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特表2022-543227線維性マトリックス蓄積の阻害剤としてのペプチド

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-10-11

(54)【発明の名称】線維性マトリックス蓄積の阻害剤としてのペプチド

(51)【国際特許分類】

C07K 7/00 20060101AFI20221003BHJP

C07K 7/64 20060101ALI20221003BHJP

C12N 15/11 20060101ALI20221003BHJP

A61K 38/08 20190101ALI20221003BHJP

A61K 38/12 20060101ALI20221003BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20221003BHJP

A61P 9/04 20060101ALI20221003BHJP

A61P 1/16 20060101ALI20221003BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20221003BHJP

A61P 13/12 20060101ALI20221003BHJP

A61P 9/00 20060101ALI20221003BHJP

【ＦＩ】

C07K7/00

C07K7/64 ZNA

C12N15/11 Z

A61K38/08

A61K38/12

A61P43/00 105

A61P9/04

A61P1/16

A61P35/00

A61P13/12

A61P9/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022506524

(86)(22)【出願日】2020-07-28

(85)【翻訳文提出日】2022-03-28

(86)【国際出願番号】 EP2020071319

(87)【国際公開番号】W WO2021018923

(87)【国際公開日】2021-02-04

(31)【優先権主張番号】19189468.2

(32)【優先日】2019-07-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】19194798.5

(32)【優先日】2019-08-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】501497655

【氏名又は名称】マックスプランクゲゼルシャフトツゥアーフェデルゥンデルヴィッセンシャフテンエーフォー

(74)【代理人】

【識別番号】110000578

【氏名又は名称】名古屋国際弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ナクバンディイナーム

(72)【発明者】

【氏名】ハメルマンシュテファン

(72)【発明者】

【氏名】ユーベルシュテファン

【テーマコード（参考）】

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084BA16

4C084BA23

4C084BA24

4C084CA59

4C084NA14

4C084ZA36

4C084ZA59

4C084ZA75

4C084ZA81

4C084ZB26

4C084ZC01

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA13

4H045EA28

4H045FA34

(57)【要約】

本発明は、器官または組織における細胞外マトリックスの過剰産生および／または過剰蓄積を阻害するペプチドに関する。本発明のペプチドは、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）を有し、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択され、直鎖ペプチドおよび環状ペプチドの両方として、器官または組織における細胞外マトリックスの過剰産生および過剰蓄積を阻害することができる。特に、本明細書に開示されるペプチドは、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、虚血性心疾患、心不全、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、および、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫などの様々な種類の癌などの細胞外マトリックスの過剰蓄積を特徴とする線維性状態を治療するために使用できる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、およびその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

ＸａがＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択される請求項１に記載のペプチド、およびその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

ＸａがＡｃ－ＧｌｙでＸｂがＧｌｕである（配列番号３）か、またはＸａがＧｌｙでＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２である（配列番号４）、請求項１または２に記載のペプチド。

【請求項4】

ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＧｌｕがＧｌｙに結合して環状ペプチド（配列番号５）：

【化1】

を形成する、請求項１または２に記載のペプチド。

【請求項5】

ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＰｒｏがＧｌｕに結合して環状ペプチド（配列番号６）：

【化2】

を形成する、請求項１に記載に記載のペプチド。

【請求項6】

請求項１に記載のペプチドＸａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物。

【請求項7】

ＸａがＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択される請求項６に記載の医薬組成物、およびその薬学的に許容される塩。

【請求項8】

ＸａがＡｃ－Ｇｌｙで、ＸｂがＧｌｕである（配列番号３）か、またはＸａがＧｌｙでＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２である（配列番号４）、請求項６または７に記載の医薬組成物。

【請求項9】

前記ペプチドが

【化3】

である、請求項６または７に記載の医薬組成物。

【請求項10】

前記ペプチドが

【化4】

である、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項11】

組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療における使用のための、請求項１～５のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項12】

前記線維性状態が、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、虚血性心疾患、心不全、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される、請求項１１に記載の使用のためのペプチド。

【請求項13】

前記ペプチドがＸａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）であり、ＸａがＡｃ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕである（配列番号３）か、またはＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２である（配列番号４）、請求項１１または１２に記載の使用のためのペプチド。

【請求項14】

前記ペプチドが、

【化5】

である、請求項１１または１２に記載の使用のためのペプチド。

【請求項15】

前記ペプチドが

【化6】

である、請求項１１または１２に記載の使用のためのペプチド。

【発明の詳細な説明】

【0001】

本発明は、器官または組織における細胞外マトリックスの過剰産生および／または過剰蓄積を阻害するペプチドに関する。本発明のペプチドは、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）を有し、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択され、直鎖ペプチドとしておよび環状ペプチドとしての両方で、器官または組織における細胞外マトリックスの過剰産生および過剰蓄積を阻害することができる。特に、本明細書に開示されるペプチドは、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、虚血性心疾患、心不全、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、および、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫などの様々な種類の癌などの細胞外マトリックスの過剰蓄積を特徴とする線維性状態を治療するために使用できる。

【0002】

［発明の背景］
本発明は、組織または器官における過剰なマトリックス蓄積に関連する状態を治療するために使用できる新規ペプチドを提供する。本発明の治療効果は、細胞外マトリックスの過剰産生の低減または防止から生じる。１つの可能性としては、ＴＧＦβ（トランスフォーミング増殖因子－β）を阻害して、細胞外マトリックス沈着のＴＧＦβ誘導成分を効果的に減少させることが含まれるが、これに限定されない。

【0003】

器官内の細胞は、線維芽細胞のさまざまな亜集団を含む多くの細胞型によって産生されるコラーゲンやフィブロネクチンを含むいくつかの種類の細胞外マトリックス分子のネットワークを介してまとめられている。ほとんどすべての種類の病気で、マトリックスの組成または分布には変化がある。線維化プロセスが開始されるたびに発生するマトリックス組成の変化は、マトリックス産生を促進することによって線維芽細胞の機能に直接影響を及ぼす。これらの変化はまた、線維芽細胞の分化を増加させ、マトリックスの産生をさらに促進するマトリックスの剛性だけでなく、線維化促進サイトカインに対する反応性にも影響を及ぼす。

【0004】

ＴＧＦβは、マトリックスの蓄積に関与する重要な分子である。ＴＧＦβは、活性化された免疫細胞および線維芽細胞を含む様々な細胞によって産生され、免疫応答を刺激し、線維芽細胞の活性化を増加させてマトリックスを産生することにより、マトリックス産生を増強することができる。ＴＧＦβは、マトリックスから放出される必要がある不活性な形でマトリックスに保存されるが、これはインテグリンと呼ばれる細胞受容体の作用を必要とするプロセスである。一部のＴＧＦβは、インテグリンが関与することなく、細胞によって産生されるいわゆるマトリックスメタロプロテアーゼなどのタンパク質の作用によっても放出され得る。放出されると、ＴＧＦβはその受容体に結合し、シグナル伝達カスケードを開始する。利用可能な濃度と関与する細胞型の両方に応じて、ＴＧＦβの作用には大きなばらつきがある。ＴＧＦβは、線維症および瘢痕組織の主要なメディエーターと見なされており、癌でもほぼ普遍的に見られ、癌の成長と進行への関与を示唆している。ＴＧＦβの線維形成作用は、マトリックスタンパク質合成の同時刺激、マトリックス分解の阻害、および細胞外マトリックスの組み立てを促進するインテグリン受容体の調節による代謝回転と細胞－マトリックス相互作用の強化から生じる。線維性疾患では、ＴＧＦβの過剰産生は細胞外マトリックスの過剰な蓄積をもたらし、組織の線維化と最終的には器官不全を引き起こす。ＴＧＦβの過剰産生による過剰な細胞外マトリックスの蓄積に関連する線維性状態は、例えば、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、および、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫などの様々な種類の癌である。

【0005】

さらに、線維症を調節する主要な細胞－細胞および細胞－マトリックス相互作用の多くは、インテグリンと呼ばれる細胞接着受容体によって媒介され、インテグリンファミリーは慢性炎症および線維症の重要な調節因子であると思われる。複数の器官の線維症モデルが、インテグリンが線維化プロセスに大きな影響を及ぼし、肝臓、腎臓、皮膚の線維症などのさまざまな種類の線維症で上方制御されることを示している。細胞増殖と生存への直接的な影響に加えて、インテグリンが潜在的なＴＧＦβを活性化できることがわかっている。前臨床データは、インテグリンターゲティングが線維性疾患の有望な治療法である可能性があることを示唆しているが、これらの介入のリスクについては現在ほとんど知られていない。最近では、抗線維化療法を目的とした研究において、抗体遮断や小分子阻害剤などのインテグリンを操作するための戦略が使用されている。

