特表 2022-544934 ＳＴＡＴ３－アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む細胞外小胞

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-10-24

(54)【発明の名称】ＳＴＡＴ３－アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む細胞外小胞

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/113 20100101AFI20221017BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20221017BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20221017BHJP

   A61K 31/712 20060101ALI20221017BHJP

   A61K 31/7125 20060101ALI20221017BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221017BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20221017BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20221017BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20221017BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20221017BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20221017BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20221017BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20221017BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20221017BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20221017BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20221017BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20221017BHJP

【ＦＩ】

C12N15/113 110Z

C12N5/10 ZNA

A61K31/7088

A61K31/712

A61K31/7125

A61P35/00

A61P35/02

A61K45/00

A61K38/16

A61K31/713

A61K31/7105

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K35/12

A61K48/00

A61K47/42

A61K47/54

G01N33/53 D

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022508816

(86)(22)【出願日】2020-08-14

(85)【翻訳文提出日】2022-04-08

(86)【国際出願番号】 US2020046549

(87)【国際公開番号】W WO2021030768

(87)【国際公開日】2021-02-18

(31)【優先権主張番号】62/886,904

(32)【優先日】2019-08-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/886,901

(32)【優先日】2019-08-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/900,376

(32)【優先日】2019-09-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/900,371

(32)【優先日】2019-09-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520170759

【氏名又は名称】コディアック バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ブティン， アダム ティー．

(72)【発明者】

【氏名】ブルーム， ウェンディ

(72)【発明者】

【氏名】サティヤナラヤナン， スリラム

(72)【発明者】

【氏名】ユー， ステファニー

(72)【発明者】

【氏名】ファン， ナイ－ジア

(72)【発明者】

【氏名】カウケ， モニーク

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C086

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA93X

4B065AB01

4B065BA01

4B065CA23

4B065CA44

4B065CA46

4C076AA16

4C076BB01

4C076BB11

4C076BB21

4C076BB27

4C076CC27

4C076EE41

4C076EE59

4C084AA13

4C084AA19

4C084BA44

4C084DC50

4C084MA21

4C084MA52

4C084MA55

4C084MA56

4C084MA65

4C084NA05

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZB26

4C084ZB27

4C084ZC75

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC22

4C085CC23

4C085EE03

4C085GG01

4C085GG08

4C085GG10

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA02

4C086MA03

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4C086MA21

4C086MA52

4C086MA55

4C086MA56

4C086MA65

4C086NA05

4C086NA13

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC75

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB63

4C087MA21

4C087MA52

4C087MA55

4C087MA56

4C087MA65

4C087NA05

4C087NA13

4C087NA14

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZC75

(57)【要約】

本開示は、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ及び／またはＳＴＡＴ３タンパク質の発現を低減及び／または阻害することができるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む、改変された細胞外小胞（例えばエキソソーム）に関する。改変された細胞外小胞と共に使用することができるＡＳＯも開示する。本明細書において、エキソソーム及びＡＳＯを使用して、がんなどの疾患を治療及び／または予防するための方法も提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アンタゴニストであり、ＳＴＡＴ３転写産物（配列番号１または配列番号３）内の核酸配列に相補的である長さ１０～３０ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む、細胞外小胞。

【請求項2】

前記ＡＳＯが、ＴＡＡＧＣＴＧＡＴＡＡＴＴＣＡＡＣＴＣＡ（配列番号５）ではない、請求項１に記載の細胞外小胞。

【請求項3】

マクロファージを標的とする、請求項１または２に記載の細胞外小胞。

【請求項4】

前記ＡＳＯが、配列番号１に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド１～５６９８２、配列番号１に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド５７００３～７５１７１、配列番号３に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド１～１２８７、または配列番号３に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド１３０６～２７８７内の核酸配列に相補的である長さ１０～３０ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項5】

前記連続ヌクレオチド配列が、前記ＳＴＡＴ３転写産物内の前記核酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％相補的である、請求項４に記載の細胞外小胞。

【請求項6】

前記ＡＳＯが、ヒト細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）において、ＳＴＡＴ３タンパク質発現を低下させることができ、前記ヒト細胞が、ＳＴＡＴ３タンパク質を発現している、請求項１～５のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項7】

前記ＳＴＡＴ３タンパク質の発現が、前記ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞におけるＳＴＡＴ３タンパク質の発現と比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％低い、請求項６に記載の細胞外小胞。

【請求項8】

前記ＡＳＯが、ヒト細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）において、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルを低下させることができ、前記ヒト細胞が、前記ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡを発現している、請求項４～７のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項9】

前記ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルが、前記ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞における前記ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルと比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％低い、請求項８に記載の細胞外小胞。

【請求項10】

前記ＡＳＯが、ギャップマー、ミックスサー、またはトータルマーである、請求項１～９のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項11】

前記ＡＳＯが、１つ以上のヌクレオシド類似体を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項12】

前記ヌクレオシド類似体の１つ以上が、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メチルＲＮＡ（２’－ＯＭｅ）；２’－アルコキシ－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（２’－ＭＯＥ）；２’－アミノ－ＤＮＡ；２’－フルオロ－ＲＮＡ；２’－フルオロ－ＤＮＡ；アラビノ核酸（ＡＮＡ）；２’－フルオロ－ＡＮＡ；または二環式ヌクレオシド類似体を含む、請求項１１に記載の細胞外小胞。

【請求項13】

前記ヌクレオシド類似体の１つ以上が糖修飾ヌクレオシドである、請求項１１または１２に記載の細胞外小胞。

【請求項14】

前記糖修飾ヌクレオシドが、親和性を増強する２’糖修飾ヌクレオシドである、請求項１３に記載の細胞外小胞。

【請求項15】

前記ヌクレオシド類似体の１つ以上が、二環式糖を含むヌクレオシドを含む、請求項１１～１４のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項16】

前記ヌクレオシド類似体の１つ以上が、ＬＮＡを含む、請求項１１～１４のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項17】

前記ヌクレオシド類似体の１つ以上が、拘束エチルヌクレオシド（ｃＥｔ）、２’，４’－拘束２’－Ｏ－メトキシエチル（ｃＭＯＥ）、α－Ｌ－ＬＮＡ、β－Ｄ－ＬＮＡ、２’－Ｏ，４’－Ｃ－エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）、アミノ－ＬＮＡ、オキシ－ＬＮＡ、チオ－ＬＮＡ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１１～１６のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項18】

前記ＡＳＯが、１つ以上の５’－メチルシトシン核酸塩基を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項19】

前記連続ヌクレオチド配列が、前記ＳＴＡＴ３転写産物の（ｉ）５’非翻訳領域（ＵＴＲ）；（ｉｉ）コーディング領域；；または（ｉｉｉ）３’ＵＴＲ内の核酸配列に相補的である、請求項１０～１８のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項20】

ＡＳＯ中の連続ヌクレオチド配列が、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド１５１～７４５；（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド６４２～１３３１；（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１０３１～１７０４；（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド１５２１～２３３５；（ｖ）配列番号３の２０６２～２７７６；（ｖｉ）配列番号３のヌクレオチド２５１～６４５；（ｖｉｉ）配列番号３のヌクレオチド７４２～１２３１；（ｖｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１１３１～１６０４；（ｉｘ）配列番号３のヌクレオチド１６２１～２２３５；（ｘ）配列番号３の２１６２～２６７６；（ｘｉ）配列番号３のヌクレオチド３０１～５９５；（ｘｉｉ）配列番号３のヌクレオチド７９２～１１８１；（ｘｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１１８１～１５５４；（ｘｉｖ）配列番号３のヌクレオチド１６７１～２１８５；（ｘｖ）配列番号３の２２１２～２６２６；（ｘｖｉ）配列番号３のヌクレオチド３４１～５５５；（ｘｖｉｉ）配列番号３のヌクレオチド８３２～１１４１；（ｘｖｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１２２１～１５１４；（ｘｉｘ）配列番号３のヌクレオチド１７１１～２１４５；または（ｘｘ）配列番号３の２２５２～２５８６を含む核酸配列に相補的である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項21】

前記連続ヌクレオチド配列が、（ｉ）配列番号３の３５１～５４５；（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド８４２～１１３１；（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１２３１～１５０４；（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド１７２１～２１３５；または（ｖ）配列番号３のヌクレオチド２２６２～２５７６内の核酸配列に相補的である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項22】

前記連続ヌクレオチド配列が、図１の配列から選択される配列に相補的なヌクレオチド配列を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項23】

前記連続ヌクレオチド配列が、ＳＴＡＴ３転写産物内のヌクレオチド配列に完全に相補的である、請求項１０～２２のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項24】

前記ＡＳＯが、配列番号１００～１９９から選択され、１つまたは２つのミスマッチを含むヌクレオチド配列を含む、請求項１３～２３のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項25】

前記ＡＳＯが、図１の設計からなる群から選択される設計を有し、図中、大文字が糖修飾ヌクレオシドであり、小文字がＤＮＡである、請求項１～２４のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項26】

前記ＡＳＯが、１４～２０ヌクレオチドの長さである、請求項１～２５のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項27】

前記連続ヌクレオチド配列が、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合を含む、請求項１０～２６のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項28】

前記１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項２７に記載の細胞外小胞。

【請求項29】

ヌクレオシド間結合の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％が修飾されている、請求項２７または２８に記載の細胞外小胞。

【請求項30】

前記ヌクレオシド間結合のそれぞれが、ホスホロチオエート結合である、請求項２９に記載の細胞外小胞。

【請求項31】

固定部分をさらに含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項32】

前記ＳＴＡＴ３アンタゴニストが、前記固定部分に連結されている、請求項３１に記載の細胞外小胞。

【請求項33】

外来性標的化部分をさらに含む、請求項１～３２のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項34】

前記外来性標的化部分が、ペプチド、抗体もしくはその抗原結合断片、化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３３に記載の細胞外小胞。

【請求項35】

前記外来性標的化部分が、ペプチドを含む、請求項３３または３４に記載の細胞外小胞。

【請求項36】

前記外来性標的化部分が、マイクロタンパク質、設計されたアンキリンリピートタンパク質（ダーピン）、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、ペプチド模倣分子、受容体の天然リガンド、ラクダナノボディ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３３～３５のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項37】

前記外来性標的化部分が、全長抗体、単一ドメイン抗体、重鎖のみ抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体、サメ重鎖のみ抗体（ＶＮＡＲ）、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３３～３６のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項38】

前記抗体が単鎖抗体である、請求項３７に記載の細胞外小胞。

【請求項39】

前記外来性標的化部分が、前記エキソソームを、肝臓、心臓、肺、脳、腎臓、中枢神経系、末梢神経系、筋肉、骨、またはそれらの任意の組み合わせに標的化する、請求項３３～３６のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項40】

前記外来性標的化部分が、前記エキソソームを、腫瘍細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ニューロン、肝細胞、造血幹細胞、またはそれらの任意の組み合わせに標的化する、請求項３３～３９のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項41】

前記外来性標的化部分が、ＣＤ３３またはその断片に結合する、請求項３３～４０のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項42】

前記ＥＶが、前記外来性標的化部分を前記ＥＶに連結する足場部分を含む、請求項３３～４１のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項43】

前記固定部分及び／または前記足場部分がＳｃａｆｆｏｌｄＸである、請求項３１～４２のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項44】

前記固定部分及び／または前記足場部分がＳｃａｆｆｏｌｄＹである、請求項３１～４２のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項45】

前記ＳｃａｆｆｏｌｄＸが、前記ＥＶの内腔表面上及び／または前記ＥＶの外面上に前記ＳＴＡＴ３アンタゴニストを固定することができる足場タンパク質である、請求項４３に記載の細胞外小胞。

【請求項46】

前記ＳｃａｆｆｏｌｄＸが、プロスタグランジンＦ２受容体ネガティブレギュレーター（「ＰＴＧＦＲＮタンパク質」）；バシギン（「ＢＳＧタンパク質」）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（「ＩＧＳＦ２タンパク質」）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（「ＩＧＳＦ３タンパク質」）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（「ＩＧＳＦ８タンパク質」）；インテグリンβ１（「ＩＴＧＢ１タンパク質」）；インテグリンα４（「ＩＴＧＡ４タンパク質」）；４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（「ＳＬＣ３Ａ２タンパク質」）；及びＡＴＰトランスポータータンパク質の一クラス（ＡＴＰ１Ａ１、ＡＴＰ１Ａ２、ＡＴＰ１Ａ３、ＡＴＰ１Ａ４、ＡＴＰ１Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ１、ＡＴＰ２Ｂ２、ＡＴＰ２Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質）；その機能的断片；ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項４３または４５に記載の細胞外小胞。

【請求項47】

前記固定部分及び／または前記足場部分が、ＰＴＧＦＲＮタンパク質またはその機能的断片である、請求項３１～４６のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項48】

前記固定部分及び／または前記足場部分が、配列番号３０２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３１～４７のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項49】

前記固定部分及び／または前記足場部分が、配列番号３０１と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項３１～４８のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項50】

前記ＳｃａｆｆｏｌｄＹが、前記ＥＶの内腔表面上及び／または前記ＥＶの外面上に前記ＳＴＡＴ３アンタゴニストを固定することができる足場タンパク質である、請求項４４に記載の細胞外小胞。

【請求項51】

前記ＳｃａｆｆｏｌｄＹが、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質（ＭＡＲＣＫＳタンパク質）、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質様１（ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質）、脳酸可溶性タンパク質１（ＢＡＳＰ１タンパク質）、その機能的断片、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項４４または５０に記載の細胞外小胞。

【請求項52】

前記ＳｃａｆｆｏｌｄＹが、ＢＡＳＰ１タンパク質またはその機能的断片である、請求項４４、５０、及び５１のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項53】

前記ＳｃａｆｆｏｌｄＹが、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、前記ＮＤ及び／または前記ＥＤが、前記ＥＶの前記内腔表面と会合している、請求項４４及び５０～５２のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項54】

前記ＮＤが、ミリストイル化を介して前記エキソソームの前記内腔表面と会合する、請求項５３に記載の細胞外小胞。

【請求項55】

前記ＥＤが、イオン性相互作用によって前記エキソソームの前記内腔表面と会合する、請求項５３または５４に記載の細胞外小胞。

【請求項56】

前記ＥＤが、配列中に（ｉ）塩基性アミノ酸または（ｉｉ）２つ以上の塩基性アミノ酸を含み、前記塩基性アミノ酸が、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項５３～５５のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項57】

前記塩基性アミノ酸が（Ｌｙｓ）ｎであり、式中、ｎが１～１０の整数である、請求項５６に記載の細胞外小胞。

【請求項58】

前記ＥＤが、Ｌｙｓ（Ｋ）、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号４０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号４０６）、Ａｒｇ（Ｒ）、ＲＲ、ＲＲＲ、ＲＲＲＲ（配列番号４０７）；ＲＲＲＲＲ（配列番号４０８）、ＫＲ、ＲＫ、ＫＫＲ、ＫＲＫ、ＲＫＫ、ＫＲＲ、ＲＲＫ、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号４０９）、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号４１０）、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５３～５７のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項59】

前記ＮＤが、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６に記載のアミノ酸配列を含み、ＧがＧｌｙを表し；「：」がペプチド結合を表し、前記Ｘ２～前記Ｘ６のそれぞれが、独立してアミノ酸を表し、前記Ｘ６が、塩基性アミノ酸を表す、請求項５３～５８のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項60】

（ｉ）前記Ｘ２が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるか；
（ｉｉ）前記Ｘ４が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ及びＭｅｔからなる群から選択されるか；
（ｉｉｉ）前記Ｘ５が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるか；
（ｉｖ）前記Ｘ６が、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるか；または
（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組み合わせである、請求項５９に記載の細胞外小胞。

【請求項61】

前記ＮＤが、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６のアミノ酸配列を含み、
（ｉ）Ｇが、Ｇｌｙを表し；
（ｉｉ）「：」が、ペプチド結合を表し；
（ｉｉｉ）前記Ｘ２が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；
（ｉｖ）前記Ｘ３がアミノ酸であり；
（ｖ）前記Ｘ４が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ及びＭｅｔからなる群から選択されるアミノ酸であり；
（ｖｉ）前記Ｘ５が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；
（ｖｉｉ）前記Ｘ６が、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸である、請求項５３～６０のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項62】

前記Ｘ３が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択される、請求項５９～６１のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項63】

前記ＮＤ及び前記ＥＤを、リンカーによって結合する、請求項５３～６２のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項64】

前記リンカーが、１つ以上のアミノ酸を含む、請求項６３に記載の細胞外小胞。

【請求項65】

前記ＮＤが、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号４１１）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫ（配列番号４１２）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫ（配列番号４１３）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫ（配列番号４１４）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫ（配列番号４１５）、または（ｖｉ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５３～６４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項66】

前記ＮＤが、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫ（配列番号４３８）、（ｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＳ（配列番号４３９）、（ｉｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫ（配列番号４４０）、（ｉｖ）ＧＡＫＬＳＫＫＳ（配列番号４４１）、（ｖ）ＧＧＫＱＳＫＫＫ（配列番号４４２）、（ｖｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＳ（配列番号４４３）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＫ（配列番号４４４）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＳ（配列番号４４５）、及び（ｉｘ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６５に記載の細胞外小胞。

【請求項67】

前記ＮＤが、アミノ酸配列ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号４１１）を含む、請求項５３～６６のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項68】

前記ＳｃａｆｆｏｌｄＹが、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約１００、少なくとも約１０５、少なくとも約１１０、少なくとも約１２０、少なくとも約１３０、少なくとも約１４０、少なくとも約１５０、少なくとも約１６０、少なくとも約１７０、少なくとも約１８０、少なくとも約１９０、または少なくとも約２００アミノ酸の長さである、請求項４３及び５０～６７のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項69】

前記ＳｃａｆｆｏｌｄＹが、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号４５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号４５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号４５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号８５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号４８４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号８５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号４５６）を含む、請求項４４及び５０～６８に記載の細胞外小胞。

【請求項70】

前記ＳｃａｆｆｏｌｄＹが、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号４５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号４５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号４５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号８５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号４８４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号８５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号４５６）からなる、請求項４４及び５０～６９に記載の細胞外小胞。

【請求項71】

前記ＳｃａｆｆｏｌｄＹが、前記Ｎ末端にＭｅｔを含まない、請求項４４及び５０～７０に記載の細胞外小胞。

【請求項72】

前記ＳｃａｆｆｏｌｄＹが、前記足場タンパク質のＮ末端にミリストイル化アミノ酸残基を含む、請求項４４及び５０～７１のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項73】

前記ＳｃａｆｆｏｌｄＹのＮ末端のアミノ酸残基がＧｌｙである、請求項７２に記載の細胞外小胞。

【請求項74】

前記ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを、前記ＥＶの前記外面上の前記固定部分及び／または前記足場部分に連結する、請求項３１～７３のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項75】

前記ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを、前記ＥＶの前記内腔表面上の前記固定部分及び／または前記足場部分に連結する、請求項３１～７４のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項76】

前記固定部分が、ステロール、ＧＭ１、脂質、ビタミン、小分子、ペプチド、またはそれらの組み合わせを含む、請求項３１～７５のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項77】

前記固定部分が、コレステロールを含む、請求項３１～７５のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項78】

前記固定部分が、リン脂質、リゾリン脂質、脂肪酸、ビタミン（例えば、ビタミンＤ及び／またはビタミンＥ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３１～７５のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項79】

前記ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを、リンカーによって前記固定部分及び／または前記足場部分に連結する、請求項３１～７８のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項80】

前記ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを、リンカーによって前記ＥＶに連結する、請求項１～７９のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項81】

前記リンカーがポリペプチドである、請求項７９または８０に記載の細胞外小胞。

【請求項82】

前記リンカーが非ポリペプチド部分である、請求項７９または８０に記載の細胞外小胞。

【請求項83】

前記リンカーが、エチレングリコールを含む、請求項７９または請求項８０に記載の細胞外小胞。

【請求項84】

前記リンカーが、ＨＥＧ、ＴＥＧ、ＰＥＧ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項７９または請求項８０に記載の細胞外小胞。

【請求項85】

前記リンカーが、アクリルホスホロアミダイト（例えば、ＡＣＲＹＤＩＴＥ（商標））、アデニル化、アジド（ＮＨＳエステル）、ジゴキシゲニン（ＮＨＳエステル）、コレステロール－ＴＥＧ、Ｉ－ＬＩＮＫＥＲ（商標）、アミノ修飾因子（例えば、アミノ修飾因子Ｃ６、アミノ修飾因子Ｃ１２、アミノ修飾因子Ｃ６ ｄＴ、またはＵｎｉ－Ｌｉｎｋ（商標）アミノ修飾剤）、アルキン、５’ヘキシニル、５－オクタジエニルｄＵ、ビオチン化（例えば、ビオチン、ビオチン（アジド）、ビオチンｄＴ、ビオチン－ＴＥＧ、デュアルビオチン、ＰＣビオチン、またはデスチオビオチン）、チオール修飾（チオール修飾剤Ｃ３ Ｓ－Ｓ、ジチオールまたはチオール修飾剤Ｃ６ Ｓ－Ｓ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項７９または８０に記載の細胞外小胞。

【請求項86】

前記リンカーが、開裂性リンカーである、請求項７９～８５のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項87】

前記リンカーが、バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメートまたはバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートを含む、請求項８６に記載の細胞外小胞。

【請求項88】

前記リンカーが、（ｉ）マレイミド部分及び（ｉｉ）バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメートまたはバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートを含む、請求項７６～８７のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項89】

前記ＥＶがエキソソームである、請求項１～８８のいずれか一項に記載の細胞外小胞。

【請求項90】

配列番号１に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド１～５６９８２、配列番号１に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド５７００３～７５１７１、配列番号３に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド１～１２８７、または配列番号３に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド１３０６～２７８７内の核酸配列に相補的である長さ１０～３０ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）。

【請求項91】

前記連続ヌクレオチド配列が、前記ＳＴＡＴ３転写産物内の前記核酸配列に、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％相補的である、請求項９０に記載のＡＳＯ。

【請求項92】

ヒト細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）において、ＳＴＡＴ３タンパク質発現を低下させることができ、前記ヒト細胞が、ＳＴＡＴ３タンパク質を発現している、請求項９０または９１に記載のＡＳＯ。

【請求項93】

前記ＳＴＡＴ３タンパク質の発現が、前記ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞におけるＳＴＡＴ３タンパク質の発現と比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％低い、請求項９２に記載のＡＳＯ。

【請求項94】

ヒト細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）において、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルを低下させることができ、前記ヒト細胞が、前記ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡを発現している、請求項９０～９３のいずれか一項に記載のＡＳＯ。

【請求項95】

前記ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルが、前記ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞における前記ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルと比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％低い、請求項９４に記載のＡＳＯ。

【請求項96】

ギャップマー、ミックスサー、またはトータルマーである、請求項９０～９５のいずれか一項に記載のＡＳＯ。

【請求項97】

１つ以上のヌクレオシド類似体を含む、請求項９０～９５のいずれか一項に記載のＡＳＯ。

【請求項98】

前記ヌクレオシド類似体の１つ以上が、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メチルＲＮＡ（２’－ＯＭｅ）；２’－アルコキシ－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（２’－ＭＯＥ）；２’－アミノ－ＤＮＡ；２’－フルオロ－ＲＮＡ；２’－フルオロ－ＤＮＡ；アラビノ核酸（ＡＮＡ）；２’－フルオロ－ＡＮＡ；または二環式ヌクレオシド類似体（ＬＮＡ）を含む、請求項９７に記載のＡＳＯ。

【請求項99】

前記ヌクレオシド類似体の１つ以上が糖修飾ヌクレオシドである、請求項９７または９８に記載のＡＳＯ。

【請求項100】

前記糖修飾ヌクレオシドが、親和性を増強する２’糖修飾ヌクレオシドである、請求項９９に記載のＡＳＯ。

【請求項101】

前記ヌクレオシド類似体の１つ以上が、二環式糖を含むヌクレオシドを含む、請求項９７～１００のいずれか一項に記載のＡＳＯ。

【請求項102】

前記ヌクレオシド類似体の１つ以上が、ＬＮＡを含む、請求項９７～１００のいずれか一項に記載のＡＳＯ。

【請求項103】

前記ＬＮＡが、拘束エチルヌクレオシド（ｃＥｔ）、２’，４’－拘束２’－Ｏ－メトキシエチル（ｃＭＯＥ）、α－Ｌ－ＬＮＡ、β－Ｄ－ＬＮＡ、２’－Ｏ，４’－Ｃ－エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）、アミノ－ＬＮＡ、オキシ－ＬＮＡ、チオ－ＬＮＡ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１０２に記載のＡＳＯ。

【請求項104】

１つ以上の５’－メチルシトシン核酸塩基を含む、請求項９０～１０３のいずれか一項に記載のＡＳＯ。

【請求項105】

前記ＡＳＯが、配列番号１００～配列番号１９９のいずれか１つを含む、請求項９０～１０４のいずれか一項に記載のＡＳＯ。

【請求項106】

前記ＡＳＯが、図１の設計からなる群から選択される設計を有し、図中、大文字が糖修飾ヌクレオシドであり、小文字がＤＮＡである、請求項９０～１０５のいずれか一項に記載のＡＳＯ。

【請求項107】

前記ＡＳＯが、１４～２０ヌクレオチドの長さである、請求項９０～１０６のいずれか一項に記載のＡＳＯ。

【請求項108】

前記連続ヌクレオチド配列が、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合を含む、請求項９０～１０７のいずれか一項に記載のＡＳＯ。

【請求項109】

前記１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項１０８に記載のＡＳＯ。

【請求項110】

少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％のヌクレオシド間結合が修飾されている、請求項１０８または１０９に記載のＡＳＯ。

【請求項111】

前記ＡＳＯの前記ヌクレオシド間結合のそれぞれが、ホスホロチオエート結合である、請求項１１０に記載のＡＳＯ。

【請求項112】

前記ＡＳＯが、少なくとも１つの非ヌクレオチドまたは非ポリヌクレオチド部分に共有結合している、請求項９０～１１１のいずれか一項に記載のＡＳＯを含む複合体。

【請求項113】

前記非ヌクレオチドまたは非ポリヌクレオチド部分が、タンパク質、脂肪酸鎖、糖残基、糖タンパク質、ポリマー、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１１２に記載の複合体。

【請求項114】

請求項９０～１１１のいずれか一項に記載のＡＳＯまたは請求項１１２もしくは１１３に記載の複合体を含む、細胞外小胞。

【請求項115】

請求項１～８９及び１１４のいずれか一項に記載の細胞外小胞、請求項９０～１１１のいずれか一項に記載のＡＳＯ、または請求項１１２もしくは１１３に記載の複合体、ならびに薬学的に許容される希釈剤、担体、塩、またはアジュバントを含む、医薬組成物。

【請求項116】

前記薬学的に許容される塩が、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１１５に記載の医薬組成物。

【請求項117】

少なくとも１つの追加の治療薬をさらに含む、請求項１１５または１１６に記載の医薬組成物。

【請求項118】

前記追加の治療薬がＳＴＡＴ３アンタゴニストである、請求項１１７に記載の医薬組成物。

【請求項119】

前記ＳＴＡＴ３アンタゴニストが、化合物、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、タンパク質、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１１８に記載の医薬組成物。

【請求項120】

前記ＳＴＡＴ３アンタゴニストが、抗ＳＴＡＴ３抗体またはその断片である、請求項１１８または１１９に記載の医薬組成物。

【請求項121】

請求項１～８９及び１１４のいずれか一項に記載の細胞外小胞、請求項９０～１１１のいずれか一項に記載のＡＳＯ、または請求項１１２もしくは１１３に記載の複合体、または請求項１１５～１２０のいずれか一項に記載の医薬組成物、ならびに使用説明書を含む、キット。

【請求項122】

請求項１～９０及び１１４のいずれか一項に記載の細胞外小胞、請求項９０～１１１のいずれか一項に記載のＡＳＯ、請求項１１２もしくは１１３に記載の複合体、または請求項１１５～１２０のいずれか一項に記載の医薬組成物、ならびに使用説明書を含む、診断キット。

【請求項123】

ＳＴＡＴ３タンパク質を発現する細胞に対して、請求項１～８９及び１１４のいずれか一項に記載の細胞外小胞、請求項９０～１１１のいずれか一項に記載のＡＳＯ、または請求項１１２もしくは１１３に記載の複合体、または請求項１１５～１２０のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、前記投与後に、前記細胞内の前記ＳＴＡＴ３タンパク質の発現が阻害または低減される、前記細胞内のＳＴＡＴ３タンパク質発現の阻害または低減方法。

【請求項124】

前記ＡＳＯが、投与後の細胞におけるＳＴＡＴ３またはｍＲＮＡの発現を阻害または低減する、請求項１２３に記載の方法。

【請求項125】

ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルが、前記ＡＳＯに曝露されていない前記細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルと比較して、前記投与後に、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または約１００％低い、請求項１２４に記載の方法。

【請求項126】

前記ＳＴＡＴ３またはタンパク質の発現が、前記ＡＳＯに曝露されていない細胞における前記ＳＴＡＴ３タンパク質の発現と比較して、前記投与後に、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％低い、請求項１２３～１２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項127】

有効量の請求項１～８９及び１１４のいずれか一項に記載の細胞外小胞、請求項９０～１１１のいずれか一項に記載のＡＳＯ、または請求項１１２もしくは１１４に記載の複合体、または請求項１１５～１２０のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、がんの治療を必要とする対象におけるがんの治療方法。

【請求項128】

がんの治療を必要とする対象におけるがんの治療のための薬剤の製造における、請求項１～８９及び１１４のいずれか一項に記載の細胞外小胞、請求項９０～１１１のいずれか一項に記載のＡＳＯ、または請求項１１２もしくは１１３に記載の複合体、または請求項１１５～１２０のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。

【請求項129】

がんの治療を必要とする対象におけるがんの治療に使用するための、請求項１～９０及び１１４のいずれか一項に記載の細胞外小胞、請求項９０～１１１のいずれか一項に記載のＡＳＯ、または請求項１１２もしくは１１３に記載の複合体、または請求項１１５～１２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項130】

前記細胞外小胞、前記ＡＳＯ、前記複合体、または前記医薬組成物を、心臓内、経口、非経口、髄腔内、側脳室内、肺、局所、または脳室内に投与する、請求項１２２～１２７のいずれか一項に記載の方法、請求項１２８に記載の使用、または請求項１２９に記載の使用のための組成物。

【請求項131】

前記がんが、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮細胞肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、リンパ腫、白血病、肝癌、神経膠芽細胞腫、メラノーマ、骨髄腫基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄質癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、急性骨髄性白血病、肝細胞癌、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１２７に記載の方法、請求項１２８に記載の使用、または請求項１３６に記載の使用のための組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は、２０１９年８月１４日に出願された米国仮出願第６２／８８６，９０１号；２０１９年８月１４日に提出された第６２／８８６，９０４号；２０１９年９月１３日に提出された６２／９００，３７６号；及び、２０１９年９月１３日に出願された６２／９００，３７１号の優先権を主張し、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0002】

ＥＦＳ－ＷＥＢを介して電子的に提出された配列表の参照
本出願とともに提出された、ＡＳＣＩＩテキストファイル（名称：４０００＿０６０ＰＣ０５＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：３４１，９８５バイト；及び作成日：２０２０年８月１３日）の電子的に提出された配列表の内容は、その全体が参照により援用される。

【0003】

本開示は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む細胞外小胞（ＥＶ）、例えば、エキソソームに関し、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物内の核酸配列に相補的な長さ１０～３０ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含む。本開示の特定の態様では、細胞外小胞は、足場タンパク質をさらに含む。

【背景技術】

【0004】

エキソソームは、すべての真核細胞によって天然に生成される小さな細胞外小胞である。エキソソームは、内部空間（すなわち、内腔）を囲む膜を含む。薬物送達ビヒクルとして、例えばエキソソームなどのＥＶは、多くの治療分野における新規治療法として、従来の薬物送達方法に比べて多くの利点を提供する。特に、エキソソームは、異なる種に投与された場合でも、本質的に免疫原性が低い。

【0005】

アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで標的遺伝子の発現を調節する強力な手段として登場した。しかしながら、ｉｎ ｖｉｖｏでのＡＳＯの安定性と送達を向上させる必要がある。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0006】

本開示は、改変ＥＶ（例えば、エキソソーム）、特に、疾患に関連する遺伝子（例えば、がんの場合はＮ）の発現を低下させることができる治療薬を送達するために使用可能なＥＶのための組成物及び方法に関する。本開示の一態様は、アンタゴニストであり、ＳＴＡＴ３転写産物（配列番号１または配列番号３）内の核酸配列に相補的な長さ１０～３０ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む細胞外小胞に関する。いくつかの態様では、細胞外小胞は、ＴＡＡＧＣＴＧＡＴＡＡＴＴＣＡＡＣＴＣＡ（配列番号５）ではないＡＳＯを含む。いくつかの態様では、細胞外小胞は、マクロファージを標的とする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド１～５６９８２、配列番号１に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド５７００３～７５１７１、配列番号３に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド１～１２８７、または配列番号３に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド１３０６～２７８７内の核酸配列に相補的な長さ１０～３０ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、連続ヌクレオチド配列は、ＳＴＡＴ３転写産物内の核酸配列に、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％相補的である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ヒト細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）において、ＳＴＡＴ３タンパク質発現を低下させることができ、その場合、ヒト細胞は、ＳＴＡＴ３タンパク質を発現している。

【0007】

いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３タンパク質の発現は、ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞におけるＳＴＡＴ３タンパク質の発現と比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％低い。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ヒト細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）において、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルを低下させることができ、その場合、ヒト細胞は、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡを発現している。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルは、ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルと比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％低い。

【0008】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、ギャップマー、ミックスマー、またはトータルマーである。いくつかの態様では、ＡＳＯは、１つ以上のヌクレオシド類似体を含む。いくつかの態様では、１つ以上のヌクレオシド類似体は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メチルＲＮＡ（２’－ＯＭｅ）；２’－アルコキシ－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（２’－ＭＯＥ）；２’－アミノ－ＤＮＡ；２’－フルオロ－ＲＮＡ；２’－フルオロ－ＤＮＡ；アラビノ核酸（ＡＮＡ）；２’－フルオロ－ＡＮＡ；または二環式ヌクレオシド類似体を含む。いくつかの態様では、ヌクレオシド類似体は、糖修飾ヌクレオシドである。いくつかの態様では、糖修飾ヌクレオシドは、親和性を増強する２’糖修飾ヌクレオシドである。いくつかの態様では、ヌクレオシド類似体は、二環式糖を含むヌクレオシドを含む。いくつかの態様では、ヌクレオシド類似体は、ＬＮＡを含む。いくつかの態様では、１つ以上のヌクレオチド類似体は、拘束エチルヌクレオシド（ｃＥｔ）、２’，４’－拘束２’－Ｏ－メトキシエチル（ｃＭＯＥ）、α－Ｌ－ＬＮＡ、β－Ｄ－ＬＮＡ、２’－Ｏ，４’－Ｃ－エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）、アミノ－ＬＮＡ、オキシ－ＬＮＡ、チオ－ＬＮＡ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＡＳＯは、１つ以上の５’－メチルシトシン核酸塩基を含む。

【0009】

いくつかの態様では、連続ヌクレオチド配列は、ＳＴＡＴ３転写産物の（ｉ）５’非翻訳領域（ＵＴＲ）；（ｉｉ）コーディング領域；；または（ｉｉｉ）３’ＵＴＲ内の核酸配列に相補的である。いくつかの態様では、ＡＳＯ内の連続ヌクレオチド配列は、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド１５１～７４５；（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド６４２～１３３１；（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１０３１～１７０４；（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド１５２１～２３３５；（ｖ）配列番号３の２０６２～２７７６、（ｖｉ）配列番号３のヌクレオチド２５１～６４５；（ｖｉｉ）配列番号３のヌクレオチド７４２～１２３１；（ｖｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１１３１～１６０４；（ｉｘ）配列番号３のヌクレオチド１６２１～２２３５；（ｘ）配列番号３の２１６２～２６７６；（ｘｉ）配列番号３のヌクレオチド３０１～５９５；（ｘｉｉ）配列番号３のヌクレオチド７９２～１１８１；（ｘｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１１８１～１５５４；（ｘｉｖ）配列番号３のヌクレオチド１６７１～２１８５；（ｘｖ）配列番号３の２２１２～２６２６；（ｘｖｉ）配列番号３のヌクレオチド３４１～５５５；（ｘｖｉｉ）配列番号３の８３２～１１４１；（ｘｖｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１２２１～１５１４；（ｘｉｘ）配列番号３のヌクレオチド１７１１～２１４５；または（ｘｘ）配列番号３のヌクレオチド２２５２～２５８６を含む核酸配列に相補的である。いくつかの態様では、連続ヌクレオチド配列は、（ｉ）配列番号３の３５１～５４５；（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド８４２～１１３１；（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１２３１～１５０４；（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド１７２１～２１３５；または（ｖ）配列番号３のヌクレオチド２２６２～２５７６内の核酸配列に相補的である。いくつかの態様では、連続ヌクレオチド配列は、図１の配列から選択される配列に相補的なヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、連続ヌクレオチド配列は、ＳＴＡＴ３転写産物内のヌクレオチド配列に完全に相補的である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１００～１９９から選択され、１つまたは２つのミスマッチを含むヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、図１の設計からなる群から選択される設計を有し、図中、大文字は糖修飾ヌクレオシドであり、小文字はＤＮＡである。いくつかの態様では、ＡＳＯは、長さが１４～２０ヌクレオチドである。いくつかの態様では、連続ヌクレオチド配列は、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合を含む。いくつかの態様では、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。いくつかの態様では、ヌクレオシド間結合の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％が修飾されている。いくつかの態様では、ＡＳＯのヌクレオシド間結合の各々は、ホスホロチオエート結合である。いくつかの態様では、本開示の組成物及び方法は、固定部分を含む。

【0010】

いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３アンタゴニストは、固定部分に連結されている。いくつかの態様では、本開示の組成物及び方法は、外来性標的化部分をさらに含む。いくつかの態様では、外来性標的化部分は、ペプチド、抗体もしくはその抗原結合断片、化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、外来性標的化部分は、ペプチドを含む。いくつかの態様では、外来性標的化部分は、マイクロタンパク質、設計されたアンキリンリピートタンパク質（ダーピン）、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、ペプチド模倣分子、受容体の天然リガンド、ラクダナノボディ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、外来性標的化部分は、全長抗体、単一ドメイン抗体、重鎖のみ抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体、サメ重鎖のみ抗体（ＶＮＡＲ）、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、抗体は単鎖抗体である。いくつかの態様では、外来性標的化部分は、エキソソームを、肝臓、心臓、肺、脳、腎臓、中枢神経系、末梢神経系、筋肉、骨、またはそれらの任意の組み合わせに標的化する。いくつかの態様では、外来性標的化部分は、エキソソームを、腫瘍細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ニューロン、肝細胞、造血幹細胞、またはそれらの任意の組み合わせに標的化する。いくつかの態様では、外来性標的化部分は、ＣＤ３３またはその断片に結合する。いくつかの態様では、ＥＶは、外来性標的化部分をＥＶに連結する足場部分を含む。いくつかの態様では、固定部分及び／または足場部分はＳｃａｆｆｏｌｄＸである。いくつかの態様では、固定部分及び／または足場部分はＳｃａｆｆｏｌｄＹである。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、ＥＶの内腔表面及び／またはＥＶの外面にＳＴＡＴ３アンタゴニストを固定することができる足場タンパク質である。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、プロスタグランジンＦ２受容体ネガティブレギュレーター（ＰＴＧＦＲＮタンパク質）、バシギン（ＢＳＧタンパク質）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（ＩＧＳＦ２タンパク質）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（ＩＧＳＦ３タンパク質）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（ＩＧＳＦ８タンパク質）；インテグリンβ１（ＩＴＧＢ１タンパク質）；インテグリンα４（ＩＴＧＡ４タンパク質）；４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（ＳＬＣ３Ａ２タンパク質）；ＡＴＰトランスポータータンパク質のクラス（ＡＴＰ１Ａ１、ＡＴＰ１Ａ２、ＡＴＰ１Ａ３、ＡＴＰ１Ａ４、ＡＴＰ１Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ１、ＡＴＰ２Ｂ２、ＡＴＰ２Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質）；その機能的断片；及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、固定部分及び／または足場部分は、ＰＴＧＦＲＮタンパク質またはその機能的断片である。いくつかの態様では、固定部分及び／または足場部分は、配列番号３０２に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、固定部分及び／または足場部分は、配列番号３０１と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、ＥＶの内腔表面及び／またはＥＶの外面にＳＴＡＴ３アンタゴニストを固定することができる足場タンパク質である。

【0011】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質（ＭＡＲＣＫＳタンパク質）、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質様１（ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質）、脳酸可溶性タンパク質１（ＢＡＳＰ１タンパク質）、その機能的断片、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、ＢＡＳＰ１タンパク質またはその機能的断片である。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、ＮＤ及び／またはＥＤは、ＥＶの内腔表面に会合している。いくつかの態様では、ＮＤは、ミリストイル化を介してエキソソームの内腔表面と会合している。いくつかの態様では、ＥＤは、イオン相互作用によってエキソソームの内腔表面と会合している。いくつかの態様では、ＥＤは、（ｉ）塩基性アミノ酸または（ｉｉ）２つ以上の塩基性アミノ酸を連続して含み、塩基性アミノ酸は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は（Ｌｙｓ）ｎであり、式中、ｎは１～１０の整数である。いくつかの態様では、ＥＤは、Ｌｙｓ（Ｋ）、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号４０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号４０６）、Ａｒｇ（Ｒ）、ＲＲ、ＲＲＲ、ＲＲＲＲ（配列番号４０７）；ＲＲＲＲＲ（配列番号４０８）、ＫＲ、ＲＫ、ＫＫＲ、ＫＲＫ、ＲＫＫ、ＫＲＲ、ＲＲＫ、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号４０９）、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号４１０）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６に記載のアミノ酸配列を含み、式中、Ｇは、Ｇｌｙを表し；「：」は、ペプチド結合を表し、Ｘ２～Ｘ６のそれぞれは、独立してアミノ酸であり、Ｘ６は、塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、（ｉ）Ｘ２が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるか；（ｉｉ）Ｘ４が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、及びＭｅｔからなる群から選択されるか；（ｉｉｉ）Ｘ５が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるか；（ｉｖ）Ｘ６が、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるか；または（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６のアミノ酸配列を含み、式中、（ｉ）Ｇは、Ｇｌｙを表し；（ｉｉ）「：」は、ペプチド結合を表し；（ｉｉｉ）Ｘ２は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；（ｉｖ）Ｘ３はアミノ酸であり；（ｖ）Ｘ４は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、及びＭｅｔからなる群から選択されるアミノ酸であり；（ｖｉ）Ｘ５は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；そして（ｖｉｉ）Ｘ６は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸である。いくつかの態様では、Ｘ３は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＮＤとＥＤは、リンカーによって結合される。

【0012】

いくつかの態様では、リンカーは、１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの態様では、ＮＤは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号４１１）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫ（配列番号４１２）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫ（配列番号４１３）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫ（配列番号４１４）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫ（配列番号４１５）、または（ｖｉ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＮＤは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫ（配列番号４３８）、（ｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＳ（配列番号４３９）、（ｉｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫ（配列番号４４０）、（ｉｖ）ＧＡＫＬＳＫＫＳ（配列番号４４１）、（ｖ）ＧＧＫＱＳＫＫＫ（配列番号４４２）、（ｖｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＳ（配列番号４４３）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＫ（配列番号４４４）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＳ（配列番号４４５）、及び（ｉｘ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＮＤは、アミノ酸配列ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号４１１）を含む。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約１００、少なくとも約１０５、少なくとも約１１０、少なくとも約１２０、少なくとも約１３０、少なくとも約１４０、少なくとも長さが約１５０、少なくとも約１６０、少なくとも約１７０、少なくとも約１８０、少なくとも約１９０、または少なくとも約２００アミノ酸である。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号４５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号４５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号４５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号４５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号４５４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号４５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号４５６）を含む。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号４５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号４５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号４５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号ＮＯ：４５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号４５４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号４５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号４５６）を含む。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、Ｎ末端にＭｅｔを含まない。

【0013】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、足場タンパク質のＮ末端にミリストイル化されたアミノ酸残基を含む。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹのＮ末端のアミノ酸残基はＧｌｙである。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３ ＡＳＯは、ＥＶの外部の固定部分及び／または足場部分に連結されている。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３ ＡＳＯは、ＥＶの内腔表面上の固定部分及び／または足場部分に連結されている。いくつかの態様では、固定部分は、ステロール、ＧＭ１、脂質、ビタミン、小分子、ペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、固定部分は、コレステロールを含む。いくつかの態様では、固定部分は、リン脂質、リゾリン脂質、脂肪酸、ビタミン（例えば、ビタミンＤ及び／またはビタミンＥ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３ ＡＳＯは、リンカーによって、固定部分及び／または足場部分に連結されている。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３ ＡＳＯは、リンカーによってＥＶに連結されている。いくつかの態様では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの態様では、リンカーは非ポリペプチド部分である。いくつかの態様では、リンカーは、エチレングリコールを含む。いくつかの態様では、リンカーは、ＨＥＧ、ＴＥＧ、ＰＥＧ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、リンカーは、アクリルホスホルアミダイト（例えば、ＡＣＲＹＤＩＴＥ（商標））、アデニル化、アジド（ＮＨＳエステル）、ジゴキシゲニン（ＮＨＳエステル）、コレステロール－ＴＥＧ、Ｉ－ＬＩＮＫＥＲ（商標）、アミノ修飾因子（例えば、アミノ修飾因子Ｃ６、アミノ修飾因子Ｃ１２、アミノ修飾因子Ｃ６ ｄＴ、またはＵｎｉ－Ｌｉｎｋ（商標）アミノ修飾剤）、アルキン、５’ヘキシニル、５－オクタジエニルｄＵ、ビオチン化（例えば、ビオチン、ビオチン（アジド）、ビオチンｄＴ、ビオチン－ＴＥＧ、デュアルビオチン、ＰＣビオチン、またはデスチオビオチン）、チオール修飾（チオール修飾剤Ｃ３ Ｓ－Ｓ、ジチオールまたはチオール修飾剤Ｃ６ Ｓ－Ｓ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、リンカーは開裂性リンカーである。いくつかの態様では、リンカーは、バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメートまたはバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートを含む。いくつかの態様では、リンカーは、（ｉ）マレイミド部分及び（ｉｉ）バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメートまたはバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートを含む。いくつかの態様では、ＥＶはエキソソームである。

【0014】

本開示の組成物及び方法は、いくつかの態様において、配列番号１に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド１～５６９８２、配列番号１に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド５７００３～７５１７１、配列番号３に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド１～１２８７、または配列番号３に対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド１３０６～２７８７内の核酸配列に相補的な長さ１０～３０ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）に関する。いくつかの態様では、その連続ヌクレオチド配列は、ＳＴＡＴ３転写産物内の核酸配列に、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％相補的である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ヒト細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）において、ＳＴＡＴ３タンパク質発現を低下させることができ、その場合、ヒト細胞は、ＳＴＡＴ３タンパク質を発現している。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３タンパク質の発現は、ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞におけるＳＴＡＴ３タンパク質の発現と比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％低い。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ヒト細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）において、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルを低下させることができ、その場合、ヒト細胞は、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡを発現している。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルは、ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞のＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルと比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％低い。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ギャップマー、ミックスマー、またはトータルマーである。いくつかの態様では、ＡＳＯは、１つ以上のヌクレオシド類似体を含む。いくつかの態様では、ヌクレオシド類似体は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メチルＲＮＡ（２’－ＯＭｅ）；２’－アルコキシ－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（２’－ＭＯＥ）；２’－アミノ－ＤＮＡ；２’－フルオロ－ＲＮＡ；２’－フルオロ－ＤＮＡ；アラビノ核酸（ＡＮＡ）；２’－フルオロ－ＡＮＡ；または二環式ヌクレオシド類似体（ＬＮＡ）を含む。いくつかの態様では、ヌクレオシド類似体の１つ以上は、糖修飾ヌクレオシドである。いくつかの態様では、糖修飾ヌクレオシドは、親和性を増強する２’糖修飾ヌクレオシドである。

【0015】

いくつかの態様では、ヌクレオシド類似体の１つ以上は、二環式糖を含むヌクレオシドを含む。いくつかの態様では、ヌクレオシド類似体の１つ以上は、ＬＮＡを含む。いくつかの態様では、ＬＮＡは、拘束エチルヌクレオシド（ｃＥｔ）、２’，４’－拘束２’－Ｏ－メトキシエチル（ｃＭＯＥ）、α－Ｌ－ＬＮＡ、β－Ｄ－ＬＮＡ、２’－Ｏ，４’－Ｃ－エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）、アミノ－ＬＮＡ、オキシ－ＬＮＡ、チオ－ＬＮＡ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＡＳＯは、１つ以上の５’－メチルシトシン核酸塩基を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１００～配列番号１９９のいずれか１つを含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、図１の設計からなる群から選択される設計を有し、図中、大文字は糖修飾ヌクレオシドであり、小文字はＤＮＡである。いくつかの態様では、ＡＳＯは、長さが１４～２０ヌクレオチドである。いくつかの態様では、連続ヌクレオチド配列は、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合を含む。いくつかの態様では、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。いくつかの態様では、ヌクレオシド間結合の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％が修飾されている。いくつかの態様では、ＡＳＯのヌクレオシド間結合の各々は、ホスホロチオエート結合である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、少なくとも１つの非ヌクレオチドまたは非ポリヌクレオチド部分に共有結合している。いくつかの態様では、非ヌクレオチドまたは非ポリヌクレオチド部分は、タンパク質、脂肪酸鎖、糖残基、糖タンパク質、ポリマー、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、細胞外小胞は、ＡＳＯまたは複合体を含む。本開示の組成物及び方法はまた、ＡＳＯまたは複合体を含む細胞外小胞、及び薬学的に許容される希釈剤、担体、塩、またはアジュバントを含む医薬組成物に関する。いくつかの態様では、薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも１つの追加の治療薬をさらに含む。いくつかの態様では、追加の治療薬は、ＳＴＡＴ３アンタゴニストである。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３アンタゴニストは、化合物、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、タンパク質、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３アンタゴニストは、抗ＳＴＡＴ３抗体またはその断片である。本開示の組成物及び方法はまた、キットに関する。いくつかの態様では、本組成物及び方法は、細胞外小胞、ＡＳＯ、もしくは複合体、または医薬組成物、及び使用説明書を含むキットに関する。本開示の組成物及び方法はまた、診断キットに関する。いくつかの態様では、本組成物及び方法は、細胞外小胞、ＡＳＯ、もしくは複合体、または医薬組成物、及び使用説明書を含む診断キットに関する。

【0016】

本開示の組成物及び方法はまた、細胞外小胞、ＡＳＯ、複合体、または医薬組成物を、ＳＴＡＴ３タンパク質を発現する細胞に投与することを含む、細胞内のＳＴＡＴ３タンパク質発現を阻害または低下させる方法に関し、細胞内のＳＴＡＴ３タンパク質発現は、投与後に阻害または低下する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、投与後の細胞内のＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡの発現を阻害または低下させる。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルは、ＡＳＯに曝露されていない細胞内のＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのレベルと比較して、投与後に、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または約１００％低下する。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３タンパク質の発現は、ＡＳＯに曝露されていない細胞内のＳＴＡＴ３タンパク質の発現と比較して、投与後に、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％低下する。本開示の組成物及び方法はまた、有効量の細胞外小胞、ＡＳＯ、複合体、または医薬組成物を対象に投与することを含む、がんの治療を必要とする対象におけるがんの治療方法に関する。

【0017】

本開示の組成物及び方法はまた、がんの治療を必要とする対象におけるがんの治療のための薬剤の製造における細胞外小胞、ＡＳＯ、複合体、または医薬組成物の使用に関する。いくつかの態様では、本開示の組成物及び方法は、がんの治療を必要とする対象におけるがんの治療に使用するための、細胞外小胞、ＡＳＯ、複合体、または医薬組成物に関する。いくつかの態様では、細胞外小胞、ＡＳＯ、複合体、または医薬組成物を、心臓内、経口、非経口、髄腔内、側脳室内、肺、局所、または脳室内に投与する。いくつかの態様では、がんは、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮細胞肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、リンパ腫、白血病、肝癌、神経膠芽細胞腫、メラノーマ、骨髄腫基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄質癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

【図面の簡単な説明】

【0018】

【図1-1】本明細書に記載の様々なＳＴＡＴ３ ＡＳＯ配列と、ｍＲＮＡ配列（すなわち、配列番号３）におけるそれぞれの相補的配列の位置を列挙する表を示す。ＡＳＯは、５’から３’方向である。化学構造の記号は以下のとおりである：ＮｂはＬＮＡを意味し；ｄＮはＤＮＡを意味し；５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し；ＮｍはＭＯＥを意味し；ｓはホスホロチオエートを意味する。

【図1-2】同上。

【図1-3】同上。

【図1-4】同上。

【図1-5】同上。

【図1-6】同上。

【図1-7】同上。

【図1-8】同上。

【図1-9】同上。

【図2-1】図２Ａ～２Ｎは、異なるＳＴＡＴ３ ＡＳＯのノックダウン効率を示す（丸）。比較として、ＧＡＰＤＨ発現に対するＳＴＡＴ３ ＡＳＯの効果も示す（四角）。図２Ａは、Ｘ５１５５０ ＡＳＯで処理した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を示す。図２Ｂは、Ｘ５１５７７ ＡＳＯで処理した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を示す。図２Ｃは、Ｘ５１５７９ ＡＳＯで処理した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を示す。図２Ｄは、Ｘ５１５７８ ＡＳＯで処理した細胞におけるｍＲＮＡ発現を示す。図２Ｅは、Ｘ５１６０９ ＡＳＯで処理した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を示す。図２Ｆは、Ｘ５１５５３ ＡＳＯで処理した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を示す。図２Ｇは、Ｘ５１５４８で処理した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を示す。図２Ｈは、Ｘ５１５６２ ＡＳＯで処理した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を示す。図２Ｉは、Ｘ５２６０３ ＡＳＯで処理した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を示す。図２Ｊは、Ｘ５１６０３ ＡＳＯで処理した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を示す。図２Ｋは、Ｘ５１５３８ ＡＳＯで処理した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を示す。図２Ｌは、Ｘ５１６０８で処理した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を示す。図２Ｍは、Ｘ５１５９３ ＡＳＯで処理した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を示す。図２Ｎは、Ｘ５１５８８ ＡＳＯで処理した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を示す。

【図2-2】同上。

【図2-3】同上。

【図3】異なるＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯで処理した細胞におけるＳＴＡＴ３及びＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの両方の全体的なノックダウンを示すグラフを示す。ノックダウンは、処理した細胞において残存するＳＴＡＴ３及びＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ発現の割合として示す。試験した各ＡＳＯ（「開始ヌクレオチド」、図１に記載のＡＳＯに対応、ｍＲＮＡ位置の列の「開始」を参照のこと）について、左側のバーは、残存するＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡを表し、右側のバーは、残存するＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡを表す。

【図4】図４Ａ～４Ｃは、対照（ＰＢＳ）（図４Ｃ）と比較した、ＳＴＡＴ３ Ｅｘｏ－ＡＳＯ（図４Ａ）及びＳＴＡＴ３遊離ＡＳＯ ＭＯＥバリアント（図４Ｂ）による接種後の腫瘍体積応答曲線を示す。図４Ａは、エキソソームによって送達される（すなわち、ＥＶの外面に連結される）ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを示し、図４Ｂは、溶液中で遊離して送達される（すなわち、エキソソームに充填されない）ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを示し、図４Ｃは、ＰＢＳ緩衝液対照を示す。各線は、試験した異なるＡＳＯを表す。

【図5】陰性対照群ＰＢＳ、ＨＥＫ－Ｅｘｏ、及びスクランブルＥｘｏ－ＡＳＯ、陽性対照群Ｃ１８－９ １００ｍｇ／ｋｇ、及び試験群ＳＴＡＴ３ Ｅｘｏ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯ、及びＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯ ２Ｘを使用したＳＴＡＴ３遺伝子発現特性応答を示す。ＳＴＡＴ３－Ｅｘｏ ＡＳＯは、エキソソームによって送達されるＳＴＡＴ３を示し、一方、ＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯは、４ｕｇの用量で、溶液中で遊離して送達されるＳＴＡＴ３を示し、ＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯ ２Ｘは、８μｇの用量で、溶液中で遊離して送達されるＳＴＡＴ３を示す。ＳＴＡＴ３－Ｅｘｏ ＡＳＯ（４μｇ）は、腫瘍溶解物全体のＳＴＡＴ３発現を４０％ノックダウンする。ＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯ（８μｇ）は、腫瘍溶解物全体のＳＴＡＴ３発現を２５％ノックダウンした。

【図6】図６Ａ～６Ｃは、対照群ＰＢＳ、スクランブルＥｘｏ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ３ Ｅｘｏ－ＡＳＯ ＭＯＥ、及びＳＴＡＴ３遊離ＡＳＯ ＭＯＥへの曝露後の浸潤性ＭＤＳＣ／ＣＤ４５（ＣＤ１１ｂ^高 Ｆ４０／８０^高／ＣＤ４５）細胞の割合を示す。図６Ａは、各試験群を投与した後の浸潤性ＣＤ４５＋細胞の割合を示す。図６Ｂは、各試験群を投与した後の浸潤性マクロファージ／ＣＤ４５細胞の割合を示す。図６Ｃは、各試験群を投与した後の浸潤性ＭＤＳＣ／ＣＤ４５＋細胞の割合を示す。

【図7】図７Ａ～７Ｂは、対照群ＰＢＳ、スクランブルＥｘｏ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ３ Ｅｘｏ－ＡＳＯ ＭＯＥ、及びＳＴＡＴ３遊離ＡＳＯ ＭＯＥへの曝露後の浸潤性ＭＤＳＣ／総ＭＤＳＣ（Ｌｙ６Ｇ^高 ＣＤ１１ｂ^高／ＩＡ／ＩＥ^低）の割合を示す。図７Ａは、各試験群を投与した後の浸潤ｇＭＤＳＣ／総ＭＤＳＣの割合を示す。図７Ｂは、各試験群を投与した後の浸潤性ｍＭＤＳＣ／総ＭＤＳＣの割合を示す。

【図8】対照群ＰＢＳ、スクランブルＥｘｏ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ３ Ｅｘｏ－ＡＳＯ、及びＳＴＡＴ３遊離ＡＳＯでの処理後の正規化されたＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡカウントを示す。ＳＴＡＴ３－Ｅｘｏ ＡＳＯは、エキソソームによって送達される（すなわち、ＥＶの外面に連結される）ＳＴＡＴ３を表し、ＳＴＡＴ３遊離ＡＳＯは、溶液中で遊離して送達される（すなわち、ＥＶに連結しない）ＳＴＡＴ３を示す。

【図9-1】図９Ａ～９Ｄは、様々なＣＤ４７－ＳｃａｆｆｏｌｄＸ融合構築物の概略図である。図９Ａは、フラグタグ付き（１０８３及び１０８４）またはフラグタグなし（１０８５及び１０８６）の全長ＳｃａｆｆｏｌｄＸ（１０８３及び１０８６）または短縮型ＳｃａｆｆｏｌｄＸ（１０８４及び１０８５）のいずれかに融合させた野生型ＣＤ４７（Ｃ１５Ｓ置換を含む）の細胞外ドメインを含む構築物を示す。図９Ｂは、フラグタグ付き（１０８７及び１０８８）またはフラグタグなし（１０８９及び１０９０）の全長ＳｃａｆｆｏｌｄＸ（１０８７及び１０９０）または短縮型ＳｃａｆｆｏｌｄＸ（１０８８及び１０８９）のいずれかに融合させたベルクロ（登録商標）ＣＤ４７の細胞外ドメインを含む構築物を示す。図９Ｃは、野生型ＣＤ４７（Ｃ１５Ｓ置換を含む；１１２７及び１１２８）またはベルクロ（登録商標）－ＣＤ４７（１１２９及び１１３０）の第１の膜貫通ドメインを、ＳｃａｆｆｏｌｄＸの膜貫通ドメインと第１の細胞外モチーフを含むＳｃａｆｆｏｌｄＸ断片に置換した構築物を示す。図９Ｄは、フラグタグ付き（１１５８及び１１５９）またはフラグタグなし（１１６０及び１１６１）の全長ＳｃａｆｆｏｌｄＸ（１１５８及び１１６１）または短縮型ＳｃａｆｆｏｌｄＸ（１１５９及び１１６０）いずれかに融合させた最小「自己」ペプチド（ＧＮＹＴＣＥＶＴＥＬＴＲＥＧＥＴＩＩＥＬＫ；配列番号６００）を含む、様々な構築物を示す。

【図9-2】同上。

【図10】ＳＴＡＴ３転写産物を標的とするＡＳＯとともに、改変エキソソームの表面上で発現させ得る例示的なマウスＣＤ４７－ＳｃａｆｆｏｌｄＸ融合構築物の発現を示す。構築物は、フラグタグ付き（１９２３及び１９２５）またはフラグタグなし（１９２４及び１９２２）の全長ＳｃａｆｆｏｌｄＸ（１９２３及び１９２２）または短縮型ＳｃａｆｆｏｌｄＸ（１９２５及び１９２４）に融合させた野生型マウスＣＤ４７（Ｃ１５Ｓ置換を含む）の細胞外ドメインを含む。

