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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-10-14
(54)【発明の名称】マスサイトメトリーのための追加的質量タグポリマー
(51)【国際特許分類】
G01N 27/62 20210101AFI20221006BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20221006BHJP
C12Q 1/04 20060101ALI20221006BHJP
【ＦＩ】
G01N27/62 V
G01N33/53 Y
C12Q1/04
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022506187
(86)(22)【出願日】2020-08-07
(85)【翻訳文提出日】2022-03-28
(86)【国際出願番号】 US2020045470
(87)【国際公開番号】W WO2021026483
(87)【国際公開日】2021-02-11
(31)【優先権主張番号】62/884,548
(32)【優先日】2019-08-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/059,545
(32)【優先日】2020-07-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520497025
【氏名又は名称】フリューダイム カナダ インコーポレイテッド
(71)【出願人】
【識別番号】512080756
【氏名又は名称】ザ ガバニング カウンシル オブ ザ ユニバーシティ オブ トロント
【氏名又は名称原語表記】ＴＨＥ ＧＯＶＥＲＮＩＮＧ ＣＯＵＮＣＩＬ ＯＦ ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＯＲＯＮＴＯ
(74)【代理人】
【識別番号】100137969
【弁理士】
【氏名又は名称】岡部 憲昭
(74)【代理人】
【識別番号】100104824
【弁理士】
【氏名又は名称】穐場 仁
(74)【代理人】
【識別番号】100121463
【弁理士】
【氏名又は名称】矢口 哲也
(72)【発明者】
【氏名】リュー，ペン
(72)【発明者】
【氏名】マホニス，ダニエル
(72)【発明者】
【氏名】バラノフ，ウラジーミル
(72)【発明者】
【氏名】ウィニック，ミッチェル エー．
(72)【発明者】
【氏名】チョ，ヒュンジュン
【テーマコード（参考）】
2G041
4B063
【Ｆターム（参考）】
2G041CA01
2G041DA14
2G041EA12
2G041GA06
2G041JA03
2G041JA04
4B063QA01
4B063QA18
4B063QQ03
4B063QQ08
4B063QR48
4B063QS39
4B063QS40
4B063QX10
(57)【要約】
ジルコニウム及びハフニウムの質量タグなどの濃縮金属同位体を含む新しい種類の質量タグポリマーが提供される。これらの新規な質量タグのケミストリーはランタニド質量タグのケミストリーとは異なり、マスサイトメトリーで使用することができる新規な質量のチャネルを開く。これらのポリマーは、マスサイトメトリー、放射性同位体の治療的送達、又は治療的同位体のスクリーニングに使用され得る。態様には、キット、作製方法、及びポリマー、同位体組成物、又はその両方を使用する方法が含まれる。キットはポリマーを含み得る。ポリマーは、ジルコニウム及び／又はハフニウムなどの濃縮同位体をキレート化するペンダント基を含み得る。キットは、濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む同位体組成物を含み得る。ポリマーは、生理活性材料にコンジュゲートされ得る。態様にはまた、キットを作製することが含まれ得る。態様には、例えばマスサイトメトリーのためのキットの使用が含まれる。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
キットであって、ジルコニウムおよび／またはハフニウムをキレート化するペンダント基を含むポリマー、および
濃縮されたジルコニウムまたはハフニウムの同位体を含む同位体組成物
を含む、キット。
【請求項2】
前記濃縮されたジルコニウムまたはハフニウムの同位体がペンダント基に担持されている、請求項１に記載のキット。
【請求項3】
前記ポリマーが、ヒドロキサメート、アザマクロサイクル、フェノキシアミン、サロフェン、および／またはシクラムのリガンドまたはその誘導体を含む、請求項１または２に記載のキット。
【請求項4】
前記ポリマーがヒドロキサメートを含む、請求項１から３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項5】
前記ポリマーがデスフェリオキサミン（Ｄｅｓｆｅｒｒｉｏｘａｍｉｎｅ：ＤＦＯ）またはその誘導体を含む、請求項４に記載のキット。
【請求項6】
前記ポリマーがアザマクロサイクルを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項7】
前記ポリマーが１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ酢酸（１，４，７，１０－ｔｅｔｒａａｚａｃｙｃｌｏｄｏｄｅｃａｎｅ－１，４，７，１０－ｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ：ＤＯＴＡ）またはその誘導体を含む、請求項６に記載のキット。
【請求項8】
前記ポリマーが、溶解性を補助する親水性基の１つまたは複数の鎖をさらに含む、請求項１から３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項9】
前記ポリマーがペグ化ペンダント基をさらに含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項10】
前記ペグ化ペンダント基が前記ポリマーの担持を補助する、請求項９に記載のキット。
【請求項11】
前記ペグ化ペンダント基が、ジルコニウムおよび／またはハフニウムをキレート化する前記ペンダント基とは別である、請求項１０に記載のキット。
【請求項12】
請求項１から１１のいずれか一項に記載のキットを作製する方法。
【請求項13】
請求項１から１２のいずれか一項に記載のキットを使用する、マスサイトメトリーの方法。
【請求項14】
キットであって、ヒドロキサメートを含む複数のペンダント基を含むポリマー、および
前記ペンダント基によってキレート化され得る濃縮された金属同位体を含む同位体組成物
を含む、キット。
【請求項15】
前記金属同位体がジルコニウム同位体またはハフニウム同位体である、請求項１４に記載のキット。
【請求項16】
前記金属同位体がジルコニウム同位体である、請求項１５に記載のキット。
【請求項17】
前記金属同位体がハフニウム同位体である、請求項１６に記載のキット。
【請求項18】
追加的な濃縮されたジルコニウム同位体および／またはハフニウム同位体を含む追加的な同位体組成物をさらに含む、請求項１４から１７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項19】
前記同位体組成物が非放射性である、請求項１４から１８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項20】
前記同位体組成物が前記ポリマーとは別に提供される、請求項１４から１９のいずれか一項に記載のキット。
【請求項21】
前記同位体組成物が溶液中にある、請求項２０に記載のキット。
【請求項22】
前記同位体組成物が、非プロトン性溶媒を含む溶液中で提供される、請求項２１に記載のキット。
【請求項23】
前記非プロトン性溶媒がジメチルスルホキシド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ：ＤＭＳＯ）である、請求項２２に記載のキット。
【請求項24】
前記同位体組成物が酸性溶液中で提供される、請求項２１に記載のキット。
【請求項25】
前記同位体組成物を前記ポリマーに担持するための金属担持緩衝液をさらに含む、請求項１４から２４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項26】
前記金属担持緩衝液がアルカリを含む、請求項２５に記載のキット。
【請求項27】
前記金属担持緩衝液が酸性ｐＨにある、請求項２５に記載のキット。
【請求項28】
前記同位体組成物が前記ポリマーの１つまたは複数のペンダント基に担持されている、請求項１４から２０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項29】
前記ポリマーが溶液中にある、請求項１４から２８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項30】
前記ポリマーが凍結乾燥されている、請求項１４から２０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項31】
前記濃縮された金属同位体の少なくとも５個の原子が前記ポリマーに担持されている、請求項１４から３０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項32】
前記濃縮された金属同位体の少なくとも２０個の原子が前記ポリマーに担持されている、請求項３１に記載のキット。
【請求項33】
前記濃縮された金属同位体の４０個未満の原子が前記ポリマーに担持されている、請求項３１または３２に記載のキット。
【請求項34】
前記同位体組成物が前記ポリマーに安定的に結合している、請求項１４から３３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項35】
前記ポリマーに担持された前記同位体組成物の１０％未満が、競合する遊離キレート剤で失われる可能性がある、請求項１４から３４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項36】
生理学的条件下で、前記同位体組成物の９５％超が前記ポリマーに結合したままである、請求項１４から３５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項37】
マスサイトメトリーのアッセイで使用される場合、前記同位体組成物の９５％超が前記ポリマーに結合したままである、請求項１４から３６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項38】
前記ポリマーがペグ化ペンダント基を含む、請求項１４から３７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項39】
前記ポリマーが、前記金属同位体を担持する前および後の両方で、前記ポリマーの溶解性を補助するペンダント基を含むように修飾されている、請求項１４から３８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項40】
前記ポリマーが、前記金属同位体の前記ペンダント基への担持の前後に、前記ポリマーの溶解性を補助する親水性基を含むペンダント基をさらに含む、請求項１４から３９のいずれか一項に記載のキット。
【請求項41】
溶解性を補助する親水性基を含む前記ペンダント基が、ヒドロキサム酸を含むペンダント基とは別である、請求項１４から４０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項42】
前記ポリマーの１つまたは複数のペンダント基が、繰り返し親水性基の鎖を含む、請求項１４から４１のいずれか一項に記載のキット。
【請求項43】
前記親水性基が前記ペンダント基の配位ケミストリーに影響を及ぼさない、請求項４２に記載のキット。
【請求項44】
前記ポリマーの溶解性により、溶液中の前記金属同位体の担持が補助される、請求項１４から４３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項45】
前記ポリマーが抗体にコンジュゲートされる場合、得られる溶解性により、前記抗体のエピトープへの抗体結合が向上する、請求項４０から４４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項46】
前記ポリマーの溶解性により、ポリマーに結合した抗体の標的結合が向上する、請求項４０から４５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項47】
前記親水性基が少なくとも１つのポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ：ＰＥＧ）基を含む、請求項４０から４６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項48】
前記ポリマーがペグ化されている、請求項４０から４７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項49】
前記ポリマーが少なくとも１００個のＰＥＧ基を含む、請求項４０から４８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項50】
前記ＰＥＧ基が複数のペンダント基にわたって分布している、請求項４０から４９のいずれか一項に記載のキット。
【請求項51】
少なくともいくつかのペンダント基が２０個を超えるＰＥＧ基を含む、請求項１４から５０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項52】
前記ポリマーの全てのペンダント基の５０％未満が、ジルコニウムおよび／またはハフニウムをキレート化し、前記ポリマーの全てのペンダント基の５０％超が、複数のＰＥＧ基を含む、請求項１４から５１のいずれか一項に記載のキット。
【請求項53】
前記ポリマーのＰＥＧ基の数が、溶液中の前記ポリマーへの前記金属同位体の担持を補助する、請求項１４から５２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項54】
前記ポリマーにコンジュゲートされた生理活性材料をさらに含む、請求項１４から５３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項55】
前記生理活性材料が親和性試薬を含む、請求項５４に記載のキット。
【請求項56】
前記親和性試薬が抗体である、請求項５５に記載のキット。
【請求項57】
前記ポリマーの１つまたは複数のペンダント基が、前記金属同位体の少なくとも６つの配位部位を配位させる、請求項１４から５６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項58】
前記ポリマーの１つまたは複数のペンダント基が、ＤＦＯまたはその誘導体を含む、請求項１４から５７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項59】
前記同位体組成物と区別可能な別の追加的同位体組成物を含む、請求項１４から５８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項60】
前記追加的同位体組成物の１つまたは複数がジルコニウムまたはハフニウムを含む、請求項５９に記載のキット。
【請求項61】
前記追加的同位体組成物の１つまたは複数がランタニドを含む、請求項５９または６０に記載のキット。
【請求項62】
ジルコニウムまたはハフニウムではなくランタニドをキレート化する複数のペンダント基を含むポリマーをさらに含む、請求項１４から６１のいずれか一項に記載のキット。
【請求項63】
別々の同位体組成物を担持したポリマーにそれぞれ共有結合した複数の抗体を含む、請求項１４から６２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項64】
前記ポリマーがリビング重合によって形成されている、請求項１４から６３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項65】
前記ポリマーが、アニオン重合、制御ラジカル重合、カチオン重合、および開環重合のうちの少なくとも１つによって形成されている、請求項１４から６４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項66】
前記ポリマーが１．５未満の多分散指数を有する、請求項１４から６５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項67】
前記ポリマーが１．２未満の多分散指数を有する、請求項６６に記載のキット。
【請求項68】
前記ポリマーが２～１００個のペンダント基を含む、請求項１４から６８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項69】
前記ポリマーが５～３０個の例の前記ペンダント基を含む、請求項６８に記載のキット。
【請求項70】
前記ポリマーが少なくとも５個の例の前記ペンダント基を含む、請求項１４から６８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項71】
前記ポリマーが、少なくとも１０個の原子の濃縮ジルコニウム同位体を含む、請求項１４から７０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項72】
前記ポリマーが、２０個と３０個の間の原子の濃縮ジルコニウム同位体を含む、請求項７１に記載のキット。
【請求項73】
前記ポリマーが一端で官能化されている、請求項１４から７２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項74】
前記ポリマーが、生理活性材料に結合するように官能化されている、請求項７３に記載のキット。
【請求項75】
前記生理活性材料が親和性試薬を含む、請求項７４に記載のキット。
【請求項76】
前記親和性試薬が抗体である、請求項７５に記載のキット。
【請求項77】
前記ポリマーが、チオール反応性ケミストリー、アミン反応性ケミストリー、またはクリックケミストリーによって前記生理活性材料に結合するように官能化されている、請求項７６に記載のキット。
【請求項78】
キットであって、複数のペンダント基を含むポリマー、および
濃縮されたジルコニウムまたはハフニウムの同位体を含む同位体組成物
を含み、
前記複数のペンダント基は、ＤＦＯまたはその誘導体を含み、
前記複数のペンダント基は、前記ポリマーの溶解性を補助し、かつ／または前記同位体組成物の前記ポリマーへの担持を補助するＰＥＧ基を含む、
キット。
【請求項79】
請求項１から７８のいずれか一項に記載のキットを作製する方法。
【請求項80】
マスサイトメトリーのためのポリマーを作製する方法であって、前記方法は、ヒドロキサメートを含むペンダント基の複数の例を含むポリマーを提供することを含む、
方法。
【請求項81】
濃縮金属同位体を含む同位体組成物を提供することをさらに含む、請求項８０に記載の方法。
【請求項82】
前記濃縮金属同位体がジルコニウムまたはハフニウムの塩化物塩である、請求項８１に記載の方法。
【請求項83】
前記濃縮金属同位体が非放射性である、請求項８１または８２に記載の方法。
【請求項84】
前記同位体組成物の前記ポリマーへの担持をさらに含む、請求項８０から８３のいずれかに記載の方法。
【請求項85】
