特表 2022-546922 抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体および抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-11-10

(54)【発明の名称】抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体および抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20221102BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20221102BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20221102BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20221102BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20221102BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20221102BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20221102BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20221102BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221102BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20221102BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20221102BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12P21/08

A61K39/395 N

A61K39/395 D

A61K45/00

A61P35/00

A61P31/00

A61K35/76

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022505588

(86)(22)【出願日】2020-07-28

(85)【翻訳文提出日】2022-03-15

(86)【国際出願番号】 US2020043799

(87)【国際公開番号】W WO2021021767

(87)【国際公開日】2021-02-04

(31)【優先権主張番号】62/880,158

(32)【優先日】2019-07-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522242018

【氏名又は名称】メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山 賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉 道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森 一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤 健司

(74)【代理人】

【識別番号】100143823

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 英彦

(74)【代理人】

【識別番号】100183519

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻田 芳恵

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜 洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100160749

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100160255

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100182132

【弁理士】

【氏名又は名称】河野 隆

(74)【代理人】

【識別番号】100172683

【弁理士】

【氏名又は名称】綾 聡平

(74)【代理人】

【識別番号】100219265

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 崇大

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬 吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山 康文

(74)【代理人】

【識別番号】100202267

【弁理士】

【氏名又は名称】森山 正浩

(72)【発明者】

【氏名】ファヤダット－ディルマン，ローレンス

(72)【発明者】

【氏名】フアン，ヴェロニカ

(72)【発明者】

【氏名】カステライン，ロバート・エー

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZC412

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE03

4C087AA01

4C087BC83

4C087MA02

4C087NA05

4C087ZC41

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA29

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、腫瘍媒介性免疫抑制に対抗することにより改善される病態の治療を提供する。より詳細には、本発明は抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体、抗ＬＡＧ３抗体および抗原結合性フラグメントを提供する。本発明は癌または感染症の治療におけるこれらの抗体および抗原結合性フラグメントの方法および使用も提供する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（Ａ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および
（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメント、
（Ｂ）（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉｖ）配列番号１１５または１５６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および
（ｖｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｃ）（ｉ）配列番号１５９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉｖ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および
（ｖｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体。

【請求項2】

抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントが、
（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および
（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１記載の抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体。

【請求項3】

（Ａ）抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントが、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、
（Ｂ）抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントが、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９または１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、および
（Ｃ）抗ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントが、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１記載の抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体。

【請求項4】

抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントが、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項３記載の抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体。

【請求項5】

（Ａ）（ｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖを含むＩｇＧ１定常領域（ここで、該定常領域のＣ末端は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合している）とを含む抗ＰＤ－１重鎖；および（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域とを含む抗ＰＤ－１軽鎖
を含む抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメント；ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１８１Ｋ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗを含むＩｇＧ１定常領域（ここで、該定常領域のＣ末端は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合している）とを含む抗ＬＡＧ３重鎖；および（ｉｉ）配列番号９９または１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域とを含む抗ＬＡＧ３軽鎖
を含む抗ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントを含み、
ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項１記載の抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体。

【請求項6】

（Ａ）（ｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗを含むＩｇＧ１定常領域（ここで、該定常領域のＣ末端は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合している）とを含む抗ＰＤ－１重鎖；および（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域とを含む抗ＰＤ－１軽鎖
を含む抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメント；ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１８１Ｋ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖを含むＩｇＧ１定常領域（ここで、該定常領域のＣ末端は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合している）とを含む抗ＬＡＧ３重鎖；および（ｉｉ）配列番号９９または１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域とを含む抗ＬＡＧ３軽鎖
を含む抗ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントを含み、
ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項１記載の抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体。

【請求項7】

（Ａ）（ｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌを含むＩｇＧ１定常領域（ここで、該定常領域のＣ末端は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合している）とを含む抗ＰＤ－１重鎖；および（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域とを含む抗ＰＤ－１軽鎖
を含む抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメント；ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１８１Ｋを含むＩｇＧ１定常領域（ここで、該定常領域のＣ末端は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合している）とを含む抗ＬＡＧ３重鎖；および（ｉｉ）配列番号９９または１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域とを含む抗ＬＡＧ３軽鎖
を含む抗ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントを含み、
ここで、抗ＰＤ－１重鎖および抗ＬＡＧ３重鎖のＩｇＧ１重鎖定常領域は、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗからなる群から選択されるＣＨ３突然変異のペアを更に含み、
ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項１記載の抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体。

【請求項8】

抗ＬＡＧ３重鎖および／または抗ＰＤ－１重鎖のＣＨ２領域における２３４Ａまたは２３４Ｄ；２３５Ａまたは２３５Ｄ；２６５Ｓまたは２６５Ａ；２３７Ａ；および２９７Ａ、２９７Ｑまたは２９７Ｄ突然変異の１以上を更に含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項５～７のいずれか１項記載の抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体。

【請求項9】

（Ａ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合した抗ＰＤ－１重鎖と、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ－１軽鎖とを含む抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメント、および
（Ｂ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合した抗ＬＡＧ３重鎖と、配列番号９８のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３軽鎖とを含む抗ＬＡＧ／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体。

【請求項10】

（Ａ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合した抗ＰＤ－１重鎖と、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ－１軽鎖とを含む抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメント、および
（Ｂ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合した抗ＬＡＧ３重鎖と、配列番号１５５のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３軽鎖とを含む抗ＬＡＧ／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体。

【請求項11】

（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域と、
（ｉｖ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および
（ｖｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項12】

配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１１記載の抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項13】

（Ａ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域と、
（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および
（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉｖ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および
（ｖｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体。

【請求項14】

抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントが、
（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および
（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１３記載の抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体。

【請求項15】

（Ａ）抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントが、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、および
（Ｂ）抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントが、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１４記載の抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体。

【請求項16】

（Ａ）（ｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖを含むＩｇＧ１定常領域とを含む重鎖；および（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域とを含む軽鎖
を含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメント；ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１８１Ｋ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗを含むＩｇＧ１定常領域とを含む重鎖；および（ｉｉ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域とを含む軽鎖
を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを含み、
ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項１３記載の抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体。

【請求項17】

（Ａ）（ｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗを含むＩｇＧ１定常領域とを含む重鎖；および（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域とを含む軽鎖
を含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメント；ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１８１Ｋ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖを含むＩｇＧ１定常領域とを含む重鎖；および（ｉｉ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域とを含む軽鎖
を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを含み、
ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項１３記載の抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体。

【請求項18】

（Ａ）（ｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌを含むＩｇＧ１定常領域とを含む重鎖；および（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域とを含む軽鎖
を含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメント；ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１８１Ｋを含むＩｇＧ１定常領域とを含む重鎖；および（ｉｉ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域とを含む軽鎖
を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを含み、
ここで、抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントおよび抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントのＩｇＧ１重鎖定常領域は、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗからなる群から選択されるＣＨ３突然変異のペアを更に含み、
ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項１３記載の抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体。

【請求項19】

抗ＬＡＧ３重鎖および／または抗ＰＤ－１重鎖のＣＨ２領域における２３４Ａまたは２３４Ｄ；２３５Ａまたは２３５Ｄ；２６５Ｓまたは２６５Ａ；２３７Ａ；および２９７Ａ、２９７Ｑまたは２９７Ｄ突然変異の１以上を更に含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項１６～１８のいずれか１項記載の抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体。

【請求項20】

（Ａ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ－１重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに
（Ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖、および配列番号１５５のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体。

【請求項21】

抗体またはその抗原結合性フラグメントが、ＣＨＯ細胞による発現に特徴的なグリコシル化パターンを含む、請求項１～２０のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメント。

【請求項22】

請求項１～４および１３～２０のいずれか１項記載の抗体をコードする、または請求項５～１２のいずれか１項記載の抗体もしくは抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチド。

【請求項23】

請求項２２記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターであって、該ポリヌクレオチドが、該ベクターでトランスフェクトされる宿主細胞により認識される制御配列に機能的に連結されている、発現ベクター。

【請求項24】

請求項２３記載の発現ベクターを含む宿主細胞。

【請求項25】

チャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項２４記載の宿主細胞。

【請求項26】

ａ．請求項１～４および１３～２０のいずれか１項記載の抗体をコードする、または請求項５～１２のいずれか１項記載の抗体もしくは抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、該ポリヌクレオチドの発現に好ましい条件下で培養し、
ｂ．抗体または抗原結合性フラグメントを宿主細胞および／または培地から回収することを含む、抗体または抗原結合性フラグメントの製造方法。

【請求項27】

請求項１～２１のいずれか１項記載の抗体と薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物。

【請求項28】

（ｉ）ＰＡＲＰインヒビター、（ｉｉ）抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｉｉ）抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｖ）抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖ）抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉ）抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉ）抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉｉ）抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｘ）抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘ）抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉ）抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉ）抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉｉ）抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｖ）抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖ）抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉ）抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉ）抗４－１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉｉ）抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｘ）抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘ）抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉ）抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉ）抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト、（ｘｘｉｖ）ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、（ｘｘｖ）ニューカッスル病ウイルス、（ｘｘｖｉ）ＩＬ－１２を発現するニューカッスル病ウイルス、および（ｘｘｖｉｉ）コクサッキーウイルスＡ２１からなる群から選択される物質を更に含む、請求項２７記載の組成物。

【請求項29】

ａ．癌の治療、または
ｂ．感染もしくは感染症の治療
における使用のための、請求項１～２１のいずれか１項記載の抗体。

【請求項30】

癌の治療または感染もしくは感染症の治療のための医薬の製造のための、請求項１～２１のいずれか１項記載の抗体の使用。

【請求項31】

請求項１～２１のいずれか１項記載の抗体または請求項２７記載の組成物の有効量を、所望により別の治療用物質または治療手技と組合せて、対象に投与することを含む、ヒト対象における癌または感染もしくは感染症の治療方法。

【請求項32】

前記の別の治療用物質が、（ｉ）ＰＡＲＰインヒビター、（ｉｉ）抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｉｉ）抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｖ）抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖ）抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉ）抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉ）抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉｉ）抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｘ）抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘ）抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉ）抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉ）抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉｉ）抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｖ）抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖ）抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉ）抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉ）抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉｉ）抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｘ）抗４－１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘ）抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉ）抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉ）抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉｉ）抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｖ）抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｖ）ＳＴＩＮＧアゴニスト、（ｘｘｖｉ）ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、（ｘｘｖｉｉ）ニューカッスル病ウイルス、（ｘｘｖｉｉｉ）ＩＬ－１２を発現するニューカッスル病ウイルス、および（ｘｘｉｘ）コクサッキーウイルスＡ２１からなる群から選択される、請求項３１記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体および抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体に関する。

【背景技術】

【0002】

ＰＤ－１は免疫調節における及び末梢性免疫寛容の維持における重要な分子として認識されている。ＰＤ－１は、ナイーブＴ、ＢおよびＮＫＴ細胞上で中等度に発現され、リンパ球、単球および骨髄性細胞上のＴ／Ｂ細胞受容体シグナリングによりアップレギュレーションされる（１）。

【0003】

ＰＤ－１に対する２つの公知リガンドであるＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）およびＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ）は、種々の組織において生じるヒトのがん（以下、がんは癌と表記される）において発現される。例えば卵巣癌、腎臓癌、結腸直腸癌、膵臓癌、肝臓癌および黒色腫の大きなサンプルセットにおいて、ＰＤ－Ｌ１発現は、後続治療には無関係に、予後不良および全生存期間の短縮と相関することが示された（２～１３）。同様に、腫瘍浸潤性リンパ球上のＰＤ－１発現は乳癌および黒色腫における機能不全Ｔ細胞の指標となること（１４～１５）、ならびに腎癌における予後不良と相関すること（１６）が判明した。したがって、ＰＤ－Ｌ１を発現する腫瘍細胞は、ＰＤ－１を発現するＴ細胞と相互作用して、免疫監視の回避およびＴ細胞活性化の低減をもたらし、それにより腫瘍に対する免疫応答の低下に関与することが提示されている。

【0004】

ＰＤ－１とそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２の一方または両方との間の相互作用を抑制する幾つかのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）が癌治療のために臨床開発中である。そのような抗体の有効性は、他の承認されている又は実験的な癌療法、例えば放射線、手術、化学療法剤、標的化療法、腫瘍において脱調節される他のシグナル伝達経路を抑制する物質および他の免疫増強剤と組合せて投与されると、増強されうることが提示されている。

【0005】

ＬＡＧ３（ＣＤ２２３）は活性化Ｔ細胞（Ｈｕａｒｄら，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ３９：２１３－２１７，１９９４）、ＮＫ細胞（Ｔｒｉｅｂｅｌら，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １７１：１３９３－１４０５，１９９０）、Ｂ細胞（Ｋｉｓｉｅｌｏｗら，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３５：２０８１－２０８８，２００５）および形質細胞様樹状細胞（Ｗｏｒｋｍａｎら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８２：１８８５－１８９１，２００９）上で発現される細胞表面分子であり、これらのリンパ球サブセットの機能において重要な役割を果たしている。また、ＬＡＧ３とその主要リガンドであるクラスＩＩ ＭＨＣとの間の相互作用は樹状細胞機能のモジュレーションにおいて或る役割を果たすと考えられている（Ａｎｄｒｅａｅら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６８：３８７４－３８８０，２００２）。最近の前臨床研究はＣＤ８ Ｔ細胞枯渇におけるＬＡＧ－３の役割を実証している（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎら，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０：２９－３７，２００９）。慢性ウイルス感染の場合と同様に、腫瘍抗原特異的ＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋ Ｔ細胞はエフェクター機能の低下を示し、また、炎症性サイトカインの産生の低下および抗原再刺激に対する低反応性により特徴づけられる枯渇（ｅｘｈａｕｓｔｅｄ）表現型を示す。これは、細胞外因性メカニズム、例えば調節性（制御性）Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、および細胞内因性メカニズム、例えば、枯渇した腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）上でアップレギュレーションされる抑制性分子によりもたらされる。これらの抑制性メカニズムは有効な抗腫瘍免疫に対する非常に大きな障壁に相当する。

【0006】

ＬＡＧ３は寛容化ＴＩＬ上で発現され、このことは、それが腫瘍媒介性免疫抑制に寄与することを示唆している。ＬＡＧ３の抑制は抗原特異的Ｔ細胞の活性化の増強をもたらすことが可能であり、これにより治療上の利益が得られうる。腫瘍に対する強力な免疫応答を生成させるために使用されうる、ＬＡＧ３およびＰＤ－１の活性に拮抗する高効力治療用抗体が、当技術分野において必要とされている。

【0007】

ＴＩＧＩＴ（ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）は、主に活性化Ｔ細胞およびＮＫ細胞上で発現される免疫調節受容体である。ＴＩＧＩＴはＶＳＩＧ９、ＶＳＴＭ３、ＷＵＣＡＭとしても公知である。その構造は１つの細胞外免疫グロブリンドメイン、１型膜貫通領域および２つのＩＴＩＭモチーフを示す。ＴＩＧＩＴは、Ｔ細胞上の陽性（ＣＤ２２６）および陰性（ＴＩＧＩＴ）免疫調節受容体ならびにＡＰＣ上で発現されるリガンド（ＣＤ１５５およびＣＤ１１２）からなる共刺激ネットワークの一部を形成する。

【0008】

ＴＩＧＩＴの構造における重要な特徴は、免疫受容体チロシンに基づく抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）がその細胞質尾部ドメインに存在することである。ＰＤ－１およびＣＴＬＡ－４の場合と同様に、ＴＩＧＩＴの細胞質領域内のＩＴＩＭドメインは、チロシンホスファターゼ、例えばＳＨＰ－１およびＳＨＰ－２をリクルートし、ついでＴ細胞受容体（ＴＣＲ）サブユニット上のＩＴＡＭ（免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ）内のチロシン残基を脱リン酸化すると予想される。したがって、腫瘍細胞またはＴＡＭＳにより発現される受容体－リガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２によるＴＩＧＩＴの結合は、有効な抗腫瘍免疫を惹起するのに必須であるＴ細胞活性化およびＴＣＲシグナリングの抑制に実質的に寄与しうる。したがって、ＴＩＧＩＴに特異的なアンタゴニスト抗体はＴ細胞応答のＣＤ１５５およびＣＤ１１２誘導性抑制を抑制し、抗腫瘍免疫を増強しうるであろう。

【発明の概要】

【0009】

発明の概括
本発明は、ＣＤＲＨ２領域におけるＳ６１Ｎグリコシル化部位補正（ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）および／またはＧ５６Ａ脱アミド部位補正（連続的番号付け）の存在下または非存在下でヒト化０８Ａアフィニティ（親和性）成熟Ｆａｂ１００重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントと、ＣＤＲＬ１領域におけるＹ３１Ｗ突然変異の存在下または非存在下で抗ＬＡＧ３ヒト化抗体２２Ｄ２ Ａｂ６の重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントと、抗ＴＩＧＩＴヒト化抗体３１Ｃ６の重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域を含む抗ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントとを含む抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体を提供する。

【0010】

また、本発明は、ＣＤＲＨ２領域におけるＳ６１Ｎグリコシル化部位補正および／またはＧ５６Ａ脱アミド部位補正（連続的番号付け）の存在下または非存在下でヒト化０８Ａアフィニティ成熟Ｆａｂ１００重鎖および軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントと、ＣＤＲＬ１領域におけるＹ３１Ｗ突然変異の存在下または非存在下で抗ＬＡＧ３ヒト化抗体２２Ｄ２ Ａｂ６の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントと、抗ＴＩＧＩＴヒト化抗体３１Ｃ６の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントとを含む抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体を提供する。

【0011】

ある実施形態においては、抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントは、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５ＥおよびＳ１８３Ｌ（ＥＵ番号付け）におけるＣＨ１突然変異を含むＩｇＧ１定常領域を含む重鎖と、Ｑ１２４Ｒ、Ｔ１７８Ｒ（ＥＵ番号付け）における突然変異を含む軽鎖カッパ定常領域とを含み、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、Ｓ１８１Ｋ（ＥＵ番号付け）におけるＣＨ１突然変異を含むＩｇＧ１定常領域を含む抗ＬＡＧ３重鎖と、Ｑ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｔ、Ｔ１７８ＹおよびＴ１８０Ｅにおける突然変異を含む抗ＬＡＧ３軽鎖カッパ定常領域とを含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている。

【0012】

他の実施形態においては、抗ＰＤ－１および抗ＬＡＧ－３抗原結合性フラグメントのＩｇＧ１重鎖定常領域は、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、およびＴ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ；Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、およびＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗ；ならびにＴ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、およびＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択されるＣＨ３突然変異のペアを更に含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている。

【0013】

ある実施形態においては、抗ＬＡＧ－３および抗ＰＤ－１重鎖のそれぞれは、Ｌ２３４ＡまたはＬ２３４Ｄ；Ｌ２３５ＡまたはＬ２３５Ｄ；Ｄ２６５ＳまたはＤ２６５Ａ；Ｇ２３７Ａ；およびＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、またはＮ２９７Ｄ突然変異（ＣＨ２領域におけるもの）の１以上を含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている。ある実施形態においては、抗ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントはＶＬ－ＶＨ形態またはＶＨ－ＶＬ形態の単鎖Ｆｖを含み、１つのｓｃＦｖは抗ＰＤ－１重鎖定常ドメインのＣ末端に融合しており、１つのｓｃＦｖは抗ＬＡＧ－３重鎖定常ドメインのＣ末端に融合している。

【0014】

また、本発明は、ＣＤＲＨ２領域におけるＳ６１Ｎグリコシル化部位補正およびＧ５６Ａ脱アミド部位補正（連続的番号付け）の存在下または非存在下でヒト化０８Ａアフィニティ成熟Ｆａｂ１００重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントと、ＣＤＲＬ１領域におけるＹ３１Ｗ突然変異の存在下で抗ＬＡＧ３ヒト化抗体２２Ｄ２ Ａｂ６の重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントとを含む抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体を提供する。また、本発明は、ＣＤＲＬ１領域におけるＹ３１Ｗ突然変異の存在下で抗ＬＡＧ３ヒト化抗体２２Ｄ２ Ａｂ６の重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。

【0015】

また、本発明は、ＣＤＲＨ２領域におけるＳ６１Ｎグリコシル化部位補正およびＧ５６Ａ脱アミド部位補正（連続的番号付け）の存在下または非存在下でヒト化０８Ａアフィニティ成熟Ｆａｂ１００重鎖および軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントと、ＣＤＲＬ１領域におけるＹ３１Ｗ突然変異の存在下で抗ＬＡＧ３ヒト化抗体２２Ｄ２ Ａｂ６の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントとを含む抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体を提供する。また、本発明は、ＣＤＲＬ１領域におけるＹ３１Ｗ突然変異の存在下で抗ＬＡＧ３ヒト化抗体２２Ｄ２ Ａｂ６の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。

【0016】

また、本発明は、本発明で提供する抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体、抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかをコードする単離された核酸を提供する。また、本発明は、そのような核酸を含む発現ベクターを提供する（ここで、該ポリペプチドは、所望により、リーダー配列を含んでいてもよい）。これらの単離された核酸およびそれらを含む発現ベクターは、組換え宿主細胞において該抗体またはその抗原結合性フラグメントを発現させるために使用されうる。したがって、本発明はまた、そのような単離された核酸を含む宿主細胞を提供する。１つの実施形態においては、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞である。１つの実施形態においては、宿主細胞は酵母細胞、例えばピチア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞またはピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）宿主細胞である。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】抗ヒトＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体ＴｓＡｂおよびＴｓＡｂ Ｙ３１Ｗで処理されたＪＹ．ｈＰＤ－Ｌ１／ＣＤ１５５で再刺激されたＣＤ４＋ Ｔ細胞クローン４－４９のＩＦＮ－γ産生。

【図2】図２Ａ～Ｆ：抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体ＴｓＡｂの連続的抗原（ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ）結合のＳＰＲセンサーグラム。（Ａ）ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ；（Ｂ）ＬＡＧ３、ＰＤ１、ＴＩＧＩＴ；（Ｃ）ＴＩＧＩＴ、ＰＤ１、ＬＡＧ３；（Ｄ）ＰＤ１、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３；（Ｅ）ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ１；（Ｆ）ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、ＰＤ１。

【図3】図３Ａ～Ｃ：ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ二量体化アッセイを利用した場合、抗ヒトＰＤ１／ＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ３ ＴｓＡｂおよびＴｓＡｂ Ｙ３１Ｗ（それぞれ、ロット８３ＢＣＮおよび３０ＢＣＭ）は、ＰＤ－１およびＬＡＧ－３（Ａ）、ＰＤ－１およびＴＩＧＩＴ（Ｂ）、またはＬＡＧ－３およびＴＩＧＩＴ（Ｃ）に、同一細胞上で同時に結合可能である。ＴｓＡｂおよびＴｓＡｂ Ｙ３１Ｗは、３つのアッセイの全てにおいて、互いに同等の結合ＥＣ５０を示す。抗ヒトＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ ＢｓＡｂ（ロット８０ＢＣＫ）が対照として含まれている。化学発光シグナルを相対光単位（ＲＬＵ）として正規化し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して抗体濃度に対してプロットする。

【図4】３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体ＴｓＡｂが投与されたアカゲザルにおけるＣＤ４＋ Ｔ細胞上の全ＰＤ－１発現。

【図5】３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体１８ＡＳＳが投与されたアカゲザルにおけるＣＤ４＋ Ｔ細胞上の全ＰＤ－１発現。

【0018】

発明の詳細な説明
用語
本発明がより容易に理解されうるように、幾つかの科学技術用語を以下に具体的に定義する。本明細書中の他の箇所で特に定義されていない限り、本明細書中で用いる他の全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解される意味を有する。

【0019】

添付の特許請求の範囲を含む本明細書において用いる単数形の語は、文脈に明らかに矛盾しない限り、その対応複数対象物を含む。

【0020】

「投与」および「治療（処理）」は、それが動物、ヒト、実験対象、細胞、組織、器官または生物学的流体に適用される場合には、該動物、ヒト、対象、細胞、組織、器官または生物学的流体との外因性医薬、治療用物質、診断剤または組成物の接触を意味する。細胞の処理は、該細胞との試薬の接触、および該細胞に接触している流体との試薬の接触を含む。「投与」および「処理（治療）」は、試薬、診断剤、結合性化合物または別の細胞による、例えば細胞の、インビトロおよびエクスビボ（ｅｘ ｖｉｖｏ）処理をも意味する。

【0021】

「治療する」または「治療」は、本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかを含有する組成物のような治療用物質を、該治療用物質が治療活性を示す疾患の症状の１以上を有する又は該疾患を有する疑いのある対象または患者に内的または外的に投与することを意味する。典型的には、該物質は、いずれかの臨床的に測定可能な度合によるそのような症状の退縮の誘導またはそのような症状の進行の抑制により、治療対象または集団における１以上の疾患症状を軽減するのに有効な量で投与される。いずれかの特定の疾患症状を軽減するのに有効な治療用物質の量は患者の病態、年齢および体重、ならびに対象において所望の応答を惹起する薬物の能力のような要因によって変動しうる。疾患症状が軽減したかどうかは、その症状の重症度または進行状態を評価するために医師または他の熟練した医療提供者によって典型的に用いられるいずれかの臨床的尺度により評価されうる。

【0022】

本明細書中で用いる「抗体」なる語は、所望の生物活性を示す任意の形態の抗体を意味する。したがって、それは最も広い意味で用いられ、具体的には、モノクローナル抗体（２つの軽鎖と２つの重鎖とを含む完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、三重特異性抗体）、ヒト化抗体、完全ヒト抗体およびキメラ抗体を包含するが、これらに限定されるものではない。

【0023】

一般に、基本的な抗体構造単位は四量体を含む。各四量体は、ポリペプチド鎖の、２つの同一ペアを含み、各ペアは１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識をもたらす約１００～１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。重鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主にもたらす定常領域を定めうる。

【0024】

抗体に関して用いられる場合の「軽鎖」なる語は、アミノ末端部分が約１００～約１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含む、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖を意味する。軽鎖のおおよその長さは２１１～２１７アミノ酸である。典型的には、ヒト軽鎖はカッパ（κ）およびラムダ（λ）軽鎖として分類される。軽鎖アミノ酸配列は当技術分野でよく知られている。軽鎖はヒト軽鎖でありうる。

【0025】

抗体に関して用いられる「重鎖」なる語は、アミノ末端部分が約１２０～１３０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含む、約５０～７０ｋＤａのポリペプチド鎖を意味する。定常領域は、重鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいてアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）およびミュー（μ）と称される５つの異なるタイプ（例えば、アイソタイプ）の１つでありうる。異なる重鎖はサイズにおいて異なり、α、δおよびγは約４５０アミノ酸を含有し、一方、μおよびεは約５５０アミノ酸を含有する。これらの異なるタイプの重鎖は、軽鎖と組合されると、免疫グロブリン（Ｉｇ）の５つのよく知られたクラス（例えば、アイソタイプ）、すなわち、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭを生成し、ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を包含する。重鎖はヒト重鎖でありうる。

【0026】

軽鎖および重鎖においては、可変領域および定常領域は「Ｊ」領域により連結されており、重鎖は「Ｄ」領域をも含む。全般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．編，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。各軽／重鎖ペアの可変領域は抗体結合部位を形成する。したがって、一般に、無傷抗体は２つの結合部位を有する。二官能性または二重特異性抗体の場合を除き、それらの２つの結合部位は一般に同じである。

【0027】

「可変領域」、「可変ドメイン」、「Ｖ領域」または「Ｖドメイン」なる語は、軽鎖または重鎖のアミノ末端に一般に位置する抗体の軽鎖または重鎖の一部を意味し、重鎖では典型的には約１１２～１３０アミノ酸、軽鎖では典型的には約１００～１１０アミノ酸の長さを有し、それぞれの個々の抗体の、その個々の抗原に対する結合および特異性において用いられる。重鎖の可変領域は「ＶＨ」と称されうる。軽鎖の可変領域は「ＶＬ」と称されうる。「可変」なる語は、可変領域の或るセグメントの配列が抗体間で大きく異なることを意味する。Ｖ領域は抗原結合をもたらし、個々の抗体の、その個々の抗原に対する特異性を定める。しかし、可変性は可変領域の１１０アミノ酸の伸長全体に均等には分布していない。そうではなく、Ｖ領域は、約１５～３０アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より低い可変性（例えば、比較的に不変性）の伸長から構成され、これらは、それぞれ約６～１７アミノ酸長である「超可変領域」と称される、より大きな可変性（例えば、極端な可変性）の、より短い領域によって分離されている。重鎖および軽鎖の可変領域はそれぞれ、４つのＦＲを含み、これらは主として、ベータシート構造を連結する（幾つかの場合には、ベータシート構造の一部を形成する）ループを形成する３つの超可変領域により連結されたベータシート立体配置をとる。各鎖内の超可変領域はＦＲによって互いに接近して保持され、他方の鎖からの超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（例えば、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（５ｔｈ ｅｄ．１９９１）を参照されたい）。定常領域は抗原への抗体の結合には直接的に関与しないが、種々のエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）における抗体の関与を示す。可変領域は、異なる抗体間で配列において大きく異なる。特定の実施形態においては、可変領域はヒト可変領域である。

【0028】

「Ｋａｂａｔによる可変領域残基の番号付け」または「Ｋａｂａｔによるアミノ酸位置の番号付け」なる語およびその変形表現は、Ｋａｂａｔら（前掲）における抗体の総まとめの重鎖可変領域または軽鎖可変領域に用いられている番号付け系を意味する。この番号付け系を用いた場合、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＣＤＲの短縮またはそれらへの挿入に対応する、より少ない又は追加的なアミノ酸を含有しうる。例えば、重鎖可変ドメインは残基５２の後の１～３アミノ酸の挿入（例えば、Ｋａｂａｔに基づく残基５２ａ、５２ｂおよび５２ｃなど）および残基８２の後の３つの挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔに基づく残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃなど）を含みうる。残基のＫａｂａｔ番号付けは、抗体の配列と「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列との相同性の領域におけるアラインメントにより、所与抗体に関して決定されうる。Ｋａｂａｔ番号付け系は、一般に、可変ドメイン内の残基（軽鎖の残基約１～１０７および重鎖の残基１～１１３）に言及する場合に用いられる（例えば、Ｋａｂａｔら，前掲）。免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基に言及する場合には、「ＥＵ番号付け系」または「ＥＵインデックス」が一般に用いられる（例えば、Ｋａｂａｔら，前掲において報告されているＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔによるＥＵインデックス」はヒトＩｇＧ １ ＥＵ抗体の残基番号付けを意味する。他の番号付け系は、例えば、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴおよびＡＨｏｎにより記載されている。

【0029】

典型的には、重鎖および軽鎖の両方の可変ドメインは、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）内に位置する、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称される３つの超可変領域を含む。ＣＤＲは、通常、特定のエピトープへの結合が可能になるように、フレームワーク領域により整列されている。一般に、軽鎖および重鎖の両方の可変ドメインは、Ｎ末端からＣ末端方向に、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の帰属は、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５^ｔｈ ｅｄ．；ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１－７５；Ｋａｂａｔら（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７またはＣｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３の定義に基づいており、ＥＵ番号付けに関しては、Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８－８５（１９６９）を参照されたい。

【0030】

「ＣＤＲ」は免疫グロブリン（Ｉｇまたは抗体）ＶＨ配列の非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２またはＨ３）の１つ、または抗体ＶＬ配列の非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２またはＬ３）の１つを意味する。したがって、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。ＣＤＲ領域は当業者によく知られており、例えば、抗体可変（Ｖ）ドメイン内の最も超可変性の領域として、Ｋａｂａｔにより定義されている（Ｋａｂａｔら，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－１６；Ｋａｂａｔ，１９７８，Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１－７５；Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（抗体のＣＤＲ領域を配列により定義している））。Ｃｈｏｔｈｉａは、その代わりに、構造ループの位置に言及している（例えば、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－１７を参照されたい）。Ｋａｂａｔ番号付け規則を用いて番号付けされた場合のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４との間で異なる（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームが該挿入をＨ３５ＡおよびＨ３５Ｂに配置するからである；３５Ａも３５Ｂも存在しない場合には、ループは３２で終了する；３５Ａのみが存在する場合には、ループは３３で終了する；３５Ａと３５Ｂとの両方が存在する場合には、ループは３４で終了する）。

【0031】

ＣＤＲ領域配列はＡｂＭ、ＣｏｎｔａｃｔおよびＩＭＧＴによっても定義されている。ＡｂＭ超可変領域はＫａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの折衷に相当し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用されている（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｌ．２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ編，２ｄ ｅｄ．２０１０）を参照されたい）。「接触」超可変領域は、利用可能な複合結晶構造の分析に基づいている。カノニカル（標準）抗体可変領域内のＣＤＲの位置は多数の構造の比較により決定されている（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－４８；Ｍｏｒｅａら，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０：２６７－７９）。超可変領域内の残基数は抗体によって異なるため、カノニカル位置に対する追加的残基には、通常、カノニカル可変領域番号付け法における残基番号の隣にａ、ｂ、ｃなどの符号が付けられる（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら，前掲）。そのような命名法も同様に当業者によく知られている。

