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特表2022-544053非枯渇性Ｂ細胞阻害剤によって免疫原性を低下させるための方法および組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-10-17
(54)【発明の名称】非枯渇性Ｂ細胞阻害剤によって免疫原性を低下させるための方法および組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20221007BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20221007BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20221007BHJP
A61K 31/436 20060101ALI20221007BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20221007BHJP
A61K 38/48 20060101ALI20221007BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20221007BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20221007BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20221007BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00
A61K48/00
A61K39/395 U
A61K31/436
A61K39/395 M
A61P37/04
A61K38/48
C07K16/46 ZNA
C07K16/28
C12N15/13
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022505598
(86)(22)【出願日】2020-07-30
(85)【翻訳文提出日】2022-03-28
(86)【国際出願番号】 US2020044312
(87)【国際公開番号】W WO2021022072
(87)【国際公開日】2021-02-04
(31)【優先権主張番号】62/880,240
(32)【優先日】2019-07-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】16/943,849
(32)【優先日】2020-07-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521155829
【氏名又は名称】プロヴェンション・バイオ・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＰＲＯＶＥＮＴＩＯＮ ＢＩＯ， ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】100099623
【弁理士】
【氏名又は名称】奥山 尚一
(74)【代理人】
【識別番号】100125380
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 綾子
(74)【代理人】
【識別番号】100142996
【弁理士】
【氏名又は名称】森本 聡二
(74)【代理人】
【識別番号】100166268
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 祐
(74)【代理人】
【識別番号】100180231
【弁理士】
【氏名又は名称】水島 亜希子
(74)【代理人】
【識別番号】100096769
【氏名又は名称】有原 幸一
(72)【発明者】
【氏名】レオン，フランシスコ
(72)【発明者】
【氏名】ダンフォード，ポール
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
4C086
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA13
4C084AA17
4C084AA19
4C084DA33
4C084MA02
4C084NA05
4C084NA06
4C084ZB082
4C085AA14
4C085BB11
4C085BB42
4C085CC23
4C085DD62
4C085EE01
4C086AA01
4C086AA02
4C086CB22
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA05
4C086ZB07
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
一態様では、生物学的治療剤の投与を受けているまたは受けた患者に、有効量の非枯渇性であるＢ細胞阻害剤を投与することを含む、免疫原性を低下させる方法が本明細書中に開示されている。関連する組成物も提供される。一部の実施形態では、生物学的治療剤は、遺伝子治療剤、遺伝子編集治療剤、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）治療剤、腫瘍退縮ウイルス、酵素補充治療剤、抗体治療剤、タンパク質治療剤、および細胞治療剤のうちの１つまたは複数から選択される。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
生物学的治療剤の投与を受けているまたは受けた患者に、有効量の非枯渇性であるＢ細胞阻害剤を投与するステップを含む、免疫原性を低下させる方法。
【請求項2】
前記生物学的治療剤が、遺伝子治療剤、遺伝子編集治療剤、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）治療剤、腫瘍退縮ウイルス、酵素補充治療剤、抗体治療剤、タンパク質治療剤、および細胞治療剤のうちの１つまたは複数から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記生物学的治療剤が、遺伝子治療剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
前記Ｂ細胞阻害剤が、ＣＤ３２ＢのエピトープおよびＣＤ７９Ｂのエピトープと免疫特異的に結合することができるＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体が、（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤ３２Ｂドメイン、
（Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤ３２Ｂドメイン、
（Ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤ７９Ｂドメイン、および
（Ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤ７９Ｂドメイン
を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
前記ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体が、（Ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖、
（Ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖、および
（Ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む第３のポリペプチド鎖
を含むＦｃダイアボディである、請求項４に記載の方法。
【請求項7】
前記Ｆｃダイアボディを、約５ｍｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇの用量で、１回の用量／２週間～１回の用量／６週間の投薬レジメンで投与することを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
前記Ｆｃダイアボディを、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で、１回の用量／４週間の投薬レジメンで投与することを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項9】
３回用量の前記Ｆｃダイアボディを、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で、２～６週の間隔で投与することを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項10】
第１の用量を、前記生物学的治療剤の投与の約２～６週間前に、第２の用量を、前記生物学的治療剤の投与とほぼ同時に、第３の用量を、前記生物学的治療剤の投与の約２～６週間後に投与することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
前記Ｆｃダイアボディが、投与の際にそれ自身の免疫原性の阻害をもたらし、増加した用量ではより低い有病率および／または抗薬物抗体（ＡＤＡ）の力価を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項12】
前記ＡＤＡが前記Ｆｃダイアボディを中和しない、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記Ｆｃダイアボディが、用量依存的な様式で、投与の際に少なくとも８０％のＢ細胞と結合し、最後の投与から少なくとも４週間、前記Ｂ細胞の少なくとも５０％と結合したまま保たれる、請求項６に記載の方法。
【請求項14】
前記Ｆｃダイアボディが、循環Ｂ細胞を枯渇させずに免疫グロブリン産生の持続的阻害をもたらす、請求項６に記載の方法。
【請求項15】
前記免疫グロブリンが、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＥを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
生物学的治療剤に対する特異的抗体の存在を検査することによって前記患者をモニタリングするステップをさらに含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
免疫原性をさらに調節するために、１回または複数回の用量の前記Ｂ細胞阻害剤を投与するステップをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
１つまたは複数の免疫調節剤を同時投与するステップをさらに含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記１つまたは複数の免疫調節剤が、シロリムス、ラパマイシン、アバタセプト、テプリズマブ、および化膿性連鎖球菌の免疫グロブリンＧ分解酵素から選択される、請求項１８に記載の方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
［関連出願の相互参照］
本出願は、その全体で本明細書中に参考として組み込まれている２０１９年７月３０日に出願の米国仮出願第６２／８８０，２４０号および２０２０年７月３０日に出願の米国実用出願第１６／９４３，８４９号の優先性および優先権を主張するものである。
本出願は、その全体で本明細書中に参考として組み込まれている２０１９年７月３０日に出願の米国仮出願第６２／８８０，２４０号および２０２０年７月３０日に出願の米国実用出願第１６／９４３，８４９号の優先性および優先権を主張するものである。
【0002】
［配列表］
２０２０年７月３０日にＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された、「０１０８０２ｓｅｑ．ｔｘｔ」と題する２０２０年７月３０日に作成した１３，２６７バイトのサイズのＡＳＣＩＩテキストファイルは、その全体が本明細書中に参考として組み込まれている。
２０２０年７月３０日にＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された、「０１０８０２ｓｅｑ．ｔｘｔ」と題する２０２０年７月３０日に作成した１３，２６７バイトのサイズのＡＳＣＩＩテキストファイルは、その全体が本明細書中に参考として組み込まれている。
【0003】
本開示は、一般に、生物学的治療剤の免疫原性を低下させるための組成物および方法に関し、より詳細には、枯渇性でないＢ細胞阻害剤によってそれを行うことに関する。
【背景技術】
【0004】
抗体およびポリペプチドなどのバイオ医薬品を治療剤として使用することには、典型的には抗薬物抗体（ＡＤＡ）応答の発生によって定義される、患者において望ましくない免疫応答を発生させる関連リスクがある。そのような応答は、分子中における「外来」エピトープの存在によって引き起こされる場合があり、とりわけ、患者のゲノムおよび疾患の背景、利用する投薬および投与のレジーム、配合物、ならびに投与経路および不純物などの外因性要因によって悪化する場合がある。これらの免疫応答は、薬理学の変更から薬物クリアランスの増加または治療上の有効性の中和および喪失までの様々な結果を有する場合がある。極端な事例では、タンパク質治療剤は、患者に相当なリスクを与える重篤なアレルギーおよびアナフィラキシー反応の発生を引き起こす場合がある。
【0005】
「外来」剤に対する別の十分に特徴づけられた免疫反応は、内在性の免疫系が外来組織に対して反応してその破壊を引き起こす、いわゆるグラフトまたは移植片拒絶である（宿主対グラフト反応とも呼ばれる）。組織拒絶は液性および細胞性の免疫応答によって媒介されることができる。遺伝子の欠損コピーを取り込ませる目的で（遺伝子治療）、または患者ががん細胞を排除することを助ける（たとえばＣＡＲ－Ｔ治療）ために作製した遺伝子改変細胞の場合、細胞の遺伝子改変に利用した「機構」の一部が改変した細胞によって「提示」され、宿主によって「外来」剤として認識されるかもしれないリスクが存在する。そのような認識は拒絶反応を始動し、これは、そのような処置を潜在的に無効にさせる、または重篤な事例では自己免疫反応を潜在的に引き起こす場合があるであろう。
【0006】
より最近では、遺伝子治療の出現は、導入遺伝子を投与するために利用するウイルスベクターの免疫原性、およびレシピエントの細胞によって発現された後の導入遺伝子タンパク質自体の免疫原性の相当な障壁を経験している。ベクターおよび導入遺伝子の免疫原性は、１）シピエントによって産生された抗体と結合し排除されるベクターおよび導入遺伝子としての有効性の減弱、２）安全性のリスクおよび費用を増加させる、用量の増加の必要性、３）先の投薬後に対象がベクターまたは導入遺伝子に対する抗体を発生した場合における再投薬の困難または不可能をもたらす。時には、レシピエントは、１回目の投与の前でさえもベクターに対する既存の抗体を有しており、天然に存在するウイルスと交差反応して死亡する。ウイルス（たとえばがんにおける腫瘍退縮ウイルス）に基づく他の治療および遺伝子編集治療（たとえばＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９に基づく治療）も免疫原性に悩まされる。
【0007】