リビング重合によって前記ペンダント基を重合することを含む、請求項８０から８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項86】
前記リビング重合が、アニオン重合、制御ラジカル重合、カチオン重合、および開環重合のうちの少なくとも１つを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項87】
前記ポリマーの少なくともいくつかのペンダント基がヒドロキサメートを含む、請求項８０から８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項88】
前記ポリマーの少なくともいくつかのペンダント基がペグ化されている、請求項８０から８７のいずれかに記載の方法。
【請求項89】
前記担持の工程が、非プロトン性溶媒の存在下である、請求項８４に記載の方法。
【請求項90】
前記非プロトン性溶媒がＤＭＳＯである、請求項８９に記載の方法。
【請求項91】
前記担持の工程が酸の存在下である、請求項８９または９０に記載の方法。
【請求項92】
前記同位体組成物が、濃縮されたジルコニウムまたはハフニウムの同位体である、請求項８１に記載の方法。
【請求項93】
前記同位体組成物が塩である、請求項９２に記載の方法。
【請求項94】
前記塩が塩化物塩である、請求項９３に記載の方法。
【請求項95】
前記塩が四塩化物塩またはオキシ塩化物塩である、請求項９４に記載の方法。
【請求項96】
酸化ジルコニウムの同位体を濃縮することをさらに含む、請求項８０から９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項97】
強酸の添加によって前記濃縮同位体を塩に変換することをさらに含む、請求項９６に記載の方法。
【請求項98】
前記塩が塩化物塩であり、前記強酸がＨＣｌを含む、請求項９７に記載の方法。
【請求項99】
前記塩が四塩化物またはオキシ塩化物の塩である、請求項９７または９８に記載の方法。
【請求項100】
生理活性材料への付着のために前記ポリマーを官能化することをさらに含む、請求項８０から９９のいずれかに記載の方法。
【請求項101】
前記ポリマーを生理活性材料にコンジュゲートすることをさらに含む、請求項８０から１００のいずれかに記載の方法。
【請求項102】
前記生理活性材料が親和性試薬を含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項103】
前記親和性試薬が抗体である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項104】
ペンダント基を前記ポリマーに付着させることをさらに含み、少なくともいくつかのペンダント基は、ヒドロキサメート、アザマクロサイクル、フェノキシアミン、サロフェン、および／またはシクラムのリガンドまたはその誘導体を含む、請求項８０から１０３のいずれかに記載の方法。
【請求項105】
前記ポリマーがヒドロキサメートを含む、請求項８０から１０４のいずれかに記載の方法。
【請求項106】
前記ポリマーがＤＦＯまたはその誘導体を含む、請求項８０から１０５のいずれかに記載の方法。
【請求項107】
前記ポリマーが、溶解性を補助する親水性基の１つまたは複数の鎖をさらに含む、請求項８０から１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項108】
前記ポリマーの１つまたは複数のペンダント基をペグ化することをさらに含む、請求項８０から１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項109】
前記ペンダント基のペグ化が前記ポリマーの担持を補助する、請求項１０８に記載の方法。
【請求項110】
前記ペグ化ペンダント基が、ジルコニウムおよび／またはハフニウムをキレート化する前記ペンダント基とは別である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項111】
請求項１から７８のいずれか一項に記載のキットを使用する、マスサイトメトリーの方法。
【請求項112】
マスサイトメトリーの方法であって、濃縮されたジルコニウムまたはハフニウムの同位体を含む質量タグ付き生理活性材料で、生体試料の細胞を標識すること、および
前記細胞に結合した質量タグを質量分析によって検出すること
を含む、方法。
【請求項113】
前記質量タグ付き生理活性材料が、請求項１から７８のいずれか一項に記載のキットによって提供される、請求項１１２に記載の方法。
【請求項114】
請求項１から７８のいずれか一項に記載のキットを使用することによって、前記質量タグ付き生理活性材料を提供することをさらに含む、請求項１１２に記載の方法。
【請求項115】
マスサイトメトリーの方法であって、第１の質量タグ付き親和性試薬を提供することであって、
前記親和性試薬はポリマーにコンジュゲートされており、
前記ポリマーは、ヒドロキサメートを含むペンダント基の複数の例を含み、
前記ポリマーは、濃縮金属同位体を含む同位体組成物を担持している、
第１の質量タグ付き親和性試薬を提供することと、
前記第１の質量タグ付き親和性試薬を含む複数の質量タグ付き親和性試薬で生体試料の細胞を標識することと、
前記細胞に結合した質量タグを質量分析によって検出することと
を含む、方法。
【請求項116】
ジルコニウムまたはハフニウムの濃縮同位体を含む同位体組成物であって、前記濃縮同位体が塩化物塩である、同位体組成物。
【請求項117】
ヒドロキサメートを含む複数のペンダント基を含むポリマー。
【請求項118】
細胞に結合した複数の質量タグを質量分析によって検出することを含み、前記複数の質量タグの少なくとも１つの質量タグが、濃縮されたジルコニウムまたはハフニウムの同位体を含む、マスサイトメトリーの方法。
【請求項119】
マスサイトメトリーのためのバーコード化キットであって、ジルコニウムおよび／またはハフニウムの濃縮同位体を含む質量タグであって、それぞれが濃縮同位体の固有の組合せを含む別々の混合物中で組み合わされる質量タグ、を含み、
各混合物は、他の試料または実験条件でプールする前に、特定の試料または実験条件を標識するための固有のバーコードを提供する、
バーコード化キット。
【請求項120】
前記質量タグが共有結合のために官能化されている、請求項１１９に記載のキット。
【請求項121】
前記質量タグがマレイミドによって官能化されている、請求項１２０に記載のキット。
【請求項122】
前記質量タグが抗体にコンジュゲートされている、請求項１１９に記載のキット。
【請求項123】
前記ポリマーが双性イオン性である、請求項１から７８のいずれか一項に記載のキット。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年７月３１日に出願された米国仮特許出願第６３／０５９，５４５号及び２０１９年８月８日に出願された米国仮特許出願第６２／８８４，５４８号に対する優先権の利益を主張し、これらの両方の内容は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年７月３１日に出願された米国仮特許出願第６３／０５９，５４５号及び２０１９年８月８日に出願された米国仮特許出願第６２／８８４，５４８号に対する優先権の利益を主張し、これらの両方の内容は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
マスサイトメトリーでは、細胞を質量タグ付き生理活性材料（抗体又はオリゴヌクレオチドなど）で標識し、質量タグを、単一細胞分解能で質量分析によって検出することができる。これらの質量タグは、通常、濃縮ランタニド同位体を担持したランタニドキレート化ポリマーである。区別することができる質量タグ付き生理活性材料の数は、異なる質量の同位体の数によって決定される。追加的質量タグは、マスサイトメトリーの用途においてより多くの標的を同時に検出することを可能にするが、新規なケミストリーを開発する必要があり得る。
【発明の概要】
【0003】
本開示の態様は、キット、作製方法、並びにポリマー及び／又は同位体組成物を使用する方法を含む。特定のキット及び方法が本明細書に記載されているが、キットの各構成要素及び／又は方法の各工程のいかなる単位又は組合せも、本出願の範囲内である。
【0004】
キットはポリマーを含み得る。ポリマーは、ジルコニウム及び／又はハフニウムなどの濃縮同位体をキレート化するペンダント基を含み得る。キットは、濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む同位体組成物をさらに含み得る。
【0005】
特定の態様では、ポリマーは、ヒドロキサメート（例えばヒドロキサム酸）、アザマクロサイクル、フェノキシアミン、サロフェン、シクラムリガンド、及び／又はそれらの誘導体を含む１つ又は複数のペンダント基を含み得る。ポリマーは、ジルコニウム又はハフニウムの少なくとも１つと八配位錯体を形成するヒドロキサメート、アザマクロサイクル、フェノキシアミン、サロフェン、又はシクラムの誘導体を含み得る。例えば、ジルコニウム及びハフニウムの少なくとも１つは、ポリマーのペンダント基と八配位錯体を形成し得る。
【0006】
特定の態様では、ポリマーは、デスフェリオキサミン（Ｄｅｓｆｅｒｒｉｏｘａｍｉｎｅ：ＤＦＯ）及び／又はその誘導体などのヒドロキサメート基を含む。代替的又は追加的に、ポリマーは、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ酢酸（１，４，７，１０－ｔｅｔｒａａｚａｃｙｃｌｏｄｏｄｅｃａｎｅ－１，４，７，１０－ｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ：ＤＯＴＡ）又はその誘導体などのアザマクロサイクルを含み得る。ポリマーは、ポリマー担持を補助し得るペグ化ペンダント基などの溶解補助部分をさらに含み得る。ペグ化ペンダント基は、ジルコニウム及び／又はハフニウムをキレート化するペンダント基とは別であり得る。ジルコニウム及び／又はハフニウムをキレート化するペンダント基は、ペグ化され得る（例えば、ジルコニウム及び／又はハフニウムをキレート化しないペンダント基に加えて）。例えば、ペンダント基は、ＤＦＯ誘導体（例えば、４個のヒドロキサメート基を含む）を含み得、ヒドロキサメート基間にエーテルなどの溶解補助基を含み得る。キレート化ペンダント基の溶解性を向上させることにより、不溶性、凝集、立体障害、及び／又は非特異的結合をもたらすことなく、より多くのペンダント基をポリマー質量タグに組み込むことが可能になり得る。例えば、このようなポリマーは、１０個を超える、１５個を超える、２０個を超える、又は２５個を超えるキレート化ペンダント基（例えば、ＤＦＯ又はその誘導体の例）を含み得る。
【0007】
ペグ化が上記の例に記載されているが、任意の適切な溶解補助基が使用され得る。このような溶解補助基には、エーテル（例えば、ポリエチレングリコールなどのポリエーテル）、オキサゾリン（又はポリオキサゾリン）、及び双性イオンポリマーなどの荷電基が含まれる。オキサゾリン（及び、例えばその誘導体）は、そのような溶解補助基の１つであり、エチレングリコール基の代わりに、又はそれに加えて使用され得る。例えば、ポリマー質量タグは、ポリマーの溶解性を向上させるために、ポリオキサゾリン（例えば、ポリ（２－メチル－２－オキサゾリン）、（２－エチル－２－オキサゾリン）、（２－プロピル－２－オキサゾリン）などのポリ（２－オキサゾリン））を含み得、かつ／又は、凝集、立体障害、及び／若しくは非特異的結合を低減し得る。溶解補助基は荷電され得る。例えば、正電荷と負電荷との組合せは、溶解性が向上した双性イオンポリマーを提供し得、かつ／又は凝集、立体障害、及び／又は非特異的結合を低減し得る。
【0008】
本出願のキットは、ヒドロキサメートを含むポリマーを含み得る。例えば、ポリマーの複数のペンダント基は、ヒドロキサメートを含み得る。キットは、ペンダント基によってキレート化することができる濃縮金属同位体を含む同位体組成物をさらに含み得る。
【0009】
本出願のポリマー（例えば、同位体組成物を担持した）は、抗体などの親和性試薬などの生理活性材料にコンジュゲートされ得る。例えば、抗体は、がん細胞で優先的に発現されるエピトープを標的とし得る。ポリマーは、抗体にコンジュゲートされ得る。ポリマーの溶解性によって、抗体のそのエピトープへの抗体結合が補助され得る。このようにして、キットは、本明細書に記載される担持ポリマーにコンジュゲートされた生理活性材料を含み得る。
【0010】
特定の態様では、キットは、ジルコニウム同位体及び／又はハフニウム同位体を含む組成物などの濃縮金属同位体の同位体組成物を含み得る。例えば、金属同位体はジルコニウム同位体であり得る。別の例では、金属同位体はハフニウム同位体である。キットは、追加的なジルコニウム及び／又はハフニウムの同位体を含む追加的同位体組成物を含み得る。同位体組成物は、非放射性であり得、例えば質量分析用途（例えばマスサイトメトリーのための質量タグとして）で使用するためのものであり得る。あるいは、同位体組成物は、例えば放射性医薬品用途（例えば、８９－Ｚｒ ＰＥＴイメージングなどのバイオメディカル・イメージング）で使用するための８９Ｚｒなどの放射性同位体を含み得る。同位体組成物は、（ポリマーの１つ又は複数のペンダント基が同位体組成物の濃縮金属同位体をキレート化するように）キット内のポリマーに担持され得る。あるいは、同位体組成物は、ポリマーとは別に提供され得る。
【0011】
同位体組成物は、ピリジン、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ：ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ：ＤＭＳＯ）、及び／又はヘキサメチルリン酸トリアミド（ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ：ＨＭＰＡ）などの非プロトン性溶媒（例えば極性非プロトン性溶媒）を含む（例えば非プロトン性溶媒の）溶液中で提供され得る。代替的又は追加的に、同位体組成物は、酸性溶液中で提供され得る。同位体組成物は、濃縮金属同位体（例えば、ジルコニウム又はハフニウムの同位体）の塩化物塩形態を含み得、又は溶液に溶解した塩化物塩形態を含み得る。同位体組成物は、本出願のポリマーに担持するのに適した形態で提供され得る。
【0012】
同位体組成物は、ポリマーとは別に提供され得る。例えば、同位体組成物は溶液中にある。あるいは、同位体組成物は、ポリマーの１つ又は複数のペンダント基に担持され得る。ポリマーは溶液中にあり得る。あるいは、ポリマーは凍結乾燥され得る。
【0013】
ポリマーは、ペグ化ペンダント基など、ポリマーの溶解性を補助する（例えば増大させる）ペンダント基を含み得る。例えば、ポリマーは、金属同位体を担持する前及び／又は後に、ポリマーの溶解性を補助するペンダント基を含むように修飾され得る。ペンダント基は、金属同位体をペンダント基に担持する前及び後に、ポリマーの溶解性を補助する親水性基を含み得る。特定の態様では、ポリマーはペグ化され得る。
【0014】
ポリマーは、生理活性材料を結合するように官能化され得る。特定の態様では、ポリマーは、チオール反応性ケミストリー、アミン反応性ケミストリー、又はクリックケミストリーによって官能化され得る。例えば、ポリマーは、チオール反応性のために官能化（例えば、マレイミド基を介して抗体のＦｃ部分のチオール基に付着）され得る。
【0015】
例えば、キットは、複数のペンダント基を含むポリマーと、濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む同位体組成物とを含み得る。複数のペンダント基は、ポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ：ＰＥＧ）基、及び／又はＤＦＯ若しくはその誘導体を含む基を含み得る。ＰＥＧ基は、ポリマーの溶解性を補助し、かつ／又は同位体組成物のポリマーへの担持を補助し得る。個々のペンダント基は、ＤＦＯ（又はその誘導体）基、ＰＥＧ基、又はその両方を含む。同位体組成物は、ポリマーとは別に提供され、又はポリマーに担持され得る。
【0016】
キットは、同位体組成物をポリマーに担持し、かつ／又は担持ポリマーを生理活性材料に結合するための任意の追加的構成要素（例えば、緩衝液、フィルタなど）をさらに含み得る。代替的又は追加的に、キットは、緩衝液、標準物質、細胞バーコード、及び／又は異なる質量の重原子を含む試薬などの、マスサイトメトリーのための追加的試薬を含み得る。
【0017】
本出願の態様は、本明細書で論じられるキット又はその一部を作製することを含む。本出願の態様は、例えばマスサイトメトリーのための、本明細書に記載のキットの使用を含む。
【0018】
本出願の態様は、マスサイトメトリーのためのポリマーを作製する方法を含み、その方法は、ヒドロキサメートを含むペンダント基の複数の例を含むポリマーを提供することを含む。
【0019】
特定の態様では、キットを作製する方法は、ポリマーを作製すること、濃縮金属同位体を含む同位体組成物を提供すること、同位体組成物（例えば、同位体組成物の濃縮金属同位体）をポリマーに担持すること、及び担持ポリマーを生理活性材料に付着させることのうちの１つ又は複数を含み得る。
【0020】
マスサイトメトリーの方法は、濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む質量タグ付き生理活性材料で生体試料の細胞を標識すること、及び質量分析によって、細胞に結合した質量タグを検出することを含み得る。当該方法は、例えば第三者からキットを入手すること、又は本明細書に記載のキットを作製することによって、本出願のキットを提供することを含み得る。
【図面の簡単な説明】
【0021】
【発明を実施するための形態】
【0022】
本開示の態様は、キット、作製方法、並びにポリマー及び／又は同位体組成物を使用する方法を含む。特定のキット及び方法が本明細書に記載されているが、キットの各構成要素及び／又は方法の各工程のいかなる単位又は組合せも、本出願の範囲内である。
【0023】
本明細書で使用される場合、試料は、細胞試料又は生体液などの生体試料である。細胞試料は、細胞懸濁液、又は固体支持体上の細胞（組織など）を含み得る。特定の態様では、細胞の一部が提供され得る。生体試料は、血液又は固形組織を含む任意の組織から、又は細胞培養物から得られ得る。
【0024】
本明細書で使用される場合、生理活性材料は、生物システムの一部に結合又は生物システムの一部を修飾する任意の材料であり得る。例えば、生理活性材料は、抗体、アミノ酸、ヌクレオシド、ヌクレオチド、アプタマー、タンパク質、抗原、ペプチド、核酸、オリゴヌクレオチド、酵素、脂質、アルブミン、細胞、炭水化物、ビタミン、ホルモン、ナノ粒子、無機支持体、ポリマー、単分子、又は薬物であり得る。特定の場合において、生体分子は、抗体（例えば、組換え抗体又は抗体フラグメントを含む）、及びアプタマー（例えば、ＤＮＡアプタマー又はＲＮＡアプタマー）、レクチン、ビオチン／ストレプトアビジン、受容体／リガンド、又は任意の他の適切な生体分子など、その三次構造に基づいて特定の標的に結合する親和性試薬であり得る。特定の態様では、生体分子は、ＤＮＡ標的若しくはＲＮＡ標的、又は中間体（ハイブリダイゼーション機構の中間体オリゴヌクレオチド、又は抗体中間体に付着したオリゴヌクレオチドなど）にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドであり得る。
【0025】
本明細書で使用される場合、質量タグは、濃縮金属同位体などの濃縮重原子を含む任意のタグを含む。質量タグは、濃縮金属同位体を担持したポリマーを含み得、任意選択で、コンジュゲートされた生理活性材料を含み得る。質量タグは、それらの濃縮金属同位体の原子質量に基づいて区別可能であり得る。