【0032】

最近、普遍的番号付け系が開発され、広く採用されている［ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（Ｌａｆｒａｎｃら，２００３，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７）］。ＩＭＧＴは、ヒトおよび他の脊椎動物の免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および主要組織適合複合体（ＭＨＣ）に特化した統合情報系である。この場合、ＣＤＲはアミノ酸配列と軽鎖または重鎖内の位置との両方に関して言及される。免疫グロブリン可変ドメインの構造内のＣＤＲの「位置」は種間で保存されており、ループと称される構造内に存在するため、可変ドメイン配列を構造的特徴に従い整列させる番号付け系を用いることにより、ＣＤＲおよびフレームワーク残基が容易に特定される。追加的な番号付け系（ＡＨｏｎ）がＨｏｎｅｇｇｅｒおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，２００１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７－７０により開発されている。例えばＫａｂａｔ番号付けおよびＩＭＧＴユニーク番号付け系を含む番号付け系の間の対応は当業者によく知られている（例えば、Ｋａｂａｔ，前掲；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，前掲；Ｍａｒｔｉｎ，前掲；Ｌｅｆｒａｎｃら，前掲を参照されたい）。幾つかの実施形態においては、ＣＤＲはＩＭＧＴ番号付け系による定義のとおりである。他の実施形態においては、ＣＤＲはＫａｂａｔ番号付け系による定義のとおりである。ある実施形態においては、ＣＤＲはＡｂＭ番号付け系による定義のとおりである。他の実施形態においては、ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａ系による定義のとおりである。更に他の実施形態においては、ＣＤＲはＣｏｎｔａｃｔ番号付け系による定義のとおりである。これらの超可変領域またはＣＤＲのそれぞれからの残基を以下に示す。

【表1】

【0033】

本明細書中で用いる「フレームワーク」または「ＦＲ」なる語は、ＣＤＲに隣接する可変領域残基を意味する。ＦＲ残基は、例えばキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ドメイン抗体、ジアボディ、線状抗体および二重特異性抗体に存在する。ＦＲ残基は、本明細書中でＣＤＲ残基として定義されている超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を意味する。

【0034】

「Ｆｃ」領域は、抗体のＣ_Ｈ３ドメインおよびＣ_Ｈ２ドメインを含む２つの重鎖フラグメントを含有する。それらの２つの重鎖フラグメントは、２以上のジスルフィド結合によって、そしてＣ_Ｈ３ドメインの疎水性相互作用を含む他の相互作用によって結合される。Ｆｃ領域は、例えば天然配列Ｆｃ領域、組換えＦｃ領域および変異Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域として定義される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々でありうるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、しばしば、Ｃｙｓ２２６位またはＰｒｏ２３０のアミノ酸残基からそのカルボキシル末端までの伸長として定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付け系による残基４４７）は、例えば、抗体の製造または精製中に、あるいは抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することにより、除去されうる。したがって、無傷抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、およびＫ４４７残基を含む抗体と含まない抗体との混合物を含有する抗体集団を含みうる。

【0035】

「定常領域」または「定常ドメイン」なる語は、抗原への抗体の結合には直接的に関与しないが、種々のエフェクター機能、例えばＦｃ受容体との相互作用を示す、軽鎖および重鎖のカルボキシ末端部分を意味する。この用語は、抗原結合部位を含有する、免疫グロブリンの残りの部分である可変領域と比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン分子の部分を意味する。定常領域は重鎖のＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３領域と軽鎖のＣＬ領域とを含有しうる。「ＩｇＧ１定常ドメイン」には、Ｃ末端リジン（Ｋ）を含有する又は含有しない重鎖ＩｇＧ１タンパク質の全アロタイプが含まれ、限定的なものではないがＧ１ｍ３、Ｇ１ｍ１７，１、Ｇ１ｍ１７、Ｇ１ｍ１７，１，２、Ｇ１ｍ（ｆ）、Ｇ１ｍ（ｚ，ａ）およびＧ１ｍ（ｚ，ａ，ｘ）が含まれる。Ｊｅｆｆｅｒｉｓら，ｍＡｂｓ １：４，１－７；２００９の表１、ならびにＬｅｆｒａｎｃ ＧおよびＬｅｆｒａｎｃ ＭＰ，ＩＭＧＴ（登録商標），ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（登録商標）ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（ワールド・ワイド・ウェブ：ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ｔｅｘｔｅｓ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／Ｐｒｏｔｅｉｎｓ／ａｌｌｏｔｙｐｅｓ／ｈｕｍａｎ／ＩＧＨ／ＩＧＨＣ／Ｈｕ＿ＩＧＨＣａｌｌｏｔｙｐｅｓ１．ｈｔｍｌ）を参照されたい。１つの実施形態においては、Ｃ末端リジンを含有しないＩｇＧ１定常ドメインは配列番号１２４である。

【0036】

「カッパ定常領域」には、軽鎖カッパタンパク質の全アロタイプが含まれ、限定的なものではないが、Ｋｍ１、Ｋｍ２およびＫｍ３が含まれる。Ｊｅｆｆｅｒｉｓら，ｍＡｂｓ １：４，１－７；２００９を参照されたい。１つの実施形態においては、カッパ定常ドメインは配列番号１２５である。

【0037】

「単鎖Ｆｖ（一本鎖Ｆｖ）」または「ｓｃＦｖ」抗体なる語は、抗体のＶ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとを含む抗体フラグメントを意味し、ここで、これらのドメインは単一ポリペプチド鎖内に存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは更に、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間にポリペプチドリンカーを含み、これは、ｓｃＦｖが抗原結合のための望ましい構造を形成することを可能にする。ｓｃＦｖの総説として、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５を参照されたい。また、国際公開番号ＷＯ ８８／０１６４９ならびに米国特許第４，９４６，７７８号および第５，２６０，２０３号も参照されたい。１つの実施形態においては、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、Ｖ_Ｈ領域、ペプチドリンカーおよびＶ_Ｌ領域を含む（ＶＨ－ＶＬ形態）。もう１つの実施形態においては、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、Ｖ_Ｌ領域、ペプチドリンカーおよびＶ_Ｈ領域を含む（ＶＬ－ＶＨ形態）。

【0038】

本明細書中で用いる「ジアボディ」なる語は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントを意味し、該フラグメントは、同一ポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）に連結された重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）（Ｖ_Ｈ－Ｖ_ＬまたはＶ_Ｌ－Ｖ_Ｈ）を含む。同一鎖上で２つのドメイン間のペア形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、それらのドメインは別の鎖の相補的ドメインとペア形成することを強要され、２つの抗原結合部位を生成する。ジアボディは、例えばＥＰ ４０４，０９７；ＷＯ ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８に、より詳細に記載されている。操作された抗体変異体の総説としては、全般的には、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ（２００５）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１２６－１１３６を参照されたい。

【0039】

「Ｆａｂ」は、重鎖のＶＨおよびＣＨ１領域と、軽鎖のＶＬおよびＣＬ領域とから構成され、それらは典型的にはジスルフィド結合により互いに連結され、単一の抗原結合部位を有する。Ｆａｂ内のＶＨ、ＣＨ１、ＶＬおよびＣＬ領域は、本開示に従い抗原結合能力を付与するために種々の様態で配置されうる。例えば、ＶＨおよびＣＨ１領域は１つのポリペプチド上に存在することが可能であり、ＶＬおよびＣＬ領域は別々のポリペプチド上に存在することが可能である。あるいは、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬおよびＣＬ領域の全てが同一ポリペプチド上に存在することが可能であり、所望に応じた種々の順序で配置されうる。

【0040】

また、本発明は抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体およびその使用方法を提供する。「抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体」は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ－１抗原結合性アームと、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性アームと、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗ＴＩＧＩＴ抗原結合性アームとを含む。特定の実施形態においては、該三重特異性抗体は、重鎖および軽鎖を含む抗ＰＤ－１抗原結合性アームと、重鎖および軽鎖を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性アームを含むヘテロ二量体であり、ここで、重鎖のＣ末端のそれぞれは抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合している。２つの重鎖定常領域は、ヘテロ二量体形成を促進するよう、ＣＨ３領域内に突然変異を有する。

【0041】

また、本発明は抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体およびその使用方法を提供する。「抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体」は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ－１抗原結合性アームと、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性アームとを含む。特定の実施形態においては、該二重特異性抗体は、重鎖および軽鎖を含む抗ＰＤ－１抗原結合性アームと、重鎖および軽鎖を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性アームとを含むヘテロ二量体である。それらの２つの抗原結合性アームは会合して、ＣＨ３領域内に突然変異を有する２つの重鎖定常領域を介してヘテロ二量体を形成する。

【0042】

また、本発明は抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメントおよびそれらの使用方法を提供する。本明細書中で用いる「抗体フラグメント」または「抗原結合性フラグメント」は、特に示されていない限り、抗体、二重特異性抗体または三重特異性抗体の抗原結合性フラグメント、すなわち、完全長抗体により結合される抗原に特異的に結合する能力を保有する抗体フラグメント、例えば、１以上のＣＤＲ領域を保有するフラグメントを意味する。抗原結合性フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２およびＦｖフラグメント；ジアボディ；線状抗体；単鎖抗体分子、例えばｓｃＦｖ；１つの抗原結合性アームの重鎖および軽鎖を含む半二重特異性分子が含まれるが、これらに限定されるものではない。

【0043】

典型的には、何らかの方法で修飾された本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントは、その活性がモル基準で表された場合、（親抗体と比較した場合に）その結合活性の少なくとも１０％を保有する。ある実施形態においては、本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントは親抗体としてのＰＤ－１、ＬＡＧ３またはＴＩＧＩＴ結合アフィニティの少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％またはそれ以上を保有する。また、本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントは、その生物活性を実質的に改変しない保存的または非保存的アミノ酸置換（抗体の「保存的変異体」または「機能保存変異体」と称される）を含みうると意図される。

【0044】

「単離（された）」抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それらが産生された細胞または細胞培養からの他の生物学的分子を少なくとも部分的に含有しない。そのような生物学的分子には、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、または細胞残渣および増殖培地のような他の物質が含まれる。単離された抗体または抗原結合性フラグメントは更に、宿主細胞からの又はその増殖培地の生物学的分子のような発現系成分を少なくとも部分的に含有しない。一般に、「単離（された）」なる語は、そのような生物学的分子の完全な非存在、または水、バッファーもしくは塩の非存在、または該抗体もしくはフラグメントを含む医薬製剤の成分を指すものではない。

【0045】

「単離された核酸分子」または「単離されたポリヌクレオチド」は、該単離ポリヌクレオチドが天然で見出される場合のポリヌクレオチドの全部または一部を伴っておらず、あるいはそれが天然で連結していないポリヌクレオチドに連結している、ゲノム、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡもしくは合成由来またはそれらの何らかの組合せのＤＮＡまたはＲＮＡを意味する。本開示の目的においては、特定のヌクレオチド配列を「含む核酸分子」は無傷染色体を含まない、と理解されるべきである。特定されている核酸配列を「含む」単離された核酸分子は、特定されている配列に加えて、１０個まで又は更には２０個まで又はそれ以上の他のタンパク質またはその一部もしくは断片のコード配列を含むことが可能であり、あるいは、挙げられている核酸配列のコード領域の発現を制御する機能的に連結された調節配列を含むことが可能であり、および／あるいは、ベクター配列を含むことが可能である。

【0046】

「制御配列」なる語は、特定の宿主生物における機能的に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を意味する。原核生物に適した制御配列には、例えば、プロモーター、所望により、オペレーター配列、およびリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞はプロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを用いることが公知である。

【0047】

核酸またはポリヌクレオチドが「機能的に連結」されていると言えるのは、それが別の核酸配列に対して機能的な関係で配置されている場合である。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡがポリペプチドのＤＮＡに機能的に連結されていると言えるのは、それが、該ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合であり、プロモーターまたはエンハンサーがコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、それが該配列の転写に影響を及ぼす場合であり、あるいはリボソーム結合部位がコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、翻訳を促進するようにそれが位置している場合である。一般に（しかし常にそうである必要はないが）、「機能的に連結（されている）」は、連結されているＤＮＡ配列が連続的であり、分泌リーダーの場合には、連続的であり、かつ、リーディングフェーズにおけるものであることを意味する。しかし、エンハンサーは連続的である必要はない。連結は簡便な制限部位における連結により達成される。そのような部位が存在しない場合には、通常の慣例に従って合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが使用される。

【0048】

本明細書中で用いる「細胞」、「細胞系」および「細胞培養」なる表現は互換的に用いられ、全てのそのような表現は後代を含む。したがって、「形質転換体」および「形質転換細胞」なる語は、導入（トランスファー）の数には無関係に、初代対象細胞、およびそれに由来する培養を含む。また、意図的または偶発的な突然変異ゆえに、全ての後代が厳密に同一のＤＮＡ含量を有するわけではないと理解される。元の形質転換細胞においてスクリーニングされたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異体後代も含まれる。異なる名称が意図される場合、それは文脈から明らかであろう。

【0049】

本明細書中で用いる「生殖系列配列」は未再構成免疫グロブリンＤＮＡ配列の配列を意味する。いずれかの適切な未再構成免疫グロブリン配列源が用いられうる。ヒト生殖系列配列は、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌ ａｎｄ Ｓｋｉｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈのウェブサイト上でＪＯＩＮＳＯＬＶＥＲ生殖系列データベースから得られうる。マウス生殖系列配列は、例えば、Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉら，（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：Ｄ２５６－Ｄ２６１に記載されているとおりに得られうる。

【0050】

抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体および抗原結合性フラグメント
１つの態様においては、本発明は、抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントと抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントとＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントとを含む抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体を提供する。

【0051】

１つの実施形態においては、本発明は、
（Ａ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントと、
（Ｂ）（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号１１５または１５６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントと、
（Ｃ）（ｉ）配列番号１５９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む抗ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体を提供する。

【0052】

もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１重鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号８６のアミノ酸配列を含む。

【0053】

もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域、および配列番号９９または１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントは、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0054】

更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントは、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域、および配列番号９９または１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントは、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0055】

もう１つの態様においては、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体は、
（Ａ）（ｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖを含むＩｇＧ１定常領域（ここで、該定常領域のＣ末端は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合している）とを含む抗ＰＤ－１重鎖；および（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域とを含む抗ＰＤ－１軽鎖
を含む抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメント；ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１８１Ｋ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗを含むＩｇＧ１定常領域（ここで、該定常領域のＣ末端は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合している）とを含む抗ＬＡＧ３重鎖；および（ｉｉ）配列番号９９または１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域とを含む抗ＬＡＧ３軽鎖
を含む抗ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントを含み、
ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている。

【0056】

もう１つの態様においては、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体は、
（Ａ）（ｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗを含むＩｇＧ１定常領域（ここで、該定常領域のＣ末端は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合している）とを含む抗ＰＤ－１重鎖；および（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域とを含む抗ＰＤ－１軽鎖
を含む抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメント；ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１８１Ｋ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖを含むＩｇＧ１定常領域（ここで、該定常領域のＣ末端は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合している）とを含む抗ＬＡＧ３重鎖；および（ｉｉ）配列番号９９または１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域とを含む抗ＬＡＧ３軽鎖
を含む抗ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントを含み、
ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている。

【0057】

もう１つの態様においては、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体は、
（Ａ）（ｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌを含むＩｇＧ１定常領域（ここで、該定常領域のＣ末端は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合している）とを含む抗ＰＤ－１重鎖；および（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域とを含む抗ＰＤ－１軽鎖
を含む抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメント；ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１８１Ｋを含むＩｇＧ１定常領域（ここで、該定常領域のＣ末端は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合している）とを含む抗ＬＡＧ３重鎖；および（ｉｉ）配列番号９９または１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域とを含む抗ＬＡＧ３軽鎖
を含む抗ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントを含み、
ここで、抗ＰＤ－１重鎖および抗ＬＡＧ３重鎖のＩｇＧ１重鎖定常領域は、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗからなる群から選択されるＣＨ３突然変異のペアを更に含み、
ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている。

【0058】

ある実施形態においては、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体は、抗ＬＡＧ３重鎖および／または抗ＰＤ－１重鎖のＣＨ２領域における２３４Ａまたは２３４Ｄ；２３５Ａまたは２３５Ｄ；２６５Ｓまたは２６５Ａ；２３７Ａ；および２９７Ａ、２９７Ｑまたは２９７Ｄ突然変異の１以上を更に含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている。

【0059】

もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体は、配列番号１５４のアミノ酸配列を含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合した抗ＰＤ－１重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ－１軽鎖、および配列番号１５３のアミノ酸配列を含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合した抗ＬＡＧ３重鎖、および配列番号９８のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３軽鎖を含む。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体は、配列番号１５４のアミノ酸配列を含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合した抗ＰＤ－１重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ－１軽鎖、および配列番号１５３のアミノ酸配列を含む抗ＴＩＧＩＴ単鎖Ｆｖに融合した抗ＬＡＧ３重鎖、および配列番号１５５のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３軽鎖を含む。

【0060】

もう１つの態様においては、本発明は、
（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域と、
（ｉｖ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。

【0061】

１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントは、軽鎖定常領域、例えばヒト軽鎖定常領域、例えばラムダもしくはカッパヒト軽鎖領域またはそれらの変異体を含む。例えば、限定的なものではないが、ヒト重鎖定常領域はγ４であることが可能であり、ヒト軽鎖定常領域はカッパであることが可能である。もう１つの実施形態においては、該抗体のＦｃ領域は、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ突然変異を有するγ４である（Ｓｃｈｕｕｒｍａｎ，Ｊら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３８：１－８，２００１）。幾つかの実施形態においては、種々の定常ドメインが抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントに連結されうる。例えば、本発明の抗体（またはフラグメント）の個々の意図される使用がエフェクター機能の改変を求めるものである場合には、ヒトＩｇＧ１以外の重鎖定常ドメインが使用可能であり、あるいはハイブリッドＩｇＧ１／ＩｇＧ４が使用可能である。

【0062】

ヒトＩｇＧ１抗体は長い半減期およびエフェクター機能、例えば補体活性化および抗体依存性細胞傷害性をもたらすが、そのような活性は該抗体の全ての用途に望ましいとは限らない可能性がある。そのような場合、例えばヒトＩｇＧ４定常ドメインが使用されうる。本発明は、ＩｇＧ４定常ドメインを含む抗ＬＡＧ３抗体およびその抗原結合性フラグメント、例えば、アンタゴニストヒト化抗ＬＡＧ３抗体およびフラグメント、ならびにそれらの使用方法を含む。１つの実施形態においては、該ＩｇＧ４定常ドメインはＥＵ系における２２８位およびＫＡＢＡＴ系における２４１位に対応する位置において天然ヒトＩｇＧ４定常ドメイン（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０１８６１．１）とは異なることが可能であり、この場合、適切な鎖内ジスルフィド結合形成を妨げうるＣｙｓ１０６およびＣｙｓ１０９（ＥＵ系におけるＣｙｓ２２６およびＣｙｓ２２９位ならびにＫＡＢＡＴ系におけるＣｙｓ２３９およびＣｙｓ２４２位に対応する）間の潜在的鎖間ジスルフィド結合を妨げるために天然Ｓｅｒ１０８はＰｒｏで置換される。Ａｎｇａｌら（１９９３）Ｍｏｌ．Ｉｍｕｎｏｌ．３０：１０５を参照されたい。他の場合においては、半減期を増加させるために又はエフェクター機能を低減するために修飾された修飾ＩｇＧ１定常ドメインが使用されうる。

【0063】

もう１つの態様においては、
（Ａ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域と、
（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および
（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉｖ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体を提供する。

【0064】

１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントは、
（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。

【0065】

もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体の場合、抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントは、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域、および配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0066】

１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体は、（Ａ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖを含むＩｇＧ１定常領域とを含む重鎖；および配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域とを含む軽鎖を含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメント；ならびに（Ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１８１Ｋ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗを含むＩｇＧ１定常領域とを含む重鎖；および配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅ（ＥＵ番号付け）を含むカッパ定常領域とを含む軽鎖を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを含む。

【0067】

もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体は、（Ａ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗを含むＩｇＧ１定常領域とを含む重鎖；および配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域とを含む軽鎖を含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメント；ならびに（Ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１８１Ｋ、およびＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖを含むＩｇＧ１定常領域とを含む重鎖；および配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅ（ＥＵ番号付け）を含むカッパ定常領域とを含む軽鎖を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを含む。

【0068】

もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体は、（Ａ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌを含むＩｇＧ１定常領域とを含む重鎖；および配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域とを含む軽鎖を含む抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメント；ならびに（Ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異１８１Ｋを含むＩｇＧ１定常領域とを含む重鎖；および配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域とを含む軽鎖を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを含み、ここで、抗ＰＤ－１抗原結合性フラグメントおよび抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントのＩｇＧ１重鎖定常領域は、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗ（ＥＵ番号付け）からなる群から選択されるＣＨ３突然変異のペアを更に含む。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。

【0069】

１つの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗ；３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗ；ならびに３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗからなる群から選択される。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。

【0070】

幾つかの特定の実施形態においては、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ－１重鎖および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに配列番号９６のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖および配列番号１５５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0071】

前記実施形態の１つの態様においては、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体または抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体は、抗ＬＡＧ３重鎖および／または抗ＰＤ－１重鎖のＣＨ２領域における２３４Ａまたは２３４Ｄ；２３５Ａまたは２３５Ｄ；２６５Ｓまたは２６５Ａ；２３７Ａ；および２９７Ａ、２９７Ｑまたは２９７Ｄ突然変異（ＥＵ番号付け）の１以上を更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３重鎖および／または抗ＰＤ－１重鎖のＩｇＧ１重鎖定常領域はＣＨ２領域におけるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ突然変異（ＥＵ番号付け）を更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３重鎖および／または抗ＰＤ－１重鎖のＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域におけるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ａ突然変異（ＥＵ番号付け）を更に含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３重鎖および／または抗ＰＤ－１重鎖のＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域におけるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａ突然変異（ＥＵ番号付け）を更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３重鎖および／または抗ＰＤ－１重鎖のＩｇＧ１重鎖定常領域は突然変異Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＱまたはＮ２９７Ｄ（ＥＵ番号付け）を更に含む。前記実施形態のもう１つの態様においては、抗ＬＡＧ３重鎖および／または抗ＰＤ－１重鎖のＩｇＧ１定常ドメインはＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ突然変異（ＥＵ番号付け）を更に含む。１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、哺乳類細胞による発現に特徴的なグリコシル化パターンを含む。

【0072】

更にもう１つの態様においては、本発明は、前記の抗体または抗原結合性フラグメントと薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を提供する。１つの実施形態においては、該組成物は、（ｉ）抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｉ）抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｉｉ）抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｖ）抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖ）抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉ）抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉ）抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉｉ）抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｘ）抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘ）抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉ）抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉ）抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉｉ）抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｖ）抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖ）抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉ）抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉ）抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉｉ）抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｘ）抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘ）抗４－１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉ）抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉ）抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉｉ）抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｖ）抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｖ）抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｖｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト、（ｘｘｖｉｉ）ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、（ｘｘｖｉｉｉ）ＰＡＲＰインヒビター、（ｘｘｉｘ）ニューカッスル病ウイルス；（ｘｘｘ）ＩＬ－１２を発現するニューカッスル病ウイルス、および（ｘｘｘｉ）コクサッキーウイルスＡ２１からなる群から選択される物質（因子）を更に含む。

【0073】

１つの実施形態においては、該物質は抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗４－１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質はＳＴＩＮＧアゴニストである。１つの実施形態においては、該物質はＣＸＣＲ２アンタゴニストである。１つの実施形態においては、該物質はＰＡＲＰインヒビターである。１つの実施形態においては、該物質はニューカッスル病ウイルスである。１つの実施形態においては、該物質は、ＩＬ－１２を発現するニューカッスル病ウイルスである。１つの実施形態においては、該物質は、ＩＬ－２を発現するニューカッスル病ウイルスである。１つの実施形態においては、該物質は、ＧＭ－ＣＳＦを発現するニューカッスル病ウイルスである。１つの実施形態においては、該物質はコクサッキーウイルスである。１つの実施形態においては、該物質はＡ群コクサッキーウイルスである。１つの実施形態においては、該物質はコクサッキーウイルスＡ２１である。

【0074】

例示的な抗体の物理的および機能的特性
「保存的に修飾された変異体」または「保存的置換」は、タンパク質におけるアミノ酸が、類似特性（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、バックボーンコンホメーションおよび剛性など）を有する他のアミノ酸で置換されることを意味し、該変化は、しばしば、該タンパク質の生物活性を変化させることなく施されうる。一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換は生物活性を実質的に変化させない、と当業者は認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎら（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ Ｅｄ．）を参照されたい）。また、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物活性を損なう可能性が低い。典型的な保存的置換を表１に示す。

【表2】

【0075】

本発明で提供される抗体の機能保存的変異体も想定される。本明細書中で用いる「機能保存的変異体」は、抗原アフィニティおよび／または特異性のような所望の特性を変化させることなく、１以上のアミノ酸残基が改変されている、抗体またはフラグメントを意味する。そのような変異体は、類似特性を有するアミノ酸でのアミノ酸の置換、例えば、表１の保存的アミノ酸置換を含むが、これらに限定されるものではない。また、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個まで又はそれ以上のアミノ酸置換を例えばフレームワーク領域内に有する単離された抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３、抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。

【0076】

ポリヌクレオチドおよびポリペプチド
また、本発明は、本発明で提供される抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメントのポリペプチドまたは免疫グロブリン鎖のいずれかをコードするポリヌクレオチドを提供する。

【0077】

１つの実施形態においては、例えば配列番号１５３、１５４、１５５、１５６または１６５のような、本明細書に記載されている単離された三重特異性抗体または抗原結合性フラグメントのポリペプチド鎖、可変領域、ＣＤＲ領域をコードする単離されたポリヌクレオチド、例えばＤＮＡを提供する。１つの実施形態においては、単離されたポリヌクレオチドは、本発明で提供される１つの成熟免疫グロブリン抗ＰＤ－１軽鎖と、本発明で提供される抗ＴＩＧＩＴ ｓｃＦｖに融合した本発明で提供される１つの成熟免疫グロブリン抗ＰＤ－１重鎖とを含むその抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントをコードする。１つの実施形態においては、単離されたポリヌクレオチドは、本発明で提供される１つの成熟免疫グロブリン抗ＬＡＧ３軽鎖と、本発明で提供される抗ＴＩＧＩＴ ｓｃＦｖに融合した本発明で提供される１つの成熟免疫グロブリン抗ＬＡＧ３重鎖とを含むその抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを更にコードする。他の実施形態においては、抗ＰＤ－１軽鎖、抗ＴＩＧＩＴ ｓｃＦｖに融合した抗ＰＤ－１重鎖、抗ＬＡＧ３軽鎖、および抗ＴＩＧＩＴ ｓｃＦｖに融合した抗ＬＡＧ３重鎖は別々のポリヌクレオチド分子上でコードされる。もう１つの実施形態においては、ポリヌクレオチドはシグナル配列を更にコードする。

【0078】

また、本発明は、単離されたポリヌクレオチドを含むベクター、例えば発現ベクター、例えばプラスミドを提供し、ここで、該ポリヌクレオチドは、宿主細胞がベクターでトランスフェクトされた場合に宿主細胞により認識される制御配列に機能的に連結されている。また、ベクターを含む宿主細胞、および本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはポリペプチドの製造方法を提供し、該製造方法は、該抗体またはその抗原結合性フラグメントの免疫グロブリン鎖をコードする発現ベクターまたは核酸を含有する宿主細胞を培地内で培養し、該抗体またはその抗原結合性フラグメントを宿主細胞または培地から単離することを含む。

【0079】

抗体およびその抗原結合性フラグメントの製造方法
本明細書に開示されている抗体は組換え法によって（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）／Ｔ７発現系、哺乳類細胞発現系または下等真核生物発現系において）も製造されうる。１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ、Ｖ_ＨまたはＶ_Ｌ）をコードする核酸をｐＥＴ系プラスミド内に挿入し、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）／Ｔ７系内で発現させることが可能である。幾つかの実施形態においては、本発明は、抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはその免疫グロブリン鎖を宿主細胞（例えば、細菌宿主細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、例えば、ＢＬ２１またはＢＬ２１ＤＥ３）内で発現させるための方法を提供し、該方法は、Ｔ７プロモーターに機能的に連結された免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドをも含む細胞内でＴ７ ＲＮＡポリメラーゼを発現させることを含む。１つの実施形態においては、細菌宿主細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、ｌａｃプロモーターに機能的に連結されたＴ７ ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含み、ＩＰＴＧ（イソプロピル－ベータ－Ｄ－チオガラクトピラノシド）の存在下の該宿主細胞のインキュベーションにより該ポリメラーゼおよび該鎖の発現が誘導される。

【0080】

当技術分野で公知である組換え抗体を製造するための幾つかの方法が存在する。抗体の組換え製造のための方法の一例は米国特許第４，８１６，５６７号に開示されている。

【0081】

形質転換は、ポリヌクレオチドを宿主細胞内に導入するためのいずれかの公知方法により行われうる。哺乳類細胞内に異種ポリヌクレオチドを導入するための方法は当技術分野でよく知られており、デキストラン媒介性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈降、ポリブレン媒介性トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リポソーム内へのポリヌクレオチドの封入、遺伝子銃注入および核内へのＤＮＡの直接マイクロインジェクションを包含する。また、ウイルスベクターにより哺乳類細胞内に核酸分子を導入することが可能である。細胞を形質転換する方法は当技術分野でよく知られている。例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，９１２，０４０号、第４，７４０，４６１号および第４，９５９，４５５号を参照されたい。

【0082】

したがって、本発明はまた、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはその免疫グロブリン鎖の組換え製造方法を提供し、該製造方法は、該抗体またはフラグメントの免疫グロブリン鎖（例えば、重鎖および／または軽鎖免疫グロブリン鎖、ｓｃＦｖ）の１以上をコードするポリヌクレオチドを導入し、そのような発現に好ましい条件下で宿主細胞［例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはピチア（Ｐｉｃｈｉａ）またはピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）］を培養することを含む。ある実施形態においては、該方法は、該宿主細胞から、および／または該宿主細胞を増殖させた培地から、該抗体またはフラグメントまたは免疫グロブリン鎖を単離することを更に含む。

【0083】

本明細書に開示されている抗体またはフラグメントまたは免疫グロブリン鎖の発現のための宿主としての、哺乳類細胞を含む真核宿主細胞および原核宿主細胞は当技術分野でよく知られており、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多数の不死化細胞系を包含する。これらは、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ＨＥＫ－２９３細胞および多数の他の細胞系を包含する。哺乳類宿主細胞はヒト細胞、マウス細胞、ラット細胞、イヌ細胞、サル細胞、ブタ細胞、ヤギ細胞、ウシ細胞、ウマ細胞およびハムスター細胞を包含する。特に好ましい細胞系は、どの細胞系が高い発現レベルを有するのかを決定することにより選択される。使用されうる他の細胞系としては、昆虫細胞系、例えばＳｆ９細胞、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞および真菌細胞が挙げられる。真菌細胞には、例えば以下のものを含む酵母および糸状菌細胞が含まれる：ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピチア・フィンランディカ（Ｐｉｃｈｉａ ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ）、ピチア・トレハロフィラ（Ｐｉｃｈｉａ ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ）、ピチア・コクラメ（Ｐｉｃｈｉａ ｋｏｃｌａｍａｅ）、ピチア・メンブラネファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）、ピチア・ミヌタ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｉｎｕｔａ）（オガタエア・ミヌタ（Ｏｇａｔａｅａ ｍｉｎｕｔａ）、ピチア・リンドネリ（Ｐｉｃｈｉａ ｌｉｎｄｎｅｒｉ））、ピチア・オプンチエ（Ｐｉｃｈｉａ ｏｐｕｎｔｉａｅ）、ピチア・テルモトレランス（Ｐｉｃｈｉａ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、ピチア・サリクタリア（Ｐｉｃｈｉａ ｓａｌｉｃｔａｒｉａ）、ピチア・グエルクウム（Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｅｒｃｕｕｍ）、ピチア・ピエペリ（Ｐｉｃｈｉａ ｐｉｊｐｅｒｉ）、ピチア・スチプティス（Ｐｉｃｈｉａ ｓｔｉｐｔｉｓ）、ピチア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピチア属種（Ｐｉｃｈｉａ ｓｐ．）、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロミセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、クライベロミセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）、クライベロミセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ルックノウエンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、フザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐ．）、フザリウム・グラミネウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、フザリウム・ベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フィスコミトレラ・パテンス（Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ ｐａｔｅｎｓ）およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）。ピチア属種（Ｐｉｃｈｉａ ｓｐ．）、任意のサッカロミセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、任意のクライベロミセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、任意のアスペルギルス属種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．）、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ルックノウエンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、任意のフザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐ．）、ヤロウィア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）。重鎖またはその抗原結合性部分もしくはフラグメント、軽鎖および／またはその抗原結合性フラグメント、あるいはｓｃＦｖをコードする組換え発現ベクターを哺乳類宿主細胞内に導入する場合、該宿主細胞における該抗体もしくはフラグメントもしくは鎖の発現、または該宿主細胞が培養される培地内への分泌を可能にするのに十分な時間にわたって該宿主細胞を培養することにより、該抗体を製造する。

【0084】

抗体およびその抗原結合性フラグメントおよび免疫グロブリン鎖は、標準的なタンパク質精製方法を用いて培地から回収されうる。更に、生産細胞系からの抗体およびその抗原結合性フラグメントおよび免疫グロブリン鎖（またはそれからの他の部分）の発現は、幾つかの公知技術を用いて増強されうる。例えば、グルタミンシンテターゼ遺伝子発現系（ＧＳ系）は、一定条件下で発現を増強するための一般的アプローチである。ＧＳ系は欧州特許第０ ２１６ ８４６号、第０ ２５６ ０５５号および第０ ３２３ ９９７号ならびに欧州特許出願第８９３０３９６４．４号において全体的または部分的に考察されている。したがって、１つの実施形態においては、哺乳類宿主細胞（例えば、ＣＨＯ）はグルタミンシンテターゼ遺伝子を欠いており、グルタミンの非存在下の培地内で増殖されるが、この場合、該免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドは、宿主細胞における該遺伝子の欠如を相補するグルタミンシンテターゼ遺伝子を含む。

