特表 2022-545904 心不全治療におけるアンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト代謝産物とＮＥＰ阻害剤との複合体の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-11-01

(54)【発明の名称】心不全治療におけるアンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト代謝産物とＮＥＰ阻害剤との複合体の使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20221025BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20221025BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221025BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20221025BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20221025BHJP

   A61K 31/41 20060101ALI20221025BHJP

   A61K 31/216 20060101ALI20221025BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P9/10

A61P43/00 121

A61K9/48

A61K9/20

A61K31/41

A61K31/216

A61P43/00 116

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022513095

(86)(22)【出願日】2020-09-18

(85)【翻訳文提出日】2022-02-25

(86)【国際出願番号】 CN2020116023

(87)【国際公開番号】W WO2021052441

(87)【国際公開日】2021-03-25

(31)【優先権主張番号】201910890853.X

(32)【優先日】2019-09-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】202010901984.6

(32)【優先日】2020-09-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】512301868

【氏名又は名称】シェンヅェン サルブリス ファーマシューティカルズ カンパニー リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＥＮＺＨＥＮ ＳＡＬＵＢＲＩＳ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＣＯ．， ＬＴＤ

【住所又は居所原語表記】３７Ｆ， Ｍａｉｎ Ｔｏｗｅｒ， Ｌｖｊｉｎｇ Ｐｌａｚａ， Ｃｈｅ Ｇｏｎｇ Ｍｉａｏ Ｎｏ． ６００９ Ｓｈｅｎｎａｎ Ｒｏａｄ， Ｆｕｔｉａｎ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ Ｓｈｅｎｚｈｅｎ， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１８０４０ Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110002871

【氏名又は名称】弁理士法人坂本国際特許商標事務所

(72)【発明者】

【氏名】スン、ジンチャオ

(72)【発明者】

【氏名】ジン、シャオロン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C076AA36

4C076AA53

4C076BB01

4C076CC11

4C076CC29

4C076FF01

4C084AA18

4C084MA02

4C084MA35

4C084MA37

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4C084NA05

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4C084ZA371

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4C084ZC171

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4C086AA01

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4C086BC62

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4C086MA02

4C086MA04

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4C206MA04

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4C206MA57

4C206MA72

4C206NA05

4C206NA14

4C206ZA37

4C206ZC17

4C206ZC75

(57)【要約】

本発明は、医薬用途技術分野に属し、心不全治療におけるアンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト代謝産物とＮＥＰ阻害剤との複合体の使用に関し、特に、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）用医薬の調製における前記複合体の使用に関する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

駆出率が低下した心不全用医薬の調製における、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト代謝産物とＮＥＰ阻害剤との複合体の使用であって、
前記複合体の構造単位は、
（ａＥＸＰ３１７４・ｂＡＨＵ３７７）・ｘＣａ・ｎＡ
〔式中、ａ：ｂ＝１：０．２５～４であり、ｘは、０．５～３の数値であり、Ａは、水、メタノール、エタノール、２－プロパノール、アセトン、酢酸エチル、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル、アセトニトリル、トルエン、ジクロロメタンを指し、ｎは、０～３の数値である。〕
である使用。

【請求項2】

前記医薬の単回投与形態は、６０ｍｇから５００ｍｇの前記複合体を含有することを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項3】

前記医薬の単回投与形態は、６０、１２０、１８０、２４０、３００、３６０、４２０、４８０ｍｇの前記複合体を含有することを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項4】

前記医薬は、経口投与に適した固形製剤であり、好ましくは経口錠剤又はカプセルであることを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項5】

ａ：ｂの値は、１：０．２５、１：０．５、１：１、１：１．５、１：２、１：２．５、１：３、１：３、１：３．５、１：４から選ばれることを特徴とする請求項１～４のいずれか１項に記載の使用。

【請求項6】

前記複合体の構成単位は、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）・ｘＣａ・ｎＨ_２Ｏ、又は

【化1】

〔式中、ｘは、０．５～２の数値であり、ｎは、０～３の数値である。〕
であることを特徴とする請求項１～５のいずれか１項に記載の使用。

【請求項7】

ｘは、０．５、１、１．５、２から選ばれることを特徴とする請求項１～６のいずれか１項に記載の使用。

【請求項8】

前記複合体の構成単位は、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）・１．５Ｃａ・ｎＨ_２Ｏ、又は
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）・２Ｃａ・ｎＨ_２Ｏであり、
〔式中、ｎは、１～３の任意の数値である。〕
であることを特徴とする請求項１～７のいずれか１項に記載の使用。

