特表 2022-543139 ハプロタイプ一致幹細胞移植における抗ウイルスセントラルメモリーＣＤ８＋ベト細胞

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-10-07

(54)【発明の名称】ハプロタイプ一致幹細胞移植における抗ウイルスセントラルメモリーＣＤ８＋ベト細胞

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/0783 20100101AFI20220930BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20220930BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20220930BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20220930BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220930BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20220930BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20220930BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20220930BHJP

   A61K 31/675 20060101ALI20220930BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20220930BHJP

   C12N 5/0784 20100101ALN20220930BHJP

   C12N 5/10 20060101ALN20220930BHJP

【ＦＩ】

C12N5/0783

A61K35/17 Z

A61P37/06

A61K35/12

A61P35/00

A61P35/04

A61P35/02

A61K47/68

A61K31/675

A61K45/00

C12N5/0784

C12N5/10

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022506965

(86)(22)【出願日】2020-08-06

(85)【翻訳文提出日】2022-03-25

(86)【国際出願番号】 IL2020050865

(87)【国際公開番号】W WO2021024264

(87)【国際公開日】2021-02-11

(31)【優先権主張番号】62/883,164

(32)【優先日】2019-08-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】516040109

【氏名又は名称】イェダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＹＥＤＡ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＡＮＤ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ ＣＯ．ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】ａｔ ｔｈｅ Ｗｅｉｚｍａｎｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ ９５， ７６１０００２ Ｒｅｈｏｖｏｔ， Ｉｓｒａｅｌ

(71)【出願人】

【識別番号】500039463

【氏名又は名称】ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム

【氏名又は名称原語表記】ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＲＥＧＥＮＴＳ，ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＸＡＳ ＳＹＳＴＥＭ

【住所又は居所原語表記】２１０ Ｗｅｓｔ ７ｔｈ Ｓｔｒｅｅｔ Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘａｓ ７８７０１ Ｕ．Ｓ．Ａ．

(74)【代理人】

【識別番号】100133503

【弁理士】

【氏名又は名称】関口 一哉

(72)【発明者】

【氏名】ライズナー， イェアー

(72)【発明者】

【氏名】バハール－ルースティッヒ， エスター

(72)【発明者】

【氏名】ラスク， アサッフ

(72)【発明者】

【氏名】オル－ゲバ， ノガ

(72)【発明者】

【氏名】ギドロン ブドフスキー， ロテム

(72)【発明者】

【氏名】シドリク ムスカテル， ラケフェット

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C086

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AA94X

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065AC20

4B065BA01

4B065BA25

4B065BA30

4B065BB15

4B065BB19

4B065BB40

4B065BD39

4B065CA24

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC27

4C076EE59

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZB261

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4C084ZB271

4C084ZC751

4C086AA01

4C086AA02

4C086DA35

4C086MA01

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4C086NA05

4C086ZB08

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC75

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB63

4C087BB64

4C087BB65

4C087DA32

4C087MA02

4C087NA14

4C087ZB08

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZC75

(57)【要約】

セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）誘導細胞の単離された集団を作製する方法であって、細胞が、寛容誘導細胞であり、かつ／または抗疾患活性を付与され、かつ移植後にリンパ節へホーミングすることができる方法が提供されている。方法、医薬組成物、および治療方法によって生成された細胞も開示される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）誘導細胞の単離された集団を作製する方法であって、前記細胞が、寛容誘導細胞であり、および／または抗疾患活性を付与され、移植後にリンパ節へホーミングすることができ、前記方法が、
（ａ）ドナー対象由来の第１の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団を、ＣＤ１４^＋発現細胞に結合することができる抗体と接触させ、抗原提示細胞に成熟することができるＣＤ１４^＋発現細胞を選択すること、
（ｂ）前記抗原提示細胞にウイルスペプチドを負荷すること、
（ｃ）ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ８^＋表現型を発現するメモリーＴ細胞を含む細胞の集団を得るために、前記第１のＰＢＭＣの集団と同じドナー対象の第２のＰＢＭＣの集団を、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋発現細胞を枯渇させることができる１つまたは複数の作用物質で処理すること、
（ｄ）ウイルス反応性メモリーＴ細胞の富化を可能にするように、ＩＬ－２１の存在下で、前記メモリーＴ細胞を含む前記細胞の集団を、工程（ｂ）の前記ウイルスペプチドが負荷された前記抗原提示細胞と接触させること、および
（ｅ）前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞の増殖を可能にするように、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７の存在下で工程（ｄ）から生じる前記細胞を培養し、それにより、前記Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を生成すること、を含む、方法。

【請求項2】

非移植片対宿主病非移植片対宿主病非移植片対宿主病セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）誘導細胞の単離された集団を作製する方法であって、前記細胞が、寛容誘導細胞であり、および／または抗疾患活性を付与され、移植後にリンパ節へホーミングすることができ、前記方法が、
（ａ）Ｔ細胞を含む細胞の集団を提供することであって、前記細胞の集団の前記Ｔ細胞が、ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ８^＋表現型を発現し、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋発現細胞を枯渇させた少なくとも４０％のメモリーＴ細胞を含む、提供すること、および
（ｂ）前記メモリーＴ細胞を含む前記細胞の集団を、ウイルス反応性メモリーＴ細胞の富化を可能にするために、ＩＬ－２１の存在下で、前記ウイルスの少なくとも１つがＢＫウイルスを含む、４～１０種類のウイルスに由来するウイルスペプチドと接触させること、および
（ｃ）前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞の増殖を可能にするように、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７の存在下で工程（ｂ）から生じる前記細胞を培養し、それにより、前記Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を生成すること、を含む、方法。

【請求項3】

セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）誘導細胞の単離された集団を作製する方法であって、前記細胞が、寛容誘導細胞であり、および／または抗疾患活性を付与され、移植後にリンパ節へホーミングすることができ、前記方法が、
（ａ）ドナー対象由来の第１の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団を、ＣＤ１４^＋発現細胞を選択することができる抗体と接触させること、および樹状細胞に成熟することができるＣＤ１４^＋発現細胞を選択すること、
（ｂ）前記樹状細胞に、４～１０種類のウイルスに由来するウイルスペプチドを負荷することであって、前記ウイルスの少なくとも１つがＢＫウイルスを含む、負荷すること、
（ｃ）ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ８^＋表現型を発現するメモリーＴ細胞を含む細胞の集団を得るために、前記第１のＰＢＭＣの集団と同じドナー対象の第２のＰＢＭＣの集団を、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋発現細胞を枯渇させることができる１つまたは複数の作用物質で処理すること、
（ｄ）ウイルス反応性メモリーＴ細胞の富化を可能にするために、ＩＬ－２１の存在下で、前記メモリーＴ細胞を含む細胞の前記集団を、工程（ｂ）の前記ウイルスペプチドが負荷された前記樹状細胞と接触させること、および
（ｅ）前記Ｔｃｍ表現型を含む細胞の増殖を可能にするように、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７の存在下で工程（ｄ）から生じる前記細胞を培養し、それにより、前記Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を生成すること、を含む、方法。

【請求項4】

前記ＰＢＭＣの前記第１の集団および前記ＰＢＭＣの前記第２の集団が同じバッチに由来する、請求項１または３に記載の方法。

【請求項5】

前記ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ８^＋表現型を発現する前記メモリーＴ細胞が、前記細胞の集団のＴ細胞の少なくとも４０％を構成する、請求項１、３、または４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

ＩＬ－２１の存在下での前記接触が１２時間～６日間影響を受ける、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

ＩＬ－２１の前記存在下での前記接触が３日間影響を受ける、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７のいずれかの前記存在下での前記培養が６～１２日間影響を受ける、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７のいずれかの前記存在下での前記培養が９日間影響を受ける、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記培養が、グルコースを少なくとも５０ｍｇ／ｄｌの濃度まで添加することをさらに含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記ウイルスペプチドが抗原提示細胞に提示される、請求項２または６～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記抗原提示細胞が、前記メモリーＴ細胞を含む前記細胞の集団と同じドナー対象のものである、請求項１または４～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

ＣＤ１４^＋発現細胞を前記選択することがプラスチック接着によって影響されない、請求項１または３～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記抗原提示細胞が樹状細胞を含む、請求項１または４～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記ウイルスペプチドが４～１０種類のウイルスに由来する、請求項１、４～１０、または１３～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記ウイルスペプチドが、ＢＫウイルス由来の少なくとも１つのペプチドを含む、請求項１、４～１０、１３～１４、または１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記ウイルスペプチドが、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）ペプチド、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ペプチド、ＢＫウイルスペプチド、およびアデノウイルス（Ａｄｖ）ペプチドを含む、請求項２～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記ウイルスペプチドが、ＥＢＶ－ＬＭＰ２、ＥＢＶ－ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ１、ＥＢＶ ｓｅｌｅｃｔ、ＣＭＶ－ｐｐ６５、ＣＭＶ－ＩＥ－１、Ａｄｖ－ペントン、Ａｄｖ－ヘキソン、ＢＫＶ ＬＴ、ＢＫＶ（カプシドＶＰ１）、ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２）、ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２、イソプロムＶＰ３）およびＢＫＶ（スモールＴ抗原）のうちの少なくとも１つを含む、請求項２～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記ウイルスペプチドが、ＡｄＶ５ Ｈｅｘｏｎ、ｈＣＭＶ ｐｐ６５、ＥＢＶ ｓｅｌｅｃｔおよびＢＫＶ ＬＴのうちの少なくとも１つを含む、請求項２～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記ウイルスペプチドが、少なくとも１種類の細菌ペプチド、真菌ペプチドまたは腫瘍ペプチドをさらに含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記ＰＢＭＣが対象に対して非同系である、請求項１、３～１０、または１３～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

Ｔ細胞を含む前記細胞の集団が、対象に対して非同系である、請求項２、６～１２、または１７～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記Ｔｃｍ表現型を有する前記細胞が、非ＧＶＨＤ誘導細胞の前記単離された集団の少なくとも３０％を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団であって、前記細胞が、寛容誘導細胞であり、かつ／または抗疾患活性を付与され、かつ移植後にリンパ節へホーミングすることができ、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法に従って作製される、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団。

【請求項25】

請求項２４に記載の前記非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団および薬学的に許容され得る担体を有効成分として含む医薬組成物。

【請求項26】

必要とする対象において疾患を処置する方法であって、治療有効量の請求項２４に記載の前記非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を前記対象に投与し、それにより、前記対象において前記疾患を処置することを含む方法。

【請求項27】

疾患の処置を必要とする対象において疾患を処置するために特定される医薬品を製造するための、請求項２４に記載の前記非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の使用。

【請求項28】

細胞または組織の移植片を前記対象に移植することをさらに含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項29】

前記医薬品が細胞または組織の移植片をさらに含む、請求項２７に記載の使用。

【請求項30】

遺伝子改変Ｔ細胞を前記対象に投与することをさらに含む、請求項２６または２８に記載の方法。

【請求項31】

前記医薬品が遺伝子改変Ｔ細胞をさらに含む、請求項２７または２９に記載の使用。

【請求項32】

前記遺伝子改変Ｔ細胞がＣＡＲ－Ｔ細胞またはＴＣＲ－トランスジェニックＴ細胞を含む、請求項３０に記載の方法または請求項３１に記載の使用。

【請求項33】

前記疾患が悪性疾患である、請求項２６、２８、３０、もしくは３２のいずれか一項に記載の方法、または請求項２７、２９、３１、もしくは３２のいずれか一項に記載の使用。

【請求項34】

前記悪性疾患が、固形腫瘍、腫瘍の転移、または血液悪性腫瘍である、請求項３３に記載の方法または使用。

【請求項35】

前記疾患が非悪性疾患である、請求項２６、２８、３０、もしくは３２のいずれか一項に記載の方法、または請求項２７、２９、３１、もしくは３２のいずれか一項に記載の使用。

【請求項36】

移植片拒絶および／または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を軽減する、および／または、必要とする対象においてドナー特異的寛容性を誘導する方法であって、前記対象が非同系の細胞または組織の移植を必要としており、前記方法が、治療有効量の請求項２４に記載の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を前記対象に投与し、それにより、前記対象における移植片拒絶および／またはＧＶＨＤを軽減することを含む、方法。

【請求項37】

移植片拒絶および／または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を軽減するため、および／または、必要とする対象においてドナー特異的寛容性を誘導するために特定される医薬品を製造するための、請求項２４に記載の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集合の使用であって、前記対象は、前記非同系の細胞または組織の移植を必要とする、使用。

【請求項38】

非同系の細胞または組織の移植を必要とする対象を処置する方法であって、
（ａ）細胞または組織の移植片を前記対象に移植すること、および
（ｂ）前記治療有効量の請求項２４に記載の前記非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を前記対象に投与し、それにより、細胞または組織の移植を必要とする前記対象を処置することを含む、方法。

【請求項39】

対象への非同系の細胞または組織の移植のためのアジュバント処置として特定される医薬品を製造するための、請求項２４に記載の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の使用であって、前記対象が、前記非同系の細胞または組織の移植を必要とする使用。

【請求項40】

前記非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団が、前記細胞または組織の移植の後での投与のためのものである、請求項２８、３０、３２～３６、もしくは３８のいずれか一項に記載の方法、または請求項２９、３１～３５、３７、もしくは３９のいずれか一項に記載の使用。

【請求項41】

前記非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団が、前記細胞または組織の移植の後の６～９日目における投与のためのものである、請求項２８、３０、３２～３６、３８、もしくは４０のいずれか一項に記載の方法、または請求項２９、３１～３５、３７、３９、もしくは４０のいずれか一項に記載の使用。

【請求項42】

前記非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団が、理想体重１ｋｇあたり少なくとも２．５×１０^６個のＣＤ８^＋細胞の用量で投与されるためのものである、請求項２８、３０、３２～３６、３８、もしくは４０～４１のいずれか一項に記載の方法、または請求項２９、３１～３５、３７、もしくは３９～４１のいずれか一項に記載の使用。

【請求項43】

前記細胞または組織の移植片が未成熟造血細胞を含む、請求項２８、３０、３２～３６、３８、もしくは４０～４２のいずれか一項に記載の方法、または請求項２９、３１～３５、３７、もしくは３９～４２のいずれか一項に記載の使用。

【請求項44】

前記未成熟造血細胞が、
対象の理想体重１キログラムあたり少なくとも５×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、および／または
ＣＤ３^＋および／またはＣＤ１９^＋発現細胞が枯渇している、および／または
前記対象の理想体重１ｋｇあたり５×１０^５個未満のＣＤ３^＋発現細胞を含む、ことを含む、請求項４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

前記移植の前に、前記対象を骨髄非破壊的前処置プロトコルのもとで前処置することをさらに含む、請求項２８、３０、３２～３６、３８、または４０～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

骨髄非破壊的移植前前処置プロトコルをさらに含む、請求項２９、３１～３５、３７、または３９～４４のいずれか一項に記載の使用。

【請求項47】

前記骨髄非破壊的前処置プロトコルが、全身照射（ＴＢＩ）、部分的身体照射（ＴＬＩ）、化学療法剤、抗体免疫療法または共刺激遮断のうちの少なくとも１つを含む、請求項４５に記載の方法または請求項４６に記載の使用。

【請求項48】

前記移植の後に治療有効量のシクロホスファミドを前記対象に投与することをさらに含む、請求項２８、３０、３２～３６、３８、４０～４５、または４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

治療有効量のシクロホスファミドをさらに含み、前記シクロホスファミドが、前記非同系の細胞または組織の移植の後で前記対象に投与されるべきである、請求項２９、３１～３５、３７、３９～４４、または４６～４７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項50】

前記治療有効量の前記シクロホスファミドが、
前記対象の理想体重１キログラムあたり２５～２００ｍｇのシクロホスファミドを含む、および／または
移植後３日目および４日目に２回の用量で前記対象に投与されることになる、請求項４８に記載の方法または請求項４９に記載の使用。

【請求項51】

未成熟造血細胞移植を必要とする対象を処置する方法であって、
（ａ）前記対象を骨髄非破壊的移植前前処置プロトコルのもとで前処置することであって、前記骨髄非破壊的前処置は全身照射（ＴＢＩ）および化学療法剤を含み、前記ＴＢＩおよび前記化学療法剤は、移植前の－７～－１日目に投与される、前処置すること、
（ｂ）前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の用量を前記対象に移植することであって、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、前記対象の理想体重１キログラムあたり５×１０^５個未満のＣＤ３^＋Ｔ細胞を含み、かつ、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、前記対象の理想体重１キログラムあたり少なくとも５×１０^６のＣＤ３４^＋細胞を含む、移植すること、
（ｃ）治療有効量のシクロホスファミドを前記対象に投与することであって、前記治療有効量の前記シクロホスファミドが、前記対象の理想体重１キログラムあたり２５～２００ｍｇのシクロホスファミドを含み、前記治療有効量の前記シクロホスファミドが、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の前記移植の３日後および４日後２回の用量で前記対象に投与されることになること、および
（ｄ）請求項２４に記載の治療有効量の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を前記対象に投与することであって、非ＧＶＨＤ誘導細胞の前記単離された集団は、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の前記移植の後の６～９日目に投与され、
それによって前記未成熟造血細胞移植を必要とする前記対象を処置することを含む、方法。

【請求項52】

コルチコステロイドが投与されない、請求項４８、５０、もしくは５１のいずれか一項に記載の方法、または請求項４９～５０のいずれか一項に記載の使用。

【請求項53】

前記対象が移植後にＧＶＨＤ予防で長期的に処置されていない、請求項４８、５０、もしくは５１～５２のいずれか一項に記載の方法、または請求項４９～５０、もしくは５２のいずれか一項に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照

【0002】

本願は、２０１９年８月６日に出願された米国仮特許出願第６２／８８３，１６４号の優先権の利益を主張するものであり、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

本発明は、そのいくつかの実施形態では、メモリーＴ細胞から生成されたベト細胞に関し、より詳細には、しかし排他的ではなく、安定している長期の細胞の移植または組織の移植を達成するための治療においてそれらを製造および使用する方法に関する。

【0004】

高用量化学放射線療法「前処理」が血液悪性腫瘍に対する同種造血細胞移植（アロ－ＨＣＴ）で永続的寛解を達成するために重要であるというパラダイムは、その後の免疫療法と併せて、新たに形成されたドナー由来免疫系の免疫移植片対悪性腫瘍効果を強調するように移行している。しかしながら、移植後の初期期間中に致死的な感染から患者を保護することができる、より強固な宿主免疫系を保持する前処置の減少はまた、移植片拒絶のリスクの増大に関連する。ハプロタイプ一致ＨＣＴでは、移植片中のアロ反応性Ｔ細胞が宿主Ｔ細胞を攻撃し、ドナー幹細胞の生着の道を開くことができるので、Ｔ細胞の完全移植を使用することによってこれを克服することができる。しかしながら、そのようなアロ反応性Ｔ細胞はまた、生命を脅かす移植片対宿主（ＧＶＨ）反応性に関連し、移植後に強力な免疫抑制薬の使用を必要とする。移植後に高用量シクロホスファミド（ＣＹ）を使用して移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の重症度を軽減することにおいて、近年、いくらかの進歩がなされている。それにもかかわらず、慢性ＧＶＨＤは依然として問題であり、移植片対悪性腫瘍効果に悪影響を及ぼす免疫抑制薬の長期使用が必要である。さらに、多くの患者におけるＧＶＨＤの発生は、不良な胸腺機能に関連し、十分な抗腫瘍免疫をさらに制限する。

【0005】

この障害を克服するために、「大量投与」Ｔ細胞枯渇ハプロタイプ一致ＨＣＴを使用することができ、これは移植後免疫抑制療法がなくてもＧＶＨＤリスクがない。しかしながら、骨髄非破壊的（ＮＭＡ）前処置後に生着を達成することは、移植前の前処置レジメンを生き残った高レベルの抗ドナーＴ細胞クローンに起因して依然として大きな課題である。この課題に対処するために使用される１つのアプローチは、移植直後の高用量ＣＹの使用である（国際公開第２０１３／０９３９２０号パンフレットおよび国際公開第２０１３／０９３９１９号パンフレットに記載されている）。
さらに、ＧＶＨ反応性を欠く寛容誘導細胞（例えばベト細胞）の作製および移植片移植のためのアジュバント処置としての使用のために様々なアプローチが企図されており、いくつかを以下に要約する。

【0006】

国際公開第２００１／４９２４３号パンフレットは、非アロ反応性抗第三者細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の使用を開示しており、非アロ反応性抗第三者ＣＴＬは、ドナーのＴリンパ球を１つまたは複数の第三者抗原に対して（外因性ＩＬ－２の非存在下で）方向付けることによって生成され、用量は、アロ反応性ＣＴＬに発達することができるＴリンパ球（例えばＣＤ４^＋Ｔ細胞および／またはＣＤ５６^＋ナチュラルキラー細胞）を実質的に枯渇させている。

【0007】

国際公開第２００７／０２３４９１号パンフレットは、対象における非同系移植片の移植片拒絶を低減または防止するための寛容原性細胞の使用を開示している。開示される寛容原性Ｔ調節細胞（例えばＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋細胞）は、対象および移植片の両方と非同系である任意のドナーに由来し得る（「第三者」寛容原性細胞）。移植片（例えば骨髄）は、対象と同種または異種である任意の移植片ドナーに由来し得る。

【0008】

国際公開第２０１０／０４９９３５号パンフレットは、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有し、寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節へホーミングすることができる非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の使用を開示している。国際公開第２０１０／０４９９３５号パンフレットによれば、細胞は、非同系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、サイトカインを欠乏させた培養物中の第三者抗原と接触させ、次いで、Ｔｃｍ表現型を含む細胞の増殖を可能にする条件下でＩＬ－１５の存在下で細胞を培養することによって生成される。

【0009】

国際公開第２０１２／０３２５２６号パンフレットは、疾患の処置における、Ｔｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞であって、寛容誘導細胞であり、細胞が移植後にリンパ節へホーミングすることができる細胞の使用を開示している。国際公開第２０１２／０３２５２６号パンフレットによれば、細胞は、ＧＶＨ反応性細胞（例えば、１～５日間の培養）の排除を可能にする条件下でＩＬ－２１の存在下または非存在下でＰＢＭＣを１つまたは複数の第三者抗原と接触させ、次いでＴｃｍ表現型を含む細胞の増殖を可能にする条件下でＩＬ－１５の存在下で細胞を培養することによって生成される。

【0010】

国際公開第２０１３／０３５０９９号パンフレットは、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有し、寛容誘導細胞であり、および／または抗疾患活性を付与され、移植後にリンパ節へホーミングすることができる非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の使用を開示している。国際公開第２０１３／０３５０９９号パンフレットによれば、細胞は、抗原反応性細胞の富化を可能にするようにＩＬ－２１の存在下でＰＢＭＣを第三者抗原と接触させ、次いで、Ｔｃｍ表現型を含む細胞の増殖を可能にするように、抗原を含まない環境においてＩＬ－２１、ＩＬ－１５およびＩＬ－７の存在下で細胞を培養することによって生成される。

【0011】

国際公開第２０１８／００２９２４号パンフレットは、メモリーＴ細胞から生成されたベト細胞、それらの製造方法ならびに移植および疾患の治療における使用を開示している。国際公開第２０１８／００２９２４号パンフレットによれば、ベト細胞は、Ｔｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞であり、寛容誘導細胞であり、および／または抗疾患活性を付与され、移植後にリンパ節にホーミングすることができる。

【0012】

さらなる背景技術としては、国際公開第２０１７／００９８５２号パンフレット、同第２０１７／００９８５３号パンフレットおよび同第２０１８／１３４８２４号パンフレットが挙げられる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0013】

【特許文献1】国際公開第２０１３／０９３９２０号パンフレット

【特許文献2】国際公開第２０１３／０９３９１９号パンフレット

【特許文献3】国際公開第２００１／４９２４３号パンフレット

【特許文献4】国際公開第２００７／０２３４９１号パンフレット

【特許文献5】国際公開第２０１０／０４９９３５号パンフレット

【特許文献6】国際公開第２０１２／０３２５２６号パンフレット

【特許文献7】国際公開第２０１３／０３５０９９号パンフレット

【特許文献8】国際公開第２０１８／００２９２４号パンフレット

【特許文献9】国際公開第２０１７／００９８５２号パンフレット

【特許文献10】国際公開第２０１７／００９８５３号パンフレット

【特許文献11】国際公開第２０１８／１３４８２４号パンフレット

【発明の概要】

【0014】

本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）誘導細胞の単離された集団を作製する方法であって、細胞が、寛容誘導細胞であり、かつ／または抗疾患活性を付与され、かつ移植後にリンパ節へホーミングすることができる方法が提供され、方法は、
（ａ）ドナー対象由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の第１の集団を、ＣＤ１４^＋発現細胞に結合することができる抗体と接触させること、および抗原提示細胞に成熟することができるＣＤ１４^＋発現細胞を選択すること、
（ｂ）抗原提示細胞にウイルスペプチドを負荷すること、
（ｃ）ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ８^＋表現型を発現するメモリーＴ細胞を含む細胞の集団を得るために、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋発現細胞を枯渇させることができる１つまたは複数の作用物質で第１のＰＢＭＣの集団と同じドナー対象の第２のＰＢＭＣの集団を処置すること、
（ｄ）ウイルス反応性メモリーＴ細胞の富化を可能にするために、ＩＬ－２１の存在下で、メモリーＴ細胞を含む細胞の集団を工程（ｂ）のウイルスペプチドが負荷された抗原提示細胞と接触させること、および
（ｅ）Ｔｃｍ表現型を含む細胞の増殖を可能にするように、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７の存在下で工程（ｄ）から得られた細胞を培養し、それにより、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を作製することを含む。

【0015】

本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）誘導細胞の単離された集団を作製する方法であって、細胞が、寛容誘導細胞であり、かつ／または抗疾患活性を付与され、かつ移植後にリンパ節へホーミングすることができる方法が提供され、方法は、
（ａ）Ｔ細胞を含む細胞の集団を提供することであって、細胞の集団のＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ８^＋表現型を発現し、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋発現細胞を枯渇させた少なくとも４０％のメモリーＴ細胞を含む、提供すること、
（ｂ）メモリーＴ細胞を含む細胞の集団に、４～１０種類のウイルスに由来するウイルスペプチドを接触させることであって、前記ウイルスの少なくとも１つが、ウイルス反応性メモリーＴ細胞の富化を可能にするために、ＩＬ－２１の存在下で、ＢＫウイルスを含む、接触すること、および
（ｃ）Ｔｃｍ表現型を含む細胞の増殖を可能にするように、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７の存在下で工程（ｂ）から得られた細胞を培養し、それにより、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を作製することを含む。

【0016】

本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）誘導細胞の単離された集団を作製する方法であって、細胞が、寛容誘導細胞であり、かつ／または抗疾患活性を付与され、かつ移植後にリンパ節へホーミングすることができる方法が提供され、方法は、
（ａ）ドナー対象由来の第１の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団を、ＣＤ１４^＋発現細胞を選択することができる抗体と接触させ、樹状細胞に成熟することができるＣＤ１４^＋発現細胞を選択すること、
（ｂ）樹状細胞に、４～１０種類のウイルスに由来するウイルスペプチドを負荷することであって、前記ウイルスの少なくとも１つがＢＫウイルスを含む負荷すること、
（ｃ）ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ８^＋表現型を発現するメモリーＴ細胞を含む細胞の集団を得るために、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋発現細胞を枯渇させることができる１つまたは複数の作用物質で第１のＰＢＭＣの集団と同じドナー対象の第２のＰＢＭＣの集団を処置すること、
（ｄ）ウイルス反応性メモリーＴ細胞の富化を可能にするために、ＩＬ－２１の存在下で、メモリーＴ細胞を含む細胞の集団を工程（ｂ）のウイルスペプチドが負荷された樹状細胞と接触させること、および
（ｅ）Ｔｃｍ表現型を含む細胞の増殖を可能にするように、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７の存在下で工程（ｄ）から得られた細胞を培養し、それにより、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を作製することを含む。

【0017】

本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団であって、本発明のいくつかの実施形態の方法に従って作製され、細胞が寛容誘導細胞であり、かつ／または抗疾患活性を付与され、移植後にリンパ節へホーミングすることができる集団が提供される。

【0018】

本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、本発明のいくつかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団と、薬学的に許容され得る担体とを有効成分として含む薬学的組成物が提供される。

【0019】

本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、必要とする対象において疾患を処置する方法であって、治療有効量の本発明のいくつかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を対象に投与し、それにより、対象において疾患を処置することを含む方法が提供される。

【0020】

本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、必要とする対象において疾患を処置するために特定される医薬品を製造するための、本発明のいくつかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の使用が提供される。

【0021】

本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、移植片拒絶および／または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を軽減する、および／または、必要とする対象においてドナー特異的寛容性を誘導する方法であって、対象が非同系の細胞または組織の移植を必要としており、方法が、治療有効量の本発明のいくつかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を対象に投与し、それにより、対象における移植片拒絶および／またはＧＶＨＤを軽減することを含む、方法が、提供される。

【0022】

本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、移植片拒絶および／または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を軽減するため、および／または、必要とする対象においてドナー特異的寛容性を誘導するために特定される医薬品を製造するための、本発明のいくつかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集合の使用であって、対象は、非同系の細胞または組織の移植を必要とする、使用が提供される。

【0023】

本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、非同系の細胞または組織の移植を必要とする対象を処置する方法であって、
（ａ）細胞または組織の移植片を対象に移植すること、および
（ｂ）本発明のいくつかの実施形態の治療有効量の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を対象に投与し、それにより、細胞または組織の移植を必要とする対象を処置することを含む、方法が提供される。

【0024】

本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、対象への非同系の細胞または組織の移植のためのアジュバント処置として特定される医薬品を製造するための、本発明のいくつかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の使用であって、対象が、非同系の細胞または組織の移植を必要としている使用が提供される。

【0025】

本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、未成熟造血細胞移植を必要とする対象を処置する方法であって、
（ａ）対象を骨髄非破壊的移植前前処置プロトコルのもとで前処置することであって、骨髄非破壊的前処置は全身照射（ＴＢＩ）および化学療法剤を含み、ＴＢＩおよび化学療法剤は、移植前の－７～－１日目に投与される（例えば移植前の－７～－２日目、例えば－６～－１日目に）、前処置すること、
（ｂ）Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の用量を対象に移植することであって、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり５×１０^５個未満のＣＤ３^＋Ｔ細胞を含み、かつ、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり少なくとも５×１０^６のＣＤ３４^＋細胞を含む、移植すること、
（ｃ）治療有効量のシクロホスファミドを対象に投与することであって、治療有効量のシクロホスファミドが、対象の理想体重１キログラムあたり２５～２００ｍｇのシクロホスファミドを含み、治療有効量のシクロホスファミドが、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の移植の３日後および４日後２回の用量で対象に投与されることになること、および
（ｄ）治療有効量の本発明のいくつかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を対象に投与することであって、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団は、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の移植の後の６～９日目に投与され、
それによって未成熟造血細胞移植を必要とする対象を処置することを含む、方法が提供される。

【0026】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＰＢＭＣの第１の集団およびＰＢＭＣの第２の集団は、同じバッチに由来する。

【0027】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ８^＋表現型を発現するメモリーＴ細胞は、細胞の集団のＴ細胞の少なくとも４０％を構成する。

【0028】

本発明のいくつかの実施形態によれば、薬剤は抗体である。

【0029】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＩＬ－２１の存在下での接触は、１２時間～６日間影響を受ける。

【0030】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＩＬ－２１の存在下での接触は、３日間影響を受ける。

【0031】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７のいずれかの存在下での培養は、６日間～１２日間影響を受ける。

【0032】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７のいずれかの存在下での培養は、９日間影響を受ける。

【0033】

本発明のいくつかの実施形態によれば、培養は、グルコースを少なくとも５０ｍｇ／ｄｌの濃度まで添加することをさらに含む。

【0034】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ウイルスペプチドは、抗原提示細胞にて提示される。

【0035】

本発明のいくつかの実施形態によれば、抗原提示細胞は、ドナー対象由来のＰＢＭＣを、ＣＤ１４^＋発現細胞に結合することができる抗体と接触させ、抗原提示細胞に成熟することができるＣＤ１４^＋発現細胞を選択することを含む方法により得られる。

【0036】

本発明のいくつかの実施形態によれば、抗原提示細胞は、メモリーＴ細胞を含む細胞の集団と同じドナー対象のものである。

【0037】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＣＤ１４^＋発現細胞を選択することは、プラスチック接着によって影響されない。

【0038】

本発明のいくつかの実施形態によれば、抗原提示細胞は樹状細胞を含む。

【0039】

本発明のいくつかの実施形態によれば、樹状細胞は成熟樹状細胞である。

【0040】

本発明のいくつかの実施形態によれば、樹状細胞は、樹状細胞成熟因子を含む培養物中でＣＤ１４^＋発現細胞を培養することを含む方法によって得られる。

【0041】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ウイルスペプチドは、１～１０種類のウイルスに由来する。

【0042】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ウイルスペプチドは、２～１０種類のウイルスに由来する。

【0043】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ウイルスペプチドは、４～１０種類のウイルスに由来する。

【0044】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ウイルスペプチドの少なくとも１つは、ＢＫウイルス由来の少なくとも１つのペプチドを含む。本発明のいくつかの実施形態によれば、ウイルスペプチドは、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）ペプチド、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ペプチド、ＢＫウイルスペプチドおよびアデノウイルス（Ａｄｖ）ペプチドを含む。

【0045】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ウイルスペプチドは、ＥＢＶ－ＬＭＰ２、ＥＢＶ－ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ１、ＥＢＶ ｓｅｌｅｃｔ、ＣＭＶ－ｐｐ６５、ＣＭＶ－ＩＥ－１、Ａｄｖ－ペントン、Ａｄｖ－ヘキソン、ＢＫＶ ＬＴ、ＢＫＶ（カプシドＶＰ１）、ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２）、ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２、イソプロムＶＰ３）およびＢＫＶ（スモールＴ抗原）のうちの少なくとも１つを含む。

【0046】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ウイルスペプチドは、ＡｄＶ５ Ｈｅｘｏｎ、ｈＣＭＶ ｐｐ６５、ＥＢＶ ｓｅｌｅｃｔおよびＢＫＶ ＬＴのうちの少なくとも１つを含む。

【0047】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ウイルスペプチドは、ＡｄＶ５ Ｈｅｘｏｎ、ｈＣＭＶ ｐｐ６５、ＥＢＶ ｓｅｌｅｃｔおよびＢＫＶ ＬＴを含む。

【0048】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ウイルスペプチドは、少なくとも１種類の細菌ペプチド、真菌ペプチドまたは腫瘍ペプチドをさらに含む。

【0049】

いくつかの実施形態によれば、ウイルスペプチド、および少なくとも１種類の細菌ペプチド、真菌ペプチド、または腫瘍ペプチドが一緒に利用される。

【0050】

いくつかの実施形態によれば、ウイルスペプチド、および細菌ペプチド、真菌ペプチド、または腫瘍ペプチドの少なくとも１種類が別個に利用される。

【0051】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＰＢＭＣは、対象に対して非同系である。

【0052】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＰＢＭＣは、対象に対して同系である。

【0053】

本発明のいくつかの実施形態によれば、メモリーＴ細胞を含む細胞の集団は、対象に対して非同系である。

【0054】

本発明のいくつかの実施形態によれば、メモリーＴ細胞を含む細胞の集団は、対象に対して同系である。

【0055】

本発明のいくつかの実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、ＣＤ３^＋、ＣＤ８^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ４５ＲＡ^－、ＣＤ４５ＲＯ^＋のシグネチャを含む。

【0056】

本発明のいくつかの実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の少なくとも３０％を構成する。

【0057】

本発明のいくつかの実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団は、新鮮な細胞として投与するために処方される。

【0058】

本発明のいくつかの実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導細された細胞として投与するために処方される。

【0059】

本発明のいくつかの実施形態によれば、方法は、細胞または組織の移植片を対象に移植することをさらに含む。

【0060】

本発明のいくつかの実施形態によれば、医薬品は、細胞または組織の移植片をさらに含む。

【0061】

本発明のいくつかの実施形態によれば、方法は、対象に遺伝子改変Ｔ細胞を投与することをさらに含む。

【0062】

本発明のいくつかの実施形態によれば、医薬品は、遺伝子改変Ｔ細胞をさらに含む。

【0063】

本発明のいくつかの実施形態によれば、遺伝子改変Ｔ細胞は、ＣＡＲ－Ｔ細胞またはＴＣＲ－トランスジェニックＴ細胞を含む。

【0064】

本発明のいくつかの実施形態によれば、細胞または組織の移植片は未成熟造血細胞を含む。

【0065】

本発明のいくつかの実施形態によれば、疾患は悪性疾患である。

【0066】

本発明のいくつかの実施形態によれば、悪性疾患は、固形腫瘍または腫瘍転移である。

【0067】

本発明のいくつかの実施形態によれば、悪性疾患は血液悪性腫瘍である。

【0068】

本発明のいくつかの実施形態によれば、悪性疾患は、白血病、リンパ腫、骨髄腫、黒色腫、肉腫、神経芽細胞腫、結腸癌、結腸直腸癌、乳癌、卵巣癌、食道癌、滑膜細胞癌、肝癌、膵臓癌、および転移、または再発からなる群から選択される。

【0069】

本発明のいくつかの実施形態によれば、疾患は非悪性疾患である。

【0070】

本発明のいくつかの実施形態によれば、非悪性疾患は、臓器機能不全または臓器不全、血液学的疾患、移植片関連疾患、感染性疾患、遺伝性疾患または障害、鎌状赤血球症、自己免疫疾患、および代謝障害、外傷および傷害からなる群から選択される。

【0071】

本発明のいくつかの実施形態によれば、非悪性疾患は、再生不良性貧血、重度の免疫不全および非悪性骨髄不全からなる群から選択される。

【0072】

本発明のいくつかの実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団は、細胞または組織の移植（例えば、非同系の細胞または組織の移植）後における投与のためのものである。

【0073】

本発明のいくつかの実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団は、細胞または組織の移植（例えば、非同系の細胞または組織の移植）の６～９日後における投与のためのものである。

【0074】

本発明のいくつかの実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団は、細胞または組織の移植（例えば、非同系の細胞または組織の移植）の７日後における投与のためのものである。

【0075】

本発明のいくつかの実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団が、理想体重１ｋｇあたり少なくとも２．５×１０^６個のＣＤ８^＋細胞の用量で投与されるためのものである。

【0076】

本発明のいくつかの実施形態によれば、非同系の細胞または組織の移植片は未成熟造血細胞を含む。

【0077】

本発明のいくつかの実施形態によれば、未成熟造血細胞は、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞を含む。