【0085】

一般に、個々の細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質は、該細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質に特徴的なグリコシル化パターンのセットを有するであろう。したがって、抗体の個々のグリコシル化パターンは、該抗体を製造するために使用される個々の細胞系またはトランスジェニック動物に左右されるであろう。しかし、抗体グリコシル化パターンには無関係に、本発明で提供されるアミノ酸配列を含む全ての抗体が想定される。同様に、特定の実施形態においては、非フコシル化Ｎ－グリカンのみを含むグリコシル化パターンを有する抗体が有利でありうる。なぜなら、これらの抗体は、インビトロおよびインビボの両方において、それらのフコシル化対応物より高い効力を典型的に示すことが示されているからである（例えば、Ｓｈｉｎｋａｗａら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：３４６６－３４７３（２００３）；米国特許第６，９４６，２９２号および第７，２１４，７７５号を参照されたい）。非フコシル化Ｎ－グリカンを有するこれらの抗体が免疫原性である可能性は低い。なぜなら、それらの炭水化物構造は、ヒト血清ＩｇＧに存在する集団の正常成分であるからである。

【0086】

免疫グロブリンは、それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、種々のクラスに帰属されうる。幾つかの実施形態においては、異なる定常ドメインがＶ_Ｌ、Ｖ_ＨまたはＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ領域に付加されうる。免疫グロブリンの、少なくとも５つの主要クラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在し、これらの幾つかは更に、サブクラス（サブタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４；ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分類されうる。

【0087】

１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは重鎖定常領域、例えばヒト定常領域、例えばγ１、γ２、γ３もしくはγ４ヒト重鎖定常領域またはそれらの変異体を含む。もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、軽鎖定常領域、例えばヒト軽鎖定常領域、例えばラムダもしくはカッパヒト軽鎖領域またはそれらの変異体を含む。

【0088】

１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体または抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体はＩｇＧ１サブタイプの重鎖定常領域を含む。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１および／または抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域はＬ２３４ＡまたはＬ２３４Ｄ；Ｌ２３５ＡまたはＬ２３５Ｄ；Ｄ２６５ＳまたはＤ２６５Ａ；およびＧ２３７Ａ突然変異（ＣＨ２領域におけるもの）（ＥＵ番号付け）の１以上を更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１および／または抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域は突然変異Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＤまたはＮ２９７Ｑ（ＥＵ番号付け）を更に含む。

【0089】

抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体または抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体の他の態様においては、抗ＰＤ－１および抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域は、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖの１以上の突然変異およびＴ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗの１以上の突然変異；Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖの１以上の突然変異およびＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗの１以上の突然変異；ならびにＴ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖの１以上の突然変異およびＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗの１以上の突然変異（ＥＵ番号付け）からなる群から選択されるＣＨ３突然変異のペアを更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１アームのＩｇＧ１重鎖定常領域はＴ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７ＶのＣＨ３突然変異を更に含み、抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域はＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗを更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域はＴ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７ＶのＣＨ３突然変異を更に含み、抗ＰＤ－１アームのＩｇＧ１重鎖定常領域はＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗを更に含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１アームのＩｇＧ１重鎖定常領域はＬ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７ＶのＣＨ３突然変異を更に含み、抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域はＣＨ３突然変異Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗを更に含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域はＬ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７ＶのＣＨ３突然変異を更に含み、抗ＰＤ－１アームのＩｇＧ１重鎖定常領域はＣＨ３突然変異Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗを更に含む。抗ＰＤ－１アームおよび抗ＬＡＧ３アームの重鎖定常領域におけるこれらの突然変異は二重特異性抗体のヘテロ二量体形成を促進する。ＷＯ２０１２０５８７６８およびＷＯ２０１３０６３７０２を参照されたい。二重特異性抗体のヘテロ二量体形成を促進する他のＣＨ３突然変異には、ＷＯ２０１２０５８７６８、ＷＯ２０１３０６３７０２、ＵＳ５７３１１６８、ＵＳ８５９２５６２、ＵＳ９８２８６１９、ＵＳ９２４８１８１またはＷＯ２０１２１３１５５５（それらの全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されているものが含まれる。

【0090】

もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１重鎖はＬ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５ＥおよびＳ１８３ＬにおけるＣＨ１突然変異を更に含み、抗ＰＤ－１軽鎖はＱ１２４Ｒ、Ｔ１７８ＲにおけるＣκ突然変異を含み、抗ＬＡＧ３重鎖はＳ１８１ＫにおけるＣＨ１突然変異、Ｑ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｔ、Ｔ１７８ＹおよびＴ１８０Ｅ（ＥＵ番号付け）における軽鎖Ｃκ突然変異（ＥＵ番号付け）を更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１重鎖は更に、Ｑ３９Ｅ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７ＴおよびＱ１７５ＥにおけるＦＲおよびＣＨ１突然変異を含み、抗ＰＤ－１軽鎖はＱ３８Ｒ、Ｑ１２４Ｒ、Ｑ１６０ＫおよびＴ１７８ＲにおけるＦＲおよびＣκ突然変異を含み、抗ＬＡＧ３重鎖はＱ３９Ｒ、Ｈ１６８Ｒ、Ｑ１７５ＫにおけるＦＲおよびＣＨ１突然変異、Ｑ３８Ｅ、Ｑ１２４Ｅ、Ｑ１６０ＥおよびＴ１８０Ｅ（ＥＵ番号付け）における軽鎖ＦＲおよびＣκ突然変異を更に含む。これらの突然変異は抗ＰＤ－１重鎖および軽鎖ならびに抗ＬＡＧ３重鎖および軽鎖の適切なペア形成を助ける。ＷＯ２０１５１８１８０５を参照されたい。適切な軽鎖および重鎖のペア形成を促進する他のＣＨ１およびＣκ突然変異には、ＷＯ２０１５１８１８０５、ＷＯ２０１６１７２４８５、ＷＯ２０１５１７３７５６、ＵＳ２０１６００３９９４７、ＷＯ２０１４１２４３２６、ＵＳ２０１４０１５４２５４またはＵＳ２０１４０３７００２０（それらの全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されているものが含まれる。

【0091】

抗体の操作
本発明で提供される配列の可変ドメイン内のフレームワーク残基に対する修飾を含むように、例えば、該抗体またはフラグメントの特性を改善するために、該抗体およびその抗原結合性タンパク質が、操作（改変）された抗体である実施形態が更に含まれる。典型的には、そのようなフレームワーク修飾は、該抗体またはフラグメントの免疫原性を低下させるために行われる。これは通常、親（例えば、げっ歯類）抗体またはフラグメントにおける可変ドメイン内の非ＣＤＲ残基（すなわち、フレームワーク残基）を、該抗体が使用されることになる種の免疫レパトワからの類似残基、例えば、ヒト用治療用物質の場合にはヒト残基で置換することにより達成される。そのような抗体またはフラグメントは「ヒト化」抗体またはフラグメントと称される。１つのアプローチは、１以上のフレームワーク残基を対応ヒト生殖系列配列へと突然変異させることである。より詳しくは、体細胞突然変異を受けた抗体またはフラグメントは、該抗体が由来する生殖系列配列とは異なるフレームワーク残基を含有しうる。そのような残基は、該抗体またはフラグメントが由来するヒト生殖系列配列と親抗体またはフラグメントのフレームワーク配列を比較することにより特定されうる。もう１つのアプローチは、該操作（例えば、ヒト化）抗体の位置の１以上において元の親（例えば、げっ歯類）残基へと復帰させること、例えば、フレームワーク残基の置換の過程において喪失した可能性がある結合アフィニティを回復させることである（例えば、米国特許第５，６９３，７６２号、米国特許第５，５８５，０８９号および米国特許第５，５３０，１０１号を参照されたい）。

【0092】

ある実施形態においては、該抗体およびその抗原結合性フラグメントを、それらの特性を改善するためにフレームワークおよび／またはＣＤＲにおける修飾を含むように、操作（例えば、ヒト化）する。そのような操作される変化は分子モデリングに基づくことが可能である。抗体の構造的特徴を理解するために、親（非ヒト）抗体配列の可変領域に関する分子モデルを構築し、それを使用して、抗原と相互作用しうる抗体上の潜在的領域を特定することが可能である。通常のＣＤＲは免疫グロブリン配列のアライメントおよび可変領域の特定に基づく。Ｋａｂａｔら，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５^ｔｈ ｅｄ．；ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１－３２４２；Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１－７５；Ｋａｂａｔら，（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６。Ｃｈｏｔｈｉａらは抗体の結晶構造におけるループのコンホメーションを注意深く調べ、超可変ループを提示した。Ｃｈｏｔｈｉａら，（１９８７）Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７またはＣｈｏｔｈｉａら，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３。「ＣＤＲ」および「超可変ループ」として分類されている領域の間には変異が存在する。後の研究（Ｒａｇｈｕｎａｔｈａｎら，（２０１２）Ｊ．Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇ．２５，３，１０３－１１３）は幾つかの抗体－抗原結晶複合体を分析し、抗体内の抗原結合領域が「ＣＤＲ」残基または「超可変」ループに必ずしも厳密には合致しないことを観察した。抗原に潜在的に結合しうる領域の選択を導くために、非ヒト抗体の可変領域に関する分子モデルが使用されうる。実際、モデルに基づく潜在的抗原結合領域は通常の「ＣＤＲ」または「超可変」ループとは異なる。市販の科学的ソフトウェア、例えばＭＯＥ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ）が分子モデリングに使用されうる。フレームワーク内とＣＤＲ内との両方の非ヒト配列との最良マッチに基づいて、ヒトフレームワークが選択されうる。ＶＨ内のＦＲ４（フレームワーク４）に関しては、ヒト生殖系列におけるＶＪ領域を対応非ヒト領域と比較する。ＶＬにおけるＦＲ４（フレームワーク４）の場合、ヒト生殖系列配列のＪ－カッパおよびＪ－ラムダ領域を対応非ヒト領域と比較する。適切なヒトフレームワークが特定されたら、選択されたヒトフレームワーク内にＣＤＲをグラフティングする。幾つかの場合には、ＶＬ－ＶＨ境界における或る残基が非ヒト（親）配列の場合と同様に保持されうる。ＣＤＲのコンホメーション、ひいては抗原への結合を潜在的に改変しうる残基を特定するためにも、分子モデルが使用されうる。幾つかの場合には、これらの残基は非ヒト（親）配列の場合と同様に保持される。望ましくない効果、例えばグリコシル化、脱アミド化および酸化をもたらしうる溶媒露出アミノ酸を特定するためにも、分子モデルが使用されうる。これらの潜在的問題を排除／最小化するために、設計段階の初期に、デベロパビリティフィルターが導入されうる。

【0093】

もう１つのタイプのフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内または更には１以上のＣＤＲ領域内の１以上の残基を突然変異させて、Ｔ細胞エピトープを除去し、それにより該抗体の潜在的免疫原性を低下させることを含む。このアプローチは「脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」とも称され、米国特許第７，１２５，６８９号に更に詳細に記載されている。

【0094】

特定の実施形態においては、脱アミド化または異性化を避けるために、最終的な抗体の、より高い化学的安定性を得るために、露出側鎖を含有する或るアミノ酸を別のアミノ酸残基へと変化させることが望ましいであろう。アスパラギンおよびグルタミンの脱アミド化／異性化はＤＧ、ＮＧ、ＮＳ、ＮＡ、ＮＴ、ＱＧまたはＱＳ配列上で生じ、イソアスパラギン酸残基の生成をもたらす可能性があり、該残基はポリペプチド鎖内にねじれ（キンク）を導入し、その安定性を低下させる（イソアスパラギン酸効果）。異性化はＤＧ、ＤＳ、ＤＡまたはＤＴ配列において生じうる。ある実施形態においては、本開示の抗体は脱アミド化またはアスパラギン異性部位を含有しない。１つの実施形態においては、抗ＰＤ１重鎖ＣＤＲＨ２は、脱アミド化部位を除去するためのＧ５６Ａ補正を含む。

【0095】

例えば、特にＣＤＲ内の、いずれかのＡｓｎ－Ｇｌｙ配列におけるイソアスパルタートの形成の可能性を低減するために、アスパラギン（Ａｓｎ）残基はＧｌｎまたはＡｌａへと改変されうる。同様の問題はＡｓｐ－Ｇｌｙ配列においても生じうる。ＲｅｉｓｓｎｅｒおよびＡｓｗａｄ（２００３）Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．６０：１２８１。イソアスパルタート形成は抗体のその標的抗原への結合を減弱し、または完全に阻止しうる。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１，ｐ．７３４を参照されたい。１つの実施形態においては、該アスパラギンはグルタミン（Ｇｌｎ）へと改変される。小さなアミノ酸がアスパラギンまたはグルタミンに隣接して存在する場合にはより高い率で生じる脱アミド化の可能性を低減するために、アスパラギン（Ａｓｎ）またはグルタミン（Ｇｌｎ）残基に隣接したアミノ酸を改変することも望ましいかもしれない。Ｂｉｓｃｈｏｆｆ ＆ Ｋｏｌｂｅ（１９９４）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．６６２：２６１を参照されたい。また、抗原結合アフィニティを低減しうる、そしてまた、最終抗体調製物における分子不均一性に寄与しうるメチオニン硫黄の酸化の可能性を低減するために、ＣＤＲ内のいずれかのメチオニン残基（典型的には溶媒露出Ｍｅｔ）がＬｙｓ、Ｌｅｕ、ＡｌａまたはＰｈｅまたは他のアミノ酸へと改変されうる（同誌）。また、Ａｓｎ－Ｐｒｏペプチド結合の潜在的な切断を妨げ又は最小にするために、ＣＤＲにおいて見出されるいずれかのＡｓｎ－Ｐｒｏの組合せをＧｌｎ－Ｐｒｏ、Ａｌａ－ＰｒｏまたはＡｓｎ－Ａｌａへと改変することが望ましいかもしれない。ついで、そのような置換を有する抗体をスクリーニングして、該置換がＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１またはＬＡＧ３に対する抗体のアフィニティもしくは特異性または他の所望の生物活性を、許容し得ないレベルに低減しないことを確認する。

【表3】

【0096】

Ｆｃ領域の抗体操作
本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントはまた、Ｆｃ領域内の修飾を含むように、典型的には、該抗体の特性、例えば血清半減期、補体固定、Ｆｃ受容体結合および／またはエフェクター機能（例えば、抗原依存性細胞傷害性）の１以上を変化させるために操作（改変）されうる。更に、本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントは化学的に修飾可能であり（例えば、１以上の化学的部分が該抗体に結合可能である）、あるいは、再び該抗体またはフラグメントの特性の１以上を改変するために、そのグリコシル化を改変するように修飾されうる。これらの実施形態のそれぞれは後記に更に詳細に記載されている。Ｆｃ領域内の残基の番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスのものである。

【0097】

本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントはまた、改変されたエフェクター機能をもたらすための、修飾（または遮断）されたＦｃ領域を有する抗体およびフラグメントをも含む。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；ＷＯ２００３／０８６３１０；ＷＯ２００５／１２０５７１；ＷＯ２００６／００５７７０２を参照されたい。そのような修飾は、診断および療法における可能な有益な効果を伴って、免疫系の種々の反応を増強または抑制するために用いられうる。Ｆｃ領域の改変には、アミノ酸変化（置換、欠失および挿入）、グリコシル化または脱グリコシル化および複数のＦｃの付加が含まれる。Ｆｃに対する変化はまた、治療用抗体における抗体の半減期を改変することが可能であり、それほど頻繁でない投与ならびにそれによる便利さの向上および物資の使用の減少を可能にする。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１，ｐ．７３４－３５を参照されたい。

【0098】

１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、重鎖定常領域のヒンジ領域内の２２８位に対応する位置におけるセリンからプロリンへの突然変異（Ｓ２２８Ｐ；ＥＵインデックス）を含むＩｇＧ４アイソタイプ抗体またはフラグメントである。この突然変異はヒンジ領域内の重鎖間ジスルフィド架橋の不均一性を排除することが報告されている（Ａｎｇａｌら，前掲；２４１位はＫａｂａｔ番号付け系に基づく）。

【0099】

１つの実施形態においては、ヒンジ領域は、該ヒンジ領域内のシステイン残基の数が増加または減少するように修飾される。このアプローチは米国特許第５，６７７，４２５号に更に詳細に記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖の集合を促進させるために、または抗体の安定性を増強もしくは低減するために改変される。

【0100】

もう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントのＦｃヒンジ領域は、該抗体またはフラグメントの生物学的半減期を減少させるために突然変異される。より詳細には、該抗体またはフラグメントが、天然ＦｃヒンジドメインＳｐＡ結合と比べて低減したスタヒロコッカスプロテインＡ（ＳｐＡ）結合を示すように、Ｆｃ－ヒンジフラグメントのＣＨ２－ＣＨ３ドメイン境界領域内に１以上のアミノ酸突然変異が導入される。このアプローチは米国特許第６，１６５，７４５号に更に詳細に記載されている。

【0101】

もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、その生物学的半減期を増加させるために修飾される。種々のアプローチが可能である。例えば、米国特許６，２７７，３７５号に記載されているとおり、以下の突然変異の１以上が導入されうる：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。あるいは、米国特許第５，８６９，０４６号および第６，１２１，０２２号に記載されているとおり、生物学的半減期を増加させるために、該抗体は、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取られたサルベージ（ｓａｌｖａｇｅ）受容体結合性エピトープを含有するようにＣＨ１またはＣＬ領域内で改変されうる。

【0102】

更に他の実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントのエフェクター機能を改変するために、少なくとも１つのアミノ酸残基を別のアミノ酸残基で置換することにより、Ｆｃ領域を改変する。例えば、該抗体がエフェクターリガンドに対する改変されたアフィニティを有し、親抗体の抗原結合能を保有するように、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０および３２２から選択される１以上のアミノ酸が別のアミノ酸残基で置換されうる。アフィニティが改変されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分でありうる。このアプローチは米国特許第５，６２４，８２１号および第５，６４８，２６０号に更に詳細に記載されている。

【0103】

もう１つの実施形態においては、該抗体がＣ１ｑ結合の変化および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の低減もしくは消失を示すように、アミノ酸残基３２９、３３１および３３２から選択される１以上のアミノ酸が別のアミノ酸残基で置換されうる。このアプローチは米国特許第６，１９４，５５１号に詳細に記載されている。

【0104】

もう１つの実施形態においては、アミノ酸２３１位および２３９位における１以上のアミノ酸残基を改変し、それにより、補体を固定する該抗体の能力を改変する。このアプローチはＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１に更に詳細に記載されている。

【0105】

更にもう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントが抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）をもたらす能力を低減するために、および／またはＦｃγ受容体に対する該抗体またはフラグメントのアフィニティを低減するために、以下の位置：２３８、２３９、２４３、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９位における１以上のアミノ酸を修飾することにより、Ｆｃ領域を修飾する。このアプローチはＰＣＴ公開ＷＯ ００／４２０７２に更に詳細に記載されている。更に、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位が位置決定されており、改善した結合を示す変異体が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６６０４を参照されたい）。

【0106】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体がエフェクター機能をもたらす能力を低減するために、および／または抗炎症特性を増強するために、残基２４３および２６４を修飾することにより、Ｆｃ領域を修飾する。１つの実施形態においては、２４３位および２６４位における残基をアラニンへと変化させることにより、該抗体またはフラグメントのＦｃ領域を修飾する。１つの実施形態においては、該抗体またはフラグメントがエフェクター機能をもたらす能力を低減するために、および／または抗炎症特性を増強するために、残基２４３、２６４、２６７および３２８を修飾することにより、Ｆｃ領域を修飾する。

【0107】

エフェクター機能の調節
本明細書中で用いる「エフェクター機能」なる語は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）媒介性応答、Ｆｃ媒介性食作用または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、およびＦｃＲｎ受容体を介した抗体リサイクリングの１以上を意味すると意図される。

【0108】

抗原結合性タンパク質の定常領域と種々のＦｃ受容体（ＦｃＲ）［ＦｃガンマＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃガンマＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃガンマＲＩＩＩ（ＣＤ１６）を含む］との間の相互作用が抗原結合性タンパク質のエフェクター機能、例えばＡＤＣＣおよびＣＤＣをもたらすと考えられている。Ｆｃ受容体は抗体架橋にも重要であり、これは抗腫瘍免疫に重要でありうる。

【0109】

エフェクター機能は、例えば、ＡＤＣＣエフェクター機能を測定するための、ナチュラルキラー細胞へのＦｃガンマＲＩＩＩの結合または単球／マクロファージへのＦｃガンマＲＩの結合による方法を含む幾つかの方法で測定されうる。ある実施形態においては、本発明で提供される抗原結合性タンパク質はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞アッセイにおいてＡＤＣＣエフェクター機能に関して評価されうる。そのようなアッセイの例はＳｈｉｅｌｄｓら，２００１ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７６，ｐ ６５９１－６６０４；Ｃｈａｐｐｅｌら，１９９３ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ ２６８，ｐ ２５１２４－２５１３１；Ｌａｚａｒら，２００６ ＰＮＡＳ，１０３；４００５－４０１０において見出されうる。

【0110】

本発明で提供される抗体のＡＤＣＣもしくはＣＤＣの特性またはそれらの架橋特性は幾つかの方法で低減されうる。残基Ａｓｎ２９７におけるグリコシル化の改変または特異的突然変異を含有するヒトＩｇＧ１定常領域はＦｃ受容体への結合を低減することが示されている。他の場合においては、これらの突然変異はＡＤＣＣおよびＣＤＣを増強することも示されている（Ｌａｚａｒら，２００６，ＰＮＡＳ，１０３；４００５－４０１０；Ｓｈｉｅｌｄｓら，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００１，２７６；６５９１－６６０４；Ｎｅｃｈａｎｓｋｙら，２００７，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４４；１８１５－１８１７）。また、Ｌ２３４ＡまたはＬ２３５Ａ、Ｌ２３６Ａ、Ｇ２３７Ａ突然変異はＦｃγＲＩＩ認識の低減をもたらす。Ｌｕｎｄら，１９９１，Ｊ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４７，２６５７－２６６３。１つの実施形態においては、そのような突然変異は、２３９、３３２および３３０位（ＩｇＧ１）または他のＩｇＧアイソタイプにおける同等位置から選択される位置の１以上に存在する。適切な突然変異の例としては、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２ＥおよびＡ３３０Ｌが挙げられる。１つの実施形態においては、本発明で提供される抗原結合性タンパク質は２３９および３３２位において突然変異している（例えば、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ）。もう１つの実施形態においては、本発明で提供される抗原結合性タンパク質は、２３９および３３２および３３０から選択される３以上の位置において突然変異している（例えば、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２ＥおよびＡ３３０Ｌ（ＥＵインデックスの番号付け））。

【0111】

修飾グリコシル化を有する抗体の製造
更にもう１つの実施形態においては、本発明で提供される二重特異性抗体または抗原結合性フラグメントは特定のグリコシル化パターンを含む。例えば、アフコシル化または非グリコシル化（アグリコシル化）（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体またはフラグメント（すなわち、該抗体は、それぞれ、フコースまたはグリコシル化を欠く）が製造されうる。抗体またはフラグメントのグリコシル化パターンは、例えば、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１またはＬＡＧ３抗原に対する該抗体またはフラグメントのアフィニティまたはアビディティを増強するために改変されうる。そのような修飾は、例えば、該抗体またはフラグメント配列内のグリコシル化部位の１以上を改変することにより達成されうる。例えば、可変領域フレームワークグリコシル化部位の１以上の除去をもたらし、それによりその部位におけるグリコシル化を排除する１以上のアミノ酸置換が施されうる。そのような非グリコシル化は抗原に対する該抗体またはフラグメントのアフィニティまたはアビディティを増強しうる。例えば、米国特許第５，７１４，３５０号および第６，３５０，８６１号を参照されたい。１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１ ＣＤＲＨ２領域はＳ６１Ｎグリコシル化補正を有する。

【0112】

本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメントは更に、哺乳類またはヒト様グリコシル化パターンを有する糖タンパク質を産生するように遺伝的に操作された下等真核宿主細胞、特に真菌宿主細胞、例えば酵母および糸状菌において産生されるものを含みうる（例えば、Ｃｈｏｉら（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１００：５０２２－５０２７；Ｈａｍｉｌｔｏｎら（２００３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０１：１２４４－１２４６；Ｈａｍｉｌｔｏｎら（２００６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１３：１４４１－１４４３；Ｎｅｔｔら，Ｙｅａｓｔ ２８（３）：２３７－５２（２０１１）；Ｈａｍｉｌｔｏｎら，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｏｃｔ；１８（５）：３８７－９２（２００７）を参照されたい）。現在使用されている哺乳類細胞系と比較した場合の、これらの遺伝的に修飾された宿主細胞の格別な利点は、該細胞内で産生される糖タンパク質のグリコシル化プロファイルの制御が可能なことであり、その結果、特定のＮ－グリカン構造が優勢な糖タンパク質の組成物が製造されうる（例えば、米国特許第７，０２９，８７２号および米国特許第７，４４９，３０８号を参照されたい）。これらの遺伝的に修飾された宿主細胞は、特定のＮ－グリカン構造を主に有する抗体を製造するために使用されている（例えば、Ｌｉら（２００６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２４：２１０－２１５を参照されたい）。

【0113】

特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントは更に、二分岐および多アンテナ（ｍｕｌｔｉａｎｔｅｎｎａｒｙ）種を含むフコシル化および非フコシル化ハイブリッドおよび複合Ｎ－グリカン（例えば、ＧｌｃＮＡｃ_{（１－４）}Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２；Ｇａｌ_{（１－４）}ＧｌｃＮＡｃ_{（１－４）}Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２；ＮＡＮＡ_{（１－４）}Ｇａｌ_{（１－４）}ＧｌｃＮＡｃ_{（１－４）}Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２のようなＮ－グリカンを含むが、これらに限定されるものではない）を含む、下等真核宿主細胞において産生されるものを含む。

【0114】

特定の実施形態においては、本発明で提供される抗体およびその抗原結合性フラグメントは、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２；ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２；およびＮＡＮＡＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２からなる群から選択される少なくとも１つのハイブリッドＮ－グリカンを有する抗体またはフラグメントを含む。特定の態様においては、該ハイブリッドＮ－グリカンは該組成物中の主要Ｎ－グリカン種である。

【0115】

特定の実施形態においては、本発明で提供される抗体およびその抗原結合性フラグメントは、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２；ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２；ＮＡＮＡＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２；ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２；ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２；Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２；ＮＡＮＡＧａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２；およびＮＡＮＡ_２Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２からなる群から選択される少なくとも１つの複合Ｎ－グリカンを有する抗体およびフラグメントを含む。特定の態様においては、該複合Ｎ－グリカンは該組成物中の主要Ｎ－グリカン種である。更に詳細な態様においては、該複合Ｎ－グリカンは、該組成物中の複合Ｎ－グリカンの約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％を構成する特定のＮ－グリカン種である。１つの実施形態においては、本発明で提供される二重特異性抗体およびその抗原結合性フラグメントは複合Ｎ－グリカンを含み、ここで、複合Ｎ－グリカンの少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％は構造ＮＡＮＡ_２Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２を含み、ここで、そのような構造はアフコシル化されている。そのような構造は、例えば、操作されたピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）宿主細胞において産生されうる。

【0116】

特定の実施形態においては、該Ｎ－グリカンはフコシル化されている。一般に、該フコースは、該Ｎ－グリカンの還元末端におけるＧｌｃＮＡｃとのα１，３－結合、該Ｎ－グリカンの還元末端におけるＧｌｃＮＡｃとのα１，６－結合、該Ｎ－グリカンの非還元末端におけるＧａｌとのα１，２－結合、該Ｎ－グリカンの非還元末端におけるＧｌｃＮＡｃとのα１，３－結合、または該Ｎ－グリカンの非還元末端におけるＧｌｃＮＡｃとのα１，４－結合で存在する。

【0117】

したがって、前記の糖タンパク質組成物の特定の態様においては、該グリコフォーム（ｇｌｙｃｏｆｏｒｍ）は、Ｍａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ）、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ）、Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ）、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ）、ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ）、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ）、Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ）、ＮＡＮＡＧａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ）およびＮＡＮＡ_２Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ）からなる群から選択されるグリコフォームを与えるα１，３－結合またはα１，６－結合フコース；ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）Ｍａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２、ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ_１－２）Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ_１－２）Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ１－２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ_２、ＮＡＮＡＧａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ_１－２）Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２およびＮＡＮＡ_２Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆｕｃ_１－２）Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２からなる群から選択されるグリコフォームを与えるα１，３－結合またはα１，４－結合フコース；あるいはＧａｌ（Ｆｕｃ）ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｇａｌ_２（Ｆｕｃ_１－２）ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、ＮＡＮＡＧａｌ_２（Ｆｕｃ_１－２）ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２およびＮＡＮＡ_２Ｇａｌ_２（Ｆｕｃ_１－２）ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２からなる群から選択されるグリコフォームを与えるα１，２－結合フコースで存在する。

【0118】

更に詳細な態様においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、Ｍａｎ_８ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｍａｎ_７ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｍａｎ_６ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｍａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｍａｎ_４ＧｌｃＮＡｃ_２、またはＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２ Ｎ－グリカン構造からなるＮ－グリカン（これらに限定されるものではない）を含む高マンノースＮ－グリカンを含む。

【0119】

前記の更に詳細な態様においては、該複合Ｎ－グリカンは更に、フコシル化および非フコシル化二分岐および多アンテナ種を含む。

【0120】

本明細書中で用いる「Ｎ－グリカン」および「グリコフォーム（糖形態）」なる語は互換的に用いられ、Ｎ－結合オリゴ糖を意味し、例えば、ポリペプチドのアスパラギン残基にアスパラギン－Ｎ－アセチルグルコサミン結合により結合しているＮ－結合オリゴ糖を意味する。Ｎ－結合糖タンパク質は、タンパク質中のアスパラギン残基のアミド窒素に結合したＮ－アセチルグルコサミン残基を含有する。糖タンパク質上で見出される主な糖としては、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）およびシアル酸（例えば、Ｎ－アセチル－ノイラミン酸（ＮＡＮＡ））が挙げられる。糖基のプロセシングは翻訳と同時にＥＲの内腔において生じ、翻訳後はＮ－結合糖タンパク質のためにゴルジ装置において継続する。

【0121】

Ｎ－グリカンはＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２の共通の五糖コアを有する（「Ｍａｎ」はマンノースを意味し、「Ｇｌｃ」はグルコースを意味し、「ＮＡｃ」はＮ－アセチルを意味し、ＧｌｃＮＡｃはＮ－アセチルグルコサミンを意味する）。通常、Ｎ－グリカン構造は、非還元末端を左側に、そして還元末端を右側にして表される。Ｎ－グリカンの還元末端は、該タンパク質上のグリコシル化部位を含むＡｓｎ残基に結合している末端である。Ｎ－グリカンは、「トリマンノースコア」、「五糖コア」または「少（ｐａｕｃｉ）マンノースコア」とも称されるＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２（「Ｍａｎ３」）コア構造に付加される周辺糖（例えば、ＧｌｃＮＡｃ、ガラクトース、フコースおよびシアル酸）を含む分岐（アンテナ）の数において異なる。Ｎ－グリカンは、その分岐（分枝）構成成分に従い分類される（例えば、高マンノース、複合またはハイブリッド）。「高マンノース」型Ｎ－グリカンは５個以上のマンノース残基を有する。「複合」型Ｎ－グリカンは、典型的には、「トリマンノース」コアの１，６マンノースアームに結合した少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃと、１，３マンノースアームに結合した少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃとを有する。複合Ｎ－グリカンは、シアル酸または誘導体（例えば、「ＮＡＮＡ」または「ＮｅｕＡｃ」が挙げられ、ここで、「Ｎｅｕ」はノイラミン酸を意味し、「Ａｃ」はアセチルを意味する）で修飾されていてもよいガラクトース（「Ｇａｌ」）またはＮ－アセチルガラクトサミン（「ＧａｌＮＡｃ」）残基をも有しうる。複合Ｎ－グリカンは、コアフコース（「Ｆｕｃ」）および「二分岐（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ）」ＧｌｃＮＡｃを含む鎖内置換をも有しうる。複合Ｎ－グリカンはまた、「トリマンノース・コア」上に複数のアンテナを有することが可能であり、これは、しばしば、「多アンテナグリカン」と称される。「ハイブリッド」Ｎ－グリカンは、トリマンノースコアの１，３マンノースアームの末端における少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃと、トリマンノースコアの１，６マンノースアーム上の０個以上のマンノースとを有する。前記の種々のＮ－グリカンは「グリコフォーム（糖形態）」とも称される。

【0122】

複合Ｎ－グリカンに関しては、「Ｇ－２」、「Ｇ－１」、「Ｇ０」、「Ｇ１」、「Ｇ２」、「Ａ１」および「Ａ２」なる語は以下を意味する。「Ｇ－２」は、Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２として特徴づけられうるＮ－グリカン構造を意味し、「Ｇ－１」なる語は、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２として特徴づけられうるＮ－グリカン構造を意味し、「Ｇ０」なる語は、ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２として特徴づけられうるＮ－グリカン構造を意味し、「Ｇ１」なる語は、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２として特徴づけられうるＮ－グリカン構造を意味し、「Ｇ２」なる語は、Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２として特徴づけられうるＮ－グリカン構造を意味し、「Ａ１」なる語は、ＮＡＮＡＧａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２として特徴づけられうるＮ－グリカン構造を意味し、「Ａ２」なる語は、ＮＡＮＡ_２Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２として特徴づけられうるＮ－グリカン構造を意味する。特に示されていない限り、「Ｇ－２」、「Ｇ－１」、「Ｇ０」、「Ｇ１」、「Ｇ２」、「Ａ１」および「Ａ２」なる語は、Ｎ－グリカンの還元末端においてＧｌｃＮＡｃ残基に結合したフコースを欠くＮ－グリカン種を意味する。該用語が「Ｆ」を含む場合、「Ｆ」は、該Ｎ－グリカン種が該Ｎ－グリカンの還元末端においてＧｌｃＮＡｃ残基上にフコース残基を含有することを示す。例えば、Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、Ｇ２Ｆ、Ａ１ＦおよびＡ２Ｆは全て、該Ｎ－グリカンが、該Ｎ－グリカンの還元末端においてＧｌｃＮＡｃ残基に結合したフコース残基を更に含むことを示す。酵母および糸状菌のような下等真核生物は、通常、フコースを有するＮ－グリカンを産生しない。

