知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
▶ ウニベルシタ デ リェイダの特許一覧 ▶ インスティトゥト デ レセルカ ビオメディカ デ リェイダ フンダシオ ドクトル ピファレの特許一覧 ▶ フンダシオ インスティトゥト ディンベスティガシオ エン シエンシス デ ラ サルト ジェルマンス トリアス イ プホルの特許一覧 ▶ フンダシオ オスピタル ウニベルシタリ バル デブロン−インスティテュート デ レセルカの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-10-31
(54)【発明の名称】中間径フィラメント由来ペプチドおよびその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/12 20060101AFI20221024BHJP
C07K 2/00 20060101ALI20221024BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20221024BHJP
C12N 7/01 20060101ALI20221024BHJP
A61K 38/08 20190101ALI20221024BHJP
A61K 38/10 20060101ALI20221024BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20221024BHJP
A61K 38/17 20060101ALI20221024BHJP
A61K 39/39 20060101ALI20221024BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20221024BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20221024BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20221024BHJP
【ＦＩ】
C12N15/12
C07K2/00 ZNA
C12N15/63 Z
C12N7/01
A61K38/08
A61K38/10
A61K38/16
A61K38/17
A61K39/39
A61P35/00
A61K48/00
A61K35/76
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021577965
(86)(22)【出願日】2020-06-26
(85)【翻訳文提出日】2022-02-25
(86)【国際出願番号】 EP2020068052
(87)【国際公開番号】W WO2020260603
(87)【国際公開日】2020-12-30
(31)【優先権主張番号】19382537.9
(32)【優先日】2019-06-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518011404
【氏名又は名称】ウニベルシタ デ リェイダ
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴ ＤＥ ＬＬＥＩＤＡ
(71)【出願人】
【識別番号】518011415
【氏名又は名称】インスティトゥト デ レセルカ ビオメディカ デ リェイダ フンダシオ ドクトル ピファレ
【氏名又は名称原語表記】ＩＮＳＴＩＴＵＴ ＤＥ ＲＥＣＥＲＣＡ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡ ＤＥ ＬＬＥＩＤＡ ＦＵＮＤＡＣＩＯ ＤＲ ＰＩＦＡＲＲＥ
(71)【出願人】
【識別番号】521568188
【氏名又は名称】フンダシオ インスティトゥト ディンベスティガシオ エン シエンシス デ ラ サルト ジェルマンス トリアス イ プホル
【氏名又は名称原語表記】ＦＵＮＤＡＣＩＯ ＩＮＳＴＩＴＵＴ Ｄ‘ＩＮＶＥＳＴＩＧＡＣＩＯ ＥＮ ＣＩＥＮＣＩＥＳ ＤＥ ＬＡ ＳＡＬＵＴ ＧＥＲＭＡＮＳ ＴＲＩＡＳ Ｉ ＰＵＪＯＬ
(71)【出願人】
【識別番号】512274953
【氏名又は名称】フンダシオ オスピタル ウニベルシタリ バル デブロン－インスティテュート デ レセルカ
(74)【代理人】
【識別番号】100094640
【弁理士】
【氏名又は名称】紺野 昭男
(74)【代理人】
【識別番号】100103447
【弁理士】
【氏名又は名称】井波 実
(74)【代理人】
【識別番号】100111730
【弁理士】
【氏名又は名称】伊藤 武泰
(74)【代理人】
【識別番号】100180873
【弁理士】
【氏名又は名称】田村 慶政
(72)【発明者】
【氏名】ベルダゲ アウトネユ、ジュアン
(72)【発明者】
【氏名】エジア メンディクテ、レイレ
(72)【発明者】
【氏名】コラル プホル、マルタ
(72)【発明者】
【氏名】モラ ジラル、コンセプシオ
(72)【発明者】
【氏名】ロセル マセス、エステーラ
(72)【発明者】
【氏名】ビベス パイ、マルタ
(72)【発明者】
【氏名】プホル アウトネユ、イルマ
(72)【発明者】
【氏名】バルキネロ マニェス、ホルディ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C084
4C085
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA90Y
4B065AA95X
4B065AA95Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA45
4C084AA02
4C084AA07
4C084AA13
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA17
4C084BA18
4C084BA19
4C084BA44
4C084CA18
4C084NA14
4C084ZB261
4C084ZB262
4C085AA38
4C085CC08
4C085EE06
4C085FF13
4C087AA01
4C087AA02
4C087AA03
4C087BC83
4C087CA12
4C087NA14
4C087ZB26
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA15
4H045BA16
4H045BA17
4H045BA18
4H045BA19
4H045CA40
4H045EA31
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、後生動物細胞において細胞死を誘導することができ、かつ／または炎症性サイトカイン分泌を刺激することができる、既知の中間径フィラメント由来のペプチドに関する。上記ペプチドは、「ｎ」個のアミノ酸の第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；９個のアミノ酸の第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および「ｍ」個のアミノ酸の第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）からなる。本発明のペプチドは、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する。これらのペプチドは、単独でまたは他の療法と併用して、ワクチンにおける新規アジュバントとして有用であり得；また、単独でまたは他の薬剤もしくは療法と併用して、化学療法剤としても有用であり得る。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域であって、前記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である、第２の領域；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、
前記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有し、
ただし、前記ペプチドの配列が、下記配列：
（ｉ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号２）；
（ｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号３）；
（ｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号４）；
（ｉｖ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号５）；
（ｖ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号６）；
（ｖｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号７）；
（ｖｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号８）；
（ｖｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９）；
（ｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０）；
（ｘ）ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）；
（ｘｉ）ＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳＬＬＥＧＱＥＤＨＹＮＮＬＳＡＳＫＶＬ（配列番号１２）；
（ｘｉｉ）ＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹ（配列番号１３）
（ｘｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）；
（ｘｉｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧＹＰＡＳＡＧＬＭＰＱＮＦＧＶＩ（配列番号８８）；
（ｘｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号８９）；
（ｘｖｉ）ＫＱＤＭＡＲＱＬＲＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９０）；
（ｘｖｉｉ）ＲＡＤＳＥＲＱＮＱＥＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳ（配列番号９１）；
（ｘｖｉｉｉ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９２）；
（ｘｉｘ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＱＥＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９３）；
（ｘｘ）ＫＤＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９４）；
（ｘｘｉ）ＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫ（配列番号９５）；
（ｘｘｉｉ）ＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩ（配列番号９６）；
（ｘｘｉｉｉ）ＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬ（配列番号９７）；
（ｘｘｉｖ）ＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号９８）；
（ｘｘｖ）ＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧ（配列番号９９）；
（ｘｘｖｉ）ＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１００）；
（ｘｘｖｉｉ）ＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１０１）；
（ｘｘｖｉｉｉ）ＤＹＱＥＬＭＮＴＫＬＡＬＤＬＥＩＡＴＹＲＴＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０２）；
（ｘｘｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０３）；
（ｘｘｘ）ＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０４）；
（ｘｘｘｉ）ＥＹＱＱＬＬＤＩＫＩＲＬＥＮＥＩＱＴＹＲＳＬＬＥＧＥＧ（配列番号１０５）；
（ｘｘｘｉｉ）ＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＬＥＤＧＥ（配列番号１０６）；
（ｘｘｘｉｉｉ）ＬＲＧＴＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧ（配列番号１０７）；
（ｘｘｘｉｖ）ＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０８）
のいずれでもない、ペプチド。
【請求項2】
前記第２の領域の９個のアミノ酸の配列が、［Ａ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｔ／Ｖ］－［Ｋ／Ｒ］－［Ｌ／Ｉ／Ｍ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ａ］－［Ｇ／Ｒ／Ａ／Ｈ／Ｋ／Ｓ／Ｆ］－［Ｌ］－［Ｄ／Ｅ］－［Ｉ／Ｎ／Ｖ／Ｍ／Ｋ／Ｑ／Ａ／Ｌ／Ｇ／Ｃ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１４）である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項3】
（１）前記第１の領域が、「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列（「ｎ」は０～８個のアミノ酸である）からなり；（２）前記第２の領域が、９個のアミノ酸のアミノ酸配列（［Ｖ］－［Ｋ］－［Ｍ／Ｌ］－［Ａ］－［Ｌ］－［Ｄ］－［Ｉ／Ｖ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１５））からなり；かつ
（３）前記第３の領域が、「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列（「ｍ」は０～８個のアミノ酸である）からなり、
最小９アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する、請求項２に記載のペプチド。
【請求項4】
最小１２アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する、請求項３に記載のペプチド。
【請求項5】
前記第１の領域および／または前記第３の領域が、細胞透過性ペプチドおよび／またはシグナルペプチドを含み；好ましくは、－ 前記細胞透過性ペプチドおよび／または前記シグナルペプチドが、ｉＲＧＤ（ＣＲＧＤＫＧＰＤＣ、配列番号１６）を含み、および／または、
－ 前記細胞透過性ペプチドおよび／または前記シグナルペプチドが、極性アミノ酸配列、より好ましくは３個以上の連続するリジンアミノ酸（Ｋ－Ｋ－Ｋ）または３個以上の連続するアルギニンアミノ酸（Ｒ－Ｒ－Ｒ）；最も好ましくは８個以上の連続するリジンアミノ酸（Ｋ－Ｋ－Ｋ－Ｋ－Ｋ－Ｋ－Ｋ－Ｋ、配列番号１７）または８個以上の連続するアルギニンアミノ酸（Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ｒ、配列番号１８）を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項6】
タンパク質タグをさらに含む、またはキメラタンパク質を形成するポリペプチドに結合している、請求項１から５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項7】
請求項１から６のいずれか一項に記載のペプチドをコードする、核酸。
【請求項8】
ヒト細胞における発現のためにコドン最適化された、請求項７に記載の核酸。
【請求項9】
請求項７または８のいずれか一項に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項10】
請求項７または８のいずれか一項に記載の核酸、または請求項９に記載の発現ベクターを含む、ウイルス。
【請求項11】
治療有効量の請求項１から６のいずれか一項に記載のペプチド、請求項７または８のいずれか一項に記載の核酸、請求項９に記載の発現ベクター、または請求項１０に記載のウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む、医薬組成物。
【請求項12】
医薬における使用のための組成物であって：Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域であって、前記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である、第２の領域；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなり、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有するペプチド、
前記ペプチドをコードする核酸；
前記核酸を含む発現ベクター；
前記核酸または前記発現ベクターを含むウイルス；または
治療有効量の前記ペプチド、前記核酸、前記発現ベクターまたは前記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物
を含み、
ただし、前記ペプチド配列が、ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）またはＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）ではない、組成物。
【請求項13】
前記ペプチドの前記第２の領域の９個のアミノ酸の配列が、［Ａ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｔ／Ｖ］－［Ｋ／Ｒ］－［Ｌ／Ｉ／Ｍ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ａ］－［Ｇ／Ｒ／Ａ／Ｈ／Ｋ／Ｓ／Ｆ］－［Ｌ］－［Ｄ／Ｅ］－［Ｉ／Ｎ／Ｖ／Ｍ／Ｋ／Ｑ／Ａ／Ｌ／Ｇ／Ｃ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１４）である、請求項１２に記載の使用のための組成物。
【請求項14】
（１）前記ペプチドの前記第１の領域が、「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列（「ｎ」は０～１１個のアミノ酸である）からなり；（２）前記ペプチドの前記第２の領域が、９個のアミノ酸のアミノ酸配列（［Ｖ］－［Ｋ］－［Ｍ／Ｌ］－［Ａ］－［Ｌ］－［Ｄ］－［Ｉ／Ｖ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１５））からなり；かつ
（３）前記ペプチドの前記第３の領域が、「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列（「ｍ」は０～１１個のアミノ酸である）からなり、
前記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する、請求項１３に記載の使用のための組成物。
【請求項15】
前記ペプチドが、最小１２アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する、請求項１４に記載の使用のための組成物。
【請求項16】
アジュバントとしての使用のための組成物であって：Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域であって、前記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である、第２の領域；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなり、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有するペプチド、
前記ペプチドをコードする核酸；
前記核酸を含む発現ベクター；
前記核酸または前記発現ベクターを含むウイルス；または
治療有効量の前記ペプチド、前記核酸、前記発現ベクターまたは前記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物
を含む、組成物。
【請求項17】
前記ペプチドの前記第２の領域の９個のアミノ酸の配列が、［Ａ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｔ／Ｖ］－［Ｋ／Ｒ］－［Ｌ／Ｉ／Ｍ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ａ］－［Ｇ／Ｒ／Ａ／Ｈ／Ｋ／Ｓ／Ｆ］－［Ｌ］－［Ｄ／Ｅ］－［Ｉ／Ｎ／Ｖ／Ｍ／Ｋ／Ｑ／Ａ／Ｌ／Ｇ／Ｃ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１４）である、請求項１６に記載の使用のための組成物。
【請求項18】
（１）前記ペプチドの前記第１の領域が、「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列（「ｎ」は０～１１個のアミノ酸である）からなり；（２）前記ペプチドの前記第２の領域が、９個のアミノ酸のアミノ酸配列（［Ｖ］－［Ｋ］－［Ｍ／Ｌ］－［Ａ］－［Ｌ］－［Ｄ］－［Ｉ／Ｖ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１５））からなり；かつ
（３）前記ペプチドの前記第３の領域が、「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列（「ｍ」は０～１１個のアミノ酸である）からなり、
前記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する、請求項１７に記載の使用のための組成物。
【請求項19】
前記ペプチドが、最小１２アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する、請求項１８に記載の使用のための組成物。
【請求項20】
癌の治療における使用のための組成物であって：Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域であって、前記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である、第２の領域；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなり、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有するペプチド、
前記ペプチドをコードする核酸；
前記核酸を含む発現ベクター；
前記核酸または前記発現ベクターを含むウイルス；または
治療有効量の前記ペプチド、前記核酸、前記発現ベクターまたは前記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物
を含む、組成物。
【請求項21】
前記ペプチドの前記第２の領域の９個のアミノ酸の配列が、［Ａ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｔ／Ｖ］－［Ｋ／Ｒ］－［Ｌ／Ｉ／Ｍ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ａ］－［Ｇ／Ｒ／Ａ／Ｈ／Ｋ／Ｓ／Ｆ］－［Ｌ］－［Ｄ／Ｅ］－［Ｉ／Ｎ／Ｖ／Ｍ／Ｋ／Ｑ／Ａ／Ｌ／Ｇ／Ｃ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１４）である、請求項２０に記載の使用のための組成物。
