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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-11-04
(54)【発明の名称】融合タンパク質およびその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/62 20060101AFI20221027BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20221027BHJP
C07K 14/21 20060101ALI20221027BHJP
C07K 14/195 20060101ALI20221027BHJP
C07K 14/01 20060101ALI20221027BHJP
C07K 14/08 20060101ALI20221027BHJP
C07K 14/03 20060101ALI20221027BHJP
C07K 14/045 20060101ALI20221027BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20221027BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20221027BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20221027BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20221027BHJP
C12P 21/02 20060101ALI20221027BHJP
A61K 38/17 20060101ALI20221027BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20221027BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20221027BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20221027BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20221027BHJP
A61P 1/18 20060101ALI20221027BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20221027BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20221027BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20221027BHJP
A61P 31/22 20060101ALI20221027BHJP
A61P 31/20 20060101ALI20221027BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20221027BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20221027BHJP
A61P 7/00 20060101ALI20221027BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20221027BHJP
A61K 35/12 20150101ALI20221027BHJP
A61K 31/522 20060101ALI20221027BHJP
A61K 31/42 20060101ALI20221027BHJP
A61K 31/517 20060101ALI20221027BHJP
A61K 31/7056 20060101ALI20221027BHJP
A61K 31/675 20060101ALI20221027BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20221027BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20221027BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20221027BHJP
A61K 36/07 20060101ALI20221027BHJP
【ＦＩ】
C12N15/62 Z
C07K19/00 ZNA
C07K14/21
C07K14/195
C07K14/01
C07K14/08
C07K14/03
C07K14/045
C12N15/63 Z
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/02 C
A61K38/17
A61K45/00
A61P31/12
A61P11/00
A61P1/16
A61P1/18
A61P25/00
A61P1/04
A61P37/06
A61P31/22
A61P31/20
A61P31/14
A61K31/7088
A61P7/00
A61K35/76
A61K35/12
A61K31/522
A61K31/42
A61K31/517
A61K31/7056
A61K31/675
A61K35/17
A61P43/00 105
A61K48/00
A61K36/07
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022514012
(86)(22)【出願日】2020-09-03
(85)【翻訳文提出日】2022-04-13
(86)【国際出願番号】 EP2020074531
(87)【国際公開番号】W WO2021043863
(87)【国際公開日】2021-03-11
(31)【優先権主張番号】19195122.7
(32)【優先日】2019-09-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522079001
【氏名又は名称】シンクリノ エーピーエス
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】ローゼンキルド，メッテ，マリー
(72)【発明者】
【氏名】ジェプセン，マッツ，グラヴァース
(72)【発明者】
【氏名】クレダル，トーマス，エヌ．
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C084
4C086
4C087
4C088
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG20
4B064AG30
4B064AG31
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B065AA01X
4B065AA72X
4B065AA90X
4B065AA95Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA44
4C084AA01
4C084AA02
4C084AA13
4C084AA19
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA22
4C084BA41
4C084CA18
4C084DA45
4C084MA56
4C084MA65
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4C084ZB08
4C084ZB33
4C084ZC75
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC45
4C086BC67
4C086CB07
4C086DA38
4C086EA11
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA02
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4C086MA56
4C086MA65
4C086MA66
4C086NA13
4C086NA14
4C086ZA02
4C086ZA51
4C086ZA59
4C086ZA66
4C086ZA68
4C086ZA75
4C086ZB08
4C086ZB33
4C086ZC75
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB21
4C087BB33
4C087BB37
4C087BB63
4C087BB65
4C087BC83
4C087CA12
4C087MA56
4C087MA65
4C087MA66
4C087NA13
4C087NA14
4C087ZA02
4C087ZA51
4C087ZA59
4C087ZA66
4C087ZA68
4C087ZA75
4C087ZB08
4C087ZB33
4C087ZC75
4C088AA02
4C088AD17
4C088BA05
4C088MA56
4C088MA65
4C088MA66
4C088NA13
4C088NA14
4C088ZA02
4C088ZA51
4C088ZA59
4C088ZA66
4C088ZA68
4C088ZA75
4C088ZB08
4C088ZB33
4C088ZC75
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045CA01
4H045CA03
4H045DA83
4H045DA86
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
第１および第２のペプチドを含む融合タンパク質が提供される。第１のペプチドにより、融合タンパク質は細胞上に発現された受容体に結合することができ、第２のペプチドは切断部位を有し、これにより、融合タンパク質は前記細胞を死滅させることができる。よって、融合タンパク質は病原体により引き起こされる感染の防止または治療に有用である。融合タンパク質をコードする核酸ならびに融合タンパク質を製造および使用する方法もまた、提供される。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ａ）細胞上に発現された少なくとも１つの受容体に結合する第１のペプチド；およびｂ）アミノ酸配列ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを有する切断部位を含む第２のペプチド
を含み、
Ｘ２はＡｒｇまたはＬｙｓであり、前記第２のペプチドは毒素を含む、融合タンパク質。
【請求項2】
Ｘ１はＧｌｎ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＡｓｎである、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項3】
Ｘ１はＧｌｎである、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項4】
前記融合タンパク質は免疫毒素である、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項5】
前記切断部位はアミノ酸配列ＡｒｇＧｌｎＡｒｇＡｒｇを含み、またはこれから構成される、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項6】
前記第１のペプチドは細胞上に発現された少なくとも２つの異なる受容体に結合する、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項7】
前記第１のペプチドに結合する１つの受容体は病原体によりコードされる受容体であり、前記第１のペプチドに結合するさらなる受容体は前記第１のペプチドまたはそのバリアントのためのヒトコード受容体および／または内在性受容体である、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項8】
前記受容体はＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のＵＳ２８である、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項9】
前記第２のペプチドは、シュードモナス外毒素Ａ、ゲロニン、ボウガニン（ｂｏｕｇａｎｉｎ）、サポリン、リシン、リシンＡ鎖、ブリオジン（ｂｒｙｏｄｉｎ）、レストリクトシン、ジフテリア毒素（ｄｉｐｈｔｅｒｉａ ｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（ｄｉｐｈｔｅｒｉａ ｔｏｘｉｎ）Ａ鎖ならびにそのバリアントおよび断片からなる群より選択される毒素を含む、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項10】
前記受容体はケモカイン受容体である、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項11】
前記ケモカイン受容体はＣＣケモカイン受容体および／またはＣＸ３Ｃケモカイン受容体である、請求項１０に記載の融合タンパク質。
【請求項12】
前記ＣＣケモカイン受容体はＵＳ２８である、請求項１１に記載の融合タンパク質。
【請求項13】
前記ＣＸ３Ｃケモカイン受容体はＣＸ３ＣＲ１である、請求項１１に記載の融合タンパク質。
【請求項14】
前記受容体は病原体によりコードされる、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項15】
前記病原体は細菌である、請求項１４に記載の融合タンパク質。
【請求項16】
前記病原体はウイルスである、請求項１４に記載の融合タンパク質。
【請求項17】
前記ウイルスはＤＮＡウイルスである、請求項１６に記載の融合タンパク質。
【請求項18】
前記ウイルスはＲＮＡウイルスである、請求項１６に記載の融合タンパク質。
【請求項19】
前記ウイルスはヘルペスウイルスである、請求項１６に記載の融合タンパク質。
【請求項20】
前記ウイルスはサイトメガロウイルスである、請求項１６に記載の融合タンパク質。
【請求項21】
前記受容体はインターナライズすることができる、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項22】
前記受容体は前記第１のペプチドに結合するとインターナライズされる、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項23】
前記受容体は構成的にインターナライズされる、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項24】
前記切断部位は酵素切断部位である、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項25】
前記酵素切断部位はフューリン切断部位である、請求項２４に記載の融合タンパク質。
【請求項26】
前記第１のペプチドは標的化部分である、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項27】
前記第１および第２のペプチドは作動可能に連結されている、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項28】
前記第１のペプチドは、ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成される、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のバリアント；
ｃ．５０を超えるアミノ酸の長さ、例えば６０、７０、または７５を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント
を含み、またはこれから構成される、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項29】
４９位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸残基は、Ａｌａ、ＬｙｓまたはＡｓｐ、好ましくはＡｌａに変異される、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項30】
前記第１のペプチドはＮ末端でメチオニン（Ｍ）をさらに含む、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項31】
