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特表2022-547208ニコチニルアルコールエーテル誘導体のマレイン酸塩、その結晶形、及びその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-11-10
(54)【発明の名称】ニコチニルアルコールエーテル誘導体のマレイン酸塩、その結晶形、及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07D 213/30 20060101AFI20221102BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20221102BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20221102BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20221102BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20221102BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20221102BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20221102BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20221102BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20221102BHJP
A61P 7/06 20060101ALI20221102BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20221102BHJP
A61P 21/04 20060101ALI20221102BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20221102BHJP
A61P 5/14 20060101ALI20221102BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20221102BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20221102BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20221102BHJP
A61P 31/00 20060101ALI20221102BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20221102BHJP
A61K 31/4406 20060101ALI20221102BHJP
【ＦＩ】
C07D213/30 CSP
A61P21/00
A61P17/00
A61P9/00
A61P19/02
A61P29/00 101
A61P25/00
A61P1/16
A61P13/12
A61P7/06
A61P1/04
A61P21/04
A61P3/10
A61P5/14
A61P31/12
A61P31/04
A61P37/06
A61P31/00
A61P35/00
A61P29/00
A61K31/4406
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022515664
(86)(22)【出願日】2020-09-09
(85)【翻訳文提出日】2022-04-26
(86)【国際出願番号】 CN2020114137
(87)【国際公開番号】W WO2021047528
(87)【国際公開日】2021-03-18
(31)【優先権主張番号】201910864721.X
(32)【優先日】2019-09-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518416551
【氏名又は名称】中国医学科学院薬物研究所
【氏名又は名称原語表記】ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＯＦ ＭＡＴＥＲＩＡ ＭＥＤＩＣＡ， ＣＨＩＮＥＳＥ ＡＣＡＤＥＭＹ ＯＦ ＭＥＤＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ
【住所又は居所原語表記】ＺＨＡＮＧ ＸＵＢＩＮ， ＮＯ．Ａ２， ＮＡＮ ＷＥＩ ＲＯＡＤ， ＸＩＣＨＥＮＧ ＤＩＳＴＲＩＣＴ， ＢＥＩＪＩＮＧ １０００５０， ＰＥＯＰＬＥ’Ｓ ＲＥＰＵＢＬＩＣ ＯＦ ＣＨＩＮＡ
(74)【代理人】
【識別番号】100166729
【弁理士】
【氏名又は名称】武田 幸子
(71)【出願人】
【識別番号】519178593
【氏名又は名称】天津紅日薬業股▲分▼有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＴＩＡＮＪＩＮ ＣＨＡＳＥ ＳＵＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ
【住所又は居所原語表記】ＮＯ． ２０， ＱＵＡＮＦＡ ＲＯＡＤ， ＴＩＡＮＪＩＮ ＷＵＱＩＮＧ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ ＡＲＥＡ， ＴＩＡＮＪＩＮ， ３０１７００ ＰＥＯＰＬＥ’Ｓ ＲＥＰＵＢＬＩＣ ＯＦ ＣＨＩＮＡ
(72)【発明者】
【氏名】フェン ジーチアン
(72)【発明者】
【氏名】チェン シャオグアン
(72)【発明者】
【氏名】マー チェン
(72)【発明者】
【氏名】ヤン ヤン
(72)【発明者】
【氏名】ライ ファンファン
(72)【発明者】
【氏名】ワン ユーチェン
(72)【発明者】
【氏名】ジー ミン
(72)【発明者】
【氏名】グオ カイジン
【テーマコード（参考）】
4C055
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C055AA01
4C055BA01
4C055CA02
4C055CA16
4C055CB10
4C055DA01
4C055FA41
4C055GA01
4C055GA03
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086AA04
4C086BC17
4C086GA14
4C086GA15
4C086GA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA03
4C086NA05
4C086NA11
4C086ZA01
4C086ZA36
4C086ZA55
4C086ZA68
4C086ZA75
4C086ZA81
4C086ZA89
4C086ZA94
4C086ZA96
4C086ZB07
4C086ZB08
4C086ZB11
4C086ZB15
4C086ZB26
4C086ZB31
4C086ZB33
4C086ZB35
4C086ZC06
4C086ZC35
(57)【要約】
本発明は、医薬の技術分野に関し、ニコチニルアルコールエーテル誘導体のマレイン酸塩、その結晶形及びその使用、すなわち、（Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリンイソプロピルエステルマレイン酸塩とその立体異性体と結晶形、その調製方法、医薬組成物とその用途を開示したものである。具体的には、本発明は、式Ｉによって表される（Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリンイソプロピルエステルマレイン酸塩、その結晶形、その立体異性体、それらの調製方法、上記化合物又はその結晶形を含む組成物、並びにＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達経路に関連する疾患、例えば癌、感染症及び自己免疫疾患を治療するための医薬の調製における上記化合物又はその結晶形の使用に関する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）で示されるイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩及びその立体異性体。【化1】