【請求項22】
（１）前記ペプチドの前記第１の領域が、「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列（「ｎ」は０～１１個のアミノ酸である）からなり；（２）前記ペプチドの前記第２の領域が、９個のアミノ酸のアミノ酸配列（［Ｖ］－［Ｋ］－［Ｍ／Ｌ］－［Ａ］－［Ｌ］－［Ｄ］－［Ｉ／Ｖ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１５））からなり；かつ
（３）前記ペプチドの前記第３の領域が、「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列（「ｍ」は０～１１個のアミノ酸である）からなり、
前記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する、請求項２１に記載の使用のための組成物。
【請求項23】
前記ペプチドが、最小１２アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する、請求項２２に記載の使用のための組成物。
【請求項24】
前記癌が、リンパ系癌または骨髄系癌であるか、または前記癌が固形腫瘍である、請求項２０から２３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項25】
アジュバントとして、請求項１から６のいずれか一項に記載のペプチド、請求項７または８のいずれか一項に記載の核酸、請求項９に記載の発現ベクター、請求項１０に記載のウイルス、または請求項１１に記載の医薬組成物を含む、ワクチン。
【請求項26】
請求項１から６のいずれか一項に記載のペプチドのインビトロプログラム細胞死誘導剤としての使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、既知の中間径フィラメントに由来するペプチド、および、ワクチンにおける新規アジュバントとしての、また癌に対する化学療法剤としての、単独でまたは他の薬剤もしくは療法との併用でのその使用に関する。
【背景技術】
【0002】
市販のアジュバントの多くは、ＰＡＭＰ（病原体関連分子パターン）と呼ばれる微生物由来生成物である。ＰＡＭＰは通常、良好な反応を誘導することができるが、重度の局所炎症および全身的副作用を引き起こすこともある。そのため、ＰＡＭＰは、動物用および実験用のワクチンとして留保されている。さらに、水酸化アルミニウムなどの塩類およびＭＦ５９などの乳剤も、アジュバントとして作用することがある。水酸化アルミニウムは非常に良好な耐容性を示し、ヒト用のワクチンで最も一般的に使用されているアジュバントである。ＭＦ５９は、インフルエンザワクチンのアジュバントとして使用するために特別に設計されたスクアレン製剤である。これらの後者のアジュバントをヒトのワクチンに使用する場合の主な問題は、それらが通常は、遮断抗体の産生を刺激するという点では良好な反応を誘導することである。しかしながら、Ｔｈ１ ＣＤ４＋および細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔリンパ球応答を刺激することにおいては効率的というわけではなく、その結果、細胞内感染に対して作用するための効率に欠けることになる。
【発明の概要】
【0003】
本発明は、既知の中間径フィラメントに由来するペプチドが、試験したすべてのタイプの真核細胞において、アポトーシス、ピロトーシスおよび／またはネクロトーシスを誘導することができるという驚くべき発見に関する。さらに、白血球においては、それらのペプチドが炎症性サイトカイン分泌を刺激することから、単独でまたは他の療法と併用して、ワクチンにおける新規アジュバントとして有用であり得；また、単独でまたは他の薬剤もしくは療法と併用して、化学療法剤としても有用であり得る。
【0004】
したがって、第１の態様において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有し、ただし、上記ペプチド配列が、以下：
（ｉ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号２）；
（ｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号３）；
（ｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号４）；
（ｉｖ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号５）；
（ｖ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号６）；
（ｖｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号７）；
（ｖｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号８）；
（ｖｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９）；
（ｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０）；
（ｘ）ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）；
（ｘｉ）ＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳＬＬＥＧＱＥＤＨＹＮＮＬＳＡＳＫＶＬ（配列番号１２）；
（ｘｉｉ）ＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹ（配列番号１３）；
（ｘｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）；
（ｘｉｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧＹＰＡＳＡＧＬＭＰＱＮＦＧＶＩ（配列番号８８）；
（ｘｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号８９）；
（ｘｖｉ）ＫＱＤＭＡＲＱＬＲＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９０）；
（ｘｖｉｉ）ＲＡＤＳＥＲＱＮＱＥＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳ（配列番号９１）；
（ｘｖｉｉｉ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９２）；
（ｘｉｘ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＱＥＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９３）；
（ｘｘ）ＫＤＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９４）；
（ｘｘｉ）ＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫ（配列番号９５）；
（ｘｘｉｉ）ＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩ（配列番号９６）；
（ｘｘｉｉｉ）ＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬ（配列番号９７）；
（ｘｘｉｖ）ＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号９８）；
（ｘｘｖ）ＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧ（配列番号９９）；
（ｘｘｖｉ）ＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１００）；
（ｘｘｖｉｉ）ＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１０１）；
（ｘｘｖｉｉｉ）ＤＹＱＥＬＭＮＴＫＬＡＬＤＬＥＩＡＴＹＲＴＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０２）；
（ｘｘｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０３）；
（ｘｘｘ）ＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０４）；
（ｘｘｘｉ）ＥＹＱＱＬＬＤＩＫＩＲＬＥＮＥＩＱＴＹＲＳＬＬＥＧＥＧ（配列番号１０５）；
（ｘｘｘｉｉ）ＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＬＥＤＧＥ（配列番号１０６）；
（ｘｘｘｉｉｉ）ＬＲＧＴＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧ（配列番号１０７）；
（ｘｘｘｉｖ）ＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０８）
のいずれでもないことを条件とする、ペプチドに関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有し、ただし、上記ペプチド配列が、以下：
（ｉ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号２）；
（ｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号３）；
（ｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号４）；
（ｉｖ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号５）；
（ｖ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号６）；
（ｖｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号７）；
（ｖｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号８）；
（ｖｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９）；
（ｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０）；
（ｘ）ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）；
（ｘｉ）ＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳＬＬＥＧＱＥＤＨＹＮＮＬＳＡＳＫＶＬ（配列番号１２）；
（ｘｉｉ）ＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹ（配列番号１３）；
（ｘｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）；
（ｘｉｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧＹＰＡＳＡＧＬＭＰＱＮＦＧＶＩ（配列番号８８）；
（ｘｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号８９）；
（ｘｖｉ）ＫＱＤＭＡＲＱＬＲＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９０）；
（ｘｖｉｉ）ＲＡＤＳＥＲＱＮＱＥＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳ（配列番号９１）；
（ｘｖｉｉｉ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９２）；
（ｘｉｘ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＱＥＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９３）；
（ｘｘ）ＫＤＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９４）；
（ｘｘｉ）ＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫ（配列番号９５）；
（ｘｘｉｉ）ＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩ（配列番号９６）；
（ｘｘｉｉｉ）ＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬ（配列番号９７）；
（ｘｘｉｖ）ＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号９８）；
（ｘｘｖ）ＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧ（配列番号９９）；
（ｘｘｖｉ）ＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１００）；
（ｘｘｖｉｉ）ＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１０１）；
（ｘｘｖｉｉｉ）ＤＹＱＥＬＭＮＴＫＬＡＬＤＬＥＩＡＴＹＲＴＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０２）；
（ｘｘｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０３）；
（ｘｘｘ）ＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０４）；
（ｘｘｘｉ）ＥＹＱＱＬＬＤＩＫＩＲＬＥＮＥＩＱＴＹＲＳＬＬＥＧＥＧ（配列番号１０５）；
（ｘｘｘｉｉ）ＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＬＥＤＧＥ（配列番号１０６）；
（ｘｘｘｉｉｉ）ＬＲＧＴＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧ（配列番号１０７）；
（ｘｘｘｉｖ）ＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０８）
のいずれでもないことを条件とする、ペプチドに関する。
【0005】
別の態様において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドを含む組成物であって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有し、ただし、上記ペプチド配列が、ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）またはＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）ではないことを条件とする、医薬における使用のための組成物に関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドを含む組成物であって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有し、ただし、上記ペプチド配列が、ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）またはＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）ではないことを条件とする、医薬における使用のための組成物に関する。
【0006】
さらなる態様において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドを含む組成物であって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する、アジュバントとしての使用のための組成物に関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドを含む組成物であって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する、アジュバントとしての使用のための組成物に関する。
【0007】
別のさらなる態様において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドを含む組成物であって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する、癌の治療における使用のための組成物に関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドを含む組成物であって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する、癌の治療における使用のための組成物に関する。
【0008】
別の態様において、本発明は、本発明によるペプチドをアジュバントとして含むワクチンに関する。
【0009】
最後の態様において、本発明は、細胞死誘導剤としての本発明によるペプチドの使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【図1】ペプチドと共に培養したマウス脾臓細胞からのサイトカイン濃度を示す図である。ペプチド７２およびＤＩＦ－Ｐと共に２４時間および４８時間インキュベートした細胞の上清の分析結果（ｎ＝４）；（Ａ）ＮＯＤ．ＲＡＧ－２－／－マウス由来の脾臓細胞；（Ｂ）ＮＯＤマウス由来の脾臓細胞。
【図2】ペプチドと共にインキュベートしたＮＯＤ、ＮＯＤ．ＲＡＧ２－／－およびＣ５７Ｂｌ／６からのアポトーシスアッセイ結果を示す図である。ＮＯＤ、ＮＯＤ．ＲＡＧ２－／－およびＣ５７Ｂｌ／６由来の脾臓細胞をペリフェリン由来のペプチドと共に２４時間インキュベーション後に得られたドットプロットの代表的画像（ｎ＝３）。
【図3】ＤＩＦの種々の改変体と共に培養した後のＮＡＬＭ６細胞の細胞死およびアポトーシスを示す図である。種々のペプチド断片ＤＩＦ－ＰおよびＤＩＦ改変体の存在下で２４時間培養後のアネキシン陽性（細胞アポトーシスのマーカー）、およびアネキシンＶとヨウ化プロピジウムの二重陽性（細胞死のマーカー）のＮＡＬＭ－６細胞。Ａ）７２、７７、ＤＩＦ－Ｐ（ペプチド７８としても知られる）、および７９は、ペリフェリン中間径フィラメントに由来する異なるペプチドを表す。活性コア配列を決定するために、ＤＩＦ－Ｐ（ペプチド７８）のネイティブ配列から、カルボキシ末端領域でアミノ酸を除去するか、またはリジンＡＡに置換した。ＤＩＦ－Ｐ３Ｋ（７８．１２ペプチド）からペプチド７８．１６まで、およびペプチド７８．Ａから７８．Ｄまでは、ＤＩＦ－Ｐの種々の改変体（ＤＩＦ－Ｐ改変体）を表す。リジンの置換は、ペプチド合成要件が異なる状況に対して実施した。極性アミノ酸（ＲまたはＫ）配列は、ペプチドの細胞侵入を補助する細胞透過性ペプチドとして作用する。ＤＩＦ－Ｐ８Ｒ（７８－１２．８Ｒペプチドとしても知られる）では、細胞質へのペプチド透過性を高めるために、ネイティブ７８ペプチドのコア配列の後のカルボキシ末端領域を、アルギニンの尾部に置換した。Ｂ）ＤＩＦ－Ｐ（ペプチド７８）、ＮＦ、ＧＦＡＰ、ＤＥＳ、ＬＭＮＡ、ＫＲＴ８４、ＫＲＴ３２およびＫＲＴ１３は、それぞれペリフェリン／ビメンチン、神経フィラメント（重、中および軽）、グリア線維酸性タンパク質、デスミン、ラミンＡ、ケラチン－８４、ケラチン－３２およびケラチン－１３中間径フィラメントのコアコンセンサス配列に由来する異なるペプチドである。７２はペリフェリンに由来する無関係のペプチドであり、ここでは陰性対照として使用した。ＮＡＬＭ－６は、ヒトＢリンパ球性白血病細胞株である。
【図4】すべての中間径フィラメントに見出されるすべての可能性のある変化を含む概要配列（ＤＩＦ配列）を示す図である。文字サイズは、配列におけるその特定のアミノ酸の確率を示し、可能性のある他のアミノ酸変異も各位置に示す。
【図5】種々のペプチドと共に培養したＮＡＬＭ－６細胞における切断型カスパーゼ－３の発現の代表的な画像を示す図である。ＮＡＬＭ－６細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋ、またはＤＩＦ－Ｐ８Ｒと共に、あるいは刺激なしで、１時間または２４時間培養し、細胞内染色を行って、切断型カスパーゼ－３の発現を分析した。太線は、ペプチドなしでの対照細胞の発現に相当し、より明瞭な曲線は、種々のペプチドと共にインキュベートした細胞に相当する（ｎ＝３）。
【図6】種々のペプチドと共に培養した後のヒトＰＢＭＣ細胞のアポトーシスアッセイの代表的なドットプロットを示す図である。４×１０５個の細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋ、またはＤＩＦ－Ｐ８Ｒと共に、あるいは刺激なしで、１時間、２４時間または４８時間培養した後に、アネキシンＶおよびＰＩ陽性細胞を分析した（ｎ＝４）。
【図7】種々のペプチドと共に培養したヒトＰＢＭＣからの活性化（切断型）カスパーゼ－１陽性細胞の代表的なヒストグラムを示す図である。４×１０５個のＰＢＭＣ細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋ、またはＤＩＦ－Ｐ８Ｒ、またはナイジェリシン（陽性対照として）と共に、あるいは刺激なしで、１時間培養し、活性化カスパーゼ－１を６６０－ＹＶＡＤ－ＦＭＫで測定した（ｎ＝４）。図の右側には、陽性細胞のパーセンテージを要約している（＊＝ｐ＜０．０５）。
【図8】種々のペプチドと共に培養したヒトＰＢＭＣからの活性化（切断型）カスパーゼ－３陽性細胞の代表的なヒストグラムを示す図である。４×１０５個のＰＢＭＣ細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋ、またはＤＩＦ－Ｐ８Ｒ、またはスタウロスポリン（陽性対照として）と共に、あるいは刺激なしで、１時間培養し、活性化カスパーゼ－３をＦＡＭ－ＤＥＶＤ－ＦＭＫで測定した（ｎ＝４）。図の右側には、陽性細胞のパーセンテージを要約している（＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１）。
【図9】ペプチドと共に培養したヒトＰＢＭＣ細胞により産生された種々のサイトカインの濃度を示す図である。１ウェルあたり４×１０５個の細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋ、またはＤＩＦ－Ｐ８Ｒ、またはスタウロスポリン、またはナイジェリシン（Ｎｉｇｅｒｉｃｉｎｅ）と共に、あるいは刺激なしで、２４時間または４８時間インキュベートした後に、上清を回収した。スタウロスポリンおよびナイジェリシン（Ｎｉｇｅｒｉｃｉｎｅ）の場合、サイトカインの産生は２４時間後にのみ分析された（＊＝ｐ＜０．０５）。
【図10】ペプチドと共に培養したＮＯＤ．ＲＡＧ２－／－脾臓細胞により産生された種々のサイトカインの濃度を示す図である。１ウェルあたり４×１０５個の細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋ、またはＤＩＦ－Ｐ８Ｒと共に、あるいは刺激なしで、２４時間または４８時間インキュベートした後に、上清を回収した（＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１）。
【図11】ペプチドと共に培養した骨髄由来のＮＯＤ．ＲＡＧ２－／－細胞により産生された種々のサイトカインの濃度を示す図である。１ウェルあたり４×１０５個の細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋ、またはＤＩＦ－Ｐ８Ｒと共に、あるいは刺激なしで、２４時間または４８時間インキュベートした後に、上清を回収した（＊＝ｐ＜０．０５）。
