特表 2022-547313 ヒトサイトメガロウイルスワクチン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-11-11

(54)【発明の名称】ヒトサイトメガロウイルスワクチン

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/00 20060101AFI20221104BHJP

   A61P 31/22 20060101ALI20221104BHJP

   A61K 9/51 20060101ALI20221104BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20221104BHJP

   A61K 47/18 20060101ALI20221104BHJP

   A61K 47/28 20060101ALI20221104BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20221104BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20221104BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20221104BHJP

   C12N 15/38 20060101ALI20221104BHJP

   C07K 14/045 20060101ALI20221104BHJP

【ＦＩ】

A61K39/00 H

A61P31/22

A61K9/51

A61K47/24

A61K47/18

A61K47/28

A61K47/10

A61K9/10

A61K48/00

C12N15/38 ZNA

C07K14/045

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022515906

(86)(22)【出願日】2020-09-11

(85)【翻訳文提出日】2022-05-09

(86)【国際出願番号】 US2020050392

(87)【国際公開番号】W WO2021050864

(87)【国際公開日】2021-03-18

(31)【優先権主張番号】62/899,624

(32)【優先日】2019-09-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/958,623

(32)【優先日】2020-01-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/899,129

(32)【優先日】2019-09-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】513084469

【氏名又は名称】モデルナティエックス インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ．

(74)【代理人】

【識別番号】100188558

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100195796

【弁理士】

【氏名又は名称】塩尻 一尋

(72)【発明者】

【氏名】シヌ・ジョン

(72)【発明者】

【氏名】ロリ・パンサー

(72)【発明者】

【氏名】タル・ザックス

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA16

4C076AA65

4C076BB15

4C076CC35

4C076DD49

4C076DD63

4C076DD70

4C076EE23

4C076FF01

4C076FF63

4C084AA13

4C084MA02

4C084MA21

4C084MA38

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZB33

4C085AA03

4C085BB23

4C085EE03

4C085GG03

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA50

4H045BA55

4H045CA01

4H045DA86

4H045EA31

4H045FA74

(57)【要約】

本開示の諸態様は、脂質ナノ粒子内に製剤化されたｈＣＭＶ抗原ポリペプチドｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ、及びｇＢを含むｍＲＮＡワクチンを投与することにより、対象内でヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）に対する抗原特異的免疫応答を生じさせるための方法に関し、ｈＣＭＶに対する抗原特異的免疫応答は、ｉ）上皮細胞感染に対する少なくとも３倍の幾何平均力価、またはｉｉ）上皮細胞感染に対する９～４１の幾何平均比、またはｉｉｉ）線維芽細胞感染に対する４～８倍の幾何平均比を有する中和抗体をもたらす。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト対象におけるヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）に対する抗原特異的免疫応答を生じさせるための方法であって、
３０μｇ～２００μｇの用量の免疫原性組成物であって、（ａ）ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、（ｂ）ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｃ）ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｄ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｅ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｆ）ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドとを含み、（ａ）～（ｆ）の前記ｍＲＮＡポリヌクレオチドが少なくとも１つの脂質ナノ粒子内に製剤化される、前記免疫原性組成物を、ヒト対象に投与することを含み、
それにより、前記対象内でのｈＣＭＶに対する抗原特異的免疫応答を誘導し、
前記免疫原性組成物の投与後、前記ヒト対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体の幾何平均力価（ＧＭＴ）が、ベースラインよりも少なくとも３倍増加する、前記方法。

【請求項2】

ヒト対象におけるヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）に対する抗原特異的免疫応答を生じさせるための方法であって、
３０μｇ～２００μｇの用量の免疫原性組成物であって、（ａ）ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、（ｂ）ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｃ）ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｄ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｅ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｆ）ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドとを含み、（ａ）～（ｆ）の前記ｍＲＮＡポリヌクレオチドが少なくとも１つの脂質ナノ粒子内に製剤化される、前記免疫原性組成物を、ヒト対象に投与することを含み、
それにより、前記対象内でのｈＣＭＶに対する抗原特異的免疫応答を誘導し、
前記免疫原性組成物の投与後、前記ヒト対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体の幾何平均比（ＧＭＲ）が約９～４１となる、前記方法。

【請求項3】

ヒト対象におけるヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）に対する抗原特異的免疫応答を生じさせるための方法であって、
３０μｇ～２００μｇの用量の免疫原性組成物であって、（ａ）ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、（ｂ）ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｃ）ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｄ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｅ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｆ）ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドとを含み、（ａ）～（ｆ）の前記ｍＲＮＡポリヌクレオチドが少なくとも１つの脂質ナノ粒子内に製剤化される、前記免疫原性組成物を、ヒト対象に投与することを含み、
それにより、前記対象内でのｈＣＭＶに対する抗原特異的免疫応答を誘導し、
前記免疫原性組成物の投与後、前記ヒト対象内で、線維芽細胞感染に対する中和抗体の幾何平均比（ＧＭＲ）が約４～８となる、前記方法。

【請求項4】

前記免疫原性組成物が３０μｇの用量で投与される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

前記免疫原性組成物が９０μｇの用量で投与される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

前記免疫原性組成物が１８０μｇの用量で投与される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記免疫原性組成物が３００μｇの用量で投与される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記免疫原性組成物の少なくとも２回の用量または少なくとも３回の用量が投与される、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記免疫原性組成物の３回の用量が投与される、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

前記免疫原性組成物の用量が、１日目と、２か月目の初め頃と、６か月目の初め頃とに投与される、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記免疫原性組成物の単回用量が、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体力価を引き出す、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

前記免疫原性組成物の単回用量後、２回用量後、または３回用量後、前記ヒト対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＴが、ベースラインよりも少なくとも３倍増加する、請求項１に記載の方法。

【請求項13】

前記免疫原性組成物の２回用量後または３回用量後、前記ヒト対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＴが、ベースラインよりも少なくとも３倍増加する、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記ワクチン組成物の２回用量後、前記ヒト対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＴが、ベースラインよりも９～２０倍増加する、請求項１２に記載の方法。

【請求項15】

前記ワクチン組成物の３回用量後、前記対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＴが、ベースラインよりも２０～４０倍増加する、請求項１２に記載の方法。

【請求項16】

３０μｇ以上の用量の少なくとも２回の前記免疫原性組成物を投与された血清反応陽性対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＲが１４～２６の範囲内にある、請求項２に記載の方法。

【請求項17】

３０μｇ以上の用量の少なくとも３回の前記免疫原性組成物を投与された血清反応陽性対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＲが１４～２６の範囲内にある、請求項２に記載の方法。

【請求項18】

３０μｇ以上の用量の少なくとも３回の前記免疫原性組成物を投与された血清反応陽性対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＲが１４～４１の範囲内にある、請求項２に記載の方法。

【請求項19】

前記ＧＭＲが３０～４１の範囲内にある、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

約１８０μｇの用量の少なくとも３回が血清反応陽性の対象に投与される、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記脂質ナノ粒子が、イオン化可能なカチオン性脂質と、コレステロールと、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）と、１，２ジミリストイル－ｓｎ－グリセロール、メトキシポリエチレングリコール（ＤＭＧ－ＰＥＧ）とを含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

前記イオン化可能なカチオン性脂質が化合物Ｉを含む、請求項２１に記載の方法。

【化1】

【請求項23】

前記脂質ナノ粒子が、２０～６０ｍｏｌ％のイオン化可能なカチオン性脂質と、２５～５５ｍｏｌ％のコレステロールと、５～２５ｍｏｌ％のＤＳＰＣと、及び０．５～１５ｍｏｌ％のＤＭＧ－ＰＥＧとを含む脂質の混合物を含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

前記脂質ナノ粒子が、４５～５５ｍｏｌ％のイオン化可能なカチオン性脂質と、３５～４０ｍｏｌ％のコレステロールと、５～１５ｍｏｌ％のＤＳＰＣと、１～２ｍｏｌ％のＤＭＧ－ＰＥＧとを含む脂質の混合物を含む、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記脂質ナノ粒子が、５０ｍｏｌ％のイオン化可能なカチオン性脂質と、３８．５ｍｏｌ％のコレステロールと、１０ｍｏｌ％のＤＳＰＣと、１．５ｍｏｌ％のＤＭＧ－ＰＥＧとを含む脂質の混合物を含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記ワクチン組成物中のｈＣＭＶ ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ、及びｇＢタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡの重量比が１：１：１：１：１：１である、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

ｈＣＭＶ ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ、及びｇＢタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、１－メチルプソイドウリジン（１－ｍｅｔｈｙｌｐｓｅｕｄｏｕｒｉｎｅ）化学修飾を含む、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

ｈＣＭＶ ｇＨタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号５の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

ｈＣＭＶ ｇＨタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号５の配列のヌクレオチド配列を含む、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

ｈＣＭＶ ｇＬタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号６の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

ｈＣＭＶ ｇＬタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号６の配列のヌクレオチド配列を含む、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

ｈＣＭＶ ＵＬ１２８タンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号２の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項33】

ｈＣＭＶ ＵＬ１２８タンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号２の配列のヌクレオチド配列を含む、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

ｈＣＭＶ ＵＬ１３０タンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号３の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

ｈＣＭＶ ＵＬ１３０タンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号３の配列のヌクレオチド配列を含む、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号４の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項１～３５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項37】

ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号４の配列のヌクレオチド配列を含む、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

ｈＣＭＶ ｇＢタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号１の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

ｈＣＭＶ ｇＢタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号１の配列のヌクレオチド配列を含む、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

ｈＣＭＶ ｇＨタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号５の配列のヌクレオチド配列を含み、ｈＣＭＶ ｇＬタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号６の配列のヌクレオチド配列を含み、ｈＣＭＶ ＵＬ１２８タンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが配列番号２の配列のヌクレオチド配列を含み、ｈＣＭＶ ＵＬ１３０タンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号３の配列のヌクレオチド配列を含み、ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号４の配列のヌクレオチド配列を含み、ｈＣＭＶ ｇＢタンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号１の配列のヌクレオチド配列を含む、請求項１～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが、配列番号１１の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、前記ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが、配列番号１２の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、前記ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが、配列番号８の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、前記ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが、配列番号９の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、前記ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが、配列番号１０の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、及び／または前記ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが、配列番号７の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項１～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

前記免疫原性組成物が、筋肉内注射を介し投与される、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

前記ヒト対象が、前記ｈＣＭＶ ｍＲＮＡ免疫原性組成物を投与される前はＣＭＶ血清反応陽性である、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

前記ヒト対象が、前記ｈＣＭＶ ｍＲＮＡ免疫原性組成物を投与される前はＣＭＶ血清反応陰性である、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

ｈＣＭＶ ｐｐ６５ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含む少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む第２の免疫原性組成物の５μｇ～１００μｇの用量を、ヒト対象に投与することをさらに含み、前記ｍＲＮＡポリヌクレオチドが、少なくとも１つの脂質ナノ粒子内に製剤化される、請求項１～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

前記第２の免疫原性組成物が１０μｇの用量で投与される、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記第２の免疫原性組成物が４０μｇの用量で投与される、請求項４５に記載の方法。

【請求項48】

前記第２の免疫原性組成物が８０μｇの用量で投与される、請求項４５に記載の方法。

【請求項49】

ｈＣＭＶ ｐｐ６５タンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号２１の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項４５～４８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

ｈＣＭＶ ｐｐ６５タンパク質をコードする前記ｍＲＮＡが、配列番号２１の配列のヌクレオチド配列を含む、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記ｈＣＭＶ ｐｐ６５ポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが、配列番号２３の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項４５～４８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

前記第２のワクチン組成物が筋肉内注射を介し投与される、請求項４５～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項53】

前記ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが、配列番号１１を含み、前記ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが、配列番号１２を含み、前記ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが、配列番号８を含み、前記ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが、配列番号９を含み、前記ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが、配列番号１０を含み、及び／または前記ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが配列番号７の配列を含む、請求項４１に記載の方法。

【請求項54】

前記ｈＣＭＶ ｐｐ６５ポリペプチドをコードする前記オープンリーディングフレームが、配列番号２３を含む、請求項５１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は米国特許法第１１９条（ｅ）に基づき、２０１９年９月１１日出願の米国仮出願第６２／８９９，１２９号（表題「Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ Ｖａｃｃｉｎｅ」）、２０１９年９月１２日出願の米国仮出願第６２／８９９，６２４号（表題「Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ Ｖａｃｃｉｎｅ」）、及び２０２０年１月８日出願の米国仮出願第６２／９５８，６２３号（表題「Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ Ｖａｃｃｉｎｅ」）の利益を主張し、これらの各々の開示内容の全体を参照により本明細書に援用する。

【0002】

ＥＦＳＷＥＢ経由でテキストファイルとして提出した配列表の参照
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂ経由でＡＳＣＩＩ形式で提出された配列表を含み、この配列表は、その全体が参照によって本明細書に援用される。このＡＳＣＩＩファイルは２０２０年９月４日に作成され、名称はＭ１３７８７０１３１ＷＯ００－ＳＥＱ－ＯＭＪ．ｔｘｔ、サイズは５５キロバイトである。