【請求項2】
イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩の結晶形Ａ固体物質であって、粉末Ｘ線回折分析を用い、Ｃｕターゲット放射線実験条件を採用した場合、回折ピークの位置、２θ値（°）又はｄ値（Å）、及び回折ピークの相対強度（％）が以下の特性を有するイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩の結晶形Ａ固体物質。【表1】
【請求項3】
赤外スペクトルによって分析した場合、３０５９、２９８４、２８４１、２７６１、２５１９、２１７０、１９８８、１９６８、１８０７、１７４１、１７１６、１６２３、１６０２、１５８０、１５０５、１４８１、１４６０、１４４６、１４２５、１４０１、１３８９、１３６８、１３０９、１２６２、１２４２、１２０５、１１７１、１１１１、１０９５、１０６９、１０４０、１００４、９７２、９５３、９２４、８８４、８７０、８６４、８５４、８２４、７８８、７６１、７２１、７０３、及び６６２ｃｍ－１±２ｃｍ－１の吸収ピークが、前記結晶形Ａ固体物質によって提示される赤外スペクトルの特徴的なピーク位置であることを特徴とする請求項２に記載のイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩の結晶形Ａ固体物質。
【請求項4】
示差走査熱量測定によって分析した場合、１０℃／分の昇温速度によるＤＳＣスペクトルにおいて、１７５℃±３℃に吸熱ピークが存在することを特徴とする請求項２に記載のイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩の結晶形Ａ固体物質。
【請求項5】
イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩の混晶固体物質であって、任意のゼロではない割合の請求項２に記載のイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩の結晶形Ａ固体物質を含むことを特徴とするイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩の混晶固体物質。
【請求項6】
請求項１に記載のイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩又は請求項２に記載の結晶形Ａ固体物質の調製方法であって、イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートをマレイン酸と溶媒中で反応させて塩を形成する工程であって、好ましくは、前記溶媒がイソプロピルアルコール、テトラヒドロフラン又はアセトンである工程と、
得られたイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩を、アセトン及び水の混合溶媒中で結晶化する工程であって、アセトンと水の比が２００：１～１：１の範囲にあり、好ましくは上記比は５０：１～５：１の範囲にあり、より好ましくは上記比は２５：１～１０：１の範囲にある工程と
を含むことを特徴とする方法。
【請求項7】
有効成分としての請求項１に記載のイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩及びその立体異性体又は請求項２から請求項４のいずれか１項に記載の結晶形Ａ固体物質又は請求項５に記載の混晶固体物質と、その薬学的に許容できる担体又は賦形剤とを含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項8】
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル経路に関連する疾患の予防及び／又は治療のための医薬の製造における、請求項１に記載のイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩及びその立体異性体又は請求項２から請求項４のいずれか１項に記載の結晶形Ａ固体物質又は請求項５に記載の混晶固体物質の使用。
【請求項9】
前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル経路に関連する疾患が、癌、感染症及び自己免疫疾患から選択されることを特徴とする請求項８に記載の使用。
【請求項10】
前記癌が、皮膚癌、肺癌、泌尿器腫瘍、血液腫瘍、乳癌、神経膠腫、消化器系腫瘍、生殖器系腫瘍、リンパ腫、神経系腫瘍、脳腫瘍、頭頸部癌から選択され、前記感染症が、細菌感染症及びウイルス感染症から選択され、前記自己免疫疾患が、臓器特異的自己免疫疾患、及び全身性自己免疫疾患から選択され、前記臓器特異的自己免疫疾患が、慢性リンパ球性甲状腺炎、甲状腺機能亢進症、インスリン依存性糖尿病、重症筋無力症、潰瘍性大腸炎、慢性萎縮性胃炎による悪性貧血、肺出血性腎炎症候群、原発性胆汁性肝硬変、多発性硬化症、及び急性特発性多発神経炎を含み、前記全身性自己免疫疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、全身性血管炎、強皮症、天疱瘡、皮膚筋炎、混合性結合組織病、及び自己免疫性溶血性貧血を含むことを特徴とする請求項９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、医薬の技術分野に属し、ニコチニルアルコールエーテル誘導体のマレイン酸塩、その結晶形及び使用、すなわち、イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩、その調製方法、その結晶形、医薬組成物及び使用を開示する。具体的には、本発明は、式Ｉに示されるイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩、その立体異性体、その調製方法、その結晶形、当該化合物又はその結晶形を含む組成物、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル経路に関連する疾患、例えば癌、感染症、自己免疫疾患等の治療又は予防のための医薬の製造における当該化合物の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
腫瘍免疫について深く研究することにより、腫瘍微小環境は、腫瘍細胞が免疫系に認識され、死滅させられることから防御することができるということが分かっている。腫瘍細胞の免疫逃避は、腫瘍の発生及び進展に非常に重要な役割を果たす。２０１３年、サイエンス誌は腫瘍免疫療法を１０大ブレークスルーの第１位に挙げ、これにより、再び免疫療法が腫瘍治療分野の「焦点」となった。免疫細胞の活性化又は阻害（抑制）は、正及び負のシグナルによって制御されている。プログラム死１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ １、ＰＤ－１）／ＰＤ－１リガンド（ＰＤ－１ ｌｉｇａｎｄ、ＰＤ－Ｌ１）は負の免疫調節シグナルであり、これは、腫瘍特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の免疫活性を阻害し、免疫逃避を媒介する。
【0003】