【図12】ペプチドと共に培養したＮＯＤ骨髄から精製した細胞により産生された種々のサイトカインの濃度を示す図である。１ウェルあたり４×１０５個の細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋ、またはＤＩＦ－Ｐ８Ｒと共に、あるいは刺激なしで、２４時間または４８時間インキュベートした後に、上清を回収した。細胞は、（Ａ）単球および（Ｂ）好中球である。
【図13】ＮＯＤ．ＲＡＧ２－／－骨髄細胞を種々のペプチドと共に培養した後のアポトーシスアッセイの代表的なドットプロットを示す図である。４×１０５個の細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋと共に、あるいは刺激なしで、２４時間または４８時間培養した後に、アネキシンＶおよびＰＩ陽性細胞を分析した（ｎ＝４）。
【図14】ＮＯＤ骨髄から精製した単球を種々のペプチドと共に培養した後のアポトーシスアッセイの代表的なドットプロットを示す図である。４×１０５個の単球を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋと共に、あるいは刺激なしで、２４時間または４８時間培養した後に、アネキシンＶおよびＰＩ陽性細胞を分析した（ｎ＝４）。
【図15】ＮＯＤ骨髄から精製した好中球を種々のペプチドと共に培養した後のアポトーシスアッセイの代表的なドットプロットを示す図である。４×１０５個の好中球を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋと共に、あるいは刺激なしで、２４時間または４８時間培養した後に、アネキシンＶおよびＰＩ陽性細胞を分析した（ｎ＝４）。
【図16】増殖アッセイを示す図である。ＤＩＦ－Ｐと共に培養したＮＯＤ．ＲＡＧ－２－／－マウス脾臓細胞では、増殖は認められない。ペプチド７２は陰性対照として使用している。
【図17】マウスＢ１６Ｆ１０（メラノーマ）およびＰ８１５（肥満細胞腫）細胞株をＤＩＦの種々の改変体と共に培養した後の細胞死およびアポトーシスを示す図である。Ａ）種々のペプチド断片ＤＩＦ－Ｐ、およびＤＩＦ改変体の存在下で培養２４時間後のアネキシン陽性（細胞アポトーシスのマーカー）、およびアネキシンＶとヨウ化プロピジウムの二重陽性（細胞死のマーカー）のＢ１６Ｆ１０細胞（ｎ＝３）。Ｂ）種々のペプチド断片ＤＩＦ－Ｐ、およびＤＩＦ改変体の存在下で培養２４時間後のアネキシン陽性（細胞アポトーシスのマーカー）、およびアネキシンＶとヨウ化プロピジウムの二重陽性（細胞死のマーカー）のＰ８１５細胞（ｎ＝１）。
【図18】ニワトリ脾臓細胞を種々のペプチドと共に培養した後のアポトーシスアッセイの代表的なドットプロットを示す図である。４×１０５個の細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋと共に、あるいは刺激なしで、２４時間または４８時間培養した後に、アネキシンＶおよびＰＩ陽性細胞を分析した（ｎ＝４）。
【図19】Ｊｕｒｋａｔ細胞を種々のペプチドと共に培養した後のアポトーシスアッセイの代表的なドットプロットを示す図である。１×１０５個の細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋ、またはＤＩＦ－Ｐ８Ｒと共に、あるいは刺激なしで、１時間、２４時間または４８時間培養した後に、アネキシンＶおよびＰＩ陽性細胞を分析した（ｎ＝４）。
【図20】ＨＬ－６０細胞を種々のペプチドと共に培養した後のアポトーシスアッセイの代表的なドットプロットを示す図である。１×１０５個の細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋ、またはＤＩＦ－Ｐ８Ｒと共に、あるいは刺激なしで、１時間、２４時間または４８時間培養した後に、アネキシンＶおよびＰＩ陽性細胞を分析した（ｎ＝４）。
【図21】ＮＡＬＭ－６細胞を種々のペプチドと共に培養した後のアポトーシスアッセイの代表的なドットプロットを示す図である。１×１０５個の細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋ、またはＤＩＦ－Ｐ８Ｒと共に、あるいは刺激なしで、１時間、２４時間または４８時間培養した後に、アネキシンＶおよびＰＩ陽性細胞を分析した（ｎ＝４）。
【図22】種々のペプチドと共に培養したＡ３７５細胞（ヒトメラノーマ細胞株）における切断型カスパーゼ－３の発現の代表的な画像を示す図である。Ａ３７５細胞を、ペプチド７２、またはＤＩＦ－Ｐ、またはＤＩＦ－Ｐ３Ｋ、またはＤＩＦ－Ｐ８Ｒと共に、あるいは刺激なしで、２４時間培養し、細胞内染色を行って、切断型カスパーゼ－３の発現を分析した。太線は、ペプチドなしでの対照細胞の発現に相当し、より明瞭な曲線は、種々のペプチドと共にインキュベートした細胞に相当する（ｎ＝２）。
【図23】ＨＥＫ２９３、ＨｅＬａおよびＲＤ細胞をＤＩＦの種々の改変体と共に培養した後の細胞死およびアポトーシスを示す図である（ｎ＝１）。Ａ）ＤＩＦ改変体の種々のペプチド断片の存在下で培養１時間後のアネキシン陽性（細胞アポトーシスのマーカー）、およびアネキシンＶとヨウ化プロピジウムの二重陽性（細胞死のマーカー）のＨＥＫ２９３細胞。Ｂ）ＤＩＦ改変体の種々のペプチド断片の存在下で培養１時間後のアネキシン陽性（細胞アポトーシスのマーカー）、およびアネキシンＶとヨウ化プロピジウムの二重陽性（細胞死のマーカー）のＨｅＬａ細胞。Ｃ）ＤＩＦ改変体の種々のペプチド断片の存在下で培養１時間後のアネキシン陽性（細胞アポトーシスのマーカー）、およびアネキシンＶとヨウ化プロピジウムの二重陽性（細胞死のマーカー）のＲＤ細胞。
【発明を実施するための形態】
【0011】
上述のように、本発明は、既知の中間径フィラメントに由来するペプチドが、試験したすべてのタイプの真核細胞において、アポトーシス、ピロトーシスおよび／またはネクロトーシスを誘導することができるという驚くべき発見に関する。さらに、白血球においては、それらのペプチドが炎症性サイトカインの分泌を刺激することから、単独でまたは他の療法と併用して、ワクチン接種における新規アジュバントとしても、また、癌の化学療法剤としても、有用であり得る。本発明のペプチドの使用は、特にリンパ系または骨髄系起源の癌に、または固形腫瘍に適応される。
【0012】
本発明のペプチド
第１の態様において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有し、ただし、上記ペプチド配列が、以下：
（ｉ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号２）；
（ｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号３）；
（ｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号４）；
（ｉｖ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号５）；
（ｖ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号６）；
（ｖｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号７）；
（ｖｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号８）；
（ｖｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９）；
（ｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０）；
（ｘ）ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）；
（ｘｉ）ＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳＬＬＥＧＱＥＤＨＹＮＮＬＳＡＳＫＶＬ（配列番号１２）；
（ｘｉｉ）ＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹ（配列番号１３）
（ｘｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）；
（ｘｉｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧＹＰＡＳＡＧＬＭＰＱＮＦＧＶＩ（配列番号８８）；
（ｘｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号８９）；
（ｘｖｉ）ＫＱＤＭＡＲＱＬＲＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９０）；
（ｘｖｉｉ）ＲＡＤＳＥＲＱＮＱＥＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳ（配列番号９１）；
（ｘｖｉｉｉ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９２）；
（ｘｉｘ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＱＥＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９３）；
（ｘｘ）ＫＤＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９４）；
（ｘｘｉ）ＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫ（配列番号９５）；
（ｘｘｉｉ）ＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩ（配列番号９６）；
（ｘｘｉｉｉ）ＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬ（配列番号９７）；
（ｘｘｉｖ）ＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号９８）；
（ｘｘｖ）ＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧ（配列番号９９）；
（ｘｘｖｉ）ＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１００）；
（ｘｘｖｉｉ）ＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１０１）；
（ｘｘｖｉｉｉ）ＤＹＱＥＬＭＮＴＫＬＡＬＤＬＥＩＡＴＹＲＴＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０２）；
（ｘｘｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０３）；
（ｘｘｘ）ＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０４）；
（ｘｘｘｉ）ＥＹＱＱＬＬＤＩＫＩＲＬＥＮＥＩＱＴＹＲＳＬＬＥＧＥＧ（配列番号１０５）；
（ｘｘｘｉｉ）ＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＬＥＤＧＥ（配列番号１０６）；
（ｘｘｘｉｉｉ）ＬＲＧＴＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧ（配列番号１０７）；
（ｘｘｘｉｖ）ＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０８）
のいずれでもないことを条件とする、ペプチドに関する。
第１の態様において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有し、ただし、上記ペプチド配列が、以下：
（ｉ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号２）；
（ｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号３）；
（ｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号４）；
（ｉｖ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号５）；
（ｖ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号６）；
（ｖｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号７）；
（ｖｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号８）；
（ｖｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９）；
（ｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０）；
（ｘ）ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）；
（ｘｉ）ＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳＬＬＥＧＱＥＤＨＹＮＮＬＳＡＳＫＶＬ（配列番号１２）；
（ｘｉｉ）ＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹ（配列番号１３）
（ｘｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）；
（ｘｉｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧＹＰＡＳＡＧＬＭＰＱＮＦＧＶＩ（配列番号８８）；
（ｘｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号８９）；
（ｘｖｉ）ＫＱＤＭＡＲＱＬＲＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９０）；
（ｘｖｉｉ）ＲＡＤＳＥＲＱＮＱＥＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳ（配列番号９１）；
（ｘｖｉｉｉ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９２）；
（ｘｉｘ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＱＥＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９３）；
（ｘｘ）ＫＤＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９４）；
（ｘｘｉ）ＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫ（配列番号９５）；
（ｘｘｉｉ）ＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩ（配列番号９６）；
（ｘｘｉｉｉ）ＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬ（配列番号９７）；
（ｘｘｉｖ）ＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号９８）；
（ｘｘｖ）ＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧ（配列番号９９）；
（ｘｘｖｉ）ＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１００）；
（ｘｘｖｉｉ）ＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１０１）；
（ｘｘｖｉｉｉ）ＤＹＱＥＬＭＮＴＫＬＡＬＤＬＥＩＡＴＹＲＴＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０２）；
（ｘｘｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０３）；
（ｘｘｘ）ＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０４）；
（ｘｘｘｉ）ＥＹＱＱＬＬＤＩＫＩＲＬＥＮＥＩＱＴＹＲＳＬＬＥＧＥＧ（配列番号１０５）；
（ｘｘｘｉｉ）ＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＬＥＤＧＥ（配列番号１０６）；
（ｘｘｘｉｉｉ）ＬＲＧＴＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧ（配列番号１０７）；
（ｘｘｘｉｖ）ＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０８）
のいずれでもないことを条件とする、ペプチドに関する。
【0013】
用語「ペプチド」とは、本明細書中で使用される場合、実質的に類似または同一の機能性を有するアミノ酸の配列、類似体または模倣体を指す。用語「ペプチド」には、ペプチド結合によって結合された合成アミノ酸および天然アミノ酸を有する類似体も含まれる。ペプチドはまた、本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、その類似体、誘導体、塩、レトロ－インベルソ異性体、模倣物、模倣体、またはペプチド模倣体も含むことが意図される。例えば、本発明のモジュレータのペプチド構造は、その安定性、生物学的利用能、溶解性などを高めるためにさらに修飾されていてもよい。「類似体」、「誘導体」および「模倣体」には、ペプチド構造体の化学構造を模倣して、ペプチド構造体の機能特性を保持する分子が含まれる。ペプチドの類似体、誘導体および模倣体を設計するためのアプローチは、当該技術分野において公知である。例えば、Ｆａｒｍｅｒ，Ｐ．Ｓ．ｉｎ Ｄｍｇ Ｄｅｓｉｇｎ（Ｅ．Ｊ．Ａｒｉｅｎｓ，ｅｄ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８０，ｖｏｌ．１０，ｐｐ．１１９～１４３；Ｂａｌｌ，Ｊ．Ｂ．およびＡｌｅｗｏｏｄ，Ｐ．Ｆ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ３：５５．Ｍｏｒｇａｎ，Ｂ．Ａ．およびＧａｉｎｏｒ，Ｊ．Ａ．（１９８９）Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２４：２４３；およびＦｒｅｉｄｉｎｇｅｒ，Ｒ．Ｍ．（１９８９）Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．１０：２７０を参照。また、Ｓａｗｙｅｒ，Ｔ．Ｋ．（１９９５）Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ Ｔａｙｌｏｒ，Ｍ．Ｄ．およびＡｍｉｄｏｎ，Ｇ．Ｌ．（ｅｄｓ．）Ｐｅｐｔｉｄｅ－Ｂａｓｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，Ｃｈａｐｔｅｒ １７；Ｓｍｉｔｈ，Ａ．Ｂ．３ｒｄ，ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１７：１１１１３～１１１２３；Ｓｍｉｔｈ，Ａ．Ｂ．３ｒｄ，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６：９９４７～９９６２；およびＨｉｒｓｃｈｍａｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１５：１２５５０～１２５６８も参照。「誘導体」（例えば、ペプチドまたはアミノ酸）には、化合物上の１つ以上の反応基が置換基で誘導体化された形態が含まれる。ペプチド誘導体の例としては、アミノ酸側鎖、ペプチド骨格、またはアミノ末端もしくはカルボキシ末端が誘導体化されたペプチド（例えば、メチル化アミド結合を有するペプチド化合物）が挙げられる。化合物Ｘの「類似体」には、機能活性に必要な化学構造を保持しつつ、ある異なる化学構造も含む化合物が含まれる。天然に存在するペプチドの類似体の例としては、１つ以上の天然に存在しないアミノ酸を含むペプチドが挙げられる。化合物の「模倣体」には、その化合物の機能活性に必要な化学構造が、その化合物の立体構造を模倣する他の化学構造で置き換えられた化合物が含まれる。ペプチド模倣体の例としては、ペプチド骨格が１つ以上のベンゾジアゼピン分子で置換されたペプチド化合物が挙げられる（例えば、Ｊａｍｅｓ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：１９３７～１９４２を参照）。
【0014】
用語「アミノ酸」とは、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体を指す。アミノ酸は、本明細書において、それらの一般に知られている３文字記号、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名法委員会により推奨される１文字記号のいずれかで呼ばれ得る。同様に、ヌクレオチドも、それらの一般に受け入れられている１文字コードで呼ばれ得る。アミノ酸という用語には、天然に存在するアミノ酸（Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ）、希少天然アミノ酸、非天然（合成）アミノ酸が含まれる。アミノ酸は、好ましくはＬ配置であるが、Ｄ配置であっても、Ｄ配置とＬ配置のアミノ酸の混合物であってもよい。用語「天然アミノ酸」には、脂肪族アミノ酸（グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン）、ヒドロキシル化アミノ酸（セリンおよびスレオニン）、含硫アミノ酸（ｓｕｌｆｕｒｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ）（システインおよびメチオニン）、ジカルボン酸アミノ酸およびそれらのアミド（アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸およびグルタミン）、２つの塩基性基を有するアミノ酸（リジン、アルギニンおよびヒスチジン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン）および環状アミノ酸（プロリン）が含まれる。本明細書中で使用される場合、用語「非天然アミノ酸」とは、位置αでアミン基に置換された、天然アミノ酸と構造的に関連しているカルボン酸、またはその誘導体を指す。修飾アミノ酸または希少アミノ酸の例示的な限定されない例としては、２－アミノアジピン酸、３－アミノアジピン酸、β－アラニン、２－アミノ酪酸、４－アミノ酪酸、６－アミノカプロン酸、２－アミノヘプタン酸、２－アミノイソ酪酸、３－アミノイソ酪酸、２－アミノピメリン酸、２，４－ジアミノ酪酸、デスモシン、２，２’－ジアミノピメリン酸、２，３－ジアミノプロピオン酸、Ｎ－エチルグリシン、Ｎ－エチルアスパラギン、ヒドロキシリジン、アロヒドロキシリジン、３－ヒドロキシプロリン、４－ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロイソロイシン、Ｎ－メチルグリシン、Ｎ－メチルイソロイシン、６－Ｎ－メチルリジン、Ｎ－メチルバリン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチンなどが挙げられる。
【0015】
括弧内に示されるアミノ酸の位置は、括弧内にあるアミノ酸が、所定の位置での選択肢として見出され得ることを示す。したがって、［（ａ）／（ｂ）］は、上記位置のアミノ酸が非極性脂肪族アミノ酸または極性非荷電アミノ酸であり得ることを示し；［Ｋ／Ｒ］は、上記位置のアミノ酸がＬｙｓまたはＡｒｇであり得ることを示し；［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］は、上記位置のアミノ酸が非極性脂肪族アミノ酸、極性非荷電アミノ酸、正荷電アミノ酸、または芳香族アミノ酸であり得ることを示し；［Ｌ］は、上記位置のアミノ酸がＬｅｕのみであり得ることを示し；［（ｅ）］は、上記位置のアミノ酸が負荷電アミノ酸のみであり得ることを示し；［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］は、上記位置のアミノ酸が非極性脂肪族アミノ酸、極性非荷電アミノ酸、または正荷電アミノ酸であり得ることを示し；［Ｅ］は、上記位置のアミノ酸がＧｌｕのみであり得ることを示し；［Ｉ］は、上記位置のアミノ酸がＩｌｅのみであり得ることを示す。
