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特表2022-543049スタチンによって誘発される血管石灰化の予防におけるアスコルビン酸塩
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-10-07
(54)【発明の名称】スタチンによって誘発される血管石灰化の予防におけるアスコルビン酸塩
(51)【国際特許分類】
A61K 31/197 20060101AFI20220930BHJP
A61K 31/375 20060101ALI20220930BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20220930BHJP
A61P 9/14 20060101ALI20220930BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/355 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/4415 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/51 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/525 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/714 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/4188 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/455 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/205 20060101ALI20220930BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/40 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/404 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/4418 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/505 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/366 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/47 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/22 20060101ALI20220930BHJP
A61K 31/122 20060101ALI20220930BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20220930BHJP
【ＦＩ】
A61K31/197
A61K31/375
A61P9/00
A61P9/14
A61P25/00
A61K31/355
A61K31/4415
A61K31/51
A61K31/525
A61K31/714
A61K31/4188
A61K31/519
A61K31/455
A61K31/205
A61K45/00
A61K31/40
A61K31/404
A61K31/4418
A61K31/505
A61K31/366
A61K31/47
A61K31/22
A61K31/122
A61P9/10 101
【審査請求】未請求
【予備審査請求】有
(21)【出願番号】P 2022506423
(86)(22)【出願日】2020-07-27
(85)【翻訳文提出日】2022-03-18
(86)【国際出願番号】 IB2020057063
(87)【国際公開番号】W WO2021019421
(87)【国際公開日】2021-02-04
(31)【優先権主張番号】16/524,383
(32)【優先日】2019-07-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】19190436.6
(32)【優先日】2019-08-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】16/562,313
(32)【優先日】2019-09-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】522040894
【氏名又は名称】マティーアス・ラート
(74)【代理人】
【識別番号】100127926
【弁理士】
【氏名又は名称】結田 純次
(74)【代理人】
【識別番号】100140132
【弁理士】
【氏名又は名称】竹林 則幸
(72)【発明者】
【氏名】マティーアス・ラート
(72)【発明者】
【氏名】ヴァジム・イヴァノフ
(72)【発明者】
【氏名】アレクサンドラ・ニージェヴィーキ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C084AA22
4C084NA06
4C084ZA451
4C086AA01
4C086AA02
4C086BA09
4C086BA17
4C086BA18
4C086BC05
4C086BC13
4C086BC17
4C086BC18
4C086BC19
4C086BC28
4C086BC42
4C086BC83
4C086CB09
4C086CB28
4C086DA39
4C086MA03
4C086MA04
4C086NA06
4C086NA14
4C086ZA02
4C086ZA36
4C086ZA44
4C086ZA45
4C206AA01
4C206AA02
4C206CB27
4C206DB03
4C206DB56
4C206FA58
4C206FA59
4C206GA05
4C206GA36
4C206KA04
4C206MA03
4C206MA04
4C206NA06
4C206NA14
4C206ZA02
4C206ZA36
4C206ZA44
4C206ZA45
(57)【要約】
少なくとも１種のスタチンおよびＬ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸塩を含む医薬組成物を患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、Ｌ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸塩またはそれらを含む混合物を患者に投与することによって、患者の血管石灰化を処置または予防する方法。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
スタチン処置を受けている患者の併用処置に使用するためのＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩。
【請求項2】
患者の血管石灰化の処置または予防に使用するためのＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩。
【請求項3】
スタチンの投与によって患者に誘発される血管石灰化の処置または予防に使用するための、請求項２に記載のＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩。
【請求項4】
スタチンによって誘発される血管石灰化を緩和するための、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の使用。
【請求項5】
少なくとも１種のスタチンおよびＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩を患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、少なくとも１種のスタチンおよびＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩を含む医薬組成物。
【請求項6】
少なくとも１種のスタチンおよびＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩が、物理的混合物として、または患者への併用投与を意図した別々の医薬組成物として存在する、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項7】
心血管系疾患の予防または処置のための、請求項５または６に記載の医薬組成物。
【請求項8】
心血管系疾患が冠動脈疾患、脳血管疾患または末梢血管疾患である、請求項５～７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項9】
スタチンが、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチンまたはそれらの混合物からなる群から選択される、請求項５～８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項10】
アスコルビン酸塩が、水溶性もしくは脂溶性アスコルビン酸塩またはそれらの混合物から、好ましくはアスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビルまたはそれらの混合物から選択される、請求項５～９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項11】
少なくとも１種のスタチン、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩、およびコエンザイムＱ１０を患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、コエンザイムＱ１０をさらに含む、請求項５～１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項12】
Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩１０ｍｇ～１００ｇ、および少なくとも１種のスタチン５ｍｇ～１００ｍｇの１日投与量を含む、請求項５～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項13】
Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の他に、好ましくは微量ミネラル、ビタミン、およびそれらの混合物から選択される１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素をさらに含む、請求項５～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項14】
ビタミンＥ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、葉酸、ビオチン、Ｌ－カルニチンおよびベタインをさらに含む、請求項５～１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項15】
医薬組成物中に、以下の量：Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩：３００ｍｇ～１０００．２ｍｇ、
ビタミンＥ：２７．５ｍｇ～８２．５ｍｇ、
ビタミンＢ１：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ２：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ３：１１５ｍｇ～３５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ５：１６．７ｍｇ～５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ６：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ１２：１０μｇ～３０μｇ、
葉酸：１３３．３μｇ～３９９．９μｇ、
ビオチン：３３．３μｇ～９９．９μｇ、
Ｌ－カルニチン：３３．３ｍｇ～９９．９ｍｇ、
ベタイン：２３．３ｍｇ～６９．９ｍｇ
を含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項16】
１つまたはそれ以上の微量栄養素が、ナイアシンを、好ましくはスタチンとの混合物中に含む、請求項１３～１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項17】
ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、葉酸、ビオチン、Ｌ－カルニチンおよびベタインを含む、またはそれらからなる組成の混合物１。
【請求項18】
医薬組成物中に、以下の量：ビタミンＣ：３００ｍｇ～１０００．２ｍｇ、
ビタミンＥ：２７．５ｍｇ～８２．５ｍｇ、