腫瘍細胞が免疫系から逃避する能力は、その表面に産生されたＰＤ－Ｌ１がＴ細胞のＰＤ－１タンパク質と結合することで実現される。体内の腫瘍微小環境は、浸潤したＴ細胞にＰＤ－１分子を高発現させ、腫瘍細胞はＰＤ－１のリガンドであるＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２を高発現することになるため、腫瘍微小環境においてＰＤ－１経路が活性化し続け、Ｔ細胞の機能が阻害されて腫瘍を発見できず、腫瘍を攻撃して腫瘍細胞を死滅させるという命令を免疫系に出せなくなる。ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１に対する抗体タンパク質であり、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との結合を阻害して上記経路を遮断し、Ｔ細胞の機能を一部回復させ、これらの細胞が腫瘍細胞を殺し続けることを可能にすることができる。
【0004】
最近、一連の驚くべき研究成果により、ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１阻害抗体が様々な腫瘍に対して強い抗腫瘍活性を有することが確認され、魅力的なものとなっている。２０１４年９月４日、米国のＭＳＤ（メルク）のＫｅｙｔｒｕｄａ（キイトルーダ）（登録商標）（ペムブロリズマブ）が、他の薬剤が効かない進行したか又は切除不能な黒色腫（メラノーマ）の患者の治療薬として、ＦＤＡから初めて承認されたＰＤ－１モノクローナル抗体となった。現在、ＭＳＤは、様々な血液癌、肺癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、頭頸部癌等３０種類以上の癌におけるＫｅｙｔｒｕｄａの可能性を検証している。２０１４年１２月２２日、巨大製薬会社であるブリストル・マイヤーズスクイブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）がその期待に応え、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）の加速承認取得に先陣を切った。同社の抗癌免疫療法薬ニボルマブが、他剤に反応しない切除不能又は転移性の黒色腫の患者の治療薬としてＯｐｄｖｉｏ（オプジーボ）の商品名で収載され、これは、米国ではＭＳＤのＫｅｙｔｒｕｄａに次いで２番目に収載されたＰＤ－１阻害剤となった。２０１５年３月４日、ＦＤＡはニボルマブを、白金製剤を用いた化学療法中又は化学療法後に病勢進行した転移性扁平上皮非小細胞肺癌の治療薬として承認した。ＭＳＤが発表した固形腫瘍の治療薬としてのＫｅｙｔｒｕｄａ（ペムブロリズマブ）の第Ｉｂ相ＫＥＹＮＯＴＥ－０２８試験データによると、Ｋｅｙｔｒｕｄａを用いた治療は、胸膜中皮腫（ＰＭ）患者２５人に対して２８％の全奏効率（ＯＲＲ）を達成し、患者の４８％が病状安定状態になり、病勢コントロール率は７６％に達した。現在承認されている薬剤が効かなかった進行性ホジキンリンパ腫（ＨＬ）の患者は、ＭＳＤのＫｅｙｔｒｕｄａ及びＢＭＳのＯｐｄｖｉｏを用いた治療の後に完全寛解を達成することができる。２０１５ＡＡＣＲ年次総会では、ジョンズホプキンス・キンメル癌センター（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｋｉｍｍｅｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）の腫瘍学准教授であるＬｅｉｓｈａ Ａ． Ｅｍｅｎｓ医学士、医学博士が、ロシュ（Ｒｏｃｈｅ）の抗ＰＤ－Ｌ１作用を有するモノクローナル抗体ＭＰＤＬ３２８０Ａが進行したトリプルネガティブ乳癌で持続的な治療効果を示したと報告した。
【0005】
腫瘍免疫療法は、標的治療に続く癌治療の革命と考えられているが、ｍＡｂ医薬品は、プロテアーゼで分解されやすく体内で不安定で経口摂取できない、免疫交差反応を起こしやすい、製品品質の管理が容易ではなく製造技術の要求が高い、大量調製及び精製が困難で製造コストが高い、注射や点滴でしか使用できず不便である、等の欠点を持っている。それゆえ、ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１相互作用低分子阻害剤は、腫瘍免疫療法のためのより良い選択である。
【0006】
国際出願ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０８５４１８号において、本発明者らは、イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－［２－（ピリジニル－３－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－（フェニル）ベンジルオキシ）－５－クロロベンジル］セリネート塩酸塩、及び癌、感染症、自己免疫疾患等のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル経路に関連する疾患の予防又は治療のための医薬の製造におけるその使用を開示した。その後の研究において、本発明者らは、本化合物のマレイン酸塩が、その塩酸塩と比較して、安定性及び有効性がより強いことを見出した。本発明の実施例１の塩酸塩は、比較例として、国際特許出願ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０８５４１８号の調製方法に完全準拠して調製したものである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明が解決する技術的課題は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用を阻害する構造式（Ｉ）のイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩、及びその立体異性体、その調製方法、その医薬組成物、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル経路に関連する疾患の予防又は治療のための医薬の製造におけるその使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明の技術的課題を解決するために、本発明は、以下の技術的解決手段を提供する。
【0009】
本発明の技術的解決手段の第１の態様は、式（Ｉ）で示されるイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩［（Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリン酸イソプロピル・マレイン酸塩］、及びその立体異性体を提供することである。
【化1】
【0010】
本発明の技術的解決手段の第２の態様は、イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩の結晶形Ａ固体物質であって、粉末Ｘ線回折分析を用い、Ｃｕターゲット放射線実験条件を採用した場合、回折ピークの位置、２θ値（°）又はｄ値（Å）、及び回折ピークの相対強度（％）が以下の特性を有するイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩の結晶形Ａ固体物質を提供する。
【表1】
【0011】
上記の結晶形Ａ固体物質では、赤外スペクトルによって分析した場合、３０５９、２９８４、２８４１、２７６１、２５１９、２１７０、１９８８、１９６８、１８０７、１７４１、１７１６、１６２３、１６０２、１５８０、１５０５、１４８１、１４６０、１４４６、１４２５、１４０１、１３８９、１３６８、１３０９、１２６２、１２４２、１２０５、１１７１、１１１１、１０９５、１０６９、１０４０、１００４、９７２、９５３、９２４、８８４、８７０、８６４、８５４、８２４、７８８、７６１、７２１、７０３、６６２ｃｍ－１±２ｃｍ－１の吸収ピークは、当該結晶形Ａ固体物質によって提示される赤外スペクトルの特徴的なピーク位置である。
【0012】
上記の結晶形Ａ固体物質では、示差走査熱量測定によって分析した場合、１０℃／分の昇温速度によるＤＳＣスペクトルにおいて、１７５℃±３℃に吸熱ピークが存在する。
【0013】
本発明の技術的解決手段の第２の態様は、イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩の混晶固体物質であって、任意のゼロでない割合の上記イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩の結晶形Ａ固体物質を含む混晶固体物質も提供する。
