特表 2022-543182 親和性成熟抗ＡＳＩＣ１ａ抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-10-11

(54)【発明の名称】親和性成熟抗ＡＳＩＣ１ａ抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20221003BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20221003BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20221003BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20221003BHJP

   G01N 33/533 20060101ALI20221003BHJP

   G01N 33/534 20060101ALI20221003BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C07K16/28

C12N15/63 Z

G01N33/53 D

G01N33/533

G01N33/534

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021572386

(86)(22)【出願日】2019-06-04

(85)【翻訳文提出日】2022-01-28

(86)【国際出願番号】 CN2019090041

(87)【国際公開番号】W WO2020243912

(87)【国際公開日】2020-12-10

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520025002

【氏名又は名称】シャンハイテック ユニバーシティ

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩＴＥＣＨ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ

(74)【代理人】

【識別番号】100094569

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 伸一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100103610

【弁理士】

【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦

(74)【代理人】

【識別番号】100109070

【弁理士】

【氏名又は名称】須田 洋之

(74)【代理人】

【識別番号】100119013

【弁理士】

【氏名又は名称】山崎 一夫

(74)【代理人】

【識別番号】100123777

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 さつき

(74)【代理人】

【識別番号】100111796

【弁理士】

【氏名又は名称】服部 博信

(74)【代理人】

【識別番号】100137626

【弁理士】

【氏名又は名称】田代 玄

(72)【発明者】

【氏名】ヤン グァン

(72)【発明者】

【氏名】キアン ミン

【テーマコード（参考）】

4H045

【Ｆターム（参考）】

4H045AA11

4H045AA30

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

酸感受性イオンチャネル１ａ（ＡＳＩＣ１ａ）タンパク質に特異的に結合する免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）およびその使用が提供される。また、アシドーシスを患っているかもしくはそれにかかりやすい対象を治療するために、または虚血発作および関連状態を含む、ＡＳＩＣ１ａ活性および／もしくはシグナル伝達の変更により引き起こされるかもしくはそれに関連する疾患を患っている対象を治療するために、有効量の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を投与する方法が提供される。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、
Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列、ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、
Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項2】

ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプのＦｃドメインをさらに含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項3】

抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）₂、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖおよびＦｖからなる群から選択される、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項4】

抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または二重特異性抗体である、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項5】

ＡＳＩＣ１ａに結合する、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項6】

ＡＳＩＣ１ａのアンタゴニストである、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項7】

ＡＳＩＣ１ａ媒介酸誘導流を阻害する、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項8】

ＡＳＩＣ１ａ媒介酸誘導カルシウム流入を阻害する、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項9】

Ｖ_Lが、配列番号２を含み、Ｖ_Hが、
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；または
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３７のＶ_H－ＣＤＲ３配列
を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項10】

重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、Ｖ_Hが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Lが、配列番号２のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項11】

軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、ＬＣが、配列番号２を含むアミノ酸配列を含み、ＨＣが、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）を含み、Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項12】

（ａ）配列番号２に存在する軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列（Ｖ_L）；および／または
（ｂ）配列番号７の重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一である重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列（Ｖ_H）
を含む抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項13】

Ｖ_Lが、
（ａ）配列番号３に存在するＶ_H－ＣＤＲ１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_L－ＣＤＲ１；
（ａ２）配列番号４に存在するＶ_H－ＣＤＲ２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_L－ＣＤＲ２；および／または
（ａ３）配列番号５に存在するＶ_H－ＣＤＲ３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_L－ＣＤＲ３
を含み、
Ｖ_Hが、
（ｂ１）配列番号８に存在するＶ_H－ＣＤＲ１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_H－ＣＤＲ１；
（ｂ２）配列番号９に存在するＶ_H－ＣＤＲ２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_H－ＣＤＲ２；および／または
（ｂ３）配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５もしくは配列番号３７のいずれか１つに存在するＶ_H－ＣＤＲ３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_H－ＣＤＲ３
を含む、請求項１２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項14】

重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む、治療有効量の有効量の抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む、それを必要とする対象においてアシドーシスを治療する方法であって、
Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、
Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、方法。

【請求項15】

重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む、治療有効量の有効量の抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む、それを必要とする対象において虚血発作を治療する方法であって、
Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、
Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、方法。

【請求項16】

重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む、治療有効量の有効量の抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む、それを必要とする対象においてＡＳＩＣ１ａ活性および／またはシグナル伝達によって引き起こされるかまたはそれに関連する障害を治療する方法であって、
Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、
Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、方法。

【請求項17】

請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸配列。

【請求項18】

配列番号１、６、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６および３８からなる群から選択される、請求項１７に記載の核酸配列。

【請求項19】

請求項１７または１８に記載の核酸を発現する宿主細胞またはベクター。

【請求項20】

請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含むキット。

【請求項21】

請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片が、放射性標識、蛍光標識および発色性標識からなる群から選択される少なくとも１種の検出可能標識にカップリングされている、請求項２０に記載のキット。

【請求項22】

請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片に特異的に結合する二次抗体をさらに含む、請求項２０または２１に記載のキット。

【請求項23】

生体試料においてＡＳＩＣ１ａを検出するための方法であって、生体試料を、検出可能標識にコンジュゲートした請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させることと、生体試料中の検出可能標識の存在およびレベルを検出することとを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本技術は、概して、酸感受性イオンチャネル１ａ（ＡＳＩＣ１ａ：ａｃｉｄ－ｓｅｎｓｉｎｇ ｉｏｎ ｃｈａｎｎｅｌ １ａ）タンパク質に特異的に結合する免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）の調製およびその使用に関する。特に、本技術は、アシドーシスを患っているかもしくはそれにかかりやすい対象を治療するために、または虚血発作および関連状態を含む、ＡＳＩＣ１ａ活性および／もしくはシグナル伝達の変更により引き起こされるかもしくはそれに関連する疾患を患っている対象を治療するために、有効量の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を投与することに関する。

【背景技術】

【0002】

以下の説明は、読み手の理解を補助するために提供される。提供される情報または引用される参考文献のいずれも、先行技術であるとは認められない。
酸感受性イオンチャネル（ＡＳＩＣ）は、細胞外プロトンにより開閉される。ＡＳＩＣは、細胞外アシドーシスにより活性化されるカチオンチャネルである。６種のＡＳＩＣサブユニット：ＡＳＩＣ１ａ、ＡＳＩＣ１ｂ、ＡＳＩＣ２ａ、ＡＳＩＣ２ｂ、ＡＳＩＣ３およびＡＳＩＣ４をコードする少なくとも４種の遺伝子が特定されており、その中で、「ａ」および「ｂ」の記号は、それぞれ、ＡＳＩＣ１およびＡＳＩＣ２遺伝子、ＡＣＣＮ２およびＡＣＣＮ１の代替スプライスバリアントを表す。アミロライドによる遮断に感受性の機能的ＡＳＩＣチャネルは、ホモマーまたはヘテロマー形のいずれかにアセンブルされる３つのサブユニットからなる。ＡＳＩＣ１ａは、脳において高度に発現され、他のＡＳＩＣアイソフォームと共に機能的ホモマーまたはヘテロマーチャネルを形成する。ｐＨ７．０近辺の活性化閾値により、ＡＳＩＣ１ａは、脳内のアシドーシスの一次センサーとしてはたらき、正常生理および病理生理において関係付けられている。

【発明の概要】

【0003】

一態様では、本技術は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列、ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片に関する。
加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプのＦｃドメインをさらに含む。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗原結合性断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖおよびＦｖからなる群から選択される。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または二重特異性抗体である。

【0004】

加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａに結合する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａのアンタゴニストである。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａ媒介酸誘導流を阻害する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａ媒介酸誘導カルシウム流入を阻害する。

【0005】

加えてまたはあるいは、Ｖ_Lは、配列番号２を含み、Ｖ_Hは、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；または配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３７のＶ_H－ＣＤＲ３配列を含む。

【0006】

加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、Ｖ_Lは、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列、配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含み、Ｖ_Hは、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；または配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３７のＶ_H－ＣＤＲ３配列を含む。

【0007】

一態様では、本開示は、（ａ）配列番号２に存在する軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列（Ｖ_L）；ならびに／または（ｂ）（ｂ１）配列番号８に存在するＶ_H－ＣＤＲ１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_H－ＣＤＲ１、（ｂ２）配列番号９に存在するＶ_H－ＣＤＲ２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_H－ＣＤＲ２および／または（ｂ３）配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５もしくは配列番号３７のいずれか１つに存在するＶ_H－ＣＤＲ３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_H－ＣＤＲ３を含む重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列（Ｖ_H）を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。

【0008】

加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、Ｖ_Lは、配列番号３に存在するＶ_H－ＣＤＲ１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_L－ＣＤＲ１；配列番号４に存在するＶ_H－ＣＤＲ２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_L－ＣＤＲ２；および／または配列番号５に存在するＶ_H－ＣＤＲ３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_L－ＣＤＲ３を含む。

【0009】

一態様では、本技術は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、Ｖ_Hが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Lが、配列番号２のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片に関する。
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号２の軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列（Ｖ_L）；および／または（ｂ）配列番号７の重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一である重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列（Ｖ_H）を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。

【0010】

一態様では、本技術は、軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を含む抗体またはその抗原結合性断片を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、ＬＣが、配列番号２を含むアミノ酸配列を含み、ＨＣが、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）を含み、Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片に関する。

【0011】

一態様では、本技術は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、Ｖ_Lが、配列番号２のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片に関する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、Ｖ_Hは、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；または配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３７のＶ_H－ＣＤＲ３配列を含む。

【0012】

一態様では、本技術は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む、治療有効量の有効量の抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む、それを必要とする対象においてアシドーシスを治療する方法であって、Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、方法に関する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、Ｖ_H－ＣＤＲ３配列は、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択される。

【0013】

一態様では、本技術は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む、治療有効量の有効量の抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む、それを必要とする対象において虚血発作を治療する方法であって、Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、方法に関する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、Ｖ_H－ＣＤＲ３配列は、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択される。

【0014】

一態様では、本技術は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む、治療有効量の有効量の抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む、それを必要とする対象においてＡＳＩＣ１ａ活性および／またはシグナル伝達によって引き起こされるかまたはそれに関連する障害を治療する方法であって、Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、方法に関する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、Ｖ_H－ＣＤＲ３配列は、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択される。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、ＡＳＩＣ１ａ活性および／またはシグナル伝達によって引き起こされるかまたはそれに関連する障害は、神経変性疾患、神経心理学的疾患、てんかん、多発性硬化症、疼痛および片頭痛である。

【0015】

一態様では、本技術は、本明細書で説明される免疫グロブリン関連組成物のいずれかをコードする核酸配列を提供する。また、本明細書で説明される抗体のいずれかをコードする組換え核酸配列が本明細書で開示される。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号１、６、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６および３８からなる群から選択される。
別の態様では、本技術は、本明細書で説明される免疫グロブリン関連組成物のいずれかをコードする任意の核酸配列を発現する宿主細胞またはベクターを提供する。

【0016】

別の態様では、本技術は、本明細書で開示される実施形態のいずれかの抗体またはその抗原結合性断片と使用のための説明書とを含むキットを提供する。一部の実施形態では、本明細書で開示される実施形態のいずれかの抗体またはその抗原結合性断片は、放射性標識、蛍光標識および発色性標識からなる群から選択される少なくとも１種の検出可能標識にカップリングされている。一部の実施形態では、キットは、本明細書で開示される実施形態のいずれかの抗体またはその抗原結合性断片に特異的に結合する二次抗体をさらに含む。

【0017】

別の態様では、本技術は、生体試料においてＡＳＩＣ１ａを検出するための方法であって、生体試料を、検出可能標識にコンジュゲートした本明細書で開示される実施形態のいずれかの抗体またはその抗原結合性断片と接触させることと、生体試料中の検出可能標識の存在およびレベルを検出することとを含む、方法を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0018】

【図1】図１（Ｒ１～Ｒ５）は、ＡＳＩＣ１ａバインダーについての酵母ディスプレイライブラリーの連続５回の選択中のＦＡＣＳソーティングの結果を示す。右下に示されるのは、第５回の選択後に選択されたＶ_H－ＣＤＲ３配列の配列整列に由来するコンセンサス配列である。

【図2】図２は、ＦＡＣＳにより測定される、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１抗体の親和性成熟誘導体の、ヒトＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ（ｈＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ）、マウスＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ（ｍＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ）またはラット－ＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ（ｒＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ）を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞への結合を示す。ｈＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ、ｍＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰまたはｒＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰをコードするプラスミドを一過性にトランスフェクトしたＣＨＯ－Ｋ１細胞を、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１の親和性成熟バージョンで染色し（赤色）、ＦＡＣＳ解析に供した。

【図3】図３は、親和性成熟抗体のサブタイプ特異性を実証する。ヒトＡＳＩＣ１ｂ（ｈＡＳＩＣ１ｂ）－ｅＹＦＰ、ヒトＡＳＩＣ２ａ（ｈＡＳＩＣ２ａ）－ｅＹＦＰおよびヒトＡＳＩＣ３ａ（ｈＡＳＩＣ３ａ）－ｅＹＦＰをコードするプラスミドを一過性にトランスフェクトしたＣＨＯ－Ｋ１細胞を、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１またはその親和性成熟バージョンで染色し、ＦＡＣＳソーティングに供した。ｅＹＦＰおよびＡｌｅｘａ５５５蛍光色素を発現する二重陽性細胞集団の非存在（ＦＡＣＳプロファイルの右上４分の１区）は、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１または親和性成熟バージョンの、細胞表面ＡＳＩＣのサブタイプであるｈＡＳＩＣ１ｂ、ｈＡＳＩＣ２ａまたはｈＡＳＩＣ３ａへの結合の欠如を示唆した。各プロットは、細胞１０，０００個を示す。

【図4A-4E】図４Ａ～４Ｅは、親和性成熟ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１誘導抗体の、ｈＡＳＩＣ１ａ流に対する効果を示す。１００ｎＭ ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１（図４Ａ）、または親和性成熟ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１バージョンＡＳＣ０６－０１－ＩｇＧ１（図４Ｂ）、ＡＳＣ０６－０２－ＩｇＧ１（図４Ｃ）、ＡＳＣ０６－０３－ＩｇＧ１（図４Ｄ）もしくはＡＳＣ０６－０４－ＩｇＧ１（図４Ｅ）の非存在もしくは存在下での、ｈＡＳＩＣ１ａを安定に発現する単一のＣＨＯ－Ｋ１細胞から記録された代表的な流れのトレースが示される。アミロライド（３０μＭ）を、陽性対照として使用した。「洗浄」とは、１００ｎＭの示される抗体の処理、および次いで、１５分間の洗浄液の注入後の流れの回復を表す。

【図5】図５は、蛍光膜電位（ＦＭＰ）アッセイ（ｎ＝６）により測定される、増大する用量のＡＳＣ０６－ＩｇＧ１の、酸誘導ＡＳＩＣ１ａ流に対する効果を示す。

【図6】図６は、蛍光画像化プレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）ベースアッセイ（ｎ＝６）により測定される、増大する用量のＡＳＣ０６－ＩｇＧ１の、ＡＳＩＣ１ａ媒介カルシウム流入に対する効果を示す。

【図7A】図７Ａは、ＡＳＣ０６のＶ_Lのヌクレオチド配列（配列番号１）を示す。

【図7B】図７Ｂは、ＡＳＣ０６のＶ_Lのアミノ酸配列（配列番号２）を示す。Ｖ_L－ＣＤＲ１（配列番号３）、Ｖ_L－ＣＤＲ２（配列番号４）およびＶ_L－ＣＤＲ３（配列番号５）は、下線付き太字フォントで示す。

【図7C】図７Ｃは、ＡＳＣ０６のＶ_Hのヌクレオチド配列（配列番号６）を示す。

【図7D】図７Ｄは、ＡＳＣ０６のＶ_Hのアミノ酸配列（配列番号７）を示す。Ｖ_H－ＣＤＲ１（配列番号８）、Ｖ_H－ＣＤＲ２（配列番号９）およびＶ_H－ＣＤＲ３（配列番号１０）は、下線付き太字フォントで示す。

【発明を実施するための形態】

【0019】

本技術の実質的な理解を提供するために、本技術のある特定の態様、様式、実施形態、変動および特色は、様々なレベルの詳細さで以下に示されることが理解されるべきである。本技術は、虚血発作および／または関連障害を治療する方法を提供する。
本明細書で説明されるＡＳＩＣ１ａタンパク質をターゲティングする例示される抗体は、ｓｃＦｖおよびＩｇＧ１抗体であるが、説明は、任意の免疫学的結合剤、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよび遺伝子改変ＩｇＧならびにそれらの断片、ならびに本明細書で説明される抗原結合活性を保持する抗体相補性決定領域（ＣＤＲ）ドメインを含むポリペプチドまで広く包含することが意図される。

【0020】

定義
本明細書で使用されるある特定の用語の定義を、以下に示す。別に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術および科学用語は、一般的に、本技術が属する分野の当業者に一般に理解されるのと同じ意味を有する。
本明細書および付属の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、内容が明らかに別のように規定しない限り、複数の指示物を含む。例えば、「ａ ｃｅｌｌ」についての言及は、２種またはそれよりも多くの細胞の組合せを含むなどである。一般的に、本明細書で使用される命名法、ならびに以下に説明される、細胞培養、分子遺伝学、有機化学、分析化学ならびに核酸化学およびハイブリダイゼーションにおける実験手技は、当該技術分野で周知および一般に使用される命名法および実験手技である。