【0016】
本明細書中で使用される場合、非極性脂肪族アミノ酸は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅからなる群から選択され；極性非荷電アミノ酸は、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、およびＧｌｎからなる群から選択され；正荷電アミノ酸は、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＡｒｇからなる群から選択され；芳香族アミノ酸は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐからなる群から選択され；そして負荷電アミノ酸は、Ａｓｐ、およびＧｌｕからなる群から選択される。
【0017】
本発明のペプチドの第２の領域は、９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる。本発明のペプチドの第２の領域の位置１のアミノ酸は、非極性脂肪族アミノ酸または極性非荷電アミノ酸であり；好ましくはＡｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、またはＶａｌであり、最も好ましくはＶａｌである。本発明のペプチドの第２の領域の位置２のアミノ酸は、ＬｙｓまたはＡｒｇであり；好ましくはＬｙｓである。本発明のペプチドの第２の領域の位置３のアミノ酸は、非極性脂肪族アミノ酸または極性非荷電アミノ酸であり；好ましくはＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、またはＡｌａであり；最も好ましくはＭｅｔまたはＬｅｕである。本発明のペプチドの第２の領域の位置４のアミノ酸は、非極性脂肪族アミノ酸、極性非荷電アミノ酸、正荷電アミノ酸、または芳香族アミノ酸であり；好ましくはＧｌｙ、Ａｒｇ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、およびＰｈｅであり；最も好ましくはＡｌａである。本発明のペプチドの第２の領域の位置５のアミノ酸は、Ｌｅｕである。本発明のペプチドの第２の領域の位置６のアミノ酸は、負荷電アミノ酸であり；好ましくはＡｓｐまたはＧｌｕであり、最も好ましくはＡｓｐである。本発明のペプチドの第２の領域の位置７のアミノ酸は、非極性脂肪族アミノ酸、極性非荷電アミノ酸、または正荷電アミノ酸であり；好ましくはＩｌｅ、Ａｓｎ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ＧｌｙまたはＣｙｓであり；最も好ましくはＩｌｅまたはＶａｌである。本発明のペプチドの第２の領域の位置８のアミノ酸は、Ｇｌｕである。本発明のペプチドの第２の領域の位置９のアミノ酸は、Ｉｌｅである。
【0018】
特定の実施形態において、本発明のペプチドは、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する。別の特定の実施形態において、本発明のペプチドは、最小１２アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する。特定の実施形態において、本発明のペプチドは、最小９アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する。別の特定の実施形態において、本発明のペプチドは、最小１２アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する。別の特定の実施形態において、本発明のペプチドは、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０個のアミノ酸の長さを有する。本発明のペプチドの第１の領域は、「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなり、ここで、「ｎ」は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０または４１個のアミノ酸である。本発明のペプチドの第３の領域は、「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなり、ここで、「ｍ」は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０または４１個のアミノ酸である。
【0019】
好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ａ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｔ／Ｖ］－［Ｋ／Ｒ］－［Ｌ／Ｉ／Ｍ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ａ］－［Ｇ／Ｒ／Ａ／Ｈ／Ｋ／Ｓ／Ｆ］－［Ｌ］－［Ｄ／Ｅ］－［Ｉ／Ｎ／Ｖ／Ｍ／Ｋ／Ｑ／Ａ／Ｌ／Ｇ／Ｃ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１４）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有し、ただし、上記ペプチド配列が、以下：
（ｉ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号２）；
（ｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号３）；
（ｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号４）；
（ｉｖ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号５）；
（ｖ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号６）；
（ｖｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号７）；
（ｖｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号８）；
（ｖｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９）；
（ｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０）；
（ｘ）ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）；
（ｘｉ）ＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳＬＬＥＧＱＥＤＨＹＮＮＬＳＡＳＫＶＬ（配列番号１２）；
（ｘｉｉ）ＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹ（配列番号１３）
（ｘｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）；
（ｘｉｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧＹＰＡＳＡＧＬＭＰＱＮＦＧＶＩ（配列番号８８）；
（ｘｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号８９）；
（ｘｖｉ）ＫＱＤＭＡＲＱＬＲＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９０）；
（ｘｖｉｉ）ＲＡＤＳＥＲＱＮＱＥＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳ（配列番号９１）；
（ｘｖｉｉｉ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９２）；
（ｘｉｘ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＱＥＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９３）；
（ｘｘ）ＫＤＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９４）；
（ｘｘｉ）ＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫ（配列番号９５）；
（ｘｘｉｉ）ＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩ（配列番号９６）；
（ｘｘｉｉｉ）ＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬ（配列番号９７）；
（ｘｘｉｖ）ＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号９８）；
（ｘｘｖ）ＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧ（配列番号９９）；
（ｘｘｖｉ）ＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１００）；
（ｘｘｖｉｉ）ＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１０１）；
（ｘｘｖｉｉｉ）ＤＹＱＥＬＭＮＴＫＬＡＬＤＬＥＩＡＴＹＲＴＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０２）；
（ｘｘｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０３）；
（ｘｘｘ）ＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０４）；
（ｘｘｘｉ）ＥＹＱＱＬＬＤＩＫＩＲＬＥＮＥＩＱＴＹＲＳＬＬＥＧＥＧ（配列番号１０５）；
（ｘｘｘｉｉ）ＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＬＥＤＧＥ（配列番号１０６）；
（ｘｘｘｉｉｉ）ＬＲＧＴＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧ（配列番号１０７）；
（ｘｘｘｉｖ）ＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０８）
のいずれでもないことを条件とする、ペプチドに関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ａ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｔ／Ｖ］－［Ｋ／Ｒ］－［Ｌ／Ｉ／Ｍ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ａ］－［Ｇ／Ｒ／Ａ／Ｈ／Ｋ／Ｓ／Ｆ］－［Ｌ］－［Ｄ／Ｅ］－［Ｉ／Ｎ／Ｖ／Ｍ／Ｋ／Ｑ／Ａ／Ｌ／Ｇ／Ｃ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１４）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有し、ただし、上記ペプチド配列が、以下：
（ｉ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号２）；
（ｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号３）；
（ｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号４）；
（ｉｖ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号５）；
（ｖ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号６）；
（ｖｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号７）；
（ｖｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号８）；
（ｖｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９）；
（ｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０）；
（ｘ）ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）；
（ｘｉ）ＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳＬＬＥＧＱＥＤＨＹＮＮＬＳＡＳＫＶＬ（配列番号１２）；
（ｘｉｉ）ＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹ（配列番号１３）
（ｘｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）；
（ｘｉｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧＹＰＡＳＡＧＬＭＰＱＮＦＧＶＩ（配列番号８８）；
（ｘｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号８９）；
（ｘｖｉ）ＫＱＤＭＡＲＱＬＲＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９０）；
（ｘｖｉｉ）ＲＡＤＳＥＲＱＮＱＥＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳ（配列番号９１）；
（ｘｖｉｉｉ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９２）；
（ｘｉｘ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＱＥＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９３）；
（ｘｘ）ＫＤＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９４）；
（ｘｘｉ）ＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫ（配列番号９５）；
（ｘｘｉｉ）ＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩ（配列番号９６）；
（ｘｘｉｉｉ）ＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬ（配列番号９７）；
（ｘｘｉｖ）ＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号９８）；
（ｘｘｖ）ＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧ（配列番号９９）；
（ｘｘｖｉ）ＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１００）；
（ｘｘｖｉｉ）ＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１０１）；
（ｘｘｖｉｉｉ）ＤＹＱＥＬＭＮＴＫＬＡＬＤＬＥＩＡＴＹＲＴＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０２）；
（ｘｘｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０３）；
（ｘｘｘ）ＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０４）；
（ｘｘｘｉ）ＥＹＱＱＬＬＤＩＫＩＲＬＥＮＥＩＱＴＹＲＳＬＬＥＧＥＧ（配列番号１０５）；
（ｘｘｘｉｉ）ＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＬＥＤＧＥ（配列番号１０６）；
（ｘｘｘｉｉｉ）ＬＲＧＴＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧ（配列番号１０７）；
（ｘｘｘｉｖ）ＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０８）
のいずれでもないことを条件とする、ペプチドに関する。
【0020】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～１１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ｖ］－［Ｋ］－［Ｍ／Ｌ］－［Ａ］－［Ｌ］－［Ｄ］－［Ｉ／Ｖ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１５）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～１１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有し、ただし、上記ペプチド配列が、以下：
（ｉ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号２）；
（ｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号３）；
（ｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号４）；
（ｉｖ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号５）；
（ｖ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号６）；
（ｖｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号７）；
（ｖｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号８）；
（ｖｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９）；
（ｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０）；
（ｘ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）；
（ｘｉ）ＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０８）
のいずれでもないことを条件とする、ペプチドに関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～１１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ｖ］－［Ｋ］－［Ｍ／Ｌ］－［Ａ］－［Ｌ］－［Ｄ］－［Ｉ／Ｖ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１５）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～１１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、
上記ペプチドが、最小９アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有し、ただし、上記ペプチド配列が、以下：
（ｉ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号２）；
（ｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号３）；
（ｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号４）；
（ｉｖ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号５）；
（ｖ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号６）；
（ｖｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号７）；
（ｖｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号８）；
（ｖｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９）；
（ｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０）；
（ｘ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）；
（ｘｉ）ＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０８）
のいずれでもないことを条件とする、ペプチドに関する。
【0021】
特定の実施形態において、本発明によるペプチドは、以下のことが可能である：
（ａ）白血球においてアポトーシス、ピロトーシスおよび／またはネクロトーシスを誘導すること、および／または
（ｂ）炎症性サイトカインの分泌を刺激すること。
したがって、これらのペプチドは、その細胞透過能によって２種類の効果を有する。一方では、これらのペプチドは、白血球または単球精製培養物に添加されるとサイトカインの産生を促進することができ、他方では、鳥類または哺乳類の真核細胞の任意の集団において細胞死を引き起こす。これらのペプチドはまた、ヒトＴ－リンパ球の細胞死を誘導することができる。これらのペプチドは内因性であるため、「ダメージ関連分子パターン」（ＤＡＭＰ）とみなされ得る。
（ａ）白血球においてアポトーシス、ピロトーシスおよび／またはネクロトーシスを誘導すること、および／または
（ｂ）炎症性サイトカインの分泌を刺激すること。
したがって、これらのペプチドは、その細胞透過能によって２種類の効果を有する。一方では、これらのペプチドは、白血球または単球精製培養物に添加されるとサイトカインの産生を促進することができ、他方では、鳥類または哺乳類の真核細胞の任意の集団において細胞死を引き起こす。これらのペプチドはまた、ヒトＴ－リンパ球の細胞死を誘導することができる。これらのペプチドは内因性であるため、「ダメージ関連分子パターン」（ＤＡＭＰ）とみなされ得る。
【0022】
用語「アポトーシス」とは、本明細書中で使用される場合、細胞自殺の選択的形態を引き起こす生化学的事象の制御されたネットワークに関するものであり、容易に観察可能な形態学的および生化学的現象、例えば、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）の断片化、クロマチンの凝縮（エンドヌクレアーゼ活性と関連している場合も関連していない場合もある）、染色体移動、細胞核における辺縁趨向、アポトーシス小体の形成、ミトコンドリア膨化、ミトコンドリアクリステの拡張、ミトコンドリア透過性遷移孔の開口、および／またはミトコンドリアプロトン勾配の消失などを特徴とする。細胞アポトーシスを測定する方法は当業者に公知であり、限定はされないが、ＤＮＡ断片化を測定するアッセイ（細胞透過処理後の染色体ＤＮＡの染色を含む）、カスパーゼ３などのカスパーゼの活性化を測定するアッセイ（プロテアーゼ活性アッセイを含む）、カスパーゼ切断産物を測定するアッセイ（ＰＡＲＰおよびサイトケラチン１８分解の検出を含む）、クロマチンクロマトグラフィー検査アッセイ（染色体ＤＮＡ染色を含む）、ＤＮＡ鎖切断（ニック）およびＤＮＡ断片化（ねじれ型ＤＮＡ末端）を測定するアッセイ（ニックトランスレーションまたはＩＳＮＴによる細胞の活性標識、および末端標識またはＴＵＮＥＬによる細胞の活性標識を含む）、アポトーシス細胞の表面上のホスファチジルセリンを検出するアッセイ（移行した膜成分の検出を含む）、細胞膜損傷／漏出を測定するアッセイ（トリパンブルー排除アッセイおよびヨウ化プロピジウム排除アッセイを含む）が挙げられる。例示的なアッセイとしては、フローサイトメトリーによるアポトーシス細胞の散乱パラメータの解析、フローサイトメトリーによるＤＮＡ含量分析（ヨウ化プロピジウムなどの蛍光色素溶液中でのＤＮＡ染色を含む）、末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼによるＤＮＡ鎖切断の蛍光色素標識またはＴｄＴアッセイ、フローサイトメトリーによるアネキシンＶ結合の分析、およびＴＵＮＥＬアッセイが挙げられる。