したがって、それだけには限定されないが、抗体、細胞治療剤、および遺伝子治療剤を含めた様々な生物学的治療剤によって誘導された免疫原性を低下させるための方法および組成物の必要性が存在する。
【発明の概要】
【0008】
一態様では、生物学的治療剤の投与を受けているまたは受けた患者に、有効量の非枯渇性であるＢ細胞阻害剤を投与することを含む、免疫原性を低下させる方法が本明細書中に開示されている。
【0009】
一部の実施形態では、生物学的治療剤は、遺伝子治療剤、遺伝子編集治療剤、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）治療剤、腫瘍退縮ウイルス、酵素補充治療剤、抗体治療剤、タンパク質治療剤および細胞治療剤のうちの１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、生物学的治療剤は、遺伝子治療剤である。
【0010】
一部の実施形態では、Ｂ細胞阻害剤は、ＣＤ３２ＢのエピトープおよびＣＤ７９Ｂのエピトープと免疫特異的に結合することができるＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体である。一部の実施形態では、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体は、
（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤ３２Ｂドメイン、
（Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤ３２Ｂドメイン、
（Ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤ７９Ｂドメイン、および
（Ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤ７９Ｂドメイン
を含む。
（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤ３２Ｂドメイン、
（Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤ３２Ｂドメイン、
（Ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤ７９Ｂドメイン、および
（Ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤ７９Ｂドメイン
を含む。
【0011】
一部の実施形態では、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体は、
（Ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖、
（Ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖、および
（Ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む第３のポリペプチド鎖
を含むＦｃダイアボディである。
（Ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖、
（Ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖、および
（Ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む第３のポリペプチド鎖
を含むＦｃダイアボディである。
【0012】
一部の実施形態では、本方法は、Ｆｃダイアボディを、約５ｍｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇの用量で、１回の用量／２週間～１回の用量／６週間の投薬レジメンで投与することをさらに含むことができる。一部の実施形態では、本方法は、Ｆｃダイアボディを、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で、１回の用量／４週間の投薬レジメンで投与することを含むことができる。一部の実施形態では、本方法は、３回用量のＦｃダイアボディを、約１０ｍｇ／ｋｇの用量、２～６週の間隔で投与することを含むことができる。
【0013】
一部の実施形態では、本方法は、第１の用量を、生物学的治療剤の投与の約２～６週間前（たとえば４週間前）、第２の用量を、生物学的治療剤の投与とほぼ同時に、第３の用量を、生物学的治療剤の投与の約２～６週間（たとえば４週間）後に投与することを含むことができる。
【0014】
一部の実施形態では、Ｆｃダイアボディは、投与の際にそれ自身の免疫原性の阻害をもたらし、増加した用量ではより低い有病率および／または抗薬物抗体（ＡＤＡ）の力価を有する。一部の実施形態では、ＡＤＡはＦｃダイアボディを中和しない。
【0015】
一部の実施形態では、Ｆｃダイアボディは、用量依存的な様式で、投与の際に少なくとも８０％のＢ細胞と結合し、最後の投与から少なくとも４週間、Ｂ細胞の少なくとも５０％と結合したまま保たれる。
【0016】
一部の実施形態では、Ｆｃダイアボディは、循環Ｂ細胞を枯渇させずに免疫グロブリン産生の持続的阻害をもたらす。一部の実施形態では、免疫グロブリンは、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＥのうちの１つまたは複数を含む。
【0017】
一部の実施形態では、本方法は、生物学的治療剤に対する特異的抗体の存在を検査することによって患者をモニタリングすることをさらに含むことができる。一部の実施形態では、本方法は、免疫原性をさらに調節するために、１回または複数回の用量のＢ細胞阻害剤を投与することをさらに含むことができる。
【0018】
一部の実施形態では、本方法は、シロリムス、ラパマイシン、アバタセプト、テプリズマブ、および化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）の免疫グロブリンＧ分解酵素などの１つまたは複数の免疫調節剤を同時投与することをさらに含むことができる。
【0019】
また、治療上有効な単位用量で提供される（たとえば梱包されている）、本明細書中に開示されている非枯渇性Ｂ細胞阻害剤を含む医薬組成物も、本明細書中で提供される。本明細書中に開示されている投薬レジメンの指示も提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0020】
【図1】本研究の模式図全体像を示す図である。
【図5】ＡＤＡ結果ごと、用量ごとのＰＲＶ－３２７９血清薬物動態学的パラメータの箱ひげ図を示す図である（薬物動態解析対象集団）。
【図6】時間および処置ごとの％抗Ｅ／Ｋ＋（ＣＤ３－／ＣＤ１９＋）の％最大結合算術平均（±ＳＥＭ）を示す図である（薬力学解析対象集団）。
【図7】Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）の細胞数－（細胞数／μＬに戻す）の算術平均（±ＳＥＭ）を示す図である（薬力学解析対象集団）。
【図8】循環血清ＩｇＭレベルの低下の算術平均（±ＳＥＭ）を示す図である（安全性解析対象集団）。
【図9】循環血清ＩｇＥレベルの低下の算術平均（±ＳＥＭ）を示す図である（安全性解析対象集団）。
【図10】循環血清ＩｇＧレベルの低下の算術平均（±ＳＥＭ）を示す図である（安全性解析対象集団）。
【発明を実施するための形態】
【0021】
一態様では、生物学的治療剤の投与を受けているまたは受けた患者に、有効量の非枯渇性であるＢ細胞阻害剤を投与することを含む、免疫原性を低下させる方法が本明細書中に開示されている。一部の実施形態では、Ｂ細胞阻害剤は、それぞれその全体が参考として本明細書の一部をなす米国特許出願公開第２０１６／０１９４３９６号、国際公開第２０１５／０２１０８９号、および国際公開第２０１７／２１４０９６号中に開示されているものなどの、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体である。
【0022】
［定義］
便宜のため、明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲で用いられる特定の用語をここに集める。別段に定義しない限りは、本明細書中で使用するすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の技術者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。
便宜のため、明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲で用いられる特定の用語をここに集める。別段に定義しない限りは、本明細書中で使用するすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の技術者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。
【0023】
単語「ａ」または「ａｎ」の使用は、特許請求の範囲および／または明細書中において用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と併せて使用した場合は、「１つ」を意味し得るが、「１つまたは複数」、「少なくとも１つ」、および「１つ以上」の意味とも一貫している。
【0024】
本出願全体にわたって、用語「約」とは、値が、値を決定するために用いられる方法／装置の誤差の固有のばらつき、または研究対象間に存在するばらつきを含むことを示すために使用する。典型的には、この用語は、状況に応じて、およそ１％もしくはそれ未満、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％のばらつきを包含することを意味する。
【0025】
用語「実質的に」とは、５０％より高い、好ましくは８０％高い、最も好ましくは９０％または９５％より高いことを意味する。
【0026】
特許請求の範囲中における用語「または」の使用は、代替物のみを指すまたは代替物が相互排他的であると明確に示されていない限りは、「および／または」を意味するために使用するが、本開示は、代替物のみおよび「および／または」を指す定義を支持する。
【0027】
本明細書および特許請求の範囲で使用する用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などのｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇのあらゆる形態）、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」（ならびに「有する（ｈａｖｅ）」および「有する（ｈａｓ）」などのｈａｖｉｎｇのあらゆる形態）、「含む、挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）などのｉｎｃｌｕｄｉｎｇのあらゆる形態」）、または「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」および「含む（ｃｏｎｔａｉｎ）」などのｃｏｎｔａｉｎｉｎｇのあらゆる形態）は、包括的またはオープンエンドであり、追加の列挙していない要素または方法ステップを排除しない。本明細書中に記述する任意の実施形態を、本発明の任意の方法、システム、宿主細胞、発現ベクター、および／または組成物に関して実行できることが企図される。さらに、本発明の組成物、システム、宿主細胞、および／またはベクターを使用して、本発明の方法およびタンパク質を達成することができる。
【0028】
本明細書中で使用する用語「から本質的になる」とは、所定の実施形態に必要な要素をいう。この用語は、本開示のその実施形態の基本的かつ新規または機能的な特徴に実質的な影響を与えない追加の要素の存在を許容する。
【0029】
用語「からなる」とは、本明細書中に記載の組成物、方法、および対応するその構成要素をいい、実施形態の説明中に列挙されていない、いかなる要素をも排除する。
【0030】
用語「たとえば」およびその対応する略記「ｅ．ｇ．」（斜体であるかどうかにかかわらない）の使用は、列挙した具体的な用語が代表的な例であり、別段に明確に記述した場合以外は、本発明の実施形態は、参照または引用した具体的な例に限定されることを意図しないことを意味する。
【0031】
「核酸」、「核酸分子」、「オリゴヌクレオチド」、または「ポリヌクレオチド」とは、共有結合されたヌクレオチドを含むポリマー化合物を意味する。用語「核酸」としてはポリリボ核酸（ＲＮＡ）およびポリデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）が挙げられ、これらはどちらも一本鎖または２本鎖であり得る。ＤＮＡとしては、それだけには限定されないが、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、ゲノムＤＮＡ、プラスミドまたはベクターＤＮＡ、および合成ＤＮＡが挙げられる。一部の実施形態では、本発明は、本明細書中に開示されているポリペプチドのうちの任意の１つをコードしているポリヌクレオチドに向けられている、たとえば、Ｃａｓタンパク質またはその変異体をコードしているポリヌクレオチドに向けられている。一部の実施形態では、本発明は、Ｃａｓ３、Ｃａｓ９、ＣａｓｌＯ、またはその変異体をコードしているポリヌクレオチドに向けられている。
【0032】
「遺伝子」とは、ポリペプチドをコードしているヌクレオチドのアセンブリをいい、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ核酸分子が挙げられる。また、「遺伝子」は、コード配列の前（５’非コード配列）および後（３’非コード配列）の調節配列として働くことができる核酸断片もいう。
【0033】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」とは、本明細書中で互換性があるように使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマー形態をいい、コードおよび非コードアミノ酸、化学修飾もしくは生化学修飾したまたは誘導体化したアミノ酸、ならびに修飾したペプチド主鎖を有するポリペプチドを挙げることができる。
【0034】
