特表 2022-544683 新規な抗ＴＣＲデルタ可変１抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-10-20

(54)【発明の名称】新規な抗ＴＣＲデルタ可変１抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20221013BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20221013BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20221013BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20221013BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20221013BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20221013BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20221013BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20221013BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221013BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20221013BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K39/395 U

A61K39/395 D

A61P35/00

A61P35/02

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022509648

(86)(22)【出願日】2020-08-14

(85)【翻訳文提出日】2022-03-30

(86)【国際出願番号】 GB2020051955

(87)【国際公開番号】W WO2021032960

(87)【国際公開日】2021-02-25

(31)【優先権主張番号】1911799.3

(32)【優先日】2019-08-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(31)【優先権主張番号】2010760.3

(32)【優先日】2020-07-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522058062

【氏名又は名称】ガンマデルタ セラピューティクス リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100138911

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻井 陽子

(72)【発明者】

【氏名】ポリヤコバ オクサーナ

(72)【発明者】

【氏名】マウント ナタリー

(72)【発明者】

【氏名】ヌスバウマー オリバー

(72)【発明者】

【氏名】ジョンズ フィリップ クロフォード

【テーマコード（参考）】

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA83X

4B065AA86X

4B065AA87X

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA46

4C085AA13

4C085BB11

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA50

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、抗Ｖδ１抗体またはその断片に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトの単離された抗ＴＣＲデルタ可変１（抗Ｖδ１）抗体またはその断片であって、
（ｉ）配列番号１の３～２０、および／または
（ｉｉ）配列番号１の３７～７７のアミノ酸領域内の１つ以上のアミノ酸残基を含むγδＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の可変デルタ１（Ｖδ１）鎖のエピトープに結合する、ヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項2】

前記エピトープが、配列番号１のアミノ酸残基３、５、９、１０、１２、１６、１７、２０、３７、４２、５０、５３、５９、６２、６４、６８、６９、７２、または７７のうちの少なくとも１つを含む、請求項１に記載のヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項3】

前記エピトープが、配列番号１のアミノ酸領域５～２０および６２～７７内の１つ以上のアミノ酸残基を含む、請求項１または請求項２に記載のヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項4】

前記エピトープが、配列番号１のアミノ酸領域５０～６４内の１つ以上のアミノ酸残基を含む、請求項１または請求項２に記載のヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項5】

前記エピトープが、配列番号１のアミノ酸領域３７～５３および５９～７７内の１つ以上のアミノ酸残基を含む、請求項１または請求項２に記載のヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項6】

前記エピトープが、γδＴ細胞の活性化エピトープである、請求項１～５のいずれか一項に記載のヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項7】

単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片であって、
配列番号２～２５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３、
配列番号２６～３７および配列Ａ１～Ａ１２（表２の）のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２、ならびに／または
配列番号３８～６１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１のうちの１つ以上を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項8】

配列番号２の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２６の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３８の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＨ領域を含む、請求項７に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項9】

配列番号３の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２７の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３９の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＨ領域を含む、請求項７に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項10】

配列番号４の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２８の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４０の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＨ領域を含む、請求項７に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項11】

配列番号１４の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ１の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５０の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＬ領域を含む、請求項７に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項12】

配列番号１５の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ２の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５１の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＬ領域を含む、請求項７に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項13】

配列番号１６の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ３の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５２の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＬ領域を含む、請求項７に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項14】

配列番号６２～８５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項15】

配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む、請求項１４に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項16】

配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む、請求項１４に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項17】

配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む、請求項１４に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項18】

前記抗Ｖδ１抗体またはその断片が、ＶＨ領域と、ＶＬ領域と、を含み、前記ＶＨ領域およびＶＬ領域が、ポリペプチドリンカーなどのリンカーによって連結されている、請求項７～１７のいずれか一項に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項19】

配列番号８６～９７のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項20】

配列番号８６を含む、請求項１９に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項21】

配列番号８７を含む、請求項１９に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項22】

配列番号８８を含む、請求項１９に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項23】

表面プラズモン共鳴によって測定される場合、１．５×１０^－７Ｍ未満の結合親和性（ＫＤ）で、γδＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の可変デルタ１（Ｖδ１）鎖に結合する、請求項１～２２のいずれか一項に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項24】

ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、可変ドメイン（例えば、ＶＨもしくはＶＬ）、ダイアボディ、ミニボディ、または全長抗体である、請求項１～２３のいずれか一項に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項25】

ｓｃＦｖ、または全長抗体、例えば、ＩｇＧ１である、請求項２４に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項26】

配列番号１１１～１２２のいずれか１つのものと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の単離された抗Ｖδ１抗体。

【請求項27】

配列番号１１１を含む、請求項２６に記載の単離された抗Ｖδ１抗体。

【請求項28】

配列番号１１２を含む、請求項２６に記載の単離された抗Ｖδ１抗体。

【請求項29】

配列番号１１６を含む、請求項２６に記載の単離された抗Ｖδ１抗体。

【請求項30】

ヒトである、請求項７～２９のいずれか一項に記載の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【請求項31】

請求項１～３０のいずれか一項に記載の抗Ｖδ１抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチド配列。

【請求項32】

配列番号９９～１１０と少なくとも７０％の配列同一性を有する配列を含む抗Ｖδ１抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチド配列。

【請求項33】

請求項３１または請求項３２に記載のポリヌクレオチド配列を含む発現ベクター。

【請求項34】

請求項３１もしくは請求項３２に記載のポリヌクレオチド配列または請求項３３に記載の発現ベクターを含む細胞。

【請求項35】

請求項１～３０のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を含む組成物。

【請求項36】

薬学的に許容される希釈剤または担体とともに、請求項１～３０のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を含む、薬学的組成物。

【請求項37】

抗Ｖδ１抗体またはその断片を生成する方法であって、
（ｉ）ＴＣＲデルタ可変１（ＴＲＤＶ１）アミノ酸配列を含む一連の抗原を設計することであって、前記ＴＲＤＶ１のＣＤＲ３配列が、前記一連のすべての抗原について同じである、設計することと、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）で設計した第１の抗原を、抗体ライブラリに曝露することと、
（ｉｉｉ）前記抗原に結合する抗体またはその断片を単離することと、
（ｉｖ）単離された前記抗体またはその断片を、ステップ（ｉ）で設計した第２の抗原に曝露することと、
（ｖ）前記第１および第２の抗原の両方に結合する抗体またはその断片を単離することと、を含む、方法。

【請求項38】

前記単離された抗体またはその断片を、異なるデルタ可変鎖を有するγδ ＴＣＲを含む第２の一連の抗原、例えば、ＴＣＲデルタ可変２（ＴＲＤＶ２）またはＴＣＲデルタ可変３（ＴＲＤＶ３）に曝露することと、次いで、前記第２の一連の抗原にも結合する抗体またはその断片の選択を解除することと、をさらに含む、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記一連の抗原が、ヘテロ二量体および／またはホモ二量体フォーマットである、請求項３７または請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

請求項３７～３９のいずれか一項に記載の方法によって得られた抗体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ガンマデルタＴ細胞のＴ細胞受容体に指向する抗体およびその断片に関する。

【背景技術】

【0002】

がんのためのＴ細胞免疫療法に対する関心の高まりは、がん細胞を認識し、特に、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、および他の受容体によって発揮される阻害経路の臨床的に媒介される拮抗作用によって抑制解除される場合に、宿主保護機能の可能性を媒介するためのＣＤ８＋およびＣＤ４＋アルファベータ（αβ）Ｔ細胞のサブセットの明らかな能力に焦点を当てている。しかしながら、αβＴ細胞は、移植片対宿主病につながる可能性があるＭＨＣ制限型である。

【0003】

ガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞）は、それらの表面上に、異なる明確なγδＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するＴ細胞のサブセットを表す。このＴＣＲは、１本のガンマ（γ）鎖および１本のデルタ（δ）鎖から構成されており、各鎖は、鎖再配置を受けるが、αβＴ細胞と比較して限られた数のＶ遺伝子を有する。Ｖγをコードする主なＴＲＧＶ遺伝子セグメントは、ＴＲＧＶ２、ＴＲＧＶ３、ＴＲＧＶ４、ＴＲＧＶ５、ＴＲＧＶ８、ＴＲＧＶ９およびＴＲＧＶ１１、ならびに非機能遺伝子ＴＲＧＶ１０、ＴＲＧＶ１１、ＴＲＧＶＡおよびＴＲＧＶＢである。最も頻度の高いＴＲＤＶ遺伝子セグメントは、Ｖδ１、Ｖδ２、およびＶδ３をコードし、加えて、ＶδおよびＶαの両方の指定を有するいくつかのＶセグメントをコードする（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，２９６：３０－４０（２０１５）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．）。ヒトγδＴ細胞は、特定のγ型およびδ型が１つ以上の組織型において、細胞上により一般的に見出されるが、排他的には見出されないため、ヒトγδＴ細胞のＴＣＲ鎖に基づいて広範囲に分類することができる。例えば、ほとんどの血液常在性γδＴ細胞は、Ｖδ２ ＴＣＲ（一般的にはＶγ９Ｖδ２）を発現するが、一方で、ガンマ鎖と対合された、例えば、腸内でＶγ４と対合されることが多いＶδ１ ＴＣＲをより頻繁に使用する、皮膚中の細胞などの組織常在性γδＴ細胞では、あまり一般的ではない。

【0004】

免疫療法のためにγδＴ細胞を利用するために、細胞を系中で拡大するための手段、または細胞を収穫し、再注入の前に細胞をエクスビボで拡大するための手段のいずれかが必要である。後者のアプローチは、外因性サイトカインの付加を使用して以前に記載されており、例えば、国際公開第２０１７／０７２３６７号および国際公開第２０１８／２１２８０８号を参照されたい。患者自身のγδＴ細胞を拡大するための方法は、薬理学的に改変された形態のヒドロキシ－メチル ブタ－２－エニルピロホスフェート（ＨＭＢＰＰ）または臨床的に承認されたアミノビスホスホネートを使用して記載されている。これらのアプローチによって、２５０人を超えるがん患者が安全に治療されているように見えるが、完全寛解の発生率は稀である。しかしながら、多数のγδＴ細胞を拡大する能力が実証された活性化剤の必要性が依然として存在する。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】国際公開第２０１７／０７２３６７号

【特許文献2】国際公開第２０１８／２１２８０８号

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，２９６：３０－４０（２０１５）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．

【発明の概要】

【0007】

本発明の第１の態様によれば、ヒトの単離された抗ＴＣＲデルタ可変１（抗Ｖδ１）抗体またはその断片であって、
（ｉ）配列番号１の３～２０、および／または
（ｉｉ）配列番号１の３７～７７のアミノ酸領域内の１つ以上のアミノ酸残基を含むγδＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の可変デルタ１（Ｖδ１）鎖のエピトープに結合する、ヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片が提供される。

【0008】

本発明のさらなる態様によれば、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片であって、
配列番号２～２５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３、
配列番号２６～３７および配列Ａ１～Ａ１２（表２の）のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２、ならびに／または
配列番号３８～６１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１のうちの１つ以上を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片が提供される。

【0009】

本発明のさらなる態様によれば、配列番号６２～８５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片が提供される。

【0010】

本発明の別の態様によれば、配列番号８６～９７のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片が提供される。

【0011】

本発明のさらなる態様によれば、結合時のγδ ＴＣＲの下方調節についてのＥＣ５０値が０．５μｇ／ｍｌ未満、例えば、０．０６μｇ／ｍｌ未満である、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片が提供される。

【0012】

本発明のさらなる態様によれば、結合時のγδＴ細胞脱顆粒についてのＥＣ５０値が０．０５μｇ／ｍｌ未満、例えば、０．００５μｇ／ｍｌ未満、特に、０．００２μｇ／ｍｌ未満である、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片が提供される。

【0013】

本発明のさらなる態様によれば、結合時のγδＴ細胞死滅についてのＥＣ５０値が０．５μｇ／ｍｌ未満、例えば、０．０５５μｇ／ｍｌ未満、特に、０．０２０μｇ／ｍｌ未満である、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片が提供される。

【0014】

本発明のさらなる態様によれば、配列番号９９～１１０と少なくとも７０％の配列同一性を有する配列を含む抗Ｖδ１抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチド配列が提供される。

【0015】

本発明のさらなる態様によれば、配列番号９９～１１０の配列からなる抗Ｖδ１抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチド配列が提供される。

【0016】

本発明のさらなる態様によれば、配列番号９９～１１０のＶＨ領域を含む発現ベクターが提供される。

【0017】

本発明のさらなる態様によれば、配列番号９９～１１０のＶＬ領域を含む発現ベクターが提供される。

【0018】

本発明のさらなる態様によれば、本明細書で定義されるポリヌクレオチド配列または発現ベクターを含む細胞が提供される。

【0019】

本発明のさらなる態様によれば、本明細書で定義される抗体またはその断片を含む組成物が提供される。

【0020】

本発明のさらなる態様によれば、薬学的に許容される希釈剤または担体とともに、本明細書で定義される抗体またはその断片を含む薬学的組成物が提供される。

【0021】

本発明のさらなる態様によれば、抗Ｖδ１抗体またはその断片を生成する際に使用するための、配列番号１２３と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗原が提供される。

【0022】

本発明のさらなる態様によれば、抗Ｖδ１抗体またはその断片を生成する方法であって、
（ｉ）ＴＣＲデルタ可変１（Ｖδ１）アミノ酸配列を含む一連の抗原を設計することであって、Ｖδ１のＣＤＲ３配列が、その一連のすべての抗原について同じである、設計することと、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）で設計した第１の抗原を、抗体ライブラリに曝露することと、
（ｉｉｉ）抗原に結合する抗体またはその断片を単離することと、
（ｉｖ）単離された抗体またはその断片を、ステップ（ｉ）で設計した第２の抗原に曝露することと、
（ｖ）第１および第２の抗原の両方に結合する抗体またはその断片を単離することと、を含む、方法が提供される。

【0023】

本発明のさらなる態様によれば、本明細書で定義される方法によって得られる抗体が提供される。

【図面の簡単な説明】

【0024】

【図1】抗Ｖδ１Ａｂ（ＲＥＡ１７３、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて直接的にコーティングされた抗原のＥＬＩＳＡ検出。検出は、Ｖδ１ドメインを含有する抗原でのみ、みられた。ロイシンジッパー（ＬＺ）フォーマットは、Ｆｃフォーマットよりも強力であるようであり、このことは、細胞ベースのフロー競合アッセイと一致する（データは示していない）。

【図2】ＤＶ１選択のためのポリクローナルファージＤＥＬＦＩＡデータ。Ａ）ヘテロ二量体選択：ラウンド１および２におけるヘテロ二量体ＬＺ ＴＣＲフォーマット、両方のラウンドにおけるヘテロ二量体ＬＺ ＴＣＲについての選択解除を伴う。Ｂ）ホモ二量体選択：ラウンド１は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃについての選択解除を伴い、ホモ二量体Ｆｃ融合ＴＣＲを使用して行われ、その後、ラウンド２は、ヘテロ二量体ＬＺ ＴＣＲについての選択解除を伴い、ヘテロ二量体ＬＺ ＴＣＲについて行われた。各グラフは、各標的についての２本の棒グラフを含み、異なるライブラリからの選択を表す。

【図3】ＩｇＧキャプチャー：左）抗Ｌ１ ＩｇＧとＬ１との相互作用のセンサグラム、右）利用可能な場合、定常状態フィッティング。すべての実験は、室温で、ＭＡＳＳ－２機器で行った。Ｌａｎｇｍｕｉｒ １：１結合による定常状態フィッティング。

【図4】クローン１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７、１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８、１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４、１２４５＿Ｐ０１＿Ｂ０７および１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５（Ａ）、またはクローン１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４、１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７、１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６ １２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９、１１３８＿Ｐ０１＿Ｂ０９、１２５１＿Ｐ０２＿Ｇ１０および１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８（Ｂ）についてのＴＣＲ下方調節アッセイの結果。

【図5】クローン１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７、１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８、１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４、１２４５＿Ｐ０１＿Ｂ０７および１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５（Ａ）、またはクローン１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４、１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７、１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６、１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９、１１３８＿Ｐ０１＿Ｂ０９、および１２５１＿Ｐ０２＿Ｇ１０（Ｂ）についてのＴ細胞脱顆粒アッセイの結果。

【図6】クローン１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７、１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８、１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４、１２４５＿Ｐ０１＿Ｂ０７および１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５（Ａ）、またはクローン１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４、１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７、１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６、１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９、１１３８＿Ｐ０１＿Ｂ０９および１２５１＿Ｐ０２＿Ｇ１０（Ｂ）についての死滅アッセイ（ＴＨＰ－１フローベースアッセイ）の結果。

【図7】１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７のエピトープマッピングデータ。配列番号１上の１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７のエピトープ結合部位のグラフィック表示。

【図8】１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８のエピトープマッピングデータ。配列番号１上の１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８のエピトープ結合部位のグラフィック表示。

【図9】１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４のエピトープマッピングデータ。配列番号１上の１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４のエピトープ結合部位のグラフィック表示。

【図10】１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５のエピトープマッピングデータ。配列番号１上の１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５のエピトープ結合部位のグラフィック表示。

【図11】１１４１＿Ｐ０１＿Ｅ０１のエピトープマッピングデータ。配列番号１上の１１４１＿Ｐ０１＿Ｅ０１のエピトープ結合部位のグラフィック表示。

【発明を実施するための形態】

【0025】

定義
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。本明細書で使用される場合、以下の用語は、以下でそれらの用語に帰属する意味を有する。

【0026】

ガンマデルタ（γδ）Ｔ細胞は、それらの表面上に、異なる明確なＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するＴ細胞の小さなサブセットを表す。このＴＣＲは、１本のガンマ（γ）鎖および１本のデルタ（δ）鎖から構成されている。各鎖は、可変（Ｖ）領域と、定常（Ｃ）領域と、膜貫通領域と、細胞質尾部と、を含む。Ｖ領域は、抗原結合部位を含む。ヒトγδＴ細胞には、末梢血で優性であるものと、非造血組織で優性であるものの２つの主要なサブタイプがある。２つのサブタイプは、細胞上に存在するδおよび／またはγの種類によって定義され得る。例えば、末梢血で優性であるγδＴ細胞は、主にデルタ可変２鎖（Ｖδ２）を発現する。非造血組織で優性である（すなわち、組織常在性である）γδＴ細胞は、主にデルタ可変１鎖を発現する。「Ｖδ１Ｔ細胞」との言及は、Ｖδ１鎖を有するγδＴ細胞、すなわち、Ｖδ１＋細胞を指す。

【0027】

「デルタ可変１」との言及は、Ｖδ１またはＶｄ１とも称されてもよく、一方で、この領域を含むＴＣＲ鎖をコードするヌクレオチドは、「ＴＲＤＶ１」と称されてもよい。γδ ＴＣＲのＶδ１鎖と相互作用する抗体またはその断片はすべて、Ｖδ１に結合する有効な抗体またはその断片であり、「抗ＴＣＲデルタ可変１抗体またはその断片」あるいは「抗Ｖδ１抗体またはその断片」と呼ばれてもよい。

【0028】

本明細書では、「デルタ可変２」鎖などの他のデルタ鎖に対するさらなる言及がなされる。これらは、同様に言及することができる。例えば、デルタ可変２鎖は、Ｖδ２と称されてもよく、一方で、この領域を含有するＴＣＲ鎖をコードするヌクレオチドは、「ＴＲＤＶ２」と称されてもよい。好ましい実施形態では、γδ ＴＣＲのＶδ１鎖と相互作用する抗体またはその断片は、Ｖδ２などの他のデルタ鎖と相互作用しない。

【0029】

「ガンマ可変鎖」への言及も、本明細書で行われる。これらは、γ鎖またはＶγと称されてもよく、一方、この領域を含有するＴＣＲ鎖をコードするヌクレオチドは、ＴＲＧＶと称されてもよい。例えば、ＴＲＧＶ４は、Ｖγ４鎖を指す。好ましい実施形態では、γδ ＴＣＲのＶδ１鎖と相互作用する抗体またはその断片は、Ｖγ４などのガンマ鎖と相互作用しない。

【0030】

「抗体」という用語は、少なくとも１つの抗原結合部位（ＡＢＳ）を含む少なくとも１つの抗体可変ドメインを含む任意の抗体タンパク質構築物を含む。抗体としては、限定されないが、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ型の免疫グロブリン（ならびにそのサブタイプ）が挙げられる。２つの同一の重（Ｈ）鎖および２つの同一の軽（Ｌ）鎖ポリペプチドから組み立てられた免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）抗体の全体的な構造は、哺乳動物において十分に確立されており、高度に保存されている（Ｐａｄｌａｎ（１９９４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１６９－２１７）。

【0031】

従来の抗体または免疫グロブリン（Ｉｇ）は、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖の４つのポリペプチド鎖を含むタンパク質である。各鎖は、定常領域および可変ドメインに分割される。重（Ｈ）鎖可変ドメインは、本明細書ではＶＨと略され、軽（Ｌ）鎖可変ドメインは、本明細書ではＶＬと略される。これらのドメイン、それに関連するドメイン、およびそれに由来するドメインは、本明細書において、免疫グロブリン鎖可変ドメインと称され得る。ＶＨドメインおよびＶＬドメイン（ＶＨ領域およびＶＬ領域とも称される）は、より保存された領域が散在する「相補性決定領域」（［ＣＤＲ」）と呼ばれる領域、「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）と呼ばれる領域にさらに細分化することができる。フレームワークおよび相補性決定領域は、正確に定義されている（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，（１９９１）ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒ ９１－３２４２）。ＣＤＲ配列についての代替的な番号付け規則、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３に示されているものも存在する。従来の抗体では、各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端まで、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲとから構成される。２つの免疫グロブリン重鎖および２つの免疫グロブリン軽鎖の従来の抗体四量体は、例えば、ジスルフィド結合によって相互接続された免疫グロブリン重鎖および軽鎖と、同様に接続した重鎖とで形成される。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の３つのドメインを含む。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬから構成される。重鎖の可変ドメインおよび軽鎖の可変ドメインは、抗原と相互作用する結合ドメインである。抗体の定常領域は、典型的には、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的な補体系の第１の構成要素（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または因子に対する抗体の結合を媒介する。

