特表 2022-544538 脊髄性筋萎縮症のための併用療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-10-19

(54)【発明の名称】脊髄性筋萎縮症のための併用療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7088 20060101AFI20221012BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20221012BHJP

   A61P 25/14 20060101ALI20221012BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20221012BHJP

   A61K 31/501 20060101ALI20221012BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20221012BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20221012BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20221012BHJP

   C12N 7/01 20060101ALI20221012BHJP

【ＦＩ】

A61K31/7088

A61K45/00

A61P25/14

A61P21/00

A61K31/501

A61K31/519

C12N15/12 ZNA

C12N15/113 Z

C12N7/01

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022509053

(86)(22)【出願日】2020-08-14

(85)【翻訳文提出日】2022-04-12

(86)【国際出願番号】 US2020046546

(87)【国際公開番号】W WO2021030766

(87)【国際公開日】2021-02-18

(31)【優先権主張番号】62/887,579

(32)【優先日】2019-08-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】398050098

【氏名又は名称】バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】Ｂｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ．

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(72)【発明者】

【氏名】マッキャンベル， アレクサンダー

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90Y

4B065AA95X

4B065AB01

4B065AC14

4B065AC20

4B065BA01

4B065CA23

4B065CA24

4B065CA44

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZA221

4C084ZA222

4C084ZA941

4C084ZA942

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC41

4C086CB09

4C086EA16

4C086GA07

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086ZA22

4C086ZA94

(57)【要約】

本出願の態様は、対象における脊髄性筋萎縮症を処置するための組成物および方法に関する。特に、本出願は、ＳＭＮ機能を促進する低分子、および／または生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）タンパク質をコードする組換え核酸（例えば、ウイルスベクター中の）、および／または全長生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡを増加させるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）（例えば、生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）をコードする核酸分子に標的化され、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７の包含を促進する）の治療用組合せを提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、前記対象に、
ａ）ＳＭＮ機能を増加させる低分子、および
ｂ）生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）タンパク質をコードする組換え核酸
を投与することを含む、方法。

【請求項2】

脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、前記対象に、
ａ）ＳＭＮ機能を増加させる低分子、および
ｂ）全長生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡを増加させるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）
を投与することを含む、方法。

【請求項3】

脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、前記対象に、
ａ）ＳＭＮ機能を増加させる低分子、
ｂ）生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）タンパク質をコードする組換え核酸、および
ｃ）全長生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡを増加させるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）
を投与することを含む、方法。

【請求項4】

前記対象が、それぞれの生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）対立遺伝子に欠失または変異を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記対象が、ＳＭＮ１遺伝子の変異についてホモ接合性である、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記対象が、ＳＭＡの１つまたは複数の症状を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記症状が、四肢筋の萎縮、歩行困難もしくは歩行不能、または呼吸困難を含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記対象が、小児および成人の集団から選択されるヒト対象である、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

ＳＭＮ機能を増加させる前記低分子が、置換ピリダジンである、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記低分子薬物が、式（Ｉ’）の置換ピリダジン：

【化48】

またはその薬学的に許容される塩
［式中、
Ａは、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル（ここで、２個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基は、それらが結合する原子と組み合わされて、５～６員環を形成することができ、かつオキソ、オキシムおよびヒドロキシから選択される０または１個の置換基で置換されている）、ハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、ジハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ－、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、ハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、ジハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヘテロアリール、ヒドロキシで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルキル、アリールで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、－ヘテロアリール、－ＮＨＣ（Ｏ）－、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－、ヘテロアリール、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、ヘテロアリール、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルＮＨＣ（Ｏ）－ヘテロアリール、３～７員シクロアルキル、５～７員シクロアルケニル、またはＳ、ＯおよびＮから独立して選択される１もしくは２個のヘテロ原子を含有する５、６もしくは９員複素環から独立して選択される０、１、２または３個の置換基で置換された２－ヒドロキシ－フェニルであり、ここで、ヘテロアリールは、５、６または９個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有し、オキソ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－ＯＨ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、４～７員複素環Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され；あるいは
Ａは、必要に応じて、ヒドロキシにより３位が置換され、ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_５アルコキシから選択される０、１または２個の置換基でさらに置換された２－ナフチルであり、ここで、前記アルコキシは、無置換であるか、またはヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）_２Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アルキレン４～７員複素環、４～７員複素環ならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換され；あるいは
Ａは、１～３個の環窒素原子を有する６員ヘテロアリールであり、前記６員ヘテロアリールは、フェニル、または５もしくは６個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される１もしくは２個の環ヘテロ原子を有し、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１もしくは２個の置換基で置換されたヘテロアリールによって置換されている；あるいは
Ａは、９～１０個の環原子およびＮ、ＯまたはＳから独立して選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有する二環式ヘテロアリールであり、前記二環式ヘテロアリールは、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_４アルキニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシならびにヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノおよびモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され；あるいは
Ａは、１２または１３個の環原子およびＮ、ＯまたはＳから独立して選択される１、２もしくは３個の環ヘテロ原子を有する三環式ヘテロアリールであり、前記三環式ヘテロアリールは、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_４アルキニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、ヒドロキシで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノならびにヘテロアリールから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され、ここで、前記ヘテロアリールは、５、６または９個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有し、オキソ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－ＯＨ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、４～７員複素環Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され；
Ｂは、式の基：

【化49】

［式中、
ｍ、ｎおよびｐは、０または１から独立して選択され；
Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３およびＲ_４は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択され、前記アルキルは、必要に応じて、ヒドロキシ、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換され；
Ｒ_５およびＲ_６は、水素およびフッ素から独立して選択され；あるいは
ＲおよびＲ_３は、組み合わされて、Ｎ、ＯまたはＳから選択される０または１個のさらなる環ヘテロ原子を有する縮合５または６員複素環式環を形成し；
Ｒ_１およびＲ_３は、組み合わされて、Ｃ_１～Ｃ_３アルキレン基を形成し；
Ｒ_１およびＲ_５は、組み合わされて、Ｃ_１～Ｃ_３アルキレン基を形成し；
Ｒ_３およびＲ_４は、それらが結合する炭素原子と組み合わされて、スピロ環式Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキルを形成し；
Ｘは、ＣＲ_ＡＲ_Ｂ、Ｏ、ＮＲ_７または結合であり；
Ｒ_７は、水素またはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり；
Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、水素およびＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択されるか、またはＲ_ＡおよびＲ_Ｂは、組み合わされて、二価Ｃ_２～Ｃ_５アルキレン基を形成し；
Ｚは、ＣＲ_８またはＮであり；ＺがＮである場合、Ｘは結合であり；
Ｒ_８は、水素であるか、またはＲ_６と組み合わされて、二重結合を形成する］
であり；あるいは
Ｂは、式の基：

【化50】

［式中、
ｐおよびｑは、０、１および２からなる群から独立して選択され；
Ｒ_９およびＲ_１３は、水素およびＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択され；
Ｒ_１０およびＲ_１４は、水素、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノならびにＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択され、前記アルキルは、必要に応じて、ヒドロキシ、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換され；
Ｒ_１１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノであり；
Ｒ_１２は、水素またはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり；あるいは
Ｒ_９およびＲ_１０は、組み合わされて、４～７個の環原子を有する飽和アザ環を形成し、前記飽和アザ環は、必要に応じて、１～３個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で置換され；あるいは
Ｒ_１１およびＲ_１２は、組み合わされて、４～７個の環原子を有する飽和アザ環を形成し、前記飽和アザ環は、必要に応じて、１～３個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で置換されている］
であり；
Ｃは、原子価が許容するかぎり、Ｈまたは非存在である］
である、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

Ａが、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル（ここで、２個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基は、それらが結合する原子と組み合わされて、５～６員環を形成することができ、かつオキソ、オキシムおよびヒドロキシから選択される０または１個の置換基で置換されている）、ハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、ジハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ－、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、ハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、ジハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヘテロアリール、ヒドロキシで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルキル、アリールで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、－ヘテロアリール、－ＮＨＣ（Ｏ）－、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－、ヘテロアリール、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、ヘテロアリール、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルＮＨＣ（Ｏ）－ヘテロアリール、３～７員シクロアルキル、５～７員シクロアルケニル、またはＳ、ＯおよびＮから独立して選択される１もしくは２個のヘテロ原子を含有する５、６もしくは９員複素環から独立して選択される０、１、２または３個の置換基で置換された２－ヒドロキシ－フェニルであり、ここで、ヘテロアリールが、５、６または９個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有し、オキソ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－ＯＨ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、４～７員複素環Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換されている、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

Ａが、式：

【化51】

［式中、Ｒ_１６は、１個の環窒素原子およびＮ、ＯまたはＳから選択される０または１個のさらなる環ヘテロ原子を有する５員ヘテロアリールであり、ここで、前記ヘテロアリールは、必要に応じて、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルで置換されている］
である、請求項１０または１１に記載の方法。

【請求項13】

Ａが、式：

【化52】

である、請求項１１または１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

Ａが、９～１０個の環原子およびＮ、ＯまたはＳから独立して選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有する二環式ヘテロアリールであり、前記二環式ヘテロアリールが、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_４アルキニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシならびにヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノおよびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換されている、請求項１０に記載の方法。

【請求項15】

Ａが、必要に応じて、ヒドロキシにより３位が置換され、ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_５アルコキシから選択される０、１または２個の置換基でさらに置換された２－ナフチルであり、ここで、前記アルコキシは、無置換であるか、またはヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）_２Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アルキレン４～７員複素環、４～７員複素環ならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換されている、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

Ａが、１～３個の環窒素原子を有する６員ヘテロアリールであり、前記６員ヘテロアリールは、フェニル、または５もしくは６個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される１もしくは２個の環ヘテロ原子を有し、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１もしくは２個の置換基で置換されたヘテロアリールによって置換されている、請求項１０に記載の方法。

【請求項17】

Ａが、１２または１３個の環原子およびＮ、ＯまたはＳから独立して選択される１、２もしくは３個の環ヘテロ原子を有する三環式ヘテロアリールであり、前記三環式ヘテロアリールは、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_４アルキニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、ヒドロキシで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノならびにヘテロアリールから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され、ここで、前記ヘテロアリールは、５、６または９個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有し、オキソ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－ＯＨ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、４～７員複素環Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換されている、請求項１０に記載の方法。

【請求項18】

Ｂが、式：

【化53】

［式中、
ｍ、ｎおよびｐは、０または１から独立して選択され；
Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３およびＲ_４は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択され、前記アルキルは、必要に応じて、ヒドロキシ、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換され；
Ｒ_５およびＲ_６は、水素およびフッ素から独立して選択され；あるいは
ＲおよびＲ_３は、組み合わされて、Ｎ、ＯまたはＳから選択される０または１個のさらなる環ヘテロ原子を有する縮合５または６員複素環式環を形成し；
Ｒ_１およびＲ_３は、組み合わされて、Ｃ_１～Ｃ_３アルキレン基を形成し；
Ｒ_１およびＲ_５は、組み合わされて、Ｃ_１～Ｃ_３アルキレン基を形成し；
Ｒ_３およびＲ_４は、それらが結合する炭素原子と組み合わされて、スピロ環式Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキルを形成し；
Ｘは、ＣＲ_ＡＲ_Ｂ、Ｏ、ＮＲ_７または結合であり；
Ｒ_７は、水素またはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり；
Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、水素およびＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択されるか、またはＲ_ＡおよびＲ_Ｂは、組み合わされて、二価Ｃ_２～Ｃ_５アルキレン基を形成し；
Ｚは、ＣＲ_８またはＮであり；ＺがＮである場合、Ｘは結合であり；
Ｒ_８は、水素であるか、またはＲ_６と組み合わされて、二重結合を形成する］
である、請求項１０～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

Ｂが、式：

【化54】

［式中、
ｐおよびｑは、０、１および２からなる群から独立して選択され；
Ｒ_９およびＲ_１３は、水素およびＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択され；
Ｒ_１０およびＲ_１４は、水素、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノならびにＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択され、前記アルキルは、必要に応じて、ヒドロキシ、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換され；
Ｒ_１１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノであり；
Ｒ_１２は、水素またはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり；あるいは
Ｒ_９およびＲ_１０は、組み合わされて、４～７個の環原子を有する飽和アザ環を形成し、前記飽和アザ環は、必要に応じて、１～３個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で置換され；あるいは
Ｒ_１１およびＲ_１２は、組み合わされて、４～７個の環原子を有する飽和アザ環を形成し、前記飽和アザ環は、必要に応じて、１～３個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で置換されている］
である、請求項１０～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

Ｂが、式：

【化55】

［式中、Ｒ_１７は、Ｈまたは無置換メチルである］
である、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

Ｂが、式：

【化56】

である、請求項１９または２０に記載の方法。

【請求項22】

式（Ｉ’）の前記置換ピリダジンが、式（ＩＩ’）：

【化57】

またはその薬学的に許容される塩
［式中、Ｒ_１６は、１個の環窒素原子およびＮ、ＯまたはＳから選択される０または１個のさらなる環ヘテロ原子を有する５員ヘテロアリールであり、ここで、前記ヘテロアリールは、必要に応じて、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルで置換されている］
である、請求項１０～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

Ｒ_１６が、チオフェン、フラン、ピロール、ジヒドロピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピラジン、イソチアゾール、イソキサゾール、トリアゾール、テトラゾール、オキサゾール、イソキサゾール、チアゾールまたはイソチアゾールである、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

Ｒ_１６が、ピラゾールである、請求項２２または２３に記載の方法。

【請求項25】

Ｒ_１６が、

【化58】

である、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

式（ＩＩ’）の前記置換ピリダジンが、式：

【化59】

またはその薬学的に許容される塩である、請求項２２～２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記置換ピリダジンが、式（ＩＩＩ）の化合物：

【化60】

またはその薬学的に許容される塩
［式中、Ｒ^１は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^２は、水素、シアノ、Ｃ_１～７アルキル、Ｃ_１～７ハロアルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～７アルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
Ａは、Ｎ－ヘテロシクロアルキルまたはＮＲ^１２Ｒ^１３であり、ここで、Ｎ－ヘテロシクロアルキルは、１または２個の窒素環原子を含み、必要に応じて、Ｒ^１４から選択される１、２、３または４個の置換基で置換され；
Ｒ^１２は、１個の窒素環原子を含むヘテロシクロアルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルは、必要に応じて、Ｒ^１４から選択される１、２、３または４個の置換基で置換され；
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１～７アルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
Ｒ^１４は、水素、Ｃ_１～７アルキル、アミノ、アミノ－Ｃ_１～７アルキル、Ｃ_３～８シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択されるか、または２個のＲ^１４は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
ただし、Ａが、１個の窒素環原子のみを含むＮ－ヘテロシクロアルキルである場合、少なくとも１個のＲ^１４置換基は、アミノまたはアミノ－Ｃ_１～７アルキルである］
である、請求項９に記載の方法。

【請求項28】

式（ＩＩＩ）の前記化合物が、式：

【化61】

またはその薬学的に許容される塩
［式中、
Ｒ^１は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^２は、水素、シアノ、Ｃ_１～７アルキル、Ｃ_１～７ハロアルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～７アルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
Ａは、１または２個の窒素環原子を含むＮ－ヘテロシクロアルキルであり、ここで、Ｎ－ヘテロシクロアルキルは、必要に応じて、Ｒ^１４から選択される１、２、３または４個の置換基で置換され；
Ｒ^１４は、水素、Ｃ_１～７アルキル、アミノ、アミノ－Ｃ_１～７アルキル、Ｃ_３～８シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択されるか、または２個のＲ^１４は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
ただし、Ａが、１個の窒素環原子のみを含むＮ－ヘテロシクロアルキルである場合、少なくとも１個のＲ^１４置換基は、アミノまたはアミノ－Ｃ_１～７アルキルである］
である、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

Ｒ^１が、Ｃ_１～７アルキルである、請求項２７または２８に記載の方法。

【請求項30】

Ｒ^１が、メチルである、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

Ｒ^２が、水素である、請求項２７～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

Ｒ^２が、Ｃ_１～７アルキルである、請求項２７～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

Ｒ^２が、メチルである、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

Ｒ^３が、水素である、請求項２７～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

Ｒ^３が、Ｃ_１～７アルキルである、請求項２７～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

Ｒ^３が、メチルである、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

Ａが、Ｎ－ヘテロシクロアルキルまたはＮＲ^１２Ｒ^１３であり、ここで、Ｎ－ヘテロシクロアルキルは、１または２個の窒素環原子を含み、必要に応じて、Ｒ^１４から選択される１、２、３または４個の置換基で置換され；
Ｒ^１２が、１個の窒素環原子を含むヘテロシクロアルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルは、必要に応じて、Ｒ^１４から選択される１、２、３または４個の置換基で置換され；
Ｒ^１３が、水素、Ｃ_１～７アルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
Ｒ^１４が、水素、Ｃ_１～７アルキル、アミノ、アミノ－Ｃ_１～７アルキル、Ｃ_３～８シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択されるか、または２個のＲ^１４は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
ただし、Ａが、１個の窒素環原子のみを含むＮ－ヘテロシクロアルキルである場合、少なくとも１個のＲ^１４置換基は、アミノまたはアミノ－Ｃ_１～７アルキルである、請求項２７～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

Ｒ^１２が、必要に応じて、Ｒ^１４から選択される１、２、３または４個の置換基で置換されたピペリジニルである、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

Ａが、式：

【化62】

［式中、
Ｘは、ＮまたはＣＨであり；
Ｒ^４は、水素、Ｃ_１～７アルキルまたは－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０であり；
Ｒ^５は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^６は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^７は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^８は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^９およびＲ^１０は、水素、Ｃ_１～７アルキルおよびＣ_３～８シクロアルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１～７アルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
ｎは、０、１または２であり；
ｍは、０、１、２または３であり；
あるいは、Ｒ^４およびＲ^５は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^４およびＲ^７は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^５およびＲ^６は、一緒にＣ_２～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^５およびＲ^７は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^５およびＲ^９は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^７およびＲ^８は、一緒にＣ_２～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^７およびＲ^９は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^９およびＲ^１０は、一緒にＣ_２～７アルキレンを形成し；
ただし、Ｘが、ＣＨである場合、Ｒ^４は、－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０であり；
ただし、Ｘが、Ｎであり、Ｒ^４が、－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０である場合、ｍは、２または３である］
である、請求項３７に記載の方法。

【請求項40】

Ａが、式：

【化63】

［式中、
Ｘは、ＮまたはＣＨであり；
Ｒ^４は、水素、Ｃ_１～７アルキルまたは－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０であり；
Ｒ^５は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^６は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^７は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^８は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^９およびＲ^１０は、水素、Ｃ_１～７アルキルおよびＣ_３～８シクロアルキルから独立して選択され；
ｎは、０、１または２であり；
ｍは、０、１、２または３であり；
あるいは、Ｒ^４およびＲ^５は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^４およびＲ^７は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^５およびＲ^６は、一緒にＣ_２～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^５およびＲ^７は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^５およびＲ^９は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^７およびＲ^８は、一緒にＣ_２～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^７およびＲ^９は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^９およびＲ^１０は、一緒にＣ_２～７アルキレンを形成し；
ただし、Ｘが、ＣＨである場合、Ｒ^４は、－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０であり；
ただし、Ｘが、Ｎであり、Ｒ^４が、－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０である場合、ｍは、２または３である］
である、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

Ｘが、Ｎである、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

ｎが、１である、請求項４０または４１に記載の方法。

【請求項43】

Ｒ^６が、水素、メチルまたは－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０である、請求項４０～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

Ｒ^６が、水素である、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

Ｒ^６が、メチルである、請求項４３に記載の方法。

【請求項46】

Ｒ^７が、水素である、請求項４０～４５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

Ｒ^７が、メチルである、請求項４０～４５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

ｍが、０である、請求項４０～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

Ｒ^４およびＲ^５が、一緒にプロピレンを形成する、請求項４０～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

Ｒ^５およびＲ^６が、一緒にエチレンを形成する、請求項４０～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

Ｒ^９およびＲ^１０が、一緒にブチレンを形成する、請求項４０～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

Ａが、式：

【化64】

である、請求項４７または３９～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

Ａが、

【化65】

である、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

前記ピリダジン誘導体が、式：

【化66】

またはその薬学的に許容される塩である、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記ピリダジン誘導体が、リスジプラムである、請求項９に記載の方法。

【請求項56】

前記ピリダジン誘導体が、ブラナプラムである、請求項９に記載の方法。

【請求項57】

前記ＡＳＯが、生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）プレｍＲＮＡのスプライシングパターンを変化させる、請求項１～５６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

前記ＡＳＯが、生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡにおけるエクソン７の包含を促進する、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

前記ＡＳＯが、配列番号１の核酸配列を含む、請求項１～５８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項60】

前記ＡＳＯが、ヌシネルセンである、請求項１～５９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項61】

ＳＭＮ機能を増加させる前記低分子およびｒＡＡＶが、同時に投与される、請求項１～６０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項62】

ＳＭＮ機能を増加させる前記低分子および前記ＡＳＯが、同時に投与される、請求項１～６０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項63】

前記低分子、ｒＡＡＶおよび前記ＡＳＯが、同時に投与される、請求項１～６０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項64】

ＳＭＮ機能を増加させる前記低分子およびｒＡＡＶが、併せて投与される、請求項１～６０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

ＳＭＮ機能を増加させる前記低分子および前記ＡＳＯが、併せて投与される、請求項１～６０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項66】

ＳＭＮ機能を増加させる前記低分子、ｒＡＡＶおよび前記ＡＳＯが、併せて投与される、請求項１～６０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項67】

ＳＭＮ機能を増加させる前記低分子およびｒＡＡＶが、逐次に投与される、請求項１～６０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項68】

ＳＭＮ機能を増加させる前記低分子および前記ＡＳＯが、逐次に投与される、請求項１～６０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項69】

ＳＭＮ機能を増加させる前記低分子、ｒＡＡＶおよび前記ＡＳＯが、逐次に投与される、請求項１～６０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項70】

脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯを含む有効量の組成物を、ＳＭＮ機能を増加させる低分子が以前に投与された対象に投与することを含む、方法。

【請求項71】

脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶを含む有効量の組成物を、ＳＭＮ機能を増加させる低分子が以前に投与された対象に投与することを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願に対する相互参照
本出願は、２０１９年８月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／８８７，５７９号に対する米国特許法第１１９条（ｅ）の優先権を主張し、これは、その全体がこれにより参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

分野
本出願は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を処置するための方法および組成物に関する。

【背景技術】

【0003】

背景
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）は、スプライソソームのバイオジェネシスに関与する遍在性発現タンパク質（生存運動ニューロン－ＳＭＮ）をコードする遺伝子である、テロメアのＳＭＮ１の変異または欠失によって引き起こされる神経筋疾患である。

【0004】

ＳＭＮ遺伝子産物は、細胞内に存在し、ＳＭＮの欠損は、下位運動ニューロンに選択毒性をもたらし、進行性のニューロンの喪失および筋力低下をもたらす。疾患の重症度は、ごく少量の全長ＳＭＮ転写物の産生をもたらすスプライス部位変異を持つ相同遺伝子（ＳＭＮ２）のセントロメアにおける重複のコピー数によって修飾される。ＳＭＮ２の１～２つのコピーを持つ患者は、生後数か月での発症および呼吸不全への急速な進行によって特徴付けられる重症形態のＳＭＡを示す。ＳＭＮ２の３つのコピーを有する患者は、一般に、典型的には、生後６か月の後に現われる、疾患の軽症型を示す。多くは歩行能力を得ることは決してないが、患者は、呼吸不全に進行するのは稀であり、多くの場合、成人期まで生きる。４つのＳＭＮ２のコピーを有する患者では成人期まで疾患が現われない場合があり、筋力低下が徐々に発症する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

ＳＭＡのためのいくつかの治療が開発されているが、異なるレベルの疾患の重症度を有する患者のための脊髄性筋萎縮症に関与する運動ニューロン中の細胞内ＳＭＮ活性を上昇させる処置に対する必要性が残されている。

【課題を解決するための手段】

【0006】

概要
一部の態様では、本出願は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、対象に、ａ）ＳＭＮ機能を増加させる低分子、およびｂ）生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）タンパク質をコードする組換え核酸を投与することを含む、方法に関する。

【0007】

一部の態様では、本出願は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、対象に、ａ）ＳＭＮ機能を増加させる低分子、およびｂ）全長生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡを増加させるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を投与することを含む、方法に関する。

【0008】

一部の態様では、本出願は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、対象に、ａ）ＳＭＮ機能を増加させる低分子、ｂ）生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）タンパク質をコードする組換え核酸、およびｃ）全長生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡを増加させるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を投与することを含む、方法に関する。

【0009】

一部の態様では、本出願は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象への、ＳＭＮ機能を増加させる低分子ならびに生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）をコードする組換え核酸および／または全長生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡを増加させるオリゴマー化合物の投与（例えば、併せてまたは逐次に）を含むＳＭＡのための併用療法に関する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子は、対象における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる低分子である。一部の態様では、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸は、ウイルスベクターで、例えば、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）で提供される。一部の態様では、オリゴマー化合物は、対象において全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる（例えば、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡスプライシングをモジュレートして、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７の包含を増加させることによって）アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。

【0010】

一部の態様では、本出願は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象への、ＳＭＮ機能を増加させる低分子ならびに生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）をコードする組換え核酸および／または生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡをコードする核酸においてエクソンスキッピングをモジュレートする（例えば、エクソン７包含を促進する）オリゴマー化合物の投与（例えば、併せてまたは逐次に）を含むＳＭＡのための併用療法に関する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子は、対象における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる低分子である。一部の態様では、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸は、ウイルスベクターで、例えば、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）で提供される。一部の態様では、ＳＭＮ２をコードする核酸においてエクソンスキッピングを誘導するオリゴマー化合物は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡにおいてエクソンスキッピングをモジュレートする（例えば、エクソン７包含を促進する）アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。

【0011】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子は、スプライスモジュレーター、ＨＤＡＣ阻害剤、またはｍＲＮＡデキャッピング酵素の活性をモジュレートする分子である。一部の態様では、低分子は、スプライスモジュレーターである。一部の態様では、スプライスモジュレーターは、ＳＭＮ２スプライスモジュレーターである。一部の態様では、スプライスモジュレーターは、７－二置換フェニルテトラサイクリンである。一部の態様では、スプライスモジュレーターは、置換イソインドリノンである。一部の態様では、スプライスモジュレーターは、置換カルバゾール誘導体である。一部の態様では、ＳＭＮ２スプライスモジュレーターは、置換１，４－ジアゼパンである。一部の態様では、ＳＭＮ２スプライスモジュレーターは、置換ピリダジンである。一部の態様では、ＳＭＮ２スプライスモジュレーターは、リスジプラムである。一部の態様では、ＳＭＮ２スプライスモジュレーターは、ブラナプラムである。

【0012】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびに組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶなどのウイルスベクター中の）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、別々の組成物として提供されるが、対象に、併せて（例えば、同時にまたは同時期に（contemporaneously）、例えば、同じ訪問診療中、例えば、同じ時間または同じ日の間で）投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびに組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶなどのウイルスベクター中の）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、別々の組成物として提供され、対象に、処置の経過の間（例えば、１週間、２～４週間、１か月、１～１２か月、１年、２～５年、またはそれよりも長い間の処置レジメン中）の、別々の訪問診療中に（例えば、異なる時間に、例えば、異なる日に）逐次に対象に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）は、組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶ）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の前および／または後に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびに組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶなどのウイルスベクター中の）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、異なる頻度で（例えば、併せてまたは逐次に）投与される。一部の態様では、対象は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶなどのウイルスベクター中の）またはＡＳＯのいずれかを含む別々の組成物の組合せで処置され、ここで、組成物は、異なる頻度で（例えば、併せてまたは逐次に）投与される。

【0013】

一部の態様では、２種またはそれよりも多くの異なるＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）が、対象に投与される。一部の態様では、２種またはそれよりも多くの異なる組換えＳＭＮ１核酸（例えば、ｒＡＡＶ中の）が、対象に投与される。一部の態様では、２種またはそれよりも多くの異なるＳＭＮ２ ＡＳＯが、対象に投与される。一部の態様では、異なる組換えＳＭＮ１核酸（例えば、ｒＡＡＶ中の）および／または異なるＳＭＮ２ ＡＳＯは、異なる訪問診療中に、対象に投与される。

【0014】

したがって、一部の態様では、ＳＭＡを有する対象（例えば、ヒト対象）におけるＳＭＡを処置する方法は、対象に、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびにＳＭＮ１をコードする組換え核酸（組換えＳＭＮ１遺伝子とも称する）（例えば、ｒＡＡＶ中の）および／または対象における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＳＭＮ２ ＡＳＯ（ＳＭＮ２ ＡＳＯとも称する）を投与することを含む。一部の態様では、対象におけるＳＭＡを処置する方法は、有効量のＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびに組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を、ＳＭＡを有する対象に投与することを含む。

【0015】

一部の態様では、ＳＭＡを有する対象は、ＳＭＡの１つまたは複数の症状（例えば、四肢筋の萎縮、歩行困難もしくは歩行不能、呼吸困難、またはＳＭＡの他の症状）を有する。一部の態様では、ＳＭＡを有する対象は、ゲノムＳＭＮ１遺伝子の２つの変異体対立遺伝子を有する。一部の態様では、対象は、それぞれのＳＭＮ１対立遺伝子に欠失または変異（例えば、機能消失点変異）を有する。一部の態様では、対象は、ＳＭＮ１遺伝子変異についてホモ接合性である。一部の態様では、対象は、２つの異なるＳＭＮ１遺伝子変異についてヘテロ接合性である。

【0016】

一部の態様では、対象は、ヒト対象である。一部の態様では、対象は、小児および成人の集団から選択される。一部の態様では、対象は、１８歳より上、または１８歳に等しい（例えば、１８歳またはそれよりも年上）である。一部の態様では、対象は、１８歳より若い、１０歳より若い、または６歳より若い。一部の態様では、対象は、およそ２週齢、１か月齢、３か月齢、６か月齢、１歳、２歳、３歳、４歳または５歳である。

【0017】

一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子は、プロモーターに機能的に連結されている。一部の態様では、ＳＭＮ１遺伝子は、ヒトＳＭＮ１遺伝子である。一部の態様では、ＳＭＮ１遺伝子は、（例えば、ヒトにおける発現について）コドン最適化される。一部の態様では、ＳＭＮ１遺伝子をコードする組換え核酸は、隣接ＡＡＶ逆位末端反復配列（ＩＴＲ）を含む組換えＡＡＶゲノムである。一部の態様では、組換え核酸は、ＡＡＶ粒子内で投与される。一部の態様では、ＡＡＶ粒子は、ＡＡＶキャプシドタンパク質（例えば、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ８キャプシドタンパク質）を含む。一部の態様では、ＡＡＶ粒子は、ＡＡＶｈｕ６８キャプシドタンパク質を含む。一部の態様では、ＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ９キャプシドタンパク質を含む。

【0018】

一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）プレｍＲＮＡのスプライシングパターンを変化させる。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡにおけるエクソン７の包含を促進する。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、ＳＭＮ２タンパク質をコードする核酸（例えば、ＳＭＮ２遺伝子またはＳＭＮ２プレｍＲＮＡ）分子のイントロン６またはイントロン７に相補的な配列を含む。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、ＳＭＮ２タンパク質をコードする核酸分子（例えば、ＳＭＮ２遺伝子またはＳＭＮ２プレｍＲＮＡ）のイントロン６に相補的な配列を含む。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、ＳＭＮ２タンパク質をコードする核酸分子（例えば、ＳＭＮ２遺伝子またはＳＭＮ２プレｍＲＮＡ）のイントロン７に相補的な配列を含む。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、配列番号１、２５または２６の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、ヌシネルセンである。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、１つもしくは複数の核酸塩基または骨格の修飾を含む。

【0019】

一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ウイルスベクター中の）は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）治療で以前に処置された対象に投与される（例えば、１回または複数回）。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶなどのウイルスベクター中の）は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）治療で現在処置が行われている対象に投与される（例えば、１回または複数回）。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびにａ）組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶなどのウイルスベクター中の）および／またはｂ）ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の並行投与または逐次投与を含む治療が、対象に対して開始される。

【0020】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびにａ）組換えＳＭＮ１遺伝子を含むｒＡＡＶ（ＳＭＮ１ ｒＡＡＶとも称する）および／またはｂ）ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、同時に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびにＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯは、併せて投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびにＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、異なる組成物で別々に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびにＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、逐次に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびにＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、異なる頻度で投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）は、１年に１～６回、またはそれよりも多くの頻度で（例えば、毎週、または１か月に２～４回）投与される。一部の態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶは、１回投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、１年に１～６回投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）単独、および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）とともに２回またはそれよりも多くのその後の投与は、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の初回投与後に施行される。一部の態様では、対象は、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶの１回または複数回の追加投与を受ける。一部の態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶの１回目および２回目の投与は、対象に、６か月より長く離して、または１年より長く離して、提供される。一部の態様では、１回目および２回目のＳＭＮ１ ｒＡＡＶ組成物は、同じｒＡＡＶキャプシドタンパク質を含む。一部の態様では、１回目および２回目のＳＭＮ１ ｒＡＡＶ組成物は、異なるｒＡＡＶキャプシドタンパク質を含む。

【0021】

一部の態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶは、１×１０^１０～５×１０^１４ＧＣの用量で投与される。一部の態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶは、２×１０^１０～２×１０^１４ＧＣの用量で投与される。一部の態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶは、３×１０^１３～５×１０^１４ＧＣの用量で投与される。一部の態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶは、２×１０^１４ＧＣの用量で投与される。

【0022】

一部の態様では、用量当たり合計５ｍｇ～６０ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計５ｍｇ～２０ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計１２ｍｇ～５０ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計１２ｍｇ～４８ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計１２ｍｇ～３６ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計２８ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計１２ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯが、対象に投与される。一部の態様では、投与体積は、５ｍＬである。

【0023】

一部の態様では、低分子は、好適な経路（例えば、経口）を介して投与され、ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯは、処置（複数可）に好適な経路、例えば、髄腔内、大槽内空間、静脈内または筋肉内投与を介して、独立して、例えば、（注射または注入を介して）投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象の髄腔内空間に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象の大槽内空間に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の初回および／またはその後の投与は、静脈内または筋肉内に施行される。

【0024】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびにＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の投与は、対象における細胞内ＳＭＮタンパク質レベルを増加させる。一部の態様では、ＳＭＮタンパク質レベルは、対象の頸髄部、胸髄部および腰髄部において増加する（例えば、対象の脳および／または脊髄における運動ニューロンにおいて）。

【0025】

一部の態様では、ＳＭＡを有する対象におけるＳＭＮタンパク質発現は、対象に、有効量のＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびにＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を（例えば、併せてまたは逐次に）投与することによって増加する。一部の態様では、対象は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）で以前に処置されている。一部の態様では、対象は、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶを以前に投与されている。一部の態様では、対象は、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）で以前に処置されている。一部の態様では、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶで以前に処置された対象におけるＳＭＮタンパク質発現は、有効量のＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を対象に投与することによって増加する。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）で以前に処置された対象におけるＳＭＮタンパク質発現は、有効量のＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および／またはＳＭＮ１ ｒＡＡＶを対象に投与することによって増加する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）で以前に処置された対象におけるＳＭＮタンパク質発現は、有効量のＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を対象に投与することによって増加する。

【0026】

一部の態様では、組成物は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）を含む。一部の態様では、組成物は、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）を含む。一部の態様では、組成物は、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を含む。一部の態様では、本明細書に記載される医薬組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。一部の態様では、治療有効量の医薬組成物は、それを必要とする対象に投与される。本明細書に記載される組成物のいずれかは、薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物であり得る。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）を含む医薬組成物は、対象に、低分子薬物を投与するために好適な任意の公知の経路を介して（例えば、経口投与）、投与される。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子を含む医薬組成物は、対象に、組換えＳＭＮ１遺伝子を投与するために好適な任意の公知の経路を介して（例えば、静脈内注射を介して）、投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を含む医薬組成物は、対象に、ＡＳＯを投与するために好適な任意の公知の経路を介して（例えば、髄腔内注射）、投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の１つまたは複数は（例えば、２つまたは３つの別々の組成物として）、対象（例えば、ヒト対象）に、髄腔内経路を介して、投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯの１つまたは複数は（例えば、２つまたは３つの別々の組成物として）、脊柱管、くも膜下腔、脳室または腰部ＣＳＦに、後頭下穿刺によって、または他の好適な経路によって、投与される（例えば、注射、注入を介して、ポンプおよびカテーテルを使用して、または他の好適な技法を介して）。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯの１つまたは複数は（例えば、２つまたは３つの別々の組成物として）、対象（例えば、ヒト対象）に、頭蓋内、脳室内、大脳内、実質内、静脈内または他の好適な経路を介して、投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）は、対象に、経口投与を介して投与されるが、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は（例えば、２つまたは３つの別々の組成物として）、対象（例えば、ヒト対象）に、注射（例えば、静脈内、髄腔内、筋肉内、頭蓋内、脳室内、大脳内または実質内）を介して、投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）は、対象に、経口投与を介して投与されるが、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は（例えば、２つまたは３つの別々の組成物として）、脊柱管、くも膜下腔、脳室または腰部ＣＳＦに、後頭下穿刺によって、または他の好適な経路によって、投与される（例えば、注射、注入を介して、ポンプおよびカテーテルを使用して、または他の好適な技法を介して）。併せてまたは逐次に投与されるかどうかにかかわらず、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）のそれぞれは、当技術分野において公知の任意の好適または適切な手段によって投与されてもよく（例えば、髄腔内、静脈内など）、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、同じ手段によって、または異なる手段によって、投与されてもよい（例えば、同じまたは異なる投与の経路を介して）。

【0027】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）などの生存運動ニューロンタンパク質（ＳＭＮ）に関連する疾患または状態を処置するための医薬（例えば、２つまたは３つの別々の医薬として）の製造において使用される。

【0028】

一部の態様では、本開示は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、有効量のＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および／または組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）を別々の組成物で、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯで以前に処置された対象に投与することを含む、方法に関する。一部の態様では、ＡＳＯ処置は、中止され、低分子および／または組換えＳＭＮ１遺伝子は、補充療法として提供され得る。一部の態様では、ＡＳＯ処置は、継続され、低分子および／または組換えＳＭＮ１遺伝子は、付加療法として（例えば、補助療法として）提供され得る。

【0029】

一部の態様では、本開示は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、有効量のＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および／または全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を別々の組成物で、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）が以前に投与された対象に投与することを含む、方法に関する。一部の態様では、対象は、低分子および／またはＡＳＯの投与が開始された後、任意の追加の組換えＳＭＮ１遺伝子を受けない。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子および／または低分子の１回または複数回の追加投与は、低分子および／またはＡＳＯの投与が開始された後に投与される。一部の態様では、１つまたは複数の療法の投与スケジュールは、付加療法が開始された時に、維持することができ、または変更することができる。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子の投与スケジュールは、ＳＭＮ機能を増加させる低分子および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯの投与が開始された後に、維持することができ、または変更することができる。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯの投与スケジュールは、ＳＭＮ機能を増加させる低分子および／または組換えＳＭＮ１遺伝子の投与が開始された後に、維持され、または変更される。一部の態様では、ＳＭＮ機能遺伝子を増加させる低分子の投与スケジュールは、組換えＳＭＮ１遺伝子および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯの投与が開始された後に、維持され、または変更される。

【0030】

一部の態様では、本開示は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、有効量の組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）および／もしくは全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）または別々の組成物を、ＳＭＮ機能を増加させるＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）で以前に処置された対象に投与することを含む、方法に関する。一部の態様では、低分子処置は、中止され、ＡＳＯおよび／または組換えＳＭＮ１遺伝子は、補充療法として提供され得る。一部の態様では、低分子処置は、継続され、ＡＳＯおよび／または組換えＳＭＮ１遺伝子は、付加療法として（例えば、補助療法として）提供され得る。

【0031】

本開示の他の態様は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶ、または全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させることができるＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を含む別々の組成物に関する。一部の態様では、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ９キャプシドタンパク質を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、ヌシネルセンである。一部の態様では、低分子は、リスジプラムまたはブラナプラムである。一部の態様では、組成物または別々の組成物は、医薬組成物であり、薬学的に許容される担体を含む。

【0032】

本発明の他の態様および利点は、本発明の以下の詳細な説明から容易に明らかである。

【0033】

下記の図面は、本明細書の一部を形成し、本出願のある特定の態様をさらに実証するために含まれ、これは、これらの図面の１つまたは複数を本明細書において示される具体的な態様の詳細な説明と組み合わせて参照することによってより良く理解することができる。