【0026】
本明細書で使用される場合、マスサイトメトリーは、例えば単一細胞分解能で区別可能な複数の質量タグを同時に検出し、生体試料中の質量タグを検出する任意の方法である。マスサイトメトリーには、懸濁マスサイトメトリー及びイメージング・マス・サイトメトリー（ｉｍａｇｉｎｇ ｍａｓｓ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ：ＩＭＣ）が含まれる。マスサイトメトリーは、レーザー放射、イオンビーム放射、電子ビーム放射、及び／又は誘導結合プラズマ（ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｐｌａｓｍａ：ＩＣＰ）のうちの１つ又は複数によって細胞試料の質量タグを微粒子化及びイオン化し得る。マスサイトメトリーは、例えば飛行時間型（ｔｉｍｅ ｏｆ ｆｌｉｇｈｔ：ＴＯＦ）又は磁気セクタ型の質量分析（ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ：ＭＳ）によって、単一細胞から別々の質量タグを同時に検出し得る。
【0027】
本出願の態様は、本明細書で論じられるキット又はその一部を作製することを含む。本出願の態様は、例えばマスサイトメトリー又は放射性同位体の送達のための、本明細書に記載のキットの使用を含む。
【0028】
本出願の態様は、マスサイトメトリーのためのポリマーを作製する方法を含み、その方法は、ヒドロキサメートを含むペンダント基の複数の例を含むポリマーを提供することを含む。
【0029】
特定の態様では、キットを作製する方法は、ポリマーを作製すること、濃縮金属同位体を含む同位体組成物を提供すること、同位体組成物（例えば、同位体組成物の濃縮金属同位体）をポリマーに担持すること、及び担持ポリマーを生理活性材料に付着させることのうちの１つ又は複数を含み得る。
【0030】
キットはポリマーを含み得る。ポリマーは、ジルコニウム及び／又はハフニウムなどの濃縮同位体をキレート化するペンダント基を含み得る。キットは、ジルコニウム又はハフニウムの同位体などの濃縮同位体を含む同位体組成物をさらに含み得る。
【0031】
キット、キットの構成要素、及びキットを作製する工程は、適切な保存媒体を含み得る。例えば、溶媒及び共可溶化剤は、以下に限定されるものではないが、水、注射用滅菌水（ｓｔｅｒｉｌｅ ｗａｔｅｒ ｆｏｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ：ＳＷＦＩ）；生理食塩水；アルコール、例えばエタノール、ベンジルアルコールなど；グリコール及びポリアルコール、例えばプロピレングリコール、グリセリンなど；ポリアルコールのエステル、例えばジアセチン、トリアセチンなど；ポリグリコール及びポリエーテル、例えばポリエチレングリコール４００、プロピレングリコールメチルエーテルなど；ジオキソラン、例えばイソプロピルリデングリセリンなど；ジメチルイソソルビド；ピロリドン誘導体、例えば、２－ピロリドン、Ｎ－メチル－２－ピロリドン、ポリビニルピロリドン（共可溶化剤のみ）など；ポリオキシエチレン化脂肪アルコール；ポリオキシエチレン化脂肪酸のエステル；ポリソルベート、例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）、ポリプロピレングリコールのポリオキシエチレン誘導体、例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標）を含み得る。特定の態様では、上に列挙した共可溶化剤を、例えば、本明細書に記載のＰＥＧ基の代わりに、又はそれに加えて、本明細書に記載の質量タグポリマーに組み込み得る。適切な安定化剤には、以下に限定されるものではないが、１つ又は複数の単糖類（例えば、ガラクトース、フルクトース、及びフコース）、二糖類（例えばラクトース）、多糖類（例えばデキストラン）、環状オリゴ糖類（例えば、アルファ－シクロデキストリン、ベータ－シクロデキストリン、ガンマ－シクロデキストリン）、脂肪族ポリオール（例えば、マンニトール、ソルビトール、及びチオグリセロール）、環状ポリオール（例えばイノシトール）、有機溶媒（例えば、エチルアルコール及びグリセロール）、及び／又は非プロトン性溶媒（ピリジン、酢酸エチル、ＤＭＦ、ＨＭＰＡ、及びＤＭＳＯ）が含まれる。上記の溶媒及び／又は安定化剤は、重合からペンダント基の付着、及び／又はキレート剤による修飾、ポリマーの同位体組成物の担持、ポリマーの生理活性材料への結合、又は上記の試薬のいずれかの保存（例えば、キットで提供するために）の任意の工程において使用され得る。特定の態様では、溶液は酸性であり得る。本出願の酸性溶液は、強酸、例えば硝酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、過塩素酸、塩酸、及び塩素酸のうちの１つ又は複数を含み得る。酸は、０．０１％超（例えば、０．０５％超、０．１％、０．２％、０．３％、０．５％、１％、２％、又は５％）、及び／又は１０％未満（例えば、５％未満、２％、１％、０．５％、０．２％、又は０．１％）で存在し得る。例えば、酸は０．０５％～２％で存在し得る。酸性溶液は、ｐＨが、６以下、５以下、４．５以下、又は４以下であり得る。本出願の凍結乾燥組成物は、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、又は１％未満の水分含有量（重量基準）を有し得る。
【0032】
任意の工程（例えば、本明細書で論じられる組成物をキットで提供する場合）において、組成物は凍結乾燥され得る。例えば、組成物（例えば、ポリマー、同位体組成物、担持ポリマー、又は生理活性材料にコンジュゲートされたポリマー）は、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、又は１％未満の水分含有量（例えば、質量基準）で凍結乾燥され得る。そのような凍結乾燥により、マスサイトメトリーでの使用前にキットでの保存が可能になり得、かつ／又は、凍結乾燥により、ポリマーが生理活性材料に後に付着するために安定化される場合、アッセイ設計の柔軟性が可能になり得る。
【0033】
キレート剤及びキレート化ペンダント基
本明細書で使用されるキレート剤は、金属原子を一緒に配位させる（例えば、安定的に配位させる）リガンドの群を指す。キットは、本出願の１つ又は複数のキレート剤を含むポリマーを含み得る。キレート剤は、ポリマーのペンダント基に存在し得、かつ／又はポリマー骨格に組み込まれ得る。特定の態様では、キレート剤はポリマーのペンダント基に含まれる。
本明細書で使用されるキレート剤は、金属原子を一緒に配位させる（例えば、安定的に配位させる）リガンドの群を指す。キットは、本出願の１つ又は複数のキレート剤を含むポリマーを含み得る。キレート剤は、ポリマーのペンダント基に存在し得、かつ／又はポリマー骨格に組み込まれ得る。特定の態様では、キレート剤はポリマーのペンダント基に含まれる。
【0034】
特定の態様では、ポリマーは、ヒドロキサメート（本明細書ではヒドロキサム酸と交換可能に使用される）、アザマクロサイクル、フェノキシアミン、サロフェン、シクラム、及び／又はそれらの誘導体などのリガンドを含む１つ又は複数のペンダント基を含み得る。ポリマーは、当技術分野で公知のキレート剤、又はヒドロキサメート、アザマクロサイクル、フェノキシアミン、サロフェン、若しくはシクラムを含むその誘導体を含み得る。特定の態様では、本出願のキレート剤は、ジルコニウム又はハフニウムの原子の６つ以上の、６つを超える、又は８つの部位を配位させ得る。例えば、キレート剤は、ジルコニウム及びハフニウムの少なくとも１つと八配位錯体を形成し得る。例えば、ジルコニウム及びハフニウムの少なくとも１つは、ポリマーのペンダント基と八配位錯体を形成し得る。
【0035】
特定の態様では、ポリマーのキレート剤は、ＤＦＯ及び／又はその誘導体などのヒドロキサメート基を含む。特定の態様では、キレート剤は、ジルコニウム又はハフニウムの結合が、ＤＦＯと比較して向上したＤＦＯ誘導体である。例えば、ＤＦＯ誘導体は、ジルコニウム原子及び／又はハフニウム原子の８つの部位を配位させ得、ジルコニウム及び／又はハフニウムの結合（例えば安定的結合）を補助するリガンド（ヒドロキサメート基）間のスペーシングを任意選択で含み得る。
【0036】
特定の態様では、ＤＦＯ誘導体は、八座誘導体（すなわち、８つの配位部位で金属をキレート化する）であり得る。代替的又は追加的に、ＤＦＯ誘導体は、ヒドロキサメート基間に配置された、エーテル基などの溶解補助基を含み得る。そのようなＤＦＯ誘導体は、Ｂｒｉａｎｄらによる「Ａ ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆａｃｉｌｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ａ ｈｉｇｈｌｙ ｗａｔｅｒ－ｓｏｌｕｂｌｅ ｚｉｒｃｏｎｉｕｍ－８９ ｃｈｅｌａｔｏｒ ｆｏｒ ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．」（Ｄａｌｔｏｎ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ、４６．４７（２０１７）：第１６３８７～１６３８９頁）に、放射性医薬品用途について記載されている。
【0037】
代替的又は追加的に、ポリマーは、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）キレート剤又はその誘導体などのアザマクロサイクルを含み得る。特定の実施形態では、キレート剤は、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラアセトアミド（１，４，７，１０－ｔｅｔｒａａｚａｃｙｃｌｏｄｏｄｅｃａｎｅ－１，４，７，１０－ｔｅｔｒａａｃｅｔａｍｉｄｅ：ＤＯＴＡＭ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ（メチレンホスホン酸）（１，４，７，１０－ｔｅｔｒａａｚａｃｙｃｌｏｄｏｄｅｃａｎｅ－１，４，７，１０－ｔｅｔｒａ（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ）ｐｈｏｎｉｃ ａｃｉｄ：ＤＯＴＰ）、及びＤＯＴＡのうちの１つを含み得る（例えば、ジルコニウム又はハフニウムの同位体を担持するか、又はジルコニウム又はハフニウムの同位体とは別に提供される）。特定の態様では、キレート剤は、ジルコニウム又はハフニウムの結合が、ＤＯＴＡと比較して向上した（かつランタニドへの結合が潜在的に減少した）ＤＯＴＡ誘導体である。例えば、ＤＯＴＡ誘導体は、ジルコニウム原子及び／又はハフニウム原子の８つの部位を配位させ得、結合する（例えば安定的に結合する）ジルコニウム及び／又はハフニウムを補助するリガンド間のスペーシングを任意選択で含み得る。例えば、ＤＯＴＡ誘導体は、ランタニド同位体と比較して、ジルコニウム及び／又はハフニウムへの結合が増加し得る。
【0038】
ジルコニウム及び／又はハフニウムを配位させるのに適したキレート剤、並びに８９Ｚｒの治療的送達又はポジトロン放出断層撮影（ｐｏｓｉｔｒｏｎ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ：ＰＥＴ）スキャンによる検出などの用途におけるキレート剤の使用については、Ｐａｔｒａら（米国特許出願公開第２０１７０１０６２０６号明細書）及びＷａｄａｓら（米国特許出願公開第２０１９００３８７８５号明細書）によって論じられている。
【0039】
ポリマーは、ポリマー担持を補助し得るペグ化ペンダント基などの、本明細書にさらに記載される溶解補助基をさらに含み得る。ポリマーは、濃縮金属同位体をキレート化するペンダント基とは別のペグ化ペンダント基を含み得る。代替的又は追加的に、ペグ化ペンダント基はキレート剤も含み得る。
【0040】
ペンダント基のケミストリーは、マクロサイクルへの様々な官能基の付加によって最適化することができる。例えば、リガンドと任意選択の溶解補助基との組合せなどのペンダントアーム組成物、リガンドのスペーシング、及び／又は同じペンダントアーム上のリガンド間のリンカー組成物は、本明細書に記載の金属同位体の安定的な配位を補助し得、本明細書に記載の他の所望の特性をさらに提供し得る。ペンダント基のキレート剤は、本出願のポリマーに付着する場合のケミストリーのために特異的に開発され得る。
【0041】
ポリマー
本出願のキットを作製する方法は、ポリマーを提供することを含み得る。ポリマーの提供には、第三者からポリマーを得ることを含み得る。あるいは、ポリマーの提供には、リビング重合によってペンダント基を重合することを含み得る。リビング重合では、連鎖停止反応及び連鎖移動反応がないか又は最小限であり得、連鎖開始反応速度が連鎖成長反応速度よりも速くなり得る。得られたポリマー鎖は、従来の連鎖重合で見られるよりも一定の速度で成長し得、ポリマーの長さは一貫性を維持し得る（すなわち、ポリマーの長さは、本明細書に記載されるように多分散指数が低い）。本出願のポリマーを作製するために使用されるリビング重合は、アニオン重合、制御ラジカル重合（触媒連鎖移動重合、イニファータ媒介重合、安定フリーラジカル媒介重合（ｓｔａｂｌｅ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ：ＳＦＲＰ）、原子移動ラジカル重合（ａｔｏｍ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｒａｄｉｃａｌ ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ：ＡＴＲＰ）、可逆的付加－開裂連鎖移動（ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ａｄｄｉｔｉｏｎ－ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｈａｉｎ ｔｒａｎｓｆｅｒ：ＲＡＦＴ）重合、及びヨウ素移動重合など）、カチオン重合、及び／又は開環重合のうちの１つ又は複数を含み得る。重合されたペンダント基は、キレート剤、溶解補助基、又はその両方を含み得る。ポリマーの個々のペンダント基は、キレート剤、溶解補助基、又はその両方を含み得る。ポリマーのペンダント基は、重合後に、キレート剤及び／又は溶解補助基を付加するために官能化され得る。代替的又は追加的に、少なくともいくつかのペンダント基は、重合前にキレート剤及び／又は溶解補助基を含み得る。
本出願のキットを作製する方法は、ポリマーを提供することを含み得る。ポリマーの提供には、第三者からポリマーを得ることを含み得る。あるいは、ポリマーの提供には、リビング重合によってペンダント基を重合することを含み得る。リビング重合では、連鎖停止反応及び連鎖移動反応がないか又は最小限であり得、連鎖開始反応速度が連鎖成長反応速度よりも速くなり得る。得られたポリマー鎖は、従来の連鎖重合で見られるよりも一定の速度で成長し得、ポリマーの長さは一貫性を維持し得る（すなわち、ポリマーの長さは、本明細書に記載されるように多分散指数が低い）。本出願のポリマーを作製するために使用されるリビング重合は、アニオン重合、制御ラジカル重合（触媒連鎖移動重合、イニファータ媒介重合、安定フリーラジカル媒介重合（ｓｔａｂｌｅ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ：ＳＦＲＰ）、原子移動ラジカル重合（ａｔｏｍ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｒａｄｉｃａｌ ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ：ＡＴＲＰ）、可逆的付加－開裂連鎖移動（ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ａｄｄｉｔｉｏｎ－ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｈａｉｎ ｔｒａｎｓｆｅｒ：ＲＡＦＴ）重合、及びヨウ素移動重合など）、カチオン重合、及び／又は開環重合のうちの１つ又は複数を含み得る。重合されたペンダント基は、キレート剤、溶解補助基、又はその両方を含み得る。ポリマーの個々のペンダント基は、キレート剤、溶解補助基、又はその両方を含み得る。ポリマーのペンダント基は、重合後に、キレート剤及び／又は溶解補助基を付加するために官能化され得る。代替的又は追加的に、少なくともいくつかのペンダント基は、重合前にキレート剤及び／又は溶解補助基を含み得る。
【0042】
ポリマーは、例えば、マスサイトメトリーによる定量を可能にするため、かつ／又はコンジュゲートされた生理活性材料に対して一貫した効果を有するように、低い多分散性を有し得る。例えば、ポリマーは、１．５未満、１．４未満、１．３未満、１．２未満、又は１．１未満の多分散指数を有し得る。
【0043】
特定の態様では、ポリマーは有機骨格を含み得る。ポリマーは、アクリル酸、カルボン酸、アクリロニトリル、メタクリル酸メチルなどのアクリレートモノマーを含み得る。特定の態様では、ポリマーは、多糖、ポリペプチド、又はポリヌクレオチドなどのバイオポリマーを含むことができる。ポリマーは、ビニルエーテル、イソブチレン、スチレン、及び／又はＮ－ビニルカルバゾールなどの電子に富むアルケンを含み得る。代替的又は追加的に、ポリマーは、エチレン、プロピレン、スチレン、アミン、ヘキセン、アスパラギン酸、アクリルアミド、活性化エステル、それらの任意の誘導体、及び／又は当技術分野で公知の任意の他の適切な骨格（リビング重合に適した任意のポリマーなど）を含み得る。ポリマーは、コポリマーであり得る（かつ異なるペンダント基の付着を補助し得る）。本出願のポリマーは、線状、分岐状、又は超分岐状であり得る。特定の態様では、ポリマーは線状ポリマーであり得る。
【0044】
本出願のポリマー骨格は、その骨格に任意の適切な数の繰り返し単位（例えば、ペンダント基を含むように修飾され得る）、例えば２個超、５個、１０個、２０個、３０個、４０個、５０個、１００個の繰り返し単位を含み得る。例えば、ポリマーは、２個以上１００個以下、５個と８０個の間、１０個と５０個の間、又は２０個と４０個の間の繰り返し単位を含み得る。
【0045】
Ｆｌｕｉｄｉｇｍによって販売されているランタニド質量タグポリマー（Ｍａｘｐａｒ（登録商標）試薬）は、図１に示すように抗体とのコンジュゲーションを可能にする。具体的には、ポリマーは、ランタニド同位体を担持することができる複数のペンダント基を含む。ポリマーはチオール反応性のために官能化され、抗体の還元（例えば、（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ｔｒｉｓ（２－ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙｌ）ｐｈｏｓｐｈｉｎｅ：ＴＣＥＰ）を介して）により、ポリマー質量タグへのコンジュゲーションを可能にするチオール（－ＳＨ）基が提供される。濾過に基づいた精製工程は、金属（ランタニド溶液）をポリマーに担持した後、還元された抗体について個別に実施される。
【0046】