前記第１のペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＮおよび／またはＣ末端で、および／または、アミノ酸配列内部に挿入された１つ以上の追加のアミノ酸を含み、またはこれから構成される、前記請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項32】
１以上のアミノ酸はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＮおよび／またはＣ末端で、および／または、アミノ酸配列内部で欠失される、前記請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項33】
前記第１のペプチドは１００未満のアミノ酸の長さ、例えば９０、８５、または８０未満のアミノ酸の長さを有する、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項34】
前記第２のペプチドはドメインＡ、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＡ、および／またはドメインＢ、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＢ、および／またはドメインＣ、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＣを含む、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項35】
前記第２のペプチドは、ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のバリアント；
ｃ．８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば９０、１００、または１１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント
を含む、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項36】
前記第２のペプチドは、ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のバリアント；
ｃ．６を超えるアミノ酸の長さ、例えば８、１０、または１２を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント
を含む、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項37】
前記第２のペプチドは、ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のバリアント；
ｃ．１８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば１９０、２００、または２１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント
を含む、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項38】
前記ドメインＡはトランスロケーションドメインであり、前記ドメインＣは細胞傷害性ドメイン、例えばＡＤＰ－リボシル化ドメインである、請求項３４に記載の融合タンパク質。
【請求項39】
前記第２のペプチドは、Ｃ末端においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列ＫＤＥＬを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項40】
前記第２のペプチドは、ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のバリアント；
ｃ．３００を超えるアミノ酸の長さ、例えば３１０、３３０、または３４０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント
を含み、またはこれから構成される、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項41】
前記第２のペプチドは、４００未満のアミノ酸の長さ、例えば３８０、３７０、３６０、３５０または３４５未満のアミノ酸の長さを有する、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項42】
前記融合タンパク質は、ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のバリアント；
ｃ．３６０を超えるアミノ酸の長さ、例えば３８０、４００、または４２０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント
を含み、またはこれから構成される、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項43】
前記融合タンパク質は、５００未満のアミノ酸の長さ、例えば４９０、４８０、４７０、４６０、４５０、４４０、４３０、４２５未満のアミノ酸の長さを有する、前記請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項44】
前記融合タンパク質は、病原体に感染した細胞、例えば病原体に潜伏感染した細胞を死滅させる、前記請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項45】
前記病原体はウイルス、例えばＤＮＡウイルス、例えばヘルペスウイルス、例えばサイトメガロウイルス、またはＲＮＡウイルスである、請求項４４に記載の融合タンパク質。
【請求項46】
前記融合タンパク質は前記受容体を発現する細胞の細胞死を誘導する、前記請求項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項47】
前記細胞死は、アポトーシス、壊死、オートファジー性細胞死および有糸分裂関連細胞死からなる群より選択される、請求項４６に記載の融合タンパク質。
【請求項48】
前記融合タンパク質は病原体に対して直接的または間接的効果を誘導し、病原体増殖、複製、ゲノム安定性、成熟、パッケージング、潜伏、再活性化、播種および／または免疫抑制の阻止という結果になる、前記請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項49】
前記融合タンパク質はＵＳ２８を発現する細胞を死滅させる、前記請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項50】
前記融合タンパク質は、ウイルスによりコードされる受容体、例えばＵＳ２８に対して、１０ｎＭ未満、例えば５ｎＭ未満、例えば１ｎＭ未満、例えば０．５ｎＭ未満、例えば０．１ｎＭ未満または０．００１ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項51】
前記融合タンパク質は、ウイルスによりコードされる受容体、例えばＵＳ２８を発現する細胞に対して、内在性受容体またはヒトコード受容体、例えばＣＸ３ＣＲ１を発現する細胞に対する効力と比べて、増加した効力、例えば少なくとも３００倍増加した効力、例えば少なくとも４００倍増加した効力、例えば少なくとも５００倍増加した効力、例えば少なくとも７００倍増加した効力を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項52】
前記融合タンパク質は、ウイルスによりコードされる受容体、例えばＵＳ２８に対して、内在性受容体またはヒトコード受容体、例えばＣＸ３ＣＲ１に対する親和性と比べて、増加した親和性、例えば少なくとも５０倍増加した親和性、例えば少なくとも１００倍増加した親和性を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項53】
請求項１～５２のいずれか一項に記載の融合タンパク質をコードする単離された核酸分子。
【請求項54】
請求項５３に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項55】
前記ベクターは発現ベクターである、請求項５４に記載のベクター。
【請求項56】
請求項５３に記載の核酸分子または請求項５４～５５に記載のベクターを含む、組換え宿主細胞。
【請求項57】
前記宿主細胞は細菌細胞、酵母細胞、哺乳類細胞、例えばヒト細胞または昆虫細胞である、請求項５６に記載の組換え宿主細胞。
【請求項58】
請求項１～５２に記載の融合タンパク質、請求項５３に記載の核酸、請求項５４～５５に記載のベクターまたは請求項５６～５７に記載の組換え宿主細胞ならびに薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項59】
１つ以上のさらなる薬剤をさらに含む、請求項５８に記載の医薬組成物。
【請求項60】
前記薬剤は、免疫抑制剤、抗ウイルス薬および免疫療法からなる群より選択される、請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項61】
前記抗ウイルス薬は、バルガンシクロビル、ガンシクロビル、シドフォビル、レフルノミド、プレバイミス、マリバビルおよびブリンシドホビルからなる群より選択される、請求項６０に記載の医薬組成物。
【請求項62】
前記免疫療法はＴ細胞治療である、請求項６０に記載の医薬組成物。
【請求項63】
医薬品として使用するための、請求項１～５２に記載の融合タンパク質、請求項５３に記載の核酸、請求項５４～５５に記載のベクター、請求項５６～５７に記載の組換え宿主細胞または請求項５８～６２に記載の医薬組成物。
【請求項64】
病原体により引き起こされる感染および／または病原体関連障害の防止または治療において使用するための、請求項１～５２に記載の融合タンパク質、請求項５３に記載の核酸、請求項５４～５５に記載のベクター、請求項５６～５７に記載の組換え宿主細胞または請求項５８～６２に記載の医薬組成物。
【請求項65】
前記病原体は細菌またはウイルスである、請求項６４に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項66】
前記ウイルスはＤＮＡウイルス、例えばヘルペスウイルス、例えばサイトメガロウイルス、またはＲＮＡウイルスである、請求項６５に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項67】
ＣＭＶ感染および／またはＣＭＶ関連障害の防止または治療において使用するための、請求項１～５２に記載の融合タンパク質、請求項５３に記載の核酸、請求項５４～５５に記載のベクター、請求項５６～５７に記載の組換え宿主細胞または請求項５８～６２に記載の医薬組成物。
【請求項68】
前記ＣＭＶ感染は潜伏および／または溶解ＣＭＶ感染である、請求項６７に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項69】
前記ＣＭＶ感染は、ｉ）網膜、角膜、心臓、肝臓、腎臓、肺、胃腸組織、胸腺、脾臓、皮膚および筋肉からなる群の１つ以上より選択される組織、および／または
ｉｉ）唾液、血液、尿、精液および母乳からなる群の１つ以上より選択される体液
において検出され得る、請求項６７～６８に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項70】
前記ＣＭＶ感染は、ＨＩＶ－患者、新生児および免疫抑制患者、骨髄移植患者、固形臓器移植患者、免疫療法患者、癌患者、集中治療患者、外傷患者、幹細胞患者、遺伝子治療患者、細胞治療患者、高齢患者および多疾病罹患患者からなる群より選択される免疫不全患者における感染である、請求項６７～６９のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項71】
前記ＣＭＶ感染は、冠疾患および／または血管疾患を患う患者における感染である、請求項６７～７０のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項72】
前記融合タンパク質、前記核酸、前記ベクター、前記宿主細胞または前記組成物は静脈内、腫瘍内、腹腔内、くも膜下腔内および／またはリンパ内投与される、請求項６３～６８のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項73】
前記融合タンパク質、前記核酸、前記ベクター、前記宿主細胞または前記組成物は１回以上前記個体に投与される、請求項６３～７２のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項74】
前記個体はヒトである、請求項７３に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項75】
前記ヒトは免疫不全患者である、請求項７４に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項76】
前記ヒトは子供である、請求項７４～７５のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項77】
前記ヒトは成人である、請求項７４～７５のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項78】
前記ヒトは固形臓器移植および／または造血幹細胞移植が必要である、請求項７４～７７のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項79】
前記ＣＭＶ関連障害は、サイトメガロウイルス間質性肺炎、サイトメガロウイルス肝炎、サイトメガロウイルス膵炎、サイトメガロウイルス単核球症、ＣＭＶ多脊髄神経根症（ｐｏｌｙｒａｄｉｃｕｌｏｍｙｅｌｏｐａｔｈｙ）、巨細胞封入体病、サイトメガロウイルス大腸炎、サイトメガロウイルス食道炎、サイトメガロウイルス網膜炎、ギラン・バレー症候群、粘表皮がんおよび潰瘍性大腸炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、固形臓器移植移植片対宿主病（ＳＯＴ－ＧＶＨＤ）からなる群より選択される、請求項６４～７８のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物。
【請求項80】
その必要のある個体において、病原体により引き起こされる感染、例えばＣＭＶ感染を治療または防止する方法であって、治療的有効量の、前記請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、組換え宿主細胞または医薬組成物を前記個体に投与することを含む、方法。
【請求項81】
移植のための固形臓器および／または移植のための造血幹細胞の処置のための、前記請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質または医薬組成物のエクスビボ使用。
【請求項82】
病原体により引き起こされる感染および／または病原体関連障害の防止または治療のため、例えば、ＣＭＶ感染および／またはＣＭＶ関連障害の防止または治療のための医薬品の製造において使用するための、請求項１～５２に記載の融合タンパク質、請求項５３に記載の核酸、請求項５４～５５に記載のベクター、請求項５６～５７に記載の宿主細胞または請求項５８～６２に記載の医薬組成物。
【請求項83】
請求項５６～５７のいずれかで規定される宿主細胞を前記コード融合タンパク質の発現を可能にする条件下で培養することを含む、請求項１～５２のいずれか一項に記載の融合タンパク質を生成するための方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、第１および第２のペプチドを含む融合タンパク質に関する。第１のペプチドにより、融合タンパク質は細胞上に発現された受容体に結合することができ、次いで、インターナライズすることができ、第２のペプチドは、最適化された選択的特性を有する切断部位を有し、よって、最適化された、または選択的切断部位と呼ばれる可能性があり、これにより、融合タンパク質は前記細胞を死滅させることができる。よって、融合タンパク質はウイルスなどの病原体により引き起こされる感染の防止または治療に有用であり、ＣＭＶはそのようなウイルスの一例である。融合タンパク質をコードする核酸ならびに融合タンパク質を製造および使用する方法もまた、提供される。
【背景技術】
【0002】