【0023】
用語「ピロトーシス」とは、本明細書中で使用される場合、細胞内病原体による免疫細胞の感染時に最も頻繁に生じ、炎症性サイトカインの放出、および感染細胞の膨張および破裂を特徴とする、非常に炎症性の高いプログラム細胞死の形態を指す。放出されたサイトカインは、感染と戦うために他の免疫細胞を引き寄せ、組織の炎症を引き起こす。ピロトーシスは、細胞内複製ニッチを取り除き、宿主の防御反応を強化することにより、様々な細菌感染およびウイルス感染の迅速な排除を促進する。ピロトーシスにはカスパーゼ１という酵素の作用が必要であり、この酵素はピロトソーム（インフラマソームとしても知られる）と呼ばれる大きな超分子複合体によって活性化される。アポトーシスとは異なり、ピロトーシスによる細胞死は細胞膜破裂を生じ、さらに多くの免疫細胞を動員して組織における炎症カスケードをさらに持続させるサイトカインを含む、ＡＴＰ、ＤＮＡおよびＡＳＣオリゴマー（スペック）などのダメージ関連分子パターン（ＤＡＭＰ）分子を細胞外環境に放出する。
【0024】
用語「ネクロトーシス」とは、本明細書中で使用される場合、アポトーシスおよびネクローシスの特徴を模倣する制御された細胞死の代替様式を指す。ネクロトーシスには、タンパク質ＲＩＰＫ３（炎症、細胞生存、および疾患の制御因子として以前からよく知られている）およびその基質であるＭＬＫＬが、この経路の重大な担い手として必要である。ネクロトーシスは、Ｔｏｌｌ様受容体、細胞死受容体、インターフェロンなどのメディエーターによって誘導される。ネクロトーシスの免疫原性は、免疫系による病原体に対する防御を助けるなど、特定の状況でのネクロトーシスの関与に有利に働く。ネクロトーシスは、ウイルス防御機構として明確に定義されており、ウイルスのカスパーゼインヒビターの存在下でカスパーゼ非依存的に細胞を「細胞自殺」させ、ウイルス複製を制限することができる。ネクロトーシスは、疾患に対する反応であることに加え、クローン病、膵炎、および心筋梗塞などの炎症性疾患の構成要素としても特徴づけられている。
【0025】
本発明の文脈において、用語「炎症性サイトカイン」とは、直接的に、または特定の細胞型では細胞接着分子または他のサイトカインの合成を誘導する能力によって、炎症を促進し、炎症反応を制御するサイトカインを指す。主な炎症性サイトカインは、ＩＬ１－α、ＩＬ１－β、ＩＬ６、およびＴＮＦ－αである。
【0026】
本発明のペプチドは、ペプチドを細胞内に送達するための１つまたは複数の追加的な要素を含み得る。ペプチドの細胞内送達を達成する他の非限定的手段としては、カチオン性脂質混合物によるトランスフェクション、ポリマーベースの試薬によるトランスフェクション、デンドリマー、ナノキャリア、マイクロインジェクション、微粒子銃粒子送達システム（すなわち、遺伝子銃）、エレクトロポレーション、ソノポレーション、光学的トランスフェクションおよびベクターフリーマイクロ流体プラットフォーム（すなわち、ＣｅｌｌＳｑｕｅｅｚｅ（登録商標））が挙げられる。
【0027】
特定の実施形態において、本発明のペプチドの第１の領域は、アミノ酸配列Ｌ－Ｌ－Ｎを含む。
【0028】
別の特定の実施形態において、本発明のペプチドの第１の領域および／または第３の領域は、細胞透過性ペプチドおよび／またはシグナルペプチドを含む。細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）は、共有結合を介した化学結合または非共有相互作用のいずれかによってペプチドと結合している様々な分子実体の細胞への摂取／取り込みを促進する短いペプチドである。結合する分子実体は、ナノサイズの粒子から小さな化学分子および大きなＤＮＡ断片まで多岐にわたる。ＣＰＰの機能は、結合する実体を細胞内に送達することであり、そのプロセスは、一般的にエンドサイトーシスによって起こる。ＣＰＰは、典型的に、リジンまたはアルギニンなどの正荷電アミノ酸を相対的に多く含むか、極性／荷電アミノ酸と非極性疎水性アミノ酸の交互パターンを含む配列を有するかのいずれかであるアミノ酸組成を有する。これらの２つのタイプの構造は、それぞれ、ポリカチオン性または両親媒性と呼ばれる。ＣＰＰの第３のクラスは、疎水性ペプチドであり、正味電荷の低い無極性残基のみを含有するか、または細胞取り込みに重要な疎水性アミノ酸基を有する。特定の実施形態において、細胞透過性ペプチドは、９アミノ酸の環状ペプチドｉＲＧＤ（ＣＲＧＤＫＧＰＤＣ、配列番号１６）を含む腫瘍透過性ペプチドである。別の特定の実施形態において、細胞透過性ペプチドは、極性アミノ酸配列を含む。好ましい実施形態において、細胞透過性ペプチドは、３個以上（すなわち、３個、４個、５個、６個、７個、８個またはそれ以上）の連続するリジンアミノ酸（Ｋ－Ｋ－Ｋ）または３個以上（すなわち、３個、４個、５個、６個、７個、８個、またはそれ以上）の連続するアルギニンアミノ酸（Ｒ－Ｒ－Ｒ）を含む。より好ましい実施形態において、細胞透過性ペプチドは、８個以上の連続するリジンアミノ酸（Ｋ－Ｋ－Ｋ－Ｋ－Ｋ－Ｋ－Ｋ－Ｋ、配列番号１７）または８個以上の連続するアルギニンアミノ酸（Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ｒ、配列番号１８）を含む。シグナルペプチド（シグナル配列、標的シグナル、局在化シグナル、局在化配列、輸送ペプチド、リーダー配列またはリーダーペプチドと呼ばれることもある）は、分泌経路に向かうことになっている新たに合成されたタンパク質の大部分のＮ末端に存在する短いペプチド（通常、１６～３０アミノ酸長）である。これらのタンパク質には、特定の細胞小器官（小胞体、ゴルジ体またはエンドソーム）内に存在するタンパク質、細胞から分泌されるタンパク質、またはほとんどの細胞膜に挿入されるタンパク質が含まれる。特定の実施形態において、本発明のペプチドの第１の領域および／または第３の領域は、「核局在化配列」（ＮＬＳ）ペプチドを含む。特定の実施形態において、本発明のペプチドは、タンパク質タグをさらに含むか、またはキメラタンパク質を形成するポリペプチドに結合される。特定の例では、本発明のペプチドは、キメラタンパク質を形成するために抗体に結合されてもよい。
【0029】
特定の実施形態において、本発明のペプチドは、以下の配列のペプチドである：
（ｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ（配列番号１９）；
（ｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＫＫＫ（配列番号２０）；
（ｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ（配列番号２１）；
（ｉｖ）ＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ（配列番号２２）；
（ｖ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥ（配列番号２３）；
（ｖｉ）ＲＥＹＱＥＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹ（配列番号２４）；
（ｖｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号２５）；
（ｖｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＫＫＫ（配列番号２６）；
（ｉｘ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＫＫＫ（配列番号２７）；
（ｘ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＫＫＫ（配列番号２８）；
（ｘｉ）ＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号２９）；
（ｘｉｉ）ＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号３０）；
（ｘｉｉｉ）ＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号３１）；
（ｘｉｖ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＫＫＫ（配列番号３２）；
（ｘｖ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＫＫＫ（配列番号３３）；
（ｘｖｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＫＫＫ（配列番号３４）；
（ｘｖｉｉ）ＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＫＫＫ（配列番号３５）；
（ｘｖｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＫＫＫ（配列番号３６）；
（ｘｉｘ）ＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＫＫＫ（配列番号３７）；
（ｘｘ）ＬＬＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＫＫＫ（配列番号３８）；または
（ｘｘｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３９）。
（ｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ（配列番号１９）；
（ｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＫＫＫ（配列番号２０）；
（ｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ（配列番号２１）；
（ｉｖ）ＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ（配列番号２２）；
（ｖ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥ（配列番号２３）；
（ｖｉ）ＲＥＹＱＥＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹ（配列番号２４）；
（ｖｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号２５）；
（ｖｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＫＫＫ（配列番号２６）；
（ｉｘ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＫＫＫ（配列番号２７）；
（ｘ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＫＫＫ（配列番号２８）；
（ｘｉ）ＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号２９）；
（ｘｉｉ）ＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号３０）；
（ｘｉｉｉ）ＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号３１）；
（ｘｉｖ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＫＫＫ（配列番号３２）；
（ｘｖ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＫＫＫ（配列番号３３）；
（ｘｖｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＫＫＫ（配列番号３４）；
（ｘｖｉｉ）ＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＫＫＫ（配列番号３５）；
（ｘｖｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＫＫＫ（配列番号３６）；
（ｘｉｘ）ＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＫＫＫ（配列番号３７）；
（ｘｘ）ＬＬＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＫＫＫ（配列番号３８）；または
（ｘｘｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３９）。
【0030】
特定の実施形態において、本発明のペプチドは、以下の配列のペプチドではない：
（ｉ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号２）；
（ｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号３）；
（ｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号４）；
（ｉｖ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号５）；
（ｖ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号６）；
（ｖｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号７）；
（ｖｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号８）；
（ｖｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９）；
（ｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０）；
（ｘ）ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）；
（ｘｉ）ＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳＬＬＥＧＱＥＤＨＹＮＮＬＳＡＳＫＶＬ（配列番号１２）；
（ｘｉｉ）ＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹ（配列番号１３）
（ｘｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）；
（ｘｉｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧＹＰＡＳＡＧＬＭＰＱＮＦＧＶＩ（配列番号８８）；
（ｘｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号８９）；
（ｘｖｉ）ＫＱＤＭＡＲＱＬＲＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９０）；
（ｘｖｉｉ）ＲＡＤＳＥＲＱＮＱＥＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳ（配列番号９１）；
（ｘｖｉｉｉ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９２）；
（ｘｉｘ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＱＥＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９３）；
（ｘｘ）ＫＤＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９４）；
（ｘｘｉ）ＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫ（配列番号９５）；
（ｘｘｉｉ）ＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩ（配列番号９６）；
（ｘｘｉｉｉ）ＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬ（配列番号９７）；
（ｘｘｉｖ）ＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号９８）；
（ｘｘｖ）ＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧ（配列番号９９）；
（ｘｘｖｉ）ＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１００）；
（ｘｘｖｉｉ）ＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１０１）；
（ｘｘｖｉｉｉ）ＤＹＱＥＬＭＮＴＫＬＡＬＤＬＥＩＡＴＹＲＴＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０２）；
（ｘｘｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０３）；
（ｘｘｘ）ＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０４）；
（ｘｘｘｉ）ＥＹＱＱＬＬＤＩＫＩＲＬＥＮＥＩＱＴＹＲＳＬＬＥＧＥＧ（配列番号１０５）；
（ｘｘｘｉｉ）ＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＬＥＤＧＥ（配列番号１０６）；
（ｘｘｘｉｉｉ）ＬＲＧＴＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧ（配列番号１０７）；
（ｘｘｘｉｖ）ＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０８）。
（ｉ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号２）；
（ｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号３）；
（ｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号４）；
（ｉｖ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号５）；
（ｖ）ＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号６）；
（ｖｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号７）；
（ｖｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号８）；
（ｖｉｉｉ）ＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９）；
（ｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０）；
（ｘ）ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）；
（ｘｉ）ＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳＬＬＥＧＱＥＤＨＹＮＮＬＳＡＳＫＶＬ（配列番号１２）；
（ｘｉｉ）ＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹ（配列番号１３）
（ｘｉｉｉ）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）；
（ｘｉｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧＹＰＡＳＡＧＬＭＰＱＮＦＧＶＩ（配列番号８８）；
（ｘｖ）ＲＡＥＧＱＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号８９）；
（ｘｖｉ）ＫＱＤＭＡＲＱＬＲＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９０）；
（ｘｖｉｉ）ＲＡＤＳＥＲＱＮＱＥＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＳ（配列番号９１）；
（ｘｖｉｉｉ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９２）；
（ｘｉｘ）ＫＥＥＭＡＲＨＬＱＥＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９３）；
（ｘｘ）ＫＤＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫ（配列番号９４）；
（ｘｘｉ）ＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫ（配列番号９５）；
（ｘｘｉｉ）ＲＱＡＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩ（配列番号９６）；
（ｘｘｉｉｉ）ＱＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬ（配列番号９７）；
（ｘｘｉｖ）ＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号９８）；
（ｘｘｖ）ＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＰＰＫＧ（配列番号９９）；
（ｘｘｖｉ）ＹＱＲＬＭＤＩＫＳＲＬＥＱＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１００）；
（ｘｘｖｉｉ）ＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲ（配列番号１０１）；
（ｘｘｖｉｉｉ）ＤＹＱＥＬＭＮＴＫＬＡＬＤＬＥＩＡＴＹＲＴＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０２）；
（ｘｘｉｘ）ＤＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＶＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０３）；
（ｘｘｘ）ＥＹＱＥＬＭＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥ（配列番号１０４）；
（ｘｘｘｉ）ＥＹＱＱＬＬＤＩＫＩＲＬＥＮＥＩＱＴＹＲＳＬＬＥＧＥＧ（配列番号１０５）；
（ｘｘｘｉｉ）ＥＹＥＡＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＡＴＹＲＲＬＬＥＤＧＥ（配列番号１０６）；
（ｘｘｘｉｉｉ）ＬＲＧＴＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧ（配列番号１０７）；
（ｘｘｘｉｖ）ＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲ（配列番号１０８）。
【0031】
本明細書の他の箇所に記載されているすべての用語および実施形態は、本発明のこれらの態様にも等しく適用可能である。