【0032】

本明細書で使用される抗体の断片（「抗体断片」、「免疫グロブリン断片」、「抗原結合断片」または「抗原結合ポリペプチド」とも称され得る）は、標的であるγδＴ細胞受容体のデルタ可変１（Ｖδ１）鎖に特異的に結合する抗体の一部（またはその部分を含有する構築物）を指す（例えば、１つ以上の免疫グロブリン鎖が完全長ではないが、標的に特異的に結合する分子）。抗体断片という用語内に包含される結合断片の例としては、以下のものが挙げられる。
（ｉ）Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片）、
（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片からなる二価断片）、
（ｉｉｉ）Ｆｄ断片（ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる）、
（ｉｖ）Ｆｖ断片（抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなる）、
（ｖ）一本鎖可変断片ｓｃＦｖ（組換え方法を使用して、合成リンカーによって接続されたＶＬおよびＶＨドメインからなり、それらが、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して一価分子を形成する単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にする）、
（ｖｉ）ＶＨ（ＶＨドメインからなる免疫グロブリン鎖可変ドメイン）、
（ｖｉｉ）ＶＬ（ＶＬドメインからなる免疫グロブリン鎖可変ドメイン）、
（ｖｉｉｉ）ドメイン抗体（ｄＡｂ、ＶＨドメインまたはＶＬドメインのいずれかからなる）、
（ｉｘ）ミニボディ（ＣＨ３ドメインを介して連結された一対のｓｃＦｖ断片からなる）、ならびに
（ｘ）ダイアボディ（小さなペプチドリンカーによって接続された１つの抗体由来のＶＨドメインと、別の抗体由来のＶＬドメインとからなる、ｓｃＦｖ断片の非共有結合二量体からなる）。

【0033】

「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を指す。上述のヒト抗体とともに投与されるヒト対象は、上述の抗体内に含まれる一次アミノ酸に対する種間抗体応答（例えば、ＨＡＭＡ応答－ヒト抗マウス抗体と呼ばれる）を生成しない。上述のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３における、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、ランダムもしくは部位特異的突然変異誘発または体細胞変異によって導入された変異）を含み得る。しかしながら、この用語は、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列へとグラフト接合された抗体を含むことを意図するものではない。組換え手段によって調製され、発現され、作製されるか、または単離されたヒト抗体、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子にトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体、あるいはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製され、発現され、作製されるか、または単離された抗体もまた、「組換えヒト抗体」と称され得る。

【0034】

非ヒト免疫グロブリン可変ドメインのフレームワーク領域中の少なくとも１つのアミノ酸残基を、ヒト可変ドメイン由来の対応する残基で置換することは、「ヒト化」と称される。可変ドメインのヒト化は、ヒトにおける免疫原性を低下させ得る。

【0035】

「特異性」は、特定の抗体またはその断片が結合することができる様々な種類の抗原または抗原決定基の数を指す。抗体の特異性は、特定の抗原を固有の分子エンティティとして認識し、別の抗原と区別する抗体の能力である。抗原またはエピトープに「特異的に結合する」抗体は、当該技術分野でよく理解されている用語である。分子が、代替的な標的と比較して、特定の標的抗原もしくはエピトープとより頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／またはより高い親和性で反応する場合、その分子は、「特異的結合」を示すと言われる。抗体が、他の物質に結合するよりも高い親和性、アビディティで、より容易に、および／またはより長い持続時間で結合する場合、その抗体は、標的抗原またはエピトープに「特異的に結合する」。

【0036】

「親和性」は、抗原と抗原結合ポリペプチドとの解離の平衡定数（ＫＤ）によって表され、抗原決定基と抗体（またはその断片）上の抗原結合部位との間の結合強度の尺度であり、ＫＤの値が小さいほど、抗原決定基と抗原結合ポリペプチドとの間の結合強度が強くなる。代替的に、親和性は、１／ＫＤである親和性定数（ＫＡ）として表すこともできる。親和性は、目的の特異的抗原に応じて、既知の方法によって決定することができる。

【0037】

１０^－６未満の任意のＫＤ値は、結合を示すとみなされる。抗体またはその断片の抗原または抗原決定基への特異的結合は、例えば、スキャッチャード分析および／または競合結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）およびサンドイッチ競合アッセイ、平衡透析、平衡結合、ゲル濾過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴、または分光法（例えば、蛍光アッセイを使用する）、ならびに当該技術分野で既知の異なるバリアントを含む、任意の好適な既知の方法で決定することができる。

【0038】

「アビディティ」は、抗体またはその断片と関連する抗原との間の結合の強度の尺度である。アビディティは、抗原決定基と抗体上のその抗原結合部位との間の親和性、ならびに抗体上に存在する関連する結合部位の数の両方に関連する。

【0039】

「ヒト組織Ｖδ１＋細胞」および「造血および血液Ｖδ１＋細胞」および「腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）Ｖδ１＋細胞」は、それぞれ、ヒト組織または造血血液系またはヒト腫瘍のいずれかに含まれるか、またはそれらに由来するＶδ１＋細胞として定義される。上述のすべての細胞型は、それらの（ｉ）位置、またはそれらが由来する場所、および（ｉｉ）Ｖδ１＋ＴＣＲの発現によって特定することができる。

【0040】

「調節抗体」は、抗体が結合する標的を発現する細胞に接触または結合すると、限定されないが、細胞周期、および／または細胞数、および／または細胞生存能、および／または１つ以上の細胞表面マーカー、および／または１つ以上の分泌分子（例えば、サイトカイン、ケモカイン、ロイコトリエンなど）の分泌、および／または機能（例えば、標的細胞もしくは疾患細胞に対する細胞傷害性）の測定可能な変化を含む、測定可能な変化をもたらす抗体である。

【0041】

細胞またはその集合体を「調節する」方法は、上述の細胞もしくは複数の細胞における少なくとも１つの測定可能な変化、またはそれらからの分泌が引き金となり、１つ以上の「調節された細胞」を生成する方法を指す。

【0042】

「免疫応答」は、調節抗体を添加するとき、免疫系（細胞媒介性応答、体液応答、サイトカイン応答、ケモカイン応答を含むが、これらに限定されない）の少なくとも１つの細胞、または１つの細胞型、または１つの内分泌経路、または１つの外分泌経路における測定可能な変化である。

【0043】

「免疫細胞」は、限定されないが、ＣＤ３４＋細胞、Ｂ細胞、ＣＤ４５＋（リンパ球共通抗原）細胞、アルファ－ベータＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、形質細胞、好中球、単球、マクロファージ、赤血球細胞、血小板、樹状細胞、食細胞、顆粒球、先天性リンパ球細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびガンマデルタＴ細胞を含む、免疫系の細胞として定義される。典型的には、免疫細胞は、コンビナトリアル細胞表面分子分析（例えば、フローサイトメトリーを介する）を用いて分類され、免疫細胞をサブ集合体に分化させるために特定するか、またはグループ分けするか、またはクラスター化する。これらはその後、追加の分析でさらに細分化することができる。例えば、ＣＤ４５＋リンパ球は、ｖδ陽性集合体およびｖδ陰性集合体にさらに細分化することができる。

【0044】

「モデル系」は、抗体またはその断片などの医薬品、疾患の徴候または症状の緩和において医薬として機能し得る方法の理解を助けるように設計された生物学的モデルまたは生物学的表現である。そのようなモデルとしては、典型的には、インビトロ、エクスビボ、およびインビボでの疾患細胞、非疾患細胞、健康な、エフェクター細胞、および組織などの使用が挙げられ、上述の医薬の性能が研究され、比較される。

【0045】

「疾患細胞」は、がんなどの疾患、ウイルス感染などの感染、または炎症性状態もしくは炎症性疾患の進行に関連する表現型を示す。例えば、疾患細胞は、腫瘍細胞、自己免疫組織細胞、またはウイルス感染細胞であり得る。したがって、上述の疾患細胞は、腫瘍性、またはウイルス感染性、または炎症性であると定義され得る。

【0046】

「健康な細胞」は、疾患ではない正常細胞を指す。これらはまた、「正常」または「非疾患」細胞とも称され得る。非疾患細胞としては、非がん性、または非感染性、または非炎症性細胞が挙げられる。上述の細胞は、医薬によってもたらされる疾患細胞特異性を決定するために、および／または医薬の治療指数をよりよく理解するために、関連する疾患細胞とともに使用されることが多い。

【0047】

「疾患細胞特異性」は、エフェクター細胞またはその集合体（例えば、Ｖδ１＋細胞の集合体など）が、がん細胞などの疾患細胞を区別し、死滅させつつ、非疾患細胞または健康な細胞は免れることがどの程度有効に行えるかの尺度である。この潜在能力は、モデル系で測定することができ、エフェクター細胞、またはエフェクター細胞の集合体が疾患細胞を選択的に死滅させるか、または溶解する傾向を、上述のエフェクター細胞が非疾患細胞または健康な細胞を死滅させるか、または溶解する潜在能力と比較することを含み得る。上述の疾患細胞特異性は、医薬の潜在的な治療指数を知らせることができる。

【0048】

「疾患細胞特異性の増強」は、疾患細胞を特異的に死滅させる能力をさらに増加させるように調節された、例えば、Ｖδ１＋細胞などのエフェクター細胞、またはその集合体の表現型を記載する。この増強は、疾患細胞死滅特異性または選択性の倍率変化または割合増加を含む様々な方法で測定することができる。

【0049】

好適には、抗体またはその断片（すなわち、ポリペプチド）は、単離される。「単離された」ポリペプチドは、その元の環境から除去されるポリペプチドである。「単離された」という用語を使用して、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指し得る（例えば、Ｖδ１に特異的に結合する単離された抗体、またはその断片は、Ｖδ１以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。「単離された」という用語はまた、単離された抗体が、薬学的組成物の活性成分として製剤化されたときに治療的に投与されるのに十分なほど純粋であるか、または少なくとも７０～８０％（ｗ／ｗ）純粋、より好ましくは少なくとも８０～９０％（ｗ／ｗ）純粋、さらにより好ましくは９０～９５％純粋であるか、最も好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％（ｗ／ｗ）純粋である調製物を指すために使用され得る。

【0050】

好適には、本発明で使用されるポリヌクレオチドは、単離される。「単離された」ポリヌクレオチドは、その元の環境から除去されるポリヌクレオチドである。例えば、天然に存在するポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドが天然系中に共存する材料の一部または全部から分離されている場合、単離されている。例えば、ポリヌクレオチドが、その天然環境の一部ではないベクター内にクローニングされている場合、またはポリヌクレオチドがｃＤＮＡ内に含まれている場合、ポリヌクレオチドは単離されているとみなされる。

【0051】

抗体またはその断片は、「機能的に活性なバリアント」であってもよく、これには、天然に存在する対立遺伝子バリアント、ならびに変異体または任意の天然に存在しないバリアントも含まれる。当該技術分野で知られているように、対立遺伝子バリアントは、ポリペプチドの生物学的機能を本質的に変化させない１つ以上のアミノ酸の置換、欠失、または付加を有することを特徴とする（ポリ）ペプチドの代替形態である。非限定的な例として、上述の機能的に活性なバリアントは、ＣＤＲを含有するフレームワークが改変されるとき、ＣＤＲ自体が改変されるとき、上述のＣＤＲが代替フレームワークにグラフト接合されるとき、またはＮ末端もしくはＣ末端伸長が組み込まれるときに、依然として機能し得る。さらに、結合ドメインを含有するＣＤＲは、別の抗体と共有されるものなどの異なるパートナー鎖と対合し得る。いわゆる「共通の」軽鎖または「共通の」重鎖と共有すると、上述の結合ドメインは、依然として機能し得る。さらに、上述の結合ドメインは、多量体化されるときに機能し得る。さらに、「抗体またはその断片」は、ＶＨまたはＶＬまたは定常ドメインが、異なるカノニカル配列（例えば、ＩＭＧＴ．ｏｒｇに列挙されるような）から離れるように、または異なるカノニカル配列に向かって改変され、依然として機能する機能性バリアントを含んでもよい。

【0052】

２つの密接に関連するポリペプチド配列を比較する目的のために、第１のポリペプチド配列と第２のポリペプチド配列との間の「配列同一性％」を、ポリペプチド配列の標準的な設定（ＢＬＡＳＴＰ）を使用して、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ ｖ２．０を使用して計算してもよい。２つの密接に関連するポリヌクレオチド配列を比較する目的のために、第１のヌクレオチド配列と第２のヌクレオチド配列との間の「配列同一性％」を、ヌクレオチド配列の標準的な設定（ＢＬＡＳＴＮ）を使用して、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ ｖ２．０を使用して計算してもよい。

【0053】

ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列が、その全長にわたって１００％の配列同一性を共有する場合、そのポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、他のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列と同じであるか、または「同一である」と言われる。配列中の残基は、左から右、すなわち、ポリペプチドについてはＮ末端からＣ末端まで、ポリヌクレオチドについては５’末端から３’末端まで番号付けされる。

【0054】

配列間の「差」は、第１の配列と比較して、第２の配列の位置における単一のアミノ酸残基の挿入、欠失、または置換を指す。２つのポリペプチド配列は、１つ、２つ、またはそれより多くのこのようなアミノ酸の差を含み得る。第１の配列に対して、それ以外は同一である（１００％配列同一性）第２の配列中の挿入、欠失、または置換は、配列同一性％を低下させる。例えば、同一の配列が９個のアミノ酸残基長である場合、第２の配列中の１個の置換により、配列同一性が８８．９％になる。第１および第２のポリペプチド配列が、９個のアミノ酸残基長であり、６個の同一の残基を共有する場合、第１および第２のポリペプチド配列は、６６％を超える同一性を共有する（第１および第２のポリペプチド配列は、６６．７％の同一性を共有する）。

【0055】

代替的に、第１の参照ポリペプチド配列を第２の比較ポリペプチド配列と比較する目的のために、第２の配列を生成するために第１の配列に対して行われた付加、置換、および／または欠失の数を確認してもよい。「付加」は、第１のポリペプチドの配列に１つのアミノ酸残基を付加することである（第１のポリペプチドのいずれかの末端での付加を含む）。「置換」は、第１のポリペプチドの配列中の１つのアミノ酸残基を１つの異なるアミノ酸残基で置換することである。この置換は、保存的であってもよく、または非保存的であってもよい。「欠失」は、第１のポリペプチドの配列からの１つのアミノ酸残基の欠失である（第１のポリペプチドのいずれかの末端での欠失を含む）。

【0056】

「保存的」アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似の化学構造を有する別のアミノ酸残基で置き換えられ、ポリペプチドの機能、活性、または他の生物学的特性にほとんど影響を与えないと予想されるアミノ酸置換である。かかる保存的置換は、好適には、以下の群内の１つのアミノ酸が、同じ群内の別のアミノ酸残基によって置換されている置換である。

【0057】

好適には、疎水性アミノ酸残基は、非極性アミノ酸である。より好適には、疎水性アミノ酸残基は、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｗ、またはＣから選択される。

【0058】

本明細書で使用される場合、ポリペプチド配列の番号付け、ならびにＣＤＲおよびＦＲの定義は、Ｋａｂａｔシステム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に従って定義されるとおりである。第１のポリペプチド配列と第２のポリペプチド配列との間の「対応する」アミノ酸残基は、第２の配列中のアミノ酸残基とＫａｂａｔ系によって同じ位置を共有する第１の配列中のアミノ酸残基であるが、第２の配列中のアミノ酸残基は、第１の配列と同一性が異なる場合がある。適切には、対応する残基は、フレームワークおよびＣＤＲがＫａｂａｔ定義に従って同じ長さである場合、同じ番号（および文字）を共有する。アラインメントは、手動で、または例えば、標準設定を使用してＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ ｖ２．０（ＢＬＡＳＴＰまたはＢＬＡＳＴＮ）などの配列アラインメントのための既知のコンピュータアルゴリズムを使用することによって達成することができる。

【0059】

本明細書における「エピトープ」との言及は、抗体またはその断片によって特異的に結合される標的の部分を指す。エピトープは、「抗原決定基」とも称され得る。抗体は、両方が同一または立体的に重複するエピトープを認識するとき、別の抗体と「本質的に同じエピトープ」に結合する。同一または重複するエピトープに２つの抗体が結合するかどうかを決定するために一般に使用される方法は、競合アッセイであり、競合アッセイは、標識された抗原または標識された抗体のいずれかを使用して、いくつかの異なるフォーマット（例えば、放射性または酵素標識を使用するウェルプレート、または抗原発現細胞上のフローサイトメトリー）で構成することができる。

【0060】

タンパク質標的上に見出されるエピトープは、「線状エピトープ」または「立体構造エピトープ」として定義され得る。線状エピトープは、タンパク質抗原中のアミノ酸の連続した配列によって形成される。立体構造エピトープは、タンパク質配列中で不連続であるが、タンパク質がその三次元構造に折り畳まれると一緒になるアミノ酸から形成される。

【0061】

「ベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことを意図している。１つの種類のベクターは、追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す「プラスミド」である。別の種類のベクターは、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされ得るウイルスベクターである。特定のベクターは、そのベクターが導入される宿主細胞において自己複製することができる（例えば、細菌性複製起源を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物および酵母ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、それにより、宿主ゲノムとともに複製され得る。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結される遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術で有用な発現ベクターは、多くの場合、プラスミドの形態である。本明細書では、「プラスミド」および「ベクター」は、プラスミドがベクターの最も一般に使用されている形態であるため、相互に置き換え可能に使用され得る。しかしながら、本発明は、等価な機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）、ならびにバクテリオファージおよびファージミド系などの発現ベクターの他の形態を含むよう意図されている。「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）という用語は、本明細書で使用される場合、組換え発現ベクターが導入された細胞を指すよう意図されている。かかる用語は、特定の対象細胞のみならず、かかる細胞の子孫も指すよう意図されており、例えば、上述の子孫が細胞株または細胞バンクを作製するために使用され、次に、本明細書に記載されるような抗体またはその断片を製造するために任意選択で保存され、提供され、販売され、移され、または使用される場合である。

【0062】

「対象」、「患者」または「個体」との言及は、治療される対象、特に哺乳動物対象を指す。哺乳動物対象としては、ヒト、非ヒト霊長類、農場動物（ウシなど）、スポーツ用動物、またはイヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、もしくはマウスなどのペット動物が挙げられる。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。代替的な実施形態では、対象は、マウスなどの非ヒト哺乳動物である。

【0063】

「十分な量」という用語は、所望の効果をもたらすのに十分な量を意味する。「治療有効量」という用語は、疾患または障害の症状を緩和するのに有効な量である。予防は療法とみなすことができるので、治療有効量は「予防有効量」であり得る。

【0064】

疾患または障害は、疾患または障害の徴候もしくは症状の重症度、そのような徴候もしくは症状が対象によって経験される頻度、またはその両方が低減される場合、「緩和」される。

【0065】

本明細書で使用される場合、「疾患または障害を治療すること」は、対象が経験する疾患または障害の少なくとも１つの徴候または症状の頻度および／または重症度を低減することを意味する。

【0066】

「がん」は、本明細書で使用される場合、細胞の異常な成長または分裂を指す。一般に、がん細胞の成長および／または寿命は、正常な細胞およびその周囲の組織の成長および／または寿命を超えており、それらと協調していない。がんは、良性、前悪性、または悪性であり得る。がんは、口腔（例えば、口、舌、咽頭など）、消化器系（例えば、食道、胃、小腸、結腸、直腸、肝臓、胆管、胆嚢、膵臓など）、呼吸器系（例えば、喉頭、肺、気管支など）、骨、関節、皮膚（例えば、基底細胞、扁平上皮、髄膜腫など）、乳房、生殖器系（例えば、子宮、卵巣、前立腺、精巣など）、泌尿器系（例えば、膀胱、腎臓、尿管など）、眼、神経系（例えば、脳など）、内分泌系（例えば、甲状腺など）、および造血系（例えば、リンパ腫、骨髄腫、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病など）を含む様々な細胞および組織で生じる。

【0067】

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、本明細書で使用される場合に、指定された値よりも最大で１０％大きく、この値を含み、指定された値よりも最大で１０％小さく、この値を含み、好適には、指定された値よりも最大で５％大きく、この値を含み、指定された値よりも最大で５％小さく、この値を含み、特に、指定された値を含む。「～の間」という用語は、指定された境界の値を含む。

【0068】

抗体またはその断片
本明細書では、γδＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のデルタ可変１鎖（Ｖδ１）に特異的に結合することが可能な抗体またはその断片が提供される。

【0069】

一実施形態では、抗体またはその断片は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、可変ドメイン（例えば、ＶＨもしくはＶＬ）、ダイアボディ、ミニボディ、またはモノクローナル抗体である。さらなる実施形態では、抗体またはその断片は、ｓｃＦｖである。

【0070】

本発明の抗体は、任意のクラス、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはそれらのアイソタイプであってもよく、カッパ軽鎖またはラムダ軽鎖を含み得る。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体、例えば、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のうちの少なくとも１つである。さらなる実施形態では、抗体は、エフェクター機能を低下させる、半減期を延長する、ＡＤＣＣを変化させる、またはヒンジの安定性を向上させるように変異したＦｃを有するものなど、所望の特性を付与するように改変されたフォーマット（例えば、ＩｇＧフォーマット）であってもよい。そのような改変は、当該技術分野で周知である。

【0071】

一実施形態では、抗体またはその断片は、ヒトである。したがって、抗体またはその断片は、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）配列に由来していてもよい。抗体（またはその断片）のＣＤＲ、フレームワークおよび／または定常領域は、ヒトＩｇ配列、特にヒトＩｇＧ配列に由来していてもよい。ＣＤＲ、フレームワークおよび／または定常領域は、ヒトＩｇ配列、特にヒトＩｇＧ配列に対して実質的に同一であってもよい。ヒト抗体を使用する利点は、ヒト抗体が、ヒトにおいて低免疫原性または非免疫原性であることである。