【0006】

欧州特許ＥＰ０４９４２６４Ｂ１は、抗ＴＧＦβ抗体または４～５０アミノ酸長のＡｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）含有ペプチドであるトランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦβ）の活性を抑制する薬剤を提供することによる、細胞外マトリックス成分の蓄積を特徴とする病状の進行を治療または阻止する方法を提供する特許である。そのような方法で治療できる病状には、様々な線維性疾患、糸球体腎炎、成人呼吸困難症候群、肝硬変、線維性癌、肺の線維症、動脈硬化、心筋梗塞後、心筋線維症、血管形成術後の再狭窄、腎間質性線維症および瘢痕が含まれる。

【0007】

米国特許ＵＳ７７１３９２４Ｂ２は、ＴＧＦβを阻害する薬剤の組み合わせを単独で、または過剰に蓄積された細胞外マトリックスを分解する薬剤と組み合わせて使用して、細胞外マトリックスの過剰蓄積を低減および防止するための方法および組成物に関する。治療可能な状態は、細胞外マトリックスの過剰な蓄積に起因する線維性疾患および瘢痕であり得る。阻害剤組成物は、２つまたは３つの薬剤を含むことができ、最初の１つまたは２つの薬剤は、アルドステロンの阻害剤、アンジオテンシンＩＩの阻害剤、抗ＴＧＦβ抗体、レニンの阻害剤、プロテオグリカンおよびＴＧＦβ受容体のリガンドであってもよく、第３の薬剤はＰＡＩ阻害剤である。

【0008】

本発明の目的は、特に過剰なマトリックス蓄積に関連する線維性状態の治療のために、薬学的に活性な薬剤として使用できる新規ペプチドおよび／またはその薬学的に許容される塩、ならびに、それらのペプチドの少なくとも１つおよび／またはその薬学的に許容される塩を薬学的に活性な成分として含む組成物を提供することである。
本発明の目的は、独立請求項の教示によって解決される。本発明のさらに有利な特徴、態様および詳細は、本出願の従属請求項、明細書、図面、および実施例から明らかである。

【発明の概要】

【0009】

［発明の簡単な説明］
本発明は、組織または器官における過剰なマトリックス蓄積に関連する状態を治療するために使用できる新規ペプチドを提供する。本発明の治療効果は、過剰なマトリックスの産生および蓄積の低減または防止に起因する。さらに、ペプチドは、ＴＧＦβを介して、またはまだ完全には特徴付けられていない細胞表面受容体と相互作用することによって直接作用している可能性がある。マトリックスの蓄積はいくつかの疾患における器官機能の低下に寄与するため、これらの新規ペプチドはマトリックスの蓄積を減少させ、それにより機能の低下を減少させることを提案する。

【0010】

【0011】

本発明の別の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＡｃ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであるペプチド、およびその薬学的に許容される塩（配列番号３）に関する。本発明のより好ましい実施形態は、ペプチドＸａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）であって、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２であるペプチド、およびその薬学的に許容される塩（配列番号４）に関する。本発明のさらにより好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＧｌｕがＧｌｙに結合して環状ペプチド（配列番号５）：

【0012】

【化1】

を形成するペプチドに関する。

【0013】

本発明のさらに好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＰｒｏがＧｌｕに結合して環状ペプチド（配列番号６）：

【0014】

【化2】

を形成するペプチドに関する。

【0015】

本発明の別の実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。本発明のさらなる実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。本発明の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＡｃ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであるペプチド（配列番号３）、および／またはその薬学的に許容される塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。本発明の別の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２であるペプチド（配列番号４）、および／またはその薬学的に許容される塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。本発明の別の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＧｌｕがＧｌｙに結合して環状ペプチド（配列番号５）：

【0016】

【化3】

を形成するペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。

【0017】

本発明の別の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＰｒｏがＧｌｕに結合して環状ペプチド（配列番号６）：

【0018】

【化4】

【0019】

別の態様では、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を提供する。特定の態様では、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を提供する。好ましい態様では、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＡｃ－Ｇｌｙで、ＸｂがＧｌｕである（配列番号３）か、またはＸａがＧｌｙで、ＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２である（配列番号４）、ペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を提供する。好ましい態様では、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＧｌｕがＧｌｙに結合して環状ペプチド（配列番号５）：

【0020】

【化5】

を形成するペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を提供する。より好ましい態様では、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＰｒｏがＧｌｕに結合して環状ペプチド（配列番号６）：

【0021】

【化6】

を形成するペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0022】

前記線維化状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、虚血性心疾患、心不全、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択されることが好ましい。

【0023】

＜発明の詳細な説明＞
本発明者らは、環状および直鎖の両方のマウスにおける化学的に誘発された肝線維症のモデルにおいてマトリックス蓄積を減少させることができ、先行技術で知られている同様の配列と比較して驚くほど強い効果を示す５つのアミノ酸Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ配列または１文字コードＧＬＱＧＥの配列を同定した。特に、本発明者らは、Ｎ末端のアセチル化形態Ａｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（配列番号３）およびＣ末端のアミド化形態Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２（配列番号４）の両方が、マウスの肝線維症の化学的に誘発されたモデルでマトリックスの蓄積を低減することができ（図１および２）、コントロールペプチドＡｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（配列番号８）、Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２（配列番号９）、Ａｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（配列番号１３）、Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２（配列番号１４）と比較してより良い効果を示すことを発見した。配列Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（配列番号７）およびＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（配列番号１２）は、コラーゲン結合インテグリンに結合する配列の一部であることが知られている。

【0024】

さらに、環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（配列番号５）は、同じ配列の直鎖形態のペプチド、すなわち、Ｎ末端のアセチル化またはＣ末端のアミド化と比較して、また、環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（配列番号１０）および環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（配列番号１５）と比較してより強い効果を示した。注目すべきことに、プロリンＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（配列番号６）を含む環状形態も、Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（配列番号１１）およびＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（配列番号１６）と比較してより強力な効果でコラーゲン蓄積を有意に低減することができたが、環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（配列番号５）と比較した場合その効果は弱かった。マトリックスの蓄積はいくつかの病気の器官機能の低下に寄与するため、これらのペプチドは、過剰なマトリックス蓄積に関連する線維性状態を治療するために使用できる。根本的なメカニズムは、まだ完全には特徴付けられていない細胞表面受容体に対するペプチドの直接的な影響、またはいくつかの病気の進行に関与する主要な分子を表すＴＧＦβの量またはＴＧＦβへの反応に影響を与えることによる間接的な影響による可能性がある。また、細胞外マトリックスタンパク質の産生を減少させる１つまたは複数の細胞型への直接的な影響が原因である可能性もある。

【0025】

したがって、本発明は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、およびその薬学的に許容される塩を提供する。本発明の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、およびその薬学的に許容される塩に関する。本発明の別の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＡｃ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであるペプチド（配列番号３）、およびその薬学的に許容される塩に関する。本発明のより好ましい実施形態は、ペプチドＸａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂであって、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２であるペプチド（配列番号４）、およびその薬学的に許容される塩に関する。本発明のさらにより好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＧｌｕがＧｌｙに結合して環状ペプチド（配列番号５）：

【0026】

【化7】

を形成するペプチドに関する。

【0027】

【0028】

【化8】

を形成するペプチドに関する。

【0029】

「ペプチド」という用語は、Ｄ－またはＬ－アミノ酸の一本鎖またはペプチド結合によって結合されたＤ－およびＬ－アミノ酸の混合物から構成される化合物を指す。一般に、本発明のペプチドの長さは、５～６アミノ酸であるのが最も好ましい。