【図面の簡単な説明】

【0034】

【図1】図１は、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸および全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７包含を促進する）アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ヌシネルセン）による組合せ処置を受けている対象におけるより多くの数の運動ニューロン中のＳＭＮ活性の増加したレベルを図示する。

【0035】

【図2】図２は、ＳＭＮ１をコードする核酸の非限定的な例の略図である。

【0036】

【図3-1】図３は、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７包含を促進する）アンチセンスオリゴヌクレオチドの非限定的な例であるヌシネルセンの化学構造を図示する。

【図3-2】図３は、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７包含を促進する）アンチセンスオリゴヌクレオチドの非限定的な例であるヌシネルセンの化学構造を図示する。

【0037】

【図4A-4B】図４Ａ～４Ｂは、非ヒト霊長類における異なる投与の様式後のｒＡＡＶの分布を示す。図４Ａは、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶの腰椎穿刺（ＬＰ）または大槽内（ＩＣＭ）注射後の頸部脊髄、胸部脊髄および腰部脊髄中のｒＡＡＶ分布を示す。図４Ｂは、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶの腰椎穿刺（ＬＰ）、大槽内（ＩＣＭ）注射または静脈内（ＩＶ）注射後の頸部脊髄、胸部脊髄および腰部脊髄中のｒＡＡＶ分布を示す。

【0038】

【図5A-5E】図５Ａ～５Ｅは、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸および全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７包含を促進する）アンチセンスオリゴヌクレオチドの物理的ならびに生物学的適合性を図示する。図５Ａは、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶのＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析を示す。図５Ｂは、全長ＳＭＮ２を増加させるＡＳＯのＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析を示す。図５Ｃは、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶおよび全長ＳＭＮ２を増加させるＡＳＯのＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析を示す。図５Ｄは、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶベクター単独での送達またはＳＭＮ１ ｒＡＡＶベクターとＳＭＮ２ ＡＳＯとの送達のいずれかによるｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞におけるＳＭＮ１ ｒＡＡＶの感染力についてのデータを提供する。結果は、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶの感染力が、共製剤中のＳＭＮ２ ＡＳＯの存在によって有意に影響を受けないことを示す。図５Ｅは、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ、ＳＭＮ２ ＡＳＯまたはその両方による処置後の細胞における細胞内ＳＭＮタンパク質発現レベルおよびＧＥＭ形成を示す。

【0039】

【図6A-6B】図６Ａ～６Ｂは、ＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶベクター中の）またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン、例えば、単一用量中）のいずれかの投与が、投与後に、出生後日数（ＰＮＤ）８に運動機能が部分的にレスキューされ^＊＊、ＰＮＤ１６に運動機能が完全にレスキューされることを示す。それらは、体重が、ＷＴ対照に遅れていることも示す。図６Ａは、ＡＳＯ（ヌシネルセン）の８および１６日後の４つの別々の群の立ち直り反射（ＲＲ）を示す一連のグラフである。図６Ｂは、ＡＳＯ（ヌシネルセン）の８および１６日後の４つの別々の群の体重を示す一連のグラフである。ＲＲ（ＰＮＤ７～１６）および体重の部分的なレスキューは、この前臨床モデルにおいて併用療法の追加の利点についての機会を提供する。

【0040】

【図7A-7B】図７Ａ～７Ｃは、ＳＭＮ１遺伝子治療（ｒＡＡＶベクター中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（ヌシネルセン）による処置についてのプライマリーエンドポイントとして体重およびＲＲを用いる最初の研究の結果を示す。図７Ａは、体重変化を経時的に（日数で）示すグラフである。図７Ｂは、ＲＲ変化を経時的に（日数で）示すグラフである。図７Ｃは、３つの試験群についての条件の概要を示すチャートである。

【図7C】図７Ａ～７Ｃは、ＳＭＮ１遺伝子治療（ｒＡＡＶベクター中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（ヌシネルセン）による処置についてのプライマリーエンドポイントとして体重およびＲＲを用いる最初の研究の結果を示す。図７Ａは、体重変化を経時的に（日数で）示すグラフである。図７Ｂは、ＲＲ変化を経時的に（日数で）示すグラフである。図７Ｃは、３つの試験群についての条件の概要を示すチャートである。

【0041】

【図8A】図８Ａ～８Ｃは、ＳＭＮ１遺伝子治療（ｒＡＡＶベクター中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（ヌシネルセン）による処置についてのプライマリーエンドポイントとして体重およびＲＲを用いる２回目の研究の結果を示す。図８Ａは、３つの試験群についての条件の概要を示すチャートである。図８Ｂは、体重変化を経時的に（日数で）示すグラフである。図８Ｃは、ＲＲ変化を経時的に（日数で）示すグラフである。

【図8B-8C】図８Ａ～８Ｃは、ＳＭＮ１遺伝子治療（ｒＡＡＶベクター中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（ヌシネルセン）による処置についてのプライマリーエンドポイントとして体重およびＲＲを用いる２回目の研究の結果を示す。図８Ａは、３つの試験群についての条件の概要を示すチャートである。図８Ｂは、体重変化を経時的に（日数で）示すグラフである。図８Ｃは、ＲＲ変化を経時的に（日数で）示すグラフである。

【0042】

【図9A-9B】図９Ａ～９Ｂは、ＰＮＤ７～ＰＮＤ１３の体重の変化％の比較を示す。図９Ａは、遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：１×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：１μｇの用量での体重の変化％を示す。図９Ｂは、遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：３×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：３μｇの用量での体重の変化％を示す。

【0043】

【図10A-10B】図１０Ａ～１０Ｂは、ＰＮＤ７～ＰＮＤ１３のＲＲの変化％の比較を示す。図１０Ａは、遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：１×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：１μｇでの用量のＲＲの変化％を示す。図１０Ｂは、遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：３×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：３μｇの用量でのＲＲの変化％を示す。

【0044】

【図11】図１１は、ＳＭＡを処置するために併用療法を使用するニューロン細胞および非ニューロン細胞における相補性を示すモデルを図示する。例えば、療法１は、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）、ＳＭＮ機能を増加させる低分子、またはＡＳＯおよびＳＭＮ機能を増加させる低分子の併用療法（例えば、併せてまたは逐次に投与される）であり得る。療法２は、ＳＭＮ１遺伝子治療、ＳＭＮ機能を増加させる低分子、またはＳＭＮ１遺伝子治療およびＳＭＮ機能を増加させる低分子の併用療法（例えば、併せてまたは逐次に投与される）であり得る。例えば、一部の態様では、療法１は、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）であり、療法２は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子である。療法１および２は、療法１または療法２において使用されない療法を含む、任意の他の療法または併用療法であり得る。

【発明を実施するための形態】

【0045】

詳細な説明
一部の態様では、本出願は、対象における、例えば、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有するヒト対象におけるＳＭＡを処置するための組成物および方法に関する。

【0046】

一部の態様では、本出願は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、対象に、ａ）ＳＭＮ機能を増加させる低分子、およびｂ）生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）タンパク質をコードする組換え核酸を投与することを含む、方法に関する。

【0047】

一部の態様では、本出願は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、対象に、ａ）ＳＭＮ機能を増加させる低分子、およびｂ）全長生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡを増加させるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を投与することを含む、方法に関する。

【0048】

一部の態様では、本出願は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有する対象におけるＳＭＡを処置する方法であって、対象に、ａ）ＳＭＮ機能を増加させる低分子、ｂ）生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）タンパク質をコードする組換え核酸、およびｃ）全長生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）ｍＲＮＡを増加させるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を投与することを含む、方法に関する。

【0049】

本出願は、併用療法を使用して、対象、例えば、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有するヒト対象におけるＳＭＡを処置するための組成物および方法に関する。

【0050】

一部の態様では、併用療法は、ＳＭＡを有する対象に、対象におけるＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびにａ）ＳＭＮ１遺伝子を発現する組換え核酸（例えば、ＳＭＮ１をコードするｒＡＡＶなどのウイルスベクター中の）および／またはｂ）全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）（例えば、ヌシネルセンなどのＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７の包含を促進するＡＳＯ）を、（例えば、併せてまたは逐次に）投与することを含む。「併用療法」、「組合せ処置」、「組合せ治療」または「組合せ処置」は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載される治療（例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子、ＳＭＮ２ ＡＳＯ、ＳＭＮ機能を増加させる低分子、または前述のいずれかの医薬組成物）の１つまたは複数を対象に投与することによる、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を処置するための方法を指す。

【0051】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させることができる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびにＳＭＮ１を発現する組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶ中の）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の投与は、組換え核酸、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）またはＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）の単独のいずれかによる処置と比べて、一部の運動ニューロン中の細胞内ＳＭＮタンパク質レベルの増強および細胞内生存運動ニューロン（ＳＭＮ）タンパク質レベルが上昇する運動ニューロンの数の増加を提供することができる。

【0052】

ＳＭＮ機能を増加させることができる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および／またはＳＭＮ１を発現する組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶ中の）および／または全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯ（例えば、ヌシネルセンなどのＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７の包含を促進するＡＳＯ）の投与のための方法および組成物は、ＳＭＡを有する対象における治療有効レベルのＳＭＮタンパク質を提供するために、および異なるレベルの疾患の重症度を有する対象を処置するためにも、有用であり得る。

【0053】

脊髄性筋萎縮症または近位脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）は、脊髄運動ニューロンの喪失によって特徴付けられる遺伝性の神経変性障害である。ＳＭＡは、早発性の常染色体劣性疾患であり、現在のところ、幼児の中で死因のトップである。ＳＭＡの重症度は、患者の間で変わり、そのため、発症の年齢および運動発達のマイルストーンに応じて異なる型に分類されている。ＳＭＡ０の指定は、出生前の発症、ならびに重度の関節拘縮、顔面両麻痺および呼吸不全を反映することが提案されている。ＳＭＡの出生後形態の３つの型が指定されている。Ｉ型ＳＭＡ（ウェルドニッヒホフマン病とも呼ばれる）は、出生時または生後６か月以内の発症を伴う最も重症の形態であり、典型的には、２年以内に死に至る。Ｉ型ＳＭＡを有する小児は、座ることも歩行することもできず、重症の呼吸機能障害を有する。ＩＩ型ＳＭＡは、最初の２年以内の発症を伴う中間形態である。ＩＩ型ＳＭＡを有する小児は、座ることはできるが、立つことも歩行することもできない。ＩＩＩ型（クーゲルベルグウェランダー病とも呼ばれる）は、１８か月齢～２歳以降に始まり（Lefebvre et al., Hum. Mol. Genet., 1998, 7, 1531-1536）、通常、慢性的に進行する。ＩＩＩ型ＳＭＡを有する小児は、少なくとも幼児期は自力で立つことおよび歩行することができる。成人形態（ＩＶ型）は、３０歳以降の発症を伴う最も穏やかな形態のＳＭＡであり、わずかな症例が報告されている。ＩＩＩ型およびＩＶ型のＳＭＡは、遅発性ＳＭＡとしても公知である。

【0054】

ＳＭＡの分子的機序は、生存運動ニューロン遺伝子１（ＳＭＮ１）の両方のコピーの喪失から生じ、これは、ｓｎＲＮＰのバイオジェネシスおよび再利用に関与すると考えられる複数のタンパク質複合体の一部であるタンパク質のＳＭＮテロメリックとしても公知であり得る。ＳＭＮセントロメリックとしても公知であり得るほぼ同一の遺伝子であるＳＭＮ２は、染色体５ｑ１３上の重複領域中に存在し、疾患の重症度をモジュレートする。正常なＳＭＮ１遺伝子の発現は、単独で、生存運動ニューロン（ＳＭＮ）タンパク質の発現をもたらす。ＳＭＮ１およびＳＭＮ２は、潜在的に同じタンパク質をコードするが、ＳＭＮ２は、エクソン７の＋６位に翻訳的にサイレントな変異を含有し、これは、ＳＭＮ２転写物におけるエクソン７の不十分な包含をもたらす。したがって、優勢な形態のＳＭＮ２は、エクソン７を欠く切断型バージョンであり、これは、不安定および不活性である（Cartegni and Krainer, Nat. Genet., 2002, 30, 377-384）。ＳＭＮ２遺伝子の発現は、およそ１０～２０％のＳＭＮタンパク質、および８０～９０％の不安定／非機能性ＳＭＮデルタ７タンパク質をもたらす。ＳＭＮタンパク質は、スプライソソームのアセンブリーにおいて十分に確立された役割を果たし、ニューロンの軸索および神経終末におけるｍＲＮＡの輸送も媒介し得る。

【0055】

ＳＭＡは、ＳＭＮ１遺伝子の両方の機能性コピーのホモ接合性の喪失によって引き起こされるが、ＳＭＮ２遺伝子は、ＳＭＮ１と同じタンパク質をコードし、そのため、ＳＭＡ患者の遺伝的欠陥を克服する可能性を有する。ＳＭＮ２は、エクソン７の＋６位に翻訳的にサイレントな変異（Ｃ→Ｔ）を含有し、これは、ＳＭＮ２転写物におけるエクソン７の不十分な包含をもたらす。したがって、優勢な形態のＳＭＮ２は、エクソン７を欠くものであり、不安定で不活性である。ＳＭＮ２遺伝子から生じるフルサイズのタンパク質は、ＳＭＮ１と呼ばれる類似の遺伝子から生じるタンパク質と同一である。しかしながら、すべての機能性ＳＭＮタンパク質のうちのわずか１０～１５パーセントが、ＳＭＮ２遺伝子から産生される（残りは、ＳＭＮ１遺伝子から産生される）。典型的には、人々は、それぞれの細胞中に、ＳＭＮ１遺伝子の２つのコピー、およびＳＭＮ２遺伝子の１～２つのコピーを有する。しかしながら、ＳＭＮ２遺伝子のコピーの数はさまざまであり、一部の人々は、最大で８つのコピーを有する。有するＳＭＮ２遺伝子のコピーが多くなると、産生するＳＭＮタンパク質が多くなる。ＳＭＮ２遺伝子の余分なコピーは、ＳＭＡの重症度を修飾し得る。脊髄性筋萎縮症を有するすべての個体は、ＳＭＮ１遺伝子の両方のコピーに変異を有するので、これにより、ＳＭＮタンパク質がＳＭＮ１からわずかに産生されるか、またはまったく産生されず、ＳＭＮ２遺伝子は、ＳＭＮタンパク質の欠如の一部を置き換えるのを助けることができる。脊髄性筋萎縮症を有する人々では、ＳＭＮ２遺伝子の複数のコピーを有することは、通常、高齢期に発生する状態のあまり重症ではない特徴に関連する。ＳＭＮ２遺伝子の１または２つの機能性コピーを有する罹患個体は、一般に、出生時または幼児期に始まる深刻な筋力低下を有する。ＳＭＮ２遺伝子の４つまたはそれよりも多くのコピーを有する罹患個体は、典型的には、成人期まで目立たない場合がある軽症の筋力低下を有する。一部の態様では、本明細書に記載される１つもしくは複数の処置の異なる用量および／または設計は、異なる数のＳＭＮ２遺伝子を有する異なる対象に施行され得る。

【0056】

一部の態様では、細胞内ＳＭＮタンパク質レベルは、運動ニューロンを、ＳＭＮ機能を増加させることができる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）ならびにａ）組換えＳＭＮタンパク質の細胞内発現を促進する組換えＳＭＮ１遺伝子をコードする組換え核酸および／またはｂ）エクソン７を含有する細胞ＳＭＮ２転写物のパーセンテージを増加させ、それによって細胞ＳＭＮ２転写物からの全長ＳＭＮタンパク質の増加した発現をもたらすように、細胞内ＳＭＮ２スプライシングをモジュレートするＡＳＯと接触させることによって増加させることができる。一部の態様では、併用療法は、ＳＭＮ機能を増加させることができる低分子、ＳＭＮ１遺伝子をコードする組換え核酸（本明細書では、組換えＳＭＮ１遺伝子とも称する）および全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの細胞内レベルを、例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７の包含を促進することによって、増加させるＡＳＯ）を投与することを含む。一部の態様では、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡは、ヌシネルセンである。一部の態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの細胞内レベルを増加させることは、ＳＭＡの複数の態様を標的とするのに有用であり、ＳＭＮ２遺伝子の異なるゲノムコピー数を有する患者を含むＳＭＡの異なる型を有する患者を含めて、異なる疾患の重症度を有するある範囲の対象を処置するために有用であり得る。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子および組換えＳＭＮ１遺伝子は、併せて投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子およびＳＭＮ２ ＡＳＯは、併せて投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子、組換えＳＭＮ１遺伝子およびＳＭＮ２ ＡＳＯは、併せて投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子および組換えＳＭＮ１遺伝子は、逐次に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子およびＳＭＮ２ ＡＳＯは、逐次に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子、組換えＳＭＮ１遺伝子およびＳＭＮ２ ＡＳＯは、逐次に投与される。

【0057】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子、組換えＳＭＮ１遺伝子またはＳＭＮ２ ＡＳＯは、別々に製剤化される。一部の態様では、それぞれの分子についての投与の経路は、異なり得、対象に投与される分子の種類によって影響される（例えば、組換え遺伝子、低分子またはアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与するために好適な公知の方法）。

【0058】

一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、組換え遺伝子を対象に送達するために好適な医薬組成物として製剤化される。組換えＳＭＮ１遺伝子の投与は、組換えＳＭＮ１遺伝子を投与するために好適な任意の公知の経路を介してであり得る。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子を含む医薬組成物は、ｒＡＡＶに基づく送達に好適である（例えば、注射用液剤）。一部の態様では、ＳＭＡを処置するための組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）の投与は、注射によって（例えば、静脈内注射、ＣＮＳへの直接注射または任意の他の好適な経路を介して）である。

【0059】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）は、低分子薬物を対象に送達するために好適な医薬組成物として製剤化される（例えば、１つまたは複数の錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤または液剤などの形態において）。ＳＭＮ機能を増加させる低分子の投与は、低分子薬物を投与するために好適な任意の公知の経路を介してであり得る（例えば、経口投与）。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子は、対象に、経口投与によって与えられる。

【0060】

一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、オリゴヌクレオチドを送達するために好適な医薬組成物として（例えば、注射用液剤として）製剤化される。ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の投与は、ＡＳＯを投与するために好適な任意の公知の経路を介してであり得る。一部の態様では、ＳＭＡを処置するためのＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象に、脳室内（ＩＣＶ）注射、静脈内（ＩＶ）注射または髄腔内（ＩＴ）注射によって（例えば、腰椎穿刺（ＬＰ）および／または大槽内（ＩＣＭ）送達を介して）投与される。一部の態様では、ＳＭＡを処置するためのＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象に、髄腔内（ＩＴ）注射によって投与される。

【0061】

一部の態様では、本明細書に記載される医薬組成物のいずれかは、薬学的に許容される担体（例えば、賦形剤）をさらに含む。薬学的に許容される担体は、本明細書で使用される場合、組成物の活性成分および／または遺伝子治療剤（例えば、ｒＡＡＶ）と適合し（および好ましくは、活性成分を安定化することができる）、投与される対象に有害ではない担体を指す。薬学的に許容される担体は、限定されるものではないが、賦形剤、バッファー、１種または複数の好適な塩、界面活性剤、抗酸化剤などを含む、当技術分野において公知の任意の好適な薬学的に許容される担体であり得る。

【0062】

本方法で使用される医薬組成物は、凍結乾燥製剤または水性溶液の形態の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤を含むことができる（Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. (2000) Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. E. Hoover）。

【0063】

ｉｎ ｖｉｖｏ投与のために使用される医薬組成物は、無菌であり得る。これは、限定されるものではないが、滅菌濾過膜を通す濾過を含む、当技術分野において公知の任意の手段によって達成することができる。

【0064】

本明細書に記載される医薬組成物は、限定されるものではないが、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、液剤もしくは懸濁剤、または坐剤などの当技術分野において公知の好適な単位剤形であり得る。

【0065】

一部の態様では、組合せ処置は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子を含む第１の組成物および組換えＳＭＮ１遺伝子を含む別々の第２の組成物を、（例えば、併せてまたは逐次に）投与することを含む。一部の態様では、組合せ処置は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子を含む第１の組成物およびＳＭＮ２ ＡＳＯを含む別々の第２の組成物を、（例えば、併せてまたは逐次に）投与することを含む。一部の態様では、組合せ処置は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子を含む第１の組成物、組換えＳＭＮ１遺伝子を含む別々の第２の組成物およびＳＭＮ２ ＡＳＯを含む別々の第３の組成物を、（例えば、併せてまたは逐次に）投与することを含む。一部の態様では、第１および第２の組成物は、本明細書に定義されるように、併せて投与される。一部の態様では、第１、第２および第３の組成物は、本明細書に定義されるように、併せて投与される。一部の態様では、第１および第２の組成物は、本明細書に定義されるように、対象に逐次に投与される。一部の態様では、第１、第２および第３の組成物は、本明細書に定義されるように、対象に逐次に投与される。

【0066】

並行投与は、本明細書で使用される場合、同時のまたは同じ訪問診療中の異なる時間での、対象への、ＳＭＡを処置するための本明細書に記載される治療（例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子、ＳＭＮ２ ＡＳＯまたはＳＭＮ機能を増加させる低分子）の２つまたはそれよりも多くの投与を指す。例えば、病院、診療所または他の医療センターへの同じ来院の間に、対象は、本明細書に記載される治療の２つまたはそれよりも多くを投与されるが、投与は、個々の治療によって規定されるように、相隔たり得る。

【0067】

逐次投与は、本明細書で使用される場合、異なる投与スケジュールの下、ＳＭＡを処置するための本明細書に記載される治療（例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子、ＳＭＮ２ ＡＳＯまたはＳＭＮ機能を増加させる低分子）の２つまたはそれよりも多くの投与を指す。例えば、治療は、異なる訪問診療中の、異なる日、週、月または年で投与されてもよい。本明細書に記載される治療は、（例えば、医師による処置計画において決定される）任意の順序で、対象に投与され得る。一部の態様では、逐次投与は、異なる頻度または投与スケジュールでの本明細書に記載される組換えＳＭＮ１遺伝子、ＳＭＮ２ ＡＳＯおよび／またはＳＭＮ機能を増加させる低分子のそれぞれの投与を含む。

【0068】

したがって、一部の態様では、本明細書に記載される第１および第２の組成物は、異なる時間に（例えば、１日の異なる時間で、同じ週もしくは月の異なる日に、または異なる週、月もしくは年に）、別々に対象に投与される。一部の態様では、本明細書に記載される第１、第２および第３の組成物は、異なる時間に（例えば、１日の異なる時間で、同じ週の異なる日に、または異なる週に）、別々に対象に投与される。一部の態様では、本明細書に記載される第１および第２の組成物は、異なる頻度で投与される。一部の態様では、本明細書に記載される第１、第２および第３の組成物は、異なる頻度で投与される。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）を含む組成物は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）を含む組成物よりも少ない頻度で投与される。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）を含む組成物は、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を含む組成物またはＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）を含む組成物よりも少ない頻度で投与される。

【0069】

一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子は、対象がＳＭＮ機能を増加させる低分子またはＳＭＮ２ ＡＳＯで処置される前に、対象に投与される。しかしながら、他の態様では、対象は、組換えＳＭＮ１遺伝子を投与される前に、ＳＭＮ機能を増加させる低分子および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯで既に処置されている。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯを既に受けている対象に投与される。

【0070】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子は、対象が組換えＳＭＮ１遺伝子および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯで処置される前に、対象に投与される。しかしながら、他の態様では、対象は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子を投与される前に、組換えＳＭＮ１遺伝子および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯで処置される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子は、組換えＳＭＮ１遺伝子および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ処置を既に受けている対象に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象が組換えＳＭＮ１遺伝子および／またはＳＭＮ機能を増加させる低分子で処置される前に、対象に投与される。しかしながら、他の態様では、対象は、ＳＭＮ２ ＡＳＯを投与される前に、組換えＳＭＮ１遺伝子および／またはＳＭＮ機能を増加させる低分子で処置される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、組換えＳＭＮ１遺伝子および／またはＳＭＮ機能を増加させる低分子を既に受けている対象に投与される。

【0071】

一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）もしくはＳＭＮ２ ＡＳＯ単独、または組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の１回、２回またはそれよりも多くのその後の投与は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）の初回投与後に施行される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）もしくはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）単独、またはＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の１回、２回またはそれよりも多くのその後の投与は、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）の初回投与後に施行される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）もしくは組換えＳＭＮ１遺伝子、またはＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）の１回、２回またはそれよりも多くのその後の投与は、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の初回投与後に施行される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）の１回、２回またはそれよりも多くのその後の投与は、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の初回投与後に施行される。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）単独の初回投与後に投与される。

【0072】

ｉｎ ｖｉｔｒｏでＳＭＮ発現および活性レベルを測定するための種々のアッセイが存在する。例えば、上記で引用したTanguy et al, 2015を参照されたい。本明細書に記載される方法は、ＳＭＡまたはその症状の処置のための任意の他の治療と組み合わせることもできる。ＳＭＡのための現在の標準治療の議論を提供するWang et al, Consensus Statement for Standard of Care in Spinal Muscular Atrophy、およびhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK1352/ (Prior TW, Leach ME, Finanger E. Spinal Muscular Atrophy. 2000 Feb 24. GeneReviews)も参照されたい。例えば、ＳＭＡにおいて栄養摂取が懸案される場合、胃瘻チューブの留置が適切である。呼吸機能の悪化につれて、気管切開術または非侵襲性の呼吸補助が提供される。睡眠呼吸障害は、連続的な陽性気道内圧の夜間の使用により処置することができる。ＳＭＡ ＩＩおよびＳＭＡ ＩＩＩを有する個体における脊柱側弯の手術は、努力肺活量が３０％～４０％を超える場合、安全に行うことができる。電動車椅子および他の機器は、クオリティオブライフを改善し得る。参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，２１１，６３１号も参照されたい。

【0073】

ＳＭＮ機能を増加させることができる低分子
一部の態様では、医薬組成物は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）を含み、対象におけるＳＭＡを処置するために、（ｉ）組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）を含む医薬組成物（複数可）および／または（ｉｉ）ＳＭＮ２ ＡＳＯを含む医薬組成物（複数可）との組合せで（例えば、並行または逐次処置において）使用される。

【0074】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子薬物は、ＳＭＮ遺伝子（例えば、ＳＭＮ１またはＳＭＮ２）のスプライシングをモジュレートし、それを安定化し、および／またはその転写もしくは翻訳を増加させることができる。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子薬物は、それを必要とする対象に投与された場合に、組成物中の他の活性剤（例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）の活性（例えば、効力および／または有効性）を改善することができる。

【0075】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子薬物は、スプライスモジュレーターである。一部の態様では、スプライスモジュレーターは、ＳＭＮ２スプライスモジュレーターである。一部の態様では、スプライスモジュレーターは、７－二置換フェニルテトラサイクリンである。７－置換フェニルテトラサイクリンＳＭＮ２スプライスモジュレーターの非限定的な例は、国際公開第２０１３／１８１３９１号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、スプライスモジュレーターは、置換イソインドリノンである。置換イソインドリノンＳＭＮ２スプライスモジュレーターの非限定的な例は、米国特許出願公開第２００９／００３１４３５号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、スプライスモジュレーターは、置換カルバゾール誘導体である。ＳＭＮ２スプライスモジュレーターとして作用する置換カルバゾール誘導体の非限定的な例は、国際公開第２００５／０２３２５５号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＳＭＮ２スプライスモジュレーターは、置換１，４－ジアゼパンである。ＳＭＮ２スプライスモジュレーターとして作用する置換１，４－ジアゼパンの非限定的な例は、国際公開第２０１９／０２８４４０号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＳＭＮ２スプライスモジュレーターは、置換ピリダジンである。ＳＭＮ２スプライスモジュレーターとして作用する置換ピリダジンの非限定的な例は、国際公開第２０１５／０１７５８９号、国際公開第２０１４／０２８４５９号、米国特許第１０，１９５，１９６号、米国特許第９，５４５，４０４号、米国特許第８，７２９，２６３号および国際公開第２０１５／１７３１８１号に記載されており、それらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0076】

一部の態様では、置換ピリダジンは、式（Ｉ’）の化合物：

【化1】

またはその薬学的に許容される塩である
［式中、
Ａは、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル（ここで、２個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基は、それらが結合する原子と組み合わされて、５～６員環を形成することができ、かつオキソ、オキシムおよびヒドロキシから選択される０または１個の置換基で置換されている）、ハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、ジハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ－、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、ハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、ジハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヘテロアリール、ヒドロキシで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルキル、アリールで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、－ヘテロアリール、－ＮＨＣ（Ｏ）－、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－、ヘテロアリール、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、ヘテロアリール、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルＮＨＣ（Ｏ）－ヘテロアリール、３～７員シクロアルキル、５～７員シクロアルケニル、またはＳ、ＯおよびＮから独立して選択される１もしくは２個のヘテロ原子を含有する５、６もしくは９員複素環から独立して選択される０、１、２または３個の置換基で置換された２－ヒドロキシ－フェニルであり、ここで、ヘテロアリールは、５、６または９個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有し、オキソ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－ＯＨ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、４～７員複素環Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され；あるいは
Ａは、必要に応じて、ヒドロキシにより３位が置換され、ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_５アルコキシから選択される０、１または２個の置換基でさらに置換された２－ナフチルであり、ここで、前記アルコキシは、無置換であるか、またはヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）_２Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アルキレン４～７員複素環、４～７員複素環ならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換され；あるいは
Ａは、１～３個の環窒素原子を有する６員ヘテロアリールであり、前記６員ヘテロアリールは、フェニル、または５もしくは６個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される１もしくは２個の環ヘテロ原子を有し、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１もしくは２個の置換基で置換されたヘテロアリールによって置換されている；あるいは
Ａは、９～１０個の環原子およびＮ、ＯまたはＳから独立して選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有する二環式ヘテロアリールであり、前記二環式ヘテロアリールは、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_４アルキニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシならびにヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノおよびモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され；あるいは
Ａは、１２または１３個の環原子およびＮ、ＯまたはＳから独立して選択される１、２もしくは３個の環ヘテロ原子を有する三環式ヘテロアリールであり、前記三環式ヘテロアリールは、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_４アルキニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、ヒドロキシで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノならびにヘテロアリールから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され、ここで、前記ヘテロアリールは、５、６または９個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有し、オキソ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－ＯＨ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、４～７員複素環Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され；
Ｂは、式の基：

【化2】

［式中、
ｍ、ｎおよびｐは、０または１から独立して選択され；
Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３およびＲ_４は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択され、前記アルキルは、必要に応じて、ヒドロキシ、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ（akylamino）で置換され；
Ｒ_５およびＲ_６は、水素およびフッ素から独立して選択され；あるいは
ＲおよびＲ_３は、組み合わされて、Ｎ、ＯまたはＳから選択される０または１個のさらなる環ヘテロ原子を有する縮合５または６員複素環式環を形成し；
Ｒ_１およびＲ_３は、組み合わされて、Ｃ_１～Ｃ_３アルキレン基を形成し；
Ｒ_１およびＲ_５は、組み合わされて、Ｃ_１～Ｃ_３アルキレン基を形成し；
Ｒ_３およびＲ_４は、それらが結合する炭素原子と組み合わされて、スピロ環式Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキルを形成し；
Ｘは、ＣＲ_ＡＲ_Ｂ、Ｏ、ＮＲ_７または結合であり；
Ｒ_７は、水素またはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり；
Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、水素およびＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択されるか、またはＲ_ＡおよびＲ_Ｂは、組み合わされて、二価Ｃ_２～Ｃ_５アルキレン基を形成し；
Ｚは、ＣＲ_８またはＮであり；ＺがＮである場合、Ｘは結合であり；
Ｒ_８は、水素であるか、またはＲ_６と組み合わされて、二重結合を形成する］
であり；あるいは
Ｂは、式の基：

【化3】

［式中、
ｐおよびｑは、０、１および２からなる群から独立して選択され；
Ｒ_９およびＲ_１３は、水素およびＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択され；
Ｒ_１０およびＲ_１４は、水素、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノならびにＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択され、前記アルキルは、必要に応じて、ヒドロキシ、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換され；
Ｒ_１１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノであり；
Ｒ_１２は、水素またはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり；あるいは
Ｒ_９およびＲ_１０は、組み合わされて、４～７個の環原子を有する飽和アザ環を形成し、前記飽和アザ環は、必要に応じて、１～３個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で置換され；あるいは
Ｒ_１１およびＲ_１２は、組み合わされて、４～７個の環原子を有する飽和アザ環を形成し、前記飽和アザ環は、必要に応じて、１～３個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で置換されている］
であり；
Ｃは、原子価が許容するかぎり、Ｈまたは非存在である］。

【0077】

一部の態様では、置換ピリダジンは、式（Ｉ）の化合物：

【化4】

またはその薬学的に許容される塩である
［式中、
Ａは、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル（ここで、２個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基は、それらが結合する原子と組み合わされて、５～６員環を形成することができ、かつオキソ、オキシムおよびヒドロキシから選択される０または１個の置換基で置換されている）、ハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、ジハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ－、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、ハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、ジハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヘテロアリール、ヒドロキシで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルキル、アリールで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、－ヘテロアリール、－ＮＨＣ（Ｏ）－、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－、ヘテロアリール、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、ヘテロアリール、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルＮＨＣ（Ｏ）－ヘテロアリール、３～７員シクロアルキル、５～７員シクロアルケニル、またはＳ、ＯおよびＮから独立して選択される１もしくは２個のヘテロ原子を含有する５、６もしくは９員複素環から独立して選択される０、１、２または３個の置換基で置換された２－ヒドロキシ－フェニルであり、ここで、ヘテロアリールは、５、６または９個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有し、オキソ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－ＯＨ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、４～７員複素環Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され；あるいは
Ａは、必要に応じて、ヒドロキシにより３位が置換され、ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_５アルコキシから選択される０、１または２個の置換基でさらに置換された２－ナフチルであり、ここで、前記アルコキシは、無置換であるか、またはヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）_２Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アルキレン４～７員複素環、４～７員複素環ならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換され；あるいは
Ａは、１～３個の環窒素原子を有する６員ヘテロアリールであり、前記６員ヘテロアリールは、フェニル、または５もしくは６個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される１もしくは２個の環ヘテロ原子を有し、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１もしくは２個の置換基で置換されたヘテロアリールによって置換されている；あるいは
Ａは、９～１０個の環原子およびＮ、ＯまたはＳから独立して選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有する二環式ヘテロアリールであり、前記二環式ヘテロアリールは、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_４アルキニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシならびにヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノおよびモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され；あるいは
Ａは、１２または１３個の環原子およびＮ、ＯまたはＳから独立して選択される１、２もしくは３個の環ヘテロ原子を有する三環式ヘテロアリールであり、前記三環式ヘテロアリールは、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_４アルキニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、ヒドロキシで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノならびにヘテロアリールから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され、ここで、前記ヘテロアリールは、５、６または９個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有し、オキソ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－ＯＨ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ（mono- and di-Ci-C₄alkylamino）、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、４～７員複素環Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され；
Ｂは、式の基：

【化5】

［式中、
ｍ、ｎおよびｐは、０または１から独立して選択され；
Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３およびＲ_４は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択され、前記アルキルは、必要に応じて、ヒドロキシ、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換され；
Ｒ_５およびＲ_６は、水素およびフッ素から独立して選択され；あるいは
ＲおよびＲ_３は、組み合わされて、Ｎ、ＯまたはＳから選択される０または１個のさらなる環ヘテロ原子を有する縮合５または６員複素環式環を形成し；
Ｒ_１およびＲ_３は、組み合わされて、Ｃ_１～Ｃ_３アルキレン基を形成し；
Ｒ_１およびＲ_５は、組み合わされて、Ｃ_１～Ｃ_３アルキレン基を形成し；
Ｒ_３およびＲ_４は、それらが結合する炭素原子と組み合わされて、スピロ環式Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキルを形成し；
Ｘは、ＣＲ_ＡＲ_Ｂ、Ｏ、ＮＲ_７または結合であり；
Ｒ_７は、水素またはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり；
Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、水素およびＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択されるか、またはＲ_ＡおよびＲ_Ｂは、組み合わされて、二価Ｃ_２～Ｃ_５アルキレン基を形成し；
Ｚは、ＣＲ_８またはＮであり；ＺがＮである場合、Ｘは結合であり；
Ｒ_８は、水素であるか、またはＲ_６と組み合わされて、二重結合を形成する］
であり；あるいは
Ｂは、式の基：

【化6】

［式中、
ｐおよびｑは、０、１および２からなる群から独立して選択され；
Ｒ_９およびＲ_１３は、水素およびＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択され；
Ｒ_１０およびＲ_１４は、水素、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノならびにＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択され、前記アルキルは、必要に応じて、ヒドロキシ、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換され；
Ｒ_１１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノであり；
Ｒ_１２は、水素またはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり；あるいは
Ｒ_９およびＲ_１０は、組み合わされて、４～７個の環原子を有する飽和アザ環を形成し、前記飽和アザ環は、必要に応じて、１～３個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で置換され；あるいは
Ｒ_１１およびＲ_１２は、組み合わされて、４～７個の環原子を有する飽和アザ環を形成し、前記飽和アザ環は、必要に応じて、１～３個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で置換されている］
である。

【0078】

一部の態様では、Ａは、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル（ここで、２個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基は、それらが結合する原子と組み合わされて、５～６員環を形成することができ、かつオキソ、オキシムおよびヒドロキシから選択される０または１個の置換基で置換されている）、ハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、ジハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ－、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、ハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、ジハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヘテロアリール、ヒドロキシで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルキル、アリールで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、－ヘテロアリール、－ＮＨＣ（Ｏ）－、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－、ヘテロアリール、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、ヘテロアリール、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルＮＨＣ（Ｏ）－ヘテロアリール、３～７員シクロアルキル、５～７員シクロアルケニル、またはＳ、ＯおよびＮから独立して選択される１もしくは２個のヘテロ原子を含有する５、６もしくは９員複素環から独立して選択される０、１、２または３個の置換基で置換された２－ヒドロキシ－フェニルであり、ここで、ヘテロアリールは、５、６または９個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有し、オキソ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－ＯＨ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、４～７員複素環Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換されている。一部の態様では、Ａは、式：

【化7】

［式中、Ｒ_１６は、１個の環窒素原子およびＮ、ＯまたはＳから選択される０または１個のさらなる環ヘテロ原子を有する５員ヘテロアリールであり、ここで、ヘテロアリールは、必要に応じて、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルで置換されている］である。一部の態様では、Ａは、式：

【化8】

である。一部の態様では、Ａは、式：

【化9】

［式中、Ｒ_１６は、１個の環窒素原子およびＮ、ＯまたはＳから選択される０または１個のさらなる環ヘテロ原子を有する５員ヘテロアリールであり、ここで、ヘテロアリールは、必要に応じて、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルで置換されている］である。一部の態様では、Ａは、式：

【化10】

である。

【0079】

一部の態様では、Ａは、必要に応じて、ヒドロキシにより３位が置換され、ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_５アルコキシから選択される０、１または２個の置換基でさらに置換された２－ナフチルであり、ここで、前記アルコキシは、無置換であるか、またはヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）_２Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アルキレン４～７員複素環、４～７員複素環ならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換されている。

【0080】

一部の態様では、Ａは、１～３個の環窒素原子を有する６員ヘテロアリールであり、前記６員ヘテロアリールは、フェニル、または５もしくは６個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される１もしくは２個の環ヘテロ原子を有し、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１もしくは２個の置換基で置換されたヘテロアリールによって置換されている。

【0081】

一部の態様では、Ａは、９～１０個の環原子およびＮ、ＯまたはＳから独立して選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有する二環式ヘテロアリールであり、前記二環式ヘテロアリールは、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_４アルキニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシならびにヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノおよびモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換されている。

【0082】

一部の態様では、Ａは、１２または１３個の環原子およびＮ、ＯまたはＳから独立して選択される１、２もしくは３個の環ヘテロ原子を有する三環式ヘテロアリールであり、前記三環式ヘテロアリールは、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_４アルキニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、ヒドロキシで置換されたＣ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノならびにヘテロアリールから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換され、ここで、前記ヘテロアリールは、５、６または９個の環原子、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１、２または３個の環ヘテロ原子を有し、オキソ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_１～Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_３～Ｃ_７シクロアルキル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル－ＯＨ、トリハロＣ_１～Ｃ_４アルキル、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキルアミノ、ヒドロキシＣ_１～Ｃ_４アルキル、４～７員複素環Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノＣ_１～Ｃ_４アルキルならびにモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択される０、１または２個の置換基で置換されている。