【0072】

抗体またはその断片はまた、キメラ、例えば、マウス－ヒト抗体キメラであり得る。

【0073】

代替的に、抗体またはその断片は、マウスなどの非ヒト種に由来する。かかる非ヒト抗体は、ヒトで天然に産生される抗体バリアントとの類似性を増加させるように改変することができるため、抗体またはその断片は、部分的に、または完全にヒト化することができる。したがって、一実施形態では、抗体またはその断片は、ヒト化される。

【0074】

本明細書に記載される抗Ｖδ１抗体またはその断片は、デルタ可変１鎖（Ｖδ１）Ｔ細胞を調節するために使用され得る。

【0075】

Ｖδ１Ｔ細胞の調節には、以下のものが含まれ得る。
－Ｖδ１Ｔ細胞の拡大、例えば、Ｖδ１Ｔ細胞の数を増加させ、またはＶδ１Ｔ細胞の生存の促進による、
－Ｖδ１Ｔ細胞の刺激、例えば、Ｖδ１Ｔ細胞の効力を増加させる、すなわち、標的細胞死滅を増加させることによる、
－Ｖδ１Ｔ細胞枯渇の予防、例えば、Ｖδ１Ｔ細胞の持続性を増加させることによる、
－Ｖδ１Ｔ細胞の脱顆粒、
－Ｖδ１Ｔ細胞の免疫抑制、例えば、Ｖδ１ ＴＣＲ細胞表面発現の下方調節、すなわち、Ｖδ１ ＴＣＲ内在化またはＶδ１ ＴＣＲタンパク質の発現の低下を引き起こすこと、またはＶδ１ ＴＣＲの結合をブロックすることによる、
－Ｖδ１Ｔ細胞数を低減すること、例えば、Ｖδ１Ｔ細胞増殖の阻害によって、またはＶδ１Ｔ細胞死を誘発すること（すなわち、Ｖδ１Ｔ細胞を死滅させること）による。

【0076】

Ｖδ１Ｔ細胞のかかる調節には、例えば、Ｖδ１Ｔ細胞活性化またはＶδ１Ｔ細胞阻害が含まれ得る。一実施形態では、Ｖδ１Ｔ細胞は、本明細書に定義される抗Ｖδ１抗体またはその断片を患者に投与すると、活性化される。代替的な実施形態では、Ｖδ１Ｔ細胞は、本明細書に定義される抗Ｖδ１抗体またはその断片を患者に投与すると、阻害される。代替的な実施形態では、Ｖδ１Ｔ細胞は、本明細書に定義される抗Ｖδ１抗体またはその断片を患者に投与すると、阻害されない。

【0077】

エピトープを標的とする抗体
γδ ＴＣＲのＶδ１鎖のエピトープに結合する抗体（またはその断片）が本明細書に提供される。かかる結合は、任意選択で、活性化または阻害などのγδ ＴＣＲ活性に効果を有し得る。

【0078】

一実施形態では、エピトープは、γδＴ細胞の活性化エピトープであり得る。「活性化」エピトープは、例えば、細胞脱顆粒、ＴＣＲ下方調節、細胞傷害性、増殖、動員、生存率の増加または枯渇に対する抵抗性、細胞内シグナル伝達、サイトカインもしくは増殖因子分泌、表現型変化、または遺伝子発現の変化などのＴＣＲ機能を刺激することを含み得る。例えば、活性化エピトープの結合は、γδＴ細胞集合体、好ましくはＶδ１＋Ｔ細胞集合体の拡大（すなわち、増殖）を刺激し得る。したがって、これらの抗体を使用して、γδＴ細胞活性化を調節し、それによって、免疫応答を調節することができる。したがって、一実施形態では、活性化エピトープの結合は、γδ ＴＣＲを下方調節する。追加的または代替的な実施形態では、活性化エピトープの結合は、γδＴ細胞の脱顆粒を活性化する。さらなる追加的または代替的な実施形態では、活性化エピトープの結合は、γδＴ細胞死滅を活性化する。

【0079】

代替的に、抗体（またはその断片）は、別の抗体または分子の結合または相互作用の防止による遮断効果を有し得る。一実施形態では、本発明は、Ｖδ１を遮断し、ＴＣＲ結合を防止する（例えば、立体障害による）、単離された抗体またはその断片を提供する。Ｖδ１を遮断することによって、抗体は、ＴＣＲ活性化および／またはシグナル伝達を防止し得る。エピトープは、γδＴ細胞の阻害性エピトープであり得る。「阻害性」エピトープは、例えば、ＴＣＲ機能を遮断し、それによってＴＣＲ活性化を阻害することを含み得る。

【0080】

エピトープは、好ましくは、少なくとも、γδ ＴＣＲのＶδ１鎖の１つの細胞外、可溶性、親水性、外部または細胞質部分からなる。

【0081】

特に、エピトープは、γδ ＴＣＲのＶδ１鎖の超可変領域、特にＶδ１鎖のＣＤＲ３に見られるエピトープを含まない。好ましい実施形態では、エピトープは、γδ ＴＣＲのＶδ１鎖の非可変領域内にある。かかる結合は、高度に可変であるＴＣＲの配列（特にＣＤＲ３）に限定されることなく、Ｖδ１鎖の独自の認識を可能にすることが理解されるであろう。ＭＨＣ様ペプチドまたは抗原を認識する様々なγδ ＴＣＲ複合体は、Ｖδ１鎖の存在のみによって、この方法で認識され得る。したがって、γδ ＴＣＲを含む任意のＶδ１鎖は、γδ ＴＣＲの特異性に関係なく、本明細書に定義される抗体またはその断片を使用して認識され得ることが理解されるであろう。一実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域１～２４および／または３５～９０内の１つ以上のアミノ酸残基、例えば、ＣＤＲ１および／またはＣＤＲ３配列の一部ではないＶδ１鎖の部分を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域９１～１０５（ＣＤＲ３）内のアミノ酸残基を含まない。

【0082】

十分に特性決定されたαβＴ細胞と同様の方法で、γδＴ細胞は、体細胞的に再配列された可変（Ｖ）、多様性（Ｄ）、接続（Ｊ）、および定常（Ｃ）遺伝子の異なるセットを利用するが、γδＴ細胞は、αβＴ細胞よりも少ないＶ、Ｄ、およびＪセグメントを含有する。一実施形態では、抗体（またはその断片）によって結合されるエピトープは、Ｖδ１鎖のＪ領域（例えば、ヒトデルタ１鎖生殖系列：配列番号１３１（Ｊ１＊０）もしくは１３２（Ｊ２＊０）もしくは１３３（Ｊ３＊０）もしくは１３４（Ｊ４＊０）にコードされる４つのＪ領域のうちの１つ）に見出されるエピトープを含まない。一実施形態では、抗体（またはその断片）によって結合されるエピトープは、Ｖδ１鎖のＣ領域（例えば、Ｃ末端の膜近接／膜貫通領域を含有する配列番号１３５（Ｃ１＊０））に見出されるエピトープを含まない。一実施形態では、抗体（またはその断片）によって結合されるエピトープは、Ｖδ１鎖のＮ末端リーダー配列（例えば、配列番号１２９）の中に見出されるエピトープを含まない。したがって、抗体または断片は、Ｖδ１鎖のＶ領域内でのみ結合し得る（例えば、配列番号１３０）。したがって、一実施形態では、エピトープは、γδ ＴＣＲのＶ領域中のエピトープ（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１～９０）からなる。

【0083】

エピトープとの言及は、Ｌｕｏｍａ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３９：１０３２－１０４２に記載される配列に由来するＶδ１配列、および配列番号１に示される、ＲＣＳＢ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋエントリ：４ＭＮＨおよび３ＯＭＺに関連して行われる。
ＡＱＫＶＴＱＡＱＳＳＶＳＭＰＶＲＫＡＶＴＬＮＣＬＹＥＴＳＷＷＳＹＹＩＦＷＹＫＱＬＰＳＫＥＭＩＦＬＩＲＱＧＳＤＥＱＮＡＫＳＧＲＹＳＶＮＦＫＫＡＡＫＳＶＡＬＴＩＳＡＬＱＬＥＤＳＡＫＹＦＣＡＬＧＥＳＬＴＲＡＤＫＬＩＦＧＫＧＴＲＶＴＶＥＰＮＩＱＮＰＤＰＡＶＹＱＬＲＤＳＫＳＳＤＫＳＶＣＬＦＴＤＦＤＳＱＴＮＶＳＱＳＫＤＳＤＶＹＩＴＤＫＴＶＬＤＭＲＳＭＤＦＫＳＮＳＡＶＡＷＳＮＫＳＤＦＡＣＡＮＡＦＮＮＳＩＩＰＥＤＴＦＦＰＳＰＥＳＳ（配列番号１）。

【0084】

配列番号１は、Ｖ領域（可変ドメインとも称される）、Ｄ領域、Ｊ領域、およびＴＣＲ定常領域を含む、可溶性ＴＣＲを表す。Ｖ領域は、アミノ酸残基１～９０を含み、Ｄ領域は、アミノ酸残基９１～１０４を含み、Ｊ領域は、アミノ酸残基１０５～１１５を含み、定常領域は、アミノ酸残基１１６～２０９を含む。Ｖ領域内で、ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸残基２５～３４として定義され、ＣＤＲ２は、配列番号１のアミノ酸残基５０～５４として定義され、ＣＤＲ３は、配列番号１のアミノ酸残基９３～１０４として定義される（Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０８（６）：２４１４－２４１９（２０１１））。

【0085】

したがって、本発明の態様によれば、以下のアミノ酸領域内の１つ以上のアミノ酸残基を含むγδＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の可変デルタ１（Ｖδ１）鎖のエピトープに結合する、単離された抗体またはその断片が提供される。
（ｉ）配列番号１の３～２０、および／または
（ｉｉ）配列番号１の３７～７７。

【0086】

さらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１２８のアミノ酸残基１～９０のエピトープを含む多型Ｖ領域をさらに認識する。したがって、配列番号１のアミノ酸１～９０および多型生殖系列バリアント配列（アミノ酸１～９０、配列番号１２８）は、本明細書に記載のエピトープを定義する場合に、相互に交換可能であるとみなされ得る。本発明の抗体は、この生殖系列配列の両方のバリアントを認識することができる。例として、本明細書で定義される抗体またはその断片が、配列番号１のアミノ酸領域１～２４および／または３５～９０内の１つ以上のアミノ酸残基を含むエピトープを認識することが記載される場合、このことはまた、配列番号１２８の同じ領域、具体的には、配列番号１２８のアミノ酸領域１～２４および／または３５～９０を指す。

【0087】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１のアミノ酸領域１～９０内の１つ以上のアミノ酸残基、および配列番号１２８の領域１～９０の等価に位置するアミノ酸を認識する。より具体的には、一実施形態では、本明細書で定義される抗体またはその断片は、ヒト生殖系列エピトープを認識し、この生殖系列は、配列番号１の７１位のアラニン（Ａ）またはバリン（Ｖ）のいずれかをコードする。

【0088】

一実施形態では、エピトープは、記載された領域内に１つ以上、例えば、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、またはそれより多くのアミノ酸残基を含む。

【0089】

さらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域３～２０内の１つ以上の（例えば５個以上、例えば１０個以上の）アミノ酸残基を含む。代替的な実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域３７～７７（例えば、アミノ酸残基５０～５４）内の１つ以上の（例えば５個以上、例えば１０個以上の）アミノ酸残基を含む。なおさらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域３～２０（例えば５～２０または３～１７）内の１つ以上の（例えば５個以上、例えば１０個以上の）アミノ酸残基と、アミノ酸領域３７～７７（例えば６２～７７または６２～６９）内の１つ以上の（例えば５個以上、例えば１０個以上の）アミノ酸残基を含む。

【0090】

上述の抗体（またはその断片）は、定義された範囲内のすべてのアミノ酸に結合する必要がないことがさらに理解されるであろう。このようなエピトープは、線状エピトープと呼ばれてもよい。例えば、配列番号１のアミノ酸領域５～２０内のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する抗体は、上述の範囲中のアミノ酸残基の１つ以上と、例えば、任意選択でその範囲内のアミノ酸（すなわち、アミノ酸５、９、１６および２０）を含む、その範囲の各末端にあるアミノ酸残基（すなわち、アミノ酸５および２０）とのみ結合してもよい。

【0091】

一実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸残基３、５、９、１０、１２、１６、１７、２０、３７、４２、５０、５３、５９、６２、６４、６８、６９、７２、または７７のうちの少なくとも１つを含む。さらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸残基３、５、９、１０、１２、１６、１７、２０、３７、４２、５０、５３、５９、６２、６４、６８、６９、７２、または７７から選択される１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、または１２個のアミノ酸を含む。

【0092】

一実施形態では、エピトープは、配列番号１（または上述の配列番号１２８）の以下のアミノ酸領域内に１つ以上のアミノ酸残基を含む。
（ｉ）３～１７、
（ｉｉ）５～２０、
（ｉｉｉ）３７～５３、
（ｉｖ）５０～６４、
（ｖ）５９～７２、
（ｖｉ）５９～７７、
（ｖｉｉ）６２～６９、および／または
（ｖｉｉｉ）６２～７７。

【0093】

さらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域５～２０および６２～７７、５０～６４、３７～５３および５９～７２、５９～７７、または３～１７および６２～６９内の１つ以上のアミノ酸残基を含む。さらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域５～２０および６２～７７、５０～６４、３７～５３および５９～７２、５９～７７、または３～１７および６２～６９内の１つ以上のアミノ酸残基からなる。

【0094】

さらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸残基３、５、９、１０、１２、１６、１７、６２、６４、６８、および６９を含むか、または好適には、配列番号１のアミノ酸残基３、５、９、１０、１２、１６、１７、６２、６４、６８、および６９からなる。さらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸残基５、９、１６、２０、６２、６４、７２、および７７を含むか、または好適には、配列番号１のアミノ酸残基５、９、１６、２０、６２、６４、７２、および７７からなる。なおさらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸残基３７、４２、５０、５３、５９、６４、６８、６９、７２、７３、および７７を含むか、または好適には、配列番号１のアミノ酸残基３７、４２、５０、５３、５９、６４、６８、６９、７２、７３、および７７からなる。さらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸残基５０、５３、５９、６２、および６４を含むか、または好適には、配列番号１のアミノ酸残基５０、５３、５９、６２、および６４からなる。さらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸残基５９、６０、６８、および７２を含むか、または好適には、配列番号１のアミノ酸残基５９、６０、６８、および７２からなる。

【0095】

一実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域５～２０および／または６２～７７内の１つ以上のアミノ酸残基を含む。さらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域５～２０および６２～７７内の１つ以上のアミノ酸残基からなる。代替的なさらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域５～２０または６２～７７内の１つ以上のアミノ酸残基を含む。かかるエピトープを有する抗体またはその断片は、１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７の配列のいくつかまたはすべてを有し得るか、あるいは、かかる抗体またはその断片は、１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７に由来し得る。例えば、１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７の１つ以上のＣＤＲ配列、または１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７のＶＨ配列およびＶＬ配列の一方または両方を有する抗体またはその断片は、そのようなエピトープに結合し得る。

【0096】

一実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域５０～６４内の１つ以上のアミノ酸残基を含む。さらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域５０～６４内の１つ以上のアミノ酸残基からなる。かかるエピトープを有する抗体またはその断片は、１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８の配列のいくつかまたはすべてを有し得るか、あるいは、かかる抗体またはその断片は、１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８に由来し得る。例えば、１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８の１つ以上のＣＤＲ配列、または１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８のＶＨ配列およびＶＬ配列の一方または両方を有する抗体またはその断片は、そのようなエピトープに結合し得る。

【0097】

一実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域３７～５３および／または５９～７７内の１つ以上のアミノ酸残基を含む。さらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域３７～５３および５９～７７内の１つ以上のアミノ酸残基からなる。代替的なさらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域３７～５３または５９～７７内の１つ以上のアミノ酸残基を含む。かかるエピトープを有する抗体またはその断片は、１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４の配列のいくつかまたはすべてを有し得るか、あるいは、かかる抗体またはその断片は、１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４に由来し得る。例えば、１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４の１つ以上のＣＤＲ配列、または１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４のＶＨ配列およびＶＬ配列の一方または両方を有する抗体またはその断片は、そのようなエピトープに結合し得る。

【0098】

一実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域５９～７２内の１つ以上のアミノ酸残基を含む。さらなる実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域５９～７２内の１つ以上のアミノ酸残基からなる。かかるエピトープを有する抗体またはその断片は、１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５の配列のいくつかまたはすべてを有し得るか、あるいは、かかる抗体またはその断片は、１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５に由来し得る。例えば、１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５の１つ以上のＣＤＲ配列、または１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５のＶＨ配列およびＶＬ配列の一方または両方を有する抗体またはその断片は、そのようなエピトープに結合し得る。

【0099】

一実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域１１～２１内のアミノ酸残基を含まない。一実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域２１～２８内のアミノ酸残基を含まない。一実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域５９および６０内のアミノ酸残基を含まない。一実施形態では、エピトープは、配列番号１のアミノ酸領域６７～８２内のアミノ酸残基を含まない。

【0100】

一実施形態では、エピトープは、ＴＳ－１またはＴＳ８．２などの市販の抗Ｖδ１抗体が結合するのと同一のエピトープではない。国際公開第２０１７／１９７３４７号に記載されているように、可溶性ＴＣＲに対するＴＳ－１およびＴＳ８．２の結合は、δ１鎖がＶδ１ Ｊ１およびＶδ１ Ｊ２配列を含むが、Ｖδ１ Ｊ３鎖への結合は含まない場合に検出され、このことは、ＴＳ－１およびＴＳ８．２の結合が、デルタＪ１残基およびデルタＪ２領域中に重要な残基を含むことを示している。

【0101】

本明細書における「～内」との言及は、定義範囲の端を含む。例えば、「アミノ酸領域５～２０内」とは、残基５を含み、残基５から残基２０までを含み、残基２０を含むアミノ酸残基のすべてを指す。

【0102】

どのエピトープが抗体に結合するかを確立するための様々な技術が、当該技術分野で既知である。例示的な技術として、例えば、日常的な交差遮断アッセイ、アラニンスキャニング変異分析、ペプチドブロット分析、ペプチド切断分析結晶学的研究、およびＮＭＲ分析が挙げられる。加えて、エピトープ切除、エピトープ抽出、および抗原の化学改変などの方法を用いることができる。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために用いることができる別の方法は、質量分析法によって検出される水素／重水素交換である（実施例９に記載されるような）。一般的に言えば、水素／重水素交換法は、目的のタンパク質を重水素標識した後、抗体を重水素標識タンパク質へ結合させることを伴う。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移し、抗体複合体によって保護されているアミノ酸内の交換可能なプロトンは、界面の一部ではないアミノ酸内の交換可能なプロトンよりも遅い速度で、重水素から水素への逆交換を受ける。結果として、タンパク質／抗体界面の一部を形成するアミノ酸は、重水素を保持し得るため、界面に含まれないアミノ酸と比較して、比較的高い質量を示す。抗体の解離後、標的タンパク質に対してプロテアーゼ切断および質量分光分析を行い、それにより、抗体が相互作用する特異的なアミノ酸に対応する、重水素標識された残基を明らかにする。

【0103】

抗体配列
本発明の単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片は、それらのＣＤＲ配列を参照して記載されてもよい。

【0104】

本発明の一態様によれば、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片であって、
配列番号２～２５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３、
配列番号２６～３７および配列Ａ１～Ａ１２のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２、ならびに／または
配列番号３８～６１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１のうちの１つ以上を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片が提供される。

【0105】

本発明の一態様によれば、配列番号２～２５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片が提供される。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６～３７および配列Ａ１～Ａ１２（表２の）のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号３８～６１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１を含む。

【0106】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２～２５のいずれか１つと少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６～３７および配列Ａ１～Ａ１２（表２の）のいずれか１つと少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号３８～６１のいずれか１つと少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１を含む。

【0107】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２～２５のいずれか１つと少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６～３７および配列Ａ１～Ａ１２（表２の）のいずれか１つと少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ２を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号３８～６１のいずれか１つと少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ１を含む。

【0108】

本発明のさらなる態様によれば、配列番号２～１３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号１４～２５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、抗体またはその断片が提供される。本発明のさらなる態様によれば、配列番号２～１３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号１４～２５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、抗体またはその断片が提供される。

【0109】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２～１３のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号１４～２５のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域と、を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２～１３のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号１４～２５のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。

【0110】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２～１３のいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号１４～２５のいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域と、を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２～１３のいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号１４～２５のいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。

【0111】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２～１３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域と、配列番号１４～２５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域と、を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２～１３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＨ領域と、配列番号１４～２５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＬ領域と、を含む。

【0112】

本発明のさらなる態様によれば、配列番号２～７、特に２～６、例えば、２、３、または４のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域と、配列番号１４～１９、特に１４～１８、例えば、１４、１５、または１６のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域と、を含む、抗体またはその断片が提供される。本発明のさらなる態様によれば、配列番号２～７、特に２～６、例えば、２、３、または４のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＨ領域と、配列番号１４～１９、特に１４～１８、例えば、１４、１５、または１６のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＬ領域と、を含む、抗体またはその断片が提供される。

【0113】

本発明の特定の態様によれば、配列番号２～７、特に２～６、例えば、２、３、または４のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号１４～１９、特に１４～１８、例えば、１４、１５、または１６のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、抗体またはその断片が提供される。本発明のさらなる態様によれば、配列番号２～７、特に２～６、例えば、２、３、または４のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号１４～１９、特に１４～１８、例えば、１４、１５、または１６のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、抗体またはその断片が提供される。

