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特表2022-543742免疫療法のための融合ポリペプチド

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-10-14

(54)【発明の名称】免疫療法のための融合ポリペプチド

(51)【国際特許分類】

C12N 15/62 20060101AFI20221006BHJP

C07K 19/00 20060101ALI20221006BHJP

C07K 14/705 20060101ALI20221006BHJP

C12N 15/12 20060101ALI20221006BHJP

C12N 15/13 20060101ALI20221006BHJP

C07K 14/725 20060101ALI20221006BHJP

C07K 16/30 20060101ALI20221006BHJP

C07K 16/28 20060101ALI20221006BHJP

C12N 15/63 20060101ALI20221006BHJP

C12N 5/10 20060101ALI20221006BHJP

C12N 5/0783 20100101ALI20221006BHJP

A61K 35/17 20150101ALI20221006BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20221006BHJP

A61P 35/02 20060101ALI20221006BHJP

A61K 47/68 20170101ALI20221006BHJP

A61K 39/395 20060101ALI20221006BHJP

A61P 37/06 20060101ALI20221006BHJP

A61P 31/00 20060101ALI20221006BHJP

A61P 29/00 20060101ALI20221006BHJP

A61P 19/02 20060101ALI20221006BHJP

A61P 3/10 20060101ALI20221006BHJP

A61P 37/02 20060101ALI20221006BHJP

A61P 1/04 20060101ALI20221006BHJP

A61P 17/06 20060101ALI20221006BHJP

A61P 5/14 20060101ALI20221006BHJP

A61P 25/00 20060101ALI20221006BHJP

A61P 11/08 20060101ALI20221006BHJP

A61P 9/00 20060101ALI20221006BHJP

A61P 13/12 20060101ALI20221006BHJP

A61P 7/06 20060101ALI20221006BHJP

A61P 7/00 20060101ALI20221006BHJP

A61P 1/18 20060101ALI20221006BHJP

A61P 21/04 20060101ALI20221006BHJP

A61P 11/00 20060101ALI20221006BHJP

A61P 25/02 20060101ALI20221006BHJP

A61K 45/00 20060101ALI20221006BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20221006BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C07K19/00 ZNA

C07K14/705

C12N15/12

C12N15/13

C07K14/725

C07K16/30

C07K16/28

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12N5/0783

A61K35/17 Z

A61P35/00

A61P35/02

A61K47/68

A61K39/395 N

A61P37/06

A61P31/00

A61P29/00 101

A61P19/02

A61P3/10

A61P37/02

A61P1/04

A61P17/06

A61P5/14

A61P25/00

A61P11/08

A61P9/00

A61P13/12

A61P7/06

A61P7/00

A61P1/18

A61P21/04

A61P11/00

A61P25/02

A61K45/00

A61P43/00 121

A61K39/395 D

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022503794

(86)(22)【出願日】2020-07-20

(85)【翻訳文提出日】2022-03-16

(86)【国際出願番号】 US2020042753

(87)【国際公開番号】W WO2021016174

(87)【国際公開日】2021-01-28

(31)【優先権主張番号】62/876,338

(32)【優先日】2019-07-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】500213834

【氏名又は名称】メモリアルスローンケタリングキャンサーセンター

(71)【出願人】

【識別番号】399026731

【氏名又は名称】スローン－ケタリング・インスティテュート・フォー・キャンサー・リサーチ

(71)【出願人】

【識別番号】522023761

【氏名又は名称】メモリアルホスピタルフォーキャンサーアンドアライドディジージズ

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下夏樹

(72)【発明者】

【氏名】サデライン，ミチェル

(72)【発明者】

【氏名】ドブリン，アントン

(72)【発明者】

【氏名】ハミエ，モハマド

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA94X

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC27

4C076EE59

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZA021

4C084ZA201

4C084ZA361

4C084ZA511

4C084ZA551

4C084ZA591

4C084ZA661

4C084ZA751

4C084ZA811

4C084ZA891

4C084ZA961

4C084ZB071

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZB151

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB311

4C084ZC061

4C084ZC351

4C084ZC751

4C085AA14

4C085BB11

4C085CC23

4C087BB65

4C087NA14

4C087ZA02

4C087ZA20

4C087ZA36

4C087ZA51

4C087ZA55

4C087ZA59

4C087ZA66

4C087ZA75

4C087ZA81

4C087ZA89

4C087ZA96

4C087ZB07

4C087ZB08

4C087ZB15

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZB31

4C087ZC06

4C087ZC35

4C087ZC75

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA42

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

本開示の主題は、腫瘍および病原体抗原に対する免疫応答を増強するための方法および組成物を提供する。本開示の主題は、細胞（例えば、抗原認識受容体を含む免疫応答細胞）において発現させて細胞の活性および／または効率を改善することができる融合ポリペプチドに関する。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン、ならびに共刺激分子の細胞内ドメインを含む。本開示の主題は、免疫療法のための活性および有効性を改善することができる融合ポリペプチドを提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ａ）共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン、ならびに
ｂ）第１の共刺激分子の細胞内ドメイン
を含む融合ポリペプチド。

【請求項2】

前記共刺激リガンドが、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーメンバー、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーメンバー、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の融合ポリペプチド。

【請求項3】

前記ＴＮＦファミリーメンバーが、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ４０Ｌ、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項２に記載の融合ポリペプチド。

【請求項4】

前記Ｉｇスーパーファミリーメンバーが、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬＧ、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項２に記載の融合ポリペプチド。

【請求項5】

前記共刺激リガンドがＣＤ８０である、請求項１、２、および４のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。

【請求項6】

ＣＤ８０の前記細胞外ドメインが、配列番号１に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の融合ポリペプチド。

【請求項7】

ＣＤ８０の前記細胞外ドメインが、配列番号１に記載のアミノ酸配列またはその機能的断片を含むかまたはそれからなる、請求項５または６に記載の融合ポリペプチド。

【請求項8】

ＣＤ８０の前記膜貫通ドメインが、配列番号２に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５～７のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。

【請求項9】

ＣＤ８０の前記膜貫通ドメインが、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むかまたはそれからなる、請求項５～８のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。

【請求項10】

前記第１の共刺激分子が、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ－１０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１～９のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。

【請求項11】

前記第１の共刺激分子が４－１ＢＢである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。

【請求項12】

４－１ＢＢの前記細胞内ドメインが、配列番号３に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の融合ポリペプチド。

【請求項13】

４－１ＢＢの前記細胞内ドメインが、配列番号３に記載のアミノ酸配列またはその機能的断片を含むかまたはそれからなる、請求項１１または１２に記載の融合ポリペプチド。

【請求項14】

前記共刺激リガンドがＣＤ８０であり、前記第１の共刺激分子が、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ－１０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１、２、および４～１３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。

【請求項15】

前記共刺激リガンドがＣＤ８０であり、前記第１の共刺激分子が４－１ＢＢである、請求項１４に記載の融合ポリペプチド。

【請求項16】

配列番号４に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の融合ポリペプチド。

【請求項17】

配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項１５または１６に記載の融合ポリペプチド。

【請求項18】

第２の共刺激分子の細胞内ドメインをさらに含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。

【請求項19】

前記第２の共刺激分子が、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ－１０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１８に記載の融合ポリペプチド。

【請求項20】

前記第２の共刺激分子がＣＤ２８である、請求項１８または１９に記載の融合ポリペプチド。

【請求項21】

ＣＤ２８の前記細胞内ドメインが、配列番号５に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載の融合ポリペプチド。

【請求項22】

ＣＤ２８の前記細胞内ドメインが、配列番号５に記載のアミノ酸配列またはその機能的断片を含むかまたはそれからなる、請求項２０または２１に記載の融合ポリペプチド。

【請求項23】

前記共刺激リガンドがＣＤ８０であり、前記第１の共刺激分子が４－１ＢＢであり、前記第２の共刺激分子がＣＤ２８である、請求項１８～２２のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。

【請求項24】

配列番号６に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の融合ポリペプチド。

【請求項25】

配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項２３または２４に記載の融合ポリペプチド。

【請求項26】

抗原認識受容体を含む細胞を刺激することが可能である、請求項１～２５のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。

【請求項27】

抗原認識受容体を含む免疫応答細胞の活性を増強することが可能である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。

【請求項28】

前記活性が、細胞傷害性、細胞増殖、および細胞の存続を含む、請求項２７に記載の融合ポリペプチド。

【請求項29】

前記抗原認識受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはＴＣＲ様融合分子である、請求項２６～２８のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。

【請求項30】

サイトカイン受容体のシグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。

【請求項31】

前記サイトカイン受容体が、ＣＤ１２１ａ、ＣＤｗ１２１ｂ、ＩＬ－１８Ｒａ、ＩＬ１８Ｒｂ、ＣＤ１２２、ＣＤ２５、ＣＤ１３２、ＣＤ１２４、ＣＤ２１３ａ１３、ＣＤ１２７、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ１５Ｒａ、ＣＤｗ１２５、ＣＤｗ１３１、ＣＤ１２６、ＣＤ１３０、ＩＬ１１Ｒａ、Ｃｄ１１４、ＣＤ２１２、ＣＤ４、ＣＤｗ２１７、ＣＤ１１８、およびＣＤｗ１１９からなる群から選択される、請求項３０に記載の融合ポリペプチド。

【請求項32】

請求項１～３１のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドをコードする核酸。

【請求項33】

請求項３２に記載の核酸を含むベクター。

【請求項34】

請求項１～３１のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド、請求項３０に記載の核酸、または請求項３３に記載のベクターを含む細胞。

【請求項35】

抗原に結合する抗原認識受容体をさらに含む、請求項３４に記載の細胞。

【請求項36】

前記抗原認識受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはＴＣＲ様融合分子である、請求項３５に記載の細胞。

【請求項37】

前記抗原が、腫瘍抗原または病原体抗原である、請求項３５に記載の細胞。

【請求項38】

前記抗原が腫瘍抗原である、請求項３７に記載の細胞。

【請求項39】

前記腫瘍抗原が、ＣＤ１９、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ８、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ４４Ｖ６、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染細胞の抗原（例えば、細胞表面抗原）、上皮糖タンパク質－２（ＥＧＰ－２）、上皮糖タンパク質－４０（ＥＧＰ－４０）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、受容体チロシンタンパク質キナーゼＥｒｂ－Ｂ２、３、４（ｅｒｂ－Ｂ２、３、４）、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、胎児型アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）、葉酸受容体－α、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ－２）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、インターロイキン－１３受容体サブユニットアルファ－２（ＩＬ－１３Ｒα２）、κ－軽鎖、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）、ＬｅｗｉｓＹ（ＬｅＹ）、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）、黒色腫抗原ファミリーＡ、１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、ムチン１（ＭＵＣ１）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＥＲＢＢ２、ＭＡＧＥＡ３、ｐ５３、ＭＡＲＴ１、ＧＰ１００、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）、チロシナーゼ、サバイビン、ｈＴＥＲＴ、ＥｐｈＡ２、ＮＫＧ２Ｄリガンド、がん－精巣抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１、癌胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＯＲ１、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、血管内皮成長因子Ｒ２（ＶＥＧＦ－Ｒ２）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ－１）、ＢＣＭＡ、ＮＫＣＳ１、ＥＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲ－ＶＩＩＩ、ＣＤ９９、ＣＤ７０、ＡＤＧＲＥ２、ＣＣＲ１、ＬＩＬＲＢ２、ＰＲＡＭＥＣＣＲ４、ＣＤ５、ＣＤ３、ＴＲＢＣ１、ＴＲＢＣ２、ＴＩＭ－３、インテグリンＢ７、ＩＣＡＭ－１、ＣＤ７０、Ｔｉｍ３、ＣＬＥＣ１２Ａ、およびＥＲＢＢから選択される、請求項３７または３８に記載の細胞。

【請求項40】

前記腫瘍抗原がＣＤ１９である、請求項３７～３９のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項41】

前記抗原認識受容体が外因性または内因性である、請求項３５～４０のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項42】

前記抗原認識受容体が組換えにより発現される、請求項３５～４１のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項43】

前記抗原認識受容体がベクターから発現される、請求項３５～４２のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項44】

リンパ系列の細胞または骨髄性系列の細胞である、請求項３４～４３のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項45】

前記リンパ系列の前記細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞から選択される、請求項４４に記載の細胞。

【請求項46】

Ｔ細胞である、請求項３４～４５のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項47】

前記Ｔ細胞が人工多能性幹細胞に由来する、請求項４６に記載の細胞。

【請求項48】

前記Ｔ細胞がＣＤ８^＋Ｔ細胞である、請求項４６または４７に記載の細胞。

【請求項49】

前記ＣＤ８^＋Ｔ細胞がＣＤ４非依存的である、請求項４８に記載の細胞。

【請求項50】

前記Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、γδ Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、制御性Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞からなる群から選択される、請求項４６～４９のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項51】

前記融合ポリペプチドおよび前記抗原認識受容体が、前記Ｔ細胞のゲノム内の遺伝子座で組み込まれる、請求項４６～５０のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項52】

前記遺伝子座が、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、ＴＲＤＣ遺伝子座、およびＴＲＧＣ遺伝子座からなる群から選択される、請求項５１に記載の細胞。

【請求項53】

前記遺伝子座がＴＲＡＣ遺伝子座またはＴＲＢＣ遺伝子座である、請求項５１または５２に記載の細胞。

【請求項54】

前記遺伝子座がＴＲＡＣ遺伝子座である、請求項５３に記載の細胞。

【請求項55】

前記抗原認識受容体がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項５１～５４のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項56】

前記抗原認識受容体および前記融合ポリペプチドの発現が、内因性プロモーターの制御下にある、請求項５１～５５のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項57】

前記内因性プロモーターが、内因性ＴＲＡＣプロモーター、内因性ＴＲＢＣプロモーター、内因性ＴＲＤＣプロモーター、および内因性ＴＲＧＣプロモーターからなる群から選択される、請求項５６に記載の細胞。

【請求項58】

前記内因性プロモーターがＴＲＡＣプロモーターである、請求項５７に記載の細胞。

【請求項59】

前記融合ポリペプチドおよび前記抗原認識受容体が、免疫阻害分子をコードする遺伝子座で組み込まれる、請求項３５～５８のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項60】

前記免疫阻害分子が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７－１、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＴＩＭ３、ＳＨＰ－１、ＳＨＰ－２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１６０、およびＬＡＩＲ１からなる群から選択される、請求項５９に記載の細胞。

【請求項61】

自己である、請求項３４～６０のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項62】

同種である、請求項３４～６０のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項63】

請求項３４～６２のいずれか一項に記載の細胞の有効量を含む組成物。

【請求項64】

薬学的に許容される賦形剤をさらに含む医薬組成物である、請求項６３に記載の組成物。

【請求項65】

新生物、自己免疫疾患、および／または感染性疾患を処置および／または防止するためのものである、請求項６３または６４に記載の組成物。

【請求項66】

前記融合ポリペプチドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能である調節因子をさらに含む、請求項６３～６５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項67】

前記調節因子が、前記融合ポリペプチドの発現を制御することが可能なプロモーター、前記共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子、前記共刺激分子の発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子からなる群から選択される、請求項６６に記載の組成物。

【請求項68】

前記共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な前記分子が、前記共刺激リガンドに結合する抗体、ならびに前記共刺激リガンドに結合し、前記共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートする融合タンパク質からなる群から選択される、請求項６７に記載の組成物。

【請求項69】

前記調節因子が抗ＣＤ８０抗体であり、前記融合ポリペプチドが、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む、請求項６６～６８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項70】

前記調節因子が、ＣＤ８０に結合し、ＣＤ８０の活性をモジュレートする融合タンパク質であり、前記融合ポリペプチドがＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む、請求項６６～６９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項71】

前記融合タンパク質が、ＣＤ８０に結合するＣＴＬＡ－４断片を含む、請求項７０に記載の組成物。

【請求項72】

ＣＤ８０に結合する前記ＣＴＬＡ－４断片が、アバタセプトまたはベラタセプトである、請求項７１に記載の組成物。

【請求項73】

前記共刺激分子の発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な前記分子が、前記共刺激分子に結合する抗体、ならびに前記共刺激分子に結合し、前記共刺激分子の発現および／または活性を調節またはモジュレートする融合タンパク質からなる群から選択される、請求項７２に記載の組成物。

【請求項74】

ａ）請求項１～３１のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド；およびｂ）抗原に結合する抗原認識受容体を含む組成物。

【請求項75】

前記融合ポリペプチドが、第１のプロモーターに作動可能に連結される、請求項７４に記載の組成物。

【請求項76】

前記抗原認識受容体が、第２のプロモーターに作動可能に連結される、請求項７４または７５に記載の組成物。

【請求項77】

前記第１および第２のプロモーターの一方または両方が、内因性または外因性である、請求項７５または７６に記載の組成物。

【請求項78】

前記外因性プロモーターが、伸長因子（ＥＦ）－１プロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＰＧＫプロモーター、およびメタロチオネインプロモーターからなる群から選択される、請求項７７に記載の組成物。

【請求項79】

前記第１および第２のプロモーターの一方または両方が、誘導型プロモーターである、請求項７５または７６に記載の組成物。

【請求項80】

前記誘導型プロモーターが、ＮＦＡＴ転写応答エレメント（ＴＲＥ）プロモーター、ＣＤ６９プロモーター、ＣＤ２５プロモーター、およびＩＬ－２プロモーターからなる群から選択される、請求項７９に記載の組成物。

【請求項81】

ａ）請求項１～３１のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド；およびｂ）抗原に結合する抗原認識受容体をコードする第２のポリヌクレオチドを含む核酸組成物。

【請求項82】

前記融合ポリペプチドに作動可能に連結された第１のプロモーターをさらに含む、請求項８１に記載の核酸組成物。

【請求項83】

前記抗原認識受容体に作動可能に連結された第２のプロモーターをさらに含む、請求項８１または８２に記載の核酸組成物。

【請求項84】

前記第１および第２のプロモーターの一方または両方が、内因性または外因性である、請求項８２または８３に記載の核酸組成物。

【請求項85】

前記外因性プロモーターが、伸長因子（ＥＦ）－１プロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＰＧＫプロモーター、およびメタロチオネインプロモーターからなる群から選択される、請求項８４に記載の核酸組成物。

【請求項86】

前記第１および第２のプロモーターの一方または両方が誘導型プロモーターである、請求項８２または８３に記載の核酸組成物。

【請求項87】

前記誘導型プロモーターが、ＮＦＡＴ転写応答エレメント（ＴＲＥ）プロモーター、ＣＤ６９プロモーター、ＣＤ２５プロモーター、およびＩＬ－２プロモーターからなる群から選択される、請求項８６に記載の核酸組成物。

【請求項88】

請求項６３～８０のいずれか一項に記載の組成物または請求項８１～８７のいずれか一項に記載の核酸組成物を含む細胞。

【請求項89】

前記リンパ系列の細胞または前記骨髄性系列の細胞である、請求項８８に記載の細胞。

【請求項90】

前記リンパ系列の前記細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞からなる群から選択される、請求項８９に記載の細胞。

【請求項91】

Ｔ細胞である、請求項８８～９０のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項92】

前記Ｔ細胞が人工多能性幹細胞に由来する、請求項９１に記載の細胞。

【請求項93】

前記Ｔ細胞がＣＤ８^＋Ｔ細胞である、請求項９１または９２に記載の細胞。

【請求項94】

前記ＣＤ８^＋Ｔ細胞がＣＤ４非依存的である、請求項９３に記載の細胞。

【請求項95】

前記Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、γδ Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、制御性Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞からなる群から選択される、請求項９１～９４のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項96】

前記組成物または前記核酸組成物が、前記Ｔ細胞のゲノム内の遺伝子座で組み込まれる、請求項８８～９５のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項97】

前記遺伝子座が、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、ＴＲＤＣ遺伝子座、およびＴＲＧＣ遺伝子座からなる群から選択される、請求項９６に記載の細胞。

【請求項98】

前記遺伝子座がＴＲＡＣ遺伝子座またはＴＲＢＣ遺伝子座である、請求項９６または９７に記載の細胞。

【請求項99】

前記遺伝子座がＴＲＡＣ遺伝子座である、請求項９８に記載の細胞。

【請求項100】

前記抗原認識受容体がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項９６～９９のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項101】

前記抗原認識受容体および前記融合ポリペプチドの発現が、内因性プロモーターの制御下にある、請求項９６～１００のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項102】

前記内因性プロモーターが、内因性ＴＲＡＣプロモーター、内因性ＴＲＢＣプロモーター、内因性ＴＲＤＣプロモーター、および内因性ＴＲＧＣプロモーターからなる群から選択される、請求項１０１に記載の細胞。

【請求項103】

前記内因性プロモーターがＴＲＡＣプロモーターである、請求項１０２に記載の細胞。

【請求項104】

前記組成物または前記核酸組成物が、免疫阻害分子をコードする遺伝子座で組み込まれる、請求項９１～１０３のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項105】

前記免疫阻害分子が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７－１、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＴＩＭ３、ＳＨＰ－１、ＳＨＰ－２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１６０、およびＬＡＩＲ１からなる群から選択される、請求項１０４に記載の細胞。

【請求項106】

細胞を産生するための方法であって、細胞に、請求項３２に記載の核酸または請求項３３に記載のベクターを導入することを含む、方法。

【請求項107】

請求項３２に記載の核酸、請求項３３に記載のベクター、請求項３４～６２および８８～１０５のいずれか一項に記載の細胞、または請求項６３～８０のいずれか一項に記載の組成物、または請求項８１～８７のいずれか一項に記載の核酸組成物を含むキット。

【請求項108】

新生物、病原体感染、および／または感染性疾患を処置および／または防止するための書面の指示をさらに含む、請求項９９に記載のキット。

【請求項109】

対象における腫瘍負荷を低減させる方法であって、前記対象に、請求項３４～６２および８８～１０５のいずれか一項に記載の細胞、または請求項６３～８０のいずれか一項に記載の組成物、または請求項８１～８７のいずれか一項に記載の核酸組成物の有効量を投与することを含む方法。

【請求項110】

前記対象における腫瘍細胞数を低減させる、腫瘍サイズを低減させる、および／または前記腫瘍を根絶する、請求項１０９に記載の方法。

【請求項111】

新生物の再発を有する対象を処置する方法であって、前記対象に、請求項３４～６２および８８～１０５のいずれか一項に記載の細胞、または請求項６３～８０のいずれか一項に記載の組成物、または請求項８１～８７のいずれか一項に記載の核酸組成物の有効量を投与する方法。

【請求項112】

対象における新生物を処置および／または防止する方法であって、前記対象に、請求項３４～６２および８８～１０５のいずれか一項に記載の細胞、または請求項６３～８０のいずれか一項に記載の組成物、または請求項８１～８７のいずれか一項に記載の核酸組成物の有効量を投与する方法。

【請求項113】

前記細胞または前記組成物の前記投与の前に、前記対象が免疫療法を受けた、請求項１１２に記載の方法。

【請求項114】

前記新生物または腫瘍ががんである、請求項１０９～１１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項115】

前記新生物または腫瘍が、血液のがんおよび固形腫瘍からなる群から選択される、請求項１０９～１１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項116】

前記血液のがんが、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、および非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される、請求項１１５に記載の方法。

【請求項117】

対象における自己免疫疾患または感染性疾患を処置および／または防止する方法であって、前記対象に、請求項３４～６２および８８～１０５のいずれか一項に記載の細胞、または請求項６３～８０のいずれか一項に記載の組成物、または請求項８１～８７のいずれか一項に記載の核酸組成物の有効量を投与する方法。

【請求項118】

前記自己免疫疾患または感染性疾患が、関節リウマチ（ＲＡ）、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、乾癬、乾癬性関節炎、強皮症、自己免疫性甲状腺疾患、グレーヴス病、クローン病、多発性硬化症、全身性硬化症、喘息、移植臓器拒絶、移植に関連する疾患または状態、高安動脈炎、巨細胞動脈炎、川崎病、結節性多発動脈炎、ベーチェット症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ＡＮＣＡ－脈管炎、チャーグストラウス症候群、顕微鏡的多発血管炎、結合組織病の血管炎、ヘノッホシェーンライン紫斑病、クリオグロブリン血症性血管炎、皮膚白血球破砕性血管炎、サルコイドーシス、コーガン症候群、ウィスコットアルドリッチ症候群、ＣＮＳの原発性血管炎、閉塞性血栓血管炎、腫瘍随伴性動脈炎、骨髄異形成症候群、持久性隆起性紅斑、アミロイドーシス、自己免疫性筋炎、ギランバレー症候群、組織球症、アトピー性皮膚炎、肺線維症、糸球体腎炎、ホイップル病、スティル病、シェーグレン症候群、骨髄線維症、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、木村病、全身性硬化症、慢性大動脈周囲炎、慢性前立腺炎、特発性肺線維症、慢性肉芽腫症、特発性ブレオマイシン誘発性肺炎症、シタラビン誘発性肺炎症、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性リンパ球減少症、慢性自己免疫性甲状腺炎、自己免疫性肝炎、橋本甲状腺炎、アトピー性甲状腺炎、グレーヴス病、多腺性自己免疫症候群、自己免疫性アジソン症候群、および重症筋無力症からなる群から選択される、請求項１１７に記載の方法。

【請求項119】

前記対象に、前記融合ポリペプチドの発現、活性を調節またはモジュレートすることが可能な調節因子を投与することをさらに含む、請求項１０９～１１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項120】

前記調節因子が、前記融合ポリペプチドの発現を制御することが可能なプロモーター、前記共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子、前記共刺激分子の発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子からなる群から選択される、請求項１１９に記載の方法。

【請求項121】

前記共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な前記分子が、前記共刺激リガンドに結合する抗体、ならびに前記共刺激リガンドに結合し、前記共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートする融合タンパク質からなる群から選択される、請求項１２０に記載の方法。

【請求項122】

前記調節因子が抗ＣＤ８０抗体であり、前記融合ポリペプチドがＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む、請求項１１９～１２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項123】

前記調節因子が、ＣＤ８０に結合し、ＣＤ８０の活性をモジュレートする融合タンパク質であり、前記融合ポリペプチドが、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む、請求項１１９～１２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項124】

前記融合タンパク質が、ＣＤ８０に結合するＣＴＬＡ－４断片である、請求項１２３に記載の方法。

【請求項125】

ＣＤ８０に結合する前記ＣＴＬＡ－４断片が、アバタセプトまたはベラタセプトである、請求項１２４に記載の方法。

【請求項126】

前記共刺激分子の発現、活性を調節またはモジュレートすることが可能な前記分子が、前記共刺激分子に結合する抗体、前記共刺激分子に結合し、前記共刺激分子の発現、活性を調節またはモジュレートする融合タンパク質からなる群から選択される、請求項１２０に記載の方法。

【請求項127】

前記調節因子が細胞を枯渇させることが可能である、請求項１１９～１２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項128】

前記調節因子が、前記細胞の投与に関連する１つまたは複数の副作用を減らすかまたは排除することが可能である、請求項１１９～１２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項129】

前記１つまたは複数の副作用が、オフ腫瘍ターゲット効果、サイトカイン放出症候群、神経毒性、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１２８に記載の方法。

【請求項130】

前記対象に、チェックポイント免疫遮断剤を投与することをさらに含む、請求項１０９～１２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項131】

前記チェックポイント免疫遮断剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ＴＩＭ３抗体、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１３０に記載の方法。

【請求項132】

前記チェックポイント免疫遮断剤が抗ＰＤ－１抗体である、請求項１３０または１３１に記載の方法。

【請求項133】

腫瘍負荷を低減させる、新生物を処置および／もしくは防止する、ならびに／または新生物の再発を有する対象を処置する、ならびに／または自己免疫疾患もしくは感染性疾患を処置および／もしくは防止することにおける使用のための、請求項３４～６２および８８～１０５のいずれか一項に記載の細胞、または請求項６３～８０のいずれか一項に記載の組成物、または請求項８１～８７のいずれか一項に記載の核酸組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、その内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１９年７月１９日に提出された米国特許仮出願第６２／８７６，３３８号の優先権を主張する。

【0002】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットでＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出され、その全体がそれにより参照により本明細書に組み込まれる配列表を含有する。ＡＳＣＩＩのコピーは２０２０年７月２０日に作成され、名称は「０７２７３４＿１１０２＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」であり、サイズは１２６，０１９バイトである。

