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▶ ベリカム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-10-18
(54)【発明の名称】免疫細胞のための改良された製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 35/17 20150101AFI20221011BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20221011BHJP
A61K 47/20 20060101ALI20221011BHJP
A61K 47/42 20170101ALI20221011BHJP
A61K 9/10 20060101ALI20221011BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20221011BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20221011BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20221011BHJP
C12N 5/0783 20100101ALI20221011BHJP
C12N 1/04 20060101ALI20221011BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20221011BHJP
C12M 3/00 20060101ALI20221011BHJP
A01N 1/02 20060101ALI20221011BHJP
A61K 47/68 20170101ALN20221011BHJP
A61K 39/395 20060101ALN20221011BHJP
【ＦＩ】
A61K35/17 Z
A61P35/00
A61K47/20
A61K47/42
A61K9/10
A61K47/02
A61K47/12
A61K48/00
C12N5/0783
C12N1/04
C12N5/10
C12M3/00 Z
A01N1/02
A61K47/68
A61K39/395 E
A61K39/395 T
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022504131
(86)(22)【出願日】2020-08-12
(85)【翻訳文提出日】2022-01-21
(86)【国際出願番号】 US2020045999
(87)【国際公開番号】W WO2021030482
(87)【国際公開日】2021-02-18
(31)【優先権主張番号】62/885,747
(32)【優先日】2019-08-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】510274452
【氏名又は名称】ベリカム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】バエズ， オマー
(72)【発明者】
【氏名】ブラス， デヴィン
【テーマコード（参考）】
4B029
4B065
4C076
4C084
4C085
4C087
4H011
【Ｆターム（参考）】
4B029AA27
4B029BB11
4B029CC01
4B065AA94X
4B065AA94Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065BB40
4B065BD09
4B065BD12
4B065CA24
4B065CA25
4B065CA44
4C076AA22
4C076BB13
4C076CC27
4C076DD23
4C076DD41
4C076DD43
4C076DD55
4C076DD55Q
4C076EE41
4C076EE41Q
4C076FF13
4C076FF36
4C076FF63
4C076FF67
4C084AA13
4C084MA23
4C084MA66
4C084NA03
4C084NA06
4C084ZB261
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB01
4C085BB12
4C085BB50
4C085CC03
4C085CC31
4C085DD62
4C085EE01
4C085GG02
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB37
4C087CA04
4C087CA05
4C087CA20
4C087DA12
4C087MA23
4C087MA66
4C087NA03
4C087NA06
4C087ZB02
4C087ZB26
4H011CA01
4H011CB08
4H011CD06
(57)【要約】
低レベルの血清アルブミン及びジメチルスルホキシドなどの凍結保護剤の使用など、Ｔ細胞の組成に関する種々の改善点を開示する。本発明者らは、Ｔ細胞と血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、＜２．５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミン（好ましくは＜２．２％（ｖ／ｖ）、＜２％（ｖ／ｖ）、または＜１％（ｖ／ｖ）、好ましくは＜０．５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミン）を含む、濃縮組成物を提供する。そのような組成物は、良好な治療効果を達成するが、薬学的に許容される形態で高価である、より大量の血清アルブミンを日常的に含む従来技術の組成物と比較して、調製するのに安価である。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
Ｔ細胞、及び血清アルブミン、及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む組成物であって、前記組成物が＜２．５％（ｖ／ｖ）血清アルブミンを含み、前記ＤＭＳＯが前記血清アルブミンと比較して≧５倍過剰（ｖ／ｖ）で存在する、前記組成物。
【請求項2】
＜２．２％（ｖ／ｖ）、＜２％（ｖ／ｖ）、＜１％（ｖ／ｖ）、または約０．５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミンを含む請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記ＤＭＳＯが前記血清アルブミンと比較して５倍～３０倍過剰（ｖ／ｖ）で存在する、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項4】
前記過剰が５倍～１５倍、６倍～１２倍、８倍～１１倍、または約１０倍である、請求項３に記載の組成物。
【請求項5】
Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯを含む組成物であって、前記血清アルブミン（ｖ／ｖ）の濃度が０．１～１％であり、前記ＤＭＳＯの濃度（ｖ／ｖ）が前記血清アルブミンの濃度より３倍～３０倍高い、前記組成物。
【請求項6】
前記血清アルブミン濃度が＜１％（ｖ／ｖ）であり、前記ＤＭＳＯ濃度が前記血清アルブミン濃度より８倍～１１倍高い、請求項５に記載の組成物。
【請求項7】
前記ＤＭＳＯの濃度が＜１０％（ｖ／ｖ）である、請求項５または請求項６に記載の組成物。
【請求項8】
前記ＤＭＳＯの濃度が２～８％（ｖ／ｖ）、４～７％（ｖ／ｖ）、５～６％（ｖ／ｖ）、または約５％（ｖ／ｖ）である、請求項７に記載の組成物。
【請求項9】
Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯを含む組成物であって、前記血清アルブミンの濃度（ｖ／ｖ）が０．１～１％であり、前記ＤＭＳＯの濃度が５～７％（ｖ／ｖ）である、前記組成物。
【請求項10】
前記血清アルブミンの濃度（ｖ／ｖ）が０．２～０．８％、０．３～０．７％、０．４～０．６％、または約０．５％である、請求項９に記載の組成物。
【請求項11】
１×１０６～４０×１０６のＴ細胞／ｍＬを有する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項12】
凍結保存された形態である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項13】
Ｔ細胞及び血清アルブミンを含む組成物であって、前記組成物が約０．１５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミンを含む、前記組成物。
【請求項14】
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）も含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項15】
前記ＤＭＳＯが前記血清アルブミンと比較して３倍～３０倍過剰（ｖ／ｖ）で存在する、請求項１４に記載の組成物。
【請求項16】
前記過剰が３倍～１５倍、６倍～１２倍、８倍～１１倍、または約１０倍である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項17】
Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯを含む組成物であって、前記血清アルブミン（ｖ／ｖ）の濃度が０．０３～０．６％であり、前記ＤＭＳＯの濃度（ｖ／ｖ）が前記血清アルブミンの濃度より３倍～３０倍高い、前記組成物。
【請求項18】
前記血清アルブミン濃度が＜０．３％（ｖ／ｖ）であり、前記ＤＭＳＯ濃度が前記血清アルブミン濃度より８倍～１１倍高い、請求項１７に記載の組成物。
【請求項19】
前記ＤＭＳＯの濃度が＜３％（ｖ／ｖ）である、請求項１７または請求項１８に記載の組成物。
【請求項20】
前記ＤＭＳＯの濃度が０．６～２．４％（ｖ／ｖ）、０．８～２．２％（ｖ／ｖ）、１．５～２％（ｖ／ｖ）、または約１．８％（ｖ／ｖ）である、請求項７に記載の組成物。
【請求項21】
Ｔ細胞及びＤＭＳＯを含む組成物であって、前記組成物が＜０．１５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含む、前記組成物。
【請求項22】
Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯを含む組成物であって、前記血清アルブミンの濃度が０．０３～０．３％（ｖ／ｖ）であり、前記ＤＭＳＯの濃度が０．１５～０．２０％（ｖ／ｖ）である、前記組成物。
【請求項23】
０．３×１０６～１２×１０６のＴ細胞／ｍＬを有する、請求項１３～２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項24】
前記Ｔ細胞が、ＣＡＲ－Ｔ細胞などの遺伝子改変Ｔ細胞である、先行請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項25】
前記Ｔ細胞がヒトＴ細胞であり、前記血清アルブミンがヒト血清アルブミンである、先行請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項26】
請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物を希釈するステップを含む、請求項１３～２５のいずれか一項に記載の組成物を調製するためのプロセス。
【請求項27】
希釈が電解質溶液によって行われる、請求項２６に記載のプロセス。
【請求項28】
前記電解質溶液が通常の生理食塩水である、請求項２７に記載のプロセス。
【請求項29】
前記電解質溶液が、ｐＨ６．５～８．０の滅菌の、非発熱性の、等張液であり、約５．２６ｇ／ＬのＮａＣｌ、約５．０２ｇ／Ｌのグルコン酸ナトリウム、約３．６８ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム三水和物、約０．３７ｇ／ＬのＫＣｌ、及び約０．３ｇ／ＬのＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏを有する、請求項２７に記載のプロセス。
【請求項30】
対象を治療する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１～２５のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、前記方法。
【請求項31】
Ｔ細胞、血清アルブミン、及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の懸濁液を含む容器であって、前記組成物が＜２．５％（ｖ／ｖ）血清アルブミンを含み、前記ＤＭＳＯが前記血清アルブミンと比較して≧５倍過剰（ｖ／ｖ）で存在し、前記懸濁液は患者に投与されるものである、前記容器。
【請求項32】
前記懸濁液が＜２．２％（ｖ／ｖ）、＜２％（ｖ／ｖ）、＜１％（ｖ／ｖ）、または約０．５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミンを含む、請求項３１に記載の容器。
【請求項33】
前記ＤＭＳＯが前記血清アルブミンと比較して５倍～３０倍過剰（ｖ／ｖ）で存在する、請求項３１または請求項３２に記載の容器。
【請求項34】
前記過剰が５倍～１５倍、６倍～１２倍、８倍～１１倍、または約１０倍である、請求項３３に記載の容器。
【請求項35】
Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯの懸濁液を含む容器であって、前記血清アルブミン（ｖ／ｖ）の濃度が０．１～１％であり、前記ＤＭＳＯの濃度（ｖ／ｖ）が前記血清アルブミンの濃度より３倍～３０倍高く、前記懸濁液が患者に投与されるものである、前記容器。
【請求項36】
前記血清アルブミン濃度が＜１％（ｖ／ｖ）であり、前記ＤＭＳＯ濃度が前記血清アルブミン濃度より８倍～１１倍高い、請求項３５に記載の容器。
【請求項37】
前記ＤＭＳＯの濃度が＜１０％（ｖ／ｖ）である、請求項３５または請求項３６に記載の容器。
【請求項38】
前記ＤＭＳＯの濃度が２～８％（ｖ／ｖ）、４～７％（ｖ／ｖ）、５～６％（ｖ／ｖ）、または約５％（ｖ／ｖ）である、請求項３７に記載の容器。
【請求項39】
Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯの懸濁液を含む容器であって、前記血清アルブミン（ｖ／ｖ）の濃度が０．１～１％であり、前記ＤＭＳＯの濃度が５～７％（ｖ／ｖ）であり、前記懸濁液が患者に投与されるものである、前記容器。
【請求項40】
前記血清アルブミンの濃度（ｖ／ｖ）が０．２～０．８％、０．３～０．７％、０．４～０．６％、または約０．５％である、請求項３９に記載の容器。
【請求項41】
１×１０６～４０×１０６のＴ細胞／ｍＬを有する、請求項３１～４０のいずれか一項に記載の容器。
【請求項42】
凍結保存された形態である、請求項３１～４１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項43】
対象を治療する方法であって、それを必要とする患者に請求項１３～２５のいずれか一項に記載の組成物を静脈内注入により投与するステップを含む、前記方法。
【請求項44】
前記静脈内注入の時間が１５分～１２０分である、請求項４３に記載の方法。
【請求項45】
前記静脈内注入の時間が最大３０分である、請求項４３に記載の方法。
【請求項46】
前記注入の体積が５０～１００ｍＬである、請求項４１～４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項47】
前記注入の体積が約５０ｍＬである、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項48】
前記Ｔ細胞がキメラシグナル伝達ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、前記キメラシグナル伝達ポリペプチドが、（ｉ）共刺激ポリペプチド細胞質シグナル伝達領域；
（ｉｉ）ＴＩＲドメインを欠く短縮型ＭｙＤ８８ポリペプチド領域；
（ｉｉｉ）ＴＩＲドメインを欠く短縮型ＭｙＤ８８ポリペプチド領域及び共刺激ポリペプチド細胞質シグナル伝達領域；または
（ｉｖ）ＴＩＲドメインを欠く短縮型ＭｙＤ８８ポリペプチド領域及びＣＤ４０細胞外ドメインを欠くＣＤ４０細胞質ポリペプチド領域を含む、先行請求項のいずれかに記載の組成物、方法、プロセス、または容器。
【請求項49】
共刺激ポリペプチド細胞質シグナル伝達領域が、ＭｙＤ８８、ＣＤ４０及び／またはＭｙＤ８８－ＣＤ４０融合キメラポリペプチドによって活性化されるシグナル伝達経路を活性化するシグナル伝達領域である、請求項４８に記載の組成物、方法、プロセス、または容器。
【請求項50】
前記Ｔ細胞が、誘導性キメラアポトーシス促進性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、先行請求項のいずれかに記載の組成物、方法、プロセス、または容器。
【請求項51】
（ａ）内部空間を含む容器と、（ｂ）前記内部空間内に含まれる組成物と、を含み、前記組成物が、
（ｉ）約１×１０６～４０×１０６（例えば、約５×１０６）の細胞／ｍｌの量のＴ細胞；
（ｉｉ）約０．１％～０．６％ｖ：ｖの濃度の血清アルブミン；
（ｉｉｉ）約５％～７％ｖ：ｖの濃度のＤＭＳＯ；及び
（ｉｖ）ヒト注射のための薬学的に許容される担体、を含む、キット。
【請求項52】
前記容器がバッグ、例えば凍結保存バッグを含む、請求項５１に記載のキット。
【請求項53】
前記容器が、前記内部空間と流体連通しているバッグスパイクをさらに含む、請求項５２に記載のキット。
【請求項54】
前記Ｔ細胞が遺伝子改変されている、請求項５１に記載のキット。
【請求項55】
前記血清アルブミンがヒト血清アルブミンである、請求項５１に記載のキット。
【請求項56】
前記血清アルブミンが約０．５％ｖ：ｖの濃度で存在する、請求項５１に記載のキット。
【請求項57】
前記ＤＭＳＯが約５％ｖ：ｖの濃度で存在する、請求項５１に記載のキット。
【請求項58】
前記薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウム、グルコン酸ナトリウムナトリウム、酢酸三水和物、塩化カリウム、及び塩化マグネシウムを含む、請求項５１に記載のキット。
【請求項59】
前記薬学的に許容される担体が、Ｐｈａｒｍａ ＬｙｔｅまたはＰｌａｓｍａ Ｌｙｔｅを含む、請求項５１に記載のキット。
【請求項60】
前記組成物が約１５ｍｌの体積を有する、請求項５１に記載のキット。
【請求項61】
（ａ）内部空間を含む容器と、（ｂ）前記内部空間内に含まれる組成物と、を含み、前記組成物が、
（ｉ）約１５×１０６の細胞～約６００×１０６（例えば、約７５×１０６）の細胞の量のＴ細胞；
（ｉｉ）約０．０３％～約１．８％の血清アルブミン、例えば、約１．５％ｖ：ｖの量の血清アルブミン；
（ｉｉｉ）約１．５％～２．１ｖ：ｖ（例えば、約１．５％ｖ：ｖ）の濃度のＤＭＳＯ；及び
（ｉｖ）ヒト注射のための薬学的に許容される担体、を含む、キット。
【請求項62】
前記容器がバッグを含み、任意選択でバッグスパイクを含むチューブを含み、前記チューブが前記内部空間と流体連通している、請求項６１に記載のキット。
【請求項63】
前記組成物が約５０ｍｌの体積を有する、請求項６１に記載のキット。
【請求項64】
疾患、例えばがんの治療に使用するための本明細書に記載の組成物。
【請求項65】
疾患、例えばがんの治療のための本明細書に記載の組成物の使用。
【請求項66】
疾患、例えばがんを治療するための薬剤の調製における本明細書に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本明細書で引用される全ての文書及びオンライン情報は、参照によりその内容の全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
関連出願への参照
本出願は、２０１９年８月１２日に出願された米国仮出願第６２／８８５，７４７号の優先日の権益を主張するものであり、その内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１９年８月１２日に出願された米国仮出願第６２／８８５，７４７号の優先日の権益を主張するものであり、その内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0003】
本発明は、免疫細胞のための製剤の分野におけるものである。
【背景技術】
【0004】
Ｔ細胞活性化は、病原性微生物（例えば、ウイルス、細菌、及び寄生虫）、外来タンパク質、環境中の有害な化学物質に対する防御免疫、ならびにがん及びその他の過剰増殖性疾患に対する免疫における重要なステップである。
【0005】
ドナーまたは患者からのＴ細胞は、患者へのそれらの投与の前に遺伝子改変することができる。例えば、キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞は、さまざまながん治療を含む種々の治療において使用され得る。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞の養子移入は、特定の血液悪性腫瘍の治療に効果的な治療法である。改変Ｔ細胞は、造血細胞移植（ＨＣＴ）及び幹細胞移植（ＨＳＣＴ）の後に、再発を治療及び予防し、移植患者に免疫を提供するために使用することもできる。
【0006】
遺伝子改変ドナーＴ細胞は通常、患者またはドナーからＴ細胞を取り出し、それらを施設に輸送し、施設において遺伝子操作し、凍結し、患者が治療を受けることができる治療施設に戻すことによって得られる。細胞は出荷及び凍結する必要があるため、通常、細胞を保護するために凍結保護剤などの添加剤と一緒に製剤化される。
【0007】
既知の組成物は、組成物中に存在する添加剤のいくつかのために、レシピエントにおける有害作用または製造コストの高さに関連することがある。当該技術分野では、副作用の可能性を低減し、費用効果の高い方法で製造することができる改良された製剤を提供する必要がある。
【発明の概要】
【0008】
本発明は、従来技術の組成物と比較してより少ない量の凍結保護剤を含み、高い細胞濃度においても細胞生存率または治療効果を著しく損なうことはない組成物を提供することによってこの必要性を満たす。これらの組成物は治療に有用である。
【0009】
本発明者らは、Ｔ細胞と血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、＜２．５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミン（好ましくは＜２．２％（ｖ／ｖ）、＜２％（ｖ／ｖ）、または＜１％（ｖ／ｖ）、好ましくは＜０．５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミン）を含む、濃縮組成物を提供する。そのような組成物は、良好な治療効果を達成するが、薬学的に許容される形態で高価である、より大量の血清アルブミンを日常的に含む従来技術の組成物と比較して、調製するのに安価である。
【0010】
濃縮組成物は、好ましくは、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）も含む。ＤＭＳＯは通常、血清アルブミンと比較して過剰（ｖ／ｖ）で存在する。濃縮組成物がｘ％（ｖ／ｖ）血清アルブミンを含む場合、ＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）の濃度はしたがって３ｘ％～３０ｘ％であり得、好ましくは過剰は３倍～１５倍、例えば６倍～１２倍、８倍～１１倍、または約１０倍である。少なくとも５倍の過剰を、例えば５倍～３倍を使用してもよい。
【0011】
したがって、本発明者らはまた、Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯを含む濃縮組成物であって、血清アルブミン（ｖ／ｖ）の濃度は０．１～２％（好ましくは＜１％（ｖ／ｖ））であり、ＤＭＳＯの濃度は（ｖ／ｖ）は血清アルブミンの濃度より３倍～３０倍高い（好ましくは３倍～１５倍高い、例えば６倍～１２倍高い、８倍～１１倍高い、または約１０倍高く；少なくとも５倍高い濃度を使用することができる）、濃縮組成物を提供する。
【0012】
これらの濃縮組成物中のＤＭＳＯの濃度は、好ましくは＜１０％（ｖ／ｖ）であり、より好ましくは２～８％（ｖ／ｖ）、４～７％（ｖ／ｖ）、５～６％（ｖ／ｖ）、または約５％である。
【0013】
本発明者らはまた、Ｔ細胞とＤＭＳＯを含む濃縮組成物であって、＜５％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを含む、濃縮組成物も提供する。上述のように、凍結保護剤は患者の副作用に関連していると報告されているが、それでもなお、とりわけ細胞の解凍後の良好な生存率を確保するために重要であるとみなされた。本発明者らは、より少量の凍結保護剤のＤＭＳＯを含む組成物が、細胞を解凍から十分に保護し、その結果、それらが良好な解凍後の生存率を示すことを示した。