本明細書中で使用する「抗体」または「抗体分子」とは、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質、たとえば免疫グロブリン鎖またはその断片をいう。抗体分子には抗体（たとえば完全長抗体）および抗体断片が包含される。一実施形態では、抗体分子は、完全長抗体の抗原結合断片もしくは機能的断片、または完全長免疫グロブリン鎖を含む。たとえば、完全長抗体は、天然に存在する、または正常な免疫グロブリン遺伝子断片組み換えプロセスによって形成された、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子（たとえばＩｇＧ）である。実施形態では、抗体分子とは、免疫学的に活性のある、抗体断片などの免疫グロブリン分子の抗原結合部分をいう。抗体断片、たとえば機能的断片とは、抗体の一部分、たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、可変断片（Ｆｖ）、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。機能的抗体断片は、インタクトな（たとえば完全長の）抗体によって認識されるものと同じ抗原と結合する。また、用語「抗体断片」または「機能的断片」としては、重鎖および軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片、または軽鎖および重鎖の可変領域がペプチドリンカーによって接続されている組換え単鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖ タンパク質」）などの、可変領域からなる単離した断片も挙げられる。一部の実施形態では、抗体断片は、Ｆｃ断片または単一アミノ酸残基などの抗原結合活性を有さない抗体の一部分は含まない。例示的な抗体分子としては、完全長抗体および抗体断片、たとえば、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、単鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片、および単鎖可変断片（ｓｃＦｖｓ）が挙げられる。用語「Ｆａｂ」および「Ｆａｂ断片」は互換性があるように使用され、抗体のそれぞれの重鎖および軽鎖からの１つの定常ドメインおよび１つの可変ドメイン、すなわち、ＶＬ、ＣＬ、ＶＨ、およびＣＨ１を含む領域をいう。
【0035】
本明細書全体にわたって、ＩｇＧ重鎖の定常領域中の残基の付番は、参照により明確に本明細書の一部をなすＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， ＮＨ１， ＭＤ （１９９１）にあるようなＥＵインデックスのものである（「Ｋａｂａｔ」）。用語「ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の付番をいう。免疫グロブリンの成熟重鎖および軽鎖の可変ドメインからのアミノ酸は、鎖中のアミノ酸の位置によって命名される。Ｋａｂａｔは、抗体の数々のアミノ酸配列を記載し、それぞれの部分群についてアミノ酸コンセンサス配列を同定し、それぞれのアミノ酸に残基番号を割り当てており、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔによって定義されるように同定される（Ｃｈｏｔｈｉａ， Ｃ． ＆ Ｌｅｓｋ， Ａ． Ｍ． （（１９８７） “Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，”． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１－９１７）によって定義されたＣＤＲＨ１は５個前の残基から始まることを理解されたい）。Ｋａｂａｔの付番スキームは、保存的アミノ酸を参照して、当該の抗体をＫａｂａｔ中のコンセンサス配列のうちの１つとアラインメントすることによって、概論に含まれない抗体へと拡張可能である。残基番号を割り当てるこの方法は、当分野において標準的となっており、キメラまたはヒト化変異体を含めた異なる抗体中の相当する位置のアミノ酸を容易に同定する。たとえば、ヒト抗体軽鎖の位置５０のアミノ酸は、マウス抗体軽鎖の位置５０のアミノ酸に相当する位置を占有する。
【0036】
実施形態では、抗体分子は単一特異性である、たとえば、これは単一のエピトープに対する結合特異性を含む。一部の実施形態では、抗体分子は多特異性である、たとえば、これは複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第１のエピトープに対する結合特異性を有し、第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第２のエピトープに対する結合特異性を有する。一部の実施形態では、抗体分子は二重特異性抗体分子である。
【0037】
用語「二重特異性抗体分子」、「ダイアボディ」、および「二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ（登録商標））」抗体とは、本明細書中で互換性があるように使用され、複数（たとえば、２つ、３つ、４つ、またはそれより多く）のエピトープおよび／または抗原に対する特異性を有する抗体分子をいう。一部の実施形態では、抗体は、それぞれその全体が参考として組み込まれている米国特許出願公開第２０１６／０１９４３９６号、国際公開第２０１５／０２１０８９号、および国際公開第２０１７／２１４０９６号中に開示されているものなどの、抗原結合が可能なダイアボディまたは足場であることができる。一部の実施形態では、抗体は、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性ダイアボディ（すなわち「ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂダイアボディ」、およびＦｃドメインをさらに含むそのようなダイアボディ（すなわち「ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ Ｆｃダイアボディ」）であることができる。一実施形態では、抗体は、チャイニーズハムスター卵巣細胞中で産生させた分子量１１１．５ｋＤａのヒト化ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ ＤＡＲＴ（登録商標）抗体であることができる。
【0038】
本明細書中で使用する「抗原」（Ａｇ）とは、すべてのタンパク質またはペプチドを含む高分子をいう。一部の実施形態では、抗原は、たとえば特定の免疫細胞の活性化および／または抗体の産生に関与する、免疫応答を誘発することができる分子である。抗原は抗体の産生に関与しているだけではない。Ｔ細胞受容体も抗原を認識した（ただし、そのペプチドまたはペプチド断片がＭＨＣ分子と複合体を形成している抗原）。ほぼすべてのタンパク質またはペプチドを含む任意の高分子が抗原となることができる。抗原はまた、ゲノム組換えまたはＤＮＡに由来することもできる。たとえば、免疫応答を誘発することができるタンパク質をコードしているヌクレオチド配列または部分ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡは、「抗原」をコードしている。実施形態では、抗原は、遺伝子の完全長ヌクレオチド配列のみによってコードされている必要はなく、また、抗原は遺伝子によってコードされている必要もまったくない。実施形態では、抗原は合成であることができる、または、生体試料、たとえば、組織試料、腫瘍試料、細胞、もしくは他の生物学的構成要素の流体に由来することができる。本明細書中で使用する「腫瘍抗原」、または互換性がある「がん抗原」としては、がん、たとえば、免疫応答を誘発することができるがん細胞または腫瘍微小環境上に存在するまたはそれに関連する任意の分子が挙げられる。本明細書中で使用する「免疫細胞抗原」としては、免疫応答を誘発することができる免疫細胞上に存在するまたはそれに関連する任意の分子が挙げられる。
【0039】
抗体分子の「抗原結合部位」または「抗原結合断片」または「抗原結合部分」（本明細書中で互換性があるように使用される）とは、抗原結合に参加する、抗体分子、たとえばＩｇＧなどの免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の一部をいう。一部の実施形態では、抗原結合部位は重（Ｈ）および軽（Ｌ）鎖の可変（Ｖ）領域のアミノ酸残基によって形成される。重鎖および軽鎖の可変領域内の３つの高度に相違するストレッチは超可変領域と呼ばれ、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれる、より保存的な隣接するストレッチの間に配置されている。ＦＲとは、自然において免疫グロブリン中で超可変領域の間かつそれに隣接して見つかるアミノ酸配列である。実施形態では、抗体分子中において、軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域は、三次元空間中において互いに対して配置されて抗原結合表面を形成し、これは結合した抗原の三次元表面に相補的である。重鎖および軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる。フレームワーク領域およびＣＤＲは、たとえば、Ｋａｂａｔ， Ｅ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ． ９１－３２４２およびＣｈｏｔｈｉａ， Ｃ． ｅｔ ａｌ． （１９８７） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１－９１７中に定義および記載されている。それぞれの可変鎖（たとえば可変重鎖および可変軽鎖）は、典型的には３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成されており、アミノ末端からカルボキシ末端へとＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４のアミノ酸順序で配置されている。可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲは、一般に、位置２７～３２（ＣＤＲ１）、５０～５６（ＣＤＲ２）、および９１～９７（ＣＤＲ３）の残基を含むと定義されている。可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲは、一般に、位置２７～３３（ＣＤＲ１）、５２～５６（ＣＤＲ２）、および９５～１０２（ＣＤＲ３）の残基を含むと定義されている。当業者は、ループは抗体間で様々な長さであることができ、フレームワークが抗体間で一貫した付番を有するようにＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｉａなどの付番システムが支配することを理解されよう。
【0040】
一部の実施形態では、抗体の抗原結合断片（たとえば融合分子の一部として含まれる場合）は、完全Ｆｃドメインを欠くまたは有さないことができる。ある特定の実施形態では、抗体結合断片は完全ＩｇＧまたは完全Ｆｃを含まないが、軽鎖および／または重鎖からの１つまたは複数の定常領域（またはその断片）を含み得る。一部の実施形態では、抗原結合断片は、いかなるＦｃドメインをも完全に含まないことができる。一部の実施形態では、抗原結合断片は、完全Ｆｃドメインを実質的に含まないことができる。一部の実施形態では、抗原結合断片は、完全Ｆｃドメインの一部分（たとえば、ＣＨ２もしくはＣＨ３ドメインまたはその一部分）を含むことができる。一部の実施形態では、抗原結合断片は完全Ｆｃドメインを含むことができる。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧドメイン、たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。一部の実施形態では、ＦｃドメインはＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。
【0041】
本明細書中で使用する「投与すること」および同様の用語は、組成物を、処置する個体に送達することを意味する。好ましくは、本開示の組成物は、たとえば、皮下、筋肉内、または好ましくは静脈内経路を含む非経口によって投与する。
【0042】
本明細書中で使用する「有効量」とは、任意の医療または診断試験に伴うであろう合理的なリスク／便益比で所望の局所または全身作用を提供するために十分である、生物活性剤または診断用薬剤の量を意味する。これは、患者、疾患、行われている処置、および薬剤の性質に応じて変動する。治療上有効な量は、処置する患者および病状、患者の体重および年齢、病状の重篤度、投与の様式などに応じて変動し、これは当業者によって容易に決定することができる。投与の用量は、たとえば、約１ｎｇ～約１０，０００ｍｇ、約５ｎｇ～約９，５００ｍｇ、約１０ｎｇ～約９，０００ｍｇ、約２０ｎｇ～約８，５００ｍｇ、約３０ｎｇ～約７，５００ｍｇ、約４０ｎｇ～約７，０００ｍｇ、約５０ｎｇ～約６，５００ｍｇ、約１００ｎｇ～約６，０００ｍｇ、約２００ｎｇ～約５，５００ｍｇ、約３００ｎｇ～約５，０００ｍｇ、約４００ｎｇ～約４，５００ｍｇ、約５００ｎｇ～約４，０００ｍｇ、約１μｇ～約３，５００ｍｇ、約５μｇ～約３，０００ｍｇ、約１０μｇ～約２，６００ｍｇ、約２０μｇ～約２，５７５ｍｇ、約３０μｇ～約２，５５０ｍｇ、約４０μｇ～約２，５００ｍｇ、約５０μｇ～約２，４７５ｍｇ、約１００μｇ～約２，４５０ｍｇ、約２００μｇ～約２，４２５ｍｇ、約３００μｇ～約２，０００、約４００μｇ～約１，１７５ｍｇ、約５００μｇ～約１，１５０ｍｇ、約０．５ｍｇ～約１，１２５ｍｇ、約１ｍｇ～約１，１００ｍｇ、約１．２５ｍｇ～約１，０７５ｍｇ、約１．５ｍｇ～約１，０５０ｍｇ、約２．０ｍｇ～約１，０２５ｍｇ、約２．５ｍｇ～約１，０００ｍｇ、約３．０ｍｇ～約９７５ｍｇ、約３．５ｍｇ～約９５０ｍｇ、約４．０ｍｇ～約９２５ｍｇ、約４．５ｍｇ～約９００ｍｇ、約５ｍｇ～約８７５ｍｇ、約１０ｍｇ～約８５０ｍｇ、約２０ｍｇ～約８２５ｍｇ、約３０ｍｇ～約８００ｍｇ、約４０ｍｇ～約７７５ｍｇ、約５０ｍｇ～約７５０ｍｇ、約１００ｍｇ～約７２５ｍｇ、約２００ｍｇ～約７００ｍｇ、約３００ｍｇ～約６７５ｍｇ、約４００ｍｇ～約６５０ｍｇ、約５００ｍｇ、または約５２５ｍｇ～約６２５ｍｇの範囲の、本明細書中に提供する抗体またはその抗原結合部分であることができる。投薬は、たとえば、１週間毎、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、または６週間毎であり得る。最適な治療反応を提供するために投薬レジメンを調節し得る。有効量とは、薬剤のいかなる毒性または有害な効果（副作用）もが、最小化されているおよび／または有益な効果に上回られているものである。投与は、静脈内で、正確にまたは約の６ｍｇ／ｋｇもしくは１２ｍｇ／ｋｇを週に１回、または１２ｍｇ／ｋｇもしくは２４ｍｇ／ｋｇを隔週であり得る。追加の投薬レジメンは以下に記載されている。
【0043】
本明細書中で使用する「薬学的に許容される」とは、一般に安全であり、無毒性であり、生物学的にも他の様式でも望ましくないものではない医薬組成物の調製において有用であるものをいい、獣医学的使用およびヒト製薬的使用のために許容されるものが挙げられる。「薬学的に許容される液体担体」の例としては、水および有機溶媒が挙げられる。好ましい薬学的に許容される水性の液体としては、ＰＢＳ、生理食塩水、およびデキストロース溶液などが挙げられる。
【0044】
用語「免疫原性」とは、抗原またはエピトープなどの特定の物質の、液性および／または細胞媒介性であることができる免疫応答を、ヒトおよび他の動物の体内において誘発する能力をいう。一部の実施形態では、本開示の組成物の投与は、治療剤などの生物学的物質の免疫原性を低下させる、および／またはそれに対する免疫寛容を増加させる。本明細書中で使用する「寛容」または「免疫寛容性」とは、それ以外は実質的に正常な免疫系の設定における、特定の抗原（たとえば治療的生物製剤）に対する免疫応答の非存在をいう。
【0045】