【0014】
本発明の技術的解決手段の第３の態様は、第１の態様における化合物及び第２の態様における結晶形Ａ固体物質の調製（製造）方法を提供する。
式（Ｉ）の化合物の調製方法は、以下の通りである。
イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートをマレイン酸と溶媒中で反応させて塩を形成する工程であって、最も好ましくは、上記溶媒がイソプロピルアルコール、テトラヒドロフラン又はアセトンである工程、
得られたイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩を、アセトン及び水の混合溶媒中で結晶化する工程であって、アセトンと水の比は２００：１～１：１の範囲にあり、好ましくは上記比は５０：１～５：１の範囲にあり、最も好ましくは上記比は２５：１～１０：１の範囲にある工程。式（Ｉ）の化合物並びにその溶媒和物及び塩の調製プロセス中に、異なる結晶化条件下で多結晶が出現してもよい。
【化2】
イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートをマレイン酸と溶媒中で反応させて塩を形成する工程であって、最も好ましくは、上記溶媒がイソプロピルアルコール、テトラヒドロフラン又はアセトンである工程、
得られたイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩を、アセトン及び水の混合溶媒中で結晶化する工程であって、アセトンと水の比は２００：１～１：１の範囲にあり、好ましくは上記比は５０：１～５：１の範囲にあり、最も好ましくは上記比は２５：１～１０：１の範囲にある工程。式（Ｉ）の化合物並びにその溶媒和物及び塩の調製プロセス中に、異なる結晶化条件下で多結晶が出現してもよい。
【0015】
本発明の技術的解決手段の第４の態様は、医薬組成物であって、有効成分としての本発明の第１の態様におけるイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩及びその立体異性体又は第２の態様における結晶形Ａ固体物質と、薬学的に許容できる担体又は賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
【0016】
本発明はさらに、本発明の化合物を有効成分として含む医薬組成物に関する。当該医薬組成物は、当該分野で周知の方法によって調製することができる。本発明の化合物を１種以上の薬学的に許容できる固体若しくは液体の賦形剤及び／又はアジュバントと組み合わせることにより、ヒト又は動物での使用に適した任意の剤形を調製することができる。当該医薬組成物中の本発明の化合物の含有量は、通常、０．１～９５重量％である。
【0017】
本発明の化合物又はそれを含む医薬組成物は、単位剤形で投与することができ、投与経路は、経口、静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、経鼻、口腔粘膜内、眼内、肺内及び気道、経皮膚、膣内、経直腸等、経腸又は非経口であることが可能である。
【0018】
投与剤形は、液体剤形、固体剤形又は半固体剤形とすることができる。液体剤形は、溶液（真正溶液及びコロイド溶液を含む）、乳剤（ｏ／ｗ型、ｗ／ｏ型及び二重エマルションを含む）、懸濁液、注射剤（水注、粉注及び点滴を含む）、点眼剤、点鼻剤、ローション、チンキ剤等であってもよく、固形剤形は、錠剤（普通錠、腸溶錠、トローチ剤、分散錠、チュアブル錠、発泡錠、口腔内崩壊錠を含む）、カプセル（ハードカプセル、ソフトカプセル、腸溶カプセルを含む）、顆粒、粉末、ペレット、滴丸剤（ドロップピル）、座剤、フィルム、パッチ、ガス（粉末）スプレー、スプレー剤等であってもよく、半固体剤形は軟膏、ジェル、ペースト等であることができる。
【0019】
本発明の化合物は、一般的な製剤の他、徐放性製剤、放出制御製剤、標的製剤、各種微粒子送達システム等に製剤化することが可能である。
【0020】
本発明の化合物を錠剤に製剤化するために、希釈剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、滑沢剤及び流動促進剤等の当該分野で公知の種々の賦形剤を広く使用することができる。希釈剤は、デンプン、デキストリン、スクロース、グルコース、ラクトース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、微結晶セルロース、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム等であってもよく、湿潤剤は、水、エタノール、又はイソプロパノール等であってもよく、結合剤は、水飴、デキストリン、シロップ（糖蜜）、蜂蜜、ブドウ糖液、微結晶セルロース、アラビアゴム、ゼラチンシロップ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、アクリル樹脂、カルボマー、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール等であってもよく、崩壊剤は、乾燥デンプン、微結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、架橋ポリビニルピロリドン、クロスカルメロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム及びクエン酸、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ドデシルスルホン酸ナトリウム等であることができ、滑沢剤及び流動促進剤は、タルク、シリカ、ステアリン酸塩、酒石酸、流動パラフィン、ポリエチレングリコール等であってもよい。
【0021】
また、錠剤はさらに、糖衣錠、フィルムコーティング錠、腸溶性コーティング錠等のコーティング錠（被覆錠剤）、又は二層錠及び多層錠に製剤化されてもよい。
【0022】
投与単位をカプセルに製剤化するために、有効成分としての本発明の化合物を希釈剤及び流動促進剤と混合し、その混合物をハードカプセル又はソフトカプセルに直接入れることができる。有効成分としての本発明の化合物を、希釈剤、結合剤及び崩壊剤とともに顆粒又はペレットに製剤化した後、ハードカプセル又はソフトカプセルに入れることもできる。本発明の化合物の錠剤を調製するための各種希釈剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤又は流動促進剤を用いて、本発明の化合物のカプセルを調製することもできる。
【0023】
本発明の化合物を注射剤に製剤化するために、溶媒として水、エタノール、イソプロパノール、プロピレングリコール又はそれらの混合物が使用されてもよく、適量の当該分野で通常用いられる可溶化剤（溶解補助剤）、共溶媒、ｐＨ調整剤、及び浸透圧調整剤が添加されてもよい。可溶化剤又は共溶媒は、ポロキサマー、レシチン、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン等であってもよく、ｐＨ調整剤は、リン酸塩、酢酸塩、塩酸、水酸化ナトリウム等であってもよく、浸透圧調整剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、グルコース、リン酸塩、酢酸塩等であってもよい。また、凍結乾燥粉末注射剤を調製する場合には、マンニトール、グルコース等がプロッパントとして添加されてもよい。
【0024】
さらに、必要に応じて、着色料、保存料、香料、矯味矯臭剤又は他の添加物を医薬製剤に添加してもよい。
【0025】
投薬の目的を達成し、治療効果を高めるために、本発明の医薬又は医薬組成物は、公知の任意の投与方法によって投与することができる。
【0026】
