特表 2022-543779 イムノコンジュゲート

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-10-14

(54)【発明の名称】イムノコンジュゲート

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20221006BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221006BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20221006BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20221006BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20221006BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221006BHJP

   A61K 31/5517 20060101ALI20221006BHJP

   A61K 31/7076 20060101ALI20221006BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20221006BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20221006BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 L

A61P35/00

A61P35/02

A61K47/68

A61K45/00

A61P43/00 121

A61K31/5517

A61K31/7076

C07K16/28 ZNA

C12N15/13

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022506456

(86)(22)【出願日】2020-07-30

(85)【翻訳文提出日】2022-03-30

(86)【国際出願番号】 AU2020050781

(87)【国際公開番号】W WO2021016668

(87)【国際公開日】2021-02-04

(31)【優先権主張番号】2019902714

(32)【優先日】2019-07-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】516287689

【氏名又は名称】デンドロサイト バイオテック ピーティーワイ リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000338

【氏名又は名称】特許業務法人ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ

(72)【発明者】

【氏名】クラーク，ジョージナ ジェーン

(72)【発明者】

【氏名】アバディア，エドワード

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE59

4C076FF70

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC021

4C084ZC022

4C085AA27

4C085BB01

4C085CC23

4C085EE01

4C085EE03

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB05

4C086EA18

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086NA13

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZB27

4H045AA11

4H045AA30

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、少なくとも１つの細胞毒性剤に連結されている抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲート、および当該イムノコンジュゲートを含む組成物に関する。本発明はまた、造血幹細胞および前駆細胞を枯渇させるためのイムノコンジュゲートの使用、造血幹細胞移植のために対象を準備するためのイムノコンジュゲートの使用、およびＣＤ３００ｆに関連する状態の治療のためのイムノコンジュゲートの使用に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに特異的に結合し、かつ、
前記抗体またはその抗原結合断片が、下記（ａ）および（ｂ）を含む、イムノコンジュゲート：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【請求項2】

前記重鎖可変領域が、配列番号２で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、を含む、請求項１に記載のイムノコンジュゲート。

【請求項3】

前記軽鎖可変領域が、配列番号６で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、を含む、請求項１または２に記載のイムノコンジュゲート。

【請求項4】

前記重鎖可変領域に含まれるアミノ酸配列は、
配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であり、かつ、
配列番号２で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、を含む、
請求項１～３のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。

【請求項5】

前記軽鎖可変領域に含まれるアミノ酸配列は、
配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であり、かつ、
配列番号６で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、を含む、
請求項１～４のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。

【請求項6】

前記重鎖可変領域が、配列番号１で表されるアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。

【請求項7】

前記軽鎖可変領域が、配列番号５で表されるアミノ酸配列を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。

【請求項8】

前記重鎖が、配列番号１３で表されるアミノ酸配列を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。

【請求項9】

前記軽鎖が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。

【請求項10】

前記ピロロベンゾジアゼピン部分が、ピロロベンゾジアゼピン二量体である、請求項１～９のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。

【請求項11】

前記ピロロベンゾジアゼピン二量体が、リンカーを介して前記抗体またはその抗原結合断片に連結されている、請求項１０に記載のイムノコンジュゲート。

【請求項12】

前記リンカーが、ペプチドを含む、請求項１１に記載のイムノコンジュゲート。

【請求項13】

請求項１～１２のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートを含む、医薬組成物。

【請求項14】

請求項１～１２のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートまたは請求項１３に記載の医薬組成物の有効量を投与する工程を含む、ＣＤ３００ｆの発現に関連する状態の治療方法。

【請求項15】

前記状態が、ＡＭＬである、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

下記（ａ）および（ｂ）を対象に投与する工程を含む、造血幹細胞移植のために前記対象を準備する方法：
（ａ）請求項１～１２のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートの有効量；
（ｂ）リンパ球枯渇剤。

【請求項17】

下記（ａ）および（ｂ）を対象に投与する工程を含む、造血幹細胞移植のために前記対象を準備する方法：
（ａ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片がＣＤ３００ｆに特異的に結合するイムノコンジュゲートの有効量；
（ｂ）リンパ球枯渇剤の有効量。

【請求項18】

前記細胞毒性剤が、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分である、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記リンパ球枯渇剤が、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１７または１８に記載の方法。

【請求項20】

前記細胞毒性剤が、ＰＢＤ二量体であり、
前記リンパ球枯渇剤が、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩である、
請求項１７～１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

ＣＤ３００ｆに特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、下記（ａ）および（ｂ）を含む、請求項１７～２０のいずれか１項に記載の方法：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【請求項22】

ＣＤ３００ｆに特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、下記（ａ）および（ｂ）を含む、請求項１７～２１のいずれか１項に記載の方法：
（ａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域。

【請求項23】

下記（ａ）および（ｂ）を含む、造血幹細胞移植のために対象を準備するための医薬組成物：
（ａ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片がＣＤ３００ｆに特異的に結合するイムノコンジュゲート；
（ｂ）リンパ球枯渇剤。

【請求項24】

前記細胞毒性剤が、ピロロベンゾジアゼピン部分である、請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項25】

前記ピロロベンゾジアゼピン部分が、ピロロベンゾジアゼピン二量体である、請求項２４に記載の医薬組成物。

【請求項26】

前記イムノコンジュゲートが、請求項１～１２のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートである、請求項２３～２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項27】

前記リンパ球枯渇剤が、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩である、請求項２３～２６のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項28】

下記（ａ）および（ｂ）を含む、造血幹細胞移植のために対象を準備するためのキット：
（ａ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片がＣＤ３００ｆに特異的に結合する、イムノコンジュゲート；
（ｂ）リンパ球枯渇剤。

【請求項29】

前記細胞毒性剤が、ピロロベンゾジアゼピン部分である、請求項２８に記載のキット。

【請求項30】

前記ピロロベンゾジアゼピン部分が、ピロロベンゾジアゼピン二量体である、請求項２９に記載のキット。

【請求項31】

前記イムノコンジュゲートが、請求項１～１２のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートである、請求項２８～３０のいずれか１項に記載のキット。

【請求項32】

前記リンパ球枯渇剤が、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩である、請求項２８～３１のいずれか１項に記載のキット。

【請求項33】

対象において造血幹細胞および前駆細胞を枯渇させる方法であって、
前記方法は、少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含み、
前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する、
方法。

【請求項34】

前記細胞毒性剤が、ピロロベンゾジアゼピン部分である、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記ピロロベンゾジアゼピン部分が、ピロロベンゾジアゼピン二量体である、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記イムノコンジュゲートが、請求項１～１２のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートである、請求項３３～３５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項37】

請求項１～１２のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートの有効量または請求項１３、２３～２７のいずれか１項に記載の組成物の有効量を対象に投与する工程を含む、造血幹細胞移植のために対象を準備する方法。

【請求項38】

造血幹細胞移植のために対象を準備する方法であって、
前記方法は、少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含み、
前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する、
方法。

【請求項39】

前記抗体またはその抗原結合断片が、下記（ａ）および（ｂ）を含む、請求項３３～３８のいずれか１項に記載の方法：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【請求項40】

前記細胞毒性剤が、ピロロベンゾジアゼピン部分である、請求項３８または３９に記載の方法。

【請求項41】

前記ピロロベンゾジアゼピン部分が、ピロロベンゾジアゼピン二量体である、請求項３８～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

前記イムノコンジュゲートが、請求項１～１２のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートである、請求項３８～４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

リンパ球枯渇剤を投与する工程をさらに含む、請求項３８～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

前記リンパ球枯渇剤が、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩である、請求項４３に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、ＣＤ３００ｆポリペプチドに特異的に結合するイムノコンジュゲートおよび当該イムノコンジュゲートを含む組成物に関する。本開示はまた、造血幹細胞および前駆細胞を枯渇させるためのイムノコンジュゲートの使用、造血幹細胞移植のために対象を準備するためのイムノコンジュゲートの使用、およびＣＤ３００ｆに関連する状態の治療のためのイムノコンジュゲートの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

血液疾患とは、血液および造血器官の障害である。血液疾患の例としては、遺伝性血液障害（先天性代謝異常、ヘモグロビン症、骨髄異形成・骨髄増殖症候群など）、悪性血液腫瘍（リンパ腫など）、白血病（白血病急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）など）が挙げられる。

【0003】

ＡＭＬは、骨髄系の血液細胞の癌である。ＡＭＬは異常な白血球の急速な増殖を特徴としており、異常な白血球は骨髄に蓄積して正常な血液細胞の産生を妨げる。ＡＭＬは成人が罹患する最も一般的な急性白血病であり、その発症率は年齢とともに増加する。そのため、人類の高齢化に伴いＡＭＬの発症率も増加すると予想されている。

【0004】

血液疾患の病因に関する理解は大いに進歩したが、患者の転帰は依然として満足のいくものではない。血液疾患および血液状態に対する治療オプションには血液幹細胞の移植があり、典型的には化学療法または放射線療法と併用する。

【0005】

造血幹細胞移植は、ＡＭＬなどの骨髄性白血病や、他の悪性血液腫瘍および遺伝性障害の治療に利用できる。しかし、実質的なドナーの定着が可能となるのは、患者の骨髄における造血幹細胞のニッチからレシピエント細胞が除去され、ドナー細胞が定着できる空間が確保されている場合だけである。移植細胞を完全に定着させるためには、前処置レジメンを施して、レシピエントの骨髄における造血幹細胞のニッチを枯渇させ、移植細胞に対する免疫応答を抑制し、残存病変による負荷を低減させる。伝統的な前処置レジメンには、放射線照射および／または化学療法剤が含まれる。アルキル化剤（ブスルファン、メルファランなど）または放射線照射は、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）を枯渇させる。一方、リンパ除去剤（フルダラビン、シクロホスファミドなど）は、レシピエントのリンパ球を枯渇させる。しかし、放射線照射やアルキル化剤などの化学療法剤は、特定の患者コホートにとっては非常に過酷であることがある。例えば、高齢の患者または遺伝性血液障害に罹患している患者は、放射線照射および化学療法剤により造血幹細胞および前駆細胞を枯渇させる治療が不適であることが多い。そのため、放射線照射または化学療法剤（アルキル化剤など）を用いる効果的な前処置レジメンは、悪性血液腫瘍の治療に必ずしも利用できる訳ではなく、遺伝性血液障害の治療に利用できるケースは稀である。ＡＭＬと診断された患者の大半を高齢患者が占めているので、このことはＡＭＬなどの悪性血液腫瘍にとって問題となる。

【0006】

造血幹細胞移植の進歩にもかかわらず、治療関連死亡率（ＴＲＭ）は依然として高く、特に６５歳以上で顕著である（Kroeger N., Blood. 2012;119(24):5632-5639）。

【0007】

悪性血液腫瘍（骨髄性白血病など）を治療するための、また造血幹細胞移植において使用するための、造血幹細胞、前駆細胞および悪性血液腫瘍にある標的に結合する代替分子が必要とされている。

【発明の概要】

【0008】

ＣＤ３００ｆは、免疫調節分子ＣＤ３００ｆファミリーのメンバーであり、染色体１７ｑ２５に位置する遺伝子複合体によってコードされている。このタンパク質は、膜貫通糖タンパク質であり、細胞質領域および細胞外ドメインを有している。細胞質領域は、抑制性ＩＴＩＭ部位モチーフおよびＰＩ３Ｋリン酸化部位モチーフの両方を有している。ＣＤ３００ｆは、抗原提示細胞などの正常な骨髄性細胞において発現する。ＣＤ３００ｆは、造血幹細胞および前駆細胞や、ＡＭＬなどの悪性血液腫瘍において高発現してしている。それゆえ、ＣＤ３００ｆは、ＡＭＬなどのＣＤ３００ｆの発現に関連する状態を治療するための標的となり、造血幹細胞移植などにおいて造血幹細胞および前駆細胞を枯渇させるための標的ともなる。

【0009】

ＤＣＲ－２は、ＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに特異的に結合するモノクローナル抗体である。本発明者らが見出したところによると、ＤＣＲ－２とピロロベンゾジアゼピン部分（ＰＢＤ部分）とを連結させると、白血病細胞を効果的に殺傷する。

【0010】

第１態様が提供するのは、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートである。ここで、抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0011】

第２態様が提供するのは、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートである。ここで、抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域。

【0012】

第３態様が提供するのは、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートである。ここで、抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに特異的に結合し、配列番号１で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または配列番号５で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0013】

第４態様が提供するのは、第１態様～第３態様のいずれか１つのイムノコンジュゲートを含む組成物である。

【0014】

第５態様が提供するのは、それを必要とする対象において、ＣＤ３００ｆの発現に関連する状態を治療する方法である。この方法は、第１態様～第３態様のいずれか１つのイムノコンジュゲートまたは第４態様の組成物の有効量を対象に投与する工程を含む。

【0015】

他の第５態様が提供するのは、それを必要とする対象におけるＣＤ３００ｆの発現に関連する状態の治療における使用のための、第１態様～第３態様のいずれか１つのイムノコンジュゲートまたは第４態様の組成物である。

【0016】

あるいは、他の第５態様が提供するのは、それを必要とする対象においてＣＤ３００ｆの発現に関連する状態を治療する医薬の製造における、第１態様～第３態様のいずれか１つのイムノコンジュゲートまたは第４態様の組成物の使用である。

【0017】

第６態様が提供するのは、第１態様～第３態様のいずれか１つのイムノコンジュゲートまたは第４態様の組成物を含むキットである。

【0018】

第７態様が提供するのは、下記（ａ）および（ｂ）を対象に投与する工程を含む、造血幹細胞移植のために対象を準備する方法である：
（ａ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片がＣＤ３００ｆに特異的に結合する、イムノコンジュゲートの有効量；
（ｂ）リンパ球枯渇剤の有効量。

【0019】

他の第７態様が提供するのは、造血幹細胞移植のための対象の準備における使用のための、下記（ａ）および（ｂ）である：
（ａ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片がＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに特異的に結合する、イムノコンジュゲート；
（ｂ）リンパ球枯渇剤。

【0020】

あるいは、他の第７態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備させる医薬の製造における、少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの使用である。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する。前記対象は、リンパ球枯渇剤を投与されているか、既に投与されたか、または今後投与される予定である。

【0021】

第８態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備する方法であって、前記対象に下記（ａ）および（ｂ）を投与する工程を含む方法である：
（ａ）少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片がＣＤ３００ｆに特異的に結合する、イムノコンジュゲートの有効量；
（ｂ）リンパ球枯渇剤の有効量。

【0022】

他の第８態様が提供するのは、造血幹細胞移植のための対象の準備における使用のための、下記（ａ）および（ｂ）である：
（ａ）少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片がＣＤ３００ｆに特異的に結合する、イムノコンジュゲート；
（ｂ）リンパ球枯渇剤。

【0023】

あるいは、他の第８態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備させる医薬の製造のための、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの使用である。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する。前記対象は、リンパ球枯渇剤を投与されているか、既に投与されたか、または今後投与される予定である。

【0024】

第９態様が提供するのは、下記（ａ）および（ｂ）を対象に投与する工程を含む、造血幹細胞移植のために前記対象を準備する方法である：
（ａ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片がＣＤ３００ｆに特異的に結合する、イムノコンジュゲートの有効量；
（ｂ）フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩の有効量。

【0025】

他の第９態様が提供するのは、造血幹細胞移植のための対象の準備における使用のための、下記（ａ）および（ｂ）である：
（ａ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片がＣＤ３００ｆに特異的に結合する、イムノコンジュゲート；
（ｂ）フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩。

【0026】

あるいは、他の第９態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備させる医薬の製造のための、少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの使用である。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する。前記対象は、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩を投与されているか、既に投与されたか、または今後投与される予定である。