【0014】
本発明者らはまた、Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯを含む濃縮組成物であって、血清アルブミン（ｖ／ｖ）の濃度が０．１～１％（例えば、０．２～０．８％、０．３～０．７％、０．４～０．６％、または約０．５％）であり、ＤＭＳＯの濃度が５～７％（ｖ／ｖ）である、濃縮組成物も提供する。この範囲のＤＭＳＯ濃度は、高レベルの血清アルブミンを必要とせずに、良好なＴ細胞の回収率と生存率を提供することが見出された。
【0015】
これらの濃縮組成物は、１×１０６～４０×１０６のＴ細胞／ｍＬ、例えば、１×１０６～３５×１０６、１．２×１０６～３３×１０６、１．２×１０６～３０×１０６、１．２×１０６～２０×１０６、１．２×１０６～１５×１０６、１．２×１０６～１０×１０６、１．２×１０６～５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、または１．５×１０６～２．５×１０６のＴ細胞／ｍＬを含み得る。少なくとも１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬの濃度が典型的であり、約２×１０６のＴ細胞／ｍＬの濃度が好ましい。ＹＥＳＣＡＲＴＡ（商標）中のＴ細胞の濃度は３×１０６／ｍＬであり、ＫＹＭＲＩＡＨ（商標）中のＴ細胞の濃度は２×１０５／ｍＬ～５×１０６／ｍＬの範囲である。
【0016】
濃縮組成物はすべて、凍結保存された形態（例えば、－８０℃以下、好ましくは－１３０℃以下の温度）、ならびに凍結保存前及び凍結保存後（例えば、解凍）の形態で提供することができる。
【0017】
一態様では、本発明は、Ｔ細胞の懸濁液、約５～７％のＤＭＳＯ、及び約０．１～１％（例えば、０．２～０．８％、０．３～０．７％、０．４～０．６％、または約０．５％）のヒトアルブミン（ｖ／ｖ）を含む容器を提供する。いくつかの実施形態では、容器は滅菌注入バッグである。いくつかの実施形態では、注入バッグの容量は、約１５ｍＬ、３０ｍＬ、５０ｍＬ、６０ｍＬ、７０ｍＬ、１００ｍＬ、２５０ｍＬ、５００ｍＬ、７５０ｍＬ、１０００ｍＬ、１５００ｍＬ、２０００ｍＬ、または３０００ｍＬである。
【0018】
本発明の濃縮組成物は患者に投与することができるが、高ＤＭＳＯ濃度はしばしば細胞損傷を引き起こす可能性があるので、濃縮組成物は患者に投与する前に希釈することができる。この希釈は、細胞損傷を避けるのに役立ち得る。希釈組成物は、希釈されたＤＭＳＯでさえ細胞損傷を引き起こさないために、希釈から３時間以内（例えば、６０～１２０分以内、理想的には９０分以内）に患者に投与されるのが理想的である。
【0019】
したがって、本発明者らはまた、Ｔ細胞及び血清アルブミンを含む希釈組成物であって、＜１％（ｖ／ｖ）血清アルブミン（好ましくは＜０．６％（ｖ／ｖ）、より好ましくは０．１５％（ｖ／ｖ））を含む、希釈組成物を提供する。希釈組成物は、好ましくは、上述のように、血清アルブミンと比較して３倍～３０倍過剰（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯ（例えば、少なくとも５倍過剰のＤＭＳＯ）も含む。
【0020】
同様に、本発明者らは、Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯを含む希釈組成物であって、血清アルブミン（ｖ／ｖ）の濃度は０．０３～０．６％（好ましくは＜０．３％（ｖ／ｖ））であり、ＤＭＳＯの濃度は（ｖ／ｖ）は血清アルブミンの濃度より３倍～３０倍高い（好ましくは３倍～１５倍高い、例えば６倍～１２倍高い、８倍～１１倍高い、または約１０倍高い）、希釈組成物を提供する。
【0021】
これらの希釈組成物中のＤＭＳＯの濃度は、好ましくは＜３％（ｖ／ｖ）であり、より好ましくは、０．６～２．４％（ｖ／ｖ）、０．８～２．２％（ｖ／ｖ）、１．５～２％（ｖ／ｖ）、または１．６～１．９％（ｖ／ｖ）、または約１．７７％（ｖ／ｖ）である。
【0022】
また、本発明者らは、Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯを含む希釈組成物であって、血清アルブミンの濃度が０．０３～０．３％（ｖ／ｖ）であり、ＤＭＳＯの濃度が０．１５～０．２０％（ｖ／ｖ）である、希釈組成物も提供する。
【0023】
これらの希釈組成物は、０．３×１０６～１２×１０６のＴ細胞／ｍＬ、例えば、０．３×１０６～１０×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～１２×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～９×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～７．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～２×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、または０．５×１０６～０．８×１０６のＴ細胞／ｍＬを含み得る。少なくとも０．４５×１０６のＴ細胞／ｍＬの濃度が典型的であり、約０．６×１０６のＴ細胞／ｍＬの濃度が好ましい。
【0024】
希釈組成物は患者に投与することができる（投与することを意図している）ので、それらは一般に凍結されていない。好ましくは、それらは、４℃～４０℃、例えば、２５～４０℃、または体温、例えば、約３７±１℃の温度を有するであろう。解凍水浴から取り出した後、５℃～１５℃の温度を有する組成物が典型的であり得る。
【0025】
本明細書に記載の濃縮組成物を希釈するステップを含む、本明細書に記載の希釈組成物を調製するためのプロセスがさらに提供される。希釈は、例えば電解質溶液などの種々の液体で行ってよい（以下を参照されたい）。このプロセスはまた、凍結された濃縮組成物を解凍し、続いて希釈するステップを含み得る。次いで、希釈組成物を患者に投与することができる（例えば、希釈と投与との間の細胞培養のステップを伴わずに）。
【0026】
組成物のバランス（すなわち、細胞、ＤＭＳＯ、及び血清アルブミン成分に加えて）は、電解質溶液であってよい（以下を参照されたい）。例えば、細胞を調製し、次いで洗浄し、電解質溶液で洗浄及び懸濁する（及び任意選択で、例えば凍結保存及び解凍後に希釈する）ことができる。したがって、好ましい組成物は、本質的に、細胞、ＤＭＳＯ、血清アルブミン、及び電解質溶液からなり得る。
【0027】
濃縮及び希釈組成物中のＴ細胞は、野生型Ｔ細胞（例えば、ポリクローナルＴ細胞）であり得るが、好ましくは、それらは、遺伝子改変されたＴ細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）である。遺伝子改変されたＴ細胞は、アクチベータースイッチ及び／または自殺スイッチを発現してもよい。Ｔ細胞は、最も好ましくはヒトＴ細胞である。
【0028】
組成物中の血清アルブミンは、一般に、組成物中のＴ細胞と同じ種に由来するであろう。最も好ましくは、組成物中のＴ細胞はヒトであるため、最も好ましい実施形態では、血清アルブミンはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である。これは、ヒト血清から調製してもよく、または組換えヒト血清アルブミンであってもよい。
【0029】
本発明の組成物は、例えば静脈内注入による治療中の患者への投与に適しており、意図されている。したがって、組成物は、さらなる細胞培養を伴わずに患者に投与することができ、例えば、その投与前に細胞培養培地を組成物に添加しない。レシピエントは、血液がん（治療抵抗性の血液がんなど）または遺伝性血液障害を患っている可能性がある。例えば、レシピエントは急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、重度の複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群（ＷＡ）、ファンコニ貧血、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、または多発性骨髄腫を患っている可能性がある。組成物は、同種移植片を受けとった後、レシピエントが移植関連感染症を制御するのを助け得る。レシピエントは造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けていてもよい。患者に投与されるＴ細胞は、通常、自家性Ｔ細胞であり、通常、例えば、ＣＡＲ、自殺スイッチなどを発現するために回収されて以降に、遺伝子改変されているであろう。
【0030】
したがって、本発明らはまた、本明細書に記載の組成物（好ましくは希釈組成物）をそれを必要とする患者に投与するステップを含む、対象を治療する方法も提供する。同様に、本発明らは、対象の治療に使用するための濃縮及び希釈組成物を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、それを必要とする患者に、静脈内注入によって本明細書に記載の組成物を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、静脈内注入の時間は１５～１２０分である。いくつかの実施形態では、静脈内注入の時間は最大３０分である。いくつかの実施形態では、注入量は、５０～１００ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入量は約５０ｍＬである。
【図面の簡単な説明】
【0031】
【発明を実施するための形態】
【0032】
製剤
Ｔ細胞（特に遺伝子改変Ｔ細胞）などの免疫細胞は、通常、凍結状態で患者のいる場所に輸送される。凍結及び融解中の生存率を維持するために、細胞は通常、損傷から保護するために凍結保護剤が配合されている。例えば、凍結保護剤のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、通常１０％（ｖ／ｖ）の濃度で添加され、凍結プロセス中に氷の結晶が形成されて細胞に損傷を与えるのを防ぐ。
Ｔ細胞（特に遺伝子改変Ｔ細胞）などの免疫細胞は、通常、凍結状態で患者のいる場所に輸送される。凍結及び融解中の生存率を維持するために、細胞は通常、損傷から保護するために凍結保護剤が配合されている。例えば、凍結保護剤のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、通常１０％（ｖ／ｖ）の濃度で添加され、凍結プロセス中に氷の結晶が形成されて細胞に損傷を与えるのを防ぐ。
【0033】
ＤＭＳＯなどの凍結保護剤は、悪心、嘔吐、腹部けいれん、頭痛、低血圧、徐脈、溶血、発疹、腎不全、高血圧、心臓ブロック、肺水腫、心停止、気管支痙攣、及び神経学的損傷などの用量依存性副作用に関連している。したがって、ＤＭＳＯの濃度を５％に下げる試みがなされてきたが（Ｍｏｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．２０１４ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ５４：２５１４－２２）、細胞を保存しながら濃度を下げるのは難しいため、組成物には依然として１０％のＤＭＳＯが含まれていることが多い。
【0034】
したがって、レシピエントへの潜在的な副作用を減らすために、治療センターは、例えば細胞を洗浄することによって、注入前にＤＭＳＯの量を減らすための措置を講じることができる。しかしながら、細胞がプロセスで失われる可能性があり、追加の処理ステップごとに本質的に汚染の可能性が高まるため、この手順は理想的ではない。
【0035】
血清アルブミンも組成物に添加され、凍結／解凍サイクル中にＴ細胞を生存可能に保つのに役立つ。特定の濃度での血清アルブミンの添加は、凍結中に細胞を保存するために不可欠であると考えられている。例えば、ＫＹＭＲＩＡＨ（商標）の製剤には２５％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）が２０％（ｖ／ｖ）含まれており、ＹＥＳＣＡＲＴＡ（商標）には２．５％のＨＳＡが含まれている。血清アルブミンの量を減らすことは、製剤をより費用効果の高いものにするという利点を有するが、それにもかかわらず、既知の製剤は、凍結中に細胞が損傷されないことを確実にするために高濃度を使用する。
【0036】
Ｔ細胞の生存率に悪影響を与えることなく、これらの組成物においてＤＭＳＯと血清アルブミンの両方の濃度を低下させることができるという従来技術の示唆はない。
【0037】
本発明者らは、驚くべきことに、既知の製剤で使用される場合よりも低い凍結保護剤濃度を使用して、Ｔ細胞を安全に製剤化できることを発見した。これらの製剤は、とりわけ費用効果が高く、追加の安全機能を備えているが、Ｔ細胞は患者に投与される最終組成物で生存率を維持する。これは、本明細書に記載の組成物に、＜２．５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミンを提供することによって達成される。当該技術分野の組成物は、２．５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミン（ＹＥＳＣＡＲＴＡ（商標））を含むことが知られているが、他のもの、例えば、ＫＹＭＲＩＡＨ（商標）は、最大５％（ｖ／ｖ）のはるかに高い量を含む。本発明者らは、驚くべきことに、組成物中の血清アルブミンの量を、Ｔ細胞の解凍後の生存率を減らすことなく減少させることができることを発見した。いくつかの実施形態では、組成物は、＜２％（ｖ／ｖ）、＜１．５％（ｖ／ｖ）、＜１％（ｖ／ｖ）、またはさらに≦０．５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミン（特にヒト血清アルブミン）を含む。本発明者らは、そのような低濃度が細胞の良好な解凍後の回収率を達成することを示した。組成物中の血清アルブミンのレベルは、通常、少なくとも０．０５％である。
【0038】
好ましい組成物には、ＤＭＳＯも含まれる。ＤＭＳＯは１０％（ｖ／ｖ）未満の濃度で存在し得る。より低い濃度を使用することもでき、本発明者らは、ＤＭＳＯの２～８％（ｖ／ｖ）の範囲の濃度で特に良好な結果を見出した（実施例２）。したがって、本発明の組成物は、２～８％（ｖ／ｖ）、４～７％（ｖ／ｖ）、４～６％（ｖ／ｖ）、または５～６％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含み得る。好ましくは、組成物は、凍結保護剤の約５．８％（ｖ／ｖ）を含む。これは、本発明者らが、この濃度が特に良好に機能することを見出したためである。
【0039】
組成物が血清アルブミンとＤＭＳＯの両方を含む場合、ＤＭＳＯは血清アルブミンより３倍～３０倍高い（ｖ／ｖ）濃度を示すことができる。ＤＭＳＯ濃度は、血清アルブミン濃度の３倍～１５倍、６倍～１２倍、８倍～１１倍、または約１０倍高くすることができる。ＫＹＭＲＩＡＨ（商標）及びＹＥＳＣＡＲＴＡ（商標）などの既知の組成物にはＤＭＳＯが過剰に含まれているが、１．５倍または２倍でしかない。
【0040】
組成物は、血清アルブミン及びＤＭＳＯに加えて、任意選択で凍結保護剤を含むことができる。例えば、組成物は、エチレングリコール、グリセロール、及び／またはジエチレングリコールを含むことができる。しかしながら、通常、これらの追加の凍結保護剤は存在しない。
【0041】
組成物は滅菌でなければならない。理想的には、それらは非発熱性でもある。それらは等張であり得る。ｐＨは、６～８の範囲、例えば、６．５～８、または６．８～７．７の範囲、例えば、約７．４であり得る。
【0042】
電解質溶液は、組成物を調製、洗浄、または希釈するために使用することができ、したがって、組成物は、電解質溶液を含み得る。組成物のバランス（すなわち、細胞、ＤＭＳＯ、及び血清アルブミン成分に加えて）は、電解質溶液であってよい。そのような電解質溶液は、Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｃｏｒｐによって販売されているＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ（商標）製品など、当該技術分野で知られている。Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ（商標）製品は、電解質、浸透圧、及びｐＨの含有量においてヒト血漿を厳密に模倣するバランスの取れた晶質液のファミリーであり、非発熱性で等張性である。１つの適切な電解質溶液は、ｐＨ６．５～８．０を有し、例えば、塩化ナトリウム、グルコン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化カリウム、及び塩化マグネシウムを含む、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、酢酸塩、塩化物、及びグルコン酸塩を含む。このタイプの好ましい溶液は、ｐＨ６．５～８．０の滅菌の、非発熱性の、等張液であり、約５．２６ｇ／ＬのＮａＣｌ、約５．０２ｇ／Ｌのグルコン酸ナトリウム、約３．６８ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム三水和物、約０．３７ｇ／ＬのＫＣｌ、及び約０．３ｇ／ＬのＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏを有する（例えばＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標））。別の適切な電解質溶液は、塩化ナトリウム溶液などの塩溶液である（例えば、通常、重量オスモルが３０８ｍＯｓｍ／Ｌである、９ｇ／ＬのＮａＣｌを含む通常の生理食塩水）。これらの種々の溶液は、理想的には非発熱性、等張性、及び滅菌である。
【0043】
濃縮組成物は、好ましくは凍結保存される。これは、組成物が－８０℃以下、好ましくは－１３０℃以下の温度で凍結されることを意味する。
【0044】
濃縮組成物は、好ましくは容器内にある。いくつかの実施形態では、容器は滅菌注入バッグである。いくつかの実施形態では、注入バッグの容量は、約１５ｍＬ、３０ｍＬ、５０ｍＬ、６０ｍＬ、７０ｍＬ、１００ｍＬ、２５０ｍＬ、５００ｍＬ、７５０ｍＬ、１０００ｍＬ、１５００ｍＬ、２０００ｍＬ、または３０００ｍＬである。
【0045】
濃縮組成物は、１×１０６～４０×１０６の細胞／ｍＬ、例えば、１×１０６～３５×１０６、１．２×１０６～３３×１０６、１．２×１０６～３０×１０６、１．２×１０６～２０×１０６、１．２×１０６～１５×１０６、１．２×１０６～１０×１０６、１．２×１０６～５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、または、１．５×１０６～２．５×１０６のＴ細胞／ｍＬを含み得る。約２×１０６の細胞／ｍＬの濃度が好ましくあり得る。これらの数字は、組成物中の所望のＴ細胞の濃度を示している。正確な濃度は、患者に投与される用量に応じて変化し得る。したがって、より高い細胞数が患者に投与される場合、組成物中の細胞濃度はより高くなり得る。適切な細胞濃度は、臨床医が決定することができる。
【0046】
凍結濃縮組成物を患者に投与する前に、それらを解凍する必要がある。治療用細胞を解凍するための方法は、当該技術分野でよく知られている。例えば、凍結組成物は、水浴を使用して（例えば、３７±１℃で）解凍することができる。細胞を含む密封された容器（例えば、凍結保存バッグ、任意選択でジップシールプラスチック容器などの第２の容器内に密封されている）は、解凍が起こることを可能にするために水浴に沈められ得る。組成物は、水浴と同じ温度に達する前に水浴から回収することができる。
【0047】
解凍された組成物は、例えば、本明細書に記載されるように希釈組成物を調製するために、患者に注入する前に希釈することができる。これらの希釈組成物は、０．３×１０６～１２×１０６の細胞／ｍＬ、例えば、０．３×１０６～１２×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～１０×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～９×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～７．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～２×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、または０．５×１０６～０．８×１０６のＴ細胞／ｍＬを含み得る。約０．６×１０６の細胞／ｍＬの濃度が好ましくあり得る。同様に、これらの数字は、組成物中の所望のＴ細胞の濃度を示している。
【0048】
組成物は、薬学的に許容される担体を含むことができる。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、医薬組成物の他の成分と適合性であり、対象に安全に投与することができる担体を指す。この用語は、「生理学的に許容される」及び「薬理学的に許容される」と同義で使用される。それらの調製及び使用のための医薬組成物及び技術は、本開示に照らして当業者に知られている。それらの投与に適した薬理組成物及び技術の詳細なリストについては、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．１９８５；Ｂｒｕｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，”ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，２００５；Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（ｅｄｓ．），“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，”Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５；及びＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（ｅｄｓ．），“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，”Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００８などの文書を参照することができる。
【0049】
薬学的に許容される担体は、少なくともヒトが使用するためには、一般に滅菌である。医薬組成物は、一般に、貯蔵中の緩衝及び保存のための薬剤を含み、投与経路に応じて、適切な送達のための緩衝剤及び担体を含むことができる。薬学的に許容される担体の例としては、通常の（０．９％）生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）、及びＰｌａｍｓＬｙｔｅ ＡＴＭ（Ｂａｘｔｅｒ）などの複数の電解質溶液が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容される担体は、意図された投与様式に適合させることができる。例えば、静脈内注射用の組成物は、滅菌であり得、そして血液と適合性のある成分を含み得る。
【0050】
製剤は、免疫細胞、特にＴ細胞、及び他の免疫細胞、ならびにリンパ系または骨髄系細胞などの造血系統の他の細胞のためのものであり得る。特定の実施形態では、本明細書に開示される組成物中の細胞は、名前が付けられた１つ以上の細胞型からなるか、または本質的にそれからなる。例えば、組成物は、細胞を含むことができ、細胞は、Ｔ細胞からなるか、または本質的にそれからなる。「本質的にからなる」という用語は、列挙された要素と、特許請求された組み合わせの基本的かつ新規の特性に実質的に影響を及ぼさない他の要素と、を含むことを指す。
【0051】
Ｔ細胞組成物を希釈するための方法は、当該技術分野で知られている。例えば、組成物は、本明細書で論じられるような電解質溶液を使用して、例えば、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標）溶液などのＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ（商標）溶液を使用して、または生理食塩水を使用して希釈され得る。希釈後、組成物は理想的には９０分以内に対象に投与される。
【0052】
希釈は、臨床医が適切と考える任意の比率にすることができる。例えば、組成物は、１：２～１：１０の比率で希釈され得る。好ましくは、組成物は３：７（すなわち、１：２＋１／３）の比率で希釈される。ＫＹＭＲＩＡＨ（商標）及びＹＥＳＣＡＲＴＡ（商標）製品は、注入前に希釈されない。
【0053】
いくつかの実施形態では、組成物は、希釈後に所望の細胞濃度を含むように希釈される。この目的のために、最終希釈組成物が所望の細胞数／ｍＬを含むように、組成物中の細胞数を決定し、希釈係数を計算することができる。