【0083】

一部の態様では、Ｂは、式の基：

【化11】

［式中、
ｍ、ｎおよびｐは、０または１から独立して選択され；
Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３およびＲ_４は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択され、前記アルキルは、必要に応じて、ヒドロキシ、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換され；
Ｒ_５およびＲ_６は、水素およびフッ素から独立して選択され；あるいは
ＲおよびＲ_３は、組み合わされて、Ｎ、ＯまたはＳから選択される０または１個のさらなる環ヘテロ原子を有する縮合５または６員複素環式環を形成し；
Ｒ_１およびＲ_３は、組み合わされて、Ｃ_１～Ｃ_３アルキレン基を形成し；
Ｒ_１およびＲ_５は、組み合わされて、Ｃ_１～Ｃ_３アルキレン基を形成し；
Ｒ_３およびＲ_４は、それらが結合する炭素原子と組み合わされて、スピロ環式Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキルを形成し；
Ｘは、ＣＲ_ＡＲ_Ｂ、Ｏ、ＮＲ_７または結合であり；
Ｒ_７は、水素またはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり；
Ｒ_ＡおよびＲ_Ｂは、水素およびＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択されるか、またはＲ_ＡおよびＲ_Ｂは、組み合わされて、二価Ｃ_２～Ｃ_５アルキレン基を形成し；
Ｚは、ＣＲ_８またはＮであり；ＺがＮである場合、Ｘは結合であり；
Ｒ_８は、水素であるか、またはＲ_６と組み合わされて、二重結合を形成する］
である。

【0084】

一部の態様では、Ｂは、式の基：

【化12】

［式中、
ｐおよびｑは、０、１および２からなる群から独立して選択され；
Ｒ_９およびＲ_１３は、水素およびＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択され；
Ｒ_１０およびＲ_１４は、水素、アミノ、モノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノならびにＣ_１～Ｃ_４アルキルから独立して選択され、前記アルキルは、必要に応じて、ヒドロキシ、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノで置換され；
Ｒ_１１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、アミノまたはモノおよびジ－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアミノであり；
Ｒ_１２は、水素またはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり；あるいは
Ｒ_９およびＲ_１０は、組み合わされて、４～７個の環原子を有する飽和アザ環を形成し、前記飽和アザ環は、必要に応じて、１～３個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で置換され；あるいは
Ｒ_１１およびＲ_１２は、組み合わされて、４～７個の環原子を有する飽和アザ環を形成し、前記飽和アザ環は、必要に応じて、１～３個のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で置換されている］
である。

【0085】

一部の態様では、Ｂは、

【化13】

である。一部の態様では、Ｂは、

【化14】

である。一部の態様では、Ｂは、

【化15】

である。一部の態様では、Ｂは、

【化16】

である。一部の態様では、Ｂは、

【化17】

［式中、Ｒ_１７は、Ｈまたは無置換メチルである］である。一部の態様では、Ｂは、

【化18】

［式中、Ｒ_１７は、Ｈまたは無置換メチルである］である。一部の態様では、Ｂは、

【化19】

［式中、Ｒ_１７は、Ｈまたは無置換メチルである］である。一部の態様では、Ｂは、

【化20】

である。一部の態様では、Ｂは、

【化21】

である。一部の態様では、Ｂは、

【化22】

である。

【0086】

一部の態様では、式（Ｉ’）の置換ピリダジンは、式（ＩＩ’）：

【化23】

またはその薬学的に許容される塩
［式中、Ｒ_１６は、１個の環窒素原子およびＮ、ＯまたはＳから選択される０または１個のさらなる環ヘテロ原子を有する５員ヘテロアリールであり、ここで、ヘテロアリールは、必要に応じて、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルで置換されている］である。

【0087】

一部の態様では、式（Ｉ）の置換ピリダジンは、式（ＩＩ）：

【化24】

またはその薬学的に許容される塩
［式中、Ｒ_１６は、１個の環窒素原子およびＮ、ＯまたはＳから選択される０または１個のさらなる環ヘテロ原子を有する５員ヘテロアリールであり、ここで、前記ヘテロアリールは、必要に応じて、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルで置換されている］
である。一部の態様では、Ｒ_１６は、チオフェン、フラン、ピロール、ジヒドロピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピラジン、イソチアゾール、イソキサゾール、トリアゾール、テトラゾール、オキサゾール、イソキサゾール、チアゾール、イソチアゾールである。一部の態様では、Ｒ_１６は、ピラゾールである。一部の態様では、Ｒ_１６は、

【化25】

である。

【0088】

一部の態様では、式（Ｉ）の置換ピリダジンは、式：

【化26】

またはその薬学的に許容される塩である。

【0089】

一部の態様では、式（Ｉ）の置換ピリダジンは、式：

【化27】

またはその薬学的に許容される塩である。

【0090】

一部の態様では、置換ピリダジンは、式（ＩＩＩ）の化合物：

【化28】

またはその薬学的に許容される塩
［式中、Ｒ^１は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^２は、水素、シアノ、Ｃ_１～７アルキル、Ｃ_１～７ハロアルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～７アルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
Ａは、Ｎ－ヘテロシクロアルキルまたはＮＲ^１２Ｒ^１３であり、ここで、Ｎ－ヘテロシクロアルキルは、１または２個の窒素環原子を含み、必要に応じて、Ｒ^１４から選択される１、２、３または４個の置換基で置換され；
Ｒ^１２は、１個の窒素環原子を含むヘテロシクロアルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルは、必要に応じて、Ｒ^１４から選択される１、２、３または４個の置換基で置換され；
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１～７アルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
Ｒ^１４は、水素、Ｃ_１～７アルキル、アミノ、アミノ－Ｃ_１～７アルキル、Ｃ_３～８シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択されるか、または２個のＲ^１４は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
ただし、Ａが、１個の窒素環原子のみを含むＮ－ヘテロシクロアルキルである場合、少なくとも１個のＲ^１４置換基は、アミノまたはアミノ－Ｃ_１～７アルキルである］
である。

【0091】

一部の態様では、式（ＩＩＩ）の化合物は、式：

【化29】

またはその薬学的に許容される塩
［式中、
Ｒ^１は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^２は、水素、シアノ、Ｃ_１～７アルキル、Ｃ_１～７ハロアルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～７アルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
Ａは、１または２個の窒素環原子を含むＮ－ヘテロシクロアルキルであり、ここで、Ｎ－ヘテロシクロアルキルは、必要に応じて、Ｒ^１４から選択される１、２、３または４個の置換基で置換され；
Ｒ^１４は、水素、Ｃ_１～７アルキル、アミノ、アミノ－Ｃ_１～７アルキル、Ｃ_３～８シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択されるか、または２個のＲ^１４は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
ただし、Ａが、１個の窒素環原子のみを含むＮ－ヘテロシクロアルキルである場合、少なくとも１個のＲ^１４置換基は、アミノまたはアミノ－Ｃ_１～７アルキルである］
である。

【0092】

一部の態様では、Ｒ^１は、Ｃ_１～７アルキルである。一部の態様では、Ｒ^１は、メチルである。

【0093】

一部の態様では、Ｒ^２は、水素またはＣ_１～７アルキルである。一部の態様では、Ｒ^２は、水素またはメチルである。一部の態様では、Ｒ^２は、水素である。一部の態様では、Ｒ^２は、メチルである。

【0094】

一部の態様では、Ｒ^３は、水素またはＣ_１～７アルキルである。一部の態様では、Ｒ^３は、水素またはメチルである。一部の態様では、Ｒ^３は、水素である。一部の態様では、Ｒ^３は、メチルである。

【0095】

一部の態様では、Ａは、Ｎ－ヘテロシクロアルキルまたはＮＲ^１２Ｒ^１３であり、ここで、Ｎ－ヘテロシクロアルキルは、１または２個の窒素環原子を含み、必要に応じて、Ｒ^１４から選択される１、２、３または４個の置換基で置換され；
Ｒ^１２が、１個の窒素環原子を含むヘテロシクロアルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルは、必要に応じて、Ｒ^１４から選択される１、２、３または４個の置換基で置換され；
Ｒ^１３が、水素、Ｃ_１～７アルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
Ｒ^１４が、水素、Ｃ_１～７アルキル、アミノ、アミノ－Ｃ_１～７アルキル、Ｃ_３～８シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択されるか、または２個のＲ^１４は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
ただし、Ａが、１個の窒素環原子のみを含むＮ－ヘテロシクロアルキルである場合、少なくとも１個のＲ^１４置換基は、アミノまたはアミノ－Ｃ_１～７アルキルである。

【0096】

一部の態様では、Ｒ^１２は、必要に応じて、Ｒ^１４から選択される１、２、３または４個の置換基で置換されたピペリジニルである。

【0097】

一部の態様では、Ａは、式：

【化30】

［式中、
Ｘは、ＮまたはＣＨであり；
Ｒ^４は、水素、Ｃ_１～７アルキルまたは－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０であり；
Ｒ^５は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^６は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^７は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^８は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^９およびＲ^１０は、水素、Ｃ_１～７アルキルおよびＣ_３～８シクロアルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１～７アルキルまたはＣ_３～８シクロアルキルであり；
ｎは、０、１または２であり；
ｍは、０、１、２または３であり；
あるいは、Ｒ^４およびＲ^５は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^４およびＲ^７は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^５およびＲ^６は、一緒にＣ_２～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^５およびＲ^７は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^５およびＲ^９は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^７およびＲ^８は、一緒にＣ_２～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^７およびＲ^９は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^９およびＲ^１０は、一緒にＣ_２～７アルキレンを形成し；
ただし、Ｘが、ＣＨである場合、Ｒ^４は、－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０であり；
ただし、Ｘが、Ｎであり、Ｒ^４が、－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０である場合、ｍは、２または３である］
のものである。

【0098】

一部の態様では、Ａは、式：

【化31】

［式中、
Ｘは、ＮまたはＣＨであり；
Ｒ^４は、水素、Ｃ_１～７アルキルまたは－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０であり；
Ｒ^５は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^６は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^７は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^８は、水素またはＣ_１～７アルキルであり；
Ｒ^９およびＲ^１０は、水素、Ｃ_１～７アルキルおよびＣ_３～８シクロアルキルから独立して選択され；
ｎは、０、１または２であり；
ｍは、０、１、２または３であり；
あるいは、Ｒ^４およびＲ^５は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^４およびＲ^７は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^５およびＲ^６は、一緒にＣ_２～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^５およびＲ^７は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^５およびＲ^９は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^７およびＲ^８は、一緒にＣ_２～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^７およびＲ^９は、一緒にＣ_１～７アルキレンを形成し；
あるいは、Ｒ^９およびＲ^１０は、一緒にＣ_２～７アルキレンを形成し；
ただし、Ｘが、ＣＨである場合、Ｒ^４は、－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０であり；
ただし、Ｘが、Ｎであり、Ｒ^４が、－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０である場合、ｍは、２または３である］
のものである。

【0099】

一部の態様では、Ｘは、Ｎである。

【0100】

一部の態様では、ｎは、１である。

【0101】

一部の態様では、Ｒ^６は、水素、メチルまたは－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＲ^９Ｒ^１０である。一部の態様では、Ｒ^６は、水素またはメチルである。一部の態様では、Ｒ^６は、水素である。一部の態様では、Ｒ^６は、メチルである。

【0102】

一部の態様では、Ｒ^７は、水素またはメチルである。

【0103】

一部の態様では、ｍは、０である。

【0104】

一部の態様では、Ｒ^４およびＲ^５は、一緒にプロピレンを形成する。一部の態様では、Ｒ^５およびＲ^６は、一緒にエチレンを形成する。一部の態様では、Ｒ^９およびＲ^１０は、一緒にブチレンを形成する。

【0105】

一部の態様では、Ａは、

【化32】

である。一部の態様では、Ａは、

【化33】

である。一部の態様では、Ａは、

【化34】

である。一部の態様では、Ａは、

【化35】

である。一部の態様では、Ａは、

【化36】

である。一部の態様では、Ａは、

【化37】

である。一部の態様では、Ａは、

【化38】

である。一部の態様では、Ａは、

【化39】

である。一部の態様では、Ａは、

【化40】

である。

【0106】

一部の態様では、Ａは、

【化41】

である。

【0107】

一部の態様では、式（ＩＩＩ）の置換ピリダジンは、式：

【化42】

またはその薬学的に許容される塩である。

【0108】

一部の態様では、ＳＭＮ２スプライスモジュレーターは、リスジプラムである。一部の態様では、ＳＭＮ２スプライスモジュレーターは、ブラナプラムである。

【0109】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子薬物は、ｍＲＮＡデキャッピング酵素の活性をモジュレートする。一部の態様では、低分子薬物は、ｍＲＮＡデキャッピング酵素の活性を阻害する。一部の態様では、低分子薬物は、ＤｃｐＳ阻害剤である。一部の態様では、ＤｃｐＳ阻害剤は、Ｃ５置換２，４－ジアミノキナゾリン（２，４－ＤＡＱ）である。一部の態様では、２，４－ＤＡＱは、ＲＧ３０３９である。一部の態様では、ＤｃｐＳ阻害剤は、２，４－ＤＡＱ誘導体である。一部の態様では、２，４－ＤＡＱ誘導体は、Ｄ１５６８４４である。

【0110】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子薬物は、ＨＤＡＣ阻害剤である。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、桂皮酸化合物およびそれら由来の誘導体である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用する桂皮酸化合物の非限定的な例は、米国特許出願公開第２０１０／０２５６４０１号および欧州特許出願公開第２２３６５０３号に記載されており、それらの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、ヒドロキサム酸インダン誘導体である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用するヒドロキサム酸インダン誘導体の非限定的な例は、国際公開第２０１７／２１８，９５０号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、３－スピロ－７－ヒドロキサム酸テトラリンである。ＨＤＡＣ阻害剤として作用する３－スピロ－７－ヒドロキサム酸テトラリンの非限定的な例は、国際公開第２０１６／１６８６６０号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、３－アルキル二環式［４，５，０］ヒドロキサム酸である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用する３－アルキル二環式［４，５，０］ヒドロキサム酸の非限定的な例は、国際公開第２０１６／１２６７２２号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、縮合ピリミジンヒドロキサメート誘導体である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用する縮合ピリミジンヒドロキサメート誘導体の非限定的な例は、米国特許出願公開第２０１８／０２６５５１２号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、テトラヒドロインドールおよび／またはテトラヒドロインダゾール誘導体である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用するテトラヒドロインドールおよびテトラヒドロインダゾール（tetrahydroindazoled）の非限定的な例は、国際公開第２００９１１４４７０号Ａ２に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、ベンズイミダゾールである。ＨＤＡＣ阻害剤として作用するベンズイミダゾールの非限定的な例は、国際公開第２００５／０２８４４７号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、２－プロピルペンタン酸誘導体である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用する２－プロピルペンタン酸の非限定的な例は、米国特許出願公開第２０１２／００７１５５４号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、ピメリン酸誘導体である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用するピメリン酸誘導体の非限定的な例は、国際公開第２０１０／０２８１９３号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、６－アミノヘキサン酸である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用する６－アミノヘキサン酸の非限定的な例は、米国特許第９，７９６，６６４号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、ヒドロキサム酸化合物である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用するヒドロキサム酸化合物の非限定的な例は、国際公開第２００６／１０１４５６号、米国特許出願公開第２０１０／０２６１７１０号に記載されており、それらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、ヒドロキサム酸化合物である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用するヒドロキサム酸化合物の非限定的な例は、米国特許出願公開第２０１０／０１０５７２１号、米国特許出願公開第２００８／００８５８９６号に記載されており、それらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、ベンゾチオフェン誘導体である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用するベンゾチオフェン誘導体の非限定的な例は、国際公開第２００６／１０１４５４号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、ヘテロアリールアミド誘導体である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用するヘテロアリールアミド誘導体の非限定的な例は、国際公開第２０１９／０１２１７２号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、置換二環式［４．６．０］ヒドロキサム酸である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用する置換二環式［４．６．０］ヒドロキサム酸の非限定的な例は、米国特許出願公開第２０１６／０２２１９９７号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、アミノベンズイミダゾール誘導体である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用するアミノベンズイミダゾール誘導体の非限定的な例は、国際公開第２０１９／０５１１２５号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0111】

一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン誘導体である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用するイミダゾ［１，２－ａ］ピリジン誘導体の非限定的な例は、米国特許出願公開第２００８／００８５８９６号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0112】

一部の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、ピリミジンヒドロキシ化合物である。ＨＤＡＣ阻害剤として作用するピリミジンヒドロキシ化合物の非限定的な例は、米国特許出願公開第２０１７／００９６４０３号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0113】

ＨＤＡＣ阻害剤の低分子薬物の他の非限定的な例は、以下に記載されており、それらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれる：国際公開第２０１８／１６５５２０号、米国特許出願公開第２０１７／００５０９８４号、米国特許出願公開第２００７／０２１９２４４号、米国特許出願公開第２０１７／０３０５９００号、米国特許出願公開第２０１７／０２２４６８４号Ａ１、米国特許出願公開第２００８／０３１２１７５号、国際公開第２０１８／１２９５３３号、国際公開第２０１８／１１９３６２号、国際公開第２０１８／０１７８５８号、国際公開第２０１８／００９５３１号、国際公開第２０１７／００４５２２号、米国特許出願公開第２０１８／００５７４５６号、国際公開第２０１６／０２０３６９号、国際公開第２０１４／１４３６６６号、日本特許第６３３６５６２号、米国特許出願公開第２０１１／０３００１３４号、米国特許出願公開第２０１１／０２１８２２１号、米国特許第８，００８，３４４号、欧州特許出願公開第２０４５２４７号、日本特許出願公開第２００９５０７８２９号、中国特許出願公開第１０２２７１６６８号、米国特許第９，８５５，２６７号、米国特許出願公開第２０１８／０３６２４７２号、米国特許出願公開第２０１７／０３４９５７３号、日本特許第５８３８１５７号、国際公開第２０１９／００７８３６号、台湾特許出願公開第２００９１１２３０号、豪州特許出願第２００７／２１６７８。

【0114】

例示的なＨＤＡＣ阻害剤としては、限定されるものではないが、バルプロ酸、ヒドロキシブチレート、フェニルブチレート、フェニルブチレート誘導体、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）およびスベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）も挙げられる。例示的なメチラーゼ阻害剤は、５－アザシチジンである。

【0115】

本明細書で使用される場合、「低分子」という用語は、天然に存在するか、または（例えば、化学合成を介して）人工的に創製されたかにかかわらず、比較的低い分子量を有する分子を指す。典型的には、低分子は、有機化合物である（すなわち、これは、炭素を含有する）。低分子は、複数の炭素－炭素結合、立体中心および他の官能基（例えば、アミン、ヒドロキシル、カルボニルおよび複素環式環など）を含有していてもよい。ある特定の態様では、低分子の分子量は、多くて約１，０００ｇ／ｍｏｌ、多くて約９００ｇ／ｍｏｌ、多くて約８００ｇ／ｍｏｌ、多くて約７００ｇ／ｍｏｌ、多くて約６００ｇ／ｍｏｌ、多くて約５００ｇ／ｍｏｌ、多くて約４００ｇ／ｍｏｌ、多くて約３００ｇ／ｍｏｌ、多くて約２００ｇ／ｍｏｌまたは多くて約１００ｇ／ｍｏｌである。ある特定の態様では、低分子の分子量は、少なくとも約１００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約２００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約３００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約４００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約５００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約６００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約７００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約８００ｇ／ｍｏｌ、または少なくとも約９００ｇ／ｍｏｌ、または少なくとも約１，０００ｇ／ｍｏｌである。上記の範囲の組合せ（例えば、少なくとも約２００ｇ／ｍｏｌで多くて約５００ｇ／ｍｏｌ）も可能である。ある特定の態様では、低分子は、薬物（例えば、連邦規則集（Ｃ．Ｆ．Ｒ．）に提供される米国食品医薬品局によって承認された分子）などの治療活性剤である。低分子はまた、１つもしくは複数の金属原子および／または金属イオンと錯体形成していてもよい。この例では、低分子は、「有機金属低分子（small organometallic molecule）」とも称される。好ましい低分子は、生物学的に活性であり、それらは、動物、好ましくは、哺乳動物、より好ましくは、ヒトにおいて、生物学的効果を生じる。ある特定の態様では、低分子は、薬物である。好ましくは、必ずしもそうではないが、薬物は、適切な政府機関または規制機関によって、ヒトまたは動物における使用のために安全で有効であると既にみなされたものである。例えば、ヒトの使用のために承認された薬物は、参照により本明細書に組み込まれる２１ Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§３３０．５、３３１～３６１および４４０～４６０の下でＦＤＡによってリストされており、動物の使用のための薬物は、参照により本明細書に組み込まれる２１ Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§５００～５８９の下でＦＤＡによってリストされている。すべてのリストされた薬物が、本発明による使用のために許容されると考えられる。

【0116】

ある特定の官能基および化学用語の定義を、下記に、より詳細に記載する。化学元素は、Elements, CAS version, Handbook of Chemistry and Physics, 75^th Ed.の中表紙の元素の周期表に従って特定され、具体的な官能基は、一般に、それらに記載される通り定義される。加えて、有機化学の一般原理、ならびに具体的な官能部分および反応性は、Thomas Sorrell, Organic Chemistry, University Science Books, Sausalito, 1999；Michael B. Smith, March's Advanced Organic Chemistry, 7^th Edition, John Wiley & Sons, Inc., New York, 2013；Richard C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, John Wiley & Sons, Inc., New York, 2018；およびCarruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3^rd Edition, Cambridge University Press, Cambridge, 1987に記載されている。

【0117】

本明細書に記載される化合物は、１つまたは複数の不斉中心を含むことができ、したがって、さまざまな立体異性体形態、例えば、エナンチオマーおよび／またはジアステレオマーで存在することができる。例えば、本明細書に記載される化合物は、個々のエナンチオマー、ジアステレオマーまたは幾何異性体の形態であり得るか、またはラセミ混合物および１つもしくは複数の立体異性体が富化された混合物を含む立体異性体の混合物の形態であり得る。異性体は、キラル高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）ならびにキラル塩の形成および結晶化を含む、当業者に公知の方法によって、混合物から単離することができ、または好ましい異性体は、不斉合成によって調製することができる。例えば、Jacques et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981)；Wilen et al., Tetrahedron 33:2725 (1977)；Eliel, E.L. Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962)；および Wilen, S.H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972)を参照されたい。本発明は、他の異性体を実質的に含まない個々の異性体として、あるいはさまざまな異性体の混合物としての化合物をさらに包含する。

【0118】

「互変異性体」または「互変異性の」という用語は、少なくとも１つの水素原子の形式移動（formal migration）および原子価の少なくとも１つの変化（例えば、単結合と二重結合、三重結合と単結合、またはその逆）から生じる２つまたはそれよりも多くの相互転換可能な化合物を指す。互変異性体の正確な比は、温度、溶媒およびｐＨを含むいくつかの因子に依存する。互変異性化（すなわち、互変異性の対を提供する反応）は、酸または塩基によって触媒されてもよい。本明細書に記載される化合物は、１つまたは複数の互変異性形態を含むことができ、したがって、互変異性体として存在することができる。

【0119】

例示的な互変異性化としては、ケト－エノール、アミド－イミド、ラクタム－ラクチム、エナミン－イミンおよびエナミン－（異なるエナミン）の互変異性化が挙げられる。例えば、ケト－エノール互変異性化は、以下を含み得る。

【化43】

【0120】

式中、結合

【化44】

は、単結合であり、破線

【化45】

は、単結合であるか、または存在せず、結合

【化46】

は、単結合または二重結合である。

【0121】

他に提示されない限り、式は、同位体富化された原子を含まない化合物、また同位体富化された原子を含む化合物も含む。同位体富化された原子を含む化合物は、例えば、生物学的アッセイにおける分析ツールおよび／またはプローブとして有用であり得る。

【0122】

値の範囲（「範囲」）がリストされる場合、それぞれの値および範囲内の下位範囲を包含することを意図する。範囲は、他に提示されない限り、範囲の２つの端の値を含む。例えば、「Ｃ_１～６アルキル」は、Ｃ_１、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５、Ｃ_６、Ｃ_１～６、Ｃ_１～５、Ｃ_１～４、Ｃ_１～３、Ｃ_１～２、Ｃ_２～６、Ｃ_２～５、Ｃ_２～４、Ｃ_２～３、Ｃ_３～６、Ｃ_３～５、Ｃ_３～４、Ｃ_４～６、Ｃ_４～５およびＣ_５～６アルキルを包含することを意図する。

【0123】

「脂肪族」という用語は、アルキル、アルケニル、アルキニルおよび炭素環式基を指す。同様に、「ヘテロ脂肪族」という用語は、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニルおよび複素環式基を指す。

【0124】

「アルキル」という用語は、１～２０個の炭素原子を有する直鎖状または分枝状の飽和炭化水素基のラジカルを指す（「Ｃ_１～２０アルキル」）。一部の態様では、アルキル基は、１～１２個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～１２アルキル」）。一部の態様では、アルキル基は、１～１０個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～１０アルキル」）。一部の態様では、アルキル基は、１～９個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～９アルキル」）。一部の態様では、アルキル基は、１～８個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～８アルキル」）。一部の態様では、アルキル基は、１～７個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～７アルキル」）。一部の態様では、アルキル基は、１～６個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～６アルキル」）。一部の態様では、アルキル基は、１～５個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～５アルキル」）。一部の態様では、アルキル基は、１～４個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～４アルキル」）。一部の態様では、アルキル基は、１～３個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～３アルキル」）。一部の態様では、アルキル基は、１～２個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～２アルキル」）。一部の態様では、アルキル基は、１個の炭素原子を有する（「Ｃ_１アルキル」）。一部の態様では、アルキル基は、２～６個の炭素原子を有する（「Ｃ_２～６アルキル」）。Ｃ_１～６アルキル基の例としては、メチル（Ｃ_１）、エチル（Ｃ_２）、プロピル（Ｃ_３）（例えば、ｎ－プロピル、イソプロピル）、ブチル（Ｃ_４）（例えば、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、イソブチル）、ペンチル（Ｃ_５）（例えば、ｎ－ペンチル、３－ペンタニル、アミル、ネオペンチル、３－メチル－２－ブタニル、ｔｅｒｔ－アミル）およびヘキシル（Ｃ_６）（例えば、ｎ－ヘキシル）が挙げられる。アルキル基の追加の例としては、ｎ－ヘプチル（Ｃ_７）、ｎ－オクチル（Ｃ_８）、ｎ－ドデシル（Ｃ_１２）などが挙げられる。他に規定されない限り、アルキル基のそれぞれの例は、独立して、無置換であるか（「無置換アルキル」）、または１個もしくは複数個の置換基（例えば、Ｆなどのハロゲン）で置換されている（「置換アルキル」）。ある特定の態様では、アルキル基は、無置換Ｃ_１～１２アルキル（無置換Ｃ_１～６アルキルなど、例えば、－ＣＨ_３（Ｍｅ）、無置換エチル（Ｅｔ）、無置換プロピル（Ｐｒ、例えば、無置換ｎ－プロピル（ｎ－Ｐｒ）、無置換イソプロピル（ｉ－Ｐｒ））、無置換ブチル（Ｂｕ、例えば、無置換ｎ－ブチル（ｎ－Ｂｕ）、無置換ｔｅｒｔ－ブチル（ｔｅｒｔ－Ｂｕまたはｔ－Ｂｕ）、無置換ｓｅｃ－ブチル（ｓｅｃ－Ｂｕまたはｓ－Ｂｕ）、無置換イソブチル（ｉ－Ｂｕ））である。ある特定の態様では、アルキル基は、置換Ｃ_１～１２アルキル（置換Ｃ_１～６アルキルなど、例えば、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨＦ_２、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２ＣＨＦ_２、－ＣＨ_２ＣＦ_３またはベンジル（Ｂｎ））である。

【0125】

「ハロアルキル」という用語は、１個または複数の水素原子が、独立して、ハロゲン、例えば、フルオロ、ブロモ、クロロまたはヨードによって置き換わっている、置換アルキル基である。「パーハロアルキル」は、ハロアルキルのサブセットであり、すべての水素原子が、独立して、ハロゲン、例えば、フルオロ、ブロモ、クロロまたはヨードによって置き換わっている、アルキル基を指す。一部の態様では、ハロアルキル部分は、１～１２個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～１２ハロアルキル」）。一部の態様では、ハロアルキル部分は、１～１０個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～１０ハロアルキル」）。一部の態様では、ハロアルキル部分は、１～９個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～９ハロアルキル」）。一部の態様では、ハロアルキル部分は、１～８個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～８ハロアルキル」）。一部の態様では、ハロアルキル部分は、１～７個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～７ハロアルキル」）。一部の態様では、ハロアルキル部分は、１～６個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～６ハロアルキル」）。一部の態様では、ハロアルキル部分は、１～５個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～５ハロアルキル」）。一部の態様では、ハロアルキル部分は、１～４個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～４ハロアルキル」）。一部の態様では、ハロアルキル部分は、１～３個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～３ハロアルキル」）。一部の態様では、ハロアルキル部分は、１～２個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～２ハロアルキル」）。一部の態様では、ハロアルキルの水素原子はすべて、独立して、フルオロで置き換えられて、「パーフルオロアルキル」基を提供する。一部の態様では、ハロアルキルの水素原子はすべて、独立して、クロロで置き換えられて、「パークロロアルキル」基を提供する。ハロアルキル基の例としては、－ＣＨＦ_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＦ_２ＣＦ_３、－ＣＦ_２ＣＦ_２ＣＦ_３、－ＣＣｌ_３、－ＣＦＣｌ_２、－ＣＦ_２Ｃｌなどが挙げられる。

【0126】

「ヘテロアルキル」という用語は、親鎖内（例えば、その隣接炭素原子の間に挿入される）の、および／または親鎖の１つもしくは複数の末端位に配置された、酸素、窒素または硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、１、２、３または４個のヘテロ原子）をさらに含む、アルキル基を指す。ある特定の態様では、ヘテロアルキル基は、親鎖内に１～１２個の炭素原子および１個または複数個のヘテロ原子を有する飽和基を指す（「ヘテロＣ_１～１２アルキル」）。一部の態様では、ヘテロアルキル基は、親鎖内に１～１１個の炭素原子および１個または複数個のヘテロ原子を有する飽和基である（「ヘテロＣ_１～１１アルキル」）。一部の態様では、ヘテロアルキル基は、親鎖内に１～１０個の炭素原子および１個または複数個のヘテロ原子を有する飽和基である（「ヘテロＣ_１～１０アルキル」）。一部の態様では、ヘテロアルキル基は、親鎖内に１～９個の炭素原子および１個または複数個のヘテロ原子を有する飽和基である（「ヘテロＣ_１～９アルキル」）。一部の態様では、ヘテロアルキル基は、親鎖内に１～８個の炭素原子および１個または複数個のヘテロ原子を有する飽和基である（「ヘテロＣ_１～８アルキル」）。一部の態様では、ヘテロアルキル基は、親鎖内に１～７個の炭素原子および１個または複数個のヘテロ原子を有する飽和基である（「ヘテロＣ_１～７アルキル」）。一部の態様では、ヘテロアルキル基は、親鎖内に１～６個の炭素原子および１個または複数個のヘテロ原子を有する飽和基である（「ヘテロＣ_１～６アルキル」）。一部の態様では、ヘテロアルキル基は、親鎖内に１～５個の炭素原子および１個または２個のヘテロ原子を有する飽和基である（「ヘテロＣ_１～５アルキル」）。一部の態様では、ヘテロアルキル基は、親鎖内に１～４個の炭素原子および１個または２個のヘテロ原子を有する飽和基である（「ヘテロＣ_１～４アルキル」）。一部の態様では、ヘテロアルキル基は、親鎖内に１～３個の炭素原子および１個のヘテロ原子を有する飽和基である（「ヘテロＣ_１～３アルキル」）。一部の態様では、ヘテロアルキル基は、親鎖内に１～２個の炭素原子および１個のヘテロ原子を有する飽和基である（「ヘテロＣ_１～２アルキル」）。一部の態様では、ヘテロアルキル基は、１個の炭素原子および１個のヘテロ原子を有する飽和基である（「ヘテロＣ_１アルキル」）。一部の態様では、ヘテロアルキル基は、親鎖内に２～６個の炭素原子および１個または２個のヘテロ原子を有する飽和基である（「ヘテロＣ_２～６アルキル」）。他に規定されない限り、ヘテロアルキル基のそれぞれの例は、独立して、無置換であるか（「無置換ヘテロアルキル」）、または１個もしくは複数個の置換基で置換されている（「置換ヘテロアルキル」）。ある特定の態様では、ヘテロアルキル基は、無置換ヘテロＣ_１～１２アルキルである。ある特定の態様では、ヘテロアルキル基は、置換ヘテロＣ_１～１２アルキルである。

【0127】

「アルケニル」という用語は、１～１２個の炭素原子および１個または複数個の炭素－炭素二重結合（例えば、１、２、３または４個の二重結合）を有する直鎖状または分枝状の炭化水素基のラジカルを指す。一部の態様では、アルケニル基は、１～１２個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～１２アルケニル」）。一部の態様では、アルケニル基は、１～１１個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～１１アルケニル」）。一部の態様では、アルケニル基は、１～１０個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～１０アルケニル」）。一部の態様では、アルケニル基は、１～９個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～９アルケニル」）。一部の態様では、アルケニル基は、１～８個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～８アルケニル」）。一部の態様では、アルケニル基は、１～７個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～７アルケニル」）。一部の態様では、アルケニル基は、１～６個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～６アルケニル」）。一部の態様では、アルケニル基は、１～５個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～５アルケニル」）。一部の態様では、アルケニル基は、１～４個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～４アルケニル」）。一部の態様では、アルケニル基は、１～３個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～３アルケニル」）。一部の態様では、アルケニル基は、１～２個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～２アルケニル」）。一部の態様では、アルケニル基は、１個の炭素原子を有する（「Ｃ_１アルケニル」）。１個または複数個の炭素－炭素二重結合は、内部（例えば、２－ブテニルにおける）または末端（例えば、１－ブテニルにおける）であり得る。Ｃ_１～４アルケニル基の例としては、メチリデニル（Ｃ_１）、エテニル（Ｃ_２）、１－プロペニル（Ｃ_３）、２－プロペニル（Ｃ_３）、１－ブテニル（Ｃ_４）、２－ブテニル（Ｃ_４）、ブタジエニル（Ｃ_４）などが挙げられる。Ｃ_１～６アルケニル基の例としては、前述のＣ_２～４アルケニル基、およびペンテニル（Ｃ_５）、ペンタジエニル（Ｃ_５）、ヘキセニル（Ｃ_６）などが挙げられる。アルケニルの追加の例としては、ヘプテニル（Ｃ_７）、オクテニル（Ｃ_８）、オクタトリエニル（Ｃ_８）などが挙げられる。他に規定されない限り、アルケニル基のそれぞれの例は、独立して、無置換であるか（「無置換アルケニル」）、または１個もしくは複数個の置換基で置換されている（「置換アルケニル」）。ある特定の態様では、アルケニル基は、無置換Ｃ_１～１２アルケニルである。ある特定の態様では、アルケニル基は、置換Ｃ_１～１２アルケニルである。アルケニル基では、立体化学が規定されていないＣ＝Ｃ二重結合（例えば、－ＣＨ＝ＣＨＣＨ_３または

【化47】

）は、（Ｅ）－または（Ｚ）－配置であり得る。

【0128】

「ヘテロアルケニル」という用語は、親鎖内（例えば、その隣接炭素原子の間に挿入される）の、および／または親鎖の１つもしくは複数の末端位に配置された、酸素、窒素または硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、１、２、３または４個のヘテロ原子）をさらに含むアルケニル基を指す。ある特定の態様では、ヘテロアルケニル基は、親鎖内に１～１２個の炭素原子、少なくとも１個の二重結合および１個または複数個のヘテロ原子を有する基を指す（「ヘテロＣ_１～１２アルケニル」）。ある特定の態様では、ヘテロアルケニル基は、親鎖内に１～１１個の炭素原子、少なくとも１個の二重結合および１個または複数個のヘテロ原子を有する基を指す（「ヘテロＣ_１～１１アルケニル」）。ある特定の態様では、ヘテロアルケニル基は、親鎖内に１～１０個の炭素原子、少なくとも１個の二重結合および１個または複数個のヘテロ原子を有する基を指す（「ヘテロＣ_１～１０アルケニル」）。一部の態様では、ヘテロアルケニル基は、親鎖内に１～９個の炭素原子、少なくとも１個の二重結合および１個または複数個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～９アルケニル」）。一部の態様では、ヘテロアルケニル基は、親鎖内に１～８個の炭素原子、少なくとも１個の二重結合および１個または複数個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～８アルケニル」）。一部の態様では、ヘテロアルケニル基は、親鎖内に１～７個の炭素原子、少なくとも１個の二重結合および１個または複数個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～７アルケニル」）。一部の態様では、ヘテロアルケニル基は、親鎖内に１～６個の炭素原子、少なくとも１個の二重結合および１個または複数個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～６アルケニル」）。一部の態様では、ヘテロアルケニル基は、親鎖内に１～５個の炭素原子、少なくとも１個の二重結合および１個または２個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～５アルケニル」）。一部の態様では、ヘテロアルケニル基は、親鎖内に１～４個の炭素原子、少なくとも１個の二重結合および１個または２個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～４アルケニル」）。一部の態様では、ヘテロアルケニル基は、親鎖内に１～３個の炭素原子、少なくとも１個の二重結合および１個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～３アルケニル」）。一部の態様では、ヘテロアルケニル基は、親鎖内に１～２個の炭素原子、少なくとも１個の二重結合および１個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～２アルケニル」）。一部の態様では、ヘテロアルケニル基は、親鎖内に１～６個の炭素原子、少なくとも１個の二重結合および１個または２個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～６アルケニル」）。他に規定されない限り、ヘテロアルケニル基のそれぞれの例は、独立して、無置換であるか（「無置換ヘテロアルケニル」）、または１個もしくは複数個の置換基で置換されている（「置換ヘテロアルケニル」）。ある特定の態様では、ヘテロアルケニル基は、無置換ヘテロＣ_１～２０アルケニルである。ある特定の態様では、ヘテロアルケニル基は、置換ヘテロＣ_１～２０アルケニルである。

【0129】

「アルキニル」という用語は、１～１０個の炭素原子を有する直鎖状または分枝状の炭化水素基のラジカルを指す（「Ｃ_１～１０アルキニル」）。一部の態様では、アルキニル基は、１～９個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～９アルキニル」）。一部の態様では、アルキニル基は、１～８個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～８アルキニル」）。一部の態様では、アルキニル基は、１～７個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～７アルキニル」）。一部の態様では、アルキニル基は、１～６個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～６アルキニル」）。一部の態様では、アルキニル基は、１～５個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～５アルキニル」）。一部の態様では、アルキニル基は、１～４個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～４アルキニル」）。一部の態様では、アルキニル基は、１～３個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～３アルキニル」）。一部の態様では、アルキニル基は、１～２個の炭素原子を有する（「Ｃ_１～２アルキニル」）。一部の態様では、アルキニル基は、１個の炭素原子を有する（「Ｃ_１アルキニル」）。１個または複数個の炭素－炭素三重結合は、内部（例えば、２－ブチニルにおける）または末端（例えば、１－ブチニルにおける）であり得る。Ｃ_１～４アルキニル基の例としては、限定されないが、メチリジニル（Ｃ_１）、エチニル（Ｃ_２）、１－プロピニル（Ｃ_３）、２－プロピニル（Ｃ_３）、１－ブチニル（Ｃ_４）、２－ブチニル（Ｃ_４）などが挙げられる。Ｃ_１～６アルキニル基の例としては、前述のＣ_２～４アルキニル基、およびペンチニル（Ｃ_５）、ヘキシニル（Ｃ_６）などが挙げられる。アルキニルの追加の例としては、ヘプチニル（Ｃ_７）、オクチニル（Ｃ_８）などが挙げられる。他に規定されない限り、アルキニル基のそれぞれの例は、独立して、無置換であるか（「無置換アルキニル」）、または１個もしくは複数個の置換基で置換されている（「置換アルキニル」）。