免疫毒素は毒素に結合される標的化部分を有するタンパク質である。免疫毒素は融合タンパク質の一例である。免疫毒素は、ある範囲の病原体により引き起こされる感染の治療のために使用することができる。例えば、抗体に結合された毒素は、大した成果もなかったが、ＣＭＶ－感染細胞を標的にするために以前は使用されていた。
【0003】
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）は種特異的ヘルペスウイルスであり、特に、免疫不全個体、新生児および移植を受けた患者においては重要な病原体である。
【0004】
現在のところ、ＨＣＭＶ感染の臨床治療のために使用される薬物の全てはかなりの有害な副作用と関連する。その上、薬物耐性の出現によりしばしば、治療の失敗という結果になる。
【0005】
既存の免疫毒素を用いた薬理学的課題および不十分な細胞－標的化選択性に加えて、治療の失敗の別の原因はしばしば、感染細胞の不十分な死滅につながる不十分なインターナリゼーションである。
【0006】
これらの制限は、ＨＣＭＶなどの病原体に誘発される感染のための新規薬物治療を開発する価値を支持する。
【0007】
ＷＯ０８／００３３２７号は、ＣＭＶ感染と関連する疾患の治療において有用な免疫毒素を開示する。その中で開示される免疫毒素は、ヒトＣＸ３ＣＬ１のケモカインドメインのバリアントおよび毒素を含む。
【発明の概要】
【0008】
本発明は特許請求の範囲において規定される通りである。
【0009】
本明細書では、標的選択性を提供する第１のペプチド、ならびに、毒素を提供し、さらに、切断部位による毒素の内部切断および結果として標的細胞におけるエフェクター毒性を提供する第２のペプチドを含む融合タンパク質が提供される。本明細書で提供される融合タンパク質は、病原体に誘発される感染の治療、例えば、潜伏感染の治療に有用である。
【0010】
本発明者らは、潜伏感染した細胞を含むＣＭＶ感染細胞などの感染細胞を効果的に標的にし、死滅させる融合タンパク質を作製している。この融合タンパク質は、少なくとも１つの受容体（これは、ウイルスにコードされた受容体、例えばＵＳ２８であり得る）に結合することができる第１のペプチド、および、最適化切断部位および毒素、例えば、外毒素Ａの選択されたドメイン、例えばドメインＩＩおよびＩＩＩを含む第２のペプチドを含む。標的結合すると、受容体は好ましくはインターナライズされ、第２のペプチドは少なくとも部分的に切断部位で切断され、よって毒素部分が放出され、次いで、これが今度は感染細胞を死滅させる。驚いたことに、発明者らは、外毒素Ａの天然フューリン切断部位における突然変異に対応するある一定の切断部位モチーフ（ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇ、式中、Ｘ２はＡｒｇなど塩基性である）は、病原体にコードされる受容体、例えばＵＳ２８を発現する細胞への選択性を増加させることを見出した。この所見により、感染細胞、例えばＣＭＶ感染細胞の改善された標的化および死滅が可能になる。よって、本明細書で記載される最適化切断部位は融合タンパク質、特に免疫毒素のために使用することができ、毒性／細胞死滅効力、とりわけ選択性が増加する。
【0011】
１つの態様では、本発明は、下記を含む融合タンパク質を提供し：
ａ）細胞上に発現された少なくとも１つの受容体に結合する第１のペプチド；および
ｂ）アミノ酸配列ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを有する切断部位を含む第２のペプチド、
Ｘ２はＡｒｇまたはＬｙｓであり、第２のペプチドは毒素を含む。
ａ）細胞上に発現された少なくとも１つの受容体に結合する第１のペプチド；および
ｂ）アミノ酸配列ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを有する切断部位を含む第２のペプチド、
Ｘ２はＡｒｇまたはＬｙｓであり、第２のペプチドは毒素を含む。
【0012】
別の態様では、本発明は上記態様による融合タンパク質をコードする単離された核酸分子を提供する。
【0013】
１つの態様では、本発明は上記態様による核酸分子を含むベクターを提供する。
【0014】
別の態様では、本発明は上記態様による核酸分子またはベクターを含む組換え宿主細胞を提供する。
【0015】
１つの態様では、本発明は上記態様による融合タンパク質、核酸、ベクターまたは組換え宿主細胞ならびに薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【0016】
別の態様では、本発明は医薬品として使用するための上記態様による融合タンパク質、核酸、ベクター、組換え宿主細胞または医薬組成物を提供する。
【0017】
１つの態様では、本発明は、病原体により引き起こされる感染および／または病原体関連障害の防止または治療において使用するための、上記態様による融合タンパク質、核酸、ベクター、組換え宿主細胞または医薬組成物を提供する。
【0018】
別の態様では、本発明は、ＣＭＶ感染および／またはＣＭＶ関連障害の防止または治療において使用するための、上記態様による融合タンパク質、核酸、ベクター、組換え宿主細胞または医薬組成物を提供する。
【0019】
１つの態様では、本発明はその必要のある個体において、病原体により引き起こされる感染、例えばＣＭＶ感染を治療または防止する方法を提供し、方法は、治療的有効量の、上記態様のいずれか１つによる融合タンパク質、核酸、ベクター、組換え宿主細胞または医薬組成物を個体に投与することを含む。
【0020】
別の態様では、本発明は、移植のための固形臓器および／または移植のための造血幹細胞の処置のための、上記態様のいずれか１つによる融合タンパク質または医薬組成物のエクスビボ使用を提供する。
【0021】
１つの態様では、本発明は、病原体により引き起こされる感染および／または病原体関連障害の防止または治療のため、例えば、ＣＭＶ感染および／またはＣＭＶ関連障害の防止または治療のための医薬品の製造において使用するための、上記態様による融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または医薬組成物を提供する。
【0022】
別の態様では、本発明は、上記態様のいずれか１つによる融合タンパク質を生成するための方法を提供し、方法は、上記態様のいずれかにおいて規定される宿主細胞をコード融合タンパク質の発現を可能にする条件下で培養することを含む。
【図面の簡単な説明】
【0023】
【図1】ヒトＣＸ３ＣＬ１、シュードモナス外毒素Ａおよび融合タンパク質ＳＹＮ００２である例示的な第１のペプチドのドメイン構造を示す。Ａ．下記のドメイン構造の概略図：ヒトＣＸ３ＣＬ１（Ｓ＝シグナル配列、ＣＸ３ＣＬ１＝ケモカインドメイン、Ｓｔａｌｋ＝ムチン様ストーク、Ｍ＝膜貫通部分およびＣ＝細胞質ドメイン、シュードモナス・エルジノーサ外毒素Ａ（Ｓ＝シグナル配列、ドメインＩ＝受容体結合ドメイン、ドメインＩＩ＝トランスロケーションドメイン、Ｉｂ＝未知機能を有するドメインＩｂおよびドメインＩＩＩ＝ＡＤＰ－リボシル化ドメイン）、前駆体タンパク質のためのアミノ酸番号付けが各タンパク質の上に与えられる。ジスルフィド架橋が、各タンパク質の下に角括弧を用いて、関係するアミノ酸の番号付けと共に示される。Ｂ．ＳＹＮ００２の概略図。所定のドメインにおける突然変異が関係するアミノ酸の１文字表記で、その番号と共に書かれている。例えば、Ｐ３０３Ｒは、位置番号３０３のプロリンがアルギニンで置換されたことを意味する。１文字表記はまた、コンストラクトのＮおよびＣ末端、およびドメイン間で使用される。２つのドメイン間の破線は、アミノ酸が連結されていることを示す。フューリンは外毒素ＡのドメインＩＩのアミノ酸３０４と３０５の間を切断する。
【図2】Ｆ４９Ａ突然変異による選択性を示す。ＳＹＮｘのケモカイン部分における単一アミノ酸の置換は、ＣＸＣＲ１受容体（Ｂ）と比較してＵＳ２８受容体（Ａ）への選択性をもたらす。ＳＹＮ０００は野生型ヒトケモカイン（Ｃ－Ｘ３－Ｃモチーフ）リガンド１（ＣＸ３ＣＬ１）（天然ケモカイン配列）であり、一方、ＳＹＮ００１はタンパク質の受容体結合部分に単一突然変異（Ｆ４９Ａ）を有する。
【図3】フューリン切断部位（この場合外毒素Ａの全長トランスロケーションドメイン）を導入すると効力が増加することを示す。フューリン切断部位を含む外毒素Ａの全長トランスロケーションドメインをＳＹＮ００１コンストラクトに付加すると、ＳＹＮ０１６が得られ、内在性ＣＸ３ＣＲ１－およびウイルスにコードされるＵＳ２８－受容体発現細胞の両方上での効力が増加する。
【図4】フューリンによるインビトロ切断を示す。最適化切断部位（ＲＱＲＲ）を有するＳＹＮ００２－コンストラクトのフューリンによるインビトロ切断は、天然フューリン切断部位配列（ＲＱＰＲ）を有する融合タンパク質コンストラクトＳＹＮ０１６と比較して、改善を生じさせない。インビトロでフューリンはＳＹＮｘを消化する。レーン１；Ｍａｒｋ１２タンパク質標準、レーン２；ＳＹＮ０００、レーン３；ＳＹＮ０１７、レーン４；ＳＹＮ０１４、レーン５；ＳＹＮ００１、レーン６；ＳＹＮ０１６およびレーン７；ＳＹＮ００２。ＳＹＮ０００、ＳＹＮ０１７およびＳＹＮ０１４は天然ＣＸ３ＣＬ１ケモカイン配列を有し、一方、ＳＹＮ００１、ＳＹＮ０１６およびＳＹＮ００２はケモカイン部分においてＦ４９Ａ突然変異を有する。ＳＹＮ０００、ＳＹＮ０１７、ＳＹＮ００１およびＳＹＮ０１６は天然フューリン切断部位（ＲＱＰＲ）を有し、一方、ＳＹＮ０１４およびＳＹＮ００２は最適化切断部位（ＲＱＲＲ）を有する。
【図5】ＳＹＮ００２はフューリンにより広いｐＨ範囲にわたり切断されることを示す。ＳＹＮ００２はインビトロで広いｐＨ範囲にわたり切断された。レーン１；Ｍａｒｋ１２タンパク質標準、レーン２；フューリン添加なし、レーン３；＋８ｍＭ ＨＣｌ（約ｐＨ５．２）、レーン４；＋６ｍＭ ＨＣｌ（約ｐＨ６．３）、レーン５；＋４ｍＭ ＨＣｌ（約ｐＨ６．６）、レーン６；＋２ｍＭ ＨＣｌ（約ｐＨ７．０）、レーン７；滴定剤添加なし（約ｐＨ７．４）、レーン８；２ｍＭ ＮａＯＨ（約ｐＨ７．７）およびレーン９；＋４ｍＭ ＮａＯＨ（約ｐＨ９．０）。
【図6】最適化切断部位は選択性を増加させることを示す。最適化切断部位ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを第２のペプチドに、この特別な場合、最適化切断部位ＡｒｇＧｌｎＡｒｇＡｒｇをＳＹＮ０１６に導入してＳＹＮ００２を得ると、ウイルスにコードされる受容体への選択性の増加が得られる。ＳＹＮ００２では、ウイルスにコードされる受容体、例えばＵＳ２８を発現する細胞について、細胞死滅効力は、切断部位ＡｒｇＧｌｎＰｒｏＡｒｇ（よって、Ｘ２＝Ｐｒｏ）を有するＳＹＮ０１６と比較して大体維持されるが、しかしながら、内在性／ヒト受容体、例えばＣＸ３ＣＲ１を発現する細胞に対する効力は、ＳＹＮ０１６と比較して減少する。選択性および効力はどちらも、フューリン切断部位を含まない第２のペプチド、例えばＳＹＮ０００（図に示さず）と比べて、増加する。
【発明を実施するための形態】
【0024】
本開示は、標的認識および標的選択性を提供する第１のペプチドならびに毒素を提供し、さらに、毒素の細胞内切断および放出および標的細胞における結果としてのエフェクター毒性を提供する第２のペプチドを含む融合タンパク質に関する。本明細書で提供される融合タンパク質は、潜伏感染の治療を含む、病原体に誘発される感染の治療に有用である。
【0025】
本発明者らは、受容体、例えばウイルスによりコードされる受容体、例えばＵＳ２８（これは便宜的に、構成的にインターナライズされ得る）に結合すると、感染細胞、例えば、潜伏感染した細胞を含むＣＭＶ感染細胞を効果的に標的にし、死滅させる融合タンパク質を作製した。
【0026】
ＵＳ２８は、ヒトサイトメガロウイルスオープンリーディングフレームＵＳ２８によりコードされたＧタンパク質共役受容体である。ＵＳ２８は、構成的にインターナライズする受容体である。よって、ＵＳ２８に結合するケモカインまたは他の化合物は、受容体を発現する細胞内にインターナライズされる。ＵＳ２８はＣＭＶで潜伏感染した細胞を含むＣＭＶ感染細胞上で発現される。
【0027】
融合タンパク質は、受容体、とりわけ病原体によりコードされる受容体、例えばＵＳ２８に結合することができる第１のペプチド、および、最適化切断部位および毒素、例えば外毒素Ａの選択されたドメインを含む第２のペプチドを含む。融合タンパク質の病原体にコードされる受容体、例えばＵＳ２８への選択性は驚いたことに切断部位における突然変異を受けて増強される。本明細書で記載される最適化切断部位は様々な融合タンパク質、特に免疫毒素のために使用することができ、細胞死滅効力を標的受容体選択様式で変化させることにより、細胞死滅選択性が増加される。
【0028】
１つの態様では、本発明は、下記を含む融合タンパク質を提供し：
ａ）細胞上に発現された少なくとも１つの受容体に結合する第１のペプチド；および
ｂ）アミノ酸配列ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを有する切断部位を含む第２のペプチド、
Ｘ２はＡｒｇまたはＬｙｓであり、第２のペプチドは毒素を含む。
ａ）細胞上に発現された少なくとも１つの受容体に結合する第１のペプチド；および
ｂ）アミノ酸配列ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを有する切断部位を含む第２のペプチド、
Ｘ２はＡｒｇまたはＬｙｓであり、第２のペプチドは毒素を含む。
【0029】
「アミノ酸」という用語は本明細書では、標準的な２０の遺伝学的にコードされるアミノ酸およびそれらの「Ｄ」型の対応する立体異性体（天然「Ｌ」型と比べて）、ωアミノ酸および他の天然起源のアミノ酸、特殊なアミノ酸（例えばα，α－二置換アミノ酸、Ｎ－アルキルアミノ酸、など）および化学的誘導体化アミノ酸を含む。アミノ酸が特定的に列挙される場合、例えば「アラニン」または「Ａｌａ」または「Ａ」である場合、その用語は、明確に別記されない限り、ｌ－アラニンおよびｄ－アラニンの両方を示す。
【0030】
発明の一実施形態では、融合タンパク質は、天然起源のアミノ酸のみから構成される。
【0031】
切断部位
本開示の第２のペプチドは、アミノ酸配列
ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇ
を有する切断部位を含む。
Ｘ１は任意のアミノ酸とすることができる。１つの実施形態では、Ｘ１は、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、ＴｈｒおよびＡｓｎからなる群より選択される。１つの実施形態では、Ｘ１はＧｌｎである。
本開示の第２のペプチドは、アミノ酸配列
ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇ
を有する切断部位を含む。
Ｘ１は任意のアミノ酸とすることができる。１つの実施形態では、Ｘ１は、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、ＴｈｒおよびＡｓｎからなる群より選択される。１つの実施形態では、Ｘ１はＧｌｎである。
【0032】
Ｘ２はＡｒｇおよびＬｙｓから選択される。有利な実施形態では、Ｘ２はＡｒｇである。１つの実施形態では、Ｘ２はＬｙｓである。塩基性アミノ酸、例えばＡｒｇをアミノ酸位置Ｘ２に導入することにより、細胞死滅選択性が増強される。そのため、例えば、ウイルスによりコードされる受容体を発現し、第１のペプチドに結合するウイルス感染細胞は、例えば、内在性受容体を発現する細胞（これもまた、第１のペプチドに結合し得る）より効率的に死滅される。
【0033】
好ましい実施形態では、切断部位はアミノ酸配列ＡｒｇＧｌｎＡｒｇＡｒｇ（ＲＱＲＲ）を含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、切断部位はアミノ酸配列ＡｒｇＧｌｎＬｙｓＡｒｇを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、切断部位はアミノ酸配列ＡｒｇＳｅｒＬｙｓＡｒｇを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、切断部位はアミノ酸配列ＡｒｇＳｅｒＡｒｇＡｒｇを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、切断部位はアミノ酸配列ＡｒｇＴｈｒＬｙｓＡｒｇを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、切断部位はアミノ酸配列ＡｒｇＴｈｒＡｒｇＡｒｇを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、切断部位はアミノ酸配列ＡｒｇＡｓｎＬｙｓＡｒｇを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、切断部位はアミノ酸配列ＡｒｇＡｓｎＡｒｇＡｒｇを含み、またはこれから構成される。