ビタミンＢ１：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ２：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ３：１１５ｍｇ～３５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ５：１６．７ｍｇ～５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ６：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ１２：１０μｇ～３０μｇ、
葉酸：１３３．３μｇ～３９９．９μｇ、
ビオチン：３３．３μｇ～９９．９μｇ、
Ｌ－カルニチン：３３．３ｍｇ～９９．９ｍｇ、
ベタイン：２３．３ｍｇ～６９．９ｍｇ
を含む、またはそれらからなる、請求項１７に記載の組成の混合物１。
【請求項19】
組成の混合物１が、心血管系疾患を処置するための医薬組成の混合物１である、請求項１７または１８に記載の組成の混合物１。
【請求項20】
心血管系疾患が、冠動脈疾患、脳血管疾患または末梢血管疾患の少なくとも１つである、医薬組成の混合物１である、請求項１９に記載の組成の混合物１。
【請求項21】
好ましくはアトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、またはそれらの混合物からなる群から選択されるスタチンをさらに含み、好ましくは５ｍｇ～１００ｍｇの１日投与量である、医薬組成の混合物１である、請求項１７～２０のいずれか１項に記載の組成の混合物１。
【請求項22】
好ましくは微量ミネラル、ビタミン、アミノ酸およびそれらの誘導体、またはそれらの混合物から選択される１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素を含み、より好ましくは１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素がスタチンとの混合物で存在することができるナイアシンを含む、請求項１７～２１のいずれか１項に記載の組成の混合物１。
【請求項23】
ビタミンＣがアスコルビン酸塩の形態であり、アスコルビン酸塩が好ましくは水溶性もしくは脂溶性アスコルビン酸塩、またはそれらの混合物から選択され、より好ましくはアスコルビン酸塩がアスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビルまたはそれらの混合物から選択される、請求項１７～２２のいずれか１項に記載の組成の混合物１。
【請求項24】
スタチン、混合物１、およびコエンザイムＱ１０の少なくとも１つを患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、コエンザイムＱ１０をさらに含む、請求項１７～２３のいずれか１項に記載の組成の混合物１。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、スタチンによって誘発される血管石灰化を予防または緩和するためのＬ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸塩またはそれらを含む混合物の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
スタチンは、ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤としても知られており、脂質低下化合物の一種である。
【0003】
コレステロールの低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）キャリアは、脂質仮説によって説明される機構により、アテローム性動脈硬化および冠動脈性心疾患の発症に重要な役割を果たしている。スタチンはＬＤＬコレステロールの低下に有効であり、そのため心血管疾患のリスクが高い人の一次予防、および心血管疾患を発症した人の二次予防に広く使用されている。
【0004】
スタチンで処置すると、患者は、筋肉痛、糖尿病のリスク上昇、および肝酵素の異常な血中レベルを含む副作用を示す。
【0005】
一部の患者において、例えばロバスタチンは、ミオパチーおよび無症状であるが顕著で持続的な肝トランスアミナーゼの上昇を引き起こす。ロバスタチンおよび他のＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤によって生じるトランスアミナーゼレベルの増加は、メバロン酸合成の阻害の直接的な結果である。少数の患者で観察されるトランスアミナーゼレベルの上昇を妨げるため、特許文献１は、ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤に関連する肝臓障害を防止するために、有効量のＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤および有効量のコエンザイムＱ１０の補助的投与を教示している。
【0006】
さらに、スタチンは、血管石灰化を増加させることが知られており、これは心臓病の認知された危険因子である（非特許文献１）。
【0007】
最近、連続冠動脈血管内超音波検査を用いた８回の前向き無作為化試験の解析で、Ｐｕｒｉら（非特許文献２）は、プラーク退縮作用とは無関係に、スタチンが冠動脈アテローム石灰化を促進すると結論付けた。
【0008】
動脈石灰化が心血管疾患発症の確立されたマーカーおよび予後指標であり、動脈石灰化における影響をスタチンが刺激していることと、ＣＶＤ患者の臨床イベントにおけるスタチン補給の明らかに有益な効果との間には、まだ論争がある。一部の研究者は、これらの矛盾した証拠は、病変安定性がより大きくなる、スタチン処置下での動脈石灰化の「特別な」機構のためであるというもっともらしい説明を提供しており、これは、より少ないＶＨ－薄被膜線維性粥腫（ＶＨ－ｔｈｉｎ－ｃａｐ ｆｉｂｒｏａｔｈｅｒｏｍａｓ）およびプラーク破裂、ならびにより石灰化した厚被膜線維性粥腫（ｔｈｉｃｋ－ｃａｐ ｆｉｂｒｏａｔｈｅｒｏｍａｓ）として定義される（非特許文献３）。
【0009】
血管石灰化は、冠動脈アテローム性動脈硬化に関連する病態生理学的プロセスであり、心血管疾患の罹患率および死亡率の予後マーカーである。
【0010】
血管平滑筋細胞（ＳＭＣ）は、造骨性表現型分化を受ける並外れた能力を有している。内膜および内側の血管細胞層の石灰化により、平滑筋細胞、間葉系細胞、または血管周皮細胞にかかわらず、特にアルカリホスファターゼ活性、オステオカルシン産生、骨基質分泌の増加を特徴とする、骨芽細胞の分化が導かれる。平滑筋細胞から骨芽細胞への変換に関連する生化学的機構は詳述されているが、このプロセスを引き起こす、および／または制御する決定的な機構は、ほとんど解明されていない。
【0011】
最近の研究から、プラークの石灰化は動的なプロセスであり、血管の炎症の程度と関連していることが明らかになった。動脈硬化の様々な段階で生じるいくつかの炎症性因子は、動脈壁内に存在する骨芽細胞の発現および活性化を誘導することができ、その結果、カルシウムの沈着を促進することが知られている。
【0012】
脱分化した骨芽細胞様細胞とともに制御タンパク質の存在は、石灰化している血管細胞に指定された血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）に由来することが示された。これらの細胞は、アテローム性動脈硬化性プラーク、特に石灰化周辺での骨の合成／再吸収に関与している。このように、血管壁における骨細胞の機能は、いくつかの局面で骨のものと類似していることが提案されている。しかし、ｉｎ ｖｉｔｒｏの研究により、血管壁中と骨格における骨合成の制御は異なるという証拠が提供された。酸化ストレスまたは酸化ＬＤＬで刺激すると、骨格の骨芽細胞およびＣＶＣ（骨芽細胞の特徴を持つ血管細胞の集団）は、それぞれ骨形成の減少および増加という相反する反応を示した。
【0013】
特許文献２には、血中脂質改善剤組成物が開示されている。この医薬組成物は、アトルバスタチンと、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カルシウムまたはアスコルビン酸であり得るアスコルビン酸誘導体とを組み合わせている。アトルバスタチンおよびアスコルビン酸の共投与の効果は表８に示されている。アトルバスタチンおよびアスコルビン酸を投与した場合、血中ＦＦＡレベルが低下している、最後の項目参照。アトルバスタチンおよびアスコルビン酸を含有する組成物が表１～４に示されている。段落［０００８］には、アトルバスタチンおよび特定のビタミン（アスコルビン酸）を共投与すると、血中の総コレステロールレベルが低下することが記載されている。
【0014】
特許文献３には、シンバスタチンおよびアスコルビン酸の組み合わせが開示されている。血中過酸化脂質レベル、血中ＦＦＡレベル、およびＣＰＫレベルは、シンバスタチンおよびアスコルビン酸の組み合わせによって低下した。対応する医薬組成物は表１～表４に挙げられている。段落［０００６］には、この組み合わせにより血中脂質レベルが改善されることが記載されている。
【0015】
特許文献４には、プラバスタチンおよびアスコルビン酸誘導体の組み合わせが開示されている。プラバスタチンおよびアスコルビン酸（ならびにさらにトコフェロールまたはトコフェロールおよび酪酸リボフラビン）の組み合わせにより、血中トリグリセリド濃度が低下し得ることが記載されている。段落［０００７］には、薬物組成物が血中のトリグリセリドレベルを低下させることが記載されている。
【0016】
特許文献５には、乾癬の処置のためのスタチンとアスコルビン酸との組み合わせが開示されている。
【0017】
非特許文献４には、第１頁の結論として、アルファ－トコフェロール、ビタミンＣおよび低用量のアトルバスタチンによる処置が冠動脈石灰化の進行に影響を与えないことが記載されている。
【0018】
非特許文献５は、要約においてｉｎ ｖｉｔｒｏでのＶＳＭＣ石灰化におけるカルシウム拮抗薬およびスタチンの効果を記述している。増殖培地はアスコルビン酸を含んでいたが、５０μｇ／ｍｌの低レベルであった。処置を組み合わせることで、アトルバスタチン単独で観察されたものと同程度に、石灰化が促進されることが記載されている。
【0019】
非特許文献６には、第２．２節中の第４８２７頁に、石灰化を刺激するために、細胞を５０μｇ／ｍｌのアスコルビン酸およびＧＰと共に培養したことが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0020】
【特許文献1】ＵＳ４，９２９，４３７
【特許文献2】ＵＳ２００４／００２３９１９Ａ１
【特許文献3】ＵＳ２００４／００１４７１２Ａ１
【特許文献4】ＵＳ２００４／０００９９８６Ａ１
【特許文献5】ＷＯ０３／０７２０１３Ａ２
【非特許文献】
【0021】
【非特許文献1】Ｉｋｅｇａｍｉ Ｙ，Ｉｎｏｕｅ Ｉ，Ｉｎｏｕｅ Ｋ，Ｓｈｉｎｏｄａ Ｙ３，Ｉｉｄａ Ｓ１，Ｇｏｔｏ Ｓ４，Ｎａｋａｎｏ Ｔ５，Ｓｈｉｍａｄａ Ａ１，Ｎｏｄａ Ｍ１．「ＰＣＳＫ９阻害剤およびスタチンの併用療法による冠動脈石灰化の年率は、スタチン単剤療法よりも低い（Ｔｈｅ ａｎｎｕａｌ ｒａｔｅ ｏｆ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ａ ＰＣＳＫ９ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ａｎｄ ａ ｓｔａｔｉｎ ｉｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｗｉｔｈ ｓｔａｔｉｎ ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ．）」ＮＰＪ Ａｇｉｎｇ Ｍｅｃｈ Ｄｉｓ ２０１８；４：７
【非特許文献2】Ｐｕｒｉ Ｒ，Ｎｉｃｈｏｌｌｓ ＳＪ，Ｓｈａｏ Ｍ，Ｋａｔａｏｋａ Ｙ，Ｕｎｏ Ｋ，Ｋａｐａｄｉａ ＳＲ，Ｔｕｚｃｕ ＥＭ，Ｎｉｓｓｅｎ ＳＥ．「アテロームの進行および退縮におけるスタチンの連続冠動脈石灰化に対する影響（Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｓｔａｔｉｎｓ ｏｎ ｓｅｒｉａｌ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ａｔｈｅｒｏｍａ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ．）」Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ２０１５； ６５：１２７３－１２８２
【非特許文献3】Ｋａｄｏｈｉｒａ Ｔ１，Ｍｉｎｔｚ ＧＳ，Ｓｏｕｚａ ＣＦ，Ｗｉｔｚｅｎｂｉｃｈｌｅｒ Ｂ，Ｍｅｔｚｇｅｒ ＤＣ，Ｒｉｎａｌｄｉ ＭＪ， Ｍａｚｚａｆｅｒｒｉ ＥＬ Ｊｒ，Ｄｕｆｆｙ ＰＬ，Ｗｅｉｓｚ Ｇ，Ｓｔｕｃｋｅｙ ＴＤ，Ｂｒｏｄｉｅ ＢＲ，Ｃｒｏｗｌｅｙ Ａ，Ｋｉｒｔａｎｅ ＡＪ，Ｓｔｏｎｅ ＧＷ，Ｍａｅｈａｒａ Ａ．「経皮的インターベンションを受ける患者における慢性スタチン療法が臨床像および基礎病変の形態に与える影響（Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｓｔａｔｉｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｌｅｓｉｏｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇ ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ）」：ＡＤＡＰＴ－ＤＥＳ ＩＶＵＳサブスタディ．Ｃｏｒｏｎ Ａｒｔｅｒｙ Ｄｉｓ ２０１７；２８：２１８－２２４
