７）および循環ＮＫ細胞の低下（４９．８％、ｐ＝０．００６）、ならびにＴ細胞の増加（９．０％、ｐ＝０．００２）をもたらした（図１６、左および右のパネル）。レロンリマブ投与後のこの細胞の再分布は、ヒト白血球による腫瘍浸潤の増大によって続発するものではなかった。ＳＷ４８０腫瘍の免疫組織化学は、Ｂ、Ｔ、ＮＫ細胞およびマクロファージ（ＣＤ２０６およびＣＤ１６３）について染色がみられず、著しく精彩のないものであった（データは示さず）。
【0178】
腫瘍担持動物および非腫瘍担持動物の両方の末梢血において、レロンリマブは、免疫抑制ヒトＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞を誘導した（それぞれ、１．４７倍増加、ｐ＝０．０１６；２．２２倍増加、ｐ＝０．００３８）（図１７）。レロンリマブはまた、ＧＶＨＤ促進性のヒト循環ＣＤ４＋ＣＤ２５－細胞の１．８４倍の減少（ｐ＝０．０３３）を引き起こした。ＦｏｘＰ３＋細胞は検出されなかった。
【0179】
例６
レロンリマブは腫瘍関連血管新生を阻害する
ヒト化マウスで増殖させたＳＷ４８０ヒト結腸癌腫のマウス異種移植モデルにおける、腫瘍関連血管新生に対するレロンリマブの作用を評価した。
レロンリマブは腫瘍関連血管新生を阻害する
ヒト化マウスで増殖させたＳＷ４８０ヒト結腸癌腫のマウス異種移植モデルにおける、腫瘍関連血管新生に対するレロンリマブの作用を評価した。
【0180】
（ａ）方法：ヒト化ＮＳＧマウスに皮膚接種して１０日のＳＷ４８０結腸癌腫瘍の周囲に増殖している血管を、解剖顕微鏡を用いて１２．５倍の倍率で写真撮影した。腫瘍結節の外周に接している可視血管はすべて１本の血管として点数化した。腫瘍面積を評価するため、２種の測定を行った（皮膚と同一平面上にある最大直径、および第一の直径に垂直な第二の直径）。これら２種の測定値の積を腫瘍面積の指標として用いた。画像は、１２．５対物レンズ付き手術用顕微鏡（World Precision Instruments、PSMT5、フロリダ州、サラソタ）を用いて撮影した。各実験群は８匹のマウスを含んでいた。腫瘍写真は、ＶＥＳＧＥＮソフトウェアを用いてデジタル解析を行い、目的の腫瘍塊を表す領域により腫瘍の外周を定義した。出力は、一連のカラー世代マップ（黒色背景にカラー血管）で、最大径の血管がＧ１と定義され、それに続くより小さい各世代がＧ２～Ｇ９として表された。血管数は、総血管面積、血管長密度、および血管径に基づき表された。
【0181】
（ｂ）結果：腹側の真皮に接種されて１０日のＳＷ４８０結腸癌腫腫瘍を直接的に栄養する血管の定量的解析により、ＩｇＧ処置宿主と比較して、レロンリマブ処置ヒト化マウスからの腫瘍における血管数の有意な低下が明らかになり、（図１９Ａ）、これは、腫瘍床における新生血管形成に対してレロンリマブが阻害作用を引き起こすことと一致していた。ＶＥＳＧＥＮソフトウェアの利用により、処置群間の詳細な比較が可能となり、総血管面積（ピクセル）の６２％減少（ｐ＝０．０１３）、血管長密度の５３％減少（ｐ＝０．００１１）、大血管（例えば、世代１～３（Ｇ１～Ｇ３））の数の６１％減少（ｐ＝０．００８２）および小血管（例えば、世代４～９（Ｇ４～Ｇ９））の数の８０％減少（ｐ＝０．０１７）を包含する、腫瘍栄養血管網の複数の主要特性における著しい減少が明らかになった（図１９Ｂ）。それゆえ、同じ初期腫瘍負荷を有する動物からの原発性腫瘍は、レロンリマブによる処置後に血管新生の低下を示した。
【0182】
２０１９年８月２日に出願された米国仮特許出願第６２／８８２，３５３号および２０２０年７月２日に出願された米国仮特許出願第６３／０４７，６９３号を包含する、本明細書において言及されるおよび／または出願データシートに列挙されている、米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願は全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。態様の側面は、必要に応じて、様々な特許および出願の概念を採用し、別のさらなる態様を提供するために改変することができる。上記の様々な態様は、組み合わせてさらなる態様を提供することができる。
【0183】
本発明の特定の態様が例示および記載されているが、上記の様々な態様は、さらなる態様を提供するために組み合わせることができること、および本発明の精神および範囲から逸脱することなく、そこに様々な変更を行うことができることが容易に理解されるであろう。これらおよび他の変更は、上記の詳細な説明に照らし、態様に対して行うことができる。
一般に、以下の特許請求の範囲においては、用いられる用語は、特許請求の範囲を明細書および特許請求の範囲において開示された特定の態様に限定するように解釈されるべきではなく、かかる特許請求の範囲が権利を有する等価物の全範囲とともに、全ての可能な態様を包含するように解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。
一般に、以下の特許請求の範囲においては、用いられる用語は、特許請求の範囲を明細書および特許請求の範囲において開示された特定の態様に限定するように解釈されるべきではなく、かかる特許請求の範囲が権利を有する等価物の全範囲とともに、全ての可能な態様を包含するように解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13A】
【図13B】
【図13C】
【図14A】
【図14B】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18A】
【図18B】
【図18C】
【図19A】
【図19B】
【手続補正書】
【提出日】2022-05-12
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】