【0021】

本明細書で使用される場合、数についての「約」という用語は、一般的に、別のように示されるかまたは別のように文脈から明らかでない限り、数のいずれかの方向の（その数よりも大きいまたは小さい）１％、５％または１０％の範囲内に入る数を含むと理解される（そのような数が、可能な値の０％未満または１００％超であり得る場合を除く）。
本明細書で使用される場合、「アシドーシス」または「酸血症」という用語は、血液および他の身体組織における酸性の増大と関連付けられる状態、ならびに低い血液ｐＨおよび／または組織ｐＨの状況を指すために使用される。アシドーシスまたは酸血症は、胎児における場合を除いて、動脈ｐＨが７．３５未満に下がったときに起こる。胎児アシドーシス酸血症は、７．２０未満の臍血管ｐＨとして定義される。代謝性アシドーシスは、嫌気的代謝中に生成する代謝性の酸、例えば乳酸の生成の増大、または腎臓を介した酸を排出する能力の妨害のいずれかから生じ得る。呼吸性アシドーシスは、低換気のための血中二酸化炭素の蓄積（高炭酸ガス血症）から生ずる。アシドーシスにおいて見られ得る徴候および症状には、頭痛、錯乱、倦怠感、振戦、眠気、羽ばたき振戦、および昏睡に進行し得る脳の大脳の機能障害が含まれる。

【0022】

本明細書で使用される場合、剤、薬剤またはペプチドの、対象への「投与」は、対象に、化合物を、その意図される機能を行うために導入または送達する任意の経路を含む。投与は、経口、鼻内、非経口（静脈内、筋内、腹腔内または皮下）または局部を含む、任意の好適な経路により行うことができる。一部の実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、頭蓋内経路または動脈内経路により投与される。投与は、自己投与および他者による投与を含む。

【0023】

本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、少なくとも１つのアミノ基および少なくとも１つのカルボキシル基を含有する任意の有機分子を指すために使用される。典型的に、少なくとも１つのアミノ基は、カルボキシル基に対してα位に存在する。「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸および合成アミノ酸、ならびにアミノ酸アナログおよび、天然アミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸ミメティックを含む。天然アミノ酸は、遺伝子コードによりコードされるアミノ酸、および後に修飾されるアミノ酸、例えばヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタメートおよびＯ－ホスホセリンである。アミノ酸アナログは、天然アミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、水素に結合しているα－炭素、カルボキシル基、アミノ基およびＲ基を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのようなアナログは、修飾Ｒ基（例えば、ノルロイシン）または修飾ペプチド骨格を有するが、天然アミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸ミメティックは、アミノ酸の一般化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様の様式で機能する化学化合物を指す。アミノ酸は、本明細書で、それらの一般に公知の３文字記号により、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名委員会により推奨される１文字記号により言及され得る。

【0024】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、例として、限定ではなく、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、それらの組合せを含む、免疫グロブリンまたは免疫グロブリン様分子；ならびに任意の脊椎動物における、例えば哺乳動物、例えばヒト、ヤギ、ウサギおよびマウスにおける免疫応答中に生成する同様の分子；ならびに非哺乳動物種、例えばサメ免疫グロブリンを集合的に指す。本明細書で使用される場合、「抗体」（インタクトな免疫グロブリンを含む）および「抗原結合性断片」は、目的の分子（または高度に類似する目的の分子の一群）に、他の分子への結合を実質的に除外するほど特異的に結合する（例えば、生体試料中の他の分子についての結合定数よりも少なくとも１０³Ｍ^-1大きいか、少なくとも１０⁴Ｍ^-1大きいかまたは少なくとも１０⁵Ｍ^-1大きい、目的の分子についての結合定数を有する抗体および抗体断片）。また、「抗体」という用語は、遺伝子操作した形態、例えば、キメラ抗体（例えばヒト化マウス抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば二重特異性抗体）を含む。また、Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.)；Kuby, J., Immunology, 3^rd Ed., W.H. Freeman & Co., New York, 1997を参照されたい。

【0025】

特に、抗体とは、抗原のエピトープを特異的に認識および結合する、少なくとも軽鎖免疫グロブリン可変領域または重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチドリガンドを指す。抗体は、重鎖および軽鎖からなり、その各々は、可変重鎖（Ｖ_H）領域および可変軽鎖（Ｖ_L）領域と呼ばれる可変領域を有する。合わせて、Ｖ_H領域およびＶ_L領域は、抗体により認識される抗原への結合の原因である。典型的に、免疫グロブリンは、ジスルフィド結合により相互接続されている重（Ｈ）鎖および軽（Ｌ）鎖を有する。２つの型の軽鎖、ラムダ（λ）およびカッパ（κ）がある。抗体分子の機能活性を決定する５種の主要な重鎖クラス（またはアイソタイプ）：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥがある。各重鎖および軽鎖は、定常領域および可変領域を含有する（これらの領域は「ドメイン」としても公知である）。組合せで、重鎖および軽鎖可変領域は、抗原に特異的に結合する。軽鎖および重鎖可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも呼ばれる３つの超可変領域により分断されている「フレームワーク」領域を含有する。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、定義されている（参照によりこれにより本明細書に組み込まれる、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1991を参照されたい）。カバット（Ｋａｂａｔ）データベースは現在、オンラインで維持されている。様々な軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、種内で比較的保存されている。構成要素軽鎖および重鎖を組み合わせたフレームワーク領域である抗体のフレームワーク領域は、大部分はβ－シートコンフォメーションを採用し、ＣＤＲは、β－シート構造を接続し、一部の場合その部分を形成するループを形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間非共有相互作用によりＣＤＲを正しい向きに位置付けるスキャフォールドを形成するように作用する。

【0026】

ＣＤＲは、主に、抗原のエピトープへの結合の原因である。各鎖のＣＤＲは、典型的に、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と呼ばれ、Ｎ末端から出発して逐次的に番号付けされ、また典型的に、特定のＣＤＲが位置する鎖により特定される。したがって、Ｖ_H－ＣＤＲ３は、それが見出される抗体の重鎖の可変ドメインに位置し、一方で、Ｖ_L－ＣＤＲ１は、それが見出される抗体の軽鎖の可変ドメインのＣＤＲ１である。ＡＳＩＣ１ａタンパク質に結合する抗体は、特異的Ｖ_H領域およびＶ_L領域配列、ならびにしたがって、特異的ＣＤＲ配列を有する。異なる特異性（すなわち、異なる抗原についての異なる結合部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。抗体毎に変動するのはＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の限定的な数のアミノ酸位置のみが抗原結合に直接的に関与する。ＣＤＲ内のこれらの位置は、特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ばれる。「本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体」は、本明細書で使用される場合、抗体（モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体などを含む）および抗体断片を指す。抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に特異的に結合する。

【0027】

本明細書で使用される場合、「抗体関連ポリペプチド」という用語は、単独で、または以下のポリペプチドエレメント：抗体分子のヒンジ領域、ＣＨ₁、ＣＨ₂およびＣＨ₃ドメインの全てもしくは部分との組合せで、可変領域を含み得る、単鎖抗体を含む抗原結合性抗体断片を意味する。また、可変領域と、ヒンジ領域、ＣＨ₁、ＣＨ₂およびＣＨ₃ドメインとの任意の組合せが、本技術に含まれる。本方法において有用な抗体関連分子には、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）₂、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）ならびにＶ_LまたはＶ_Hドメインのいずれかを含む断片が含まれるが、これらに限定されない。例には、（ｉ）Ｖ_L、Ｖ_H、Ｃ_LおよびＣＨ₁ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により結合された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）₂断片、（ｉｉｉ）Ｖ_HおよびＣＨ₁ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶ_LおよびＶ_HドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）Ｖ_HドメインからなるｄＡｂ断片（Ward et al., Nature 341: 544-546, 1989）、ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。そのため、「抗体断片」または「抗原結合性断片」は、全長抗体の一部、一般的にはその抗原結合領域または可変領域を含み得る。抗体断片または抗原結合性断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂およびＦｖ断片；ディアボディ；直鎖抗体；単鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成した多重特異性抗体が含まれる。

【0028】

本明細書で使用される場合、「コンジュゲートされた」という用語は、当業者に公知の任意の方法による２つの分子の会合を指す。好適な型の会合には、化学結合および物理的結合が含まれる。化学結合には、例えば、共有結合および配位結合が含まれる。物理的結合には、例えば、水素結合、双極子相互作用、ファンデルワールス力、静電相互作用、疎水性相互作用および芳香族積層が含まれる。

【0029】

本明細書で使用される場合、「ディアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小抗体断片を指し、その断片は、同じポリペプチド鎖（Ｖ_H Ｖ_L）内の軽鎖可変ドメイン（Ｖ_L）に接続された重鎖可変ドメイン（Ｖ_H）を含む。同じ鎖の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、別の鎖の相補的ドメインと対形成することを強制され、２つの抗原結合部位を創出する。ディアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号；国際公開第９３／１１１６１号；およびHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)においてより完全に説明されている。
本明細書で使用される場合、「単鎖抗体」または「単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）」という用語は、Ｆｖ断片の２つのドメイン、Ｖ_LおよびＶ_Hの抗体融合分子を指す。単鎖抗体分子は、いくつかの個々の分子を有する多量体、例えば、二量体、三量体または他の多量体を含み得る。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、Ｖ_LおよびＶ_Hは、別々の遺伝子によりコードされるが、それらは、組換え法を使用して、合成リンカーにより接合してもよく、それによりそれらは、Ｖ_LおよびＶ_H領域が対を形成して一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知）として作製することが可能である。Bird et al. (1988) Science 242:423-426およびHuston et al. (1988) Proc. Natl. Acad Sci. USA 85:5879-5883。そのような単鎖抗体は、組換え技法、またはインタクトな抗体の酵素切断もしくは化学切断により調製することができる。

【0030】

本明細書で使用される場合、「抗原」とは、抗体（またはその抗原結合性断片）が選択的に結合することができる分子を指す。標的抗原は、タンパク質、炭水化物、核酸、脂質、ハプテンまたは他の天然もしくは合成化合物であり得る。一部の実施形態では、標的抗原は、ポリペプチド（例えば、ＡＳＩＣ１ａポリペプチド）であり得る。また、抗原は、動物に投与されて、動物において免疫応答を発生し得る。
「抗原結合性断片」という用語は、抗原への結合の原因であるポリペプチドの一部を所有する全免疫グロブリン構造の断片を指す。本技術において有用な抗原結合性断片の例には、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）₂、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）₂が含まれるが、これらに限定されない。
上記に示される抗体断片のいずれも、当業者に公知の従来型技法を使用して得られ、断片は、インタクトな抗体と同じ様式で結合特異性および中和活性についてスクリーニングされる。

【0031】

「結合親和性」により、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原または抗原性ペプチド）との間の全非共有相互作用の強さを意味する。分子Ｘの、そのパートナーＹについての親和性は、一般的に、解離定数（Ｋ_D）により表すことができる。親和性は、本明細書で説明される方法を含む、当該技術分野で公知の標準の方法により測定することができる。低親和性複合体は、一般的に抗原から容易に解離する傾向がある抗体を含有し、一方で、高親和性複合体は、一般的により長い期間、抗原に結合したままである傾向がある抗体を含有する。

【0032】

本明細書で使用される場合、「生体試料」という用語は、生細胞に由来する試料材料を意味する。生体試料には、対象から単離された組織、細胞、タンパク質または細胞の膜抽出物および生体液（例えば、腹水または脳脊髄液（ＣＳＦ））、ならびに対象内に存在する組織、細胞および体液が含まれ得る。本技術の生体試料には、乳房組織、腎組織、子宮頸部、子宮内膜、頭頸部、胆嚢、耳下腺組織、前立腺、脳、下垂体、腎臓組織、筋肉、食道、胃、小腸、結腸、肝臓、脾臓、膵臓、甲状腺組織、心組織、肺組織、膀胱、脂肪組織、リンパ節組織、子宮、卵巣組織、副腎組織、精巣組織、扁桃腺、胸腺、血液、毛髪、頬、皮膚、血清、血漿、ＣＳＦ、精液、前立腺液、精漿、尿、糞便、汗、唾液、痰、粘液、骨髄、リンパおよび涙から採取した試料が含まれるが、これらに限定されない。また、生体試料は、内臓生検からまたはがんから得てもよい。生体試料は、診断もしくは研究のために対象から得てもよく、または対照としてもしくは基礎研究のために非疾患個体から得てもよい。試料は、例えば、静脈穿刺および直視下生検を含む、標準の方法により得ることができる。ある特定の実施形態では、生体試料は、皮膚組織、毛髪、爪、皮脂腺または筋生検試料である。

【0033】

本明細書で使用される場合、「対照」は、比較目的のために実験において使用される代替試料である。対照は、「陽性」であっても、「陰性」であってもよい。例えば、実験の目的が、特定の型の疾患のための治療についての治療剤の有効性の相関を決定することである場合、陽性対照（所望の治療効果を呈することが公知の化合物または組成物）および陰性対照（治療を受容しないかまたはプラセボを受容する対象または試料）が典型的に使用される。

【0034】

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、所望の治療効果および／または予防効果を達成するのに十分な量、例えば、本明細書で説明される疾患もしくは状態、または本明細書で説明される疾患もしくは状態と関連付けられる１種もしくは複数種の徴候もしくは症状の予防またはその減少をもたらす量を指す。治療適用または予防適用に関して、対象に投与される組成物の量は、組成物、疾患の程度、型および重症度によって、ならびに個体の特徴、例えば、健康全般、年齢、性別、体重および薬物への耐性よって変動する。当業者は、これらおよび他の因子によって適切な投与量を決定することができる。また、組成物は、１種または複数種の追加の治療用化合物と組み合わせて投与してもよい。本明細書で説明される方法において、治療用組成物は、本明細書で説明される疾患または状態の１種または複数種の徴候または症状を有する対象に投与され得る。本明細書で使用される場合、「治療有効量」の組成物とは、疾患または状態の生理学的効果が改善または除去される組成物レベルを指す。治療有効量は、１回または複数回の投与で与えることができる。

【0035】

「単離された」または「精製された」ポリペプチドまたはペプチドは、その剤が由来する細胞もしくは組織源からの細胞物質もしくは他の夾雑ポリペプチドを実質的に含まないか、または化学合成された場合、化学前駆物質もしくは他の化学物質を実質的に含まない。例えば、単離された本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、その剤の診断的使用または治療的使用を干渉し得る物質を含まないことがある。そのような干渉物質は、酵素、ホルモンならびに他のタンパク質性および非タンパク質性溶質を含み得る。

【0036】

本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗体に特異的に結合することができるタンパク質決定基を意味する。エピトープは、通常、分子の化学活性表面群、例えば、アミノ酸または糖側鎖からなり、通常、特異的三次元構造特徴および特異的電荷特徴を有する。コンフォメーションおよび非コンフォメーションエピトープは、前者への結合は変性溶媒の存在下で失われるが、後者はそうではない点で区別される。一部の実施形態では、「エピトープ」は、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体が特異的に結合する、ＡＳＩＣ１ａタンパク質三量体の領域であり、ＡＳＩＣ１ａの細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、エピトープは、２つのＡＳＩＣ１ａ単量体にまたがることがある。一部の実施形態では、エピトープは、コンフォメーションエピトープまたは非コンフォメーションエピトープである。エピトープに結合する抗ＡＳＩＣ１ａ抗体についてスクリーニングするために、ルーチンの交差ブロッキングアッセイ、例えば、Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)で説明されるアッセイを行ってもよい。このアッセイは、抗ＡＳＩＣ１ａ抗体が、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体と同じ部位またはエピトープに結合するかどうかを決定するために使用することができる。あるいはまたは加えて、エピトープマッピングは、当該技術分野で公知の方法により行うことができる。例えば、抗体配列は、アラニンスキャニングによる変異誘発などの変異誘発を行って、接触残基を特定してもよい。異なる方法において、ＡＳＩＣ１ａタンパク質の様々な領域に対応するペプチドは、試験抗体との、または試験抗体および特徴付けられたもしくは公知のエピトープを有する抗体との競合アッセイにおいて使用してもよい。

【0037】

本明細書で使用される場合、「発現」は、以下のこと：遺伝子の、ｍＲＮＡ前駆体への転写；成熟ｍＲＮＡを生成するｍＲＮＡ前駆体のスプライシングおよび他のプロセシング；ｍＲＮＡ安定性；成熟ｍＲＮＡのタンパク質への翻訳（コドン利用およびｔＲＮＡ利用可能性を含む）；ならびに適切な発現および機能に必要とされる場合、翻訳産物の糖鎖付加および／または他の修飾のうちの１つまたは複数を含む。
本明細書で使用される場合、「遺伝子」という用語は、プロモーター、エクソン、イントロンおよび発現を制御する他の非翻訳領域を含む、ＲＮＡ産物の生合成の調節についての全ての情報を含有するＤＮＡのセグメントを意味する。