【背景技術】

【0003】

サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）は、ヘルペスウイルス科のウイルスである。ＣＭＶは、主に感染性粘膜分泌物との接触または子宮内で獲得され、一次感染後に潜伏する。米国におけるＣＭＶの血清学的有病率は、全体では５０．４％であるが、資源の乏しい地域では６０％～１００％の比率で報告されている。

【0004】

ＣＭＶは最も一般的な先天性ウイルス感染症であり、米国では年間３０，０００～４０，０００人の乳児（出生数の０．６％～２％）が罹患している。妊娠初期３か月での先天性ＣＭＶ感染症は、最も有害な妊娠転帰に関連するが、症候性の先天性ＣＭＶは、妊娠中のいかなる時期の感染からも生じ得る。妊娠中にＣＭＶに一次感染した母親のおよそ３０％～３５％がウイルスを胎児に媒介し、このような新生児のうち１２％が症候性疾患を有し、およそ４％が生後１年以内に死亡する。加えて、出生時に症候性であるＣＭＶ感染乳児のおよそ半数が、知的障害、感音性難聴、及び発達遅延などの後期合併症を発症する。先天性ＣＭＶ感染症が小児の健康に与える影響が重大であることから、２０１７年のＩｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｒｅｐｏｒｔでは、先天性ＣＭＶ感染症防止のためのＣＭＶワクチンの開発が最優先カテゴリーに位置付けられている。

【0005】

固形臓器または造血幹細胞移植後に慢性的に免疫抑制療法を受けている患者において、移植片拒絶反応または末端臓器疾患を引き起こすＣＭＶ感染症は、高い死亡率に結び付くものである。米国では、年間およそ３０，０００人の成人が固形臓器移植を受け、２２，０００人が造血細胞移植を受けている。全体的に見て、抗ウイルス薬予防投与を受ける固形臓器移植患者の８％～４０％及び造血細胞移植患者の３％～６％が、ＣＭＶに起因する移植後合併症を発症する。移植患者におけるＣＭＶ感染症の主な合併症は、移植組織の急性または慢性拒絶反応、ならびに侵襲性疾患（例えば、大腸炎、肝炎、及び脳炎）である。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】米国仮出願第６２／８９９，１２９号（表題「Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ Ｖａｃｃｉｎｅ」）

【特許文献2】米国仮出願第６２／８９９，６２４号（表題「Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ Ｖａｃｃｉｎｅ」）

【特許文献3】米国仮出願第６２／９５８，６２３号（表題「Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ Ｖａｃｃｉｎｅ」）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

先天性ＣＭＶ感染症を防止するための安全かつ有効な方法に対するアンメット・メディカル・ニーズは非常に高い。もう１つのアンメット・メディカル・ニーズは、固形臓器または造血幹細胞移植後に慢性的な免疫抑制療法を受けている患者におけるＣＭＶ感染症の防止である。

【課題を解決するための手段】

【0008】

メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ベースのワクチンプラットフォームは、対応するｍＲＮＡの送達及び細胞取込みによって標的ウイルス抗原がｉｎ ｖｉｖｏで産生されるという原理及び知見に基づいて開発された。そして、ｍＲＮＡは細胞内でリボソーム翻訳を経て、ワクチンｍＲＮＡによってコードされるタンパク質抗原を内在的に発現する。このようなｍＲＮＡベースワクチンは、細胞核に侵入したりヒトゲノムと相互作用したりせず、複製せず、一過性に発現する。これにより、ｍＲＮＡワクチンは、野生型ウイルス感染を模倣した方法で、構造的にインタクトなタンパク質抗原の内在的産生を刺激する機構を提供し、ＣＭＶなどの感染性病原体に対する高度に標的化された免疫応答を誘導することができる。

【0009】

いくつかの態様において、本明細書では、全長ＣＭＶ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）をコードするｍＲＮＡと、五量体ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａ糖タンパク質複合体をコードするｍＲＮＡとを含む、メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ベース予防ワクチン（本明細書ではｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡと呼ぶ）について説明する。

【0010】

本開示のいくつかの態様は、ヒト対象内でヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）に対する抗原特異的免疫応答を生じさせるための方法を提供し、当該方法は、３０μｇ～２００μｇの用量の免疫原性組成物であって、（ａ）ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、（ｂ）ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｃ）ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｄ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｅ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｆ）ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドとを含み、（ａ）～（ｆ）のｍＲＮＡポリヌクレオチドが、少なくとも１つの脂質ナノ粒子内に製剤化される、免疫原性組成物をヒト対象に投与することを含み、それにより、当該対象内でのｈＣＭＶに対する抗原特異的免疫応答を誘導し、当該ヒト対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体の幾何平均力価（ＧＭＴ）は、当該免疫原性組成物の投与後、ベースラインよりも少なくとも３倍増加する。

【0011】

本開示のさらなる態様は、ヒト対象内でヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）に対する抗原特異的免疫応答を生じさせるための方法を提供し、当該方法は、３０μｇ～２００μｇの用量の免疫原性組成物であって、（ａ）ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、（ｂ）ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｃ）ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｄ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｅ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｆ）ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドとを含み、（ａ）～（ｆ）のｍＲＮＡポリヌクレオチドが、少なくとも１つの脂質ナノ粒子内に製剤化される、免疫原性組成物をヒト対象に投与することを含み、それにより、当該対象内でのｈＣＭＶに対する抗原特異的免疫応答を誘導し、当該ヒト対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体の幾何平均比（ＧＭＲ）は、当該免疫原性組成物の投与後、約９～４１となる。

【0012】

本開示のさらなる態様は、ヒト対象内でヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）に対する抗原特異的免疫応答を生じさせるための方法を提供し、当該方法は、３０μｇ～２００μｇの用量の免疫原性組成物であって、（ａ）ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、（ｂ）ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｃ）ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｄ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｅ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｆ）ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドとを含み、（ａ）～（ｆ）のｍＲＮＡポリヌクレオチドが、少なくとも１つの脂質ナノ粒子内に製剤化される、免疫原性組成物をヒト対象に投与することを含み、それにより、当該対象内でのｈＣＭＶに対する抗原特異的免疫応答を誘導し、当該ヒト対象内で、線維芽細胞感染に対する中和抗体の幾何平均比（ＧＭＲ）は、当該免疫原性組成物の投与後、約４～８となる。

【0013】

本開示のさらなる態様は、ヒト対象内でヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）に対する抗原特異的免疫応答を生じさせるのに使用するための組成物を提供し、当該使用は、３０μｇ～２００μｇの用量の免疫原性組成物であって、（ａ）ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、（ｂ）ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｃ）ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｄ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｅ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｆ）ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドとを含み、（ａ）～（ｆ）のｍＲＮＡポリヌクレオチドが、少なくとも１つの脂質ナノ粒子内に製剤化される、免疫原性組成物をヒト対象に投与することを含み、それにより、当該対象内でのｈＣＭＶに対する抗原特異的免疫応答を誘導し、当該ヒト対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体の幾何平均力価（ＧＭＴ）は、当該免疫原性組成物の投与後、ベースラインよりも少なくとも３倍増加する。

【0014】

本開示のさらなる態様は、ヒト対象内でヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）に対する抗原特異的免疫応答を生じさせるのに使用するための組成物を提供し、当該使用は、３０μｇ～２００μｇの用量の免疫原性組成物であって、（ａ）ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、（ｂ）ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｃ）ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｄ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｅ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｆ）ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドとを含み、（ａ）～（ｆ）のｍＲＮＡポリヌクレオチドが、少なくとも１つの脂質ナノ粒子内に製剤化される、免疫原性組成物をヒト対象に投与することを含み、それにより、当該対象内でのｈＣＭＶに対する抗原特異的免疫応答を誘導し、当該ヒト対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体の幾何平均比（ＧＭＲ）は、当該免疫原性組成物の投与後、約９～４１となる。

【0015】

本開示のさらなる態様は、ヒト対象内でヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）に対する抗原特異的免疫応答を生じさせるのに使用するための組成物を提供し、当該使用は、３０μｇ～２００μｇの用量の免疫原性組成物であって、（ａ）ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、（ｂ）ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｃ）ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｄ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｅ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｆ）ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドとを含み、（ａ）～（ｆ）のｍＲＮＡポリヌクレオチドが、少なくとも１つの脂質ナノ粒子内に製剤化される、免疫原性組成物をヒト対象に投与することを含み、それにより、当該対象内でのｈＣＭＶに対する抗原特異的免疫応答を誘導し、当該ヒト対象内で、線維芽細胞感染に対する中和抗体の幾何平均比（ＧＭＲ）は、当該免疫原性組成物の投与後、約４～８となる。

【0016】

いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、３０μｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、９０μｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、１８０μｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、３００μｇの用量で投与される。

【0017】

いくつかの実施形態において、免疫原性組成物の少なくとも２回用量または少なくとも３回用量が投与される。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物の３回用量が投与される。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物の用量は、１日目と、２か月目の初め頃と、６か月目の初め頃とに投与される。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物の単回投与の投与は、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体力価を引き出す。

【0018】

いくつかの実施形態において、免疫原性組成物の単回用量後、２回用量後、または３回用量後、ヒト対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも少なくとも３倍増加する。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物の２回用量後または３回用量後、ヒト対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも少なくとも３倍増加する。いくつかの実施形態において、ワクチン組成物の２回用量後、ヒト対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも９～２０倍増加する。いくつかの実施形態において、ワクチン組成物の３回用量後、対象内で、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも２０～４０倍増加する。

【0019】

いくつかの実施形態において、少なくとも２回の３０μｇ以上の用量の免疫原性組成物を投与された血清反応陽性対象において、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＲは１４～２６の範囲内にある。いくつかの実施形態において、少なくとも３回の３０μｇ以上の用量の免疫原性組成物を投与された血清反応陽性対象において、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＲは１４～２６の範囲内にある。いくつかの実施形態において、少なくとも３回の３０μｇ以上の用量の免疫原性組成物を投与された血清反応陽性対象において、上皮細胞感染に対する中和抗体のＧＭＲは１４～４１の範囲内にある。いくつかの実施形態において、ＧＭＲは３０～４１の範囲内にある。いくつかの実施形態において、少なくとも３回の約１８０μｇの用量が血清反応陽性対象に投与される。

【0020】

いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、イオン化可能なカチオン性脂質と、コレステロールと、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）と、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロール－メトキシポリエチレングリコール（ＤＭＧ－ＰＥＧ）とを含む。いくつかの実施形態において、イオン化可能なカチオン性脂質は、化合物Ｉを含む。

【化1】

【0021】

いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、２０～６０ｍｏｌ％のイオン化可能なカチオン性脂質と、２５～５５ｍｏｌ％のコレステロールと、５～２５ｍｏｌ％のＤＳＰＣと、０．５～１５ｍｏｌ％のＤＭＧ－ＰＥＧとを含む脂質の混合物を含む。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、４５～５５ｍｏｌ％のイオン化可能なカチオン性脂質と、３５～４０ｍｏｌ％のコレステロールと、５～１５ｍｏｌ％のＤＳＰＣと、１～２ｍｏｌ％のＤＭＧ－ＰＥＧとを含む脂質の混合物を含む。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、５０ｍｏｌ％のイオン化可能なカチオン性脂質と、３８．５ｍｏｌ％のコレステロールと、１０ｍｏｌ％のＤＳＰＣと、１．５ｍｏｌ％のＤＭＧ－ＰＥＧとを含む脂質の混合物を含む。

【0022】

いくつかの実施形態において、ワクチン組成物中のｈＣＭＶ ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ、及びｇＢタンパク質をコードするｍＲＮＡの重量比は、１：１：１：１：１：１である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ、及びｇＢタンパク質をコードするｍＲＮＡは、１－メチルプソイドウリジン（１－ｍｅｔｈｙｌｐｓｅｕｄｏｕｒｉｎｅ）の化学修飾を含む。

【0023】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＨタンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号５の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＨタンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号５の配列のヌクレオチド配列を含む。

【0024】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＬタンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号６の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＬタンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号６の配列のヌクレオチド配列を含む。

【0025】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１２８タンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号２の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１２８タンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号２の配列のヌクレオチド配列を含む。

【0026】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１３０タンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号３の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１３０タンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号３の配列のヌクレオチド配列を含む。

【0027】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号４の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号４の配列のヌクレオチド配列を含む。

【0028】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＢタンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号１の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＢタンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号１の配列のヌクレオチド配列を含む。

【0029】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＨタンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号５の配列のヌクレオチド配列を含み、ｈＣＭＶ ｇＬタンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号６の配列のヌクレオチド配列を含み、ｈＣＭＶ ＵＬ１２８タンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号２の配列のヌクレオチド配列を含み、ｈＣＭＶ ＵＬ１３０タンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号３の配列のヌクレオチド配列を含み、ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号４の配列のヌクレオチド配列を含み、ｈＣＭＶ ｇＢタンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号１の配列のヌクレオチド配列を含む。