【図11A】他の任意の部分、例えば、生物学的活性部分と共に送達することができるニューロトロフィン－ＳｃａｆｆｏｌｄＸ融合構築物を使用してＴｒｋを標的とする、例示的な細胞外小胞（例えば、エキソソーム）の概略図を示す。ニューロトロフィンは、ホモ二量体としてＴｒｋ受容体に結合し、ＥＶが感覚ニューロンを標的にすることができるようになる。

【図11B】ＥＶの外面に、（ｉ）神経向性ならびに（ｉｉ）抗食作用シグナル、例えば、ＣＤ４７及び／またはＣＤ２４を有し、（ｉｉｉ）ＳＴＡＴ３転写産物を標的とするＡＳＯとともに送達することができる、例示的な細胞外小胞（例えば、エキソソーム）の概略図を示す。

【図12-1】図１２Ａ～１２Ｄは、２人のドナー（例えば、黒いバー及び白いバー）由来のＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのＥｘｏ－ＳＴＡＴ３用量依存的ノックダウン（図１２Ａ）及び３人のドナー由来の初代ヒトマクロファージ（例えば、白丸、黒丸、影付きの丸）におけるＭ１サイトカイン産生のＥｘｏ－ＳＴＡＴ３用量依存的な増加（図１２Ｂ～１２Ｄ）を示す。図１２Ｂは、ＴＮＦ－α産生の結果を示す。図１２Ｃは、ＩＬ－２３産生の結果を示す。図１２Ｄは、ＩＬ－１２ ｐ４０産生の結果を示す。

【図12-2】同上。

【図13】図１３Ａ～１３Ｃは、本開示において開示するＥｘｏ－ＳＴＡＴ３のノックダウン効率を示す。様々な濃度のＥｘｏ－ＳＴＡＴ３で処理したＨｅｐ３Ｂ肝細胞における（ｉ）相対的なＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現（図１３Ａ）、（ｉｉ）相対的なｍｃｌ１（ＳＴＡＴ３下流標的遺伝子）ｍＲＮＡ発現（図１３Ｂ）、及び（ｉｉｉ）相対的なＳＴＡＴ３タンパク質発現（図１３Ｃ）を示すことによって、ノックダウン効率を示す。使用する濃度を、ｘ軸に沿って示す。図１３Ａ及び１３Ｂでは、未処理の細胞及びスクランブル対照ＡＳＯを含むＥＶで処理した細胞を対照として使用した。図１３Ｃでは、ＳｃａｆｆｏｌｄＸのみを含む（すなわち、ＳＴＡＴ３ ＡＳＯに融合していない）ＥＶを対照として使用した。

【図14】Ｈｅｐ３Ｂ皮下異種移植片モデルの腫瘍内治療に由来する腫瘍溶解物におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡのＥｘｏ－ＳＴＡＴ３ノックダウンを示す。動物を以下のいずれか１つで処置した：（ｉ）野生型ＥＶ（丸）；（ｉｉ）ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯのみ（すなわち、ＥＶに連結していない）（四角）；（ｉｉｉ）ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯのみを含む野生型ＥＶ（すなわち、ＳｃａｆｆｏｌｄＸに融合していない）（菱形）；及び（ｉｖ）ＳｃａｆｆｏｌｄＸ（ＰＴＧＦＲＮ）に融合させ、ＥＶの外面に連結させたＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯを含むＥＶ（「三角」）。

【図15】Ｏｃｔｅｔを使用して測定した、ＡＦ５６８標識したエキソソームの、ＣＤ３３への結合動態を示す。「可溶性ｈＰ６７．６」は、組換えヒトＣＤ３３細胞外ドメインへの可溶性抗ＣＤ３３抗体の結合を表す。「ＰｒＸ」及び「ＰｒＸ－ＡＦ５６８」は、それぞれ、ＰＴＧＦＲＮ過剰発現エキソソーム及びＮＨＳ－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８で標識したＰＴＧＦＲＮ過剰発現エキソソームの、組換えヒトＣＤ３３細胞外ドメインへの結合を表す。「ＡＬＦＡ」及び「ＡＬＦＡ－ＡＦ５６８」は、ＮＨＳ－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ５６８標識の存在下または非存在下での、組換えヒトＣＤ３３細胞外ドメインへのＡＬＦＡナノボディ発現エキソソームの結合を表す。「野生型」及び「野生型－ＡＦ５６８」は、ＮＨＳ－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ５６８標識の存在下または非存在下での、組換えヒトＣＤ３３細胞外ドメインへの野生型エキソソームの結合を表す。「ＡＬＦＡ－ｈＰ６７．６」及び「ＡＬＦＡ－ｈＰ６７．６－ＡＦ５６８」は、可溶性ＡＬＦＡタグ付きｈＰ６７．６ａＣＤ３３抗体に結合したＡＬＦＡナノボディ発現エキソソームの、ＮＨＳ－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ５６８標識の存在下または非存在下での組換えヒトＣＤ３３細胞外ドメインへの結合を表す。

【図16-1】図１６Ａ～１６Ｆは、ＡＭＬ細胞におけるＣＤ３３標的化エキソソーム（すなわち、抗ＣＤ３３標的化部分を含む）の取り込みの増加を示す。図１６Ａは、ＭＶ４－１１細胞におけるエキソソームの取り込みを示す。図１６Ｂは、ＫＧ１細胞におけるエキソソームの取り込みを示す。図１６Ｃは、ＲＡＷ２６４．７細胞におけるエキソソームの取り込みを示す。図１６Ｄは、ＭＯＩ １×１０^６でのＭＶ４－１１、ＫＧ１、及びＲＡＷ２６４．７細胞におけるエキソソームの取り込みを示す。図１６Ｅは、ＭＯＩ １．２５×１０^５でのＭＶ４－１１、ＫＧ１、及びＲＡＷ２６４．７細胞におけるエキソソームの取り込みを示す。図１６Ｆは、ＭＯＩ １．５６×１０^４でのＭＶ４－１１、ＫＧ１、及びＲＡＷ２６４．７細胞におけるエキソソームの取り込みを示す。

【図16-2】同上。

【発明を実施するための形態】

【0019】

本開示は、ＳＴＡＴ３アンタゴニストを含む細胞外小胞（ＥＶ）（例えばエキソソーム）に関する。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３アンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物内の核酸配列に相補的な長さ１０～３０ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、足場タンパク質をさらに含む。

【0020】

Ｉ． 定義
本記載を、より容易に理解することができるように、特定の用語を最初に定義する。さらなる定義は、詳細な説明の全体を通して記載されている。

【0021】

用語「ａ」または「ａｎ」実体とは、その実体の１つ以上を指すことに留意されたい；例えば、「ヌクレオチド配列」は、１つ以上のヌクレオチド配列を表すと理解される。したがって、用語「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」は、本明細書中では同じ意味で用いられる。

【0022】

さらに、本明細書中で使用する「及び／または」は、他方の有無にかかわらず、指定された２つの機能または成分のそれぞれの特定の開示として解釈される。したがって、本明細書中の「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される用語「及び／または」とは、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことを意図する。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される用語「及び／または」は、以下の各態様を包含することを意図している：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。

【0023】

態様が本明細書で「含む」という言葉で記載される場合は常に、さもなければ「からなる」及び／または「から本質的になる」という用語で記載される類似の態様もまた提供されることを理解されたい。

【0024】

他に定義されない限り、本明細書中で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本開示に関連する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。例えば、ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される多くの用語の一般的な辞書とともに技術の１つを提供する。

【0025】

単位、接頭辞、及び記号は、Ｓｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ （ＳＩ）で承認された形式で示される。数値範囲は、その範囲を定義する数を含むものとする。特に明記しない限り、ヌクレオチド配列は、左から右へ５’から３’の向きで記述される。アミノ酸配列は、左から右へアミノからカルボキシの方向で記述される。本明細書中で提供する見出しは、本明細書全体を参照することによって有し得る本開示の様々な態様を制限するものではない。したがって、すぐ下で定義する用語は、明細書全体を参照することにより、より完全に定義される。

【0026】

用語「約」とは、本明細書中では、およそ、ほぼ、大まかに、または近位を意味するために使用される。用語「約」を数値範囲と併用して使用する場合、この用語は、記載の数値の境界を上下に引き伸ばすことによって、その範囲を修飾する。一般的に、用語「約」は、記載の値の上下の数値を、例えば上下１０％の変動（より高くまたはより低く）で、修飾することができる。例えば、「ＡＳＯは、ＡＳＯの投与後の細胞におけるＳＴＡＴ３タンパク質の発現を少なくとも約６０％減少させる」と述べられる場合、それはＳＴＡＴ３レベルが５０％～７０％の範囲で減少することを意味する。

【0027】

用語「アンチセンスオリゴヌクレオチド」（ＡＳＯ）とは、ヌクレオチド間結合を介して互いに共有結合している、天然のヌクレオシドまたはその修飾形態などのヌクレオシドのオリゴマーまたはポリマーを指す。本開示に有用なＡＳＯは、少なくとも１つの非天然のヌクレオシドを含む。ＡＳＯは、標的核酸に少なくとも部分的に相補的であり、その結果、ＡＳＯは、標的核酸配列にハイブリダイズする。

【0028】

用語「核酸」または「ヌクレオチド」は、複数の核酸を包含することを意図している。いくつかの態様では、用語「核酸」または「ヌクレオチド」は、標的配列、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏでのプレｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ、またはＤＮＡを指す。この用語が標的配列中の核酸またはヌクレオチドを指す場合、核酸またはヌクレオチドは、細胞内で天然に存在する配列であり得る。他の態様では、「核酸」または「ヌクレオチド」は、本開示のＡＳＯ中の配列を指す。この用語がＡＳＯの配列を指す場合、核酸またはヌクレオチドは、非天然、すなわち、化学合成されたか、酵素産生されたか、組換え産生されたか、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの態様では、ＡＳＯ中の核酸またはヌクレオチドは、合成的または組換え的に産生されるが、天然の配列またはその断片ではない。いくつかの態様では、ＡＳＯ中の核酸またはヌクレオチドは、自然界に天然に存在しない少なくとも１つのヌクレオシド類似体を含むため、非天然である。

【0029】

本明細書中で使用する用語「ヌクレオチド」とは、糖部分、塩基部分、及びリン酸またはホスホロチオエートヌクレオチド間結合基などの共有結合基（結合基）を含むグリコシドを指し、これには、天然のヌクレオチド、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ、ならびに本明細書中では「ヌクレオチド類似体」とも呼ばれる、修飾された糖及び／または塩基部分を含む非天然ヌクレオチドの両方が含まれる。本明細書中では、単一のヌクレオチドは、単量体またはユニットと呼ばれ得る。特定の態様では、用語「ヌクレオチド類似体」とは、修飾された糖部分を有するヌクレオチドを指す。修飾された糖部分（例えば、ＬＮＡ）を有するヌクレオチドの非限定的な例は、本明細書中の他の場所に開示されている。特定の態様では、用語「ヌクレオチド類似体」とは、修飾された糖部分を有するヌクレオチドを指す。修飾された核酸塩基部分を有するヌクレオチドとして、５－メチル－シトシン、イソシトシン、シュードイソシトシン、５－ブロモウラシル、５－プロピニルウラシル、６－アミノプリン、２－アミノプリン、イノシン、ジアミノプリン、及び２－クロロ－６－アミノプリンが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、用語「ヌクレオチド」、「ユニット」及び「単量体」は、同じ意味で用いられる。ヌクレオチドまたは単量体の配列が言及される場合、言及されるのは、Ａ、Ｔ、Ｇ、ＣまたはＵなどの塩基の配列、及びその類似体であることが理解されよう。

【0030】

本明細書中で使用する用語「ヌクレオシド」は、糖部分及び塩基部分を含むグリコシドを指すために使用され、したがって、ＡＳＯのヌクレオチド間のヌクレオチド間結合によって共有結合的に連結されるヌクレオチド単位を指す場合に使用することができる。バイオテクノロジーの分野では、用語「ヌクレオチド」は、核酸の単量体またはユニットを指すためによく使用される。ＡＳＯに関して、用語「ヌクレオチド」とは、塩基のみ、すなわち、シトシン（ＤＮＡ及びＲＮＡ）、グアニン（ＤＮＡ及びＲＮＡ）、アデニン（ＤＮＡ及びＲＮＡ）、チミン（ＤＮＡ）を含む核酸塩基配列を指すことができる。糖骨格とヌクレオチド間結合の存在が暗示されているウラシル（ＲＮＡ）。同様に、特にヌクレオチド間結合基の１つ以上が修飾されているオリゴヌクレオチドの場合、用語「ヌクレオチド」は「ヌクレオシド」を指し得る。例えば、用語「ヌクレオチド」は、ヌクレオシド間の結合の存在または性質を特定する場合でさえ、使用することができる。

【0031】

本明細書中で使用する用語「ヌクレオチド長」は、所与の配列中のヌクレオチド（単量体）の総数を意味する。例えば、配列が２０ヌクレオチドを有する場合、配列のヌクレオチド長は２０である。したがって、用語「ヌクレオチド長」は、本明細書中では「ヌクレオチド番号」と同じ意味で用いられる。

【0032】

当業者が認識するように、オリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドは、５’末端基を含み得るが、５’ヌクレオチド間結合基を含まない。

【0033】

本明細書に記載の化合物は、いくつかの非対称中心を含むことができ、光学的に純粋なエナンチオマー、例えば、ラセミ体、ジアステレオ異性体の混合物、ジアステレオ異性体ラセミ体またはジアステレオ異性体ラセミ体の混合物などのエナンチオマーの混合物の形態で存在し得る。いくつかの態様では、不斉中心は不斉炭素原子であり得る。用語「不斉炭素原子」とは、４つの異なる置換基を有する炭素原子を意味する。カーン・インゴルド・プレローグ順位則によれば、不斉炭素原子は、「Ｒ」または「Ｓ」配置であり得る。

【0034】

本明細書中で使用する場合、用語「二環式糖」とは、４～７員環の２個の原子をつないで第２の環を形成して、二環式構造をもたらす架橋を含む４～７員環を含む修飾糖部分を意味する。いくつかの態様では、架橋は、ＬＮＡヌクレオシドで観察されるように、ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’を接続する（すなわち、２’－４’架橋）。

【0035】

本明細書中で使用する場合、「コード領域」または「コード配列」は、アミノ酸に翻訳可能なコドンからなるポリヌクレオチドの一部である。「終止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡ、またはＴＡＡ）は通常、アミノ酸に翻訳されないものの、コード領域の一部と見なし得るが、隣接する配列、例えば、プロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロン、非翻訳領域（「ＵＴＲ」）などは、コード領域の一部ではない。コード領域の境界は、通常、得られたポリペプチドのアミノ末端をコードする５’末端の開始コドンと、得られたポリペプチドのカルボキシル末端をコードする３’末端の翻訳終止コドンによって決定される。

【0036】

本明細書中で使用する用語「非コード領域」とは、コード領域ではないヌクレオチド配列を意味する。非コード領域の例として、プロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロン、非翻訳領域（「ＵＴＲ」）、非コードエキソンなどが挙げられるが、これらに限定されない。一部のエキソンは、各転写産物の５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）または３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）の全体または一部であり得る。非翻訳領域は、転写産物を効率的に翻訳し、翻訳速度と転写産物の半減期を制御するために重要である。

【0037】

ヌクレオチド配列に関して使用する場合の用語「領域」とは、その配列の部分を指す。例えば、語句「ヌクレオチド配列内の領域」または「ヌクレオチド配列の補体内の領域」とは、それぞれ、特定のヌクレオチド配列内またはヌクレオチド配列の補体内に位置し、ヌクレオチド配列より短いが、少なくとも１０ヌクレオチドより長い配列を指す。用語「部分配列（ｓｕｂ－ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」または「部分配列（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅ）」もまた、ヌクレオチド配列の領域を指し得る。

【0038】

ヌクレオチド配列に言及する場合の用語「下流」とは、核酸またはヌクレオチド配列が参照ヌクレオチド配列の３’側に位置することを意味する。特定の態様では、下流のヌクレオチド配列は、転写の開始点に続く配列に関連している。例えば、遺伝子の翻訳開始コドンは、転写開始部位の下流に位置する。

【0039】

用語「上流」とは、参照ヌクレオチド配列の５’側に位置するヌクレオチド配列を指す。

【0040】

本明細書中で使用する場合、用語「調節領域」とは、コード領域の上流（５’非コード配列）、内部、または下流（３’非コード配列）に位置し、関連するコード領域の転写、ＲＮＡプロセシング、安定性、または翻訳に影響を与えるヌクレオチド配列を指す。調節領域には、プロモーター、翻訳リーダー配列、イントロン、ポリアデニル化認識配列、ＲＮＡプロセシング部位、エフェクター結合部位、ＵＴＲ、及びステムループ構造が含まれ得る。コード領域が真核細胞での発現を目的としている場合、ポリアデニル化シグナル及び転写終結配列が、通常、コード配列の３’側に位置する。

【0041】

本明細書中で使用する用語「転写産物」は、ＤＮＡの転写によって合成され、プロセシング後にメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）になる一次転写産物、すなわち、メッセンジャーＲＮＡ前駆体（プレｍＲＮＡ）、及びプロセシングされたｍＲＮＡ自体を指し得る。用語「転写産物」は、「プレｍＲＮＡ」及び「ｍＲＮＡ」と同じ意味で用いられ得る。ＤＮＡ鎖が一次転写産物に転写された後、この新規合成された一次転写産物はいくつかの方法で修飾され、成熟した機能的な形態に変換されて、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなどの様々なタンパク質及びＲＮＡを生成する。したがって、用語「転写産物」には、エキソン、イントロン、５’ＵＴＲ、及び３’ＵＴＲが含まれ得る。

【0042】

本明細書中で使用する用語「発現」とは、ポリヌクレオチドが、遺伝子産物、例えば、ＲＮＡまたはポリペプチドを産生するプロセスを指す。これには、ポリヌクレオチドからメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）への転写及びｍＲＮＡからポリペプチドへの翻訳が含まれるが、これらに限定されない。発現は、「遺伝子産物」を生成する。本明細書中で使用する場合、遺伝子産物は、核酸、例えば、遺伝子の転写によって生成されるメッセンジャーＲＮＡ、または転写産物から翻訳されるポリペプチドのいずれかであり得る。本明細書に記載の遺伝子産物には、転写後修飾、例えば、ポリアデニル化もしくはスプライシングを有する核酸、または翻訳後修飾、例えば、メチル化、グリコシル化、脂質の付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、もしくはタンパク質分解切断を有するポリペプチドがさらに含まれる。

【0043】

２つ以上の核酸に関する用語「同一」または「同一性」の割合とは、比較し、保存的アミノ酸置換を配列同一性の一部として考慮せずに、対応を最大化するためにアラインメントする（必要に応じてギャップを導入する）場合に、同一であるか、またはヌクレオチド残基もしくはアミノ酸残基の特定の割合が同一である２つ以上の配列を指す。同一性の割合は、配列比較ソフトウェアまたはアルゴリズムを使用して、または目視検査によって測定することができる。アミノ酸配列またはヌクレオチド配列のアラインメントを得るために使用することができる様々なアルゴリズム及びソフトウェアは、当技術分野で公知である。

【0044】

配列アラインメントアルゴリズムのそのような非限定的な一例は、Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８７：２２６４－２２６８に記載されており、Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９０：５８７３－５８７７において改修され、さらにＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９－３４０２）に組み込まれている。特定の態様では、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２に記載されているように使用することができる。ＢＬＡＳＴ－２，ＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：４６０－４８０），ＡＬＩＧＮ，ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）は、配列をアラインメントするために使用することができる、一般的に利用可能な追加のソフトウェアプログラムである。特定の態様では、２つのヌクレオチド配列間の同一性の割合を、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを使用して（例えば、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスならびに４０、５０、６０、７０、または９０のギャップ重み及び１、２、３、４、５、または６の長さ重みを使用して）、決定する。特定の代替の態様では、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈのアルゴリズム（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４－４５３（１９７０））を組み込んだＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを使用して（例えば、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、ならびにギャップの重み１６、１４、１２、１０、８、６、または４、及び長さの重み１、２、３、４、５を使用して）、２つのアミノ酸配列間の同一性の割合を決定することができる。あるいは、特定の態様では、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列間の同一性の割合を、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ，４：１１－１７（１９８９））を使用して決定する。例えば、同一性の割合を、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）を使用し、ＰＡＭ１２０残基重み表、ギャップ長ペナルティ１２及びギャップペナルティ４を使用して決定することができる。当業者は、特定のアライメントソフトウェアにより、最大アラインメントのための適切なパラメータを決定することができる。特定の態様では、アラインメントソフトウェアのデフォルトパラメータを使用する。

【0045】

特定の態様では、第２のヌクレオチド配列に対する第１のヌクレオチド配列の同一性の割合「Ｘ」は、１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、式中、Ｙは、第１及び第２の配列のアラインメント（目視検査または特定の配列アラインメントプログラムによってアラインメントする）において同一の一致としてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｚは、第２の配列中の残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列よりも長い場合、第２の配列に対する第１の配列の同一性の割合は、第１の配列に対する第２の配列の同一性の割合よりも高くなる。

【0046】

ポリヌクレオチド参照配列とアラインメントする単一のポリヌクレオチド標的配列内の異なる領域は、各々が、それら固有の配列同一性の割合を有し得る。配列同一性の割合の値は、最も近似の１０分の１に丸められることに留意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は、８０．１に切り捨てられ、一方、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は、８０．２に切り上げられる。また、長さの値は常に整数になることに留意されたい。

【0047】

本明細書中で使用する場合、用語「相同」及び「相同性」は、用語「同一性」及び「同一」と同じ意味である。

【0048】

用語「その天然のバリアント」とは、マウス、サル、及びヒトなどの哺乳類などの定義された分類学的群内に天然に存在するＳＴＡＴ３ポリペプチド配列またはＳＴＡＴ３核酸配列（例えば、転写産物）のバリアントを指す。一般的には、ポリヌクレオチドの「天然のバリアント」に言及する場合、この用語はまた、染色体転座または複製による、２４７，４１６，１５６～２４７，４４９，１０８（すなわち、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＧ＿００７３７０．１のヌクレオチド５，００１～８０，１７１）の染色体位置１７ｑ２１．２に認められるＳＴＡＴ３をコードするゲノムＤＮＡの任意の対立遺伝子バリアント、及びそれに由来するｍＲＮＡなどのＲＮＡを包含し得る。「天然のバリアント」はまた、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡの選択的スプライシングに由来するバリアントを含み得る。特定のポリペプチド配列に言及する場合、例えば、この用語はまた、タンパク質の天然の形態を含み、この形態は、したがって、例えば、シグナルペプチド切断、タンパク質分解切断、グリコシル化などの翻訳時修飾または翻訳後修飾によってプロセシングされ得る。特定のポリペプチド配列に言及する場合、例えば、この用語はまた、タンパク質の天然の形態を含み、したがって、例えば、シグナルペプチド切断、タンパク質分解切断、グリコシル化などの翻訳時修飾または翻訳後修飾によってプロセシングされ得る。

【0049】

本開示のＡＳＯ（またはその領域）と、本明細書に開示するものなどの哺乳類ＳＴＡＴ３（例えば、ＳＴＡＴ３遺伝子）をコードする核酸の標的領域との間の「相補性」の程度を決定する際に、「相補性」（及び「相同性」または「同一性」）の程度は、ＡＳＯ（またはその領域）の配列と、それに最もよく一致する標的領域（または標的領域の逆相補）配列との間の同一性の割合（または相同性の割合）として表される。割合は、２つの配列間で同一であるアラインメントされた塩基の数を計数し、ＡＳＯ内の連続する単量体の総数で割り、１００を掛けることによって計算される。そのような比較において、ギャップが存在する場合、そのようなギャップは、本開示のＡＳＯと標的領域との間でギャップ内の単量体の数が異なる領域ではなく、単にミスマッチであることが好ましい。

【0050】

本明細書中で使用する用語「相補体」とは、参照配列に相補的な配列を示す。相補性は、２つのＤＮＡまたはＲＮＡ配列間で共有される特性であり、互いに逆平行にアラインメントすると、鏡を見て物事の逆を見るのと同じように、配列の各位置のヌクレオチド塩基が相補的となることから、ＤＮＡ複製及び転写の基本原理であることは周知である。したがって、例えば、５’「ＡＴＧＣ」３’の配列の相補体は、３’「ＴＡＣＧ」５’または５’「ＧＣＡＴ」３’と記述することができる。本明細書中で使用する用語「逆相補体」、「逆相補的」、及び「逆相補性」は、用語「相補体」、「相補的」、及び「相補性」と同じ意味である。いくつかの態様では、用語「相補的」とは、ＳＴＡＴ３転写産物内の連続する核酸配列に対する１００％の一致または相補性（すなわち、完全に相補的）を指す。いくつかの態様では、用語「相補的」とは、ＳＴＡＴ３転写産物内の連続する核酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の一致または相補性であることを指す。

【0051】

２つの別個の核酸配列またはヌクレオチド配列に言及する場合、用語「対応する（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｔｏ）」及び「対応する（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｓ ｔｏ）」は、相同性及び／または機能性に基づいて互いに対応または類似する配列の領域を明確にするために使用することができるが、特定の配列のヌクレオチドには異なる番号が付され得る。例えば、遺伝子転写産物の異なるアイソフォームは、ヌクレオチド配列の類似または保存された部分を有することができ、その付番は、選択的スプライシング及び／または他の修飾に基づいてそれぞれのアイソフォームで異なり得る。さらに、核酸配列またはヌクレオチド配列を特徴決定する場合に、異なる付番系を使用することができることを理解されたい（例えば、遺伝子転写産物、及び翻訳開始コドンから配列の付番を開始するか、または５’ＵＴＲを含めるか）。さらに、遺伝子または遺伝子転写産物の異なるバリアントの核酸配列またはヌクレオチド配列は、様々に異なり得ることを理解されたい。しかしながら、本明細書中で使用する場合、核酸配列またはヌクレオチド配列の相同性及び／または機能性を共有するバリアントの領域は、互いに「対応する」と見なされる。例えば、配列番号１（「参照配列」）のヌクレオチドＸからＹに対応するＳＴＡＴ３転写産物のヌクレオチド配列は、配列番号１のヌクレオチドＸからＹと同一の配列または類似の配列を有するＳＴＡＴ３転写産物配列（例えば、ＳＴＡＴ３プレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ）を指す（式中、Ｘは開始部位であり、Ｙは終了部位である（図１に示すように））。当業者であれば、ＳＴＡＴ３転写配列（配列番号３）を配列番号１とアラインメントすることにより、ＳＴＡＴ３転写配列中の対応するＸ残基及びＹ残基を同定することができる。

【0052】

用語「対応するヌクレオチド類似体」及び「対応するヌクレオチド」とは、ヌクレオチド類似体及び天然のヌクレオチドの核酸塩基が、同じ対形成またはハイブリダイズ能力を有することを示すことを意図している。例えば、ヌクレオチドの２－デオキシリボースユニットがアデニンに連結されている場合、「対応するヌクレオチド類似体」は、アデニンに連結されたペントースユニット（２－デオキシリボースとは異なる）を含む。

【0053】

ＡＳＯ化学構造の注釈は以下のとおりである β－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオチドはＯｘｙＢで示され、式中、Ｂは、チミン（Ｔ）、ウリジン（Ｕ）、シトシン（Ｃ）、５－メチルシトシン（ＭＣ）、アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）などのヌクレオチド塩基を示し、したがってＯｘｙＡ、ＯｘｙＴ、ＯｘｙＭＣ、ＯｘｙＣ及びＯｘｙＧが含まれる。ＤＮＡヌクレオチドはＤＮＡｂで示され、式中、小文字のｂはチミン（Ｔ）、ウリジン（Ｕ）、シトシン（Ｃ）、５－メチルシトシン（Ｍｃ）、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）などのヌクレオチド塩基を示し、したがって、ＤＮＡａ、ＤＮＡｔ、ＤＮＡ、及びＤＮＡｇが含まれる。Ｃまたはｃの前の文字Ｍは、５－メチルシトシンを示す。文字「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を示す。

【0054】

本明細書中で使用する場合、用語「ＡＳＯ番号（ＡＳＯ Ｎｕｍｂｅｒ）」または「ＡＳＯ番号（ＡＳＯ Ｎｏ．）」とは、成分、例えば、ヌクレオシド（例えば、ＤＮＡ）、ヌクレオシド類似体（例えば、β－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ）、核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、Ｕ、またはＭＣ）の詳細な化学構造、及びバックボーン構造（例えば、ホスホロチオエートまたはホスホロジエステル）を有するヌクレオチド配列に与えられる固有の番号を指す。例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５９は、ＳＴＡＴ３－２５５９（配列番号１００）を指し得る。

【0055】

「効力」は通常、特に明記しない限り、ＩＣ_５０またはＥＣ_５０値として、μＭ、ｎＭ、またはｐＭで表される。効力は、阻害率で表すこともできる。ＩＣ_５０は、治療用分子の阻害濃度の中央値である。ＥＣ_５０は、ビヒクルまたは対照（生理食塩水など）に対する治療用分子の有効濃度の中央値である。機能アッセイにおいて、ＩＣ_５０とは、治療用分子によって達成される、生物学的応答、例えば、ｍＲＮＡの転写またはタンパク質の発現を、その生物学的応答の５０％まで減少させる治療用分子の濃度である。機能アッセイにおいて、ＥＣ_５０とは、生物学的応答、例えば、ｍＲＮＡの転写またはタンパク質の発現の５０％を生成させる治療用分子の濃度である。ＩＣ_５０またはＥＣ_５０は、当技術分野で公知の任意の数の手段によって計算することができる。

【0056】

本明細書中で使用する場合、例えば、ＳＴＡＴ３遺伝子転写産物及び／またはＳＴＡＴ３タンパク質の発現を「阻害する」という用語は、細胞または組織内のＳＴＡＴ３遺伝子転写産物及び／またはＳＴＡＴ３タンパク質の発現を低下させるＡＳＯを指す。いくつかの態様では、用語「阻害する」とは、ＳＴＡＴ３遺伝子転写産物またはＳＴＡＴ３タンパク質の完全な阻害（１００％阻害または検出不可能なレベル）を指す。他の態様では、用語「阻害する」とは、細胞または組織内のＳＴＡＴ３遺伝子転写産物及び／またはＳＴＡＴ３タンパク質の発現を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％阻害することを指す。

【0057】

本明細書中で使用する場合、用語「細胞外小胞」すなわち「ＥＶ」とは、内部空間を封入する膜を含む細胞由来小胞を指す。細胞外小胞は、それらが由来する細胞よりも小さい直径を有するすべての膜結合小胞（例えば、エキソソーム、ナノ小胞）を含む。いくつかの態様では、細胞外小胞は、直径が２０ｎｍ～１０００ｎｍの範囲であり、内部空間（すなわち、ルーメン）内で、細胞外小胞の外部表面に提示されて、及び／または膜にわたってのいずれかで、様々な高分子ペイロードを含み得る。いくつかの態様では、ペイロードは、核酸、タンパク質、炭水化物、脂質、小分子、及び／またはそれらの組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、足場部分を含む。例として、及び限定されないが、細胞外小胞は、アポトーシス小体、細胞の断片、直接的操作または間接的操作による細胞由来の小胞（例えば、連続押出またはアルカリ溶液での処理による）、小胞化オルガネラ、及び生細胞により産生される小胞（例えば、直接原形質膜出芽または後期エンドソームの原形質膜との融合による）を含む。細胞外小胞は、生きているもしくは死んだ生物、外植された組織もしくは器官、及び／または培養された細胞に由来し得る。いくつかの態様では、細胞外小胞は、１つ以上の導入遺伝子産物を発現する細胞によって生成される。

【0058】

本明細書中で使用する場合、用語「エキソソーム」とは、直径が２０～３００ｎｍの間（例えば、４０～２００ｎｍの間）の細胞外小胞を指す。エキソソームは、内部空間（すなわち、内腔）を囲む膜を含み、いくつかの態様では、直接の原形質膜出芽によって、または後期エンドソームと原形質膜との融合によって、細胞（例えば、プロデューサー細胞）から生成され得る。いくつかの態様では、エキソソームは足場部分を含む。以下に記載するように、エキソソームは、プロデューサー細胞に由来することができ、そのサイズ、密度、生化学的パラメータ、またはそれらの組み合わせに基づいてプロデューサー細胞から単離され得る。いくつかの態様では、本開示のＥＶ、例えば、エキソソームは、１つ以上の導入遺伝子産物を発現する細胞によって生成される。

【0059】

本明細書中で使用する場合、用語「ナノ小胞」とは、直径が２０～２５０ｎｍ（例えば、３０～１５０ｎｍ）の細胞外小胞を指し、細胞（例えば、プロデューサー細胞）から、操作なしでは細胞によってナノ小胞が生成されないような、直接または間接の操作によって生成される。ナノ小胞を産生するための細胞の適切な操作には、連続押出、アルカリ溶液での処理、超音波処理、またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、ナノ小胞の産生は、プロデューサー細胞の破壊を生じ得る。いくつかの態様では、本明細書に記載のナノ小胞の集団は、原形質膜からの直接出芽または後期エンドソームの原形質膜との融合により、細胞に由来する小胞を実質的に含まない。いくつかの態様では、ナノ小胞は、足場部分を含む。以前にプロデューサー細胞に由来したナノ小胞は、そのサイズ、密度、生化学的パラメータ、またはそれらの組み合わせに基づいてプロデューサー細胞から単離され得る。

【0060】

本明細書中で使用する場合、用語「表面改変ＥＶ、例えば、エキソソーム」（例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ改変ＥＶ、例えば、エキソソーム）とは、改変ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面が、改変前のＥＶ（例えばエキソソーム）の表面、または天然のＥＶ（例えばエキソソーム）の表面とは異なっているように、その組成が改変されたＥＶ（例えばエキソソーム）の膜または表面を有するＥＶ（例えばエキソソーム）を指す。改変は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上、またはＥＶ（例えばエキソソーム）の膜内に対して行うことができ、その結果、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面が変化する。例えば、膜は、そのタンパク質、脂質、小分子、炭水化物などの組成が改変される。組成は、化学的、物理的、もしくは生物学的方法によって、または化学的、物理的、もしくは生物学的方法によって、あらかじめまたは同時に改変した細胞から産生させることによって、変更することができる。具体的には、組成は、遺伝子工学によって、または遺伝子工学によってあらかじめ改変した細胞から産生させることによって、変更することができる。いくつかの態様では、表面改変されたＥＶ、例えば、エキソソームは、外来性タンパク質（すなわち、ＥＶ（例えばエキソソーム）が天然に発現しないタンパク質）またはその断片もしくはバリアントを含み、これらは、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面に露出し得るか、またはＥＶ（例えばエキソソーム）の表面に露出した部分の固定点（接着部）であり得る。他の態様では、表面改変されたＥＶ（例えばエキソソーム）は、高発現（例えば、多数）の、天然のエキソソームタンパク質（例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ）またはその断片もしくはバリアントを含み、これらは、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面に露出し得るか、またはＥＶ（例えばエキソソーム）の表面に露出した部分の固定点（接着部）であり得る。

【0061】

本明細書中で使用する場合、用語「内腔改変エキソソーム」（例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＹ改変エキソソーム）とは、改変ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔が、改変前のＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔、または天然のＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔とは異なっているように、その組成が改変されたＥＶ（例えばエキソソーム）の膜または内腔を有するＥＶ（例えばエキソソーム）を指す。改変は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔内または膜内で直接行うことができ、その結果、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔が変化する。例えば、膜は、そのタンパク質、脂質、小分子、炭水化物などの組成が改変され、その結果、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔が改変される。組成は、化学的、物理的、もしくは生物学的方法によって、または化学的、物理的、もしくは生物学的方法によって、あらかじめ改変した細胞から産生させることによって、変更することができる。具体的には、組成は、遺伝子工学によって、または遺伝子工学によってあらかじめ改変した細胞から産生させることによって、変更することができる。いくつかの態様では、内腔を改変されたエキソソームは、外来性タンパク質（すなわち、ＥＶ（例えばエキソソーム）が天然に発現しないタンパク質）またはその断片もしくはバリアントを含み、これらは、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔に露出し得るか、またはＥＶ（例えばエキソソーム）の内層に露出した部分の固定点（接着部）であり得る。他の態様では、内腔を改変されたＥＶ（例えばエキソソーム）は、高発現の天然のエキソソームタンパク質（例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸまたはＳｃａｆｆｏｌｄＹ）またはその断片もしくはバリアントを含み、これらは、エキソソームの内腔に露出し得るか、またはエキソソームの内腔に露出した部分の固定点（接着部）であり得る。

【0062】

用語「改変された」とは、本明細書に記載のＥＶ（例えばエキソソーム）に関して使用される場合、改変されたＥＶ（例えばエキソソーム）が天然のＥＶ（例えばエキソソーム）とは異なっているように、ＥＶ（例えばエキソソーム）を変更または改変することを指す。いくつかの態様では、本明細書に記載の改変ＥＶ（例えばエキソソーム）は、天然のＥＶ（例えばエキソソーム）の膜と比較して、タンパク質、脂質、小分子、炭水化物などの組成が異なる膜を含む（例えば、膜はより高い密度または数の天然エキソソームタンパク質を含み、及び／または膜は、エキソソーム（例えば、ＡＳＯ）には天然に見出されないタンパク質を含む。特定の態様では、膜に対するそのような改変は、ＥＶ（例えばエキソソーム）（例えば、本明細書に記載の表面改変されたＥＶ（例えばエキソソーム））の外面を変化させる。特定の態様では、膜に対するそのような改変は、ＥＶ（例えばエキソソーム）（例えば、本明細書に記載の内腔を改変されたＥＶ（例えばエキソソーム））の内腔を変化させる。

【0063】

本明細書中で使用する場合、用語「足場部分」とは、ペイロードまたは任意の他の目的の化合物（例えば、ＡＳＯ）を、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面または外面のいずれかにおいて、ＥＶ（例えばエキソソーム）に固定するために使用することができる分子を指す。特定の態様では、足場部分は合成分子を含む。いくつかの態様では、足場部分は、非ポリペプチド部分を含む。他の態様では、足場部分は、ＥＶ（例えばエキソソーム）に天然に存在する脂質、炭水化物、またはタンパク質を含む。いくつかの態様では、足場部分は、ＥＶ（例えばエキソソーム）に天然には存在しない脂質、炭水化物、またはタンパク質を含む。特定の態様では、足場部分はＳｃａｆｆｏｌｄＸである。いくつかの態様では、足場部分はＳｃａｆｆｏｌｄＹである。さらなる態様では、足場部分は、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ及びＳｃａｆｆｏｌｄＹの両方を含む。本開示とともに使用し得る他の足場部分として：アミノペプチダーゼＮ（ＣＤ１３）；ネプリライシン、別名膜メタロエンドペプチダーゼ（ＭＭＥ）；エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー１（ＥＮＰＰ１）；ニューロピリン－１（ＮＲＰ１）；ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリン（ＭＦＧＥ８）、ＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂが挙げられる。

【0064】

本明細書中で使用する場合、用語「ＳｃａｆｆｏｌｄＸ」とは、エキソソームの表面で最近同定されたエキソソームタンパク質を指す。例えば、米国特許第１０，１９５，２９０号を参照されたい（その全体が参照により本明細書に援用される）。ＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質の非限定的な例として：プロスタグランジンＦ２受容体ネガティブレギュレーター（「ＰＴＧＦＲＮタンパク質」）；バシギン（「ＢＳＧタンパク質」）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（「ＩＧＳＦ２タンパク質」）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（「ＩＧＳＦ３タンパク質」）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（「ＩＧＳＦ８タンパク質」）；インテグリンβ１（「ＩＴＧＢ１タンパク質」）；インテグリンα４（「ＩＴＧＡ４タンパク質」）；４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（「ＳＬＣ３Ａ２タンパク質」）；及びＡＴＰトランスポータータンパク質の一クラス（「ＡＴＰ１Ａ１タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ２タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ３タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ４タンパク質」、「ＡＴＰ１Ｂ３タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ１タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ２タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ３タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂタンパク質」）；及びその機能的断片が挙げられる。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質は、タンパク質全体またはその断片（例えば、機能的断片、例えば、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の外面または内腔表面上に別の部分を固定することができる最小断片）であり得る。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、部分（例えば、ＡＳＯ）を、エキソソームの外面または内腔表面に固定することができる。

【0065】

本明細書中で使用する場合、用語「ＳｃａｆｆｏｌｄＹ」とは、エキソソームの内腔表面内で新たに同定されたエキソソームタンパク質を指す。例えば、国際公開第ＷＯ／２０１９／０９９９４２号に記載されている方法を参照されたい（その全体が参照により本明細書に援用される）。ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質の非限定的な例として：ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質（「ＭＡＲＣＫＳタンパク質」）；ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質様１（「ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質」）；及び脳酸可溶性タンパク質１（「ＢＡＳＰ１タンパク質」）が挙げられる。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、タンパク質全体またはその断片（例えば、機能的断片、例えば、エキソソームの内腔表面上に部分を固定することができる最小断片）であり得る。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、部分（例えば、ＡＳＯ）を、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面に固定することができる。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、部分（例えば、ＡＳＯ）を、ＥＶ（例えばエキソソーム）の外面に固定することができる。

【0066】

本明細書中で使用する場合、タンパク質（例えば、治療用タンパク質、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ、またはＳｃａｆｆｏｌｄＹ）の用語「断片」とは、天然のタンパク質と比較して、天然の配列よりも短いか、Ｎ末端及び／またはＣ末端を欠失させるか、またはタンパク質の一部を欠失させたタンパク質のアミノ酸配列を指す。本明細書中で使用する場合、用語「機能的断片」とは、タンパク質機能を保持しているタンパク質断片を指す。したがって、いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質の機能的断片は、部分をＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面上または外面上に固定する能力を保持している。同様に、特定の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質の機能的断片は、部分をＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面上または外面上に固定する能力を保持している。断片が機能的断片であるかどうかは、ウエスタンブロット、ＦＡＣＳ分析、及び断片と、例えばＧＦＰなどの自家蛍光タンパク質との融合を含む、ＥＶ（例えばエキソソーム）のタンパク質含有量を決定するための任意の既知の方法によって評価することができる。特定の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質の機能的断片は、天然のＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質の能力、例えば、部分を固定する能力の、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または少なくとも約１００％を保持している。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質の機能的断片は、天然のＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質の能力、例えば、別の分子を固定する能力の、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または少なくとも約１００％を保持している。

【0067】

本明細書中で使用する場合、分子（例えば、機能性分子、抗原、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ及び／またはＳｃａｆｆｏｌｄＹ）の用語「バリアント」とは、当技術分野で公知の方法によって比較する際に、別の分子と特定の構造的及び機能的同一性を共有する分子を指す。例えば、タンパク質のバリアントは、別のタンパク質における置換、挿入、欠失、フレームシフトまたは再構成を含み得る。

【0068】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸのバリアントは、全長の成熟ＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、もしくはＡＴＰトランスポータータンパク質、またはＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、もしくはＡＴＰトランスポータータンパク質の断片（例えば、機能的断片）に対して、少なくとも約７０％の同一性を有するバリアントを含む。いくつかの態様では、ＰＴＧＦＲＮのバリアントまたはＰＴＧＦＲＮの断片のバリアントは、配列番号３０１に記載のＰＴＧＦＲＮまたはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＢＳＧのバリアントまたはＢＳＧの断片のバリアントは、配列番号３０３に記載のＢＳＧまたはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＩＧＳＦ２のバリアントまたはＩＧＳＦ２の断片のバリアントは、配列番号３０８に記載のＩＧＳＦ２またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＩＧＳＦ３のバリアントまたはＩＧＳＦ３の断片のバリアントは、配列番号３０９に記載のＩＧＳＦ３またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＩＧＳＦ８のバリアントまたはＩＧＳＦ８の断片のバリアントは、配列番号３０４に記載のＩＧＳＦ８またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＩＴＧＢ１のバリアントまたはＩＴＧＢ１の断片のバリアントは、配列番号３０５に記載のＩＴＧＢ１またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＩＴＧＡ４のバリアントまたはＩＴＧＡ４の断片のバリアントは、配列番号３０６に記載のＩＴＧＡ４またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＳＬＣ３Ａ２のバリアントまたはＳＬＣ３Ａ２の断片のバリアントは、配列番号３０７に記載のＳＬＣ３Ａ２またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＡＴＰ１Ａ１のバリアントまたはＡＴＰ１Ａ１の断片のバリアントは、配列番号３１０に記載のＡＴＰ１Ａ１またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＡＴＰ１Ａ２のバリアントまたはＡＴＰ１Ａ２の断片のバリアントは、配列番号３１１に記載のＡＴＰ１Ａ２またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＡＴＰ１Ａ３のバリアントまたはＡＴＰ１Ａ３の断片のバリアントは、配列番号３１２に記載のＡＴＰ１Ａ３またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＡＴＰ１Ａ４のバリアントまたはＡＴＰ１Ａ４の断片のバリアントは、配列番号３１３に記載のＡＴＰ１Ａ４またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＡＴＰ１Ｂ３のバリアントまたはＡＴＰ１Ｂ３の断片のバリアントは、配列番号３１４に記載のＡＴＰ１Ｂ３またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＡＴＰ２Ｂ１のバリアントまたはＡＴＰ２Ｂ１の断片のバリアントは、配列番号３１５に記載のＡＴＰ２Ｂ１またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＡＴＰ２Ｂ２のバリアントまたはＡＴＰ２Ｂ２の断片のバリアントは、配列番号３１６に記載のＡＴＰ２Ｂ２またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＡＴＰ２Ｂ３のバリアントまたはＡＴＰ２Ｂ３の断片のバリアントは、配列番号３１７に記載のＡＴＰ２Ｂ３またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＡＴＰ２Ｂ４のバリアントまたはＡＴＰ２Ｂ４の断片のバリアントは、配列番号３１８に記載のＡＴＰ２Ｂ４またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、本明細書に開示するＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質のバリアントまたはＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質の断片のバリアントは、ＥＶ（例えばエキソソーム）を特異的に標的とする能力を保持している。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、１つ以上の変異、例えば、保存的アミノ酸置換を含む。

【0069】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹのバリアントは、ＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＲＣＫＳＬ１、ＢＡＳＰ１またはＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＲＣＫＳＬ１、もしくはＢＡＳＰ１の断片に対して少なくとも７０％の同一性を有するバリアントを含む。いくつかの態様では、ＭＡＲＣＫＳのバリアントまたはＭＡＲＣＫＳの断片のバリアントは、配列番号４０１に記載のＭＡＲＣＫＳまたはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＭＡＲＣＫＳＬ１のバリアントまたはＭＡＲＣＫＳＬ１の断片のバリアントは、配列番号４０２に記載のＭＡＲＣＫＳＬ１またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＢＡＳＰ１のバリアントまたはＢＡＳＰ１の断片のバリアントは、配列番号４０３に記載のＢＡＳＰ１またはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質のバリアントまたはＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質の断片のバリアントは、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面を特異的に標的とする能力を保持している。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、１つ以上の変異、例えば、保存的アミノ酸置換を含む。

【0070】

「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置換される置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーは、当該技術分野において定義されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。したがって、ポリペプチドのアミノ酸が同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸に置換されている場合、その置換は保存的であると見なされる。別の態様では、アミノ酸のストリングを、側鎖ファミリーメンバーの順序及び／または組成が異なる構造的に類似したストリングに保存的に置き換えることができる。

【0071】

２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の用語「配列同一性の割合」または「同一性の割合」とは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入しなければならない付加または欠失（すなわち、ギャップ）を考慮に入れ、比較ウィンドウ上で配列によって共有される同一の一致した位置の数を指す。一致した位置とは、標的配列と参照配列の両方で同一のヌクレオチドまたはアミノ酸が提示されている任意の位置である。ギャップはヌクレオチドまたはアミノ酸ではないため、標的配列に存在するギャップはカウントしない。同様に、参照配列由来のヌクレオチドまたはアミノ酸ではなく、標的配列のヌクレオチドまたはアミノ酸をカウントするため、参照配列に提示されるギャップはカウントしない。

【0072】

配列同一性の割合は、両方の配列において同一のアミノ酸残基または核酸塩基が生じる位置の数を決定して、一致した位置の数を取得し、比較ウィンドウ内の一致した位置の数を位置の総数で除し、結果に１００を乗じて、配列同一性の割合を取得することによって計算される。２つの配列間の配列の比較と配列同一性の割合の決定は、オンラインでの使用とダウンロード用の両方において、容易に利用可能なソフトウェアを使用して達成してもよい。好適なソフトウェアプログラムは、様々な供給元から入手可能であり、タンパク質配列とヌクレオチド配列の両方のアラインメントに利用可能である。配列同一性の割合を決定するための１つの好適なプログラムは、米国政府の国立バイオテクノロジー情報センターＢＬＡＳＴ Ｗｅｂサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なプログラムのＢＬＡＳＴ ｓｕｉｔｅの一部であるｂｌ２ｓｅｑである。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して２つの配列間の比較を実行する。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用され、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するために使用される。他の好適なプログラムは、例えば、バイオインフォマティクスプログラムのＥＭＢＯＳＳ ｓｕｉｔｅの一部である、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒであり、欧州バイオインフォマティクス研究所（ＥＢＩ）（ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ）からも入手可能である。

【0073】

ポリヌクレオチドまたはポリペプチド参照配列とアラインメントする単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域は、それぞれ、それら自身の配列同一性の割合を有し得る。配列同一性の割合の値は、最も近似の１０分の１に丸められることに留意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は、８０．１に切り捨てられ、一方、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は、８０．２に切り上げられる。また、長さの値は常に整数になることに留意されたい。

【0074】

当業者であれば、配列同一性の割合の計算のための配列アラインメントの生成が、一次配列データによって排他的に行われる一対での配列－配列比較に限定されないことを理解するであろう。配列アラインメントは、多重配列アラインメントから導き出すことができる。多重配列アラインメントを生成するための好適なプログラムの１つは、ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｃｌｕｓｔａｌ．ｏｒｇから入手可能なＣｌｕｓｔａｌＷ２である。別の好適なプログラムは、ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｄｒｉｖｅ５．ｃｏｍ／ｍｕｓｃｌｅ／から入手可能なＭＵＳＣＬＥである。ＣｌｕｓｔａｌＷ２とＭＵＳＣＬＥは、例えば、ＥＢＩから代替的に入手可能である。

【0075】

配列アラインメントは、配列データを、構造データ（例えば、結晶学的タンパク質構造）、機能データ（例えば、変異の位置）、または系統発生データなどの異種供給源由来のデータと統合することによって生成できることも理解されよう。異種データを統合して多重配列アラインメントを生成する好適なプログラムは、Ｔ－Ｃｏｆｆｅｅであり、ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで入手可能であり、あるいは、例えば、ＥＢＩから入可能である。配列同一性の割合を計算するために使用される最終アラインメントが、自動または手動のいずれかで精選され得ることも理解されよう。

【0076】

ポリヌクレオチドバリアントは、コード領域、非コード領域、またはその両方に改変を含み得る。一態様では、ポリヌクレオチドバリアントは、サイレント置換、付加、または欠失を生じるが、コードされたポリペプチドの特性または活性を変化させない改変を含む。別の態様では、ヌクレオチドバリアントは、遺伝暗号の縮重によるサイレント置換によって生成される。他の態様では、５～１０、１～５、または１～２アミノ酸が、任意の組み合わせで置換、欠失、または付加されているバリアントである。ポリヌクレオチドバリアントは、様々な理由のために、例えば、特定の宿主のコドン発現を最適化する（ヒトｍＲＮＡのコドンを他の宿主、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌宿主に変更する）ために、生成され得る。

【0077】

天然のバリアントは「対立遺伝子バリアント」と呼ばれ、生物の染色体上の所与の遺伝子座を占める遺伝子のいくつかの代替形態の１つを指す（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ，Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立遺伝子バリアントは、ポリヌクレオチド及び／またはポリペプチドレベルのいずれかで様々に異なっていてもよく、また、本開示に含まれる。あるいは、非天然のバリアントを、変異誘発技術または直接合成によって生成することができる。

【0078】

タンパク質工学及び組換えＤＮＡ技術の既知の方法を使用して、バリアントを生成してポリペプチドの特徴を向上または改変することができる。例えば、生物学的機能を実質的に失わせることなく、分泌されたタンパク質のＮ末端またはＣ末端から１つ以上のアミノ酸を欠失させることができる。Ｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２９８４－２９８８（１９９３）（その全体が参照により本明細書に援用される）は、３、８、または２７個のアミノ末端アミノ酸残基を欠失させた後でもヘパリン結合活性を有するバリアント型ＫＧＦタンパク質を報告した。同様に、インターフェロンγは、このタンパク質のカルボキシ末端から８～１０アミノ酸残基を欠失させた後、最大１０倍高い活性を示した。（Ｄｏｂｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９－２１６（１９８８）（その全体が参照により本明細書に援用される））。

【0079】

さらに、多くのエビデンスが、バリアントがしばしば天然のタンパク質と同様の生物学的活性を保持していることを示している。例えば、Ｇａｙｌｅと共同研究者（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５－２２１１１（１９９３）、その全体が参照により本明細書に援用される）は、ヒトサイトカインＩＬ－１ａの広範な変異分析を行った。彼らはランダム変異誘発を使用して、分子の全長にわたってバリアントあたり平均２．５アミノ酸の変化を示す３，５００を超える個々のＩＬ－１ａ変異体を生成した。考えられるすべてのアミノ酸位置で複数の変異を調べた。研究者らは、「分子のほとんどは、［結合または生物活性］にほとんど影響を与えることなく変更することができる」ことを発見した。（要約を参照のこと。）実際、調べた３，５００を超えるヌクレオチド配列のうち、２３の固有のアミノ酸配列のみが、野生型とは活性が有意に異なるタンパク質を生成した。

【0080】

上記のように、ポリペプチドバリアントには、例えば、修飾ポリペプチドが含まれる。修飾としては、例えば、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、γ－カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ化（Ｍｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１６：２７０－７９（２０１０）、これはその全体が参照により本明細書に援用される）、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、タンパク質へのアミノ酸の転移－ＲＮＡ媒介付加アルギニル化、及びユビキチン化が挙げられる。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ及び／またはＳｃａｆｆｏｌｄＹは、任意の便利な位置で修飾される。

【0081】

本明細書中で使用する場合、用語「に連結される」または「に複合体化される」は同じ意味で使用され、第１の部分と第２の部分、例えば、細胞外小胞の内腔表面または外面における、それぞれＳｃａｆｆｏｌｄＸとＡＳＯ、それぞれ、例えば、細胞外小胞及びＡＳＯの中または上に発現する足場部分と、ＡＳＯ、例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ（例えば、ＰＴＧＦＲＮタンパク質）との間に形成される共有または非共有結合を指す。

【0082】

用語「カプセル化された」、またはこの用語の文法的に異なる形式（例えば、カプセル化、またはカプセル化すること）は、２つの部分を化学的または物理的に連結することなく、第１の部分（例えば、ＡＳＯ）が第２の部分（例えば、ＥＶ、例えば、エキソソーム）の内部にある状態またはプロセスを指す。いくつかの態様では、用語「カプセル化された」は、「～の内腔内」と同じ意味で使用することができる。第１の部分（例えば、ＡＳＯ）を第２の部分（例えば、ＥＶ、例えば、エキソソーム）にカプセル化する非限定的な例は、本明細書の他の場所に開示されている。

【0083】

本明細書中で使用する場合、用語「プロデューサー細胞」とは、ＥＶ、例えば、エキソソームを生成するために使用する細胞を指す。プロデューサー細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養された細胞、またはｉｎ ｖｉｖｏでの細胞であり得る。プロデューサー細胞には、ＥＶ（例えばエキソソーム）の生成に有効であることが知られている細胞、例えば、ＨＥＫ２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、ＢＪヒト包皮線維芽細胞、ｆＨＤＦ線維芽細胞、ＡＧＥ．ＨＮ（登録商標）神経前駆細胞、ＣＡＰ（登録商標）羊膜細胞、脂肪間葉系幹細胞、ＲＰＴＥＣ／ＴＥＲＴ１細胞が含まれるが、これらに限定されない。特定の態様では、プロデューサー細胞は、抗原提示細胞ではない。特定の態様では、プロデューサー細胞は、樹状細胞、Ｂ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、クッパー－ブロウィッツ細胞、これらの細胞のいずれかに由来する細胞、またはそれらの任意の組み合わせではない。いくつかの態様では、本開示で有用なＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面に露出したＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩ分子上の抗原を保有しておらず、代わりに、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ及び／またはＳｃａｆｆｏｌｄＹへの接着により、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔内、またはＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上の抗原を保有する。

【0084】

本明細書中で使用する場合、用語「単離する」、「単離された」、及び「単離すること」または「精製する」、「精製された」、及び「精製すること」、同様に「抽出された」及び「抽出すること」は、同じ意味で使用され、精製、例えば、所望の細胞外小胞調製物の選択または濃縮の１つ以上のプロセスを経た所望の細胞外小胞の調製（例えば、複数の既知または未知の量及び／または濃度）の状態を指す。いくつかの態様では、本明細書中で使用する単離することまたは精製することは、プロデューサー細胞を含有する試料から細胞外小胞を除去、部分的に除去する（例えば、画分）プロセスである。いくつかの態様では、単離されたＥＶ組成物は、検出可能な望ましくない活性を有しないか、または、代替的には、望ましくない活性のレベルもしくは量は、許容されるレベルもしくは量未満である。他の態様では、単離されたＥＶ組成物は、許容される量及び／または濃度以上の所望のＥＶの量及び／または濃度を有する。他の態様では、単離されたＥＶ組成物は、組成物が得られる出発材料（例えば、プロデューサー細胞調製物）と比較して濃縮される。この濃縮は、出発材料と比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、９９．９９９％、９９．９９９９％、または９９．９９９９％超であり得る。いくつかの態様では、単離されたＥＶ調製物は、残留生物学的産物を実質的に含まない。いくつかの態様では、単離されたＥＶ調製物は、いかなる汚染生物物質も１００％含まないか、９９％含まないか、９８％含まないか、９７％含まないか、９６％含まないか、または９５％含まない。残留生物学的産物は、非生物物質（化学物質を含む）または不要な核酸、タンパク質、脂質、もしくは代謝産物を含み得る。残留生物学的産物を実質的に含まないことはまた、ＥＶ組成物が検出可能なプロデューサー細胞を含有しないことと、ＥＶのみが検出可能であることとを意味し得る。

【0085】

本明細書中では、用語「ペイロード」とは、ＥＶと接触する標的（例えば、標的細胞）に作用する薬剤を指す。ＥＶ（例えばエキソソーム）に含めることができるペイロードの非限定的な例はＡＳＯである。ＥＶ（例えばエキソソーム）及び／またはプロデューサー細胞中に導入され得るペイロードとして、ヌクレオチド（例えば、検出可能な部分もしくは毒素を含むか、または転写を妨害するヌクレオチド）、核酸（例えば、酵素などのポリペプチドをコードするＤＮＡもしくはｍＲＮＡ分子、またはｍｉＲＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｓｉＲＮＡなどの制御機能を有するＲＮＡ分子）、アミノ酸（例えば、検出可能な部分もしくは毒素を含むか、または翻訳を妨害するアミノ酸）、ポリペプチド（例えば、酵素）、脂質、炭水化物、及び小分子（例えば、小分子薬物及び毒素）などの薬剤が挙げられる。特定の態様では、ペイロードはＡＳＯを含む。本明細書中で使用する場合、用語「抗体」には、天然であるか、または部分的もしくは全体的に合成的に産生されているかに関わらず、免疫グロブリン、及びその断片が包含される。この用語はまた、免疫グロブリン結合ドメインに相同である結合ドメインを有する任意のタンパク質を網羅する。「抗体」は、抗原に特異的に結合し認識する免疫グロブリン遺伝子またはその断片由来のフレームワーク領域を含むポリペプチドをさらに含む。本明細書中で使用する場合、用語「抗原」とは、対象に導入された場合にそれ自体に対する免疫応答（細胞性または体液性）を誘発する任意の薬剤を指す。抗体という用語の使用には、全抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、及び組換え抗体、それらの断片を含むことを意味し、例えば、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）_２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ１）_２、Ｆｖ、ｄＡｂ、及びＦｄ断片、ダイアボディ、及び抗体関連ポリペプチドなどの、単鎖抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ、マウス－ヒト、マウス－霊長類、霊長類－ヒトモノクローナル抗体、抗イディオタイプ抗体、抗体断片をさらに含む。抗体は、それらが所望の生物学的活性または機能を呈する限り、二重特異性抗体及び多重特異性抗体を含む。

【0086】

用語「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」は、本明細書中では同じ意味で使用され、診断、処置、または治療が所望される任意の哺乳類対象、特にヒトを指す。本明細書に記載の組成物及び方法は、ヒトの治療及び獣医学的用途の両方に適用可能である。いくつかの態様では、対象は哺乳類であり、他の態様では、対象はヒトである。本明細書中で使用する場合、「哺乳類対象」には、ヒト、飼育動物（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）及び実験動物（例えば、サル、ラット、マウス、ウサギ、モルモットなど）を含むがこれらに限定されないすべての哺乳類が含まれる。

【0087】

用語「医薬製剤」とは、活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤を投与する対象にとって許容できない毒性を有する追加の成分を含有しない調製物を指す。そのような組成物は無菌であり得る。

【0088】

本明細書中で使用する場合、用語「実質的に含まない」とは、ＥＶ（例えばエキソソーム）を含む試料が、質量／容量（ｍ／ｖ）パーセント濃度で１０％未満の高分子を含むことを意味する。一部の画分は、０．００１％未満、０．０１％未満、０．０５％未満、０．１％未満、０．２％未満、０．３％未満、０．４％未満、０．５％未満、０．６％未満、０．７％未満、０．８％未満、０．９％未満、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、６％未満、７％未満、８％未満、９％未満、または１０％（ｍ／ｖ）未満の高分子を含み得る。