【0078】

本発明のいくつかの実施形態によれば、未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり少なくとも５×１０^６ＣＤ３４^＋を含む。

【0079】

本発明のいくつかの実施形態によれば、未成熟造血細胞は、ＣＤ３^＋細胞および／またはＣＤ１９^＋細胞が枯渇している。

【0080】

本発明のいくつかの実施形態によれば、未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり４×１０^５未満のＣＤ３^＋発現細胞を含む。

【0081】

本発明のいくつかの実施形態によれば、未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり３×１０^５未満のＣＤ３^＋発現細胞を含む。

【0082】

本発明のいくつかの実施形態によれば、未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり２×１０^５未満のＣＤ３^＋発現細胞を含む。

【0083】

本発明のいくつかの実施形態によれば、方法は、移植の前に、対象を骨髄非破壊的前処置プロトコルのもとで前処置することをさらに含む。

【0084】

本発明のいくつかの実施形態によれば、方法はさらに、骨髄非破壊的移植前前処置プロトコルを含む。

【0085】

本発明のいくつかの実施形態によれば、骨髄非破壊的前処置プロトコルは、全身照射（ＴＢＩ）、部分的身体照射（ＴＬＩ）、化学療法剤、抗体免疫療法または共刺激遮断のうちの少なくとも１つを含む。

【0086】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＢＩは、１～５Ｇｙの範囲内の単回照射線量または分割照射線量を含む。

【0087】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＢＩは移植の－１日前に投与される。

【0088】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＢＩは移植の日に、例えば０日目の朝に投与され、移植は同日に、例えば夕方に行われる。

【0089】

本発明のいくつかの実施形態によれば、化学療法剤は、フルダラビン、シクロホスファミド、ラパマイシン、ブスルファン、トリスルファン、メルファランまたはチオテパのうちの少なくとも１つを含む。

【0090】

本発明のいくつかの実施形態によれば、骨髄非破壊的前処置プロトコルはＴ細胞減量を含む。

【0091】

本発明のいくつかの実施形態によれば、骨髄非破壊的前処置プロトコルはＴ細胞減量を含まない。

【0092】

本発明のいくつかの実施形態によれば、Ｔ細胞減量は抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体、抗ＣＤ５２抗体、または抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体の少なくとも１つにより影響される。

【0093】

本発明のいくつかの実施形態によれば、方法は、移植の後に治療有効量のシクロホスファミドを対象に投与することをさらに含む。

【0094】

本発明のいくつかの実施形態によれば、治療有効量のシクロホスファミドをさらに含み、シクロホスファミドが、非同系の細胞または組織の移植の後で対象に投与される。

【0095】

本発明のいくつかの実施形態によれば、治療有効量のシクロホスファミドは、対象の理想体重１キログラムあたり２５～２００ｍｇのシクロホスファミドを含む。

【0096】

本発明のいくつかの実施形態によれば、治療有効量のシクロホスファミドが、対象に、移植後３日目および４日目に２回の用量で投与されることになる。

【0097】

本発明のいくつかの実施形態によれば、骨髄非破壊的移植前前処置プロトコルはＴ細胞減量を含む。

【0098】

本発明のいくつかの実施形態によれば、Ｔ細胞減量は抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）によって影響される。

【0099】

本発明のいくつかの実施形態によれば、骨髄非破壊的移植前前処置プロトコルはＴ細胞減量を含まない。

【0100】

本発明のいくつかの実施形態によれば、コルチコステロイドは投与されない。

【0101】

本発明のいくつかの実施形態によれば、対象は、移植後にＧＶＨＤ予防によって長期的に処置されない。

【0102】

本発明のいくつかの実施形態によれば、対象はヒト対象である。

【0103】

特に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および／または科学用語は、本発明が関係する当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施形態の実施または試験に使用することができるが、例示的な方法および／または材料を以下に記載する。矛盾する場合、定義を含む特許明細書が支配する。さらに、材料、方法、および例は単なる例示であり、必ずしも限定することを意図するものではない。

【0104】

本明細書では、本発明のいくつかの実施形態を、単なる例として、添付の図面を参照して説明する。これより図面を詳細に具体的に参照すると、示されている詳細は例としてであり、本発明の実施形態の例示的な説明の目的のためであることが強調される。これに関して、図面と共に得られる説明は、本発明の実施形態がどのように実施され得るかを当業者に明らかにする。

【図面の簡単な説明】

【0105】

【図1】本発明のいくつかの実施形態による抗ウイルスＣＤ８^＋ベト細胞枯渇細胞の処理および試験を概説するフロー図である。

【図2】本発明のいくつかの実施形態によるＣＤ３４^＋富化およびＣＤ３^＋ＣＤ１９^＋枯渇細胞の処理および試験を概説するフロー図である。

【図3】本発明のいくつかの実施形態による使用のための新鮮な未成熟造血細胞移植を伴うレシピエント対象の前処置レジメンの概略図である。

【図4】本発明のいくつかの実施形態による使用のための凍結保存の未成熟造血細胞移植を伴うレシピエント対象の前処置レジメンの概略図である。

【図5】Ｔ細胞減量（ＡＴＧを用いる）、フルダラビンおよび３ＧＹのＴＢＩによる骨髄非破壊的前処置の後での、ミスマッチ大量投与Ｔ細胞枯渇造血幹細胞移植を、移植後の高用量ＣＹと組み合わせる併用プロトコルの概略図である。

【図6】７日目のベト細胞の注入が、レシピエントのＴ細胞減量の非存在下で移植片拒絶を克服することを可能にすることを示すグラフである。Ｃ３Ｈレシピエントマウスに、３．５ＧＹのＴＢＩ後に、大量投与Ｔ細胞枯渇Ｂａｌｂ／Ｎｕｄｅ（Ｈ２^ｄ）ＢＭ細胞を移植した。移植マウスはまた、３～４日目にＣＹ移植後（１００ｍｇ／ｋｇ）（Ｎｕ／ＢＮ＋ＣＴＸと命名）、または移植後７日目に５×１０^６Ｂａｌｂ／ｃベトＴｃｍ（Ｈ２^ｄ）（Ｎｕ／ＢＮ＋ＴｃｍＤ－７と命名）、またはその両方（Ｎｕ／ＢＮ＋ＴｃｍＤ７＋ＣＴＸと命名）を受けた。末梢血中のドナー細胞の割合を、抗ドナーおよび抗宿主（Ｈ２^ｄおよびＨ２^ｋ）抗体を使用してＦＡＣＳによって分析した。各ドットは、適切な群に属する１匹のマウスを表す。

【図7】７日目のベト細胞の投与によって置き換えられるＡＴＧを含まない治療プロトコルの概略図である。

【図8A】ＩＮＦ－γおよびＴＮＦ－αの細胞内染色によって決定されるＴｃｍ細胞の抗ウイルス活性を示す。ベト－Ｔｃｍ細胞を、ブレフェルジンＡ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の存在下、３７℃で５％ＣＯ_２で６時間、それぞれのウイルスペプチド混合物（ＥＢＶ、ＣＭＶ、Ａｄｅｎｏ、ＢＫＶ）と共培養した。細胞を固定し、透過処理し（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｆｉｘ＆Ｐｅｒｍセット）、ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ８、ＩＦＮγおよびＴＮＦα（ＢＤ）について免疫染色した。陽性対照には、ＰＭＡ／イオノマイシンによるＴＣＲ非依存性刺激が含まれた。細胞をＣＤ４５^＋／ＦＳＣリンパ球ゲートおよびＣＤ３^＋ＣＤ８^＋でゲートした。

【図8B】ＩＮＦ－γおよびＴＮＦ－αの細胞内染色によって決定されるＴｃｍ細胞の抗ウイルス活性を示す。ベト－Ｔｃｍ細胞を、ブレフェルジンＡ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の存在下、３７℃で５％ＣＯ_２で６時間、それぞれのウイルスペプチド混合物（ＥＢＶ、ＣＭＶ、Ａｄｅｎｏ、ＢＫＶ）と共培養した。細胞を固定し、透過処理し（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｆｉｘ＆Ｐｅｒｍセット）、ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ８、ＩＦＮγおよびＴＮＦα（ＢＤ）について免疫染色した。陽性対照には、ＰＭＡ／イオノマイシンによるＴＣＲ非依存性刺激が含まれた。細胞をＣＤ４５^＋／ＦＳＣリンパ球ゲートおよびＣＤ３^＋ＣＤ８^＋でゲートした。

【図8C】ＩＮＦ－γおよびＴＮＦ－αの細胞内染色によって決定されるＴｃｍ細胞の抗ウイルス活性を示す。ベト－Ｔｃｍ細胞を、ブレフェルジンＡ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の存在下、３７℃で５％ＣＯ_２で６時間、それぞれのウイルスペプチド混合物（ＥＢＶ、ＣＭＶ、Ａｄｅｎｏ、ＢＫＶ）と共培養した。細胞を固定し、透過処理し（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｆｉｘ＆Ｐｅｒｍセット）、ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ８、ＩＦＮγおよびＴＮＦα（ＢＤ）について免疫染色した。陽性対照には、ＰＭＡ／イオノマイシンによるＴＣＲ非依存性刺激が含まれた。細胞をＣＤ４５^＋／ＦＳＣリンパ球ゲートおよびＣＤ３^＋ＣＤ８^＋でゲートした。

【発明を実施するための形態】

【0106】

本発明は、そのいくつかの実施形態では、メモリーＴ細胞から生成されたベト細胞に関し、より詳細には、しかし排他的ではなく、安定している長期の細胞の移植または組織の移植を達成するための治療においてそれらを製造および使用する方法に関する。

【0107】

本発明の原理および動作は、図面および添付の説明を参照してよりよく理解され得る。

【0108】

本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、その適用において、以下の説明に記載されるか実施例によって例示される詳細に必ずしも限定されないことを理解されたい。本発明は、他の実施形態が可能であり、または様々な方法で実施または実行することができる。また、本明細書で使用される表現および用語は、説明目的のためのものであり、限定するものと見なされるべきではないことを理解されたい。

【0109】

本発明を実施に移している間に、本発明者らは、移植片対宿主（ＧＶＨ）反応を誘導することなく、抗疾患活性（例えば抗ウイルス活性）も含む大規模な用量の寛容誘導細胞（例えばベト細胞）を作製するための改善されたプロトコルを明示した。これらの細胞は、ウイルス提示樹状細胞を産生（ＰＢＭＣからのＣＤ１４^＋細胞の選択、成熟因子における培養、およびウイルスペプチドの特定の組み合わせによる負荷による）し、次いで、ウイルス抗原活性化に使用されるウイルスペプチドの特定の組み合わせによってメモリーＣＤ８Ｔ細胞からアロ反応性クローンを枯渇させることによって、生成された。本発明者らはさらに、Ｔ細胞枯渇大量投与同種造血細胞移植（アロ－ＨＣＴ）を、これらの移植を促進するベト細胞（例えば、ＨＣＴ後に、例えば、ＨＣＴ後＋７日目に投与される）で補うことにより、宿主抗ドナーＴ細胞が寛容化され、安全な骨髄非破壊的（ＮＭＡ）前処置（例えば、ＴＢＩおよびフルダラビンなどの化学療法剤を含む）後のＧＶＨＤの非存在下での生着が、シクロホスファミド（例えば、ＨＣＴ後＋３日目および＋４日目に投与）を含む最小限の移植後免疫抑制療法で可能になることを発見した。

【0110】

簡潔には、非動員末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を細胞のドナーから得て、Ｆｉｃｏｌｌを使用して分画して単核細胞（ＭＮＣ）を得た。ＭＮＣを２つの画分に分離し、１つは刺激細胞（すなわち、ウイルスペプチドを提示する抗原提示細胞）を生成するためのものであり、第２のものは抗ウイルスセントラルメモリーＣＤ８^＋ベト細胞を生成するためのものであった。したがって、ＣＤ１４結合モノクローナル抗体を使用してＭＮＣ画分からＣＤ１４^＋発現細胞を選択することによって、第１のＭＮＣ画分から刺激細胞を生成し、ＣＤ１４^＋発現細胞を、ＩＬ－４、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γおよびＬＰＳを含む樹状細胞成熟因子と共に１６時間増殖させた。次いで、成熟樹状細胞（ｍＤＣ）に、ＥＢＶ、ＣＭＶ、ＢＫＶ、およびアデノウイルスを含むウイルスペプチドを負荷し、放射線照射した（例えば２５Ｇｙによって）。同時に、メモリー細胞を、超常磁性粒子にコンジュゲートしたＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋、およびＣＤ４５ＲＡ^＋抗体を使用したＣＤ４^－ＣＤ５６^－ＣＤ４５ＲＡ^－発現細胞の陰性の選択によって、第２のＭＮＣ画分から富化した。ＣＤ４^－ＣＤ５６^－ＣＤ４５ＲＡ^－枯渇細胞を、サイトカインを含まず、ＩＬ－２１のみを補充したＴ細胞増殖培地（このような条件は、ウイルス反応性メモリーＣＤ８Ｔ細胞の増殖、およびＧＶＨ反応性細胞の排除を可能にする）の中で、ウイルス負荷樹状細胞（ＤＣに対する５：１細胞の比で）と３日間共培養した。３日後、Ｔ細胞をＩＬ－２１、ＩＬ－１５、およびＩＬ－７の存在下でさらに９日間培養した（そのような条件は、Ｔｃｍの表現型を含む細胞の増殖を可能にする）。細胞培地を２日ごとに交換し、グルコースおよびＰＨの値をモニターし、必要に応じて調整した。得られた細胞の集団は、免疫表現型検査（例えば、ＣＤ３^＋ＣＤ８^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋の発現によって）および機能的免疫研究によって（例えば、抗ウイルス活性を評価することによって、例えば、培養の開始時に使用した元のウイルスペプチドに対してＴｃｍ細胞を再刺激し、ＩＮＦγ^＋ＴＮＦ^＋細胞のパーセンテージを、例えばＦＡＣＳによって測定することによって）決定される抗ウイルス性セントラルメモリーＣＤ８^＋ベト細胞を含む。

【0111】

抗ウイルス性セントラルメモリーＣＤ８^＋ベト細胞は、骨髄非破壊的（ＮＭＡ）前処置レジメン後の同種異系ＣＤ３４^＋リッチなＣＤ３^＋ＣＤ１９^＋枯渇造血細胞の移植（すなわち、大量投与Ｔ細胞枯渇同種異系造血幹細胞（ＨＳＣ）の移植）の生着を促進する。したがって、例えば、レシピエントの対象は、調製レジメンとして、－６日目～－３日目に（または－７日目～－４日目に）フルダラビンで毎日処置され、続いて－１日目に（または－２日目に）低用量ＴＢＩ（すなわち、それぞれ移植前の６～３日目、７～４日目、１日目、または２日目に）で処置され得る。＋３日目および＋４日目（すなわち移植後３～４日目）に、患者はシクロホスファミド（ＣＹ）を受け、続いて＋７日目（すなわち、移植後＋７日目）にベト細胞の注入を受ける。場合により、レシピエントの対象においてＴ細胞の減量を誘導するために、ＡＴＧを移植前の－９～－７日目（または－１０～－８日目）に毎日投与することができる。

【0112】

まとめると、抗ウイルスセントラルメモリーＣＤ８^＋ベト細胞は、ドナー細胞に対する免疫寛容を誘導するそれらの能力のために、ドナー造血始原体の生着の増強と相まって、疾患の処置（例えば、ウイルス感染からの保護またはウイルス感染の治療）を提供する。さらに、ベト細胞は、安全な骨髄非破壊的レジメンの後、長期の免疫抑制を伴うことなく、大量投与Ｔ細胞枯渇同種ＨＳＣ移植の生着を可能にする。さらに、提供された大規模なプロトコルは、ヒトの対象の治療に使用するのに適した用量で抗ウイルス性セントラルメモリーＣＤ８^＋ベト細胞を生成することを可能にする。

【0113】

したがって、本発明の一態様によれば、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）誘導細胞の単離された集団を作製する方法であって、細胞が、寛容誘導細胞であり、かつ／または抗疾患活性を付与され、かつ移植後にリンパ節へホーミングすることができる方法が提供され、方法は、
（ａ）ドナー対象由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の第１の集団を、ＣＤ１４^＋発現細胞に結合することができる抗体と接触させること、および抗原提示細胞に成熟することができるＣＤ１４^＋発現細胞を選択すること、
（ｂ）抗原提示細胞にウイルスペプチドを負荷すること、
（ｃ）ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ８^＋表現型を発現するメモリーＴ細胞を含む細胞の集団を得るために、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋発現細胞を枯渇させることができる１つまたは複数の作用物質で第１のＰＢＭＣの集団と同じドナー対象の第２のＰＢＭＣの集団を処置すること、
（ｄ）ウイルス反応性メモリーＴ細胞の富化を可能にするために、ＩＬ－２１の存在下で、メモリーＴ細胞を含む細胞の集団を工程（ｂ）のウイルスペプチドが負荷された抗原提示細胞と接触させること、および
（ｅ）Ｔｃｍ表現型を含む細胞の増殖を可能にするように、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７の存在下で工程（ｄ）から得られた細胞を培養し、それにより、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を作製することを含む。

【0114】

本発明の一態様によれば、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）誘導細胞の単離された集団を作製する方法であって、細胞が、寛容誘導細胞であり、かつ／または抗疾患活性を付与され、かつ移植後にリンパ節へホーミングすることができる方法が提供され、方法は、
（ａ）Ｔ細胞を含む細胞の集団を提供することであって、細胞の集団のＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ８^＋表現型を発現して、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋発現細胞を枯渇させた少なくとも４０％のメモリーＴ細胞を含む、提供すること、
（ｂ）メモリーＴ細胞を含む細胞の集団に、４～１０種類のウイルスに由来するウイルスペプチドを接触させることであって、ウイルスの少なくとも１つが、ウイルス反応性メモリーＴ細胞の富化を可能にするために、ＩＬ－２１の存在下で、ＢＫウイルスを含む、接触すること、および
（ｃ）Ｔｃｍ表現型を含む細胞の増殖を可能にするように、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７の存在下で工程（ｂ）から得られた細胞を培養し、それにより、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を作製することを含む。

【0115】

「単離された」という用語は、それらの天然環境（例えば、人体）から単離された細胞を指す。

【0116】

一実施形態によれば、細胞の集団は、不均一な細胞混合物を指す。

【0117】

本明細書で使用される「非ＧＶＨＤ」または「非移植片対宿主病」という用語は、移植片対宿主（ＧＶＨ）誘導反応性が実質的に低下しているか、またはまったくないことを指す。したがって、本発明のいくつかの実施形態の細胞は、移植後３０～１２０日の移植された対象の生存、体重および全体的な外観によって証明されるように、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を顕著には引き起こさないように作製される。ＧＶＨＤの減少について対象を評価する方法は、当業者に周知である。

【0118】

一実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の細胞は、本教示に従って作製されていない細胞と比較して、宿主に対する反応性が少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはさらには１００％低下している。

【0119】

本明細書で使用される「セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型」という語句は、リンパ節にホーミングするＴ細胞のサブセットを指す。Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、ヒトでは、典型的には、ＣＤ３^＋／ＣＤ８^＋／ＣＤ６２Ｌ^＋／ＣＤ４５ＲＯ^＋／ＣＤ４５ＲＡ^－シグネチャを含む。Ｔｃｍ細胞は、単一細胞のシグネチャマーカーのすべてを発現し得るか、または単一細胞のシグネチャマーカーの一部のみを発現し得ることが理解されよう。細胞表現型の判定は、当業者に公知の任意の方法を使用して、例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）または捕捉ＥＬＩＳＡ標識などによって行うことができる。

【0120】

一実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、またはさらには１００％が、Ｔｃｍ細胞シグネチャを有する。

【0121】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の２０％を構成する。

【0122】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の３０％を構成する。

【0123】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の４０％を構成する。

【0124】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の５０％を構成する。

【0125】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の６０％を構成する。

【0126】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の７０％を構成する。

【0127】

具体的な実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の約１０～２０％、約１０～３０％、約１０～４０％、約１０～５０％、約２０～３０％、約２０～４０％、約３０～５０％、約４０～６０％、約５０～７０％、約６０～８０％、約７０～９０％、約８０～１００％または約９０～１００％がＴｃｍ細胞シグネチャを有する。

【0128】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の１０～３０％を構成する。

【0129】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の１０～５０％を構成する。

【0130】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の２０～４０％を構成する。

【0131】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の３０～５０％を構成する。

【0132】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の５０～７０％を構成する。

【0133】

本発明のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞はまた、本明細書で「Ｔｃｍ細胞」とも称される。

【0134】

述べられたように、Ｔｃｍ細胞は、典型的には、移植後にリンパ節にホーミングする。いくつかの態様によれば、本発明のいくつかの態様の単離された細胞の集団は、移植後のリンパ節のいずれか、例えば末梢リンパ節および腸間膜リンパ節にホーミングし得る。これらの細胞のホーミング特性は、それらがそれらの拒否効果を迅速かつ効率的に発揮することを可能にする。

【0135】

本発明のいくつかの実施形態のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、寛容誘導細胞である。

【0136】

「寛容誘導細胞」という言い回しは、本明細書の中で使用されるとき、投与された寛容誘導細胞の非存在下におけるレシピエントの細胞の応答性と比較して、レシピエントの細胞（例えばレシピエントのＴ細胞）がドナーの細胞と接触するとき、応答性の低下を引き起こす細胞のことを指す。寛容誘導細胞には、国際公開第２００１／０４９２４３号パンフレットおよび国際公開第２００２／１０２９７１号パンフレットに以前に記載されたようなベト細胞（すなわち、宿主Ｔ細胞と接触すると宿主Ｔ細胞のアポトーシスを引き起こすＴ細胞）が含まれる。

【0137】

「ベト活性」という用語は、ベト細胞を認識して結合すると抗ドナーレシピエントＴ細胞の不活性化をもたらす免疫細胞（例えばドナー由来Ｔ細胞）に関する。一実施形態によれば、不活性化は、抗ドナーレシピエントＴ細胞のアポトーシスをもたらす。

【0138】

本発明のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、本明細書で「ベト細胞」とも称される。

【0139】

加えて、または、代替において、本発明のいくつかの実施形態のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団は、抗疾患活性を含む。

【0140】

「抗疾患活性」という用語は、異常細胞に対するＴｃｍ細胞の機能を指す。抗疾患活性は、異常細胞に対して直接的、例えば、異常細胞の死滅能力であり得る。この活性は、ＬＦＡ１－Ｉ／ＣＡＭ１結合によって媒介されるＴＣＲ非依存性殺傷に起因し得る［Ａｒｄｉｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（２００５）１０５（８）：３３６５－７１．Ｅｐｕｂ ２００４ ７月６日］。追加的または代替的に、抗疾患活性は、例えば、異常細胞（例えば、死滅、アポトーシスによって、または他の因子、例えば抗体、サイトカインなどの分泌によって）の死をもたらす他の種類の細胞（例えば、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞）の活性化によって間接的であり得る。

【0141】

「抗ウイルス活性」という用語は、ウイルス感染細胞（例えば、細胞表面のＭＨＣ－ペプチド複合体に関連してウイルスの抗原を発現させる）に対するＴｃｍ細胞の機能を指す。典型的には、抗ウイルス活性は、ウイルス感染細胞の死滅をもたらす。

【0142】

「抗腫瘍活性」という用語は、腫瘍細胞に対するＴｃｍ細胞の機能を指す。典型的には、抗腫瘍活性は腫瘍細胞の死滅をもたらす。具体的な実施形態によれば、抗腫瘍活性は、移植片対白血病／リンパ腫（ＧＶＬ）の活性を含む。

【0143】

異常細胞は、例えば、ウイルス感染細胞、細菌感染細胞、癌細胞［例えば、固形腫瘍の細胞または白血病／リンパ腫細胞（本明細書ではＴｃｍ細胞の移植片対白血病（ＧＶＬ）活性とも呼ばれる）］、自己免疫疾患に関連する細胞、アレルギー反応に関連する細胞、またはストレス、放射線もしくは年齢によって変化した細胞を含み得る。

【0144】

いくつかの実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む本発明のいくつかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導細胞は、必要とされる用途（例えば、治療される疾患に対して）に応じて、非遺伝子改変細胞または遺伝子改変細胞（例えば、特定の遺伝子、マーカーもしくはペプチドを発現するかもしくは発現しないように、または特定のサイトカインを分泌するかもしくは分泌しないように遺伝子操作された細胞）であり得る。そのような判定は、十分に当業者の能力の範囲内である。

【0145】

一実施形態によれば、Ｔｃｍ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する。

【0146】

したがって、本発明のいくつかの実施形態のＴｃｍ細胞は、ＴＣＲまたはＣＡＲを発現するように形質導入され得る。

【0147】

本明細書で使用される場合、「ＴＣＲによる形質導入」は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のアルファ鎖、ＴＣＲのベータ鎖、ＴＣＲのガンマ鎖、ＴＣＲのデルタ鎖、またはそれらの組み合わせ（例えば、αβ鎖またはγδ鎖）などの２つの鎖（すなわち、ポリペプチド鎖）のクローニングを指す。一実施形態によれば、ＴＣＲは、ＴＣＲの可変領域（例えば、α鎖およびβ鎖またはγ鎖およびδ鎖）を含む。細胞（例えば、Ｔ細胞）にＴＣＲ（例えば、生成されたＴＣＲ－Ｔ細胞）を形質導入する方法は、当技術分野で公知であり、例えばＮｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ａｄｖ Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１２；２０１２：４０４０８１；Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｒｉｖｉｅｒｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１５ Ｍａｒ；２２（２）：８５－９４）；およびＬａｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２００２）９，６１３－６２３において開示されている。

【0148】

本明細書で使用される場合、「ＣＡＲによる形質導入」は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列のクローニングを指し、ＣＡＲは、抗原認識部分およびＴ細胞活性化部分を含む。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインまたはＴ細胞活性化ドメインに連結された抗体（例えば、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ））の抗原結合ドメインを含有する人工的に構築されたハイブリッドタンパク質またはポリペプチドである。細胞（例えば、Ｔ細胞）にＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ－Ｔを作製）を形質導入する方法は当技術分野で公知であり、例えばＤａｖｉｌａ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１２ Ｄｅｃ １；１（９）：１５７７－１５８３；Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｒｉｖｉｅｒｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１５ Ｍａｒ；２２（２）：８５－９４）；およびＭａｕｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１４ Ａｐｒ ２４；１２３（１７）：２６２５－３５において開示されている。

【0149】

一実施形態によれば、遺伝子改変Ｔｃｍ細胞は、トランスジェニックＴＣＲ（ＴＣＲ－Ｔ）またはＣＡＲ（ＣＡＲ－Ｔ）を発現する。

【0150】

したがって、本発明のいくつかの実施形態のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）による形質導入によって疾患の抗原（例えば腫瘍抗原）を標的とする受容体の提示を促進することによって、細胞特異性（例えば、Ｔ細胞特異性）を再指向させることによって、治療（例えば、抗癌細胞療法）のために遺伝子改変され得る。例えば、ＴＣＲまたはＣＡＲを発現するＴｃｍ細胞は、悪性の疾患、例えば、濾胞性リンパ腫（ＣＤ２０またはＧＤ２）、神経芽腫（ＣＤ１７１）、非ホジキンリンパ腫（ＣＤ２０）、リンパ腫（ＣＤ１９）、神経膠芽腫（ＩＬ１３Ｒα２）、慢性リンパ性白血病またはＣＬＬおよび急性リンパ性白血病またはＡＬＬ（両方ともＣＤ１９）を標的とするために作製され得る。

【0151】

本発明のいくつかの実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を生成する方法が提供される。

【0152】

一実施形態によれば、本方法は、ドナー対象由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の第１の集団を、ＣＤ１４^＋発現細胞に結合することができる抗体と接触させること、および抗原提示細胞に成熟することができるＣＤ１４^＋発現細胞を選択することを含む。

【0153】

「ドナー対象」という用語は、ヒトを指す。

【0154】

一実施形態によれば、ドナー対象は、本明細書の以降で詳しく論じられるように、対象（例えば同種異系）に対して非同系である。

【0155】

「末梢血単核球（ＰＢＭＣ）」という用語は、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞などを含む）および単球を含む血液試料の画分を指す。

【0156】

一実施形態によれば、ＰＢＭＣは、本明細書の以降で詳しく論じられるように、レシピエントの対象（例えば同種異系）に関して非同系である。

【0157】

一実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞を生成するために使用されるＰＢＭＣは、動員されない（すなわち、プライミングされていない）ＰＢＭＣ、すなわち、造血前駆体（例えば、幹細胞）の骨髄から末梢血循環への移動に影響を及ぼす薬物を使用することによって得られない細胞である。

【0158】

一実施形態によれば、ＰＢＭＣが、本明細書の以降で詳しく論じられるように、造血細胞（ＨＣＴ）の計画された移植日（すなわち、０日目）の５～１５日前（例えば７～１０日間、例えば７日間、例えば８日間）に収集される。しかしながら、ＰＢＭＣは、計画された移植日より前の任意の時点で収集され得ることが理解されるべきである。そのようなＰＢＭＣは、そのまま保存することができるか、または後述するように処理し、その後、将来の使用のために保存することができる（例えば、凍結保存）。

【0159】

一実施形態によれば、ＰＢＭＣは、標準的な技術を使用してドナー対象から収集される。具体的な実施形態によれば、ＰＢＭＣは、白血球除去療法（すなわち、ＰＢＭＣをドナー対象から本質的に除去し、残りの血液成分をドナー対象に戻すプロセス）を使用して回収される。

【0160】

一実施形態によれば、ＰＢＭＣ回収処置（例えば白血球アフェレーシス）により、例えば０．０１～１０００×１０^１０の単核細胞（ＭＮＣ）、例えば０．１～１００×１０^１０、例えば１×１０^１０のＭＮＣが得られる。

【0161】

一実施形態によれば、ＰＢＭＣ採取処置（例えば白血球アフェレーシス）により、最小５００×１０^６の単核細胞（ＭＮＣ）、例えば５００×１０^１０～１０００×１０^１０のＭＮＣ、例えば１×１０^１０のＭＮＣが得られる。

【0162】

一実施形態によれば、ＰＢＭＣは単一の収集処置で収集される。

【0163】

一実施形態によれば、ＰＢＭＣは、２、３、４、５、またはそれより多い収集手順（例えば、必要な数のＭＮＣを得るために）で収集される。

【0164】

一実施形態によれば、ＰＢＭＣが２つ以上の収集手順で収集される（例えば、同じドナー対象からのもの）場合、ＰＢＭＣは一緒にプールされる（例えば、さらなる処理のために）か、または別々に使用され得る。

【0165】

一実施形態によれば、上記の収集物のいずれもバッチと呼ぶことができる。あるいは、任意のグループの集合（例えば、数日間、例えば１、２、３、４、５日間、例えば３日間にわたる収集の状況で同じドナー対象からのもの）をバッチと呼ぶことができる。

【0166】

一実施形態によれば、上記のＰＢＭＣの収集物のいずれも、さらなる処理（例えば、以下に記載されるようなＭＮＣの分離）の前に、１日間または複数日間（例えば、１、２、３、４、５日間、例えば１～２日間）にわたって収集管に保持され得る。

【0167】

一実施形態によれば、単核細胞（ＭＮＣ）がＰＢＭＣから単離される。当技術分野で公知の任意の標準的な技術を、ＰＢＭＣからのＭＮＣ単離に使用することができる。例えば、一実施形態によれば、収集したＰＢＭＣを、例えばカルシウムもマグネシウムを含まず、例えば０．６％ＡＣＤ－Ａおよび２５％ＨＡＳの０．５％を補充したダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ））で希釈し（例えば、１：２）、ＭＮＣをフィコール密度勾配分離によって単離する。フィコール密度勾配分離後、一実施形態のＭＮＣ調製物を、手動の遠心分離によって例えば１～５回、例えば１～３回、例えば２回血小板洗浄（すなわち、血栓の洗浄）をし、洗浄緩衝液（例えば、ＡＣＤ－Ａおよび２５％ＨＳＡの０．５％を含むＰＢＳ）で再懸濁する。

【0168】

本発明のいくつかの実施形態のＰＢＭＣ調製物またはＭＮＣ調製物は、２つの画分（例えば等しい画分）に分けられる。１つのＰＢＭＣまたはＭＮＣ画分が抗原提示細胞（すなわち、本明細書ではＰＢＭＣの第１の集団と呼ばれる）にさらにプロセシングされ、第２のＰＢＭＣまたはＭＮＣ画分（すなわち、本明細書ではＰＢＭＣの第２の集団と呼ばれる）がＣＤ８^＋メモリーＴ細胞について富化される。

【0169】

一実施形態によれば、ＰＢＭＣの第１の集団およびＰＢＭＣの第２の集団は、同じバッチに由来する。

【0170】

あるいは、異なるＰＢＭＣ収集処置からの２つのＰＢＭＣ調製物を使用してもよい。したがって、一実施形態によれば、ＰＢＭＣの第１の集団およびＰＢＭＣの第２の集団は、多様なバッチに由来する。

【0171】

一実施形態によれば、抗原提示細胞（例えば樹状細胞）は、最初にＰＢＭＣの第１の集団をＣＤ１４^＋発現細胞に結合することができる抗体と接触させ、ＣＤ１４^＋発現細胞を選択することによって生成される。

【0172】

一実施形態によれば、ＣＤ１４^＋発現細胞に結合することができる抗体は、ＣＤ１４モノクローナル抗体である。そのような抗体は、例えばＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、およびＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから商業的に入手することができる。

【0173】

ＣＤ１４モノクローナル抗体を使用してＣＤ１４^＋発現細胞を選択することは、当技術分野で公知の任意の方法を使用して、例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃから入手可能な磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ（商標））、ＦＡＣＳ選別機および／またはｃａｐｔｕｒｅ ＥＬＩＳＡの標識の使用によって行うことができる。

【0174】

一実施形態によれば、異なる枯渇／分離方法を組み合わせることができ、例えば、分離の質を高めるために、または複数のパラメータによる選別を可能にするために、磁気細胞選別をＦＡＣＳと組み合わせることができる。

【0175】

一実施形態によれば、ＣＤ１４^＋発現細胞の選択は、プラスチック接着によって影響されない。

【0176】

一実施形態によれば、ＣＤ１４^＋発現細胞は、磁気分離技術によって選択される。例えば、Ｄｙｎａｌ（ノルウェー）、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ（ケンブリッジ、マサチューセッツ州、米国）、Ｉｍｍｕｎｃｏｎ（フィラデルフィア、米国）、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃ（マルセイユ、フランス）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（米国）、Ｃｅｌｌｐｒｏ（米国）およびＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ ＧｍｂＨ（ドイツ）を含むいくつかの供給源から異なる磁気ビーズが入手可能である。あるいは、抗体をビオチン化またはジゴキシゲニンとコンジュゲート化し、アビジンまたは抗ジゴキシゲニン被覆アフィニティーカラムと組み合わせて使用することができる。

【0177】

一実施形態によれば、ＣＤ１４モノクローナル抗体は、磁性粒子にコンジュゲートされる。

【0178】

具体的な実施形態によれば、磁性粒子は、超常磁性鉄デキストラン粒子を含む。

【0179】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ１４標識細胞は、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）カラムで処理される。

【0180】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ１４標識細胞は、ＸＳ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｃｏｌｕｍｎを使用してＳｕｐｅｒＭＡＣＳ（商標）ＩＩで選択される。

【0181】

一実施形態によれば、ＣＤ１４磁気標識細胞（すなわちＣＤ１４^＋発現細胞）を分離カラム（すなわち、陽性選択）によって保持し、ＣＤ１４^－細胞を除去する。次いで、ＣＤ１４^＋細胞をカラムから放出させ、回収する。一実施形態によれば、細胞数、生存率および／または免疫表現型検査のために、各画分からの試料を除去する。

【0182】

一実施形態によれば、生存率が、７ＡＡＤ、すなわち、７ＡＡＤ^＋細胞の陽性発現によって評価される。

【0183】

一実施形態によれば、ＣＤ１４^＋富化細胞調製物を、細胞培養培地（例えば樹状細胞培養培地、例えばＣｅｌｌＧｒｏ／１％ＨＳＡ）に、例えば１～１０×１０^６細胞／ｍｌ、例えば３×１０^６細胞／ｍｌの細胞濃度で再懸濁する。一実施形態によれば、細胞培養培地には、サイトカインおよび成長因子が補充される。使用されるサイトカインおよび成長因子の決定は、当業者の技術の範囲内である。例えば、細胞培養培地には、ＩＬ－４（例えば２００～２０００ＩＵ／ｍＬ、例えば１０００ＩＵ／ｍＬ）およびＧＭ－ＣＳＦ（例えば１０００～４０００ＩＵ／ｍＬ、例えば２０００ＩＵ／ｍＬ）が補充される。次いで、細胞懸濁液を播種し（例えば細胞培養プレート、例えばＣｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｙプレート）、３７℃、５％ＣＯ_２で１２～３６時間、例えば１６～２４時間、例えば２４時間インキュベートする。

【0184】

一実施形態によれば、ＣＤ１４^＋発現細胞の抗原提示細胞（例えば樹状細胞）への成熟を誘導するために、ＣＤ１４^＋富化細胞調製物を成熟因子（例えば樹状細胞成熟因子）の存在下で培養する。使用される成熟因子の決定は、当業者の技術の範囲内である。したがって、一実施形態によれば、播種した（例えば、細胞培養プレート、例えば、Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｙプレートにおいて）ＣＤ１４^＋富化細胞を、ＩＬ－４（例えば２００～２０００ＩＵ／ｍＬ、例えば１０００ＩＵ／ｍＬ）、ＧＭ－ＣＳＦ（例えば１０００～４０００ＩＵ／ｍＬ、例えば２０００ＩＵ／ｍＬ）、ＬＰＳ（例えば１０～１００ｎｇ／ｍＬ、例えば４０ｎｇ／ｍＬ）、およびＩＦＮ－γ（例えば５０～５００ＩＵ／ｍＬ、例えば２００ＩＵ／ｍＬ）の存在下、３７℃、５％ＣＯ_２で１０～２４時間、例えば１４～１８時間、例えば１６時間培養する。