対照的に、図２は、本出願のジルコニウム又はハフニウムの質量タグポリマーを示す。金属キレート化ペンダント基に加えて、ポリマーは、溶解性を補助するペンダント基であるが、図中の黒色ペンダント基によって表される金属（例えば、本明細書でさらに説明する金属）はキレート化しないペンダント基を含み得る。ジルコニウム又はハフニウムの同位体などの金属イオン（Ｍ＋）の溶液は、ポリマーのキレート化ペンダント基（例えば、ＤＦＯ又はその誘導体を含むペンダント基）に担持され得る。本明細書で論じるように、ＤＦＯ誘導体は、八座キレート化（例えば、４つのヒドロキサメート基を介して）を可能にし得、かつ／又はヒドロキサメート間に１つ又は複数の溶解補助部分を含み得る。特に、図２のＭ＋記号は、４＋電荷を有する金属（例えば、４＋電荷を有するジルコニウム又はハフニウム）などの任意の電荷を有する金属イオンを指す。生体分子への（例えば、抗体又はその断片などの親和性試薬への）ポリマーの付着は、チオール反応性ケミストリー、アミン反応性ケミストリー、クリックケミストリー、又は当技術分野で公知の任意の適切なコンジュゲーション機構によるものであり得る。特定の態様では、本出願の質量タグポリマーは、開環重合によって形成され得る。主題の質量タグを作製する特定の態様では、ポリマー骨格のアジド開始重合が含まれ、ペンダント基（キレート化ペンダント基と非キレート化溶解補助ペンダント基との混合物など）を後に組み込み得る（例えばアミノリシスによって）。そのような質量タグは、クリックケミストリー媒介コンジュゲーションのためのアジド官能基を含み得る。例えば、生体分子（抗体など）のアミン修飾又はアミノ酸モチーフの修飾により、アジドとの反応のためのジベンゾシクロオクチン（ｄｉｂｅｎｚｏｃｙｃｌｏｏｃｔｙｎｅ：ＤＢＣＯ）基が提供され得る。そのような質量タグポリマーの設計及び合成は、抗体への金属担持及び／又はコンジュゲーションを可能にする溶解性を有し得、凝集、立体障害、及び／又は非特異的結合をさらに低減し得る。さらに、そのようなアプローチは、より簡単な合成、収率の増加、チオール以外の部分とのコンジュゲーションが可能な質量タグ、及び／又はより多くの金属の組込みを可能にし得る。
【0047】
特定の態様では、ポリマーは、デスフェリオキサミン（ＤＦＯ）及び／又はその誘導体などのヒドロキサメート基を含む。代替的又は追加的に、ポリマーは、ＤＯＴＡ又はその誘導体などのアザマクロサイクルを含み得る。ポリマーは、ポリマー担持を補助し得るペグ化ペンダント基などの溶解補助部分をさらに含み得る。ペグ化ペンダント基は、ジルコニウム及び／又はハフニウムをキレート化するペンダント基とは別であり得る。ジルコニウム及び／又はハフニウムをキレート化するペンダント基は、ペグ化され得る（例えば、ジルコニウム及び／又はハフニウムをキレート化しないペンダント基に加えて）。例えば、ペンダント基は、ＤＦＯ誘導体（例えば、４個のヒドロキサメート基を含む）を含み得、ヒドロキサメート基間にエーテルなどの溶解補助基を含み得る。キレート化ペンダント基の溶解性を向上させることにより、不溶性、凝集、立体障害、及び／又は非特異的結合をもたらすことなく、より多くのペンダント基をポリマー質量タグに組み込むことが可能になり得る。例えば、このようなポリマーは、１０個を超える、１５個を超える、２０個を超える、又は２５個を超えるキレート化ペンダント基（例えば、ＤＦＯ又はその誘導体の例）を含み得る。
【0048】
ペグ化が上記の例に記載されているが、任意の適切な溶解補助基が使用され得る。このような溶解補助基には、エーテル（例えば、ポリエチレングリコールなどのポリエーテル）、オキサゾリン（又はポリオキサゾリン）、及び双性イオンポリマーなどの荷電基が含まれる。オキサゾリン（及び、例えばその誘導体）は、そのような溶解補助基の１つであり、エチレングリコール基の代わりに、又はそれに加えて使用され得る。例えば、ポリマー質量タグは、ポリマーの溶解性を向上させるために、ポリオキサゾリン（例えば、ポリ（２－メチル－２－オキサゾリン）、（２－エチル－２－オキサゾリン）、（２－プロピル－２－オキサゾリン）などのポリ（２－オキサゾリン））を含み得、かつ／又は、凝集、立体障害、及び／若しくは非特異的結合を低減し得る。溶解補助基は荷電され得る。例えば、正電荷と負電荷との組合せは、溶解性が向上した双性イオンポリマーを提供し得、かつ／又は凝集、立体障害、及び／又は非特異的結合を低減し得る。
【0049】
ペンダント基の修飾
ポリマーは、ペグ化ペンダント基など、ポリマーの溶解性を補助する（例えば増大させる）ペンダント基を含み得る。例えば、ポリマーは、金属同位体を担持する前及び／又は後に、ポリマーの溶解性を補助するペンダント基を含むように修飾され得る。ここで、ペンダント基は、金属同位体をペンダント基に担持する前及び後に、ポリマーの溶解性を補助する親水性基を含む。このようにして、ポリマーの１つ又は複数のペンダント基は、繰り返し親水性基（例えば、ポリマーの溶解性を補助する）の鎖を含み得る。例えば、配位ペンダント基は、親水性基を含み得、かつ／又は親水性基を含むペンダント基とは別であり得る。繰り返し親水性基の鎖は、ポリマーの配位ペンダント基の配位ケミストリーに影響しない可能性がある。親水性基はＰＥＧ基を含み得る。ポリマーの補助された（例えば増加した）溶解性により、溶液中の金属同位体の担持が補助（例えば増加）され得る。
ポリマーは、ペグ化ペンダント基など、ポリマーの溶解性を補助する（例えば増大させる）ペンダント基を含み得る。例えば、ポリマーは、金属同位体を担持する前及び／又は後に、ポリマーの溶解性を補助するペンダント基を含むように修飾され得る。ここで、ペンダント基は、金属同位体をペンダント基に担持する前及び後に、ポリマーの溶解性を補助する親水性基を含む。このようにして、ポリマーの１つ又は複数のペンダント基は、繰り返し親水性基（例えば、ポリマーの溶解性を補助する）の鎖を含み得る。例えば、配位ペンダント基は、親水性基を含み得、かつ／又は親水性基を含むペンダント基とは別であり得る。繰り返し親水性基の鎖は、ポリマーの配位ペンダント基の配位ケミストリーに影響しない可能性がある。親水性基はＰＥＧ基を含み得る。ポリマーの補助された（例えば増加した）溶解性により、溶液中の金属同位体の担持が補助（例えば増加）され得る。
【0050】
特定の態様では、ペンダント基（例えば、キレート剤及び／又は溶解補助基を有する）は、骨格の重合時に組み込まれ得る。代替的又は追加的に、ペンダント基、溶解補助基（例えば鎖）、又はその両方は、例えば当技術分野で公知の任意の付着ケミストリーによって、ポリマー骨格によって提供される官能基に付着され得る。例えば、溶解補助基を有する（かつキレート剤がない）ペンダント基に対してキレート剤を有するペンダント基の割当量が得られるように、溶解補助基に対するキレート剤の割合がポリマーに加えられ得る。適切な付着ケミストリーには、カルボキシル対アミン反応性ケミストリー（例えばカルボジイミドとの反応など）、アミン反応性ケミストリー（例えば、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（Ｎ－ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ：ＮＨＳ）エステル、イミドエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ヒドロキシメチルホスフィンなどとの反応など）、スルフヒドリル反応性ケミストリー（例えば、マレイミド、ハロアセチル（ブロモアセチル又はヨードアセチル）、ピリジルジスルフィド、チオスルホナート、ビニルスルホンなどとの反応など）、アルデヒド反応性ケミストリー（例えば、ヒドラジド、アルコキシアミンなどとの反応など）、ヒドロキシル反応性ケミストリー（例えば、イソチオシアナートとの反応など）が含まれ得る。代替の付着方法には、歪み促進クリックケミストリー（例えば、ＤＢＣＯ－アジド又はトランスーシクロオクテン（ｔｒａｎｓ－ｃｙｃｌｏｏｃｔｅｎｅ：ＴＣＯ）－テトラジンによる）などのクリックケミストリーが含まれる。
【0051】
ポリマーは、少なくとも一部が鎖状に構築され得る溶解補助基を含み得る。本明細書で使用される溶解補助基は、金属原子を配位させなくてもよい。ポリマーは、溶解性を補助する（例えば増加させる）ためにペグ化され得る。例えば、ポリマーは、少なくとも５０個、少なくとも１００個、少なくとも２００個、又は少なくとも５００個のＰＥＧ単位（例えばＰＥＧ基）を含み得る。ＰＥＧ単位は、ポリマーの複数のペンダント基がペグ化され得るように、複数のペンダント基にわたって分布し得る。例えば、少なくともいくつかのペンダント基は、５個を超える、１０個を超える、２０個を超える、３０個を超える、又は４０個を超えるＰＥＧ単位（例えば鎖状に構築される）を含み得る。ポリマーのＰＥＧ単位の数は、ポリマーへの金属同位体の担持を補助（例えば増加）し得る。特定の態様では、ポリマーの全てのペンダント基の５０％未満が、ジルコニウム及び／又はハフニウムをキレート化し、ポリマーの全てのペンダント基の５０％超が、複数のＰＥＧ単位を含む。例えば、ポリマーのペンダント基の６０％未満～３０％超、例えば５０％未満～４０％超がキレート剤を含み得る。
【0052】
特定の態様では、ポリマーのペグ化は、ＰＥＧ単位の鎖をポリマーのペンダント基に付着させることを含み得る。鎖は、５個以上、１０個以上、２０個以上、３０個以上、４０個以上、又は５０個以上のＰＥＧ単位を含み得る。ペグ化ペンダント基は、キレート剤を含み得るか、又はキレート剤を含むペンダント基とは別であり得る。キレート剤及び溶解補助基（例えばＰＥＧ）の量、分布、及び／又は割合により、ポリマーへの同位体組成物の担持が補助され得る。例えば、キレート剤及び溶解補助基（例えばＰＥＧ）の量、分布、及び／又は割合により、ポリマーに担持することができる同位体組成物（例えば組成物の濃縮同位体）の量が最大（例えば、最大値の８０％以内、９０％以内、又は９５％以内）にされ得る。ポリマーの担持については、本明細書でさらに論じられる。
【0053】
ペグ化が上記の例に記載されているが、任意の適切な溶解補助基が使用され得る。このような溶解補助基には、エーテル（又はポリエーテル）、オキサゾリン（又はポリオキサゾリン）、及び、例えば双性イオンポリマーにおける荷電基が含まれる。オキサゾリン（及び、例えばその誘導体）は、そのような溶解補助基の１つであり、エチレングリコール基の代わりに、又はそれに加えて使用され得る。例えば、ポリマー質量タグは、ポリマーの溶解性を向上させるためにポリオキサゾリン（例えばポリ（２－オキサゾリン））を含み得、かつ／又は、凝集、立体障害、及び／若しくは非特異的結合を低減し得る。溶解補助基は荷電され得る。例えば、正電荷と負電荷との組合せは、溶解性が向上した双性イオンポリマーを提供し得、かつ／又は凝集、立体障害、及び／又は非特異的結合を低減し得る。
【0054】
ポリマー（例えば、担持前、担持後、及び／又は生理活性材料へのコンジュゲーション後）は、凝集しない可能性がある（例えば凝集しにくい可能性がある）。例えば、ポリマーの９０％超、９５％超、９８％超、９９％超、又は実質的に全てが凝集しない可能性がある。本明細書に記載されるように、ポリマーは、同位体組成物を非担持であり得、同位体組成物を担持し得、かつ／又は生理活性材料にコンジュゲートされ得る。ポリマーは、本明細書に記載されるように溶液中にあり得る。例えば、ポリマーの９０％超、９５％超、９８％超、９９％超、又は実質的に全てが凝集しない可能性がある。キットで提供（例えば、本明細書に記載の追加的構成要素を用いて）されるポリマーは、少なくとも１ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、又は少なくとも１年間、安定であり得る。
【0055】
本出願のポリマーは、任意の適切な数のペンダント基（例えば、ポリマー主鎖の繰り返し単位に付着された）、例えば２個超、５個、１０個、２０個、３０個、４０個、５０個、１００個のペンダント基を含み得る。例えば、ポリマーは、２個以上１００個以下、５個と８０個の間、１０個と５０個の間、又は２０個と４０個の間のペンダント基を含み得る。
【0056】
本出願の同位体組成物
キットは、ランタニド同位体又は遷移同位体を含む組成物などの濃縮金属同位体の同位体組成物を含み得る。濃縮金属同位体は、元素の周期表の第３族、第４族、第６族、第７族、第９族、第１０族、第１１族、第１３族、又は第１５族の同位体を含み得る。特定の態様では、同位体組成物は、ジルコニウム同位体又はハフニウム同位体などの第４族の同位体を含み得る。例えば、金属同位体はジルコニウム同位体であり得る。別の例では、金属同位体はハフニウム同位体である。キットは、追加的なジルコニウム及び／又はハフニウムの同位体を含む追加的同位体組成物を含み得る。同位体組成物は非放射性であり得る。あるいは、同位体組成物は、８９Ｚｒなどの放射性同位体を含み得る。同位体組成物は、（ポリマーの１つ又は複数のペンダント基が同位体組成物の濃縮金属同位体をキレート化するように）キット内のポリマーに担持され得る。あるいは、同位体組成物は、ポリマーとは別に提供され得る。
キットは、ランタニド同位体又は遷移同位体を含む組成物などの濃縮金属同位体の同位体組成物を含み得る。濃縮金属同位体は、元素の周期表の第３族、第４族、第６族、第７族、第９族、第１０族、第１１族、第１３族、又は第１５族の同位体を含み得る。特定の態様では、同位体組成物は、ジルコニウム同位体又はハフニウム同位体などの第４族の同位体を含み得る。例えば、金属同位体はジルコニウム同位体であり得る。別の例では、金属同位体はハフニウム同位体である。キットは、追加的なジルコニウム及び／又はハフニウムの同位体を含む追加的同位体組成物を含み得る。同位体組成物は非放射性であり得る。あるいは、同位体組成物は、８９Ｚｒなどの放射性同位体を含み得る。同位体組成物は、（ポリマーの１つ又は複数のペンダント基が同位体組成物の濃縮金属同位体をキレート化するように）キット内のポリマーに担持され得る。あるいは、同位体組成物は、ポリマーとは別に提供され得る。
【0057】
特定の態様では、キットは、ジルコニウム同位体及び／又はハフニウム同位体を含む組成物などの濃縮金属同位体の同位体組成物を含み得る。例えば、金属同位体はジルコニウム同位体であり得る。ジルコニウム同位体は、天然に存在する同位体、９０Ｚｒ、９１Ｚｒ、９２Ｚｒ、９４Ｚｒ、９６Ｚｒであり得る。ジルコニウム同位体は、非放射性であり得る。あるいは、ジルコニウム同位体は、８９Ｚｒなどの放射性同位体であり得る。別の例では、金属同位体はハフニウム同位体である。ハフニウム同位体は、１７４Ｈｆ、１７６Ｈｆ、１７７Ｈｆ、１７８Ｈｆ、１７９Ｈｆ、又は１８０Ｈｆであり得る。
【0058】
本明細書に記載されるように、本出願のキットは、ヒドロキサメートを含むポリマーを含み得る。例えば、ポリマーの複数のペンダント基は、ヒドロキサメートを含み得る。キットは、ペンダント基によってキレート化することができる濃縮金属同位体を含む同位体組成物をさらに含み得る。
【0059】
同位体組成物は、ピリジン、酢酸エチル、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、及び／又はＨＭＰＡなどの非プロトン性溶媒（例えば極性非プロトン性溶媒）を含む（例えば非プロトン性溶媒の）溶液中で提供され得る。代替的又は追加的に、同位体組成物は、酸性溶液、例えばｐＨが６以下、５以下、４．５以下、例えば４と６の間の溶液中で提供され得る。同位体組成物は、濃縮金属同位体の塩化物塩形態（例えば、ジルコニウム又はハフニウムの同位体の結晶化塩化物塩形態）を含み得、又は溶液に溶解した塩化物塩形態を含み得る。例えば、塩化物塩は、０．１ｍｇ／ｍｌ超（例えば、０．２ｍｇ／ｍｌ超、０．５ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、又は５０ｍｇ／ｍｌ）、及び／又は１００ｍｇ／ｍｌ未満（例えば、５０ｍｇ／ｍｌ未満、２０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、又は５ｍｇ／ｍｌ）の濃度で溶解され得る。例えば、塩化物塩は、０．５ｍｇ／ｍｌ～２０ｍｇ／ｍｌで溶解され得る。同位体組成物は、本出願のポリマーに担持するのに適した形態で提供され得る。
【0060】
本出願のポリマーは、ジルコニウム又はハフニウムなどの非ランタニド金属同位体と一緒に提供され得、又は非ランタニド金属同位体を担持し得る。特定の態様では、金属同位体はジルコニウム同位体であり得る。特定の態様では、金属同位体はハフニウム同位体であり得る。
【0061】
本明細書に記載されるように、金属同位体は濃縮金属同位体であり得、天然に存在する金属中よりも高い存在量で単一の同位体が存在する。例えば、濃縮金属同位体は、９５％超、９９％、又は９９．９％の純度で存在し得る。同位体濃縮は、前駆体元素の衝撃によるものであり得る。例えば、イットリウム８９（８９Ｙ）は、プロトン衝撃によってジルコニウム８９（８９Ｚｒ）に変換され得る。あるいは、濃縮は、原子量（すなわち質量に基づく）によるものであり得、例えば遠心分離又はセクタ型質量分析（例えばカルトロン）による。
【0062】
濃縮金属同位体の塩形態は、本出願のポリマーへの可溶化及び／又は担持を可能にするために提供され得る。塩は、塩化物塩又はシュウ酸塩であり得る。特定の態様では、塩形態は、オキシ塩化物形態又は四塩化物形態などの塩化物形態であり得る。例えば、濃縮金属同位体は、四塩化ジルコニウム又は四塩化ハフニウムであり得る。
【0063】
治療的使用には、８９Ｚｒなどの放射性同位体が所望され得る。例えば、抗体にコンジュゲートしたポリマーへの８９Ｚｒの担持により、抗体によって送達される８９Ｚｒ原子の数が増加し得る。
【0064】
マスサイトメトリーの用途では、異なる濃縮同位体を含み、異なる生理活性材料に結合した複数の区別可能な質量タグが使用され得る。さらに、放射性同位体は使用者にとって危険であり得るため、マスサイトメトリーのための質量タグはそのような同位体は含まなくてもよい。このようにして、マスサイトメトリーのためのジルコニウム同位体又はハフニウム同位体は、８９Ｚｒを除外し得、原子量によって濃縮され得る。そのような場合、ジルコニウム又はハフニウムなどの天然に存在する金属は、１）分子量による同位体濃縮、及び２）本出願のポリマーへの担持に適した形態を得ることの両方によって処理され得る。
【0065】
本出願のキットを作製する方法は、同位体組成物を提供することを含み得る。特定の実施形態では、作製方法は、ポリマー及び同位体組成物の両方を提供することを含み得る。同位体組成物の提供には、第三者から同位体組成物を得ることを含み得る。あるいは、同位体組成物の提供には、同位体（ジルコニウム又はハフニウムの同位体など）を濃縮すること、及び／又は同位体を塩に変換することの１つ又は複数が含まれ得る。
【0066】
塩形態（塩化物塩又はシュウ酸塩など）を溶液に溶解し、本出願のポリマーに担持し得る。ジルコニウム又はハフニウムは、塩として、又は溶液中で提供され得る。特定の態様では、ジルコニウム又はハフニウムは、例えば、Ｈｏｌｌａｎｄら（Ｈｏｌｌａｎｄ、Ｊａｓｏｎ Ｐ．、Ｙｉａｕｃｈｕｎｇ Ｓｈｅｈ、Ｊａｓｏｎ Ｓ．Ｌｅｗｉｓによる「Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ ｓｐｅｃｉｆｉｃ－ａｃｔｉｖｉｔｙ ｚｉｒｃｏｎｉｕｍ－８９」、Ｎｕｃｌｅａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｙ ３６、第７号（２００９）第７２９～７３９頁）、Ｍｏｈａｎｄａｓら（Ｍｏｈａｎｄａｓ、Ｋ．Ｓ．、Ｄ．Ｊ．Ｆｒａｙによる「Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｄｅｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｚｉｒｃｏｎｉｕｍ ｄｉｏｘｉｄｅ ｉｎ ｍｏｌｔｅｎ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ」、Ｍｅｔａｌｌｕｒｇｉｃａｌ ａｎｄ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ Ｂ ４０．５（２００９）第６８５～６９９頁）、又はＴｕｙｅｎら（Ｔｕｙｅｎ、Ｎｇｏ Ｖａｎらによる「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｚｉｒｃｏｎｉｕｍ Ｏｘｙｃｈｌｏｒｉｄｅ ｆｒｏｍ Ｚｉｒｃｏｎ ｏｆ Ｖｉｅｔｎａｍ」）によって、塩の形態で提供され得る。