【0130】

「ヘテロアルキニル」という用語は、親鎖内（例えば、その隣接炭素原子の間に挿入される）の、および／または親鎖の１つもしくは複数の末端位に配置された、酸素、窒素または硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、１、２、３または４個のヘテロ原子）をさらに含むアルキニル基を指す。ある特定の態様では、ヘテロアルキニル基は、親鎖内に１～１０個の炭素原子、少なくとも１個の三重結合および１個または複数個のヘテロ原子を有する基を指す（「ヘテロＣ_１～１０アルキニル」）。一部の態様では、ヘテロアルキニル基は、親鎖内に１～９個の炭素原子、少なくとも１個の三重結合および１個または複数個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～９アルキニル」）。一部の態様では、ヘテロアルキニル基は、親鎖内に１～８個の炭素原子、少なくとも１個の三重結合および１個または複数個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～８アルキニル」）。一部の態様では、ヘテロアルキニル基は、親鎖内に１～７個の炭素原子、少なくとも１個の三重結合および１個または複数個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～７アルキニル」）。一部の態様では、ヘテロアルキニル基は、親鎖内に１～６個の炭素原子、少なくとも１個の三重結合および１個または複数個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～６アルキニル」）。一部の態様では、ヘテロアルキニル基は、親鎖内に１～５個の炭素原子、少なくとも１個の三重結合および１個または２個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～５アルキニル」）。一部の態様では、ヘテロアルキニル基は、親鎖内に１～４個の炭素原子、少なくとも１個の三重結合および１個または２個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～４アルキニル」）。一部の態様では、ヘテロアルキニル基は、親鎖内に１～３個の炭素原子、少なくとも１個の三重結合および１個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～３アルキニル」）。一部の態様では、ヘテロアルキニル基は、親鎖内に１～２個の炭素原子、少なくとも１個の三重結合および１個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～２アルキニル」）。一部の態様では、ヘテロアルキニル基は、親鎖内に１～６個の炭素原子、少なくとも１個の三重結合および１個または２個のヘテロ原子を有する（「ヘテロＣ_１～６アルキニル」）。他に規定されない限り、ヘテロアルキニル基のそれぞれの例は、独立して、無置換であるか（「無置換ヘテロアルキニル」）、または１個もしくは複数個の置換基で置換されている（「置換ヘテロアルキニル」）。

【0131】

「カルボシクリル」または「炭素環式」という用語は、非芳香族環系中に３～１０個の環炭素原子（「Ｃ_３～１０カルボシクリル」）およびゼロ個のヘテロ原子を有する非芳香族環式炭化水素基のラジカルを指す。一部の態様では、カルボシクリル基は、３～１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ_３～１０カルボシクリル」）。一部の態様では、カルボシクリル基は、３～８個の環炭素原子を有する（「Ｃ_３～８カルボシクリル」）。一部の態様では、カルボシクリル基は、３～７個の環炭素原子を有する（「Ｃ_３～７カルボシクリル」）。一部の態様では、カルボシクリル基は、３～６個の環炭素原子を有する（「Ｃ_３～６カルボシクリル」）。一部の態様では、カルボシクリル基は、４～６個の環炭素原子を有する（「Ｃ_４～６カルボシクリル」）。一部の態様では、カルボシクリル基は、５～６個の環炭素原子を有する（「Ｃ_５～６カルボシクリル」）。一部の態様では、カルボシクリル基は、５～１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ_５～１０カルボシクリル」）。例示的なＣ_３～６カルボシクリル基としては、シクロプロピル（Ｃ_３）、シクロプロペニル（Ｃ_３）、シクロブチル（Ｃ_４）、シクロブテニル（Ｃ_４）、シクロペンチル（Ｃ_５）、シクロペンテニル（Ｃ_５）、シクロヘキシル（Ｃ_６）、シクロヘキセニル（Ｃ_６）、シクロヘキサジエニル（Ｃ_６）などが挙げられる。例示的なＣ_３～８カルボシクリル基としては、前述のＣ_３～６カルボシクリル基、ならびにシクロヘプチル（Ｃ_７）、シクロヘプテニル（Ｃ_７）、シクロヘプタジエニル（Ｃ_７）、シクロヘプタトリエニル（Ｃ_７）、シクロオクチル（Ｃ_８）、シクロオクテニル（Ｃ_８）、ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル（Ｃ_７）、ビシクロ［２．２．２］オクタニル（Ｃ_８）などが挙げられる。例示的なＣ_３～１０カルボシクリル基としては、前述のＣ_３～８カルボシクリル基、ならびにシクロノニル（Ｃ_９）、シクロノネニル（Ｃ_９）、シクロデシル（Ｃ_１０）、シクロデセニル（Ｃ_１０）、オクタヒドロ－１Ｈ－インデニル（Ｃ_９）、デカヒドロナフタレニル（Ｃ_１０）、スピロ［４．５］デカニル（Ｃ_１０）などが挙げられる。例示的なＣ_３～８カルボシクリル基としては、前述のＣ_３～１０カルボシクリル基などが挙げられる。前述の例が説明するように、ある特定の態様では、カルボシクリル基は、単環式（「単環式カルボシクリル」）もしくは多環式（例えば、二環式系（「二環式カルボシクリル」）または三環式系（「三環式カルボシクリル」）などの縮合、架橋またはスピロ環系を含有する）のいずれかであり、飽和であり得るか、あるいは１個もしくは複数個の炭素－炭素二重結合または三重結合を含有し得る。「カルボシクリル」は、上記で定義されたカルボシクリル環が、１個もしくは複数個のアリール基またはヘテロアリール基と縮合し、結合点が、カルボシクリル環上にある環系も含み、そのような例でも、炭素の数は、炭素環式環系中の炭素の数をやはり表す。他に規定されない限り、カルボシクリル基のそれぞれの例は、独立して、無置換であるか（「無置換カルボシクリル」）、または１個もしくは複数個の置換基で置換されている（「置換カルボシクリル」）。ある特定の態様では、カルボシクリル基は、無置換Ｃ_３～１０カルボシクリルである。ある特定の態様では、カルボシクリル基は、置換Ｃ_３～１０カルボシクリルである。一部の態様では、シクロアルキル基は、３～１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ_３～１０シクロアルキル」）。一部の態様では、シクロアルキル基は、３～８個の環炭素原子を有する（「Ｃ_３～８シクロアルキル」）。一部の態様では、シクロアルキル基は、３～６個の環炭素原子を有する（「Ｃ_３～６シクロアルキル」）。一部の態様では、シクロアルキル基は、４～６個の環炭素原子を有する（「Ｃ_４～６シクロアルキル」）。一部の態様では、シクロアルキル基は、５～６個の環炭素原子を有する（「Ｃ_５～６シクロアルキル」）。一部の態様では、シクロアルキル基は、５～１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ_５～１０シクロアルキル」）。Ｃ_５～６シクロアルキル基の例としては、シクロペンチル（Ｃ_５）およびシクロヘキシル（Ｃ_５）が挙げられる。Ｃ_３～６シクロアルキル基の例としては、前述のＣ_５～６シクロアルキル基、ならびにシクロプロピル（Ｃ_３）およびシクロブチル（Ｃ_４）が挙げられる。Ｃ_３～８シクロアルキル基の例としては、前述のＣ_３～６シクロアルキル基、ならびにシクロヘプチル（Ｃ_７）およびシクロオクチル（Ｃ_８）が挙げられる。他に規定されない限り、カルボシクリル基のそれぞれの例は、独立して、無置換であるか（「無置換シクロアルキル」）、または１個もしくは複数個の置換基で置換されている（「置換シクロアルキル」）。ある特定の態様では、シクロアルキル基は、無置換Ｃ_３～１４シクロアルキルである。ある特定の態様では、シクロアルキル基は、置換Ｃ_３～１４シクロアルキルである。ある特定の態様では、カルボシクリルは、原子価が許容するかぎり、炭素環式環系中に０、１または２個のＣ＝Ｃ二重結合を含む。

【0132】

「ヘテロシクリル」または「複素環式」という用語は、環炭素原子および１～４個の環ヘテロ原子を有する３～１４員非芳香族環系のラジカルを指し、それぞれのヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「３～１４員ヘテロシクリル」）。１個または複数個の窒素原子を含有するヘテロシクリル基では、結合点は、原子価が許容するかぎり、炭素原子または窒素原子であり得る。ヘテロシクリル基は、単環式（「単環式ヘテロシクリル」）もしくは多環式（例えば、二環式系（「二環式ヘテロシクリル」）または三環式系（「三環式ヘテロシクリル」）などの縮合、架橋またはスピロ環系）のいずれかであり得、飽和であり得るか、あるいは１個もしくは複数個の炭素－炭素二重結合または三重結合を含有し得る。ヘテロシクリル多環式環系は、１個または両方の環中に、１個または複数個のヘテロ原子を含むことができる。「ヘテロシクリル」は、上記に定義されたヘテロシクリル環が、１個または複数個のカルボシクリル基と縮合し、結合点が、カルボシクリル環またはヘテロシクリル環上のいずれかにある環系、あるいは上記に定義されたヘテロシクリル環が、１個もしくは複数個のアリール基またはヘテロアリール基と縮合し、結合点が、ヘテロシクリル環上にある環系も含み、そのような例でも、環員の数は、ヘテロシクリル環系中の環員の数をやはり表す。他に規定されない限り、ヘテロシクリル基のそれぞれの例は、独立して、無置換であるか（「無置換ヘテロシクリル」）、または１個もしくは複数個の置換基で置換されている（「置換ヘテロシクリル」）。ある特定の態様では、ヘテロシクリル基は、無置換ヘテロ３～１４員ヘテロシクリルである。ある特定の態様では、ヘテロシクリル基は、置換ヘテロ３～１４員ヘテロシクリルである。ある特定の態様では、ヘテロシクリルは、置換または無置換の３～７員の単環式ヘテロシクリルであり、複素環式環系中の１、２または３個の原子は、原子価が許容するかぎり、独立して、酸素、窒素または硫黄である。

【0133】

一部の態様では、ヘテロシクリル基は、環炭素原子および１～４個の環ヘテロ原子を有する５～１０員非芳香族環系であり、それぞれのヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「５～１０員ヘテロシクリル」）。一部の態様では、ヘテロシクリル基は、環炭素原子および１～４個の環ヘテロ原子を有する５～８員非芳香族環系であり、それぞれのヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「５～８員ヘテロシクリル」）。一部の態様では、ヘテロシクリル基は、環炭素原子および１～４個の環ヘテロ原子を有する５～６員非芳香族環系であり、それぞれのヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「５～６員ヘテロシクリル」）。一部の態様では、５～６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素および硫黄から選択される１～３個の環ヘテロ原子を有する。一部の態様では、５～６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素および硫黄から選択される１～２個の環ヘテロ原子を有する。一部の態様では、５～６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素および硫黄から選択される１個の環ヘテロ原子を有する。

【0134】

１個のヘテロ原子を含有する例示的な３員ヘテロシクリル基としては、アジルジニル（azirdinyl）、オキシラニルおよびチイラニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な４員ヘテロシクリル基としては、アゼチジニル、オキセタニルおよびチエタニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基としては、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ジヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ジヒドロピロリルおよびピロリル－２，５－ジオンが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基としては、ジオキソラニル、オキサチオラニルおよびジチオラニルが挙げられる。３個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基としては、トリアゾリニル、オキサジアゾリニルおよびチアジアゾリニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基としては、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピリジニルおよびチアニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基としては、ピペラジニル、モルホリニル、ジチアニルおよびジオキサニルが挙げられる。３個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基としては、トリアジニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な７員ヘテロシクリル基としては、アゼパニル、オキセパニルおよびチエパニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な８員ヘテロシクリル基としては、アゾカニル、オキセカニルおよびチオカニルが挙げられる。例示的な二環式ヘテロシクリル基としては、インドリニル、イソインドリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチエニル、テトラヒドロベンゾチエニル、テトラヒドロベンゾフラニル、テトラヒドロインドリル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、デカヒドロイソキノリニル、オクタヒドロクロメニル、オクタヒドロイソクロメニル、デカヒドロナフチリジニル、デカヒドロ－１，８－ナナフチリジニル、オクタヒドロピロロ［３，２－ｂ］ピロール、インドリニル、フタルイミジル、ナフタルイミジル、クロマニル、クロメニル、１Ｈ－ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピニル、１，４，５，７－テトラヒドロピラノ［３，４－ｂ］ピロリル、５，６－ジヒドロ－４Ｈ－フロ［３，２－ｂ］ピロリル、６，７－ジヒドロ－５Ｈ－フロ［３，２－ｂ］ピラニル、５，７－ジヒドロ－４Ｈ－チエノ［２，３－ｃ］ピラニル、２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジニル、２，３－ジヒドロフロ［２，３－ｂ］ピリジニル、４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジニル、４，５，６，７－テトラヒドロフロ［３，２－ｃ］ピリジニル、４，５，６，７－テトラヒドロチエノ［３，２－ｂ］ピリジニル、１，２，３，４－テトラヒドロ－１，６－ナフチリジニルなどが挙げられる。

【0135】

「アリール」という用語は、芳香族環系に提供される６～１４個の環炭素原子および０個のヘテロ原子を有する、単環式または多環式（例えば、二環式または三環式）の４ｎ＋２芳香族環系（例えば、環式配列において共有される６、１０または１４個のπ電子を有する）のラジカルを指す（「Ｃ_６～１４アリール」）。一部の態様では、アリール基は、６個の環炭素原子を有する（「Ｃ_６アリール」；例えば、フェニル）。一部の態様では、アリール基は、１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ_１０アリール」；例えば、１－ナフチルおよび２－ナフチルなどのナフチル）。一部の態様では、アリール基は、１４個の環炭素原子を有する（「Ｃ_１４アリール」；例えば、アントラシル）。「アリール」は、上記で定義されたアリール環が、１個もしくは複数個のカルボシクリル基またはヘテロシクリル基と縮合し、ラジカルまたは結合点が、アリール環上にある環系も含み、そのような例でも、炭素原子の数は、アリール環系中の炭素の数をやはり表す。他に規定されない限り、アリール基のそれぞれの例は、独立して、無置換であるか（「無置換アリール」）、または１個もしくは複数個の置換基で置換されている（「置換アリール」）。ある特定の態様では、アリール基は、無置換Ｃ_６～１４アリールである。ある特定の態様では、アリール基は、置換Ｃ_６～１４アリールである。

【0136】

「アラルキル」は、「アルキル」のサブセットであり、アリール基によって置換されたアルキル基を指し、結合点は、アルキル部分上にある。

【0137】

「ヘテロアリール」という用語は、芳香族環系に提供される環炭素原子および１～４個のヘテロ原子を有する、５～１４員の単環式または多環式（例えば、二環式または三環式）の４ｎ＋２芳香族環系（例えば、環式配列において共有される６、１０または１４個のπ電子を有する）のラジカルを指し、それぞれのヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「５～１４員ヘテロアリール」）。１個または複数個の窒素原子を含有するヘテロアリール基では、結合点は、原子価が許容するかぎり、炭素原子または窒素原子であり得る。ヘテロアリール多環式環系は、１個または両方の環中に、１個または複数個のヘテロ原子を含むことができる。「ヘテロアリール」は、上記で定義されたヘテロアリール環が、１個もしくは複数個のカルボシクリル基またはヘテロシクリル基と縮合し、結合点が、ヘテロアリール環上にある環系を含み、そのような例でも、環員の数は、ヘテロアリール環系中の環員の数をやはり表す。「ヘテロアリール」は、上記で定義されたヘテロアリール環が、１個もしくは複数個のアリール基と縮合し、結合点が、アリール環またはヘテロアリール環上のいずれかにある環系も含み、そのような例では、環員の数は、縮合多環式（アリール／ヘテロアリール）環系中の環員の数を表す。１個の環がヘテロ原子を含有しない（例えば、インドリル、キノリニル、カルバゾリルなど）多環式ヘテロアリール基の結合点は、いずれかの環上、例えば、ヘテロ原子を有する環（例えば、２－インドリル）上またはヘテロ原子を含有しない環（例えば、５－インドリル）上のいずれかにあり得る。ある特定の態様では、ヘテロアリールは、置換または無置換の５または６員の単環式ヘテロアリールであり、ヘテロアリール環系中の１、２、３または４個の原子は、独立して、酸素、窒素または硫黄である。ある特定の態様では、ヘテロアリールは、置換または無置換の９または１０員の二環式ヘテロアリールであり、ヘテロアリール環系中の１、２、３または４個の原子は、独立して、酸素、窒素または硫黄である。

【0138】

一部の態様では、ヘテロアリール基は、芳香族環系に提供される環炭素原子および１～４個の環ヘテロ原子を有する５～１０員芳香族環系であり、それぞれのヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「５～１０員ヘテロアリール」）。一部の態様では、ヘテロアリール基は、芳香族環系に提供される環炭素原子および１～４個の環ヘテロ原子を有する５～８員芳香族環系であり、それぞれのヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「５～８員ヘテロアリール」）。一部の態様では、ヘテロアリール基は、芳香族環系に提供される環炭素原子および１～４個の環ヘテロ原子を有する５～６員芳香族環系であり、それぞれのヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される（「５～６員ヘテロアリール」）。一部の態様では、５～６員ヘテロアリールは、窒素、酸素および硫黄から選択される１～３個の環ヘテロ原子を有する。一部の態様では、５～６員ヘテロアリールは、窒素、酸素および硫黄から選択される１～２個の環ヘテロ原子を有する。一部の態様では、５～６員ヘテロアリールは、窒素、酸素および硫黄から選択される１個の環ヘテロ原子を有する。他に規定されない限り、ヘテロアリール基のそれぞれの例は、独立して、無置換であるか（「無置換ヘテロアリール」）、または１個もしくは複数個の置換基で置換されている（「置換ヘテロアリール」）。ある特定の態様では、ヘテロアリール基は、無置換５～１４員ヘテロアリールである。ある特定の態様では、ヘテロアリール基は、置換５～１４員ヘテロアリールである。

【0139】

１個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、ピロリル、フラニルおよびチオフェニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリルおよびイソチアゾリルが挙げられる。３個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、トリアゾリル、オキサジアゾリルおよびチアジアゾリルが挙げられる。４個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、テトラゾリルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基としては、ピリジニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基としては、ピリダジニル、ピリミジニルおよびピラジニルが挙げられる。３個または４個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基としては、それぞれ、トリアジニルおよびテトラジニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な７員のヘテロアリール基としては、アゼピニル、オキセピニルおよびチエピニルが挙げられる。例示的な５，６－二環式ヘテロアリール基としては、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、イソベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ベンゾイソフラニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンズチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンズチアジアゾリル、インドリジニルおよびプリニルが挙げられる。例示的な６，６－二環式ヘテロアリール基としては、ナフチリジニル、プテリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キノキサリニル、フタラジニルおよびキナゾリニルが挙げられる。例示的な三環式ヘテロアリール基としては、フェナントリジニル、ジベンゾフラニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニルおよびフェナジニルが挙げられる。

【0140】

「ヘテロアラルキル」は、「アルキル」のサブセットであり、ヘテロアリール基によって置換されたアルキル基を指し、結合点は、アルキル部分上にある。

【0141】

「不飽和結合」という用語は、二重結合または三重結合を指す。

【0142】

「不飽和」または「部分的に不飽和」という用語は、少なくとも１個の二重結合または三重結合を含む部分を指す。

【0143】

「飽和」または「完全に飽和」という用語は、二重結合も三重結合も含有しない部分、例えば、単結合のみを含有する部分を指す。

【0144】

「－エン（－ｅｎｅ）」という接尾辞を基に付けると、基が二価部分であることを示し、例えば、アルキレンはアルキルの二価部分であり、アルケニレンはアルケニルの二価部分であり、アルキニレンはアルキニルの二価部分であり、ヘテロアルキレンはヘテロアルキルの二価部分であり、ヘテロアルケニレンはヘテロアルケニルの二価部分であり、ヘテロアルキニレンはヘテロアルキニルの二価部分であり、カルボシクリレンはカルボシクリルの二価部分であり、ヘテロシクリレンはヘテロシクリルの二価部分であり、アリーレンはアリールの二価部分であり、ヘテロアリーレンはヘテロアリールの二価部分である。

【0145】

基は、他に明示的に提示されない限り、必要に応じて置換されている。「必要に応じて置換されている」という用語は、置換されているか、または無置換であることを指す。ある特定の態様では、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ヘテロアルキル基、ヘテロアルケニル基、ヘテロアルキニル基、カルボシクリル基、ヘテロシクリル基、アリール基およびヘテロアリール基は、必要に応じて置換されている。「必要に応じて置換されている」とは、置換または無置換であり得る基（例えば、「置換」または「無置換」のアルキル基、「置換」または「無置換」のアルケニル基、「置換」または「無置換」のアルキニル基、「置換」または「無置換」のヘテロアルキル基、「置換」または「無置換」のヘテロアルケニル基、「置換」または「無置換」のヘテロアルキニル基、「置換」または「無置換」のカルボシクリル基、「置換」または「無置換」のヘテロシクリル基、「置換」または「無置換」のアリール基、あるいは「置換」または「無置換」のヘテロアリール基）を指す。一般に、「置換されている」という用語は、基に存在する少なくとも１個の水素が、許容される置換基、例えば、置換の際に、安定な化合物、例えば、転位、環化、脱離または他の反応などによる変換を自発的に受けない化合物をもたらす置換基で置き換えられることを意味する。他に指示されない限り、「置換された」基は、基の１つまたは複数の置換可能な位置に置換基を有し、任意の所与の構造中の２つ以上の位置が置換されている場合、置換基は、それぞれの位置で、同じか異なるかのいずれかである。「置換されている」という用語は、有機化合物のすべての許容される置換基による置換を含むことを企図し、安定な化合物の形成をもたらす本明細書に記載される置換基のいずれかを含む。本発明は、安定な化合物に到達するために、ありとあらゆるそのような組合せを企図する。本発明の目的のために、窒素などのヘテロ原子は、水素置換基および／またはヘテロ原子の原子価を満たし、安定な部分の形成をもたらす本明細書に記載される任意の好適な置換基を有していてもよい。本発明は、本明細書に記載される例示的な置換基によって、如何なる方法でも限定されることを意図するものではない。

【0146】

例示的な炭素原子の置換基としては、ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＳＯ_２Ｈ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＯＨ、－ＯＲ^ａａ、－ＯＮ（Ｒ^ｂｂ）_２、－Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_３ ^＋Ｘ^－、－Ｎ（ＯＲ^ｃｃ）Ｒ^ｂｂ、－ＳＨ、－ＳＲ^ａａ、－ＳＳＲ^ｃｃ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＨＯ、－Ｃ（ＯＲ^ｃｃ）_２、－ＣＯ_２Ｒ^ａａ、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＯＣＯ_２Ｒ^ａａ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＮＲ^ｂｂＣＯ_２Ｒ^ａａ、－ＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、－Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ、－ＯＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、－ＯＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ、－Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＯＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＮＲ^ｂｂＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^ｂｂＳＯ_２Ｒ^ａａ、－ＮＲ^ｂｂＳＯ_２Ｒ^ａａ、－ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＳＯ_２Ｒ^ａａ、－ＳＯ_２ＯＲ^ａａ、－ＯＳＯ_２Ｒ^ａａ、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＯＳ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－Ｓｉ（Ｒ^ａａ）_３、－ＯＳｉ（Ｒ^ａａ）_３ －Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、－Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ａａ、－ＳＣ（＝Ｓ）ＳＲ^ａａ、－ＳＣ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、－ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、－ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲ^ａａ、－ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２、－ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２、－Ｐ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２）_２、－ＯＰ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２）_２、－ＮＲ^ｂｂＰ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、－ＮＲ^ｂｂＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２、－ＮＲ^ｂｂＰ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２）_２、－Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_２、－Ｐ（ＯＲ^ｃｃ）_２、－Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_３ ^＋Ｘ^－、－Ｐ（ＯＲ^ｃｃ）_３ ^＋Ｘ^－、－Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_４、－Ｐ（ＯＲ^ｃｃ）_４、－ＯＰ（Ｒ^ｃｃ）_２、－ＯＰ（Ｒ^ｃｃ）_３ ^＋Ｘ^－、－ＯＰ（ＯＲ^ｃｃ）_２、－ＯＰ（ＯＲ^ｃｃ）_３ ^＋Ｘ^－、－ＯＰ（Ｒ^ｃｃ）_４、－ＯＰ（ＯＲ^ｃｃ）_４、－Ｂ（Ｒ^ａａ）_２、－Ｂ（ＯＲ^ｃｃ）_２、－ＢＲ^ａａ（ＯＲ^ｃｃ）、Ｃ_１～２０アルキル、Ｃ_１～２０パーハロアルキル、Ｃ_１～２０アルケニル、Ｃ_１～２０アルキニル、ヘテロＣ_１～２０アルキル、ヘテロＣ_１～２０アルケニル、ヘテロＣ_１～２０アルキニル、Ｃ_３～１０カルボシクリル、３～１４員ヘテロシクリル、Ｃ_６～１４アリールおよび５～１４員ヘテロアリールが挙げられ、ここで、それぞれのアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲ^ｄｄ基で置換され；式中、Ｘ^－は、対イオンであり；
あるいは、炭素原子上の２個のジェミナル水素は、基＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮ（Ｒ^ｂｂ）_２、＝ＮＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、＝ＮＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）ＯＲ^ａａ、＝ＮＮＲ^ｂｂＳ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、＝ＮＲ^ｂｂまたは＝ＮＯＲ^ｃｃで置き換えられ；
それぞれのＲ^ａａの例は、独立して、Ｃ_１～２０アルキル、Ｃ_１～２０パーハロアルキル、Ｃ_１～２０アルケニル、Ｃ_１～２０アルキニル、ヘテロＣ_１～２０アルキル、ヘテロＣ_１～２０アルケニル、ヘテロＣ_１～２０アルキニル、Ｃ_３～１０カルボシクリル、３～１４員ヘテロシクリル、Ｃ_６～１４アリールおよび５～１４員ヘテロアリールから選択されるか、あるいは２個のＲ^ａａ基は、結合して、３～１４員ヘテロシクリル環または５～１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールのそれぞれは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲ^ｄｄ基で置換され；
それぞれのＲ^ｂｂの例は、独立して、水素、－ＯＨ、－ＯＲ^ａａ、－Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、－ＣＯ_２Ｒ^ａａ、－ＳＯ_２Ｒ^ａａ、－Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）ＯＲ^ａａ、－Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、－ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、－ＳＯ_２Ｒ^ｃｃ、－ＳＯ_２ＯＲ^ｃｃ、－ＳＯＲ^ａａ、－Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ｃｃ、－Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ｃｃ、－Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２、－Ｐ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２）_２、Ｃ_１～２０アルキル、Ｃ_１～２０パーハロアルキル、Ｃ_１～２０アルケニル、Ｃ_１～２０アルキニル、ヘテロＣ_１～２０アルキル、ヘテロＣ_１～２０アルケニル、ヘテロＣ_１～２０アルキニル、Ｃ_３～１０カルボシクリル、３～１４員ヘテロシクリル、Ｃ_６～１４アリールおよび５～１４員ヘテロアリールから選択されるか、あるいは２個のＲ^ｂｂ基は、結合して、３～１４員ヘテロシクリル環または５～１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、それぞれのアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲ^ｄｄ基で置換され；
それぞれのＲ^ｃｃの例は、独立して水素、Ｃ_１～２０アルキル、Ｃ_１～２０パーハロアルキル、Ｃ_１～２０アルケニル、Ｃ_１～２０アルキニル、ヘテロＣ_１～２０アルキル、ヘテロＣ_１～２０アルケニル、ヘテロＣ_１～２０アルキニル、Ｃ_３～１０カルボシクリル、３～１４員ヘテロシクリル、Ｃ_６～１４アリールおよび５～１４員ヘテロアリールから選択されるか、あるいは２個のＲ^ｃｃ基は、結合して、３～１４員ヘテロシクリル環または５～１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、それぞれのアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲ^ｄｄ基で置換され；
それぞれのＲ^ｄｄの例は、独立して、ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＳＯ_２Ｈ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＯＨ、－ＯＲ^ｅｅ、－ＯＮ（Ｒ^ｆｆ）_２、－Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、－Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_３ ^＋Ｘ^－、－Ｎ（ＯＲ^ｅｅ）Ｒ^ｆｆ、－ＳＨ、－ＳＲ^ｅｅ、－ＳＳＲ^ｅｅ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ｅｅ、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯ_２Ｒ^ｅｅ、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^ｅｅ、－ＯＣＯ_２Ｒ^ｅｅ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、－ＮＲ^ｆｆＣ（＝Ｏ）Ｒ^ｅｅ、－ＮＲ^ｆｆＣＯ_２Ｒ^ｅｅ、－ＮＲ^ｆｆＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、－Ｃ（＝ＮＲ^ｆｆ）ＯＲ^ｅｅ、－ＯＣ（＝ＮＲ^ｆｆ）Ｒ^ｅｅ、－ＯＣ（＝ＮＲ^ｆｆ）ＯＲ^ｅｅ、－Ｃ（＝ＮＲ^ｆｆ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、－ＯＣ（＝ＮＲ^ｆｆ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、－ＮＲ^ｆｆＣ（＝ＮＲ^ｆｆ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、－ＮＲ^ｆｆＳＯ_２Ｒ^ｅｅ、－ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、－ＳＯ_２Ｒ^ｅｅ、－ＳＯ_２ＯＲ^ｅｅ、－ＯＳＯ_２Ｒ^ｅｅ、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ^ｅｅ、－Ｓｉ（Ｒ^ｅｅ）_３、－ＯＳｉ（Ｒ^ｅｅ）_３、－Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ｅｅ、－Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ｅｅ、－ＳＣ（＝Ｓ）ＳＲ^ｅｅ、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｅｅ）_２、－Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ｅｅ）_２、－ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ^ｅｅ）_２、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｅｅ）_２、Ｃ_１～１０アルキル、Ｃ_１～１０パーハロアルキル、Ｃ_１～１０アルケニル、Ｃ_１～１０アルキニル、ヘテロＣ_１～１０アルキル、ヘテロＣ_１～１０アルケニル、ヘテロＣ_１～１０アルキニル、Ｃ_３～１０カルボシクリル、３～１０員ヘテロシクリル、Ｃ_６～１０アリール、５～１０員ヘテロアリールから選択され、ここで、それぞれのアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲ^ｇｇ基で置換されているか、あるいは２個のジェミナルＲ^ｄｄ置換基は、結合して、＝Ｏまたは＝Ｓを形成することができ；式中、Ｘ^－は、対イオンであり；
それぞれのＲ^ｅｅの例は、独立して、Ｃ_１～１０アルキル、Ｃ_１～１０パーハロアルキル、Ｃ_１～１０アルケニル、Ｃ_１～１０アルキニル、ヘテロＣ_１～１０アルキル、ヘテロＣ_１～１０アルケニル、ヘテロＣ_１～１０アルキニル、Ｃ_３～１０カルボシクリル、Ｃ_６～１０アリール、３～１０員ヘテロシクリルおよび３～１０員ヘテロアリールから選択され、ここで、それぞれのアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲ^ｇｇ基で置換され；
それぞれのＲ^ｆｆの例は、独立して、水素、Ｃ_１～１０アルキル、Ｃ_１～１０パーハロアルキル、Ｃ_１～１０アルケニル、Ｃ_１～１０アルキニル、ヘテロＣ_１～１０アルキル、ヘテロＣ_１～１０アルケニル、ヘテロＣ_１～１０アルキニル、Ｃ_３～１０カルボシクリル、３～１０員ヘテロシクリル、Ｃ_６～１０アリールおよび５～１０員ヘテロアリールから選択されるか、あるいは２個のＲ^ｆｆ基は、結合して、３～１０員ヘテロシクリル環または５～１０員ヘテロアリール環を形成し、ここで、それぞれのアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、独立して、０、１、２、３、４または５個のＲ^ｇｇ基で置換され；
それぞれのＲ^ｇｇの例は、独立して、ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＳＯ_２Ｈ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＯＨ、－ＯＣ_１～６アルキル、－ＯＮ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_３ ^＋Ｘ^－、－ＮＨ（Ｃ_１～６アルキル）_２ ^＋Ｘ^－、－ＮＨ_２（Ｃ_１～６アルキル）^＋Ｘ^－、－ＮＨ_３ ^＋Ｘ^－、－Ｎ（ＯＣ_１～６アルキル）（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｎ（ＯＨ）（Ｃ_１～６アルキル）、－ＮＨ（ＯＨ）、－ＳＨ、－ＳＣ_１～６アルキル、－ＳＳ（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１～６アルキル）、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯ_２（Ｃ_１～６アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）（Ｃ_１～６アルキル）、－ＯＣＯ_２（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１～６アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１～６アルキル）、－ＮＨＣＯ_２（Ｃ_１～６アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１～６アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（＝ＮＨ）Ｏ（Ｃ_１～６アルキル）、－ＯＣ（＝ＮＨ）（Ｃ_１～６アルキル）、－ＯＣ（＝ＮＨ）ＯＣ_１～６アルキル、－Ｃ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＯＣ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－ＯＣ（ＮＨ）ＮＨ（Ｃ_１～６アルキル）、－ＯＣ（ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（ＮＨ）Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２（Ｃ_１～６アルキル）、－ＳＯ_２Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、－ＳＯ_２ＮＨ（Ｃ_１～６アルキル）、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＳＯ_２Ｃ_１～６アルキル、－ＳＯ_２ＯＣ_１～６アルキル、－ＯＳＯ_２Ｃ_１～６アルキル、－ＳＯＣ_１～６アルキル、－Ｓｉ（Ｃ_１～６アルキル）_３、－ＯＳｉ（Ｃ_１～６アルキル）_３ －Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ（Ｃ_１～６アルキル）、Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ_２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｃ（＝Ｓ）ＳＣ_１～６アルキル、－ＳＣ（＝Ｓ）ＳＣ_１～６アルキル、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣ_１～６アルキル）_２、－Ｐ（＝Ｏ）（Ｃ_１～６アルキル）_２、－ＯＰ（＝Ｏ）（Ｃ_１～６アルキル）_２、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣ_１～６アルキル）_２、Ｃ_１～１０アルキル、Ｃ_１～１０パーハロアルキル、Ｃ_１～１０アルケニル、Ｃ_１～１０アルキニル、ヘテロＣ_１～１０アルキル、ヘテロＣ_１～１０アルケニル、ヘテロＣ_１～１０アルキニル、Ｃ_３～１０カルボシクリル、Ｃ_６～１０アリール、３～１０員ヘテロシクリルまたは５～１０員ヘテロアリールであるか；あるいは２個のジェミナルＲ^ｇｇ置換基は、結合して、＝Ｏまたは＝Ｓを形成することができ；ならびに
それぞれのＸ^－は、対イオンである。

【0147】

ある特定の態様では、炭素原子の置換基は、独立して、ハロゲン、置換された（例えば、１個または複数個のハロゲンで置換された）もしくは無置換のＣ_１～６アルキル、－ＯＲ^ａａ、－ＳＲ^ａａ、－Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＣＮ、－ＳＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＣＯ_２Ｒ^ａａ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＯＣＯ_２Ｒ^ａａ、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＮＲ^ｂｂＣＯ_２Ｒ^ａａまたは－ＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２である。ある特定の態様では、炭素原子の置換基は、独立して、ハロゲン、置換された（例えば、１個または複数個のハロゲンで置換された）もしくは無置換のＣ_１～１０アルキル、－ＯＲ^ａａ、－ＳＲ^ａａ、－Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＣＮ、－ＳＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＣＯ_２Ｒ^ａａ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＯＣＯ_２Ｒ^ａａ、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＮＲ^ｂｂＣＯ２Ｒ^ａａまたは－ＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２であり、式中、Ｒ^ａａは、水素、置換された（例えば、１個または複数個のハロゲンで置換された）もしくは無置換のＣ_１～１０アルキル、酸素原子に結合する場合に酸素保護基（例えば、シリル、ＴＢＤＰＳ、ＴＢＤＭＳ、ＴＩＰＳ、ＴＥＳ、ＴＭＳ、ＭＯＭ、ＴＨＰ、ｔ－Ｂｕ、Ｂｎ、アリル、アセチル、ピバロイルまたはベンゾイル）、または硫黄原子に結合する場合に硫黄保護基（例えば、アセトアミドメチル、ｔ－Ｂｕ、３－ニトロ－２－ピリジンスルフェニル、２－ピリジンスルフェニルまたはトリフェニルメチル）であり；それぞれのＲ^ｂｂは、独立して、水素、置換された（例えば、１個または複数個のハロゲンで置換された）もしくは無置換のＣ_１～１０アルキルまたは窒素保護基（例えば、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｃｂｚ、Ｆｍｏｃ、トリフルオロアセチル、トリフェニルメチル、アセチルまたはＴｓ）である。ある特定の態様では、炭素原子の置換基は、独立して、ハロゲン、置換された（例えば、１個または複数個のハロゲンで置換された）もしくは無置換のＣ_１～６アルキル、－ＯＲ^ａａ、－ＳＲ^ａａ、－Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＣＮ、－ＳＣＮまたは－ＮＯ_２である。ある特定の態様では、炭素原子の置換基は、独立して、ハロゲン、置換された（例えば、１個または複数個のハロゲンで置換された）もしくは無置換のＣ_１～１０アルキル、－ＯＲ^ａａ、－ＳＲ^ａａ、－Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＣＮ、－ＳＣＮまたは－ＮＯ_２であり、式中、Ｒ^ａａは、水素、置換された（例えば、１個または複数個のハロゲンで置換された）もしくは無置換のＣ_１～１０アルキル、酸素原子に結合する場合に酸素保護基（例えば、シリル、ＴＢＤＰＳ、ＴＢＤＭＳ、ＴＩＰＳ、ＴＥＳ、ＴＭＳ、ＭＯＭ、ＴＨＰ、ｔ－Ｂｕ、Ｂｎ、アリル、アセチル、ピバロイルまたはベンゾイル）、または硫黄原子に結合する場合に硫黄保護基（例えば、アセトアミドメチル、ｔ－Ｂｕ、３－ニトロ－２－ピリジンスルフェニル、２－ピリジンスルフェニルまたはトリフェニルメチル）であり；それぞれのＲｂｂは、独立して、水素、置換された（例えば、１個または複数個のハロゲンで置換された）もしくは無置換のＣ_１～１０アルキルまたは窒素保護基（例えば、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｃｂｚ、Ｆｍｏｃ、トリフルオロアセチル、トリフェニルメチル、アセチルまたはＴｓ）である。

【0148】

ある特定の態様では、炭素原子の置換基の分子量は、２５０ｇ／ｍｏｌよりも少なく、２００ｇ／ｍｏｌよりも少なく、１５０ｇ／ｍｏｌよりも少なく、１００ｇ／ｍｏｌよりも少なく、または５０ｇ／ｍｏｌよりも少ない。ある特定の態様では、炭素原子の置換基は、炭素、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、酸素、硫黄、窒素および／またはケイ素原子からなる。ある特定の態様では、炭素原子の置換基は、炭素、水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、酸素、硫黄および／または窒素原子からなる。ある特定の態様では、炭素原子の置換基は、炭素、水素、フッ素、塩素、臭素および／またはヨウ素原子からなる。ある特定の態様では、炭素原子の置換基は、炭素、水素、フッ素および／または塩素原子からなる。

【0149】

「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フッ素（フルオロ、－Ｆ）、塩素（クロロ、－Ｃｌ）、臭素（ブロモ、－Ｂｒ）またはヨウ素（ヨード、－Ｉ）を指す。

【0150】

「ヒドロキシル」または「ヒドロキシ」という用語は、－ＯＨ基を指す。「置換されたヒドロキシル」または「置換されたヒドロキシル」という用語は、ひいては、親分子に直接結合する酸素原子が、水素以外の基で置換されたヒドロキシル基を指し、－ＯＲ^ａａ、－ＯＮ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＯＣＯ_２Ｒ^ａａ、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＯＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、－ＯＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ、－ＯＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＯＳ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＯＳＯ_２Ｒ^ａａ、－ＯＳｉ（Ｒ^ａａ）_３、－ＯＰ（Ｒ^ｃｃ）_２、－ＯＰ（Ｒ^ｃｃ）_３ ^＋Ｘ^－、－ＯＰ（ＯＲ^ｃｃ）_２、－ＯＰ（ＯＲ^ｃｃ）_３ ^＋Ｘ^－、－ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２および－ＯＰ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒ^ｂｂ））_２から選択される基を含み、式中、Ｘ^－、Ｒ^ａａ、Ｒ^ｂｂおよびＲ^ｃｃは、本明細書に定義される通りである。