【0030】

本明細書で使用される「環状ペプチド」という用語は、ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ、およびそのコントロールＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ、Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕを指し、ペプチドのアミノ末端が、ペプチド結合によってペプチドのカルボキシル末端または遊離のカルボキシル基を有するアミノ酸Ｇｌｕの側鎖に結合されているものを指す。ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－ＧｌｕのＧｌｙのアミノ末端は、ペプチド結合を介して、Ｇｌｕの側鎖カルボキシル基ではなく、Ｇｌｕのカルボキシル末端に結合されているのが好ましい。本明細書には、環状ペプチドＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ、およびそのコントロールのＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－ＧｌｕおよびＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕも記載されており、ペプチドのアミノ末端は、ペプチド結合によってペプチドのカルボキシル末端または遊離のカルボキシル基を有するアミノ酸Ｇｌｕの側鎖に結合されている。ペプチドＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－ＧｌｕにおけるＰｒｏのアミノ末端は、ペプチド結合を介して、Ｇｌｕの側鎖カルボキシル基ではなく、Ｇｌｕのカルボキシル末端に結合されているのが好ましい。

【0031】

本発明の選択された特定のペプチドの実施形態を表す式において、アミノ末端基およびカルボキシ末端基は、多くの場合、具体的に示されていないが、特に明記しない限り、生理的ｐＨ値で想定される形態であると理解される。したがって、生理的ｐＨでのＮ末端Ｈ^＋およびＣ末端Ｏ^－（すなわちベタイン型）は、特定の例または一般式のいずれかで必ずしも特定および示されているわけではないが、存在すると理解される。本明細書で使用されるペプチド表記法では、標準的な使用法および慣例に従って、分子の左端がアミノ末端であり、右端がカルボキシ末端である。もちろん、非生理的ｐＨ値で形成されるものを含む塩基性塩および酸付加塩も、本発明の化合物に含まれる。

【0032】

本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、標準的な２０の遺伝的にコードされたアミノ酸および「Ｄ」型（天然の「Ｌ」型と比較して）のそれらの対応する立体異性体、オメガアミノ酸、他の天然に存在するアミノ酸、非従来型アミノ酸（例えば、α，α－二置換アミノ酸、Ｎ－アルキルアミノ酸など）および化学的に誘導体化されたアミノ酸を含む。「グルタミン」または「Ｇｌｎ」または「Ｑ」などのようにアミノ酸が具体的に列挙されている場合、この用語は、特に明記しない限り、Ｌ－グルタミンおよびＤ－グルタミンの両方を指す。ただし、天然に存在するＬ型が最も好ましい。したがって、本明細書に開示されるペプチドのＬ型、特にＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－ＧｌｕのＬ型が好ましい。他の従来のアミノ酸もまた、所望の機能的特性がポリペプチドによって保持される限り、本発明のポリペプチドに適した成分であり得る。示されているペプチドの場合、コード化された各アミノ酸残基は、適切な場合、従来のアミノ酸の慣用名に対応する３文字で表される。本発明において、配列Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（ＧＬＯＧＥ）のペプチドにおいて、一般的な非タンパク質新生アミノ酸ヒドロキシプロリンは、３文字コードを使用する場合はＨｙｐと省略され、１文字コードを使用する場合は「０」と省略される。

【0033】

本発明によるペプチドは、化学合成を含むいくつかの方法によって合成することができる。固相合成法は、成長するペプチド鎖への１つまたは複数のアミノ酸残基または適切に保護されたアミノ酸残基の連続的な付加からなる。最初のアミノ酸残基のアミノ基またはカルボキシル基のいずれかが、適切な選択的に除去可能な保護基によって保護される。リシンなどの反応性側基を含むアミノ酸には、別の選択的に除去可能な保護基が利用される。固相合成法を使用して、保護または誘導体化されたアミノ酸は、保護されていないカルボキシル基またはアミノ基を介して不活性な固体支持体に結合する。次に、アミノ基またはカルボキシル基の保護基を選択的に除去し、適切に保護された相補的な（アミノまたはカルボキシル）基を有する配列中の次のアミノ酸を固体支持体と混合し、反応させて、すでに固体支持体に結合した残基とのアミド結合を形成する。次に、アミノ基またはカルボキシル基の保護基がこの新たに追加されたアミノ酸残基から除去され、次に（適切に保護された）次のアミノ酸が追加され、以下同様に続く。すべての所望のアミノ酸が適切な配列で連結された後、残りの末端および側基保護基（および固体支持体）を順次または同時に除去して、最終的な所望のペプチドを得る。次に、得られた直鎖ペプチドを反応させて、それらの対応する環状ペプチドを形成することができる。ペプチドを環化するための方法は、技術の観点で知られている。

【0034】

「薬学的に許容される塩」という用語は、化合物の無機および有機酸付加塩を指す。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」、「生理学的に許容される」という用語およびその文法的変形は交換可能に使用され、悪心、めまい、胃の不調など望ましくない生理学的作用を生じさせることなく哺乳類に投与することができることを表す。ペプチドを有する塩を形成することができる酸には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、マロン酸、サリチル酸、ｐ－アミノサリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、スルホン酸、ホスホン酸、過塩素酸、硝酸、ギ酸、プロピオン酸、グルコン酸、乳酸、酒石酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、安息香酸、ｐ－アミノ安息香酸、ｐ－ヒドロキシ安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、亜硝酸、ヒドロキシエタンスルホン酸酸、エチレンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ナフチルスルホン酸、スルファニル酸、カンファースルホン酸、チャイナ酸、マンデル酸、ｏ－メチルマンデル酸、水素－ベンゼンスルホン酸、ピクリン酸、アジピン酸、Ｄ－ｏ－トリル酒石酸、タルトロン酸、ａ－トルイル酸、（ｏ，ｍ，ｐ）－トルイル酸、ナフチルアミンスルホン酸、および当業者によく知られている他のミネラル酸またはカルボン酸などの無機酸が含まれる。好ましいのは、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、塩酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、アントラニル酸、桂皮酸、ナフタレンスルホン酸、スルファニル酸などである。より好ましいのは、塩酸およびトリフルオロ酢酸塩である。塩は、従来の方法で遊離塩基形態を十分な量の所望の酸と接触させて塩を生成することによって調製される。

【0035】

本発明のペプチドと塩を形成することができる適切な塩基には、水酸化ナトリウムなどの無機塩基、ならびにモノ、ジ、およびトリアルキルおよびアリールアミン（例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、メチルアミン、ジメチルアミンなど）および任意に置換されたエタノールアミン（例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミンなど）が含まれる。

【0036】

本発明のペプチドは、好ましくは、汚染物質を実質的に含まないように精製されている。ある材料が、所望の目的に有用なものにするのに十分な程度に、細胞内またはインビトロシステムのいずれかで、合成時に関連していた望ましくない材料から実質的に精製されている場合、その材料は、「汚染物質を実質的に含まない」と言われる。

【0037】

＜医薬組成物＞
本発明の実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕ、Ｇｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。本発明のさらなる実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。本発明の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＡｃ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであるペプチド（配列番号３）、および／またはその薬学的に許容される塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。本発明の別の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２であるペプチド（配列番号４）、および／またはその薬学的に許容される塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。本発明の別の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＧｌｕがＧｌｙに結合して環状ペプチド（配列番号５）：

【0038】

【化9】

を形成するペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。
本発明の別の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＰｒｏがＧｌｕに結合して環状ペプチド（配列番号６）：

【0039】

【化10】

【0040】

より具体的には、本発明は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される非毒性塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物に関する。本発明のさらなる実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される非毒性塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。本発明の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＡｃ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであるペプチド（配列番号３）、および／またはその薬学的に許容される非毒性塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。本発明の別の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２であるペプチド（配列番号４）、および／またはその薬学的に許容される非毒性塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。本発明の別の好ましい実施形態は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＧｌｕがＧｌｙに結合して環状ペプチド（配列番号５）：

【0041】

【化11】

を形成するペプチド、および／またはその薬学的に許容される非毒性塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される媒体、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。

【0042】

【0043】

【化12】

【0044】

医薬組成物は、本発明のペプチドを効果的な方法で投与することを容易にするように設計されている。通常、本発明の組成物のペプチドは、薬学的に許容される賦形剤に溶解または分散される。

【0045】

適切な担体または賦形剤の例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、グルコース、粉末糖、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、デンプン、アカシアガム、キサンタンガム、グアーガム、タラガム、メスキートガム、フェヌグリークガム、イナゴマメガム、ガッティガム、トラガカンスガム、イノシトール、モラセス、マルトデキストリン、アイリッシュモスの抽出物、パンワーガム、イサポール殻粘液、ビーガム、カラマツアラボガラクタン、ケイ酸カルシウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、カオリン、塩化ナトリウム、ポリエチレングリコール、アルギネート、ゼラチン、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、生理食塩水、シロップ、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カーボポール９４１、カーボポール９８０、カーボポール９８１などのカーボポールのようなポリアクリル酸、およびＰｈａｒｍａｇｕｍ＜商標＞（ＳＰＩＰｈａｒｍａＧｒｏｕｐ；ＮｅｗＣａｓｔｌｅ，Ｄｅｌ．）などのガムベース、および同様のものが含まれるが、これらに限定されない。典型的には、本発明の組成物は、媒体、賦形剤またはそれらの組み合わせの約１０重量％から約９０重量％を含む。