【0030】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、配列番号１１の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、配列番号１２の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、配列番号８の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、配列番号９の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、配列番号１０の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、及び／またはｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、配列番号７の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。

【0031】

いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、筋肉内注射を介し投与される。

【0032】

いくつかの実施形態において、ヒト対象は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡ免疫原性組成物を投与される前はＣＭＶ血清反応陽性である。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡ免疫原性組成物を投与される前はＣＭＶ血清反応陰性である。

【0033】

いくつかの実施形態において、本方法はさらに、５μｇ～１００μｇの用量の第２の免疫原性組成物であって、ｈＣＭＶ ｐｐ６５ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含む少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該ｍＲＮＡポリヌクレオチドが、少なくとも１つの脂質ナノ粒子内に製剤化される、第２の免疫原性組成物をヒト対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、第２の免疫原性組成物は、１０μｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、第２の免疫原性組成物は、４０μｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、第２の免疫原性組成物は、８０μｇの用量で投与される。

【0034】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｐｐ６５タンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号２１の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｐｐ６５タンパク質をコードするｍＲＮＡは、配列番号２１の配列のヌクレオチド配列を含む。

【0035】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｐｐ６５ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、配列番号２３の配列に対し少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、第２のワクチン組成物は、筋肉内注射を介し投与される。

【0036】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、配列番号１１を含み、ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、配列番号１２を含み、ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、配列番号８を含み、ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、配列番号９を含み、ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、配列番号１０を含み、及び／またはｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは配列番号７の配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｐｐ６５ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、配列番号２３を含む。

【0037】

本発明の各制限は、本発明の様々な実施形態を包含し得る。そのため、任意の１つの要素または要素の組合せを伴う本発明の各制限は、本発明の各態様に含まれ得ることが予測される。本発明は、その適用において、以下の説明で示されるまたは図面で例示される構成の詳細にも構成要素の配置にも限定されるものではない。本発明は、他の実施形態が可能であり、様々な方法で実施または実行することができる。

【0038】

添付の図面は、一定の縮尺で描画したわけではない。図面において、様々な図に示されている各々の同一またはほぼ同一の構成要素は、類似の数字によって表されている。分かりやすくするため、あらゆる構成要素があらゆる図面において標識されているとは限らない。図面の説明は以下の通り。

【図面の簡単な説明】

【0039】

【図1-1】図１。研究デザインの概要を示す。略語は以下の通り。ＩＳＴ：内部安全性チーム、ＳＭＣ：安全性モニタリング委員会。

【図1-2】図１の続き。

【図2】用量漸増フェーズＡにおける採血時点を示す。略語は以下の通り。Ａ：抗体媒介免疫原性のための血液試料、Ｓ：安全性のための血液試料。「来院」は、病院への来院を意味する。

【図3】用量漸増フェーズＢ、用量選択フェーズＢ、及びセンチネル拡大フェーズＣの採血時点を示す。略語は以下の通り。Ａ：抗体媒介免疫原性のための血液試料、Ｃ：細胞媒介免疫原性のための血液試料、Ｓ：安全性のための血液試料。「来院」は、病院への来院を意味する。

【図4】用量漸増フェーズＡ及びＢにおける順次登録及び内部安全性チームの安全性評価の概要を示す。略語は以下の通り。ＩＳＴ：内部安全性チーム、ＳＭＣ：安全性モニタリング委員会。

【図5】センチネル拡大フェーズＣの順次登録及び安全性評価の概要を示す。略語は以下の通り。ＩＳＴ：内部安全性チーム、ＳＭＣ：安全性モニタリング委員会。

【図6】フェーズＡ及びフェーズＢの血清反応陰性対象における上皮細胞感染パープロトコルセットに対する中和抗体の結果を示す。灰色の基準実線は、本試験におけるＣＭＶ血清反応陽性対象のベースラインＧＭＴを表す。１回目投与からの日数：１日目＝１回目ワクチン接種、２８日目＝１回目ワクチン接種から１か月後、８４日目＝２回目ワクチン接種の１か月後、１６８日目＝６か月目で３回目ワクチン接種前、１９６日目＝３回目ワクチン接種の１か月後、３３６日目＝１２か月目で３回目ワクチン接種の６か月後。

【図7】フェーズＢにおける上皮細胞感染パープロトコルセットに対する中和抗体の結果を血清状態別に示す。灰色の実線は、本試験におけるＣＭＶ血清反応陽性対象のベースラインＧＭＴを表す。１回目投与からの日数：１日目＝１回目ワクチン接種、２８日目＝１回目ワクチン接種の１か月後、８４日目＝２回目ワクチン接種の１か月後。

【図8】フェーズＡ及びＢの血清反応陰性対象における線維芽細胞感染パープロトコルセットに対する中和抗体の結果を示す。灰色の基準実線は、本試験におけるＣＭＶ血清反応陽性対象のベースラインＧＭＴを表す。１回目投与からの日数：１日目＝１回目ワクチン接種、２８日目＝１回目ワクチン接種の１か月後、８４日目＝２回目ワクチン接種の１か月後、１６８日目＝６か月目で３回目ワクチン接種前、１９６日目＝３回目ワクチン接種の１か月後、３３６日目＝１２か月目で３回目ワクチン接種の６か月後。

【図9】フェーズＢにおける線維芽細胞中和抗体の結果を血清状態パープロトコルセット別に示す。灰色の基準実線は、本試験におけるＣＭＶ血清反応陽性対象のベースラインＧＭＴを表す。１回目投与からの日数：１日目＝１回目ワクチン接種、２８日目＝１回目ワクチン接種の１か月後、８４日目＝２回目ワクチン接種の１か月後。

【図10】上皮細胞感染に対する中和抗体応答を血清状態別に示す。

【図11】線維芽細胞感染に対する中和抗体応答を血清状態別に示す。＊ＣＭＶ血清反応陰性フェーズＢプラセボレシピエント１例のｎＡｂ力価は、１か月目時点と３か月目時点との間に発生した血清転換に一致するものであった。

【図12】ＣＭＶ血清反応陰性対象パープロトコルセットにおける上皮細胞芽細胞感染に対する中和抗体応答を示す。＊ＣＭＶ血清反応陰性フェーズＢプラセボレシピエント１例のｎＡｂ力価は、１か月目時点と３か月目時点との間に発生した血清転換に一致するものであった。

【図13】ＣＭＶ血清反応陰性対象パープロトコルセットにおける線維芽細胞感染に対する中和抗体応答を示す。＊ＣＭＶ血清反応陰性フェーズＢプラセボレシピエント１例のｎＡｂ力価は、１か月目時点と３か月目時点との間に発生した血清変換と一致するものであった。

【発明を実施するための形態】

【0040】

本明細書に示す臨床試験データの結果は、本開示のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチン接種が、試験した全ての用量レベル（３０、９０、１８０μｇ、及び３００μｇ）で、ｈＣＭＶ感染に対する血清中和価のブーストを引き出したことを実証するものである。血清中和抗体（ｎＡｂ）の幾何平均力価（ＧＭＴ）は、各ワクチン接種後に用量相関的に増加した。フェーズＢの２回目ワクチン接種後、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、９０μｇ及び１８０μｇの治療群において自然ＣＭＶ感染ベンチマークに近づき、上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、全ての治療群において自然ＣＭＶ感染ベンチマークを上回った。単回ワクチン接種後、ＣＭＶ血清反応陽性対象では中和抗体ＧＭＴがブーストされ、２回目ワクチン接種後には上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴがさらに増加した。フェーズＡ及びフェーズＢのＣＭＶ血清反応陰性対象において、血清応答（ＧＭＴがベースライン力価の４倍以上である対象のパーセンテージ）は２回目ワクチン接種までロバストであり、フェーズＡでは１２か月まで継続的にロバストであった。このことから、３回目ワクチン接種後少なくとも６か月までｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡに対する抗体応答が持続することを示唆するものである。

【0041】

さらに、本明細書に記載のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンの全体的な安全性プロファイルは、認可済みワクチン（例えば、Ｇａｒｄａｓｉｌ及びＳｈｉｎｇｒｉｘ）と同様であった。

【0042】

抗原
抗原とは、免疫応答を誘導する（例えば、免疫系に抗原に対する抗体を産生させる）ことが可能なタンパク質または多糖である。本明細書では、抗原という用語の使用は、別段の明記がない限り、ｈＣＭＶに対する免疫応答を誘導する（または誘導することが可能な）免疫原性タンパク質及び免疫原性フラグメントを包含する。「タンパク質」という用語がペプチドを包含し、「抗原」という用語が抗原フラグメントを包含することを理解されたい。

【0043】

ＨＣＭＶは、異なる細胞タイプへのウイルスの付着及び侵入に関与するいくつかの表面糖タンパク質を含む。五量体複合体（ＰＣ）は、ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａから構成され（Ｈａｈｎ ｅｔ ａｌ．，２００４；Ｒｙｃｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｓｈｅｎｋ，２００５ｂ（これらの各々が参照により本明細書に援用される）、内皮細胞、上皮細胞、及び骨髄性細胞への侵入を媒介する。

【0044】

ＨＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、及びＵＬ１３１Ａは、ｇＨ及びｇＬタンパク質と集合して、ＨＣＭＶの表面に見出されるｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８－１３１Ａと呼ばれる異種五量体複合体を形成する。天然バリアントならびに欠失及び変異解析により、ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８－１３１Ａ複合体のタンパク質が、ある特定の細胞タイプ（例えば、内皮細胞、上皮細胞、及び白血球を含む）に感染する能力を有することが示唆された。

【0045】

ＨＣＭＶは、そのエンベロープを細胞膜（線維芽細胞）またはエンドソーム膜（上皮細胞及び内皮細胞）と融合させることにより、細胞に侵入する。ＨＣＭＶは、エンベロープ糖タンパク質Ｍ（ｇＭ）またはｇＢを用いて細胞表面のヘパラン硫酸プロテオグリカンに付着することにより、細胞侵入を開始する。このステップに続いて細胞表面受容体との相互作用が生じ、侵入の誘発または細胞内シグナル伝達の開始が行われる。侵入受容体機能は、ｇＨ／ｇＬ糖タンパク質複合体によって提供される。異なるｇＨ／ｇＬ複合体が上皮細胞、内皮細胞、または線維芽細胞への侵入を促進することが知られている。例えば、線維芽細胞への侵入にはｇＨ／ｇＬのヘテロ二量体が必要となるが、上皮細胞及び内皮細胞への侵入には、ｇＨ／ｇＬに加えてｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１の五量体複合体が必要となる。このように、異なるｇＨ／ｇＬ複合体が、上皮／内皮細胞及び線維芽細胞上の異なる侵入受容体と結合する。受容体結合に続いて、ｇＢ及びｇＨ／ｇＬによって媒介されるプロセスである膜融合が行われる。初期の抗体研究から、ｇＢ及びｇＨ／ｇＬが共にｈＣＭＶ侵入で重要な役割を有することが支持されている。ｇＢは侵入と細胞伝播に不可欠である。ｇＢ及びｇＨ／ｇＬは細胞融合に必要かつ十分であり、したがってＨＣＭＶの「コア融合機構」に該当する。これは他のヘルペスウイルス間でも保存されている。このように、４つの糖タンパク質複合体は、宿主細胞へのウイルスの付着、結合、融合、及び侵入で決定的な役割を担っている。

【0046】

ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８－１３１Ａ複合体に関する研究により、ｈＣＭＶの糖タンパク質ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＭ、及びｇＮ、ならびにＵＬ１２８、ＵＬ１３０、及びＵＬ１３１Ａタンパク質が免疫原性を有し、様々な細胞タイプの免疫刺激応答に関与していることが示された。さらに、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、及びＵＬ１３１Ａ遺伝子は、ｈＣＭＶ分離株間で比較的保存されているため、ワクチン接種の魅力的な標的となる。さらに、最近の研究では、五量体ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８－１３１複合体内のエピトープに対する抗体が内皮、上皮、及びその他の細胞タイプへの侵入を中和して、ｈＣＭＶの複数の細胞タイプに感染する能力を阻害することが示されている。

【0047】

いかなる理論にも拘束されることは望まないが、中和抗体の大部分はエンベロープ糖タンパク質を対象にしていると考えられ（Ｂｒｉｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９０；Ｆｏｕｔｓ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｍａｃａｇｎｏ ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｍａｒｓｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９２（参照により本明細書に援用される））、一方、ロバストなＴ細胞応答はテグメントタンパク質ｐｐ６５ならびにＩＥ１及びＩＥ２などの非構造タンパク質を対象にしていると考えられている（Ｂｌａｎｃｏ－Ｌｏｂｏ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｂｏｒｙｓｉｅｗｉｃｚ ｅｔ ａｌ．，１９８８；Ｋｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，２００２（参照により本明細書に援用される））。