【0114】

本発明のさらなる態様によれば、配列番号２～７、特に２～６、例えば、２、３、または４のいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号１４～１９、特に１４～１８、例えば、１４、１５、または１６のいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、抗体またはその断片が提供される。本発明のさらなる態様によれば、配列番号２～７、特に２～６、例えば、２、３、または４のいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号１４～１９、特に１４～１８、例えば、１４、１５、または１６のいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、抗体またはその断片が提供される。

【0115】

本発明の特定の態様によれば、配列番号８～１３、特に、８、９、１０、または１１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号２０～２５、特に、２０、２１、２２、または２３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、抗体またはその断片が提供される。本発明の別の態様によれば、配列番号８～１３、特に、８、９、１０、または１１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号２０～２５、特に、２０、２１、２２、または２３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、抗体またはその断片が提供される。

【0116】

本発明の特定の態様によれば、配列番号８～１３、特に、８、９、１０、または１１のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号２０～２５、特に、２０、２１、２２、または２３のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、抗体またはその断片が提供される。本発明の別の態様によれば、配列番号８～１３、特に、８、９、１０、または１１のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号２０～２５、特に、２０、２１、２２、または２３のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、抗体またはその断片が提供される。

【0117】

本発明の特定の態様によれば、配列番号８～１３、特に、８、９、１０、または１１のいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号２０～２５、特に、２０、２１、２２、または２３のいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、抗体またはその断片が提供される。本発明の別の態様によれば、配列番号８～１３、特に、８、９、１０、または１１のいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号２０～２５、特に、２０、２１、２２、または２３のいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する配列からなるＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、抗体またはその断片が提供される。

【0118】

本明細書において「少なくとも８０％」または「８０％以上」と称する実施形態は、８０％以上、例えば８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性などのすべての値を含むと理解されるであろう。一実施形態では、本発明の抗体または断片は、指定された配列に対する少なくとも８５％、例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を含む。

【0119】

配列同一性率の代わりに、実施形態は、１つ以上のアミノ酸変化、例えば、１つ以上の付加、置換、および／または欠失を用いて定義されてもよい。一実施形態では、配列は、最大５個のアミノ酸変化、例えば、最大３個のアミノ酸変化、特に最大２個のアミノ酸変化を含み得る。さらなる実施形態では、配列は、最大５個のアミノ酸置換、例えば、最大３個のアミノ酸置換、特に最大１個または２個のアミノ酸置換を含み得る。例えば、本発明の抗体またはその断片のＣＤＲ３は、配列番号２～２５のいずれか１つと比較して、２個以下、より好適には１個以下の置換を有する配列を含むか、またはより好適には、それらからなる。

【0120】

好適には、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３のいずれかの残基であって、配列番号２～６１および配列Ａ１～Ａ１２中のそれらの対応する残基とは異なるものは、それらの対応する残基に関して、保存的置換である。例えば、配列番号２～２５中のそれらの対応する残基と異なるＣＤＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基に関して、保存的置換である。

【0121】

一実施形態では、抗体またはその断片は、
（ｉ）配列番号２～１３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域、
（ｉｉ）配列番号２６～３７のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２を含むＶＨ領域、
（ｉｉｉ）配列番号３８～４９のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１を含むＶＨ領域、
（ｉｖ）配列番号１４～２５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域、
（ｖ）配列Ａ１～Ａ１２のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２を含むＶＬ領域、および／または
（ｖｉ）配列番号５０～６１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１を含むＶＬ領域を含む。

【0122】

一実施形態では、抗体またはその断片は、
（ｉ）配列番号２～１３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域、
（ｉｉ）配列番号２６～３７のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２を含むＶＨ領域、および
（ｉｉｉ）配列番号３８～４９のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１を含むＶＨ領域を有する重鎖を含む。

【0123】

一実施形態では、抗体またはその断片は、
（ｉ）配列番号１４～２５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域、
（ｉｉ）配列Ａ１～Ａ１２のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２を含むＶＬ領域、および
（ｉｉｉ）配列番号５０～６１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１を含むＶＬ領域を有する軽鎖を含む。

【0124】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２、３、４、５、または６、例えば２、３、４、または５、特に２、３、または４のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６、２７、２８、２９、または３０、例えば２６、２７、２８、または２９、特に２６、２７、または２８のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２を含むＶＨ領域を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号３８、３９、４０、４１、または４２、例えば３８、３９、４０、または４１、特に３８、３９、または４０のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１を含むＶＨ領域を含む（またはそれらからなる）。

【0125】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８、９、１０、または１１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号３２、３３、３４、または３５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２を含むＶＨ領域を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号４４、４５、４６、または４７のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１を含むＶＨ領域を含む（またはそれらからなる）。

【0126】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号２の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２６の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３８の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号２の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列番号２６の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号３８の配列からなる。

【0127】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号３の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２７のＣＤＲ２配列と、配列番号３９のＣＤＲ１配列と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号３の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列番号２７の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号３９の配列からなる。

【0128】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号４の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２８の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４０の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号４の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列番号２８の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号４０の配列からなる。

【0129】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号５の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２９の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４１の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号５の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列番号２９の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号４１の配列からなる。

【0130】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号６の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号３０の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４２の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号６の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列番号３０の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号４２の配列からなる。

【0131】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号８の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号３２のＣＤＲ２配列と、配列番号４４のＣＤＲ１配列と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号８の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列番号３２の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号４４の配列からなる。

【0132】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号９の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号３３のＣＤＲ２配列と、配列番号４５のＣＤＲ１配列と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号９の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列番号３３の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号４５の配列からなる。

【0133】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１０の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号３４のＣＤＲ２配列と、配列番号４６のＣＤＲ１配列と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号１０の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列番号３４の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号４７の配列からなる。

【0134】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１１の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号３５のＣＤＲ２配列と、配列番号４７のＣＤＲ１配列と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号１１の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列番号３５の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号４７の配列からなる。

【0135】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１４～２５、例えば、配列番号１４、１５、１６、１７、または１８、例えば、１４、１５、１６、または１７、特に１４、１５、または１６のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列Ａ１～Ａ１２（表２の）、例えば、配列Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、またはＡ５、例えば、Ａ１、Ａ２、Ａ３、またはＡ４、特に、Ａ１、Ａ２、またはＡ３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２を含むＶＬ領域を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号５０～６１、例えば、配列番号５０、５１、５２、５３、または５４、例えば、５０、５１、５２、または５３、特に５０、５１、または５２のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１を含むＶＬ領域を含む（またはそれらからなる）。

【0136】

一実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号１４の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ１の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５０の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号１４の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列Ａ１の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号５０の配列からなる。

【0137】

一実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号１５の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ２の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５１の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号１５の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列Ａ２の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号５１の配列からなる。

【0138】

一実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号１６の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ３の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５２の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号１６の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列Ａ３の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号５２の配列からなる。

【0139】

一実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号１７の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ４の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５３の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号１７の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列Ａ４の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号５３の配列からなる。

【0140】

一実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号１８の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ５の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５４の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号１８の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列Ａ５の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号５４の配列からなる。

【0141】

一実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号２０の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ７の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５６の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号２０の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列Ａ７の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号５６の配列からなる。

【0142】

一実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号２１の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ８の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５７の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号２１の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列Ａ８の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号５７の配列からなる。

【0143】

一実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号２２の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ９の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５８の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号２２の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列Ａ９の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号５８の配列からなる。

【0144】

一実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号２３の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ１０の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５９の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３は、配列番号２３の配列からなり、ＣＤＲ２は、配列Ａ１０の配列からなり、ＣＤＲ１は、配列番号５９の配列からなる。

【0145】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号２の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２６の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３８の配列を含むＣＤＲ１と、を含み、ＶＬ領域は、配列番号１４の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ１の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５０の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号２の配列からなり、ＨＣＤＲ２は、配列番号２６の配列からなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号３８の配列からなり、ＬＣＤＲ３は、配列番号１４の配列からなり、ＬＣＤＲ２は、配列Ａ１の配列からなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号５０の配列からなる。

【0146】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号３の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２７の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３９の配列を含むＣＤＲ１と、を含み、ＶＬ領域は、配列番号１５の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ２の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５１の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号３の配列からなり、ＨＣＤＲ２は、配列番号２７の配列からなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号３９の配列からなり、ＬＣＤＲ３は、配列番号１５の配列からなり、ＬＣＤＲ２は、配列Ａ２の配列からなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号５１の配列からなる。

【0147】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号４の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２８の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４０の配列を含むＣＤＲ１と、を含み、ＶＬ領域は、配列番号１６の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ３の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５２の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号４の配列からなり、ＨＣＤＲ２は、配列番号２８の配列からなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号４０の配列からなり、ＬＣＤＲ３は、配列番号１６の配列からなり、ＬＣＤＲ２は、配列Ａ３の配列からなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号５２の配列からなる。

【0148】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号５の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２９の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４１の配列を含むＣＤＲ１と、を含み、ＶＬ領域は、配列番号１７の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ４の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５３の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号５の配列からなり、ＨＣＤＲ２は、配列番号２９の配列からなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号４１の配列からなり、ＬＣＤＲ３は、配列番号１７の配列からなり、ＬＣＤＲ２は、配列Ａ４の配列からなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号５３の配列からなる。

【0149】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号６の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号３０の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４２の配列を含むＣＤＲ１と、を含み、ＶＬ領域は、配列番号１８の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ５の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５４の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号６の配列からなり、ＨＣＤＲ２は、配列番号３０の配列からなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号４２の配列からなり、ＬＣＤＲ３は、配列番号１８の配列からなり、ＬＣＤＲ２は、配列Ａ５の配列からなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号５４の配列からなる。

【0150】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号７の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号３１の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４３の配列を含むＣＤＲ１と、を含み、ＶＬ領域は、配列番号１９の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ６の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５５の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号７の配列からなり、ＨＣＤＲ２は、配列番号３１の配列からなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号４３の配列からなり、ＬＣＤＲ３は、配列番号１９の配列からなり、ＬＣＤＲ２は、配列Ａ６の配列からなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号５５の配列からなる。

【0151】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号８の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号３２の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４４の配列を含むＣＤＲ１と、を含み、ＶＬ領域は、配列番号２０の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ７の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５６の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号８の配列からなり、ＨＣＤＲ２は、配列番号３２の配列からなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号４４の配列からなり、ＬＣＤＲ３は、配列番号２０の配列からなり、ＬＣＤＲ２は、配列Ａ７の配列からなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号５６の配列からなる。

【0152】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号９の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号３３の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４５の配列を含むＣＤＲ１と、を含み、ＶＬ領域は、配列番号２１の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ８の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５７の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号９の配列からなり、ＨＣＤＲ２は、配列番号３３の配列からなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号４５の配列からなり、ＬＣＤＲ３は、配列番号２１の配列からなり、ＬＣＤＲ２は、配列Ａ８の配列からなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号５７の配列からなる。

【0153】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１０の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号３４の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４６の配列を含むＣＤＲ１と、を含み、ＶＬ領域は、配列番号２２の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ９の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５８の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号１０の配列からなり、ＨＣＤＲ２は、配列番号３４の配列からなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号４６の配列からなり、ＬＣＤＲ３は、配列番号２２の配列からなり、ＬＣＤＲ２は、配列Ａ９の配列からなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号５８の配列からなる。

【0154】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１１の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号３５の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４７の配列を含むＣＤＲ１と、を含み、ＶＬ領域は、配列番号２３の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ１０の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５９の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号１１の配列からなり、ＨＣＤＲ２は、配列番号３５の配列からなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号４７の配列からなり、ＬＣＤＲ３は、配列番号２３の配列からなり、ＬＣＤＲ２は、配列Ａ１０の配列からなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号５９の配列からなる。

【0155】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１２の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号３６の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４８の配列を含むＣＤＲ１と、を含み、ＶＬ領域は、配列番号２４の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ１１の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６０の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号１２の配列からなり、ＨＣＤＲ２は、配列番号３６の配列からなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号４８の配列からなり、ＬＣＤＲ３は、配列番号２４の配列からなり、ＬＣＤＲ２は、配列Ａ１１の配列からなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号６０の配列からなる。

【0156】

一実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１３の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号３７の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４９の配列を含むＣＤＲ１と、を含み、ＶＬ領域は、配列番号２５の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ１２の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号６１の配列を含むＣＤＲ１と、を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号１３の配列からなり、ＨＣＤＲ２は、配列番号３７の配列からなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号４９の配列からなり、ＬＣＤＲ３は、配列番号２５の配列からなり、ＬＣＤＲ２は、配列Ａ１２の配列からなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号６１の配列からなる。

【0157】

一実施形態では、抗体またはその断片は、表２に記載される１つ以上のＣＤＲ配列を含む。さらなる実施形態では、抗体またはその断片は、表２に記載されるクローン１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８の１つ以上の（例えば、すべての）ＣＤＲ配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、表２に記載されるクローン１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７の１つ以上の（例えば、すべての）ＣＤＲ配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、表２に記載されるクローン１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４の１つ以上の（例えば、すべての）ＣＤＲ配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、表２に記載されるクローン１２４５＿Ｐ０２＿Ｂ０７の１つ以上の（例えば、すべての）ＣＤＲ配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、表２に記載されるクローン１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５の１つ以上の（例えば、すべての）ＣＤＲ配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、表２に記載されるクローン１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４の１つ以上の（例えば、すべての）ＣＤＲ配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、表２に記載されるクローン１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７の１つ以上の（例えば、すべての）ＣＤＲ配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、表２に記載されるクローン１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６の１つ以上の（例えば、すべての）ＣＤＲ配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、表２に記載されるクローン１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９の１つ以上の（例えば、すべての）ＣＤＲ配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、表２に記載されるクローン１１３８＿Ｐ０１＿Ｂ０９の１つ以上の（例えば、すべての）ＣＤＲ配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、表２に記載されるクローン１２５１＿Ｐ０２＿Ｇ１０の１つ以上の（例えば、すべての）ＣＤＲ配列を含む。

【0158】

好適には、上に列挙されるＶＨ領域およびＶＬ領域は、それぞれ４つのフレームワーク領域（ＦＲ１～ＦＲ４）を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６２～８５のいずれか１つの中のフレームワーク領域と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むフレームワーク領域（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４）を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６２～８５のいずれか１つの中のフレームワーク領域と少なくとも９０％、例えば少なくとも９５％、９７％または９９％の配列同一性を有する配列を含むフレームワーク領域（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４）を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６２～８５のいずれか１つの中の配列を含むフレームワーク領域（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４）を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６２～８５のいずれか１つの中の配列からなるフレームワーク領域（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４）を含む。

【0159】

本明細書に記載の抗体は、それらの完全な軽鎖および／または重鎖可変配列によって定義され得る。したがって、本発明のさらなる態様によれば、配列番号６２～８５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片が提供される。本発明のさらなる態様によれば、配列番号６２～８５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片が提供される。

【0160】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６２～７３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６２～７３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＨ領域を含む。さらなる実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号６２、６３、６４、６５、または６６、例えば６２、６３、６４、または６５、特に６２、６３、または６４のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。さらなる実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号６２、６３、６４、６５、または６６、例えば６２、６３、６４、または６５、特に６２、６３、または６４のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる。さらなる実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号６８、６９、７０、７１、７２、または７３、例えば、６８、６９、７０、または７１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。さらなる実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号６８、６９、７０、７１、７２、または７３、例えば、６８、６９、７０、または７１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる。

【0161】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７４～８５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７４～８５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＬ領域を含む。さらなる実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号７４、７５、７６、７７、または７８、例えば７４、７５、７６、または７７、特に７４、７５、または７６のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。さらなる実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号７４、７５、７６、７７、または７８、例えば７４、７５、７６、または７７、特に７４、７５、または７６のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる。さらなる実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号８０、８１、８２、８３、８４、または８５、例えば、８０、８１、８２、または８３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。さらなる実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号８０、８１、８２、８３、８４、または８５、例えば、８０、８１、８２、または８３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる。

【0162】

さらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６２～７３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号７４～８５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む。さらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６２～７３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＨ領域と、配列番号７４～８５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＬ領域と、を含む。

【0163】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６３（１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８）のアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６２（１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７）のアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６４（１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４）のアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６８（１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４）のアミノ酸配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６９（１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７）のアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７０（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６）のアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７１（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９）のアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。

【0164】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６３（１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６２（１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６４（１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６８（１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６９（１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７０（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７１（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域を含む。

【0165】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７５（１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７４（１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７６（１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８０（１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８１（１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８２（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８３（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。

【0166】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７５（１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７４（１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７６（１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８０（１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８１（１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８２（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８３（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域を含む。

【0167】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６３（１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８）のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号７５（１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６２（１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７）のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号７４（１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６４（１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４）のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号７６（１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６８（１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４）のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号８０（１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６９（１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７）のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号８１（１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７０（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６）のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号８２（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７１（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６）のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号８３（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９）のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む。

【0168】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６３（１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域と、配列番号７５（１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域と、を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６２（１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域と、配列番号７４（１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域と、を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６４（１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域と、配列番号７６（１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域と、を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６８（１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域と、配列番号８０（１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域と、を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号６９（１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域と、配列番号８１（１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域と、を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７０（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域と、配列番号８２（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域と、を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７１（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６）のアミノ酸配列からなるＶＨ領域と、配列番号８３（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９）のアミノ酸配列からなるＶＬ領域と、を含む。

【0169】

ＶＨ領域およびＶＬ領域の両方を含む断片について、これらは、共有結合的に（例えば、ジスルフィド結合もしくはリンカー）、または非共有結合的のいずれかで会合し得る。本明細書に記載の抗体断片は、ｓｃＦｖ、すなわち、リンカーによって連結されたＶＨ領域およびＶＬ領域を含む断片を含み得る。一実施形態では、ＶＨ領域およびＶＬ領域は、（例えば、合成）ポリペプチドリンカーによって連結されている。ポリペプチドリンカーは、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎリンカーを含んでいてもよく、ここで、ｎ＝１～８、例えば、２、３、４、５、または７である。ポリペプチドリンカーは、［（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎ（Ｇｌｙ_３ＡｌａＳｅｒ）_ｍ］_ｐリンカーを含んでいてもよく、ここで、ｎ＝１～８、例えば、２、３、４、５、または７、ｍ＝１～８、例えば、０、１、２、または３、およびｐ＝１～８、例えば、１、２、または３である。さらなる実施形態では、リンカーは、配列番号９８を含む。さらなる実施形態では、リンカーは、配列番号９８からなる。

【0170】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８６～９７のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。さらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８６～９７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。なおさらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８７（１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８）のアミノ酸配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８６（１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７）のアミノ酸配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８８（１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４）のアミノ酸配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号９２（１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４）のアミノ酸配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号９３（１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７）のアミノ酸配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号９４（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６）のアミノ酸配列を含む。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号９５（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９）のアミノ酸配列を含む。

【0171】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８６～９７のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる。さらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８６～９７のいずれか１つのアミノ酸配列からなる。なおさらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８７（１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８）のアミノ酸配列からなる。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８６（１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７）のアミノ酸配列からなる。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８８（１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４）のアミノ酸配列からなる。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号９２（１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４）のアミノ酸配列からなる。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号９３（１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７）のアミノ酸配列からなる。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号９４（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６）のアミノ酸配列からなる。代替的な実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号９５（１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９）のアミノ酸配列からなる。

【0172】

翻訳、精製および検出を補助するために、ｓｃＦｖ構築物がＮ末端改変およびＣ末端改変を含むように設計され、作製され得ることは、当業者によって理解されるであろう。例えば、ｓｃＦｖ配列のＮ末端で、追加のメチオニンおよび／またはアラニンアミノ酸残基は、カノニカルＶＨ配列の前に含まれ得る（例えば、ＱＶＱまたはＥＶＱから開始する）。Ｃ末端（すなわち、ＩＭＧＴ定義に従って終わるカノニカルＶＬドメイン配列に対するＣ末端）で、（ｉ）定常ドメインの部分配列、および／または（ｉｉ）精製および検出を補助するために、ＨｉｓタグおよびＦｌａｇタグなどのタグを含む追加の合成配列などの追加の配列が含まれ得る。一実施形態では、配列番号１２４は、配列番号８６、８８～９０、９２～９７のいずれか１つのＣ末端に付加される。一実施形態では、配列番号１２５は、配列番号８６、８８～９０、９２～９７のいずれか１つのＣ末端に付加される。一実施形態では、配列番号１２６は、配列番号８７または９１のいずれか１つのＣ末端に付加される。一実施形態では、配列番号１２７は、配列番号８７または９１のいずれか１つのＣ末端に付加される。上述のｓｃＦｖのＮ末端配列またはＣ末端配列は任意要素であり、代替的なｓｃＦｖの設計、翻訳、精製、または検出戦略が採用される場合、除去され、改変され、または置換され得ることが十分に理解される。

【0173】

本明細書に記載される場合、抗体は、任意のフォーマットであってもよい。好ましい実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１フォーマットである。したがって、一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１１１～１２２のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。さらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１１１～１２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。なおさらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１１１～１１６、例えば、配列番号１１１～１１３および１１６のアミノ酸配列を含む。なおさらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１１７～１２２、例えば、配列番号１１７～１２０のアミノ酸配列を含む。なおさらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１１１、１１２、１１６～１２０、例えば、配列番号１１１、１１２もしくは１１６、または配列番号１１７～１２０のアミノ酸配列を含む。

【0174】

一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１１１～１２２のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる。さらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１１１～１２２のいずれか１つのアミノ酸配列からなる。なおさらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１１１～１１６、例えば、配列番号１１１～１１３および１１６のアミノ酸配列からなる。なおさらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１１７～１２２、例えば、配列番号１１７～１２０のアミノ酸配列からなる。なおさらなる実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１１１、１１２、１１６～１２０、例えば、配列番号１１１、１１２もしくは１１６、または配列番号１１７～１２０のアミノ酸配列からなる。