【0003】

１．緒言
本開示の主題は、免疫療法のための活性および有効性を改善することができる融合ポリペプチドを提供する。

【背景技術】

【0004】

２．発明の背景
細胞に基づく免疫療法は、がんの処置に関して治癒の潜在性を有する治療である。Ｔ細胞および他の免疫細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と呼ばれる、選択された抗原に対して特異的な天然のもしくは改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）または抗原の合成受容体をコードする遺伝物質の導入を通して腫瘍抗原を標的とするように改変され得る。患者の操作されたＣＡＲＴ細胞は、一連の液性および固形の悪性腫瘍に対して顕著な有効性を実証している。しかし、患者の大部分では処置の失敗および再発が起こっている。したがって、改善された免疫療法が依然として必要である。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

３．発明の概要
本開示の主題は、免疫療法（例えば、Ｔ細胞免疫療法）の活性および有効性を増強することができる融合ポリペプチドを提供する。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ａ）共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン、ならびにｂ）第１の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。

【0006】

ある特定の実施形態では、共刺激リガンドは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーメンバー、および免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーメンバー、およびそれらの組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、ＴＮＦファミリーメンバーは、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ４０Ｌ、およびそれらの組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、Ｉｇスーパーファミリーメンバーは、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬＧ、およびそれらの組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはＣＤ８０である。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の細胞外ドメインは、配列番号１に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の細胞外ドメインは、配列番号１に記載のアミノ酸配列またはその機能的断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の細胞外ドメインは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0007】

ある特定の実施形態では、第１の共刺激分子は、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ－１０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２、およびそれらの組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、第１の共刺激分子は４－１ＢＢである。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内ドメインは、配列番号３に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内ドメインは、配列番号３に記載のアミノ酸配列またはその機能的断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内ドメインは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0008】

ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはＣＤ８０であり、第１の共刺激分子は、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ－１０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２、およびそれらの組合せからなる群から選択される。

【0009】

ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはＣＤ８０であり、第１の共刺激分子は４－１ＢＢである。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号４に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0010】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドはさらに、第２の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。ある特定の実施形態では、第２の共刺激分子は、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ－１０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２、およびそれらの組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、第２の共刺激分子はＣＤ２８である。ある特定の実施形態では、第１の共刺激分子は４－１ＢＢであり、第２の共刺激分子はＣＤ２８である。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８の細胞内ドメインは、配列番号５に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８の細胞内ドメインは、配列番号５に記載のアミノ酸配列またはその機能的断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８の細胞内ドメインは、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0011】

ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはＣＤ８０であり、第１の共刺激分子は４－１ＢＢであり、第２の共刺激分子はＣＤ２８である。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号６に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0012】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、抗原認識受容体を含む細胞を刺激することが可能である。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、抗原認識受容体を含む細胞の活性を増強することが可能である。ある特定の実施形態では、活性は細胞傷害性、細胞増殖、細胞の存続、およびそれらの組合せを含む。

【0013】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドはさらに、サイトカイン受容体のシグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、サイトカイン受容体は、ＣＤ１２１ａ、ＣＤｗ１２１ｂ、ＩＬ－１８Ｒａ、ＩＬ１８Ｒｂ、ＣＤ１２２、ＣＤ２５、ＣＤ１３２、ＣＤ１２４、ＣＤ２１３ａ１３、ＣＤ１２７、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ１５Ｒａ、ＣＤｗ１２５、ＣＤｗ１３１、ＣＤ１２６、ＣＤ１３０、ＩＬ１１Ｒａ、Ｃｄ１１４、ＣＤ２１２、ＣＤ４、ＣＤｗ２１７、ＣＤ１１８、およびＣＤｗ１１９からなる群から選択される。

【0014】

本開示の主題はさらに、本明細書に開示される融合ポリペプチドをコードする核酸分子および核酸分子を含むベクターを提供する。

【0015】

本開示の主題はまた、本明細書に開示される融合ポリペプチド、核酸分子、またはベクターを含む細胞も提供する。

【0016】

ある特定の実施形態では、細胞はさらに、抗原認識受容体を含む。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、およびＴＣＲ様融合分子からなる群から選択される。

【0017】

ある特定の実施形態では、抗原は、腫瘍抗原または病原体抗原である。ある特定の実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。ある特定の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡｌＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ８、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ４４Ｖ６、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染細胞の抗原（例えば、細胞表面抗原）、上皮糖タンパク質－２（ＥＧＰ－２）、上皮糖タンパク質－４０（ＥＧＰ－４０）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、受容体チロシンタンパク質キナーゼＥｒｂ－Ｂ２、Ｅｒｂ－Ｂ３、Ｅｒｂ－Ｂ４、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、胎児型アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）、葉酸受容体－α、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ－２）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、インターロイキン－１３受容体サブユニットアルファ－２（ＩＬ－１３Ｒα２）、κ－軽鎖、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）、ＬｅｗｉｓＹ（ＬｅＹ）、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）、黒色腫抗原ファミリーＡ、１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、ムチン１（ＭＵＣ１）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＥＲＢＢ２、ＭＡＧＥＡ３、ｐ５３、ＭＡＲＴ１、ＧＰ１００、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）、チロシナーゼ、サバイビン、ｈＴＥＲＴ、ＥｐｈＡ２、ＮＫＧ２Ｄリガンド、がん－精巣抗原ＮＹ－ＥＳ０－１、癌胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＯＲ１、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、血管内皮成長因子Ｒ２（ＶＥＧＦ－Ｒ２）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ－１）、ＢＣＭＡ、ＮＫＣＳ１、ＥＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲ－ＶＩＩＩ、ＣＤ９９、ＣＤ７０、ＡＤＧＲＥ２、ＣＣＲ１、ＬＩＬＲＢ２、ＰＲＡＭＥＣＣＲ４、ＣＤ５、ＣＤ３、ＴＲＢＣ１、ＴＲＢＣ２、ＴＩＭ－３、インテグリンＢ７、ＩＣＡＭ－１、ＣＤ７０、Ｔｉｍ３、ＣＬＥＣ１２Ａ、およびＥＲＢＢからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、腫瘍抗原はＣＤ１９である。

【0018】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、外因性または内因性である。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は組換えにより発現される。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体はベクターから発現される。

【0019】

ある特定の実施形態では、細胞はリンパ系列の細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、骨髄性系列の細胞である。ある特定の実施形態では、リンパ系列の細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、およびそこからリンパ系細胞が分化し得る幹細胞からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、細胞はＴ細胞である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、人工多能性幹細胞に由来する。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞はＣＤ８^＋Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、ＣＤ８^＋Ｔ細胞はＣＤ４非依存的である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、γδ Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドおよび抗原認識受容体は、Ｔ細胞のゲノム内の遺伝子座で組み込まれる。ある特定の実施形態では、遺伝子座は、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、ＴＲＤＣ遺伝子座、およびＴＲＧＣ遺伝子座からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、遺伝子座はＴＲＡＣ遺伝子座またはＴＲＢＣ遺伝子座である。ある特定の実施形態では、遺伝子座はＴＲＡＣ遺伝子座である。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体および融合ポリペプチドの発現は、内因性プロモーターの制御下にある。ある特定の実施形態では、内因性プロモーターは、内因性ＴＲＡＣプロモーター、内因性ＴＲＢＣプロモーター、内因性ＴＲＤＣプロモーター、および内因性ＴＲＧＣプロモーターからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、内因性プロモーターはＴＲＡＣプロモーターである。

【0020】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドおよび抗原認識受容体は、免疫阻害分子をコードする遺伝子座内に組み込まれる。ある特定の実施形態では、免疫阻害分子は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７－１、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＴＩＭ３、ＳＨＰ－１、ＳＨＰ－２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１６０、およびＬＡＩＲ１からなる群から選択される。

【0021】

ある特定の実施形態では、細胞は自己である。ある特定の実施形態では、細胞は同種である。

【0022】

本開示の主題は、本明細書に開示される細胞を含む組成物を提供する。ある特定の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む医薬組成物である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、新生物、自己免疫疾患、および／または感染性疾患を処置および／または防止するためのものである。ある特定の実施形態では、新生物はがんである。

【0023】

ある特定の実施形態では、組成物はさらに、融合ポリペプチドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な調節因子を含む。

【0024】

ある特定の実施形態では、調節因子は、融合ポリペプチドの発現を制御することが可能なプロモーター、共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子、ならびに共刺激分子の発現および活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子からなる群から選択される。

【0025】

ある特定の実施形態では、共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子は、共刺激リガンドに結合する抗体、ならびに共刺激リガンドに結合し、共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートする融合タンパク質からなる群から選択される。

【0026】

ある特定の実施形態では、調節因子は抗ＣＤ８０抗体であり、融合ポリペプチドはＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。

【0027】

ある特定の実施形態では、調節因子は、ＣＤ８０に結合し、ＣＤ８０の活性をモジュレートする融合タンパク質であり、融合ポリペプチドは、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、ＣＤ８０に結合するＣＴＬＡ－４断片を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０に結合するＣＴＬＡ－４断片は、アバタセプトまたはベラタセプトである。

【0028】

ある特定の実施形態では、共刺激分子の発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子は、共刺激分子に結合する抗体、ならびに共刺激分子に結合し、共刺激分子の発現および／または活性を調節またはモジュレートする融合タンパク質からなる群から選択される。

【0029】

本開示の主題はさらに、ａ）本明細書に開示される融合ポリペプチド；およびｂ）抗原に結合する抗原認識受容体を含む組成物を提供する。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、第１のプロモーターに作動可能に連結される。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、第２のプロモーターに作動可能に連結される。

【0030】

加えて、本開示の主題はさらに、ａ）本明細書に開示される融合ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド；およびｂ）抗原に結合する抗原認識受容体をコードする第２のポリヌクレオチドを含む組成物を提供する。ある特定の実施形態では、核酸組成物は、融合ポリペプチドに作動可能に連結された第１のプロモーターをさらに含む。ある特定の実施形態では、核酸組成物は、抗原認識受容体に作動可能に連結された第２のプロモーターをさらに含む。

【0031】

ある特定の実施形態では、第１および第２のプロモーターの一方または両方は、内因性または外因性である。ある特定の実施形態では、外因性プロモーターは、伸長因子（ＥＦ）－１プロモーター、サイトメガロウイルス前初期プロモーター（ＣＭＶ）プロモーター、シミアンウイルス４０初期プロモーター（ＳＶ４０）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、およびメタロチオネインプロモーターからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、第１および第２のプロモーターの一方または両方は、誘導型プロモーターである。ある特定の実施形態では、誘導型プロモーターは、ＮＦＡＴ転写応答エレメント（ＴＲＥ）プロモーター、ＣＤ６９プロモーター、ＣＤ２５プロモーター、およびＩＬ－２プロモーターから選択される。

【0032】

本開示の主題はさらに、本明細書に開示される組成物または本明細書に開示される核酸組成物を含む細胞を提供する。ある特定の実施形態では、組成物または核酸組成物は、Ｔ細胞のゲノム内の遺伝子座で組み込まれる。ある特定の実施形態では、遺伝子座は、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、ＴＲＤＣ遺伝子座、およびＴＲＧＣ遺伝子座からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、遺伝子座はＴＲＡＣ遺伝子座またはＴＲＢＣ遺伝子座である。ある特定の実施形態では、組成物または核酸組成物は、免疫阻害分子をコードする遺伝子座内に組み込まれる。ある特定の実施形態では、免疫阻害分子は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７－１、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＴＩＭ３、ＳＨＰ－１、ＳＨＰ－２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１６０、およびＬＡＩＲ１からなる群から選択される。

【0033】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞、組成物、または核酸組成物は、腫瘍負荷を低減させる、新生物を処置および／もしくは防止する、自己免疫疾患を処置および／もしくは防止する、病原体感染（例えば、感染性疾患）を処置および／もしくは防止する、ならびに／または新生物の再発を有する対象を処置することにおける使用のためのものである。

【0034】

本開示の主題はさらに、細胞を産生するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、方法は、細胞に、本明細書に開示される核酸分子、核酸組成物、またはベクターを導入することを含む。

【0035】

本開示の主題は、本明細書に開示される核酸分子、ベクター、細胞、組成物、または核酸組成物を含むキットを提供する。ある特定の実施形態では、キットは、新生物、病原体感染（例えば、感染性疾患）、および／または自己免疫疾患を処置および／または防止するための書面の指示をさらに含む。

【0036】

本開示の主題は、対象における腫瘍負荷を低減させる、新生物（例えば、がん）の再発を有する対象を処置する、新生物（例えば、がん）を処置および／もしくは防止する、病原体感染（例えば、感染性疾患）を処置および／もしくは防止する、ならびに／または自己免疫疾患を処置および／もしくは防止する方法を提供する。ある特定の実施形態では、方法は、対象に、本明細書に開示される細胞、組成物、または核酸組成物の有効量を投与することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、対象における腫瘍細胞数を低減させる、腫瘍サイズを低減させる、および／または腫瘍を根絶する。ある特定の実施形態では、新生物または腫瘍は、血液のがんおよび固形腫瘍からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、新生物または腫瘍は固形腫瘍である。ある特定の実施形態では、血液のがんは、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、および非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される。

【0037】

ある特定の実施形態では、自己免疫疾患および感染性疾患は、関節リウマチ（ＲＡ）、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、乾癬、乾癬性関節炎、強皮症、自己免疫性甲状腺疾患、グレーヴス病、クローン病、多発性硬化症、全身性硬化症、喘息、移植臓器拒絶、移植に関連する疾患または状態、高安動脈炎、巨細胞動脈炎、川崎病、結節性多発動脈炎、ベーチェット症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ＡＮＣＡ－脈管炎、チャーグストラウス症候群、顕微鏡的多発血管炎、結合組織病の血管炎、ヘノッホシェーンライン紫斑病（Ｈｅｎｎｏｃｈ－Ｓｃｈｏｎｌｅｉｎｐｕｒｐｕｒａ）、クリオグロブリン血症性血管炎、皮膚白血球破砕性血管炎、サルコイドーシス、コーガン症候群、ウィスコットアルドリッチ症候群、ＣＮＳの原発性血管炎、閉塞性血栓血管炎、腫瘍随伴性動脈炎、骨髄異形成症候群、持久性隆起性紅斑、アミロイドーシス、自己免疫性筋炎、ギランバレー症候群、組織球症、アトピー性皮膚炎、肺線維症、糸球体腎炎、ホイップル病、スティル病、シェーグレン症候群、骨髄線維症、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、木村病、全身性硬化症、慢性大動脈周囲炎、慢性前立腺炎、特発性肺線維症、慢性肉芽腫症、特発性ブレオマイシン誘発性肺炎症、シタラビン誘発性肺炎症、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性リンパ球減少症、慢性自己免疫性甲状腺炎、自己免疫性肝炎、橋本甲状腺炎、アトピー性甲状腺炎、グレーヴス病、多腺性自己免疫症候群、自己免疫性アジソン症候群、および重症筋無力症からなる群から選択される。

【0038】

ある特定の実施形態では、方法はさらに、対象に、融合ポリペプチドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な調節因子を投与することを含む。ある特定の実施形態では、調節因子は、融合ポリペプチドの発現を制御することが可能なプロモーター、共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子、ならびに共刺激分子の発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子は、共刺激リガンドに結合する抗体、および共刺激リガンドに結合し、共刺激リガンドの発現、活性を調節またはモジュレートする融合タンパク質からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、調節因子は抗ＣＤ８０抗体であり、融合ポリペプチドはＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、調節因子は、ＣＤ８０に結合し、ＣＤ８０の活性をモジュレートする融合タンパク質であり、融合ポリペプチドは、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、ＣＤ８０に結合するＣＴＬＡ４断片である。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０に結合するＣＴＬＡ４断片は、アバタセプトまたはベラタセプトである。

【0039】

【0040】

ある特定の実施形態では、調節因子は、細胞を枯渇させることが可能である。ある特定の実施形態では、調節因子は、細胞の投与に関連する１つまたは複数の副作用を減らすかまたは排除することが可能である。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の副作用は、オフ腫瘍ターゲット効果、サイトカイン放出症候群、神経毒性、およびそれらの組合せからなる群から選択される。

【0041】

ある特定の実施形態では、方法はさらに、対象に、チェックポイント免疫遮断剤を投与することを含む。ある特定の実施形態では、チェックポイント免疫遮断剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ＴＩＭ３抗体、およびそれらの組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、チェックポイント免疫遮断剤は、抗ＰＤ－１抗体である。

【0042】

例として提供されるが、本開示の主題を記載された具体的な実施形態に限定することを意図しない以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて理解され得る。
４．図面の簡単な説明

【図面の簡単な説明】

【0043】

【図1】図１は、本開示の主題のある特定の実施形態に従う細胞を示す。

【0044】

【図2-1】図２Ａ～２Ｈは、抗腫瘍Ｔ細胞応答をブーストするためのユニバーサルＣＤ８０－４－１ＢＢ融合ポリペプチドを示す。図２Ａは、ＣＤ８０－４－１ＢＢ融合ポリペプチドあり（右）またはなし（左）での１９２８ｚＣＡＲの発現を示すＦＡＣＳプロファイルを示す。Ｔ細胞を、１９２８ｚおよびＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドを安定に発現するように、ガンマレトロウイルスベクターで形質導入する。図２Ｂは、外因性ＣＤ８０分子、外因性４－１ＢＢＬ分子またはＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドを共発現する１０^５個の１９－２８－ｚＣＡＲＴ細胞で処置した、ＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を保有するマウスのカプラン・マイヤー生存分析を示す。図２Ｃは、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドあり（右）またはなし（左）での１９２８ｚ－１ｘｘＣＡＲＴ細胞の発現を示すＦＡＣＳプロファイルを示す。１９２８ｚ－１ｘｘおよびＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドを、ＴＲＡＣ遺伝子座へと標的化し、内因性ＴＲＡＣプロモーターの制御下で発現させた。図２Ｄは、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドの共発現ありまたはなしの２×１０^４個の１９－２８－ｚ－１ｘｘＣＡＲＴ細胞で処置した、ＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を保有するマウスのカプラン・マイヤー生存分析を示す。図２Ｅは、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドあり（中央および右）またはなし（左）での１９－ＨＩＴの発現を示すＦＡＣＳプロファイルを示す。図２Ｅ左および図２Ｅ中央は、ＴＲＡＣ遺伝子座へと標的化され、内因性ＴＲＡＣプロモーターの制御下で発現された１９－ＨＩＴおよびＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドに関する。図２Ｅ右は、高レベルのＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドを発現するようにＳＦＧガンマ－レトロウイルスベクターで形質導入した１９－ＨＩＴＴ細胞に関する。図２Ｆは、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありまたはなしの１０^５個の１９－ＨＩＴＴ細胞で処置した、ＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を保有するマウスのカプラン・マイヤー生存分析を示す。図２Ｇは、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドあり（右）またはなし（左）でのＮＹ－ＥＳＯ－１ＴＣＲの発現を示すＦＡＣＳプロファイルを示す。ＮＹ－ＥＳＯ－１ＴＣＲまたはＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドをコードするガンマレトロウイルスベクターを使用した。図２Ｈは、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありまたはなしの２×１０^６個のＮＹ－ＥＳＯ－１ＴＣＲＴ細胞で処置した、ＨＬＡＡ２．１／ＮＹＥＳＯ複合体を発現するＳＫ－ＭＥＬ－２３黒色腫細胞系を保有するマウスのカプラン・マイヤー生存分析を示す。Ｐ値を、ログランクマンテル・コックス検定によって決定した。

【図2-2】同上。

【図2-3】同上。

【図2-4】同上。

【0045】

【図3】図３Ａおよび３Ｂは、ＰＤＬ－１阻害性リガンドの存在下でのＣＤ８０－４－１ＢＢの抗腫瘍利益の維持を示す。図３Ａは、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありまたはなしの５×１０^４個の１９－ＣＡＲＴ細胞で処置した、ＰＤＬ－１分子を過剰発現するＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を保有するマウスのカプラン・マイヤー生存分析を示す。図３Ｂは、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありまたはなしの１０^５個のＨＩＴＴ細胞で処置した、ＰＤＬ－１分子を過剰発現するＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を保有するマウスのカプラン・マイヤー生存分析を示す。Ｐ値を、ログランクマンテル・コックス検定によって決定した。

【0046】

【図4】図４Ａおよび４Ｂは、ＣＤ８０－４－１ＢＢ発現レベルが抗腫瘍応答効率を支配することを示す。図４Ａは、内因性ＴＲＡＣ遺伝子座の制御下の、またはＴＲＢＣ遺伝子座へと標的化された、外因性ＥＦ１ａもしくはＰＧＫプロモーターの制御下でのＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドの発現を示すＦＡＣＳプロファイルを示す。全ての条件において、１９２８ｚ－１ｘｘを、内因性ＴＲＡＣプロモーターの制御下で発現させた。Ｔ細胞を、抗ＣＤ８０抗体を使用して、ＣＤ８０発現に基づいて、形質導入後にビーズ選別した。ＣＤ８０の平均蛍光強度を示した。図４Ｂは、ＣＡＲＴ細胞注射の１５日後の、ホタルルシフェラーゼを発現するＮＡＬＭ６腫瘍細胞の全光束シグナルを示す。Ｐ値をマン・ホイットニーｔ検定によって決定した（ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄＭａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙｔ－ｔｅｓｔ）。

【0047】

【図5】図５、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありの２．５×１０^４個の１９２８ｚ－１ｘｘＣＡＲＴ細胞で処置した、ＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を保有するマウスのカプラン・マイヤー生存分析を示す。内因性４－１ＢＢ遺伝子ノックアウトを、タンパク質ＣＡＳ９および特異的ｇＲＮＡの電気穿孔によって得た。４－１ＢＢの破壊が、注入されたＣＡＲＴ細胞の６８％において達成された。ＴＲＢＣｇＲＮＡを対照として使用した。Ｐ値を、ログランクマンテル・コックス検定によって決定した。

【0048】

【図6】図６は、２．５×１０^４個のＣＡＲＴ細胞で処置した、ＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を保有するマウスのカプラン・マイヤー生存分析を示す。タンパク質ＣＡＳ９および特異的ｇＲＮＡの電気穿孔によって得た、内因性ＰＤ－１遺伝子ノックアウト。ＰＤ－１の破壊が、注入されたＣＡＲＴ細胞の５５％において達成される。ＴＲＢＣｇＲＮＡを対照として使用する。Ｐ値を、ログランクマンテル・コックス検定によって決定した。

【0049】

【図7】図７Ａおよび７Ｂは、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありの８×１０^５個の１９２８ｚＣＡＲＣＤ８^＋Ｔ細胞で処置した（図７Ａ）またはＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありの４×１０^５個の１９２８ｚＣＡＲＣＤ８^＋Ｔ細胞で処置した（図７Ｂ）、ＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を保有するマウスのカプラン・マイヤー生存分析を示す。Ｐ値を、ログランクマンテル・コックス検定によって決定した。

【発明を実施するための形態】

【0050】

５．発明の詳細な説明
本開示の主題は、免疫療法（例えば、Ｔ細胞免疫療法）の活性および／または有効性を増強することが可能である融合ポリペプチドを提供する。融合ポリペプチドは、抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＣＲ様融合分子）を含む細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の活性および／または有効性を増強することができる。本開示の主題はまた、標的抗原に対する細胞の免疫応答を誘導および／もしくは増強するために、ならびに／または新生物もしくは他の疾患／障害（例えば、自己免疫疾患および感染性疾患）を処置および／もしくは防止するためにそのような融合ポリペプチドを使用する方法も提供し、例えば、ここでは抗原特異的免疫応答の増加が望ましい。本開示の主題は、少なくとも部分的に、本明細書に開示される融合ポリペプチドが、抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＣＲ様融合分子）を含む細胞の活性（例えば、細胞傷害性）を増強することができるという発見に基づいている。

【0051】

本開示の非限定的な実施形態を、本明細書および実施例に記載する。

【0052】

開示を限定ではなく明快にする目的で、詳細な説明を、以下の小区分に分ける：
５．１．定義；
５．２．融合ポリペプチド；
５．３．細胞；
５．４．抗原認識受容体；
５．５．組成物およびベクター；
５．６．ポリペプチドおよびアナログ；
５．７．投与；
５．８．製剤化；
５．９．処置の方法；ならびに
５．１０．キット
５．１．定義

【0053】

特にそれ以外であると定義していない限り、本明細書で使用する全ての科学技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。以下の参考文献は、本開示の主題で使用される用語の多くの一般的な定義を当業者に提供する：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎｅｔａｌ．，ＤｉｃｔｉｏｎａｒｙｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄｅｄ．１９９４）；ＴｈｅＣａｍｂｒｉｄｇｅＤｉｃｔｉｏｎａｒｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｋｅｒｅｄ．，１９８８）；ＴｈｅＧｌｏｓｓａｒｙｏｆＧｅｎｅｔｉｃｓ，５ｔｈＥｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒｅｔａｌ．（ｅｄｓ．），ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ（１９９１）；およびＨａｌｅ＆Ｍａｒｈａｍ，ＴｈｅＨａｒｐｅｒＣｏｌｌｉｎｓＤｉｃｔｉｏｎａｒｙｏｆＢｉｏｌｏｇｙ（１９９１）。

【0054】

本明細書で使用される場合、「約」または「およそ」という用語は、値が測定または決定される方法、すなわち測定系の限界に部分的に依存する、当業者によって決定された特定の値の許容される誤差範囲内を意味する。例えば、「約」は、当技術分野での実践に従って３標準偏差以内または３標準偏差より上を意味し得る。あるいは、「約」は、所定の値の最大２０％、例えば最大１０％、最大５％、または最大１％の範囲を意味し得る。あるいは、特に生物系または生物プロセスに関して、用語は、一桁以内、例えば値の５倍以内または２倍以内を意味し得る。

【0055】

本明細書で使用される場合、「共刺激分子」は、抗原に対するリンパ球の効率的な応答を提供することができる抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子を指す。ある特定の実施形態では、共刺激分子は、最適なリンパ球活性化を提供することができる。

【0056】

本明細書で使用される場合、「共刺激リガンド」は、その受容体（例えば、共刺激分子）に結合すると、共刺激応答、例えば抗原認識受容体（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ））がその標的抗原に結合する場合に刺激をもたらす細胞内応答を産生する分子を指す。

【0057】

「免疫応答細胞」とは、免疫応答において機能する細胞またはその前駆体、もしくは子孫を意味する。ある特定の実施形態では、免疫応答細胞はリンパ系列の細胞である。リンパ系列の細胞の非限定的な例としては、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、およびそこからリンパ系細胞が分化し得る幹細胞が挙げられる。ある特定の実施形態では、免疫応答細胞は骨髄性系列の細胞である。

【0058】

「免疫応答細胞を活性化する」とは、免疫応答の開始をもたらす細胞におけるシグナル伝達の誘導またはタンパク質発現の変化を意味する。例えば、ＣＤ３鎖がリガンドの結合および免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＡＭ）に応答して集合すると、シグナル伝達カスケードが産生される。ある特定の実施形態では、内因性ＴＣＲまたは外因性ＣＡＲが抗原に結合すると、結合した受容体付近の多くの分子の集合（例えば、ＣＤ４またはＣＤ８、ＣＤ３γ／δ／ε／ζ等）を含む免疫シナプスの形成が起こる。膜結合シグナル伝達分子のこの集合は、ＣＤ３鎖内に含有されるＩＴＡＭモチーフをリン酸化させることができる。このリン酸化は次に、Ｔ細胞活性化経路を開始し、最終的に転写因子、例えばＮＦ－κＢおよびＡＰ－１を活性化する。これらの転写因子は、Ｔ細胞の全体的な遺伝子発現を誘導して、Ｔ細胞媒介免疫応答を開始するために、マスターレギュレーターＴ細胞タンパク質の増殖および発現のためにＩＬ－２産生を増加させる。

【0059】

「免疫応答細胞を刺激する」とは、強固で持続的な免疫応答をもたらすシグナルを意味する。様々な実施形態では、これは免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化後に起こるか、またはＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－ｌＢＢ）、ＯＸ４０、ＣＤ４０、およびＩＣＯＳを含むがこれらに限定されない受容体を通して同時に媒介される。複数の刺激シグナルを受けることは、強固で長期間のＴ細胞媒介免疫応答を開始するために重要であり得る。Ｔ細胞は、急速に阻害され、抗原に対して不応性となり得る。これらの共刺激シグナルの効果は変動し得るが、それらは一般的に、完全かつ持続的な根絶のために抗原に強固に応答する長命、増殖性で抗アポトーシス性のＴ細胞を生成するために遺伝子発現の増加をもたらす。

【0060】

「抗原認識受容体」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原に対するその結合に応答して免疫または免疫応答細胞（例えば、Ｔ細胞）を活性化することが可能な受容体を指す。