【0089】

本明細書中で使用する場合、用語「高分子」とは、核酸、夾雑タンパク質、脂質、炭水化物、代謝産物、またはそれらの組み合わせを意味する。

【0090】

本明細書中で使用する場合、用語「従来のエキソソームタンパク質」とは、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリン（ＭＦＧＥ８）、ＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂを含むがこれらに限定されない、エキソソーム内で豊富であることが以前に知られているタンパク質、その断片、またはそれに結合するペプチドを意味する。

【0091】

本明細書中で使用する「投与」とは、薬学的に許容される経路を介して、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）を含む組成物を対象に与えることを意味する。投与経路は、静脈内投与、例えば、静脈内注射及び静脈内注入であり得る。追加の投与経路として、例えば、皮下、筋肉内、経口、経鼻、及び肺への投与が挙げられる。ＥＶ（例えばエキソソーム）は、少なくとも１つの賦形剤を含む医薬組成物の一部として投与することができる。

【0092】

本明細書に開示するような、例えば、ＡＳＯまたは細胞外小胞の「有効量」とは、具体的に述べられた目的を実行するのに十分な量である。「有効量」は、記載する目的に関連して、経験的かつ日常的な方法で決定することができる。

【0093】

本明細書中で使用する「治療する」、「治療」、または「治療すること」とは、例えば、疾患または病態の重症度の低下、疾患の経過期間の短縮、疾患または病態に関連する１つ以上の症状の改善または排除、疾患または病態を必ずしも治癒させることなく、疾患または病態を有する対象に有益な効果を提供することを意味する。この用語はまた、疾患もしくは病態またはその症状の予防または防止を含む。一態様では、「治療すること」または「治療」は、造血の誘発を必要とする対象において造血を誘発することを含む。いくつかの態様では、疾患または病態は、造血またはその欠損に関連している。特定の態様では、疾患または病態はがんである。いくつかの態様では、治療は、がんを有する対象における造血を増強し、増強された造血は、対象における１つ以上の免疫細胞の増殖及び／または分化の増加を含む。

【0094】

本明細書中で使用する場合、用語「予防する」または「予防」とは、特定の結果の発生または重症度を低減または低下させることを指す。いくつかの態様では、結果の予防は、予防的治療を通じて達成される。いくつかの態様では、本明細書に記載のＡＳＯを含むＥＶ（例えばエキソソーム）を、予防的に対象に投与する。いくつかの態様では、対象は、がんを有するか、またはがんを発症するリスクを有する。いくつかの態様では、対象は、造血障害を発症するリスクを有する。

【0095】

ＩＩ． アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）
本開示は、ＳＴＡＴ３核酸、例えば、ＳＴＡＴ３プレｍＲＮＡ、及びＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡを含むＳＴＡＴ３転写産物などの哺乳類ＳＴＡＴ３をコードする核酸分子、または哺乳類ＳＴＡＴ３をコードするそのような核酸分子の天然のバリアントの機能を調節する際に使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を使用する。本開示に関する用語「ＡＳＯ」とは、２つ以上のヌクレオチドの共有結合によって形成される分子（すなわち、オリゴヌクレオチド）を指す。本発明に有用なＡＳＯは、非天然であり、自然界には見出されない。いくつかの態様では、ＡＳＯは化学的に修飾されている。

【0096】

ＡＳＯは、長さが約１０～約５０、例えば、約１０～３０、例えば、１０～２０、１４～２０、１６～２０、または１５～２５ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を有する。本明細書中で使用する用語「アンチセンスＡＳＯ」、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」、及び「オリゴマー」は、用語「ＡＳＯ」と同じ意味である。本発明に有用なＡＳＯは、非天然であり、自然界には見出されない。いくつかの態様では、ＡＳＯは、化学的に修飾されている。

【0097】

配列番号への参照には、特定の核酸塩基配列が含まれるが、設計または完全な化学構造は含まれない。さらに、本明細書に開示するＡＳＯに関連して示されるいかなる設計も、他に示されない限り、限定することを意図するものではない。例えば、特許請求の範囲（または本明細書）が配列番号１００に言及する場合、それは、配列番号１００のヌクレオチド配列のみを含む。本明細書に開示する任意のＡＳＯの設計は、配列番号１００として記述することができ、５’末端から１番目のヌクレオチド、２番目のヌクレオチド、３番目のヌクレオチド、６番目のヌクレオチド、１０番目のヌクレオチド、１３番目のヌクレオチド、１４番目のヌクレオチド、及び１５番目の各ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えば、ＬＮＡまたは５ＭｄＣであり、他の各ヌクレオチドは、非修飾ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ）である。

【0098】

様々な態様において、本開示のＡＳＯは、ＲＮＡ（ユニット）を含まない。いくつかの態様では、ＡＳＯは、１つ以上のＤＮＡユニットを含む。一態様では、本開示によるＡＳＯは、直鎖状分子であるか、または直鎖状分子として合成される。いくつかの態様では、ＡＳＯは単鎖分子であり、例えば、同じＡＳＯ内の同等の領域（すなわち、二本鎖）に相補的な、例えば、少なくとも３、４または５個の連続ヌクレオチドの短い領域を含まない‐その点で、ＡＳＯは（本質的に）二本鎖ではない。いくつかの態様では、ＡＳＯは、本質的に二本鎖ではない。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ｓｉＲＮＡではない。様々な態様において、本開示のＡＳＯは、完全に連続ヌクレオチド領域からなり得る。したがって、いくつかの態様では、ＡＳＯは、実質的に自己補完的ではない。

【0099】

他の態様では、本開示は、ＡＳＯの断片を含む。例えば、本開示は、本明細書に開示するＡＳＯの、少なくとも１つのヌクレオチド、少なくとも２つの連続ヌクレオチド、少なくとも３つの連続ヌクレオチド、少なくとも４つの連続ヌクレオチド、少なくとも５つの連続ヌクレオチド、少なくとも６つの連続ヌクレオチド、少なくとも７つの連続ヌクレオチド、少なくとも８つの連続ヌクレオチド、または少なくとも９つの連続ヌクレオチドを含む。本明細書に開示する配列のいずれかの断片は、本開示の一部として企図される。

【0100】

いくつかの態様では、本開示のためのＡＳＯは、ホスホロジアミデートモルフォリノオリゴマー（ＰＭＯ）またはペプチド結合ホスホロジアミデートモルフォリノオリゴマー（ＰＰＭＯ）を含む。

【0101】

ＩＩ．Ａ． 標的（ＳＴＡＴ３）
好適には、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現を下方制御する（例えば、低減または除去する）ことができる。これに関して、本開示のＡＳＯは、通常、ヒト細胞などの哺乳類細胞、例えば、腫瘍細胞において、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡレベルの低下を介してＳＴＡＴ３タンパク質の間接的阻害に影響を及ぼし得る。特に、本開示は、ＳＴＡＴ３プレｍＲＮＡの１つ以上の領域（例えば、イントロン領域、エキソン領域、及び／またはエキソン－イントロン接合領域）を標的とするＡＳＯに関する。特に明記しない限り、本明細書中で使用する用語「ＳＴＡＴ３」とは、１つ以上の種（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、及びクマ）由来のＳＴＡＴ３を指し得る。

【0102】

シグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ３）は、細胞表面受容体から核にシグナルを伝達するシグナル伝達性転写因子である。ＳＴＡＴ３は、多くのヒトのがんにおいて頻繁に過剰活性化される。高レベルの活性化ＳＴＡＴ３は、転移の進行に関して、多くの場合にヒト乳癌患者の予後不良と相関が認められる（Ｒａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．２００９）。したがって、ＳＴＡＴ３は、ＥＲ陽性及びＥＲ陰性の両方の乳癌、ならびに膵臓癌、頭頸部癌、前立腺癌、肺癌などの他のがんの予防と治療のための有望な標的である。しかしながら、ペプチドの遮断、転座の遮断、二量体化の破壊、またはホスファターゼ活性の調節によってＳＴＡＴ３活性を阻害する現在の戦略では、がん細胞のＳＴＡＴ３活性は十分に阻害されていない。通常の状態では、ＳＴＡＴ３の活性化は一時的であり、緊密に調節されている。成長因子やサイトカインなどのリガンドによる細胞刺激により、ＳＴＡＴ３は重要なチロシン残基（Ｔｙｒ７０５）でリン酸化され、その結果、２つの相互のホスホチロシン（ｐＴｙｒ）－Ｓｒｃ－ｈｏｍｏｌｏｇｙ２（ＳＨ２）相互作用を介してＳＴＡＴ３二量体化を誘導する。次いで、ＳＴＡＴ３二量体は核に移行し、標的遺伝子のプロモーター内の特定のＤＮＡ応答エレメントに結合し、それによって転写を活性化する。異常なＳＴＡＴ３活性化と多くの種類のヒト悪性腫瘍及び固形腫瘍との関連性により、ＳＴＡＴ３は、新規がん治療薬の開発にとって魅力的な分子標的となっている。

【0103】

ＳＴＡＴ３は、腫瘍細胞において構成的に活性化され、細胞周期の進行、ｃ－Ｍｙｃ及びサイクリン－Ｄ１を駆動する遺伝子とともに、抗アポトーシス遺伝子Ｂｃｌ－ｘＬ、Ｂｃｌ－２、Ｍｃｌ－１及びサバイビンなどの標的遺伝子の調節を通じて腫瘍進行に寄与することが多くの場合に見出される。ＳＴＡＴ３の異常な活性化は、リンパ腫及び白血病、乳癌、前立腺癌、肺癌、頭頸部癌、脳癌ならびに結腸癌を含むほとんどすべての血液悪性腫瘍及び固形腫瘍で頻繁に起こり、ＳＴＡＴ３は抗癌剤開発の魅力的な標的となっている。ＳＴＡＴ活性化の特異性は、特定のサイトカインによるものであり、すなわち、各ＳＴＡＴは少数の特定のサイトカインに反応する。成長因子などの他の非サイトカインシグナル伝達分子も、ＳＴＡＴを活性化することが見出されている。これらの因子がプロテインチロシンキナーゼに関連する細胞表面受容体に結合すると、ＳＴＡＴのリン酸化も起こる。特にＳＴＡＴ３は、インターロイキン－６（ＩＬ－６）及び上皮成長因子（ＥＧＦ）に応答することがわかっている（Ｄａｒｎｅｌｌ，Ｊｒ．，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４，２６４，１４１５－１４２１）。ＳＴＡＴ３がＭＡＰＫ経路によって調節され得ることを示唆するエビデンスが存在する。ＥＲＫ２はセリンリン酸化を誘導し、ＳＴＡＴ３とも結合する（Ｊａｉｎ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９８，１７，３１５７－３１６７）。ＳＴＡＴ３は、ほとんどの細胞型で発現しており、組織の損傷や炎症への応答に関与する遺伝子の発現の誘導にも関与している。ＳＴＡＴ３の異常な発現または構成的発現は、多くの疾患プロセスに関連している。ＳＴＡＴ３は、培養及び多発性骨髄腫患者の骨髄単核細胞の両方で、骨髄腫腫瘍細胞で構成的に活性であることがわかっている。これらの細胞はＦａｓを介したアポトーシスに耐性があり、高レベルのＢｃｌ－ｘＬを発現する。ＳＴＡＴ３ ＳＨ２ドメインは、二量体化を促進するために必要である。タンパク質の二量体化を標的とすることの制約の１つは、二量体界面を標的とすることの実用性であり、これは、大きな表面積の平面性のために困難である。

【0104】

シグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ３）は、当技術分野では様々な名称で知られている。そのような名称には：ＤＮＡ結合タンパク質ＡＰＲＦ、及び急性期応答因子が含まれる。ヒトＳＴＡＴ３をコードするｍＲＮＡは、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿００３１５０．３にあり、配列（配列番号３）で表される。
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【0105】

ＳＴＡＴ３タンパク質配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｐ４０７６３に見出すことができ、配列（配列番号２）によって表される：
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ＴＩＤＬＰＭＳＰＲＴＬＤＳＬＭＱＦＧＮＮＧＥＧＡＥＰＳＡＧＧＱＦＥＳＬＴＦＤＭＥＬＴＳＥＣＡＴＳＰＭ

【0106】

ヒトＳＴＡＴ３遺伝子産物の天然バリアントは公知である。例えば、ヒトＳＴＡＴ３タンパク質の天然バリアントは、Ｒ３８２Ｌ、Ｒ３８２Ｑ、またはＲ３８２Ｗ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。Ｒ３８２Ｗ、Ｆ３８４Ｌ、Ｆ３８４Ｓ、Ｔ３８９Ｉ、Ｎ３９５Ｙ、Ｒ４２３Ｑ、Ｎ４２５Ｙ、Ｈ４３７Ｙ、Ｄｅｌ－４６３、Ｓ６１１Ｎ、Ｆ６２１Ｖ、Ｔ６２２Ｉ、Ｖ６３７Ｌ、Ｖ６３７Ｍ、Ｄｅｌ－６４４、Ｙ６５７Ｃ、Ｐ３３０Ｓ、Ｋ３９２Ｒ、Ｎ６４６Ｋ、Ｋ６５８Ｎ、Ｄｅｌ－７０１、またはＴ７１６Ｍなどの、選択的スプライシングから生じるヒトＳＴＡＴ３タンパク質の追加のバリアントもまた、当技術分野で公知である。したがって、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３タンパク質の天然のバリアントの発現を低減または阻害するように設計され得る。

【0107】

配列番号１は、配列番号１のヌクレオチド「ｔ」がプレｍＲＮＡでは「ｕ」として示されていることを除いて、ＳＴＡＴ３プレｍＲＮＡ配列と同一である。特定の態様では、「標的核酸」には、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードする核酸またはその天然バリアントのイントロン、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、プレｍＲＮＡが含まれる。他の態様では、標的核酸には、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードする核酸またはその天然バリアントのエキソン領域、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、プレｍＲＮＡが含まれる。さらに他の態様では、標的核酸には、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードする核酸またはその天然バリアントのエキソン－イントロン接合部、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、プレｍＲＮＡが含まれる。いくつかの態様では、例えば、研究または診断において使用する場合、「標的核酸」は、上記のＤＮＡまたはＲＮＡ核酸標的に由来するｃＤＮＡまたは合成オリゴヌクレオチドであり得る。ＳＴＡＴ３プレｍＲＮＡによってコードされるヒトＳＴＡＴ３タンパク質配列は、配列番号２として示される。他の態様では、標的核酸には、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードする核酸またはその天然バリアントの非翻訳領域、例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、またはその両方が含まれる。

【0108】

さらに他の態様では、標的核酸は、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードする核酸またはその天然のバリアントのエキソン－イントロン接合部、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、プレｍＲＮＡを含む。いくつかの態様では、例えば、研究または診断において使用する場合、「標的核酸」は、上記のＤＮＡまたはＲＮＡ核酸標的に由来するｃＤＮＡまたは合成オリゴヌクレオチドであり得る。ＳＴＡＴ３プレｍＲＮＡによってコードされるヒトＳＴＡＴ３タンパク質配列を、配列番号３として示す。他の態様では、標的核酸は、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードする核酸またはその天然のバリアントの非翻訳領域、例えば５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、またはその両方を含む。

【0109】

いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物（例えば、配列番号１または配列番号３）のイントロン内の領域にハイブリダイズする。特定の態様では、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物（例えば、配列番号１または配列番号３）のエキソン内の領域にハイブリダイズする。他の態様では、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物（例えば、配列番号１または配列番号３）のエキソン－イントロン接合部内の領域にハイブリダイズする。いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物（例えば、配列番号１または配列番号３）内の領域（例えば、イントロン、エキソン、またはエキソン－イントロン接合部）にハイブリダイズし、ＡＳＯは、本明細書中の他の箇所に記載のように、式：５’ Ａ－Ｂ－Ｃ ３’に記載の設計を有する。

【0110】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３タンパク質の特定のアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１）をコードするｍＲＮＡを標的とする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３タンパク質のすべてのアイソフォームを標的とする。他の態様では、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３タンパク質の２つのアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ： Ｐ４０７６３－１）及びアイソフォーム２（配列番号７）（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ： Ｐ４０７６３－２）、アイソフォーム２及びアイソフォーム３（配列番号８）（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ： Ｐ４０７６３－３）を標的とする。

【0111】

いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物（例えば、配列番号１または配列番号３）のイントロン内の領域にハイブリダイズする。特定の態様では、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物（例えば、配列番号１または配列番号３）のエキソン内の領域にハイブリダイズする。他の態様では、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物（例えば、配列番号番号１または配列番号３）のエキソン－イントロン接合部内の領域にハイブリダイズする。いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物（例えば、配列番号１または配列番号３）内の領域（例えば、イントロン、エキソン、またはエキソン－イントロン接合部）にハイブリダイズし、ＡＳＯは、本明細書の他の場所に記載されているように、式：５’ ＡＢＣ ３’に従った設計を有する。

【0112】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物の核酸配列またはその核酸配列内の領域（「標的領域」）にハイブリダイズする連続ヌクレオチド配列を含み、核酸配列は、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド２５１～６４５；（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド７４２～１２３１；（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１１３１～１６０４；（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド１６２１～２２３５；（ｖ）配列番号３の２１６２～２６７６に対応し、任意選択で、ＡＳＯは、本明細書に記載の設計の１つ（例えば、ＩＩ．Ｇ節）または本明細書中の他の箇所に示す化学構造を有する。

【0113】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物の核酸配列またはその核酸配列内の領域（「標的領域」）にハイブリダイズする連続ヌクレオチド配列を含み、核酸配列は、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド３０１～５９５；（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド７９２～１１８１；（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１１８１～１５５４；（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド１６７１～２１８５；（ｖ）配列番号３の２２１２～２６２６に対応し、任意選択で、ＡＳＯは、本明細書に記載の設計の１つ（例えば、ＩＩ．Ｇ節）または本明細書の他の場所に示す化学構造を有する。

【0114】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物の核酸配列またはその核酸配列内の領域（「標的領域」）にハイブリダイズする連続ヌクレオチド配列を含み、核酸配列は、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド３４１～５５５；（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド８３２～１１４１；（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１２２１～１５１４；（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド１７１１～２１４５；または（ｖ）配列番号３の２２５２～２５８６に対応し、任意選択で、ＡＳＯは、本明細書に記載の設計の１つ（例えば、ＩＩ．Ｇ節）または本明細書の他の場所に示す化学構造を有する。

【0115】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物の核酸配列またはその核酸配列内の領域（「標的領域」）にハイブリダイズする連続ヌクレオチド配列を含み、核酸配列は、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド３５１～５４５；（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド８４２～１１３１；（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１２３１～１５０４；（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド１７２１～２１３５；または（ｖ）配列番号３の２２６２～２５７６に対応する。

【0116】

いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５９～２５７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５９；配列番号１００）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５６～２５７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５６；配列番号１０１）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５７～２５７７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７；配列番号１０２）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０４６～１０６１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０４６；配列番号１０３）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３５１～３７１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－３５１；配列番号１０４）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド４５０～４７０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４５０；配列番号１０５）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５８～２５７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８；配列番号１０６）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５８～２５７８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８；配列番号１０７）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８６５～８８５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８６５；配列番号１０８）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９４～９１０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４；配列番号１０９）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７７８～１７９８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７７８；配列番号１１０）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５８～２５７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８；配列番号１１１）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１４８２～１４９８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１４８２；配列番号１１２）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９２～９１２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９２；配列番号１１３）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６２～２２８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６２；配列番号１１４）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６７～２２８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７；配列番号１１５）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド４１１～４３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４１１；配列番号１１６）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６７～２２８４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７；配列番号１１７）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９６～９１１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９６；配列番号１１８）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５５～２５７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５５；配列番号１１９）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５２５～５４５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２５；配列番号１２０）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７６６～１７８６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７６６；配列番号１２１）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１４～１１３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１１１４；配列番号１２２）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５７～２５７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７；配列番号１２３）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９９５～１０１５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９５；配列番号１２４）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６３～２２８３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６３；配列番号１２５）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１１～５３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１１；配列番号１２６）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１１～５２７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１１；配列番号１２７）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０４３～１０６３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０４３；配列番号１２８）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７８０～１８００（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７８０；配列番号１２９）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド４５８～４７８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４５８；配列番号１３０）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９４～９１１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４；配列番号１３１）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７７９～１７９９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７７９；配列番号１３２）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２７４～２２９４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２７４；配列番号１３３）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０３９～１０５９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０３９；配列番号１３４）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３８～１２５８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１２３８；配列番号１３５）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３９～１２５９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１２３９；配列番号１３６）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１６～５３６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１６；配列番号１３７）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３８～１２５４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１２３８；配列番号１３８）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０３４～１０５４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０３４；配列番号１３９）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３９～１２５４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１２３９；配列番号１４０）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１３～１１３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１３；配列番号１４１）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１４８４～１５０４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１４８４；配列番号１４２）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５６～２５７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５６；配列番号１４３）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド４６１～４８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４６１；配列番号１４４）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２７３～２２９３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２７３；配列番号１４５）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７８３～１８０３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７８３；配列番号１４６）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９１～９１１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９１；配列番号１４７）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１０～５３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１０；配列番号１４８）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２１１５～２１３５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２１１５；配列番号１４９）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１４８２～１５０２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１４８２；配列番号１５０）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９８６～１００６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９８６；配列番号１５１）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９３～９１３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９３；配列番号１５２）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３７～１２５２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３７；配列番号１５３）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１１～１１３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１１；配列番号１５４）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３６～１２５２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１２３６；配列番号１５５）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５７～２５７２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７；配列番号１５６）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６４～２２８４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６４；配列番号１５７）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３４～１２４９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１２３４；配列番号１５８）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２４１～１２５８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１２４１；配列番号１５９）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５２４～５４４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２４；配列番号１６０）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９０～９１０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９０；配列番号１６１）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１４～１１３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１４；配列番号１６２）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１０８～１１２８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１１０８；配列番号１６３）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド４０９～４２９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４０９；配列番号１６４）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５６～１３７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１３５６；配列番号１６５）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３１～１２４６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３１；配列番号１６６）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６７～２２８７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７；配列番号１６７）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３８～１２５３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１２３８；配列番号１６８）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３７～１２５３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３７；配列番号１６９）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５２２～５４２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２２；配列番号１７０）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６６～２２８６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６６；配列番号１７１）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９９８～２０１８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１９９８；配列番号１７２）に対応する。いくつかの

態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８８１～９０１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８１；配列番号１７３）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１３～５３３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１３；配列番号１７４）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１０７～１１２７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０７；配列番号１７５）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３５～１２５０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１２３５；配列番号１７６）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８８２～９０２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８２；配列番号１７７）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１２～１１３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１２；配列番号１７８）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５２１～５４１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２１；配列番号１７９）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１０～１１３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１１１０；配列番号１８０）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１４７５～１４９５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１４７５；配列番号１８１）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９４～９１４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４；配列番号１８２）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１９～５３９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１９；配列番号１８３）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５３～２５７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５３；配列番号１８４）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５２～２５７２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５２；配列番号１８５）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８８３～９０３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８３；配列番号１８６）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８４２～８６２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８４２；配列番号１８７）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８５１～８７１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８５１；配列番号１８８）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６５～２２８５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６５；配列番号１８９）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５２０～５４０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２０；配列番号１９０）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９８５～１００５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９８５；配列番号１９１）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５２４～５４１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２４；配列番号１９２）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１０６～１１２６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０６；配列番号１９３）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１７～５３７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１７；配列番号１９４）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７２１～１７４１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１７２１；配列番号１９５）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１３～１１３３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１３；配列番号１９６）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９９２～１００８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９２；配列番号１９７）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９９３～１００８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９３；配列番号１９８）に対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１０４～１１２４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０４；配列番号１９９）に対応する。

【0117】

いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５９～２５７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５９；配列番号１００）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５６～２５７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５６；配列番号１０１）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５７～２５７７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７；配列番号１０２）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０４６～１０６１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０４６；配列番号１０３）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３５１～３７１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－３５１；配列番号１０４）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド４５０～４７０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４５０；配列番号１０５）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５８～２５７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８；配列番号１０６）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５８～２５７８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８；配列番号１０７）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８６５～８８５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８６５；配列番号１０８）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９４～９１０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４；配列番号１０９）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７７８～１７９８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７７８；配列番号１１０）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５８～２５７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８；配列番号１１１）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１４８２～１４９８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４８２；配列番号１１２）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９２～９１２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９２；配列番号１１３）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６２～２２８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６２；配列番号１１４）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６７～２２８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７；配列番号１１５）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド４１１～４３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４１１；配列番号１１６）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６７～２２８４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７；配列番号１１７）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９６～９１１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９６；配列番号１１８）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５５～２５７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５５；配列番号１１９）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５２５～５４５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２５；配列番号１２０）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７６６～１７８６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７６６；配列番号１２１）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１４～１１３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１４；配列番号１２２）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５７～２５７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７；配列番号１２３）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９９５～１０１５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９５；配列番号１２４）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６３～２２８３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６３；配列番号１２５）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１１～５３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１１；配列番号１２６）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１１～５２７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１１；配列番号１２７）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０４３～１０６３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０４３；配列番号１２８）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７８０～１８００（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７８０；配列番号１２９）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド４５８～４７８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４５８；配列番号１３０）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９４～９１１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４；配列番号１３１）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７７９～１７９９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７７９；配列番号１３２）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２７４～２２９４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２７４；配列番号１３３）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０３９～１０５９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０３９；配列番号１３４）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３８～１２５８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３８；配列番号１３５）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３９～１２５９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３９；配列番号１３６）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１６～５３６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１６；配列番号１３７）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３８～１２５４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３～１２３８；配列番号１３８）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０３４～１０５４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－

１０３４；配列番号１３９）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３９～１２５４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３９；配列番号１４０）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１３～１１３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１３；配列番号１４１）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１４８４～１５０４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４８４；配列番号１４２）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５６～２５７１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５６；配列番号１４３）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド４６１～４８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４６１；配列番号１４４）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２７３～２２９３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２７３；配列番号１４５）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７８３～１８０３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７８３；配列番号１４６）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９１～９１１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９１；配列番号１４７）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１０～５３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１０；配列番号１４８）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２１１５～２１３５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２１１５；配列番号１４９）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１４８２～１５０２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４８２；配列番号１５０）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９８６～１００６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９８６；配列番号１５１）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９３～９１３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９３；配列番号１５２）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３７～１２５２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３７；配列番号１５３）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１１～１１３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１１；配列番号１５４）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３６～１２５２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３６；配列番号１５５）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５７～２５７２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７；配列番号１５６）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６４～２２８４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６４；配列番号１５７）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３４～１２４９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３４；配列番号１５８）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２４１～１２５８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２４１；配列番号１５９）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５２４～５４４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２４；配列番号１６０）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９０～９１０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９０；配列番号１６１）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１４～１１３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１４；配列番号１６２）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１０８～１１２８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０８；配列番号１６３）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド４０９～４２９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４０９；配列番号１６４）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５６～１３７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１３５６；配列番号１６５）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３１～１２４６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３１；配列番号１６６）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６７～２２８７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７；配列番号１６７）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３８～１２５３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３８；配列番号１６８）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３７～１２５３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３７；配列番号１６９）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５２２～５４２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２２；配列番号１７０）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６６～２２８６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６６；配列番号１７１）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９９８～２０１８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１９９８；配列番号１７２）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８８１～９０１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８１；配列番号１７３）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１３～５３３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１３；配列番号１７４）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１０７～１１２７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０７；配列番号１７５）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３５～１２５０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３５；配列番号１７６）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８８２～９０２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８２；配列番号１７７）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１２～１１３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１２；配列番号１７８）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５

０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５２１～５４１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２１；配列番号１７９）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１０～１１３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１０；配列番号１８０）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１４７５～１４９５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４７５；配列番号１８１）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９４～９１４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４；配列番号１８２）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１９～５３９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１９；配列番号１８３）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５３～２５７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５３；配列番号１８４）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５５２～２５７２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５２；配列番号１８５）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８８３～９０３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８３；配列番号１８６）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８４２～８６２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８４２；配列番号１８７）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８５１～８７１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８５１；配列番号１８８）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２２６５～２２８５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６５；配列番号１８９）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５２０～５４０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２０；配列番号１９０）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９８５～１００５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９８５；配列番号１９１）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５２４～５４１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２４；配列番号１９２）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１０６～１１２６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０６；配列番号１９３）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１７～５３７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１７；配列番号１９４）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７２１～１７４１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７２１；配列番号１９５）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１３～１１３３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１３；配列番号１９６）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９９２～１００８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９２；配列番号１９７）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９９３～１００８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９３；配列番号１９８）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１０４～１１２４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０４；配列番号１９９）の３’末端及び／または５’末端の±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０ヌクレオチドに対応する。

【0118】

いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物（例えば、ゲノム配列、配列番号１）内の複数の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物内の２つの異なる標的領域にハイブリダイズする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物内の３つの異なる標的領域にハイブリダイズする。複数の標的領域にハイブリダイズする例示的なＡＳＯの配列、及び異なる標的領域の開始／終了部位を図１に示す。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３転写産物（例えば、ゲノム配列、配列番号１）内の複数の領域にハイブリダイズするＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物（例えば、ゲノム配列、配列番号１）内の単一領域にハイブリダイズするＡＳＯに比べて、ＳＴＡＴ３発現をより低下させることに関して、より強力である（例えば、より低いＥＣ５０を有する）。

【0119】

いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、生理学的条件下、すなわち、ｉｎ ｖｉｖｏ条件下で、標的核酸（例えば、ＳＴＡＴ３転写産物）にハイブリダイズすることができる。いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで標的核酸（例えば、ＳＴＡＴ３転写産物）にハイブリダイズすることができる。いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、ストリンジェントな条件下でｉｎ ｖｉｔｒｏにて標的核酸（例えば、ＳＴＡＴ３転写産物）にハイブリダイズすることができる。ｉｎ ｖｉｔｒｏでのハイブリダイゼーションのストリンジェンシー条件は、とりわけ、生産的な細胞取り込み、ＲＮＡのアクセス可能性、温度、結合の自由エネルギー、塩濃度、及び時間に依存する（例えば、Ｓｔａｎｌｅｙ Ｔ Ｃｒｏｏｋｅ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００７）を参照のこと）。一般的に、高～中程度のストリンジェンシー条件をｉｎ ｖｉｔｒｏハイブリダイゼーションに使用して、実質的に類似した核酸間ではハイブリダイゼーションできるが、異なる核酸間ではハイブリダイゼーションできないようにする。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の例には、５×生理食塩水－クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）緩衝液（０．７５Ｍ塩化ナトリウム／０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）中で４０℃にて１時間ハイブリダイゼーションした後、試料を１×ＳＳＣ中で４０℃にて１０回洗浄し、１×ＳＳＣ緩衝液中で室温にて５回洗浄することが含まれる。ｉｎ ｖｉｖｏハイブリダイゼーション条件は、アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的配列とのハイブリダイゼーションを決定づける細胞内条件（例えば、生理学的ｐＨ及び細胞内イオン条件）からなる。ｉｎ ｖｉｖｏ条件は、比較的低いストリンジェンシー条件によってｉｎ ｖｉｔｒｏで模倣することができる。例えば、ハイブリダイゼーションは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、２×ＳＳＣ（０．３Ｍ塩化ナトリウム／０．０３Ｍクエン酸ナトリウム）、０．１％ＳＤＳ、３７℃にて実行することができる。４×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳを含有する洗浄液を３７℃で使用することができ、最終洗浄では１×ＳＳＣ中で４５℃とする。

【0120】

いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、１つ以上の種（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、クマ）由来のＳＴＡＴ３転写産物を標的とすることができる。特定の態様では、本明細書に開示するＡＳＯは、ヒトとげっ歯類（例えば、マウスまたはラット）のＳＴＡＴ３転写産物の両方を標的とすることができる。したがって、いくつかの態様では、ＡＳＯは、ヒトとげっ歯類（例えば、マウスまたはラット）の両方において、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現を下方制御（例えば、低減または除去）することができる。

【0121】

ＩＩ．Ｂ． ＡＳＯ配列（ＳＴＡＴ３）
本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物の領域の相補体に対応する連続ヌクレオチド配列、例えば、配列番号１または配列番号３に対応するヌクレオチド配列を含む。

【0122】

特定の態様では、本開示は、１０～３０、例えば、１０～１５ヌクレオチド、１０～２０ヌクレオチド、２０ヌクレオチドの長さ、または１０～２５ヌクレオチドの長さのＡＳＯを提供し、連続ヌクレオチド配列は、配列番号１もしくは配列番号３またはその天然バリアントなどのＳＴＡＴ３転写産物の相補体の領域に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有する。したがって、例えば、ＡＳＯは、配列番号１の配列またはその一部を有する単鎖核酸分子にハイブリダイズする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号３の配列またはその一部を有する単鎖核酸分子にハイブリダイズする。

【0123】

ＡＳＯは、哺乳類ＳＴＡＴ３タンパク質をコードする核酸（例えば、配列番号１または配列番号３）の同等の領域に十分に相補的（完全に相補的）である連続ヌクレオチド配列を含み得る。ＡＳＯは、配列番号３のヌクレオチドＸ－Ｙに対応する核酸配列またはその核酸配列内の領域に十分に相補的（完全に相補的）である連続ヌクレオチド配列を含み得、ＸとＹは、図１に示すように、それぞれ開始部位と終了部位である。

【0124】

ＡＳＯは、哺乳類ＳＴＡＴ３タンパク質（例えば、配列番号２）をコードするｍＲＮＡの同等の領域に十分に相補的（完全に相補的）である連続ヌクレオチド配列を含み得る。ＡＳＯは、配列番号１もしくは３のヌクレオチドＸ－Ｙに対応するｍＲＮＡ配列またはその配列内の領域に十分に相補的（完全に相補的）である連続ヌクレオチド配列を含み得、ＸとＹは、それぞれ開始部位と終了部位である。

【0125】

いくつかの態様では、本開示のＡＳＯのヌクレオチド配列または連続ヌクレオチド配列は、ＳＴＡＴ３に対して配列番号１００～１９９から選択される配列（すなわち、図１の配列）に対して少なくとも約８０％の配列同一性、例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％の配列同一性、少なくとも約９７％の配列同一性、少なくとも約９８％の配列同一性、少なくとも約９９％の配列同一性、例えば、約１００％の配列同一性（相同性）を有する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、本明細書の他の箇所に記載されている設計、または本明細書の他の箇所に示されている化学構造を有する。

【0126】

いくつかの態様では、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、ＳＴＡＴ３に対して配列番号１００～１９９またはその少なくとも１０連続ヌクレオチドの領域からなる群から選択される配列のうちの１つから選択されるか、またはそれらを含み、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択で、対応するＳＴＡＴ３転写産物（例えば、配列番号１または配列番号３）と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。

【0127】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１００（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５９）、配列番号１０１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５６）、配列番号１０２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７）、配列番号１０３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０４６）、配列番号１０４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－３５１）、配列番号１０５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４５０）、配列番号１０６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８）、配列番号１０７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８）、配列番号１０８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８６５）、配列番号１０９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４）、配列番号１１０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７７８）、配列番号１１１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８）、配列番号１１２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４８２）、配列番号１１３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９２）、配列番号１１４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６２）、配列番号１１５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７）、配列番号１１６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４１１）、配列番号１１７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７）、配列番号１１８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９６）、配列番号１１９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５５）、配列番号１２０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２５）、配列番号１２１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７６６）、配列番号１２２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１４）、配列番号１２３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７）、配列番号１２４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９５）、配列番号１２５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６３）、配列番号１２６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１１）、配列番号１２７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１１）、配列番号１２８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０４３）、配列番号１２９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７８０）、配列番号１３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４５８）、配列番号１３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４）、配列番号１３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７７９）、配列番号１３３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２７４）、配列番号１３４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０３９）、配列番号１３５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３８）、配列番号１３６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３９）、配列番号１３７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１６）、配列番号１３８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３８）、配列番号１３９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０３４）、配列番号１４０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３９）、配列番号１４１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１３）、配列番号１４２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４８４）、配列番号１４３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５６）、配列番号１４４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４６１）、配列番号１４５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２７３）、配列番号１４６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７８３）、配列番号１４７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９１）、配列番号１４８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１０）、配列番号１４９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２１１５）、配列番号１５０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４８２）、配列番号１５１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９８６）、配列番号１５２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９３）、配列番号１５３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３７）、配列番号１５４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１１）、配列番号１５５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３６）、配列番号１５６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７）、配列番号１５７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６４）、配列番号１５８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３４）、配列番号１５９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２４１）、配列番号１６０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２４）、配列番号１６１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９０）、配列番号１６２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１４）、配列番号１６３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０８）、配列番号１６４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４０９）、配列番号１６５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１３５６）、配列番号１６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３１）、配列番号１６７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７）、配列番号１６８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３８）、配列番号１６９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３７）、配列番号１７０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２２）、配列番号１７１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６６）、配列番号１７２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１９９８）、配列番号１７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８１）、配列番号１７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１３）、配列番号１７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０７）、配列番号１７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３５）、配列番号１７７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８２）、配列番号１７８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１２）、配列番号１７９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２１）、配列番号１８０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１０）、配列番号１８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４７５）、配列番号１８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４）、配列番号１８３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１９）、配列番号１８４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５３）、配列番号１８５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５２）、配列番号１８６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８３）、配列番号１８７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８４２）、配列番号１８８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８５１）、配列番号１８９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６５）、配列番号１９０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２０）、配列番号１９１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９８５）、配列番号１９２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２４）、配列番号１９３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０６）、配列番号１９４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１７）、配列番号１９５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７２１）、配列番号１９６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１３）、配列番号１９７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９２）、配列番号１９８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９３）、または配列番号１９９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０４）からなる群から選択される配列を含む。

【0128】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１００に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５９）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１０１に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５６）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１０２に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１０３に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０４６）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１０４に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－３５１）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１０５に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４５０）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１０６に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１０７に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１０８に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８６５）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１０９に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１１０に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７７８）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１１１に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１１２に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４８２）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１１３に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９２）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１１４に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６２）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１１５に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１１６に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４１１）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１１７に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１１８に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９６）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１１９に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５５）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２０に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２５）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２１に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７６６）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２２に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２３に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２４に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９５）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２５に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６３）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２６に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１１）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２７に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１１）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２８に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０４３）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２９に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７８０）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１３０に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４５８）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１３１に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１３２に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７７９）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１３３に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２７４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１３４に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０３９）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１３５に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３８）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１３６に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３９）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１３７に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１６）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１３８に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３８）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１３９に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０３４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１４０に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３９）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１４１に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１３）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１４２に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４８４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１４３に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５６）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１４４に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４６１）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１４５に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２７３）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１４６に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７８３）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１４７に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９１）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１４８に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１０）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１４９に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２１１５）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１５０に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４８２）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１５１に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９８６）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１５２に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９３）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１５３に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３７）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１５４に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１１）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１５５に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３６）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１５６に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１５７に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１５８に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１５９に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２４１）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１６０に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１６１に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９０）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１６２に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１６３に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０８）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１６４に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４０９）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１６５に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１３５６）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１６６に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３１）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１６７に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１６８に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３８）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１６９に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３７）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１７０に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２２）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１７１に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６６）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１７２に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１９９８）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１７３に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８１）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１７４に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１３）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１７５に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０７）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１７６に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３５）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１７７に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８２）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１７８に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１２）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１７９に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２１）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１８０に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１０）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１８１に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４７５）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１８２に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１８３に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１９）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１８４に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５３）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１８５に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５２）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１８６に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８３）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１８７に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８４２）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１８８に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８５１）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１８９に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６５）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１９０に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２０）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１９１に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９８５）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１９２に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１９３に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０６）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１９４に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１７）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１９５に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７２１）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１９６に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１３）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１９７に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９２）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１９８に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９３）を含む。いくつかの態様では、

ＡＳＯは、配列番号１９９に記載の配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０４）を含む。

【0129】

いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、標的核酸配列（例えば、ＳＴＡＴ３転写産物）に結合し、ＳＴＡＴ３転写産物の発現を、細胞における正常な（すなわち、対照）発現レベルと比較して、少なくとも１０％または２０％、例えば、正常な発現レベル（例えば、ＡＳＯに曝露されていない細胞での発現レベル）と比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％阻害または低減することができる。

【0130】

いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、細胞を２５μＭのＡＳＯと接触させる場合、ＡＳＯと接触させない（例えば、生理食塩水と接触させる）細胞と比較して、細胞において、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡの発現を、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％低減することができる。

【0131】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、標的配列にハイブリダイズする場合、１、２、３、または４（またはそれ以上）のミスマッチを許容し、それでも標的に十分に結合して、所望の効果、すなわち、標的ｍＲＮＡ及び／またはタンパク質の下方制御を示すことができる。不一致は、例えば、ＡＳＯヌクレオチド配列の長さの増加及び／またはヌクレオチド類似体の数の増加によって補償することができ、これらは本明細書中の他の箇所に開示されている。

【0132】

いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、標的配列にハイブリダイズする場合、３つ以下のミスマッチを含む。他の態様では、連続ヌクレオチド配列は、標的配列にハイブリダイズする場合、２つ以下のミスマッチを含む。他の態様では、連続ヌクレオチド配列は、標的配列にハイブリダイズする場合、複数のミスマッチを含む。

【0133】

ＩＩ．Ｃ． ＡＳＯの長さ
ＡＳＯは、合計１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０連続ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み得る。ＡＳＯ、または連続ヌクレオチド配列の長さについて範囲が与えられる場合、その範囲は、例えば、１０と３０の両方を含む、１０～３０の（またはその間の）範囲で提供される下限及び上限の長さを含むことを理解されたい。

【0134】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、合計で約１４～２０、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０連続ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む。特定の態様では、ＡＳＯは、合計で約２０連続ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む。特定の態様では、本開示のＡＳＯは、１４ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、１３ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、１２ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、１１ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、１０ヌクレオチド長である。特定の態様では、本開示のＡＳＯは、１５ヌクレオチド長である。特定の態様では、本開示のＡＳＯは、１６ヌクレオチド長である。特定の態様では、本開示のＡＳＯは、１７ヌクレオチド長である。特定の態様では、本開示のＡＳＯは、１８ヌクレオチド長である。特定の態様では、本開示のＡＳＯは、１９ヌクレオチド長である。

【0135】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、長さが約１０～約５０ヌクレオチド、例えば、約１０～約４５、約１０～約４０、約１０～約３５、または約１０～約３０の連続ヌクレオチド配列を含む。特定の態様では、ＡＳＯは、２１ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、２２ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、２３ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、２４ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、２５ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、２６ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、２７ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、２８ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、２９ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、３０ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、３１ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、３２ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、３３ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、３４ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、３５ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、３６ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、３７ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、３８ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、３９ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、４０ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、４１ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、４２ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、４３ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、４４ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、４５ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、４６ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、４７ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、４８ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、４９ヌクレオチド長である。特定の態様では、ＡＳＯは、５０ヌクレオチド長である。

【0136】

ＩＩ．Ｄ． ヌクレオシド及びヌクレオシド類似体
本開示の一態様では、ＡＳＯは、１つ以上の天然ヌクレオシド類似体を含む。本明細書中で使用する「ヌクレオシド類似体」とは、糖及び／または塩基部分の修飾による、ＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオシドなどの天然ヌクレオシドのバリアントである。類似体は、原則として、オリゴヌクレオチドに関して、天然ヌクレオシドに対して単に「サイレント」または「同等」である可能性があり、すなわち、オリゴヌクレオチドが標的遺伝子発現を阻害するように働く方法に機能的影響を及ぼさない。それにもかかわらず、そのような「同等の」類似体は、例えば、それらが、製造がより容易もしくは安価であるか、または保管もしくは製造条件に対してより安定であるか、またはタグまたは標識を表す場合に有用であり得る。しかしながら、いくつかの態様では、類似体は、例えば、標的への結合親和性を増加させ、及び／または細胞内ヌクレアーゼに対する耐性を増加させ、及び／または細胞への輸送しやすさを高めることによって、ＡＳＯが発現を阻害するように作用する方法に機能的な影響を及ぼす。ヌクレオシド類似体の特定の例は、例えば、Ｆｒｅｉｅｒ ＆ Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３及びＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３、ならびにスキーム１に記載されている。本開示のＡＳＯは、１つより多くの、２つより多くの、３つより多くの、４つより多くの、５つより多くの、６つより多くの、７つより多くの、８つより多くの、９つより多くの、１０個より多くの、１１個より多くの、１２個より多くの、１３個より多くの、１４個より多くの、１５個より多くの、１６個より多くの、１８個より多くの、１９個より多くの、または２０個より多くのヌクレオシド類似体を含み得る。いくつかの態様では、ＡＳＯ中のヌクレオシド類似体は同じである。いくつかの態様では、ＡＳＯ中のヌクレオシド類似体は異なっている。ＡＳＯのヌクレオチド類似体は、以下のヌクレオシド類似体のいずれか１つまたは組み合わせとすることができる。

【0137】

いくつかの態様では、ヌクレオシド類似体は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メチルＲＮＡ（２’－ＯＭｅ）；２’－アルコキシ－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（２’－ＭＯＥ）；２’－アミノ－ＤＮＡ；２’－フルオロ－ＲＮＡ；２’－フルオロ－ＤＮＡ；アラビノ核酸（ＡＮＡ）；２’－フルオロ－ＡＮＡ；二環式ヌクレオシド類似体；またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、ヌクレオシド類似体は、糖修飾ヌクレオシドを含む。いくつかの態様では、ヌクレオシド類似体は、二環式糖を含むヌクレオシドを含む。いくつかの態様では、ヌクレオシド類似体は、ＬＮＡを含む。

【0138】

いくつかの態様では、ヌクレオシド類似体は、拘束エチルヌクレオシド（ｃＥｔ）、２’，４’－拘束２’－Ｏ－メトキシエチル（ｃＭＯＥ）、α－Ｌ－ＬＮＡ、β－Ｄ－ＬＮＡ、２’－Ｏ，４’－Ｃ－エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）、アミノ－ＬＮＡ、オキシ－ＬＮＡ、チオ－ＬＮＡ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＡＳＯは、１つ以上の５’－メチルシトシン核酸塩基を含む。

【0139】

ＩＩ．Ｄ．１．核酸塩基
核酸塩基という用語は、核酸ハイブリダイゼーションにおいて水素結合を形成するヌクレオシド及びヌクレオチドに存在するプリン（例えば、アデニン及びグアニン）及びピリミジン（例えば、ウラシル、チミン及びシトシン）部分を含む。本開示に関して、核酸塩基という用語はまた、天然核酸塩基とは異なり得るが、核酸ハイブリダイゼーション時に機能する修飾された核酸塩基を包含する。いくつかの態様では、核酸塩基部分は、核酸塩基を改変または置換することによって改変される。これに関連して、「核酸塩基」とは、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチン及びヒポキサンチンなどの天然核酸塩基、ならびに非天然バリアントの両方を指す。そのようなバリアントは、例えば、Ｈｉｒａｏ ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｖｏｌ ４５ ｐａｇｅ ２０５５ ａｎｄ Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１に記載されて いる。

【0140】

いくつかの態様では、核酸塩基部分は、プリンまたはピリミジンを、置換プリンまたは置換ピリミジン、例えば、イソシトシン、偽イソシトシン、５－メチル－シトシン、５－チオゾロ－シトシン、５－プロピニル－シトシン、５－プロピニル－ウラシル、５－ブロモウラシル、５－チアゾロ－ウラシル、２－チオ－ウラシル、２’チオ－チミン、イノシン、ジアミノプリン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリン、及び２－クロロ－６－アミノプリンから選択される核酸塩基などの修飾プリンまたはピリミジンに変更することによって修飾される。

【0141】

核酸塩基部分は、対応する各核酸塩基、例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、またはＵの文字コードによって示され得、各文字は、場合により、同等の機能の修飾核酸塩基を含み得る。例えば、例示されたオリゴヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分は、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、及び５－メチルシトシンから選択される。任意選択で、ＬＮＡギャップマーの場合、５－メチルシトシンＬＮＡヌクレオシドを使用してもよい。

【0142】

ＩＩ．Ｄ．２． 糖修飾
本開示のＡＳＯは、修飾糖部分、すなわち、ＤＮＡ及びＲＮＡに認められるリボース糖部分と比較した場合に、糖部分の修飾を有する１つ以上のヌクレオシドを含み得る。主に、親和性及び／またはヌクレアーゼ耐性などのオリゴヌクレオチドの特定の特性を向上させることを目的として、リボース糖部分を修飾した多数のヌクレオシドが作製されてきた。

【0143】

そのような修飾には、例えば、ヘキソース環（ＨＮＡ）、または通常リボース環（ＬＮＡ）上のＣ２’及びＣ４’炭素の間にビラジカル架橋を有する二環式環での置換によって、リボース環構造が修飾されるもの、または、通常、Ｃ２’とＣ３’の炭素間の結合を欠く非結合リボース環（例えば、ＵＮＡ）が含まれる。他の糖修飾ヌクレオシドとして、例えば、ビシクロヘキソース核酸（ＷＯ２０１１／０１７５２１）または三環系核酸（ＷＯ２０１３／１５４７９８）が挙げられる。修飾ヌクレオシドには、例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはモルフォリノ核酸の場合に、糖部分が非糖部分で置き換えられているヌクレオシドも含まれる。

【0144】

糖修飾には、リボース環の置換基を水素以外の基、またはＲＮＡヌクレオシドに天然に存在する２’－ＯＨ基に変更することによって行われる修飾も含まれる。置換基は、例えば、２’、３’、４’、または５’位に導入してもよい。修飾糖部分を有するヌクレオシドには、２’置換ヌクレオシドなどの２’修飾ヌクレオシドも含まれる。実際、２’置換ヌクレオシドの開発に多くの焦点が当てられており、ヌクレオシド耐性の強化や親和性の強化など、オリゴヌクレオチドに組み込むと、多くの２’置換ヌクレオシドが有益な特性を有することがわかっている。

【0145】

ＩＩ．Ｄ．２．ａ． ２’修飾ヌクレオシド
２’糖修飾ヌクレオシドとは、２’位にＨまたは－ＯＨ以外の置換基を有する（２’置換ヌクレオシド）か、または２’結合ビラジカルを含み、２’置換ヌクレオシド及びＬＮＡ（２’－４’ビラジカル架橋）ヌクレオシドを含むヌクレオシドである。例えば、２’修飾糖は、結合親和性（例えば、親和性増強２’糖修飾ヌクレオシド）を増強し、及び／またはオリゴヌクレオチドに対するヌクレアーゼ耐性を高め得る。２’置換修飾ヌクレオシドの例は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、及び２’－フルオロ－ＡＮＡヌクレオシドである。さらなる例については、例えば、Ｆｒｅｉｅｒ ＆ Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３；Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３；及びＤｅｌｅａｖｅｙ ａｎｄ Ｄａｍｈａ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１２，１９，９３７を参照されたい。以下は、いくつかの２’置換修飾ヌクレオシドの図である。

【化1】

【0146】

ＩＩ．Ｄ．２．ｂ． ロックド核酸ヌクレオシド（ＬＮＡ）
ＬＮＡヌクレオシドは、ヌクレオシドのリボース糖環（すなわち、２’－４’架橋）のＣ２’とＣ４’の間にリンカー基（ビラジカルまたは架橋と呼ばれる）を含む修飾ヌクレオシドであり、リボース環の立体配座を制限する。これらのヌクレオシドは、文献では架橋核酸または二環式核酸（ＢＮＡ）とも呼ばれる。リボースのコンフォメーションのロックは、ＬＮＡが相補的なＲＮＡまたはＤＮＡ分子のオリゴヌクレオチドに組み込まれる場合のハイブリダイゼーションの親和性の向上（二重鎖の安定化）に関連している。これは、オリゴヌクレオチド／相補体の二本鎖の融解温度を測定することによって日常的に決定することができる。

【0147】

非限定的な例示的なＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ９９／０１４２２６，ＷＯ００／６６６０４，ＷＯ９８／０３９３５２，ＷＯ２００４／０４６１６０，ＷＯ００／０４７５９９，ＷＯ２００７／１３４１８１，ＷＯ２０１０／０７７５７８，ＷＯ２０１０／０３６６９８，ＷＯ２００７／０９００７１，ＷＯ２００９／００６４７８，ＷＯ２０１１／１５６２０２，ＷＯ２００８／１５４４０１，ＷＯ２００９／０６７６４７，ＷＯ２００８／１５０７２９，Ｍｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２，７３－７６，Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０，Ｖｏｌ ７５（５） ｐｐ．１５６９－８１，及びＭｉｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９，３７（４），１２２５－１２３８に開示されている。

【0148】

いくつかの態様では、本開示のＡＳＯの修飾ヌクレオシドまたはＬＮＡヌクレオシドは、式ＩまたはＩＩの一般的な構造を有する：

【化2】

式中、
Ｗは、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｎ（Ｒ^ａ）－、－Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）－から選択され、特に－Ｏ－であり；
Ｂは、核酸塩基または修飾核酸塩基部分であり；
Ｚは、隣接するヌクレオシドまたは５’末端基へのヌクレオシド間結合であり；
Ｚ＊は、隣接するヌクレオシドまたは３’末端基へのヌクレオシド間結合であり；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニルオキシ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニル、ホルミル、アジド、複素環及びアリールから独立して選択され；ならびに
Ｘ、Ｙ、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、本明細書で定義されている通りである。

【0149】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－、Ｒ^ａは、水素またはアルキル、特に水素またはメチルである。いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－、Ｒ^ｂは、水素またはアルキル、特に水素またはメチルである。－Ｘ－Ｙ－の他の態様では、Ｒ^ａとＲ^ｂの一方または両方が水素である。－Ｘ－Ｙ－のさらなる態様では、Ｒ^ａとＲ^ｂの一方のみが水素である。－Ｘ－Ｙ－のいくつか態様では、Ｒ^ａとＲ^ｂの一方がメチルであり、他方が水素である。－Ｘ－Ｙ－の特定の態様では、Ｒ^ａとＲ^ｂは、両方とも同時にメチルである。

【0150】

いくつかの態様では、－Ｘ－、Ｒ^ａは、水素またはアルキル、特に水素またはメチルである。いくつかの態様では、－Ｘ－、Ｒ^ｂは、水素またはアルキル、特に水素またはメチルである。－Ｘ－の他の態様では、Ｒ^ａとＲ^ｂの一方または両方が水素である。－Ｘ－の特定の態様では、Ｒ^ａとＲ^ｂの一方のみが水素である。－Ｘ－の特定の態様では、Ｒ^ａとＲ^ｂの一方がメチルであり、他方が水素である。－Ｘ－の他の態様では、Ｒ^ａとＲ^ｂは、両方とも同時にメチルである。

【0151】

いくつかの態様では、－Ｙ－、Ｒ^ａは、水素またはアルキル、特に水素またはメチルである。特定の態様では、－Ｙ－、Ｒ^ｂは、水素またはアルキル、特に水素またはメチルである。－Ｙ－の他の態様では、Ｒ^ａとＲ^ｂの一方または両方が水素である。－Ｙ－のいくつかの態様では、Ｒ^ａとＲ^ｂの一方のみが水素である。－Ｙ－の他の態様では、Ｒ^ａとＲ^ｂの一方がメチルであり、他方が水素である。－Ｙ－のいくつかの態様では、Ｒ^ａとＲ^ｂは、両方とも同時にメチルである。

【0152】

いくつかの態様では、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、水素及びアルキル、特に水素及びメチルから独立して選択される。

【0153】

いくつかの態様では、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。

【0154】

いくつかの態様では、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３はすべて同時に水素であり、Ｒ^５及びＲ^５＊の一方は水素であり、他方は上記で定義された通りであり、特にアルキル、より具体的にはメチルである。

【0155】

いくつかの態様では、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、すべて同時に水素であり、Ｒ^５及びＲ^５＊の一方は水素であり、他方はアジドである。

【0156】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。そのようなＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ９９／０１４２２６、ＷＯ００／６６６０４、ＷＯ９８／０３９３５２及びＷＯ２００４／０４６１６０に開示されており、これらはすべて参照により本明細書に援用され、当技術分野でβ－Ｄ－オキシＬＮＡ及びα－Ｌ－オキシＬＮＡヌクレオシドとして一般的に知られているものを含む。

【0157】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｓ－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。そのようなチオＬＮＡヌクレオシドは、参照により本明細書に援用されるＷＯ９９／０１４２２６及びＷＯ２００４／０４６１６０に開示されている。

【0158】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－ＮＨ－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。そのようなチオＬＮＡヌクレオシドは、参照により本明細書に援用されるＷＯ９９／０１４２２６及びＷＯ２００４／０４６１６０に開示されている。

【0159】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－または－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。そのようなＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ００／０４７５９９及びＭｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２，７３－７６に開示されており、これらは参照により本明細書に援用され、２’－Ｏ－４’Ｃ－エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）として当技術分野で一般的に知られているものを含む。

【0160】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、すべて同時に水素であり、Ｒ^５及びＲ^５＊の一方は水素であり、他方は水素ではなく、例えば、アルキル、例えば、メチルである。そのような５’置換ＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ２００７／１３４１８１に開示されており、これは参照により本明細書に援用される。

【0161】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－であり、Ｒ^ａ及びＲ^ｂの一方または両方が水素ではなく、特にメチルなどのアルキルであり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、すべて同時に水素であり、Ｒ^５及びＲ^５＊の一方は水素であり、他方は水素ではなく、特にアルキル、例えば、メチルである。そのようなビス修飾ＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ２０１０／０７７５７８に開示されており、これは参照により本明細書に援用される。

【0162】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_３）－である（「２’Ｏ－メトキシエチル二環式核酸」、Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０，Ｖｏｌ ７５（５）ｐｐ．１５６９－８１）。

【0163】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＨＲ^ａ－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。そのような６’置換ＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ２０１０／０３６６９８及びＷＯ２００７／０９００７１に開示されており、これらはいずれも参照により本明細書に援用される。そのような６’置換ＬＮＡヌクレオシドにおいて、Ｒ^ａは、特にＣ１－Ｃ６アルキルであり、例えば、メチルである。

【0164】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_３）－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。そのようなＬＮＡヌクレオシドは、環状ＭＯＥ（ｃＭＯＥ）としても当技術分野では知られており、ＷＯ２００７／０９００７１に開示されている。

【0165】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）－である。

【0166】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－である（Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ ２０１０ ｏｐ．ｃｉｔ．）。

【0167】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。そのような６’－メチルＬＮＡヌクレオシドは、ｃＥＴヌクレオシドとしても当技術分野で知られており、いずれも参照により本明細書に援用されるＷＯ２００７／０９００７１（β－Ｄ）及びＷＯ２０１０／０３６６９８（α－Ｌ）に開示されているように、（Ｓ）－ｃＥＴまたは（Ｒ）－ｃＥＴジアステレオ異性体のいずれかであり得る。

【0168】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－であり、Ｒ^３もＲ^４も水素ではなく、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。特定の態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは両方とも同時にアルキルであり、特に両方とも同時にメチルである。そのような６’ジ置換ＬＮＡヌクレオシドは、参照により本明細書に援用されるＷＯ２００９／００６４７８に開示されている。

【0169】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｓ－ＣＨＲ^ａ－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。そのような６’置換チオＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ２０１１／１５６２０２に開示されており、これは参照により本明細書に援用される。そのような６’置換チオＬＮＡの特定の態様では、Ｒ^ａはアルキル、特にメチルである。

【0170】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｃ（＝ＣＨ_２）Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。そのようなビニルカルボＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ２００８／１５４４０１及びＷＯ２００９／０６７６４７に開示されており、これらはいずれも参照により本明細書に援用される。

【0171】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｎ（ＯＲ^ａ）－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。いくつかの態様では、Ｒ^ａは、メチルなどのアルキルである。そのようなＬＮＡヌクレオシドは、Ｎ置換ＬＮＡとしても知られており、ＷＯ２００８／１５０７２９に開示されており、これは参照により本明細書に援用される。

【0172】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＮＣＨ_３－である（Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ ２０１０ ｏｐ．ｃｉｔ．）。

【0173】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－はＯＮ（Ｒ^ａ）－ －Ｎ（Ｒ^ａ）－Ｏ－、－ＮＲ^ａ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－、または－ＮＲ^ａ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。いくつかの態様では、Ｒ^ａはアルキル、例えばメチルである。（Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ ２０１０ ｏｐ．ｃｉｔ．）。

【0174】

いくつかの態様では、Ｒ^５及びＲ^５＊は、両方とも同時に水素である。他の態様では、Ｒ^５とＲ^５＊の一方が水素であり、他方がアルキル、例えば、メチルである。そのような態様では、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は、特に水素であり得、－Ｘ－Ｙ－は、特に－Ｏ－ＣＨ_２－または－Ｏ－ＣＨＣ（Ｒ^ａ）_３－、例えば－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）－であり得る。

【0175】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－－ＣＲ^ａＲ^ｂ－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－、例えば、－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。そのような態様では、Ｒ^ａは、特にメチルなどのアルキルであり得る。そのようなＬＮＡヌクレオシドは、立体配座制限ヌクレオチド（ＣＲＮ）としても知られており、ＷＯ２０１３／０３６８６８に開示されており、これは参照により本明細書に援用される。

【0176】

いくつかの態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－、例えば、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、すべて同時に水素である。特定の態様では、Ｒ^ａは、特にメチルなどのアルキルであり得る。そのようなＬＮＡヌクレオシドは、ＣＯＣヌクレオチドとしても知られており、Ｍｉｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９，３７（４），１２２５－１２３８に開示されており、これは参照により本明細書に援用される。