【0175】

一実施形態では、抗体は、本明細書で定義される抗体またはその断片と同一もしくは本質的に同一のエピトープに結合するか、またはそれと競合する。当該技術分野で既知の常法を使用して、抗体が、参照抗Ｖδ１抗体と同一のエピトープに結合するか、またはそれとの結合と競合するかどうかを容易に決定することができる。例えば、試験抗体が本発明の参照抗Ｖδ１抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照抗体を、飽和条件下でＶδ１タンパク質またはペプチドに結合させる。次に、試験抗体がＶδ１鎖に結合する能力を評価する。試験抗体が、参照抗Ｖδ１抗体との飽和結合の後にＶδ１に結合することができる場合、その試験抗体は、参照抗Ｖδ１抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。その一方で、試験抗体が、参照抗Ｖδ１抗体との飽和結合の後にＶδ１鎖に結合することができない場合、その試験抗体は、本発明の参照抗Ｖδ１抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合する可能性がある。

【0176】

本発明はまた、Ｖδ１との結合について、本明細書に定義される抗体またはその断片、または本明細書に記載の例示的な抗体のうちのいずれかのＣＤＲ配列を有する抗体と競合する抗Ｖδ１抗体を含む。例えば、競合アッセイは、どのタンパク質、抗体、および他のアンタゴニストが、Ｖδ１との結合について本発明の抗体と競合し、かつ／またはエピトープを共有するかを決定するために、本発明の抗体を用いて実施することができる。これらのアッセイは、当業者に容易に知られており、これらのアッセイは、タンパク質（例えば、Ｖδ１）上の限られた数の結合部位に対するアンタゴニストまたはリガンドとの間の競合を評価する。抗体（またはその断片）を、競合の前または後に固定化または不溶化し、Ｖδ１鎖に結合した試料を、例えば、デカンテーション（抗体が予め不溶化された場合）または遠心分離（抗体が競合反応の後に析出した場合）によって、結合していない試料から分離する。また、競合的結合は、その機能が、タンパク質に対する抗体の結合または結合の欠如によって変化するかどうか、例えば、抗体分子が、例えば、標識の酵素活性を阻害または強化するかどうかによって決定され得る。当該技術分野で既知であり、本明細書に記載されるように、ＥＬＩＳＡおよび他の機能アッセイを使用してもよい。

【0177】

２つの抗体が各々、標的抗原に対する他の結合を競合的に阻害する（ブロックする）場合、その２つの抗体は、同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する。すなわち、１倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍過剰量の一方の抗体は、競合結合アッセイで測定した場合、他方の抗体の結合を少なくとも５０％、しかし、好ましくは７５％、９０％、またはさらに９９％阻害する。代替的に、一方の抗体の結合を減少または排除する標的抗原において本質的にすべてのアミノ酸変異がもう他の結合を減少または排除する場合、２つの抗体は、同じエピトープを有する。

【0178】

次に、試験抗体の結合の観察された欠失が、実際に、参照抗体と同じエピトープに対する結合に起因するものであるか、または立体遮断（または別の現象）が、観察された結合の欠失の原因であるのかを確認するために、さらなる通常の実験（例えば、ペプチド変異および結合分析）を実施することができる。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、または当該技術分野で利用可能な任意の他の定量的もしくは定性的な抗体結合アッセイを使用して実施することができる。

【0179】

いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、Ａｓｎ ２９７（ＥＵ番号付けスキーム）に連結した糖への改変を通じて改変されたエフェクター機能を含有する。上述のさらなる改変では、Ａｓｎ ２９７は、フコシル化されていないか、または低減されたフコシル化（すなわち、脱フコシル化抗体または非フコシル化抗体）を示す。フコシル化は、分子への糖フコースの付加、例えば、Ｎ－グリカン、Ｏ－グリカン、および糖脂質へのフコースの接続を含む。したがって、脱フコシル化抗体において、フコースは、定常領域の炭水化物鎖に接続しない。抗体は、抗体のフコシル化を防止または阻害するように改変され得る。典型的には、グリコシル化改変は、標的化操作を介して、または標的化されたかもしくは偶然発見した宿主もしくはクローン選択を介してのいずれかで、代替のグリコシル化処理能力を有する宿主細胞において上述の抗体またはその断片を発現することを含む（例えば、実施例１３を参照されたい）。これらおよび他のエフェクター改変は、例えば、Ｘｉｎｈｕａ Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｐｒｏｔｅｉｎ ＆ Ｃｅｌｌ ９：６３－７３によって、また、Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．（２０１８）ｍＡｂｓ １０（５）：６９３－７１１によって、近年の概説にさらに記載されており、それらは本明細書に組み込まれる。

【0180】

抗体配列改変
抗体およびその断片は、既知の方法を使用して改変され得る。本明細書に記載される抗体分子に対する配列改変は、当業者によって容易に組み込むことができる。以下の例は、非限定的なものである。

【0181】

抗体発見およびファージライブラリからの配列回収の間、所望の抗体可変ドメインは、サブクローニングによって完全長ＩｇＧに再フォーマットされ得る。このプロセスを加速するために、可変ドメインは、多くの場合、制限酵素を使用して移される。これらの独自の制限部位は、追加の／代替のアミノ酸を導入し、カノニカル配列から離れてもよい（かかるカノニカル配列は、例えば、国際的なＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ［ＩＭＧＴ］情報システム中に見出されてもよく、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇを参照されたい）。これらは、カッパまたはラムダ軽鎖配列改変として導入され得る。

【0182】

カッパ軽鎖改変
可変カッパ軽鎖可変配列は、完全長ＩｇＧへの再フォーマット中に制限部位（例えば、Ｎｈｅ１－Ｎｏｔ１）を使用してクローニングされ得る。より具体的には、カッパ軽鎖Ｎ末端において、クローニングを補助するために追加のＡｌａ－Ｓｅｒ配列を導入した。好ましくは、この追加のＡＳ配列は、次いで、カノニカルＮ末端配列を生成するなどのさらなる発達の間に除去される。したがって、一実施形態では、本明細書に記載の抗体を含有するカッパ軽鎖は、そのＮ末端にＡＳ配列を含有せず、すなわち、配列番号７４、７６～７８および８０～８５は、初期ＡＳ配列を含まない。さらなる実施形態では、配列番号７４および７６～７８は、初期ＡＳ配列を含まない。この実施形態は、この配列を含有する本明細書に含まれる他の配列（例えば、配列番号８６、８８～９０、および９２～９７）にも適用されることが理解されるであろう。

【0183】

クローニングを補助するために、追加のアミノ酸変化が行われ得る。例えば、本明細書に記載の抗体について、カッパ軽鎖可変ドメイン／定常ドメインの境界で、クローニングを補助するために、バリンからアラニンへの変化を導入した。これにより、カッパ定常ドメイン改変が得られた。具体的には、これにより、（ＮｏｔＩ制限部位からの）ＲＴＡＡＡＰＳから始まる定常ドメインが得られる。好ましくは、この配列は、ＲＴＶＡＡＰＳから始まるカノニカルカッパ軽鎖定常領域を生成するために、さらなる発達中に改変され得る。したがって、一実施形態では、本明細書に記載される抗体を含有するカッパ軽鎖は、配列ＲＴＶを用いて記載される定常ドメインを含む。したがって、一実施形態では、配列番号１１１～１１４および１１７～１２２の配列ＲＴＡＡＡＰＳは、配列ＲＴＶＡＡＰＳと置き換えられる。

【0184】

ラムダ軽鎖改変
上のカッパの例と同様に、ラムダ軽鎖可変ドメインはまた、完全長ＩｇＧへの再フォーマット中に制限部位（例えば、Ｎｈｅ１－Ｎｏｔ１）を導入することによってクローニングされてもよい。より具体的には、ラムダ軽鎖Ｎ末端において、クローニングを補助するために追加のＡｌａ－Ｓｅｒ配列を導入され得る。好ましくは、この追加のＡＳ配列は、次いで、カノニカルＮ末端配列を生成するなどのさらなる発達の間に除去される。したがって、一実施形態では、本明細書に記載の抗体を含有するλ軽鎖は、そのＮ末端にＡＳ配列を含有せず、すなわち、配列番号７５および７９は、初期ＡＳ配列を含まない。この実施形態は、この配列を含有する本明細書に含まれる他の配列（例えば、配列番号８７、９１、１１５および１１６）にも適用されることが理解されるであろう。一実施形態では、配列番号７５は、最初の６個の残基を含有せず、すなわち、ＡＳＳＹＥＬ配列が除去される。

【0185】

別の例として、本明細書に記載の抗体について、ラムダ軽鎖可変ドメイン／定常ドメインの境界で、クローニングを補助するために、リジンからアラニンへの配列変化を導入した。これにより、ラムダ定常ドメイン改変が得られた。具体的には、これにより、（ＮｏｔＩ制限部位からの）ＧＱＰＡＡＡＰＳで始まる定常ドメインが得られる。好ましくは、この配列は、ＧＱＰＫＡＡＰＳから始まるカノニカルラムダ軽鎖定常領域を生成するために、さらなる発達中に改変され得る。したがって、一実施形態では、本明細書に記載される抗体を含有するラムダ軽鎖は、配列ＧＱＰＫから始まる定常ドメインを含む。したがって、一実施形態では、配列番号１１５または１１６の配列ＧＱＰＡＡＡＰＳは、配列ＧＱＰＫＡＡＰＳと置き換えられる。

【0186】

重鎖改変
典型的には、ヒト可変重鎖配列は、塩基性グルタミン（Ｑ）または酸性グルタミン酸塩（Ｅ）のいずれかで始まる。しかしながら、次いで、そのような配列は両方とも、酸性アミノ酸残基であるピログルタミン酸塩（ｐＥ）に変換されることが知られている。ＱからｐＥへの変換は、抗体に対する電荷を変化させる一方で、ＥからｐＥへの変換は、抗体の電荷を変化させない。したがって、経時的な変動可能な電荷変化を回避するために、１つの選択肢は、第１の事例において、開始重鎖配列をＱからＥに改変することである。したがって、一実施形態では、本明細書に記載の抗体の重鎖は、Ｎ末端にＱからＥへの改変を含有する。特に、配列番号６２、６４、および／または６７～７１の初期残基は、ＱからＥに改変され得る。この実施形態が、この配列を含有する本明細書に含まれる他の配列（例えば、配列番号８６、８８、９１～９７および１１１、１１２、１１５、１１７～１２０）にも適用されることが理解されるであろう。

【0187】

さらに、ＩｇＧ１定常ドメインのＣ末端は、ＰＧＫで終わる。しかしながら、末端塩基性リジン（Ｋ）は、その後、発現中にしばしば切断される（例えば、ＣＨＯ細胞において）。この結果、Ｃ末端リジン残基の様々な損失を通じて、抗体に対する電荷が変化する。したがって、１つの選択肢は、第１の事例においてリジンを除去し、ＰＧで終わる均一および一貫した重鎖Ｃ末端配列を得ることである。したがって、一実施形態では、本明細書に記載の抗体の重鎖は、末端ＫをそのＣ末端から除去している。特に、本発明の抗体は、末端リジン残基が除去された、配列番号１１１～１２２のいずれか１つを含み得る。

【0188】

任意選択のアロタイプ改変
抗体の発見中に、特定のヒトアロタイプが用いられ得る。任意選択で、抗体は、発生中に異なるヒトアロタイプに切り替えられ得る。非限定的な例として、カッパ鎖について、３つのＫｍ対立遺伝子を定義する（アロタイプ番号付けを使用する）、Ｋｍ１、Ｋｍ１，２、およびＫｍ３と呼ばれる３つのヒトアロタイプがある。Ｋｍ１は、バリン１５３（ＩＭＧＴ Ｖ４５．１）およびロイシン１９１（ＩＭＧＴ Ｌ１０１）と相関し、Ｋｍ１，２は、アラニン１５３（ＩＭＧＴ Ａ４５．１）およびロイシン１９１（ＩＭＧＴ Ｌ１０１）と相関し、Ｋｍ３は、アラニン１５３（ＩＭＧＴ Ａ４５．１）およびバリン１９１（ＩＭＧＴ Ｖ１０１）と相関する。したがって、任意選択で、標準的なクローニングアプローチによって、あるアロタイプから別のアロタイプへと配列を改変することができる。例えば、Ｌ１９１Ｖ（ＩＭＧＴ Ｌ１０１Ｖ）変化は、Ｋｍ１，２アロタイプをＫｍ３アロタイプに変換する。このようなアロタイプについてのさらなる参照は、参照により本明細書に組み込まれるＪｅｆｆｅｒｉｓ ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ（２００９）ＭＡｂｓ １（４）：３３２－８を参照されたい。

【0189】

したがって、一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、同じ遺伝子の別のヒトアロタイプに由来するアミノ酸置換を含有する。さらなる実施形態では、抗体は、ｃドメインをｋｍ１，２からｋｍ３アロタイプに変換するためのカッパ鎖に対するＬ１９１Ｖ（ＩＭＧＴ Ｌ１０１Ｖ）置換を含有する。

【0190】

抗体結合
本発明の抗体またはその断片は、表面プラズモン共鳴により測定される場合、１．５×１０^－７Ｍ（すなわち、１５０ｎＭ）未満の結合親和性（ＫＤ）でγδ ＴＣＲのＶδ１鎖に結合し得る。好ましい実施形態では、ＫＤは、１．５×１０^－７Ｍ（すなわち、１５０ｎＭ）未満である。さらなる実施形態では、ＫＤは、１．３×１０^－７Ｍ（すなわち、１３０ｎＭ）以下、例えば、１．０×１０^－７Ｍ（すなわち、１００ｎＭ）以下である。なおさらなる実施形態では、ＫＤは、５．０×１０^－８Ｍ（すなわち、５０ｎＭ）未満、例えば、４．０×１０^－８Ｍ（すなわち、４０ｎＭ）未満、３．０×１０^－８Ｍ（すなわち、３０ｎＭ）未満、または２．０×１０^－８Ｍ（すなわち、２０ｎＭ）未満である。例えば、一態様によれば、表面プラズモン共鳴により測定される場合、１．５×１０^－７Ｍ（すなわち、１５０ｎＭ）未満の結合親和性（ＫＤ）でγδ ＴＣＲのＶδ１鎖に結合するヒト抗Ｖδ１抗体が提供される。

【0191】

本発明の一態様では、表面プラズモン共鳴により測定される場合、４．０×１０^－８Ｍ（すなわち、４０ｎＭ）未満、３．０×１０^－８Ｍ（すなわち、３０ｎＭ）未満、または２．０×１０^－８Ｍ（すなわち、２０ｎＭ）未満の結合親和性（ＫＤ）でγδ ＴＣＲのＶδ１鎖に結合する抗体またはその断片が提供される。

【0192】

一実施形態では、抗体またはその断片の結合親和性は、抗体またはその断片を直接的または間接的に（例えば、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃでキャプチャーすることによって）センサの表面（例えば、アミンハイキャパシティチップまたは等価物）上にコーティングすることによって確立され、抗体またはその断片によって結合される標的（すなわち、γδ ＴＣＲのＶδ１鎖）は、チップ上を流れ、結合を検出する。好適には、ＭＡＳＳ－２機器（Ｓｉｅｒｒａ ＳＰＲ－３２とも称され得る）は、ＰＢＳ＋０．０２％のＴｗｅｅｎ ２０ランニングバッファー中、２５℃、３０μＬ／分で使用される。

【0193】

本明細書には、抗体機能を定義するために使用され得る他のアッセイが記載される。例えば、本明細書に記載の抗体またはその断片は、γδ ＴＣＲ係合、例えば、抗体結合時のγδ ＴＣＲの下方調節を測定することによって評価され得る。抗体またはその断片の適用後のγδ ＴＣＲの表面発現（任意選択で細胞の表面上に提示される）は、例えばフローサイトメトリーによって測定され得る。本明細書に記載の抗体またはその断片は、γδＴ細胞脱顆粒を測定することによっても評価され得る。例えば、細胞脱顆粒のためのマーカーであるＣＤ１０７ａの発現は、例えばフローサイトメトリーによって、抗体またはその断片（任意選択で、細胞の表面上に提示される）をγδＴ細胞に適用した後に測定され得る。本明細書に記載の抗体またはその断片は、（抗体がγδＴ細胞の死滅活性に影響を有するかどうかを試験するために）γδＴ細胞死滅活性を測定することによっても評価され得る。例えば、標的細胞は、抗体またはその断片の存在下で（任意選択で、細胞の表面上に提示される）、γδＴ細胞とともにインキュベートされ得る。インキュベーション後、培養物を細胞生存率染料で染色して、生存標的細胞と死んだ標的細胞を区別してもよい。次に、死んだ細胞の割合を、例えばフローサイトメトリーによって測定することができる。

【0194】

本明細書に記載されるように、アッセイに使用される抗体またはその断片は、表面、例えば、Ｆｃ受容体を含む細胞などの細胞の表面上に提示され得る。例えば、抗体またはその断片は、ＴＩＢ－２０２（商標）細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能である）などのＴＨＰ－１細胞の表面上に提示され得る。代替的に、抗体またはその断片は、アッセイで直接使用され得る。

【0195】

そのような機能アッセイにおいて、出力は、「ＥＣ５０」または「５０％での有効濃度」とも称される、半数効果濃度を計算することによって測定され得る。「ＩＣ５０」という用語は、阻害濃度を指す。ＥＣ５０およびＩＣ５０は両方とも、フローサイトメトリー法などの当該技術分野で既知の方法を使用して測定され得る。疑問を避けるために、本出願におけるＥＣ５０の値は、ＩｇＧ１フォーマット化抗体を使用して提供される。かかる値は、以下のように等価値について抗体フォーマットの分子量に基づいて容易に変換することができる。
（μｇ／ｍｌ）／（ｋＤａにおけるＭＷ）＝μＭ

【0196】

抗体（または断片）結合時のγδ ＴＣＲの下方調節についてのＥＣ５０は、０．５０μｇ／ｍｌ未満、例えば、０．４０μｇ／ｍｌ未満、０．３０μｇ／ｍｌ未満、０．２０μｇ／ｍｌ未満、０．１５μｇ／ｍｌ未満、０．１０μｇ／ｍｌ未満、０．０６μｇ／ｍｌ未満、または０．０５μｇ／ｍｌ未満であり得る。好ましい実施形態では、抗体（または断片）結合時のγδ ＴＣＲの下方調節についてのＥＣ５０は、０．１０μｇ／ｍｌ未満である。特に、抗体（または断片）結合時のγδ ＴＣＲの下方調節についてのＥＣ５０は、０．０６μｇ／ｍｌ未満、例えば、０．０５μｇ／ｍｌ未満、０．０４μｇ／ｍｌ未満、または０．０３μｇ／ｍｌ未満であり得る。特に、上述のＥＣ５０値は、抗体がＩｇＧ１フォーマットで測定される場合のものである。例えば、ＥＣ５０ γδ ＴＣＲ下方調節値は、フローサイトメトリーを使用して測定することができる（例えば、実施例６のアッセイに記載されているように）。

【0197】

抗体（または断片）結合時のγδＴ細胞脱顆粒のＥＣ５０は、０．０５０μｇ／ｍｌ未満、例えば、０．０４０μｇ／ｍｌ未満、０．０３０μｇ／ｍｌ未満、０．０２０μｇ／ｍｌ未満、０．０１５μｇ／ｍｌ未満、０．０１０μｇ／ｍｌ未満、または０．００８μｇ／ｍｌ未満であってよい。特に、抗体（または断片）結合時のγδＴ細胞脱顆粒のＥＣ５０は、０．００５μｇ／ｍｌ未満、例えば、０．００２μｇ／ｍｌ未満であり得る。好ましい実施形態では、抗体（または断片）結合時のγδＴ細胞脱顆粒についてのＥＣ５０は、０．００７μｇ／ｍｌ未満である。特に、上述のＥＣ５０値は、抗体がＩｇＧ１フォーマットで測定される場合のものである。例えば、γδＴ細胞脱顆粒ＥＣ５０値は、フローサイトメトリー（例えば、実施例７のアッセイに記載されるように）を使用してＣＤ１０７ａ発現（すなわち、細胞脱顆粒のマーカー）を検出することによって測定することができる。一実施形態では、ＣＤ１０７ａ発現は、抗ヒトＣＤ１０７ａ ＢＶ４２１（クローンＨ４Ａ３）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）などの抗ＣＤ１０７ａ抗体を使用して測定される。

【0198】

抗体（または断片）結合時のγδＴ細胞死滅のＥＣ５０は、０．５０μｇ／ｍｌ未満、例えば、０．４０μｇ／ｍｌ未満、０．３０μｇ／ｍｌ未満、０．２０μｇ／ｍｌ未満、０．１５μｇ／ｍｌ未満、０．１０μｇ／ｍｌ未満、または０．０７μｇ／ｍｌ未満であり得る。好ましい実施形態では、抗体（または断片）結合時のγδＴ細胞死滅についてのＥＣ５０は、０．１０μｇ／ｍｌ未満である。特に、抗体（または断片）結合時のγδＴ細胞死滅についてのＥＣ５０は、０．０６０μｇ／ｍｌ未満、例えば、０．０５５μｇ／ｍｌ未満、特に０．０２０μｇ／ｍｌまたは０．０１０μｇ／ｍｌ未満であり得る。特に、上述のＥＣ５０値は、抗体がＩｇＧ１フォーマットで測定される場合のものである。例えば、ＥＣ５０ γδＴ細胞死滅値は、抗体、γδＴ細胞および標的細胞のインキュベーション後にフローサイトメトリーを使用して、死亡細胞の割合を検出する（例えば、細胞生存率染料を使用する）ことによって測定することができる（例えば、実施例８のアッセイに記載されるように）。一実施形態では、標的細胞の死亡は、細胞生存率染料を使用して測定され、生存率染料は、Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ｅＦｌｕｏｒ（商標）５２０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）である。

【0199】

これらの態様に記載されるアッセイでは、抗体またはその断片は、ＴＨＰ－１細胞、例えば、ＴＩＢ－２０２（商標）（ＡＴＣＣ）などの細胞の表面上に提示され得る。ＴＨＰ－１細胞は、任意選択で、ＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ（商標）Ｏｒａｎｇｅ ＣＭＴＭＲ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）などの染料で標識される。