【0032】
本発明の核酸、ベクターおよびウイルス
別の態様において、本発明は、本発明のペプチドをコードする核酸、ならびに上記核酸を含む発現カセット、ベクターおよびウイルスに関する。
別の態様において、本発明は、本発明のペプチドをコードする核酸、ならびに上記核酸を含む発現カセット、ベクターおよびウイルスに関する。
【0033】
好ましくは、上記核酸はポリヌクレオチドであり、ヌクレオチドモノマー（核酸）の一本鎖または二本鎖ポリマーを指し、ヌクレオチド間ホスホジエステル結合連鎖（ｂｏｎｄ ｌｉｎｋａｇｅ）によって連結された２’－デオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）およびリボヌクレオチド（ＲＮＡ）を含むが、これらに限定されない。一実施形態では、上記核酸はコドン最適化されている。好ましい実施形態において、上記核酸は、ヒトにおける発現のためにコドン最適化されている。本発明による使用のためのコドン最適化核酸は、免疫原をコードする核酸のコドンを「ヒト化」コドン（すなわち、高発現ヒト遺伝子において頻繁に現れるコドン）に置き換えることによって調製され得る。Ａｎｄｒｅ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１９９８；７２：１４９７～１５０３を参照。本発明のこの態様の核酸は、ベクターに連結するために、制限酵素による切断を必要とする場合がある。この手順は、様々な末端ヌクレオチド（例えば、１個、２個、または３個）の除去を伴う可能性がある。従って、一実施形態では、本発明は、制限酵素で各末端を切断された上記核酸に関する。
【0034】
別の実施形態において、本発明は、本発明のこの態様の核酸、プロモーター配列および３’－ＵＴＲ、および場合により選択マーカーを含む発現カセットに関する。好ましくは、プロモーター配列は、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターまたは初期－後期ｐ７．５プロモーター配列である。好ましくは、３’－ＵＴＲは、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリＡである。任意の選択マーカーは、好ましくは、抗生物質耐性遺伝子（例えば、カナマイシン、アンピシリン、テトラサイクリン、スペクチノマイシン）である。
【0035】
さらに別の実施形態において、本発明は、本発明のこの態様の核酸または発現カセットを含む発現ベクターに関する。用語「ベクター」とは、本明細書中で使用される場合、目的の１つ以上のポリヌクレオチドを宿主細胞に送達することができ、好ましくはさらに発現させることができる構築物を指す。ベクターの例としては、ウイルスベクター、裸のＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤と結合したＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソームに封入されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、および産生細胞などの特定の真核細胞が挙げられるが、これらに限定されない。この用語はまた、ゲノムＤＮＡへの標的化構築物のランダムなまたは部位特異的な組込みを可能にする標的化構築物に関する。そのような標的化構築物は、好ましくは、相同組換えまたは異種組込みのいずれかに十分な長さのＤＮＡを含む。特定の実施形態において、ベクターは発現ベクターである。用語「発現ベクター」とは、細胞、好ましくは真核細胞、より好ましくは哺乳動物細胞において本発明の核酸構築物を発現するために使用される複製ＤＮＡ構築物をいう。発現ベクターはまた、細菌におけるベクター増幅に必要な、原核生物の複製起点を含むことが好ましい。さらに、発現ベクターは、細菌のための選択遺伝子、例えば、抗生物質（例えば、アンピシリン、カナマイシン、クロラムフェニコールなど）に対する耐性を付与するタンパク質をコードする遺伝子も含み得る。発現ベクターは、１つ以上の複数のクローニング部位も含み得る。
【0036】
特定の実施形態において、発現ベクターは、本発明の核酸を含むウイルスベクターまたはウイルス、または本発明の発現ベクターである。より特定の実施形態において、発現ベクターは、レンチウイルスベクターまたはアデノウイルスベクターである。用語「レンチウイルスベクター」とは、本明細書中で使用される場合、宿主ゲノムに組み込む能力により、本質的に緩徐に発症する疾患を引き起こすレトロウイルスの群（または科学的属）に基づくベクターを指す。改変されたレンチウイルスゲノムは、細胞に核酸配列を送達するためのウイルスベクターとして有用である。細胞の感染に対するレンチウイルスの利点は、導入遺伝子を持続的に発現する能力である。これらのウイルスとしては、特に、ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ－１）、ヒト免疫不全ウイルス２型（ＨＩＶ－２）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、ヒツジのビスナウイルス（ＶＩＳＮＡ）およびヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）が挙げられる。組換えレンチウイルスベクターは、非分裂細胞に感染することができ、インビボおよびエクスビボの両方での遺伝子導入および核酸配列の発現に使用され得る。例えば、パッケージング機能、すなわち、ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ、ならびにｒｅｖおよびｔａｔを有する２つ以上のベクターを用いて適切な宿主細胞をトランスフェクトする、非分裂細胞に感染することができる組換えレンチウイルスが、米国特許第５，９９４，１３６号に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。特定の細胞型の受容体を標的とするために、抗体または特定のリガンドと、エンベロープタンパク質とを結合させることによって、組換えウイルスを標的化し得る。例えば、目的の配列（調節領域を含む）を、特定の標的細胞上の受容体に対するリガンドをコードする別の遺伝子と共にウイルスベクターに挿入することによって、そのベクターは標的特異的となる。本発明によるレンチウイルスベクターは、天然の感染性ウイルスを構成する特定の遺伝子を除去し、標的細胞に導入すべき目的の核酸配列に置き換えるような方法で遺伝子改変されていてもよい。用語「アデノウイルスベクター」とは、本明細書中で使用される場合、アデノウイルスに基づくベクターを指す。用語「アデノウイルス」とは、二本鎖ＤＮＡゲノムを含む擬似二十面体ヌクレオカプシドを有する非エンベロープウイルスであることを特徴とする、アデノウイルス科に属する任意のウイルスを指す。この用語には、標的細胞への感染のための受容体としてＣＡＲ、ＣＤ４６またはデスモグレイン－２を用いるすべての群、亜群、および血清型を含む、ヒトまたは動物に感染可能な任意のアデノウイルスが含まれる。アデノウイルスという用語には、限定されるものではないが、トリ、イヌ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヒトまたはカエルのアデノウイルスが含まれる。特定の実施形態において、アデノウイルスは、ヒトアデノウイルス、すなわち、ヒトに感染可能なアデノウイルスである。「血清型」とは、免疫学的に異なるアデノウイルスの各型を指す。ヒトアデノウイルスには少なくとも５７の血清型が存在し、いくつかの亜群（Ａ～Ｇ）に分類されている。別の実施形態において、ウイルスベクターは、ウイルスまたはパルボウイルス科、好ましくはパルボウイルス亜科由来、より好ましくはディペンドパルボウイルス属（Ｄｅｐｅｎｄｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）由来、さらにより好ましくはアデノ随伴ウイルスに基づくベクターである。
【0037】
発現ベクターおよび／またはウイルスベクターは、コアペプチドが細胞内で直接合成され、そこでその効果を発揮し得るように、９アミノ酸コアペプチドをコードしかつ送達することが可能であるべきである。
【0038】
本明細書の他の箇所に記載されているすべての用語および実施形態は、本発明のこれらの態様にも等しく適用可能である。
【0039】
本発明の薬理学的組成物
さらなる態様では、本発明は、治療有効量の本発明のペプチド、本発明の核酸、本発明の発現ベクターまたは本発明のウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を指す。
さらなる態様では、本発明は、治療有効量の本発明のペプチド、本発明の核酸、本発明の発現ベクターまたは本発明のウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を指す。
【0040】
用語「医薬組成物」とは、本明細書中で使用される場合、治療有効量の本発明によるペプチドまたは核酸構築物（または上記核酸構築物を含むベクター、ウイルス粒子または細胞）および少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む組成物を指す。本発明による医薬組成物は、例えば、液体溶液、懸濁液、およびエマルジョンなどの注射剤として調製され得る。「薬学的に許容される賦形剤」、または「薬学的に許容される担体」、「薬学的に許容される希釈剤」、または「薬学的に許容されるビヒクル」という用語は、本明細書中で互換的に使用され、任意の従来型の非毒性の固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、封入材料または製剤補助剤を指す。薬学的に許容される担体は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに対して本質的に無毒性であり、かつ、製剤の他の成分と適合性である。適切な担体としては、水、デキストロース、グリセロール、生理食塩水、エタノール、およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。担体は、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、または製剤の有効性を高めるアジュバントなどの追加の薬剤を含み得る。アジュバントは、無菌液体、例えば、水および油（石油、動物、植物、または合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などを含む）からなる群から選択され得る。ビヒクルとしては、特に注射剤用に、水または生理食塩水およびデキストロース水溶液およびグリセロール水溶液が好ましく使用される。好適な医薬用ビヒクルは、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ著「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第２１版、２００５年に記載されている。
【0041】
用語「治療有効量」は、本発明の化合物に関連して、または、本発明の医薬組成物に含まれる化合物、賦形剤および／または担体に関連して、本明細書中で使用される場合、所望の効果をもたらすための、すなわち、疾患から生じる１つ以上の症状の明らかな予防、治癒、遅延、重症度の軽減または寛解を達成するための、上記化合物、賦形剤および／または担体の十分量に関し、これは一般に、他の要因の中でも特に、薬剤自体の特性および達成されるべき治療効果によって決定される。治療有効量はまた、治療される被験体、上記被験体が罹患している疾患の重症度、選択された剤形などにも依存する。このため、本発明に記載され得る用量は、前述の変動要素に応じて用量を調整しなければならない当業者にとっての指針としてのみ考慮されなければならない。一実施形態では、有効量は、治療されている疾患の１つ以上の症状の寛解をもたらす。個々のニーズが異なっていても、本発明による化合物の治療有効量の最適範囲の決定は、当業者の共通の経験に属する。一般に、有効な治療を提供するために必要な投薬量は、当業者により調整可能であるが、年齢、健康、体力、性別、食事、体重、受容体の変化の程度、治療の頻度、損傷の性質および状態、障害または疾病の性質および程度、被験体の医学的状態、投与経路、使用する特定の化合物の活性、効力、薬物動態学および毒物学プロファイルなどの薬理学的考慮事項、薬物送達システムを使用するか否か、および化合物が薬物の組み合わせの一部として投与されるか否かによって異なる。被験体の虚血傷害または虚血／再灌流傷害の予防および／または治療において治療的に有効な本発明による化合物の量は、従来の臨床技術（例えば、Ｔｈｅ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ，Ｏｒａｄｅｌｌ，ＮＪ，１９９５およびＤｒｕｇ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ，Ｉｎｃ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，１９９３を参照）によって決定され得る。
【0042】
本明細書の他の箇所に記載されているすべての用語および実施形態は、本発明のこれらの態様にも等しく適用可能である。
【0043】
本発明のペプチドの、および本発明の核酸、ベクター、ウイルスおよび医薬組成物の医学的使用
さらなる態様において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、医薬における使用のための組成物であって、ただし、上記ペプチド配列が、ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）、またはＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）ではないことを条件とする、組成物に関する。
さらなる態様において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、医薬における使用のための組成物であって、ただし、上記ペプチド配列が、ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）、またはＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）ではないことを条件とする、組成物に関する。
【0044】
特定の実施形態において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ａ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｔ／Ｖ］－［Ｋ／Ｒ］－［Ｌ／Ｉ／Ｍ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ａ］－［Ｇ／Ｒ／Ａ／Ｈ／Ｋ／Ｓ／Ｆ］－［Ｌ］－［Ｄ／Ｅ］－［Ｉ／Ｎ／Ｖ／Ｍ／Ｋ／Ｑ／Ａ／Ｌ／Ｇ／Ｃ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１４）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、医薬における使用のための組成物であって、ただし、上記ペプチド配列が、ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）、またはＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）ではないことを条件とする、組成物に関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ａ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｔ／Ｖ］－［Ｋ／Ｒ］－［Ｌ／Ｉ／Ｍ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ａ］－［Ｇ／Ｒ／Ａ／Ｈ／Ｋ／Ｓ／Ｆ］－［Ｌ］－［Ｄ／Ｅ］－［Ｉ／Ｎ／Ｖ／Ｍ／Ｋ／Ｑ／Ａ／Ｌ／Ｇ／Ｃ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１４）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、医薬における使用のための組成物であって、ただし、上記ペプチド配列が、ＶＫＩＡＬＥＶＥＩＡＴＹ（配列番号１１）、またはＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）ではないことを条件とする、組成物に関する。
【0045】
別の特定の実施形態において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～１１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ｖ］－［Ｋ］－［Ｍ／Ｌ］－［Ａ］－［Ｌ］－［Ｄ］－［Ｉ／Ｖ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１５）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～１１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、医薬における使用のための組成物であって、ただし、上記ペプチド配列が、ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）ではないことを条件とする、組成物に関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～１１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ｖ］－［Ｋ］－［Ｍ／Ｌ］－［Ａ］－［Ｌ］－［Ｄ］－［Ｉ／Ｖ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１５）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～１１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、医薬における使用のための組成物であって、ただし、上記ペプチド配列が、ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹ（配列番号８７）ではないことを条件とする、組成物に関する。
【0046】
別のさらなる態様において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、アジュバントとしての使用のための組成物に関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、アジュバントとしての使用のための組成物に関する。
【0047】
特定の実施形態において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ａ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｔ／Ｖ］－［Ｋ／Ｒ］－［Ｌ／Ｉ／Ｍ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ａ］－［Ｇ／Ｒ／Ａ／Ｈ／Ｋ／Ｓ／Ｆ］－［Ｌ］－［Ｄ／Ｅ］－［Ｉ／Ｎ／Ｖ／Ｍ／Ｋ／Ｑ／Ａ／Ｌ／Ｇ／Ｃ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１４）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、アジュバントとしての使用のための組成物に関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ａ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｔ／Ｖ］－［Ｋ／Ｒ］－［Ｌ／Ｉ／Ｍ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ａ］－［Ｇ／Ｒ／Ａ／Ｈ／Ｋ／Ｓ／Ｆ］－［Ｌ］－［Ｄ／Ｅ］－［Ｉ／Ｎ／Ｖ／Ｍ／Ｋ／Ｑ／Ａ／Ｌ／Ｇ／Ｃ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１４）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、アジュバントとしての使用のための組成物に関する。
【0048】
別の特定の実施形態において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～１１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ｖ］－［Ｋ］－［Ｍ／Ｌ］－［Ａ］－［Ｌ］－［Ｄ］－［Ｉ／Ｖ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１５）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～１１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；または、上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス、または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、アジュバントとしての使用のための組成物に関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～１１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ｖ］－［Ｋ］－［Ｍ／Ｌ］－［Ａ］－［Ｌ］－［Ｄ］－［Ｉ／Ｖ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１５）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～１１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；または、上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス、または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、アジュバントとしての使用のための組成物に関する。
【0049】
用語「アジュバント」とは、本明細書中で使用される場合、免疫原性作用物質に添加すると、その混合物に曝露されたレシピエント宿主において、その作用物質に対する免疫応答を非特異的に強化または増強する物質を指す。用語「免疫原性作用物質」または「免疫原」とは、本明細書中で使用される場合、注入された場合に単独で適応免疫応答を誘発することができる抗原を指す。すべての免疫原は抗原でもあるが、すべての抗原が免疫原というわけではない。用語「免疫原性組成物」とは、本明細書中で使用される場合、特定の免疫原に対して抗体または細胞性免疫応答を生じる被験体において、免疫応答を誘発する組成物を指す。免疫原性組成物は、例えば、液体溶液、懸濁液、およびエマルジョンなどの注射剤として調製され得る。用語「抗原性組成物」とは、宿主免疫系によって認識され得る組成物を指す。例えば、抗原性組成物は、宿主免疫系の体液性または細胞性成分によって認識され得るエピトープを含む。
【0050】
別の態様において、本発明は、アジュバントとして、本発明のペプチド、または本発明による核酸、発現ベクター、ウイルス、または医薬組成物を含むワクチンに関する。用語「ワクチン」とは、本明細書中で使用される場合、免疫学的記憶を含む適応免疫応答を誘導することにより、特定の疾患に対する免疫を確立または向上させる物質または組成物を指す。ワクチンは、典型的には、疾患を引き起こす微生物またはその一部に似た作用物質（例えば、ポリペプチド）を含む。ワクチンには、予防的なものと治療的なものがある。
【0051】