【0123】

多アンテナＮ－グリカンに関しては、「多アンテナＮ－グリカン」なる語は、該Ｎ－グリカンの１，６アームもしくは１，３アームの非還元末端を含むマンノース残基上のＧｌｃＮＡｃ残基、または該Ｎ－グリカンの１，６アームおよび１，３アームの非還元末端を含むマンノース残基のそれぞれにおけるＧｌｃＮＡｃ残基を更に含むＮ－グリカンを意味する。したがって、多アンテナＮ－グリカンは、式ＧｌｃＮＡｃ_{（２－４）}Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｇａｌ_{（１－４）}ＧｌｃＮＡｃ_{（２－４）}Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、またはＮＡＮＡ_{（１－４）}Ｇａｌ_{（１－４）}ＧｌｃＮＡｃ_{（２－４）}Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２により特徴づけられうる。「１－４」なる語は１、２、３または４個の残基を意味する。

【0124】

二分岐Ｎ－グリカンに関しては、「二分岐Ｎ－グリカン」なる語は、ＧｌｃＮＡｃ残基が該Ｎ－グリカンの還元末端においてマンノース残基に結合している、Ｎ－グリカンを意味する。二分岐Ｎ－グリカンは式ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２により特徴づけられることが可能であり、ここで、各マンノース残基はその非還元末端においてＧｌｃＮＡｃ残基に結合している。これに対して、多アンテナＮ－グリカンがＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２として特徴づけられる場合、該式は、２つのＧｌｃＮＡｃ残基が、Ｎ－グリカンの、２つのアームの一方の非還元末端において、マンノース残基に結合しており、１つのＧｌｃＮＡｃ残基が、該Ｎ－グリカンの他方のアームの非還元末端において、マンノース残基に結合していることを示す。

【0125】

抗体の物理的特性
本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントは更に、軽鎖または重鎖免疫グロブリン可変領域内に１以上のグリコシル化部位を含有しうる。そのようなグリコシル化部位は抗原結合の変化による該抗体のｐＫの変化または該抗体もしくはフラグメントの免疫原性の増強をもたらしうる（Ｍａｒｓｈａｌｌら（１９７２）Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ４１：６７３－７０２；ＧａｌａおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ（２００４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７２：５４８９－９４；Ｗａｌｌｉｃｋら（１９８８）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １６８：１０９９－１０９；Ｓｐｉｒｏ（２００２）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ １２：４３Ｒ－５６Ｒ；Ｐａｒｅｋｈら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１６：４５２－７；Ｍｉｍｕｒａら（２０００）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３７：６９７－７０６）。グリコシル化は、Ｎ－Ｘ－Ｓ／Ｔ配列を含有するモチーフにおいて生じることが公知である。

【0126】

各抗体または抗原結合性フラグメントは、一般には６～９．５のｐＨ範囲内である特有の等電点（ｐＩ）を有する。ＩｇＧ１抗体のｐＩは典型的には７～９．５のｐＨ範囲内であり、ＩｇＧ４抗体のｐＩは典型的には６～８のｐＨ範囲内である。

【0127】

各抗体または抗原結合性フラグメントは特徴的な融解温度を有し、より高い融解温度は、より大きなインビボ総安定性を示す（Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ ＲおよびＭａｎｎｉｎｇ ＭＣ（２００２）Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ３：３６１－７１）。一般に、Ｔ_Ｍ１（初期アンフォールディングの温度）は６０℃より高い、６５℃より高い、または７０℃より高いことが可能である。抗体またはフラグメントの融点は、示差走査熱量測定（Ｃｈｅｎら（２００３）Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ２０：１９５２－６０；Ｇｈｉｒｌａｎｄｏら（１９９９）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ６８：４７－５２）または円二色性（Ｍｕｒｒａｙら（２００２）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｓｃｉ ４０：３４３－９）を用いて測定されうる。

【0128】

もう１つの実施形態においては、急速に分解しない抗体およびその抗原結合性フラグメントを選択する。抗体またはフラグメントの分解は、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）およびＭＡＬＤＩ－ＭＳ（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ＡＪおよびＨｕｇｈｅｓ ＤＥ（１９９５）Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ ６７：３６２６－３２）を用いて測定されうる。

【0129】

もう１つの実施形態においては、望ましくない免疫応答の誘発および／または変化した若しくは好ましくない薬物動態特性を招きうる凝集作用が最小である抗体およびその抗原結合性フラグメントを選択する。一般に、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下または５％以下の凝集を示す抗体およびフラグメントが許容される。凝集は、サイズ排除カラム（ＳＥＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）および光散乱を含む幾つかの技術により測定されうる。

【0130】

抗体コンジュゲート
本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントは化学的部分にコンジュゲート化（結合）されることも可能である。化学的部分は、とりわけ、免疫調節物質に結合する重合体、放射性核種または小分子でありうる。特定の実施形態においては、化学的部分は、対象の体内の該抗体またはフラグメントの半減期を増加させる重合体である。適切な重合体には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、２ｋＤａ、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１２ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａまたは４０ｋＤａの分子量を有するＰＥＧ）、デキストランおよびモノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）（これらに限定されるものではない）を包含する親水性重合体が含まれるが、これらに限定されるものではない。Ｌｅｅら（１９９９）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１０：９７３－９８１）はＰＥＧコンジュゲート化単鎖抗体を開示している。Ｗｅｎら，（２００１）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１２：５４５－５５３）は、放射性金属キレーター（ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ））に結合したＰＥＧに対して抗体をコンジュゲート化することを開示している。

【0131】

本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントはまた、例えば^９９Ｔｃ、^９０Ｙ、^１１１Ｉｎ、^３２Ｐ、^１４Ｃ、^１２５Ｉ、^３Ｈ、^１３１Ｉ、^１１Ｃ、^１５Ｏ、^１３Ｎ、^１８Ｆ、^３５Ｓ、^５１Ｃｒ、^５７Ｔｏ、^２２６Ｒａ、^６０Ｃｏ、^５９Ｆｅ、^５７Ｓｅ、^１５２Ｅｕ、^６７ＣＵ、^２１７Ｃｉ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^４７Ｓｃ、^１０９Ｐｄ、^２３４Ｔｈ、^４０Ｋ、^１５７Ｇｄ、^５５Ｍｎ、^５２Ｔｒおよび^５６Ｆｅのような標識に対してコンジュゲート化されうる。

【0132】

本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメントは、例えば、その生物学的（例えば、血清）半減期を増加させるために、ペグ化（ＰＥＧｙｌａｔｅ）されることも可能である。抗体またはフラグメントをペグ化するためには、典型的には、１以上のＰＥＧ基が該抗体または抗体フラグメントに結合する条件下、該抗体またはフラグメントを、反応性形態のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えば、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体と反応させる。特定の実施形態においては、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似反応性水溶性重合体）とのアルキル化反応またはアシル化反応により行われる。本明細書中で用いる「ポリエチレングリコール」なる語は、他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの形態のいずれか、例えばモノ（Ｃ１－Ｃ１０）アルコキシ－またはアリールオキシ－ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール－マレイミドを含むと意図される。ある実施形態においては、ペグ化されるべき抗体またはフラグメントは非グリコシル化抗体またはフラグメントである。タンパク質をペグ化するための方法は当技術分野で公知であり、本発明で提供される抗体に適用されうる。例えば、ＥＰ０１５４３１６およびＥＰ０４０１３８４を参照されたい。

【0133】

本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメントは、蛍光または化学発光標識、例えば発蛍光団、例えば希土類キレート、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、イソチオシアナート、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ－フタルアルデヒド、フルオレスカミン、^１５２Ｅｕ、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェリン、ルミナール標識、イソルミナール標識、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジミウム塩標識、シュウ酸エステル標識、エクオリン標識、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、ビオチン／アビジン、スピン標識および安定フリーラジカルに対してコンジュゲート化されることも可能である。

【0134】

該抗体およびその抗原結合性フラグメントを種々の部分にコンジュゲート化するための当技術分野で公知のいずれかの方法が利用可能であり、該方法は、Ｈｕｎｔｅｒら（１９６２）Ｎａｔｕｒｅ １４４：９４５；Ｄａｖｉｄら（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １３：１０１４；Ｐａｉｎら（１９８１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．４０：２１９；およびＮｙｇｒｅｎ，Ｊ．（１９８２）Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．ａｎｄ Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３０：４０７に記載されている方法を包含する。抗体およびフラグメントをコンジュゲート化するための方法は常套手段であり、当技術分野において公知である。

【0135】

抗体の治療用途
更に、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントでの治療を要する対象（ヒト対象を含む）の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、そのような対象は癌または感染症に罹患している。

【0136】

「対象」は哺乳動物、例えばヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、マウス、ラット、サル［例えば、カニクイザル、例えば、マカカ・ファシクラリス（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）］またはウサギである。ある実施形態においては、対象はヒト対象である。

【0137】

「組合される」なる語は、本発明で提供される方法において投与される成分が、同時運搬のために単一組成物へと製剤化されることが可能であり、あるいは２以上の組成物（例えば、キット）に別々に製剤化されることが可能であることを示す。各成分は、その他の成分が投与される時点とは異なる時点で対象に投与されうる。ある実施形態においては、各投与は、ある時間にわたって、幾つかの間隔をあけて非同時（例えば、別々または連続的）に行われうる。更に、そのような別々の成分は、同じ経路または異なる経路によって対象に投与されうる。

【0138】

更に、本明細書に開示されている単離された抗体またはその抗原結合性フラグメントでの治療を要する対象（ヒト対象を含む）の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、そのような対象は感染または感染症に罹患している。幾つかの実施形態においては、本発明は癌の治療における使用のための抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。他の実施形態においては、本発明は感染または感染症の治療における使用のための抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。幾つかの実施形態においては、本発明は、癌の治療用の医薬の製造のための、抗体または抗原結合性フラグメントの使用を提供する。他の実施形態においては、本発明は、感染または感染症の治療用の医薬の製造のための、抗体または抗原結合性フラグメントの使用を提供する。１つの実施形態においては、本発明は、本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、本発明は、本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントをコードする核酸を含む発現ベクターの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法を提供する。ある実施形態においては、本発明で提供される方法は更に、別の治療用物質または治療手技を含み、またはそれと組合せて使用される。

【0139】

１つの実施形態においては、前記の別の治療用物質は、（ｉ）抗ＰＡＲＰインヒビター、（ｉｉ）抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｉｉ）抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｖ）抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖ）抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉ）抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉ）抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉｉ）抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｘ）抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘ）抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉ）抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉ）抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉｉ）抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｖ）抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖ）抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉ）抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉ）抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉｉ）抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｘ）抗４－１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘ）抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉ）抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉ）抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉｉ）抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｖ）抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｖ）ＳＴＩＮＧアゴニスト、および（ｘｘｖｉ）ＣＸＣＲ２アンタゴニストからなる群から選択される。

【0140】

１つの実施形態においては、該物質は抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗４－１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該物質はＳＴＩＮＧアゴニストである。１つの実施形態においては、該物質はＣＸＣＲ２アンタゴニストである。１つの実施形態においては、該物質はＰＡＲＰインヒビターである。

【0141】

もう１つの実施形態においては、対象は癌に罹患している。１つの実施形態においては、癌は骨肉腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、腎臓癌、白血病、腎移行細胞癌、膀胱癌、ウィルムス癌、卵巣癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、骨癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、胃癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、滑膜肉腫、頭頸部癌、扁平上皮癌、多発性骨髄腫、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、肝芽腫、肝細胞癌、黒色腫、腎臓のラブドイド腫瘍、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、脳腫瘍、神経膠芽腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍、髄芽腫、星細胞腫、退形成性星細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫、脈絡叢乳頭腫、真性多血症、血小板血症、特発性筋線維症、軟部組織肉腫、甲状腺癌、子宮内膜癌、カルチノイド癌または肝臓癌、乳癌または胃癌である。１つの実施形態においては、癌は、例えば前記の種々のものの、転移癌である。

【0142】

本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメント、組成物および方法により治療されうる癌には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫および奇形腫；肺：気管支原性癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨腫過誤腫、中皮腫；胃腸：食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（腺管腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、ＶＩＰ産生腫瘍）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、尿細管腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫） 結腸直腸；尿生殖路：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽腫］、リンパ腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、精巣（腺癌、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、脂肪腫）；肝臓：肝癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫；骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網細胞肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫瘍脊索腫、骨軟骨腫（骨軟骨性外骨腫）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫および巨細胞腫瘍；神経系：頭蓋（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣細胞腫、胚細胞腫［松果腫］、多形神経膠芽腫、乏突起膠腫、シュワン細胞腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）；婦人科：子宮（子宮内膜癌）、子宮頸部（子宮頸癌、前腫瘍子宮頸部異形成）、卵巣（卵巣癌［漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、未分類癌腫］、顆粒膜嚢細胞腫瘍、セルトリライディッヒ細胞腫、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰部（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫）、卵管（癌）、乳房；血液学：血液（骨髄性白血病［急性および慢性］、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫［悪性リンパ腫］；皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、奇形腫異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬；ならびに副腎：神経芽腫。したがって、本明細書に記載されている「癌細胞」なる語は、前記状態のいずれかに罹患した細胞を含む。

【0143】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメント、組成物および方法により治療されうる癌には、肺癌、膵臓癌、結腸癌、結腸直腸癌、骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、甲状腺癌、骨髄異形成症候群、膀胱癌、表皮癌、黒色腫、乳癌、前立腺癌、頭頸部癌、卵巣癌、脳癌（脳腫瘍）、間葉系癌、肉腫、奇形癌、神経芽細胞腫、腎癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫および未分化甲状腺癌が含まれるが、これらに限定されるものではない。

【0144】

１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用する、対象の治療方法を提供し、ここで、対象はウイルス感染に罹患している。１つの実施形態においては、ウイルス感染は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、肝炎ウイルス（Ａ、ＢまたはＣ）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ－１、ＨＡＶ－６、ＨＳＶ－ＩＩおよびＣＭＶ、エプスタインバーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスまたはアルボウイルス性脳炎ウイルスからなる群から選択されるウイルスによる感染である。

【0145】

１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用する、対象の治療方法を提供し、ここで、対象は細菌感染に罹患している。１つの実施形態においては、細菌感染は、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、リケッチア細菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌および淋菌、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、コリネバクテリウム・ジフテリエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、桿菌、ビブリオ・コレレ（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、クロストリジウム・テタン（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎ）、クロストリジウム・ボツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、バシラス・アンスリシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒｉｃｉｓ）、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）、マイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・レプロマトシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ）およびボリエラ（Ｂｏｒｒｉｅｌｌａ）からなる群から選択される細菌による感染である。

【0146】

１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用する、対象の治療方法を提供し、ここで、対象は真菌感染に罹患している。１つの実施形態においては、真菌感染は、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）［アルビカンス（ａｌｂｉｃａｎｓ）、クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）、グラブラタ（ｇｌａｂｒａｔａ）、トロピカリス（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など］、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）［フミガタス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など］、ムコラーレス（Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）属［ムコール（ｍｕｃｏｒ）、アブシジア（ａｂｓｉｄｉａ）、リゾプス（ｒｈｉｚｏｐｕｓ）］、スポロスリクス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｋｉｉ）、ブラストマイセス・デルマチチディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、パラコクシジオイデス・ブラシリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）およびヒストプラスマ・カプスラツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）からなる群から選択される真菌による感染である。

【0147】

１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用する、対象の治療方法を提供し、ここで、対象は寄生虫感染に罹患している。１つの実施形態においては、寄生虫感染は、エンタモエバ・ヒストリティカ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、バランチジウム・コリ（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ ｃｏｌｉ）、ネグレリア・フォウレリ（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ ｆｏｗｌｅｒｉ）、アカンタモエバ（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ）、ジアルジア・ランビア（Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｉａ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）、プラスモジウム・ビバックス（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ）、バベシア・ミクロッティ（Ｂａｂｅｓｉａ ｍｉｃｒｏｔｉ）、トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ）、トリパノソーマ・クルジ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）、リーシュマニア・ドノバニ（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｄｏｎｏｖａｎｉ）、トキソプラスマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）およびニッポストロンジルス・ブラシリエンシス（Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）からなる群から選択される寄生虫による感染である。

【0148】

特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントは、例えば本明細書に記載されている癌のようないずれかの疾患を予防または治療するために、そのような治療または予防を要する対象において、単独で、または他の別の治療用物質および／または治療手技と組合せて使用されうる。別の治療用物質と組合されたそのような抗体およびフラグメントを含む組成物（例えば、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物）も想定される。

【0149】

したがって、本発明は、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法を提供する。ある実施形態においては、投与は別の治療用物質または治療手技と組合せて使用される。

【0150】

また、本発明は、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染または感染症の治療方法を提供する。ある実施形態においては、投与は別の治療用物質または治療手技と組合せて使用される。

【0151】

もう１つの実施形態においては、本発明は、別の治療用物質と組合された、癌の治療または感染もしくは感染症の治療における使用のための、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは癌の治療における使用のためのものである。１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、感染の治療における使用のためのものである。１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは感染症の治療における使用のためのものである。ある実施形態においては、治療は別の治療用物質を含む。

【0152】

もう１つの実施形態においては、別の治療用物質と組合された、癌の治療または感染もしくは感染症の治療のための医薬の製造のための、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントの使用を提供する。もう１つの実施形態においては、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントと癌の治療または感染もしくは感染症の治療のための別の治療用物質との組合せを提供する。１つの実施形態においては、癌の治療のための医薬の製造のための、抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。１つの実施形態においては、感染の治療のための医薬の製造のための、抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。１つの実施形態においては、感染症の治療のための医薬の製造のための、抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。ある実施形態においては、医薬は別の治療用物質と共に処方（製剤化）される。

【0153】

他の実施形態においては、別の治療用物質または治療手技と所望により組合されていてもよい、本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたは本明細書に開示されている発現ベクターもしくは宿主細胞の有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法または感染もしくは感染症の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法を提供する。もう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染の治療方法を提供する。更にもう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染症の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法を提供する。もう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染の治療方法を提供する。更にもう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染症の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞の有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法を提供する。もう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞の有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染の治療方法を提供する。更にもう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞の有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染症の治療方法を提供する。ある実施形態においては、該方法は追加的な治療用物質の投与を更に含む。他の実施形態においては、該方法は追加的な治療手技を更に含む。

【0154】

特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントは、単独で、または腫瘍ワクチンと組合せて使用されうる。腫瘍ワクチンの例には以下のものが挙げられるが、それらに限定されるものではない：ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染により引き起こされる癌に対するワクチン、例えばＧａｒｄａｓｉｌ（登録商標）、Ｇａｒｄａｓｉｌ（登録商標）およびＣｅｒｖａｒｉｘ（登録商標）；Ｂ型肝炎ウイルスにより引き起こされる肝癌を予防するワクチン、例えばＥｎｇｅｒｉｘ－Ｂ（登録商標）およびＲｅｃｏｍｂｉｖａｘＨＢ（登録商標）；免疫応答を誘発する腫瘍溶解性ウイルス療法、例えばＩｍｌｙｇｉｃ（登録商標）；ＤＮＡワクチン、例えばＳｙｎｃｈｏｔｒｏｐｅ ＭＡ２ＭプラスミドＤＮＡワクチンおよびＺＹＣ１０１；マンマグロビン－ａ ＤＮＡワクチン（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１４ ２０（２３）：５９６４－７５を参照されたい）；ベクターに基づくワクチン、例えばＰＳＡ－ＴＲＩＣＯＭ（プロストバック（ｐｒｏｓｔｖａｃ））、ＰＡＮＶＡＣ－ＶＦ、リステリア・モノシトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）に基づくＰＳＡワクチン（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ，２０１４，２（５）１３７－１４８を参照されたい）、リステリア－メソテリン（Ｌｉｓｔｅｒｉａ－ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）アデノ（Ａｄｅｎｏ）－ＣＥＡ；同種ワクチン、例えばＧＶＡＸ、ＢＬＰ－２５（抗アンカラムチン１）、ベラゲンプマツセル（Ｂｅｌａｇｅｎｐｕｍａｔｕｃｅｌ）－Ｌ、ＴＧ４０１０、ＣＩＭＡｖａｘ上皮増殖因子ワクチン、ＮＹ－ＥＳＯ、ＧＭ．ＣＤ４０Ｌ－ＣＣＬ２１；自己ワクチン、例えばアデノ（Ａｄｅｎｏ）－ＣＤ４０Ｌ、ＢＣＧ、ＩＮＧＮ－２２５、樹状細胞ワクチン、例えばＰｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標）（シプロイセル（Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ）－Ｔ）、ｒＦ－ＣＥＡ－ＭＵＣ１－ＴＲＩＣＯＭ（パンバック（ｐａｎｖａｃ）－ＤＣ）；抗原ワクチン、例えばＭＵＣ－１（スチムバックス（ｓｔｉｍｕｖａｘ））、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＰ－１００、ＭＡＧＥ－Ａ３（黒色腫抗原コード遺伝子Ａ３）、ＩＮＧＮ－２２５（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １５３（２０１５）１－９を参照されたい）。

【0155】

特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントは、単独で、または化学療法剤と組合せて使用されうる。

【0156】

特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントは、単独で、または放射線療法と組合せて使用されうる。

【0157】

特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントは、単独で、または標的化療法と組合せて使用されうる。標的化療法の例には以下のものが含まれる：ホルモン療法、シグナル伝達インヒビター（例えば、ＥＧＦＲインヒビター、例えば、セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））およびエルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）））；ＨＥＲ２インヒビター（例えば、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））およびペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）（Ｐｅｒｊｅｔａ（登録商標）））；ＢＣＲ－ＡＢＬインヒビター（例えば、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））およびダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標）））；ＡＬＫインヒビター（例えば、クリゾチニブ（ｃｒｉｚｏｔｉｎｉｂ）（Ｘａｌｋｏｒｉ（登録商標））およびセリチニブ（ｃｅｒｉｔｉｎｉｂ）（Ｚｙｋａｄｉａ（登録商標）））；ＢＲＡＦインヒビター（例えば、ベムラフェニブ（ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ）（Ｚｅｌｂｏｒａｆ（登録商標））およびダブラフェニブ（ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ）（Ｔａｆｉｎｌａｒ（登録商標）））、遺伝子発現モジュレーター、アポトーシス誘導物質（例えば、ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））およびカルフィルゾミブ（ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ）（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ（登録商標）））、血管新生インヒビター（例えば、ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））およびラムシルマブ（ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）（Ｃｙｒａｍｚａ（登録商標））、毒素に結合したモノクローナル抗体（例えば、ブレンツキシマブ・ベドチン（ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標））およびアド－トラスツズマブ・エムタンシン（ａｄｏ－ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）（Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）））。

【0158】

特定の実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗癌治療用物質と組合せて使用されうる。他の実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは免疫調節薬と組合せて使用されうる。幾つかの実施形態においては、免疫調節薬は免疫調節受容体インヒビターである。ある実施形態においては、免疫調節薬は、受容体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントと組合せて使用されうる。

【0159】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは以下のものの１以上と組合せて使用される：抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＣＳ１抗体（例えば、エロツズマブ（ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ））、抗ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３抗体（例えば、リリルマブ（ｌｉｒｉｌｕｍａｂ））、抗ＣＤ１３７抗体（例えば、ウレルマブ（ｕｒｅｌｕｍａｂ））、抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、ＴＲＸ５１８）、抗ＰＤ１抗体［例えば、ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）（ＣＴ－０１１）］、抗ＰＤ－Ｌ１抗体［例えば、ＢＭＳ－９３６５５９、ドゥルバルマブ（Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、ＭＳＢ００１０７１８ＣまたはＭＰＤＬ３２８０Ａ］、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＩＬＴ１抗体、抗ＩＬＴ２抗体、抗ＩＬＴ３抗体、抗ＩＬＴ４抗体、抗ＩＬＴ５抗体、抗ＩＬＴ６抗体、抗ＩＬＴ７抗体、抗ＩＬＴ８抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＩＣＯＳ、抗ＳＩＲＰα、抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ２／３抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ１抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ３抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫＧ２Ｃ抗体、抗ＮＫＧ２Ｅ抗体、抗４－１ＢＢ抗体（例えば、ＰＦ－０５０８２５６６）、抗ＴＳＬＰ抗体、抗ＩＬ－１０抗体、ＩＬ－１０またはペグ化（ＰＥＧｙｌａｔｅｄ）ＩＬ－１０、あるいはそのような標的の任意の小さな有機分子インヒビター。

【0160】

１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＰＤＬ１抗体［例えば、ＢＭＳ－９３６５５９、ドゥルバルマブ（Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、ＭＳＢ００１０７１８ＣまたはＭＰＤＬ３２８０Ａ］と組合せて使用される。

【0161】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＣＴＬＡ４抗体と組合せて使用される。

【0162】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＣＳ１抗体と組合せて使用される。

【0163】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３抗体と組合せて使用される。

【0164】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＣＤ１３７（例えば、ウレルマブ（ｕｒｅｌｕｍａｂ））抗体と組合せて使用される。

【0165】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＧＩＴＲ（例えば、ＴＲＸ５１８）抗体と組合せて使用される。

【0166】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＰＤ－Ｌ２抗体と組合せて使用される。

【0167】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＩＴＬ１抗体と組合せて使用される。

【0168】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＩＴＬ２抗体と組合せて使用される。

【0169】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＩＴＬ３抗体と組合せて使用される。

【0170】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＩＴＬ４抗体と組合せて使用される。

【0171】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＩＴＬ５抗体と組合せて使用される。

【0172】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＩＴＬ６抗体と組合せて使用される。

【0173】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＩＴＬ７抗体と組合せて使用される。

【0174】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＩＴＬ８抗体と組合せて使用される。

【0175】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＣＤ４０抗体と組合せて使用される。

【0176】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＯＸ４０抗体と組合せて使用される。

【0177】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体と組合せて使用される。

【0178】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＫＩＲ２ＤＬ２／３抗体と組合せて使用される。

【0179】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体と組合せて使用される。

【0180】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ抗体と組合せて使用される。

【0181】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ抗体と組合せて使用される。

【0182】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＫＩＲ３ＤＬ１抗体と組合せて使用される。

【0183】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と組合せて使用される。

【0184】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＫＩＲ３ＤＬ３抗体と組合せて使用される。

【0185】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＮＫＧ２Ａ抗体と組合せて使用される。

【0186】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＮＫＧ２Ｃ抗体と組合せて使用される。

【0187】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＩＣＯＳ抗体と組合せて使用される。

【0188】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＳＩＲＰα抗体と組合せて使用される。

【0189】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗４－１ＢＢ抗体と組合せて使用される。

【0190】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＩＬ－１０抗体と組合せて使用される。

【0191】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗ＴＳＬＰ抗体と組合せて使用される。

【0192】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントはＩＬ－１０またはペグ化ＩＬ－１０と組合せて使用される。

【0193】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは以下のものの１以上と組合せて使用される：インヒビター（例えば、小さな有機分子または抗体もしくはその抗原結合性フラグメント）、例えばＭＴＯＲ（ラパマイシンの哺乳類標的）インヒビター、細胞毒性物質、白金物質、ＥＧＦＲインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、微小管安定化剤、タキサン、ＣＤ２０インヒビター、ＣＤ５２インヒビター、ＣＤ３０インヒビター、ＲＡＮＫ（核因子カッパＢの受容体アクチベーター）インヒビター、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、ＲＡＮＫＬ（核因子カッパＢリガンドの受容体アクチベーター）インヒビター、ＥＲＫインヒビター、ＭＡＰキナーゼインヒビター、ＡＫＴインヒビター、ＭＥＫインヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、ＰＩ３Ｋインヒビター、ＨＥＲ１インヒビター、ＨＥＲ２インヒビター、ＨＥＲ３インヒビター、ＨＥＲ４インヒビター、Ｂｃｌ２インヒビター、ＣＤ２２インヒビター、ＣＤ７９ｂインヒビター、ＥｒｂＢ２インヒビターまたはファルネシルタンパク質トランスフェラーゼインヒビター。