【0054】
濃縮組成物は、種々の体積を有することができる。典型的な体積は、５～１００ｍＬ、例えば１０～２０ｍＬ（例えば、約１５ｍＬ）または５０～７０ｍＬ（例えば、約６０ｍＬ）である。いくつかの実施形態では、組成物は少なくとも１４ｍＬの体積を有する。いくつかの実施形態では、凍結保存された組成物は、少なくとも２ｍＬ、例えば、少なくとも５ｍＬの体積を有する。約１５ｍＬの体積は、５００×１０６細胞未満を含む組成物に有用であり得、一方、約６０ｍＬの体積は、５００×１０６細胞を超える組成物に有用であり得る。
【0055】
組成物は、凍結保存バッグ内に入れることができ、凍結保存バッグは、次に、凍結保存カセット内またはジップシールプラスチック容器内に入れることができる。凍結保存バッグ内の濃縮組成物は、例えば注射器を介して電解質溶液を導入することによって、バッグ内で希釈されて希釈組成物をもたらすことができる。例えば、７：３の希釈比をもたらすために、３５ｍＬの電解質溶液を１５ｍＬの濃縮組成物に加えることができ、または１４０ｍＬの電解質溶液を６０ｍＬの濃縮組成物に加えることができる。
【0056】
凍結保存バッグ（または他の容器）は、好ましくは、ＩＳＢＴ １２８規格（１９９４年に承認された）に準拠する識別ラベルを備える。典型的な凍結保存バッグには、セプタムを備えたスパイクポートであり、不正開封防止カバーによって外部汚染から保護できる出口ポートを備えている。
【0057】
凍結保存は、例えばチューブを通してバッグから材料を引き出すためのバッグスパイクを受け入れるように構成されたスパイクポートを備えることができる。
【0058】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、フェノールレッド（フェノールスルホンフタレイン）を実質的に含まない。例えば、フェノールレッドの濃度は、５０μｇ／Ｌ未満、理想的には５μｇ／Ｌ未満である。残留フェノールレッドは、例えば、ＲＰＭＩ－１６４０培地の使用後に存在する可能性がある。組成物はフェノールレッドを含まなくてもよい。
【0059】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とヒト血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、（ｉ）０．５％（ｖ／ｖ）～２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、（ｉｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～４０×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、濃縮組成物を提供する。この組成物はまた、２～１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含んでもよい。
【0060】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とヒト血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、（ｉ）０．５％（ｖ／ｖ）～２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、（ｉｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～３５×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、濃縮組成物を提供する。この組成物はまた、２～１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含んでもよい。
【0061】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とヒト血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、（ｉ）０．５％（ｖ／ｖ）～２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、（ｉｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～３０×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、濃縮組成物を提供する。この組成物はまた、２～１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含んでもよい。
【0062】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とヒト血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、（ｉ）０．５％（ｖ／ｖ）～２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、（ｉｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～２０×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、濃縮組成物を提供する。この組成物はまた、２～１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含んでもよい。
【0063】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とヒト血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、（ｉ）０．５％（ｖ／ｖ）～２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、（ｉｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～１０×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、濃縮組成物を提供する。この組成物はまた、２～１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含んでもよい。
【0064】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とＤＭＳＯを含む濃縮組成物であって、（ｉ）２～８％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、（ｉｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～４０×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、濃縮組成物を提供する。この組成物はまた、＜２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミン、好ましくは０．４～１％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含んでもよい。
【0065】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とＤＭＳＯを含む濃縮組成物であって、（ｉ）２～８％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、（ｉｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～３５×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、濃縮組成物を提供する。この組成物はまた、＜２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミン、好ましくは０．４～１％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含んでもよい。
【0066】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とＤＭＳＯを含む濃縮組成物であって、（ｉ）２～８％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、（ｉｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～３０×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、濃縮組成物を提供する。この組成物はまた、＜２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミン、好ましくは０．４～１％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含んでもよい。
【0067】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とＤＭＳＯを含む濃縮組成物であって、（ｉ）２～８％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、（ｉｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～２０×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、濃縮組成物を提供する。この組成物はまた、＜２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミン、好ましくは０．４～１％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含んでもよい。
【0068】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とＤＭＳＯを含む濃縮組成物であって、（ｉ）２～８％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、（ｉｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～１０×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、濃縮組成物を提供する。この組成物はまた、＜２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミン、好ましくは０．４～１％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含んでもよい。
【0069】
本発明者らは、ヒトＴ細胞、ＤＭＳＯ、及びヒト血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、（ｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～４０×１０６のＴ細胞／ｍＬを含み、（ｉｉ）０．５％（ｖ／ｖ）～２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含み、（ｉｉｉ）ＤＭＳＯの濃度は、ヒト血清アルブミンの濃度よりも５～１５倍高く、好ましくは約１０倍高い、濃縮組成物を提供する。
【0070】
本発明者らは、ヒトＴ細胞、ＤＭＳＯ、及びヒト血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、（ｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～３５×１０６のＴ細胞／ｍＬを含み、（ｉｉ）０．５％（ｖ／ｖ）～２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含み、（ｉｉｉ）ＤＭＳＯの濃度は、ヒト血清アルブミンの濃度よりも５～１５倍高く、好ましくは約１０倍高い、濃縮組成物を提供する。
【0071】
本発明者らは、ヒトＴ細胞、ＤＭＳＯ、及びヒト血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、（ｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～３０×１０６のＴ細胞／ｍＬを含み、（ｉｉ）０．５％（ｖ／ｖ）～２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含み、（ｉｉｉ）ＤＭＳＯの濃度は、ヒト血清アルブミンの濃度よりも５～１５倍高く、好ましくは約１０倍高い、濃縮組成物を提供する。
【0072】
本発明者らは、ヒトＴ細胞、ＤＭＳＯ、及びヒト血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、（ｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～２０×１０６のＴ細胞／ｍＬを含み、（ｉｉ）０．５％（ｖ／ｖ）～２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含み、（ｉｉｉ）ＤＭＳＯの濃度は、ヒト血清アルブミンの濃度よりも５～１５倍高く、好ましくは約１０倍高い、濃縮組成物を提供する。
【0073】
本発明者らは、ヒトＴ細胞、ＤＭＳＯ、及びヒト血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、（ｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～１０×１０６のＴ細胞／ｍＬを含み、（ｉｉ）０．５％（ｖ／ｖ）～２％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含み、（ｉｉｉ）ＤＭＳＯの濃度は、ヒト血清アルブミンの濃度よりも５～１５倍高く、好ましくは約１０倍高い、濃縮組成物を提供する。
【0074】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とヒト血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、（ｉ）＜１％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、（ｉｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは約２×１０６のＴ細胞／ｍＬと、を含む、濃縮組成物を提供する。この組成物はまた、＜１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯ、好ましくは約５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含んでもよい。
【0075】
本発明者らは、ヒトＴ細胞、ＤＭＳＯ、及びヒト血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、（ｉ）＜１％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、（ｉｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは約２×１０６のＴ細胞／ｍＬと、（ｉｉｉ）＜１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯ、好ましくは約５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、を含む、濃縮組成物を提供する。
【0076】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とＤＭＳＯを含む濃縮組成物であって、（ｉ）＜８％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯ、好ましくは約５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、（ｉｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは約２×１０６のＴ細胞／ｍＬと、を含む、濃縮組成物を提供する。この組成物はまた、＜１％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミン、好ましくは約０．５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含んでもよい。
【0077】
本発明者らは、１ミリリットルあたり１．５×１０６～４０×１０６の遺伝子改変ヒトＴ細胞と、約０．５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、約５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、を含む濃縮組成物を提供する。例えば、本発明者らは、１ミリリットルあたり約３０×１０６の遺伝子改変ヒトＴ細胞と、約０．５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、約５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、を含む組成物を提供する。
【0078】
本発明者らは、１ミリリットルあたり１．５×１０６～３０×１０６の遺伝子改変ヒトＴ細胞と、約０．５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、約５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、を含む濃縮組成物を提供する。例えば、本発明者らは、１ミリリットルあたり約２０×１０６の遺伝子改変ヒトＴ細胞と、約０．５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、約５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、を含む組成物を提供する。
【0079】
本発明者らは、１ミリリットルあたり１．５×１０６～２０×１０６の遺伝子改変ヒトＴ細胞と、約０．５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、約５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、を含む濃縮組成物を提供する。例えば、本発明者らは、１ミリリットルあたり約１２×１０６の遺伝子改変ヒトＴ細胞と、約０．５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、約５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、を含む組成物を提供する。
【0080】
本発明者らは、１ミリリットルあたり１．５×１０６～１０×１０６の遺伝子改変ヒトＴ細胞と、約０．５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、約５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、を含む濃縮組成物を提供する。例えば、本発明者らは、１ミリリットルあたり約２×１０６の遺伝子改変ヒトＴ細胞と、約０．５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、約５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、を含む組成物を提供する。
【0081】
本発明者らは、ヒトＴ細胞、ＤＭＳＯ、及びヒト血清アルブミンを含む濃縮組成物であって、（ｉ）１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは、約２×１０６のＴ細胞／ｍＬを含み、（ｉｉ）＜１％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．５％の（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含み、（ｉｉｉ）ＤＭＳＯの濃度は、ヒト血清アルブミンの濃度よりも５～１５倍高く、好ましくは約１０倍高い、濃縮組成物を提供する。
【0082】
本発明者らは、ヒトＴ細胞と、ヒト血清アルブミンと、ＤＭＳＯと、を含む濃縮組成物であって、ヒト血清アルブミン（ｖ／ｖ）の濃度が０．４～０．６％、または約０．５％であり、ＤＭＳＯの濃度が５～７％（ｖ／ｖ）であり、ヒトＴ細胞の濃度が、１．５×１０６～４０×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは約３０×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは約２０×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは約１５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは約１０×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは約５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは約２×１０６のＴ細胞／ｍＬである、濃縮組成物を提供する。
【0083】
本発明者らは、ヒトＴ細胞と、ヒト血清アルブミンと、を含む希釈組成物であって、（ｉ）０．１５％（ｖ／ｖ）～０．６％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、（ｉｉ）０．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～１２×１０６のＴ細胞／ｍＬ、例えば、０．３×１０６～１０×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～９×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～７．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～２×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、または０．５×１０６～０．８×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、希釈組成物を提供する。この組成物はまた、０．６～３％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含んでもよい。
【0084】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とヒト血清アルブミンを含む希釈組成物であって、（ｉ）０．１５％（ｖ／ｖ）～０．６％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、（ｉｉ）０．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～３×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、希釈組成物を提供する。この組成物はまた、０．６～３％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含んでもよい。
【0085】
本発明者らは、ヒトＴ細胞と、ＤＭＳＯと、を含む希釈組成物であって、（ｉ）０．６～２．５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、（ｉｉ）０．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～１２×１０６のＴ細胞／ｍＬ、例えば、０．３×１０６～１０×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～９×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～７．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～２×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、または０．５×１０６～０．８×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、希釈組成物を提供する。この組成物はまた、０．６～３％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含んでもよい。この組成物はまた、＜０．６％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミン、好ましくは０．１～０．３％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含んでもよい。