本明細書中で使用する「主要組織適合複合体」または「ＭＨＣ」タンパク質とは、脊椎動物の免疫系において顕著な役割を果たす大きな遺伝子ファミリーによってコードされている細胞表面分子の組をいう。これらのタンパク質の主要な機能は、内在性または外因性（外来）のタンパク質に由来するペプチド断片と結合し、宿主生物の適切なＴ細胞による認識のためにそれらを細胞表面上に表示することである。ＭＨＣ遺伝子ファミリーは、クラスＩ、クラスＩＩ、およびクラスＩＩＩの３つの部分群へと分類される。ヒトＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ遺伝子は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－それぞれＨＬＡクラスＩおよびＨＬＡクラスＩＩとも呼ばれる。ヒトにおける最も研究されているＨＬＡ遺伝子の一部は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－ＤＰＡｌ、ＨＬＡ－ＤＰＢｌ、ＨＬＡ－ＤＱＡｌ、ＨＬＡ－ＤＱＢｌ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－ＤＲＢｌ、およびＨＬＡ－ＤＲＢ３４５の９個のＭＨＣ遺伝子である。
【0046】
本開示の様々な態様は以下にさらに詳述されている。追加の定義は本明細書全体にわたって記載されている。
【0047】
＜非枯渇性Ｂ細胞阻害剤および医薬組成物＞
様々な実施形態では、Ｂ細胞阻害剤を、免疫原性を低下させるまたは調節するために使用することができる。一部の実施形態では、そのようなＢ細胞阻害剤は非枯渇性免疫調節物質である。本明細書中で使用する「非枯渇性（ｎｏｎ－ｄｅｐｌｅｔｉｏｎａｌ）」または「非枯渇性（ｎｏｎ－ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ）」とは、阻害剤または免疫調節物質がＢ細胞活性を完全には枯渇させないことを意味する。他方では、Ｂ細胞の「枯渇」とは、Ｂ細胞を排除または破壊するように働くことを意味し、抗ＣＤ２０抗体、たとえばリツキシマブなどである。したがって、一実施形態では、本明細書中に開示されている非枯渇性Ｂ細胞阻害剤または免疫調節物質はリツキシマブではない。一部の実施形態では、非枯渇性Ｂ細胞阻害剤または免疫調節物質は抗ＣＤ２０抗体または他のＣＤ２０阻害剤ではない。
様々な実施形態では、Ｂ細胞阻害剤を、免疫原性を低下させるまたは調節するために使用することができる。一部の実施形態では、そのようなＢ細胞阻害剤は非枯渇性免疫調節物質である。本明細書中で使用する「非枯渇性（ｎｏｎ－ｄｅｐｌｅｔｉｏｎａｌ）」または「非枯渇性（ｎｏｎ－ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ）」とは、阻害剤または免疫調節物質がＢ細胞活性を完全には枯渇させないことを意味する。他方では、Ｂ細胞の「枯渇」とは、Ｂ細胞を排除または破壊するように働くことを意味し、抗ＣＤ２０抗体、たとえばリツキシマブなどである。したがって、一実施形態では、本明細書中に開示されている非枯渇性Ｂ細胞阻害剤または免疫調節物質はリツキシマブではない。一部の実施形態では、非枯渇性Ｂ細胞阻害剤または免疫調節物質は抗ＣＤ２０抗体または他のＣＤ２０阻害剤ではない。
【0048】
例示的な非枯渇性Ｂ細胞阻害剤としては、それだけには限定されないが、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性阻害剤、ＣＤ３２Ｂモジュレーター、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）遮断剤、たとえば抗ＣＤ２２分子、Ｂ細胞生存および活性化阻害剤、たとえばＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）またはベリムマンブ（ｂｅｌｉｍｕｍａｎｂ）などのＡ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）阻害剤、抗ＣＤ４０および抗ＣＤ４０Ｌ分子、ならびにイブルチニブ（ＰＣＩ－３２７６５）およびアカラブルチニブなどのブルトン（Ｂｒｕｔｏｎ）チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤が挙げられる。
【0049】
一部の実施形態では、Ｂ細胞阻害剤は、すべてその全体が参考として組み込まれている、米国特許出願公開第２０１６／０１９４３９６号、国際公開第２０１５／０２１０８９号、および国際公開第２０１７／２１４０９６号中に開示されているものなどの、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体、またはその抗原結合断片であることができる。
【0050】
例示的なＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性ダイアボディは２本以上のポリペプチド鎖を含むことができ、
（１）ＣＤ３２Ｂ（ＶＬＣＤ３２Ｂ）と結合する抗体のＶＬドメインであって、
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQEIS GYLSWLQQKP GKAPRRLIYA
ASTLDSGVPS RFSGSESGTE FTLTISSLQP EDFATYYCLQ YFSYPLTFGG
GTKVEIK
の配列（配列番号１）を有するＶＬＣＤ３２Ｂドメイン
（２）ＣＤ３２Ｂ（ＶＨＣＤ３２Ｂ）と結合する抗体のＶＨドメインであって、
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DAWMDWVRQA PGKGLEWVAE
IRNKAKNHAT YYAESVIGRF TISRDDAKNS LYLQMNSLRA EDTAVYYCGA
LGLDYWGQGT LVTVSS
の配列（配列番号２）を有するＶＨＣＤ３２Ｂドメイン
（３）ＣＤ７９Ｂ（ＶＬＣＤ７９Ｂ）と結合する抗体のＶＬドメインであって、
DVVMTQSPLS LPVTLGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW FQQRPGQSPN
RLIYLVSKLD SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCWQGTHFP
LTFGGGTKLE IK
の配列（配列番号３）を有するＶＬＣＤ７９Ｂドメイン
（４）ＣＤ７９Ｂ（ＶＨＣＤ７９Ｂ）と結合する抗体のＶＨドメインであって、
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWMNWVRQA PGQGLEWIGM
IDPSDSETHY NQKFKDRVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCARAM
GYWGQGTTVT VSS
の配列（配列番号４）を有するＶＨＣＤ７９Ｂドメイン
を含むことができる。
（１）ＣＤ３２Ｂ（ＶＬＣＤ３２Ｂ）と結合する抗体のＶＬドメインであって、
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQEIS GYLSWLQQKP GKAPRRLIYA
ASTLDSGVPS RFSGSESGTE FTLTISSLQP EDFATYYCLQ YFSYPLTFGG
GTKVEIK
の配列（配列番号１）を有するＶＬＣＤ３２Ｂドメイン
（２）ＣＤ３２Ｂ（ＶＨＣＤ３２Ｂ）と結合する抗体のＶＨドメインであって、
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DAWMDWVRQA PGKGLEWVAE
IRNKAKNHAT YYAESVIGRF TISRDDAKNS LYLQMNSLRA EDTAVYYCGA
LGLDYWGQGT LVTVSS
の配列（配列番号２）を有するＶＨＣＤ３２Ｂドメイン
（３）ＣＤ７９Ｂ（ＶＬＣＤ７９Ｂ）と結合する抗体のＶＬドメインであって、
DVVMTQSPLS LPVTLGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW FQQRPGQSPN
RLIYLVSKLD SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCWQGTHFP
LTFGGGTKLE IK
の配列（配列番号３）を有するＶＬＣＤ７９Ｂドメイン
（４）ＣＤ７９Ｂ（ＶＨＣＤ７９Ｂ）と結合する抗体のＶＨドメインであって、
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWMNWVRQA PGQGLEWIGM
IDPSDSETHY NQKFKDRVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCARAM
GYWGQGTTVT VSS
の配列（配列番号４）を有するＶＨＣＤ７９Ｂドメイン
を含むことができる。
【0051】
一実施形態では、Ｂ細胞阻害剤は、ＰＲＶ－３２７９、チャイニーズハムスター卵巣細胞中で産生させた分子量１１１．５ｋＤａのヒト化ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ（登録商標））タンパク質であることができる。ＤＡＲＴ（登録商標）タンパク質は、２つの明白に異なる抗原と同時に結合することができる、二重特異性の、抗体に基づく分子である。ＰＲＶ－３２７９は、Ｂリンパ球上のＣＤ３２Ｂ（Ｆｃガンマ受容体ＩＩｂ）およびＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）複合体の免疫グロブリン関連ベータサブユニット）を標的とするように設計されている。Ｂリンパ球上におけるＣＤ３２ＢおよびＣＤ７９Ｂの優先的なシス結合様式での同時ライゲーションは、ＣＤ３２Ｂとカップリングさせた免疫受容体チロシンに基づく阻害性モチーフシグナル伝達を始動させ、これが、広範な枯渇なしに、抗原媒介性のナイーブおよび記憶Ｂ細胞の活性化を減少させる。インビボ半減期を延長させるために、ＰＲＶ－３２７９は、ＦｃγＲおよび補体との望ましくない結合を大きく低下させるか排除するが、新生児ＦｃＲ結合に対する親和性を保持してこの受容体によって媒介されたＩｇＧサルベージ経路を利用するように突然変異させた、ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）１ Ｆｃ領域も含有する。
【0052】
ＣＤ３２Ｂ分子は、Ｂ細胞ならびにマクロファージ、好中球、および肥満細胞などの他の免疫エフェクター細胞上で広く発現される膜貫通の阻害性受容体である。ＰＲＶ－３２７９の抗ＣＤ３２Ｂ構成要素は、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ社専売のマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）８Ｂ５のヒト化バージョンに基づいている。ＣＤ７９Ｂは、Ｂ細胞上で排他的に発現される、ＢＣＲの必須のシグナル伝達構成要素である。ＰＲＶ－３２７９の抗ＣＤ７９Ｂ構成要素はマウスｍＡｂ ＣＢ３のヒト化バージョンに基づいている。
【0053】
一実施形態では、ＰＲＶ－３２７９は、以下の配列を含む（ＣＤＲには下線を引き、コイルドメインを太字で示す）。
【化1】
【化2】
【化3】
【0054】
別の態様では、本明細書中に開示されている方法において使用することができる医薬組成物、すなわち、それを必要としている対象において、たとえば顕著な免疫原性を引きおこす生物製剤の投与を受けている間もしくはその後に、免疫原性を低下させるもしくは抑制するための医薬組成物、または対象が生物療法剤に対して既存の免疫原性を有していたため（たとえば、以前の野生型アデノウイルス感染症が原因もしくはｒＡＡＶ治療への以前の曝露が原因の、既存の抗ＡＡＶ抗体の場合）に使用することができる医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、本明細書中に開示されている組成物は、免疫原性を防止するおよび／または既存の抗体を低下させるために、抗体または遺伝子治療剤などの生物製剤の投与を受ける前に患者に投与することができる。
【0055】
一部の実施形態では、医薬組成物は、本明細書中に開示されているＢ細胞阻害剤および薬学的に許容される担体を含む。Ｂ細胞阻害剤は、薬学的に許容される担体を用いて医薬組成物内に配合することができる。さらに、医薬組成物は、たとえばそれを必要としている対象において、たとえば顕著な免疫原性を引きおこす生物製剤の投与を受けている間またはその後に免疫原性を低下させるまたは抑制するために患者を処置するための組成物の、使用説明書を含むことができる。
【0056】
本明細書中で使用する「薬学的に許容される担体」としては、任意かつすべての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、緩衝剤、ならびに生理的に適合性のある他の賦形剤が挙げられる。好ましくは、担体は非経口、経口、または外用の投与に適切である。投与経路に応じて、活性化合物、たとえば小分子または生物製剤は、酸の作用および化合物を失活させ得る他の天然条件から化合物を保護する材料でコーティングし得る。
【0057】
薬学的に許容される担体としては、無菌的な水溶液または分散体および無菌的な注射用溶液または分散体を即時調製するための無菌的な粉末、ならびに錠剤、丸薬、カプセルなどを調製するための慣用の賦形剤が挙げられる。製薬的に活性のある物質を配合するためのそのような媒体および薬剤の使用は当分野で知られている。いかなる慣用の媒体または薬剤も、活性化合物と不適合である場合以外は、本明細書中に提供する医薬組成物におけるその使用が企図される。補助的な活性化合物も組成物内に取り込ませることができる。
【0058】
薬学的に許容される担体としては、薬学的に許容される抗酸化剤を挙げることができる。製薬的に許容される抗酸化剤の例としては、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤、（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ－トコフェロールなどの油可溶性抗酸化剤、および（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート化剤が挙げられる。
【0059】
本明細書中に提供する医薬組成物において用い得る適切な水性および非水性の担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびその適切な混合物、ならびにオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルが挙げられる。必要な場合は、適切な流動性を、たとえば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散体の場合は所要の粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合、等張化剤、たとえば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、または塩化ナトリウムを組成物中に含めることが有用であり得る。注射用組成物の持続的吸収は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、たとえばモノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることによってもたらすことができる。