【0027】

第１０態様が提供するのは、下記（ａ）および（ｂ）を対象に投与する工程を含む、造血幹細胞移植のために前記対象を準備する方法である：
（ａ）少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片がＣＤ３００ｆに特異的に結合する、イムノコンジュゲートの有効量；
（ｂ）フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩の有効量。

【0028】

他の第１０態様が提供するのは、造血幹細胞移植のための対象の準備における使用のための、下記（ａ）および（ｂ）である：
（ａ）少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片がＣＤ３００ｆに特異的に結合する、イムノコンジュゲート；
（ｂ）フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩。

【0029】

あるいは、他の第１０態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備させる医薬の製造のための、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの使用である。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する。前記対象は、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩を投与されているか、既に投与されたか、または今後投与される予定である。

【0030】

第１１態様が提供するのは、下記（１）および（２）を対象に投与する工程を含む、造血幹細胞移植のために前記対象を準備する方法である：
（１）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片はＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む、イムノコンジュゲートの有効量：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（２）リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）の有効量。

【0031】

他の第１１態様が提供するのは、造血幹細胞移植のための対象の準備における使用のための、下記（１）および（２）である：
（１）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲート；
（２）リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0032】

あるいは、他の第１１態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備させる医薬の製造における、少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの使用である。ここで、前記対象は、リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）を、投与されているか、既に投与されたか、または今後投与される予定である。
前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0033】

第１２態様が提供するのは、下記（１）および（２）を対象に投与する工程を含む、造血幹細胞移植のために前記対象を準備する方法である：
（１）少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片はＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む、イムノコンジュゲートの有効量：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（２）リンパ球枯渇剤の有効量（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）。

【0034】

他の第１２態様が提供するのは、造血幹細胞移植のための対象の準備における使用のための、下記（１）および（２）である：
（１）少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲート；
（２）リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0035】

あるいは、他の第１２態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備させる医薬の製造における、少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの使用である。ここで、前記対象は、リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）を投与されているか、既に投与されたか、または今後投与される予定である。前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0036】

第１３態様が提供するのは、下記（１）および（２）を対象に投与する工程を含む、造血幹細胞移植のために前記対象を準備する方法である：
（１）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片はＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む、イムノコンジュゲートの有効量：
（ａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域；
（２）リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）の有効量。

【0037】

他の第１３態様が提供するのは、造血幹細胞移植のための対象の準備における使用のための、下記（ａ）および（ｂ）である：
（ａ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含む、イムノコンジュゲート；
（ｂ）リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域。

【0038】

あるいは、他の第１３態様が提供するのは、
造血幹細胞移植のために対象を準備させる医薬の製造における、少なくとも１つの細胞毒性剤に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの使用である。前記対象は、リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）を投与されているか、既に投与されたか、または今後投与される予定である。前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域。

【0039】

第１４態様が提供するのは、下記（１）および（２）を対象に投与する工程を含む、造血幹細胞移植のために前記対象を準備する方法である：
（１）少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片はＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む、イムノコンジュゲートの有効量：
（ａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域；
（２）リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）の有効量。

【0040】

他の第１４態様が提供するのは、造血幹細胞移植のための対象の準備における使用のための、下記（１）および（２）である：
（１）少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲート；
（２）リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域。

【0041】

あるいは、他の第１４態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備させる医薬の製造における、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの使用である。ここで、前記対象は、リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）を、投与されているか、既に投与されたか、または今後投与される予定である。前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域。

【0042】

第１５態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備するための医薬組成物である。この医薬組成物は、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片がＣＤ３００ｆに特異的に結合する、イムノコンジュゲート；
（ｂ）リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）。

【0043】

第１６態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備するための医薬組成物である。この医薬組成物は、下記（１）および（２）を含む：
（１）少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片はＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む、イムノコンジュゲート：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（２）リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）。

【0044】

第１７態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備するための医薬組成物である。この医薬組成物は、下記（１）および（２）を含む：
（１）少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片はＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む、イムノコンジュゲート：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（２）リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）。

【0045】

第１８態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備するためのキットである。このキットは、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合断片がＣＤ３００ｆに特異的に結合する、イムノコンジュゲート；
（ｂ）リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）。

【0046】

第１９態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備するためのキットである。このキットは、下記（１）および（２）を含む：
（１）第１態様、第２態様または第３態様のいずれか１つのイムノコンジュゲート；
（２）リンパ球枯渇剤（典型的には、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩）。

【0047】

第２０態様が提供するのは、対象における造血幹細胞および前駆細胞を枯渇させる方法である。この方法は、少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する。

【0048】

他の第２０態様が提供するのは、対象における造血幹細胞および前駆細胞の枯渇における使用のための、少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートである。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する。

【0049】

あるいは、他の第２０態様が提供するのは、対象における造血幹細胞および前駆細胞を枯渇させる医薬の製造における、少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの使用である。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する。

【0050】

第２１態様が提供するのは、第１態様、第２態様または第３態様のいずれか１つのイムノコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、前記対象における造血幹細胞および前駆細胞を枯渇させる方法である。

【0051】

他の第２１態様が提供するのは、対象における造血幹細胞および前駆細胞の枯渇における使用のための、第１態様、第２態様または第３態様のいずれか１つのイムノコンジュゲートである。

【0052】

あるいは、他の第２１態様が提供するのは、対象における造血幹細胞および前駆細胞を枯渇させる医薬の製造における、第１態様、第２態様または第３態様のイムノコンジュゲートの使用である。

【0053】

第２２態様が提供するのは、第１態様、第２態様または第３態様のいずれか１つのイムノコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、造血幹細胞移植のために前記対象を準備する方法である。

【0054】

他の第２２態様が提供するのは、造血幹細胞移植のための対象の準備における使用のための、第１態様、第２態様または第３態様のいずれか１つのイムノコンジュゲートである。

【0055】

あるいは、他の第２２態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備させる医薬の製造における、第１態様、第２態様または第３態様のいずれか１つのイムノコンジュゲートの使用である。

【0056】

第２３態様が提供するのは、少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、造血幹細胞移植のために対象を準備する方法である。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する。

【0057】

他の第２３態様が提供するのは、造血幹細胞移植のための対象の準備における使用のための、少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートである。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する。

【0058】

あるいは、他の第２３態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備させる医薬の製造における、少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結されたイムノコンジュゲートの使用である。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する。

【0059】

第２４態様が提供するのは、少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、造血幹細胞移植のために対象を準備する方法である。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0060】

他の第２３態様が提供するのは、造血幹細胞移植のための対象の準備における使用のための、少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートである。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0061】

あるいは、他の第２３態様が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備させる医薬の製造における、少なくとも１つの細胞毒性剤（典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの使用である。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片はＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【図面の簡単な説明】

【0062】

【図1】図１Ａは、ＣＤ３３およびＣＤ３００ｆの遺伝子発現を、線形回帰分析により比較したグラフである。図１Ｂは、患者由来ＡＭＬ細胞のＣＤ３３およびＣＤ３００ｆのＭＦＩ比を、線形回帰分析により比較したグラフである（ｎ＝３３）。図１Ｃは、ＨＳＰＣの複数のサブタイプにおけるＣＤ３００ｆ遺伝子の発現を表すグラフである。****は、Ｐ＜０．０００１を表す（巨核球－赤血球系前駆細胞 vs. 他の全てのサブタイプ）。図１Ｄは、正常な骨髄（ＢＭ）から得られたＨＳＰＣにおけるＣＤ３００ｆのＭＦＩ比を表すグラフである。

【図2】図２は、フローサイトメトリーによってＨＳＰＣ群を同定するためのゲーティング戦略のフローである。

【図3】図３は、健康なドナーからから得た末梢血のサブセットにおけるＣＤ３００ｆのＭＦＩ比を表すグラフである（ｎ＝３）。平均値およびＳＥＭを示す。

【図4】図４Ａは、ヒトデータセットの種々の臓器におけるＲＮＡ配列データから得られる、ＣＤ３００ｆ遺伝子の発現を表すグラフである。****は、Ｐ＜０．０００１を表す（血球、脾臓または肺 vs. 全臓器）。灰色のバーは、造血器官を表す。ＴＰＭ（１００万個の転写物あたりの相対値）。図４Ｂは、種々の臓器におけるＲＮＡ配列データから得られる、ＣＤ３３遺伝子の発現を表すグラフである。****は、Ｐ＜０．０００１を表す（血球、脾臓、肺臓 vs. 全臓器）。灰色のバーは、造血器官を示す。ＴＰＭ（１００万個の転写物あたりの相対値）。

【図5】図５は、ＨＬ－６０細胞におけるＤＣＲ－２の内部移行の動態を表すグラフである。内部移行率（％）＝全体染色のＭＦＩの相対ＭＦＩ－表面染色の相対ＭＦＩ。

【図6】図６は、ＰＢＤ二量体と直接複合体化しているＤＣＲ－２（ＤＣＲ－２ＰＢＤ）の細胞毒性と、ＰＢＤ二量体と直接複合体化しているＣＭＲＦ－８１（ＣＭＲＦ－８１ＰＢＤ）の細胞毒性を比較したグラフである。ＨＬ－６０細胞、Ｕ９３７細胞、ＴＨＰ－１細胞およびＺ－１３８細胞における細胞毒性を検討した。ＲＰＭＩ（GlutamaxおよびPen/Strepを含む）およびＦＣＳの中で、細胞株およびイムノコンジュゲートを７２時間インキュベートし、イムノコンジュゲートの毒性を決定した。グラフによると、ＤＣＲ－２－ＰＢＤは、ＣＤ３００ｆ^＋ＡＭＬ細胞株を効率的に殺傷するが、ＣＤ３００ｆ^－ホジキンリンパ腫細胞株を殺傷しない。

【図7】図７は、造血前駆細胞のコロニー形成単位に対する、ＤＣＲ－２ ＰＢＤの用量依存性の細胞毒性を表すグラフである。

【図8】図８は、骨髄系コロニー形成単位、赤血球系コロニー形成単位および多能コロニー形成単位に対する、ＤＣＲ－２ＰＢＤの用量依存性の細胞毒性を表すグラフである。ＢＦＵ：バースト形成単位。ＧＥＭＭ：顆粒球、赤血球、マクロファージおよび巨核球。ＧＭ：顆粒球マクロファージ。

【図9】図９は、ＤＣＲ－２ ＰＢＤの濃度の増加に伴う、ＡＭＬのコロニー形成単位の阻害を表すグラフである。duplicateで実施した。*は、Ｐ＜０．０５を表す（１９６．２ｐＭにおけるＣＲＧＨ１に対するＣＦＵ阻害）。**は、Ｐ＜０．０１を表す（１．６ｐＭにおけるＣＲＧＨ９に対するＣＦＵ阻害）。***は、Ｐ＜０．００１を表す（３９．２ｐＭおよび１９６．２ｐＭにおけるＣＲＧＨ９に対するＣＦＵ阻害）。

【図10】図１０Ａは、ＤＣＲ－２ＰＢＤの細胞毒性を評価するためのフローを表す。図１０Ｂは、ＤＣＲ－２ＰＢＤの時間依存的な細胞毒性を表すグラフである。ＦＣＳを含有するＲＰＭＩの中で、細胞株およびイムノコンジュゲートを最大９６時間インキュベートした後、生存率を決定した。このグラフによると、ＤＣＲ－２ＰＢＤは、迅速な細胞毒性を呈する。

【図11】図１１Ａは、バイスタンダー的な殺傷を測定するアプローチを表すフローである（バイスタンダー殺傷アッセイ）。図１１Ｂは、ＤＣＲ－２ＰＢＤによるバイスタンダー的な殺傷の効果を表すグラフである。細胞株ＨＬ－６０（ＣＤ３００ｆ^＋ｖｅ細胞）、Ｍｉｎｏ（ＣＤ３００ｆ^－ｖｅ細胞）、またはＨＬ－６０およびＭｉｎｏの混合集団を、ＦＣＳを含有するＲＰＭＩの中で、種々の濃度のＤＣＲ－２ＰＢＤと共に９６時間インキュベートした後、細胞の生存率を決定した。混合集団では、Ｍｉｎｏの生存率のみを決定した。

【図12】図１２は、単球由来樹状細胞の生存における、ＤＣＲ－２ＰＢＤ、ＣＭＲＦ－８１ＰＢＤおよびＰＢＳ対照の影響を表すグラフである。

【図13】図１３は、ＤＣＲ－２ＰＢＤで治療しＬＰＳで活性化させた後における、新鮮な末梢血の樹状細胞のフローサイトメトリー分析のためのゲーティングを表す。

【図14】図１４のヒストグラムは、ＬＰＳで刺激した樹状細胞における活性化マーカーであるＣＤ８０およびＣＤ８３の上方制御をＤＣＲ－２は阻害せず、それゆえ、ＤＣＲ－２はＤＣの活性化を阻害しないことを表している。

【図15】図１５Ａは、混合リンパ球反応において、Ｔ細胞の増殖に対するＤＣＲ－２ＰＢＤの影響を試験するアプローチを表すフローである。図１５Ｂは、混合リンパ球反応においてＤＣＲ－２ＰＢＤがＴ細胞の増殖を阻害しないことを表すグラフである。したがって、ＤＣＲ－２ＰＢＤは、Ｔ細胞に対する抗原提示を阻害せず、Ｔ細胞は分裂できる。

【図16】図１６Ａは、ＨＬ－６０異種移植マウスモデルにおいて、in vivoにおけるＡＤＣの効力を試験するアプローチを表すフローである。５×１０^６個のＨＬ－６０細胞をマウスに注射した。図１６Ｂは、ＰＢＳ、ＣＭＲＦ－８１ＰＢＤまたはＤＣＲ－２ＰＢＤにより治療した後における、ＨＬ－６０異種移植マウスの生存を表すグラフである。

【図17】図１７は、ＰＢＳ、ＣＭＲＦ－８１ＰＢＤまたはＤＣＲ－２ＰＢＤによってＵ９３７ ＮＳＧ異種移植マウスを治療した後における（投与量：１５０μｇ／ｋｇおよび３００μｇ／ｋｇ）、Ｕ９３７腫瘍の体積に対する影響を表すグラフである。

【図18】図１８は、ＰＢＳ、ＣＭＲＦ－８１ＰＢＤまたはＤＣＲ－２ＰＢＤによって治療した後における（投与量：１５０μｇ／ｋｇおよび３００μｇ／ｋｇ）、Ｕ９３７異種移植マウスの生存を表すグラフである。

【図19】図１９は、ＤＣＲ－２ＰＢＤ単独、フルダラビン単独、またはＤＣＲ－２ＰＢＤとフルダラビンとの組合せの、ＨＬ－６０細胞に対する用量依存性の細胞毒性を表すグラフである。

【図20】図２０Ａは、ＤＣＲ－２－ＰＢＤまたはアイソタイプ－ＰＢＤを注射してから７日後のヒト化ＮＳＧマウスのＢＭにおける、ＣＤ３４^＋細胞およびＣＤ３４^＋ＣＤ３８^－ＣＤ９０^＋細胞の総細胞数を表すグラフである（ＤＣＲ－２－ＰＢＤはｎ＝６、アイソタイプ－ＰＢＤはｎ＝５）。**は、Ｐ＜０．０１を表す（アイソタイプ対照コホートと比較すると、ＤＣＲ－２－ＰＢＤコホートではＣＤ３４^＋細胞およびＣＤ３４^＋ＣＤ３８^－ＣＤ９０^＋細胞が減少した）。図２０Ｂは、ＤＣＲ－２－ＰＢＤおよびアイソタイプ－ＰＢＤで治療したヒト化マウスの、血液１μＬあたりの細胞数を表すグラフである。**は、Ｐ＜０．０１を表す（アイソタイプ－ＰＢＤコホートと比較すると、ＤＣＲ－２－ＰＢＤコホートの末梢血では、骨髄細胞が減少していた）。