【0086】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とＤＭＳＯを含む希釈組成物であって、（ｉ）０．６～２．５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、（ｉｉ）０．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～３×１０６のＴ細胞／ｍＬを含む、希釈組成物を提供する。この組成物はまた、０．６～３％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含んでもよい。この組成物はまた、＜０．６％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミン、好ましくは０．１～０．３％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含んでもよい。
【0087】
本発明者らは、ヒトＴ細胞と、ＤＭＳＯと、ヒト血清アルブミンと、を含む希釈組成物であって、（ｉ）０．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～１２×１０６のＴ細胞／ｍＬ、例えば、０．３×１０６～１０×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～９×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～７．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～２×１０６のＴ細胞／ｍＬ、０．３×１０６～１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、または０．５×１０６～０．８×１０６のＴ細胞／ｍＬを含み、（ｉｉ）組成物が、０．１５％（ｖ／ｖ）～０．６％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含み、（ｉｉｉ）ＤＭＳＯの濃度が、ヒト血清アルブミンの濃度よりも５～１５倍高く、好ましくは約１０倍高い、希釈組成物を提供する。
【0088】
本発明者らは、ヒトＴ細胞、ＤＭＳＯ、及びヒト血清アルブミンを含む希釈組成物であって、（ｉ）０．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～３×１０６のＴ細胞／ｍＬを含み、（ｉｉ）０．１５％（ｖ／ｖ）～０．６％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含み、（ｉｉｉ）ＤＭＳＯの濃度は、ヒト血清アルブミンの濃度よりも５～１５倍高く、好ましくは約１０倍高い、希釈組成物を提供する。
【0089】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とヒト血清アルブミンを含む希釈組成物であって、（ｉ）＜０．３％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．１５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、（ｉｉ）０．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは約０．６×１０６のＴ細胞／ｍＬと、を含む、希釈組成物を提供する。この組成物はまた、＜３％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯ、好ましくは約１．５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含んでもよい。
【0090】
本発明者らは、ヒトＴ細胞、ＤＭＳＯ、及びヒト血清アルブミンを含む希釈組成物であって、（ｉ）＜０．３％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．１５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、（ｉｉ）０．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは約０．６×１０６のＴ細胞／ｍＬと、（ｉｉｉ）＜３％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯ、好ましくは約１．５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、を含む、希釈組成物を提供する。
【0091】
本発明者らは、ヒトＴ細胞とＤＭＳＯを含む希釈組成物であって、（ｉ）＜２．５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯ、好ましくは約１．５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、（ｉｉ）０．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは約０．６×１０６のＴ細胞／ｍＬと、を含む、希釈組成物を提供する。この組成物はまた、＜０．３％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミン、好ましくは約０．１５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含んでもよい。
【0092】
本発明者らは、１ミリリットルあたり０．５×１０６～３×１０６の遺伝子改変ヒトＴ細胞と、約０．５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、約５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、を含む濃縮組成物を提供する。例えば、本発明者らは、１ミリリットルあたり約０．６×１０６の遺伝子改変ヒトＴ細胞と、約０．１５％（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンと、約１．５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯと、を含む組成物を提供する。
【0093】
本発明者らは、ヒトＴ細胞、ＤＭＳＯ、及びヒト血清アルブミンを含む希釈組成物であって、（ｉ）０．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ～１．５×１０６のＴ細胞／ｍＬ、好ましくは、約０．６×１０６のＴ細胞／ｍＬを含み、（ｉｉ）＜０．３％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．１５％の（ｖ／ｖ）のヒト血清アルブミンを含み、（ｉｉｉ）ＤＭＳＯの濃度は、ヒト血清アルブミンの濃度よりも５～１５倍高く、好ましくは約１０倍高い、希釈組成物を提供する。
【0094】
本発明者らは、ヒトＴ細胞、ヒト血清アルブミン、及びＤＭＳＯを含む希釈組成物であって、ヒト血清アルブミン（ｖ／ｖ）の濃度が０．４～０．６％、または約０．５％であり、ＤＭＳＯの濃度が５～７％（ｖ／ｖ）であり、ヒトＴ細胞の濃度が１．５×１０６～５×１０６の細胞／ｍＬ、好ましくは約２×１０６の細胞／ｍＬである、希釈組成物を提供する。
【0095】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞を含む本明細書に記載の組成物は、５～７％のＤＭＳＯ及び０．１～１％のヒト血清アルブミン中の約１５～６０ｍＬのＴ細胞の凍結懸濁液を含む注入バッグで供給される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、５～７％ＤＭＳＯ及び０．１～１％ヒト血清アルブミン中の、約１５～１００ｍＬ、１５～９０ｍＬ、１５～８０ｍＬ、１５～７０ｍＬ、１５～６０ｍＬ、６０～７０ｍＬ、６０～７５ｍＬ、または６５～７５ｍＬのＴ細胞の懸濁液を含む注入バッグで供給される。
【0096】
実際には、血清アルブミンは濃縮血清アルブミン溶液の体積希釈によって組み込まれるため、血清アルブミンの濃度は、本明細書ではｖ／ｖで表される（例えば、１％ＨＳＡは、２５％溶液の２５倍の体積希釈、例えば４０ｍＬを最終体積１Ｌに希釈することによって達成できる）が、濃縮血清アルブミン溶液は重量ベースで調製される（例えば、濃縮２５％溶液は１００ｍＬの水容量に２５ｇの血清アルブミンを含む）。したがって、最終的には、血清アルブミンのｖ／ｖパーセンテージは、実際には１：１ベースのｗ／ｖパーセンテージを反映し、すなわち、これらの単位は互換的に使用される。
【0097】
Ｔ細胞
本明細書に開示される組成物は、Ｔ細胞を含む。本発明で使用するのに適したＴ細胞の例としては、ＣＡＲ－Ｔ細胞及び野生型ポリクローナルＴ細胞が挙げられる。組成物は、ＣＡＲ－Ｔ細胞などの遺伝子改変Ｔ細胞にとって特に有用である。
本明細書に開示される組成物は、Ｔ細胞を含む。本発明で使用するのに適したＴ細胞の例としては、ＣＡＲ－Ｔ細胞及び野生型ポリクローナルＴ細胞が挙げられる。組成物は、ＣＡＲ－Ｔ細胞などの遺伝子改変Ｔ細胞にとって特に有用である。
【0098】
遺伝子改変されたＴ細胞は、ドナーリンパ球投与の恩恵を受けることができる対象への投与に有用である。これらの対象は典型的には、ヒトである。したがって、最も好ましくは、Ｔ細胞はヒトＴ細胞である。
【0099】
本発明の組成物中のＴ細胞は、一般に、単一のドナーに由来し、それらは、例えば、拡大及び／または遺伝子改変後に、そのドナーまたは別のレシピエントへの再導入を意図してもよい。
【0100】
Ｔ細胞は任意のドナーに由来することができる。ドナーは一般的に成人（少なくとも１８歳）であるが、小児もＴ細胞ドナーとして適している（例えば、Ｓｔｙｃｚｙｎｓｋｉ ２０１８，Ｔｒａｎｓｆｕｓ Ａｐｈｅｒ Ｓｃｉ ５７（３）：３２３－３３０を参照されたい）。Ｔ細胞は、遺伝子改変細胞を必要としている同じ患者に由来することもできる。
【0101】
ドナーからＴ細胞を取得するための適切なプロセスは、Ｄｉ Ｓｔａｓｉ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６５：１６７３－８３に付随する公開されたプロトコールに記載されている。一般的に、Ｔ細胞はドナーから取得され、遺伝子改変と選択を受けた後、レシピエントの対象に投与することができる。Ｔ細胞の有用な供給源はドナーの末梢血である。末梢血サンプルは、一般的に白血球アフェレーシスを受けて、白血球が濃縮されたサンプルを提供する。この濃縮されたサンプル（ロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｋ）としても知られる）は、単球、リンパ球、血小板、血漿、及び赤血球を含む種々の血液細胞で構成され得る。ロイコパックは典型的には、静脈穿刺またはバフィーコート製品と比較して、より高濃度の細胞を含んでいる。
【0102】
サンプルはアロデプリーション（ａｌｌｏｄｅｐｌｅｔｉｏｎ）を受ける可能性があるが、サンプルはアロデプリーションを受けないことが好ましい。したがって、Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｂｌｏｏｄ １２５：４１０３－１３で論じられているように、好ましいサンプルはアロレプリート（ａｌｌｏｒｅｐｌｅｔｅ）である。これらの集団は、ドナー細胞の治療上の利点を提供するためのより堅牢なＴ細胞レパートリーを提供する。したがって、本発明の好ましい組成物は、アロデプリーションされているＴ細胞ではなく、アロデプリーションのステップを受けていない。
【0103】
ドナーＴ細胞は、一般的に、遺伝子改変前に、（通常、活性化条件下で、例えば、抗ＣＤ３及び／または抗ＣＤ２８抗体を使用して、任意選択で、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－７などのサイトカインの存在下で）培養される。このステップにより、改変プロセスの最後にＴ細胞の収量が増加する。
【0104】
Ｔ細胞は、目的の安全スイッチ、共刺激スイッチ、及び／またはキメラ抗原受容体などの望ましい核酸をコードするウイルスベクターを使用して形質導入することができる（以下を参照されたい）。適切な形質導入技術が開示されているが、当該技術分野でもよく知られており、フィブロネクチンフラグメントＣＨ－２９６を含み得る。ウイルスベクターを使用した形質導入の代替として、目的の核酸及び目的の細胞表面導入遺伝子マーカーをコードするＤＮＡで、例えば、リン酸カルシウム、カチオン性ポリマー（ＰＥＩなど）、磁気ビーズ、エレクトロポレーション、ならびにＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）及びＦｕｇｅｎｅ（商標）などの市販の脂質ベースの試薬を使用して、細胞をトランスフェクトすることができる。形質導入／トランスフェクションステップの結果の１つは、種々のドナーＴ細胞が遺伝子改変Ｔ細胞となり、目的の自殺スイッチを発現できるようになることである。
【0105】
形質導入のための好ましいウイルスベクターは、Ｔｅｙ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌ １３：９１３－２４ ａｎｄ ｂｙ Ｄｉ Ｓｔａｓｉ ｅｔ ａｌ．（２０１１）（前出）によって開示されたレトロウイルスベクターである。このベクターは、ｉＣａｓｐ９自殺スイッチとΔＣＤ１９細胞表面導入遺伝子マーカーをコードするテナガザル白血病ウイルス（Ｇａｌ－Ｖ）疑似型レトロウイルスに基づいている（以下を参照されたい）。これは、Ｔｅｙ ｅｔ ａｌ．（２００７）（前出）によって論じられているように、ＰＧ１３パッケージング細胞株で生産することができる。所望のタンパク質をコードする他のウイルスベクターも使用することができる。レトロウイルスベクター、特に細胞あたりのプロウイルス組み込み体の高いコピー数を提供できるものが好ましい。
【0106】
形質導入／トランスフェクション後、細胞を形質導入／トランスフェクション材料から分離し、再度培養して、遺伝子改変Ｔ細胞を拡大させることができる。Ｔ細胞は、遺伝子改変されたＴ細胞の所望の最小数が達成されるように拡大することができる。
【0107】
特定の養子細胞移植法は、ＣＡＲ改変Ｔ細胞を使用しており、種々の悪性腫瘍の治療に大きな期待を寄せられている。この治療法では、Ｔ細胞は患者またはドナーの血液から抽出され、細胞表面にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子操作されている。
【0108】
キメラ抗原受容体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物及び方法は、ＣＡＲ－Ｔ細胞集団を使用する。「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」とは、例えば、Ｔ細胞を活性化し、特異的免疫を提供するために選択された膜貫通ポリペプチド及び細胞内ドメインポリペプチドに連結された標的抗原を認識するポリペプチド配列（抗原認識ドメイン、抗原認識領域、抗原認識部分、または抗原結合領域）を含むキメラポリペプチドを意味する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物及び方法は、ＣＡＲ－Ｔ細胞集団を使用する。「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」とは、例えば、Ｔ細胞を活性化し、特異的免疫を提供するために選択された膜貫通ポリペプチド及び細胞内ドメインポリペプチドに連結された標的抗原を認識するポリペプチド配列（抗原認識ドメイン、抗原認識領域、抗原認識部分、または抗原結合領域）を含むキメラポリペプチドを意味する。
【0109】
抗原認識部分
「抗原認識部分」は、例えば、抗原に結合する、天然由来または合成のいずれかの抗体断片可変ドメインなどの任意のポリペプチドまたはその断片であり得る。抗原認識部分の例としては、例えば、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片などの抗体に由来するポリペプチド；例えば、ＴＣＲ可変ドメインなどのＴ細胞受容体に由来するポリペプチド；シグナル伝達ドメイン（例えば「ザイトキン（ｚｙｔｏｋｉｎｅ）」）に人工的に融合できる分泌因子（例えば、サイトカイン、増殖因子）、ならびに細胞外同族タンパク質に結合する任意のリガンドまたは受容体断片（例えば、ＣＤ２７、ＮＫＧ２Ｄ）が挙げられるが、これらに限定されない。コンビナトリアルライブラリーを使用して、腫瘍関連標的に高い親和性で結合するペプチドを同定することもできる。さらに、「ユニバーサル」ＣＡＲは、ビオチン化腫瘍標的化抗体（Ｕｒｂａｎｓｋａ（１２）Ｃａ Ｒｅｓ）と組み合わせてシグナル伝達ドメインにアビデンを融合するか、Ｆｃガンマ受容体／ＣＤ１６を使用してＩｇＧ標的化腫瘍に結合させる（Ｋｕｄｏ Ｋ（１３）Ｃａ Ｒｅｓ）ことによって作成できる。
「抗原認識部分」は、例えば、抗原に結合する、天然由来または合成のいずれかの抗体断片可変ドメインなどの任意のポリペプチドまたはその断片であり得る。抗原認識部分の例としては、例えば、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片などの抗体に由来するポリペプチド；例えば、ＴＣＲ可変ドメインなどのＴ細胞受容体に由来するポリペプチド；シグナル伝達ドメイン（例えば「ザイトキン（ｚｙｔｏｋｉｎｅ）」）に人工的に融合できる分泌因子（例えば、サイトカイン、増殖因子）、ならびに細胞外同族タンパク質に結合する任意のリガンドまたは受容体断片（例えば、ＣＤ２７、ＮＫＧ２Ｄ）が挙げられるが、これらに限定されない。コンビナトリアルライブラリーを使用して、腫瘍関連標的に高い親和性で結合するペプチドを同定することもできる。さらに、「ユニバーサル」ＣＡＲは、ビオチン化腫瘍標的化抗体（Ｕｒｂａｎｓｋａ（１２）Ｃａ Ｒｅｓ）と組み合わせてシグナル伝達ドメインにアビデンを融合するか、Ｆｃガンマ受容体／ＣＤ１６を使用してＩｇＧ標的化腫瘍に結合させる（Ｋｕｄｏ Ｋ（１３）Ｃａ Ｒｅｓ）ことによって作成できる。
【0110】
膜貫通領域
本明細書のキメラタンパク質は、（例えば、キメラタンパク質のＮ末端またはＣ末端に）シングルパスまたはマルチパスの膜貫通配列を含み得る。シングルパス膜貫通領域は、特定のＣＤ分子、チロシンキナーゼ受容体、セリン／スレオニンキナーゼ受容体、ＴＧＦβ、ＢＭＰ、アクチビン、ホスファターゼに見られる。シングルパス膜貫通領域は、多くの場合、シグナルペプチド領域及び約２０～約２５アミノ酸の膜貫通領域を含み、膜貫通領域の多くは疎水性アミノ酸であり、アルファヘリックスを形成することができる。正に帯電したアミノ酸の短いトラックは、しばしば膜貫通スパンに続き、タンパク質を膜に固定する。マルチパスタンパク質としては、イオンポンプ、イオンチャネル、及びトランスポーターが挙げられ、膜を複数回またがる２つ以上のヘリックスが含まれる。マルチパスタンパク質のすべてまたは実質的にすべてが、キメラタンパク質に組み込まれることがある。シングルパス及びマルチパス膜貫通領域の配列は既知であり、キメラタンパク質分子に組み込むために選択することができる。
本明細書のキメラタンパク質は、（例えば、キメラタンパク質のＮ末端またはＣ末端に）シングルパスまたはマルチパスの膜貫通配列を含み得る。シングルパス膜貫通領域は、特定のＣＤ分子、チロシンキナーゼ受容体、セリン／スレオニンキナーゼ受容体、ＴＧＦβ、ＢＭＰ、アクチビン、ホスファターゼに見られる。シングルパス膜貫通領域は、多くの場合、シグナルペプチド領域及び約２０～約２５アミノ酸の膜貫通領域を含み、膜貫通領域の多くは疎水性アミノ酸であり、アルファヘリックスを形成することができる。正に帯電したアミノ酸の短いトラックは、しばしば膜貫通スパンに続き、タンパク質を膜に固定する。マルチパスタンパク質としては、イオンポンプ、イオンチャネル、及びトランスポーターが挙げられ、膜を複数回またがる２つ以上のヘリックスが含まれる。マルチパスタンパク質のすべてまたは実質的にすべてが、キメラタンパク質に組み込まれることがある。シングルパス及びマルチパス膜貫通領域の配列は既知であり、キメラタンパク質分子に組み込むために選択することができる。
【0111】
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合している。一実施形態では、ＣＡＲ内のドメインのうちの１つと天然で会合する膜貫通ドメインが使用される。他の実施形態では、ＣＡＲ内のドメインのうちの１つと天然で会合しない膜貫通ドメインが使用される。いくつかの実例では、膜貫通ドメインが、アミノ酸置換（例えば、典型的には、疎水性残基に帯電する）によって選択または改変され、それによって、そのようなドメインが、同じもしくは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに結合されるのが回避されて、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えることができる。
【0112】
膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体の、ＣＤ３－ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、またはＣＤ１５４のアルファ、ベータ、またはゼータ鎖に由来し得る。または、いくつかの例では、膜貫通ドメインは、例えば、ロイシン及びバリンなどのほとんど疎水性の残基を含んで、新たに合成され得る。特定の実施形態では、短いポリペプチドリンカーは、キメラ抗原受容体の膜貫通ドメインと細胞内ドメインとの間の結合を形成し得る。キメラ抗原受容体は、ストーク（ｓｔａｌｋ）、すなわち、細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間のアミノ酸の細胞外領域をさらに含み得る。例えば、ストークは、選択された膜貫通ドメインに天然で関連するアミノ酸の配列であり得る。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、ＣＤ８膜貫通ドメインを含み、特定の実施形態では、キメラ抗原受容体は、ＣＤ８膜貫通ドメイン及び膜貫通ドメインの細胞外部分上の追加のアミノ酸を含み、特定の実施形態では、キメラ抗原受容体は、ＣＤ８膜貫通ドメイン及びＣＤ８ストークを含む。キメラ抗原受容体は、膜貫通ドメインと細胞質ドメインとの間のアミノ酸の領域をさらに含み得、これらは、膜貫通ドメインが由来するポリペプチドと天然で関連している。
【0113】
標的抗原
キメラ抗原受容体は標的抗原に結合する。インビトロまたはエクスビボでＴ細胞活性化をアッセイする場合、標的抗原は、さまざまな供給源から取得または単離され得る。本明細書で使用される場合、標的抗原は、抗原または抗原上の免疫学的エピトープであり、これは、哺乳動物における免疫認識及び疾患の原因物質または疾患状態の最終的な排除または制御において重要である。免疫認識は、細胞性及び／または体液性であり得る。細胞内病原体及びがんの場合、免疫認識は、例えば、Ｔリンパ球応答であり得る。
キメラ抗原受容体は標的抗原に結合する。インビトロまたはエクスビボでＴ細胞活性化をアッセイする場合、標的抗原は、さまざまな供給源から取得または単離され得る。本明細書で使用される場合、標的抗原は、抗原または抗原上の免疫学的エピトープであり、これは、哺乳動物における免疫認識及び疾患の原因物質または疾患状態の最終的な排除または制御において重要である。免疫認識は、細胞性及び／または体液性であり得る。細胞内病原体及びがんの場合、免疫認識は、例えば、Ｔリンパ球応答であり得る。
【0114】
標的抗原は、例えば、ＨＩＶ（Ｋｏｒｂｅｒ ｅｔ ａｌ，ｅｄｓ ＨＩＶ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｄａｔａｂａｓｅ，Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ，Ｎ．Ｍｅｘ）、インフルエンザ、単純ヘルペス、ヒト乳頭腫ウイルス（米国特許第５，７１９，０５４号）、Ｂ型肝炎（米国特許第５，７８０，０３６号）、Ｃ型肝炎（米国特許第５，７０９，９９５号）、ＥＢＶ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）を含むウイルスなどの病原性微生物に由来するか、またはそれらから単離され得る。標的抗原は、例えば、クラミジア（米国特許第５，８６９，６０８号）、マイコバクテリア、レジオネラ、髄膜炎菌、グループＡ連鎖球菌、サルモネラ、リステリア、ヘモフィルスインフルエンザ（米国特許第５，９５５，５９６号など）などの病原性細菌に由来するか、またはそれらから単離され得る。標的抗原は、例えば、アスペルギルス、侵襲性カンジダ（米国特許第５，６４５，９９２号）、ノカルディア、ヒストプラズマ症、クリプトスポリジウムなどを含む病原性酵母に由来するか、またはそれらから単離され得る。標的抗原は、例えば、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ、トリパノソーマ、リーシュマニア（米国特許第５，９６５，２４２号）、マラリア原虫（米国特許第５，５８９，３４３号）、及びＴｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉを含むがこれらに限定されない病原性原生動物及び病原性寄生虫に由来するか、またはそれらから単離され得る。