【0185】

培養期間の後、細胞培養物から抗原提示細胞（例えば、成熟樹状細胞、すなわちｍＤＣ）が得られる。一実施形態によれば、非接着性細胞が除去され、抗原提示細胞（すなわち、接着細胞）が、当技術分野において知られているいずれかの方法（例えば、氷冷緩衝液、例えば２５％ＨＡＳ０．５％を含むＡＣＤ－ＡおよびＤＰＢＳ緩衝液を添加し、氷上または凍結ゲルパック上で１０～６０分間、例えば３０分間インキュベートすることによる）を使用して培養プレートから剥離される。次いで、収集した抗原提示細胞を遠心分離し、洗浄し、再懸濁する（例えば、２５％ＨＡＳ０．５％およびＤＰＢＳ緩衝液を含むＡＣＤ－Ａで）。

【0186】

一実施形態によれば、抗原提示細胞（例えばｍＤＣ）に１つまたは複数の抗原を負荷する。

【0187】

本明細書で使用される場合、「負荷」という語句は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上のペプチド－ＭＨＣ複合体に提示されたＭＨＣペプチド（例えばＭＨＣクラスＩまたはＩＩ）への１つまたは複数の抗原（例えばペプチド）の付着を指す。

【0188】

本明細書で使用される場合、表現「１つまたは複数の抗原」は、免疫応答を誘導することができる可溶性または不溶性の（例えば、膜結合型の）分子を示す。

【0189】

例えば、１つまたは複数の抗原は、細胞全体（例えば、生細胞または死細胞）、細胞画分（例えば溶解細胞）、細胞抗原（例えば、細胞表面抗原）、タンパク質抽出物、精製タンパク質または合成ペプチドであり得る。

【0190】

一実施形態によれば、１つまたは複数の抗原はウイルス抗原を含む。

【0191】

一実施形態によれば、ウイルス抗原は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、またはそれ以上の異なる種類のウイルスに由来する。

【0192】

一実施形態によれば、ウイルス抗原は、１～５０、１～４０、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、２～５０、２～４０、２～３０、２～２０、２～１０、２～８、２～６、２～４、３～５０、３～４０、３～３０、３～２０、３～１０、３～９、３～７、３～５、３～４、４～５０、４～４０、４～３０、４～２０、４～１０、４～８、または４～６種類のウイルスに由来する。

【0193】

具体的な実施形態によれば、ウイルス抗原は１～２０種類のウイルスに由来する。

【0194】

具体的な実施形態によれば、ウイルス抗原は１～１０種類のウイルスに由来する。

【0195】

具体的な実施形態によれば、ウイルス抗原は１～４種類のウイルスに由来する。

【0196】

具体的な実施形態によれば、ウイルス抗原は、２～１０種類のウイルスに由来する。

【0197】

具体的な実施形態によれば、ウイルス抗原は２～４種類のウイルスに由来する。

【0198】

具体的な実施形態によれば、ウイルス抗原は４～２０種類のウイルスに由来する。

【0199】

具体的な実施形態によれば、ウイルス抗原は４～１０種類のウイルスに由来する。

【0200】

具体的な実施形態によれば、ウイルス抗原は４～８種類のウイルスに由来する。

【0201】

具体的な実施形態によれば、ウイルス抗原は４～６種類のウイルスに由来する。

【0202】

抗原を誘導する（すなわち、起源とする）ことができる例示的なウイルスとしては、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、アデノウイルス（Ａｄｖ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、風邪ウイルス、インフルエンザウイルス、Ａ型、Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルス、単純ヘルペス、ＨＩＶ、インフルエンザ、日本脳炎、麻疹、ポリオ、狂犬病、呼吸器合胞体、風疹、天然痘、水痘帯状疱疹、ロタウイルス、ウエストナイルウイルス、ポリオーマウイルス（例えば、ＢＫウイルス）、ジカウイルス、パルボウイルス（例えば、パルボウイルスＢ１９）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、ならびに重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0203】

ウイルスおよびそれらのそれぞれの抗原の特定の例としては、限定されないが、ＢＫウイルス抗原として、限定されないが、ＢＫＶ ＬＴ；ＢＫＶ（カプシドＶＰ１）、ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２）、ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２、イソプロムＶＰ３）、ＢＫＶ（スモールＴ抗原）が挙げられる；アデノウイルス抗原としては、Ａｄｖ－ペントンまたはＡｄｖ－ヘキソンが挙げられるが、これらに限定されない；ＣＭＶ抗原としては、限定されないが、エンベロープ糖タンパク質Ｂ、ＣＭＶ ＩＥ－１およびＣＭＶ ｐｐ６５、ＵＬ２８、ＵＬ３２、ＵＬ３６、ＵＬ４０、ＵＬ４８、ＵＬ５５、ＵＬ８４、ＵＬ９４、ＵＬ９９、ＵＬ１０３、ＵＬ１５１、ＵＬ１５３、ＵＳ２９、ＵＳ３２が挙げられる；ＥＢＶ抗原としては、ＥＢＶ ＬＭＰ２、ＥＢＶ ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ ＥＢＮＡ１、ＥＢＶ Ｐ１８およびＥＢＶ Ｐ２３が挙げられるが、これらに限定されない；肝炎抗原としては、限定されないが、Ｂ型肝炎ウイルスのＳ、ＭおよびＬタンパク質、Ｂ型肝炎ウイルスのプレＳ抗原、ＨＢＣＡＧ ＤＥＬＴＡ、ＨＢＶ ＨＢＥ、Ｃ型肝炎ウイルスＲＮＡ、ＨＣＶ ＮＳ３およびＨＣＶ ＮＳ４が挙げられる；単純ヘルペスウイルス抗原としては、限定されないが、前初期タンパク質および糖タンパク質Ｄが挙げられる；ＨＩＶ抗原としては、限定されないが、ＨＩＶ ｇｐ３２、ＨＩＶ ｇｐ４１、ＨＩＶ ｇｐ１２０、ＨＩＶ ｇｐ１６０、ＨＩＶ Ｐ１７／２４、ＨＩＶ Ｐ２４、ＨＩＶ Ｐ５５ ＧＡＧ、ＨＩＶ Ｐ６６ ＰＯＬ、ＨＩＶ ＴＡＴ、ＨＩＶ ＧＰ３６、Ｎｅｆタンパク質および逆転写酵素などのｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ遺伝子の遺伝子産物が挙げられる；インフルエンザ抗原としては、ヘマグルチニンおよびノイラミニダーゼが挙げられるが、これらに限定されない；日本脳炎ウイルス抗原としては、タンパク質Ｅ、Ｍ－Ｅ、Ｍ－Ｅ－ＮＳ１、ＮＳ１、ＮＳ１－ＮＳ２Ａおよび８０％Ｅが挙げられるが、これらに限定されない；はしか抗原としては、限定されないが、はしかウイルス融合タンパク質が挙げられる；狂犬病抗原としては、限定されないが、狂犬病糖タンパク質および狂犬病核タンパク質が挙げられる；呼吸器合胞体ウイルス抗原としては、ＲＳＶ融合タンパク質およびＭ２タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない；ロタウイルス抗原としては、ＶＰ７ｓｃが挙げられるが、これに限定されない；風疹抗原としては、タンパク質Ｅ１およびＥ２が挙げられるが、これらに限定されない；重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）抗原としては、Ｓ１、ＲＢＤ、ＮｕｃｌｅｃａｐｓｉｄおよびＰｌｐｒｏが挙げられるが、これらに限定されない；重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）抗原としては、Ｓ１、Ｓ２、Ｓ１＋Ｓ２ ＥＣＤ、ＲＢＤ、Ｎ抗原、Ｓ抗原およびヌクレカプシドが挙げられるが、これらに限定されない；また水痘帯状疱疹ウイルス抗原としては、ｇｐｌおよびｇｐｌｌが挙げられるが、これらに限定されない。

【0204】

一実施形態によれば、１つまたは複数の抗原はウイルスペプチド（またはそのフラグメント）を含む。

【0205】

一実施形態によれば、ウイルスペプチドは、１～５０、１～４０、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、２～５０、２～４０、２～３０、２～２０、２～１０、２～８、２～６、２～４、３～５０、３～４０、３～３０、３～２０、３～１０、３～９、３～７、３～５、３～４、４～５０、４～４０、４～３０、４～２０、４～１０、４～８、または４～６のウイルスペプチドを含む。

【0206】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、４～５０個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0207】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、４～４０個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0208】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、４～３０個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0209】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、４～２０個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0210】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、４～１０個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0211】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、４～８個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0212】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、４～６個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0213】

一実施形態によれば、ウイルスペプチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0214】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、４つのウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0215】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、５つのウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0216】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、６つのウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0217】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、８つのウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0218】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、１０個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0219】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、１５個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0220】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、２０個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0221】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、３０個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0222】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、４０個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0223】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、５０個のウイルスペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）を含む。

【0224】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、単一の生物（すなわち、１つのウイルス型から）由来のペプチドを含む。

【0225】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、２つまたはそれを超える生物（すなわち、２、３、４、５、またはそれより多いウイルス型の混合物）に由来するペプチドを含む。

【0226】

一実施形態によれば、ウイルスペプチドは、ＢＫウイルスペプチドを含む。

【0227】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）ペプチド、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ペプチド、ＢＫウイルスペプチドおよびアデノウイルス（Ａｄｖ）ペプチドのうちの少なくとも１つを含む。

【0228】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）ペプチド、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ペプチド、ＢＫウイルスペプチドおよびアデノウイルス（Ａｄｖ）ペプチドを含む。

【0229】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、ＥＢＶ－ＬＭＰ２、ＥＢＶ－ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ１、ＥＢＶ－ＢＲＡＦ１、ＥＢＶ－ＢＭＬＦ１、ＥＢＶ－ＧＰ３４０／３５０ ＥＢＮＡ２、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ３ａ、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ３ｂ、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ３ｃ、ＣＭＶ－ｐｐ６５、ＣＭＶ－ＩＥ－１、Ａｄｖ－ペントン、Ａｄｖ－ヘキソン、ＢＫＶ ＬＴ、ＢＫＶ（カプシドＶＰ１）、ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２）、ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２、イソプロムＶＰ３）およびＢＫＶ（スモールＴ抗原）のうちの少なくとも１つを含む。

【0230】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、ＡｄＶ５ Ｈｅｘｏｎ、ｈＣＭＶ ｐｐ６５、ＥＢＶ ｓｅｌｅｃｔ（後述）およびＢＫＶ ＬＴのうちの少なくとも１つを含む。

【0231】

専用のソフトウェアを使用して抗原配列を分析し、免疫原性短ペプチド、すなわち主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩに関連して提示可能なペプチドを同定することができる。

【0232】

具体的な実施形態によれば、１つまたは複数の抗原は、ＣＭＶ、ＥＢＶおよびＡｄｅｎｏ（そのようなペプミックスは、例えば、ＪＰＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ベルリン、ドイツ、から商業的に購入することができる）の３つのウイルスの全タンパク質配列に及ぶ重複ペプチドライブラリー（例えば、１１アミノ酸が重複する１５量体）であるペプミックスの混合物を含む。

【0233】

具体的な実施形態によれば、ウイルスペプチドは、「ＥＢＶ ｓｅｌｅｃｔ」、すなわちＥＢＶ由来の１３種の異なるタンパク質由来の４３種のＭＨＣクラス１およびクラス２拘束性ペプチドを含むＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃからの市販の品を含む（例えば、ＭＡＣＳ ＧＭＰ ＰｅｐＴｉｖａｔｏｒ（登録商標）ＥＢＶ Ｓｅｌｅｃｔ、例えばカタログ番号１７０－０７６－１４３）。追加的または代替的に、ウイルスペプチドは、「回収ＥＢＶ」を含み、すなわち、ＪＰＴの市販品は、１４種の異なるＥＢＶ抗原由来のペプチドを含むペプミックスを含む。追加的または代替的に、ウイルスペプチドは、ＰｅｐＭｉｘ（商標）ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ１）、ＰｅｐＭｉｘ（商標）ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２）、ＰｅｐＭｉｘ（商標）ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２、アイソフォームＶＰ３）、ＰｅｐＭｉｘ（商標）ＢＫＶ（ラージＴ抗原）、ＰｅｐＭｉｘ（商標）ＢＫＶ（スモールＴ抗原）、ＪＰＴから市販されているものを含む。

【0234】

別の具体的な実施形態によれば、１つまたは複数の抗原は、ＥＢＶ－ＬＭＰ２、ＥＢＶ－ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ１、ＣＭＶ－ｐｐ６５、ＣＭＶ－ＩＥ－１、Ａｄｖ－ペントンおよびＡｄｖ－ヘキソンにまたがる７種類のペプミックスの混合物を、例えば、１００ｎｇ／ペプチドまたは７００ｎｇ／７種類のペプチドの混合物の濃度で含むものである。

【0235】

一実施形態によれば、１つまたは複数の抗原は、典型的には免疫を含む対象、例えば移植患者に影響を及ぼす感染性生物（例えば、細菌、真菌生物）の１つまたは複数の抗原を含む。

【0236】

一実施形態によれば、抗原は、限定されないが、細菌抗原、例えば炭疽の抗原；グラム陰性桿菌、クラミジア、ジフテリア、インフルエンザ菌、ピロリ菌、マラリア、結核菌、百日咳毒素、肺炎球菌、リケッチア、ブドウ球菌、連鎖球菌および破傷風である。

【0237】

細菌抗原のさらなる特定の例として、炭疽抗原としては、限定されないが、炭疽保護抗原が挙げられる。グラム陰性桿菌抗原には、リポ多糖が含まれるが、これらに限定されない。ヘモフィルスインフルエンザ抗原としては、限定されないが、莢膜多糖類が挙げられる。ジフテリア抗原としては、限定されないが、ジフテリア毒素が挙げられる。結核菌抗原としては、限定されないが、ミコール酸、熱ショックタンパク質６５（ＨＳＰ６５）、３０ｋＤａの主要分泌タンパク質および抗原８５Ａが挙げられる。百日咳毒素抗原としては、ヘマグルチニン、ペルタクチン、ＦＩＭ２、ＦＩＭ３およびアデニル酸シクラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。肺炎球菌抗原としては、ニューモリシンおよび肺炎球菌莢膜多糖類が挙げられるが、これらに限定されない。リケッチア抗原としては、限定されないが、ｒｏｍｐＡが挙げられる。連鎖球菌抗原としては、限定されないが、Ｍタンパク質が挙げられる。および破傷風抗原としては、限定されないが、破傷風毒素が挙げられる。

【0238】

一実施形態によれば、抗原はスーパーバグ抗原（例えば多剤耐性細菌）である。スーパーバグの例としては、限定されないが、エンテロコッカス・フェシウム、クロストリジウム・ディフィシル、アシネトバクター・バウマンニ、緑膿菌および腸内細菌科（大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ．）を含む）が挙げられる。

【0239】

一実施形態によれば、抗原は真菌抗原である。真菌の例としては、カンジダ、コクシジオデス、クリプトコッカス、ヒストプラズマ、リーシュマニア、プラスモジウム、原虫、寄生虫、住血吸虫、白癬、トキソプラズマ、およびクルーズトリパノソーマが挙げられるが、これらに限定されない。

【0240】

真菌抗原のさらなる特定の例として、コクシジウム抗原としては、限定されないが、球状体抗原が挙げられる。クリプトコッカス抗原としては、限定されないが、莢膜多糖類が挙げられる。ヒストプラズマ抗原としては、限定されないが、熱ショックタンパク質６０（ＨＳＰ６０）が挙げられる。リーシュマニア抗原としては、限定されないが、ｇｐ６３およびリポホスホグリカンが挙げられる。熱帯熱マラリア原虫抗原は、限定されないが、メロゾイト表面抗原、スポロゾイト表面抗原、サーカムスポロゾイト抗原、配偶子細胞／配偶子表面抗原、原虫および他の寄生虫抗原、例えば血液段階抗原ｐｆ １５５／ＲＥＳＡを含む。住血吸虫抗原は、限定されないが、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼおよびパラミオシンが含まれる。白癬真菌抗原には、限定されないが、トリコフィチンが含まれる。トキソプラズマ抗原は、限定されないが、ＳＡＧ－１およびｐ３０が挙げられる。クルーズトリパノソーマ抗原は、限定されないが、７５～７７ｋＤａ抗原および５６ｋＤａ抗原が挙げられる。

【0241】

一実施形態によれば、１つまたは複数の抗原は、悪性疾患（例えば腫瘍抗原）に関連する抗原を含む。

【0242】

一実施形態によれば、抗原は、腫瘍細胞によって発現される抗原（またはその一部、例えば抗原エピトープ）である。一実施形態によれば、抗原（またはその一部）は、造血組織において発現されるタンパク質（例えば、白血病抗原などの造血悪性腫瘍）、または固形腫瘍において発現されるタンパク質（例えば、黒色腫、膵臓癌、肝臓癌、胃腸癌など）に由来する。

【0243】

腫瘍抗原の例には、Ａ３３、ＢＡＧＥ、Ｂｃｌ－２、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＣＲ－ＡＢＬ、β－カテニン、癌精巣抗原（ＣＴＡ、例えばＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－Ａ２／Ａ３およびＮＹ－ＥＳＯ－１）、ＣＡ１．２５、ＣＡ１９－９、ＣＡ５０、ＣＡ２７．２９（ＢＲ２７．２９）、ＣＡ１５－３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ１２３、ＣＥＡ、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳ－１、サイクリンＢ１、ＤＡＧＥ、ＥＢＮＡ、ＥＧＦＲ、ＥＬＡ２、エフリンＢ２、エストロゲン受容体、ＦＡＰ、フェリチン、葉酸結合タンパク質、ＧＡＧＥ、Ｇ２５０／ＣＡ ＩＸ、ＧＤ－２、ＧＭ２、ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、ＨＡ－１、ＨＡ－２、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＨＭ１．２４、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、ｈＴＥＲＴ、Ｋｉ－６７、ＬＲＰ、メソテリン、ムチン様癌関連抗原（ＭＣＡ）、ＭＵＣ１、ｐ５３、ＰＲ１、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＴＮ３、ＲＨＡＭＭ（ＣＤ１６８）、ＷＴ－１が含まれるが、これらに限定されない。さらなる腫瘍抗原は、Ｍｏｌｌｄｒｅｍ Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（２００６）１２：１３－１８；Ａｌａｔｒａｓｈ Ｇ．ａｎｄ Ｍｏｌｌｄｒｅｍ Ｊ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｈｅｍａｔｏｌ．（２０１１）４（１）：３７－５０；Ｒｅｎｋｖｉｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ ｌｍｍｕｎｏｌ ｌｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２００１）５０：３－１５；ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｒｕｇｇｅｎ Ｐ，Ｓｔｒｏｏｂａｎｔ Ｖ，Ｖｉｇｎｅｒｏｎ Ｎ，Ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｙｎｄｅ Ｂ．Ｐｅｐｔｉｄｅ ｄａｔａｂａｓｅ：Ｔ ｃｅｌｌ－ｄｅｆｉｎｅｄ ｔｕｍｏｒ ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎ（２０１３），ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｃａｎｃｅｒｉｍｍｕｎｉｔｙ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／ｐｅｐｔｉｄｅ／；Ｒｉｔｔｅｎｈｏｕｓｅ，Ｍａｎｄｅｒｉｎｏ，ａｎｄ Ｈａｓｓ，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（１９８５）１６（９）５５６－５６０において提供されており、これらのすべては、参照により本明細書に組み込まれる。

【0244】

一実施形態によれば、１つまたは複数の抗原は、抗原の混合物（例えば、議論されるような抗原の１つの群の抗原、例えばウイルス抗原の混合物；または抗原の異なる群からの抗原の混合物、例えばウイルス抗原と細菌抗原、ウイルス抗原と腫瘍抗原）を含む。

【0245】

一実施形態によれば、１つまたは複数の抗原は、ウイルスペプチドと腫瘍ペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）の混合物を含む。

【0246】

一実施形態によれば、１つまたは複数の抗原は、ウイルスペプチドと細菌ペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）との混合物を含む。

【0247】

一実施形態によれば、１つまたは複数の抗原は、ウイルスペプチドと真菌ペプチド（例えば、単一の処方またはいくつかの処方）の混合物を含む。

【0248】

一実施形態によれば、抗原提示細胞（例えばｍＤＣ）への１つまたは複数の抗原の負荷は、当技術分野で公知の任意の方法を用いて行うことができる。

【0249】

一実施形態によれば、ウイルスペプチドを抗原提示細胞（例えばｍＤＣ）に負荷する（例えば、提示する）ために、ウイルスペプチドを抗原提示細胞（例えばｍＤＣ）と、３７℃、５％ＣＯ_２で、３０分～３時間（例えば１時間）に共培養する。例えば、抗原提示細胞（例えばｍＤＣ）に、５％ＣＯ_２、３７℃で３０分～３時間（例えば１時間）のインキュベーションによって、ペプタイベーター（例えば、ＡｄＶ５ Ｈｅｘｏｎ、ＨＣＭＶ ｐｐ６５、ＥＢＶ ｓｅｌｅｃｔおよびＢＫＶ ＬＴ）を負荷し得る。

【0250】

インキュベーション後、ウイルスペプチドを負荷した抗原提示細胞（例えばｍＤＣ）を洗浄し、例えば２５％ＨＡＳ０．５％およびＤＰＢＳ緩衝液を含むＡＣＤ－Ａで遠心分離し、細胞増殖培地（例えばＴ細胞増殖培地）に再懸濁する。

【0251】

一実施形態によれば、１つまたは複数の抗原（例えばウイルスペプチド）負荷抗原提示細胞（例えばｍＤＣ）は、Ｘ線源を介して照射される。したがって、一実施形態によれば、負荷された抗原提示細胞（例えばｍＤＣ）は、１～５Ｇｙ、約５～１０Ｇｙ、約１０～２０Ｇｙ、約１０～３０Ｇｙ、約１０～４０Ｇｙ、約１０～５０Ｇｙ、約２０～３０Ｇｙ、約２０～４０Ｇｙ、約２０～５０Ｇｙで照射される。具体的な実施形態によれば、ＤＣは、約１０～４０Ｇｙ（例えば２５～３０Ｇｙ、例えば３０Ｇｙ）で照射される。

【0252】

照射が完了すると、負荷された抗原提示細胞（例えば、ウイルスペプチド負荷ｍＤＣを洗浄し、遠心分離し、細胞増殖培地（例えばＴ細胞増殖培地）に再懸濁する。

【0253】

次いで、抗原負荷抗原提示細胞（例えばｍＤＣ）は、本発明のいくつかの実施形態によるメモリーＣＤ８ Ｔ細胞を含む細胞の集団からのＴｃｍ細胞の生成に使用する準備が整う。

【0254】

具体的な実施形態によれば、抗原提示細胞は樹状細胞（ＤＣ）を含む。

【0255】

具体的な実施形態によれば、抗原提示細胞は、成熟樹状細胞（ｍＤＣ）を含む。

【0256】

具体的な実施形態によれば、抗原提示細胞の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％または１００％が成熟樹状細胞（ｍＤＣ）を含む。

【0257】

具体的な実施形態によれば、抗原提示細胞は、照射された樹状細胞を含む。

【0258】

一実施形態によれば、抗原提示細胞は、（下記で論じられるように）細胞の集団と同じドナー対象のものである。

【0259】

細胞は、単一細胞の抗原のすべてを発現し得るか、または単一細胞に抗原の一部のみを発現し得ることが理解されよう。さらに、異なる抗原提示細胞（例えば、同じ調製物中で）は、異なる抗原を発現し得る。したがって、抗原提示細胞（例えば、ｍＤＣ）は、不均一な細胞混合物を含む。

【0260】

本発明のいくつかの実施形態によれば、１つまたは複数の抗原（例えばウイルスペプチド）は、メモリーＣＤ８Ｔ細胞（例えば、１つまたは複数の抗原をトランスフェクトした細胞株）によって認識可能なＭＨＣ抗原（ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）とも呼ばれる）を示す遺伝子組換え抗原提示細胞または人工抗原提示細胞によって提示され得る。追加的または代替的に、本発明のいくつかの実施形態の１つまたは複数の抗原（例えばウイルスペプチド）は、人工ビヒクル（例えばリポソーム）に提示することができる。

【0261】

したがって、抗原提示細胞（上記のような）、細胞株、人工ビヒクル（リポソームなど）または人工抗原提示細胞（例えば、１つまたは複数の抗原をトランスフェクトした白血病細胞株または線維芽細胞株）を使用して、それに融合もしくは負荷された短い合成ペプチドを提示するか、またはタンパク質抽出物もしくは精製タンパク質を提示することができる。そのような短いペプチド、タンパク質抽出物または精製タンパク質は、ウイルス、細菌、真菌または腫瘍抗原由来のペプチド、または任意の他の抗原を表すペプチドであり得る。

【0262】

上述のように、本発明のいくつかの実施形態の方法は、Ｔ細胞を含む細胞の集団を提供することによって影響され、細胞の集団のＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ８^＋表現型を発現し、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋発現細胞を枯渇させた少なくとも４０％のメモリーＴ細胞を含む。

【0263】

「Ｔ細胞を含む細胞の集団」という用語は、Ｔ細胞、Ｂ細胞および骨髄系細胞を含むＰＢＭＣの不均一な混合物を指す。Ｔ細胞を含む細胞の集団は、典型的には、多数のシグネチャ、機能を有し、様々な抗原（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、エフェクターＴ細胞など）に結合することができるＴ細胞を含む。

【0264】

一実施形態によれば、Ｔ細胞を含む細胞の集団は、赤血球および顆粒球を含まない。

【0265】

本明細書で使用される「メモリーＴ細胞」という用語は、抗原経験Ｔ細胞とも呼ばれる、抗原に以前に遭遇し、それに応答したＴリンパ球のサブセットを指す。

【0266】

一実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、細胞の集団のＴ細胞の少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、またはさらに１００％を構成する。

【0267】

正常条件下（すなわち、健康な対象において決定されるように）では、メモリーＴ細胞のレベルは、Ｔ細胞を含む細胞の集団の細胞の総数の２０％未満を含むことが理解されよう。

【0268】

一実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８マーカー（すなわち、ＣＤ８^＋Ｔ細胞）を発現するＴ細胞を含む。

【0269】

別の実施形態によれば、メモリーＴ細胞はＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋表現型を含む。

【0270】

別の実施形態によれば、メモリーＴ細胞はＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^－表現型を含む。

【0271】

別の実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＤ４５ＲＡ^－表現型を含む。

【0272】

一実施形態によれば、メモリーＴ細胞はＣＤ４５ＲＡ^＋細胞を欠いている。

【0273】

一実施形態によれば、メモリーＴ細胞はＣＤ４^＋および／またはＣＤ５６^＋細胞を欠いている。

【0274】

メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞の選択は、ＣＤ８^＋およびＣＤ４５ＲＡ^－を共発現する細胞および／またはＣＤ８^＋およびＣＤ４５ＲＯ^＋を共発現する細胞の選択によって影響され得、当技術分野で公知の任意の方法を使用して、例えば、アフィニティーベースの精製（例えば、ＭＡＣＳビーズ、ＦＡＣＳソーターおよび／または捕捉ＥＬＩＳＡ標識の使用などによる）によって行われ得る。

【0275】

メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞の選択は、エフェクターＴ細胞およびセントラルメモリーＴ細胞の選択によってさらに影響され得、セントラルメモリーＴ細胞は、例えば、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２７および／またはＣＤ２８を発現する。

【0276】

Ｔ細胞の集団が高純度のメモリーＴ細胞（例えば、少なくとも約３０～５０％のメモリーＴ細胞、例えば４０％のメモリーＴ細胞）を含む細胞の集団を得るために、またはメモリーＴ細胞の数を増加させるために、ＰＢＭＣは、ナイーブ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ^＋細胞、ＣＤ４^＋細胞（例えば、Ｔヘルパー細胞）、ＣＤ５６^＋細胞（例えばＮＫ細胞）、またはメモリーＴ細胞表現型を含まない任意の他の細胞が枯渇し得る。

【0277】

ナイーブＴ細胞（例えばＣＤ４５ＲＡ^＋細胞を発現する）、ＣＤ４^＋および／またはＣＤ５６^＋細胞の枯渇は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して、例えば親和性に基づく精製（例えば、ＭＡＣＳビーズ、ＦＡＣＳソーターおよび／または捕捉ＥＬＩＳＡ標識の使用などによる）によって行われ得る。

【0278】

一実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から得られる。

【0279】

一実施形態によれば、メモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ８^＋表現型を発現する少なくとも４０％のメモリーＴ細胞を含む細胞の集団を得るために、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋発現細胞を枯渇させることができる１つまたは複数の作用物質で第１のＰＢＭＣの集団と同じドナー対象の第２のＰＢＭＣの集団を処理することを含む方法によって得られる。

【0280】

一実施形態によれば、細胞の集団は、Ｂ細胞および骨髄系細胞をさらに含む。

【0281】

一実施形態によれば、第１の細胞の集団から収集されたＣＤ１４^－細胞は、メモリーＴ細胞の富化の前に第２の細胞の集団と組み合わされる。

【0282】

一実施形態によれば、メモリーＴ細胞の富化の前に、第１の細胞の集団から得られたＣＤ１４^－細胞および／または第２の細胞の集団から得られたＰＢＭＣを遠心分離し、細胞増殖培地、例えばＴ細胞増殖培地（例えば、１：１００ Ｇｌｕｔａｍａｘｅおよび５％ヒトＡＢ血清を補充した高度ＲＰＭＩ１６４０を含むクリック培地）中に、ＩＬ－７（３０ＩＵ／ｍＬ）と共に、例えば１０－５０×１０^６細胞／ｍｌ、例えば３０×１０^６細胞／ｍｌの濃度で再懸濁する。一実施形態によれば、細胞増殖培地には、ＩＬ－７（例えば１～１００ＩＵ／ｍＬ、例えば３０ＩＵ／ｍＬの濃度で）が補充される。次いで、細胞懸濁液を播種し（例えば組織培養フラスコ内で）、３７℃、５％のＣＯ_２で１２～３６時間、例えば１６～２４時間、例えば２４時間インキュベートする。

【0283】

一実施形態によれば、第２のＰＢＭＣの集団を遠心分離し、緩衝液（例えば、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）／０．５％ＨＳＡ緩衝液）中に最小１：２の比まで再懸濁する。

【0284】

一実施形態によれば、第２のＰＢＭＣの集団を血小板洗浄し（例えば、血栓の洗浄）、遠心分離し、緩衝液（例えば、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）／０．５％ＨＳＡ緩衝液）に再懸濁する。

【0285】

一実施形態によれば、一実施形態の血小板除去後細胞調製物をＩＶＩｇで５～３０分間、例えば１０～１５分間インキュベートする。最初のインキュベーションの後、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋結合剤を細胞調製物に添加し、オービタルロテータにて例えば１０～６０分間、例えば３０分間インキュベートする。

【0286】

一実施形態によれば、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋および／またはＣＤ４５ＲＡ^＋結合剤は抗体である。

【0287】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋、および／またはＣＤ４５ＲＡ^＋結合剤はモノクローナル抗体である。

【0288】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ４^＋モノクローナル抗体、ＣＤ５６^＋モノクローナル抗体、および／またはＣＤ４５ＲＡ^＋モノクローナル抗体が磁性粒子にコンジュゲートされる。

【0289】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋および／またはＣＤ４５ＲＡ^＋モノクローナル抗体は、超常磁性粒子にコンジュゲートされる。

【0290】

一実施形態によれば、インキュベーションの最後に、細胞を遠心分離によって洗浄し、細胞ペレットを緩衝液（例えば、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）／０．５％ＨＳＡ緩衝液）に再懸濁して過剰な試薬を除去する。

【0291】

一実施形態によれば、ＣＤ４^＋／ＣＤ５６^＋／ＣＤ４５ＲＡ^＋標識細胞は、磁気分離技術（本明細書にて上で詳しく論じられているように）によって選択される。

【0292】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ４^＋／ＣＤ５６^＋／ＣＤ４５ＲＡ^＋標識細胞は、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）カラムで処理される。

【0293】

一実施形態によれば、ＣＤ４^＋／ＣＤ５６^＋／ＣＤ４５ＲＡ^＋磁気標識細胞（すなわち、ＣＤ４^＋／ＣＤ５６^＋／ＣＤ４５ＲＡ^＋発現細胞）を分離カラム（すなわち、陰性の選択）によって保持し、ＣＤ４^－／ＣＤ５６^－／ＣＤ４５ＲＡ^－細胞を回収する。一実施形態によれば、収集された細胞が洗浄され、Ｔ細胞増殖培地に再懸濁される。一実施形態によれば、細胞数、生存率および／または免疫表現型検査のために、各画分からの試料を除去する。

【0294】

一実施形態によれば、回収されたＣＤ４^－／ＣＤ５６^－／ＣＤ４５ＲＡ^－細胞画分は、サイトカインおよび増殖因子を補充したＴ細胞増殖培地中で０．０１～１０×１０^６細胞／ｍｌ、例えば２×１０^６細胞／ｍｌに調整される。使用されるサイトカインおよび成長因子の決定は、当業者の技術の範囲内である。例えば、Ｔ細胞増殖培地にＩＬ－７（例えば１～１００ＩＵ／ｍＬ、例えば３０ＩＵ／ｍＬの濃度で）を補充する。次いで、細胞懸濁液を播種し（例えば、Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）１００）、３７℃、５％のＣＯ_２で１２～３６時間、例えば１６～２４時間、例えば２４時間インキュベートする。

【0295】

抗原（例えばウイルス抗原）活性化によってメモリーＴ細胞プールからアロ反応性クローンを枯渇させるために、メモリーＴ細胞を抗原性ペプチド、例えばウイルスペプチドと接触させる。

【0296】

典型的には、本発明のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、メモリーＴ細胞を含む細胞の集団を、ＩＬ－２１（例えば、他の点ではサイトカインを含まない培養において、すなわち、いかなる追加のサイトカインも添加せず）を補充した培養物中で抗原性ペプチド、例えばウイルスペプチド（上記のような）が負荷された抗原提示細胞と接触させることによって作製される。この工程は、典型的には、約１２～２４時間、約１２～３６時間、約１２～７２時間、１２～９６時間、１２～１２０時間、約２４～３６時間、約２４～４８時間、約２４～７２時間、約３６～４８時間、約３６～７２時間、約４８～７２時間、約４８～９６時間、約４８～１２０時間、０．５～１日、０．５～２日、０．５～３日、０．５～５日、１～２日、１～３日、１～５日、１～７日、１～１０日、２～３日、２～４日、２～５日、２～６日、２～８日、３～４日、３～５日、３～７日、４～５日、４～８日、５～７日、６～８日、または８～１０日行われ、抗原（例えばウイルス抗原）反応性細胞の富化を可能にする。

【0297】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ４^＋細胞、ＣＤ５６^＋細胞およびＣＤ４５ＲＡ^＋細胞が枯渇され、かつ、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞（例えば、Ｔ細胞を含む細胞の集団であって、細胞の集団のＴ細胞が少なくとも４０％のメモリーＴ細胞を含む）を含むＰＢＭＣの集団を、ＩＬ－２１が補充される培養物（そうでなければ、サイトカインを含まない培養物）において１つまたは複数の抗原（例えば、上で記載されるような）と接触させることが、１２時間～６日間（例えば３日）にわたって実行される。

【0298】

ＩＬ－２１を補充した培養物中でメモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む細胞の集団と１つまたは複数の抗原（上記のような）とを接触させることは、典型的には、約０．００１～３０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１～３０００ＩＵ／ｍｌ、０．１～３０００ＩＵ／ｍｌ、１～３０００ＩＵ／ｍｌ、１０～３０００ＩＵ／ｍｌ、１００～３０００ＩＵ／ｍｌ、１０００～３０００ＩＵ／ｍｌ、０．００１～１０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１～１０００ＩＵ／ｍｌ、０．１～１０００ＩＵ／ｍｌ、１～１０００ＩＵ／ｍｌ、１０～１０００ＩＵ／ｍｌ、１００～１０００ＩＵ／ｍｌ、２５０～１０００ＩＵ／ｍｌ、５００～１０００ＩＵ／ｍｌ、７５０～１０００ＩＵ／ｍｌ、１０～５００ＩＵ／ｍｌ、５０～５００ＩＵ／ｍｌ、１００～５００ＩＵ／ｍｌ、２５０～５００ＩＵ／ｍｌ、１００～２５０ＩＵ／ｍｌ、０．１～１００ＩＵ／ｍｌ、１～１００ＩＵ／ｍｌ、１０～１００ＩＵ／ｍｌ、３０～１００ＩＵ／ｍｌ、５０～１００ＩＵ／ｍｌ、１～５０ＩＵ／ｍｌ、１０～５０ＩＵ／ｍｌ、２０～５０ＩＵ／ｍｌ、３０～５０ＩＵ／ｍｌ、１～３０ＩＵ／ｍｌ、１０～３０ＩＵ／ｍｌ、２０～３０ＩＵ／ｍｌ、１０～２０ＩＵ／ｍｌ、０．１～１０ＩＵ／ｍｌ、または～１０ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２１の存在下で行われる。具体的な実施形態によれば、ＩＬ－２１の濃度は５０～５００ＩＵ／ｍｌ（例えば１００ＩＵ／ｍｌ）である。

【0299】

具体的な実施形態によれば、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む細胞の集団を、１つまたは複数の抗原と接触させることは、サイトカインを含まない培養（例えば、ＩＬ－２１のみが補充される）において影響を受け、そのような培養条件は、１つまたは複数の抗原による刺激および活性化を受ける細胞（すなわち、抗原反応性細胞、例えばウイルス反応性メモリーＴ細胞）のみの生存および富化を可能にする。なぜなら、これらの細胞は、それらの生存を可能にするサイトカイン（例えばＩＬ－２）を分泌するからである（残りの細胞はすべて、これらの培養条件下で死ぬ）。

【0300】

一実施形態によれば、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞（すなわち、ＣＤ４^－ＣＤ５６^－ＣＤ４５ＲＡ^－細胞）を含む細胞の集団と抗原性（例えばウイルス）ペプチド負荷抗原提示細胞（例えばｍＤＣ）との比は、典型的には約２：１～約１０：１、例えば約２：１、約３：１、約４：１、約５：１、約６：１、約８：１、または約１０：１である。具体的な実施形態によれば、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞（すなわち、ＣＤ４^－ＣＤ５６^－ＣＤ４５ＲＡ^－細胞）を含む細胞の集団の、抗原性（例えばウイルス）ペプチド負荷抗原提示細胞（例えばｍＤＣ）に対する比は、約２：１～８：１、例えば、約５：１である。