【非特許文献4】Ｙ． Ａｒａｄら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，第４６巻，第１号，２００５，第１６６－１７２頁
【非特許文献5】Ａ．Ｔｒｉｏｎら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第３０８巻，第１－２号，２００７，第２５－３３頁
【非特許文献6】Ｎ．Ｓｋａｆｉら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，第２３４巻，第４号，２０１８，第４８２５－４８３９頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0022】
本発明の基礎となる目的は、スタチンの投与によって患者に誘発される血管石灰化を処置または予防することである。
【課題を解決するための手段】
【0023】
この目的は、本発明によれば、以下の実施形態のうちの１つまたはそれ以上によって達成される。
第１セットの実施形態
１．スタチン処置を受けている患者の併用処置に使用するためのＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩。
２．患者における血管石灰化の処置、低減または予防に使用するためのＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩。
３．スタチンの投与によって患者に誘発される血管石灰化の処置または予防に使用するための、実施形態２に記載のＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩。
４．スタチンによって誘発される血管石灰化を緩和するための、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の使用。
５．少なくとも１種のスタチンとＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩とを患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、少なくとも１種のスタチンとＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩とを含む医薬組成物。
６．少なくとも１種のスタチンおよびＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩が、物理的混合物として、または患者への併用投与を意図した別々の医薬組成物として存在する、実施形態５に記載の医薬組成物。
７．心血管疾患の予防または処置のための、実施形態６に記載の医薬組成物。
８．心血管系疾患が冠動脈疾患、脳血管疾患または末梢血管疾患である、実施形態５～７の１つに記載の医薬組成物。
９．スタチンが、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、もしくはそれらの混合物、もしくはいずれか他のタイプもしくは形態のスタチンからなる群から、またはスタチンとナイアシンの組み合わせから選ばれる、実施形態５～８の１つに記載の医薬組成物。
１０．アスコルビン酸塩が、水溶性もしくは脂溶性アスコルビン酸塩またはそれらの混合物から、好ましくはアスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビルまたはそれらの混合物から選択される、実施形態６～９の１つに記載の医薬組成物。
１１．少なくとも１種のスタチン、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩、およびコエンザイムＱ１０を患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、コエンザイムＱ１０をさらに含む、実施形態６～１０の１つに記載の医薬組成物。
１２．Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩１０ｍｇ～１００ｇ、好ましくは１００ｍｇ～１０ｇ、および少なくとも１種のスタチンの商業的に入手可能なまたは臨床的に適用可能な最低用量から最高用量、好ましくは５ｍｇ～１００ｍｇの１日投与量を含む、実施形態５～１１の１つに記載の医薬組成物。
１３．Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の他に、好ましくは微量ミネラル、ビタミン、およびそれらの混合物から選択される１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素をさらに含む、実施形態５～１２の１つに記載の医薬組成物。
１４．１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素が、ナイアシンを、好ましくはスタチンとの混合物中に含む、実施形態１３に記載の医薬組成物。
第１セットの実施形態
１．スタチン処置を受けている患者の併用処置に使用するためのＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩。
２．患者における血管石灰化の処置、低減または予防に使用するためのＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩。
３．スタチンの投与によって患者に誘発される血管石灰化の処置または予防に使用するための、実施形態２に記載のＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩。
４．スタチンによって誘発される血管石灰化を緩和するための、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の使用。
５．少なくとも１種のスタチンとＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩とを患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、少なくとも１種のスタチンとＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩とを含む医薬組成物。
６．少なくとも１種のスタチンおよびＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩が、物理的混合物として、または患者への併用投与を意図した別々の医薬組成物として存在する、実施形態５に記載の医薬組成物。
７．心血管疾患の予防または処置のための、実施形態６に記載の医薬組成物。
８．心血管系疾患が冠動脈疾患、脳血管疾患または末梢血管疾患である、実施形態５～７の１つに記載の医薬組成物。
９．スタチンが、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、もしくはそれらの混合物、もしくはいずれか他のタイプもしくは形態のスタチンからなる群から、またはスタチンとナイアシンの組み合わせから選ばれる、実施形態５～８の１つに記載の医薬組成物。
１０．アスコルビン酸塩が、水溶性もしくは脂溶性アスコルビン酸塩またはそれらの混合物から、好ましくはアスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビルまたはそれらの混合物から選択される、実施形態６～９の１つに記載の医薬組成物。
１１．少なくとも１種のスタチン、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩、およびコエンザイムＱ１０を患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、コエンザイムＱ１０をさらに含む、実施形態６～１０の１つに記載の医薬組成物。
１２．Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩１０ｍｇ～１００ｇ、好ましくは１００ｍｇ～１０ｇ、および少なくとも１種のスタチンの商業的に入手可能なまたは臨床的に適用可能な最低用量から最高用量、好ましくは５ｍｇ～１００ｍｇの１日投与量を含む、実施形態５～１１の１つに記載の医薬組成物。
１３．Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の他に、好ましくは微量ミネラル、ビタミン、およびそれらの混合物から選択される１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素をさらに含む、実施形態５～１２の１つに記載の医薬組成物。
１４．１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素が、ナイアシンを、好ましくはスタチンとの混合物中に含む、実施形態１３に記載の医薬組成物。
【0024】
第２セットの実施形態
１．好ましくはスタチンで処置されている、患者において、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩を患者に投与することによって、血管石灰化を処置または予防する方法。
２．患者をＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩で処置する方法であって、患者が少なくとも１種のスタチンで併用処置される方法。
３．心血管系疾患を処置、軽減または予防するために、患者に少なくとも１種のスタチンとＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩とを併用投与する方法。
４．スタチンによって誘発される血管石灰化を緩和するための、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の使用方法。
５．少なくとも１種のスタチンとＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩とを患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、少なくとも１種のスタチンおよびＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩を含む医薬組成物。
６．少なくとも１種のスタチンおよびＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩が、物理的混合物として、または患者への併用投与を意図した別々の医薬組成物として存在する、実施形態５に記載の医薬組成物。
７．心血管疾患の予防または処置のための実施形態５に記載の医薬組成物。
８．心血管系疾患が冠動脈疾患、脳血管疾患または末梢血管疾患である、実施形態５～７の１つに記載の医薬組成物。
９．スタチンが、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、もしくはそれらの混合物、またはいずれか他のタイプもしくは形態のスタチンからなる群から、またはスタチンとナイアシンとの組み合わせから選ばれる、実施形態５～８の１つに記載の医薬組成物。
１０．アスコルビン酸塩が、水溶性もしくは脂溶性アスコルビン酸塩、またはそれらの混合物から、好ましくはアスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビルまたはそれらの混合物から選ばれる、実施形態５～９の１つに記載の医薬組成物。
１１．少なくとも１種のスタチン、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩、およびコエンザイムＱ１０を患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、コエンザイムＱ１０をさらに含む、実施形態５～１０の１つに記載の医薬組成物。
１２．Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩１０ｍｇ～１００ｇ、好ましくは１００ｍｇ～１０ｇ、および少なくとも１種のスタチンの商業的に入手可能なまたは臨床的に適用可能な最低から最高用量、好ましくは５ｍｇ～１００ｍｇの１日投与量を含む、実施形態５～１１の１つに記載の医薬組成物。
１３．Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の他に１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素をさらに含む、実施形態５～１２の１つに記載の医薬組成物。
１４．１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素が、微量ミネラル、ビタミン、およびそれらの混合物から選択され、好ましくは、スタチンとの混合物で存在し得るナイアシンを含む、実施形態１３に記載の医薬組成物。
１５．有効量の少なくとも１種のスタチンおよび有効量のＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩を併用投与することを含む、そのような処置を必要とする対象におけるスタチン関連の増加した血管石灰化の妨げる方法。
１６．有効量のＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩を患者に投与することを含む、患者の血管石灰化を処置または予防する方法。
