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▶ バイオ−ラッド・ラボラトリーズ・インコーポレーテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-10-17
(54)【発明の名称】ポリマードット
(51)【国際特許分類】
C09K 11/06 20060101AFI20221007BHJP
C08G 61/12 20060101ALI20221007BHJP
G01N 33/533 20060101ALI20221007BHJP
C07D 271/12 20060101ALN20221007BHJP
C07D 417/14 20060101ALN20221007BHJP
【ＦＩ】
C09K11/06
C08G61/12
G01N33/533
C07D271/12
C07D417/14
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021577366
(86)(22)【出願日】2020-08-07
(85)【翻訳文提出日】2022-02-28
(86)【国際出願番号】 US2020045307
(87)【国際公開番号】W WO2021030160
(87)【国際公開日】2021-02-18
(31)【優先権主張番号】62/884,706
(32)【優先日】2019-08-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】504121623
【氏名又は名称】バイオ－ラッド・ラボラトリーズ・インコーポレーテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110003339
【氏名又は名称】特許業務法人南青山国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】べライル，クリストファー
(72)【発明者】
【氏名】ガリメラ，プラヴィーナ，ディー．
(72)【発明者】
【氏名】ラニス，レイラ，アメリー
【テーマコード（参考）】
4C063
4J032
【Ｆターム（参考）】
4C063AA03
4C063BB01
4C063CC92
4C063DD67
4C063EE10
4J032BA12
4J032BA20
4J032BB06
4J032CG03
(57)【要約】
官能化蛍光ポリマーと両親媒性分子とを含むポリマードットを提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
疎水性領域及び親水性官能基を有する親水性領域を有する蛍光ポリマーと、疎水性領域及び親水性領域を有する両親媒性分子と
を含み、前記親水性官能基は、コンジュゲーションに利用される、
ポリマードット。
【請求項2】
前記蛍光ポリマー及び前記両親媒性分子の前記疎水性領域は、前記ポリマードットの疎水性コアに埋め込まれ、前記蛍光ポリマー及び前記両親媒性分子の前記親水性領域は、親水性外層を形成し、前記蛍光ポリマー中の前記親水性官能基は、前記ポリマードットの表面上の前記親水性外層に位置する、請求項１に記載のポリマードット。
【請求項3】
前記蛍光ポリマーは、ヘテロポリマーである、請求項１又は２に記載のポリマードット。
【請求項4】
前記ヘテロポリマーは、少なくとも２つの異なるモノマーを含む、請求項３に記載のポリマードット。
【請求項5】
前記モノマーは、それぞれ独立して、ＢＯＤＩＰＹ、ＢＯＤＩＰＹ誘導体、フルオレン、フルオレン誘導体、ベンゾチアジアゾール、ベンゾチアジアゾール誘導体、ベンゾオキサジアゾール、及びベンゾオキサジオール誘導体からなる群から選択される、請求項４に記載のポリマードット。
【請求項6】
前記モノマーは、それぞれ独立して、【化1】
【化2】
【化3】
【化4】
【化5】
【化6】
請求項５に記載のポリマードット。
【請求項7】
ｎが２２である、請求項６に記載のポリマードット。
【請求項8】
前記親水性官能基は、カルボキシル、アミノ、メルカプト、アジド、アルキン、アルデヒド、ヒドロキシル、カルボニル、サルフェート、スルホネート、ホスフェート、シアネート、スクシンイミジルエステル、歪みアルキン、アジド、ジエン、アルケン、テトラジン、歪みアルケン、シクロオクチン、ホスフィン基及びそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項１～７のいずれか１項に記載のポリマードット。
【請求項9】
前記ポリマー中の前記親水性官能基は、生体分子にコンジュゲートしている、請求項１～８のいずれか１項に記載のポリマードット。
【請求項10】
前記生体分子は、合成又は天然に存在するタンパク質、糖タンパク質、ポリペプチド、アミノ酸、核酸、炭水化物、脂質、及び脂肪酸からなる群より選択される、請求項９に記載のポリマードット。
【請求項11】
前記生体分子は、抗体である、請求項９又は１０に記載のポリマードット。
【請求項12】
前記両親媒性分子の前記親水性領域は、ポリアルキレングリコールを含む、請求項１又は２に記載のポリマードット。
【請求項13】
前記ポリアルキレングリコールは、ポリエチレングリコールである、請求項１２に記載のポリマードット。
【請求項14】
前記ポリマードットのサイズは、約５～約２５ナノメートル又は約５～約２０ｎｍである、請求項１～１３のいずれか１項に記載のポリマードット。
【請求項15】
前記両親媒性分子対前記蛍光ポリマーの重量比（ｗ／ｗ％）は、約１０％～約２００％である、請求項１～１４のいずれか１項に記載のポリマードット。
【請求項16】
前記両親媒性分子の前記疎水性領域は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミノ（ＤＳＰＥ）部分、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）部分、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）部分、及び（１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン）（ＤＰＰＥ）部分からなる群より選択される脂質部分を含む、請求項１又は２に記載のポリマードット。
【請求項17】
前記両親媒性分子は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－ポリ（エチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）
からなる群から選択される、請求項１～１６のいずれか１項に記載のポリマードット。
【請求項18】
ポリマードットを生成する方法であって、非プロトン性溶媒中で両親媒性分子と蛍光ポリマーとの混合物を調製し、
前記混合物をプロトン性溶媒に添加して、ポリマードットを形成することを含み、
前記蛍光ポリマーは、疎水性領域及び親水性領域を含み、前記親水性領域は、親水性官能基を有し、前記両親媒性分子は、疎水性領域及び親水性領域を含み、前記両親媒性分子対前記蛍光ポリマーの重量比（ｗ／ｗ）（両親媒性分子：蛍光ポリマー）は、０．１～２：１又は約１０％～約２００％であり、前記親水性官能基は、コンジュゲーションに利用される、方法。
【請求項19】
前記蛍光ポリマー及び前記両親媒性分子の前記疎水性領域は、前記ポリマードットの疎水性コアに埋め込まれ、前記蛍光ポリマー及び前記両親媒性分子の前記親水性領域は、親水性外層を形成し、前記蛍光ポリマー中の前記親水性官能基は、前記ポリマードットの表面上の前記親水性外層に位置する、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
前記非プロトン性溶媒は、テトラヒドロフランである、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項21】
前記プロトン性溶媒は、水である、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項22】
生体分子を、前記親水性官能基を介して前記ポリマードットにコンジュゲートさせることをさらに含む、請求項１８～２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項23】
前記両親媒性分子は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－ポリ（エチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）
からなる群から選択される、請求項１８～２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項24】
両親媒性分子の蛍光ポリマーに対する重量比（パーセンテージとして表される）は、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１０５％、約１１０％、約１１５％、約１２０％、約１２５％、約１３０％、約１３５％、約１４０％、約１４５％、約１５０％、約１５５％、約１６０％、約１６５％、約１７０％、約１７５％、約１８０％、約１８５％、約１９０％、約１９５％、又は約２００％である、請求項１８～２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項25】
両親媒性分子対蛍光ポリマーの重量比は、約０．１：１、０．２：１、０．３：１、０．４：１、０．５：１、０．６：１、０．７：１、０．８：１、０．９：１、１．０：１、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１、又は２．０：１である、請求項１８～２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項26】
請求項１８～２５のいずれか１項に記載の方法によって製造されたポリマードットの集団であって、前記ポリマードットの集団は、約５ｎｍ～約２５ｎｍの平均有効直径を有し、ただし、前記集団中のポリマードットの少なくとも５０％は、約２５ｎｍ未満の平均有効直径を有する、ポリマードットの集団。
【請求項27】
生物学的サンプル中の標的分子を検出する方法であって、生物学的サンプルを、請求項１～１７のいずれか１項に記載のポリマードットと接触させ、前記標的分子を検出することを含む、方法。
【請求項28】
前記ポリマードットは、約５ｎｍ～約２５ｎｍの平均有効直径を有し、ただし、前記集団中のポリマードットの少なくとも５０％は、約２５ｎｍ未満の平均有効直径を有する、請求項１に記載のポリマードット。
【請求項29】
前記蛍光ポリマーは、ホモポリマーである、請求項１又は２に記載のポリマードット。
【請求項30】