【0151】

「チオール」または「チオ」という用語は、－ＳＨ基を指す。「置換されたチオール」または「置換されたチオ」という用語は、ひいては、親分子に直接結合する硫黄原子が、水素以外の基で置換されたチオール基を指し、－ＳＲ^ａａ、－Ｓ＝ＳＲ^ｃｃ、－ＳＣ（＝Ｓ）ＳＲ^ａａ、－ＳＣ（＝Ｓ）ＯＲ^ａａ、－ＳＣ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＳＣ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、－ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲ^ａａ、－ＳＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２および－ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａから選択される基を含み、式中、Ｒ^ａａおよびＲ^ｃｃは、本明細書に定義される通りである。

【0152】

「アミノ」という用語は、－ＮＨ_２基を指す。「置換されたアミノ」という用語は、ひいては、一置換アミノ、二置換アミノまたは三置換アミノを指す。ある特定の態様では、「置換されたアミノ」は、一置換アミノ基または二置換アミノ基である。

【0153】

「一置換アミノ」という用語は、親分子に直接結合する窒素原子が、１個の水素および水素以外の１個の基で置換されたアミノ基を指し、－ＮＨ（Ｒ^ｂｂ）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＮＨＣＯ_２Ｒ^ａａ、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＮＨＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＮＨＳＯ_２Ｒ^ａａ、－ＮＨＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２および－ＮＨＰ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２）_２から選択される基を含み、式中、Ｒ^ａａ、Ｒ^ｂｂおよびＲ^ｃｃは、本明細書に定義される通りであり、－ＮＨ（Ｒ^ｂｂ）基のＲ^ｂｂは、水素ではない。

【0154】

「二置換アミノ」という用語は、親分子に直接結合する窒素原子が、水素以外の２個の基で置換されたアミノ基を指し、－Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、－ＮＲ^ｂｂＣＯ_２Ｒ^ａａ、－ＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＮＲ^ｂｂＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＮＲ^ｂｂＳＯ_２Ｒ^ａａ、－ＮＲ^ｂｂＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２および－ＮＲ^ｂｂＰ（＝Ｏ）（Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２）_２から選択される基を含み、式中、Ｒ^ａａ、Ｒ^ｂｂおよびＲ^ｃｃは、本明細書に定義される通りであり、ただし、親分子に直接結合する窒素原子は水素で置換されていない。

【0155】

「三置換アミノ」という用語は、親分子に直接結合する窒素原子が、３個の基で置換されたアミノ基を指し、－Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_３および－Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_３ ^＋Ｘ^－から選択される基を含み、式中、Ｒ^ｂｂおよびＸ^－は、本明細書に定義される通りである。

【0156】

「スルホニル」という用語は、－ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－ＳＯ_２Ｒ^ａａおよび－ＳＯ_２ＯＲ^ａａから選択される基を指し、式中、Ｒ^ａａおよびＲ^ｂｂは、本明細書に定義される通りである。

【0157】

「スルフィニル」という用語は、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ基を指し、式中、Ｒ^ａａは、本明細書に定義される通りである。

【0158】

「アシル」という用語は、一般式－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^Ｘ１、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^Ｘ１、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^Ｘ１、－Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^Ｘ１、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｘ１）_２、－Ｃ（＝Ｓ）Ｒ^Ｘ１、－Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｘ１）_２および－Ｃ（＝Ｓ）Ｓ（Ｒ^Ｘ１）、－Ｃ（＝ＮＲ^Ｘ１）Ｒ^Ｘ１、－Ｃ（＝ＮＲ^Ｘ１）ＯＲ^Ｘ１、－Ｃ（＝ＮＲ^Ｘ１）ＳＲ^Ｘ１、ならびに－Ｃ（＝ＮＲ^Ｘ１）Ｎ（Ｒ^Ｘ１）_２を有する基を指し、式中、Ｒ^Ｘ１は、水素；ハロゲン；置換もしくは無置換のヒドロキシル；置換もしくは無置換のチオール；置換もしくは無置換のアミノ；置換もしくは無置換のアシル、環式もしくは非環式の、置換もしくは無置換の、分枝状もしくは非分枝状脂肪族；環式もしくは非環式の、置換もしくは無置換の、分枝状もしくは非分枝状のヘテロ脂肪族；環式もしくは非環式の、置換もしくは無置換の、分枝状もしくは非分枝状のアルキル；環式もしくは非環式の、置換もしくは無置換の、分枝状もしくは非分枝状のアルケニル；置換もしくは無置換のアルキニル；置換もしくは無置換のアリール、置換もしくは無置換のヘテロアリール、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、モノもしくはジ脂肪族アミノ、モノもしくはジヘテロ脂肪族アミノ、モノもしくはジアルキルアミノ、モノもしくはジヘテロアルキルアミノ、モノもしくはジアリールアミノまたはモノもしくはジヘテロアリールアミノであり；あるいは、２個のＲ^Ｘ１基は、一緒になって、５～６員複素環式環を形成する。例示的なアシル基としては、アルデヒド（－ＣＨＯ）、カルボン酸（－ＣＯ_２Ｈ）、ケトン、ハロゲン化アシル、エステル、アミド、イミン、カーボネート、カルバメートおよび尿素が挙げられる。アシル置換基としては、限定されるものではないが、安定な部分の形成をもたらす本明細書に記載される置換基のいずれかが挙げられる（例えば、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、オキソ、イミノ、チオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、 ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシなど、それらのそれぞれは、さらに置換されていてもよく、またはさらに置換されていなくてもよい）。

【0159】

「カルボニル」という用語は、親分子に直接結合する炭素が、ｓｐ^２混成であり、酸素、窒素または硫黄原子で置換された基、例えば、ケトン（－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ）、カルボン酸（－ＣＯ_２Ｈ）、アルデヒド（－ＣＨＯ）、エステル（－ＣＯ_２Ｒ^ａａ、－Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、－Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ａａ）、アミド（－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^ｂｂＳＯ_２Ｒ^ａａ、－Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２）およびイミン（－Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、－Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ）、－Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２）から選択される基を指し、式中、Ｒ^ａａおよびＲ^ｂｂは、本明細書に定義される通りである。

【0160】

本明細書で使用される場合、「塩（ｓａｌｔ）」または「塩（ｓａｌｔｓ）」という用語は、本発明の化合物の酸付加塩または塩基付加塩を指す。「塩」としては、特に、「薬学的に許容される塩」が挙げられる。

【0161】

「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物の生物学的な有効性および特性を保持し、典型的には、生物学的にもその他の点で望ましくはないものでもない、塩を指す。多くの場合では、本発明の化合物は、アミノ基および／もしくはカルボキシル基、またはそれらに類似する基の存在のおかげで、酸および／または塩基の塩を形成することができる。

【0162】

薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸および有機酸と形成され得、例えば、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、臭化物／臭化水素酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、カンファースルホン酸塩、塩化物／塩酸塩、クロルテオフィロネート（chlortheophyllonate）、クエン酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフトエ酸塩、ナプシレート、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロ酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩およびトリフルオロ酢酸塩であり得る。

【0163】

塩が由来し得る無機酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。

【0164】

塩が由来し得る有機酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸、スルホサリチル酸などが挙げられる。薬学的に許容される塩基付加塩は、無機塩基および有機塩基と形成され得る。

【0165】

塩が由来し得る無機塩基としては、例えば、アンモニウム塩、および周期表のＩ～ＸＩＩ列からの金属が挙げられる。ある特定の態様では、塩は、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銀、亜鉛および銅に由来し、特に好適な塩としては、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウムおよびマグネシウムの塩が挙げられる。

【0166】

塩が由来し得る有機塩基としては、例えば、第一級、第二級および第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂などが挙げられる。ある特定の有機アミンとしては、イソプロピルアミン、ベンザチン、コリネート、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、リシン、メグルミン、ピペラジンおよびトロメタミンが挙げられる。

【0167】

本開示の薬学的に許容される塩は、従来の化学方法によって、親化合物の塩基性または酸性部分から合成することができる。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸形態を化学量論量の適切な塩基（例えば、Ｎａ、Ｃａ、ＭｇまたはＫの水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩など）と反応させることによって、またはこれらの化合物の遊離塩基形態を化学量論量の適切な酸と反応させることによって、調製することができる。そのような反応は、典型的には、水中もしくは有機溶媒中、またはその２つの混合物中で行われる。一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルのような非水性媒体の使用は、使用可能な場合、望ましい。さらなる好適な塩のリストは、例えば、"Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985)；および"Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH. Weinheim, Germany, 2002)に見出すことができる。

【0168】

ＳＭＮ１をコードする組換え核酸
一部の態様では、ＳＭＡを処置するための組合せ治療は、本明細書に記載される他の治療（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯまたはＳＭＮ機能を増加させる低分子）に加えて、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸の投与（例えば、併せてまたは逐次に）を含む（例えば、ｒＡＡＶなどのウイルスベクターで投与される）。一部の態様では、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸（本明細書では、組換えＳＭＮ１遺伝子とも称される）は、プロモーターに（例えば、運動ニューロン細胞中で活性なプロモーターに）機能的に連結されたＳＭＮ１遺伝子を含む。一部の態様では、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸は、非ウイルスベクター中（例えば、非ウイルスプラスミド中）で提供される。しかしながら、一部の態様では、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸は、組換えウイルスベクター中（例えば、ウイルスキャプシド内にパッケージングされた組換えウイルスゲノム中）で提供される。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子は、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ゲノムで提供され、ＡＡＶキャプシド粒子内にパッケージングされる。

【0169】

一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子は、ウイルスベクターで対象に投与される。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子は、隣接ＡＡＶ逆位末端反復配列（ＩＴＲ）を含む組換えＡＡＶゲノムで投与される。したがって、一部の態様では、ＳＭＮ１をコードする遺伝子を含む組換えウイルス粒子（例えば、ｒＡＡＶ粒子）は、ＳＭＮ２ ＡＳＯと一緒に対象に投与される。

【0170】

図２は、プロモーターに作動可能に連結されたＳＭＮ１遺伝子を含む組換えウイルスゲノムの非限定的な例を提供する。図２は、ＡＡＶ ＩＴＲに挟まれたＳＭＮ１遺伝子を図示する。ＳＭＮ１遺伝子は、ヒトＳＭＮ１コドン最適化ＳＭＮ１オープンリーディングフレームを含み、ＣＢ７プロモーター（サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーを有するニワトリベータアクチンプロモーター）に作動可能に連結される。組換えＡＡＶゲノムは、ニワトリベータ－アクチンイントロンおよびウサギベータ－グロビンポリＡシグナルも含む。図２に図示されるｒＡＡＶゲノムは、非限定的なものであり、代替のＳＭＮ１コード配列、プロモーターおよび他の調節エレメントを使用することができる。

【0171】

一部の態様では、ｒＡＡＶゲノムは、ウイルスキャプシド中にパッケージングされる。一部の態様では、キャプシドタンパク質は、ｈｕ６８血清型キャプシドタンパク質である。しかしながら、他の血清型の他のキャプシドタンパク質を使用することができる。

【0172】

組換えＳＭＮ１遺伝子のこれらの態様および他の態様を、以下の段落において、より詳細に記載する。

【0173】

ＳＭＮ１コード配列：
一部の態様では、野生型ヒトＳＭＮタンパク質をコードするコード配列（例えば、ＳＭＮ１ ｃＤＮＡ配列）が提供される。ヒトＳＭＮ１をコードする核酸配列は、当技術分野において公知である。例えば、ヒトＳＭＮ１の核酸配列の非限定的な例について、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１２９７７１５．１；ＮＭ＿０００３４４．３；ＮＭ＿０２２８７４．２．、ＤＱ８９４０９５、ＮＭ＿０００３４４、ＮＭ＿０２２８７４およびＢＣ０６２７２３を参照されたい。野生型ヒトＳＭＮタンパク質についてのアミノ酸配列の非限定的な例は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｑ１６６３７．１において提供される。ＳＭＮ１コード配列が記載されている他の刊行物は、例えば、それらの全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１０１２９０２１号Ａ１および国際公開第２００９１５１５４６号Ａ２を参照されたい。

【0174】

一部の態様では、機能性ＳＭＮタンパク質をコードするコード配列が提供される。一部の態様では、機能性ＳＭＮ１のアミノ酸配列は、ヒトＳＭＮ１タンパク質のものであるか、またはそれと９５％の同一性を共有する配列である。

【0175】

一部の態様では、改変ｈＳＭＮ１コード配列が提供される。一部の態様では、改変ｈＳＭＮ１コード配列は、全長ネイティブｈＳＭＮ１コード配列と、約８０％未満の同一性、好ましくは、約７５％またはそれよりも低い同一性を有する。一部の態様では、改変ｈＳＭＮ１コード配列は、ＡＡＶ媒介送達（例えば、ｒＡＡＶ粒子を使用する）の後、ネイティブｈＳＭＮ１と比較して、改善された翻訳率によって特徴付けられる。一部の態様では、改変ｈＳＭＮ１コード配列は、全長ネイティブｈＳＭＮ１コード配列と、約８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７４％、７３％、７２％、７１％、７０％、６９％、６８％、６７％、６６％、６５％、６４％、６３％、６２％、６１％未満、またはそれよりも低い同一性を共有する。

【0176】

「同一性パーセント（％）」、「配列同一性」、「配列同一性パーセント」または「同一パーセント」という用語は、核酸配列の文脈では、対応させるために整列させたときに同じである２つの配列中の残基を指す。配列同一性の比較の長さは、ゲノムの全長にわたっていてもよく、遺伝子コード配列の全長、または少なくとも約５００～５０００ヌクレオチドの断片が望ましい。しかしながら、より小さな断片、例えば、少なくとも約９ヌクレオチド、通常、少なくとも約２０～２４ヌクレオチド、少なくとも約２８～３２ヌクレオチド、少なくとも約３６またはそれよりも多くのヌクレオチドの間での同一性が望ましい場合もある。

【0177】

「整列された」配列または「整列」は、参照配列と比較して、多くの場合、塩基もしくはアミノ酸の欠失または付加に対する補正を含有する、複数の核酸配列またはタンパク質（アミノ酸）配列を指す。

【0178】

整列は、種々の公的または商業的に利用可能な複数の配列整列プログラムのいずれかを使用して行うことができる。配列整列プログラムは、アミノ酸配列に対して利用可能であり、例えば、「Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ」、「ＭＡＰ」、「ＰＩＭＡ」、「ＭＳＡ」、「ＢＬＯＣＫＭＡＫＥＲ」、「ＭＥＭＥ」および「Ｍａｔｃｈ－Ｂｏｘ」プログラムが利用可能である。一般に、これらのプログラムのいずれかは、デフォルト設定で使用されるが、当業者であれば、必要により、これらの設定を変更することができる。あるいは、当業者であれば、参照アルゴリズムおよび参照プログラムによって提供されるものと少なくとも同一性または整列のレベルを提供する別のアルゴリズムまたはコンピュータープログラムを利用することができる。例えば、J. D. Thomson et al, Nucl. Acids. Res., "A comprehensive comparison of multiple sequence alignments", 27(13):2682-2690 (1999)を参照されたい。

【0179】

複数の配列整列プログラムが、核酸配列についても利用可能である。そのようなプログラムの例としては、「Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ」、「ＣＡＰ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｓｓｅｍｂｌｙ」、「ＢＬＡＳＴ」、「ＭＡＰ」および「ＭＥＭＥ」が挙げられ、これらは、インターネット上のウェブサーバーを通じてアクセス可能である。そのようなプログラムの他の供給元は、当業者に公知である。あるいは、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩユーティリティも使用される。上記に記載されるプログラムに含有されるものを含め、ヌクレオチド配列同一性を測定するために使用され得る当技術分野において公知の多くのアルゴリズムもある。別の例として、ポリヌクレオチド配列は、ＧＣＧバージョン６．１中のプログラムであるＦａｓｔａ（商標）を使用して比較することができる。Ｆａｓｔａ（商標）は、クエリ配列および検索配列の間で最適な重複の領域の整列および配列同一性パーセントを提供する。例えば、核酸配列間の配列同一性パーセントは、参照により本明細書に組み込まれるＧＣＧバージョン６．１中で提供されるＦａｓｔａ（商標）とそのデフォルトパラメーター（ワードサイズ６、およびスコアリング行列のためのＮＯＰ ＡＭ係数）とを使用して決定することができる。

【0180】

一部の態様では、改変ｈＳＭＮ１コード配列は、対象種における発現について最適化されたコドン最適化配列である。本明細書で使用される場合、「対象」は哺乳動物、例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、またはサル、チンパンジー、ヒヒもしくはゴリラなどの非ヒト霊長類である。一部の態様では、対象は、ヒトである。したがって、一部の態様では、ＳＭＮ１コード配列は、ヒトにおける発現についてコドンが最適化される。

【0181】

コドン最適化コード領域は、さまざまな異なる方法によって設計することができる。この最適化は、オンラインで利用可能な方法（例えば、ＧｅｎｅＡｒｔ）、公開された方法、またはコドン最適化サービスを提供する企業、例えば、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ）を使用して行ってもよい。１つのコドン最適化方法は、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国の国際公開第２０１５／０１２９２４号に記載されている。例えば、米国特許出願公開第２０１４／００３２１８６号および米国特許出願公開第２００６／０１３６１８４号も参照されたい。

【0182】

一部の態様では、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の全長が改変される。しかしながら、一部の態様では、ＯＲＦの断片のみが変更される。これらの方法の１つを使用することによって、任意の所与のポリペプチド配列に頻度を適用し、ポリペプチドをコードするコドン最適化コード領域の核酸断片を生成することができる。したがって、一部の態様では、コドン最適化ＳＭＮ１コード配列が使用される（例えば、コドン最適化ｈＳＭＮ１ ＯＲＦ）。一部の態様では、ＳＭＮ１コード配列の１つまたは複数の部分（例えば、最大でＯＲＦ全体）が、ヒトにおける発現についてコドン最適化される。

【0183】

多くの選択肢が、コドンに対する実際の変更を行うため、または本明細書に記載されるように設計されるコドン最適化コード領域を合成するために利用可能である。そのような改変または合成は、当業者に周知の標準的および日常的な分子生物学的操作を使用して行うことができる。１つの手法では、長さがそれぞれ８０～９０ヌクレオチドの、所望の配列の長さにおよぶ一連の相補的オリゴヌクレオチド対が、標準的な方法によって合成される。これらのオリゴヌクレオチド対は、アニーリングの際に、それらが、付着末端を含有する８０～９０塩基対の二本鎖断片を形成するように合成され、例えば、対におけるそれぞれのオリゴヌクレオチドは、対における他のオリゴヌクレオチドに相補的である領域を超えて３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれよりも多くの塩基が伸長するように合成される。オリゴヌクレオチドのそれぞれの対の一本鎖末端は、オリゴヌクレオチドの別の対の一本鎖末端とアニーリングするように設計される。オリゴヌクレオチド対はアニーリングすることが可能であり、次いで、これらの二本鎖断片のおよそ５～６つは、付着一本鎖末端を介して一緒にアニーリングすることが可能であり、次いで、それらは、一緒にライゲートされ、標準的な細菌クローニングベクター、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆから利用可能なＴＯＰＯ（登録商標）ベクターにクローニングされる。次いで、構築物は、標準的な方法によって配列決定される。所望の配列全体が、一連のプラスミド構築物で表されるように、一緒にライゲートされた８０～９０の塩基対断片の５～６の断片、すなわち、約５００塩基対の断片からなるこれらの構築物のいくつかが、調製される。次いで、これらのプラスミドの挿入物が、適切な制限酵素で切断され、一緒にライゲートされて、最終構築物が形成される。次いで、最終構築物は、標準的な細菌クローニングベクターにクローニングされ、配列決定される。追加または代替の方法も使用され得る（例えば、商業的に利用可能な遺伝子合成サービスを含む）。

【0184】

一部の態様では、ＳＭＮｌ ｃＤＮＡ配列は、当技術分野において公知の技法を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成的に作製することができる。例えば、Xiong et al, PCR-based accurate synthesis of long DNA sequences, Nature Protocols 1, 791 - 797 (2006)に記載されているように、長鎖ＤＮＡ配列のＰＣＲに基づく高精度合成（ＰＡＳ）法を利用してもよい。二重非対称ＰＣＲ法およびオーバーラップ伸長ＰＣＲ法を組み合わせる方法は、Young and Dong, Two-step total gene synthesis method, Nucleic Acids Res. 2004; 32(7): e59によって記載されている。Gordeeva et al, J Microbiol Methods. Improved PCR-based gene synthesis method and its application to the Citrobacter freundii phytase gene codon modification. 2010 May;81(2): 147-52. Epub 2010 Mar 10も参照されたい；またオリゴヌクレオチド合成および遺伝子合成に対する以下の特許のGene Seq. 2012 Apr;6(l): 10-21；米国特許第８００８００５号および米国特許第７９８５５６５号も参照されたい。これらの文書のそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。加えて、ＰＣＲを介してＤＮＡを作製するためのキットおよびプロトコールが商業的に利用可能である。これらには、限定されないが、Ｔａｑポリメラーゼ；ＯｎｅＴａｑ（登録商標）（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）；Ｑ５（登録商標）Ｈｉｇｈ－Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）；およびＧｏＴａｑ（登録商標）Ｇ２ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を含む、ポリメラーゼの使用を含む。ＤＮＡはまた、本明細書に記載されるｈＳＭＮ配列を含有するプラスミドをトランスフェクトされた細胞からも作製されてもよい。キットおよびプロトコールは、公知であり、商業的に利用可能であり、限定されないが、ＱＩＡＧＥＮプラスミドキット；Ｃｈａｒｇｅｓｗｉｔｃｈ（登録商標）Ｐｒｏ Ｆｉｌｔｅｒ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｋｉｔｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）；およびＧｅｎＥｌｕｔｅ（商標）Ｐｌａｓｍｉｄ Ｋｉｔｓ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）が挙げられる。本明細書で有用な他の技法としては、熱循環についての必要性を除いた配列特異的な等温増幅法が挙げられる。熱の代わりに、これらの方法は、典型的には、Ｂｓｔ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、Ｌａｒｇｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）のような鎖置換ＤＮＡポリメラーゼを用いて、二本鎖ＤＮＡを分離する。ＤＮＡはまた、ＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼである逆転写酵素（ＲＴ）の使用を介した増幅によりＲＮＡ分子から作製されてもよい。ＲＴは、元のＲＮＡ鋳型に相補的でありｃＤＮＡと称される、ＤＮＡの鎖を重合する。次いで、このｃＤＮＡは、上記で概説されたＰＣＲ法または等温法によりさらに増幅され得る。カスタムＤＮＡは、限定されないが、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ；ＧＥＮＥＷＩＺ（登録商標）；ＧｅｎｅＡｒｔ（登録商標）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）；およびＩｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓを含む企業から商業的に作製することもできる。

【0185】

「機能性ＳＭＮ１」とは、ネイティブＳＭＮタンパク質をコードする遺伝子、あるいは少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、もしくはほぼ同じ、または１００％より高いネイティブ生存運動ニューロンタンパク質の生物活性レベルを提供する別のＳＭＮタンパク質をコードする遺伝子、あるいは疾患に関連しないそれらの天然バリアントまたは多型を意味する。加えて、ＳＭＮｌホモログであるＳＭＮ２はまた、ＳＭＮタンパク質をコードするが、機能性タンパク質のプロセシングはあまり効率的ではない。ＳＭＮ２のコピー数に基づいて、機能性ｈＳＭＮｌ遺伝子を欠く対象は、異なる程度のＳＭＡを実証する。したがって、一部の対象については、ＳＭＮタンパク質がネイティブＳＭＮタンパク質の生物活性の１００％未満を提供し得ることが望ましい場合がある。

【0186】

一部の態様では、そのような機能性ＳＭＮは、ネイティブタンパク質に対して約９５％もしくはそれよりも高い、またはアミノ酸レベルで、約９７％もしくはそれよりも高い、または約９９％の同一性を有する配列を有する。そのような機能性ＳＭＮタンパク質は、天然の多型も包含し得る。同一性は、配列の整列を準備することによって、ならびに当技術分野において公知のもしくは商業的に利用可能な種々のアルゴリズムおよび／またはコンピュータープログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＥｘＰＡＳｙ；ＣｌｕｓｔａｌＯ；ＦＡＳＴＡ；例えば、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム、Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを使用すること）の使用により、決定され得る。

【0187】

同一性パーセントは、タンパク質の全長、ポリペプチド、約３２アミノ酸、約３３０アミノ酸もしくはそのペプチド断片にわたるアミノ酸配列、または配列をコードする対応する核酸配列について、容易に決定され得る。好適なアミノ酸断片は、少なくとも約８アミノ酸長であり得、最大で約７００アミノ酸であり得る。一般に、２つの異なる配列間の「同一性」、「相同性」または「類似性」に言及する場合、「同一性」、「相同性」または「類似性」は、「整列された」配列に関して決定される。

【0188】

一部の態様では、本明細書に記載される改変ＳＭＮ１（例えば、ｈＳＭＮ１）遺伝子は、ウイルスベクターを作製するため、および／または宿主細胞に送達するために有用な、そこに運ばれるＳＭＮ１配列を移す、好適な遺伝エレメント（例えば、ベクター）、例えば、ネイキッドＤＮＡ、ファージ、トランスポゾン、コスミド、エピソームなどへと操作される。選択されるベクターは、トランスフェクション、電気穿孔、リポソーム送達、膜融合技法、高速度ＤＮＡコーティングペレット、ウイルス感染およびプロトプラスト融合を含む任意の好適な方法によって送達され得る。そのような構築物を作製するために使用される方法は、核酸操作における当業者に公知であり、遺伝子操作、組換え操作および合成技法が挙げられる。例えば、Sambrook et al, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NYを参照されたい。

【0189】

一部の態様では、ＳＭＮ１（例えば、ｈＳＭＮ１）核酸配列（複数可）を含む発現カセットが提供される。本明細書で使用される場合、「発現カセット」は、プロモーターに作動可能に連結されたＳＭＮ１配列を含み、他の調節配列を含んでいてもよい核酸分子を指す。一部の態様では、発現カセットは、ウイルスベクターのキャプシド（例えば、ウイルス粒子）にパッケージングされる。典型的には、ウイルスベクターを作製するためのそのような発現カセットは、ウイルスゲノムのパッケージングシグナルおよび本明細書に記載されるものなどの他の発現制御配列に挟まれた本明細書に記載されるＳＭＮ１（例えば、ｈＳＭＮ１）配列を含有する。例えば、ＡＡＶウイルスベクターについて、パッケージングシグナルは、５’逆位末端反復配列（ＩＴＲ）および３’ＩＴＲである。ＡＡＶキャプシドにパッケージングされる場合、発現カセットとともにＩＴＲは、本明細書では、ｒＡＡＶ粒子またはキャプシド内の「組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ゲノム」または「ベクターゲノム」と称される。

【0190】

「発現」という用語は、本明細書において、その最も広い意味で使用され、ＲＮＡの産生またはＲＮＡおよびタンパク質の産生を含む。ＲＮＡに関して、「発現」または「翻訳」という用語は、特に、ペプチドまたはタンパク質の産生に関する。発現は、一過性であってもよく、または安定的であってもよい。

【0191】

「翻訳」という用語は、本発明の文脈では、ｍＲＮＡ鎖がアミノ酸配列のアセンブリーを制御して、タンパク質またはペプチドを生成するリボソームでのプロセスに関する。

【0192】

プロモーターおよび調節エレメント：
一部の態様では、発現構築物は、ＳＭＮ１遺伝子のコード配列の発現を促進する配列、例えば、コード配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む１つまたは複数の領域を含む。発現制御配列の非限定的な例としては、プロモーター、インスレーター、サイレンサー、応答エレメント、イントロン、エンハンサー、開始部位、終結シグナルおよびポリ（Ａ）テイルが挙げられる。そのような制御配列の任意の組合せが、本明細書で企図される（例えば、プロモーターおよびエンハンサー）。

【0193】

一部の態様では、発現カセットは、発現制御配列の一部としてプロモーター配列を含有し、例えば、５’ＩＴＲ配列およびＳＭＮ１コード配列の間に位置する。本明細書に記載される例示のプラスミドおよびベクターは、ＣＭＶ前初期エンハンサー（ＣＭＶ ＩＥ）を有するユビキタスニワトリβ－アクチンプロモーター（ＣＢ）を使用する。あるいは、他のニューロン特異的プロモーターが使用されてもよい（例えば、ｈｔｔｐ：／／ｃｈｉｎｏｏｋ．ｕｏｒｅｇｏｎ．ｅｄｕ／ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ．ｈｔｍｌでアクセス可能なＬｏｃｋｅｒｙ Ｌａｂニューロン特異的プロモーターデータベースを参照されたい）。そのようなニューロン特異的プロモーターとしては、限定されないが、シナプシンＩ（ＳＹＮ）、カルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩ、チューブリンアルファＩ、ニューロン特異的エノラーゼおよび血小板由来成長因子ベータ鎖プロモーターが挙げられる。参照により本明細書に組み込まれるHioki et al, Gene Therapy, June 2007, 14(l l):872-82を参照されたい。他のニューロン特異的プロモーターとしては、６７ｋＤａのグルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６７）、ホメオボックスＤｌｘ５／６、グルタミン酸受容体１（ＧｌｕＲｌ）、プレプロタキキニン１（Ｔａｃｌ）、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）およびドーパミン作動性受容体１（Ｄｒｄｌａ）のプロモーターが挙げられる。例えば、Delzor et al, Human Gene Therapy Methods. August 2012, 23(4): 242-254を参照されたい。別の態様では、プロモーターは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｃｉ．Ｏｒｇ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ｖｉｅｗ／４１６１５＃Ｂ３０のＧＵＳｂプロモーターである。

【0194】

構成的プロモーター、調節可能プロモーター（例えば、国際公開第２０１１／１２６８０８号および国際公開第２０１３／０４９４３号を参照されたい）または生理学的な合図に応答性のプロモーターなどの他のプロモーターを使用してもよい。プロモーター（複数可）は、異なる供給源、例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期エンハンサー／プロモーター、ＳＶ４０初期エンハンサー／プロモーター、ＪＣポリオーマウイルスプロモーター、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）またはグリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ－１）潜伏関連プロモーター（ＬＡＰ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ニューロン特異的プロモーター（ＮＳＥ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）プロモーター、ｈＳＹＮ、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）プロモーター、ニワトリベータ－アクチン（ＣＢＡ）プロモーターおよびマトリックス金属タンパク質（ＭＰＰ）プロモーターから選択することができる。

【0195】

プロモーターに加えて、発現カセットおよび／またはベクターは、１つまたは複数の他の適切な転写開始配列、終結配列、エンハンサー配列、スプライシングおよびポリアデニル化（ポリＡ）シグナルなどの有効なＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列、例えばＷＰＲＥ；翻訳効率を増強する配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を増強する配列；ならびに所望される場合、コードされる産物の分泌を増強する配列を含有していてもよい。好適なポリＡ配列の例としては、例えば、ＳＶ４０、ＳＶ５０、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）、ヒト成長ホルモンおよび合成ポリＡが挙げられる。好適なエンハンサーの例は、ＣＭＶエンハンサーである。他の好適なエンハンサーとしては、ＣＮＳの徴候に適したものが挙げられる。一部の態様では、発現カセットは、１つまたは複数の発現エンハンサーを含む。一部の態様では、発現カセットは、２つまたはそれよりも多くの発現エンハンサーを含有する。これらのエンハンサーは、互いに同じであってもよく、または互いに異なっていてもよい。例えば、エンハンサーは、ＣＭＶ前初期エンハンサーを含んでいてもよい。このエンハンサーは、互いに隣接して位置する２つのコピー中に存在していてもよい。あるいは、エンハンサーの二重コピーは、１つまたは複数の配列によって分離されていてもよい。さらに別の態様では、発現カセットは、イントロン、例えば、ニワトリベータ－アクチンイントロンをさらに含有する。他の好適なイントロンとしては、当技術分野において公知のものが挙げられ、例えば、国際公開第２０１１／１２６８０８号などに記載されている。一部の態様では、イントロンは、コード配列の上流に組み込まれて、ｍＲＮＡの５’キャッピングおよび安定性を改善する。必要に応じて、１つまたは複数の他の配列が、ｍＲＮＡが安定化するように選択されてもよい。そのような配列の例は、改変ＷＰＲＥ配列であり、これは、ポリＡ配列の上流およびコード配列の下流の位置で操作され得る（例えば、MA Zanta-Boussif, et al, Gene Therapy (2009) 16: 605-619を参照されたい）。

【0196】

一部の態様では、これらの制御配列は、ＳＭＮ１遺伝子配列に「作動可能に連結され」ている。本明細書で使用される場合、「作動可能に連結される」という用語は、目的の遺伝子と隣接する発現制御配列、およびトランスで作用して、または離れて、目的の遺伝子を制御する発現制御配列の両方を指す。

【0197】

組換えウイルスベクター：
一部の態様では、ＡＡＶキャプシドおよび少なくとも１つの発現カセットを含むアデノ随伴ウイルスベクターが提供される。一部の態様では、少なくとも１つの発現カセットは、ＳＭＮ１をコードする核酸配列、および宿主細胞においてＳＭＮ１配列の発現を指示する発現制御配列を含む。ｒＡＡＶベクター遺伝子は、ＡＡＶ ＩＴＲ配列を含むこともできる。一部の態様では、ＩＴＲは、ｒＡＡＶゲノムをパッケージングするために使用されるキャプシドタンパク質の血清型と異なるＡＡＶ血清型に由来する。一部の態様では、ＩＴＲ配列は、ＡＡＶ２またはその欠失バージョン（ＡＩＴＲ）に由来し、これは、便宜上、および規制当局の承認を加速するために使用され得る。しかしながら、他のＡＡＶ起源由来のＩＴＲを選択してもよい。ＩＴＲの起源がＡＡＶ２由来であり、ＡＡＶキャプシドが別のＡＡＶ起源由来である場合、得られるベクターは、シュードタイプ化と称される場合がある。典型的には、ｒＡＡＶベクターゲノムは、ＡＡＶ ５’ＩＴＲ、ＳＭＮ１コード配列および任意の調節配列、ならびにＡＡＶ ３’ＩＴＲを含む。しかしながら、これらのエレメントの他の配置も好適であり得る。ＡＩＴＲと称される５’ＩＴＲの短縮バージョンが記載されており、そこでは、Ｄ－配列および末端分解部位（ｔｒｓ）が欠失している。他の態様では、全長ＡＡＶ ５’ＩＴＲおよびＡＡＶ ３’ＩＴＲが使用される。

【0198】

本明細書に記載される核酸または核酸ベクターのＩＴＲ配列は、任意のＡＡＶ血清型（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０）に由来し得るか、または２以上の血清型に由来し得る。一部の態様では、ＩＴＲ配列およびＩＴＲ配列を含有するプラスミドは、当技術分野において公知であり、商業的に利用可能である（例えば、Ｖｅｃｔｏｒ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ；Ｃｅｌｌｂｉｏｌａｂｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、ＣａおよびＡｄｄｇｅｎｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡから利用可能な製品およびサービス；ならびにGene delivery to skeletal muscle results in sustained expression and systemic delivery of a therapeutic protein. Kessler PD, Podsakoff GM, Chen X, McQuiston SA, Colosi PC, Matelis LA, Kurtzman GJ, Byrne BJ. Proc Natl Acad Sci U S A. 1996 Nov 26;93(24):14082-7；およびCurtis A. Machida. Methods in Molecular Medicine（商標）. Viral Vectors for Gene Therapy Methods and Protocols. 10.1385/1-59259-304-6:201 (C) Humana Press Inc. 2003. Chapter 10. Targeted Integration by Adeno-Associated Virus. Matthew D. Weitzman, Samuel M. Young Jr., Toni Cathomen and Richard Jude Samulski；米国特許第５，１３９，９４１号および同第５，９６２，３１３号を参照されたい、それらのすべては、参照により本明細書に組み込まれる）。

【0199】

一部の態様では、ｒＡＡＶ核酸またはゲノムは、一本鎖（ｓｓ）であり得る。しかしながら、一部の態様では、ｒＡＡＶ核酸またはゲノムは、自己相補性（ｓｃ）ＡＡＶ核酸ベクターであり得る。一部の態様では、組換えＡＡＶ粒子は、一本鎖（ｓｓ）または自己相補性（ｓｃ）のＡＡＶ核酸ベクターなどの核酸ベクターを含む。一部の態様では、核酸ベクターは、ＳＭＮ１遺伝子、および発現構築物に隣接する逆位末端反復（ＩＴＲ）配列（例えば、野生型ＩＴＲ配列または操作されたＩＴＲ配列）を含む１つまたは複数の領域を含有する。一部の態様では、核酸は、ウイルスキャプシドによってキャプシド封入される。

【0200】

したがって、一部の態様では、ＡＡＶ粒子は、ウイルスキャプシド、およびウイルスキャプシドによってキャプシド封入される本明細書に記載される核酸ベクターを含む。一部の態様では、ウイルスキャプシドは、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３を含む６０個のキャプシドタンパク質サブユニットを含む。一部の態様では、ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３サブユニットは、それぞれ、およそ１：１：１０の比でキャプシド中に存在する。

【0201】

一部の態様では、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）は、標的細胞への送達のために核酸配列がパッケージングされたＡＡＶタンパク質キャプシドを有するＡＡＶ ＤＮａｓｅ抵抗性粒子である。一部の態様では、ＡＡＶキャプシドは、選択されるＡＡＶに応じて、およそ１：１：１０～１：１：２０の比で、正二十面体対称で配置された６０個のキャプシド（ｃａｐ）タンパク質サブユニットのＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３で構成される。ＡＡＶキャプシドは、そのバリアントを含む当業者に公知のものから選択されてもよい。一部の態様では、ＡＡＶキャプシドは、ニューロン細胞を効率的に形質導入するものから選択される。一部の態様では、ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ５、ＡＡＶｈｕ１１、ＡＡＶ８ＤＪ、ＡＡＶｈｕ３２、ＡＡＶｈｕ３７、ＡＡＶｐｉ２、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｈｕ４８Ｒ３、ＡＡＶｈｕ６８およびそれらのバリアントから選択される。それらのそれぞれが参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１８１６０５８５号Ａ２、国際公開第２０１８１６０５８２号Ａ１、Royo, et al, Brain Res, 2008 Jan, 1190: 15-22；Petrosyan et al, Gene Therapy, 2014 Dec, 21(12):991-1000；Holehonnur et al, BMC Neuroscience, 2014, 15:28；およびCearley et al, Mol Ther. 2008 Oct; 16(10): 1710-1718を参照されたい。本明細書で有用な他のＡＡＶキャプシドとしては、ＡＡＶｒｈ３９、ＡＡＶｒｈ２０、ＡＡＶｒｈ２５、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｂｂ１およびＡＡＶｂｂ２、ならびにそれらのバリアントが挙げられる。例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ６４Ｒｌ、ＡＡＶｒｈ６４Ｒ２、ＡＡＶｒｈ８、および公知もしくは言及されたＡＡＶまたはまだ発見されていないＡＡＶのいずれかのバリアントを含む、他のＡＡＶ血清型を、ＡＡＶウイルスベクター（ＤＮａｓｅ抵抗性ウイルス粒子）のキャプシドのための起源として選択してもよい。例えば、米国特許出願公開第２００７－００３６７６０号Ａ１；米国特許出願公開第２００９－０１９７３３８号Ａ１；欧州特許出願公開第１３１０５７１号を参照されたい。国際公開第２００３／０４２３９７号（ＡＡＶ７および他のサルＡＡＶ）、米国特許第７７９０４４９号および米国特許第７２８２１９９号（ＡＡＶ８）、国際公開第２００５／０３３３２１号および米国特許第７，９０６，１１１号（ＡＡＶ９）、ならびに国際公開第２００６／１１０６８９号、ならびに国際公開第２００３／０４２３９７号（ｒｈ１０）も参照されたい。あるいは、列挙されたＡＡＶのいずれかに基づく組換えＡＡＶを、ＡＡＶキャプシドのための起源として使用してもよい。これらの文書は、ＡＡＶを作製するために選択され得る他のＡＡＶも記載しており、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ウイルスベクターにおける使用のためのＡＡＶ ｃａｐは、前述のＡＡＶ Ｃａｐの１つまたはそのコード核酸の変異誘発によって（例えば、挿入、欠失または置換によって）作製することができる。一部の態様では、ＡＡＶキャプシドは、前述のＡＡＶキャプシドタンパク質の２つまたは３つまたは４つまたはそれよりも多くに由来するドメインを含むキメラである。一部の態様では、ＡＡＶキャプシドは、２つもしくは３つの異なるＡＡＶまたは組換えＡＡＶに由来するＶｐ１、Ｖｐ２およびＶｐ３モノマーのモザイクである。一部の態様では、ｒＡＡＶ組成物は、前述のＣａｐの２つ以上を含む。本明細書で使用される場合、ＡＡＶに関して、バリアントという用語は、公知のＡＡＶ配列に由来する任意のＡＡＶ配列を意味し、アミノ酸配列または核酸配列にわたって、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、またはそれよりも高い配列同一性を共有するものを含む。別の態様では、ＡＡＶキャプシドとしては、記載されるまたは公知のＡＡＶキャプシド配列のいずれかと最大で約１０％の変動を含み得るバリアントが挙げられる。すなわち、ＡＡＶキャプシドは、本明細書で提供される、および／または当技術分野において公知のＡＡＶキャプシドと、約９０％の同一性～約９９．９％の同一性、約９５％～約９９％の同一性、または約９７％～約９８％の同一性を共有する。一部の態様では、ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶキャプシドと少なくとも９５％の同一性を共有する。ＡＡＶキャプシドの同一性パーセントを決定する場合、比較を、可変タンパク質（例えば、ｖｐ１、ｖｐ２またはｖｐ３）のいずれかにわたって行い得る。一部の態様では、ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶ８ ｖｐ３と少なくとも９５％の同一性を共有する。