【図21】図２１は、マウスに注射してから６日後における、ＢＭにおける初代ＡＭＬ細胞の計数を表すグラフである。アイソタイプ－ＰＢＤおよびＤＣＲ－２－ＰＢＤで治療した（ＤＣＲ－２－ＰＢＤはｎ＝６、アイソタイプ－ＰＢＤはｎ＝５）。*は、Ｐ＜０．０５を表す（アイソタイプ－ＰＢＤコホートと比較すると、ＤＣＲ－２－ＰＢＤコホートでは骨髄における初代ＡＭＬ細胞が減少していた）。

【発明を実施するための形態】

【0063】

ＣＤ３００ｆは、免疫調節分子であるＣＤ３００ファミリーのメンバーであり、ヒト染色体１７ｑ２５に位置する遺伝子複合体によってコードされている。ＣＤ３００ｆは、膜貫通糖タンパク質である。その細胞質領域は、抑制性の免疫受容体抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）と、ホスファチジルイノシチド－３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）リン化部位との両方を有している。ＣＤ３００ファミリーの他のメンバーと同様に、ＣＤ３００ｆは、Ｉｇ様細胞外ドメインを１個有している膜貫通糖タンパク質である。

【0064】

本発明者らは既に、ＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに特異的に結合するモノクローナル抗体を単離している。本明細書においては、このモノクローナル抗体をＤＣＲ－２と称する。ＤＣＲ－２は、ＷＯ２０１８／０９４４６０に開示されている。ＤＣＲ－２を産生するハイブリドーマは、２０１６年９月２７日に、ブダペスト条約に基づいて、CellBank Australia（214 Hawkesbury Rd., Westmead, NSW 2145, Australia）に寄託されている（アクセッション番号：ＣＢＡ２０１６００２９）。

【0065】

ＤＣＲ－２は、ＡＭＬおよびＣＤ３４^＋ＣＤ３８^－白血病幹細胞（ＬＳＣ）において発現している複数のＣＤ３００ｆのアイソフォームに結合する。

【0066】

この度、本発明者らが見出したところによると、ＤＣＲ－２が１つ以上のピロロベンゾジアゼピン部分（１つ以上のピロロベンゾジアゼピン二量体など）に連結されると、効果的に白血病細胞を殺傷する。

【0067】

したがって、一態様により提供されるのは、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分（より典型的には、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン二量体）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートである。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0068】

典型的には、ピロロベンゾジアゼピン部分は、ピロロベンゾジアゼピン二量体である。

【0069】

本技術分野で周知の任意の方法により、ＰＢＤ二量体と本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片とを連結できる。ＰＢＤ二量体と抗体とを連結する方法は本技術分野で周知である。例えば、ＷＯ２０１１／１３０６１３、ＷＯ２０１１／１３０６１６、ＷＯ２０１１／１３０５７８、ＷＯ２０１６／０６４７４９、ＵＳ２０１６０２５６５６１に開示されている。

【0070】

一実施形態において、イムノコンジュゲートは、下記式（Ｉ）またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む。
Ａｂ－（Ｌ－Ｐ）_ｍ （Ｉ）
式中、
Ａｂは、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片である。
Ｌは、リンカーである。
Ｐは、ピロロベンゾジアゼピン二量体である。
ｍは、１～１０から選択される整数である。典型的には、ｍは、１、２、３または４である。

【0071】

一実施形態において、イムノコンジュゲートは、下記式（Ｉａ）またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む。

【化1】

式中、
Ａｂは、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片である。
Ｒ_２は、Ｃ_１～Ｃ_６アルキレンまたは下記である。

【化2】

Ｌは、リンカーであるか、または存在しない。
Ｒ_１は、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル（メチルなど）または下記である。

【化3】

ｎは、０または１である。
ｍは１、２、３または４である。

【0072】

他の実施形態において、イムノコンジュゲートは、下記式（Ｉｂ）またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む。

【化4】

式中、
Ａｂは、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片である。
Ｒ_２はＣ_１～Ｃ_６アルキル（メチルなど）または下記である。

【化5】

Ｌは、リンカーであるか、または存在しない。
Ｒ_１は、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル（メチルなど）または下記である。

【化6】

Ｒ_５は、下記である。

【化7】

ｎは、０または１である。
ｍは、１、２、３または４である。

【0073】

リンカーは、抗体またはＰＢＤ二量体の機能に悪影響を及ぼすことなくＰＢＤ二量体と抗体とを複合体化させる、任意のリンカーでありうる。抗体薬物複合体の作製に好適なリンカーは、本技術分野で周知である。例えば、ＵＳ２０１６０３０３２４７、ＵＳ２０１６０３６７６９９、ＵＳ２０１８０１４７２９４、ＵＳ６，２１４，３４５、ＷＯ２０１６／０６４７４９、ＵＳ２０１６０２５６５６１に開示されている。

【0074】

いくつかの実施形態において、リンカーは、切断可能なリンカーである。切断可能なリンカーは、ｐＨ感受性またはプロテアーゼ感受性のリンカーでありうる。いくつかの実施形態において、切断可能なリンカーは、２アミノ酸長以上のペプチジルユニットを有している。典型的には、切断可能なリンカーは、細胞内のペプチダーゼ酵素またはプロテアーゼ酵素に対して感受性を有している。ペプチジルユニットの例としては、Ｐｈｅ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔが挙げられる。いくつかの実施形態において、切断可能なリンカーは、ＰＢＤ二量体に直接的に連結された切断可能なペプチジルユニット（Ｐｈｅ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａなど）を有している。他の実施形態において、切断可能なペプチジルユニットは、さらなるユニット（スペーサーなど）を介してＰＢＤ二量体に連結されている。

【0075】

いくつかの実施形態において、切断可能な第１ペプチジルユニットはＰＢＤ二量体に直接連結されており、切断可能な第２ペプチジルユニットは抗体に直接連結されている。いくつかの実施形態において、切断可能な第１ペプチジルユニットおよび第２ペプチジルユニットは、同じである。いくつかの実施形態において、切断可能な第１ペプチドユニットおよび第２ペプチドユニットは、異なっている。

【0076】

抗体とリンカーとの間の結合は、チオエーテル結合、ジスルフィド結合、アミド結合またはエステル結合を介していてもよい。一実施形態において、リンカーと抗体との連結は、抗体のシステイン残基のチオール基とリンカーのマレイミド基とを介している。

【0077】

いくつかの実施形態において、リンカーは、切断不可能なリンカーである。

【0078】

種々の実施形態において、リンカーは、Ｃ_１～Ｃ_６アルキレン、Ｃ_１～Ｃ_６ヘテロアルキレン、Ｃ_２～Ｃ_６アルケニレン、Ｃ_２～Ｃ_６ヘテロアルケニレン、Ｃ_２～Ｃ_６アルキニレン、Ｃ_２～Ｃ_６ヘテロアルキニレン、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキレン、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクロアルキレン、Ｃ_６～Ｃ_１４アリーレンまたはＣ_６～Ｃ_１４ヘテロアリーレンを有している。

【0079】

一実施形態において、イムノコンジュゲートに含まれているリンカーは、下記構造を有する。

【化8】

式中、Ｒ_３は、下記（ａ）～（ｄ）からなる群より選択される。
（ａ）Ｃ_１～Ｃ_６アルキレン
（ｂ）下記式（式中、ｑは１～６の整数であり、ｒは１～１５の整数である）

【化9】

（ｃ）下記式（式中、ｑは１～６の整数であり、Ｒ_４はＣ_１～Ｃ_６アルキレンである）

【化10】

（ｄ）下記式（式中、ｑは１～６の整数である）

【化11】

【0080】

一実施形態において、イムノコンジュゲートに含まれているリンカーは、下記構造を有する。

【化12】

式中、
ｑは、１～６の整数である。
ｒは、１～１５の整数（典型的には１～１２の整数であり、より典型的には１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０からなる群から選択される整数）である。一実施形態において、ｒは２である。

【0081】

一実施形態において、イムノコンジュゲートに含まれているリンカーは、下記構造を有する。

【化13】

【0082】

一実施形態において、イムノコンジュゲートは、下記構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。

【化14】

式中、
Ａｂは本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片である。
ｍは、１、２、３または４である。

【0083】

実施例に示す通り、本発明者らが見出したところによると、ＤＣＲ－２は、それ単独では、ＡＭＬのＮＯＳ／ＳＣＩＤマウスモデルにおいて生存を延長したり疾患の負荷を軽減したりしない。しかし、ピロロベンゾジアゼピン二量体と連結させると、得られるイムノコンジュゲートには以下の特徴が見られた。
（ａ）ＡＭＬ細胞を充分に殺傷する。
（ｂ）ＣＤ３００ｆ－ｖｅ細胞をバイスタンダー的に殺傷する。
（ｃ）ＰＢＤ二量体と結合したＣＭＲＦ－８１ｍＡｂよりも、ＨＬ－６０を接種したＮＳＧマウスの生存を延長する。
（ｄ）ＰＢＤ二量体と結合したＣＭＲＦ－８１ｍＡｂよりも、Ｕ９３７を接種したマウスの腫瘍増殖を遅らせ、生存を延長する。
（ｅ）フルダラビンと相乗的に作用し、細胞毒性作用を増強する。

【0084】

一態様において、本開示は、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分（典型的には、１つ以上のピロロベンゾジアゼピン二量体）に結合した抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートに関する。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに特異的に結合する。前記抗体またはその抗原結合断片は、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）モノクローナル抗体ＤＣＲ－２の重鎖可変領域の相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と同一であるＣＤＲ１、モノクローナル抗体ＤＣＲ－２の重鎖可変領域の相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と同一であるＣＤＲ２および／またはモノクローナル抗体ＤＣＲ－２の重鎖可変領域の相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と同一であるＣＤＲ３；
（ｂ）下記（ｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）モノクローナル抗体ＤＣＲ－２の軽鎖可変領域の相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と同一であるＣＤＲ１、モノクローナル抗体ＤＣＲ－２の軽鎖可変領域の相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と同一であるＣＤＲ２および／またはモノクローナル抗体ＤＣＲ－２の軽鎖可変領域の相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と同一であるＣＤＲ３。

【0085】

配列表に記載のアミノ酸および核酸配列を、表１に示す。

【0086】

【表1】

【0087】

ＤＣＲ－２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
Ｍ Ｅ Ｓ Ｇ Ｇ Ｇ Ｌ Ｖ Ｑ Ｐ Ｇ Ｇ Ｐ Ｌ Ｋ Ｌ Ｓ Ｃ Ａ Ａ Ｓ Ｇ Ｆ Ｇ Ｆ Ｓ Ｇ Ｓ Ｗ Ｍ Ｓ Ｗ Ｖ Ｒ Ｑ Ａ Ｐ Ｇ Ｋ Ｇ Ｌ Ｅ Ｗ Ｉ Ｇ Ｑ Ｉ Ｎ Ｐ Ｄ Ｓ Ｓ Ｔ Ｉ Ｎ Ｙ Ｔ Ｐ Ｓ Ｌ Ｋ Ｄ Ｋ Ｆ Ｉ Ｉ Ｓ Ｒ Ｄ Ｎ Ａ Ｋ Ｎ Ｔ Ｌ Ｙ Ｌ Ｑ Ｉ Ｎ Ｋ Ｖ Ｒ Ｓ Ｅ Ｄ Ｔ Ａ Ｌ Ｙ Ｙ Ｃ Ａ Ｒ Ｒ Ｇ Ｆ Ｆ Ｅ Ｇ Ｙ Ｓ Ａ Ｗ Ｆ Ａ Ｙ Ｗ （配列番号１）
ＤＣＲ－２の重鎖可変領域のＣＤＲ１のアミノ酸配列は、ＧＦＧＦＳＧＳＷ（配列番号２）である。

【0088】

ＤＣＲ－２の重鎖可変領域のＣＤＲ２のアミノ酸配列は、ＩＮＰＤＳＳＴＩ（配列番号３）である。

【0089】

ＤＣＲ－２の重鎖可変領域のＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＡＲＲＧＦＦＥＧＹＳＡＷＦＡＹ（配列番号４）である。

【0090】

ＤＣＲ－２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
Ｉ Ｌ Ｍ Ｔ Ｑ Ｔ Ｐ Ｋ Ｆ Ｌ Ｌ Ｖ Ｓ Ａ Ｇ Ｄ Ｒ Ｖ Ｔ Ｉ Ｔ Ｃ Ｋ Ａ Ｓ Ｑ Ｓ Ｖ Ｓ Ｎ Ｄ Ｖ Ａ Ｗ Ｙ Ｑ Ｑ Ｋ Ｐ Ｇ Ｑ Ｓ Ｐ Ｓ Ｌ Ｌ Ｉ Ｙ Ｙ Ａ Ｓ Ｎ Ｒ Ｎ Ｔ Ｇ Ｖ Ｐ Ｄ Ｒ Ｆ Ｔ Ｇ Ｓ Ｇ Ｙ Ｅ Ｔ Ｄ Ｆ Ｔ Ｆ Ｔ Ｉ Ｓ Ｔ Ｖ Ｑ Ａ Ｅ Ｄ Ｌ Ａ Ｖ Ｙ Ｆ Ｃ Ｑ Ｑ Ｄ Ｙ Ｔ Ｓ Ｐ Ｗ Ｔ Ｆ Ｇ Ｇ Ｇ （配列番号５）

【0091】

ＤＣＲ－２の軽鎖可変領域のＣＤＲ１のアミノ酸配列は、ＱＳＶＳＮＤ（配列番号６）である。

【0092】

ＤＣＲ－２の軽鎖可変領域のＣＤＲ２のアミノ酸配列は、ＹＡＳ（配列番号７）である。

【0093】

ＤＣＲ－２の軽鎖可変領域のＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＱＱＤＹＴＳＰＷＴ（配列番号８）である。

【0094】

したがって、本開示は一態様において、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン部分（典型的には、１つ以上のピロロベンゾジアゼピン二量体）に連結された抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートに関する。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに特異的に結合し、下記（ａ）および／または（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）ＧＦＧＦＳＧＳＷ（配列番号２）を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＩＮＰＤＳＳＴＩ（配列番号３）を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／またはＡＲＲＧＦＦＥＧＹＳＡＷＦＡＹ（配列番号４）を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）ＱＳＶＳＮＤ（配列番号６）を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＹＡＳ（配列番号７）を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／またはＱＱＤＹＴＳＰＷＴ（配列番号８）を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0095】

一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0096】

一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、下記（ａ）および／または（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列；
（ｂ）下記（ｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列。

【0097】

一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、下記（ａ）または（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0098】

一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列と同一である相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0099】

一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号１で表されるアミノ酸配列と１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0100】

一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号５で表されるアミノ酸配列と１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0101】

種々の実施形態において、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、下記（ａ）～（ｅｅ）を含む：
（ａ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｃ）配列番号５で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および、配列番号５で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および、配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｈ）配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；
（ｉ）配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、および、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；
（ｋ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、および、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｌ）配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｍ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｎ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｏ）配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
（ｐ）配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｑ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、および、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
（ｒ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、および、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｓ）配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｔ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｕ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、および、配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
（ｗ）配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、および、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｘ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、および、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
（ｙ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、および、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｚ）配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ａａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｂｂ）配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列を含み、かつ、配列番号２で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
（ｃｃ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列を含み、かつ、配列番号６で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｄｄ）配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列を含み、かつ、配列番号２で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびに、配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列を含み、かつ、配列番号６で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｅｅ）配列番号１５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および、配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。