生物学的サンプル中の標的分子を検出する方法であって、生物学的サンプルを請求項２６に記載のポリマードットの集団と接触させ、標的分子を検出することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願を相互参照
本出願は、２０１９年８月９日出願の米国仮出願第６２／８８４，７０６号の優先権を主張するものであり、内容を参照することにより組み込まれる。
本出願は、２０１９年８月９日出願の米国仮出願第６２／８８４，７０６号の優先権を主張するものであり、内容を参照することにより組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
従来の有機染料よりも高い輝度及び光安定性のために、量子ドット及びポリマーベースドット（又はポリマードット）等のナノ粒子ベースの蛍光プローブは、生物学系を研究するための様々な蛍光ベースの技法で使用されている。しかしながら、無機量子ドットは、活性酸素種によって分解され、有毒な重金属を放出する可能性がある。従って、量子ドットの使用は、ex vivo用途に限定される。蛍光ポリマードットは、溶液中に浸出する重金属を有しておらず、従って、インビボ用途に使用することができる。生物学系において使用するために、蛍光プローブが、プローブの表面上の官能基を介してタンパク質（例えば、抗体）にコンジュゲートされる。ポリマーベースのナノ粒子については、ナノ粒子を生成するために使用されるポリマーは疎水性であり、タンパク質が付加する粒子の表面上に官能基を常に有するとは限らない。ポリマードットの表面を官能化するために使用される１つのアプローチは、ポリマードットの表面に親水性コーティングを適用することである。親水性コーティングは、タンパク質をコンジュゲートさせることができる親水性官能基を有する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0003】
ポリマードット、ポリマードットを生成する方法、及びそのようなポリマードットのバイオコンジュゲートが提供される。
【0004】
一実施形態において、ポリマードットは、疎水性領域及び親水性官能基を有する親水性領域を有する蛍光ポリマーと、疎水性領域及び親水性領域を有する両親媒性分子とを含み、親水性官能基は、コンジュゲーションに利用される。いくつかの実施形態において、蛍光ポリマー及び両親媒性分子の疎水性領域は、ポリマードットの疎水性コアに埋め込まれ、蛍光ポリマー及び両親媒性分子の親水性領域は、親水性外層を形成し、蛍光ポリマー中の親水性官能基は、ポリマードットの表面上の親水性外層に位置する。
【0005】
いくつかの実施形態において、蛍光ポリマーはヘテロポリマーである。いくつかの実施形態において、ヘテロポリマーは、少なくとも２つの異なるモノマーを含む。特定の実施形態において、モノマーは、ＢＯＤＩＰＹ、ＢＯＤＩＰＹ誘導体、フルオレン、フルオレン誘導体、ベンゾチアジアゾール、ベンゾチアジアゾール誘導体、ベンゾキサジオール、及び／又はベンゾオキサジオール誘導体である。いくつかの実施形態において、モノマーは、
（ジブロモベンゾオキサジオール）、
（４，７ビス（２－ブロモ－５－チエニル）－２，１，３－ベンゾチアジアゾール）、
（９，９－ジオクチル－２，７－ジブロモフルオレン）、
（９，９－ジオクチルフルオレン－２，７－ジボロン酸
ビス（１，３－プロパンジオール）エステル）、
及び／又は
（ｎ＝１０～３０）である。一実施形態において、ｎ＝２２である。いくつかの実施形態において、蛍光ポリマーはホモポリマーである。
【化1】
【化2】
【化3】
【化4】
ビス（１，３－プロパンジオール）エステル）、
【化5】
【化6】
【0006】
いくつかの実施形態において、親水性官能基は、カルボキシル、アミノ、メルカプト、アジド、アルキン、アルデヒド、ヒドロキシル、カルボニル、サルフェート、スルホネート、ホスフェート、シアネート、スクシンイミジルエステル、歪みアルキン、アジド、ジエン、アルケン、テトラジン、歪みアルケン、シクロオクチン、ホスフィン基又はそれらの誘導体である。特定の実施形態において、ポリマー中の親水性官能基は、生体分子にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、生体分子は、合成又は天然に存在するタンパク質、糖タンパク質、ポリペプチド、アミノ酸、核酸、炭水化物、脂質、又は脂肪酸である。いくつかの実施形態において、生体分子は抗体である。いくつかの実施形態において、両親媒性分子の親水性領域は、ポリアルキレングリコールを含む。いくつかの実施形態において、ポリアルキレングリコールはポリエチレングリコールである。いくつかの実施形態において、ポリマードットのサイズは、約５～２０ナノメートルである。いくつかの実施形態において、蛍光ポリマーに対する両親媒性分子の重量比は、約１０％～約２００％である。他の実施形態において、重量比は、蛍光ポリマーに対して約０．１～約２（すなわち、約０．１～２．０：１）である両親媒性分子の範囲として表される。これらの実施形態のいくつかは、約０．２５：１、約０．５：１、約０．７５：１、約１：１、約１．２５：１、約１．５：１、約１．７５：１、又は約２：１の重量比となる。いくつかの実施形態において、両親媒性分子の疎水性領域は、これらに限られるものではないが、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミノ（ＤＳＰＥ）部分、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）部分、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）部分、及び（１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン）（ＤＰＰＥ）部分をはじめとする脂質部分を含む。いくつかの実施形態において、両親媒性分子は、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－ポリ（エチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３），１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）又は
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）である。
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－ポリ（エチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３），１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）又は
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）である。
【0007】
一実施形態において、ポリマードットを生成する方法は、非プロトン性溶媒中で蛍光ポリマーと両親媒性分子との混合物を調製し、混合物をプロトン性溶媒に添加して、ポリマードットを形成することを含み、蛍光ポリマーは、疎水性領域及び親水性領域を含み、親水性領域は、親水性官能基を有し、両親媒性分子は、疎水性領域及び親水性領域を含み、親水性官能基は、コンジュゲーションに利用される。いくつかの実施形態において、蛍光ポリマー及び両親媒性分子の疎水性領域は、ポリマードットの疎水性コアに埋め込まれ、蛍光ポリマー及び両親媒性分子の親水性領域は、親水性外層を形成し、蛍光ポリマー中の親水性官能基は、ポリマードットの表面上の親水性外層に位置する。いくつかの実施形態において、非プロトン性溶媒はテトラヒドロフランである。特定の実施形態において、プロトン性溶媒は水である。いくつかの実施形態において、本方法は、親水性官能基を介して生体分子をポリマードットにコンジュゲートさせることをさらに含む。
【0008】
一実施形態において、生物学的サンプル中の標的分子を検出する方法は、生物学的サンプルを、上記及び本明細書中の他の箇所に記載されるようなポリマードットと接触させることを含む。
【図面の簡単な説明】
【0009】
【図3】図３は、ポリフルオレン（ＰＤＨＦ及びＰＦＯ等）、ポリ（フェニレンエチニレン）（ＰＰＥ等）、ポリ（フェニレンビニレン）（ＭＥＨ－ＰＰＶ及びＣＮ－ＰＰＶ等）、フルオレン系共重合体（ＰＦＰＶ、ＰＦＢＴ、及びＰＦＤＢＴ５等）、及び全体が参照により本明細書に援用されるＷｕ及びＣｈｉｕ、Ａｎｇｅｗ．ＣｈｅｍＩｎｔ．Ｅｄ．２０１３、５２：３０８６－３１０９に開示されている関連誘導体等の蛍光ポリマーを示す。
【発明を実施するための形態】
【0010】
本明細書には、ポリマードット、その製造方法、及びその生体分子複合体が記載されている。ポリマードットの表面官能化は、製造中に官能基を有する蛍光ポリマーを両親媒性分子とブレンドすることによって達成される。ポリマードットは安定であり（例えば、凝集せず、溶液から沈殿しない）、表面反応性基を有するために生体分子にコンジュゲートさせることができる。複合体は、フローサイトメトリー、蛍光活性化ソーティング、免疫蛍光、免疫組織化学、蛍光多重化、単一分子イメージング、単一粒子追跡、タンパク質フォールディング、タンパク質回転力学、ＤＮＡ及び遺伝子分析、タンパク質分析、代謝産物分析、脂質分析、ＦＲＥＴベースのセンサー、ハイスループットスクリーニング、細胞イメージング、in vivoイメージング、イムノアッセイ及び酵素ベースのアッセイのような蛍光ベースの生物学的アッセイ、ならびに生物学的アッセイ及び測定における様々な蛍光技術を含むが、これらに限定されない、多数の異なる用途において使用される。
【0011】
定義
特に断らない限り、本明細書及び特許請求の範囲を含む、本出願において使用される以下の用語は、後述の定義を有する。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形は、内容が別段の明確な指示をしない限り、複数の指示対象を含む。標準化学用語の定義は、Ｃａｒｅｙ及びＳｕｎｄｂｅｒｇ（２００７）「Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５ｔｈ Ｅｄ．」Ｖｏｌｓ．Ａ ａｎｄ Ｂ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ＋Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｍｅｄｉａ ＬＬＣ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを含む参考文献の研究にある。本発明の実施は、特に断りのない限り、合成有機化学、質量分析、クロマトグラフィーの生成及び分析方法、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術及び薬理学の従来の方法を使用する。