【0202】

一部の態様では、自己相補性ＡＡＶが提供される。この文脈における「ｓｃ」という略語は、自己相補性を指す。「自己相補性ＡＡＶ」は、組換えＡＡＶ核酸配列によって運ばれるコード領域が、分子内二本鎖ＤＮＡ鋳型を形成するように設計されている構築物を指す。感染の際に、第２の鎖の細胞媒介合成を待つよりもむしろ、ｓｃＡＡＶの２つの相補性の半分が会合して、即時の複製および転写の準備が整った１つの二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）ユニットが形成される。例えば、D M McCarty et al, "Self-complementary recombinant adeno-associated virus (scAAV) vectors promote efficient transduction independently of DNA synthesis", Gene Therapy, (August 2001), Vol 8, Number 16, Pages 1248-1254を参照されたい。自己相補性ＡＡＶは、例えば、米国特許第６，５９６，５３５号、同第７，１２５，７１７号および同第７，４５６，６８３号に記載されており、それらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0203】

対象への送達に好適なＡＡＶウイルスベクターを作製および単離するための方法は、当技術分野において公知である。例えば、米国特許出願公開第２００７／００３６７６０号（２００７年２月１５日）、米国特許第７７９０４４９号；米国特許第７２８２１９９号；国際公開第２００３／０４２３９７号；国際公開第２００５／０３３３２１号、国際公開第２００６／１１０６８９号；および米国特許第７５８８７７２号Ｂ２を参照されたい。１つの系では、産生細胞系は、ＩＴＲに挟まれた導入遺伝子をコードする構築物、ならびにｒｅｐおよびｃａｐをコードする構築物（複数可）で、一過性にトランスフェクトされる。第２の系では、ｒｅｐおよびｃａｐを安定的に供給するパッケージング細胞系は、ＩＴＲに挟まれた導入遺伝子をコードする構築物で一過性にトランスフェクトされる。これらの系のそれぞれでは、ＡＡＶビリオンが、ヘルパーアデノウイルスまたはヘルペスウイルスによる感染に応答して産生し、混入ウイルスからのｒＡＡＶの分離が必要である。ＡＡＶを回復させるためのヘルパーウイルスによる感染を必要としない系も開発されており、必要なヘルパー機能（例えば、アデノウイルスのＥｌ、Ｅ２ａ、ＶＡおよびＥ４、またはヘルペスウイルスのＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ５２およびＵＬ２９、ならびにヘルペスウイルスポリメラーゼ）も系によってトランスで供給される。これらの系では、ヘルパー機能は、必要なヘルパー機能をコードする構築物による細胞の一過性トランスフェクションによって供給することができ、または細胞は、ヘルパー機能をコードする遺伝子を安定に含有するように操作することができ、その発現は、転写または転写後レベルで制御することができる。さらに別の系では、ＩＴＲに挟まれた導入遺伝子およびｒｅｐ／ｃａｐ遺伝子は、バキュロウイルス系ベクターによる感染によって昆虫細胞に導入される。これらの産生系に対する総説については、一般に、例えば、そのそれぞれの内容が、その全体が参照により本明細書に組み込まれるZhang et al, 2009, "Adenovirus-adeno-associated virus hybrid for large-scale recombinant adeno-associated virus production," Human Gene Therapy 20:922-929を参照されたい。これらのおよび他のＡＡＶ産生系を作製および使用する方法は、そのそれぞれの内容が、その全体が参照により本明細書に組み込まれる以下の米国特許にも記載されている：第５，１３９，９４１号；第５，７４１，６８３号；第６，０５７，１５２号；第６，２０４，０５９号；第６，２６８，２１３号；第６，４９１，９０７号；第６，６６０，５１４号；第６，９５１，７５３号；第７，０９４，６０４号；第７，１７２，８９３号；第７，２０１，８９８号；第７，２２９，８２３号および第７，４３９，０６５号。

【0204】

必要に応じて、本明細書に記載されるＳＭＮ１遺伝子を使用して、ｒＡＡＶ以外のウイルスベクターを作製してもよく、これはまた、ＳＭＮ２ ＡＳＯとの併用療法において使用することができる。そのような他のウイルスベクターとしては、使用され得る遺伝子治療に好適な任意のウイルスが挙げられ得、限定されるものではないが、アデノウイルス；ヘルペスウイルス；レンチウイルス；レトロウイルスなどが挙げられる。好適には、これらの他のベクターの１つが作製される場合、それは、複製欠陥ウイルスベクターとして生成される。

【0205】

「複製欠陥ウイルス」または「ウイルスベクター」は、目的の遺伝子を含有する発現カセットがウイルスキャプシドもしくはエンベロープにパッケージングされた合成または人工ウイルス粒子を指し、ここで、ウイルスキャプシドまたはエンベロープ内にパッケージングされる任意のウイルスゲノム配列も複製欠損であり、すなわち、それらは、子孫ビリオンを生成することができないが、標的細胞に感染する能力を保持する。一部の態様では、ウイルスベクターのゲノムは、複製に必要な酵素をコードする遺伝子を含まないが（ゲノムは、「弱く」なるように操作され得、人工ゲノムの増幅およびパッケージングに必要なシグナルに挟まれた目的の導入遺伝子のみを含有する）、これらの遺伝子は、産生の間に供給され得る。したがって、子孫ビリオンによる複製および感染が、複製に必要なウイルス酵素が存在する場合を除いて起こり得ないので、遺伝子治療における使用のために安全と見なされる。そのような複製欠陥ウイルスは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス（組み込み型もしくは非組み込み型）、または別の好適なウイルス起源であり得る。

【0206】

開示されるＡＡＶ粒子、発現構築物または核酸ベクターの少なくとも１つを含む宿主細胞も提供される。そのような宿主細胞としては、哺乳動物宿主細胞、例えば、ヒト宿主細胞が挙げられ、細胞培養または組織培養のいずれかにおいて単離され得る。遺伝子改変動物モデル（例えば、マウス）の場合では、形質転換される宿主細胞は、非ヒト動物それ自体の身体内に含まれていてもよい。

【0207】

全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの産生を増加させるオリゴマー化合物
一部の態様では、ＳＭＡを処置するための組合せ治療は、本明細書に記載される他の治療（例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子および／またはＳＭＮ機能を増加させる低分子）に加えて、ＳＭＮ２をコードするプレｍＲＮＡに相補的なＡＳＯ（本出願では、ＳＭＮ２ ＡＳＯとも称される）を（例えば、併せてまたは逐次に）投与することを含む。一部の態様では、ＡＳＯは、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる。一部の態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのスプライシングを変化させる。一部の態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７包含を促進する。ＳＭＮ２のスプライシングを変化させるために有用な一部の配列および領域は、ＰＣＴ／ＵＳ０６／０２４４６９号（国際公開第２００７／００２３９０号として公開）および国際公開第２０１８０１４０４１号Ａ２において見出すことができ、これらは、任意の目的のために、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0208】

一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、ＳＭＮ２のスプライシングを効率的にモジュレートし、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７包含の増加、最終的には、エクソン７に対応するアミノ酸を含むＳＭＮ２タンパク質の増加をもたらす。そのような代替ＳＭＮ２タンパク質は、野生型ＳＭＮタンパク質と１００％同一である。

【0209】

ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの発現を効率的にモジュレートして、機能性ＳＭＮタンパク質を産生するＡＳＯは、活性なＡＳＯと考えられる。ＳＭＮ２の発現のモジュレーションは、体液において測定することができ、これは、動物の細胞、組織もしくは器官を含有していてもよく、またはそれらを含有していなくてもよい。分析のための試料、例えば、体液（例えば、痰、血清、ＣＳＦ）、組織（例えば、生検）または器官を得る方法、および分析を可能にするための試料の調製の方法は、当業者に周知である。処置の効果は、本出願に記載される１つまたは複数の組成物を接触させた動物から収集される、１つもしくは複数の生体液、組織または器官における標的遺伝子発現に関連するバイオマーカーを測定することによって評価することができる。

【0210】

一部の態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの増加は、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの細胞内レベルが、参照レベル、例えば、対照（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯが投与されていない対象）における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルよりも高いことを意味する。細胞内全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの増加は、ＳＭＮ２遺伝子から産生する全長タンパク質および／またはｍＲＮＡのレベルの増加として測定することができる。一部の態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの増加は、細胞もしくは生物体の外面的特性の調査によって（例えば、下記の実施例において記載される通り）、あるいはＲＮＡ溶液ハイブリダイゼーション、ヌクレアーゼ保護、ノーザンハイブリダイゼーション、逆転写、マイクロアレイによる遺伝子発現のモニタリング、抗体結合、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、核酸配列決定、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、他のイムノアッセイ、蛍光活性化細胞分析（ＦＡＣＳ）、または全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡもしくはタンパク質（例えば、対象または対象から得られる試料中）の存在を検出することができる任意の他の技法もしくは技法の組合せなどのアッセイ技法によって、決定することができる。

【0211】

一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ処置を受けている対象から得られた試料における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルを、ＳＭＮ２ ＡＳＯで処置されていない対象における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルと比較することによって、ＳＭＮ２ ＡＳＯが全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させた程度を決定することができる。一部の態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの参照レベルは、ＳＭＮ２ ＡＳＯを受ける前の同じ対象から得られる。一部の態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの参照レベルは、ＳＭＮ２ ＡＳＯを受けていない対象の集団によって決定される範囲である。

【0212】

一部の態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの増加レベルは、例えば、参照値よりも、１倍よりも高い、１．５～５倍、５～１０倍、１０～５０倍、５０～１００倍、約１．１倍、１．２倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、またはそれよりも高い。

【0213】

一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ投与を受けている対象における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのより短いＳＭＮ２ ｍＲＮＡ（例えば、エクソン７なしのＳＭＮ２ ｍＲＮＡ）に対する比を参照比と比較することによって、ＳＭＮ２ ＡＳＯが全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの増加をもたらしたかどうかを決定することができる。一部の態様では、参照比は、ＳＭＮ２ ＡＳＯの投与前の、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの短いＳＭＮ２ ｍＲＮＡ（例えば、エクソン７なしのＳＭＮ２ ｍＲＮＡ）に対する比である。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯを受けている対象における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの短いＳＭＮ２ ｍＲＮＡ（例えば、エクソン７なしのＳＭＮ２ ｍＲＮＡ）に対する比は、例えば、参照比よりも、１倍よりも高い、１．５～５倍、５～１０倍、１０～５０倍、５０～１００倍、約１．１倍、１．２倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、またはそれよりも高い。

【0214】

一部の態様では、対象における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの増加は、参照レベルと比較して、全長ＳＭＮタンパク質の増加によって示すことができる。一部の態様では、全長ＳＭＮタンパク質の参照レベルは、処置前にＳＭＡを有する対象またはＳＭＡを有する危険性がある対象から得た全長ＳＭＮタンパク質のレベルである。一部の態様では、エクソン７含有ＳＭＮタンパク質の産生は、参照値よりも、少なくとも約、例えば、１倍超、１．５～５倍、５～１０倍、１０～５０倍、５０～１００倍、約１．１倍、１．２倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、またはそれよりも高いエクソン７含有ＳＭＮタンパク質レベルの増強を伴って、ＳＭＮ２ ＡＳＯ投与を受けている対象において増加する。体液、器官または組織を、有効量の本出願に記載される１つまたは複数の組成物と接触させることによる方法も企図される。体液、器官または組織は、１つまたは複数の組成物と接触させることができ、体液、器官または組織の細胞においてＳＭＮ１の発現、およびＳＭＮ２発現のモジュレーションをもたらす。組成物の有効量は、対象に投与されるか、または細胞と接触される組換えＳＭＮ１遺伝子およびＳＭＮ２ ＡＳＯの機能性ＳＭＮタンパク質の発現に対する効果をモニタリングすることによって決定することができる。

【0215】

１．アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）
一部の態様では、ヒトＳＭＮ２をコードする核酸に相補的な配列を含むＡＳＯは、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）などの生存運動ニューロンタンパク質（ＳＭＮ）に関連する疾患または状態の処置（例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子および／またはＳＭＮ機能を増加させる低分子による）に使用するために提供される。一部の態様では、ヒトＳＭＮ２をコードする核酸に相補的な配列を含むＡＳＯは、ＡＳＯを中枢神経系（ＣＮＳ）またはＣＳＦに直接投与することによる、生存運動ニューロンタンパク質（ＳＭＮ）に関連する疾患または状態の処置（例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子および／またはＳＭＮ機能を増加させる低分子による）に使用するために提供される。

【0216】

本明細書で使用される場合、「オリゴマー化合物」という用語は、オリゴヌクレオチドを含む化合物を指す。一部の態様では、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドからなる。本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」という用語は、リン酸連結基、複素環式塩基部分および糖部分を含む化合物を指す。一部の態様では、オリゴマー化合物は、１つまたは複数のコンジュゲート基および／または末端基をさらに含む。一部の態様では、オリゴマー化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。本明細書で使用される場合、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」または「ＡＳＯ」という用語は、オリゴマー化合物を指し、その少なくとも一部が、それをハイブリダイズする標的核酸に少なくとも部分的に相補的であり、ここで、そのようなハイブリダイゼーションは、少なくとも１つのアンチセンス活性をもたらす。

【0217】

一部の例では、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）は、対象における全長ＳＭＮタンパク質を増加させる。一部の例では、ＡＳＯは、対象における全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる。一部の態様では、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯは、ＳＭＮ２をコードする核酸に相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドである。一部の態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのスプライシングパターンを変化させることによって、全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる。一部の態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのスプライシングの間に、エクソンスキッピングを促進する。一部の態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７の包含を促進する。一部の態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６、イントロン７またはエクソン７と隣接イントロンの間の境界を標的化して、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７の包含を促進するように設計される。一部の態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６に相補的な核酸塩基配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのエクソン６に相補的な核酸塩基配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７に相補的な核酸塩基配列を含む。一部の態様では、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７を標的化するＡＳＯは、配列番号１のヌクレオチド配列を含む。一部の態様では、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７を標的化するＡＳＯは、ヌシネルセンである。一部の態様では、本明細書に記載されるＡＳＯの１つまたは複数を、全長ＳＭＮタンパク質および／または全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルを増加させるために対象に投与することができる。ＳＭＮ２のスプライシングを変化させるために有用な配列および領域の非限定的な例は、ＰＣＴ／ＵＳ０６／０２４４６９号において見出すことができ、これは、任意の目的のために、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＳＭＮ２のイントロン７に相補的である核酸塩基配列を有する。そのような核酸塩基配列の非限定的な例を、下記の表に例示する。

【0218】

【表1-1】

【表1-2】

【0219】

一部の態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７を標的にする。一部の態様では、ＡＳＯは、配列：ＴＣＡＣＴＴＴＣＡＴＡＡＴＧＣＴＧＧ配列（配列番号１）の少なくとも１０個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１の少なくとも１１個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１の少なくとも１２個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１の少なくとも１３個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１の少なくとも１４個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１の少なくとも１５個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１の少なくとも１６個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１の少なくとも１７個の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１の核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１の核酸塩基からなる核酸塩基配列を有する。一部の態様では、ＡＳＯは、１０～１８個の連結ヌクレオシドからなり、配列：ＴＣＡＣＴＴＴＣＡＴＡＡＴＧＣＴＧＧ（配列番号１）の等しい長さの部分と１００％同一の核酸塩基配列を有する。

【0220】

一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、ＳＭＮ２タンパク質をコードする核酸分子に相補的である。一部の態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２タンパク質をコードする核酸分子のイントロン６、エクソン７（またはエクソン７および隣接イントロンの境界）またはイントロン７に相補的である。一部の態様では、ＡＳＯは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７を標的にする。一部の態様では、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７を標的化するＳＭＮ２ ＡＳＯは、ヌシネルセンである。ヌシネルセンについての例示的なヌクレオチド配列は、５’－ＵＣＡＣＵＵＵＣＡＵＡＡＵＧＣＵＧＧ－３’（配列番号２６）である。活性物質のヌシネルセン（ＩＳＩＳ３９６４４３とも称される）は、配列：５’－^ＭｅＵ^ＭｅＣＡ^ＭｅＣ^ＭｅＵ^ＭｅＵ^ＭｅＵ^ＭｅＣＡ^ＭｅＵＡＡ^ＭｅＵＧ^ＭｅＣ^ＭｅＵＧＧ－３’（配列番号２５）を有する１８個のヌクレオチド残基からなる均一に修飾された２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）ホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドである。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、配列番号２５または２６の核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む。

【0221】

ヌシネルセンナトリウムの化学名は、分子式Ｃ２３４Ｈ３２３Ｎ６１Ｏ１２８Ｐ１７Ｓ１７Ｎａ１７に対応する、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－５－メチル－Ｐ－チオウリジリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－５－メチル－Ｐ－チオシチジリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－Ｐ－チオアデニリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－５－メチル－Ｐ－チオシチジリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－５－メチル－Ｐ－チオウリジリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－５－メチル－Ｐ－チオウリジリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－５－メチル－Ｐ－チオウリジリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－５－メチル－Ｐ－チオシチジリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－Ｐ－チオアデニリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－５－メチル－Ｐ－チオウリジリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－Ｐ－チオアデニリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－Ｐ－チオアデニリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－５－メチル－Ｐ－チオウリジリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－Ｐ－チオグアニリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－５－メチル－Ｐ－チオシチジリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－５－メチル－Ｐ－チオウリジリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）－Ｐ－チオグアニリル－（３’－Ｏ→５’－Ｏ）－２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、相対分子質量７５０１．０ｇ／ｍｏｌおよび図３に示される構造を有する。

【0222】

アンチセンスは、１つまたは複数の特異的な遺伝子産物の発現をモジュレートするための有効な手段であり、多くの治療、診断および研究の適用において比類なく有用である。標的の占有に基づくアンチセンス機構を含むアンチセンス作用機構を介して遺伝子発現をモジュレートするために有用なアンチセンス化合物が本明細書に提供される。一態様では、本明細書で提供されるアンチセンス化合物は、標的遺伝子のスプライシングをモジュレートする。そのようなモジュレーションとしては、エクソンの包含を促進すること、またはそれを阻害することが挙げられる。エクソンのスプライシングエンハンサー、エクソンのスプライシングサイレンサー、イントロンのスプライシングエンハンサーおよびイントロンのスプライシングサイレンサーを含む、プレｍＲＮＡ分子中に存在するシスのスプライシング調節エレメントを標的化するアンチセンス化合物が本明細書にさらに提供される。シスのスプライシング調節エレメントの破壊は、スプライス部位の選択を変化させると考えられ、これは、スプライス産物の組成の変化をもたらし得る。

【0223】

真核生物のプレｍＲＮＡＳのプロセシングは、適切なｍＲＮＡスプライシングを達成するために多数のシグナルおよびタンパク質因子を必要とする複雑なプロセスである。スプライソソームによるエクソンの定義は、イントロン－エクソン境界を定義する標準的なスプライシングシグナルよりも多くを必要とする。そのような追加のシグナルの１つは、シス作用性の調節エンハンサーおよびサイレンサー配列によって提供される。エクソンのスプライシングエンハンサー（ＥＳＥ）、エクソンのスプライシングサイレンサー（ＥＳＳ）、イントロンのスプライシングエンハンサー（ＩＳＥ）およびイントロンのスプライシングサイレンサー（ＩＳＳ）は、それらの部位および作用機序に応じて、スプライスドナー部位もしくはスプライスアクセプター部位の使用を抑制または増強するかのいずれかのものとして同定されている（Yeo et al. 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101(44): 15700-15705）。これらの調節配列に特異的なタンパク質（トランス因子）の結合は、スプライシングプロセスを指示し、特定のスプライス部位の使用を促進または阻害し、そのようにして、スプライシング産物の比をモジュレートする（Scamborova et al. 2004, Mol. Cell. Biol. 24(5):1855-1869: Hovhannisyan and Carstens, 2005, Mol. Cell. Biol. 25(1):250-263；Minovitsky et al. 2005, Nucleic Acids Res. 33(2):714-724）。

【0224】

一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの天然に存在するオリゴマーのオリゴヌクレオチドと比較して、１つまたは複数の修飾を含む。そのような修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の望ましい特性を持つ場合がある。一部の態様では、修飾は、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドのその標的核酸に対する親和性を増加させること、１つもしくは複数のヌクレアーゼに対するその抵抗性を増加させること、および／またはオリゴヌクレオチドの薬物動態もしくは組織分布を変化させることによって、アンチセンスオリゴヌクレオチドのアンチセンス活性を変化させる。一部の態様では、修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つもしくは複数の修飾ヌクレオシドおよび／または１もしくは複数の修飾ヌクレオシド連結および／または１つもしくは複数のコンジュゲート基を含む。

【0225】

ａ．修飾ヌクレオシド
一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオシドを含む。そのような修飾ヌクレオシドは、修飾糖および／または修飾核酸塩基を含み得る。一部の態様では、そのような修飾ヌクレオシドのオリゴヌクレオチド中への組み込みは、限定されるものではないが、ヌクレアーゼによる分解に対する抵抗性の増加、ならびにまたは修飾オリゴヌクレオチドの毒性および／もしくは取り込み特性の改善を含む、標的核酸に対する親和性の増加および／または安定性の増加をもたらす。

【0226】

ｉ．核酸塩基
天然に存在するヌクレオシドの塩基部分は、複素環式塩基であり、典型的には、プリンおよびピリミジンである。プリン核酸塩基のアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）ならびにピリミジン核酸塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、およびウラシル（Ｕ）などの「未修飾」または「天然」核酸塩基に加えて、当業者に公知の多くの修飾核酸塩基または核酸塩基模倣体が、本明細書に記載される化合物への組み込みに適している。一部の態様では、修飾核酸塩基は、例えば、７－デアザプリン、５－メチルシトシンまたはＧ－クランプなどの、親核酸塩基に構造がかなり類似した核酸塩基である。一部の態様では、核酸塩基模倣体は、例えば、三環式フェノキサジン核酸塩基模倣体などのより複雑な構造を含む。修飾核酸塩基を調製するための方法は、当業者に周知である。

【0227】

ｉｉ．修飾糖および糖代替物
本出願のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、必要に応じて、天然糖と比較して糖部分が修飾された、１つまたは複数のヌクレオシドを含有することができる。糖修飾ヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ安定性が増強され得るか、結合親和性が増加し得るか、また一部の他の有利な生物学的特性を有し得る。そのような修飾としては、限定されないが、例えば、２’－Ｆ－５’－メチル置換ヌクレオシド（他の開示された５’，２’－ビス置換ヌクレオシドについては２００８年８月２１日に公開されたＰＣＴ国際出願公開第２００８／１０１１５７号を参照されたい）またはリボシル環酸素原子のＳでの置き換えと２’位のさらなる置換（２００５年６月１６日に公開された米国特許出願公開第２００５０１３０９２３号を参照されたい）または代替のＢＮＡの５’－置換（ＬＮＡが、例えば、５’－メチル基または５’－ビニル基で置換されている、２００７年１１月２２日に公開されたＰＣＴ国際出願公開第２００７／１３４１８１号を参照されたい）などの、置換基の付加、非ジェミナル環原子を架橋して二環式核酸（ＢＮＡ）の形成、リボシル環酸素原子のＳ、Ｎ（Ｒ）またはＣ（Ｒ_１）（Ｒ）_２（Ｒ＝Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルまたは保護基）での置き換え、およびこれらの組合せが挙げられる。

【0228】

修飾糖部分を有するヌクレオシドの例としては、限定されないが、５’－ビニル、５’－メチル（ＲまたはＳ）、４’－Ｓ、２’－Ｆ、２’－ＯＣＨおよび２’－Ｏ（ＣＨ_２）_２ＯＣＨ_３置換基を含むヌクレオシドが挙げられる。２’位の置換基はまた、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ－アリル、Ｏ－Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル、ＯＣＦ_３、Ｏ（ＣＨ_２）ＳＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_２－Ｏ－Ｎ（Ｒ_ｍ）（Ｒ_ｎ）およびＯ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ_ｍ）（Ｒ_ｎ）（式中、それぞれのＲ_ｍおよびＲ_ｎは、独立して、Ｈまたは置換もしくは無置換のＣ_１～Ｃ_１０アルキルである）からも選択することができる。

【0229】

二環式核酸（ＢＮＡ）の例としては、限定されないが、４’および２’リボシル環原子の間に架橋を含むヌクレオシドが挙げられる。一部の態様では、本明細書で提供されるアンチセンス化合物は、架橋が以下の式の１つを含む１つまたは複数のＢＮＡヌクレオシドを含む：４’－ベータ－Ｄ－（ＣＨ_２）－Ｏ－２’（ベータ－Ｄ－ＬＮＡ）；４’－（ＣＨ_２）－Ｓ－２：４’－アルファ－Ｌ－（ＣＨ_２）－Ｏ－２’（アルファ－Ｌ－ＬＮＡ）；４’－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－２’（ＥＮＡ）；４’－Ｃ（ＣＨ_３）_２－Ｏ－２’（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２号を参照されたい）；４’－ＣＨ（ＣＨ_３）－Ｏ－２’および４’－Ｃ－Ｈ（ＣＨ_２ＯＣＨ_３）－Ｏ－２’（２００８年７月１５日に発行された米国特許第７，３９９，８４５号を参照されたい）；４’－ＣＨ_２－Ｎ（ＯＣＨ_３）－２’（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１号を参照されたい）；４’－ＣＨ_２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ_３）－２’（２００４年９月２日に公開された米国特許出願公開第２００４－０１７１５７０号を参照されたい）；４’－ＣＨ_２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’（２００８年９月２３日に発行された米国特許第７，４２７，６７２号を参照されたい）；４’－ＣＨ_２－Ｃ（ＣＨ_３）－２’および４’－ＣＨ_２－Ｃ（＝ＣＨ_２）－２’（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４号を参照されたい）；ここで、Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、または保護基である。

【0230】

一部の態様では、修飾糖部分を含む修飾ヌクレオシドは、二環式糖部分ではない。一部の態様では、ヌクレオシドの糖環は、任意の位置で修飾されていてもよい。有用な糖修飾の例としては、限定されるものではないが、ＯＨ、Ｆ、Ｏ－アルキル、Ｓ－アルキル、Ｎ－アルキルまたはＯ－アルキル－Ｏ－アルキルから選択される糖置換基を含む化合物が挙げられ、ここで、アルキル、アルケニルおよびアルキニルは、置換もしくは無置換のＣ_１～Ｃ_１０アルキルまたはＣ_２～Ｃ_１０アルケニルおよびＣ_２～Ｃ_１０アルキニルであり得る。一部の態様では、そのような置換基は、糖の２’位にある。

【0231】

一部の態様では、修飾ヌクレオシドは、糖の２’位に置換基を含む。一部の態様では、そのような置換基は、ハロゲン化物（限定されないが、Ｆを含む）、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ－アリル、Ｏ－Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル、－ＯＣＦ_３、Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－ＣＨ_３、２’－Ｏ（ＣＨ_２）_２ＳＣＨ_３、Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－Ｎ（Ｒ_ｍ）（Ｒ_ｎ）またはＯ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ_ｍ）（Ｒ_ｎ）（式中、それぞれのＲ_ｍおよびＲ_ｎは、独立して、Ｈまたは置換もしくは無置換のＣ_１～Ｃ_１０アルキルである）の中から選択される。

【0232】

一部の態様では、本発明における使用に好適な修飾ヌクレオシドは、２－メトキシエトキシ、２’－Ｏメチル（２’－Ｏ ＣＨ_３）、２’－フルオロ（２’－Ｆ）である。

【0233】

一部の態様では、Ｏ［（ＣＨ_２）_ｎＯ］_ｍＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、Ｏ（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＨ_２、ＯＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ_３およびＯ（ＣＨ_２）_ｎＯＮ［（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３］_２（式中、ｎおよびｍは、１～約１０である）から選択された、２’位に置換基を有する修飾ヌクレオシド。他の２’－糖置換基としては、Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル、置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル、アラルキル、Ｏ－アルカリルまたはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＳＯＣＨ_３、ＳＯ_２ＣＨ_３、ＯＮＯ_２、ＮＯ_２、Ｎ_３、ＮＨ_２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、オリゴマー化合物の薬物動態特性を改善するための基またはオリゴマー化合物の薬力学的特性を改善するための基、および類似の特性を有する他の置換基が挙げられる。

【0234】

一部の態様では、修飾ヌクレオシドは、２’－ＭＯＥ側鎖を含む（Baker et al., J. Biol. Chem., 1997, 272, 11944-12000）。そのような２’－ＭＯＥ置換は、未修飾ヌクレオシド、ならびに２’－Ｏ－メチル、Ｏ－プロピルおよびＯ－アミノプロピルなどの他の修飾ヌクレオシドと比較して、改善された結合親和性を有するものとして記載されている。２’－ＭＯＥ置換基を有するオリゴヌクレオチドは、ｉｎ ｖｉｖｏでの使用のために有望な特徴を有する遺伝子発現のアンチセンス阻害剤であることも示されている（Martin, P., Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann et al., Chimia, 1996, 50, 168-176；Altmann et al., Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637；およびAltmann et al., Nucleosides Nucleotides, 1997, 16,917-926）。

【0235】

一部の態様では、２’－糖置換基は、アラビノ（上向き）位またはリボ（下向き）位のいずれかにある。一部の態様では、２’－アラビノ修飾は、２’－Ｆアラビノ（ＦＡＮＡ）である。同様の修飾を、糖の他の位置、特に、３’末端ヌクレオシドまたは２’－５’連結オリゴヌクレオチドの糖の３’位、および５’末端ヌクレオチドの５’位で行うこともできる。

【0236】

一部の態様では、好適なヌクレオシドは、リボフラノシル糖の代わりに、シクロブチルなどの糖代替物を有する。そのような修飾糖構造の調製を教示する代表的な米国特許としては、限定されないが、米国特許第４，９８１，９５７号；同第５，１１８，８００号；同第５，３１９，０８０号；同第５，３５９，０４４号；同第５，３９３，８７８号；同第５，４４６，１３７号；同第５，４６６，７８６号；同第５，５１４，７８５号；同第５，５１９，１３４号；同第５，５６７，８１１号；同第５，５７６．４２７号；同第５，５９１，７２２号；同第５，５９７，９０９号；同第５，６１０，３００号；同第５，６２７，０５３号；同第５，６３９，８７３号；同第５，６４６，２６５号；同第５，６５８，８７３号；同第５，６７０，６３３号；同第５，７９２，７４７号；および同第５，７００，９２０号が挙げられ、それらのそれぞれが、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0237】

一部の態様では、ヌクレオシドは、糖の２’位に修飾を含む。一部の態様では、ヌクレオシドは、糖の５’位に修飾を含む。一部の態様では、ヌクレオシドは、糖の２’位および５’位に修飾を含む。一部の態様では、修飾ヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドへの組み込みに有用であり得る。一部の態様では、修飾ヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの５’末端でオリゴヌクレオシドに組み込まれる。

【0238】

ｂ．ヌクレオシド間連結
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、必要に応じて、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド間連結を含有することができる。連結基の２つの主なクラスは、リン原子の存在または非存在によって定義される。代表的なリン含有連結としては、限定されるものではないが、ホスホジエステル（Ｐ＝Ｏ）、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホロアミデートおよびホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）が挙げられる。代表的な非リン含有連結基としては、限定されるものではないが、メチレンメチルイミノ（－ＣＨ_２－Ｎ（ＣＨ_３）－Ｏ－ＣＨ２）、チオジエステル（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｓ－）、チオノカルバメート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）（ＮＨ）－Ｓ－）、シロキサン（－Ｏ－Ｓｉ（Ｈ）_２－Ｏ－）およびＮ，Ｎ’－ジメチルヒドラジン（－ＣＨ_２－Ｎ（ＣＨ_３）－Ｎ（ＣＨ_３）－）が挙げられる。非リン連結基を有するオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオシドと称される。天然のホスホジエステル結合と比較して修飾された連結を、オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ抵抗性を変化させるため、典型的には、増加させるために使用することができる。一部の態様では、キラル原子を有する連結は、ラセミ混合物として、別々のエナンチオマーとして調製することができる。代表的なキラル連結としては、限定されるものではないが、アルキルホスホネートおよびホスホロチオエートが挙げられる。リン含有連結および非リン含有連結の調製の方法は、当業者に周知である。

【0239】

本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の不斉中心を含有することができ、そのため、エナンチオマー、ジアステレオマー、および絶対立体化学に関して、糖アノマーなどについて（Ｒ）もしくは（Ｓ）として、またはアミノ酸などについて（Ｄ）もしくは（Ｌ）として、定義され得る他の立体異性体配置が生じ得る。本明細書で提供されるアンチセンス化合物は、そのような可能性がある異性体ならびにそれらのラセミ形態および光学的に純粋な形態をすべて含み得る。

【0240】

一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１個の修飾ヌクレオシド間連結を有する。一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも２個の修飾ヌクレオシド間連結を有する。一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも３個の修飾ヌクレオシド間連結を有する。一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個の修飾ヌクレオシド間連結を有する。一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシド間連結は、修飾ヌクレオシド間連結である。一部の態様では、そのような修飾ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。

【0241】

ｃ．長さ
一部の態様では、本発明は、種々の範囲の長さのいずれかのアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。一部の態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｘ－Ｙの連結ヌクレオシドを含むか、またはそれらからなり、ここで、ＸおよびＹは、それぞれ独立して、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９および５０から選択され、ただし、Ｘ－Ｙである。例えば、一部の態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、８～９、８～１０、８～１１、８～１２、８～１３、８～１４、８～１５、８～１６、８～１７、８～１８、８～１９、８～２０、８～２１、８～２２、８～２３、８～２４、８～２５、８～２６、８～２７、８～２８、８～２９、８～３０、９～１０、９～１１、９～１２、９～１３、９～１４、９～１５、９～１６、９～１７、９～１８、９～１９、９～２０、９～２１、９～２２、９～２３、９～２４、９～２５、９～２６、９～２７、９～２８、９～２９、９～３０、１０～１１、１０～１２、１０～１３、１０～１４、１０～１５、１０～１６、１０～１７、１０～１８、１０～１９、１０～２０、１０～２１、１０～２２、１０～２３、１０～２４、１０～２５、１０～２６、１０～２７、１０～２８、１０～２９、１０～３０、１１～１２、１１～１３、１１～１４、１１～１５、１１～１６、１１～１７、１１～１８、１１～１９、１１～２０、１１～２１、１１～２２、１１～２３、１１～２４、１１～２５、１１～２６、１１～２７、１１～２８、１１～２９、１１～３０、１２～１３、１２～１４、１２～１５、１２～１６、１２～１７、１２～１８、１２～１９、１２～２０、１２～２１、１２～２２、１２～２３、１２～２４、１２～２５、１２～２６、１２～２７、１２～２８、１２～２９、１２～３０、１３～１４、１３～１５、１３～１６、１３～１７、１３～１８、１３～１９、１３～２０、１３～２１、１３～２２、１３～２３、１３～２４、１３～２５、１３～２６、１３～２７、１３～２８、１３～２９、１３～３０、１４～１５、１４～１６、１４～１７、１４～１８、１４～１９、１４～２０、１４～２１、１４～２２、１４～２３、１４～２４、１４～２５、１４～２６、１４～２７、１４～２８、１４～２９、１４～３０、１５～１６、１５～１７、１５～１８、１５～１９、１５～２０、１５～２１、１５～２２、１５～２３、１５～２４、１５～２５、１５～２６、１５～２７、１５～２８、１５～２９、１５～３０、１６～１７、１６～１８、１６～１９、１６～２０、１６～２１、１６～２２、１６～２３、１６～２４、１６～２５、１６～２６、１６～２７、１６～２８、１６～２９、１６～３０、１７～１８、１７～１９、１７～２０、１７～２１、１７～２２、１７～２３、１７～２４、１７～２５、１７～２６、１７～２７、１７～２８、１７～２９、１７～３０、１８～１９、１８～２０、１８～２１、１８～２２、１８～２３、１８～２４、１８～２５、１８～２６、１８～２７、１８～２８、１８～２９、１８～３０、１９～２０、１９～２１、１９～２２、１９～２３、１９～２４、１９～２５、１９～２６、１９～２９、１９～２８、１９～２９、１９～３０、２０～２１、２０～２２、２０～２３、２０～２４、２０～２５、２０～２６、２０～２７、２０～２８、２０～２９、２０～３０、２１～２２、２１～２３、２１～２４、２１～２５、２１～２６、２１～２７、２１～２８、２１～２９、２１～３０、２２～２３、２２～２４、２２～２５、２２～２６、２２～２７、２２～２８、２２～２９、２２～３０、２３～２４、２３～２５、２３～２６、２３～２７、２３～２８、２３～２９、２３～３０、２４～２５、２４～２６、２４～２７、２４～２８、２４～２９、２４～３０、２５～２６、２５～２７、２５～２８、２５～２９、２５～３０、２６～２７、２６～２８、２６～２９、２６～３０、２７～２８、２７～２９、２７～３０、２８～２９、２８～３０または２９～３０の連結ヌクレオシドを含むか、またはそれらからなる。

【0242】

一部の態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５ヌクレオシド長である。一部の態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１６ヌクレオシド長である。一部の態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１７ヌクレオシド長である。一部の態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１８ヌクレオシド長である。一部の態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１９ヌクレオシド長である。一部の態様では、アンチセンス化合物またはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、２０ヌクレオシド長である。

【0243】

ｄ．オリゴヌクレオチドモチーフ
一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、それらの長さに沿って特定の方向で配置された化学修飾されたサブユニットを有する。一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、完全に修飾されている。一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、均一に修飾されている。一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、均一に修飾され、それぞれのヌクレオシドは、２－ＭＯＥ糖部分を含む。一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、均一に修飾され、それぞれのヌクレオシドは、２’－ＯＭｅ糖部分を含む。一部の態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、均一に修飾され、それぞれのヌクレオシドは、モルホリノ糖部分を含む。

【0244】

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、交互モチーフを含む。一部の態様では、交互修飾型は、２’－ＭＯＥ、２’－Ｆ、二環式糖修飾ヌクレオシドおよびＤＮＡ（未修飾２’－デオキシ）の中から選択される。一部の態様では、それぞれの交互領域は、単一のヌクレオシドを含む。

【0245】

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、第１の型のヌクレオシドの１つまたは複数のブロック、および第２の型のヌクレオシドの１つまたは複数のブロックを含む。