【0115】
本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、免疫応答を誘発する分子として定義される。この免疫応答には、抗体産生、または特定の免疫学的コンピテントセルの活性化、あるいはその両方が含まれ得る。抗原は、生物、タンパク質／抗原のサブユニット、殺傷または不活化された全細胞または溶解物に由来し得る。したがって、事実上すべてのタンパク質またはペプチドを含む任意の高分子が抗原として機能することができる。さらに、抗原は、例えば、病原性ゲノムのヌクレオチド配列もしくは部分的ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡ、または免疫応答を誘発して抗原の合成をもたらすタンパク質の遺伝子もしくは遺伝子の断片を含む、組換えまたはゲノムＤＮＡに由来することができる。
【0116】
標的抗原には、前腫瘍性または過形成状態に関連する抗原が含まれる。標的抗原はまた、がんに関連するか、またはがんの原因であってもよい。そのような標的抗原は、例えば、腫瘍特異的抗原、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、または組織特異的抗原、そのエピトープ、及びそのエピトープアゴニストであり得る。そのような標的抗原としては、がん胎児抗原（ＣＥＡ）及びそのエピトープ、例えば、ＣＡＰ－１、ＣＡＰ－１－６Ｄなど（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｍ２９５４０）、ＭＡＲＴ－１（Ｋａｗａｋａｒｎｉ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８０：３４７－３５２，１９９４）、ＭＡＧＥ－１（米国特許第５，７５０，３９５号）、ＭＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ（米国特許第５，６４８，２２６号）、ＧＰ－１００（Ｋａｗａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：６４５８－６４６２，１９９２）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２，、点変異ｒａｓ癌遺伝子、正常及び点変異ｐ５３がん遺伝子（Ｈｏｌｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：３５５１－３５５５，１９９４）、ＰＳＭＡ（Ｉｓｒａｅｌｉ ｅｔ ａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：２２７－２３０，１９９３）、チロシナーゼ（Ｋｗｏｎ ｅｔ ａｌ ＰＮＡＳ ８４：７４７３－７４７７，１９８７）、ＴＲＰ－１（ｇｐ７５）（Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１８：２８０７－２８０８，１９９０；米国特許第５，８４０，８３９号）、ＮＹ－ＥＳＯ－１（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ ＰＮＡＳ ９４：１９１４－１９１８，１９９７）、ＴＲＰ－２（Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ ＥＭＢＯＪ，１１：５２７－５３５，１９９２）、ＴＡＧ７２、ＫＳＡ、ＣＡ－１２５、ＣＤ－１２３、ＰＳＡ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ／ｃ－ｅｒｂ／Ｂ２、（米国特許第５，５５０，２１４号）、ＢＲＣ－Ｉ、ＢＲＣ－ＩＩ、ｂｃｒ－ａｂｌ、ｐａｘ３－ｆｋｈｒ、ｅｗｓ－ｆｌｉ－１、ＴＡＡ及び組織特異的抗原の改変、ＴＡＡのスプライスバリアント、エピトープアゴニストなどが挙げられるが、これらに限定されない。他のＴＡＡは、米国特許第４，５１４，５０６号に開示されているものなどの当該技術分野で知られている方法によって同定、単離、及びクローン化することができる。標的抗原はまた、１つ以上の増殖因子及びそれぞれのスプライスバリアントを含み得る。腫瘍抗原は、例えばペプチドまたはポリペプチドなどの任意の抗原であり、腫瘍に対する宿主の免疫応答を誘発する。腫瘍抗原は、腫瘍関連抗原であり得、これは、腫瘍性腫瘍細胞に関連している。
【0117】
これらの抗原を標的とするｓｃＦｖは当該技術分野で知られており、例えば、Ｂｅｒａｈｏｖｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１８ Ｃａｎｃｅｒｓ １０，３２３；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２３（１）：１８４－１９１；Ｈａｎ ｅｔ ａｌ．２０１８，Ａｍ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ８（１）：１０６－１１９；Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１７；Ｈｅｍａｔｏｌ ＆ Ｏｎｃｏｌ． １０：６８；Ｊａｃｈｉｍｏｗｉｃｚ ｅｔ ａｌ． ２０１１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １０（６）：１０３６－１０４５；Ｓｃｈａｕ ｅｔ ａｌ．２０１９，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｒｅｐｏｒｔｓ ９：３２９９；Ｈａｎ ｅｔ ａｌ．２０１７，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２３（１３）：３３８５－３３９５；Ｎｅｊａｔｏｌｌａｈｉ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．２０１３，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ８３９８３１；Ｋｕｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１０ ＢＪＨ Ｖｏｌ １５０，５７４－５８６を参照されたい。
【0118】
共刺激
いくつかの実施形態では、本発明は、共刺激ポリペプチドを含むＣＡＲ－Ｔ細胞集団を含む組成物及び方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、共刺激ポリペプチドを含むＣＡＲ－Ｔ細胞集団を含む組成物及び方法を提供する。
【0119】
ＣＡＲは最初に単一のシグナル伝達ドメイン、例えば「第１世代ＣＡＲ」としても知られるＣＤ３ζとともに設計されたが（例えば、Ｂｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｃｅｌｌ ５８：９１１－９２１；Ｇｏｖｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｃｅｌｌ ６０：９２９－９３９；Ｇｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００２４－１００２８；Ｋｕｗａｎａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １４９：９６０－９６８を参照されたい）、ＣＡＲ免疫療法の実現可能性を評価する臨床試験は限られた臨床的利益のみを示した（例えば、Ｔｉｌｌ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｂｌｏｏｄ １１９：３０４０－３０５０；Ｐｕｌｅ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｎａｔ Ｍｅｄ １４：１２６４－１２７０；Ｊｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １６：１２４５－１２５６；Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １５：８２５－８３３を参照されたい）。限られた臨床的利益は、主に腫瘍認識後のＴ細胞の不完全な活性化に起因し、これはインビボでの細胞の限られた持続性及び拡大をもたらす（例えば、Ｒａｍｏｓ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ １１：８５５－８７３を参照されたい）。
【0120】
この欠陥に対処するために、ＣＡＲは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、及びＤＡＰ１０を含む、Ｔ細胞共刺激分子の細胞質部分に由来することが多い別の刺激ドメインを含むように操作されており（例えば、Ｃａｒｐｅｎｉｔｏ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．１０６：３３６０－３３６５；Ｆｉｎｎｅｙ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：２７９１－２７９７；Ｈｏｍｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６７：６１２３－６１３１；Ｍａｈｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２０：７０－７５；Ｉｍａｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｌｅｕｋｅｍｉａ １８：６７６－６８４；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １８：７１２－７２５；Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８３：５５６３－５５７４；Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １７：１４５３－１４６４；Ｙｖｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １５：５８５２－５８６０を参照されたい）、これにより、ＣＡＲ－Ｔ細胞は標的抗原の結合時に適切な共刺激を受けることができる。最も一般的に使用される共刺激分子には、ＣＤ２８及び４－１ＢＢが含まれる。これらは、腫瘍認識に続いて、Ｔ細胞増殖と細胞生存の両方を促進するＮＦ－κＢ活性化をもたらすシグナル伝達カスケードを開始できる。難治性急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の治療のためにＣＤ２８または４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを有する抗ＣＤ１９ ＣＡＲを用いて実施された臨床試験は、養子移入後の有意なＴ細胞の持続、拡大及び連続腫瘍殺傷を示した（Ｋａｌｏｓ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ３：９５ｒａ７３；Ｐｏｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６５：７２５－７３３；Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ５：１７７ｒａ３８）。第３世代のＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ２８改変ＣＡＲに、ＯＸ４０及び４－１ＢＢなどの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリータンパク質からの追加のシグナル伝達分子を付加する（Ｆｉｎｎｅｙ ＨＭ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７２：１０４－１３，２００４；Ｇｕｅｄａｎ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１４）。
【0121】
いくつかの実施形態では、ＤＭＳＯ及びＨＳＡを含む本明細書に記載の組成物は、ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む。
【0122】
いくつかの実施形態では、ＤＭＳＯ及びＨＳＡを含む本明細書に記載の組成物は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞を増強及び維持するための共刺激ポリペプチドを含むＣＡＲ－Ｔ細胞を含む。
【0123】
共刺激ポリペプチドは、誘導性または構成的に活性化することができる。共刺激ポリペプチドは、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＲＡＮＫ、ＴＲＡＮＣＥ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＭｙＤ８８、またはＣＤ４０などの１つ以上の共刺激シグナル伝達領域、または例えばそれらの細胞質領域を含むことができる。共刺激ポリペプチドは、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＲＡＮＫ、ＴＲＡＮＣＥ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＭｙＤ８８、またはＣＤ４０によって活性化されるシグナル伝達経路を活性化する１つ以上の適切な共刺激シグナル伝達領域を含むことができる。共刺激ポリペプチドには、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリー（すなわち、ＣＤ４０、ＲＡＮＫ／ＴＲＡＮＣＥ－Ｒ、ＯＸ４０、４－１ＢＢ）及びＣＤ２８ファミリーメンバー（ＣＤ２８、ＩＣＯＳ）のＮＦ－κＢ経路、Ａｋｔ経路、及び／またはｐ３８経路を活性化する任意の分子またはポリペプチドが含まれる。１つを超える共刺激ポリペプチドまたは共刺激ポリペプチド細胞質領域は、本明細書で論じられる改変Ｔ細胞において発現され得る。
【0124】
ＭｙＤ８８及びＣＤ４０によって提供される共刺激
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＤＭＳＯ及びＨＳＡ組成物中に製剤化されたＣＡＲ Ｔ細胞集団は、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＲＡＮＫ、ＴＲＡＮＣＥ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＭｙＤ８８、またはＣＤ４０によって活性化されるシグナル伝達経路を活性化する１つ以上の共刺激シグナル伝達領域を含む共刺激ポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＤＭＳＯ及びＨＳＡ組成物中に製剤化されたＣＡＲ Ｔ細胞集団は、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＲＡＮＫ、ＴＲＡＮＣＥ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＭｙＤ８８、またはＣＤ４０によって活性化されるシグナル伝達経路を活性化する１つ以上の共刺激シグナル伝達領域を含む共刺激ポリペプチドを含む。
【0125】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＤＭＳＯ及びＨＳＡ組成物中に製剤化されたＣＡＲ Ｔ細胞集団は、ＭｙＤ８８、ＣＤ４０及び／またはＭｙＤ８８－ＣＤ４０融合キメラポリペプチドによって活性化されるシグナル伝達経路を活性化する１つ以上の共刺激シグナル伝達領域を含む共刺激ポリペプチドを含む。
【0126】
ＭｙＤ８８は、ＴＬＲのユニバーサルアダプター分子であり、自然免疫システムの重要なシグナル伝達コンポーネントであり、外来の侵入物に対するアラートをトリガーし、免疫細胞の動員と活性化を刺激する。ＭｙＤ８８は、自然免疫応答及び獲得免疫応答において中心的な役割を果たす細胞質ゾルアダプタータンパク質である。このタンパク質は、インターロイキン－１及びＴｏｌｌ様受容体シグナル伝達経路において必須のシグナル伝達物質として機能する。これらの経路は、多数の炎症性遺伝子の活性化を調節する。コードされたタンパク質は、Ｎ末端のデスドメインとＣ末端のＴｏｌｌ－インターロイキン１受容体ドメインで構成されている。ＭｙＤ８８ ＴＩＲドメインは、ＴＬＲとヘテロ二量体化し、他のＭｙＤ８８タンパク質とホモ二量体化することができる。これにより、ＭｙＤ８８のアミノ末端のデスドメイン（ＤＤ）とＩＲＡＫキナーゼの相互作用を通じて、ＩＲＡＫファミリーキナーゼの動員と活性化が起こり、これにより、ＪＮＫ、ｐ３８ ＭＡＰＫ（マイトジェン活性化プロテインキナーゼ）、ならびにＮＦ－κＢ、サイトカイン及びケモカインをコードする遺伝子（及び他の遺伝子）の発現を誘導する転写因子の活性化をもたらすシグナル伝達経路が開始される。ＭｙＤ８８は、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＲＦ７、及びＴＲＡＦ６を介して作用し、ＮＦ－κＢの活性化、サイトカイン分泌、炎症反応を引き起こす。また、ＩＲＦ１を活性化し、核への急速な移動をもたらし、ＩＦＮ－β、ＮＯＳ２／ＩＮＯＳ、及びＩＬ１２Ａ遺伝子の効率的な誘導を仲介する。腸上皮細胞におけるＭｙＤ８８を介したシグナル伝達は、腸の恒常性の維持に不可欠であり、小腸における抗菌レクチンＲＥＧ３Ｇの発現を制御する。ＴＬＲシグナル伝達は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーのメンバーであるＣＤ４０の発現も上方制御する。ＣＤ４０は、抗原で感作されたＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４またはＣＤ４０Ｌ）と相互作用する。
【0127】
ＣＤ４０は適応免疫応答の重要な部分であり、同族のＣＤ４０Ｌとの結合を通じてＡＰＣを活性化し、より強力なＣＴＬ応答を分極化するのに役立つ。ＣＤ４０／ＣＤ１５４シグナル伝達システムは、Ｔ細胞機能及びＢ細胞－Ｔ細胞相互作用の重要なコンポーネントである。ＣＤ４０シグナル伝達は、ＣＤ４０ホモダイマーの形成とＴＮＦＲ関連因子（ＴＲＡＦ）との相互作用を介して進行し、ＣＤ４０の細胞質ドメインへのＴＲＡＦの動員によって実行される。これにより、ＮＦ－κＢ、ＪＮＫ、及びＡＫＴ経路などのいくつかの二次シグナルが含まれるＴ細胞の活性化をもたらす。
【0128】
生存と増殖の利点とは別に、ＭｙＤ８８またはＭｙＤ８８－ＣＤ４０融合キメラポリペプチドベースの共刺激は、ＣＡＲ改変Ｔ細胞に追加の機能を提供し得る。ＭｙＤ８８シグナル伝達は、Ｔｈ１とＴｈ１７の両方の応答に重要であり、ＩＬ－１を介して作用し、ＣＤ４＋Ｔ細胞を制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）による抑制に抵抗性にする（例えば、Ｓｃｈｅｎｔｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４０：７８－９０を参照されたい）。さらに、Ｒａｓ、ＰＩ３Ｋ、及びプロテインキナーゼＣを介したＣＤ８＋Ｔ細胞でのＣＤ４０シグナル伝達は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞を溶解する細胞傷害性メディエーターであるグランザイム及びパーフォリンのＮＦ－κＢ依存性誘導をもたらす（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８４：５５１０－５５１８）。したがって、ＭｙＤ８８とＣＤ４０の共活性化により、ＣＡＲ－Ｔ細胞はＴｒｅｇ細胞の免疫抑制作用に耐性を示し得る。これは、固形腫瘍及びその他の種類のがんの治療に非常に重要であり得る機能である。
【0129】
ＭｙＤ８８とＣＤ４０は、Ｔ細胞を含む免疫細胞で一緒になって、転写因子の下流で作用し、炎症誘発性サイトカインであるＩ型ＩＦＮを上方制御し、増殖と生存を促進する。ＭｙＤ８８／ＣＤ４０は、ＣＡＲからのＣＤ３ｚからのシグナル入力に加えて、強力で多面的な共刺激分子を生成する。いくつかの実施形態では、本発明は、ＭｙＤ８８、ＣＤ４０、及び／またはＭｙＤ８８－ＣＤ４０融合キメラポリペプチドによって活性化されるシグナル伝達経路を活性化する１つ以上の共刺激シグナル伝達領域を含む共刺激ポリペプチドを含むＣＡＲ Ｔ細胞を提供する。適切な共刺激シグナル伝達領域の例としては、ＩＲＡＫ－４、ＩＲＡＫ－１、ＴＲＡＦ６、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ５、Ａｃｔ、ＪＡＫ３、またはそれらの任意の機能的断片が挙げられるが、これらに限定されない。
【0130】
細胞活性化を誘導するのに有用なキメラポリペプチド、ならびに例えば、発現構築物、ベクターを構築するための方法、及び活性または機能のアッセイを含むＣＡＲ－Ｔ細胞活性化を誘導するための関連する方法の非限定的な例はまた、以下の特許及び特許出願に見出すことができ、これらのそれぞれは、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＵＳ２０１６－００４６７００－Ａ１；ＷＯ２０１５／１２３５２７；米国特許第７，４０４，９５０号；ＷＯ２００４／０７３６４１；米国特許第８，６９１，２１０号；ＷＯ２００８／０４９１１３；米国特許第９，３１５，５５９号；ＷＯ２０１０／０３３９４９；ＵＳ２０１１－０２８７０３８－Ａ１；ＷＯ２０１１／１３０５６６；ＵＳ２０１６－０１７５３５９－Ａ１；ＷＯ２０１６／０３６７４６；ＷＯ２０１６／１００２４１；ＵＳ２０１７－０１６６８７７－Ａ１；ＷＯ２０１７／１０６１８５；ＢａｙｌｅらによるＷＯ２０１８／２０８８４９。これらのそれぞれは、すべての目的のために、すべての文章、表、及び図面を含めて、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0131】
安全スイッチ
本明細書に記載のＤＭＳＯ及びＨＳＡ組成物中に製剤化された遺伝子改変Ｔ細胞は、誘導性自殺遺伝子または自殺スイッチとしても知られる安全スイッチを発現してもよい。これは、ＧＶＨＤが発症した場合など、必要に応じてインビボでＴ細胞を根絶するために使用できる。いくつかの例では、キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞が、オフターゲット毒性などの有害事象を引き起こす患者に提供される。いくつかの治療例では、患者は、キメラ抗原受容体改変細胞を使用する治療中に悪い症状を経験する可能性がある。場合によっては、これらの治療法は、部分的に、健康な組織への非特異的な攻撃による副作用を引き起こした。いくつかの例では、治療用Ｔ細胞はもはや必要とされない場合があり、または治療は特定の期間を対象とし、例えば、治療用Ｔ細胞は腫瘍細胞または腫瘍サイズを減少させるように働き、もはや必要とされない場合がある。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＤＭＳＯ及びＨＳＡ組成物中に製剤化された改変Ｔ細胞もまた誘導性カスパーゼ－９ポリペプチドを発現する核酸、細胞、及び方法が提供される。例えば、キメラ抗原受容体改変Ｔ細胞の数を減らす必要がある場合、誘導性リガンドを患者に投与し、それによって改変Ｔ細胞のアポトーシスを誘導することができる。
本明細書に記載のＤＭＳＯ及びＨＳＡ組成物中に製剤化された遺伝子改変Ｔ細胞は、誘導性自殺遺伝子または自殺スイッチとしても知られる安全スイッチを発現してもよい。これは、ＧＶＨＤが発症した場合など、必要に応じてインビボでＴ細胞を根絶するために使用できる。いくつかの例では、キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞が、オフターゲット毒性などの有害事象を引き起こす患者に提供される。いくつかの治療例では、患者は、キメラ抗原受容体改変細胞を使用する治療中に悪い症状を経験する可能性がある。場合によっては、これらの治療法は、部分的に、健康な組織への非特異的な攻撃による副作用を引き起こした。いくつかの例では、治療用Ｔ細胞はもはや必要とされない場合があり、または治療は特定の期間を対象とし、例えば、治療用Ｔ細胞は腫瘍細胞または腫瘍サイズを減少させるように働き、もはや必要とされない場合がある。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＤＭＳＯ及びＨＳＡ組成物中に製剤化された改変Ｔ細胞もまた誘導性カスパーゼ－９ポリペプチドを発現する核酸、細胞、及び方法が提供される。例えば、キメラ抗原受容体改変Ｔ細胞の数を減らす必要がある場合、誘導性リガンドを患者に投与し、それによって改変Ｔ細胞のアポトーシスを誘導することができる。