【0067】
同位体組成物の提供には、原料からジルコニウム又はハフニウムを精製すること、例えばジルコニウム又はハフニウムの酸化物形態を砂から精製すること、又はジルコニウム又はハフニウムの酸化物形態を他の方法で得ることが含まれ得る。特定の態様では、方法には、例えば強塩基（例えば水酸化ナトリウム）の添加、及び少なくとも５００℃、少なくとも６００℃、少なくとも７００℃、又は５００℃と８００℃の間の温度でのインキュベーションの後に、アルカリ分解によって砂から乾燥酸化ジルコニウム（例えばジルコン酸ナトリウム）を得ることが含まれ得る。同位体組成物の提供には、ジルコニウム若しくはハフニウムの同位体を濃縮すること、又はジルコニウム若しくはハフニウムの濃縮同位体を得ることが含まれ得る。例えば、ジルコニウム又はハフニウムの同位体の酸化物形態は、例えばカルトロン（磁気セクタ型）によって、質量により濃縮され得る。特定の同位体を得る代替手段は当技術分野で公知であり、遠心分離又は衝撃が含まれる。例えば、８９Ｚｒは、８９Ｙのサイクロトロン衝撃などの衝撃（例えばプロトン衝撃）によって得られ得る。同位体組成物は、塩化物塩（例えば、オキシ塩化物又は四塩化物）などの塩として提供され得る。特定の態様では、濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体の酸化物形態は、（塩酸）などの強酸の添加によってオキシ塩化物塩に変換され得る。そのような変換は、少なくとも８０℃、少なくとも９０℃、又は少なくとも９５℃などの高温で行い得る。あるいは、塩化物ガスへの電気分解など、塩化物ガスへの曝露によって四塩化ジルコニウムが得られ得る。
【0068】
本出願の態様は、濃縮金属同位体（例えば、上記の濃縮金属同位体を得ることによって、又は上記の工程のうちの１つ又は複数を行うことによって）を提供することを含み得る。特定の態様では、濃縮金属同位体は、ポリマーへの担持（例えば本明細書でさらに説明する）に適した形態で提供され得る。
【0069】
ポリマー担持
キットは、同位体組成物をポリマーに担持するための金属担持緩衝液を含み得る。金属担持緩衝液は、本出願のポリマーに担持する前に、溶液中の同位体組成物と混合され得る。金属担持緩衝液は、酸性溶液（例えば強酸、例えば硝酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、過塩素酸、塩酸、及び塩素酸のうちの１つ又は複数を含む）であり得る。同位体組成物は、本出願のポリマーに担持するのに適した形態で提供され得る。代替的又は追加的に、担持緩衝液は、酢酸アンモニウム、酢酸ナトリウムなどの酢酸塩（例えば酢酸アルカリ）、及び／又は炭酸塩又は重炭酸塩などの別のアルカリと対になった酢酸塩を含み得る。
キットは、同位体組成物をポリマーに担持するための金属担持緩衝液を含み得る。金属担持緩衝液は、本出願のポリマーに担持する前に、溶液中の同位体組成物と混合され得る。金属担持緩衝液は、酸性溶液（例えば強酸、例えば硝酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、過塩素酸、塩酸、及び塩素酸のうちの１つ又は複数を含む）であり得る。同位体組成物は、本出願のポリマーに担持するのに適した形態で提供され得る。代替的又は追加的に、担持緩衝液は、酢酸アンモニウム、酢酸ナトリウムなどの酢酸塩（例えば酢酸アルカリ）、及び／又は炭酸塩又は重炭酸塩などの別のアルカリと対になった酢酸塩を含み得る。
【0070】
同位体組成物は、ポリマーとは別に提供され得る。例えば、同位体組成物は溶液中にある。あるいは、同位体組成物は、ポリマーの１つ又は複数のペンダント基に担持され得る。ポリマーは溶液中にあり得る。あるいは、ポリマーは凍結乾燥され得る。
【0071】
特定の態様では、濃縮金属同位体の少なくとも５個の原子がポリマーに担持される。例えば、濃縮金属同位体の少なくとも１０個の原子、２０個の原子、３０個の原子、４０個の原子、５０個の原子、又は１００個の原子、例えば、５個と５０個の間の原子、１０個と４０個の間の原子、又は２０個と３０個の間の原子が、ポリマーに担持され得る。
【0072】
同位体組成物は、ポリマーによって安定的に（例えば、同位体組成物の金属原子が生理学的条件下及び／又は実験条件下でポリマーのペンダント基から解離しないように）結合され得る。例えば、ポリマーに担持された同位体組成物の１０％未満が、競合する遊離キレート剤（例えば、ＤＦＯ、ＤＯＴＡ、ジエチレントリアミン五酢酸（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ：ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ：ＥＤＴＡ）、これらの誘導体など）で失われ得る。競合する遊離（例えば非担持の）キレート剤は、ポリマーの担持キレート剤と化学的に類似又は同一であり得、生理学的条件下で担持ポリマーと混合され得る。元の同位体－キレート剤錯体の解離は、高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：ＨＰＬＣ）、ＭＳ、又は蛍光によって測定することができる。代替的又は追加的に、同位体組成物の９０％超、９５％超、９８％超、又は９９％超は、生理学的条件下及び／又は実験条件下（マスサイトメトリーアッセイなど）で、ポリマーに結合したままであり得る。
【0073】
ポリマーの少なくともいくつかのペンダント基は、ジルコニウム及び／又はハフニウムなどの金属を配位させ得る。ペンダント基（例えば配位ペンダント基）は、金属同位体の少なくとも６つの配位部位、又は６つを超える配位部位（金属同位体の８つの配位部位など）を配位させ得る。
【0074】
ポリマーのペンダント基（例えば１つ又は複数のペンダント基）は、ＤＦＯ又はその誘導体を含み得る。例えば、ペンダント基は、金属同位体の６つを超える配位部位を配位させるＤＦＯの誘導体を含み得る。ここで、ペンダント基は、４つのヒドロキサメート基を含むＤＦＯ誘導体を含み得る。ペンダント基は、最も近いヒドロキサム基から少なくとも８個の結合で離間した第１のヒドロキサメート基（例えば同じペンダント基の）を含むＤＦＯ誘導体を含み得る。特定の態様では、キレート剤は、１つの基が金属原子から解離しても８つの部位を安定的に配位させるように、４つを超えるヒドロキサメート基を含み得る。
【0075】
キットを作製する態様は、同位体組成物を本出願のポリマーに担持することを含み得る。担持する工程は、ピリジン、酢酸エチル、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、及び／又はＨＭＰＡなどの非プロトン性溶媒を含む溶液の存在下であり得る。代替的又は追加的に、担持は、酸の存在下で、例えば本明細書に記載の酸性溶液中で行われ得る。代替的又は追加的に、担持は、酢酸アンモニウム、酢酸ナトリウムなどの酢酸塩（例えば酢酸アルカリ）、及び／又は炭酸塩又は重炭酸塩などの別のアルカリと対になった酢酸塩の存在下であり得る。
【0076】
生理活性材料への質量タグのコンジュゲーション
キットは、例えば共有結合を介して、質量タグ（例えばポリマー質量タグ）にコンジュゲートされた生理活性材料をさらに含み得る。例えば、生理活性材料は、親和性試薬（抗体など）又はオリゴヌクレオチドであり得る。生理活性材料（例えば親和性試薬）は、溶液であり得、又は凍結乾燥され得る。キットを作製する態様は、ポリマー（例えば、同位体組成物を担持した）を生理活性材料にコンジュゲートすることをさらに含み得る。
キットは、例えば共有結合を介して、質量タグ（例えばポリマー質量タグ）にコンジュゲートされた生理活性材料をさらに含み得る。例えば、生理活性材料は、親和性試薬（抗体など）又はオリゴヌクレオチドであり得る。生理活性材料（例えば親和性試薬）は、溶液であり得、又は凍結乾燥され得る。キットを作製する態様は、ポリマー（例えば、同位体組成物を担持した）を生理活性材料にコンジュゲートすることをさらに含み得る。
【0077】
例えば、生理活性材料は、抗体、アミノ酸、ヌクレオシド、ヌクレオチド、アプタマー、タンパク質、抗原、ペプチド、核酸、オリゴヌクレオチド、酵素、脂質、アルブミン、細胞、炭水化物、ビタミン、ホルモン、ナノ粒子、無機支持体、ポリマー、単分子、又は薬物であり得る。特定の場合において、生体分子は、抗体（例えば、組換え抗体又は抗体フラグメントを含む）、及びアプタマー（例えば、ＤＮＡアプタマー又はＲＮＡアプタマー）、レクチン、ビオチン／ストレプトアビジン、受容体／リガンド、又は任意の他の適切な生体分子など、その三次構造に基づいて特定の標的に結合する親和性試薬であり得る。特定の態様では、生体分子は、ＤＮＡ標的若しくはＲＮＡ標的、又は中間体（ハイブリダイゼーション機構の中間体オリゴヌクレオチド、又は抗体中間体に付着したオリゴヌクレオチドなど）にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドであり得る。
【0078】
質量タグは、生理活性材料にコンジュゲートされ得る。生理活性材料は、オリゴヌクレオチド、親和性試薬（例えば、抗体、アプタマー、レクチン、又はリガンド若しくは人工的に選択されたペプチドに結合するタンパク質などの別の特異的結合パートナー）、又はバイオセンサ（例えば、低酸素、タンパク質合成、細胞周期、及び／又は細胞死などの条件下で沈着又は結合する）を含み得る。生理活性材料は、内因性標的又は中間体などの標的に結合し得る。親和性試薬は、分析物に非共有結合的に特異的に結合する三次構造を含み得る。生理活性材料が抗体を含む例では、抗体という用語は、一般に、組換え抗体及びそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ部分を含むだけ）を含む。生理活性材料がオリゴヌクレオチドを含む例では、オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡ又はＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡなど）などの内因性標的にハイブリダイズし（直接的又は間接的に）、ハイブリダイゼーション機構（例えば信号増幅のための）でオリゴヌクレオチド中間体にハイブリダイズし、かつ／又は、抗体（又は他の親和性試薬）中間体にコンジュゲートしたオリゴヌクレオチドにハイブリダイズし得る（直接的又は間接的に）。特定の態様では、ポリマーは、ＰＥＧリンカーなどの任意の適切なリンカーによって生理活性材料から分離され得る。
【0079】
あるいは、キットは、本明細書に記載されるか又は当業者に公知の任意のケミストリーによって、生理活性材料へのコンジュゲーションに適したポリマーを提供し得る。例えば、本出願のポリマーは、例えばマレイミド、ビオチン、アジド、又は本明細書で論じられる任意の他の反応性基による末端基官能化を含み得る。
【0080】
様々な適切なコンジュゲーション手段が、当技術分野で公知である。例えば、質量タグは、例えば共有結合（例えば、アミンケミストリー、チオールケミストリー、リン酸ケミストリー、酵素反応、酸化還元反応（例えば金属ハロゲン化物で）、及び親和性中間体（例えば、ストレプトアビジン又はビオチン）、又は歪み促進クリックケミストリー若しくは金属触媒クリックケミストリーなどのクリックケミストリーの形態）によって、生理活性材料にコンジュゲートされ得る。
【0081】
ポリマーは、生理活性材料を結合するように官能化され得る。特定の態様では、ポリマーは、チオール反応性ケミストリー、アミン反応性ケミストリー、又はクリックケミストリーによって官能化され得る。例えば、ポリマーは、チオール反応性のために官能化（例えば、マレイミド基を介して抗体のＦｃ部分のチオール基に付着）され得る。
【0082】
追加的キット構成要素
上記の構成要素の任意の組合せがキットで提供され得る。キットは、ポリマー、同位体組成物、同位体組成物を担持したポリマー、別々に提供されたポリマー及び同位体組成物、又は同位体組成物を担持し、抗体にコンジュゲートされたポリマーを含み得る。
上記の構成要素の任意の組合せがキットで提供され得る。キットは、ポリマー、同位体組成物、同位体組成物を担持したポリマー、別々に提供されたポリマー及び同位体組成物、又は同位体組成物を担持し、抗体にコンジュゲートされたポリマーを含み得る。
【0083】
キットは、同位体組成物をポリマーに担持し、かつ／又は担持ポリマーを生理活性材料に結合するための任意の追加的構成要素（例えば、緩衝液、フィルタなど）をさらに含み得る。代替的又は追加的に、キットは、緩衝液、標準物質、細胞バーコード、及び／又は異なる質量の重原子を含む試薬（例えば、生理活性材料に付着されるか、又は生理活性材料への付着のために提供された質量タグ）などの、マスサイトメトリーのための追加的試薬を含み得る。
【0084】
キットは、上記の同位体組成物と区別可能な別の（例えば、異なる質量の濃縮同位体を有する）追加的同位体組成物を含み得る。追加的同位体組成物は、ジルコニウム、ハフニウム、及び／又はランタニド同位体を含み得る。例えば、キットは、ジルコニウム又はハフニウムではなくランタニドをキレート化（例えば安定的にキレート化）する複数のペンダント基を含む追加的ポリマーをさらに含み得る。特定の態様では、キットは、別々の同位体組成物を担持したポリマーに共有結合した複数の抗体（例えば異なる標的に対する）を含み得る。そのような抗体の集合は、単一のパネルで一緒に提供され得る。パネルは、溶液で、又は質量で１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、又は１％未満の水分を含む凍結乾燥混合物で提供され得る。
【0085】
マスサイトメトリーの方法
ジルコニウム及び／又はハフニウムの１つ又は複数の濃縮同位体を含む質量タグは、質量分析によって分析され得る。例えば、単一細胞、組織、又は生体溶液が分析され得る。
ジルコニウム及び／又はハフニウムの１つ又は複数の濃縮同位体を含む質量タグは、質量分析によって分析され得る。例えば、単一細胞、組織、又は生体溶液が分析され得る。
【0086】
特定の態様では、ジルコニウム及び／又はハフニウムの１つ又は複数の濃縮同位体を、懸濁マスサイトメトリー又はイメージング・マス・サイトメトリー（ＩＭＣ）などのマスサイトメトリーのワークフローにおいて使用し得る。本明細書で使用される場合、マスサイトメトリーは、生体試料中の質量タグの元素分析を指す。マスサイトメトリーは、細胞分解能又はより良好な分解能を有し得る。特定の態様では、元素分析は、飛行時間型質量分析又は磁気セクタ型質量分析などの質量分析であり得る。個々の質量タグは、他の質量タグと区別する濃縮同位体又は同位体の固有の組合せを含み得る。
【0087】
質量タグは、８０ａｍｕを超える質量を有する原子などの重原子を含み得る。質量タグは、遷移元素、ランタニド、貴金属、及び／又はメタロイドを含み得る。少なくともいくつかの質量タグは、濃縮金属同位体を結合している複数のペンダント基を含む有機ポリマーを含み得る。そのようなポリマーは、単一の同位体を含む質量タグと比較して、金属同位体チャネルにおける信号を改善し得る。しかし、質量タグは立体障害をもたらし得、かつ／又は、溶解性が低いと、質量タグが結合している親和性試薬の結合又は特異性が低減され得る。放射性同位体は使用者にリスクをもたらす可能性があり、質量分析による検出には不要であり得るため、マスサイトメトリーに使用される質量タグは放射性同位体を有さなくてもよい。
【0088】
質量タグは、例えば、共有結合（例えば、アミンケミストリー、チオールケミストリー、リン酸ケミストリー、酵素反応、又は、歪み促進クリックケミストリー若しくは金属触媒クリックケミストリーなどのクリックケミストリーの形態）によって、生理活性材料にコンジュゲートされ得る。生理活性材料は、親和性試薬（例えば、抗体又はその断片、アプタマー、レクチンなど）、又は内因性標的（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）若しくは中間体（例えば、抗体－オリゴヌクレオチド中間体及び／又はオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション機構）にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブであり得る。本明細書に記載されるように、適切な付着ケミストリーには、カルボキシル－アミン反応性ケミストリー（例えば、カルボジイミドとの反応など）、アミン反応性ケミストリー（例えば、ＮＨＳエステル、イミドエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ヒドロキシメチルホスフィンなどとの反応など）、スルフヒドリル反応性ケミストリー（例えば、マレイミド、ハロアセチル（ブロモアセチル又はヨードアセチル）、ピリジルジスルフィド、チオスルホナート、ビニルスルホンなどとの反応など）、アルデヒド反応性ケミストリー（例えば、ヒドラジド、アルコキシアミンなどとの反応など）、ヒドロキシル反応性ケミストリー（例えば、イソチオシアナートとの反応など）が含まれ得る。代替の付着方法には、歪み促進クリックケミストリー（例えば、ＤＢＣＯ－アジド又はＴＣＯ－テトラジンによる）などのクリックケミストリーが含まれる。
【0089】
マスサイトメトリーのための追加的試薬には、金属含有バイオセンサ（例えば、低酸素、タンパク質合成、細胞周期、及び／又は細胞死などの条件下で沈着又は結合する）、及び／又は化学的特性に基づいて構造体（例えば、ＤＮＡ、細胞膜、層）に結合する金属含有組織化学的化合物が含まれる。そのような質量タグは、ただ１つのキレート剤（例えば、本明細書に記載の１つのＤＦＯ又はその誘導体）を含み得る。加えて、他の試料又は実験条件でプールする前に特定の試料又は実験条件を標識するために、質量タグ（例えば、本出願又は他の質量タグの）を組み合わせて固有のバーコードが提供され得る。ジルコニウム及び／又はハフニウムの質量タグがバーコード化に使用される実施形態では、質量タグは、ポリマー質量タグ（例えば、抗体に付着した）又は小分子質量タグ（細胞内の部分に対する共有結合など、付着のために官能化された単一のキレート剤など）であり得る。例えば、バーコード質量タグは、細胞に付着するための官能基を含むＤＦＯの誘導体であり得る。付着は、例えば、チオール反応性ケミストリー又はアミン反応性ケミストリーによるものであり得る。例えば、官能基は、チオール（例えば、細胞内のタンパク質のシステインによって提示されるチオール）と反応するマレイミドであり得る。別の例では、官能基は、アミンと反応するイソチオシアナートであり得る。ＤＦＯ誘導体は、３つのヒドロキサメート基を含み得、又は４つのヒドロキサメート基（すなわち、ジルコニウム又はハフニウムの原子を８つの配位部位に保持する）を含み得る。本明細書に記載されるように、質量タグは、１つ又は複数の溶解補助部分で修飾され得る。溶解補助部分は親水性であり得、又は荷電され得る。反対の電荷の基は、一緒になって双性イオン質量タグを提供し得る。親水性溶解補助部分は、例えば、エチレングリコール（例えば、ＰＥＧ中、エチレングリコール単位の鎖）又はオキサゾリン（例えばポリオキサゾリン中）であり得る。特定の態様では、個々のエチレングリコール単位などの溶解補助部分は、ＤＦＯ誘導体のヒドロキサメート基間に配置され得る。バーコード化試薬は、当技術分野で公知のように調製され得る。例えば、バーコード化キットは、別個の混合物を含み得、それぞれが、質量タグバーコードの固有の組合せ（例えば、ジルコニウム同位体及び／又はハフニウム同位体の固有の組合せ）を含む。質量タグバーコードの混合物は特定の試料の細胞に適用され得、その後、細胞を試料全体にプールすることができる。プールした試料は質量タグ付き抗体で染色し、一緒に分析し得る（例えば同じ細胞懸濁液中で）。所与の細胞事象においてマスサイトメトリーによって検出されたバーコード質量タグの組合せを使用して、その細胞がどの試料由来であったかを特定し得る（例えば、その細胞事象を特定の試料データセットに分類するために）。特定の態様では、バーコードを使用して、生細胞をバーコード化し得る（例えば、染色プロトコルにおける細胞の固定化及び／又は透過処理の前に）。