【0061】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、インタクト抗体分子のみならず、免疫原結合能を保持する抗体分子の断片も意味する。そのような断片もまた当技術分野で周知であり、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏの両方で通常、用いられる。したがって、本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、インタクト免疫グロブリン分子のみならず、周知の活性な断片Ｆ（ａｂ’）_２およびＦａｂも意味する。インタクト抗体のＦｅ断片を欠如するＦ（ａｂ’）_２およびＦａｂ断片は、循環中からより急速に取り除かれ、より少ないインタクト抗体の非特異的組織結合を有し得る（Ｗａｈｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２４：３１６－３２５（１９８３）。本明細書で使用される場合、抗体は、ネイティブ抗体全体、二重特異性抗体；キメラ抗体；Ｆａｂ、Ｆａｂ’、一本鎖Ｖ領域断片（ｓｃＦｖ）、融合ポリペプチド、および非従来型抗体を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶ_Ｈと略す）および重鎖定常（Ｃ_Ｈ）領域で構成される。重鎖定常領域は３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶ_Ｌと略す）および軽鎖定常Ｃ_Ｌ領域で構成される。軽鎖定常領域は１つのドメインＣ_Ｌで構成される。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域はさらに、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域へと細分することができ、この間にフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が点在する。各Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順に整列する３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の構成成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介し得る。

【0062】

本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である抗体の相補性決定領域アミノ酸配列として定義される。例えば、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，４ｔｈＵ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ（１９８７）を参照されたい。一般的に、抗体は、可変領域に３つの重鎖および３つの軽鎖ＣＤＲまたはＣＤＲ領域を含む。ＣＤＲは、抗体が抗原またはエピトープに結合するための接触残基の大部分を提供する。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔのシステム（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔａｌ．（１９９１）ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．９１－３２４２）を使用して表される。

【0063】

本明細書で使用される場合、「一本鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」という用語は、共有結合により連結されてＶ_Ｈ：：Ｖ_Ｌヘテロ二量体を形成する免疫グロブリンの重鎖（Ｖ_Ｈ）および軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域の融合タンパク質である。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、直接接合されるかまたはペプチドコードリンカー（例えば、１０、１５、２０、２５アミノ酸）によって接合され、Ｖ_ＨのＮ末端をＶ_ＬのＣ末端と、またはＶ_ＨのＣ末端をＶ_ＬのＮ末端と接続する。リンカーは通常、柔軟性のためにグリシンに、ならびに溶解性のためにセリンまたはスレオニンに富む。定常領域の除去、およびリンカーの導入にもかかわらず、ｓｃＦｖタンパク質は、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。一本鎖Ｆｖポリペプチド抗体は、Ｈｕｓｔｏｎ，ｅｔａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：５８７９－５８８３，１９８８）によって記載されるように、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌコード配列を含む核酸から発現させることができる。同様に、米国特許第５，０９１，５１３号、第５，１３２，４０５号、および第４，９５６，７７８号；ならびに米国特許出願公開第２００５０１９６７５４号および第２００５０１９６７５４号を参照されたい。阻害活性を有するアンタゴニスト性のｓｃＦｖが記載されている（例えば、Ｚｈａｏｅｔａｌ．，Ｈｙｒｂｉｄｏｍａ（Ｌａｒｃｈｍｔ）２００８２７（６）：４５５－５１；Ｐｅｔｅｒｅｔａｌ．，ＪＣａｃｈｅｘｉａＳａｒｃｏｐｅｎｉａＭｕｓｃｌｅ２０１２Ａｕｇｕｓｔ１２；Ｓｈｉｅｈｅｔａｌ．，ＪＩｍｕｎｏｌ２００９１８３（４）：２２７７－８５；Ｇｉｏｍａｒｅｌｌｉｅｔａｌ．，ＴｈｒｏｍｂＨａｅｍｏｓｔ２００７９７（６）：９５５－６３；Ｆｉｆｅｅｔａ．，ＪＣｌｉｎＩｎｖｓｔ２００６１１６（８）：２２５２－６１；Ｂｒｏｃｋｓｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１９９７３（３）：１７３－８４；Ｍｏｏｓｍａｙｅｒｅｔａｌ．，ＴｈｅｒＩｍｍｕｎｏｌ１９９５２（１０：３１－４０）を参照されたい。刺激活性を有するアゴニスト性のｓｃＦｖが記載されている（例えば、Ｐｅｔｅｒｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｉＣｈｅｒｎ２００３２５２７８（３８）：３６７４０－７；Ｘｉｅｅｔａｌ．，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈ１９９７１５（８）：７６８－７１；Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒｅｔａｌ．，ＣｒｉｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ１９９７１７（５－６）：４２７－５５；Ｈｏｅｔａｌ．，ＢｉｏＣｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ２００３１６３８（３）：２５７－６６を参照されたい）。

【0064】

本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、結合強度の尺度を意味する。親和性は、抗体結合部位と抗原決定基との間の立体化学的適合の緊密度、それらの間の接触面積のサイズ、ならびに／または荷電基および疎水性基の分布に依存し得る。本明細書で使用される場合、「親和性」という用語はまた、可逆的複合体の形成後の抗原－抗体結合の強度を指す「アビディティ」も含む。抗原に対する抗体の親和性を計算するための方法は、当技術分野で公知であり、様々な抗原結合実験、例えば機能的アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）を含むがこれらに限定されない。

【0065】

「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、免疫細胞または免疫応答細胞を活性化または刺激することが可能である細胞内シグナル伝達ドメインおよび膜貫通ドメインに融合した細胞外抗原結合ドメインを含む分子を指す。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインはｓｃＦｖを含む。ｓｃＦｖは、抗体の可変の重領域と軽領域との融合に由来し得る。あるいはまたはさらに、ｓｃＦｖはＦａｂ’に由来し得る（抗体に由来するのではなくて、例えば、Ｆａｂライブラリーから得られる）。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、膜貫通ドメインに、次いで細胞内シグナル伝達ドメインに融合される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、抗原に関して高い結合親和性またはアビディティを有するように選択される。

【0066】

本明細書で使用される場合、「核酸分子」という用語は、目的のポリペプチドまたはその断片をコードする任意の核酸分子を含む。そのような核酸分子は、内因性の核酸配列と１００％相同または同一である必要はないが実質的な同一性を示し得る。内因性の配列と「実質的な同一性」または「実質的な相同性」を有するポリヌクレオチドは典型的に、二本鎖核酸分子の少なくとも１つの鎖とハイブリダイズすることが可能である。「ハイブリダイズする」とは、様々なストリンジェンシーの条件下で相補的ポリヌクレオチド配列（例えば、本明細書で記載される遺伝子）またはその一部との間で二本鎖分子を形成する対を意味する（例えば、Ｗａｈｌ，Ｇ．Ｍ．ａｎｄＳ．Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ（１９８７）ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．１５２：３９９；Ｋｉｍｍｅｌ，Ａ．Ｒ．（１９８７）ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．１５２：５０７を参照されたい）。

【0067】

例えば、ストリンジェントな塩濃度は通常、約７５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、例えば約５００ｍＭ未満のＮａＣｌおよび５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、または約２５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび２５ｍＭのクエン酸三ナトリウムである。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、有機溶媒、例えばホルムアミドの非存在下で得ることができるが、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％ホルムアミド、例えば少なくとも約５０％ホルムアミドの存在下で得ることができる。ストリンジェントな温度条件は通常、少なくとも約３０℃、少なくとも約３７℃、または少なくとも約４２℃の温度を含む。様々な追加のパラメーター、例えばハイブリダイゼーション時間、洗浄剤、例えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度、および担体ＤＮＡを含めるかまたは除外するかは、当業者に周知である。様々なレベルのストリンジェンシーは、必要に応じてこれらの様々な条件を組み合わせることによって達成される。ある特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、３０℃、７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および１％ＳＤＳ中で起こる。ある特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、３７℃、５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％ＳＤＳ、３５％ホルムアミド、および１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）中で起こる。ある特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、４２℃、２５０ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、および２００μｇ／ｍｌのｓｓＤＮＡ中で起こる。これらの条件に関する有用な変形形態は、当業者には容易に明らかとなる。

【0068】

ほとんどの適用に関して、ハイブリダイゼーション後の洗浄するステップもまた、ストリンジェンシーが変動する。洗浄のストリンジェンシー条件は、塩濃度によっておよび温度によって定義され得る。上記のように、洗浄のストリンジェンシーは、塩濃度を減少させることによって、または温度を上昇させることによって増加させることができる。例えば、洗浄ステップに関するストリンジェントな塩濃度は、約３０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、例えば約１５ｍＭ未満のＮａＣｌおよび１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウムであり得る。洗浄ステップのためのストリンジェントな温度条件は通常、少なくとも約２５℃、少なくとも約４２℃、または少なくとも約６８℃の温度を含む。ある特定の実施形態では、洗浄ステップは、２５℃、３０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％ＳＤＳ中で起こる。ある特定の実施形態では、洗浄ステップは、４２℃、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％ＳＤＳ中で起こる。ある特定の実施形態では、洗浄ステップは、６８℃、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％ＳＤＳ中で起こる。これらの条件に関する追加の変形形態は、当業者には容易に明らかとなる。ハイブリダイゼーション技術は、当業者に周知であり、例えば、ＢｅｎｔｏｎａｎｄＤａｖｉｓ（Ｓｃｉｅｎｃｅ１９６：１８０，１９７７）；ＧｒｕｎｓｔｅｉｎａｎｄＲｏｇｎｅｓｓ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ７２：３９６１，１９７５）；Ａｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＮｅｗＹｏｒｋ，２００１）；ＢｅｒｇｅｒａｎｄＫｉｍｍｅｌ（ＧｕｉｄｅｔｏＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９８７，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ）；およびＳａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋに記載される。

【0069】

「実質的に同一」または「実質的に相同な」とは、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書に記載されるアミノ酸配列のいずれか１つ）または核酸配列（例えば、本明細書に記載される核酸配列のいずれか１つ）と少なくとも約５０％相同または同一を示すポリペプチドまたは核酸分子を意味する。ある特定の実施形態では、そのような配列は、比較のために使用されるアミノ酸または核酸の配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一である。

【0070】

配列同一性は、配列分析ソフトウェア（例えば、ＳｅｑｕｅｎｃｅＡｎａｌｙｓｉｓＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅｏｆｔｈｅＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＷｉｓｃｏｎｓｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｅｎｔｅｒ、１７１０ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＡｖｅｎｕｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用ことによって測定することができる。そのようなソフトウェアは、様々な置換、欠失、および／または他の改変に対して相同性の程度を割り当てることによって同一または類似の配列を一致させる。保存的置換は典型的には、以下の群内の置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リシン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。同一性の程度を決定するための例示的なアプローチでは、ＢＬＡＳＴプログラムを、近縁の配列を示すｅ－３～ｅ－１００の間の確率スコアで使用してもよい。

【0071】

「アナログ」とは、参照ポリペプチドまたは核酸分子の機能を有する構造的に関連するポリペプチドまたは核酸分子を意味する。

【0072】

「リガンド」という用語は、本明細書で使用される場合、受容体に結合する分子を指す。ある特定の実施形態では、リガンドは別の細胞上の受容体に結合し、細胞－細胞認識および／または相互作用を可能にする。

【0073】

「構成的発現」または「構成的に発現された」という用語は、本明細書で使用される場合、全ての生理的条件下での発現または発現されることを指す。

【0074】

「疾患」とは、細胞、組織、または臓器の正常な機能に傷害を与えるまたは妨害する任意の状態、疾患、または障害、例えば新生物および細胞の病原体感染を意味する。

【0075】

「有効量」とは、治療効果を有するために十分な量を意味する。ある特定の実施形態では、「有効量」は、新生物の持続的な増殖、成長、または転移（例えば、浸潤または遊走）を停止、好転、または阻害するために十分な量である。

【0076】

「内因性」とは、細胞または組織において通常発現される核酸分子またはポリペプチドを意味する。

【0077】

「外因性」とは、細胞に内因的に存在しない核酸分子またはポリペプチドを意味する。したがって「外因性」という用語は、細胞において発現される任意の組換え核酸分子またはポリペプチド、例えば外来の、異種の、および過剰発現された核酸分子およびポリペプチドを包含する。「外因性」核酸とは、ネイティブ野生型細胞に存在しない核酸を意味し、例えば外因性核酸は、配列、位置／場所、または両方が内因性相対物とは異なり得る。明快にするために、外因性核酸は、そのネイティブの内因性相対物と比較して同じまたは異なる配列を有し得、これは、細胞そのものまたはその前駆体に遺伝子操作によって導入されてもよく、非ネイティブプロモーターまたは分泌配列などの代替の制御配列に必要に応じて連結してもよい。

【0078】

「異種核酸分子またはポリペプチド」とは、細胞または細胞から得た試料に通常存在しない核酸分子（例えば、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ、またはＲＮＡ分子）またはポリペプチドを意味する。この核酸は、別の生物に由来してもよく、または例えば細胞もしくは試料において通常発現されないｍＲＮＡ分子であり得る。

【0079】

「モジュレートする」とは、正または負に変更することを意味する。例示的なモジュレーションは、約１％、約２％、約５％、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％、または約１００％の変化を含む。

【0080】

「増加する」とは、少なくとも約５％正に変更することを意味する。変更は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、約１００％、またはそれより多くであり得る。

【0081】

「低減する」とは、少なくとも約５％負に変更することを意味する。変更は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、またはさらに約１００％であり得る。

【0082】

「単離された」、「精製された」または「生物学的に純粋な」という用語は、材料であって、そのネイティブの状態で見られるようにそれに通常付随する構成成分を様々な程度で含まない材料を指す。「単離する」とは、元の起源または周囲からの分離の程度を示す。「精製する」とは、単離よりも高い分離の程度を示す。「精製された」または「生物学的に純粋な」タンパク質は、任意の不純物がタンパク質の生物学的特性に実質的に影響を及ぼさず、他の有害な結果を引き起こしもしないように他の材料を十分に含まない。すなわち、核酸またはペプチドは、それが組換えＤＮＡ技術によって産生される場合に細胞材料、ウイルス材料、もしくは培養培地を、または化学合成される場合に前駆的化学物質もしくは他の化学物質を実質的に含まなければ精製されている。純度および均一性は典型的に、分析化学技術、例えばポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーを使用して決定される。「精製された」という用語は、核酸またはタンパク質が電気泳動ゲルにおいて本質的に１つのバンドを生じることを示し得る。改変、例えばリン酸化またはグリコシル化に供することができるタンパク質の場合、異なる改変は、異なる単離されたタンパク質を生じ得、これを個別に精製することができる。

【0083】

「単離された細胞」とは、細胞に天然に付随する分子および／または細胞構成成分から分離されている細胞を意味する。

【0084】

「抗原結合ドメイン」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞上に存在する特定の抗原決定基または抗原決定基のセットに特異的に結合することが可能なドメインを指す。

【0085】

「リンカー」とは、本明細書で使用される場合、２つまたはそれより多くのポリペプチドまたは核酸を互いに接続されるように共有結合により付着する官能基（例えば、化学物質またはポリペプチド）を意味するものとする。本明細書で使用される場合、「ペプチドリンカー」は、２つのタンパク質を共にカップリングするために（例えば、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌドメインをカップリングするために）使用される１つまたは複数のアミノ酸を指す。ある特定の実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ［配列番号７］に記載の配列を含む。

【0086】

「新生物」とは、細胞または組織の病的な増殖およびその後の他の組織または臓器への遊走または浸潤によって特徴付けられる疾患を意味する。新生物の成長は典型的に制御されず、進行性であり、正常な細胞の複製を誘発しないかまたはその中止を引き起こす条件下で起こる。新生物は、膀胱、骨、脳、乳房、軟骨、グリア、食道、卵管、胆嚢、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、神経組織、卵巣、膵臓、前立腺、骨格筋、皮膚、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、尿生殖器、尿管、尿道、子宮、および膣、またはその組織もしくは細胞タイプから選択される臓器を含むがこれらに限定されない多様な細胞タイプ、組織、または臓器を冒し得る。新生物は、がん、例えば肉腫、癌、または形質細胞腫（形質細胞の悪性腫瘍）を含む。ある特定の実施形態では、新生物はがんである。

【0087】

「受容体」とは、１つまたは複数のリガンドに選択的に結合する、細胞膜上に存在するポリペプチドまたはその一部を意味する。

【0088】

「認識する」とは、標的に選択的に結合することを意味する。腫瘍を認識するＴ細胞は、腫瘍抗原に結合する受容体（例えば、ＴＣＲまたはＣＡＲ）を発現することができる。

【0089】

「参照」または「対照」とは、比較の標準物質を意味する。例えば、ＣＡＲおよびｓｃＦｖを発現する細胞によるｓｃＦｖ－抗原結合レベルを、ＣＡＲのみを発現する対応する細胞におけるｓｃＦｖ－抗原結合レベルと比較してもよい。

【0090】

「分泌された」とは、小胞体、ゴルジ体を通しての分泌経路を介して細胞から放出される、および、細胞形質膜で一過性に融合しタンパク質を細胞外に放出する小胞として細胞から放出される、ポリペプチドを意味する。

【0091】

「シグナル配列」または「リーダー配列」とは、それらが分泌経路に入ることを方向付ける、新たに合成されたタンパク質のＮ末端に存在するペプチド配列（例えば、５、１０、１５、２０、２５、または３０アミノ酸）を意味する。例示的なリーダー配列としては、ヒトＩＬ－２シグナル配列（例えば、ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ［配列番号８］）、マウスＩＬ－２シグナル配列（例えば、ＭＹＳＭＱＬＡＳＣＶＴＬＴＬＶＬＬＶＮＳ［配列番号９］）；ヒトカッパリーダー配列（例えば、ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ［配列番号１０］）、マウスカッパリーダー配列（例えば、ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ［配列番号１１］）；ヒトＣＤ８リーダー配列（例えば、ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ［配列番号１２］）；切断型ヒトＣＤ８シグナルペプチド（例えば、ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡ［配列番号１３］）；ヒトアルブミンシグナル配列（例えば、ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＳＳＡＹＳ［配列番号１４］）；およびヒトプロラクチンシグナル配列（例えば、ＭＤＳＫＧＳＳＱＫＧＳＲＬＬＬＬＬＶＶＳＮＬＬＬＣＱＧＶＶＳ［配列番号１５］）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0092】

「可溶性」とは、水性環境において自由に拡散可能であるポリペプチドを意味する（例えば、膜に結合していない）。

【0093】

「特異的に結合する」とは、目的の生物学的分子（例えば、ポリペプチド）を認識し、それに結合するが、本開示のポリペプチドを天然に含む試料、例えば生物試料中の他の分子を実質的に認識も結合もしないポリペプチドまたはその断片を意味する。

【0094】

「腫瘍抗原」という用語は、本明細書で使用される場合、正常なまたは非新生物細胞と比較して腫瘍細胞上で独自にまたは差次的に発現される抗原（例えば、ポリペプチド）を指す。ある特定の実施形態では、腫瘍抗原は、抗原認識受容体（例えば、ＣＤ１９、ＭＵＣ－１６）を介して免疫応答を活性化もしくは誘導することが可能な、または受容体－リガンド結合（例えば、ＣＤ４７、ＰＤ－Ｌ１／Ｌ２、Ｂ７．１／２）を介して免疫応答を抑制することが可能な、腫瘍によって発現される任意のポリペプチドを含む。

【0095】

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、それらを米国特許法に帰する広い意味を有すると意図され、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」等を意味し得る。

【0096】

本明細書で使用される場合、「処置」は、処置される個体または細胞の疾患経過を変更する試みでの臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理の過程の間のいずれかに実施することができる。処置の治療効果としては、疾患の発生または再発を防止すること、症状の軽減、疾患の任意の直接または間接的な病的結果の縮小、転移を防止すること、疾患進行速度を減少すること、疾患状態の好転または緩和、および寛解または予後の改善が、限定なしに挙げられる。疾患または障害の進行を予防することによって、処置は、罹患したもしくは診断された対象、または障害を有することが疑われる対象における障害による悪化を防止することができるが、処置はまた、障害のリスクがある対象または障害を有することが疑われる対象における障害の発生または障害の症状を防止し得る。

【0097】

本明細書における「個体」または「対象」は、ヒトまたは非ヒト動物、例えば哺乳動物などの脊椎動物である。哺乳動物としては、ヒト、霊長類、農場動物、競技用動物、齧歯類、およびペットが挙げられるがこれらに限定されない。非ヒト動物対象の非限定的な例としては、マウス、ラット、ハムスター、およびモルモットなどの齧歯類；ウサギ；イヌ；ネコ；ヒツジ；ブタ；ヤギ；ウシ；ウマ；ならびに非ヒト霊長類、例えば類人猿およびサルが挙げられる。「免疫無防備状態」という用語は、本明細書で使用される場合、免疫不全を有する対象を指す。前記対象は、健康な免疫系を有する人では通常疾患を引き起こさないが、免疫系の機能が不良であるかまたは抑制されている人を冒し得る生物によって引き起こされる感染症である、日和見感染症に対して非常に脆弱である。

【0098】

本明細書で使用される場合、分子またはポリペプチドの「機能的断片」は、分子またはポリペプチドの主な機能の少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％を保持する分子またはポリペプチドの断片を含む。

【0099】

本開示の主題の他の態様は、以下の開示に記載され、本開示の主題の範囲内である。
５．２．融合ポリペプチド

【0100】

本開示の主題は、抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＣＲ様融合分子）を含む細胞の活性および／または有効性を増強することが可能である融合ポリペプチドを提供する。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ａ）共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン、ならびにｂ）第１の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。
５．２．１．共刺激リガンド

【0101】

共刺激リガンドは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーメンバー、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーメンバー、およびそれらの組合せからなる群から選択することができる。ＴＮＦファミリーメンバーは、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ４０Ｌ、およびそれらの組合せからなる群から選択することができる。Ｉｇスーパーファミリーメンバーは、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳリガンド（ＩＣＯＳＬＧ（「ＣＤ２７５」としても公知）、およびそれらの組合せからなる群から選択することができる。

【0102】

ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはＣＤ８０である。ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはヒトＣＤ８０である。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０は、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００５１８２を有するアミノ酸配列（配列番号１６）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号１６を以下に提供する。

【化1】

【0103】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の細胞外ドメインは、配列番号１に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸１～２４２）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の細胞外ドメインは、配列番号１に記載のアミノ酸配列またはその機能的断片を含むかまたはそれからなる。配列番号１の機能的断片は、少なくとも約５０、少なくとも約７５、少なくとも約１００、少なくとも約１２５、少なくとも約１５０、少なくとも約１７５、または少なくとも約２００、または少なくとも約２２０アミノ酸の長さである配列番号１の連続する部分であり得る。ある特定の実施形態では、配列番号１の機能的断片は、ＣＤ８０の細胞外ドメインの主な機能の少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％を保持する。ＣＤ８０の細胞外ドメインの主な機能の非限定的な例としては、ＣＤ２８に結合すること／それと相互作用すること、ＣＴＬＡ－４に結合すること／それと相互作用すること、ＰＤ－Ｌ１に結合すること／それと相互作用すること、およびＣＤ８０ホモ二量体形成に寄与することが挙げられる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の細胞外ドメインは、配列番号１に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸１～２４２）を含むかまたはそれからなる。配列番号１を以下に提供する。

【化2】

【0104】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むかまたはそれからなる。配列番号２の断片は、少なくとも約５、少なくとも約１０、少なくとも約１５、または少なくとも約２０アミノ酸の長さであり得る。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）を含むかまたはそれからなる。配列番号２を以下に提供する。

【化3】

【0105】

ある特定の実施形態では、共刺激リガンドは４－１ＢＢＬである。ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはヒト４－１ＢＢＬである。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢＬは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００３８０２．１を有するアミノ酸配列（配列番号１７）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号１７を以下に提供する。

【化4-1】

【化4-2】

【0106】

ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはＯＸ４０Ｌである。ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはヒトＯＸ４０Ｌである。ある特定の実施形態では、ＯＸ４０Ｌは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００３３１７を有するアミノ酸配列（配列番号１８）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号１８を以下に提供する。

【化5】

【0107】

ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはＣＤ７０である。ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはヒトＣＤ７０である。ある特定の実施形態では、ＣＤ７０は、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１２４３を有するアミノ酸配列（配列番号１９）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号１９を以下に提供する。

【化6】

【0108】

ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはＣＤ８６である。ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはヒトＣＤ８６である。ある特定の実施形態では、ＣＤ８６は、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿７８７０５８．５を有するアミノ酸配列（配列番号２０）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号２０を以下に提供する。

【化7-1】

【化7-2】

【0109】

ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはＧＩＴＲＬである。ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはヒトＧＩＴＲＬである。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲＬは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００５０８３．２を有するアミノ酸配列（配列番号２１）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号２１を以下に提供する。

【化8】

【0110】

ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはＩＣＯＳリガンド（ＩＣＯＳＬＧ）である。ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはヒトＩＣＯＳＬＧである。ある特定の実施形態では、ＩＣＯＳＬＧは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿０５６０７４．１を有するアミノ酸配列（配列番号２２）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号２２を以下に提供する。

【化9】

【0111】

ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはＣＤ４０Ｌ（「ＣＤ１５４」としても公知）である。ある特定の実施形態では、共刺激リガンドはヒトＣＤ４０Ｌである。ある特定の実施形態では、ＣＤ４０Ｌは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００００６５．１を有するアミノ酸配列（配列番号２３）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号２３を以下に提供する。

【化10】

【0112】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、第２の共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、第３の共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、第４の共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、第５の共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、第１の、第２の、第３の、第４の、および第５の共刺激リガンドは、互いに同じかまたは異なり得る。

【0113】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。
５．２．２．共刺激分子

【0114】

共刺激分子の非限定的な例としては、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ－１０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２、およびそれらの組合せが挙げられる。

【0115】

ある特定の実施形態では、共刺激分子は４－１ＢＢである。４－１ＢＢは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドとして作用し、刺激活性を有し得る。ある特定の実施形態では、共刺激分子はヒト４－１ＢＢである。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１５５２を有するアミノ酸配列（配列番号２４）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号２４を以下に提供する。

【化11】

【0116】

ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内ドメインは、配列番号３に記載のアミノ酸配列（または配列番号２４のアミノ酸２１４～２５５）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内ドメインは、配列番号３に記載のアミノ酸配列またはその機能的断片を含むかまたはそれからなる。配列番号３の機能的断片は、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、または少なくとも約４０アミノ酸の長さである配列番号３の連続する部分であり得る。ある特定の実施形態では、配列番号３の機能的断片は、４－１ＢＢの細胞内ドメインの主な機能の少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％を保持する。４－１ＢＢの細胞内ドメインの主な機能の非限定的な例としては、免疫応答細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化および増殖のための共刺激シグナル伝達を提供すること、ならびに下流のアダプター（例えば、ＴＲＡＦ）と相互作用することおよび活性化することが挙げられる。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内ドメインは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号３を以下に提供する：

【化12】

【0117】

ある特定の実施形態では、共刺激分子はＣＤ２８である。ある特定の実施形態では、共刺激分子はヒトＣＤ２８である。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８は、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００６１３０を有するアミノ酸配列（配列番号２５）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号２５を以下に提供する。

【化13】

【0118】

ある特定の実施形態では、ＣＤ２８の細胞内ドメインは、配列番号５に記載のアミノ酸配列（または配列番号２５のアミノ酸１８０～２１９）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８の細胞内ドメインは、配列番号５に記載のアミノ酸配列またはその機能的断片を含むかまたはそれからなる。配列番号５の機能的断片は、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、または少なくとも約３５アミノ酸の長さである配列番号５の連続する部分であり得る。ある特定の実施形態では、配列番号５の機能的断片は、ＣＤ２８の細胞内ドメインの主な機能の少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％を保持する。ＣＤ２８の細胞内ドメインの主な機能の非限定的な例としては、免疫応答細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化および増殖のための共刺激シグナル伝達を提供すること、ならびにタンパク質アダプター（例えば、ＰＩ３Ｋ、ＧＲＢ２、およびＬＣＫ）と相互作用することが挙げられる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８の細胞内ドメインは、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号５を以下に提供する：

【化14】

【0119】

ある特定の実施形態では、共刺激分子はＯＸ４０である。ある特定の実施形態では、共刺激分子はヒトＯＸ４０である。ある特定の実施形態では、ＯＸ４０は、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００３３１８．１を有するアミノ酸配列（配列番号２６）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＯＸ４０の細胞内ドメインは、配列番号２６のアミノ酸２３６～２７７もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＯＸ４０の細胞内ドメインは、配列番号２６のアミノ酸２３６～２７７またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＯＸ４０の細胞内ドメインは、配列番号２６のアミノ酸２３６～２７７を含むかまたはそれからなる。配列番号２６を以下に提供する。