【0048】

ＨＣＭＶエンベロープ糖タンパク質複合体（例えば、ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａ）は、抗ウイルス免疫応答の主要な抗原標的である。本開示の諸実施形態は、ＨＣＭＶ抗原、詳細には、ＨＣＭＶ糖タンパク質複合体の１つに由来するＨＣＭＶ抗原をコードするポリヌクレオチドを含むＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）を提供する。本開示の諸実施形態は、少なくとも１つのｈＣＭＶ抗原ポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）を提供する。本明細書で提供するＨＣＭＶ ＲＮＡ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）を使用して、ＤＮＡワクチン及び弱毒生ワクチンに関連するリスクの多くを伴うことなく、細胞免疫及び液性免疫を共に含む、バランスのとれた免疫応答を誘導することができる。

【0049】

国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２７４００号（ＷＯ２０１５／１６４６７４）（表題「Ｎｕｃｌｅｃ Ａｃｉｄ Ｖａｃｃｉｎｅｓ」）、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５８３１０号（ＷＯ２０１７／０７０６１３）（表題「ＨＵＭＡＮ ＣＹＴＯＭＥＧＡＬＯＶＩＲＵＳ ＶＡＣＣＩＮＥ」）、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０５７７４８号（ＷＯ２０１８／０７５９８０）（表題「ＨＵＭＡＮ ＣＹＴＯＭＥＧＡＬＯＶＩＲＵＳ ＶＡＣＣＩＮＥ」）、米国特許第１０，０６４，９３５号（表題「ＨＵＭＡＮ ＣＹＴＯＭＥＧＡＬＯＶＩＲＵＳ ＶＡＣＣＩＮＥ」）、米国特許第１０，３８３，９３７号（表題「ＨＵＭＡＮ ＣＹＴＯＭＥＧＡＬＯＶＩＲＵＳ ＶＡＣＣＩＮＥ」）、米国特許第１０，０６４，９３５号（表題「ＨＵＭＡＮ ＣＹＴＯＭＥＧＡＬＯＶＩＲＵＳ ＶＡＣＣＩＮＥ」）、及び米国特許第１０，７１６，８４６号（表題「ＨＵＭＡＮ ＣＹＴＯＭＥＧＡＬＯＶＩＲＵＳ ＶＡＣＣＩＮＥ」）の全体の内容が、参照により本明細書に援用される。

【0050】

本開示の免疫原性組成物（例えば、ワクチン（例えば、ｍＲＮＡワクチン））のｈＣＭＶ抗原を本明細書の表５に示す。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、（ａ）ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、（ｂ）ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｃ）ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｄ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｅ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｆ）ｈＣＭＶ ｇＢをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドとを含む。いくつかの実施形態において、ワクチン組成物中のｈＣＭＶ ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ、及びｇＢタンパク質をコードするｍＲＮＡの重量比は、１：１：１：１：１：１である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ワクチン）の構成要素は、表５に示される配列を含む。

【0051】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、ｈＣＭＶ変異体ｐｐ６５ポリペプチド（本明細書ではｐｐ６５ｍｕｔと呼ぶ）をコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドを含む。

【0052】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、（ａ）ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、（ｂ）ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｃ）ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｄ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｅ）ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｆ）ｈＣＭＶ ｇＢをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｇ）ｈＣＭＶ変異体ｐｐ６５ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡポリヌクレオチドとを含む。

【0053】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む。

【0054】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号１１のヌクレオチド配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号１２のヌクレオチド配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号８のヌクレオチド配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号９のヌクレオチド配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１３１ＡポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号１０のヌクレオチド配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号７のヌクレオチド配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。

【0055】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＨポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号６のヌクレオチド配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１２８ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号２のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１３０ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号３のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ＵＬ１３１ＡポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｇＢポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号１のヌクレオチド配列を含む。

【0056】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｐｐ６５ｍｕｔポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｐｐ６５ｍｕｔポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号２３のヌクレオチド配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｐｐ６５ｍｕｔポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号２１のヌクレオチド配列を含む。

【0057】

いくつかの実施形態において、前述のｍＲＮＡはさらに、５’キャップ（例えば、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ）、ポリＡテール（例えば、約１００ヌクレオチド）、または５’キャップ及びポリＡテールを含み得る。

【0058】

本開示の免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡ構成要素がシグナル配列を含み得ることを理解されたい。また、本開示の免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡ構成要素が、任意の５’非翻訳領域（ＵＴＲ）及び／または任意の３’ＵＴＲを含み得ることも理解されたい。例示的なＵＴＲ配列は表５に示されているが、他のＵＴＲ配列（例えば、従来技術の配列）を使用しても、本明細書に記載の任意のＵＴＲ配列と交換してもよい。また、ＵＴＲは、本明細書で提供するワクチンコンストラクトから省いてもよい。

【0059】

核酸
本開示のｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、少なくとも１つのｈＣＭＶ抗原をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つの（１つ以上の）リボ核酸（ＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態において、ＲＮＡは、少なくとも１つのｈＣＭＶ抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である。いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）はさらに、（少なくとも１つの）５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、ポリＡテール、及び／または５’キャップを含む。

【0060】

核酸は、ヌクレオチド（ヌクレオチド単量体）のポリマー（ポリヌクレオチドとも称される）を含む。核酸は、例えば、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ；β－Ｄ－リボ構成を有するＬＮＡ、α－Ｌ－リボ構成を有するα－ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’－アミノ官能化を有する２’－アミノ－ＬＮＡ、及び２’－アミノ官能化を有する２’－アミノ－α－ＬＮＡを含む）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、シクロヘキセニル核酸（ＣｅＮＡ）、及び／またはこれらのキメラ及び／または組合せであってもよく、これらを含んでもよい。

【0061】

「メッセンジャーＲＮＡ」（ｍＲＮＡ）とは、（少なくとも１つの）タンパク質（アミノ酸の天然、非天然、または修飾ポリマー）をコードする任意のリボ核酸であり、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｓｉｔｕ、またはｅｘ ｖｉｖｏで翻訳してコードされたタンパク質を産生することができる。当業者であれば、別段の記載がある場合を除き、本出願に記載の核酸配列が代表的なＤＮＡ配列内で「Ｔ」を列挙することがあるが、配列がＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）に相当する場合、「Ｔ」が「Ｕ」で置き換えられることが理解されよう。したがって、本明細書で開示され、特定の配列識別番号によって識別される任意のＤＮＡは、そのＤＮＡに相補的な対応するＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）配列も開示しており、その場合、ＤＮＡ配列の各「Ｔ」は「Ｕ」に置き換えられる。

【0062】

オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）とは、開始コドン（例えば、メチオニン（ＡＴＧまたはＡＵＧ））で始まり、終止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、もしくはＴＧＡ、またはＵＡＡ、ＵＡＧ、もしくはＵＧＡ）で終わるＤＮＡまたはＲＮＡの連続的な連なりである。ＯＲＦは、典型的にはタンパク質をコードする。本明細書に開示する配列はさらに、追加のエレメント（例えば、５’及び３’ＵＴＲ）を含んでもよいが、これらのエレメントは、ＯＲＦとは異なり、本開示のワクチンに必ずしも存在する必要はないことが理解されよう。

【0063】

バリアント
いくつかの実施形態において、本開示のｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、ｈＣＭＶ抗原バリアントをコードするｍＲＮＡを含む。抗原バリアントまたは他のポリペプチドバリアントは、野生型、ネイティブ、または参照配列とはアミノ酸配列が異なる分子を指す。抗原／ポリペプチドバリアントは、ネイティブ配列または参照配列と比較してアミノ酸配列内のある特定の位置に置換、欠失、及び／または挿入を有し得る。通常、バリアントは、野生型、ネイティブ、または参照配列に対し少なくとも５０％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、バリアントは、野生型、ネイティブ、または参照配列と少なくとも８０％または少なくとも９０％の同一性を共有する。

【0064】

本開示の核酸によってコードされるバリアント抗原／ポリペプチドは、複数の望ましい特性、例えば、その免疫原性を強化する、その発現を強化する、及び／または対象内でのその安定性またはＰＫ／ＰＤ特性を改善する特性のいずれかを付与するアミノ酸変化を含むことができる。バリアント抗原／ポリペプチドは、通例の変異誘発技法を用いて作製し、適宜アッセイして、所望の特性を有するかどうかを評価することができる。発現レベル及び免疫原性を評価するためのアッセイは、当技術分野で周知されている。同様に、タンパク質バリアントのＰＫ／ＰＤ特性も、当技術分野で認識されている技法を用いて（例えば、ワクチン接種した対象内の抗原の発現を経時的に評価することにより、及び／または誘導された免疫応答の持続性を確認することにより）測定することができる。バリアント核酸によってコードされるタンパク質（複数可）の安定性は、熱安定性もしくは尿素変性時の安定性を分析することによって測定することができ、またはｉｎ ｓｉｌｉｃｏ予測を用いて測定することができる。このような実験及びｉｎ ｓｉｌｉｃｏ評価のための方法は、当技術分野で知られている。

【0065】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、本明細書で提供する配列のいずれか１つによって特定されるヌクレオチド配列を有する（例えば、表５を参照）ｍＲＮＡ ＯＲＦ、または本明細書で提供する配列のいずれか１つによって特定されるヌクレオチド配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％（これらの間の全ての値を含む）同一であるヌクレオチド配列を有するｍＲＮＡ ＯＲＦを含む。

【0066】

「同一性」という用語は、２つ以上のポリペプチド（例えば、抗原）またはポリヌクレオチド（核酸）の配列間の関係を指し、これらの配列を比較することにより決定される。また、同一性は、配列間の配列関連性の程度も指し、２つ以上のアミノ酸残基または核酸残基の鎖間のマッチ数により決定される。同一性は、特定の数学的モデルまたはコンピュータープログラム（例えば、「アルゴリズム」）によって処理されたギャップアラインメント（もしあれば）を有する２つ以上の配列の小さい方の間の同一なマッチのパーセントを測定するものである。関連する抗原または核酸の同一性は、既知の方法によって容易に計算することができる。ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列に適用される「同一性パーセント（％）」は、候補配列及び第２の配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入して最大の同一性パーセントを達成した後に、アミノ酸または核酸の候補配列内で、第２の配列のアミノ酸配列または核酸配列内の残基と同一である残基（アミノ酸残基または核酸残基）のパーセンテージとして定義される。アラインメントのための方法及びコンピュータープログラムは、当技術分野では周知されている。同一性は、同一性パーセントの計算に依存するが、この計算に導入されるギャップ及びペナルティーのために値が異なる場合があることが理解されている。概して、特定のポリヌクレオチドまたはポリペプチド（例えば、抗原）のバリアントは、特定の参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対し、本明細書に記載され当業者に知られている配列アラインメントプログラム及びパラメーターによる定量において、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％でありただし１００％未満の配列同一性を有する。このようなアラインメント用のツールとしては、ＢＬＡＳＴスイート（Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｆ．Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ（１９９７），“Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ ａｎｄ ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ：ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａｔａｂａｓｅ ｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒａｍｓ”，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２）のものが挙げられる。別のよく知られたローカルアラインメント技法は、Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．Ｆ．＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｍ．Ｓ．（１９８１）“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｍｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．” Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５－１９７）に基づく。動的プログラミングに基づく一般的なグローバルアラインメント技法は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．（１９７０）“Ａ ｇｅｎｅｒａｌ ｍｅｔｈｏｄ ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ ｔｏ ｔｈｅ ｓｅａｒｃｈ ｆｏｒ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｗｏ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．” Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３－４５３）である。より最近では、Ｆａｓｔ Ｏｐｔｉｍａｌ Ｇｌｏｂａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ（ＦＯＧＳＡＡ）が開発され、これは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムを含めた他の最適グローバルアラインメント法よりも速く、ヌクレオチド及びタンパク質配列を網羅的にアラインメントするとされている。

【0067】

そのため、参照配列、とりわけ本明細書で開示するポリペプチド（例えば、抗原）配列に関する置換、挿入、及び／または付加、欠失、及び共有結合修飾を含むペプチドまたはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、本開示の範囲内に含まれる。例えば、配列タグまたはアミノ酸（例えば、１つ以上のリジン）をペプチド配列に（例えば、そのＮ末端またはＣ末端に）付加することができる。配列タグは、ペプチドの検出、精製、または局在化に使用することができる。リジンは、ペプチド溶解性の増加、またはビオチン化のために使用することができる。代替的に、ペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列のカルボキシ及びアミノ末端領域に位置するアミノ酸残基を任意選択で欠失させて、切断配列をもたらすことができる。ある特定のアミノ酸（例えば、Ｃ末端またはＮ末端残基）は、代替的に、配列の用途に応じて欠失させることができる（例えば、溶解性であるより大きな配列の一部としてのまたは固体支持体に結合した配列の発現）。いくつかの実施形態において、シグナル配列、終結配列、膜貫通ドメイン、リンカー、多量体化ドメイン（例えば、フォールドオン領域）などのための（またはこれらをコードする）配列は、同じまたは類似の機能を達成する代替的な配列で置き換えることができる。いくつかの実施形態において、タンパク質のコア内の空洞は、例えば、より大きなアミノ酸を導入することにより、安定性を改善するために充填することができる。他の実施形態において、埋没した（ｂｕｒｉｅｄ）水素結合ネットワークは、安定性を改善するために疎水性残基で置き換えることができる。また他の実施形態において、グリコシル化部位を除去し、適切な残基で置き換えることができる。このような配列は、当業者には容易に識別可能である。また、本明細書で提供する配列のいくつかは、例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの調製で使用する前に、欠失させ得る配列タグまたは末端ペプチド配列を（例えば、Ｎ末端またはＣ末端に）含むことも理解されたい。