【0177】

特に明記されていない限り、ＬＮＡヌクレオシドはβ－Ｄまたはα－Ｌステレオアイソフォームであってもよいと認識される。

【0178】

ＬＮＡヌクレオシドの特定の例をスキーム１に示す。
スキーム１

【化3】

【0179】

他の箇所に記載されているように、本開示のいくつかの態様では、オリゴヌクレオチド中のＬＮＡヌクレオシドは、β－Ｄ－オキシ－ＬＮＡヌクレオシドである。

【0180】

ＩＩ．Ｅ． ヌクレアーゼ媒介分解
ヌクレアーゼ媒介分解とは、そのような配列と二重鎖を形成する場合に相補的ヌクレオチド配列の分解を媒介することができるオリゴヌクレオチドを指す。

【0181】

いくつかの態様では、オリゴヌクレオチドは、標的核酸のヌクレアーゼ媒介分解を介して機能し得、本開示のオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ、特にエンドヌクレアーゼ、好ましくは、ＲＮａｓｅＨなどのエンドリボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）を動員することができる。ヌクレアーゼ媒介メカニズムを介して作動するオリゴヌクレオチド設計の例は、通常、少なくとも５または６個のＤＮＡヌクレオシドの領域を含み、親和性増強ヌクレオシド、例えばギャップマーが片側または両側に隣接しているオリゴヌクレオチドである。

【0182】

ＩＩ．Ｆ． ＲＮａｓｅＨ活性及び動員
アンチセンスオリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅＨ活性とは、相補的ＲＮＡ分子と二重鎖を形成する場合にＲＮａｓｅＨを動員し、相補的ＲＮＡ分子の分解を誘導する能力を指す。ＷＯ０１／２３６１３は、ＲＮａｓｅＨ活性を決定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法を提供し、これを使用して、ＲＮａｓｅＨを動員する能力を判定してもよい。通常、オリゴヌクレオチドは、相補的な標的核酸配列が提供される場合、試験対象の修飾オリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、ＤＮＡ単量体のみを含み、オリゴヌクレオチド内のすべての単量体間にホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドを使用し、ｐｍｏｌ／ｌ／分による測定で、ＷＯ０１／２３６１３の実施例９１～９５によって提供される方法論を使用する場合に測定される初期速度の少なくとも５％、例えば少なくとも１０％または２０％超の初期速度を有する場合、ＲＮａｓｅＨを動員できると見なされる。

【0183】

いくつかの態様では、オリゴヌクレオチドは、相補的標的核酸が提供される場合に、ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定されるＲＮａｓｅＨ初期速度が、例えば、試験対象のオリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、２’置換を含まないＤＮＡ単量体のみを含み、オリゴヌクレオチド中のすべての単量体間にホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドを使用し、ＷＯ０１／２３６１３の実施例９１～９５によって提供される方法論を使用する場合に測定される初期速度の２０％未満、例えば１０％未満、例えば５％未満である場合、ＲＮａｓｅＨを動員することが本質的に不可能であると見なされる。

【0184】

ＩＩ．Ｇ． ＡＳＯ設計
本開示のＡＳＯは、ヌクレオシド及びヌクレオシド類似体の両方を含むヌクレオチド配列を含み得、ギャップマーの形態であり得る。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ギャップマーである。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ミックスマーである。いくつかの態様では、ＡＳＯは、トータルマーである。本開示のＡＳＯと共に使用することができるギャップマーの構成の例は、米国特許出願公開第２０１２／０３２２８５１号に記載されており、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0185】

本明細書中で使用する用語「ギャップマー」とは、１つ以上の親和性増強修飾ヌクレオシド（フランク）が５’及び３’に隣接するＲＮａｓｅＨ動員オリゴヌクレオチド（ギャップ）の領域を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを指す。用語「ＬＮＡギャップマー」とは、親和性増強修飾ヌクレオシドの少なくとも１つがＬＮＡヌクレオシドであるギャップマーオリゴヌクレオチドである。用語「混合ウィングギャップマー」とは、フランク領域が少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシド及び少なくとも１つのＤＮＡヌクレオシドまたは非ＬＮＡ修飾ヌクレオシド、例えば、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、及び２’－フルオロ－ＡＮＡヌクレオシド（複数可）などの少なくとも１つの２’置換修飾ヌクレオシドを含むＬＮＡギャップマーを指す。

【0186】

いくつかの態様では、標的領域に対するＡＳＯの親和性を増強することに加えて、いくつかのヌクレオシド類似体はまた、ＲＮａｓｅ（例えば、ＲＮａｓｅＨ）の結合及び切断を媒介する。α－Ｌ－ＬＮＡ単量体はある程度ＲＮａｓｅＨ活性を動員するため、いくつかの態様では、α－Ｌ－ＬＮＡ単量体を含むＡＳＯのギャップ領域（例えば、本明細書で言及される領域Ｂ）は、ＲＮａｓｅＨによって認識及び切断可能な少数の単量体からなり、ミックスマー構造により高い柔軟性が導入される。

【0187】

ＩＩ．Ｈ． ギャプマー設計
いくつかの態様では、本開示のＡＳＯはギャップマーであり、本明細書において領域Ｂ（Ｂ）と呼ばれるＲＮａｓｅＨなどのＲＮａｓｅを動員することができるヌクレオチド（例えば、１つ以上のＤＮＡ）の連続したストレッチを含み、領域Ｂは、５’及び３’の両方において、領域Ｂの連続するヌクレオチドのストレッチに対してヌクレオシド類似体の領域が５’及び３’側から隣接し、これらの領域は、それぞれ領域Ａ（Ａ）及びＣ（Ｃ）と呼ばれる。いくつかの態様では、ヌクレオシド類似体は、糖修飾ヌクレオシド（例えば、高親和性糖修飾ヌクレオシド）である。特定の態様では、領域Ａ及びＣの糖修飾ヌクレオシドは、標的核酸に対するＡＳＯの親和性を増強する（すなわち、親和性増強２’糖修飾ヌクレオシド）。いくつかの態様では、糖修飾ヌクレオシドは、ＬＮＡ及び／または２’－ＭＯＥなどの高親和性２’糖修飾などの２’糖修飾ヌクレオシドである。

【0188】

ギャップマーでは、領域Ｂの５’及び３’のほとんどのヌクレオシドはＤＮＡヌクレオシドであり、それぞれ領域Ａ及びＣのヌクレオシド類似体（例えば、高親和性糖修飾ヌクレオシド）に隣接して配置される。いくつかの態様では、領域Ａ及びＣは、領域Ｂから最も離れた末端（すなわち、領域Ａの５’末端及び領域Ｃの３’末端）にヌクレオシド類似体を有することによってさらに定義され得る。

【0189】

いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、式（５’から３’方向に）Ａ－Ｂ－Ｃのヌクレオチド配列を含み、式中：（Ａ）（５’領域または第１のウィング配列）は、少なくとも１つのヌクレオシド類似体（例えば、３～５個のＬＮＡユニット）を含み；（Ｂ）は、少なくとも４つの連続ヌクレオシド（例えば、４－２４ ＤＮＡユニット）を含み、ＲＮａｓｅを動員することができ（プレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的などの相補的ＲＮＡ分子と二重鎖形成する場合）；そして（Ｃ）（３’領域または第２のウィング配列）は、少なくとも１つのヌクレオシド類似体（例えば、３～５個のＬＮＡユニット）を含む。

【0190】

いくつかの態様では、領域Ａは、ＬＮＡなどの３～５個のヌクレオシド類似体を含み、領域Ｂは、６～２４個（例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４個）のＤＮＡユニットからなり、領域Ｃは、ＬＮＡなどの３つまたは４つのヌクレオシド類似体からなる。そのような設計は、（Ａ－Ｂ－Ｃ）３－１４－３、３－１１－３、３－１２－３、３－１３－３、４－９－４、４－１０－４、４－１１－４、４－１２－４、及び５－１０－５を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＬＬＬＤ_ｎＬＬＬ、ＬＬＬＬＤ_ｎＬＬＬＬ、またはＬＬＬＬＬＤ_ｎＬＬＬＬＬの設計を有し、Ｌはヌクレオシド類似体であり、ＤはＤＮＡであり、ｎは４～２４の任意の整数であり得る。いくつかの態様では、ｎは、６～１４の間の任意の整数であり得る。いくつかの態様では、ｎは、８～１２の間の任意の整数であり得る。いくつかの態様では、ｎは、６～１４の間の任意の整数であり得る。いくつかの態様では、ｎは、８～１２の間の任意の整数であり得る。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＬＬＬＭＭＤｎＭＭＬＬＬ、ＬＬＬＭＤｎＭＬＬＬ、ＬＬＬＬＭＭＤｎＭＭＬＬＬＬ、ＬＬＬＬＭＤｎＭＬＬＬＬ、ＬＬＬＬＬＬＭＭＤｎＭＭＬＬＬＬＬ、またはＬＬＬＬＬＬＭＤｎＭＬＬＬＬＬの設計を有し、式中、ＤはＤＮＡであり、ｎは３～１５の間の任意の整数であり得、ＬはＬＮＡであり、Ｍは２’ＭＯＥである。

【0191】

さらなるギャップマーの設計は、ＷＯ２００４／０４６１６０、ＷＯ２００７／１４６５１１、及びＷＯ２００８／１１３８３２に開示されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0192】

ＩＩ．Ｉ． ヌクレオチド間結合
本明細書に記載のＡＳＯの単量体は、結合基を介して一緒に結合する。好適には、各単量体は、結合基を介して３’隣接単量体に結合する。

【0193】

当業者は、本開示に関して、ＡＳＯの末端の５’単量体は、５’末端基を含む場合も含まない場合もあるが、５’結合基を含まないことを理解するであろう。

【0194】

いくつかの態様では、連続ヌクレオチド配列は、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合を含む。用語「結合基」または「ヌクレオシド間結合」とは、２つのヌクレオシドを共有結合することができる基を意味することを意図している。非限定的な例として、リン酸基及びホスホロチオエート基が挙げられる。

【0195】

本開示のＡＳＯのヌクレオシドまたはその連続ヌクレオシド配列は、結合基を介して一緒に結合する。好適には、各ヌクレオシドは、結合基を介して３’隣接ヌクレオシドに結合する。

【0196】

いくつかの態様では、ヌクレオシド間結合を、その通常のホスホジエステルから、ＲＮａｓｅＨによって切断可能なホスホロチオエートなどのヌクレアーゼ攻撃に対してより耐性のあるものに改変し、標的遺伝子の発現を減少させる際のアンチセンス阻害の経路も可能にする。いくつかの態様では、ヌクレオシド間結合の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％が修飾される。

【0197】

ＩＩＩ． 細胞外小胞、例えば、エキソソーム
本明細書において、ＳＴＡＴ３アンタゴニストを含むＥＶ（例えばエキソソーム）を開示する。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３アンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。ＡＳＯは、本明細書に記載の任意のＡＳＯまたはその機能的断片であり得る。特定の態様では、ＡＳＯは、標的細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡまたはＳＴＡＴ３タンパク質のレベルを低下させる。

【0198】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、免疫細胞を標的とする。いくつかの態様では、免疫細胞は、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。特定の態様では、本開示のＥＶは、腫瘍細胞を標的とする。特定の態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、マクロファージを標的とする。特定の態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、樹状細胞を標的とする。特定の態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、Ｂ細胞を標的とする。特定の態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、Ｔ細胞を標的とする。

【0199】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、がんの治療を必要とする対象のがんを治療する。いくつかの態様では、がんは、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜癌、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、リンパ腫、白血病、肝癌、神経膠芽細胞腫、メラノーマ、骨髄腫基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄質癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、急性骨髄性白血病、胃癌、肝細胞癌、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。

【0200】

上記に記載されるように、ＥＶ、例えば、エキソソームは、本明細書に記載される、直径が約２０～３００ｎｍの間の細胞外小胞である。特定の態様では、本開示のＥＶ、例えば、エキソソームは、約２０～２９０ｎｍ、２０～２８０ｎｍ、２０～２７０ｎｍ、２０～２６０ｎｍ、２０～２５０ｎｍ、２０～２４０ｎｍ、２０～２３０ｎｍ、２０～２２０ｎｍ、２０～２１０ｎｍ、２０～２００ｎｍ、２０～１９０ｎｍ、２０～１８０ｎｍ、２０～１７０ｎｍ、２０～１６０ｎｍ、２０～１５０ｎｍ、２０～１４０ｎｍ、２０～１３０ｎｍ、２０～１２０ｎｍ、２０～１１０ｎｍ、２０～１００ｎｍ、２０～９０ｎｍ、２０～８０ｎｍ、２０～７０ｎｍ、２０～６０ｎｍ、２０～５０ｎｍ、２０～４０ｎｍ、２０～３０ｎｍ、３０～３００ｎｍ、３０～２９０ｎｍ、３０～２８０ｎｍ、３０～２７０ｎｍ、３０～２６０ｎｍ、３０～２５０ｎｍ、３０～２４０ｎｍ、３０～２３０ｎｍ、３０～２２０ｎｍ、３０～２１０ｎｍ、３０～２００ｎｍ、３０～１９０ｎｍ、３０～１８０ｎｍ、３０～１７０ｎｍ、３０～１６０ｎｍ、３０～１５０ｎｍ、３０～１４０ｎｍ、３０～１３０ｎｍ、３０～１２０ｎｍ、３０～１１０ｎｍ、３０～１００ｎｍ、３０～９０ｎｍ、３０～８０ｎｍ、３０～７０ｎｍ、３０～６０ｎｍ、３０～５０ｎｍ、３０～４０ｎｍ、４０～３００ｎｍ、４０～２９０ｎｍ、４０～２８０ｎｍ、４０～２７０ｎｍ、４０～２６０ｎｍ、４０～２５０ｎｍ、４０～２４０ｎｍ、４０～２３０ｎｍ、４０～２２０ｎｍ、４０～２１０ｎｍ、４０～２００ｎｍ、４０～１９０ｎｍ、４０～１８０ｎｍ、４０～１７０ｎｍ、４０～１６０ｎｍ、４０～１５０ｎｍ、４０～１４０ｎｍ、４０～１３０ｎｍ、４０～１２０ｎｍ、４０～１１０ｎｍ、４０～１００ｎｍ、４０～９０ｎｍ、４０～８０ｎｍ、４０～７０ｎｍ、４０～６０ｎｍ、４０～５０ｎｍ、５０～３００ｎｍ、５０～２９０ｎｍ、５０～２８０ｎｍ、５０～２７０ｎｍ、５０～２６０ｎｍ、５０～２５０ｎｍ、５０～２４０ｎｍ、５０～２３０ｎｍ、５０～２２０ｎｍ、５０～２１０ｎｍ、５０～２００ｎｍ、５０～１９０ｎｍ、５０～１８０ｎｍ、５０～１７０ｎｍ、５０～１６０ｎｍ、５０～１５０ｎｍ、５０～１４０ｎｍ、５０～１３０ｎｍ、５０～１２０ｎｍ、５０～１１０ｎｍ、５０～１００ｎｍ、５０～９０ｎｍ、５０～８０ｎｍ、５０～７０ｎｍ、５０～６０ｎｍ、６０～３００ｎｍ、６０～２９０ｎｍ、６０～２８０ｎｍ、６０～２７０ｎｍ、６０～２６０ｎｍ、６０～２５０ｎｍ、６０～２４０ｎｍ、６０～２３０ｎｍ、６０～２２０ｎｍ、６０～２１０ｎｍ、６０～２００ｎｍ、６０～１９０ｎｍ、６０～１８０ｎｍ、６０～１７０ｎｍ、６０～１６０ｎｍ、６０～１５０ｎｍ、６０～１４０ｎｍ、６０～１３０ｎｍ、６０～１２０ｎｍ、６０～１１０ｎｍ、６０～１００ｎｍ、６０～９０ｎｍ、６０～８０ｎｍ、６０～７０ｎｍ、７０～３００ｎｍ、７０～２９０ｎｍ、７０～２８０ｎｍ、７０～２７０ｎｍ、７０～２６０ｎｍ、７０～２５０ｎｍ、７０～２４０ｎｍ、７０～２３０ｎｍ、７０～２２０ｎｍ、７０～２１０ｎｍ、７０～２００ｎｍ、７０～１９０ｎｍ、７０～１８０ｎｍ、７０～１７０ｎｍ、７０～１６０ｎｍ、７０～１５０ｎｍ、７０～１４０ｎｍ、７０～１３０ｎｍ、７０～１２０ｎｍ、７０～１１０ｎｍ、７０～１００ｎｍ、７０～９０ｎｍ、７０～８０ｎｍ、８０～３００ｎｍ、８０～２９０ｎｍ、８０～２８０ｎｍ、８０～２７０ｎｍ、８０～２６０ｎｍ、８０～２５０ｎｍ、８０～２４０ｎｍ、８０～２３０ｎｍ、８０～２２０ｎｍ、８０～２１０ｎｍ、８０～２００ｎｍ、８０～１９０ｎｍ、８０～１８０ｎｍ、８０～１７０ｎｍ、８０～１６０ｎｍ、８０～１５０ｎｍ、８０～１４０ｎｍ、８０～１３０ｎｍ、８０～１２０ｎｍ、８０～１１０ｎｍ、８０～１００ｎｍ、８０～９０ｎｍ、９０～３００ｎｍ、９０～２９０ｎｍ、９０～２８０ｎｍ、９０～２７０ｎｍ、９０～２６０ｎｍ、９０～２５０ｎｍ、９０～２４０ｎｍ、９０～２３０ｎｍ、９０～２２０ｎｍ、９０～２１０ｎｍ、９０～２００ｎｍ、９０～１９０ｎｍ、９０～１８０ｎｍ、９０～１７０ｎｍ、９０～１６０ｎｍ、９０～１５０ｎｍ、９０～１４０ｎｍ、９０～１３０ｎｍ、９０～１２０ｎｍ、９０～１１０ｎｍ、９０～１００ｎｍ、１００～３００ｎｍ、１１０～２９０ｎｍ、１２０～２８０ｎｍ、１３０～２７０ｎｍ、１４０～２６０ｎｍ、１５０～２５０ｎｍ、１６０～２４０ｎｍ、１７０～２３０ｎｍ、１８０～２２０ｎｍ、または１９０～２１０ｎｍの直径を有する。本明細書に記載のＥＶ（例えばエキソソーム）のサイズは、以下に記載する方法に従って測定することができる。

【0201】

いくつかの態様では、本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）は、内（内腔）表面及び外面を含む二脂質膜（「ＥＶ（例えばエキソソーム）膜」）を含む。特定の態様では、内（内腔）表面は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内部コアに面する。特定の態様では、外面は、プロデューサー細胞または標的細胞のエンドソーム、多小胞体、または膜／細胞質と接触し得る。

【0202】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）膜は、脂質及び脂肪酸を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）膜は、リン脂質、糖脂質、脂肪酸、スフィンゴ脂質、ホスホグリセリド、ステロール、コレステロール、及びホスファチジルセリンを含む。

【0203】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）膜は、内部リーフレット及び外部リーフレットを含む。内部及び外部リーフレットの組成物は、当技術分野で公知のトランスバイレイヤー（ｔｒａｎｓｂｉｌａｙｅｒ）分布アッセイによって決定することができ、例えば、Ｋｕｙｐｅｒｓ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １９８５ ８１９：１７０を参照されたい。いくつかの態様では、外部リーフレットの組成物は、およそ７０～９０％のコリンリン脂質、およそ０～１５％の酸性リン脂質、及びおよそ５～３０％のホスファチジルエタノールアミンである。いくつかの態様では、内部リーフレットの組成物は、およそ１５～４０％のコリンリン脂質、およそ１０～５０％の酸性リン脂質、及びおよそ３０～６０％のホスファチジルエタノールアミンである。

【0204】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）膜は、グリカンなどの１つ以上の多糖類を含む。

【0205】

いくつかの態様では、本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＡＳＯを含み、ＡＳＯは、ＥＶの外面またはＥＶの内腔表面のいずれかで、足場部分を介してＥＶに連結する。

【0206】

いくつかの態様では、ＡＳＯを含むＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＡＳＯとエキソソーム膜との間に固定部分（任意選択でリンカーを含む）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、外来である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、プロデューサー細胞によって産生されるエキソソームの一部ではない。

【0207】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、少なくとも１つのＡＳＯを含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、少なくとも２つのＡＳＯ、例えば、第１のヌクレオチド配列を含む第１のＡＳＯ及び第２のヌクレオチド配列を含む第２のＡＳＯを含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、少なくとも３つのＡＳＯ、少なくとも４つのＡＳＯ、少なくとも５つのＡＳＯ、少なくとも６つのＡＳＯ、または６つを超えるＡＳＯを含む。いくつかの態様では、第１のＡＳＯ、第２のＡＳＯ、第３のＡＳＯ、第４のＡＳＯ、第５のＡＳＯ、第６のＡＳＯ、及び／または第ＮのＡＳＯのそれぞれが異なる。

【0208】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、第１のＡＳＯ及び第２のＡＳＯを含み、第１のＡＳＯは、第１の転写産物中の第１の標的配列に相補的である第１のヌクレオチド配列を含み、第２のＡＳＯは、第１の転写産物の第２の標的配列に相補的な第２のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、第１の標的配列は、第２の標的配列と重複しない。いくつかの態様では、第１の標的配列は、転写産物の５’ＵＴＲ内にある少なくとも１つのヌクレオチドを含み、第２の標的配列は、５’ＵＴＲ内にあるヌクレオチドを含まない。いくつかの態様では、第１の標的配列は、転写産物の３’ＵＴＲ内にある少なくとも１つのヌクレオチドを含み、第２の標的配列は、３’ＵＴＲ内にあるヌクレオチドを含まない。いくつかの態様では、第１の標的配列は、転写産物の５’ＵＴＲ内にある少なくとも１つのヌクレオチドを含み、第２の標的配列は、３’ＵＴＲ内にある少なくとも１つのヌクレオチドを含む。

【0209】

いくつかの態様では、第１のＡＳＯは、エキソン－イントロン接合部内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、エキソン－イントロン接合部内の配列を標的とする。いくつかの態様では、第１のＡＳＯは、エキソン－イントロン接合部内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、エキソン内の配列を標的とする。いくつかの態様では、第１のＡＳＯは、エキソン－イントロン接合部内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、イントロン内の配列を標的とする。いくつかの態様では、第１のＡＳＯは、エキソン内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、エキソン内の配列を標的とする。いくつかの態様では、第１のＡＳＯは、イントロン内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、エキソン内の配列を標的とする。いくつかの態様では、第１のＡＳＯは、イントロン内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、イントロン内の配列を標的とする。

【0210】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、第１のＡＳＯ及び第２のＡＳＯを含み、第１のＡＳＯは、第１の転写産物中の第１の標的配列に相補的である第１のヌクレオチド配列を含み、第２のＡＳＯは、第２の転写産物の第２の標的配列に相補的な第２のヌクレオチド配列を含み、第１の転写産物は、第２の転写産物と同じ遺伝子の産物ではない。

【0211】

いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、ホスホロジアミデートモルフォリノオリゴマー（ＰＭＯ）またはペプチド結合ホスホロジアミデートモルフォリノオリゴマー（ＰＰＭＯ）を含む。

【0212】

リンカーの非限定的な例は、本明細書中の他の箇所に開示されている。

【0213】

ＩＩＩ．Ａ． 固定部分（ＡＭ）
１つ以上の固定部分（ＡＭ）を使用して、ＡＳＯを本開示のＥＶに固定することができる。いくつかの態様では、ＡＳＯは、固定部分に直接またはリンカーを介して連結される。いくつかの態様では、ＡＳＯを、「反応性基」（ＲＧ；例えば、アミン、チオール、ヒドロキシ、カルボン酸、またはアジド）と「反応性部分」（ＲＭ；例えば、マレイミド、コハク酸塩、ＮＨＳ）との間の反応を介して、固定部分またはリンカーの組み合わせに結合させることができる。例えば以下のようないくつかの潜在的な合成ルートが想定される：
［ＡＭ］－／反応性部分／ ＋ ／反応性基／－［ＡＳＯ］
［ＡＭ］－［リンカー］ｎ－／反応性部分／ ＋ ／反応性基／－［ＡＳＯ］
［ＡＭ］－／反応性部分／ ＋ ／反応性基／－［リンカー］ｎ－［ＡＳＯ］
［ＡＭ］－［リンカー］ｎ－／反応性部分／ ＋ ／反応性基／－［リンカー］ｎ－［ＡＳＯ］

【0214】

固定部分は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の脂質二重層に挿入することができ、エキソソームへのＡＳＯの充填が可能になる。現在、極性ＡＳＯの送達媒体としてのエキソソームの商業化に対する主な障害は、充填の効率が非常に低いことである。この障害は、極性ＡＳＯを、エキソソームに充填する前に修飾することで克服することができる。したがって、本明細書に記載するように、ＡＳＯの修飾は、それらのエキソソームへの充填を促進する。

【0215】

本明細書に記載の修飾極性ＡＳＯをエキソソームに充填する方法は、例えば、エレクトロポレーションまたはカチオン性脂質トランスフェクションによって非修飾ＡＳＯをエキソソームに導入する方法について、以前に報告された充填効率と比較して、充填効率を有意に向上させる。

【0216】

いくつかの態様では、修飾は、ＡＳＯの疎水性を、天然（非修飾）ＡＳＯと比較して、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍だけ増加させる。いくつかの態様では、修飾は、ＡＳＯの疎水性を、天然（非修飾）ＡＳＯと比較して、少なくとも約１桁、少なくとも約２桁、少なくとも約３桁、少なくとも約４桁、少なくとも約５桁、少なくとも約６桁、少なくとも約７桁、少なくとも約８桁、少なくとも約９桁、または少なくとも約１０桁だけ増加させる。

【0217】

いくつかの態様では、修飾は、天然（非修飾）ＡＳＯ、例えば、対応する非修飾ＡＳＯと比較して、ＡＳＯの疎水性を、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１２５％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１７５％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、少なくとも約３００％、少なくとも約３５０％、少なくとも約４００％、少なくとも約４５０％、少なくとも約５００％、少なくとも約６００％、少なくとも約７００％、少なくとも約８００％、少なくとも約９００％、または少なくとも約１０００％増加させる。疎水性の増加は、任意の好適な方法を使用して評価することができる。例えば、疎水性は、水などの水性溶媒への溶解度と比較した、オクタノールなどの有機溶媒への溶解度の割合を測定することによって決定することができる。

【0218】

いくつかの態様では、固定部分をＡＳＯに化学的に結合させ、その疎水性特性を増強することができる。例示的な態様では、固定部分は、ステロール（例えばコレステロール）、ＧＭ１、脂質、ビタミン、小分子、ペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、部分は脂質である。いくつかの態様では、固定部分は、ステロール、例えば、コレステロールを含む。追加の疎水性部分は、例えば、リン脂質、リゾリン脂質、脂肪酸、またはビタミン（例えば、ビタミンＤまたはビタミンＥ）を含む。

【0219】

いくつかの態様では、固定部分は、直接または１つ以上のリンカーを介して、ＡＳＯの末端で複合体化される（すなわち、「末端修飾」）。他の態様では、固定部分を、ＡＳＯの他の部分と複合体化する。

【0220】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、検出可能な標識を含み得る。例示的な標識には、蛍光標識及び／または放射性標識が含まれる。ＡＳＯが蛍光標識されているいくつかの態様では、検出可能な標識は、例えば、Ｃｙ３であり得る。検出可能な標識をＡＳＯに追加することは、エキソソームを標識化し、それらの生体内分布を追跡する方法として使用することができる。他の態様では、例えば、エキソソーム脂質及び／またはエキソソームペプチドを標識することによって、検出可能な標識をエキソソームに直接結合させることができる。

【0221】

ＡＳＯの様々な成分（すなわち、固定部分、リンカーとリンカーの組み合わせ、及びＡＳＯ）は、アミド、エステル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、ホスホルアミデート、ホスホトリエステル、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、ホスホジエステル、またはホスホロチオエート結合、あるいは任意のまたは他の結合によって連結することができる。

【0222】

いくつかの態様では、ＡＳＯの異なる成分は、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート、Ｎ－４－マレイミド酪酸、Ｓ－（２－ピリジルジチオ）システアミン、ヨードアセトキシスクシンイミド、Ｎ－（４－マレイミドブチルオキシ）スクシンイミド、Ｎ－［５－（３’－マレイミドプロピルアミド）－１－カルボキシペンチル］イミノ二酢酸、Ｎ－（５－アミノペンチル）－イミノ二酢酸などの二官能性リンカー（すなわち、２つの官能基を含むリンカー）を使用するリンカーであり得る。

【0223】

ＩＩＩ．Ｂ．１． 固定部分
ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面にＡＳＯを固定することができる好適な固定部分は、以下で詳細に記載するように、例えば、ステロール（例えば、コレステロール）、脂質、リゾリン脂質、脂肪酸、または脂溶性ビタミンを含む。

【0224】

いくつかの態様では、固定部分は脂質であり得る。脂質固定部分は、当技術分野で公知の任意の脂質、例えば、パルミチン酸またはグリコシルホスファチジルイノシトールであり得る。いくつかの態様では、脂質は、脂肪酸、ホスファチド、リン脂質（例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、またはホスファチジルエタノールアミン）、またはその類似体（例えば、ホスファチジルコリン、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、セファリン、もしくはホスファチジルセリンまたはその類似体もしくはその部分、例えば、その部分的に加水分解された部分）である。いくつかの態様では、固定部分はコレステロールである。

【0225】

一般的に、固定部分は、化学的に結合させる。しかしながら、固定部分を、酵素的にＡＳＯに結合させることができる。いくつかの態様では、細胞培養条件の改変を介して固定部分をＡＳＯに結合させることができる。例えば、ミリスチン酸が制限されている培地を使用することにより、短鎖及び不飽和を含む他のいくつかの脂肪酸をＮ末端グリシンに結合させることができる。例えば、ＢＫチャネルでは、ミリスチン酸は、ヒドロキシエステル結合を介して、翻訳後に内部のセリン／トレオニンまたはチロシン残基に結合することが報告されている。

【0226】

固定部分は、化学的に実行可能な任意の位置、例えば、ＡＳＯの５’及び／または３’末端で、リンカーの組み合わせを介して直接的または間接的にＡＳＯと複合体化することができる。一態様では、固定部分を、ＡＳＯの３’末端にのみ複合体化させる。一態様では、固定部分を、ＡＳＯの５’末端にのみ複合体化させる。一態様では、固定部分を、ＡＳＯの３’末端でも５’末端でもない位置で複合体化させる。

【0227】

以下の表に示す本開示の方法を実施するために使用することができるいくつかのタイプの膜アンカー：

【表1】

【0228】

いくつかの態様では、本開示の固定部分は、本明細書に開示する２つ以上のタイプの固定部分を含み得る。例えば、いくつかの態様では、固定部分には、２つの脂質、例えば、リン脂質と脂肪酸、または２つのリン脂質、または２つの脂肪酸、または脂質とビタミン、またはコレステロールとビタミンなどを含ませることができ、これらはまとめて６～８０の炭素原子（すなわち、６～８０の同等の炭素数（ＥＣＮ））を有する。

【0229】

いくつかの態様では、固定部分の組み合わせ、例えば、脂質（例えば、脂肪酸）の組み合わせは、６～８０、８～８０、１０～８０、１２～８０、１４～８０、１６～８０、１８～８０、２０～８０、２２～８０、２４～８０、２６～８０、２８～８０、３０～８０、４～７６、６～７６、８～７６、１０～７６、１２～７６、１４～７６、１６～７６、１８～７６、２０～７６、２２～７６、２４～７６、２６～７６、２８～７６、３０～７６、６～７２、８～７２、１０～７２、１２～７２、１４～７２、１６～７２、１８～７２、２０～７２、２２～７２、２４～７２、２６～７２、２８～７２、３０～７２、６～６８、８～６８、１０～６８、１２～６８、１４～６８、１６～６８、１８～６８、２０～６８、２２～６８、２４～６８、２６～６８、２８～６８、３０～６８、６～６４、８～６４、１０～６４、１２～６４、１４～６４、１６～６４、１８～６４、２０～６４、２２～６４、２４～６４、２６～６４、２８～６４、３０～６４、６～６０、８～６０、１０～６０、１２～５６、１４～５６、１６～５６、１８～５６、２０～５６、２２～５６、２４～５６、２６～５６、２８～５６、３０～５６、６～５２、８～５２、１０～５２、１２～５２、１４～５２、１６～５２、１８～５２、２０～５２、２２～５２、２４～５２、２６～５２、２８～５２、３０～５２、６～４８、８～４８、１０～４８、１２～４８、１４～４８、１６～４８、１８～４８、２０～４８、２２～４８、２４～４８、２６～４８、２８～４８、３０～４８、６～４４、８～４４、１０～４４、１２～４４、１４～４４、１６～４４、１８～４４、２０～４４、２２～４４、２４～４４、２６～４４、２８～４４、３０～４４、６～４０、８～４０、１０～４０、１２～４０、１４～４０、１６～４０、１８～４０、２０～４０、２２～４０、２４～４０、２６～４０、２８～４０、３０～４０、６～３６、８～３６、１０～３６、１２～３６、１４～３６、１６～３６、１８～３６、２０～３６、２２～３６、２４～３６、２６～３６、２８～３６、３０～３６、６～３２、８～３２、１０～３２、１２～３２、１４～３２、１６～３２、１８～３２、２０～３２、２２～３２、２４～３２、２６～３２、２８～３２、または３０～３２のＥＣＮを有する。

【0230】

ＩＩＩ．Ｂ．１．ａ． コレステロール及び他のステロール
いくつかの態様では、固定部分は、ステロール、ステロイド、ホパノイド、ヒドロキシステロイド、セコステロイド、または親油性を有するその類似体を含む。いくつかの態様では、固定部分は、植物ステロール、マイコステロール、または動物ステロールなどのステロールを含む。例示的な動物ステロールとして、コレステロール及び２４Ｓ－ヒドロキシコレステロールが挙げられ；例示的な植物ステロールとして、エルゴステロール（マイコステロール）、カンペステロール、シトステロール、及びスチグマステロールが挙げられる。いくつかの態様では、ステロールは、エルゴステロール、７－デヒドロコレステロール、コレステロール、２４Ｓ－ヒドロキシコレステロール、ラノステロール、シクロアルテノール、フコステロール、サリンゴステロール、カンペステロール、β－シトステロール、シトスタノール、コプロスタノール、アベナステロール、またはスチグマステロールから選択される。ステロールは、遊離ステロール、アシル化（ステロールエステル）、アルキル化（ステリルアルキルエーテル）、硫酸化（ステロール硫酸塩）、またはそれ自体がアシル化可能なグリコシド部分（ステリルグリコシド）に結合している（アシル化ステロールグリコシド）として見出され得る。

【0231】

いくつかの態様では、固定部分は、ステロイドを含む。いくつかの態様では、ステロイドは、ジヒドロテストステロン、ウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン、プロゲステロン、またはコルチゾールから選択される。

【0232】

例えば、ステロールは、ステロールの利用可能な－ＯＨ基において、直接またはリンカーの組み合わせを介してＡＳＯに複合体化させてもよい。例示的なステロールは、以下に示す一般的な骨格を有する：

【化4】

【0233】

さらなる例として、エルゴステロールは以下の構造を有する：

【化5】

【0234】

コレステロールは、以下の構造を有する：

【化6】

【0235】

したがって、いくつかの実施形態では、ステロールまたはステロイドの遊離－ＯＨ基を使用して、ＡＳＯを直接またはリンカーの組み合わせを介して、ステロール（例えば、コレステロール）またはステロイドに複合体化する。

【0236】

ＩＩＩ．Ｂ．１．ｂ． 脂肪酸
いくつかの態様では、固定部分は脂肪酸である。いくつかの態様では、脂肪酸は、短鎖、中鎖、または長鎖脂肪酸である。いくつかの態様では、脂肪酸は飽和脂肪酸である。いくつかの態様では、脂肪酸は不飽和脂肪酸である。いくつかの態様では、脂肪酸はモノ不飽和脂肪酸である。いくつかの態様では、脂肪酸は、ω－３（オメガ－３）またはω－６（オメガ－６）脂肪酸などの多価不飽和脂肪酸である。

【0237】

いくつかの態様では、脂質、例えば、脂肪酸は、Ｃ_２－Ｃ_６０鎖を有する。いくつかの実施形態では、脂質、例えば、脂肪酸は、Ｃ_２－Ｃ_２８鎖を有する。いくつかの態様では、脂質は、Ｃ_２－Ｃ_４０鎖を有する。いくつかの態様では、脂質は、Ｃ_２－Ｃ_１２またはＣ_４－Ｃ_１２鎖を有する。いくつかの態様では、脂質は、Ｃ_４－Ｃ_４０鎖を有する。いくつかの態様では、脂肪酸は、Ｃ_４－Ｃ_４０、Ｃ_２－Ｃ_３８、Ｃ_２－Ｃ_３６、Ｃ_２－Ｃ_３４、Ｃ_２－Ｃ_３２、Ｃ_２－Ｃ_３０、Ｃ_４－Ｃ_３０、Ｃ_２－Ｃ_２８、Ｃ_４－Ｃ_２８、Ｃ_２－Ｃ_２６、Ｃ_４－Ｃ_２６、Ｃ_２－Ｃ_２４、Ｃ_４－Ｃ_２４、Ｃ_６－Ｃ_２４、Ｃ_８－Ｃ_２４、Ｃ_１０－Ｃ_２４、Ｃ_２－Ｃ_２２、Ｃ_４－Ｃ_２２、Ｃ_６－Ｃ_２２、Ｃ_８－Ｃ_２２、Ｃ_１０－Ｃ_２２、Ｃ_２－Ｃ_２０、Ｃ_４－Ｃ_２０、Ｃ_６－Ｃ_２０、Ｃ_８－Ｃ_２０、Ｃ_１０－Ｃ_２０、Ｃ_２－Ｃ_１８、Ｃ_４－Ｃ_１８、Ｃ_６－Ｃ_１８、Ｃ_８－Ｃ_１８、Ｃ_１０－Ｃ_１８、Ｃ_１２－Ｃ_１８、Ｃ_１４－Ｃ_１８、Ｃ_１６－Ｃ_１８、Ｃ_２－Ｃ_１６、Ｃ_４－Ｃ_１６、Ｃ_６－Ｃ_１６、Ｃ_８－Ｃ_１６、Ｃ_１０－Ｃ_１６、Ｃ_１２－Ｃ_１６、Ｃ_１４－Ｃ_１６、Ｃ_２－Ｃ_１５、Ｃ_４－Ｃ_１５、Ｃ_６－Ｃ_１５、Ｃ_８－Ｃ_１５、Ｃ_９－Ｃ_１５、Ｃ_１０－Ｃ_１５、Ｃ_１１－Ｃ_１５、Ｃ_１２－Ｃ_１５、Ｃ_１３－Ｃ_１５、Ｃ_２－Ｃ_１４、Ｃ_４－Ｃ_１４、Ｃ_６－Ｃ_１４、Ｃ_８－Ｃ_１４、Ｃ_９－Ｃ_１４、Ｃ_１０－Ｃ_１４、Ｃ_１１－Ｃ_１４、Ｃ_１２－Ｃ_１４、Ｃ_２－Ｃ_１３、Ｃ_４－Ｃ_１３、Ｃ_６－Ｃ_１３、Ｃ_７－Ｃ_１３、Ｃ_８－Ｃ_１３、Ｃ_９－Ｃ_１３、Ｃ_１０－Ｃ_１３、Ｃ_１０－Ｃ_１３、Ｃ_１１－Ｃ_１３、Ｃ_２－Ｃ_１２、Ｃ_４－Ｃ_１２、Ｃ_６－Ｃ_１２、Ｃ_７－Ｃ_１２、Ｃ_８－Ｃ_１２、Ｃ_９－Ｃ_１２、Ｃ_１０－Ｃ_１２、Ｃ_２－Ｃ_１１、Ｃ_４－Ｃ_１１、Ｃ_６－Ｃ_１１、Ｃ_７－Ｃ_１１、Ｃ_８－Ｃ_１１、Ｃ_９－Ｃ_１１、Ｃ_２－Ｃ_１０、Ｃ_４－Ｃ_１０、Ｃ_２－Ｃ_９、Ｃ_４－Ｃ_９、Ｃ_２－Ｃ_８、Ｃ_２－Ｃ_７、Ｃ_４－Ｃ_７、Ｃ_２－Ｃ_６、またはＣ_４－Ｃ_６鎖を有する。いくつかの態様では、脂肪酸は、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５、Ｃ_６、Ｃ_７、Ｃ_８、Ｃ_９、Ｃ_１０、Ｃ_１１、Ｃ_１２、Ｃ_１３、Ｃ_１４、Ｃ_１５、Ｃ_１６、Ｃ_１７、Ｃ_１８、Ｃ_１９、Ｃ_２０、Ｃ_２１、Ｃ_２２、Ｃ_２３、Ｃ_２４、Ｃ_２５、Ｃ_２６、Ｃ_２７、Ｃ_２８、Ｃ_２９、Ｃ_３０、Ｃ_３１、Ｃ_３２、Ｃ_３３、Ｃ_３４、Ｃ_３５、Ｃ_３６、Ｃ_３７、Ｃ_３８、Ｃ_３９、Ｃ_４０、Ｃ_４１、Ｃ_４２、Ｃ_４３、Ｃ_４４、Ｃ_４５、Ｃ_４６、Ｃ_４７、Ｃ_４８、Ｃ_４９、Ｃ_５０、Ｃ_５１、Ｃ_５２、Ｃ_５３、Ｃ_５４、Ｃ_５５、Ｃ_５６、Ｃ_５７、Ｃ_５８、Ｃ_５９、またはＣ_６０を有する。

【0238】

いくつかの態様では、固定部分は２つの脂肪酸を含み、それらのそれぞれは、独立して、前述の範囲または数の炭素原子のいずれか１つを有する鎖を有する脂肪酸から選択される。いくつかの態様では、脂肪酸の１つは、独立して、Ｃ６－Ｃ２１鎖を有する脂肪酸であり、そして１つは、独立して、Ｃ１２－Ｃ３６鎖を有する脂肪酸である。いくつかの実施形態では、各脂肪酸は、独立して、１１、１２、１３、１４、１５、１６、または１７個の炭素原子の鎖を有する。

【0239】

好適な脂肪酸として、飽和直鎖脂肪酸、飽和分岐脂肪酸、不飽和脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸、及びポリカルボン酸が挙げられる。いくつかの態様では、そのような脂肪酸は、最大３２個の炭素原子を有する。

【0240】

有用な飽和直鎖脂肪酸の例として、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、ヘキサコサン酸、オクタコサン酸、トリアコンタン酸及びｎ－ドトリアコンタン酸などの偶数の炭素原子を有するもの、ならびにプロピオン酸、ｎ－吉草酸、エナント酸、ペラルゴン酸、ヘンデカン酸、トリデカン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカン酸、ヘネイコサン酸、トリコサン酸、ペンタコサン酸、及びヘプタコサン酸などの奇数の炭素原子を有するものが挙げられる。

【0241】

好適な飽和分岐脂肪酸の例として、イソ酪酸、イソカプロン酸、イソカプリル酸、イソカプリン酸、イソラウリン酸、１１－メチルドデカン酸、イソミリスチン酸、１３－メチル－テトラデカン酸、イソパルミチン酸、１５－メチル－ヘキサデカン酸、イソステアリン酸、１７－メチルオクタデカン酸、イソアラシン酸、１９－メチル－エイコサン酸、α－エチル－ヘキサン酸、α－ヘキシルデカン酸、α－ヘプチルウンデカン酸、２－デシルテトラデカン酸、２－ウンデシルテトラデカン酸、２－デシルペンタデカン酸、２－ウンデシルペンタデカン酸、及びＦｉｎｅオキソコール１８００酸（Ｎｉｓｓａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ， Ｌｔｄ．製）が挙げられる。好適な飽和奇数炭素分岐脂肪酸として、イソブチル基で終結するアンテイソ脂肪酸、例えば、６－メチル－オクタン酸、８－メチル－デカン酸、１０－メチル－ドデカン酸、１２－メチル－テトラデカン酸、１４－メチルヘキサデカン酸、１６－メチルオクタデカン酸、１８－メチル－エイコサン酸、２０－メチル－ドコサン酸、２２－メチル－テトラコサン酸、２４－メチル－ヘキサコサン酸、及び２６－メチルオクタコサン酸が挙げられる。

【0242】

好適な不飽和脂肪酸の例として、４－デセン酸、カプロレイン酸、４－ドデセン酸、５－ドデセン酸、ラウロレイン酸、４－テトラデセン酸、５－テトラデセン酸、９－テトラデセン酸、パルミトレイン酸、６－オクタデセン酸、オレイン酸、９－オクタデセン酸、１１－オクタデセン酸、９－エイコセン酸、シス－１１－エイコセン酸、セトレイン酸、１３－ドコセン酸、１５－テトラコセン酸、１７－ヘキサコセン酸、６，９，１２，１５－ヘキサデカテトラエン酸、リノール酸、リノレン酸、α－エレオステアリン酸、β－エレオステアリン酸、プニカ酸、６，９，１２，１５－オクタデカテトラエン酸、パリナリン酸、５，８，１１，１４－エイコサテトラエン酸、５，８，１１，１４，１７－エイコサペンタエン酸、７，１０，１３，１６，１９－ドコサペンタエン酸、４，７，１０，１３，１６，１９－ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。

【0243】

好適なヒドロキシ脂肪酸の例として、α－ヒドロキシラウリン酸、α－ヒドロキシミリスチン酸、α－ヒドロキシパルミチン酸、α－ヒドロキシステアリン酸、ω－ヒドロキシラウリン酸、α－ヒドロキシアラキン酸、９－ヒドロキシ－１２－オクタデセン酸、リシノール酸、α－ヒドロキシベヘン酸、９－ヒドロキシ－トランス－１０，１２－オクタデカジエン酸、カモレン酸（ｋａｍｏｌｅｎｉｃ ａｃｉｄ）、イプロリン酸、９，１０－ジヒドロキシステアリン酸、１２－ヒドロキシステアリン酸などが挙げられる。

【0244】

好適なポリカルボン酸の例として、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、Ｄ，Ｌ－リンゴ酸などが挙げられる。

【0245】

いくつかの態様では、各脂肪酸は、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデシル酸、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデシル酸、アラキジン酸、ヘンイコシル酸、ベヘン酸、トリコシル酸、リグノセリン酸、ペンタコシル酸、セロチン酸、ヘプタコシル酸、モンタン酸、ノナコシル酸、メリシン酸、ヘナトリアコンチル酸、ラッセル酸、プシル酸、ゲジン酸、セロプラスチック酸、ヘキサトリアコンチル酸、ヘプタトリアコンタン酸、またはオクタトリアコンタン酸から独立して選択される。

【0246】

いくつかの態様では、各脂肪酸は、α－リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、リノール酸、γ－リノール酸、ジホモ－γ－リノール酸、アラキドン酸、ドコサテトラエン酸、パルミトレイン酸、バクセン酸、パウリン酸、オレイン酸、エライジン酸、ゴンドイン酸、エルカ酸（ｅｕｒｃｉｃ ａｃｉｄ）、ネルボン酸、ミード酸、アドレン酸、ボセオペンタエン酸、オズボンド酸、サルジン酸、ニシン酸、ドコサヘキサエン酸、またはテトラコサノールペンタエン酸、または別のモノ不飽和または多価不飽和脂肪酸から独立して選択される。

【0247】

いくつかの態様では、脂肪酸の一方または両方が、必須脂肪酸である。特定の必須脂肪酸の有益な健康効果を考慮すると、開示する治療的に充填されたエキソソームの治療効果は、そのような脂肪酸を治療薬に含めることによって増加され得る。いくつかの態様では、必須脂肪酸は、リノレン酸、γ－リノレン酸、ジホモ－γ－リノレン酸、アラキドン酸、アドレン酸、ドコサペンタエンｎ－６酸、α－リノレン酸、ステアリドン酸、２０：４ｎ－３酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエンｎ－３酸、またはドコサヘキサエン酸からなる群から選択されるｎ－６またはｎ－３必須脂肪酸である。

【0248】

いくつかの態様では、各脂肪酸は、独立して、ａｌｌ－ｃｉｓ－７，１０，１３－ヘキサデカトリエン酸、α－リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、テトラコサペンタエン酸、テトラコサヘキサエン酸、またはリポ酸から選択される。他の態様では、脂肪酸は、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、またはリポ酸から選択される。脂肪酸の他の例として、ａｌｌ－ｃｉｓ－７，１０，１３－ヘキサデカトリエン酸、α－リノレン酸（ＡＬＡまたはａｌｌ－ｃｉｓ－９，１２，１５－オクタデカトリエン酸）、ステアリドン酸（ＳＴＤまたはａｌｌ－ｃｉｓ－６，９，１２，１５－オクタデカテトラエン酸）、エイコサトリエン酸（ＥＴＥまたはａｌｌ－ｃｉｓ－１１，１４，１７－エイコサトリエン酸）、エイコサテトラエン酸（ＥＴＡまたはａｌｌ－ｃｉｓ－８，１１，１４，１７－エイコサテトラエン酸）、エイコサテトラエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ、クルパノドン酸またはａｌｌ－ｃｉｓ－７，１０，１３，１６，１９－ドコサペンタエン酸）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡまたはオールシス－４，７，１０，１３、１６，１９－ドコサヘキサエン酸）、テトラコサペンタエン酸（ａｌｌ－ｃｉｓ－９，１２，１５，１８，２１－ドコサヘキサエン酸）、またはテトラコサヘキサエン酸（ニシン酸またはａｌｌ－ｃｉｓ－６，９，１２，１５，１８，２１－テトラコセン酸）が挙げられる。いくつかの態様では、脂肪酸は、リポ酸などの中鎖脂肪酸である。

【0249】

脂肪酸鎖は鎖の長さが大きく異なり、例えば、短いものから非常に長いものまで、鎖の長さによって分類され得る。短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）は、炭素数が約５以下の脂肪酸（例えば、酪酸）である。いくつかの態様では、脂肪酸はＳＣＦＡである。中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）は、約６～１２個の炭素の鎖を有する脂肪酸を含み、中鎖トリグリセリドを形成することができる。いくつかの態様では、脂肪酸はＭＣＦＡである。長鎖脂肪酸（ＬＣＦＡ）は、炭素数１３～２１の脂肪酸を含む。いくつかの態様では、脂肪酸はＬＣＦＡである。いくつかの態様では、脂肪酸はＬＣＦＡである。超長鎖脂肪酸（ＶＬＣＦＡ）は、２２個以上の炭素、例えば、２２～６０、２２～５０、または２２～４０個の炭素の鎖を有する脂肪酸を含む。いくつかの態様では、脂肪酸はＶＬＣＦＡである。

【0250】

ＩＩＩ．Ｂ．１．ｃ． リン脂質
いくつかの態様では、固定部分は、リン脂質を含む。リン脂質は、すべての細胞膜の主成分である脂質のクラスである。それらは両親媒性の特徴のために脂質二重層を形成することができる。リン脂質分子の構造は、一般的に、２つの疎水性脂肪酸「テール」とリン酸基からなる親水性「ヘッド」からなる。例えば、リン脂質は、次式に記載の脂質であり得る：

【化7】

式中、Ｒ_ｐはリン脂質部分を表し、Ｒ_１とＲ_２は、不飽和の有無にかかわらず、同じかまたは異なり得る脂肪酸部分を表す。

【0251】

リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２ リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的基から選択され得る。

【0252】

特定のリン脂質は、脂質二重層、例えば、エキソソーム膜の脂質二重層への融合を促進し得る。例えば、カチオン性リン脂質は、膜の１つ以上の負に荷電したリン脂質と相互作用し得る。リン脂質の膜への融合は、脂質含有組成物の１つ以上の要素が膜に結合するか、または膜を通過することを可能にし得る。

【0253】

脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、α－リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的基から選択され得る。

【0254】

本開示において固定部分として使用するリン脂質は、天然または非天然のリン脂質であり得る。分岐、酸化、環化、及びアルキンを含む修飾及び置換を有する天然種を含む非天然リン脂質種もまた企図される。例えば、リン脂質は、１つ以上のアルキン（例えば、１つ以上の二重結合が三重結合で置き換えられているアルケニル基）で官能化または架橋され得る。適切な反応条件下で、アルキン基は、アジドへの曝露時に銅触媒による付加環化反応を受け得る。

【0255】

リン脂質には、グリセロリン脂質、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジン酸が含まれるが、これらに限定されない。

【0256】

本明細書に開示する固定部分で使用することができるリン脂質の例には、以下が含まれる。
・ ホスファチジルエタノールアミン：例えば、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、１－パルミトイル－２－オレイルホスファチジルエタノールアミン、１－オレイル－２－パルミトイルホスファチジルエタノールアミン、及びジエルコイルホスファチジルエタノールアミン；
・ ホスファチジルグリセロール：例えば、ジラウロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルグリセロール、１－オレイル－２－パルミトイルホスファチジルグリセロール、及びジエルコイルホスファチジルグリセロール；
・ ホスファチジルセリン：例えば、ジラウロイルホスファチジルセリン、ジミリストイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、ジステアロイルホスファチジルセリン、ジオレオイルホスファチジルセリン、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルセリン、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジルセリン、及びジエルコイルホスファチジルセリン；
・ ホスファチジン酸：例えば、ジラウロイルホスファチジン酸、ジミリストイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸、ジステアロイルホスファチジン酸、ジオレオイルホスファチジン酸、１－パルミトイル－２－オレイルホスファチジン酸、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジン酸、及びジエルコイルホスファチジン酸；ならびに、
・ ホスファチジルイノシトール：例えば、ジラウロイルホスファチジルイノシトール、ジミリストイルホスファチジルイノシトール、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール、ジステアロイルホスファチジルイノシトール、ジオレオイルホスファチジルイノシトール、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルイノシトール、１－オレイル－２－パルミトイルホスファチジルイノシトール、及びジエルコイルホスファチジルイノシトール。

【0257】

リン脂質は、対称型または非対称型であり得る。本明細書中で使用する場合、用語「対称リン脂質」は、一致する脂肪酸部分を有するグリセロリン脂質、及び可変脂肪酸部分及びスフィンゴシン骨格の炭化水素鎖が同等の数の炭素原子を含むスフィンゴ脂質を含む。本明細書中で使用する場合、用語「非対称リン脂質」は、リゾ脂質、異なる脂肪酸部分（例えば、異なる数の炭素原子及び／または不飽和（例えば、二重結合）を有する脂肪酸部分）を有するグリセロリン脂質、ならびにスフィンゴシン骨格の可変脂肪酸部分及び炭化水素鎖が異なる数の炭素原子を含むスフィンゴ脂質を含む（例えば、可変脂肪酸部分は、炭化水素鎖よりも少なくとも２つ多い炭素原子を含むか、または炭化水素鎖よりも少なくとも２つ少ない炭素原子を含む）。

【0258】

いくつかの態様では、固定部分は、少なくとも１つの対称リン脂質を含む。対称リン脂質は、以下からなる非限定的な群から選択され得る。
１，２－ジプロピオニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（０３：０ ＰＣ）、
１，２－ジブチリル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（０４：０ ＰＣ）、
１，２－ジペンタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（０５：０ ＰＣ）、
１，２－ジヘキサノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（０６：０ ＰＣ）、
１，２－ジヘプタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（０７：０ ＰＣ）、
１，２－ジオクタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（０８：０ ＰＣ）、
１，２－ジノナノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（０９：０ ＰＣ）、
１，２－ジデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１０：０ ＰＣ）、
１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１１：０ ＰＣ、ＤＵＰＣ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１２：０ ＰＣ）、
１，２－ジトリデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１３：０ ＰＣ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１４：０ ＰＣ、ＤＭＰＣ）、
１，２－ジペンタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１５：０ ＰＣ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０ ＰＣ、ＤＰＰＣ）、
１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（４ＭＥ １６：０ ＰＣ）、
１，２－ジヘプタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１７：０ ＰＣ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ ＰＣ、ＤＳＰＣ）、
１，２－ジノナデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１９：０ ＰＣ）、
１，２－ジアラキドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２０：０ ＰＣ）、
１，２－ジヘンアラキドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２１：０ ＰＣ）、
１，２－ベヘノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２２：０ ＰＣ）、
１，２－ジトリコサノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２３：０ ＰＣ）、
１，２－ジリグノセロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２４：０ ＰＣ）、
１，２－ジミリストレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１４：１ （Δ９－Ｃｉｓ） ＰＣ）、
１，２－ジミリステライドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１４：１ （Δ９－Ｔｒａｎｓ） ＰＣ）、
１，２－ジパルミトレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：１ （Δ９－Ｃｉｓ） ＰＣ）、
１，２－ジパルミテライドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：１ （Δ９－Ｔｒａｎｓ） ＰＣ）、
１，２－ジペトロセレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１ （Δ６－Ｃｉｓ） ＰＣ）、
１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１ （Δ９－Ｃｉｓ） ＰＣ、ＤＯＰＣ）、
１，２－ジエライドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１ （Δ９－Ｔｒａｎｓ） ＰＣ）、
１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：２ （Ｃｉｓ） ＰＣ、ＤＬＰＣ）、
１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：３ （Ｃｉｓ） ＰＣ、ＤＬｎＰＣ）、
１，２－ジエイコセノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２０：１ （Ｃｉｓ） ＰＣ）、
１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２０：４ （Ｃｉｓ） ＰＣ、ＤＡＰＣ）、
１，２－ジエルコイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２２：１ （Ｃｉｓ） ＰＣ）、
１，２－ジドコサヘキサノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２２：６ （Ｃｉｓ） ＰＣ、ＤＨＡＰＣ）、
１，２－ジネルボノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２４：１ （Ｃｉｓ） ＰＣ）、
１，２－ジヘキサノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（０６：０ ＰＥ）、
１，２－ジオクタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（０８：０ ＰＥ）、
１，２－ジデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１０：０ ＰＥ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１２：０ ＰＥ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１４：０ ＰＥ）、
１，２－ジペンタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１５：０ ＰＥ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：０ ＰＥ）、
１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（４ＭＥ １６：０ ＰＥ）、
１，２－ジヘプタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１７：０ ＰＥ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：０ ＰＥ、ＤＳＰＥ）、
１，２－ジパルミトレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：１ ＰＥ）、
１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：１ （Δ９－Ｃｉｓ） ＰＥ、ＤＯＰＥ）、
１，２－ジエライドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：１ （Δ９－Ｔｒａｎｓ） ＰＥ）、
１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：２ ＰＥ、ＤＬＰＥ）、
１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：３ ＰＥ、ＤＬｎＰＥ）、
１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（２０：４ ＰＥ、ＤＡＰＥ）、
１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（２２：６ ＰＥ、ＤＨＡＰＥ）、
１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ ジエーテル ＰＣ）、
１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びそれらの任意の組み合わせ。

【0259】

いくつかの態様では、固定部分は、ＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＯＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＵＰＣ、１８：０ ジエーテル ＰＣ、ＤＬｎＰＣ、ＤＡＰＣ、ＤＨＡＰＣ、ＤＯＰＥ、４ＭＥ １６：０ ＰＥ、ＤＳＰＥ、ＤＬＰＥ、ＤＬｎＰＥ、ＤＡＰＥ、ＤＨＡＰＥ、ＤＯＰＧ、及びそれらの任意の組み合わせからなる非限定的な基から選択される少なくとも１つの対称リン脂質を含む。

【0260】

いくつかの態様では、固定部分は、少なくとも１つの非対称リン脂質を含む。非対称リン脂質は、以下からなる非限定的な群から選択され得る。
１－ミリストイル－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１４：０－１６：０ ＰＣ、ＭＰＰＣ）、
１－ミリストイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１４：０－１８：０ ＰＣ、ＭＳＰＣ）、
１－パルミトイル－２－アセチル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０－０２：０ ＰＣ）、
１－パルミトイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０－１４：０ ＰＣ、ＰＭＰＣ）、
１－パルミトイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０－１８：０ ＰＣ、ＰＳＰＣ）、
１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０－１８：１ ＰＣ、ＰＯＰＣ）、
１－パルミトイル－２－リノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０－１８：２ ＰＣ、ＰＬＰＣ）、
１－パルミトイル－２－アラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０－２０：４ ＰＣ）、
１－パルミトイル－２－ドコサヘサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１４：０－２２：６ ＰＣ）、
１－ステアロイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０－１４：０ ＰＣ、ＳＭＰＣ）、
１－ステアロイル－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０－１６：０ ＰＣ、ＳＰＰＣ）、
１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０－１８：１ ＰＣ、ＳＯＰＣ）、
１－ステアロイル－２－リノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０－１８：２ ＰＣ）、
１－ステアロイル－２－アラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０－２０：４ ＰＣ）、
１－ステアロイル－２－ドコサヘサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０－２２：６ ＰＣ）、
１－オレオイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１－１４：０ ＰＣ、ＯＭＰＣ）、
１－オレオイル－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１－１６：０ ＰＣ、ＯＰＰＣ）、
１－オレオイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１－１８：０ ＰＣ、ＯＳＰＣ）、
１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：０－１８：１ ＰＥ、ＰＯＰＥ）、
１－パルミトイル－２－リノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：０－１８：２ ＰＥ）、
１－パルミトイル－２－アラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：０－２０：４ ＰＥ）、
１－パルミトイル－２－ドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：０－２２：６ ＰＥ）、
１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：０－１８：１ ＰＥ）、
１－ステアロイル－２－リノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：０－１８：２ ＰＥ）、
１－ステアロイル－２－アラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：０－２０：４ ＰＥ）、
１－ステアロイル－２－ドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：０－２２：６ ＰＥ）、
１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、及び
それらの任意の組み合わせ。