【0200】

免疫コンジュゲート
本発明の抗体またはその断片は、細胞毒素または化学療法剤などの治療部分にコンジュゲートされ得る。このようなコンジュゲートは、免疫コンジュゲートと称されてもよい。本明細書で使用される場合、「免疫コンジュゲート」という用語は、細胞毒素、放射性剤、サイトカイン、インターフェロン、標的またはレポーター部分、酵素、毒素、ペプチドまたはタンパク質、または治療薬剤などの別の部分に化学的または生物学的に連結されている抗体を指す。抗体は、その標的に結合することができる限り、分子に沿った任意の位置で、細胞毒素、放射性剤、サイトカイン、インターフェロン、標的またはレポーター部分、酵素、毒素、ペプチド、または治療薬剤に連結され得る。免疫コンジュゲートの例としては、抗体薬物複合体および抗体－毒素融合タンパク質が挙げられる。一実施形態では、薬剤は、Ｖδ１に対する第２の異なる抗体であり得る。特定の実施形態では、抗体は、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞に特異的な薬剤にコンジュゲートされ得る。抗Ｖδ１抗体にコンジュゲートされてもよく、かつ治療されるべき状態および達成されるべき所望の治療効果を考慮に入れる治療部分の種類。一実施形態では、薬剤は、Ｖδ１以外の分子に結合する第２の抗体、またはその断片であり得る。

【0201】

多重特異性抗体
本発明の抗体は、単一特異性であってもよく、または本発明の抗体は、追加の標的に結合してもよく、したがって、二重特異性もしくは多重特異性であってもよい。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であってもよく、または１つより多い標的ポリペプチドに特異的であってもよい。したがって、一実施形態では、抗体またはその断片は、Ｖδ１に対する第１の結合特異性と、第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性とを含む。

【0202】

第２の結合特異性は、Ｖδ１と同じ細胞上、または同じ組織型の異なる細胞上、または異なる組織型の異なる細胞上の抗原を標的化し得る。特定の実施形態では、標的エピトープは、異なるＴ細胞、Ｂ細胞、腫瘍細胞、自己免疫組織細胞、またはウイルス感染細胞を含む異なる細胞上にあり得る。代替的に、標的エピトープは、同じ細胞上にあり得る。

【0203】

ポリヌクレオチドおよび発現ベクター
本発明の一態様では、本発明の抗Ｖδ１抗体または断片をコードするポリヌクレオチドが提供される。一実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号９９～１１０と少なくとも７０％、例えば、少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％、例えば、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。一実施形態では、発現ベクターは、配列番号９９～１１０のＶＨ領域を含む。別の実施形態では、発現ベクターは、配列番号９９～１１０のＶＬ領域を含む。さらなる実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号９９～１１０を含むか、またはそれらからなる。さらなる態様では、上述のポリヌクレオチドを含むｃＤＮＡが提供される。

【0204】

本発明の一態様では、本発明の抗Ｖδ１抗体または断片をコードするポリヌクレオチドが提供される。一実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号９９～１０１または１０５～１０８と少なくとも７０％、例えば、少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％、例えば、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。一実施形態では、発現ベクターは、配列番号９９～１０１または１０５～１０８のＶＨ領域を含む。別の実施形態では、発現ベクターは、配列番号９９～１０１または１０５～１０８のＶＬ領域を含む。さらなる実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号９９～１０１または１０５～１０８を含むか、またはそれらからなる。さらなる態様では、上述のポリヌクレオチドを含むｃＤＮＡが提供される。

【0205】

一実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号９９～１０１と少なくとも７０％、例えば、少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％、例えば、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。一実施形態では、発現ベクターは、配列番号９９～１０１のＶＨ領域を含む。別の実施形態では、発現ベクターは、配列番号９９～１０１のＶＬ領域を含む。さらなる実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号９９～１０１を含むか、またはそれらからなる。さらなる態様では、上述のポリヌクレオチドを含むｃＤＮＡが提供される。

【0206】

本発明の一態様では、コードされた免疫グロブリン鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３をコードする配列番号９９～１１０の一部のいずれか１つと少なくとも７０％、例えば、少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％、例えば、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなるポリヌクレオチドが提供される。一実施形態では、ポリヌクレオチドは、コードされた免疫グロブリン鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３をコードする配列番号９９～１０１または１０５～１０８の一部のいずれか１つと少なくとも７０％、例えば、少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％、例えば、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。一実施形態では、ポリヌクレオチドは、コードされた免疫グロブリン鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３をコードする配列番号９９～１０１の一部のいずれか１つと少なくとも７０％、例えば、少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％、例えば、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。

【0207】

本発明の一態様では、コードされた免疫グロブリン鎖可変ドメインのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／またはＦＲ４をコードする配列番号９９～１１０の一部のいずれか１つと少なくとも７０％、例えば、少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％、例えば、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなるポリヌクレオチドが提供される。一実施形態では、ポリヌクレオチドは、コードされた免疫グロブリン鎖可変ドメインのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／またはＦＲ４をコードする配列番号９９～１０１または１０５～１０８の一部のいずれか１つと少なくとも７０％、例えば、少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％、例えば、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。一実施形態では、ポリヌクレオチドは、コードされた免疫グロブリン鎖可変ドメインのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／またはＦＲ４をコードする配列番号９９～１０１の一部のいずれか１つと少なくとも７０％、例えば、少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％、例えば、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。

【0208】

本発明のポリヌクレオチドおよび発現ベクターはまた、コードされるアミノ酸配列を参照して記載されてもよい。したがって、一実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号６２～８５のいずれか１つのアミノ酸配列をコードする配列を含むか、またはそれらからなる。一実施形態では、発現ベクターは、配列番号６２～７３のいずれか１つのアミノ酸配列をコードする配列を含む。別の実施形態では、発現ベクターは、配列番号７４～８５のいずれか１つのアミノ酸配列をコードする配列を含む。

【0209】

抗体またはその断片を発現させるために、本明細書に記載の部分的または完全長の軽鎖および重鎖をコードするポリヌクレオチドを、遺伝子が転写および翻訳制御配列に作動可能に連結されるように発現ベクターに挿入する。したがって、本発明の一態様では、本明細書で定義されるポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターが提供される。一実施形態では、発現ベクターは、配列番号９９～１１０、例えば、配列番号９９、１００、１０１、１０５、１０６、１０７、または１０８のＶＨ領域を含む。別の実施形態では、発現ベクターは、配列番号９９～１１０、例えば、配列番号９９、１００、１０１、１０５、１０６、１０７、または１０８のＶＬ領域を含む。

【0210】

本明細書に記載のヌクレオチド配列は、翻訳、精製および検出を補助するためにアミノ酸残基をコードする追加の配列を含むことが理解されるが、使用される発現系に応じて、代替的な配列が使用され得る。例えば、配列番号９９～１１０の最初の（５’末端）９個のヌクレオチド、配列番号９９～１００、１０２～１０３、１０５～１１０の最後の（３’末端）３６個のヌクレオチド、または配列番号１０１および１０４の最後の（３’末端）３９個のヌクレオチドは、任意要素の配列である。代替の設計、翻訳、精製、または検出戦略が採用される場合、これらの任意要素の配列を除去し、改変し、または置換することができる。

【0211】

ポリペプチドのアミノ酸配列に関してサイレントであるが、特定の宿主における翻訳のための好ましいコドンを提供するポリペプチドをコードするＤＮＡまたはｃＤＮＡに対する変異を作製することができる。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、ならびに哺乳動物、具体的にはヒトにおける核酸の翻訳のための好ましいコドンが知られている。

【0212】

ポリペプチドの変異は、例えば、ポリペプチドをコードする核酸に対する置換、付加、または欠失によって達成され得る。ポリペプチドをコードする核酸に対する置換、付加または欠失は、例えば、エラープローンＰＣＲ、シャッフリング、オリゴヌクレオチド指向性突然変異誘発、アセンブリＰＣＲ、ＰＣＲ突然変異誘発、インビボ突然変異誘発、カセット突然変異誘発、再帰的アンサンブル突然変異誘発、指数的アンサンブル突然変異誘発、部位特異的突然変異誘発、遺伝子再アセンブリ、人工遺伝子合成、遺伝子部位飽和突然変異誘発（ＧＳＳＭ）、合成ライゲーション再アセンブリ（ＳＬＲ）、またはこれらの方法の組み合わせを含む多くの方法によって導入することができる。核酸に対する改変、付加または欠失は、組換え、再帰的配列組換え、ホスホチオエート改変ＤＮＡ突然変異誘発、ウラシル含有テンプレート突然変異誘発、ギャップ二本鎖突然変異誘発、点ミスマッチ修復突然変異誘発、修復不全宿主株突然変異誘発、化学的突然変異誘発、放射崩壊による突然変異誘発、欠失突然変異誘発、制限選択突然変異誘発、制限精製突然変異誘発、アンサンブル突然変異誘発、キメラ核酸多量体作製、またはそれらの組み合わせを含む方法によっても導入することができる。

【0213】

特に、人工遺伝子合成が使用され得る。本発明のポリペプチドをコードする遺伝子は、例えば、固相ＤＮＡ合成によって合成的に生成され得る。前駆テンプレートＤＮＡを必要とせずに、遺伝子全体をデノボで合成することができる。所望のオリゴヌクレオチドを得るために、ビルディングブロックを、生成物の配列によって必要とされる順序で、成長しつつあるオリゴヌクレオチド鎖に順次結合させる。鎖アセンブリが完了すると、生成物は、固相から溶液に放出され、脱保護され、収集される。生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって単離して、所望のオリゴヌクレオチドを高純度で得ることができる。

【0214】

発現ベクターとしては、例えば、プラスミド、レトロウイルス、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、およびエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）由来エピソームが挙げられる。ポリヌクレオチドは、ベクター内の転写および翻訳制御配列が、ポリヌクレオチドの転写および翻訳を調節するそれらの意図された機能を果たすように、ベクター内にライゲーションされる。発現および／または制御配列は、プロモーター、エンハンサー、転写終結因子、コード配列に対する開始コドン（すなわち、ＡＴＧ）５’、イントロンのスプライシングシグナル、および終止コドンを含み得る。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合するように選択される。配列番号９９～１１０は、合成リンカー（配列番号９８をコードする）によって接続されるＶＨ領域およびＶＬ領域を含む、本発明の一本鎖可変断片をコードするヌクレオチド配列を含む。本発明のポリヌクレオチドまたは発現ベクターは、ＶＨ領域、ＶＬ領域、またはそれらの両方（任意選択的に、リンカーを含む）を含み得ることが理解されるだろう。したがって、ＶＨ領域およびＶＬ領域をコードするポリヌクレオチドを別個のベクターに挿入することができ、代替的に、両方の領域をコードする配列が、同じ発現ベクターに挿入される。ポリヌクレオチドは、標準的な方法（例えば、ポリヌクレオチドおよびベクター上の相補的制限部位のライゲーション、または制限部位が存在しない場合の平滑末端ライゲーション）によって発現ベクターに挿入される。

【0215】

簡便なベクターは、本明細書に記載されるように、任意のＶＨ配列またはＶＬ配列を容易に挿入し、発現することができるように操作された適切な制限部位を有する、機能的に完全なヒトＣＨまたはＣＬ免疫グロブリン配列をコードするベクターである。発現ベクターは、宿主細胞からの抗体（またはその断片）の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることもできる。ポリヌクレオチドは、シグナルペプチドが抗体のアミノ末端にフレーム内で連結されるように、ベクターにクローニングされ得る。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質からのシグナルペプチド）であり得る。

【0216】

本発明の一態様では、本明細書で定義されるポリヌクレオチドまたは発現ベクターを含む細胞（例えば、宿主細胞）が提供される。細胞が、抗体またはその断片の軽鎖をコードする第１のベクターと、抗体またはその断片の重鎖をコードする第２のベクターとを含み得ることが理解されるであろう。代替的に、重鎖および軽鎖は、両方とも、細胞に導入された同じ発現ベクター上でコードされる。

【0217】

一実施形態では、ポリヌクレオチドまたは発現ベクターは、抗体またはその断片に融合した膜アンカーまたは膜貫通ドメインをコードし、抗体またはその断片は、細胞の細胞外表面上に提示される。

【0218】

形質転換は、ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための任意の既知の方法によるものであり得る。哺乳動物細胞に異種ポリヌクレオチドを導入するための方法は、当該技術分野で周知であり、デキストラン媒介性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介性トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リポソームへのポリヌクレオチドの封入、微粒子銃注射、および核へのＤＮＡの直接マイクロインジェクションが含まれる。加えて、核酸分子は、ウイルスベクターによって哺乳動物細胞に導入され得る。

【0219】

発現のための宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当該技術分野で周知であり、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株を含む。これらの細胞株としては、特に、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞がん細胞（例えば、ＨｅｐＧ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、および他のいくつかの細胞株が挙げられる。哺乳動物宿主細胞としては、ヒト、マウス、ラット、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、およびハムスターの細胞が挙げられる。特定の好ましい細胞株は、どの細胞株が高い発現レベルを有するかを決定することによって選択される。使用することが可能な他の細胞株は、Ｓｆ９細胞などの昆虫細胞株、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞、および真菌細胞である。ＳｃＦｖおよびＦｖ断片などの抗体の抗原結合断片は、当該技術分野で知られている方法を使用して、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて単離され、発現させることができる。

【0220】

抗体は、宿主細胞における抗体の発現、またはより好ましくは、宿主細胞が成長する培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製方法を使用して培養培地から回収することができる。

【0221】

本発明の抗体（または断片）は、例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （２０１２）４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓに開示される技術を使用して得られ、操作され得る。

【0222】

モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術を使用して、特定の抗体産生Ｂ細胞を、組織培養物で成長する能力および抗体鎖合成の非存在について選択される骨髄腫（Ｂ細胞がん）細胞と融合することによって産生することができる。

【0223】

決定された抗原に対して指向されるモノクローナル抗体は、例えば、
ａ）ハイブリドーマを形成するために、決定された抗原で以前に免疫化された動物の末梢血から得られたリンパ球を、不死細胞で、好ましくは骨髄腫細胞で不死化することと、
ｂ）形成された不死化細胞（ハイブリドーマ）を培養することと、所望の特異性を有する抗体を産生する細胞を回収することと、によって得ることができる。

【0224】

代替的に、ハイブリドーマ細胞の使用は必要ではない。本明細書に記載の標的抗原に結合することができる抗体は、例えば、当該技術分野で既知のファージディスプレイ、酵母ディスプレイ、リボソームディスプレイ、または哺乳動物ディスプレイ技術を使用して、通常の実践を介して好適な抗体ライブラリから単離され得る。したがって、モノクローナル抗体は、例えば、
ａ）動物のリンパ球、特に末梢血リンパ球（決定された抗原で以前に好適に免疫化したもの）から得られたベクター、特にファージ、より具体的には繊維状バクテリオファージ、ＤＮＡまたはｃＤＮＡ配列にクローニングするステップと、
ｂ）抗体の産生を可能にする条件下で、上述のベクターで原核細胞を形質転換するステップと、
ｃ）抗原親和性選択を行うことによって抗体を選択するステップと、
ｄ）所望の特異性を有する抗体を回収するステップと、を含むプロセスによって得ることができる。

【0225】

薬学的組成物
本発明のさらなる態様によれば、本明細書で定義される抗体またはその断片を含む組成物が提供される。かかる実施形態では、組成物は、抗体を、任意選択で他の賦形剤と組み合わせて、含み得る。１つ以上の追加の活性薬剤（例えば、本明細書で言及される疾患を治療するのに好適な活性薬剤）を含む組成物も含まれる。

【0226】

本発明のさらなる態様によれば、薬学的に許容される希釈剤または担体とともに、本明細書で定義される抗体またはその断片を含む薬学的組成物が提供される。本発明の抗体を、対象への投与に好適な薬学的組成物に組み込むことができる。典型的には、薬学的組成物は、本発明の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性である、任意およびすべての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤、ならびに吸収遅延剤などを含む。薬学的に許容される担体の例としては、水、生理食塩水、塩、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、ならびにそれらの組み合わせのうちの１つ以上が挙げられる。多くの場合、等張化剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを組成物中に含むことが好ましい。抗体またはその断片の保存期間または有効性を向上させる、湿潤剤または乳化剤、防腐剤または緩衝剤などの補助物質の湿潤する量または少量などの薬学的に許容される物質。

【0227】

本発明の組成物は、様々な形態であってよい。これらの組成物としては、例えば、液体、半固体および固体剤形、例えば、液体溶液（例えば、注射可能および注入可能な溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸剤、散剤、リポソームおよび坐剤が挙げられる。好ましい形態は、意図される投与様式および治療的用途に依存する。典型的な好ましい組成物は、注射可能および注入可能な溶液の形態である。

【0228】

好ましい投与様式は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、髄腔内）である。好ましい実施形態では、抗体は、静脈内注入または注射によって投与される。別の好ましい実施形態では、抗体は、筋肉内注射または皮下注射によって投与される。

【0229】

治療用組成物は、典型的には、製造条件および保存条件で無菌であり、かつ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、または高薬物濃度に好適な他の規則的な構造として製剤化することができる。

【0230】

本発明の薬学的組成物を、本明細書に記載の疾患の治療のための治療方法において、そのような疾患の治療に通常使用される他の確立された療法の補助として、またはそれと併せて使用することは、本発明の範囲内である。

【0231】

本発明のさらなる態様では、抗体、組成物または薬学的組成物は、少なくとも１つの活性薬剤と連続して、同時に、または別々に投与される。

【0232】

抗体またはその断片の使用
本発明のさらなる態様によれば、γδＴ細胞（特にＶδ１Ｔ細胞）の抗原認識、活性化、シグナル伝達または機能を研究するための、本明細書に記載の抗Ｖδ１抗体またはその断片の使用が提供される。本明細書に記載される場合、抗体は、γδＴ細胞機能を調べるために使用することができるアッセイにおいて活性であることが示されている。かかる抗体はまた、γδＴ細胞の増殖を誘導するために有用であってもよく、したがって、γδＴ細胞（例えばＶδ１Ｔ細胞）を拡大する方法において使用され得る。

【0233】

Ｖδ１鎖に結合する抗体を使用して、γδＴ細胞を検出することができる。例えば、抗体は、検出可能な標識またはレポーター分子で標識され得るか、または試料中のＶδ１Ｔ細胞を選択的に検出および／または単離するためのキャプチャーリガンドとして使用され得る。標識された抗体は、当該技術分野で既知の多くの方法、例えば、免疫組織化学およびＥＬＩＳＡでの用途が見出される。

【0234】

検出可能な標識またはレポーター分子は、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３５Ｓもしくは^１２５Ｉなどの放射性同位体、フルオレセインイソチオシアナートもしくはローダミンなどの蛍光部分もしくは化学発光部分、またはアルカリフォスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼなどの酵素であり得る。次いで、本発明の抗体に適用される蛍光標識は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）方法において使用され得る。

【0235】

抗体またはその断片を生成する方法
本明細書には、抗体を生成する際に使用するための可溶性ＴＣＲが記載される。したがって、本発明の一態様によれば、抗Ｖδ１抗体またはその断片を生成する際に使用するための、配列番号１２３と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗原が提供される。また、抗Ｖδ１抗体またはその断片を生成する際に使用するための、配列番号１２３と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗原の使用も提供される。一実施形態では、単離された抗原は、配列番号１２３を含む。

【0236】

本発明の一態様によれば、抗Ｖδ１抗体またはその断片を生成する方法であって、
（ｉ）ＴＣＲデルタ可変１（Ｖδ１）アミノ酸配列を含む一連の抗原を設計することであって、Ｖδ１のＣＤＲ３配列が、その一連のすべての抗原について同じである、設計することと、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）で設計した第１の抗原を、（例えば、ファージディスプレイによって）抗体ライブラリに曝露することと、
（ｉｉｉ）抗原に結合する抗体またはその断片を単離することと、
（ｉｖ）単離された抗体またはその断片を、ステップ（ｉ）で設計した第２の抗原に曝露することと、
（ｖ）第１および第２の抗原の両方に結合する抗体またはその断片を単離することと、を含む、方法が提供される。

【0237】

第１の抗原および第２の抗原の両方に結合する抗体（またはその断片）を単離することは、可変ドメイン内の配列を認識する抗体を提供することを目的としており、これは生殖系列によってコードされ、したがってすべてのクローンにおいて同じであり、したがって、γδＴ細胞のより広いサブセットを認識する抗体を提供する。本明細書に記載の一連の抗原はまた、異なるフォーマットの抗原（すなわち、ＴＣＲデルタ可変１鎖）を含んでもよい。したがって、上述の抗原は、合成／組換え抗原であり得る。例えば、抗原は、ロイシンジッパーまたはＦｃ融合物として提示され得る。一実施形態では、ＴＣＲデルタ可変１（ＴＲＤＶ１）アミノ酸配列は、配列番号１２３を含む。好適な抗原配列は、例えば、ＩＭＭＵＮＯＧＥＮＥＴＩＣＳ情報システムデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）に記載されている配列を使用して設計してよい。

【0238】

抗原はまた、タンパク質発現を補助するための追加の特徴を含み得る。例えば、本明細書に記載の組換えＴＣＲ抗原は、ＴＣＲαまたはＴＣＲβ定常領域に融合され得る（Ｘｕ ｅｔ ａｌ．（２０１１）ＰＮＡＳ １０８：２４１４－２４１９を参照されたい）。

【0239】

一実施形態では、本方法は、単離された抗体またはその断片を、異なるデルタ可変鎖を有するγδ ＴＣＲを含む第２の一連の抗原、例えば、デルタ可変２（Ｖδ２）またはデルタ可変３（Ｖδ３）に曝露することと、次いで、第２の一連の抗原にも結合する抗体またはその断片の選択を解除することと、をさらに含む。

【0240】

さらなる実施形態では、異なるデルタ可変鎖を有するγδ ＴＣＲを含む第２の一連の抗原は、第１の一連の抗原と同じＣＤＲ３配列を含む。したがって、すべての抗原は、（Ｖδ１からの）同じＣＤＲ３配列を含む。