【請求項9】

ｎは、０．５、１、１．５、２、２．５、３から選ばれることを特徴とする請求項１～８のいずれか１項に記載の使用。

【請求項10】

前記複合体は、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）１．５Ｃａ・１Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）１．５Ｃａ・１．５Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）１．５Ｃａ・２Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）１．５Ｃａ・２．５Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）１．５Ｃａ・３Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）・２Ｃａ・１Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）・２Ｃａ・１．５Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）２Ｃａ・２Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）２Ｃａ・２．５Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）２Ｃａ・３Ｈ_２Ｏ
から選ばれることを特徴とする請求項１～９のいずれか１項に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、医薬用途技術分野に属し、心不全治療におけるアンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト代謝産物とＮＥＰ阻害剤との複合体の使用に関し、特に、駆出率が低下した心不全用医薬の調製における前記複合体の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

心不全は、様々な心臓病の重篤な症状又は進行期であり、死亡率及び再入院率は高いままである。先進国の心不全の有病率は１．５％～２．０％であり、７０歳以上の人々の有病率は１０％以上である。２００３年の疫学調査によると、我が国３５～７４歳の成人の心不全の有病率は０．９％であった。我が国人口の高齢化が進み、冠状動脈性心疾患、高血圧、糖尿病、肥満などの慢性疾患の発症が増加傾向にあり、医療水準の向上により、心臓疾患患者の生存期間が延長されることで、我が国心不全の有病率が継続的に上昇する傾向にある。国内１０７１４例の入院心不全患者の調査によると、１９８０年、１９９０年、２０００年の心不全患者の入院中の死亡率は、それぞれ１５．４％、１２．３％及び６．２％であり、主な死因は、順に左心不全（５９％）、不整脈（１３％）及び心臓突然死（１３％）であった。Ｃｈｉｎａ－ＨＦ研究によると、入院心不全患者の死亡率が４．１％である。

【0003】

ＷＯ２００７／０５６５４６Ａ１には、バルサルタン（Ｖａｌｓａｒｔａｎ）－サクビトリル（Ｓａｃｕｂｉｔｒｉｌ）のナトリウム塩複合体（ＬＣＺ６９６）及びその調製方法が開示されており、２０１７年に中国での販売が承認され、商品名は、諾欣妥（登録商標／Ｅｎｔｒｅｓｔｏ）であり、心不全のために用いられる。その分子構造単位は、

【化1】

である。

【0004】

また、ＷＯ２０１７／１２５０３１Ａ１には、アンジオテンシン受容体アンタゴニスト代謝産物（ＥＸＰ３１７４）とＮＥＰ阻害剤（Ｓａｃｕｂｉｔｒｉｌ）との一連の複合体が開示されており、駆出率が保持された心不全ＨＦｐＥＦに対して一定の効果を示し、その分子構造単位は、

【化2】

である。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】ＷＯ２００７／０５６５４６Ａ１

【特許文献2】ＷＯ２０１７／１２５０３１Ａ１

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

駆出率が低下した心不全に対して高い治療効果を有する標的薬を見つけることが非常に重要であることがわかる。

【課題を解決するための手段】

【0007】

従来技術に存在する技術的問題に鑑み、本発明によれば、駆出率が低下した心不全用医薬の調製におけるアンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト代謝産物とＮＥＰ阻害剤との複合体（又は「超分子錯体」という）の使用が提供され、前記複合体の構造単位は、（ａＥＸＰ３１７４・ｂＡＨＵ３７７）・ｘＣａ・ｎＡである。

【0008】

具体的には、前記駆出率が低下した心不全は、「中国の心不全の診断と治療に関するガイドライン」２０１８－心不全の分類と診断基準表１に定義されるように、ＨＦｒＥＦを指す。

【0009】

本発明の好適態様として、前記医薬は、前記駆出率が低下した心不全の患者に適用されることを意味する。本発明の実験結果及び前駆体薬物の投与量の推定によれば、前記医薬の単回投与形態は、（ａＥＸＰ３１７４・ｂＡＨＵ３７７）の総質量で計算すると約６０ｍｇから５００ｍｇの前記複合体を含有することを意味し、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３１０ｍｇ、３２０ｍｇ、３３０ｍｇ、３４０ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、３７０ｍｇ、３８０ｍｇ、３９０ｍｇ、４００ｍｇ、４１０ｍｇ、４２０ｍｇ、４３０ｍｇ、４４０ｍｇ、４５０ｍｇ、４６０ｍｇ、４７０ｍｇ、４８０ｍｇ、４９０ｍｇ、５００ｍｇを含むが、これらに限定されない。