【0102】

一実施形態において、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0103】

一実施形態において、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0104】

一実施形態において、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。

【0105】

一実施形態において、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0106】

一実施形態において、特異的にＣＤ３００ｆに結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0107】

一実施形態において、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、下記を含む：
配列番号２で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；および、
配列番号６で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域。

【0108】

一実施形態において、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、下記を含む：
配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、かつ、配列番号２で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；および、
配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、かつ、配列番号６で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域。

【0109】

一実施形態において、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、下記を含む：
配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、かつ、配列番号２で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；および、
配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、かつ、配列番号６で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域。

【0110】

２つのアミノ酸配列間の同一性（％）は、本技術分野で周知の任意のアラインメントアルゴリズムを用いて決定できる。例えば、配列解析プログラムのＦＡＳＴＡパッケージ（Lipman & Pearson, (1985) Science 227(4693): 1435-1441）、ＢＬＡＳＴ（Altschul et al. J. Mol. Biol. 215(3):403-410）が挙げられる。

【0111】

ＤＣＲ－２は、２０１６年９月２７日にブダペスト条約に基づいてCellBank Australia（214 Hawkesbury Road, Westmead, NSW 2145, Australia）に寄託されたハイブリドーマから得られる（アクセッション番号：ＣＢＡ２０１６００２９）。ブダペスト条約に基づき寄託された、アクセッション番号：ＣＮＡ２０１６００２９のハイブリドーマは、ＤＣＲ－２を産生する。

【0112】

イムノコンジュゲートとは、薬物などの部分と連結している抗原結合タンパク質を表す。典型的には、イムノコンジュゲートは、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）である。

【0113】

抗体とは、抗原に対して特異的に結合できる免疫グロブリン分子を表す。抗体は、組換え抗体または修飾抗体であってもよく、キメラ抗体、ヒト化抗体、脱免疫化抗体、ＣＤＲ移植抗体、二重特異性抗体、ヒト抗体などが挙げられる。全長抗体は、典型的には、２本の重鎖に共有結合している２本の軽鎖を含む。全長抗体の重鎖は、それぞれ、重鎖可変領域および重鎖定常領域を含む。全長抗体の軽鎖は、それぞれ、軽鎖可変領域および軽鎖定常領域を含む。全長抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＡのうち任意のタイプでありうる。一実施形態において、抗体は、ＩｇＧである。

【0114】

本明細書において用いられるとき、抗体の「抗原結合断片」は、抗体の抗原結合ドメインを含み、典型的には、全長抗体と同じエピトープに特異的に結合する抗体の一部を含む。典型的には、抗体の抗体断片は、抗体の重鎖および／または軽鎖の可変領域の一部を含む。典型的には、抗原結合断片は、(i)重鎖可変領域のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域および／またはＣＤＲ３領域、および／または、(ii)軽鎖可変領域のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域および／またはＣＤＲ３領域を含む。より典型的には、抗原結合断片は、(i)重鎖可変領域のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤＲ３領域、および／または、(ii)軽鎖可変領域のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤＲ３領域を含む。さらに典型的には、抗原結合断片は、(i)重鎖可変領域のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤＲ３領域、および、(ii)軽鎖可変領域のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体の抗原結合断片は、抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。重鎖可変領域および軽鎖可変領域の部分は、異なるポリペプチド鎖に位置していてもよいし（Ｆｖ断片など）、軽鎖可変領域および重鎖可変領域がペプチドリンカーで連結されている１本のポリペプチド鎖に位置していてもよい（ｓｃＦｖタンパク質）。抗体の抗原結合断片の例としては、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖ、ｓｃＦｖが挙げられる。

【0115】

本明細書において用いられるとき、抗体の抗原結合断片には、抗体の抗原結合ドメインを含む１つ以上のポリペプチドが含まれる（Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖ、ｓｃＦｖなど）。

【0116】

「抗原結合ドメイン」とは、抗原に特異的に結合できる抗体の領域を表す。典型的には、抗原結合ドメインは、(i)抗体の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３、および／または、(ii)抗体の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含む。より典型的には、抗原結合ドメインは、抗体の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、および／または、抗体の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含む。さらに典型的には、抗原結合ドメインは、抗体の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに、抗体の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。

【0117】

用語「可変領域」とは、抗体の軽鎖および／または重鎖の部分であって、抗原に特異的に結合できる部分を表す。可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。フレームワーク領域は、可変領域のうち、相補性決定領域以外の部分である。

【0118】

用語「相補性決定領域」とは、抗体の軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域の可変領域の３つのアミノ酸配列のうちの１つを表し、抗体が抗原に対して特異的に結合する能力の主要な原因である。軽鎖および重鎖の可変領域の３つの相補性決定領域を、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と称する。

【0119】

軽鎖および重鎖の可変領域のＣＤＲ領域およびフレームワーク（ＦＲ）領域を決定する方法は、本技術分野で周知である。例えば、ＣＤＲおよびＦＲに割り当てられるアミノ酸の位置は、Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institute of Health, Bethesda, MD, 1987 and 1991; Enhanced Clothia Numbering Scheme; Clothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917; Clothia et al. Nature 342: 877-883; Honnegher and Plukthun, J. Mol. Biol. 309: 657-670.に従って定義できる。抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに特異的に結合する。本明細書において用いられるとき、「ＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片」とは、他の抗原と比較するとＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに対して、より頻繁に、より迅速に、より長時間にわたって、またはより高い親和性で相互作用する抗体またはその抗原結合断片である。

【0120】

抗体の可変ドメインは、本技術分野で周知の従来技術によってクローニングできる（例えば、Sambrook and Russell, Eds, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3^rdEd, vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001を参照）。一般的に、抗体（マウス抗体など）の軽鎖可変領域および重鎖可変領域の配列は、種々の分子クローニング手法により得られる（ＲＴ－ＰＣＲ、５’－ＲＡＣＥ、ｃＤＮＡライブラリースクリーニングなど）。

【0121】

本明細書において用いられるとき、キメラ抗体とは、ある種の抗体（典型的にはマウス抗体）の相補性決定領域（ＣＤＲ；典型的には可変領域）と、抗体分子の定常ドメインとを含む抗体タンパク質を表す。いくつかの実施形態において、フレームワーク領域（ＦＲ）は、他の種（ヒトなど）に由来する。

【0122】

ヒト化抗体とは、キメラ抗体の一種である。ヒト化抗体では、ＣＤＲのアミノ酸配列がある種（マウスなど）の抗体に由来しており、定常領域のアミノ酸配列が（および、典型的にはフレームワーク領域も）ヒト抗体に由来する。

【0123】

一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、キメラ抗体である。このキメラ抗体は、ＤＣＲ－２の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、典型的にはＤＣＲ－２のフレームワーク領域（ＦＲ）とを含む。キメラ抗体は、ヒト抗体の軽鎖および重鎖の定常領域を含んでいてもよい。キメラ化モノクローナル抗体に由来する抗体成分を使用することにより、マウス定常領域の免疫原性に伴う潜在的な問題が軽減される。典型的には、抗体は、ヒト化抗体である。マウス抗体および抗体断片のヒト化は、当業者にとって周知である（例えば、ＵＳ５２２５５３９、ＵＳ６０５４２９７、ＵＳ７５６６７７１に開示されている）。例えば、ヒト化モノクローナル抗体は、(i)マウス免疫グロブリンの重鎖可変鎖および軽鎖可変鎖から、マウスの相補的決定領域をヒトの可変領域に移植し、次に、(ii)フレームワーク領域におけるマウスの残基をヒトの残基で置換することにより、作製できる。ヒトの定常領域配列に加えてヒトのフレームワーク領域配列を使用することにより、ＨＡＭＡ反応を惹起する機会がさらに減少する。

【0124】

抗体は、充分に確立された種々の技術により、血清およびハイブリドーマ培養物から単離および精製できる。単離技術の例としては、プロテインＡセファロースを使用したアフィニティクロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィが挙げられる。例えば、Coligan, pp.2.7.1-2.7.12, pp.2.9.1-2.9.3を参照。また、Baines et al., "Purification of Immunoglobulin G (IgG)," in Methods in Molecular Biology, Vol. 10, pages 79-104 (The Humana Press, Inc. 1992)をも参照。

【0125】

いくつかの実施形態において、抗体の抗原結合断片は、抗体の重鎖および／または軽鎖の可変領域の部分を含む。重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域の部分は、異なるポリペプチド鎖に位置していてもよいし（Ｆｖ断片など）、軽鎖可変領域および重鎖可変領域がペプチドリンカーにより連結されている１本のポリペプチド鎖に位置していてもよい（ｓｃＦｖタンパク質など）。抗体断片の例としては、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖ、ｓｃＦｖが挙げられる。典型的には、抗体断片は、(i)重鎖可変領域のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤＲ３領域、および／または、(ii)軽鎖可変領域のＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤＲ３領域を含む。特定のエピトープを認識する抗体断片は、公知の技術により作製できる。例えば、Ｆ（ａｂ’）_２断片は、抗体分子をペプシンで消化することにより作製できる。上記の方法および他の方法は、例えば、Coligan, pp.2.8.1-2.8.10, pp.2.10.-2.10.4に開示されている。あるいは、Ｆａｂ’発現ライブラリを構築して、所望の特異性を有するＦａｂ’断片を迅速かつ容易に同定することもできる。

【0126】

いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、天然に存在するＩｇＧよりも半減期が短い。造血幹細胞移植においては、移植されるドナー組織への損傷を低減するために、抗体の半減期を短縮することが有用である。例えば、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）認識部位を除去することにより、抗体の半減期を短縮できる。ＩｇＧ抗体のＦｃＲｎ認識部位は、ＩｇＧのＦｃ部分のＣＨ２～ＣＨ３領域に存在する。ＩｇＧのＣＨ２～ＣＨ３領域を取り除くと、ＦｃＲｎ認識領域が除去され、これにより抗体の半減期が短縮される。Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖ、ｓｃＦｖなどの抗体断片は、ＦｃＲｎ認識部位を欠いている。

【0127】

抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を作製する方法は本技術分野で周知である。例えば、Alley et al., Current Opinion in Chemical Biology, 2010 14:1-9、ＵＳ２０１６０３０３２４７、ＵＳ２０１６０３６７６９９、ＵＳ２０１８０１４７２９４、ＷＯ２０１６／０６４７４９、ＵＳ９３９９６４１、ＵＳ１００１０６２４に開示されている。ＰＢＤ二量体および抗体（またはその抗原結合断片）を複合体化させるためのＰＢＤ二量体およびリンカーの組合せは、例えば、ＷＯ２０１１／１３０６１３、ＷＯ２０１１／１３０６１６、ＷＯ２０１１／１３０５７８、ＷＯ２０１６／０６４７４９に開示されている。さらに、ＡＤＣを調製するためのキットが、例えば、Levena Biopharma, CAから市販されている。

【0128】

本明細書に記載のイムノコンジュゲートを、医薬組成物として製剤化してもよい。したがって、さらなる態様が提供するのは、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン分子（典型的には、１つ以上のピロロベンゾジアゼピン二量体）に連結された本明細書に記載の単離されたＤＣＲ－２抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容されるキャリアとを含む医薬組成物を提供する。

【0129】

「薬学的に許容されるキャリア」とは、当該キャリアが組成物に含まれる他の成分との適合性を有しており、対象に対して有害でないことを表す。組成物は、下記に記載の他の治療薬を含有していてもよい。例えば、従来の液状ビヒクルまたは稀釈剤に加えて、所望の投与方法にとって適当な種類の医薬品添加物（賦形剤、結合剤、保存剤、安定剤など）を利用して、組成物を製剤化してもよい。製剤化は、医薬品製造分野で周知の技術によることができる（例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., 2005, Lippincott Williams & Wilkinsを参照）。

【0130】

医薬組成物の形態は、典型的には、無菌の注射用水性懸濁液である。この懸濁液は、公知の技術に従って製剤化でき、水性懸濁液の製造に適した添加剤との混合物の形で有効成分を含有している。このような添加剤の例としては、懸濁剤（カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、アラビアガムなど）が挙げられる。分散剤または湿潤剤の例としては、天然のホスファチド（例えば、レシチン、ポリオキシエチレンステアリン酸エステルなどのアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合物、ヘプタデカエチレンオキシセタノールなどのエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合物、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレイン酸エステルなどのエチレンオキシドと脂肪酸由来部分エステルおよびヘキシトールとの縮合物、ポリエチレンソルビタンモノオレイン酸エステルなどのエチレンオキシドと脂肪酸由来部分エステルおよびヘキシトール無水物との縮合物）が挙げられる。水性懸濁液はまた、１つ以上の保存剤（エチルベンゾエート、ｎ－プロピルベンゾエート、ｐ－ヒドロキシベンゾエートなど）、１つ以上の着色剤、１つ以上の香料、１つ以上の甘味料（スクロース、サッカリンなど）を含んでもよい。

【0131】

無菌の注射用調製物はまた、非毒性かつ非経口的に許容される稀釈剤または溶媒（１，３－ブタンジオールなど）中の、無菌の注射用溶液または懸濁液であってもよい。採用できる許容可能なビヒクルおよび溶媒の例としては、水、リンゲル液、生理食塩水が挙げられる。さらに、無菌の不揮発性油も、溶媒または懸濁媒として常用できる。この目的には、無刺激性の任意の不揮発性油を使用できる（合成されたモノジグリセリドまたはジグリセリドなど）。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も、注射用製剤の調製において使用される。

【0132】

ＷＯ２０１８／０９４４６０に開示されている通り、ＤＣＲ－２は、ＣＤ３００ｆを発現する細胞に結合する（造血幹細胞および前駆細胞、ＡＭＬ細胞、白血病幹細胞など）。

【0133】

したがって、本明細書に記載のイムノコンジュゲートは、ＣＤ３００ｆの発現に関連する状態に罹患している対象を治療するために使用できる。したがって、さらなる態様が提供するのは、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン分子（典型的には、１つ以上のピロロベンゾジアゼピン二量体）に結合した抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの有効量を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、ＣＤ３００ｆの発現に関連する状態（ＡＭＬなど）を治療する方法である。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一（典型的には、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0134】

一実施形態において、ＣＤ３００ｆの発現に関連する状態は、骨髄性白血病である。一実施形態において、骨髄性白血病は、ＡＭＬである。

【0135】

種々の実施形態においては、本明細書に記載のイムノコンジュゲートの有効量を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、ＣＤ３００ｆの発現に関連する状態（ＡＭＬなど）を治療する方法が提供される。

【0136】

典型的には、イムノコンジュゲートを、本明細書に記載の薬学的に許容される組成物として投与する。

【0137】

同種間造血幹細胞移植に伴う病的状態の大部分は、非特異的で毒性のある前処置剤に起因している。レシピエントの造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）を上首尾に定着させるには、これを除去することが求められる。本明細書に記載のＣＤ３００ｆイムノコンジュゲートは、ＨＳＰＣ、ＡＭＬ細胞株およびコロニー形成単位を効果的に枯渇させる。実施例に記載の通り、本明細書に記載のＣＤ３００ｆイムノコンジュゲートを単回注射すると、複数の細胞株が含まれているマウス異種移植片の生存を延長し、移植された初代ＡＭＬを枯渇させる。ヒト化マウスモデルにおいて、抗体複合体を単回注射すると、ＣＤ３４^＋ＨＳＰＣおよびＣＤ３４^＋ＣＤ３８^－ＣＤ９０^＋ＨＳＣが枯渇される。