【0194】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは以下のものの任意の１以上と組合せて使用される：１３－シス－レチノイン酸、３－［５－（メチルスルホニルピペラジンメチル）－インドリル］－キノロン、４－ヒドロキシタモキシフェン、５－デオキシウリジン、５’－デオキシ－５－フルオロウリジン、５－フルオロウラシル、６－メルカプトプリン、７－ヒドロキシスタウロスポリン、Ａ－４４３６５４、アビラテロンアセタート（ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅａｃｅｔａｔｅ）、アブラキサン（ａｂｒａｘａｎｅ）、ＡＢＴ－５７８、アコルビフェン（ａｃｏｌｂｉｆｅｎｅ）、ＡＤＳ－１００３８０、ＡＬＴ－１１０、アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、アミホスチン（ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ）、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、アムルビシン（ａｍｒｕｂｉｃｉｎ）、アムサクリン（Ａｍｓａｃｒｉｎｅ）、アナグレリド（ａｎａｇｒｅｌｉｄｅ）、アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、アンジオスタチン（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、ＡＰ－２３５７３、ＡＲＱ－１９７、アルゾキシフェン（ａｒｚｏｘｉｆｅｎｅ）、ＡＳ－２５２４２４、ＡＳ－６０５２４０、アスパラギナーゼ、ＡＴ－９２６３、アトラセンタン（ａｔｒａｓｅｎｔａｎ）、アキシチニブ（ａｘｉｔｉｎｉｂ）、ＡＺＤ１１１５、カルメットゲラン桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）（ＢＣＧ）ワクチン、バタブリン（ｂａｔａｂｕｌｉｎ）、ＢＣ－２１０、ベソデュトクス（ｂｅｓｏｄｕｔｏｘ）、ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、Ｂｉｏ１１１、ＢＩＯ１４０、ブレオマイシン、ＢＭＳ－２１４６６２、ＢＭＳ－２４７５５０、ＢＭＳ－２７５２９１、ＢＭＳ－３１０７０５、ボルテジミブ（ｂｏｒｔｅｚｉｍｉｂ）、ブセレリン（ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ）、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、カルシトリオール（ｃａｌｃｉｔｒｉｏｌ）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、カネルチニブ（ｃａｎｅｒｔｉｎｉｂ）、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、ＣＣ８４９０、セジラニブ（Ｃｅｄｉｒａｎｉｂ）、ＣＧ－１５２１、ＣＧ－７８１、クラミドシン（ｃｈｌａｍｙｄｏｃｉｎ）、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、クロロトキシン（ｃｈｌｏｒｏｔｏｘｉｎ）、シレンジチド（ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅ）、シミチジン（ｃｉｍｉｔｉｄｉｎｅ）、シスプラチン、クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、クロドロナート（ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ）、ＣＯＬ－３、ＣＰ－７２４７１４、シクロホスファミド、シプロテロン（ｃｙｐｒｏｔｅｒｏｎｅ）、シプロテロンアセタート、シタラビン、シトシンアラビノシド、ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ダシノスタット（ｄａｃｉｎｏｓｔａｔ）、ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ダロツズマブ（ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、ダヌセルチブ（ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ）、ダサタニブ（ｄａｓａｔａｎｉｂ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、デカタニブ（ｄｅｃａｔａｎｉｂ）、デグエリン（ｄｅｇｕｅｌｉｎ）、デニロイキン（ｄｅｎｉｌｅｕｋｉｎ）、デオキシコホルマイシン（ｄｅｏｘｙｃｏｆｏｒｍｙｃｉｎ）、デプシペプチド（ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅ）、ジアリールプロピオニトリル、ジエチルスチルベストロール（ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ）、ジフチトックス（ｄｉｆｔｉｔｏｘ）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、ドビチニブ（ｄｏｖｉｔｉｎｉｂ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、エドテカリン（ｅｄｏｔｅｃａｒｉｎ）、イットリウム－９０標識エドトレオチド（ｅｄｏｔｒｅｏｔｉｄｅ）、エドトレオチド、ＥＫＢ－５６９、ＥＭＤ１２１９７４、エンドスタチン（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、エンザルタミド（ｅｎｚａｌｕｔａｍｉｄｅ）、エンザスタウリン（ｅｎｚａｓｔａｕｒｉｎ）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、エピチロン（ｅｐｉｔｈｉｌｏｎｅ）Ｂ、ＥＲＡ－９２３、エルビツクス（ＥＲＢＩＴＵＸ）、エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、エストラジオール（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、フィクラツズマブ（ｆｉｃｌａｔｕｚｕｍａｂ）、フィナステリド（ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ）、フラボピリドール（ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ）、フロクスウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、フルドロコルチゾン（ｆｌｕｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ）、フルオキシメステロン（ｆｌｕｏｘｙｍｅｓｔｅｒｏｎｅ）、フルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ＦＯＬＦＯＸレジメン、フルベストラント（Ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ）、ガレテロン（ｇａｌｅｔｅｒｏｎｅ）、ゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、ギマテカン（ｇｉｍａｔｅｃａｎ）、ゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）、酢酸ゴセレリン、ゴシポール（ｇｏｓｓｙｐｏｌ）、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＳＫ６９０６９３、ＨＭＲ－３３３９、ヒドロキシプロゲステロンカプロアート、ヒドロキシウレア、ＩＣ８７１１４、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、イドキシフェン（ｉｄｏｘｙｆｅｎｅ）、イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ＩＭ８６２、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）、ＩＭＣ－１Ｃ１１、ＩＮＣＢ２４３６０、ＩＮＯ１００１、インターフェロン（ＩＦＮ）、インターロイキン１２、イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、ＪＮＪ－１６２４１１９９、ケトコナゾール、ＫＲＸ－０４０２、ラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、ラソホキシフェン（ｌａｓｏｆｏｘｉｆｅｎｅ）、レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）、ロイプロリド（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）、酢酸ロイプロリド、レバミゾール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）、リポソーム封入パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ロナファルニブ（ｌｏｎａｆａｒｎｉｂ）、ルカントン（ｌｕｃａｎｔｈｏｎｅ）、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６４６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９４００２、ＬＹ３１７６１５、マリマスタット（ｍａｒｉｍａｓｔａｔ）、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メドロキシプロゲステロンアセタート（ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅａｃｅｔａｔｅ）、メゲストロールアセタート（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌａｃｅｔａｔｅ）、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、メルカプトプリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、メスナ（ｍｅｓｎａ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、ミトラマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）、ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、トザセルチブ（ｔｏｚａｓｅｒｔｉｂ）、ＭＬＮ８０５４、ネオバスタット（ｎｅｏｖａｓｔａｔ）、ネラチニブ（ｎｅｒａｔｉｎｉｂ）、ニューラジアブ（ｎｅｕｒａｄｉａｂ）、ニロチニブ（ｎｉｌｏｔｉｎｉｂ）、ニルチミド（ｎｉｌｕｔｉｍｉｄｅ）、ノラトレキセド（ｎｏｌａｔｒｅｘｅｄ）、ＮＶＰ－ＢＥＺ２３５、オブリメルセン（ｏｂｌｉｍｅｒｓｅｎ）、オクトレオチド（ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ）、オファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、オラパリブ（ｏｌａｐａｒｉｂ）、オレゴボマブ（ｏｒｅｇｏｖｏｍａｂ）、オルテロネル（ｏｒｔｅｒｏｎｅｌ）、オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、パルボシクリブ（ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ）、パミドロナート（ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ）、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、パゾパニブ（ｐａｚｏｐａｎｉｂ）、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ１８４３５２、ＰＥＧ－インターフェロン、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）、ペリホシン（ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ）、フェニルアラニンマスタード（ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅｍｕｓｔａｒｄ）、ＰＩ－１０３、ピクチリシブ（ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ）、ＰＩＫ－７５、ピペンドキシフェン（ｐｉｐｅｎｄｏｘｉｆｅｎｅ）、ＰＫＩ－１６６、プリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ）、ポルフィマー（ｐｏｒｆｉｍｅｒ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）、プロゲスチン（ｐｒｏｇｅｓｔｉｎ）、ＰＸ－８６６、Ｒ－７６３、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ラルチトレキセド（ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅｄ）、ラゾキシン（ｒａｚｏｘｉｎ）、リダホロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、ロミデプシン（ｒｏｍｉｄｅｐｓｉｎ）、ＲＴＡ７４４、ルビテカン（ｒｕｂｉｔｅｃａｎ）、スクリプタイド（ｓｃｒｉｐｔａｉｄ）、Ｓｄｘ１０２、セリシクリブ（ｓｅｌｉｃｉｃｌｉｂ）、セルメチニブ（ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）、セマキサニブ（ｓｅｍａｘａｎｉｂ）、ＳＦ１１２６、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ＳＮ３６０９３、ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）、スピロノラクトン（ｓｐｉｒｏｎｏｌａｃｔｏｎｅ）、スクアラミン（ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ）、ＳＲ１３６６８、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、ＳＵ６６６８、スベロイルアナリド（ｓｕｂｅｒｏｙｌａｎａｌｉｄｅ）ヒドロキサム酸、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）、合成エストロゲン、タランパネル（ｔａｌａｍｐａｎｅｌ）、タリモゲン ラヘルパレプベック（ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ）、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、テスミリフェン（ｔｅｓｍｉｌｉｆｅｎｅ）、テストステロン、テトランドリン（ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ）、ＴＧＸ－２２１、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、チシリムマブ（ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ）、チピファルニブ（ｔｉｐｉｆａｒｎｉｂ）、チボザニブ（ｔｉｖｏｚａｎｉｂ）、ＴＫＩ－２５８、ＴＬＫ２８６、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、クエン酸トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）、トラベクテジン（ｔｒａｂｅｃｔｅｄｉｎ）、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、トレチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）、トリコスタチン（ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ）Ａ、トリシリビンホスファート（ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ）一水和物、トリプトレリン（ｔｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ）パモアート、ＴＳＥ－４２４、ウラシルマスタード、バルプロ酸、バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、バンデタニブ（ｖａｎｄｅｔａｎｉｂ）、バタラニブ（ｖａｔａｌａｎｉｂ）、ＶＥＧＦトラップ、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、ビタキシン（ｖｉｔａｘｉｎ）、ビテスパン（ｖｉｔｅｓｐａｎ）、ボリノスタット（ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）、ＶＸ－７４５、ウォートマンニン（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）、Ｘｒ３１１、ザノリムマブ（ｚａｎｏｌｉｍｕｍａｂ）、ＺＫ１８６６１９、ＺＫ－３０４７０９、ＺＭ３３６３７２、またはＺＳＴＫ４７４。

【0195】

本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントと組合せて使用される適切な抗癌物質（抗癌因子）の非限定的な例には、癌および腫瘍性疾患に対する細胞増殖抑制物質、細胞毒性物質、標的化治療用物質（小分子、生物製剤、ｓｉＲＮＡおよびマイクロＲＮＡ）が含まれる。１つの実施形態においては、該物質は代謝拮抗剤（例えば、メトクストレキサート、５－フルオロウラシル、ゲムシタビン、フルダラビン、カペシタビン）である。１つの実施形態においては、該物質はアルキル化剤、例えばテモゾロミドまたはシクロホスファミドである。１つの実施形態においては、該物質はＤＮＡ相互作用性またはＤＮＡ損傷性物質、例えばシスプラチン、オキサリプラチン、またはドキソルビシンである。１つの実施形態においては、該因子は電離放射線、例えば放射線療法である。１つの実施形態においては、該物質はトポイソメラーゼＩＩインヒビター、例えばエトポシドまたはドキソルビシンである。１つの実施形態においては、該物質はトポイソメラーゼＩインヒビター、例えばイリノテカンまたはトポテカンである。１つの実施形態においては、該物質はチューブリン相互作用物質、例えばパクリタキセル、ドセタキセル、アブラキサナーまたはエポチロンである。１つの実施形態においては、該物質はキネシン紡錘体タンパク質インヒビターである。１つの実施形態においては、該物質は紡錘体チェックポイントインヒビターである。１つの実施形態においては、該物質はポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）インヒビター、例えばオラパリブ、ニラパリブまたはベリパリブである。１つの実施形態においては、該物質はマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）インヒビターである。１つの実施形態においては、該物質はプロテアーゼインヒビター、例えばカテプシンＤまたはカテプシンＫインヒビターである。１つの実施形態においては、該物質はプロテオソームまたはユビキチン化インヒビター、例えばボルテゾミブである。１つの実施形態においては、該物質は、突然変異体ｐ５３の、その野生型ｐ５３活性を回復させるためのアクチベーターである。１つの実施形態においては、該物質はアデノウイルス－ｐ５３である。１つの実施形態においては、該物質はＢｃｌ－２インヒビター、例えばＡＢＴ－２６３である。１つの実施形態においては、該物質は熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）モジュレーター、例えばゲルダナマイシンおよび１７－ＡＡＧである。１つの実施形態においては、該物質はヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビター、例えばボリノスタット（ＳＡＨＡ）である。１つの実施形態においては、該物質は性ホルモン調節物質である。１つの実施形態においては、該物質は抗エストロゲン、例えばタモキシフェンまたはフルベストラントである。１つの実施形態においては、該物質は選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えばラロキシフェンである。１つの実施形態においては、該物質は抗アンドロゲン、例えばビカルタミドまたはフルタミドである。１つの実施形態においては、該物質はＬＨＲＨアゴニスト、例えばロイプロリドである。１つの実施形態においては、該物質は５α－レダクターゼインヒビター、例えばフィナステリドである。１つの実施形態においては、該物質はチトクロームＰ４５０ Ｃ１７リアーゼ（ＣＹＰ４５０ｃ１７；１７αＣとも称される）である。１つの実施形態においては、該物質はアロマターゼインヒビター、例えばレトロゾール、アナストロゾールまたはエキセメスタンである。１つの実施形態においては、該物質はＥＧＦＲキナーゼインヒビター、例えばゲフチニブ、エルロチニブまたはラプチニブである。１つの実施形態においては、該物質は二重ｅｒｂＢ１およびｅｒｂＢ２インヒビター、例えばラパチニブである。１つの実施形態においては、該物質は多標的化キナーゼ（セリン／スレオニンおよび／またはチロシンキナーゼ）インヒビターである。１つの実施形態においては、該物質はＡＢＬキナーゼインヒビター、例えばイマチニブおよびニロチニブまたはダサチニブである。１つの実施形態においては、該物質はＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＰＤＧＦＲ、ＫＤＲ、ＦＬＴ、ｃ－Ｋｉｔ、Ｔｉｅ２、Ｒａｆ、ＭＥＫまたはＥＲＫインヒビター、例えばスニチニブ、ソラフェニブ、バンデタニブ、パゾパニブ、ＰＬＸ－４０３２、アキシチニブ、ＰＴＫ７８７またはＧＳＫ－１１２０２１２である。１つの実施形態においては、該物質はポロ様キナーゼインヒビターである。１つの実施形態においては、該物質はオーロラキナーゼインヒビターである。１つの実施形態においては、該物質はＪＡＫインヒビターである。１つの実施形態においては、該物質はｃ－ＭＥＴキナーゼインヒビターである。１つの実施形態においては、該物質はＰＩ３ＫまたはｍＴＯＲインヒビター、例えばＧＤＣ－０９４１、ＢＥＺ－２３５、ＢＫＭ－１２０またはＡＺＤ－８０５５である。１つの実施形態においては、該物質はラパマイシンまたはラパマイシン類似体、例えばテムシロリムス、エベロリムス、またはデフォロリムスである。１つの実施形態においては、該物質はＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子）アゴニストである。１つの実施形態においては、該物質はＣＸＣＲ（ＣＸＣケモカイン受容体）インヒビター、ＣＸＣＲ２アンタゴニストである。

【0196】

他の抗癌物質（抗腫瘍物質としても公知である）には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：アラ（ａｒａ）－Ｃ、アドリアマイシン、サイトキサン、カルボプラチン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イフォスフミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、フロクスウリジン、シタラビン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、フルダラビンリン酸塩、ペントスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ナベルビン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、テニポシド、シタラビン、ペメトレキセド、イダルビシン、ミトラマイシン、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン－Ｃ、Ｌ－アスパラギナーゼ、テニポシド、エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、ドロモスタノロンプロピオナート、テストラクトン、メゲストロールアセタート、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、フルタミド メドロキシプロゲステロンアセタート、トレミフェン、ゴセレリン、カルボプラチン、ヒドロキシ尿素、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミゾール、ドロロキサフィン、ヘキサメチルメラミン、Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）、プロファイマー、チオテパ、アルトレタミン、ドキシル、オンタク、デポサイト、アラネスプ、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標）またはＫｅｐｉｖａｎｃｅ（登録商標）。１つの実施形態においては、該物質はファルネシルタンパク質トランスフェラーゼインヒビター、例えばＳＡＲＡＳＡＲ（商標）（４－［２－［４－［（１１Ｒ）－３，１０－ジブロモ－８－クロロ－６，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［５，６］シクロヘプタ［１，２－ｂ］ピリジン－１１－イル－］－１－ピペリジニル］－２－オキソエチル］－ピペリジンカルボキサミド、チピファルニブである。１つの実施形態においては、該物質はインターフェロン、例えばイントロン（Ｉｎｔｒｏｎ）Ａまたはペグ－イントロン（Ｐｅｇ－Ｉｎｔｒｏｎ）である。１つの実施形態においては、該物質は抗ｅｒｂＢ１抗体、例えばセツキシマブまたはパニツムマブである。１つの実施形態においては、該物質は抗ｅｒｂＢ２抗体、例えばトラスツズマブである。１つの実施形態においては、該物質はＣＤ５２抗体、例えばアレムツズマブである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＣＤ３３抗体、例えばゲムツズマブ オゾガマイシンである。１つの実施形態においては、該物質は抗ＶＥＧＦ抗体、例えばＡＶＡＳＴＩＮである。１つの実施形態においては、該物質はＴＲＩＡＬリガンド、例えばレキサツムマブ、マパツムマブまたはＡＭＧ－６５５である。１つの実施形態においては、該物質は抗ＣＴＬＡ－４抗体、例えばイピリムマブである。１つの実施形態においては、該物質はＣＴＡ１、ＣＥＡ、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ４４、ＣＤ４４Ｖ６、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、ＭＨＣＩＩ、ＨＧＦ、ＩＬ－６、ＭＵＣ１、ＰＳＭＡ、ＴＡＬ６、ＴＡＧ－７２、ＴＲＡＩＬＲ、ＶＥＧＦＲ、ＩＧＦ－２またはＦＧＦのいずれかに対する抗体である。１つの実施形態においては、該物質は抗ＩＧＦ－１Ｒ抗体、例えばダロツズマブ（ＭＫ－０６４６）またはロバツムマブ（ＳＣＨ７１７４５４）である。

【0197】

「エストロゲン受容体モジュレーター」は、メカニズムには無関係に、受容体へのエストロゲンの結合を阻害または抑制する化合物を意味する。エストロゲン受容体モジュレーターの例には、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ヨードキシフェン（ｉｄｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）、フルベストラント（ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ）、４－［７－（２，２－ジメチル－１－オキソプロポキシ－４－メチル－２－［４－［２－（１－ピペリジニル）エトキシ］フェニル］－２Ｈ－１－ベンゾピラン－３－イル］－フェニル－２，２－ジメチルプロパノアート、４，４’－ジヒドロキシベンゾフェノン－２，４－ジニトロフェニル－ヒドラゾンおよびＳＨ６４６が含まれるが、これらに限定されるものではない。

【0198】

「アンドロゲン受容体モジュレータ」は、メカニズムには無関係に、受容体へのアンドロゲンの結合を阻害または抑制する化合物を意味する。アンドロゲン受容体モジュレーターの例には、フィナステリド（ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ）および他の５α－レダクターゼインヒビター、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、フルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、リアロゾール（ｌｉａｒｏｚｏｌｅ）および酢酸アビラテロン（ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅ）が含まれる。

【0199】

「レチノイド受容体モジュレーター」は、メカニズムには無関係に、受容体へのレチノイドの結合を阻害または抑制する化合物を意味する。そのようなレチノイド受容体モジュレーターの例には、ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）、トレチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）、１３－シス－レチノイン酸、９－シス－レチノイン酸、α－ジフルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３－７５５３、トランス－Ｎ－（４’－ヒドロキシフェニル）レチナミドおよびＮ－４－カルボキシフェニルレチナミドが含まれる。

【0200】

「細胞毒性／細胞増殖抑制物質」なる語は、主に細胞の機能を直接的に阻害することにより細胞死を引き起こす若しくは細胞増殖を抑制する又は細胞有糸分裂を抑制もしくは阻害する化合物を意味し、例えばアルキル化物質、腫瘍壊死因子、インターカレーター、低酸素活性化可能化合物、微小管インヒビター／微小管安定化物質、有糸分裂キネシンのインヒビター、ヒストンデアセチラーゼインヒビター、有糸分裂進行に関与するキナーゼのインヒビター、増殖因子およびサイトカインシグナル伝達経路に関与するキナーゼのインヒビター、代謝拮抗物質、生体応答調節物質、ホルモン／抗ホルモン治療用物質、造血成長因子、モノクローナル抗体標的化治療用物質、トポイソメラーゼインヒビター、プロテアソームインヒビター、ユビキチンリガーゼインヒビターおよびオーロラキナーゼインヒビターを包含する。

【0201】

細胞毒性／細胞増殖抑制物質の例には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：白金配位化合物、セルテネフ（ｓｅｒｔｅｎｅｆ）、カケクチン（ｃａｃｈｅｃｔｉｎ）、イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、タソネルミン（ｔａｓｏｎｅｒｍｉｎ）、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ジブロモズルシトール（ｄｉｂｒｏｍｏｄｕｌｃｉｔｏｌ）、ラニムスチン（ｒａｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ホテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ネダプラチン（ｎｅｄａｐｌａｔｉｎ）、オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、ヘプタプラチン（ｈｅｐｔａｐｌａｔｉｎ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、トシル酸イムプロスルファン（ｉｍｐｒｏｓｕｌｆａｎ）、トロホスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、塩化ジブロスピジウム（ｄｉｂｒｏｓｐｉｄｉｕｍ）、プミテパ（ｐｕｍｉｔｅｐａ）、ロバプラチン（ｌｏｂａｐｌａｔｉｎ）、サトラプラチン（ｓａｔｒａｐｌａｔｉｎ）、プロフィロマイシン（ｐｒｏｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、イロフルベン（ｉｒｏｆｕｌｖｅｎ）、デキシホスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、シス－アミンジクロロ（２－メチル－ピリジン）白金、ベンジルグアニン、グルホスファミド（ｇｌｕｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ＧＰＸ１００、（トランス，トランス，トランス）－ビス－ミュー－（ヘキサン－１，６－ジアミン）－ミュー－［ジアミン－白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、ジアリジジニルスペルミン（ｄｉａｒｉｚｉｄｉｎｙｌｓｐｅｒｍｉｎｅ）、三酸化ヒ素、１－（１１－ドデシルアミノ－１０－ヒドロキシウンデシル）－３，７－ジメチルキサンチン、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）、ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）、ピナフィド（ｐｉｎａｆｉｄｅ）、バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、アムルビシン（ａｍｒｕｂｉｃｉｎ）、アンチネオプラストン（ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｏｎ）、３’－デアミノ－３’－モルホリノ－１３－デオキソ－１０－ヒドロキシカルミノマイシン、アンナマイシン（ａｎｎａｍｙｃｉｎ）、ガラルビシン（ｇａｌａｒｕｂｉｃｉｎ）、エリナフィド（ｅｌｉｎａｆｉｄｅ）、ＭＥＮ１０７５５、４－デメトキシ－３－デアミノ－３－アジリジニル－４－メチルスルホニル－ダウノルビシン（ＷＯ ００／５００３２を参照されたい）。

【0202】

低酸素活性化可能化合物の一例としては、チラパザミン（ｔｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ）が挙げられる。

【0203】

プロテアソームインヒビターの例には、ラクタシスチン（ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ）およびＭＬＮ－３４１（Ｖｅｌｃａｄｅ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。

【0204】

微小管インヒビター／微小管安定化物質の例には一般にタキサンが含まれる。具体的な化合物には以下のものが含まれる：パクリタクセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、硫酸ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、３’，４’－ジデヒドロ－４’－デオキシ－８’－ノルビンカロイコブラスチン（ｎｏｒｖｉｎｃａｌｅｕｋｏｂｌａｓｔｉｎｅ）、ドセタキソール（ｄｏｃｅｔａｘｏｌ）（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）、ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）、ミボブリン（ｍｉｖｏｂｕｌｉｎ）イセチオナート、オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、セマドチン（ｃｅｍａｄｏｔｉｎ）、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニン（ｖｉｎｆｌｕｎｉｎｅ）、クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）、２，３，４，５，６－ペンタフルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン（ａｎｈｙｄｒｏｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｌ－バリル－Ｌ－バリル－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｌ－プロリル－Ｌ－プロリン－ｔ－ブチルアミド（配列番号１２８として開示されている「Ｌ－バリル－Ｌ－バリル－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｌ－プロリル－Ｌ－プロリン」）、ＴＤＸ２５８、エポチロン（例えば、米国特許第６，２８４，７８１号および第６，２８８，２３７号を参照されたい）およびＢＭＳ１８８７９７。

【0205】

トポイソメラーゼインヒビターの幾つかの例としては、以下のものが挙げられる：トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、ヒカプタミン（ｈｙｃａｐｔａｍｉｎｅ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、ルビテカン（ｒｕｂｉｔｅｃａｎ）、６－エトキシプロピオニル－３’，４’－Ｏ－エキソ－ベンジリデン－シャールトルーシン（ｃｈａｒｔｒｅｕｓｉｎ）、９－メトキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－５－ニトロピラゾロ［３，４，５－ｋｌ］アクリジン－２－（６Ｈ）プロパンアミン、１－アミノ－９－エチル－５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：ｂ，７］－インドリジノール［１，２ｂ］キノリン－１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）ジオン，ルルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、７－［２－（Ｎ－イソプロピルアミノ）エチル］－（２０Ｓ）カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、ソブゾキサン（ｓｏｂｕｚｏｘａｎｅ）、２’－ジメチルアミノ－２’－デオキシ－エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、ＧＬ３３１、Ｎ－［２－（ジメチルアミノ）エチル］－９－ヒドロキシ－５，６－ジメチル－６Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］カルバゾール－１－カルボキサミド、アスラクリン（ａｓｕｌａｃｒｉｎｅ）、（５ａ，５ａＢ，８ａａ，９ｂ）－９－［２－［Ｎ－［２－（ジメチルアミノ）エチル］－Ｎ－メチルアミノ］エチル］－５－［４－ヒドロキシ－３，５－ジメトキシフェニル］－５，５ａ，６，８，８ａ，９－ヘキソヒドロフロ（３’，４’：６，７）ナフト（２，３－ｄ）－１，３－ジオキソール－６－オン、２，３－（メチレンジオキシ）－５－メチル－７－ヒドロキシ－８－メトキシベンゾ［ｃ］－フェナントリジニウム、６，９－ビス［（２－アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソグイノリン－５，１０－ジオン、５－（３－アミノプロピルアミノ）－７，１０－ジヒドロキシ－２－（２－ヒドロキシエチルアミノメチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，５，１－デ］アクリジン－６－オン、Ｎ－［１－［２（ジエチルアミノ）エチルアミノ］－７－メトキシ－９－オキソ－９Ｈ－チオキサンテン－４－イルメチル］ホルムアミド、Ｎ－（２－（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン－４－カルボキサミド、６－［［２－（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］－３－ヒドロキシ－７Ｈ－インデノ［２，１－ｃ］キノリン－７－オンおよびジメスナ（ｄｉｍｅｓｎａ）。

【0206】

有糸分裂キネシン、特にヒト有糸分裂キネシンＫＳＰのインヒビターの例は刊行物ＷＯ０３／０３９４６０、ＷＯ０３／０５００６４、ＷＯ０３／０５０１２２、ＷＯ０３／０４９５２７、ＷＯ０３／０４９６７９、ＷＯ０３／０４９６７８、ＷＯ０４／０３９７７４、ＷＯ０３／０７９９７３、ＷＯ０３／０９９２１１、ＷＯ０３／１０５８５５、ＷＯ０３／１０６４１７、ＷＯ０４／０３７１７１、ＷＯ０４／０５８１４８、ＷＯ０４／０５８７００、ＷＯ０４／１２６６９９、ＷＯ０５／０１８６３８、ＷＯ０５／０１９２０６、ＷＯ０５／０１９２０５、ＷＯ０５／０１８５４７、ＷＯ０５／０１７１９０、ＵＳ２００５／０１７６７７６に記載されている。１つの実施形態においては、有糸分裂キネシンのインヒビターには、ＫＳＰのインヒビター、ＭＫＬＰ１のインヒビター、ＣＥＮＰ－Ｅのインヒビター、ＭＣＡＫのインヒビターおよびＲａｂ６－ＫＩＦＬのインヒビターが含まれるが、これらに限定されるものではない。

【0207】

「ヒストンデアセチラーゼインヒビター」の例には、ＳＡＨＡ、ＴＳＡ、オキサムフラチン（ｏｘａｍｆｌａｔｉｎ）、ＰＸＤ１０１、ＭＧ９８およびスクリプタイド（ｓｃｒｉｐｔａｉｄ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。他のヒストンデアセチラーゼインヒビターに対する更なる言及は以下の文書：Ｍｉｌｌｅｒ，Ｔ．Ａ．ら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６（２４）：５０９７－５１１６（２００３）に見出されうる。

【0208】

「有糸分裂の進行に関与するキナーゼのインヒビター」には、オーロラキナーゼのインヒビター、Ｐｏｌｏ様キナーゼ（ＰＬＫ）のインヒビター（特にＰＬＫ－１のインヒビター）、ｂｕｂ－１のインヒビターおよびｂｕｂ－Ｒ１のインヒビターが含まれるが、これらに限定されるものではない。「オーロラキナーゼインヒビター」の一例はＶＸ－６８０である。

【0209】

「抗増殖性物質」には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：アンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡオリゴヌクレオチド、例えばＧ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１およびＩＮＸ３００１、ならびに抗代謝拮抗物質、例えばエノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、カルモフル（ｃａｒｍｏｆｕｒ）、テガフル（ｔｅｇａｆｕｒ）、ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ガロシタビン（ｇａｌｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、シタラビンオクホスファート（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ ｏｃｆｏｓｆａｔｅ）、ホステアビン（ｆｏｓｔｅａｂｉｎｅ）ナトリウム水和物、ラルチトレキセド（ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅｄ）、パルチトレキシド（ｐａｌｔｉｔｒｅｘｉｄ）、エミテフル（ｅｍｉｔｅｆｕｒ）、チアゾフリン（ｔｉａｚｏｆｕｒｉｎ）、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ノラトレキセド（ｎｏｌａｔｒｅｘｅｄ）、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、ネルザラビン（ｎｅｌｚａｒａｂｉｎｅ）、２’－デオキシ－２’－メチリデンシチジン、２’－フルオロメチレン－２’－デオキシシチジン、Ｎ－［５－（２，３－ジヒドロ－ベンゾフリル）スルホニル］－Ｎ’－（３，４－ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６－［４－デオキシ－４－［Ｎ２－［２（Ｅ），４（Ｅ）－テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］－Ｌ－グリセロ－Ｂ－Ｌ－マンノ－ヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン（ａｐｌｉｄｉｎｅ）、エクテイナスシジン（ｅｃｔｅｉｎａｓｃｉｄｉｎ）、トロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）、４－［２－アミノ－４－オキソ－４，６，７，８－テトラヒドロ－３Ｈ－ピリミジノ［５，４－ｂ］［１，４］チアジン－６－イル－（Ｓ）－エチル］－２，５－チエノイル－Ｌ－グルタミン酸、アミノプテリン（ａｍｉｎｏｐｔｅｒｉｎ）、５－フルオロウラシル、アラノシン（ａｌａｎｏｓｉｎｅ）、１１－アセチル－８－（カルバモイルオキシメチル）－４－ホルミル－６－メトキシ－１４－オキサ－１，１１－ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）－テトラデカ－２，４，６－トリエン－９－イル酢酸エステル、スワインソニン（ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ）、ロメトレキソール（ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ）、デクスラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）、メチオニナーゼ（ｍｅｔｈｉｏｎｉｎａｓｅ）、２’－シアノ－２’－デオキシ－Ｎ４－パルミトイル－１－Ｂ－Ｄ－アラビノフラノシルシトシン、３－アミノピリジン－２－カルボキサルデヒドチオセミカルバゾンおよびトラスツズマブ。

【0210】

モノクローナル抗体標的化治療用物質の例には、癌細胞特異的または標的細胞特異的モノクローナル抗体に細胞毒性物質または放射性同位体が結合している治療用物質が含まれる。具体例にはＢｅｘｘａｒが含まれる。

【0211】

「プレニル－タンパク質トランスフェラーゼインヒビター」は、ファルネシル－タンパク質トランスフェラーゼ（ＦＰＴアーゼ）、ゲラニルゲラニル－タンパク質トランスフェラーゼＩ型（ＧＧＰＴアーゼ－Ｉ）およびゲラニルゲラニル－タンパク質トランスフェラーゼＩＩ型（ＧＧＰＴアーゼ－ＩＩ；Ｒａｂ ＧＧＰＴアーゼとも称される）を含むプレニル－タンパク質トランスフェラーゼ酵素の任意の１つ又は任意の組合せを阻害する化合物を意味する。

【0212】

プレニル－タンパク質トランスフェラーゼインヒビターの例には、以下の刊行物および特許において見出されうるものが含まれる：ＷＯ ９６／３０３４３、ＷＯ ９７／１８８１３、ＷＯ ９７／２１７０１、ＷＯ ９７／２３４７８、ＷＯ ９７／３８６６５、ＷＯ ９８／２８９８０、ＷＯ ９８／２９１１９、ＷＯ ９５／３２９８７、米国特許第５，４２０，２４５号，米国特許第５，５２３，４３０号、米国特許第５，５３２，３５９号、米国特許第５，５１０，５１０号、米国特許第５，５８９，４８５号、米国特許第５，６０２，０９８号、欧州特許公開番号０ ６１８ ２２１、欧州特許公開番号０ ６７５ １１２、欧州特許公開番号０ ６０４ １８１、欧州特許公開番号０ ６９６ ５９３、ＷＯ ９４／１９３５７、ＷＯ ９５／０８５４２、ＷＯ ９５／１１９１７、ＷＯ ９５／１２６１２、ＷＯ ９５／１２５７２、ＷＯ ９５／１０５１４、米国特許第５，６６１，１５２号、ＷＯ ９５／１０５１５、ＷＯ ９５／１０５１６、ＷＯ ９５／２４６１２、ＷＯ ９５／３４５３５、ＷＯ ９５／２５０８６、ＷＯ ９６／０５５２９、ＷＯ ９６／０６１３８、ＷＯ ９６／０６１９３、ＷＯ ９６／１６４４３、ＷＯ ９６／２１７０１、ＷＯ ９６／２１４５６、ＷＯ ９６／２２２７８、ＷＯ ９６／２４６１１、ＷＯ ９６／２４６１２、ＷＯ ９６／０５１６８、ＷＯ ９６／０５１６９、ＷＯ ９６／００７３６、米国特許第５，５７１，７９２号、ＷＯ ９６／１７８６１、ＷＯ ９６／３３１５９、ＷＯ ９６／３４８５０、ＷＯ ９６／３４８５１、ＷＯ ９６／３００１７、ＷＯ ９６／３００１８、ＷＯ ９６／３０３６２、ＷＯ ９６／３０３６３、ＷＯ ９６／３１１１１、ＷＯ ９６／３１４７７、ＷＯ ９６／３１４７８、ＷＯ ９６／３１５０１、ＷＯ ９７／００２５２、ＷＯ ９７／０３０４７、ＷＯ ９７／０３０５０、ＷＯ ９７／０４７８５、ＷＯ ９７／０２９２０、ＷＯ ９７／１７０７０、ＷＯ ９７／２３４７８、ＷＯ ９７／２６２４６、ＷＯ ９７／３００５３、ＷＯ ９７／４４３５０、ＷＯ ９８／０２４３６および米国特許第５，５３２，３５９号。血管新生に対するプレニル－タンパク質トランスフェラーゼインヒビターの役割の一例に関しては、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ．ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．９，ｐｐ．１３９４－１４０１（１９９９）を参照されたい。

【0213】

「血管新生インヒビター」は、メカニズムには無関係に、新たな血管の形成を阻害する化合物を意味する。血管新生インヒビターの例には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：チロシンキナーゼインヒビター、例えば、チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ－１（ＶＥＧＦＲ１）およびＦｌｋ－１／ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）のインヒビター、上皮由来、線維芽細胞由来または血小板由来増殖因子のインヒビター、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）インヒビター、インテグリンブロッカー、インターフェロンα、インターロイキン－１２、ペントサンポリスルファート、シクロオキシゲナーゼインヒビター、例えば非ステロイド抗炎症物質（ＮＳＡＩＤ）、例えばアスピリンおよびイブプロフェン、ならびに選択的シクロオキシゲナーゼ２インヒビター、例えばセレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）およびロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）（ＰＮＡＳ，Ｖｏｌ．８９，ｐ．７３８４（１９９２）；ＪＮＣＩ，Ｖｏｌ．６９，ｐ．４７５（１９８２）；Ａｒｃｈ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ，Ｖｏｌ．１０８，ｐ．５７３（１９９０）；Ａｎａｔ．Ｒｅｃ，Ｖｏｌ．２３８，ｐ．６８（１９９４）；ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．３７２，ｐ．８３（１９９５）；Ｃｌｉｎ，Ｏｒｔｈｏｐ．Ｖｏｌ．３１３，ｐ．７６（１９９５）；Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，Ｖｏｌ．１６，ｐ．１０７（１９９６）；Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，Ｖｏｌ．７５，ｐ．１０５（１９９７）；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７，ｐ．１６２５（１９９７）；Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．９３，ｐ．７０５（１９９８）；Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．２，ｐ．７１５（１９９８）；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７４，ｐ．９１１６（１９９９））、ステロイド抗炎症物質（例えば、コルチコステロイド、ミネラルコルチコステロイド、デキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、メチルプレド（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄ）、ベタメタゾン（ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ））、カルボキシアミドトリアゾール、コムブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）Ａ－４、スクアラミン（ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ）、６－Ｏ－クロロアセチル－カルボニル）－フマギロール（ｆｕｍａｇｉｌｌｏｌ）、サリドマイド（ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、アンジオスタチン（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、トロポニン－１、アンジオテンシンＩＩアンタゴニスト（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚら，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１０５：１４１－１４５（１９８５）を参照されたい）、およびＶＥＧＦに対する抗体（Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１７，ｐｐ．９６３－９６８（Ｏｃｔｏｂｅｒ １９９９）；Ｋｉｍら，Ｎａｔｕｒｅ，３６２，８４１－８４４（１９９３）；ＷＯ００／４４７７７；およびＷＯ００／６１１８６を参照されたい）。