【0034】
１つの実施形態では、切断は切断部位のＣ末端で起こる。
【0035】
融合タンパク質をフューリンで切断することは可能であるかもしれないが、しかしながら、他の酵素またはプロテアーゼもまた、切断部位での切断に関与することができる。
【0036】
よって、１つの実施形態では、切断部位は酵素切断部位である。
【0037】
１つの実施形態では、酵素切断部位はフューリン切断部位である。
【0038】
受容体
１つの実施形態では、第１のペプチドは、細胞上に発現された少なくとも１つの受容体に結合する。１つの実施形態では、第１のペプチドは細胞上に発現された少なくとも２つの受容体に結合する。
１つの実施形態では、第１のペプチドは、細胞上に発現された少なくとも１つの受容体に結合する。１つの実施形態では、第１のペプチドは細胞上に発現された少なくとも２つの受容体に結合する。
【0039】
１つの実施形態では、第１のペプチドに結合する１つの受容体は病原体によりコードされる受容体であり、第１のペプチドに結合するさらなる受容体は第１のペプチドまたはそのバリアントのためのヒトコード受容体および／または内在性受容体である。
【0040】
１つの実施形態では、受容体はＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のＵＳ２８である。
【0041】
１つの実施形態では、受容体はケモカイン受容体である。１つの実施形態では、ケモカイン受容体はＣＣケモカイン受容体および／またはＣＸ３Ｃケモカイン受容体である。１つの実施形態では、ＣＣケモカイン受容体はＵＳ２８である。１つの実施形態では、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体はＣＸ３ＣＲ１である。
【0042】
１つの実施形態では、受容体は病原体によりコードされる。１つの実施形態では、病原体は細菌である。１つの実施形態では、病原体はウイルスである。１つの実施形態では、ウイルスはＤＮＡウイルスである。１つの実施形態では、ウイルスはＲＮＡウイルスである。１つの実施形態では、ウイルスはヘルペスウイルスである。１つの実施形態では、ウイルスはサイトメガロウイルスである。
【0043】
１つの実施形態では、受容体はインターナライズすることができる。１つの実施形態では、受容体は第１のペプチドに結合するとインターナライズされる。１つの実施形態では、受容体は構成的にインターナライズされる。病原体によりコードされる受容体は便宜的に、構成的にインターナライズされ、これにより、病原体感染細胞による融合タンパク質の効率的な取り込みが確保され、よって、感染細胞の死が最低の望まれない毒性および副作用で確保される。「インターナリゼーション」は、受容体が、それが発現される細胞内に移動されるプロセスを示す。例えば、受容体はエンドサイトーシスまたは食作用により細胞に入ることができる。
【0044】
いくつかの実施形態では、本発明は、選択的様式で受容体に結合し、前記受容体のインターナリゼーションに至らしめることにより、特定の細胞を標的にする融合タンパク質を提供する。次いで、融合タンパク質の毒素部分が切断され、前記細胞が死滅させられる。
【0045】
毒素
１つの実施形態では、融合タンパク質は免疫毒素である。「免疫毒素」は毒素に結合された標的化部分からなるタンパク質を示す。標的化部分はまた、リガンドとも呼ばれる。
１つの実施形態では、融合タンパク質は免疫毒素である。「免疫毒素」は毒素に結合された標的化部分からなるタンパク質を示す。標的化部分はまた、リガンドとも呼ばれる。
【0046】
毒素は異なる種類の毒素であってもよい。１つの実施形態では、第２のペプチドはシュードモナス外毒素Ａ、ゲロニン、ボウガニン（ｂｏｕｇａｎｉｎ）、サポリン、リシン、リシンＡ鎖、ブリオジン（ｂｒｙｏｄｉｎ）、レストリクトシン、ジフテリア毒素（ｄｉｐｈｔｅｒｉａ ｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（ｄｉｐｈｔｅｒｉａ ｔｏｘｉｎ）Ａ鎖ならびにそのバリアントおよび断片からなる群より選択される毒素を含む。融合タンパク質の毒素部分は細胞の死滅を可能にする。毒素は細胞傷害性である。
【0047】
１つの実施形態では、第２のペプチドはシュードモナス外毒素Ａの１つ以上のドメインを含む。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の外毒素Ａの少なくとも一部を含む。
【0048】
融合タンパク質
第１のペプチドは標的化部分であり、これにより細胞上に発現された受容体への結合が可能になる。
第１のペプチドは標的化部分であり、これにより細胞上に発現された受容体への結合が可能になる。
【0049】
１つの実施形態では、第１および第２のペプチドは作動可能に連結されている。一般に、「作動可能に連結された」は、連結される配列は互いに近接しており、および／または、機能的関係になるよう配置され、例えば共有結合により連結されることを意味する。
【0050】
１つの実施形態では、第１のペプチドは下記を含み、またはこれから構成される：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成される、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のバリアント；
ｃ．５０を超えるアミノ酸の長さ、例えば６０、７０、または７５を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成される、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のバリアント；
ｃ．５０を超えるアミノ酸の長さ、例えば６０、７０、または７５を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
【0051】
１つの実施形態では、第１のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のバリアントを含み、またはこれから構成される。
【0052】
１つの実施形態では、第１のペプチドは５０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片を含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドは６０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片を含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドは７０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片を含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドは７５を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片を含み、またはこれから構成される。
【0053】
１つの実施形態では、第１のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第１のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。
【0054】
１つの実施形態では、４９位におけるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸残基は、Ａｌａ、ＬｙｓまたはＡｓｐ、好ましくはＡｌａに変異される。これらの置換は、第１のペプチドに結合するヒトまたは内在性コード受容体と比較すると、第１のペプチドに結合する病原体にコードされる受容体を発現する細胞への細胞死滅選択性の増加に導くことができる。
【0055】
１つの実施形態では、第１のペプチドは、Ｎ末端でメチオニン（Ｍ）をさらに含む。
【0056】
１つの実施形態では、第１のペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＮおよび／またはＣ末端で、および／または、アミノ酸配列内部に挿入された１つ以上の追加のアミノ酸を含み、またはこれから構成される。
【0057】
１つの実施形態では、１つ以上のアミノ酸はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＮおよび／またはＣ末端で、および／または、アミノ酸配列内部で欠失される。
【0058】
１つの実施形態では、第１のペプチドは１００未満のアミノ酸の長さを有する。
【0059】
１つの実施形態では、第１のペプチドは９０未満のアミノ酸の長さを有する。
【0060】
１つの実施形態では、第１のペプチドは８５未満のアミノ酸の長さを有する。
【0061】
１つの実施形態では、第１のペプチドは８０未満のアミノ酸の長さを有する。
【0062】
１つの実施形態では、第２のペプチドは、ドメインＡ（トランスロケーションドメインであり得る）、例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＡ、および／またはドメインＢ、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＢ、および／またはドメインＣ（細胞傷害性ドメインであり得る）、例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＣを含む。
【0063】
１つの実施形態では、第２のペプチドはドメインＡ、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＡを含む。１つの実施形態では、第２のペプチドはドメインＡ、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＡ、ならびに、ドメインＢ、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＢを含む。１つの実施形態では、第２のペプチドはドメインＡ、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＡ、ならびに、ドメインＢ、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＢ、ならびに、ドメインＣ、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＣを含む。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＢを含む。１つの実施形態では、第２のペプチドはドメインＣ、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５またはその断片もしくはバリアントによるアミノ酸配列を有するドメインＣを含む。
【0064】
１つの実施形態では、第２のペプチドは下記を含む：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のバリアント；
ｃ．８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば９０、１００、または１１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のバリアント；
ｃ．８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば９０、１００、または１１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
【0065】
１つの実施形態では、第２のペプチドは、下記を含む：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のバリアント；
ｃ．６を超えるアミノ酸の長さ、例えば８、１０、または１２を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のバリアント；
ｃ．６を超えるアミノ酸の長さ、例えば８、１０、または１２を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
【0066】
１つの実施形態では、第２のペプチドは、下記を含む：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のバリアント；
ｃ．１８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば１９０、２００、または２１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のバリアント；
ｃ．１８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば１９０、２００、または２１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
【0067】
１つの実施形態では、第２のペプチドは下記を含む：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のバリアント；
ｃ．８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば９０、１００、または１１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント；ならびに
ｄ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列；
ｅ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のバリアント；
ｆ．６を超えるアミノ酸の長さ、例えば８、１０、または１２を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のバリアント；
ｃ．８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば９０、１００、または１１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント；ならびに
ｄ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列；
ｅ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のバリアント；
ｆ．６を超えるアミノ酸の長さ、例えば８、１０、または１２を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
【0068】
１つの実施形態では、第２のペプチドは下記を含む：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のバリアント；
ｃ．８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば９０、１００、または１１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント；ならびに
ｄ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列；
ｅ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のバリアント；
ｆ．６を超えるアミノ酸の長さ、例えば８、１０、または１２を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント；ならびに
ｇ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列；
ｈ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のバリアント；
ｉ．１８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば１９０、２００、または２１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のバリアント；