【0010】

本発明のより好適態様として、前記医薬の単回投与形態は、６０、１２０、１８０、２４０、３００、３６０、４２０、４８０ｍｇの前記複合体を含有する。

【0011】

一実施形態において、単回投与形態は、６０ｍｇ／日～５００ｍｇ／日を含有する前記複合体を患者に投与する一日用量形態を意味する。前記投与回数は、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回などを含むが、これらに限定されない。前記用量は、医薬用途の開始用量又は維持用量であり、高血圧の用途では、通常、開始用量は維持用量よりも低い。前記用量は、特殊な状況における難治性高血圧患者を対象としており、使用用量を適宜高めることができる。

【0012】

具体的には、前記推定方法は、前駆体医薬の一日用量に基づいて計算されることを含む。ＥＸＰ３１７４はアリサルタンイソプロキシルの体内代謝物であり、市販されている医薬の一般名はアリサルタンイソプロキシル錠であり、英語名はＡｌｌｉｓａｒｔａｎ Ｉｓｏｐｒｏｘｉｌ Ｔａｂｌｅｔｓであり、商品名は信立坦であり、使用用量は２４０ｍｇ／日である。

【0013】

ここで、アリサルタンイソプロキシルは、分子式がＣ_２７Ｈ_２９ＣｌＮ_６Ｏ_５であり、分子量が５５３である。ＥＸＰ３１７４は分子式がＣ_２２Ｈ_２１ＣｌＮ_６Ｏ_２であり、分子量が約４３６．９である。ＡＨＵ３７７は分子式がＣ_２４Ｈ_２９ＮＯ_５であり、分子量が約４１１．５である。複合体の一日用量はアリサルタンイソプロキシルの使用の一日用量に相当する必要があるため、前述の複合体の単回投与形態が推定される。

【0014】

駆出率が低下した犬の心不全モデルデータにより、ヒトの有効用量は１００ｍｇ／日であり、用量の使用範囲は６０ｍｇ／日～５００ｍｇ／日であると推測される。

【0015】

前記医薬は、経口投与に適した固形製剤であり、経口錠剤又はカプセルであることが好ましく、医薬の総量が６０ｍｇ～５００ｍｇである複数の錠剤及び複数のカプセルであってもよい。

【0016】

前記医薬の前記複合体は、従来技術における公知の方法により得ることができ、ここで、ＷＯ２０１７１２５０３１Ａ１に開示された複合体及びその調製方法は、本発明に組み入れられる。

【0017】

本発明のより好適態様として、ａ：ｂの値は、１：０．２５、１：０．５、１：１、１：１．５、１：２、１：２．５、１：３、１：３．５、１：４から選ばれる。

【0018】

本発明のより好適態様として、前記複合体の構成単位は、（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）・ｘＣａ・ｎＨ_２Ｏ、又は

【化3】

〔式中、ｘは、０．５～２の数値であり、ｎは、０～３の数値である。〕
である。

【0019】

本発明のより好適態様として、ｘは、０．５、１、１．５、２から選ばれる。

【0020】

本発明のより好適態様として、前記複合体の構成単位は、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）・１．５Ｃａ・ｎＨ_２Ｏ、又は
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）・２Ｃａ・ｎＨ_２Ｏ
〔式中、ｎは、１～３の任意の数値である。〕
である。

【0021】

本発明のより好適態様として、ｎは、０．５、１、１．５、２、２．５、３から選ばれる。

【0022】

本発明のより好適態様として、前記複合体は、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）１．５Ｃａ・１Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）１．５Ｃａ・１．５Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）１．５Ｃａ・２Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）１．５Ｃａ・２．５Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）１．５Ｃａ・３Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）・２Ｃａ・１Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）・２Ｃａ・１．５Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）２Ｃａ・２Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）２Ｃａ・２．５Ｈ_２Ｏ、
（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）２Ｃａ・３Ｈ_２Ｏ
から選ばれる。