【0214】

血管新生インヒビターの他の例には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：エンドスタチン（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、ウクライン（ｕｋｒａｉｎ）、ランピルナーゼ（ｒａｎｐｉｒｎａｓｅ）、ＩＭ８６２、５－メトキシ－４－［２－メチル－３－（３－メチル－２－ブテニル）オキシラニル］－１－オキサスピロ［２，５］オクタ－６－イル（クロロアセチル）カルバマート、アセチルジナナリン（ａｃｅｔｙｌｄｉｎａｎａｌｉｎｅ）、５－アミノ－１－［［３，５－ジクロロ－４－（４－クロロベンゾイル）－フェニル］メチル］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－カルボキサミド、ＣＭ１０１、スクアラミン（ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ）、コムブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）、ＲＰＩ４６１０、ＮＸ３１８３８、硫酸化マンノペントースホスファート、７，７－（カルボニル－ビス［イミノ－Ｎ－メチル－４，２－ピロロカルボニルイミノ［Ｎ－メチル－４，２－ピロール］－カルボニルイミノ］－ビス－（１，３－ナフタレンジスルホナート）、および３－［（２，４－ジメチルピロール－５－イル）メチレン］－２－インドリノン（ＳＵ５４１６）。

【0215】

血管新生をモジュレーションまたは抑制し、本発明で提供される化合物と組合せて使用されることも可能である他の治療用物質には、凝固および線維素溶解系をモジュレーションまたは抑制する物質が含まれる（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｌａ．Ｍｅｄ．３８：６７９－６９２（２０００）における総説を参照されたい）。凝固および線維素溶解経路をモジュレーションまたは抑制するそのような物質の例には、ヘパリン（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８０：１０－２３（１９９８）を参照されたい）、低分子量ヘパリンおよびカルボキシペプチダーゼＵインヒビター（活性トロンビン活性化可能線維素溶解インヒビター（ＴＡＦＩａ）のインヒビターとしても公知である）（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓ．１０１：３２９－３５４（２００１）を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されるものではない。ＴＡＦＩａインヒビターは米国特許出願（Ｕ．Ｓ．Ｓｅｒ．）番号６０／３１０，９２７（２００１年８月８日付け出願）および６０／３４９，９２５（２００２年１月１８日付け出願）に記載されている。

【0216】

「受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を阻害する物質」は、ＲＴＫを阻害する、したがって、発癌および腫瘍進行に関与するメカニズムを阻害する化合物を意味する。そのような物質には、ｃ－Ｋｉｔ、Ｅｐｈ、ＰＤＧＦ、Ｆｌｔ３およびｃ－Ｍｅｔのインヒビターが含まれる。他の物質には、Ｂｕｍｅ－ＪｅｎｓｅｎおよびＨｕｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，４１１：３５５－３６５，２００１に記載されているＲＴＫのインヒビターが含まれる。

【0217】

「細胞増殖および生存シグナル伝達経路のインヒビター」は、細胞表面受容体の下流のシグナル伝達カスケードを阻害する化合物を意味する。そのような物質には以下のものが含まれる：セリン／トレオニンキナーゼのインヒビター（限定的なものではないが、例えばＷＯ ０２／０８３０６４、ＷＯ ０２／０８３１３９、ＷＯ ０２／０８３１４０、ＵＳ ２００４－０１１６４３２、ＷＯ ０２／０８３１３８、ＵＳ ２００４－０１０２３６０、ＷＯ ０３／０８６４０４、ＷＯ ０３／０８６２７９、ＷＯ ０３／０８６３９４、ＷＯ ０３／０８４４７３、ＷＯ ０３／０８６４０３、ＷＯ ２００４／０４１１６２、ＷＯ ２００４／０９６１３１、ＷＯ ２００４／０９６１２９、ＷＯ ２００４／０９６１３５、ＷＯ ２００４／０９６１３０、ＷＯ ２００５／１００３５６、ＷＯ ２００５／１００３４４、ＵＳ ２００５／０２９９４１、ＵＳ ２００５／４４２９４、ＵＳ ２００５／４３３６１、６０／７３４１８８、６０／６５２７３７、６０／６７０４６９に記載されているもののようなＡｋｔのインヒビターを含む）、Ｒａｆキナーゼのインヒビター（例えば、ＰＬＸ－４０３２）、ＭＥＫのインヒビター（例えば、Ａｒｒｙ－１６２、ＲＯ－４９８７６５５およびＧＳＫ－１１２０２１２）、ｍＴＯＲのインヒビター（例えば、ＡＺＤ－８０５５、ＢＥＺ－２３５およびエベロリムス）およびＰＩ３Ｋのインヒビター（例えば、ＧＤＣ－０９４１、ＢＫＭ－１２０）。

【0218】

前記で用いた「インテグリンブロッカー」は、αｖβ３インテグリンへの生理学的リガンドの結合を選択的に拮抗、阻害または相殺する化合物、αｖβ５インテグリンへの生理学的リガンドの結合を選択的に拮抗、阻害または相殺する化合物、αｖβ３インテグリンとαｖβ５インテグリンとの両方への生理学的リガンドの結合を拮抗、阻害または相殺する化合物、ならびに毛細血管内皮細胞上で発現される個々のインテグリンの活性を拮抗、阻害または相殺する化合物を意味する。この語は、αｖβ６、αｖβ８、α１β１、α２β１、α５β１、α６β１およびα６β４インテグリンのアンタゴニストをも意味する。この語はまた、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、α１β１、α２β１、α５β１、α６β１およびα６β４インテグリンの任意の組合せのアンタゴニストをも意味する。

【0219】

チロシンキナーゼインヒビターの幾つかの具体例には以下のものが含まれる：Ｎ－（トリフルオロメチルフェニル）－５－メチルイソオキサゾール－４－カルボキサミド、３－［（２，４－ジメチルピロール－５－イル）メチリデニル）インドリン－２－オン、１７－（アリルアミノ）－１７－デメトキシゲルダナマイシン（ｄｅｍｅｔｈｏｘｙｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）、４－（３－クロロ－４－フルオロフェニルアミノ）－７－メトキシ－６－［３－（４－モルホリニル）プロポキシル］キナゾリン、Ｎ－（３－エチニルフェニル）－６，７－ビス（２－メトキシエトキシ）－４－キナゾリンアミン、ＢＩＢＸ１３８２、２，３，９，１０，１１，１２－ヘキサヒドロ－１０－（ヒドロキシメチル）－１０－ヒドロキシ－９－メチル－９，１２－エポキシ－１Ｈ－ジインドロ［１，２，３－ｆｇ：３’，２’，１’－ｋｌ］ピロロ［３，４－ｉ］［１，６］ベンゾジアゾシン－１－オン、ＳＨ２６８、ゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、ＳＴＩ５７１、ＣＥＰ２５６３、４－（３－クロロフェニルアミノ）－５，６－ジメチル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジンメタンスルホナート、４－（３－ブロモ－４－ヒドロキシフェニル）アミノ－６，７－ジメトキシキナゾリン、４－（４’－ヒドロキシフェニル）アミノ－６，７－ジメトキシキナゾリン、ＳＵ６６６８、ＳＴＩ５７１Ａ、Ｎ－４－クロロフェニル－４－（４－ピリジルメチル）－１－フタラジンアミンおよびＥＭＤ１２１９７４。

【0220】

本発明の抗体または抗原結合性フラグメントとＰＰＡＲ－γ（すなわち、ＰＰＡＲ－ガンマ）アゴニストおよびＰＰＡＲ－δ（すなわち、ＰＰＡＲ－デルタ）アゴニストとの組合せは或る悪性疾患の治療に有用でありうる。ＰＰＡＲ－γおよびＰＰＡＲ－δは核ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γおよびδである。内皮細胞上のＰＰＡＲ－γの発現および血管新生におけるその関与が文献において報告されている（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９８，３１：９０９－９１３；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９９，２７４：９１１６－９１２１；Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２０００，４１：２３０９－２３１７を参照されたい）。より最近になって、ＰＰＡＲ－γアゴニストはインビトロにおけるＶＥＧＦに対する血管新生応答を抑制することが示されており、トログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）およびマレイン酸ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）の両方がマウスにおける網膜血管新生の発生を抑制する（Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．２００１；１１９：７０９－７１７）。ＰＰＡＲ－γアゴニストおよびＰＰＡＲ－γ／αアゴニストの例には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：Ｌｙｎｐａｒｚａ（登録商標）、Ｒｕｃａｐａｒｉｂ（登録商標）、Ｔａｌａｚｏｐａｒｉｂ（登録商標）、ニラパリブ（ｎｉｒａｐａｒｉｂ）、Ｖｅｌｉｐａｒｉｂ（登録商標）、チアゾリジンジオン［例えば、ＤＲＦ２７２５、ＣＳ－０１１、トログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）およびピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）］、フェノフィブレート（ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）、ジェムフィブロジル（ｇｅｍｆｉｂｒｏｚｉｌ）、クロフィブレート（ｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ）、ＧＷ２５７０、ＳＢ２１９９９４、ＡＲ－Ｈ０３９２４２、ＪＴＴ－５０１、ＭＣＣ－５５５、ＧＷ２３３１、ＧＷ４０９５４４、ＮＮ２３４４、ＫＲＰ２９７、ＮＰ０１１０、ＤＲＦ４１５８、ＮＮ６２２、ＧＩ２６２５７０、ＰＮＵ１８２７１６、ＤＲＦ５５２９２６、２－［（５，７－ジプロピル－３－トリフルオロメチル－１，２－ベンゾイソオキサゾール－６－イル）オキシ］－２－メチルプロピオン酸および２（Ｒ）－７－（３－（２－クロロ－４－（４－フルオロフェノキシ）フェノキシ）プロポキシ）－２－エチルクロマン－２－カルボン酸。

【0221】

本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、アロマターゼインヒビターと組合せて、乳癌を治療または予防するのにも有用でありうる。アロマターゼインヒビターの例には、アナストロゾール、レトロゾールおよびエキセメスタンが含まれるが、これらに限定されるものではない。

【0222】

本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、以下の化学療法剤と組合せて癌を治療するのにも有用でありうる：アバレリックス（ａｂａｒｅｌｉｘ）（Ｐｌｅｎａｘｉｓ ｄｅｐｏｔ（登録商標））；アルデスロイキン（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）（Ｐｒｏｋｉｎｅ（登録商標））；アルデスロイキン（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））；アレムツズマブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂｂ）（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））；アリトレチノイン（ａｌｉｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）（Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標））；アロプリノール（ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌ）（Ｚｙｌｏｐｒｉｍ（登録商標））；アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）（Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；アミホスチン（ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ）（Ｅｔｈｙｏｌ（登録商標））；アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））；三酸化ヒ素（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標））；アスパラギナーゼ（ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）（Ｅｌｓｐａｒ（登録商標））；アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）（Ｖｉｄａｚａ（登録商標））；塩酸ベンダムスチン（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ベバクジマブ（ｂｅｖａｃｕｚｉｍａｂ）（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））；ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）カプセル（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））；ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）ゲル（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））；ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））；ブレフェルジン（ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ）Ａ；静脈内ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））；経口ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））；カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）（Ｍｅｔｈｏｓａｒｂ（登録商標））；カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））；カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））；カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）（ＢＣＮＵ（登録商標），ＢｉＣＮＵ（登録商標））；カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））；ポリフェプロサン（Ｐｏｌｉｆｅｐｒｏｓａｎ）２０インプラントと組合されたカルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｇｌｉａｄｅｌ Ｗａｆｅｒ（登録商標））；セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標））；セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））；シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））；クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標）、２－ＣｄＡ（登録商標））；クロファラビン（ｃｌｏｆａｒａｂｉｎｅ）（Ｃｌｏｌａｒ（登録商標））；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標））；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（Ｃｙｔｏｘａｎ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（Ｃｙｔｏｘａｎ Ｔａｂｌｅｔ（登録商標））；シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）（Ｃｙｔｏｓａｒ－Ｕ（登録商標））；シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）リポソーム（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））；ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））；ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アクチノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）Ｄ（Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；ダルテパリン（ｄａｌｔｅｐａｒｉｎ）ナトリウム注射用（Ｆｒａｇｍｉｎ（登録商標））；ダルベポエチンアルファ（Ｄａｒｂｅｐｏｅｔｉｎ ａｌｆａ）（Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標））；ダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標））；ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）リポソーム（ＤａｎｕｏＸｏｍｅ（登録商標））；ダウノルビシン，ダウノマイシン（ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ）（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ（登録商標））；ダウノルビシン，ダウノマイシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；デガレリックス（ｄｅｇａｒｅｌｉｘ）（Ｆｉｒｍａｇｏｎ（登録商標））；デニロイキン・ジフチトックス（Ｄｅｎｉｌｅｕｋｉｎ ｄｉｆｔｉｔｏｘ）（Ｏｎｔａｋ（登録商標））；デクスラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）（Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標））；塩酸デクスラゾキサン（Ｔｏｔｅｃｔ（登録商標））；ジデムニン（ｄｉｄｅｍｎｉｎ）Ｂ；１７－ＤＭＡＧ；ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））；ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ ＰＦＳ（登録商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標），Ｒｕｂｅｘ（登録商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ ＰＦＳ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；ドキソルビシンリポソーム（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ）（Ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（Ｍａｓｔｅｒｏｎｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；エクリズマブ注射用（ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））；エリオットＢ（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ Ｂ）溶液（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ Ｂ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（登録商標））；エルトロンボパッグ（ｅｌｔｒｏｍｂｏｐａｇ）（Ｐｒｏｍａｃｔａ（登録商標））；エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））；エポエチン（Ｅｐｏｅｔｉｎ）アルファ（ｅｐｏｇｅｎ（登録商標））；エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））；エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））；エチニルエストラジオール；リン酸エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）（Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標））；エトポシド，ＶＰ－１６（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））；エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）錠剤（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））；エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）（Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標））；フェルモキシトール（ｆｅｒｕｍｏｘｙｔｏｌ）（Ｆｅｒａｈｅｍｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；フィルグラスチム（Ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標））；フロクスウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）（動脈内）（ＦＵＤＲ（登録商標））；フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））；フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ），５－ＦＵ（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標））；フルベストラント（ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ）（Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標））；ゲフィニチブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））；ゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）；ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））；ゲムツズマブ・オゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））；酢酸ゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）（Ｚｏｌａｄｅｘ Ｉｍｐｌａｎｔ（登録商標））；酢酸ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標））；酢酸ヒストレリン（ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ）（Ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ ｉｍｐｌａｎｔ（登録商標））；ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））；イブリツモマブ・チウキセタン（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ Ｔｉｕｘｅｔａｎ）（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））；イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））；イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）（ＩＦＥＸ（登録商標））；メシル酸イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））；インターフェロンアルファ２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ Ａ（登録商標））；インターフェロンアルファ２ｂ（Ｉｎｔｒｏｎ Ａ（登録商標））；イオベングアン（ｉｏｂｅｎｇｕａｎｅ）Ｉ １２３注射用（ＡｄｒｅＶｉｅｗ（登録商標））；イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））；イキサベピロン（ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ）（Ｉｘｅｍｐｒａ（登録商標））；イアパチニブ（Ｉａｐａｔｉｎｉｂ）錠剤（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標））；レナリドミド（ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ）（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））；レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）（Ｆｅｍａｒａ（登録商標））；ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）（Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標），Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標））；酢酸ロイプロイド（Ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）（Ｅｌｉｇａｒｄ（登録商標））；レバミソール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ（登録商標））；ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ），ＣＣＮＵ（ＣｅｅＢＵ（登録商標））；メクロレタミン（ｍｅｃｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ），ナイトロジェンマスタード（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））；酢酸メゲストロール（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌ）（Ｍｅｇａｃｅ（登録商標））；メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ），Ｌ－ＰＡＭ（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））；メルカプトプリン，６－ＭＰ（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））；メスナ（ｍｅｓｎａ）（Ｍｅｓｎｅｘ（登録商標））；メスナ（Ｍｅｓｎｅｘ ｔａｂｓ（登録商標））；メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ（登録商標））；メトクスサレン（ｍｅｔｈｏｘｓａｌｅｎ）（Ｕｖａｄｅｘ（登録商標））；８－メトキシソラレン；マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）Ｃ（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））；ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）（Ｌｙｓｏｄｒｅｎ（登録商標））；ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））；ミトラマイシン（ｍｉｔｒａｍｙｃｉｎ）；フェンプロピオン酸ナンドロロン（ｎａｎｄｒｏｌｏｎｅ）（Ｄｕｒａｂｏｌｉｎ－５０（登録商標））；ネララビン（ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ）（Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標））；ニロチニブ（ｎｉｌｏｔｉｎｉｂ）（Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標））；ノフェツモマブ（Ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ）（Ｖｅｒｌｕｍａ（登録商標））；オファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））；オプレルベキン（Ｏｐｒｅｌｖｅｋｉｎ）（Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標））；オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））；パクリタクセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）（Ｐａｘｅｎｅ（登録商標））；パクリタクセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））；パクリタクセルタンパク質結合粒子（Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標））；パリフェルミン（ｐａｌｉｆｅｒｍｉｎ）（Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ（登録商標））；パミドロナート（ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ）（Ａｒｅｄｉａ（登録商標））；パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））；パゾパニブ（ｐａｚｏｐａｎｉｂ）錠剤（Ｖｏｔｒｉｅｎｔｔｍ（登録商標））；ペガデマーゼ（ｐｅｇａｄｅｍａｓｅ）（Ａｄａｇｅｎ（Ｐｅｇａｄｅｍａｓｅ Ｂｏｖｉｎｅ）（登録商標））；ペガスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）（Ｏｎｃａｓｐａｒ（登録商標））；ペグフィルグラスチム（Ｐｅｇｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）二ナトリウム（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））；ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）（Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標））；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）（Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））；プレリキサホル（ｐｌｅｒｉｘａｆｏｒ）（Ｍｏｚｏｂｉｌ（登録商標））；プリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ），ミトラマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（Ｍｉｔｈｒａｃｉｎ（登録商標））；ポルフィメル（ｐｏｒｆｉｍｅｒ）ナトリウム（Ｐｈ
ｏｔｏｆｒｉｎ（登録商標））；プララトレキサート（ｐｒａｌａｔｒｅｘａｔｅ）注射用（Ｆｏｌｏｔｙｎ（登録商標））；プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；キナクリン（ｑｕｉｎａｃｒｉｎｅ）（Ａｔａｂｒｉｎｅ（登録商標））；ラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）；ラスブリカーゼ（Ｒａｓｂｕｒｉｃａｓｅ）（Ｅｌｉｔｅｋ（登録商標））；塩酸ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）（Ｅｖｉｓｔａ（登録商標））；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））；ロミデプシン（ｒｏｍｉｄｅｐｓｉｎ）（Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標））；ロミプロスチム（ｒｏｍｉｐｌｏｓｔｉｍ）（Ｎｐｌａｔｅ（登録商標））；サルグラモスチム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）（Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標））；サルグラモスチム（Ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）（Ｐｒｏｋｉｎｅ（登録商標））；ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））；ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；マレイン酸スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））；タルク（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ（登録商標））；タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））；テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））；テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標））；テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ），ＶＭ－２６（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））；テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）（Ｔｅｓｌａｃ（登録商標））；チオグアニン，６－ＴＧ（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ（登録商標））；チオプリン；チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）（Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標））；トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）（Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標））；トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；トシツモマブ／Ｉ－１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；トランス－レチノイン酸；トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））；トレチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ），ＡＴＲＡ（Ｖｅｓａｎｏｉｄ（登録商標））；トリエチレンメラミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｍｅｌａｍｉｎｅ）；ウラシルマスタード（Ｕｒａｃｉｌ Ｍｕｓｔａｒｄ）（Ｕｒａｃｉｌ Ｍｕｓｔａｒｄ Ｃａｐｓｕｌｅｓ（登録商標））；バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）（Ｖａｌｓｔａｒ（登録商標））；ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））；ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））；ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））；ボリノスタット（ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）（Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標））；ウォルトマンニン（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）；およびゾレドロナート（ｚｏｌｅｄｒｏｎａｔｅ）（Ｚｏｍｅｔａ（登録商標））。

【0223】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、以下のもの（それらに限定されるものではない）を含む１以上の抗嘔吐物質と組合せて使用される：カソピタント（ｃａｓｏｐｉｔａｎｔ）（Ｇｌａｘｏ ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ネツピタント（Ｎｅｔｕｐｉｔａｎｔ）（ＭＧＩ－Ｈｅｌｓｉｎｎ）および他のＮＫ－１受容体アンタゴニスト、パロノセトロン（ｐａｌｏｎｏｓｅｔｒｏｎ）（ＭＧＩ ＰｈａｒｍａによりＡｌｏｘｉとして販売されている）、アプレピタント（ａｐｒｅｐｉｔａｎｔ）（Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏ．；Ｒａｈｗａｙ，ＮＪによりＥｍｅｎｄとして販売されている）、ジフェンヒドラミン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＢｅｎａｄｒｙｌ（登録商標）として販売されている）、ヒドロキシジン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＡｔａｒａｘ（登録商標）として販売されている）、メトクロプラミド（ｍｅｔｏｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ）（ＡＨ Ｒｏｂｉｎｓ Ｃｏ，；Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＶＡによりＲｅｇｌａｎ（登録商標）として販売されている）、ロラゼパム（ｌｏｒａｚｅｐａｍ）（Ｗｙｅｔｈ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＮＪによりＡｔｉｖａｎ（登録商標）として販売されている）、アルプラゾラム（ａｌｐｒａｚｏｌａｍ）（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＸａｎａｘ（登録商標）として販売されている）、ハロペリドール（Ｏｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ；Ｒａｒｉｔａｎ，ＮＪによりＨａｌｄｏｌ（登録商標）として販売されている）、ドロペリドール（ｄｒｏｐｅｒｉｄｏｌ）（Ｉｎａｐｓｉｎｅ（登録商標））、ドロナビノール（ｄｒｏｎａｂｉｎｏｌ）（Ｓｏｌｖａｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．；Ｍａｒｉｅｔｔａ，ＧＡによりＭａｒｉｎｏｌ（登録商標）として販売されている）、デキサメタゾン（Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏ．；Ｒａｈｗａｙ，ＮＪによりＤｅｃａｄｒｏｎ（登録商標）として販売されている）、メチルプレドニゾロン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＭｅｄｒｏｌ（登録商標）として販売されている）、プロクロルペラジン（Ｇｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ，ＮＣによりＣｏｍｐａｚｉｎｅ（登録商標）として販売されている）、グラニセトロン（ｇｒａｎｉｓｅｔｒｏｎ）（Ｈｏｆｆｍａｎｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ｉｎｃ．；Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪによりＫｙｔｒｉｌ（登録商標）として販売されている）、オンダンセトロン（ｏｎｄａｎｓｅｔｒｏｎ）（Ｇｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ，ＮＣによりＺｏｆｒａｎ（登録商標）として販売されている）、ドラセトロン（ｄｏｌａｓｅｔｒｏｎ）（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＡｎｚｅｍｅｔ（登録商標）として販売されている）、トロピセトロン（ｔｒｏｐｉｓｅｔｒｏｎ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；Ｅａｓｔ Ｈａｎｏｖｅｒ，ＮＪによりＮａｖｏｂａｎ（登録商標）として販売されている）。

【0224】

癌治療の他の副作用には、赤血球および白血球の欠乏症が含まれる。したがって、１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、そのような欠乏症を治療または予防する物質、例えばフィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）、ＰＥＧ－フィルグラスチム、エリスロポエチン、エポエチンアルファまたはダルベポエチンアルファと組合される。

【0225】

１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントは抗癌放射線療法と組合せて投与される。例えば、１つの実施形態においては、放射線療法は外部ビーム療法（体外照射療法）（ＥＢＴ）であり、これは、腫瘍の位置に高エネルギーＸ線のビームを照射するための方法である。該ビームは患者の外部で（例えば、線形加速装置により）生成され、腫瘍部位を標的化する。これらのＸ線は癌細胞を破壊することが可能であり、注意深い治療計画は周辺の正常組織が損なわれないことを可能にする。患者の体内には放射能源は配置されない。１つの実施形態においては、放射線療法は、Ｘ線ではなく陽子を罹患組織に照射する原体（ｃｏｎｆｏｒｍａｌ）療法の一種である陽子線療法である。１つの実施形態においては、放射線療法は原体外部ビーム放射線療法であり、これは、放射線療法を個々の身体構造に適合させる先進技術を用いる方法である。１つの実施形態においては、放射線療法は密封小線源治療であり、この場合、放射線の余分の線量、つまりブーストを或る領域に与えるために通常使用される放射性物質が体内に一時的に配置される。

【0226】

１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントと組合されて適用される外科手技は外科的腫瘍摘出である。

【0227】

医薬組成物および投与
本発明で提供される抗体および抗原結合性フラグメントの医薬組成物または無菌組成物を製造するために、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、薬学的に許容される担体または賦形剤と混合されうる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＳｃｉｅｎｃｅｓおよびＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）を参照されたい。

【0228】

治療用および診断用物質の製剤は、例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水性の溶液または懸濁液の形態で、許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより製造されうる（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。

【0229】

単独で又は別の治療用物質と組合せて投与される、本発明で提供される抗体またはフラグメント組成物の毒性および治療効力は、例えばＬＤ_５０（集団の５０％に致死的である用量）およびＥＤ_５０（集団の５０％において治療的に有効である用量）を決定するための、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手法により決定されうる。毒性効果と治療効果との用量比は治療係数（ＬＤ_５０／ＥＤ_５０）である。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用のための投与量の範囲の決定において使用されうる。そのような化合物の投与量は、好ましくは、毒性をほとんど又は全く伴わないＥＤ_５０を含む循環濃度の範囲内である。該投与量は、使用される剤形および投与経路に応じて、この範囲内で変動しうる。

【0230】

もう１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントと組合せて、別の治療用物質を、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ２００３（Ｔｈｏｍｓｏｎ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；５７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００２年１１月１日））に従い、対象に投与する。

【0231】

投与様式は様々でありうる。投与経路には、経口、直腸、経粘膜、腸、非経口；筋肉内、皮下、皮内、髄内、鞘内、直接心室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、眼内、吸入、吹送、局所、皮膚、経皮または動脈内が含まれる。

【0232】

特定の実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、侵襲的経路、例えば注射により投与されうる。更に詳細な実施形態においては、抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物は静脈内、皮下、筋肉内、動脈内、腫瘍内に、または吸入、エアゾール運搬により投与される。非侵襲的経路（例えば、経口的、例えば、丸剤、カプセル剤または錠剤）による投与も想定される。

【0233】

また、本発明は、本発明で提供される抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物のいずれかを含む容器（例えば、プラスチックまたはガラスバイアル、例えば、キャップまたはクロマトグラフィーカラム、中空穿孔針またはシリンジシリンダーを有するもの）を提供する。また、本発明は、本発明で提供される抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物のいずれかを含む注射装置を提供する。注射装置は、非経口経路、例えば筋肉内、皮下または静脈内経路により患者の体内に物質を導入する装置である。例えば、注射装置はシリンジ（例えば、医薬組成物が予め充填されたもの、例えば、自動注入装置）であることが可能であり、これは、例えば、注射すべき流体（例えば、抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物）を保持するためのシリンダーまたは筒状物、該流体の注射のために皮膚および／または血管を穿刺するための針、ならびに該シリンダーから及び針穿孔を介して該流体を押出すプランジャーを含む。１つの実施形態においては、本発明で提供される二重特異性抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物を含む注射装置は静脈内（ＩＶ）注射装置である。そのような装置は、カニューレまたはトロカール／針を介して患者の体内に導入される流体（例えば、生理食塩水；またはＮａＣｌ、乳酸ナトリウム、ＫＣｌ、ＣａＣｌ_２を含み、所望によりグルコースを含む乳酸リンゲル液）を保持するためのバッグ（袋）またはリザーバ（貯蔵容器）に接続されうるチューブに接続されうるカニューレまたはトロカール／針の中に該抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物を含む。幾つかの実施形態においては、トロカールおよびカニューレが対象の静脈内に挿入され、挿入カニューレからトロカールが取り外されたら、該抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物が装置内に導入される。ＩＶ装置は、例えば、（例えば、手または腕における）末梢静脈内；上大静脈または下大静脈、または心臓の右心房（例えば、中央ＩＶ）内；あるいは鎖骨下、内頚、または大腿静脈に挿入されることが可能であり、例えば、それが上大静脈または右心房（例えば、中心静脈線）に達するまで、心臓に向けて進入可能である。１つの実施形態においては、注射装置は自動注入装置、ジェットインジェクターまたは外部注入ポンプである。ジェットインジェクターは、該抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物を患者の体内へ導入するために、表皮に浸透する液体の高圧ナロー（ｎａｒｒｏｗ）ジェットを使用する。外部注入ポンプは、制御された量の該抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物を患者の体内に運搬（送達）する医療装置である。外部注入ポンプは電気的または機械的に駆動されうる。ポンプは、ポンプによって異なる様態で作動する。例えば、シリンジポンプはシリンジのリザーバ内に流体を保持し、可動式ピストンが流体運搬を制御し、弾性（ｅｌａｓｔｏｍｅｒｉｃ）ポンプは伸縮性バルーンリザーバ内に流体を保持し、バルーンの弾性壁からの圧力が流体運搬を駆動する。蠕動ポンプにおいては、１組のローラーが可撓性チューブの或る長さを絞り込んで、流体を前方へ押出す。マルチチャネルポンプにおいては、流体は複数のリザーバから複数の速度で運搬されうる。

【0234】

本明細書に開示されている医薬組成物は、例えば米国特許第６，６２０，１３５号、第６，０９６，００２号、第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号または第４，５９６，５５６号に開示されている装置のような無針（ｎｅｅｄｌｅｌｅｓｓ）皮下注射装置によっても投与されうる。医薬組成物を含むそのような無針装置も想定される。本明細書に開示されている医薬組成物は注入によっても投与されうる。医薬組成物を投与するための良く知られたインプラントおよびモジュールの例には、米国特許第４，４８７，６０３号（これは、制御された速度で医薬を分注するための移植可能な微量注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２３３号（これは、正確な注入速度で医薬を運搬するための医薬注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２２４号（これは、連続的薬物運搬のための可変流量移植可能注入装置を開示している）、米国特許第４，４３９，１９６号（これは、マルチチャンバ・コンパートメントを有する浸透性薬物運搬系を開示している）に開示されているものが含まれる。多数の他のそのようなインプラント、運搬系およびモジュールは当業者によく知られており、本発明で提供される医薬組成物を含むものも想定される。

【0235】

投与レジメンは、治療用抗体または抗原結合性フラグメントの血清または組織代謝回転速度、症状の程度、治療用抗体の免疫原性、および生物学的マトリックスにおける標的細胞の接近可能性を含む幾つかの要因に左右される。好ましくは、投与レジメンは、望ましくない副作用を最小にすると同時に標的罹患状態の改善をもたらす十分な治療用抗体またはフラグメントを運搬する。したがって、運搬される生物学的物質の量は、部分的には、個々の治療用抗体および治療される状態の重症度に左右される。治療用抗体またはフラグメントの適切な用量を選択する際の指針が利用可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１－６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら（１９９９）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３；Ｓｌａｍｏｎら（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２；Ｌｉｐｓｋｙら（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２を参照されたい）。

【0236】

適切な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野で知られている又は疑われているパラメータまたは因子を用いて、臨床家によりなされる。一般に、用量は最適用量より幾分少ない量から開始し、ついで、負の副作用と比較して所望または最適効果が得られるまで、それを少しずつ増量する。重要な診断尺度には、例えば炎症の症状の尺度、または産生される炎症性サイトカインのレベルが含まれる。一般に、使用される生物学的物質は、治療のために標的化される動物と同じ種から誘導され、それにより薬剤に対する免疫応答を最小化することが望ましい。ヒト対象の場合には、例えば、ヒト化抗体および完全ヒト抗体が望ましい可能性がある。

【0237】

本明細書中で用いる「有効量」なる語は、単独で又は追加的な治療用物質と共に細胞、組織または対象に投与された場合に、疾患の症状の１以上における測定可能な改善を引き起こすのに有効である、本発明で提供される二重特異性抗体またはその抗原結合性フラグメントの量を意味する。有効量は、単独で投与される個々の有効成分に適用される場合には、その成分のみに関するものである。有効量は、組合せ体に適用される場合には、連続投与または同時投与のいずれで組合せ投与されるかにかかわらず、治療効果をもたらす、有効成分の組合された量を意味する。治療用物質の有効量は、少なくとも１０％、通常は少なくとも２０％、好ましくは少なくとも約３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％の、診断尺度またはパラメータの改善をもたらす。有効量はまた、疾患の重症度を評価するために主観的尺度が用いられる場合には、主観的尺度における改善をもたらしうる。

【0238】

キット
更に、本明細書に記載されている治療用物質および／または薬学的に許容される担体（これらに限定されるものではない）を含む１以上の追加的成分と共に、抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメント、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体または抗原結合性フラグメント、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体または抗原結合性フラグメント（これらに限定されるものではない）を含む１以上の成分を含むキットを提供する。該抗体もしくはフラグメントおよび／または該治療用物質は、純粋な組成物として、または医薬組成物において薬学的に許容される担体と組合せて製剤化（処方）されうる。