【0301】

具体的な実施形態によれば、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞（すなわち、ＣＤ４^－ＣＤ５６^－ＣＤ４５ＲＡ^－細胞）を含む細胞の集団を、ウイルスペプチド負荷抗原提示細胞（例えばｍＤＣ）と一緒に、約２：１～約８：１の比、例えば約５：１（メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞：抗原提示細胞（例えば、ｍＤＣ））で、ＩＬ－２１（例えば、５０～５００ＩＵ／ｍｌ、例えば１００ＩＵ／ｍｌの濃度で）と共に、Ｔ細胞増殖培地中に、３７℃、５％ＣＯ_２で１～５日間（例えば３日）にわたって、０．０１～１０×１０^６細胞／ｍｌ、例えば１×１０^６細胞／ｍｌの濃度で、播種する（例えば、Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）１００）。

【0302】

次に、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞（すなわち、ＩＬ－２１との培養後）を含む得られた細胞の集団を、Ｔｃｍ表現型を含む細胞の増殖を可能にするように、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、および／またはＩＬ－７の存在下で培養する。この工程は、典型的には、約１２～２４時間、約１２～３６時間、約１２～７２時間、約１２～９６時間、約１２～１２０時間、約１２～２４０時間、２４～３６時間、２４～４８時間、約２４～７２時間、２４～９６時間、２４～１２０時間、２４～２４０時間、約４８～７２時間、約４８～１２０時間、約４８～２４０時間、約９６～２４０時間、約１２０～１４４時間、約１２０～２４０時間、約１４４～２４０時間、０．５～１日、０．５～２日、０．５～３日、０．５～５日、０．５～１０日、１～２日、１～３日、１～４日、１～６日、１～８日、１～９日、１～１０日、２～３日、２～４日、２～５日、２～６日、２～８日、２～９日、２～１０日、４～５日、４～６日、４～８日、４～９日、４～１０日、５～６日、５～７日、５～８日、５～９日、５～１０日、５～１５日、６～７日、６～８日、６～９日、６～１０日、６～１２日、７～８日、７～９日、７～１１日、７～１３日、７～１５日、８～９日、８～１０日、９～１０日、９～１２日、９～１５日、１０～１２日、１０～１５日、１２～１５日、１４～１６日、１４～１８日、１６～１８日、または１８～２０日実行される。具体的な実施形態によれば、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞（すなわち、ＩＬ－２１との培養後）を含む得られた細胞の集団を、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５およびＩＬ－７の存在下において約６日間～１２日間（例えば９日）培養する。

【0303】

この工程は、典型的には、ＩＬ－２１の存在下、約０．００１～３０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１～３０００ＩＵ／ｍｌ、０．１～３０００ＩＵ／ｍｌ、１～３０００ＩＵ／ｍｌ、１０～３０００ＩＵ／ｍｌ、１００～３０００ＩＵ／ｍｌ、１０００～３０００ＩＵ／ｍｌ、０．００１～１０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１～１０００ＩＵ／ｍｌ、０．１～１０００ＩＵ／ｍｌ、１～１０００ＩＵ／ｍｌ、１０～１０００ＩＵ／ｍｌ、１００～１０００ＩＵ／ｍｌ、２５０～１０００ＩＵ／ｍｌ、５００～１０００ＩＵ／ｍｌ、７５０～１０００ＩＵ／ｍｌ、１０～５００ＩＵ／ｍｌ、５０～５００ＩＵ／ｍｌ、１００～５００ＩＵ／ｍｌ、２５０～５００ＩＵ／ｍｌ、１００～２５０ＩＵ／ｍｌ、０．１～１００ＩＵ／ｍｌ、１～１００ＩＵ／ｍｌ、１０～１００ＩＵ／ｍｌ、３０～１００ＩＵ／ｍｌ、５０～１００ＩＵ／ｍｌ、１～５０ＩＵ／ｍｌ、１０～５０ＩＵ／ｍｌ、２０～５０ＩＵ／ｍｌ、３０～５０ＩＵ／ｍｌ、１～３０ＩＵ／ｍｌ、１０～３０ＩＵ／ｍｌ、２０～３０ＩＵ／ｍｌ、１０～２０ＩＵ／ｍｌ、０．１～１０ＩＵ／ｍｌ、または１～１０ＩＵ／ｍｌのＩＬー２１の濃度で行われる。具体的な実施形態によれば、ＩＬ－２１の濃度は５０～５００ＩＵ／ｍｌ（例えば１００ＩＵ／ｍｌ）である。

【0304】

この工程は、さらに、ＩＬ－１５の存在下、約０．００１～３０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１～３０００ＩＵ／ｍｌ、０．１～３０００ＩＵ／ｍｌ、１～３０００ＩＵ／ｍｌ、１０～３０００ＩＵ／ｍｌ、１００～３０００ＩＵ／ｍｌ、１２５～３０００ＩＵ／ｍｌ、１０００～３０００ＩＵ／ｍｌ、０．００１～１０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１～１０００ＩＵ／ｍｌ、０．１～１０００ＩＵ／ｍｌ、１～１０００ＩＵ／ｍｌ、１０～１０００ＩＵ／ｍｌ、１００～１０００ＩＵ／ｍｌ、１２５～１０００ＩＵ／ｍｌ、２５０～１０００ＩＵ／ｍｌ、５００～１０００ＩＵ／ｍｌ、７５０～１０００ＩＵ／ｍｌ、１０～５００ＩＵ／ｍｌ、５０～５００ＩＵ／ｍｌ、１００～５００ＩＵ／ｍｌ、１２５～５００ＩＵ／ｍｌ、２５０～５００ＩＵ／ｍｌ、２５０～５００ＩＵ／ｍｌ、１２５～２５０ＩＵ／ｍｌ、１００～２５０ＩＵ／ｍｌ、０．１～１００ＩＵ／ｍｌ、１～１００ＩＵ／ｍｌ、１０～１００ＩＵ／ｍｌ、３０～１００ＩＵ／ｍｌ、５０～１００ＩＵ／ｍｌ、１～５０ＩＵ／ｍｌ、１０～５０ＩＵ／ｍｌ、２０～５０ＩＵ／ｍｌ、３０～５０ＩＵ／ｍｌ、１～３０ＩＵ／ｍｌ、１０～３０ＩＵ／ｍｌ、２０～３０ＩＵ／ｍｌ、１０～２０ＩＵ／ｍｌ、０．１～１０ＩＵ／ｍｌ、または１～１０ＩＵ／ｍｌのＩＬー１５の濃度で行われる。具体的な実施形態によれば、ＩＬ－１５の濃度は５０～５００ＩＵ／ｍｌ（例えば１２５ＩＵ／ｍｌ）である。

【0305】

この工程は、さらに、ＩＬ－７の存在下、約０．００１～３０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１～３０００ＩＵ／ｍｌ、０．１～３０００ＩＵ／ｍｌ、１～３０００ＩＵ／ｍｌ、１０～３０００ＩＵ／ｍｌ、３０～３０００ＩＵ／ｍｌ、１００～３０００ＩＵ／ｍｌ、１０００～３０００ＩＵ／ｍｌ、０．００１～１０００ＩＵ／ｍｌ、０．０１～１０００ＩＵ／ｍｌ、０．１～１０００ＩＵ／ｍｌ、１～１０００ＩＵ／ｍｌ、１０～１０００ＩＵ／ｍｌ、３０～１０００ＩＵ／ｍｌ、１００～１０００ＩＵ／ｍｌ、２５０～１０００ＩＵ／ｍｌ、５００～１０００ＩＵ／ｍｌ、７５０～１０００ＩＵ／ｍｌ、１０～５００ＩＵ／ｍｌ、３０～５００ＩＵ／ｍｌ、５０～５００ＩＵ／ｍｌ、１００～５００ＩＵ／ｍｌ、２５０～５００ＩＵ／ｍｌ、２５０～５００ＩＵ／ｍｌ、１００～２５０ＩＵ／ｍｌ、０．１～１００ＩＵ／ｍｌ、１～１００ＩＵ／ｍｌ、１０～１００ＩＵ／ｍｌ、３０～１００ＩＵ／ｍｌ、５０～１００ＩＵ／ｍｌ、１～５０ＩＵ／ｍｌ、１０～５０ＩＵ／ｍｌ、２０～５０ＩＵ／ｍｌ、３０～５０ＩＵ／ｍｌ、１～３０ＩＵ／ｍｌ、１０～３０ＩＵ／ｍｌ、２０～３０ＩＵ／ｍｌ、１０～２０ＩＵ／ｍｌ、０．１～１０ＩＵ／ｍｌ、または１～１０ＩＵ／ｍｌのＩＬー７の濃度で行われる。具体的な実施形態によれば、ＩＬ－７の濃度は１～１００ＩＵ／ｍｌ（３０ＩＵ／ｍｌ）である。

【0306】

具体的な実施形態によれば、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む得られた細胞の集団を含む細胞培養物（すなわち、ＩＬ－２１との培養後）に、ＩＬ－７（例えば、例えば１～１００ＩＵ／ｍｌ、例えば３０ＩＵ／ｍＬの濃度で）、ＩＬ－１５（例えば、例えば５０～５００ＩＵ／ｍｌ、例えば１２５ＩＵ／ｍＬの濃度で）およびＩＬ－２１（例えば、５０～５００ＩＵ／ｍｌ、例えば１００ＩＵ／ｍＬの濃度で）を培養体積の５０％で補充し、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１を、約４８時間～９６時間ごとに、例えば４８時間ごとに、例えば７２時間ごとに補充しながら、約６～１２日間（例えば９日）培養する。

【0307】

一実施形態によれば、Ｔｃｍ細胞を作製するための培養時間の全長は、約９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１７、１９、または２１日（例えば１２日）である。

【0308】

一実施形態によれば、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む得られた細胞の集団を含む細胞培養物（すなわち、ＩＬ－２１との培養後）が、グルコースレベルについてモニターされる。

【0309】

一実施形態によれば、グルコースは、１０～５００ｍｇ／ｄｌ、例えば５０～１７０ｍｇ／ｄｌを含むレベルである。

【0310】

一実施形態によれば、グルコースレベルが１７０ｍｇ／ｄＬ～１３０ｍｇ／ｄＬの間である場合、サイトカインＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１を培養物に添加する（上で詳述したように）。

【0311】

一実施形態によれば、グルコースレベルが１２９ｍｇ／ｄＬ～１００ｍｇ／ｄＬの間である場合、新鮮なＴ細胞増殖培地、例えば２５％容量、例えば１００ｍｌ（例えば、４００ｍｌのＧ－Ｒｅｘ（登録商標）１００体積の２５％）＋サイトカインＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１を、培養物に添加する。

【0312】

一実施形態によれば、グルコースレベルが９９ｍｇ／ｄＬ～５０ｍｇ／ｄＬの間である場合、新鮮なＴ細胞増殖培地、例えば５０％容量、例えば２００ｍｌ（例えば、４００ｍｌのＧ－Ｒｅｘ（登録商標）１００体積の５０％）＋サイトカインＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１を、培養物に添加する。

【0313】

一実施形態によれば、培養は、少なくとも約２０ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約３０ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約４０ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約５０ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約６０ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約７０ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約８０ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約９０ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約１００ｍｇ／ｄｌの濃度までグルコースを添加することをさらに含む。

【0314】

具体的な実施形態によれば、培養は、グルコースを少なくとも約５０ｍｇ／ｄｌの濃度まで添加することをさらに含む。

【0315】

一実施形態によれば、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む得られた細胞の集団を含む細胞培養物（すなわち、ＩＬ－２１との培養後）が、ｐＨレベルについてモニターされる。一実施形態によれば、ｐＨは生理学的範囲（例えば、ｐＨ７．２～７．６）にある。ｐＨレベルが生理学的範囲にない場合、ｐＨレベルは、当技術分野で公知の任意の方法を使用して調整することができる。

【0316】

本発明の一実施形態によれば、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む非移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）誘導細胞の単離された集団を作製する方法であって、細胞が、寛容誘導細胞であり、かつ／または抗疾患活性を付与され、かつ移植後にリンパ節へホーミングすることができる方法が提供され、方法は、
（ａ）ドナー対象由来の第１の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団を、ＣＤ１４^＋発現細胞を選択することができる抗体と接触させ、樹状細胞に成熟することができるＣＤ１４^＋発現細胞を選択すること、
（ｂ）樹状細胞に、４～１０種類のウイルスに由来するウイルスペプチドを負荷することであって、ウイルスの少なくとも１つがＢＫウイルスを含む負荷すること、
（ｃ）ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ８^＋表現型を発現するメモリーＴ細胞を含む細胞の集団を得るために、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋発現細胞を枯渇させることができる１つまたは複数の作用物質で第１のＰＢＭＣの集団と同じドナー対象の第２のＰＢＭＣの集団を処置すること、
（ｄ）ウイルス反応性メモリーＴ細胞の富化を可能にするために、ＩＬ－２１の存在下で、メモリーＴ細胞を含む細胞の集団を工程（ｂ）のウイルスペプチドが負荷された樹状細胞と接触させること、および
（ｅ）Ｔｃｍ表現型を含む細胞の増殖を可能にするように、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７の存在下で工程（ｄ）から得られた細胞を培養し、それにより、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を作製することを含む。

【0317】

一実施形態によれば、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む得られた細胞の集団（すなわち、ＩＬ－２１との培養後）をＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－７の存在下で培養することは、典型的には、抗原を含まない環境（すなわち、１つまたは複数の抗原、例えばウイルスペプチドを添加せずに）において影響を受ける。しかしながら、残存する１つまたは複数の抗原（例えばウイルスペプチド）が、ＩＬ－２１とともに培養した後の細胞培養物中に存在することができ（すなわち、例えば、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５およびＩＬ－７の添加を含むＴｃｍ増殖工程において）、したがって、抗原を含まない環境は、１つまたは複数の抗原を提示する補助的な抗原提示細胞を加えない細胞培養物に関連する（例えばウイルスペプチド）ことを理解されたい。

【0318】

一実施形態によれば、１つまたは複数の抗原に特異的なメモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞を得るために、１つまたは複数の抗原（例えば、腫瘍抗原、ウイルス抗原）をドナー対象に投与した後、そこからメモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞を得る（例えば、少なくとも４０％のメモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞を含むＴ細胞の集団を提供する前に）。免疫原性応答（例えば、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞の生成）を誘発するために抗原に対して細胞ドナーを免疫する任意の方法を使用することができる。

【0319】

抗原は、そのままで、またはアジュバント（例えば、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）または不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ））を含む組成物の一部として投与され得る。一実施形態によれば、抗原は、ドナー対象に１回投与される。一実施形態によれば、ドナー対象は、抗原の少なくとも１回（例えば、２、３、４回またはそれを超える投与）のさらなる（例えば、ブースト）投与を受ける。そのようなさらなる投与は、抗原の最初の投与の１、３、５、７、１０、１２、１４、２１、３０日またはそれより後に影響を受け得る。

【0320】

メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞を特定の抗原に対してさらに富化し、メモリーＴ細胞のプールからアロ反応性クローンを枯渇させるために、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む細胞の集団を、本明細書の上で記載されるように、同じ１つまたは複数の抗原（例えば、細胞ドナーに投与されるのと同じ抗原）とさらに接触させることができる。

【0321】

細胞サンプルおよび培養培地サンプルは、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団を作製するプロセスの間の任意の段階で得ることができることが理解されるであろう。これらは、細胞数、細胞生存率、無菌性、免疫表現型検査、グルコースおよびｐＨレベルなどを評価するために使用することができる。当技術分野で公知の任意の方法を使用して、そのような処置を実施することができる。

【0322】

一実施形態によれば、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団であって、本発明のいくつかの実施形態の方法に従って作製され、細胞が寛容誘導細胞であり、かつ／または抗疾患活性を付与され、移植後にリンパ節へホーミングすることができる集団が提供される。

【0323】

Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導の生成後、細胞は、新鮮な細胞（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０日以内、例えば、約３日以内）として使用され得る。

【0324】

あるいは、必要になるまで（例えば、１週間、２週間、１ヶ月、２ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、１年以上）細胞を凍結保存してもよい。

【0325】

一実施形態によれば、本発明のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、天然に存在せず、天然の産物ではない。これらの細胞は、典型的には、エクスビボ操作（すなわち、特定のサイトカインの存在下での１つまたは複数の抗原への曝露）によって産生される。

【0326】

上記のプロトコルは、典型的には、非同系適用のために使用され、したがって、使用されるメモリーＴ細胞またはＰＢＭＣを含む細胞の集団は、典型的には、レシピエント対象（例えば、同種異系ドナーからの）に関して同種異系である。同様に、異種適用が有益であり得る場合、使用されるメモリーＴ細胞またはＰＢＭＣは、後述するように異種起源のものであり得る。しかしながら、同系適用が有益であり得る場合、使用されるメモリーＴ細胞またはＰＢＭＣを含む細胞の集団は、レシピエント対象（例えば、対象から）に関して自己であり得る。そのような決定は、特に提供される開示を考慮して、十分に当業者の能力の範囲内である。

【0327】

したがって、述べられたように、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞またはＰＢＭＣを含む細胞の集団は、対象に関して同系または非同系であり得る。

【0328】

本明細書で使用される場合、「同系」細胞という用語は、対象または対象の本質的にすべてのリンパ球と本質的に遺伝的に同一である細胞を指す。同系細胞の例としては、対象に由来する細胞（当技術分野では「自己」とも呼ばれる）、対象のクローンに由来する細胞、または対象の一卵性双生児に由来する細胞が挙げられる。

【0329】

本明細書で使用される場合、「非同系」細胞という用語は、同種細胞または異種細胞など、対象または対象の本質的にすべてのリンパ球と本質的に遺伝的に同一ではない細胞を指す。

【0330】

本明細書で使用される場合、「同種異系」という用語は、レシピエント対象と同じ種であるがレシピエント対象と実質的に非クローン性であるドナー対象に由来する細胞を指す。典型的には、同じ種の非近交系の非接合性双生児哺乳動物は、互いに同種異系である。同種異系細胞は、レシピエント対象に対してＨＬＡ同一、部分的ＨＬＡ同一またはＨＬＡ非同一（すなわち、１つまたはそれを超える異種ＨＬＡ決定基を示す）であり得ることが理解されるであろう。

【0331】

一実施形態によれば、ドナーはヒトである。

【0332】

本明細書で使用される場合、「異種」という用語は、対象のリンパ球のかなりの割合の種とは異なる種の抗原を実質的に発現する細胞を指す。典型的には、異なる種の非近交系哺乳動物は互いに異種である。

【0333】

本発明は、異種細胞が様々な種に由来することを想定する。したがって、一実施形態によれば、細胞は、任意の哺乳動物に由来し得る。細胞にとって適した種の起源は、主要な飼育動物または家畜動物および霊長類を含む。そのような動物には、ブタ属（例えば、ブタ）、ウシ属（例えば、牛）、ウマ属（例えば、ウマ）、ヒツジ属（例えば、ヤギ、ヒツジ）、ネコ（例えば、Ｆｅｌｉｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）、イヌ（例えば、Ｃａｎｉｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、スナネズミ、ハムスター）および霊長類（例えば、チンパンジー、アカゲザル、マカクサル、マーモセット）が含まれるが、これらに限定されない。異種起源の細胞（例えば、ブタ属起源）は、好ましくは、ブタ内因性レトロウイルスなどの人畜共通感染症を含まないことが知られている供給源から得られる。同様に、ヒト由来の細胞または組織は、好ましくは、実質的に病原体を含まない供給源から得られる。

【0334】

したがって、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞またはＰＢＭＣを含む細胞の集団の供給源は、細胞の意図される用途に関して決定され（本明細書で下記のさらなる詳細を参照のこと）、特に本明細書に提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。

【0335】

ベト細胞の使用は、移植片の拒絶を排除し、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を克服し、および／または同種異系もしくは異種の細胞もしくは組織の移植などにおいて、ドナー特異的寛容性を誘導する必要がある状況において特に有益である。ベト細胞の使用はまた、ＣＡＲ－Ｔ細胞またはＴＣＲトランスジェニックＴ細胞（ＴＣＲ－Ｔ）などの「既製の」同種遺伝子改変Ｔ細胞の延長にも有益であり得る。

【0336】

したがって、本発明のいくつかの実施形態のベト細胞は、本明細書の上で詳しく論じられるように、Ｔ細胞受容体シグナル伝達モジュール（すなわち、受容体が配置されているＴ細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する受容体の細胞内部分）を含む細胞表面受容体、例えばトランスジェニックＴ細胞受容体（ｔｇ－ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように形質導入された遺伝子改変細胞の生着を促進するためのアジュバント療法として使用され得る。

【0337】

一実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のベト細胞は、任意のＣＡＲ－Ｔ細胞またはＴＣＲ－Ｔ細胞（例えばベト細胞ドナーの細胞から作製されたＣＡＲ－ＴまたはＴＣＲ－Ｔ細胞）、例えば、造血癌または固形癌の処置のための種々の腫瘍抗原を標的とする腫瘍特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞またはＴＣＲ－Ｔ細胞と併せて使用することができる。標的とすることができるこれらの癌およびそれらの抗原の例には、濾胞性リンパ腫（ＣＤ２０またはＧＤ２）、神経芽腫（ＣＤ１７１）、非ホジキンリンパ腫（ＣＤ２０）、リンパ腫（ＣＤ１９）、神経膠芽腫（ＩＬ１３Ｒα２）、慢性リンパ性白血病またはＣＬＬ、多発性骨髄腫（ＢＣＭＡ、ＣＤ１３８、ＣＳ１）および急性リンパ性白血病またはＡＬＬ（両方ともＣＤ１９）が含まれるが、これらに限定されない。

【0338】

ベト細胞およびＣＡＲ－Ｔ／ＴＣＲ－Ｔ細胞は、互いに同時にまたは続いて（例えば、互いと同じ日に、または例えば約１、２、３、４、５、６、７日以内に）使用され得ることが理解されるであろう。

【0339】

上述のように、本発明のベト細胞は、抗疾患活性（例えば、抗ウイルス活性または抗腫瘍活性、例えばＧＶＬ）をさらに授けられており、したがって、対象、例えば移植される対象が、移植前または移植後に疾患または状態（例えば、悪性、ウイルス性、細菌性、真菌性、自己免疫性またはアレルギー性の疾患または状態）を有する状況において有益である（例えば、免疫再構成が確立される前）。

【0340】

一実施形態によれば、本発明のベト細胞は、ウイルス感染を予防するのに有益である。

【0341】

一実施形態によれば、本発明のベト細胞は、残留癌細胞（例えば白血病細胞）を含む癌細胞を死滅させるのに有益である。

【0342】

一実施形態によれば、本発明のベト細胞は、疾患の再発（例えば、白血病再発）を防止するために有益である。

【0343】

したがって、本発明の別の態様によれば、必要とする対象において疾患を処置する方法であって、治療有効量の本発明のいくつかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団（すなわち、Ｔｃｍ細胞）を対象に投与し、それにより、対象において疾患を処置することを含む方法が提供される。

【0344】

本発明の別の態様によれば、必要とする対象において疾患を処置するために特定される医薬品を製造するための、本発明のいくつかの実施形態のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の使用が提供される。

【0345】

本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、状態の進行を無効にする、実質的に阻害する、遅らせる、または逆転させる、状態の臨床的または審美的症状を実質的に改善する、または状態の臨床的または審美的症状の出現を実質的に防止することを含む。

【0346】

本明細書で使用される場合、「対象」または「必要とする対象」という用語は、細胞または組織の移植を必要とするか、または非ＧＶＨＤ誘導Ｔｃｍ細胞で治療され得る疾患に罹患している任意の年齢の雄または雌の哺乳動物、好ましくはヒトを指す。典型的には、対象は、障害または病理学的もしくは望ましくない状態、状況もしくは症候群、または細胞もしくは組織の移植による治療に適した物理的、形態学的もしくは生理学的異常に起因して、細胞または組織の移植（本明細書ではレシピエントとも呼ばれる）を必要としている。そのような障害の例を以下にさらに提供する。

【0347】

したがって、本発明の方法は、限定されないが、悪性疾患、移植片の移植に関連する疾患（例えば、移植片拒絶、移植片対宿主病）、感染性疾患（例えば、ウイルス性疾患、真菌性疾患または細菌性疾患）、炎症性疾患、自己免疫疾患および／またはアレルギー疾患もしくは状態などの任意の疾患を治療するために適用され得る。

【0348】

一実施形態によれば、対象は悪性疾患を有する。

【0349】

本発明のいくつかの実施形態の方法によって処置することができる悪性疾患（癌とも呼ばれる）は、任意の固形もしくは非固形腫瘍および／または腫瘍転移および／または疾患の再発であり得る。

【0350】

癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。そのような癌のより具体的な例には、扁平上皮癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、黒色腫、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（胃腸癌を含む）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、カルチノイド癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、中皮腫、多発性骨髄腫、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、および様々な種類の頭頸部癌（例えば、脳腫瘍）が含まれる。本発明の治療に適した癌性状態には、転移性癌が含まれる。

【0351】

具体的な実施形態によれば、悪性疾患は、白血病、リンパ腫、骨髄腫、黒色腫、肉腫、神経芽細胞腫、結腸癌、結腸直腸癌、乳癌、卵巣癌、食道癌、滑膜細胞癌、肝癌および膵臓癌である。

【0352】

一実施形態によれば、悪性疾患は血液悪性腫瘍である。例示的な血液悪性腫瘍には、白血病［例えば、急性リンパ芽球性、急性リンパ芽球性、急性リンパ芽球性プレＢ細胞、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、急性巨核芽球性、単球性、急性骨髄性（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）、急性骨髄性（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ）、好酸球増加を伴う急性骨髄性、Ｂ細胞、好塩基球性、慢性骨髄性、慢性、Ｂ細胞、好酸球性、フレンド、顆粒球性または骨髄性、有毛細胞、リンパ球性、巨核芽球性、単球性、単球性マクロファージ、骨髄芽球性、骨髄単球性、形質細胞、プレＢ細胞、前骨髄球性、亜急性、Ｔ細胞、リンパ系新生物、骨髄性悪性腫瘍の素因、急性非リンパ球性白血病、Ｔ細胞急性リンパ球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）およびＢ細胞慢性リンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）］およびリンパ腫［例えば、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、バーキット、皮膚Ｔ細胞、組織球性、リンパ芽球性、Ｔ細胞、胸腺、Ｂ細胞（低悪性度／濾胞性を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中間グレード／濾胞性ＮＨＬ；中間グレードのびまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度の小型非切断細胞ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症］が含まれるが、これらに限定されない。

【0353】

具体的な実施形態によれば、血液悪性腫瘍は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性症候群（ＭＰＤ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、または急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）である。

【0354】

一実施形態によれば、対象は、非悪性疾患を有する。

【0355】

一実施形態によれば、非悪性疾患は、臓器機能不全または臓器不全、血液学的疾患、移植片関連疾患、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、遺伝性疾患または遺伝性障害、代謝障害、外傷および傷害である。

【0356】

一実施形態によれば、本発明の対象は、細胞または組織移植によって治療可能な心血管疾患、リウマチ様疾患、腺疾患、胃腸疾患、皮膚疾患、肝疾患、神経疾患、筋疾患、腎疾患、結合組織疾患、全身性疾患および／または生殖に関連する疾患のいずれかに罹患し得る。

【0357】

例示的な非悪性疾患には、重症複合免疫不全症候群（ＳＣＩＤ）、鎌状赤血球症（例えば、鎌状赤血球貧血）、先天性好中球減少症、血小板減少症、再生不良性貧血（例えば、重度の再生不良性貧血）、骨髄異形成症候群、モノソミー７、大理石骨病、ゴーシェ病、ハーラー病、異染性白質ジストロフィー、副腎白質ジストロフィー、サラセミア、先天性または遺伝的に決定された造血異常、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）、狼瘡、自己免疫性肝炎、セリアック病、Ｉ型糖尿病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、関節リウマチ、強皮症および乾癬が含まれるが、これらに限定されない。

【0358】

一実施形態によれば、非悪性疾患は、ベト細胞の添加によって補助される造血前駆細胞の移植によって処置され得る。

【0359】

一実施形態によれば、非悪性疾患は、造血前駆細胞およびベト細胞の移植（例えば、ドナーキメラ現象を誘導すること）によって補助される細胞または組織の移植片の移植によって処置され得る（下で論じられるように）。

【0360】

感染性疾患
感染性疾患の例としては、慢性感染性疾患、亜急性感染性疾患、急性感染性疾患、ウイルス性疾患、細菌性疾患、原虫性疾患、寄生虫性疾患、真菌性疾患、マイコプラズマ性疾患およびプリオン病が挙げられるが、これらに限定されない。

【0361】

本発明の教示に従って処置可能な感染性疾患を引き起こすウイルス性病原体の具体的なタイプとしては、レトロウイルス、サーコウイルス、パルボウイルス、パポバウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、イリドウイルス、ポックスウイルス、ヘパドナウイルス、ピコルナウイルス、カリシウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、オルトミクソウイルス、パラミクソウイルス、ラブドウイルス、ブニヤウイルス、コロナウイルス、アレナウイルスおよびフィロウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。

【0362】

本発明の教示に従って処置され得るウイルスの感染の具体例としては、限定されないが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）誘発性後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、インフルエンザ、ライノウイルスの感染、ウイルス性髄膜炎、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）の感染、Ａ型、Ｂ型またはＣ型肝炎ウイルスの感染、麻疹、パピローマウイルスの感染／疣贅、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の感染、単純ヘルペスウイルスの感染、黄熱病、エボラウイルスの感染、狂犬病、アデノウイルス（Ａｄｖ）、風邪ウイルス、流感ウイルス、日本脳炎、ポリオ、呼吸器合胞体、風疹、天然痘、水痘帯状疱疹、ロタウイルス、ウエストナイルウイルスおよびジカウイルスによって引き起こされるものが挙げられる。

【0363】

本発明の教示に従って処置され得る細菌感染の具体例としては、限定されないが、炭疽、グラム陰性桿菌、クラミジア、ジフテリア、インフルエンザ菌、ピロリ菌、マラリア、結核菌、百日咳毒素、肺炎球菌、リケッチア、ブドウ球菌、連鎖球菌および破傷風によって引き起こされるものが挙げられる。

【0364】

本発明の教示に従って処置され得るスーパーバグ感染症（例えば多剤耐性細菌）の具体例としては、限定されないが、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、およびＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ．）を含む）によって引き起こされるものが挙げられる。

【0365】

本発明の教示に従って処置され得る真菌感染の具体例としては、限定されないが、カンジダ、コクシジオデス、クリプトコッカス、ヒストプラズマ、リーシュマニア、プラスモジウム、原虫、寄生虫、住血吸虫、白癬、トキソプラズマおよびクルーズトリパノソーマによって引き起こされるものが挙げられる。

【0366】

移植片拒絶疾患
他の実施形態によれば、疾患は、移植片の移植に関連する。移植片の移植に関連する疾患の例には、移植片拒絶、慢性移植片拒絶、亜急性移植片拒絶、超急性移植片拒絶、急性移植片拒絶、同種移植片拒絶、異種移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）が含まれるが、これらに限定されない。

【0367】

非悪性血液疾患
非悪性血液疾患の例には、貧血、骨髄障害、深部静脈血栓症／肺塞栓症、ダイヤモンドブラックファン貧血、ヘモクロマトーシス、血友病、免疫血液学的障害、鉄代謝障害、鎌状赤血球症（例えば、鎌状赤血球貧血）、サラセミア、血小板減少症およびフォン・ヴィレブランド病が含まれるが、これらに限定されない。

【0368】

具体的な実施形態によれば、非悪性疾患は、鎌状赤血球症または自己免疫疾患（例えば、以下に記載されるように、ＨＣＴ＋ベト細胞によって治療可能である）である。

【0369】

自己免疫疾患の非限定的な例としては、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、抗シンテターゼ症候群、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性腸症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、自己免疫性多内分泌症候群、自己免疫性プロゲステロン、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性ブドウ膜炎（例えば、非感染性ブドウ膜炎）、ベーチェット病、セリアック病、慢性糸球体腎炎、寒冷凝集素症、クローン病、皮膚筋炎、皮膚筋炎、１型糖尿病（１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ））、好酸球性筋膜炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、橋本脳症、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、免疫性血小板球性紫斑病（ＩＴＰ）、紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、Ｍｉｌｌｅｒ－Ｆｉｓｈｅｒ症候群、混合性結合組織病、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症、ナルコレプシー、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性胆汁性筋炎、乾癬、乾癬性関節炎、再発性多発性軟骨炎、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、リウマチ熱、全身性強皮症、シェーグレン症候群、側頭動脈炎、脊髄横断炎、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、未分化結合組織病、血管炎、およびウェゲナー肉芽腫症が挙げられるが、これらに限定されない。

【0370】

具体的な実施形態によれば、自己免疫疾患は、紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、および１型糖尿病（１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ））である。

【0371】

具体的な実施形態によれば、非悪性疾患は、再生不良性貧血、重度の免疫不全および非悪性骨髄不全である。

【0372】

上述のように、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の抗疾患活性を高めるために、処置される疾患に関連する１つまたは複数の抗原（例えばウイルス抗原）を選択し、処置のための抗原特異的Ｔｃｍ細胞を作製することが有益である。加えて、または、代替において、上記で論じられるように、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、治療のために遺伝子改変され得る。

【0373】

上で論じられるように、本発明のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、ベト活性が授けられる。したがって、本発明のＴｃｍ細胞は、細胞または組織の移植のための補助療法として使用され得る。本発明のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞はまた、抗疾患活性を付与されるので、本発明の方法はさらに、細胞または組織の移植片の生着を同時に促進しながら、対象における疾患の処置に有利に適用され得る。

【0374】

一実施形態によれば、方法は、細胞または組織の移植片を対象に移植することをさらに含む。

【0375】

一実施形態によれば、医薬品は、細胞または組織の移植をさらに含む。

【0376】

一実施形態によれば、非同系の細胞または組織の移植片を必要とする対象を処置する方法であって、（ａ）細胞または組織の移植片を対象に移植すること、および（ｂ）治療有効量の本発明のいくつかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を対象に投与し、それにより、細胞または組織の移植を必要とする対象を処置することを含む方法が提供される。

【0377】

一実施形態によれば、対象への非同系の細胞または組織の移植のためのアジュバント処置として特定される医薬品を製造するための、本発明のいくつかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団の使用であって、対象が、非同系の細胞または組織の移植を必要としている使用が提供される。

【0378】

本明細書で使用される場合、「細胞または組織の移植」という語句は、身体の細胞（例えば、単一の細胞または細胞の群）または組織（例えば、完全にまたは部分的に移植され得る実質組織／器官または軟組織）を指す。本教示に従って移植され得る例示的な組織または器官には、肝臓、膵臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、皮膚、腸およびリンパ系／造血組織（例えば、リンパ節、パイエル板胸腺または骨髄）が含まれるが、これらに限定されない。本教示に従って移植され得る例示的な細胞としては、限定されないが、未成熟造血細胞、例えば、幹細胞、心臓細胞、肝細胞、膵細胞、脾細胞、肺細胞、脳細胞、腎細胞、腸細胞、卵巣細胞、皮膚細胞（例えば、これらの細胞のいずれかの単離された集団）が挙げられる。さらに、本発明は、例えば腎臓、心臓、肝臓または皮膚などの臓器全体の移植も企図する。

【0379】

用途および利用可能な供給源に応じて、本発明の細胞または組織は、出生前生物、出生後生物、成体生物または死体のドナーから得ることができる。さらに、必要な用途に応じて、細胞または組織はナイーブであっても遺伝子改変されていてもよい。そのような判定は、十分に当業者の能力の範囲内である。

【0380】

当技術分野で公知の任意の方法を使用して、細胞または組織（例えば移植のために）を得ることができる。

【0381】

具体的な実施形態によれば、細胞または組織の移植片は未成熟造血細胞を含む。

【0382】

本明細書で使用される場合、「未成熟造血細胞」という表現は、前駆造血細胞（例えば造血幹細胞）を含む造血組織調製物または造血細胞調製物を示す。そのような組織／細胞調製物は、生物学的試料、例えば、骨髄、動員末梢血（例えば、それらの濃度を高めるためのＣＤ３４^＋細胞の動員）、臍帯血（例えば臍帯）、胎児肝臓、卵黄嚢および／または胎盤を含むか、またはそれらに由来する。さらに、精製されたＣＤ３４^＋細胞またはＣＤ１３１^＋細胞などの他の造血幹細胞は、エクスビボ増殖の有無にかかわらず、本教示に従って使用することができる。

【0383】

一実施形態によれば、未成熟造血細胞は、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞を含む。

【0384】

本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞」という表現は、Ｔリンパ球が枯渇される前駆造血細胞の集団を示す。Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞には、例えば、ＣＤ３４^＋、ＣＤ３３^＋および／またはＣＤ５６^＋細胞が含まれ得る。Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、ＣＤ３^＋細胞、ＣＤ２^＋細胞、ＣＤ８^＋細胞、ＣＤ４^＋細胞、α／βＴ細胞および／またはγ／δＴ細胞を枯渇させ得る。

【0385】

一実施形態によれば、未成熟造血細胞は、ＣＤ３４^＋未成熟造血細胞が富化されたＴ細胞枯渇動員血液細胞を含む。

【0386】

実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１ｋｇあたり、少なくとも約０．１×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、０．５×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、１×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、２×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、３×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、４×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、５×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、６×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、７×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、８×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、９×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、１０×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、１５×１０^６のＣＤ３４^＋細胞または２０×１０^６のＣＤ３４^＋細胞を含む。

【0387】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１ｋｇあたり少なくとも約２．５～２０×１０^６のＣＤ３４^＋細胞（例えば５～１０×１０^６のＣＤ３４^＋細胞）を含む。

【0388】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１ｋｇあたり少なくとも約５×１０^６のＣＤ３４^＋細胞を含む。

【0389】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１ｋｇあたり少なくとも約６×１０^６のＣＤ３４^＋細胞を含む。

【0390】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１ｋｇあたり少なくとも約８×１０^６のＣＤ３４^＋細胞を含む。

【0391】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１ｋｇあたり少なくとも約１０×１０^６のＣＤ３４^＋細胞を含む。

【0392】

一実施形態によれば、未成熟造血細胞は、ＣＤ３^＋細胞および／またはＣＤ１９^＋細胞が枯渇している。

【0393】

実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１ｋｇあたり、約５０×１０^５のＣＤ３^＋細胞、４０×１０^５のＣＤ３^＋細胞、３０×１０^５のＣＤ３^＋細胞、２０×１０^５のＣＤ３^＋細胞、１５×１０^５のＣＤ３^＋細胞、１０×１０^５のＣＤ３^＋細胞９×１０^５のＣＤ３^＋細胞、８×１０^５のＣＤ３^＋細胞、７×１０^５のＣＤ３^＋細胞、６×１０^５のＣＤ３^＋細胞、５×１０^５のＣＤ３^＋細胞、４×１０^５のＣＤ３^＋細胞、３×１０^５のＣＤ３^＋細胞、２×１０^５のＣＤ３^＋細胞、１×１０^５のＣＤ３^＋細胞、０．５×１０^５のＣＤ３^＋細胞、または０．１×１０^５のＣＤ３^＋細胞未満を含む。