【0090】
質量タグは、元素分析の前に、サンプリング、微粒子化、及びイオン化され得る。例えば、生体試料中の質量タグは、レーザビーム、イオンビーム、又は電子ビームなどの放射線によって、サンプリング、微粒子化、及び／又はイオン化され得る。代替的又は追加的に、質量タグは、誘導結合プラズマ（ＩＣＰ）などのプラズマによって微粒子化及びイオン化され得る。懸濁マスサイトメトリーでは、質量タグを含む細胞全体を、ＩＣＰ－ＴＯＦ－ＭＳなどのＩＣＰ－ＭＳに流し得る。イメージング・マス・サイトメトリーでは、放射線の形態により、質量タグを含む組織試料などの固体生体試料の一部（例えば、ピクセル、対象領域）が除かれ得る（及び任意選択的にイオン化及び微粒子化し得る）。ＩＭＣの例には、質量タグ付き試料のレーザアブレーション（Ｌａｓｅｒ Ａｂｌａｔｉｏｎ：ＬＡ）－ＩＣＰ－ＭＳ及び二次イオン質量分析（Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ Ｉｏｎ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒ：ＳＩＭＳ）－ＭＳが含まれる。特定の態様では、イオン光学系は、質量タグの同位体以外のイオンを枯渇させ得る。例えば、イオン光学系により、より軽いイオン（例えば、Ｃ、Ｎ、Ｏ）、有機分子イオンが除かれ得る。ＩＣＰ用途では、イオン光学系により、例えば高域四重極フィルタを介して、Ａｒ及び／又はＸｅなどのガスが除かれ得る。特定の態様では、ＩＭＣにより、細胞分解能又は細胞内分解能を有する質量タグ（例えば、質量タグに関連した標的）の画像が提供され得る。
【0091】
マスサイトメトリーによって検出される１つ又は複数の質量タグは、本明細書に記載の濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含み得る。特定の場合には、ジルコニウム又はハフニウム（例えば、ジルコニウム又はハフニウムの濃縮同位体）を含む抗体を動物被験体に投与し得、対象の組織中のジルコニウムの分布をＩＭＣによって評価し得る。例えば、異なるジルコニウム同位体でタグ付けされた同じ抗体を異なる時点で投与するパルスチェイス実験により、経時的なジルコニウムの代謝及び／又は分布の画像化が可能になり得る。そのようなアッセイは、８９Ｚｒの送達のための１つ又は複数の抗体をスクリーニングするために行われ得る（例えばオフターゲット作用なしで）。
【0092】
マスサイトメトリーの方法は、濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む質量タグ付き生理活性材料で生体試料の細胞を標識すること、及び質量分析によって、細胞に結合した質量タグを検出することを含み得る。当該方法は、例えば第三者からキットを入手すること、又は本明細書に記載のキットを作製することによって、本出願のキットを提供することを含み得る。
【0093】
特定の態様では、マスサイトメトリーの方法は、第１の質量タグ付き親和性試薬を提供することを含み得、その親和性試薬はポリマーにコンジュゲートされ、そのポリマーは、ヒドロキサメートを含むペンダント基の複数の例を含み、また、そのポリマーは、濃縮金属同位体を含む同位体組成物を担持している。その方法は、第１の質量タグ付き親和性試薬を含む複数の質量タグ付き親和性試薬で、生体試料の細胞を標識することをさらに含む。この方法は、質量分析によって、細胞に結合した質量タグを検出することをさらに含み得る。細胞は、例えば懸濁マスサイトメトリーによって、又は固体支持体から個々の細胞（又は細胞の一部）をサンプリングすることによって、単一細胞分解能で検出され得る。
【0094】
特定の態様では、マスサイトメトリーの方法は、細胞に結合した複数の質量タグを検出することを含み、複数の質量タグのうちの少なくとも１つの質量タグは、濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む。
【0095】
追加的な使用
本出願のポリマーには、マスサイトメトリー以外で使用するために、８９Ｚｒなどの放射性同位体が担持され得る。例えば、８９Ｚｒ担持ポリマーは、特定の組織又は細胞型（例えばがん細胞）に対して８９Ｚｒを標的化する抗体などの生理活性材料に付着され得る。８９Ｚｒは、マスサイトメトリー以外の手段によって、例えばＰＥＴスキャンによって、検出及び／又は画像化し得る。代替的又は追加的に、８９Ｚｒを担持したポリマーは、ヒト被験体における放射線療法などの治療用途のために、又は動物モデルにおいて可能性のある療法を調べるために使用され得る。このようにして、６７Ｇａ、６８Ｇａ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、又は２２５Ａｃなどの８９Ｚｒ以外の放射性同位体が使用され得る。
本出願のポリマーには、マスサイトメトリー以外で使用するために、８９Ｚｒなどの放射性同位体が担持され得る。例えば、８９Ｚｒ担持ポリマーは、特定の組織又は細胞型（例えばがん細胞）に対して８９Ｚｒを標的化する抗体などの生理活性材料に付着され得る。８９Ｚｒは、マスサイトメトリー以外の手段によって、例えばＰＥＴスキャンによって、検出及び／又は画像化し得る。代替的又は追加的に、８９Ｚｒを担持したポリマーは、ヒト被験体における放射線療法などの治療用途のために、又は動物モデルにおいて可能性のある療法を調べるために使用され得る。このようにして、６７Ｇａ、６８Ｇａ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、又は２２５Ａｃなどの８９Ｚｒ以外の放射性同位体が使用され得る。
【0096】
このようにして、本出願のキット及び方法は、濃縮８９Ｚｒ同位体を含む同位体組成物を含み得る。特定の態様では、８９Ｚｒはポリマーにコンジュゲートされ得る。ポリマーは、生理活性材料に付着するためのものであり得、又は抗体などの生理活性材料にコンジュゲートして提供され得る。例えば、抗体は、がん細胞で優先的に発現されるエピトープを標的とし得る。
【0097】
使用方法は、本発明のポリマー（例えば、８９Ｚｒを担持し、治療用生理活性材料に結合した）を動物被験体に投与することを含み得る。そのような方法は、例えばマスサイトメトリー、又はＰＥＴスキャンなどの別の手段によって、放射性同位体を検出することをさらに含み得る。
【0098】
適用例としては、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）（トラスツズマブ）、ＲＩＴＵＸＡＮ（商標）（リツキシマブ）、ＺＥＶＡＬＩＮ（商標）（イブリツモマブ・チウキセタン）、ＬＹＭＰＨＯＣＩＤＥ（商標）（エプラツズマブ）、ＧＬＥＥＶＡＣ（商標）、及びＢＥＸＸＡＲ（商標）（ヨウ素１３１トシツモマブ）、Ｎｅｕｌａｓｔａ、プロベンジ、ニボルマブ、ブリナツモマブなどの抗腫瘍剤が含まれる。
【0099】
本発明の化合物と組み合わせて使用することができる他の抗新生物剤／化合物には、ＥＲＢＩＴＵＸ（商標）（ＩＭＣ－Ｃ２２５）、キナーゼドメイン受容体（ｋｉｎａｓｅ ｄｏｍａｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＫＤＲ）阻害剤（例えば、キナーゼドメイン受容体に特異的に結合する抗体及び抗原結合領域）などの抗血管新生化合物、ＡＶＡＳＴＩＮ（商標）又はＶＥＧＦ－ＴＲＡＰ（商標）、及び抗血管内皮増殖因子（ａｎｔｉ－ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ：ａｎｔｉ－ＶＥＧＦ）受容体剤（例えばＶＥＧＦに特異的に結合する抗体又は抗原結合領域）などの抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体若しくは抗原結合領域、又は可溶性ＶＥＧＦ受容体若しくはそのリガンド結合領域）、ＡＢＸ－ＥＧＦ（パニツムマブ）、ＩＲＥＳＳＡ（商標）（ゲフィチニブ）、ＴＡＲＣＥＶＡ（商標）（エルロチニブ）、抗Ａｎｇ１剤、及び抗Ａｎｇ２剤（例えば、ＥＧＦＲ又はその受容体に特異的に結合する抗体又は抗原結合領域、例えばＴｉｅ２／Ｔｅｋ）などの上皮増殖因子受容体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＥＧＦＲに特異的に結合する抗体又は抗原結合領域）、及び抗Ｔｉｅ２キナーゼ阻害剤（例えば、Ｔｉｅ２キナーゼに特異的に結合する抗体又は抗原結合領域）が含まれる。
【0100】
本発明の化合物と併せて使用することができる他の抗血管新生化合物／薬剤には、キャンパス、ＩＬ－８、Ｂ－ＦＧＦ、Ｔｅｋ拮抗剤、抗ＴＷＥＡＫ剤（例えば、特異的に結合する抗体若しくは抗原結合領域、又は可溶性ＴＷＥＡＫ受容体拮抗剤、インテグリンのそのリガンドへの結合に拮抗するＡＤＡＭディスインテグリンドメイン、特異的に結合する抗ｅｐｈ受容体及び／又は抗エフリン抗体若しくは抗原結合領域、及び抗血小板由来増殖因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ：ＰＤＧＦ）－ＢＢ拮抗剤（例えば、特異的に結合する抗体又は抗原結合領域）、並びにＰＤＧＦ－ＢＢリガンドに特異的に結合する抗体若しくは抗原結合領域、及び血小板由来増殖因子受容体（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＰＤＧＦＲ）キナーゼ阻害剤（例えば、特異的に結合する抗体又は抗原結合領域）が含まれる。
【0101】
本発明の化合物と併せて使用することができる他の抗血管新生剤／抗腫瘍剤には、以下が含まれる。すなわち、ＳＤ－７７８４（Ｐｆｉｚｅｒ、米国）；シレンジタイド（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、ドイツ、ＥＰＯ ７７０６２２）；ペガプタニブオクタナトリウム、（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国）；アルファスタチン、（ＢｉｏＡｃｔａ、英国）；Ｍ－ＰＧＡ、（Ｃｅｌｇｅｎｅ、米国）；イロマスタット、（Ａｒｒｉｖａ、米国）；エマキサニブ、（Ｐｆｉｚｅｒ、米国）；バタラニブ、（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、スイス）；２－メトキシエストラジオール、（ＥｎｔｒｅＭｅｄ、米国）；ＴＬＣ ＥＬＬ－１２、（Ｅｌａｎ、アイルランド）；アネコルタブ酢酸、（Ａｌｃｏｎ、米国）；アルファ－Ｄ １４８ Ｍａｂ、（Ａｍｇｅｎ、米国）；ＣＥＰ－７０５５、（Ｃｅｐｈａｌｏｎ，米国）；抗Ｖｎ Ｍａｂ、（Ｃｒｕｃｅｌｌ、オランダ）ＤＡＣ：抗血管新生剤、（ＣｏｎｊｕＣｈｅｍ、カナダ）；アンジオシジン、（ＩｎＫｉｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ、米国）；ＫＭ－２５５０、（協和発酵、日本）；ＳＵ－０８７９、（Ｐｆｉｚｅｒ、米国）；ＣＧＰ－７９７８７、（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、スイス）；ｔｈｅ ＡＲＧＥＮＴ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｒｉａｄ、米国；ＹＩＧＳＲ－Ｓｔｅａｌｔｈ、（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ、米国）；フィブリノーゲン－Ｅ断片、（ＢｉｏＡｃｔａ、英国）；Ｔｒｉｇｅｎの血管新生阻害剤、英国；ＴＢＣ－１６３５、（Ｅｎｃｙｓｉｖｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、米国）；ＳＣ－２３６、（Ｐｆｉｚｅｒ、米国）；ＡＢＴ－５６７、（Ａｂｂｏｔｔ、米国）；メタスタチン、（ＥｎｔｒｅＭｅｄ、米国）；血管新生阻害剤、（Ｔｒｉｐｅｐ、スウェーデン）；マスピン、（そーせい、日本）；２－メトキシエストラジオール、（Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、米国）；ＥＲ－６８２０３－００、（ＷＶＡＸ、米国）；ベネフィン（Ｌａｎｅ Ｌａｂｓ、米国）；Ｔｚ－９３、（ツムラ、日本）；ＴＡＮ－１１２０、（武田薬品、日本）；ＦＲ－１１１１４２、（フジサワ、日本）；血小板第４因子（ＲｅｐｌｉＧｅｎ、米国）；血管内皮増殖因子拮抗剤、（Ｂｏｒｅａｎ、デンマーク）；ベバシズマブ（ｐＩＮＮ）、（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、米国）；ＸＬ ７８４、（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ、米国）；ＸＬ ６４７、（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ、米国）；ＭＡｂ、アルファ５ベータ３インテグリン、第二世代、（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ、米国及びＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、米国）；遺伝子治療、網膜症（Ｏｘｆｏｒｄ ＢｉｏＭｅｄｉｃａ、英国）；エンザスタウリン塩酸塩（ＵＳＡＮ）、（Ｌｉｌｌｙ、米国）；ＣＥＰ ７０５５、（Ｃｅｐｈａｌｏｎ、米国及びＳａｎｏｆｉ－Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ、フランス）；ＢＣ １、（Ｇｅｎｏａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、イタリア）；血管新生阻害剤（Ａｌｃｈｅｍｉａ、オーストラリア）；ＶＥＧＦ拮抗剤、（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ、米国）；ｒＢＰＩ ２１及びＢＰＩ由来の抗血管新生剤、（ＸＯＭＡ、米国）；ＰＩ ８８、（Ｐｒｏｇｅｎ、オーストラリア）；シレンギチド（ｐＩＮＮ）、（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、ドイツ；Ｍｕｎｉｃｈ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ドイツ、Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｃｌｉｎｉｃ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、米国）；セツキシマブ（ＩＮＮ）、（Ａｖｅｎｔｉｓ、フランス）；ＡＶＥ ８０６２、（味の素、日本）；ＡＳ １４０４、（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ニュージーランド）；ＳＧ ２９２、（Ｔｅｌｉｏｓ、米国）；エンドスタチン、（Ｂｏｓｔｏｎ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、米国）；ＡＴＮ １６１、（Ａｔｔｅｎｕｏｎ、米国）；アンジオスタチン、（Ｂｏｓｔｏｎ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、米国）；２－メトキシエストラジオール、（Ｂｏｓｔｏｎ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、米国）；ＺＤ ６４７４、（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃ、英国）；ＺＤ ６１２６、（ＡｎｇｉｏｇｅｎｅＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、英国）；ＰＰＩ ２４５８、（Ｐｒａｅｃｉｓ、米国）；ＡＺＤ ９９３５、（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、英国）；ＡＺＤ ２１７１、（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、英国）；バタラニブ（ｐＩＮＮ）、（Ｎｏｖａｒｔｉｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ ａｎｄ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ、ドイツ）；組織因子経路阻害剤、（ＥｎｔｒｅＭｅｄ、米国）；ペガプタニブ（Ｐｉｎｎ）、（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国）；キサントリゾール、（Ｙｏｎｓｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、韓国）；ワクチン、遺伝子ベース、ＶＥＧＦ－２、（Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｃｌｉｎｉｃ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、米国）；ＳＰＶ５．