特に断らない限り、本明細書及び特許請求の範囲を含む、本出願において使用される以下の用語は、後述の定義を有する。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形は、内容が別段の明確な指示をしない限り、複数の指示対象を含む。標準化学用語の定義は、Ｃａｒｅｙ及びＳｕｎｄｂｅｒｇ（２００７）「Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５ｔｈ Ｅｄ．」Ｖｏｌｓ．Ａ ａｎｄ Ｂ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ＋Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｍｅｄｉａ ＬＬＣ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを含む参考文献の研究にある。本発明の実施は、特に断りのない限り、合成有機化学、質量分析、クロマトグラフィーの生成及び分析方法、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術及び薬理学の従来の方法を使用する。
【0012】
用語「約」又は「およそ」は、当業者によって判断される特定の値についての許容可能な誤差範囲内を意味し、これは、値がどのように測定又は決定されるか、すなわち、測定方式の限界に部分的に依存する。用語「約」及び「およそ」は、所与の値の±２５％、±２０％、±１０％又は±５％の範囲を包含することを意味する。ポリマードットサイズに関して、用語「約」又は「およそ」は、ポリマードットサイズが値（Ｘ±１０％）付近で０～１０％の変動を伴う記載されたサイズのものであることを示す。従って、約２０ｎｍの直径を有するポリマードットは、１８～２２ｎｍの直径を有するポリマードットを含む。用語「約」が、比率（例えば、約０．１：１）に関して使用される場合、用語「約」は両方の値に適用され、具体的には、この用語は、例示した比率における０．１の値及び１の値の両方に適用されると考えられる。
【0013】
本開示においては、長さで設定し、その範囲内の全ての値を記載することを回避するために、範囲は簡潔に記載されている。範囲内の任意の適切な値は、適切な場合、範囲の上限値、下限値、又は末端として選択される。例えば、０．１～１．０の範囲は、０．１及び１．０の末端値、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９の中間値、ならびに０．２～０．５、０．２～０．８、０．７～１．０等の０．１～１．０内に包含される全ての中間範囲を表す。
【0014】
本明細書中で使用される場合、用語「ポリマードット」は、安定なサブミクロンサイズの粒子へと崩壊された１つ以上のポリマーを含む構造を指す。本明細書に提供されるポリマードットは、これらに制限されるものではないが、析出に依存する方法、エマルジョン（例えば、ミニエマルジョン又はミクロエマルジョン）の形成に依存する方法、及び縮合に依存する方法を含む、ポリマーを崩壊させるための当技術分野で公知の任意の方法によって形成されてもよい。いくつかの実施形態において、ポリマードットは、ナノ沈殿によって形成される。
【0015】
本明細書中で使用される「ポリマー」は、典型的には共有化学結合によって連結された少なくとも２つの繰り返し構造単位から構成される分子である。繰り返し構造単位はモノマーの一種であってもよく、得られるポリマーはホモポリマーである。いくつかの実施形態において、ポリマーは、２つの異なる種類のモノマー、又は３つの異なる種類のモノマー、又はそれ以上の種類のモノマーを含むことができる。異なる種類のモノマーは、様々な方法で、ポリマー鎖に沿って分布させることができる。例えば、３つの異なる種類のモノマーをポリマーに沿ってランダムに分布させることができる。ポリマーに沿ったモノマーの分布は、異なる方法で表すことができる。ポリマーの長さに沿った繰り返し構造単位（例えば、モノマー）の数は「ｎ」で表すことができる。いくつかの実施形態において、ｎは、例えば、少なくとも２、少なくとも１００、少なくとも５００、少なくとも１０００、少なくとも５０００、又は少なくとも１０，０００、又は少なくとも１００，０００、又はそれ以上とすることができる。特定の実施形態において、ｎは、２～１０，０００、２０～１０，０００、２０～５００、５０～３００、１００～１０００、又は５００～１０，０００の範囲である。ポリマーは、一般に、ペンダント側基を任意で含有する骨格を含む伸長した分子構造を有する。本明細書で提供されるポリマーは、線状ポリマー及び分岐ポリマーを含むことができるが、これらに限定されない。
【0016】
本明細書で使用される「ナノ粒子」という用語は、約１０００ｎｍ未満の寸法を有する粒子を指す。
【0017】
本明細書中で使用される「非プロトン性溶媒」という用語は、酸性水素を含有せず、水素結合供与体として作用しない極性溶媒を指す。
【0018】
本明細書中で使用される「プロトン性溶媒」という用語は、解離可能なＨ＋イオンを含む溶媒を指す。
【0019】
本明細書中で使用される「両親媒性分子」又は「両親媒性マトリックス」という用語は、分子内に疎水性セグメント及び親水性セグメントの両方を含む分子を指す。この文脈における「親水性」という用語は、水等の水溶液に対して高い親和性を有する両親媒性分子のセグメントを指す。この文脈における「疎水性」という用語は、水等の水溶液をはじく両親媒性分子のセグメントを指す。
【0020】
「脂質部分」という用語は、少なくとも１つの脂質を含む部分を指す。本明細書で使用される「脂質」という用語は、疎水性又は両親媒性を有する小分子を指し、これらに限られるものではないが、脂肪、ワックス、脂肪酸、コレステロール、ステロール、リン脂質、モノグリセリド、ジグリセリド及びトリグリセリドを含む。脂肪酸は、飽和、一不飽和又は多不飽和である。脂肪酸の例としては、これらに限られるものではないが、酪酸（Ｃ４）、カプロン酸（Ｃ６）、カプリル酸（Ｃ８）、カプリン酸（Ｃ１０）、ラウリン酸（Ｃ１２）、ミリスチン酸（Ｃ１４）、パルミチン酸（Ｃ１６）、パルミトレイン酸（Ｃ１６）、ステアリン酸（Ｃ１８）、イソステアリン酸（Ｃ１８）、オレイン酸（Ｃ１８）、バクセン酸（Ｃ１８）、リノール酸（Ｃ１８）、アルファリノール酸（Ｃ１８）、ガンマジオレイン酸（Ｃ１８）、アラキジン酸（Ｃ２０）、ガドレイン酸（Ｃ２０）、アラキドン酸（Ｃ２０）、エイコサペンタエン酸（Ｃ２０）、ベヘン酸（Ｃ２２）、エルカ酸（Ｃ２２）、ドコサヘキサエン酸（Ｃ２２）、リグノセリン酸（Ｃ２４）及びヘキサコサン酸（Ｃ２６）が挙げられる。脂質部分は、リジン及び他の分岐アミン等の分岐基を使用するいくつかの脂肪酸基を含む。
【0021】
本明細書中で使用される「官能基」という用語は、任意の安定な物理的又は化学的会合等によって蛍光ポリマーに付加して、それによってポリマードットの表面を変化させる、例えば、表面を生体分子へのコンジュゲーション（例えば、バイオコンジュゲーション）が可能になる、任意の化学単位を指す。官能基は、蛍光ポリマーの主鎖、側鎖、又は末端単位の１つに共有結合される。官能基としては、これらに限られるものではないが、アルデヒド、アルケン、アルキル、アルキン、歪みアルキン、アミノ、アジド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、シクロオクチン、ジエノ、エステル、スクシンイミジルエステル、ハロアルキル、ヒドロキシル、イミド、ケトン、マレイミド、メルカプト、ホスフェート、ホスフィン、サルフェート、スルホネート、それらの置換誘導体、又はそれらの組み合わせが挙げられる、一般に、バイオコンジュゲーションに適した任意の官能基を使用することができる。このような官能基は、例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２０１３）に記載されており、これは、全ての目的について、その全体が参照により本明細書に援用される。
【0022】
本明細書中で使用される「親水性官能基」という用語は、親水性の性質である官能基を指す。
【0023】
本明細書中で使用される「誘導体」という用語は、得られる、又は他のものから誘導されると化学物質又は化合物を指す。例えば、ＢＯＤＩＰＹ誘導体は、ＢＯＤＩＰから誘導される。
【0024】
本明細書で使用される「脂肪族」という用語は、直鎖又は分岐鎖構造、又は閉環構造を特徴とする有機化合物又はラジカルを指し、それらのいずれかは、飽和炭素結合、及び任意で、炭素－炭素二重結合等の１つ又は複数の非共役炭素－炭素不飽和結合を含むことができる。脂肪族基は１～２４個の炭素原子、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４個の炭素原子を有する。
【0025】
本明細書中で使用される「生体分子」という用語は、合成又は天然に存在するタンパク質（例えば、抗体）、糖タンパク質、ペプチド、アミノ酸、代謝産物、薬物、毒素、核酸、ヌクレオチド、炭水化物、糖、脂質、又は脂肪酸を指す。
【0026】
「抗体」は、免疫グロブリン、複合体（例えば、融合体）、又はそのフラグメント形態を指す。この用語には、これらに限定されるものではないが、ヒト化、ヒト、一本鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、突然変異、移植、及びin vitroで生成された抗体等の天然又は遺伝的に改変された形態を含む、ヒト又は他の哺乳動物細胞株から誘導されるＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの部類のポリクローナル又はモノクローナル抗が含まれる。「抗体」にはまた、これらに限定されるものではないが、免疫グロブリン部分を有する融合体タンパク質を含む複合形態も含まれる。「抗体」にはまた、抗原結合機能を保持しているか否かにかかわらず、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、Ｆｃ等の抗体フラグメントも含まれる。
【0027】
ポリマードット