なお別のさらなる態様において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、癌の治療における使用のための組成物に関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［（ａ）／（ｂ）］－［Ｋ／Ｒ］－［（ａ）／（ｂ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）／（ｄ）］－［Ｌ］－［（ｅ）］－［（ａ）／（ｂ）／（ｃ）］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１）であり、ここで、（ａ）は非極性脂肪族アミノ酸、（ｂ）は極性非荷電アミノ酸、（ｃ）は正荷電アミノ酸、（ｄ）は芳香族アミノ酸、（ｅ）は負荷電アミノ酸である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、癌の治療における使用のための組成物に関する。
【0052】
特定の実施形態において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ａ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｔ／Ｖ］－［Ｋ／Ｒ］－［Ｌ／Ｉ／Ｍ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ａ］－［Ｇ／Ｒ／Ａ／Ｈ／Ｋ／Ｓ／Ｆ］－［Ｌ］－［Ｄ／Ｅ］－［Ｉ／Ｎ／Ｖ／Ｍ／Ｋ／Ｑ／Ａ／Ｌ／Ｇ／Ｃ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１４）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなり、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、癌の治療における使用のための組成物に関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～４１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ａ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｔ／Ｖ］－［Ｋ／Ｒ］－［Ｌ／Ｉ／Ｍ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ａ］－［Ｇ／Ｒ／Ａ／Ｈ／Ｋ／Ｓ／Ｆ］－［Ｌ］－［Ｄ／Ｅ］－［Ｉ／Ｎ／Ｖ／Ｍ／Ｋ／Ｑ／Ａ／Ｌ／Ｇ／Ｃ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１４）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～４１個のアミノ酸である）
からなり、最小９アミノ酸から最大５０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、癌の治療における使用のための組成物に関する。
【0053】
別の特定の実施形態において、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に：
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～１１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ｖ］－［Ｋ］－［Ｍ／Ｌ］－［Ａ］－［Ｌ］－［Ｄ］－［Ｉ／Ｖ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１５）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～１１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、癌の治療における使用のための組成物に関する。
（１）「ｎ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第１の領域（「ｎ」は０～１１個のアミノ酸である）；
（２）９個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第２の領域（上記９個のアミノ酸の配列は、［Ｖ］－［Ｋ］－［Ｍ／Ｌ］－［Ａ］－［Ｌ］－［Ｄ］－［Ｉ／Ｖ］－［Ｅ］－［Ｉ］（配列番号１５）である）；および
（３）「ｍ」個のアミノ酸のアミノ酸配列からなる第３の領域（「ｍ」は０～１１個のアミノ酸である）
からなるペプチドであって、最小９アミノ酸から最大２０アミノ酸までの長さを有する上記ペプチド；上記ペプチドをコードする核酸；上記核酸を含む発現ベクター；上記核酸または上記発現ベクターを含むウイルス；または、治療有効量の上記ペプチド、上記核酸、上記発現ベクターまたは上記ウイルスを、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含む、癌の治療における使用のための組成物に関する。
【0054】
本明細書で使用される用語「癌」または「腫瘍」とは、制御されていない細胞分裂（または生存率もしくはアポトーシス抵抗性の増大）によって、および上記細胞が他の隣接組織に侵入し（浸潤）、リンパ管および血管を介して上記細胞が通常存在しない身体の他の領域に広がり（転移）、血流を介して循環し、次いで身体の他の場所の正常組織に侵入する能力によって特徴づけられる疾患を指す。腫瘍は、浸潤および転移によって広がることができるか否かに応じて、良性または悪性のいずれかに分類される：良性腫瘍は、浸潤または転移によって広がることができない腫瘍、すなわち、局所的にしか増殖しない腫瘍であり；一方、悪性腫瘍は、浸潤および転移によって広がることができる腫瘍である。癌に関連することが知られている生物学的プロセスには、血管新生、免疫細胞浸潤、細胞遊走および転移が含まれる。癌という用語には、肺癌、肉腫、悪性黒色腫、胸膜中皮腫、膀胱癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞腫、乳癌、結腸直腸癌、腎癌、食道癌、腎上部癌（ｓｕｐｒａｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、耳下腺癌、頭頸部癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、肝癌、中皮腫、多発性骨髄腫、白血病、およびリンパ腫が含まれるが、これらに限定されない。本発明の特定の実施形態では、癌は、リンパ性癌または骨髄性癌である。好ましい実施形態では、癌は多発性骨髄腫である。別の好ましい実施形態では、癌は白血病である。さらに別の好ましい実施形態では、癌はリンパ腫である。別の特定の実施形態では、癌は固形腫瘍である。
【0055】
用語「治療」とは、本明細書中で使用される場合、本明細書中に記載されるような臨床状態を終結させるか、予防するか、寛解させるか、または臨床状態に対する感受性を低下させることを目的とした、任意のタイプの療法を指す。好ましい実施形態において、治療という用語は、本明細書中で定義される障害または状態の予防的治療（すなわち、臨床状態に対する感受性を低下させる療法）に関する。したがって、「治療」、「治療すること」、およびそれらの等価語は、所望の薬理学的効果または生理学的効果を得ることを指し、ヒトを含めた哺乳動物における病的状態または障害の任意の治療を含む。その効果は、障害またはその症状を完全にまたは部分的に予防するという点で予防的であってもよく、かつ／あるいは、障害および／または障害に起因する有害作用の部分的または完全な治癒という点で治療的であってもよい。すなわち、「治療」には、（１）被験体において障害が発症または再発するのを予防すること、（２）障害を抑制すること、例えば、その進行を阻止すること、（３）例えば、失われたか欠損したかまたは欠陥のある機能を回復または修復するか、または非効率的なプロセスを刺激することによって、障害またはその症状の退縮をもたらすなど、宿主が障害またはその症状にもはや苦しまないように、障害または少なくともそれに関連する症状を停止または終結させること、あるいは（４）障害、またはそれに関連する症状を緩和、軽減、または寛解させること（ここで、寛解は、炎症、疼痛、または免疫不全などのパラメータの大きさを少なくとも縮小させることを指す広い意味で使用される）が含まれる。
【0056】
本発明による使用のための化合物または医薬組成物は、任意の適切な投与経路、例えば、非経口（例えば、筋肉内、静脈内、皮下、鼻腔など）、経腸（すなわち、経口、直腸など）、局所などによって被験体に投与され得る。特定の実施形態では、本発明の使用のための組成物は、腹腔内、くも膜下腔内（ｉｎｔｒａｔｅｃａｌ）、膀胱内、胸膜内、静脈内、筋肉内、皮下、鼻腔、または局所経路を介して投与される。固形腫瘍の場合、本発明のペプチドは、腫瘍内に直接投与され得る。別の特定の実施形態では、本発明による使用のための化合物または医薬組成物は、非経口的に、より好ましくは静脈内経路によって投与される。本発明の対応するポリヌクレオチドを含む本発明のベクターは、従来の方法によって被験体に直接投与され得る。あるいは、上記ベクターを用いて、細胞、例えば、ヒトを含めた哺乳動物細胞をエクスビボで形質転換、すなわちトランスフェクトまたは感染させてもよく、その後、人体または動物に移植して、所望の治療効果を得る。人体または動物への投与のために、上記細胞は、細胞生存率に悪影響を及ぼさない適切な培地中で調製される。
【0057】
用語「被験体」、「患者」または「個体」は、動物界の任意のメンバーを指すために本明細書中で互換的に使用され、ヒト、非ヒト霊長類、ウマ、ブタ、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、トリ、ネコ、モルモットまたはげっ歯類を含む、魚類、鳥類、爬虫類、両生類または哺乳類などの脊椎動物であってよい。好ましくは、被験体は哺乳類であり、より好ましくはヒトである。
【0058】
本明細書の他の箇所に記載されているすべての用語および実施形態は、本発明のこれらの態様にも等しく適用可能である。
【0059】
本発明のペプチドのプログラム細胞死誘導剤としての使用
最後の態様において、本発明は、プログラム細胞死誘導剤としての本発明によるペプチドの使用に関する。したがって、アポトーシス、ピロトーシスおよび／またはネクロトーシスによりプログラム細胞死を誘導することができる薬剤としての本発明によるペプチドの使用が企図される。特に、本発明のペプチドは、研究、診断および治療用途において、アポトーシス、ピロトーシスおよび／またはネクロトーシスによりインビトロでのプログラム細胞死を誘導するための試薬として有用であり得ることが想定される。本発明のさらなる態様は、本発明によるペプチドを細胞培養物にインビトロで投与する工程；細胞培養物においてアポトーシスを誘導する工程；および細胞培養物において誘導されたアポトーシスの進行を調べる工程を含む、アポトーシスを調べる方法である。
最後の態様において、本発明は、プログラム細胞死誘導剤としての本発明によるペプチドの使用に関する。したがって、アポトーシス、ピロトーシスおよび／またはネクロトーシスによりプログラム細胞死を誘導することができる薬剤としての本発明によるペプチドの使用が企図される。特に、本発明のペプチドは、研究、診断および治療用途において、アポトーシス、ピロトーシスおよび／またはネクロトーシスによりインビトロでのプログラム細胞死を誘導するための試薬として有用であり得ることが想定される。本発明のさらなる態様は、本発明によるペプチドを細胞培養物にインビトロで投与する工程；細胞培養物においてアポトーシスを誘導する工程；および細胞培養物において誘導されたアポトーシスの進行を調べる工程を含む、アポトーシスを調べる方法である。
【0060】
本明細書の他の箇所に記載されているすべての用語および実施形態は、本発明のこれらの態様にも等しく適用可能である。
【実施例】
【0061】
以下、本発明を以下の実施例を用いて説明するが、これらの実施例は単なる例示であって、本発明の範囲を限定するものではないと解釈されるべきである。
【0062】
材料および方法
マウス
ＮＯＤ、ＮＯＤ－ＲＡＧ２－／－またはＣ５７ＢＬ／６マウスは、Ｌｌｅｉｄａ大学で、特定の病原体を含まない条件下で同胞交配により維持した。本研究は、バーゼル宣言の原則および実験動物の保護に関するカタロニア政府（Ｇｅｎｅｒａｌｉｔａｔ ｄｅ Ｃａｔａｌｕｎｙａ）の勧告に従って実施された。本プロトコルは、スペインのＬｌｅｉｄａ大学の動物実験研究倫理委員会により承認された。プロトコル番号：ＣＥＥＡ０２－０４／１６。
マウス
ＮＯＤ、ＮＯＤ－ＲＡＧ２－／－またはＣ５７ＢＬ／６マウスは、Ｌｌｅｉｄａ大学で、特定の病原体を含まない条件下で同胞交配により維持した。本研究は、バーゼル宣言の原則および実験動物の保護に関するカタロニア政府（Ｇｅｎｅｒａｌｉｔａｔ ｄｅ Ｃａｔａｌｕｎｙａ）の勧告に従って実施された。本プロトコルは、スペインのＬｌｅｉｄａ大学の動物実験研究倫理委員会により承認された。プロトコル番号：ＣＥＥＡ０２－０４／１６。
【0063】
ヒトＰＢＭＣおよび細胞株
健常血液ドナー由来のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、Ｖａｌｌ Ｄ’Ｈｅｂｒｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＶＨＩＲ、バルセロナ）のＪｏｒｄｉ Ｂａｒｑｕｉｎｅｒｏ博士から提供された。ＮＡＬＭ－６（Ｂリンパ球白血病）は、Ｅｕｌａｌｉａ Ｇｅｎｅｓｃａ博士（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｊｏｓｅｐ Ｃａｒｒｅｒａｓ、Ｃａｍｐｕｓ ＩＣＯ－Ｇｅｒｍａｎｓ Ｔｒｉａｓ ｉ Ｐｕｊｏｌ、バダロナ）から提供され、ＨＬ－６０（前骨髄球性細胞株）およびＪＵＲＫＡＴ（Ｔリンパ球）は、ＩＲＢ Ｌｌｅｉｄａの細胞株細胞バンクから入手した。
健常血液ドナー由来のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、Ｖａｌｌ Ｄ’Ｈｅｂｒｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＶＨＩＲ、バルセロナ）のＪｏｒｄｉ Ｂａｒｑｕｉｎｅｒｏ博士から提供された。ＮＡＬＭ－６（Ｂリンパ球白血病）は、Ｅｕｌａｌｉａ Ｇｅｎｅｓｃａ博士（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｊｏｓｅｐ Ｃａｒｒｅｒａｓ、Ｃａｍｐｕｓ ＩＣＯ－Ｇｅｒｍａｎｓ Ｔｒｉａｓ ｉ Ｐｕｊｏｌ、バダロナ）から提供され、ＨＬ－６０（前骨髄球性細胞株）およびＪＵＲＫＡＴ（Ｔリンパ球）は、ＩＲＢ Ｌｌｅｉｄａの細胞株細胞バンクから入手した。
【0064】
インビトロ培養
ＨＬ－６０、ＪｕｒｋａｔおよびＮＡＬＭ－６細胞を、３７℃で加湿した５％ＣＯ２雰囲気下、完全培地中で増殖および維持した。６週齢の雌のＮＯＤマウス、ＮＯＤ．ＲＡＧ２－／－マウスおよびＣ５７Ｂｌ／６マウスから、脾臓を機械的に破壊して脾臓細胞を得、赤血球を０．８７％塩化アンモニウム溶液に溶解した（Ｐｕｅｒｔａｓ，Ｍ．Ｃ．ｅｔ．ａｌ．Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｉｓｌｅｔ－Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ Ｂ－Ｃｅｌｌｓ Ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈｅ Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｉｎ Ｉｓｌｅｔ Ｍｉｌｉｅｕ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ ２００７，５６，９４０～９４９）。バフィーコートからヒト脾臓細胞を、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ １０７７（Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ（登録商標）－１０７７，１０７７１ ｓｉｇｍａ）を用いた密度勾配により、他で記載されているように収集した（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｌ．，Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｓ．Ａ．＆Ｌａ Ｆｌａｍｍｅ，Ａ．Ｃ．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｅｘ ｖｉｖｏ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０１５，２２０，１３０５～１３１０）。同じく別の箇所に記載されているように、大腿骨および脛骨を破壊し、骨髄から細胞を得た（Ｌｉｕ，Ｘ．＆Ｑｕａｎ，Ｎ．Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｍｏｕｓｅ Ｆｅｍｕｒ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ．Ｂｉｏ－ｐｒｏｔｏｃｏｌ ５，２０１５）。骨髄由来の単球および好中球は、Ｓｔｅｍｃｅｌｌキット（続いて、１９８６１および１９７６２）を用いて精製し、キットプロトコルに従った。細胞を９６ウェル組織培養プレート（初代細胞については４×１０５／ウェル、細胞株については１×１０５）中で、５５μＭの種々のペリフェリンペプチドを用いた完全培地中で、５％ＣＯ２下、３７℃でインキュベートした。増殖アッセイのために、細胞をＣＦＳＥ（Ｃ３４５５４、ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で標識した。１時間後、２４時間後または４８時間後に、細胞をフローサイトメトリーによって分析し、培養上清は使用するまで－８０℃で保存した。
ＨＬ－６０、ＪｕｒｋａｔおよびＮＡＬＭ－６細胞を、３７℃で加湿した５％ＣＯ２雰囲気下、完全培地中で増殖および維持した。６週齢の雌のＮＯＤマウス、ＮＯＤ．ＲＡＧ２－／－マウスおよびＣ５７Ｂｌ／６マウスから、脾臓を機械的に破壊して脾臓細胞を得、赤血球を０．８７％塩化アンモニウム溶液に溶解した（Ｐｕｅｒｔａｓ，Ｍ．Ｃ．ｅｔ．ａｌ．Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｉｓｌｅｔ－Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ Ｂ－Ｃｅｌｌｓ Ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈｅ Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｉｎ Ｉｓｌｅｔ Ｍｉｌｉｅｕ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ ２００７，５６，９４０～９４９）。バフィーコートからヒト脾臓細胞を、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ １０７７（Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ（登録商標）－１０７７，１０７７１ ｓｉｇｍａ）を用いた密度勾配により、他で記載されているように収集した（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｌ．，Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｓ．Ａ．＆Ｌａ Ｆｌａｍｍｅ，Ａ．Ｃ．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｅｘ ｖｉｖｏ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０１５，２２０，１３０５～１３１０）。同じく別の箇所に記載されているように、大腿骨および脛骨を破壊し、骨髄から細胞を得た（Ｌｉｕ，Ｘ．＆Ｑｕａｎ，Ｎ．Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｍｏｕｓｅ Ｆｅｍｕｒ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ．Ｂｉｏ－ｐｒｏｔｏｃｏｌ ５，２０１５）。骨髄由来の単球および好中球は、Ｓｔｅｍｃｅｌｌキット（続いて、１９８６１および１９７６２）を用いて精製し、キットプロトコルに従った。細胞を９６ウェル組織培養プレート（初代細胞については４×１０５／ウェル、細胞株については１×１０５）中で、５５μＭの種々のペリフェリンペプチドを用いた完全培地中で、５％ＣＯ２下、３７℃でインキュベートした。増殖アッセイのために、細胞をＣＦＳＥ（Ｃ３４５５４、ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で標識した。１時間後、２４時間後または４８時間後に、細胞をフローサイトメトリーによって分析し、培養上清は使用するまで－８０℃で保存した。
【0065】
フローサイトメトリー
細胞死およびアポトーシス分析のために、４００．０００個の初代細胞または１００．０００個の細胞株細胞を、９６ウェルプレート中で、２００μＬの完全培地中、３７℃および５％ＣＯ２下で２４時間、５５μＭの種々のペプチドの非存在下または存在下でインキュベートした。１時間後、２４時間後または４８時間後に、アポトーシスを、ＣＦＢｌｕｅ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ ｗｉｔｈ ＰＩ（ＡＮＸＶＫＣＦＢ－１００Ｔ，Ｉｍｍｕｎｏｓｔｅｐ）により、キットプロトコルに従って測定した。切断型カスパーサ（ｃａｓｐａｓａ）－３の細胞内染色のために、単核細胞を、ＦｏｘＰ３ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｅｔ（００－５５２３－００，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の製造業者の指示に従って透過処理し、染色のためにｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓａ－３－Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ（８７８８Ｓ，Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ）を使用した。細胞懸濁液は、ＦＡＣＳ ＣＡＮＴＯ ＩＩ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ（ＢＤ，Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）およびＦｌｏｗｊｏ（バージョン８．７）ソフトウェアを用いたフローサイトメトリーによって分析した。
細胞死およびアポトーシス分析のために、４００．０００個の初代細胞または１００．０００個の細胞株細胞を、９６ウェルプレート中で、２００μＬの完全培地中、３７℃および５％ＣＯ２下で２４時間、５５μＭの種々のペプチドの非存在下または存在下でインキュベートした。１時間後、２４時間後または４８時間後に、アポトーシスを、ＣＦＢｌｕｅ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ ｗｉｔｈ ＰＩ（ＡＮＸＶＫＣＦＢ－１００Ｔ，Ｉｍｍｕｎｏｓｔｅｐ）により、キットプロトコルに従って測定した。切断型カスパーサ（ｃａｓｐａｓａ）－３の細胞内染色のために、単核細胞を、ＦｏｘＰ３ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｅｔ（００－５５２３－００，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の製造業者の指示に従って透過処理し、染色のためにｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓａ－３－Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ（８７８８Ｓ，Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ）を使用した。細胞懸濁液は、ＦＡＣＳ ＣＡＮＴＯ ＩＩ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ（ＢＤ，Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）およびＦｌｏｗｊｏ（バージョン８．７）ソフトウェアを用いたフローサイトメトリーによって分析した。