１．好ましくはスタチンで処置されている、患者において、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩を患者に投与することによって、血管石灰化を処置または予防する方法。
２．患者をＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩で処置する方法であって、患者が少なくとも１種のスタチンで併用処置される方法。
３．心血管系疾患を処置、軽減または予防するために、患者に少なくとも１種のスタチンとＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩とを併用投与する方法。
４．スタチンによって誘発される血管石灰化を緩和するための、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の使用方法。
５．少なくとも１種のスタチンとＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩とを患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、少なくとも１種のスタチンおよびＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩を含む医薬組成物。
６．少なくとも１種のスタチンおよびＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩が、物理的混合物として、または患者への併用投与を意図した別々の医薬組成物として存在する、実施形態５に記載の医薬組成物。
７．心血管疾患の予防または処置のための実施形態５に記載の医薬組成物。
８．心血管系疾患が冠動脈疾患、脳血管疾患または末梢血管疾患である、実施形態５～７の１つに記載の医薬組成物。
９．スタチンが、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、もしくはそれらの混合物、またはいずれか他のタイプもしくは形態のスタチンからなる群から、またはスタチンとナイアシンとの組み合わせから選ばれる、実施形態５～８の１つに記載の医薬組成物。
１０．アスコルビン酸塩が、水溶性もしくは脂溶性アスコルビン酸塩、またはそれらの混合物から、好ましくはアスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビルまたはそれらの混合物から選ばれる、実施形態５～９の１つに記載の医薬組成物。
１１．少なくとも１種のスタチン、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩、およびコエンザイムＱ１０を患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、コエンザイムＱ１０をさらに含む、実施形態５～１０の１つに記載の医薬組成物。
１２．Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩１０ｍｇ～１００ｇ、好ましくは１００ｍｇ～１０ｇ、および少なくとも１種のスタチンの商業的に入手可能なまたは臨床的に適用可能な最低から最高用量、好ましくは５ｍｇ～１００ｍｇの１日投与量を含む、実施形態５～１１の１つに記載の医薬組成物。
１３．Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の他に１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素をさらに含む、実施形態５～１２の１つに記載の医薬組成物。
１４．１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素が、微量ミネラル、ビタミン、およびそれらの混合物から選択され、好ましくは、スタチンとの混合物で存在し得るナイアシンを含む、実施形態１３に記載の医薬組成物。
１５．有効量の少なくとも１種のスタチンおよび有効量のＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩を併用投与することを含む、そのような処置を必要とする対象におけるスタチン関連の増加した血管石灰化の妨げる方法。
１６．有効量のＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩を患者に投与することを含む、患者の血管石灰化を処置または予防する方法。
【0025】
第３セットの実施形態
１．ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、葉酸、ビオチン、Ｌ－カルニチンおよびベタインを含むか、もしくはそれらからなり、好ましくはさらにスタチンを含むか、もしくはそれらからなり、または患者にスタチンの１回投与量で投与することを可能にする投薬形態における、好ましくは医薬の、組成の混合物１（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｍｉｘｔｕｒｅ １）。
２．好ましくは、心血管疾患を患う患者に１日用量として投与することを可能にする、混合物で栄養素を有する投薬形態における、少なくとも１種のスタチンを含む（医薬）組成物混合物１。
３．少なくとも１種のスタチンおよび混合物１またはＬ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸が、物理的混合物として、または患者への併用投与を意図する別々の（医薬）組成物として存在する、（医薬）組成物。
４．心血管疾患の予防または処置のための（医薬）組成の混合物１。
５．心血管系疾患が、冠動脈疾患、脳血管疾患または末梢血管疾患である、（医薬）組成の混合物１。
６．スタチンが、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、もしくはそれらの混合物、もしくはいずれか他のタイプもしくは形態のスタチンからなる群から、またはスタチンとナイアシンとの組み合わせから選ばれる、（医薬）組成物１。
７．ビタミンＣが、好ましくは水溶性もしくは脂溶性アスコルビン酸塩またはそれらの混合物から、好ましくはアスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビルまたはそれらの混合物から選ばれるアスコルビン酸塩の形態である、（医薬）組成の混合物１。
８．少なくとも１種のスタチン、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩、およびコエンザイムＱ１０を患者に併用投与することを可能にする投薬形態においてコエンザイムＱ１０をさらに含む（医薬）組成の混合物１。
９．Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩１０ｍｇ～１００ｇ、好ましくは１００ｍｇ～１０ｇ、および少なくとも１種のスタチンの商業的に入手可能なまたは臨床的に適用可能な最低用量から最高用量、好ましくは５ｍｇ～１００ｍｇの１日投与量を含む（医薬）組成の混合物１。
１０．Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の他に、好ましくは微量ミネラル、ビタミン、およびそれらの混合物から選択される１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素をさらに含む、（医薬）組成の混合物１。
１１．１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素が、ナイアシンを、好ましくはスタチンとの混合物中に含む、（医薬）組成物。
１２．（医薬）組成の混合物１は、好ましくは、単回投与または１日当たりの投与量として、以下のような栄養素：ビタミンＣ（アスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム）：３００ｍｇ～１０００．２ｍｇ、ビタミンＥ：２７．５ｍｇ～８２．５ｍｇ、ビタミンＢ１：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、ビタミンＢ２：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、ビタミンＢ３：１１５ｍｇ～３５０．１ｍｇ、ビタミンＢ５：１６．７ｍｇ～５０．１ｍｇ、ビタミンＢ６：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、ビタミンＢ１２：１０μｇ～３０μｇ、葉酸：１３３．３μｇ～３９９．９μｇ、ビオチン：３３．３μｇ～９．９μｇ、Ｌ－カルニチン：３３．３ｍｇ～９９．９ｍｇ、ベタイン：２３．３ｍｇ～６９．９ｍｇを含む。
１．ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、葉酸、ビオチン、Ｌ－カルニチンおよびベタインを含むか、もしくはそれらからなり、好ましくはさらにスタチンを含むか、もしくはそれらからなり、または患者にスタチンの１回投与量で投与することを可能にする投薬形態における、好ましくは医薬の、組成の混合物１（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｍｉｘｔｕｒｅ １）。
２．好ましくは、心血管疾患を患う患者に１日用量として投与することを可能にする、混合物で栄養素を有する投薬形態における、少なくとも１種のスタチンを含む（医薬）組成物混合物１。
３．少なくとも１種のスタチンおよび混合物１またはＬ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸が、物理的混合物として、または患者への併用投与を意図する別々の（医薬）組成物として存在する、（医薬）組成物。
４．心血管疾患の予防または処置のための（医薬）組成の混合物１。
５．心血管系疾患が、冠動脈疾患、脳血管疾患または末梢血管疾患である、（医薬）組成の混合物１。
６．スタチンが、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、もしくはそれらの混合物、もしくはいずれか他のタイプもしくは形態のスタチンからなる群から、またはスタチンとナイアシンとの組み合わせから選ばれる、（医薬）組成物１。
７．ビタミンＣが、好ましくは水溶性もしくは脂溶性アスコルビン酸塩またはそれらの混合物から、好ましくはアスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビルまたはそれらの混合物から選ばれるアスコルビン酸塩の形態である、（医薬）組成の混合物１。
８．少なくとも１種のスタチン、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩、およびコエンザイムＱ１０を患者に併用投与することを可能にする投薬形態においてコエンザイムＱ１０をさらに含む（医薬）組成の混合物１。
９．Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩１０ｍｇ～１００ｇ、好ましくは１００ｍｇ～１０ｇ、および少なくとも１種のスタチンの商業的に入手可能なまたは臨床的に適用可能な最低用量から最高用量、好ましくは５ｍｇ～１００ｍｇの１日投与量を含む（医薬）組成の混合物１。
１０．Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の他に、好ましくは微量ミネラル、ビタミン、およびそれらの混合物から選択される１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素をさらに含む、（医薬）組成の混合物１。
１１．１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素が、ナイアシンを、好ましくはスタチンとの混合物中に含む、（医薬）組成物。
１２．（医薬）組成の混合物１は、好ましくは、単回投与または１日当たりの投与量として、以下のような栄養素：ビタミンＣ（アスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム）：３００ｍｇ～１０００．２ｍｇ、ビタミンＥ：２７．５ｍｇ～８２．５ｍｇ、ビタミンＢ１：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、ビタミンＢ２：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、ビタミンＢ３：１１５ｍｇ～３５０．１ｍｇ、ビタミンＢ５：１６．７ｍｇ～５０．１ｍｇ、ビタミンＢ６：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、ビタミンＢ１２：１０μｇ～３０μｇ、葉酸：１３３．３μｇ～３９９．９μｇ、ビオチン：３３．３μｇ～９．９μｇ、Ｌ－カルニチン：３３．３ｍｇ～９９．９ｍｇ、ベタイン：２３．３ｍｇ～６９．９ｍｇを含む。
【0026】
（医薬）組成の混合物１は、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の代わりに用いることができる。
【0027】
本発明によれば、Ｌ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸塩、またはビタミンＣを含む栄養素もしくは医薬混合物が、特にスタチンと併用投与（ｃｏ－ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）したときに、ヒトシステムにおける血管石灰化の処置または予防に有効であることが見出された。