【化15】

【0120】

ある特定の実施形態では、共刺激分子はＩＣＯＳである。ある特定の実施形態では、共刺激分子はヒトＩＣＯＳである。ある特定の実施形態では、ＩＣＯＳは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿０３６２２４．１を有するアミノ酸配列（配列番号２７）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一で相同である（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｏｒｉｄｅｎｔｉｃａｌｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＩＣＯＳの細胞内ドメインは、配列番号２７のアミノ酸１６２～１９９もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＩＣＯＳの細胞内ドメインは、配列番号２７のアミノ酸１６２～１９９またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＩＣＯＳの細胞内ドメインは、配列番号２７のアミノ酸１６２～１９９を含むかまたはそれからなる。配列番号２７を以下に提供する。

【化16】

【0121】

ある特定の実施形態では、共刺激分子はＤＡＰ－１０である。ある特定の実施形態では、共刺激分子はヒトＤＡＰ－１０である。ある特定の実施形態では、ＤＡＰ－１０は、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１００７４７０．１を有するアミノ酸配列（配列番号２８）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＤＡＰ１０の細胞内ドメインは、配列番号２８のアミノ酸７０～９２もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＤＡＰ１０の細胞内ドメインは、配列番号２８のアミノ酸７０～９２またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＤＡＰ１０の細胞内ドメインは、配列番号２８のアミノ酸７０～９２を含むかまたはそれからなる。配列番号２８を以下に提供する。

【化17】

【0122】

ある特定の実施形態では、共刺激分子はＣＤ２７である。ある特定の実施形態では、共刺激分子はヒトＣＤ２７である。ある特定の実施形態では、ＣＤ２７は、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１２３３．１を有するアミノ酸配列（配列番号２９）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一で相同である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２７の細胞内ドメインは、配列番号２９のアミノ酸２１３～２６０もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２７の細胞内ドメインは、配列番号２９のアミノ酸２１３～２６０またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２７の細胞内ドメインは、配列番号２９のアミノ酸２１３～２６０を含むかまたはそれからなる。配列番号２９を以下に提供する。

【化18】

【0123】

ある特定の実施形態では、共刺激分子はＣＤ４０である。ある特定の実施形態では、共刺激分子はヒトＣＤ４０である。ある特定の実施形態では、ＣＤ４０は、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１２４１．１を有するアミノ酸配列（配列番号３０）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ４０の細胞内ドメインは、配列番号３０のアミノ酸２１６～２７７もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ４０の細胞内ドメインは、配列番号３０のアミノ酸２１６～２７７またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ４０の細胞内ドメインは、配列番号３０のアミノ酸２１６～２７７を含むかまたはそれからなる。配列番号３０を以下に提供する。

【化19】

【0124】

ある特定の実施形態では、共刺激分子はＮＫＧ２Ｄである。ある特定の実施形態では、共刺激分子はヒトＮＫＧ２Ｄである。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿０３１３８６．２を有するアミノ酸配列（配列番号３１）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一で相同である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄの細胞内ドメインは、配列番号３１のアミノ酸７３～２１６もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄの細胞内ドメインは、配列番号３１のアミノ酸７３～２１６またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄの細胞内ドメインは、配列番号３１のアミノ酸７３～２１６を含むかまたはそれからなる。配列番号３１を以下に提供する。

【化20】

【0125】

ある特定の実施形態では、共刺激分子はＣＤ２である。ある特定の実施形態では、共刺激分子はヒトＣＤ２である。ある特定の実施形態では、ＣＤ２は、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１３１５５３８を有するアミノ酸配列（配列番号３２）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２の細胞内ドメインは、配列番号３２のアミノ酸２３６～３５１もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２の細胞内ドメインは、配列番号３２のアミノ酸アミノ酸２３６～３５１またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２の細胞内ドメインは、配列番号３２のアミノ酸２３６～３５１を含むかまたはそれからなる。配列番号３２を以下に提供する。

【化21】

【0126】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、第２の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、第３の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、第４の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、第５の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。ある特定の実施形態では、第１の、第２の、第３の、第４の、および第５の共刺激分子は、互いに同じかまたは異なり得る。

【0127】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、４－１ＢＢである第１の共刺激分子の細胞内ドメイン、およびＣＤ２８である第２の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。
５．２．３．サイトカイン受容体

【0128】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドはさらに、サイトカイン受容体を含む。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドはさらに、サイトカイン受容体のシグナル伝達ドメインを含む。サイトカイン受容体またはサイトカイン受容体のシグナル伝達ドメインは、融合ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に配置され得る。ある特定の実施形態では、サイトカイン受容体またはサイトカイン受容体のシグナル伝達ドメインは、融合ポリペプチドのＣ末端に配置される。ある特定の実施形態では、サイトカイン受容体またはサイトカイン受容体のシグナル伝達ドメインは、共刺激リガンド（例えば、ＣＤ８０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ８６、またはＩＣＯＳＬＧ）のＣ末端に配置される。サイトカイン受容体の非限定的な例としては、ＣＤ１２１ａ、ＣＤｗ１２１ｂ、ＩＬ－１８Ｒａ、ＩＬ１８Ｒｂ、ＣＤ１２２、ＣＤ２５、ＣＤ１３２、ＣＤ１２４、ＣＤ２１３ａ１３、ＣＤ１２７、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ１５Ｒａ、ＣＤｗ１２５、ＣＤｗ１３１、ＣＤ１２６、ＣＤ１３０、ＩＬ１１Ｒａ、Ｃｄ１１４、ＣＤ２１２、ＣＤ４、ＣＤｗ２１７、ＣＤ１１８、およびＣＤｗ１１９が挙げられる。
５．２．４．例示的な融合ポリペプチド

【0129】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ａ）ＣＤ８０である共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン；ならびにｂ）４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ－１０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２、およびそれらの組合せからなる群から選択される第１の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。
５．２．４．１．ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチド

【0130】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ａ）ＣＤ８０である共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン；ならびにｂ）４－１ＢＢである第１の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。

【0131】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８０は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0132】

【0133】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）を含むかまたはそれからなる。

【0134】

ある特定の実施形態では、４－１ＢＢは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0135】

ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内ドメインは、配列番号３に記載のアミノ酸配列（または配列番号２４のアミノ酸２１４～２５５）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内ドメインは、配列番号３に記載のアミノ酸配列またはその機能的断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内ドメインは、配列番号３に記載のアミノ酸配列（または配列番号２４のアミノ酸２１４～２５５）を含むかまたはそれからなる。

【0136】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号４に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号４を以下に提供する。

【0137】

【化22】

５．２．４．２．ＣＤ８０／４－１ＢＢ－ＣＤ２８融合ポリペプチド

【0138】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ａ）ＣＤ８０である共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン；ｂ）４－１ＢＢである第１の共刺激分子の細胞内ドメイン；ならびにｃ）ＣＤ２８である第２の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。

【0139】

【0140】

【0141】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）を含むかまたはそれからなる。

【0142】

【0143】

ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列（または配列番号２４のアミノ酸２１４～２５５）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内ドメインは、配列番号３に記載のアミノ酸配列またはその機能的断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内ドメインは、配列番号３に記載のアミノ酸配列（または配列番号２４のアミノ酸２１４～２５５）を含むかまたはそれからなる。

【0144】

ある特定の実施形態では、ＣＤ２８は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0145】

ある特定の実施形態では、ＣＤ２８の細胞内ドメインは、配列番号５に記載のアミノ酸配列（または配列番号２５のアミノ酸１８０～２１９）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８の細胞内ドメインは、配列番号５に記載のアミノ酸配列またはその機能的断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８の細胞内ドメインは、配列番号５に記載のアミノ酸配列（または配列番号２５のアミノ酸１８０～２１９）を含むかまたはそれからなる。

【0146】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号６に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号６を以下に提供する。

【化23】

５．２．４．３．ＣＤ８０／ＣＤ２８融合ポリペプチド

【0147】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ａ）ＣＤ８０である共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン；ならびにｂ）ＣＤ２８である第１の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。

【0148】

【0149】

【0150】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）を含むかまたはそれからなる。

【0151】

【0152】

【0153】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ａ）ＣＤ８０である共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン；ならびにｂ）ＯＸ４０である第１の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。

【0154】

【0155】

【0156】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）を含むかまたはそれからなる。

【0157】

ある特定の実施形態では、ＯＸ４０は、配列番号２６に記載のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＯＸ４０の細胞内ドメインは、配列番号２６のアミノ酸２３６～２７７もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＯＸ４０の細胞内ドメインは、配列番号２６のアミノ酸２３６～２７７またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＯＸ４０の細胞内ドメインは、配列番号２６のアミノ酸２３６～２７７を含むかまたはそれからなる。
５．２．４．５．ＣＤ８０／ＩＣＯＳ融合ポリペプチド

【0158】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ａ）ＣＤ８０である共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン；ならびにｂ）ＩＣＯＳである第１の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。

【0159】

【0160】

【0161】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）を含むかまたはそれからなる。

【0162】

ある特定の実施形態では、ＩＣＯＳは、配列番号２７に記載のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一で相同である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＩＣＯＳの細胞内ドメインは、配列番号２７のアミノ酸１６２～１９９もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＩＣＯＳの細胞内ドメインは、配列番号２７のアミノ酸１６２～１９９またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＩＣＯＳの細胞内ドメインは、配列番号２７のアミノ酸１６２～１９９を含むかまたはそれからなる。
５．２．４．６．ＣＤ８０／ＤＡＰ－１０融合ポリペプチド

【0163】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ａ）ＣＤ８０である共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン；ならびにｂ）ＤＡＰ－１０である第１の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。

【0164】

【0165】

【0166】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）を含むかまたはそれからなる。

【0167】

ある特定の実施形態では、ＤＡＰ－１０は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＤＡＰ１０の細胞内ドメインは、配列番号２８のアミノ酸７０～９２もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＤＡＰ１０の細胞内ドメインは、配列番号２８のアミノ酸７０～９２またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＤＡＰ１０の細胞内ドメインは、配列番号２８のアミノ酸７０～９２を含むかまたはそれからなる。
５．２．４．７．ＣＤ８０／ＣＤ２７融合ポリペプチド

【0168】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ａ）ＣＤ８０である共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン；ならびにｂ）ＣＤ２７である第１の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。

【0169】

【0170】

【0171】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）を含むかまたはそれからなる。

【0172】

ある特定の実施形態では、ＣＤ２７は、配列番号２９に記載のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一で相同である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２７の細胞内ドメインは、配列番号２９のアミノ酸２１３～２６０もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２７の細胞内ドメインは、配列番号２９のアミノ酸２１３～２６０またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２７の細胞内ドメインは、配列番号２９のアミノ酸２１３～２６０を含むかまたはそれからなる。
５．２．４．８．ＣＤ８０／ＣＤ４０融合ポリペプチド

【0173】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ａ）ＣＤ８０である共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン；ならびにｂ）ＣＤ４０である第１の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。

【0174】

【0175】

【0176】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）を含むかまたはそれからなる。

【0177】

ある特定の実施形態では、ＣＤ４０は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ４０の細胞内ドメインは、配列番号３０のアミノ酸２１６～２７７もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ４０の細胞内ドメインは、配列番号３０のアミノ酸２１６～２７７またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ４０の細胞内ドメインは、配列番号３０のアミノ酸２１６～２７７を含むかまたはそれからなる。
５．２．４．９．ＣＤ８０／ＮＫＧ２Ｄ融合ポリペプチド

【0178】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ａ）ＣＤ８０である共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン；ならびにｂ）ＮＫＧ２Ｄである第１の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。

【0179】

【0180】

【0181】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）を含むかまたはそれからなる。

【0182】

ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一で相同である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄの細胞内ドメインは、配列番号３１のアミノ酸７３～２１６もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄの細胞内ドメインは、配列番号３１のアミノ酸７３～２１６またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄの細胞内ドメインは、配列番号３１のアミノ酸７３～２１６を含むかまたはそれからなる。
５．２．４．９．ＣＤ８０／ＣＤ２融合ポリペプチド

【0183】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ａ）ＣＤ８０である共刺激リガンドの細胞外ドメインおよび膜貫通ドメイン；ならびにｂ）ＣＤ２である第１の共刺激分子の細胞内ドメインを含む。

【0184】

【0185】

【0186】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０の膜貫通ドメインは、配列番号２に記載のアミノ酸配列（または配列番号１６のアミノ酸２４３～２６３）を含むかまたはそれからなる。

【0187】

ある特定の実施形態では、ＣＤ２は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２の細胞内ドメインは、配列番号３２のアミノ酸２３６～３５１もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２の細胞内ドメインは、配列番号３２のアミノ酸２３６～３５１またはその断片を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２の細胞内ドメインは、配列番号３２のアミノ酸２３６～３５１を含むかまたはそれからなる。
５．２．５．融合ポリペプチドの活性

【0188】

本開示の融合ポリペプチドは、抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＣＲ様分子）を含む細胞を刺激することが可能である。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、シスおよび／またはトランスでＴ細胞に刺激を提供する。

【0189】

ある特定の実施形態では、本開示の融合ポリペプチドに含まれる共刺激リガンドは、ＣＤ８０である。ＣＤ８０は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、およびＰＤ－Ｌ１と相互作用することができる。ＣＤ８０は、Ｔ細胞によって発現される主な共刺激分子であるＣＤ２８分子のリガンドである。活性化されると、Ｔ細胞はＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を発現し、これはＴ細胞受容体（「ＴＣＲ」）およびＣＤ２８の下流のシグナル伝達を負に調節する。ＣＴＬＡ－４は、ＣＤ８０と相互作用することによってＣＤ２８の競合剤（ｃｏｍｐｅｔｉｔｏｒ）として機能する（ＣＴＬＡ－４／ＣＤ８０の相互作用の親和性は通常、ＣＤ８０／ＣＤ２８より高い）。ＰＤ－Ｌ１、ＰＤＬ１の受容体は、ＴＣＲおよびＣＤ２８の下流のシグナロソームの脱リン酸化によってＴ細胞阻害剤として機能する。ＣＴＬＡ－４と同様に、ＰＤ－Ｌ１もまた、ある特定の条件下でＣＤ８０と相互作用することが可能である。

【0190】

本開示の融合ポリペプチド（例えば、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む融合ポリペプチド）は、３つの異なる受容体：ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、およびＰＤ－Ｌ１をライゲーションすることができる。そうすることによって、これらのライゲーションは、（ｉ）共刺激分子（例えば、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ－１０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＮＫＧ２Ｄ、またはＣＤ２）の細胞内ドメインを通してシグナル伝達すること、ならびに（ｉｉ）ＣＴＬＡ４／ＣＤ８０およびＰＤＬ－１／ＰＤ－１ライゲーションと競合し、それによってＴ細胞に対する阻害性のシグナル伝達を活性化シグナル伝達へとシフトさせることを提供する。Ｔ細胞上でのＣＤ８０の構成的発現（例えば、高レベルで）は、内因性ＣＤ２８との相互作用の際に強い共刺激を提供する。ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１と相互作用することによって、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む融合ポリペプチドは、内因性のＣＤ８０／ＣＴＬＡ４およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１（例えば、低レベルで発現される）と競合して、Ｔ細胞に正のシグナル伝達を与えることができる。ＣＴＬＡ－４は、操作されたバイスタンダーＴ細胞上に発現される。ＰＤ－Ｌ１は、異なる細胞タイプ（主に抗原提示細胞および腫瘍細胞）に発現され、操作されたＴ細胞上でもまた見出され得る。ＣＤ８０の細胞内ドメインを共刺激由来シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、および／または４－１ＢＢ等）の細胞内ドメイン）と交換することにより、ＣＤ８０シグナル伝達を負から正へとシフトさせる。

【0191】

本開示の融合ポリペプチド（例えば、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む融合ポリペプチド）は、ＣＤ２８分子との結合（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）を介してのシスおよびトランスでＴ細胞の刺激、ならびに１つまたは複数の共刺激分子（例えば、４－１ＢＢおよび／またはＣＤ２８）の細胞内ドメインを介してのシグナル伝達の送達を提供する。その上、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む融合ポリペプチドは、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１と結合することができ、２つの阻害性分子は腫瘍微小環境において上方調節されることが公知である。これらの相互作用はＴ細胞阻害をＴ細胞活性化へとシフトさせる。このように、本開示の融合ポリペプチド（例えば、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む融合ポリペプチド）は、Ｔ細胞に共刺激を与え、好ましくない腫瘍微小環境において発現されるＴ細胞阻害性受容体から確実に利益をもたらす。
５．２．６．融合ポリペプチドの調節可能性

【0192】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは調節することができ、例えば調節可能である。調節因子は、融合ポリペプチドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることができる。調節因子によって、融合ポリペプチドの発現および／または活性のスイッチをオンにする、またはスイッチをオフにすることができる。融合ポリペプチドは、その発現レベル（すなわち、構成的に高い、構成的に低い、または誘導可能）を制御することによって、または外因性の分子（例えば、抗体、Ｉｇ融合タンパク質）の投与によって調節することができる。これらのアプローチは、融合ポリペプチドの機能のスイッチをオンおよびオフにする目的を果たす。

【0193】

調節因子の非限定的な例としては、融合ポリペプチドの発現を制御することが可能なプロモーター（例えば、誘導型プロモーター）、融合ポリペプチドに含まれる共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子、ならびに融合ポリペプチドに含まれる共刺激分子の発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子が挙げられる。

【0194】

融合ポリペプチドに含まれる共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子は、共刺激リガンドに結合する抗体、ならびに共刺激リガンドに結合し、共刺激リガンドの発現および／または活性をモジュレートする融合タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、調節因子は、共刺激リガンドに結合する抗体である。

【0195】

融合ポリペプチドに含まれる共刺激分子の発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子は、共刺激分子に結合する抗体、ならびに共刺激分子に結合し、共刺激分子の発現および／または活性をモジュレートする融合タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、調節因子は、共刺激分子に結合する抗体である。

【0196】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含み、調節因子は抗ＣＤ８０抗体である。

【0197】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含み、調節因子は、ＣＤ８０に結合し、ＣＤ８０の活性をモジュレートする融合タンパク質である。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、ＣＤ８０に結合するＣＴＬＡ４断片を含む。ある特定の実施形態では、ＣＴＬＡ４断片は、アバタセプトおよびベラタセプトからなる群から選択される。
５．２．７．融合ポリペプチドをコードする核酸分子

【0198】

本開示の主題はさらに、本明細書に開示される融合ポリペプチドをコードする核酸分子を提供する。加えて、本開示の主題は、本明細書に記載される核酸分子を含むベクターを提供する。ベクターはウイルスベクターまたは非ウイルスベクターであり得る。ある特定の実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、例えばガンマレトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。
５．３．細胞

【0199】

本開示の主題は、本明細書に開示される融合ポリペプチドを含む細胞を提供する。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、細胞の抗腫瘍効果を促進することが可能である。ある特定の実施形態では、細胞は、リンパ系列の細胞および骨髄性系列の細胞からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、細胞は免疫応答細胞である。ある特定の実施形態では、免疫応答細胞はリンパ系列の細胞である。

【0200】

ある特定の実施形態では、細胞はリンパ系列の細胞である。リンパ系列の細胞は、抗体の産生、細胞性免疫系の調節、血液中の外来作用物質の検出、宿主に対して外来である細胞の検出等を提供することができる。リンパ系列の細胞の非限定的な例としては、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、そこからリンパ系細胞が分化し得る幹細胞が挙げられる。ある特定の実施形態では、幹細胞は、多能性幹細胞（例えば、胚性幹細胞）である。

【0201】

ある特定の実施形態では、細胞はＴ細胞である。Ｔ細胞は、胸腺で成熟し、主に細胞性免疫を担うリンパ球であり得る。Ｔ細胞は、適応免疫系に関係している。本開示の主題のＴ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞（セントラルメモリーＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞（または幹様メモリーＴ細胞）、および２つのタイプのエフェクターメモリーＴ細胞：例えば、Ｔ_ＥＭ細胞およびＴ_ＥＭＲＡ細胞を含む）、制御性Ｔ細胞（サプレッサーＴ細胞としても公知）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞、およびγδ Ｔ細胞を含むがこれらに限定されない任意のタイプのＴ細胞であり得る。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬまたはキラーＴ細胞）は、感染した体細胞または腫瘍細胞の死を誘導することが可能なＴリンパ球のサブセットである。患者自身のＴ細胞を、抗原認識受容体、例えばＣＡＲまたはＴＣＲの導入を通して特異的抗原を標的とするように遺伝子改変してもよい。Ｔ細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞またはＣＤ８^＋Ｔ細胞であり得る。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞はＣＤ４^＋Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞はＣＤ８^＋Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、ＣＤ８^＋Ｔ細胞はＣＤ４非依存的である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）に由来する。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４非依存的であるＣＤ８^＋Ｔ細胞であり、ＣＤ８^＋Ｔ細胞はｉＰＳＣに由来する。

【0202】

ある特定の実施形態では、細胞はＮＫ細胞である。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、細胞性免疫の一部であり、自然免疫応答の際に作用するリンパ球であり得る。ＮＫ細胞は、標的細胞上でその細胞傷害効果を実施するために予め活性化を必要としない。

【0203】

本開示の主題のヒトリンパ球のタイプとしては、末梢ドナーリンパ球、例えばＳａｄｅｌａｉｎ，Ｍ．，ｅｔａｌ．２００３ＮａｔＲｅｖＣａｎｃｅｒ３：３５－４５（ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された末梢ドナーリンパ球を開示する）、Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．Ａ．，ｅｔａｌ．２００６Ｓｃｉｅｎｃｅ３１４：１２６－１２９（αおよびβヘテロ二量体を含む全長の腫瘍抗原認識Ｔ細胞受容体複合体を発現するように遺伝子改変された末梢ドナーリンパ球を開示する）、Ｐａｎｅｌｌｉ，Ｍ．Ｃ．，ｅｔａｌ．２０００ＪＩｍｍｕｎｏｌ１６４：４９５－５０４；Ｐａｎｅｌｌｉ，Ｍ．Ｃ．，ｅｔａｌ．２０００ＪＩｍｍｕｎｏｌ１６４：４３８２－４３９２（腫瘍生検中の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）に由来するリンパ球培養を開示する）、およびＤｕｐｏｎｔ，Ｊ．，ｅｔａｌ．２００５ＣａｎｃｅｒＲｅｓ６５：５４１７－５４２７；Ｐａｐａｎｉｃｏｌａｏｕ，Ｇ．Ａ．，ｅｔａｌ．２００３Ｂｌｏｏｄ１０２：２４９８－２５０５（人工抗原提示細胞（ＡＡＰＣ）またはパルスした樹状細胞を用いる選択的にｉｎｖｉｔｒｏで増大させた抗原特異的末梢血白血球を開示する）に開示されるリンパ球が、限定なしに挙げられる。

【0204】

細胞（例えば、Ｔ細胞）は、自己、非自己（例えば、同種）であるか、または操作された前駆細胞もしくは幹細胞からｉｎｖｉｔｒｏで得ることができる。

【0205】

ある特定の実施形態では、本開示の細胞は、腫瘍微小環境をモジュレートすることが可能である。腫瘍は、免疫による認識および排除から腫瘍を保護するために悪性細胞による一連の機構を伴う、宿主免疫応答に対して好ましくない微小環境を有する。この「好ましくない腫瘍微小環境（ｈｏｓｔｉｌｅｔｕｍｏｒｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ）」は、浸潤性制御性ＣＤ４^＋Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、ＴＧＦ－βを含む免疫抑制性サイトカイン、および活性化Ｔ細胞によって発現される免疫抑制性受容体（ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－１）に標的化されるリガンドの発現を含む多様な免疫抑制因子を含む。免疫抑制のこれらの機構は、寛容の維持、および不適切な免疫応答の抑制において役割を果たすが、腫瘍微小環境内では、これらの機構は有効な抗腫瘍免疫応答を防止する。集合的に、これらの免疫抑制因子は、標的化腫瘍細胞と遭遇すると養子移入されたＣＡＲ改変Ｔ細胞の顕著なアネルギーまたはアポトーシスのいずれかを誘導することができる。

【0206】

ある特定の実施形態では、細胞は骨髄性系列の細胞である。骨髄性系列の細胞の非限定的な例としては、単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球、およびそこから骨髄系の細胞が分化し得る幹細胞が挙げられる。

【0207】

ある特定の実施形態では、幹細胞は多能性幹細胞（例えば、胚性幹細胞または人工多能性幹細胞）である。

【0208】

ある特定の実施形態では、細胞はさらに、抗原認識受容体を含む。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は細胞を活性化することが可能である。細胞が抗原認識受容体および融合ポリペプチドを共発現するように、細胞に、抗原認識受容体および融合ポリペプチドを形質導入することができる。

【0209】

融合ポリペプチドは、第１のプロモーターに作動可能に連結され得る。抗原認識受容体は、第２のプロモーターに作動可能に連結され得る。第１のプロモーターは第２のプロモーターと同じであり得る。あるいは、第１のプロモーターは第２のプロモーターとは異なる。第１および第２のプロモーターは内因性または外因性であり得る。外因性プロモーターの非限定的な例としては、伸長因子（ＥＦ）－１プロモーター、サイトメガロウイルス前初期プロモーター（ＣＭＶ）プロモーター、シミアンウイルス４０初期プロモーター（ＳＶ４０）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、およびメタロチオネインプロモーターが挙げられる。ある特定の実施形態では、第１および第２のプロモーターの一方または両方は、誘導型プロモーターである。ある特定の実施形態では、誘導型プロモーターは、ＮＦＡＴ転写応答エレメント（ＴＲＥ）プロモーター、ＣＤ６９プロモーター、ＣＤ２５プロモーター、およびＩＬ－２プロモーターから選択される。

【0210】

ある特定の実施形態では、細胞はＴ細胞であり、融合ポリペプチドおよび抗原認識受容体は、Ｔ細胞のゲノム内の遺伝子座で組み込まれる。遺伝子座の非限定的な例としては、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、ＴＲＤＣ遺伝子座、およびＴＲＧＣ遺伝子座が挙げられる。ある特定の実施形態では、遺伝子座はＴＲＡＣ遺伝子座またはＴＲＢＣ遺伝子座である。ＣＡＲをＴ細胞のゲノム内の部位へと標的化する方法は、その両方のその全体が参照により組み込まれる、ＷＯ２０１７１８０９８９およびＥｙｑｕｅｍｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．（２０１７Ｍａｒ２）；５４３（７６４３）：１１３－１１７に開示されている。

【0211】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドおよび抗原認識受容体は、免疫阻害分子をコードする遺伝子座で組み込まれる。免疫阻害分子の非限定的な例としては、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７－１、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＴＩＭ３、ＳＨＰ－１、ＳＨＰ－２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１６０、およびＬＡＩＲ１が挙げられる。
５．４．抗原認識受容体

【0212】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は目的の抗原に結合する。ある特定の実施形態では、抗原は腫瘍抗原または病原体抗原である。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体はＴＣＲ様融合分子である。
５．４．１．抗原

【0213】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は腫瘍抗原に結合する。任意の腫瘍抗原（抗原性ペプチド）を本明細書に記載される腫瘍関連実施形態に使用することができる。抗原の起源としては、がんタンパク質が挙げられるがこれらに限定されない。抗原は、ペプチドとして、またはインタクトタンパク質もしくはその一部として発現され得る。インタクトタンパク質またはその一部は、ネイティブまたは変異誘発であり得る。腫瘍抗原の非限定的な例としては、ＣＤ１９、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ８、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ４４Ｖ６、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染細胞の抗原（例えば、細胞表面抗原）、上皮糖タンパク質－２（ＥＧＰ－２）、上皮糖タンパク質－４０（ＥＧＰ－４０）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、受容体チロシンタンパク質キナーゼＥｒｂ－Ｂ２、Ｅｒｂ－Ｂ３、Ｅｒｂ－Ｂ４、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、胎児型アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）、葉酸受容体－α、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ－２）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、インターロイキン１３受容体サブユニットアルファ－２（ＩＬ－１３Ｒα２）、κ－軽鎖、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）、ＬｅｗｉｓＹ（ＬｅＹ）、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）、黒色腫抗原ファミリーＡ、１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、ムチン１（ＭＵＣ１）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＥＲＢＢ２、ＭＡＧＥＡ３、ｐ５３、ＭＡＲＴ１、ＧＰ１００、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）、チロシナーゼ、サバイビン、ｈＴＥＲＴ、ＥｐｈＡ２、ＮＫＧ２Ｄリガンド、がん－精巣抗原ＮＹ－ＥＳ０－１、癌胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＯＲ１、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、血管内皮成長因子Ｒ２（ＶＥＧＦ－Ｒ２）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ－１）、ＢＣＭＡ、ＮＫＣＳ１、ＥＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲ－ＶＩＩＩ、ＣＤ９９、ＣＤ７０、ＡＤＧＲＥ２、ＣＣＲ１、ＬＩＬＲＢ２、ＰＲＡＭＥ、およびＥＲＢＢが挙げられる。