ｃ．８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば９０、１００、または１１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント；ならびに
ｄ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列；
ｅ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のバリアント；
ｆ．６を超えるアミノ酸の長さ、例えば８、１０、または１２を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント；ならびに
ｇ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列；
ｈ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のバリアント；
ｉ．１８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば１９０、２００、または２１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
【0069】
１つの実施形態では、第２のペプチドは、下記を含む：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のバリアント；
ｃ．８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば９０、１００、または１１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント；ならびに
ｄ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列；
ｅ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のバリアント；
ｆ．１８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば１９０、２００、または２１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のバリアント；
ｃ．８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば９０、１００、または１１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント；ならびに
ｄ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列；
ｅ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のバリアント；
ｆ．１８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば１９０、２００、または２１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
【0070】
１つの実施形態では、第２のペプチドは下記を含む：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のバリアント；
ｃ．６を超えるアミノ酸の長さ、例えば８、１０、または１２を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント；ならびに
ｄ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列；
ｅ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のバリアント；
ｆ．１８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば１９０、２００、または２１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のバリアント；
ｃ．６を超えるアミノ酸の長さ、例えば８、１０、または１２を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント；ならびに
ｄ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列；
ｅ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のバリアント；
ｆ．１８０を超えるアミノ酸の長さ、例えば１９０、２００、または２１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
【0071】
１つの実施形態では、ドメインＡはトランスロケーションドメインであり、ドメインＣは細胞傷害性ドメイン、例えばＡＤＰ－リボシル化ドメインである。
【0072】
１つの実施形態では、第２のペプチドはＣ末端においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列ＫＤＥＬを含む。１つの実施形態では、第２のペプチドの５つの最後のアミノ酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列と置き換えられる。
【0073】
１つの実施形態では、第２のペプチドは下記を含み、またはこれから構成される：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のバリアント；
ｃ．３００を超えるアミノ酸の長さ、例えば３１０、３３０、または３４０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のバリアント；
ｃ．３００を超えるアミノ酸の長さ、例えば３１０、３３０、または３４０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
【0074】
１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のバリアントを含み、またはこれから構成される。
【0075】
１つの実施形態では、第２のペプチドは、３００を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片を含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドは、３１０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片を含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドは、３３０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片を含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドは、３４０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片を含み、またはこれから構成される。
【0076】
１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、第２のペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。
【0077】
１つの実施形態では、第２のペプチドは４００未満のアミノ酸の長さ、例えば３８０、３７０、３６０、３５０または３４５未満のアミノ酸の長さを有する。
【0078】
１つの実施形態では、第２のペプチドは４００未満のアミノ酸の長さを有する。
【0079】
１つの実施形態では、第２のペプチドは３８０未満のアミノ酸の長さを有する。
【0080】
１つの実施形態では、第２のペプチドは３７０未満のアミノ酸の長さを有する。
【0081】
１つの実施形態では、第２のペプチドは３６０未満のアミノ酸の長さを有する。
【0082】
１つの実施形態では、第２のペプチドは３５０未満のアミノ酸の長さを有する。
【0083】
１つの実施形態では、第２のペプチドは３４５未満のアミノ酸の長さを有する。
【0084】
１つの実施形態では、融合タンパク質は下記を含み、またはこれから構成される：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のバリアント；
ｃ．３６０を超えるアミノ酸の長さ、例えば３８０、４００、または４２０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のバリアント；
ｃ．３６０を超えるアミノ酸の長さ、例えば３８０、４００、または４２０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
【0085】
１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のバリアントを含み、またはこれから構成される。
【0086】
１つの実施形態では、融合タンパク質は、３６０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片を含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、３８０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片を含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、４００を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片を含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、４２０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片を含み、またはこれから構成される。
【0087】
１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％配列同一性を有するそのバリアントを含み、またはこれから構成される。
【0088】
１つの実施形態では、融合タンパク質は５００未満のアミノ酸の長さ、例えば４９０、４８０、４７０、４６０、４５０、４４０、４３０、４２５未満のアミノ酸の長さを有する。
【0089】
１つの実施形態では、融合タンパク質は５００未満のアミノ酸の長さを有する。１つの実施形態では、融合タンパク質は４９０未満のアミノ酸の長さを有する。１つの実施形態では、融合タンパク質は４８０未満のアミノ酸の長さを有する。１つの実施形態では、融合タンパク質は４７０未満のアミノ酸の長さを有する。１つの実施形態では、融合タンパク質は４６０未満のアミノ酸の長さを有する。１つの実施形態では、融合タンパク質は４５０未満のアミノ酸の長さを有する。１つの実施形態では、融合タンパク質は４４０未満のアミノ酸の長さを有する。１つの実施形態では、融合タンパク質は４３０未満のアミノ酸の長さを有する。１つの実施形態では、融合タンパク質は４２０未満のアミノ酸の長さを有する。
【0090】
１つの実施形態では、融合タンパク質は、病原体に感染した細胞、例えば病原体に潜伏感染した細胞を死滅させる。
【0091】
１つの実施形態では、病原体はウイルス、例えばＤＮＡウイルス、例えばヘルペスウイルス、例えばサイトメガロウイルス、またはＲＮＡウイルスである。
【0092】
１つの実施形態では、融合タンパク質は受容体を発現する細胞の細胞死を誘導する。
【0093】
１つの実施形態では、細胞死は、アポトーシス、壊死、オートファジー性細胞死および有糸分裂関連細胞死からなる群より選択される。「アポトーシス」および「アポトーシス活性」という用語は広い意味で使用され、典型的には、細胞質の濃縮、細胞膜微絨毛の喪失、核の分割、染色体ＤＮＡの分解またはミトコンドリア機能の喪失を含む、１つ以上の特徴的な細胞変化を伴う、哺乳類における細胞死の秩序あるまたは制御された形態を示す。
【0094】
１つの実施形態では、融合タンパク質は病原体に対して直接的または間接的効果を誘導し、病原体増殖、複製、ゲノム安定性、成熟、パッケージング、潜伏、再活性化、播種および／または免疫抑制の阻止という結果になる。
【0095】
１つの実施形態では、融合タンパク質は、病原体にコードされる受容体を発現する細胞を選択的に死滅させる。
【0096】
１つの実施形態では、融合タンパク質はＵＳ２８を発現する細胞を死滅させる。
【0097】
１つの実施形態では、融合タンパク質は、ウイルスによりコードされる受容体、例えばＵＳ２８に対して、１０ｎＭ未満、例えば５ｎＭ未満、例えば１ｎＭ未満、例えば０．５ｎＭ未満、例えば０．１ｎＭ未満または０．００１ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する。
【0098】
１つの実施形態では、融合タンパク質は、内在性受容体またはヒトコード受容体、例えばＣＸ３ＣＲ１を発現する細胞に対する効力と比べて、ウイルスによりコードされる受容体、例えばＵＳ２８を発現する細胞に対して増加した効力、例えば少なくとも１００倍増加した効力、例えば少なくとも３００倍増加した効力、例えば少なくとも４００倍増加した効力、例えば少なくとも５００倍増加した効力を有する。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＣＸ３ＣＲ１を発現する細胞に対する効力と比べて、ＵＳ２８を発現する細胞に対して増加した効力、例えば少なくとも１００倍増加した効力を有する。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＣＸ３ＣＲ１を発現する細胞に対する効力と比べて、ＵＳ２８を発現する細胞に対して増加した効力、例えば少なくとも３００倍増加した効力を有する。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＣＸ３ＣＲ１を発現する細胞に対する効力と比べて、ＵＳ２８を発現する細胞に対して増加した効力、例えば少なくとも４００倍増加した効力を有する。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＣＸ３ＣＲ１を発現する細胞に対する効力と比べて、ＵＳ２８を発現する細胞に対して増加した効力、例えば少なくとも５００倍増加した効力を有する。
【0099】
１つの実施形態では、融合タンパク質は、内在性受容体またはヒトコード受容体、例えばＣＸ３ＣＲ１に対する親和性と比べて、ウイルスによりコードされる受容体、例えばＵＳ２８に対する増加した親和性、例えば少なくとも５０倍増加した親和性、例えば少なくとも１００倍増加した親和性を有する。１つの実施形態では、融合タンパク質は、ＣＸ３ＣＲ１に対する親和性と比べて、ＵＳ２８に対して増加した親和性、例えば少なくとも１００倍増加した親和性を有する。
【0100】
１つの実施形態では、本発明の融合タンパク質の選択比ＵＳ２８／ＣＸ３ＣＲ１は、少なくとも７５０、例えば少なくとも８００、例えば少なくとも８５０、例えば少なくとも９００である。１つの実施形態では、本発明の融合タンパク質の選択比ＵＳ２８／ＣＸ３ＣＲ１は、少なくとも８８０である。１つの実施形態では、本発明の融合タンパク質の選択比ＵＳ２８／ＣＸ３ＣＲ１は、少なくとも７５０である。１つの実施形態では、本発明の融合タンパク質の選択比ＵＳ２８／ＣＸ３ＣＲ１は、少なくとも８００である。１つの実施形態では、本発明の融合タンパク質の選択比ＵＳ２８／ＣＸ３ＣＲ１は、少なくとも８５０である。１つの実施形態では、本発明の融合タンパク質の選択比ＵＳ２８／ＣＸ３ＣＲ１は、少なくとも９００である。
【0101】
核酸
１つの態様では、本発明は本明細書で記載される融合タンパク質をコードする単離された核酸分子を提供する。
１つの態様では、本発明は本明細書で記載される融合タンパク質をコードする単離された核酸分子を提供する。
【0102】
「核酸分子」により、ＤＮＡ（例えばゲノムＤＮＡまたは相補的ＤＮＡ）およびｍＲＮＡ分子が含まれ、それは一本鎖または二本鎖であり得る。「単離された」により、核酸分子は細胞内に位置せず、細胞内で提供されないことが意味される。
【0103】
ベクター
１つの態様では、本発明は本明細書で記載される核酸分子を含むベクターを提供する。
１つの態様では、本発明は本明細書で記載される核酸分子を含むベクターを提供する。
【0104】
１つの実施形態では、ベクターは発現ベクターである。
【0105】
宿主細胞
１つの態様では、本発明は、本明細書で記載される核酸分子またはベクターを含む組換え宿主細胞を提供する。