【0066】
サイトカインプロファイル解析
マウス増殖アッセイからの培養上清を回収し、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１０、ＴＮＦ－αおよびＩＬ－１７サイトカイン量を、ＣＢＡキット（５６０４８５，ＢＤ）を用いたフローサイトメトリーによって解析した。ヒト細胞培養物については、Ｌｅｇｅｎｄｐｌｅｘ Ｋｉｔを使用し（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，７４０５０２）、サイトカインＩＬ－１２ｐ７０、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１β、アルギナーゼ、ＩＬ－１ｓｔ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－２３、ＩＦＮ－γおよびＩＰ－１０を調べた。
マウス増殖アッセイからの培養上清を回収し、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１０、ＴＮＦ－αおよびＩＬ－１７サイトカイン量を、ＣＢＡキット（５６０４８５，ＢＤ）を用いたフローサイトメトリーによって解析した。ヒト細胞培養物については、Ｌｅｇｅｎｄｐｌｅｘ Ｋｉｔを使用し（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，７４０５０２）、サイトカインＩＬ－１２ｐ７０、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１β、アルギナーゼ、ＩＬ－１ｓｔ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－２３、ＩＦＮ－γおよびＩＰ－１０を調べた。
【0067】
ＦＬＩＣＡによる細胞内カスパーゼ染色
特異的カスパーゼの細胞内活性化を調べ、切断型カスパーサ－３抗体による以前に得られたフローサイトメトリー結果を確認するために、蛍光標識したカスパーゼ阻害剤（ＦＬＩＣＡ）プローブアッセイを行った。ＦＬＩＣＡ染色は、細胞を５５μＭの種々のペリフェリンペプチドと共に１時間または２４時間インキュベートした後、他で記載されているように（Ｄｏｉｔｓｈ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｂｙ ｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｄｒｉｖｅｓ ＣＤ４ Ｔ－ｃｅｌｌ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｉｎ ＨＩＶ－１ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ２０１４，５０５，５０９～５１４）、製造業者の指示に従って達成した。
特異的カスパーゼの細胞内活性化を調べ、切断型カスパーサ－３抗体による以前に得られたフローサイトメトリー結果を確認するために、蛍光標識したカスパーゼ阻害剤（ＦＬＩＣＡ）プローブアッセイを行った。ＦＬＩＣＡ染色は、細胞を５５μＭの種々のペリフェリンペプチドと共に１時間または２４時間インキュベートした後、他で記載されているように（Ｄｏｉｔｓｈ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｂｙ ｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｄｒｉｖｅｓ ＣＤ４ Ｔ－ｃｅｌｌ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｉｎ ＨＩＶ－１ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ２０１４，５０５，５０９～５１４）、製造業者の指示に従って達成した。
【0068】
統計
解析には、ＰＲＩＳＭ Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェアを使用した。統計は、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ検定を用いて行った。すべての平均値±ＳＤを示す。
解析には、ＰＲＩＳＭ Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェアを使用した。統計は、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ検定を用いて行った。すべての平均値±ＳＤを示す。
【0069】
結果
ペプチド特性評価
ヒトタンパク質ペリフェリン（Ｅｎｓｅｍｂｌ ＩＤ番号：ＥＮＳＧ０００００１３５４０６）の断片化により、前後のペプチドと５アミノ酸で重複する２０アミノ酸ペプチドのペプチドライブラリーを得た。調べた全ての断片の中で、ＤＩＦ－Ｐ（ペプチド７８としても知られる、ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ、配列番号１９）が、炎症性サイトカインの産生（図１）および細胞死（図２）を誘導する能力から、目的の分子であると認定された。ＤＩＦ－Ｐは、系統的に高度に保存されており、マウス、ヒト、ラット、ラクダ、ビーバーなどにおいて１００％の配列相同性を有している。同様に、ＤＩＦ－Ｐは、以下の種々のヒト中間径フィラメントにおいても高度に保存された配列である：
－ ビメンチン（１００％相同性）；
－ グリア線維酸性タンパク質－ＧＦＡＰ（９５％相同性）；
－ デスミン（９５％相同性）；
－ 神経フィラメント（重、中および軽）（９５％相同性）；
－ αインターネキシン（９５％相同性）；
－ 神経フィラメント６６（９５％相同性）。
ペプチド７２は、対照ペプチドである（ＧＧＹＱＡＧＡＡＲＬＥＥＥＬＲＱＬＫＥＥ、配列番号７５、刺激活性を有さないペリフェリン配列）。
ペプチド特性評価
ヒトタンパク質ペリフェリン（Ｅｎｓｅｍｂｌ ＩＤ番号：ＥＮＳＧ０００００１３５４０６）の断片化により、前後のペプチドと５アミノ酸で重複する２０アミノ酸ペプチドのペプチドライブラリーを得た。調べた全ての断片の中で、ＤＩＦ－Ｐ（ペプチド７８としても知られる、ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ、配列番号１９）が、炎症性サイトカインの産生（図１）および細胞死（図２）を誘導する能力から、目的の分子であると認定された。ＤＩＦ－Ｐは、系統的に高度に保存されており、マウス、ヒト、ラット、ラクダ、ビーバーなどにおいて１００％の配列相同性を有している。同様に、ＤＩＦ－Ｐは、以下の種々のヒト中間径フィラメントにおいても高度に保存された配列である：
－ ビメンチン（１００％相同性）；
－ グリア線維酸性タンパク質－ＧＦＡＰ（９５％相同性）；
－ デスミン（９５％相同性）；
－ 神経フィラメント（重、中および軽）（９５％相同性）；
－ αインターネキシン（９５％相同性）；
－ 神経フィラメント６６（９５％相同性）。
ペプチド７２は、対照ペプチドである（ＧＧＹＱＡＧＡＡＲＬＥＥＥＬＲＱＬＫＥＥ、配列番号７５、刺激活性を有さないペリフェリン配列）。
【0070】
下記表１に示すように、マウス脾臓細胞を種々のペプチド断片と共に２４時間培養し、細胞死（アポトーシスおよび／またはピロトーシス）のマーカーとしてアネキシンＶの発現を分析した結果から、ペプチド断片の活性部分は、以下の９アミノ酸コア配列：ＶＫＭＡＬＤＩＥＩ（配列番号７６）により構成されていることが示唆される。
【0071】
【表1】
【0072】
この結果を考慮して、本発明者らは、この９アミノ酸コア配列が他の中間径フィラメントにも存在するか否かを検討した。表２に示した異なる位置のアミノ酸変異の解析に基づいて、図４に示すようにコンセンサス配列を提案することができる。
【0073】
【表2-1】
【0074】
【表2-2】
【0075】
しかしながら、さらなる実験により、上記の９アミノ酸コア配列を細胞培養物に直接添加した場合、単独では活性がないことが実証された。ペリフェリン由来ペプチド、および、デスミンおよびグリア線維酸性タンパク質に対応するペプチド［Ｐｅｒ９：ＶＫＭＡＬＤＩＥＩ（配列番号５５）；Ｄｅｓ９：ＶＫＭＡＬＤＶＥＩ（配列番号５６）；ＦＡＰ９：ＶＫＬＡＬＤＩＥＩ（配列番号５１）］を用いて行った詳細分析の結果、陽性ではないことが判明し（すなわち、上記９アミノ酸ペプチドのいずれも、異なる白血球集団においてアネキシンＶの発現を誘導することができなかった）、これらのペプチドのアミノ酸配列にかかわらず、そのＮ末端および／またはＣ末端に付加的なアミノ酸が存在することが、それらのペプチドの正しい機能性に必要であること（細胞膜にペプチドを固定し、細胞質へのペプチドの内在化を誘導するために）が示された。
【0076】
具体的には、各末端に最低３個のアミノ酸を付加することが、最も適した機能形態であると考えられ、特に、リジンまたはアルギニンなどの正荷電アミノ酸を相対的に多く含むアミノ酸組成を有する細胞透過性ペプチドをＣ末端に有する場合である。例えば、本発明者らは、ペプチド配列ＤＩＦ－Ｐ３Ｋ、（ペプチド７８－１２－３Ｋとしても知られる）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＫＫＫ（配列番号２０）およびＤＩＦ－Ｐ８Ｒ、（７８－１２－８Ｒとしても知られる）ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３９）が、ヒト急性リンパ芽球性白血病のモデルであるＮＡＬＭ－６細胞の細胞培養において、わずか１時間後に２２％および５５％、または２４時間後に４０％および８５％の細胞死（切断型カスパーゼ－３の発現によって決定される）を引き起こし得ることを観察した（図５）。
【0077】
ヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）の培養において、細胞培養物中の細胞溶解活性（アポトーシスおよび／またはピロトーシスの誘導）および炎症性サイトカインの産生を、ペプチドＤＩＦ－Ｐ、ＤＩＦ－Ｐ３ＫおよびＤＩＦ－Ｐ８Ｒについて、陰性対照としてペプチド７２を用いて分析した。アポトーシスおよび／またはピロトーシスの誘導、および細胞死は、フローサイトメトリー分析により、細胞膜中のアネキシンＶの発現（存在）、およびヨウ化プロピジウムによる細胞核の染色をそれぞれ決定することによって検出した（図６）。細胞ピロトーシスの存在は、刺激因子と共に１時間インキュベーション後のカスパーゼ－１発現の分析によって確認し（図７）、一方、アポトーシス細胞死は、刺激因子と共に１時間インキュベーション後のカスパーゼ－３発現の分析によって明らかにしている（図８）。炎症性サイトカイン（ＩＬ－６、ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－２３、ＩＰ－１０、ＩＦＮ－γ）の産生は、刺激因子と共に２４時間または４８時間インキュベーション後に測定している（図９）。
【0078】
得られた結果は、ペプチドＤＩＦ－ＰおよびＤＩＦ－Ｐ３ＫおよびＤＩＦ－Ｐ８Ｒが、アポトーシスおよび／またはピロトーシスを誘導する一方で、炎症性サイトカインの分泌も誘導することを示している。しかしながら、アポトーシスおよび／またはピロトーシスによる細胞死の誘導、およびサイトカイン分泌の誘導の程度は、ペプチドによって異なっている。したがって、ペプチドＤＩＦ－Ｐは、ペプチドＤＩＦ－Ｐ３ＫまたはＤＩＦ－Ｐ８Ｒと比較してアポトーシスによる細胞死の誘導が少ないが、ペプチドＤＩＦ－Ｐ３Ｋは、ペプチドＤＩＦ－Ｐと比較して有意なパーセンテージのピロトーシスを誘導し、ペプチドＤＩＦ－Ｐ８Ｒでは、ピロトーシスはほとんど誘導されない。対照的に、培養終了時に生き残っている白血球による炎症性サイトカインの有意な産生は、ペプチドＤＩＦ－Ｐに曝露された培養物で観察されるが、ペプチドＤＩＦ－Ｐ３Ｋは、サイトカイン分泌を誘導する効率が最も低い。一般に、ペプチドＤＩＦ－Ｐ３ＫおよびＤＩＦ－Ｐ８Ｒは、悪性細胞であっても迅速な細胞死を誘導するが、炎症性サイトカインの産生はペプチドＤＩＦ－Ｐよりも低い。
【0079】
マウスの脾臓細胞または骨髄細胞における細胞死の誘導および炎症性サイトカイン分泌の刺激
ＮＯＤ．ＲＡＧ－２－／－マウスは、Ｒａｇ－２遺伝子（組換え活性化遺伝子－２）にホモ接合性の変異を有するため、免疫グロブリン遺伝子およびＢＣＲ／ＴＣＲのＶ（Ｄ）Ｊ領域を再編成することができない。その結果、これらのマウスではＢリンパ球およびＴリンパ球の成熟が行われず、したがって、これらの細胞が獲得免疫から完全に欠損している。このことは、これらのマウスの二次リンパ器官、例えば脾臓などにおいて、マクロファージおよびＤＣなどの免疫系の他の細胞亜集団の割合が、正常な状態（すなわち野生型マウス）で観察される割合と異なることを意味する。このため、これらの集団をより効率的に研究することが可能になる。
ＮＯＤ．ＲＡＧ－２－／－マウスは、Ｒａｇ－２遺伝子（組換え活性化遺伝子－２）にホモ接合性の変異を有するため、免疫グロブリン遺伝子およびＢＣＲ／ＴＣＲのＶ（Ｄ）Ｊ領域を再編成することができない。その結果、これらのマウスではＢリンパ球およびＴリンパ球の成熟が行われず、したがって、これらの細胞が獲得免疫から完全に欠損している。このことは、これらのマウスの二次リンパ器官、例えば脾臓などにおいて、マクロファージおよびＤＣなどの免疫系の他の細胞亜集団の割合が、正常な状態（すなわち野生型マウス）で観察される割合と異なることを意味する。このため、これらの集団をより効率的に研究することが可能になる。
【0080】
ペプチドＤＩＦ－Ｐ、ＤＩＦ－Ｐ３ＫおよびＤＩＦ－Ｐ８Ｒを用いたＮＯＤ．ＲＡＧ－２－／－マウス脾臓細胞の２４時間および４８時間の培養で得られたデータによれば、培地へのＩＬ－６およびＩＬ－４などの炎症性サイトカインの放出は、ペプチドＤＩＦ－Ｐ８Ｒの場合に特に顕著であり、一方、ペプチドＤＩＦ－ＰおよびＤＩＦ－Ｐ３Ｋは、ＴＮＦ－αの放出を誘導するのにより効率的であることが分かる（図１０）。しかしながら、ペプチドＤＩＦ－Ｐ、ＤＩＦ－Ｐ３ＫおよびＤＩＦ－Ｐ８Ｒを用いたＮＯＤ．ＲＡＧ－２－／－マウス骨髄細胞の２４時間および４８時間の培養では、ペプチドＤＩＦ－Ｐ３ＫおよびＤＩＦ－Ｐ８Ｒはいずれも、培地への炎症性サイトカインＩＬ－６およびＩＬ－４の放出を刺激するのに同様に効率的であるように見える（図１１）。興味深いことに、ＮＯＤマウスの骨髄から単球および好中球を精製すると、培地への炎症性サイトカインＩＬ－６およびＩＬ－４の刺激は、ペプチドＤＩＦ－Ｐ３Ｋに関して、他の２つのペプチドと比較して、単球では著しく高く、好中球でもなおかなり高い（図１２）。細胞死に関しては、ペプチドＤＩＦ－Ｐ３ＫおよびＤＩＦ－Ｐ８Ｒのいずれも、骨髄細胞（図１３）、精製好中球（図１４）および単球（図１５）においてアポトーシスおよび／またはピロトーシスを誘導するのにペプチドＤＩＦ－Ｐよりも効率的である。
【0081】
本発明者らは、ペプチドＤＩＦ－ＰがＢリンパ球、マクロファージ、およびＤＣの増殖を誘導する能力についても検討した。その結果、インビトロ培養において、ペプチドＤＩＦ－Ｐ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ、配列番号１９、すなわち目的の配列）と共に培養した細胞と、対照ペプチド（ＧＧＹＱＡＧＡＡＲＬＥＥＥＬＲＱＬＫＥＥ、配列番号７５、すなわち、ペプチド７２、刺激活性を有さないペリフェリン配列）と共に培養した細胞との間に増殖の差はなく、したがって、ペプチドＤＩＦ－Ｐは白血球増殖を刺激しないことがわかった（図１６）。
【0082】
他の系統および異なる種における細胞死の誘導
本発明のペプチドによる細胞死の誘導は、異なるマウス系統の細胞培養においても、または異なる種（すなわち、ニワトリ）に対応する細胞培養においても実証された。マウスＢ１６Ｆ１０（メラノーマ）およびＰ８１５（肥満細胞腫）細胞株は、ＤＩＦ－Ｐ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ、配列番号１９）；ＤＩＦ－Ｐ３Ｋ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＫＫＫ、配列番号２０）；ＤＩＦ－Ｐ８Ｒ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＲＲＲＲＲＲＲＲ；配列番号３９）；およびペプチド７２（ＧＧＹＱＡＧＡＡＲＬＥＥＥＬＲＱＬＫＥＥ；配列番号７５）と共に、または対照として刺激なしで、２４時間培養した（図１７）。ニワトリ脾臓細胞は、ＤＩＦ－Ｐ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ、配列番号１９）；ＤＩＦ－Ｐ３Ｋ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＫＫＫ、配列番号２０）；およびペプチド７２（ＧＧＹＱＡＧＡＡＲＬＥＥＥＬＲＱＬＫＥＥ；配列番号７５）と共に、または刺激なしで、２４時間または４８時間培養した（図１８）。これらの結果から、本発明のペプチドは、一般に、広範な後生動物細胞（すなわち、脊椎動物細胞）において細胞死を誘導する能力があることが示される。
本発明のペプチドによる細胞死の誘導は、異なるマウス系統の細胞培養においても、または異なる種（すなわち、ニワトリ）に対応する細胞培養においても実証された。マウスＢ１６Ｆ１０（メラノーマ）およびＰ８１５（肥満細胞腫）細胞株は、ＤＩＦ－Ｐ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ、配列番号１９）；ＤＩＦ－Ｐ３Ｋ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＫＫＫ、配列番号２０）；ＤＩＦ－Ｐ８Ｒ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＲＲＲＲＲＲＲＲ；配列番号３９）；およびペプチド７２（ＧＧＹＱＡＧＡＡＲＬＥＥＥＬＲＱＬＫＥＥ；配列番号７５）と共に、または対照として刺激なしで、２４時間培養した（図１７）。ニワトリ脾臓細胞は、ＤＩＦ－Ｐ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ、配列番号１９）；ＤＩＦ－Ｐ３Ｋ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＫＫＫ、配列番号２０）；およびペプチド７２（ＧＧＹＱＡＧＡＡＲＬＥＥＥＬＲＱＬＫＥＥ；配列番号７５）と共に、または刺激なしで、２４時間または４８時間培養した（図１８）。これらの結果から、本発明のペプチドは、一般に、広範な後生動物細胞（すなわち、脊椎動物細胞）において細胞死を誘導する能力があることが示される。
【0083】
ヒト細胞株における細胞死の誘導
ヒト白血病の異なる細胞株由来の細胞において、ペプチドＤＩＦ－Ｐ、ＤＩＦ－Ｐ３ＫおよびＤＩＦ－Ｐ８Ｒがアポトーシス、ピロトーシスおよび／またはネクローシスを誘導する能力を分析することで、細胞死の研究を補完する。細胞株は以下の通りである：
ｉ．Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞：Ｔ細胞白血病モデル；
ｉｉ．ＨＬ－６０細胞：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）モデル；
ｉｉｉ．ＮＡＬＭ－６細胞：急性リンパ芽球性白血病モデル（ＡＬＬ）。
ヒト白血病の異なる細胞株由来の細胞において、ペプチドＤＩＦ－Ｐ、ＤＩＦ－Ｐ３ＫおよびＤＩＦ－Ｐ８Ｒがアポトーシス、ピロトーシスおよび／またはネクローシスを誘導する能力を分析することで、細胞死の研究を補完する。細胞株は以下の通りである：
ｉ．Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞：Ｔ細胞白血病モデル；
ｉｉ．ＨＬ－６０細胞：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）モデル；
ｉｉｉ．ＮＡＬＭ－６細胞：急性リンパ芽球性白血病モデル（ＡＬＬ）。
【0084】
図１９は、Ｊｕｒｋａｔ－Ｔ細胞において、ペプチドＤＩＦ－Ｐ、ＤＩＦ－Ｐ３ＫおよびＤＩＦ－Ｐ８Ｒを培養物に添加後、１時間、２４時間および４８時間の時点での死亡率パーセンテージをフローサイトメトリーによって示している。Ｊｕｒｋａｔ－Ｔ細胞において、ペプチドＤＩＦ－Ｐは、３８％（１時間）、２６％（２４時間）および２０％（４８時間）の細胞死を誘導し、一方、ペプチドＤＩＦ－Ｐ３Ｋは、より高いパーセンテージの細胞死（４４％（１時間）、５８％（２４時間）および４５％（４８時間））を誘導し、ペプチドＤＩＦ－Ｐ８Ｒは、最も高いパーセンテージの細胞死（５７％（１時間）、７１％（２４時間）および７７％（４８時間））を誘導している。
【0085】
図２０は、ＨＬ－６０細胞において、ペプチドＤＩＦ－Ｐ、ＤＩＦ－Ｐ３ＫおよびＤＩＦ－Ｐ８Ｒを培養物に添加後、１時間、２４時間および４８時間の時点での死亡率パーセンテージをフローサイトメトリーによって示している。ＨＬ－６０細胞において、ペプチドＤＩＦ－Ｐは、２８％（１時間）の死亡率を誘導しているが、死細胞の総数は２４時間（１８％）および４８時間（１２％）でより低く、これはおそらく細胞増殖によるものである。ペプチドＤＩＦ－Ｐ３Ｋは、より高いパーセンテージの細胞死（４１％（１時間）、５３％（２４時間）および５７％（４８時間））を誘導し、ペプチドＤＩＦ－Ｐ８Ｒは、最も高いパーセンテージの細胞死（８５％（１時間）、７５％（２４時間）および７８％（４８時間））を誘導している。
【0086】
図２１は、ＮＡＬＭ－６細胞において、ペプチドＤＩＦ－Ｐ、ＤＩＦ－Ｐ３ＫおよびＤＩＦ－Ｐ８Ｒを培養物に添加後、１時間、２４時間および４８時間の時点での死亡率をフローサイトメトリーによって示している。ＮＡＬＭ－６細胞において、ペプチドＤＩＦ－Ｐは、１４％（１時間）、１２％（２４時間）および１５％（４８時間）の細胞死を誘導し、一方、ペプチドＤＩＦ－Ｐ３Ｋは、３６％（１時間）、９１％（２４時間）および９６％（４８時間）の細胞死を誘導し、ペプチドＤＩＦ－Ｐ８Ｒは、８５％（１時間）、８１％（２４時間）および８０％（４８時間）の細胞死を誘導している。
【0087】
上記ペプチドが細胞死を誘導する能力は、ヒトメラノーマの細胞株（Ａ３７５細胞）、および、ＨＥＫ２９３、ＨｅＬａおよびＲＤ細胞などの細胞株でも実証されている。
【0088】
図２２は、以下のペプチドと共に２４時間培養後のＡ３７５細胞における切断型カスパーゼ－３の発現を示している：ＤＩＦ－Ｐ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥ、配列番号１９）；ＤＩＦ－Ｐ３Ｋ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＫＫＫ、配列番号２０）；ＤＩＦ－Ｐ８Ｒ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＲＲＲＲＲＲＲＲ；配列番号３９）；およびペプチド７２（ＧＧＹＱＡＧＡＡＲＬＥＥＥＬＲＱＬＫＥＥ；配列番号７５）。
【0089】
図２３は、以下のペプチドと共に１時間培養後の細胞株ＨＥＫ２９３、ＨｅＬａおよびＲＤ細胞についての細胞死およびアポトーシスを示している：ＫＲＴ１８－８Ｒ（ＬＬＮＩＫＶＫＬＥＡＥＩＲＲＲＲＲＲＲＲ、配列番号８４）、ＫＲＴ１７－８Ｒ（ＬＬＤＶＫＴＲＬＥＱＥＩＲＲＲＲＲＲＲＲ、配列番号８５）、ＤＥＳ－８Ｒ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＶＥＩＲＲＲＲＲＲＲＲ、配列番号８６）、ＤＩＦ－Ｐ８Ｒ（ＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＲＲＲＲＲＲＲＲ；配列番号３９）；ペプチド７２－８Ｒ（ＧＧＹＱＡＧＡＡＲＬＥＥＥＬＲＱＬＫＥＥＲＲＲＲＲＲＲＲ；配列番号７６）；およびペプチド７２（ＧＧＹＱＡＧＡＡＲＬＥＥＥＬＲＱＬＫＥＥ；配列番号７５）。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【配列表】
【国際調査報告】