【0060】
これらの組成物は、保存料、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などの機能的賦形剤も含有し得る。
【0061】
治療的組成物は、典型的には、無菌的、非系統学的（ｎｏｎ－ｐｈｙｌｏｇｅｎｉｃ）、かつ製造および貯蔵の条件下で安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高い薬物濃度に適した他の秩序構造として配合することができる。
【0062】
無菌的注射用溶液は、活性化合物を、所要量で、適切な溶媒中に、必要に応じて上に列挙した構成成分のうちの１つまたは組合せと共に取り込ませ、続いて、たとえば微量濾過によって滅菌することによって、調製することができる。一般に、分散体は、活性化合物を、基本分散媒および上に列挙したものからの所要の他の構成成分を含有する無菌的ビヒクル内に取り込ませることによって調製する。無菌的注射用溶液を調製するための無菌的粉末の場合、調製方法としては、活性成分および事前に無菌濾過したその溶液からの任意の追加の所望の構成成分の粉末を与える、真空乾燥および凍結乾燥が挙げられる。活性薬剤（複数でもよい）を、追加の薬学的に許容される担体（複数でもよい）および必要であり得る任意の保存料、緩衝剤、または噴霧剤と共に、無菌的条件下で混合し得る。
【0063】
微生物の存在の防止は、上記の滅菌手順、ならびに様々な抗細菌剤および抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの包含の両方によって確実にし得る。糖、塩化ナトリウムなどの等張化剤を組成物内に含めることも望ましい場合がある。さらに、注射用製薬形態の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤の包含によってもたらし得る。
【0064】
最適な所望の応答（たとえば治療反応）を提供するために投薬レジメンを調節する。たとえば、単一ボーラスを投与し得る、いくつかの分割用量を経時的に投与し得る、または、治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例的に低下または増加させ得る。
【0065】
抗体を投与するための例示的な投薬範囲としては、１０～１０００ｍｇ（抗体）／ｋｇ（患者の体重）、１０～８００ｍｇ／ｋｇ、１０～６００ｍｇ／ｋｇ、１０～４００ｍｇ／ｋｇ、１０～２００ｍｇ／ｋｇ、３０～１０００ｍｇ／ｋｇ、３０～８００ｍｇ／ｋｇ、３０～６００ｍｇ／ｋｇ、３０～４００ｍｇ／ｋｇ、３０～２００ｍｇ／ｋｇ、５０～１０００ｍｇ／ｋｇ、５０～８００ｍｇ／ｋｇ、５０～６００ｍｇ／ｋｇ、５０～４００ｍｇ／ｋｇ、５０～２００ｍｇ／ｋｇ、１００～１０００ｍｇ／ｋｇ、１００～９００ｍｇ／ｋｇ、１００～８００ｍｇ／ｋｇ、１００～７００ｍｇ／ｋｇ、１００～６００ｍｇ／ｋｇ、１００～５００ｍｇ／ｋｇ、１００～４００ｍｇ／ｋｇ、１００～３００ｍｇ／ｋｇ、および１００～２００ｍｇ／ｋｇが挙げられる。例示的な投薬スケジュールとしては、３日毎に１回、５日毎に１回、７日毎に１回（すなわち１週間に１回）、１０日毎に１回、１４日毎に１回（すなわち２週間毎に１回）、２１日毎に１回（すなわち３週間毎に１回）、２８日毎に１回（すなわち４週間毎に１回）、１カ月に１回、５週間毎に１回、および６週間毎に１回が挙げられる。
【0066】
一部の実施形態では、約５～４０ｍｇ／ｋｇ、約５～２０ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ／ＰＲＶ－３２７９の用量を、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、５週間５毎に１回、または６週間毎に１回、投与することができる。１回用量、２回用量、または３回用量などの、１回または複数回の用量を投与することができる。投与は、ＩＶ輸液を介するものであることができる。前述のものの任意の組合せ（たとえば、３回用量の１０ｍｂ／ｋｇ／用量、４週間毎に１回）を、遺伝子治療製品を含めた生物療法剤の免疫原性を低下させるために使用することができる。一部の実施形態では、第１の用量を、遺伝子治療の２～６週間（たとえば４週間）前に、第２の用量を、遺伝子治療とほぼ同時に、第３の用量を、遺伝子治療の２～６週間（たとえば４週間）後に与えることができる。それ以降、遺伝子治療ベクター（たとえばｒＡＡＶ）および／または導入遺伝子に対する特異的抗体の量を検査することによって、患者をモニタリングすることができる。抗体が検出されないまたはわずかしか検出されない場合は、追加のＰＲＶ－３２７９の必要はない。有意な量の抗体が存在する場合は、免疫原性をさらに調節するため１回または複数回の用量のＰＲＶ－３２７９を投与することができる。
【0067】
投与の容易性および投薬の均一性のために、非経口組成物を単位剤形で配合することが有利であり得る。本明細書中で使用する単位剤形とは、処置する患者の単位投薬に適した物理的に別個の単位をいう。それぞれの単位は、任意の所要の製薬的担体と関連して所望の治療効果を生じるように計算された、事前に決定された量の活性薬剤を含有する。単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物のユニークな特徴および達成する特定の、ならびに（ｂ）個体において感度を処置するための、そのような活性化合物を配合する分野に固有の制限によって指示され、それに直接依存する。
【0068】
本明細書中に開示されている医薬組成物中の活性成分の実際の投薬レベルは、患者に対して毒性とならずに、特定の患者、組成物、および投与様式において所望の治療反応を達成するために有効である、活性成分の量を得るために、変動させ得る。投与のコンテキストにおいて本明細書中で使用する「非経口」とは、経腸および外用投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、それだけには限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、および胸骨内の注射、ならびに輸液が挙げられる。
【0069】
本明細書中で使用する語句「非経口投与」および「非経口投与した」とは、経腸（すなわち消化管を介する）および外用投与以外の、通常は注射または輸液による投与様式をいい、それだけには限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、および胸骨内の注射、ならびに輸液が挙げられる。静脈内注射および輸液が抗体投与にしばしば（であるが排他的ではなく）使用される。
【0070】
本明細書中に提供する薬剤を製薬としてヒトまたは動物に投与する場合、これらは、単独で、または、たとえば０．００１～９０％（たとえば０．００５～７０％、たとえば０．０１～３０％）の活性成分を薬学的に許容される担体と組み合わせて含有する医薬組成物として与えることができる。
【0071】
＜治療的使用および方法＞
本明細書中に開示されている組成物を使用して、コード化導入遺伝子タンパク質、遺伝子編集治療（たとえばＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）治療（たとえばｍＲＮＡワクチン）、腫瘍退縮ウイルス（たとえば、ＶＳＶ、ＨＳＶ－１）、酵素補充治療（たとえば第ＶＩＩＩ／ＩＸ因子交換）、抗体および融合タンパク質に基づく治療剤（たとえば抗ＴＮＦ生物製剤）、細胞治療（たとえばＣＡＲ－Ｔ治療）を含む、様々な手段（たとえば、ＡＡＶならびに他の野生型および組換えベクター、レンチウイルス改変ヒト幹細胞）によって送達する遺伝子治療剤などの様々な生物製剤製品によって引き起こされた免疫原性を低下させるまたは抑制することができる。
本明細書中に開示されている組成物を使用して、コード化導入遺伝子タンパク質、遺伝子編集治療（たとえばＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）治療（たとえばｍＲＮＡワクチン）、腫瘍退縮ウイルス（たとえば、ＶＳＶ、ＨＳＶ－１）、酵素補充治療（たとえば第ＶＩＩＩ／ＩＸ因子交換）、抗体および融合タンパク質に基づく治療剤（たとえば抗ＴＮＦ生物製剤）、細胞治療（たとえばＣＡＲ－Ｔ治療）を含む、様々な手段（たとえば、ＡＡＶならびに他の野生型および組換えベクター、レンチウイルス改変ヒト幹細胞）によって送達する遺伝子治療剤などの様々な生物製剤製品によって引き起こされた免疫原性を低下させるまたは抑制することができる。
【0072】
一部の実施形態では、本明細書中に開示されているＢ細胞免疫調節物質を使用して、
１．以下を含む、ｒＡＡＶ（組換えアデノ関連ウイルス）ベクターに基づく治療：
・導入遺伝子の「従来の」ウイルス送達、たとえば遺伝性酵素欠損症のためのｒＡＡＶ
・遺伝子編集技術（たとえば、クラスター化された規則的な間隔の短い回文構造リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連ヌクレアーゼＣａｓ９（「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９」）のインビボ送達のためのｒＡＡＶ
・ワクチン抗体（たとえばインフルエンザ）の送達のためのｒＡＡＶ
２．レンチウイルス改変ＨＳＣを用いたヒト幹細胞（ＨＳＣ）治療、
３．Ｃａｓ９タンパク質送達（Ｃａｓ９は細菌由来および免疫原性である）、ならびに
４．水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）および単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）などの腫瘍退縮ウイルス
などの遺伝子および細胞に基づく治療の複数の既存または新興プラットフォームを改善させることができる。
１．以下を含む、ｒＡＡＶ（組換えアデノ関連ウイルス）ベクターに基づく治療：
・導入遺伝子の「従来の」ウイルス送達、たとえば遺伝性酵素欠損症のためのｒＡＡＶ
・遺伝子編集技術（たとえば、クラスター化された規則的な間隔の短い回文構造リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連ヌクレアーゼＣａｓ９（「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９」）のインビボ送達のためのｒＡＡＶ
・ワクチン抗体（たとえばインフルエンザ）の送達のためのｒＡＡＶ
２．レンチウイルス改変ＨＳＣを用いたヒト幹細胞（ＨＳＣ）治療、
３．Ｃａｓ９タンパク質送達（Ｃａｓ９は細菌由来および免疫原性である）、ならびに
４．水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）および単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）などの腫瘍退縮ウイルス
などの遺伝子および細胞に基づく治療の複数の既存または新興プラットフォームを改善させることができる。
【0073】
一部の実施形態では、本明細書中に開示されているＢ細胞免疫調節物質を使用して、全身性、筋肉内、眼球（高い局所用量を必要とし、局所免疫応答をもたらす）、および中枢神経系（ＣＮＳ）（ＣＮＳからのウイルスカプシドの漏出が、ＣＮＳ中におけるＡＡＶの取り込みを減弱させる全身性応答を誘導する）などの複数の送達経路（認知されている免疫特権部位でえさも）によって誘発される制限免疫応答を調節することができる。
【0074】
一部の実施形態では、本明細書中に開示されているＢ細胞免疫調節物質を使用して、
・中和抗体（ｎＡｂ）の開発
・抗体依存性細胞介在性細胞毒性
・抗体依存性補体媒介性細胞毒性
・自律的Ｂ細胞活性化、たとえばトール様受容体（ＴＬＲ）を介したもの
を含むＢ細胞依存性である複数の制限免疫経路を調節することができる。
・中和抗体（ｎＡｂ）の開発
・抗体依存性細胞介在性細胞毒性
・抗体依存性補体媒介性細胞毒性
・自律的Ｂ細胞活性化、たとえばトール様受容体（ＴＬＲ）を介したもの
を含むＢ細胞依存性である複数の制限免疫経路を調節することができる。
【0075】
一部の実施形態では、本明細書中に開示されているＢ細胞免疫調節物質を使用して、繰り返し投薬および／またはＡＡＶ用量の増加などのＢ細胞調節を通じて複数のＡＡＶの臨床応用を改善させることができる。
【0076】
一部の実施形態では、ＰＲＶ－３２７９の投与後、ピーク血漿濃度は二重特異性分子の輸液の終わりに起こり、複数の投薬の際に蓄積は最小限であった。これは、ＰＲＶ－３２７９が良好な薬物動態学的特性を有することを示す。
【0077】
一部の実施形態では、ＰＲＶ－３２７９二重特異性剤の投与は、それ自身の免疫原性の阻害、すなわち、薬物の用量の増加に伴ってより低い有病率および／または抗薬物抗体（ＡＤＡ）の力価をもたらすことができる。このことは、他の免疫調節剤とは対照的である。さらに、これは、２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、または４０ｍｇ／ｋｇなどの増加したＰＲＶ－３２７９の用量が、追加の免疫原性なしで十分に許容されうることを示唆している。
【0078】
一部の実施形態では、ＰＲＶ－３２７９ ＡＤＡが薬物動態学（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）、安全性、または有効性に影響を与えないことが観察されている。ＡＤＡは通常は少なくともＰＫおよびＰＤに影響を与えるため、このことは驚くべきである。理論に束縛されないが、ＡＤＡはＰＲＶ－３２７９を中和しないことが仮定されている。
【0079】
一部の実施形態では、ＰＲＶ－３２７９二重特異性剤は、用量依存的な様式で、投与の際、ネイティブおよび記憶表現型の両方を含むＢ細胞のほとんど（たとえば＞８０～９０％）と結合し、薬物の特定のより高用量での最後の投与から少なくとも４週間にわたって、Ｂ細胞の少なくとも５０％と結合したまま保たれる。これは、ＰＲＶ－３２７９のＰＤ効果の持続的耐久性を示しており、１カ月（またはより長い期間）に１回の投与を支持する。
【0080】
一部の実施形態では、用量依存性およびＰＲＶ－３２７９二重特異性薬物による持続的Ｂ細胞結合は、Ｂ細胞を含むいかなる循環細胞サブセットも枯渇していない場合に、免疫グロブリン産生の耐久性のある阻害をもたらす。末梢血中で低下している免疫グロブリンとしては、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＥが挙げられる。阻害は、抗原刺激の非存在または存在（たとえばワクチン接種）において観察することができる。これは、患者が、Ｂ細胞などの循環細胞を免疫系の一部として機能するように保持することができるための、ＰＲＶ－３２７９の非枯渇剤としての有利な安全機能である。対照的に、枯渇剤（たとえば、リツキシマブ、オクレリズマブ、イネビリズマブ）を受けている患者は回復に時間がかかる（たとえば１年）。
【実施例】
【0081】
実施した実験および達成された結果を含む以下の実施例は、例示目的のみで提供し、本開示を限定するものと解釈されるべきでない。
【0082】
［実施例１］
＜組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）に対する免疫原性の低下＞