【0239】

１つの実施形態においては、キットは、本発明で提供される抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物を１つの容器（例えば、無菌ガラスまたはプラスチックバイアル）内に、そしてその医薬組成物および／または治療用物質を別の容器（例えば、無菌ガラスまたはプラスチックバイアル）内に含む。

【0240】

もう１つの実施形態においては、キットは、単一の共通の容器内に、所望により医薬組成物において、一緒に製剤化された１以上の治療用物質と所望により組合されていてもよい、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントと薬学的に許容される担体とを含む組合せを含む。

【0241】

キットが対象への非経口投与のための医薬組成物を含む場合、キットは、そのような投与を行うための装置を含みうる。例えば、キットは前記の１以上の皮下針または他の注射装置を含みうる。

【0242】

キットは、キットにおける医薬組成物および剤形に関する情報を含む添付文書を含みうる。一般に、そのような情報は、封入されている医薬組成物および剤形を有効かつ安全に使用することにおいて患者および医師を補助する。例えば、本発明で提供される物質の組合せに関する以下の情報が添付文書（インサート）において供給されうる：薬物動態、薬力学、臨床試験、有効性パラメータ、適応症および用法、禁忌、警告、予防策、有害反応、過剰投薬、適切な投与量および投与、供給方法、適切な保存条件、参考資料、製造業者／流通業者情報ならびに特許情報。

【0243】

便宜上、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、キットにおいて、すなわち、診断用または検出用アッセイを行うための説明を伴う所定量の試薬のパッケージ化された組合せにおいて提供されうる。抗体またはフラグメントが酵素で標識されている場合には、キットは、酵素により要求される基質および補因子（例えば、検出可能な発色団または発蛍光団を与える基質前駆体）を含みうる。また、他の添加物、例えば安定剤、バッファー（例えば、ブロッキングバッファーまたは細胞溶解バッファー）などが含まれうる。種々の試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中濃度をもたらすように大きく変動しうる。特に、試薬は、適切な濃度を有する試薬溶液を溶解時に与える賦形剤を含む乾燥粉末、通常は凍結乾燥粉末として提供されうる。

【0244】

また、例えば酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）（サンドイッチ型または競合形態）のようなイムノアッセイを含む種々の検出アッセイにおいて使用される１以上のそのような試薬を含む診断用または検出用試薬およびキットを提供する。キットの成分は固体支持体に予め結合していることが可能であり、あるいはキットが使用される際に固体支持体の表面に適用されることが可能である。幾つかの実施形態においては、シグナル生成手段は、本発明で提供される抗体またはフラグメントが予め結合した状態で提供されることが可能であり、あるいは使用前に１以上の成分、例えばバッファー、抗体－酵素コンジュゲート、酵素基質などと一緒にすることを要しうる。キットはまた、追加的な試薬、例えば、固相表面への非特異的結合を低減するためのブロッキング試薬、洗浄試薬、酵素基質などを含みうる。固相表面はチューブ、ビーズ、マイクロタイタープレート、ミクロスフェア、またはタンパク質、ペプチドもしくはポリペプチドを固定化するのに適した他の材料の形態でありうる。特定の態様においては、化学発光性もしくは発色性産物の形成または化学発光性もしくは発色性基質の還元を触媒する酵素がシグナル生成手段の成分の１つである。そのような酵素は当技術分野でよく知られている。キットは、本明細書に記載されている捕捉剤および検出試薬のいずれかを含みうる。所望により、キットは、本発明で提供される方法を実施するための説明をも含みうる。

【0245】

また、容器、例えばバイアルまたはボトル内にパッケージングされた抗体またはその抗原結合性フラグメントを含み、更に、該容器に貼付またはパッケージングされたラベルを含むキットを提供し、ラベルは容器の内容物を記載し、本明細書に記載されている１以上の病態を治療するための、容器の内容物の使用に関する指示および／または説明を提供する。

【0246】

併用（組合せ）療法の節において前記したとおり、２つの治療用物質の同時投与は、それらの物質がそれらの治療効果を奏する期間の重複が存在する限り、それらの物質が同時に又は同じ経路によって投与されることを要しない。異なる日または週の投与と同様に、同時または連続投与が想定される。

【0247】

本明細書に開示されている抗体、ペプチド、抗原結合性フラグメントまたはポリヌクレオチドの少なくとも１つと、検出試薬または治療用物質として該組成物を使用するための説明とを含む、本明細書に開示されている治療用キットおよび検出用キットも製造されうる。そのようなキットにおいて使用される容器は、検出用および／または治療用組成物の１以上が配置されうる、そして好ましくは、適切にアリコート化されうる、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジまたは他の適切な容器を含みうる。第２の治療用物質も提供される場合には、キットは、この第２の検出用および／または治療用組成物が配置されうる第２の異なる容器をも含有しうる。あるいは複数の化合物が単一医薬組成物において調製可能であり、単一収容手段、例えばバイアル、フラスコ、シリンジ、ボトルまたは他の適切な単一容器内にパッケージングされうる。本明細書に開示されているキットはまた、典型的には、商業的販売のために密封された、バイアルを収容するための手段、例えば、所望のバイアルが保持される射出成形またはブロー成形プラスチック容器を含む。放射能標識、発色性、蛍光性または他のタイプの検出可能な標識または検出手段がキット内に含まれる場合、標識剤は検出用または治療用組成物自体と同じ容器において提供されることが可能であり、あるいは、この第２の組成物が配置されうる、そして適切にはアリコート化されうる第２の異なる収容手段内に配置されうる。あるいは検出試薬および標識は単一収容手段において調製されることが可能であり、ほとんどの場合、キットは、典型的には、商業的販売および／または簡便な包装および運搬のために密封してバイアルを収容するための手段をも含む。

【0248】

本明細書に記載されている検出またはモニタリング方法を実施するための装置または器具をも提供する。そのような装置は、サンプルが入れられうるチャンバーまたはチューブ、サンプルの流れを装置に通すためのバルブまたはポンプを所望により含んでいてもよい流体処理系、血液から血漿または血清を分離するための所望により含まれていてもよいフィルター、捕捉剤または検出試薬の添加のための混合チャンバー、および捕捉剤免疫複合体に結合した検出可能な標識の量を検出するための所望により含まれていてもよい検出装置を含みうる。サンプルの流れは受動的（例えば、サンプルが適用されたら該装置の更なる操作を要しない毛管力、流体静力または他の力）または能動的（例えば、機械ポンプ、電気浸透ポンプ、遠心力または空気圧の増加により生じる力の適用によるもの）、または能動的力と受動的力との組合せでありうる。

【0249】

他の実施形態においては、プロセッサ、コンピュータ可読メモリおよびルーチンをも提供し、これは、該コンピュータ可読メモリ上で保存され、本明細書に記載されている方法のいずれかを実施するために該プロセッサ上で実行されるように適合化される。適切なコンピューティングシステム、環境および／または設定の例には、パーソナルコンピュータ、サーバコンピュータ、ハンドヘルドまたはラップトップデバイス、マルチプロセッサシステム、マイクロプロセッサベースシステム、セットトップボックス、プログラマブルコンシューマエレクトロニクス、ネットワークＰＣ、ミニコンピュータ、メインフレームコンピュータ、前記のシステムまたはデバイスのいずれかを含む分散コンピューティング環境、あるいは当技術分野で公知のいずれかの他のシステムが含まれる。

【0250】

一般的方法
分子生物学における標準的な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ（１９８２ ＆ １９８９ ２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１ ３^ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，３^ｒｄｅｄ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．に記載されている。標準的な方法は、Ａｕｓｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＶｏＩｓ．１－４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹにも記載されており、これは、細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ突然変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳類細胞および酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質およびタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。

【0251】

免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化を含むタンパク質精製のための方法が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の製造、タンパク質のグリコシル化が記載されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５－１６．２２．１７；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５－８９；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４－３９１を参照されたい）。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の製造、精製およびフラグメント化が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前掲）。リガンド／受容体相互作用を特徴づけるための標準的な技術が利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい）。

【0252】

モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体およびヒト化抗体は製造可能である（例えば、ＳｈｅｐｅｒｄおよびＤｅａｎ（編）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（編）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９－２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９；Ｔａｎｇら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１－２７３７８；Ｂａｃａら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３；ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７－４９９；米国特許第６，３２９，５１１号を参照されたい）。

【0253】

単鎖抗体およびジアボディが記載されている（例えば、Ｍａｌｅｃｋｉら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：２１３－２１８；Ｃｏｎｒａｔｈら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：７３４６－７３５０；Ｄｅｓｍｙｔｅｒら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５－２６２９０；ＨｕｄｓｏｎおよびＫｏｒｔｔ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：１７７－１８９；ならびに米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい）。二官能性抗体が提供される（例えば、Ｍａｃｋら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：７０２１－７０２５；Ｃａｒｔｅｒ（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８：７－１５；Ｖｏｌｋｅｌら（２００１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １４：８１５－８２３；Ｓｅｇａｌら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８：１－６；Ｂｒｅｎｎａｎら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１－８３；Ｒａｓｏら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：２７６２３；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２－１２０７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら（１９９１）ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５－３６５９；ならびに米国特許第５，９３２，４４８号、第５，５３２，２１０号および第６，１２９，９１４号を参照されたい）。

【0254】

二重特異性抗体も提供される（例えば、Ａｚｚｏｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：３４９３；Ｋｉｔａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：６９０１；Ｍｅｒｃｈａｎｔら（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．７４：９１１５；Ｐａｎｄｅｙら（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：３８６３３；Ｚｈｅｎｇら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７６：１２９９９；Ｐｒｏｐｓｔら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：２２１４；Ｌｏｎｇ（１９９９）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：８７５を参照されたい）。

【0255】

抗原の精製は抗体の製造に必要ではない。関心のある抗原を含有する細胞で動物を免疫化することが可能である。ついで免疫化動物から脾細胞を単離し、脾細胞を骨髄腫細胞系と融合させてハイブリドーマを得ることが可能である（例えば、Ｍｅｙａａｒｄら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ７：２８３－２９０；Ｗｒｉｇｈｔら（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３：２３３－２４２；Ｐｒｅｓｔｏｎら，前掲；Ｋａｉｔｈａｍａｎａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：５１５７－５１６４を参照されたい）。

【0256】

抗体は例えば小薬物分子、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲート化されうる。抗体は治療、診断、キットまたは他の目的に有用であり、例えば色素、放射性同位体、酵素または金属、例えばコロイド金に結合した抗体を包含する（例えば、Ｌｅ Ｄｏｕｓｓａｌら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１６９－１７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１－３８９８；ＨｓｉｎｇおよびＢｉｓｈｏｐ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：２８０４－２８１１；Ｅｖｅｒｔｓら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：８８３－８８９を参照されたい）。

【0257】

蛍光標識細胞分取検出系（ＦＡＣＳ）を含むフローサイトメトリーのための方法が利用可能である（例えば、Ｏｗｅｎｓら（１９９４）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２^ｎｄ ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照されたい）。例えば診断試薬としての使用のための、核酸プライマーおよびプローブを含む核酸、ポリペプチドならびに抗体を修飾するのに適した蛍光試薬が利用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。

【0258】

免疫系の標準的な組織学的方法が記載されている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ－Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（編）（１９８６）Ｈｕｍａｎ Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｈｉａｔｔら（２０００）Ｃｏｌｏｒ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ；Ｌｏｕｉｓら（２００２）Ｂａｓｉｃ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ ａｎｄ Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。

【0259】

例えば抗原フラグメント、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能的ドメイン、グリコシル化部位および配列アライメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースが利用可能である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ，Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １６：７４１－７４２；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｎｏｔｅ １６：７４１－７４２；Ｗｒｅｎら（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｏｇｒａｍｓ Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７７－１８１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７－２１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：４６８３－４６９０を参照されたい）。

【0260】

実施例
この節における実施例は、限定的なものとしてではなく、例示として記載されている。

【0261】

実施例１：ヒト化０８Ａ抗体のアフィニティ成熟および結合アフィニティの研究
単一ＣＤＲコドンベース突然変異誘発ライブラリーによる０８Ａのアフィニティ成熟
ヒト化０８Ａ（Ｓ６１Ｎグリコシル化部位補正を含有する；配列番号に従う配列の番号付け）Ｆａｂ００１（配列番号１および２）のＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１およびＣＤＲＬ３をコドンベース突然変異誘発のために標的化した。Ｈ３、Ｌ１およびＬ３ライブラリーを、それぞれＨ９５～Ｈ１００Ｂ位、Ｌ２７Ｂ～Ｌ３２位およびＬ９０～Ｌ９７位においてランダム化した。各ライブラリーからの代表的な個々のコロニーの配列決定は標的化残基の予想ＣＤＲにおけるランダム化を証明した。各ライブラリーは１０^８個を超えるコロニーを生成し、このことは、ライブラリーのサイズが標的領域内の全ての可能なアミノ酸の組合せを示すのに十分であることを示唆している。

【0262】

ライブラリーを、各ラウンドで抗原の濃度を減少させながら、４ラウンドのアフィニティベース液相ファージ提示選択に付した。比較的高い抗原濃度（２０ｎＭ）を第１ラウンドに用いた。高アフィニティ変異体を選択するために、後続の３ラウンドのそれぞれで、抗原濃度を１０倍減少させた。第４ラウンドからの個々の変異体を、ＥＬＩＳＡスクリーニングにより、抗原への陽性結合に関して試験した。

【0263】

野生型より低いＫＤを有する変異体ｓｃＦｖを特定するために、細菌ＰＰＥにおける未精製天然ｓｃＦｖにおいて、ＯＣＴＥＴ ＲＥＤ９６（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ，ＵＳＡ）により、見掛けＫｏｆｆを測定した。４ラウンドの選択からの合計１５６個のｓｃＦｖをｋｏｆｆによりランク付けした。ｋｏｆｆの改善を示す２０個のクローンをＦａｂ変換のために選択した。ｋｏｎおよびｋｏｆｆをＢＩＡＣＯＲＥにより測定し、ＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用してＫＤを計算した。ただ１つのＦａｂ、すなわちＦａｂ ００４、または３Ｇ９が、０８Ａと比較してＫＤにおける２倍の改善を示した。

【0264】

ランダム突然変異誘発ライブラリーおよびＶＨ／ＶＬコンビナトリアルライブラリーによる０８Ａのアフィニティ成熟
Ｈ３、Ｌ１およびＬ３に焦点を合わせるのではなくＫＤの改善を達成するために、本発明者らは、ＶＨおよびＶＬコンビナトリアル突然変異誘発ライブラリーを構築するために、ランダム化突然変異誘発のために０８ＡからのＣＤＲ３のＶＨおよびＶＬ領域の６つ全てを標的化した。該配列は、野生型配列と比較して大きな多様性を有するが、減少させた抗原濃度を用いるパンニングは、結合を保持する、より高いアフィニティのクローンの富化をもたらすはずである。パンニング用の以下の３つのＶＨ／ＶＬコンビナトリアルライブラリを作製した：（１）０８Ａ ＶＨ ＋コンビナトリアルＶＬライブラリーを使用する軽鎖シャッフリング、（２）Ｆａｂ ００４ ＶＨ ＋コンビナトリアルＶＬライブラリーを使用する軽鎖シャッフリング、および（３）ＶＨ＋ＶＬコンビナトリアルライブラリー。

【0265】

ＶＨおよびＶＬにおける６つ全てのＣＤＲにわたる多様性を増大させるために、本発明者らはランダム突然変異誘発法を用いた。具体的には、６つのＣＤＲを２０アミノ酸のいずれかに変化させるために、ＮＮＫコドンランダム化を用いて突然変異誘発を行った。ＣＤＲループ内の各残基にランダム突然変異を含有する配列ライブラリーを得るために、合計１２個のライブラリーを構築した。６つのＶＨライブラリを、それぞれ、Ｈ３１～Ｈ３５位（Ｈ１ライブラリ）、Ｈ５１～Ｈ５４位（Ｈ２Ａライブラリ）、Ｈ５５～Ｈ５９位（Ｈ２Ｂライブラリ）、Ｈ６０～Ｈ６４位（Ｈ２Ｃライブラリ）、Ｈ９６～Ｈ１００位（Ｈ３Ａライブラリ）およびＨ９６Ａ～Ｈ１０２位（Ｈ３Ｂライブラリ）においてランダム化した。６つのＶＬライブラリーを、それぞれ、Ｌ２１～Ｌ２７Ａ位（Ｌ１Ａライブラリー）、Ｌ２７Ｂ～Ｌ２９位（Ｌ１Ｂライブラリー）、Ｌ３０～Ｌ３４位（Ｌ１Ｃライブラリー）、Ｌ５１～Ｌ５５位（Ｌ２ライブラリー）、Ｌ８９～Ｌ９３位（Ｌ３Ａライブラリー）およびＬ９３～Ｌ９７位（Ｌ３Ｂライブラリ）においてランダム化した。各ライブラリーからの代表的な個々のコロニーの配列決定は標的化残基の予想ＣＤＲにおけるランダム化を証明した。各ライブラリーは１０^８個を超えるコロニーを生成し、このことは、ライブラリーのサイズが標的領域内の全ての可能なアミノ酸の組合せを示すのに十分であることを示唆している。

【0266】

１２個全てのライブラリーを３ラウンドのパンニングに付した。第３ラウンド生成プラスミドＤＮＡを調製し、突然変異ＣＤＲフラグメントを増幅するための鋳型として使用した。コンビナトリアルＶＨ突然変異誘発ｓｃＦｖを２工程オーバーラップＰＣＲにより作製して、３つのＣＤＲを互いに合体させた。コンビナトリアルＶＬ突然変異誘発ｓｃＦｖを同様にして作製した。重鎖および軽鎖コンビナトリアルライブラリーを、前記のとおりファージミドベクター内にｓｃＦｖをクローニングすることにより作製した。

【0267】

１２個全てのライブラリーを別々に、各ラウンドで抗原濃度を減少させながら、３ラウンドのオフレート（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）ファージ提示選択に付した。比較的高い抗原濃度（１０ｎＭ）を第１ラウンドに用いた。抗原濃度を後続の２ラウンドのそれぞれで１０倍減少させた。第３ラウンド生成物からのＶＨまたはＶＬプール化レパートリーを使用して、３つのＣＤＲを互いに合体させる２工程オーバーラップＰＣＲにより、コンビナトリアルＶＨまたはＶＬ突然変異誘発ライブラリーを作製した。また、オーバーラップＰＣＲを用いて、クローンＦａｂ ００４の重鎖をコンビナトリアル軽鎖と合体させることにより、鎖シャッフリングライブラリーを作製した。これらのコンビナトリアルライブラリーを、漸減濃度（１００ｐＭおよび１０ａｍ）の抗原の存在下、オフレート（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）選択の更なる２つのラウンドに付した。

【0268】

Ｆａｂ ００４から開始することによる、アフィニティの、より大きな増加の可能性ゆえに、Ｆａｂ ００４ ＶＨ軽鎖シャッフリングライブラリーからのパンニングおよびスクリーニングを０８Ａ ＶＨ軽鎖シャッフリングライブラリーより優先させた。Ｆａｂ ００４ ＶＨ軽鎖シャッフリングコンビナトリアルライブラリーの第２ラウンド生成物からの個々の変異体を、ＥＬＩＳＡスクリーニングにより、抗原への陽性結合に関して試験した。合計１０８個のｓｃＦｖをｋｏｆｆによりランク付けした。ｋｏｆｆの改善を伴う７つのクローンをＦａｂ変換用に選択した。ｋｏｎおよびｋｏｆｆをＢＩＡＣＯＲＥにより測定し、ＫＤを計算した。７つ全てのＦａｂが、０８Ａと比較して、ＫＤにおける５～１０倍の改善を示した。これは、単一突然変異誘発ライブラリーを使用する従来の方法で観察されたものより大きな、ＫＤにおける改善であった（表４）。コンビナトリアル軽鎖ライブラリーと組合された３Ｇ９重鎖の第２ラウンドの選択からＦａｂ０９８、Ｆａｂ０９９、Ｆａｂ１００、Ｆａｂ１０１、Ｆａｂ１０２、Ｆａｂ１０３およびＦａｂ１０４を単離した。

【0269】

ＶＨ＋ＶＬコンビナトリアル突然変異誘発ライブラリーを作製するために、ＶＨおよびＶＬコンビナトリアルライブラリーの第１ラウンド生成物からのＶＨおよびＶＬプール化レパートリーを重複ＰＣＲにより組換えて、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖の両方に突然変異を有する組換え変異体の単一ライブラリーを作製した。ＶＨおよびＶＬコンビナトリアルライブラリーを、１０ｐＭの抗原を使用するオフレート（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）選択の更なる２つのラウンドに付した。コンビナトリアルライブラリーの第２ラウンド生成物からの個々の変異体を、ＥＬＩＳＡにより、抗原への陽性結合に関して試験した。合計２１６個のｓｃＦｖをｋｏｆｆによりランク付けした。ｋｏｆｆの改善を伴う４つのクローンをＦａｂ変換用に選択した。ｋｏｎおよびｋｏｆｆをＢＩＡＣＯＲＥにより測定し、ＫＤを計算した。４つのＦａｂ（Ｆａｂ１２８、Ｆａｂ１３３、Ｆａｂ１３８およびＦａｂ１３９）は、０８Ａと比較してＫＤにおける５～１８倍の改善を示した（表４）。

【0270】

選択されたクローンの配列
オフレート（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）改善クローン（ＶＨおよびＶＬ）の可変領域をＰＣＲ増幅した（プライマーはＧｅｎｅｗｉｚ，Ｓｕｚｈｏｕにより合成された）。ＰＣＲ反応は、９５℃で２分、９５℃３０秒、５２℃で１分、７２℃で１分の１５サイクル、７２℃１０分、そしてそれに続く４℃で行った。最終的なＰＣＲ産物を１％ アガロースゲルにおいて確認し、Ｑｉａｇｅｎ ＱＩＡＱＵＩＣＫ精製キットを使用して精製した。

【0271】

精製したＶＬおよびＶＨ ＰＣＲ産物を、それぞれｐＣＰ－ｈＣｋ（ＶＬ）またはｐＣＰ－ｈＣｇ４（Ｆａｂベクター）内にクローニングした。ついで陽性クローンを配列決定のためにＢｉｏＳｕｎｅ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）に送った。ＭＮ ｍｉｄｉ－ｐｒｅｐキット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ，ＵＳＡ）を使用して、プラスミドＤＮＡを調製した。

【0272】

Ｆａｂ９８～１０４のアフィニティ成熟突然変異アラインメント（Ｆａｂ００１と比較した場合の突然変異が下線で示されている）を表３に示す。

【表4】

【0273】

２９３細胞における一過性トランスフェクション
トランスフェクションの約２４時間前に、２９３－Ｆ細胞をＯＰＭ－２９３ ＣＤ０３培地（ＯＰＭ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎａ）内で２．２×１０^６細胞／ｍｌで継代し、シェーカー上、１２０ｒｐｍ／分、３７℃、５％ ＣＯ_２においてインキュベートした。トランスフェクション当日、細胞密度は約４×１０^６細胞／ｍｌであった。最適なトランスフェクションを確保するには、細胞の生存率は９５％を超えている必要がある。

【0274】

細胞培養１００ｍｌ当たり１５０μｇのプラスミドＤＮＡ（Ｆｄ：ＬＣ＝２：３）を調製した。ＤＮＡを、トランスフェクションされる培養液の２０分の１に相当する容量で、ＯＰＴＩ－ＭＥＭ発現培地（Ｇｉｂｃｏ，ＵＳＡ）中で希釈し、１ｍｇのＰＥＩ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＳＡ）を、該ＤＮＡ溶液の場合と同等の容量で、ＯＰＴＩ－ＭＥＭ培地中で希釈した。ＰＥＩ溶液を該希釈ＤＮＡ溶液に加え、ＤＮＡ－ＰＥＩ混合物を穏やかに混合し、トランスフェクション前に室温で１５分間インキュベートした。フラスコの細胞をゆっくりと渦巻かせながら、ＤＮＡ－ＰＥＩ混合物を細胞培養に加え、ＤＮＡ－ＰＥＩ混合物を該細胞と共に４時間インキュベートした。培地容量の２０分の１のペプトン（Ｆｌｕｋａ，ＵＳＡ）をフラスコに加えた。ついで細胞を１２５ｒｐｍ／分、３７℃および５％ ＣＯ_２において培養した。

【0275】

Ｆａｂの精製
第６日の前記馴化培地を、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ８．０）で平衡化された０．６ｍｌのＫＡＰＰＡＳＥＬＥＣＴ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＵＳＡ）カラム上にローディングした。ついで、サンプルのローディングの後、カラムを平衡化バッファーでベースラインまで洗浄した。洗浄後、カラムを５０ｍＭ クエン酸ナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ３．０）で溶出し、ついで直ちに１Ｍ アルギニン、４００ｍＭ コハク酸（ｐＨ９．０）を加えてｐＨ値を５．５に調整した。最終生成物をＰＢＳ溶液に対して透析した。タンパク質純度をＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分析し、その濃度をブラッドフォード法により測定した。

【0276】

精製Ｆａｂのサイズ排除クロマトグラフィー分析
外界温度でＨＰＬＣ系（Ｅ２６９５，Ｗａｔｅｒｓ）を使用するＳＥＣ ＳＩＺＥＳＥＰ－ＳＩＨカラム（Ｗａｔｅｒｓ，内径７．８ｍｍ、長さ３０ｃｍ）で、精製抗体を分析するためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を行った。移動相として、５倍量のＰＢＳバッファーを流速１ｍｌ／分で使用した。注入体積は２０μｌで、２８０ｎｍで検出を行った。

【0277】

精製ＦａｂのＢｉａｃｏｒｅアッセイ
ＣＭ５チップ上への組換えヒトまたはカニクイザルＰＤ－１の固定化： 新たに調製された１：１ ５０ｍＭ ＮＨＳ：２００ｍＭ ＥＤＣの７分間の注入（１０μｌ／分）により、ＣＭ５センサーチップをＦＣ２において活性化した。１０ｍＭ 酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ５．０）中の０．２μｇ／ｍｌの濃度のＰＤ－１を活性化チップ上に５μｌ／分で１２０秒間注入した（ＨＢＳ－ＥＰランニングバッファー：１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３．４ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％ 界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）。残存活性カップリング部位を、１Ｍ エタノールアミンの１０μｌ／分での７分間の注入によりブロッキングした。

【0278】

結合速度論測定： 会合段階において、種々の濃度のＦａｂを３０μｌ／分の流速で１８０秒間注入した。ＨＢＳ－ＥＰバッファーをチップ表面上に６００秒間流すことにより、結合抗体の解離をモニターした。各サイクルの終了時に、再生バッファー（ｐＨ１．７を有する１０ｍＭ グリシンバッファー）を１８０秒間注入することにより、センサー表面を再生させた。参照フローからのシグナルに関してセンソグラムを補正した後、ＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ ２００評価ソフトウェアｖｅｒ．１．０（Ｂｉａｃｏｒｅ，ＧＥ，ＵＳＡ）を使用して、速度論を計算した。

【表5】

【0279】

実施例２：ヒトＰＤ１に対するマウスおよびヒト化抗ＰＤ－１ ｍＡｂのアフィニティ
ＢＩＡｃｏｒｅによる表面速度論
捕捉モードを使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）に基づくアッセイを用いて、ポリヒスチジンタグ付きヒトＰＤ－１（ｈＰＤ１－Ｈｉｓ，９８ＡＦＫ）に対する抗ＰＤ－１抗体の結合速度論およびアフィニティを決定した。製造業者の説明に従い、アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１０００５０）を使用して、シリーズＳセンサーチップＣＭ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００５３０）を活性化させた。供給されたｐＨ５．０の１０ｍＭ 酢酸ナトリウムバッファー中で希釈されたヒト捕捉キット（抗ヒトＦｃ、２５μｇ／ｍＬ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００８３９）またはマウス捕捉キット（抗マウスＦｃ、３０μｇ／ｍＬ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００８３８）抗体を活性化表面上に７分間固定化した。固定化後、表面を１Ｍ エタノールアミン／ＨＣｌ（ｐＨ８．５）で７分間不活性化した。最終的な固定化レベルは、４つのフローセルのそれぞれにおいて、マウス捕捉の場合には約８，０００共鳴単位（ＲＵ）、またはヒト捕捉の場合には約１２，０００ ＲＵに達した。

【0280】

ＨＢＳ－ＥＰ＋［０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ ｖ／ｖ 界面活性剤Ｐ２０］ランニングバッファー中、ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で２５℃で結合速度論を測定した。流速１０μｌ／分でマウスまたはヒトＦｃ捕捉表面上に抗体を捕捉した。フローセル２、３および４上に抗体を捕捉した。フローセル１は捕捉抗体の非存在下の参照体として使用した。２０ｎＭから開始するアナライト９８ＡＦＫ（ｈＰＤ１－Ｈｉｓ）の６点２倍系列希釈液をランニングバッファー（ＨＢＳ－ＥＰ＋）中で調製した。二重参照のために２つのバッファーブランクを含めた。滴定系列物を５０μｌ／分で３分間注入し、ついで６００秒間の解離を行った。各サイクルの後、抗ヒトＦｃチップ上の１０μｌ／ｍＬでの３Ｍ ＭｇＣｌ_２の３０秒間の注入または抗マウスＦｃチップ上の１０μｌ／分での１０ｍＭ グリシン（ｐＨ１．７）の１８０秒間の注入により、表面を再生させた。

【0281】

センサーグラム処理およびデータ分析をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアバージョン（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ）２．０．４（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で行った。参照フローセル１におけるシグナルおよびブランク注入からのシグナルの減算による二重参照の後、抗体結合を示すセンサーグラムを得た。処理された曲線を１：１結合モデルに全体的（グローバル）にフィットさせて、結合速度定数ｋ_ｏｎ（Ｍ^－１ｓ^－１；ここで、「Ｍ」はモル濃度に相当し、「ｓ」は秒に相当する）および解離速度定数ｋ_ｏｆｆ（ｓ^－１）を決定した。これらの速度定数を使用して、平衡解離定数Ｋ_Ｄ（Ｍ）＝ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎを計算した。

【0282】

ＢＩＡｃｏｒｅによる溶液アフィニティ
溶液モードを使用する、ＳＰＲに基づくアッセイを用いて、ポリヒスチジンタグ付きヒトＰＤ－１（ｈＰＤ１－Ｈｉｓ，９８ＡＦＫ）に対する抗ＰＤ－１ヒト化抗体の溶液アフィニティを決定した。製造業者の説明に従い、アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１０００５０）を使用して、シリーズＳセンサーチップＣＭ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００５３０）を活性化させた。ヒトＰＤ１－Ｈｉｓ（ｐＨ５．０の１０ｍＭ 酢酸ナトリウムバッファー中で希釈された４０μｇ／ｍＬの９８ＡＦＫ）を活性化表面上に７分間固定化した。固定化後、表面を１Ｍ エタノールアミン／ＨＣｌ（ｐＨ８．５）で７分間不活性化した。最終的な固定化レベルはフローセルにおいて約６，０００共鳴単位（ＲＵ）に達した。

【0283】

一連の滴定において抗体パラトープの未結合画分を測定することにより、溶液のアフィニティを決定し、この場合、抗体濃度を一定に保ち（５００ｐＭまたは１００ｐＭ）、抗原ｈＰＤ１－Ｈｉｓ（９８ＡＦＫ）濃度を１６点滴定系列において１００ｎＭから３ｐＭまで１：２希釈した。滴定系列物を室温で１６～２４時間インキュベートして平衡に到達させた。抗原が固定化されたＢＩＡｃｏｒｅチップを使用して、競合モードで未結合部位を測定した。この場合、検出されたＳＰＲシグナルは未結合抗体に対応した。

【0284】

ＨＢＳ－ＥＰ＋（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ ｖ／ｖ 界面活性剤Ｐ２０）ランニングバッファー中、ＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ２００において、２５℃で溶液アフィニティを測定した。１６時間を超えるインキュベーションの後の滴定系列物を、ｈＰＤ１－Ｈｉｓ（前記）が固定化されたセンサーチップ上に注入した。１０μＬ／分で１２０秒間（５００ｐＭ ｍＡｂ系列の場合）または４００秒間（１００ｐＭ ｍＡｂ系列の場合）の注入の後、ＲＵに比例するものとして、遊離未結合抗体濃度を測定した。各サイクルの後、３Ｍ ＭｇＣｌ_２とｐＨ２．０の１０ｍＭ グリシンとの１：１混合物の３０μＬ／分での３０秒間の注入により、表面を再生させた。

【0285】

ＫＩＮＥＸＡ Ｐｒｏバージョン１．０２（Ｓａｐｙｄｙｎｅ）を使用して、データ分析を行った。この場合、ＲＵを正規化し、濃度に対してプロットした。２つの滴定（１００ｐＭおよび５００ｐＭの一定の抗体濃度を使用）からの正規化データを、ｎ－カーブ分析（Ｃｕｒｖｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ）バージョン１．０２（Ｓａｐｉｄｙｎｅ）を使用してフィットさせて、各相互作用に関するＫ_Ｄ（Ｍ）値を得た。