【0132】
これらのスイッチは、Ｔ細胞を根絶することが望まれるときに供給され、細胞死（例えば、壊死またはアポトーシスをトリガーすることによって）をもたらす薬剤などのトリガーに応答する。これらの薬剤は有毒な遺伝子産物の発現をもたらす可能性があるが、遺伝子改変Ｔ細胞が、薬剤に応答して有毒な形態に切り替わるタンパク質をすでに発現している場合、より迅速な応答を得ることができる。
【0133】
いくつかの実施形態では、安全スイッチは、二量体化の化学的誘導物質を対象に投与することによってトリガーされ得るアポトーシス促進性タンパク質に基づく。アポトーシス促進性タンパク質が二量体化の化学的誘導物質に結合するポリペプチド配列に融合している場合、この化学的誘導物質の送達により、２つのアポトーシス促進性タンパク質を近接させてアポトーシスをトリガーすることができる。例えば、カスパーゼ－９は、薬剤であるリミドゥシド（ＡＰ１９０３）に応答して二量体化するように誘導できる改変ヒトＦＫ結合タンパク質に融合させることができる。例えば、カスパーゼ－９などのヒトアポトーシス促進性タンパク質に基づく安全スイッチを使用すると、スイッチを発現する細胞がヒト対象の免疫系によって異物として認識されるリスクが最小限に抑えられる。したがって、対象へのリミドゥシドの送達は、カスパーゼ－９スイッチを発現するＴ細胞のアポトーシスをトリガーし得る。
【0134】
カスパーゼ－９スイッチは、Ｄｉ Ｓｔａｓｉ ｅｔ ａｌ．（２０１１）（前出）に記載され、Ｙａｇｙｕ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２３（９）：１４７５－８５；Ｒｏｓｓｉｇｌｏｎｉ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１４１７－０１８－００３４－１；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｆｒｏｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３３８９／ｆｐｈａｒ．２０１４．００２５４；米国特許第９，４３４，９３５号；米国特許第９，９１３，８８２号；米国特許第９，３９３，２９２号；及び特許出願ＵＳ２０１５／０３２８２９２も参照されたい。自殺スイッチは、ＦａｓまたはＨＳＶチミジンキナーゼに基づいてもよい。
【0135】
スイッチのリガンド誘導物質の例としては、例えば、Ｋｏｐｙｔｅｋ，Ｓ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｙ ７：３１３－３２１（２０００） ａｎｄ ｉｎ Ｇｅｓｔｗｉｃｋｉ，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｃｈｅｍ．＆ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ １０：６６７－６７５（２００７）；Ｃｌａｃｋｓｏｎ Ｔ（２００６）Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ ６７：４４０－２；Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ． ，ｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｆｒｏｍ Ｓｍａｌｌ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｏ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ（Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，ｓ．，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｗｉｌｅｙ，２００７）に論じられるものが挙げられる。
【0136】
安全スイッチに組み込まれるリガンド結合領域としては、ＦＫＢＰ１２ｖ３６改変ＦＫＢＰ１２ポリペプチド、またはＡＰ１９０３に結合するバリアントポリペプチドを含む他の適切なＦＫＢＰ１２バリアントポリペプチド、または例えばＡＰ２０１８７もしくはＡＰ２０１５などの他の合成ホモ二量体化物質が挙げられ得る。バリアントは、例えば、３６位に、バリン、ロイシン、イソロイシン、及びアラニンからなる群から選択されるアミノ酸置換を有するＦＫＢＰ領域を含み得る（Ｃｌａｃｋｓｏｎ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１９９８，９５：１０４３７－１０４４２）。リミドゥシドとしても知られるＡＰ１９０３（ＣＡＳインデックス名：２－ピペリジンカルボン酸、１－［（２Ｓ）－１－オキソ－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）ブチル］－、１，２－エタンジイルビス［イミノ（２－オキソ－２，１－エタンジイル）オキシ－３，１－フェニレン［（１Ｒ）－３－（３，４－ジメトキシフェニル）プロピリデン］］エステル、［２Ｓ－［１（Ｒ＊），２Ｒ＊［Ｓ＊［Ｓ＊［１（Ｒ＊），２Ｒ＊］］］］］－（９ＣＩ）、ＣＡＳ登録番号：１９５５１４－６３－７；分子式：Ｃ７８Ｈ９８Ｎ４Ｏ２０、分子量：１４１１．６５）は、健康なボランティアで安全性が実証済みの合成分子である（Ｉｕｌｉｕｃｃｉ ＪＤ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００１，４１：８７０－８７９）。
【0137】
いくつかの実施形態では、Ｆ３６Ｖ変異を有するヒトＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ１２）（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＨ００２ ８１８）の配列で構成され、ＳＧＧＧＳリンカーを介して内因性カスパーゼ活性化及び動員ドメインを欠く改変ヒトカスパーゼ９（ＣＡＳＰ９）に接続される、例えば、Ｄｉ Ｓｔａｓｉ ｅｔ ａｌ．（２０１１）（前出）で論じられる安全スイッチなどの安全スイッチが提供される。Ｆ３６Ｖ変異は、合成ホモ二量体化物質ＡＰ２０１８７及びＡＰ１９０３（リミドゥシド）に対するＦＫＢＰ１２の結合親和性を高める。
【0138】
安全スイッチは、例えば、ホモ二量体化リガンドの非存在下での基礎活性の低下などの改変された活性を有する改変カスパーゼ－９ポリペプチドを含み得る。改変カスパーゼ－９ポリペプチドは、例えば、前出の米国特許第９，９１３，８８２号及びＵＳ－２０１５－０３２８２９２で論じられており、例えば、３３０位でのアミノ酸置換（例えば、Ｄ３３０ＥもしくはＤ３３０Ａ）または例えば、４５０位でのアミノ酸置換（例えば、Ｎ４０５Ｑ）、または、例えばＤ３３０Ｅ－Ｎ４０５Ｑ及びＤ３３０Ａ－Ｎ４０５Ｑを含むそれらの組み合わせを含み得る。
【0139】
本明細書に提供される二量体化または多量体化リガンドなどの医薬組成物の有効量は、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９７％を超えるか、または８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、もしくは１０％未満の、治療用細胞が殺傷されるような、カスパーゼ－９発現細胞Ｔ細胞においてアポトーシスを誘導するこの選択された結果を達成する量である。この用語は「十分な量」とも同義である。殺傷された治療用細胞のパーセントを決定するために、任意の適切なアッセイを使用することができる。アッセイは、二量体化または多量体化リガンドの投与前に対象から第１のサンプルを取得するステップと、二量体化または多量体化リガンドの投与後に対象から第２のサンプルを取得するステップと、殺傷された治療用細胞のパーセントを決定するために、第１のサンプルと第２のサンプル中の治療用細胞の数または濃度を比較するステップと、を含み得る。過度の実験を必要とせずに、本明細書に提供される特定の組成物の有効量を経験的に決定することができる。
【0140】
細胞死またはアポトーシスを誘導するのに有用なキメラポリペプチド、ならびに発現構築物、ベクターを構築する方法、活性または機能のアッセイ、及びエクスビボとインビボの両方でキメラポリペプチドの多量体化領域に結合する多量体化合物またはその薬学的に許容される塩を用いて誘導性キメラポリペプチドを発現する細胞を接触させることによるキメラポリペプチドの多量体化、対象への本明細書に記載の発現ベクター、細胞、または多量体化合物、またはその薬学的に許容される塩の投与、及び誘導性キメラポリペプチドを発現する細胞を投与された対象への本明細書に記載の多量体化合物またはその薬学的に許容される塩の投与を含む細胞死またはアポトーシスを誘導するための関連する方法の非限定的な例も、以下の特許及び特許出願に見出すことができ、これらのそれぞれは、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。米国特許第９，０８９，５２０号；米国特許第９，４３４，９３５号；ＷＯ２０１４／１６４３８；ＵＳ２０１６－０１５１４６５－Ａ１；ＷＯ２０１４／１９７６３８；ＵＳ２０１５－０３２８２９２－Ａ１；ＷＯ２０１５／１３４８７７；ＵＳ２０１６－０１６６６１３－Ａ１；ＷＯ２０１６／１００２３６；ＵＳ２０１６－０１７５３５９－Ａ１；ＷＯ２０１６／１００２４１；ＵＳ２０１７－０１６６８７７－Ａ１；ＷＯ２０１７／１０６１８５、これらのそれぞれは、すべての目的のために、すべての文、表、及び図面を含めて、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の多量体化合物、またはその薬学的に許容される塩は、本質的に、これらの刊行物に提供される実施例、及び本明細書に提供される他の実施例に記載されるように使用され得る。
【0141】
治療方法
「患者」または「対象」という用語は互換的であり、本明細書で使用される場合、生物または動物、例えば、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、サル）、マウス、ブタ、ウシ、ヤギ、ウサギ、ラット、モルモット、ハムスター、ウマ、サル、ヒツジ、または他の非ヒト哺乳動物を含む哺乳動物；例えば、鳥類（例えば、ニワトリもしくはアヒル）または魚類などの非哺乳動物脊椎動物を含む非哺乳動物；及び非哺乳類の無脊椎動物が含まれるが、これらに限定されない。対象は、例えば、ヒト、例えば、感染症に罹患している患者、及び／または免疫不全であるか、または過剰増殖性疾患に罹患している対象であり得る。
「患者」または「対象」という用語は互換的であり、本明細書で使用される場合、生物または動物、例えば、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、サル）、マウス、ブタ、ウシ、ヤギ、ウサギ、ラット、モルモット、ハムスター、ウマ、サル、ヒツジ、または他の非ヒト哺乳動物を含む哺乳動物；例えば、鳥類（例えば、ニワトリもしくはアヒル）または魚類などの非哺乳動物脊椎動物を含む非哺乳動物；及び非哺乳類の無脊椎動物が含まれるが、これらに限定されない。対象は、例えば、ヒト、例えば、感染症に罹患している患者、及び／または免疫不全であるか、または過剰増殖性疾患に罹患している対象であり得る。
【0142】
本明細書で提供される改変細胞集団は、それを必要とするヒト対象を治療するための方法で使用することができ、そのような対象を治療するための医薬を調製するために使用することができる。細胞は通常、注入（通常は静脈内注入）によってレシピエント対象に送達される。対象のＴ細胞の典型的な用量は１０４～１０９の細胞／ｋｇであり、例えば、対象の体重１ｋｇ当たり、１×１０４、５×１０４、１×１０５、２×１０５、３×１０５、４×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、２×１０６、３×１０６、４×１０６、５×１０６、６×１０６、７×１０６、８×１０６、９×１０６、１×１０７、２×１０７、３×１０７、４×１０７、５×１０７、６×１０７、７×１０７、８×１０７、９×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、４×１０８、５×１０８、６×１０８、７×１０８、８×１０８、９×１０８、または１×１０９の、改変細胞または改変細胞集団由来の細胞が対象に投与される。いくつかの実施形態では、投与量は、全細胞の所望の固定用量及び所望の比率に基づいており、及び／または個々のサブタイプまたはサブ集団の１つ以上、例えばそれぞれの所望の固定用量に基づいている。
【0143】
一般に、２，０００～２億個のＴ細胞（例えば、３，０００～１億２，０００万個のＴ細胞）を対象に注入することができる。
【0144】
送達される細胞の数は、特定のカテゴリーのすべての患者（例えば、すべての小児患者、またはすべての成人患者）で同じであるか、または体重に応じて変化し得る（例えば、小児で約１×１０６細胞／ｋｇ、または成人で約３×１０６細胞／ｋｇ）。したがって、患者に投与される量は、組成物中の細胞の濃度に応じて、及び任意選択で患者の体重に応じて変化し得、所望の数の細胞が確実に受け取られるようにすることができる。
【0145】
レシピエントは、遺伝子改変Ｔ細胞を含む改変細胞集団を受け取る前に、骨髄破壊的コンディショニングを受けることができる。したがって、遺伝子改変Ｔ細胞を受け取る前に、レシピエント自身のα／βＴ細胞（及びＢ細胞）を枯渇させることができる。同様に、レシピエントに投与される造血（幹）細胞は、α／β細胞を枯渇させることができる。対照的に、レシピエントに投与される遺伝子改変ドナーＴ細胞は、一般に、α／β細胞が枯渇していない。
【0146】
レシピエントは小児、例えば、０～１６歳、または０～１０歳の小児であり得る。いくつかの実施形態では、レシピエントは成人である。
【0147】
Ｔ細胞を受け取る対象はまた、同種異系ドナーから他の組織を受け取ってもよく、例えば、造血細胞及び／または造血幹細胞（例えば、ＣＤ３４＋細胞）を受け取ることができる。この同種移植組織と遺伝子改変Ｔ細胞は、理想的には同じドナーに由来するため、遺伝的に一致する。いくつかの実施形態では、ドナー及びレシピエントは、一致する無関係のドナー、または適切な家族の一員である。例えば、ドナーはレシピエントの親または子であってもよい。したがって、対象が遺伝子改変Ｔ細胞を必要としていると特定される場合、適切なドナーをＴ細胞ドナーとして特定することができる。
【0148】
本明細書で提供される改変細胞集団（例えば、改変Ｔ細胞を含む改変細胞集団）が造血細胞及び／または造血幹細胞と組み合わせて使用される場合、改変細胞集団は、いくつかの例では、後の時点で、例えば、７～１００日後に投与されてもよい。
【0149】
Ｔ細胞集団が共刺激ポリペプチドを含むいくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチドは、例えば、有効量の誘導性リガンド（例えば、リミドゥシドまたはラパログ）をレシピエントに投与することによってトリガーされ得る。いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチドは、ＭｙＤ８８、ＣＤ４０、及び／またはＭｙＤ８８－ＣＤ４０融合キメラポリペプチドによって活性化されるシグナル伝達経路を活性化する１つ以上の共刺激シグナル伝達領域を含む。
【0150】
遺伝子改変Ｔ細胞を受け取った後にレシピエントが合併症を発症した場合（例えば、ＧＶＨＤを発症した場合）、例えば、誘導性リガンド（例えば、リミドゥシドまたはラパログ）をレシピエントに投与することによって、自殺スイッチをトリガーすることができる。改変細胞を排除するために必要な誘導性リガンド（例えば、リミドゥシドまたはラパログ）の最小用量は、改変細胞が誘導性キメラアポトーシス促進性ポリペプチドを含む場合、レシピエントに存在する遺伝子改変Ｔ細胞の数に依存する。この最小量を超える用量を投与することはできるが、通常の製薬原則に従って、過剰な投薬は避ける必要がある。いくつかの実施形態では、自殺スイッチは、リミドゥシドでトリガーすることができ、例えば、０．４ｍｇ／ｋｇの用量は、１．５×１０７細胞／ｋｇの用量で注入された細胞を排除することができる。一般的に、０．１～５ｍｇ／ｋｇのリミドゥシド用量が投与され、通常、０．１～２ｍｇ／ｋｇまたは０．１ １ｍｇ／ｋｇで十分であり、いくつかの実施形態では、用量は０．４ｍｇ／ｋｇである。一連の複数回投与のリミドゥシドを投与することができる。例えば、最初の投与ですべての遺伝子改変Ｔ細胞が排除されるわけではないことがわかった場合は、２回目の投与などを行うことができる。
【0151】
いくつかの実施形態では、最も感受性の高い細胞を殺傷する誘導リガンド（例えば、リミドゥシド）の第１の用量が投与され、次いで、感受性の低い細胞を殺傷する（第１の用量よりも高い）第２の用量が投与される。必要に応じて、追加の用量（必要に応じて漸増）を投与することができる。
【0152】
本発明の方法はまた、病原性微生物及び／または過剰増殖性疾患によって引き起こされる疾患の治療または予防の方法を包含する。
【0153】
治療または予防され得る疾患としては、ウイルス、細菌、酵母、寄生虫、原生動物、がん細胞などによって引き起こされる疾患が挙げられる。医薬組成物は、一般化された免疫増強剤（Ｔ細胞活性化組成物またはシステム）として使用することができ、したがって、疾患の治療に有用である。治療及び／または予防することができる例示的な疾患としては、ＨＩＶ、インフルエンザ、ヘルペス、ウイルス性肝炎、エプスタイン・バー、ポリオ、ウイルス性脳炎、麻疹、ニワトリ痘、乳頭腫ウイルスなどのウイルス病因の感染症；または、肺炎、結核、梅毒などの細菌病因の感染症；または、マラリア、トリパノソーマ症、リーシュマニア症、トリコモナス症、アメーバ症などの寄生虫病因の感染症が挙げられるが、これらに限定されない。
【0154】
医薬組成物（形質導入されたＴ細胞、発現ベクター、発現構築物など）を使用して治療または予防され得る前腫瘍性または過形成状態としては、結腸ポリープ、クローン病、潰瘍性大腸炎、乳房病変などの前腫瘍性または過形成状態が挙げられるが、これらに限定されない。
【0155】
組成物を使用して治療することができる固形腫瘍を含むがんとしては、原発性または転移性の黒色腫、腺癌、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、胸腺腫、リンパ腫、肉腫、肺癌、肝臓癌、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、子宮癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、結腸癌、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、ＮＰＣ、膀胱癌、頸部癌などが挙げられるが、これらに限定されない。
【0156】
例えば、例えば、肺、骨、肝臓、前立腺、または脳に、また、例えば、乳房、卵巣、腸、精巣、結腸、膵臓、腎臓、膀胱、神経内分泌系、軟組織、骨塊、及びリンパ系に存在する固形腫瘍を含む、任意の組織または器官からの固形腫瘍は、本発明の方法を使用して治療することができる。治療され得る他の固形腫瘍としては、例えば、膠芽腫、及び悪性骨髄腫が挙げられる。
【0157】
レシピエントは、血液がん（治療抵抗性の血液がんなど）または遺伝性血液障害を患っている可能性がある。例えば、レシピエントは急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、重度の複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群（ＷＡ）、ファンコニ貧血、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、または多発性骨髄腫を患っている可能性がある。
【0158】
本明細書で使用される「がん」という用語は、その独特の特性（正常な制御の喪失）が無秩序な増殖、分化の欠如、局所組織浸潤、及び転移をもたらす細胞の過剰増殖として定義される。例としては、メラノーマ、非小細胞肺、小細胞肺、肺、肝癌、白血病、網膜芽細胞腫、星状細胞腫、神経膠芽腫、歯肉、舌、神経芽細胞腫、頭、首、乳房、膵臓、前立腺、腎臓、骨、精巣、卵巣、中皮腫、子宮頸部、胃腸、リンパ腫、脳、結腸、肉腫、または膀胱が挙げられるが、これらに限定されない。
【0159】
「過剰増殖性疾患」という用語は、細胞の過剰増殖に起因する疾患として定義される。本明細書に提供されるＴ細胞及び他の治療用細胞の活性化システムを使用して治療され得る固形腫瘍を含む他の過剰増殖性疾患としては、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、骨関節炎、平滑筋腫、腺腫、脂肪腫、血管腫、線維腫、血管閉塞、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、前腫瘍性病変（腺腫性過形成及び前立腺上皮内腫瘍など）、上皮内癌、口腔毛状白斑、または乾癬が挙げられるが、これらに限定されない。
【0160】
本明細書で使用される場合、「治療」、「治療する」、「治療される」、または「治療すること」という用語は、予防及び／または治療を指す。例えば、がん性固形腫瘍などの固形腫瘍に関して使用される場合、この用語は、固形腫瘍またはがんに対する対象の耐性を高める予防的治療による予防を指す。いくつかの例では、対象は、がんが家族性であるか、または遺伝的に関連しているがんを予防するために治療され得る。例えば、感染症に関して使用される場合、この用語は、病原体による感染に対する対象の耐性を増加させる、言い換えれば、対象が病原体に感染するか、感染症に起因する病気の兆候を示す可能性を減少させる予防的治療、感染症と戦う、例えば、感染症を軽減または排除するか、それが悪化するのを防ぐために対象が感染した後の治療を指す。
【0161】
本明細書で提供される方法は、例えば、腫瘍抗原の発現が上昇している疾患、障害、または状態を治療するために使用することができる。
【0162】
医薬組成物の投与は、「予防的」または「治療的」の目的のいずれかであり得る。予防的に提供される場合、医薬組成物は、症状の前に提供される。改変細胞集団の予防的投与は、その後の感染または疾患を予防または改善するのに役立つ。治療的に提供される場合、改変細胞集団は、感染または疾患の症状の発症時または発症後に提供される。したがって、本明細書に提供される組成物は、疾患の原因物質への予想される曝露もしくは疾患状態の前、または感染または疾患の開始後のいずれかで提供され得る。したがって、本明細書で提供されるのは、本明細書で論じられる改変細胞集団を使用する、がん、または例えば、非限定的に、前立腺癌に見られるような固形腫瘍の予防的治療のための方法である。例えば、本明細書で論じられる改変細胞集団を投与することを含む、対象における腫瘍のサイズを予防的に予防または縮小する方法が提供され、それにより、改変細胞集団は、対象における腫瘍のサイズを予防または縮小を達成する量で投与される。
【0163】
本明細書に記載の医薬組成物の有効量は、免疫応答を増強するというこの選択された結果を達成する量であり、そのような量を決定することができる。例えば、免疫系欠損症を治療するための有効量は、免疫系の活性化を引き起こし、抗原への曝露時に抗原特異的免疫応答の発生をもたらすのに必要な量であり得る。この用語は「十分な量」とも同義である。他の例では、有効量は、腫瘍のサイズまたは腫瘍の数を減らすために、または腫瘍の増殖速度または腫瘍の増殖の速度を減らすために必要な量であり得る。他の例では、有効量は、本明細書で提供される改変細胞集団の投与前、投与中、及び／または投与後に得られたサンプル中の標的抗原の量または濃度を比較することによって測定される、対象の標的抗原の量または濃度を低下させるのに必要な量であり得る。
【0164】
特定の用途の有効量は、治療される疾患または状態、投与される特定の組成物、対象のサイズ、及び／または疾患または状態の重症度など因子に応じて変化し得る。したがって、例えば、一実施形態では、形質導入されたＴ細胞または他の細胞は、例えば、免疫応答を誘導するために、または例えば、腫瘍のサイズを縮小するために、または腫瘍血管系の量を縮小するために有効な量で対象に投与される。
【0165】
いくつかの実施形態では、改変細胞の複数の投与が対象に投与され、複数の投与の間で投与量レベルが段階的に増加する。いくつかの実施形態では、投与レベルの増大は、ＣＡＲ－Ｔ細胞活性のレベルを増加させ、したがって、例えば、腫瘍細胞などの標的細胞の量または濃度の減少などの治療効果を増加させる。
【0166】