一実施形態において、ポリマードットは、疎水性領域及び親水性領域を有する蛍光ポリマーを含み、親水性領域は親水性官能基を含む。ポリマードットは、疎水性領域及び親水性領域を有する両親媒性分子をさらに含む。蛍光ポリマーと両親媒性分子の疎水性領域はポリマードットの疎水性コアに埋め込まれ、蛍光ポリマーと両親媒性分子の親水性領域は親水性外層を形成し、蛍光ポリマー中の親水性官能基はポリマードットの表面上の親水性外層に位置する。ポリマードットの表面に局在化されることによって、親水性官能基は、生体分子への付加に利用可能である。特定の実施形態において、蛍光ポリマーは、共役しており、π電子非局在化骨格を含む。蛍光ポリマーは、部分的に又は完全に共役させることができる。本明細書で使用される「蛍光ポリマー」という用語は、蛍光特性を示すポリマーを指す。蛍光ポリマーのこれらに限られるものではない例としては、ポリフルオレン（ＰＤＨＦ及びＰＦＯ等）、ポリ（フェニレンエチニレン）（ＰＰＥ等）、ポリ（フェニレンビニレン）（ＭＥＨ－ＰＰＶ及びＣＮ－ＰＰＶ等）、フルオレン系共重合体（ＰＦＰＶ、ＰＦＢＴ、及びＰＦＤＢＴ５等）、及び関連する誘導体が挙げられる（その全体が参照により本明細書に援用される、Ｗｕ及びＣｈｉｕ、Ａｎｇｅｗ．ＣｈｅｍＩｎｔ．Ｅｄ．２０１３、５２：３０８６～３１０９の図３を参照されたい）。蛍光ポリマーの他のこれらに限られるものではない例としては、その全体が参照により本明細書に援用される、Ｒｏｎｇら、ＡＣＳ Ｎａｎｏ、２０１３、７（１）：３７６－３８４に開示されているようなポリマーを形成するＢＯＤＩＰＹ含有ポリマー及びＢＯＤＩＰＹモノマーが挙げられる。
一実施形態において、ポリマードットは、疎水性領域及び親水性領域を有する蛍光ポリマーを含み、親水性領域は親水性官能基を含む。ポリマードットは、疎水性領域及び親水性領域を有する両親媒性分子をさらに含む。蛍光ポリマーと両親媒性分子の疎水性領域はポリマードットの疎水性コアに埋め込まれ、蛍光ポリマーと両親媒性分子の親水性領域は親水性外層を形成し、蛍光ポリマー中の親水性官能基はポリマードットの表面上の親水性外層に位置する。ポリマードットの表面に局在化されることによって、親水性官能基は、生体分子への付加に利用可能である。特定の実施形態において、蛍光ポリマーは、共役しており、π電子非局在化骨格を含む。蛍光ポリマーは、部分的に又は完全に共役させることができる。本明細書で使用される「蛍光ポリマー」という用語は、蛍光特性を示すポリマーを指す。蛍光ポリマーのこれらに限られるものではない例としては、ポリフルオレン（ＰＤＨＦ及びＰＦＯ等）、ポリ（フェニレンエチニレン）（ＰＰＥ等）、ポリ（フェニレンビニレン）（ＭＥＨ－ＰＰＶ及びＣＮ－ＰＰＶ等）、フルオレン系共重合体（ＰＦＰＶ、ＰＦＢＴ、及びＰＦＤＢＴ５等）、及び関連する誘導体が挙げられる（その全体が参照により本明細書に援用される、Ｗｕ及びＣｈｉｕ、Ａｎｇｅｗ．ＣｈｅｍＩｎｔ．Ｅｄ．２０１３、５２：３０８６～３１０９の図３を参照されたい）。蛍光ポリマーの他のこれらに限られるものではない例としては、その全体が参照により本明細書に援用される、Ｒｏｎｇら、ＡＣＳ Ｎａｎｏ、２０１３、７（１）：３７６－３８４に開示されているようなポリマーを形成するＢＯＤＩＰＹ含有ポリマー及びＢＯＤＩＰＹモノマーが挙げられる。
【0028】
一実施形態において、蛍光ポリマーは、少なくとも２つの異なるモノマーを含むヘテロポリマーである。一実施形態において、少なくとも１つのモノマーは蛍光性であり、少なくとも１つのモノマーは親水性官能基に付加又は連結（例えば、共有結合）されることによって「官能化」される。一実施形態において、親水性官能基は、蛍光ポリマーのポリマー鎖内のモノマーの側鎖に付加する。いくつかの実施形態において、親水性官能基は、蛍光ポリマーの末端単位に付加する。特定の実施形態において、蛍光ポリマーは、親水性官能基に連結された約６～約１０％未満のモノマーを含む。
【0029】
蛍光ポリマーを形成するためのモノマーとしては、これらに限られるものではないが、ＢＯＤＩＰＹ、ＢＯＤＩＰＹ誘導体、フルオレン、フルオレン誘導体、ベンゾチアジアゾール、ベンゾチアジアゾール誘導体、ベンゾオキサジアゾール、及びベンゾオキサジオール誘導体が例示される。いくつかの実施形態において、ヘテロポリマーは、少なくとも２つの異なるモノマーを含む。いくつかの実施形態において、モノマーは、ジブロモベンゾオキサジオール、４，７ビス（２－ブロモ－５－チエニル）－２，１，３－ベンゾチアジアゾール、９，９－ジオクチル－２，７－ジブロモフルオレン、９，９－ジオクチルフルオレン－２，７－ジボロン酸ビス（１，３－プロパンジオール）エステル、
及び／又は
であり、ｎ＝１０～３０である。ｎ＝１０～３０であるポリマー側鎖を有していると、蛍光ポリマー中の親水性官能基がポリマードットの表面上の親水性外層中に位置する「アーム」が生成され、その結果、親水性官能基をバイオコンジュゲーションに利用することができる。一実施形態において、ｎ＝２２である。
【化7】
【化8】
【0030】
両親媒性分子は、少なくとも約１週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年、３年、又は５年以上、凝集を引き起こすことなく、溶液中のポリマードットの水溶性及び安定性を維持するのを助ける。両親媒性分子の疎水性領域は、１～２４個の炭素原子、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４個の炭素原子を有する飽和又は不飽和脂肪族鎖部分を含む。実施形態において、脂肪族鎖部分は、脂質部分の一部を形成する。脂質部分は１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミノ（ＤＳＰＥ）部分、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）部分、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）部分、又は１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）部分を含むが、これらに限定されない。
【0031】
両親媒性分子の親水性領域は、親水性ポリマーを含む。親水性ポリマーとしては、これらに限られるものではないが、ポリオキシアルキレン、ポリアルキレングリコール、及びポリカルボキシアルキレンが挙げられる。親水性ポリマーとしては、これらに限られるものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、ポリカルボキシメチレン、ポリカルボキシエチレン（又はポリアクリル酸（ＰＡＡ））、ポリカルボキシプロピレン、及びポリカルボキシブチレンが例示される。
【0032】
いくつかの実施形態において、ＰＥＧの分子量は、約８００～約５０００、約８００～約４８００、約８００～約４６００、約８００～約４４００、約８００～約４２００、約８００～約４０００、約８００～約３８００、約８００～約３６００、約８００～約３４００、約８００～約３２００、約８００～約３０００、約８００～約２８００、約８００～約２６００、約８００～約２４００、約８００～約２２００、約８００～約２０００、約８００～約１８００、約８００～約１６００、約８００～約１４００、約８００～約１２００、約８００～約１０００、約１０００～約２０００、約１０００～約３０００、約１０００～約４０００、約１０００～約５０００、約８００、約１０００、約１２００、約１４００、約１６００、約１８００、約２０００、約２２００、約２４００、約２６００、約２８００、約３０００、約３２００、約３４００、約３６００、約３８００、約４０００、約４２００、約４４００、約４６００、約４８００、約５０００である。
【0033】
両親媒性分子としては、これらに限られるものではないが、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－ポリ（エチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）及び
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）が例示される。
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－ポリ（エチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）及び
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）が例示される。
【0034】
いくつかの実施形態において、両親媒性分子対蛍光ポリマーの重量比（ｗ／ｗ％で表される）は、約１０％～約２００％、約１０％～約１７５％、約１０％～約１５０％、約１０％～約１００％、約１０％～約７５％、又は約１００％～約２００％の範囲である。いくつかの実施形態において、両親媒性分子対蛍光ポリマーの重量比は、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１０５％、約１１０％、約１１５％、約１２０％、約１２５％、約１３０％、約１３５％、約１４０％、約１４５％、約１５０％、約１５５％、約１６０％、約１６５％、約１７０％、約１７５％、約１８０％、約１８５％、約１９０、約１９５％又は約２００％である。様々な他の実施形態において、両親媒性分子対蛍光ポリマーの重量比は、約４０％～約１００％（又は約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％又は約１００％）の範囲である。これらの値はパーセンテージではなく、１０進形式で表すこともできる（例えば、表１に示すように、０．１、０．２５等）。他の実施形態において、重量比（ｗ／ｗ）は、蛍光ポリマーに対して約０．１～約２（すなわち、約０．１～２．０：１）である両親媒性分子の範囲として表される。これらの実施形態のいくつかは、約０．２５：１、約０．５：１、約０．７５：１、約１：１、約１．２５：１、約１．５：１、約１．７５：１、又は約２：１の重量比となる。重量比が低すぎると、凝集する不安定なポリマードットとなり、重量比が高すぎると、粒径の増大が控えめになる（表１を参照のこと）。いくつかの例において、より高い重量比を使うと、下流のプロセスにおいて問題が生じる（例えば、低いコンジュゲーション収率、表６を参照のこと）。表１にはまた、ポリマーに対する両親媒性分子の様々な重量比（例えば、蛍光ポリマー１ｍｇ当たり０．２５ｍｇの両親媒性分子）が示される。
【0035】
実施形態において、ポリマードットのサイズ（平均有効直径）は、約５ｎｍ～約２５ｎｍ、約１０ｎｍ～約２５ｎｍ、約１０ｎｍ～約２５ｎｍ、又は約１５ｎｍ～約２５ｎｍの範囲である。変形の実施形態において、ポリマードットのサイズは、約１０ｎｍ～約２０ｎｍ、約１０ｎｍ～約１５ｎｍ、又は約１５ｎｍ～約２０ｎｍの範囲である。いくつかの実施形態において、ポリマードットのサイズは、約１０ｎｍ、約１５ｎｍ、約２０ｎｍ、又は約２５ｎｍである。さらに他の実施形態は、平均有効直径が約５ｎｍ、約６ｎｍ、約７ｎｍ、約８ｎｍ、約９ｎｍ、約１０ｎｍ、約１１ｎｍ、約１２ｎｍ、約１３ｎｍ、約１４ｎｍ、約１５ｎｍ、約１６ｎｍ、約１７ｎｍ、約１８ｎｍ、約１９ｎｍ、約２０ｎｍ、約２１ｎｍ、約２２ｎｍ、約２３ｎｍ、約２４ｎｍ、又は約２５ｎｍのポリマードットを提供する。
【0036】