【0038】

本明細書で使用される場合、「相同性」または「同一性」または「類似性」という用語は、２つのペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性を指す。相同性は、比較の目的のために整列され得る各配列における位置を比較することにより決定することができる。比較される配列における位置が同じ塩基またはアミノ酸により占有されている場合、それらの分子は、その位置で相同である。配列間の相同性の程度は、それらの配列により共有される適合位置または相同位置の数の関数である。ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド領域（またはポリペプチドもしくはポリペプチド領域）が、別の配列とのある特定の割合（例えば、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％）の「配列同一性」を有するとは、整列させた場合、２つの配列を比較すると、その割合の塩基（またはアミノ酸）が同じであることを意味する。この整列および相同性パーセントまたは配列同一性は、当該技術分野において公知のソフトウェアプログラムを使用して決定することができる。一部の実施形態では、デフォルトパラメーターは、整列に使用される。１つの整列プログラムは、デフォルトパラメーターを使用するＢＬＡＳＴである。特に、プログラムは、以下のデフォルトパラメーター：遺伝子コード＝標準；フィルター＝なし；鎖＝両方；カットオフ＝６０；除外＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；記載＝５０配列；ソート＝高スコア順；データベース＝非重複、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲを使用するＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰである。これらのプログラムの詳細は、国立バイオテクノロジー情報センター（米国）において見出すことができる。生物学的に同等なポリヌクレオチドは、特定の相同性パーセントを有し、かつ同じまたは類似する生物活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。２つの配列が、互いに４０％未満の同一性または２５％未満の同一性を共有する場合、それらは、「非関連」または「非相同」と考えられる。

【0039】

本明細書で使用される場合、非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの部分について、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えば、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類からの超可変領域残基により置換されているヒト免疫グロブリンである。一部の実施形態では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基により置換されている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にまたはドナー抗体に見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体性能、例えば、結合親和性をさらに改良するために行われる。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメイン（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂またはＦｖ）の実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサスＦＲ配列のＦＲ領域であるが、ＦＲ領域は、結合親和性を改善する１つまたは複数のアミノ酸置換を含み得る。ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、典型的に、Ｈ鎖において６以下、およびＬ鎖において３以下である。また、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的に、ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。さらなる詳細については、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann et al., Nature 332: 323-327 (1988)；およびPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照されたい。例えば、Ahmed & Cheung, FEBS Letters 588(2):288-297 (2014)；Saxena & Wu, Frontiers in immunology 7: 580 (2016)を参照されたい。

【0040】

本明細書で使用される場合、「同一の」または「同一性」パーセントという用語は、２つまたはそれよりも多くの核酸またはポリペプチド配列に関して使用される場合、比較ウィンドウまたは指定領域にわたる最大一致について比較および整列させたとき、ＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ ２．０配列比較アルゴリズムを使用して以下に説明されるデフォルトパラメーターにより、または手動の整列および目視検査（例えば、ＮＣＢＩウェブサイト）により測定すると、同じであるか、または特定の割合の同じ（すなわち、特定の領域（例えば、本明細書で説明される抗体をコードするヌクレオチド配列、または本明細書で説明される抗体のアミノ酸配列）にわたる約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれよりも高い同一性）であるアミノ酸残基もしくはヌクレオチドを有する２つまたはそれよりも多くの配列またはサブ配列を指す。それから、そのような配列は、「実質的に同一」であると言われる。また、この用語は、試験配列の相補体を指すかまたはそれに適用することができる。また、この用語は、欠失および／または付加を有する配列、ならびに置換を有する配列を含む。一部の実施形態では、同一性は、少なくとも約２５個のアミノ酸もしくはヌクレオチドの長さ、または５０～１００個のアミノ酸もしくはヌクレオチドの長さである領域にわたり存在する。

【0041】

本明細書で使用される場合、「インタクトな抗体」または「インタクトな免疫グロブリン」という用語は、ジスルフィド結合により相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖ポリペプチドおよび２つの軽（Ｌ）鎖ポリペプチドを有する抗体を意味する。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書でＨＣＶＲまたはＶ_Hと略される）および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ₁、ＣＨ₂およびＣＨ₃からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書でＬＣＶＲまたはＶ_Lと略される）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、Ｃ_Lからなる。Ｖ_HおよびＶ_L領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域、およびそこに散在するフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域にさらに細分することができる。各Ｖ_HおよびＶ_Lは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなり、アミノ末端からカルボキシル末端まで以下の順序：ＦＲ₁、ＣＤＲ₁、ＦＲ₂、ＣＤＲ₂、ＦＲ₃、ＣＤＲ₃、ＦＲ₄で配置される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫グロブリンの、宿主組織、または免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系第１成分（Ｃｌｑ）を含む因子への結合を媒介し得る。

【0042】

本明細書で使用される場合、「個体」、「患者」または「対象」という用語は、個々の生物、脊椎動物、哺乳動物またはヒトであり得る。一部の実施形態では、個体、患者または対象は、ヒトである。

【0043】

「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然の突然変異の可能性を除いては同一である。例えば、モノクローナル抗体は、任意の真核、原核またはファージクローンを含む、単一のクローンに由来し、抗体が生成される方法には由来しない抗体であり得る。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープについての単一の結合特異性および親和性を呈する。モノクローナル抗体は、非常に特異的であり、単一の抗原性部位を対象としている。さらに、典型的に様々な決定基（エピトープ）を対象とする様々な抗体を含む従来型（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原の単一の決定基を対象としている。「モノクローナルの」という修飾語句は、実質的に均一な抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の生成を必要とするとは解釈されるべきではない。モノクローナル抗体は、例えば、非限定的に、ハイブリドーマ、組換えおよびファージディスプレイ技術を含む、当該技術分野において公知の広範な技法を使用して調製することができる。例えば、本方法により使用されるモノクローナル抗体は、最初にKohler et al., Nature 256:495 (1975)により説明されたハイブリドーマ法により作製してもよく、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）により作製してもよい。また、「モノクローナル抗体」は、例えば、Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991)およびMarks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)で説明される技法を使用するファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。

【0044】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容できる担体」という用語は、医薬投与と適合性の、任意および全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌および抗真菌化合物、等張性化合物および吸収遅延化合物などを含むと意図される。薬学的に許容できる担体およびそれらの製剤は、当業者に公知であり、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences (20^th edition, ed. A. Gennaro, 2000, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA.)において説明されている。
本明細書で使用される場合、障害または状態の「予防」または「予防すること」とは、統計的試料において、非処置の対照試料と比較して処置された試料における障害もしくは状態の発生を低減するか、または非処置の対照試料と比較して障害もしくは状態の１つもしくは複数の症状の開始を遅延させるかもしくはその重症度を低減する化合物を指す。

【0045】

本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書で互換的に使用されて、ペプチド結合または修飾ペプチド結合（すなわちペプチドアイソスター）により互いに接合された２つもしくはそれよりも多くのアミノ酸を含むポリマーを意味する。ポリペプチドとは、一般にペプチド、糖ペプチドまたはオリゴマーと呼ばれる短鎖、および一般的にタンパク質と呼ばれるより長い鎖の両方を指す。ポリペプチドは、遺伝子にコードされる２０種のアミノ酸以外のアミノ酸を含有し得る。ポリペプチドは、天然プロセス、例えば翻訳後プロセシングにより、または当該技術分野において周知の化学修飾技法により修飾されたアミノ酸配列を含む。
本明細書で使用される場合、「別々の」治療的使用という用語は、異なる経路による同時のまたは実質的に同時の少なくとも２種の活性成分の投与を指す。

【0046】

本明細書で使用される場合、「逐次的な」治療的使用という用語は、投与経路が同一であるかまたは異なる、異なる時間における少なくとも２種の活性成分の投与を指す。特に、逐次的使用とは、活性成分のうちの１種の、他の活性成分（単数または複数）の投与が始まる前の、全投与を指す。したがって、活性成分のうちの１種を、他の活性成分（単数または複数）を投与する前に、数分間、数時間または数日間にわたり投与することは可能である。この場合、同時治療はない。
本明細書で使用される場合、「同時の」治療的使用という用語は、同じ経路による、同時のまたは実質的に同時の少なくとも２種の活性成分の投与を指す。

【0047】

本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」とは、別の分子（例えば、抗原）を認識および結合するが、他の分子を実質的に認識および結合しない分子（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）を指す。特定の分子（例えば、ポリペプチドまたはポリペプチドのエピトープ）「への特異的結合」、「に特異的に結合する」または「について特異的である」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば、それが結合する分子について約１０^-4Ｍ、１０^-5Ｍ、１０^-6Ｍ、１０^-7Ｍ、１０^-8Ｍ、１０^-9Ｍ、１０^-10Ｍ、１０^-11Ｍまたは１０^-12ＭのＫ_Dを有する分子により示すことができる。また、「特異的に結合する」という用語は、分子（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）が、他の任意のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに実質的に結合することなく、特定のポリペプチド（例えば、ＡＳＩＣ１ａポリペプチド）または特定のポリペプチドのエピトープに結合する結合を指し得る。

【0048】

本明細書で使用される場合、「対象」、「個体」または「患者」という用語は、個々の生物、脊椎動物、哺乳動物またはヒトであり得る。
本明細書で使用される場合、「治療すること」または「治療」または「軽減」という用語は、目的が、ターゲティングされた病理学的状態または障害を防ぐことまたは減速する（減じる）ことである、治療的処置および予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃまたはｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段の両方を指す。対象は、本明細書で説明される方法による治療的量の本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を受容した後、対象が観察可能な阻害および／または測定可能な阻害を示す場合、虚血発作についての「治療」に成功している。また、説明される医学的状態の様々な治療または予防様式は、全体的な治療または予防を含むが、全体に達しない治療または予防も含み、一部の生物学的または医学的に関連する結果が達成される「実質的な」を意味すると意図されることが理解されるべきである。
また、本明細書で説明される障害の様々な治療様式は、全体的な治療を含むが、全体に達しない治療も含み、一部の生物学的または医学的に関連する結果が達成される「実質的な」を意味すると意図されることが理解されるべきである。治療は、慢性疾患のための連続的な延長された治療、または急性状態の治療のための単回もしくは数回の投与であり得る。

【0049】

本明細書で説明される抗ＡＳＩＣ１ａ抗体のアミノ酸配列改変が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗ＡＳＩＣ１ａ抗体のアミノ酸配列バリアントは、適切なヌクレオチド変化を抗体核酸に導入することによりまたはペプチド合成により調製される。そのような改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／またはそれへの挿入、および／またはその置換が含まれる。欠失、挿入および置換の任意の組合せは、得られる抗体が所望の特性を所有する限り、目的の抗体を得るために行われる。また、改変は、タンパク質の糖鎖付加のパターン変化を含む。最も置換変異誘発の対象となる部位は、超可変領域を含むが、ＦＲ変更もまた企図される。「保存的置換」を、以下の表に示す。

【0050】

【表1】

【0051】

置換バリアントの１つの型は、親抗体の１つまたは複数の超可変領域残基を置換することを含む。そのような置換バリアントを発生させるための便利な方法は、ファージディスプレイを使用する親和性成熟を含む。具体的には、いくつかの超可変領域部位（例えば、６～７部位）を変異させて、各部位において全ての可能なアミノ酸置換を発生させる。そのようにして発生させた抗体バリアントは、各粒子内にパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物への融合物として、繊維状ファージ粒子から一価の様式でディスプレイされる。その後、ファージディスプレイされたバリアントは、本明細書で開示される通り、それらの生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。改変のための超可変領域部位候補を特定するために、アラニンスキャニング変異誘発を行って、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を特定してもよい。あるいはまたは加えて、抗原－抗体複合体の結晶構造を解析して、抗体と抗原との間の接触点を特定することは有益であり得る。そのような接触残基および近隣の残基は、本明細書で練り上げた技法による置換のための候補である。そのようなバリアントを発生させると、バリアントのパネルを、本明細書で説明されるスクリーニングに供し、１回または複数回の関連アッセイにおいて類似するかまたは優れた特性を有する抗体を、さらなる開発のために選択し得る。

【0052】

ＡＳＩＣ１活性の変更を有する疾患状態
疼痛、神経学的疾患および精神医学的疾患のげっ歯類モデルにおけるＡＳＩＣについての役割を益々多くの証拠が支持している。Wemmie et al., Nat Rev Neurosci. 14(7): 461-471 (2013)。ＡＳＩＣ１ａの活性は、リガンド、例えば、神経ペプチド（例えば、ダイノルフィン（Ｄｙｎｏｒｐｉｎ）Ａおよびビッグダイノルフィン）、ポリアミン（例えば、スペルミン）、カチオン（例えば、Ｃａ²⁺、Ｍｇ²⁺、Ｃｄ²⁺、Ｃｕ²⁺、Ｇｄ³⁺、Ｎｉ²⁺、Ｐｂ²⁺、Ｚｎ²⁺、Ｂａ²⁺）、毒素（ＰｃＴｘ１、ＭｉｔＴｘおよびマンバルジン－１）により制御される。蓄積してきている証拠から、アシドーシスは細胞死を増強すること、およびＡＳＩＣ１ａ活性の変更を特徴とする疾患は、虚血発作、神経変性疾患、神経心理学的疾患、てんかん、多発性硬化症、疼痛および片頭痛を含むことが示唆される。Wemmie et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 101(10):3621-6 (2004)；Coryell et al., J Neurosci. 29(17):5381-8 (2009)；Xiong et al., Cell 118(6):687-98 (2004)；Pignataro et al., Brain 130(Pt 1):151-8 (2007)；Duan et al., J Neurosci. 31(6):2101-12 (2011)；Friese et al., Nat Med. 13(12):1483-9 (2007)；Vergo et al., Brain 134(Pt 2):571-84 (2011)；Arun et al., Brain 136(Pt 1):106-15 (2013)；およびDuan et al., J Neurosci. 27(41):11139-48 (2007)。したがって、ＡＳＩＣ１活性に拮抗することは、これらの疾患の治療のための治療手法である。興味深いことに、ＮＳＡＩＤＳ、例えば、フルルビプロフェン、イブプロフェン、アスピリン、サリチル酸、ジクロフェナクは、ＡＳＩＣ１ａ流を低減することが公知である。一部の実施形態では、ＡＳＩＣ１ａ活性の変更は、ＡＳＩＣ１ａ活性の増大である。Wemmie et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 101(10):3621-6 (2004)；Duan et al., J Neurosci. 27(41):11139-48 (2007)；Vergo et al., Brain 134(Pt 2):571-84 (2011)；Duan et al., J Neurosci. 31(6):2101-12 (2011)；およびArun et al., Brain 136(Pt 1):106-15 (2013)。

【0053】

虚血発作の病態形成
発作は、脳の一部への酸素に富む血液の供給の中断または低減により引き起こされる。酸素なしでは、脳細胞は、数分以内に死滅し始める。発作は、通常、症状、例えば、突然の脱力；とりわけ身体の片側の、顔面、腕または脚の麻痺またはしびれ；顔面の片側の下垂；錯乱；発話困難、例えば、不明瞭な言葉、または会話を理解することの困難；片目または両目の視覚の異常、例えば、片目または両目の霧視もしくは黒くなった視野または複視；呼吸困難；眩暈；歩行困難；例えば不明な転倒を引き起こす平衡感覚または共調運動の喪失；意識消失；および突然かつ重度の頭痛により示される。最も一般的な症状は、突然開始する顔面脱力（例えば、顔面の片側の下垂）、腕のふらつきおよび発話異常を含む。これらの症状は、典型的に、突然開始し、数秒間から数分間にわたり、ほとんどの場合、さらに進行しない。脳および機能性への最小限の損傷で発作から生還するためには即座の救急治療が重要である。

【0054】

全ての発作の約８７％を占める虚血発作は、脳の一部への血液供給が遮断されたときに起こる。脳血流量（ＣＢＦ）の減少、ＣＢＦの減少への脳組織の主要な応答の１つは、アシドーシスである。低酸素とグルコース枯渇との組合せは、虚血脳領域におけるＡＴＰ含有量の減少を引き起こす。ＡＴＰの減少は、代償的な嫌気的解糖の活性化、ならびに乳酸アシドーシスの発達を引き起こすラクテートおよびＨ⁺の生成の増大をもたらす。虚血の初期段階におけるＨ⁺濃度の中程度の増大は、境界領域における灌流の改善を促進するので、それは、代償的かつ適応性の役割を果たす。虚血発作の最初の数時間以内のラクテートレベルの有意な上昇は、細胞外ｐＨの減少を引き起こし、局所脳虚血中の中心部において７．２から６．５未満まで降下し得る。アシドーシスは、虚血発作の不都合な予後徴候であるように見える。

【0055】

虚血発作は、血餅または他の粒子による血管の閉塞のために、脳の一部への血液供給が遮断されたときに起こる。また、プラークと呼ばれる脂肪質は、血管内での蓄積により封鎖を引き起こし得る。虚血発作における血流の封鎖は、経時的に動脈の狭窄を引き起こすアテローム性動脈硬化症により引き起こされることがある。虚血発作は、脳に供給する動脈のどこかの封鎖により引き起こされ得る。
虚血発作は、血餅またはプラーク片が身体のどこか別の場所（通常、心臓）で形成し、脳に移動する塞栓性発作であり得る。脳に入ると、血餅は、細いためにその通過を封鎖する血管へと移動する。血餅はそこに留まり、血管を封鎖し、発作を引き起こす。塞栓性発作の約１５％は、心房細動（Ａｆｉｂ）を有する人において起こる。