１つの態様では、本発明は、本明細書で記載される核酸分子またはベクターを含む組換え宿主細胞を提供する。
【0106】
１つの実施形態では、宿主細胞は細菌細胞、酵母細胞、哺乳類細胞、例えばヒト細胞または昆虫細胞である。
【0107】
医薬組成物
１つの態様では、本発明は本明細書で記載される融合タンパク質、核酸、ベクターまたは組換え宿主細胞ならびに薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
１つの態様では、本発明は本明細書で記載される融合タンパク質、核酸、ベクターまたは組換え宿主細胞ならびに薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【0108】
１つの実施形態では、医薬組成物は１つ以上の薬剤をさらに含む。１つの実施形態では、薬剤は、免疫抑制剤、抗ウイルス薬および免疫療法薬からなる群より選択される。
【0109】
１つの実施形態では、抗ウイルス薬は、バルガンシクロビル、ガンシクロビル、シドフォビル、レフルノミド、プレバイミス、マリバビルおよびブリンシドホビルからなる群より選択される。
【0110】
１つの実施形態では、免疫療法は細胞療法である。１つの実施形態では、免疫療法はＴ細胞治療である。
【0111】
疾患
１つの態様では、本発明は、医薬品として使用するための、本明細書で記載される融合タンパク質、核酸、ベクター、組換え宿主細胞または医薬組成物を提供する。
１つの態様では、本発明は、医薬品として使用するための、本明細書で記載される融合タンパク質、核酸、ベクター、組換え宿主細胞または医薬組成物を提供する。
【0112】
別の態様では、本発明は、病原体により引き起こされる感染および／または病原体関連障害の防止または治療において使用するための、本明細書で記載される融合タンパク質、核酸、ベクター、組換え宿主細胞または医薬組成物を提供する。
【0113】
１つの実施形態では、病原体は細菌またはウイルスである。１つの実施形態では、ウイルスはＤＮＡウイルス、例えばヘルペスウイルス、例えばサイトメガロウイルス、またはＲＮＡウイルスである。
【0114】
１つの態様では、本発明はＣＭＶ感染および／またはＣＭＶ関連障害の防止または治療において使用するための、本明細書で記載される融合タンパク質、核酸、ベクター、組換え宿主細胞または医薬組成物を提供する。
【0115】
１つの実施形態では、ＣＭＶ感染は潜伏および／または溶解ＣＭＶ感染である。
【0116】
１つの実施形態では、ＣＭＶ感染は下記において検出され得る：
ｉ）網膜、角膜、心臓、肝臓、腎臓、肺、胃腸組織、胸腺、脾臓、皮膚および筋肉からなる群の１つ以上より選択される組織、および／または
ｉｉ）唾液、血液、尿、精液および母乳からなる群の１つ以上より選択される体液。
ｉ）網膜、角膜、心臓、肝臓、腎臓、肺、胃腸組織、胸腺、脾臓、皮膚および筋肉からなる群の１つ以上より選択される組織、および／または
ｉｉ）唾液、血液、尿、精液および母乳からなる群の１つ以上より選択される体液。
【0117】
１つの実施形態では、ＣＭＶ感染は、ＨＩＶ－患者、新生児および免疫抑制患者、骨髄移植患者、固形臓器移植患者、免疫療法患者、癌患者、集中治療患者、外傷患者、幹細胞患者、遺伝子治療患者、細胞治療患者、高齢患者および多疾病罹患患者からなる群より選択される免疫不全患者における感染である。
【0118】
１つの実施形態では、ＣＭＶ感染は、冠疾患および／または血管疾患を患う患者における感染である。
【0119】
１つの実施形態では、融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物は、静脈内、腫瘍内、腹腔内、くも膜下腔内および／またはリンパ内投与される。
【0120】
１つの実施形態では、融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または組成物は、１回以上個体に投与される。
【0121】
１つの実施形態では、個体はヒトである。
【0122】
１つの実施形態では、ヒトは免疫不全患者である。免疫不全患者により、免疫系の障害または弱化のために感染に正常に応答することができない患者が示される。例えば、免疫不全患者は免疫系に影響する疾患、例えば糖尿病およびＨＩＶと診断され得る。免疫不全患者は、化学療法などの治療後に抑制された免疫応答を有する可能性がある。
【0123】
１つの実施形態では、ヒトは子供である。１つの実施形態では、ヒトは成人である。
【0124】
１つの実施形態では、ヒトは固形臓器移植および／または造血幹細胞移植が必要である。造血幹細胞移植は、通常、１つの骨髄、末梢血または臍帯血由来の多能性造血幹細胞の移植である。移植は自家（幹細胞は同じ患者から単離される）または同種（幹細胞は異なる患者から単離される）とすることができる。
【0125】
１つの実施形態では、ＣＭＶ関連障害は、サイトメガロウイルス間質性肺炎、サイトメガロウイルス肝炎、サイトメガロウイルス膵炎、サイトメガロウイルス単核球症、ＣＭＶ多脊髄神経根症（ｐｏｌｙｒａｄｉｃｕｌｏｍｙｅｌｏｐａｔｈｙ）、巨細胞封入体病、サイトメガロウイルス大腸炎、サイトメガロウイルス食道炎、サイトメガロウイルス網膜炎、ギラン・バレー症候群、粘表皮がんおよび潰瘍性大腸炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、固形臓器移植移植片対宿主病（ＳＯＴ－ＧＶＨＤ）からなる群より選択される。
【0126】
１つの態様では、本発明は病原体により引き起こされる感染および／または病原体関連障害の防止または治療のため、例えば、ＣＭＶ感染および／またはＣＭＶ関連障害の防止または治療のための医薬品の製造において使用するための本明細書で記載される融合タンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞または医薬組成物を提供する。
【0127】
別の態様では、本発明は移植のための固形臓器および／または移植のための造血幹細胞の処置のための、本明細書で記載される融合タンパク質または医薬組成物のエクスビボ使用を提供する。
【0128】
「治療すること」、「治療」、および「療法」という用語は本明細書では、根治療法、予防療法、寛解および対症療法を示す。好ましくは、治療は根治的である。
【0129】
治療方法
１つの態様では、本発明はその必要のある個体において、病原体により引き起こされる感染、例えばＣＭＶ感染を治療または防止する方法を提供し、方法は、治療的有効量の、本明細書で記載される融合タンパク質、核酸、ベクター、組換え宿主細胞または医薬組成物を個体に投与することを含む。
１つの態様では、本発明はその必要のある個体において、病原体により引き起こされる感染、例えばＣＭＶ感染を治療または防止する方法を提供し、方法は、治療的有効量の、本明細書で記載される融合タンパク質、核酸、ベクター、組換え宿主細胞または医薬組成物を個体に投与することを含む。
【0130】
化合物の「有効量」または「治療的有効量」は、有益な効果を化合物が投与される被検体に提供するのに十分である化合物の量である。「治療的有効量」という句は本明細書では、感染を治療する（その発症を遅延させ、もしくは防止する、その進行を防止する、阻害する、減少させるまたは逆転させる）のに十分または有効である融合タンパク質の量を示し得る。
【0131】
生成するための方法
１つの態様では、本発明は、本明細書で記載される融合タンパク質を生成するための方法を提供し、方法は、本明細書で規定される宿主細胞をコード融合タンパク質の発現を可能にする条件下で培養することを含む。
１つの態様では、本発明は、本明細書で記載される融合タンパク質を生成するための方法を提供し、方法は、本明細書で規定される宿主細胞をコード融合タンパク質の発現を可能にする条件下で培養することを含む。
【0132】
配列
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（例示的な第１のペプチド）
ＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＦＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２（例示的な第２のペプチド）
ＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＲＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３（外毒素ＡのドメインＡ）
ＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＲＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４（外毒素ＡのドメインＢ）
ＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５（外毒素ＡのドメインＣ）
ＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６（ＳＹＮ００２）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＡＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＲＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥＬ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７（ヒトＣＸ３ＣＬ１）
ＭＡＰＩＳＬＳＷＬＬＲＬＡＴＦＣＨＬＴＶＬＬＡＧＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＦＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧＧＴＦＥＫＱＩＧＥＶＫＰＲＴＴＰＡＡＧＧＭＤＥＳＶＶＬＥＰＥＡＴＧＥＳＳＳＬＥＰＴＰＳＳＱＥＡＱＲＡＬＧＴＳＰＥＬＰＴＧＶＴＧＳＳＧＴＲＬＰＰＴＰＫＡＱＤＧＧＰＶＧＴＥＬＦＲＶＰＰＶＳＴＡＡＴＷＱＳＳＡＰＨＱＰＧＰＳＬＷＡＥＡＫＴＳＥＡＰＳＴＱＤＰＳＴＱＡＳＴＡＳＳＰＡＰＥＥＮＡＰＳＥＧＱＲＶＷＧＱＧＱＳＰＲＰＥＮＳＬＥＲＥＥＭＧＰＶＰＡＨＴＤＡＦＱＤＷＧＰＧＳＭＡＨＶＳＶＶＰＶＳＳＥＧＴＰＳＲＥＰＶＡＳＧＳＷＴＰＫＡＥＥＰＩＨＡＴＭＤＰＱＲＬＧＶＬＩＴＰＶＰＤＡＱＡＡＴＲＲＱＡＶＧＬＬＡＦＬＧＬＬＦＣＬＧＶＡＭＦＴＹＱＳＬＱＧＣＰＲＫＭＡＧＥＭＡＥＧＬＲＹＩＰＲＳＣＧＳＮＳＹＶＬＶＰＶ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８（細胞内での逆行輸送のためのＫＤＥＬ－受容体への結合を確保する配列）
ＫＤＥＬ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９（全長外毒素Ａ）
ＭＨＬＴＰＨＷＩＰＬＶＡＳＬＧＬＬＡＧＧＳＦＡＳＡＡＥＥＡＦＤＬＷＮＥＣＡＫＡＣＶＬＤＬＫＤＧＶＲＳＳＲＭＳＶＤＰＡＩＡＤＴＮＧＱＧＶＬＨＹＳＭＶＬＥＧＧＮＤＡＬＫＬＡＩＤＮＡＬＳＩＴＳＤＧＬＴＩＲＬＥＧＧＶＥＰＮＫＰＶＲＹＳＹＴＲＱＡＲＧＳＷＳＬＮＷＬＶＰＩＧＨＥＫＰＳＮＩＫＶＦＩＨＥＬＮＡＧＮＱＬＳＨＭＳＰＩＹＴＩＥＭＧＤＥＬＬＡＫＬＡＲＤＡＴＦＦＶＲＡＨＥＳＮＥＭＱＰＴＬＡＩＳＨＡＧＶＳＶＶＭＡＱＡＱＰＲＲＥＫＲＷＳＥＷＡＳＧＫＶＬＣＬＬＤＰＬＤＧＶＹＮＹＬＡＱＱＲＣＮＬＤＤＴＷＥＧＫＩＹＲＶＬＡＧＮＰＡＫＨＤＬＤＩＫＰＴＶＩＳＨＲＬＨＦＰＥＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＰＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＡＤＶＶＳＬＴＣＰＶＡＡＧＥＣＡＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＲＥＤＬＫ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０（ＵＳ２８）
ＭＴＰＴＴＴＴＡＥＬＴＴＥＦＤＹＤＥＡＡＴＰＣＶＦＴＤＶＬＮＱＳＫＰＶＴＬＦＬＹＧＶＶＦＬＦＧＳＩＧＮＦＬＶＩＦＴＩＴＷＲＲＲＩＱＣＳＧＤＶＹＦＩＮＬＡＡＡＤＬＬＦＶＣＴＬＰＬＷＭＱＹＬＬＤＨＮＳＬＡＳＶＰＣＴＬＬＴＡＣＦＹＶＡＭＦＡＳＬＣＦＩＴＥＩＡＬＤＲＹＹＡＩＶＹＭＲＹＲＰＶＫＱＡＣＬＦＳＩＦＷＷＩＦＡＶＩＩＡＩＰＨＦＭＶＶＴＫＫＤＮＱＣＭＴＤＹＤＹＬＥＶＳＹＰＩＩＬＮＶＥＬＭＬＧＡＦＶＩＰＬＳＶＩＳＹＣＹＹＲＩＳＲＩＶＡＶＳＱＳＲＨＫＧＲＩＶＲＶＬＩＡＶＶＬＶＦＩＩＦＷＬＰＹＨＬＴＬＦＶＤＴＬＫＬＬＫＷＩＳＳＳＣＥＦＥＲＳＬＫＲＡＬＩＬＴＥＳＬＡＦＣＨＣＣＬＮＰＬＬＹＶＦＶＧＴＫＦＲＱＥＬＨＣＬＬＡＥＦＲＱＲＬＦＳＲＤＶＳＷＹＨＳＭＳＦＳＲＲＳＳＰＳＲＲＥＴＳＳＤＴＬＳＤＥＶＣＲＶＳＱＩＩＰ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１（ＳＹＮ０００）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＦＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＲＱＰＲＧＷＥＱＬＥＱＳＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥＬ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２（ＳＹＮ００１）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＡＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＲＱＰＲＧＷＥＱＬＥＱＳＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３（ＳＹＮ０１４）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＦＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＲＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥＬ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４（ＳＹＮ０１６）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＡＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＰＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥＬ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５（ＳＹＮ０１７）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＦＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＰＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥＬ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（例示的な第１のペプチド）
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２（例示的な第２のペプチド）
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３（外毒素ＡのドメインＡ）
ＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＲＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４（外毒素ＡのドメインＢ）
ＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５（外毒素ＡのドメインＣ）
ＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６（ＳＹＮ００２）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＡＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＲＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥＬ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７（ヒトＣＸ３ＣＬ１）