【0246】

一部の態様では、交互モチーフ中の１つまたは複数の交互領域は、ある型の単一ヌクレオシドよりも多くを含む。例えば、オリゴマー化合物は、以下のヌクレオシドモチーフ：

【表2】

のいずれかの１つまたは複数の領域を含んでいてもよく、ここで、Ｎｕ１は、第１の型のヌクレオシドであり、Ｎｕ２は、第２の型のヌクレオシドである。一部の態様では、Ｎｕ１およびＮｕ２の一方は、２’－ＭＯＥヌクレオシドであり、Ｎｕ１およびＮｕ２の他方は、２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオシド、ＢＮＡおよび未修飾ＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオシドから選択される。

【0247】

２．オリゴマー化合物
一部の態様では、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドのみから構成される。一部の態様では、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドならびに１つもしくは複数のコンジュゲート基および／または末端基を含む。そのようなコンジュゲート基および／または末端基は、本出願に記載される化学モチーフのいずれかを有するオリゴヌクレオチドに付加され得る。したがって、例えば、交互ヌクレオシドの１つまたは複数の領域を有するオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物は、末端基を含み得る。

【0248】

ａ．コンジュゲート基
一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のコンジュゲート基の結合によって修飾される。一般に、コンジュゲート基は、限定されるものではないが、薬力学、薬物動態、安定性、結合、吸収、細胞分布、細胞の取り込み、電荷およびクリアランスを含む、結合されたオリゴマー化合物の１つまたは複数の特性を改変する。コンジュゲート基は、化学の技術分野において日常的に使用されており、オリゴヌクレオチドなどのオリゴマー化合物などの親化合物に対して、直接的に連結されるか、または必要に応じて、コンジュゲート連結部分もしくはコンジュゲート連結基を介して連結される。コンジュゲート基としては、限定されないが、インターカレーター、レポーター分子、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、チオエーテル、ポリエーテル、コレステロール、チオコレステロール、コール酸部分、葉酸、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、フェナントリジン、アントラキノン、アダマンタン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリンおよび色素が挙げられ得る。ある特定のコンジュゲート基は以前に記載されている、例えば：コレステロール部分（Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556）、コール酸（Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1994, 4, 1053-1060）、チオエーテル、例えば、ヘキシル－Ｓ－トリチルチオール（Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309；Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765-2770）、チオコレステロール（Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538）、脂肪族鎖、例えば、ド－デカン－ジオール残基もしくはウンデシル残基（Saison-Behmoaras et al., EMBO.J., 1991, 10, 1111-1118；Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330；Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54）、リン脂質、例えば、ジ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロールもしくはトリエチル－アンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－Ｈ－ホスホネート（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654；Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783）、ポリアミン鎖もしくはポリエチレングリコール鎖（Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14,969-973）、またはアダマンタン酢酸（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654）、パルミチル部分（Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264. 229-237）、またはオクタデシルアミン部分もしくはヘキシルアミノ－カルボニル－オキシコレステロール部分（Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937）。

【0249】

一部の態様では、コンジュゲート基は、活性薬物物質、例えば、アスピリン、ワルファリン、フェニルブタゾン、イブプロフェン、スプロフェン、フェン－ブフェン、ケトプロフェン、（Ｓ）－（＋）－プラノプロフェン、カルプロフェン、ダンシルサルコシン、２，３，５－トリヨード安息香酸、フルフェナム酸、フォリン酸、ベンゾチアジアジド、クロロチアジド、ジアゼピン、インドメタシン（indo-methicin）、バルビツレート、セファロスポリン、サルファ薬、抗糖尿病薬、抗細菌薬または抗生物質を含む。オリゴヌクレオチド－薬物コンジュゲートおよびそれらの調製は、米国特許出願第０９／３３４，１３０号に記載されている。

【0250】

オリゴヌクレオチドコンジュゲートの調製を教示する代表的な米国特許としては、限定されるものではないが、Ｕ．Ｓ．：４，８２８，９７９：４，９４８，８８２：５，２１８，１０５：５，５２５，４６５；５，５４１， ３１３；５，５４５，７３０；５，５５２，５３８；５，５７８，７１７， ５，５８０，７３１：５，５８０，７３１：５，５９１，５８４；５，１０９，１２４；５，１１８，８０２；５，１３８，０４５；５，４１４，０７７；５，４８６，６０３：５，５１２．４３９；５，５７８，７１８；５，６０８，０４６；４，５８７，０４４；４，６０５，７３５；４，６６７，０２５；４，７６２，７７９；４，７８９，７３７；４，８２４，９４１；４，８３５，２６３；４，８７６，３３５；４，９０４，５８２：４，９５８，０１３；５，０８２，８３０；５，１１２，９６３：５，２１４，１３６；５，０８２，８３０；５，１１２，９６３：５，２１４，１３６：５，２４５，０２２：５，２５４，４６９；５，２５８，５０６；５，２６２，５３６；５，２７２，２５０；５，２９２，８７３；５，３１７，０９８：５，３７１，２４１，５，３９１，７２３；５，４１６，２０３，５，４５１，４６３，５，５１０，４７５；５，５１２，６６７：５，５１４，７８５：５，５６５，５５２；５，５６７，８１０；５，５７４，１４２；５，５８５，４８１：５，５８７，３７１；５，５９５，７２６；５，５９７．６９６；５，５９９，９２３；５，５９９，９２８および５，６８８，９４１が挙げられる。コンジュゲート基は、オリゴヌクレオチドのいずれかもしくは両方の末端に（末端コンジュゲート基）および／または任意の内部部分で結合され得る。

【0251】

ｂ．末端基
一部の態様では、オリゴマー化合物は、一方または両方の末端に末端基を含む。一部の態様では、末端基は、本出願に記載されるコンジュゲート基のいずれかを含んでいてもよい。一部の態様では、末端基は、追加のヌクレオシドおよび／または逆位無塩基ヌクレオシドを含んでいてもよい。一部の態様では、末端基は、安定化基である。

【0252】

一部の態様では、オリゴマー化合物は、例えば、ヌクレアーゼ安定性などの特性を増強する１つまたは複数の末端安定化基を含む。安定化基には、キャップ構造が含まれる。「キャップ構造」または「末端キャップ部分」という用語は、本明細書で使用される場合、オリゴマー化合物の末端の一方または両方に結合され得る化学修飾を指す。ある特定の末端修飾は、末端核酸部分を有するオリゴマー化合物をエキソヌクレアーゼの分解から保護し、細胞内への送達および／または細胞内での局在化を助けることができる。キャップは、５’末端（５’－キャップ）もしくは３’末端（３’－キャップ）に存在し得るか、または両方の末端に存在し得る（より非限定的な詳細については、Ｗｉｎｃｏｔｔらの国際ＰＣＴ公開第９７／２６２７０号；Beaucage and Tyer, 1993, Tetrahedron 49, 1925；米国特許出願公開第２００５／００２０５２５号；および国際公開第０３／００４６０２号を参照されたい）。

【0253】

一部の態様では、１つまたは複数の追加のヌクレオシドが、オリゴマー化合物のオリゴヌクレオチドの一方または両方の末端に付加される。そのような追加の末端ヌクレオシドは、本明細書では、末端基ヌクレオシドと称される。二本鎖化合物では、そのような末端基ヌクレオシドは、末端（３’および／または５’）オーバーハングである。二本鎖アンチセンス化合物の状況では、そのような末端基ヌクレオシドは、標的核酸に相補的であってもよく、または相補的でなくてもよい。一部の態様では、末端基は、非ヌクレオシド末端基である。そのような非末端基は、ヌクレオシド以外の任意の末端基であってもよい。

【0254】

ｃ．オリゴマー化合物モチーフ
一部の態様では、オリゴマー化合物は、モチーフ：Ｔ－（Ｎｕ_１）_ｎ１，－（Ｎｕ_２）_ｎ２－（Ｎｕ_１）_ｎ３－（Ｎｕ_２）_ｎ４－（Ｎｕ_１）_ｎ５－Ｔ２
［式中、
Ｎｕ_１は、第１の型のヌクレオシドであり、
Ｎｕ_２は、第２の型のヌクレオシドであり、
ｎ１およびｎ５のそれぞれは、独立して、０～３であり、
ｎ２とｎ４の合計は、１０と２５の間であり、
ｎ３は、０～５であり、
それぞれのＴ_１およびＴ_２は、独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、必要に応じて連結されたコンジュゲート基またはキャッピング基である］
を含む。

【0255】

一部の態様では、ｎ２およびｎ４の合計は、１３または１４であり、ｎ１は、２であり、ｎ３は、２または３であり、ｎ５は、２である。一部の態様では、オリゴマー化合物は、表Ａから選択されるモチーフを含む。

【0256】

【表A】

【0257】

３．アンチセンス
一部の態様では、オリゴマー化合物は、アンチセンス化合物である。したがって、一部の態様では、オリゴマー化合物は、標的核酸（例えば、標的プレｍＲＮＡまたは標的ｍＲＮＡ）とハイブリダイズし、アンチセンス活性をもたらす。

【0258】

ａ．ハイブリダイゼーション
一部の態様では、アンチセンス化合物は、特異的結合が望ましい条件下（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイまたは治療的処置の場合に生理学的条件下、およびｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの場合にアッセイが行われる条件下）、非標的核酸配列へのアンチセンス化合物の非特異的結合を回避するために十分な程度の相補性が存在する場合、標的核酸に特異的にハイブリダイズする。

【0259】

したがって、「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」または「ストリンジェントな条件」は、アンチセンス化合物が標的配列にハイブリダイズするが、他の配列の数を最小化する条件を意味する。ストリンジェントな条件は、配列依存性であり、異なる状況下では異なり、アンチセンスオリゴヌクレオチドが標的配列にハイブリダイズする「ストリンジェントな条件」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの性質および組成、ならびにそれらが調べられるアッセイによって決定される。

【0260】

当技術分野では、ヌクレオチドの親和性修飾の組み込みは、未修飾化合物と比較して、より多くのミスマッチの数を可能にし得ることが理解される。同様に、ある特定の核酸塩基配列は、他の核酸塩基配列よりもミスマッチに対して寛容性が高い場合がある。当業者であれば、例えば、融解温度（Ｔｍ）を決定することによって、オリゴヌクレオチド間、またはアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび標的核酸の間の適切なミスマッチの数を決定することができる。ＴｍまたはＡＴｍは、当業者に知られた技法によって算出することができる。例えば、Freier et al.（Nucleic Acids Research, 1997, 25, 22: 4429-4443）に記載される技法は、当業者が、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖の融解温度を増加させるそれらの能力についてヌクレオチド修飾を評価することを可能にする。

【0261】

ｂ．プレｍＲＮＡプロセシング
一部の態様では、本明細書で提供されるアンチセンス化合物は、プレｍＲＮＡに相補的である。一部の態様では、そのようなアンチセンス化合物は、プレｍＲＮＡのスプライシングを変化させる。一部の態様では、標的プレｍＲＮＡに対応する成熟ｍＲＮＡの１つのバリアントのその成熟ｍＲＮＡの別のバリアントに対する比が変化する。一部の態様では、標的プレｍＲＮＡから発現するタンパク質の１つのバリアントのタンパク質の別のバリアントに対する比が変化する。プレｍＲＮＡのスプライシングを変化させるために使用され得るある特定のオリゴマー化合物および核酸塩基配列は、例えば、米国特許第６，２１０，８９２号；米国特許第５，６２７，２７４号；米国特許第５，６６５，５９３号；米国特許第５，９１６，８０８号；米国特許第５，９７６，８７９号；米国特許出願公開第２００６／０１７２９６２号；米国特許出願公開第２００７／００２３９０号；米国特許出願公開第２００５／００７４８０１号；米国特許出願公開第２００７／０１０５８０７号；米国特許出願公開第２００５／００５４８３６号；国際公開第２００７／０９００７３号；国際公開第２００７／０４７９１３号；Hua et al., PLoS Biol 5(4):e73；Vickers et al., J. Immunol. 2006 Mar. 15; 176(6):3652-61；およびHua et al., American J. of Human Genetics (April 2008) 82, 1-15において見出すことができ、それらのそれぞれは、任意の目的のために、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、スプライシングを変化させるアンチセンス配列は、本出願に記載されるモチーフに従って修飾される。

【0262】

一部の態様では、ＡＳＯまたはオリゴマー化合物は、国際公開第２０１８／０１４０４３号（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０４２４６５号）、国際公開第２０１８／０１４０４２号（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０４２４６４号）、国際公開第２０１８／０１４０４１号（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０４２４６３号）に記載される１つまたは複数の修飾を含んでいてもよく、それらの内容は、それらの全体が本明細書に組み込まれる。

【0263】

投与および処置
一部の態様では、「治療有効」量のＳＭＮ機能を増加させることができる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ウイルスベクター中の、例えば、ｒＡＡＶ中の）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、本明細書に記載される対象に送達されて（例えば、並行または逐次投与を介して）、所望の結果、例えば、ＳＭＡまたはその１つもしくは複数の症状の処置を達成する。一部の態様では、ＳＭＡは、体重の減少、減少した筋力、減少した筋緊張、脊柱側弯、振戦もしくは攣縮の存在、および／または減少した呼吸器の健康状態などの臨床症状によって評価される。一部の態様では、ＳＭＡは、年齢および能力に適切な運動機能のスケール、ならびに運動単位の健康状態の電気生理学的測定によって評価される。一部の態様では、対象の運動ニューロン機能は、フィラデルフィア小児病院乳児神経筋疾患検査（ＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤ）（例えば、Glanzman AM, et al. The Children's Hospital of Philadelphia Infant Test of Neuromuscular Disorders (CHOP INTEND): test development and reliability. Neuromuscul Disord. 2010;20(3):155-161；Glanzman AM, Validation of the Children's Hospital of Philadelphia Infant Test of Neuromuscular Disorders (CHOP INTEND). Pediatr Phys Ther. 2011;23(4):322-326、ＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤに関する内容は、参照により本明細書に組み込まれる）によって試験することができる。一部の態様では、後期発症ＳＭＡを有する対象の運動ニューロン機能は、拡大Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ運動機能評価スケール（ＨＦＭＳＥ）（例えば、Glanzman AM et al; the Pediatric Neuromuscular Clinical Research Network for Spinal Muscular Atrophy (PNCR), and the Muscle Study Group (MSG). Validation of the Expanded Hammersmith Functional Motor Scale in spinal muscular atrophy type II and III. J Child Neurol. 2011;26(12):1499-1507；The Pediatric Neuromuscular Clinical Research Network for SMA. Expanded Hammersmith Functional Motor Scale for SMA (HFMSE). March 7, 2009、ＨＦＭＳＥに関する内容は、参照により本明細書に組み込まれる）によって評価される。一部の態様では、複合筋活動電位（ＣＭＡＰ）および／または運動単位数推定（ＭＵＮＥ）を使用して、運動ニューロンの電気生理学的機能を評価する。ＣＡＭＰ応答は、神経支配の神経の刺激後の特異的な筋肉または筋肉群からの電気生理学的出力の尺度であり、これは、Arnold WD, Sheth KA, et al. Electrophysiological motor unit number estimation (MUNE) measuring compound muscle action potential (CMAP) in mouse hindlimb muscles. J Vis Exp. 2015;103:1-8)に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＣＭＡＰ値は、ＳＭＡを有する対象において減少する。一部の態様では、ＣＭＡＰは、身体症状が現れる前に減少する。運動単位数推定（ＭＵＮＥ）は、神経によって供給される筋肉の群を刺激する下位運動ニューロンの数を推定するための電気生理学方法であり、ＳＭＡにおける運動ニューロンの喪失を評価するために十分に適しており、これは、Bromberg MB, Swoboda KJ. Motor unit number estimation in infants and children with spinal muscular atrophy. Muscle Nerve. 2002;25(3):445-447に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。ＭＵＮＥ値は、最大複合筋活動電位（ＣＭＡＰ）の平均単一運動単位電位（ＳＭＵＰ）に対する比から算出される。

【0264】

一部の態様では、所望の結果には、筋力低下を低減すること、筋力および筋緊張を増加させること、脊柱側弯を予防もしくは低減すること、または呼吸器の健康状態を維持もしくは増加させること、または振戦もしくは攣縮を低減することを含む。他の所望のエンドポイントは、医師によって決定され得る。

【0265】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、体重を増加させる。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、体重を増加させる。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、体重を増加させる。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、筋力低下を予防または低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、筋力低下を予防または低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、筋力低下を予防または低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、筋力を増加させる。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、筋力を増加させる。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、筋力を増加させる。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、筋緊張を増加させる。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、筋緊張を増加させる。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、筋緊張を増加させる。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、脊柱側弯を予防または低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、脊柱側弯を予防または低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、脊柱側弯を予防または低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、振戦または攣縮を低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、振戦または攣縮を低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、振戦または攣縮を低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、呼吸器の健康状態を維持または増加させる。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、呼吸器の健康状態を維持または増加させる。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、呼吸器の健康状態を維持または増加させる。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、ニューロンの喪失を予防または低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、ニューロンの喪失を予防または低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、ニューロンの喪失を予防または低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、運動ニューロンの喪失を予防または低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子およびＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、運動ニューロンの喪失を予防または低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、運動ニューロンの喪失を予防または低減する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、運動ニューロン機能試験および／または電気生理学的試験のいずれかのスコアを改善する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、運動ニューロン機能試験および／または電気生理学的試験のいずれかのスコアを改善する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に（例えば、併せておよび逐次に）投与されて、運動ニューロン機能試験および／または電気生理学的試験のいずれかのスコアを改善する。

【0266】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の投与は、本明細書に記載される試験のいずれかによって測定されるように、相乗効果を生じる。一部の態様では、本明細書に記載される方法は、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）の効果を強化し、対象に投与されるＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）のより低い用量を可能にする。一部の態様では、本明細書に記載される方法は、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）の効果を強化し、対象に送達されるより低い用量（例えば、組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶのより低い用量）を可能にする。一部の態様では、本明細書に記載される方法は、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の効果を強化し、対象に投与されるよりＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の低い用量を可能にする。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶのより低い用量は、１×１０^１０ＧＣ未満である。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶのより低い用量は、１．０×１０^８～１．０×１０^１０ＧＣである。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶのより低い用量は、１．０×１０^９～１．０×１０^１０ＧＣである。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶのより低い用量は、１．０×１０^１０～１．０×１０^１３ＧＣである。一部の態様では、ヒト対象に投与される組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶのより低い用量は、３×１０^１３ＧＣである。一部の態様では、ヒト対象に投与される組換えＳＭＮ１遺伝子をコードするｒＡＡＶのより低い用量は、１×１０^１４ＧＣ未満であり、例えば、ヒト対象に投与される用量当たり、１×１０^１３～１×１０^１４ＧＣ、１×１０^１２～１×１０^１３ＧＣ、１×１０^１１～１×１０^１２ＧＣ、１×１０^１０～１×１０^１１ＧＣもしくは１×１０^９～１×１０^１０ＧＣ、またはそれよりも少ない。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）のより低い用量は、１２ｍｇである。用量当たり合計５ｍｇ～６０ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）が、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計１２ｍｇ～４８ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）が、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計１２ｍｇ～３６ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）が、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計１２ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）が、対象に投与される。

【0267】

一部の例では、ＳＭＡは、妊娠３０～３６週あたりの胎児において検出される。この状況では、分娩後、可能な限り早く、新生児を処置することが望ましい場合がある。子宮内の胎児を処置することも望ましい場合がある。したがって、ＳＭＡを有する新生児対象をレスキューおよび／または処置する方法であって、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を、胎児および／または新産児対象（例えば、ヒト胎児および／または新産児）のニューロン細胞に、（例えば、併せてまたは逐次に）投与するステップを含む方法が提供される。一部の態様では、ＳＭＡを有する胎児をレスキューおよび／または処置する方法であって、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を、子宮内の胎児のニューロン細胞に、（例えば、併せてまたは逐次に）投与するステップを含む方法が提供される。一部の態様では、方法は、髄腔内注射を介して本明細書に記載される１つまたは複数の組成物を、（例えば、併せてまたは逐次に）投与することを含む。一部の態様では、子宮内処置は、胎児におけるＳＭＡの検出後、本明細書に記載されるＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）、またはＳＭＮ２機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を（例えば、併せておよび逐次に）投与することとして定義される。例えば、参照により本明細書に組み込まれるDavid et al, Recombinant adeno-associated virus-mediated in utero gene transfer gives therapeutic transgene expression in the sheep, Hum Gene Ther. 2011 Apr;22(4):419-26. doi: 10.1089/hum.2010.007. Epub 2011 Feb 2を参照されたい。

【0268】

一部の態様では、新生児処置は、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）、またはＳＭＮ２機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の組合せの少なくとも１用量を、分娩の８時間以内、最初の１２時間以内、最初の２４時間以内または最初の４８時間以内に送達することを含む。別の態様では、特に霊長類（ヒトまたは非ヒト）について、新生児送達は、約１２時間～約１週間、２週間、３週間もしくは約１か月の期間内、または約２４時間～約４８時間後である。

【0269】

一部の態様では、遅発性のＳＭＡについて、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の組合せ、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の組合せは、症状の発症後に投与される。一部の態様では、患者の処置（例えば、最初の注射）は、１歳になる前に開始される。別の態様では、処置は、１歳以降、または２～３歳以降、５歳以降、１１歳以降、またはそれよりも高い年齢で開始される。

【0270】

一部の態様では、ＳＭＮ２機能を増加させるための低分子および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、後日、再投与される。

【0271】

一部の態様では、２回以上の再投与が提供される。そのような再投与は、同じ型のウイルスベクターで、異なるウイルスベクターで（例えば、異なる血清型のＡＡＶカプシドタンパク質を使用する）、または非ウイルス送達を介して、組換えＳＭＮ１遺伝子を再投与することを含み得る。例えば、患者が、ＳＭＮ１をコードする第１のｒＡＡＶ（例えば、ｒＡＡＶ９）で処置され、（例えば、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）または低分子およびＳＭＮ２ ＡＳＯを受けるのに加えて）組換えＳＭＮ１遺伝子による第２の処置を必要とする事象では、組換えＳＭＮ１遺伝子をコードする第２の異なるｒＡＡＶ（例えば、ｒＡＡＶｈｕ６８）を、その後に投与することができ、逆もまた同様である。また、患者が、第１のｒＡＡＶ血清型に対する中和抗体を有するならば、その結果、第２の異なるｒＡＡＶ血清型を使用して、第２の用量の組換えＳＭＮ１遺伝子を対象に送達することができる。

【0272】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）、またはＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯによるＳＭＡ患者の処置は、本出願に記載される組成物による処置の前、その間および／またはその後の免疫抑制薬による一過性の共処置などのさらなる治療を必要とする場合がある。そのような共治療のための免疫抑制薬としては、限定されるものではないが、ステロイド、代謝拮抗剤、Ｔ細胞阻害剤およびアルキル化剤、またはプラスマフェレーシスなどの循環抗体を除去する手順が挙げられる。例えば、そのような一過性の処置としては、約６０ｍｇで開始し１０ｍｇ／日ずつ減量する減少用量（７日目は投与なし）で、毎日１回、７日間、投与されるステロイド（例えば、プレドニゾンまたはプレドニゾロン）が挙げられ得る。他の用量および免疫抑制薬を選択してもよい。

【0273】

一部の態様では、対象は、ＳＭＡの１つまたは複数の指標を有する。一部の態様では、対象は、１つまたは複数の筋肉の電気的活動が低下している。一部の態様では、対象は、変異体ＳＭＮ１遺伝子（例えば、ＳＭＮ１遺伝子の２つ変異体対立遺伝子）を有する。一部の態様では、対象のＳＭＮ１遺伝子（例えば、ＳＭＮ１遺伝子の両対立遺伝子）は、非存在であるか、または機能性ＳＭＮタンパク質を産生することができない。一部の態様では、対象は、それぞれのＳＭＮ１対立遺伝子に欠失または機能喪失点変異を有する。一部の態様では、対象は、ＳＭＮ１遺伝子変異についてホモ接合性である。一部の態様では、対象は、遺伝子検査によって診断される。一部の態様では、対象は、筋肉生検によって特定される。一部の態様では、対象は、背筋を伸ばして座ることができない。一部の態様では、対象は、立つことや歩くことができない。一部の態様では、対象は、呼吸および／または摂食に支援を必要とする。一部の態様では、対象は、筋肉の電気生理学的測定および／または筋肉生検によって特定される。

【0274】

一部の態様では、対象は、Ｉ型ＳＭＡを有する。一部の態様では、対象は、ＩＩ型ＳＭＡを有する。一部の態様では、対象は、ＩＩＩ型ＳＭＡを有する。一部の態様では、対象は、子宮内でＳＭＡを有すると診断される。一部の態様では、対象は、出生後１週間以内にＳＭＡを有すると診断される。一部の態様では、対象は、出生後１か月以内にＳＭＡを有すると診断される。一部の態様では、対象は、３か月齢までにＳＭＡを有すると診断される。一部の態様では、対象は、６か月齢までにＳＭＡを有すると診断される。一部の態様では、対象は、１歳までにＳＭＡを有すると診断される。一部の態様では、対象は、１～２歳の間にＳＭＡを有すると診断される。一部の態様では、対象は、１～１５歳の間にＳＭＡを有すると診断される。一部の態様では、対象は、対象が１５歳よりも上であるときに、ＳＭＡを有すると診断される。

【0275】

一部の態様では、医薬組成物（例えば、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）、または両方）の最初の用量は、子宮内投与される。一部のそのような態様では、最初の用量は、血液脳関門の完全な発達の前に投与される。一部の態様では、最初の用量は、子宮内に対象に全身投与される。一部の態様では、最初の用量は、血液脳関門の形成後に子宮内投与される。一部の態様では、最初の用量は、ＣＳＦに投与される。

【0276】

一部の態様では、医薬組成物（例えば、リスジプラムもしくはブラナプラムなどのＳＭＮ機能を増加させるための低分子、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）、または両方）の最初の用量は、対象が１週齢未満であるときに投与される。一部の態様では、最初の用量は、対象が１か月齢未満であるときに投与される。一部の態様では、最初の用量は、対象が３か月齢未満であるときに投与される。一部の態様では、最初の用量は、対象が６か月齢未満であるときに投与される。一部の態様では、最初の用量は、対象が１歳未満であるときに投与される。一部の態様では、最初の用量は、対象が２歳未満であるときに投与される。一部の態様では、最初の用量は、対象が１５歳未満であるときに投与される。一部の態様では、最初の用量は、対象が１５歳より上であるときに投与される。

【0277】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、１年に１～６回投与され、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、最初に１回投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の２回またはそれよりも多くのその後の投与は、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）の初回投与の後、施行される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、毎月２回投与される。一部の態様では、そのような投与は、１か月ごとに施行される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、２か月ごとに投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、６か月ごとに投与される。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、例えば、初回投与の１年またはそれよりも後（例えば、２～５年、５～１０年、１０～１５年、１５～２０年、またはそれより後）に再投与される。

【0278】

一部の態様では、少なくとも１つの医薬組成物（例えば、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の）の投与は、対象における表現型の変化をもたらす。一部の態様では、そのような表現型の変化としては、限定されるものではないが、エクソン７を含む組換えＳＭＮ ｍＲＮＡおよび／または細胞ＳＭＮ ｍＲＮＡの絶対量の増加；エクソン７を欠くＳＭＮ ｍＲＮＡに対するエクソン７を含むＳＭＮ ｍＲＮＡの比の増加；エクソン７を含むＳＭＮタンパク質の絶対量の増加；エクソン７を欠くＳＭＮタンパク質に対するエクソン７を含むＳＭＮタンパク質の比の増加；筋力の改善；少なくとも１つの筋肉における電気的活動の改善；呼吸の改善；体重増加；および生存が挙げられる。一部の態様では、少なくとも１つの表現型の変化は、対象の運動ニューロンにおいて検出される。一部の態様では、本出願に記載される少なくとも１つの医薬組成物の投与により、対象は、上体を起こすこと、立つことおよび／または歩くことができるようになる。一部の態様では、少なくとも１つの医薬組成物の投与により、対象は、支援なしで、食べること、飲むことおよび／または呼吸することができるようになる。一部の態様では、処置の有効性は、筋肉の電気生理学的評価によって評価される。一部の態様では、医薬組成物の投与は、ＳＭＡの少なくとも１つの症状を改善し、炎症作用はほとんどまたは全くない。一部の態様では、炎症作用の非存在は、処置の際に、Ａｉｆ１レベルの有意な増加の非存在によって決定される。

【0279】

一部の態様では、少なくとも１つの医薬組成物の投与は、ＳＭＡの少なくとも１つの症状の発症を遅延させる。一部の態様では、少なくとも１つの医薬組成物の投与は、ＳＭＡの少なくとも１つの症状の進行を遅らせる。一部の態様では、少なくとも１つの医薬組成物の投与は、ＳＭＡの少なくとも１つの症状の重症度を低減する。一部の態様では、少なくとも１つの医薬組成物の投与は、望ましくない副作用をもたらす。一部の態様では、望ましくない副作用を回避しながら症状の望ましい改善をもたらす処置レジメンが特定される。

【0280】

投与量および製剤
したがって、一部の態様では、治療有効量のＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、ＳＭＡを有する対象に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、単独で対象に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、他の化合物および／または医薬組成物と一緒に対象に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）および組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶ中の）、またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）およびＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）は、対象に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）および／またはＳＭＮ１をコードする組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、併せて（例えば、同時に、または同じ訪問診療中に）、または逐次に（例えば、異なる訪問診療中に）、対象に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）および組換え核酸は、別々に対象に投与される。

【0281】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ１をコードする組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、対象に、併せて（例えば、同時に、または病院、診療所もしくは他の医療センターへの来院の間の異なる時間に、例えば、訪問診療の同じ日の間の異なる時間にのいずれか）、投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に併せて投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に併せて投与される。したがって、一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）およびＳＭＮ１をコードする組換え核酸を併せて投与することは、同じ訪問診療中（例えば、同じ診療日の間）の投与を意味する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）およびＳＭＮ１をコードする組換え核酸を併せて投与することは、同じ来院の間（例えば、同じ診療日の間）の異なる時間での投与を意味する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の並行投与は、新たな治療の開始である。他の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の並行投与は、異なる組成物で現在処置されている対象に対する付加療法である。

【0282】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ１をコードする組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、対象に、異なる来院の間（例えば、異なる診療日）に逐次に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象に、異なる来院の間（例えば、異なる診療日）に逐次に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸およびＳＭＮ２遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、対象に、異なる来院の間（例えば、異なる診療日）に逐次に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）およびＳＭＮ１をコードする組換え核酸を逐次に投与することは、最初の来院の間のＳＭＮ１をコードする組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶ中の）の投与、続いて異なる来院の間（例えば、異なる診療日）の低分子および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の投与を意味する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）およびＳＭＮ１をコードする組換え核酸を逐次に投与することは、最初の来院の間のＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の投与、続いて異なる来院の間（例えば、異なる診療日）のＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および／またはＳＭＮ１をコードする組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶ中の）の投与を意味する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）およびＳＭＮ１をコードする組換え核酸を逐次に投与することは、最初の来院の間のＳＭＮ機能を増加させる低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）の投与、続いて異なる来院の間（例えば、異なる診療日）のＳＭＮ１をコードする組換え核酸および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の投与を意味する。一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１をコードする組換え核酸およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、異なる頻度で投与される。本明細書で使用される場合、逐次投与は、訪問診療中の第１の治療（例えば、リスジプラムまたはブラナプラムなどのＳＭＮ２機能を増加させるための低分子）の投与が、１回または複数回の異なる訪問診療中の、第２の治療（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）および／もしくはＳＭＮ１をコードする組換え核酸（例えば、ｒＡＡＶ中の）、またはそれらの組合せ）の１回もしくは複数回の投与に続くか、またはそれに先行し得る、投与プロトコールを含み得る。

【0283】

一部の態様では、ＳＭＮ２機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）および組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、異なる頻度で投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）またはＳＭＮ２機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）は、対象に、１年に１～６回投与される。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、１回投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の２回またはそれよりも多くのその後の投与は、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）および組換えＳＭＮ１遺伝子の初回投与後に施行される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、ＳＭＮ２機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ２ ＡＳＯおよび／または組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）の投与前に対象に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象の体重１キログラム当たり０．０１～２５ミリグラム（例えば、０．０１～１０ミリグラム、０．０５～５ミリグラム、０．１～２ミリグラムまたは０．５～１ミリグラム）の用量で対象に投与され、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、２×１０^１０～２×１０^１４ＧＣ（例えば、１．０×１０^１３～１．０×１０^１４ＧＣ、または例えば、ＩＴ投与については、約１．０×１０^１３～５．０×１０^１４ＧＣ）の用量で、ｒＡＡＶで投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯは、対象の体重１キログラム当たり０．００１～２５ミリグラム（例えば、０．００１～１０ミリグラム、０．００５～５ミリグラム、０．０１～２ミリグラムまたは０．０５～１ミリグラム）の用量で対象に投与され、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）は、１×１０^１０～２×１０^１４ＧＣ（例えば、１．０×１０^１３～１．０×１０^１４ＧＣ、または例えば、ＩＴ投与については、約１．０×１０^１３～５．０×１０^１４ＧＣ）、または例えば、ＩＶ投与については、約３×１０^１３～５×１０^１４ＧＣの用量で、ｒＡＡＶで投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象の体重１キログラム当たり０．０１～１０ミリグラムの用量で投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象の体重１キログラム当たり０．００１～１０ミリグラムの用量で投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）は、対象の体重１キログラム当たり０．００１ミリグラム未満の用量で投与される。

【0284】

一部の態様では、用量当たり合計５ｍｇ～６０ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）が、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計５ｍｇ～２０ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）が、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計１２ｍｇ～４８ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）が、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計１２ｍｇ～３６ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）が、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計２８ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）が、対象に投与される。一部の態様では、用量当たり合計１２ｍｇのＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）が、対象に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）および／または組換えＳＭＮ１遺伝子は、対象に、静脈内または筋肉内投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）および／または組換えＳＭＮ１遺伝子は、対象の髄腔内空間に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）および／または組換えＳＭＮ１遺伝子は、対象の大槽内空間に投与される。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）および組換え核酸の投与は、対象における細胞内ＳＭＮタンパク質レベルを増加させる。一部の態様では、ＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）および組換え核酸の投与は、対象における運動ニューロンの頸髄部、胸髄部および腰髄部における細胞内ＳＭＮタンパク質レベルを増加させる。

【0285】

一部の態様では、ＳＭＮ２機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）およびＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）の用量は、ＣＳＦへのボーラス注射によって投与される。一部の態様では、用量は、ＬＰおよび／またはＩＣＭボーラス注射によって投与される。一部の態様では、用量は、ボーラス全身注射（例えば、皮下、筋肉内または静脈内注射）によって投与される。一部の態様では、対象は、ＣＳＦへのボーラス注射およびボーラス全身注射を受ける。一部の態様では、ＣＳＦボーラスおよび全身ボーラスの用量は、互いに同じまたは異なっていてもよい。一部の態様では、ＣＳＦおよび全身の用量は、異なる頻度で投与される。

【0286】

一部の態様では、ＳＭＮ２機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を含む医薬組成物が提供される。医薬組成物は、任意の適切な経路による（例えば、それぞれの治療について好適な異なる経路による）、それを必要とする対象への送達のために設計することができる。例えば、１つまたは複数の組成物は、脳室内（ＩＣＶ）、静脈内（ＩＶ）および髄腔内（ＩＴ）（例えば、腰椎穿刺（ＬＰ）および／または大槽内（ＩＣＭ）送達を介する）を含む経路を使用して、ヒト対象に投与され得る。

【0287】

一部の態様では、ＣＮＳへの直接送達が、望ましく、髄腔内注射を介して行われ得る。「髄腔内投与」という用語は、脳脊髄液（ＣＳＦ）を標的にする送達を指す。これは、脳室または腰部のＣＳＦへの直接注射によって、後頭下穿刺によって、または他の好適な手段によって行われ得る。Meyer et al, Molecular Therapy (31 October 2014)は、ＩＶ適用と比較して、１０倍低い用量を使用した場合にマウスおよび非ヒト霊長類の脊髄全体にわたって広範な導入遺伝子発現をもたらす直接ＣＳＦ注射の有効性を実証した。この文書は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、組換えＳＭＮ１遺伝子は、脳室内ウイルス注射を介して送達される（例えば、参照により本明細書に組み込まれるKim et al, J Vis Exp. 2014 Sep 15;(91):51863を参照されたい）。参照により本明細書に組み込まれるPassini et al, Hum Gene Ther. 2014 Jul;25(7):619-30も参照されたい。一部の態様では、組成物は、腰部注射を介して送達される。

【0288】

一部の態様では、送達手段および製剤は、本出願に記載されるＡＡＶ組成物（複数可）を含有する懸濁液の直接全身送達を回避するように設計される。好適には、これは、全身投与と比較して全身曝露を低減する、毒性を低減する、ならびに／またはＡＡＶおよび／もしくは導入遺伝子産物に対する望ましくない免疫応答を低減するという利点を有し得る。

【0289】

ＳＭＮ２機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を含む組成物は、任意の好適な投与の経路（例えば、経口、吸入、鼻腔内、気管内、動脈内、眼内、静脈内、筋肉内および他の非経口経路）のために製剤化され得る。

【0290】

一部の態様では、本出願に記載される組換えＳＭＮ１遺伝子送達構築物は、単一の組成物または複数の組成物において送達され得る。一部の態様では、２つまたはそれよりも多くの異なるＡＡＶが送達され得る（例えば、国際公開第２０１１／１２６８０８号および国際公開第２０１３／０４９４９３号を参照されたい）。一部の態様では、そのような複数のウイルスは、異なる複製欠陥ウイルス（例えば、ＡＡＶ、アデノウイルスおよび／またはレンチウイルス）を含有し得る。あるいは、送達は、例えば、ミセル、リポソーム、カチオン性脂質－核酸組成物、ポリ－グリカン組成物および他のポリマー、脂質および／またはコレステロール系核酸コンジュゲートを含む、さまざまな送達組成物およびナノ粒子と組み合わされた、非ウイルス構築物、例えば、「ネイキッドＤＮＡ」、「ネイキッドプラスミドＤＮＡ」、ＲＮＡ、およびｍＲＮＡ、ならびに例えば、本出願に記載または当技術分野において公知の他の構築物によって、媒介され得る。例えば、その両方が参照により本明細書に組み込まれる、X. Su et al, Mol. Pharmaceutics, 2011, 8 (3), pp 774-787; web publication: March 21, 2011；国際公開第２０１３／１８２６８３号、国際公開第２０１０／０５３５７２号および国際公開第２０１２／１７０９３０号を参照されたい。非ウイルスＳＭＮ１送達構築物も、任意の好適な投与の経路のために製剤化され得る。

【0291】

ウイルスベクターまたは非ウイルスＤＮＡもしくはＲＮＡ移入部分は、遺伝子導入および遺伝子治療の適用における使用のための生理学的に許容される担体を用いて製剤化され得る。多くの好適な精製方法が選択され得る。ベクター粒子から空キャプシドを分離するための好適な精製方法の例は記載されており、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、「ＡＡＶ８のためのスケーラブルな精製方法」という名称の２０１６年１２月９日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１６／６５９７６号ならびにその優先権文書である２０１６年４月１３日に出願された米国特許出願第６２／３２２，０９８号および２０１５年１２月１１日に出願された米国特許出願第６２／２６６，３４１号に記載されるプロセスである。参照により本明細書に組み込まれる、２０１６年１２月９日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１６／６５９７４号ならびにその優先権文書である２０１６年４月１３日に出願された米国特許出願第６２／３２２，０８３号および２０１５年１２月１１日に出願された同第６２／２６６，３５１号（ＡＡＶ１）；２０１６年１２月９日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１６／６６０１３号ならびにその優先権文書である２０１６年４月１３日に出願された米国仮出願第６２／３２２，０５５号および２０１５年１２月１１日に出願された同第６２／２６６，３４７号（ＡＡＶｒｈｌＯ）；ならびに２０１６年１２月９日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１６／６５９７０号ならびにその優先権出願である米国仮出願第６２／２６６，３５７号および同第６２／２６６，３５７号（ＡＡＶ９）に記載される精製方法も参照されたい。簡潔には、ゲノム含有ｒＡＡＶベクター粒子をｒＡＡＶ産生細胞培養物の清澄化濃縮上清から選択的に捕捉および単離する２ステップの精製スキームが、記載されている。プロセスは、高塩濃度で行われる親和性捕捉方法、続いて高ｐＨで行われるアニオン交換樹脂方法を利用して、ｒＡＡＶ中間体を実質的に含まないｒＡＡＶベクター粒子を提供する。