【0261】

より顕著なヌクレアーゼ耐性、細胞取り込み効率、及びより顕著なＲＮＡ干渉効果を提供するために、ホスファチジルエタノールアミン、例えば、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルエタノールアミン、及びジオレオイルホスファチジルエタノールアミンを固定部分として使用してもよい。

【0262】

脂質（例えば、リン脂質）及びリンカーの組み合わせまたはＢＡＭ、例えば、ＡＳＯの結合部位は、脂質及びリンカーまたはＡＳＯのタイプに従って好適に選択され得る。脂質の疎水性基以外の任意の位置は、化学結合によってリンカーまたはＡＳＯに連結され得る。例えば、ホスファチジルエタノールアミンを使用する場合、ホスファチジルエタノールアミンのアミノ基とリンカーまたはＡＳＯとの間にアミド結合などを形成することにより連結を行ってもよい。ホスファチジルグリセロールを使用する場合、グリセロール残基のヒドロキシル基とリンカーまたはＡＳＯとの間にエステル結合、エーテル結合などを形成することによって連結を行ってもよい。ホスファチジルセリンを使用する場合、セリン残基のアミノ基またはヒドロキシル基とリンカーまたはＡＳＯとの間にエステル結合、アミド結合またはエステル結合などを形成することによって連結を行ってもよい。ホスファチジン酸を使用する場合、リン酸残基とリンカーまたはＡＳＯとの間にリン酸エステル結合などを形成することによって連結を行ってもよい。ホスファチジルイノシトールを使用する場合、イノシトール残基のヒドロキシル基とリンカーまたはＡＳＯとの間にエステル結合、エーテル結合などを形成することによって連結を行ってもよい。

【0263】

ＩＩＩ．Ｂ．１．ｄ． リゾ脂質（例えば、リゾリン脂質）
いくつかの態様では、固定部分は、リン脂質、例えば、リゾリン脂質を含む。リゾ脂質は、一般的に加水分解によって一方または両方の脂肪アシル鎖が除去された脂質の誘導体である。リゾリン脂質は、一方または両方の脂肪アシル鎖が加水分解によって除去された脂質の誘導体である。

【0264】

いくつかの態様では、固定部分は、一方または両方のアシル鎖が加水分解によって除去された上記のリン脂質のいずれかを含み、したがって、得られるリゾリン脂質は、一方の脂肪酸アシル鎖を含むか、またはまったく含まない。

【0265】

いくつかの態様では、固定部分は、リゾグリセロリン脂質、リゾグリコスフィンゴ脂質、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルイノシトール、またはリゾホスファチジルセリンを含む。

【0266】

いくつかの態様では、固定部分は、以下からなる非限定的な基から選択されるリゾ脂質を含む。
１－ヘキサノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（０６：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－ヘプタノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（０７：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－オクタノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（０８：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－ノナノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（０９：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－デカノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１０：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－ウンデカノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１１：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－ラウロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１２：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－トリデカノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１３：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－ミリストイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１４：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－ペンタデカノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１５：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－ヘプタデカノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１７：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－オレオイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：１ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－ノナデカノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１９：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－アラキドイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２０：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－ベヘノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２２：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－リグノセロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２４：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－ヘキサコサノイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２６：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１－ミリストイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１４：０ Ｌｙｓｏ ＰＥ）、
１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１６：０ Ｌｙｓｏ ＰＥ）、
１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：０ Ｌｙｓｏ ＰＥ）、
１－オレオイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（１８：１ Ｌｙｓｏ ＰＥ）、
１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、及び
それらの任意の組み合わせ。

【0267】

ＩＩＩ．Ａ．１．ｅ． ビタミン
いくつかの態様では、固定部分は、親油性ビタミン、例えば、葉酸、ビタミンＡ、ビタミンＥ、またはビタミンＫを含む。

【0268】

いくつかの態様では、固定部分はビタミンＡを含む。ビタミンＡは、レチノール、レチナール、レチノイン酸、及びいくつかのプロビタミンＡカロテノイド（特にβカロチン）を含む不飽和栄養有機化合物の群である。いくつかの態様では、固定部分は、レチノールを含む。いくつかの態様では、固定部分は、レチノイドを含む。レチノイドは、ビタミンＡのビタミン剤であるか、または化学的に関連している化合物の一種である。いくつかの態様では、固定部分は、第１世代レチノイド（例えば、レチノール、トレチノイン、イソトレチノイン、またはアリトレチノイン）、第２世代レチノイド（例えば、エトレチナートまたはアシトレチン）、第３世代レチノイド（例えば、アダパレン、ベキサロテン、またはタザロテン）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【化8】

【0269】

いくつかの態様では、固定部分はビタミンＥを含む。トコフェロールはメチル化フェノールのクラスであり、その多くはビタミンＥ活性を有する。したがって、いくつかの態様では、固定部分は、α－トコフェロール、β－トコフェロール、γ－トコフェロール、δ－トコフェロール、またはそれらの組み合わせを含む。

【化9】

【化10】

【化11】

【化12】

【0270】

トコトリエノールは、ビタミンＥ活性も有する。トコトリエノールとトコフェロールの重要な化学的構造の違いは、トコトリエノールは、トコフェロールの飽和側鎖に対して、３つの炭素－炭素二重結合を有する不飽和イソプレノイド側鎖を有することである。いくつかの態様では、固定部分は、α－トコトリエノール、β－トコトリエノール、γ－トコトリエノール、δ－トコトリエノール、またはそれらの組み合わせを含む。トコトリエノールは以下の式で表すことができる。

【化13】

アルファ（α）－トコトリエノール：Ｒ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝Ｍｅ、Ｒ３＝Ｍｅ；
ベータ（β）－トコトリエノール：Ｒ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝Ｍｅ；
ガンマ（γ）－トコトリエノール：Ｒ１＝Ｈ、Ｒ２＝Ｍｅ、Ｒ３＝Ｍｅ；
デルタ（δ）－トコトリエノール：Ｒ１＝Ｈ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝Ｍｅ。

【0271】

いくつかの態様では、固定部分はビタミンＫを含む。化学的に、ビタミンＫファミリーは、２－メチル－１．４－ナフトキノン（３－）誘導体を含む。ビタミンＫは、２つの天然ビタミン：ビタミンＫ_１とビタミンＫ_２を含む。ビタミンＫ_１（フィトナジオン、フィロキノン、または（Ｅ）－フィトナジオンとしても知られる）の構造は、フィチル基の存在によって特徴づけられる。ビタミンＫ_２（メナキノン）の構造は、６～１３個のイソプレニル単位を含み得る分子内に存在するポリイソプレニル側鎖によって特徴づけられる。したがって、ビタミンＫ_２は、イソプレノイド原子群でできた炭素側鎖の長さが異なる、いくつかの関連する化学サブタイプからなる。ＭＫ－４は、ビタミンＫ_２の最も一般的な形態である。ＭＫ－７、ＭＫ－８、ＭＫ－９などの長鎖型は、発酵食品で主流である。ＭＫ－１０～ＭＫ－１３などの長鎖型のビタミンＫ_２は、細菌によって合成されるが、それらは十分に吸収されず、生物学的機能がほとんどない。天然型のビタミンＫに加えて、ビタミンＫ_３（メナジオン；２－メチルナフタレン－１，４－ジオン）、ビタミンＫ_４、ビタミンＫ_５などのいくつかの合成型のビタミンＫが存在する。

【0272】

したがって、いくつかの態様では、固定部分は、ビタミンＫ_１、Ｋ_２（例えば、ＭＫ－４、ＭＫ－５、ＭＫ－６、ＭＫ－７、ＭＫ－８、ＭＫ－９、ＭＫ－１０、ＭＫ－１１、ＭＫ－１２、またはＭＫ－１３）、Ｋ_３、Ｋ_４、Ｋ_５、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【化14】

【0273】

ＩＩＩ．Ａ．２． リンカーの組み合わせ
いくつかの態様では、ＡＳＯは、リンカーの組み合わせ（開裂性及び／または非開裂性リンカーの任意の組み合わせを含み得る）を介して、本明細書に開示する疎水性膜固定部分に連結される。リンカーの組み合わせの主な機能は、固定部分とＢＡＭ標的との間に最適な間隔を提供することである。例えば、ＡＳＯの場合、リンカーの組み合わせにより、立体障害を減らし、ＡＳＯを配置して、ｍＲＮＡやｍｉＲＮＡなどの標的核酸と相互作用できるようにされるべきである。

【0274】

リンカーは開裂しやすい場合があり（「開裂性リンカー」）、それにより、生体活性分子の遊離を促進する。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示するリンカーの組み合わせは、開裂性リンカーを含み得る。そのような開裂性リンカーは、例えば、生体活性分子が活性状態を維持する条件下で、酸誘導性の開裂、光誘導性の開裂、ペプチダーゼ誘導性の開裂、エステラーゼ誘導性の開裂、及びジスルフィド結合の開裂をしやすい。代替的に、リンカーは、実質的に開裂に対して耐性がある（「非開裂性リンカー」）場合がある。いくつかの態様では、開裂性リンカーは、スペーサーを含む。いくつかの態様では、スペーサーはＰＥＧである。

【0275】

いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、本明細書に開示する少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つ以上の異なるリンカーを含む。いくつかの態様では、リンカーの組み合わせにおけるリンカーは、エステル結合（例えば、ホスホジエステルまたはホスホロチオエートエステル）によって連結され得る。

【0276】

いくつかの態様では、リンカーは、固定部分とＢＡＭ、例えば、ＡＳＯとの間の直接結合である。

【0277】

ＩＩＩ．Ｂ．２．ａ． 非開裂性リンカー
いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、「非開裂性リンカー」を含む。非開裂性リンカーは、本開示の修飾された生体活性分子の２つ以上の成分（例えば、生体活性分子及び固定部分；生体活性分子及び開裂性リンカー；固定部分及び開裂性リンカー）を安定した共有結合方式で連結することができる任意の化学部分であり、開裂性リンカーについての上記のカテゴリーには分類されない。したがって、非開裂性リンカーは、実質的に、酸誘導性の開裂、光誘導性の開裂、ペプチダーゼ誘導性の開裂、エステラーゼ誘導性の開裂、及びジスルフィド結合の開裂に対して耐性である。

【0278】

さらに、非開裂性とは、リンカー中またはリンカーに隣接する化学結合の、酸、光解離性開裂剤、ペプチダーゼ、エステラーゼ、またはジスルフィド結合を開裂する化学的もしくは生理学的化合物に誘導される開裂に耐える能力を指す。いくつかの態様では、生体活性分子を、別のリンカー、例えば、自壊牲リンカーを介してリンカーに結合させる。

【0279】

いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、例えば、テトラエチレングリコール（ＴＥＧ）、ヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、スクシンイミド、またはそれらの任意の組み合わせを含む非開裂性リンカーを含む。いくつかの態様では、非開裂性リンカーは、生体活性分子を非開裂性リンカーに連結するためのスペーサーユニットを含む。

【0280】

いくつかの態様では、１つ以上の非開裂性リンカーは、一緒に連結されるより小さなユニット（例えば、ＨＥＧ、ＴＥＧ、グリセロール、Ｃ２～Ｃ１２アルキルなど）を含む。一態様では、結合は、エステル結合（例えば、ホスホジエステルまたはホスホロチオエートエステル）または他の結合である。
ＩＩＩ．Ｂ．２．ｂ． エチレングリコール（ＨＥＧ、ＴＥＧ、ＰＥＧ）

【0281】

いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、非開裂性リンカーを含み、非開裂性リンカーは、式Ｒ^３－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）_ｎ－またはＲ^３－（０－ＣＨ_２－ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－（式中、Ｒ^９は、水素、メチルまたはエチルであり、ｎは、２～２００の値を有する）によって特徴づけられるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。いくつかの態様では、リンカーはスペーサーを含み、スペーサーはＰＥＧである。

【0282】

いくつかの態様では、ＰＥＧリンカーは、オリゴエチレングリコール、例えば、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール（ＴＥＧ）、ペンタエチレングリコール、またはヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）リンカーである。

【0283】

いくつかの態様では、ｎは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８９、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、または２００の値を有する。

【0284】

いくつかの態様では、ｎは、２～１０、１０～２０、２０～３０、３０～４０、４０～５０、５０～６０、６０～７０、７０～８０、８０～９０、９０～１００、１００～１１０、１１０～１２０、１２０～１３０、１３０～１４０、１４０～１５０、１５０～１６０、１６０～１７０、１７０～１８０、１８０～１９０、または１９０～２００の間である。

【0285】

いくつかの特定の態様では、ｎは、３～２００、３～２０、１０～３０、または９～４５の値を有する。

【0286】

いくつかの態様では、ＰＥＧは、分岐ＰＥＧである。分岐ＰＥＧは、中央コア群から発出する３～１０個のＰＥＧ鎖を有する。

【0287】

特定の実施形態では、ＰＥＧ部分は、単分散ポリエチレングリコールである。本開示に関して、単分散ポリエチレングリコール（ｍｄＰＥＧ）は、単一の、定義された鎖長及び分子量を有するＰＥＧである。ｍｄＰＥＧは通常、クロマトグラフィーによる重合混合物からの分離によって生成される。特定の式では、単分散ＰＥＧ部分に略語ｍｄＰＥＧが割り当てられる。

【0288】

いくつかの態様では、ＰＥＧは、Ｓｔａｒ ＰＥＧである。Ｓｔａｒ ＰＥＧは、中央コア群から発出する１０～１００個のＰＥＧ鎖を有する。

【0289】

いくつかの態様では、ＰＥＧは、Ｃｏｍｂ ＰＥＧである。Ｃｏｍｂ ＰＥＧは、通常、ポリマー主鎖にグラフトされた複数のＰＥＧ鎖を有する。

【0290】

特定の態様では、ＰＥＧは、１００ｇ／ｍｏｌ～３０００ｇ／ｍｏｌ、特に１００ｇ／ｍｏｌ～２５００ｇ／ｍｏｌ、より具体的にはおよそ１００ｇ／ｍｏｌ～２０００ｇ／ｍｏｌのモル質量を有する。特定の態様では、ＰＥＧは、２００ｇ／ｍｏｌ～３０００ｇ／ｍｏｌ、特に３００ｇ／ｍｏｌ～２５００ｇ／ｍｏｌ、より具体的にはおよそ４００ｇ／ｍｏｌ～２０００ｇ／ｍｏｌのモル質量を有する。

【0291】

いくつかの態様では、ＰＥＧは、ＰＥＧ_１００、ＰＥＧ_２００、ＰＥＧ_３００、ＰＥＧ_４００、ＰＥＧ_５００、ＰＥＧ_６００、ＰＥＧ_７００、ＰＥＧ_８００、ＰＥＧ_９００、ＰＥＧ_１０００、ＰＥＧ_１１００、ＰＥＧ_１２００、ＰＥＧ_１３００、ＰＥＧ_１４００、ＰＥＧ_１５００、ＰＥＧ_１６００、ＰＥＧ_１７００、ＰＥＧ_１８００、ＰＥＧ_１９００、ＰＥＧ_２０００、ＰＥＧ_２１００、ＰＥＧ_２２００、ＰＥＧ_２３００、ＰＥＧ_２４００、ＰＥＧ_２５００、ＰＥＧ_１６００、ＰＥＧ_１７００、ＰＥＧ_１８００、ＰＥＧ_１９００、ＰＥＧ_２０００、ＰＥＧ_２１００、ＰＥＧ_２２００、ＰＥＧ_２３００、ＰＥＧ_２４００、ＰＥＧ_２５００、ＰＥＧ_２６００、ＰＥＧ_２７００、ＰＥＧ_２８００、ＰＥＧ_２９００、またはＰＥＧ_３０００である。特定の一態様では、ＰＥＧはＰＥＧ_４００である。別の特定の態様では、ＰＥＧはＰＥＧ_２０００である。

【0292】

いくつかの態様では、本開示のリンカーの組み合わせは、いくつかのＰＥＧリンカー、例えば、ＰＥＧ、ＨＥＧ、またはＴＥＧリンカーに隣接する開裂性リンカーを含み得る。

【0293】

いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、（ＨＥＧ）ｎ及び／または（ＴＥＧ）ｎを含み、式中、ｎは、１～５０の整数であり、各ユニットは、例えば、リン酸エステルリンカー、ホスホロチオエートエステル結合、またはそれらの組み合わせを介して接続される。

【0294】

ＩＩＩ．Ｂ．２．ｃ． グリセロール及びポリグリセロール（ＰＧ）
いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、式（（Ｒ_３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＨ－ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－）（式中、Ｒ３は、水素、メチルまたはエチルであり、ｎは、３～２００の値を有する）で記述されるグリセロール単位またはポリグリセロール（ＰＧ）を含む開裂性リンカーを含む。いくつかの態様では、ｎは、３～２０の値を有する。いくつかの態様では、ｎは、１０～３０の値を有する。

【0295】

いくつかの態様では、ＰＧリンカーは、ジグリセロール、トリグリセロール、テトラグリセロール（ＴＧ）、ペンタグリセロール、またはヘキサグリセロール（ＨＧ）リンカーである。

【0296】

いくつかの態様では、ｎは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８９、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、または２００の値を有する。

【0297】

いくつかの態様では、ｎは、２～１０、１０～２０、２０～３０、３０～４０、４０～５０、５０～６０、６０～７０、７０～８０、８０～９０、９０～１００、１００～１１０、１１０～１２０、１２０～１３０、１３０～１４０、１４０～１５０、１５０～１６０、１６０～１７０、１７０～１８０、１８０～１９０、または１９０～２００の間である。

【0298】

これらの実施形態のいくつかの代替では、ｎは、９～４５の値を有する。いくつかの態様では、異種部分は、式（Ｒ^３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＲ^５－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－）によって記述される分岐ポリグリセロールであり、式中、Ｒ^５は、式（Ｒ^３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＨ－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－）によって記述される水素または直鎖状グリセロール鎖であり、Ｒ^３は、水素、メチルまたはエチルである。いくつかの態様では、異種部分は、式（Ｒ^３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＲ^５－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－）によって記述される超分岐ポリグリセロールであり、式中、Ｒ^５は、式（Ｒ^３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＲ^６－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－）によって記述される水素またはグリセロール鎖であり、Ｒ^６は、水素または式（Ｒ^３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＲ^７－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－）で記述されるグリセロール鎖であり、Ｒ^７は、水素または式（Ｒ^３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＨ－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－）で記述される直鎖状グリセロール鎖であり、Ｒ^３は、水素、メチル、またはエチルである。超分岐グリセロール及びその合成方法は、Ｏｕｄｓｈｏｒｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２７：５４７１－５４７９；Ｗｉｌｍｓ ｅｔ ａｌ．（２０１００ Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４３，１２９－４１、及びそこに引用される参考文献に記載されている。

【0299】

特定の態様では、ＰＧは、１００ｇ／ｍｏｌ～３０００ｇ／ｍｏｌ、特に１００ｇ／ｍｏｌ～２５００ｇ／ｍｏｌ、より具体的にはおよそ１００ｇ／ｍｏｌ～２０００ｇ／ｍｏｌのモル質量を有する。特定の態様では、ＰＧは、２００ｇ／ｍｏｌ～３０００ｇ／ｍｏｌ、特に３００ｇ／ｍｏｌ～２５００ｇ／ｍｏｌ、より具体的にはおよそ４００ｇ／ｍｏｌ～２０００ｇ／ｍｏｌのモル質量を有する。

【0300】

いくつかの態様では、ＰＧは、ＰＧ_１００、ＰＧ_２００、ＰＧ_３００、ＰＧ_４００、ＰＧ_５００、ＰＧ_６００、ＰＧ_７００、ＰＧ_８００、ＰＧ_９００、ＰＧ_１０００、ＰＧ_１１００、ＰＧ_１２００、ＰＧ_１３００、ＰＧ_１４００、ＰＧ_１５００、ＰＧ_１６００、ＰＧ_１７００、ＰＧ_１８００、ＰＧ_１９００、ＰＧ_２０００、ＰＧ_２１００、ＰＧ_２２００、ＰＧ_２３００、ＰＧ_２４００、ＰＧ_２５００、ＰＧ_１６００、ＰＧ_１７００、ＰＧ_１８００、ＰＧ_１９００、ＰＧ_２０００、ＰＧ_２１００、ＰＧ_２２００、ＰＧ_２３００、ＰＧ_２４００、ＰＧ_２５００、ＰＧ_２６００、ＰＧ_２７００、ＰＧ_２８００、ＰＧ_２９００、またはＰＧ_３０００である。特定の一態様では、ＰＧはＰＧ_４００である。別の特定の態様では、ＰＧはＰＧ_２０００である。

【0301】

いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、（グリセロール）ｎ、及び／または（ＨＧ）ｎ及び／または（ＴＧ）ｎを含み、式中、ｎは、１～５０の整数であり、各ユニットは、例えば、リン酸エステルリンカー、ホスホロチオエートエステル結合、またはそれらの組み合わせを介して接続される。

【0302】

ＩＩＩ．Ｂ．２．ｄ． 脂肪族（アルキル）リンカー
いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、少なくとも１つの脂肪族（アルキル）リンカー、例えば、プロピル、ブチル、ヘキシル、またはＣ２－Ｃ１０アルキルまたはＣ２－Ｃ６アルキルなどのＣ２－Ｃ１２アルキルを含む。

【0303】

いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、アルキル鎖、例えば、非置換アルキルを含む。いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、置換または非置換アルケニル、置換または非置換アルキニル、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルアリールアルキル、アルキルアリールアルケニル、アルキルアリールアルキニル、アルケニルアリールアルキル、アルケニルレイルアルケニル、アルケニルアリールアルキニル、アルキニルアリールアルキル、アルキニルアリールアルケニル、アルキニルアリールアルキニル、アルキルヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリールアルケニル、アルキルヘテロアリールアルキニル、アルケニルヘテロアリールアルキル、アルケニルヘテロアリールアルケニル、アルケニルヘテロアリールアルキニル、アルキニルヘテロアリールアルキル、アルキニルヘテロアリールアルケニル、アルキニルヘテロアリールアルキニル、アルキルヘテロシクリルアルキル、アルキルヘテロシクリルアルケニル、アルキルヘテロシクリルアルキニル、アルケニルヘテロシクリルアルキル、アルケニルヘテロシクリルアルケニル、またはアルケニルヘテロシクリルアルキニルを含む。

【0304】

任意選択で、これらの成分を置換する。置換基には、アルコール、アルコキシ（メトキシ、エトキシ、及びプロポキシなど）、直鎖または分岐鎖アルキル（Ｃ１－Ｃ１２アルキルなど）、アミン、アミノアルキル（アミノＣ１－Ｃ１２アルキルなど）、ホスホルアミダイト、ホスフェート、ホスホルアミデート、ホスホロジチオエート、チオホスフェート、ヒドラジド、ヒドラジン、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩなど）、アミド、アルキルアミド（アミドＣ１－Ｃ１２アルキルなど）、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸無水物、カルボン酸ハロゲン化物、エーテル、ハロゲン化スルホニル、イミデートエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、ハロホルメート、カルボジイミド付加物、アルデヒド、ケトン、スルフヒドリル、ハロアセチル、アルキルハライド、アルキルスルホネート、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣ（＝Ｏ）（マレイミド）、チオエーテル、シアノ、糖（マンノース、ガラクトース、及びグルコースなど）、α，β－不飽和カルボニル、アルキル水銀、またはα，β－不飽和スルホンが含まれる。

【0305】

それ自体でまたは別の置換基の一部としての用語「アルキル」とは、別途指示のない限り、表記される炭素原子の数（例えば、Ｃ_１－_１０は、１～１０個の炭素を意味する）を有する直鎖または分岐鎖炭化水素を意味する。通常、アルキル基は、１～２４個の炭素原子を有し、例えば、１～１０個の炭素原子、１～８個の炭素原子、または１～６個の炭素原子を有する。「低級アルキル」基とは、１～４個の炭素原子を有するアルキル基である。用語「アルキル」には、二価及び多価ラジカルが含まれる。例えば、用語「アルキル」には、例えば、アルキル基が二価であることを式が示す場合、または置換基が結合して環を形成する場合など、適切な場合には常に「アルキレン」が含まれる。アルキルラジカルの例として、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、イソ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ならびに同族体及び異性体、例えば、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル及びｎ－オクチルが挙げられるが、これらに限定されない。

【0306】

それ自体で、または別の置換基の一部としての用語「アルキレン」は、二価（ジラジカル）アルキル基を意味し、アルキルは本明細書中で定義される。「アルキル」は、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－によって例示されるが、これに限定されない。通常、アルキル基は、１～２４個の炭素原子を有し、例えば、１０個以下の炭素原子（例えば、１～８個または１～６個の炭素原子）を有する。「低級アルキレン」基とは、１～４個の炭素原子を有するアルキレン基である。

【0307】

それ自体で、または別の置換基の一部としての用語「アルケニル」とは、２～２４個の炭素原子及び少なくとも１つの二重結合を有する直鎖または分枝鎖炭化水素ラジカルを指す。一般的なアルケニル基は、２～１０個の炭素原子と少なくとも１つの二重結合を有する。一実施形態では、アルケニル基は、２～８個の炭素原子または２～６個の炭素原子と、１～３個の二重結合を有する。例示的なアルケニル基として、ビニル、２－プロペニル、１－ブタ－３－エニル、クロチル、２－（ブタジエニル）、２，４－ペンタジエニル、３－（１，４－ペンタジエニル）、２－イソペンテニル、１－ペント－３－エニル、１－ヘキサ－５－エニルなどが挙げられる。

【0308】

それ自体で、または別の置換基の一部としての用語「アルキニル」とは、２～２４個の炭素原子及び少なくとも１つの三重結合を有する直鎖または分枝鎖の不飽和または多価不飽和炭化水素ラジカルを指す。一般的なアルキニル基は、２～１０個の炭素原子と少なくとも１つの三重結合を有する。本開示の一態様では、アルキニル基は、２～６個の炭素原子及び少なくとも１つの三重結合を有する。例示的なアルキニル基として、プロプ－１－イニル、プロプ－２－イニル（すなわち、プロパルギル）、エチニル及び３－ブチニルが挙げられる。

【0309】

用語「アルコキシ」、「アルキルアミノ」及び「アルキルチオ」（またはチオアルコキシ）は、それらの従来の意味において使用され、それぞれ、酸素原子、アミノ基、または硫黄原子を介して分子の残部に付加されるアルキル基を指す。

【0310】

それ自体で、または別の用語との組み合わせでの用語「ヘテロアルキル」は、指定される数の炭素原子（例えば、Ｃ_２－Ｃ_１０、またはＣ_２－Ｃ_８）、ならびに例えば、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ、Ｂ及びＰ（一実施形態では、Ｎ、Ｏ及びＳ）から選択される少なくとも１つのヘテロ原子からなる、安定した直鎖もしくは分岐鎖炭化水素ラジカルを意味し、窒素、硫黄及びリン原子は、任意選択で酸化されていてもよく、窒素原子（複数可）は、任意選択で四級化されていてもよい。ヘテロ原子（複数可）は、ヘテロアルキル基の任意の内部位置に配置される。ヘテロアルキル基の例として、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_３、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＮＨ－ＣＨ_３、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_３、－ＣＨ_２－Ｓ－ＣＨ_２－ＣＨ_３、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ（Ｏ）－ＣＨ_３、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ（Ｏ）_２－ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｏ－ＣＨ_３、－ＣＨ_２－Ｓｉ（ＣＨ_３）_３、－ＣＨ_２－ＣＨ＝Ｎ－ＯＣＨ_３、及び－ＣＨ＝ＣＨ－Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_３が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、－ＣＨ_２－ＮＨ－ＯＣＨ_３及び－ＣＨ_２－Ｏ－Ｓｉ（ＣＨ_３）_３など、最大２個のヘテロ原子が連続し得る。

【0311】

同様に、それ自体で、または別の置換基の一部としての用語「ヘテロアルキレン」とは、ヘテロアルキルに由来する二価のラジカルを意味し、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－及び－ＣＨ_２－Ｓ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＮＨ－ＣＨ_２－が例として挙げられるが、これらに限定されない。通常、ヘテロアルキル基は３～２４個の原子（水素を除く炭素及びヘテロ原子）を有する（３～２４員のヘテロアルキル）。別の例では、ヘテロアルキル基は、合計で３～１０個の原子（３～１０員のヘテロアルキル）または３～８個の原子（３～８員のヘテロアルキル）を有する。用語「ヘテロアルキル」には、例えば、ヘテロアルキル基が二価であることを式が示す場合、または置換基が結合して環を形成する場合など、適切な場合には常に「ヘテロアルキレン」が含まれる。

【0312】

それ自体で、または他の用語と組み合わせての用語「シクロアルキル」とは、３～２４個の炭素原子を有する、例えば、３～１２個の炭素原子を有する飽和または不飽和の非芳香族炭素環式ラジカルを表す（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルまたはＣ_３－Ｃ_６シクロアルキル）。シクロアルキルの例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、１－シクロヘキセニル、３－シクロヘキセニル、シクロヘプチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。用語「シクロアルキル」は、ノルボルニル、アダマンチル及びビシクロ［２．２．１］ヘプチルなどの架橋された多環式（例えば、二環式）構造も含む。「シクロアルキル」基は、アリール（例えば、フェニル）、ヘテロアリール（例えば、ピリジル）及び非芳香族（例えば、炭素環式または複素環式）環から選択される少なくとも１つ（例えば、１～３）の他の環に融合させることができる。「シクロアルキル」基が縮合アリール、ヘテロアリールまたは複素環を含む場合、「シクロアルキル」基は、炭素環を介して分子の残りの部分に結合する。

【0313】

それ自体で、または他の用語と組み合わせての用語「ヘテロシクロアルキル」、「複素環式」、「複素環」、または「ヘテロシクリル」とは、例えば、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ、Ｂ及びＰ（例えば、Ｎ、Ｏ及びＳ）から選択される（その場合、窒素、硫黄及びリン原子は、任意選択で酸化され、窒素原子（複数可）は、任意選択で四級化される）少なくとも１つ及び最大５つのヘテロ原子（例えば、窒素、酸素及び硫黄から選択される１～４個のヘテロ原子）を含む炭素環式の非芳香族環（例えば、３～８員環及び例えば、４、５、６または７員環）、または当業者に公知の安定した組み合わせで、少なくとも１つ及び最大１０個のヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～５個のヘテロ原子）を含む４～８員環の縮合環系を表す。例示的なヘテロシクロアルキル基として、縮合フェニル環が挙げられる。「複素環」基が、縮合アリール、ヘテロアリールまたはシクロアルキル環を含む場合、「複素環」基は、複素環を介して分子の残りの部分に結合する。ヘテロ原子は、複素環が分子の残りの部分に結合する位置を占め得る。

【0314】

本開示の例示的なヘテロシクロアルキルまたは複素環式基として、モルホリニル、チオモルホリニル、チオモルホリニルＳ－オキシド、チオモルホリニルＳ，Ｓ－ジオキシド、ピペラジニル、ホモピペラジニル、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピペリジニル、ホモピペリジニル、ホモモルホリニル、ホモチオモルホリニル、ホモチオモルホリニルＳ，Ｓ－ジオキシド、オキサゾリジノニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピロリル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピリジル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロフリル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチエニルＳ－オキシド、テトラヒドロチエニルＳ，Ｓ－ジオキシド、ホモチオモルホリニルＳ－オキシド、１－（１，２，５，６－テトラヒドロピリジル）、１－ピペリジニル、２－ピペリジニル、３－ピペリジニル、４－モルホリニル、３－モルホリニル、テトラヒドロフラン－２－イル、テトラヒドロフラン－３－イル、テトラヒドロチエン－２－イル、テトラヒドロチエン－３－イル、１－ピペラジニル、２－ピペラジニルなどが挙げられる。

【0315】

「アリール」とは、単一の環（例えば、フェニル）を有するか、または他の芳香族もしくは非芳香族環（例えば、１～３個の他の環）に融合している５、６または７員の芳香族炭素環基を意味する。「アリール」基が非芳香族環（１，２，３，４－テトラヒドロナフチルなど）またはヘテロアリール基を含む場合、「アリール」基は、アリール環（例えば、フェニル環）を介して分子の残りの部分に結合する。アリール基は、任意選択で置換される（例えば、本明細書に記載の１～５個の置換基で）。一例では、アリール基は、６～１０個の炭素原子を有する。アリール基の非限定的な例として、フェニル、１－ナフチル、２－ナフチル、キノリン、インダニル、インデニル、ジヒドロナフチル、フルオレニル、テトラリニル、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソリルまたは６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［ａ］シクロヘプテニルが挙げられる。一実施形態では、アリール基は、フェニル、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソリル及びナフチルから選択される。さらに別の実施形態では、アリール基はフェニルである。

【0316】

用語「アリールアルキル」または「アラルキル」とは、アリール基またはヘテロアリール基がアルキル基に結合して－アルキル－アリール及び－アルキル－ヘテロアリールのラジカルを生成する、そのようなラジカルを含むことを意味し、アルキル、アリール及びヘテロアリールは、本明細書中で定義される。例示的な「アリールアルキル」または「アラルキル」基として、ベンジル、フェネチル、ピリジルメチルなどが挙げられる。

【0317】

「アリールオキシ」とは、－Ｏ－アリール基を意味し、アリールは、本明細書中で定義されるとおりである。一例では、アリールオキシ基のアリール部分は、フェニルまたはナフチルである。一実施形態では、アリールオキシ基のアリール部分はフェニルである。

【0318】

用語「ヘテロアリール」または「ヘテロ芳香族」とは、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ及びＢ（例えば、Ｎ、Ｏ及びＳ）から選択される少なくとも１つのヘテロ原子（例えば、１～５個のヘテロ原子、例えば、１～３個のヘテロ原子）を含む多不飽和の５、６または７員の芳香族部分を指し、窒素及び硫黄原子は任意選択で酸化され、窒素原子（複数可）は任意選択で四級化される。「ヘテロアリール」基は、単一の環であり得るか、または他のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環（例えば、１～３個の他の環）に融合され得る。「ヘテロアリール」基が縮合アリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環を含む場合、「ヘテロアリール」基は、ヘテロアリール環を介して分子の残りの部分に結合する。ヘテロアリール基は、炭素またはヘテロ原子を通して、分子の残りの部分に結合し得る。

【0319】

一例では、ヘテロアリール基は、４～１０個の炭素原子と、Ｏ、Ｓ及びＮから選択される１～５個のヘテロ原子を有する。ヘテロアリール基の非限定的な例として、ピリジル、ピリミジニル、キノリニル、ベンゾチエニル、インドリル、インドリニル、ピリダジニル、ピラジニル、イソインドリル、イソキノリル、キナゾリニル、キノキサリニル、フタラジニル、イミダゾリル、イソキサゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、インドリジニル、インダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、フラニル、チエニル、ピロリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソチアゾリル、ナフチリジニル、イソクロマニル、クロマニル、テトラヒドロイソキノリニル、イソインドリニル、イソベンゾテトラヒドロフラニル、イソベンゾテトラヒドロチエニル、イソベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ピリドピリジル、ベンゾテトラヒドロフラニル、ベンゾテトラヒドロチエニル、プリニル、ベンゾジオキソリル、トリアジニル、プテリジニル、ベンゾチアゾリル、イミダゾピリジル、イミダゾチアゾリル、ジヒドロベンジソキサジニル、ベンジソキサジニル、ベンゾキサジニル、ジヒドロベンズイソチアジニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、クロモニル、クロマノニル、ピリジル－Ｎ－オキシド、テトラヒドロキノリニル、ジヒドロキノリニル、ジヒドロキノリノニル、ジヒドロイソキノリノニル、ジヒドロクマリニル、ジヒドロイソクマリニル、イソインドリノニル、ベンゾジオキサニル、ベンゾキサゾリノニル、ピロリルＮ－オキシド、ピリミジニルＮ－オキシド、ピリダジニルＮ－オキシド、インドリルＮ－オキシド、ピラジニルＮ－オキシド、キノリニルＮ－オキシド、インドリルＮ－オキシド、インドリニルＮ－オキシド、イソキノリルＮ－オキシド、キナゾリニルＮ－オキシド、キノキサリニルＮ－オキシド、フタラジニルＮ－オキシド、イミダゾリルＮ－オキシド、イソキサゾリルＮ－オキシド、オキサゾリルＮ－オキシド、チアゾリルＮ－オキシド、インドリジニルＮ－オキシド、インダゾリルＮ－オキシド、ベンゾチアゾリルＮ－オキシド、ベンズイミダゾリルＮ－オキシド、ピロリルＮ－オキシド、オキサジアゾリルＮ－オキシド、チアジアゾリルＮ－オキシド、トリアゾリルＮ－オキシド、テトラゾリルＮ－オキシド、ベンゾチオピラニルＳ－オキシド、ベンゾチオピラニルＳ，Ｓ－ジオキシドが挙げられる。例示的なヘテロアリール基として、イミダゾリル、ピラゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、及びピリジルが挙げられる。他の例示的なヘテロアリール基として、１‐ピロリル、２‐ピロリル、３‐ピロリル、３‐ピラゾリル、２‐イミダゾリル、４‐イミダゾリル、ピラジニル、２‐オキサゾリル、４‐オキサゾリル、２‐フェニル‐４‐オキサゾリル、５‐オキサゾリル、３‐イソオキサゾリル、４‐イソオキサゾリル、５‐イソオキサゾリル、２‐チアゾリル、４‐チアゾリル、５‐チアゾリル、２‐フリル、３‐フリル、２‐チエニル、３‐チエニル、２‐ピリジル、３‐ピリジル、ピリジン－４－イル、２‐ピリミジル、４‐ピリミジル、５‐ベンゾチアゾリル、プリニル、２‐ベンズイミダゾリル、５‐インドリル、１‐イソキノリル、５‐イソキノリル、２‐キノキサリニル、５‐キノキサリニル、３‐キノリル、及び６‐キノリルが挙げられる。上記のアリール及びヘテロアリール環系の各々に関する置換基は、下記の許容されるアリール基の置換基の群から選択される。

【0320】

脂肪族リンカーの例として、以下の構造が挙げられる：
－Ｏ－ＣＯ－Ｏ－
－ＮＨ－ＣＯ－Ｏ－
－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ－
－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ１－
－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ１－
－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ｎ１－ＣＯ－
－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ｎ１－ＮＨ－
－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ１－ＮＨ－
－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ１－ＮＨ－ＣＯ－
－Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ１－ＮＨ－ＣＯ－
－Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ１－ＮＨ－Ｃ－（＝Ｓ）－
－ＣＯ－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ１－Ｏ－ＣＯ－
－Ｃ（＝Ｓ）－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ１－Ｏ－ＣＯ－
－Ｃ（＝Ｓ）－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ１－Ｏ－Ｃ－（＝Ｓ）－
－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ１－Ｏ－ＣＯ－
－Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ１－Ｏ－ＣＯ－
－Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ１－Ｏ－Ｃ－（＝Ｓ）－
－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ１－Ｏ－ＣＯ－
－Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ１－ＣＯ－
－Ｃ（＝Ｓ）－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ１－ＮＨ－ＣＯ－
－Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ１－Ｏ－Ｃ－（＝Ｓ）－
－ＮＨ－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ２－ＣＨ（ＣＨ_２ＯＨ）－
－ＮＨ－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ２－ＣＨ_２－
－ＮＨ－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ２－ＣＨ_２－ＣＯ－
－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ３－Ｓ－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ４－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）_２－
－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ｎ３－Ｏ－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ４－
－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ｎ３－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ４－
－（ＣＨ２）_ｎ１ＮＨ－
－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）_ｎ１ＮＨ－
－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）_ｎ１－Ｃ（Ｏ）－
－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）_ｎ１－Ｃ（Ｏ）Ｏ－
－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－
－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）_ｎ１－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－
－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）_ｎ１－
－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－
－Ｃ（Ｏ）－
－（ＣＨ２）_ｎ１－Ｃ（Ｏ）－
－（ＣＨ２）_ｎ１－Ｃ（Ｏ）Ｏ－
－（ＣＨ２）_ｎ１－
－（ＣＨ２）_ｎ１－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－
ｎ１は、１～４０の整数である（例えば、２～２０、または２～１２）；ｎ２は、１～２０の整数である（例えば、１～１０、または１～６）；ｎ３とｎ４は、同じでも異なっていてもよく、１～２０の整数である（例えば、１～１０、または１～６）。

【0321】

いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、（Ｃ３）ｎ、（Ｃ４）ｎ、（Ｃ５）ｎ、（Ｃ６）ｎ、（Ｃ７）ｎ、もしくは（Ｃ８）ｎ、またはそれらの組み合わせを含み、式中、ｎは、１～５０の整数であり、各ユニットは、例えば、リン酸エステルリンカー、ホスホロチオエートエステル結合、またはそれらの組み合わせを介して接続される。

【0322】

ＩＩＩ．Ｂ．３． 開裂性リンカー
いくつかの態様では、本明細書に開示するＡＳＯの異なる成分は、開裂性リンカーによるリンカーであり得る。開裂性リンカーという用語は、切断または開裂し得る少なくとも１つの結合または化学結合を含むリンカーを指す。本明細書中で使用する場合、開裂という用語は、２つ以上の比較的小さい分子を生成する方法で、比較的大きい分子内の１つ以上の化学結合を切断することを指す。開裂は、例えば、ヌクレアーゼ、ペプチダーゼ、プロテアーゼ、ホスファターゼ、オキシダーゼ、またはレダクターゼによって、または特定の物理化学的条件、例えば、酸化還元環境、ｐＨ、活性酸素種の存在、または特定の波長の光によって媒介され得る。

【0323】

いくつかの態様では、本明細書中で使用する用語「開裂性」とは、例えば、ホスホジエステル及びジスルフィドなどの急速に分解可能なリンカーを指し、一方、用語「非開裂性」とは、例えば、より安定の結合、例えば、ヌクレアーゼ耐性ホスホロチオエートを指す。

【0324】

いくつかの態様では、開裂性リンカーは、ジヌクレオチドまたはトリヌクレオチドリンカー、ジスルフィド、イミン、チオケタール、ｖａｌ－ｃｉｔジペプチド、またはそれらの任意の組み合わせである。

【0325】

いくつかの態様では、開裂性リンカーは、バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメートまたはバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートを含む。

【0326】

ＩＩＩ．Ｂ．３．ａ． 酸化還元開裂性リンカー
いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、酸化還元開裂性リンカーを含む。非限定的な例として、開裂性リンカーの１つのタイプは、還元または酸化の際に開裂する酸化還元開裂性結合基である。

【0327】

いくつかの態様では、酸化還元開裂性リンカーは、ジスルフィド結合を含み、すなわち、それは、ジスルフィド開裂性リンカーである。

【0328】

酸化還元開裂性リンカーは、例えば、細胞内メルカプタン、オキシダーゼ、またはレダクターゼによって還元することができる。

【0329】

ＩＩＩ．Ｂ．３．ｂ． 活性酸素種（ＲＯＳ）開裂性リンカー
いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、例えば、活性化好中球などの炎症過程によって生成される、スーパーオキシド（Ｏｆ）または過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）などの活性酸素種（ＲＯＳ）によって切断され得る開裂性リンカーを含み得る。いくつかの態様では、ＲＯＳ開裂性リンカーは、チオケタール開裂性リンカーである。例えば、米国特許８，３５４，４５５Ｂ２を参照されたい（その全体が参照により本明細書に援用される）。

【0330】

ＩＩＩ．Ｂ．３．ｃ． ｐＨ依存性の開裂性リンカー
いくつかの態様では、リンカーは、酸性条件下（ｐＨ＜７）で選択的に開裂する結合基である酸開裂性結合基を含む「酸不安定性リンカー」である。

【0331】

非限定的な例として、酸開裂性結合基は、酸性環境、例えば、約６．０、５．５、５．０以下で開裂する。いくつかの態様では、ｐＨは約６．５以下である。いくつかの態様では、リンカーは、一般的な酸、例えば、ペプチダーゼ（基質特異的であり得る）またはホスファターゼとして作用することができる酵素などの薬剤によって開裂する。細胞内では、エンドソームやリソソームなどの特定の低ｐＨオルガネラが、酸開裂性結合基に開裂環境を提供することができる。ヒト血清のｐＨは７．４であるが、細胞の平均ｐＨはわずかに低く、約７．１～７．３の範囲である。エンドソームも５．５～６．０の範囲の酸性ｐＨを有し、リソソームはさらに酸性のｐＨで約５．０である。したがって、ｐＨ依存性の開裂性リンカーは、当技術分野では、エンドソーム的に不安定なリンカーと呼ばれることがある。

【0332】

酸開裂性基は、一般式－Ｃ＝ＮＮ－、Ｃ（Ｏ）Ｏ、または－ＯＣ（Ｏ）を有し得る。別の非限定的な例では、エステル酸素（アルコキシ基）に結合した炭素が、例えば、アリール基、置換アルキル基、または第三級アルキル基、例えば、ジメチルペンチルまたはｔ－ブチルに結合している場合。酸開裂性結合基の例として、アミン、イミン、アミノエステル、安息香酸イミン、ジオルトエステル、ポリホスホエステル、ポリホスファゼン、アセタール、ビニルエーテル、ヒドラゾン、シス－アコニテート、ヒドラジド、チオカルバモイル、イミジン、アジドメチル－メチルマレイン無水物、チオプロピオネート、マスク化エンドソーム溶解剤、シトラコニル基、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。ジスルフィド結合もｐＨの影響を受ける。

【0333】

いくつかの態様では、リンカーは、低ｐＨ不安定性ヒドラゾン結合を含む。そのような酸不安定性結合は、複合体、例えば抗体薬物複合体の分野で広く使用されてきた。例えば、Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０１１，１２，１４６０－７；Ｙｕａｎ ｅｔ ａｌ，Ａｃｔａ Ｂｉｏｍａｔｅｒ．２００８，４，１０２４－３７；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ａｃｔａ Ｂｉｏｍａｔｅｒ．２００７，６，８３８－５０；Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｅｘｐ． Ｔｈｅｒ．２００７，３２１，４６２－８；Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００６，５８，２２９－３６；Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００３，２１，７７８－８４を参照のこと。

【0334】

特定の実施形態では、リンカーは、以下から選択される低ｐＨ不安定性結合を含む：酸性環境（例えば、ｐＨが７未満、約４を超える）で不安定であり、ジオール及びケトンを形成するケタール；酸性環境（例えば、ｐＨが７未満、約４を超える）で不安定であり、ジオールとアルデヒドを形成するアセタール；酸性環境（例えば、ｐＨが７未満、約４を超える）で不安定であり、アミン及びアルデヒドまたはケトンを形成するイミンまたはイミニウム；酸性条件下で不安定なシリコン－酸素－炭素結合；シリコン－窒素（シラザン）結合；シリコン－炭素結合（例えば、アリールシラン、ビニルシラン、及びアリルシラン）；マレアメート（無水マレイン酸誘導体とアミンから合成されるアミド結合）；オルトエステル；ヒドラゾン；酸触媒による加水分解を受けるように設計された活性化カルボン酸誘導体（例えば、エステル、アミド）；またはビニルエーテル。

【0335】

さらなる例は、米国特許第９，７９０，４９４Ｂ２号及び第８，１３７，６９５Ｂ２号に見出すことができ、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0336】

ＩＩＩ．Ｂ．３．ｄ． 酵素的開裂性リンカー
いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、細胞内または細胞外酵素、例えば、プロテアーゼ、エステラーゼ、ヌクレアーゼ、アミダーゼによって開裂され得るリンカーを含み得る。リンカーの組み合わせのうちの特定のリンカーを開裂させることができる酵素の範囲は、リンカーの特定の結合及び化学構造に依存する。したがって、ペプチドリンカーは、例えば、ペプチダーゼによって開裂させることができ、エステル結合を含むリンカーは、例えば、エステラーゼによって切断することができ；アミド結合を含むリンカーは、例えば、アミダーゼによって開裂させることができる；などである。

【0337】

ＩＩＩ．Ｂ．３．ｅ． プロテアーゼ開裂性リンカー
いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、プロテアーゼ開裂性リンカー、すなわち、内在性プロテアーゼによって開裂され得るリンカーを含む。特定のペプチドのみが細胞の内側または外側で容易に開裂される。例えば、Ｔｒｏｕｔ ｅｔ ａｌ．，７９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，６２６－６２９（１９８２）及びＵｍｅｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．４３ Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６７７－６８４（１９８９）を参照されたい。開裂性リンカーは、α－アミノ酸単位、及び化学的には、１つのアミノ酸のカルボキシレートと第二のアミノ酸のアミノ基の間のアミド結合であるペプチド結合からなる開裂部位を含み得る。他のアミド結合、例えば、カルボキシレートとリジンのα－アミノ酸基の間の結合は、ペプチド結合ではないと理解され、非開裂性であると見なされる。

【0338】

いくつかの態様では、プロテアーゼ開裂性リンカーは、プロテアーゼ、例えば、ネプリライシン（ＣＡＬＬＡまたはＣＤｌＯ）、チメットオリゴペプチダーゼ（ＴＯＰ）、ロイコトリエンＡ４ヒドロラーゼ、エンドテリン変換酵素、ｓｔｅ２４プロテアーゼ、ニューロライシン、ミトコンドリア中間ペプチダーゼ、間質性コラゲナーゼ、コラゲナーゼ、ストロメリシン、マクロファージエラスターゼ、マトリライシン、ゲラチナーゼ、メプリン、プロコラーゲンＣ－エンドペプチダーゼ、プロコラーゲンＮ－エンドペプチダーゼ、ＡＤＡＭ及びＡＤＡＭＴメタロプロテイナーゼ、ミエリン関連メタロプロテイナーゼ、エナメリシン、腫瘍壊死因子α変換酵素、インスリジン、ナルディライジン、ミトコンドリアプロセシングペプチダーゼ、マグノリシン、ダクチリシン様メタロプロテアーゼ、好中球コラゲナーゼ、マトリックスメタロペプチダーゼ、膜型マトリックスメタロプロテイナーゼ、ＳＰ２エンドペプチダーゼ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、プラスミン、ウロキナーゼ、ヒト線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰα）、トリプシン、キモトリプシン、カルデクリン、膵臓エラスターゼ、膵臓エンドペプチダーゼ、エンテロペプチダーゼ、白血球エラスターゼ、骨髄芽球、キマーゼ、トリプターゼ、グランザイム、角質層キモトリプシン酵素、アクロシン、カリクレイン、補体成分及び因子、補体第二経路ｃ３／ｃ５コンバターゼ、マンノース結合タンパク質関連セリンプロテアーゼ、凝固因子、トロンビン、プロテインｃ，ｕ及びｔ型プラスミノーゲンアクチベーター、カテプシンＧ、ヘプシン、プロスタシン、肝細胞増殖因子活性化エンドペプチダーゼ、サブチリシン／ケキシン型プロタンパク質コンバターゼ、フューリン、プロタンパク質コンバターゼ、プロリルペプチダーゼ、アシルアミノアシルペプチダーゼ、ペプチジルグリカミナーゼ、シグナルペプチダーゼ、ｎ末端求核性アミノヒドロラーゼ、２０ｓプロテアソーム、γ－グルタミルトランスペプチダーゼ、ミトコンドリアエンドペプチダーゼ、ミトコンドリアエンドペプチダーゼＩａ、ｈｔｒａ２ペプチダーゼ、マトリプターゼ、サイト１プロテアーゼ、レグマイン、カテプシン、システインカテプシン、カルパイン、ユビキチンイソペプチダーゼＴ、カスパーゼ、グリコシルホスファチジルイノシトールタンパク質トランスアミダーゼ、腫瘍凝固促進因子、プロホルモンチオールプロテアーゼ、γ－グルタミルヒドロラーゼ、ブレオマイシンヒドロラーゼ、セプラーゼ、カテプシンＢ、カテプシンＤ、カテプシンＬ、カテプシンＭ、プロテイナーゼＫ、ペプシン、キモシン、ガストリクシン、レニン、ヤプシン及び／またはマプシン、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、または任意の一般的なＡｓｐ－Ｎ、Ｇｌｕ－Ｃ、Ｌｙｓ－ＣもしくはＡｒｇ－Ｃプロテアーゼの切断部位を含む。例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７７（２４）：７０２７－７０３７（２０１７）を参照されたい（その全体が参照により本明細書に援用される）。

【0339】

いくつかの態様では、開裂性リンカー成分は、１～１０個のアミノ酸残基を含むペプチドを含む。これらの態様では、ペプチドは、プロテアーゼによるリンカーの開裂を可能にし、それによって、リソソーム酵素などの細胞内プロテアーゼへの曝露時に生体活性分子の放出を促進する（Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８－７８４）。例示的なペプチドとして、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、及びヘキサペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。

【0340】

ペプチドは、天然型及び／または非天然型アミノ酸残基を含み得る。用語「天然型アミノ酸」とは、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｈｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｉｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、及びＴｙｒを指す。「非天然型アミノ酸」（すなわち、アミノ酸が天然に存在しない）としては、非限定的な例として、ホモセリン、ホモアルギニン、シトルリン、フェニルグリシン、タウリン、ヨードチロシン、セレノ―システイン、ノルロイシン（「Ｎｌｅ」）、ノルバリン（「Ｎｖａ」）、β－アラニン、Ｌ－またはＤ－ナフタレン、オルニチン（「Ｏｒｎ」）などが挙げられる。ペプチドは、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ、及びＤ、またはプラスミンプロテアーゼによる酵素的開裂のために設計及び最適化され得る。

【0341】

アミノ酸には、天然及び非天然アミノ酸のＤ型も含まれる。「Ｄ－」は、天然型（「Ｌ－」）アミノ酸における配置に対立するものとして、「Ｄ」（右旋性の）配置を有するアミノ酸を示す。天然及び非天然アミノ酸は、商業的に入手（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｔｅｃｈ）してもよいし、当技術分野で公知の方法を用いて合成してもよい。

【0342】

例となるジペプチドとして、バリン－アラニン、バリン－シトルリン、フェニルアラニン－リジン、Ｎ－メチル－バリン－シトルリン、シクロヘキシルアラニン－リジン、及びβ－アラニン－リジンが挙げられるが、これらに限定されない。例となるトリペプチドとして、グリシン－バリン－シトルリン（ｇｌｙ－ｖａｌ－ｃｉｔ）及びグリシン－グリシン－グリシン（ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｇｌｙ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0343】

ＩＩＩ．Ｂ．３．ｆ． エステラーゼ開裂性リンカー
いくつかのリンカーは、エステラーゼによって開裂される（「エステラーゼ開裂性リンカー」）。特定のエステルだけが細胞内または細胞外に存在するエステラーゼ及びアミダーゼによって開裂され得る。エステルは、カルボン酸及びアルコールの縮合によって形成される。単純エステルは、単純アルコール、例えば、脂肪族アルコール、ならびに小環状及び小芳香族アルコールで生成されるエステルである。エステル系開裂性結合基の例として、アルキレン、アルケニレン、及びアルキニレン基のエステルが挙げられるが、これらに限定されない。エステル開裂性結合基は、一般式－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－を有する。

【0344】

ＩＩＩ．Ｂ．３．ｇ． ホスファターゼ開裂性リンカー
いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、リン酸基を分解または加水分解する薬剤によって開裂されるリン酸系開裂性結合基を含み得る。細胞内リン酸基を開裂させる薬剤の例は、細胞内ホスファターゼなどの酵素である。リン酸系結合基の例は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ_ｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲ_ｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＳＲ_ｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ_ｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ_ｋ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ_ｋ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲ_ｋ）－Ｓ－、－ＳＰ（Ｓ）（ＯＲ_ｋ）－Ｏ－、－ＯＰ（Ｏ）（Ｒ_ｋ）－Ｏ－、－ＯＰ（Ｓ）（Ｒ_ｋ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｏ）（Ｒ_ｋ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｓ）（Ｒ_ｋ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｏ）（Ｒ_ｋ）－Ｓ－、または－ＯＰ（Ｓ）（Ｒ_ｋ）－Ｓ－である。

【0345】

様々な態様において、Ｒ_ｋは、以下のいずれかである：ＮＨ_２、ＢＨ_３、ＣＨ_３、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_６－１０アリール、Ｃ_１－６アルコキシ及びＣ_６－１０アリール－オキシ。いくつかの態様では、Ｃ_１－６アルキル及びＣ_６－１０アリールは非置換である。さらなる非限定的な例は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＳＨ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｓ）（Ｈ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｏ）（Ｈ）－Ｓ－、－ＯＰ（Ｓ）（Ｈ）－Ｓ－、または－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－である。

【0346】

ＩＩＩ．Ｂ．３．ｈ． 光活性化開裂性リンカー
いくつかの態様では、組み合わせリンカーは、光活性化開裂性リンカー、例えば、ニトロベンジルリンカーまたはニトロベンジル反応性基を含むリンカーを含む。

【0347】

ＩＩＩ．Ｂ．３．ｉ． 自壊牲リンカー
いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、自壊牲リンカーを含む。いくつかの態様では、本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）における自壊牲リンカーは、プロテアーゼ開裂性リンカーの酵素的切断後に１，４除去を受ける。いくつかの態様では、本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）における自壊牲リンカーは、プロテアーゼ開裂性リンカーの酵素的切断後に１，６除去を受ける。いくつかの態様では、自壊牲リンカーは、例えば、ｐ－アミノベンジル（ｐＡＢ）誘導体、例えば、ｐ－アミノベンジルカルバメート（ｐＡＢＣ）、ｐ－アミノベンジルエーテル（ＰＡＢＥ）、ｐ－アミノベンジルカーボネート、またはそれらの組み合わせである。

【0348】

特定の態様では、自壊牲リンカーは、芳香族基を含む。いくつかの態様では、芳香族基は、ベンジル、シンナミル、ナフチル、及びビフェニルからなる群から選択される。いくつかの態様では、芳香族基は複素環式である。他の態様では、芳香族基は、少なくとも１つの置換基を含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの置換基は、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂｒ、ＯＨ、メチル、メトキシ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、ＮＯ^３＋、ＮＨＣＯＣＨ_３、Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＮＨＣＯＣＦ_３、アルキル、ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_８アルキルハライド、カルボキシレート、サルフェート、スルファメート、及びスルホネートからなる群から選択される。他の態様では、芳香族基内の少なくとも１つのＣは、Ｎ、Ｏ、またはＣ－Ｒ＊で置換され、式中、Ｒ＊は、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂｒ、ＯＨ、メチル、メトキシ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、ＮＯ^３＋、ＮＨＣＯＣＨ_３、Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＮＨＣＯＣＦ_３、アルキル、ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_８アルキルハライド、カルボキシレート、サルフェート、スルファメート、及びスルホネートから選択される。

【0349】

いくつかの態様では、自壊牲リンカーは、アミノベンジルカルバメート基（例えば、パラアミノベンジルカルバメート）、アミノベンジルエーテル基、またはアミノベンジルカーボネート基を含む。一態様では、自壊牲リンカーは、ｐ－アミノベンジルカルバメート（ｐＡＢＣ）である。

【0350】

ｐＡＢＣは、自壊牲部位特異的プロドラッグ活性化のための最も効率的で最も普及しているコネクター結合である（例えば、Ｃａｒｌ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２４：４７９－４８０（１９８１）；ＷＯ１９８１／００１１４５；Ｒａｕｔｉｏ ｅｔ ｌａ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ７：２５５－２７０（２００８）；Ｓｉｍｐｌｉｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ １３：５１９－５４７（２００８）を参照のこと）。

【0351】

いくつかの態様では、自壊牲リンカーは、生体活性分子（例えば、ＡＳＯ）をプロテアーゼ切断可能な基質（例えば、Ｖａｌ－Ｃｉｔ）に接続する。特定の態様では、ｐＡＢＣ自壊牲リンカーのカルバメート基を、生体活性分子（例えば、ＡＳＯ）のアミノ基に接続し、ｐＡＢＣ自壊牲リンカーのアミノ基を、プロテアーゼ切断可能な基質に接続する。

【0352】

アミノベンジル基の芳香環は、任意選択で、芳香環上の１つ以上の（例えば、Ｒ_１及び／またはＲ_２）置換基で置換することができ、これにより、さもなければ環を形成する４つの非置換炭素のうちの１つに結合している水素が置換される。本明細書中で使用する場合、記号「Ｒ_ｘ」（例えば、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４）は、本明細書中に記載するような置換基を表す一般的な略語である。

【0353】

置換基は、ｐ－アミノベンジル基の自壊牲能力を向上させることができる（Ｈａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１：２７５９－２７７０（１９９９）；Ｓｙｋｅｓ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１：１６０１－１６０８（２０００）も参照のこと）。

【0354】

自壊性除去は、例えば、１，４除去、１，６除去（例えば、ｐＡＢＣ）、１，８除去（例えば、ｐ－アミノ－シンナミルアルコール）、β－除去、環化除去（例えば、４－アミノブタノールエステル及びエチレンジアミン）、環化／ラクトン化、環化／ラクトール化などを介して起こり得る。例えば、Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ． Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１５：１８０２－１８２６（２００８）；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４３：４７５－４８７（２０００）を参照のこと。