本発明の化合物又は医薬組成物の投与量は、予防又は治療すべき疾患の性質及び重症度、患者又は動物の個々の状態、投与経路、並びに剤形等に応じて広い範囲に変化させることができる。一般に、本発明の化合物の好適な１日投与量は、０．００１～１５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にあり、好ましくは０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。上記投与量は、医師の臨床経験及び他の治療手段の使用を含む投与レジメンに応じて、１投与単位又は分割投与単位で投与されてもよい。
【0027】
本発明の化合物又は組成物は、単独で、又は他の治療剤若しくは症状改善剤と組み合わせて投与することができる。本発明の化合物が他の治療剤と相乗効果を発揮する場合、その投与量は実際の状況に応じて調節する必要がある。
【0028】
本発明の技術的解決手段の第５の態様は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル経路に関連する疾患の予防及び／又は治療のための医薬の製造における、イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩及びその立体異性体又は第２の態様における結晶形Ａ固体物質の使用を提供する。
【0029】
上記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル経路に関連する疾患は、癌、感染症、及び自己免疫疾患からなる群から選択される。この癌は、皮膚癌、肺癌、泌尿器腫瘍、血液腫瘍、乳癌、神経膠腫、消化器系腫瘍、生殖器系腫瘍、リンパ腫、神経系腫瘍、脳腫瘍、頭頸部癌からなる群から選択される。上記感染症は、細菌感染症及びウイルス感染症からなる群から選択される。上記自己免疫疾患は、臓器特異的自己免疫疾患、全身性自己免疫疾患からなる群から選択され、この臓器特異的自己免疫疾患としては、慢性リンパ球性甲状腺炎、甲状腺機能亢進症、インスリン依存性糖尿病、重症筋無力症、潰瘍性大腸炎、慢性萎縮性胃炎による悪性貧血、肺出血性腎炎症候群、原発性胆汁性肝硬変、多発性硬化症、急性特発性多発神経炎が挙げられる。上記全身性自己免疫疾患としては、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、全身性血管炎、強皮症、天疱瘡、皮膚筋炎、混合性結合組織病、自己免疫性溶血性貧血が挙げられる。
【発明の効果】
【0030】
イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネート塩酸塩と比較すると、本発明の化合物イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩は結晶形が安定であり、光照射、高湿度、高温の環境に対する安定性が良好であり、マウスの皮下移植腫瘍モデル又はヒト免疫系で再構築したＮＳＧ腫瘍保有マウスモデルにおいて、各種腫瘍に対して高い腫瘍抑制率を有する。
【図面の簡単な説明】
【0031】
【発明を実施するための形態】
【0032】
以下、本発明を具体的な実施例と組み合わせてさらに説明するが、本発明の範囲はこれに限定されるものではない。
【0033】
試験装置：核磁気共鳴分光法には、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ ５００型高分解能超伝導核磁気共鳴分光計を使用する。質量分析には、ＱＳＴＡＲ Ｅｌｉｔｅ ＬＣ／ＭＳ／ＭＳシステムを使用する。元素分析には、ＦＬＡＳＨ１１１２微量元素分析装置及びＭＸ－５百万分の一天秤装置を使用する。紫外分析には、島津製作所ＵＶ－２７００紫外可視分光光度計を使用した。比旋光度の測定には、米国のＰＥの３４３型旋光計を使用する。粉末Ｘ線回折分析には、Ｄ８－Ａｄｖａｎｃｅ Ｘ線回折計を用いる。示差走査熱量測定／熱重量分析（ＤＳＣ／ＴＧ）には、スイスのＭｅｔｔｌｅｒ（メトラー）のＴＧＡ／ＤＳＣ３＋熱分析計を用いる。
【0034】
１． 塩の調製
実施例１：イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－［２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－（フェニル）ベンジルオキシ）－５－クロロベンジル］セリネート塩酸塩（本実施例は比較例であり、本化合物は公知化合物であり、その調製方法は、国際出願ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０８５４１８号の実施例６と全く同じである）。
実施例１：イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－［２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－（フェニル）ベンジルオキシ）－５－クロロベンジル］セリネート塩酸塩（本実施例は比較例であり、本化合物は公知化合物であり、その調製方法は、国際出願ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０８５４１８号の実施例６と全く同じである）。
【化3】
【0035】
１００ｍｌ丸底フラスコに５９８ｍｇの（Ｓ）－Ｎ－［２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－（フェニル）ベンジルオキシ）－５－クロロベンジル］セリン及び６０ｍｌの無水イソプロパノールを入れ、氷水浴中で撹拌しながら、６ｍｌの塩化スルホキシド及び２滴のＤＭＦを添加した。この混合物を室温で２時間撹拌し、反応が完了するまで加熱還流した。溶媒を減圧下で留去し、イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－［２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－（フェニル）ベンジルオキシ）－５－クロロベンジル］セリネート塩酸塩を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ９．６２（ｓ，１Ｈ，－ＨＣｌ），９．４０（ｓ，１Ｈ，－ＨＣｌ），９．１０（ｓ，１Ｈ，－ＡｒＨ），８．８６（ｄ，１Ｈ，－ＡｒＨ），８．５９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ，－ＡｒＨ），８．０１－７．９１（ｍ，１Ｈ，－ＡｒＨ），７．７３－７．６４（ｍ，２Ｈ，－ＡｒＨ），７．５７－７．４６（ｍ，３Ｈ，－ＡｒＨ），７．４６－７．３７（ｍ，４Ｈ，－ＡｒＨ），７．１６（ｓ，１Ｈ，－ＡｒＨ），５．４７（ｓ，２Ｈ，－ＣＨ２－），５．３６（ｓ，２Ｈ，－ＣＨ２－），４．９２（ｍ１Ｈ，－ＣＨ－），４．３０－４．１５（ｍ，２Ｈ，－ＣＨ２－），４．０５（ｓ，１Ｈ，－ＣＨ－），３．９７（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，３．０Ｈｚ，１Ｈ，－ＣＨ２－），３．８４（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，３．８Ｈｚ，１Ｈ，－ＣＨ２－），１．２０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ，－ＣＨ３），１．１８（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ，－ＣＨ３）。ＭＳ（ＦＡＢ）：６４０（Ｍ）。
【0036】
実施例２：イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩（ＩＭＭＨ－０１０）