【0046】

好ましくは、医薬組成物は、約０．００１重量％から約９０重量％、好ましくは約０．０１重量％から約７５重量％、より好ましくは約０．１重量％から５０重量％、さらにより好ましくは約０．１重量％から１０重量％の本発明の環状ペプチドまたはその組み合わせを含み、残りは適切な医薬担体、賦形剤、および／または希釈剤からなる。

【0047】

医薬組成物は、粉末、顆粒、錠剤、カプセル、懸濁液、乳濁液、シロップ、経口剤形、外用製剤、坐剤、または通常の方法でエアロゾル化されるような無菌の注射可能な溶液の形態にそれぞれ配合することができる。配合される場合、一般的に使用される充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して調製することができる。

【0048】

医薬組成物において、経口投与のための固形製剤は、錠剤、ピル、粉末、顆粒、またはカプセルであることができる。固形製剤は、賦形剤をさらに含み得る。賦形剤は、例えば、デンプン、炭酸カルシウム、ショ糖、乳糖、またはゼラチンであることができる。さらに、固形製剤は、ステアリン酸マグネシウムまたはタルクなどの潤滑剤をさらに含み得る。医薬組成物において、経口投与のための液体製剤として最良なのは、懸濁液、溶液、乳濁液、またはシロップであり得る。液体製剤は、水または流動パラフィンを含み得る。液体製剤は、例えば、賦形剤の場合、湿潤剤、甘味料、芳香族または防腐剤を含むことができる。非経口投与の目的で、本発明のペプチドを含む組成物は、蒸留水に溶解するのが好ましく、ｐＨは約６から８に調整されるのが好ましい。ペプチドが凍結乾燥形態で提供される場合、ラクトースを溶液に添加して凍結乾燥プロセスを促進することができる。このような形態では、溶液は次に滅菌され、バイアルに導入され、凍結乾燥される。
非経口投与のための本発明の組成物の有用な製剤はまた、無菌の水性および非水性溶媒、懸濁液および乳濁液を含む。有用な非水性溶媒の例には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、魚油、および注射可能な有機エステルが含まれる。

【0049】

＜ペプチドの用途＞
本明細書で使用される「細胞外マトリックスの過剰蓄積」は、線維性疾患の結果として、組織または器官機能の障害、そして最終的には器官不全をもたらす程度まで、組織におけるコラーゲン、ラミニン、フィブロネクチンおよびプロテオグリカンを含む細胞外マトリックス成分の沈着が増加することを意味する。細胞外マトリックスは、タンパク質、プロテオグリカン、糖タンパク質、及びコラーゲンの混合物が、複雑な上部構造に組み立てられたものである。

【0050】

さまざまな線維性状態は、細胞外マトリックスの過剰蓄積を特徴としている。そのような状態には、例えば、糸球体腎炎、急性呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、糖尿病性腎臓病などの糖尿病関連病態、腎臓線維症、肺線維症、心筋線維症、心臓瘢痕、梗塞後心筋線維症、肝臓の線維性疾患、肝線維症、肝硬変、線維硬化症、骨髄線維症、および以下に報告するさまざまな種類の癌が含まれるが、これらに限定されない。

【0051】

細胞外マトリックスの過剰蓄積に関連する病状も数多くある。そのような状態には、例えば、心筋梗塞後、左心室肥大、肺線維症、静脈閉塞性疾患、脊髄損傷後、網膜および緑内障の手術後、血管形成術後の再狭窄および腎間質性線維症、動静脈移植片不全、動脈硬化、並びに、ケロイド瘢痕、肥大性瘢痕、および怪我、火傷または手術に起因する瘢痕などの過度の瘢痕が含まれるが、これらに限定されない。

【0052】

肝臓では、ほとんどすべての病気が線維芽細胞の活性化とマトリックスの産生につながる。次に、このマトリックスは細胞の再生を防ぎ、マイクロアーキテクチャを破壊して、機能の低下と肝不全に特徴的な門脈圧の上昇の症状を引き起こす。肺では、マトリックスの蓄積が酸素と二酸化炭素の適切な交換を妨げ、慢性呼吸不全を引き起こし、最も重症の場合は窒息を引き起こす。心臓では、虚血性発作後または心筋症の状況で起こるリモデリングは、心筋の収縮に寄与することができないマトリックスからなる瘢痕の発生につながり、重度の形態では、収縮する代わりに拡大するため、心不全につながる。糖尿病性腎症では、糸球体と呼ばれる機能単位に細胞外マトリックスが蓄積すると、同様に腎機能が低下する。

【0053】

「癌」という用語は、器官機能を破壊するか、または周囲の組織に侵入し、新しい身体部位に転移する傾向がある退形成細胞の増殖を特徴とする様々な悪性新生物のいずれかを指す。当技術分野では、癌の進行は、細胞外マトリックス成分の過剰な蓄積および細胞外マトリックス組成の変化に関連していることが知られている。本発明を使用する治療に適した異なる種類の癌の例には、乳癌、前立腺癌、子宮癌、膵臓癌または結腸癌、皮膚癌、リンパ腫および白血病などの血液細胞癌、多形性神経膠芽細胞腫、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫などの中枢神経系の癌が含まれるが、これらに限定されない。

【0054】

本明細書で使用される場合、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする好ましい線維性状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、虚血性心疾患、心不全、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。

【0055】

当技術分野から、多くのサイトカインが線維化プロセスに関与していることが知られている。ＴＧＦβは、線維症および瘢痕組織の重要なメディエーターと見なされており、癌でもほぼ普遍的に見られ、癌の成長と進行への関与を示唆している。ＴＧＦβの線維形成作用は、マトリックスタンパク質合成の同時刺激、マトリックス分解の阻害、および代謝回転から生じる。線維性疾患では、ＴＧＦβの過剰産生は細胞外マトリックスの過剰な蓄積をもたらし、組織の線維化と最終的には器官不全を引き起こす。ＴＧＦβの過剰産生による過剰な細胞外マトリックスの蓄積に関連する線維性状態は、例えば、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、さまざまな種類の癌である。

【0056】

抗体などの薬剤でＴＧＦβの作用を遮断すると、さまざまな組織の線維症に治療効果があり、ＴＧＦβの過剰産生を妨害することがわかっている。本明細書で使用される場合、「ＴＧＦβの阻害」は、ＴＧＦβ活性または過剰産生のメカニズムに関係なく、細胞外マトリックス蓄積の過剰産生および過剰蓄積をもたらすＴＧＦβ産生の阻害、ならびに例えば細胞外マトリックスの蓄積の過剰沈着を引き起こすＴＧＦβ活性の阻害を含む。この阻害は、例えばＴＧＦβまたはその受容体に結合することによって直接引き起こされるか、または例えばインテグリン経路などのＴＧＦβ産生をもたらす経路を阻害することによって間接的に引き起こされ得る。阻害は、阻害の正確なメカニズムに関係なく、ＴＧＦβの細胞外マトリックス産生活性の低下を引き起こす。

【0057】

他のサイトカインに関連する、またはいかなるサイトカインにも関連しない他のメカニズムによる細胞外マトリックス産生の減少も可能である。組織線維症を効率的に治療するための治療薬としての新規ペプチドを見つける試みにおいて、本発明者らは、配列Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（ＧＬＯＧＥ）およびＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（ＧＬＮＧＥ）を持つペプチドの活性をＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（ＧＬＱＧＥ）と比較した。ＧＬＮＧＥはＲ１Ｒ２に含まれる短い配列であり、コラーゲンの蓄積を減少させることがわかっている。ＧＬＯＧＥは、コラーゲン結合インテグリンに結合する配列の一部であることが知られている配列である。