他の実施形態において、開示された方法によって形成されたポリマードットの集団は、約５ｎｍ、約６ｎｍ、約７ｎｍ、約８ｎｍ、約９ｎｍ、約１０ｎｍ、約１１ｎｍ、約１２ｎｍ、約１３ｎｍ、約１４ｎｍ、約１５ｎｍ、約１６ｎｍ、約１７ｎｍ、約１８ｎｍ、約１９ｎｍ、約２０ｎｍ、約２１ｎｍ、約２２ｎｍ、約２３ｎｍ、約２４ｎｍ、又は約２５ｎｍのサイズ（平均有効直径）を有し、ポリマードットの集団中のポリマードットの少なくとも５０％は、規定値以下である平均有効直径を有する。さらに他の実施形態は、少なくとも５０％が約２５ｎｍ以下及び少なくとも約５ｎｍを超える（＜）の平均有効直径を有するポリマードットの集団を提供する（例えば、集団中のポリマードットの少なくとも５０％が約５ｎｍ～約２５ｎｍの範囲の平均有効直径を有する）。さらに他の実施形態は、少なくとも５０％が約２０ｎｍ以下及び少なくとも約５ｎｍを超える（＜）の平均有効直径を有するポリマードットの集団を提供する（例えば、集団中のポリマードットの少なくとも５０％が約５ｎｍ～約２０ｎｍの範囲の平均有効直径を有する）。
【0037】
ポリマードットのバイオコンジュゲーション
また、ポリマードットを生体分子にコンジュゲートする方法も提供される。生体分子は、ポリマードットを生成するために使用される蛍光ポリマー中の親水性官能基を介してポリマードットの表面にコンジュゲートされる。一実施形態において、生体分子は、細胞の表面上の抗原に結合するモノクローナル抗体である。
また、ポリマードットを生体分子にコンジュゲートする方法も提供される。生体分子は、ポリマードットを生成するために使用される蛍光ポリマー中の親水性官能基を介してポリマードットの表面にコンジュゲートされる。一実施形態において、生体分子は、細胞の表面上の抗原に結合するモノクローナル抗体である。
【0038】
生体分子をポリマードットの表面に付加又はコンジュゲートさせるために使用される方法は、表面上に位置する官能基の種類に応じて異なる。例えば、タンパク質のポリマードット－ＮＨ２又はポリマードット－ＣＯＯＨへの付加は、カルボイミド媒介カップリング反応を介してもよい。一実施形態において、生体分子コンジュゲート官能化ポリマードットの特性は、バイオコンジュゲーションの際に変化しない。
【0039】
他の態様において、生物学的サンプル中の標的分子を検出する方法は、生物学的サンプルを開示されたポリマードットと接触させることを含む。
【0040】
ポリマードットの製造方法
また、ポリマードットを製造する方法も提供される。この方法は、非プロトン性溶媒中で蛍光ポリマーと両親媒性分子との混合物を調製することを含み、蛍光ポリマーは、疎水性領域及び親水性領域を含み、親水性領域は親水性官能基を有し、両親媒性分子は、疎水性領域及び親水性領域を含む。
また、ポリマードットを製造する方法も提供される。この方法は、非プロトン性溶媒中で蛍光ポリマーと両親媒性分子との混合物を調製することを含み、蛍光ポリマーは、疎水性領域及び親水性領域を含み、親水性領域は親水性官能基を有し、両親媒性分子は、疎水性領域及び親水性領域を含む。
【0041】
方法の次の工程は、混合物をプロトン性溶媒に添加してポリマードットを形成することを含む。得られたポリマードットにおいて、蛍光ポリマーと両親媒性分子の疎水性領域は、ポリマードットの疎水性コアに埋め込まれ、蛍光ポリマーと両親媒性分子の親水性領域は、親水性外層を形成し、蛍光ポリマー中の親水性官能基は、ポリマードットの表面の親水性外層に位置する。
【0042】
非プロトン性溶媒中の蛍光ポリマーと両親媒性分子との混合物を、プロトン性溶媒に添加すると、球形ポリマードットが形成される。疎水性の低下は、蛍光ポリマー及び両親媒性分子の疎水性領域の崩壊につながる。このようにして形成されたポリマードットは、蛍光ポリマーのコア及び親水性領域に埋め込まれた疎水性領域と、官能基がバイオコンジュゲーションに利用可能であるように、外表面上の両親媒性分子とを有する。
【0043】
非プロトン性溶媒の例としては。テトラヒドロフラン、エーテル、ジクロロメタン、アセトン、アセトニトリル、及びジメチルホルムアミドが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なプロトン性溶媒としては、水、メタノール、エタノール、プロパノール、及びブタノールが挙げられるが、これらに限定されない。
【0044】
いくつかの実施形態において、本方法は、非プロトン性溶媒中の蛍光ポリマーの初期濃度を調整することによって、ポリマードットのサイズを制御することをさらに含む。ポリマードットのサイズを制御することによって、特定の用途におけるポリマードットの使用が可能となる。例えば、サイズが約１０ｎｍ～約２０ｎｍであるポリマードットを、フローサイトメトリーにおいて使用することができる。他の適切なサイズのポリマードットは、異なる用途において有用である。
【0045】
いくつかの実施形態において、非プロトン性溶媒中の蛍光ポリマーの初期濃度は、約０．０５ｍｇ／ｍＬから約５．０ｍｇ／ｍＬ、約０．１から約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．２ｍｇ／ｍＬから約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬから約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬから約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬから約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬから約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．７ｍｇ／ｍＬから約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．８ｍｇ／ｍＬから約１．０ｍｇ／ｍＬ、又は約０．９ｍｇ／ｍＬから約１．０ｍｇ／ｍＬの範囲である。いくつかの実施形態において、非プロトン性溶媒中の蛍光ポリマーの初期濃度は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ、０．７ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、０．９ｍｇ／ｍＬ、又は約１．０ｍｇ／ｍＬである。
【0046】
特定の実施形態において、本方法は、非プロトン性溶媒中の両親媒性分子の初期濃度を制御することによって、ポリマードットの安定性を制御することをさらに含む。
【0047】
様々な限定されない実施形態は以下を含む。
１．疎水性領域及び親水性官能基を有する親水性領域を有する蛍光ポリマーと、
疎水性領域及び親水性領域を有する両親媒性分子と
を含み、該親水性官能基は、コンジュゲーションに利用される、ポリマードット。
２．該蛍光ポリマー及び該両親媒性分子の該疎水性領域は、該ポリマードットの疎水性コアに埋め込まれ、該蛍光ポリマー及び該両親媒性分子の該親水性領域は、親水性外層を形成し、該蛍光ポリマー中の該親水性官能基は、該ポリマードットの表面上の該親水性外層に位置する、実施形態１に記載のポリマードット。
３．該蛍光ポリマーは、ヘテロポリマーである、実施形態１又は２に記載のポリマードット。
４．該ヘテロポリマーは、少なくとも２つの異なるモノマーを含む、実施形態３に記載のポリマードット。
５．該モノマーは、それぞれ独立して、ＢＯＤＩＰＹ、ＢＯＤＩＰＹ誘導体、フルオレン、フルオレン誘導体、ベンゾチアジアゾール、ベンゾチアジアゾール誘導体、ベンゾオキサジアゾール、及びベンゾオキサジオール誘導体からなる群から選択される、実施形態４に記載のポリマードット。
６．該モノマーは、それぞれ独立して、
（ジブロモベンゾオキサジオール）、
（４，７ビス（２－ブロモ－５－チエニル）－２，１，３－ベンゾチアジアゾール）、
（９，９－ジオクチル－２，７－ジブロモフルオレン）、
（９，９－ジオクチルフルオレン－２，７－ジボロン酸ビス（１，３－プロパンジオール）エステル）、
及び
（ｎ＝１０～３０）からなる群から選択される、実施形態５に記載のポリマードット。
７.ｎが２２である、実施形態６に記載のポリマードット。
８.該親水性官能基は、カルボキシル、アミノ、メルカプト、アジド、アルキン、アルデヒド、ヒドロキシル、カルボニル、サルフェート、スルホネート、ホスフェート、シアネート、スクシンイミジルエステル、歪みアルキン、アジド、ジエン、アルケン、テトラジン、歪みアルケン、シクロオクチン、ホスフィン基及びそれらの誘導体からなる群より選択される、実施形態１～７のいずれか１つに記載のポリマードット。
９.該ポリマー中の該親水性官能基は、生体分子にコンジュゲートしている、実施形態１～８のいずれか１つに記載のポリマードット。
１０.該生体分子は、合成又は天然に存在するタンパク質、糖タンパク質、ポリペプチド、アミノ酸、核酸、炭水化物、脂質、及び脂肪酸からなる群より選択される、実施形態９に記載のポリマードット。
１１.該生体分子は、抗体である、実施形態９又は１０に記載のポリマードット。
１２.該両親媒性分子の該親水性領域は、ポリアルキレングリコールを含む、実施形態１又は２に記載のポリマードット。
１３.該ポリアルキレングリコールは、ポリエチレングリコールである、実施形態１２に記載のポリマードット。
１４.該ポリマードットのサイズは、約５～約２５ナノメートル又は約５～約２０ｎｍである、実施形態１～１３のいずれか１つに記載のポリマードット。
１５.該両親媒性分子対該蛍光ポリマーの重量比（ｗ／ｗ％）は、約１０％～約２００％である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載のポリマードット。
１６.該両親媒性分子の該疎水性領域は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミノ（ＤＳＰＥ）部分、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）部分、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）部分、及び（１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン）（ＤＰＰＥ）部分からなる群より選択される脂質部分を含む、実施形態１又は２に記載のポリマードット。
１７．該両親媒性分子は、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－ポリ（エチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）
からなる群から選択される、実施形態１～１６のいずれか１つに記載のポリマードット。
１８．ポリマードットを生成する方法であって、
非プロトン性溶媒中で両親媒性分子と蛍光ポリマーとの混合物を調製し、
該混合物をプロトン性溶媒に添加して、ポリマードットを形成することを含み、