【0286】

標準的な表面ベースアフィニティ測定においては、親マウス０８Ａ抗体は０．２４ｎＭのアフィニティを示した。これとは対照的に、ＶＨ ＣＤＲ２における親マウス０８Ａ抗体変異体Ｎ５９Ｑ、Ｎ５９ＥおよびＮ５９Ａは、親マウス０８Ａ抗体と比較して低下したアフィニティを示した。ヒト化０８Ａ ＩｇＧ４抗体変異体は全て、親マウス０８Ａ抗体より高いアフィニティを示した。ＣＤＨＲ２におけるＧ５６Ａ、Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ／Ｓ６１Ｎ補正を含有する後続ヒト化０８Ａ ＩｇＧ４抗体変異体はアフィニティの改善への傾向を示したが、Ｎ５５Ｅはそうではなかった。Ｇ５６Ａ補正を含有するヒト化０８Ａアフィニティ成熟形態Ｆａｂ０９８ ＩｇＧ４抗体はアフィニティを約３倍改善させた。Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を含有するヒト化０８Ａアフィニティ成熟形態Ｆａｂ１００ ＩｇＧ４抗体はアフィニティを約６倍改善させた（表５を参照されたい）。

【表6】

【0287】

溶液モードアフィニティの決定においては、Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を含有するアフィニティ成熟ヒト化０８Ａ ＩｇＧ４ Ｆａｂ １００抗体は、Ｓ６１Ｎ補正を含有するヒト化０８Ａ ＩｇＧ４抗体と比較して有意なアフィニティの改善を示した（表６を参照されたい）。

【表7】

【0288】

実施例３：抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３二重特異性抗体の製造
抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）１８ＡＳＳは、ＣＤＲＨ２ Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を有するアフィニティ成熟Ｆａｂ１００の重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５ＥおよびＳ１８３Ｌ、ＣＨ２突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖを有するＩｇＧ１定常領域とを含有する抗ＰＤ－１重鎖（配列番号１０２）；アフィニティ成熟Ｆａｂ１００の軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異Ｑ１２４Ｒ、Ｔ１７８Ｒを有するカッパ定常領域とを含有する抗ＰＤ－１軽鎖（配列番号１０３）；ＷＯ ２０１６０２８６７２のヒト化２２Ｄ２抗体Ａｂ６の重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異Ｓ１８１Ｋ、ＣＨ２突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを有するＩｇＧ１定常領域とを含有する抗ＬＡＧ３重鎖（配列番号９６）；ＷＯ ２０１６０２８６７２の抗体Ａｂ６の軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異Ｑ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｔ、Ｔ１７８ＹおよびＴ１８０Ｅを有するカッパ定常領域とを含有する抗ＬＡＧ３軽鎖（配列番号９８）を有する。

【0289】

抗ＰＤ－１重鎖および抗ＬＡＧ３重鎖のそれぞれにおけるＣＨ３突然変異（ＥＵ番号付け）は抗ＰＤ－１アームと抗ＬＡＧ３アームとのヘテロ二量体形成を促進する。抗ＰＤ－１重鎖および軽鎖ならびに抗ＬＡＧ３重鎖および軽鎖におけるＣＨ１およびＣκ突然変異（ＥＵ番号付け）は重鎖および軽鎖の適切なペア形成を促進する。ＣＨ２突然変異（ＥＵ番号付け）はエフェクター機能を低下させる。Ｓ６１Ｎ補正はグリコシル化部位を除去し、Ｇ５６Ａ補正は脱アミド化部位（配列番号における連続的番号付け）を除去する。

【0290】

１８ＡＳＳのトランスフェクション、発現および精製
ＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥトランスフェクション試薬を使用する一過性トランスフェクションにより、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）において１８ＡＳＳを組換え発現させた。重鎖および軽鎖抗体鎖の２つのペア（１８ＡＳＳ：抗ＰＤ－１：配列番号１０２および１０３；抗ＬＡＧ３：配列番号９６および９８）をコードする遺伝子を、哺乳類発現用に最適化されたコドンを使用する遺伝子合成により構築した。４つの鎖をコードする発現カセットをｐＴＴ５哺乳類発現ベクター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ，Ｃａｎａｄａからのもの）内にクローニングした。異なるタンパク質鎖（２つの重鎖および２つの軽鎖）をコードする４つのプラスミドＤＮＡを１：１：１：１のプラスミドＤＮＡ比でトランスフェクトし、７日間発現させた後、細胞生存率９３％で回収した。構築された分泌抗体をプロテインＡクロマトグラフィー樹脂（ＭＡＢＳＥＬＥＣＴ ＳＵＲＥ ＬＸ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の存在下の一晩のインキュベーションにより培養上清から捕捉し、通常のタンパク質精製法によって更に精製した。キャピラリーゲル電気泳動、分析サイズ排除クロマトグラフィーおよび質量分析（無傷質量）で測定した最終的な二重特異性抗体の純度は９８％を超えた。

【0291】

実施例４：抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体の製造
抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体（ＴｓＡｂ）（ロット８３ＢＣＮまたは５１ＡＶＷ）は、ＣＤＲＨ２ Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を有するアフィニティ成熟Ｆａｂ１００の重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５ＥおよびＳ１８３Ｌ、ＣＨ２突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖを有するＩｇＧ１定常領域［ここで、Ｃ末端は、配列ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１６６）を有する１６アミノ酸のＧＳリンカーを介して抗ＴＩＧＩＴ ３１Ｃ６ ｓｃＦｖに結合しており、該ｓｃＦｖはＶＬ－ＶＨ形態であり、配列ＧＧＳＳＲＳＳＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号１６７）を有する２１アミノ酸のＧＳリンカーと互いに融合している］とを含有する抗ＰＤ－１重鎖（配列番号１５４）；アフィニティ成熟Ｆａｂ１００の軽鎖可変領域と、Ｃκ変異Ｑ１２４Ｒ、Ｔ１７８Ｒを有するカッパ定常領域とを含有する抗ＰＤ－１軽鎖（配列番号１０３）；ＷＯ ２０１６０２８６７２のヒト化２２Ｄ２抗体Ａｂ６の重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異Ｓ１８１Ｋ、ＣＨ２突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを有するＩｇＧ１定常領域［ここで、Ｃ末端は、配列ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１６６）を有する１６アミノ酸のＧＳリンカーを介して抗ＴＩＧＩＴ ３１Ｃ６ ｓｃＦｖに結合しており、該ｓｃＦｖはＶＬ－ＶＨ形態であり、配列ＧＧＳＳＲＳＳＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号１６７）を有する２１アミノ酸のＧＳリンカーと互いに融合している］とを含有する抗ＬＡＧ３重鎖（配列番号１５３）；ＷＯ ２０１６０２８６７２の抗体Ａｂ６の軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異Ｑ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｔ、Ｔ１７８ＹおよびＴ１８０Ｅを有するカッパ定常領域とを含有する抗ＬＡＧ３軽鎖（配列番号９８）を有する。抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体（ＴｓＡｂＹ３１Ｗ）（ロット３０ＢＣＭ）は、抗ＬＡＧ３ ２２Ｄ２軽鎖ＣＤＲ１がＹ３１Ｗ突然変異を有すること（配列番号１５５）を除いて、ＴｓＡｂと同じ配列を有する。Ｙ３１Ｗ突然変異はチロシン硫酸化部位を除去する。

【0292】

抗ＰＤ－１重鎖および抗ＬＡＧ３重鎖のそれぞれにおけるＣＨ３突然変異（ＥＵ番号付け）は抗ＰＤ－１アームと抗ＬＡＧ３アームとのヘテロ二量体形成を促進する。抗ＰＤ－１重鎖および軽鎖ならびに抗ＬＡＧ３重鎖および軽鎖におけるＣＨ１およびＣκ突然変異（ＥＵ番号付け）は重鎖および軽鎖の適切なペア形成を促進する。ＣＨ２突然変異（ＥＵ番号付け）はエフェクター機能を低下させる。Ｓ６１Ｎ補正はグリコシル化部位を除去し、Ｇ５６Ａ補正は脱アミド化部位（配列番号における連続的番号付け）を除去する。

【0293】

ＴｓＡｂおよびＴｓＡｂ Ｙ３１Ｗのトランスフェクション、発現および精製
ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅトランスフェクション試薬を使用する一過性トランスフェクションにより、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ－Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）においてＴｓＡｂおよびＴｓＡｂ Ｙ３１Ｗを組換え発現させた。重鎖および軽鎖抗体鎖の２つのペア（ＴｓＡｂ：抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ：配列番号１５４および１０３；抗ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ：配列番号１５３および９８）（ＴｓＡｂ Ｙ３１Ｗ：抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ 配列番号：１５４および１０３；抗ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ：配列番号１５３および１５５）をコードする遺伝子を、哺乳類発現用に最適化されたコドンを使用する遺伝子合成により構築した。４つの鎖をコードする発現カセットをｐＴＴ５哺乳類発現ベクター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ，Ｃａｎａｄａからのもの）内にクローニングした。異なるタンパク質鎖（ＬＡＧ３ ＨＣ：ＰＤ１ ＨＣ：ＬＡＧ３ ＬＣ：ＰＤ１ ＬＣ）をコードする４つのプラスミドＤＮＡを３５：３５：２０：１０のプラスミドＤＮＡ比でトランスフェクトし、７日間発現させた後、細胞生存率９３％で回収した。プロテインＡカートリッジ（ＰＯＲＯＳＡ２０カラム，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ，Ｐａｒｔ＃ ２－１００１－００，２．１ｍｍＤ×３０ｍｍＨ，１０４μＬ）と共に６００／７１７／９９６ ＨＰＬＣ系（ＷＡＴＥＲＳ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用して、上清中の抗体の定量を行った。ＮＡＮＯＳＥＰ ＭＦ ＧＨＰ ０．４５μｍ遠心分離装置（ＰＡＬＬ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐａｒｔ＃ＯＤＧＨＰＣ３５）を使用して８０００～１１０００ｇで３分間遠心分離することによりサンプルを濾過した後、ＰＢＳを使用して２ｍＬ／分の流速でカラム上に注入した。溶出を０．１５Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ２．０）で行った。ＥＭＰＯＷＥＲソフトウェア（ＷＡＴＥＲＳ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用して、データを処理し、線形回帰により曲線をフィットさせた。

【0294】

構築された分泌抗体をプロテインＡクロマトグラフィー樹脂（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＬＸ－ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の存在下の一晩のインキュベーションにより培養上清から捕捉し、通常のタンパク質精製法によって更に精製した。サンプルをサンプル変性溶液（還元条件用）またはタンパク質発現サンプルバッファー（非還元条件用）のいずれかと混合し、ＢｉｏＲａｄハードシェル９６ウェルプレート上にローディングした。ついでサンプルを７０℃で１５分間加熱し、遠心分離し、水およびゲル色素溶液と混合した後、ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩ上で泳動させた。ＣＥ－ＳＤＳによる純度が９５％を超える画分を一緒にプールして、最終サンプルを得た。

【0295】

キャピラリーゲル電気泳動、分析サイズ排除クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーおよび質量分析（無傷質量）で測定した最終的な三重特異性抗体の純度は９８％を超えた。

【0296】

実施例５：抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体の結合アフィニティ
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００またはＢｉａｃｏｒｅ ４０００バイオセンサー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）を使用して、結合アフィニティを測定した。固定化、サンプル希釈およびデータ収集のために、以下のランニングバッファーを使用した：１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０５％ ｖ／ｖ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０、３ｍＭ ＥＤＴＡ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００６６９，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）。全ての実験は２５℃で行った。抗ヒトＦｃ抗体により捕捉された抗体への抗原結合を、シリーズＳセンサーチップＣＭ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，２９１４９６０３，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）を使用して測定した。ヒト抗体捕捉キット（Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｋｉｔ）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００８３９，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）およびアミンカップリングキット（Ａｍｉｎｅ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｋｉｔ）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００６３３，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）における説明に従い、抗ヒトＦｃ抗体をチップの全表面上に固定化した。各相互作用のアフィニティを測定するために、抗体を捕捉し、４つまたは６つの濃度の各抗原を３０～５０μＬ／分の流速で３分間注入した。ヒトＰＤ１（５０ＡＦＲ）の濃度は０．１８ｎＭ～４４ｎＭの範囲であった。ヒトＬＡＧ－３（６０ＡＸＥ）の濃度は０．０１９ｎＭ～４．５ｎＭの範囲であった。ヒトＴＩＧＩＴ（９４ＡＧＶ）の濃度は０．１６ｎＭ～８０ｎＭの範囲であった。抗原注射後、相互作用の解離を１５分間モニターした。結合サイクルの間に、３Ｍ ＭｇＣｌ_２を３０秒間注入して、抗体および抗原をチップから除去した。

【0297】

Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）バージョン２．０またはＢｉａｃｏｒｅ ４０００評価ソフトウェアバージョン１．１（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）を使用して、データを処理し、フィットさせた。陰性対照フローセルからの応答を差し引き、バッファー注入からの応答または２回のバッファー注入からの平均応答を差し引くことにより、データを「二重参照」した。ついでデータを「１：１結合」モデルにフィットさせて、結合速度定数ｋ_ａ（Ｍ^－１ｓ^－１；ここで、「Ｍ」はモル濃度に相当し、「ｓ」は秒に相当する）および解離速度定数ｋ_ｄ（ｓ^－１）を決定した。これらの速度定数を使用して、平衡解離定数Ｋ_Ｄ（Ｍ）＝ｋ_ｄ／ｋ_ａを計算した。

【表8】

【0298】

実施例６：ヒトＴ細胞クローン＋ＪＹ．ｈＰＤ－Ｌ１／ＣＤ１５５アッセイ
ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞クローンの作製および培養
ＭＨＣクラスＩＩ同種抗原特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞クローンＢＣ４－４９をＥＢＶ形質転換Ｂ細胞株ＪＹとの２ラウンドの混合白血球反応により作製し、限界希釈によりクローニングした。該クローンを２週間ごとの間隔で同種特異的抗原で再刺激し、イッセル（Ｙｓｓｅｌ’ｓ）培地（ＩＭＤＭ，Ｇｉｂｃｏ １２４４０－０５３；ヒト血清ＡＢ、Ｇｅｍｉｍｉ １００５１２；ペニシリン／ストレプトマイシン、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ ３０－００２－ＣＩ；ヒトアルブミン、Ｓｉｇｍａ Ａ９０８０；ＩＴＳ－Ｘ、Ｇｉｂｃｏ ５１５０００５６；トランスフェリン、Ｒｏｃｈｅ １０６５２２０２００１；ＰＡ Ｂｉｏｘｔｒａ Ｓｉｇｍａ ｐ５５８５；ＬＡ－ＯＡ－アルブミン、Ｓｉｇｍａ Ｌ９６５５）内で培養した。新鮮なＰＢＭＣを、スタンフォード血液センター（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）により提供された２つのヒトバフィーコートから単離し、１：１の細胞比でプールした。ＰＢＭＣを、使用前に、ガンマ線照射装置において４０００ラドの線量で照射した。野生型ＪＹ細胞を調製し、５０００ラドの線量で照射した。最終濃度０．２×１０^６／ｍＬのＣＤ４＋ Ｔ細胞、１×１０^６／ｍＬの照射ＰＢＭＣ、０．１×１０^６／ｍＬの照射ＪＹおよび１００ｎｇ／ｍＬのＰＨＡ（Ｓｉｇｍａ Ｌ９０１７）を使用して、Ｔ細胞クローンを、フィーダーの存在下、２４ウェルプレート内で１ｍｌ／ウェルで培養した。組換えヒトＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；２０２－ＩＬ／ＣＦ）を再刺激後第３日に最終濃度１００ｎｇ／ｍＬで加え、増殖中の全体にわたって３～４日ごとに補充した。細胞を０．５～１．０×１０^６／ｍＬの最適濃度まで継代した。再刺激後第７日に、十分なレベルのＬＡＧ－３およびＴＩＧＩＴならびに中程度のレベルのＰＤ－１がＴ細胞表面上で発現された。

【0299】

ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞機能アッセイ
同種抗原特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞を抗原再刺激後第７日の２４ウェル培養プレートから採取し、ついで、２ｍＭ ＥＤＴＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，１５５７５－３８）を含有する２０ｍｌのＰＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ，ＳＨ３００２８０２）で遠心分離により２回洗浄した。ペレットをイッセル培地内の単細胞懸濁液に再懸濁させた。三重特異性抗体８３ＢＣＮおよびそのＹ３１Ｗ突然変異体３０ＢＣＭを、９６ウェルＵ底培養プレート（Ｆａｌｃｏｎ，３５３０７７）において、１００μＬの容量中で合計７回の希釈で、最終最高濃度１３３ｎＭから始めるイッセル培地内での５倍系列希釈により滴定した。４×１０^５細胞／ｍＬの密度のＴ細胞懸濁液５０μｌを、滴定抗体を含有するウェルに加えた。抗体／Ｔ細胞混合物を、５％ ＣＯ_２、３７℃のインキュベーター内で１時間プレインキュベートした。ヒトＰＤ－Ｌ１およびヒトＣＤ１５５トランスジーン発現ＪＹ細胞（ＪＹ．ｈＰＤ－Ｌ１／ＣＤ１５５）を共培養において使用して、Ｌａｇ３に対するリガンドであるＭＨＣクラスＩＩを含むアロ特異的抗原を得た。Ｔ－７５フラスコ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，１５６４９９）内で、１０％ ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｅｌｌｇｒｏ，１０－０４０－ＣＶ）内で培養されたＪＹ．ｈＰＤ－Ｌ１／ＣＤ１５５細胞を採集し、ガンマ線照射装置において５０００ラドの線量で照射し、ついで、２ｍＭ ＥＤＴＡを含有するＰＢＳで遠心分離により２回洗浄した。ペレットをイッセル培地で再懸濁させ、プレーティング前に４０μｍのセルストレーナーで濾過した。２×１０^５細胞／ｍＬの濃度の５０μｌ／ウェルのＪＹ．ｈＰＤ－Ｌ１／ＣＤ１５５懸濁液を、プレインキュベートされた抗体－Ｔ細胞混合物中に、２：１のＴ細胞：ｈＰＤ－Ｌ１／ＣＤ１５５細胞の比で分注した。全ての条件を重複反復して行った。約３日間の培養の後、ウェル当たり１００μｌの上清をヒトＩＦＮγの定量のために回収した。ｈＩＦＮγ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＳＩＦ５０）を使用して、重複反復物からのプール化上清におけるＩＦＮγレベルを評価するために、ヒトＩＦＮγＥＬＩＳＡを行った。製造業者により提供された標準的なプロトコルに従い、アッセイを行った。ＧｒａｐｈＰａｄプリズムソフトウェアを使用して、ＥＣ５０値を計算した。これらの実験からのデータを図１に示す。

【0300】

この実施例が実証したところによると、抗ヒトＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体ＴｓＡｂ（８３ＢＣＮ）およびそのＴｓＡｂ Ｙ３１Ｗ突然変異体（３０ＢＣＭ）は、Ｔ細胞クローンにより発現されたヒトＰＤ－１、ヒトＬＡＧ－３およびヒトＴＩＧＩＴに結合し、ＰＤ－Ｌ１とのＰＤ－１の相互作用を遮断し、ＭＨＣクラスＩＩとのＬＡＧ－３の相互作用を遮断し、ＣＤ１５５とのＴＩＧＩＴの相互作用を遮断し、それにより、三重ＰＤ－Ｌ１媒介性、ＭＨＣクラスＩＩ媒介性およびＣＤ１５５媒介性抑制に基づく同種刺激に対してＩＦＮγを用量依存的に産生するようにＴ細胞が応答することを可能にした。また、この実施例は、抗ヒトＰＤ－１／ＬＡＧ－３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体ＴｓＡｂ（８３ＢＣＮ）およびそのＴｓＡｂ Ｙ３１Ｗ突然変異体（３０ＢＣＭ）がＴ細胞ＩＦＮγ産生の促進において同等の効力を有することを示した。アイソタイプ対照抗体は活性化Ｔ細胞クローンによるＩＦＮγ産生を増強しなかった。

【0301】

実施例７：ＢＩＡｃｏｒｅによればＴｓＡｂはヒトＰＤ－１、ＬＡＧ－３およびＴＩＧＩＴに同時に結合しうる
ヒトＦｃ捕捉表面を使用するＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）における表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて、三重特異性抗体（ＴｓＡｂ）がその３つの抗原全てに同時に結合する能力を測定した。ＧＥヒト抗体捕捉キット（Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｋｉｔ）（Ｃａｔ＃ＢＲ１００８３９）を製造業者の説明に従い使用して、シリーズＳ ＣＭ５チップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を調製した。

【表9】

【0302】

抗ＰＤ－１／ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体ＴｓＡｂ（５１ＡＶＷ）を、１０分間の表面安定化および捕捉減衰を可能にした後、約３００ＲＵレベルで捕捉した。３つのヒト抗原、すなわち、ＰＤ－１－Ｈｉｓ（５０ＡＦＲ）、ＬＡＧ３－Ｈｉｓ（６６ＡＫＯ）およびＴＩＧＩＴ－Ｈｉｓ（８７ＡＧＸ）のそれぞれを、以下の表に示されている最終濃度の、ＨＢＳ－ＥＰランニングバッファー中の互いのプレミックス組合せ体として調製した。ＬＡＧ３－Ｈｉｓ（６６ＡＫＯ）の濃度は、それが遥かに高いアフィニティ（～ｐＭ）を有することから、およびチップへの非特異的結合を最小化するために、より低く維持した。

【表10】

【0303】

サンプルプレミックスを、３つの抗原の６つの連続した組合せの全てをカバーするように注入した。適切な順序（例えば、プレミックス１－＞４－＞７、プレミックス２－＞６－＞７、プレミックス３－＞５－＞７）でのプレミックスの注入は、第１の注入および第２の注入からの抗原活性、ならびに顕著な解離の場合の占拠部位のほぼ飽和を維持するのに役立った。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００では、最初の２回の注入はデュアル注入モードを用いて行い、第３の注入は通常の注入モードを用いて行った（違いは、第２の注入と第３の注入との間の余剰時間である）。抗原自体が、プレミックスにおいて、自己会合する、または互いに相互作用する可能性があるが、解釈を単純にするために、それは可能性が低い、または有意ではないと仮定した。

【0304】

各注入の開始から各工程に関する最大シグナルまでの結合レベル（ＲＵ単位）を推定した。これを、分子の捕捉レベルおよび分子量に基づく理論上の最大値と比較して、以下の推定結合能（％ ＢＣ）を得た。

【数1】

【0305】

ここで、結合は、各抗原注入シグナルの高さに基づく、抗原に関する推定結合レベルであり、捕捉は、捕捉されたＴｓＡｂの量であり、ｎはＴｓＡｂ上の所与抗原に対する結合部位の数であり（すなわち、ＰＤ１およびＬＡＧ３の場合はｎ＝１、ＴＩＧＩＴの場合はｎ＝２）、ＭＷは抗原またはＴｓＡｂの分子量である。

【0306】

高濃度の抗原をほぼ飽和の各結合部位に連続的に注入することにより、各抗原に関する部位占拠を推定し、結果は、三重特異性抗体上の全ての利用可能な部位の同時占拠に合致する結合シグナルを示した。各センサーグラム（図２）において、ＴｓＡｂ（５１ＡＶＷ）は最初の抗原注入の前に約３００ＲＵで捕捉された。プレミックス注入の際のシグナルにおける各後続上方シフトは未占拠部位への抗原の結合を示す。完全占拠部位に関する典型的な％ＢＣは、マトリックス効果、分子量変動（例えば、グリコシル化）、高速解離、非特異的結合、試薬品質（例えば、凝集）などにより、約７０％～約１２０％の範囲となりうる。図面に示されている％ＢＣはそれらの３つの抗原に関する良好な全体的結合能を示しており、最初の結合体に関して、幾分高い％ＢＣを示している。抗原結合のいずれかが他の抗原の遮断もしくは置換につながる場合、または抗原結合が捕捉表面からのＴｓＡｂの遊離につながる場合、シグナル損失の幾らかの可能性があるが、注入順序に無関係に％ＢＣが一貫していることは、そのような事象が重要でないことを示唆している。

【表11】

【0307】

実施例８：ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ二量体化アッセイにおける細胞上のＰＤ－１／ＬＡＧ３、ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴまたはＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴへのＴｓＡｂおよびＴｓＡｂ Ｙ３１Ｗの結合
同一細胞上の２つのリガンドに同時に結合する三重特異性抗体の能力を、ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ二量体化（Ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）細胞ベースアッセイを用いて実証した。このアッセイは、酵素断片補完（ｅｎｚｙｍｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ）（ＥＦＣ）技術を利用するものであり、この場合、β－ガラクトシダーゼ（β－ｇａｌ）酵素が、独立して不活性である２つの断片、すなわち、ＰｒｏＬｉｎｋ（ＰＫ）および酵素アクセプター（Ｅｎｚｙｍｅ Ａｃｃｅｐｔｏｒ）（ＥＡ）に分割される。それらは、タンパク質間相互作用により補完されると、化学発光基質を加水分解して光を生成する活性β－ｇａｌ酵素を生成する。ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ Ｕ２ＯＳ細胞（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）は、ＰＫ断片上の標的タンパク質１とＥＡ断片上の標的タンパク質２とを共発現するように操作されている：ヒトＰＤ１／ＬＡＧ３二量体細胞クローン＃９（ロット５６ＡＵＡ）、ヒトＰＤ１／ＴＩＧＩＴ二量体細胞クローン＃５（ロット１４ＢＡＵ）、およびヒトＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ二量体細胞クローン＃１６（ロット９５ＢＣＳ）。９６ウェル白色組織培養プレート内で、アッセイコンプリート細胞プレーティング試薬（Ａｓｓａｙ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｃｅｌｌ Ｐｌａｔｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ）（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）において、１０，０００細胞／１００μＬ／ウェルで、細胞をプレーティングした。０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％ ｖ／ｖ 界面活性剤Ｐ２０中の４．５ｎＭから開始するＴｓＡｂまたは対照抗体の１６点２．２５倍滴定物を１０μＬ／ウェルで細胞に加え、３７℃、５％ ＣＯ_２で１６時間インキュベートした。ついで、ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒフラッシュ検出試薬（Ｆｌａｓｈ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ）（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）を１１０μＬ／ウェルで加え、プレートを暗所で室温で１時間インキュベートし、ついで、それを発光プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５ｅ）で１秒積分で読み取った。化学発光シグナルを正規化し、抗体濃度に対してプロットした。ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウェアを使用する非線形回帰分析により、結合ＥＣ５０を計算した。

【0308】

ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ二量体化細胞ベース近接アッセイは、ＴｓＡｂおよびＴｓＡｂ Ｙ３１Ｗが同一細胞上のＰＤ－１およびＬＡＧ３、ＰＤ－１およびＴＩＧＩＴ、またはＬＡＧ３およびＴＩＧＩＴに同時に結合しうることを示した（図３Ａ～Ｃを参照されたい）。また、ＴｓＡｂおよびＴｓＡｂ Ｙ３１Ｗ突然変異体は、３つの二量体化アッセイのそれぞれにおいて、類似した結合ＥＣ５０を示した。

【表12】

【0309】

実施例９：アカゲザル全血における薬物治療後のＰＤ－１発現の評価
３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ１／ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ三重特異性抗体または抗ＰＤ１／ＬＡＧ３二重特異性抗体１８ＡＳＳが投与されたアカゲザルから、投与の前および後の複数の時点で全血を収集した。各時点からの１００μＬの全血を、２ｍＬの塩化アンモニウム－カリウム細胞溶解液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，カタログ番号Ａ１０４９２－０１）で室温で５分間、細胞溶解した。ついで細胞を４００Ｇ、４℃で５分間の遠心分離によりペレット化した。次に、細胞を０．５μｇのビオチン化キートルーダ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）非競合性ＰＤ－１ナノボディ（Ｌｌａｍａ×［ＰＤ－１＿Ｈ］ＶＨＨ（Ｆ０２３７５０８Ｃ０３）Ｆｌａｇ３－Ｈｉｓ（ＰＸ），Ｍｅｒｃｋ，ロット番号１２ＡＭＶ）と共に４℃で３０分間インキュベートした。サンプルをリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ，Ｈｙｃｌｏｎｅ，カタログ番号ＳＨ３００２８．０２）で洗浄し、ＰＢＳ中の固定可能な生存性色素（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，カタログ番号６５－０８６６－１８）の０．２％溶液１００μＬと共に４℃で３０分間インキュベートした。次にサンプルを２ｍＬのＦＡＣＳバッファー［２％ ウシ胎児血清（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，カタログ番号ＳＨ３００８８．０３）と２ｍＭ 二カリウム－エチレンジアミン四酢酸とを含有するＰＢＳ］で洗浄し、マウス血清の２％溶液（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，カタログ番号０１５－０００－１２０）で４℃で１０分間ブロッキングした。この後、表面マーカーに対する蛍光標識抗体（表１２）とストレプトアビジンとを含有する１００μＬのフローサイトメトリーパネルと共に４℃で３０分間インキュベートした。ついでサンプルをＦＡＣＳバッファーで洗浄し、１．６％ パラホルムアルデヒド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，カタログ番号１５７１０）で４℃で１５分間固定した。細胞を再び洗浄し、ペレット化し、２００μＬのＦＡＣＳバッファーに再懸濁させ、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターで取得した。

【0310】

データ分析をＦｌｏｗ Ｊｏ Ｖ１０ソフトウェアで行った。生存性色素での染色に基づいて、死細胞を分析から除外した。前方散乱および側方散乱に基づいて、末梢血単核細胞を特定した。ＣＤ１４に関する細胞表面染色を用いて、リンパ球から単球を分離した。ＣＤ２０、ＮＫＧ２ａおよびＣＤ３抗体を使用して、リンパ球をＢ細胞、Ｔ細胞およびＮＫ細胞に分割した。ついでＣＤ３＋ Ｔ細胞をＣＤ４＋ 細胞およびＣＤ８ ＋細胞に更に細分した。ＣＤ４＋ 細胞上の全ＰＤ－１発現を、標識ストレプトアビジンに関して陽性のサブセットをゲーティングすることにより評価し、ＣＤ４＋ 細胞の陽性率として表した。ＰＤ－１発現の投与前平均を計算するために、２つの投与前時点のＰＤ－１陽性率（％）を平均した。ＰＤ－１発現の変化率を、以下の式を用いて計算した。

【0311】

変化率＝（陽性率／投与前平均）^＊１００

【表13】

【0312】

細胞表面上でＰＤ－１受容体を発現するＣＤ４＋ Ｔ細胞の割合の減少が、三重特異性抗体抗ＰＤ１／ＬＡＧ３／ＴＩＧＩＴ ＴｓＡｂが投与されたアカゲザル（ｎ＝４）において観察され、ＰＤ－１発現の最小量は投与後第３日に観察された。抗ＰＤ１／ＬＡＧ３二重特異性抗体１８ＡＳＳをサルに注射した場合には、同じ細胞集団においてＰＤ－１の減少は観察されなかった（図４および５を参照されたい）。エラーバーは平均からの標準偏差を表す。

【0313】

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１１．Ｇａｏら，Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＰＤ－Ｌ１ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｎｅｓｓ ａｎｄ ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２００９）１５：９７１－９７９．
１２．Ｎａｋａｎｉｓｈｉら，Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｂ７－Ｈ１（ＰＤ－Ｌ１）ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒ ｇｒａｄｅ ａｎｄ ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ ｃａｎｃｅｒｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（２００７）５６：１１７３－１１８２．
１３．Ｈｉｎｏら，Ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ－１ ｉｓ ａ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ（２０１０）１１６：１７５７－１７６６．
１４．Ｇｈｅｂｅｈら，Ｆｏｘｐ３＋ ｔｒｅｇｓ ａｎｄ Ｂ７－Ｈ１＋／ＰＤ－１＋ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｃｏ－ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｈｉｇｈ－ｒｉｓｋ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ： ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ（２００８）８：５７．
１５．Ａｈｍａｄｚａｄｅｈｅｔら，Ｔｕｍｏｒ ａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＣＤ８ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＰＤ－１ ａｎｄ ａｒｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ ｉｍｐａｉｒｅｄ．Ｂｌｏｏｄ（２００９）１１４：１５３７－１５４４．
１６．Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，ＰＤ－１ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｂｙ ｔｕｍｏｒ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｏｕｔｃｏｍｅ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｅｎａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００７）１５：１７５７－１７６１．
２０１９年７月３０日付出願の米国仮特許出願第６２／８８０，１５８号の全体を参照により本明細書に組み入れることとする。本明細書中に引用されている全ての参考文献を、各個の刊行物、データベースエントリー（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願または特許が参照により本明細書に組み入れられると具体的かつ個別に示されている場合と同様に、参照により本明細書に組み入れることとする。参照により組み入れるというこの陳述は、そのような引用が、参照により組み入れるという宣誓陳述の直前直後にない場合であっても、３７ Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５７（ｂ）（１）に従い、各個の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願または特許［それらのそれぞれは３７ Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５７（ｂ）（２）に従い明らかに特定されるものである］に関連づけることを出願人が意図しているものである。参照により組み入れるという宣誓陳述が本明細書中に含まれている場合、それは、参照により組み入れるというこの一般的（ｇｅｎｅｒａｌ）陳述を何ら弱めるものではない。本明細書における参考文献の引用は、該参考文献が関連先行技術であると自認するものではなく、また、それは、これらの刊行物または文書の内容または日付に関して何ら自認するものでもない。

【0314】

本発明は、本明細書に記載されている特定の実施形態により範囲において限定されるものではない。実際、本明細書に記載されているものに加えて、本発明の種々の修飾が前記説明および添付図面から当業者に明らかとなるであろう。そのような修飾は添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれると意図される。

【0315】

前記の明細書は、当業者が本発明を実施しうるのに十分なものであるとみなされる。本明細書に示され記載されているものに加えて、本発明の種々の修飾が前記説明から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。

【表14】

【0316】

イタリック体の突然変異（可変領域における突然変異は連続的番号付けを用いており、定常領域における突然変異はＥＵ番号付けを用いている）、下線はＣＤＲ領域（Ｋａｂａｔ）を示す。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図2F】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4】

【図5】

【配列表】

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【国際調査報告】