【0355】

いくつかの態様では、自壊牲リンカーは、例えば、シンナミル、ナフチル、またはビフェニル基を含み得る（例えば、Ｂｌｅｎｃｏｗｅ ｅｔ ａｌ． Ｐｏｌｙｍ．Ｃｈｅｍ．２：７７３－７９０（２０１１）を参照のこと）。いくつかの態様では、自壊牲リンカーは、複素環を含む（例えば、米国特許第７，３７５，０７８号；第７，７５４，６８１号を参照のこと）。多数のホモ芳香族（例えば、Ｃａｒｌ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２４：４７９（１９８１）；Ｓｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：２９７５（１９９０）；Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４３：１１９７（１９７８）；Ａｎｄｒｉａｎｏｍｅｎｊａｎａｈａｒｙ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２：１９０３（１９９２）を参照のこと）、及びクマリン（例えば、Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ． Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．４６：５５３（２０１０）を参照のこと）、フラン、チオフェン、チアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、ピロール、ピラゾール（例えば、Ｈａｙ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６：５５３３（２００３）を参照のこと）、ピリジン（例えば、Ｐｅｒｒｙ－Ｆｅｉｇｅｎｂａｕｍ ｅｔ ａｌ． Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．７：４８２５（２００９）を参照のこと）、イミダゾン（例えば、Ｎａｉｌｏｒ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ． Ｚ：１２６７（１９９９）；Ｈａｙ ａｎｄ Ｄｅｎｎｙ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３８：８４２５（１９９７）を参照のこと）、及びトリアゾール（例えば、Ｂｅｒｔｒａｎｄ ａｎｄ Ｇｅｓｓｏｎ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．７２：３５９６（２００７）を参照のこと）に基づく、水性及び生理学的条件下の両方で自壊性であるヘテロ芳香族基は、当技術分野で公知である。米国特許第７，６９１，９６２号；第７，０９１，１８６号；米国特許公開第ＵＳ２００６／０２６９４８０号；ＵＳ２０１０／００９２４９６；ＵＳ２０１０／０１４５０３６；ＵＳ２００３／０１３０１８９；ＵＳ２００５／０２５６０３０）も参照のこと。

【0356】

いくつかの態様では、本明細書に開示するリンカーの組み合わせは、タンデムに複数の自壊牲リンカー、例えば、２つ以上のｐＡＢＣユニットを含む。例えば、ｄｅ Ｇｒｏｏｔ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６６：８８１５－８８３０（２００１）を参照のこと。いくつかの態様では、本明細書に開示するリンカーの組み合わせは、蛍光発生プローブに連結された自壊牲リンカー（例えば、ｐ－アミノベンジルアルコールまたはｐ－カルボキシベンズアルデヒドもしくはグリオキシル酸のヘミチオアミナール誘導体）を含み得る（例えば、Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．８：１７７７－１７８０（２０１０）を参照のこと）。

【0357】

自壊性リンカー中の置換基が、左から右へ記述されるそれらの従来の化学式によって指定される場合、それらは、構造を右から左へ記述することによって得られるであろう化学的に同一な置換基を等しく包括する。例えば、「－ＣＨ_２Ｏ－」は、「－ＯＣＨ_２－」も指定することを意図する。

【0358】

自壊性の置換基、例えば、上述のｐ－アミノベンジル自壊牲リンカー内のＲ_１及び／またはＲ_２置換基は、例えば、アルキル、アルキレン、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルアミノ、アルキルチオ、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールオキシ、ヘテロアリールなどを含み得る。本開示の化合物が複数の置換基を含む場合、各置換基は、独立して選択される。

【0359】

いくつかの特定の態様では、自壊牲リンカーを、以下の式を有する開裂性ペプチドリンカーに結合し、その組み合わせは、以下の式を有し：
－Ａ_ａ－Ｙ_ｙ－
式中、各－Ａ－は、独立してアミノ酸単位であり、ａは、独立して１～１２の整数であり；－Ｙ－は自壊牲スペーサーであり、ｙは、１または２である。いくつかの態様では、－Ａ_ａ－は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、またはヘキサペプチドである。いくつかの態様では、－Ａ_ａ－は、バリン－アラニン、バリン－シトルリン、フェニルアラニン－リジン、Ｎ－メチルバリン－シトルリン、シクロヘキシルアラニン－リジン、及びβ－アラニン－リジンからなる群から選択される。いくつかの態様では、－Ａ_ａ－は、バリン－アラニンまたはバリン－シトルリンである。

【0360】

いくつかの態様では、自壊牲リンカー－Ｙ_ｙ－は、以下の式を有し：

【化15】

式中、各Ｒ^２は、独立して、Ｃ_１－８アルキル、－Ｏ－（Ｃ_１－８アルキル）、ハロゲン、ニトロ、またはシアノであり；ｍは、０～４の整数である。いくつかの態様では、ｍは、０、１、または２である。いくつかの態様では、ｍは０である。

【0361】

いくつかの態様では、開裂性リンカーは、バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメートまたはバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートである。

【0362】

ＩＩＩ．Ｂ．４． 反応性部分（ＲＭ）
本開示のＡＳＯは、それらの成分間の化学合成または化学反応のいずれかを介して生成される。例えば、いくつかの態様では、反応性基（例えば、マレイミド）を含む固定部分は、マレイミド反応基を含むＡＳＯと反応して、本開示の疎水的に修飾されたＡＳＯを生成し得、固定部分を、エキソソームの膜の脂質二重層に挿入し、それによってＡＳＯをエキソソームの表面に結合させてもよい。

【0363】

本開示の疎水的に修飾されたＡＳＯの任意の成分または成分の群には、少なくとも１つのＲＧ及び／またはＲＭを含ませることができ、これにより、１つの反応または一連の反応によって成分を結合させて、本開示の疎水的に修飾されたＡＳＯを得ることができる。疎水的に修飾されたＡＳＯを生成するための例示的な合成スキームは、以下を含む：
［ＡＭ］－／ＲＧ／ ＋ ／ＲＭ／－［ＡＳＯ］ → ［ＡＭ］－［ＡＳＯ］
［ＡＭ］－／ＲＭ／ ＋ ／ＲＧ／－［ＡＳＯ］ → ［ＡＭ］－［ＡＳＯ］
［ＡＭ］－［Ｌ］－／ＲＭ／ ＋ ／ＲＧ／－［ＡＳＯ］ → ［ＡＭ］－［Ｌ］－［ＡＳＯ］
［ＡＭ］－［Ｌ］－／ＲＧ／ ＋ ／ＲＭ／－［ＡＳＯ］ → ［ＡＭ］－［Ｌ］－［ＡＳＯ］
［ＡＭ］－／ＲＭ／ ＋ ／ＲＧ／－［Ｌ］－［ＡＳＯ］ → ［ＡＭ］－［Ｌ］－［ＡＳＯ］
［ＡＭ］－／ＲＧ／ ＋ ／ＲＭ／－［Ｌ］－［ＡＳＯ］ → ［ＡＭ］－［Ｌ］－［ＡＳＯ］
［ＡＭ］－［Ｌ］－／ＲＭ／ ＋ ／ＲＧ／－［Ｌ］－［ＡＳＯ］ → ［ＡＭ］－［Ｌ］－［Ｌ］－［ＡＳＯ］
［ＡＭ］－［Ｌ］－／ＲＧ／ ＋ ／ＲＭ／－［Ｌ］－［ＡＳＯ］ → ［ＡＭ］－［Ｌ］－［Ｌ］－［ＡＳＯ］
式中、［ＡＭ］は固定部分、［ＡＳＯ］はアンチセンスオリゴヌクレオチド、［Ｌ］はリンカーまたはリンカーの組み合わせ、／ＲＭ／は反応性部分、／ＲＧ／は反応性基である。示した概略図のいずれにおいても、ＡＳＯを、例えば、その５’端または３’端を介して結合させることができる。

【0364】

ＡＳＯの合成における中間体の生成のための例示的な合成スキームは、以下を含む：
［ＡＭ］－／ＲＭ／ ＋ ／ＲＧ／－［Ｌ］ → ［ＡＭ］－［Ｌ］
［ＡＭ］－／ＲＧ／ ＋ ／ＲＭ／－［Ｌ］ → ［ＡＭ］－［Ｌ］
［Ｌ］－／ＲＭ／ ＋ ／ＲＧ／－［Ｌ］ → ［Ｌ］－［Ｌ］
［Ｌ］－／ＲＧ／ ＋ ／ＲＭ／－［Ｌ］ → ［Ｌ］－［Ｌ］
［Ｌ］－／ＲＭ／ ＋ ／ＲＧ／－［ＡＳＯ］ → ［Ｌ］－［ＡＳＯ］
［Ｌ］－／ＲＧ／ ＋ ／ＲＭ／－［ＡＳＯ］ → ［Ｌ］－［ＡＳＯ］
式中、［ＡＭ］は固定部分、［ＡＳＯ］はアンチセンスオリゴヌクレオチド、［Ｌ］はリンカーまたはリンカーの組み合わせ、／ＲＭ／は反応性部分、／ＲＧ／は反応性基である。示した概略図のいずれにおいても、ＡＳＯを、例えば、その５’端または３’端を介して結合させることができる。

【0365】

いくつかの態様では、反応性基「／ＲＧ／」は、例えば、アミノ基、チオール基、ヒドロキシル基、カルボン酸基、またはアジド基であり得る。これらの反応性基と反応することができる特定の反応性部分「／ＲＭ／」を、以下により詳細に記載する。

【0366】

［ＡＭ］－（／ＲＭ／）ｎ ＋ （／ＲＧ／－［Ｌ］－［ＡＳＯ］）ｎ → ［ＡＭ］－［Ｌ］－［ＡＳＯ］

【0367】

本明細書に開示する固定部分、リンカーもしくはリンカーの組み合わせ、またはＡＳＯのいずれかを、反応性部分、例えば、アミノ反応性部分（例えば、ＮＨＳ－エステル、ｐ－ニトロフェノール、イソチオシアネート、イソシアネート、またはアルデヒド）、チオール反応性部分（例えば、アクリレート、マレイミド、またはピリジルジスルフィド）、ヒドロキシ反応性部分（例えば、イソチオシアネートまたはイソシアネート）、カルボン酸反応性部分（例えば、エポキシド）、またはアジド反応性部分（例えば、アルキン）と複合体化することができる。

【0368】

本明細書に開示する２つの成分（例えば、固定部分とＡＳＯ、または固定部分とリンカー、または固定部分とリンカー、または２つのリンカー、またはリンカーとＡＳＯ、または２つの固定部分）を共有結合するために使用できる例示的な反応性部分として、例えば、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート、Ｎ－４－マレイミド酪酸、Ｓ－（２－ピリジルジチオ）システアミン、ヨードアセトキシスクシンイミド、Ｎ－（４－マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミド、Ｎ－［５－（３’－マレイミドプロピルアミド）－１－カルボキシペンチル］イミノ二酢酸、Ｎ－（５－アミノペンチル）イミノ二酢酸、及び１’－［（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホルアミダイト）が挙げられる。二官能性リンカー（２つの官能基を含むリンカー）も使用することができる。

【0369】

いくつかの態様では、固定部分、リンカー、またはＡＳＯは、末端オキシアミノ基、例えば、－ＯＮＨ２、ヒドラジノ基、－ＮＨＮＨ２、メルカプト基（すなわち、ＳＨまたはチオール）、またはオレフィン（例えば、ＣＨ＝ＣＨ２）を含み得る。いくつかの態様では、固定部分、リンカー、またはＡＳＯは、例えば、末端位置に、求電子性部分、例えば、アルデヒド、ハロゲン化アルキル、メシレート、トシレート、ノシレート、もしくはブロシレートを、または活性化カルボン酸エステル、例えば、ＮＨＳエステル、ホスホルアミダイト、もしくはペンタフルオロフェニルエステルを含み得る。いくつかの態様では、共有結合は、リガンドの求核性基、例えば、ヒドロキシル、チオールまたはアミノ基を求電子性基とカップリングすることによって形成することができる。

【0370】

本発明は、当技術分野で公知のものを含むがこれらに限定されない、あらゆる種類の反応性基及び反応性部分に適している。

【0371】

本明細書中で使用する用語「保護基」とは、ヒドロキシル、アミノ及びチオール基を含むがこれらに限定されない反応性基を、合成手順中の望ましくない反応から保護することが当技術分野で公知である、不安定な化学部分を指す。保護基は、通常、他の反応部位での反応中に部位を保護するために選択的及び／または直交して使用され、その後、除去して、保護されていない基を残すか、またはさらなる反応に利用できるようにすることができる。当技術分野で公知の保護基は、一般的に、Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）に記載されている。

【0372】

さらに、様々な合成ステップを代替の順番または順序で実行して、所望の化合物を取得してもよい。本明細書に記載の化合物を合成するのに有用な合成化学変換及び保護基の方法論（保護及び脱保護）は当技術分野で公知であり、例えば、Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｄ． Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９１）；Ｌ．Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｆｉｅｓｅｒ，Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９４）；ならびにＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９５）、及びその後続の版に記載されている方法が挙げられる。

【0373】

当技術分野で公知の固相合成を追加的または代替的に使用してもよい。自動合成技術を含む適切な固相技術は、Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．），Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ，ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９１）及びＴｏｙ，Ｐ．Ｈ．；Ｌａｍ，Ｙ（ｅｄ．），Ｓｏｌｉｄ－Ｐｈａｓｅ Ｏｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（２０１２）に記載されている。

【0374】

いくつかの態様では、反応性基は、以下に記載する複数の反応性部分と代替的に反応することができる。

【0375】

ＩＩＩ．Ｂ．４．ａ． アミン反応性部分
いくつかの態様では、反応性部分はアミン反応性部分である。本明細書中で使用する場合、用語「アミン反応性部分」とは、アミノ部分を有する反応性基、例えば、第一級アミンと反応することができる化学基を指す。例示的なアミン反応性部分は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ－エステル）、ｐ－ニトロフェノール、イソチオシアネート、イソシアネート、及びアルデヒドである。第一級アミンと反応する代替の反応性部分もまた、当技術分野で周知である。いくつかの態様では、アミン反応性部分を、本開示の固定部分、リンカーの組み合わせ、またはＡＳＯの末端位置に結合させることができる。

【0376】

いくつかの態様では、アミン反応性部分はＮＨＳ－エステルである。通常、ＮＨＳ－エステル反応性部分は、反応性基の第一級アミンと反応して、安定したアミド結合とＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を生成する。

【0377】

いくつかの態様では、アミン反応性部分はｐ－ニトロフェノール基である。通常、ｐ－ニトロフェノール反応性部分は、反応性基の第一級アミンと反応して、安定なカルバメート部分とｐ－ニトロフェノールを生成する活性化カルバメートである。

【0378】

いくつかの態様では、アミン反応性部分はイソチオシアネートである。通常、イソチオシアネートは、反応性基の第一級アミンと反応して、安定したチオ尿素部分を生成する。

【0379】

いくつかの態様では、アミン反応性部分はイソシアネートである。通常、イソシアネートは、反応性基の第一級アミンと反応して、安定した尿素部分を生成する。

【0380】

いくつかの態様では、アミン反応性部分はアルデヒドである。通常、アルデヒドは第一級アミンと反応してシッフ塩基を形成し、これをさらに還元して還元的アミノ化により共有結合を形成することができる。

【0381】

ＩＩＩ．Ｂ．４．ｂ． チオール反応性部分
いくつかの態様では、反応性部分はチオール反応性部分である。本明細書中で使用する場合、用語「チオール反応性部分」とは、チオール部分（またはメルカプト基）を有する反応性基と反応することができる化学基を指す。例示的なチオール反応性部分は、アクリレート、マレイミド、及びピリジルジスルフィドである。チオールと反応する代替の反応性部分もまた、当技術分野で周知である。いくつかの態様では、チオール反応性部分を、本開示の固定部分、リンカーの組み合わせ、またはＡＳＯの末端位置に結合させることができる。

【0382】

いくつかの態様では、チオール反応性部分はアクリレートである。通常、アクリレートは、アクリレートのカルボニルの炭素βにおいてチオールと反応して、安定した硫化物結合を形成する。

【0383】

いくつかの態様では、チオール反応性部分はマレイミドである。通常、マレイミドは、アクリレートのカルボニルの炭素βのいずれかにおいてチオールと反応して、安定した硫化物結合を形成する。

【0384】

いくつかの態様では、チオール反応性部分はピリジルジスルフィドである。通常、ピリジルジスルフィドは、ピリジルの硫黄原子βにおいてチオールと反応して、安定したジスルフィド結合及びピリジン－２－チオンを形成する。

【0385】

ＩＩＩ．Ｂ．４．ｃ． ヒドロキシ反応性部分
いくつかの態様では、反応性部分はヒドロキシル反応性部分である。本明細書中で使用する場合、用語「ヒドロキシル反応性部分」とは、ヒドロキシル部分を有する反応性基と反応することができる化学基を指す。例示的なヒドロキシル反応性部分は、イソチオシアネート及びイソシアネートである。ヒドロキシル部分と反応する代替の反応性部分もまた、当技術分野で周知である。いくつかの態様では、ヒドロキシル反応性部分を、本開示の固定部分、リンカーの組み合わせ、またはＡＳＯの末端位置に結合させることができる。

【0386】

いくつかの態様では、ヒドロキシル反応性部分はイソチオシアネートである。通常、イソチオシアネートは、反応性基のヒドロキシルと反応して、安定したカルバモチオエート部分を生成する。

【0387】

いくつかの態様では、アミン反応性部分はイソシアネートである。通常、イソシアネートは、反応性基のヒドロキシルと反応して、安定したカルバメート部分を生成する。

【0388】

ＩＩＩ．Ｂ．４．ｄ． カルボン酸反応性部分
いくつかの態様では、反応性部分はカルボン酸反応性部分である。本明細書中で使用する場合、用語「カルボン酸反応性部分」とは、カルボン酸部分を有する反応性基と反応することができる化学基を指す。例示的なカルボン酸反応性部分はエポキシドである。カルボン酸部分と反応する代替の反応性部分もまた、当技術分野で周知である。いくつかの態様では、カルボン酸反応性部分を、本開示の固定部分、リンカーの組み合わせ、またはＡＳＯの末端位置に結合させることができる。

【0389】

いくつかの態様では、カルボン酸反応性部分はエポキシドである。通常、エポキシドは、エポキシドの炭素原子のいずれかにおいて反応性基のカルボン酸と反応して、２－ヒドロキシエチルアセテート部分を形成する。

【0390】

ＩＩＩ．Ｂ．４．ｅ． アジド反応性部分
いくつかの態様では、反応性部分はアジド反応性部分である。本明細書中で使用する場合、用語「アジド反応性部分」とは、アジド部分を有する反応性基と反応することができる化学基を指す。例示的なアジド反応性部分はアルキンである。アジド部分と反応する代替の反応性部分もまた、当技術分野で周知である。いくつかの態様では、カルボン酸反応性部分を、本開示の固定部分、リンカーの組み合わせ、またはＡＳＯの末端位置に結合させることができる。

【0391】

いくつかの態様では、アジド反応性部分はアルキンである。通常、アルキンは、「クリックケミストリー」とも呼ばれる１，３－双極子付加環化反応を介して反応基のアジドと反応し、１，２，３－トリアゾール部分を形成する。

【0392】

ＩＩＩ．Ｂ．５． 具体的な実施例及びトポロジー
本開示の特定の態様では、リンカーの組み合わせは、次式のリンカーからなる。
［アルキルリンカー］ｍ－［ＰＥＧ１］ｎ－［ＰＥＧ２］ｏ
式中、ｍ、ｎ、及びｏは、０または１であり、ｍ、ｎ、またはｏの少なくとも１つはゼロではない。そのような式による例示的なリンカーの組み合わせは、Ｃ６－ＴＥＧ－ＨＥＧ、Ｃ６－ＨＥＧ、Ｃ６－ＴＥＧ、Ｃ６、ＴＥＧ－ＨＥＧ、ＴＥＧ、Ｃ８－ＴＥＧ－ＨＥＧ、Ｃ８－ＨＥＧ、Ｃ８－ＴＥＧ、及びＣ８である。

【0393】

いくつかの態様では、リンカーの組み合わせは、１つ以上の開裂性リンカー、例えば、酵素開裂性リンカー及び自壊牲リンカーと組み合わせた、非開裂性リンカー（例えば、ＴＥＧまたはＨＥＧ）を含む。

【0394】

特定の態様では、リンカーの組み合わせは、以下に示すように、ＴＥＧ（非開裂性リンカー）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ（開裂性リンカー）－ｐＡＢ（自壊牲リンカー）のリンカーの組み合わせを含む。

【化16】

【0395】

固定部分とリンカーの組み合わせの特定の組み合わせを以下の表に示す。

【表2】

【表3】

【0396】

本開示のＡＳＯなどの特定のオリゴヌクレオチドを、以下に例示する。
［コレステロール］－［ＴＥＧ］－［ＨＥＧ］－［ＡＳＯ］

【化17】

［コレステロール］－［ＳＭａｌ］－［Ｖａｌ－Ｃｉｔ］－［ｐＡＢ］－［ＡＳＯ］

【化18】

［コレステロール］－［ＴＥＧ］－［Ｖａｌ－Ｃｉｔ］－［Ｃ６］－［ＡＳＯ］

【化19】

［コレステロール］－［ＴＥＧ］－［ＳＳ］－［Ｃ６］－［ＡＳＯ］

【化20】

式中、［コレステロール］はコレステロール固定部分、［ＴＥＧ］はＴＥＧ非開裂性リンカー、［ＨＥＧ］はＨＥＧ非開裂性リンカー、［ＳＳ］はジスルフィド酸化還元開裂性リンカー、［Ｃ６］はアルキル非開裂性リンカー、［ＳＭａｌ］はＳ－マレイミド、［Ｖａｌ－Ｃｉｔ］はバリン－シトルリン開裂性リンカー、［ｐＡＢ］はｐＡＢ自壊牲リンカーである。いくつかの態様では、本開示のＡＳＯは、上記に示す例示的な構造に記載の構造を有し、１つ以上の成分が、実施例に示すものと同じクラスの成分によって置き換えられている。例えば、［コレステロール］固定部分を、本明細書に開示する別の固定部分に置換することができ、［ＴＥＧ］を、本明細書に開示する別の高分子非開裂性リンカー（例えば、ＨＥＧ、ＰＥＧ、ＰＧ）に置換することができ、［Ｖａｌ－Ｃｉｔ］を、別のペプチダーゼ開裂性リンカーに置き換えることができ、または［ｐＡＢ］を別の自壊牲リンカーに置き換えることができる。

【0397】

ＩＩＩ．Ｂ．６． 足場部分
１つ以上の足場部分をＥＶに発現させることができる。いくつかの態様では、１つ以上の足場部分を使用して、ＡＳＯを本開示のＥＶに固定する。他の態様では、１つ以上の足場部分を使用して、ＡＳＯに加えて、タンパク質または分子をＥＶに固定する。したがって、本開示のＥＶは、ＡＳＯを連結する固定部分、及びタンパク質または分子を連結する足場部分、例えば、標的化部分を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯを、足場部分に連結する。いくつかの態様では、ＥＶは、複数の足場部分を含む。いくつかの態様では、第１のＡＳＯを第１の足場部分に連結し、第２のＡＳＯを第２の足場部分に連結する。いくつかの態様では、第１の足場部分と第２の足場部分は同じタイプの足場部分であり、例えば、第１及び第２の足場部分は、いずれもＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質である。いくつかの態様では、第１の足場部分と第２の足場部分は異なるタイプの足場部分であり、例えば、第１の足場部分はＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質、第２の足場部分はＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質である。いくつかの態様では、第１の足場部分は、本明細書に開示するＳｃａｆｆｏｌｄＹである。いくつかの態様では、第１の足場部分は、本明細書に開示するＳｃａｆｆｏｌｄＸである。いくつかの態様では、第２の足場部分は、本明細書に開示するＳｃａｆｆｏｌｄＹである。いくつかの態様では、第２の足場部分は、本明細書に開示するＳｃａｆｆｏｌｄＸである。

【0398】

いくつかの態様では、ＥＶは、１つ以上の足場部分を含み、これは、ＡＳＯをＥＶ（例えばエキソソーム）に（例えば、内腔表面または外面のいずれかに）固定することができる。特定の態様では、足場部分はポリペプチド（「足場タンパク質」）である。特定の態様では、足場タンパク質は、エキソソームタンパク質またはその断片を含む。他の態様では、足場部分は非ポリペプチド部分である。いくつかの態様では、足場タンパク質は、膜貫通タンパク質、内在性タンパク質及び末梢タンパク質などの、エキソソーム膜上で濃縮された様々な膜タンパク質を含む。それらには、様々なＣＤタンパク質、トランスポーター、インテグリン、レクチン、及びカドヘリンが含まれる。特定の態様では、足場部分（例えば、足場タンパク質）は、ＳｃａｆｆｏｌｄＸを含む。他の態様では、足場部分（例えば、エキソソームタンパク質）は、ＳｃａｆｆｏｌｄＹを含む。さらなる態様では、足場部分（例えば、エキソソームタンパク質）は、ＳｃａｆｆｏｌｄＸとＳｃａｆｆｏｌｄＹの両方を含む。

【0399】

ＩＩＩ．Ｃ．１． ＳｃａｆｆｏｌｄＸ改変ＥＶ（例えばエキソソーム）
いくつかの態様では、本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）は、その組成が改変された膜を含む。例えば、それらの膜組成は、膜のタンパク質、脂質、またはグリカン含有量を変更することによって改変することができる。

【0400】

いくつかの態様では、表面改変ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＰＥＧ誘発融合及び／または超音波融合などの化学的及び／または物理的方法によって生成される。他の態様では、表面改変ＥＶ（例えばエキソソーム）を、遺伝子改変によって生成する。遺伝子改変されたプロデューサー細胞または遺伝子改変された細胞の子孫から産生されるＥＶ（例えばエキソソーム）は、改変された膜組成物を含み得る。いくつかの態様では、表面改変ＥＶ（例えばエキソソーム）は、より高いもしくはより低い密度（例えば、より高い数）で足場部分（例えば、エキソソームタンパク質、例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ）を有するか、または足場部分のバリアントもしくは断片を含む。

【0401】

例えば、表面（例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ）改変ＥＶは、足場部分（例えば、エキソソームタンパク質、例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ）またはそのバリアントもしくは断片をコードする外来性配列で形質転換された細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）から作成することができる。外来性配列から発現する足場部分を含むＥＶは、改変された膜組成物を含み得る。

【0402】

足場部分の様々な修飾または断片を、本開示の態様に使用することができる。例えば、結合剤への親和性が増強されるように修飾された足場部分は、結合剤を使用して精製することができる表面改変ＥＶを生成するために使用することができる。ＥＶ及び／または膜に、より効果的に標的化するように修飾された足場部分を使用することができる。エキソソーム膜への特異的かつ効果的な標的化に必要な最小限の断片を含むように修飾された足場部分も使用することができる。

【0403】

足場部分は、融合分子、例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸとＡＳＯとの融合分子として発現するように改変することができる。例えば、融合分子は、ＡＳＯに連結された、本明細書に開示する足場部分（例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ、例えば、ＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、ＡＴＰトランスポーター、またはその断片もしくはバリアント）を含み得る。

【0404】

いくつかの態様では、本明細書に記載の表面（例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ）改変ＥＶは、当技術分野で公知のＥＶと比較して優れた特性を示す。例えば、表面（例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ）改変されたＥＶは、天然のＥＶまたは従来のエキソソームタンパク質を使用して生産されるＥＶに比べて、表面上により高度に濃縮された修飾タンパク質を含む。さらに、本開示の表面（例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ）改変ＥＶは、天然のＥＶまたは従来のエキソソームタンパク質を使用して生産されるＥＶに比べて、より大きい、より特異的な、またはより制御された生物活性を有し得る。

【0405】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、プロスタグランジンＦ２受容体負レギュレーター（ＰＴＧＦＲＮポリペプチド）を含む。ＰＴＧＦＲＮタンパク質は、ＣＤ９パートナー１（ＣＤ９Ｐ－１）、Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ ＥＷＩモチーフ含有タンパク質Ｆ（ＥＷＩ－Ｆ）、プロスタグランジンＦ２α受容体調節タンパク質、プロスタグランジンＦ２α受容体関連タンパク質、またはＣＤ３１５とも呼ばれ得る。ヒトＰＴＧＦＲＮタンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ登録番号Ｑ９Ｐ２Ｂ２）の全長アミノ酸配列を、配列番号３０１として表２に示す。ＰＴＧＦＲＮポリペプチドは、シグナルペプチド（配列番号３０１のアミノ酸１～２５）、細胞外ドメイン（配列番号３０１のアミノ酸２６～８３２）、膜貫通ドメイン（配列番号３０１のアミノ酸８３３～８５３）、及び細胞質ドメイン（配列番号３０１のアミノ酸８５４～８７９）を含む。成熟ＰＴＧＦＲＮポリペプチドは、シグナルペプチドを含まない配列番号３０１、すなわち、配列番号３０１のアミノ酸２６～８７９からなる。いくつかの態様では、本開示に有用なＰＴＧＦＲＮポリペプチド断片は、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの膜貫通ドメインを含む。他の態様では、本開示に有用なＰＴＧＦＲＮポリペプチド断片は、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの膜貫通ドメイン、及び（ｉ）膜貫通ドメインのＮ末端の少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０アミノ酸、（ｉｉ）膜貫通ドメインのＣ末端の少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、または少なくとも２５アミノ酸、または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を含む。

【0406】

いくつかの態様では、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの断片は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠いている。

【0407】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３０１のアミノ酸２６～８７９と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３０２と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号３０２のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３０２のアミノ酸配列、及び配列番号３０２のＮ末端及び／またはＣ末端の１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、もしくは２０アミノ酸またはそれ以上を含む。

【0408】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、または３１８と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、または３１８のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、または３１８のアミノ酸配列、及び配列番号３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、または３１８のＮ末端及び／またはＣ末端の１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸を含む。、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、もしくは２０アミノ酸またはそれ以上を含む。

【表4】

【0409】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２３、または３２５と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２３、または３２５のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２３、または３２５のアミノ酸配列、及び配列番号３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２３、または３２５のＮ末端及び／またはＣ末端の１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸を含む。、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、もしくは２０アミノ酸またはそれ以上を含む。

【表5-1】

【表5-2】

【0410】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３０３によって表されるベイシジン（ＢＳＧタンパク質）を含む。ＢＳＧタンパク質は、５Ｆ７、コラゲナーゼ刺激因子、細胞外マトリックスメタロプロテイナーゼインデューサー（ＥＭＭＰＲＩＮ）、白血球活性化抗原Ｍ６、ＯＫ血液型抗原、腫瘍細胞由来コラゲナーゼ刺激因子（ＴＣＳＦ）、またはＣＤ１４７としても知られる。ヒトＢＳＧタンパク質のＵｎｉｐｒｏｔ番号はＰ３５６１３である。ＢＳＧタンパク質のシグナルペプチドは、配列番号３０３のアミノ酸１～２１である。配列番号３０３のアミノ酸１３８～３２３は細胞外ドメインであり、アミノ酸３２４～３４４は膜貫通ドメインであり、配列番号３０３のアミノ酸３４５～３８５は細胞質ドメインである。

【0411】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３０３のアミノ酸２２～３８５と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＢＳＧポリペプチドの断片は、ＩｇＶ、例えば、配列番号３０３のアミノ酸２２１～３１５などの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠いている。他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３２６、３２７、または３２８と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号３２６、３２７、または３２８のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３２６、３２７、または３２８のアミノ酸配列、及び配列番号３２６、３２７、または３２８のＮ末端及び／またはＣ末端の１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸を含む。、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、もしくは２０アミノ酸またはそれ以上を含む。

【0412】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（ＩｇＳＦ８またはＩＧＳＦ８タンパク質）を含み、これは、ＣＤ８１パートナー３、Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ ＥＷＩモチーフ含有タンパク質２（ＥＷＩ－２）、ケラチノサイト関連膜貫通タンパク質４（ＫＣＴ－４）、ＬＩＲ－Ｄ１、プロスタグランジン調節様タンパク質（ＰＧＲＬ）またはＣＤ３１６としても知られる。全長のヒトＩＧＳＦ８タンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔの登録番号Ｑ９６９Ｐ０であり、本明細書中では配列番号３０４として示す。ヒトＩＧＳＦ８タンパク質は、シグナルペプチド（配列番号３０４のアミノ酸１～２７）、細胞外ドメイン（配列番号３０４のアミノ酸２８～５７９）、膜貫通ドメイン（配列番号３０４のアミノ酸５８０～６００）、及び細胞質ドメイン（配列番号３０４のアミノ酸６０１～６１３）を有する。

【0413】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３０４のアミノ酸２８～６１３と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＧＳＦ８タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠いている。他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３３０、３３１、３３２、または３３３と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号３３０、３３１、３３２、または３３３のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３３０、３３１、３３２、または３３３のアミノ酸配列、及び配列番号３３０、３３１、３３２、または３３３のＮ末端及び／またはＣ末端の１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸を含む。、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、もしくは２０アミノ酸またはそれ以上を含む。

【0414】

いくつかの態様では、本開示のＳｃａｆｆｏｌｄＸは、Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ ＥＷＩモチーフ含有タンパク質３（ＥＷＩ－３）としても知られる免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（ＩｇＳＦ３またはＩＧＳＦ３タンパク質）を含み、配列番号３０９のアミノ酸配列として示される。ヒトＩＧＳＦ３タンパク質は、シグナルペプチド（配列番号３０９のアミノ酸１～１９）、細胞外ドメイン（配列番号３０９のアミノ酸２０～１１２４）、膜貫通ドメイン（配列番号３０９のアミノ酸１１２５～１１４５）、及び細胞質ドメイン（配列番号３０９のアミノ酸１１４６～１１９４）を有する。

【0415】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３０９のアミノ酸２８～６１３と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＧＳＦ３タンパク質は、１つ以上の機能ドメインまたは構造ドメイン、例えば、ＩｇＶを欠失している。

【0416】

いくつかの態様では、本開示のためのＳｃａｆｆｏｌｄＸは、インテグリンβ１（ＩＴＧＢ１タンパク質）（フィブロネクチン受容体サブユニットβ、糖タンパク質ＩＩａ（ＧＰＩＩＡ）、ＶＬＡ－４サブユニットβ、またはＣＤ２９としても知られ、配列番号３０５のアミノ酸配列として示される）を含む。ヒトＩＴＧＢ１タンパク質は、シグナルペプチド（配列番号３０５のアミノ酸１～２０）、細胞外ドメイン（配列番号３０５のアミノ酸２１～７２８）、膜貫通ドメイン（配列番号３０５のアミノ酸７２９～７５１）、及び細胞質ドメイン（配列番号３０５のアミノ酸７５２～７９８）を有する。

【0417】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号３０５のアミノ酸２１～７９８と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＴＧＢ１タンパク質は、１つ以上の機能ドメインまたは構造ドメイン、例えば、ＩｇＶを欠失している。

【0418】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、シグナルペプチド（配列番号３０６のアミノ酸１～３３）を含まない配列番号３０６と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＩＴＧＡ４タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＩＴＧＡ４タンパク質は、１つ以上の機能的または構造的ドメイン、例えば、ＩｇＶを欠失している。

【0419】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、シグナルペプチドを含まない配列番号３０７と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＳＬＣ３Ａ２タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＳＬＣ３Ａ２タンパク質は、１つ以上の機能的または構造的ドメイン、例えば、ＩｇＶを欠失している。

【0420】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、シグナルペプチドを含まない配列番号３１０と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＡＴＰ１Ａ１タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＡＴＰ１Ａ１タンパク質は、１つ以上の機能的または構造的ドメイン、例えば、ＩｇＶを欠失している。

【0421】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、シグナルペプチドを含まない配列番号３１１と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＡＴＰ１Ａ２タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＡＴＰ１Ａ２タンパク質は、１つ以上の機能的または構造的ドメイン、例えば、ＩｇＶを欠失している。

【0422】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、シグナルペプチドを含まない配列番号３１２と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＡＴＰ１Ａ３タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＡＴＰ１Ａ３タンパク質は、１つ以上の機能的または構造的ドメイン、例えば、ＩｇＶを欠失している。

【0423】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、シグナルペプチドを含まない配列番号３１３と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＡＴＰ１Ａ４タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＡＴＰ１Ａ４タンパク質は、１つ以上の機能的または構造的ドメイン、例えば、ＩｇＶを欠失している。

【0424】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、シグナルペプチドを含まない配列番号３１４と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＡＴＰ２Ｂ１タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＡＴＰ２Ｂ１タンパク質は、１つ以上の機能的または構造的ドメイン、例えば、ＩｇＶを欠失している。

【0425】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、シグナルペプチドを含まない配列番号３１５と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＡＴＰ２Ｂ２タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＡＴＰ２Ｂ２タンパク質は、１つ以上の機能的または構造的ドメイン、例えば、ＩｇＶを欠失している。

【0426】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、シグナルペプチドを含まない配列番号３１６と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＡＴＰ２Ｂ３タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＡＴＰ２Ｂ３タンパク質は、１つ以上の機能的または構造的ドメイン、例えば、ＩｇＶを欠失している。

【0427】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、シグナルペプチドを含まない配列番号３１７と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＡＴＰ２Ｂ４タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質は、１つ以上の機能的または構造的ドメイン、例えば、ＩｇＶを欠失している。

【0428】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、シグナルペプチドを含まない配列番号３１８と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有するＩＧＳＦ２タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＩＧＳＦ２タンパク質は、１つ以上の機能的または構造的ドメイン、例えば、ＩｇＶを欠失している。

【0429】

他のＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質の非限定的な例は、２０１９年２月５日に発行された米国特許第ＵＳ１０１９５２９０Ｂ１号に記載されており、その全体が参照により援用される。

【0430】

いくつかの態様では、配列は、天然タンパク質のＮ末端から少なくとも５、１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、または８００アミノ酸を欠く足場部分の断片をコードする。いくつかの態様では、配列は、天然タンパク質のＣ末端から少なくとも５、１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、または８００アミノ酸を欠く足場部分の断片をコードする。いくつかの態様では、配列は、天然タンパク質のＮ末端とＣ末端の両方から少なくとも５、１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、または８００アミノ酸を欠く足場部分の断片をコードする。いくつかの態様では、配列は、天然タンパク質の１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く足場部分の断片をコードする。

【0431】

いくつかの態様では、足場部分、例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ、例えば、ＰＴＧＦＲＮタンパク質を、１つ以上の異種タンパク質に連結する。１つ以上の異種タンパク質を、足場部分のＮ末端に連結することができる。１つ以上の異種タンパク質を、足場部分のＣ末端に連結することができる。いくつかの態様では、１つ以上の異種タンパク質を、足場部分のＮ末端とＣ末端の両方に連結する。いくつかの態様では、異種タンパク質は哺乳類タンパク質である。いくつかの態様では、異種タンパク質はヒトタンパク質である。

【0432】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸを使用して、任意の部分、例えば、ＡＳＯを、内腔表面及びＥＶ（例えばエキソソーム）の外面に同時に連結することができる。例えば、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドを使用して、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の外面に加えて、内腔内部（例えば、内腔表面）のＡＳＯを連結することができる。したがって、特定の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、例えば、内腔表面上のＡＳＯ及びＥＶ（例えばエキソソーム）の外面上のＡＳＯの二重の目的に使用することができる。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、ＥＶの内腔表面上及び／またはＥＶの外面上にＡＳＯを固定することができる足場タンパク質である。

【0433】

ＩＩＩ．Ｃ．２． ＳｃａｆｆｏｌｄＹ改変ＥＶ（例えばエキソソーム）
いくつかの態様では、本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）は、天然のＥＶ（例えばエキソソーム）とは異なる内部空間（すなわち、内腔）を含む。例えば、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面の組成が、天然のエキソソームの組成とは異なるタンパク質、脂質、またはグリカン含有量を有するように、ＥＶを変化させることができる。

【0434】

いくつかの態様では、改変ＥＶ（例えばエキソソーム）は、足場部分（例えば、エキソソームタンパク質、例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＹ）をコードする外来性配列、またはＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面の組成または内容を変化させる足場部分の修飾もしくは断片で形質転換された細胞から生成され得る。ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面で発現させることができるエキソソームタンパク質の様々な修飾または断片を、本開示の態様に使用することができる。

【0435】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面を変化させることができるエキソソームタンパク質として、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質（ＭＡＲＣＫＳ）タンパク質、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質様１（ＭＡＲＣＫＳＬ１）タンパク質、脳酸可溶性タンパク質１（ＢＡＳＰ１）タンパク質、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0436】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、ＭＡＲＣＫＳタンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ登録番号Ｐ２９９６６）を含む。ＭＡＲＣＫＳタンパク質は、プロテインキナーゼＣ基質（８０ｋＤａタンパク質、軽鎖）としても知られる。全長のヒトＭＡＲＣＫＳタンパク質は、３３２アミノ酸の長さであり、アミノ酸残基１５２～１７６にカルモジュリン結合ドメインを含む。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ登録番号Ｐ４９００６）を含む。ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質は、ＭＡＲＣＫＳ様タンパク質１、及びマクロファージのミリストイル化アラニンリッチＣキナーゼ基質としても知られる。全長のヒトＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質は、１９５アミノ酸の長さである。ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質は、脂質結合及びカルモジュリン結合に関与するエフェクタードメインを、アミノ酸残基８７～１１０に有する。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、ＢＡＳＰ１タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ登録番号Ｐ８０７２３）を含む。ＢＡＳＰ１タンパク質は、２２ｋＤａ神経組織富化酸性タンパク質または神経軸索膜タンパク質ＮＡＰ－２２としても知られる。全長のヒトＢＡＳＰ１タンパク質配列（異性体１）は、２２７アミノ酸の長さである。選択的スプライシングによって生成される異性体は、配列番号４０３のアミノ酸８８～１４１を欠失している（異性体１）。

【表6】

【0437】

成熟ＢＡＳＰ１タンパク質配列は、配列番号４０３の最初のＭｅｔを欠失しており、したがって配列番号４０３のアミノ酸２～２２７を含む。同様に、成熟ＭＡＲＣＫＳ及びＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質も、それぞれ配列番号４０１及び４０２の最初のＭｅｔを欠失している。したがって、成熟ＭＡＲＣＫＳタンパク質は、配列番号４０１のアミノ酸２～３３２を含む。成熟ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質は、配列番号４０２のアミノ酸２～２２７を含む。

【0438】

他の態様では、本開示に有用なＳｃａｆｆｏｌｄＹは、配列番号４０３のアミノ酸２～２２７と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹは、配列番号４０４～５６７のいずれか１つと、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。他の態様では、本開示に有用なＳｃａｆｆｏｌｄＹは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号４０３のアミノ酸配列を含む。他の態様では、本開示に有用なＳｃａｆｆｏｌｄＹは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号４０３のアミノ酸残基１のＭｅｔ以外の配列番号４０３のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの態様では、本開示に有用なＳｃａｆｆｏｌｄＹは、配列番号４０４～５６７のいずれか１つのアミノ酸配列、及び配列番号４０４～５６７のＮ末端及び／またはＣ末端の１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、もしくは２０アミノ酸またはそれ以上を含む。

【0439】

いくつかの態様では、配列番号４０４～５６７のいずれかのタンパク質配列は、本開示のためのＳｃａｆｆｏｌｄＹ（例えば、ＡＳＯに連結された足場部分）であるのに十分である。

【0440】

いくつかの態様では、本開示に有用なＳｃａｆｆｏｌｄＹは、ＧＸＫＬＳＫＫＫを有するペプチドを含み、配列中、Ｘはアラニンまたは任意の他のアミノ酸（配列番号４０４）である。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、（Ｇ）（π）（ξ）（Φ／π）（Ｓ／Ａ／Ｇ／Ｎ）（＋）（＋）の配列を有するペプチドを含み、配列中、各括弧内の位置はアミノ酸を表し、πは（Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ）からなる群から選択される任意のアミノ酸、ξは（Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ）からなる群から選択される任意のアミノ酸、Φは、（Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ）からなる群から選択される任意のアミノ酸、（＋）は、（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり；そして、５位は（＋）ではなく、そして６位は（＋）でも（ＡｓｐまたはＧｌｕ）でもない。さらなる態様では、本明細書に記載のＥＶ（例えば改変エキソソーム）は、（Ｇ）（π）（Ｘ）（Φ／π）（＋）（＋）の配列を有するペプチドを含み、配列中、各括弧内の位置はアミノ酸を表し、πは（Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ）からなる群から選択される任意のアミノ酸、Ｘは、任意のアミノ酸、Φは、（Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ）からなる群から選択される任意のアミノ酸、（＋）は、（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり；そして、５位は（＋）ではなく、そして６位は（＋）でも（ＡｓｐまたはＧｌｕ）でもない。アミノ酸の命名法については、Ａａｓｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ５１３（２００２）１４１－１４４を参照されたい。

【0441】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＸは、配列番号４０４～５６７のいずれか１つと、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0442】

本明細書に記載のＳｃａｆｆｏｌｄＹ改変ＥＶ（例えばエキソソーム）は、配列番号４０４～５６７に記載の配列で形質転換された細胞から生成することができる。

【0443】

いくつかの態様では、本開示に有用なＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、「Ｎ末端ドメイン」（ＮＤ）及び「エフェクタードメイン」（ＥＤ）を含み、ＮＤ及び／またはＥＤは、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面に会合する。いくつかの態様では、本開示に有用なＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、細胞内ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外ドメインを含み；細胞内ドメインは、「Ｎ末端ドメイン」（ＮＤ）及び「エフェクタードメイン」（ＥＤ）を含み、ＮＤ及び／またはＥＤは、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面に結合する。本明細書中で使用する場合、用語「会合する」とは、膜成分への共有結合を含まない、足場タンパク質とＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面との間の相互作用を指す。例えば、本開示に有用な足場は、例えば、脂質アンカー（例えば、ミリスチン酸）を介して、ＥＶの内腔表面、及び／または負に荷電した膜リン脂質の頭部と静電的に相互作用する多塩基性ドメインと会合することができる。他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、ＮＤは、ＥＶの内腔表面に会合し、ＥＤは、イオン性相互作用によりＥＶの内腔表面に会合し、ＥＤは、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、または少なくとも７つの連続塩基性アミノ酸、例えば、リジン（Ｌｙｓ）を順番に含む。

【0444】

他の態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、ＮＤは、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面に会合し、ＥＤは、イオン性相互作用によりＥＶの内腔表面に会合し、ＥＤは、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、または少なくとも７つの連続塩基性アミノ酸、例えば、リジン（Ｌｙｓ）を順番に含む。

【0445】

いくつかの態様では、ＮＤは、脂質化を介して、例えばミリストイル化を介して、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面に会合する。いくつかの態様では、ＮＤは、Ｎ末端にＧｌｙを有する。いくつかの態様では、Ｎ末端Ｇｌｙはミリストイル化されている。

【0446】

いくつかの態様では、ＥＤは、イオン性相互作用を介して、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面に会合する。いくつかの態様では、ＥＤは、静電相互作用を介して、特に引力静電相互作用を介して、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔表面に会合する。

【0447】

いくつかの態様では、ＥＤは、（ｉ）塩基性アミノ酸（例えば、リジン）、または（ｉｉ）ポリペプチド配列において互いに隣接する２つ以上の塩基性アミノ酸（例えば、リジン）を含む。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、リジン（Ｌｙｓ；Ｋ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）である。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は（Ｌｙｓ）ｎであり、ｎは、１～１０の整数である。

【0448】

他の態様では、ＥＤのＮ末端がＮＤのＣ末端でリジンに直接連結している場合、すなわち、リジンがＥＤのＮ末端にあり、ＮＤのＣ末端のリジンに融合している場合、ＥＤは少なくともリジンを含み、ＮＤはＣ末端にリジンを含む。他の態様では、ＥＤのＮ末端が、リンカー、例えば、１つ以上のアミノ酸によってＮＤのＣ末端に連結している場合、ＥＤは、少なくとも２つのリジン、少なくとも３つのリジン、少なくとも４つのリジン、少なくとも５つのリジン、少なくとも６つのリジン、または少なくとも７つのリジンを含む。

【0449】

いくつかの態様では、ＥＤは、Ｋ、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号４０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号４０６）、Ｒ、ＲＲ、ＲＲＲ、ＲＲＲＲ（配列番号４０７）；ＲＲＲＲＲ（配列番号４０８）、ＫＲ、ＲＫ、ＫＫＲ、ＫＲＫ、ＲＫＫ、ＫＲＲ、ＲＲＫ、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号４０９）、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号４１０）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＥＤは、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号４０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号４０６）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６に記載のアミノ酸配列を含み、ＧはＧｌｙを表し；「：」はペプチド結合を表し；Ｘ２～Ｘ６のそれぞれは、独立してアミノ酸を表し、Ｘ６は、塩基性アミノ酸を表す。いくつかの態様では、Ｘ６アミノ酸は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択される。いくつかの態様では、Ｘ５アミノ酸は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択される。いくつかの態様では、Ｘ２アミノ酸は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択される。いくつかの態様では、Ｘ４は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、及びＭｅｔからなる群から選択される。

【0450】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、ＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６に記載のアミノ酸配列を含み、ＧはＧｌｙを表し；「：」はペプチド結合を表し；Ｘ２～Ｘ６のそれぞれは、独立してアミノ酸であり；Ｘ６は塩基性アミノ酸を含み、ＥＤはペプチド結合によってＸ６に連結し、ＥＤのＮ末端に少なくとも１つのリジンを含む。

【0451】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質のＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６のアミノ酸配列を含み、ＧはＧｌｙを表し；「：」はペプチド結合を表し；Ｘ２は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸を表し；Ｘ３は任意のアミノ酸を表し；Ｘ４は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、及びＭｅｔからなる群から選択されるアミノ酸を表し；Ｘ５は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸を表し；Ｘ６は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸を表す。

【0452】

いくつかの態様では、Ｘ３アミノ酸は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択される。

【0453】

いくつかの態様では、ＮＤとＥＤを、リンカーによって結合する。いくつかの態様では、リンカーは、１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの態様では、用語「リンカー」とは、ペプチドまたはポリペプチド配列（例えば、合成ペプチドまたはポリペプチド配列）または非ポリペプチド、例えば、アルキル鎖を指す。いくつかの態様では、２つ以上のリンカーをタンデムに連結することができる。一般的に、リンカーは柔軟性を提供するか、または立体障害を防止／改善する。リンカーは通常、開裂せず；しかしながら、特定の態様では、そのような開裂が望ましい場合がある。したがって、いくつかの態様では、リンカーは、リンカーの配列内に位置するか、またはリンカー配列のいずれかの末端でリンカーに隣接し得る、１つ以上のプロテアーゼ開裂性部位を含み得る。ＮＤとＥＤをリンカーで結合する場合、ＥＤは、少なくとも２つのリジン、少なくとも３つのリジン、少なくとも４つのリジン、少なくとも５つのリジン、少なくとも６つのリジン、または少なくとも７つのリジンを含む。

【0454】

いくつかの態様では、リンカーは、ペプチドリンカーである。いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、または少なくとも約１００アミノ酸を含み得る。

【0455】

いくつかの態様では、リンカーは、グリシン／セリンリンカーである。いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、式［（Ｇｌｙ）ｎ－Ｓｅｒ］ｍによるグリシン／セリンリンカーであり、ｎは、１～１００の任意の整数であり、ｍは、１～１００の任意の整数である。いくつかの態様では、グリシン／セリンリンカーは、式［（Ｇｌｙ）ｘ－Ｓｅｒｙ］ｚで記載され、ｘは、１～４の整数であり、ｙは０または１であり、ｚは、１～５０の整数である。いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、配列Ｇｎを含み、ｎは、１～１００の整数であり得る。いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、配列（ＧｌｙＡｌａ）ｎを含み得、ｎは、１～１００の整数である。他の態様では、ペプチドリンカーは、配列（ＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）ｎを含み得、ｎは、１～１００の整数である。

【0456】

いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、合成、すなわち非天然である。一態様では、ペプチドリンカーは、アミノ酸の第１の直鎖配列を、天然には連結していないか、または天然には遺伝的に融合していないアミノ酸の第２の直鎖配列に、連結または遺伝的に融合するアミノ酸配列を含むペプチド（またはポリペプチド）（例えば、天然または非天然ペプチド）を含む。例えば、一態様では、ペプチドリンカーは、天然ポリペプチドの修飾形態である非天然ポリペプチド（例えば、付加、置換または欠失などの変異を含む）を含み得る。

【0457】

他の態様では、ペプチドリンカーは、非天然アミノ酸を含み得る。さらに他の態様では、ペプチドリンカーは、天然には存在しない直鎖配列中に存在する天然アミノ酸を含み得る。さらに他の態様では、ペプチドリンカーは、天然のポリペプチド配列を含み得る。

【0458】

本開示はまた、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質に連結されたＡＳＯを含む単離された細胞外小胞（ＥＶ）（例えばエキソソーム）を提供し、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、ＮＤ－ＥＤを含み：ＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６を含み；Ｇは、Ｇｌｙを表し；「：」は、ペプチド結合を表し；Ｘ２は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸を表し；Ｘ３は、任意のアミノ酸を表し；Ｘ４は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、及びＭｅｔからなる群から選択されるアミノ酸を表し；Ｘ５は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸を表し；Ｘ６は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸を表し；「－」は、任意選択のリンカーを表し；ＥＤは、（ｉ）ペプチド結合または１つ以上のアミノ酸によってＸ６に連結されている少なくとも２つの連続リジン（Ｌｙｓ）、または（ｉｉ）ペプチド結合によりＸ６に直接連結する少なくとも１つのリジンを含むエフェクタードメインである。

【0459】

いくつかの態様では、Ｘ２アミノ酸は、Ｇｌｙ及びＡｌａからなる群から選択される。いくつかの態様では、Ｘ３アミノ酸はＬｙｓである。いくつかの態様では、Ｘ４アミノ酸は、ＬｅｕまたはＧｌｕである。いくつかの態様では、Ｘ５アミノ酸は、Ｓｅｒ及びＡｌａからなる群から選択される。いくつかの態様では、Ｘ６アミノ酸はＬｙｓである。いくつかの態様では、Ｘ２アミノ酸は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＳｅｒであり；Ｘ３アミノ酸は、ＬｙｓまたはＧｌｕであり；Ｘ４アミノ酸は、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、またはＧｌｕであり；Ｘ５アミノ酸は、ＳｅｒまたはＡｌａであり；Ｘ６アミノ酸はＬｙｓである。いくつかの態様では、「－」リンカーは、ペプチド結合または１つ以上のアミノ酸を含む。

【0460】

いくつかの態様では、足場タンパク質中のＥＤは、Ｌｙｓ（Ｋ）、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号４０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号４０６）、Ａｒｇ（Ｒ）、ＲＲ、ＲＲＲ、ＲＲＲＲ（配列番号４０７）；ＲＲＲＲＲ（配列番号４０８）、ＫＲ、ＲＫ、ＫＫＲ、ＫＲＫ、ＲＫＫ、ＫＲＲ、ＲＲＫ、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号４０９）、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号４１０）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0461】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号４１１）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫ（配列番号４１２）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫ（配列番号４１３）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫ（配列番号４１４）、または（ｖ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0462】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質のＮＤは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫ（配列番号４１５）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫ（配列番号４１６）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫ（配列番号４１７）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫ（配列番号４１８）、または（ｖ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、足場タンパク質中のＥＤは、Ｋ、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＧ（配列番号４１９）、ＫＫＫＧＹ（配列番号４２０）、ＫＫＫＧＹＮ（配列番号４２１）、ＫＫＫＧＹＮＶ（配列番号４２２）、ＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４２３）、ＫＫＫＧＹＳ（配列番号４２４）、ＫＫＫＧＹＧ（配列番号４２５）、ＫＫＫＧＹＧＧ（配列番号４２６）、ＫＫＫＧＳ（配列番号４２７）、ＫＫＫＧＳＧ（配列番号４２８）、ＫＫＫＧＳＧＳ（配列番号４２９）、ＫＫＫＳ（配列番号４３０）、ＫＫＫＳＧ（配列番号４３１）、ＫＫＫＳＧＧ（配列番号４３２）、ＫＫＫＳＧＧＳ（配列番号４３３）、ＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号４３４）、ＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号４３５）、ＫＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号４３６）、ＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号４３７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0463】

いくつかの態様では、本開示に有用なＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質のポリペプチド配列は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号４１１）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫ（配列番号４１２）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫ（配列番号４１３）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫ（配列番号４１４）、または（ｖ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。

【0464】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫ（配列番号４３８）、（ｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＳ（配列番号４３９）、（ｉｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫ（配列番号４４０）、（ｉｖ）ＧＡＫＬＳＫＫＳ（配列番号４４１）、（ｖ）ＧＧＫＱＳＫＫＫ（配列番号４４２）、（ｖｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＳ（配列番号４４３）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＫ（配列番号４４４）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＳ（配列番号４４５）、及び（ｉｘ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0465】

いくつかの態様では、本開示に有用なＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質のポリペプチド配列は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫ（配列番号４３８）、（ｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＳ（配列番号４３９）、（ｉｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫ（配列番号４４０）、（ｉｖ）ＧＡＫＬＳＫＫＳ（配列番号４４１）、（ｖ）ＧＧＫＱＳＫＫＫ（配列番号４４２）、（ｖｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＳ（配列番号４４３）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＫ（配列番号４４４）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＳ（配列番号４４５）、及び（ｉｘ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。

【0466】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、少なくとも約２５、少なくとも約２６、少なくとも約２７、少なくとも約２８、少なくとも約２９、少なくとも約３０、少なくとも３１、少なくとも約３２、少なくとも約３３、少なくとも約３４、少なくとも約３５、少なくとも約３６、少なくとも約３７、少なくとも約３８、少なくとも約３９、少なくとも約３９、少なくとも約４０、少なくとも約４１、少なくとも約４２、少なくとも約４３、少なくとも約４４、少なくとも約５０、少なくとも約４６、少なくとも約４７、少なくとも約４８、少なくとも約４９、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約１００、少なくとも約１０５、少なくとも約１１０、少なくとも約１１５、少なくとも約１２０、少なくとも約１２５、少なくとも約１３０、少なくとも約１３５、少なくとも約１４０、少なくとも約１４５、少なくとも約１５０、少なくとも約１５５、少なくとも約１６０、少なくとも約１６５、少なくとも約１７０、少なくとも約１７５、少なくとも約１８０、少なくとも約１８５、少なくとも約１９０、少なくとも約１９５、少なくとも約２００、少なくとも約２０５、少なくとも約２１０、少なくとも約２１５、少なくとも約２２０、少なくとも約２２５、少なくとも約２３０、少なくとも約２３５、少なくとも約２４０、少なくとも約２４５、少なくとも約２５０、少なくとも約２５５、少なくとも約２６０、少なくとも約２６５、少なくとも約２７０、少なくとも約２７５、少なくとも約２８０、少なくとも約２８５、少なくとも約２９０、少なくとも約２９５、少なくとも約３００、少なくとも約３０５、少なくとも約３１０、少なくとも約３１５、少なくとも約３２０、少なくとも約３２５、少なくとも約３３０、少なくとも約３３５、少なくとも約３４０、少なくとも約３４５、または少なくとも約３５０アミノ酸の長さである。

【0467】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、約５～約１０、約１０～約２０、約２０～約３０、約３０～約４０、約４０～約５０、約５０～約６０、約６０～約７０、約７０～約８０、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１３０～約１４０、約１４０～約１５０、約１５０～約１６０、約１６０～約１７０、約１７０～約１８０、約１８０～約１９０、約１９０～約２００、約２００～約２１０、約２１０～約２２０、約２２０～約２３０、約２３０～約２４０、約２４０～約２５０、約２５０～約２６０、約２６０～約２７０、約２７０～約２８０、約２８０～約２９０、約２９０～約３００、約３００～約３１０、約３１０～約３２０、約３２０～約３３０、約３３０～約３４０、または約３４０～約３５０アミノ酸の長さである。

【0468】

いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号４５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号４５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号４５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号４５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号４８４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号４５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号４５６）を含む。

【0469】

いくつかの態様では、本開示に有用なＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質のポリペプチド配列は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号４５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号４５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号４５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号８５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号４８４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号８５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号４５６）からなる。

【0470】

本開示に有用なＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質の非限定的な例を以下に記載する。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、配列番号４１１、４３８、４４６～５６７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、配列番号４１１、４３８、４４６～５６７のいずれか１つのアミノ酸配列からなる。

【0471】

いくつかの態様では、本開示に有用なＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、Ｎ末端Ｍｅｔを含まない。いくつかの態様では、ＳｃａｆｆｏｌｄＹタンパク質は、脂質アンカーとして機能する足場タンパク質のＮ末端に、脂質化アミノ酸、例えば、ミリストイル化アミノ酸を含む。いくつかの態様では、足場タンパク質のＮ末端のアミノ酸残基はＧｌｙである。Ｎ末端Ｇｌｙの存在は、Ｎ－ミリストイル化の絶対的な要件である。いくつかの態様では、足場タンパク質のＮ末端のアミノ酸残基は合成である。いくつかの態様では、足場タンパク質のＮ末端のアミノ酸残基は、グリシン類似体、例えば、アリルグリシン、ブチルグリシン、またはプロパルギルグリシンである。

【0472】

足場タンパク質の非限定的な例は、２０１９年５月２３日に公開されたＷＯ／２０１９／０９９９４２及び２０２０年５月２２日に公開されたＷＯ／２０２０／１０１７４０に見出すことができ、これらはその全体が参照により援用される。

【0473】

ＩＩＩ．Ｄ． 標的化部分
いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、標的化部分、例えば、外来性標的化部分を含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ペプチド、抗体もしくはその抗原結合断片、化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、マイクロタンパク質、設計されたアンキリンリピートタンパク質（ダーピン）、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、ペプチド模倣分子、受容体の天然リガンド、ラクダナノボディ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、全長抗体、単一ドメイン抗体、重鎖のみ抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体、サメ重鎖のみ抗体（ＶＮＡＲ）、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはそれらの任意の組み合わせを含む外来性標的化部分を含む。いくつかの態様では、抗体は単鎖抗体である。