【0394】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり１～５×１０^５未満のＣＤ３^＋細胞（例えば、２～５×１０^５のＣＤ３^＋細胞）を含む。

【0395】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり５×１０^５未満のＣＤ３^＋細胞を含む。

【0396】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり４×１０^５未満のＣＤ３^＋細胞を含む。

【0397】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり３×１０^５未満のＣＤ３^＋細胞を含む。

【0398】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり２×１０^５未満のＣＤ３^＋細胞を含む。

【0399】

一実施形態によれば、未成熟造血細胞は、ＣＤ８^＋細胞が枯渇している。

【0400】

実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり１×１０^４～５×１０^５未満のＣＤ８^＋細胞（例えば、０．１～４×１０^５のＣＤ８^＋細胞、例えば、１～３×１０^５のＣＤ８^＋細胞）を含む。

【0401】

実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり約５０×１０^５ＣＤ８^＋細胞、２５×１０^５ＣＤ８^＋細胞、１５×１０^５ＣＤ８^＋細胞、１０×１０^５ＣＤ８^＋細胞、９×１０^５ＣＤ８^＋細胞、８×１０^５ＣＤ８^＋細胞、７×１０^５ＣＤ８^＋細胞、６×１０^５ＣＤ８^＋細胞、５×１０^５ＣＤ８^＋細胞、４×１０^５ＣＤ８^＋細胞、３×１０^５ＣＤ８^＋細胞、２×１０^５ＣＤ８^＋細胞、１×１０^５ＣＤ８^＋細胞、９×１０^４ＣＤ８^＋細胞、８×１０^４ＣＤ８^＋細胞、７×１０^４ＣＤ８^＋細胞、６×１０^４ＣＤ８^＋細胞、５×１０^４ＣＤ８^＋細胞、４×１０^４ＣＤ８^＋細胞、３×１０^４ＣＤ８^＋細胞、２×１０^４ＣＤ８^＋細胞または１×１０^４ＣＤ８^＋細胞未満を含む。

【0402】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり５×１０^５未満のＣＤ８^＋細胞を含む。

【0403】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり４×１０^５未満のＣＤ８^＋細胞を含む。

【0404】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり３×１０^５未満のＣＤ８^＋細胞を含む。

【0405】

実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり約１×１０^６ＣＤ８^＋ＴＣＲα／β^－細胞、０．５×１０^６ＣＤ８^＋ＴＣＲα／β^－細胞、１×１０^５ＣＤ８^＋ＴＣＲα／β^－細胞、０．５×１０^５ＣＤ８^＋ＴＣＲα／β^－細胞、１×１０^４ＣＤ８^＋ＴＣＲα／β^－細胞、０．５×１０^４ＣＤ８^＋ＴＣＲα／β^－細胞、１×１０^３ＣＤ８^＋ＴＣＲα／β^－細胞、または０．５×１０^３ＣＤ８^＋ＴＣＲα／β^－細胞未満を含む。

【0406】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり１×１０^５～１×１０^６ＣＤ８^＋ＴＣＲα／β^－細胞未満を含む。

【0407】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり１×１０^６ＣＤ８^＋ＴＣＲα／β^－細胞未満を含む。

【0408】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり５×１０^５ＣＤ８^＋ＴＣＲα／β^－細胞を含む。

【0409】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり１×１０^５ＣＤ８^＋ＴＣＲα／β^－細胞を含む。

【0410】

一実施形態によれば、未成熟造血細胞は、Ｂ細胞が枯渇している。

【0411】

実施形態によれば、未成熟造血細胞は、Ｂ細胞（ＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋Ｂ細胞）が枯渇している。

【0412】

実施形態によれば、未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり、約５０×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞、４０×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞、３０×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞、２０×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞、１０×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞、９×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞、８×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞、７×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞、６×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞、５×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞、４×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞、３×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞、２×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞、または１×１０^５のＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞より少なく含む。

【0413】

具体的な実施形態によれば、未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり１～５×１０^５ＣＤ１９^＋細胞および／またはＣＤ２０^＋細胞（例えば３～５×１０^５ＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞）未満含む。

【0414】

具体的な実施形態によれば、未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり４×１０^５ＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞未満を含む。

【0415】

具体的な実施形態によれば、未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり３×１０^５ＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞未満を含む。

【0416】

具体的な実施形態によれば、未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり２×１０^５ＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋細胞未満を含む。

【0417】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、２つまたはそれを超えるバッチの細胞を含み、例えば、第１のバッチは、ＣＤ３４^＋の選択された細胞を含み、第２のバッチは、ＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋枯渇細胞（すなわち、同じドナーから得られる）を含む。これらは、互いに、同時にまたは続いて（例えば、以下で論じられるように、同じ日に、または例えば互いに約１、２、３、４、５、６、７日以内に）使用することができることが理解されよう。

【0418】

Ｔ細胞、例えば、ＣＤ３^＋、ＣＤ２^＋、ＴＣＲα／β^＋、ＣＤ４^＋および／もしくはＣＤ８^＋細胞、またはＢ細胞、例えば、ＣＤ１９^＋および／もしくはＣＤ２０^＋細胞の枯渇は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して、例えば、特異的抗体を用いた根絶（例えば、死滅）によって、または例えば、磁気細胞分離技術、ＦＡＣＳソーターおよび／もしくは捕捉ＥＬＩＳＡ標識化の使用などによる親和性に基づく精製によって行われ得る。

【0419】

そのような方法は、本明細書でおよびＴＨＥ ＨＡＮＤＢＯＯＫ ＯＦ ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １ ｔｏ ４，（Ｄ．Ｎ．Ｗｅｉｒ，ｅｄｉｔｏｒ）およびＦＬＯＷ ＣＹＴＯＭＥＴＲＹ ＡＮＤ ＣＥＬＬ ＳＯＲＴＩＮＧ（Ａ．Ｒａｄｂｒｕｃｈ，ｅｄｉｔｏｒ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，１９９２）に記載される。例えば、細胞は、例えば、フローサイトメトリーまたはＦＡＣＳによって選別され得る。したがって、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用することができ、様々な程度のカラーチャネル、低角度および鈍角の光散乱検出チャネル、ならびにインピーダンスチャネルを有することができる。当技術分野で公知の任意のリガンド依存性分離技術は、抗体親和性、例えば非限定的に、溶出および密度勾配遠心分離ではなく、細胞の物理的特性に依存する陽性および陰性双方の分離技術と併せて、使用することができる。

【0420】

細胞選別のための他の方法には、例えば、プレート、ビーズおよびカラムなどの固体支持体を使用する技術を含む親和性技術を使用したパンニングおよび分離が含まれる。したがって、生物学的試料は、固体マトリックス、例えばプレートに結合した抗体を用いた「パンニング」によって分離され得る。

【0421】

あるいは、細胞を磁気分離技術によって選別／分離することができ、これらの方法のいくつかは磁気ビーズを利用する。例えば、Ｄｙｎａｌ（ノルウェー）、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ（ケンブリッジ、マサチューセッツ州、米国）、Ｉｍｍｕｎｃｏｎ（フィラデルフィア、米国）、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃ（マルセイユ、フランス）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（米国）、およびＣｅｌｌｐｒｏ（米国）を含むいくつかの供給源から異なる磁気ビーズが入手可能である。あるいは、抗体をビオチン化またはジゴキシゲニンとコンジュゲート化し、アビジンまたは抗ジゴキシゲニン被覆アフィニティーカラムと組み合わせて使用することができる。

【0422】

実施形態によれば、異なる枯渇／分離方法を組み合わせることができ、例えば、分離の質を高めるために、または複数のパラメータによる選別を可能にするために、磁気細胞選別をＦＡＣＳと組み合わせることができる。

【0423】

具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が、動員されたＰＢＭＣをドナー対象（例えば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞を作製するために非動員ＰＢＭＣを収集した同じドナー対象）から集めることを含む方法によって得られる。

【0424】

一実施形態によれば、動員はＧ－ＣＳＦによって影響される。

【0425】

一実施形態によれば、動員は、Ｇ－ＣＳＦおよびプレリキサフォルによって影響される。

【0426】

具体的な実施形態によれば、動員されたＰＢＭＣの集合は、単一の回収で得られる。

【0427】

具体的な実施形態によれば、動員されたＰＢＭＣの収集物は、２、３、４、５回またはそれを超える毎日の収集、例えば、３回の毎日の収集（例えば、続く数日または数日以内に）で得られる。

【0428】

具体的な実施形態によれば、（例えば、第１の収集物から得られる）理想体重１ｋｇあたり少なくとも約０．１～５×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、例えば、２×１０^６のＣＤ３４^＋細胞、例えば、１×１０^６のＣＤ３４^＋細胞を含有する未改変の動員されたＰＢＭＣのバックアップ画分が除外され、凍結保存される。

【0429】

具体的な実施形態によれば、動員されたＰＢＭＣの収集（例えば、第１日目および第２日目の収集からの残りの）がプールされ、ＣＤ３４^＋が選択され（下記で議論されるように）、凍結保存される。

【0430】

具体的な実施形態によれば、３日目の収集物からＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋細胞を枯渇させ（後述するように）、凍結保存する。

【0431】

一実施形態によれば、ＣＤ３４^＋発現細胞の富化は、ＰＢＭＣをＣＤ３４結合剤でインキュベートすることによって影響を受ける。

【0432】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ３４結合剤は抗体である。

【0433】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ３４抗体はモノクローナル抗体である。

【0434】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ３４モノクローナル抗体は、磁性粒子にコンジュゲートされる。

【0435】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ３４モノクローナル抗体は、超常磁性粒子にコンジュゲート化される。

【0436】

一実施形態によれば、ＣＤ３４^＋標識細胞は、磁気分離技術によって選択される（本明細書にて上で詳しく論じられるように）。

【0437】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ３４磁気標識細胞（すなわちＣＤ３４^＋発現細胞）を分離カラム（すなわち、陽性選択）によって保持し、ＣＤ３４^－細胞を除去する。次いで、ＣＤ３４^＋細胞をカラムから放出させ、回収する。一実施形態によれば、細胞数、生存率および／または免疫表現型検査のために、各画分からの試料を除去する。

【0438】

一実施形態によれば、動員されたＰＢＭＣは、例えばＣＯＢＥ２９９１を用いて血小板が枯渇される。

【0439】

一実施形態によれば、一実施形態の血小板除去後ＰＢＭＣ調製物をＩＶＩｇで５～３０分間、例えば１０～１５分間インキュベートする。最初のインキュベーションの後、ＣＤ３^＋、およびＣＤ１９^＋結合剤を細胞調製物に添加し、オービタルロテータにて例えば１０～６０分間、例えば３０分間インキュベートする。

【0440】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ３および／またはＣＤ１９結合剤は抗体である。

【0441】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ３および／またはＣＤ１９抗体はモノクローナル抗体である。

【0442】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ３および／またはＣＤ１９モノクローナル抗体は、磁性粒子にコンジュゲート化される。

【0443】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ３および／またはＣＤ１９モノクローナル抗体は、超常磁性粒子にコンジュゲート化される。

【0444】

一実施形態によれば、インキュベーションの最後に、細胞を遠心分離によって洗浄し、細胞ペレットを緩衝液（例えば、ＣＯＢＥ２９９１）に再懸濁して過剰な試薬を除去する。

【0445】

一実施形態によれば、ＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋標識細胞は、磁気分離技術によって選択される（本明細書にて上で詳しく論じられるように）。

【0446】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋標識細胞は、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）カラムで処理される。

【0447】

具体的な実施形態によれば、ＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋磁気標識細胞（すなわち、ＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋発現細胞）を分離カラム（すなわち、陰性選択）によって保持し、ＣＤ４^－／ＣＤ５６^－／ＣＤ４５ＲＡ^－細胞を回収する。一実施形態によれば、収集された細胞（ＣＤ３^－／ＣＤ１９^－細胞）が洗浄され、収集される。一実施形態によれば、細胞数、生存率および／または免疫表現型検査のために、各画分からの試料を除去する。

【0448】

具体的な実施形態によれば、第２のＣＤ３^＋枯渇工程は、理想体重１ｋｇあたり約１×１０^５を超えるＣＤ３～５×１０^５のＣＤ３、例えば１×１０^５のＣＤ３～３×１０^５のＣＤ３、例えば２．５×１０^５のＣＤ３、例えば２×１０^５のＣＤ３が、収集された細胞画分中に存在する状況で、（上述のように）行われる。

【0449】

あるいは、５×１０^５を超えるＣＤ３、例えば３×１０^５のＣＤ３、例えば２×１０^５のＣＤ３細胞／ｋｇの理想体重の注入を回避するために、Ｔ細胞枯渇画分の一部のみの注入が利用される。

【0450】

一実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞（すなわち、細胞移植のため）およびＴｃｍ表現型（すなわち、ベト細胞の生成のため）を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞の作製のために使用されるＰＢＭＣが、同じドナー対象から得られる。

【0451】

用途に応じて、本方法は、本明細書の上で論じられているように、レシピエント対象（例えば同種異系）と同系または非同系である細胞または組織を使用して影響され得る。

【0452】

本発明の実施形態によれば、レシピエント対象およびドナー対象の両方がヒトである。

【0453】

本発明の実施形態によれば、対象（すなわち、レシピエント対象）は、細胞または組織の移植片の移植によって処置され得る疾患に罹患している。

【0454】

本発明の実施形態によれば、対象（すなわち、レシピエント対象）は、臓器または組織の移植によって処置され得る疾患に罹患している。

【0455】

本発明の実施形態によれば、対象（すなわち、レシピエント対象）は、未成熟造血細胞移植（例えば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞）によって治療され得る疾患に罹患している。

【0456】

本発明の実施形態によれば、対象（すなわち、レシピエント対象）は、未成熟造血細胞と、実質臓器または組織（例えば、腎臓、肺、肝臓、膵臓、心臓など）との共移植によって処置され得る疾患に罹患している。

【0457】

本発明の実施形態によれば、対象（すなわち、レシピエント対象）は、未成熟造血細胞と、実質臓器または実質組織から得られた単離細胞（例えば、上で論じられているような腎臓、肺細胞、肝細胞、膵細胞、心臓細胞など）との共移植によって治療され得る疾患に罹患している。

【0458】

本発明の実施形態によれば、対象（すなわち、レシピエント対象）は、いくつかの器官（例えば、心臓および肺組織）の共移植によって処置され得る疾患を罹患している。

【0459】

一実施形態によれば、共移植のための細胞、器官または組織は、同じドナーから得られる。

【0460】

細胞または組織を対象に移植することは、例えば、細胞または組織の種類、レシピエントの疾患のタイプ、ステージまたは重症度（例えば、悪性疾患のタイプおよびステージ）、対象に特異的な物理的または生理学的パラメータ、および／または所望の治療の転帰などの様々なパラメータに応じて、多くの方法で影響を受ける可能性がある。

【0461】

本発明の細胞または組織の移植片を移植することは、用途に応じて、細胞または組織の移植片を様々な解剖学的位置のいずれか１つに移植することによって影響され得る。細胞または組織の移植は、同所の解剖学的位置（移植のための正常な解剖学的位置）、または異所の解剖学的位置（移植のための異常な解剖学的位置）に移植され得る。用途に応じて、細胞または組織の移植は、腎被膜の下、または腎臓、精巣脂肪、皮下組織、網、門脈、肝臓、脾臓、心腔、心臓、胸腔、肺、皮膚、膵臓および／または腹腔内空間に、有利にも移植され得る。

【0462】

本発明のいくつかの実施形態の未成熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞）は、細胞移植のための当技術分野で公知の任意の方法を使用して、例えば、限定されないが、細胞の注入（例えば、Ｉ．Ｖ．）または腹腔内経路を介して、対象に移植され得る。

【0463】

本教示による対象への細胞または組織の移植片の移植後、標準的な医療実践によれば、様々な標準的な技術のいずれか１つに従って、細胞、組織または器官の成長機能性および免疫適合性をモニターすることが望ましい。例えば、未成熟造血細胞の細胞数は、標準的な血液および骨髄試験（例えば、ＦＡＣＳ分析による）によって対象においてモニターされ得る。細胞または組織の構造的発達は、コンピュータ断層撮影または超音波撮像によって監視され得る。

【0464】

移植状況に応じて、細胞または組織の移植片の生着を促進するために、本方法は、移植前に対象を亜致死的、致死的または超致死的条件下で前処置することをさらに有利に含み得る。

【0465】

本明細書で使用される場合、「亜致死」、「致死」、および「超致死」という用語は、本発明の対象の前処置に関連する場合、それぞれ対象の代表的な集団に適用される場合、典型的には、集団の本質的にすべてのメンバーに対して非致死性である、集団のすべてではないが一部のメンバーにとって致命的である、または、無菌の通常の条件下で集団の本質的にすべてのメンバーにとって致命的である骨髄毒性および／またはリンパ球毒性治療を指す。

【0466】

本発明のいくつかの実施形態によれば、亜致死的前処置、致死的前処置または超致死的前処置は、全身照射（ＴＢＩ）、全身リンパ節照射（ＴＬＩ、すなわち、すべてのリンパ節、胸腺および脾臓の曝露）、部分的な身体照射（例えば、肺、腎臓、脳などの特異的曝露）、骨髄破壊的前処置、および／または骨髄非破壊的前処置を含み、例えば、共刺激遮断、化学療法剤、および／または抗体免疫療法を含むがこれらに限定されない種々の組み合わせを含む。本発明のいくつかの実施形態によれば、上記の前処置プロトコルのいずれかの組み合わせ（例えば、化学療法剤およびＴＢＩ、共刺激遮断および化学療法剤、抗体免疫療法および化学療法剤など）を含む。

【0467】

一実施形態によれば、前処置は、骨髄破壊条件下（すなわち、骨髄細胞が破壊される強力な前処置レジメン）などの超致死的条件下で対象を前処置することによって影響される。

【0468】

あるいは、前処置は、致死的または亜致死的な条件下で対象を前処置することによって、例えば、それぞれ骨髄縮小条件下または骨髄非破壊的条件下で対象を前処置すること（すなわち、低侵襲的な前処置レジメンである強度軽減前処置）によって影響され得る。

【0469】

具体的な実施形態によれば、前処置は、骨髄非破壊的前処置（例えば、強度軽減前処置レジメン）を含む。

【0470】

実施形態によれば、強度低下前処置は、細胞または組織の移植片の移植前の最長２週間（例えば、１～１０日または１～７日）にわたって影響を受ける。

【0471】

具体的な実施形態によれば、骨髄非破壊的前処置は、化学療法剤およびＴＢＩ／ＴＬＩを含む。

【0472】

一実施形態によれば、ＴＢＩは、０．５～１Ｇｙ、０．５～１．５Ｇｙ、０．５～２Ｇｙ、０．５～２．５Ｇｙ、０．５～５Ｇｙ、０．５～７．５Ｇｙ、０．５～１０Ｇｙ、０．５～１５Ｇｙ、１～１．５Ｇｙ、１～２Ｇｙ、１～２．５Ｇｙ、１～３Ｇｙ、１～３．５Ｇｙ、１～４Ｇｙ、１～４．５Ｇｙ、１～５Ｇｙ、１～７．５Ｇｙ、１～１０Ｇｙ、２～３Ｇｙ、２～４Ｇｙ、２～５Ｇｙ、２～６Ｇｙ、２～７Ｇｙ、２～８Ｇｙ、２～９Ｇｙ、２～１０Ｇｙ、３～４Ｇｙ、３～５Ｇｙ、３～６Ｇｙ、３～７Ｇｙ、３～８Ｇｙ、３～９Ｇｙ、３～１０Ｇｙ、４～５Ｇｙ、４～６Ｇｙ、４～７Ｇｙ、４～８Ｇｙ、４～９Ｇｙ、４～１０Ｇｙ、５～６Ｇｙ、５～７Ｇｙ、５～８Ｇｙ、５～９Ｇｙ、５～１０Ｇｙ、６～７Ｇｙ、６～８Ｇｙ、６～９Ｇｙ、６～１０Ｇｙ、７～８Ｇｙ、７～９Ｇｙ、７～１０Ｇｙ、８～９Ｇｙ、８～１０Ｇｙ、１０～１２Ｇｙ、または１０～１５Ｇｙの範囲内の単一または分割照射線量を含む。

【0473】

具体的な実施形態によれば、ＴＢＩは、１～７．５Ｇｙの範囲内の単回照射線量または分割照射線量を含む。

【0474】

具体的な実施形態によれば、ＴＢＩは、１～５Ｇｙの範囲内の単回照射線量または分割照射線量を含む。

【0475】

具体的な実施形態によれば、ＴＢＩは、３Ｇｙの範囲内の単回照射線量または分割照射線量を含む。

【0476】

実施形態によれば、ＴＢＩ処置は、移植の１～１０日前（例えば１～３日）に対象に投与される。一実施形態によれば、対象は、移植の１日前、２日前、３日前または４日前にＴＢＩにより１回条件付けされる。

【0477】

実施形態によれば、ＴＢＩは移植の－２日前に投与される。

【0478】

実施形態によれば、ＴＢＩは移植の－１日前に投与される。

【0479】

実施形態によれば、ＴＢＩは移植の日に、例えば０日目の朝に投与され、移植は同日に、例えば夕方に行われる。

【0480】

具体的な実施形態によれば、ＴＢＩは、－１日目（すなわち移植の１日前）における単回照射線量または分割照射線量を含む。

【0481】

具体的な実施形態によれば、ＴＬＩは、０．５～１Ｇｙ、０．５～１．５Ｇｙ、０．５～２．５Ｇｙ、０．５～５Ｇｙ、０．５～７．５Ｇｙ、０．５～１０Ｇｙ、０．５～１５Ｇｙ、１～１．５Ｇｙ、１～２Ｇｙ、１～２．５Ｇｙ、１～３Ｇｙ、１～３．５Ｇｙ、１～４Ｇｙ、１～４．５Ｇｙ、１～１．５Ｇｙ、１～７．５Ｇｙ、１～１０Ｇｙ、２～３Ｇｙ、２～４Ｇｙ、２～５Ｇｙ、２～６Ｇｙ、２～７Ｇｙ、２～８Ｇｙ、２～９Ｇｙ、２～１０Ｇｙ、３～４Ｇｙ、３～５Ｇｙ、３～６Ｇｙ、３～７Ｇｙ、３～８Ｇｙ、３～９Ｇｙ、３～１０Ｇｙ、４～５Ｇｙ、４～６Ｇｙ、４～７Ｇｙ、４～８Ｇｙ、４～９Ｇｙ、４～１０Ｇｙ、５～６Ｇｙ、５～７Ｇｙ、５～８Ｇｙ、５～９Ｇｙ、５～１０Ｇｙ、６～７Ｇｙ、６～８Ｇｙ、６～９Ｇｙ、６～１０Ｇｙ、７～８Ｇｙ、７～９Ｇｙ、７～１０Ｇｙ、８～９Ｇｙ、８～１０Ｇｙ、１０～１２Ｇｙ、１０～１５Ｇｙ、１０～２０Ｇｙ、１０～３０Ｇｙ、１０～４０Ｇｙ、１０～５０Ｇｙ、０．５～２０Ｇｙ、０．５～３０Ｇｙ、０．５～４０Ｇｙ、または０．５～５０Ｇｙの範囲内の照射線量を含む。

【0482】

具体的な実施形態によれば、ＴＬＩは、１～７．５Ｇｙの範囲内の単回照射線量または分割照射線量を含む。

【0483】

具体的な実施形態によれば、ＴＬＩは、１～５Ｇｙの範囲内の単回照射線量または分割照射線量を含む。

【0484】

具体的な実施形態によれば、ＴＬＩは、３Ｇｙの範囲内の単回照射線量または分割照射線量を含む。

【0485】

実施形態によれば、ＴＬＩ処置は、移植の１～１０日前（例えば１～３日）に対象に投与される。一実施形態によれば、対象は、移植の１日前、２日前、３日前または４日前にＴＬＩにより１回条件付けされる。

【0486】

実施形態によれば、ＴＬＩは移植の－２日前に投与される。

【0487】

実施形態によれば、ＴＬＩは移植の－１日前に投与される。

【0488】

実施形態によれば、ＴＬＩは移植の日に、例えば０日目の朝に投与され、移植は同日に、例えば夕方に行われる。

【0489】

具体的な実施形態によれば、ＴＬＩは、－１日目（すなわち移植の１日前）における単回照射線量または分割照射線量を含む。

【0490】

一実施形態によれば、前処置は化学療法剤を含む。例示的な化学療法剤には、ブスルファン、ブスルフェックス、シクロホスファミド、フルダラビン、メルファラン、ミレラン、ラパマイシン、トリスルファンおよびチオテパが含まれるが、これらに限定されない。化学療法剤は、移植前に、単回用量または数回用量で、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える用量（例えば、毎日投与）で対象に投与され得る。

【0491】

具体的な実施形態によれば、対象には、化学療法剤（例えば、フルダラビン、例えば、約３０ｍｇ／ｍ^２／日の用量）が移植（例えば－７から－４日目、例えば－６から－３日目に）の前の３、４、５または６日間連続して（例えば連続４日間）投与される。

【0492】

フルダラビンは、例えばＳａｎｏｆｉ Ｇｅｎｚｙｍｅ、ＢａｙｅｒおよびＴｅｖａから、例えばＦｌｕｄａｒａの商品名で市販されている。

【0493】

一実施形態によれば、移植前処置は、インビボのＴ細胞の減量を含む。

【0494】

いくつかの態様によれば、インビボＴ細胞減量は抗体によって影響される。

【0495】

本発明のいくつかの実施形態によれば、抗体は、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４抗体またはその両方を含む。

【0496】

本発明のいくつかの実施形態によれば、抗体は抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体、抗ＣＤ５２抗体、または抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体を含む。

【0497】

一実施形態によれば、抗体は、移植前に、単回用量、または、数回の用量で、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回またはそれを超える用量（例えば、毎日投与）で対象に投与される。

【0498】

具体的な実施形態によれば、対象には、抗体治療剤（例えば、ＡＴＧ、例えば、理想体重１ｋｇあたり約２ｍｇの用量）が移植（例えば移植前の－１０から－８日目に、例えば移植前の－９から－７日目に）の前の２、３、４または５日間連続して（例えば連続３日間）投与される。

【0499】

具体的な実施形態によれば、対象が、移植前にＡＴＧの３回の投与により処置される（例えば、理想体重１ｋｇあたり約２ｍｇの用量で、例えば移植前の－９、－８および－７日目に）。

【0500】

具体的な実施形態によれば、対象が、移植前にＡＴＧの２回の投与（例えば、理想体重１ｋｇあたり約２ｍｇの用量で、例えば移植前の－９および－８日目、または－８および－７日目に）により処置される。

【0501】

具体的な実施形態によれば、対象が、移植前のＡＴＧの単回投与（例えば、理想体重１ｋｇあたり約２ｍｇの用量で、例えば移植前の－９、－８、または－７日目に）により処置される。

【0502】

具体的な実施形態によれば、移植前処置はインビボＴ細胞減量を含まない。

【0503】

具体的な実施形態によれば、対象は、移植前にＡＴＧにより処置されない。

【0504】

ＡＴＧを使用しない場合、またはＡＴＧのより低い用量、例えば単回用量または２回用量（例えば、それぞれ、理想体重１ｋｇあたり約２ｍｇの用量）を使用する場合、骨髄非破壊的前処置プロトコル（例えば、３～５Ｇｙ、例えば３Ｇｙ、４Ｇｙまたは５Ｇｙの単回または分割照射線量でのＴＢＩ）の一部として、より高い放射線用量を使用することができることが理解されよう。

【0505】

抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体は、例えば、Ｇｅｎｚｙｍｅおよびファイザーから、例えば、ＴｈｙｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎやＡｔｇａｍの商品名で市販されている。

【0506】

一実施形態によれば、対象がＢ細胞悪性腫瘍を有する場合、移植前の前処置レジメンはリツキシマブ（例えば約３７５ｍｇ／ｍ^２の用量、例えば移植の－１２、－１１、－１０、－９、－８、または－７日前、例えば－１０日前）を含む。

【0507】

リツキシマブは、例えばＭａｂｔｈｅｒａや、Ｒｉｘａｔｈｏｎ、Ｔｒｕｘｉｍａ、Ｒｉｔｕｘａｎの商品名で、例えばＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＲｏｃｈｅから市販されている。

【0508】

一実施形態によれば、方法は、治療有効量のシクロホスファミドの移植後投与を含む。

【0509】

一実施形態によれば、本発明はさらに、本明細書に記載されるような移植後の投与に加えて、移植前のシクロホスファミド（例えば移植前の６、５、４、または３日目、すなわちＤ－６から－３日目）の投与を意図する。

【0510】

例えば、細胞または組織の移植片の場合、治療有効量のシクロホスファミドは、対象の理想体重１キログラムあたり、約１～２５ｍｇ、１～５０ｍｇ、１～７５ｍｇ、１～１００ｍｇ、１～２５０ｍｇ、１～５００ｍｇ、１～７５０ｍｇ、１～１０００ｍｇ、５～５０ｍｇ、５～７５ｍｇ、５～１００ｍｇ、５～２５０ｍｇ、５～５００ｍｇ、５～７５０ｍｇ、５～１０００ｍｇ、１０～５０ｍｇ、１０～７５ｍｇ、１０～１００ｍｇ、１０～２５０ｍｇ、１０～５００ｍｇ、１０～７５０ｍｇ、１０～１０００ｍｇ、２５～５０ｍｇ、２５～７５ｍｇ、２５～１００ｍｇ、２５～１２５ｍｇ、２５～２００ｍｇ、２５～３００ｍｇ、２５～４００ｍｇ、２５～５００ｍｇ、２５～７５０ｍｇ、２５～１０００ｍｇ、５０～７５ｍｇ、５０～１００ｍｇ、５０～１２５ｍｇ、５０～１５０ｍｇ、５０～１７５ｍｇ、５０～２００ｍｇ、５０～２５０ｍｇ、５０～５００ｍｇ、５０～１０００ｍｇ、７５～１００ｍｇ、７５～１２５ｍｇ、７５～１５０ｍｇ、７５～２５０ｍｇ、７５～５００ｍｇ、７５～１０００ｍｇ、１００～１２５ｍｇ、１００～１５０ｍｇ、１００～２００ｍｇ、１００～３００ｍｇ、１００～４００ｍｇ、１００～５００ｍｇ、１００～１０００ｍｇ、１２５～１５０ｍｇ、１２５～２５０ｍｇ、１２５～５００ｍｇ、１２５～１０００ｍｇ、１５０～２００ｍｇ、１５０～３００ｍｇ、１５０～５００ｍｇ、１５０～１０００ｍｇ、２００～３００ｍｇ、２００～４００ｍｇ、２００～５００ｍｇ、２００～７５０ｍｇ、２００～１０００ｍｇ、２５０～５００ｍｇ、２５０～７５０ｍｇ、２５０～１０００ｍｇを含む。

【0511】

具体的な実施形態によれば、治療有効量のシクロホスファミドが対象の理想体重１キログラムあたり約２５～２００ｍｇである。

【0512】

一実施形態によれば、シクロホスファミドが単回用量で投与される。

【0513】

一実施形態によれば、シクロホスファミドが、複数回用量で、例えば、２、３、４、５、またはそれを超える用量で投与される。

【0514】

具体的な実施形態によれば、シクロホスファミドが２つの用量で投与される。

【0515】

各シクロホスファミド投与の用量は、対象の理想体重１キログラムあたり約５ｍｇ、７．５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇまたは５００ｍｇを含み得る。

【0516】

具体的な実施形態によれば、シクロホスファミドの各用量が対象の理想体重１キログラムあたり５０ｍｇである。

【0517】

述べられたように、シクロホスファミドが移植後に投与される。したがって、例えば、シクロホスファミドを移植後１、２、３、４、５日（すなわち、Ｄ＋１、＋２、＋３、＋４、＋５）に対象に投与することができる。

【0518】

具体的な実施形態によれば、シクロホスファミドが、移植後３日目および４日目に２つの用量で対象に投与される。

【0519】

シクロホスファミドは、例えば、Ｚｙｄｕｓ（Ｇｅｒｍａｎ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ）、Ｒｏｘａｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ－Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ－Ｍｅａｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏ、およびファイザー－Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆Ｕｐｊｏｈｎから、Ｅｎｄｏｘａｎ、Ｃｙｔｏｘａｎ、Ｎｅｏｓａｒ、ＰｒｏｃｙｔｏｘおよびＲｅｖｉｍｍｕｎｅの商品名で市販されている。

【0520】

一実施形態によれば、対象は、さらなる支持薬（例えば、化学療法補助剤）により処置される。

【0521】

一実施形態によれば、対象が、シクロホスファミド（例えば、シクロホスファミドの最初の投与の２時間前、１時間前、３０分前、１５分前）の最初の用量の直前にＭｅｓｎａの用量（例えば、１０ｍｇ／ｋｇ静脈内ピギーバック（ＩＶＰＢ）により処置される。一実施形態によれば、Ｍｅｓｎａの投与は、４時間毎に合計１０回繰り返される。

【0522】

Ｍｅｓｎａは、例えば、ウロミテキサンおよびＭｅｓｎｅｘの商品名でＢａｘｔｅｒから市販されている。

【0523】

一実施形態によれば、対象が、シクロホスファミド（Ｃｙ）の各投与の前にオンダンセトロン（または別の制吐薬）により処置される。

【0524】

一実施形態によれば、対象は、免疫抑制剤（例えば、本明細書で論じられるＣＹおよびベト細胞とは別に）で処置されない。

【0525】

一実施形態によれば、対象は、免疫抑制剤で処置される。

【0526】

免疫抑制剤の例には、タクロリムス（ＦＫ－５０６またはフジマイシンとも呼ばれ、商品名：Ｐｒｏｇｒａｆ、Ａｄｖａｇｒａｆ、Ｐｒｏｔｏｐｉｃ）、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、プレドニゾン、メトトレキサート、シクロホスファミド、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン（スルファサラゾピリン）、金塩、Ｄ－ペニシラミン、レフルノミド、アザチオプリン、アナキンラ、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、エタネルセプト、ＴＮＦαブロッカー、炎症性サイトカインを標的とする生物学的薬剤、および非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が含まれるが、これらに限定されない。ＮＳＡＩＤの例には、アセチルサリチル酸、サリチル酸コリンマグネシウム、ジフルニサル、サリチル酸マグネシウム、サルサラート、サリチル酸ナトリウム、ジクロフェナク、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、メクロフェナメート、ナプロキセン、ナブメトン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、アセトアミノフェン、イブプロフェン、Ｃｏｘ－２阻害剤、トラマドール、ラパマイシン（シロリムス）およびラパマイシン類似体（ＣＣＩ－７７９、ＲＡＤ００１、ＡＰ２３５７３など）が含まれるが、これらに限定されない。これらの薬剤は、個別にまたは組み合わせて投与することができる。

【0527】

一実施形態によれば、コルチコステロイドはベト細胞に対する前処理として投与されない。

【0528】

本発明の別の態様によれば、未成熟造血細胞移植を必要とする対象を処置する方法であって、
（ａ）対象を骨髄非破壊的移植前前処置プロトコルのもとで前処置することであって、骨髄非破壊的前処置は全身照射（ＴＢＩ）および化学療法剤を含み、ＴＢＩおよび化学療法剤は、移植前の－７～－１日目に投与される（例えば移植前の－７～－２、または－６～－１日目に）、前処置すること、
（ｂ）Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の用量を対象に移植することであって、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり５×１０^５個未満のＣＤ３^＋Ｔ細胞を含み、かつ、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラムあたり少なくとも５×１０^６のＣＤ３４^＋細胞を含む、移植すること、
（ｃ）治療有効量のシクロホスファミドを対象に投与することであって、治療有効量のシクロホスファミドが、対象の理想体重１キログラムあたり２５～２００ｍｇのシクロホスファミドを含み、治療有効量のシクロホスファミドが、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の移植の３日後および４日後２回の用量で対象に投与されることになること、および
（ｄ）治療有効量の本発明のいくつかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団を対象に投与することであって、非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離された集団は、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の移植の後の７日目に投与され、
それによって未成熟造血細胞移植を必要とする対象を処置することを含む、方法が提供される。

【0529】

具体的な実施形態によれば、ＴＢＩが、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の移植の日に、例えば、０日目の朝に投与され、移植が同日に、例えば、夕方に行われる。

【0530】

具体的な実施形態によれば、対象は以下のように治療される：フルダラビンは、－６～－３日目（移植前）に４回の連続用量（例えば３０ｍｇ／ｍ^２／日）で対象に投与され、ＴＢＩは、移植前の－１日目に単回または分割照射用量（例えば３～５Ｇｙ、例えば３Ｇｙ）で対象に投与され、０日目（すなわち移植日）に、対象は、ＣＤ３４^＋選択細胞および／またはＣＤ３／ＣＤ１９枯渇細胞（例えば、本明細書に記載されるように、ドナーの動員後に収集され、ＣＤ３／ＣＤ１９発現細胞が枯渇され、かつ／またはＣＤ３４の発現のために選択され、凍結保存され、移植の日に解凍された細胞）を含む大量投与Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞を注入（例えばＩＶ）され、＋３日目および＋４日目に、対象は、それぞれ例えば５０ｍｇ／ｋｇ理想体重／日の用量でシクロホスファミド（ＣＹ）を投与（例えばＩＶ）され、＋７日目に、対象は、本発明のいくつかの実施形態の抗ウイルス性ベト細胞を、例えば２．５～１０×１０^６個のＣＤ８^＋細胞／ｋｇ理想体重の用量で注入される。

【0531】

具体的な実施形態によれば、対象に、－９～－７日目に（移植前に）ＡＴＧ（チモグロブリン）を３回の連続用量（例えば、理想体重１ｋｇあたり２ｍｇ）で投与する。

【0532】

具体的な実施形態によれば、対象が以下のように処置される：フルダラビンが、－７～－４日目（移植前）に４回の連続用量（例えば３０ｍｇ／ｍ^２／日）で対象に投与され、ＴＢＩが、移植前の－２日目に、単回照射用量または分割照射用量（例えば３～５Ｇｙ、例えば３Ｇｙ）で対象に投与され、－１日目に、対象に、ＣＤ３４^＋選択細胞（例えば、ドナーの動員後に収集され、ＣＤ３４の発現のために選択され、本明細書に記載されるような新鮮な細胞として使用される細胞）を含む最初の用量の大量投与Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が注入され（例えばＩＶ）、０日目に、対象に、ＣＤ３／ＣＤ１９枯渇細胞（例えば、ドナーの動員後に収集され、ＣＤ３／ＣＤ１９発現細胞が枯渇され、本明細書に記載されるような新鮮な細胞として使用される細胞）を含む２番目の用量の大量投与Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が注入され（例えばＩＶ）、＋３日目および＋４日目に、対象に、それぞれ例えば５０ｍｇ／ｋｇ理想体重／日の用量のシクロホスファミド（ＣＹ）が投与され（例えばＩＶ）、＋７日目に、対象に、本発明のいくつかの実施形態の抗ウイルスベト細胞を、例えば、理想体重１ｋｇあたり２．５～１０×１０^６個のＣＤ８^＋細胞の用量で注入する。