【0028】
ビタミンＣは、ヒトを含む特定の動物にとって必須栄養素である。臨床試験では、１日当たり５００ｍｇを超える用量で摂取したときに、内皮機能におけるビタミンＣの有意な正の効果が示されている。心血管系疾患の処置または予防におけるその影響の可能性が議論されてきた。
【0029】
ビタミンＣは非常に強力な抗酸化物質であり、コラーゲンおよび最適な細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の形成に必須である。血管壁の完全性および強度を保護することによって、リポタンパク質の沈着およびアテローム性動脈硬化の発症を防ぐことができる。
【0030】
本発明者らの以前の研究では、アスコルビン酸がｉｎ ｖｉｔｒｏでのＳＭＣの過剰な増殖および移動を抑制することが示されている（Ｉｖａｎｏｖ Ｖ，Ｉｖａｎｏｖａ Ｓ，Ｒｏｏｍｉ ＭＷ，Ｋａｌｉｎｏｖｓｋｙ Ｔ，Ｎｉｅｄｚｗｉｅｃｋｉ Ａ，Ｒａｔｈ Ｍ．「アスコルビン酸、リジン、プロリンおよびカテキンの組み合わせによる大動脈平滑筋細胞の増殖および移動の細胞外マトリックス介在性制御（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ａｏｒｔｉｃ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ， ｌｙｓｉｎｅ， ｐｒｏｌｉｎｅ ａｎｄ ｃａｔｅｃｈｉｎｓ．）」Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２００７；５０：５４１－５４７）。また、ビタミンＣを産生できない点、ヒトリポタンパク質（ａ）を発現する点で、ヒトの代謝を模倣した遺伝子改変マウスにおける血管壁へのリポタンパク質沈着およびアテローム性動脈硬化の予防において、食事性ビタミンＣは不可欠である（Ｃｈａ Ｊ，Ｎｉｅｄｚｗｉｅｃｋｉ Ａ，Ｒａｔｈ Ｍ．「低アスコルビン血症は、トランスジェニックマウスにおいて動脈硬化およびリポタンパク質（ａ）の血管沈着を誘発する（Ｈｙｐｏａｓｃｏｒｂｅｍｉａ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ（ａ） ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ．）」Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｄｉｓ ２０１５；５：５３－６２）。臨床試験では、約４ｇのビタミンＣを含む、毎日の微量栄養素補給により、初期の冠動脈疾患と診断された患者の冠動脈石灰化の進行を止めることができた（Ｒａｔｈ Ｍ，Ｎｉｅｄｚｗｉｅｃｋｉ Ａ．（１９９６）「栄養補助食品プログラムは、超高速コンピュータ断層撮影によって記録された初期冠動脈アテローム性動脈硬化の進行を停止させる（Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ｐｒｏｇｒａｍ ｈａｌｔｓ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅａｒｌｙ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｄｏｃｕｍｅｎｔｅｄ ｂｙ ｕｌｔｒａｆａｓｔ ｃｏｍｐｕｔｅｄ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ．）」Ｊ Ａｐｐｌ Ｎｕｔｒ １９９６；４８：６７－７８）。
【0031】
このように、ビタミンＣは血管壁内の細胞および細胞外の構造および機能の調節に決定的な役割を果たしていると考えられる。アスコルビン酸の最適な利用能では、とりわけ、コラーゲンおよびその他のＥＣＭ分子の最適な合成によって血管壁の完全性および安定性がもたらされるであろう。慢性的なアスコルビン酸欠乏または初期の壊血病では、石灰化によるものを含む構造的に損なわれた血管壁に代償的に安定性を付加する代償的な機構が必要とされることがある。
【0032】
本発明者らは、血管ＳＭＣ、ヒト皮膚線維芽細胞（ＤＦ）および不死化ヒト胎児骨芽細胞（ＦＯＢ）におけるビタミンＣの効果、ならびにこれらの細胞が血管石灰化に寄与する可能性を検討した。さらに、本発明者らは、スタチン系薬剤が血管石灰化を抑制することを期待して、現在何百万人もの患者に摂取されている事実を踏まえ、この調節過程に関連するスタチンの役割を評価した。それによって、本明細書に開示された発明に到達した。
【0033】
本発明によれば、アスコルビン酸またはＬ－アスコルビン酸としても知られているビタミンＣが用いられる。代替物として、アスコルビン酸塩を用いることができ、アスコルビン酸塩、アスコルビン酸より強い塩基または酸との塩は、好ましくは水溶性または脂溶性アスコルビン酸塩またはそれらの混合物から選択され、より好ましくはアスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビルまたはそれらの混合物からなる群から選択される。
【0034】
Ｌ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸塩、またはビタミンＣ、Ｅ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ５、Ｂ６、Ｂ１２、葉酸、ビオチン、Ｌ－カルニチンおよびベタインを含む、またはそれらからなる組成の混合物１は、（好ましくは）スタチンで処置された患者に投与される。
【0035】
本発明の文脈では、スタチンは、ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤としても記載することができる。したがって、スタチンは、コレステロールを作るために必要な酵素ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素を阻害する。したがって、スタチンは、心血管疾患のリスクが高い人の病気および死亡率を低下させる脂質低下薬のクラスに関する。すべての適切なスタチンは、本発明の文脈において用いることができる。好ましくは、スタチンは、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、またはそれらの混合物、またはいずれか他のタイプもしくは形態のスタチンなる群から、またはスタチンとナイアシンの組み合わせから選択される。
【0036】
本発明の一態様によれば、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩およびスタチンまたは混合物１は、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の他に１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素と共に投与することができる。例えば、スタチン、Ｌ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸塩または混合物１、および１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素を含む医薬組成物をこの目的のために提供することができる。
【0037】
好ましくは、１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素は、混合物１またはＬ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸塩と共に、およびスタチンと共に投与される。１つまたはそれ以上の微量栄養素は、好ましくは、微量ミネラル、アスコルビン酸塩／ビタミンＣとは異なるビタミン、およびそれらの混合物から選択される。微量ミネラルは、ヒトが少量（微量）だけ必要とするものである。
【0038】
微量ミネラルは、好ましくは、ホウ素、コバルト（好ましくはビタミンＢ１２の成分として）、クロム、銅、ヨウ素、鉄、マンガン、モリブデン、セレン、亜鉛、およびそれらの混合物から選択される。
【0039】
ビタミンＣとは異なるビタミンは、好ましくは、ビタミンＢ複合体、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ピリドキシン、ピリドキサール－５－リン酸、およびピリドキサミンを含むビタミンＢ６群、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ９（葉酸塩または葉酸）、ビタミンＢ１２（コバラミン）、コリン、ビタミンＡ（例えば、レチノールまたはプロビタミンＡカロテノイド）、エルゴカルシフェロールおよびコレカルシフェロールを含むビタミンＤ、ビタミンＥ（トコフェロールおよびトコトリエノール）、ビタミンＫ１（フィロキノン）およびビタミンＫ２（メナキノン）を含むビタミンＫ、アルファカロテン、ベータカロテン、クリプトキサンチン、ルテイン、リコピンおよびゼアキサンチンを含むカロテノイドから選択される。微量栄養素には、例えば、葉酸、ビオチン、Ｌ－カルニチンおよびベタインが含まれうる。
【0040】
アミノ酸およびその誘導体には、ベタインおよびＬ－カルニチンが含まれる。さらなる微量栄養素は、好ましくは、ビタミンＢ６およびＢ１２、葉酸およびベタインを含む。微量栄養素の好ましい組み合わせは、以下に説明するように、混合物１に含まれる。
【0041】
患者がスタチンで処置される場合、１日の投与量は、商業的に入手可能なまたは臨床的に適用可能な最低用量から最高用量までとすることができる。投与量は、好ましくは５～１００ｍｇ、好ましくは１０～８０ｍｇ、より好ましくは１０～４０ｍｇ、最も好ましくは１０～２０ｍｇの範囲内である。
【0042】
スタチン処置を受けている患者に投与されるＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の量は、好ましくは１０ｍｇ～１００ｇ、より好ましくは１００ｍｇ～１０ｇ、最も好ましくは２００ｍｇ～５ｇの１日投与量である。
【0043】
Ｌ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸塩（および場合により１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素）または後述の混合物１をスタチンと同時に、例えば、Ｌ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸塩（および場合によりに１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素）または後述の混合物１、およびスタチンの両方を含む錠剤で投与することが可能である。さらに、Ｌ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸塩（および場合により１つまたはそれ以上の追加の微量栄養素）または後述の混合物１とスタチンとを別々の医薬組成物で、しかし併用して投与することが可能である。用語「併用して」は、両有効成分の投与が、１日当たり１回の投与を基準として、０～５時間、好ましくは０～３時間、より好ましくは０～１時間の時間範囲内で行われることを意味する。
【0044】
スタチンおよびＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩（およびビタミンＣとは異なる他の／追加の微量栄養素）の両方は、それを必要とする患者への単独のおよび別々の投与が十分に確立されているので、両方の有効成分、または混合物１およびスタチンの併用使用を確保しながら、知られた医薬もしくは栄養組成物または後述の混合物１を本発明にしたがって用いることができる。
【0045】
例えば、アスコルビン酸塩を含み、スタチンと組み合わせて有利に用いることができる微量栄養素組成物は、混合物１である。混合物１は、ビタミン、Ｌ－カルニチンおよびベタインを含み、具体的には、ビタミンＣ、Ｅ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ５、Ｂ６、Ｂ１２、葉酸、ビオチン、Ｌ－カルニチンおよびベタインを含むかまたはそれらからなり、毎日の栄養補給のために用いることができる。通常、１日３錠（食事時に多量の液体（水、ジュース、お茶）と共に１錠を１日３回）を服用する。
【0046】
混合物１は、好ましくは、１～３錠の範囲で各栄養素を以下のように含有する：
ビタミンＣ（アスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム）：３００ｍｇ～１０００．２ｍｇ、
ビタミンＥ：２７．５ｍｇ～８２．５ｍｇ、
ビタミンＢ１：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ２：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ３：１１５ｍｇ～３５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ５：１６．７ｍｇ～５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ６：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ１２：１０μｇ～３０μｇ、
葉酸：１３３．３μｇ～３９９．９μｇ、
ビオチン：３３．３μｇ～９９．９μｇ、
Ｌ－カルニチン：３３．３ｍｇ～９９．９ｍｇ、