【0241】

一実施形態では、第１および／または第２の一連の抗原は、ロイシンジッパーおよび／またはＦｃ融合物として提示される。

【0242】

一実施形態では、一連の抗原は、ヘテロ二量体および／またはホモ二量体フォーマットである。

【0243】

さらなる実施形態では、一連の抗原は、標的（すなわち、ＴＣＲデルタ可変１鎖）とともに、対のＴＣＲ可変鎖を含む。特定の実施形態では、対のＴＣＲ可変鎖は、可変γ（Ｖγ）鎖である（すなわち、抗原は、ヘテロ二量体フォーマットである）。一実施形態では、Ｖδ１鎖およびＶγ鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって共有結合される。さらなる実施形態では、Ｖδ１鎖およびＶγ鎖は、特異的なヘテロ二量体化相互作用（例えば、ロイシンジッパー）によって対合される。代替的な実施形態では、Ｖδ１鎖およびＶγ鎖は、単鎖フレーム内融合物を含む。特定の実施形態では、Ｖδ１鎖は、Ｖγ鎖に対してＮ末端である。代替的な実施形態では、Ｖδ１鎖は、Ｖγ鎖に対してＣ末端である。さらなる実施形態では、一本鎖フレーム内融合物は、内部リンカー配列を含む。一実施形態では、第１の一連における抗原は、Ｖδ１鎖と、Ｖγ２、Ｖγ４、またはＶγ８などの異なるＶγ鎖とを含むヘテロ二量体フォーマットである。すべてのフォーマットに結合する抗体を選択することで、上述の単離された抗体またはその断片が、ヘテロ二量体に存在するパートナー鎖とは独立して、Ｖδ１鎖を認識することが確実になる。

【0244】

代替的な実施形態では、対合ＴＣＲ可変鎖は、別のＶδ鎖である。さらなる実施形態では、Ｖδ鎖は、標的と同じである（すなわち、抗原は、ホモ二量体フォーマットである）。

【0245】

本明細書で提供される実施例２は、使用され得る一連の抗原の例を記載する。（第１の）一連の抗原が、ＴＲＤＶ１（Ｖδ１）が存在する抗原（例えば、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３およびＦｃ１／１）を含み、第２の一連の抗原が、Ｖδ１が存在しない抗原（例えば、Ｌ４、Ｆ９、Ｆｃ３／３、Ｆｃ４／４、Ｆｃ８／８）を含むことが理解されるであろう。

【0246】

さらなる実施形態では、一連の抗原は、ＴＣＲ定常領域にフレーム内で融合された標的（すなわち、ＴＣＲデルタ可変１鎖）を含む。例えば、上述のＴＣＲ定常領域は、Ｖδ１鎖のＣ末端にフレーム内で融合され得る。一実施形態では、ＴＣＲ定常領域は、ヒトＴＣＲ定常領域であり得る。一実施形態では、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲαまたはＴＣＲβ定常領域から選択される。別の実施形態では、定常領域は、ＴＣＲγ定常領域である。さらに別の実施形態では、一連の抗原は、さらなる第２のＴＣＲ定常領域を含んでいてもよく、第２のＴＣＲ定常領域は、対合ＴＣＲ可変鎖にフレーム内で融合される。さらなる実施形態では、第２のＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲαまたはＴＣＲβ定常領域から選択される。さらなる実施形態では、定常領域は、ＴＣＲγ定常領域である。

【0247】

本明細書に記載の一連の抗原は、可溶性または連結／融合形態のいずれかで提示され得るか、または細胞膜と関連付けられ得ることが理解されるであろう。例えば、提示目的のために、一連の抗原は、無機または有機材料（例えば、ビーズ、プレート、カラム、またはファージ）に融合され得るか、もしくはつなぎ止められ得るか、または細胞表面上で発現され得る。

【0248】

本発明の様々な実施形態によれば、ＴＣＲデルタ可変１（Ｖδ１）アミノ酸配列を含む一連の抗原は、すべての抗原について同じであるＶδ１のＣＤＲ３配列を含む。一実施形態では、ＣＤＲ３配列は、ＲＣＳＢ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋエントリ：３ＯＭＺのＣＤＲ３配列に由来する。

【0249】

本発明のさらなる態様によれば、本明細書で定義される方法によって得られる抗体が提供される。

【0250】

節
本発明およびその好ましい態様を定義する一連の節は、以下のとおりである。

【0251】

節１．単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片であって、
配列番号２～２５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３、
配列番号２６～３７および配列Ａ１～Ａ１２（表２の）のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２、ならびに／または
配列番号３８～６１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１のうちの１つ以上を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0252】

節２．配列番号２～１３、例えば配列番号２、３、または４のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、節１に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0253】

節３．配列番号２６～３７、例えば配列番号２６、２７、または２８のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２を含むＶＨ領域を含む、節１または節２に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0254】

節４．配列番号３８～４９、例えば配列番号３８、３９、または４０のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１を含むＶＨ領域を含む、節１～３のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0255】

節５．配列番号２の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２６の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３８の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＨ領域を含む、節１～４のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0256】

節６．配列番号３の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２７の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３９の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＨ領域を含む、節１～４のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0257】

節７．配列番号４の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２８の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４０の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＨ領域を含む、節１～４のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0258】

節８．配列番号５の配列を含むＣＤＲ３と、配列番号２９の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号４１の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＨ領域を含む、節１～４のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0259】

節９．配列番号１４～２５、例えば配列番号１４、１５、または１６のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、節１～８のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0260】

節１０．配列Ａ１～Ａ１２、例えば配列番号Ａ１、Ａ２、またはＡ３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ２を含むＶＬ領域を含む、節１～９のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0261】

節１１．配列番号５０～６１、例えば配列番号５０、５１、または５２のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲ１を含むＶＬ領域を含む、節１～１０のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0262】

節１２．配列番号１４の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ１の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５０の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＬ領域を含む、節１～１１のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0263】

節１３．配列番号１５の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ２の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５１の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＬ領域を含む、節１～１１のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0264】

節１４．配列番号１６の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ３の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５２の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＬ領域を含む、節１～１１のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0265】

節１５．配列番号１７の配列を含むＣＤＲ３と、配列Ａ４の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号５３の配列を含むＣＤＲ１と、を含む、ＶＬ領域を含む、節１～１１のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0266】

節１６．節５に定義されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含むＶＨ領域と、節１２に定義されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含むＶＬ領域と、を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0267】

節１７．節６に定義されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含むＶＨ領域と、節１３に定義されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含むＶＬ領域と、を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0268】

節１８．節７に定義されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含むＶＨ領域と、節１４に定義されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含むＶＬ領域と、を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0269】

節１９．節８に定義されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含むＶＨ領域と、節１５に定義されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含むＶＬ領域と、を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0270】

節２０．配列番号６２～８５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0271】

節２１．配列番号６２～７３のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む、節２０に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0272】

節２２．ＶＨ領域が、配列番号６２、６３、または６４のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、節２１に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0273】

節２３．配列番号７４～８５のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む、節２０～２２のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0274】

節２４．ＶＬ領域が、配列番号７４、７５、または７６のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、節２３に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0275】

節２５．配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む、節２０～２４のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0276】

節２６．配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む、節２０～２４のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0277】

節２７．配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む、節２０～２４のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0278】

節２８．配列番号６８のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む、節２０～２４のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0279】

節２９．配列番号６９のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む、節２０～２４のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0280】

節３０．配列番号７０のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む、節２０～２４のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0281】

節３１．配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨ領域と、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＬ領域と、を含む、節２０～２４のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0282】

節３２．ＶＨ領域およびＶＬ領域が、ポリペプチドリンカーなどのリンカーによって連結されている、節２０～３１のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0283】

節３３．リンカーが、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎフォーマットを含み、ｎ＝１～８である、節３２に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0284】

節３４．リンカーが、［（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎ（Ｇｌｙ_３ＡｌａＳｅｒ）_ｍ］_ｐリンカーを含み、ｎ、ｍおよびｐ＝１～８である、節３２または節３３に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0285】

節３５．リンカーが、配列番号９８を含む、節３２～３４のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0286】

節３６．リンカーが、配列番号９８からなる、節３５に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0287】

節３７．配列番号８６～９７のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0288】

節３８．配列番号８６～９７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、節３７に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0289】

節３９．配列番号８６を含む、節３７または節３８に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0290】

節４０．配列番号８７を含む、節３７または節３８に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0291】

節４１．配列番号８８を含む、節３７または節３８に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0292】

節４２．配列番号９２を含む、節３７または節３８に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0293】

節４３．配列番号９３を含む、節３７または節３８に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0294】

節４４．配列番号９４を含む、節３７または節３８に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0295】

節４５．配列番号９５を含む、節３７または節３８に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0296】

節４６．節１～４５のいずれか１つに定義される抗体またはその断片と同一または本質的に同一のエピトープに結合するか、またはそれと競合する、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0297】

節４７．ヒトの単離された抗ＴＣＲデルタ可変１（抗Ｖδ１）抗体またはその断片であって、
（ｉ）配列番号１の３～２０、および／または
（ｉｉ）配列番号１の３７～７７のアミノ酸領域内の１つ以上のアミノ酸残基を含むγδＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の可変デルタ１（Ｖδ１）鎖のエピトープに結合する、ヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0298】

節４８．エピトープが、配列番号１のアミノ酸残基３、５、９、１０、１２、１６、１７、２０、３７、４２、５０、５３、５９、６２、６４、６８、６９、７２、または７７のうちの少なくとも１つを含む、節４７に定義されるヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0299】

節４９．エピトープが、配列番号１のアミノ酸領域５～２０および６２～７７、５０～６４、３７～５３および５９～７２、５９～７７、または３～１７および６２～６９内の１つ以上のアミノ酸残基を含む、節４７または節４８に定義されるヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0300】

節５０．エピトープが、配列番号１のアミノ酸領域５～２０および６２～７７、５０～６４、３７～５３および５９～７２、５９～７７、または３～１７および６２～６９内の１つ以上のアミノ酸残基からなる、節４９に定義されるヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0301】

節５１．エピトープが、配列番号１のアミノ酸領域５～２０および６２～７７内の１つ以上のアミノ酸残基を含む、節４７～５０のいずれか１つに定義されるヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0302】

節５２．エピトープが、配列番号１のアミノ酸領域５０～６４内の１つ以上のアミノ酸残基を含む、節４７～５０のいずれか１つに定義されるヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0303】

節５３．エピトープが、配列番号１のアミノ酸領域３７～５３および５９～７７内の１つ以上のアミノ酸残基を含む、節４７～５０のいずれか１つに定義されるヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0304】

節５４．エピトープが、γδＴ細胞の活性化エピトープである、節４６～５３のいずれか１つに定義されるヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0305】

節５５．活性化エピトープの結合が、（ｉ）γδ ＴＣＲを下方調節し、（ｉｉ）γδＴ細胞の脱顆粒を活性化し、および／または（ｉｉｉ）γδＴ細胞死滅を活性化する、節５４に定義されるヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0306】

節５６．γδ ＴＣＲのＶδ１鎖のＶ領域中のエピトープにのみ結合する、節４７～５５のいずれか１つに定義されるヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0307】

節５７．γδ ＴＣＲのＶδ１鎖のＣＤＲ３中に見出されるエピトープに結合しない、節４７～５６のいずれか１つに定義されるヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0308】

節５８．配列番号１のアミノ酸領域９１～１０５（ＣＤＲ３）内のエピトープに結合しない、節５７に定義されるヒトの単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0309】

節５９．表面プラズモン共鳴によって測定される場合、１．５×１０^－７Ｍ未満の結合親和性（ＫＤ）で、γδＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の可変デルタ１（Ｖδ１）鎖に結合する、節１～５８のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0310】

節６０．ＫＤが、１．３×１０^－７Ｍ未満またはそれより小さい、例えば１．０×１０^－７Ｍ未満、特に５．０×１０^－８Ｍ未満である、節５９に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0311】

節６１．結合時のγδ ＴＣＲの下方調節についてのＥＣ５０値が０．５μｇ／ｍｌ未満である、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0312】

節６２．結合時のγδ ＴＣＲの下方調節についてのＥＣ５０値が０．０６μｇ／ｍｌ未満である、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0313】

節６３．結合時のγδＴ細胞脱顆粒についてのＥＣ５０値が０．０５μｇ／ｍｌ未満である、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0314】

節６４．結合時のγδＴ細胞脱顆粒についてのＥＣ５０値が０．００５μｇ／ｍｌ未満、例えば、０．００２μｇ／ｍｌ未満である、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0315】

節６５．γδＴ細胞脱顆粒ＥＣ５０値が、ＣＤ１０７ａ発現を検出することによって測定される、節６３または節６４に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0316】

節６６．結合時のγδＴ細胞死滅についてのＥＣ５０値が０．５μｇ／ｍｌ未満である、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0317】

節６７．結合時のγδＴ細胞死滅についてのＥＣ５０値が０．０５５μｇ／ｍｌ未満、例えば、０．０２０μｇ／ｍｌ未満である、単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0318】

節６８．ＥＣ５０値が、フローサイトメトリーを使用して測定される、節６１～６７のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0319】

節６９．ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、可変ドメイン（例えば、ＶＨもしくはＶＬ）、ダイアボディ、ミニボディ、または全長抗体である、節１～６８のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0320】

節７０．ｓｃＦｖ、または全長抗体、例えば、ＩｇＧ１である、節６９に定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0321】

節７１．配列番号１１１～１２２のいずれか１つのものと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、節７０に定義される単離された抗Ｖδ１抗体。

【0322】

節７２．配列番号１１１～１２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、節７０または節７１に定義される単離された抗Ｖδ１抗体。

【0323】

節７３．配列番号１１１を含む、節７１または節７２に定義される単離された抗Ｖδ１抗体。

【0324】

節７４．配列番号１１２を含む、節７１または節７２に定義される単離された抗Ｖδ１抗体。

【0325】

節７５．配列番号１１６を含む、節７１または節７２に定義される単離された抗Ｖδ１抗体。

【0326】

節７６．配列番号１１７を含む、節７１または節７２に定義される単離された抗Ｖδ１抗体。

【0327】

節７７．配列番号１１８を含む、節７１または節７２に定義される単離された抗Ｖδ１抗体。

【0328】

節７８．配列番号１１９を含む、節７１または節７２に定義される単離された抗Ｖδ１抗体。

【0329】

節７９．配列番号１２０を含む、節７１または節７２に定義される単離された抗Ｖδ１抗体。

【0330】

節８０．ヒトである、節１～７９のいずれか１つに定義される単離された抗Ｖδ１抗体またはその断片。

【0331】

節８１．節１～８０のいずれか１つに定義される抗Ｖδ１抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチド配列。

【0332】

節８２．配列番号９９～１１０と少なくとも７０％の配列同一性を有する配列を含む抗Ｖδ１抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチド配列。

【0333】

節８３．配列番号９９～１１０の配列からなる抗Ｖδ１抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチド配列。

【0334】

節８４．節８１～８３のいずれか１つに定義されるポリヌクレオチド配列を含む発現ベクター。

【0335】

節８５．配列番号９９～１１０のＶＨ領域を含む発現ベクター。

【0336】

節８６．配列番号９９～１１０のＶＬ領域を含む発現ベクター。

【0337】

節８７．節８５のＶＨ領域と節８６のＶＬ領域とを含む発現ベクター。

【0338】

節８８．節８１～８３のいずれか１つに定義されるポリヌクレオチド配列または節８４～８７のいずれか１つに定義される発現ベクターを含む細胞。

【0339】

節８９．節８５に定義される第１の発現ベクターと、節８６に定義される第２の発現ベクターと、を含む、細胞。

【0340】

節９０．節８７に定義される発現ベクターを含む細胞。

【0341】

節９１．ポリヌクレオチドまたは発現ベクターが、その抗体またはその断片に融合した膜アンカーまたは膜貫通ドメインをコードし、その抗体またはその断片が、細胞の細胞外表面上に提示される、節８８～９０のいずれか１つに定義される細胞。

【0342】

節９２．節１～８０のいずれか１つに定義される抗体またはその断片を含む組成物。

【0343】

節９３．薬学的に許容される希釈剤または担体とともに、節１～８０のいずれか１つに定義される抗体またはその断片を含む、薬学的組成物。

【0344】

節９４．抗Ｖδ１抗体またはその断片を生成する際に使用するための、配列番号１２３と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗原。

【0345】

節９５．抗Ｖδ１抗体またはその断片を生成する方法であって、
（ｉ）ＴＣＲデルタ可変１（ＴＲＤＶ１）アミノ酸配列を含む一連の抗原を設計することであって、ＴＲＤＶ１のＣＤＲ３配列が、その一連のすべての抗原について同じである、設計することと、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）で設計した第１の抗原を、抗体ライブラリに曝露することと、
（ｉｉｉ）抗原に結合する抗体またはその断片を単離することと、
（ｉｖ）単離された抗体またはその断片を、ステップ（ｉ）で設計した第２の抗原に曝露することと、
（ｖ）第１および第２の抗原の両方に結合する抗体またはその断片を単離することと、を含む、方法。

【0346】

節９６．単離された抗体またはその断片を、異なるデルタ可変鎖を有するγδ ＴＣＲを含む第２の一連の抗原、例えば、ＴＣＲデルタ可変２（ＴＲＤＶ２）またはＴＣＲデルタ可変３（ＴＲＤＶ３）に曝露することと、次いで、第２の一連の抗原にも結合する抗体またはその断片の選択を解除することと、をさらに含む、節９５に定義される方法。

【0347】

節９７．第１および／または第２の一連の抗原が、ロイシンジッパーおよび／またはＦｃ融合物として提示される、節９５または節９６に定義される方法。

【0348】

節９８．一連の抗原が、ヘテロ二量体および／またはホモ二量体フォーマットである、節９５～９７のいずれか１つに定義される方法。

【0349】

節９９．節９５～９８のいずれか１つに定義される方法によって得られた抗体。

【0350】

本発明の他の特徴および利点は、本明細書に提供される説明から明らかであろう。しかしながら、様々な変更および修正が当業者には明白になるので、本発明の好ましい実施形態を示す一方で、説明および特定の実施例は例示としてのみ与えられることが理解されるべきである。ここで、本発明は、以下の非限定的な実施例を使用して説明される。

【実施例】

【0351】

実施例１．材料および方法
ヒト抗体の発見
ヒトファージディスプレイを用いて、本明細書に記載されるヒト抗ヒト可変Ｖδ１＋ドメイン抗体を生成した。ライブラリは、Ｓｃｈｏｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ（Ｇｅｎｏｍｅ ｂｉｏｌｏｇｙ ２００７，８（１１）：Ｒ２５４）に記載されるように構築され、約４００億個のヒトクローンのライブラリを示す一本鎖断片可変（ｓｃＦｖ）を含んでいた。このライブラリを、本明細書に記載のように、抗原、方法、選択、選択解除、スクリーニング、および特徴決定戦略を使用してスクリーニングした。

【0352】

抗原調製
以下の実施例で使用されるＴＣＲαおよびＴＣＲβ定常領域を含む可溶性ｙδ ＴＣＲヘテロ二量体の設計は、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．（２０１１）ＰＮＡＳ １０８：２４１４－２４１９に従って生成された。ＶγまたはＶδドメインを、膜貫通ドメインを欠くＴＣＲαまたはＴＣＲβ定常領域、続いてロイシンジッパー配列またはＦｃ配列、およびヒスチジンタグ／リンカーにフレーム内で融合させた。

【0353】

発現構築物を哺乳動物ＥＸＰＩ ＨＥＫ２９３懸濁細胞中で（ヘテロ二量体の単一または共トランスフェクションのいずれかとして）一過性トランスフェクトした。分泌された組換えタンパク質を回収し、親和性クロマトグラフィーによって培養物上清から精製した。単量体抗原の良好な回復を確実にするために、試料を、分取サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用してさらに精製した。精製した抗原を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって純度について分析し、分析ＳＥＣによって凝集状態を分析した。

【0354】

抗原機能検証
ＤＥＬＦＩＡイムノアッセイ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）およびＲＥＡ１７３－Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ抗Ｖδ１抗体を使用したγδＴ細胞との競合におけるフローベースアッセイにおいて、デルタ可変１（Ｖδ１）鎖を含有する抗原の特異性を確認した。

【0355】

解離増強型ランタニド蛍光イムノアッセイ（ＤＥＬＦＩＡ）
抗原の特異性の確認のために、プレートに直接コーティングされた抗原（４℃で一晩、５０μＬ ＰＢＳ中の３μｇ／ｍＬの抗原）でＤＥＬＦＩＡイムノアッセイを行い（Ｎｕｎｃ番号４３７１１１）、３００ｎＭから始まる一次抗体の連続希釈を行った。検出のために、ＤＥＬＦＩＡ Ｅｕ－Ｎ１抗ヒトＩｇＧ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ番号１２４４－３３０）を、５０μＬの３％のＭＰＢＳ（ＰＢＳ＋３％（ｗ／ｖ）脱脂乳粉末）中で１／５００希釈して、二次抗体として使用した。５０μＬのＤＥＬＦＩＡ増強溶液（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ番号４００１－００１０）を用いて開発した。

【0356】

目的の抗体の親和性ランキングを、ＤＥＬＦＩＡイムノアッセイを使用して行い、このアッセイでは、プレート上にコーティングされたプロテインＧを介して抗体をキャプチャーし、可溶性ビオチン化Ｌ１（ＤＶ１～ＧＶ４）抗原を、５０μＬ（３Ｍ ＰＢＳ）中で５ｎＭで添加した。５０μＬのストレプトアビジン－Ｅｕ（アッセイ緩衝液中で１：５００、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を検出するために使用し、ＤＥＬＦＩＡ増強溶液を用いてシグナルを開発した。Ｄ１．３ ｈＩｇＧ１（Ｅｎｇｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：２１２９－２１３６に記載される）を陰性対照として使用した。