【0533】

具体的な実施形態によれば、対象に、－１０～－８日目に（移植前に）ＡＴＧ（チモグロブリン）を３回の連続用量（例えば、理想体重１ｋｇあたり２ｍｇ）で投与する。

【0534】

具体的な実施形態によれば、対象が、シクロホスファミドの最初の服用量の直前にＭｅｓｎａの用量（例えば、１０ｍｇ／ｋｇ静脈内ピギーバック（ＩＶＰＢ）により処置される。一実施形態によれば、これは、４時間毎に合計１０回繰り返される。

【0535】

具体的な実施形態によれば、対象が、シクロホスファミド（ＣＹ）の各用量の前にオンダンセトロン（または別の制吐薬）により処置される。

【0536】

具体的な実施形態によれば、ベト細胞のための前投薬はコルチコステロイドを含まない。

【0537】

具体的な実施形態によれば、対象がＢ細胞悪性腫瘍を有する場合、移植前前処置レジメンはリツキシマブ（例えば約３７５ｍｇ／ｍ２の用量で、例えば移植前の－１０日目に）を含む。

【0538】

移植前および移植後の免疫抑制薬および／または免疫抑制照射の投与回数および治療有効量は、移植の種類およびレジメンに対する対象の応答を考慮して必要に応じて調整することができる。投与回数と治療有効量の判定は、特に本明細書で提供される詳細な開示に照らして、十分当業者の能力の範囲内である。

【0539】

移植のタイプにかかわらず、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧＨＶＤ）を回避するために、および／またはドナー特異的寛容性を誘導するために、本発明の方法は、（本明細書中上記で詳細に記載されるような）新規Ｔｃｍ細胞を利用する。

【0540】

一実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、それ自体、移植片拒絶の低減のために、および／または移植された細胞、組織もしくは器官（例えば、同じドナーから移植される）のＧＶＨＤの低減のために使用される。

【0541】

一実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、細胞または組織の移植片の移植と同時に、移植前に、または移植後に投与されるためのものである。

【0542】

一実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、未成熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞）の移植と同時に、移植前に、または移植後に投与されるためのものである。

【0543】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、非同系の細胞または組織の移植の後での投与のためのものである。

【0544】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、未成熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞）に続いて投与されるためのものである。

【0545】

一実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、非同系の細胞または組織の移植（例えば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞）後の３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、２１日目における投与のためのものである。

【0546】

一実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、未成熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞）の後の３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、２１日目における投与のためのものである。

【0547】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、非同系の細胞または組織の移植（例えば未成熟造血細胞、例えばＴ細胞枯渇未成熟造血細胞）の後の６～９日目における投与のためのものである。

【0548】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、非同系の細胞または組織の移植の後の９日目における投与のためのものである。

【0549】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、非同系の細胞または組織の移植の後の８日目における投与のためのものである。

【0550】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、非同系の細胞または組織の移植の後の７日目における投与のためのものである。

【0551】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、非同系の細胞または組織の移植の後の６日目における投与のためのものである。

【0552】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、未成熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞）の後の９日目における投与のためのものである。

【0553】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、未成熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞）の後の８日目における投与のためのものである。

【0554】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、未成熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞）の後の７日目における投与のためのものである。

【0555】

具体的な実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞（すなわちベト細胞）は、未成熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞）の後の６日目における投与のためのものである。

【0556】

具体的な実施形態によれば、ベト細胞が、実質器官または組織（例えば、上で論じられているような腎臓、肺細胞、肝臓細胞、膵臓細胞、心臓細胞など）から得られる細胞または組織の移植のためのアジュバント処置として使用されるとき、ベト細胞は、細胞または組織の移植片の移植と同時に、移植の前に、または移植の後で投与される場合がある。

【0557】

具体的な実施形態によれば、未成熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞）と、実質臓器または組織から得られた細胞または組織（例えば、上述の腎臓、肺細胞、肝臓細胞、膵臓細胞、心臓細胞など）とを共移植する場合、ベト細胞、未成熟造血細胞及び細胞または組織の投与順序は任意である（例えば、腎臓、未成熟造血細胞およびベト細胞；未成熟造血細胞、腎臓およびベト細胞など）。

【0558】

具体的な実施形態によれば、未成熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞）と、実質臓器または組織から得られる細胞または組織（例えば、上述の腎臓、肺細胞、肝臓細胞、膵臓細胞、心臓細胞など）との共移植が行われる場合、ベト細胞および未成熟造血細胞が投与され、細胞または組織の移植片が、キメラ現象（例えば、未成熟造血細胞、ベト細胞、腎臓）が確立された後にのみ移植される。

【0559】

具体的な実施形態によれば、未成熟造血細胞は、例えば、ＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋枯渇ＣＤ３４^＋細胞（例えば、移植日に解凍される凍結保存細胞を使用する場合）を含む単回投与で投与される場合がある。

【0560】

具体的な実施形態によれば、未成熟造血細胞は、２回またはそれを超える投与、例えば、ＣＤ３４^＋選択された細胞を含む第１の投与およびＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋枯渇細胞（例えば、新鮮な細胞を使用する場合、すなわち、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０日以内、例えば約１日以内に収集および使用される細胞）を含む第２の投与で投与される場合がある。これらは、互いに同時にまたは続いて（例えば、互いに同じ日に、または１、２、３、４、５日以内に）投与することができることが理解されよう。

【0561】

本発明のいくつかの実施形態のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、細胞移植のための当技術分野で公知の任意の方法、例えば、限定されないが、細胞注入（例えば静脈内）または腹腔内経路を介して投与され得る。

【0562】

一実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、新鮮な細胞として使用される。

【0563】

一実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞を凍結保存する。

【0564】

本発明のいくつかの実施形態のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、それ自体で、または適切な担体もしくは賦形剤と混合される医薬組成物において、生物に投与することができる。

【0565】

同様に、本発明のいくつかの実施形態の細胞または組織の移植片、例えば未成熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞）は、生物自体に投与する、または適切な担体もしくは賦形剤と混合される医薬組成物にあることができる。

【0566】

本明細書で使用される場合、「医薬組成物」は、生理学的に適切な担体および賦形剤などの他の化学成分を用いた、本明細書に記載の有効成分の１つまたは複数の調製物を指す。医薬組成物の目的は、生物への化合物の投与を容易にすることである。

【0567】

本明細書では、「有効成分」という用語は、生物学的効果を説明できるＴｃｍ細胞を指す。

【0568】

以下、互換的に使用され得る「生理学的に許容される担体」および「薬学的に許容される担体」という句は、生物に重大な刺激を引き起こさず、投与された化合物の生物学的活性および特性を無効にしない担体または希釈剤を指す。これらの句にはアジュバントが含まれている。

【0569】

本明細書において、「賦形剤」という用語は、有効成分の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖およびデンプンの種類、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、およびポリエチレングリコールが含まれるが、これらに限定されない。

【0570】

薬物の処方および投与のための技術は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ、ペンシルベニア州イーストン、最新版に見出すことができ、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0571】

適切な投与経路には、例えば、経口、直腸、経粘膜、特に経鼻、腸または非経口送達を含み得、これには、筋肉内、皮下および髄内注射、ならびに髄腔内、直接脳室内、心臓内、例えば、右心室腔または左心室腔内、総頚動脈内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、または眼内への注射が含まれ得る。

【0572】

中枢神経系（ＣＮＳ）への薬物送達のための従来のアプローチには、神経外科的戦略（例えば、脳内注入または脳室内注入）；ＢＢＢの内因性輸送経路の１つを利用する試みにおける薬剤（例えば、それ自体がＢＢＢを通過することができない薬剤と組み合わせて、内皮細胞表面分子に対して親和性を有する輸送ペプチドを含むキメラ融合タンパク質の産生）の分子操作；薬剤の脂質溶解度を増加させるように設計された薬理学的戦略（例えば、水溶性薬剤と脂質またはコレステロール担体とのコンジュゲーション）；（頸動脈内へのマンニトール溶液の注入またはアンジオテンシンペプチドなどの生物学的に活性な薬剤の使用から生じる）高浸透圧破壊によるＢＢＢの完全性の一時的な破壊が含まれる。しかしながら、これらの戦略の各々は、侵襲的外科処置に関連する固有のリスク、内因性輸送系に固有の制限によって課されるサイズの制限、ＣＮＳの外側で活性であり得るキャリアモチーフから構成されるキメラ分子の全身投与に関連する潜在的に望ましくない生物学的副作用、およびＢＢＢが破壊される脳の領域内の脳損傷のリスクの可能性などの制限を有し、それにより準最適な送達方法になる。

【0573】

あるいは、例えば、患者の組織領域に直接医薬組成物を注射することにより、全身的ではなく局所的な方法で、医薬組成物を投与することができる。

【0574】

本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物は、当技術分野で周知のプロセスによって、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、浮揚、乳化、カプセル化、捕捉または凍結乾燥のプロセスによって製造することができる。

【0575】

したがって、本発明のいくつかの実施形態に従って使用するための医薬組成物は、有効成分を薬学的に使用できる調製物に加工することを容易にする、賦形剤および助剤を含む、１つまたは複数の生理学的に許容される担体を使用して、従来の方法で処方することができる。適切な処方は、選択した投与経路によって異なる。

【0576】

注射の場合、医薬組成物の有効成分は、水溶液、好ましくはハンクス液、リンゲル液、または生理食塩水緩衝液などの生理学的に適合性のある緩衝液に処方することができる。経粘膜投与の場合、浸透するバリアに適した浸透剤が処方において使用される。そのような浸透剤は、当技術分野で一般的に知られている。

【0577】

経口投与の場合、医薬組成物は、活性化合物を当技術分野で周知の薬学的に許容される担体と組み合わせることによって容易に処方することができる。そのような担体は、患者による経口摂取のために、医薬組成物を錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして処方することを可能にする。経口使用のための薬理学的調製物は、固体賦形剤を使用して作製でき、任意選択で得られた混合物を粉砕し、顆粒の混合物を処理して、適切な助剤を添加した後、所望するのであれば、錠剤または糖衣錠のコアを得る。適切な賦形剤は、特に、糖、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトール；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、馬鈴薯デンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボメチルセルロースナトリウム、および／または生理学的に許容されるポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの充填剤である。所望であれば、崩壊剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸、またはそれらの塩、例えばアルギン酸ナトリウムを添加することができる。

【0578】

糖衣錠コアには適切なコーティングが施されている。この目的のために、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物を任意選択で含み得る強化糖溶液を使用することができる。染料または顔料は、識別のために、または活性化合物の用量の異なる組み合わせを特徴づけるために、錠剤または糖衣錠コーティングに添加され得る。

【0579】

経口にて使用できる医薬組成物には、ゼラチンで作られたプッシュフィットカプセル、ならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤で作られた柔らかく密封されたカプセルが含まれる。プッシュフィットカプセルは、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、および任意選択で安定剤と混合した有効成分を含み得る。ソフトカプセルでは、有効成分は、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体に溶解または懸濁され得る。さらに、安定剤を加えることができる。経口投与用のすべての処方は、選択した投与経路に適した投与量であるべきである。

【0580】

頬側投与の場合、組成物は、従来の方法で処方された錠剤またはロゼンジの形態をとることができる。

【0581】

経鼻吸入による投与の場合、本発明のいくつかの実施形態による使用のための有効成分は、適切な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンまたは二酸化炭素を使用して、加圧パックまたはネブライザからエアゾールスプレーの呈示の形で、便利にも送達される。加圧エアロゾルの場合、投与ユニットは、計量された量を送達するためのバルブを設けることによって、判定することができる。ディスペンサーで使用するための例えばゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、化合物と適切な粉末ベース、例えばラクトースまたはデンプンの粉末混合物を含むように処方することができる。

【0582】

本明細書に記載の医薬組成物は、例えば、ボーラス注射または持続注入による非経口投与用に処方することができる。注射用処方は、単位剤形で、例えば、アンプルで、または任意選択で防腐剤を添加した複数回投与容器で提示することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳濁液であり得、懸濁剤、安定剤および／または分散剤などの配合剤を含み得る。

【0583】

非経口投与用の医薬組成物には、水溶性形態の活性製剤の水溶液が含まれる。さらに、有効成分の懸濁液は、適切な油性または水ベースの注射懸濁液として調製することができる。適切な親油性溶媒またはビヒクルには、ゴマ油などの脂肪油、またはオレイン酸エチル、トリグリセリドまたはリポソームなどの合成脂肪酸エステルが含まれる。水性注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランなどの懸濁液の粘度を増加させる物質を含み得る。任意選択で、懸濁液はまた、高い濃度の溶液の調製を可能にするために、有効成分の溶解度を増加させる適切な安定剤または薬剤を含み得る。

【0584】

あるいは、有効成分は、使用前に、適切なビヒクル、例えば、無菌のパイロジェンフリーの水ベースの溶液と構成するための粉末形態であり得る。

【0585】

本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物はまた、例えば、カカオバターまたは他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を使用して、坐剤または停留浣腸などの直腸組成物に処方され得る。

【0586】

一実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、新鮮な細胞として投与するために製剤化される。

【0587】

一実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、冷凍保存された細胞として投与するために製剤化される。

【0588】

本発明のいくつかの実施形態の文脈での使用に適した医薬組成物には、有効成分が意図された目的を達成するのに有効な量で含まれている組成物が含まれる。より具体的には、治療有効量は、寛容化（すなわち、拒否効果）、抗疾患効果、抗腫瘍効果および／またはＧＶＨＤを誘導しない免疫再構成に有効な有効成分（非ＧＶＨＤ誘導Ｔｃｍ細胞）の量を意味する。本発明のＴｃｍ細胞は、移植後にリンパ節にホーミングするので、細胞の有益な効果（例えば、寛容化、抗疾患、抗腫瘍効果および／または免疫再構成）を達成するために、より少ない量の細胞（以前に使用された細胞の用量と比較して、例えば国際公開第２００１／０４９２４３号パンフレットを参照のこと）が必要とされ得る。本発明のＴｃｍ細胞と併せて、より低レベルの免疫抑制薬（上述）が必要とされ得ることが理解されるであろう。同様に、本発明のＴｃｍ細胞（例えば、移植前の前処置プロトコルからのＡＴＧの排除）と併せて、より低レベルの骨髄非破壊的薬物（上記で論じられる）が必要とされ得る。

【0589】

治療有効量の判定は、特に本明細書で提供される詳細な開示に照らして、十分当業者の能力の範囲内である。

【0590】

本発明の方法で使用される任意の調製物について、治療有効量または用量は、最初に、インビトロおよび細胞培養アッセイから推定することができる。例えば、所望の濃度または力価を達成するために、動物モデルにおいて用量を処方することができる。このような情報は、ヒトの有用な用量をより正確に判断するために使用できる。

【0591】

例えば、細胞の移植（例えば、本明細書にて下で論じられるような大量投与Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の移植）の場合、対象に注入されるＴｃｍ細胞の数は、理想体重１ｋｇあたり１×１０^６細胞より多くなるべきである。対象に注入されるＴｃｍ細胞の数は、典型的には、理想体重１ｋｇあたり０．０１×１０^６から２０×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり０．０１×１０^６から０．５×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり０．０１×１０^６から１×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり０．０１×１０^６から５×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり０．１×１０^６から０．５×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり０．１×１０^６から１×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり０．１×１０^６から５×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり０．５×１０^６から１×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり０．５×１０^６から１×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり０．５×１０^６から５×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり１×１０^６から５×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり１×１０^６から２０×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり５×１０^６から２０×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり１０×１０^６から１５×１０^６細胞、理想体重１ｋｇあたり１０×１０^６から２０×１０^６細胞、または理想体重１ｋｇあたり１５×１０^６から２０×１０^６細胞の範囲にあるべきである。

【0592】

具体的な実施形態によれば、対象に注入されるＴｃｍ細胞の用量は、理想体重１ｋｇあたり約２．５×１０^６のＣＤ８^＋細胞である。

【0593】

具体的な実施形態によれば、対象に注入されるＴｃｍ細胞の用量は、理想体重１ｋｇあたり約５×１０^６のＣＤ８^＋細胞である。

【0594】

具体的な実施形態によれば、対象に注入されるＴｃｍ細胞の用量は、理想体重１ｋｇあたり約１０×１０^６のＣＤ８^＋細胞である。

【0595】

本明細書で使用される「理想体重」という用語は、薬物投与を調整し、腎機能および薬物動態の推定（肥満患者などの）を助けるために臨床的に使用される測定値を指す。

【0596】

理想体重（ｋｇ）を推定する式は以下の通りである。
男性：ＩＢＷ＝５０ｋｇ＋５フィートを超える１インチごとに２．３ｋｇ。
女性：ＩＢＷ＝４５．５ｋｇ＋５フィートを超える１インチごとに２．３ｋｇ。

【0597】

理想体重は、参照により本明細書に組み込まれるＰｅｔｅｒｓｏｎら［Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ ２０１６；１０３：１１９７－２０３］に詳細に記載されている。

【0598】

本明細書に記載の有効成分の毒性および治療効果は、細胞の培養または実験動物において、インビトロでの標準的な製薬の処置によって判断することができる。これらのｉｎ ｖｉｔｒｏおよび細胞培養アッセイおよび動物実験から得られたデータは、ヒトで使用するための一連の投与量を処方する際に使用することができる。投与量は、使用される剤形および利用される投与経路に応じて変化し得る。正確な処方、投与経路、および投与量は、患者の状態を考慮して個々の医師が選択することができる。（例えば、Ｆｉｎｇｌ，ｅｔ ａｌ．の１９７５年、‘‘Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ’’，Ｃｈ．１ ｐ．１を参照）。

【0599】

投与量と間隔は、生物学的効果（最小有効濃度、ＭＥＣ）を誘発または抑制するのに十分である有効成分の十分なレベルが提供されるように個別に調整することができる。ＭＥＣは製剤ごとに異なるが、ｉｎ ｖｉｔｒｏのデータから推定できる。ＭＥＣを達成するために必要な投与量は、個々の特性と投与経路によって異なる。検出アッセイは、血漿濃度を判定するために使用することができる。

【0600】

治療される状態の重症度および応答性に応じて、投薬は、単回または複数回の投与であり得、治療の過程は、数日から数週間、または治癒がもたらされるか、または病状の減少が達成されるまで続く。

【0601】

治療される状態の重症度および応答性に応じて、投薬は、単回または複数回の投与であり得、治療の過程は、数日から数週間、または治癒がもたらされるか、または病状の減少が達成されるまで続く。

【0602】

もちろん、投与される組成物の量は、治療される対象、苦痛の重症度、投与方法、処方する医師の判断などに依存する。

【0603】

本発明のいくつかの実施形態の組成物は、必要に応じて、有効成分を含む１つまたは複数の単位剤形を含み得る、ＦＤＡ承認キットなどのパックまたはディスペンサーデバイスで提示され得る。パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属またはプラスチック箔を含み得る。パックまたはディスペンサーデバイスには、投与の説明書が添付されている場合がある。パックまたはディスペンサーは、医薬品の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって規定された形式の容器に関連する通知に適合され得る。この通知は、組成物の形態またはヒトまたは獣医の投与の機関による承認を反映している。このような通知は、例えば、処方薬について米国食品医薬品局によって承認されたラベル、または承認された製品挿入物に関するものである可能性がある。適合性のある医薬担体に処方された本発明の調製物を含む組成物はまた、調製され、適切な容器に入れられ、上でさらに詳述されるように、示された状態の治療のために標識され得る。

【0604】

一実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、治療用の「既製」製品（例えば、上述の治療に使用するためのベト細胞として）のために製造することができる。

【0605】

一実施形態によれば、対象は、移植後にＧＶＨＤ予防によって（例えば、コルチコステロイドおよび／または免疫抑制剤を用いて）長期的に（例えば長期間、例えば８、９、１０、１２、１４、２１、２５、３０、４５、６０、または９０日間を超えて、例えば１０～２１日間、例えば１０、または１４日間）処置されない。

【0606】

一実施形態によれば、造血幹細胞移植後の再発の場合、対象は、ドナーリンパ球注入（ＤＬＩ）によってさらに処置される場合がある。例えば、対象には、参照により本明細書に完全に組み込まれるＤａｚｚｉら［Ｄａｚｚｉ，Ｓｚｙｄｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，（２０００）９６：２７１２－６］によって以前に記載されたように、段階的用量のＴ細胞が投与され得る。

【0607】

本明細書で使用される「約」という用語は、±１０％を指す。

【0608】

用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」およびそれらの結合は、「含むが限定されない」ことを意味する。

【0609】

「からなる」という用語は、「含んで限定される」ことを意味する。

【0610】

「から本質的になる」という用語は、組成物、方法または構造が追加の成分、工程および／または部品を含むことができるが、追加の成分、工程および／または部品がクレームされる組成物、方法、または構造の基本的および新規の特性を実質的に変更しない場合のみを含み得ることを意味する。

【0611】

本明細書で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈からそうでないことが明確に示されない限り、複数の言及を含む。例えば、用語「化合物」または「少なくとも１つの化合物」は、それらの混合物を含む複数の化合物を含み得る。

【0612】

本出願を通して、本発明の様々な実施形態は、範囲形式で提示され得る。範囲形式での説明は単に便宜上および簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない制限として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、すべての可能な部分範囲およびその範囲内の個々の数値を具体的に開示したと見なされるべきである。例えば、１～６などの範囲の説明は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などの副次的な範囲およびその範囲内の個々の番号、例えば１、２、３、４、５、６を具体的に開示していると見なされるべきである。これは、範囲の幅に関係なく適用される。

【0613】

本明細書で数値範囲が示されるときはいつでも、それは、示された範囲内の任意の引用された数字（分数または整数）を含むことを意味する。第１の表示番号と第２の表示番号との「範囲／間の範囲」、また第１の表示番号から第２の表示番号「の範囲／までの範囲」という句は、本明細書では互換的に使用され、第１および第２の表示番号およびそれらの間のすべての分数と整数を含むことを意味する。

【0614】

本明細書で使用される「方法」という用語は、化学、薬理学、生物学、生化学および医学の実務家により公知であるか、公知の様式、方法、手段、技術および処置から容易に開発される様式、手段、技術、および手順を含むがこれらに限定されない、所与のタスクを達成するための様式、手段、技術、および手順を指す。

【0615】

明確にするため別個の実施形態の文脈で説明されている本発明の特定の特徴は単一の実施形態に組み合わせて提供することもできることは分かるであろう。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈で説明される本発明の様々な特徴は、別個に、または任意の適切なサブコンビネーションで、または本発明の他の説明された実施形態で適切に提供されてもよい。様々な実施形態の文脈で説明される特定の特徴は、実施形態がそれらの要素なしで動作不能でない限り、それらの実施形態の本質的な特徴と見なされるべきではない。

【0616】

本明細書の上にて詳述され、以下の特許請求の範囲で請求される本発明の様々な実施形態および態様は、以下の実施例で実験的裏付けを見出す。

【実施例】

【0617】

ここで、以下の実施例を参照するが、これらの実施例は、上記の説明と共に、本発明を非限定的な方法で説明するものである。

【0618】

一般に、本明細書で使用される命名法および本発明で利用される実験室手順には、分子、生化学、微生物学および組換えＤＮＡ技術が含まれる。そのような技術は文献で徹底的に説明されている。例えば、‘‘Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ’’Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）；‘‘Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ’’Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．，ｅｄ．（１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，‘‘Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ’’，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ，‘‘Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ’’，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，‘‘Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ’’，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｂｉｒｒｅｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ）‘‘Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ’’，Ｖｏｌｓ．１～４，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９８）；米国特許第４，６６６，８２８号明細書；第４，６８３，２０２号明細書；第４，８０１，５３１号明細書；第５，１９２，６５９号明細書および第５，２７２，０５７号明細書；‘‘Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ’’，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．，ｅｄ．（１９９４）；‘‘Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ’’Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ｃｏｌｉｇａｎ Ｊ．Ｅ．，ｅｄ．（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ），‘‘Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ’’（８^ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ（１９９４）；Ｍｉｓｈｅｌｌ ａｎｄ Ｓｈｉｉｇｉ（ｅｄｓ），‘‘Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ’’，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８０）にて記載されている方法論を参照されたい；米国特許第３，７９１，９３２号明細書；第３，８３９，１５３号明細書；第３，８５０，７５２号明細書；第３，８５０，５７８号明細書；第３，８５３，９８７号明細書；第３，８６７，５１７号明細書；第３，８７９，２６２号明細書；第３，９０１，６５４号明細書；第３，９３５，０７４号明細書；第３，９８４，５３３号明細書；第３，９９６，３４５号明細書；第４，０３４，０７４号明細書；第４，０９８，８７６号明細書；第４，８７９，２１９号明細書；第５，０１１，７７１号明細書、および第５，２８１，５２１号明細書；‘‘Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’’Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．，ｅｄ．（１９８４）；‘‘Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ’’Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｓ．Ｊ．，ｅｄｓ．（１９８５）；‘‘Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ’’Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｓ．Ｊ．，Ｅｄｓ．（１９８４）；‘‘Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ’’Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．，ｅｄ．（１９８６）；‘‘Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ’’ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）；‘‘Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ’’Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．，（１９８４）ａｎｄ‘‘Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ’’Ｖｏｌ．１～３１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；‘‘ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ’’，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）；Ｍａｒｓｈａｋ ｅｔ ａｌ．，‘‘Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ’’ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）などの特許および科学文献に利用可能なイムノアッセイが広範囲に記載されており、参照されたい；これらはすべて、本明細書に完全に記載されているかのように、参照により組み込まれている。他の一般的な参考文献は、この文書全体で提示されている。その中の手順は、当技術分野で周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。ここに含まれるすべての情報は、参照により本明細書に組み込まれる。
実施例１

【0619】

臨床プロトコル
組み入れ基準：
・１２～７０歳
・濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性症候群（ＭＰＤ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、または急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）の血液悪性腫瘍診断の患者。
・再生不良性貧血および重度の免疫不全または非悪性骨髄不全の状態を有する患者。
・血液悪性腫瘍を有する患者は、最初の化学療法にもかかわらず持続性または進行性の疾患を有していなおり、直近の化学療法に対して安定した疾患または部分的もしくは完全な応答を達成している者でなければならない。
・細胞ドナーの入手可能性
・カルノフスキーパフォーマンスステータス≧７０％
・以下によって実証されるような適切な主要臓器系機能：
－少なくとも４０％の左室駆出率
－ヘモグロビン濃度の予測値の少なくとも５０％の調整拡散能を実証する肺機能検査（ＰＦＴ）
－血清クレアチニン≦１．５ｍｇ／ｄｌ。
－ＳＧＰＴ≦２００ＩＵ／ｍｌ
－ビリルビン＜１．５ｍｇ／ｄｌ（ギルバート症候群でない限り）。
－妊娠の可能性がある女性における妊娠検査陰性。

【0620】

除外基準
・ＨＩＶ血清陽性。
・プロトコル治療に対する寛容を制限するであろう無制御の感染または重篤な医学的もしくは精神医学的状態。
・活動性ＣＮＳ悪性腫瘍。

【0621】

治療計画
ドナーからの２つの収集物、すなわちベト細胞を調製するための１つの「プライミングされていない」単核細胞（ＭＮＣ）、および大量投与Ｔ細胞枯渇幹細胞移植を調製するための動員された末梢血前駆細胞（ＰＢＰＣ）の第２の収集物が存在する。両方の収集は標準的なケア手順（ＳＯＣ）に従い、ドナーは提供のためにＳＯＣ同意に署名する。

【0622】

抗ウイルス性セントラルメモリーＣＤ８^＋ベトＴ細胞の産生のためのプライミングされていない（すなわち、非可動化）末梢血単核細胞の収集は、いつでも行われ得るが、一般に、計画された移植日（すなわち０日目、すなわちＤ０）の約７日前に行われる。ベト細胞は、その製造の最後に新鮮な状態で使用され、Ｄ＋７に注入されるか、またはその製造の最後に凍結保存される。

【0623】

Ｇ－ＣＳＦおよびプレリキサフォルを使用した動員されたＰＢＰＣの回収は、臨床的に必要であれば、大量投与移植のために、抗ウイルス性セントラルメモリーＣＤ８^＋ベト細胞の産生のためのＰＢＭＣの回収の７日以上前に完了することができる。あるいは、新鮮なＣＤ３４^＋幹細胞を使用することができ、動員された幹細胞の収集を連続した３日（－２日目、－１日目および０日目）で行うことができ、一方、ベト細胞のためのＰＢＭＣの収集を－８日目に開始することができる。理想体重１ｋｇあたり≧１０×１０^６のＣＤ３４^＋細胞という最適なＰＢＭＣ細胞用量という目標が達成される；理想体重１ｋｇあたり少なくとも５×１０^６のＣＤ３４^＋細胞が必要であり、これは、理想体重１ｋｇあたり約１×１０^６のＣＤ３４^＋細胞を含有するＰＢＰＣの未分画アリコートを含み、移植後のベト細胞産生または移植片不全の場合のバックアップとして凍結保存されるか、または移植片不全の治療に利用可能である。ドナーが処置に寛容ではない場合、または十分な細胞用量を収集することができない場合、利用可能であれば代替ドナーを使用することができる。

【0624】

動員されたＰＢＰＣは、一般に３日間で収集される。最初の２日間の収集物をプールし、ＣｌｉｎｉＭａｃｓデバイス（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用してＣＤ３４^＋細胞を選択し、細胞を新鮮な状態で（第３の収集物の細胞と共に）使用することができ、または凍結保存することができる。３日目の収集物からＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋細胞を除去し、細胞を新鮮な状態で（前の２日間の収集物の細胞と共に）使用することができ、または凍結保存することができる。Ｔ細胞枯渇幹細胞移植全体における最大のＴ細胞用量は、２×１０^５のＣＤ３^＋細胞／ｋｇ理想的レシピエント体重である。未操作のＰＢＰＣのバックアップ画分は、ＣＤ３４^＋細胞選択処置が残りのＰＢＰＣ産物に対して行われる前に、１日目の収集物から除去される。

【0625】

新鮮なＣＤ３４^＋選択幹細胞およびＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋枯渇幹細胞を使用する場合、これらは、典型的には、それぞれ－１および０日目に投与される。あるいは、凍結保存されたＣＤ３４^＋選択およびＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋枯渇幹細胞を使用する場合、それらは、典型的には、解凍され、０日目に注入される。

【0626】

抗ウイルスセントラルメモリーＣＤ８^＋ベトＴ細胞（ベト細胞）の作製
ベト細胞の産生のための詳細なプロトコルは、以下の実施例２に提供される。このセクションは、本発明のいくつかの実施形態の簡単な説明を提供する。

【0627】

プロトコルは、以下の３つの工程を含む：

【0628】

工程１：刺激薬の調製（－８日目～－５日目）：
ＰＢＭＣ中の単球からのドナーＤＣの調製
－８日目：およそ１×１０^１０個の単核細胞を白血球アフェレーシスによって回収し、一晩維持する。
－７日目：細胞をＦｉｃｏｌ分離によって処理し、その後、単核細胞の半分をＣＤ１４磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ磁気ビーズ選別システム）による単球の単離に使用する。その後、ＣＤ１４^＋単球は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）およびインターロイキン４（ＩＬ－４）を用いて未成熟ＤＣに分化される。

【0629】

並行して、ＣＤ１４－（すなわち、ＣＤ１４ ｎｅｇ）細胞を、フィコール単離後に得られた最初の単核細胞の半分と合わせ、ＩＬ－７の存在下、３７℃、５％Ｏ２／ＣＯ２中で一晩保存する。これらの細胞は、翌日のＣＤ８^＋メモリーＴ細胞の富化に使用される。
－６日目：１６時間のインキュベーションのためのリポ多糖（ＬＰＳ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４を含むサイトカインカクテルの添加によるＤＣ成熟。
－５日目：成熟ＤＣ（ｍＤＣ）を採取し、ウイルスペプチドカクテルを負荷し、照射する。

【0630】

工程２：レスポンダーの調製およびウイルス負荷ｍＤＣとの共培養（－６日目～－５日目）：
（Ａ）メモリーＴ細胞（ＣＤ４^－ＣＤ５６^－ＣＤ４５^－）精製（ドナーＰＢＭＣ－レスポンダー由来）
－６日目：ＩＬ－７と共に一晩インキュベートした単核細胞の半分と組み合わせたドナーＣＤ１４^－細胞を、磁気ビーズによってＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋細胞を枯渇させ、ＩＬ－７の存在下、３７℃、５％Ｏ２／ＣＯ２中でさらに一晩保存する。

【0631】

Ｂ）レスポンダー（ドナー）刺激因子（ドナーウイルスペプチド負荷ＤＣ）の共培養確立。
－５日目：精製メモリーレスポンダーＴ細胞（ＣＤ４^－ＣＤ５６^－ＣＤ４５ＲＡ^－）を、ＩＬ－２１の存在下で、ウイルスペプチドを負荷したｍＤＣで３日間インキュベートする。

【0632】

工程３：抗ウイルスベトＴｃｍの分化および増殖（－５日目～＋７日目）：
（Ａ）抗ウイルスセントラルメモリーＣＤ８^＋ベトＴ細胞（Ｔｃｍ）の増殖
－５から－２日目：ＩＬ－２１のみによるＴｃｍ表現型の開始。
－２～＋７日目：グルコースレベルの消費に従って分割することによるＴｃｍ培養物の増殖、および培養物中で観察された増殖に応じた以下のサイトカイン：ＩＬ－７、ＩＬ－１５およびＩＬ－２１を補充した培地の添加。
＋７日目：細胞の採取および注入。

【0633】

目的のＰＢＭＣドナーからのＴｃｍ産生およびＤＣ調製のおおよそのタイムラインを図１に示す。細胞を採取し、造血幹細胞移植後の＋７日目に注入する。

【0634】

抗ウイルス性セントラルメモリーＣＤ８^＋ベト細胞のアリコートを放出基準および機能的免疫研究について評価する（以下に考察する）。

【0635】

治療計画－前処置レジメン
新鮮なＣＤ３４^＋細胞を含む

【0636】

図３に示すように、Ｄ－１０からＤ－２への前処置レジメン（すなわち、移植の１０から２日前）には、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）（－１０日目から－８日目までの３回の用量）、フルダラビン（Ｆｌｕ）（７日目から－４日目までの４回の用量）、および３Ｇｙの全身照射（ＴＢＩ）（２日目に１回）が含まれる。Ｔ細胞枯渇幹細胞移植片を－１日目および０日目に注入する。移植後Ｄ＋３および＋４（すなわち移植後３および４日目）に、患者はシクロホスファミド（ＣＹ）を受け、続いて移植後Ｄ＋７（すなわち、移植後７日目）に、ベト細胞の注入を受ける。Ｂ細胞悪性腫瘍を有する患者は、－１１日目にリツキシマブ３７５ｍｇ／ｍ^２を投与され得る。

【0637】

日および処置：
－１１ 水和／リツキサン３７５ｍｇ／ｍ^２（Ｂ細胞悪性腫瘍の場合）を承認／静脈内（ＩＶ）投与する
－１０ ＡＴＧ（チモグロブリン）２ｍｇ／ｋｇ
－９ ＡＴＧ（チモグロブリン）２ｍｇ／ｋｇ
－８ ＡＴＧ（チモグロブリン）２ｍｇ／ｋｇ
－７ フルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２
－６ フルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２
－５ フルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２
－４ フルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２
－３ 安静（無処置）
－２ ＴＢＩ３Ｇｙを単一画分で。
－１ 大量投与Ｔ細胞枯渇ＰＢＰＣ（ＣＤ３４^＋選択細胞を含有する）の注入
０ ＣＤ３^－／ＣＤ１９^－枯渇細胞の注入
＋３ シクロホスファミド（ＣＹ）５０ｍｇ／ｋｇ／日のＩＶ
＋４ シクロホスファミド（ＣＹ）５０ｍｇ／ｋｇ／日のＩＶ
＋７ 必要な用量での抗ウイルスベト細胞の注入。

【0638】

注目すべきことに、患者は、シクロホスファミドの最初の用量の直前に、Ｍｅｓｎａ１０ｍｇ／ｋｇの用量の静脈内ピギーバック（ＩＶＰＢ）を受ける。これを４時間毎に合計１０回繰り返す。患者はまた、シクロホスファミド（Ｃｙ）の各用量の前にオンダンセトロン（または他の制吐薬）を投与される。

【0639】

ベト細胞のための前投薬は、コルチコステロイドを含まない。

【0640】

凍結保存ＣＤ３４^＋細胞を用いて
図４に示すように、Ｄ－９からＤ－１（すなわち移植の９～１日前）まで、患者は、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）、フルダラビン（Ｆｕ）および低用量全身照射（ＴＢＩ）を準備レジメンとして受ける。移植後Ｄ＋３および＋４（すなわち移植後３～４日目）に、患者はシクロホスファミド（ＣＹ）を受け、続いて移植後７日目（すなわち、移植後Ｄ＋７）に、ベト細胞の注入を受ける。Ｂ細胞悪性腫瘍を有する患者は、－１０日目にリツキシマブ３７５ｍｇ／ｍ^２を投与され得る。

【0641】

日および処置：
－１０ 水和／リツキサン３７５ｍｇ／ｍ^２（Ｂ細胞悪性腫瘍の場合）を承認／静脈内（ＩＶ）投与
－９ ＡＴＧ（チモグロブリン）理想体重１ｋｇあたり２ｍｇ
－８ ＡＴＧ（チモグロブリン）理想体重１ｋｇあたり２ｍｇ
－７ ＡＴＧ（チモグロブリン）理想体重１ｋｇあたり２ｍｇ
－６ フルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２
－５ フルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２
－４ フルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２
－３ フルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２
－２ 安静（無処置）
－１ ＴＢＩ３Ｇｙを単一画分で。
０ 大量投与Ｔ細胞枯渇ＰＢＰＣ（ＣＤ３４^＋選択細胞およびＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋枯渇細胞を含有する）の注入
＋３ シクロホスファミド（ＣＹ）５０ｍｇ／ｋｇ理想体重／日ＩＶ
＋４ シクロホスファミド（ＣＹ）５０ｍｇ／ｋｇ理想体重／日ＩＶ
＋７ 必要な用量での抗ウイルスベト細胞注入。