【0023】

当業者は、超分子錯体（複合体）の単位結晶細胞において、前記アリサルタンイソプロキシル代謝産物（ＥＸＰ３１７４）、ＡＨＵ３７７、カルシウムイオン（Ｃａ^２＋）及び溶媒分子は、いくつかの構造単位の形で充填される。

【0024】

本発明に係る前記超分子錯体（複合体）は、二つの活性成分の単純な物理的混合によって得られる混合物とは異なる。得られた超分子錯体（複合体）のＸＲＤスペクトルは、ＥＸＰ３１７４及びＡＨＵ３７７カルシウム塩のＸＲＤスペクトルとは明らかに異なり、様々な溶媒（例えば、水、エタノール、エタノール－水など）における溶解性能にも明らかな違いが存在し、例えば、吸湿性、融点、赤外線スペクトルなど、他の様々な理化学的性質にはいずれも明らかな違いが存在する。

【発明の効果】

【0025】

本発明は、従来技術に対して、以下の利点及び効果を有する。
１．本発明によれば、アリサルタンイソプロキシル代謝産物（ＥＸＰ３１７４）とエンケファリナーゼ阻害剤（ＡＨＵ３７７）との二重作用を有する一連の超分子錯体（複合体）の駆出率が低下した心不全用医薬における使用が提供され、ＬＺ６９６の使用に対して同じ用量で明らかにより良い効果を有する。
２．本発明の複合体は、駆出率が低下した犬モデルにおける効果が、駆出率が保持された犬モデルにおける効果よりも優れていることから、本発明の医薬組成物は、駆出率が低下した心不全に対して特異的な選択性を有し、従来技術に基づいて予測することが困難であることがわかる。
３．本発明の複合体は、ＥＸＰ３１７４＋ＡＨＵ３７７物理的混合物に対してより良い効果を有し、複合体の使用が医薬の物理的組み合わせの使用に対して明らかな利点を有することを十分に示している。

【図面の簡単な説明】

【0026】

【図1】「中国の心不全の診断と治療に関するガイドライン」２０１８－心不全の分類と診断基準表。

【発明を実施するための形態】

【0027】

以下、実施例及び図面を参照しながら本発明についてさらに詳細に説明するが、発明の実施形態はこれに限定されない。

【0028】

以下の実施例において、
Ｘ線粉末回折は、鋭影（Ｅｍｐｙｒｅａｎ）Ｘ線回折装置を使用して検出され、検出条件は、ＣｕターゲットＫα線、電圧４０ＫＶ、電流４０ｍＡ、発光スリット１／３２°、散乱防止スリット１／１６°、散乱防止スリット７．５ｍｍ、２θ範囲：３°－６０°、ステップ幅０．０２°、ステップあたりの滞留時間４０秒である。
示差走査熱量測定スペクトルは、ドイツＮＥＴＺＳＣＨ社のＤＳＣ２０４Ｆ１示差走査熱量装置を使用して検出され、検出条件は、雰囲気：Ｎ２、２０ｍＬ／分、走査プログラム：室温から１０℃／分で２５０℃まで昇温し、昇温曲線を記録することである。
水分含有量は、ドイツＮＥＴＺＳＣＨ社のＴＧ２０９熱重量分析装置を使用して検出され、検出条件は、雰囲気：Ｎ２、２０ｍＬ／分、走査プログラム：室温－７００℃、昇温速度：１０℃／分である。
実施例に用いられるＥＸＰ３１７４は、純度９８．３％の自社製である。
実施例に用いられるＡＨＵ３７７カルシウム塩は、純度９９．４％の自社製である。

【実施例】

【0029】

実施例１
ＡＨＵ３７７遊離酸の調製
２．１ｇのＡＨＵ３７７カルシウム塩、４０ｍＬの酢酸イソプロピルを２５０ｍＬの単口フラスコに加え、室温で２ｍｏｌ／Ｌの塩酸４．５ｍＬを加え、攪拌して溶解する。分液し、有機層を回収し、２０ｍＬの水で有機層を２回洗浄し、３５℃で減圧により沈殿させることで、ＡＨＵ３７７遊離酸が得られる。