ＭＡＰＩＳＬＳＷＬＬＲＬＡＴＦＣＨＬＴＶＬＬＡＧＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＦＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧＧＴＦＥＫＱＩＧＥＶＫＰＲＴＴＰＡＡＧＧＭＤＥＳＶＶＬＥＰＥＡＴＧＥＳＳＳＬＥＰＴＰＳＳＱＥＡＱＲＡＬＧＴＳＰＥＬＰＴＧＶＴＧＳＳＧＴＲＬＰＰＴＰＫＡＱＤＧＧＰＶＧＴＥＬＦＲＶＰＰＶＳＴＡＡＴＷＱＳＳＡＰＨＱＰＧＰＳＬＷＡＥＡＫＴＳＥＡＰＳＴＱＤＰＳＴＱＡＳＴＡＳＳＰＡＰＥＥＮＡＰＳＥＧＱＲＶＷＧＱＧＱＳＰＲＰＥＮＳＬＥＲＥＥＭＧＰＶＰＡＨＴＤＡＦＱＤＷＧＰＧＳＭＡＨＶＳＶＶＰＶＳＳＥＧＴＰＳＲＥＰＶＡＳＧＳＷＴＰＫＡＥＥＰＩＨＡＴＭＤＰＱＲＬＧＶＬＩＴＰＶＰＤＡＱＡＡＴＲＲＱＡＶＧＬＬＡＦＬＧＬＬＦＣＬＧＶＡＭＦＴＹＱＳＬＱＧＣＰＲＫＭＡＧＥＭＡＥＧＬＲＹＩＰＲＳＣＧＳＮＳＹＶＬＶＰＶ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８（細胞内での逆行輸送のためのＫＤＥＬ－受容体への結合を確保する配列）
ＫＤＥＬ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９（全長外毒素Ａ）
ＭＨＬＴＰＨＷＩＰＬＶＡＳＬＧＬＬＡＧＧＳＦＡＳＡＡＥＥＡＦＤＬＷＮＥＣＡＫＡＣＶＬＤＬＫＤＧＶＲＳＳＲＭＳＶＤＰＡＩＡＤＴＮＧＱＧＶＬＨＹＳＭＶＬＥＧＧＮＤＡＬＫＬＡＩＤＮＡＬＳＩＴＳＤＧＬＴＩＲＬＥＧＧＶＥＰＮＫＰＶＲＹＳＹＴＲＱＡＲＧＳＷＳＬＮＷＬＶＰＩＧＨＥＫＰＳＮＩＫＶＦＩＨＥＬＮＡＧＮＱＬＳＨＭＳＰＩＹＴＩＥＭＧＤＥＬＬＡＫＬＡＲＤＡＴＦＦＶＲＡＨＥＳＮＥＭＱＰＴＬＡＩＳＨＡＧＶＳＶＶＭＡＱＡＱＰＲＲＥＫＲＷＳＥＷＡＳＧＫＶＬＣＬＬＤＰＬＤＧＶＹＮＹＬＡＱＱＲＣＮＬＤＤＴＷＥＧＫＩＹＲＶＬＡＧＮＰＡＫＨＤＬＤＩＫＰＴＶＩＳＨＲＬＨＦＰＥＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＰＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＡＤＶＶＳＬＴＣＰＶＡＡＧＥＣＡＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＲＥＤＬＫ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０（ＵＳ２８）
ＭＴＰＴＴＴＴＡＥＬＴＴＥＦＤＹＤＥＡＡＴＰＣＶＦＴＤＶＬＮＱＳＫＰＶＴＬＦＬＹＧＶＶＦＬＦＧＳＩＧＮＦＬＶＩＦＴＩＴＷＲＲＲＩＱＣＳＧＤＶＹＦＩＮＬＡＡＡＤＬＬＦＶＣＴＬＰＬＷＭＱＹＬＬＤＨＮＳＬＡＳＶＰＣＴＬＬＴＡＣＦＹＶＡＭＦＡＳＬＣＦＩＴＥＩＡＬＤＲＹＹＡＩＶＹＭＲＹＲＰＶＫＱＡＣＬＦＳＩＦＷＷＩＦＡＶＩＩＡＩＰＨＦＭＶＶＴＫＫＤＮＱＣＭＴＤＹＤＹＬＥＶＳＹＰＩＩＬＮＶＥＬＭＬＧＡＦＶＩＰＬＳＶＩＳＹＣＹＹＲＩＳＲＩＶＡＶＳＱＳＲＨＫＧＲＩＶＲＶＬＩＡＶＶＬＶＦＩＩＦＷＬＰＹＨＬＴＬＦＶＤＴＬＫＬＬＫＷＩＳＳＳＣＥＦＥＲＳＬＫＲＡＬＩＬＴＥＳＬＡＦＣＨＣＣＬＮＰＬＬＹＶＦＶＧＴＫＦＲＱＥＬＨＣＬＬＡＥＦＲＱＲＬＦＳＲＤＶＳＷＹＨＳＭＳＦＳＲＲＳＳＰＳＲＲＥＴＳＳＤＴＬＳＤＥＶＣＲＶＳＱＩＩＰ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１（ＳＹＮ０００）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＦＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＲＱＰＲＧＷＥＱＬＥＱＳＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥＬ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２（ＳＹＮ００１）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＡＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＲＱＰＲＧＷＥＱＬＥＱＳＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３（ＳＹＮ０１４）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＦＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＲＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥＬ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４（ＳＹＮ０１６）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＡＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＰＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥＬ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５（ＳＹＮ０１７）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＦＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＰＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥＬ
【0133】
項目
１．下記を含む融合タンパク質であって、
ａ）細胞上に発現された少なくとも１つの受容体に結合する第１のペプチド；および
ｂ）アミノ酸配列ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを有する切断部位を含む第２のペプチド、
Ｘ２はＡｒｇまたはＬｙｓであり、第２のペプチドは毒素を含む、融合タンパク質。
１．下記を含む融合タンパク質であって、
ａ）細胞上に発現された少なくとも１つの受容体に結合する第１のペプチド；および
ｂ）アミノ酸配列ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを有する切断部位を含む第２のペプチド、
Ｘ２はＡｒｇまたはＬｙｓであり、第２のペプチドは毒素を含む、融合タンパク質。
【0134】
２．融合タンパク質は免疫毒素である、項目１による融合タンパク質。
【0135】
３．切断部位はアミノ酸配列ＡｒｇＧｌｎＡｒｇＡｒｇを含み、またはこれから構成される、前記項目のいずれか一つによる融合タンパク質。
【0136】
４．第１のペプチドは細胞上に発現された少なくとも２つの異なる受容体に結合する、前記項目のいずれか一つによる融合タンパク質。
【0137】
５．第１のペプチドに結合する１つの受容体は病原体によりコードされる受容体であり、第１のペプチドに結合するさらなる受容体は第１のペプチドまたはそのバリアントのためのヒトコード受容体および／または内在性受容体である、前記項目のいずれか一つによる融合タンパク質。
【0138】
６．受容体はＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のＵＳ２８である、前記項目のいずれか一つによる融合タンパク質。
【0139】
７．第２のペプチドはシュードモナス外毒素Ａ、ゲロニン、ボウガニン（ｂｏｕｇａｎｉｎ）、サポリン、リシン、リシンＡ鎖、ブリオジン（ｂｒｙｏｄｉｎ）、レストリクトシン、ジフテリア毒素（ｄｉｐｈｔｅｒｉａ ｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（ｄｉｐｈｔｅｒｉａ ｔｏｘｉｎ）Ａ鎖ならびにそのバリアントおよび断片からなる群より選択される毒素を含む、前記項目のいずれか一つによる融合タンパク質。
【0140】
８．受容体は第１のペプチドに結合するとインターナライズされる、前記項目のいずれか一つによる融合タンパク質。
【0141】
９．受容体は構成的にインターナライズされる、前記項目のいずれか一つによる融合タンパク質。
【0142】
１０．第１のペプチドは、下記を含み、またはこれから構成される、前記項目のいずれか一つによる融合タンパク質：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成される、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のバリアント；
ｃ．５０を超えるアミノ酸の長さ、例えば６０、７０、または７５を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成される、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のバリアント；
ｃ．５０を超えるアミノ酸の長さ、例えば６０、７０、または７５を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の断片、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
【0143】
１１．第２のペプチドは、下記を含み、またはこれから構成される、前記項目のいずれか一つによる融合タンパク質：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のバリアント；
ｃ．３００を超えるアミノ酸の長さ、例えば３１０、３３０、または３４０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のバリアント；
ｃ．３００を超えるアミノ酸の長さ、例えば３１０、３３０、または３４０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
【0144】
１２．融合タンパク質は、下記を含み、またはこれから構成される、前記項目のいずれか一つによる融合タンパク質：
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のバリアント；
ｃ．３６０を超えるアミノ酸の長さ、例えば３８０、４００、または４２０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
ａ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列；
ｂ．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を含み、またはこれから構成されるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のバリアント；
ｃ．３６０を超えるアミノ酸の長さ、例えば３８０、４００、または４２０を超えるアミノ酸の長さを有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の断片、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％配列同一性、より好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも８５％または９０％配列同一性、最も好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するそのバリアント。
【0145】
１３．融合タンパク質は、病原体に感染した細胞、例えば病原体に潜伏感染した細胞を死滅させる、前記項目のいずれか一つによる融合タンパク質。
【0146】
１４．融合タンパク質は、ウイルスによりコードされる受容体、例えばＵＳ２８を発現する細胞に対して、内在性受容体またはヒトコード受容体、例えばＣＸ３ＣＲ１を発現する細胞に対する効力と比べて、増加した効力、例えば少なくとも３００倍増加した効力、例えば少なくとも４００倍増加した効力、例えば少なくとも５００倍増加した効力、例えば少なくとも７００倍増加した効力を有する、前記項目のいずれか一つによる融合タンパク質。
【0147】
１５．病原体により引き起こされる感染および／または病原体関連障害の防止または治療において使用するための、項目１～１４のいずれか一つによる融合タンパク質。
【0148】
１６．ＣＭＶ感染および／またはＣＭＶ関連障害の防止または治療において使用するための、項目１～１４のいずれか一つによる融合タンパク質。
【0149】
実施例
実施例１：融合タンパク質ＳＹＮｘの第１のペプチドにおける突然変異は細胞死滅における選択性につながる
材料および方法
誘導性ＵＳ２８またはＣＸ３ＣＲ１発現ＨＥＫ２９３細胞
結合および細胞死滅アッセイのために、細胞をＨｊｏｒｔｏ ＧＭ ｅｔ ａｌ．， ２０１３に記載されるように構築した。簡単に言うと、ＨＡ－ＣＸ３ＣＲ１－およびＨＡ－ＵＳ２８－発現細胞の安定な誘導性クローンをＦｌｐ－Ｉｎ Ｔ－Ｒｅｘ－２９３細胞をＦｌｐ－リコンビナーゼ発現ベクター、ｐＯＧ４４およびｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＴＯ受容体コンストラクトのいずれかでコトランスフェクトすることにより作製した。ＦＲＴ部位でのこの標的クローニングは受容体遺伝子をテトラサイクリンリプレッサー／オペレーターシステムの制御下に置く。受容体の発現をＷｅｓｔｅｒｎブロッティングにより確認した。細胞培養のために、細胞を、加湿インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２）において１ｘＤＭＥＭ（９％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、１８０Ｕ／ｍＬペニシリンおよび４５μｇ／ｍＬストレプトマイシン、１３．５μｇ／ｍＬブラストサイジンおよび１．３２ｍｇ／ｍＬハイグロマイシンＢを有する）中で、増殖させた。
実施例１：融合タンパク質ＳＹＮｘの第１のペプチドにおける突然変異は細胞死滅における選択性につながる
材料および方法
誘導性ＵＳ２８またはＣＸ３ＣＲ１発現ＨＥＫ２９３細胞
結合および細胞死滅アッセイのために、細胞をＨｊｏｒｔｏ ＧＭ ｅｔ ａｌ．， ２０１３に記載されるように構築した。簡単に言うと、ＨＡ－ＣＸ３ＣＲ１－およびＨＡ－ＵＳ２８－発現細胞の安定な誘導性クローンをＦｌｐ－Ｉｎ Ｔ－Ｒｅｘ－２９３細胞をＦｌｐ－リコンビナーゼ発現ベクター、ｐＯＧ４４およびｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＴＯ受容体コンストラクトのいずれかでコトランスフェクトすることにより作製した。ＦＲＴ部位でのこの標的クローニングは受容体遺伝子をテトラサイクリンリプレッサー／オペレーターシステムの制御下に置く。受容体の発現をＷｅｓｔｅｒｎブロッティングにより確認した。細胞培養のために、細胞を、加湿インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２）において１ｘＤＭＥＭ（９％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、１８０Ｕ／ｍＬペニシリンおよび４５μｇ／ｍＬストレプトマイシン、１３．５μｇ／ｍＬブラストサイジンおよび１．３２ｍｇ／ｍＬハイグロマイシンＢを有する）中で、増殖させた。
【0150】
細胞死滅アッセイ
８０μＬの２０μｇ／ｍＬポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）を含む１ｘＰＢＳをホワイト９６－ウェルプレートの各ウェルに添加し、３０分間室温でインキュベートした。誘導性ＵＳ２８またはＣＸ３ＣＲ１発現ＨＥＫ２９３細胞を１０ｍＬの１ｘＰＢＳ中で洗浄し、２ｍＬの０．０５％（ｗ／ｖ）トリプシン－ＥＤＴＡを用いて２分間放出させた。細胞を１０ｍＬの増殖培地（１ｘＤＭＥＭ、９％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、１８０Ｕ／ｍＬペニシリンおよび４５μｇ／ｍＬストレプトマイシン）に再懸濁させ、次いで、細胞密度を決定した。ＰＤＬ－溶液をプレートから吸引し、各ウェルを１００μＬの１ｘＰＢＳで洗浄した。洗浄バッファーの吸引後、９６－ウェルプレートを１００μＬ中２，０００～１０，０００細胞／ウェルで播種し、ＣＯ２－インキュベーター（３７℃、１０％ＣＯ２）に一晩入れた。