【0642】

注目すべきことに、患者は、シクロホスファミドの最初の用量の直前に、Ｍｅｓｎａ１０ｍｇ／ｋｇの用量の静脈内ピギーバック（ＩＶＰＢ）を受ける。これを４時間毎に合計１０回繰り返す。患者はまた、シクロホスファミド（Ｃｙ）の各用量の前にオンダンセトロン（または他の制吐薬）を投与される。

【0643】

ベト細胞のための前投薬は、コルチコステロイドを含まない。

【0644】

抗ウイルスベト細胞用量レベル－ＣＤ８^＋細胞用量漸増
用量レベル１：理想体重１ｋｇあたり２．５×１０^６のＣＤ８^＋細胞
用量レベル２：理想体重１ｋｇあたり５．０×１０^６のＣＤ８^＋細胞
用量レベル３：理想体重１ｋｇあたり１０×１０^６のＣＤ８^＋細胞

【0645】

追加の移植後免疫抑制療法はＧＶＨＤ予防として投与されない。

【0646】

製造された細胞産物が計画された用量レベル未満である場合の考察
用量レベル１は、理想体重１ｋｇあたり２．５×１０^６個の細胞を含む。注目すべきことに、より低い用量は、典型的には許容されないと考えられる。

【0647】

用量レベル２の場合、目標用量は理想体重１ｋｇあたり５×１０^６細胞であるが、理想体重１ｋｇあたり２．６～５×１０^６細胞の用量が適切であると考えられ、用量レベル２と考えられる。

【0648】

用量レベル３の場合、目標用量は、理想体重１ｋｇあたり１０×１０^６細胞であるが、理想体重１ｋｇあたり５．１から１０×１０^６細胞の用量が適切であると考えられ、用量レベル３と考えられる。

【0649】

試験中の評価
事象のスケジュールおよびすべてのプロトコル要件を遵守する努力がなされる。患者の権利および安全性に影響を及ぼさない事象のスケジュールおよび他のプロトコル要件の変動は、逸脱と見なされない。そのような変動には、スケジュール外で完了した実験室評価および必要な研究サンプルを時折欠くことが含まれ得る。相関研究のための欠落したサンプルは、プロトコルの逸脱を構成しない。

【0650】

移植前の評価（ベースライン）：
移植および疾患評価のための標準的な後処理は、診断的または日常的な移植前評価の一部として試験に参加する前に行われる。以下の試験は、標準的な移植前のケアの試験であり、プロトコル特異ではない。結果は、移植適格性を判定するために使用され、治療開始前に繰り返されない。治療が同意後３０日間を超えて遅延した場合、ＰＩまたは被指名人は、もしあれば、臨床的な必要に応じて、どの検査を繰り返す必要があるかを決定すべきである。
－ＣＢＣ、鑑別および血小板
－ビリルビン、血清クレアチニンおよびクレアチニンクリアランス、ＡＬＴ、アルブミン、電解質、ＬＤＨ、アルカリホスファターゼ
－感染性疾患パネル（肝炎血清学（Ｂ、Ｃ）、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ、Ｉ／ＩＩ、ＣＭＶ、ＴＰＨＡスクリーニング）、トキソプラズマ血清学、ストロンギロイデス血清学（必要な場合）、結核、ＩＲＧＡ（必要な場合）
－ＰＴおよびＰＴＴ
－ＡＢＯおよびＲｈの分類
－臨床的に必要であれば、細胞遺伝学および分子研究を伴う骨髄吸引
－キメラ現象分析ベースライン
－妊娠可能性のある女性における妊娠試験
－ＤＬＣＯを用いた肺機能検査
－左心室ＥＦおよび肺動脈圧を評価するための心エコー図
－胸部Ｘ線およびＥＣＧ
－ドナー特異的抗ＨＬＡ抗体（ＤＳＡ）の血清

【0651】

この試験で治療される患者の有効な治療期間は、準備レジメンの開始（－９日目）から移植後＋４２日目までである。その後、患者は、臨床的に必要であればＤ＋１００までフォローアップを行う。その後、幹細胞移植レシピエントの標準的なフォローアップに従って、疾患の再発、感染、急性および慢性ＧＶＨＤならびに生存データを収集する。１年後、患者を試験から外す。急性ＧＶＨＤおよび慢性ＧＶＨＤを、ＮＩＨ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｃｒｉｔｅｒｉａに従ってスコア化する。

【0652】

標準的な事後評価
標準的な事後評価は、同種移植後のＳＯＣによる。骨髄吸引および末梢血－処置応答、生着、キメラ現象および免疫再構成を評価するため－を３ヶ月間にわたって、臨床的に必要であれば毎月行う。

【0653】

相関研究
免疫再構成を、フローサイトメトリー免疫表現型パネルおよび四量体分析による抗ウイルス応答によって評価する。免疫寛容試験を移植のおよそ３ヶ月後に行う。相関研究のための欠落したサンプルは、プロトコルの逸脱を構成しない。

【0654】

急性ＧＶＨＤの発症をＮＩＨコンセンサス基準によって評価し、スコア化する。疾患の再発または進行は、患者の悪性腫瘍の形態学的再発によって評価される。細菌、ウイルス、真菌および寄生虫の感染に関するデータを収集する。慢性ＧＶＨＤの発症は、ＮＩＨ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｃｒｉｔｅｒｉａ［Ｊａｇａｓｉａ ＭＨ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｐｒｏｊｅｃｔ ｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓ ｉｎ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－Ｈｏｓｔ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｉ．Ｔｈｅ ２０１４ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｓｔａｇｉｎｇ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ ｒｅｐｏｒｔ．Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．（２０１５）２１：３８９－４０１ ｅ３８１］に従って記載される。

【0655】

【表1A】

【0656】

支持療法
・移植後成長因子なし
・移植後免疫抑制療法はＧＶＨＤ予防として投与されない。
・支持療法の他の態様は、臨床的に必要であれば投与される（例えば、生着が遅い場合のＧ－ＣＳＦによる支持、または例えばメチルプレドニゾロン、タクロリムスもしくは他の免疫抑制薬によるＧＶＨＤの処置）。試験中に患者に投与された併用薬は、患者の一次医療記録に記録されている。

【0657】

不適切な抗ウイルスベト細胞産生に対する偶発事象
ベト細胞が放出基準を満たすが、細胞用量が標的細胞用量レベル未満である場合：用量が理想体重１ｋｇあたり≧２．５×１０^６のＣＤ８^＋細胞（用量レベル１）である場合、細胞は注入される。この場合、患者は治療意図の原理によって割り当てられた用量レベルで評価される。

【0658】

ベト細胞用量が理想体重１ｋｇあたり２．５×１０^６個未満のＣＤ８^＋細胞である場合、またはベト細胞が放出基準を満たさない場合、これらの細胞は注入されない。代わりに、予備のＰＢＰＣ＋Ｔ細胞枯渇ＰＢＰＣを注入して「標準的なＰＢＰＣ移植」を再構成し、患者は、標準的なＧＶＨＤ予防としてタクロリムスおよびミコフェノール酸を用いた標準的なケア準備レジメンを受ける。

【0659】

持続性または進行性疾患のためのドナーリンパ球注入（ＤＬＩ）
ＧＶＨＤが存在しない場合、生着を達成し、≧５％の骨髄性ドナー細胞を有し、移植後の任意の時点で進行性疾患または≧３ヶ月で持続性疾患を有する患者は、標準治療または代替療法としてドナーリンパ球注入を受けることができる。

【0660】

グラフトの処置の不全
これは骨髄非破壊的レジメンである。移植片拒絶が起こった場合、自己造血回復が起こり得ると予想される。生着は、キメラ現象分析および絶対好中球数（ＡＮＣ＞０．５×１０^９／Ｌ）の回復によるドナー細胞の検出として定義される。ドナー細胞の生着および造血回復を有さない患者（２８日後にＡＮＣ＞０．５×１０^９／Ｌ）、または回復を達成するがその後５日間にわたって少なくとも３回連続してＡＮＣが＜０．５×１０^９／Ｌに低下したという判定があり、骨髄生検での＜１０％の細胞充実性があり、ドナーキメラ現象の証拠がない（可逆的感染、骨髄抑制薬治療または疾患の進行に関連しない）患者を、移植片不全と定義し、処置の失敗とみなし、試験を中止する。これらの患者は、臨床的に必要であれば再移植のために考慮され、予備の未改変ＰＢＰＣを使用し得る。

【0661】

移植後に生じるＧＶＨＤに対する介入
以下は、急性ＧＶＨＤの管理のためのガイドラインである。これは、患者の主治医によって、臨床的に必要であれば変更される。

【0662】

急性ＧＶＨＤ
ａ）グレードＩ－１週間投薬なし（Ｒｘ）または局所ステロイドのみを監視する。
ｂ）グレードＩＩ～ＩＶが発生した場合、メチルプレドニゾロン１～２ｍｇ／ｋｇ理想体重／日で治療する。
ｃ）メチルプレドニゾロンの添加後、グレード＞ＩＩが４８時間の間持続または進行する場合、タクロリムスまたは他の免疫抑制薬を、臨床的に必要であれば、または能動的ＧＶＨＤ治療プロトコルで追加することができる。

【0663】

グレード３～４のステロイド抵抗性急性ＧＶＨＤを有する患者は、処置失敗と見なされ、臨床的に必要であれば、他の免疫抑制処置を受ける場合がある。

【0664】

統計的考察
１．予備。これは、ＮＨＬ、ＡＭＬ、ＣＬＬまたはＭＭを含む血液悪性腫瘍を有する患者であって、以前に再発したかまたは初期治療に対して難治性であると宣言され、その後部分寛解または完全寛解を達成した患者に投与されるドナー由来ベト細胞の最適用量を決定するための第Ｉ相－ＩＩ相試験である。各患者は、まず、ハプロタイプ一致ドナーからの同種異系幹細胞移植（アロスクト）を受け、前処置レジメンは、ＡＴＧ、フルダラビンおよびＴＢＩが、アロスクト後３および４日目にＧＶＨＤの予防として与えられ、引き続いてベト細胞が、アロスクト後７日目に与えられる。各患者コホートのベト細胞用量は、第Ｉ－ＩＩ相の設計を使用して適応的に選択される。

【0665】

２．用量設定設計
目標：試験の主要な科学的目標は、理想体重１キログラムあたり２．５×１０^６、５×１０^６、および１０^７のＣＤ８^＋細胞の３つのレベルの中から最適なベト細胞用量を決定することであり、以後、用量１、２、３と呼ばれ、用量－転帰モデルにおいて（以下の表１Ｂを参照されたい）数値的にコードされる。用量設定は、先に論じたように逐次適応第Ｉ相－ＩＩ相のＥｆｆＴｏｘのトレードオフベースの設計を使用して行われる［Ｔｈａｌｌ ＰＦ ａｎｄ Ｃｏｏｋ ＪＤ．Ｄｏｓｅ－ｆｉｎｄｉｎｇ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｅｆｆｉｃａｃｙ－ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｒａｄｅ－ｏｆｆｓ．Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ（２００４）６０：６８４－６９３；Ｔｈａｌｌ ＰＦ ｅｔ ａｌ．Ｕｓｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｓａｍｐｌｅ ｓｉｚｅ ｆｏｒ ｐｒｉｏｒ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｉｎ Ｂａｙｅｓｉａｎ ｐｈａｓｅ Ｉ－ＩＩ ｄｏｓｅ－ｆｉｎｄｉｎｇ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓ．（２０１４）１１：６５７－６６６］。

【0666】

共通の主要転帰：用量設定の目的のために、（１）毒性は、ベト細胞注入の４２日間以内のグレード３、もしくは４のＧＶＨＤ、または何らかの原因による死亡と定義される。（２）有効性は、ベト細胞注入後４２日目に生存し移植されている患者として定義される。治験に登録されているが、何らかの理由でベト細胞を受けていない患者は、アロストがサンプル中で交換された後７日目にベト細胞を投与される。

【0667】

用量許容性：２つのＥｆｆＴｏｘの用量許容可能性ルールの場合、毒性の確率の上限は．２０で、有効性の最小確率は．８０、事後確率決定カットオフは．１０が使用されるか、または両方が許容性基準である。最低用量レベルが高い毒性または低い有効性のいずれかに関して許容できないことが判明した場合、試験は終了し、ベト細胞用量レベルは選択されない。

【0668】

最大サンプルサイズおよびコホートサイズ：最大２４人の患者がサイズ３の最大８つのコホートで治療され、第１のコホートは用量ｄ＝２で治療され、その後のすべてのコホートの用量は、最新の蓄積データに基づいて計算された有効性－毒性のトレードオフを最大化するように適応的に選択される。転帰適応規則を適用するために、４２日間の有効性および毒性転帰の両方が以前に治療されたすべての患者について評価されることを確実にするために、必要に応じてコホート間で発生が保留される。

【0669】

事前：モデルパラメータの事前の値は、ＥｆｆＴｏｘプログラムバージョン４．０．１２を使用して、表１Ｂに示す誘発された平均限界転帰確率から計算し、事前の有効サンプルサイズ１を得るために超分散を較正した。

【0670】

【表1B】

【0671】

有効性－毒性トレードオフ輪郭：トレードオフ輪郭を計算するために使用される３つの等価なトレードオフ確率対は、（３０、０）、（５５、３０）、および（１、８０）である。

【0672】

３．設計動作特性
６つの仮定的用量－転帰シナリオの下での設計の動作特性（ＯＣ）を以下に要約する。ＯＣを計算するためのシミュレーションは、シミュレーションシード１０５０２を使用して、シナリオごとに２０００回の複製で、ＥｆｆＴｏｘバージョン４．０．１２を使用して実行された。

【0673】

【表2A】

【0674】

４．実装
ＥｆｆＴｏｘ設計は、ＭＤ Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ（ＭＤＡＣＣ）Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｓｔａｔｉｃｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｃｏｎｄｕｃｔ、ウェブサイトｗｗｗ（ｄｏｔ）ｂｉｏｓｔａｔｉｃｓ（ｄｏｔ）ｍｄａｎｄｅｒｓｏｎ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌＣｏｎｄｕｃｔ／を使用して実施される。試験実施中に必要であれば、試験生物統計学者のＰｅｔｅｒ ＴｈａｌｌまたはＢｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔの指定された統計学専門家に相談すべきである。

【0675】

５．副次的転帰およびデータ分析
副次的転帰には、感染、無増悪生存期間（ＰＦＳ）時間、全生存期間（ＯＳ）時間、サイトメガロウイルス、および免疫再構成が含まれ、各患者について１年間の追跡調査期間を伴う。事象までの時間の転帰の調整されていない分布を、ＫａｐｌａｎおよびＭｅｉｅｒの方法［Ｋａｐｌａｎ，ＥＬ ａｎｄ Ｍｅｉｅｒ，Ｐ：Ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ ｅｓｔｉｍａｔｏｒ ｆｒｏｍ ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ．Ｊ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（１９５８）５３：４５７－４８１］を使用して推定し、予後共変量およびベト細胞用量レベルに対するそれらの関係を、ベイズの区分的指数生存回帰［Ｉｂｒａｈｉｍ ＪＧ，Ｃｈｅｎ Ｍ－Ｈ，Ｓｉｎｈａ Ｄ．Ｂａｙｅｓｉａｎ Ｓｕｒｖｉｖａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（２００１）］によって評価する。

【0676】

データおよびプロトコルの管理
プロトコルのコンプライアンス
患者は、最初の２８日間、臨床試験の治験責任医師および／またはその代理人によって、臨床的に必要であれば、毒性および生着について毎週監視される。試験責任者は、意見の相違が存在する場合の毒性の最終的な調停者である。

【0677】

試験からの除去基準
以下のいずれかについて患者を試験から外す：
１）参加する患者の同意の撤回。
２）注入には不十分なベト細胞産物。
３）疾患の進行。
４）２回目の移植を必要とする移植片不全の発症。
５）処置の１年後。
６）試験責任者によって許容できないと見なされた毒性の増加または予想外のパターン。
７）患者の幸福および最良の利益が損なわれたときの治験責任医師の判断。
８）試験エンドポイントの評価を損なうために試験責任者が検討した不適合
９）死

【0678】

報告要件
有害事象の定義
有害事象は、その事象が試験薬に関連すると考えられない場合であっても、試験薬の開始後に生じる任意の望ましくない徴候、症状または医学的状態の出現または悪化である。試験薬を開始する前に存在する医学的状態／疾患は、試験薬を開始した後に悪化する場合にのみ有害事象とみなされる。異常な臨床検査値または検査結果は、それらが臨床的徴候または症状を誘発するか、臨床的に意味があると考えられるか、または治療を必要とする場合にのみ有害事象を構成する。

【0679】

有害事象の評価
治験責任医師または医師の指名者は、すべての有害事象に関する情報源の文書を検証および提供し、治験に登録されたすべての対象について各事象の属性を割り当てる責任を負う。

【0680】

有害事象およびプロトコル特異的データをＲｅｄｃａｐに入力する。このプロトコルの電子症例報告書には、Ｒｅｄｃａｐが使用される。

【0681】

有害事象（ＡＥ）の重症度
抗ベト細胞注入に関連する全グレードのＡＥを収集する。

【0682】

一般的な格付け：

【0683】

グレード１：軽度：日常的な活動を妨害せず、予防以外の処置を必要としない不快感が存在する。

【0684】

グレード２：中程度：日常的な活動のいくらかの妨害を伴う不快感が存在し、治療を必要とする。

【0685】

グレード３：重度：通常の日常的な活動を中断する不快感であり、一次治療に反応しない。

【0686】

グレード４：生命を脅かす：死亡の即時リスクを表す不快感

【0687】

【表2B】

【0688】

因果関係評価
この試験の治療計画の調査コンポーネントは、ベト細胞の注入である。

【0689】

ベト細胞の注入に関連する有害事象。注入反応が起こり得る。他の毒性は予想されない。

【0690】

したがって、ベト細胞注入によって引き起こされることが知られている事象およびその直接的な結果は、因果関係を評価するときに明確に関連すると評価される。

【0691】

ベト細胞注入と移植前処置との間の有害事象の関係を排除することができない場合、その事象はおそらく関連するかまたは関連する可能性があるとしてスコア化される。

【0692】

化学療法として使用される薬物ならびに支持療法として使用される薬物に関連することが知られている事象は、抗ベト細胞注入とは無関係であるとしてスコア化される。

【0693】

治験責任医師は、因果関係評価を決定する際の最後の調停者である。

【0694】

重篤と考えられる有害事象
この試験の目的のために、元の疾患に関連すると考えられる異常な検査所見、ならびに電解質マグネシウムおよび代謝不均衡、尿酸変化、ＧＰＴ、ＧＯＴ、ＬＤＨおよびアルカリホスファターゼの上昇などの検査パラメータの孤立した変化は有害事象とはみなされず、データベースに収集されない。

【0695】

重篤な有害事象の報告（ＳＡＥ）
治験責任医師または治験依頼者のいずれかの観点から、有害事象または有害反応の疑いが以下の転帰のいずれかをもたらす場合、有害事象または有害反応の疑いは「重篤」とみなされる。
・死
・生命を脅かす有害な薬物経験－最初の報告者の観点で、その経験が生じるとその有害な経験により患者を直ちに死亡の危険にさらすいずれかの有害な経験。それは、より重度の形態で発生した場合に死を引き起こしたかもしれない有害な経験を含まない。
・入院患者の入院または既存の入院の延長
・正常な生活機能を果たす能力の持続的なまたは著しい無能力化または実質的な崩壊。
・先天異常／出生時欠損。
・死に至らない、生命を脅かない、または入院を必要としない可能性のある重要な医療事象は、適切な医学的判断に基づいて、患者または対象を危険にさらす可能性があり、この定義に列挙された転帰の１つを防ぐために医学的または外科的介入を必要とする可能性がある場合、重篤な有害薬物経験と見なされ得る。

【0696】

そのような医療事象の例には、緊急治療室または家庭での集中治療を必要とするアレルギー性気管支攣縮、入院患者の入院をもたらさない血液障害または痙攣、または薬物依存もしくは薬物乱用の発生が含まれる（２１ ＣＦＲ ３１２．３２）。
・上で定義した重要な医療事象は、重篤な有害事象とも考えられ得る。任意の重要な医療事象は、治験責任医師またはＩＮＤの主催者、ＩＮＤオフィスによって適切であると考えられる場合、ＳＡＥとして報告することができ、報告すべきである。
・プロトコルの実施中に発生し、ＳＡＥの定義を満たすすべての事象は、「Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ Ｍ．Ｄ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ Ｂｏａｒｄ Ｐｏｌｉｃｙ ｆｏｒ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓ ｏｎ Ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ Ｕｎａｎｔｉｃｉｐａｔｅｄ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｄｅｖｉｃｅｓ」に概説されている時間枠および手順に従ってＩＲＢに報告しなければならない。治験実施計画書に別段の記載がない限り、全ＳＡＥは、帰属にかかわらず（当該事象に関する知識の５営業日以内に）、予想または予想外のすべてをＩＮＤオフィスに報告しなければならない。
・予期せずかつ試験薬に関連する全ての生命を脅かすまたは致命的な事象は、その事象に関する知識の２４時間（次の稼働日）以内にＩＮＤオフィスの安全プロジェクトマネージャに報告書を提出しなければならない。
・特に明記しない限り、電子ＳＡＥアプリケーション（ｅＳＡＥ）は、ＩＮＤ ＯｆｆｉｃｅおよびＭＤＡＣＣ ＩＲＢへの安全性報告に利用される。
・重篤な有害事象は、最初のプロトコル特異的介入の時点から、参加者が同意を取り下げない限り、抗ベト細胞の注入後３０日まで取得される。重篤な有害事象は、臨床的回復が完了し、実験室試験がベースラインに戻るまで、事象の進行が安定化するまで、または事象の許容可能な解消が得られるまで、追跡されなければならない。
・さらに、試験の治療に関連する３０日間の期間後に発生するいずれかの重篤な有害事象は、ＩＮＤオフィスに報告しなければならない。

【0697】

背景薬物情報
シクロホスファミド
安定性および保存要件：
・混合前：室温
・混合後：室温で２４時間、冷蔵すると６日間安定。

【0698】

通常の投薬範囲：３週間ごとに繰り返される、単回用量として最大２０００ｍｇ／ｍ^２。より少ない用量をより頻繁に与えることができる。最大１．５ｇｍ／ｍ^２／ｄ×４の用量が、骨髄または末梢血前駆細胞移植と併せて使用され得る。

【0699】

既知の副作用および毒性：骨髄抑制（血小板減少症を超える白血球減少症）、出血性膀胱炎、悪心、嘔吐、脱毛症、ならびにまれな無月経および無精子症。

【0700】

特別な予防策：コピウス尿排出量で毎日２～３リットルの体液で十分に水和することにより、膀胱炎を予防することができる。顕著な腎排泄のため、腎機能不全患者では用量を減少させなければならない。

【0701】

作用機序：シクロホスファミドは古典的な二官能性アルキル化剤と考えられており、主なアルキル化反応はグアニンの７窒素で起こる。シクロホスファミドは、ＤＮＡ分子を損傷するために肝臓ミクロソーム酵素によって活性化されなければならない。細胞周期を通して活性であるが、薬剤はＳ期中に最も活性である。

【0702】

ヒト薬理学：シクロホスファミドは経口または静脈内投与することができるが、経口吸収は不完全である（用量の３０～６０％が便中で回復可能である）。最大血漿レベルは、経口投与から１時間以内に達成される。血漿Ｔ－１／２は、４～６．５時間である。静脈内投与量の約６０％が２４時間以内に尿中に回収され、腎機能不全の患者では投与量の調整が必要である。薬物は、肝臓ミクロソーム酵素によって活性化され、続いて不活性化される。

【0703】

フルダラビン（ＦＵ）
類義語（商品名など）：フルダラ
治療分類：フッ素化ヌクレオシド類似体
各バイアルは、５０ｍｇの凍結乾燥薬物を含有し、２ｍｌの滅菌水を用いて、ＩＶ投与のために２５ｍｇ／ｍｌである溶液に再構成される。

【0704】

医薬データ：溶液用の静脈内粉末：５０ｍｇ

【0705】

溶液の調製：各バイアルを２ｍｌの発熱物質を含まない滅菌水と混合して透明な溶液にし、これはＩＶ投与のみで２５ｍｇ／ｍｌである。再構成溶液は８時間以内に使用すべきである。
・化学療法の取り扱いおよび廃棄に適切な手順を使用する

【0706】

作用機序：フルオロ－ａｒａ－ＡＴＰへのリン酸化後、薬物はＤＮＡに組み込まれ、ＤＮＡポリメラーゼアルファ、リボヌクレオチドレダクターゼおよびＤＮＡプライマーゼを阻害し、したがってＤＮＡ合成を阻害するようである。

【0707】

ヒト安全性および薬理学：活性化化合物の半減期は約１０時間であるが、薬理学は完全には理解されていない。腎機能障害患者では排泄が障害される。

【0708】

抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）（チモグロブリン）
治療分類：免疫抑制剤

【0709】

作用機序：ＡＴＧはウサギ抗胸腺細胞グロブリンである。それは、選択的免疫抑制剤の過剰免疫血清の精製された滅菌された主として単量体ＩｇＧ画分である。リンパ球の数および機能を改変することによって作用すると考えられている。

【0710】

薬学的データ：ＡＴＧを０．９％ＮａＣｌで希釈する。ＡＴＧは、中心静脈への４時間の注入として静脈内投与される。これは、無色からわずかに乳白光のタンパク質溶液である。ＡＴＧは沈殿を引き起こす可能性があるので、デキストロースまたは低塩流体で希釈すべきではない。酸性溶液の注入は、物理的不安定を引き起こす可能性がある。さらなる不適合性または薬物相互作用は知られていないが、ＡＴＧを単独で投与することが推奨される。

【0711】

安定性および保存要件：市販。注入用溶液は１ｍｇのＡＴＧ／２ｍｌを含む。２℃～８℃の冷蔵庫で保存する（凍結しない）べきである。希釈したＡＴＧは２４時間安定である。

【0712】

既知の副作用：ＡＴＧは、任意の細胞株の血球減少、悪寒、発熱、または浮腫を引き起こし得る。血清病様症候群も発症し得る。発疹、掻痒症、蕁麻疹、水疱、および発赤反応、気管支痙攣出血およびアナフィラキシーショックを含む有害反応が報告されている。蘇生装置は、投与中に利用可能であるべきである。アナフィラキシー反応後、注入を再開すべきではない。

【0713】

Ｍｅｓｎａ
類似物（商品名など）：Ｍｅｓｎｅｘ
治療の分類：出血性膀胱炎阻害剤、抗腫瘍剤

【0714】

薬学的データ：１００ｍｇ／ｍｌ注射用溶液、４００ｍｇ経口錠剤

【0715】

通常の投薬範囲：
・シクロホスファミド有害反応、高用量；予防－出血性膀胱炎；予防：０、３、６、９時間およびＩＶ液でのシクロホスファミド用量の４０％ＩＶ（Ｗ／Ｗ）。
・シクロホスファミド有害反応、低用量；予防－出血性膀胱炎；予防：２０ｍｇ／ｋｇ理想体重、経口で３～４時間毎。
・出血性膀胱炎；予防－イホスファミド有害反応；予防：ボーラスＩＶレジメン、０、４、８時間でのイホスファミド用量（ｗ／ｗ）の２０％のＩＶボーラス。
・出血性膀胱炎；予防－イホスファミド有害反応；予防：経口錠剤レジメン、注入時に２０％のイホスファミド用量（ｗ／ｗ）のＩＶボーラス、２、６時間で４０％のイホスファミド用量の錠剤。
・出血性膀胱炎；予防－イホスファミド有害反応；予防：連続ＩＶレジメン（ＦＤＡ非承認レジメン）、ボーラス用量（総イホスファミド用量の２０％）、次いでイホスファミドＣＩＶの４０％。

【0716】

既知の副作用および毒性：一般的な有害作用：疲労、頭痛、悪心、嘔吐および下痢（より高用量（８０ｍｇ／ｋｇ理想体重）で起こる）。低血圧が起こり得る。

【0717】

特別な注意：ＩＶのｍｅｓｎａは、イホスファミドまたはシクロホスファミドの完了後１２～２４時間継続すべきである。

【0718】

禁忌：Ｍｅｓｎａ／他のチオール化合物に対する過敏症。

【0719】

薬物相互作用：ワルファリン
実施例２

【0720】

抗ウイルスセントラルメモリーＣＤ８^＋ベト細胞の作製
細胞調製物の製造および特性評価情報

【0721】

細胞型および派生
このプロトコルは、２つの別個の幹細胞調製物の収集を必要とする。幹細胞調製物の１つのタイプは、動員されたハプロタイプ一致ドナーに由来し、その一部は、ＣＤ３４^＋細胞のために選択され、他の部分は、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）デバイスを使用してＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋細胞が枯渇され、凍結保存される。第２のタイプの調製物は、抗ウイルス性セントラルメモリーＣＤ８^＋ベトＴ細胞を産生するための同種異系の非動員末梢血単核（ＰＢＭＣ）細胞である。ＰＢＭＣを使用して樹状細胞およびメモリーレスポンダーＴ細胞（ＣＤ４^－ＣＤ５６^－ＣＤ４５ＲＡ^－）を生成し、次いで、それらを共培養して抗ウイルスセントラルメモリーＣＤ８^＋ベト細胞（Ｔｃｍ）の産生を刺激する。次いで、Ｔｃｍ細胞を増殖させ、採取し、注入する。この調製物は、ＣＤ３４^＋富化細胞からのＴ細胞枯渇大量投与ハプロタイプ一致ドナーの注入後にＧＶＨＤなしでの生着を達成するために、Ｔｃｍ細胞の製造および注入において使用される。

【0722】

製造研究所
本発明のいくつかの実施形態の細胞調製物は、ＭＤＡＣＣの幹細胞移植細胞療法研究所（ＳＣＴＣＴ）細胞療法研究所（ＣＴＬ）で処理されている。この施設は、最小限に操作された細胞調製物のための細胞処理研究所と、最小限より多く操作された細胞調製物のためのＣｌａｓｓｉｆｉｅｄ Ｓｕｉｔｅｓ（クラスＩＳＯ７）の両方を含む。本発明のいくつかの実施形態の細胞調製物は、主にクラスＩＳＯ７スイートで製造される。ＣＴＬには、臨床試験、研究および開発を支援するためのフローサイトメトリーおよび品質管理研究所も含まれる。

【0723】

関連する認定（ＦＡＣＴ、ＣＡＰ、ＣＬＩＡ）
ＳＣＴＣＴ ＣＴＬは、ＦＤＡ（ＦＥＩ＃０００１６７００１４）に登録されており、細胞療法認定協会（ＦＡＣＴ）、米国病理学者協会（ＣＡＰ）によって認定されており、メディケア・メディケイド・サービスセンター（ＣＭＳ）によって発行された認定のための臨床検査改善補正（ＣＬＩＡ）証明書を保持している。

【0724】

出発材料
ＰＢＭＣ：このプロトコルには２つの別個の細胞型調製物が必要である。一方の調製物は、抗ウイルスセントラルメモリーＣＤ８^＋ベトＴ細胞（Ｔｃｍ）を産生するための同種異系の非動員末梢血単核細胞を含むが、他方は、動員されたハプロタイプ一致末梢血調製物に由来する。両方の調製物を白血球搬出法によって収集する。

【0725】

Ｔｃｍ細胞を産生するための動員されていない（プライミングされていない）末梢血単核細胞は、移植予定日（０日目）の７日ほど前に収集される。標的白血球搬出法単核細胞収量は１×１０^１０である。ＣＤ３４^＋富化調製物の注入後、Ｔｃｍ細胞をＤ＋７に注入する。

【0726】

動員された末梢血細胞を３日間にわたって収集する。１日目および２日目の収集物はＣＤ３４^＋の選択をし、凍結保存する。３日目の収集物からＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋細胞を枯渇させ、凍結保存する。富化処置の前に複数の収集物をプールすることができる。理想体重１ｋｇあたり２×１０^６のＣＤ３４^＋細胞を含有する未改変ＰＢＭＣのバックアップ画分を１日目の収集物から採取し、凍結保存する。

【0727】

プロセスの説明
ＭＤＡＣＣドナーは、まず、適格性スクリーニングおよび身体検査を含む適合性について評価される。その後、ドナーは同意し、回収の予定が組まれる。標的細胞の番号はプロトコル固有であり、複数の収集が必要な場合がある。収集処置が完了した後、細胞は、温度変動および物理的損傷から細胞を保護するために、プラスチック冷却器にてＣＴＬのスタッフによって、収穫施設からＣＴＬ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙに輸送される。次いで、調製物をＣＴＬに記録する。

【0728】

感染症検査および交差汚染の予防
ドナー適格性
すべてのドナーを以下に従ってスクリーニングし、試験する。ドナーは、治療用細胞（ＰＢＭＣ）について７日以内に試験されなければならない。

【0729】

ＺＩＫＡウイルスドナーのスクリーニング：
ドナーは、以下のリスク因子のいずれかを有する場合、不適格とみなされる。
１．過去６ヶ月のＺＩＫＶ感染の医学的診断。
２．過去６ヶ月以内に活動性ＺＩＫＶ伝染のあった領域に滞在または移動すること。
３．上記の項目１または２に列挙された危険因子のいずれかを有することが知られている男性との過去６ヶ月以内の性行為。

【0730】

病歴
ＭＤＡＣＣドナーおよび患者の病歴は、ＳＣＴＣＴクリニックにおいて、主治医またはその指名者によって決定される。

【0731】

試験リスト
全試験は、利用可能な場合にはＦＤＡ承認試験を使用してＣＬＩＡ認定試験所によって実施される。感染性疾患の検査には、抗ＨＩＶ－１／ＨＩＶ－２（ＤＨＩＶ／１／２）、Ｃ型肝炎ウイルス抗体（ＤＨＣＶＡＢ）、抗ＨＴＬＶ Ｉ／ＨＴＬＶＩＩ（ＤＨＴＬＶ Ｉ／ＩＩ）、Ｂ型肝炎抗原（ＤＨＢＳＡＧ）、Ｂ型肝炎コア抗体（ＤＨＢＣＡＢ）、ウエストナイルウイルス－ＮＡＴ検査（核酸検査によるＷＮＶ）、梅毒の血清学的検査（ドナーＴＰ－ＨＡまたはＲＰＲ）、抗ＣＭＶ（ドナーＣＭＶ抗体）、シャーガス病、ＨＩＶ、核酸検査（ＮＡＴ）によるＨＣＶ抗原検査が含まれる。注記：ＮＡＴ ＨＩＶ／ＨＣＶ検査は併用検査である。結果が反応性である場合、識別試験が行われる。

【0732】

ドナー適格性非決定
適格性が決定されていないドナーから得られた一実施形態によるすべての細胞調製物は、適格性が決定されるまで検疫に保管されなければならない。検疫における細胞調製物は、放出を防ぐために明確に標識されている。適格性判定の前に細胞調製物を放出しなければならない場合、緊急の医学的必要性を文書化しなければならない。これらの細胞調製物は、「感染性物質について評価されていない」および「警告：伝染病の危険性について患者に助言」と標識されなければならない。

【0733】

不適格ドナーからの細胞調製物の放出
不適格なドナーからの１つの実施形態の細胞調製物の放出は、緊急の医学的必要性の文書化および患者の同意を必要とする。細胞調製物は、「警告：伝染病の危険性について患者に助言」を含む「バイオハザード」ラベルでラベル付けされる。スクリーニングおよび試験結果は、細胞調製物に付随し、注入する医師に提供されなければならない。

【0734】

陽性ＩＤＭ結果を伴う細胞調製物の注入
陽性ＩＤＭの結果に関する一実施形態による細胞調製物の注入は、緊急の医学的必要性の文書化および患者の同意を必要とする。細胞調製物は、「警告：伝染病の危険性について患者に助言」を含む「バイオハザード」ラベルでラベル付けされる。スクリーニングおよび試験結果は、細胞調製に付随し、注入医に提供されなければならない。予防的処置およびさらなる患者モニタリングが必要な場合がある。

【0735】

細胞の処置
抗ウイルス性セントラルメモリーＣＤ８^＋ベト細胞（Ｔｃｍ細胞）の作製

【0736】

処置の概要
抗ウイルス性セントラルメモリーＣＤ８^＋ベトＴ細胞を産生するためのプライミングされていない末梢血単核細胞の収集物を、計画された注入日（０日目）の７日前に収集する。ベト細胞を、大量投与Ｔ細胞枯渇細胞後Ｄ＋７に注入する。

【0737】

図１に示すように：
１日目：ＭＮＣの単離およびＤＣ成熟

【0738】

ＰＢＭＣの単離および血栓の洗浄：
一実施形態の非動員白血球除去細胞調製物を、０．５％のヒト血清アルブミン、２５％（ＨＳＡ）を補充したカルシウムおよびマグネシウムを含まないダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）で１：２に希釈する。フィコール処理の前に、細胞数、トリパンブルー（ＴＢ）生存率および無菌性のサンプルを得る。ＭＮＣは、フィコール密度勾配分離によって単離される。フィコールの後、一実施形態のＭＮＣ細胞調製物を、ＣＤ１４^＋単離の前に手動遠心分離によって２回血小板洗浄し（血栓の洗浄）、洗浄緩衝液で再懸濁する。細胞数およびＴＢ生存率の試料をＱＣ試験のために除去する。

【0739】

フィコール後の血栓の洗浄に続いて、細胞を２つの等しい画分に分割し、それぞれ約５００ｍＬまで希釈する。半分はＣＤ１４^＋選択による樹状細胞（ＤＣ）単離のために処理され、残りの半分（画分Ｉ）は翌日のＣＤ８^＋メモリーＴ細胞富化プロセスのために一晩維持される。

【0740】

画分Ｉを遠心分離し、Ｔ細胞増殖培地（１：１００のＧｌｕｔａｍａｘｅおよび５％ヒトＡＢ血清を補充した高度ＲＰＭＩ１６４０を含むクリック培地）中に３０×１０^６細胞／ｍｌの濃度で再懸濁し、ＩＬ－７（３０ＩＵ／ｍＬ）と共に無菌試験用の試料を除去する。次いで、画分Ｉを組織培養フラスコに播種し、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩インキュベートする。

【0741】

ＤＣ単離－ＣＤ１４^＋単球単離
ＤＣ単離画分を遠心分離し、５０ｍｌの磁気ビーズ緩衝液（０．６％ＡＣＤ－Ａおよび０．５％の２５％ＨＡＳを補充したカルシウムおよびマグネシウムを含まないダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ））に再懸濁する。細胞数およびＴＢ生存率用の試料を除去する。

【0742】

ＤＣ単離ＭＮＣ画分をＣＤ１４試薬（超常磁性鉄デキストラン粒子にコンジュゲートさせたＣＤ１４モノクローナル抗体）でインキュベートする。次いで、細胞を磁気ビーズ緩衝液で洗浄して過剰の試薬を除去する。細胞数、ＴＢ生存率、および免疫表現型検査のための試料を除去する。洗浄後、ＣＤ１４標識細胞を、確立されたＳＯＰあたりＸＳ分離カラムを使用してＳｕｐｅｒＭＡＣＳ（商標）ＩＩで処理する。磁気標識細胞（ＣＤ１４^＋）をカラムによって保持し、ＣＤ１４陰性細胞を除去する。次いで、ＣＤ１４^＋細胞をカラムから放出させ、回収する。ＣＤ１４^＋画分を洗浄し、ＤＣ培地（ＣｅｌｌＧｒｏ／１％ＨＳＡ）に再懸濁し、ＣＤ１４^－画分を洗浄し、Ｔ細胞増殖培地に再懸濁する。細胞数、ＴＢ生存率、および免疫表現型検査のために、各画分からの試料を除去する。次いで、一実施形態のＣＤ１４^＋富化細胞調製物をＤＣ成熟工程へと継続し、ＣＤ１４陰性細胞濃度をＩＬ－７（３０ＩＵ／ｍＬ）と共にＴ細胞増殖培地中３０×１０^６細胞／ｍｌで調整する。無菌試験用の試料を除去する。次いで、ＣＤ１４陰性画分を組織培養フラスコに播種し、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩インキュベートする。これらの細胞を翌日、ＣＤ８^＋メモリーＴ細胞富化プロセスのために画分Ｉと組み合わせる。

【0743】

ＤＣ成熟－ＣＤ１４^＋単球付着
一実施形態のＣＤ１４^＋富化細胞調製物を、ＩＬ－４（１０００ＩＵ／ｍＬ）およびＧＭ－ＣＳＦ（２０００ＩＵ／ｍＬ）を補充したＤＣ培地（ＣｅｌｌＧｒｏ／１％ＨＳＡ）に３×１０^６細胞／ｍｌという細胞の濃度で再懸濁する。無菌試験用の試料を除去する。次いで、細胞懸濁液をＣｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｙプレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩１６～２４時間インキュベートする。

【0744】

２日目：メモリー細胞の単離およびＤＣ成熟誘導

【0745】

ＤＣ成熟誘導
ＣＤ１４^＋富化細胞の２４時間のインキュベーションの後、サイトカイン：ＩＬ－４（１０００ＩＵ／ｍＬ）、ＧＭ－ＣＳＦ（２０００ＩＵ／ｍＬ）、ＬＰＳ（４０ｎｇ／ｍＬ）およびＩＦＮ－γ（２００ＩＵ／ｍＬ）をＣｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｉｅｓに添加して、ＤＣの成熟を誘導する。次いで、細胞をサイトカインで３７℃、５％ＣＯ_２で１６時間（＋／－２時間）インキュベートする。

【0746】

メモリー細胞の分離
一晩保存した後、画分ＩおよびＣＤ１４陰性画分中の細胞を回収し、混合する。混合したら（Ｔ細胞単離ＴＮＣ画分）、細胞を遠心分離し、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）／０．５％ＨＳＡ緩衝液に最小で１：２の比まで再懸濁する。血小板枯渇（血栓の洗浄）を、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）／０．５％ＨＳＡにおける細胞ペレットの遠心分離および再懸濁によって行う。細胞数およびＴＢ生存率用の試料を除去する。

【0747】

一実施形態の血小板除去後細胞調製物をＩＶＩｇで１０～１５分間インキュベートする。最初のインキュベーション後、ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋試薬（超常磁性粒子にコンジュゲートしたＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋抗体）を細胞調製物に添加し、オービタルロテータにて３０分間インキュベートする。インキュベーションの最後に、細胞を遠心分離によって洗浄し、細胞ペレットをＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）／０．５％ＨＳＡ緩衝液に再懸濁して過剰な試薬を除去する。細胞数および免疫表現型決定の試料を除去する。次いで、ＣＤ４^＋／ＣＤ５６^＋／ＣＤ４５ＲＡ^＋標識細胞を、枯渇チューブセットおよび枯渇プログラムを使用してＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）で処理する。この場合、磁気標識細胞（ＣＤ４^＋、ＣＤ５６^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋）がカラムによって保持され、ＣＤ４、ＣＤ５６、およびＣＤ４５ＲＡ陰性細胞がカラムを通過し、ＣＤ４^－ＣＤ５６^－ＣＤ４５ＲＡ^－枯渇画分（画分ＩＩ）として回収される。画分ＩＩを洗浄し、Ｔ細胞増殖培地に再懸濁する。細胞数、ＴＢ生存率、および免疫表現型検査のために、各画分からの試料を除去する。各画分の体積およびＴＮＣが判定されると、陽性画分は破棄され、陰性画分（画分ＩＩ）はさらに処理される。

【0748】

画分ＩＩの細胞濃度を、ＩＬ－７（３０ＩＵ／ｍＬ）と共にＴ細胞増殖培地で２×１０^６細胞／ｍｌにて調整する。無菌試験用の試料を除去する。画分ＩＩをＧ－Ｒｅｘ（登録商標）１００に播種し、３７℃、５％、ＣＯ_２で２４時間（＋／－２時間）インキュベートする。

【0749】

制限：
１つの試薬キットおよびチューブセットで処理する最大ＴＮＣは、より多くの数が検査室長または指定者によって承認されない限り、２００×１０^６ＴＮＣ／ｍＬである。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）機器の最大負荷容量は３００ｍｌである。

【0750】

３日目：成熟ＤＣの採取およびウイルスペプチドの負荷および共培養

【0751】

成熟ＤＣ（ｍＤＣ）の採取
１６時間のインキュベーション後、上清を除去し、Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｉｅｓを温かい磁気ビーズ緩衝液で穏やかに洗浄する。洗浄緩衝液および任意の非接着細胞を除去し、ｍＤＣ上清に添加する。ｍＤＣ上清および洗浄緩衝液からの試料を、細胞数、ＴＢ生存率および免疫表現型検査のために除去する。

【0752】

接着性ｍＤＣを剥離し、氷冷磁気ビーズ緩衝液を添加することによってＣｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｉｅｓから回収し、凍結ゲルパック上で３０分間放置する。３０分後、ｍＤＣを回収し、氷冷磁気ビーズ緩衝液でＣｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｉｅｓを１回洗浄する。全ｍＤＣが除去されたかどうかを判定するために、Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｉｅｓを顕微鏡で検査する。すべてのｍＤＣが除去されてはいないことが認められた場合、洗浄プロセスを繰り返す。次いで、収集した（接着性の）ｍＤＣ懸濁液を遠心分離し、洗浄し、磁気ビーズ緩衝液に再懸濁する。接着性ｍＤＣからの試料を細胞数ＴＢのために除去する。ｍＤＣの体積およびＴＮＣを決定した後、細胞の濃度をペプチド負荷のために１×１０^７細胞／ｍｌに調整する。免疫表現型検査のためのインプロセス試料を除去する。各画分の体積およびＴＮＣが決定されると、ｍＤＣ上清画分が廃棄され、一実施形態のｍＤＣ細胞調製物がさらに処理される。

【0753】

ウイルスペプチドの負荷
ｍＤＣを回収した後、計算したペプチベータ（ＡｄＶ５ヘキソン、ＨＣＭＶ ｐｐ６５、ＥＢＶ選択およびＢＫＶ ＬＴ）を細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ_２で１時間インキュベートする。インキュベーション後、ウイルスペプチドを負荷したｍＤＣを洗浄し、磁気ビーズ緩衝液で遠心分離する。次いで、ウイルスペプチドを負荷したｍＤＣをＴ細胞増殖培地で再懸濁し、Ｘ線源を介して３０～２５Ｇｙを照射する。

【0754】

照射が完了したら、ウイルスペプチドを負荷したｍＤＣを洗浄し、遠心分離し、Ｔ細胞増殖培地に再懸濁する。細胞数、ＴＢ生存率、免疫表現型検査および無菌性のために試料を除去する。

【0755】

共培養の調製および飢餓段階
画分ＩＩ（ＣＤ４^－ＣＤ５６^－ＣＤ４５ＲＡ^－）の２４時間のインキュベーション後、細胞をインキュベーターから回収し、遠心分離し、Ｔ細胞増殖培地に再懸濁する。細胞数、ＴＢ生存率、免疫表現型検査および無菌性のための試料を除去する。次いで、画分ＩＩからの細胞（ＣＤ４^－ＣＤ５６^－ＣＤ４５ＲＡ^－）を洗浄し、ＩＬ－２１（１００ＩＵ／ｍＬ）と、Ｔ細胞増殖培地で、ウイルスペプチドを負荷したｍＤＣと５：１（画分ＩＩ細胞：樹状細胞（ＤＣ））の比で一緒に、１×１０^６細胞／ｍｌの濃度（１００ｍｌ／Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）１００）で、Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）１００に播種する。共培養細胞を３７℃、５％ＣＯ_２で３日間、飢餓期間インキュベートする。

【0756】

６日目：抗ウイルスベト細胞（Ｔｃｍ）の分化および増殖

【0757】

７２時間の飢餓段階の後、Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）１００の上清からの試料を、細胞層を破壊することなく慎重に除去して、培養物のｐＨおよびグルコースレベルを決定する。ｐＨは生理学的範囲（ｐＨ７．２～７．６）にあり、グルコースは少なくとも５０ｍｇ／ｄｌであるべきである。ＩＬ－７（３０ＩＵ／ｍＬ）、ＩＬ－１５（１２５ＩＵ／ｍＬ）およびＩＬ－２１（１００ＩＵ／ｍＬ）を補充した新鮮なＴ細胞増殖培地を各Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）１００に培養体積の５０％で添加する。次いで、細胞を５％ＣＯ_２下、３７℃でさらに４８時間インキュベートする。このプロセスを培養終了まで７２時間毎に繰り返す。

【0758】

細胞を最大１２日間培養する。サイトカインまたはサイトカインのみを含有する新鮮な培地を、ｐＨおよびグルコースレベルに応じて４８時間毎に添加する。グルコースレベルが以下の間である場合：
・１７０ｍｇ／ｄＬ～１３０ｍｇ／ｄＬのグルコース濃度：サイトカインＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１のみを培養物に添加する。
・１２９ｍｇ／ｄＬ～１００ｍｇ／ｄＬのグルコース濃度：１００ｍｌ（Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）１００容量の２５％）の新鮮なＴ細胞増殖培地＋サイトカインＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１を培養物に添加する。
・９９ｍｇ／ｄＬ～５０ｍｇ／ｄＬのグルコース濃度：２００ｍｌ（Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）１００容量の５０％）の新鮮なＴ細胞増殖培地＋サイトカインＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１を培養物に添加する。

【0759】

注記：Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）１００の最大容量レベルは４００ｍＬである。Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）１００の最大容量に達した場合、培養物の容量を補充する。

【0760】

１２日目：
１２日目に、質管理放出試験のために無菌の試料を得る。

【0761】

１３日目：培養細胞数の評価

【0762】

１３日目に、細胞数、ＴＢ生存率および免疫表現型決定試料をＴＮＣの決定のために除去する。

【0763】

１４日目：
１４日目に、サイトカインまたはサイトカインのみを含有する新鮮な培地を、上記のようにｐＨおよびグルコースレベルに応じて添加する。培地および／またはサイトカインを添加したら、細胞培養物を３７℃、５％ＣＯ_２で２４時間（＋／－２時間）インキュベートしてから回収する。

【0764】

培養総時間：１２日間（３日目～１５日目）

【0765】

１５日目：抗ウイルスＣＤ８セントラルメモリー細胞（Ｔｃｍ）の最終処方および注入

【0766】

１５日目に、Ｔｃｍ細胞を目視汚染について検査し、回収し、細胞懸濁培地（Ｐｌａｍａｌｙｔｅ－Ａ／２５％ＨＳＡの０．５％）で洗浄した。非放出試験：細胞数、ＴＢ生存率、無菌性および放出試験：細胞の洗浄前の内毒素およびマイコプラズマのために、試料を除去する。

【0767】

一実施形態の細胞調製物を洗浄し、再懸濁した後、細胞数、生存率および免疫表現型検査のための放出試験試料を除去する。細胞数およびＴＮＣの判定の後、１つの実施形態の細胞調製物を、臨床プロトコルにおいて処方された用量に従ってＴｃｍ細胞用量になるように、およそ５０～１００ｍＬの細胞懸濁培地に再懸濁する。放出試験用の試料は、非放出試験としてグラム染色および無菌性について得られる。最終的なＴｃｍ細胞調製物は、細胞調製物の放出前の放出基準を満たす。

【0768】

最終的なＴｃｍ細胞は、温度の変動および物理的損傷から細胞調製物を保護するために、プラスチック冷却器内でＣＴＬスタッフによってＣＴＬから患者用フロアに輸送される。ＣＴＬスタッフは、注入する人員に細胞調製物を送達および支給する。

【0769】

ＣＤ３４^＋富化細胞の作製

【0770】

処置の概要
図２に例示されるように、動員された造血前駆細胞（ＨＰＣ－Ａとも称される）が、３日で回収される。理想体重１ｋｇあたり１×１０^６のＣＤ３４^＋細胞を含有する未改変ＰＢＭＣのバックアップ画分を破棄し、凍結保存する。残りの第１日および第２日の収集物をプールし、ＣＤ３４^＋を選択し、凍結保存する。３日目の収集物からＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋細胞を枯渇させ、凍結保存する。すべての画分から回収されたＴ細胞枯渇幹細胞移植全体における最大Ｔ細胞用量は、理想体重１ｋｇあたり２×１０^５のＣＤ３^＋細胞である。

【0771】

両方の手順は、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）の装置を使用してＣＴＬ Ｃｏｒｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙで行われる。ＣＴＬは、このデバイスを使用するための十分に確立されたＳＯＰを有しており、複数の臨床試験のための細胞調製物の製造にそれを使用してきた。単一のＨＰＣ－Ａ調製物は、細胞数およびスケジューリングに応じて分割またはプールされ得る。一実施形態の細胞調製物は、それぞれの処置の完了時に凍結保存される。

【0772】

ＣＤ３４^＋富化プロセス
設定
動員されたＨＰＣ－Ａの最初の収集日に、０．５％ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含有するＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）ＰＢＳ／ＥＤＴＡ Ｂｕｆｆｅｒバッグ（１０００ｍｌ）を、十分に確立された実験室ＳＯＰに従って処理する前に調製する。ＨＰＣ－Ａ調製物の重量を判定する。ＨＰＣ－Ａの１日目および２日目の試料を以下の試験のために除去する：細胞数、生存率、無菌性、免疫表現型検査。各緩衝液および細胞調製物バッグは、患者の名前、ＭＤＡＣＣ番号、および調製日でラベル付けされる。残りのＰＢＰＣ細胞調製物に対してＣＤ３４^＋選択処置を実施する前に、１日目の収集物から、理想体重１ｋｇあたり２×１０^６のＣＤ３４^＋細胞のバックアップ画分を除去する。第１日の収集物の残りの細胞を一晩維持し、ＣＤ３４^＋富化プロセスのための第２日の収集物と共にプールする。

【0773】

ＣＤ３４^＋単離
一実施形態のプールされたＨＰＣ－Ａ細胞調製物をＣＤ３４試薬（超常磁性粒子にコンジュゲートされたＣＤ３４抗体）でインキュベートする。細胞を洗浄して過剰な試薬を除去する。細胞数および免疫表現型決定の試料を除去する。次いで、ＣＤ３４標識細胞を、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）チューブセットおよびＣＤ３４^＋選択プログラムを使用してＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）上で処理する。この場合、磁気標識細胞（ＣＤ３４^＋）はカラムに保持され、ＣＤ３４陰性細胞は除去される。次いで、ＣＤ３４^＋細胞をカラムから放出させ、回収する。細胞数、生存率、および免疫表現型検査のために、各画分からの試料を除去する。

【0774】

ＣＤ３４^＋富化細胞調製物は、注入のために凍結保存され得（後述）、または新鮮な細胞として使用され得る（上述）。

【0775】

制限：
１つの試薬キットおよびチューブセットで処理する最大ＴＮＣは、より多くの数が検査室長または指定者によって承認されない限り、６×１０^１０である。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）機器の最大負荷容量は３００ｍｌである。

【0776】

ＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋枯渇プロセス

【0777】

設定
０．５％ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含有するＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）ＰＢＳ／ＥＤＴＡ緩衝液バッグ（１０００ｍｌ）を、十分に確立された実験室ＳＯＰに従って処理する前に調製する。ＨＰＣ－Ａ細胞調製物の重量を判定する。ＨＰＣ－Ａからの試料を以下の試験のために除去する：細胞数、生存率、無菌性および免疫表現型検査。各緩衝液および細胞調製物バッグは、患者の名前、医療記録番号（ＭＲＮ）および調製日でラベル付けされる。

【0778】

血小板枯渇
一実施形態のＨＰＣ－Ａ細胞調製物は、ＣＯＢＥ ２９９１を使用してＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋を枯渇させる前に血小板を枯渇させる。細胞がＣＯＢＥ ２９９１から除去されると、細胞数のための試料が除去される。次いで、細胞調製物をＣＤ３試薬およびＣＤ１９試薬でインキュベートする。

【0779】

ＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋の枯渇
一実施形態の血小板枯渇後のＨＰＣ－Ａ細胞調製物をＩＶＩｇで１０～１５分間インキュベートする。最初のインキュベーションの後、ＣＤ３^＋およびＣＤ１９^＋試薬（超常磁性粒子にコンジュゲートしたＣＤ３およびＣＤ１９抗体）を細胞調製物に添加し、オービタルロテータ上で３０分間インキュベートする。インキュベーションの最後に、細胞をＣＯＢＥ ２９９１を使用して洗浄して過剰な試薬を除去する。細胞数および免疫表現型決定の試料を除去する。次いで、ＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋標識細胞を、枯渇チューブセットおよび枯渇プログラムを使用してＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）で処理する。この場合、磁気標識細胞（ＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋）はカラムによって保持され、ＣＤ３およびＣＤ１９陰性細胞はカラムを通過し、ＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋枯渇画分として回収される。細胞数、生存率、および免疫表現型検査のために、各画分からの試料を除去する。

【0780】

一実施形態のＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋枯渇細胞調製物は、注入のために凍結保存される（下記で議論されるように）か、または新鮮な細胞として使用され得る（上で論じられているように）。

【0781】

制限事項：１つの試薬キットおよびチューブセットで処理する最大ＴＮＣは、より多くの数が検査室長または指定者によって承認されない限り、８×１０^１０である。

【0782】

２回目のＣＤ３^＋枯渇（必須の工程ではなく、必要に応じて使用）
２×１０^５ＣＤ３／ｋｇ理想体重を超えて存在する場合、細胞調製物中のＣＤ３集団をさらに減少させるために、枯渇したＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋に対してＣＤ３枯渇の第２サイクルを実施し得る。細胞数および免疫表現型検査、生存率および無菌性のための試料を各画分から得る。

【0783】

あるいは、Ｔ細胞枯渇画分の一部のみの注入が、２×１０^５個を超えるＣＤ３細胞／ｋｇ理想体重の注入を回避するべく利用される。

【0784】

ＣＤ３４^＋富化細胞調製物およびＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋枯渇細胞調製物の最終処方化および凍結保存：

【0785】

細胞の選択または枯渇およびサンプリングの後、一実施形態の細胞調製物を濃縮し、ＣＴＬで検証された手順に従って凍結保存する。細胞調製物の凍結保存の前に、最終的な細胞数、生存率、免疫表現型検査、グラム染色および無菌サンプルを得る。細胞数およびＴＮＣの決定の後、一実施形態の細胞調製物を、ＳＯＰに従って凍結培地（５０％ Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、７．５％ＤＭＳＯ、３５％ＨＳＡ２５％）中で凍結保存する。ＣＤ３４^＋富化細胞またはＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋枯渇細胞を含有するバッグを、制御された速度フリーザーで凍結し、液体窒素フリーザーで気相で保存する。

【0786】

注記：最終的な細胞調製物は、細胞の解凍がさらなる操作なしにベッドサイドで行われるので、凍結保存前の調製物である。

【0787】

細胞調製物の放出および注入
注入の日に、ＣＤ３４^＋富化細胞および／またはＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋枯渇細胞調製物は、ＣＴＬスタッフによって患者のフロアに送達され、注入要員に支給される。最終的な細胞調製物は、細胞調製物の放出前にロット放出基準を満たす。次いで、これらの細胞をプロトコル特異的用量に従って患者に注入する。注目すべきことに、凍結保存が使用される場合、細胞はフロアで解凍され、標準的な操作手順に従って注入人員に放出される。また、凍結保存が使用される場合、最終的な細胞調製物は、約２インチの液体窒素で満たされたシームレスな金属インサートを備えた承認された発泡スチロールＬＮ２輸送容器で、ＣＴＬスタッフによって、ＣＴＬからフロアに輸送される。

【0788】

すべての細胞調製試験はプロトコル特異的であり、ＳＯＰに従って実施される。

【0789】

試薬

【表3】

【0790】

試薬はプロトコル固有であり、製造業者の推奨に従って保存される。すべての試薬は、細胞調製製造の開始前に適格である。試薬の在庫管理には、受領の文書化、試薬の文書化レビュー、在庫管理者による追跡が含まれる。必要に応じて品質保証部によるレビュー・リリースを行う。すべてのＦＤＡ承認試薬の文書は、ＭＤＡＣＣ Ｐｈａｒｍａｃｙを通じて入手可能である。未承認の試薬に関する分析証明書および相互参照証明書は、供給者から入手しなければならない。ＭＳＤＳは、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓａｆｅｔｙ Ｐｏｌｉｃｙの一部として管理される。

【0791】

認定プログラム
試薬は、臨床製剤の製造の開始前に適格でなければならない。これは、典型的には、製造に関与する手順の検証中に達成される。試薬および供給元は、以前の臨床プロトコルの一部として以前に認定されていてもよい。

【0792】

最終細胞調製物からの試薬の除去
試薬を最終細胞調製物から除去する。これは、様々な細胞洗浄、濃縮および再懸濁手順を使用して達成される。

【0793】

細胞調製物の試験
微生物学的試験
無菌試験：
ＢＤ ＢＡＣＴＥＣ：ＭＤＡＣＣ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅは、この自動微生物検出システムを使用してインプロセスおよび最終細胞調製試料を試験する。すべての試験を１４日間または細胞調製物が陽性になるまで行う。試験結果は、細胞調製物の放出前に得られる。

【0794】

試験するサンプル：
試験の回数およびタイミングは、細胞に対して行われる操作の量、培養時間、および試験要件の要因である。試験される試料は、試験の種類に最適でなければならない。培養培地または他の緩衝液の一部が無菌アッセイを妨害しないことを保証するために、サンプル条件を製造開始前に検証する。０．５ｍｌ／試験の最小試料体積が必要である。

【0795】

無菌のサンプリングポイント：
抗ウイルスセントラルメモリーＣＤ８^＋ベトＴ細胞（Ｔｃｍ）の増殖
１．１日目：ＨＰＣ－Ａ－プレフィコール
２．１日目：ＨＰＣ－Ａ－フィコール後画分Ｉ
３．１日目：ＣＤ１４^＋単離－陰性画分（一晩）
４．１日目：ＣＤ１４^＋単離－サイトカインによる陽性画分（一晩）
５．２日目：ＣＤ４^＋ＣＤ５６^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋枯渇－陰性画分（画分ＩＩ）（一晩）
６．３日目：ウイルス負荷ＤＣ－照射後
７．３日目：画分ＩＩ－一晩収穫
８．３日目：共培養－画分ＩＩおよびウイルス負荷ＤＣ
９．１２日目：共培養－１２日目
１０．１３日目：共培養－１３日目
１１．１５日目：共培養－収穫後
１２．１５日目：最終Ｔｃｍ細胞
ＣＤ３４^＋大量投与
１．ＨＰＣ－Ａ－収穫
２．ＣＤ３４^＋富化細胞－最終細胞調製物（凍結前）または使用した新鮮な細胞
３．ＣＤ３^＋ＣＤ１９^＋枯渇細胞－最終細胞調製物（凍結前）または使用した新鮮な細胞

【0796】

マイコプラズマ試験
一実施形態の凍結保存Ｔｃｍ細胞調製物を、マイコプラズマの存在について試験する。Ｔｃｍ細胞調製物（凍結保存）を、Ｇｅｌ Ｅｎｄｐｏｉｎｔ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＰＣＲ）ベースのアッセイによって試験する。ＰＣＲアッセイは、認可された参照検査室によって実施される。ＰＣＲに基づくアッセイに加えて、最終的なＴｃｍ細胞も、承認された生化学的マイコプラズマ迅速検出試験（ＭｙｃｏＡｌｅｒｔ，Ｌｏｎｚａ Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｉｎｃ．）を用いて試験する。サンプルは、細胞洗浄前の採取時に採取され、細胞および培地の両方を含む。サンプル容量は最低０．５ｍｌである。マイコプラズマＰＣＲに基づくアッセイを実施しながら、ＭｙｃｏＡｌｅｒｔの結果を暫定的な試験放出基準として使用する。マイコプラズマＰＣＲの結果は、放出基準として使用されず、陽性の臨床転帰に関連する基準を特定するのを助けるために臨床応答と共に分析される。マイコプラズマの結果は陰性でなければならない。

【0797】

製剤注入後に受けた陽性滅菌結果
細胞調製物が注入された後、培養細胞調製物に対する１４日間の無菌性またはマイコプラズマの結果が陽性に戻った場合、検査室長、技術部長、医療部長、実験室品質保証部、原理研究員、主治医および治験新薬（ＩＮＤ）のオフィス－または臨床研究の施設スポンサー／ＶＰに通知する。品質保証部は、いずれかの是正および／または予防措置を特定するための調査を行う。陽性無菌性試験のための調査および提案された補正には、微生物の同定および抗菌剤感受性試験；汚染が導入され得る工程を決定するために細胞調製物を収集および処理するための現在の処置の評価；将来の無菌性の逸脱を防止するのに役立つ処置の変更の開発；および処置に対するそのような変更が滅菌細胞調製物を生成することを確実にするための適切な試験の実施が含まれる。主治医は、患者への通知、モニタリングおよび処置を担当する。治験責任医師は、逸脱および有害事象を適切な規制機関（ＦＤＡ、ＩＲＢ）に通知する責任を負う。また、無菌性の不良、原因調査結果、いずれかの是正処置を報告する（適時に、例えば陽性培養試験結果の最初の受領後３０暦日以内に、ＩＮＤに提出される情報補正において）。

【0798】

グラム染色
迅速な微生物検査が必要とされる状況では、グラム染色がＭＤＡＣＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔによって行われる。最低０．５ｍｌのサンプルが必要である。Ｔｃｍ細胞、ＣＤ３４^＋富化細胞調製物およびＣＤ３^＋ＣＤ１９^＋枯渇細胞調製物を試験し、結果は新鮮な注入のための放出基準の一部である。細胞調製物は、生物が認められてはならない。

【0799】

識別情報
すべてのＣＴＬ細胞調製物は、正確な同定を確実にし、取り違えを防止するために標識され、保存される。すべての細胞調製物には、固有の識別子番号が割り当てられる。細胞調製物の標識化および回収の間の重要な工程は、監視員による検証を必要とする。

【0800】

ＣＤ３４^＋富化細胞調製物およびＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋枯渇細胞調製物：フローサイトメトリーはまた、患者に注入して戻される異なる細胞集団を同定するために使用される。ＣＤ３４^＋およびＣＤ３^＋／ＣＤ１９^＋の決定に加えて、以下のサブセットマーカーを評価する：ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６／ＣＤ５６、ＣＤ１９ ＣＤ１４、ＣＤ４５ＲＯ、およびＣＤ３７。

【0801】

Ｔｃｍ細胞調製物：フローサイトメトリーはまた、患者に注入して戻される異なる細胞集団を同定するために使用される。ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ４５ＲＯの決定に加えて、以下のサブセットマーカーが評価される：ＣＤ４、ＣＤ５６、ＣＤ１６、ＣＤ９５、およびＣＤ４５ＲＡ。

【0802】

純度
フローサイトメトリーを複数の時点で使用して、細胞表現型を決定する。ＣＤ４５^＋細胞のＣＤ３^＋ＣＤ８^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋７ＡＡＤ^－のＴｃｍ細胞調製フローサイトメトリーマーカーは、≧３０％でなければならない。

【0803】

ＣＤ３４^＋富化調製物およびＣＤ３^＋ＣＤ１９^＋枯渇調製物の両方の合計は、理想体重１ｋｇあたり６×１０^６ＣＤ３４^＋細胞を超える最小許容細胞用量を有しなければならない。他のすべての免疫表現型決定データは、放出基準として使用されず、陽性臨床転帰に関連し得る適切な効力アッセイを特定するのを助けるために臨床応答と共に分析される。

【0804】

効力
フローサイトメトリーによる免疫表現型検査を使用して、上記純度の節で述べたマーカーを含むいくつかの潜在的な効力のマーカーを測定する。他の免疫表現型決定データはいずれも放出基準として使用されないが、陽性臨床転帰に関連する基準を特定するのを助けるために臨床応答と共に分析される。

【0805】

効力アッセイは、この第Ｉ相を通して開発され、第ＩＩＩ相試験の開始前に確立される。

【0806】

内毒素
内毒素レベルは、カブトガニ血球抽出液（ＬＡＬ）アッセイを使用してＣＴＬ品質管理研究所において決定される。この方法は、臨床使用前に試験される全ての細胞／培地の組み合わせについて検証される。最終的なＴｃｍ細胞調製物を試験し、結果は放出基準の一部である。最低０．５ｍＬの試料が必要である。内毒素レベルは、レシピエントの理想体重の５ＥＵ／Ｋｇ未満でなければならない。

【0807】

目視検査
全細胞調製物を注入前に目視検査する。細胞調製物は、汚染の証拠を有してはならない。

【0808】

生存率
生存率は、トリパンブルー（ＴＢ）アッセイまたはフローサイトメトリー（７ＡＡＤ）のいずれかを使用することによってＣＴＬによって決定することができる。最終的なＴｃｍ細胞、ＣＤ３４^＋富化細胞調製物およびＣＤ３^＋ＣＤ１９^＋枯渇調製物は、≧７０％の７ＡＡＤ生存率を有しなければならない。トリパンブルー生存率は、プロセス中のインプロセス試験として使用することができる。

【0809】

細胞の用量
ＣＴＬ細胞の用量を、細胞の計数およびフローサイトメトリーによる免疫表現型決定を使用して判定する。

【0810】

最終Ｔｃｍ細胞調製用量は、対象が臨床試験に登録されているＣＤ８^＋用量レベルによって決定される。過剰な細胞は、細胞の機能、表現型研究および凍結保存のための相関研究に使用され得る。データは、放出基準として使用されず、陽性の臨床転帰に関連する基準を特定するのを助けるために臨床応答と共に分析される。Ｔｃｍ細胞調製物ＣＤ８^＋用量が、理想体重１ｋｇあたり２．５×１０^６のＣＤ８^＋細胞の計画された用量レベル１（用量レベル１）未満である場合、またはＣＤ８^＋細胞が放出基準を満たさない場合、これらの細胞は注入されない。代わりに、バックアップＰＢＰＣ＋Ｔ細胞枯渇ＰＢＰＣを注入して「標準的なＰＢＰＣ移植」を再構成し、患者はプロトコルごとに標準的なケア準備レジメンを受ける。Ｔｃｍ細胞が放出基準を満たすが、ＣＤ８^＋細胞用量が、理想体重１ｋｇあたり５×１０^６のＣＤ８^＋細胞の用量レベル２の標的細胞用量レベル未満である場合、理想体重１ｋｇあたり２．６～５×１０^６のＣＤ８^＋細胞が適切であると考えられ、用量レベル２と考えられる。理想体重１ｋｇあたり１０×１０^６のＣＤ８^＋細胞の標的用量の用量レベル３の場合、理想体重１ｋｇあたり５．１～１０×１０^６のＣＤ８^＋細胞が適切であると考えられ、用量レベル３と考えられる。

【0811】

ＣＤ３４^＋富化調製物およびＣＤ３^＋ＣＤ１９^＋枯渇調製物の両方の合計は、理想体重１ｋｇあたり６×１０^６のＣＤ３４^＋細胞の最小許容細胞用量を有しなければならず、理想体重１ｋｇあたり２×１０^５のＣＤ３^＋細胞として放出基準によって定義されるＴ細胞用量の限界を超えてはならない。最終的なＣＤ３４^＋富化細胞調製物用量は、陽性臨床転帰に関連する基準を特定するのを助けるために、臨床応答と共に監視および分析される。

【0812】

アリコート保持
すべてのＱＣチューブを１週間保持する；しかし、これらの試料の有用性は、ほとんどのサンプルについて４８時間後に急速に低下する。すべての凍結細胞調製物はまた、凍結保存時に同時に保存される参照バイアルを有する。

【0813】

細胞調製放出基準試験および追加試験

【0814】

【表4】

【0815】

【表5】

【0816】

【表6】

実施例３

【0817】

ＡＴＧ非存在下での処置レジメン
材料および実験条件
宿主非反応性ドナー抗第三者細胞の調製
抗第三者Ｔｃｍ細胞を以前に記載されたように調製した［Ｏｐｈｉｒ Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１３，１２１：１２２０］。簡潔には、ドナーマウスの脾細胞を、サイトカイン欠乏下で、照射された第三者脾細胞に対して６０時間培養した。続いて、磁気粒子（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いてＣＤ８細胞を陽性選択し、Ａｇ不含有環境下で培養した。ｒｈＩＬ－１５（２０ｎｇ／ｍＬ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を２日毎に加えた。培養終了時（１６日目）に精製集団を得るために、ＴｃｍｓをＣＤ６２ Ｌ発現について陽性選択し（磁気活性化細胞選別［ＭＡＣＳ（登録商標）細胞分離、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ、ドイツ］）、細胞をＦＡＣＳ分析のために回収した。

【0818】

造血幹細胞の調製
Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（１０～１２週齢）から長骨を採取した。骨を粉砕して単一細胞懸濁液に到達させることによって骨髄を抽出した。骨髄を計数し、正しい濃度にし、次いでマウスの尾静脈にＩＶで注射した。

【0819】

キメラ現象分析
キメラ現象をフローサイトメトリーによって測定した。後眼窩出血によって末梢血を採取し、細胞をＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＡＢ）で分画し、各マウスの単離された単核細胞をドナーおよび宿主表面マーカーに対する直接免疫蛍光によって染色した。

【0820】

細胞内染色によって決定されるＴｃｍ細胞の抗ウイルス活性
ベト－Ｔｃｍ細胞を、ブレフェルジンＡ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の存在下、３７℃、５％ＣＯ_２で６時間、それぞれのウイルスペプチド混合物（ＥＢＶ、ＣＭＶ、Ａｄｅｎｏ、ＢＫＶ）と共培養した。細胞を固定し、透過処理し（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｆｉｘ＆Ｐｅｒｍセット）、ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ８、ＩＦＮ－γおよびＴＮＦ－α（ＢＤ）について免疫染色した。陽性対照には、ＰＭＡ／イオノマイシンによるＴＣＲ非依存性刺激が含まれた。細胞をＣＤ４５^＋／ＦＳＣリンパ球ゲートおよびＣＤ３^＋ＣＤ８^＋でゲートした。

【0821】

結果
本発明者らは以前に、ＡＴＧ、３ＧＹ ＴＢＩおよびフルダラビンによるＴ細胞減量による骨髄非破壊的前処置の後に、Ｔ細胞枯渇大量投与ハプロ－ＨＣＴを移植後ＣＹと組み合わせること（図５）が、ＧＶＨＤの非存在下での永続的な生着を可能にし得ることを実証している（データは示さず）。

【0822】

ＡＴＧなどの抗Ｔ細胞抗体によるＴ細胞減量が、ウイルス感染のリスクの増強を含む顕著な毒性に関連することを考慮して、７日目に注入されたセントラルメモリーベト細胞の使用によってＴ細胞減量を置き換える可能性を調べた。

【0823】

図６に示されるように、Ｔ細胞減量の非存在下での亜致死的ＴＢＩ（３．５ＧＹ）の後でのＴ細胞枯渇化大量投与ハプロ－ＨＣＴをＣＹと移植後に組み合わせることにより、移植拒絶がもたらされ、キメラ現象の証拠が何らもたらされなかった。対照的に、７日目のセントラルメモリーＣＤ８^＋ベト細胞の注入は、顕著なドナータイプのキメラ現象を可能にした。

【0824】

これらの結果は、Ｔ細胞減量の代わりに７日目のベト細胞投与を、ＡＴＧなどの薬剤で使用するための概念実証を提供する。そのようなプロトコルには、図７に示されるように、亜致死的ＴＢＩ（例えば、３ＧＹ）、フルダラビン、大量投与Ｔ細胞枯渇造血幹細胞および移植後のＣＹが含まれる。

【0825】

さらに、ベト細胞産物は、ＩＮＦ－γおよびＴＮＦ－α染色によって例示されるように、ウイルスペプチドの混合物、すなわちＥＢＶ、ＣＭＶ、Ａｄｅｎｏ、ＢＫＶに対して向けられる抗ウイルス活性を独自的に示した（図８Ａ～Ｃ）。

【0826】

本発明をその特定の実施形態に関連して説明したが、多くの代替、修正、および変形が当業者には明らかであることは明白である。したがって、添付の特許請求の範囲の精神および広い範囲内にあるそのようなすべての代替、修正、および変形を包含することが意図されている。

【0827】

本明細書で言及されるすべての出版物、特許、および特許出願は、個々の出版物、特許、または特許出願が本明細書内により組み込まれることが具体的かつ個別に示されるのと同程度に、参照により全体が本明細書に組み込まれる。さらに、本出願における任意の参考文献の引用または識別は、そのような参考文献が本発明の先行技術として利用可能であることの承認として解釈されるべきではない。セクションの見出しが使用される限り、それらは必ずしも限定するものと解釈されるべきではない。さらに、本願の任意の優先権の書類は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A-8B-8C】

【国際調査報告】