２、（Ｓｕｐｒａｔｅｋ、カナダ）；ＳＤＸ １０３、（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ａｔ Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、米国）；ＰＸ ４７８、（ＰｒｏＩＸ、米国）；メタスタチン、（ＥｎｔｒｅＭｅｄ、米国）；トロポニンＩ、（Ｈａｒｖａｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、米国）；ＳＵ ６６６８、（ＳＵＧＥＮ、米国）；ＯＸＩ ４５０３、（ＯＸｉＧＥＮＥ、米国）；ｏ－グアニジン、（Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、米国）；モツポラミンＣ、（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、カナダ）；ＣＤＰ ７９１、（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ Ｇｒｏｕｐ、英国）；アチプリモド（ｐｌＮＮ）、（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、英国）；Ｅ ７８２０、（エーザイ、日本）；ＣＹＣ ３８１、（Ｈａｒｖａｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、米国）；ＡＥ ９４１、（Ａｅｔｅｒｎａ、カナダ）；ワクチン、血管新生、（ＥｎｔｒｅＭｅｄ、米国）；ウロキナーゼ型プラスミノゲン活性化因子阻害剤、（Ｄｅｎｄｒｅｏｎ、米国）；オグルファニド（ｐＩＮＮ）、（Ｍｅｌｍｏｔｔｅ、米国）；ＨＩＦ－１アルファ阻害剤、（Ｘｅｎｏｖａ、英国）；ＣＥＰ ５２１４、（Ｃｅｐｈａｌｏｎ、米国）；ＢＡＹ ＲＥＳ ２６２２、（Ｂａｙｅｒ、ドイツ）；アンジオシジン、（ＩｎＫｉｎｅ、米国）；Ａ６、（Ａｎｇｓｔｒｏｍ、米国）；ＫＲ ３１３７２、（Ｋｏｒｅａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、韓国）；ＧＷ ２２８６、（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、英国）；ＥＨＴ ０１０１、（ＥｘｏｎＨｉｔ、フランス）；ＣＰ ８６８５９６、（Ｐｆｉｚｅｒ、米国）；ＣＰ ５６４９５９、（ＯＳＩ，米国）；ＣＰ ５４７６３２、（Ｐｆｉｚｅｒ、米国）；７８６０３４、（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、米国）；ＫＲＮ ６３３、（キリンブルワリー、日本）；薬物送達システム、眼内、２－メトキシエストラジオール（ＥｎｔｒｅＭｅｄ、米国）；アンジネックス、（Ｍａａｓｔｒｉｃｈｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、オランダ及びＭｉｎｎｅｓｏｔａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、米国）；ＡＢＴ ５１０、（Ａｂｂｏｔｔ、米国）；ＡＡＬ ９９３、（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、スイス）；ＶＥＧＩ、（ＰｒｏｔｅｏｍＴｅｃｈ、米国）；腫瘍壊死因子アルファ阻害剤、（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｎ Ａｇｉｎｇ、米国）；ＳＵ １１２４８、（Ｐｆｉｚｅｒ、米国及びＳＵＧＥＮ、米国）；ＡＢＴ ５１８、（Ａｂｂｏｔｔ、米国）；ＹＨ１６、（Ｙａｎｔａｉ Ｒｏｎｇｃｈａｎｇ、中国）；Ｓ－３ＡＰＧ、（Ｂｏｓｔｏｎ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、米国及びＥｎｔｒｅＭｅｄ、米国）；ＭＡｂ、ＫＤＲ、（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、米国）；ＭＡｂ、アルファ５ベータ１、（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ、米国）；ＫＤＲキナーゼ阻害剤、（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ Ｇｒｏｕｐ、英国及びＪｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ、米国）；ＧＦＢ １１６、（Ｓｏｕｔｈ Ｆｌｏｒｉｄａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、米国及びＹａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、米国）；ＣＳ ７０６、（三共、日本）；コンブレタスタチンＡ４プロドラッグ、（Ａｒｉｚｏｎａ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、米国）；コンドロイチナーゼＡＣ、（ＩＢＥＸ、カナダ）；ＢＡＹ ＲＥＳ ２６９０、（Ｂａｙｅｒ、ドイツ）；ＡＧＭ １４７０、（Ｈａｒｖａｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、米国、武田薬品、日本、及びＴＡＰ、米国）；ＡＧ １３９２５、（Ａｇｏｕｒｏｎ、米国）；テトラチオモリブデン酸塩、（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｃｈｉｇａｎ、米国）；ＧＣＳ １００、（Ｗａｙｎｅ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、米国）ＣＶ ２４７、（Ｉｖｙ Ｍｅｄｉｃａｌ、英国）；ＣＫＤ ７３２、（Ｃｈｏｎｇ Ｋｕｎ Ｄａｎｇ、韓国）；ＭＡｂ、血管内皮増殖因子、（Ｘｅｎｏｖａ、英国）；イルソグラジン（ＩＮＮ）、（日本新薬、日本）；ＲＧ １３５７７、（Ａｖｅｎｔｉｓ、フランス）；ＷＸ ３６０、（Ｗｉｌｅｘ、ドイツ）；スクアラミン（ｐＩＮ）、（Ｇｅｎａｅｒａ、米国）；ＲＰＩ ４６１０、（Ｓｉｍａ、米国）；ヘパラナーゼ阻害剤、（ＩｎＳｉｇｈｔ、イスラエル）；ＫＬ ３１０６、（Ｋｏｌｏｎ、韓国）；ホノキオール、（Ｅｍｏｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、米国）；ＺＫ ＣＤＫ、（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ、ドイツ）；ＺＫアンジオ、（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ、ドイツ）；ＺＫ ２２９５６１、（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、スイス及びＳｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ、ドイツ）；ＸＭＰ ３００、（ＸＯＭＡ、米国）；ＶＧＡ １１０２、（大正製薬、日本）；ＶＥＧＦ受容体調節剤、（Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ、米国）；ＶＥ－カドヘリン－２拮抗剤、（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、米国）；バソスタチン、（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、米国）；ワクチン、Ｆｌｋ－１、（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、米国）；ＴＺ ９３、（ツムラ、日本）；タムスタチン（Ｂｅｔｈ Ｉｓｒａｅｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、米国）；切断型可溶性ＦＬＴ １（血管内皮増殖因子受容体１）、（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ、米国）；Ｔｉｅ－２リガンド、（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ、米国）；２８Ｈ１（Ｒｏｃｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、スイス）及びトロンボスポンジン１阻害剤（Ａｌｌｅｇｈｅｎｙ Ｈｅａｌｔｈ，Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、米国）などの抗ＦＡＰ剤が含まれる。
【0102】
ユーティリティ
マスサイトメトリーでは、細胞を質量タグ付き生理活性材料（抗体又はオリゴヌクレオチドなど）で標識し、多くの場合、単一細胞分解能で、質量分析によって質量タグを検出する。これらの質量タグは、一般的に、濃縮ランタニド同位体を担持したランタニドキレート化ポリマーである。区別することができる質量タグ付き生理活性材料の数は、異なる質量のランタニド同位体の数である。本発明は、マスサイトメトリー分析のための新規な種類の質量タグ、具体的にはジルコニウム及びハフニウムの質量タグを提示する。これらの新しい質量タグの配位ケミストリーは、ランタニド質量タグの配位ケミストリーとは異なる。
マスサイトメトリーでは、細胞を質量タグ付き生理活性材料（抗体又はオリゴヌクレオチドなど）で標識し、多くの場合、単一細胞分解能で、質量分析によって質量タグを検出する。これらの質量タグは、一般的に、濃縮ランタニド同位体を担持したランタニドキレート化ポリマーである。区別することができる質量タグ付き生理活性材料の数は、異なる質量のランタニド同位体の数である。本発明は、マスサイトメトリー分析のための新規な種類の質量タグ、具体的にはジルコニウム及びハフニウムの質量タグを提示する。これらの新しい質量タグの配位ケミストリーは、ランタニド質量タグの配位ケミストリーとは異なる。
【0103】
マスサイトメトリーに利用できる区別可能な質量タグの一覧を発展させることに加えて、本明細書に記載の質量タグは、治療的使用が可能であり、又はマスサイトメトリーで使用されない放射性形態についての治療の可能性を評価するために使用され得る。例えば、８９Ｚｒは、治療的使用のために抗体にコンジュゲートされたジルコニウムの放射性同位体である。本明細書に記載のジルコニウムポリマーは、抗体が８９Ｚｒを送達する能力を増加させ得る。薬物開発の重要な側面は、例えば、オフターゲット分布が最小限である標的組織及び／又は細胞型への送達をスクリーニングするために、薬物送達の機構及び分布を理解することである。マスサイトメトリーで従来使用されている天然に存在するランタニド同位体は放射性ではない。このようにして、本明細書で提供される質量タグにより、化学的に同一の放射性ジルコニウム類似体を有する質量タグの分布を検出する独自の能力が可能になる。例えば、ジルコニウムタグ付き抗体の異なる同位体を用いたパルスチェイスを行うことができ（例えば、動物被験体に投与する）、イメージング・マス・サイトメトリーによって組織を分析することができる。このようにして、本出願の方法は、ジルコニウム同位体の分布を、他の標的及び組織形態の状況における細胞分解能又は細胞内分解能で、ＩＭＣによって、かつ任意選択で、さらに光学顕微鏡又は蛍光顕微鏡によって特定することを含み得る。このような実験で放射性８９Ｚｒが使用されない場合でも、非放射性ジルコニウム同位体の分布を推定して、８９Ｚｒの分布を表すことができる。このようにして、本明細書に記載される方法及びキットは、たとえその方法又はキットがジルコニウムの非放射性同位体のみを使用し得る場合であっても、治療的使用のための８９Ｚｒタグ付き抗体のスクリーニングを提供し得る。特定の態様では、８９Ｚｒ分布を、放射能アッセイ（例えばＰＥＴ）によってアッセイし、さらにＩＭＣによって調べ得る。
【0104】
本発明のいくつかのキット及び方法の開発には、より多くの質量チャネルのマスサイトメトリー、知識治療試薬、無機ケミストリー（例えば、金属精製、同位体濃縮、及び／又は塩形態への変換のための）、及び有機ケミストリー（例えば、複数のジルコニウム同位体又はハフニウム同位体を安定的に担持した多分散性の低いポリマーを生成すること）の価値の理解が必要であり得る。なお、本発明者らの知るところでは、複数のジルコニウム同位体又はハフニウム同位体を含むポリマーは、８９Ｚｒなどの同位体により治療的な送達が増加する可能性があるにもかかわらず、公表されていない。そのようなポリマーは、キレート化されたジルコニウム又はハフニウムの安定性を崩壊させ、立体障害、凝集、及び／又は溶解性が低いことにより、抗体の特異性を低下させる危険性があり、そのいずれも、治療的使用におけるオフターゲット作用の危険性があり得る。特定の態様では、隣接するペンダント基のリガンドが、ジルコニウム又はハフニウムの同位体とポリマーとの会合をさらに安定化し得る。
【0105】
ジルコニウム又はハフニウムの同位体をポリマーに担持することによって、キレート化されたジルコニウム又はハフニウムの抗体への直接結合と比較して、抗体中間体を介して送達される原子の数を増加させることができる。しかし、ポリマーの開発及び使用は、担持又は非担持のポリマーの１つ又は複数の凝集、同位体のポリマーへの不十分な担持、ポリマーへの担持に不適合な形態の同位体、隣接するペンダント基のリガンドなどの隣接ポリマー構造による配位安定性の崩壊、抗体親和性に対するポリマーの立体障害、及びポリマーのサイズの変動性によって阻害され得、これらのいずれも検出及び／又は標的特異的送達を妨げ得る。
【0106】
例示的な態様
主題のキット及び方法の例示的な態様を以下に列挙する。
主題のキット及び方法の例示的な態様を以下に列挙する。
【0107】
１．キットであって、
ジルコニウム及び／又はハフニウムをキレート化するペンダント基を含むポリマー、及び
濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む同位体組成物
を含む、キット。
ジルコニウム及び／又はハフニウムをキレート化するペンダント基を含むポリマー、及び
濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む同位体組成物
を含む、キット。
【0108】
２．前記濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体が前記ペンダント基に担持されている、態様１に記載のキット。
【0109】
３．前記ポリマーが、ヒドロキサメート、アザマクロサイクル、フェノキシアミン、サロフェン、及び／又はシクラムのリガンド又はその誘導体を含む、態様１又は２に記載のキット。
【0110】
４．前記ポリマーが、ジルコニウム又はハフニウムの少なくとも１つと八配位錯体を形成するヒドロキサメート、アザマクロサイクル、フェノキシアミン、サロフェン、及び／又はシクラムの誘導体を含む、態様１から３のいずれか一項に記載のキット。
【0111】
５．ジルコニウム及びハフニウムの少なくとも１つが、前記ポリマーのペンダント基と八配位錯体を形成する、態様１から４のいずれか一項に記載のキット。
【0112】
６．前記ポリマーがヒドロキサメートを含む、態様１から５のいずれか一項に記載のキット。
【0113】
７．前記ポリマーがＤＦＯ又はその誘導体を含む、態様６に記載のキット。
【0114】
８．前記ポリマーがアザマクロサイクルを含む、態様１から７のいずれか一項に記載のキット。
【0115】
９．前記ポリマーがＤＯＴＡ又はその誘導体を含む、態様８に記載のキット。
【0116】
１０．前記ポリマーが、溶解性を補助する親水性基の１つ又は複数の鎖をさらに含む、態様１から３のいずれか一項に記載のキット。
【0117】
１１．前記ポリマーがペグ化ペンダント基をさらに含む、態様１から１０のいずれか一項に記載のキット。
【0118】
１２．前記ペグ化ペンダント基が前記ポリマーの担持を補助する、態様１１に記載のキット。
【0119】
１３．前記ペグ化ペンダント基が、ジルコニウム及び／又はハフニウムをキレート化する前記ペンダント基とは別である、態様１２に記載のキット。
【0120】
１４．態様１から１３のいずれか一項に記載のキットを作製する方法。
【0121】
１５．態様１から１４のいずれか一項に記載のキットを使用する、マスサイトメトリーの方法。
【0122】
１６．キットであって、
ヒドロキサメートを含む複数のペンダント基を含むポリマー、及び
前記ペンダント基によってキレート化され得る濃縮された金属同位体を含む同位体組成物
を含む、キット。
ヒドロキサメートを含む複数のペンダント基を含むポリマー、及び
前記ペンダント基によってキレート化され得る濃縮された金属同位体を含む同位体組成物
を含む、キット。
【0123】
１７．前記金属同位体がジルコニウム同位体又はハフニウム同位体である、態様１６に記載のキット。
【0124】
１８．前記金属同位体がジルコニウム同位体である、態様１７に記載のキット。
【0125】
１９．前記金属同位体がハフニウム同位体である、態様１７に記載のキット。
【0126】
２０．追加的な濃縮されたジルコニウム同位体及び／又はハフニウム同位体を含む追加的な同位体組成物をさらに含む、態様１６から１９のいずれか一項に記載のキット。
【0127】
２１．前記同位体組成物が非放射性である、態様１６から２０のいずれか一項に記載のキット。
【0128】
２２．前記同位体組成物が前記ポリマーとは別に提供される、態様１６から２１のいずれか一項に記載のキット。
【0129】
２３．前記同位体組成物が溶液中にある、態様１６から２２のいずれか一項に記載のキット。
【0130】
２４．前記同位体組成物が、非プロトン性溶媒を含む溶液中で提供される、態様１６から２３のいずれか一項に記載のキット。
【0131】
２５．前記非プロトン性溶媒がＤＭＳＯである、態様２４に記載のキット。
【0132】
２６．前記同位体組成物が酸性溶液中で提供される、態様１６から２５のいずれか一項に記載のキット。
【0133】
２７．前記同位体組成物を前記ポリマーに担持するための金属担持緩衝液をさらに含む、態様１６から２６のいずれか一項に記載のキット。
【0134】
２８．前記金属担持緩衝液がアルカリを含む、態様２７に記載のキット。
【0135】
２９．前記金属担持緩衝液が酸性ｐＨにある、態様２８に記載のキット。
【0136】
３０．前記同位体組成物が前記ポリマーの１つ又は複数のペンダント基に担持されている、態様１６から２９のいずれか一項に記載のキット。
【0137】
３１．前記ポリマーが溶液中にある、態様１６から３０のいずれか一項に記載のキット。
【0138】
３２．前記ポリマーが凍結乾燥されている、態様１６から３０のいずれか一項に記載のキット。
【0139】
３３．前記濃縮された金属同位体の少なくとも５個の原子が前記ポリマーに担持されている、態様１６から３２のいずれか一項に記載のキット。
【0140】
３４．前記濃縮された金属同位体の少なくとも２０個の原子が前記ポリマーに担持されている、態様３３に記載のキット。
【0141】
３５．前記濃縮された金属同位体の４０個未満の原子が前記ポリマーに担持されている、態様３３又は３４に記載のキット。
【0142】
３６．前記同位体組成物が前記ポリマーに安定的に結合している、態様１６から３５のいずれか一項に記載のキット。
【0143】
３７．前記ポリマーに担持された前記同位体組成物の１０％未満が、競合する遊離キレート剤で失われる可能性がある、態様１６から３６のいずれか一項に記載のキット。
【0144】
３８．生理学的条件下で、前記同位体組成物の９５％超が前記ポリマーに結合したままである、態様１６から３７のいずれか一項に記載のキット。
【0145】
３９．マスサイトメトリーのアッセイで使用される場合、前記同位体組成物の９５％超が前記ポリマーに結合したままである、態様１６から３８のいずれか一項に記載のキット。
【0146】
４０．前記ポリマーがペグ化ペンダント基を含む、態様１６から３９のいずれか一項に記載のキット。
【0147】
４１．前記ポリマーが、前記金属同位体を担持する前及び後の両方で、前記ポリマーの溶解性を補助するペンダント基を含むように修飾されている、態様１６から４０のいずれか一項に記載のキット。
【0148】
４２．前記ポリマーが、前記金属同位体の前記ペンダント基への担持の前後に、前記ポリマーの溶解性を補助する親水性基を含むペンダント基をさらに含む、態様１６から４１のいずれか一項に記載のキット。
【0149】
４３．溶解性を補助する親水性基を含む前記ペンダント基が、ヒドロキサム酸を含むペンダント基とは別である、態様１６から４２のいずれか一項に記載のキット。
【0150】
４４．前記ポリマーの１つ又は複数のペンダント基が、繰り返し親水性基の鎖を含む、態様１６から４３のいずれか一項に記載のキット。
【0151】
４５．前記親水性基が前記ペンダント基の配位ケミストリーに影響を及ぼさない、態様１６から４４のいずれか一項に記載のキット。
【0152】
４６．前記ポリマーの溶解性の増加により、溶液中の前記金属同位体の担持が補助される、態様１６から４５のいずれか一項に記載のキット。
【0153】
４７．前記ポリマーが抗体にコンジュゲートされる場合、結果として生じる溶解性により、前記抗体のエピトープへの抗体結合が向上する、態様４２から４６のいずれか一項に記載のキット。
【0154】
４８．前記ポリマーの溶解性の増加により、ポリマーに結合した抗体の標的結合が向上する、態様４２から４７のいずれか一項に記載のキット。
【0155】
４９．前記親水性基が少なくとも１つのＰＥＧ基を含む、態様４２から４８のいずれか一項に記載のキット。
【0156】
５０．前記ポリマーがペグ化されている、態様１６から４９のいずれか一項に記載のキット。
【0157】
５１．前記ポリマーが少なくとも１００個のＰＥＧ基を含む、態様１６から５０のいずれか一項に記載のキット。
【0158】
５２．前記ＰＥＧ基が複数のペンダント基にわたって分布している、態様１６から５１のいずれか一項に記載のキット。
【0159】