【0058】

肝線維症の動物モデルは、肝線維症の根底にあるメカニズムとその進行に対するさまざまな薬剤の効果を研究するために広く使用されている。肝線維症は、多様な代謝、ウイルス、および毒性の刺激に対する肝臓への急性または慢性の損傷に特徴的である。ヒアルロン酸、ラミニン、およびコラーゲンを含む細胞外マトリックス蓄積タンパク質の過剰な沈着は、肝星細胞（ＨＳＣ）の活性化とともに線維形成中に発生する。活性化されたＨＳＣは、細胞外マトリックスの蓄積につながるコラーゲン産生を誘導するトランスフォーミング増殖因子ＴＧＦβを産生し、メタロプロテイナーゼの組織阻害剤も上方制御する。ＣＣｌ_４は、急性肝障害および肝線維症を引き起こす毒性を特徴とする実験用試薬であり、肝臓関連の研究で広く使用されている。ＣＣｌ_４の腹腔内投与が肝臓の損傷を誘発し、同時にＴＧＦβの産生および放出を誘発し、それが次に肝臓のＩ、ＩＩＩおよびＩＶ型コラーゲンのｍＲＮＡおよびタンパク質の合成を増強することは、最先端技術においてよく知られている。したがって、ＴＧＦβのインビボ中和はコラーゲンｍＲＮＡを低減することがわかっている。

【0059】

マウスのＣＣｌ_４誘発性肝線維症で実施された実験（実施例２、図１および実施例３、図２）は、配列Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２およびＡｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕの直鎖ペプチドが、コラーゲン沈着を抑制することができることを示した。驚くべきことに、Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２（直鎖ＧＬＱＧＥ－ＮＨ_２）およびＡｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（直鎖Ａｃ－ＧＬＱＧＥ）の阻害活性は、対応するアセチル化またはアミド化された形態のコントロールＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（直鎖ＧＬＯＧＥ）およびＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（直鎖ＧＬＮＧＥ）と比較して強かった。

【0060】

この発見は、直鎖配列Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２（直鎖ＧＬＱＧＥ－ＮＨ_２）がマウス肝細胞における刺激されていないＴＧＦβ発現を効率的に阻害する（データは示していない）一方で、２つのコントロールＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２（ＧＬＮＧＥ－ＮＨ_２）およびＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２（ＧＬＯＧＥ－ＮＨ_２）の直鎖配列は効果がなかったという観察によって裏付けられている。

【0061】

さらに、環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥ）は、直鎖Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２またはＡｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕに比べて、マウスの化学的に誘発された慢性肝障害におけるコラーゲンの蓄積（図１）に対して大きな阻害効果があった。直鎖ペプチドと同様に、環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＮＧＥ）およびＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＯＧＥ）はコラーゲンの蓄積を阻害できなかった。

【0062】

したがって、直鎖および環状の両方の形態の配列Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕを有するペプチドは、Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－ＧｌｕおよびＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ配列の両方よりも、化学的に誘発された肝臓損傷におけるコラーゲン蓄積を阻害する能力が高く、線維症の進行を阻害するための治療薬として使用できると思われる。

【0063】

特に、環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－ＧｌｕとＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（図２）はどちらもコラーゲン蓄積に対して強い阻害効果を示したため、治療薬として特に興味深いと考えられている。確かに、環状ペプチドは、アミノ末端とカルボキシル末端の両方がないためにエキソペプチダーゼによる加水分解に耐性があり、直鎖ペプチドよりも構造の柔軟性が低いため、エンドペプチダーゼにも耐性があるという利点がある。特に、環状ペプチドは、その構造的剛性のために、受容体アゴニストまたはアンタゴニストとして非常にうまく機能する。さらに、抗体などの小分子と比較して、分子のサイズはより小さいがより選択的であることができ、したがってより有利であることができる。環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕは、肺線維症の実験モデルでコラーゲンの蓄積を減少させることもでき（図４）、このペプチドがマトリックスの蓄積を減少させる能力を確認し、細胞外マトリックス量の増加に関連する他の疾患に効果的であることを示唆している。

【0064】

したがって、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を提供する。特定の実施形態において、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＡｃ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであるペプチド（配列番号３）、および／またはその薬学的に許容される塩を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２であるペプチド（配列番号４）、および／またはその薬学的に許容される塩を提供する。好ましい態様では、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＧｌｕがＧｌｙに結合して環状ペプチド（配列番号５）：

【0065】

【化13】

【0066】

【化14】

を形成するペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0067】

本明細書に開示される環状ペプチドはまた、様々な種類の癌の増殖を防ぐことができた。実際、環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（ＨＣｌ塩）は、マウスの黒色腫の癌のサイズを大幅に減少させることができた（図３）。さらに、環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（ＨＣｌ塩）は、マウスの乳癌の増殖を抑えることができた（図５）。

【0068】

本発明の好ましい実施形態は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を提供し、該状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。特定の実施形態において、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を提供し、該状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。好ましい実施形態において、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＡｃ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであるペプチド（配列番号３）、および／またはその薬学的に許容される塩を提供し、該状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。好ましい実施形態において、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２であるペプチド（配列番号４）、および／またはその薬学的に許容される塩を提供し、該状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。好ましい態様では、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＧｌｕがＧｌｙに結合して環状ペプチド（配列番号５）：

【0069】

【化15】

を形成するペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を提供し、該状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。より好ましい態様では、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療に使用するための、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＰｒｏがＧｌｕに結合して環状ペプチド（配列番号６）：

【0070】

【化16】

【0071】

本明細書に開示されるペプチドまたは医薬組成物は、ラット、マウス、イヌ、ウシ、ウマ、サル、およびヒトを含む哺乳動物などの被験者に様々な経路で投与されてよい。
本明細書に開示されるペプチドは、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの生理学的に適合性のある医薬担体に懸濁して、被験者に投与するための生理学的に許容される水性医薬組成物を形成することができる。非経口媒体には、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、ならびに乳酸化リンガー溶液が含まれる。抗菌剤などの他の物質を必要に応じて加えることができる。

【0072】

本明細書に開示されるペプチドの投与方法は、治療薬について当技術分野で知られているものであり、例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、および皮下および皮内を含む表皮、経口、または例えばエアロゾル懸濁液の吸入を使用した鼻腔内投与によって、および被験者の筋肉または他の組織に移植することによって、粘膜表面に適用されることができる。坐剤および局所製剤もまた考えられる。

【0073】

一般に、眼、頬、経皮、直腸、経鼻吸入または経口吸入を介して本発明のペプチドの吸収を増加させることが望まれる場合、特定の浸透促進剤を使用する。これらの促進剤には、ＥＤＴＡ、クエン酸、コラーゲンのＮ－アシル誘導体、エナミン（β－ジケトンのＮ－アミノ－Ｎ－アシル誘導体）などのキレート剤が含まれ得る。浸透を高めるために界面活性剤も使用できる。界面活性剤には、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテルおよびポリオキシエチレン－２０－セチルエーテルが含まれる。胆汁酸塩および誘導体はまた、ペプチドの浸透を増強することが知られており、これらには、デオキシコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロジヒドロフシジン酸ナトリウムおよびグリコジヒドロフシジン酸ナトリウムが含まれる。本発明の組成物に有用なさらに別の種類の浸透促進剤には、ケラチン脂肪酸、ならびにオレイン酸、カプリル酸、カプリン酸、アシルカルニチン、アシルコリンならびにモノおよびジグリセリドなどの誘導体が含まれる。非界面活性剤は、浸透促進剤としても有用である。浸透促進剤は、化合物および浸透促進剤が、例えば経鼻投与によって投与することができる薬学的に許容される滅菌溶液中にある、本発明の化合物を含む溶液中で使用できる。あるいは、浸透促進剤は、空気の流れの中に粒子状物質を浮遊させ、患者に浮遊粒子を吸入させることによってエアロゾルとして投与することができる動力製剤に含めることができる。このような動力製剤は、ドライパウダー吸入器によって投与可能である。

【0074】

したがって、本発明のペプチド化合物は、ヒトの医療従事者および獣医によっても投与され得る。
本発明の別の関連する態様は、癌に対する、そして転移の確立の制御のための従来の薬物療法化学療法などの他の療法と組み合わせて、本発明の化合物を投与するための方法である。本発明のペプチドの投与は、通常、化学療法の前、最中、または後に行われる。

【0075】

「治療有効量」という用語は、直鎖または環状ペプチドの量、ならびにそれを必要とする被験者において治療効果を達成可能な本明細書に開示される医薬組成物の量を指す。例えば、治療有効量の環状ペプチドまたは環状ペプチドの組み合わせとは、影響を受けやすい組織および器官における細胞外マトリックス、または１つまたは複数の関連する症状の過剰蓄積を防止または低減することができる量である。