【0214】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体はＣＤ１９に結合する。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体はマウスＣＤ１９ポリペプチドに結合する。ある特定の実施形態では、マウスＣＤ１９ポリペプチドは配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号３３を以下に提供する。

【化24】

【0215】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体はヒトＣＤ１９ポリペプチドに結合する。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１９ポリペプチドは配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号３４を以下に提供する。

【化25】

【0216】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、ＣＤ１９タンパク質の細胞外ドメインに結合する。

【0217】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、例えば免疫無防備状態の対象における、例えば病原体感染または他の感染性疾患を処置および／または防止することにおける使用のために、病原体抗原に結合する。病原体の非限定的な例としては、疾患を引き起こすことが可能なウイルス、細菌、真菌、寄生虫、および原虫が挙げられる。

【0218】

ウイルスの非限定的な例としては、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ヒト免疫不全ウイルス、例えばＨＩＶ－１（ＨＤＴＶ－ＩＩＩ、ＬＡＶＥ、またはＨＴＬＶ－ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ－ＩＩＩとも称される；および他の分離株、例えばＨＩＶ－ＬＰ；Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ（例えば、胃腸炎を引き起こす株）；Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；Ｆｌａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、デングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；Ｃｏｒｏｎｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、コロナウイルス）；Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、エボラウイルス）；Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、インフルエンザウイルス）；Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ハンタンウイルス、ブニヤウイルス（ｂｕｎｇａｖｉｒｕｓ）、フレボウイルスおよびナイラウイルス（Ｎａｉｒａｖｉｒｕｓ））；Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ（出血熱ウイルス）；Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、レオウイルス、オルビウイルス、およびロタウイルス）；Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ；Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ（Ｂ型肝炎ウイルス）；Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａ（パルボウイルス）；Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ（乳頭腫ウイルス、ポリオーマウイルス）；Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ（ほとんどのアデノウイルス）；Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１型および２型、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス；Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；ならびにＩｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、アフリカブタ熱ウイルス）；ならびに分類不能ウイルス（例えば、デルタ型肝炎の因子（Ｂ型肝炎ウイルスの欠陥サテライトであると考えられる）、非Ａ非Ｂ型肝炎の因子（クラス１＝内部伝播；クラス２＝非経口伝播（すなわち、Ｃ型肝炎）；ノーウォークおよび関連ウイルス、ならびにアストロウイルス）が挙げられる。

【0219】

細菌の非限定的な例としては、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種が挙げられる。感染性細菌の具体的な例としては、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉｓ、Ｂｏｒｅｌｉａｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｓｐｓ（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍ．ｋａｎｓａｉｉ、Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ、Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群連鎖球菌）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（ビリダンス群）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｂｏｖｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（嫌気性種）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、病原性Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｓｐ．、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｊｅｊｕｎｉ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓａｎｔｒａｃｉｓ、ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐ．、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｓｐｐ．、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｒｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｔｅｔａｎｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓｓｐ．、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｐａｌｌｉｄｉｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｐｅｒｔｅｎｕｅ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、およびＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓｉｓｒａｅｌｌｉ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｃｏｒｙｎｏｂａｃｔｅｒｉａｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａｈｅｎｓｅｌａｅ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａｑｕｉｎｔａｎａ、Ｃｏｘｉｅｌｌａｂｕｒｎｅｔｉｉ、ｃｈｌａｍｙｄｉａ、ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｓｐｐ．、Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ、Ｂｒｕｃｅｌｌａｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓｍｉｒａｂｉｌｉｓ、およびＰｒｏｔｅｕｓが挙げられるがこれらに限定されない。

【0220】

ある特定の実施形態では、病原体抗原は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に存在するウイルス抗原、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）に存在するウイルス抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に存在するウイルス抗原、またはインフルエンザウイルスに存在するウイルス抗原である。
５．４．２．Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）

【0221】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体はＴＣＲである。ＴＣＲは、インバリアントＣＤ３鎖分子との複合体の一部として発現される２つの可変鎖からなるジスルフィド結合したヘテロ二量体タンパク質である。ＴＣＲは、Ｔ細胞の表面上に見出され、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合したペプチドとして抗原を認識する役割を担う。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、アルファ鎖およびベータ鎖を含む（それぞれ、ＴＲＡおよびＴＲＢによってコードされる）。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、ガンマ鎖およびデルタ鎖を含む（それぞれ、ＴＲＧおよびＴＲＤによってコードされる）。

【0222】

ＴＣＲの各鎖は、２つの細胞外ドメイン：可変（Ｖ）領域および定常（Ｃ）領域で構成される。定常領域は、細胞膜の近位にあり、その後に膜貫通領域および短い細胞質尾部が続く。可変領域はペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。両方の鎖の可変ドメインは各々が３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する。

【0223】

ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、３つの二量体シグナル伝達モジュール：ＣＤ３δ／ε、ＣＤ３γ／ε、およびＣＤ２４７ζ／ζまたはζ／ηと受容体複合体を形成することができる。ＴＣＲ複合体がその抗原およびＭＨＣと結合すると（ペプチド／ＭＨＣ）、ＴＣＲ複合体を発現するＴ細胞が活性化される。

【0224】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は内因性ＴＣＲである。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、天然に存在するＴＣＲである。

【0225】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は外因性ＴＣＲである。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は組換えＴＣＲである。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、天然に存在しないＴＣＲである。ある特定の実施形態では、天然に存在しないＴＣＲは、任意の天然に存在するＴＣＲと少なくとも１アミノ酸残基が異なる。ある特定の実施形態では、天然に存在しないＴＣＲは、任意の天然に存在するＴＣＲと、少なくとも約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約２０、約２５、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、またはそれより多くのアミノ酸残基が異なる。ある特定の実施形態では、天然に存在しないＴＣＲは、天然に存在するＴＣＲから少なくとも１アミノ酸残基が改変されている。ある特定の実施形態では、天然に存在しないＴＣＲは、天然に存在するＴＣＲから少なくとも約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約２０、約２５、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、またはそれより多くのアミノ酸残基が改変されている。
５．４．３．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）

【0226】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。ＣＡＲは、免疫エフェクター細胞に目的の特異性をグラフトまたは付与する、操作された受容体である。ＣＡＲを使用して、モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞にグラフトすることができ、そのコード配列の移入はレトロウイルスベクターによって容易となる。

【0227】

ＣＡＲには３つの世代が存在する。「第１世代」ＣＡＲは、典型的に細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）で構成され、これは膜貫通ドメインに融合され、膜貫通ドメインは細胞質／細胞内シグナル伝達ドメインに融合される。「第１世代」ＣＡＲは、ｄｅｎｏｖｏ抗原認識を提供し、ＨＬＡ媒介抗原提示とは無関係に単一の融合分子内でそのＣＤ３ζ鎖シグナル伝達ドメインを通してＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の両方の活性化を引き起こすことができる。「第２世代」ＣＡＲは、様々な共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、およびＮＫＧ２Ｄ）からの細胞内シグナル伝達ドメインをＣＡＲの細胞質尾部に付加して、Ｔ細胞に追加のシグナルを提供する。「第２世代」ＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８または４－１ＢＢ）および活性化（ＣＤ３ζ）の両方を提供するＣＡＲを含む。「第３世代」ＣＡＲは、複数の共刺激（例えば、ＣＤ２８および４－１ＢＢ）および活性化（ＣＤ３ζ）を提供するＣＡＲを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、第２世代ＣＡＲである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、抗原に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含み、細胞内シグナル伝達ドメインは共刺激シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲはさらに、ヒンジ（ｈｉｎｇｅｒ）／スペーサー領域を含む。

【0228】

ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖまたはそのアナログ）は、約２×１０^－７Ｍまたはそれ未満の解離定数（Ｋ_ｄ）で抗原に結合する。ある特定の実施形態では、Ｋ_ｄは、約２×１０^－７Ｍもしくはそれ未満、約１×１０^－７Ｍもしくはそれ未満、約９×１０^－８Ｍもしくはそれ未満、約１×１０^－８Ｍもしくはそれ未満、約９×１０^－９Ｍもしくはそれ未満、約５×１０^－９Ｍもしくはそれ未満、約４×１０^－９Ｍもしくはそれ未満、約３×１０^－９もしくはそれ未満、約２×１０^－９Ｍもしくはそれ未満、約１×１０^－９Ｍもしくはそれ未満、約１×１０^－１０Ｍもしくはそれ未満、または約１×１０^－１１Ｍもしくはそれ未満である。ある特定の非限定的な実施形態では、Ｋ_ｄは、約１×１０^－８Ｍまたはそれ未満である。ある特定の非限定的な実施形態では、Ｋ_ｄは、約１×１０^－９Ｍまたはそれ未満である。ある特定の非限定的な実施形態では、Ｋ_ｄは、約１×１０^－９Ｍ～約１×１０^－７Ｍである。

【0229】

細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖまたはそのアナログにおける）の結合は、例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ解析、バイオアッセイ（例えば、成長阻害）、またはウェスタンブロットアッセイによって確認することができる。これらのアッセイの各々は一般的に、目的の複合体に特異的な標識された試薬（例えば、抗体またはｓｃＦｖ）を用いることによって特定の目的のタンパク質－抗体複合体の存在を検出する。例えば、ｓｃＦｖを放射活性標識し、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）に使用することができる（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，Ｂ．，ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＲａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，ＳｅｖｅｎｔｈＴｒａｉｎｉｎｇＣｏｕｒｓｅｏｎＲａｄｉｏｌｉｇａｎｄＡｓｓａｙＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ＴｈｅＥｎｄｏｃｒｉｎｅＳｏｃｉｅｔｙ，Ｍａｒｃｈ，１９８６を参照されたい）。放射活性同位元素は、γカウンターもしくはシンチレーションカウンターを使用するなどの手段によって、またはオートラジオグラフィーによって検出することができる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、蛍光マーカーによって標識される。蛍光マーカーの非限定的な例としては、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、青色蛍光タンパク質（例えば、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、アズライト（Ａｚｕｒｉｔｅ）、およびｍＫａｌａｍａ１）、シアン蛍光タンパク質（例えば、ＥＣＦＰ、セルリアン（Ｃｅｒｕｌｅａｎ）、およびＣｙＰｅｔ）、および黄色蛍光タンパク質（例えば、ＹＦＰ、シトリン（Ｃｉｔｒｉｎｅ）、Ｖｅｎｕｓ、およびＹＰｅｔ）が挙げられる。
５．４．３．１．ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン

【0230】

ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは抗原に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖはヒトｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖはヒト化ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖはマウスｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、必要に応じて架橋されたＦａｂである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインはＦ（ａｂ）_２である。ある特定の実施形態では、前述の分子のいずれかは、異種配列との融合タンパク質に含まれて、細胞外抗原結合ドメインを形成し得る。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、抗原－Ｆｃ融合タンパク質によってｓｃＦｖファージライブラリをスクリーニングすることによって同定される。ｓｃＦｖは、ヒトＶ_Ｌおよび／またはＶ_Ｈ遺伝子を有するマウスに由来し得る。ｓｃＦｖをまた、ラクダ重鎖（例えば、ラクダ、ラマ等からのＶＨＨ）または細胞表面受容体の部分的天然のリガンドによって置換することもできる。ある特定の実施形態では、抗原は、腫瘍抗原、例えば本明細書に開示される抗原である。ある特定の実施形態では、抗原は、病原体抗原、例えば本明細書に開示される抗原である。

【0231】

ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインはマウスｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１９ポリペプチドに結合するマウスｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含み、ヒトＣＤ１９ポリペプチド（例えば、配列番号３４に記載のアミノ酸配列またはその一部を含むヒトＣＤ１９ポリペプチド）に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、配列番号３５のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列が、配列番号３６に記載される。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、「ＳＪ２５Ｃ１」として指定されるクローンに由来する。

【0232】

ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３７に記載のアミノ酸配列またはその保存的改変を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ＣＤＲ１、配列番号３８に記載のアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶ_ＨＣＤＲ２、および配列番号３９に記載のアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶ_ＨＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ１、配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ２、および配列番号３９に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４０に記載のアミノ酸配列またはその保存的改変を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ＣＤＲ１、配列番号４１に記載のアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶ_ＬＣＤＲ２、および配列番号４２に記載のアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶ_ＬＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ１、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ２、および配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ３を含む。

【0233】

ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３７に記載のアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶ_ＨＣＤＲ１、配列番号３８に記載のアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶ_ＨＣＤＲ２、配列番号３９に記載のアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶ_ＨＣＤＲ３、配列番号４０に記載のアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶ_ＬＣＤＲ１、配列番号４１に記載のアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶ_ＬＣＤＲ２、および配列番号４２に記載のアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶ_ＬＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３７に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ_ＨＣＤＲ１、配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ２、配列番号３９に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ３、配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ１、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ２、および配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ３を含む。

【0234】

ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４３に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４３に記載のアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。

【0235】

ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４４に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４４に記載のアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。

【0236】

ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４３に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４４に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。

【0237】

ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈおよび配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを、必要に応じて（ｉｉｉ）Ｖ_ＨとＶ_Ｌとの間のリンカー配列、例えばリンカーペプチドと共に含む。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む。

【0238】

配列番号３５～４４を以下の表１に提供する。
表１

【表1-1】

【表1-2】

【0239】

本明細書で使用される場合、「保存的配列改変」という用語は、アミノ酸配列を含む本開示のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン）の結合特徴に有意な影響を及ぼさず結合特徴も変更しないアミノ酸改変を指す。保存的改変は、アミノ酸の置換、付加、および欠失を含み得る。改変は、当技術分野で公知の標準的な技術、例えば部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発によって本開示のＣＡＲのヒトｓｃＦｖに導入することができる。アミノ酸は、電荷および極性などのその物理化学特性に従って群に分類することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同じ群内のアミノ酸によって交換されている置換である。例えば、アミノ酸を電荷によって分類することができ：正電荷を持つアミノ酸は、リシン、アルギニン、ヒスチジンを含み、負電荷を持つアミノ酸は、アスパラギン酸、グルタミン酸を含み、中性の電荷を持つアミノ酸は、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンを含む。加えて、アミノ酸は極性によって分類することができ：極性アミノ酸は、アルギニン（塩基性極性）、アスパラギン、アスパラギン酸（酸性極性）、グルタミン酸（酸性極性）グルタミン、ヒスチジン（塩基性極性）、リシン（塩基性極性）、セリン、スレオニン、およびチロシンを含み、非極性アミノ酸は、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、およびバリンを含む。このように、ＣＤＲ領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基を、同じ群からの他のアミノ酸残基と交換することができ、変更された抗体を、本明細書に記載される機能的アッセイを使用して機能（すなわち、上記の（ｃ）から（ｌ）に記載の機能）の保持に関して試験することができる。ある特定の実施形態では、指定された配列またはＣＤＲ領域内で１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下の残基が変更される。

【0240】

特定の配列（例えば、配列番号４３および４４）と少なくとも約８０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％（例えば、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％）の相同性または同一性を有するＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌアミノ酸配列は、指定された配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し得るが、標的抗原（例えば、ＣＤ１９）に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、全体で１～１０個のアミノ酸が、特定の配列（例えば、配列番号４３および４４）において置換、挿入、および／または欠失される。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、細胞外抗原結合ドメインのＣＤＲ外の領域で（例えば、ＦＲにおいて）起こる。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、その配列（配列番号４３および４４）の翻訳後修飾を含む、配列番号４３および４４から選択されるＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌ配列を含む。

【0241】

本明細書で使用される場合、２つのアミノ酸配列間のパーセント相同性は、２つの配列間のパーセント同一性と等価である。２つの配列間のパーセント同一性は、２つの配列の最適なアライメントのために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れた、配列が共有する同一の位置の数の関数である（すなわち、％相同性＝同一の位置の数／位置の総数×１００）。２つの配列間の配列の比較およびパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。

【0242】

２つのアミノ酸配列間のパーセント相同性は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．ＭｅｙｅｒｓａｎｄＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１－１７（１９８８））のアルゴリズムを使用して、ＰＡＭ１２０重み付き残基表（ｗｅｉｇｈｔｒｅｓｉｄｕｅｔａｂｌｅ）、ギャップ長ペナルティ１２およびギャップペナルティ４を使用して決定することができる。加えて、２つのアミノ酸配列間のパーセント相同性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラム（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）に組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４－４５３（１９７０））のアルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２行列またはＰＡＭ２５０行列のいずれか、およびギャップ重み１６、１４、１２、１０、８、６、または４、および長さ重み１、２、３、４、５、または６を使用して決定することができる。

【0243】

加えてまたはあるいは、本開示の主題のアミノ酸配列はさらに、例えば関連する配列を同定するために、公開されたデータベースに対して検索を実行するための「クエリ配列」として使用することができる。そのような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実行することができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本明細書に開示される指定された配列（例えば、ｓｃＦｖｍ９０３、ｍ９０４、ｍ９０５、ｍ９０６、およびｍ９００の重鎖および軽鎖可変領域配列）に対して相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて実行することができる。比較目的のためにギャップを含むアライメントを得るために、ＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，（１９９７）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２に記載されるように利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用することができる。
５．４．３．２．ＣＡＲの膜貫通ドメイン

【0244】

ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、膜の少なくとも一部に及ぶ疎水性アルファヘリックスを含む。異なる膜貫通ドメインは、異なる受容体安定性をもたらす。抗原認識後、受容体は集合し、シグナルが細胞に伝達される。本開示の主題に従って、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４０ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ８４ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０ペプチド、ＮＫＧ２Ｄペプチド、合成ポリペプチド（免疫応答に関連するタンパク質に基づかない）、またはそれらの組合せのネイティブまたは改変膜貫通ドメインを含み得る。
ＣＤ８

【0245】

ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインはＣＤ８ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、以下に提供するＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１１３９３４５．１を有するアミノ酸配列（配列番号４５）（本明細書における相同性は、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡなどの標準的なソフトウェアを使用して決定され得る）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたは有する。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大２３５アミノ酸の長さである配列番号４５の連続する部分であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、配列番号４５のアミノ酸１～２３５、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、または２００～２３５のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号４５のアミノ酸１３７～２０９を含むかまたはそれからなるＣＤ８ポリペプチドを含む。配列番号４５を以下に提供する。

【化26】

【0246】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、以下に提供するＧｅｎＢａｎｋＮｏ：ＡＡＡ９２５３３．１を有するアミノ酸配列（配列番号４６）（本明細書における相同性は、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡなどの標準的なソフトウェアを使用して決定され得る）もしくその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、または少なくとも約６０、または少なくとも約７０、または少なくとも約１００、または少なくとも約２００、および最大２４７アミノ酸の長さである配列番号４６の連続する部分であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、配列番号４６のアミノ酸１～２４７、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１５１～２１９、または２００～２４７を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号４６のアミノ酸１５１～２１９を含むかまたはそれからなるＣＤ８ポリペプチドを含む。配列番号４６を以下に提供する。

【化27】

【0247】

ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、以下に提供する配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる：

【化28】

【0248】

本開示の主題に従って、「ＣＤ８核酸分子」は、ＣＤ８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。

【0249】

配列番号４７のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号４８に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化29】

ＣＤ２８

【0250】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ２８ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大２２０アミノ酸の長さである配列番号２５の連続する部分であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、１５３～１７９、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８（例えば、ヒトＣＤ２８）の膜貫通ドメインまたはその一部を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８の膜貫通ドメインまたはその一部は、配列番号２５のアミノ酸１５３～１７９を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２５のアミノ酸１５３～１７９を含むかまたはそれからなるＣＤ２８ポリペプチドを含む。

【0251】

配列番号２５のアミノ酸１５３～１７９をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号４９に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化30】

ＣＤ８４

【0252】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８４ポリペプチドのネイティブまたは改変膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８４ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１１７１８０８．１を有するアミノ酸配列（配列番号５０）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＤ８４ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大３４５アミノ酸の長さである配列番号５０の連続する部分であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ８４ポリペプチドは、配列番号５０のアミノ酸１～３４５、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、２００～２５０、２２６～２５０、２５０～３００、または３００～３４５のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号５０のアミノ酸２２６～２５０を含むかまたはそれからなるＣＤ８４ポリペプチドを含む。

【0253】

配列番号５０を以下に提供する：

【化31】

【0254】

本開示の主題に従って、「ＣＤ８４核酸分子」は、ＣＤ８４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。配列番号５０のアミノ酸２２６～２５０をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号５１に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化32】

ＣＤ１６６

【0255】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ１６６ポリペプチドのネイティブまたは改変膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１６６ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１６１８．２を有するアミノ酸配列（配列番号５２）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＤ１６６ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大５８３アミノ酸の長さである配列番号５２の連続する部分であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ１６６ポリペプチドは、配列番号５２のアミノ酸１～５８３、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、２００～２５０、２５０～３００、３００～３５０、３５０～４００、４００～４５０、４５０～５００、５００～５５０、５２８～５４９、５２８～５５３、または５５０～５８３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号５２のアミノ酸５２８～５５３を含むかまたはそれからなるＣＤ１６６ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号５２のアミノ酸５２８～５４９を含むかまたはそれからなるＣＤ１６６ポリペプチドを含む。

【0256】

配列番号５２を以下に提供する：

【化33】

【0257】

本開示の主題に従って、「ＣＤ１６６核酸分子」は、ＣＤ１６６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。配列番号５２のアミノ酸５２８～５５３をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号５３に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化34】

ＣＤ８ａ

【0258】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａポリペプチドのネイティブまたは改変膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ａポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１１３９３４５．１を有するアミノ酸配列（配列番号５４）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ａポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大２３５アミノ酸の長さである配列番号５４の連続する部分であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ８ａポリペプチドは、配列番号５４のアミノ酸１～２３５、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１８３～２０７、または２００～２３５のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号５４のアミノ酸１８３～２０７を含むかまたはそれからなるＣＤ８ａポリペプチドを含む。

【0259】

配列番号５４を以下に提供する：

【化35】

【0260】

本開示の主題に従って、「ＣＤ８ａ核酸分子」は、ＣＤ８ａポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。配列番号５４のアミノ酸１８３～２０７をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号５５に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化36】

ＣＤ８ｂ

【0261】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ｂポリペプチドのネイティブまたは改変膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ｂポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿７４２０９９．１を有するアミノ酸配列（配列番号５６）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ｂポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大２２１アミノ酸の長さである配列番号５６の連続する部分であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ８ｂポリペプチドは、配列番号５６のアミノ酸１～２２１、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、１７１～１９５、または２００～２２１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号５６のアミノ酸１７１～１９５を含むかまたはそれからなるＣＤ８ｂポリペプチドを含む。

【0262】

配列番号５６を以下に提供する：

【化37】

【0263】

本開示の主題に従って、「ＣＤ８ｂ核酸分子」は、ＣＤ８ｂポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。配列番号５６のアミノ酸１７１～１９５をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号５７に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化38】

ＩＣＯＳ

【0264】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＩＣＯＳポリペプチドのネイティブまたは改変膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＩＣＯＳポリペプチドは、配列番号２７に記載のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。非限定的なある特定の実施形態では、ＩＣＯＳポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大１９９アミノ酸の長さである配列番号２７の連続する部分であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＩＣＯＳポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸１～１９９、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１４１～１６５、または１５０～１９９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号２７のアミノ酸１４１～１６５を含むかまたはそれからなるＩＣＯＳポリペプチドを含む。

【0265】

本開示の主題に従って、「ＩＣＯＳ核酸分子」は、ＩＣＯＳポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。配列番号２７のアミノ酸１４１～１６５をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号５８に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化39】

ＣＴＬＡ－４

【0266】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドのネイティブまたは改変膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００５２０５．２を有するアミノ酸配列（配列番号５９）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大２２３アミノ酸の長さである配列番号５９の連続する部分であるアミノ酸配列を含むかまたは有する。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドは、配列番号５９のアミノ酸１～２２３、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１６２～１８６、または２００～２２３を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号５９のアミノ酸１６２～１８６を含むかまたはそれからなるＣＴＬＡ－４ポリペプチドを含む。

【0267】

配列番号５９を以下に提供する：

【化40】

【0268】

本開示の主題に従って、「ＣＴＬＡ－４核酸分子」は、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。配列番号５９のアミノ酸１６２～１８６をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号６０に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化41】

ＩＣＡＭ－１

【0269】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＩＣＡＭ－１ポリペプチドのネイティブまたは改変膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＩＣＡＭ－１ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿０００１９２．２を有するアミノ酸配列（配列番号６１）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＩＣＡＭ－１ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大５３２アミノ酸の長さである配列番号６１の連続する部分であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＩＣＡＭ－１ポリペプチドは、配列番号６１のアミノ酸１～５３２、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、２００～２２５、２５０～３００、３００～３５０、３５０～４００、４００～４５０、４８１～５０７、４５０～５００、または５００～５３２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメイン（ｔｈｅｅｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｄｏｍａｉｎ）は、配列番号６１のアミノ酸４８１～５０７を含むかまたはそれからなるＩＣＡＭ－１ポリペプチドを含む。

【0270】

配列番号６１を以下に提供する：

【化42】

【0271】

本開示の主題に従って、「ＩＣＡＭ－１核酸分子」は、ＩＣＡＭ－１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。配列番号６１のアミノ酸４８１～５０７をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号６２に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化43】

５．４．３．３．ヒンジ／スペーサー領域

【0272】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲはさらに、細胞外抗原結合ドメインを膜貫通ドメインに連結するヒンジ／スペーサー領域を含む。ヒンジ／スペーサー領域は、抗原結合ドメインが異なる方向に配向して容易に抗原認識ができるように十分に柔軟であり得る。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４０ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ８４ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０ペプチド、ＮＫＧ２Ｄペプチド、合成ポリペプチド（免疫応答に関連するタンパク質に基づかない）、またはそれらの組合せのネイティブまたは改変ヒンジ領域を含み得る。ヒンジ／スペーサー領域は、ＩｇＧ１からのヒンジ領域、または免疫グロブリンのＣＨ_２ＣＨ_３領域、およびＣＤ３の一部、ＣＤ２８ポリペプチドの一部（例えば、配列番号２５の一部）、ＣＤ８ポリペプチドの一部（例えば、配列番号４５の一部、または配列番号４６の一部）、それと少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％相同もしくは同一である前述のいずれかの変形形態、または合成スペーサー配列であり得る。
ＣＤ２８

【0273】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載されるＣＤ２８ポリペプチドのネイティブまたは改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、配列番号２５のアミノ酸１１４～１５２を含むかまたはそれからなるＣＤ２８ポリペプチドを含む。配列番号２５のアミノ酸１１４～１５２をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号６３に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化44】

ＣＤ８４

【0274】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載されるＣＤ８４ポリペプチドのネイティブまたは改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、配列番号５０のアミノ酸１８７～２２５のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＣＤ８４ポリペプチドを含む。配列番号５０のアミノ酸１８７～２２５をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号６４に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化45】

ＣＤ１６６

【0275】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載されるＣＤ１６６ポリペプチドのネイティブまたは改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、配列番号５２のアミノ酸４８９～５２７を含むかまたはそれからなるＣＤ１６６ポリペプチドを含む。配列番号５２のアミノ酸４８９～５２７をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号６５に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化46】

【0276】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域に含まれるＣＤ１６６ポリペプチドは、配列番号５２のアミノ酸４８４～５２７を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、配列番号５２のアミノ酸５０６～５２７を含むかまたはそれからなるＣＤ１６６を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、配列番号５２のアミノ酸５１７～５２７を含むかまたはそれからなるＣＤ１６６ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、配列番号６６または配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＣＤ１６６ポリペプチドを含む。

【化47】

【0277】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域および膜貫通ドメインに含まれるＣＤ１６６ポリペプチドは、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、または配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【化48-1】

【化48-2】

ＣＤ８ａ

【0278】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載されるＣＤ８ａポリペプチドのネイティブまたは改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、配列番号５４のアミノ酸１３７～１８２を含むかまたはそれからなるＣＤ８ａポリペプチドを含む。配列番号５４のアミノ酸１３７～１８２をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号７５に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化49】

ＣＤ８ｂ

【0279】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載されるＣＤ８ｂポリペプチドのネイティブまたは改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、配列番号５６のアミノ酸１３２～１７０を含むかまたはそれからなるＣＤ８ｂポリペプチドを含む。配列番号５６のアミノ酸１３２～１７０をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号７６に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化50】