特定の実験では、薬理学的カバレッジを維持するために、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を、単独療法として、または、たとえば、シロリムス、ラパマイシン、アバタセプト、テプリズマブ、および化膿性連鎖球菌の免疫グロブリンＧ分解酵素などの他の免疫調節剤と組み合わせて、マウスに、潜在的に治療的である導入遺伝子をコードしているｒＡＡＶベクターを投与する前に、およびそれ以降の続く時点に投与することができる。特定の時点（たとえば１５～４５日）で、マウスを安楽死させることができ、免疫学的評価およびアデノ随伴ウイルス遺伝子移入効率の評価をすることができる。免疫学的エンドポイントとしては、それぞれｒＡＡＶベクターおよび導入遺伝子に対する全抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ）、補体の活性化、ベクターおよび導入遺伝子に対するＢ細胞およびＴ細胞の機能アッセイ、ならびに表現型の特徴づけが挙げられる。アデノ随伴ウイルス遺伝子移入の効率の測度としては、ＰＣＲによる血中ベクターゲノムコピー数、ならびに、それだけには限定されないが、心臓、骨格筋、肝臓、および脾臓を含む組織中における導入遺伝子の活性が挙げられる。
＜組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）に対する免疫原性の低下＞
特定の実験では、薬理学的カバレッジを維持するために、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を、単独療法として、または、たとえば、シロリムス、ラパマイシン、アバタセプト、テプリズマブ、および化膿性連鎖球菌の免疫グロブリンＧ分解酵素などの他の免疫調節剤と組み合わせて、マウスに、潜在的に治療的である導入遺伝子をコードしているｒＡＡＶベクターを投与する前に、およびそれ以降の続く時点に投与することができる。特定の時点（たとえば１５～４５日）で、マウスを安楽死させることができ、免疫学的評価およびアデノ随伴ウイルス遺伝子移入効率の評価をすることができる。免疫学的エンドポイントとしては、それぞれｒＡＡＶベクターおよび導入遺伝子に対する全抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ）、補体の活性化、ベクターおよび導入遺伝子に対するＢ細胞およびＴ細胞の機能アッセイ、ならびに表現型の特徴づけが挙げられる。アデノ随伴ウイルス遺伝子移入の効率の測度としては、ＰＣＲによる血中ベクターゲノムコピー数、ならびに、それだけには限定されないが、心臓、骨格筋、肝臓、および脾臓を含む組織中における導入遺伝子の活性が挙げられる。
【0083】
プラセボ対照と比較して、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体をｒＡＡＶレシピエント動物に投与することで達成された結果としては、抗ｒＡＡＶおよび導入遺伝子特異的抗体の応答の減弱、補体の活性化の減少、ならびに抗ｒＡＡＶ特異的Ｔ細胞活性の低下を挙げることができる。ベクターゲノムコピー数および導入遺伝子の活性は、プラセボ動物と比較して、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体の投与で増加させることができ、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体の投与が組換えＡＡＶの免疫原性を低下させるという仮説を支持する。
【0084】
［実施例２］
＜組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）の繰り返し投薬に対する免疫原性の低下＞
特定の実験では、薬理学的カバレッジを維持するために、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を、単独療法として、または、他の免疫調節剤、たとえばシロリムスと組み合わせて、マウスに、潜在的に治療的である導入遺伝子をコードしているｒＡＡＶベクターを投与する前に、およびそれ以降の続く時点に投与することができる。特定の時点（たとえば、４５、９０、１３５日）で、マウスは、同じｒＡＡＶベクター／導入遺伝子の追加の投与（複数回でもよい）を受けることができる。マウスは、特定の時点（たとえば、９０、１３５、１８０日）で安楽死させ、免疫学的エンドポイントおよびアデノ随伴ウイルス遺伝子移入の効率の評価を行う前は、薬理学的に関連性のある用量のＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を受け続けることができる。測定した免疫学的エンドポイントとしては、それぞれｒＡＡＶベクターおよび導入遺伝子に対する全抗体、補体の活性化、ベクターおよび導入遺伝子に対するＢ細胞およびＴ細胞機能アッセイ、ならびに表現型の特徴づけが挙げられる。アデノ随伴ウイルス遺伝子移入の効率の測度としては、ＰＣＲによるベクターゲノムコピー数、ならびに、それだけには限定されないが、心臓、骨格筋、肝臓、および脾臓を含む様々な組織中における導入遺伝子の活性が挙げられる。
＜組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）の繰り返し投薬に対する免疫原性の低下＞
特定の実験では、薬理学的カバレッジを維持するために、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を、単独療法として、または、他の免疫調節剤、たとえばシロリムスと組み合わせて、マウスに、潜在的に治療的である導入遺伝子をコードしているｒＡＡＶベクターを投与する前に、およびそれ以降の続く時点に投与することができる。特定の時点（たとえば、４５、９０、１３５日）で、マウスは、同じｒＡＡＶベクター／導入遺伝子の追加の投与（複数回でもよい）を受けることができる。マウスは、特定の時点（たとえば、９０、１３５、１８０日）で安楽死させ、免疫学的エンドポイントおよびアデノ随伴ウイルス遺伝子移入の効率の評価を行う前は、薬理学的に関連性のある用量のＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を受け続けることができる。測定した免疫学的エンドポイントとしては、それぞれｒＡＡＶベクターおよび導入遺伝子に対する全抗体、補体の活性化、ベクターおよび導入遺伝子に対するＢ細胞およびＴ細胞機能アッセイ、ならびに表現型の特徴づけが挙げられる。アデノ随伴ウイルス遺伝子移入の効率の測度としては、ＰＣＲによるベクターゲノムコピー数、ならびに、それだけには限定されないが、心臓、骨格筋、肝臓、および脾臓を含む様々な組織中における導入遺伝子の活性が挙げられる。
【0085】
プラセボ対照と比較して、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体をｒＡＡＶレシピエント動物に投与することで達成された結果としては、抗ｒＡＡＶおよび導入遺伝子特異的抗体の応答の減弱、補体の活性化の減少、ならびに抗ｒＡＡＶ特異的Ｔ細胞活性の低下を挙げることができる。ベクターゲノムコピー数および導入遺伝子の活性は、プラセボ動物と比較して、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体の投与で増加させることができる。これらの効果は、ｒＡＡＶベクターの単回投与後およびｒＡＡＶベクターの続く投与後に観察されることができ、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体の投与が免疫原性組換えＡＡＶの繰り返し投薬および有効性の増加を可能にし得るという仮説を支持する。
【0086】
［実施例３］
＜組換えアデノ随伴ウイルスを投与する前のＡＡＶまたはｒＡＡＶに対する既存の免疫応答の低下＞
特定の実験では、野生型ＡＡＶまたはｒＡＡＶに対する既存の免疫を、潜在的に治療的である導入遺伝子をコードしている、同じＡＡＶ血清型のそれぞれのＡＡＶまたはｒＡＡＶの投与によって、マウスにおいて発生させることができる。続いて、特定の時点、たとえば、１５日目に、薬理学的カバレッジを維持するために、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を、単独療法として、または、他の免疫調節剤、たとえばシロリムスと組み合わせて、同じマウスに、特定の期間、たとえば、潜在的に治療的である導入遺伝子をコードしている同じｒＡＡＶベクターの再投与の１４日前、およびそれ以降の続く時点に投与することができる。特定の時点（たとえば、４５、９０、１３５日）で、一部のマウスは、同じｒＡＡＶベクター／導入遺伝子の追加の投与（複数回でもよい）を受けることができる。これらのマウスは、特定の時点（たとえば、９０、１３５、１８０日）で安楽死させ、免疫学的エンドポイントおよびアデノ随伴ウイルス遺伝子移入の効率の評価を行う前は、薬理学的に関連性のある用量のＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を受け続けることができる。測定した免疫学的エンドポイントとしては、それぞれ野生型ＡＡＶおよび／またはｒＡＡＶベクターならびに導入遺伝子に対する全抗体、補体の活性化、ＡＡＶおよび／またはベクターならびに導入遺伝子に対するＢ細胞およびＴ細胞機能アッセイ、表現型の特徴づけが挙げられる。アデノ随伴ウイルス遺伝子移入の効率の測度としては、ＰＣＲによるベクターゲノムコピー数、ならびに、それだけには限定されないが、心臓、骨格筋、肝臓、および脾臓を含む組織中における導入遺伝子の活性が挙げられる。
＜組換えアデノ随伴ウイルスを投与する前のＡＡＶまたはｒＡＡＶに対する既存の免疫応答の低下＞
特定の実験では、野生型ＡＡＶまたはｒＡＡＶに対する既存の免疫を、潜在的に治療的である導入遺伝子をコードしている、同じＡＡＶ血清型のそれぞれのＡＡＶまたはｒＡＡＶの投与によって、マウスにおいて発生させることができる。続いて、特定の時点、たとえば、１５日目に、薬理学的カバレッジを維持するために、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を、単独療法として、または、他の免疫調節剤、たとえばシロリムスと組み合わせて、同じマウスに、特定の期間、たとえば、潜在的に治療的である導入遺伝子をコードしている同じｒＡＡＶベクターの再投与の１４日前、およびそれ以降の続く時点に投与することができる。特定の時点（たとえば、４５、９０、１３５日）で、一部のマウスは、同じｒＡＡＶベクター／導入遺伝子の追加の投与（複数回でもよい）を受けることができる。これらのマウスは、特定の時点（たとえば、９０、１３５、１８０日）で安楽死させ、免疫学的エンドポイントおよびアデノ随伴ウイルス遺伝子移入の効率の評価を行う前は、薬理学的に関連性のある用量のＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を受け続けることができる。測定した免疫学的エンドポイントとしては、それぞれ野生型ＡＡＶおよび／またはｒＡＡＶベクターならびに導入遺伝子に対する全抗体、補体の活性化、ＡＡＶおよび／またはベクターならびに導入遺伝子に対するＢ細胞およびＴ細胞機能アッセイ、表現型の特徴づけが挙げられる。アデノ随伴ウイルス遺伝子移入の効率の測度としては、ＰＣＲによるベクターゲノムコピー数、ならびに、それだけには限定されないが、心臓、骨格筋、肝臓、および脾臓を含む組織中における導入遺伝子の活性が挙げられる。
【0087】
プラセボ対照と比較して、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体をＡＡＶおよび／またはｒＡＡＶ免疫前動物に投与することで達成された結果としては、既存の抗ＡＡＶおよび／またはｒＡＡＶならびに導入遺伝子特異的抗体の応答の減弱、補体の活性化の減少、抗ｒＡＡＶ特異的Ｔ細胞活性の低下を挙げることができる。ｒＡＡＶの続く投与後、抗ｒＡＡＶおよび導入遺伝子特異的抗体の応答の減弱、補体の活性化の減少、ならびに抗ｒＡＡＶ特異的Ｔ細胞活性の低下が観察され得る。ベクターゲノムコピー数および導入遺伝子の活性は、プラセボ動物と比較して、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体の投与で増加させることができる。これらの効果は、以前に免疫性の動物へのｒＡＡＶベクターの単回投与後、および以前に免疫性の動物へのｒＡＡＶベクターの続く投与後に観察されることができ、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体の投与が、ＡＡＶまたはｒＡＡＶに対する既存の免疫応答が存在する場合での免疫原性組換えＡＡＶの投薬を可能にし得るという仮説を支持する。
【0088】
［実施例４］
＜酵素補充治療（ＥＲＴ）の反復投薬に対する免疫原性の低下＞
特定の実験では、薬理学的カバレッジを維持するために、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を、単独療法として、または、他の免疫調節剤、たとえばシロリムスと組み合わせて、特定の酵素の固有の欠損を有するマウス（本明細書中に参考として組み込まれているＦｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１９ Ｍａｒ １３；１０：４１６に開示されているノックアウトマウスなど）に、酵素補充治療を投与する前およびそれ以降の続く時点に投与することができる。特定の時点で（たとえば、７、１４、２１、２８日など）、マウスは、同じＥＲＴの追加の投与（複数回でもよい）を受けることができる。マウスは、特定の時点（たとえば、１４、２１、２８、３５日など）で安楽死させ、免疫学的エンドポイントおよび酵素補充治療の効率の評価を行う前は、薬理学的に関連性のある用量のＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を受け続けることができる。免疫学的エンドポイントとしては、１）酵素に対する全抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ）、Ｂ細胞機能アッセイ、および表現型の特徴づけ、２）酵素欠損の生理的結果の逆転ならびに実験全体にわたる酵素および基質の活性の生化学分析を含む、酵素導入の効率の測度が挙げられる。
＜酵素補充治療（ＥＲＴ）の反復投薬に対する免疫原性の低下＞
特定の実験では、薬理学的カバレッジを維持するために、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を、単独療法として、または、他の免疫調節剤、たとえばシロリムスと組み合わせて、特定の酵素の固有の欠損を有するマウス（本明細書中に参考として組み込まれているＦｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１９ Ｍａｒ １３；１０：４１６に開示されているノックアウトマウスなど）に、酵素補充治療を投与する前およびそれ以降の続く時点に投与することができる。特定の時点で（たとえば、７、１４、２１、２８日など）、マウスは、同じＥＲＴの追加の投与（複数回でもよい）を受けることができる。マウスは、特定の時点（たとえば、１４、２１、２８、３５日など）で安楽死させ、免疫学的エンドポイントおよび酵素補充治療の効率の評価を行う前は、薬理学的に関連性のある用量のＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を受け続けることができる。免疫学的エンドポイントとしては、１）酵素に対する全抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ）、Ｂ細胞機能アッセイ、および表現型の特徴づけ、２）酵素欠損の生理的結果の逆転ならびに実験全体にわたる酵素および基質の活性の生化学分析を含む、酵素導入の効率の測度が挙げられる。