８０μＬの２０μｇ／ｍＬポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）を含む１ｘＰＢＳをホワイト９６－ウェルプレートの各ウェルに添加し、３０分間室温でインキュベートした。誘導性ＵＳ２８またはＣＸ３ＣＲ１発現ＨＥＫ２９３細胞を１０ｍＬの１ｘＰＢＳ中で洗浄し、２ｍＬの０．０５％（ｗ／ｖ）トリプシン－ＥＤＴＡを用いて２分間放出させた。細胞を１０ｍＬの増殖培地（１ｘＤＭＥＭ、９％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、１８０Ｕ／ｍＬペニシリンおよび４５μｇ／ｍＬストレプトマイシン）に再懸濁させ、次いで、細胞密度を決定した。ＰＤＬ－溶液をプレートから吸引し、各ウェルを１００μＬの１ｘＰＢＳで洗浄した。洗浄バッファーの吸引後、９６－ウェルプレートを１００μＬ中２，０００～１０，０００細胞／ウェルで播種し、ＣＯ２－インキュベーター（３７℃、１０％ＣＯ２）に一晩入れた。
【0151】
受容体発現について、１０μＬのテトラサイクリン、１．３７５μｇ／ｍＬ ＵＳ２８および５．５μｇ／ｍＬ ＣＸ３ＣＲ１））を含む増殖培地を選択なしでプレート内の各ウェルに添加し、これをＣＯ２－インキュベーター（３７℃、１０％ＣＯ２）に一晩戻した。
【0152】
融合毒素タンパク質アリコートを氷上で解凍し、これを使用して、１ｍＭ酢酸および５ｇ／Ｌ ＢＳＡ中で希釈系列を作製した。受容体発現増殖培地を吸引し、１００μＬの新鮮増殖培地で置き換えた。５μＬの融合毒素タンパク質希釈系列を各ウェルに添加し、５μＬの１ｇ／Ｌシクロヘキシミドを陽性対照として１つのウェルに添加した。プレートをＣＯ２－インキュベーター（３７℃、１０％ＣＯ２）に一晩戻した。
【0153】
１：１０希釈のＡｌａｍａｒＢｌｕｅを含むアッセイ増殖培地を調製した。溶液をスズ箔で覆い、１０分間、３７℃水浴中で加熱し、次いで０．２μｍフィルタに通して濾過した。ウェル溶液を吸引し、１００μＬのＡｌａｍａｒＢｌｕｅ溶液を各ウェルに添加し、プレートをＣＯ２－インキュベーター（３７℃、１０％ＣＯ２）に４時間戻した。蛍光データをＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３上で、５４０ｎｍでの励起および５８５ｎｍでの発光を用いて収集した。
【0154】
結果
ＳＹＮｘの細胞死滅効率を、ウイルスによりコードされる受容体、例えばＵＳ２８または内在性受容体、例えばＣＸ３ＣＲ１のいずれかを発現するテトラサイクリン誘導ＨＥＫ２９３細胞を受容体発現のない非誘導細胞（陰性対照）と一緒に使用して決定した。データを生細胞の最大数に対して正規化した。ＳＹＮｘの第１のペプチド（ここでは、ケモカイン部分）における単一アミノ酸の置換により、図２に示されるようにウイルスにコードされる受容体ＵＳ２８への選択性が得られる。どちらのコンストラクトも同様の選択性でＵＳ２８に結合するが（図２Ａ）、タンパク質の第１のペプチド（受容体結合部分）において単一突然変異を有する（Ｆ４９Ａ、前駆体番号付けを使用するとＦ７３Ａに対応する）ＳＹＮ００１は、内在性受容体、ここではＣＸＣ３Ｒ１に対する選択性が低い（図２Ｂ）。
ＳＹＮｘの細胞死滅効率を、ウイルスによりコードされる受容体、例えばＵＳ２８または内在性受容体、例えばＣＸ３ＣＲ１のいずれかを発現するテトラサイクリン誘導ＨＥＫ２９３細胞を受容体発現のない非誘導細胞（陰性対照）と一緒に使用して決定した。データを生細胞の最大数に対して正規化した。ＳＹＮｘの第１のペプチド（ここでは、ケモカイン部分）における単一アミノ酸の置換により、図２に示されるようにウイルスにコードされる受容体ＵＳ２８への選択性が得られる。どちらのコンストラクトも同様の選択性でＵＳ２８に結合するが（図２Ａ）、タンパク質の第１のペプチド（受容体結合部分）において単一突然変異を有する（Ｆ４９Ａ、前駆体番号付けを使用するとＦ７３Ａに対応する）ＳＹＮ００１は、内在性受容体、ここではＣＸＣ３Ｒ１に対する選択性が低い（図２Ｂ）。
【0155】
結論
融合タンパク質コンストラクトの第１のペプチド（例えば、ケモカイン部分）における単一アミノ酸Ｆ４９Ａ置換は、融合タンパク質（ＳＹＮｘ）のウイルスにコードされる受容体ＵＳ２８への選択性を誘導する。
融合タンパク質コンストラクトの第１のペプチド（例えば、ケモカイン部分）における単一アミノ酸Ｆ４９Ａ置換は、融合タンパク質（ＳＹＮｘ）のウイルスにコードされる受容体ＵＳ２８への選択性を誘導する。
【0156】
実施例２：外毒素Ａの全長トランスロケーションドメインによるフューリン切断部位の付加により得られる増加した効力
材料および方法
実施例１を参照されたい。
材料および方法
実施例１を参照されたい。
【0157】
結果
ＳＹＮｘの細胞死滅効率を、ウイルスにコードされる受容体ＵＳ２８または内在性受容体ＣＸ３ＣＲ１のいずれかを発現するテトラサイクリン誘導ＨＥＫ２９３細胞を受容体発現のない非誘導細胞（陰性対照）と一緒に使用して決定した。データを生細胞の最大数に対して正規化した。フューリン切断部位、例えば全長トランスロケーションドメインをＳＹＮ００１コンストラクトに付加して、ＳＹＮ０１６を得ると、図３および表１に示されるように、内在性／ヒトＣＸ３ＣＲ１－および病原体コードＵＳ２８－受容体発現細胞の両方への効力が増加する。
ＳＹＮｘの細胞死滅効率を、ウイルスにコードされる受容体ＵＳ２８または内在性受容体ＣＸ３ＣＲ１のいずれかを発現するテトラサイクリン誘導ＨＥＫ２９３細胞を受容体発現のない非誘導細胞（陰性対照）と一緒に使用して決定した。データを生細胞の最大数に対して正規化した。フューリン切断部位、例えば全長トランスロケーションドメインをＳＹＮ００１コンストラクトに付加して、ＳＹＮ０１６を得ると、図３および表１に示されるように、内在性／ヒトＣＸ３ＣＲ１－および病原体コードＵＳ２８－受容体発現細胞の両方への効力が増加する。
【0158】
結論
外毒素ＡのドメインＩＩは、触媒ドメイン、ドメインＩＩＩの細胞内小胞からサイトゾル中への移行の一因となるトランスロケーションドメインとして同定されている（Ｈｗａｎｇ Ｊ ｅｔ ａｌ．， １９８７； Ｓｉｅｇａｌｌ ＣＢ ｅｔ ａｌ．， １９８９）。フューリン切断部位、例えば外毒素ＡのドメインＩＩを含むトランスロケーションドメインをＳＹＮ００１に付加して、ＳＹＮ０１６を得ると、結果として、内在性受容体ＣＸ３ＣＲ１およびウイルスにコードされる受容体ＵＳ２８の両方について増加した効力を有する融合タンパク質コンストラクトが得られた。
外毒素ＡのドメインＩＩは、触媒ドメイン、ドメインＩＩＩの細胞内小胞からサイトゾル中への移行の一因となるトランスロケーションドメインとして同定されている（Ｈｗａｎｇ Ｊ ｅｔ ａｌ．， １９８７； Ｓｉｅｇａｌｌ ＣＢ ｅｔ ａｌ．， １９８９）。フューリン切断部位、例えば外毒素ＡのドメインＩＩを含むトランスロケーションドメインをＳＹＮ００１に付加して、ＳＹＮ０１６を得ると、結果として、内在性受容体ＣＸ３ＣＲ１およびウイルスにコードされる受容体ＵＳ２８の両方について増加した効力を有する融合タンパク質コンストラクトが得られた。
【表1】
【0159】
実施例３：ヒトフューリンによるＳＹＮｘのインビトロ切断
材料および方法
ヒトフューリンによるＳＹＮｘのインビトロ切断
精製ＳＹＮｘコンストラクトを実験台で解凍させた。解凍させると、次いで、試料を沈降させた。試料の濃度を測定し、消化を新しい管内で５ｍＭ ＣａＣｌ２を含む１ｘＰＢＳにおいて２０μＭ ＳＹＮｘを含む５０μＬを用いて開始した。５μｇを、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析のために取り出した。１μＬのヒトフューリン（ＮＥＢ、２単位／μＬ）を混合物に添加し、３７℃の水浴に入れた。１．５時間後、５μｇのＳＹＮｘを、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析のために取り出した。反応混合物のｐＨを１Ｍ ＨＣＬまたは１Ｍ ＮａＯＨのいずれかで調整し、その後、ＳＹＮｘを添加した。
材料および方法
ヒトフューリンによるＳＹＮｘのインビトロ切断
精製ＳＹＮｘコンストラクトを実験台で解凍させた。解凍させると、次いで、試料を沈降させた。試料の濃度を測定し、消化を新しい管内で５ｍＭ ＣａＣｌ２を含む１ｘＰＢＳにおいて２０μＭ ＳＹＮｘを含む５０μＬを用いて開始した。５μｇを、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析のために取り出した。１μＬのヒトフューリン（ＮＥＢ、２単位／μＬ）を混合物に添加し、３７℃の水浴に入れた。１．５時間後、５μｇのＳＹＮｘを、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析のために取り出した。反応混合物のｐＨを１Ｍ ＨＣＬまたは１Ｍ ＮａＯＨのいずれかで調整し、その後、ＳＹＮｘを添加した。
【0160】
還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析
試料を調製し、タンパク質マーカー標準と共に、ＮｕＰＡＧＥ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ４－１２％ゲル上で２ｍＭ ＤＴＴを含む１ｘＭＥＳ泳動用緩衝液を用いて、製造者プロトコルに従い、分析した。ゲルを１２５Ｖ一定電圧で７５分間泳動させた。ゲルをＳｉｍｐｌｙＢｌｕｅ（商標）ＳａｆｅＳｔａｉｎ Ｍａｎｕａｌ（Ｎｏｖｅｘ）に従い染色した。
試料を調製し、タンパク質マーカー標準と共に、ＮｕＰＡＧＥ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ４－１２％ゲル上で２ｍＭ ＤＴＴを含む１ｘＭＥＳ泳動用緩衝液を用いて、製造者プロトコルに従い、分析した。ゲルを１２５Ｖ一定電圧で７５分間泳動させた。ゲルをＳｉｍｐｌｙＢｌｕｅ（商標）ＳａｆｅＳｔａｉｎ Ｍａｎｕａｌ（Ｎｏｖｅｘ）に従い染色した。
【0161】
結果
精製ＳＹＮｘコンストラクトを、精製ヒトフューリンで、インビトロで処理し、異なるＳＹＮｘコンストラクトのフューリンによる切断効率を決定した。フューリンによるもの以外の他の切断メカニズムが起こる可能性がある。結果をＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分析した。全トランスロケーションドメイン、例えばこの場合全ＥｘｏＡトランスロケーションドメインのＳＹＮ０００またはＳＹＮ００１への付加により、それぞれ、ＳＹＮ０１７およびＳＹＮ０１６が得られ、フューリンによるインビトロ切断が改善される。ＳＹＮ０１７およびＳＹＮ０１６におけるフューリン切断部位の最適化により、それぞれ、ＳＹＮ０１４およびＳＹＮ００２が得られ、図４に示されるように、さらには、フューリンによるインビトロ切断は改善されるとは見えない。
精製ＳＹＮｘコンストラクトを、精製ヒトフューリンで、インビトロで処理し、異なるＳＹＮｘコンストラクトのフューリンによる切断効率を決定した。フューリンによるもの以外の他の切断メカニズムが起こる可能性がある。結果をＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分析した。全トランスロケーションドメイン、例えばこの場合全ＥｘｏＡトランスロケーションドメインのＳＹＮ０００またはＳＹＮ００１への付加により、それぞれ、ＳＹＮ０１７およびＳＹＮ０１６が得られ、フューリンによるインビトロ切断が改善される。ＳＹＮ０１７およびＳＹＮ０１６におけるフューリン切断部位の最適化により、それぞれ、ＳＹＮ０１４およびＳＹＮ００２が得られ、図４に示されるように、さらには、フューリンによるインビトロ切断は改善されるとは見えない。
【0162】
精製ＳＹＮ００２を精製ヒトフューリンで、インビトロで異なるｐＨ値にて処理し、切断効率を決定し、結果をＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分析した。ＳＹＮ００２は図５に示されるように、広いｐＨ範囲にわたりフューリンにより切断される。
【0163】
結論
最適化切断部位（この場合ＡｒｇＧｌｎＡｒｇＡｒｇ）をＳＹＮｘコンストラクト（ここでは、ＳＹＮ００２－コンストラクトはまた、トランスロケーションドメインを含む）に付加しても、ＳＹＮ０１６のように天然配列（ＡｒｇＧｌｎＰｒｏＡｒｇ）を有するコンストラクトと比較して、フューリンによるインビトロ切断において改善は生じない。ＳＹＮ００２はインビトロで広いｐＨ範囲にわたって切断させることができ、フューリンによる切断はエンドソーム内だけでなく、いずれの細胞部位でも起こり得ることが示唆された。
最適化切断部位（この場合ＡｒｇＧｌｎＡｒｇＡｒｇ）をＳＹＮｘコンストラクト（ここでは、ＳＹＮ００２－コンストラクトはまた、トランスロケーションドメインを含む）に付加しても、ＳＹＮ０１６のように天然配列（ＡｒｇＧｌｎＰｒｏＡｒｇ）を有するコンストラクトと比較して、フューリンによるインビトロ切断において改善は生じない。ＳＹＮ００２はインビトロで広いｐＨ範囲にわたって切断させることができ、フューリンによる切断はエンドソーム内だけでなく、いずれの細胞部位でも起こり得ることが示唆された。
【0164】
実施例４：内在性受容体およびウイルスにコードされる受容体－発現細胞の間の細胞死滅選択性もまた最適化切断部位により増強され、媒介される
材料および方法
実施例１を参照されたい。
材料および方法
実施例１を参照されたい。
【0165】
結果
ＳＹＮｘの細胞死滅効率を、ＵＳ２８またはＣＸ３ＣＲ１のいずれかを発現するテトラサイクリン誘導ＨＥＫ２９３細胞を、受容体発現のない非誘導細胞（陰性対照）と共に使用して決定した。データを生細胞の最大数に対して正規化した。
ＳＹＮｘの細胞死滅効率を、ＵＳ２８またはＣＸ３ＣＲ１のいずれかを発現するテトラサイクリン誘導ＨＥＫ２９３細胞を、受容体発現のない非誘導細胞（陰性対照）と共に使用して決定した。データを生細胞の最大数に対して正規化した。
【0166】
最適化切断部位ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを第２のペプチドに、この特別な場合、最適化切断部位ＡｒｇＧｌｎＡｒｇＡｒｇをＳＹＮ０１６に導入してＳＹＮ００２を得ると、選択性において驚きの増加が得られる。ウイルスにコードされる受容体、例えばＵＳ２８を発現する細胞上でのＳＹＮ００２については、細胞死滅効力は、切断部位ＡｒｇＧｌｎＰｒｏＡｒｇ（よって、Ｘ２＝Ｐｒｏ）を有するＳＹＮ０１６と比較して大体維持される（図６Ａ、表１）。しかしながら、内在性受容体、例えばＣＸ３ＣＲ１を発現する細胞についての効力は減少し（約０．９ｌｏｇ（ＥＣ５０））、図６Ｂを参照されたい）、よって、副作用がより少なく、より有効な薬物を支持することができる効果が得られる。最適化切断部位を含まない第２のペプチドと比較すると、選択性および効力はどちらも増加する。
【0167】
結論
細胞－死滅選択性に対する驚きの効果が切断部位の最適化により得られる。いずれの理論にも縛られないが、これは、ウイルスによりコードされる受容体、例えばＵＳ２８受容体、対内在性受容体、例えばＣＸ３ＣＲ１受容体についてのインターナリゼーションおよび細胞内輸送の差による可能性がある。
細胞－死滅選択性に対する驚きの効果が切断部位の最適化により得られる。いずれの理論にも縛られないが、これは、ウイルスによりコードされる受容体、例えばＵＳ２８受容体、対内在性受容体、例えばＣＸ３ＣＲ１受容体についてのインターナリゼーションおよび細胞内輸送の差による可能性がある。
【0168】
参考文献
Ｈｗａｎｇ Ｊ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ． １９８７ Ｊａｎ １６；４８（１）：１２９－３６；
Ｓｉｅｇａｌｌ ＣＢ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． １９８９ Ａｕｇ ２５；２６４（２４）：１４２５６－６１）。
Ｈｗａｎｇ Ｊ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ． １９８７ Ｊａｎ １６；４８（１）：１２９－３６；
Ｓｉｅｇａｌｌ ＣＢ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． １９８９ Ａｕｇ ２５；２６４（２４）：１４２５６－６１）。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【手続補正書】
【提出日】2022-05-12
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】