ＩＣＯＳ

【0280】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載されるＩＣＯＳポリペプチドのネイティブまたは改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、配列番号２７のアミノ酸１０２～１４０を含むかまたはそれからなるＩＣＯＳポリペプチドを含む。配列番号２７のアミノ酸１０２～１４０をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号７７に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化51】

ＣＴＬＡ－４

【0281】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載されるＣＴＬＡ－４ポリペプチドのネイティブまたは改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、配列番号５９のアミノ酸１２３～１６１を含むかまたはそれからなるＣＴＬＡ－４ポリペプチドを含む。配列番号５９のアミノ酸１２３～１６１をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号７８に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化52】

ＩＣＡＭ－１

【0282】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載されるＩＣＡＭ－１ポリペプチドのネイティブまたは改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、配列番号６１のアミノ酸４４２～４８０を含むかまたはそれからなるＩＣＡＭ－１ポリペプチドを含む。配列番号６１のアミノ酸４４２～４８０をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号７９に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化53】

【0283】

ある特定の実施形態では、ヒンジ／スペーサー領域は、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する。ある特定の実施形態では、ヒンジ／スペーサー領域は、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０ペプチド、ＮＫＧ２Ｄペプチド、合成ポリペプチド（免疫応答に関連するタンパク質に基づかない）、またはそれらの組合せを含む。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０ペプチド、ＮＫＧ２Ｄペプチド、合成ポリペプチド（免疫応答に関連するタンパク質に基づかない）、またはそれらの組合せを含む。

【0284】

ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域は、同じ分子に由来する。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域は、異なる分子に由来する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ２８ポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ２８ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ２８ポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ２８ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ８４ポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ８４ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ１６６ポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ１６６ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ８ａポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ８ａポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ８ｂポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ８ｂポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ２８ポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＩＣＯＳポリペプチドを含む。
５．４．３．４．ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメイン
Ａ．ＣＤ３ζ

【0285】

ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲは細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞（例えば、リンパ系列の細胞、例えばＴ細胞）を活性化または刺激することができるＣＤ３ζポリペプチドを含む。野生型（「ネイティブ」）ＣＤ３ζは、３つの免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）（例えば、ＩＴＡＭ１、ＩＴＡＭ２、およびＩＴＡＭ３）、３つの塩基リッチストレッチ（ＢＲＳ）領域（ＢＲＳ１、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３）を含み、抗原が結合した後、活性化シグナルを細胞（例えば、リンパ系列の細胞、例えばＴ細胞）に伝達する。ネイティブＣＤ３ζ鎖の細胞内シグナル伝達ドメインは、内因性ＴＣＲからのシグナルの一次伝達物質である。本明細書の実施形態で使用されるＣＤ３ζは、ネイティブＣＤ３ζではなく、改変ＣＤ３ζである。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿９３２１７０を有するアミノ酸配列（配列番号８０）またはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、または少なくとも１００、または少なくとも１１０、または少なくとも１１３、および最大１６４アミノ酸の長さである配列番号８０の連続する部分であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。あるいはまたはさらに、ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号８０のアミノ酸１～５０、５０～１００、１００～１５０、５０～１６４、５２～１６４、５５～１６４、または１５０～１６４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号８０のアミノ酸５２～１６４を含むかまたはそれからなる。

【0286】

配列番号８０を以下に提供する：

【化54】

【0287】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号８１のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号８１を以下に提供する：

【化55】

【0288】

配列番号８１のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号８２に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化56】

【0289】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号８３もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号８３を以下に提供する：

【化57】

【0290】

配列番号８３のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号８４に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化58】

免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）

【0291】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つ、２つ、または３つのＩＴＡＭを含むかまたはそれからなる改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号８５に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるネイティブＩＴＡＭ１を含む。

【化59】

【0292】

配列番号８５のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号８６に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化60】

【0293】

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、１つまたは複数の機能喪失変異を含むＩＴＡＭ１バリアントを含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、２つの機能喪失変異を含むかまたはそれからなる１つのＩＴＡＭ１バリアントからなる。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失変異の各々は、ＩＴＡＭ１においてチロシン残基の変異を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ１バリアント（例えば、２つの機能喪失変異からなるバリアント）は、以下に提供する配列番号８７に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【化61】

【0294】

配列番号８７のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号８８に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化62】

【0295】

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、以下に提供する配列番号８９に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるネイティブＩＴＡＭ２を含む。

【化63】

【0296】

配列番号８９のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号９０に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化64】

【0297】

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、１つまたは複数の機能喪失変異を含むＩＴＡＭ２バリアントを含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、２つの機能喪失変異を含むかまたはそれからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏ）１つのＩＴＡＭ２バリアントからなる。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失変異の各々は、ＩＴＡＭ２においてチロシン残基の変異を含む。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ２バリアント（例えば、２つの機能喪失変異からなるバリアント）は、以下に提供する配列番号９１に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【化65】

【0298】

配列番号９１のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号９２に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化66】

【0299】

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、以下に提供する配列番号９３に記載のアミノ酸配列を含むネイティブＩＴＡＭ３を含む。

【化67】

【0300】

配列番号９３のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号９４に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化68】

【0301】

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、１つまたは複数の機能喪失変異を含むＩＴＡＭ３バリアントを含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、２つの機能喪失変異を含むかまたはそれからなる１つのＩＴＡＭ３バリアントからなる。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失変異の各々は、ＩＴＡＭ３においてチロシン残基の変異を含む。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ３バリアント（例えば、２つの機能喪失変異からなるバリアント）は、以下に提供する配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【化69】

【0302】

配列番号９５のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号９６に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化70】

【0303】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つもしくは複数の機能喪失変異を含むＩＴＡＭ１バリアント、１つもしくは複数の機能喪失変異を含むＩＴＡＭ２バリアント、１つもしくは複数の機能喪失変異を含むＩＴＡＭ３バリアント、またはそれらの組合せを含むか、またはそれから本質的になるか、またはそれからなる改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数（例えば２つ）の機能喪失変異を含むＩＴＡＭ２バリアントおよび１つまたは複数（例えば２つ）の機能喪失変異を含むＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ネイティブＩＴＡＭ１、２つの機能喪失変異を含むまたはそれからなるＩＴＡＭ２バリアント、および２つの機能喪失変異を含むかまたはそれからなるＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号８５に記載のアミノ酸配列からなるネイティブＩＴＡＭ１、配列番号９１に記載のアミノ酸配列からなるＩＴＡＭ２バリアント、および配列番号９５に記載のアミノ酸配列からなるＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む（例えば、「１ＸＸ」と指定される構築物）。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）かまたはそれからなる。

【0304】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失変異を含むＩＴＡＭ１バリアント、および１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失変異を含むＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの機能喪失変異を含むＩＴＡＭ１バリアント、ネイティブＩＴＡＭ２、および２つの機能喪失変異を含むＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号８７に記載のアミノ酸配列からなるＩＴＡＭ１バリアント、配列番号８９に記載のアミノ酸配列からなるネイティブＩＴＡＭ２、および配列番号９５に記載のアミノ酸配列からなるＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む（例えば、「Ｘ２Ｘ」と指定される構築物）。

【0305】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失変異を含むＩＴＡＭ１バリアント、および１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失変異を含むＩＴＡＭ２バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの機能喪失変異を含むかまたはそれからなるＩＴＡＭ１バリアント、２つの機能喪失変異（ｗｏｌｏｓｓ－ｏｆ－ｆｕｎｃｔｉｏｎｍｕｔａｔｉｏｎｓ）を含むかまたはそれからなるＩＴＡＭ２バリアント、およびネイティブＩＴＡＭ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号８７に記載のアミノ酸配列からなるＩＴＡＭ１バリアント、配列番号９１に記載のアミノ酸配列からなるＩＴＡＭ２バリアント、および配列番号９３に記載のアミノ酸配列からなるネイティブＩＴＡＭ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む（例えば、「ＸＸ３」と指定される構築物）。

【0306】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失変異を含むＩＴＡＭ１バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの機能喪失変異を含むかまたはそれからなるＩＴＡＭ１バリアント、ネイティブＩＴＡＭ２、およびネイティブＩＴＡＭ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号８７に記載のアミノ酸配列からなるＩＴＡＭ１バリアント、配列番号８９に記載のアミノ酸配列からなるネイティブＩＴＡＭ２、および配列番号９３に記載のアミノ酸配列からなるネイティブＩＴＡＭ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む（例えば、「Ｘ２３」と指定される構築物）。

【0307】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ネイティブＩＴＡＭ１、ネイティブＩＴＡＭ２、および１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失変異を含むＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ネイティブＩＴＡＭ１、ネイティブＩＴＡＭ２、および２つの機能喪失変異を含むかまたはそれからなるＩＴＡＭ１バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号８５に記載のアミノ酸配列からなるネイティブＩＴＡＭ１、配列番号８９に記載のアミノ酸配列からなるネイティブＩＴＡＭ２、および配列番号９５に記載のアミノ酸配列からなるＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む（例えば、「１２Ｘ」と指定される構築物）。

【0308】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ネイティブＩＴＡＭ１、１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失変異を含むＩＴＡＭ２バリアント、およびネイティブＩＴＡＭ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ネイティブＩＴＡＭ１、２つの機能喪失変異を含むかまたはそれからなるＩＴＡＭ２バリアント、およびネイティブＩＴＡＭ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号８５に記載のアミノ酸配列からなるネイティブＩＴＡＭ１、配列番号９１に記載のアミノ酸配列からなるＩＴＡＭ２バリアント、および配列番号９３に記載のアミノ酸配列からなるネイティブＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む（例えば、「１Ｘ３」と指定される構築物）。

【0309】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは２つのＩＴＡＭの欠失を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１およびＩＴＡＭ２の欠失を含むかまたはそれからなり、例えば改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ネイティブＩＴＡＭ３またはＩＴＡＭ３バリアントを含み、ＩＴＡＭ１もＩＴＡＭ２も含まない。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号９３に記載のアミノ酸配列からなるネイティブＩＴＡＭ３を含み、ＩＴＡＭ１（ネイティブまたは改変）もＩＴＡＭ２（ネイティブまたは改変）も含まない（例えば、「Ｄ１２」と指定される構築物）。

【0310】

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２およびＩＴＡＭ３の欠失を含むかまたはそれからなり、例えば改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ネイティブＩＴＡＭ１またはＩＴＡＭ１バリアントを含み、ＩＴＡＭ２もＩＴＡＭ３も含まない。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号８５に記載のアミノ酸配列からなるネイティブＩＴＡＭ１を含み、ＩＴＡＭ２（ネイティブまたは改変）もＩＴＡＭ３（ネイティブまたは改変）も含まない（例えば、「Ｄ２３」と指定される構築物）。

【0311】

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１およびＩＴＡＭ３の欠失を含むかまたはそれからなり、例えば改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ネイティブＩＴＡＭ２またはＩＴＡＭ２バリアントを含み、ＩＴＡＭ１もＩＴＡＭ３も含まない。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号８９に記載のアミノ酸配列からなるネイティブＩＴＡＭ２を含み、ＩＴＡＭ１（ネイティブまたは改変）もＩＴＡＭ３（ネイティブまたは改変）も含まない（例えば、「Ｄ１３」と指定される構築物）。

【0312】

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１の欠失を含むかまたはそれからなり、例えば改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ネイティブＩＴＡＭ２またはＩＴＡＭ２バリアント、およびネイティブＩＴＡＭ３またはＩＴＡＭ３バリアントを含み、ＩＴＡＭ１（ネイティブまたは改変）を含まない。

【0313】

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２の欠失を含むかまたはそれからなり、例えば改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ネイティブＩＴＡＭ１またはＩＴＡＭ１バリアント、およびネイティブＩＴＡＭ３またはＩＴＡＭ３バリアントを含み、ＩＴＡＭ２（ネイティブまたは改変）を含まない。

【0314】

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３の欠失を含むかまたはそれからなり、例えば改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ネイティブＩＴＡＭ１またはＩＴＡＭ１バリアント、およびネイティブＩＴＡＭ２またはＩＴＡＭ２バリアントを含み、ＩＴＡＭ３（ネイティブまたは改変）を含まない。
Ｂ．共刺激シグナル伝達領域

【0315】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも共刺激シグナル伝達領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、共刺激分子（例えば、５．２．２節に開示される共刺激分子）の細胞内ドメインを含む。ある特定の実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ－１０、ＣＤ２、およびＮＫＧ２Ｄからなる群から選択される。

【0316】

少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ－１０ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０ポリペプチド、ＣＤ２ポリペプチド、ＮＫＧ２Ｄポリペプチド、またはそれらの組合せを含み得る。少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８の細胞内ドメインもしくはその一部、４－１ＢＢの細胞内ドメインもしくはその一部、ＯＸ４０の細胞内ドメインもしくはその一部、ＩＣＯＳの細胞内ドメインもしくはその一部、ＤＡＰ－１０の細胞内ドメインもしくはその一部、ＣＤ２７の細胞内ドメインもしくはその一部、ＣＤ４０の細胞内ドメインもしくはその一部、ＣＤ２の細胞内ドメインもしくはその一部、ＮＫＧ２Ｄの細胞内ドメインもしくはその一部、またはそれらの組合せを含み得る。

【0317】

共刺激分子は、共刺激リガンド（例えば、５．２．１節に開示される共刺激リガンド）に結合することができる。一例として、４－１ＢＢリガンド（すなわち、４－１ＢＢＬ）は、ＣＡＲシグナルと組み合わせてＣＡＲ^＋Ｔ細胞のエフェクター細胞機能を誘導する細胞内シグナルを提供するために４－１ＢＢ（「ＣＤ１３７」としても公知）に結合し得る。４－１ＢＢポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、またはＤＡＰ－１０ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｕ．Ｓ．７，４４６，１９０に開示されている。

【0318】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ＣＤ２８の細胞内ドメイン）を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその一部を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大２２０アミノ酸の長さである配列番号２５の連続する部分であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１８０～２２０、１８０～２１９、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその一部を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその一部を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２５のアミノ酸１８０～２２０を含むかまたはそれからなるＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２５のアミノ酸１８０～２１９を含むかまたはそれからなるＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。

【0319】

ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１０１もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１０１（または配列番号２５のアミノ酸１８０～２２０）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号１０１を以下に提供する：

【化71】

【0320】

配列番号１０１のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号１０２に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓｏｆｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆ）。

【化72】

【0321】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ２８の脱免疫された細胞内ドメインまたはその一部を含む。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ２８の脱免疫された細胞内ドメインまたはその一部は、配列番号１０３もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１０３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号１０３を以下に提供する：

【化73】

【0322】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、マウスＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその一部を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿０３１６６８．３を有するアミノ酸配列（配列番号９７）もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、および最大２１８アミノ酸の長さである配列番号９７の連続する部分であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号９７のアミノ酸１～２１８、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、１７８～２１８、または２００～２１８のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの共刺激シグナル伝達領域は、配列番号９７のアミノ酸１７８～２１８を含むかまたはそれからなるＣＤ２８ポリペプチドを含む。

【0323】

配列番号９７を以下に提供する：

【化74】

【0324】

配列番号９７のアミノ酸１７８～２１８をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号９８に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化75】

【0325】

ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号９９のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号９９に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。配列番号９９を以下に提供する：

【化76】

【0326】

配列番号９９のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号１００に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化77】

【0327】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激分子を含む共刺激シグナル伝達領域、例えばＣＤ２８および４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達領域、またはＣＤ２８およびＯＸ４０の共刺激シグナル伝達領域を含む。

【0328】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢポリペプチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0329】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢの細胞内ドメインまたはその一部を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒト４－１ＢＢの細胞内ドメインまたはその一部を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内シグナル伝達ドメインまたはその一部は、配列番号３もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、４－１ＢＢの細胞内ドメインは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0330】

配列番号３のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供する配列番号１０４に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化78】

【0331】

ＯＸ４０ポリペプチドは、配列番号２６に記載のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたは有し得る。

【0332】

ＩＣＯＳポリペプチドは、配列番号２７に記載のアミノ酸配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一で相同である、および／または必要に応じて最大１つ、もしくは最大２つ、もしくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得るアミノ酸配列を含むかまたは有し得る。

【0333】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ヒト細胞において核酸配列を発現させるための誘導型プロモーターをさらに含む。ＣＡＲ遺伝子を発現させることにおける使用のためのプロモーターは、構成的プロモーター、例えばユビキチンＣ（ＵｂｉＣ）プロモーターであり得る。

【0334】

ある特定の実施形態では、異なるタンパク質に由来するＣＡＲのドメイン／モチーフ／領域間の変異部位および／または接合部は、脱免疫される。異なるＣＡＲ部分の間の接合部の免疫原性は、ＮｅｔＭＨＣ４．０サーバーを使用して予測することができる。次の部分からの少なくとも１つのアミノ酸を含有する各ペプチドに関して、全ての対立遺伝子に関してＨＬＡＡ、Ｂ、およびＣに対する結合親和性を予測することができる。各ペプチドの免疫原性のスコアを、各ペプチドに関して割り当てることができる。免疫原性スコアは、免疫原性スコア＝［（５０－結合親和性）＊ＨＬＡ頻度］_ｎの式を使用して計算することができる。ｎは各ペプチドに関する予測数である。
５．４．３．５．例示的なＣＡＲ
１９２８ｚＣＡＲ

【0335】

ある特定の実施形態では、細胞は、本開示の融合ポリペプチド、ならびにＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド、例えば、ＣＤ２８（例えば、ヒトＣＤ２８）の膜貫通ドメインまたはその一部分）を含む膜貫通ドメイン、ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド、例えば、ＣＤ２８（例えば、ヒトＣＤ２８）の細胞内ドメインまたはその一部分（ｏｆａｐｏｒｔｉｏｎｔｈｅｒｅｏｆ））を含む共刺激シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「１９２８ｚ」として表わされる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１９２８ｚ）は、以下に提供される配列番号１０５に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１９２８ｚ）は、配列番号１０５に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号１０５に記載のアミノ酸配列を含むＣＡＲは、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

【化79】

【0336】

配列番号１０５のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号１０６に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化80-1】

【化80-2】

【0337】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８リーダーをさらに含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８リーダーは、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれを有する。

【0338】

配列番号１３のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号１０７に記載される。

【化81】

１９２８ｚ－１ｘｘＣＡＲ

【0339】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ１９ポリペプチド）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド、例えば、ＣＤ２８（例えば、ヒトＣＤ２８）の膜貫通ドメインまたはその一部分）を含む膜貫通ドメイン、ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８）に由来するヒンジ／スペーサー領域、ネイティブＩＴＡＭ１、２つの機能喪失型変異からなるＩＴＡＭ２バリアントおよび２つの機能喪失型変異からなるＩＴＡＭ３バリアントを含む改変されたＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変されたヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド、例えば、ＣＤ２８（例えば、ヒトＣＤ２８）の細胞内ドメインまたはその一部分（ｏｆａｐｏｒｔｉｏｎｔｈｅｒｅｏｆ））を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「１９２８ｚ－１ｘｘ」として表わされる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１９２８ｚ－１ｘｘ）は、以下に提供される配列番号１０９に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１９２８ｚ－１ｘｘ）は、配列番号１０９に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号１０９に記載のアミノ酸配列を含むＣＡＲは、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

【化82-1】

【化82-2】

【0340】

配列番号１０９のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号１１０に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

【化83】

【0341】

【0342】

配列番号１３のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、配列番号１０７に記載のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。
５．４．４．ＴＣＲ様融合分子

【0343】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、ＴＣＲ様融合分子である。ＴＣＲ融合分子の非限定的な例には、ＨＬＡ非依存的ＴＣＲベースのキメラ抗原受容体（「ＨＩＴ－ＣＡＲ」としても公知の、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ１９／０１７５２５号に開示されるもの）およびＴ細胞受容体融合構築物（ＴＲｕＣ）（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＢａｅｕｅｒｌｅｅｔａｌ．， ”ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＴＲｕＣｒｅｃｅｐｔｏｒｓｅｎｇａｇｉｎｇｔｈｅｃｏｍｐｌｅｔｅＴｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒｆｏｒｐｏｔｅｎｔａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｒｅｓｐｏｎｓｅ”，ＮａｔｕｒｅＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓｖｏｌｕｍｅ１０，Ａｒｔｉｃｌｅｎｕｍｂｅｒ：２０８７（２０１９）に開示されるもの）が含まれる。

【0344】

ある特定の実施形態では、ＨＬＡ非依存的様式で、抗原に結合するＴＣＲ様融合分子は、細胞外抗原結合ドメインおよび定常ドメインを含む抗原結合鎖を含む。ある特定の実施形態では、定常ドメインは、ネイティブのまたは改変されたＴＲＡＣペプチド、ネイティブのまたは改変されたＴＲＢＣペプチド、ネイティブのまたは改変されたＴＲＤＣペプチド、ネイティブのまたは改変されたＴＲＧＣペプチド、およびその任意のバリアントまたは機能的断片からなる群から選択されるＴ細胞受容体定常領域を含む。ある特定の実施形態では、定常ドメインは、ネイティブのまたは改変されたＴＲＡＣペプチドを含む。ある特定の実施形態では、定常ドメインは、ネイティブのまたは改変されたＴＲＢＣペプチドを含む。ある特定の実施形態では、定常ドメインは、別の定常ドメインと、ホモダイマーまたはヘテロダイマーを形成することが可能である。ある特定の実施形態では、抗原結合鎖は、ＣＤ３ζポリペプチドと会合することが可能である。ある特定の実施形態では、抗原結合鎖は、抗原への結合の際に、抗原結合鎖に会合したＣＤ３ζポリペプチドを活性化することが可能である。ある特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドの活性化は、免疫応答細胞を活性化することが可能である。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子は、ＣＤ３複合体と一体化することが可能であり、ＨＬＡ非依存的抗原認識を提供することが可能である。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体中の内因性ＴＣＲを置き換える。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、別の細胞外抗原結合ドメインとダイマー化することが可能である。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、細胞表面受容体に対するリガンド、細胞表面リガンドに対する受容体、抗体の抗原結合部分もしくはその断片、またはＴＣＲの抗原結合部分を含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、１つまたは２つの免疫グロブリン可変領域を含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、別の細胞外抗原結合ドメインとダイマー化することが可能である。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、抗体のＶ_Ｈを含み、Ｖ_Ｈは、抗体のＶ_Ｌを含む別の細胞外抗原結合ドメインとダイマー化することが可能であり、可変断片（Ｆｖ）を形成する。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、抗体のＶ_Ｌを含み、Ｖ_Ｌは、抗体のＶ_Ｈを含む別の細胞外抗原結合ドメインとダイマー化することが可能であり、可変断片（Ｆｖ）を形成する。

【0345】

ＴＣＲ様融合分子は、腫瘍抗原または病原体抗原に結合し得る。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子は、腫瘍抗原に結合する。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ融合分子は、ＣＤ１９に結合する。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子は、ヒトＣＤ１９に結合する。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ融合分子は、「１９－ＨＩＴ」として表わされる。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子（例えば、１９－ＨＩＴ）は、以下に提供される配列番号１１１に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子（例えば、１９－ＨＩＴ）は、配列番号１１１に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号１１１に記載のアミノ酸配列を含むＴＣＲ融合分子は、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

【化84】

【0346】

ある特定の実施形態では、細胞は、ＴＣＲ様融合分子および本開示の融合ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、細胞は、高レベルの融合ポリペプチドを発現する。
５．５．組成物およびベクター

【0347】

本開示の主題（ｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｄｉｓｃｌｏｓｅｓｓｕｂｊｅｃｔｍａｔｔｅｒ）は、本開示の融合ポリペプチド（例えば、セクション５．２で開示される）および本開示の抗原認識受容体（例えば、セクション５．４で開示される）を含む組成物を提供する。かかる組成物を含む細胞もまた提供される。

【0348】

ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、第１のプロモーターに作動可能に連結される。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、第２のプロモーターに作動可能に連結される。

【0349】

さらに、本開示の主題（ｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｄｉｓｃｌｏｓｅｓｓｕｂｊｅｃｔｍａｔｔｅｒ）は、本開示の融合ポリペプチド（例えば、セクション５．２で開示される）をコードする第１のポリヌクレオチドおよび本開示の抗原認識受容体（例えば、セクション５．４で開示される）をコードする第２のポリヌクレオチドを含む核酸組成物を提供する。かかる核酸組成物を含む細胞もまた提供される。

【0350】

ある特定の実施形態では、核酸組成物は、融合ポリペプチドに作動可能に連結された第１のプロモーターをさらに含む。ある特定の実施形態では、核酸組成物は、抗原認識受容体に作動可能に連結された第２のプロモーターをさらに含む。

【0351】

ある特定の実施形態では、第１および第２のプロモーターの１つまたは両方は、内因性または外因性である。

【0352】

ある特定の実施形態では、外因性プロモーターは、伸長因子（ＥＦ）－１プロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＰＧＫプロモーター、およびメタロチオネインプロモーターから選択される。ある特定の実施形態では、第１および第２のプロモーターの１つまたは両方は、誘導型プロモーターである。ある特定の実施形態では、誘導型プロモーターは、ＮＦＡＴ転写応答エレメント（ＴＲＥ）プロモーター、ＣＤ６９プロモーター、ＣＤ２５プロモーター、およびＩＬ－２プロモーターから選択される。

【0353】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、ＴＣＲであり、融合ポリペプチドは、安定な高い発現レベルの融合ポリペプチドを誘導することが可能である、第１のプロモーターに作動可能に連結さる。

【0354】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、ＴＣＲ様融合分子（例えば、ＨＩＴＣＡＲ）であり、融合ポリペプチドは、安定な高い発現レベルの融合ポリペプチドを誘導することが可能である、第１のプロモーターに作動可能に連結される。

【0355】

ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体であり、キメラ抗原受容体および融合ポリペプチドの発現は、内因性プロモーターの制御下にある。内因性プロモーターの非限定的な例には、内因性ＴＲＡＣプロモーター、内因性ＴＲＢＣプロモーター、内因性ＴＲＤＣプロモーター、および内因性ＴＲＧＣプロモーターが含まれる。ある特定の実施形態では、内因性プロモーターは、内因性ＴＲＡＣプロモーターである。

【0356】

組成物および核酸組成物は、当該分野で公知の方法によって、または本明細書に記載されるように、対象に投与され得るまたはおよび／（ｏｒａｎｄ／）細胞中に送達され得る。細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の遺伝子改変は、実質的に均一な細胞組成物を組換えＤＮＡ構築物で形質導入することによって達成され得る。ある特定の実施形態では、レトロウイルスベクター（ガンマ－レトロウイルスまたはレンチウイルスのいずれか）は、細胞中への核酸組成物の導入のために用いられる。例えば、融合ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドおよび抗原認識受容体をコードする第２のポリヌクレオチドは、レトロウイルスベクター中にクローニングされ得、発現は、その内因性プロモーターから、レトロウイルスのロングターミナルリピートから、または目的の標的細胞型に特異的なプロモーターから駆動され得る。非ウイルスベクターも同様に使用され得る。

【0357】

抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＣＲ様融合分子）を含むようにするための細胞の初回遺伝子改変について、レトロウイルスベクターが形質導入のために一般に用いられるが、任意の他の適切なウイルスベクターまたは非ウイルス送達系が使用されてもよい。抗原認識受容体および融合ポリペプチドは、単一のマルチシストロン性発現カセットで、単一のベクターの複数の発現カセットで、または複数のベクターで構築され得る。ポリシストロン性発現カセットを創出するエレメントの例には、種々のウイルス性および非ウイルス性の内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ、例えば、ＦＧＦ－１ＩＲＥＳ、ＦＧＦ－２ＩＲＥＳ、ＶＥＧＦＩＲＥＳ、ＩＧＦ－ＩＩＩＲＥＳ、ＮＦ－κＢＩＲＥＳ、ＲＵＮＸ１ＩＲＥＳ、ｐ５３ＩＲＥＳ、Ａ型肝炎ＩＲＥＳ、Ｃ型肝炎ＩＲＥＳ、ペスチウイルスＩＲＥＳ、アフトウイルスＩＲＥＳ、ピコルナウイルスＩＲＥＳ、ポリオウイルスＩＲＥＳおよび脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳ）ならびに切断可能なリンカー（例えば、２Ａペプチド、例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡおよびＦ２Ａペプチド）が含まれるがこれらに限定されない。レトロウイルスベクターおよび適切なパッケージング系の組合せもまた適切であり、カプシドタンパク質は、ヒト細胞に感染するために機能的である。ＰＡ１２（Ｍｉｌｌｅｒ，ｅｔａｌ．（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３１－４３７）；ＰＡ３１７（Ｍｉｌｌｅｒ，ｅｔａｌ．（１９８６）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６：２８９５－２９０２）；およびＣＲＩＰ（Ｄａｎｏｓ，ｅｔａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：６４６０－６４６４）が含まれるがこれらに限定されない種々のアンホトロピックウイルス産生細胞系が公知である。非アンホトロピック粒子、例えば、ＶＳＶＧ、ＲＤ１１４またはＧＡＬＶエンベロープでシュードタイプ化された粒子および当該分野で公知の任意の他のものもまた適切である。ある特定の実施形態では、Ｐ２Ａペプチドは、以下に提供される配列番号１０８に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれを有する：