【0138】

ＣＤ３００ｆを標的とすることにより、ＨＳＰＣおよびＡＭＬ細胞の効率的な枯渇させられる。このことは、本明細書に記載のＣＤ３００ｆイムノコンジュゲートを同種間造血幹細胞移植のための前処置レジメンにおいて使用することができ、それゆえ、放射線照射またはアルキル化剤療法などの非特異的で毒性のある前処置剤を使用しなくて済むことを意味している。

【0139】

したがって、一態様において提供されるのは、造血幹細胞移植のために対象を準備する方法であって、抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む方法である。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、少なくとも１つの細胞毒性剤（少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン二量体など）に連結されている。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域。

【0140】

さらなる態様が提供するのは、抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの有効量を対象に投与する工程を含む、対象における造血幹細胞を枯渇させる方法である。ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、少なくとも１つの細胞毒性剤（少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン二量体など）に連結されされている。一実施形態において、前記抗体またはその抗原結合断片は、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域。

【0141】

本明細書において用いられるとき、細胞毒性剤とは、細胞と接触するか、または細胞に導入されたときに、細胞に対して細胞傷害効果を有する化合物である。細胞傷害効果とは、細胞死または細胞生存率の低下でありうる。

【0142】

実施例に記載の通り、本発明者らがさらに見出したところによると、ＡＭＬ細胞株ＨＬ－６０をＤＣＲ－２と連結したピロロベンゾジアゼピン二量体（ＤＣＲ－２ＰＢＤ）およびフルダラビンで処理すると、併用処置による細胞傷害効果は、ＤＣＲ－２ＰＢＤの細胞傷害効果およびフルダラビンの細胞傷害効果の合計よりも大きくなる。これに関連して本発明者らが見出したところによると、ＤＣＲ－２ＰＢＤとフルダラビンとの組合せの細胞傷害効果は、相乗的である。

【0143】

ＤＣＲ－２ＰＢＤとフルダラビンとの組合せ効果は相乗的である。そのため、本発明者らが予想するところによると、フルダラビンをＤＣＲ－２ＰＢＤと組合せて使用すると、より低濃度かつ認容可能な濃度でフルダラビンを使用できる。本発明者らが予想するところによると、この相乗効果は、造血幹細胞移植のために対象を準備するときに利用できる。放射線照射およびアルキル化剤による治療をなくし、使用するフルダラビンの濃度を低下させることにより、高濃度のフルダラビンの毒性のために従前は造血幹細胞移植が治療オプションとならなかった患者に移植を施せる可能性がある（高齢の対象、遺伝性障害に罹患している対象など）。

【0144】

したがって、一実施形態が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備する方法である。この方法は、ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、少なくとも１つのピロロベンゾジアゼピン二量体に連結されている抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの有効量と、リンパ球枯渇剤の有効量とを対象に投与する工程を含む。本明細書において用いられるとき、リンパ球枯渇剤とは、対象に投与したときにリンパ球を枯渇させる薬剤である。一実施形態において、リンパ球枯渇剤は、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域。

【0145】

一実施形態において、重鎖可変領域は配列番号１を含み、軽鎖可変領域は配列番号５を含む。

【0146】

一実施形態が提供するのは、造血幹細胞移植のために対象を準備するための医薬組成物である。この医薬組成物は、下記（１）および（２）を含む：
（１）ＣＤ３００ｆに特異的に結合し、少なくとも１つのＰＢＤ二量体に結合している抗体またはその抗原結合断片イムノコンジュゲート；
（２）リンパ球枯渇剤。

【0147】

一実施形態において、リンパ球枯渇剤は、フルダラビンまたはその薬学的に許容される塩である。

【0148】

一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、下記（ａ）および（ｂ）を含む：
（ａ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１で表されるアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号４で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
（ｂ）下記（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号５で表されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号６で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および／または配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）。

【0149】

一実施形態において、重鎖可変領域は配列番号１を含み、軽鎖可変領域は配列番号５を含む。

【0150】

本明細書に記載の医薬組成物は、任意の適切な手段により投与されうる。投与は、典型的には、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、皮内注射、脳槽内注射、点滴などの非経口投与である（例えば、無菌の注射用水溶液または懸濁液として）。投与は、典型的には、非毒性の薬学的に許容されるビヒクルまたは稀釈剤を含む投与単位製剤において行う。抗体またはその抗原結合断片を、例えば、即時放出または長期放出に適した形態で投与してもよい。即時放出または長期放出は、化合物を含む適切な医薬組成物の使用により達成できる。あるいは、特に長期放出の場合には、皮下インプラントまたは浸透圧ポンプなどの装置の使用によっても達成できる。

【0151】

投与のための医薬組成物は、投薬単位の形態で便利に提供してもよい。この形態は、薬学分野で周知の任意の方法により調製できる。一般的には、化合物と液体キャリアとを均一かつ密接に関連させることにより、医薬組成物を調製する。医薬組成物には、疾患の進行または状態に対して所望の効果を生じさせるのに充分な量の活性化合物が含まれている。本明細書において用いられるとき、用語「組成物」には、特定量の特定成分を含む製品に加えて、特定量の特定成分の組合せから直接的または間接的に生じる任意の製品が含まれることが意図される。

【0152】

薬学的に許容される塩の例としては、薬学的に許容されるカチオンの塩（ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩、アルキルアンモニウム塩など）；薬学的に許容される無機酸の酸付加塩（塩酸塩、オルトリン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、炭酸塩、ホウ酸塩、スルファミン酸塩、臭化水素酸塩など）；薬学的に許容される有機酸の塩（酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ムチン酸塩、グルコン酸塩、安息香酸塩、琥珀酸塩、シュウ酸塩、フェニル酢酸塩、トリハロ酢酸塩（トリフルオロ酢酸塩など）、メタンスルホン酸塩、トリハロメタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、サリチル酸塩、スルファニル酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、エデト酸塩、ステアリン酸塩、パルミチン酸塩、オレイン酸塩、ラウリン酸塩、パントテン酸塩、タンニン酸塩、アスコルビン酸塩、吉草酸塩など）が挙げられる。

【0153】

一般的に、用語「治療」とは、対象、組織または細胞に影響を及ぼし、所望の薬学的効果および／または生理学的効果を得ることを意味する。治療には、次の（ａ）～（ｃ）のいずれかが含まれる。（ａ）疾患が発生する傾向にあるが疾患を有するとは診断されていない対象において、疾患の発生を予防すること。（ｂ）疾患を阻害すること（すなわち、疾患の進行を阻止すること）。（ｃ）疾患の影響を軽減または改善すること（すなわち、疾患の影響を後退させること）。一実施形態においては、治療の結果、レシピエント対象において、ＣＤ３００ｆを発現している細胞（ＡＭＬ細胞および／またはＬＳＣ細胞など）の数が減少する。

【0154】

用語「対象」とは、本発明の方法による治療を必要とする疾患を有している、任意の動物を表す。霊長類（ヒトなど）に加えて、他の種々の哺乳動物を本発明の方法により治療できる。一例を挙げると、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、モルモット、ラット、または他のウシ類、ヒツジ類、ウマ類、イヌ類、ネコ類、齧歯類もしくはネズミ類の生物種などの哺乳動物を治療できる（ただし、これらに限定されない）。特に、イヌは、多発性骨髄腫を発症することが知られている。

【0155】

用語「治療有効量」とは、組織、系、動物またはヒトの生物学的反応または医学的反応であって、研究者、獣医師、医師または他の臨床家が求めている反応を惹起する、イムノコンジュゲートの量を表す。

【0156】

造血幹細胞移植およびＡＭＬの治療または予防において、適切な用量レベルは、一般的に約０．０１～５０ｍｇ／ｋｇ患者体重／日であり、単回投与であってもよいし、複数回投与であってもよい。用量は、好ましくは約０．１～約２５ｍｇ／ｋｇ／日であり、より好ましくは約０．５～約１０ｍｇ／ｋｇ／日である。適切な用量レベルは、約０．０１～２５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０５～１０ｍｇ／ｋｇ／日または約０．１～５ｍｇ／ｋｇ／日でありうる。この範囲内で、用量は、０．０５～０．５ｍｇ／ｋｇ／日または０．５～５ｍｇ／ｋｇ／日でありうる。

【0157】

理解されるであろうことには、任意の特定の患者のための投薬の特定の用量レベルおよび投与頻度は、変化することがあり、また種々の因子に依存する。因子の例としては、使用される特定の化合物の活性、化合物の代謝安定性および作用の長さ、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食事、投与方法および投与時刻、排泄速度、薬物の組合せ、特定の状態の重篤度、治療を受けている対象が挙げられる。

【0158】

また、本明細書において開示されるのは、本明細書に記載のイムノコンジュゲートを含む、ＣＤ３００ｆの発現に関連する状態（ＡＭＬなど）の治療のためのキットである。キットは、典型的には、イムノコンジュゲートで満たされた１つ以上の容器を含む。

【0159】

一実施形態において、キットは、１つ以上の容器に含まれるイムノコンジュゲートと、ＣＤ３００ｆの発現に関連する状態（ＡＭＬなど）の治療に有用な１つ以上の他の治療薬および／または造血幹細胞移植に有用な１つ以上の他の治療薬と、を含む。

【0160】

本明細書において用いられるとき、抗原に対して「特異的に結合する」抗体またはその抗原結合断片とは、他の抗原または細胞に対するときよりも、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／または、より高い親和性で当該抗原と反応または会合する、抗体またはその抗原結合断片である。例えば、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、他の抗原または細胞に対するときよりも、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／または、より高い親和性でＣＤ３００ｆと反応または結合する、抗体またはその抗原結合断片である。典型的には、ＣＤ３００ｆに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３００ｆの細胞外ドメインに特異的に結合する。したがって、抗体またはその抗原結合断片は、他の抗原または細胞に対するときよりも、ＣＤ３００ｆの細胞外ドメインとより頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／または、より高い親和性で反応または結合する。

【0161】

「抗体薬物複合体」（ＡＤＣ）とは、１つ以上の薬物（細胞毒素など）と複合体化している抗体またはその抗原結合断片である。典型的にはリンカーを介して複合体化している。

【0162】

本明細書において用いられるとき、用語「連結された(linked, coupled)」は、同じ意味であり、交換可能に使用されうる。

【0163】

本明細書において用いられるとき、「リンカー」とは、抗体またはその抗原結合断片と、薬物（例えば、細胞毒素）などの部分とを連結する分子である。リンカーは、典型的には、抗体に含まれるシステインのチオール基またはリシンのアミン基を介して抗体に連結されている。典型的には、チオール反応性基（マレイミドにおけるもののような二重結合など）、脱離基（クロロ基、ブロモ基、ヨード基、Ｒ－スルファニル基、スルホニル基など）、アミン反応性基（カルボキシル基、本明細書で定義される基など）との反応によって、リンカーは形成される。用語「リンカー」は、複合体化している状態のリンカーを表す際に使用される。このとき、リンカー、抗体（またはその抗原結合断片）および細胞毒素との間で結合が形成されるので、反応性末端の一方または両方は存在していない。

【0164】

本明細書において用いられるとき、用語「アルキル」および「アルキレン」とは、直鎖または分枝の飽和炭化水素基を表す。適切に使用されるとき、アルキル基またはアルキレン基は、特定の個数の炭素原子を有していることがある（Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６アルキレンなど）。これらの基は、１個、２個、３個、４個、５個または６個の炭素原子を有しており、炭素原子は直鎖状または分枝状に配置されている。好適なアルキレン基の例としては、メチレン、エチレン、ｎ－プロピレン、ｉ－プロピレン、ｎ－ブチレン、ｉ－ブチレン、ｔ－ブチレン、ｎ－ペンチレン、２－メチルブチレン、３－メチルブチレン、４－メチルブチレン、ｎ－ヘキシレン、２－メチルペンチレン、３－メチルペンチレン、４－メチルペンチレン、５－メチルペンチレン、２－エチルブチレン、３－エチルブチレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン、デシレンが挙げられる（ただし、これらには限定されない）。好適なアルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｉ－ブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、２－メチルブチル、３－メチルブチル、４－メチルブチル、ｎ－ヘキシル、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、４－メチルペンチル、５－メチルペンチル、２－エチルブチル、３－エチルブチル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルが挙げられる（ただし、これらには限定されない）。

【0165】

本明細書において用いられるとき、用語「アルケニレン」とは、炭素原子間に１つ以上の二重結合を有し、２～１０個の炭素原子を有する直鎖または分枝の炭化水素基を表す。適切に使用されるとき、アルケニレン基は、特定の数の炭素原子を有していることがある。例えば、「Ｃ_２～Ｃ_６アルケニレン」のＣ_２～Ｃ_６には、直線状または分枝状に配置されている２個、３個、４個、５個または６個の炭素原子を有する基が含まれる。アルケニレン基の例としては、エテニレン、プロペニレン、イソプロペニレン、ブテニレン、ブタジエニレン、ペンテニレン、ペンタジエニレン、ヘキセニレン、ヘキサジエニレン、ヘプテニレン、オクテニレン、ノネニレン、デセニレンが挙げられる（ただし、これらには限定されない）。

【0166】

本明細書において用いられるとき、用語「アルキニレン」とは、１つ以上の三重結合を有し、２～１０個の炭素原子を有する、直鎖または分枝の炭化水素基を表す。適切に使用されるとき、アルキニレン基は、特定の数の炭素原子を有していることがある。例えば、「Ｃ_２～Ｃ_６アルキニレン」のＣ_２～Ｃ_６には、直線状または分枝状に配置されている２個、３個、４個、５個または６個の炭素原子を有する基が含まれる。好適なアルキニレン基の例としては、エチニレン、プロピニレン、ブチニレン、ペンチニレン、ヘキシニレンが挙げられる（ただし、これらには限定されない）。

【0167】

本明細書において用いられるとき、用語「シクロアルキレン」とは、飽和環状炭化水素を表す。シクロアルキレン環は、特定の数の炭素原子を有していることがある。例えば、３～８員シクロアルキレン基には、３個、４個、５個、６個、７個または８個の炭素原子が含まれる。好適なシクロアルキレン基の例としては、シクロプロピレン、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロヘキシレン、シクロヘプチレン、シクロオクチレンが挙げられる（ただし、これらには限定されない）。

【0168】

本明細書において用いられるとき、用語「アリーレン」とは、安定な単環式、二環式または三環式の炭素環を意味しており、各環は最大で７個の原子を有しており、少なくとも１個の環は芳香族である。アリール基の例としては、フェニレン、ナフチレン、テトラヒドロナフチレン、インダニレン、フルオレニレン、フェナントレニレン、ビフェニレン、ビナフチレンが挙げられる（ただし、これらには限定されない）。

【0169】

本明細書において用いられるとき、用語「ヘテロアルキレン」「ヘテロアルキニレン」または「ヘテロシクロアルキレン」とは、少なくとも１個の炭素原子がヘテロ原子により置換されている炭化水素を表す。ヘテロ原子は、Ｎ、Ｎ（Ｒ）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）_２およびＯからなる群より独立して選択される。

【0170】

本明細書において用いられるとき、用語「ヘテロアリーレン」とは、安定な単環式、二環式または三環式の環を表しており、各環は最大で７個の原子を有しており、少なくとも１個の環は芳香族であり、少なくとも１個の環は１～４個のヘテロ原子を有している。ヘテロ原子は、Ｏ、ＮおよびＳからなる群より選択される。

【0171】

理解されたいことには、本明細書において用いられている用語は、特定の実施形態のみを記載するためのものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。本明細書および添付の特許請求の範囲において用いられるとき、単数形の「ａ」「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかに異なる場合を除き、複数への言及を包含している。したがって、例えば、「抗体(an antibody)」との言及は、複数の当該抗体を包含している。異なる定義がなされていない限り、本明細書において用いられている全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者が通常理解するものと同じ意味を有する。