【0068】

当業者には認識されるように、タンパク質フラグメント、機能タンパク質ドメイン、及び相同タンパク質も、目的ｈＣＭＶ抗原の範囲内であると考えられる。例えば、本明細書では、参照タンパク質の任意のタンパク質フラグメント（参照抗原配列より少なくとも１アミノ酸残基短いがそれ以外は同一であるポリペプチド配列を意味する）であって、免疫原性であり、ｈＣＭＶ病原体に対する防御免疫応答を付与することを条件とする、タンパク質フラグメントを提供する。参照タンパク質と同一であるが切断されているバリアントに加えて、いくつかの実施形態において、抗原は、本明細書で提供または言及するいずれかの配列に対し２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の変異を含む。抗原／抗原ポリペプチドの長さは、約４、６、または８アミノ酸から全長タンパク質までの範囲をとり得る。

【0069】

安定化エレメント
天然の真核ｍＲＮＡ分子は、他の構造的特徴（例えば、５’－キャップ構造または３’－ポリ（Ａ）テール）に加えて、安定化エレメント（限定されるものではないが、その５’末端（５’ＵＴＲ）及び／またはその３’末端（３’ＵＴＲ）の非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む）を含み得る。５’ＵＴＲと３’ＵＴＲはいずれも、典型的にはゲノムＤＮＡから転写され、未成熟ｍＲＮＡのエレメントである。成熟ｍＲＮＡに特有の構造的特徴、例えば、５’－キャップ及び３’－ポリ（Ａ）テールは、通常はｍＲＮＡのプロセシング中、転写された（未成熟）ｍＲＮＡに付加される。

【0070】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、少なくとも１つの修飾を有する少なくとも１つの抗原ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチド、少なくとも１つの５’末端キャップを含み、脂質ナノ粒子内で製剤化される。ポリヌクレオチドの５’－キャップは、以下の化学ＲＮＡキャップアナログ：３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ［ＡＲＣＡキャップ］；Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ；Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ；ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ；ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを用いてｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応中に同時に完了させて、製造業者のプロトコルに従って５’－グアノシンキャップ構造を生成することができる（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）。修飾ＲＮＡの５’－キャッピングは、ワクシニアウイルスキャッピング酵素を用いて転写後に完了させて、「キャップ０構造」：ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを生成することができる（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）。キャップ１構造は、ワクシニアウイルスキャッピング酵素及び２’－Ｏメチルトランスフェラーゼの両方を用いて生成して、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ－２’－Ｏ－メチルを生成することができる。キャップ２構造は、キャップ１構造から、次に２’－Ｏメチルトランスフェラーゼを用いて５’末端から３番目のヌクレオチドを２’－Ｏメチル化することにより、生成することができる。キャップ３構造は、キャップ２構造から、次に２’－Ｏメチルトランスフェラーゼを用いて５’末端から４番目のヌクレオチドを２’－Ｏメチル化することにより、生成することができる。酵素は、組換え供給源に由来してもよい。

【0071】

３’－ポリ（Ａ）テールは、典型的には、転写されたｍＲＮＡの３’末端に付加されるアデニンヌクレオチドの連なりである。これは、場合によっては最大約４００個のアデニンヌクレオチドを含むことがある。いくつかの実施形態において、３’－ポリ（Ａ）テールの長さは、個々のｍＲＮＡの安定性に関して必須のエレメントであり得る。

【0072】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、１つ以上の安定化エレメントを含む。安定化エレメントは、例えば、ヒストンステムループを含み得る。３２ｋＤａのステムループ結合タンパク質（ＳＬＢＰ）が報告されている。これは、核及び細胞質の両方におけるヒストンメッセージの３’末端にあるヒストンステムループと関連している。その発現レベルは細胞周期によって調節され、Ｓ期にピークに達し、このときヒストンｍＲＮＡレベルも上昇する。このタンパク質は、Ｕ７ ｓｎＲＮＰによるヒストンプレｍＲＮＡの効率的な３’末端プロセシングに必須であることが示されている。ＳＬＢＰはプロセシング後も引き続きステムループと会合し、次いで、細胞質中での成熟ヒストンｍＲＮＡからヒストンタンパク質への翻訳を促進する。ＳＬＢＰのＲＮＡ結合ドメインは、後生動物及び原生動物の全体にわたり保存されており、ヒストンのステムループとの結合は、ループの構造に依存する。最小結合部位は、ステムループに対し少なくとも３つのヌクレオチド５’及び２つのヌクレオチド３’を含む。

【0073】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、コード領域と、少なくとも１つのヒストンステムループと、任意選択でポリ（Ａ）配列またはポリアデニル化シグナルとを含む。ポリ（Ａ）配列またはポリアデニル化シグナルは、概して、コードされたタンパク質の発現レベルを強化する。コードされたタンパク質は、いくつかの実施形態においては、ヒストンタンパク質、レポータータンパク質（例えば、ルシフェラーゼ、ＧＦＰ、ＥＧＦＰ、β－ガラクトシダーゼ、ＥＧＦＰ）、またはマーカーもしくは選択タンパク質（例えば、アルファ－グロビン、ガラクトキナーゼ、及びキサンチン：グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＧＰＴ））ではない。

【0074】

いくつかの実施形態において、ポリ（Ａ）配列またはポリアデニル化シグナルと少なくとも１つのヒストンステムループとの組合せは、いずれも本来は代替的機構に相当するが、相乗的に作用して、個々のエレメントのいずれかで観察されるレベルを上回ってタンパク質発現を増加させる。ポリ（Ａ）と少なくとも１つのヒストンステムループとの組合せによる相乗効果は、エレメントの順序またはポリ（Ａ）配列の長さには依存しない。

【0075】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、ヒストン下流エレメント（ＨＤＥ）を含まない。「ヒストン下流エレメント（ＨＤＥ）」は、天然ステムループの３’にある約１５～２０ヌクレオチドのプリンリッチなポリヌクレオチドの連なりを含み、これはヒストンプレｍＲＮＡから成熟ヒストンｍＲＮＡへのプロセシングに関与するＵ７ ｓｎＲＮＡの結合部位に相当する。いくつかの実施形態において、核酸はイントロンを含まない。

【0076】

ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、エンハンサー及び／またはプロモーター配列を含んでも含まなくてもよく、これらは、修飾されても修飾されなくてもよく、活性化されても活性化されなくてもよい。いくつかの実施形態において、ヒストンステムループは、概してヒストン遺伝子に由来し、短い配列からなるスペーサーによって分離された２つの隣接する部分的または全体的に逆相補的な配列の分子内塩基対を含み、これがこの構造のループを形成する。不対ループ領域は、典型的には、ステムループエレメントのいずれとも塩基対形成することができない。これは、多くのＲＮＡ二次構造の重要な構成要素であるため、より高頻度にＲＮＡに存在するが、一本鎖ＤＮＡにも存在し得る。ステムループ構造の安定性は、概して、長さ、ミスマッチまたはバルジの数、及び対となる領域の塩基組成に依存する。いくつかの実施形態において、ゆらぎ塩基対（非ワトソン・クリック塩基対）が結果的に生じ得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのヒストンステムループ配列は、１５～４５ヌクレオチドの長さを含む。

【0077】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、１つ以上のＡＵリッチ配列が除去されている。これらの配列（ＡＵＲＥＳと称されることがある）は、３’ＵＴＲに見られる不安定化配列である。ＡＵＲＥＳはＲＮＡワクチンから除去されてもよい。あるいは、ＡＵＲＥＳはＲＮＡワクチン中に残存していてもよい。

【0078】

シグナルペプチド
いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、ｈＣＭＶ抗原と融合したシグナルペプチドをコードするＯＲＦを有するｍＲＮＡを含む。シグナルペプチドは、タンパク質のＮ末端側の１５～６０アミノ酸を含み、典型的には、分泌経路上の膜を横断した転位に必要であるため、真核生物及び原核生物の両方でほとんどのタンパク質が分泌経路に侵入するのを普遍的に制御している。真核生物においては、新生前駆体タンパク質（プレタンパク質）のシグナルペプチドがリボソームを粗面小胞体（ＥＲ）膜に誘導し、プロセシングのために、成長ペプチド鎖の膜横断輸送を開始する。ＥＲプロセシングにより成熟タンパク質が生成され、シグナルペプチドは、典型的には、宿主細胞のＥＲ常駐シグナルペプチダーゼにより、前駆体タンパク質から切断されるか、または切断されないまま保たれ、膜アンカーとして機能する。また、シグナルペプチドは、タンパク質を細胞膜に標的化するのも促進することができる。

【0079】

シグナルペプチドの長さは１５～６０アミノ酸とすることができる。例えば、シグナルペプチドの長さは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、または６０アミノ酸とすることができる。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドの長さは、２０～６０、２５～６０、３０～６０、３５～６０、４０～６０、４５～６０、５０～６０、５５～６０、１５～５５、２０～５５、２５～５５、３０～５５、３５～５５、４０～５５、４５～５５、５０～５５、１５～５０、２０～５０、２５～５０、３０～５０、３５～５０、４０～５０、４５～５０、１５～４５、２０～４５、２５～４５、３０～４５、３５～４５、４０～４５、１５～４０、２０～４０、２５～４０、３０～４０、３５～４０、１５～３５、２０～３５、２５～３５、３０～３５、１５～３０、２０～３０、２５～３０、１５～２５、２０～２５、または１５～２０アミノ酸である。

【0080】

異種遺伝子由来のシグナルペプチド（事実上ｈＣＭＶ抗原以外の遺伝子の発現を調節する）が当技術分野で知られており、これを所望の特性について試験してから本開示の核酸に組み込むことができる。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、以下の配列のうちの１つを含み得る：ＭＤＳＫＧＳＳＱＫＧＳＲＬＬＬＬＬＶＶＳＮＬＬＬＰＱＧＶＶＧ（配列番号２５）；ＭＤＷＴＷＩＬＦＬＶＡＡＡＴＲＶＨＳ（配列番号２６）；ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ（配列番号２２）；ＭＬＧＳＮＳＧＱＲＶＶＦＴＩＬＬＬＬＶＡＰＡＹＳ（配列番号２７）；ＭＫＣＬＬＹＬＡＦＬＦＩＧＶＮＣＡ（配列番号２８）；ＭＷＬＶＳＬＡＩＶＴＡＣＡＧＡ（配列番号２９）。

【0081】

配列最適化
いくつかの実施形態において、本開示の抗原をコードするＯＲＦは、コドン最適化されている。コドン最適化の方法は、当技術分野で知られている。例えば、本明細書で提供する配列のいずれか１つ以上のＯＲＦがコドン最適化されてもよい。いくつかの実施形態において、コドン最適化を使用して、標的及び宿主生物におけるコドン頻度を一致させて適切な折り畳みを確保したり、ＧＣ含量にバイアスをかけてｍＲＮＡの安定性を増加するもしくは二次構造を低減したり、遺伝子構成もしくは発現を損ない得るタンデムリピートコドンもしくは塩基の連続を最小にしたり、転写及び翻訳調節領域をカスタマイズしたり、タンパク質輸送配列を挿入もしくは除去したり、コードされるタンパク質内の翻訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）を除去／付加したり、タンパク質ドメインを付加、除去、もしくは入れ替えたり、制限酵素認識部位を挿入もしくは欠失させたり、リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を修飾したり、翻訳速度を調節してタンパク質の様々なドメインが適切に折り畳まれるようにしたり、またはポリヌクレオチド内の問題のある二次構造を低減するもしくは取り除くことができる。コドン最適化ツール、アルゴリズム、及びサービスは、当技術分野で知られており、非限定的な例としては、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ ＣＡ）のサービス、及び／または独自方法が挙げられる。いくつかの実施形態において、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）配列は、最適化アルゴリズムを用いて最適化される。

【0082】

いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型の配列ＯＲＦ（例えば、ｈＣＭＶ抗原をコードする天然または野生型のｍＲＮＡ配列）に対し９５％未満の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型の配列（例えば、ｈＣＭＶ抗原をコードする天然または野生型のｍＲＮＡ配列）に対し９０％未満の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型の配列（例えば、ｈＣＭＶ抗原をコードする天然または野生型のｍＲＮＡ配列）に対し８５％未満の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型の配列（例えば、ｈＣＭＶ抗原をコードする天然または野生型のｍＲＮＡ配列）に対し８０％未満の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型の配列（例えば、ｈＣＭＶ抗原をコードする天然または野生型のｍＲＮＡ配列）に対し７５％未満の配列同一性を共有する。

【0083】

いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型の配列（例えば、ｈＣＭＶ抗原をコードする天然または野生型のｍＲＮＡ配列）に対し６５％～８５％（例えば、約６７％～約８５％または約６７％～約８０％）の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型の配列（例えば、ｈＣＭＶ抗原をコードする天然または野生型のｍＲＮＡ配列）に対し６５％～７５％または約８０％の配列同一性を共有する。