【化85】

【0358】

形質導入の可能な方法には、例えば、Ｂｒｅｇｎｉ，ｅｔａｌ．（１９９２）Ｂｌｏｏｄ８０：１４１８－１４２２の方法による、細胞と産生細胞との直接的共培養、または例えば、Ｘｕ，ｅｔａｌ．（１９９４）Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔ．２２：２２３－２３０；およびＨｕｇｈｅｓ，ｅｔａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８９：１８１７の方法による、適切な成長因子およびポリカチオンありもしくはなしで、ウイルス上清単独もしくは濃縮されたベクターストックと共に培養することも含まれる。

【0359】

他の形質導入ウイルスベクターが、細胞を改変するために使用され得る。ある特定の実施形態では、選択されたベクターは、高い効率の感染ならびに安定な組込みおよび発現を示す（例えば、Ｃａｙｏｕｅｔｔｅｅｔａｌ．，ＨｕｍａｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ８：４２３－４３０，１９９７；Ｋｉｄｏｅｔａｌ．，ＣｕｒｒｅｎｔＥｙｅＲｅｓｅａｒｃｈ１５：８３３－８４４，１９９６；Ｂｌｏｏｍｅｒｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙ７１：６６４１－６６４９，１９９７；Ｎａｌｄｉｎｉｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２７２：２６３－２６７，１９９６；およびＭｉｙｏｓｈｉｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：１０３１９，１９９７を参照のこと）。使用され得る他のウイルスベクターには、例えば、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、およびアデノ（ａｄｅｎａ）随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルス、ウシパピローマウイルス、またはヘルペスウイルス、例えば、エプスタイン・バーウイルス（例えば、Ｍｉｌｌｅｒ，ＨｕｍａｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ１５－１４，１９９０；Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４４：１２７５－１２８１，１９８９；Ｅｇｌｉｔｉｓｅｔａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ６：６０８－６１４，１９８８；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖｅｔａｌ．，ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１：５５－６１，１９９０；Ｓｈａｒｐ，ＴｈｅＬａｎｃｅｔ３３７：１２７７－１２７８，１９９１；Ｃｏｒｎｅｔｔａｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ３６：３１１－３２２，１９８７；Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２２６：４０１－４０９，１９８４；Ｍｏｅｎ，ＢｌｏｏｄＣｅｌｌｓ１７：４０７－４１６，１９９１；Ｍｉｌｌｅｒｅｔａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ７：９８０－９９０，１９８９；ＬｅＧａｌＬａＳａｌｌｅｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５９：９８８－９９０，１９９３；およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｃｈｅｓｔ１０７：７７Ｓ－８３Ｓ，１９９５のベクターもまた参照のこと）が含まれる。レトロウイルスベクターが、特によく開発され、臨床実践場面において使用されてきた（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ３２３：３７０，１９９０；Ａｎｄｅｒｓｏｎら、米国特許第５，３９９，３４６号）。

【0360】

非ウイルスアプローチもまた、細胞の遺伝子改変に用いられ得る。例えば、核酸分子は、リポフェクションの存在下で核酸を投与すること（Ｆｅｉｇｎｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４：７４１３，１９８７；Ｏｎｏｅｔａｌ．，ＮｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅＬｅｔｔｅｒｓ１７：２５９，１９９０；Ｂｒｉｇｈａｍｅｔａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．２９８：２７８，１９８９；Ｓｔａｕｂｉｎｇｅｒｅｔａｌ．，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１０１：５１２，１９８３）、アシアロオロソムコイド－ポリリシンコンジュゲーション（Ｗｕｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２６３：１４６２１，１９８８；Ｗｕｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２６４：１６９８５，１９８９）、または外科的条件下でのマイクロインジェクション（Ｗｏｌｆｆｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４７：１４６５，１９９０）によって、細胞中に導入され得る。遺伝子移入のための他の非ウイルス手段には、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン、電気穿孔、およびプロトプラスト融合を使用するｉｎｖｉｔｒｏでのトランスフェクションが含まれる。リポソームもまた、細胞中へのＤＮＡの送達のために、潜在的に有益であり得る。対象の罹患組織中への正常遺伝子の移植は、正常核酸を培養可能な細胞型（例えば、自己もしくは異種初代細胞またはその後代）中にｅｘｖｉｖｏで移入させ、その後、細胞（またはその子孫）を、標的化された組織中に注射するかまたは全身性に注射することによっても達成され得る。組換え受容体は、トランスポザーゼまたは標的化されたヌクレアーゼ（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼまたはＴＡＬＥヌクレアーゼ、ＣＲＩＳＰＲ）を使用しても、誘導され得るかまたは得られ得る。一過的発現は、ＲＮＡ電気穿孔によって得られ得る。

【0361】

任意の標的化されたゲノム編集法もまた、本開示の融合ポリペプチドおよび／または抗原認識受容体を細胞または対象に送達するために使用され得る。ある特定の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲシステムが、本開示の融合ポリペプチドおよび／または抗原認識受容体を送達するために使用される。ある特定の実施形態では、ジンクフィンガーヌクレアーゼが、本開示の融合ポリペプチドおよび／または抗原認識受容体を送達するために使用される。ある特定の実施形態では、ＴＡＬＥＮシステムが、本開示の融合ポリペプチドおよび／または抗原認識受容体を送達するために使用される。

【0362】

クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）システムは、原核生物細胞において発見されたゲノム編集ツールである。ゲノム編集のために利用される場合、このシステムは、Ｃａｓ９（そのガイドとしてｃｒＲＮＡを利用してＤＮＡを改変することができるタンパク質）、ＣＲＩＳＰＲＲＮＡ（Ｃａｓ９と活性な複合体を形成するｔｒａｃｒＲＮＡ（一般にはヘアピンループ形態）に結合する領域と共に、それを宿主ＤＮＡの正しいセクションにガイドするためにＣａｓ９によって使用されるＲＮＡを含有する、ｃｒＲＮＡ）、トランス活性化ｃｒＲＮＡ（ｃｒＲＮＡに結合し、Ｃａｓ９と共に活性な複合体を形成する、ｔｒａｃｒＲＮＡ）、およびＤＮＡ修復鋳型の必要に応じたセクション（特異的ＤＮＡ配列の挿入を可能にする細胞修復プロセスをガイドするＤＮＡ）を含む。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９は、標的細胞をトランスフェクトするために、プラスミドを用いる場合が多い。ｃｒＲＮＡは、各適用のために設計される必要があるが、それは、これが、細胞中の標的ＤＮＡを同定しそれに直接結合するためにＣａｓ９が使用する配列だからである。修復鋳型を保有するＣＡＲ発現カセットもまた、各適用のために設計される必要があるが、それは、これが、切断のいずれの側の配列とも重複しなければならず、挿入配列をコードしなければならないからである。複数のｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡは、シングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を形成するために、一緒にまとめられ得る。このｓｇＲＮＡは、Ｃａｓ９遺伝子と一緒に接合され得、細胞中にトランスフェクトされるために、プラスミドにされ得る。

【0363】

ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）は、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることによって生成される人工制限酵素である。ジンクフィンガードメインは、特異的ＤＮＡ配列を標的とするように操作され得、これにより、ジンクフィンガーヌクレアーゼがゲノム内の所望の配列を標的とすることを可能にする。個々のＺＦＮのＤＮＡ結合ドメインは、典型的には、複数の個々のジンクフィンガーリピートを含有し、各々が複数の塩基対を認識し得る。新たなジンクフィンガードメインを生成するための最も一般的な方法は、既知の特異性のより小さいジンクフィンガー「モジュール」を組み合わせることである。ＺＦＮ中の最も一般的な切断ドメインは、ＩＩ型制限エンドヌクレアーゼＦｏｋＩ由来の非特異的切断ドメインである。内因性相同組換え（ＨＲ）機構と相同なＤＮＡ鋳型を保有するＣＡＲ発現カセットとを使用して、ＺＦＮは、ＣＡＲ発現カセットをゲノム中に挿入するために使用され得る。標的化された配列がＺＦＮによって切断されると、ＨＲ機構は、損傷した染色体と相同なＤＮＡ鋳型との間の相同性について検索し、次いで、染色体の２つの切断された末端間の鋳型の配列をコピーし、それにより、相同なＤＮＡ鋳型がゲノム中に組み込まれる。

【0364】

転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）は、ＤＮＡの特異的配列を切断するように操作され得る制限酵素である。ＴＡＬＥＮシステムは、ＺＦＮとほとんど同じ原理で動作する。これらは、転写活性化因子様エフェクターＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることによって生成される。転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）は、特異的ヌクレオチドに対する強い認識を有する２つの可変の位置を有する３３～３４アミノ酸の反復モチーフから構成される。これらのＴＡＬＥのアレイをアセンブルすることによって、ＴＡＬＥのＤＮＡ結合ドメインは、所望のＤＮＡ配列に結合するように操作され得、それにより、ゲノム中の特異的な位置で切断するようにヌクレアーゼをガイドし得る。ポリヌクレオチド治療法における使用のためのｃＤＮＡ発現は、任意の適切なプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サルウイルス４０（ＳＶ４０）、またはメタロチオネインプロモーター）から指示され得、任意の適切な哺乳動物調節エレメントまたはイントロン（例えば、伸長因子１ａエンハンサー／プロモーター／イントロン構造）によって調節され得る。例えば、所望の場合、特定の細胞型において遺伝子発現を優先的に指示することが公知のエンハンサーが、核酸の発現を指示するために使用され得る。使用されるエンハンサーには、組織特異的または細胞特異的エンハンサーとして特徴付けられるものが限定なしに含まれ得る。あるいは、ゲノムクローンが治療的構築物として使用される場合、調節は、同族調節配列によって、または所望の場合、上記プロモーターもしくは調節エレメントのいずれかを含む異種供給源に由来する調節配列によって、媒介され得る。

【0365】

ゲノム編集剤／システムを送達するための方法は、必要に依存して変動し得る。ある特定の実施形態では、選択されたゲノム編集法の構成成分は、１つまたは複数のプラスミドでのＤＮＡ構築物として送達される。ある特定の実施形態では、構成成分は、ウイルスベクターを介して送達される。一般的な送達法には、電気穿孔、マイクロインジェクション、遺伝子銃、インパルフェクション（ｉｍｐａｌｅｆｅｃｔｉｏｎ）、静水圧、持続注入、超音波処理、マグネトフェクション、アデノ随伴ウイルス、ウイルスベクターのエンベロープタンパク質シュードタイプ化、複製コンピテントなベクターのシスおよびトランス作用性エレメント、単純ヘルペスウイルス、ならびに化学的ビヒクル（例えば、オリゴヌクレオチド、リポプレックス、ポリマーソーム、ポリプレックス、デンドリマー、無機ナノ粒子、および細胞透過性ペプチド）が含まれるがこれらに限定されない。

【0366】

本開示の組成物または核酸組成物は、ゲノム中のいずれの場所にも配置され得る。ある特定の実施形態では、組成物または核酸組成物は、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、ＴＲＤＣ遺伝子座、および／またはＴＲＧＣ遺伝子座が含まれるがこれらに限定されない、Ｔ細胞のゲノム内の遺伝子座に配置される。ある特定の実施形態では、組成物または核酸組成物の配置は、内因性Ｔ細胞受容体の発現を破壊させる。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。

【0367】

ある特定の実施形態では、組成物または核酸組成物は、免疫阻害分子をコードする遺伝子座に組み込まれる。免疫阻害分子の非限定的な例には、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７－１、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＴＩＭ３、ＳＨＰ－１、ＳＨＰ－２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１６０、およびＬＡＩＲ１が含まれる。
５．６．ポリペプチドおよびアナログ

【0368】

所望の目的のための手法で、例えば、細胞において発現された場合にそれらの抗新生物および／または抗腫瘍活性を増強するための手法で改変された、本開示のポリペプチド（例えば、ＣＤ１９、４－１ＢＢ、ＣＤ８０、ＣＤ２８、ＣＤ３ζなど、またはその断片）もまた、本開示の主題に含まれる。本開示の主題は、配列中に変更を生じることによってアミノ酸配列または核酸配列を最適化するための方法、ならびに改変されたアミノ酸配列および核酸配列を提供する。かかる変更には、ある特定の変異、欠失、挿入、または翻訳後改変が含まれ得る。本開示の主題は、本開示の任意のポリペプチドのアナログをさらに含む。アナログは、アミノ酸配列差異により、翻訳後改変により、または両方により、本開示のポリペプチドとは異なり得る。アナログは、本開示の主題のアミノ酸配列（ａｎａｍｉｎｏ，ａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅ）の全てまたは一部と少なくとも約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれよりも高い相同性（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）を示し得る。配列比較の長さは、少なくとも５、１０、１５もしくは２０アミノ酸残基、例えば、少なくとも２５、５０、もしくは７５アミノ酸残基、または１００よりも多くのアミノ酸残基である。再び、同一性の程度を決定するための例示的なアプローチでは、ＢＬＡＳＴプログラムを使用することができ、ｅ^－３とｅ^－１００との間の確率スコアは密接に関連した配列を示す。改変には、ポリペプチドのｉｎｖｉｖｏおよびｉｎｖｉｔｒｏでの化学的誘導体化、例えば、アセチル化、カルボキシル化、リン酸化、またはグリコシル化が含まれる；かかる改変は、ポリペプチド合成もしくはプロセシングの間に、または単離された改変酵素による処置の後に生じ得る。アナログはまた、一次配列中の変更によって、ポリペプチドとは異なり得る。これらには、天然のおよび誘導された（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈａｎｄＭａｎｉａｔｉｓ，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（２ｄｅｄ．），ＣＳＨＰｒｅｓｓ，１９８９または上記Ａｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．に記載されるような、照射もしくは硫酸エタンメチル（ｅｔｈａｎｅｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ）への曝露によるランダム変異誘発から、または部位特異的変異誘発によって生じる）の両方の遺伝的バリアントが含まれる。Ｌ－アミノ酸（ａｍｉｎａａｃｉｄｓ）以外の残基、例えば、Ｄ－アミノ酸または天然に存在しないもしくは合成のアミノ酸、例えば、βもしくはγアミノ酸を含有する、環化されたペプチド、分子、およびアナログもまた含まれる。

【0369】

全長ポリペプチドに加えて、本開示の主題は、本開示のポリペプチドのいずれか１つの断片もまた提供する。本明細書で使用される場合、用語「断片」は、少なくとも５、１０、１３、または１５アミノ酸を意味する。ある特定の実施形態では、断片は、少なくとも２０連続するアミノ酸、少なくとも３０連続するアミノ酸、または少なくとも５０連続するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、断片は、少なくとも６０～８０、１００、２００、３００またはそれよりも多くの連続するアミノ酸を含む。断片は、当業者に公知の方法によって生成され得、または通常のタンパク質プロセシング（例えば、新生ポリペプチドからの生物活性にとって必要ではないアミノ酸の除去、または選択的ｍＲＮＡスプライシングもしくは選択的タンパク質プロセシング事象によるアミノ酸の除去）から生じ得る。

【0370】

非タンパク質アナログは、本開示のタンパク質（例えば、融合ポリペプチド）の機能的活性を模倣するように設計された化学構造を有する。かかるアナログは、元のポリペプチドの生理活性を上回り得る。アナログ設計の方法は、当該分野で周知であり、アナログの合成は、細胞において発現された場合に、得られたアナログが元のポリペプチドの抗新生物活性を増加させるように、化学構造を改変することによって、かかる方法に従って実施され得る。これらの化学的改変には、代替Ｒ基の置換、および参照ポリペプチドの特定の炭素原子における飽和の程度の変動が含まれるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、タンパク質アナログは、ｉｎｖｉｖｏ分解に対して比較的耐性であり、投与の際のより延長された治療効果を生じる。機能的活性を測定するためのアッセイには、以下の実施例に記載されるものが含まれるがそれらに限定されない。
５．７．投与

【0371】

本開示の細胞を含む組成物は、抗原に対する免疫応答を誘導および／もしくは増強するため、ならびに／または新生物（例えば、がん）、病原体感染、もしくは感染性疾患を処置および／もしくは防止するために、対象に全身性にまたは直接提供され得る。ある特定の実施形態では、本開示の細胞、組成物、または核酸組成物は、目的の臓器（例えば、新生物に冒された臓器）中に直接注射される。あるいは、本開示の細胞、組成物、または核酸組成物は、例えば、循環系（例えば、腫瘍脈管構造）中への投与によって、目的の臓器に間接的に提供される。拡大および分化剤が、ｉｎｖｉｔｒｏまたはｉｎｖｉｖｏでの細胞（例えば、Ｔ細胞（例えば、ＣＴＬ細胞）またはＮＫ細胞）の産生を増加させるために、細胞、組成物、または核酸組成物の投与の前、その間またはその後に提供され得る。

【0372】

本開示の細胞、組成物、または核酸組成物は、静脈内、皮下、結節内、腫瘍内、髄腔内、胸膜内、腹腔内が含まれるがこれらに限定されない任意の適切な経路で投与され得る。通常、最終的に約１×１０^１０またはそれよりも多くに達する、少なくとも約１×１０^５個の細胞が投与される。本開示の細胞は、細胞の精製された集団を構成し得る。当業者は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などの種々の周知の方法を使用して、集団中の本開示の細胞のパーセンテージを容易に決定することができる。本開示の細胞を含む集団における純度の適切な範囲は、約５０％～約５５％、約５％～約６０％、および約６５％～約７０％である。ある特定の実施形態では、純度は、約７０％～約７５％、約７５％～約８０％、または約８０％～約８５％である。ある特定の実施形態では、純度は、約８５％～約９０％、約９０％～約９５％、および約９５％～約１００％である。投薬量は、当業者によって容易に調整され得る（例えば、純度における減少は、投薬量における増加を要求し得る）。細胞は、注射、カテーテルなどによって導入され得る。本開示の組成物は、本開示の細胞またはそれらの前駆体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であり得る。投与は、自己または異種であり得る。例えば、細胞、または前駆体は、１つの対象から得られ得、同じ対象または異なる適合性の対象に投与され得る。末梢血由来の細胞またはその後代（例えば、ｉｎｖｉｖｏ、ｅｘｖｉｖｏまたはｉｎｖｉｔｒｏで誘導されるもの）は、カテーテル投与が含まれる局所注射、全身性注射、局所注射、静脈内注射、または非経口投与を介して投与され得る。本開示の主題の治療的組成物（例えば、本開示の細胞を含む医薬組成物）を投与する場合、注射可能な単位剤形（液剤、懸濁剤、乳剤）で製剤化され得る。

【0373】

ある特定の実施形態では、医薬組成物は、融合ポリペプチド（例えば、セクション５．２．４で開示されるもの）の発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な調節因子をさらに含む。
５．８．製剤化

【0374】

本開示の細胞を含む組成物は、選択されたｐＨに緩衝化され得る無菌液体調製物、例えば、等張水性液剤、懸濁剤、乳剤、分散液剤（ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ）、または粘性組成物として、簡便に提供され得る。液体調製物は、通常、ゲル剤、他の粘性組成物、および固体組成物よりも、調製が容易である。さらに、液体組成物は、特に注射によって投与するのに、いくらかより簡便である。他方、粘性組成物は、特定の組織とのより長い接触期間を提供するための適切な粘度範囲内で製剤化され得る。液体または粘性組成物は、例えば、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る担体を含み得る。

【0375】

無菌の注射可能な液剤は、所望により種々の量の他の成分と共に、遺伝子改変された細胞を、必要な量の適切な溶媒中に組み込むことによって調製され得る。かかる組成物は、適切な担体、希釈剤、または賦形剤、例えば、無菌の水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどと混合され得る。組成物は、凍結乾燥もされ得る。組成物は、所望の投与の経路および調製物に依存して、補助物質、例えば、湿潤剤、分散剤、または乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝化剤、ゲル化または粘度増強添加剤、防腐剤、香味剤、顔料などを含有し得る。これにより参照により本明細書に組み込まれる”ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’ＳＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥ”，１７ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，１９８５などの標準的なテキストが、過度の実験なしに適切な調製物を調製するために参考にされ得る。

【0376】

抗菌防腐剤、抗酸化剤、キレート剤、および緩衝剤が含まれる、組成物の安定性および無菌性を増強する種々の添加剤が添加され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって確実にされ得る。注射可能な医薬形態の延長された吸収は、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によってもたらされ得る。しかし、本開示の主題によれば、使用される任意のビヒクル、希釈剤、または添加剤は、遺伝子改変された細胞またはそれらの前駆体と適合性である必要がある。

【0377】

組成物は、等張であり得る、即ち、血液および涙液と同じ浸透圧を有し得る。組成物の所望の等張性は、塩化ナトリウム、または他の薬学的に許容される剤、例えば、デキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコールまたは他の無機もしくは有機溶質を使用して達成され得る。塩化ナトリウムは、特に、ナトリウムイオンを含有する緩衝剤のためのものであり得る。

【0378】

組成物の粘度は、所望の場合、薬学的に許容される増粘剤（ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇａｇｅｎｔ）を使用して、選択されたレベルで維持され得る。例えば、メチルセルロースは、容易にかつ経済的に入手可能であり、扱いが容易である。他の適切な増粘剤には、例えば、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマーなどが含まれる。増粘剤（ｔｈｉｃｋｅｎｅｒ）の濃度は、選択された剤に依存し得る。重要な点は、選択された粘度を達成する量を使用することである。明らかに、適切な担体および他の添加剤の選択は、投与の正確な経路、および特定の剤形、例えば、液体剤形の性質（例えば、組成物が、液剤、懸濁剤、ゲル剤または別の液体形態、例えば、持続放出形態または液体充填形態へと製剤化されるかどうか）に依存する。

【0379】

投与される細胞の量は、処置されている対象によって変動する。ある特定の実施形態では、約１０^４個と約１０^１０個との間、約１０^５個と約１０^９個との間、または約１０^４個と約１０^８個との間の本開示の細胞が、ヒト対象に投与される。ある特定の実施形態では、約１０^４個と約１０^７個との間の本開示の細胞が、ヒト対象に投与される。より有効な細胞は、さらにより少ない数で投与され得る。ある特定の実施形態では、少なくとも約１×１０^４個の本開示の細胞が、ヒト対象に投与される。ある特定の実施形態では、少なくとも約１×１０^５個の本開示の細胞が、ヒト対象に投与される。有効用量とみなされるものの正確な決定は、それらのサイズ、年齢、性別、体重、および特定の対象の状態が含まれる、各対象について個別の因子に基づき得る。投薬量は、本開示および当該分野の知識から、当業者によって容易に確認され得る。

【0380】

当業者は、組成物中の、ならびに方法において投与される細胞および必要に応じた添加剤、ビヒクル、および／または担体の量を容易に決定することができる。典型的には、任意の添加剤（活性な細胞（複数可）および／または剤（複数可）に加えて）は、リン酸緩衝食塩水中に、０．００１～５０％（重量）溶液の量で存在し、活性成分は、マイクログラム～ミリグラムのオーダーで、例えば、約０．０００１～約５ｗｔ％、約０．０００１～約１ｗｔ％、約０．０００１～約０．０５ｗｔ％または約０．００１～約２０ｗｔ％、約０．０１～約１０ｗｔ％、または約０．０５～約５ｗｔ％で存在する。動物またはヒトに投与される任意の組成物について、以下が決定され得る：適切な動物モデル、例えば、マウスなどのげっ歯類において、致死用量（ＬＤ）およびＬＤ５０を決定することなどによる、毒性；適切な応答を惹起する、組成物の投薬量、その中の構成成分の濃度、および組成物を投与するタイミング。かかる決定は、当業者の知識、本開示および本明細書で引用される文書から、過度の実験を要求しない。そして、逐次的投与のための時間は、過度の実験なしに確認され得る。
５．９．処置の方法

【0381】

本開示の主題は、それを必要とする対象における免疫応答を誘導および／または増加させるための方法を提供する。本開示の細胞、組成物、および核酸組成物は、治療または医薬において使用され得る。本開示の細胞およびそれを含む組成物は、対象における新生物を処置および／または防止するために使用され得る。本開示の細胞、組成物および核酸組成物は、新生物に罹患している対象の生存を延長させるために使用され得る。本開示の細胞、組成物、および核酸組成物は、対象における新生物を処置および／または防止するためにも使用され得る。ある特定の実施形態では、新生物は、がんである。本開示の細胞、組成物、および核酸組成物は、対象、例えば、免疫無防備状態のヒト対象における病原体感染または他の感染性疾患を処置および／または防止するためにも使用され得る。本開示の細胞、組成物、および核酸組成物は、対象における自己免疫疾患を処置および／または防止するためにも使用され得る。かかる方法は、既存の状態の緩和または再発の防止である所望の効果を達成するために、有効量での本開示の細胞、本開示の組成物（例えば、医薬組成物）、または本開示の核酸組成物を投与することを含む。処置のために、投与される量は、所望の効果を生じるのに有効な量である。有効量は、１回の投与または一連の投与で提供され得る。有効量は、ボーラスで、または連続灌流によって、提供され得る。

【0382】

「有効量」（または「治療有効量」）は、処置の際に有益なまたは所望の臨床結果をもたらすのに十分な量である。有効量は、１つまたは複数の用量で対象に投与され得る。処置に関して、有効量は、疾患を緩和、寛解、安定化、逆転させるのに、もしくはその進行を緩徐化するのに、または疾患の病理学的結果を他の方法で低減させるのに十分な量である。有効量は、一般に、ケースバイケースで医師によって決定され、当業者の技術範囲内である。典型的には、いくつかの因子が、有効量を達成するための適切な投薬量を決定する場合に考慮される。これらの因子には、対象の年齢、性別および体重、処置されている状態、状態の重症度ならびに投与される細胞の形態および有効濃度が含まれる。

【0383】

抗原特異的Ｔ細胞を使用する養子免疫療法について、約１０^６～１０^１０個の範囲（例えば、約１０^９個）の細胞用量が、典型的には注入される。宿主中への本開示の細胞の投与および引き続く分化の際に、特異的抗原に特異的に向けられたＴ細胞が誘導される。

【0384】

本開示の主題は、対象における新生物を処置および／または防止するための方法を提供する。この方法は、本開示の細胞、本開示の組成物、または本開示の核酸組成物の有効量を、新生物を有する対象に投与することを含み得る。

【0385】

新生物の非限定的な例には、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、および骨髄腫）、卵巣がん、乳がん、膀胱がん、脳がん、結腸がん、腸がん、肝臓がん、肺がん、膵がん、前立腺がん、皮膚がん、胃がん、神経膠芽腫、咽喉がん、黒色腫、神経芽細胞腫、腺癌、神経膠腫、軟部組織肉腫、および種々の癌（前立腺がんおよび小細胞肺がんが含まれる）が含まれる。適切な癌には、星状細胞腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、乏突起神経膠腫、上衣腫、髄芽細胞腫、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）、軟骨肉腫、骨原性肉腫、膵管腺癌、小細胞および大細胞肺腺癌、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、扁平上皮癌、気管支肺胞癌、上皮腺癌、およびその肝臓転移、リンパ管肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、ヘパトーマ、胆管癌、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、横紋筋肉腫、結腸癌、基底細胞癌、汗腺癌、乳頭癌、皮脂腺癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、精巣腫瘍、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、および重鎖病、乳房腫瘍、例えば、乳管および小葉腺癌、子宮頸部の扁平上皮および腺癌、子宮および卵巣上皮癌、前立腺腺癌、膀胱の移行扁平上皮癌、ＢおよびＴ細胞リンパ腫（結節性およびびまん性）、形質細胞腫、急性および慢性白血病、悪性黒色腫、軟部組織肉腫ならびに平滑筋肉腫が含まれるがこれらに限定されない、腫瘍学の分野で公知の任意のものがさらに含まれる。ある特定の実施形態では、新生物は、がんである。ある特定の実施形態では、新生物は、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、および骨髄腫）、卵巣がん、前立腺がん、乳がん、膀胱がん、脳がん、結腸がん、腸がん、肝臓がん、肺がん、膵がん、前立腺がん、皮膚がん、胃がん、神経膠芽腫、および咽喉がんからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、本開示の細胞、組成物、核酸組成物は、従来の治療介入に適していない血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、および骨髄腫）または卵巣がんを処置および／または防止するために使用され得る。ある特定の実施形態では、本開示の細胞、組成物、核酸組成物は、固形腫瘍を処置および／または防止するために使用され得る。