ベタイン：２３．３ｍｇ～６９．９ｍｇ。
ビタミンＣ（アスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム）：３００ｍｇ～１０００．２ｍｇ、
ビタミンＥ：２７．５ｍｇ～８２．５ｍｇ、
ビタミンＢ１：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ２：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ３：１１５ｍｇ～３５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ５：１６．７ｍｇ～５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ６：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ１２：１０μｇ～３０μｇ、
葉酸：１３３．３μｇ～３９９．９μｇ、
ビオチン：３３．３μｇ～９９．９μｇ、
Ｌ－カルニチン：３３．３ｍｇ～９９．９ｍｇ、
ベタイン：２３．３ｍｇ～６９．９ｍｇ。
【0047】
混合物１は、相乗的な組み合わせで選択された微量栄養素を含む。この再構成処方は、他の基本処方、例えばＶｉｔａｃｏｒ Ｐｌｕｓ（商標）と組み合わせることができる。
【0048】
それは、正常なホモシステインおよびコレステロールの代謝を助ける重要な因子を有する、特定のビタミンおよびその他の微量栄養素のスペクトルを補う。錠剤は、通常、以下の成分：ビタミンＣ、セルロース充填剤、ビタミンＢ３、Ｌ－カルニチン酒石酸塩５．２６％、離型剤ステアリン酸、ベタイン塩酸塩３．２４％、ビタミンＥ、ビタミンＢ５、クロスカルメロースナトリウム、艶出し剤炭酸カルシウム、マルトデキストリン、離型剤二酸化ケイ素、艶出し剤シェラック、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ビオチン、着色剤リボフラビン（ビタミンＢ２）、ヤシ油エキス、葉酸、ビタミンＢ２、レモン油、ビタミンＢ１２、天然レモン香料を含む。
【0049】
ビタミンＢ６、Ｂ１２、葉酸およびベタインは、正常なホモシステイン代謝を補助する重要な因子である。したがって、これらの微量栄養素の最適な供給は、正常なホモシステインレベルを維持するために不可欠である。
【0050】
医薬組成の混合物１の成分は、例えば、
ａ）正常なホモシステイン代謝を支えるベタイン、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２および葉酸と共に
ｂ）正常なエネルギー代謝を支えることに寄与するビオチンおよびビタミンＢと共に
ｃ）酸化ストレスに対する細胞の保護に寄与するビタミンＣおよびビタミンＥと共に
多くの方法で同時に細胞の代謝を支える。
ａ）正常なホモシステイン代謝を支えるベタイン、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２および葉酸と共に
ｂ）正常なエネルギー代謝を支えることに寄与するビオチンおよびビタミンＢと共に
ｃ）酸化ストレスに対する細胞の保護に寄与するビタミンＣおよびビタミンＥと共に
多くの方法で同時に細胞の代謝を支える。
【0051】
推奨される１日の投与量は、上記に示したとおりであるか、またはその１０～３００％、好ましくは２０～２００％、より好ましくは５０～１５０％であることができる。使用されるアスコルビン酸塩は、好ましくは、同一量のアスコルビン酸カルシウムおよびアスコルビン酸マグネシウムから得られる。
【0052】
必要に応じて、成分もしくは混合物１および／またはスタチンの一方または両方を、ＵＳ４，９２９，４３７に説明されているように、複合医薬組成物または別々の医薬組成物においてコエンザイムＱ１０と組み合わせることができる。
【0053】
本発明によれば、Ｌ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸塩または混合物１は、血管石灰化、特にスタチンの投与によって患者に誘発される血管石灰化を処置または予防するために使用される。
【0054】
この文脈における用語「処置する」は、「緩和する」または「逆転させる」を意味する。
【0055】
「混合物１」、「医薬組成の混合物１」、「（医薬）組成の混合物１」または「医薬組成物」という用語は、本願を通じて、混合物１またはＬアスコルビン酸もしくはアスコルビン酸塩を表すために使用される。
【0056】
具体的には、血管平滑筋細胞（ＳＭＣ）、より具体的にはヒト大動脈平滑筋細胞（ＡｏＳＭＣ）の石灰化を防止または緩和するものである。本発明は、特に、血管ＳＭＣ、ヒト皮膚線維芽細胞（ＤＦ）、ならびに不死化ヒト胎児骨芽細胞（ＦＯＢ）におけるビタミンＣの好ましい効果に基づく。血管石灰化の過程では、血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）の骨形成原細胞への形質転換が必要である。
【0057】
少なくとも１種のスタチンおよびＬ－アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸塩または混合物１を患者に併用投与することは、心血管疾患、例えば冠状動脈疾患、脳血管疾患または末梢血管疾患を処置または予防するのに有用である。
【0058】
本発明を適用することにより、長期のスタチン処置下で観察される増加した石灰化を緩和、逆転または防止することができる。したがって、スタチン誘発性石灰化が有益であり得る、または有害な微小石灰化とは対照的に有益なマクロ石灰化（ｍａｃｒｏ－ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ）が存在し得るという仮説的な解釈は必要ない。
【0059】
物質および方法
試薬
混合物１の栄養サプリメントは、米国薬局方標準手順（ＵＳＰ ２０４０ Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｅｔａｒｙ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）に従って、以下のように溶解した。３回分の推奨された1日投与量（９錠）を粉砕し、０．１Ｎ ＨＣｌ９００ｍｌ中で懸濁した。３７℃、７５ｒｐｍのウォーターバスインキュベーター中で１時間インキュベートした後、サプリメント懸濁液を０．２ｍｃｍ滅菌フィルターでろ過し、１ｍｌアリコートを使用まで２０℃で凍結し保存した。得られた混合物１溶液は、製造者の仕様に従って１９ｍＭのアスコルビン酸を含んでいた。すべての試薬は、異なる表示がある場合を除き、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（セントルイス、ＭＯ、米国）からであった。
試薬
混合物１の栄養サプリメントは、米国薬局方標準手順（ＵＳＰ ２０４０ Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｅｔａｒｙ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）に従って、以下のように溶解した。３回分の推奨された1日投与量（９錠）を粉砕し、０．１Ｎ ＨＣｌ９００ｍｌ中で懸濁した。３７℃、７５ｒｐｍのウォーターバスインキュベーター中で１時間インキュベートした後、サプリメント懸濁液を０．２ｍｃｍ滅菌フィルターでろ過し、１ｍｌアリコートを使用まで２０℃で凍結し保存した。得られた混合物１溶液は、製造者の仕様に従って１９ｍＭのアスコルビン酸を含んでいた。すべての試薬は、異なる表示がある場合を除き、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（セントルイス、ＭＯ、米国）からであった。
【0060】
細胞培養
正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＤＦ）および不死化ヒト胎児骨芽細胞（ｈＦＯＢ）はＡＴＣＣ（マナサス、ＶＡ、米国）により供給された。ヒト大動脈平滑筋細胞（ＡｏＳＭＣ）は、Ｃａｍｂｒｉｘ（イーストラザフォード、ＮＪ）から購入し、５～７継代で実験に使用した。細胞培養は、抗生物質および５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ＡＴＣＣ）を含むＤＭＥＭ培地（ＡＴＣＣ）中で維持した。いくつかの実験では、細胞を、２５ｍｃＭフォルスコリンを含むか、または含まない５ｍＭベータ－グリセロリン酸で強化した５％ＦＢＳ／ＤＭＥＭとして定義される骨形成促進培地中で培養した。すべての細胞培養は、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気で維持した。細胞生存率は、ＭＴＴアッセイでモニターした。
正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＤＦ）および不死化ヒト胎児骨芽細胞（ｈＦＯＢ）はＡＴＣＣ（マナサス、ＶＡ、米国）により供給された。ヒト大動脈平滑筋細胞（ＡｏＳＭＣ）は、Ｃａｍｂｒｉｘ（イーストラザフォード、ＮＪ）から購入し、５～７継代で実験に使用した。細胞培養は、抗生物質および５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ＡＴＣＣ）を含むＤＭＥＭ培地（ＡＴＣＣ）中で維持した。いくつかの実験では、細胞を、２５ｍｃＭフォルスコリンを含むか、または含まない５ｍＭベータ－グリセロリン酸で強化した５％ＦＢＳ／ＤＭＥＭとして定義される骨形成促進培地中で培養した。すべての細胞培養は、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気で維持した。細胞生存率は、ＭＴＴアッセイでモニターした。
【0061】
ＡｏＳＭＣにおけるアルカリホスファターゼ活性アッセイ
ＡｏＳＭＣを９６ウェルプレート中で培養し、コンフルエント層まで増殖させた。細胞を増殖培地中でアスコルビン酸と共に３日間培養した。細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、アルカリ緩衝液（Ｓｉｇｍａ）／１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００中の５０ｍｃｌ／ウェル ２５ｍｃｇ／ｍｌ ４－ＭＵＰ（蛍光ＡＬＰ基質、Ｓｉｇｍａ）を室温で１時間補充した。蛍光は３６０／４５０ｎｍで測定した。
ＡｏＳＭＣを９６ウェルプレート中で培養し、コンフルエント層まで増殖させた。細胞を増殖培地中でアスコルビン酸と共に３日間培養した。細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、アルカリ緩衝液（Ｓｉｇｍａ）／１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００中の５０ｍｃｌ／ウェル ２５ｍｃｇ／ｍｌ ４－ＭＵＰ（蛍光ＡＬＰ基質、Ｓｉｇｍａ）を室温で１時間補充した。蛍光は３６０／４５０ｎｍで測定した。
【0062】
細胞外マトリックス中のカルシウム蓄積
ＡｏＳＭＣをフィブロネクチン被覆プラスチックプレートに２５，０００／平方ｃｍの密度で播種し、５～７日間コンフルエンスまで増殖させた。Ｉｖａｎｏｖ Ｖ，Ｉｖａｎｏｖａ Ｓ，Ｋａｌｉｎｏｖｓｋｙ Ｔ，Ｎｉｅｄｚｗｉｅｃｋｉ Ａ，Ｒａｔｈ Ｍ．「植物由来の微量栄養素は、培養ヒト大動脈内皮細胞層の細胞外マトリックス組成を調節することにより、単球の接着を抑制する（Ｐｌａｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｉｃｒｏｎｕｔｒｉｅｎｔｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｔｏ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｈｕｍａｎ ａｏｒｔｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｌａｙｅｒ ｂｙ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｉｔｓ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ．）」Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２００８；５２：５５－６５．に記載されたように、２％ＦＢＳで補充されたＤＭＥＭ中でアスコルビン酸または混合物１を指示濃度で７２時間細胞に添加し、細胞が産生した細胞外マトリックスを、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中の０．５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００および２０ｍＭ硫酸アンモニウムにより、室温でそれぞれ３分間、順次処理することにより曝露させた。ＰＢＳで４回洗浄後、０．６Ｎ ＨＣｌ中３７℃で４８時間インキュベートすることによりＥＣＭ層を可溶化した。可溶化したサンプルのカルシウム含量は、製造元のプロトコールに従ってＴＥＣＯ Ｃａアッセイで測定した。