【0172】

本明細書に記載のものと類似または均等の任意の材料および方法を使用して、本発明を実施または試験できる。しかし、好ましい材料および方法は、本明細書に記載のものである。

【0173】

本明細書に記載の全ての刊行物は、プロトコルおよび試薬を説明および開示する目的のために引用される。これらのプロトコルおよび試薬は、上記刊行物中に開示されており、本発明に関連して使用できる。本明細書のいかなる内容も、先の発明を理由に、本発明が上記刊行物中の開示に先行する権利がないことの自認として解釈されない。

【0174】

本明細書において言及されている全ての刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる。当業者であれば理解するであろうところによると、広汎に説明されている本発明の趣旨または範囲から逸脱することなく、特定の実施形態に示されているように、本発明に多数の変形および／または変更を施すことができる。したがって、本実施形態は、あらゆる点において例示的であり、限定的ではないと解釈すべきである。

【0175】

下記の特許請求の範囲および上述の本発明の説明においては、明示的な言明または必然的な含意に基づいて文脈上そうではない場合を除いて、単語「含む」およびその変化形(comprise, comprises, comprising)は、包括的な意味で使用される。すなわち、記載された特徴点が存在することを特定しているが、本発明の種々の実施形態において、さらなる特徴点の存在または追加を排除しない。

【0176】

本出願はオーストラリア特許出願第２０１９９０２７１４号の優先権を主張する。同出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0177】

本発明の性質を例示して、これをより明確に理解できるようにするために、以下に非限定的な実施例を提供する。

【実施例】

【0178】

造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）は、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性新生物、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、骨髄機能不全症候群、鎌状赤血球症、サラセミア、原発性免疫不全障害、遺伝性代謝障害、遺伝子改変自家移植などの多くの状態の治療に利用されている。

【0179】

造血幹細胞移植における治療関連死亡率（ＴＲＭ）は、特に６５歳超においては、依然として顕著である。ＨＳＣＴ前処置の一環としての、抗体により造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）を枯渇させる治療を開発すれば、ＨＳＰＣを枯渇させる従来の方法（アルキル化剤、放射線照射など）を減らしたりなくしたりできる可能性がある。

【0180】

ＣＤ３００ｆは、正常な骨髄性抗原提示細胞（ＡＰＣ）に見られる抑制性の受容体である（Borrego F. Blood. 2013;121(11):1951-1960; Clark et al. Trends Immunol. 2009; 30(5):209-217）。ＣＤ３００ｆは、ＡＭＬ細胞およびＨＳＰＣにおいて、高発現している（Korver et al. Leukemia. 2009;23(9):1587-1597; Abadir et al. Mol Oncol. 2019; 13(10):2107-2120）。本発明者らは、同種間ＨＳＣＴの前処置に抗ＣＤ３００ｆ ＡＤＣを用いて、伝統的な非特異的毒性物質を減少および／または不使用とすることにより、再発および毒性を低下させる方法を実証した。

【0181】

〔材料および方法〕
［組織サンプルの作製］
ＡＭＬ患者の血液サンプルおよび骨髄サンプル（ＢＭサンプル）は、Concord Repatriation General Hospital (CRGH)またはRoyal Prince Alfred (RPA) Hospital (Sydney Australia)において採取した。健康なドナーの末梢血サンプル（ＰＢサンプル）またはＢＭサンプルは、ＣＲＧＨにおいて採取した。臍帯血サンプル（ＣＢサンプル）は、Sydney CB bankにおいて採取した。Sydney Local District Human Research Ethics Committeeの倫理的承認の下、全てのドナーにインフォームド・コンセントを提供した（HREC/12/CRGH/59, HREC/11/CRGH/61 & 118）。Ficoll-Paque Plus（GE Healthcare）による密度勾配遠心分離を使用して、製造者のプロトコルに従い、単核細胞（ＭＣ）をサンプルから単離した。ＢＭ吸引液は、健康な参加者の後腸骨稜から採取した。２２ゲージの針にサンプルを通してＢＭ断片を破砕した後、上述したＭＣの単離に先立って濾過した。ヒト単球は、ＣＤ１４マイクロビーズによる選択によってＭＣから精製した（AutoMACS Pro（Miltenyi Biotec）を使用した）。

【0182】

［細胞株］
ＡＭＬ細胞株のＨＬ－６０およびＴＨＰ－１ならびに赤白血病細胞株のＨＥＬは、Christchurch School of Medicine, University of Otagoから取得した。Ｕ９７３、Ｚ－１３８およびＭｉｎｏ細胞株は、American Type Culture Collection（ＡＴＣＣ）から取得した。全ての細胞株は、１０％ＦＣＳ、２ｍＭ Gluta-MAX、１００Ｕ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含有するcomplete RPMI 1640（完全ＲＰＭＩ；ThermoFisher）中で維持した。

【0183】

［遺伝子発現］
ＡＭＬの遺伝子発現データは、Gene Expression Omnibus microarray dataset GSE14468（Wouters et al. Blood. 2009; 113(13):3088-3091）から検索した。ＨＳＰＣの遺伝子発現は、ＧＳＥ４２５１９、ＧＳＥ１７０５４およびＧＳＥ１９５９９から検索した（Rapin et al. Blood. 2014;123(6):894-904; Majeti et al. Proc Natl Acad Sci USA. 2009;106(9):3396-3401）。一連のマトリクスファイルをＲで解析し、ＣＤ３００ＬＦ（１５５３０４３＿ａ＿ａｔ）およびＣＤ３３（２０６１２０＿ａｔ）に対応するプローブＩＤおよびシグナル値を抽出した。GTExデータをRStudioで解析した。ＣＤ３００ＬＦおよびＣＤ３３について、組織タイプおよび１００万個の転写物あたりの転写データを、このデータセットに含まれる全ての実験から抽出した。

【0184】

［抗体ならびにＤＣＲ－２ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）およびアイソタイプ－ＰＢＤの作製］
モノクローナル抗体ＤＣＲ－２（ＩｇＧ１、κ）は、２０１６年９月２７日にブダペスト条約に基いてCellBank Australia（214 Hawkesbury Road, Westmead, NSW 2145, Australia）に寄託されたハイブリドーマから産生させた（アクセッション番号：ＣＢＡ２０１６００２９）。ＤＣＲ－２は、マウス免疫グロブリンＧ１抗体であり、ＣＤ３００ｆの全ての細胞外形態に結合する。

【0185】

天然のシステインを反応させることにより、カテプシンＢで切断可能リンカーであるＭＡ－ＰＥＧ４－ＶＡ－ＰＢＤ（SET0212-Levena Biopharma, CA）を介して抗体とピロロベンゾジアゼピン二量体とを複合体化させた。概略すると、ｍＡｂを１０ｍＭジチオエリトリトールで還元して、鎖間のジスルフィドから遊離したチオールを露出させ、ＰＤ－１０カラムで精製した。還元された抗体（抗体の２ｍＬアリコート）を、１０倍モル過剰（１０ｍｇ／ｍＬ）のＰＢＤリンカー（ＭＡ－ＰＥＧ４－ＰＢＤ）と３時間反応させた。次に、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で一晩透析した。抗体に対する薬物の最終的なモル比は、ＤＣＲ－２－ＰＢＤは３．３であり、アイソタイプ－ＰＢＤは４．６であった。

【0186】

［コロニー形成単位毒性アッセイ］
２４ウェルプレート（Corning, NY, USA）に注入した半固体メチルセルロース培地（MethoCult Classic, Stemcell Technologies）に、２×１０^４細胞／ウェルの密度でＣＦＵコロニーを播種した。３７℃、５％ＣＯ_２中にて１４日間コロニーを培養し、顕微鏡観察により計数した。全臍帯血のＰＢＭＣを使用した。異なる複数の濃度のＤＣＲ－２と、等濃度のＰＢＤ二量体と複合体化したヤギ抗マウス二次抗体とを併せたものに、ＣＤ３４^＋前駆細胞を連続的に曝露した。対照としては、ＰＢＤ二量体と複合体化した二次抗体のみを使用した。

【0187】

［活性化マーカーの発現および単球由来樹状細胞（ＭｏＤＣ）毒性アッセイ］
ＤＣに対する活性化マーカーの上方制御における、ＤＣＲ－２ＰＢＤの活性を測定した。具体的には、ＤＣＲ－２ＰＢＤを含むまたは抗体を含まない条件にて全ＰＢＭＣを６時間インキュベートしてから洗浄し、次に、１２時間ＬＰＳで刺激した。対照となるＤＣは、ＤＣＲ－２ＰＢＤまたはＬＰＳに暴露しなかった。骨髄性ＤＣをゲートアウトした。具体的には、死細胞およびＬｉｎ^＋（ＣＤ３、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ５６、ＣＤ１４）を除去し、次に、ＨＬＡ－ＤＲ^＋細胞およびＣＤ１１ｃ^＋細胞をゲーティングした。活性化マーカーであるＣＤ８０およびＣＤ８３を、フローサイトメトリーで評価した。ＤＣＲ－２ＰＢＤを含む条件でインキュベートした活性化ＤＣと、ＤＣＲ－２ＰＢＤを含まない条件でインキュベートした活性化ＤＣとを比較することにより、活性化の変化を決定した。活性化ＤＣは、不活性化ＤＣと比較した。

【0188】

ＤＣＲ－２ＰＢＤの抗原提示に対する影響を評価した。具体的には、ＤＣＲ－２ＰＢＤまたはアイソタイプ－ＰＢＤと全ＰＢＭＣとを２４時間インキュベートした後で洗浄した。次に、ＣＦＳＥで標識した同種のＴ細胞（ナイーブＣＤ４、磁気により分離した）を加え、ＣＦＳＥの発現の減少からＴ細胞の分裂を測定した。より詳細には、次の通りである。AutoMACS Proおよび抗ＣＤ３ ｍＡｂ（HIT3a, Biolegend）を使用して、磁気的な選択により、ＰＢＭＣからＴ細胞を枯渇させた。全てのサンプルにおいて、９０％超のＴ細胞を枯渇させた。ＣＤ３を枯渇させたＰＢＭＣを、ＤＣＲ－２－ＰＢＤ（２００ｐｍｏｌ）、アイソタイプ－ＰＢＤ（２００ｐｍｏｌ）またはＰＢＳを含む完全ＲＰＭＩ培地中で、２４時間インキュベートした。洗浄して結合しなかったＡＤＣを除去した後、ＣＤ３を枯渇させたＰＢＭＣを使用して、ＣＦＳＥで標識した同種のナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞を刺激した。このナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞は、RosetteSep Kit（Stem Cell Technologies 17555）を使用して準備したものである。５日目に、フローサイトメトリーを使用して、ＣＦＳＥの減少によりＴ細胞の増殖を評価した。Ｔ細胞は、抗ＣＤ３ ＡＦ７００（ＳＰ３４－２）を使用して同定した。ＤＣＲ－２－ＰＢＤ群およびアイソタイプ－ＰＢＤ群の結果を、ＰＢＳ対照群によって標準化した。刺激用の集団は３つのＰＢＭＣドナーから調製し、実験はduplicateで行った。

【0189】

［内部移行アッセイ］
実験室内にて、ＤＣＲ－２（ＩｇＧ_１）とアイソタイプ対照として抗破傷風トキソイドｍＡｂであるＣＭＲＦ－８１（ＩｇＧ_１）とを産生させ、精製し、フィコエリトリン（ＰＥ）と直接複合体化させた（Abadir et al. Mol Oncol. 2019; 13(10):2107-2120）。ＤＣＲ－２－ＰＥまたはＣＭＲＦ－８１－ＰＥ（１０μｇ／ｍＬ）と共に、氷上にて２０分間細胞をインキュベートし、洗浄して結合していないｍＡｂを除去した。次に、３７℃、５％ＣＯ_２にて記載の時間だけインキュベートすることにより、内部移行させた。インキュベーションの後、細胞表面に残存している残留ｍＡｂを、ヤギ抗マウス（ＧＡＭ）二次抗体であるＩｇＧ－ＡＦ４８８抗体で検出した。フローサイトメトリー分析のために、１％パラホルムアルデヒド／ＰＢＳ中にて細胞を固定した。表面および全体の相対蛍光指数（ＭＦＩ）は、「３７℃における（ある時点における結合抗体のＭＦＩ－ある時点におけるアイソタイプ対照のＭＦＩ）÷０℃における（ある時点におけるアイソタイプ対照のＭＦＩ－ある時点における結合抗体のＭＦＩ）」として算出した。内部移行率は、「１００－（表面染色の相対ＭＦＩ÷全体染色の相対ＭＦＩ）」により評価した。免疫蛍光顕微鏡実験では、細胞をＤＣＲ－２で染色した後に風乾し、４％パラホルムアルデヒドで固定した。あるいは、３７℃にて３０分間インキュベートした後に固定した。１％のＢＳＡ／ＰＢＳにより湿潤化してから、ＧＡＭ ＩｇＧ－ＡＦ４８８抗体および１８μＭのＤＡＰＩ（ThermoFisher）で染色した。

【0190】

［細胞毒性アッセイ］
細胞毒性の決定は、次の様に行った。５０００個のＡＭＬ細胞またはリンパ腫細胞を、ＤＣＲ－２－ＰＢＤ、アイソタイプ－ＰＢＤまたはＰＢＳ対照と共に、完全ＲＰＭＩ中、３７℃、５％ＣＯ_２にて９６時間インキュベートした。培養物の全容量は、２００μＬとした。次に、フローサイトメトリーにより、ＤＡＰＩ^－生存細胞を計数した。条件ごとの生存数を対照群の平均と比較して、生存率（％）を計算した。上述の通り、ＣＤ３００ｆ^－Ｍｉｎｏ細胞をバイスタンダー的に殺傷した。インキュベーションの後、生存しているバイスタンダー細胞を、抗ＣＤ２０－ＰＥ抗体（２Ｈ７）およびＤＡＰＩで同定した。動態の分析は、上述の通り行った。記載の時点において、細胞を３回洗浄した後、完全ＲＰＭＩ中に再懸濁し、９６時間培養してから分析した。ＡＤＣとフルダラビンとの相乗効果は、サンプル中においてＤＣＲ－２－ＰＢＤおよび／またはフルダラビンを組合せることにより、上述の通り評価した。Combination Index（ＣＩ）は、Compusynソフトウェア（Hsu et al. OncoImmunology. 2018;7(4): e1419114）を使用して計算した。

【0191】

［活性化マーカーの発現および単球由来樹状細胞（ＭｏＤＣ）毒性アッセイ］
ＤＣＲ－２－ＰＢＤ（２００ｐｍｏｌ）を含むまたは含まない条件で、完全ＲＰＭＩ培地中でＰＢＭＣをインキュベートした。１２時間後、洗浄した細胞を、ＬＰＳを含むまたは含まない条件で、さらに１２時間インキュベートした。次に、ＤＣ集団における活性化マーカーの発現について、表現型を決定した。既報の通り、ＭｏＤＣは、ＣＤ１４^＋単球に由来していた（Fromm et al. J Leukoc Biol. 2020;107(2):323-339）。ＤＣＲ－２－ＰＢＤまたはアイソタイプ－ＰＢＤ（２００ｐｍｏｌ）を加えてから７２時間後に、フローサイトメトリーにより生存細胞を計数した。