該蛍光ポリマーは、疎水性領域及び親水性領域を含み、該親水性領域は、親水性官能基を有し、該両親媒性分子は、疎水性領域及び親水性領域を含み、該両親媒性分子対該蛍光ポリマーの重量比（ｗ／ｗ）（両親媒性分子：蛍光ポリマー）は、０．１～２：１又は約１０％～約２００％であり、該親水性官能基は、コンジュゲーションに利用される、方法。
１９.該蛍光ポリマー及び該両親媒性分子の該疎水性領域は、該ポリマードットの疎水性コアに埋め込まれ、該蛍光ポリマー及び該両親媒性分子の該親水性領域は、親水性外層を形成し、該蛍光ポリマー中の該親水性官能基は、該ポリマードットの表面上の該親水性外層に位置する、実施形態１８に記載の方法。
２０.該非プロトン性溶媒は、テトラヒドロフランである、実施形態１８又は１９に記載の方法。
２１.該プロトン性溶媒は、水である、実施形態１８又は１９に記載の方法。
２２.生体分子を、該親水性官能基を介して該ポリマードットにコンジュゲートさせることをさらに含む、実施形態１８～２１のいずれか１つに記載の方法。
２３．前記両親媒性分子は、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－ポリ（エチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）
からなる群から選択される、実施形態１８～２２のいずれか１つに記載の方法。
２４.両親媒性分子の蛍光ポリマーに対する重量比（パーセンテージとして表される）は、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１０５％、約１１０％、約１１５％、約１２０％、約１２５％、約１３０％、約１３５％、約１４０％、約１４５％、約１５０％、約１５５％、約１６０％、約１６５％、約１７０％、約１７５％、約１８０％、約１８５％、約１９０％、約１９５％、又は約２００％である、実施形態１８～２３のいずれか１つに記載の方法。
２５.両親媒性分子対蛍光ポリマーの重量比は、約０．１：１、０．２：１、０．３：１、０．４：１、０．５：１、０．６：１、０．７：１、０．８：１、０．９：１、１．０：１、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１、又は２．０：１である、実施形態１８～２３のいずれか１つに記載の方法。
２６.実施形態１８～２５のいずれか１つに記載の方法によって製造されたポリマードットの集団であって、該ポリマードットの集団は、約５ｎｍ～約２５ｎｍの平均有効直径を有し、ただし、該集団中のポリマードットの少なくとも５０％は、約２５ｎｍ未満の平均有効直径を有する、ポリマードットの集団。
２７.生物学的サンプル中の標的分子を検出する方法であって、生物学的サンプルを、実施形態１～１７のいずれか１つのポリマードット又は実施形態２６に記載のポリマードットの集団と接触させ、該標的分子を検出することを含む、方法。
２８.該ポリマードットは、約５ｎｍ～約２５ｎｍの平均有効直径を有し、ただし、該集団中のポリマードットの少なくとも５０％は、約２５ｎｍ未満の平均有効直径を有する、実施形態１～１７のいずれか１つに記載のポリマードット。
２９.該蛍光ポリマーは、ホモポリマーである、実施形態１又は２に記載のポリマードット。
１．疎水性領域及び親水性官能基を有する親水性領域を有する蛍光ポリマーと、
疎水性領域及び親水性領域を有する両親媒性分子と
を含み、該親水性官能基は、コンジュゲーションに利用される、ポリマードット。
２．該蛍光ポリマー及び該両親媒性分子の該疎水性領域は、該ポリマードットの疎水性コアに埋め込まれ、該蛍光ポリマー及び該両親媒性分子の該親水性領域は、親水性外層を形成し、該蛍光ポリマー中の該親水性官能基は、該ポリマードットの表面上の該親水性外層に位置する、実施形態１に記載のポリマードット。
３．該蛍光ポリマーは、ヘテロポリマーである、実施形態１又は２に記載のポリマードット。
４．該ヘテロポリマーは、少なくとも２つの異なるモノマーを含む、実施形態３に記載のポリマードット。
５．該モノマーは、それぞれ独立して、ＢＯＤＩＰＹ、ＢＯＤＩＰＹ誘導体、フルオレン、フルオレン誘導体、ベンゾチアジアゾール、ベンゾチアジアゾール誘導体、ベンゾオキサジアゾール、及びベンゾオキサジオール誘導体からなる群から選択される、実施形態４に記載のポリマードット。
６．該モノマーは、それぞれ独立して、
【化9】
【化10】
【化11】
【化12】
【化13】
【化14】
７.ｎが２２である、実施形態６に記載のポリマードット。
８.該親水性官能基は、カルボキシル、アミノ、メルカプト、アジド、アルキン、アルデヒド、ヒドロキシル、カルボニル、サルフェート、スルホネート、ホスフェート、シアネート、スクシンイミジルエステル、歪みアルキン、アジド、ジエン、アルケン、テトラジン、歪みアルケン、シクロオクチン、ホスフィン基及びそれらの誘導体からなる群より選択される、実施形態１～７のいずれか１つに記載のポリマードット。
９.該ポリマー中の該親水性官能基は、生体分子にコンジュゲートしている、実施形態１～８のいずれか１つに記載のポリマードット。
１０.該生体分子は、合成又は天然に存在するタンパク質、糖タンパク質、ポリペプチド、アミノ酸、核酸、炭水化物、脂質、及び脂肪酸からなる群より選択される、実施形態９に記載のポリマードット。
１１.該生体分子は、抗体である、実施形態９又は１０に記載のポリマードット。
１２.該両親媒性分子の該親水性領域は、ポリアルキレングリコールを含む、実施形態１又は２に記載のポリマードット。
１３.該ポリアルキレングリコールは、ポリエチレングリコールである、実施形態１２に記載のポリマードット。
１４.該ポリマードットのサイズは、約５～約２５ナノメートル又は約５～約２０ｎｍである、実施形態１～１３のいずれか１つに記載のポリマードット。
１５.該両親媒性分子対該蛍光ポリマーの重量比（ｗ／ｗ％）は、約１０％～約２００％である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載のポリマードット。
１６.該両親媒性分子の該疎水性領域は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミノ（ＤＳＰＥ）部分、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）部分、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）部分、及び（１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン）（ＤＰＰＥ）部分からなる群より選択される脂質部分を含む、実施形態１又は２に記載のポリマードット。
１７．該両親媒性分子は、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－ポリ（エチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）
からなる群から選択される、実施形態１～１６のいずれか１つに記載のポリマードット。
１８．ポリマードットを生成する方法であって、
非プロトン性溶媒中で両親媒性分子と蛍光ポリマーとの混合物を調製し、
該混合物をプロトン性溶媒に添加して、ポリマードットを形成することを含み、
該蛍光ポリマーは、疎水性領域及び親水性領域を含み、該親水性領域は、親水性官能基を有し、該両親媒性分子は、疎水性領域及び親水性領域を含み、該両親媒性分子対該蛍光ポリマーの重量比（ｗ／ｗ）（両親媒性分子：蛍光ポリマー）は、０．１～２：１又は約１０％～約２００％であり、該親水性官能基は、コンジュゲーションに利用される、方法。
１９.該蛍光ポリマー及び該両親媒性分子の該疎水性領域は、該ポリマードットの疎水性コアに埋め込まれ、該蛍光ポリマー及び該両親媒性分子の該親水性領域は、親水性外層を形成し、該蛍光ポリマー中の該親水性官能基は、該ポリマードットの表面上の該親水性外層に位置する、実施形態１８に記載の方法。
２０.該非プロトン性溶媒は、テトラヒドロフランである、実施形態１８又は１９に記載の方法。
２１.該プロトン性溶媒は、水である、実施形態１８又は１９に記載の方法。
２２.生体分子を、該親水性官能基を介して該ポリマードットにコンジュゲートさせることをさらに含む、実施形態１８～２１のいずれか１つに記載の方法。
２３．前記両親媒性分子は、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－ポリ（エチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＬＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリエチレングリコール）－ヒドロキシル－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリエチレングリコール）－１０００又は－２０００］（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－ビオチン）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＳＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＭＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＬＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ヒドロキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＯＣＨ３）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＮＨ２）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［カルボキシ（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ＣＯＯＨ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［マレイミド（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－マレイミド）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［ビオチニル（ポリアクリル酸）］（ＤＰＰＥ－ＰＡＡ－ビオチン）
からなる群から選択される、実施形態１８～２２のいずれか１つに記載の方法。
２４.両親媒性分子の蛍光ポリマーに対する重量比（パーセンテージとして表される）は、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１０５％、約１１０％、約１１５％、約１２０％、約１２５％、約１３０％、約１３５％、約１４０％、約１４５％、約１５０％、約１５５％、約１６０％、約１６５％、約１７０％、約１７５％、約１８０％、約１８５％、約１９０％、約１９５％、又は約２００％である、実施形態１８～２３のいずれか１つに記載の方法。