【0357】

ファージディスプレイ選択の出力を、ｓｃＦｖ発現ベクターｐＳＡＮＧ１０にサブクローニングした（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６：４６）。可溶性ｓｃＦｖを発現させ、ＤＥＬＦＩＡで直接固定化された標的に結合するためにスクリーニングした。ヒットは、３０００蛍光単位を超えるＤＥＬＦＩＡシグナルとして定義された。

【0358】

抗体調製
選択されたｓｃＦｖを、市販のプラスミドを使用してＩｇＧ１フレームワークにサブクローニングした。ｅｘｐｉ２９３Ｆ懸濁細胞を、抗体発現のために上述のプラスミドでトランスフェクトした。便宜上、別段の記載がない限り、これらの実施例で特性決定される抗体は、ｓｃＦｖとしてファージディスプレイから選択されるＩｇＧ１フォーマット化抗体を指す。しかしながら、本発明の抗体は、前述のように任意の抗体フォーマットであってもよい。

【0359】

抗体精製
ＩｇＧ抗体を、プロテインＡクロマトグラフィーを使用して上清からバッチ精製した。次いで、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して、濃縮プロテインＡ溶出液を精製した。ＥＬＩＳＡ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用して、精製したＩｇＧの品質を分析した。

【0360】

γδＴ細胞調製
濃縮されたγδＴ細胞の集合体を、国際公開第２０１６／１９８４８０号（すなわち、血液由来γδＴ細胞）または国際公開第２０２０／０９５０５９号（すなわち、皮膚由来γδＴ細胞）に記載される方法に従って調製した。簡単に述べると、血液由来γδＴ細胞については、ＰＢＭＣを血液から採取し、αβＴ細胞の磁気枯渇を行った。次に、αβ枯渇ＰＢＭＣを、ＯＫＴ－３（またはそれぞれの抗Ｖδ１抗体）、ＩＬ－４、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２１およびＩＬ－１βの存在下で７日間、ＣＴＳ ＯｐＴｍｉｓｅｒ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）中で培養した。培養７日目に、培地にＯＫＴ－３（またはそれぞれの抗Ｖδ１抗体）、ＩＬ－２１およびＩＬ－１５をさらに４日間補充した。培養１１日目に、培地にＯＫＴ－３（またはそれぞれの抗Ｖδ１抗体）およびＩＬ－１５をさらに３日間補充した。培養１４日目に、培地の半分を新鮮な完全ＯｐＴｍｉｓｅｒに交換し、ＯＫＴ－３（またはそれぞれの抗Ｖδ１抗体）、ＩＬ－１５およびＩＦＮ－γを補充した。培養１７日目以降、培養物にＯＫＴ－３（またはそれぞれの抗Ｖδ１抗体）およびＩＬ－１５を３～４日毎に補充し、培地の半分を７日毎に新鮮な培地と交換した。

【0361】

皮膚由来γδＴ細胞について、皮下脂肪を除去することによって皮膚試料を調製し、３ｍｍ生検パンチを使用して複数のパンチを作製する。パンチを、カーボンマトリックスグリッド上に配置し、Ｇ－ＲＥＸ６（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ）のウェルに配置する。各ウェルを、ＡＩＭ－Ｖ培地（Ｇｉｂｃｏ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＣＴＳ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＩＬ－２、およびＩＬ－１５を含有する完全単離培地で満たす。培養の最初の７日間、アムホテリシンＢ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含有する完全単離培地を使用した（「＋Ａｍｐ」）。上側培地を穏やかに吸引し、プレートまたはバイオリアクターの底部の細胞を乱さないようにしつつ、２倍の完全単離培地（ＡＭＰを含まない）で置き換えることによって、７日毎に培地を変更した。次いで、培養中の３週間を超えて、得られた放出された細胞を、新鮮な組織培養容器および新鮮な培地（例えば、ＡＩＭ－Ｖ培地またはＴｅｘＭＡＸ培地（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ））に、さらに、組換えＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１５、およびＩＬ－２１を加えたものに収穫前に通す。任意選択で、培養物内にも存在するαβ Ｔ細胞を、αβ Ｔ細胞枯渇キットおよび関連するプロトコル、例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉによって提供されるプロトコルを用いて除去する。さらなる参考文献については、国際公開第２０２０／０９５０５９号を参照されたい。

【0362】

γδＴ細胞結合アッセイ
γδＴ細胞に対する抗体の結合を、固定濃度の精製抗体を２５００００個のγδＴ細胞とともにインキュベーションすることによって試験した。このインキュベーションは、Ｆｃ受容体を介した抗体の非特異的結合を防止するために、遮断条件下で実施した。検出は、ヒトＩｇＧ１に対する二次的な蛍光染料コンジュゲート抗体の添加によって行った。陰性対照については、ａ）アイソタイプ抗体のみ（組換えヒトＩｇＧ）、ｂ）蛍光染料コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ抗体のみ、およびｃ）ａ）およびｂ）の組み合わせを用い、細胞を調製した。完全に染色されていない細胞の対照ウェルも調製し、分析した。陽性対照として、精製したマウスモノクローナルＩｇＧ２抗ヒトＣＤ３抗体および精製したマウスモノクローナルＩｇＧ１抗ヒトＴＣＲ Ｖδ１抗体を２種類の異なる濃度で使用し、蛍光染料コンジュゲートヤギ抗マウス二次抗体で染色した。ＦＩＴＣチャネルにおける低濃度陽性対照の平均蛍光強度が、最高陰性対照の少なくとも１０倍である場合、そのアッセイを許容した。

【0363】

ＳＰＲ分析
アミン大容量チップを備えるＭＡＳＳ－２機器（いずれもドイツのＳｉｅｒｒａ Ｓｅｎｓｏｒｓ）を使用して、ＳＰＲ分析を行った。１５ｎＭのＩｇＧを、プロテインＧを介してアミン高容量チップにキャプチャーした（ＴＳ８．２については１００ｎＭ）。Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）抗原を、以下のパラメータを用いて、２０００ｎＭ～１５．６２５ｎＭの１：２段階希釈で細胞の上に飛ばした。１８０秒の会合、６００秒の解離、流量３０μＬ／分、操作緩衝液ＰＢＳ＋０．０２％ Ｔｗｅｅｎ２０。すべての実験は、室温で、ＭＡＳＳ－２機器で行った。ソフトウェアＳｉｅｒｒａ Ａｎａｌｙｚｅｒ ３．２を使用して、Ｌａｎｇｍｕｉｒ１：１の結合に従って定常状態フィッティングを決定した。

【0364】

コンパレータ抗体
記載した試験アッセイにおいて、本発明の抗体を市販の抗体と比較した。

【0365】

γδ ＴＣＲ下方調節および脱顆粒アッセイ
試験抗体ロードしたか、またはロードしていないＴＨＰ－１（ＴＩＢ－２０２（商標）、ＡＴＣＣ）標的細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ（商標）Ｏｒａｎｇｅ ＣＭＴＭＲ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｃ２９２７）で標識し、ＣＤ１０７ａ抗体（抗ヒトＣＤ１０７ａ ＢＶ４２１（クローンＨ４Ａ３）ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５６２６２３）存在下、２：１の比率でγδＴ細胞とともにインキュベーションした。２時間のインキュベーションの後、フローサイトメトリーを使用して、γδＴ細胞に対するγδ ＴＣＲの表面発現（ＴＣＲの下方調節を測定するため）およびＣＤ１０７ａの発現（脱顆粒を測定するため）を評価した。

【0366】

死滅アッセイ
ガンマデルタＴ細胞の死滅活性と、試験抗体がγδＴ細胞の死滅活性に及ぼす効果を、フローサイトメトリーによって利用した。比率２０：１のγδＴ細胞およびＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ（商標）Ｏｒａｎｇｅ ＣＭＴＭＲ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｃ２９２７）標識されたＴＨＰ－１細胞（抗体ロードしたか、またはロードしていない）をインビトロで４時間共培養した後、Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ｅＦｌｕｏｒ（商標）５２０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、５２０ ６５－０８６７－１４）で染色して、生存標的ＴＨＰ－１細胞と死亡標的ＴＨＰ－１細胞とを区別した。試料取得中、標的細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ（商標）Ｏｒａｎｇｅ ＣＭＴＭＲ陽性に対してゲーティングし、生存率染料の取り込みに基づき、細胞死について調べた。ＣＭＴＭＲおよびｅＦｌｕｏｒ（商標）５２０二重陽性細胞は、死亡標的細胞として認識された。γδＴ細胞の死滅活性は、死亡標的細胞の％として提示された。

【0367】

エピトープマッピング
エピトープマッピングのために使用されるすべてのタンパク質試料（抗原Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）および抗体１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７、１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４、１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８、１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５および１１４１＿Ｐ０１＿Ｅ０１）を、高質量ＭＡＬＤＩを使用して、タンパク質の完全性および凝集レベルについて分析した。

【0368】

高分解能でＬ１（ＤＶ１－ＧＶ４）／１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７、Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）／１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４、Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）／１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８、Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）／１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５、およびＬ１（ＤＶ１－ＧＶ４）／１１４１＿Ｐ０１＿Ｅ０１複合体のエピトープを決定するために、タンパク質複合体を重水素化架橋剤とともにインキュベートし、トリプシン、キモトリプシン、Ａｓｐ－Ｎ、エラスターゼおよびテルモリシンを使用して多酵素タンパク質分解を行った。架橋したペプチドの濃縮後、試料を高分解能質量分析（ｎＬＣ－ＬＴＱ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳ）によって分析し、生成されたデータをＸＱｕｅｓｔおよびＳｔａｖｒｏｘソフトウェアを使用して分析した。

【0369】

実施例２．抗原設計
ガンマデルタ（γδ）Ｔ細胞は、ＣＤＲ３多クローン性を有するポリクローナルである。（ＣＤＲ３配列は、ＴＣＲクローン毎に異なるであろうため）生成された抗体がＣＤＲ３配列に対して選択される状況を回避するために、抗原設計は、異なるフォーマットで一貫したＣＤＲ３を維持することを伴う。この設計は、可変ドメイン内の配列を認識する抗体を生成することを目的としており、これは生殖系列によってコードされ、したがってすべてのクローンにおいて同じであり、したがって、γδＴ細胞のより広いサブセットを認識する抗体を提供する。

【0370】

抗原調製プロセスの別の重要な態様は、タンパク質としての発現に適した抗原を設計することであった。γδ ＴＣＲは、鎖間および鎖内ジスルフィド結合を有するヘテロ二量体を伴う複合体タンパク質である。ロイシンジッパー（ＬＺ）フォーマットおよびＦｃフォーマットを使用して、ファージディスプレイ選択において使用される可溶性ＴＣＲ抗原を生成した。ＬＺおよびＦｃフォーマットの両方が良好に発現し、ＴＣＲ（特にヘテロ二量体ＴＣＲ、例えばＶδ１Ｖγ４）の提示に成功した。

【0371】

γδ ＴＣＲの公開データベースエントリからのＣＤＲ３配列が、タンパク質として良好に発現したことが見出された（ＲＣＳＢ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋエントリ：３ＯＭＺ）。したがって、これを抗原調製のために選択した。

【0372】

デルタ可変１鎖を含有する抗原は、ヘテロ二量体として（すなわち、異なるγ可変鎖「Ｌ１」、「Ｌ２」、「Ｌ３」と組み合わせて）ＬＺフォーマットで、また、ヘテロ二量体として（「Ｆ１」、「Ｆ２」、「Ｆ３」）、またはホモ二量体として（すなわち、別のデルタ可変１鎖「Ｆｃ１／１」と組み合わせて）のいずれかでＦｃフォーマットで発現した。抗原のすべてのデルタ可変１鎖は、３ＯＭＺ ＣＤＲ３を含有していた。類似のフォーマットを使用する別の一連のγδ ＴＣＲ抗原を、異なるデルタ可変鎖（例えば、デルタ可変２およびデルタ可変３）を含有するように設計し、非特異的結合またはオフターゲット結合を有する抗体（「Ｌ４」、「Ｆ９」、「Ｆｃ４／４」、「Ｆｃ８／８」）の選択を解除するために使用した。これらの抗原はまた、３ＯＭＺ ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３領域中で結合する抗体も確実に選択解除されるように設計した。

【0373】

抗原機能検証を実施して、設計された抗原が、抗ＴＲＤＶ１（ＴＣＲデルタ可変１）抗体を生成するのに好適であることを確認した。δ１ドメインを含有する抗原を用いた場合のみ、検出がみられた（図１）。

【0374】

実施例３．ファージディスプレイ
ファージディスプレイ選択を、ラウンド１および２のいずれかのヘテロ二量体ＬＺ ＴＣＲフォーマットを使用して、ヒトｓｃＦｖのライブラリに対して行い、両方のラウンドでヘテロ二量体ＬＺ ＴＣＲの選択解除を行った。または、ラウンド１を、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃについての選択解除を伴う、ホモ二量体Ｆｃ融合ＴＣＲを使用して行い、その後、ラウンド２を、ヘテロ二量体ＬＺ ＴＣＲについての選択解除を伴う、ヘテロ二量体ＬＺ ＴＣＲについて行った（表１を参照されたい）。

【0375】

選択は、１００ｎＭのビオチン化タンパク質を使用して、溶液相で行った。１μＭのビオチン化していないタンパク質を使用して、選択解除を行った。

【0376】

ファージディスプレイ選択の成功を、ポリクローナルファージＥＬＩＳＡ（ＤＥＬＦＩＡ）によって分析した。すべてのＤＶ１選択出力は、標的Ｆｃ１／１、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｆ１およびＦ３に対する所望の結合を示した。非標的Ｌ４、Ｆ９、Ｆｃ４／４、Ｆｃ８／８およびＦｃに対する様々な結合度を検出した（図２ＡおよびＢを参照されたい）。

【0377】

実施例４．抗体選択
実施例３で得られたヒットを（当該技術分野で既知の標準的な方法を使用して）配列決定した。１３０個の独自のクローンを特定し、これは、ＶＨおよびＶＬ ＣＤＲ３の固有の組み合わせを示した。これらの１３０個の独自のクローンのうち、１２５個は、独自のＶＨ ＣＤＲ３を示し、１０９個は、独自のＶＬ ＣＤＲ３を示した。

【0378】

独自のクローンを再配列し、特異性をＥＬＩＳＡ（ＤＥＬＦＩＡ）によって分析した。選択から、ＴＲＤＶ１（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３）に結合するが、ＴＲＤＶ２（Ｌ４）に結合しない９４個の独自のヒトｓｃＦｖ結合剤の一団を特定した。

【0379】

選択した結合剤の親和性ランキングを含めることで、クローンの選択を進めるのを補助した。多数の結合剤は、ナノモル濃度範囲での親和性を示し、２５～１００ｎＭのビオチン化抗原と反応した。一握りの結合剤が、５ｎＭの抗原との強い反応を示し、このことは、可能性のある一桁のナノモル濃度の親和性を示している。いくつかの結合剤は、マイクロモル濃度範囲の親和性を示す、１００ｎＭ抗原との反応を示さなかった。

【0380】

ＩｇＧへの変換を進めるクローンの選択のために、できるだけ多くの生殖系列系統およびできるだけ多くの異なるＣＤＲ３を可能な限り含めることが目的であった。さらに、グリコシル化、インテグリン結合部位、ＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８結合部位、対合していないシステインなどの配列ライアビリティ（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｉａｂｉｌｉｔｉｅｓ）を回避した。加えて、様々な親和性が含まれていた。

【0381】

選択されたクローンを、異なるドナーから得られた皮膚由来γδＴ細胞を用いて、天然の細胞表面発現γδＴＣＲに対する結合についてスクリーニングした。ＩｇＧに変換されるように選択されるクローンを表２に示す。

【0382】

実施例５：抗体ＳＰＲ分析
γδ細胞結合アッセイを通過したＩｇＧ抗体を調製し、さらなる機能および生物物理学的特性決定のために５個を選択した。ＳＰＲ分析を行って、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を決定した。定常状態フィッティングとともに（利用可能な場合）、試験した抗体と分析物との相互作用のセンサグラムを図３に示す。８０ＲＵのＩｇＧがチップ上にキャプチャーされたＴＳ８．２について、結合は検出されなかった。結果を表３にまとめている。

【0383】

実施例６：ＴＣＲ係合アッセイ
本願発明者らは、選択した抗体の機能的特性決定のために使用されるいくつかのアッセイを設計した。第１のアッセイは、抗体結合時のγδ ＴＣＲの下方調節を測定することによって、γδ ＴＣＲ係合を評価した。選択した抗体を、陽性対照として使用した市販の抗ＣＤ３および抗Ｖδ１抗体、または陽性対照として１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８に対して（１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４、１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７、１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６および１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９に対して）試験した。市販の抗ｐａｎγδ抗体は、ｐａｎγδ抗体であり、可変鎖に関係なくすべてのγδＴ細胞を認識するために、異なる作用様式を有する可能性が高いため、市販の抗ｐａｎγδ抗体を陰性対照として使用した。

【0384】

３つの異なるドナー試料（９４％、８０％および５７％の純度を有する試料）から得た皮膚由来γδＴ細胞を用いてアッセイを行った。結果を図４に示す。ＥＣ５０値を、以下の表４にまとめている。

【0385】

実施例７：Ｔ細胞脱顆粒アッセイ
第２のアッセイは、γδＴ細胞の脱顆粒を評価した。γδＴ細胞は、アポトーシスのパーフォリン－グランザイム媒介性活性化による標的細胞死滅を媒介し得ると考えられている。γδＴ細胞の細胞質内の溶解性顆粒は、Ｔ細胞活性化の際に標的細胞に向かって放出され得る。したがって、標的細胞をＣＤ１０７ａに対する抗体で標識し、フローサイトメトリーによって発現を測定することを使用して、脱顆粒γδＴ細胞を特定することができる。

【0386】

実施例６について、選択した抗体を、陽性対照としての市販の抗ＣＤ３および抗Ｖδ１抗体、または陽性対照として１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８に対して（１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４、１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７、１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６および１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９に対して）試験した。陰性対照として、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ１およびＤ１．３抗体を使用した。３つの異なるドナー試料（９４％、８０％および５７％の純度を有する試料）から得た皮膚由来γδＴ細胞を用いてアッセイを行った。結果を図５に示す。ＥＣ５０値を、以下の表４にまとめている。

【0387】

実施例８：死滅アッセイ
第３のアッセイは、選択した抗体で活性化されたγδＴ細胞が標的細胞を死滅させる能力を評価した。

【0388】

実施例６について、選択した抗体を、陽性対照としての市販の抗ＣＤ３および抗Ｖδ１抗体、または陽性対照として１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８に対して（１１３９＿Ｐ０１＿Ｅ０４、１２４５＿Ｐ０２＿Ｆ０７、１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０６および１２４５＿Ｐ０１＿Ｇ０９に対して）、ならびに陰性対照として抗ｐａｎγδに対して試験した。アイソタイプ対照として、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ１およびＤ１．３抗体も使用した。２名のドナーから得た皮膚由来γδＴ細胞（純度９４％および８０％）を用いてアッセイを行い、結果を図６に示す。

【0389】

実施例６～８で試験した３つの機能アッセイからの結果を表４にまとめている。

【0390】

実施例９：エピトープマッピング
高分解能を有する抗原／抗体複合体のエピトープを決定するために、タンパク質複合体を、重水素化架橋剤とともにインキュベートし、多酵素切断を行った。架橋したペプチドの濃縮後、試料を高分解能質量分析（ｎＬＣ－ＬＴＱ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳ）によって分析し、生成されたデータをＸＱｕｅｓｔ（バージョン２．０）およびＳｔａｖｒｏｘ（バージョン３．６）ソフトウェアを使用して分析した。

【0391】

重水素化ｄ０ｄ１２を含むタンパク質複合体Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）／１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７のトリプシン、キモトリプシン、Ａｓｐ－Ｎ、エラスターゼ、およびテルモリシンタンパク質分解の後、ｎＬＣ－ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳ／ＭＳ分析は、Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）と抗体１２４５＿Ｐ０１＿Ｅ０７との間の１３個の架橋ペプチドを検出した。結果を図７に提示する。

【0392】

重水素化ｄ０ｄ１２を含むタンパク質複合体Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）／１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８のトリプシン、キモトリプシン、Ａｓｐ－Ｎ、エラスターゼ、およびテルモリシンタンパク質分解の後、ｎＬＣ－ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳ／ＭＳ分析は、Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）と抗体１２５２＿Ｐ０１＿Ｃ０８との間の５個の架橋ペプチドを検出した。結果を図８に提示する。

【0393】

重水素化ｄ０ｄ１２を含むタンパク質複合体Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）／１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４のトリプシン、キモトリプシン、Ａｓｐ－Ｎ、エラスターゼ、およびテルモリシンタンパク質分解の後、ｎＬＣ－ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳ／ＭＳ分析は、Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）と抗体１２４５＿Ｐ０２＿Ｇ０４との間の２０個の架橋ペプチドを検出した。結果を図９に提示する。

【0394】

重水素化ｄ０ｄ１２を含むタンパク質複合体Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）／１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５のトリプシン、キモトリプシン、Ａｓｐ－Ｎ、エラスターゼ、およびテルモリシンタンパク質分解の後、ｎＬＣ－ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳ／ＭＳ分析は、Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）と抗体１２５１＿Ｐ０２＿Ｃ０５との間の５個の架橋ペプチドを検出した。結果を図１０に提示する。

【0395】

別の抗体であるクローンＩＤ１１４１＿Ｐ０１＿Ｅ０１とのエピトープ結合も試験した。重水素化ｄ０ｄ１２を含むタンパク質複合体Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）／１１４１＿Ｐ０１＿Ｅ０１のトリプシン、キモトリプシン、Ａｓｐ－Ｎ、エラスターゼ、およびテルモリシンタンパク質分解の後、ｎＬＣ－ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳ／ＭＳ分析は、Ｌ１（ＤＶ１－ＧＶ４）と抗体１１４１＿Ｐ０１＿Ｅ０１との間の２０個の架橋ペプチドを検出した。結果を図１１に提示する。

【0396】

エピトープマッピング結果のまとめを表５に提示する。

【図1】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】

【図3-3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【配列表】

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【国際調査報告】