ＡｏＳＭＣをフィブロネクチン被覆プラスチックプレートに２５，０００／平方ｃｍの密度で播種し、５～７日間コンフルエンスまで増殖させた。Ｉｖａｎｏｖ Ｖ，Ｉｖａｎｏｖａ Ｓ，Ｋａｌｉｎｏｖｓｋｙ Ｔ，Ｎｉｅｄｚｗｉｅｃｋｉ Ａ，Ｒａｔｈ Ｍ．「植物由来の微量栄養素は、培養ヒト大動脈内皮細胞層の細胞外マトリックス組成を調節することにより、単球の接着を抑制する（Ｐｌａｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｉｃｒｏｎｕｔｒｉｅｎｔｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｔｏ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｈｕｍａｎ ａｏｒｔｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｌａｙｅｒ ｂｙ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｉｔｓ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ．）」Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２００８；５２：５５－６５．に記載されたように、２％ＦＢＳで補充されたＤＭＥＭ中でアスコルビン酸または混合物１を指示濃度で７２時間細胞に添加し、細胞が産生した細胞外マトリックスを、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中の０．５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００および２０ｍＭ硫酸アンモニウムにより、室温でそれぞれ３分間、順次処理することにより曝露させた。ＰＢＳで４回洗浄後、０．６Ｎ ＨＣｌ中３７℃で４８時間インキュベートすることによりＥＣＭ層を可溶化した。可溶化したサンプルのカルシウム含量は、製造元のプロトコールに従ってＴＥＣＯ Ｃａアッセイで測定した。
【0063】
ヒト培養細胞における骨芽細胞マーカーの発現
実験では、ＡｏＳＭＣ、ＤＦおよびｈＦＯＢ細胞を別々の９６ウェルプラスチックプレートに２５，０００／平方ｃｍの密度で播種し、５～７日間コンフルエンスまで成長させた。２％ＦＢＳで補充されたＤＭＥＭ中で、試験化合物を表示濃度で７２時間細胞に添加した。細胞層をＰＢＳで３回洗浄し、ＰＢＳ中の３％ホルムアルデヒドにより４℃で１時間固定した。固定した細胞層をＰＢＳで４回洗浄し、１％ＢＳＡ／ＰＢＳにより室温で１時間処理した。骨形成マーカーのイムノアッセイは、１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中で一次モノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を２時間インキュベートした後、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識した二次ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体を１時間インキュベートして順次実施した。保持されたペルオキシダーゼ活性は、最後の洗浄サイクル（０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳで３回）の後、ＴＭＢペルオキシダーゼ基質試薬（Ｒｏｃｋｌａｎｄ）を使用して測定した。光学密度は、プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて４５０ｎｍで読み取り、無補充２％ＦＢＳ／ＤＭＥＭでインキュベートした対照細胞サンプルのパーセンテージとして表示した。異なる細胞タイプにおける骨形成マーカーの発現を確実に直接比較するために、イムノアッセイ中、すべてのｐｃｅｌｌで覆われたプレートを、同一かつ同時に処理した。
実験では、ＡｏＳＭＣ、ＤＦおよびｈＦＯＢ細胞を別々の９６ウェルプラスチックプレートに２５，０００／平方ｃｍの密度で播種し、５～７日間コンフルエンスまで成長させた。２％ＦＢＳで補充されたＤＭＥＭ中で、試験化合物を表示濃度で７２時間細胞に添加した。細胞層をＰＢＳで３回洗浄し、ＰＢＳ中の３％ホルムアルデヒドにより４℃で１時間固定した。固定した細胞層をＰＢＳで４回洗浄し、１％ＢＳＡ／ＰＢＳにより室温で１時間処理した。骨形成マーカーのイムノアッセイは、１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中で一次モノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を２時間インキュベートした後、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識した二次ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体を１時間インキュベートして順次実施した。保持されたペルオキシダーゼ活性は、最後の洗浄サイクル（０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳで３回）の後、ＴＭＢペルオキシダーゼ基質試薬（Ｒｏｃｋｌａｎｄ）を使用して測定した。光学密度は、プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて４５０ｎｍで読み取り、無補充２％ＦＢＳ／ＤＭＥＭでインキュベートした対照細胞サンプルのパーセンテージとして表示した。異なる細胞タイプにおける骨形成マーカーの発現を確実に直接比較するために、イムノアッセイ中、すべてのｐｃｅｌｌで覆われたプレートを、同一かつ同時に処理した。
【0064】
統計解析
図中の結果は、少なくとも２つの独立した実験のうち最も代表的なものから３回またはそれ以上繰り返した平均±標準偏差ＳＤである。サンプル間の差は、Ｅｘｃｅｌソフトウェア（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）を用いて両側スチューデントｔ検定で推定し、０．０５未満のｐレベルで有意と認めた。
図中の結果は、少なくとも２つの独立した実験のうち最も代表的なものから３回またはそれ以上繰り返した平均±標準偏差ＳＤである。サンプル間の差は、Ｅｘｃｅｌソフトウェア（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）を用いて両側スチューデントｔ検定で推定し、０．０５未満のｐレベルで有意と認めた。
【0065】
図４Ａ、４Ｂ、５Ａおよび５Ｂの結果は、補充した対照に対するパーセンテージで表され、少なくとも２つの独立した実験の最も代表的なものから６回またはそれ以上繰り返した平均±ＳＤとして示した。
【0066】
結果
例示的な実施形態を、添付した図面の図中に例として説明するが、限定されるわけではなく、その中で、同様の参照は類似の要素を示し、その中で、以下のとおりである：
例示的な実施形態を、添付した図面の図中に例として説明するが、限定されるわけではなく、その中で、同様の参照は類似の要素を示し、その中で、以下のとおりである：
【図面の簡単な説明】
【0067】
【図1】培養ヒト大動脈平滑筋細胞における細胞外マトリックスの石灰化に対するアスコルビン酸による処理の効果を示す図である。
【図2A】フォルスコリンを用いないＡｏＳＭＣ培養物におけるＣａ蓄積に対するシンバスタチンの効果を示す図である。
【図2B】２５ｍｃＭフォルスコリン入りのＡｏＳＭＣ培養物におけるＣａ蓄積に対するメバスタチンの効果を示す図である。
【図3A】５ｍＭベータ－グリセロリン酸および２５ｍｃＭフォルスコリンを補充した骨形成培地中で４週間培養したヒト大動脈ＳＭＣにおける骨芽細胞マーカー発現に対する２００ｍｃＭアスコルビン酸の効果を示す図である。
【図3B】５ｍＭベータ－グリセロリン酸および２５ｍｃＭフォルスコリンを補充した骨形成培地中で４週間培養したヒト皮膚線維芽細胞における骨芽細胞マーカー発現に対する２００ｍｃＭアスコルビン酸の効果を示す図である。
【図4A】プレーン５％ＦＢＳ／ＤＭＥＭで４日間補充したＡｏＳＭＣにおけるアルカリホスファターゼ活性に対する１ｍｃＭスタチンおよび混合物１（１００ｍｃＭアスコルビン酸塩で）の効果を示す図である。ＭＳＵ基質で９０分間培養。
【図4B】５ｍＭ ｂ－ＧＰおよび２５ｍｃＭフォルスコリンで４日間補充されたＡｏＳＭＣにおけるアルカリホスファターゼ活性に対する１ｍｃＭスタチンおよび混合物１（および１００ｍｃＭアスコルビン酸塩）の効果を示す図である。ＭＳＵ基質で９５分間培養。
【図5A】プレーン５％ＦＢＳ／ＤＭＥＭで５日間補充されたＡｏＳＭＣにおいてアルカリホスファターゼ活性に対する１ｍｃＭスタチンおよび３００ｍｃＭアスコルビン酸の効果を示す図である。
【図5B】５％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ／５ｍＭ ｂ－ＧＰ、２５ｍｃＭフォルスコリン中で５日間補充されたＡｏＳＭＣにおけるアルカリホスファターゼ活性に対する１ｍｃＭスタチンおよび３００ｍｃＭアスコルビン酸の効果を示す図である。
【0068】
細胞の石灰化過程は、通常の細胞増殖培地（５％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ）中、様々な量のアスコルビン酸の非存在下および存在下で培養したヒトＡｏＳＭＣにおいて調べた。ＡｏＳＭＣの石灰化過程は、細胞性アルカリホスファターゼの活性および細胞が産生する細胞外マトリックス中のカルシウム蓄積によって評価した（図１）。
【0069】
結果は、ＡｏＳＭＣ培地にアスコルビン酸を最大３００ｍｃＭ補充すると、用量依存的に細胞外カルシウムのレベルが有意に低下し、細胞性アルカリホスファターゼの活性がより低くなることを示している。３００ｍｃＭアスコルビン酸の存在下で、ＡｏＳＭＣによる細胞外Ｃａ蓄積は２０％減少し、アルカリホスファターゼ活性は８０％減少した。
【0070】
図２Ａに示した結果は、ＡｏＳＭＣ層におけるカルシウム蓄積がシンバスタチン存在下で２３％増加したことを示している。しかし、１００ｍｃＭアスコルビン酸カルシウムが同時に存在すると、蓄積されたカルシウムは０．２ｍｃｇ／ウェルの値まで５４％減少し、これはシンバスタチンに暴露していない細胞で観察された値と相関していた。
【0071】
強化された石灰化促進条件下（フォルスコリン使用）およびスタチン（メバスタチン）存在下でのＡｏＳＭＣにおけるカルシウム蓄積に対するアスコルビン酸の効果を図２Ｂに示す。結果から、１ｍＭメバスタチン存在下でカルシウム蓄積は、対照の１．３５ｍｃｇ／ウェルからメバスタチン存在下で１．８ｍｃｇ／ウェルに増加したことがわかった。しかし、１００ｍｃＭアスコルビン酸塩を添加すると、カルシウム蓄積は、対照（非補充）値より下に１９％減少した。
【0072】
ＳＭＣに加えて、本発明者らは、ヒト皮膚線維芽細胞（ＤＦ）および不死化ヒト胎児骨芽細胞（ＦＯＢ）の細胞石灰化過程におけるアスコルビン酸塩の効果を、これらの細胞における様々な骨形成マーカーの発現の変化を評価することによって研究した。５ｍＭベータ－グリセロリン酸および２５ｍｃＭフォルスコリンを補充した培地で培養するなどによる骨形成促進条件で、異なるタイプの細胞におけるアスコルビン酸塩の効果を検証した。その結果、ＡｏＳＭＣおよびＤＦ培養の両方において、試験したすべての骨形成マーカーの発現が１００ｍｃＭアスコルビン酸の補充により有意に減少したことがわかった（図３）。骨形成促進培地中のｈＦＯＳ骨芽細胞に４週間にわたりアスコルビン酸を補充すると、細胞毒性となった。対応するデータは、提示から省いた。
【0073】
本発明者らは、表１に示すように、試験ヒト細胞タイプにおける骨形成マーカーの発現レベルを比較した。その結果、通常の増殖培地では、オステオカルシン、オステオアドヘリン、デンチンマトリックスタンパク質１（ＤＭＰ－１）、およびスクレロスチン（ＳＯＳＴ）の発現は、ＤＭＰ－１を除いて、骨芽細胞（ＦＯＢ）において最も顕著で、繊維芽細胞（ＤＦ）がすぐ続いて、繊維芽細胞でのＤＭＰ－１の発現はＦＯＢ培養の発現をわずかに上回った。通常の増殖培地で培養したＡｏＳＭＣにおける、これらの４つの骨形成マーカーの細胞発現は、ＦＯＢおよびＤＦ培養よりも（２～４）倍有意に顕著に少なかった。
【0074】
本試験において、本発明者らは最大で３００ｍｃＭ濃度までの試験したアスコルビン酸がＡｏＳＭＣによって産生されたＥＣＭ中のカルシウム蓄積を減少させることができることを実証した。この効果は、細胞内のアルカリホスファターゼ活性の低下および骨芽細胞マーカータンパク質の細胞発現など、特定の代謝パラメータの変化によって示されるＳＭＣの骨形成形質転換の阻止を伴った。高レベルの血清アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）は、死亡率および心筋梗塞のリスクの上昇と関連している。ＡＬＰは無機ピロリン酸を加水分解し、これはリン酸カルシウム沈着の強い阻害剤である。
【0075】
【表1】
【0076】
生理的条件下（通常の細胞培養培地で培養された細胞）では、オステオカルシン、オステオアドヘリン、ＳＯＳＴ／スクレロスチンの発現は、ｈＦＯＳ培養物で最も高く、ｈＡｏＳＭＣ培養物で最も低かった。これらのマーカーの発現は、ｈＤＦ培養物では中程度であった。生理的条件下（通常の細胞培養培地で培養された細胞）では、ＤＭＰ－１の発現はｈＤＦ培養物で最も高く、ｈＡｏＳＭＣ培養物で最も低かった。ＤＭＰ－１の発現は、ｈＦＯＳ培養物では中程度であった。ＡｏＳＭＣ培養物では、通常の培地と比較して骨形成促進培地の細胞補充により、試験したすべての骨マーカー（ｏｓｔｅｏｍａｔｅｒ）の刺激を生じた。対照的に、ｈＤＦおよびｈＦＯＳ培養液では、骨形成促進培地の添加により、試験したすべての骨形成マーカーの抑制を生じた。
【0077】