【0192】

［混合白血球反応］
AutoMACS Proおよび抗ＣＤ３ ｍＡｂ（HIT3a, Biolegend）を使用して、磁気的な選択により、ＰＢＭＣからＴ細胞を枯渇させた。全てのサンプルにおいて、９０％超のＴ細胞を枯渇させた。ＣＤ３を枯渇させたＰＢＭＣを、ＤＣＲ－２－ＰＢＤ（２００ｐｍｏｌ）、アイソタイプ－ＰＢＤ（２００ｐｍｏｌ）またはＰＢＳを含む完全ＲＰＭＩ培地中で、２４時間インキュベートした。洗浄して結合しなかったＡＤＣを除去した後、ＣＤ３を枯渇させたＰＢＭＣを使用して、ＣＦＳＥで標識した同種のナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞を刺激した。このナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞は、RosetteSep Kit（Stem Cell Technologies 17555）を使用して準備したものである。５日目に、フローサイトメトリーを使用して、ＣＦＳＥの減少によりＴ細胞の増殖を評価した。Ｔ細胞は、抗ＣＤ３ ＡＦ７００（ＳＰ３４－２）を使用して同定した。ＤＣＲ－２－ＰＢＤ群およびアイソタイプ－ＰＢＤ群の結果を、ＰＢＳ対照群によって標準化した。刺激用の集団は３つのＰＢＭＣドナーから調製し、実験はduplicateで行った。

【0193】

［コロニー形成単位毒性アッセイ］
２４ウェルプレート（Corning, NY, USA）に注入した半固体メチルセルロース培地（MethoCult Classic, Stemcell Technologies）に、２×１０^４細胞／ウェルの密度でＣＢ細胞を播種した。３７℃、５％ＣＯ_２中にて１４日間細胞を培養し、コロニー形成単位を計数した。各ウェルには、ＤＣＲ－２－ＰＢＤまたはアイソタイプ－ＰＢＤを加え、連続的に曝露させた。各実験においては、３つのＣＢサンプルを２連のウェルで試験した。

【0194】

［マウス異種移植アッセイ］
Australian BioResourcesから取得したNOD.Cg-Prkdc^scidII2rg^tm1Wjl/SzJマウス（ＮＳＧマウス）を、特定病原体除去条件にて飼育した。皮下モデルでは、２×１０^６個のＵ９３７細胞を、右側腹部の皮下に注射した。デジタルノギスを用いて毎日腫瘍を測定した。腫瘍の平均体積が１００ｍｍ^３超になったとき、ＤＣＲ－２－ＰＢＤ、アイソタイプ－ＰＢＤまたはＰＢＳを腹腔内に１回注射した。各条件が同程度の平均腫瘍体積となるように、マウスを割り振った（１３０．３～１３７．２ｍｍ^３）。腫瘍体積が１０００ｍｍ^３超になるまで測定を続け、この時点で、倫理プロトコルの要請に則りマウスを安楽死させた。

【0195】

ＨＬ－６０白血病モデルに関して、５×１０^６個のＨＬ－６０細胞を静脈内投与する２４時間前に、ＮＳＧマウスに２００ｃＧｙの放射線を照射した。７日目に、ＤＣＲ－２－ＰＢＤ、アイソタイプ－ＰＢＤまたはＰＢＳをマウスに注射し、疾患の進行および生存をモニターした。臨床スコアが４を超えるか、７０日目に到達した時点で、マウスを安楽死させた。

【0196】

ヒト化マウスモデルには、凍結ＣＤ３４^＋細胞（純度：９５％超）を使用した。ＣＤ３４^＋細胞は、プールしていた２つのＣＢサンプルから、製造者の指示に従って正の選択により単離した（Miltenyi 130-046-702）。それぞれのＮＳＧマウスに１５０ｃＧｙの放射線を照射してから４時間後に、１０万個のＣＤ３４^＋細胞を注射した。静脈血中におけるヒトＣＤ４５^＋細胞の割合として決定される定着率を、１２週目に評価した。マウスを、ＰＢにおけるヒトＣＤ４５^＋の割合の平均値が同程度となるように、マウスを治療群に割り振った（ＤＣＲ－２－ＰＢＤコホート：１０．１６％、アイソタイプ－ＰＢＤコホート：１０．７４％）。次に、３００μｇ／ｋｇのＤＣＲ－２－ＰＢＤまたはアイソタイプ－ＰＢＤをマウスに注射した。７日目にマウスを安楽死させ、ＢＭ（両側の大腿骨および脛骨）および３００μＬの血液に含まれるヒトＣＤ４５^＋細胞をフローサイトメトリーで計数し、表現型を決定した。

【0197】

初代ＡＭＬ異種移植に関して、ＮＳＧマウスに１５０ｃＧｙの放射線を２４時間照射した後、８×１０^６個のＣＲＧＨ１１由来のＡＭＬ細胞（表Ｓ１のサンプル１０）を静脈内注射した。定着した時点で（ＰＢにおいてヒトＣＤ４５^＋が１％を超えた時点で）、ＤＣＲ－２－ＰＢＤまたはアイソタイプ－ＰＢＤをマウスに投与した。６日後にマウスを安楽死させ、ＢＭを回収して、フローサイトメトリーにより計数および表面マーカーを分析した。

【0198】

側腹部注射モデルに関して、２×１０^６個のＵ９３７細胞をＮＳＧマウスに皮下注射した。次に、ノギスを用いて毎日腫瘍を測定し、体積を計算した。６日目に、１５０μｇ／ｋｇのＤＣＲ－２ＡＤＣ、アイソタイプ－ＡＤＣまたは同量のＰＢＳをマウスに注射した。腫瘍の体積が１０００ｍｍ^３に達した時点で、マウスを安楽死させた。生存率および腫瘍サイズを記録した。

【0199】

［フローサイトメトリー］
初代ＡＭＬサンプルおよびＢＭサンプルにおけるＣＤ３００ｆの発現には、Influx flow cytometer（BD Biosciences）を用いた。マウスＡＭＬ細胞株の実験には、Accuri flow cytometer（BD Biosciences）を用いた。他のアッセイには、Fortessa LSR flow cytometer（BD Biosciences）を用いた。ＴｉＳＮＥを含む分析には、FlowJo（FlowJo LLC）を用いた。

【0200】

［統計解析］
統計解析には、Prism（GraphPad Software, Inc.）を用いた。エラーバーは、標準誤差に対応している。２つの群の平均値の差を、ｔ検定により評価した。ＡＮＮＯＶＡおよびに検定後比較より、多群検定を行った。生存率の差はLogrank検定（Mantel-Cox検定）により評価した。

【0201】

〔結果〕
ＣＤ３００ｆの分布を評価するために、遺伝子発現データを解析した。ＣＤ３３を標的とするゲムツズマブオゾガマイシンは、表面分子を結合する唯一のＡＭＬ承認治療薬である。そのため、ＡＭＬにおけるＣＤ３００ｆの発現をＣＤ３３と比較した。ＡＭＬ患者（ｎ＝４６０）の発現アレイデータを解析し、ＣＤ３３とＣＤ３００とを比較した（図１Ａ）。ＣＤ３００ｆの平均発現レベルは、ＣＤ３３よりも有意に高かった（８．３９ｌｏｇ_２ vs. ７．８９ｌｏｇ_２；Ｐ＜０．０００１）。European LeukemiaNetリスク群の中では、ＣＤ３００の発現に有意差はなかった。

【0202】

ＣＤ３００ｆおよびＣＤ３３のタンパク質発現を、フローサイトメトリーで比較した（図１Ｂ）。平均蛍光強度比（ＭＦＩ比）には、有意差がなかった。発現には、中程度から強い相関があった（ｒ＝０．６３、Ｐ＜０．０００１）。初代ＡＭＬのＣＤ３４^＋ＣＤ３８^－サブセットにおけるＣＤ３００ｆタンパク質の発現は、ＣＤ３３タンパク質の発現とは有意な相関を示さなかった。１細胞における発現を、ＴｉＳＮＥを用いて、９つのＡＭＬのセットで比較した。その結果、ＣＤ３００ｆおよびＣＤ３３について、同じような分布が見られた。遺伝発現アレイデータが示すところによると、ＣＤ３００ｆの発現は造血幹細胞および骨髄性造血前駆細胞で見られ、発現が最も低いのは巨核球－赤血球系前駆細胞であった（図１Ｃ、Ｐ＜０．０００１）。フローサイトメトリーによるタンパク質発現からは、ＨＳＰＣ群間のＭＦＩ比における有意差が全く得られなかった。標準的なゲーティング戦略を使用して、ＨＳＰＣのサブセットを決定した（図２）。末梢血の単核細胞におけるタンパク質の発現によると、単球および好中球ではＣＤ３００ｆが発現していたが、リンパ球では発現が見られなかった（図３）。抗ＣＤ３００ｆによる治療における潜在的なオフ・ターゲット効果に関して、複数の臓器のヒトＧＴｘデータベースから取得したＲＮＡ配列データ（ＲＮＡ－ｓｅｑデータ）を解析した。ＣＤ３３およびＣＤ３００ＬＦのいずれも、他の全ての臓器と比較して、血液、脾臓および肺における発現が著しく高かった（Ｐ＜０．０００１、図４）。The Human Protein Atlas（https://www.proteinatlas.org/）による免疫組織染色分析が示すところによると、ＣＤ３３およびＣＤ３００ｆは、肺マクロファージにおいて発現しているが、肺胞細胞では発現していなかった。

【0203】

［ＣＤ３００ｆに対する抗体は、結合すると内部移行する］
フローサイトメトリーにより、マウス抗ヒトＣＤ３００ｆ抗体であるＤＣＲ－２の内部移行能力を評価した。ＤＣＲ－２は、ＨＬ－６０細胞に結合すると迅速に内部移行する（図５）。３０分後には顕著な内部移行が見られ、１８０分後には５０％超が内部移行した。ＨＬ－６０、ＣＤ１４^＋単球および初代ＡＭＬ細胞において、３０分後における内部移行を蛍光顕微鏡により確認した。内部移行のデータは、ＤＣＲ－２がＡＤＣの開発に好適なｍＡｂであることを示している。

【0204】

［in vitroにおけるＤＣＲ－２－ＰＢＤの細胞毒性］
ＤＣＲ－２およびアイソタイプ対照ｍＡｂをＰＢＤ二量体毒素と複合体化させて、潜在的な細胞毒性を評価した。ＤＣＲ－２－ＰＢＤおよびアイソタイプ－ＰＢＤの、ＣＤ３００ｆ^＋細胞株およびＣＤ３００ｆ^－細胞株に対する細胞毒性を試験した。結果を図６および表２に示す。

【0205】

【表2】

【0206】

ＤＣＲ－２－ＰＢＤは、ＣＤ３００ｆ^＋ＡＭＬ細胞株であるＨＬ－６０、Ｕ９３７およびＴＨＰ－１を殺傷し、ＩＣ５０は低ピコモルオーダーであった（ＨＬ－６０：５．４４ｐＭ、Ｕ９３７：６．７４ｐＭ、ＴＨＰ－１：２９．３９ｐＭ）。このＩＣ５０は、他のＰＢＤ系ＡＤＣと同程度であった（Chou TC. Cancer Res. 2010;70(2):440-446; Li et al. Mol Cancer Ther. 2018;17(2):554-564）。ＣＤ３００^－リンパ腫細胞株であるＺ－１３８に関して、ＤＣＲ－２－ＰＢＤおよびアイソタイプ－ＰＢＤのＩＣ５０は２００ｐＭ超であった。ＨＬ－６０およびＵ９３７に対するアイソタイプ－ＰＢＤのＩＣ５０は、２００ｐＭであった。

【0207】

ＣＦＵアッセイにより、ＨＳＰＣおよび初代ＡＭＬに対するＤＣＲ－２－ＰＢＤの活性を試験した。ＣＦＵの総数の有意な減少が、７．８４ｐＭ（ｐ＝０．００３３）、３９．２１ｐＭ（ｐ＜０．０００１）および１９６．１ｐＭ（ｐ＜０．０００１）において観察された（図７）。主要なＣＦＵサブタイプは全て、ＤＣＲ－２－ＰＢＤの濃度が３２．９ｐＭおよび１９６．１ｐＭのときに阻害された（図８）。したがって、ＤＣＲ－２ＰＢＤは、用量依存的に造血前駆細胞を効果的に枯渇させる。ＤＣＲ－２ＰＢＤは、多能前駆細胞、赤血球系前駆細胞および骨髄前駆細胞を用量依存的に枯渇させるのに有効である。

【0208】

次の２つの初代ＡＭＬサンプルを試験した。一つはＣＤ３００ｆの発現が低い（ＭＦＩ比：２．６）ＣＲＧＨ１であり、もう一つはＣＤ３００ｆの発現が高い（ＭＦＩ：１０９．９）ＣＲＧＨ９である（図９）。１９６．１ｐＭにおいて、ＣＲＧＨ１に対する有意な毒性が示された（Ｐ５．０３６）。全ての用量レベルにおいて、ＣＲＧＨ９に対する有意な毒性が見られた（Ｐ＜０．００１）。このことは、ＤＣＲ－２ＰＢＤがＡＭＬ細胞を枯渇させるのにも有効であることを示している。

【0209】

ＤＣＲ－２－ＰＢＤがＨＬ－６０細胞株に対する細胞毒性を生じさせるのに必要な曝露時間を評価した。結果を図１０に示す。ＤＣＲ－２ＰＢＤへの曝露から５時間以内に、ＨＬ－６０細胞の生存率は１０％未満に低下した。１２時間後にはＨＬ－６０細胞の９８％超が死滅し、２４時間後および９６時間後には９９％超が死滅していた。

【0210】

ＡＭＬの表面標的（ＣＤ３００ｆなど）は、ＡＭＬ症例において不均一に発現する場合がある。そこで、本発明者らは、効果的なＡＤＣにとっては、バイスタンダー的な殺傷が有用であると考えた。ＣＤ３００ｆを発現しない細胞に対してＤＣＲ－２ＰＢＤが影響を及ぼすか否かを検討するために、ＣＤ３００ｆ－リンパ腫細胞株であるＭｉｎｏの生存率を比較することにより、バイスタンダー的な殺傷を調査した。具体的には、ＤＣＲ－２－ＰＢＤの存在下において、Ｍｉｎｏのみの培養物における生存率と、ＭｉｎｏおよびＨＬ－６０を混合した培養物（５０％ＨＬ－６０／５０％Ｍｉｎｏおよび２５％ＨＬ－６０／７５％Ｍｉｎｏ）における生存率を比較した。種々の濃度のＤＣＲ－２ＰＢＤと一緒に、細胞を９６時間インキュベートした（図１１）。Ｍｉｎｏの割合が７５％の条件では、ＤＣＲ－２－ＰＢＤの濃度が２５ｐＭにおいて、Ｍｉｎｏのみの対照と比較して生存率が有意に低下した（図１０、ｐ＝０．０００２）。Ｍｉｎｏの割合が５０％である条件では、ＤＣＲ－２－ＰＢＤの濃度が２５ｐＭ（ｐ＜０．０００１）および１２．５ｐＭ（ｐ＝０．０００４）のいずれにおいても、生存率が有意に低下した（図１１）。ＨＬ－６０と組合せた場合におけるＭｉｎｏ細胞の減少により、ＤＣＲ－２－ＰＢＤがバイスタンダー的な殺傷能が確認された。

【0211】

最終分化した抗原提示細胞（単球由来樹状細胞（ＭｏＤＣ））に対してＤＣＲ－２ＰＢＤが及ぼす影響を、ＣＭＲＦ－８１ＰＢＤおよびＰＢＳが及ぼす影響と比較した。結果を図１２に示す。図１２から分かるように、ＤＣＲ－２ＰＢＤは、ＭｏＤＣ細胞にほとんど影響を及ぼさなかった。このことは、ＤＣＲ－２ＰＢＤが抗原提示に対してほとんど影響を及ぼさないことを示唆する。さらに、樹状細胞をＤＣＲ－２ＰＢＤで処理した後で、当該樹状細胞をＬＰＳで処理すると、樹状細胞活性化マーカーであるＨＬＡ－ＤＲおよびＣＤ１１ｃが上方制御され（図１３）、ＣＤ８０およびＣＤ８３も上方制御された（図１４）。このことにより、ＤＣＲ－２ＰＢＤは、樹状細胞の活性化マーカーの上方制御を妨げないことが示された。さらに、図１５が示すところによると、ＤＣＲ－２ＰＢＤは、混合リンパ球反応において、Ｔ細胞の増殖に影響を及ぼさない。