室温で、イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－［２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－（フェニル）ベンジルオキシ）－５－クロロベンジル］セリネート（２．６ｇ）及びイソプロパノール（９ｍｌ）を５０ｍｌ反応フラスコに添加した。この混合物を４０℃に加熱し、０．５時間撹拌し、マレイン酸（０．５９４ｇ）－イソプロパノール（４ｍｌ）溶液を滴下しながら加えた。温度を３５～４５℃に制御し、固体を析出させた後、その混合物をその温度で０．５時間撹拌し、自然に室温まで冷却し、一晩撹拌した。翌日、この混合物を吸引濾過し、濾過ケーキを０．５ｍｌのイソプロパノール及び０．５ｍｌのアセトンで順次洗浄し、淡黄色固体を得たが、これがイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩の粗生成物である。室温で、この粗生成物及びアセトン（２６ｍｌ）を５０ｍｌ反応フラスコに加え、加熱して還流させ、１．４ｍｌの精製水を滴下して加えた。完全に溶解させた後、混合物を熱濾過にかけた。濾過後、濾過ケーキを５０ｍｌの反応フラスコに移し、自然に室温まで冷却し、晶析のために一晩撹拌した。翌日、この混合物を５～１５℃に冷却し、２時間撹拌した後、吸引濾過した。濾過ケーキを０．５ｍｌのアセトンで洗浄し、４５℃で恒量まで強制風乾し、純品（０．７３ｇ）を白色固体として得た。
室温で、イソプロピル （Ｓ）－Ｎ－［２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－（フェニル）ベンジルオキシ）－５－クロロベンジル］セリネート（２．６ｇ）及びイソプロパノール（９ｍｌ）を５０ｍｌ反応フラスコに添加した。この混合物を４０℃に加熱し、０．５時間撹拌し、マレイン酸（０．５９４ｇ）－イソプロパノール（４ｍｌ）溶液を滴下しながら加えた。温度を３５～４５℃に制御し、固体を析出させた後、その混合物をその温度で０．５時間撹拌し、自然に室温まで冷却し、一晩撹拌した。翌日、この混合物を吸引濾過し、濾過ケーキを０．５ｍｌのイソプロパノール及び０．５ｍｌのアセトンで順次洗浄し、淡黄色固体を得たが、これがイソプロピル （Ｓ）－Ｎ－（２－（ピリジン－３－イル－メトキシ）－４－（２－ブロモ－３－フェニルベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）セリネートマレイン酸塩の粗生成物である。室温で、この粗生成物及びアセトン（２６ｍｌ）を５０ｍｌ反応フラスコに加え、加熱して還流させ、１．４ｍｌの精製水を滴下して加えた。完全に溶解させた後、混合物を熱濾過にかけた。濾過後、濾過ケーキを５０ｍｌの反応フラスコに移し、自然に室温まで冷却し、晶析のために一晩撹拌した。翌日、この混合物を５～１５℃に冷却し、２時間撹拌した後、吸引濾過した。濾過ケーキを０．５ｍｌのアセトンで洗浄し、４５℃で恒量まで強制風乾し、純品（０．７３ｇ）を白色固体として得た。
【0037】
２． 実施例２の化合物の構造確認
１）元素分析：
（１）試験装置：微量元素分析装置ＦＬＡＳＨ１１１２及び百万分の一天秤ＭＸ－５。
（２）試験方法：炭素、水素及び窒素を並行して２回測定した。
（３）測定結果：
１）元素分析：
（１）試験装置：微量元素分析装置ＦＬＡＳＨ１１１２及び百万分の一天秤ＭＸ－５。
（２）試験方法：炭素、水素及び窒素を並行して２回測定した。
（３）測定結果：
【表2】
【0038】
２）高分解能質量分析：
（１）試験装置：ＱＳＴＡＲ Ｅｌｉｔｅ ＬＣ／ＭＳ／ＭＳシステム
（２）試験条件：ＥＳＩ源
（３）実測データ：
（１）試験装置：ＱＳＴＡＲ Ｅｌｉｔｅ ＬＣ／ＭＳ／ＭＳシステム
（２）試験条件：ＥＳＩ源
（３）実測データ：
【表3】
【0039】
３）紫外線吸収スペクトル：
（１）試験装置：島津製作所ＵＶ－２７００紫外可視分光光度計
（２）試験方法：試料を所定濃度の溶液に調製し、同じバッチの溶媒をブランク対照として使用し、１ｃｍ吸収セルを用いて１９０～４００ｎｍの範囲で吸収値を測定した。
溶媒：水－メタノール（１：１）、０．１ｍｏｌ／Ｌの塩酸－メタノール（１：１）、０．１ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム－メタノール（１：１）
試験溶液濃度：２０μｌ／ｍｌ。
（３）実測データ
（１）試験装置：島津製作所ＵＶ－２７００紫外可視分光光度計
（２）試験方法：試料を所定濃度の溶液に調製し、同じバッチの溶媒をブランク対照として使用し、１ｃｍ吸収セルを用いて１９０～４００ｎｍの範囲で吸収値を測定した。
溶媒：水－メタノール（１：１）、０．１ｍｏｌ／Ｌの塩酸－メタノール（１：１）、０．１ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム－メタノール（１：１）
試験溶液濃度：２０μｌ／ｍｌ。
（３）実測データ
【表4】
【0040】
４）赤外吸収スペクトル：
（１）試験装置：英国のＰＥ（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ４００）赤外分光計
（２）試験条件：減衰全反射（ＡＴＲ）赤外分光法、粉末直接注入法
（１）試験装置：英国のＰＥ（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ４００）赤外分光計
（２）試験条件：減衰全反射（ＡＴＲ）赤外分光法、粉末直接注入法
【表5】
【0041】
５）核磁気共鳴水素スペクトル及び炭素スペクトル：
（１）試験装置：Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ ５００型高分解能超伝導核磁気共鳴分光計
（２）試験条件：溶媒はＤＭＳＯ－ｄ６であり、内部標準はＴＭＳであった。
（１）試験装置：Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ ５００型高分解能超伝導核磁気共鳴分光計
（２）試験条件：溶媒はＤＭＳＯ－ｄ６であり、内部標準はＴＭＳであった。
【表6】
【表7】
【0042】
６）比旋光度：
（１）試験装置：米国ＰＥ製３４３型旋光計。
（２）試験方法：本発明の生成物を正確に秤量し、ＤＭＳＯに溶解し、１ｍｌあたり約５０ｍｇを含む溶液となるように定量的に希釈し、比旋光度を測定した。
（３）試験温度：２０℃
（４）結果
ＤＭＳＯを溶媒とし、測定濃度を５０ｍｇ／ｍｌとした場合、実施例２の化合物の比旋光度は＋５．５°であった。［α］２０ ５８９＝＋５．５°（Ｃ＝５、ＤＭＳＯ）。
（１）試験装置：米国ＰＥ製３４３型旋光計。
（２）試験方法：本発明の生成物を正確に秤量し、ＤＭＳＯに溶解し、１ｍｌあたり約５０ｍｇを含む溶液となるように定量的に希釈し、比旋光度を測定した。
（３）試験温度：２０℃
（４）結果
ＤＭＳＯを溶媒とし、測定濃度を５０ｍｇ／ｍｌとした場合、実施例２の化合物の比旋光度は＋５．５°であった。［α］２０ ５８９＝＋５．５°（Ｃ＝５、ＤＭＳＯ）。
【0043】
３． 実施例２の化合物の結晶形分析
１）粉末Ｘ線回折分析：
（１）試験装置：Ｄ８－Ａｄｖａｎｃｅ Ｘ線回折計
（２）試験条件：動作電圧：４０ｋＶ、動作電流：４０ｍＡ、Ｃｕターゲット。走査速度：０．０２度／ステップ、データ取り込み時間：０．１秒／ステップ。
（３）試験結果（図３参照）：
（４）分析：粉末Ｘ線回折分析は、実施例２の化合物が結晶性物質であることを示した。
２）示差走査熱量測定／熱重量分析（ＤＳＣ／ＴＧ）：
（１）試験装置：スイスのＭｅｔｔｌｅｒのＴＧＡ／ＤＳＣ３＋熱分析計
（２）パラメータ設定：開始温度：３５℃；終了温度：２５０℃；昇温速度：１０℃／分。
（３）実測データ：ＤＳＣ：ピーク温度：１７４．６８℃（吸熱）。
ＴＧＡ：１７０℃付近で重量減少が始まり、１７５℃で重量減少が明らかになった。
（４）分析：ＤＳＣは、１７４．６８℃に吸熱ピークがあることを示し、この吸熱ピークは実施例２の化合物の融解から吸収された熱に起因するはずである。ＴＧＡは、１６０℃までは基本的に熱重量曲線に変化はなく、重量減少もないことを示し、これは、実施例２の化合物は結晶化溶媒を含まないことを示唆した。ＤＳＣ吸熱ピークの頂点（約１７５℃）まで温度が上昇すると、重量減少が明らかになり、これは、試料の溶融分解に伴う重量減少であった。このＤＳＣ吸熱ピークは、実施例２の化合物の分解点であった。
１）粉末Ｘ線回折分析：
（１）試験装置：Ｄ８－Ａｄｖａｎｃｅ Ｘ線回折計
（２）試験条件：動作電圧：４０ｋＶ、動作電流：４０ｍＡ、Ｃｕターゲット。走査速度：０．０２度／ステップ、データ取り込み時間：０．１秒／ステップ。
（３）試験結果（図３参照）：