図４（ＡおよびＢ）および図５（ＡおよびＢ）に示した結果の説明は、それぞれ１ｍｃＭ濃度で使用された様々なスタチン：シンバスタチン、メバスタチンおよびプラバスタチンの非存在下および存在下の細胞培養培地中で培養したヒト大動脈平滑筋細胞（ＡｏＳＭＣ）において、細胞石灰化過程を調べたことを示している。ＡｏＳＭＣの石灰化過程は、細胞のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性によって評価した。この研究では、標準条件（５％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ）および石灰化促進条件（５ｍＭベータ－グリセロリン酸（ｂ－ＧＰ）および２５ｍｃＭフォルスコリンを補充した５％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ－図４Ｂ）において、混合物１（アスコルビン酸塩を含む微量栄養素の組み合わせ）およびアスコルビン酸塩の効果を個々に評価した。
【0078】
図４Ａに示した結果から、通常の細胞培養条件下におけるＡｏＳＭＣのＡＬＰ活性はシンバスタチンによって影響を受けないが、対照と比較してメバスタチン存在下では２５％、プラバスタチン存在下では３９％増加することが示された。混合物１を１００ｍｃＭアスコルビン酸に相当する濃度で添加すると、ＡＬＰ活性が低下した。その結果、ＡＬＰは対照で３３％、シンバスタチン、メバスタチン、プラバスタチンの存在下でそれぞれ２９％、２５％、２７％低くなった。プラバスタチンと混合物１との組み合わせは、石灰化過程を対照（無補充）で観察されるレベルまで低下させる結果となった。シンバスタチンおよびメバスタチンの存在下での混合物１は、ＡＬＰ活性を対照値よりも下に低下させた。ＡＰＬ活性の低下に最も効果的なのは、混合物１とシンバスタチンとの組み合わせで対照値より３３％低く、単独で適用された混合物１の効果とほぼ同等であった。
【0079】
図４Ｂに示した結果は、石灰化促進条件下（５ｍＭｂ－ＧＰおよび２５ｍｃＭフォルスコリン）では、シンバスタチンの存在により、対照と比較してＡＬＰ活性が２２％、メバスタチンでは３９％、そしてプラバスタチンでは２５％増加することを示している。スタチンの存在下および非存在下で混合物１を添加することにより、ＡＬＰ活性は、混合物１なしの値と比較して、対照において５２％、そしてシンバスタチン、メバスタチンおよびプラバスタチン存在下で、それぞれ５２％、４５％、４４％減少した。通常の細胞培養条件と同様に、ＡＬＰ活性の低下における混合物１の効力は、シンバスタチンと組み合わせた場合に最も高かった（対照と比較して４０％）。混合物１とすべての試験スタチンとの組み合わせにより、ＡＰＬ活性は、対照レベルより下に有意に低下した。混合物１の有意なＡＬＰ低下効果は、３００ｍｃＭ濃度で単独で使用されたアスコルビン酸に匹敵し、これは混合物１製剤に含まれるその相当量よりも３倍高い。
【0080】
図５Ａの結果は、試験スタチンの存在下および非存在下でＡｏＳＭＣ培地に３００ｍｃＭのアスコルビン酸を補充することにより、細胞アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）の活性が有意に低下することを示す。通常の培養培地条件下では、アスコルビン酸はアルカリホスファターゼ活性を約４３％低下させた。シンバスタチン存在下では、ＡＬＰ活性は５７％高く、３００ｍｃＭのアスコルビン酸を加えた後、対照レベルまで減少した。同様にメバスタチンおよびプラバスタチンはＡＬＰ活性をそれぞれ６１％および６０％増加させた。これらの刺激効果は、アスコルビン酸の存在下で、それぞれ２９％および３０％減少した。
【0081】
図５Ｂの結果から、石灰化促進条件下では、スタチンは、シンバスタチン、メバスタチン、およびプラバスタチンに対してそれぞれ３０％、４１％、および２５％のＡＬＰ活性の刺激増加を生じたことがわかる。アスコルビン酸塩の同時補充により、シンバスタチン、メバスタチン、およびプラバスタチン含有試料では、それぞれＡＬＰ活性が３６％、３７％、および２４％減少した。同じ実験条件下で、スタチンの非存在下でＡｏＳＭＣに添加したアスコルビン酸は、ＡＬＰ活性を２９％低下させた。
【0082】
このように、本研究では、本発明者らは、混合物１および／またはビタミンＣが、血管壁内部の細胞および細胞外の構造および機能の調節に決定的な役割を果たすことを証明する。アスコルビン酸塩または混合物１の最適に利用能により、血管壁の完全性および安定性は、とりわけ、コラーゲンおよび他のＥＣＭ分子の最適な合成によってもたらされるであろう。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図5A】
【図5B】
【手続補正書】
【提出日】2021-06-28
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
スタチンの投与によって患者に誘発される血管石灰化の処置または予防に使用するための、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩、ビタミンＥ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、葉酸、ビオチン、Ｌ－カルニチンおよびベタインを含む組成の混合物。
【請求項2】
スタチン処置を併用して受けている患者の処置に使用するための、請求項１に記載の組成の混合物。
【請求項3】
組成の混合物が以下の量：Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩：３００ｍｇ～１０００．２ｍｇ、
ビタミンＥ：２７．５ｍｇ～８２．５ｍｇ、
ビタミンＢ１：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ２：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ３：１１５ｍｇ～３５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ５：１６．７ｍｇ～５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ６：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ１２：１０μｇ～３０μｇ、
葉酸：１３３．３μｇ～３９９．９μｇ、
ビオチン：３３．３μｇ～９９．９μｇ、
Ｌ－カルニチン：３３．３ｍｇ～９９．９ｍｇ、
ベタイン：２３．３ｍｇ～６９．９ｍｇ
を含む、請求項１または２に記載の使用のための組成物混合物。
【請求項4】
アスコルビン酸塩が、水溶性もしくは脂溶性アスコルビン酸塩またはそれらの混合物から、好ましくはアスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビルまたはそれらの混合物から選ばれる、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用のための組成の混合物。
【請求項5】
少なくとも１種のスタチンならびにＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩およびビタミンＥ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、葉酸、ビオチン、Ｌ－カルニチンおよびベタインを患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、少なくとも１種のスタチンならびにＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩、ビタミンＥ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、葉酸、ビオチン、Ｌ－カルニチンおよびベタインを含む医薬組成物。
【請求項6】
少なくとも１種のスタチンならびにＬ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩、ビタミンＥ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、葉酸、ビオチン、Ｌ－カルニチンおよびベタインが物理的混合物としてまたは患者への併用投与を意図した別々の医薬組成物として存在する、請求項５または６に記載された医薬組成物。
【請求項7】
心血管系疾患の予防または処置に使用するための、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項8】
心血管系疾患が冠動脈疾患、脳血管疾患または末梢血管疾患である、請求項７に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項9】
スタチンが、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチンまたはそれらの混合物からなる群から選択される、請求項５～８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項10】
アスコルビン酸塩が、水溶性もしくは脂溶性アスコルビン酸塩またはそれらの混合物、好ましくはアスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビルまたはそれらの混合物から選択される、請求項５～９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項11】
少なくとも１種のスタチン、Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩、およびコエンザイムＱ１０を患者に併用投与することを可能にする投薬形態において、コエンザイムＱ１０をさらに含む、請求項５～１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項12】
Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩の１日投与量が１０ｍｇ～１００ｇであり、少なくとも１種のスタチンの１日投与量が５ｍｇ～１００ｍｇである、請求項５～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項13】
医薬組成物中に、以下の量：Ｌ－アスコルビン酸またはアスコルビン酸塩：３００ｍｇ～１０００．２ｍｇ、
ビタミンＥ：２７．５ｍｇ～８２．５ｍｇ、
ビタミンＢ１：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ２：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ３：１１５ｍｇ～３５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ５：１６．７ｍｇ～５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ６：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ１２：１０μｇ～３０μｇ、
葉酸：１３３．３μｇ～３９９．９μｇ、
ビオチン：３３．３μｇ～９９．９μｇ、
Ｌ－カルニチン：３３．３ｍｇ～９９．９ｍｇ、
ベタイン：２３．３ｍｇ～６９．９ｍｇ
を含む、請求項５～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項14】
ナイアシンを、好ましくはスタチンとの混合物で、さらに含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項15】
組成の混合物中に以下の量：ビタミンＣ：３００ｍｇ～１０００．２ｍｇ、
ビタミンＥ：２７．５ｍｇ～８２．５ｍｇ、
ビタミンＢ１：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ２：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ３：１１５ｍｇ～３５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ５：１６．７ｍｇ～５０．１ｍｇ、
ビタミンＢ６：３．３ｍｇ～９．９ｍｇ、
ビタミンＢ１２：１０μｇ～３０μｇ、
葉酸：１３３．３μｇ～３９９．９μｇ、
ビオチン：３３．３μｇ～９９．９μｇ、
Ｌ－カルニチン：３３．３ｍｇ～９９．９ｍｇ、
ベタイン：２３．３ｍｇ～６９．９ｍｇ
を含む、またはそれらからなる、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、葉酸、ビオチン、Ｌ－カルニチンおよびベタインを含むか、またはそれらからなる、組成の混合物１。
【請求項16】
ビタミンＣがアスコルビン酸塩の形態であり、アスコルビン酸塩が、好ましくは水溶性もしくは脂溶性アスコルビン酸塩、またはそれらの混合物から選択され、より好ましくは、アスコルビン酸塩が、アスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸マグネシウム、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビルまたはそれらの混合物から選択される、請求項１５に記載の組成の混合物１。
【請求項17】
さらにコエンザイムＱ１０を含む、請求項１５または１６に記載の組成の混合物１。
【国際調査報告】