【0084】

いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、非コドン最適化配列によってコードされるｈＣＭＶ抗原と免疫原性が同じか、またはそれよりも免疫原性が高い（例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、または少なくとも２００％以上高い）抗原をコードする。

【0085】

修飾ｍＲＮＡは、哺乳類宿主細胞に形質移入された場合、１２～１８時間、または１８時間超、例えば、２４、３６、４８、６０、７２時間、または７２時間超の安定性を有し、哺乳類宿主細胞による発現が可能である。

【0086】

いくつかの実施形態において、コドン最適化ＲＮＡは、Ｇ／Ｃレベルが強化されたＲＮＡであり得る。核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ）のＧ／Ｃ含量は、ＲＮＡの安定性に影響を及ぼし得る。グアニン（Ｇ）及び／またはシトシン（Ｃ）残基の量が増加したＲＮＡは、大量のアデニン（Ａ）及びチミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ）ヌクレオチドを含むＲＮＡより機能的に安定していると考えられる。例として、ＷＯ０２／０９８４４３は、翻訳領域内の配列修飾によって安定化されたｍＲＮＡを含む医薬組成物を開示している。遺伝暗号の縮退のため、この修飾は、既存のコドンを、得られるアミノ酸を変更することなくより高いＲＮＡ安定性を促進するコドンに置き換えることによって機能する。このアプローチは、ＲＮＡのコード領域に限定される。

【0087】

化学修飾されていないヌクレオチド
いくつかの実施形態において、本開示のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンの少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）は、化学的に修飾されておらず、アデノシン、グアノシン、シトシン、及びウリジンからなる標準的なリボヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、本開示のヌクレオチド及びヌクレオシドは、標準的なヌクレオシド残基（例えば、転写ＲＮＡ内に存在する残基（例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、またはＵ））を含む。いくつかの実施形態において、本開示のヌクレオチド及びヌクレオシドは、標準的なデオキシリボヌクレオシド（例えば、ＤＮＡ内に存在するデオキシリボヌクレオシド（例えば、ｄＡ、ｄＧ、ｄＣ、またはｄＴ））を含む。

【0088】

化学修飾
本開示のｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、いくつかの実施形態においては、少なくとも１つのｈＣＭＶ抗原をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つの核酸（例えば、ＲＮＡ）を含み、当該核酸は、標準的（非修飾）であっても当技術分野で知られているように修飾されてもよいヌクレオチド及び／またはヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態において、本開示のヌクレオチド及びヌクレオシドは、修飾ヌクレオチドまたはヌクレオシドを含む。このような修飾ヌクレオチド及びヌクレオシドは、天然の修飾ヌクレオチド及びヌクレオシドの場合も非天然の修飾ヌクレオチド及びヌクレオシドの場合もある。このような修飾は、当技術分野で認識されているヌクレオチド及び／またはヌクレオシドの糖、骨格、または核酸塩基部分での修飾が含まれ得る。

【0089】

いくつかの実施形態において、本開示の天然の修飾ヌクレオチドまたはヌクレオシドは、当技術分野で一般的に知られているまたは認識されているものである。このような天然の修飾ヌクレオチド及びヌクレオシドの非限定的な例は、とりわけ、広く認識されているＭＯＤＯＭＩＣＳデータベースに見出すことができる。

【0090】

いくつかの実施形態において、本開示の非天然の修飾ヌクレオチドまたはヌクレオシドは、当技術分野で一般的に知られているまたは認識されているものである。このような非天然の修飾ヌクレオチド及びヌクレオシドの非限定的な例は、とりわけ、公開された米国特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５８５１９号、第ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０７５１７７号、第ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５８８９７号、第ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５８８９１号、第ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０７０４１３号、第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／３６７７３号、第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／３６７５９号、第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／３６７７１号、または第ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／０５１３６７号（これらの全てが参照により本明細書に援用される）に見出すことができる。

【0091】

したがって、本開示の核酸（例えば、ＤＮＡ核酸及びＲＮＡ核酸（例えば、ｍＲＮＡ核酸））は、標準的なヌクレオチド及びヌクレオシド、天然のヌクレオチド及びヌクレオシド、非天然のヌクレオチド及びヌクレオシド、またはこれらの任意の組合せを含み得る。

【0092】

本開示の核酸（例えば、ＤＮＡ核酸及びＲＮＡ核酸（例えば、ｍＲＮＡ核酸））は、いくつかの実施形態においては、様々な（複数の）異なるタイプの標準的及び／または修飾ヌクレオチド及びヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態において、核酸の特定の領域は、１つ、２つ、またはそれ以上の（任意選択で異なる）タイプの標準的及び／または修飾ヌクレオチド及びヌクレオシドを含む。

【0093】

いくつかの実施形態において、細胞または生物に導入された修飾ＲＮＡ核酸（例えば、修飾ｍＲＮＡ核酸）は、標準ヌクレオチド及びヌクレオシドを含む非修飾核酸に比べて、それぞれ細胞または生物内で分解が低減することが示される。

【0094】

いくつかの実施形態において、細胞または生物内に導入された修飾ＲＮＡ核酸（例えば、修飾ｍＲＮＡ核酸）は、標準ヌクレオチド及びヌクレオシドを含む非修飾核酸に比べて、それぞれ細胞または生物内での免疫原性が低減し得る（例えば、自然応答が低減する）。

【0095】

核酸（例えば、ＲＮＡ核酸（例えば、ｍＲＮＡ核酸））は、いくつかの実施形態においては、核酸の合成中または合成後に導入されて所望の機能または特性を達成する、非天然の修飾ヌクレオチドを含む。修飾は、ヌクレオチド間結合、プリンもしくはピリミジン塩基、または糖に存在し得る。修飾は、化学合成により、または鎖の末端もしくは鎖の他の箇所にあるポリメラーゼ酵素により、導入することができる。核酸の任意の領域を化学的に修飾することができる。

【0096】

本開示は、核酸（例えば、ＲＮＡ核酸（例えば、ｍＲＮＡ核酸））の修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドを提供する。「ヌクレオシド」とは、糖分子（例えば、ペントースもしくはリボース）またはその誘導体と、有機塩基（例えば、プリンもしくはピリミジン）またはその誘導体（本明細書では「核酸塩基」とも称される）との組合せを含む化合物を指す。「ヌクレオチド」とは、リン酸基を含むヌクレオシドを指す。修飾ヌクレオチドは、任意の有用な方法によって（例えば、化学的に、酵素的に、または組換え的に）合成して、１つ以上の修飾または非天然ヌクレオシドを含めることができる。核酸は、結合したヌクレオシドの領域（単数または複数）を含み得る。このような領域は、可変骨格結合を有し得る。この結合は、標準的なホスホジエステル結合であり得、この場合、この核酸はヌクレオチドの領域を含む。

【0097】

修飾ヌクレオチド塩基対合は、標準的アデノシン－チミン、アデノシン－ウラシル、またはグアノシン－シトシン塩基対だけでなく、非標準的または修飾塩基を含むヌクレオチド及び／または修飾ヌクレオチド間で形成される塩基対も包含し、このとき、水素結合供与体及び水素結合受容体の配置により、例えば、少なくとも１つの化学的修飾を有する核酸内で、非標準的塩基と標準的塩基との間、または２つの相補的な非標準的塩基構造間の水素結合が可能となる。このような非標準的塩基対合の一例は、修飾ヌクレオチドイノシンとアデニン、シトシン、またはウラシルとの間の塩基対合である。塩基／糖またはリンカーの任意の組合せを本開示のポリヌクレオチドに組み込むことができる。

【0098】

いくつかの実施形態において、核酸（例えば、ＲＮＡ核酸（例えば、ｍＲＮＡ核酸））中の修飾核酸塩基は、１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）、１－エチル－プソイドウリジン（ｅ１ψ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５－メチルシチジン（ｍ５Ｃ）、及び／またはプソイドウリジン（ψ）を含む。いくつかの実施形態において、核酸（例えば、ＲＮＡ核酸（例えば、ｍＲＮＡ核酸））中の修飾核酸塩基は、５－メトキシメチルウリジン、５－メチルチオウリジン、１－メトキシメチルプソイドウリジン、５－メチルシチジン、及び／または５－メトキシシチジンを含む。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチドは、前述の任意の修飾核酸塩基（限定されるものではないが、化学修飾を含む）のうちの少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）の組合せを含む。

【0099】

いくつかの実施形態において、本開示のｍＲＮＡは、核酸の１つ以上または全てのウリジン位置に１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）置換を含む。

【0100】

いくつかの実施形態において、本開示のｍＲＮＡは、核酸の１つ以上または全てのウリジン位置に１－メチルプソイドウリジン（ｍ１ψ）置換、及び核酸の１つ以上または全てのシチジン位置に５－メチルシチジン置換を含む。

【0101】

いくつかの実施形態において、本開示のｍＲＮＡは、核酸の１つ以上または全てのウリジン位置にプソイドウリジン（ψ）置換を含む。

【0102】

いくつかの実施形態において、本開示のｍＲＮＡは、核酸の１つ以上または全てのウリジン位置にプソイドウリジン（ψ）置換、及び核酸の１つ以上または全てのシチジン位置に５－メチルシチジン置換を含む。

【0103】

いくつかの実施形態において、本開示のｍＲＮＡは、核酸の１つ以上または全てのウリジン位置にウリジンを含む。

【0104】

いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、特定の修飾について一様に修飾される（例えば、完全に修飾される、配列全体にわたり修飾される）。例えば、核酸は１－メチル－プソイドウリジンで一様に修飾されてもよく、これは、ｍＲＮＡ配列内の全てのウリジン残基が１－メチル－プソイドウリジンで置き換えられることを意味する。同様に、核酸は、修飾残基（例えば、上記の残基）で置き換えることにより、配列内に存在する任意のタイプのヌクレオシド残基について一様に修飾することができる。

【0105】

本開示の核酸は、分子の全長に沿って部分的にも完全にも修飾することができる。例えば、本開示の核酸内、またはその所定の配列領域内（例えば、ポリＡテールを含むまたは除くｍＲＮＡ内）で、１つ以上または全てまたは所与のタイプのヌクレオチド（例えば、プリンもしくはピリミジン、またはＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃのいずれか１つ以上もしくは全て）を一様に修飾することができる。いくつかの実施形態において、本開示の核酸（またはその配列領域）内の全てのヌクレオチドＸが修飾ヌクレオチドであり、Ｘは、ヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃのいずれか１つ、または以下の組合せＡ＋Ｇ、Ａ＋Ｕ、Ａ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ、Ｇ＋Ｃ、Ｕ＋Ｃ、Ａ＋Ｇ＋Ｕ、Ａ＋Ｇ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ＋Ｃ、もしくはＡ＋Ｇ＋Ｃのいずれか１つであり得る。

【0106】

核酸は、約１％～約１００％の修飾ヌクレオチド（全体的なヌクレオチド含量に関して、または１つ以上のタイプのヌクレオチド（すなわち、Ａ、Ｇ、Ｕ、もしくはＣの１つ以上）に関して）、または任意の範囲のパーセンテージ（例えば、１％～２０％、１％～２５％、１％～５０％、１％～６０％、１％～７０％、１％～８０％、１％～９０％、１％～９５％、１０％～２０％、１０％～２５％、１０％～５０％、１０％～６０％、１０％～７０％、１０％～８０％、１０％～９０％、１０％～９５％、１０％～１００％、２０％～２５％、２０％～５０％、２０％～６０％、２０％～７０％、２０％～８０％、２０％～９０％、２０％～９５％、２０％～１００％、５０％～６０％、５０％～７０％、５０％～８０％、５０％～９０％、５０％～９５％、５０％～１００％、７０％～８０％、７０％～９０％、７０％～９５％、７０％～１００％、８０％～９０％、８０％～９５％、８０％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、及び９５％～１００％）を含み得る。任意の残りのパーセンテージは、非修飾Ａ、Ｇ、Ｕ、またはＣの存在によって説明されることが理解されよう。

【0107】

ｍＲＮＡは、１％以上１００％までの修飾ヌクレオチド、または任意の範囲のパーセンテージ（例えば、少なくとも５％の修飾ヌクレオチド、少なくとも１０％の修飾ヌクレオチド、少なくとも２５％の修飾ヌクレオチド、少なくとも５０％の修飾ヌクレオチド、少なくとも８０％の修飾ヌクレオチド、もしくは少なくとも９０％の修飾ヌクレオチド）を含み得る。例えば、核酸は、修飾ピリミジン（例えば、修飾ウラシルまたはシトシン）を含み得る。いくつかの実施形態において、核酸内のウラシルの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％が、修飾ウラシル（例えば、５－置換ウラシル）で置き換えられる。修飾ウラシルは、単一の固有の構造を有する化合物で置き換えることも、異なる構造（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の固有の構造）を有する複数の化合物で置き換えることもできる。いくつかの実施形態において、核酸内のシトシンの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％が、修飾シトシン（例えば、５－置換シトシン）で置き換えられる。修飾シトシンは、単一の固有の構造を有する化合物で置き換えることも、異なる構造（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の固有の構造）を有する複数の化合物で置き換えることもできる。