【0056】

虚血発作は、脳に血液を供給する動脈のうちの１つの内側で形成する血餅により引き起こされる血栓性発作であり得る。この型の発作は、通常、高コレステロールレベルおよびアテローム性動脈硬化症を有する人において見られる。血栓性発作は、大血管血栓症または小血管疾患であり得る。大血管血栓症は、脳のより大きな動脈において起こる。ほとんどの場合、それは、迅速な血餅形成と組み合わさった長期アテローム性動脈硬化症により引き起こされる。高コレステロールは、この型の発作の共通リスク因子である。小血管疾患またはラクナ梗塞は、高血圧に密接に連結している。

【0057】

本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体
本技術は、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体（例えば、抗ＡＳＩＣ１ａ抗体またはその抗原結合性断片）の発生および使用のための方法および組成物を説明する。本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、虚血発作の診断または治療において有用であり得る。本技術の範囲内の本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、例えば、標的ポリペプチド、そのホモログ、誘導体または断片に特異的に結合するモノクローナル、キメラ、ヒト化、二重特異性抗体およびディアボディを含むが、これらに限定されない。
以下の表は、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を示す。
したがって、抗体またはその抗原結合性断片（本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体）は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含むことがあり、Ｖ_Hは、本明細書で開示される相補性決定領域Ｖ_H－ＣＤＲ１、Ｖ_H－ＣＤＲ２およびＶ_H－ＣＤＲ３を含み；Ｖ_Lは、本明細書で開示される相補性決定領域Ｖ_L－ＣＤＲ１、Ｖ_L－ＣＤＲ２およびＶ_L－ＣＤＲ３を含む。

【0058】

ＡＳＣ０６のＶ_H－ＣＤＲ１、Ｖ_H－ＣＤＲ２、Ｖ_H－ＣＤＲ３、Ｖ_L－ＣＤＲ１、Ｖ_L－ＣＤＲ２およびＶ_L－ＣＤＲ３の配列は、以下の通りである。

【表2】

【0059】

以下の配列は、ＡＳＣ０６－０１～ＡＳＣ０６－１４のＶ_H－ＣＤＲ１、Ｖ_H－ＣＤＲ２、Ｖ_L－ＣＤＲ１、Ｖ_L－ＣＤＲ２およびＶ_L－ＣＤＲ３配列を示す。

【表3】

【0060】

一部の実施形態では、ＡＳＣ０６－０１～ＡＳＣ０６－１４は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＶ_Lドメインを含む。ＡＳＣ０６－０１～ＡＳＣ０６－１４のＶ_H－ＣＤＲ３配列は、以下の表に示される通りである。

【表4】

【0061】

一態様では、本技術は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列、ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片に関する。

【0062】

加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプのＦｃドメインをさらに含む。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗原結合性断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖおよびＦｖからなる群から選択される。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または二重特異性抗体である。

【0063】

加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａに結合する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａのアンタゴニストである。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａ媒介酸誘導流を阻害する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａ媒介酸誘導カルシウム流入を阻害する。

【0064】

加えてまたはあるいは、ＶＬは、配列番号２を含み、Ｖ_Hは、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；または配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３７のＶ_H－ＣＤＲ３配列を含む。

【0065】

加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、Ｖ_Lは、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列、配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含み、Ｖ_Hは、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；または配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３７のＶ_H－ＣＤＲ３配列を含む。

【0066】

一態様では、本技術は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、Ｖ_Hが配列番号７のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Lが配列番号２のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片に関する。一態様では、本開示は、（ａ）配列番号２の軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列（Ｖ_L）；および／または（ｂ）配列番号７の重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一である重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列（Ｖ_H）を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
一態様では、本技術は、軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を含む抗体またはその抗原結合性断片を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、ＬＣが、配列番号２を含むアミノ酸配列を含み、ＨＣが、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）を含み、Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片に関する。

【0067】

一態様では、本開示は、（ａ）配列番号２に存在する軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列（Ｖ_L）；ならびに／または（ｂ）（ｂ１）配列番号８に存在するＶ_H－ＣＤＲ１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_H－ＣＤＲ１、（ｂ２）配列番号９に存在するＶ_H－ＣＤＲ２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_H－ＣＤＲ２および／または（ｂ３）配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５もしくは配列番号３７のいずれか１つに存在するＶ_H－ＣＤＲ３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_H－ＣＤＲ３を含む重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列（Ｖ_H）を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。

【0068】

加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、Ｖ_Lは、配列番号３に存在するＶ_H－ＣＤＲ１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_L－ＣＤＲ１；配列番号４に存在するＶ_H－ＣＤＲ２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_L－ＣＤＲ２；および／または配列番号５に存在するＶ_H－ＣＤＲ３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_L－ＣＤＲ３を含む。

【0069】

一態様では、本技術は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、Ｖ_Lが配列番号２のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片に関する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、Ｖ_Hは、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；または配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３７のＶ_H－ＣＤＲ３配列を含む。

【0070】

加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体は、配列番号８および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列をさらに含む。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体は、配列番号８および配列番号９のアミノ酸配列を含む。
加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプのＦｃドメインをさらに含む。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または二重特異性抗体である。
加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体は、ＡＳＩＣ１ａに結合する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体は、ＡＳＩＣ１ａのアンタゴニストである。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体は、ＡＳＩＣ１ａ媒介酸誘導流を阻害する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体は、ＡＳＩＣ１ａ媒介酸誘導カルシウム流入を阻害する。

【0071】

一態様では、本技術は、本明細書で説明される免疫グロブリン関連組成物のいずれかをコードする核酸配列を提供する。また、本明細書で説明される抗体のいずれかをコードする組換え核酸配列が本明細書で開示される。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号１、６、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６および３８からなる群から選択される。
別の態様では、本技術は、本明細書で説明される免疫グロブリン関連組成物のいずれかをコードする任意の核酸配列を発現する宿主細胞を提供する。
抗体またはその抗原結合性断片（本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体）は、ＡＳＩＣ１ａタンパク質に特異的に結合し得る。一部の実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、ＡＳＩＣ１ａの細胞外ドメインに結合し得る。一部の実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、２つのＡＳＩＣ１ａ単量体にまたがるエピトープに結合し得る。

【0072】

一部の実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、ＡＳＩＣ１ａ三量体の機能を阻害する。一部の実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、ＡＳＩＣ１ａ三量体の安定性を減少させる。一部の実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、ＡＳＩＣ１ａ三量体の機能を向上する。一部の実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、ＡＳＩＣ１ａ三量体を安定化する。一部の実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、ＡＳＩＣ１ａと、他のＡＳＩＣ１アイソマーとのヘテロオリゴマー化（例えば、ヘテロ三量体化）を阻害する。

【0073】

一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、抗体、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）₂、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂またはｓｃＦｖ－Ｆｃ抗体である。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ｓｃＦｖ抗体である。一部の実施形態では、ｓｃＦｖ抗体は、ＡＳＣ０６、ＡＳＣ０６－０１、ＡＳＣ０６－０２、ＡＳＣ０６－０３、ＡＳＣ０６－０４、ＡＳＣ０６－０５、ＡＳＣ０６－０６、ＡＳＣ０６－０７、ＡＳＣ０６－０８、ＡＳＣ０６－０９、ＡＳＣ０６－１０、ＡＳＣ０６－１１、ＡＳＣ０６－１２、ＡＳＣ０６－１３またはＡＳＣ０６－１４である。

【0074】

製剤
例として、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、単純な送達媒体で処方される。しかしながら、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、凍結乾燥するか、またはゲル、クリーム、生体材料、放出維持送達媒体に組み込んでもよい。
本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、一般的に、薬学的に許容できる担体と組み合わせられる。「薬学的に許容できる担体」という用語は、それ自体、組成物を受容する個体に有害な抗体の生成を誘導せず、かつ過度の毒性を伴わずに投与され得る任意の薬学的担体を指す。好適な担体は、大きな、緩徐に代謝される高分子、例えば、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、アミノ酸ポリマーおよびアミノ酸コポリマーであり得る。そのような担体は、当業者に周知である。治療用組成物中の薬学的に許容できる担体には、液体、例えば、水、食塩水、グリセロールおよびエタノールが含まれ得る。また、補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝物質などは、そのような媒体中に存在してもよい。また、薬学的に許容できる塩、例えば、鉱酸塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩など；および有機酸塩、例えば、酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩などは、医薬組成物中に存在してもよい。

【0075】

投与様式および有効投与量
細胞、器官または組織をペプチドと接触させるための当業者に公知の任意の方法を使用することができる。好適な方法には、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ法が含まれる。ｉｎ ｖｉｖｏ法には、典型的に、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体、例えば、上記で説明される抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の、哺乳動物、好適にはヒトへの投与が含まれる。治療のためにｉｎ ｖｉｖｏで使用される場合、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、有効量（すなわち、所望の治療効果を有する量）で対象に投与される。用量および投与量レジメンは、対象における感染の程度、使用される本技術の特定の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の特徴、例えば、その治療指数、対象および対象の病歴に依存する。
有効量は、医師および臨床医によく知られている方法により前臨床試験および臨床試験中に決定され得る。本方法において有用なペプチドの有効量は、医薬化合物を投与するためのいくつかの周知の方法のいずれかにより、それを必要とする哺乳動物に投与され得る。ペプチドは、全身的にまたは局所的に投与され得る。

【0076】

本明細書で説明される本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、単独でまたは組合せで、本明細書で説明される障害の治療または予防のための、対象への投与のために医薬組成物に組み込まれ得る。そのような組成物は、典型的に、活性剤および薬学的に許容できる担体を含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容できる担体」という用語は、医薬投与と適合性の食塩水、溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。また、補助的活性化合物を、組成物に組み込んでもよい。

【0077】

医薬組成物は、典型的に、その意図される投与経路と適合性であるように処方される。投与経路の例には、非経口（例えば、静脈内、皮内、腹腔内または皮下）、経口、吸入、経皮（局部）、眼内、イオン導入および経粘膜投与が含まれる。非経口、皮内または皮下適用に使用される溶液または懸濁液は、以下の成分：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、食塩溶液、不揮発油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化物質、例えば、アスコルビン酸または重硫酸ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝液、例えば、アセテート、シトレートまたはホスフェート；および等張性の調節のための剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロースを含み得る。ｐＨは、酸または塩基、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムにより調節することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製の、アンプル、使い捨てシリンジまたは多用量バイアルに封入され得る。患者または治療する医師の便利のために、投薬製剤は、治療過程（例えば、７日間の治療）に必要な全ての設備（例えば、薬物のバイアル、希釈剤のバイアル、シリンジおよび針）を含有するキットで提供してもよい。

【0078】

一部の実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、非経口経路により投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、局部経路により投与される。
注射用使用に好適な医薬組成物は、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液、および滅菌注射用溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末を含み得る。静脈内投与のために、好適な担体は、生理食塩水、制菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。全ての場合において、非経口投与のための組成物は、無菌でなければならず、容易にシリンジ使用可能であるように流動性であるべきである。それは、製造および保存の条件下で安定であるべきであり、微生物、例えば、細菌および真菌の汚染作用に対して保存されなければならない。

【0079】

本技術の組成物の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒体であり得る担体を含んでもよい。適切な流動性は、例えば、コーティング、例えば、レシチンの使用により、分散液の場合必要な粒径の維持により、および界面活性剤の使用により維持することができる。微生物の作用の予防は、様々な抗菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チオメルサール（ｔｈｉｏｍｅｒａｓｏｌ）などにより達成することができる。酸化を防ぐためにグルタチオンおよび他の抗酸化物質を含めてもよい。多くの場合、等張剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトールまたは塩化ナトリウムは、組成物に含まれる。注射用組成物の吸収の延長は、組成物に、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを含めることによってもたらすことができる。

【0080】

滅菌注射用溶液は、上記に列挙される成分のうちの１種または組合せを伴って、必要な量の活性化合物を適切な溶媒に組み込み、必要に応じて、次いで濾過滅菌することにより調製することができる。一般的に、分散液は、活性化合物を、基本分散媒体および上記に列挙される成分からの必要な他の成分を含有する滅菌媒体に組み込むことにより調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、典型的な調製方法には、真空乾燥および凍結乾燥が含まれ、これらは、活性成分および任意の追加の所望の成分の以前に濾過滅菌した溶液から、その粉末を生成し得る。

【0081】

経口組成物は、一般的に、不活性希釈剤または食用担体を含む。経口治療剤投与の目的のために、活性化合物を、賦形剤と組み合わせ、錠剤、トローチ剤またはカプセル、例えば、ゼラチンカプセルの形態で使用してもよい。また、経口組成物は、口腔洗浄薬としての使用のために、流動担体を使用して調製してもよい。薬学的に適合性の結合剤および／または補助物質を、組成物の部分として含めてもよい。錠剤、丸薬、カプセル、トローチ剤などは、以下の成分：結合剤、例えば、微結晶セルロース、トラガカントガムもしくはゼラチン；賦形剤、例えば、デンプンもしくはラクトース；崩壊剤、例えば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌもしくはトウモロコシデンプン；潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムもしくはＳｔｅｒｏｔｅｓ；滑剤、例えば、コロイド状二酸化ケイ素；甘味剤、例えば、スクロースもしくはサッカリン；または香剤、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチルもしくはオレンジ香料、または同様の性質の化合物のいずれかを含有することができる。

【0082】

吸入による投与のために、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、好適な噴射剤、例えば、気体、例えば、二酸化炭素または噴霧剤を含有する加圧容器またはディスペンサーからのエアゾールスプレーの形態で送達してもよい。そのような方法は、米国特許第６，４６８，７９８号で説明される方法を含む。
また、本明細書で説明される本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の全身的投与は、経粘膜または経皮手段による投与であってもよい。経粘膜または経皮投与のために、浸透するべき障壁に適切な浸透剤が、製剤において使用される。そのような浸透剤は、一般的に、当該技術分野において公知であり、例えば、経粘膜投与のために、洗剤、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻スプレーの使用を通して達成してもよい。経皮投与のために、活性化合物は、当該技術分野において一般的に公知の、軟膏、膏薬、ゲルまたはクリームに処方される。一実施形態では、経皮投与は、イオン導入により行うことができる。

【0083】

本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、担体系に処方することができる。担体は、コロイド系であり得る。コロイド系は、リン脂質二重層媒体であるリポソームであり得る。一実施形態では、治療用ペプチドは、ペプチド完全性を維持しながらリポソームに被包される。当業者が理解し得る通り、リポソームを調製するための様々な方法が存在する。（Lichtenberg et al., Methods Biochem. Anal., 33:337-462 (1988)；Anselem et al., Liposome Technology, CRC Press (1993)を参照されたい）。リポソーム製剤は、クリアランスを遅延させ、細胞取り込みを増大させることができる（Reddy, Ann. Pharmacother., 34(7-8):915-923 (2000)を参照されたい）。また、活性剤は、非限定的に、可溶性、不溶性、浸透性、不浸透性、生分解性または胃保持性ポリマーまたはリポソームを含む薬学的に許容できる成分から調製した粒子にロードしてもよい。そのような粒子には、ナノ粒子、生分解性ナノ粒子、微粒子、生分解性微粒子、ナノスフェア、生分解性ナノスフェア、マイクロスフェア、生分解性マイクロスフェア、カプセル、エマルジョン、リポソーム、ミセルおよびウイルスベクター系が含まれるが、これらに限定されない。

【0084】

また、担体は、ポリマー、例えば、生分解性、生体適合性ポリマーマトリックスであり得る。一実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、タンパク質完全性を維持しながら、ポリマーマトリックスに包埋され得る。ポリマーは、天然、例えば、ポリペプチド、タンパク質もしくは多糖、または合成、例えば、ポリα－ヒドロキシ酸であり得る。例には、例えば、コラーゲン、フィブロネクチン、エラスチン、セルロースアセテート、セルロースナイトレート、多糖、フィブリン、ゼラチンおよびそれらの組合せから製造された担体が含まれる。一実施形態では、ポリマーは、ポリ乳酸（ＰＬＡ）またはコ－ポリ乳酸／グリコール酸（ＰＧＬＡ）である。ポリマーマトリックスは、マイクロスフェアおよびナノスフェアを含む様々な形態およびサイズで調製および単離され得る。ポリマー製剤は、治療効果の持続期間の延長をもたらし得る（Reddy, Ann. Pharmacother., 34(7-8):915-923 (2000)を参照されたい）。ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）のポリマー製剤は、臨床試験において使用されている。（Kozarich and Rich, Chemical Biology, 2:548-552 (1998)を参照されたい）。

【0085】

ポリマーマイクロスフェア放出維持製剤の例は、ＰＣＴ公開公報第９９／１５１５４号（Ｔｒａｃｙら）、米国特許第５，６７４，５３４号および同第５，７１６，６４４号（両方ともＺａｌｅら）、ＰＣＴ公開公報第９６／４００７３号（Ｚａｌｅら）ならびにＰＣＴ公開公報第００／３８６５１号（Ｓｈａｈら）で説明されている。米国特許第５，６７４，５３４号および同第５，７１６，６４４号、ならびにＰＣＴ公開公報第９６／４００７３号は、塩により凝集に対して安定化される、エリスロポエチンの粒子を含有するポリマーマトリックスを説明している。