【0089】
プラセボ対照と比較して、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を酵素補充レシピエント動物に投与することで達成された結果としては、プラセボ動物と比較して、抗酵素特異的抗体の応答の減弱、酵素依存性の生理的結果の改善、酵素活性の持続期間の増加、およびＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体の投与で観察された基質の蓄積の低下を挙げることができ、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体の投与が、酵素補充治療に対する免疫原性を減少させ、酵素補充治療の繰り返し投薬および有効性の増加を可能にし得るという仮説を支持する。
【0090】
［実施例５］
＜抗体および融合タンパク質に基づく治療剤の繰り返し投薬に対する免疫原性の低下＞
特定の実験では、薬理学的カバレッジを維持するために、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を、単独療法として、または、他の免疫調節剤、たとえばシロリムスと組み合わせて、マウスに、ヒト抗体および融合タンパク質に基づく治療と同様に抗体または融合タンパク質を投与する前に、およびそれ以降の続く時点に投与することができる。特定の時点（たとえば、７、１４、２１、２８日など）で、マウスは、同じ抗体または融合タンパク質の追加の投与（複数回でもよい）を受けることができる。マウスは、特定の時点（たとえば、１４、２１、２８、３５日など）で安楽死させ、免疫学的エンドポイントおよび抗体または融合タンパク質の活性の評価を行う前は、薬理学的に関連性のある用量のＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を受け続けることができる。免疫学的エンドポイントとしては、１）酵素に対する全抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ）、Ｂ細胞機能アッセイ、および表現型の特徴づけ、ならびに、２）実験全体にわたる抗体または融合タンパク質の活性、たとえば抗体または融合タンパク質がその標的タンパク質を阻害する能力の、薬物動態学的、免疫学的、および／または薬力学的な分析を含む、抗体または融合タンパク質の効率の測度が挙げられる。
＜抗体および融合タンパク質に基づく治療剤の繰り返し投薬に対する免疫原性の低下＞
特定の実験では、薬理学的カバレッジを維持するために、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を、単独療法として、または、他の免疫調節剤、たとえばシロリムスと組み合わせて、マウスに、ヒト抗体および融合タンパク質に基づく治療と同様に抗体または融合タンパク質を投与する前に、およびそれ以降の続く時点に投与することができる。特定の時点（たとえば、７、１４、２１、２８日など）で、マウスは、同じ抗体または融合タンパク質の追加の投与（複数回でもよい）を受けることができる。マウスは、特定の時点（たとえば、１４、２１、２８、３５日など）で安楽死させ、免疫学的エンドポイントおよび抗体または融合タンパク質の活性の評価を行う前は、薬理学的に関連性のある用量のＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を受け続けることができる。免疫学的エンドポイントとしては、１）酵素に対する全抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ）、Ｂ細胞機能アッセイ、および表現型の特徴づけ、ならびに、２）実験全体にわたる抗体または融合タンパク質の活性、たとえば抗体または融合タンパク質がその標的タンパク質を阻害する能力の、薬物動態学的、免疫学的、および／または薬力学的な分析を含む、抗体または融合タンパク質の効率の測度が挙げられる。
【0091】
プラセボ対照と比較して、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体を抗体または融合タンパク質レシピエント動物に投与することで達成された結果としては、抗抗体または融合タンパク質抗体応答の減弱、クリアランスの減少、および半減期（ｔ１／２）の増加を挙げることができる。プラセボ動物と比較して、改善かつ延長された有効性の薬力学的な測度も観察することができ、ＣＤ３２Ｂ×ＣＤ７９Ｂ二重特異性抗体の投与が、免疫原性抗体または融合タンパク質の繰り返し投薬および有効性の増加を可能にし得るという仮説を支持する。
【0092】
［実施例６］
＜健康な対象においてＰＲＶ－３２７９の安全性、許容性、薬物動態学、薬力学、および免疫原性を評価するための第１ｂ相、二重盲検、プラセボ対照、複数漸増用量研究＞
本研究では、複数用量のＰＲＶ－３２７９の安全性、許容性、および免疫原性を、健康な対象において、持続的な高いレベルの受容体カバレッジをもたらすと予想される用量レベルで評価した。ＡＤＡの発生を混乱させる可能性がある背景医薬品ならびに許容性の評価を混乱させる可能性がある徴候および症状を回避するために、本研究には健康な対象を選択し、したがって、ＰＲＶ－３２７９の反復投薬の免疫原性および許容性のより徹底的かつ安全な検査が可能となった。
＜健康な対象においてＰＲＶ－３２７９の安全性、許容性、薬物動態学、薬力学、および免疫原性を評価するための第１ｂ相、二重盲検、プラセボ対照、複数漸増用量研究＞
本研究では、複数用量のＰＲＶ－３２７９の安全性、許容性、および免疫原性を、健康な対象において、持続的な高いレベルの受容体カバレッジをもたらすと予想される用量レベルで評価した。ＡＤＡの発生を混乱させる可能性がある背景医薬品ならびに許容性の評価を混乱させる可能性がある徴候および症状を回避するために、本研究には健康な対象を選択し、したがって、ＰＲＶ－３２７９の反復投薬の免疫原性および許容性のより徹底的かつ安全な検査が可能となった。
【0093】
２つのコホートに逐次の登録を予定した。コホートＡは、ＰＲＶ－３２７９ ３ｍｇ／ｋｇを２週間毎に、合計３回用量で評価した。コホートＢは、ＰＲＶ－３２７９ １０ｍｇ／ｋｇを２週間毎に、３回用量で評価した。それぞれのコホートは、ＰＲＶ－３２７９またはプラセボのどちらかに３：１の比でランダムに割り当てた８人の対象から構成されていた（すなわち、ＰＲＶ－３２７９はｎ＝６人、プラセボはｎ＝２人）。研究薬物（ＰＲＶ－３２７９またはプラセボ）の３回用量は、それぞれのコホートにおいて１日目、１５日目、および２９日目に２時間のＩＶ輸液として投与した。
【0094】
対象は、１日目のランダム化および第１の用量の投与の２８日前以内に、適格性を決定するためのスクリーニング評価を受けた。－１日目に、対象は臨床研究ユニット（ＣＲＵ）に入所し、その適格性を確認するためにベースライン試験を受けた。１日目に、それぞれの対象を、ＰＲＶ－３２７９またはプラセボのどちらかの２時間のＩＶ輸液を二重盲検様式で受けるようにランダムに割り当て、投薬後４時間モニタリングした。２日目に、対象に安全性の臨床検査、ＰＫ、およびＡＥの評価を行い、ＣＲＵから退所した。対象は、その割り当てられた処置の第２の用量（１５日目）および第３の用量（２９日目）を受けるためにＣＲＵに戻った。第１の用量と同様、対象は投薬の前日にＣＲＵに入所し、投薬の翌日に退所した。
【0095】
それぞれのコホートは２人のセンチネル対象を含んでおり、二重盲検様式で１人はＰＲＶ－３２７９を受け、１人はプラセボを受けた。センチネル対象は、コホート中の残りの対象がその最初の輸液を受ける前に、第１の輸液の開始から少なくとも７日目までＡＥ（たとえば、輸液反応、遅延型過敏症）について評価した。センチネル対象および時差投薬スケジュールの使用により、潜在的かつ高頻度の反応（たとえばＡＤＡに関連する輸液反応）が存在する場合はすべて、全コホートの繰り返し投薬の前に認識されることが確実となる。
【0096】
安全性評価としては、過敏症または輸液反応を含む報告されたＡＥ、生命徴候測定、身体検査、ＥＣＧ、および臨床検査が挙げられる。身体検査は、ベースラインを確立し、ＡＥに関連する身体的徴候を確認するために行った。有害事象を各訪問時に収集し、重篤度および研究薬物との関連性について評価した。１日目、１５日目、および２９日目に、生命徴候（体温、脈拍数、血圧、および呼吸数）をすぐに時間０（用量前、輸液の５分前まで）、０．５時間、１時間（輸液の中間点）、２時間（輸液の終わり）、および輸液の開始の６時間後（輸液の終わりの４時間後）に記録した。ＩＶ輸液の開始を時間「０」時と指定した。生命徴候は予定された時点の±５分間で得た。身長はスクリーニング訪問時にのみ記録した。体重は－１日目、１４日目、および２８日目に得た。
【0097】
ＰＫ、免疫原性、およびＰＤのための血清試料を選択された時点で得た。研究設計の略図を図１に提供する。
【0098】
＜有害事象の概要＞
研究中にＡＥＳＩ、重篤なＴＥＡＥ、ＳＡＥ、または死をもたらしたＴＥＡＥは存在しなかった。４件の軽度であるが再発性のＴＥＡＥが１人（１６．７％）のＰＲＶ－３２７９ １０ｍｇ／ｋｇの対象からの離脱をもたらした。他のＴＥＡＥは研究からの対象の離脱をもたらさなかった（表エラー！文書中に指定スタイルのテキストが存在しません。）。
研究中にＡＥＳＩ、重篤なＴＥＡＥ、ＳＡＥ、または死をもたらしたＴＥＡＥは存在しなかった。４件の軽度であるが再発性のＴＥＡＥが１人（１６．７％）のＰＲＶ－３２７９ １０ｍｇ／ｋｇの対象からの離脱をもたらした。他のＴＥＡＥは研究からの対象の離脱をもたらさなかった（表エラー！文書中に指定スタイルのテキストが存在しません。）。
【0099】
全体的に、３４件のＴＥＡＥが９人（５６．３％）の対象によって報告された。１８件のＴＥＡＥが５人（８３．３％）のＰＲＶ－３２７９ １０ｍｇ／ｋｇの対象において報告され、１２件のＴＥＡＥが３人（５０．０％）のＰＲＶ－３２７９ ３ｍｇ／ｋｇの対象において報告され、４件のＴＥＡＥが１人（２５．０％）のプラセボ対象において報告された（表エラー！文書中に指定スタイルのテキストが存在しません。）。４人（６６．７％）のＰＲＶ－３２７９ １０ｍｇ／ｋｇの対象における１２件のＴＥＡＥおよび１人（１６．７％）のＰＲＶ－３２７９ ３ｍｇ／ｋｇの対象における４件のＴＥＡＥが調査員によって研究薬物に関連しているとみなされ、すべての他の報告されたＴＥＡＥは非関連とみなされた（表エラー！文書中に指定スタイルのテキストが存在しません。）。
【0100】
【表1】
【0101】
研究中、調査員によって非ＴＥＡＥであるとみなされた２件のＡＥが、２人（９．２％）の対象において報告された。どちらも研究薬物に非関連であるとみなされた（表２）。
【0102】
【表2】
【0103】
処置ごとおよび全体の、ＳＯＣおよびＰＴごとのＴＥＡＥの概要を表中に提示する。ＳＯＣおよびＰＴごとの、処置ごとの、重篤度ごとのＴＥＡＥの概要を表中に提示し、関連するＴＥＡＥの概要を表中に提示する。ＳＯＣおよびＰＴごとの、処置ごとおよび全体の、中断をもたらしたＴＥＡＥの概要を表中に提示する。
【0104】
【表3-1】
【表3-2】
【0105】
【表4-1】
【表4-2】
【表4-3】
【0106】
【表5】
【0107】
【表6】
【0108】
＜薬物動態学的濃度データ＞
ＰＲＶ－３２７９をヒト血清からＥＣＬを使用して定量的に測定する。本アッセイでは、コーティングされていないＭＳＤＭｕｌｔｉ－Ａｒｒａｙ（登録商標）標準結合プレートを、ＰＲＶ－３２７９の捕捉試薬としてウサギ抗ｈ８Ｂ５抗体でコーティングする。ＰＲＶ－３２７９を含有する試料をコーティングしたプレート上でインキュベートする。結合したＰＲＶ－３２７９をビオチン標識した２Ａ５抗体で検出する。ストレプトアビジンスルホタグのコンジュゲートを加え、一次検出抗体と結合させる。トリプロピルアミン（ＴＰＡ、ＭＳＤ Ｇｏｌｄ Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ）をプレートに加え、電荷を与えた際に電気化学発光シグナルが発生し、それをＭＳＤ ＳＥＣＴＯＲ Ｓ ６００プレートリーダーで検出する。
ＰＲＶ－３２７９をヒト血清からＥＣＬを使用して定量的に測定する。本アッセイでは、コーティングされていないＭＳＤＭｕｌｔｉ－Ａｒｒａｙ（登録商標）標準結合プレートを、ＰＲＶ－３２７９の捕捉試薬としてウサギ抗ｈ８Ｂ５抗体でコーティングする。ＰＲＶ－３２７９を含有する試料をコーティングしたプレート上でインキュベートする。結合したＰＲＶ－３２７９をビオチン標識した２Ａ５抗体で検出する。ストレプトアビジンスルホタグのコンジュゲートを加え、一次検出抗体と結合させる。トリプロピルアミン（ＴＰＡ、ＭＳＤ Ｇｏｌｄ Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ）をプレートに加え、電荷を与えた際に電気化学発光シグナルが発生し、それをＭＳＤ ＳＥＣＴＯＲ Ｓ ６００プレートリーダーで検出する。
【0109】
算術平均（±ＳＤ）ＰＲＶ－３２７９血清濃度－時間データを図２Ａ～２Ｃに表示する。ＢＬＱ＝定量限界未満、ＬＬＯＱ、定量下限、ＳＤ＝標準偏差。エラーバー：ＳＤ。用量前にＢＬＱであった値および最初の定量可能な濃度の前に吸収相にあった値はゼロで置換した。それ以降、評価可能な濃度間のＢＬＱ値はＬＬＯＱ／２によって置換した。ＬＬＯＱ＝１．５ｎｇ／ｍＬ
【0110】
算術平均ＰＲＶ－３２７９血清濃度－時間データを図３Ａ～３Ｃに表示する。ＢＬＱ＝定量限界未満、ＬＬＯＱ、定量下限、ＳＤ＝標準偏差。用量前にＢＬＱであった値および最初の定量可能な濃度の前に吸収相にあった値はゼロで置換した。それ以降、評価可能な濃度間のＢＬＱ値はＬＬＯＱ／２によって置換した。ＬＬＯＱ＝１．５ｎｇ／ｍＬ。
【0111】
３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇのＰＲＶ－３２７９の２時間の輸液の投与の後、平均ピーク濃度は、１、１５、および２９日目について輸液の終わり（２時間）で起こった。平均濃度は、両方の用量レベルについて、２９日目の投与の後１３４４時間まで定量下限（ＬＬＯＱ、１．５ｎｇ／ｍＬ）を上回っていた。１５、２９、および４３日目の平均用量前濃度は、３ｍｇ／ｋｇ用量ではそれぞれ６１４５ｎｇ／ｍＬ、７５９０ｎｇ／ｍＬ、および１２４４０ｎｇ／ｍＬであり、１０ｍｇ／ｋｇ用量ではそれぞれ４８３８３ｎｇ／ｍＬ、６０４６０ｎｇ／ｍＬ、および７７１４０ｎｇ／ｍＬであった。これらの日の用量前濃度は増加し続けており、５回未満の半減期が経過していたため、定常状態は１５日目にも２９日目にも達成されていなかった。
【0112】
算術平均ＰＲＶ－３２７９濃度－時間データを処置およびＡＤＡ結果ごとに図４Ａ～４Ｂに表示する。このプロットにおけるＡＤＡ結果は、それぞれの具体的な時点での免疫原性試料結果に基づいて定義する。ＡＤＡ＝抗薬物抗体、ＢＬＱ＝定量限界未満、ＬＬＯＱ、定量下限、ＳＤ＝標準偏差。用量前にＢＬＱであった値および最初の定量可能な濃度の前に吸収相にあった値はゼロで置換した。それ以降、評価可能な濃度間のＢＬＱ値はＬＬＯＱ／２によって置換した。ＬＬＯＱ＝１．５ｎｇ／ｍＬ。３ｍｇ／ｋｇでは、日ごとのＡＤＡ陰性／陽性：１および８日目＝６／０人（Ｎ＝６人）、１５、２２、および２９日目＝５／１人（Ｎ＝６人）、３６日目＝４／２人（Ｎ＝６人）、４３日目＝３／３人（Ｎ＝６人）、５７日目＝２／４人（Ｎ＝６人）、７１日目＝１／５人（Ｎ＝６人）、８５日目 ０／６人（Ｎ＝６人）。１０ｍｇ／ｋｇでは、日ごとのＡＤＡ陰性／陽性：１、８、１５、および２２日目＝６／０人（Ｎ＝６人）、２９日目＝５／０人（Ｎ＝５人）、３６日目＝５／０人（Ｎ＝５人）、４３日目＝５／０人（Ｎ＝５人）、５７日目＝５／０人（Ｎ＝５人）、７１日目＝３／２人（Ｎ＝５人）、８５日目 ２／３人（Ｎ＝５人）。