【0474】

いくつかの態様では、標的化部分は、エキソソームを、肝臓、心臓、肺、脳、腎臓、中枢神経系、末梢神経系、筋肉、骨、関節、皮膚、腸、膀胱、膵臓、リンパ節、脾臓、またはそれらの任意の組み合わせに標的化する。いくつかの態様では、標的化部分は、エキソソームを、腫瘍細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ニューロン、肝細胞、クッパー細胞、骨髄系細胞（例えば、好中球、単球、またはマクロファージ）、造血幹細胞、またはそれらの任意の組み合わせに標的化する。

【0475】

いくつかの態様では、標的化部分を、足場タンパク質によってＥＶ（例えばエキソソーム）に連結する。いくつかの態様では、足場部分は、本明細書に開示する任意の足場タンパク質である。いくつかの態様では、足場タンパク質はＳｃａｆｆｏｌｄＸである。いくつかの態様では、足場タンパク質はＳｃａｆｆｏｌｄＹである。

【0476】

ＩＩＩ．Ｅ． リンカー
上記のように、本開示の細胞外小胞（ＥＶ）（例えば、エキソソーム及びナノ小胞）は、目的の分子（例えば、ＡＳＯ）をＥＶに連結する（例えば、外面または内腔表面上に）１つ以上のリンカーを含み得る。いくつかの態様では、ＡＳＯを、直接または足場部分（例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸまたはＳｃａｆｆｏｌｄＹ）を介してＥＶに連結する。特定の態様では、ＡＳＯを、リンカーにより、足場部分に連結する。特定の態様では、ＡＳＯを、リンカーにより、第２の足場部分に連結する。

【0477】

特定の態様では、ＡＳＯを、ＳｃａｆｆｏｌｄＸを介してエキソソームの外面に連結する。さらなる態様では、ＡＳＯを、ＳｃａｆｆｏｌｄＸまたはＳｃａｆｆｏｌｄＹを介してエキソソームの内腔表面に連結する。リンカーは当技術分野で公知の任意の化学部分であり得る。

【0478】

本明細書中で使用する場合、用語「リンカー」とは、ペプチドまたはポリペプチド配列（例えば、合成ペプチドまたはポリペプチド配列）または非ポリペプチド、例えば、アルキル鎖を指す。いくつかの態様では、２つ以上のリンカーをタンデムに連結することができる。複数のリンカーが存在する場合、各リンカーは同じでも異なっていてもよい。一般的に、リンカーは柔軟性を提供するか、または立体障害を防止／改善する。リンカーは通常、開裂せず；しかしながら、特定の態様では、そのような開裂が望ましい場合がある。したがって、いくつかの態様では、リンカーは、リンカーの配列内に位置するか、またはリンカー配列のいずれかの末端でリンカーに隣接し得る、１つ以上のプロテアーゼ開裂性部位を含み得る。

【0479】

いくつかの態様では、リンカーは、ペプチドリンカーである。いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、または少なくとも約１００アミノ酸を含み得る。

【0480】

いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、合成、すなわち非天然である。一態様では、ペプチドリンカーは、アミノ酸の第１の直鎖配列を、天然には連結していないか、または天然には遺伝的に融合していないアミノ酸の第２の直鎖配列に、連結または遺伝的に融合するアミノ酸配列を含むペプチド（またはポリペプチド）（例えば、天然または非天然ペプチド）を含む。例えば、一態様では、ペプチドリンカーは、天然ポリペプチドの修飾形態である非天然ポリペプチド（例えば、付加、置換または欠失などの変異を含む）を含み得る。

【0481】

リンカーは開裂しやすい場合があり（「開裂性リンカー」）、それにより、生体活性分子（例えば、ＡＳＯ）の遊離を促進する。

【0482】

いくつかの態様では、リンカーは「還元感受性リンカー」である。いくつかの態様では、還元感受性リンカーは、ジスルフィド結合を含む。いくつかの態様では、リンカーは、「酸不安定性リンカー」である。いくつかの態様では、酸不安定性リンカーは、ヒドラゾンを含む。好適な酸不安定性リンカーはまた、例えば、ｃｉｓ－アコニット酸リンカー、ヒドラジドリンカー、チオカルバモイルリンカー、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0483】

いくつかの態様では、リンカーは、非開裂性リンカーを含む。

【0484】

いくつかの態様では、リンカーは、アクリルホスホルアミダイト（例えば、Ａｃｒｙｄｉｔｅ（商標））、アデニル化、アジド（ＮＨＳエステル）、ジゴキシゲニン（ＮＨＳエステル）、コレステロール－ＴＥＧ、Ｉ－ＬＩＮＫＥＲ（商標）、アミノ修飾因子（例えば、アミノ修飾因子Ｃ６、アミノ修飾因子Ｃ１２、アミノ修飾因子Ｃ６ ｄＴ、またはＵｎｉ－Ｌｉｎｋ（商標）アミノ修飾剤）、アルキン、５’ヘキシニル、５－オクタジエニルｄＵ、ビオチン化（例えば、ビオチン、ビオチン（アジド）、ビオチンｄＴ、ビオチン－ＴＥＧ、デュアルビオチン、ＰＣビオチン、またはデスチオビオチン）、チオール修飾（チオール修飾剤Ｃ３ Ｓ－Ｓ、ジチオールまたはチオール修飾剤Ｃ６ Ｓ－Ｓ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0485】

いくつかの態様では、リンカーは、ネロリドール、ファルネソール、リモネン、リナロール、ゲラニオール、カルボン、フェンコン、またはメントールなどのテルペン；パルミチン酸やミリスチン酸などの脂質；コレステロール；オレイル；レチニル；コレステリル残基；コール酸；アダマンタン酢酸；１－ピレン酪酸；ジヒドロテストステロン；１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール；ゲラニルオキシヘキシル基；ヘキサデシルグリセロール；ボルネオール；１，３－プロパンジオール；ヘプタデシル基；Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸；Ｏ３－（オレオイル）コレン酸；ジメトキシトリチル；フェノキサジン、マレイミド部分、グルコリニダーゼタイプ、ＣＬ２Ａ－ＳＮ３８タイプ、葉酸；炭水化物；ビタミンＡ；ビタミンＥ；ビタミンＫ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0486】

ＩＩＩ．Ｆ． 屈性部分を含む改変ＥＶ
いくつかの態様では、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）を表面改変して、例えば、免疫親和性リガンドまたは同族受容体リガンドの組み込みを介して、その特性、例えば、生体内分布を調整することができる。例えば、本明細書に開示するＥＶ（例えば、エキソソーム）は、それらを特定の細胞型、例えば、シュワン細胞、感覚ニューロン、運動ニューロン、髄膜マクロファージ、もしくは腫瘍細胞に向かわせるように表面改変することができ、または特定の区画、例えば、ＣＮＳ（髄腔内区画の保持を向上させるために）または腫瘍微小環境へのそれらの移行を増強するように表面改変することができる。

【0487】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、（ｉ）本明細書に開示するＡＳＯ、及び（ｉｉ）生体内分布修飾剤または標的化部分を含む。いくつかの態様では、生体内分布修飾剤または標的化部分は、単一ドメイン抗原結合部分、例えば、ＶＨＨ及び／またはｖＮＡＲを含む。本明細書中で使用する場合、用語「生体内分布修飾剤」及び「標的化部分」は、同じ意味で使用され、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏでの（例えば、異なる品種の細胞の混合培養物中での）細胞外小胞（例えば、エキソソーム、ナノ小胞）の分布を改変することができる薬剤を指す。いくつかの態様では、標的化部分は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の向性を変化させる、すなわち、標的部分は「向性部分」である。本明細書中で使用する場合、用語「向性部分」とは、ＥＶ（例えばエキソソーム）上で発現すると、ＥＶ天然の挙動を変更及び／または増強する標的化部分を指す。例えば、いくつかの態様では、向性部分は、特定の細胞、組織、または器官へのＥＶ（例えばエキソソーム）の取り込みを促進することができる。

【0488】

ＥＶ（例えばエキソソーム）は、個別の細胞型及び組織への優先的な取り込みを示し、それらの向性は、標的細胞の表面の受容体と相互作用するタンパク質をそれらの表面に加えることによって指示することができる。向性部分は、タンパク質、ペプチド、脂質、もしくは炭水化物などの生体分子、または合成分子を含み得る。例えば、いくつかの態様では、向性部分は、親和性リガンド、例えば、抗体（抗ＣＤ１９ナノボディ、抗ＣＤ２２ナノボディ、抗ＣＬＥＣ９Ａナノボディ、または抗ＣＤ３ナノボディなど）、ＶＨＨドメイン、ファージディスプレイペプチド、フィブロネクチンドメイン、ラクダ科ナノボディ、及び／またはｖＮＡＲを含み得る。いくつかの態様では、向性部分は、例えば、合成ポリマー（例えば、ＰＥＧ）、天然のリガンド／分子（例えば、ＣＤ４０Ｌ、アルブミン、ＣＤ４７、ＣＤ２４、ＣＤ５５、ＣＤ５９）、及び／または組換えタンパク質（例えば、ＸＴＥＮ）を含み得る。

【0489】

いくつかの態様では、向性部分は、細胞によるＥＶ（例えばエキソソーム）の取り込みを増加させることができる。いくつかの態様では、細胞によるＥＶ（例えばエキソソーム）の取り込みを増加させることができる向性部分として、リンパ球抗原７５（ＤＥＣ２０５またはＣＤ２０５としても知られる）、Ｃ型レクチンドメインファミリー９メンバーＡ（ＣＬＥＣ９Ａ）、Ｃ型レクチンドメインファミリー６（ＣＬＥＣ６）、Ｃ型レクチンドメインファミリー４メンバーＡ（ＤＣＩＲまたはＣＬＥＣ４Ａとしても知られる）、樹状細胞特異的細胞間接着分子－３－グラビング非インテグリン（ＤＣ－ＳＩＧＮまたはＣＤ２０９としても知られる）、レクチン型酸化ＬＤＬ受容体１（ＬＯＸ－１）、コラーゲン構造を有するマクロファージ受容体（ＭＡＲＣＯ）、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）、Ｃ型レクチンドメインファミリー１０メンバーＡ（ＣＬＥＣ１０Ａ）、ＤＣ－アシアロ糖タンパク質受容体（ＤＣ－ＡＳＧＰＲ）、ＤＣ免疫受容体２（ＤＣＩＲ２）、Ｄｅｃｔｉｎ－１、マクロファージマンノース受容体（ＭＭＲ）、ＢＤＣＡ－２（ＣＤ３０３、ＣＬＥＣ４Ｃ）、Ｄｅｃｔｉｎ－２、ＢＳＴ－２（ＣＤ３１７）、ランゲリン、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ３０４、ＸＣＲ１、ＡＸＬ、ＳＩＧＬＥＣ６、ＣＤ２０９、ＳＩＲＰＡ、ＣＸ３ＣＲ１、ＧＰＲ１８２、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ３２、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ１０、抗ＣＤ３抗体、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0490】

いくつかの態様では、中枢神経系への向性が望まれる場合、本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）は、特定の中枢神経系組織または細胞へのＥＶ（例えばエキソソーム）の向性を増加させる組織または細胞特異的標的リガンドを含み得る。いくつかの態様では、細胞はグリア細胞である。いくつかの態様では、グリア細胞は、オリゴデンドロサイト、星状細胞、上衣細胞、ミクログリア細胞、シュワン細胞、サテライトグリア細胞、嗅覚鞘細胞、またはそれらの組み合わせである。いくつかの態様では、細胞は神経幹細胞である。いくつかの態様では、シュワン細胞へのＥＶ（例えばエキソソーム）の向性を増加させる細胞特異的標的リガンドは、シュワン細胞表面マーカー、例えば、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンタンパク質ゼロ（Ｐ０）、Ｐ７５ＮＴＲ、ＮＣＡＭ、ＰＭＰ２２、またはそれらの任意の組み合わせに結合する。いくつかの態様では、細胞特異的向性部分は、抗体またはその抗原結合部分、アプタマー、またはシュワン細胞の表面に発現する受容体のアゴニストもしくはアンタゴニストを含む。

【0491】

いくつかの態様では、生体内分布修飾剤または標的化部分は、腫瘍細胞上に発現する抗原に結合する抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、生体内分布修飾剤または標的化部分は、腫瘍微小環境内に発現する抗原に結合する抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、生体内分布修飾剤または標的化部分は、メソセリンまたはその断片に結合する抗原結合部分を含む。メソセリンまたはその断片に結合することができる当技術分野で公知の任意の抗原結合部分を、本明細書に開示するＥＶにおいて使用することができる。いくつかの態様では、生体内分布修飾剤または標的化部分は、ＣＤ３３またはその断片に結合する抗原結合部分を含む。ＣＤ３３またはその断片に結合することができる当技術分野で公知の任意の抗原結合部分を、本明細書に開示するＥＶにおいて使用することができる。特定の態様では、ＣＤ３３またはその断片に結合する抗原結合部分は、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許第５，８７７，２９６号に開示されている抗ＣＤ３３結合部分から選択される。ＣＤ３３は、骨髄細胞とリンパ系細胞の両方で発現する膜貫通型受容体である。ＣＤ３３は、シアル酸に結合し、したがってシアル酸結合免疫グロブリン型レクチン（ＳＩＧＬＥＣ）ファミリーのメンバーである。ＣＤ３３は、細胞間相互作用を媒介し、免疫細胞を休止状態に維持する役割を果たす。結合すると、タンパク質の細胞質ゾル部分に存在するＣＤ３３の免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）がリン酸化され、ＳＨＰホスファターゼなどのＳｒｃ相同性２（ＳＨ２）ドメイン含有タンパク質のドッキングサイトとして機能する。これは、細胞内の食作用を阻害するカスケードをもたらし得る。構造的には、ＣＤ３３の細胞外部分には２つの免疫グロブリンドメインが含まれ、細胞外部分にはＩＴＩＭが含まれる。ＣＤ３３の同義語として、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン３、ＳＩＧＬＥＣ３、ＳＩＧＬＥＣ－３、ｇｐ６７、及びｐ６７が挙げられるが、これらに限定されない。

【0492】

ＣＤ３３の配列も当技術分野で公知である。ヒトＣＤ３３の標準的なアミノ酸配列は、配列番号９００（ＵｎｉＰｒｏｔ識別子：Ｐ２０１３８－１）に記載されている。選択的スプライシングから生じるヒトＣＤ３３のアイソフォーム：（ｉ）アイソフォーム２（ＵｎｉＰｒｏｔ識別子：Ｐ２０１３８－３；配列番号９０１）；（ｉｉ）アイソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔ識別子：Ｐ２０１３８－２；配列番号９０２）；（ｉｉｉ）アイソフォームＸ１（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＸＰ＿０１１５２５８３３．１；配列番号９０３）；（ｉｖ）アイソフォームＸ２（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＸＰ＿０１６８８２９９８．１；配列番号９０４）；及び（ｖ）アイソフォームＸ４（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＸＰ＿０１６８８２９９９．１；配列番号９０５）が知られている。いくつかの態様では、本明細書に開示する標的化部分は、本明細書に開示するヒトＣＤ３３タンパク質の１つ以上に結合することができる。

【0493】

向性部分が存在することにより（単独で、またはＣＤ４７などの抗食作用シグナルの存在及び特定の投与経路の使用と組み合わせて）、所望の標的細胞または組織へのＥＶ（例えばエキソソーム）の向性が誘発されることから、原則として、本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）を特定の標的細胞または組織（例えば、ＣＮＳの細胞または末梢神経のシュワン細胞）に向かわせることができる少なくとも１つの向性部分を含む本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）を、当技術分野で公知の任意の好適な投与方法（例えば、静脈内注射または注入）を用いて投与することができる。

【0494】

特定の態様では、例えば、ＥＶ（例えばエキソソーム）の外面上の足場部分、例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質またはその断片に、向性部分を連結、例えば、マレイミド部分を介して化学的に連結する。抗食作用シグナル（例えば、ＣＤ４７及び／またはＣＤ２４）、半減期延長部分（例えば、アルブミンまたはＰＥＧ）、またはそれらの任意の組み合わせを、本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）の外面に結合させることによって、向性をさらに向上させることができる。特定の態様では、例えば、ＥＶ（例えばエキソソーム）の外面上の足場部分、例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質またはその断片に、抗食作用シグナルを連結、例えば、マレイミド部分を介して化学的に連結する。

【0495】

薬物動態、生体内分布、特に所望の組織または解剖学的位置における向性及び保持は、適切な投与経路（例えば、中枢神経系への向性を向上させるための髄腔内投与または眼内投与）を選択することによっても達成することができる。

【0496】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、少なくとも２つの異なる向性部分を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、３つの異なる向性部分を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、４つの異なる向性部分を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、５つ以上の異なる向性部分を含む。いくつかの態様では、向性部分の１つ以上は、細胞によるＥＶ（例えばエキソソーム）の取り込みを増加させる。いくつかの態様では、各向性部分を、足場部分、例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質またはその断片に結合させる。いくつかの態様では、複数の向性部分を、同じ足場部分、例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質またはその断片に結合させることができる。いくつかの態様では、いくつかの向性部分を、足場部分、例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質またはその断片にタンデムに結合させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示する向性部分またはその組み合わせを、足場部分、例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質またはその断片に、リンカーまたはスペーサーを介して結合させる。いくつかの態様では、リンカーもしくはスペーサーまたはそれらの組み合わせを、本明細書に開示する２つの向性部分の間に挿入する。

【0497】

本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）を異なる神経系細胞型に向かわせることができる向性部分の非限定的な例を以下に開示する。

【0498】

ＩＩＩ．Ｆ．１． シュワン細胞を標的とする向性部分
いくつかの態様では、向性部分は、シュワン細胞を標的とすることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）を、シュワン細胞標的に向かわせる向性部分は、例えば、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）、アポリポプロテインＤ（ＡｐｏＤ）、ガレクチン１（ＬＧＡＬＳ１）、ミエリンプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、グリピカン１、またはシンデカン３を標的とする。いくつかの態様では、本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）をシュワン細胞に向かわせる向性部分は、トランスフェリン、またはその断片、バリアントもしくは誘導体である。

【0499】

いくつかの態様では、本開示の向性部分は、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）を標的とする。トランスフェリン受容体、例えば、ＴｆＲ１またはＴｆＲ２は、トランスフェリンの担体タンパク質である。トランスフェリン受容体は、受容体を介したエンドサイトーシスにより、トランスフェリン－イオン錯体を内在化することにより、鉄分を移入する。

【0500】

ＴｆＲ１（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０２７８６ ＴＦＲ１＿Ｈｕｍａｎを参照のこと）またはトランスフェリン受容体１（表面抗原分類７１すなわちＣＤ７１としても知られる）は、血液脳関門（ＢＢＢ）の内皮細胞に発現する。ＴｆＲ１は、赤血球、単球、肝細胞、腸細胞、及び赤血球などの様々な細胞で発現することが知られており、腫瘍細胞（非小細胞肺癌、結腸癌、及び白血病）などの急速に分裂する細胞において、ならびに急性呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）などの障害の影響を受けた組織において上方制御される。ＴｆＲ２は、主に肝臓と赤血球の細胞で発現し、肺、脾臓、筋肉ではあまり認められず、ＴｆＲ１と４５％の同一性及び６６％の類似性を有する。ＴｆＲ１は、膜貫通型受容体であり、ジスルフィド結合を有する分子量９０ｋＤａの７６０残基のホモ二量体を形成する。トランスフェリンに対する親和性は、２つの受容体型間で異なり、ＴｆＲ１に対する親和性は、ＴｆＲ２の親和性に比べて少なくとも２５～３０倍高い。

【0501】

ＴｆＲ１に結合すると、大きな分子、例えば、抗体が脳内に移動する。いくつかのＴｆＲ１標的抗体は、鉄分の取り込みを妨げることなく、血液脳関門を通過することが示されている。それらの中には、マウス抗ラットＴｆＲ抗体ＯＸ２６及びラット抗マウスＴｆＲ抗体８Ｄ３がある。抗体－ＴｆＲ相互作用の親和性は、ＢＢＢの内皮細胞を介したトランスサイトーシス輸送の成功を決定するために重要である。一価のＴｆＲ相互作用は、細胞内ソーティング経路の変化によりＢＢＢ輸送に有利に働く。リソソームへの輸送をリダイレクトする二価相互作用の結合力効果。また、ＴｆＲ結合親和性を低下させると、ＴｆＲからの解離が直接促進され、ＴｆＲ結合抗体の脳実質への曝露が増加する。例えば、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許第８，８２１，９４３号を参照されたい。したがって、いくつかの態様では、本開示の向性部分は、ＴｆＲを標的とする、例えば、標的ＴｆＲ１を標的とすることができるリガンド、例えば、トランスフェリン、またはＴｆＲに特異的に結合することができる抗体もしくは他の結合分子を含み得る。いくつかの態様では、トランスフェリン受容体を標的とする抗体は、低親和性抗トランスフェリン受容体抗体である（例えば、その全体が参照により本明細書に援用されるＵＳ２０１９０２０２９３６Ａ１を参照のこと）。

【0502】

いくつかの態様では、向性部分は、トランスフェリン受容体のリガンド、例えば、登録番号ＮＭ００１０６３、ＸＭ００２７９３、ＸＭ０３９８４７、ＮＭ００２３４３またはＮＭ０１３９００などとしてＧｅｎＢａｎｋで入手可能なヒトトランスフェリン、またはそのバリアント、断片、もしくは誘導体の全部または一部（例えば、結合部分）を含む。

【0503】

いくつかの態様では、向性部分は、トランスフェリン受容体標的化部分、すなわち、トランスフェリン受容体に向けられた標的化部分を含む。好適なトランスフェリン受容体標的化部分として、血清トランスフェリン、ラクトトランスフェリン（ラクトフェリン）オボトランスフェリン、またはメラノトランスフェリンなどのトランスフェリンまたはトランスフェリンバリアントが挙げられるが、これらに限定されない。トランスフェリンは、血清トランスフェリン、ラクトトランスフェリン（ラクトフェリン）、オボトランスフェリン、及びメラノトランスフェリンなど、脊椎動物に認められる非ヘム鉄結合タンパク質のファミリーである。血清トランスフェリンは、分子量が約８０ｋＤａの糖タンパク質であり、分岐して複数のアンテナで終端し、それぞれが末端シアル酸残基を有する２つのＮ結合型多糖鎖を有する単一のポリペプチド鎖を含む。２つの主要なドメイン、すなわち約３３０アミノ酸のＮドメインと約３４０アミノ酸のＣドメインがあり、それぞれが２つのサブドメイン、Ｎ１とＮ２、及びＣ１とＣ２に分けられる。トランスフェリンの受容体結合は、グリコシル化に関係なく、Ｃドメインを介して起こる。

【0504】

いくつかの態様では、向性部分は、血清トランスフェリンまたはトランスフェリンバリアント、例えば、ヘキサシアロトランスフェリン、ペンタシアロトランスフェリン、テトラシアロトランスフェリン、トリシアロトランスフェリン、ジシアロトランスフェリン、モノシアロトランスフェリン、もしくはアシアロトランスフェリン、または糖鎖欠損トランスフェリン（ＣＤＴ）、例えば、アシアロ、モノシアロもしくはジシアロトランスフェリン、または糖鎖フリートランスフェリン（ＣＦＴ）、例えば、アシアロトランスフェリンであるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、向性部分は、トランスフェリンのＮ末端ドメイン、トランスフェリンのＣ末端ドメイン、天然のトランスフェリンのグリコシル化、天然（野生型）のトランスフェリンに比べて低いグリコシル化を有するトランスフェリンバリアント、グリコシル化なし、トランスフェリンの少なくとも２つのＮ末端ローブ、トランスフェリンの少なくとも２つのＣ末端ローブ、Ｎドメインの少なくとも１つの変異、Ｃドメインの少なくとも１つの変異、変異体が天然のトランスフェリンよりもトランスフェリン受容体に対してより弱い結合能力を有する変異、及び／または変異体が天然のトランスフェリンよりもトランスフェリン受容体に対してより強い結合能力を有する変異、または前述の任意の組み合わせである。

【0505】

いくつかの態様では、トランスフェリン受容体を標的とする向性部分は、抗トラスフェリン受容体可変新規抗原受容体（ｖＮＡＲ）、例えば、一般的なモチーフ構造（ＦＷ１－ＣＤＲ１－ＦＷ２－３－ＣＤＲ３－ＦＷ４）を有する結合ドメインを含む。例えば、ＵＳ２０１７－０３４８４１６を参照されたい（その全体が参照により本明細書に援用される）。ｖＮＡＲは、サメの適応免疫系の重要な成分である。わずか１１ｋＤａのこれらの単一ドメイン構造は、動物界で最小のＩｇＧ様タンパク質であり、分子工学及び生物製剤の創薬のための優れたプラットフォームを提供する。ｖＮＡＲの属性には、標的に対する高い親和性、発現の容易さ、安定性、溶解性、多重特異性、及び固形組織への浸透能力の増加が含まれる。Ｕｂａｈ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．（２０１８）４６（６）：１５５９－１５６５を参照のこと。

【0506】

いくつかの態様では、向性部分は、ＴｆＲ１に特異的に結合することができるｖＮＡＲドメインを含み、ｖＮＡＲドメインは、ＵＳ２０１７－０３４８４１６の表１の任意の１つのＣＤＲ３ペプチドと組み合わせたＵＳ２０１７－０３４８４１６の表１の任意の１つのＣＤＲ１ペプチドを有するｖＮＡＲ足場を含むか、または本質的にそれからなる。

【0507】

いくつかの態様では、本開示の向性部分は、ＡｐｏＤを標的とする。主に肝臓で産生される他のリポタンパク質とは異なり、アポリポタンパク質Ｄは、主に脳、小脳、及び末梢神経で産生される。ＡｐｏＤは１６９アミノ酸の長さで、２０アミノ酸の分泌ペプチドシグナルを含む。ＡｐｏＤは、２つのグリコシル化部位（アスパラギン４５及び７８）を含み、成熟タンパク質の分子量は２０～３２ｋＤａである。ＡｐｏＤは、プロゲステロン及びプレグネノロンなどのステロイドホルモンに比較的強い親和性で結合し、エストロゲンに弱い親和性で結合する。アラキドン酸（ＡＡ）は、プロゲステロンやプレグネノロンよりもはるかに優れた親和性を有するＡｐｏＤリガンドである。他のＡｐｏＤリガンドとして、Ｅ－３－メチル－２－ヘキセン酸、レチノイン酸、スフィンゴミエリン及びスフィンゴ脂質が挙げられる。したがって、いくつかの態様では、本開示の向性部分は、ＡｐｏＤを標的とすることができるリガンド、例えば、ＡｐｏＤに特異的に結合することができる抗体または他の結合分子を含む。

【0508】

いくつかの態様では、本開示の向性部分は、ガレクチン１を標的とする。ガレクチン－１タンパク質は、１３５アミノ酸の長さである。したがって、いくつかの態様では、本開示の向性部分は、ガレクチン１を標的とすることができるリガンド、例えば、ガレクチン１に特異的に結合することができる抗体または他の結合分子を含む。

【0509】

いくつかの態様では、本開示の向性部分は、ＰＬＰを標的とする。ＰＬＰは、ＣＮＳ由来の主要なミエリンタンパク質である。ＰＬＰは、ミエリンの多層構造の形成または維持において重要な役割を果たす。ミエリン鞘は多層膜であり、軸索インパルス伝導の効率を大幅に高める絶縁体として機能する神経系に特有のものである。ＰＬＰは、２７６～２８０アミノ酸の高度に保存された疎水性タンパク質であり、４つの膜貫通セグメント、２つのジスルフィド結合を含み、脂質（哺乳類では少なくとも６つのパルミチン酸基）に共有結合する。したがって、いくつかの態様では、本開示の向性部分は、ＰＬＰを標的とすることができるリガンド、例えば、ＰＬＰに特異的に結合することができる抗体または他の結合分子を含む。

【0510】

いくつかの態様では、本開示の向性部分は、グリピカン１を標的とする。したがって、いくつかの態様では、本開示の向性部分は、グリピカン１を標的とすることができるリガンド、例えば、グリピカン１に特異的に結合することができる抗体または他の結合分子を含む。いくつかの態様では、本開示の向性部分は、シンデカン３を標的とする。したがって、いくつかの態様では、本開示の向性部分は、シンデカン３を標的とすることができるリガンド、例えば、シンデカン３に特異的に結合する抗体または他の結合分子を含む。

【0511】

ＩＩＩ．Ｆ．２． 感覚ニューロンを標的とする向性部分
いくつかの態様では、本明細書に開示する向性部分は、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）を感覚ニューロンに向かわせることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）を感覚ニューロンに向かわせる向性部分は、Ｔｒｋ受容体、例えば、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣ、またはそれらの組み合わせを標的とする。

【0512】

Ｔｒｋ（トロポミオシン受容体キナーゼ）受容体は、哺乳類の神経系のシナプス強度と可塑性を調節するチロシンキナーゼのファミリーである。Ｔｒｋ受容体の一般的なリガンドは、神経系の機能に重要な成長因子のファミリーであるニューロトロフィンである。これらの分子の結合は、非常に特異的である。ニューロトロフィンの各タイプは、対応するＴｒｋ受容体に対して異なる結合親和性を有する。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）を感覚ニューロンに向かわせる向性部分は、ニューロトロフィンを含む。

【0513】

ニューロトロフィンは、ホモ二量体としてＴｒｋ受容体に結合する。したがって、いくつかの態様では、向性部分は、本明細書に開示する少なくとも２つのニューロトロフィンを、例えば、タンデムに含む。いくつかの態様では、向性部分は、本明細書に開示する少なくとも２つのニューロトロフィンを、例えば、タンデムに含み、それらは、足場タンパク質、例えば、プロテインＸにリンカーを介して結合している。いくつかの態様では、足場タンパク質、例えば、プロテインＸをニューロトロフィン（例えば、ニューロトロフィンホモ二量体）に接続するリンカーは、少なくとも１０アミノ酸の長さを有する。いくつかの態様では、足場タンパク質、例えば、プロテインＸをニューロトロフィン（例えば、ニューロトロフィンホモ二量体）に接続するリンカーは、少なくとも２５アミノ酸、少なくとも３０アミノ酸、少なくとも３５アミノ酸、少なくとも４０アミノ酸、少なくとも４５アミノ酸、または少なくとも５０アミノ酸の長さを有する。

【0514】

いくつかの態様では、ニューロトロフィンは、ニューロトロフィン前駆体、すなわち、プロニューロトロフィンであり、これは、後で切断されて、成熟タンパク質を生成する。

【0515】

神経成長因子（ＮＧＦ）は、最初に同定され、おそらく最も良好に特徴決定されたニューロトロフィンファミリーのメンバーである。ＮＧＦは、末梢神経系の感覚及び交感神経ニューロンの発達に顕著な影響を及ぼす。脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）は、ＮＧＦと同様の神経栄養活性を有し、主にＣＮＳで発現し、心臓、肺、骨格筋、末梢の坐骨神経で検出されている（Ｌｅｉｂｒｏｃｋ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４１：１４９－１５２（１９８９））。ニューロトロフィン－３（ＮＴ－３）は、ＮＧＦファミリーの第３のメンバーであり、主に海馬の錐体ニューロンと顆粒ニューロンのサブセットで発現し、小脳、大脳皮質、ならびに肝臓及び骨格筋などの末梢組織で検出されている（Ｅｒｎｆｏｒｓ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ １： ９８３－９９６（１９９０））。ニューロトロフィン－４（ＮＴ－４１５とも呼ばれる）は、ニューロトロフィンファミリーの中で最も多様なメンバーである。ニューロトロフィン－６（ＮＴ－５）は硬骨魚に認められ、ｐ７５受容体に結合する。

【0516】

いくつかの態様では、ＴｒｋＢを標的とするニューロトロフィンは、例えば、ＮＴ－４もしくはＢＤＮＦ、またはその断片、バリアント、または誘導体を含む。いくつかの態様では、ＴｒｋＡを標的とするニューロトロフィンは、例えば、ＮＧＦ、またはその断片、バリアント、または誘導体を含む。いくつかの態様では、ＴｒｋＣを標的とするニューロトロフィンは、例えば、ＮＴ－３、またはその断片、バリアント、または誘導体を含む。

【0517】

いくつかの態様では、向性部分は、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）を含む。いくつかの態様では、ＢＤＮＦは、天然のＢＤＮＦのバリアント、例えば、２アミノ酸のカルボキシル短縮型バリアントである。いくつかの態様では、向性部分は、ＢＤＮＦの全長１１９アミノ酸配列を含む（ＨＳＤＰＡＲＲＧＥＬＳＶＣＤＳＩＳＥＷＶＴＡＡＤＫＫＴＡＶＤＭＳＧＧＴＶＴＶＬＥＫＶＰＶＳＫＧＱＬＫＱＹＦＹＥＴＫＣＮＰＭＧＹＴＫＥＧＣＲＧＩＤＫＲＨＷＮＳＱＣＲＴＴＱＳＹＶＲＡＬＴＭＤＳＫＫＲＩＧＷＲＦＩＲＩＤＴＳＣＶＣＴＬＴＩＫＲＧＲ；配列番号７１１）。いくつかの態様では、ＢＤＮＦの１アミノ酸カルボキシ短縮型バリアントを利用する（配列番号７１１のアミノ酸１～１１８）。

【0518】

いくつかの態様では、向性部分は、天然のＢＤＮＦのカルボキシ短縮型バリアント、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０超のアミノ酸がＢＤＮＦのカルボキシ末端に存在しないバリアントを含む。ＢＤＮＦバリアントには、完全な１１９アミノ酸のＢＤＮＦ、短縮されたカルボキシル末端を有する１１７もしくは１１８アミノ酸のバリアント、短縮されたアミノ末端を有するバリアント、またはタンパク質バリアントが依然として高い親和性でＴｒｋＢ受容体に結合する限りにおいて、最大約２０％、約３０、もしくは約４０％のアミノ酸組成の変化を有するバリアントが含まれる。

【0519】

いくつかの態様では、向性部分は、ＢＤＮＦの２アミノ酸カルボキシ短縮型バリアント（配列番号７１１のアミノ酸１～１１７）を含む。いくつかの態様では、向性部分は、ＢＤＮＦの３アミノ酸カルボキシ短縮型バリアント（配列番号７１１のアミノ酸１～１１６）を含む。いくつかの態様では、向性部分は、ＢＤＮＦの４アミノ酸カルボキシ短縮型バリアント（配列番号７１１のアミノ酸１～１１５）を含む。いくつかの態様では、向性部分は、ＢＤＮＦの５アミノ酸カルボキシ短縮型バリアント（配列番号７１１のアミノ酸１～１１４）を含む。いくつかの態様では、向性部分は、配列番号７１１の配列、またはその短縮バージョン、例えば、１アミノ酸もしくは２アミノ酸短縮型カルボキシル末端を有する１１７もしくは１１８アミノ酸のバリアント、または短縮型アミノ末端を有するバリアントと、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるＢＤＮＦを含む。例えば、米国特許第８，０５３，５６９Ｂ２号を参照されたい（その全体が参照により本明細書に援用される）。

【0520】

いくつかの態様では、向性部分は、神経成長因子（ＮＧＦ）を含む。いくつかの態様では、ＮＧＦは、天然のＮＧＦのバリアント、例えば、短縮型バリアントである。いくつかの態様では、向性部分は、タンパク質の２６ｋＤａのβサブユニットを含み、これは、生物学的に活性である７Ｓ ＮＧＦ複合体の唯一の成分である。いくつかの態様では、向性部分は、βＮＧＦの全長１２０アミノ酸配列（ＳＳＳＨＰＩＦＨＲＧＥＦＳＶＣＤＳＶＳＶＷＶＧＤＫＴＴＡＴＤＩＫＧＫＥＶＭＶＬＧＥＶＮＩＮＮＳＶＦＫＱＹＦＦＥＴＫＣＲＤＰＮＰＶＤＳＧＣＲＧＩＤＳＫＨＷＮＳＹＣＴＴＴＨＴＦＶＫＡＬＴＭＤＧＫＱＡＡＷＲＦＩＲＩＤＴＡＣＶＣＶＬＳＲＫＡＶＲＲＡ；配列番号７１２）を含む。いくつかの態様では、向性部分は、天然のＮＧＦのカルボキシ短縮型バリアント、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０超のアミノ酸がＮＧＦのカルボキシ末端に存在しないバリアントを含む。ＮＧＦバリアントには、完全な１２０アミノ酸のＮＧＦ、短縮されたカルボキシル末端を有する、より短いアミノ酸のバリアント、短縮されたアミノ末端を有するバリアント、または向性部分が依然として高い親和性でＴｒｋＢ受容体に結合する限りにおいて、最大約２０％、約３０％、もしくは約４０％のアミノ酸組成の変化を有するバリアントが含まれる。いくつかの態様では、向性部分は、配列番号７１２の配列、またはその短縮バージョンと、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるＮＧＦを含む。

【0521】

いくつかの態様では、向性部分は、ニューロトロフィン－３（ＮＴ－３）を含む。いくつかの態様では、ＮＴ－３は、天然のＮＴ－３のバリアント、例えば、短縮型バリアントである。いくつかの態様では、向性部分は、ＮＴ－３の全長１１９アミノ酸配列（ＹＡＥＨＫＳＨＲＧＥＹＳＶＣＤＳＥＳＬＷＶＴＤＫＳＳＡＩＤＩＲＧＨＱＶＴＶＬＧＥＩＫＴＧＮＳＰＶＫＱＹＦＹＥＴＲＣＫＥＡＲＰＶＫＮＧＣＲＧＩＤＤＫＨＷＮＳＱＣＫＴＳＱＴＹＶＲＡＬＴＳＥＮＮＫＬＶＧＷＲＷＩＲＩＤＴＳＣＶＣＡＬＳＲＫＩＧＲＴ；配列番号７１３）を含む。いくつかの態様では、向性部分は、天然のＮＴ－３のカルボキシ短縮型バリアント、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０超のアミノ酸がＮＴ－３のカルボキシ末端に存在しないバリアントを含む。ＮＴ－３バリアントには、完全な１１９アミノ酸のＮＴ－３、短縮されたカルボキシル末端を有する、より短いアミノ酸のバリアント、短縮されたアミノ末端を有するバリアント、または向性部分が依然として高い親和性でＴｒｋＣ受容体に結合する限りにおいて、最大約２０％、約３０％、もしくは約４０％のアミノ酸組成の変化を有するバリアントが含まれる。いくつかの態様では、向性部分は、配列番号７１３の配列、またはその短縮バージョンと、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるＮＴ－３を含む。

【0522】

いくつかの態様では、向性部分は、ニューロトロフィン－４（ＮＴ－４）を含む。いくつかの態様では、ＮＴ－４は、天然のＮＴ－４のバリアント、例えば、短縮型バリアントである。いくつかの態様では、向性部分は、ＮＴ－４の全長１３０アミノ酸配列（ＧＶＳＥＴＡＰＡＳＲＲＧＥＬＡＶＣＤＡＶＳＧＷＶＴＤＲＲＴＡＶＤＬＲＧＲＥＶＥＶＬＧＥＶＰＡＡＧＧＳＰＬＲＱＹＦＦＥＴＲＣＫＡＤＮＡＥＥＧＧＰＧＡＧＧＧＧＣＲＧＶＤＲＲＨＷＶＳＥＣＫＡＫＱＳＹＶＲＡＬＴＡＤＡＱＧＲＶＧＷＲＷＩＲＩＤＴＡＣＶＣＴＬＬＳＲＴＧＲＡ；配列番号７１４）を含む。いくつかの態様では、向性部分は、天然のＮＴ－４のカルボキシ短縮型バリアント、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０超のアミノ酸がＮＴ－４のカルボキシ末端に存在しないバリアントを含む。ＮＴ－４バリアントには、完全な１３０アミノ酸のＮＴ－４、短縮されたカルボキシル末端を有する、より短いアミノ酸のバリアント、短縮されたアミノ末端を有するバリアント、または向性部分が依然として高い親和性でＴｒｋＢ受容体に結合する限りにおいて、最大約２０％、約３０％、もしくは約４０％のアミノ酸組成の変化を有するバリアントが含まれる。いくつかの態様では、向性部分は、配列番号７１４の配列、またはその短縮バージョンと、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるＮＴ－４を含む。

【0523】

ＮＧＦ及びＮＧＦ関連組換え分子の構造／機能関係研究により、ＮＧＦ領域２５～３６の変異が、他のβヘアピンループ及び非ループ領域とともに、ＮＧＦ／ＮＧＦ受容体相互作用に有意に影響を及ぼすことが示された（Ｉｂａｎｅｚ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１０，２１０５－２１１０，（１９９１））。この領域に由来する小さなペプチドが、モック受容体への結合及び生物学的応答に影響を与えることにおいてＮＧＦを模倣することが示されている（ＬｅＳａｕｔｅｕｒ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，６５６４－６５６９，１９９５）。ＮＧＦのβループ領域に対応する環化ペプチドの二量体は、生存促進及びＮＧＦ阻害活性の両方を有するという点で部分的ＮＧＦアゴニストとして作用し、一方、単量体及び直鎖状ペプチドは不活性であったことが見出された（Ｌｏｎｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｒｅｓ．，４８，１－１７，１９９７）。したがって、いくつかの態様では、本開示の向性部分は、そのようなペプチドを含む。

【0524】

環状ペプチドも、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ３及びＮＴ－４／５のβループ領域を模倣するように設計及び合成されている。これらの環状ペプチドの特定の単量体、二量体、またはポリマーは、生理学的条件下でニューロトロフィン受容体に結合する三次元構造を有し得る。神経細胞表面受容体に結合し、内在化されるニューロトロフィンのこれらの構造類似体のすべては、本開示による化合物の結合剤Ｂとして機能して、複合体化した治療部分ＴＭを神経系に送達することができる。したがって、いくつかの態様では、本開示の向性部分は、そのような環状ペプチドまたはその組み合わせを含む。

【0525】

いくつかの態様では、神経細胞表面受容体に結合して内在化し得る、神経細胞表面受容体に対する抗体はまた、Ｔｒｋ受容体に結合する向性部分として機能し得る。例えば、モノクローナル抗体（ＭＡｂ）５Ｃ３は、ヒトｐ１４０ ＴｒｋＡ受容体のＮＧＦドッキング部位に特異的であり、ヒトＴｒｋＢ受容体との交差反応性はない。ＭＡｂ ５Ｃ３とそのＦａｂは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＮＧＦの効果を模倣し、ｉｎ ｖｉｖｏでヒトＴｒｋ－Ａ陽性腫瘍を画像化する（Ｋｒａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ． Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，３３，２０９０－２０９１，（１９９７））。Ｍａｂ ５Ｃ３可変領域の分子クローニング、組換え、変異誘発、及びモデリング研究により、その相補性決定領域（ＣＤＲ）の３つ以下がＴｒｋＡへの結合に関連していることが示された。組換えＣＤＲ及びＣＤＲ様合成ポリペプチドを用いたアッセイにより、それらがインタクトなＭａｂ５Ｃ３と同様のアゴニスト生物活性を有することが示された。ｐ７５受容体に対するモノクローナル抗体ＭＣ１９２も神経栄養効果があることが示されている。したがって、これらの抗体及びその機能的に同等の断片はまた、本開示の向性部分として機能し得る。

【0526】

いくつかの態様では、非天然アミノ酸または他の有機分子を組み込むことによって合成されるペプチド模倣物もまた、本開示の向性部分として機能し得る。

【0527】

他のニューロトロフィンは当技術分野で公知である。したがって、いくつかの態様では、標的部分は、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）－２及び他のＦＧＦ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、表皮成長因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）－ａ、ＴＧＦ－（３、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、インターロイキン－１受容体アンタゴニスト（ＩＬ－ｌｒａ）、繊毛神経栄養因子 （ＣＮＴＦ）、グリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ヘレグリン、ニューレグリン、アルテミン、ペルセフィン、インターロイキン、顆粒球－コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、顆粒球－マクロファージ－ＣＳＦ、ネトリン、カルジオトロフィン－１、ヘッジホッグ、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、ミッドシン、プレイオトロフィン、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、ネトリン、サポシン、セマホリン、及び幹細胞因子（ＳＣＦ）からなる群から選択されるニューロトロフィンを含む。

【0528】

いくつかの態様では、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）を感覚ニューロンに向かわせる向性部分は、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）ペプチドを含む。

【0529】

ＩＩＩ．Ｆ．３． 運動ニューロンを標的とする向性部分
いくつかの態様では、本明細書に開示する向性部分は、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）を運動ニューロンに向かわせることができる。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を本明細書に開示するモーターに向かわせる向性部分は、狂犬病ウイルス糖タンパク質（ＲＶＧ）ペプチド、標的軸索移入（ＴＡｘＩ）ペプチド、Ｐ７５Ｒペプチド、またはＴｅｔ－Ｃペプチドを含む。

【0530】

いくつかの態様では、向性部分は、狂犬病ウイルス糖タンパク質（ＲＶＧ）ペプチドを含む。例えば、米国特許出願公開２０１４－００２９４７２７を参照されたい（その全体が参照により本明細書に援用される）。いくつかの態様では、ＲＶＧペプチドは、ＲＶＧのアミノ酸残基１７３～２０２（ＹＴＩＷＭＰＥＮＰＲＰＧＴＰＣＤＩＦＴＮＳＲＧＫＲＡＳＮＧ；配列番号６０１）またはそのバリアント、断片、もしくは誘導体を含む。いくつかの態様では、向性部分は、配列番号６０１の断片である。そのような配列番号６０１の断片は、例えば、配列番号６０１のＮ末端及び／またはＣ末端から欠失させた１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸を有し得る。配列番号６０１に由来する機能的断片は、配列番号６０１からＮ末端及び／またはＣ末端アミノ酸を連続的に欠失させ、得られたペプチド断片の機能、例えば、アセチルコリン受容体への結合能力及び／または血液脳関門を介して伝達する能力を評価することによって同定することができる。いくつかの態様では、向性部分は、配列番号６０１、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６または１５アミノ酸の長さの断片を含む。いくつかの態様では、向性部分は、長さが１５ペプチド未満の、配列番号６０１の断片を含む。

【0531】

ＲＧＶペプチドの「バリアント」、例えば配列番号６０１は、構造及び機能において、分子全体、またはその断片のいずれかに実質的に類似している分子を指すことを意味する（すなわち、機能は、ＢＢＢを通過または移行する能力である）。ＲＶＧペプチドのバリアントは、配列番号６０１の参照アミノ酸とは異なる変異または修飾を含み得る。いくつかの態様では、配列番号６０１のバリアントは、本明細書に開示するような配列番号６０１の断片である。いくつかの態様では、ＲＶＧバリアントは、配列番号６０１の異なるアイソフォームであり得るか、または異なる異性体アミノ酸を含み得る。バリアントは、当技術分野で周知の方法を使用して単離または生成された、天然の、合成の、組換えの、または化学的に修飾されたポリヌクレオチドまたはポリペプチドであり得る。ＲＶＧバリアントは、保存的または非保存的なアミノ酸変化を含み得る。例えば、米国特許第９，７５７，４７０号を参照されたい（その全体が参照により本明細書に援用される）。

【0532】

いくつか態様では、向性部分は、標的軸索移入（ＴＡｘＩ）ペプチドを含む。いくつかの態様では、ＴＡｘＩペプチドは、配列ＳＡＣＱＳＱＳＱＭＲＣＧＧＧ（配列番号６０２）の環化ＴＡｘＩペプチドである。例えば、Ｓｅｌｌｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１３：２５１４－２５１９、及び米国特許第９，０５６，８９２号を参照のこと（その全体が参照により本明細書に援用される）。本明細書に記載のＴＡｘＩ輸送ペプチドは、任意の長さであってよい。一般的に、輸送ペプチドは長さが６～５０アミノ酸であり、より一般的には、長さが１０～２０アミノ酸である。いくつかの態様では、ＴＡｘＩ輸送ペプチドは、アミノ酸配列ＱＳＱＳＱＭＲ（配列番号６０３）、ＡＳＧＡＱＡＲ（配列番号６０４）、ＰＦ、またはＴＳＴＡＰＨＬＲＬＲＬＴＳＲ（配列番号６０５）を含む。任意選択で、ＴＡｘＩ輸送ペプチドは、送達構築物または担体への組み込みを容易にするための隣接配列、例えばリンカーをさらに含む。一態様では、ペプチドはシステインに隣接している。いくつかの態様では、ＴＡｘＩ輸送ペプチドは、核への送達を容易にするために選択された追加の配列をさらに含む。例えば、核への送達を促進するペプチドは核局在化シグナル（ＮＬＳ）である。通常、このシグナルは、ＰＰＫＫＲＫＶ（配列番号６０６）などの正に荷電したリジンまたはアルギニンのいくつかの短い配列からなる。一態様では、ＮＬＳは、アミノ酸配列ＰＫＫＲＫＶ（配列番号６０７）を有する。

【0533】

いくつかの態様では、本開示の向性部分は、以下の表に開示するペプチドＢＢＢシャトルを含む。例えば、Ｏｌｌｅｒ－Ｓａｌｖｉａ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．４５，４６９０－４７０７、及びＪａｆａｒｉ ｅｔ ａｌ．（２０１９）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ １６：５８３－６０５を参照されたい（その全体が参照により本明細書に援用される）。

【表7】

【0534】

ＩＩＩ．Ｇ． 抗食作用シグナル
体の免疫系による、投与されたＥＶ（例えばエキソソーム）のクリアランスは、投与されたＥＶ（例えばエキソソーム）治療の有効性を低下させ得る。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面を改変して、免疫系の細胞、例えば、マクロファージによるＥＶ（例えばエキソソーム）の取り込みを制限または遮断する。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面を改変して、マクロファージによるＥＶ（例えばエキソソーム）の取り込みを阻害する１つ以上の表面抗原を発現させる。いくつかの態様では、表面抗原を、ＥＶ（例えばエキソソーム）の外面と会合させる。

【0535】

本開示において有用な表面抗原には、細胞を「自己」細胞として標識する抗原が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、表面抗原は、抗食作用シグナルを含む。いくつかの態様では、抗食作用シグナルは、ＣＤ４７、ＣＤ２４、その断片、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。特定の態様では、抗食作用シグナルは、ＣＤ２４、例えば、ヒトＣＤ２４を含む。いくつかの態様では、抗食作用シグナルは、ＣＤ２４（例えば、ヒトＣＤ２４）の断片を含む。特定の態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、ＥＶ（例えばエキソソーム）の外面上でＣＤ４７またはその断片を発現させる。

【0536】

本明細書中で使用する場合、ＣＤ４７（白血球表面抗原ＣＤ４７及びインテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）とも呼ばれる）は、体内の多くの細胞に認められる膜貫通タンパク質である。ＣＤ４７は、ＣＤ４７を発現する特定の細胞が外来細胞ではないことを知らせるシグナルを免疫細胞、特に骨髄細胞に伝達することから、しばしば「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルと呼ばれる。ＣＤ４７はＳＩＲＰＡの受容体であり、未成熟樹状細胞の成熟を防ぎ、成熟樹状細胞によるサイトカイン産生を阻害する。ＣＤ４７とＳＩＲＰＧの相互作用は、細胞間接着を媒介し、スーパー抗原依存性のＴ細胞を介した増殖を促進し、Ｔ細胞の活性化を共刺激する。ＣＤ４７は、血小板上のＴＨＢＳ１の接着受容体として作用することによる細胞接着と、インテグリンの調節の両方に役割を果たすことも知られている。ＣＤ４７は、海馬の記憶形成とシナプス可塑性にも重要な役割を果たす（類似性による）。さらに、ＣＤ４７は、膜輸送及び／またはインテグリン依存性シグナル伝達において役割を果たし、赤血球の早期除去を防ぎ、ウイルス感染後に誘発される膜透過性の変化に関与し得る。

【0537】

いくつかの態様では、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上でヒトＣＤ４７を発現させる。ヒトＣＤ４７及び様々な既知のアイソフォームの標準的なアミノ酸配列は、表３に示されている（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ０８７２２；配列番号６２９～６３２）。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、配列番号６２９に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むポリペプチドを発現させる。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、配列番号６３０に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むポリペプチドを発現させる。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、配列番号６３１に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むポリペプチドを発現させる。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、配列番号６３２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むポリペプチドを発現させる。

【表8】

【0538】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上で全長ＣＤ４７を発現させる。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上にＣＤ４７の断片を発現させ、その場合、断片は、ＣＤ４７、例えば、ヒトＣＤ４７の細胞外ドメインを含む。マクロファージによる食作用を遮断及び／または阻害する能力を保持するＣＤ４７の任意の断片を、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）に使用することができる。いくつかの態様では、断片は、標準的なヒトＣＤ４７配列のアミノ酸１９～約１４１（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１４１）を含む。いくつかの態様では、断片は、標準的なヒトＣＤ４７配列のアミノ酸１９～約１３５（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１３５）を含む。いくつかの態様では、断片は、標準的なヒトＣＤ４７配列のアミノ酸１９～約１３０（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１３０）を含む。いくつかの態様では、断片は、標準的なヒトＣＤ４７配列のアミノ酸１９～約１２５（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１２５）を含む。

【0539】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、標準的なヒトＣＤ４７配列（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１４１）のアミノ酸１９～約１４１に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチドを発現させる。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、標準的なヒトＣＤ４７配列（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１３５）のアミノ酸１９～約１３５に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチドを発現させる。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、標準的なヒトＣＤ４７配列（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１３０）のアミノ酸１９～約１３０に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチドを発現させる。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、標準的なヒトＣＤ４７配列（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１２５）のアミノ酸１９～約１２５に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチドを発現させる。

【0540】

いくつかの態様では、ＣＤ４７またはその断片を改変して、ＣＤ４７及びそのリガンドＳＩＲＰαの親和性を増加させる。いくつかの態様では、ＣＤ４７の断片は、ベルクロ（登録商標）－ＣＤ４７を含む（例えば、その全体が参照により本明細書に援用されるＨｏ ｅｔ ａｌ．，ＪＢＣ ２９０：１２６５０－６３（２０１５）を参照されたい）。いくつかの態様では、ベルクロ（登録商標）－ＣＤ４７は、野生型ヒトＣＤ４７配列（配列番号６２９）と比較してＣ１５Ｓ置換を含む。

【0541】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に、未修飾のＥＶ（例えばエキソソーム）よりも高いレベルで発現するＣＤ４７またはその断片を含む。いくつかの態様では、ＣＤ４７またはその断片を、足場タンパク質と融合させる。本明細書に開示する任意の足場タンパク質を使用して、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上にＣＤ４７またはその断片を発現させることができる。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、ＳｃａｆｆｏｌｄＸタンパク質のＮ末端に融合したＣＤ４７の断片を発現させる。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を改変して、ＰＴＧＦＲＮのＮ末端に融合したＣＤ４７の断片を発現させる。

【0542】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に、少なくとも約２０分子、少なくとも約３０分子、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約７５、少なくとも約１００、少なくとも約１２５、少なくとも約１５０、少なくとも約２００、少なくとも約２５０、少なくとも約３００、少なくとも約３５０、少なくとも約４００、少なくとも約４５０、少なくとも約５００、少なくとも約７５０、または少なくとも約１０００分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に、少なくとも約２０分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に、少なくとも約３０分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に、少なくとも約４０分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に、少なくとも約５０分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に、少なくとも約１００分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に、少なくとも約２００分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に、少なくとも約３００分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に、少なくとも約４００分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に、少なくとも約５００分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に、少なくとも約１０００分子のＣＤ４７を含む。

【0543】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に、少なくとも約２０分子、少なくとも約３０分子、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約７５、少なくとも約１００、少なくとも約１２５、少なくとも約１５０、少なくとも約２００、少なくとも約２５０、少なくとも約３００、少なくとも約３５０、少なくとも約４００、少なくとも約４５０、少なくとも約５００、少なくとも約７５０、または少なくとも約１０００分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に少なくとも約２０分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に少なくとも約３０分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に少なくとも約４０分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に少なくとも約５０分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に少なくとも約１００分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に少なくとも約２００分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に少なくとも約３００分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に少なくとも約４００分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に少なくとも約５００分子のＣＤ４７を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上に少なくとも約１０００分子のＣＤ４７を含む。

【0544】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上でＣＤ４７またはその断片を発現させることにより、ＣＤ４７またはその断片を発現しないＥＶ（例えばエキソソーム）と比較して、骨髄細胞によるＥＶ（例えばエキソソーム）の取り込みを低下させる。いくつかの態様では、ＣＤ４７またはその断片を発現するＥＶ（例えばエキソソーム）の、骨髄細胞による取り込みは、ＣＤ４７またはその断片を発現しないＥＶ（例えばエキソソーム）の、骨髄細胞による取り込みと比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％低下する。

【0545】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上でＣＤ４７またはその断片を発現させることにより、ＣＤ４７またはその断片を発現しないＥＶ（例えばエキソソーム）と比較して、骨髄細胞によるＥＶ（例えばエキソソーム）の取り込みを低下させる。いくつかの態様では、ＣＤ４７またはその断片を発現するＥＶ（例えばエキソソーム）の、骨髄細胞による取り込みは、ＣＤ４７またはその断片を発現しないＥＶ（例えばエキソソーム）の、骨髄細胞による取り込みに比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％低下する。

【0546】

いくつかの態様では、ＣＤ４７またはその断片を発現するＥＶ（例えばエキソソーム）のｉｎ ｖｉｖｏ半減期は、ＣＤ４７またはその断片を発現しないＥＶ（例えばエキソソーム）のｉｎ ｖｉｖｏ半減期に比べて増加する。いくつかの態様では、ＣＤ４７またはその断片を発現するＥＶ（例えばエキソソーム）のｉｎ ｖｉｖｏ半減期は、ＣＤ４７またはその断片を発現しないＥＶ（例えばエキソソーム）のｉｎ ｖｉｖｏ半減期に比べて、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍増加する。

【0547】

いくつかの態様では、循環、例えば、血漿中のＣＤ４７またはその断片を発現するＥＶ（例えばエキソソーム）は、循環、例えば、血漿中でＣＤ４７またはその断片を発現しないＥＶ（例えばエキソソーム）に比べて増加する。いくつかの態様では、ＣＤ４７またはその断片を発現するＥＶ（例えばエキソソーム）の循環、例えば、血漿中の保持は、ＣＤ４７またはその断片を発現しないＥＶ（例えばエキソソーム）の循環、例えば、血漿中の保持に比べて、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍増加する。

【0548】

いくつかの態様では、ＣＤ４７またはその断片を発現するＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＣＤ４７または断片を発現しないエキソソームと比較した場合、変化した生体内分布を有する。いくつかの態様では、変化した生体内分布は、内皮細胞、Ｔ細胞への取り込みの増加、または骨格筋、心筋、横隔膜、腎臓、骨髄、中枢神経系、肺、脳脊髄液（ＣＳＦ）、またはそれらの任意の組み合わせを含むがこれらに限定されない様々な組織における蓄積の増加をもたらす。

【0549】

ＩＶ． 改変エキソソームの生産のためのプロデューサー細胞
ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで増殖させた細胞または対象の体液から産生することができる。ＥＶ（例えばエキソソーム）をｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物から産生する場合、様々なプロデューサー細胞、例えば、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、及びＭＳＣを使用することができる。特定の態様では、プロデューサー細胞は、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、マスト細胞、好中球、クッパー－ブロウィッツ細胞、これらの細胞のいずれかに由来する細胞、またはそれらの任意の組み合わせではない。

【0550】

ヒト胎児腎臓２９３細胞は、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ－２９３、２９３細胞、またはより正確にはＨＥＫ細胞とも呼ばれ、組織培養で増殖させたヒト胎児腎臓細胞に由来する特定の細胞株である。ＨＥＫ２９３細胞は、オランダのライデンにあるＡｌｅｘ ｖａｎ ｄｅｒ Ｅｂの研究室で、正常ヒト胎児腎臓細胞の培養物にせん断アデノウイルス５ＤＮＡをトランスフェクトすることによって１９７３年に生成された。細胞を培養し、アデノウイルスでトランスフェクトした。その後の分析では、ウイルスゲノムの左側アームから約４．５キロベースを挿入することで形質転換がもたらされ、それにより、ヒト１９番染色体に組み込まれることが示された。ＨＥＫ２９３及び５つの誘導細胞株のゲノムとトランスクリプトームの包括的な研究では、ＨＥＫ２９３トランスクリプトームをヒトの腎臓、副腎、下垂体、及び中枢神経組織のトランスクリプトームと比較した。ＨＥＫ２９３パターンは、多くのニューロン特性を有する副腎細胞のパターンに最もよく似ていた。ＨＥＫ２９３細胞は複雑な核型を有し、各染色体の２つ以上のコピーを示し、様式上の染色体数は６４である。それらは、一倍体のヒト配偶子の染色体数の３倍未満を含む低三倍体として説明される。染色体異常には、Ｘ染色体の合計３つのコピーと、１７番染色体と２２番染色体の４つのコピーが含まれる。ＥＶの生産に有用なＨＥＫ２９３細胞のバリアントには、ＨＥＫ２９３Ｆ、ＨＥＫ２９３ＦＴ、及びＨＥＫ２９３Ｔが含まれるが、これらに限定されない。

【0551】

プロデューサー細胞は、本明細書に記載のＥＶを産生するためにＡＳＯをコードする外来性配列を含むように遺伝子改変することができる。遺伝子改変されたプロデューサー細胞は、一過性または安定的な形質転換によって外来性配列を含み得る。外来性配列は、プラスミドとして形質転換することができる。いくつかの態様では、外来性配列はベクターである。外来性配列は、標的部位またはランダム部位で、プロデューサー細胞のゲノム配列に安定的に組み込むことができる。いくつかの態様では、安定した細胞株を、内腔改変エキソソームの産生のために生成する。