【0076】

当業者は、効力、したがって「治療上有効な」量が本発明の化合物について変化し得ることを認識するであろう。しかしながら、本明細書によって示されるように、当業者は、本発明の候補ペプチドの効力を容易に評価することができる。効力は、ＴＧＦβ産生の阻害、コラーゲン蓄積、ビトロネクチン、フィブロネクチンおよび／またはコラーゲンへの細胞接着の阻害、および同様のアッセイを含む様々な手段によって測定可能である。

【0077】

本発明のペプチドまたは医薬組成物の治療有効量は、典型的には、生理学的に許容される組成物で投与された場合、約０．１ナノグラム（ｎｇ）／ミリリットル（ｍｌ）から約２００μｇ／ｍｌ、好ましくは、約１ｎｇ／ｍｌから約１００μｇ／ｍｌの血漿濃度を達成するのに十分なペプチドの量である。体重あたりの投与量は、１日または数日間、１日１回以上の投与で、１０ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは２０ｍｇ／ｋｇから８０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは２０ｍｇ／ｋｇから６０ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは２０ｍｇ／ｋｇから４０ｍｇ／ｋｇまで変化し得る。

【0078】

本発明のペプチドまたは医薬組成物の好ましい投与計画および投与様式は、細胞外マトリックスの蓄積の重症度、および結果として生じる組織または器官機能の障害、被験者の健康、以前の病歴、年齢、体重、身長、性別、治療への反応、および治療を行う医師の判断に応じて変化し得る。好ましい投与計画および投与様式は、当業者によって適切に選択され得る。最初に、そのようなパラメータは、安全性と有効性について動物モデルで、および候補治療製剤の臨床試験中にヒト被験者で適切な試験を用いて、熟練した施術者によって容易に決定される。ヒトの線維性状態の適切な動物モデルが当技術分野で知られている。

【0079】

投与後、本発明の方法を使用する治療の有効性は、蓄積された細胞外マトリックスの量を検出するための過剰なマトリックス蓄積による腎臓、肺または肝臓または別の組織標的の生検を含む様々な方法によって評価される。細胞外マトリックスの有意な過剰蓄積の欠如、または組織または器官における細胞外マトリックスの量または拡大の減少は、被験者における望ましい治療反応を示す。治療反応を検出するために非侵襲的手順を使用するのが好ましい。たとえば、ＴＧＦβ活性の変化は、治療用化合物による治療の前後の血漿サンプルで測定でき、生検組織を使用して、ＲＮＡ分離に使用される病変組織を個別に分離できる。次に、ＴＧＦβのｍＲＮＡ転写物、および／または細胞外マトリックス成分（コラーゲンなど）が、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して決定される。

【0080】

「投与する」または「投与」には、例えば、静脈内、筋肉内、皮内または皮下経路、または、吸入用の点鼻薬またはエアロゾルとして、または摂取可能な溶液、カプセルまたは錠剤としての粘膜経路などの注射可能な形態による送達が含まれるが、これらに限定されない。

【0081】

「細胞外マトリックスの過剰蓄積を低減する」とは、例えば組織、器官、または創傷部位での細胞外マトリックスの過剰蓄積を防ぎ、細胞外マトリックスのさらなる沈着を防ぎ、および／またはすでに存在する過剰蓄積マトリックスの量を減らして、組織または器官の機能または外観を維持または復元することを意味する。

【0082】

さらに、好ましい実施形態によれば、本発明はまた、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法を提供し、該方法は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択される治療有効量のペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少する。

【0083】

さらにより好ましい実施形態によれば、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法を提供し、該方法は、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択される治療有効量のペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が防止されるまたは治療時のレベルから減少し、該線維性状態が、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。

【0084】

本発明の別の実施形態は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法に関し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択される治療有効量のペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少する。

【0085】

本発明の別の好ましい実施形態は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法に関し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択される治療有効量のペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積は、治療時のレベルから減少し、該線維性状態が、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。

【0086】

本発明のさらなる実施形態は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法に関し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＡｃ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕである治療有効量のペプチド（配列番号３）、および／またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少する。
本発明のさらに好ましい実施形態は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法に関し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＡｃ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕである治療有効量のペプチド（配列番号３）、および／またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少し、該線維性状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。

【0087】

本発明のさらなる実施形態は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法に関し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２である治療有効量のペプチド（配列番号４）、および／またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少する。
本発明のさらに好ましい実施形態は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法に関し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２である治療有効量のペプチド（配列番号４）、および／またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少し、該線維性状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。

【0088】

本発明のさらなる実施形態は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法に関し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＧｌｕがＧｌｙに結合して環状ペプチド（配列番号５）：

【0089】

【化17】

を形成する治療有効量のペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少する。

【0090】

本発明のさらに好ましい実施形態は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法に関し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＧｌｕがＧｌｙに結合して環状ペプチド（配列番号５）：

【0091】

【化18】

を形成する治療有効量のペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少し、該線維性状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。

【0092】

本発明のさらなる実施形態は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法に関し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＰｒｏがＧｌｕに結合して環状ペプチド（配列番号６）：

【0093】

【化19】

【0094】

本発明のさらに好ましい実施形態は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法に関し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＸｂがＧｌｕであり、ＰｒｏがＧｌｕに結合して環状ペプチド（配列番号６）：

【0095】

【化20】

【0096】

【0097】

【0098】

さらに好ましい実施形態において、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法を提供し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＡｃ－Ｇｌｙで、ＸｂがＧｌｕであるペプチド（配列番号３）、および／またはその薬学的に許容される塩を含む治療有効量の医薬組成物を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少する。

【0099】

【0100】

さらに好ましい実施形態において、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法を提供し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙ、ＸｂがＧｌｕであり、ＧｌｕがＧｌｙに結合して環状ペプチド（配列番号５）：

【0101】

【化21】

を形成するペプチドおよび／またはその薬学的に許容される塩を含む治療有効量の医薬組成物を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少する。

【0102】

さらに好ましい実施形態において、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法を提供し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであり、ＰｒｏがＧｌｕに結合して環状ペプチド（配列番号６）：

【0103】

【化22】

を形成するペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を含む治療有効量の医薬組成物を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少する。

【0104】

別の実施形態において、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法を提供し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＰｒｏ－Ｇｌｙ、ＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を含む治療有効量の医薬組成物を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少し、該線維性状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。

【0105】

別の好ましい実施形態において、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法を提供し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂ（配列番号１）からなり、ＸａがＧｌｙおよびＡｃ－Ｇｌｙから選択され、ＸｂがＧｌｕおよびＧｌｕ－ＮＨ_２から選択されるペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を含む治療有効量の医薬組成物を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少し、該線維性状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。

【0106】

さらに好ましい実施形態において、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法を提供し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＡｃ－Ｇｌｙであり、ＸｂがＧｌｕであるペプチド（配列番号３）、および／またはその薬学的に許容される塩を含む治療有効量の医薬組成物を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少し、該線維性状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。

【0107】

さらに好ましい実施形態において、本発明は、組織および／または器官における細胞外マトリックスの過剰な蓄積を特徴とする線維性状態の治療のための方法を提供し、該方法が、一般配列Ｘａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｘｂからなり、ＸａがＧｌｙであり、ＸｂがＧｌｕ－ＮＨ_２であるペプチド（配列番号４）、および／またはその薬学的に許容される塩を含む治療有効量の医薬組成物を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少し、該線維性状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。

【0108】

【0109】

【化23】

を形成するペプチド、および／またはその薬学的に許容される塩を含む治療有効量の医薬組成物を患者に投与することを含み、該組織および／または器官における細胞外マトリックスの蓄積が、治療時のレベルから減少し、該線維性状態は、肝線維症、肝硬変、肺線維症、慢性呼吸不全、心筋線維症、心不全、虚血性心疾患、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、骨髄線維症、乳癌、子宮癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸癌、皮膚癌、血液細胞癌、中枢神経系の癌、子宮筋腫、線維腫、線維腺腫および線維肉腫からなる群から選択される。