【0108】

非翻訳領域（ＵＴＲ）
本開示のｍＲＮＡは、非翻訳領域として作用または機能する１つ以上の領域または部分を含み得る。ｍＲＮＡが少なくとも１つの目的抗原をコードするように設計されている場合、核酸はこれらの非翻訳領域（ＵＴＲ）のうちの１つ以上を含み得る。核酸の野生型非翻訳領域は、転写されるが翻訳はされない。ｍＲＮＡでは、５’ＵＴＲは転写開始点で開始し、開始コドンまで続くが、開始コドンは含まない。一方、３’ＵＴＲは終止コドンの直後から転写終結シグナルまで続く。ＵＴＲが核酸分子の安定性及び翻訳に関して調節的役割を担っていることについてのエビデンスが増えている。ＵＴＲの調節機能は、特に分子の安定性を高めるために、本開示のポリヌクレオチドに組み込むことができる。また、転写産物が望ましくない臓器部位に誤って向けられた場合に備え、転写産物の下方調節の制御を確保するための特定の機能も組み込むことができる。様々な５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲ配列が知られており、当技術分野で利用可能である。

【0109】

５’ＵＴＲは、ｍＲＮＡの開始コドン（リボソームによって翻訳されるｍＲＮＡ転写産物の最初のコドン）からすぐ上流（５’）にある領域である。５’ＵＴＲはタンパク質をコードしない（ノンコーディングである）。天然５’ＵＴＲは、翻訳開始で役割を果たす機能を有する。それらは、リボソームが多くの遺伝子の翻訳を開始するプロセスに関与することが一般的に知られているＫｏｚａｋ配列のようなシグネチャーを有する。Ｋｏｚａｋ配列は、コンセンサスＣＣＲ（Ａ／Ｇ）ＣＣＡＵＧＧ（配列番号３０）を有し、Ｒは開始コドン（ＡＵＧ）の３塩基上流のプリン（アデニンまたはグアニン）であり、この後に別の「Ｇ」が続く。５’ＵＴＲは、伸長因子の結合に関与する二次構造を形成することも知られている。

【0110】

本開示のいくつかの実施形態において、５’ＵＴＲは、異種ＵＴＲであり、すなわち、異なるＯＲＦに関連する自然界で見出されるＵＴＲである。別の実施形態において、５’ＵＴＲは合成ＵＴＲであり、すなわち、自然界には存在しない。合成ＵＴＲは、その特性を改善する（例えば、遺伝子発現を増加する）ために変異させたＵＴＲと、完全に合成のものとを含む。例示的な５’ＵＴＲとしては、Ｘｅｎｏｐｕｓまたはヒト由来のａ－グロビンまたはｂ－グロビン（ＵＳ８２７８０６３、ＵＳ９０１２２１９）、ヒトシトクロムｂ－２４５ ａポリペプチド、ヒドロキシステロイド（１７ｂ）デヒドロゲナーゼ、及びタバコエッチウイルス（ＵＳ８２７８０６３、９０１２２１９）が挙げられる。ＣＭＶ ｉｍｍｅｄｉａｔｅ－ｅａｒｌｙ １（ＩＥ１）遺伝子（ＵＳ２０１４０２０６７５３、ＷＯ２０１３／１８５０６９）、配列ＧＧＧＡＵＣＣＵＡＣＣ（配列番号３１）（ＷＯ２０１４１４４１９６）も使用することができる。別の実施形態において、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲは、５’ＴＯＰモチーフ（オリゴピリミジントラクト）が欠如したＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲであり（例えば、ＷＯ／２０１５１０１４１４、ＷＯ／２０１５１０１４１５、ＷＯ／２０１５／０６２７３８、ＷＯ２０１５０２４６６７、ＷＯ２０１５０２４６６７）、リボソームタンパク質Ｌａｒｇｅ３２（Ｌ３２）遺伝子に由来する５’ＵＴＲエレメント（ＷＯ／２０１５１０１４１４、ＷＯ２０１５１０１４１５、ＷＯ／２０１５／０６２７３８）、ヒドロキシステロイド（１７－β）デヒドロゲナーゼ４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）の５’ＵＴＲに由来する５’ＵＴＲエレメント（ＷＯ２０１５０２４６６７）、またはＡＴＰ５Ａ１の５’ＵＴＲに由来する５’ＵＴＲエレメント（ＷＯ２０１５０２４６６７）が使用され得る。いくつかの実施形態において、５’ＵＴＲの代わりに内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）が使用される。

【0111】

いくつかの実施形態において、本開示の５’ＵＴＲは、配列番号１３のヌクレオチド配列を含む。

【0112】

３’ＵＴＲは、終止コドン（翻訳終了をシグナル伝達するｍＲＮＡ転写産物のコドン）のする下流（３’）にあるｍＲＮＡの領域である。３’ＵＴＲはタンパク質をコードしない（ノンコーディングである）。天然または野生型の３’ＵＴＲには、アデノシン及びウリジンの連なりが埋め込まれていることが知られている。これらのＡＵリッチシグネチャーは、高い回転率を有する遺伝子内で特に広く見られる。配列の特徴及び機能的特性に基づいて、ＡＵリッチエレメント（ＡＲＥ）は３つのクラスに分類することができ（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ，１９９５）、クラスＩ ＡＲＥは、Ｕリッチ領域内にＡＵＵＵＡモチーフのいくつかの分散コピーを含む。Ｃ－Ｍｙｃ及びＭｙｏＤはクラスＩ ＡＲＥを含む。クラスＩＩ ＡＲＥは、２つ以上の重複するＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ）（配列番号３２）九量体を有する。このタイプのＡＲＥを含む分子としては、ＧＭ－ＣＳＦ及びＴＮＦ－ａが挙げられる。クラスＩＩＩ ＡＲＥはそれほど十分には定義されていない。これらのＵリッチ領域はＡＵＵＵＡモチーフを含まない。ｃ－Ｊｕｎ及びＭｙｏｇｅｎｉｎはこのクラスで十分に研究されている２つの例である。ＡＲＥに結合するほとんどのタンパク質はメッセンジャーを不安定にすることが知られており、一方ＥＬＡＶファミリーのメンバー、とりわけＨｕＲはｍＲＮＡの安定性を増加させることが実証されている。ＨｕＲは、３つ全てのクラスのＡＲＥに結合する。核酸分子の３’ＵＴＲ内でＨｕＲ特異的結合部位を操作することで、ＨｕＲ結合、ひいてはｉｎ ｖｉｖｏでのメッセージの安定化につながる。

【0113】

３’ＵＴＲは、異種であっても合成であってもよい。３’ＵＴＲについては、グロビンＵＴＲ（Ｘｅｎｏｐｕｓ β－グロビンＵＴＲ及びヒトβ－グロビンＵＴＲを含む）が当技術分野で知られている（ＵＳ８２７８０６３、ＵＳ９０１２２１９、ＵＳ２０１１００８６９０７）。２つの連続したヒトβグロビン３’ＵＴＲをヘッドトゥーテールでクローニングすることにより、いくつかの細胞タイプでの安定性が強化された修飾βグロビンコンストラクトが開発されており、当技術分野で周知されている（ＵＳ２０１２／０１９５９３６、ＷＯ２０１４／０７１９６３）。加えて、ａ２－グロビン、ａ１－グロビン、ＵＴＲ及びこれらの変異体も当技術分野で知られている（ＷＯ２０１５１０１４１５、ＷＯ２０１５０２４６６７）。非特許文献においてｍＲＮＡコンストラクトで説明されている他の３’ＵＴＲとしては、ＣＹＢＡ（Ｆｅｒｉｚｉ ｅｔ ａｌ．，２０１５）及びアルブミン（Ｔｈｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，２０１５）が挙げられる。他の例示的な３’ＵＴＲとしては、ウシまたはヒト成長ホルモン（野生型または修飾）（ＷＯ２０１３／１８５０６９、ＵＳ２０１４０２０６７５３、ＷＯ２０１４１５２７７４）、ウサギβグロビン及びＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）のものが挙げられ、αグロビン３’ＵＴＲ及びウイルスＶＥＥＶ ３’ＵＴＲ配列も当技術分野で知られている。いくつかの実施形態において、配列ＵＵＵＧＡＡＵＵ（ＷＯ２０１４１４４１９６）が使用される。いくつかの実施形態において、ヒト及びマウスリボソームタンパク質の３’ＵＴＲが使用される。他の例としては、ｒｐｓ９ ３’ＵＴＲ（ＷＯ２０１５１０１４１４）、ＦＩＧ４（ＷＯ２０１５１０１４１５）、及びヒトアルブミン７（ＷＯ２０１５１０１４１５）が挙げられる。

【0114】

いくつかの実施形態において、本開示の３’ＵＴＲは、配列番号１４のヌクレオチド配列を含む。

【0115】

当業者であれば、異種または合成の５’ＵＴＲが、任意の所望の３’ＵＴＲ配列と共に使用することができることを理解するであろう。例えば、異種５’ＵＴＲを、合成３’ＵＴＲと、異種３”ＵＴＲと共に使用することができる。

【0116】

特徴の組合せをフランキング領域に含めることも、他の特徴の中に含めることもできる。例えば、ＯＲＦは、強力なＫｏｚａｋ翻訳開始シグナルを含み得る５’ＵＴＲ及び／またはポリＡテールを鋳型的に付加するためのオリゴ（ｄＴ）配列を含み得る３’ＵＴＲが隣接してもよい。５’ＵＴＲは、同じ及び／または異なる遺伝子からの第１のポリヌクレオチドフラグメント及び第２のポリヌクレオチドフラグメントを含み得る（例えば、米国特許出願公開第２０１００２９３６２５号及びＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６９１５５（参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載の５’ＵＴＲ）。

【0117】

ＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写
本明細書に記載のポリヌクレオチドをコードするｃＤＮＡは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）システムを用いて転写することができる。ＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写は当技術分野で知られており、国際公開第ＷＯ／２０１４／１５２０２７号（その全体が参照により本明細書に援用される）に記載されている。

【0118】

いくつかの実施形態において、ＲＮＡ転写産物は、ＲＮＡ転写産物を生成するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応で、増幅されていない直鎖化されたＤＮＡ鋳型を用いて生成される。いくつかの実施形態において、鋳型ＤＮＡは単離されたＤＮＡである。いくつかの実施形態において、鋳型ＤＮＡはｃＤＮＡである。いくつかの実施形態において、ｃＤＮＡは、ＲＮＡポリヌクレオチド（例えば、限定されるものではないが、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡ）の逆転写によって形成される。いくつかの実施形態において、細胞（例えば、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、例えば、ＤＨ－１細胞）に、プラスミドＤＮＡ鋳型を用いて形質移入する。いくつかの実施形態において、形質移入細胞は、プラスミドＤＮＡを複製するために培養され、次いで単離及び精製される。いくつかの実施形態において、ＤＮＡ鋳型は、ＲＮＡポリメラーゼプロモーター、例えば、目的遺伝子の５’側に位置し、目的遺伝子に作用可能に結合しているＴ７プロモーターを含む。

【0119】

いくつかの実施形態において、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写鋳型は、５’非翻訳（ＵＴＲ）領域をコードし、オープンリーディングフレームを含み、３’ＵＴＲ及びポリＡテールをコードする。ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写鋳型の特定の核酸配列組成及び長さは、鋳型によってコードされるｍＲＮＡに依存する。

【0120】

ＲＮＡ転写産物が生成されている場合、５’ＵＴＲはプロモーター配列を含み得る。このようなプロモーター配列は、当技術分野で知られている。本開示のワクチンにはこのようなプロモーター配列が存在しないことを理解されたい。

【0121】

ポリＡテールは、１０～３００個のアデノシン一リン酸を含み得る。例えば、ポリＡテールは、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、または３００個のアデノシン一リン酸を含み得る。いくつかの実施形態において、ポリＡテールは、５０～２５０個のアデノシン一リン酸を含む。関連する生物学的環境（例えば、細胞内、ｉｎ ｖｉｖｏ）において、ポリ（Ａ）テールは、（例えば、細胞質での）酵素分解からｍＲＮＡを保護し、転写終結、及び／または核からのｍＲＮＡの輸送及び翻訳で補助するように機能する。

【0122】

いくつかの実施形態において、核酸は２００～３０００ヌクレオチドを含む。例えば、核酸は、２００～５００、２００～１０００、２００～１５００、２００～３０００、５００～１０００、５００～１５００、５００～２０００、５００～３０００、１０００～１５００、１０００～２０００、１０００～３０００、１５００～３０００、または２０００～３０００ヌクレオチドを含み得る。

【0123】

いくつかの実施形態において、ＲＮＡ転写産物は、酵素キャッピングを介しキャッピングされる。いくつかの実施形態において、ＲＮＡは、５’末端キャップ、例えば、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐを含む。