【0292】

ＡＡＶウイルスベクターの場合では、ゲノムコピー（「ＧＣ」）の定量は、製剤中に含有される用量の尺度として使用され得る。当技術分野において公知の任意の方法を使用して、本発明の複製欠陥ウイルス組成物のゲノムコピー（ＧＣ）数を決定することができる。ＡＡＶ ＧＣ数の滴定を行うための１つの方法は、下記の通りである。精製ＡＡＶベクター試料を、ＤＮａｓｅで最初に処理して、産生プロセス由来の混入宿主ＤＮＡを排除する。次いで、ＤＮａｓｅ抵抗性粒子を、熱処理に供して、ゲノムをキャプシドから放出させる。次いで、放出されたゲノムを、ウイルスゲノムの特定の領域（例えば、ポリＡシグナル）を標的にするプライマー／プローブセットを使用するリアルタイムＰＣＲによって定量する。ゲノムコピーを決定するための別の好適な方法は、定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）、特に、最適化ｑＰＣＲまたはデジタル液滴ＰＣＲ（Lock Martin, et al, Human Gene Therapy Methods. April 2014, 25(2): 115-125. doi: 10.1089/hgtb.2013.131、編集に先立って２０１３年１２月１３日にオンライン公開）である。

【0293】

一部の態様では、複製欠陥ウイルス組成物は、投与量単位で、範囲内のすべての整数または分数の量を含め、約１．０×１０^９ＧＣ～約１．０×１０^１５ＧＣの範囲（例えば、体重７０ｋｇの平均的な対象を処置するため）、好ましくは、ヒト患者については、１．０×１０^１２ＧＣ～１．０×１０^１４ＧＣの複製欠陥ウイルスの量を含有するように製剤化され得る。対象に投与される総用量は、投与の経路に依存し得る。一部の態様では、組成物は、範囲内のすべての整数または分数の量を含め、用量当たり少なくとも１×１０^９、２×１０^９、３×１０^９、４×１０^９、５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９または９×１０^９ＧＣを含有するように製剤化される。別の態様では、組成物は、範囲内のすべての整数または分数の量を含め、用量当たり少なくとも１×１０^１０、２×１０^１０、３×１０^１０、４×１０^１０、５×１０^１０、６×１０^１０、７×１０^１０、８×１０^１０または９×１０^１０ＧＣを含有するように製剤化される。別の態様では、組成物は、範囲内のすべての整数または分数の量を含め、用量当たり少なくとも１×１０^１１、２×１０^１１、３×１０^１１、４×１０^１１、５×１０^１１、６×１０^１１、７×１０^１１、８×１０^１１または９×１０^１１ＧＣを含有するように製剤化される。別の態様では、組成物は、範囲内のすべての整数または分数の量を含め、用量当たり少なくとも１×１０^１２、２×１０^１２、３×１０^１２、４×１０^１２、５×１０^１２、６×１０^１２、７×１０^１２、８×１０^１２または９×１０^１２ＧＣを含有するように製剤化される。別の態様では、組成物は、範囲内のすべての整数または分数の量を含め、用量当たり少なくとも１×１０^１３、２×１０^１３、３×１０^１３、４×１０^１３、５×１０^１３、６×１０^１３、７×１０^１３、８×１０^１３または９×１０^１３ＧＣを含有するように製剤化される。別の態様では、組成物は、範囲内のすべての整数または分数の量を含め、用量当たり少なくとも１×１０^１４、２×１０^１４、３×１０^１４、４×１０^１４、５×１０^１４、６×１０^１４、７×１０^１４、８×１０^１４または９×１０^１４ＧＣを含有するように製剤化される。別の態様では、組成物は、範囲内のすべての整数または分数の量を含め、用量当たり少なくとも１×１０^１５、２×１０^１５、３×１０^１５、４×１０^１５、５×１０^１５、６×１０^１５、７×１０^１５、８×１０^１５または９×１０^１５ＧＣを含有するように製剤化される。一部の態様では、ヒト適用のために、ウイルスの（例えば、ｒＡＡＶの）用量は、範囲内のすべての整数または分数の量を含め、用量当たり１×１０^１０～約１×１０^１２ＧＣの範囲であり得る。

【0294】

これらの上記の用量は、処置される領域のサイズ、使用されるウイルス力価、投与の経路および方法の所望の効果に応じて、範囲内のすべての数字を含め、約２５マイクロリットルから、約１，０００マイクロリットルまで、または約１０ミリリットルまで、または最大で２０ミリリットルまでの範囲の種々の体積の薬学的に許容される担体、賦形剤またはバッファー製剤で投与され得る。一部の態様では、薬学的に許容される担体、賦形剤またはバッファーの体積は、少なくとも約２５μｌである。一部の態様では、体積は、約５０μｌである。別の態様では、体積は、約７５μｌである。別の態様では、体積は、約１００μｌである。別の態様では、体積は、約１２５μｌである。別の態様では、体積は、約１５０μｌである。別の態様では、体積は、約１７５μｌである。さらに別の態様では、体積は、約２００μｌである。別の態様では、体積は、約２２５μｌである。さらに別の態様では、体積は、約２５０μｌである。さらに別の態様では、体積は、約２７５μｌである。さらに別の態様では、体積は、約３００μｌである。さらに別の態様では、体積は、約３２５μｌである。別の態様では、体積は、約３５０μｌである。別の態様では、体積は、約３７５μｌである。別の態様では、体積は、約４００μｌである。別の態様では、体積は、約４５０μｌである。別の態様では、体積は、約５００μｌである。別の態様では、体積は、約５５０μｌである。別の態様では、体積は、約６００μｌである。別の態様では、体積は、約６５０μｌである。別の態様では、体積は、約７００μｌである。別の態様では、体積は、約７００～１０００μｌである。

【0295】

他の態様では、約１μｌ～１５０ｍＬの体積が選択され得、より多くの体積が成人のために選択される。典型的には、新生乳児については、好適な体積は、約０．５ｍＬ～約１０ｍＬである。より年長の乳児については、約０．５ｍＬ～約１５ｍＬが選択され得る。幼児については、約０．５ｍＬ～約２０ｍＬの体積が選択され得る。小児については、最大で約３０ｍＬの体積が選択され得る。前青年期および青年期の者については、最大で約５０ｍＬの体積が選択され得る。さらに他の態様では、患者は、約５ｍＬ～約１５ｍＬが選択される、または約７．５ｍＬ～約１０ｍＬの体積で髄腔内投与を受け得る。他の好適な体積および投与量が決定されてもよい。投与量は、任意の副作用に対する治療利益のバランスをとるように調整され、そのような投与量は、組換えベクターが用いられる治療用途に応じて変わり得る。

【0296】

組換えＳＭＮ１遺伝子、例えば、ウイルスベクター中のもの（例えば、ｒＡＡＶ中にパッケージングされる）は、好適な方法を使用して宿主細胞に送達され得る。好ましくは、生理学的に適合する担体（例えば、薬学的に許容される担体）に懸濁されたｒＡＡＶは、ヒトまたは非ヒト哺乳動物患者に投与されてもよい。一部の態様では、組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤および／または補助剤を含む。好適な担体は、投与の経路に対して選択され得る。例えば、好適なある担体としては、食塩水が挙げられ、これは、種々の緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝食塩水）を用いて製剤化され得る。他の例示的な薬学的に許容される担体としては、滅菌食塩水、ラクトース、スクロース、リン酸カルシウム、ゼラチン、デキストラン、寒天、ペクチン、ピーナッツ油、ゴマ油および水が挙げられる。

【0297】

一部の態様では、組成物は、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶ、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）および／またはＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）、ならびに薬学的に許容される担体（複数可）に加えて、保存剤または化学安定剤などの他の従来の医薬成分を含有し得る。好適な例示的な保存剤としては、クロロブタノール、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸、二酸化硫黄、没食子酸プロピル、パラベン、エチルバニリン、グリセリン、フェノールおよびパラクロロフェノールが挙げられる。好適な化学安定剤としては、ゼラチンおよびアルブミンが挙げられる。

【0298】

一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子（例えば、リスジプラムまたはブラナプラム）、ＳＭＮ１ ｒＡＡＶおよび／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ（例えば、ヌシネルセン）を含む組成物は、薬学的に許容される担体を含んでいてもよく、および／あるいは注射、浸透圧ポンプ、髄腔内カテーテルを介した対象への送達のため、または別のデバイスもしくは経路による送達のために設計された好適な賦形剤と混合されていてもよい。一例では、組成物は、髄腔内送達のために製剤化される。一部の態様では、髄腔内送達は、脊柱管、例えば、くも膜下腔への注射を包含する。

【0299】

本出願に記載されるウイルスベクターは、ＳＭＮ１を、それを必要とする対象（例えば、ヒト患者）に送達して、機能性ＳＭＮを対象に供給するため、および／または１つもしくは複数のＳＭＮ２ ＡＳＯとの併用療法において脊髄性筋萎縮症を処置するための医薬（例えば、併せてまたは逐次に投与される）の調製において使用され得る。

【0300】

一部の態様では、ｒＡＡＶを含む薬学的に許容される担体（例えば、バッファー、塩および／または医薬製剤の他の構成成分）を含む医薬組成物は、注入チューブへのｒＡＡＶの付着を防止するが、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶの結合活性を妨げない１つまたは複数の構成成分を含むように選択される。

【0301】

一部のそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり５ｍｇ～６０ｍｇの範囲のＡＳＯの量での送達のため（例えば、全身投与のため）に製剤化される。一部のそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり５ｍｇ～２０ｍｇの範囲のＡＳＯの量での送達のため（例えば、全身投与のため）に製剤化される。一部のそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり１２ｍｇ～５０ｍｇの範囲のＡＳＯの量での送達のため（例えば、全身投与のため）に製剤化される。一部のそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり１２ｍｇ～４８ｍｇの範囲のＡＳＯの量での送達のため（例えば、全身投与のため）に製剤化される。一部のそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり１２ｍｇ～３６ｍｇの範囲のＡＳＯの量での送達のため（例えば、全身投与のため）に製剤化される。一部のそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり２８ｍｇのＡＳＯの量での送達のため（例えば、全身投与のため）に製剤化される。一部のそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）は、用量当たり１２ｍｇのＡＳＯの量での送達のため（例えば、全身投与のため）に製剤化される。一部のそのような態様では、投与体積は、５ｍＬである。

【0302】

一部のそのような態様では、ＡＳＯ（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）（単独で、あるいは組換えＳＭＮ１遺伝子およびまたはリスジプラムもしくはブラナプラムなどのＳＭＮ機能を増加させるための低分子とともに）は、０．１ｍｇ／ｋｇ～２００ｍｇ／ｋｇ（ＡＳＯ／患者体重）の範囲での送達のため（例えば、全身投与のため）に製剤化される。一部の態様では、用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇである。一部の態様では、用量は、０．５ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇである。一部の態様では、用量は、１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇである。一部の態様では、用量は、１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇである。一部の態様では、用量は、１ｍｇ／ｋｇ～２５ｍｇ／ｋｇである。一部の態様では、用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ～２５ｍｇ／ｋｇである。一部の態様では、用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇである。一部の態様では、用量は、１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇである。一部の態様では、用量は、１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇである。

【0303】

一部の態様では、ＡＳＯによる対象の投与は、誘導段階および維持段階に分けられる。一部のそのような態様では、誘導段階の間に投与される用量は、維持段階の間の投与される用量よりも多い。一部の態様では、誘導段階の間に投与される用量は、維持段階の間の投与される用量よりも少ない。一部の態様では、誘導段階は、ボーラス注射によって達成され、維持段階は、持続注入によって達成される。一部の態様では、併用製剤は、誘導段階の間に使用される。

【0304】

一部の態様では、医薬組成物は、ボーラス注射として投与される。一部のそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計５ｍｇ～６０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含有する。一部のそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計５ｍｇ～２０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含有する。一部のそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計１２ｍｇ～５０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含有する。一部のそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計１２ｍｇ～４８ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含有する。一部のそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計１２ｍｇ～３６ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含有する。一部のそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計２８ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含有する。一部のそのような態様では、ボーラス注射の用量は、用量当たり合計１２ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）を含有する。一部のそのような態様では、投与体積は、５ｍＬである。

【0305】

一部の態様では、医薬組成物は、ボーラス注射として投与される。一部のそのような態様では、ボーラス注射の用量は、対象の体重１キログラム当たり０．０１～２５ミリグラムのアンチセンス化合物である。一部のそのような態様では、ボーラス注射の用量は、対象の体重１キログラム当たり０．０１～１０ミリグラムのアンチセンス化合物である。一部の態様では、用量は、対象の体重１キログラム当たり０．０５～５ミリグラムのアンチセンス化合物である。一部の態様では、用量は、対象の体重１キログラム当たり０．１～２ミリグラムのアンチセンス化合物である。一部の態様では、用量は、対象の体重１キログラム当たり０．５～１ミリグラムのアンチセンス化合物である。

【0306】

一部の態様では、そのような用量は、毎月２回投与される。一部の態様では、そのような用量は、１か月ごとに投与される。一部の態様では、そのような用量は、２か月ごとに投与される。一部の態様では、そのような用量は、６か月ごとに投与される。一部の態様では、そのような用量は、ＣＳＦへのボーラス注射によって投与される。一部の態様では、そのような用量は、髄腔内ボーラス注射によって投与される。一部の態様では、そのような用量は、ボーラス全身注射（例えば、皮下、筋肉内または静脈内注射）によって投与される。一部の態様では、対象は、ＣＳＦへのボーラス注射およびボーラス全身注射を受ける。そのような態様では、ＣＳＦボーラスおよび全身ボーラスの用量は、互いに同じまたは異なっていてもよい。一部の態様では、ＣＳＦおよび全身の用量は、異なる頻度で投与される。一部の態様では、本発明は、少なくとも１回のボーラス髄腔内注射および少なくとも１回のボーラス皮下注射を含む投与レジメンを提供する。

【0307】

一部の態様では、医薬組成物は、持続注入によって投与される（例えば、ここで、用量は、一定期間、例えば、２４時間の期間にわたって投与され得る）。そのような持続注入は、医薬組成物をＣＳＦに送達する注入ポンプによって達成され得る。一部の態様では、そのような注入ポンプは、医薬組成物をＩＴまたはＩＣＶに送達する。一部のそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たり５ｍｇ～６０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）である。一部のそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たり５ｍｇ～２０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）である。一部のそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たり１２ｍｇ～５０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）である。一部のそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たり１２ｍｇ～４８ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）である。一部のそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たり１２ｍｇ～３６ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）である。一部のそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たり２８ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）である。一部のそのような態様では、投与される用量は、１日当たり用量当たり１２ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＮ２ ＡＳＯ）である。一部のそのような態様では、投与体積は、５ｍＬである。

【0308】

一部の態様では、投与される用量は、１日当たり対象の体重１キログラム当たり０．０５～２５ミリグラムのアンチセンス化合物である。一部の態様では、投与される用量は、１日当たり対象の体重１キログラム当たり０．１～１０ミリグラムのアンチセンス化合物である。一部の態様では、投与される用量は、１日当たり対象の体重１キログラム当たり０．５～１０ミリグラムのアンチセンス化合物である。一部の態様では、投与される用量は、１日当たり対象の体重１キログラム当たり０．５～５ミリグラムのアンチセンス化合物である。一部の態様では、投与される用量は、１日当たり対象の体重１キログラム当たり１～５ミリグラムのアンチセンス化合物である。

【0309】

一部の態様では、本発明は、ＣＮＳへの注入および少なくとも１回のボーラス全身注射を含む投与レジメンを提供する。一部の態様では、本発明は、ＣＮＳへの注入および少なくとも１回のボーラス皮下注射を含む投与レジメンを提供する。一部の態様では、用量は、ボーラスまたは注入にかかわらず、ＣＮＳ組織１グラム当たり０．１～１００マイクログラムのアンチセンス化合物の濃度を達成または維持するように調整される。一部の態様では、用量は、ボーラスまたは注入にかかわらず、ＣＮＳ組織１グラム当たり１～１０マイクログラムのアンチセンス化合物の濃度を達成または維持するように調整される。一部の態様では、用量は、ボーラスまたは注入にかかわらず、ＣＮＳ組織１グラム当たり０．１～１マイクログラムのアンチセンス化合物の濃度を達成または維持するように調整される。

【0310】

したがって、一部の態様では、本発明は、１つまたは複数の治療用分子、例えば、１つまたは複数の組換え核酸（例えば、ウイルスベクター中、例えば、ｒＡＡＶ内にパッケージングされる）および／またはアンチセンス化合物を含む医薬組成物を提供する。一部の態様では、そのような医薬組成物は、滅菌食塩水溶液および１つまたは複数の治療用分子を含む。一部の態様では、そのような医薬組成物は、滅菌食塩水溶液および１つまたは複数の治療用分子からなる。一部の態様では、治療用分子は、医薬組成物または製剤の調製のために、薬学的に許容される活性物質および／または不活性物質と混合され得る。医薬組成物の製剤化のための組成物および方法は、限定されるものではないが、投与の経路、疾患の程度または投与される用量を含む多くの基準に依存する。一部の態様では、治療用分子は、そのような治療用分子を好適な薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせることによって、医薬組成物において利用することができる。一部の態様では、薬学的に許容される希釈剤としては、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。ＰＢＳは、非経口的に送達される組成物での使用に好適な希釈剤である。したがって、一部の態様では、本明細書に記載される方法において用いられるのは、１つまたは複数の治療用分子および薬学的に許容される希釈剤を含む医薬組成物である。一部の態様では、薬学的に許容される希釈剤は、ＰＢＳである。本出願に記載される１つまたは複数の治療用分子を含む医薬組成物は、任意の薬学的に許容される塩、エステルまたはそのようなエステルの塩を包含する。一部の態様では、ＡＳＯを含む医薬組成物は、ヒトを含む動物への投与の際に、その生物学的に活性な代謝産物または残留物を（直接的または間接的に）提供することができる１つまたは複数のオリゴヌクレオチドを含む。したがって、一部の態様では、ＡＳＯの薬学的に許容される塩、プロドラッグ、そのようなプロドラッグの薬学的に許容される塩、および他の生物学的同等物が提供される。好適な薬学的に許容される塩としては、限定されるものではないが、ナトリウムおよびカリウムの塩が挙げられる。

【0311】

一部の態様では、プロドラッグは、身体内の内因性ヌクレアーゼによって切断されて、活性なアンチセンスオリゴマー化合物を形成する、オリゴマー化合物の一方または両方の末端での追加のヌクレオシドの組み込みを含み得る。脂質系ベクターは、種々の方法で核酸治療において使用されている。例えば、一方法では、核酸は、カチオン性脂質および中性脂質の混合物で構成される予め形成されたリポソームまたはリポプレックスに導入される。別の方法では、モノ－またはポリ－カチオン性の脂質とのＤＮＡ複合体は、中性脂質の存在なしで形成される。一部の調製は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるAkinc et al., Nature Biotechnology 26, 561-569 (1 May 2008)に記載されている。

【0312】

キット
一部の態様では、ＳＭＮ機能を増加させるための低分子、組換えＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶ中の）および／またはＳＭＮ２ ＡＳＯ、例えば、医薬組成物中のものを含むキットが提供される。一部の態様では、そのようなキットは、１つまたは複数の免疫抑制剤などの追加の治療剤をさらに含む。一部の態様では、そのようなキットは、送達の手段、例えば、シリンジまたは注入ポンプをさらに含む。

【0313】

下記の実施例は実例にすぎず、本発明を限定することを意図するものではない。

【実施例】

【0314】

（実施例１）
ｈＳＭＮ１遺伝子を含有するｒＡＡＶベクター
コドン最適化ヒトＳＭＮ１ ｃＤＮＡを保有する組換え神経向性ＡＡＶウイルスを構築した。

【0315】

（実施例２）
全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させるＡＳＯ（例えば、ｈＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７包含を促進することによって）
全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７包含を促進する）ＡＳＯを調製した（図３）。

【0316】

（実施例３）
ｈＳＭＮ１遺伝子を含有するｒＡＡＶベクターと全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７包含を促進する）ＡＳＯとの投与および生体内分布
実施例１のｒＡＡＶおよび実施例２のＡＳＯを、動物ＳＭＡ疾患モデル、ならびにマウス、ブタおよび非ヒト霊長類（例えば、マカク）を含む対照動物に、ＳＭＡ疾患モデルならびに対照動物モデルに投与する。

【0317】

ｒＡＡＶおよびＡＳＯを、髄腔内および全身経路を介して（例えば、腰椎穿刺、大槽内および静脈内送達を介して）を含む異なる経路を介して投与する。

【0318】

ｒＡＡＶおよびＡＳＯの分布を、動物モデルにおいて評価する。特に、脊髄内での分布を評価して、例えば、脊髄の頸部、胸部および腰部におけるｒＡＡＶおよび／またはＡＳＯの相対量を決定する。

【0319】

図４は、腰椎穿刺または大槽内送達を介して投与された３×１０^１３ＧＣのｒＡＡＶを使用した結果、および静脈内投与された２×１０^１４ＧＣを使用した結果を図示する。

【0320】

（実施例４）
ｈＳＭＮ１遺伝子を含有するｒＡＡＶベクターと全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７包含を促進する）ＡＳＯの共製剤
図５は、ｒＡＡＶベクターｈＳＭＮ１遺伝子（an rAAV vector an hSMN1 gene）、および全長ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増加させる（例えば、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７包含を促進する）ＡＳＯの両方を含む組成物の物理的および生物学特徴付けの非限定的な例を図示する。

【0321】

図５Ａは、ｒＡＡＶベクター単独のＳＥＣ－ＨＰＬＣプロファイルを示す。図５Ｂは、ＡＳＯ単独のＳＥＣ－ＨＰＬＣプロファイルを示す。図５Ｃは、ｒＡＡＶベクターおよびＡＳＯが同じ製剤中に存在する場合のそれらのＳＥＣ－ＨＰＬＣプロファイルを示す。ｒＡＡＶベクターおよびＡＳＯのＨＰＬＣプロファイルは、図５Ｃにおいて依然として同じであり、ｒＡＡＶおよびＡＳＯを共製剤化した場合に有意な不適合性が存在しないことを示す。

【0322】

図５Ｄは、ｒＡＡＶベクター単独での送達またはｒＡＡＶベクターとＡＳＯとの送達のいずれかの際のｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞におけるｒＡＡＶの感染力についてのデータを提供する。結果は、ｒＡＡＶの感染力が、共製剤中のＡＳＯの存在によって有意に影響を受けないことを示す。

【0323】

図５Ｅは、ｒＡＡＶ、ＡＳＯまたはその両方による処置後の細胞における細胞内ＳＭＮタンパク質発現レベルおよびＧＥＭ形成を示す。

【0324】

（実施例５）
ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１の脳室内（ＩＣＶ）投与
マイクロ浸透圧ポンプ（ＡＬＺＥＴ Ｏｓｍｏｔｉｃ Ｐｕｍｐｓ、Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ、Ｃａｌｉｆ．、ＵＳＡ）を使用して、ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１を、ヒトＳＭＮ２導入遺伝子を有する新生仔（Ｐ０～Ｐ１）ＳＭＡマウスにおいて、右側脳室を通して脳脊髄液（ＣＳＦ）に送達する。低用量または高用量のヌシネルセン（それぞれ、１μｇおよび４μｇ）を、低用量または高用量のＡＡＶ－ＳＭＮ１（それぞれ、１×１０^１０ＧＣまたは８×１０^１０ＧＣ）と一緒に、出生時（Ｐ０～Ｐ１）にマウスに投与する。マウスの体重および立ち直り反射を測定し、ヌシネルセンまたはＡＡＶ－ＳＭＮ１単独のいずれかを受けている同じ遺伝子型の対照マウスの体重および立ち直り反射と比較する。

【0325】

ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１の両方が投与されたマウスは、対照と比較して、有意により高い体重およびより速い立ち直り反射を有する。

【0326】

研究は、ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１の脳室内（ＩＣＶ）投与が、脊髄におけるＳＭＮ２のエクソン７包含を増加させることを明らかにする。さらなる研究は、より多くの数の脊髄運動ニューロンが、対照と比較して、ＳＭＮ発現が増加していたことを示す。

【0327】

（実施例６）
ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１の組成物の投与
マイクロ浸透圧ポンプ（ＡＬＺＥＴ Ｏｓｍｏｔｉｃ Ｐｕｍｐｓ、Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ、Ｃａｌｉｆ．、ＵＳＡ）を使用して、ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１の組成物を、ヒトＳＭＮ２導入遺伝子を有する新生仔（Ｐ０～Ｐ１）ＳＭＡマウスにおいて、右側脳室を通して脳脊髄液（ＣＳＦ）に送達する。低用量のヌシネルセン（１μｇ）および低用量のＡＡＶ－ＳＭＮ１（１×１０^１０ＧＣ）の組成物、または低用量のヌシネルセン（１μｇ）および高用量のＡＡＶ－ＳＭＮ１（８×１０^１０ＧＣ）の組成物、または高用量のヌシネルセン（４μｇ）および低用量のＡＡＶ－ＳＭＮ１（１×１０^１０ＧＣ）の組成物、または高用量のヌシネルセン（４μｇ）および高用量のＡＡＶ－ＳＭＮ１（８×１０^１０ＧＣ）の組成物を、出生時（Ｐ０～Ｐ１）にマウスに投与する。マウスの体重および立ち直り反射を測定し、ヌシネルセンまたはＡＡＶ－ＳＭＮ１単独のいずれかを受けている同じ遺伝子型の対照マウスの体重および立ち直り反射と比較する。

【0328】

ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１の組成物が投与されたマウスは、対照と比較して、有意により高い体重およびより速い立ち直り反射を有する。

【0329】

研究は、ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１の組成物の脳室内（ＩＣＶ）投与が、脊髄におけるＳＭＮ２のエクソン７包含を増加させることを明らかにする。さらなる研究は、より多くの数の脊髄運動ニューロンが、対照と比較して、ＳＭＮ発現が増加していたことを示す。

【0330】

（実施例７）
非ヒト哺乳動物におけるヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１の投与およびその分布の分析
ＳＭＡのマウス、アカゲザルおよびカニクイザルを使用して、異なる用量および投与の経路でのヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１組成物の分布を評価する。ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１組成物を、一部のマウスおよび一部のサルに、２４時間の期間にわたる、脳室内（ＩＣＶ）注入によって、または髄腔内（ＩＴ）注入によって、約１ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。動物を、注入期間の終了の９６時間後に屠殺し、組織を回収する。ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１の濃度を、脊髄の頸部、胸部および腰部に由来する試料において測定する。

【0331】

上記と同じ遺伝子型の追加のマウス、アカゲザルおよびカニクイザルに、ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１組成物を、ＩＣＶ注入によって、またはＩＴ注入によって、約１ｍｇ／ｋｇの同じ用量で投与する。動物に、ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１組成物を３日間、７日間または１４日間の期間にわたって投与した後、注入期間の終了の５日後に屠殺する。

【0332】

（実施例８）
ヒト対象へのヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１の投与
ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１を、脳室内（ＩＣＶ）、静脈内（ＩＶ）および髄腔内（ＩＴ）（例えば、腰椎穿刺（ＬＰ）および／または大槽内（ＩＣＭ）送達を介して）を含む経路を使用して、ヒト対象に投与する。組成物は、小児および成人の両方において試験する。

【0333】

一部の態様では、ｒＡＡＶ－ＳＭＮ１組成物を、例えば、腰椎穿刺（ＬＰ）注入によって（例えば、２４時間の期間にわたって）、小児（例えば、ＳＭＡを有する）に約１×１０^１４ＧＣの用量で投与する。一部の態様では、ｒＡＡＶ－ＳＭＮ１組成物を、例えば、大槽内（ＩＣＭ）注入によって（例えば、２４時間の期間にわたって）、成人（例えば、ＳＭＡを有する）に約１．５×１０^１４ＧＣの用量で投与する。

【0334】

一部の態様では、他のｒＡＡＶ－ＳＭＮ１用量、例えば、約５～６×１０^１３ＧＣまたはそれよりも高い、例えば、およそ１．２×１０^１４ＧＣまたは１．５～１．８×１０^１４ＧＣを使用することができる。例えば、ＩＴ送達を介する（例えば、２４時間の期間にわたる注入）、例えば、ＬＰ送達またはＩＣＭ送達を介する任意の適切な投与の経路を使用することができる。

【0335】

（実施例９）
ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１の脳室内（ＩＣＶ）投与
ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１を、ヒトＳＭＮ２導入遺伝子を有する新生仔（Ｐ０～Ｐ１）ＳＭＡマウスに投与した。低用量または高用量のヌシネルセン（それぞれ、１μｇおよび３μｇ）を、低用量または高用量のＡＡＶ－ＳＭＮ１（それぞれ、１×１０^１０ＧＣまたは３×１０^１０ＧＣ）と一緒に、出生時（Ｐ０～Ｐ１）にマウスに投与した。マウスの体重および立ち直り反射を測定し、ヌシネルセンまたはＡＡＶ－ＳＭＮ１単独のいずれかを受けている同じ遺伝子型の対照マウスの体重および立ち直り反射と比較した。

【0336】

ヌシネルセンおよびＡＡＶ－ＳＭＮ１の両方が投与されたマウスは、対照と比較して、有意により高い体重およびより速い立ち直り反射を有する。

【0337】

図６Ａ～６Ｂ、ＳＭＮ１遺伝子（例えば、ｒＡＡＶベクター中の）またはヌシネルセンなどのＡＳＯ（例えば、単一用量中）のいずれか。実験は、投与後に、出生後日数（ＰＮＤ）８で運動機能の部分的なレスキュー^＊＊、ＰＮＤ１６で運動機能の完全なレスキューを示す。図６Ａは、ヌシネルセンの８および１６日後の４つの別々の群のマウスの立ち直り反射（ＲＲ）を示す。図６Ｂは、ヌシネルセンの８および１６日後の４つの別々の群のマウスの体重を示す。併用療法は、単剤療法で見られたＲＲ（ＰＮＤ７～１６）および体重の部分的なレスキューを改善することができる。

【0338】

図７Ａ～７Ｃは、ＳＭＮ１遺伝子治療とヌシネルセンとの体重およびＲＲに対する効果を示す最初の併用療法研究の結果を示す。図７Ａは、経時的な体重変化を示す。図７Ｂは、経時的なＲＲ変化を示す。図７Ｃは、試験された３つの動物群についての条件の概要を示すチャートである。

【0339】

図８Ａ～８Ｃは、ＳＭＮ１遺伝子治療とヌシネルセンとの体重およびＲＲに対する効果を示す２回目の併用療法の結果を示す。図８Ａは、試験された３つの動物群についての条件の概要を示すチャートである。図８Ｂは、経時的な体重変化を示し、図８Ｃは、経時的なＲＲ変化を示す（日数で）。

【0340】

図９Ａ～９Ｂは、ＰＮＤ７～ＰＮＤ１３の体重の変化％の比較を示す。図９Ａは、遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：１×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：１μｇの用量での体重の変化％を示す。図９Ｂは、遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：３×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：３μｇの用量での体重の変化％を示す。図１０Ａ～１０Ｂは、ＰＮＤ７～ＰＮＤ１３のＲＲの変化％の比較を示す。図１０Ａは、遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：１×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：１μｇの用量でのＲＲの変化％を示す。図１０Ｂは、遺伝子治療（ｒＡＡＶ）：３×１０^１０ＧＣ／ＡＳＯ（ヌシネルセン）：３μｇの用量でのＲＲの変化％を示す。

【0341】

他の態様
本明細書に開示されるすべての特徴は、任意の組合せで組み合わせてもよい。本明細書に開示されるそれぞれの特徴は、同じ、同等または同様の目的を果たす代替の特徴によって置き換えられてもよい。したがって、他に明確に述べられない限り、開示されるそれぞれの特徴は、一般的な一連の同等または同様の特徴の一例にすぎない。

【0342】

上記の説明から、当業者であれば、本開示の必須の特徴を容易に確かめることができ、その精神および範囲から逸脱することなく、本開示にさまざまな変更および改変を行って、それをさまざまな使用法および条件に適応させることができる。したがって、他の態様も特許請求の範囲内である。

【0343】

均等物
いくつかの本発明の態様を本明細書に記載および説明したが、当業者であれば、本明細書に記載される機能を行うため、ならびに／あるいは本明細書に記載される結果および／または１つもしくは複数の利点を得るために、種々の他の手段および／または構造を容易に想定するであろうし、そのような変形および／または改変のそれぞれは、本明細書に記載される本発明の態様の範囲内であると見なされる。より一般には、当業者であれば、本明細書に記載されるすべてのパラメーター、寸法、材料および配置が例示的であることを意味すること、ならびに実際のパラメーター、寸法、材料および／または配置が、本発明の教示を使用するための具体的な１つまたは複数の適用に依存することを、容易に理解する。当業者であれば、ただの日常的な実験を使用して、本明細書に記載される具体的な発明の態様に対する多くの均等物を、認識し、または確かめることができる。したがって、前述の態様が例としてのみ提示されること、添付の特許請求の範囲およびそれに対する均等物の範囲内で、本発明の態様を、具体的に記載され、かつ特許請求の範囲に記載される以外の他のもので実行し得ることが理解されるべきである。本開示の発明の態様は、本明細書に記載されるそれぞれの個々の特徴、系、物品、材料、キットおよび／または方法に対する。加えて、２つまたはそれよりも多くのそのような特徴、系、物品、材料、キットおよび／または方法の任意の組み合わせは、そのような特徴、系、物品、材料、キットおよび／または方法が互いに不整合でなければ、本開示の発明の範囲内に含まれる。

【0344】

本明細書で定義および使用されるすべての定義は、辞書の定義、参照によって組み込まれる文書における定義、および／または定義される用語の通常の意味に対して優先することが理解されるべきである。

【0345】

本明細書に開示されるすべての参考文献、特許および特許出願は、それぞれの引用される主題に関して、参照によって組み込まれ、それは、一部の場合では、文書の全体を包含する場合がある。

【0346】

本明細書および特許請求の範囲でここに使用される場合、「ａ」および「ａｎ」という不定冠詞は、逆のことが明確に示されない限り、「少なくとも１つ」を意味することを理解されるべきである。

【0347】

「および／または」という語句は、本明細書および特許請求の範囲でここに使用される場合、そのように結合される要素、すなわち、一部の場合で結合して存在し、他の場合で分離して存在する要素の「いずれかまたは両方」を意味することが理解されるべきである。「および／または」を用いて列挙される複数の要素は、同じ様式で解釈されるべきであり、すなわち、そのように結合される要素の「１つまたは複数」であると解釈されるべきである。他の要素は、必要に応じて、具体的に特定されるこれらの要素と関連するか関連しないかにかかわらず、「および／または」節によって具体的に特定される要素以外に存在してもよい。したがって、非限定的な例として、「Ａおよび／またはＢ」に対する言及は、「含む」などのオープンエンドの語と併用される場合、一態様では、Ａのみ（必要に応じて、Ｂ以外の要素を含む）を指すことができ、別の態様では、Ｂのみ（必要に応じて、Ａ以外の要素を含む）を指すことができ、さらに別の態様では、ＡおよびＢの両方（必要に応じて、他の要素を含む）を指すことができる。

【0348】

本明細書および特許請求の範囲でここに使用される場合、「または」は、上記で定義される「および／または」と同じ意味を有することが理解されるべきである。例えば、リスト中の項目が「または」または「および／または」によって分離されている場合、包括的であるとして、すなわち、要素の少なくとも１つの包含だけでなく、多くの要素もしくは要素のリストの２つ以上、および必要に応じてリストされていない項目も含むとして、解釈されるべきである。「の１つのみ」もしくは「の正確に１つ」、または特許請求の範囲で使用される場合に「からなる」などの、それとは反対に明確に示す、のみという用語は、正確に１つの要素または多くの要素もしくは要素のリストの包含を指す。一般に、「または」という用語は、本明細書で使用される場合、「いずれか」、「の１つ」、「の１つのみ」または「の正確に１つ」などの排他性の用語に先行する場合、排他的な選択肢を示す（すなわち、「１つまたは他のものであるが、両方ではない」）としてのみ解釈されるべきである。「から本質的になる」は、特許請求の範囲で使用される場合、特許法の分野で使用されるその通常の意味を有するものとする。

【0349】

本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、「少なくとも１つ」という語句は、１つまたは複数の要素のリストに関して、要素のリスト中の要素のいずれか１つまたは複数から選択される少なくとも１つの要素を意味するが、要素のリスト内で具体的にリストされたありとあらゆる要素の少なくとも１つを含むことは必ずしも必要ではなく、要素のリスト中の要素の任意の組合せを除外しないことが理解されるべきである。この定義は、要素が、具体的に特定されたこれらの要素と関連するか関連しないかにかかわらず、「少なくとも１つ」という語句が指す要素のリスト内で具体的に特定された要素以外に必要に応じて存在していてもよいことも許容する。したがって、非限定的な例として、「ＡおよびＢの少なくとも１つ」（または同等に、「ＡまたはＢの少なくとも１つ」、または同等に、「Ａおよび／またはＢの少なくとも１つ」）は、一態様では、Ｂが存在しない、必要に応じて２つ以上のＡを含む少なくとも１つのＡ（および必要に応じて、Ｂ以外の要素を含む）を指すことができ、別の態様では、Ａが存在しない、必要に応じて２つ以上のＢを含む少なくとも１つのＢ（および必要に応じて、Ａ以外の要素を含む）を指すことができる、さらに別の態様では、必要に応じて２つ以上のＡを含む少なくとも１つのＡ、および必要に応じて２つ以上のＢを含む少なくとも１つのＢ（および必要に応じて、他の要素を含む）などを指すことができる。

【0350】

逆のことが明確に示されない限り、２つ以上のステップまたは行為を含む、特許請求の範囲に記載されるここで任意の方法では、方法のステップまたは行為の順序は、方法のステップまたは行為が列挙される順序に必ずしも限定されないことも理解されるべきである。

【0351】

特許請求の範囲ならびに上記の本明細書では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「持つ（ｃａｒｒｙｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」、「保持する（ｈｏｌｄｉｎｇ）」、「で構成される（ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ）」などのようなすべての移行句は、オープンエンドであること、すなわち、含むが、限定されないことを意味することが理解されるべきである。「からなる」および「から本質的になる」という移行句のみを、それぞれ、米国特許庁特許審査便覧のセクション２１１１．０３に記述されている通り、クローズまたはセミクローズの移行句とする。オープンエンドの移行句（例えば、「含む」）を使用して本文書に記載される態様は、代替の態様では、オープンエンドの移行句によって記載される特徴「からなる」および「から本質的になる」も企図することが理解されるべきである。例えば、本開示が「ＡおよびＢを含む組成物」と記載する場合、本開示は、「ＡおよびＢからなる組成物」および「ＡおよびＢから本質的になる組成物」という代替の態様も企図する。

【0352】

この出願に添付される配列表は、必要により、それぞれの配列を「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」のいずれかとして特定するが、実際には、これらの配列は、化学修飾の任意の組合せで修飾されていてもよい。当業者であれば、修飾オリゴヌクレオチドを記載するための「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」としてのそのような指定は、一部の場合では、任意であることを容易に理解する。例えば、２’－ＯＨ糖部分およびチミン塩基を含むヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドは、修飾糖（ＤＮＡの天然の２’－Ｈが２’－ＯＨ）を有するＤＮＡとして、または修飾塩基（ＲＮＡの天然のウラシルがチミン（メチル化ウラシル））を有するＲＮＡとして、記載され得る。

【0353】

したがって、限定されるものではないが、配列表中のものを含めて、本明細書で提供される核酸配列は、限定されるものではないが、修飾核酸塩基を有するそのような核酸を含む、天然または修飾のＲＮＡおよび／もしくはＤＮＡの任意の組合せを含有する核酸を包含することが意図される。さらなる例として、限定されないが、「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」という核酸塩基配列を有するオリゴマー化合物は、修飾または未修飾にかかわらず、そのような核酸塩基配列を有する任意のオリゴマー化合物を包含し、限定されるものではないが、「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」という配列を有するものなどのＲＮＡ塩基を含むそのような化合物、ならびに「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」などの一部のＤＮＡ塩基および一部のＲＮＡ塩基を有するもの、ならびに「ＡＴ“ＣＧＡＵＣＧ」（ここで、“Ｃは、５位にメチル基を含むシトシン塩基を示す）などの他の修飾塩基を有するオリゴマー化合物が挙げられる。

【図1】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】

【図4A-4B】

【図5A-5E】

【図6A-6B】

【図7A-7B】

【図7C】

【図8A】

【図8B-8C】

【図9A-9B】

【図10A-10B】

【図11】

【配列表】

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【国際調査報告】