【0086】

一部の実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を、身体からの迅速な除去から保護する担体、例えば、インプラントおよびマイクロカプセル化送達系を含む放出制御製剤を伴って調製される。生分解性、生体適合性ポリマー、例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸を使用してもよい。そのような製剤は、公知の技法を使用して調製することができる。また、材料は、市販で、例えば、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃから得てもよい。また、リポソーム懸濁液（細胞特異的抗原に対するモノクローナル抗体により特定の細胞にターゲティングされたリポソームを含む）は、薬学的に許容できる担体として使用することができる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号で説明される通り、当業者に公知の方法により調製することができる。

【0087】

また、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、細胞内送達を向上するように処方してもよい。例えば、リポソーム送達系は、当該技術分野において公知であり、例えば、Chonn and Cullis, “Recent Advances in Liposome Drug Delivery Systems,” Current Opinion in Biotechnology 6:698-708 (1995)；Weiner, “Liposomes for Protein Delivery: Selecting Manufacture and Development Processes,” Immunomethods, 4(3):201-9 (1994)；およびGregoriadis, “Engineering Liposomes for Drug Delivery: Progress and Problems,” Trends Biotechnol., 13(12):527-37 (1995)を参照されたい。Mizguchi et al., Cancer Lett., 100:63-69 (1996)は、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏの両方でタンパク質を細胞に送達するための膜融合性リポソームの使用を説明している。

【0088】

本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の投与量、毒性および治療的有効性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するための、細胞培養物または実験動物における標準の薬学的手技により決定することができる。毒性効果と治療効果との間の用量比は、治療指数であり、それは、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。一部の実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、高治療指数を呈する。毒性副作用を呈する本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を使用してもよいが、非感染細胞への潜在的な損傷を最小限にするために、そのような化合物を冒された組織部位にターゲティングし、それにより副作用を低減する送達系を設計することに注意を払うべきである。

【0089】

細胞培養アッセイおよび動物研究から得たデータを、ヒトにおける使用のための投与量範囲を処方することにおいて使用することができる。そのような化合物の投与量は、ほとんどまたは全く毒性を有しない、ＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投与量は、使用される剤形、および利用される投与経路に依存してこの範囲内で変動し得る。本方法において使用される本技術の任意の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体について、治療有効用量は、細胞培養アッセイから最初に見積もることができる。細胞培養物で決定されるＩＣ₅₀（すなわち、症状の最大半量の阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成する用量を、動物モデルにおいて処方してもよい。そのような情報を使用して、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定することができる。血漿におけるレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーにより測定してもよい。

【0090】

典型的に、治療効果または予防効果を達成するのに十分な、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の有効量は、約０．０００００１ｍｇ／体重ｋｇ／日～約１０，０００ｍｇ／体重ｋｇ／日に及ぶ。好適には、投与量範囲は、約０．０００１ｍｇ／体重ｋｇ／日～約１００ｍｇ／体重ｋｇ／日である。例えば、投与量は、毎日、２日毎もしくは３日毎に１ｍｇ／体重ｋｇもしくは１０ｍｇ／体重ｋｇ、または毎週、２週毎もしくは３週毎に１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。一実施形態では、ペプチドの１回の投与量は、０．００１～１０，０００μｇ／体重ｋｇに及ぶ。一実施形態では、担体中の本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の濃度は、０．２～２０００μｇ／送達ｍｌに及ぶ。例示的な治療レジメンは、１日１回または１週間に１回の投与を必要とする。治療適用では、疾患の進行が低減または停止するまで、および対象が疾患の症状の部分的または完全な改善を示すまで、比較的短い間隔での比較的高い投与量が、ときには必要とされる。その後、患者は、予防レジメンを投与され得る。

【0091】

一部の実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の治療有効量は、標的組織における、１０^-12～１０^-6Ｍ、例えば、約１０^-7Ｍのペプチドの濃度として定義され得る。この濃度は、０．００１～１００ｍｇ／ｋｇの全身用量または体表面積による同等の用量により送達することができる。用量のスケジュールは、標的組織における治療用濃度を維持するために最適化され得る。一部の実施形態では、用量は、毎日１回または毎週１回の投与により投与されるが、連続投与（例えば、非経口点滴または経皮適用）もまた含み得る。一部の実施形態では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の投与量は、「低」、「中」または「高」用量レベルで提供される。一実施形態では、低用量は、約０．０００１～約０．５ｍｇ／ｋｇ／時、好適には約０．００１～約０．１ｍｇ／ｋｇ／時で提供される。一実施形態では、中用量は、約０．０１～約１．０ｍｇ／ｋｇ／時、好適には約０．０１～約０．５ｍｇ／ｋｇ／時で提供される。一実施形態では、高用量は、約０．５～約１０ｍｇ／ｋｇ／時、好適には約０．５～約２ｍｇ／ｋｇ／時で提供される。

【0092】

例えば、治療有効量は、突然の脱力；とりわけ身体の片側の、顔面、腕または脚の麻痺またはしびれ；顔面の片側の下垂；錯乱；発話困難、例えば、不明瞭な言葉、または会話を理解することの困難；片目または両目の視覚の異常、例えば、片目または両目の霧視もしくは黒くなった視野または複視；呼吸困難；眩暈；歩行困難；例えば不明な転倒を引き起こす平衡感覚または共調運動の喪失；意識消失；および突然かつ重度の頭痛を含む、虚血発作の１種または複数種の症状を部分的または完全に軽減し得る。治療有効量は、非限定的に、突然開始する顔面脱力（例えば、顔面の片側の下垂）、腕のふらつきおよび発話異常を含む、虚血発作の１種または複数種の症状を部分的または完全に軽減し得る。

【0093】

当業者は、非限定的に、疾患または障害の重症度、以前の治療、対象の健康全般および／または年齢、ならびに存在する他の疾患を含む、ある特定の因子が、対象を有効に治療するために必要とされる投与量およびタイミングに影響し得ることを理解する。さらに、対象の、治療有効量の本明細書で説明される治療用組成物での治療は、１回の治療または１連の治療を含み得る。
本方法により治療される哺乳動物は、例えば、家畜動物、例えば、ヒツジ、ブタ、ウシおよびウマ；愛玩動物、例えば、イヌおよびネコ；研究用動物、例えば、ラット、マウスおよびウサギを含む、任意の哺乳動物であり得る。一部の実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。

【0094】

本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の使用
概略。本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、ＡＳＩＣ１ａタンパク質またはその変異体の位置の特定および／または定量に関連する（例えば、適切な生理学的試料内のＡＳＩＣ１ａタンパク質のレベルの測定における使用のため、診断方法における使用のため、ポリペプチドの画像化における使用のためなどの）当該技術分野において公知の方法において有用である。本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、標準の技法、例えば、親和性クロマトグラフィーまたは免疫沈降により、ＡＳＩＣ１ａタンパク質を単離するために有用である。本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、生体試料、例えば、哺乳動物血清または細胞からの天然免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質、および宿主系で発現された組換え生成免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質の精製を促進し得る。さらに、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を使用して、免疫反応性ポリペプチドの発現の存在量およびパターンを評価するために、免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質またはその断片（例えば、血漿、細胞溶解物または細胞上清中の）を検出することができる。本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を診断的に使用して、臨床試験手技の部分として組織における免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質レベルをモニターすること、例えば、所与の治療レジメンの有効性を決定することができる。上記に示される通り、検出は、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を検出可能な物質にカップリングすること（すなわち、物理的に連結すること）により促進することができる。

【0095】

ＡＳＩＣ１ａタンパク質の検出。生体試料中の免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質の存在または非存在を検出するための例示的な方法は、試験対象から生体試料を得ることと、免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質の存在が生体試料において検出されるように、生体試料を、免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質を検出することができる本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体と接触させることとを含む。検出は、抗体に付着した検出可能な標識の手段により達成され得る。

【0096】

本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体についての「標識化」という用語は、検出可能な物質を抗体にカップリングすること（すなわち、物理的に連結すること）による抗体の直接的な標識化、および直接的に標識化される別の化合物、例えば、二次抗体との反応性による抗体の間接的な標識化を包含すると意図される。間接的な標識化の例には、蛍光標識二次抗体を使用する一次抗体の検出、およびビオチンが蛍光標識ストレプトアビジンにより検出され得るような、ＤＮＡプローブの、ビオチンによる末端標識化が含まれる。
一部の実施形態では、本明細書で開示される本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、１種または複数種の検出可能な標識にコンジュゲートされる。そのような使用のために、本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、発色性標識、酵素標識、放射性同位体標識、同位体標識、蛍光標識、毒性標識、化学発光標識、核磁気共鳴造影剤標識または他の標識の共有または非共有結合により検出可能に標識化され得る。

【0097】

好適な発色性標識の例には、ジアミノベンジジンおよび４－ヒドロキシアゾベンゼン－２－カルボン酸が含まれる。好適な酵素標識の例には、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、Δ－５－ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α－グリセロールリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼが含まれる。

【0098】

好適な放射性同位体標識の例には、³Ｈ、¹¹¹Ｉｎ、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、³²Ｐ、³⁵Ｓ、¹⁴Ｃ、⁵¹Ｃｒ、⁵⁷Ｔｏ、⁵⁸Ｃｏ、⁵⁹Ｆｅ、⁷⁵Ｓｅ、¹⁵²Ｅｕ、⁹⁰Ｙ、⁶⁷Ｃｕ、²¹⁷Ｃｉ、²¹¹Ａｔ、²¹²Ｐｂ、⁴⁷Ｓｃ、¹⁰⁹Ｐｄなどが含まれる。¹¹¹Ｉｎは、¹²⁵Ｉまたは¹³¹Ｉ標識したＡＳＩＣ１ａまたはＡＳＩＣ１ａタンパク質結合抗体の肝臓による脱ハロゲン化の問題を避けるので、それは、ｉｎ ｖｉｖｏ画像化が使用される例示的な同位体である。加えて、この同位体は、画像化に、より有利なガンマ放射エネルギーを有する（Perkins et al, Eur. J. Nucl. Med. 70:296-301 (1985)；Carasquillo et al., J. Nucl. Med. 25:281-287 (1987)）。例えば、１－（Ｐ－イソチオシアネートベンジル）－ＤＰＴＡを伴うモノクローナル抗体にカップリングした¹¹¹Ｉｎは、非腫瘍性組織、特に肝臓においてほとんど取り込みを示さず、腫瘍位置の特定の特異性を向上する（Esteban et al., J. Nucl. Med. 28:861-870 (1987)）。好適な非放射性同位体標識の例には、¹⁵⁷Ｇｄ、⁵⁵Ｍｎ、¹⁶²Ｄｙ、⁵²Ｔｒおよび⁵⁶Ｆｅが含まれる。

【0099】

好適な蛍光標識の例には、¹⁵²Ｅｕ標識、蛍光標識、イソチオシアネート標識、ローダミン標識、フィコエリトリン標識、フィコシアニン標識、アロフィコシアニン標識、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）標識、ｏ－フタルアルデヒド（ｏ－ｐｈｔｈａｌｄｅｈｙｄｅ）標識およびフルオレスカミン標識が含まれる。好適な毒素標識の例には、ジフテリア毒素、リシンおよびコレラ毒素が含まれる。
化学発光標識の例には、ルミノール標識、イソルミノール標識、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジニウム塩標識、シュウ酸エステル標識、ルシフェリン標識、ルシフェラーゼ標識およびエクオリン標識が含まれる。核磁気共鳴造影剤の例には、重金属核、例えば、Ｇｄ、Ｍｎおよび鉄が含まれる。

【0100】

本技術の検出方法を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで、生体試料中の免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質を検出することができる。免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質の検出のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技法には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈降、放射免疫アッセイおよび免疫蛍光が含まれる。さらに、免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質の検出のためのｉｎ ｖｉｖｏ技法は、対象に、標識化した本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を導入することを含む。例えば、本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、対象における存在および場所が標準の画像化技法により検出され得る放射性マーカーで標識化され得る。一実施形態では、生体試料は、試験対象からのＡＳＩＣ１ａタンパク質分子を含有する。

【0101】

免疫アッセイおよび画像化。本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を使用して、抗体ベースの技法を使用して生体試料（例えば、ヒト血漿）中の免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質レベルをアッセイすることができる。例えば、組織におけるタンパク質発現は、古典的免疫組織学的方法により研究され得る。Jalkanen, M. et al., J. Cell. Biol. 101: 976-985, 1985；Jalkanen, M. et al., J. Cell. Biol. 105: 3087-3096, 1987。タンパク質遺伝子発現を検出するために有用な他の抗体ベースの方法には、免疫アッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）が含まれる。好適な抗体アッセイ標識は、当該技術分野において公知であり、酵素標識、例えば、グルコースオキシダーゼ、ならびに放射性同位体または他の放射性の剤、例えば、ヨウ素（¹²⁵Ｉ、¹²¹Ｉ、¹³¹Ｉ）、炭素（¹⁴Ｃ）、硫黄（³⁵Ｓ）、トリチウム（³Ｈ）、インジウム（¹¹²Ｉｎ）およびテクネチウム（⁹⁹ｍＴｃ）、ならびに蛍光標識、例えば、フルオレセイン、ローダミンおよび緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ならびにビオチンを含む。

【0102】

生体試料において免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質レベルをアッセイすることに加えて、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、ＡＳＩＣ１ａタンパク質のｉｎ ｖｉｖｏ画像化のために使用することができる。この方法に有用な抗体は、Ｘ線撮影、ＮＭＲまたはＥＳＲにより検出可能な抗体を含む。Ｘ線撮影について、好適な標識は、検出可能な放射線を放出するが、対象にとって明白に有害でない放射性同位体、例えば、バリウムまたはセシウムを含む。ＮＭＲおよびＥＳＲに好適なマーカーは、関連ｓｃＦｖクローンのための栄養素の標識化により本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体に組み込むことができる、検出可能な特徴的スピンを有するマーカー、例えば、重水素を含む。

【0103】

適切な検出可能な画像化部分、例えば、放射性同位体（例えば、¹³¹Ｉ、¹¹²Ｉｎ、⁹⁹ｍＴｃ）、放射線不透過性物質、または核磁気共鳴により検出可能な物質で標識化した本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、対象に導入される（例えば、非経口で、皮下にまたは腹腔内に）。対象のサイズおよび使用される画像化系が、診断画像を生成するために必要な画像化部分の量を決定することが当該技術分野において理解される。放射性同位体部分の場合、ヒト対象について、注入される放射活性の量は、普通、約５～２０ｍＣｉの⁹⁹ｍＴｃに及ぶ。標識化した本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、その後、細胞の、特定の標的ポリペプチドを含有する場所で蓄積する。例えば、標識化した本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、対象内で、ＡＳＩＣ１ａタンパク質が局在化した細胞および組織において蓄積する。

【0104】

したがって、本技術は、（ａ）個体の細胞または体液中の本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の結合を測定することにより免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質の発現をアッセイすることと、（ｂ）試料中に存在する免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質の量を標準対照と比較することであって、標準と比較した免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質レベルの増大または減少が健康状態を示す、比較することとを含む、健康状態の診断方法を提供する。
親和性精製。本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を使用して、試料から免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質を精製することができる。一部の実施形態では、抗体は、固体支持体上に固定される。そのような固体支持体の例には、プラスチック、例えば、ポリカーボネート；複合糖質、例えば、アガロースおよびセファロース；アクリル樹脂、例えば、ポリアクリルアミド；ならびにラテックスビーズが含まれる。抗体の、そのような固体支持体へのカップリングのための技法は、当該技術分野において周知である（Weir et al., “Handbook of Experimental Immunology” 4th Ed., Blackwell Scientific Publications, Oxford, England, Chapter 10 (1986)；Jacoby et al., Meth. Enzym. 34 Academic Press, N.Y. (1974)）。

【0105】

抗原を抗体支持マトリックスに結合する最も単純な方法は、ビーズをカラム内に収集し、抗原溶液をカラムに通すことである。この方法の効率は、固定化抗体と抗原との間の接触時間に依存し、それは、低流速を使用することにより拡張することができる。固定化抗体は、抗原が流れて通り過ぎるときに抗原を捕獲する。あるいは、抗原溶液を支持体（例えば、ビーズ）と混合し、スラリーを回転または振盪し、抗原と固定化抗体との間の最大接触を可能にすることにより、抗原を、抗体支持マトリックスと接触させてもよい。結合反応が完了した後、スラリーをカラムに通し、ビーズを収集する。ビーズを好適な洗浄緩衝液を使用して洗浄し、その後、純粋なまたは実質的に純粋な抗原を溶離する。

【0106】

目的の抗体またはポリペプチドは、固体支持体、例えば、ビーズにコンジュゲートしてもよい。加えて、また、第１の固体支持体、例えば、ビーズは、所望の場合、ポリペプチドの、支持体へのコンジュゲーションのための本明細書で開示される手段を含む任意の好適な手段により、第２のビーズまたは他の支持体であり得る第２の固体支持体にコンジュゲートしてもよい。したがって、また、ポリペプチドの、固体支持体へのコンジュゲーションについての、本明細書で開示されるコンジュゲーション方法および手段のいずれかは、第１の支持体の、第２の支持体へのコンジュゲーションに適用してもよく、第１および第２の固体支持体は、同じであっても、異なっていてもよい。