【0386】

本開示の主題は、対象におけるウイルス感染症を処置および／または防止するための方法を提供する。この方法は、本開示の細胞、本開示の組成物、または本開示の核酸組成物の有効量を、ウイルス感染症を有する対象に投与することを含み得る。ウイルス感染症の非限定的な例には、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦまたはＧ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、アデノウイルス、ＢＫポリオーマウイルス、コロナウイルス、コクサッキーウイルス、ポリオウイルス、単純ヘルペス１型、単純ヘルペス２型、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、水痘帯状疱疹ウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、パピローマウイルス、狂犬病ウイルス、および風疹ウイルスによって引き起こされるウイルス感染症が含まれる。他のウイルス標的には、Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ニューモウイルス、モルビリウイルス、メタニューモウイルス、レスピロウイルスまたはルブラウイルス）、Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、アデノウイルス）、Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、アレナウイルス、例えば、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス）、Ａｒｔｅｒｉｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ブタ繁殖・呼吸障害症候群ウイルスまたはウマ動脈炎ウイルス）、Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、フレボウイルスまたはハンタウイルス）、Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ノーウォークウイルス）、Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、コロナウイルスまたはトロウイルス）、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、エボラ様ウイルス）、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ヘパシウイルスまたはフラビウイルス）、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ（例えば、シンプレックスウイルス、バリセロウイルス、サイトメガロウイルス、ロゼオロウイルス、またはリンホクリプトウイルス）、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、インフルエンザウイルスまたはトゴトウイルス）、Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、パルボウイルス）、Ｐｉｃｏｍａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、エンテロウイルスまたはヘパトウイルス）、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ（例えば、オルソポックスウイルス、アビポクッスウイルス、またはレポリポックスウイルス）、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、レンチウイルスまたはスプーマウイルス）、Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ロタウイルス）、Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、リッサウイルス、ノビラブドウイルス、またはベシクロウイルス）、およびＴｏｇａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、アルファウイルスまたはルビウイルス）が含まれる。ある特定の実施形態では、ウイルス感染症には、ヒト呼吸器コロナウイルス、インフルエンザウイルスＡ～Ｃ、Ａ～Ｇ型肝炎ウイルス、および単純ヘルペスウイルス１～９が含まれる。ある特定の実施形態では、対象は、免疫不全を有する。

【0387】

本開示の主題は、対象における細菌感染症を処置および／または防止するための方法を提供する。この方法は、本開示の細胞、本開示の組成物、または本開示の核酸組成物の有効量を、細菌感染症を有する対象に投与することを含み得る。細菌感染症には、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｇｏｎｏｒｒｈｅｏｅａｅ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｃｏｒｙｎｏｂａｃｔｅｒｉａｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｓｐｐ．、腸管毒素原性Ｅｓｃｈｅｒｉｃｉａｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａｈｅｎｓｅｌａｅ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａｑｕｉｎｔａｎａ、Ｃｏｘｉｅｌｌａｂｕｒｎｅｔｉｉ、ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｅｐｒａｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ；Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｓｐｐ．、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ、Ｂｒｕｃｅｌｌａｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｊｅｊｕｎｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｐｒｏｔｅｕｓｍｉｒａｂｉｌｉｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、およびＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅが含まれるがこれらに限定されない。

【0388】

本開示の主題は、対象における自己免疫疾患を処置および／または防止するための方法を提供する。この方法は、本開示の細胞、本開示の組成物、または本開示の核酸組成物の有効量を、自己免疫疾患を有する対象に投与することを含み得る。

【0389】

本開示の主題は、対象における自己免疫疾患を処置および／または防止するための方法を提供する。この方法は、本開示の細胞、本開示の組成物、または本開示の核酸組成物の有効量を、感染性疾患を有する対象に投与することを含み得る。

【0390】

自己免疫疾患および炎症性疾患またはそれらの状態の非限定的な例には、関節炎、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、乾癬、乾癬性関節炎、強皮症、自己免疫性甲状腺疾患、グレーヴス病、クローン病、多発性硬化症、全身性硬化症、喘息、臓器移植片の拒絶、移植に関連する疾患または状態、高安動脈炎、巨細胞動脈炎、川崎病、結節性多発動脈炎、ベーチェット症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ＡＮＣＡ－脈管炎、チャーグストラウス症候群、顕微鏡的多発血管炎、結合組織病の血管炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、クリオグロブリン血症性血管炎、皮膚白血球破砕性血管炎、サルコイドーシス、コーガン症候群、ウィスコット・アルドリッチ症候群、ＣＮＳの原発性血管炎、閉塞性血栓血管炎、腫瘍随伴性動脈炎、骨髄異形成症候群、持久性隆起性紅斑、アミロイドーシス、自己免疫性筋炎、ギラン・バレー症候群、組織球症、アトピー性皮膚炎、肺線維症、糸球体腎炎、ホイップル病、スティル病、シェーグレン症候群、骨髄線維症、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、木村病、全身性硬化症、慢性大動脈周囲炎、慢性前立腺炎、特発性肺線維症、慢性肉芽腫症、特発性ブレオマイシン誘発性肺炎症、シタラビン誘発性肺炎症、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性リンパ球減少症、慢性自己免疫性甲状腺炎、自己免疫性肝炎、橋本甲状腺炎、アトピー性甲状腺炎、グレーヴス病、自己免疫性多内分泌腺症候群、自己免疫性アジソン症候群、および／または重症筋無力症が含まれる。本開示の主題によれば、上記種々の方法は、チェックポイント免疫遮断剤を対象に投与することを含み得る。

【0391】

ある特定の実施形態では、チェックポイント免疫遮断剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ＴＩＭ３抗体、およびそれらの組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、チェックポイント免疫遮断剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体または抗ＰＤ－１抗体である。ある特定の実施形態では、チェックポイント免疫遮断剤は、抗ＰＤ－１抗体である。

【0392】

本開示の主題によれば、上記種々の方法は、融合ポリペプチドの発現、活性を調節またはモジュレートすることが可能な調節因子を、対象に投与することを含み得る。

【0393】

ある特定の実施形態では、調節因子は、融合ポリペプチドの発現を制御することが可能なプロモーター、共刺激リガンドの発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子、共刺激分子の発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子からなる群から選択される。

【0394】

【0395】

ある特定の実施形態では、調節因子は、抗ＣＤ８０抗体であり、融合ポリペプチドは、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。

【0396】

ある特定の実施形態では、調節因子は、ＣＤ８０に結合し、ＣＤ８０の活性をモジュレートする融合タンパク質であり、融合ポリペプチドは、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、ＣＤ８０に結合するＣＴＬＡ－４断片である。ある特定の実施形態では、ＣＤ８０に結合するＣＴＬＡ－４断片は、アバタセプトまたはベラタセプトである。

【0397】

ある特定の実施形態では、共刺激分子の発現、活性を調節またはモジュレートすることが可能な分子は、共刺激分子に結合する抗体、共刺激分子に結合し、共刺激分子の発現、活性を調節またはモジュレートする融合タンパク質からなる群から選択される。

【0398】

ある特定の実施形態では、調節因子は、細胞を枯渇させることが可能である。ある特定の実施形態では、調節因子は、細胞の投与に関連する１つまたは複数の副作用を減らすかまたは除去することが可能である。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の副作用は、オフ腫瘍ターゲット効果、サイトカイン放出症候群、神経毒性、およびそれらの組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、対象は、ヒトである。

【0399】

対象は、進行形態の疾患を有し得、この場合、処置目標には、疾患進行の軽減もしくは逆転、および／または副作用の寛解が含まれ得る。対象は、すでに処置された状態の履歴を有し得、この場合、治療目標には、典型的には、再発のリスクにおける低下または遅延が含まれる。

【0400】

治療に適切なヒト対象は、典型的には、臨床基準によって識別され得る２つの処置群を構成する。「進行疾患」または「高い腫瘍負荷」を有する対象は、臨床的に測定可能な腫瘍を保有する対象である。臨床的に測定可能な腫瘍は、腫瘍量に基づいて検出され得る腫瘍である（例えば、触診、ＣＡＴスキャン、ソノグラム、マンモグラムまたはＸ線による；陽性の生化学的または組織病理学的マーカーは単独では、この集団を同定するためには不十分である）。医薬組成物は、それらの状態を緩和することを目標として、抗腫瘍応答を惹起するためにこれらの対象に投与される。理想的には、腫瘍量における低減が結果として生じるが、任意の臨床的改善が利益を構成する。臨床的改善には、腫瘍の進行のリスクもしくは速度の減少、または腫瘍の病理学的結果における低減が含まれる。

【0401】

適切な対象の第２の群は、当該分野で「アジュバント群」として公知である。これらは、新生物の履歴を有しているが、別の様式の治療に対して応答性であった個体である。以前の治療には、外科的切除、放射線療法、および従来型の化学療法が含まれ得るがこれらに限定されない。結果として、これらの個体は、臨床的に測定可能な腫瘍を有さない。しかし、彼らは、元の腫瘍部位の近傍の、または転移による、疾患の進行のリスクがあると疑われている。この群は、高リスク個体および低リスク個体へとさらに細分され得る。細分は、初回処置の前または後に観察された特色（ｆｅａｔｕｒｅ）に基づいてなされる。これらの特色は、臨床分野において公知であり、各異なる新生物について適切に定義される。高リスクサブグループに典型的な特色は、腫瘍が隣接する組織に浸潤しているサブグループ、またはリンパ節の関与を示すサブグループである。

【0402】

別の群は、新生物になる遺伝的素因を有するが、新生物の臨床的徴候をまだ証明していない。例えば、乳がんに関連する遺伝的変異について試験陽性であるが、まだ妊娠可能な年齢である女性は、防止的手術を実施するのが適切になるまで、新生物の発生を防止するための予防的処置において、１つまたは複数の本明細書に記載される細胞を受けることを希望することができる。

【0403】

腫瘍抗原に結合する抗原認識受容体および細胞の抗腫瘍効果を増強する融合ポリペプチドの発現の結果として、養子移入された細胞には、腫瘍部位における向上した選択的な細胞溶解活性が与えられる。さらに、腫瘍またはウイルス感染へのそれらの局在化およびそれらの増殖に引き続いて、Ｔ細胞は、腫瘍またはウイルス感染部位を、生理的な抗腫瘍または抗ウイルス応答に関与する広範な免疫細胞（腫瘍浸潤リンパ球、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、樹状細胞、およびマクロファージ）のための高度に伝導性の（ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｅ）環境へと変える。

【0404】

さらに、本開示の主題は、対象における、例えば、免疫無防備状態の対象における病原体感染（例えば、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、寄生生物感染、または原生動物感染）を処置および／または防止するための方法を提供する。この方法は、本開示の細胞、本開示の組成物、または本開示の核酸組成物の有効量を、病原体感染を有する対象に投与することを含み得る。処置に対して感受性の例示的なウイルス感染には、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、およびインフルエンザウイルス感染が含まれるがこれらに限定されない。

【0405】

さらなる改変が、本開示の細胞（例えば、Ｔ細胞）に導入され、免疫学的合併症（「悪性Ｔ細胞形質転換」として公知）、例えば、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）のリスク、または健康な組織が腫瘍細胞と同じ標的抗原を発現する場合、ＧｖＨＤと類似の転帰をもたらすことのリスクを回避するかまたは最小限にすることができる。この問題に対する潜在的な解法は、自殺遺伝子を本開示の細胞へと操作することである。適切な自殺遺伝子には、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ｈｓｖ－ｔｋ）、誘導型カスパーゼ９自殺遺伝子（ｉＣａｓｐ－９）、および切断型ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲｔ）ポリペプチドが含まれるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、自殺遺伝子は、ＥＧＦＲｔポリペプチドである。ＥＧＦＲｔポリペプチドは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（例えば、セツキシマブ）を投与することによるＴ細胞除去を可能にし得る。ＥＧＦＲｔは、本開示のＣＡＲの抗原認識受容体の上流に共有結合的に接合され得る。自殺遺伝子は、本開示のＣＡＲをコードする核酸を含むベクター内に含まれ得る。この手法で、悪性Ｔ細胞形質転換（例えば、ＧＶＨＤ）の間に自殺遺伝子を活性化するように設計されたプロドラッグ（例えば、プロドラッグ（例えば、ｉＣａｓｐ－９を活性化することができるＡＰ１９０３））の投与は、自殺遺伝子が活性化されたＣＡＲ発現Ｔ細胞においてアポトーシスを誘発する。本開示のＣＡＲ中への自殺遺伝子の組込みは、非常に短い期間内にＣＡＲＴ細胞の大部分を除去する能力と共に、追加的レベルの安全性を与える。自殺遺伝子が組み込まれた本開示の細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ＣＡＲＴ細胞注入後の所与の時点において先制して除去され得、または毒性の最も早い徴候の時点で根絶され得る。

【0406】

さらに、セクション５．２．４で開示されるように、融合ポリペプチドの発現および／または活性は、調節因子（例えば、セクション５．２．４で開示されるもの）によって調節またはモジュレートされ得る。ある特定の実施形態では、調節因子は、例えば、本開示の細胞の投与に関連する副作用（複数可）、例えば、オフ腫瘍ターゲット効果、サイトカイン放出症候群、および／または神経毒性を減らすかまたは除去するために、本開示の細胞を枯渇させ得る。

【0407】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法または使用は、融合ポリペプチド（例えば、セクション５．２．４で開示されるもの）の発現および／または活性を調節またはモジュレートすることが可能な調節因子を投与することをさらに含む。調節因子は、本開示の細胞またはそれを含む組成物の投与（例えば、初回投与）の前に、それと同時に、またはその後に投与され得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法または使用は、抗ＣＤ８０抗体を投与することをさらに含み、細胞に含まれる融合ポリペプチドは、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法または使用は、ＣＤ８０に結合しＣＤ８０の活性をモジュレートする融合タンパク質を投与することをさらに含み、細胞に含まれる融合ポリペプチドは、ＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、例えば、ＣＤ８０に結合するＣＴＬＡ－４断片である。
５．１０．キット

【0408】

本開示の主題は、免疫応答を誘導および／もしくは増強するため、ならびに／または対象における新生物もしくは病原体感染を処置および／もしくは防止するためのキットを提供する。ある特定の実施形態では、キットは、本開示の細胞、本開示の組成物、または本開示の核酸組成物の有効量を含む。ある特定の実施形態では、キットは、無菌容器を含む；かかる容器は、ボックス、アンプル、ボトル、バイアル、管、バッグ、ポーチ、ブリスターパック、または当該分野で公知の他の適切な容器形態であり得る。かかる容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属ホイル、または医薬を保持するために適切な他の材料で作製され得る。ある特定の非限定的な実施形態では、キットは、同じまたは異なるベクター中に必要に応じて含まれ得る、目的の抗原に対する抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲ）をコードする単離された核酸分子、および発現可能な形態で融合ポリペプチドをコードする単離された核酸分子を含む。

【0409】

所望の場合、細胞、組成物、または核酸組成物は、細胞、組成物、または核酸組成物を、新生物（例えば、がん）もしくは病原体感染（例えば、感染性疾患）、もしくは免疫障害（例えば、自己免疫疾患）を有しているか、またはそれを発症するリスクがある対象に投与することに関する指示と一緒に提供される。指示は、一般に、新生物、または病原体感染（例えば、感染性疾患）、または免疫障害（例えば、自己免疫疾患）の処置および／または防止のための細胞、組成物または核酸組成物の使用についての情報を含む。ある特定の実施形態では、指示は、以下のうち少なくとも１つを含む：治療剤の説明；新生物、病原体感染（例えば、感染性疾患）、もしくは免疫障害（例えば、自己免疫疾患）またはその症状の処置または防止のための投薬スケジュールおよび投与；使用上の注意；警告；適応症；禁忌（ｃｏｕｎｔｅｒ－ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）；過量情報；有害反応；動物薬理学；臨床研究；および／または参考文献。指示は、容器（存在する場合）上に直接、または容器に貼付されるラベルとして、または容器中にもしくは容器と共に供給される別々のシート、パンフレット、カードもしくはフォルダーとして印刷され得る。

【実施例】

【0410】

６．実施例
本開示の実施は、他に示されない限り、当業者の技術範囲内に十分に入る、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来の技法を用いる。かかる技法は、”ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９）； ”ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ” （Ｇａｉｔ，１９８４）； ”ＡｎｉｍａｌＣｅｌｌＣｕｌｔｕｒｅ” （Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９８７）； ”ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ” ”ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ” （Ｗｅｉｒ，１９９６）； ”ＧｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｒＶｅｃｔｏｒｓｆｏｒＭａｍｍａｌｉａｎＣｅｌｌｓ” （ＭｉｌｌｅｒａｎｄＣａｌｏｓ，１９８７）； ”ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ” （Ａｕｓｕｂｅｌ，１９８７）； ”ＰＣＲ：ＴｈｅＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ，１９９４）； ”ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ” （Ｃｏｌｉｇａｎ，１９９１）などの文献中で完全に説明されている。これらの技法は、本開示のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの産生に適用可能であり、したがって、本開示の主題を作製および実施する際に考慮され得る。特定の実施形態のための特に有用な技法は、以下のセクションで議論される。

【0411】

以下の実施例は、当業者に、本開示の細胞および組成物を作製および使用する方法についての完全な開示および説明を提供するために提示されているのであって、本発明者らが自身の発明とみなすものの範囲を限定することを意図しない。
（実施例１）
ＣＤ８０／４－１ＢＢ共刺激分子

【0412】

本開示の融合ポリペプチドを生成した。この融合ポリペプチドは、ヒトＣＤ８０の細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインならびにヒト４－１ＢＢの細胞内ドメインを含む（「ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチド」として表わされる）。このＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドを、ヒトＣＤ１９を標的化するＣＡＲ（「１９２８ｚ」または「１９２８ｚ－１ｘｘ」）、ＨＬＡ非依存的ＴＣＲ受容体（ＨＩＴ）であるＣＤ１９標的化ＴＣＲ様融合分子（「１９－ＨＩＴ」として表わされる）、またはＮＹ－ＥＳＯ－１ＴＣＲを含むＴ細胞にトランスフェクトした。ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありの１９２８ｚＣＡＲ、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドなしの１９２８ｚＣＡＲ、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありの１９２８ｚ－１ｘｘＣＡＲ、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドなしの１９２８ｚ－１ｘｘＣＡＲ、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありの１９－ＨＩＴ、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドなしの１９－ＨＩＴの発現を測定し、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありのＮＹ－ＥＳＯ－１ＴＣＲ、またはＣＤ８０／４－１ＢＢなしのＮＹ－ＥＳＯ－１ＴＣＲを測定した。ＦＡＣＳ発現結果は、図２Ａ、２Ｃ、２Ｅおよび２Ｇに示される。米国特許第９，２２０，７２８号は、外因性共刺激リガンド（例えば、ＣＤ８０、４－１ＢＢＬ）がＣＡＲＴ細胞の細胞傷害性を増強できることを開示している。外因性共刺激リガンドを含むＣＡＲＴ細胞の細胞傷害性を比較するために、ＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を保有するマウスを、（ａ）１９２８ｚおよびこのＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチド（「１９２８ｚ－ＣＤ８０／４－１ＢＢ」）を含む１０^５個のＴ細胞、（ｂ）１９２８ｚおよび外因性４－１ＢＢＬ分子（「１９２８ｚ－４－１ＢＢＬ」）を含む１０^５個のＴ細胞、または（ｃ）１９２８ｚおよび外因性ＣＤ８０分子（「１９２８ｚ－ＣＤ８０」）を含む１０^５個のＴ細胞で処置した。これらのマウスの生存率を測定し、結果は、図２Ｂに示される。図２Ｂに示されるように、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドは、Ｔ細胞の細胞傷害性および／または抗腫瘍活性を増強した（例えば、１９２８ｚ－４－１ＢＢＬを発現するＴ細胞または１９２８ｚ－ＣＤ８０を発現するＴ細胞で処置したマウスと比較して、１９２８ｚ－ＣＤ８０／４－１ＢＢを発現するＴ細胞で処置したマウスの生存率を増加させた）。

【0413】

さらに、ＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を、（ａ）１９－２８ｚ－１ｘｘおよびこのＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチド（「１９－２８ｚ－１ｘｘ－ＣＤ８０／４－１ＢＢ」）を含む２×１０^４個のＴ細胞、（ｂ）１９－２８ｚ－１ｘｘを含む２×１０^４個のＴ細胞、（ｃ）１９－ＨＩＴを含む１０^５個のＴ細胞、または（ｄ）１９－ＨＩＴおよびこのＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチド（「１９－ＨＩＴ－ＣＤ８０／４－１ＢＢ」）を含む１０^５個のＴ細胞で処置した。これらのマウスの生存率を測定し、結果は、図２Ｄおよび２Ｆに示される。さらに、ＨＬＡＡ２．１／ＮＹＥＳＯ複合体を発現するＳＫ－ＭＥＬ－２３黒色腫細胞系を保有するマウスを、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドなしの２×１０^６個のＮＹ－ＥＳＯ－１ＴＣＲＴ細胞またはＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありの１０^６個のＮＹ－ＥＳＯ－１ＴＣＲＴ細胞で処置した。これらのマウスの生存率を測定し、結果は、図２Ｈに示される。

【0414】

図２Ｄ、２Ｆ、および２Ｈに示されるように、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドは、未処置のマウスおよび１９－２８ｚ－１ｘｘＣＡＲ単独を含むＴ細胞または１９－ＨＩＴ単独を含むＴ細胞で処置したマウスと比較して、生存率を改善した。１９－ＨＩＴおよびＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドをＴＲＡＣ遺伝子座へと標的化し、内因性ＴＲＡＣプロモーターの制御下で発現させた、１９－ＨＩＴ－ＣＤ８０／４－１ＢＢで処置したマウスの生存率は、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドの低い発現に恐らくは起因した。本明細書で示される全ての結果は、抗腫瘍Ｔ細胞応答を改善するための本開示のＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドの広い使用を支持する。
（実施例２）

【0415】

ＰＤＬ－１分子を過剰発現するＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を保有するマウスを、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドなしの１９－２８ｚ－１ｘｘを含む５×１０^４個のＴ細胞、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありの１９－２８ｚ－１ｘｘを含む５×１０^４個のＴ細胞、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドなしの１９－ＨＩＴを含む１０^５個のＴ細胞、またはＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありの１９－ＨＩＴを含む１０^５個のＴ細胞で処置した。これらのマウスの生存率を測定し、結果は、図３Ａおよび３Ｂに示される。図３Ａおよび３Ｂに示されるように、本開示のＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドは、腫瘍微小環境中に存在するＰＤ－１などの阻害性分子の存在にもかかわらず、Ｔ細胞抗腫瘍応答を保つことができる。
（実施例３）

【0416】

本発明者らは、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドの発現レベルが抗腫瘍応答効率を支配するかどうかを調査した。図４Ａおよび４Ｂに示されるデータは、ＣＤ８０－４１－ＢＢの発現のレベルによって決定される、Ｔ細胞抗腫瘍応答の微調整調節を強調する。ＨＩＴおよびＴＣＲ特異的Ｔ細胞は、ＣＤ８０－４－１ＢＢの高い発現から利益を得るが、ＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ８０－４－１ＢＢが内因性ＴＲＡＣプロモーターの下で発現される場合、改善された抗腫瘍応答を付与する。
（実施例４）

【0417】

本開示のＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドが内因性４－１ＢＢの欠如を代償できるかどうかを調査した。ＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を保有するマウスを、１９２８ｚ－１ｘｘおよび外因性４－１ＢＢＬ分子および外因性ＣＤ８０分子（「１９２８ｚ－１ｘｘ－ＣＤ８０４－１ＢＢＬ」）を含む２．５×１０^４個のＴ細胞、または１９２８ｚ－１ｘｘおよびＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチド（１９２８ｚ－１ｘｘ－ＣＤ８０／４－１ＢＢ」）を含む２．５×１０^４個のＴ細胞で処置した。内因性４－１ＢＢ遺伝子ノックアウトを、タンパク質ＣＡＳ９および特異的ｇＲＮＡの電気穿孔によって得た。内因性４－１ＢＢの破壊が、注入されたＣＡＲＴ細胞の６８％において達成された。ＴＲＢＣｇＲＮＡを対照として使用した。これらのマウスの生存率を測定し、結果は、図５に示される。図５に示されるように、外因性ＣＤ８０および外因性４－１ＢＢＬの組合せならびにＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドが、より良い生存を提供するＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドと匹敵するＣＡＲＴ細胞の抗腫瘍効果を提供したにもかかわらず、前者（外因性ＣＤ８０および外因性４－１ＢＢＬの組合せ）は、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドとは対照的に、Ｔ細胞活性化の際に上方調節される４－１ＢＢ分子の内因性発現に依存する。内因性４－１ＢＢの非存在下では、ＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドは、ＣＤ８０－４－１ＢＢＬＴＲＢＣノックアウトと類似のレベルまで、ＣＡＲＴ細胞抗腫瘍応答を改善した。
（実施例５）

【0418】

次に、本発明者らは、阻害性分子ＰＤ－１の破壊がＣＤ８０－４－１ＢＢの存在下での抗腫瘍応答を増強するかどうかを調査した。ＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を保有するマウスを、本開示のＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドありの１９２８ｚ－１ｘｘを含む２．５×１０^４個のＴ細胞で処置した。内因性ＰＤ－１遺伝子ノックアウトを、タンパク質ＣＡＳ９および特異的ｇＲＮＡの電気穿孔によって得た。ＰＤ－１の破壊が、注入されたＣＡＲＴ細胞の５５％において達成された。ＴＲＢＣｇＲＮＡを対照として使用した。これらのマウスの生存率を測定し、結果は、図６に示される。図６に示されるデータは、遺伝子操作の多重化の実現可能性を実証しており、本開示のＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドを発現するＴ細胞との関連で（ｉｎｔｈｅｃｏｎｔｅｘｔＴｃｅｌｌｓ）ＫＯＰＤ－１分子の利益を強調する。
（実施例６）

【0419】

ＣＤ４^＋ＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ８^＋ＣＡＲＴ細胞応答を維持することが公知である。しかし、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の存在に由来する副作用を軽減するために、本発明者らは、本開示のＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドがＣＤ４^＋ＣＡＲＴ細胞の非存在を代償できるかどうかを調査した。

【0420】

ＮＡＬＭ６ＣＤ１９白血病細胞を保有するマウスを、（ａ）１９２８ｚおよび本開示のＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチド（「１９２８ｚ－ＣＤ８０／４－１ＢＢ」）を含む４×１０^５個のＣＤ８^＋Ｔ細胞、（ｂ）１９２８ｚおよび外因性４－１ＢＢＬ分子（「１９２８ｚ－４－１ＢＢＬ」）を含む４×１０^５個のＣＤ８^＋Ｔ細胞、（ｃ）１９２８ｚ－ＣＤ８０／４－１ＢＢを含む８×１０^５個のＣＤ８^＋Ｔ細胞、または（ｄ）１９２８ｚ－４－１ＢＢＬを含む８×１０^５個のＣＤ８^＋Ｔ細胞で処置した。これらのマウスの生存率を測定し、結果は、図７Ａおよび７Ｂに示される。図７Ａおよび７Ｂに示されるように、本開示のＣＤ８０／４－１ＢＢ融合ポリペプチドは、最適なＣＤ８^＋ＣＡＲＴ細胞応答に必要な（ｎｅｅｄｆｏｒ）共刺激を提供することによって、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の非存在を代償した。
本開示の主題の実施形態

【0421】

上述の説明から、変更および改変が、本開示の主題を種々の使用および条件に採用するために、本開示の主題に対してなされ得ることが明らかである。かかる実施形態もまた、以下の特許請求の範囲の範囲内である。

【0422】

本明細書中の変数の任意の定義における要素の目録の列挙は、任意の単一の要素またはリストされた要素の組合せ（または下位組合せ）としての、その変数の定義を含む。本明細書の実施形態の列挙は、任意の単一の実施形態としての、または任意の他の実施形態もしくはその部分と組み合わせた、その実施形態を含む。

【0423】

本明細書中で言及される全ての特許および刊行物は、各個々の特許および刊行物がこれにより参照により本明細書に組み込まれると具体的かつ個々に示されるのと同じ程度まで、これにより参照により本明細書に組み込まれる。

【図1】