【0110】

【0111】

【化24】

【図面の簡単な説明】

【0112】

【図1】プロリン含有環状およびアミド化直鎖ペプチドによる線維症進行の防止。肝線維症を誘発するために、マウスにＣＣｌ_４を６週間注射した。３２日目から、マウスは、合計１０日間、０．９％のＮａＣｌ中２５ｍｇ／ｋｇ／マウス／日のペプチドの腹腔内注射を毎日受けた。ＣＣｌ_４で処置したマウスにもＮａＣｌ０.９％を投与した。健康なコントロール群（ＣＴ）は０.９％のＮａＣｌしか投与されなかった。２回の実験でＮ＝４／１０／８／５／１０／８／１１／７。次のペプチド：環状Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＰＧＬＱＧＥ）をＣＣｌ_４処理マウスで試験し、２つのコントロール：環状Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＣＴ１＋Ｐ：環状ＰＧＬＮＧＥ）および環状Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＣＴ２＋Ｐ：環状ＰＧＬＯＧＥ）と比較した。直鎖Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２（直鎖ＧＬＱＧＥ－ＮＨ_２）も試験し、２つのコントロール：直鎖Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２（直鎖ＣＴ１－ＮＨ_２：直鎖ＧＬＮＧＥ－ＮＨ_２）および直鎖Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２（直鎖ＣＴ２－ＮＨ_２：直鎖ＧＬＯＧＥ－ＮＨ_２）と比較した。＊ｐ＜０.０５。ｔ検定によって評価した。データは平均±ＳＥＭとして表す。

【図2】環状ペプチドおよびアセチル化直鎖ペプチドによる線維症進行の防止。肝線維症を誘発するために、マウスにＣＣｌ_４を６週間注射した。３２日目から、マウスは、合計１０日間、０．９％のＮａＣｌ中２５ｍｇ／ｋｇ／マウス／日のペプチドの腹腔内注射を毎日受けた。ＣＣｌ_４で処置したマウスもＮａＣｌ０.９％を投与された。健康なコントロール群（ＣＴ）は０.９％のＮａＣｌだけ投与された。２回の実験でＮ＝５／１８／９／９／６／５／４／４。次のペプチド：環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥ）をＣＣｌ_４処理マウスで試験し、２つのコントロール：環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＣＴ１：環状ＧＬＮＧＥ）および環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＣＴ２：環状ＧＬＯＧＥ）と比較した。直鎖Ａｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（直鎖Ａｃ－ＧＬＱＧＥ）も試験し、２つのコントロール：直鎖Ａｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（直鎖Ａｃ－ＣＴ１：直鎖Ａｃ－ＧＬＮＧＥ）および直鎖Ａｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（直鎖Ａｃ－ＣＴ２：直鎖Ａｃ－ＧＬＯＧＥ）と比較した。＊ｐ＜０.０５、＊＊ｐ＜０.００５。ｔ検定によって評価した。データは平均±ＳＥＭとして表す。

【図3】塩酸塩（環状ＧＬＱＧＥＨＣl塩）の形態の環状ＧＬＱＧＥによる癌増殖の防止。Ｂ１６メラノーマ癌細胞をマウスに皮下注射した。７日目に、１ｍｇのペプチドまたは０．９％のＮａＣｌの皮下注射を行った。１２日目に、マウスを安楽死させ、腫瘍を取り除き、秤量した。Ｎ＝１１／１１マウス。データは平均±ＳＥＭとして表す。

【図4】環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（酢酸塩）による線維症進行の防止。０日目に気管内ブレオマイシン注入を５０μｌに０.００５単位の用量で使用して、６週齢の雄Ｃ５７ｂｌ／６マウスに肺線維症を誘発した。１１日目から、合計１０日間、環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥ）を０．９％のＮａＣｌ中１ｍｇ／マウス／日の用量で皮下注射した。コントロール群は、０．９％のＮａＣｌの注射のみを毎日受けた。４つのグループの動物の数は３回の実験でＮ＝１４／１０／１０／９であった。環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥ）（酢酸塩）を試験し、環状Ａｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＮＧＥ）（酢酸塩）および環状Ａｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＯＧＥ）（酢酸塩）と比較した、＊ｐ＜０.０５。ｔ検定によって評価した。データは平均±ＳＥＭとして表す。

【図5】塩酸塩（環状ＧＬＱＧＥＨＣｌ塩）の形態の環状ＧＬＱＧＥによる乳癌増殖の防止。乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１の細胞をマウスの脛骨内に注射した。３０日目から、０．１ｍｇ／マウス／日の環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥＨＣｌ塩）を１０日間、または０．９％のＮａＣｌを皮下注射した。４０日目に、腫瘍のサイズを生物発光イメージングで評価した（生物発光イメージングは、「ＩＶＩＳＬｕｍｉｎａＩＩ」イメージングシステムを使用して、Ｄ－ルシフェリン注射（１５０ｍｇ／ｋｇ）の５分後に光子シグナルを検出することによって実行した。その結果得られた画像は、ソフトウェア「ＬｉｖｉｎｇＩｍａｇｅ」を使用して分析した）。ＲＬＵ＝相対光単位。各グループの動物の数は、２回の実験でＮ＝１４／７マウスだった。ｔ検定で評価した場合、＊ｐ＜０.０５。データは平均±ＳＥＭとして表す。

【発明を実施するための形態】

【0113】

以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含まれている。以下の実施例に開示される技術は、発明者によって本発明の実施において良好に機能することが確認された技術を表し、したがって、その実施のための好ましい様式を構成すると見なすことができることを当業者は理解すべきである。しかしながら、当業者は、本開示に照らして、開示される特定の実施形態において多くの変更を行うことができ、それでも本発明の精神および範囲から逸脱することなく同様の結果を得ることができることを理解すべきである。
本発明の様々な態様のさらなる修正および代替実施形態は、本説明を考慮すれば当業者には明らかであろう。したがって、本説明は、例示としてのみ解釈されるべきであり、当業者に本発明を実施する一般的な方法を教示することを目的としている。本明細書に示され、説明される本発明の形態は、実施形態の実施例としてとられるべきであることが理解されるべきである。要素および材料は本明細書に図示および記載されたものを置き換えて使用することができ、部品およびプロセスは逆にすることができ、本発明の特定の特徴は独立して利用することができることが、本発明のこの説明の利益を得た後、当業者には明らかになるであろう。以下の特許請求の範囲に記載されているように、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本明細書に記載されている要素に変更を加えることができる。

【実施例】

【0114】

実施例１：ペプチド合成
ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（ＧＬＱＧＥ）は、直鎖形態でＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２（直鎖ＧＬＱＧＥ－ＮＨ_２とも呼ばれる）として、直鎖形態で酢酸塩-Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（直鎖Ａｃ－ＧＬＱＧＥとも呼ばれる）として、および環状形態で環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（Ｃ末端アミドおよびＮ末端酢酸塩を含まない環状ＧＬＱＧＥとも呼ばれる）として合成した。ペプチドＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＰＧＬＱＧＥとも呼ばれる）は、環状形態でのみ合成した。コントロールペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（直鎖ＣＴ１（直鎖ＧＬＮＧＥ）とも呼ばれる）とＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（直鎖ＣＴ２（直鎖ＧＬＯＧＥ）とも呼ばれる）は、共にＣ末端アミド化（ＧＬＮＧＥ－ＮＨ_２およびＧＬＯＧＥ－ＮＨ_２）およびＮ末端アセチル化（Ａｃ-ＧＬＮＧＥおよびＡｃ－ＧＬＯＧＥ）を有する直鎖形態で、およびプロリン（環状ＧＬＮＧＥまたは環状ＰＧＬＮＧＥ、ならびに環状ＧＬＯＧＥまたは環状ＰＧＬＯＧＥ）を含有するおよび含有しない環状形態で合成した。本願で使用されるすべてのペプチドの名称を表１に示す。

【0115】

直鎖ペプチドは、ＡＢＩ４３３ペプチドシンセサイザー（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で、Ｒｉｎｋアミド樹脂（ＭｅｒｃｋＫＧａＡ）に標準Ｆｍｏｃ（Ｎ－（９－フルオレニル）メトキシカルボニル）化学を使用して合成した。ペプチド精製はＲＰ-ＨＰＬＣによる。ペプチドの純度と同一性は、ＲＰ－ＨＰＬＣおよびＥＳＩ－ＴＯＦ質量分析によって検証した。環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕは、ＧｌｕがＧｌｙに直接結合し（頭から尾への環化）Ｈ_２Ｏを除去するか、プロリンの存在下で合成した。環にプロリンを含む環状ペプチドは、ＴＣＰ樹脂（ＩｎｔａｖｉｓＢｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＡＧ）に完全に保護されたペプチドとして合成し、プロピルホスホン酸無水物を使用して環化した。プロリンを含有しない環状ペプチドは、液相合成を使用して合成した。すべての基が、Ｎ末端アミノ基とＣ末端カルボキシル基のみを残して、保護基によって保護されていた。液相で環が形成された後、保護基を除去した。この場合、ＴＣＰ樹脂、およびプロピルホスホン酸無水物は使用されなかった。