【0552】

外来性配列は、エキソソームタンパク質をコードする内在性配列の上流（５’末端）または下流（３’末端）内にあるプロデューサー細胞のゲノム配列に挿入することができる。当技術分野で公知の様々な方法を、外来性配列をプロデューサー細胞に導入するために使用することができる。例えば、様々な遺伝子編集方法（例えば、相同組換え、トランスポゾン媒介系、ｌｏｘＰ－Ｃｒｅ系、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９またはＴＡＬＥＮを使用する方法）を使用して改変する細胞は、本開示の範囲内にある。

【0553】

外来性配列は、本明細書に開示する足場部分またはその断片またはバリアントをコードする配列を含み得る。足場部分をコードする配列の追加のコピーを導入して、本明細書に記載のエキソソーム（例えば、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面または内腔表面上に、より高密度の足場部分を有する）を生成することができる。足場部分の改変または断片をコードする外来性配列を導入して、足場部分の改変または断片を含む内腔改変型及び／または表面改変型のエキソソームを生成することができる。

【0554】

いくつかの態様では、プロデューサー細胞を、ＡＳＯに連結された足場部分をコードする１つ以上のベクターで改変、例えば、トランスフェクトすることができる。

【0555】

いくつかの態様では、本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）（例えば、表面改変型及び／または内腔改変型エキソソーム）を、本明細書に開示する全長の成熟足場部分またはＡＳＯに連結された足場部分をコードする配列で形質転換した細胞から産生することができる。本明細書に記載の１つ以上のエキソソームタンパク質のいずれも、プラスミド、ゲノムに挿入された外来性配列、または合成メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）などの他の外来性核酸から発現させることができる。

【0556】

Ｖ．医薬組成物
本明細書において、所望の程度の純度を有する本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）、及び薬学的に許容される担体または賦形剤を、対象への投与に適した形態で含む医薬組成物を提供する。薬学的に許容される賦形剤または担体は、部分的には、投与する特定の化合物によって、及び組成物を投与するために使用する特定の方法によって決定することができる。したがって、複数の細胞外小胞を含む医薬組成物の多種多様な好適な製剤が存在する。（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．２１ｓｔ ｅｄ．（２００５）を参照されたい）。医薬組成物は一般的に滅菌して製剤化され、米国食品医薬品局のすべての適正製造基準（ＧＭＰ）規制に完全に準拠する。

【0557】

いくつかの態様では、医薬組成物は、本明細書に記載の１つ以上の治療薬及びエキソソームを含む。特定の態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、薬学的に許容される担体中で１つ以上の追加の治療薬と共投与する。いくつかの態様では、本開示のためのＡＳＯと１つ以上の追加の治療薬を、同じＥＶで投与することができる。他の態様では、本開示のためのＡＳＯと１つ以上の追加の治療薬を、異なるＥＶで投与する。例えば、本開示は、ＡＳＯを含むＥＶ及び追加の治療薬を含むＥＶを含む医薬組成物を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を含む医薬組成物を、追加の治療薬（複数可）の投与の前に投与する。他の態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を含む医薬組成物を、追加の治療薬（複数可）の投与の後に投与する。さらなる態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を含む医薬組成物を、追加の治療薬（複数可）と同時に投与する。

【0558】

許容される担体、賦形剤、または安定剤は、レシピエント（例えば、動物またはヒト）に対し、用いる用量及び濃度で非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；及び／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。

【0559】

担体または希釈剤の例として、水、生理食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。薬学的活性物質のためのそのような媒体及び化合物の使用は、当技術分野で公知である。任意の従来の培地または化合物が本明細書に記載の細胞外小胞と不適合でない限り、組成物におけるその使用が企図される。補助的な治療薬もまた、組成物中に組み込むことができる。一般的には、医薬組成物を、その意図する投与経路に適合するように製剤化する。ＥＶ（例えばエキソソーム）を、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、皮内、経皮、直腸内、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、筋肉内経路または吸入剤によって投与することができる。特定の態様では、エキソソームを含む医薬組成物を、例えば、注射によって静脈内投与する。ＥＶ（例えばエキソソーム）を、任意選択で、ＥＶ（例えばエキソソーム）が意図される疾患、障害または病態の治療に少なくとも部分的に有効である他の治療薬と組み合わせて投与することができる。

【0560】

溶液または懸濁液は、以下の成分を含み得る：水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの滅菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗微生物化合物；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩などの緩衝液、及び塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧の調整のための化合物。塩酸や水酸化ナトリウムなどの酸または塩基でｐＨを調整することができる。製剤は、アンプル、使い捨てシリンジ、またはガラス製もしくはプラスチック製の複数回投与バイアルに入れることができる。

【0561】

注射可能な使用に適した医薬組成物として、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液及び滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与の場合、好適な担体として、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。組成物は、一般的に、容易に注射可能である程度まで、無菌かつ流動性である。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの好適な混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合には必要とされる粒径を維持することによって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌化合物及び抗真菌化合物、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成され得る。所望される場合、等張化合物、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、及び塩化ナトリウムを、組成物に添加することができる。注射可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる化合物、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含めることによってもたらされ得る。

【0562】

滅菌注射溶液は、所望により、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、有効量で、かつ本明細書中に列挙されるか、または当技術分野で公知の１つ以上の成分を含む適切な溶媒中に、組み込むことによって調製することができる。一般的に、分散液は、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、塩基性の分散媒と任意の所望の他の成分とを含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。滅菌注射溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法は、真空乾燥及び凍結乾燥であり、活性成分と任意の追加の所望の成分を事前に滅菌濾過した溶液から、粉末が得られる。ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の持続性または拍動性放出を可能にするような様式で製剤化され得るデポー注射またはインプラント製剤の形態で投与することができる。

【0563】

エキソソームを含む組成物の全身投与は、経粘膜手段によることもできる。経粘膜投与のために、浸透すべき障壁に適切な浸透剤を製剤に使用する。そのような浸透剤は、一般的に当技術分野で公知であり、例えば、経粘膜投与のための、界面活性剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、例えば、点鼻薬の使用を通じて達成され得る。

【0564】

特定の態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を含む医薬組成物を、医薬組成物の恩恵を受けるであろう対象に静脈内投与する。特定の他の態様では、組成物を、リンパ系に、例えば、リンパ内注射によってまたは結節内注射によって（例えば、Ｓｅｎｔｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １０５（４６）：１７９０８（２００８）を参照されたい）、または筋肉内注射によって、皮下注射によって、腫瘍内注射によって、胸腺もしくは肝臓への直接注射による皮下投与によって投与する。

【0565】

特定の態様では、エキソソームを含む医薬組成物を、液体懸濁液として投与する。特定の態様では、医薬組成物を、投与に続いてデポーを形成できる製剤として投与する。特定の好ましい態様では、デポーは、ＥＶ（例えばエキソソーム）を循環中に徐放するか、またはデポー形態のままである。

【0566】

通常、薬学的に許容される組成物は、汚染物質を含まないように高度に精製され、生体適合性があり、毒性がなく、対象への投与に適している。水が担体の成分である場合、水は高度に精製され、エンドトキシンなどの汚染物質を含まないように処理される。

【0567】

薬学的に許容される担体は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシ安息香酸塩、プロピルヒドロキシ安息香酸塩、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び／または鉱油であり得るが、これらに限定されない。医薬組成物は、潤滑剤、湿潤剤、甘味料、風味増強剤、乳化剤、懸濁剤、及び／または防腐剤をさらに含み得る。

【0568】

本明細書に記載の医薬組成物は、本明細書に記載のＥＶ（例えばエキソソーム）、及び任意選択で、薬学的に活性な薬剤または治療薬を含む。治療薬は、生物学的薬剤、小分子薬剤、または核酸薬剤であり得る。いくつかの態様では、追加の治療薬は、追加のＳＴＡＴ３アンタゴニストである。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３アンタゴニストは、本明細書に開示する任意のＳＴＡＴ３アンタゴニストである。いくつかの態様では、追加のＳＴＡＴ３アンタゴニストは、抗ＳＴＡＴ３抗体である。いくつかの態様では、追加のＳＴＡＴ３アンタゴニストは、小分子である。特定の態様では、追加の治療薬は、抗がん療法である。そのような抗がん療法の非限定的な例として、外科的療法、化学療法、放射線療法、凍結療法、ホルモン療法、免疫療法、またはそれらの組み合わせが挙げられる。

【0569】

いくつかの態様では、追加のＳＴＡＴ３アンタゴニストは、ＡＳＯを含む。いくつかの態様では、追加のＳＴＡＴ３アンタゴニストは、本明細書に記載の任意のＡＳＯを含む。

【0570】

本明細書に記載のＥＶ（例えばエキソソーム）を含む医薬組成物を含む剤形を提供する。いくつかの態様では、剤形は、静脈内注射用の液体懸濁液として製剤化される。いくつかの態様では、剤形は、腫瘍内注射用の液体懸濁液として製剤化される。

【0571】

特定の態様では、エキソソームの製剤を、残留複製能のある（ｒｅｓｉｄｕａｌ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ－ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ）核酸を損傷するために、放射線、例えば、Ｘ線、γ線、β粒子、α粒子、中性子、陽子、元素核、紫外線に曝露させる。

【0572】

特定の態様では、エキソソームの製剤を、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、または１００ｋＧｙ超の照射線量を使用するγ照射に曝露させる。

【0573】

特定の態様では、エキソソームの製剤を、０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００、または１００００ｍＳｖ超の照射線量を使用するＸ線照射に曝露させる。

【0574】

ＶＩ． キット
本明細書に記載の１つ以上のエキソソームを含むキットも本明細書に提供する。いくつかの態様では、本明細書において、本明細書に記載の医薬組成物の１つ以上の成分、例えば、本明細書中に提供する１つ以上のエキソソームで満たされた１つ以上の容器と、任意選択で使用説明書を含む医薬パックまたはキットを提供する。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載の医薬組成物、及び任意の予防薬または治療薬、例えば、本明細書に記載の予防薬または治療薬を含む。いくつかの態様では、キットは、本明細書に開示する任意の方法に従ってＥＶを投与するための説明書をさらに含む。いくつかの態様では、キットは、造血に関連する疾患または病態の治療に使用するためのキットである。

【0575】

ＶＩＩ． ＥＶの製造方法
いくつかの態様では、本開示はまた、本明細書に記載のＥＶの製造方法に関する。いくつかの態様では、方法は：プロデューサー細胞からＥＶ（例えばエキソソーム）を取得し（プロデューサー細胞は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の１つ以上の成分（例えば、ＡＳＯ）を含む）；そして、任意選択で、得られたＥＶ（例えばエキソソーム）を単離することを含む。いくつかの態様では、方法は：本明細書に開示するＥＶの１つ以上の成分（例えば、ＡＳＯ）を導入することによってプロデューサー細胞を改変し；改変したプロデューサー細胞から、ＥＶ（例えばエキソソーム）を取得し；そして、任意選択で、取得したＥＶ（例えばエキソソーム）を単離することを含む。さらなる態様では、方法は：プロデューサー細胞からＥＶを取得し；取得したＥＶを単離し；単離したＥＶを改変することを含む。特定の態様では、方法は、単離したＥＶを医薬組成物に製剤化することをさらに含む。

【0576】

ＶＩＩ．Ａ． プロデューサー細胞を改変する方法
上記のように、いくつかの態様では、ＥＶの産生方法は、１つ以上の部分（例えば、ＡＳＯ）で産生細胞を改変することを含む。特定の態様では、１つ以上の部分は、ＡＳＯを含む。いくつかの態様では、１つ以上の部分は、本明細書に開示する足場部分（例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸまたはＳｃａｆｆｏｌｄＹ）をさらに含む。

【0577】

いくつかの態様では、プロデューサー細胞は、哺乳類細胞株、植物細胞株、昆虫細胞株、真菌細胞株、または原核細胞株であり得る。特定の態様では、プロデューサー細胞は、哺乳類細胞株である。哺乳類細胞株の非限定的な例として：ヒト胎児腎（ＨＥＫ）細胞株、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、ＨＴ－１０８０細胞株、ＨｅＬａ細胞株、ＰＥＲＣ－６細胞株、ＣＥＶＥＣ細胞株、線維芽細胞株、羊膜細胞株、上皮細胞株、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）細胞株、及びそれらの組み合わせが挙げられる。特定の態様では、哺乳類細胞株は、ＨＥＫ－２９３細胞、ＢＪヒト包皮繊維芽細胞、ｆＨＤＦ線維芽細胞、ＡＧＥ．ＨＮ（登録商標）神経前駆細胞、ＣＡＰ（登録商標）羊膜細胞、脂肪性間葉系幹細胞、ＲＰＴＥＣ／ＴＥＲＴ１細胞、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、プロデューサー細胞は初代細胞である。特定の態様では、初代細胞は、初代哺乳類細胞、初代植物細胞、初代昆虫細胞、初代真菌細胞、または初代原核細胞であり得る。

【0578】

いくつかの態様では、プロデューサー細胞は、抗原提示細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、マクロファージ、Ｔヘルパー細胞、または制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）などの免疫細胞ではない。他の態様では、プロデューサー細胞は、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、マスト細胞、好中球、クッパー－ブロウィッツ細胞、またはそのような細胞のいずれかに由来する細胞）ではない。

【0579】

いくつかの態様では、１つ以上の部分は、導入遺伝子またはｍＲＮＡであり得、トランスフェクション、ウイルス形質導入、エレクトロポレーション、押し出し、超音波処理、細胞融合、または当技術分野で公知の他の方法によってプロデューサー細胞に導入することができる。

【0580】

いくつかの態様では、１つ以上の部分を、トランスフェクションによってプロデューサー細胞に導入する。いくつかの態様では、１つ以上の部分を、カチオン性脂質及びポリマーなどの合成高分子を使用して好適なプロデューサー細胞中に導入することができる（Ｐａｐａｐｅｔｒｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１１８－Ｓ１３０（２００５））。いくつかの態様では、カチオン性脂質は、電荷相互作用を通じて１つ以上の部分と複合体を形成する。これらの態様のいくつかでは、正に荷電した複合体は、負に荷電した細胞表面に結合し、エンドサイトーシスによって細胞に取り込まれる。いくつかの他の態様では、カチオン性ポリマーを用いて、プロデューサー細胞をトランスフェクトすることができる。これらの態様のいくつかでは、カチオン性ポリマーは、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）である。特定の態様では、リン酸カルシウム、シクロデキストリン、またはポリブレンなどの化学物質を使用して、１つ以上の部分をプロデューサー細胞に導入することができる。１つ以上の部分はまた、粒子媒介性トランスフェクション、「遺伝子銃」、微粒子銃（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）、または粒子衝撃技術などの物理的方法を使用してプロデューサー細胞中に導入することができる（Ｐａｐａｐｅｔｒｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１１８－Ｓ１３０（２００５））。例えば、βガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、ルシフェラーゼ、または緑色蛍光タンパク質などのレポーター遺伝子を使用して、プロデューサー細胞のトランスフェクション効率を評価することができる。

【0581】

特定の態様では、１つ以上の部分を、ウイルス形質導入によってプロデューサー細胞に導入する。モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、レンチウイルス、及びスプマウイルスを含む多くのウイルスを、遺伝子導入ビヒクルとして使用することができる。ウイルス媒介性遺伝子導入ビヒクルは、レトロウイルス系ベクターと同様に、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス及びヘルペスウイルスなどのＤＮＡウイルスに基づくベクターを含む。

【0582】

特定の態様では、１つ以上の部分を、エレクトロポレーションによってプロデューサー細胞に導入する。エレクトロポレーションは、細胞膜に一時的な孔を作成し、細胞内に様々な分子を導入することを可能にする。いくつかの態様では、ＤＮＡ及びＲＮＡならびにポリペプチド及び非ポリペプチド治療薬を、エレクトロポレーションによってプロデューサー細胞内に導入することができる。

【0583】

特定の態様では、１つ以上の部分を、マイクロインジェクションによってプロデューサー細胞に導入する。いくつかの態様では、ガラス製マイクロピペットを使用して、顕微鏡レベルで、１つ以上の部分をプロデューサー細胞内に注射することができる。

【0584】

特定の態様では、１つ以上の部分を、押し出しによってプロデューサー細胞に導入する。

【0585】

特定の態様では、１つ以上の部分を、超音波処理によってプロデューサー細胞に導入する。いくつかの態様では、プロデューサー細胞を、高強度音波に曝露し、細胞膜の一時的な破壊を引き起こして、１つ以上の部分を充填することができる。

【0586】

特定の態様では、１つ以上の部分を、細胞融合によってプロデューサー細胞に導入する。いくつかの態様では、１つ以上の部分を、電気的細胞融合によって導入する。他の態様では、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を使用して、プロデューサー細胞を融合させる。さらなる態様では、センダイウイルスを使用して、プロデューサー細胞を融合させる。

【0587】

いくつかの態様では、１つ以上の部分を、低張溶解によってプロデューサー細胞に導入する。そのような態様では、プロデューサー細胞を、低イオン強度緩衝液に曝露し、それらを破裂させて１つ以上の部分を充填することができる。他の態様では、低張溶液に対する制御された透析を使用して、プロデューサー細胞を膨潤させ、プロデューサー細胞膜に孔を作成することができる。プロデューサー細胞を、その後、膜のリシーリング（ｒｅｓｅａｌｉｎｇ）を可能にする条件に曝露する。

【0588】

いくつかの態様では、１つ以上の部分を、界面活性剤処理によってプロデューサー細胞に導入する。特定の態様では、１つ以上の部分の充填を可能にする孔を作成することによってプロデューサー細胞膜を一時的に損わせる穏やかな界面活性剤で、プロデューサー細胞を処理する。プロデューサー細胞に充填した後、界面活性剤を洗い流し、それによって膜をリシールする。

【0589】

いくつかの態様では、１つ以上の部分を、受容体媒介性エンドサイトーシスによってプロデューサー細胞に導入する。特定の態様では、プロデューサー細胞は、１つ以上の部分の結合時に受容体及び関連する部分の内部移行を誘導する表面受容体を有する。

【0590】

いくつかの態様では、１つ以上の部分を、濾過によってプロデューサー細胞に導入する。特定の態様では、プロデューサー細胞及び１つ以上の部分に、プロデューサー細胞より小さい孔径のフィルターを強制的に通過させ、プロデューサー細胞膜の一時的な破壊を引き起こし、１つ以上の部分がプロデューサー細胞に入ることを可能にする。

【0591】

いくつかの態様では、プロデューサー細胞を、いくつかの凍結融解サイクルに供し、細胞膜破壊を生じさせ、１つ以上の部分の充填を可能にする。

【0592】

ＶＩＩ．Ｂ． ＥＶ（例えばエキソソーム）の改変方法
いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）の生成方法は、１つ以上の部分をＥＶに直接導入することによって、単離されたＥＶを改変することを含む。特定の態様では、１つ以上の部分は、ＡＳＯを含む。いくつかの態様では、１つ以上の部分は、本明細書に開示する足場部分（例えば、ＳｃａｆｆｏｌｄＸまたはＳｃａｆｆｏｌｄＹ）を含む。

【0593】

特定の態様では、１つ以上の部分を、トランスフェクションによってプロデューサー細胞に導入する。いくつかの態様では、１つ以上の部分を、カチオン性脂質及びポリマーなどの合成高分子を使用してＥＶ中に導入することができる（Ｐａｐａｐｅｔｒｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１１８－Ｓ１３０（２００５））。特定の態様では、リン酸カルシウム、シクロデキストリン、またはポリブレンなどの化学物質を使用して、１つ以上の部分をＥＶに導入することができる。

【0594】

特定の態様では、１つ以上の部分を、エレクトロポレーションによってＥＶに導入する。いくつかの態様では、ＥＶ膜に一時的な孔を生じさせ、１つ以上の部分の充填を可能にする電界に、ＥＶを曝露する。

【0595】

特定の態様では、１つ以上の部分を、マイクロインジェクションによってＥＶに導入する。いくつかの態様では、ガラス製マイクロピペットを使用して、顕微鏡レベルで、１つ以上の部分を直接、ＥＶ内に注射することができる。

【0596】

特定の態様では、１つ以上の部分を、押し出しによってＥＶに導入する。

【0597】

特定の態様では、１つ以上の部分を、超音波処理によってＥＶに導入する。いくつかの態様では、ＥＶを、高強度音波に曝露し、ＥＶ膜の一時的な破壊を引き起こして、１つ以上の部分を充填することができる。

【0598】

いくつかの態様では、１つ以上の部分を、ＥＶの表面と複合体化することができる。複合体化は、当技術分野で公知の方法により、化学的または酵素的に達成することができる。

【0599】

いくつかの態様では、ＥＶは、化学的に複合体化された１つ以上の部分を含む。化学的複合体化は、リンカーを使用するか使用しないかに関わらず、１つ以上の部分を別の分子に共有結合させることによって達成することができる。そのような複合体の形成は、当技術分野の範囲内であり、複合体化を達成するための様々な技法が知られており、特定の技法の選択は複合体化させる物質によって導かれる。特定の態様では、ポリペプチドをＥＶと複合体化させる。いくつかの態様では、脂質、炭水化物、核酸、及び小分子のような非ポリペプチドを、ＥＶと複合体化させる。

【0600】

いくつかの態様では、１つ以上の部分を、低張溶解によってＥＶに導入する。そのような態様では、ＥＶを、低イオン強度緩衝液に曝露し、それらを破裂させて１つ以上の部分を充填することができる。他の態様では、低張溶液に対する制御された透析を使用して、ＥＶを膨潤させ、ＥＶ膜に孔を作成することができる。ＥＶを、その後、膜のリシーリング（ｒｅｓｅａｌｉｎｇ）を可能にする条件に曝露する。

【0601】

いくつかの態様では、１つ以上の部分を、界面活性剤処理によってＥＶに導入する。特定の態様では、１つ以上の部分の充填を可能にする孔を作成することによってＥＶ膜を一時的に損わせる穏やかな界面活性剤で、細胞外小胞を処理する。ＥＶに充填した後、界面活性剤を洗い流し、それによって膜をリシールする。

【0602】

いくつかの態様では、１つ以上の部分を、受容体媒介性エンドサイトーシスによってＥＶに導入する。特定の態様では、ＥＶは、１つ以上の部分の結合時に受容体及び関連する部分の内部移行を誘導する表面受容体を有する。

【0603】

いくつかの態様では、１つ以上の部分を、機械焚きによってＥＶに導入する。特定の態様では、細胞外小胞は、金マイクロキャリアなどの重い粒子または荷電粒子に結合させた１つ以上の部分を用いて衝撃され得る。これらの態様のいくつかでは、粒子は、粒子がＥＶ膜を横断するように機械的または電気的に加速され得る。

【0604】

いくつかの態様では、細胞外小胞を、いくつかの凍結融解サイクルに供し、ＥＶ膜破壊を生じさせ、１つ以上の部分の充填を可能にする。

【0605】

ＶＩＩ．Ｃ． ＥＶ（例えばエキソソーム）の単離方法
いくつかの態様では、本明細書に開示するＥＶの生成方法は、プロデューサー細胞からＥＶを単離することを含む。特定の態様では、ＥＶは、プロデューサー細胞から細胞培地中に放出される。ＥＶの単離のすべての既知の様式は、本明細書での使用に適すると思われることが企図される。例えば、電荷（例えば、電気泳動分離）、サイズ（例えば、濾過、分子ふるいなど）、密度（例えば、通常の遠心分離または勾配遠心分離）、Ｓｖｅｄｂｅｒｇ定数（例えば、外力を伴うまたは伴わない沈降など）に基づく分離を含め、ＥＶの物理的特性を用いて、ＥＶを培地または他の供給源材料から分離することができる。代替的にまたは追加的に、単離は、１つ以上の生物学的特性に基づくことができ、表面マーカーを使用し得る方法（例えば、沈殿、固相への可逆的結合、ＦＡＣＳ分離、特異的リガンド結合、非特異的リガンド結合、アフィニティ精製など）を含む。

【0606】

単離及び濃縮は、一般的に連続遠心分離を含む、一般的かつ非選択的様式で行うことができる。あるいは、単離及び濃縮は、ＥＶまたはプロデューサー細胞特異的表面マーカーを使用するような、より特異的かつ選択的な様式で行うことができる。例えば、特異的表面マーカーは、免疫沈降、ＦＡＣＳソーティング、アフィニティ精製、及びビーズ結合リガンドを用いた磁気分離において使用され得る。

【0607】

いくつかの態様では、サイズ排除クロマトグラフィーを利用して、ＥＶを単離することができる。サイズ排除クロマトグラフィー技法は、当技術分野で公知である。例示的で非限定的な技法を、本明細書に提供する。いくつかの態様では、ボイド容積画分は単離され、目的のＥＶを含む。さらに、いくつかの態様では、当技術分野で一般に公知のように、（１つ以上のクロマトグラフィー画分の）遠心分離技法によるクロマトグラフィー分離後にＥＶをさらに単離することができる。いくつかの態様では、例えば、密度勾配遠心分離を利用して、細胞外小胞をさらに単離することができる。特定の態様では、プロデューサー細胞由来のＥＶを他の起源のＥＶからさらに分離することが望ましい場合がある。例えば、プロデューサー細胞に特異的な抗原抗体を使用する免疫吸着剤捕捉により、プロデューサー細胞由来のＥＶを非プロデューサー細胞由来のＥＶから分離することができる。

【0608】

いくつかの態様では、ＥＶの単離は、示差遠心分離、サイズに基づく膜濾過、免疫沈降、ＦＡＣＳソーティング、及び磁気分離を含むがこれらに限定されない方法の組み合わせを含み得る。

【0609】

ＶＩＩ．Ｄ． 使用方法
本開示はまた、本明細書中に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）（例えば、本開示のＡＳＯを含む）を、対象に投与することを含む、疾患または障害を予防及び／または治療することを必要とする対象における疾患または障害を予防及び／または治療する方法を提供する。本開示はさらに、細胞（例えば、腫瘍細胞）におけるＳＴＡＴ３タンパク質発現を低減及び／または阻害する方法（ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏでの）を提供する。特定の態様では、ＳＴＡＴ３タンパク質発現を低減及び／または阻害するｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法は、本明細書中に開示するＥＶ、ＡＳＯ、複合体、または医薬組成物を、ＳＴＡＴ３タンパク質を発現する細胞に接触させることを含む。特定の態様では、ＳＴＡＴ３タンパク質発現を低減及び／または阻害するｉｎ ｖｉｖｏでの方法は、本開示のＥＶ、ＡＳＯ、複合体、または医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。

【0610】

いくつかの態様では、細胞との接触、または対象への投与は、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ及び／またはＳＴＡＴ３タンパク質の発現を低減及び／または阻害する。特定の態様では、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡは、投与後に、ＡＳＯに曝露されていない細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現と比較して、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または約１００％減少する。いくつかの態様では、ＳＴＡＴ３タンパク質は、投与後に、ＡＳＯに曝露されていない細胞におけるＳＴＡＴ３タンパク質の発現と比較して、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％減少する。本明細書に記載されるように、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ及び／またはＳＴＡＴ３タンパク質は、野生型またはそのバリアントであり得る。

【0611】

本開示に有用なＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写産物の１つ以上の領域（例えば、プレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ）に特異的にハイブリダイズし、細胞内のＳＴＡＴ３タンパク質発現を低下及び／または阻害することができる。したがって、そのようなＡＳＯ（例えば、本明細書に開示するＥＶ）を含むＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＳＴＡＴ３タンパク質の発現の増加に関連する任意の疾患または障害の予防及び／または治療に有用であり得る。

【0612】

いくつかの態様では、本発明の方法で治療することができる疾患または障害には、がんが含まれる。特定の態様では、がんは、ＳＴＡＴ３タンパク質の発現の増加に関連している。本開示で治療することができるがんの非限定的な例として、結腸直腸癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、膵臓癌、白血病、子宮癌、卵巣癌、膀胱癌、胆管癌、胃癌、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。他の例として、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮細胞肉腫、滑膜腫、中皮癌、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、リンパ腫、白血病、肝癌、神経膠芽細胞腫、メラノーマ、骨髄腫基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄質癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞腫、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、急性骨髄性白血病、肝細胞癌、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0613】

がんを有する対象に投与する場合、特定の態様では、本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）は、免疫応答を上方制御し、対象の免疫系の腫瘍標的化を増強することができる。いくつかの態様では、治療しようとするがんは、白血球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球）の腫瘍微小環境への浸潤、すなわち、いわゆる「ｈｏｔ ｔｕｍｏｒ」または「炎症性腫瘍」により特徴付けられる。いくつかの態様では、治療しようとするがんは、腫瘍微小環境への低レベルもしくは検出不可能なレベルの白血球浸潤、すなわち、いわゆる「ｃｏｌｄ ｔｕｍｏｒ」または「非炎症性腫瘍」により特徴付けられる。いくつかの態様では、組成物を、「ｃｏｌｄ ｔｕｍｏｒ」を「ｈｏｔ ｔｕｍｏｒ」に変換するのに十分な量及び時間投与し、すなわち、前記投与により、腫瘍微小環境への白血球（Ｔ細胞など）の浸潤が生じる。特定の態様では、がんは、膀胱癌、子宮頸癌、腎細胞癌、精巣癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頸部癌、及び卵巣癌、リンパ腫、肝臓癌、神経膠芽細胞腫、メラノーマ、骨髄腫、白血病、膵臓癌、またはそれらの組み合わせを含む。他の用語「遠位腫瘍」または「遠隔腫瘍」とは、元の（すなわち原発性）腫瘍から遠隔にある臓器または遠隔にある組織、例えばリンパ節に広がった腫瘍を指す。いくつかの態様では、本開示のＥＶは、転移性の広がりの後に腫瘍を治療する。

【0614】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、対象の循環系に静脈内投与する。いくつかの態様では、ＥＶを、好適な液体に注入し、対象の静脈中に投与する。

【0615】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、対象の循環系に動脈内投与する。いくつかの態様では、ＥＶを、好適な液体に注入し、対象の動脈中に投与する。

【0616】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、髄腔内投与によって対象に投与する。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、髄腔内投与によって投与し、その後、機械的対流力を胴体に加える。例えば、Ｖｅｒｍａ ｅｔ ａｌ．，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｅｍｅｎｔ．１２：ｅ１２０３０（２０２０）を参照のこと（その全体が参照により本明細書に援用される）。したがって、本開示の特定の態様は、ＥＶ（例えばエキソソーム）を髄腔内注射によって対象に投与し、続いて、対象の胴体に機械的対流力を適用することを含む、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、それを必要とする対象に投与する方法に関する。いくつかの態様では、機械的対流力は、高頻度胸壁または胸腰部振動呼吸クリアランス装置（例えば、Ｓｍａｒｔ ＶｅｓｔまたはＳｍａｒｔ Ｗｒａｐ，ＥＬＥＣＴＲＯＭＥＤ ＩＮＣ，Ｎｅｗ Ｐｒａｇｕｅ，ＭＮ，ＵＳＡ）を使用して達成される。いくつかの態様では、機械的対流力、例えば、振動ベストは、髄腔内に投与したＥＶ（例えばエキソソーム）が神経のさらに下へ広がることを促進し、したがって、ＥＶ（例えばエキソソーム）をより良好に神経へ送達することができる。

【0617】

いくつかの態様では、エキソソームの区画内及び区画間生体内分布を、エキソソームの区画送達後に対象に作用する外来性の体外力によって操作することができる。これには、例えば、体の区画または全身の打診、振動、振盪、またはマッサージを適用することによる機械的対流の適用が含まれる。例えば、髄腔内投与に続いて、振動する機械的ジャケットを含むいくつかの手段による胸壁振動の適用は、神経軸に沿って、または脳神経及び脊髄神経に沿ってエキソソームの生体内分布を広げることができ、これは、薬物運搬エキソソームによる神経障害の治療に役立ち得る。

【0618】

いくつかの態様では、振動ジャケットまたは他の同様の手段を介した外部の機械的対流力の適用を使用して、髄腔内空間の脳脊髄液から末梢循環へとエキソソーム及び他の物質を除去することができる。この態様は、除去するために、内在性の有毒なエキソソーム、ならびに他の有害な高分子、例えば、βアミロイド、タウ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ４３、ニューロフィラメント、及び過剰な脳脊髄液を、髄腔内から末梢に除去するのに役立つ。

【0619】

いくつかの態様では、脳室内経路を介して送達されるエキソソームを、同時に腰椎穿刺を組み込み、脳室－腰椎灌流を可能にすることによって、神経軸全体に移行させることができ、その場合、腰椎穿刺でＣＳＦの既存の脊髄軸柱を抜き去ることを可能にする一方で、エキソソーム投与後に追加の流体を脳室に注入する。脳室－腰部灌流は、軟髄膜癌及び他の疾患を治療するために、ＩＣＶ投与したエキソソームが神経軸全体に沿って広がり、くも膜下腔を完全にカバーすることを可能にすることができる。

【0620】

いくつかの態様では、外部の体外集束超音波、熱エネルギー（熱）または低温の適用を用いて、これらの現象に高感受性であるように設計されたエキソソームの区画の薬物動態及び薬物放出特性を操作してもよい。

【0621】

いくつかの態様では、常磁性材料を含むように設計されたエキソソームの区画内挙動及び生体内分布を、磁石または磁場の外部印加によって操作することができる。

【0622】

いくつかの態様では、ＥＶが脳脊髄液（ＣＳＦ）に到達するように、脊柱管またはくも膜下腔への注射を介してＥＶを投与する。

【0623】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、対象の１つ以上の腫瘍内に腫瘍内投与する。

【0624】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、鼻腔内投与によって対象に投与する。いくつかの態様では、ＥＶを、局所投与または全身投与のいずれかの形態で、鼻を通して吹き込むことができる。特定の態様では、ＥＶを鼻スプレーとして投与する。

【0625】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、腹腔内投与によって対象に投与する。いくつかの態様では、ＥＶを、好適な液体に注入し、対象の腹膜中に投与する。いくつかの態様では、腹腔内投与は、リンパ管へのＥＶの分布をもたらす。いくつかの態様では、腹腔内投与は、胸腺、脾臓、及び／または骨髄へのＥＶの分布をもたらす。いくつかの態様では、腹腔内投与は、１つ以上のリンパ節へのＥＶの分布をもたらす。いくつかの態様では、腹腔内投与は、頸部リンパ節、鼠径部リンパ節、縦隔リンパ節、または胸骨リンパ節のうちの１つ以上へのＥＶの分布を生じる。いくつかの態様では、腹腔内投与は、膵臓へのＥＶの分布をもたらす。

【0626】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、眼球周囲投与によって対象に投与する。いくつかの態様では、ｓを、眼球周囲組織に注射する。眼球周囲薬物投与は、結膜下、前テノン嚢下、後テノン嚢下、及び眼球後投与の経路を含む。

【0627】

ＶＩＩＩ．Ａ． 脳腫瘍の治療方法
本開示の特定の態様は、脳腫瘍の治療を必要とする対象における脳腫瘍の治療方法に関する。いくつかの態様では、方法は、本明細書に開示するように、治療有効量のＥＶ（例えばＡＳＯ）を含むエキソソームを対象に投与することを含む。いくつかの態様では、本明細書に開示するように、ＥＶ（例えばエキソソーム）により、治療薬（例えば、ＡＳＯ）をＣＮＳに標的化送達して脳腫瘍を治療することができる。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）により、対象における免疫応答を上方制御し、それにより、神経免疫学的障害に対する対象の免疫応答を増強することができる。いくつかの態様では、組成物を、対象に、腫瘍内投与または髄腔内投与する。

【0628】

また、本明細書において、対象における脳腫瘍の転移の予防方法を提供する。方法は、本明細書に開示する治療有効量の組成物を対象に投与することを含み、組成物は、対象の１つの場所にある脳腫瘍が、対象の別の場所にある１つ以上の腫瘍の成長を促進するのを予防することができる。いくつかの態様では、組成物を、１つの場所の第１の腫瘍に腫瘍内投与または髄腔内投与し、第１の腫瘍に投与した組成物が、第２の場所での１つ以上の腫瘍の転移を予防する。

【0629】

いくつかの態様では、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）を投与することにより、対象の腫瘍の成長が抑制及び／または低減される。いくつかの態様では、脳腫瘍の成長（例えば、腫瘍の体積または重量）は、参照（例えば、ＡＳＯを含まないＥＶ（例えばエキソソーム）投与後の対応する対象における腫瘍体積）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または約１００％低下する。

【0630】

本明細書中で使用する場合、用語「脳腫瘍」とは、脳内（例えば、髄膜内）の細胞の異常な成長を指す。脳腫瘍は、原発性または続発性脳腫瘍に分類され得る。「原発性脳腫瘍」とは、脳内で発生する脳腫瘍を指す。「続発性脳腫瘍」とは、脳外の原発部位で発生したがん細胞が脳に転移した（すなわち、広がった）結果である脳腫瘍を指す。特に明記されていない限り、脳腫瘍という用語は、原発性脳腫瘍と続発性脳腫瘍の両方を指し得る。

【0631】

いくつかの態様では、本開示で治療することができる脳腫瘍は、聴神経腫瘍、脈絡叢腫瘍、頭蓋咽頭腫、胚芽腫、神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、小児脳腫瘍、松果体芽細胞腫、下垂体腫瘍、またはそれらの組み合わせを含む。

【0632】

特定の態様では、本開示で治療することができる脳腫瘍は、神経膠腫を含む。本明細書中で使用する場合、用語「神経膠腫」とは、脳または脊椎のグリア細胞で始まる腫瘍のタイプを指す。いくつかの態様では、神経膠腫は、それらが組織学的特徴を共有する特定のタイプの細胞によって分類され得る。したがって、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）で治療することができる神経膠腫は、上衣腫（上衣細胞）、星状細胞腫（星状細胞）、乏突起神経膠腫（オリゴデンドロサイト）、脳幹神経膠腫（例えば、びまん性内在性橋神経膠腫）、視神経膠腫、混合神経膠腫、乏突起星細胞腫、またはそれらの任意の組み合わせとして分類され得る。特定の態様では、星状細胞腫は、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）を含む。

【0633】

本明細書に開示する神経膠腫は、腫瘍の病理学的評価によって決定されるそれらの悪性度に従ってさらに分類され得る。いくつかの態様では、脳腫瘍標本の神経病理学的評価及び診断を、中枢神経系の腫瘍のＷＨＯ分類に従って行う。いくつかの態様では、本開示で治療することができる神経膠腫は、低悪性度神経膠腫を含む。「低悪性度神経膠腫」［ＷＨＯグレードＩＩ］は、高分化型（未分化ではない）であり、良性の傾向を示し、患者の予後を改善する傾向がある。しかしながら、いくつかの態様では、低悪性度神経膠腫は、均一な再発率を有し、時間の経過とともに悪性度が上昇し得るため、悪性として分類すべきである。いくつかの態様では、治療することができる神経膠腫は、高悪性度神経膠腫を含む。「高悪性度神経膠腫」［ＷＨＯグレードＩＩＩ～ＩＶ］神経膠腫は、未分化または退形成性であり、悪性であり、予後が不良である。使用されている多数の評価システムの中で、星状細胞腫の世界保健機関（ＷＨＯ）の評価システムが最も一般的であり、腫瘍は、Ｉ（最も進行の遅い疾患－最良の予後）～ＩＶ（最も進行した疾患－最も悪い予後）に評価される。高悪性度神経膠腫の非限定的な例には、未分化星状細胞腫及び多形性膠芽腫が含まれる。

【0634】

いくつかの態様では、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）を使用して、ＷＨＯ評価システムの下で決定される、神経膠腫グレードＩ、グレードＩＩ、グレードＩＩＩ、グレードＩＶ、またはそれらの組み合わせを治療することができる。特定の態様では、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）を使用して、任意のタイプの神経膠腫を治療することができる。

【0635】

いくつかの態様では、本方法によって治療可能な神経膠腫は、脳幹神経膠腫の一種であるびまん性内在性橋神経膠腫（ＤＩＰＧ）である。びまん性内在性橋神経膠腫は、主に５歳～７歳の子供に発症する。ＤＩＰＧの生存期間中央値は１２か月未満である。腫瘍の除去を試みる手術は、通常、ＤＩＰＧでは不可能であるか、または推奨されない。その性質上、これらの腫瘍は脳幹全体に拡散して侵入し、正常な神経細胞間で成長する。

【0636】

他の態様では、本方法によって治療可能な神経膠腫は、ＩＤＨ１及びＩＤＨ２変異型神経膠腫である。ＩＤＨ１またはＩＤＨ２のいずれかに変異を有する神経膠腫の患者は、野生型ＩＤＨ１／２遺伝子を有する神経膠腫の患者と比較して、比較的良好な生存率を有する。ＷＨＯグレードＩＩＩの神経膠腫では、ＩＤＨ１／２変異型神経膠腫は、約３．５年の予後中央値を有し、一方、ＩＤＨ１／２野生型神経膠腫は、１．５年の全生存期間中央値しか有さない。神経膠芽細胞腫では、差異がより大きくなる。

【0637】

いくつかの態様では、本開示で治療することができる神経免疫学的障害は、腫瘍性髄膜炎を含む。本明細書中で使用する場合、「腫瘍性髄膜炎」とは、元の腫瘍部位から、脳及び脊髄を覆う薄い組織膜である硬膜及び軟膜に広がった腫瘍を指す。いくつかの態様では、髄膜から神経に、そして神経内に延びる結合組織神経鞘もまた関与するようになり得る。腫瘍性髄膜炎は、がん性髄膜炎、軟膜癌腫、軟膜癌腫症、軟膜転移、軟膜疾患（ＬＭＤ）、軟膜癌、髄膜癌腫症、及び髄膜転移としても知られる。特定の態様では、腫瘍性髄膜炎は、白血病によって引き起こされる。いくつかの態様では、腫瘍性髄膜炎は、メラノーマ、乳癌、肺癌、胃腸癌、またはそれらの組み合わせによって引き起こされる。特定の態様では、腫瘍性髄膜炎は、神経膠腫によって引き起こされる。

【0638】

本開示を実施する際には、別段に示されていない限り、細胞生物学、分子生物学、遺伝子導入生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、及び免疫学の、当技術分野の範囲内にある従来の技法を用いることになる。そのような技法は、文献で十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ ｅｄ．；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ）；Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ｅｄ．，（１９８５）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ；Ｇａｉｔ，ｅｄ．（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ． 米国特許第４，６８３，１９５号；Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ， ｅｄｓ．（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７）Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）（１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５４ ａｎｄ １５５；Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）；Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＶ；Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８６）；）；Ｃｒｏｏｋｅ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２^ｎｄ Ｅｄ．ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００７）及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．）を参照されたい。

【0639】

上記で引用したすべての参考文献、及び本明細書中で引用するすべての参考文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0640】

下記の実施例は、例示として示されており、限定するために示されているものではない。

【実施例】

【0641】

実施例１：ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現の分析
本明細書に開示する例示的なＡＳＯは、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードするＳＴＡＴ３転写産物を特異的に標的とするように設計された。図１を参照されたい。本開示のＡＳＯを、ＩＬ－６で刺激されたＰＡＮＣ－１細胞においてＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を低下させるそれらの能力について試験した。ＰＡＮＣ－１細胞を細胞培養培地中で増殖させ、２０，０００細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに播種した。ＡＳＯを、２つの別々のコホートで試験した：２回の投与または５回の投与を、それぞれ最終濃度２０ｎＭ及び２ｎＭでＰＡＮＣ－１細胞（表４を参照のこと）に行った。このアッセイでは、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００トランスフェクションと４８時間の処理サイクルを使用し、３７℃及び５％ＣＯ_２でインキュベートした。次いで、分岐ＤＮＡアッセイを使用してｍＲＮＡ発現の分析を行った。

【0642】

概して、試験した各ＡＳＯは、ＧＡＤＰＨ ｍＲＮＡ発現への影響を最小限としながら、ＰＡＮＣ－１細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を低下させることができた（表４、図２Ａ～２Ｎ、及び図３を参照のこと）。

【表9】

【0643】

実施例２：エキソソームの構築
本明細書に記載のエキソソームを生成するために、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞株（例えば、ＨＥＫ２９３ＳＦ）を使用する。ＳｃａｆｆｏｌｄＸ、ＳｃａｆｆｏｌｄＹ、及び／または目的の薬剤に結合した固定部分で安定的に細胞をトランスフェクトする。

【0644】

トランスフェクション時に、ＨＥＫ細胞を、化学的に定義された培地で７日間、高密度に増殖させる。次いで、調整された細胞培養液を回収し、３００～８００×ｇで５分間、室温で遠心分離して、細胞と大きな破片を除去する。培地上清に１０００Ｕ／ＬのＢＥＮＺＯＮＡＳＥ（登録商標）を添加し、水浴中で３７℃、１時間インキュベートする。上清を回収し、１６，０００×ｇで４℃、３０分間遠心分離して、残存する細胞破片及び他の大きな汚染物質を除去する。次いで、上清を１３３，９００×ｇで４℃、３時間超遠心分離し、エキソソームをペレット化する。上清を廃棄し、残留培地をチューブの底から吸引する。ペレットを２００～１０００μＬのＰＢＳ（－Ｃａ －Ｍｇ）に再懸濁する。

【0645】

エキソソーム集団をさらに濃縮するために、ペレットを密度勾配精製（スクロースまたはＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標））で処理する。

【0646】

ＳＷ４１Ｔｉローターに配置された１２ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５９）チューブ内で、勾配を２００，０００×ｇで４℃、１６時間スピンして、エキソソーム画分を分離する。

【0647】

次いで、エキソソーム層を最上層から緩やかに取り除き、３８．５ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５８）チューブ内の約３２．５ｍＬ ＰＢＳ中で希釈し、１３３，９００×ｇで４℃、３時間、再度超遠心分離して、精製されたエキソソームをペレット化する。得られたペレットを、最小量のＰＢＳ（約２００μＬ）に再懸濁し、４℃で保存する。

【0648】

ＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標）グラジエントの場合、ＳＷ４１Ｔｉローター用の１２ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５９）チューブ内の等量の１０％、３０％、４５％ ＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標）を用いて、３層無菌勾配を調製する。ペレットをＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標）グラジエントに加えて、２００，０００×ｇで４℃、１６時間超遠心分離して、エキソソーム画分を分離する。次いで、エキソソーム層を、チューブの上層約３ｍＬから穏やかに回収する。

【0649】

エキソソーム画分を、３８．５ｍＬのＵｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５８）チューブ中の約３２ｍＬのＰＢＳに希釈し、１３３，９００×ｇで４℃、３時間超遠心分離して、精製されたエキソソームをペレット化する。次いで、ペレット化したエキソソームを、最小量のＰＢＳ（約２００μＬ）に再懸濁し、使用する準備ができるまで４℃で保存する。

【0650】

実施例３：Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯを使用した腫瘍モデルの治療
腫瘍細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスの脇腹に皮下移植した。移植の６日後、マウスをＥｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯ（すなわち、遊離ＳＴＡＴ３－ＡＳＯ（すなわち、ＥＶに関連付けられていない）またはＰＢＳで腫瘍内処置した。マウスに対し、６日間連続して処置の単回投与を行った（すなわち、腫瘍接種後６～１２日目から処置した）。次いで、様々な時点で動物内の腫瘍体積を評価した。

【0651】

図４Ａ～４Ｃに示すように、Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯ－ＭＯＥ及び遊離ＳＴＡＴ３ ＡＳＯ ＭＯＥで処置したマウスは、ＰＢＳ対照で処置したマウスと比較して、移植後１３日にわたって腫瘍増殖が減少した。これらの結果は、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）が、ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯを腫瘍細胞に効果的に送達し、それによって腫瘍増殖を減少させることができることを示唆している。

【0652】

実施例４：Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯ処置マウスにおけるＳＴＡＴ３遺伝子発現の分析
本明細書に記載の（すなわち、ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯを含む）ＥＶ（例えばエキソソーム）のノックダウン効率をさらに特徴づけるために、細胞を以下のうちの１つで処置した：（１）ＰＢＳ；（２）野生型ＥＶ（「ＨＥＫ Ｅｘｏ」）；（３）スクランブル対照ＡＳＯ（「スクランブルＥｘｏ ＡＳＯ」）を含むＥＶ；（４）Ｃ１８８－９（１００ｍｇ／ｋｇ）；（５）ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯ（「Ｓｔａｔ３ Ｅｘｏ ＡＳＯ」）を含むＥＶ；（６）４μｇの用量のＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯのみ（すなわち、ＥＶに連結されていない）（「Ｓｔａｔ ３遊離ＡＳＯ」）；及び（７）８μｇの用量のＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯのみ（「Ｓｔａｔ ３遊離ＡＳＯ２×」）。

【0653】

図５に示すように、ＳＴＡＴ３－Ｅｘｏ－ＡＳＯ処置細胞では、ＰＢＳ処置対照と比較してＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現におよそ４０％のノックダウンがあった。対照的に、より高い用量（すなわち、８μｇ）でも、ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯのみで処置した細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現は、ＰＢＳ対照と比較して最大で約２５％減少していた。これらの結果は、本明細書に開示するＥＶが、標的細胞におけるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を低減及び／または阻害するＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯの能力を向上させ得ることを示唆している。

【0654】

次に、本明細書に開示するＥＶ（すなわち、ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯを含む）の抗腫瘍効果をさらに理解するために、実施例３の動物を殺処分し、以下の細胞集団の浸潤を腫瘍中で評価した：ｉ）全ＣＤ４５＋細胞；（ｉｉ）ＣＤ４５＋マクロファージ（ＣＤ１１ｂ^高Ｆ４０／８０^高／ＣＤ４５）、及び（ｉｉｉ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）（Ｌｙ６Ｇ^高ＣＤ１１ｂ^高／ＩＡ／ＩＥ^低）。図６Ａ～６Ｃに示すように、浸潤性ＣＤ４５＋細胞及びＭＤＳＣ／ＣＤ４５＋細胞の両方の割合の有意な増加が、ＰＢＳ及びＥｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯ－ＭＯＥ処置の間で観察された。観察された増加は、ＣＤ４５＋細胞の集団内のマクロファージの割合の対応する減少と関連していた（図６Ｂを参照のこと）。対照的に、腫瘍マウスをＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯのみ（すなわち、ＥＶに連結していない）で処置しても、評価した様々な細胞集団の浸潤に対して最小限の影響しか及ぼさなかった。

【0655】

さらに、図７Ａ及び７Ｂに示すように、ＭＤＳＣの浸潤の増加は、主に、顆粒球（ｇＭＤＳＣ）の集団の増加によるものであった。実際、ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯ（すなわち、Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯ－ＭＯＥ）を含むＥＶで処置したマウス由来の腫瘍は、単球ＭＤＳＣの集団が減少していた（図７Ｂを参照）。

【0656】

最後に、上記の結果が本明細書に開示するＥＶ（すなわち、ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯを含む）に関連することを確認するために、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を、異なる処置群由来の動物の腫瘍において評価した。図８に示すように、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡは、ＰＢＳ及びスクランブルされたＥｘｏ－ＡＳＯ対照の両方と比較して、Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ－３ＡＳＯ処置マウスにおいて有意に減少していた（図８）。

【0657】

まとめると、上記の結果は、本明細書に記載のＥＶ（例えばエキソソーム）が、ｉｎ ｖｉｖｏで標的細胞にＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯを効果的に送達し、標的細胞においてＳＴＡＴ３転写産物を成功裏にノックダウンさせることができることを示している。データはさらに、ＳＴＡＴ３発現の減少が抗腫瘍免疫応答の増加（例えば、腫瘍体積の減少、顆粒球ＭＤＳＣを含むＣＤ４５＋細胞の浸潤の増加、及びマクロファージ及び単球ＭＤＳＣの浸潤の減少）に関連していることを示している。

【0658】

実施例５：Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ３はＭ２マクロファージを再分極化することができる
ＰＢＭＣから単離した単球を培養し、Ｍ２マクロファージに分化させ、そしてＥｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯの濃度を増加させて４８時間処置した：（ｉ）スクランブル対照ＡＳＯ（「スクランブル」）を含むＥＶ（例えばエキソソーム）または（ｉｉ）ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯのみ（すなわち、ＥＶに会合していない）（「遊離ＡＳＯ」）で処置した細胞を、対照として使用した。「遊離ＡＳＯ」群では、ＡＳＯはＥＶに存在するＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯの最高濃度（つまり、１．２５×１０^５ｎＭ）で使用した。

【0659】

Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯによるこれらの初代ヒトＭ２マクロファージのｉｎ ｖｉｔｒｏ処置は、ｑＰＣＲによって測定されるＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡの用量依存的ノックダウンを誘導した（図１２Ａ）。Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯ処置は、初代ヒトマクロファージにおける同等用量の遊離ＡＳＯよりも高いレベルのノックダウンをもたらした。

【0660】

次に、減少したＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現がマクロファージの分極化に何らかの影響を及ぼしたかどうかを評価するために、本明細書に開示するＥＶ（すなわち、ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯを含む）またはＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯのみで処置した後のＬＰＳ刺激ヒト初代マクロファージで、炎症性サイトカイン応答を測定した。マクロファージを培養して４８時間処置し、培地からサイトカインを検出した。図１２Ｂ～１２Ｄに示すように、Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ３処置は、対照群（すなわち、未処置及びスクランブル対照ＡＳＯを含むＥＶで処置した）と比較して、ＴＮＦ－α（２×）、ＩＬ－２３（５×）、及びＩＬ－１２ｐ４０（３７×）の用量依存的な増加をもたらした。

【0661】

まとめると、上記の結果は、本明細書に記載のＥＶ（例えばエキソソーム）がＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯをマクロファージに効果的に送達し、ＳＴＡＴ３転写産物のノックダウンを成功させ、Ｍ２マクロファージをより炎症誘発性の表現型に再分極させることができることを示している。

【0662】

実施例６：Ｈｅｐ３Ｂ肝細胞におけるＥｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯノックダウン
本明細書に開示するＥＶ（すなわち、ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯを含む）が肝癌の治療に有用であるかどうかを評価するために、Ｈｅｐ３Ｂ肝細胞を、高濃度のＥｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯ（すなわち、ＥＶの外面に連結されたＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯを含む）で処置した。処置の約４８時間後、ＳＴＡＴ３及びｍｃｌ１（ＳＴＡＴ３下流の標的遺伝子）のｍＲＮＡ発現をｑＰＣＲで測定した。ＳＴＡＴ３タンパク質の発現も、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ ｓｕｒｅｆｉｒｅ Ｕｌｔｒａキットを使用して評価した。

【0663】

図１３Ａに示すように、Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯで処置したすべての細胞について、対照細胞と比較して、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現の有意な減少（およそ６０％のノックダウン）があった。減少したＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現は、ｍｃｌ１ ｍＲＮＡ（３５～６５％阻害）（図１３Ｂ）及びＳＴＡＴ３タンパク質（３５％阻害）（図１３Ｃ）の両方の減少した発現と関連していた。

【0664】

これらの結果から、本明細書に開示するＥＶ（すなわち、ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯを含む）が、肝細胞を含む様々な細胞型におけるＳＴＡＴ３発現を低減するのに有効であり得ることが確認される。

【0665】

実施例７：Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯを使用した肝癌マウスモデルの処置
上記の実施例６で提供されたｉｎ ｖｉｔｒｏデータに加えて、本明細書に開示するＥＶの抗腫瘍効果を、ヒト肝癌の動物モデルにおいて評価した。簡潔に述べると、Ｈｅｐ３Ｂヒト肝癌細胞をマウスの脇腹に皮下移植した。移植後、マウスを腫瘍内でＥｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯ（すなわち、外面に連結したＳｃａｆｆｏｌｄＸ（ＰＴＧＦＲＮ）に融合したＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯを含む）を２日ごとに３回処置した。対照動物には、以下のいずれかを処置した：（ｉ）天然ＥＶ；（ｉｉ）ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯのみ（すなわち、ＥＶに連結していない）；及び（ｉｉｉ）ＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯのみを含む（すなわち、ＳｃａｆｆｏｌｄＸに融合していない）天然ＥＶ。次いで、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡの発現を動物の腫瘍溶解物中で評価した。

【0666】

図１４に示すように、最大のノックダウンは、ＥＶを使用してＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯを送達した動物において観察された。Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯ処置の結果、腫瘍溶解物内で３μｇのＳＴＡＴ３ ＡＳＯの３回処置後にヒトＳＴＡＴ３が３５％ノックダウンされた（図１４）。

【0667】

上記の結果は、本明細書に記載のＥＶ（例えばエキソソーム）が、ｉｎ ｖｉｖｏで標的細胞にＳＴＡＴ３特異的ＡＳＯを効果的に送達し、標的細胞におけるＳＴＡＴ３転写産物のノックダウンの成功をもたらすことができ、がん、特に肝癌などの異常なＳＴＡＴ３活性に関連する疾患において効果的な治療を提供することができることを示している。

【0668】

実施例８：Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯを使用した肝細胞癌マウスモデルの処置
Ｈｅｐａ１－６マウスを使用して、腫瘍を治療するためのＥｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯのｉｎ ｖｉｖｏ有効性を試験する。Ｈｅｐａ１－６系統は、肝細胞癌の同所性マウスモデルである。Ｈｅｐａ１－６マウス肝癌モデルを使用して、肝腫瘍の増殖速度を低下させるためのＥｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯ投与の静脈内送達を評価する。

【0669】

実施例９：Ｅｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯを使用した結腸癌マウスモデルの処置
ＩＬ－６駆動でマクロファージリッチな皮下ＣＴ２６マウス結腸直腸癌モデルを使用して、マクロファージにおけるＳＴＡＴ３ノックダウンが抗腫瘍効果を駆動することを示す。ＣＴ２６腫瘍細胞は、ＢＡＬＢ／ｃマウスの脇腹に皮下移植する。移植の８日後、マウスを、腫瘍内にてｅｘｏ－ＳＴＡＴ３－ＡＳＯもしくは遊離ＳＴＡＴ３ ＡＳＯで、または腹腔内にて抗ＰＤ１抗体もしくは抗ＣＳＦ１Ｒ抗体で処置する（群あたりｎ＝１０マウス）。対照として、２つの群のマウスをｅｘｏＡＳＯスクランブルまたはＰＢＳで処置する。腫瘍体積の幾何平均を分析する。

【0670】

実施例１０：ＡＭＬ細胞におけるＣＤ３３標的化エキソソームの取り込みの増加
本明細書に記載するように、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、特定の細胞に対するＥＶの親和性を改変及び／または増強することができる標的化部分を含むように改変することができる。ＣＤ３３＋細胞を標的化するようにＥＶ（例えばエキソソーム）を改変することができるかどうかを評価するために、ＳｃａｆｆｏｌｄＸ（ＰＴＧＦＲＮ）に融合した抗ＣＤ３３標的化部分をＥＶの外面に連結させ、様々なＡＭＬ細胞による取り込みを評価した。

【0671】

最初に、ＡＬＦＡ Ｎｂ－抗ＣＤ３３抗体（例えば、ｈＰ６７．６－ＡＦ５６８）（その全体が参照により本明細書に援用される米国特許第５，８７７，２９６号を参照のこと）を使用して、ＡＭＬ細胞上のＣＤ３３発現を測定した。ＭＶ４－１１及びＫＧ１細胞は、細胞あたりそれぞれ２０４，０００及び７６，０００のＣＤ３３を含むと測定された。

【0672】

次に、Ｏｃｔｅｔを使用して、抗ＣＤ３３標的化部分を含むＥＶ（例えばエキソソーム）がＣＤ３３に結合する能力を確認した。図１５に示すように、試験した様々なＥＶ（例えばエキソソーム）の中で、ＳｃａｆｆｏｌｄＸに融合され、ＥＶの外面に連結された抗ＣＤ３３標的化部分を含むＥＶは、最大の結合を示した（図１５の「ＰｒＸ」及び「ＰｒＸ－ＡＦ５６８」を参照のこと）。

【0673】

次いで、ＡＭＬ細胞における抗ＣＤ３３標的化部分を含むＥＶの取り込みを評価するために、ＡＬＦＡプラグアンドプレイシステムを使用して、抗ＣＤ３３ ＡＬＦＡタグ付き抗体をＡＬＦＡ Ｎｂエキソソームに外部から充填した。フローサイトメトリーの読み取りの前に、１００ｋ細胞／ウェルをＮＨＳ－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８標識エキソソームとともに、１．０ｅ６～１．５６ｅ４の範囲のＭＯＩで、２つ組でインキュベートした。低レベルのＣＤ３３を発現するＫＧ１細胞（図１６Ｂ）と比較して、ＣＤ３３高発現ＭＶ４－１１ ＡＭＬ細胞（図１６Ａ）における抗ＣＤ３３抗体結合ＡＬＦＡ Ｎｂエキソソームの取り込みの増加が観察された。ＲＡＷ２６４．７細胞を陽性対照として使用した（図１６Ｃ）。ＣＤ３３を標的とするエキソソームでは取り込みの増加が観察され、ＭＯＩが低いほど倍率変化が大きかった（図１６Ｅ～１６Ｇ）。

【0674】

上記の結果からは、抗ＣＤ３３抗体をＥＶ（例えばエキソソーム）の外面に連結することにより、ＡＭＬ細胞などのＣＤ３３＋細胞に対するＥＶの向性を増強することができることが確認される。

【0675】

本出願を通して、様々な刊行物が、著者名及び日付によって、または特許番号もしくは特許公開番号によって括弧内に参照される。これらの刊行物の開示は、本明細書に記載され、請求される開示の日付の時点で、当業者に公知の最新技術をより完全に記載するために、参照によりその全体が本出願に援用される。しかしながら、本明細書における参考文献の引用は、そのような参考文献が本開示の先行技術であることを承認するものとして解釈されるべきではない。

【図1-1】

【図1-2】

【図1-3】

【図1-4】

【図1-5】

【図1-6】

【図1-7】

【図1-8】

【図1-9】

【図2-1】

【図2-2】

【図2-3】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9-1】

【図9-2】

【図10】

【図11A】

【図11B】

【図12-1】

【図12-2】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16-1】

【図16-2】

【配列表】

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【国際調査報告】