【0107】

ポリペプチドを固体支持体へコンジュゲートするための使用のための、架橋結合剤であり得る適切なリンカーは、支持体の表面に存在する官能基と、もしくはポリペプチドと、または両方と反応し得る様々な剤を含む。架橋結合剤として有用な試薬には、ホモ二官能性、および特に、ヘテロ二官能性試薬が含まれる。有用な二官能性架橋結合剤には、Ｎ－ＳＩＡＢ、ジマレイミド、ＤＴＮＢ、Ｎ－ＳＡＴＡ、Ｎ－ＳＰＤＰ、ＳＭＣＣおよび６－ＨＹＮＩＣが含まれるが、これらに限定されない。架橋結合剤は、ポリペプチドと固体支持体との間に選択的に切断可能な結合を提供するように選択してもよい。例えば、感光性架橋リンカー、例えば、３－アミノ－（２－ニトロフェニル）プロピオン酸は、固体支持体からポリペプチドを切断するための手段として使用することができる。（Brown et al., Mol. Divers, pp, 4-12 (1995)；Rothschild et al., Nucl. Acids Res., 24:351-66 (1996)；および米国特許第５，６４３，７２２号）。他の架橋結合試薬は、当該技術分野において周知である。（例えば、Wong (1991)、上記；およびHermanson (1996)、上記を参照されたい）。

【0108】

抗体またはポリペプチドは、カルボキシル基官能基化ビーズとポリペプチドのアミノ末端との間に形成した共有アミド結合を通して、または逆に、アミノ基官能基化ビーズとポリペプチドのカルボキシル末端との間に形成した共有アミド結合を通して、固体支持体、例えば、ビーズに固定してもよい。加えて、二官能性トリチルリンカーは、支持体に、例えば、樹脂、例えば、Ｗａｎｇ樹脂上の４－ニトロフェニル活性エステルに、アミノ樹脂を介して樹脂上のアミノ基またはカルボキシル基を通して、付着させてもよい。二官能性トリチル手法を使用すると、ポリペプチドが切断され、除去され得ることを確実にするために、固体支持体は、揮発酸、例えば、蟻酸またはトリフルオロ酢酸による処理を必要とし得る。そのような場合、ポリペプチドは、固体支持体のウェルの底に、または固体支持体の平らな表面上に、ビーズを含まないパッチとして堆積し得る。マトリックス溶液の添加後、ポリペプチドは、ＭＳへと脱着され得る。

【0109】

また、疎水性トリチルリンカーは、揮発酸または適切なマトリックス溶液、例えば、３－ＨＰＡを含有するマトリックス溶液を使用することにより、ポリペプチドからアミノ連結トリチル基を切断するための、酸不安定性リンカーとして利用することができる。また、酸不安定性は、変えることができる。例えば、トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルまたはトリメトキシトリチルは、ポリペプチドの適切なｐ－置換またはより酸不安定性のトリチルアミン誘導体に変えることができる、すなわち、トリチルエーテルおよびトリチルアミン結合を、ポリペプチドに作製することができる。したがって、ポリペプチドは、例えば、疎水性引力を破壊することにより、または所望の場合、マトリックス、例えば３－ＨＰＡが酸として作用する典型的なＭＳ条件下を含む酸性条件下で、トリチルエーテルもしくはトリチルアミン結合を切断することにより、疎水性リンカーから除去することができる。

【0110】

また、直交性に切断可能なリンカーは、第１の固体支持体、例えば、ビーズを、第２の固体支持体に結合するために、または目的のポリペプチドを固体支持体に結合するために有用であり得る。そのようなリンカーを使用して、支持体からポリペプチドを切断することなく、第１の固体支持体、例えば、ビーズは、第２の固体支持体から選択的に切断することができ；その後、ポリペプチドを、後にビーズから切断することができる。例えば、還元剤、例えば、ＤＴＴを使用して切断することができるジスルフィドリンカーは、ビーズを第２の固体支持体に結合するために使用することができ、酸切断可能な二官能性トリチル基は、ポリペプチドを支持体に固定するために使用することができる。所望の場合、ポリペプチドの、固体支持体への連結は、最初に切断してもよく、例えば、第１の支持体と第２の支持体との間の連結をインタクトなまま残す。トリチルリンカーは、共有または疎水性コンジュゲーションを提供することができ、コンジュゲーションの性質にかかわらず、トリチル基は、酸性条件下で容易に切断される。

【0111】

例えば、ビーズは、ビーズの固体支持体への高密度結合、またはポリペプチドのビーズへの高密度結合が促進されるような長さおよび化学的性質を有するように選択され得る連結基を通して、第２の支持体に結合することができる。そのような連結基は、例えば、「木のような」構造を有し、それにより固体支持体の付着部位当たりの官能基の多重性を提供し得る。そのような連結基の例には、ポリリジン、ポリグルタミン酸、ペンタエリトロール（ｐｅｎｔａ－ｅｒｙｔｈｒｏｌｅ）およびトリスヒドロキシアミノメタンが含まれる。

【0112】

非共有結合会合。非共有相互作用を通して、抗体またはポリペプチドを、固体支持体にコンジュゲートしてもよく、または、また、第１の固体支持体を、第２の固体支持体にコンジュゲートしてもよい。例えば、磁化することができる強磁性物質製の磁気ビーズは、磁気固体支持体に付着することができ、磁場の除去により支持体から放出することができる。あるいは、固体支持体は、イオン性または疎水性部分の、それぞれ、ポリペプチド、例えば、付着したトリチル基を含有するポリペプチドとの、または疎水性特徴を有する第２の固体支持体との相互作用を可能にし得る、イオン性または疎水性部分を伴って提供してもよい。

【0113】

また、固体支持体は、特異的結合対のメンバーを伴って提供してもよく、それゆえ、相補的結合部分を含有するポリペプチドまたは第２の固体支持体にコンジュゲートすることができる。例えば、アビジンでまたはストレプトアビジンでコーティングしたビーズは、組み込まれたビオチン部分を有するポリペプチドに、またはビオチンもしくはビオチン誘導体、例えばイミノビオチンでコーティングした第２の固体支持体に結合することができる。

【0114】

本明細書で開示されるかまたはそうでなければ当該技術分野において公知の結合メンバーのいずれかを逆にすることができることが認識されるべきである。したがって、例えば、ビオチンは、ポリペプチドまたは固体支持体のいずれかに組み込むことができ、逆に、アビジンまたは他のビオチン結合部分は、それぞれ、支持体またはポリペプチドに組み込まれ得る。本明細書における使用に企図される他の特異的結合対には、ホルモンおよびそれらの受容体、酵素およびそれらの基質、ヌクレオチド配列およびその相補的配列、抗体およびそれが特異的に相互作用する抗原、ならびに当業者に公知の他のそのような対が含まれるが、これらに限定されない。

【0115】

Ａ．本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の診断的使用
概略。本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、診断方法において有用である。そのため、本技術は、対象におけるＡＳＩＣ１ａタンパク質活性の診断において抗体を使用する方法を提供する。本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、それらが、任意のレベルのエピトープ結合特異性およびＡＳＩＣ１ａタンパク質への非常に高い結合親和性を有するように選択され得る。一般的に、抗体の結合親和性が高ければ高いほど、免疫アッセイにおいて、標的ポリペプチドを除去することなく非特異的に結合した物質を除去するために、より厳密な洗浄条件を行うことができる。したがって、診断アッセイにおいて有用な本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、通常、約１０⁸Ｍ^-1、１０⁹Ｍ^-1、１０¹⁰Ｍ^-1、１０¹¹Ｍ^-1または１０¹²Ｍ^-1の結合親和性を有する。さらに、診断試薬として使用される本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、標準条件下で、少なくとも１２時間、少なくとも５時間または少なくとも１時間で平衡に達するのに十分な速度論的結合速度を有する。

【0116】

本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を使用して、様々な標準アッセイ形式において免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質を検出することができる。そのような形式には、免疫沈降、ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、放射免疫アッセイおよび免疫測定アッセイが含まれる。Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Publications, New York, 1988)；米国特許第３，７９１，９３２号；同第３，８３９，１５３号；同第３，８５０，７５２号；同第３，８７９，２６２号；同第４，０３４，０７４号、同第３，７９１，９３２号；同第３，８１７，８３７号；同第３，８３９，１５３号；同第３，８５０，７５２号；同第３，８５０，５７８号；同第３，８５３，９８７号；同第３，８６７，５１７号；同第３，８７９，２６２号；同第３，９０１，６５４号；同第３，９３５，０７４号；同第３，９８４，５３３号；同第３，９９６，３４５号；同第４，０３４，０７４号；および同第４，０９８，８７６号を参照されたい。生体試料は、対象の任意の組織または体液から得ることができる。ある特定の実施形態では、対象は、がんの初期段階にある。一実施形態では、がんの初期段階は、対象から得た試料中のＡＳＩＣ１ａタンパク質のレベルまたは発現パターンにより決定される。ある特定の実施形態では、試料は、尿、血液、血清、血漿、唾液、羊水、脳脊髄液（ＣＳＦ）および生検体組織からなる群から選択される。

【0117】

免疫測定アッセイまたはサンドイッチアッセイは、本技術の診断方法のための１つの形式である。米国特許第４，３７６，１１０号、同第４，４８６，５３０号、同第５，９１４，２４１号および同第５，９６５，３７５号を参照されたい。そのようなアッセイは、固相に固定された１つの抗体、例えば、本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体、または本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の集団と、溶液中の別の本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体、または本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の集団とを使用する。典型的に、本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体、または本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の集団である溶液を標識化する。抗体集団が使用される場合、集団は、標的ポリペプチド内の様々なエピトープ特異性に結合する抗体を含有し得る。したがって、同じ集団を、固相および溶液抗体の両方に使用してもよい。本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体が使用される場合、異なる結合特異性を有する第１および第２のＡＳＩＣ１ａタンパク質モノクローナル抗体が、固相および溶液相に使用される。固相（「キャプチャー」とも呼ばれる）抗体および溶液（「検出」とも呼ばれる）抗体は、いずれかの順序でまたは同時に、標的抗原と接触させてもよい。固相抗体を最初に接触させる場合、アッセイは、前向きアッセイであると言われる。逆に、溶液抗体を最初に接触させる場合、アッセイは、逆向きアッセイであると言われる。標的を両方の抗体と同時に接触させる場合、アッセイは、同時アッセイと呼ばれる。ＡＳＩＣ１ａタンパク質を本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体と接触させた後、試料を、通常約１０分間～約２４時間で変動し、通常約１時間である期間の間、インキュベートする。その後、洗浄ステップを行って、診断試薬として使用される本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体に特異的に結合していない試料の成分を除去する。固相抗体および溶液抗体を別々のステップで結合させる場合、洗浄は、いずれかの結合ステップまたは両方の結合ステップの後に行ってもよい。洗浄後、典型的に、標識化溶液抗体の結合を通して固相に連結した標識を検出することにより、結合を定量する。通常、所与の抗体または抗体集団の対および所与の反応条件について、公知の濃度の標的抗原を含有する試料から、較正曲線を準備する。その後、試験される試料中の免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質の濃度を、較正曲線（すなわち、標準曲線）から補間により読み取る。分析物は、平衡において結合した標識化溶液抗体の量から、または平衡に達する前の１連の時点における結合した標識化溶液抗体の速度論的測定値により測定することができる。そのような曲線の傾きは、試料中のＡＳＩＣ１ａタンパク質の濃度の測定値である。

【0118】

上記方法における使用に好適な支持体には、例えば、ニトロセルロース膜、ナイロン膜および誘導体化ナイロン膜、ならびにまた粒子、例えば、アガロース、デキストランベースのゲル、ディップスティック、粒子状物質、マイクロスフェア、磁気粒子、試験管、マイクロタイターウェル、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ Ｎ．Ｊ．）などが含まれる。固定化は、吸収による、または共有結合による固定化であり得る。本技術抗体の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、表面結合リンカー、例えば、アビジンへの付着のために、リンカー分子、例えば、ビオチンに接合させてもよい。

【0119】

一部の実施形態では、本開示は、診断剤にコンジュゲートした本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を提供する。診断剤は、放射性または非放射性標識、造影剤（例えば、磁気共鳴画像化、コンピュータ断層撮影または超音波のための）を含むことがあり、放射性標識は、ガンマ－、ベータ－、アルファ－、オージェ電子－または陽電子－放射同位体であり得る。診断剤は、抗体部分、すなわち、抗体または抗体断片もしくはサブ断片にコンジュゲートして投与される分子であり、抗原を含有する細胞の位置を特定することにより、疾患を診断または検出することにおいて有用である。

【0120】

有用な診断剤には、放射性同位体、染料（例えば、ビオチン－ストレプトアビジン複合体による）、造影剤、蛍光化合物または分子、および磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）のための増強剤（例えば、常磁性イオン）が含まれるが、これらに限定されない。米国特許第６，３３１，１７５号は、ＭＲＩ技法、およびＭＲＩ増強剤にコンジュゲートした抗体の調製を説明しており、参照によりその全体を本明細書に組み込む。一部の実施形態では、診断剤は、放射性同位体、磁気共鳴画像化における使用のための増強剤、および蛍光化合物からなる群から選択される。抗体成分に放射性金属または常磁性イオンをロードするために、それを、イオンを結合するための多重性のキレート基が付着しているロングテールを有する試薬と反応させることが必要であり得る。そのようなテールは、キレート基、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビスチオセミカルバゾン、ポリオキシムおよびこの目的のために有用であることが公知のそのような基が結合し得るポリマー、例えば、ポリリジン、多糖、またはペンダント基を有する他の誘導体化もしくは誘導体化可能な鎖であり得る。キレートは、標準の化学を使用して本技術の抗体にカップリングされ得る。キレートは、普通、最小限の免疫反応性の喪失ならびに最小限の凝集および／または内部架橋結合で、分子への結合の形成を可能にする基により抗体に連結される。キレートを抗体にコンジュゲートするための他の方法および試薬は、米国特許第４，８２４，６５９号で開示されている。特に有用な金属キレートの組合せには、放射性画像化のための診断用同位体で使用される、２－ベンジル－ＤＴＰＡならびにそのモノメチルおよびシクロヘキシルアナログが含まれる。同じキレートは、非放射性金属、例えば、マンガン、鉄およびガドリニウムと複合化させた場合、本技術のＡＳＩＣ１ａタンパク質抗体と共に使用すると、ＭＲＩに有用である。

【0121】

本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の治療的使用
概略。一部の態様では、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、本明細書で開示される方法において有用であり、虚血発作および関連状態の予防、改善または治療のための療法を提供する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａタンパク質に結合する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａの細胞外ドメインに結合する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、２つのＡＳＩＣ１ａモノマーに及ぶエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａトリマーの機能を阻害する。

【0122】

一態様では、本技術は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む、治療有効量の有効量の抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む、それを必要とする対象においてアシドーシスを治療する方法であって、Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、方法に関する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、Ｖ_H－ＣＤＲ３配列は、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択される。

【0123】

一態様では、本技術は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む、治療有効量の有効量の抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む、それを必要とする対象において虚血発作を治療する方法であって、Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、方法に関する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、Ｖ_H－ＣＤＲ３配列は、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択される。

【0124】

一態様では、本技術は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む、治療有効量の有効量の抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む、それを必要とする対象においてＡＳＩＣ１ａ活性および／またはシグナル伝達によって引き起こされるかまたはそれに関連する障害を治療する方法であって、Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、方法に関する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、Ｖ_H－ＣＤＲ３配列は、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択される。

【0125】

加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプのＦｃドメインをさらに含む。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗原結合性断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖおよびＦｖからなる群から選択される。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または二重特異性抗体である。

【0126】

加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａに結合する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａのアンタゴニストである。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａ媒介酸誘導流を阻害する。加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＳＩＣ１ａ媒介酸誘導カルシウム流入を阻害する。

【0127】

加えてまたはあるいは、ＶＬは、配列番号２を含み、Ｖ_Hは、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；または配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３７のＶ_H－ＣＤＲ３配列を含む。

【0128】

加えてまたはあるいは、一部の実施形態では、Ｖ_Lは、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列、配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含み、Ｖ_Hは、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；または配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３７のＶ_H－ＣＤＲ３配列を含む。

【0129】

一部の実施形態では、虚血発作の１種または複数種の症状は、突然の脱力；とりわけ身体の片側の、顔面、腕または脚の麻痺またはしびれ；顔面の片側の下垂；錯乱；発話困難、例えば、不明瞭な言葉、または会話を理解することの困難；片目または両目の視覚の異常、例えば、片目または両目の霧視もしくは黒くなった視野または複視；呼吸困難；眩暈；歩行困難；例えば不明な転倒を引き起こす平衡感覚または共調運動の喪失；意識消失；および突然または重度の頭痛である。一部の実施形態では、虚血発作の１種または複数種の症状は、突然開始する顔面脱力（例えば、顔面の片側の下垂）、腕のふらつきおよび発話異常からなる群から選択される。

【0130】

一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、抗体、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）₂、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂またはｓｃＦｖ－Ｆｃ抗体である。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ｓｃＦｖ抗体である。一部の実施形態では、ｓｃＦｖ抗体は、ＡＳＣ０６、ＡＳＣ０６－０１、ＡＳＣ０６－０２、ＡＳＣ０６－０３、ＡＳＣ０６－０４、ＡＳＣ０６－０５、ＡＳＣ０６－０６、ＡＳＣ０６－０７、ＡＳＣ０６－０８、ＡＳＣ０６－０９、ＡＳＣ０６－１０、ＡＳＣ０６－１１、ＡＳＣ０６－１２、ＡＳＣ０６－１３またはＡＳＣ０６－１４である。