２５.両親媒性分子対蛍光ポリマーの重量比は、約０．１：１、０．２：１、０．３：１、０．４：１、０．５：１、０．６：１、０．７：１、０．８：１、０．９：１、１．０：１、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１、又は２．０：１である、実施形態１８～２３のいずれか１つに記載の方法。
２６.実施形態１８～２５のいずれか１つに記載の方法によって製造されたポリマードットの集団であって、該ポリマードットの集団は、約５ｎｍ～約２５ｎｍの平均有効直径を有し、ただし、該集団中のポリマードットの少なくとも５０％は、約２５ｎｍ未満の平均有効直径を有する、ポリマードットの集団。
２７.生物学的サンプル中の標的分子を検出する方法であって、生物学的サンプルを、実施形態１～１７のいずれか１つのポリマードット又は実施形態２６に記載のポリマードットの集団と接触させ、該標的分子を検出することを含む、方法。
２８.該ポリマードットは、約５ｎｍ～約２５ｎｍの平均有効直径を有し、ただし、該集団中のポリマードットの少なくとも５０％は、約２５ｎｍ未満の平均有効直径を有する、実施形態１～１７のいずれか１つに記載のポリマードット。
２９.該蛍光ポリマーは、ホモポリマーである、実施形態１又は２に記載のポリマードット。
【0048】
実施例
以下の実施例は、例示のためのみであって、限定するものではない。当業者であれば、実質的に同じ又は同様の結果をもたらすように変更又は修正することができる様々な重要でないパラメータが容易に認識される。
以下の実施例は、例示のためのみであって、限定するものではない。当業者であれば、実質的に同じ又は同様の結果をもたらすように変更又は修正することができる様々な重要でないパラメータが容易に認識される。
【0049】
実施例１－ポリマー７００に対するＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨの最適比の判定
ポリマー７００を５０ｍＬの不安定化テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解して、２００ｐｐｍのポリマー溶液を生成した。無水ジメチルスルホキシド中のＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ Ｎａｎｏｓｏｆｔポリマーの２５ｍｇ／ｍＬストック溶液を使用して、０．２５、０．５、０．７５、１．２５、１．５、又は１．７５質量等価のＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨをポリマー溶液に添加して、ポリマーとＰＥＧ－脂質との６つの異なる混合物を生成した。各混合物について、１００ｍＬのナノ純水を氷浴中で３０分間冷却しながら（温度＝５～６℃）、ＴＨＦ中のポリマーとＰＥＧ－脂質の混合物を１５分間冷却した（温度＝２～３℃）。
ポリマー７００を５０ｍＬの不安定化テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解して、２００ｐｐｍのポリマー溶液を生成した。無水ジメチルスルホキシド中のＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ Ｎａｎｏｓｏｆｔポリマーの２５ｍｇ／ｍＬストック溶液を使用して、０．２５、０．５、０．７５、１．２５、１．５、又は１．７５質量等価のＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨをポリマー溶液に添加して、ポリマーとＰＥＧ－脂質との６つの異なる混合物を生成した。各混合物について、１００ｍＬのナノ純水を氷浴中で３０分間冷却しながら（温度＝５～６℃）、ＴＨＦ中のポリマーとＰＥＧ－脂質の混合物を１５分間冷却した（温度＝２～３℃）。
【0050】
ポリマードットを形成するために、ＴＨＦ中のポリマー及びＰＥＧ－脂質の各混合物を、撹拌しながら（速度＝１１．０～１１．２Ｋｒｐｍ）、ポンプ（速度＝３０ｍＬ／分）によって１００ｍＬの冷ナノ純水に注入した。ポリマードット混合物中のＴＨＦを、ｃｅｔｒｉＶａｐ真空濃縮器を用いて３時間蒸発させた。この工程によってまた水が多少除去されて、約２００ｐｐｍのポリマードット溶液となった。
【0051】
ポリマードットのバッチを、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｓｐｉｎ－Ｘ ＵＦ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒｓ又はＳａｒｔｏｒｉｕｓ Ｖｉｖａｃｅｌｌ ２５０（１００ｋ ＭＷＣＯ ＰＥＳ）を使用してさらに５０００ｐｐｍに濃縮した。
【0052】
ポリマードットの各ロットのサイズを、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定した。量子収率（ＱＹ）は、光ルミネセンスＱＹによって決定した。ポリマードットのロットの収率パーセントも計算した。結果を表１に示す。結果は、ポリマーに対するＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨの比が、ポリマードットのサイズに影響を及ぼすことを示している。１ｍｇのポリマー当たり１．２５ｍｇ未満のＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨを有するポリマードットは、６～７ｎｍのｐドット（ＤＬＳによる）を生じる。しかしながら、５０００ｐｐｍに濃縮した後、これらの同じポリマードットのサイズは１７～２０ｎｍ（ＤＬＳによる）に増加した。サイズの増加は凝集体形成によるものであり、低収率（４４～６９％）をもたらす。量子収率もまた、これらのロットについて減少した。１ｍｇのポリマー当たり１．５又は１．７５ｍｇのＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨを添加すると、ＤＬＳサイズが僅かに増大し、ポリマードットの製造コストが増大した。
【0053】
【表1】
【0054】
【表2】
【0055】
実施例２－ポリマー７００及びＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨを用いたポリマードットの生成
ポリマー７００を５０ｍＬの不安定化テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解して、２００ｐｐｍのポリマー溶液を生成した。無水ジメチルスルホキシド中ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ（Ｎａｎｏ－ｓｏｆｔ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ）の２５ｍｇ／ｍＬストック溶液を使用して、１．２５質量等価のＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨをポリマー溶液に添加して、ポリマーとＰＥＧ－脂質との混合物を生成した。ナノ純水１００ｍＬを氷浴中で３０分間冷却しながら（温度＝５～６℃）、ＴＨＦ中のポリマーとＰＥＧ－脂質の混合物を１５分間冷却した（温度＝２～３℃）。
ポリマー７００を５０ｍＬの不安定化テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解して、２００ｐｐｍのポリマー溶液を生成した。無水ジメチルスルホキシド中ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ（Ｎａｎｏ－ｓｏｆｔ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ）の２５ｍｇ／ｍＬストック溶液を使用して、１．２５質量等価のＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨをポリマー溶液に添加して、ポリマーとＰＥＧ－脂質との混合物を生成した。ナノ純水１００ｍＬを氷浴中で３０分間冷却しながら（温度＝５～６℃）、ＴＨＦ中のポリマーとＰＥＧ－脂質の混合物を１５分間冷却した（温度＝２～３℃）。
【0056】
ポリマードットを形成するために、ＴＨＦ中のポリマー及びＰＥＧ－脂質の混合物を、撹拌しながら（速度＝１１．０～１１．２Ｋｒｐｍ）、ポンプ（速度＝３０ｍＬ／分）によって冷ナノ純水中に注入した。ポリマードット混合物中のＴＨＦを、ｃｅｔｒｉＶａｐ真空濃縮器を用いて３時間蒸発させた。この工程によってまた水が多少除去されて、約２００ｐｐｍのポリマードット溶液となった。
【0057】
ポリマードットのいくつかのバッチを、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｓｐｉｎ－Ｘ ＵＦ濃縮器（１００ｋ ＭＷＣＯ ＰＥＳ）を用いて５０００ｐｐｍまでさらに濃縮した。あるいは、複数のポリマードットのバッチを一緒にプールし、タンパク質へコンジュゲーションに備えるために、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｖｉｖａｃｅｌｌ ２５０（１００ｋ ＭＷＣＯ ＰＥＳ）を用いて５０００ｐｐｍまで濃縮した。
【0058】
動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定したポリマードットのサイズを、ポリマードットの４つの異なるロットについての収率％と共に表２に示す。結果は、ロット毎に一貫したサイズを示している。結果はまた、約５０００ｐｐｍに濃縮すると、４つのロットのうち３つについて収率がやや減少したことも示している。
【0059】
【表3】
【0060】
実施例３－ポリマー４６０及びＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨを用いたポリマードットの生成
この実施例では、実施例２と同じ方法を使用して、異なるポリマー（ポリマー４６０）を有するポリマードットを生成した。
この実施例では、実施例２と同じ方法を使用して、異なるポリマー（ポリマー４６０）を有するポリマードットを生成した。
【0061】
ポリマードットの各ロットのサイズを、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定した。量子収率（ＱＹ）は、フォトルミネセンスによって決定した。ポリマードットのロットの収率パーセントも計算した。結果を表３に示す。結果は、ロット毎に一貫したサイズを示している。パーセント収率は、２００ｐｐｍのポリマードットについて７０％から９１％まで変化した。結果はまた、約５０００ｐｐｍまでの濃度の際に、３つのロット全てについて収率がやや減少したことも示している。量子収率は、約５０００ｐｐｍまでの濃度で変化しなかった。