【0030】

実施例２
複合体の調製（ＷＯ２０１７１２５０３１Ａ１の実施例２に従って調製した）

【化4】

【0031】

室温で、実施例１の方法に従って得られたＡＨＵ３７７遊離酸２．３６ｇ、２ｇのＥＸＰ３１７４及び４０ｍＬのアセトンを２５０ｍＬの三口フラスコに加え、溶解し、室温でＡＨＵ３７７に対して１．３当量の水酸化カルシウム固体と１ｍＬの水を加え、室温で１０時間攪拌し、４０ｍＬのアセトンを追加で加え、さらに８時間反応させ、窒素保護下でブフナー漏斗によって吸引ろ過し、固体をアセトンで溶脱することで、白色固体が得られ、３５℃で８時間真空乾燥させることで、固体３．５ｇの（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）^３－・１．５Ｃａ^２＋・２．５Ｈ_２Ｏが得られ、ＨＰＬＣ検査純度は９９％である。十分な薬効試験量を得るために試験を繰り返す。

【0032】

実施例３
複合体の調製（ＷＯ２０１７１２５０３１Ａ１の実施例３に従って調製した）

【化5】

【0033】

室温で、実施例１の方法に従って得られたＡＨＵ３７７遊離酸２．３６ｇ、２ｇのＥＸＰ３１７４及び４０ｍＬのアセトンを２５０ｍＬの三口フラスコに加え、溶解し、室温でＡＨＵ３７７に対して１．６当量の水酸化カルシウム固体と０．６ｍＬの水を加え、３５℃で６時間攪拌し、４０ｍＬのアセトンを追加で加え、さらに８時間反応させ、窒素保護下でブフナー漏斗によって吸引ろ過し、固体をアセトンで溶脱することで、白色固体が得られ、５０℃で８時間真空乾燥させることで、固体３．１ｇの（ＥＸＰ３１７４・ＡＨＵ３７７）^３－・１．５Ｃａ^２＋・２Ｈ_２Ｏが得られる。十分な薬効試験量を得るために試験を繰り返す。

【0034】

実施例４
犬の慢性心不全モデルにおける複合体の薬効研究－駆出率の低下
４．１ 方法：動物が施設に到着した後、適応飼育、心エコー図検査及び心電検査の後にランダムに群分けしてから試験を開始する。手術当日、シュタイ（５ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射により動物を麻酔し、麻酔した犬の気管を人工呼吸器に接続し、仰臥位に固定し、第３と第４肋骨の間で胸を開き、冠動脈左前下行枝を結紮して胸腔を閉じ、皮膚を縫合する。動物が術後３日間回復した後、胃内注入により４週間連続で１日１回、治療薬を投与する。実験中、動物の生活状態を毎日観察し、異常な状態を記録する。４２日間投薬した後、心エコー図検査を行う。

【0035】

４．２ 造型：手術の前日、動物を一晩断食させる。手術当日、麻酔導入のためにシュタイ（用量：５ｍｇ／ｋｇ）を筋肉内注射すると同時に、硫酸アトロピン注射液（用量：０．５ｍｇ／犬）を筋肉内注射する。動物を麻酔した後に左胸部毛を剃り、気管挿管を速やかに行い、人工呼吸器をオンにして人工呼吸を提供し、麻酔状態を維持するために１．５％のイソフルランガスを供給すると同時に、血中酸素飽和度、心拍数、心電図、体温及び呼吸頻度などを監視するためにモニターを使用する。前肢皮膚に７０％のアルコールを用いて消毒した後、頭静脈を見つけ、静脈挿管を行うとともに静脈内投薬経路を留置する。ヨードフォア及び７０％のアルコールを用いて左胸部皮膚を消毒無菌処理し、無菌手術用ホールタオルを敷き、無菌メスを用いて第４と第５肋骨の間に沿って皮膚を切開し、止血後に電気ナイフを用いて皮下組織、筋肉層を層ごとに切開するとともに適時に止血する。胸腔膜を慎重に開き、肺組織への損傷を避けるように肺組織を露出させ、第４肋骨の下縁に沿って手術視野を２０～２５ｃｍに徐々に拡大し、エキスパンダを用いて手術窓を拡大する。温生理食塩水で浸漬した無菌ガーゼを用いて左心耳を推移させ、左心室と左心房の間を慎重に露出させるとともに鈍性直角鉗子を用いて冠動脈左前下行枝を遊離させ、４番絹糸で当該動脈を通し、遊離と糸通し中に動脈を引っ張らないようにする。絹糸で冠動脈左前下行枝を結紮し、結紮中に動物の血中酸素飽和度、心拍数、心電図、体温及び呼吸を注意深く観察し、動物に心室細動などの異常が生じた場合は直ちに手術を中止し、頭静脈を介してリドカイン注射治療（１０ｍｇ／ｋｇ）を速やかに与える。胸腔内に出血がないことを確認した後、保護用ガーゼを取り出し、７番縫合糸で第４及び第５肋骨を通して胸腔を縫合し、人工押圧法を用いて肺を動員する。組織及び皮膚を層ごとに縫合する。術後、動物を保温し、生理食塩水を適切に補充し、血中酸素飽和度、心拍数、心電図、体温及び呼吸変化を注意深く観察し、ガス麻酔器をシャットダウンし、動物が自律呼吸を完全に回復した後に気管挿管を抜き取る。術後、痛みを止めるためにモルヒネ（メロキシカム、０．６７ｍｇ／ｋｇ）を筋肉内注射し、抗感染のために２０ｍｇ／ｋｇのアンピシリンナトリウムを筋肉内注射する。