【0131】

したがって、例えば、１種または複数種の本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、（１）共に処方され、単独で、または他の活性剤もしくは本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体との組合せ製剤で同時に投与または送達されるか；（２）別々の製剤として交互にまたは並行して送達されるか；あるいは（３）当該技術分野において公知の他の任意の組合せ療法レジメンによる場合がある。交互療法で送達される場合、本明細書で説明される方法は、活性成分を逐次的に、例えば、別々の溶液、エマルジョン、懸濁液、錠剤、丸薬もしくはカプセルで、または別々のシリンジでの異なる注射により、投与または送達することを含み得る。一般的に、交互療法中、各活性成分の有効投与量は逐次的に、すなわち、順次に投与され、一方で同時療法では、２種またはそれよりも多い活性成分の有効投与量は、共に投与される。また、様々な順序の間欠性組合せ療法を使用してもよい。本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体と他の活性剤とのそのような組合せを投与することは、内科疾患または状態を患っている、治療を必要とする対象に治療有効量で投与されたとき、相乗的な生物学的効果をもたらし得る。そのような手法の利点は、虚血発作を患っているかまたはそれにかかりやすい対象を予防、改善または治療するために、対象において、より低用量の本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体および／または他の活性剤が必要とされ得ることである。さらに、治療の潜在的な副作用は、より低い投与量の本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体および／または他の活性剤の使用により避けることができる。

【0132】

本明細書で説明される本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体、例えば、ＡＳＣ０６、ＡＳＣ０６－０１、ＡＳＣ０６－０２、ＡＳＣ０６－０３、ＡＳＣ０６－０４、ＡＳＣ０６－０５、ＡＳＣ０６－０６、ＡＳＣ０６－０７、ＡＳＣ０６－０８、ＡＳＣ０６－０９、ＡＳＣ０６－１０、ＡＳＣ０６－１１、ＡＳＣ０６－１２、ＡＳＣ０６－１３、ＡＳＣ０６－１４などは、疾患を予防または治療するために有用である。具体的には、本開示は、虚血発作を患っているかまたはそれにかかりやすい対象を処置する予防方法および治療方法の両方を提供する。したがって、本方法は、変異体イオンチャネルタンパク質三量体の機能の回復のために、有効量の本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体を、それを必要とする対象に投与することにより、対象における、虚血発作を患っているかまたはそれにかかりやすい対象の予防および／または治療を提供する。本技術は、治療有効量の本明細書で開示される本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体、例えば、ＡＳＣ０６、ＡＳＣ０６－０１、ＡＳＣ０６－０２、ＡＳＣ０６－０３、ＡＳＣ０６－０４、ＡＳＣ０６－０５、ＡＳＣ０６－０６、ＡＳＣ０６－０７、ＡＳＣ０６－０８、ＡＳＣ０６－０９、ＡＳＣ０６－１０、ＡＳＣ０６－１１、ＡＳＣ０６－１２、ＡＳＣ０６－１３、ＡＳＣ０６－１４などの、それを必要とする対象への投与を通した、哺乳動物における、虚血発作を患っているかまたはそれにかかりやすい対象の治療に関する。

【0133】

本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体の生物学的効果の決定
様々な実施形態において、好適なｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイを行って、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体に基づく特定の治療薬の効果、およびその投与が治療に指示されるかどうかを決定する。様々な実施形態において、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイは、代表的な細胞株、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、例えば、本明細書で開示されるＣＨＯ－Ｋ１／ｈＡＳＩＣ１ａ（全長ｈＡＳＩＣ１ａを過剰発現する安定な細胞株）で行われ得る。これらの実験を使用して、所与の本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体が、ＡＳＩＣ１ａタンパク質三量体の活性を阻害することにおいて所望の効果を発揮するかどうかを決定してもよい。治療における使用のための化合物は、ヒト対象における試験の前に、非限定的に、ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ウサギなどを含む好適な動物モデル系において試験してもよい。同様に、ｉｎ ｖｉｖｏ試験のために、当該技術分野において公知の動物モデル系のいずれかは、ヒト対象への投与前に使用することができる。

【0134】

一部の実施形態では、ＡＳＩＣ１ａ活性は、本明細書で開示される通り、非限定的に、電気生理学的アッセイ、例えば、パッチクランプを含む当該技術分野において周知のアッセイにより決定される。一部の実施形態では、ＡＳＩＣ１ａ活性は、動物モデルにおいて生物活性を測定するアッセイにより決定される。一部の実施形態では、ＡＳＩＣ１ａ活性は、非限定的に、本明細書で開示されるマウス中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ：ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）誘導虚血発作モデルを含む、動物モデルの疾患表現型の救済を測定するアッセイにより決定される。

【0135】

投与様式および有効投与量
細胞、器官または組織をペプチドと接触させるための当業者に公知の任意の方法を使用することができる。好適な方法には、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ法が含まれる。ｉｎ ｖｉｖｏ法には、典型的に、免疫グロブリン関連組成物、例えば、上記に説明される組成物の、哺乳動物、好適にはヒトへの投与が含まれる。治療のためにｉｎ ｖｉｖｏで使用される場合、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、有効量（すなわち、所望の治療効果を有する量）で対象に投与される。用量および投与量レジメンは、対象における症状の程度、使用される特定の免疫グロブリンの特徴、例えば、その治療指数、対象および対象の病歴に依存する。
有効量は、医師および臨床医によく知られている方法により前臨床試験および臨床試験中に決定され得る。本方法において有用な免疫グロブリンの有効量は、医薬化合物を投与するためのいくつかの周知の方法のいずれかにより、それを必要とする哺乳動物に投与され得る。免疫グロブリンは、全身的にまたは局所的に投与され得る。

【0136】

Ｃ．キット
本技術は、少なくとも１種の本技術の免疫グロブリン関連組成物（例えば、本明細書で説明される任意の抗体または抗原結合性断片）またはその機能的バリアント（例えば、置換バリアント）を含む、虚血発作の検出および／または治療のためのキットを提供する。本技術のキットの上記に説明される成分は、虚血発作、またはＡＳＩＣ１活性もしくはシグナル伝達の変更と関連付けられる疾患、例えば、神経変性疾患、神経心理学的疾患、てんかん、多発性硬化症、疼痛および片頭痛の診断および／または治療のために、好適な容器に包装し、ラベルを付けてもよい。上記に挙げる成分は、単位容器または多用量容器、例えば、密閉アンプル、バイアル、瓶、シリンジおよび試験管中に；水性溶液、好ましくは水性滅菌溶液として；または再構成のための凍結乾燥製剤、好ましくは凍結乾燥滅菌製剤として保存してもよい。キットは、医薬組成物をより大きな体積に希釈するために好適な希釈剤を保持する第２の容器をさらに含んでもよい。好適な希釈剤には、医薬組成物の薬学的に許容できる賦形剤および食塩溶液が含まれるが、これらに限定されない。さらに、キットは、医薬組成物を希釈するための説明書、および／または希釈されたかどうかにかかわらず、医薬組成物を投与するための説明書を含んでもよい。容器は、様々な材料、例えば、ガラスまたはプラスチックから形成してもよく、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針を突き刺してもよい、ストッパーを有する静脈内用溶液バッグまたはバイアルであり得る）。キットは、薬学的に許容できる緩衝液、例えば、リン酸緩衝食塩水、リンガー液およびデキストロース溶液を含むより多くの容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、好適な宿主のうちの１種または複数種のための培養培地を含む、市販およびユーザーの観点から望ましい他の物質をさらに含んでもよい。キットは、例えば、治療用または診断用製品の使用に関する適応症、用法、投与量、製造、投与、禁忌および／または警告についての情報を含有する、そのような治療用または診断用製品の市販用包装物に習慣的に含まれる説明書を含んでもよい。

【0137】

キットは、生物学的試料、例えば、非限定的に、例えば血清、血漿、リンパ、嚢胞液、尿、便、脳脊髄液、腹水または血液を含む任意の体液、および体組織の生検試料を含む生物学的試料中の免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質の存在を検出するために有用である。例えば、キットは、生物学的試料中のＡＳＩＣ１ａタンパク質に結合することができる１種または複数種の本技術のヒト化、キメラまたは二重特異性抗ＡＳＩＣ１ａ抗体（またはその抗原結合性断片）；試料中のＡＳＩＣ１ａタンパク質の量を決定するための手段；および試料中の免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質の量を標準と比較するための手段を含み得る。抗ＡＳＩＣ１ａ抗体のうちの１種または複数種を標識化してもよい。キット成分（例えば、試薬）は、好適な容器に包装してもよい。キットは、免疫反応性ＡＳＩＣ１ａタンパク質を検出するためにキットを使用するための説明書をさらに含み得る。

【0138】

抗体ベースのキットについて、キットは、例えば、１）固体支持体に付着した第１の抗体、例えば、本技術のヒト化またはキメラ抗ＡＳＩＣ１ａ抗体（またはその抗原結合性断片）と、任意に、２）ＡＳＩＣ１ａタンパク質または第１の抗体のいずれかに結合し、かつ検出可能な標識にコンジュゲートされている第２の異なる抗体とを含み得る。
また、キットは、例えば、緩衝剤、保存剤またはタンパク質安定化剤を含み得る。キットは、検出可能な標識を検出するために必要な成分、例えば、酵素または基質をさらに含み得る。また、キットは、アッセイして試験試料と比較することができる対照試料または１連の対照試料を含有してもよい。キットの各成分は、個々の容器内に封入してもよく、様々な容器の全ては、キットを使用して行ったアッセイの結果を解釈するための説明書を伴って、単一の包装内に存在してもよい。本技術のキットは、キット容器上またはキット容器内に文書製品を含有してもよい。文書製品は、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ ｖｉｖｏでのＡＳＩＣ１ａタンパク質の検出のために、またはそれを必要とする対象における虚血発作の治療のために、キットに含有される試薬をどのように使用するかを説明する。ある特定の実施形態では、試薬の使用は、本技術の方法に従い得る。

【実施例】

【0139】

本技術は、以下の実施例によりさらに例示され、この実施例は、いかなるようにも限定として解釈されるべきではない。以下の実施例の各々について、本明細書で説明される任意の免疫学的結合剤、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよび遺伝子改変ＩｇＧならびにそれらの断片を使用することができた。例として、限定ではなく、以下の実施例で使用されるｓｃＦｖまたはＩｇＧ１抗体は、ＡＳＣ０６、ＡＳＣ０６－０１、ＡＳＣ０６－０２、ＡＳＣ０６－０３、ＡＳＣ０６－０４、ＡＳＣ０６－０５、ＡＳＣ０６－０６、ＡＳＣ０６－０７、ＡＳＣ０６－０８、ＡＳＣ０６－０９、ＡＳＣ０６－１０、ＡＳＣ０６－１１、ＡＳＣ０６－１２、ＡＳＣ０６－１３またはＡＳＣ０６－１４などであり得る。

【0140】

（実施例１）
ＡＳＣ０６抗体の親和性成熟
ＡＳＣ０６は、ＡＳＩＣ１ａに対するアンタゴニスト活性を有する酸感受性イオンチャネル１ａ（ＡＳＩＣ１ａ）特異的抗体である。以下の表および図７Ａ～Ｄは、ＡＳＣ０６のＶ_L、Ｖ_HおよびＣＤＲ配列のヌクレオチドおよびアミノ酸を示す（配列番号１～１０）。

【0141】

【表5】

【0142】

より高い親和性のＡＳＩＣ１ａ選択的抗体を得るために、５ｘ１０⁷の多様性を有する、ＡＳＣ０６抗体の変異体Ｖ_H－ＣＤＲ３配列を含む変異サブライブラリーを設計および合成した。変異サブライブラリーを含有するＡＳＣ０６－Ｆａｂの重鎖およびＡＳＣ０６－Ｆａｂの軽鎖の両方をコードするプラスミドを、酵母コンピテント細胞にトランスフェクトして、相同組換え法を使用して酵母ライブラリーを発生させた。酵母表面上にＡＳＣ０６－Ｆａｂライブラリーをディスプレイするために、酵母ライブラリーをＡｇａ２ｐタンパク質およびＥＧＦＰタンパク質と融合した。

【0143】

最初に、ｈＡＳＩＣ１ａのビオチニル化三量体エクトドメイン（ｈＡＳＩＣ１ａ－ＥＣＤ）への結合を、抗体の親和性成熟に使用した。次いで、反復回の蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳソーティング）により、酵母ライブラリーをスクリーニングした。図１で示される通り、毎回、より特異的なバインダーを選択し、増幅し、次回のＦＡＣＳソーティングに供した。５回のスクリーニング後、富化酵母クローンを収集し、重鎖をコードするプラスミドを、配列決定および解析した。図１の右下のコンセンサス配列により示される通り、Ｖ_H－ＣＤＲ３の配列整列を含む、５回の選択後に選択されたプラスミドの配列解析は、Ｖ_H－ＣＤＲ３内のある特定のアミノ酸の保存を明らかにした。５回のスクリーニング後、成熟させた抗体の１４種のクローンをサブライブラリーから特定した。１４種のクローンをＡＳＣ０６－０１～ＡＳＣ０６－１４と命名した。以下の表は、ＡＳＣ０６－０１～ＡＳＣ０６－１４のＶ_H－ＣＤＲ３のアミノ酸配列、およびＶ_H－ＣＤＲ３配列をコードする例示的なヌクレオチド配列を示す。

【0144】

【表6】

【0145】

以下の表の配列、および図１の右下に示されるコンセンサス配列は、Ｖ_H－ＣＤＲ３が、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５または配列番号３７と少なくとも７５、８０、８５、９０または９５％同一であり得ることを実証する。これらの結果は、本明細書で開示される方法を使用して、Ｖ_H－ＣＤＲ１が配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも７５、８０、８５、９０または９５％同一である場合があり；Ｖ_H－ＣＤＲ２が配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも７５、８０、８５、９０または９５％同一である場合があり；かつＶ_H－ＣＤＲ２が配列番号９と少なくとも７５、８０、８５、９０または９５％同一である場合があり；Ｖ_H－ＣＤＲ３が配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも７５、８０、８５、９０または９５％同一である場合があり；かつＶ_Lが配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも７５、８０、８５、９０または９５％同一である場合があることを含む、本開示の抗体を導き出すことができる場合があることをさらに実証する。
１４種の抗体のうちの５種は、全長ＩｇＧ１形式にさらに構築し、精製し、それらの結合特徴の研究に使用した。

【0146】

（実施例２）
結合能測定
ＩｇＧ１形式の４種の親和性成熟抗体（ＡＳＣ０６－０１－ＩｇＧ１～ＡＳＣ０６－０４－ＩｇＧ１）の、ｈＡＳＩＣ１ａの組換え細胞外ドメイン（ｈＡＳＩＣ１ａ－ＥＣＤ）への結合親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して測定した。ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１抗体を、陽性対照として使用した。全ての操作は、製造業者のユーザーガイドに従った。簡潔に説明すると、ｈＡＳＩＣ１ａを固定化し、示される抗体の連続希釈物を分析物として添加した。結果の解析を、ＢＩＡ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅ（商標）においてプロセスした。以下の表は、結合測定の結果を示す。以下の表で示される通り、ＷＴ抗体ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１の結合親和性は、２．８ｘ１０^-10Ｍであった。比較すると、全ての４種の成熟抗体の結合親和性は、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１の結合親和性よりも高かった。

【0147】

【表7】

【0148】

（実施例３）
結合選択性
ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１親和性成熟抗体の種選択性を調査するために、ｅＹＦＰとＡＳＩＣ１ａのげっ歯類ホモログとの融合タンパク質をコードするプラスミドを構築した。これらのプラスミドは、ヒトＡＳＩＣ１ａ（ｈＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ）、マウスＡＳＩＣ１ａ（ｍＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ）およびラットＡＳＩＣ１ａ（ｒＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ）をコードするプラスミドを含んだ。ＣＨＯ－Ｋ１細胞に、ＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰプラスミドを一過性にトランスフェクトし、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）ベース結合アッセイを行って、細胞表面上に発現したＡＳＩＣ１ａのホモログまたはアイソフォームへの結合を決定した。アイソタイプ対照を、結合についての陰性対照（ＮＣ）として使用した。ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１を、陽性対照として使用した。要約すると、ＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ（緑色）ホモログを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞を、示される抗体（赤色）で染色し、ＦＡＣＳに供した。ＡＳＩＣ１ａ結合を、ＡＳＩＣ１ａ発現（ｅＹＦＰ、緑色）および抗体結合（赤色）について二重陽性であり、ＦＡＣＳプロファイルの右上４分の１区に見られる細胞集団の存在に基づいて検出した。図２で示される通り、ＦＡＣＳ結果は、ＡＳＣ０６－０１－ＩｇＧ１、ＡＳＣ０６－０２－ＩｇＧ１、ＡＳＣ０６－０３－ＩｇＧ１およびＡＳＣ０６－０４－ＩｇＧ１が、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１と同様に、ｈＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ、ｍＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰおよびｒＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰを発現する細胞に結合したことを明らかにした。これらのデータは、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１およびその親和性成熟誘導体は、ＡＳＩＣ１ａのヒトおよびげっ歯類ホモログに結合したことを示す。