【0116】

表１は、本発明で使用されるペプチドおよび配列表中の対応する配列番号を示す。

【0117】

【表1】

【0118】

直鎖ＧＬＱＧＥ（Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ）

【0119】

【化25】

【0120】

直鎖Ａｃ－ＧＬＱＧＥ（Ａｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ）

【0121】

【化26】

【0122】

直鎖ＧＬＱＧＥ－ＮＨ_２（Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２）

【0123】

【化27】

【0124】

環状ＧＬＱＧＥ

【0125】

【化28】

【0126】

環状ＰＧＬＱＧＥ

【0127】

【化29】

【0128】

直鎖ＣＴ１（Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ）

【0129】

【化30】

【0130】

直鎖ＣＴ１－ＮＨ_２（Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２）

【0131】

【化31】

【0132】

直鎖Ａｃ－ＣＴ１（Ａｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ）

【0133】

【化32】

【0134】

環状ＣＴ１（Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ）

【0135】

【化33】

【0136】

環状ＣＴ１＋Ｐ（Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ）

【0137】

【化34】

【0138】

直鎖ＣＴ２（Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ）

【0139】

【化35】

【0140】

直鎖ＣＴ２－ＮＨ_２（Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２）

【0141】

【化36】

【0142】

直鎖Ａｃ－ＣＴ２（Ａｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ）

【0143】

【化37】

【0144】

環状ＣＴ２（Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ）

【0145】

【化38】

【0146】

環状ＣＴ２＋Ｐ（Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ）

【0147】

【化39】

【0148】

実施例２：マウスにおける化学的に誘発された肝線維症に対するプロリン含有環状ペプチドおよびアミド化直鎖ペプチドの効果。
肝線維症を誘発するために、マウスにＣＣｌ_４を６週間注射した。３２日目から、マウスは、合計１０日間、ＮａＣｌ０．９％で希釈された２５ｍｇ／ｋｇ／マウス／日の最終用量でペプチドの腹腔内注射を毎日受けた。これらの実験では、次のペプチドを試験した：環状ペプチドＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ、環状ペプチドＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ、環状ペプチドＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ、直鎖ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２、直鎖ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２、直鎖ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２。

【0149】

結果は、ＣＣｌ_４による処置が肝臓でのコラーゲン産生（マトリックス蓄積のマーカー）を有意に誘導し、環状ペプチドＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕがコラーゲン蓄積を有意に減少させることができることを示した。また、直鎖ペプチドＧＬＱＧＥ－ＮＨ_２は、ＣＣｌ_４によって誘発されるコラーゲンの蓄積を大幅に減らすことができた。対照的に、コントロールペプチド（Ｐｒｏを含む：Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－ＧｌｕまたはＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ）の環状形態も、コントロールペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２およびＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－ＮＨ_２の直鎖形態も、肝臓のコラーゲン量を減らすことができなかった。したがって、直鎖および環状の両方の配列Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕのペプチドは、細胞外マトリックスの過剰な蓄積を阻害することができ、線維症の進行を防ぐのに役立つ可能性がある（図１）。

【0150】

実施例３：マウスにおいて化学的に誘発された肝線維症に対する環状ペプチド（プロリンなし）およびアセチル化直鎖ペプチドの効果。
肝線維症を誘発するために、マウスにＣＣｌ_４を６週間注射した。３２日目から、マウスは、合計１０日間、ＮａＣｌ０．９％で希釈された２５ｍｇ／ｋｇ／マウス／日の最終用量でペプチドの腹腔内注射を毎日受けた。これらの実験では、次のペプチドを試験した：環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ、環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ、環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ、直鎖ペプチドＡｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ、直鎖ペプチドＡｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ、直鎖ペプチドＡｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ。

【0151】

結果は、ＣＣｌ_４による処置が肝臓でのコラーゲン産生（マトリックス蓄積のマーカー）を有意に誘導し、環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕがコラーゲン蓄積を有意に減少させることができることを示した。また、直鎖ペプチドＡｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕは、ＣＣｌ_４によって誘発されるコラーゲンの蓄積を大幅に減らすことができた。対照的に、ペプチドＡｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－ＧｌｕおよびＡｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕの環状形態も直鎖形態も、肝臓のコラーゲン量を減らすことができなかった。したがって、直鎖および環状の両方の形態の配列Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕのペプチドは、細胞外マトリックスの過剰な蓄積を阻害することができ、線維症の進行を防ぐのに役立ち得る。

【0152】

さらに、環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕは、プロリン含有環状ペプチドＰｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕと比較してもコラーゲン蓄積を減らすのにより効率的だった（図１と図２のＹ軸の値を比較されたい、その差は統計的に有意である、ｐ＜０.００１）。

【0153】

実施例４：マウスの癌に対する環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥ）の塩酸塩の効果。
塩酸塩の形態の環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥ）について、マウスの黒色腫モデルにおける癌増殖の防止能力を試験した。Ｂ１６黒色腫癌細胞（１０^６細胞）をマウスに皮下注射した。７日目に、１ｍｇの環状ＧＬＱＧＥペプチドまたは０．９％のＮａＣｌ（コントロールマウス）の皮下注射を行った。１２日目に、マウスを安楽死させ、腫瘍を取り除き、体重を測定した。Ｎ＝１１／１１マウス。結果を平均±ＳＥＭとして図３に示す。コントロールおよび処置マウスにおける腫瘍重量の分析は、環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（ＨＣｌ塩）がコントロールマウスと比較して癌サイズを約７２％有意に減少させることができることを示した。したがって、環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕは、癌の治療に使用するための有望な治療薬である。

【0154】

実施例５：マウスにおいて化学的に誘発された肺線維症に対する酢酸塩の形態の環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥ）の効果。
環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥ酢酸塩）について、マウスの肺線維症の防止能力について試験した。０日目に気管内ブレオマイシン注入を５０μｌの０．９％のＮａＣｌに０.００５単位の用量で使用して、６週齢の雄Ｃ５７ｂｌ／６マウスに肺線維症を誘発した。１１日目から、環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥ）またはコントロール環状Ａｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＮＧＥ）またはコントロール環状Ｇｌｙ－Ｈｙｐ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥ）（３つすべてが酢酸塩の形態）を１ｍｇ／マウス／日の用量で１０日間皮下注射した。結果は、環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（酢酸塩）の投与が、ブレオマイシンのみ（ｐ＜０．０５）またはコントロールペプチドである環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＮＧＥ酢酸塩）または環状Ｇｌｙ－Ｈｙｐ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥ酢酸塩）を投与されたマウスと比較して、肺のコラーゲンの総量を有意に減少させることを示した（図４）。

【0155】

実施例６：マウスの乳癌モデルに対する環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（ＨＣl塩）の効果。
環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥ）の塩酸塩について、マウスにおける乳癌防止能力を試験した。乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１の細胞をＣＤ１ヌードマウスの脛骨内に注入することによって、転移性乳癌の骨病変を誘発した。３０日目から、０.１ｍｇの環状ペプチドＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（環状ＧＬＱＧＥＨＣｌ塩）または０．９％のＮａＣｌの皮下注射を１０日間毎日行った。４０日目に、腫瘍のサイズを生物発光イメージングで評価した（生物発光イメージングは、「ＩＶＩＳＬｕｍｉｎａＩＩ」イメージングシステムを使用して、Ｄ－ルシフェリン注射（１５０ｍｇ／ｋｇ）の５分後に光子シグナルを検出することによって実行した。その結果得られた画像は、ソフトウェア「ＬｉｖｉｎｇＩｍａｇｅ」を使用して分析した）。コントロール群と処置群の動物の数は、２回の実験でＮ＝１４／７マウスだった。結果は、環状Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ（ＨＣｌ塩）の投与が、０．９％のＮａＣｌを投与されたマウスと比較して、腫瘍のサイズを有意に（ｐ＜０．０５）減少させることを示した（図５）。

【図1】