【0036】

４．３ 群分けと投薬：群分けする前の各犬は、心エコー図検査と心電監視を行い、駆出率に基づいて５つの群（各群に４～６匹の動物）にランダムに分け、動物が造型されてから３日後、各群の犬には、胃内注入により６週間連続で１日１回、対応する医薬を投与する。全手術は、実験のために６つのバッチに分かれ、各バッチは４～５匹の動物があり、各群は０～１匹がある。各群の状況を表１に示す。

【表1】

【0037】

４．４ 実験結果：慢性心不全の重要な症状は、左心室収縮機能の低下であり、慢性心不全の主要な臨床的検出エンドポイントである。心エコー図検査により、モデル群犬左室駆出率（ＬＶＥＦ）は造型後に顕著に低下し（＜４０％）、偽の手術群と比較してＰ＜０．００１であり、ヒト臨床駆出率が低下した慢性心不全を良好にシミュレートできる。表２から明らかなように、ＬＣＺ６９６群の犬のエンドポイントＬＶＥＦは４６．４５％であり、モデル群（Ｐ＜０．００１）より顕著に高い。本発明の複合体及び物理的混合群は、いずれもＬＶＥＦを上昇させることができ、モデル群と比較していずれも統計的有意性を有する（Ｐ＜０．００１）。一方、１００ｍｐｋ（ｍｇ／ｋｇ）の本発明の複合体は、ＬＣＺ６９６などのモル用量群がＬＶＥＦに与える影響よりも薬効がより優れている。具体的には、次の表に示す。

【0038】

【表2】

【0039】

以上の結果から明らかなように、本発明によって提供される二重作用の超分子錯体（複合体）の駆出率が低下した心不全用医薬における使用は、同じ用量でＬＣＺ６９６ １００ｍｐｋの使用に対して明らかにより良い効果を有する。

【0040】

本発明の複合体は、ＥＸＰ３１７４＋ＡＨＵ３７７物理的混合物に対してより良い効果を有し、複合体の使用が医薬の物理的組み合わせの使用に対して明らかな利点を有することを十分に示している。

【0041】

実施例５
犬の慢性心不全モデルにおける複合体の薬効研究－駆出率の保持
５．１ 方法：動物が施設に到着した後、適応飼育、心エコー図検査及び心電検査の後にランダムに群分けしてから試験を開始する。手術当日、シュタイ（５ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射により動物を麻酔し、麻酔した犬の気管を人工呼吸器に接続し、仰臥位に固定し、第３と第４肋骨の間で胸を開き、冠動脈左前下行枝を結紮して胸腔を閉じ、皮膚を縫合する。動物が術後３日間回復した後、胃内注入により二週間連続で１日１回、治療薬を投与する。実験中、動物の生活状態を毎日観察し、異常な状態を記録する。１４日間投薬した後、心エコー図検査を行う。