【0212】

［ＤＣＲ－２－ＰＢＤは、マウスＡＭＬ細胞株モデルの生存を延長する］
ＡＭＬマウスモデルに対するＤＣＲ－２ＰＢＤの効果を検討するために、マウスに２５０ｃＧｙの放射線を照射し、ＨＬ－６０を静脈内注射した（図１６）。これにより、細胞がＢＭに重度に浸潤し、臨床上のエンドポイントを満たした（中央値：２３日）。７日目に、ＰＢＳまたは３００μｇ／ｋｇのＣＭＲＦ－８１ＰＢＤもしくはＤＣＲ－２ＰＢＤのいずれかをマウスに単回注射し、生存をモニターした。生存のデータを図１６に示す。ＤＣＲ－２－ＰＢＤ（３００μｇ／ｋｇ）を単回注射することにより、アイソタイプ－ＰＢＤと比較して、生存が有意に延長された（図１６、ｐ＝０．００５８）。ＤＣＲ－２－ＰＢＤで処置した８匹のマウスのうち６匹が、実験のエンドポイントまで生存した。７０日目まで生存したマウスでは、ヒト細胞が検出されなかった。他の全てのマウスにおけるヒトＣＤ４５^＋細胞の割合は、安楽死時点において、７６％～８８％であった。

【0213】

Ｕ９３７細胞に基づくマウスモデルにおけるＤＣＲ－２ＰＢＤの効果を検討するために、マウスに細胞株Ｕ９３７を皮下注射した。６日後、ＰＢＳ、１５０ｍｇ／ｋｇもしくは３００ｍｇ／ｋｇのＣＭＲＦ－８１ＰＢＤ、または１５０ｍｇ／ｋｇもしくは３００ｍｇ／ｋｇのＤＣＲ－２ＰＢＤをマウスに腹腔内投与し、腫瘍の増殖をモニターした。マウスの腫瘍体積および生存を評価した。結果をそれぞれ図１７および図１８に示す。腫瘍増殖は遅延され、１５０μｇ／ｋｇのＤＣＲ－２－ＰＢＤ群（ｐ＝０．００１７）および３００μｇ／ｋｇのＤＣＲ－２－ＰＢＤ（ｐ＝０．００１７）の両群において、３００μｇ／ｋｇのアイソタイプ－ＰＢＤ群と比較して生存が有意に延長された。

【0214】

フルダラビンは、宿主のリンパ球を枯渇させることによりドナー細胞の定着を促進する目的で、複数の同種ＨＳＣＴレジメンにおいて使用されている。抗ＣＤ３００ｆによる治療は、レシピエントＨＳＰＣを枯渇させるかもしれないが、前処置レジメンの一部として宿主のリンパ球を枯渇することはないと考えられる。これらの補完的な役割を考慮して、ＤＣＲ－２－ＰＢＤとフルダラビンとの相乗効果を評価した。ＨＬ－６０細胞に対するＤＣＲ－２ＰＢＤおよびフルダラビンの組合せの効果を検討するために、in vitroにおいてＨＬ－６０細胞をインキュベートした。インキュベート条件は、ＤＣＲ－２ＰＢＤのみ、フルダラビンのみ、またはＤＣＲ－２ＰＢＤとフルダラビンとの混合物とし、濃度は種々に変更した。９６時間後に生存細胞を計数し、結果をプロットした（図１９）。同じ実験を、ＴＨＰ－１細胞でも行った。ＤＣＲ－２－ＰＢＤおよびフルダラビンの両方の存在下におけるＨＬ－６０およびＴＨＰ－１に対する細胞毒性は、いずれか一方のみの細胞毒性よりも高く、相乗効果が確認された。ＣＩは、ＨＬ－６０では０．８２であり、ＴＨＰ－１では０．７６であった。

【0215】

この結果が意味しているのは、フルダラビンおよびＤＣＲ－２ＰＢＤを併用すると、より低いフルダラビンの濃度において、同様の細胞傷害効果が得られるということである。このことから、従前はフルダラビン治療に耐えられなかった造血幹細胞移植を必要とする対象に対しても、より低用量のフルダラビンを用いた併用治療が可能になると考えられる。

【0216】

［ＤＣＲ－２－ＰＢＤは、マウス異種移植において初代ＨＳＰＣおよびＡＭＬ細胞の両方を枯渇させた］
抗ＣＤ３００ｆ ＡＤＣがＨＳＣＴ前処置に有効でありうることをさらに示すために、ＤＣＲ－２－ＰＢＤを使用して、正常なＣＤ３４^＋移植マウスモデルにおけるＨＳＰＣおよび骨髄細胞を選択的に枯渇させた。ＤＣＲ－２－ＰＢＤの単回用量（３００μｇ／ｋｇ）を注射したヒト化マウスは、アイソタイプ－ＰＢＤ処置群と比較して、ＣＤ３４^＋細胞および初代ＣＤ３４^＋ＣＤ３８^－ＣＤ９０^＋細胞のいずれの平均値も、有意に枯渇させていた（図２０Ａ）。ＣＤ３４^＋細胞では、０．２９×１０^５ vs. ９．４２×１０^５であり、ｐ＝０．００１であった。初代ＣＤ３４^＋ＣＤ３８^－ＣＤ９０^＋細胞では、０．０５×１０^４ vs. ５．５４×１０^４であり、ｐ＝０．００８であった。ＣＤ３４^＋集団においても、ＣＤ３４^＋ＣＤ３８^－ＣＤ９０^＋集団においても、ヒトＣＤ４５^＋細胞の合計割合の差異は有意であった。ＣＤ３４^＋集団では、３．０９％ vs. ２０．６２％であり、ｐ＜０．０００１であった。ＣＤ３４^＋ＣＤ３８^－ＣＤ９０^＋集団では、０．１６％ vs. ２．１７％であり、ｐ＝０．００８であった。末梢血中の骨髄細胞を枯渇させることにより、ＤＣＲ－２－ＰＢＤの選択性が示された（０．３１細胞／μＬ vs. １４．８９細胞／μＬ、ｐ＝０．０００２）。しかし、長寿命でＣＤ３００ｆを発現していないリンパ球では、選択性は示されなかった（２０８．５細胞／μＬ vs. ２６３細胞／μＬ、図２０Ｂ）。

【0217】

ＤＣＲ－２－ＰＢＤまたはアイソタイプ－ＰＢＤの単回用量（３００μｇ／ｋｇ）をマウスに注射し、７日目にＢＭ移植細胞を計数することにより、初代ＡＭＬに対するＤＣＲ－２－ＰＢＤの有効性を実証した（図２１）。ＤＣＲ－２－ＰＢＤは、アイソタイプ対照と比較して、ＢＭに存在するヒトＡＭＬ細胞を有意に枯渇させた（図２１）。合計数の平均値は、０．３７×１０^６ vs. １．４５×１０^６であり、ｐ＝０．０１９であった。ＤＣＲ－２－ＰＢＤは、アイソタイプ－ＰＢＤと比較して、ＡＭＬ細胞を有意に減少させた。全細胞における割合の平均値は、１２．３２ vs. ３８．９２％であり、ｐ＝０．０３であった。

【0218】

〔結論〕
ＤＣＲ－２－ＰＢＤは、ＡＭＬ細胞株およびＨＳＰＣに対して特異的な、in vitroにおける毒性を示した。ＰＢＤ二量体成分により、迅速な細胞毒性およびバイスタンダー的な殺傷が見られた。

【0219】

ＰＢＤ二量体は、抗ＣＤ３００ｆ抗体上に取り込まれると、短時間の曝露であっても有意な細胞毒性を示した。このことは、前処置剤として理想的である。

【0220】

ＣＤ３００ｆは、ＨＳＰＣの主要なサブタイプにわたって均一に分布しているので、前処置剤としてより有効である。現在研究されているＡＭＬの標的は、しばしば、ＨＳＰＣにおける発現が変化する。

【0221】

〔概要〕
ＤＣＲ－２－ＰＢＤは、下記の特性を示す：
・造血系以外では、標的が限定的である可能性が高い。
・容易に内部移行し、毒素を送達できる。
・in vitroおよびin vivoにおいて、ＣＤ３００ｆを発現しているＡＭＬ細胞株に対して有効である。
・正常なＣＤ３４^＋造血前駆細胞を枯渇させる。
・２４時間以内の曝露で有効である。
・ＣＤ３００ｆ^＋ｖｅ細胞およびＣＤ３００ｆ^－ｖｅ細胞が混在しているコロニーを殺傷できる。
・抗原提示に対して限定的な影響しか及ぼさない。
・フルダラビンとの相乗効果を示し、細胞毒性が増強される。
・造血幹細胞移植のための対象の前処置に有効である。

【0222】

〔配列表〕
配列番号１
Met Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Pro Leu Lys Leu
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Gly Phe Ser Gly Ser Trp Met Ser Trp
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln Ile Asn
Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe
Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Ile Asn
Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly
Phe Phe Glu Gly Tyr Ser Ala Trp Phe Ala Tyr Trp
配列番号２
Gly Phe Gly Phe Ser Gly Ser Trp
配列番号３
Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile
配列番号４
Ala Arg Arg Gly Phe Phe Glu Gly Tyr Ser Ala Trp Phe Ala Tyr
配列番号５
Ile Leu Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly Asp
Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Val
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ile Tyr
Tyr Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser
Gly Tyr Glu Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala Glu
Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Thr Ser Pro Trp Thr
Phe Gly Gly Gly
配列番号６
Gln Ser Val Ser Asn Asp
配列番号７
Tyr Ala Ser
配列番号８
Gln Gln Asp Tyr Thr Ser Pro Trp Thr
配列番号９
atggagtctg gaggtggcct ggtgcagcct ggaggacccc tgaaactctc ctgtgcagcc 60
tcaggattcg gttttagtgg atcttggatg agttgggtcc ggcaggctcc agggaaaggg 120
ctagaatgga ttggacaaat taatccagat agcagtacga taaattatac accatctcta 180
aaggataaat tcatcatctc cagagacaac gccaaaaata ccctgtacct gcaaattaac 240
aaagtgagat ctgaggacac agccctttat tactgtgcaa gacgggggtt ctttgaaggt 300
tactccgcct ggtttgctta ctgg 324
配列番号１０
attttgatga cccagactcc caaattcctg cttgtatcag caggagacag ggtgaccata 60
acctgcaagg ccagtcagag tgtgagtaat gatgtagctt ggtaccaaca gaagccaggg 120
cagtctcctt cactcctgat atactatgca tccaatcgca acactggagt ccctgatcgc 180
ttcactggca gtggatatga gacggatttc actttcacca tcagcactgt gcaggctgaa 240
gacctggcag tttatttctg tcagcaggat tatacctctc cgtggacgtt cggtggaggc 300
配列番号１１
atggtcctga gcctgctgta cctgctgaca gctctgcctg gcatcctgtc tgaggtccag 60
ctgcaagagt ctggccccat ggaatctggc ggaggattgg ttcaacctgg cggccctctg 120
aagctgtctt gtgccgcttc tggcttcggc ttctccggct cttggatgtc ctgggtccga 180
caggctcctg gcaaaggcct ggaatggatc ggccagatca accccgactc ctccaccatc 240
aactacaccc ctagcctgaa ggacaagttc atcatctccc gggacaacgc caagaacacc 300
ctgtacttgc agatcaacaa agtgcggagc gaggacaccg ctctgtacta ctgtgccaga 360
cggggcttct tcgagggcta ctctgcttgg tttgcctact ggggccaggg cacactggtc 420
acagtttctg ccgcctctac caagggaccc agcgttttcc ctctggctcc atcctccaag 480
tctacctctg gcggaacagc tgctctgggc tgcctggtca aggactactt tcctgagcca 540
gtgaccgtgt cctggaactc tggcgctctg acatctggcg tgcacacctt tccagctgtg 600
ctgcagtcct ccggcctgta ctctctgtcc tctgtcgtga ccgtgccttc cagctctctg 660
ggaacccaga cctacatctg caatgtgaac cacaagcctt ccaacaccaa ggtggacaag 720
aaggtggaac ccaagtcctg cgacaagacc cacacctgtc ctccatgtcc tgctccagaa 780
ctgctcggcg gaccttccgt gttcctgttt cctccaaagc ctaaggacac cctgatgatc 840
tctcggaccc ctgaagtgac ctgcgtggtg gtggatgtgt ctcacgagga tcccgaagtg 900
aagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa gtgcacaatg ccaagaccaa gcctagagag 960
gaacagtaca actccaccta tagagtggtg tccgtgctga ccgtgctgca ccaggattgg 1020
ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg tccaacaagg ccctgcctgc tcctatcgaa 1080
aagaccatct ccaaggccaa gggccagcct agggaacccc aggtttacac cttgcctcca 1140
tctcgggacg agctgaccaa gaaccaggtg tccctgacct gtctcgtgaa gggcttctac 1200
ccctccgata tcgccgtgga atgggagtct aatggccagc ctgagaacaa ctacaagaca 1260
acccctcctg tgctggactc cgacggctca ttcttcctgt actccaagct gacagtggac 1320
aagtccagat ggcagcaggg caacgtgttc tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac 1380
aatcactaca cccagaagtc cctgtctctg tcccctggca ag 1422
配列番号１２
atggactctc aggcccaggt gctgatgctg ctgctgttgt gggtgtccgg cacctgtggc 60
gacatcctga tgacccagac tcctaagttc ctgctggtgt ctgccggcga cagagtgacc 120
atcacatgca aggcctctca gtccgtgtcc aacgacgtgg cctggtatca gcagaagcct 180
ggccagtctc ctagcctgct gatctactac gcctccaaca gaaacaccgg cgtgcccgat 240
agattcaccg gctctggcta cgagacagac ttcaccttca ccatctccac cgtgcaggcc 300
gaggatctgg ccgtgtactt ctgccagcaa gactacacct ctccatggac ctttggcgga 360
ggcaccaagc tggaaatcaa gcggacagtg gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 420
tccgacgagc agctgaagtc tggcacagcc tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 480
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 540
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctaca gcctgtcctc cacactgacc 600
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 660
ctgtctagcc ctgtgaccaa gtctttcaac cggggcgagt gc 702
配列番号１３
Met Val Leu Ser Leu Leu Tyr Leu Leu Thr Ala Leu Pro Gly Ile Leu
Ser Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Met Glu Ser Gly Gly Gly
Leu Val Gln Pro Gly Gly Pro Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
Phe Gly Phe Ser Gly Ser Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile
Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn
Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Ile Asn Lys Val Arg Ser Glu Asp
Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Phe Phe Glu Gly Tyr Ser
Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
配列番号１４
Met Asp Ser Gln Ala Gln Val Leu Met Leu Leu Leu Leu Trp Val Ser
Gly Thr Cys Gly Asp Ile Leu Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu
Val Ser Ala Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser
Val Ser Asn Asp Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
Ser Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Tyr Glu Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser
Thr Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr
Thr Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
配列番号１５
Met Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Gly Phe Ser Gly Ser Trp Met Ser Trp
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Asn Ile Asn
Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Ser
Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly
Phe Phe Glu Gly Tyr Ser Ala Trp Phe Ala Tyr Trp

【受託番号】

【0223】

ＣＢＡ２０１６００２９

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【配列表】

2022543779000001.app

【国際調査報告】