【表8(1)】
【表8(2)】
２）示差走査熱量測定／熱重量分析（ＤＳＣ／ＴＧ）：
（１）試験装置：スイスのＭｅｔｔｌｅｒのＴＧＡ／ＤＳＣ３＋熱分析計
（２）パラメータ設定：開始温度：３５℃；終了温度：２５０℃；昇温速度：１０℃／分。
（３）実測データ：ＤＳＣ：ピーク温度：１７４．６８℃（吸熱）。
ＴＧＡ：１７０℃付近で重量減少が始まり、１７５℃で重量減少が明らかになった。
（４）分析：ＤＳＣは、１７４．６８℃に吸熱ピークがあることを示し、この吸熱ピークは実施例２の化合物の融解から吸収された熱に起因するはずである。ＴＧＡは、１６０℃までは基本的に熱重量曲線に変化はなく、重量減少もないことを示し、これは、実施例２の化合物は結晶化溶媒を含まないことを示唆した。ＤＳＣ吸熱ピークの頂点（約１７５℃）まで温度が上昇すると、重量減少が明らかになり、これは、試料の溶融分解に伴う重量減少であった。このＤＳＣ吸熱ピークは、実施例２の化合物の分解点であった。
【0044】
４． 実施例１の化合物と実施例２の化合物との安定性の比較
１）実施例１の化合物の安定性
（１）物理的及び化学的な特性
外観：オフホワイトの粉末
融点：１１９．３６℃（ＤＳＣ法）（図１参照）
純度：９９．５％（ＨＰＬＣ規格化法）
ｌｏｇＰ＝２．４
（２）影響因子試験
１）実施例１の化合物の安定性
（１）物理的及び化学的な特性
外観：オフホワイトの粉末
融点：１１９．３６℃（ＤＳＣ法）（図１参照）
純度：９９．５％（ＨＰＬＣ規格化法）
ｌｏｇＰ＝２．４
（２）影響因子試験
【表9】
【0045】
実施例１の化合物は、６０℃の高温下に５日間置いても外観、融点及び不純物含有量に明らかな変化を示さず、これは、実施例１の化合物が高温条件下で安定であることを示唆する。ＲＨ９２．５％の高湿度下に５日間置いた後、この化合物は深刻な吸湿を示し、外観は無色の高粘性液体になったが、関連物質には変化がなかった。この化合物は、照明条件下では、外観は透明なバルクとなり、その不純物含量は４．０％に増加し、これは、この化合物は照明条件下では不安定であることを示唆した。
【0046】
２）実施例２の化合物の安定性
（１）物理的及び化学的な特性
外観：白色固体
融点：１７４．６８℃（ＤＳＣ法）（図２参照）
純度：９８．７％（ＨＰＬＣ規格化法）
ｌｏｇＰ＝３．２
（２）影響因子試験
（１）物理的及び化学的な特性
外観：白色固体
融点：１７４．６８℃（ＤＳＣ法）（図２参照）
純度：９８．７％（ＨＰＬＣ規格化法）
ｌｏｇＰ＝３．２
（２）影響因子試験
【表10】
【0047】
実施例２の化合物は、照明、高温及び高湿の条件下でも安定であった。
【0048】
５． マウスメラノーマＢ１６Ｆ１０に対する実施例１の化合物及び実施例２の化合物のインビボでの抗腫瘍効果の比較
実験の目的：
マウスメラノーマＢ１６Ｆ１０に対するＰＤ－Ｌ１阻害剤としての実施例１の化合物及び実施例２の化合物のインビボ抗腫瘍効果を、マウスの皮下移植腫瘍モデルで評価した。
実験的解決手段：
動物群分け：実験動物を溶媒対照群、シクロホスファミド８０ｍｇ／ｋｇ群（ＣＴＸ）、実施例１の化合物５ｍｇ／ｋｇ群及び１０ｍｇ／ｋｇ群、並びに実施例２の化合物５ｍｇ／ｋｇ群及び１０ｍｇ／ｋｇ群にそれぞれ分けた。
実験手順：継代培養したＢ１６Ｆ１０腫瘍株をホモジナイザで粉砕し、滅菌した普通食塩水で２回洗浄し、計数し、腫瘍細胞懸濁液の細胞濃度を普通食塩水で９×１０６／ｍｌに調整した。この細胞懸濁液０．２ｍｌをＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの右脇の下に接種し、その日を０日目と記録した。接種の翌日、動物を無作為に群分けし、体重測定して投与した。溶媒対照群のマウスには、０．５％ＣＭＣを毎日経口投与した。シクロホスファミドは腹腔内投与した。試験対象となる化合物は１日１回経口投与した。処理の過程で、動物を体重測定し、殺処分した。腫瘍組織を剥離し、重量測定し、写真を撮った。最後に、抗腫瘍効果の強さを評価するために、腫瘍抑制率を計算した。
計算及び統計の方法：腫瘍増殖抑制率ＴＧＩ（％）：ＴＧＩ＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００ （Ｔ：処理群における腫瘍重量、Ｃ：陰性対照群における腫瘍重量）。
統計方法：データの統計解析にはＧｒａｐｈｐａｄ（グラフパッド）を使用し、一元配置ＡＮＯＶＡ検定を使用した、＊ Ｐ＜０．０５、＊＊ Ｐ＜０．０１、＊＊＊ Ｐ＜０．００１。
実験の目的：
マウスメラノーマＢ１６Ｆ１０に対するＰＤ－Ｌ１阻害剤としての実施例１の化合物及び実施例２の化合物のインビボ抗腫瘍効果を、マウスの皮下移植腫瘍モデルで評価した。
実験的解決手段：
動物群分け：実験動物を溶媒対照群、シクロホスファミド８０ｍｇ／ｋｇ群（ＣＴＸ）、実施例１の化合物５ｍｇ／ｋｇ群及び１０ｍｇ／ｋｇ群、並びに実施例２の化合物５ｍｇ／ｋｇ群及び１０ｍｇ／ｋｇ群にそれぞれ分けた。
実験手順：継代培養したＢ１６Ｆ１０腫瘍株をホモジナイザで粉砕し、滅菌した普通食塩水で２回洗浄し、計数し、腫瘍細胞懸濁液の細胞濃度を普通食塩水で９×１０６／ｍｌに調整した。この細胞懸濁液０．２ｍｌをＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの右脇の下に接種し、その日を０日目と記録した。接種の翌日、動物を無作為に群分けし、体重測定して投与した。溶媒対照群のマウスには、０．５％ＣＭＣを毎日経口投与した。シクロホスファミドは腹腔内投与した。試験対象となる化合物は１日１回経口投与した。処理の過程で、動物を体重測定し、殺処分した。腫瘍組織を剥離し、重量測定し、写真を撮った。最後に、抗腫瘍効果の強さを評価するために、腫瘍抑制率を計算した。
計算及び統計の方法：腫瘍増殖抑制率ＴＧＩ（％）：ＴＧＩ＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００ （Ｔ：処理群における腫瘍重量、Ｃ：陰性対照群における腫瘍重量）。
統計方法：データの統計解析にはＧｒａｐｈｐａｄ（グラフパッド）を使用し、一元配置ＡＮＯＶＡ検定を使用した、＊ Ｐ＜０．０５、＊＊ Ｐ＜０．０１、＊＊＊ Ｐ＜０．００１。
【0049】
実験結果
投与後、動物を実行し、腫瘍の重量を測定した。マウスメラノーマＢ１６Ｆ１０に対する実施例１の化合物及び実施例２の化合物の抗腫瘍効果を下記表に示した。
投与後、動物を実行し、腫瘍の重量を測定した。マウスメラノーマＢ１６Ｆ１０に対する実施例１の化合物及び実施例２の化合物の抗腫瘍効果を下記表に示した。
【0050】
【表11】
【0051】
【表12】
【0052】
６． マウス大腸癌ＭＣ３８に対する実施例１の化合物及び実施例２の化合物のインビボでの抗腫瘍効果の比較
実験の目的：
マウス大腸癌ＭＣ３８に対するＰＤ－Ｌ１阻害剤としての実施例１の化合物及び実施例２の化合物のインビボ抗腫瘍効果を、マウスの皮下移植腫瘍モデルで評価した。
実験的解決手段：
動物群分け：実験動物を溶媒対照群、シクロホスファミド８０ｍｇ／ｋｇ群（ＣＴＸ）、実施例１の化合物５ｍｇ／ｋｇ群及び１０ｍｇ／ｋｇ群、並びに実施例２の化合物５ｍｇ／ｋｇ群及び１０ｍｇ／ｋｇ群にそれぞれ分けた。
実験手順：継代培養したＭＣ３８腫瘍株をホモジナイザで粉砕し、滅菌した普通食塩水で２回洗浄し、計数し、腫瘍細胞懸濁液の細胞濃度を普通食塩水で９×１０６／ｍｌに調整し、この細胞懸濁液０．２ｍｌをＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの右脇の下に接種し、その日を０日目と記録した。接種の翌日、動物を無作為に群分けし、体重測定して投与した。溶媒対照群のマウスには、０．５％ＣＭＣを毎日経口投与した。シクロホスファミドは腹腔内投与した。試験対象となる化合物は１日１回経口投与した。処理の過程で、動物を体重測定し、殺処分した。腫瘍組織を剥離し、重量測定し、写真を撮った。最後に、抗腫瘍効果の強さを評価するために、腫瘍抑制率を計算した。
計算及び統計の方法：腫瘍増殖抑制率ＴＧＩ（％）：ＴＧＩ＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００ （Ｔ：処理群における腫瘍重量、Ｃ：陰性対照群における腫瘍重量）。