【0042】

５．２ 造型：手術の前日、動物を一晩断食させる。手術当日、麻酔導入のためにシュタイ（用量：５ｍｇ／ｋｇ）を筋肉内注射すると同時に、硫酸アトロピン注射液（用量：０．５ｍｇ／犬）を筋肉内注射する。動物を麻酔した後に左胸部毛を剃り、気管挿管を速やかに行い、人工呼吸器をオンにして人工呼吸を提供し、麻酔状態を維持するために１．５％のイソフルランガスを供給すると同時に、血中酸素飽和度、心拍数、心電図、体温及び呼吸頻度などを監視するためにモニタを使用する。前肢皮膚に７０％のアルコールを用いて消毒した後、頭静脈を見つけ、静脈挿管を行うとともに静脈内投薬経路を留置する。ヨードフォア及び７０％のアルコールを用いて左胸部皮膚を消毒無菌処理し、無菌手術用ホールタオルを敷き、無菌メスを用いて第４と第５肋骨の間に沿って皮膚を切開し、止血後に電気ナイフを用いて皮下組織、筋肉層を層ごとに切開するとともに適時に止血する。胸腔膜を慎重に開き、肺組織への損傷を避けるように肺組織を露出させ、第４肋骨の下縁に沿って手術視野を２０～２５ｃｍに徐々に拡大し、エキスパンダを用いて手術窓を拡大する。温生理食塩水で浸漬した無菌ガーゼを用いて左心耳を推移させ、左心室と左心房の間を慎重に露出させるとともに鈍性直角鉗子を用いて冠動脈左前下行枝を遊離させ、４番絹糸で当該動脈を通し、遊離と糸通し中に動脈を引っ張らないようにする。絹糸で冠動脈左前下行枝を結紮し、結紮中に動物の血中酸素飽和度、心拍数、心電図、体温及び呼吸を注意深く観察し、動物に心室細動などの異常が生じた場合は直ちに手術を中止し、頭静脈を介してリドカイン注射治療（１０ｍｇ／ｋｇ）を速やかに与える。胸腔内に出血がないことを確認した後、保護用ガーゼを取り出し、７番縫合糸で第４及び第５肋骨を通して胸腔を縫合し、人工押圧法を用いて肺を動員する。組織及び皮膚を層ごとに縫合する。術後、動物を保温し、生理食塩水を適切に補充し、血中酸素飽和度、心拍数、心電図、体温及び呼吸変化を注意深く観察し、ガス麻酔器をシャットダウンし、動物が自律呼吸を完全に回復した後に気管挿管を抜き取る。術後、痛みを止めるためにモルヒネ（メロキシカム、０．６７ｍｇ／ｋｇ）を筋肉内注射し、抗感染のために２０ｍｇ／ｋｇのアンピシリンナトリウムを筋肉内注射する。

【0043】

５．３ 群分けと投薬：群分けする前の各犬は、心エコー図検査と心電監視を行い、駆出率に基づいて５つの群（各群に５～６匹の動物）にランダムに分け、動物が造型されてから３日後、各群の犬には、胃内注入により２週間連続で１日１回、対応する医薬を投与する。全手術は、実験のために６つのバッチに分かれ、各バッチは４～５匹の動物があり、各群は０～１匹がある。各群の状況を表３に示す。

【表3】

【0044】

５．４ 実験結果：慢性心不全の重要な症状は、左心室収縮機能の低下であり、慢性心不全の主要な臨床的検出エンドポイントである。心エコー図検査により、モデル群犬左室駆出率（ＬＶＥＦ）は造型後に顕著に低下したが依然として５０％を超えており、偽の手術群と比較してＰ＜０．００１であり、ヒト臨床駆出率が低下した慢性心不全を良好にシミュレートできる。表４から明らかなように、ＬＣＺ６９６群の犬のエンドポイントＬＶＥＦは５７．９８％であり、モデル群（Ｐ＜０．００１）より顕著に高い。本発明の複合体及び物理的混合群は、いずれもＬＶＥＦを上昇させることができ、モデル群と比較していずれも統計的有意性を有する（Ｐ＜０．０５）。一方、１００ｍｐｋ（ｍｇ／ｋｇ）の本発明の複合体は、ＬＣＺ６９６などのモル用量群がＬＶＥＦに与える影響と比較して薬効が相当し、物理的混合群よりも顕著に優れている。実験結果を表４に示す。

【0045】

【表4】

【0046】

以上の結果から明らかなように、本発明の複合体は、駆出率が低下した犬モデルにおける効果が駆出率が保持された犬モデルにおける効果よりも優れており、したがって、本発明の医薬組成物は、駆出率が低下した心不全に対して特異的な選択性を有し、従来技術に基づいて予測することは困難である。

【0047】

上記実施例は、本発明の好適実施形態であるが、本発明の実施形態は、上記実施例によって限定されるものではなく、本発明の精神及び原理から逸脱することなく行われるその他の如何なる変更、修飾、置換、組み合わせ、簡略化は、いずれも同等の置換方式とされるべきであり、いずれも本発明の保護範囲に含まれるものとする。

【図1】

【国際調査報告】