【0149】

ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１親和性成熟抗体のＡＳＩＣアイソタイプ選択性を調査するために、ｅＹＦＰとＡＳＩＣ１ａのアイソフォームとの融合タンパク質をコードするプラスミドを構築した。これらのプラスミドは、ヒトＡＳＩＣ１ｂ（ｈＡＳＩＣ１ｂ－ｅＹＦＰ）、ヒトＡＳＩＣ２ａ（ｈＡＳＩＣ２ａ－ｅＹＦＰ）およびヒトＡＳＩＣ３ａ（ｈＡＳＩＣ３ａ－ｅＹＦＰ）をコードするプラスミドを含んだ。ＣＨＯ－Ｋ１細胞に、これらのプラスミドを一過性にトランスフェクトし、本明細書で開示されるＦＡＣＳベース結合アッセイにおいて使用した。ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１の、ヒトＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ（ｈＡＳＩＣ１ａ－ｅＹＦＰ）を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞への結合を、陽性対照として使用し（データは示していない、および図２）、アイソタイプ対照を、結合についての陰性対照（ＮＣ）として使用した。図３で示される通り、ＦＡＣＳ結果は、二重陽性細胞を示さず、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１ならびにその誘導体ＡＳＣ０６－０１－ＩｇＧ１、ＡＳＣ０６－０２－ＩｇＧ１、ＡＳＣ０６－０３－ＩｇＧ１およびＡＳＣ０６－０４－ＩｇＧ１は、ｈＡＳＩＣ１ｂ、ｈＡＳＩＣ２ａまたはｈＡＳＩＣ３ａアイソフォームへの検出可能な結合を示さないことを示唆した。これらのデータは、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１およびその親和性成熟誘導体は、アッセイ条件下でＡＳＩＣ１ａにアイソタイプ特異的に結合したことを示す。
したがって、本技術の抗体または抗原結合性断片は、生体試料中のＡＳＩＣ１ａを検出するための方法に有用である。

【0150】

（実施例４）
親和性成熟ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１誘導抗体による酸誘導ＡＳＩＣ１ａ流の阻害
親和性成熟ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１誘導抗体が、細胞において酸誘導ｈＡＳＩＣ１ａ媒介電流に対して効果を有するかどうかを試験した。ｈＡＳＩＣ１ａ過剰発現安定細胞系を、これらの研究のモデルとして使用した。細胞外ｐＨをｐＨ７．４からｐＨ６．０まで低下させ、ｈＡＳＩＣ１ａ媒介内向き流の振幅を、親和性成熟ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１誘導抗体の存在下で全細胞記録様式にて記録した（図４Ａ～４Ｅ）。ＡＳＩＣ１ａ阻害剤アミロライド（３０μＭ）を、ＡＳＩＣ１ａ流の阻害についての陽性対照として使用した。図４Ａで示される通り、細胞外ｐＨをｐＨ７．４からｐＨ６．０まで低下させることは、ｈＡＳＩＣ１ａ過剰発現安定細胞において電流の形成をもたらし、１００ｎＭのＡＳＣ０６－ＩｇＧ１は、３０μＭアミロライドで観察された阻害と同様の、酸誘導ＡＳＩＣ１ａ流の５０％超の阻害を呈した（図４Ａ）。比較すると、同じ濃度の４種の親和性成熟抗体のうちの３種（すなわち、ＡＳＣ０６－０２－ＩｇＧ１、ＡＳＣ０６－０３－ＩｇＧ１およびＡＳＣ０６－０４－ＩｇＧ１）は、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１と比較してＡＳＩＣ１ａ媒介流のより強い遮断を示した（図４Ａ～４Ｅ）。以下の表は、パッチクランプにより測定した、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１およびＩｇＧ１形式の４種の親和性成熟誘導抗体による酸誘導ｈＡＳＩＣ１ａ流の阻害の程度を示す。

【0151】

【表8】

【0152】

これらのデータは、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１およびその親和性成熟誘導体が、ＡＳＩＣ１ａのアンタゴニストであり、したがって、アシドーシスを患っているかもしくはそれにかかりやすい対象を治療するため、または虚血発作および関連状態を含む、ＡＳＩＣ１ａ活性および／もしくはシグナル伝達の増大により引き起こされるかもしくはそれに関連する疾患を患っている対象を治療するための方法において有用であることを実証する。

【0153】

（実施例５）
ＦＬＩＰＲベース蛍光膜電位（ＦＭＰ）アッセイ
ＦＬＩＰＲ膜電位アッセイキット（ＦＭＰキット）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用する蛍光ベースアッセイを、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１およびその親和性成熟誘導体の機能的特徴付けのために使用した。具体的には、アシドーシスにおけるＡＳＩＣ１ａの役割、および本開示の抗体の効果をさらに調査した。キット中のＦＭＰ染料は、より迅速な応答時間で膜電位の変化の高感度評価を可能にする親油性アニオン性ビスオキソノール染料である。ＦＭＰキットを使用して、酸誘導ＡＳＩＣ１ａ流を検出するための高感度細胞ベースアッセイを、ＡＳＩＣ１ａを安定に発現する細胞株を使用して開発した。ＡＳＩＣ１ａ発現安定細胞を、９６ウェルプレートに播種した。細胞を、様々な濃度のＡＳＣ０６－ＩｇＧ１で処理した。非処理細胞を、陰性対照として使用した。ＡＳＩＣ１ａを、細胞外ｐＨを６まで低下させることによりアシドーシスを誘導することによって刺激し、ＦＭＰ染料の蛍光シグナルの変化を測定した。アイソタイプ対照を、結合についての陰性対照として使用した。図５で示される通り、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１は、蛍光強度の用量依存的阻害を呈し、これは、ＡＳＩＣ１ａ媒介流の阻害を示した。アッセイを、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１およびその親和性成熟誘導体によるＡＳＩＣ１ａ流の阻害効率を検出するために適用した。

【0154】

同様のアッセイを使用して、ＡＳＩＣ１ａ流の阻害についてのＩＣ₅₀値を、陰性対照と比較した各濃度の抗体の最大蛍光強度に基づいて計算した。以下の表は、ＦＭＰアッセイにより測定される、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１およびその親和性成熟誘導体によるＡＳＩＣ１ａ流の阻害についてのＩＣ₅₀値を示す。

【0155】

【表9】

これらのデータは、ＡＳＣ０６－０１－ＩｇＧ１～ＡＳＣ０６－０４－ＩｇＧ１は、親ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１抗体と比較して、ＡＳＩＣ１ａのより強力なアンタゴニストであることを実証する。

【0156】

上記に説明される通り、酸感受性イオンチャネルＡＳＩＣ１ａのアップレギュレーションは、アシドーシスを含む、神経変性疾患、神経心理学的疾患、てんかん、多発性硬化症、疼痛および片頭痛の病態形成と関連付けられる。これらの結果は、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１およびその親和性成熟誘導体は、ＡＳＩＣ１ａのアンタゴニストであり、したがって、アシドーシスを患っているかもしくはそれにかかりやすい対象を治療するため、または虚血発作および関連状態を含む、ＡＳＩＣ１ａ活性および／もしくはシグナル伝達の増大により引き起こされるかもしくはそれに関連する疾患を患っている対象を治療するための方法において有用であることを実証する。

【0157】

（実施例６）
ＡＳＩＣ１ａ媒介カルシウム流入を測定するＦＬＩＰＲベースアッセイ
蛍光画像化プレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）器具を使用して、ｈＡＳＩＣ１ａ－ｍＣｈｅｒｒｙ融合物を発現する安定細胞系において細胞内カルシウムインジケーター染料カルシウム５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）により発生した蛍光シグナルを測定することにより、ＡＳＩＣ１ａチャネルのカルシウム流入を測定した。図６で示される通り、細胞外ｐＨを６まで低下させることによるホモマーｈＡＳＩＣ１ａチャネルの活性化は、記録の１０秒の点で強いカルシウム流入を誘導した。ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１は、カルシウム流入の用量依存的阻害を呈した（図６）。

【0158】

また、親和性成熟ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１誘導抗体によるカルシウム流入の阻害を、ＦＬＩＰＲベースアッセイを使用して測定した。これらのアッセイを使用して、細胞内カルシウムインジケーター染料の最大蛍光強度に基づいて、ＩＣ₅₀値を計算した。以下の表は、ＦＬＩＰＲベースアッセイにより測定した、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１およびその親和性成熟誘導体による酸誘導ＡＳＩＣ１ａ媒介カルシウム流入の阻害についてのＩＣ₅₀値を示す。

【0159】

【表10】

これらの結果は、ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１およびその親和性成熟誘導体は、ＡＳＩＣ１ａのアンタゴニストであり、したがって、アシドーシスを患っているかもしくはそれにかかりやすい対象を治療するため、または虚血発作および関連状態を含む、ＡＳＩＣ１ａ活性および／もしくはシグナル伝達の増大により引き起こされるかもしくはそれに関連する疾患を患っている対象を治療するための方法において有用であることを実証する。

【0160】

（実施例７）
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＡＳＣ０６－ＩｇＧ１誘導体の、アシドーシス誘導細胞死に対する効果
発作または虚血再灌流傷害における細胞外アシドーシスは、ＡＳＩＣ１ａチャネルの活性化を誘導することが公知であり、それは、最も高い可能性としてＡＳＩＣ１ａにより媒介される細胞内カルシウムの一過性の増大および関連する細胞シグナル伝達を通して、中枢神経系の神経細胞死を引き起こす。ｈＡＳＩＣ１ａ過剰発現安定細胞の生存を、細胞外ｐＨの低下に際して査定する。対照ＣＨＯ－Ｋ１細胞のｐＨ感受性を、とりわけｐＨ５．５で、ｈＡＳＩＣ１ａを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞のｐＨ感受性と比較する。様々な濃度のＡＳＣ０６－０１－ＩｇＧ１～ＡＳＣ０６－１４－ＩｇＧ１を、細胞に添加し、用量依存的保護効果をアッセイする。
これらの結果は、本技術の抗体は、アシドーシス誘導細胞死を予防するための方法において有用であり、したがって、アシドーシスを患っているかまたはそれにかかりやすい対象を治療するための方法において有用であることを実証する。

【0161】

（実施例１２）
ｉｎ ｖｉｖｏでのＡＳＣ０６－０１－ＩｇＧ１～ＡＳＣ０６－１４－ＩｇＧ１の、アシドーシス誘導細胞死に対する効果
ｉｎ ｖｉｔｒｏでの抗体ＡＳＣ０６－ＩｇＧ１の保護効果がｉｎ ｖｉｖｏでの病理に拡張され得るかどうかを決定するために、中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）モデルを使用して、抗体の神経保護効果を研究する。ＭＣＡＯにより、マウスの脳の左半球に対して虚血を６０分間誘導し、その後再灌流する。増大する用量の、ＡＳＣ０６－０１－ＩｇＧ１～ＡＳＣ０６－１４－ＩｇＧ１のうちの１種または複数種を、マウスの反対側半球の脳室内に（ｉ．ｃ．ｖ．）注入する。同じ濃度の無関係の抗体（アイソタイプ）を、陰性対照として投与する。皮質および線条体の梗塞体積を、注射２４時間後に計算する。
これらの結果は、本技術の抗ＡＳＩＣ１ａ抗体は、アシドーシス誘導細胞死を予防するため、および虚血発作を治療するための方法において有用であることを実証する。

【0162】

均等物
本技術は、本技術の個々の態様の単一の例示として意図される、本出願で説明される特定の実施形態について限定されるべきではない。当業者に明らかな通り、本技術の多くの改変および変化は、その趣旨および範囲から逸脱することなく行うことができる。本技術の範囲内の機能的に同等な方法および装置は、本明細書で列挙された方法および装置に加えて、上記の説明から当業者に明らかであった。そのような改変および変化は、附属の特許請求の範囲内に入ることが意図される。本技術は、附属の特許請求の範囲の用語によってのみ、そのような特許請求の範囲が与えられる均等物の全範囲に沿って、限定されるべきである。本技術は、もちろん変動し得る特定の方法、試薬、化合物、組成物または生物系に限定されないことが理解されるべきである。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のためのみであり、限定であるとは意図されないことが理解されるべきである。

【0163】

加えて、本開示の特色または態様がマーカッシュ群に関して説明されている場合、当業者は、本開示がそれによりマーカッシュ群の任意の個々の構成員または構成員のサブ群に関しても説明されていることを認識する。

【0164】

当業者により理解された通り、任意および全ての目的について、特に書面の説明を提供する点で、また、本明細書で開示される全ての範囲は、任意および全ての可能なサブ範囲およびそのサブ範囲の組合せを包含する。任意の列挙される範囲は、同じ範囲を十分に説明し、同じ範囲を少なくとも均等な半分、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１などに分解することを可能にすると容易に認識され得る。非限定的な例として、本明細書で説明される各範囲は、下部３分の１、中部３分の１および上部３分の１などに容易に分解することができる。また、当業者に理解される通り、全ての言語、例えば、「最大で」、「少なくとも」、「超」、「未満」などは、列挙される数値を含み、上記に説明される通り、次いでサブ範囲に分解することができる範囲を指す。最後に当業者に理解された通り、範囲は、各個々の構成員を含む。したがって、例えば、１～３個の細胞を有する群は、１、２または３個の細胞を有する群を指す。同様に、１～５個の細胞を有する群は、１、２、３、４または５個の細胞を有する群を指し、以下同様である。

【0165】

本明細書で参照または引用される全ての特許、特許出願、仮出願および公開公報は、全ての図面および表を含んで、それらが本明細書の明白な教示と矛盾しない限り、それらの全体を参照により本明細書に組み込む。
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内で示される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【配列表】

2022543182000001.app

【手続補正書】

【提出日】2022-06-02

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、
Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列、ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、
Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項2】

ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプのＦｃドメインをさらに含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項3】

抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）₂、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖおよびＦｖからなる群から選択される、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項4】

抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または二重特異性抗体である、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項5】

ＡＳＩＣ１ａに結合する、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項6】

ＡＳＩＣ１ａのアンタゴニストである、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項7】

ＡＳＩＣ１ａ媒介酸誘導流を阻害する、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項8】

ＡＳＩＣ１ａ媒介酸誘導カルシウム流入を阻害する、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項9】

Ｖ_Lが、配列番号２を含み、Ｖ_Hが、
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号１９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２７のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号２９のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３１のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３３のＶ_H－ＣＤＲ３配列；
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３５のＶ_H－ＣＤＲ３配列；または
配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列および配列番号３７のＶ_H－ＣＤＲ３配列
を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項10】

重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、Ｖ_Hが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Lが、配列番号２のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項11】

軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、ＬＣが、配列番号２を含むアミノ酸配列を含み、ＨＣが、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）を含み、Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項12】

（ａ）配列番号２に存在する軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列（Ｖ_L）；および／または
（ｂ）配列番号７の重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一である重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列（Ｖ_H）
を含む抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項13】

Ｖ_Lが、
（ａ）配列番号３に存在するＶ_H－ＣＤＲ１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_L－ＣＤＲ１；
（ａ２）配列番号４に存在するＶ_H－ＣＤＲ２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_L－ＣＤＲ２；および／または
（ａ３）配列番号５に存在するＶ_H－ＣＤＲ３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_L－ＣＤＲ３
を含み、
Ｖ_Hが、
（ｂ１）配列番号８に存在するＶ_H－ＣＤＲ１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_H－ＣＤＲ１；
（ｂ２）配列番号９に存在するＶ_H－ＣＤＲ２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_H－ＣＤＲ２；および／または
（ｂ３）配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５もしくは配列番号３７のいずれか１つに存在するＶ_H－ＣＤＲ３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＶ_H－ＣＤＲ３
を含む、請求項１２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項14】

重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む抗体またはその抗原結合性断片を含む、それを必要とする対象におけるアシドーシスの治療に使用するための医薬組成物であって、
Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、
Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、医薬組成物。

【請求項15】

重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む抗体またはその抗原結合性断片を含む、それを必要とする対象における虚血発作の治療に使用するための医薬組成物であって、
Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、
Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、医薬組成物。

【請求項16】

重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_H）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（Ｖ_L）を含む抗体またはその抗原結合性断片を含む、それを必要とする対象におけるＡＳＩＣ１ａ活性および／またはシグナル伝達によって引き起こされるかまたはそれに関連する障害の治療に使用するための医薬組成物であって、
Ｖ_Hが、配列番号８のＶ_H－ＣＤＲ１配列、配列番号９のＶ_H－ＣＤＲ２配列ならびに配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５および配列番号３７からなる群から選択されるＶ_H－ＣＤＲ３配列を含み、
Ｖ_Lが、配列番号３のＶ_L－ＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_L－ＣＤＲ２配列および配列番号５のＶ_L－ＣＤＲ３配列を含む、医薬組成物。

【請求項17】

請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸配列。

【請求項18】

配列番号１、６、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６および３８からなる群から選択される、請求項１７に記載の核酸配列。

【請求項19】

請求項１７または１８に記載の核酸を発現する宿主細胞またはベクター。

【請求項20】

請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含むキット。

【請求項21】

請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片が、放射性標識、蛍光標識および発色性標識からなる群から選択される少なくとも１種の検出可能標識にカップリングされている、請求項２０に記載のキット。

【請求項22】

請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片に特異的に結合する二次抗体をさらに含む、請求項２０または２１に記載のキット。

【請求項23】

生体試料におけるＡＳＩＣ１ａをｉｎ ｖｉｔｒｏで検出するための方法であって、生体試料を、検出可能標識にコンジュゲートした請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させることと、生体試料中の検出可能標識の存在およびレベルを検出することとを含む、方法。

【国際調査報告】