【0113】
＜免疫原性データの評価＞
ヒト血清中の抗ＰＲＶ－３２７９抗体を、ヒト血清中において、ＭＳＤ－ＥＣＬアッセイにおける多段階手法を使用して検出および確認する。本アッセイでは、試料、陽性対照（ＰＣ）、および陰性対照（ＮＣ）を３００ｍＭの酢酸中の１：１０の最小要求希釈（ＭＲＤ）に供する。その後、酸性化した試料を中和し、ＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ高容量プレート上にコーティングしたビオチン－ＰＲＶ－３２７９と共に終夜プリインキュベートする。ヒト血清中に存在する抗薬物抗体（ＡＤＡ）はすべてビオチン－ＰＲＶ－３２７９と結合する。終夜のインキュベーション後、ビオチン－ＰＲＶ－３２７９：ＡＤＡの複合体を、複合体を破壊するための第２の酸処理に供する。その後、酸性化したＡＤＡ試料を裸のＭＳＤ高結合プレート上にコーティングする。ブロッキング後、ＡＤＡ試料を、スルホタグ－ＰＲＶ－３２７９を用いて、電位を与えた場合に発生する化学発光シグナルによって検出する。生じる電気化学発光（ＥＣＬ）シグナルまたは相対発光量（ＲＬＵ）は、ヒト血清中に存在するＡＤＡの量に正比例する。
ヒト血清中の抗ＰＲＶ－３２７９抗体を、ヒト血清中において、ＭＳＤ－ＥＣＬアッセイにおける多段階手法を使用して検出および確認する。本アッセイでは、試料、陽性対照（ＰＣ）、および陰性対照（ＮＣ）を３００ｍＭの酢酸中の１：１０の最小要求希釈（ＭＲＤ）に供する。その後、酸性化した試料を中和し、ＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ高容量プレート上にコーティングしたビオチン－ＰＲＶ－３２７９と共に終夜プリインキュベートする。ヒト血清中に存在する抗薬物抗体（ＡＤＡ）はすべてビオチン－ＰＲＶ－３２７９と結合する。終夜のインキュベーション後、ビオチン－ＰＲＶ－３２７９：ＡＤＡの複合体を、複合体を破壊するための第２の酸処理に供する。その後、酸性化したＡＤＡ試料を裸のＭＳＤ高結合プレート上にコーティングする。ブロッキング後、ＡＤＡ試料を、スルホタグ－ＰＲＶ－３２７９を用いて、電位を与えた場合に発生する化学発光シグナルによって検出する。生じる電気化学発光（ＥＣＬ）シグナルまたは相対発光量（ＲＬＵ）は、ヒト血清中に存在するＡＤＡの量に正比例する。
【0114】
全体的に、ＡＤＡは経時的に増加した。８５日目にＡＤＡを有していた対象が６人中４人しかいかなかった、１０ｍｇ／ｋｇ用量を受けた対象と比較して、３ｍｇ／ｋｇ用量を受けた対象中における抗薬物抗体は、より早くＡＤＡを発生し（１５日目対３６日目）、すべての対象が８５日目までにＡＤＡを発生した。ベースラインからの経時的なＰＲＶ－３２７９に対するＡＤＡの力価を表７に示し、＜１０～２７０および＜１０～２４３０の範囲であった。これは、ＰＲＶ－３２７９がそれ自身の免疫原性を阻害することを示している。
【0115】
【表7】
【0116】
＜薬物動態学的／免疫原性データの評価＞
ＰＲＶ－３２７９の薬物動態学的パラメータ（Ｃ最大およびＡＵＣ０～３３６）を表８にＡＤＡ結果、処置、および日ごとに記述的に要約する。ＰＲＶ－３２７９のＣ最大およびＡＵＣ０～３３６パラメータの箱ひげ図を図５に提示し、これはＡＤＡがＰＫに影響を与えないことを示している。ＡＤＡ＝抗薬物抗体、Ｎ＝対応するＡＤＡ分類中の薬物動態解析対象集団中の対象の人数。箱内部の記号は平均を表す。箱の上（下）端は７５（２５）パーセンタイルを表す。箱の上（下）端から、箱の端より１．５×四分位範囲上（下）以内の最大（最小）値まで、ひげが描かれている。ひげの外側の値は記号で同定される。
ＰＲＶ－３２７９の薬物動態学的パラメータ（Ｃ最大およびＡＵＣ０～３３６）を表８にＡＤＡ結果、処置、および日ごとに記述的に要約する。ＰＲＶ－３２７９のＣ最大およびＡＵＣ０～３３６パラメータの箱ひげ図を図５に提示し、これはＡＤＡがＰＫに影響を与えないことを示している。ＡＤＡ＝抗薬物抗体、Ｎ＝対応するＡＤＡ分類中の薬物動態解析対象集団中の対象の人数。箱内部の記号は平均を表す。箱の上（下）端は７５（２５）パーセンタイルを表す。箱の上（下）端から、箱の端より１．５×四分位範囲上（下）以内の最大（最小）値まで、ひげが描かれている。ひげの外側の値は記号で同定される。
【0117】
【表8-1】
【表8-2】
【0118】
＜薬力学的データの評価＞
ＰＲＶ－３２７９飽和試料中において得られる最大結合を含む、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、記憶Ｂ細胞（ＣＤ１９＋／ＣＤ２７＋）、およびナイーブＢ細胞（ＣＤ１９＋／ＣＤ２７－）上の抗ＰＲＶ－３２７９（抗ＥＫ）の染色による、ＰＲＶ－３２７９結合（パーセント結合Ｂ細胞）ならびに絶対およびパーセント受容体占有（ＭＥＳＦ）を検査する。％結合Ｂ細胞および％受容体占有の計算には、それぞれの個々の試料中におけるＰＲＶ－３２７９のＢ細胞との最大結合は、それぞれの時点での抗ＰＲＶ－３２７９（抗ＥＫ）によって結合された％細胞および等価な可溶性蛍光色素（ＭＥＳＦ）の絶対受容体占有分子の値を、ＰＲＶ－３２７９飽和試料（合計）の対応する値と比較することによって計算した。
ＰＲＶ－３２７９飽和試料中において得られる最大結合を含む、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、記憶Ｂ細胞（ＣＤ１９＋／ＣＤ２７＋）、およびナイーブＢ細胞（ＣＤ１９＋／ＣＤ２７－）上の抗ＰＲＶ－３２７９（抗ＥＫ）の染色による、ＰＲＶ－３２７９結合（パーセント結合Ｂ細胞）ならびに絶対およびパーセント受容体占有（ＭＥＳＦ）を検査する。％結合Ｂ細胞および％受容体占有の計算には、それぞれの個々の試料中におけるＰＲＶ－３２７９のＢ細胞との最大結合は、それぞれの時点での抗ＰＲＶ－３２７９（抗ＥＫ）によって結合された％細胞および等価な可溶性蛍光色素（ＭＥＳＦ）の絶対受容体占有分子の値を、ＰＲＶ－３２７９飽和試料（合計）の対応する値と比較することによって計算した。
【0119】
図６に示すように、３および１０ｍｇ／ｋｇのＰＲＶ－３２７９の用量の後、どちらの用量群においても全利用可能なＢ細胞（ＣＤ１９＋）の＞８５％が投薬の１日後に薬物によって結合された。どちらの用量群においても、結合は第２の用量の前に約８０％までわずかに減少し、第２の用量の後に再度約９０％まで増加した。１０ｍｇ／ｋｇの用量群では、％結合Ｂ細胞はおよそ５７日目までこの高いレベルで維持され、その後、８５日目に５０％未満まで下がった（図６を参照）。３ｍｇ／ｋｇの用量では、％結合Ｂ細胞は最初の２２日間はより高い用量に匹敵しており、４３日目まで７０％あたりに保たれたが、この用量レベルでは投与間に結合は一般によりゆらいだ。パーセント結合Ｂ細胞は８５日目に＜２０％であり、これはプラセボと同じ範囲内であった。データのばらつきは低度から中等度であった。
【0120】
次に、リンパ球、単球（ＣＤ１４＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、Ｔヘルパー細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ４＋）、細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ８＋）、ナチュラルキラー細胞（ＣＤ３－／ＣＤ１６＋）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ１６＋／ＣＤ５６＋）、およびＢ細胞（ＣＤ１９＋）の百分率および絶対数を調査した。Ｂ細胞の絶対数の時間経過を処置ごとに図７に示す。他の細胞種は同様のパターンを示す（データ示さず）。Ｂ細胞の数は、３および１０ｍｇ／ｋｇのＰＲＶ－３２７９の投薬の後に１日以内にそれぞれ平均して－３９％および－４７％下がったが、１週間後にベースラインレベルまで戻った。プラセボで処置した対象では匹敵する低下は観察されなかった。細胞数の下落は、ＰＲＶ－３２７９の第２および第３の用量の後はわずかにそれほど明白でなかった。第３の用量の後、細胞数は３ｍｇ／ｋｇよりも１０ｍｇ／ｋｇで低く保たれたが、８５日目には両方の数が同様であり、再度ベースラインに匹敵していた。
【0121】
要約すると、研究により末梢Ｂ細胞数の初期の一過性の減少が実証され、これは、ＰＲＶ－３２７９の第２および第３の用量の後にそれほど明白でなくなり、それぞれの用量の後に素早く回復した。Ｂ細胞の持続的枯渇は本研究で起こらなかった。また、調査した他の免疫細胞型はいずれも臨床的に関連のある枯渇を示さなかった。
【0122】
次に、免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）、ＩｇＥ、およびＩｇＧの循環レベルを、既知の方法を使用して測定する。図８に示すように、３および１０ｍｇ／ｋｇのＰＲＶ－３２７９の投薬後の免疫グロブリンＭのレベルはおよそ３６日目まで着実に減少し、８５日目までそのレベルに留まった。しかし、減少は明白に用量依存的ではなく、３６および８５日目に１０ｍｇ／ｋｇよりも３ｍｇ／ｋｇで明白さが低い傾向にあった。１０ｍｇ／ｋｇのＰＲＶ－３２７９の投薬後の免疫グロブリンＥのレベルは、ベースラインからの平均％変化がプラセボの－５．０％と比較して１０ｍｇ／ｋｇで－２８．２％であった、８５日目の最後の時点以外は、研究の過程でプラセボで観察された値と類似であった（図９を参照）。３および１０ｍｇ／ｋｇのＰＲＶ－３２７９の投薬後の免疫グロブリンＧのレベルは高度に可変であり、研究の過程で一般にプラセボと異ならないように見えた。ＩｇＧレベルのベースラインからの％変化は、すべての処置について大部分は±５％以内であった（図１０を参照）。
【0123】
＜結論＞
この第１ｂ相、二重盲検、プラセボ対照のＭＡＤ研究の主な目的は、健康な対象におけるＰＲＶ－３２７９の２つの用量レベル（３および１０ｍｇ／ｋｇ）の複数（３）のＩＶ輸液の安全性および許容性を評価することであった。２番目の目的は、ＰＲＶ－３２７９の複数用量ＰＫおよび免疫原性を特徴づけることであった。予備的目的は、標的結合およびＢ細胞機能に関する潜在的なバイオマーカーに及ぼすＰＲＶ－３２７９の効果を探索することであった。
この第１ｂ相、二重盲検、プラセボ対照のＭＡＤ研究の主な目的は、健康な対象におけるＰＲＶ－３２７９の２つの用量レベル（３および１０ｍｇ／ｋｇ）の複数（３）のＩＶ輸液の安全性および許容性を評価することであった。２番目の目的は、ＰＲＶ－３２７９の複数用量ＰＫおよび免疫原性を特徴づけることであった。予備的目的は、標的結合およびＢ細胞機能に関する潜在的なバイオマーカーに及ぼすＰＲＶ－３２７９の効果を探索することであった。
【0124】
合計１６人の対象を登録し、ランダム化し、投薬した。２つのコホートにＰＲＶ－３２７９またはプラセボを、２週間毎に合計３回用量投与した。研究薬物（ＰＲＶ－３２７９ ３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇまたはプラセボ）の３回用量を、１日目、１５日目、および２９日目にＩＶでそれぞれのコホートに投与した。１４人の対象が予定されたすべての処置をプロトコル通りに受け、研究を完了した。１人のプラセボ対象は１日目および１５日目のプラセボ投与を受けた後に同意を撤回し、１人のＰＲＶ－３２７９ １０ｍｇ／ｋｇの対象は２９日目のＰＲＶ－３２７９ １０ｍｇ／ｋｇの投与を３分間受けた後にＡＥが原因で離脱させた。
【0125】
１６人（１００．０％）の対象すべてを安全性、ＰＤ、および免疫原性集団に含めた。研究薬物を受けた１２人（７５．５％）の対象すべてをＰＫ集団に含めたが、すべてのＰＫ概要プロットおよび概要統計学には、ＡＥが原因で離脱させた１人のＰＲＶ－３２７９ １０ｍｇ／ｋｇの対象については２９日目以降のデータを排除した。
【0126】
この第１ｂ相研究は、ファーストインヒューマン研究において得られた許容性およびＰＤ情報に基づいており、ＰＲＶ－３２７９を再投薬することの実現可能性に取り組むものである。研究の結果は、ＡＤＡによって影響を受けることのない、深く、持続的な方法で、Ｂ細胞機能を枯渇させずに機能的に抑制するＰＲＶ－３２７９の能力を確認している。
【0127】
ＰＲＶ－３２７９は十分に許容されており、ＳＡＥがなかった。ＰＫ特徴は、隔週または場合によってはより低い頻度の投薬を支持する。抗薬物抗体はより高い用量群においてより低く、これは、ＰＲＶ－３２７９がそれ自身の免疫原性を阻害する能力と一貫している。
【0128】
ＰＲＶ－３２７９の受容体占有ＰＤ効果は投薬の休止をはるかに超えて持続し、１０ｍｇ／ｋｇ用量でより持続され、最終用量の少なくとも２８日後に＞５０％の結合が観察され、これは、最適なＢ細胞調節のために必要な結合の最小レベルであるとみなされている。
【0129】
経過観察期間にわたって持続したＩｇＭレベルの明確な低下があり、これは拡張ＰＤ効果を示唆している。重要なことに、かつ予想どおり、Ｂ細胞枯渇はなく、免疫細胞またはサイトカインに対するいかなる観察可能な有害効果もなかった。
【0130】
結論として、優秀な安全性プロフィールおよびより低い免疫原性を有する１０ｍｇ／ｋｇでの優れたＰＤ効果に基づいて、１０ｍｇ／ｋｇ以上の用量を、遺伝子治療製品を含めた生物療法剤の免疫原性を低下させるために使用することができる。
【0131】
［改変］
本開示の記載した方法および組成物の改変および変形は、本開示の範囲および精神から逸脱せずに当業者に明らかとなるであろう。本開示は具体的な実施形態に関連して記載されているが、特許請求した本開示はそのような具体的な実施形態に過度に制限されるべきでないことが理解されよう。実際、記載した発明を実施するための形態の様々な改変は、以下の特許請求の範囲によって表される本開示の範囲内にあることが意図され、本開示が属する関連分野の技術者によってそう理解される。
本開示の記載した方法および組成物の改変および変形は、本開示の範囲および精神から逸脱せずに当業者に明らかとなるであろう。本開示は具体的な実施形態に関連して記載されているが、特許請求した本開示はそのような具体的な実施形態に過度に制限されるべきでないことが理解されよう。実際、記載した発明を実施するための形態の様々な改変は、以下の特許請求の範囲によって表される本開示の範囲内にあることが意図され、本開示が属する関連分野の技術者によってそう理解される。
【0132】
［参照による組み込み］
本明細書中で言及したすべての特許および出版物は、それぞれの独立した特許および出版物が、参考として組み込まれていると具体的かつ個々に示されている場合と同じ程度に、本明細書中に参考として組み込まれている。
本明細書中で言及したすべての特許および出版物は、それぞれの独立した特許および出版物が、参考として組み込まれていると具体的かつ個々に示されている場合と同じ程度に、本明細書中に参考として組み込まれている。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図4A】
【図4B】
【図5-1】
【図5-2】
【図5-3】
【図5-4】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【配列表】
【国際調査報告】