【0062】
【表4】
【0063】
実施例４－ポリマー７００及びＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３を用いたポリマードットの生成
異なるタイプのＰＥＧ－脂質を使用して、ポリマードットを生成した。ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３をＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨの代わりに使用したことを除いて、実施例２と同じ方法を使用した。また、ＰＥＧ－脂質対ポリマーの２つの異なる比：ポリマー１ｍｇ当たり１．２５ｍｇ又は０．７５ｍｇの脂質で試験した。
異なるタイプのＰＥＧ－脂質を使用して、ポリマードットを生成した。ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３をＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨの代わりに使用したことを除いて、実施例２と同じ方法を使用した。また、ＰＥＧ－脂質対ポリマーの２つの異なる比：ポリマー１ｍｇ当たり１．２５ｍｇ又は０．７５ｍｇの脂質で試験した。
【0064】
ポリマードットの各ロットのサイズを、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定した。ポリマードットのロットの収率パーセントも計算した。結果を以下の表４及び５に示す。結果は、試験したポリマーに対するＰＥＧ－脂質の両方の比率について、サイズ及び収率に関して同様の結果を示し、ポリマードットを安定化させるために必要なＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＣＨ３がより少ないことを示している。
【0065】
【表5】
【0066】
【表6】
【0067】
実施例５－ポリマードットへのＩｇＧ抗体の結合
実施例２のポリマードット２５０μｌ（１．２５ｍｇ）を、まず、１．５ｍＬのエッペンドルフ管中で、６．３μｌの２５０ｍＭスルホ－ＮＨＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）及び３．２μｌの２００ｍＭ ＥＤＣ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）と共に、室温で３０分間インキュベートすることによって活性化した。次に、３．２μｌの３Ｍトリエタノールアミン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）及び３．２μｌの１Ｍアミノエチルマレイミド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を管に添加し、混合し、管を暗所にて室温で３時間インキュベートした。
実施例２のポリマードット２５０μｌ（１．２５ｍｇ）を、まず、１．５ｍＬのエッペンドルフ管中で、６．３μｌの２５０ｍＭスルホ－ＮＨＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）及び３．２μｌの２００ｍＭ ＥＤＣ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）と共に、室温で３０分間インキュベートすることによって活性化した。次に、３．２μｌの３Ｍトリエタノールアミン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）及び３．２μｌの１Ｍアミノエチルマレイミド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を管に添加し、混合し、管を暗所にて室温で３時間インキュベートした。
【0068】
２．０μｌの０．５Ｍ ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）及び２．０μｌの１０ｍｇ／ｍＬイミノチオラン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を２００μｌ（１ｍｇ）の抗ＣＤ４ ＩｇＧに１．５ｍＬエッペンドルフ管に添加することによって、抗ＣＤ４ ＩｇＧ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を活性化した。溶液を混合し、室温で１時間インキュベートした。
【0069】
２０μｌの０．５Ｍタウリン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）をポリマードット溶液に添加することによって、活性化ポリマードットを冷却した。ポリマードット溶液を混合し、暗所にて室温で１５分間インキュベートした。
【0070】
活性化ポリマードット及び抗ＣＤ４ ＩｇＧの両方を、４０Ｋ ＭＷＣＯスピンカラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で脱塩し、吸光度を使用して、各脱塩生成物の総量を決定した。ポリマードット対ＩｇＧの比率は３：１をコンジュゲーション反応に用いて、これを、暗所にて４℃で一晩インキュベートした。コンジュゲーションを、１／２００容量の２５％Ｎ－エチルマレイミド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加し、暗所にて室温で３０分間インキュベートすることによって冷却した。
【0071】
フリー抗ＣＤ４抗体を、サイズ排除クロマトグラフィーによってポリマードット－ＩｇＧコンジュゲートから除去した。
【0072】
実施例６－フローサイトメトリーによる、ＩｇＧにコンジュゲートしたポリマードット対対照コンジュゲートの特性決定
フローサイトメトリーを使用して、実施例５からのポリマードット抗ＣＤ４ ＩｇＧコンジュゲート（又は試験コンジュゲート）が、対照コンジュゲート（ＰｅｒＣＰＣｙ５．５、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ製）とどのように比較されるかを決定した。ＺＥ５サファイアフローサイトメーター（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を実験に使用した。
フローサイトメトリーを使用して、実施例５からのポリマードット抗ＣＤ４ ＩｇＧコンジュゲート（又は試験コンジュゲート）が、対照コンジュゲート（ＰｅｒＣＰＣｙ５．５、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ製）とどのように比較されるかを決定した。ＺＥ５サファイアフローサイトメーター（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を実験に使用した。
【0073】
染色指数を、試験コンジュゲート及び対照コンジュゲートについて決定した。染色指数は、式:（ＭＦＩｐｏｓ－ＭＦＩｎｅｇ）／（２＊ｒＳＤｎｅｇ）（式中、ＭＦＩｐｏｓは陽性集団の蛍光強度中央値であり、ＭＦＩｎｅｇは負集団の蛍光強度中央値であり、ｒＳＤｎｅｇは負集団の相対標準偏差である）を用いて計算した。図１を参照すると、試験コンジュゲートは、対照コンジュゲートよりも大幅に高い染色指数（＞＞２ｘ）を与える。
【0074】
正負細胞集団のヒストグラムプロットを、試験（６４５２－６６－１）及び対照（ＰｅｒＣＰＣｙ５．５）コンジュゲートについて得た。結果を図２に示す。試験コンジュゲートについては、ＳＥＣはサイズ排除クロマトグラフィーを指す。試験コンジュゲートの陽性ピーク及び陰性ピークの陽性ピーク形状及び高さは、対照コンジュゲートのものに匹敵した。
【0075】
実施例７－Ｐ－ドット安定性におけるＰＥＧ－脂質の影響
実験：
各ポリマーについて、２組の小さなＰ－ドットを生成した。１つはＤＳＰＥ－ＰＥＧ１０００－ＯＨ（ＰＥＧ－脂質）を含むもの、もう１つはＰＥＧ－脂質を含まないものである。添加されるＰＥＧ－脂質の量は、各ポリマーについて異なり、異なる実験で既に決定しておいたものである。両組の小さいＰ－ドットを～５０００ｐｐｍに濃縮した。粒子サイズ及び収率回復を評価して、Ｐ－ドット安定性を決定した。
結果：
実験：
各ポリマーについて、２組の小さなＰ－ドットを生成した。１つはＤＳＰＥ－ＰＥＧ１０００－ＯＨ（ＰＥＧ－脂質）を含むもの、もう１つはＰＥＧ－脂質を含まないものである。添加されるＰＥＧ－脂質の量は、各ポリマーについて異なり、異なる実験で既に決定しておいたものである。両組の小さいＰ－ドットを～５０００ｐｐｍに濃縮した。粒子サイズ及び収率回復を評価して、Ｐ－ドット安定性を決定した。
結果：
【0076】
【表7】
【0077】
ＰＥＧ－脂質なしで生成された小さなＰ－ドットの不安定性は、５０００ｐｐｍまでの濃度になる前ですでに明らかであった。ポリマー４０５／６１０、４０５／７９０及び４０５／５１５については、ＴＨＦの除去後という早期に凝集が観察された。この結果、ＰＥＧ－脂質で生成された小さいＰ－ドット（８０～９７％）と比較して、低収率（～６０％）となった。
【0078】
ＰＥＧ－脂質なしで生成された小さなＰ－ドットを～５０００ｐｐｍに濃縮することは不可能であった。凝集体が形成され、濃縮器の膜に付着し、依然として希釈された（１０００～２０００ｐｐｍ）低い収率（１２～２４％）となった。対照的に、ＰＥＧ－脂質で生成された小さなＰ－ドットは、ほとんど又は全く工程損失なしで、その小さな粒子サイズを保持していた。
【0079】
実施例８：加速安定性試験
実験方法：
加速貯蔵寿命試験を３７℃で行った。アレニウスモデルに基づいて、反応の活性化エネルギーが１５ｋｃａｌ／ｍｏｌであると仮定すると、３７℃での２０日間は、理論的には４℃（推奨貯蔵温度）での１年間に等しい。
実験方法：
加速貯蔵寿命試験を３７℃で行った。アレニウスモデルに基づいて、反応の活性化エネルギーが１５ｋｃａｌ／ｍｏｌであると仮定すると、３７℃での２０日間は、理論的には４℃（推奨貯蔵温度）での１年間に等しい。
【0080】
Ｐドットを７本のエッペンドルフ管に分けた。６つのサンプルを３７℃で保管し、異なる時点で取り出した（下の表７を参照のこと）。１つのサンプルを４℃で保管し、対照とした。
【0081】
【表8】
【0082】
インキュベーションチャンバーから取り出した後、サンプルを凝集体について調べ、粒子サイズも測定した。安定性試験に合格するためには、サンプルは凝集体を有していてはならず、その粒径は、参照試料の粒径の１５％以内でなければならない。
【0083】
【表9】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【国際調査報告】