統計方法：データの統計解析にはＧｒａｐｈｐａｄを使用し、一元配置ＡＮＯＶＡ検定を使用した、＊ Ｐ＜０．０５、＊＊ Ｐ＜０．０１、＊＊＊ Ｐ＜０．００１。
実験結果：
投与後、動物を実行し、腫瘍の重量を測定した。マウス大腸癌ＭＣ３８に対する実施例１の化合物及び実施例２の化合物の抗腫瘍効果を下記表に示した。
実験の目的：
マウス大腸癌ＭＣ３８に対するＰＤ－Ｌ１阻害剤としての実施例１の化合物及び実施例２の化合物のインビボ抗腫瘍効果を、マウスの皮下移植腫瘍モデルで評価した。
実験的解決手段：
動物群分け：実験動物を溶媒対照群、シクロホスファミド８０ｍｇ／ｋｇ群（ＣＴＸ）、実施例１の化合物５ｍｇ／ｋｇ群及び１０ｍｇ／ｋｇ群、並びに実施例２の化合物５ｍｇ／ｋｇ群及び１０ｍｇ／ｋｇ群にそれぞれ分けた。
実験手順：継代培養したＭＣ３８腫瘍株をホモジナイザで粉砕し、滅菌した普通食塩水で２回洗浄し、計数し、腫瘍細胞懸濁液の細胞濃度を普通食塩水で９×１０６／ｍｌに調整し、この細胞懸濁液０．２ｍｌをＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの右脇の下に接種し、その日を０日目と記録した。接種の翌日、動物を無作為に群分けし、体重測定して投与した。溶媒対照群のマウスには、０．５％ＣＭＣを毎日経口投与した。シクロホスファミドは腹腔内投与した。試験対象となる化合物は１日１回経口投与した。処理の過程で、動物を体重測定し、殺処分した。腫瘍組織を剥離し、重量測定し、写真を撮った。最後に、抗腫瘍効果の強さを評価するために、腫瘍抑制率を計算した。
計算及び統計の方法：腫瘍増殖抑制率ＴＧＩ（％）：ＴＧＩ＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００ （Ｔ：処理群における腫瘍重量、Ｃ：陰性対照群における腫瘍重量）。
統計方法：データの統計解析にはＧｒａｐｈｐａｄを使用し、一元配置ＡＮＯＶＡ検定を使用した、＊ Ｐ＜０．０５、＊＊ Ｐ＜０．０１、＊＊＊ Ｐ＜０．００１。
実験結果：
投与後、動物を実行し、腫瘍の重量を測定した。マウス大腸癌ＭＣ３８に対する実施例１の化合物及び実施例２の化合物の抗腫瘍効果を下記表に示した。
【0053】
【表13】
【0054】
【表14】
【0055】
７． ヒト肺癌ＮＣＩ－Ｈ４６０モデルに対する実施例１の化合物及び実施例２の化合物の抗腫瘍効果の比較
実験の目的：
ＰＤ－Ｌ１阻害剤としての実施例１の化合物及び実施例２の化合物のインビボ抗腫瘍効果を、ヒト免疫系で再構成したＮＳＧ腫瘍保有マウスにおけるヒト肺癌のＮＣＩ－Ｈ４６０モデルで評価した。
実験的解決手段：
動物群分け：実験動物を溶媒対照群、シクロホスファミド８０ｍｇ／ｋｇ群（ＣＴＸ）、実施例１の化合物５ｍｇ／ｋｇ群及び１０ｍｇ／ｋｇ群、並びに実施例２の化合物５ｍｇ／ｋｇ群及び実施例２の化合物１０ｍｇ／ｋｇ群にそれぞれ分けた。
実験の手順：新鮮なヒト白血球を分離してＰＢＭＣを得た後、尾静脈からＮＳＧマウスに接種し、各マウスには１×１０７個ずつ接種した。３日目にＮＣＩ－Ｈ４６０腫瘍細胞をマウスの脇の下に接種し、各マウスに１×１０６個ずつ接種した。腫瘍が１００～３００ｍｍ３に成長した後、マウスを群分けして投与した。溶媒対照群のマウスには、０．５％ＣＭＣを毎日経口投与した。シクロホスファミドは腹腔内投与した。試験対象となる化合物は１日１回経口投与した。処理の過程で、動物を体重測定し、殺処分した。腫瘍組織を剥離し、重量測定し、写真を撮った。最後に、抗腫瘍効果の強さを評価するために、腫瘍抑制率を計算した。
計算及び統計の方法：腫瘍増殖抑制率ＴＧＩ（％）：ＴＧＩ＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００ （Ｔ：処理群における腫瘍重量、Ｃ：陰性対照群における腫瘍重量）。
統計方法：データの統計解析にはＧｒａｐｈｐａｄを使用し、一元配置ＡＮＯＶＡ検定を使用した、＊ Ｐ＜０．０５、＊＊ Ｐ＜０．０１、＊＊＊ Ｐ＜０．００１。
実験結果：
投与後、動物を実行し、腫瘍の重量を測定した。ＮＣＩ－Ｈ４６０に対する実施例１の化合物及び実施例２の化合物の抗腫瘍効果を下記表に示した。
実験の目的：
ＰＤ－Ｌ１阻害剤としての実施例１の化合物及び実施例２の化合物のインビボ抗腫瘍効果を、ヒト免疫系で再構成したＮＳＧ腫瘍保有マウスにおけるヒト肺癌のＮＣＩ－Ｈ４６０モデルで評価した。
実験的解決手段：
動物群分け：実験動物を溶媒対照群、シクロホスファミド８０ｍｇ／ｋｇ群（ＣＴＸ）、実施例１の化合物５ｍｇ／ｋｇ群及び１０ｍｇ／ｋｇ群、並びに実施例２の化合物５ｍｇ／ｋｇ群及び実施例２の化合物１０ｍｇ／ｋｇ群にそれぞれ分けた。
実験の手順：新鮮なヒト白血球を分離してＰＢＭＣを得た後、尾静脈からＮＳＧマウスに接種し、各マウスには１×１０７個ずつ接種した。３日目にＮＣＩ－Ｈ４６０腫瘍細胞をマウスの脇の下に接種し、各マウスに１×１０６個ずつ接種した。腫瘍が１００～３００ｍｍ３に成長した後、マウスを群分けして投与した。溶媒対照群のマウスには、０．５％ＣＭＣを毎日経口投与した。シクロホスファミドは腹腔内投与した。試験対象となる化合物は１日１回経口投与した。処理の過程で、動物を体重測定し、殺処分した。腫瘍組織を剥離し、重量測定し、写真を撮った。最後に、抗腫瘍効果の強さを評価するために、腫瘍抑制率を計算した。
計算及び統計の方法：腫瘍増殖抑制率ＴＧＩ（％）：ＴＧＩ＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００ （Ｔ：処理群における腫瘍重量、Ｃ：陰性対照群における腫瘍重量）。
統計方法：データの統計解析にはＧｒａｐｈｐａｄを使用し、一元配置ＡＮＯＶＡ検定を使用した、＊ Ｐ＜０．０５、＊＊ Ｐ＜０．０１、＊＊＊ Ｐ＜０．００１。
実験結果：
投与後、動物を実行し、腫瘍の重量を測定した。ＮＣＩ－Ｈ４６０に対する実施例１の化合物及び実施例２の化合物の抗腫瘍効果を下記表に示した。
【表15】
【0056】
まとめると、実験結果は以下のことを示した。
マウスメラノーマ高転移性株Ｂ１６Ｆ１０の皮下移植腫瘍モデルにおいて、実施例２の化合物の１日経口投与量５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇにおける腫瘍抑制率はそれぞれ４０％及び５５％であり、実施例１の化合物の同じ投与量での腫瘍抑制率はそれぞれ１１％及び１３％であった。
マウス大腸癌ＭＣ３８の皮下移植腫瘍モデルにおいて、実施例２の化合物の１日経口投与量５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇにおける腫瘍抑制率はそれぞれ７５％及び５７％であり、実施例１の化合物の同じ投与量での腫瘍抑制率はそれぞれ１８％及び２７％であった。
ヒト免疫系を再構築したＮＳＧ腫瘍保有マウス（ＮＣＩ－Ｈ４６０）において、実施例２の化合物の１日経口投与量１５ｍｇ／ｋｇにおける腫瘍抑制率は、実施例１の化合物の腫瘍抑制率より優れていた（腫瘍抑制率：３０．６％対２４．７％）。
マウスメラノーマ高転移性株Ｂ１６Ｆ１０の皮下移植腫瘍モデルにおいて、実施例２の化合物の１日経口投与量５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇにおける腫瘍抑制率はそれぞれ４０％及び５５％であり、実施例１の化合物の同じ投与量での腫瘍抑制率はそれぞれ１１％及び１３％であった。
マウス大腸癌ＭＣ３８の皮下移植腫瘍モデルにおいて、実施例２の化合物の１日経口投与量５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇにおける腫瘍抑制率はそれぞれ７５％及び５７％であり、実施例１の化合物の同じ投与量での腫瘍抑制率はそれぞれ１８％及び２７％であった。
ヒト免疫系を再構築したＮＳＧ腫瘍保有マウス（ＮＣＩ－Ｈ４６０）において、実施例２の化合物の１日経口投与量１５ｍｇ／ｋｇにおける腫瘍抑制率は、実施例１の化合物の腫瘍抑制率より優れていた（腫瘍抑制率：３０．６％対２４．７％）。
【0057】
【表16】
【図1】
【図2】
【図3】
【国際調査報告】