いくつかの実施形態では、疾患または状態の段階またはレベルが、改変細胞の投与前、改変細胞の追加用量の投与前、または改変細胞の投与に関与する方法及び投与量を決定する際に決定される個別化治療が提供される。これらの方法は、本出願の任意の方法で使用することができる。改変細胞を投与する前に患者を評価するこれらの方法が、例えば、固形腫瘍を有する対象の治療の文脈で論じられる場合、これらの方法は、他の状態及び疾患の治療に同様に適用され得ることが理解される。したがって、例えば、本出願のいくつかの実施形態では、この方法は、本出願の改変細胞を対象に投与することを含み、さらに、腫瘍サイズの効果的なレベルの縮小を達成するための改変細胞の適切な用量を決定することを含む。細胞の量は、例えば、対象の臨床状態、体重、及び／または性別、または他の関連する身体的特徴に基づいて決定することができる。対象に投与される改変細胞の量を制御することにより、例えば、サイトカインストームなどの有害事象の可能性を低減することができる。
【0167】
「投与量」という用語は、投与の量と例えば次の投与のタイミングなどの投与頻度の両方を含むことを意味する。「投与量レベル」という用語は、対象の体重に関連して投与される細胞集団の量を指す。
【0168】
いくつかの例では、投与量という用語は、リガンド誘導物質の投与量を指し得る。例えば、キメラカスパーゼ－９ポリペプチドまたはキメラ共刺激ポリペプチドを誘導するために、「投与量レベル」という用語は、対象の体重に関連して投与される多量体リガンドの量を指す。したがって、投与量レベルを増加させることは、対象の体重と比べて投与されるリガンドの量を増加させることを意味するであろう。さらに、例えば、多量体リガンドが連続注入ポンプを使用して投与される場合など、投与される用量の濃度を増加させることは、１分または１秒あたりに投与される濃度（したがって投与量）が増加することを意味する。
【0169】
本明細書に提供される方法は、本明細書に記載の細胞集団を含む有効量のＤＭＳＯ及びＨＳＡ組成物の送達を含むがこれに限定されない。細胞集団の「有効量」は、一般に、例えば、疾患またはその症状の程度を改善、低減、最小化、または制限するために、述べられた所望の結果を検出可能かつ繰り返し達成するのに十分な量として定義される。疾患の排除、根絶、または治癒を含む、他のより厳密な定義が適用され得る。いくつかの実施形態では、治療の有効性を評価し、毒性を制御するために、バイオマーカー、または腫瘍サイズもしくは腫瘍抗原発現などの他の疾患症状をモニタリングするステップがあり得る。
【0170】
必要に応じて、この方法は、治療に使用されるより多くの細胞を得るために、追加の白血球アフェレーシスをさらに含み得る。
【0171】
併用療法
本明細書に提供される組成物の有効性を高めるために、これらの組成物及び方法を、疾患の治療に有効な薬剤と組み合わせることが望ましくあり得る。
本明細書に提供される組成物の有効性を高めるために、これらの組成物及び方法を、疾患の治療に有効な薬剤と組み合わせることが望ましくあり得る。
【0172】
特定の実施形態では、抗がん剤は、本発明の方法と組み合わせて使用され得る。「抗がん」剤は、対象において、例えば、１つ以上のがん細胞の殺傷、１つ以上のがん細胞におけるアポトーシスの誘導、１つ以上のがん細胞の増殖速度の低減、転移の発生もしくは数の低減、腫瘍サイズの低減、腫瘍増殖の阻害、腫瘍もしくは１つ以上のがん細胞に対する血液供給の低減、１つ以上のがん細胞もしくは腫瘍に対する免疫応答の促進、がんの増殖の防止もしくは阻害、またはがんを有する対象の寿命の増加によって、がんに悪い影響を及ぼすことができる。抗がん剤としては、例えば、化学療法剤（化学療法）、放射線療法剤（放射線療法）、外科的処置（外科手術）、免疫療法剤（免疫療法）、遺伝子療法剤（遺伝子療法）、ホルモン療法、他の生物学的剤（生物療法）及び／または代替療法が挙げられる。
【0173】
いくつかの実施形態では、抗生物質を医薬組成物と組み合わせて使用して、感染症を治療及び／または予防することができる。このような抗生物質としては、アミカシン、アミノグリコシド（例えば、ゲンタマイシン）、アモキシシリン、アンホテリシンＢ、アンピシリン、アンチモニアル、アトバクオンスチボグルコン酸ナトリウム、アジスロマイシン、カプレオマイシン、セフォタキシム、セフォキシチン、セフトリアキソン、クロラムフェニコール、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、クロファジミン、シクロセリン、ダプソン、ドキシサイクリン、エタンブトール、エチオナミド、フルコナゾール、フルオロキノロン、イソニアジド、イトラコナゾール、カナマイシン、ケトコナゾール、ミノサイクリン、オフロキサシン）、パラアミノサリチル酸、ペンタミジン、ポリミキシンデフィンシン、プロチオナミド、ピラジンアミド、ピリメタミンスルファジアジン、キノロン（例えば、シプロフロキサシン）、リファブチン、リファンピン、スパルフロキサシン、ストレプトマイシン、スルホンアミド、テトラサイクリン、チアセタゾン、トリメタプリム－スルファメトキサゾール、ビオマイシン、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【0174】
より一般的には、そのような薬剤は、がん細胞及び／または微生物を殺傷するか、またはその増殖を阻害するのに有効な医薬組成物と組み合わせた量で提供されるであろう。このプロセスは、同時、あるいは、細胞、組織、または生物への医薬組成物及び薬剤の別々の投与が所望の治療上の利点をもたらす期間内で、細胞（複数可）と薬剤（複数可）及び医薬組成物とを接触させることを含む。これは、細胞、組織、または生物を、医薬組成物と１つ以上の薬剤の両方を含む単一の組成物または薬理製剤と接触させることによって、あるいは細胞を１つの組成物が医薬組成物を含み他のものが１つ以上の薬剤を含む２つ以上の別個の組成物または製剤と接触させることによって達成され得る。
【0175】
「接触させる」及び「曝露させる」という用語は、細胞、組織、または生物に適用される場合、医薬組成物及び／または別の薬剤、例えば、化学療法剤または放射線療法剤などが標的細胞、組織、もしくは生物に送達されるか、または標的細胞、組織、もしくは生物と直接的に並置されるプロセスを記載するために本明細書で使用される。細胞の殺傷または停滞を達成するために、医薬組成物及び／または追加の薬剤（複数可）は、細胞（複数可）を殺傷するかまたはそれらが分裂するのを防ぐのに有効な合計量で１つ以上の細胞に送達される。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、カルボプラチン、リン酸エストラムスチン（Ｅｍｃｙｔ）、及びサリドマイドからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、化学療法剤はタキサンである。タキサンは、例えば、ドセタキセル（タキソテール）、パクリタキセル、及びカバジタキセルからなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、タキサンは、ドセタキセルである。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、改変細胞または核酸の投与と同時に、または投与後１週間以内に投与される。他の実施形態では、化学療法剤は、改変細胞または核酸の投与の後、１～４週間または１週間～１ヶ月、１週間～２ヶ月、１週間～３ヶ月、１週間～６ヶ月、１週間～９ヶ月、または１週間～１２ヶ月で投与される。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、細胞または核酸を投与する少なくとも１ヶ月前に投与される。
【0176】
医薬組成物の投与は、数分から数週間の範囲の間隔で、他の薬剤（複数可）に先行するか、同時であるか、及び／またはその後に続くことができる。医薬組成物及び他の薬剤（複数可）が細胞、組織、または生物に別々に適用される実施形態では、一般に、各送達の時間の間に有意な期間が満了しないことを確実にし、結果として、医薬組成物及び薬剤（複数可）が、細胞、組織、または生物に対して有利に組み合わされた効果を発揮することができるようになる。例えば、そのような場合、細胞、組織、または生物を、医薬組成物と実質的に同時に（すなわち、約１分未満以内に）２、３、４、またはそれ以上のモダリティーで接触させることができると考えられる。他の実施形態では、１つ以上の薬剤は、発現ベクターの投与と実質的に同時に、その約１分から約２４時間～約７日～約１週間～約８週間またはそれ以上前に及び／または後に、ならびにその導出可能な任意の範囲で投与され得る。なおもさらに、本明細書に提供される医薬組成物と１つ以上の薬剤との種々の組み合わせレジメンを使用することができる。
【0177】
いくつかの実施形態では、化学療法剤は、リンパ球枯渇性化学療法剤であり得る。他の例では、化学療法剤は、タキソテール（ドセタキセル）、または例えばカバジタキセルなどの別のタキサンであり得る。化学療法剤は、細胞及び誘導物質による治療の前、治療中、または治療後に投与することができる。例えば、化学療法剤は、活性化核酸の第１の用量の投与の約１年、１１、１０、９、８、７、６、５、もしくは４ヶ月、または１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２週間、または１週間前に投与することができる。または、例えば、化学療法剤は、細胞または誘導物質の第１の用量の投与の約１週間または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、もしくは１８週間、または４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１か月または１年後に投与することができる。
【0178】
化学療法剤の投与は、１つを超える化学療法剤の投与を含み得る。例えば、シスプラチンは、タキソテールまたは他のタキサン、例えば、カバジタキセルなどに加えて投与され得る。
【0179】
いくつかの実施形態では、レシピエントは、本明細書に記載の細胞集団を含む組成物を受け取る前に、骨髄破壊的コンディショニングを受けることができる。したがって、レシピエント自身のα／βＴ細胞（及びＢ細胞）は、本明細書に記載の細胞集団を含む組成物を受け取る前に枯渇させることができる。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法レジメンは、本明細書に記載の細胞集団を含む組成物の注入の前に投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法レジメンは、シクロホスファミド５００ｍｇ／ｍ２を静脈内に含み、組み合わせが許容されない場合を除き、注入の５、４、及び３日前にフルダラビン３０ｍｇ／ｍ２が静脈内投与された。組み合わせベースのリンパ球枯渇が対象に好ましくない安全性リスクを示したと判断された場合、リンパ球枯渇はシクロホスファミドのみで行うことができる。
【0180】
概要
本発明の実施は、別途示されない限り、当該技術分野の技術水準の範囲内の化学、生化学、分子生物学、免疫学、及び薬理学の従来の方法を使用する。このような技術は、文献で十分に説明されている。例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．），Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ－ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｂｏｔａｎ ＆ Ｖｅｔｖｉｃｋａ，１ｓｔ ｅｄ．２０００）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｃｏｌｉｇａｎ，２００５）、Ｇｒｅｅｎ ＆ Ｓａｍｂｒｏｏｋ（２０１２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ）Ｓｈｏｒｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ：Ａｎ Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ，（Ｒｅａｍ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９８，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）などを参照されたい。
本発明の実施は、別途示されない限り、当該技術分野の技術水準の範囲内の化学、生化学、分子生物学、免疫学、及び薬理学の従来の方法を使用する。このような技術は、文献で十分に説明されている。例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．），Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ－ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｂｏｔａｎ ＆ Ｖｅｔｖｉｃｋａ，１ｓｔ ｅｄ．２０００）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｃｏｌｉｇａｎ，２００５）、Ｇｒｅｅｎ ＆ Ｓａｍｂｒｏｏｋ（２０１２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ）Ｓｈｏｒｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ：Ａｎ Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ，（Ｒｅａｍ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９８，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）などを参照されたい。
【0181】
「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含する。例えば、Ｘを「含む」組成物は、Ｘのみからなるか、または追加の何か、例えば、Ｘ＋Ｙを含み得る。
【0182】
数値ｘに関連する「約」という用語は任意選択であり、例えばｘ±１０％を意味する。
【0183】
「実質的に」という単語は、「完全に」を除外するものではない。例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まないものであり得る。必要に応じて、「実質的に」という単語は、本発明の定義から省略され得る。
【0184】
２つの値に関する「間」という用語は、それらの２つの値を含む。例えば、１０ｍｇ～２０ｍｇの範囲は、とりわけ１０、１５、及び２０ｍｇを包含する。
【0185】
特に明記しない限り、２つ以上の成分を混合するステップを含む方法は、いずれかの特定の混合順序を必要としない。したがって、成分は任意の順序で混合できる。３つの成分がある場合、例えば、２つの成分を互いに組み合わせることができ、次いで、その組み合わせを第３の成分と組み合わせることができる。
【0186】
方法のさまざまなステップは、同じまたは異なる時間に、同じまたは異なる地理的場所（例えば、国）で、同じまたは異なる人々またはエンティティによって実行され得る。
【0187】
番号付きの実施形態
１． Ｔ細胞及び血清アルブミンを含む組成物であって、前記組成物が＜２．５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミンを含む、前記組成物。
１． Ｔ細胞及び血清アルブミンを含む組成物であって、前記組成物が＜２．５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミンを含む、前記組成物。
【0188】
２． ＜２．２％（ｖ／ｖ）、＜２％（ｖ／ｖ）、＜１％（ｖ／ｖ）、または約０．５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミンを含む実施形態１の組成物。
【0189】
３． ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）も含む、実施形態１または実施形態２の組成物。
【0190】
４． 前記ＤＭＳＯが前記血清アルブミンと比較して３倍～３０倍過剰（ｖ／ｖ）で存在する、実施形態３の組成物。
【0191】
５． 前記過剰が３倍～１５倍、６倍～１２倍、８倍～１１倍、または約１０倍である、実施形態４の組成物。
【0192】
６． Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯを含む組成物であって、前記血清アルブミン（ｖ／ｖ）の濃度が０．１～２％であり、前記ＤＭＳＯの濃度（ｖ／ｖ）が前記血清アルブミンの濃度より３倍～３０倍高い、前記組成物。
【0193】
７． 前記血清アルブミン濃度が＜１％（ｖ／ｖ）であり、前記ＤＭＳＯ濃度が前記血清アルブミン濃度より８倍～１１倍高い、実施形態６の組成物。
【0194】
８． 前記ＤＭＳＯの濃度が＜１０％（ｖ／ｖ）である、実施形態６または実施形態７の組成物。
【0195】
９． 前記ＤＭＳＯの濃度が２～８％（ｖ／ｖ）、４～７％（ｖ／ｖ）、５～６％（ｖ／ｖ）、または約５％（ｖ／ｖ）である、実施形態８の組成物。
【0196】
１０． Ｔ細胞及びＤＭＳＯを含む組成物であって、前記組成物が＜５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含む、前記組成物。
【0197】
１１． Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯを含む組成物であって、前記血清アルブミンの濃度（ｖ／ｖ）が０．１～１％であり、前記ＤＭＳＯの濃度が５～７％（ｖ／ｖ）である、前記組成物。
【0198】
１２． 前記血清アルブミンの濃度（ｖ／ｖ）が０．２～０．８％、０．３～０．７％、０．４～０．６％、または約０．５％である、実施形態１１の組成物。
【0199】
１３． １×１０６～４０×１０６のＴ細胞／ｍＬを有する、実施形態１～１２のいずれか１つの組成物。
【0200】
１４． 凍結保存された形態である、実施形態１～１３のいずれか１つの組成物。
【0201】
１５． Ｔ細胞及び血清アルブミンを含む組成物であって、前記組成物が＜１％（ｖ／ｖ）の血清アルブミンを含む、前記組成物。
【0202】
１６． ＜０．６％（ｖ／ｖ）の血清アルブミンまたは約０．１５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミンを含む実施形態１５の組成物。
【0203】
１７． ＤＭＳＯも含む、実施形態１５または実施形態１６の組成物。
【0204】
１８． 前記ＤＭＳＯが前記血清アルブミンと比較して３倍～３０倍過剰（ｖ／ｖ）で存在する、実施形態１７の組成物。
【0205】
１９． 前記過剰が３倍～１５倍、６倍～１２倍、８倍～１１倍、または約１０倍である、実施形態１８の組成物。
【0206】
２０． Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯを含む組成物であって、前記血清アルブミン（ｖ／ｖ）の濃度が０．０３～０．６％であり、前記ＤＭＳＯの濃度（ｖ／ｖ）が前記血清アルブミンの濃度より３倍～３０倍高い、前記組成物。
【0207】
２１． 前記血清アルブミン濃度が＜０．３％（ｖ／ｖ）であり、前記ＤＭＳＯ濃度が前記血清アルブミン濃度より８倍～１１倍高い、実施形態２０の組成物。
【0208】
２２． 前記ＤＭＳＯの濃度が＜３％（ｖ／ｖ）である、実施形態２０または実施形態２１の組成物。
【0209】
２３． 前記ＤＭＳＯの濃度が０．６～２．４％（ｖ／ｖ）、０．８～２．２％（ｖ／ｖ）、１．５～２％（ｖ／ｖ）、または約１．８％（ｖ／ｖ）である、実施形態８の組成物。
【0210】
２４． Ｔ細胞及びＤＭＳＯを含む組成物であって、前記組成物が＜０．１５％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯを含む、前記組成物。
【0211】
２５． Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯを含む組成物であって、前記血清アルブミンの濃度が０．０３～０．３％（ｖ／ｖ）であり、前記ＤＭＳＯの濃度が０．１５～０．２０％（ｖ／ｖ）である、前記組成物。
【0212】
２６． ０．３×１０６～１２×１０６のＴ細胞／ｍＬを有する、実施形態１５～２５のいずれか１つの組成物。
【0213】
２７． 前記Ｔ細胞が、ＣＡＲ－Ｔ細胞などの遺伝子改変Ｔ細胞である、先行する実施形態のいずれかの組成物。
【0214】
２８． 前記Ｔ細胞がヒトＴ細胞であり、前記血清アルブミンがヒト血清アルブミンである、先行する実施形態のいずれかの組成物。
【0215】
２９． 実施形態１～１４のいずれか１つの組成物を希釈するステップを含む、実施形態１５～２８のいずれか１つの組成物を調製するためのプロセス。
【0216】
３０． 希釈が電解質溶液によって行われる、実施形態２９のプロセス。
【0217】
３１． 前記電解質溶液が通常の生理食塩水である、実施形態３０のプロセス。
【0218】
３２． 前記電解質溶液が、ｐＨ６．５～８．０の滅菌の、非発熱性の、等張液であり、約５．２６ｇ／ＬのＮａＣｌ、約５．０２ｇ／Ｌのグルコン酸ナトリウム、約３．６８ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム三水和物、約０．３７ｇ／ＬのＫＣｌ、及び約０．３ｇ／ＬのＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏを有する、実施形態３０のプロセス。
【0219】
３３． 対象を治療する方法であって、それを必要とする患者に実施形態１～２８のいずれか１つの組成物を投与するステップを含む、前記方法。
【0220】
３４． Ｔ細胞、血清アルブミン、及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の懸濁液を含む容器であって、前記組成物が＜２．５％（ｖ／ｖ）血清アルブミンを含み、前記ＤＭＳＯが前記血清アルブミンと比較して≧５倍過剰（ｖ／ｖ）で存在し、前記懸濁液は患者に投与されるものである、前記容器。
【0221】
３５． 前記懸濁液が＜２．２％（ｖ／ｖ）、＜２％（ｖ／ｖ）、＜１％（ｖ／ｖ）、または約０．５％（ｖ／ｖ）の血清アルブミンを含む、実施形態３４の容器。
【0222】
３６． 前記ＤＭＳＯが前記血清アルブミンと比較して５倍～３０倍過剰（ｖ／ｖ）で存在する、実施形態３４または実施形態３５の容器。
【0223】
３７． 前記過剰が５倍～１５倍、６倍～１２倍、８倍～１１倍、または約１０倍である、実施形態３６の容器。
【0224】
３８． Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯの懸濁液を含む容器であって、前記血清アルブミン（ｖ／ｖ）の濃度が０．１～１％であり、前記ＤＭＳＯの濃度（ｖ／ｖ）が前記血清アルブミンの濃度より３倍～３０倍高く、前記懸濁液が患者に投与されるものである、前記容器。
【0225】
３９． 前記血清アルブミン濃度が＜１％（ｖ／ｖ）であり、前記ＤＭＳＯ濃度が前記血清アルブミン濃度より８倍～１１倍高い、実施形態３８の容器。
【0226】
４０． 前記ＤＭＳＯの濃度が＜１０％（ｖ／ｖ）である、実施形態３８または実施形態３９の容器。
【0227】
４１． 前記ＤＭＳＯの濃度が２～８％（ｖ／ｖ）、４～７％（ｖ／ｖ）、５～６％（ｖ／ｖ）、または約５％（ｖ／ｖ）である、実施形態４０の容器。
【0228】
４２． Ｔ細胞、血清アルブミン、及びＤＭＳＯの懸濁液を含む容器であって、前記血清アルブミン（ｖ／ｖ）の濃度が０．１～１％であり、前記ＤＭＳＯの濃度が５～７％（ｖ／ｖ）であり、前記懸濁液が患者に投与されるものである、前記容器。
【0229】
４３． 前記血清アルブミンの濃度（ｖ／ｖ）が０．２～０．８％、０．３～０．７％、０．４～０．６％、または約０．５％である、実施形態４２の容器。
【0230】
４４． １×１０６～４０×１０６のＴ細胞／ｍＬを有する、実施形態３４～４３のいずれか１つの容器。
【0231】
４５． 凍結保存された形態である、実施形態３４～４４のいずれか１つの組成物。
【0232】
４６． 対象を治療する方法であって、それを必要とする患者に実施形態１５～２８のいずれか１つの組成物を静脈内注入により投与するステップを含む、前記方法。
【0233】
４７． 前記静脈内注入の時間が１５分～１２０分である、実施形態４６の方法。
【0234】
４８． 前記静脈内注入の時間が最大３０分である、実施形態４６の方法。
【0235】
４９． 前記注入の体積が５０～１００ｍＬである、実施形態４４～４６のいずれか１つの方法。
【0236】
５０． 前記注入の体積が約５０ｍＬである、実施形態４６～４９のいずれか１つの方法。
【0237】
５１． 前記Ｔ細胞がキメラシグナル伝達ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、前記キメラシグナル伝達ポリペプチドが、
（ｉ） 共刺激ポリペプチド細胞質シグナル伝達領域；
（ｉｉ） ＴＩＲドメインを欠く短縮型ＭｙＤ８８ポリペプチド領域；
（ｉｉｉ） ＴＩＲドメインを欠く短縮型ＭｙＤ８８ポリペプチド領域及び共刺激ポリペプチド細胞質シグナル伝達領域；または
（ｉｖ） （ｉｖ）ＴＩＲドメインを欠く短縮型ＭｙＤ８８ポリペプチド領域及びＣＤ４０細胞外ドメインを欠くＣＤ４０細胞質ポリペプチド領域を含む、任意の先行する実施形態の組成物、方法、プロセス、または容器。