５３．少なくともいくつかのペンダント基が２０個を超えるＰＥＧ基を含む、態様１６から５２のいずれか一項に記載のキット。
【0160】
５４．前記ポリマーの全てのペンダント基の５０％未満が、ジルコニウム及び／又はハフニウムをキレート化し、前記ポリマーの全てのペンダント基の５０％超が、複数のＰＥＧ基を含む、態様１６から５３のいずれか一項に記載のキット。
【0161】
５５．前記ポリマーのＰＥＧ基の数が、溶液中の前記ポリマーへの前記金属同位体の担持を補助する、態様１６から５４のいずれか一項に記載のキット。
【0162】
５６．前記ポリマーにコンジュゲートされた生理活性材料をさらに含む、態様１６から５５のいずれか一項に記載のキット。
【0163】
５７．前記生理活性材料が親和性試薬を含む、態様５６に記載のキット。
【0164】
５８．前記親和性試薬が抗体である、態様５７に記載のキット。
【0165】
５９．前記親和性試薬が溶液中にある、態様５６から５８のいずれか一項に記載のキット。
【0166】
６０．前記親和性試薬が凍結乾燥されている、態様５６から５８のいずれか一項に記載のキット。
【0167】
６１．前記ポリマーの１つ又は複数のペンダント基が、前記金属同位体の少なくとも６つの配位部位を配位させる、態様１６から６０のいずれか一項に記載のキット。
【0168】
６２．前記ポリマーの１つ又は複数のペンダント基が、前記金属同位体の６つを超える部位を配位させる、態様１６から６０のいずれか一項に記載のキット。
【0169】
６３．前記ポリマーの１つ又は複数のペンダント基が、前記金属同位体の８つの配位部位を配位させる、態様１６から６０のいずれか一項に記載のキット。
【0170】
６４．前記ポリマーの１つ又は複数のペンダント基が、ＤＦＯ又はその誘導体を含む、態様１６から６１のいずれか一項に記載のキット。
【0171】
６５．前記ポリマーの１つ又は複数のペンダント基が、４つのヒドロキサメート基を含むＤＦＯ誘導体を含む、態様１６から６１のいずれか一項に記載のキット。
【0172】
６６．前記ポリマーの１つ又は複数のペンダント基が、最も近いヒドロキサム基から少なくとも８個の結合で離間した第１のヒドロキサメート基を含むＤＦＯ誘導体を含む、態様１６から６１のいずれか一項に記載のキット。
【0173】
６７．前記同位体組成物と区別可能な別の追加的同位体組成物を含む、態様１６から６６のいずれか一項に記載のキット。
【0174】
６８．前記追加的同位体組成物の１つ又は複数がジルコニウム又はハフニウムを含む、態様６７に記載のキット。
【0175】
６９．前記追加的同位体組成物の１つ又は複数がランタニドを含む、態様６７又は６８のキット。
【0176】
７０．ジルコニウム又はハフニウムではなくランタニドをキレート化する複数のペンダント基を含むポリマーをさらに含む、態様１６から６９のいずれか一項に記載のキット。
【0177】
７１．別々の同位体組成物を担持したポリマーにそれぞれ共有結合した複数の抗体を含む、態様１６から７０のいずれか一項に記載のキット。
【0178】
７２．前記ポリマーがリビング重合によって形成されている、態様１６から７１のいずれか一項に記載のキット。
【0179】
７３．前記ポリマーが、アニオン重合、制御ラジカル重合、カチオン重合、及び開環重合のうちの少なくとも１つによって形成されている、態様１６から７２のいずれか一項に記載のキット。
【0180】
７４．前記ポリマーが１．５未満の多分散指数を有する、態様１６から７３のいずれか一項に記載のキット。
【0181】
７５．前記ポリマーが１．２未満の多分散指数を有する、態様１６から７４のいずれか一項に記載のキット。
【0182】
７６．前記ポリマーが２～１００個のペンダント基を含む、態様１６から７５のいずれか一項に記載のキット。
【0183】
７７．前記ポリマーが５～３０個の例の前記ペンダント基を含む、態様１６から７６のいずれか一項に記載のキット。
【0184】
７８．前記ポリマーが少なくとも５個の例の前記ペンダント基を含む、態様１６から７７のいずれか一項に記載のキット。
【0185】
７９．前記ポリマーが、少なくとも１０個の原子の濃縮ジルコニウム同位体を含む、態様１６から７８のいずれか一項に記載のキット。
【0186】
８０．前記ポリマーが、２０個と３０個の間の原子の濃縮ジルコニウム同位体を含む、態様７９に記載のキット。
【0187】
８１．前記ポリマーが一端で官能化されている、態様１６から８０のいずれか一項に記載のキット。
【0188】
８２．前記ポリマーが、生理活性材料に結合するように官能化されている、態様８１に記載のキット。
【0189】
８３．前記生理活性材料が親和性試薬を含む、態様８２に記載のキット。
【0190】
８４．前記親和性試薬が抗体である、態様８３に記載のキット。
【0191】
８５．前記ポリマーが、チオール反応性ケミストリー、アミン反応性ケミストリー、又はクリックケミストリーによって前記生理活性材料に結合するように官能化されている、態様８４に記載のキット。
【0192】
８６．キットであって、
複数のペンダント基を含むポリマー、及び
濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む同位体組成物
を含み、
前記複数のペンダント基は、ＤＦＯ又はその誘導体を含み、
前記複数のペンダント基は、前記ポリマーの溶解性を補助し、かつ／又は前記同位体組成物の前記ポリマーへの担持を補助するＰＥＧ基を含む、
キット。
複数のペンダント基を含むポリマー、及び
濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む同位体組成物
を含み、
前記複数のペンダント基は、ＤＦＯ又はその誘導体を含み、
前記複数のペンダント基は、前記ポリマーの溶解性を補助し、かつ／又は前記同位体組成物の前記ポリマーへの担持を補助するＰＥＧ基を含む、
キット。
【0193】
８７．態様１から８６のいずれか一項に記載のキットの作製方法。
【0194】
８８．マスサイトメトリーのためのポリマーを作製する方法であって、前記方法は、
ヒドロキサメートを含むペンダント基の複数の例を含むポリマーを提供することを含む、
方法。
ヒドロキサメートを含むペンダント基の複数の例を含むポリマーを提供することを含む、
方法。
【0195】
８９．濃縮金属同位体を含む同位体組成物を提供することをさらに含む、態様８８に記載の方法。
【0196】
９０．前記濃縮金属同位体がジルコニウム又はハフニウムの塩化物塩である、態様８９に記載の方法。
【0197】
９１．前記濃縮金属同位体が非放射性である、態様９０に記載の方法。
【0198】
９２．前記同位体組成物の前記ポリマーへの担持をさらに含む、態様８８から９２のいずれかに記載の方法。
【0199】
９３．リビング重合によって前記ペンダント基を重合することを含む、態様８７から９２のいずれか一項に記載の方法。
【0200】
９４．前記リビング重合が、アニオン重合、制御ラジカル重合、カチオン重合、及び開環重合のうちの少なくとも１つを含む、態様９３に記載の方法。
【0201】
９５．前記ポリマーの少なくともいくつかのペンダント基がヒドロキサメートを含む、態様８７から９３のいずれか一項に記載の方法。
【0202】
９６．前記ポリマーの少なくともいくつかのペンダント基がペグ化されている、態様８７から９４のいずれかに記載の方法。
【0203】
９７．前記担持の工程が、非プロトン性溶媒の存在下である、態様９２に記載の方法。
【0204】
９８．前記非プロトン性溶媒がＤＭＳＯである、態様９６に記載の方法。
【0205】
９９．前記担持の工程が酸の存在下である、態様９７又は９８に記載の方法。
【0206】
１００．前記同位体組成物が、濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体である、態様８９に記載の方法。
【0207】
１０１．前記同位体組成物が塩である、態様１００に記載の方法。
【0208】
１０２．前記塩が塩化物塩である、態様１０１に記載の方法。
【0209】
１０３．前記塩が四塩化物塩又はオキシ塩化物塩である、態様１０２に記載の方法。
【0210】
１０４．強塩基の添加及び／又は少なくとも５００℃の温度でのインキュベーションの後に、乾燥酸化ジルコニウムを砂から得る、態様１０５に記載の方法。
【0211】
１０５．酸化ジルコニウムの同位体を濃縮することをさらに含む、態様８７から１０４のいずれか一項に記載の方法。
【0212】
１０６．強酸の添加によって前記濃縮同位体を塩に変換することをさらに含む、態様１０５に記載の方法。
【0213】
１０７．前記塩が塩化物塩であり、前記強酸がＨＣｌを含む、態様１０６に記載の方法。
【0214】
１０８．前記塩が四塩化物又はオキシ塩化物の塩である、態様１０６又は１０７に記載の方法。
【0215】
１０９．前記濃縮同位体を少なくとも８０℃の温度で塩に変換することをさらに含む、態様１０５から１０９のいずれかに記載の方法。
【0216】
１１０．生理活性材料への付着のために前記ポリマーを官能化することをさらに含む、態様８６から１０９のいずれかに記載の方法。
【0217】
１１１．前記ポリマーを生理活性材料にコンジュゲートすることをさらに含む、態様８６から１１０のいずれかに記載の方法。
【0218】
１１２．前記生理活性材料が親和性試薬を含む、態様１１１に記載の方法。
【0219】
１１３．前記親和性試薬が抗体である、態様１１２に記載の方法。
【0220】
１１４．ペンダント基を前記ポリマーに付着させることをさらに含み、少なくともいくつかのペンダント基は、ヒドロキサメート、アザマクロサイクル、フェノキシアミン、サロフェン、及び／又はシクラムのリガンド又はその誘導体を含む、態様８６から１１３のいずれかに記載の方法。
【0221】
１１５．前記ポリマーが、ジルコニウム又はハフニウムの少なくとも１つと八配位錯体を形成するヒドロキサメート、アザマクロサイクル、フェノキシアミン、サロフェン、及び／又はシクラムの誘導体を含む、態様１１４に記載の方法。
【0222】
１１６．ジルコニウム及びハフニウムの少なくとも１つが、前記ポリマーのペンダント基と八配位錯体を形成する、態様８６から１１５のいずれかに記載の方法。
【0223】
１１７．前記ポリマーがヒドロキサメートを含む、態様８６から１１６のいずれかに記載の方法。
【0224】
１１８．前記ポリマーがＤＦＯ又はその誘導体を含む、態様８６から１１７のいずれかに記載の方法。
【0225】
１１９．前記ポリマーが、溶解性を補助する親水性基の１つ又は複数の鎖をさらに含む、態様８６から１１８のいずれか一項に記載の方法。
【0226】
１２０．前記ポリマーの１つ又は複数のペンダント基をペグ化することをさらに含む、態様８６から１１９のいずれか一項に記載の方法。
【0227】
１２１．前記ペンダント基のペグ化が前記ポリマーの担持を補助する、態様１２０に記載の方法。
【0228】
１２２．前記ペグ化ペンダント基が、ジルコニウム及び／又はハフニウムをキレート化する前記ペンダント基とは別である、態様１２１に記載の方法。
【0229】
１２３．態様１から８６のいずれか一項に記載のキットを使用する、マスサイトメトリーの方法。
【0230】
１２４．マスサイトメトリーの方法であって、
濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む質量タグ付き生理活性材料で、生体試料の細胞を標識すること、及び
前記細胞に結合した質量タグを質量分析によって検出すること
を含む、方法。
濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む質量タグ付き生理活性材料で、生体試料の細胞を標識すること、及び
前記細胞に結合した質量タグを質量分析によって検出すること
を含む、方法。
【0231】
１２５．前記質量タグ付き生理活性材料が、態様１から８６のいずれか一項に記載のキットによって提供される、態様１２４に記載の方法。
【0232】
１２６．態様１から８６のいずれか一項に記載のキットを使用することによって、前記質量タグ付き生理活性材料を提供することをさらに含む、態様１２４に記載の方法。
【0233】
１２７．マスサイトメトリーの方法であって、
第１の質量タグ付き親和性試薬を提供することであって、
前記親和性試薬はポリマーにコンジュゲートされており、
前記ポリマーは、ヒドロキサメートを含むペンダント基の複数の例を含み、
前記ポリマーは、濃縮金属同位体を含む同位体組成物を担持している、
第１の質量タグ付き親和性試薬を提供することと、
前記第１の質量タグ付き親和性試薬を含む複数の質量タグ付き親和性試薬で生体試料の細胞を標識することと、
前記細胞に結合した質量タグを質量分析によって検出することと
を含む、方法。
第１の質量タグ付き親和性試薬を提供することであって、
前記親和性試薬はポリマーにコンジュゲートされており、
前記ポリマーは、ヒドロキサメートを含むペンダント基の複数の例を含み、
前記ポリマーは、濃縮金属同位体を含む同位体組成物を担持している、
第１の質量タグ付き親和性試薬を提供することと、
前記第１の質量タグ付き親和性試薬を含む複数の質量タグ付き親和性試薬で生体試料の細胞を標識することと、
前記細胞に結合した質量タグを質量分析によって検出することと
を含む、方法。
【0234】
１２８．ジルコニウム又はハフニウムの濃縮同位体を含む同位体組成物であって、前記濃縮同位体が塩化物塩である、同位体組成物。
【0235】
１２９．ヒドロキサメートを含む複数のペンダント基を含むポリマー。
【0236】
１３０．細胞に結合した複数の質量タグを質量分析によって検出することを含み、前記複数の質量タグの少なくとも１つの質量タグが、濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む、マスサイトメトリーの方法。
【0237】
１３１．ジルコニウム及び／又はハフニウムをキレート化する前記ペンダント基が溶解補助部分を含む、態様７に記載のキット。
【0238】
１３２．前記溶解補助部分が、ヒドロキサメート間に配置される、態様１３１に記載のキット。
【0239】
１３３．前記溶解補助部分がエーテルである、態様１３１又は１３２に記載のキット。
【0240】
１３４．マスサイトメトリーのためのバーコード化キットであって、
ジルコニウム及び／又はハフニウムの濃縮同位体を含む質量タグであって、それぞれが濃縮同位体の固有の組合せを含む別々の混合物中で組み合わされる質量タグ、を含み、
各混合物は、他の試料又は実験条件でプールする前に、特定の試料又は実験条件を標識するための固有のバーコードを提供する、
バーコード化キット。
ジルコニウム及び／又はハフニウムの濃縮同位体を含む質量タグであって、それぞれが濃縮同位体の固有の組合せを含む別々の混合物中で組み合わされる質量タグ、を含み、
各混合物は、他の試料又は実験条件でプールする前に、特定の試料又は実験条件を標識するための固有のバーコードを提供する、
バーコード化キット。
【0241】
１３５．前記質量タグが共有結合のために官能化されている、態様１３４に記載のキット。
【0242】
１３６．前記質量タグがマレイミドによって官能化されている、態様１３５に記載のキット。
【0243】
１３７．前記質量タグが抗体にコンジュゲートされている、態様１３４に記載のキット。
【0244】
１３８．質量タグポリマーを作製する方法であって、
ポリマー骨格を形成するためのアジド開始重合の第１の工程と、
ペンダント基の混合物を組み込む第２の工程であって、ペンダント基の前記混合物は、
ＤＦＯ又はその誘導体を含むキレート化ペンダント基、
溶解補助ペンダント基、
を含む第２の工程と、
濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む同位体組成物を提供する第３の工程であって、前記同位体組成物は溶液中の金属である、第３の工程と
を含む、方法。
ポリマー骨格を形成するためのアジド開始重合の第１の工程と、
ペンダント基の混合物を組み込む第２の工程であって、ペンダント基の前記混合物は、
ＤＦＯ又はその誘導体を含むキレート化ペンダント基、
溶解補助ペンダント基、
を含む第２の工程と、
濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む同位体組成物を提供する第３の工程であって、前記同位体組成物は溶液中の金属である、第３の工程と
を含む、方法。
【0245】
１３９．前記第２の工程がアミノリシスによるものである、態様１３８に記載の方法。
【0246】
１４０．前記第２の工程で生成された前記ポリマーに前記同位体組成物を担持する第３の工程をさらに含む、態様１３８又は１３９に記載の方法。
【0247】
１４１．質量タグキットであって、
濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む同位体組成物、及び
ＤＦＯ又はその誘導体及び溶解補助部分を含む複数のペンダント基を含むポリマー
を含み、
前記ポリマーは、抗体又はその抗体断片に付着しているか、又は前記抗体又はその抗体断片に付着するために官能化されている、
質量タグキット。
濃縮されたジルコニウム又はハフニウムの同位体を含む同位体組成物、及び
ＤＦＯ又はその誘導体及び溶解補助部分を含む複数のペンダント基を含むポリマー
を含み、
前記ポリマーは、抗体又はその抗体断片に付着しているか、又は前記抗体又はその抗体断片に付着するために官能化されている、
質量タグキット。
【0248】
１４２．ＤＦＯ又はその誘導体を含まない複数の溶解補助ペンダント基をさらに含む、態様１４１に記載のキット。
【0249】
１４３．前記ポリマーが、チオール反応性ケミストリー、アミン反応性ケミストリー、又はクリックケミストリーによる付着のために官能化されている、態様１４１又は１４２に記載のキット。
【0250】
１４４．前記ポリマーがマレイミドで官能化されている、態様１４３に記載のキット。
【0251】
１４５．前記ポリマーがＮＨＳエステルで官能化されている、態様１４３に記載のキット。
【0252】
１４６．前記ポリマーがアジドで官能化されている、態様１４３に記載のキット。
【0253】
１４７．前記ポリマーが、前記ペンダント基の組込みの前にアジド開始によって重合された、態様１４６に記載のキット。
【0254】
１４８．前記同位体が非放射性である、態様１４１に記載のキット。
【0255】
１４９．複数の前記ペンダント基が、４つのヒドロキサメート基を含むＤＦＯ誘導体を含む、態様１４１又は１４２に記載のキット。
【0256】
１５０．前記ＤＦＯ誘導体が、ヒドロキサメート間に散在している複数の溶解補助部分を含む、態様１４９に記載のキット。
【0257】
１５１．前記ポリマーが少なくとも２０個の例の前記ＤＦＯ誘導体を提供する、態様１５０に記載のキット。
【0258】
１５２．前記溶解補助部分の少なくともいくつかが親水性である、態様１４１のキット。
【0259】
１５３．前記溶解補助部分の少なくともいくつかがポリエーテルを含む、態様１５２に記載のキット。
【0260】
１５４．前記ポリエーテルがポリエチレングリコールである、態様１５３に記載のキット。
【0261】
１５５．前記溶解補助部分の少なくともいくつかが、ヒドロキサメート間に配置されたエーテルを含む、態様１５２に記載のキット。
【0262】
１５６．前記溶解補助部分の少なくともいくつかがオキサゾリンを含む、態様１５２に記載のキット。
【0263】
１５７．前記溶解補助部分の少なくともいくつかが、ポリオキサゾリンを含む、態様１５６に記載のキット。
【0264】
１５８．前記ポリマーが双性イオン性である、態様１４１に記載のキット。
【0265】
１５９．前記同位体組成物が溶液中の金属である、態様１４１に記載のキット。
【0266】
１６０．前記ポリマーが前記同位体組成物を担持している、態様１４１のキット。
【0267】
上に列挙した例のいずれも、本出願の他の箇所に記載されている追加的な態様をさらに含み得る。
【図1】
【図2】
【国際調査報告】