（ｉ） 共刺激ポリペプチド細胞質シグナル伝達領域；
（ｉｉ） ＴＩＲドメインを欠く短縮型ＭｙＤ８８ポリペプチド領域；
（ｉｉｉ） ＴＩＲドメインを欠く短縮型ＭｙＤ８８ポリペプチド領域及び共刺激ポリペプチド細胞質シグナル伝達領域；または
（ｉｖ） （ｉｖ）ＴＩＲドメインを欠く短縮型ＭｙＤ８８ポリペプチド領域及びＣＤ４０細胞外ドメインを欠くＣＤ４０細胞質ポリペプチド領域を含む、任意の先行する実施形態の組成物、方法、プロセス、または容器。
【0238】
５２． 共刺激ポリペプチド細胞質シグナル伝達領域が、ＭｙＤ８８、ＣＤ４０及び／またはＭｙＤ８８－ＣＤ４０融合キメラポリペプチドによって活性化されるシグナル伝達経路を活性化するシグナル伝達領域である、実施形態４８の組成物、方法、プロセス、または容器。
【0239】
５３． 前記Ｔ細胞が、誘導性キメラアポトーシス促進性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、先行する実施形態のいずれかの組成物、方法、プロセス、または容器。
【0240】
５４．
（ａ）内部空間を含む容器と、
（ｂ）前記内部空間内に含まれる組成物と、を含み、前記組成物が、
（ｉ）約１×１０６～約４０×１０６（例えば、約５×１０６）の細胞／ｍｌの量のＴ細胞；
（ｉｉ）約０．１％～０．６％ｖ：ｖの濃度の血清アルブミン；
（ｉｉｉ）約５％～７％ｖ：ｖの濃度のＤＭＳＯ；及び
（ｉｖ）ヒト注射のための薬学的に許容される担体、を含む、キット。
（ａ）内部空間を含む容器と、
（ｂ）前記内部空間内に含まれる組成物と、を含み、前記組成物が、
（ｉ）約１×１０６～約４０×１０６（例えば、約５×１０６）の細胞／ｍｌの量のＴ細胞；
（ｉｉ）約０．１％～０．６％ｖ：ｖの濃度の血清アルブミン；
（ｉｉｉ）約５％～７％ｖ：ｖの濃度のＤＭＳＯ；及び
（ｉｖ）ヒト注射のための薬学的に許容される担体、を含む、キット。
【0241】
５５． 前記容器がバッグ、例えば凍結保存バッグを含む、実施形態５４のキット。
【0242】
５６． 前記容器が、前記内部空間と流体連通しているバッグスパイクをさらに含む、実施形態５５のキット。
【0243】
５７． 前記Ｔ細胞が遺伝子改変されている、実施形態５４のキット。
【0244】
５８． 前記血清アルブミンがヒト血清アルブミンである、実施形態５４のキット。
【0245】
５９． 前記血清アルブミンが約０．５％ｖ：ｖの濃度で存在する、実施形態５４のキット。
【0246】
６０． 前記ＤＭＳＯが約５％ｖ：ｖの濃度で存在する、実施形態５４のキット。
【0247】
６１． 前記薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウム、グルコン酸ナトリウムナトリウム、酢酸三水和物、塩化カリウム、及び塩化マグネシウムを含む、実施形態５４のキット。
【0248】
６２． 前記薬学的に許容される担体が、Ｐｈａｒｍａ ＬｙｔｅまたはＰｌａｓｍａ Ｌｙｔｅを含む、実施形態５４のキット。
【0249】
６３． 前記組成物が約１５ｍｌの体積を有する、実施形態５４のキット。
【0250】
６４．
（ａ）内部空間を含む容器と、
（ｂ）前記内部空間内に含まれる組成物と、を含み、前記組成物が、
（ｉ）約１５×１０６～約６００×１０６（例えば、約７５×１０６）の細胞の量のＴ細胞；
（ｉｉ）約０．０３％～約１．８％の血清アルブミン、例えば、約１．５％ｖ：ｖの量の血清アルブミン；
（ｉｉｉ）約１．５％～２．１ｖ：ｖ（例えば、約１．５％ｖ：ｖ）の濃度のＤＭＳＯ；及び
（ｉｖ）ヒト注射のための薬学的に許容される担体、を含む、キット。
（ａ）内部空間を含む容器と、
（ｂ）前記内部空間内に含まれる組成物と、を含み、前記組成物が、
（ｉ）約１５×１０６～約６００×１０６（例えば、約７５×１０６）の細胞の量のＴ細胞；
（ｉｉ）約０．０３％～約１．８％の血清アルブミン、例えば、約１．５％ｖ：ｖの量の血清アルブミン；
（ｉｉｉ）約１．５％～２．１ｖ：ｖ（例えば、約１．５％ｖ：ｖ）の濃度のＤＭＳＯ；及び
（ｉｖ）ヒト注射のための薬学的に許容される担体、を含む、キット。
【0251】
６５． 前記容器がバッグを含み、任意選択でバッグスパイクを含むチューブを含み、前記チューブが前記内部空間と流体連通している、実施形態６３のキット。
【0252】
６６． 前記組成物が約５０ｍｌの体積を有する、実施形態６３のキット。
【0253】
６７． 疾患、例えばがんの治療に使用するための本明細書に記載の組成物。
【0254】
６８． 疾患、例えばがんの治療のための本明細書に記載の組成物の使用。
【0255】
６９． 疾患、例えばがんを治療するための薬剤の調製における本明細書に記載の組成物の使用。
【実施例】
【0256】
実施例１：遺伝子改変Ｔ細胞の調製
細胞は本質的に以下のように得られた：
・ 細胞は、白血球を濃縮するために、白血球アフェレーシスによってドナーの末梢血のサンプルから得られる。単核細胞は、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙ（商標）装置（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用した密度勾配分離によって濃縮され、－１３０℃で保存するために凍結保存される。
・ 必要に応じて、それらをドライバスで解凍し、次いで（１日目）Ｐｒｏｄｉｇｙ（商標）装置で培養バッグ内で３７℃、５％ＣＯ２で培養する。細胞を１～３×１０６の細胞／ｍＬで培地に播種する。この培地は、１００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、０．２μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３ｍＡｂ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＢｉｏｔｅｃのＯＫＴ３）、及び０．５μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２８ｍＡｂが補充された、Ｔ細胞をサポートする無血清培地（トランスフェリン、アルブミン、及びインスリンを含む）である。これらの条件はＴ細胞を活性化する。
・ ３日目に、培養物に新鮮な１００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２と３３％の追加の新鮮な培地を供給する。
・ ５日目に、細胞をＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（商標）でコーティングされたＡＣバッグに移し、Ｔｅｙ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌ １３：９１３－２４ ａｎｄ Ｄｉ Ｓｔａｓｉ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６５：１６７３－８３によって開示されたｉＣａｓｐ９自殺スイッチをコードするＧａｌ－Ｖレトロウイルスベクターで形質導入する。ＩＬ－２は２００Ｕ／ｍＬで添加される。
・ ６日目に、細胞を処理して残りのレトロウイルス粒子（上清）を除去し、２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を含む１０６の細胞／ｍＬで、培地に再懸濁する。培養は３７℃、５％ＣＯ２で継続する。
・ ８日目に、形質導入された細胞は、ＣＤ１９発現に基づいてＭＡＣＳによって選択され、再びＰｒｏｄｉｇｙ（商標）システムを使用する。ＣＤ１９＋細胞は、前と同じように、さらなるＩＬ－２（２００ＩＵ／ｍＬ）と共に、１０６の細胞／ｍＬで、バッグ内で培養される。
・ ９日目に細胞を回収し、遠心分離機でＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（Ｒｉｚｏｌｉ （２０１１）Ｊ Ｔｒａｕｍａ ７０（５ Ｓｕｐｐｌ）Ｓ１７－８）によって洗浄し、凍結保存培地に再懸濁して、同種異系のレシピエントによって必要とされるまで－１３０℃で保存する。
・ しかしながら、９日目に細胞数が十分でなかった場合（例えば、目的の処理に対して細胞が少なすぎる場合）、前のポイントで説明したように、回収前に培養を１５日目まで継続できる。
細胞は本質的に以下のように得られた：
・ 細胞は、白血球を濃縮するために、白血球アフェレーシスによってドナーの末梢血のサンプルから得られる。単核細胞は、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙ（商標）装置（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用した密度勾配分離によって濃縮され、－１３０℃で保存するために凍結保存される。
・ 必要に応じて、それらをドライバスで解凍し、次いで（１日目）Ｐｒｏｄｉｇｙ（商標）装置で培養バッグ内で３７℃、５％ＣＯ２で培養する。細胞を１～３×１０６の細胞／ｍＬで培地に播種する。この培地は、１００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２、０．２μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３ｍＡｂ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＢｉｏｔｅｃのＯＫＴ３）、及び０．５μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２８ｍＡｂが補充された、Ｔ細胞をサポートする無血清培地（トランスフェリン、アルブミン、及びインスリンを含む）である。これらの条件はＴ細胞を活性化する。
・ ３日目に、培養物に新鮮な１００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２と３３％の追加の新鮮な培地を供給する。
・ ５日目に、細胞をＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（商標）でコーティングされたＡＣバッグに移し、Ｔｅｙ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌ １３：９１３－２４ ａｎｄ Ｄｉ Ｓｔａｓｉ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６５：１６７３－８３によって開示されたｉＣａｓｐ９自殺スイッチをコードするＧａｌ－Ｖレトロウイルスベクターで形質導入する。ＩＬ－２は２００Ｕ／ｍＬで添加される。
・ ６日目に、細胞を処理して残りのレトロウイルス粒子（上清）を除去し、２００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を含む１０６の細胞／ｍＬで、培地に再懸濁する。培養は３７℃、５％ＣＯ２で継続する。
・ ８日目に、形質導入された細胞は、ＣＤ１９発現に基づいてＭＡＣＳによって選択され、再びＰｒｏｄｉｇｙ（商標）システムを使用する。ＣＤ１９＋細胞は、前と同じように、さらなるＩＬ－２（２００ＩＵ／ｍＬ）と共に、１０６の細胞／ｍＬで、バッグ内で培養される。
・ ９日目に細胞を回収し、遠心分離機でＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（Ｒｉｚｏｌｉ （２０１１）Ｊ Ｔｒａｕｍａ ７０（５ Ｓｕｐｐｌ）Ｓ１７－８）によって洗浄し、凍結保存培地に再懸濁して、同種異系のレシピエントによって必要とされるまで－１３０℃で保存する。
・ しかしながら、９日目に細胞数が十分でなかった場合（例えば、目的の処理に対して細胞が少なすぎる場合）、前のポイントで説明したように、回収前に培養を１５日目まで継続できる。
【0257】
得られた細胞はドナーへの再導入に適しており、幹細胞移植後にウイルス及び腫瘍特異的免疫を提供することができる。遺伝子改変Ｔ細胞は宿主内で再拡大できる。ＧＶＨＤの例では、リミドゥシドによるｉＣ９の活性化は、アロ反応性Ｔ細胞の急速な殺傷とＧＶＨＤの解消をもたらす。
【0258】
遺伝子改変は典型的には、ドナー患者から離れた専門の場所で行われる。したがって、細胞はドナーに輸送される必要があり、これは典型的には、凍結保存を伴う。次の実施例では、凍結保存前、凍結保存中、凍結保存後のＴ細胞の回収率と生存率に影響を及ぼし得るパラメーターを検討する。
【0259】
実施例２：凍結保存プロセスパラメーターの特性評価
細胞濃度とＤＭＳＯ濃度は、解凍細胞の生存率と回収率に重要な影響を及ぼす可能性があることが確認されているため、これらのパラメーターをＤｏＥ研究で調査した。研究のばらつきを減らすために、互いに類似した実験単位を配置するという統計理論に基づくブロック係数が後で追加された。この理論を使用すると、ブロック間で異なる回帰は実験的な変動を示す。主要な因子に加えて、モデルは３つの主要な因子（エイリアス用語（Ａｌｉａｓ Ｔｅｒｍｓ））間の相互作用も調べる。
細胞濃度とＤＭＳＯ濃度は、解凍細胞の生存率と回収率に重要な影響を及ぼす可能性があることが確認されているため、これらのパラメーターをＤｏＥ研究で調査した。研究のばらつきを減らすために、互いに類似した実験単位を配置するという統計理論に基づくブロック係数が後で追加された。この理論を使用すると、ブロック間で異なる回帰は実験的な変動を示す。主要な因子に加えて、モデルは３つの主要な因子（エイリアス用語（Ａｌｉａｓ Ｔｅｒｍｓ））間の相互作用も調べる。
【0260】
培養中の細胞の細胞濃度範囲は１～３×１０６の細胞／ｍＬであり、最終製剤のＤＭＳＯ含有量は２～８％（ｖ／ｖ）であった。
【0261】
凍結保存のための細胞の生産と調製
健康なドナーから得られた白血球アフェレーシスは、このプロセスの出発物質として使用された。細胞は実施例１に記載されているように製造された。採取時（９日目）、細胞は３つの異なる濃度：１．３×１０６／ｍＬ、２．６×１０６／ｍＬ、及び３．６×１０６／ｍＬで製剤化され、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（商標）細胞凍結保存培地ＣＳ１０（ＣＳ１０）により、最終ＤＭＳＯ濃度が２％、５％、または８％（ｖ／ｖ）になるように希釈された。希釈に続いて、細胞は、制御された速度の凍結（ＣＲＦ）を使用して凍結保存された。
健康なドナーから得られた白血球アフェレーシスは、このプロセスの出発物質として使用された。細胞は実施例１に記載されているように製造された。採取時（９日目）、細胞は３つの異なる濃度：１．３×１０６／ｍＬ、２．６×１０６／ｍＬ、及び３．６×１０６／ｍＬで製剤化され、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（商標）細胞凍結保存培地ＣＳ１０（ＣＳ１０）により、最終ＤＭＳＯ濃度が２％、５％、または８％（ｖ／ｖ）になるように希釈された。希釈に続いて、細胞は、制御された速度の凍結（ＣＲＦ）を使用して凍結保存された。
【0262】
解凍後及び培養後の測定
バイアル内の凍結保存された細胞は、ＤｒｙＢａｔｈを使用してバッチで解凍された。解凍後の細胞をＰｒｉｍｅＸＶ＋１０％ＦＢＳ完全培地で１０倍に希釈した。ＮＣ－３０００ Ｎｕｃｌｅｏｃｏｕｎｔｅｒを使用した細胞数と生存率の測定のために、３００μｌのアリコートを取り出した。解凍後のサンプルを３７℃で６０分間保持した後、減速を２に設定して３５０×ｇで１０分間遠心分離した。遠心分離後、デカンテーションにより上清を除去し、細胞を５ｍＬのＰｒｉｍｅＸＶ＋１０％ＦＢＳ完全培地に再懸濁した。スピン後の細胞数と生存率の測定は、ＮＣ－３０００を使用して実施された。細胞を３７℃／５％ＣＯ２のインキュベーター内に入れて培養した。インキュベーション後２０±４時間後、培養物に２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を補充し、培養をさらに２０±４時間継続した。合計４０±８時間のインキュベーション後、培養物を回収し、ＮＣ－３０００を使用して細胞数と生存率の測定を行った。
バイアル内の凍結保存された細胞は、ＤｒｙＢａｔｈを使用してバッチで解凍された。解凍後の細胞をＰｒｉｍｅＸＶ＋１０％ＦＢＳ完全培地で１０倍に希釈した。ＮＣ－３０００ Ｎｕｃｌｅｏｃｏｕｎｔｅｒを使用した細胞数と生存率の測定のために、３００μｌのアリコートを取り出した。解凍後のサンプルを３７℃で６０分間保持した後、減速を２に設定して３５０×ｇで１０分間遠心分離した。遠心分離後、デカンテーションにより上清を除去し、細胞を５ｍＬのＰｒｉｍｅＸＶ＋１０％ＦＢＳ完全培地に再懸濁した。スピン後の細胞数と生存率の測定は、ＮＣ－３０００を使用して実施された。細胞を３７℃／５％ＣＯ２のインキュベーター内に入れて培養した。インキュベーション後２０±４時間後、培養物に２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を補充し、培養をさらに２０±４時間継続した。合計４０±８時間のインキュベーション後、培養物を回収し、ＮＣ－３０００を使用して細胞数と生存率の測定を行った。
【0263】
結果
細胞生存率は７５．２～８５．１％の範囲であった。細胞の回収率は少なくとも９７％であった。
細胞生存率は７５．２～８５．１％の範囲であった。細胞の回収率は少なくとも９７％であった。
【0264】
多変量効果を実証するために使用された第１の予測プロファイラー（図１）は、ＤＭＳＯ濃度が５％～７％の望ましい範囲で二次的に生存率に影響を与え、最大生存率が５．８８％であることを示した。第２の予測プロファイラー（図２）は、試験された濃度で回収率がＤＭＳＯと線形関係にあることを示し、ＤＭＳＯ濃度が高いほど回収率が高いことを示した。
生存率と回収率に対するＤＭＳＯの影響に関するこの情報は、その安全性プロファイルに関する知識と組み合わせることができ、凍結保存に最適なＤＭＳＯ濃度が５～７％であることを示している。約５％の濃度は、特に小児患者の安全性に関して、３つのパラメーターすべての良好なバランスを提供する。５％未満の濃度は、凍結保存手順に供される細胞には好ましくない。
生存率と回収率に対するＤＭＳＯの影響に関するこの情報は、その安全性プロファイルに関する知識と組み合わせることができ、凍結保存に最適なＤＭＳＯ濃度が５～７％であることを示している。約５％の濃度は、特に小児患者の安全性に関して、３つのパラメーターすべての良好なバランスを提供する。５％未満の濃度は、凍結保存手順に供される細胞には好ましくない。
【0265】
実施例３：細胞注入
細胞の調製
実施例１に従って調製された細胞は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標）によって洗浄される。上清を除去し、ＨＳＡ（Ｎｏｖａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を補充したＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標）を使用して最終体積を７．５ｍＬにして、ＨＳＡ濃度を１％（ｖ／ｖ）にする。次いで、７．５ｍＬのＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０（商標）（１０％ｖ／ｖのＤＭＳＯを含む）を加えて、最終体積を１５ｍＬにする。したがって、最終的な組成物には、０．５％のＨＳＡ（ｖ／ｖ）と５％のＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）が含まれている。次いで、細胞は輸送のために凍結保存される。
細胞の調製
実施例１に従って調製された細胞は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標）によって洗浄される。上清を除去し、ＨＳＡ（Ｎｏｖａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を補充したＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標）を使用して最終体積を７．５ｍＬにして、ＨＳＡ濃度を１％（ｖ／ｖ）にする。次いで、７．５ｍＬのＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０（商標）（１０％ｖ／ｖのＤＭＳＯを含む）を加えて、最終体積を１５ｍＬにする。したがって、最終的な組成物には、０．５％のＨＳＡ（ｖ／ｖ）と５％のＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）が含まれている。次いで、細胞は輸送のために凍結保存される。
【0266】
細胞の解凍
凍結保存された細胞は、３７°±１℃に加熱された滅菌水浴を使用して注入用に調製された。製品バッグを解凍するために、最終製品バッグのポートを３７°±１℃のウォーターバスに沈め、バッグの漏れの恐れについて目視検査する。ポートの漏れが観察または検出されない場合、最終製品のバッグは完全に３７°±１℃の水浴に沈められ、水がジップシールバッグに入らないことを確実にする。次いで、最終製品のバッグを解凍中に穏やかにマッサージして、解凍した細胞懸濁液がバッグ内を循環し、バッグ内の解凍した液体のより均一な温度分布を作成する。氷の最後の一片が溶ける直前に、最終製品のバッグを水浴から取り出し、ジッパーシール容器から取り出し、滅菌ドレープの上に置く。
凍結保存された細胞は、３７°±１℃に加熱された滅菌水浴を使用して注入用に調製された。製品バッグを解凍するために、最終製品バッグのポートを３７°±１℃のウォーターバスに沈め、バッグの漏れの恐れについて目視検査する。ポートの漏れが観察または検出されない場合、最終製品のバッグは完全に３７°±１℃の水浴に沈められ、水がジップシールバッグに入らないことを確実にする。次いで、最終製品のバッグを解凍中に穏やかにマッサージして、解凍した細胞懸濁液がバッグ内を循環し、バッグ内の解凍した液体のより均一な温度分布を作成する。氷の最後の一片が溶ける直前に、最終製品のバッグを水浴から取り出し、ジッパーシール容器から取り出し、滅菌ドレープの上に置く。
【0267】
注入の準備
無針バルブ（または他のサンプリングデバイス）を備えたバッグスパイクを、解凍した最終製品バッグとＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標）バッグに無菌的に挿入する。代替的に、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標）の代わりに０．９％のＮａＣｌ溶液を使用することもできる。３５ｍＬのＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標）（または０．９％のＮａＣｌ）を無菌的にシリンジに吸引する。製品バッグを穏やかに混合しながら、シリンジの内容物を製品バッグにゆっくりと移し、バッグ内の細胞を希釈する（１５ｍＬから５０ｍＬ）。次いで、空のシリンジを最終製品バッグから取り外し、希釈した最終製品を注入場所に輸送する。次いで、最終製品バッグを患者の注入ラインに接続し、２０～３０分かけて注入する。
無針バルブ（または他のサンプリングデバイス）を備えたバッグスパイクを、解凍した最終製品バッグとＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標）バッグに無菌的に挿入する。代替的に、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標）の代わりに０．９％のＮａＣｌ溶液を使用することもできる。３５ｍＬのＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標）（または０．９％のＮａＣｌ）を無菌的にシリンジに吸引する。製品バッグを穏やかに混合しながら、シリンジの内容物を製品バッグにゆっくりと移し、バッグ内の細胞を希釈する（１５ｍＬから５０ｍＬ）。次いで、空のシリンジを最終製品バッグから取り外し、希釈した最終製品を注入場所に輸送する。次いで、最終製品バッグを患者の注入ラインに接続し、２０～３０分かけて注入する。
【0268】
バッグ内のすべての細胞が確実に使用されるように、最終製品の量がバッグから排出される前に、最終製品のバッグを追加の最小量の＞１５ｍＬのＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標）（または０．９％のＮａＣｌ）ですすぐ。このすすぎは、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（または０．９％のＮａＣｌ）バッグを注入セットに接続し、重力流によって希釈液を最終製品バッグに排出することによって実施される。代替的に、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（商標）（または０．９％のＮａＣｌ）ボーラスをバッグスパイクの無針バルブ（または他のサンプリングデバイス）に接続して、バッグに注入することができる。
【0269】
本発明者らの研究は例としてのみ上述されており、本発明の範囲及び趣旨の範囲内にとどまりながら修正を行うことができることが理解されよう。
【図1】
【図2】
【国際調査報告】