【0124】

脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）
いくつかの実施形態において、本開示のｈＣＭＶ免疫原性組成物（ｍＲＮＡワクチン）は、１つ以上の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）内に製剤化される。脂質ナノ粒子は、典型的には、イオン化可能なカチオン性脂質、非カチオン性脂質、ステロール、及びＰＥＧ脂質構成要素を、目的核酸カーゴと共に含む。本開示の脂質ナノ粒子は、当技術分野で一般的に知られている構成要素、組成物、及び方法（例えば、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５２３５２、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６８３００、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０３７５５１、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２７４００、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０４７４０６、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６０００１２９、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０１４２８０、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０３８４２６、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２７０７７、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５５３９４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／５２１１７、ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６９６１０、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２７４９２、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５９５７５、及びＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６９４９１を参照（これらは全てその全体が参照により本明細書に援用される））を用いて生成することができる。

【0125】

本開示のワクチンは、典型的には、脂質ナノ粒子内に製剤化される。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、少なくとも１つのイオン化可能なカチオン性脂質、少なくとも１つの非カチオン性脂質、少なくとも１つのステロール、及び／または少なくとも１つのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）修飾脂質を含む。

【0126】

本開示の脂質ナノ粒子は、脂質の混合物から構成され、その量は、脂質ナノ粒子中の各脂質構成要素のモル分率またはモルパーセントに従って測定される。モルパーセントは、モル分率に１００％を掛けることによって得られる。脂質混合物が数値的に説明される場合、ｍＲＮＡ及び任意の水は表されない。

【0127】

いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、２０～６０ｍｏｌ％のイオン化可能なカチオン性脂質を含む脂質の混合物を含む。例えば、脂質ナノ粒子は、モルパーセントで２０～５０ｍｏｌ％、２０～４０ｍｏｌ％、２０～３０ｍｏｌ％、３０～６０ｍｏｌ％、３０～５０ｍｏｌ％、３０～４０ｍｏｌ％、４０～６０ｍｏｌ％、４０～５０ｍｏｌ％、または５０～６０ｍｏｌ％のイオン化可能カチオン性脂質を含み得る。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、２０ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％、４０ｍｏｌ％、５０ｍｏｌ％、または６０ｍｏｌ％のイオン化可能なカチオン性脂質を含む。

【0128】

いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、５～２５ｍｏｌ％の非カチオン性脂質を含む脂質の混合物を含む。例えば、脂質ナノ粒子は、５～２０ｍｏｌ％、５～１５ｍｏｌ％、５～１０ｍｏｌ％、１０～２５ｍｏｌ％、１０～２０ｍｏｌ％、１０～２５ｍｏｌ％、１５～２５ｍｏｌ％、１５～２０ｍｏｌ％、または２０～２５ｍｏｌ％の非カチオン性脂質を含む非カチオン性脂質を含み得る。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、５ｍｏｌ％、１０ｍｏｌ％、１５ｍｏｌ％、２０ｍｏｌ％、または２５ｍｏｌ％の非カチオン性脂質を含む脂質の混合物を含む。

【0129】

いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、２５～５５ｍｏｌ％のステロールを含む脂質の混合物を含む。例えば、脂質ナノ粒子は、２５～５０ｍｏｌ％、２５～４５ｍｏｌ％、２５～４０ｍｏｌ％、２５～３５ｍｏｌ％、２５～３０ｍｏｌ％、３０～５５ｍｏｌ％、３０～５０ｍｏｌ％、３０～４５ｍｏｌ％、３０～４０ｍｏ％、３０～３５ｍｏｌ％、３５～５５ｍｏｌ％、３５～５０ｍｏｌ％、３５～４５ｍｏｌ％、３５～４０ｍｏ％、４０～５５ｍｏｌ％、４０～５０ｍｏｌ％、４０～４５ｍｏｌ％、４５～５５ｍｏｌ％、４５～５０ｍｏｌ％、または５０～５５ｍｏｌ％のステロールを含むステロールを含み得る。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、モルパーセントで２５ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％、３５ｍｏｌ％、４０ｍｏｌ％、４５ｍｏｌ％、５０ｍｏｌ％、または５５ｍｏｌ％のステロールを含む。

【0130】

いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、０．５～１５ｍｏｌ％のＰＥＧ修飾脂質を含む脂質の混合物を含む。例えば、脂質ナノ粒子は、モルパーセントで０．５～１０ｍｏｌ％、０．５～５ｍｏｌ％、１～１５ｍｏｌ％、１～１０ｍｏｌ％、１～５ｍｏｌ％、２～１５ｍｏｌ％、２～１０ｍｏｌ％、２～５ｍｏｌ％、５～１５ｍｏｌ％、５～１０ｍｏｌ％、または１０～１５ｍｏｌ％のＰＥＧ修飾脂質を含む。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、モルパーセントで０．５ｍｏｌ％、１ｍｏｌ％、２ｍｏｌ％、３ｍｏｌ％、４ｍｏｌ％、５ｍｏｌ％、６ｍｏｌ％、７ｍｏｌ％、８ｍｏｌ％、９ｍｏｌ％、１０ｍｏｌ％、１１ｍｏｌ％、１２ｍｏｌ％、１３ｍｏｌ％、１４ｍｏｌ％、または１５ｍｏｌ％のＰＥＧ修飾脂質を含む。

【0131】

いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、モル比で２０～６０％のイオン化可能なカチオン性脂質、５～２５％の非カチオン性脂質、２５～５５％のステロール、及び約０．５～１５％のＰＥＧ修飾脂質を含む。

【0132】

いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、４９ｍｏｌ％のイオン化可能なカチオン性脂質と、３８．５ｍｏｌ％のコレステロールと、１０ｍｏｌ％のＤＳＰＣと、２．５ｍｏｌ％のＤＭＧ－ＰＥＧとを含む脂質の混合物を含む。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、４８ｍｏｌ％のイオン化可能なカチオン性脂質と、３８．５ｍｏｌ％のコレステロールと、１１ｍｏｌ％のＤＳＰＣと、２．５ｍｏｌ％のＤＭＧ－ＰＥＧとを含む脂質の混合物を含む。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、４７ｍｏｌ％のイオン化可能なカチオン性脂質と、３８．５ｍｏｌ％のコレステロールと、１１．５ｍｏｌ％のＤＳＰＣと、３ｍｏｌ％のＤＭＧ－ＰＥＧとを含む脂質の混合物を含む。

【0133】

いくつかの実施形態において、本開示のイオン化可能なカチオン性脂質は、以下の構造を有する化合物を含む。

【0134】

【化2】

【0135】

いくつかの実施形態において、本開示のイオン化可能なカチオン性脂質は、以下の構造を有する化合物を含む。

【化3】

【0136】

いくつかの実施形態において、本開示の非カチオン性脂質は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ１６．０ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及びこれらの混合物を含む。

【0137】

いくつかの実施形態において、本開示のＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びこれらの混合物を含む。いくつかの実施形態において、ＰＥＧ修飾脂質は、ＤＭＧ－ＰＥＧ、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯMＧ（ＰＥＧ－ＤＯＭＧとも称される）、ＰＥＧ－ＤＳＧ、及び／またはＰＥＧ－ＤＰＧである。

【0138】

いくつかの実施形態において、本開示のステロールは、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、及びそれらの混合物を含む。

【0139】

いくつかの実施形態において、本開示のＬＮＰは、化合物１のイオン化可能なカチオン性脂質を含み、このとき、非カチオン性脂質はＤＳＰＣであり、構造脂質はコレステロールであり、ＰＥＧ脂質はＤＭＧ－ＰＥＧである。

【0140】

いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、４５～５５モルパーセントのイオン化可能なカチオン性脂質を含む。例えば、脂質ナノ粒子は、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、または５５モルパーセントのイオン化可能なカチオン性脂質を含み得る。

【0141】

いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、５～１５モルパーセントのＤＳＰＣを含む。例えば、脂質ナノ粒子は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５モルパーセントのＤＳＰＣを含み得る。

【0142】

いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、３５～４０モルパーセントのコレステロールを含む。例えば、脂質ナノ粒子は、３５、３６、３７、３８、３９、または４０モルパーセントのコレステロールを含み得る。

【0143】

いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、１～２モルパーセントのＤＭＧ－ＰＥＧを含む。例えば、脂質ナノ粒子は、１、１．５、または２モルパーセントのＤＭＧ－ＰＥＧを含み得る。

【0144】

いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、５０モルパーセントのイオン化可能なカチオン性脂質と、１０モルパーセントのＤＳＰＣと、３８．５モルパーセントのコレステロールと、１．５モル％のＤＭＧ－ＰＥＧとを含む。

【0145】

いくつかの実施形態において、本開示のＬＮＰは、約２：１～約３０：１のＮ：Ｐ比を含む。

【0146】

いくつかの実施形態において、本開示のＬＮＰは、約６：１のＮ：Ｐ比を含む。

【0147】

いくつかの実施形態において、本開示のＬＮＰは、約３：１のＮ：Ｐ比を含む。

【0148】

いくつかの実施形態において、本開示のＬＮＰが含むイオン化可能なカチオン性脂質構成要素：ＲＮＡのｗｔ／ｗｔ比は約１０：１～約１００：１である。

【0149】

いくつかの実施形態において、本開示のＬＮＰが含むイオン化可能なカチオン性脂質構成要素：ＲＮＡのｗｔ／ｗｔ比は約２０：１である。

【0150】

いくつかの実施形態において、本開示のＬＮＰが含むイオン化可能なカチオン性脂質構成要素：ＲＮＡのｗｔ／ｗｔ比は約１０：１である。

【0151】

いくつかの実施形態において、本開示のＬＮＰの平均直径は約５０ｎｍ～約１５０ｎｍである。

【0152】

いくつかの実施形態において、本開示のＬＮＰの平均直径は約７０ｎｍ～約１２０ｎｍである。

【0153】

多価ワクチン
本明細書で提供するｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、同じまたは異なるｈＣＭＶ種の２つ以上の抗原をコードするｍＲＮＡまたは複数のｍＲＮＡを含み得る。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、２つ以上の抗原をコードするＲＮＡまたは複数のＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）のｍＲＮＡは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはそれ以上の抗原をコードし得る。

【0154】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（ｍＲＮＡワクチン）は、ｈＣＭＶ ｇＨ、ｈＣＭＶ ｇＬ、ｈＣＭＶ ＵＬ１２８、ｈＣＭＶ ＵＬ１３０、ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａ、及びｈＣＭＶ ｇＢをコードする少なくとも１つのＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、ｈＣＭＶ ｐｐ６５ｍｕｔをコードする少なくとも１つのＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、ｈＣＭＶ ｇＨ、ｈＣＭＶ ｇＬ、ｈＣＭＶ ＵＬ１２８、ｈＣＭＶ ＵＬ１３０、ｈＣＭＶ ＵＬ１３１Ａ、ｈＣＭＶ ｇＢ、及びｈＣＭＶ ｐｐ６５ｍｕｔをコードする少なくとも１つのＲＮＡを含む。

【0155】

いくつかの実施形態において、抗原をコードする２つ以上の異なるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）が、同じ脂質ナノ粒子内に製剤化されてもよい。他の実施形態において、抗原をコードする２つ以上の異なるＲＮＡが、別々の脂質ナノ粒子内に製剤化されてもよい（例えば、各ＲＮＡが単一の脂質ナノ粒子内に製剤化される）。脂質ナノ粒子は、次に、組み合わせて単一のワクチン組成物（例えば、複数の抗原をコードする複数のＲＮＡを含むワクチン組成物）として投与することも、別々に投与することもできる。

【0156】

医薬製剤
本明細書では、例えば、ヒト及び他の哺乳類におけるｈＣＭＶの予防または治療のための組成物（例えば、医薬組成物）、方法、キット、及び試薬を提供する。ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンは、治療薬剤または予防薬剤として使用することができる。これらは、医学分野で感染性疾患の予防及び／または治療に使用することができる。

【0157】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載のｍＲＮＡを含むｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、対象（例えば、ヒト対象などの哺乳類対象）に投与することができ、ＲＮＡポリヌクレオチドはｉｎ ｖｉｖｏで翻訳されて抗原ポリペプチド（抗原）が産生される。

【0158】

ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）の「有効量」は、少なくとも部分的には、標的組織、標的細胞タイプ、投与手段、ＲＮＡの物理的特性（例えば、長さ、ヌクレオチド組成、及び／または修飾ヌクレオシドの程度）、ワクチンの他の構成要素、ならびに他の決定因子、例えば、対象の年齢、体重、身長、性別、及び全体的健康状態に基づく。典型的には、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）の有効量は、対象の細胞内での抗原産生の関数として、誘導またはブーストされた免疫応答を提供する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの化学修飾を有するＲＮＡポリヌクレオチドを含むｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）の有効量は、同じ抗原またはペプチド抗原をコードする対応する非修飾ポリヌクレオチドを含む組成物よりも効率的である。抗原産生の増加は、細胞形質移入の増加（ＲＮＡワクチンで形質移入された細胞のパーセンテージ）、ポリヌクレオチドからのタンパク質翻訳及び／または発現の増加、核酸分解の減少（例えば、修飾ポリヌクレオチドからのタンパク質翻訳の持続時間の増加によって示される）、または宿主細胞の抗原特異的免疫応答の変化によって実証され得る。

【0159】

「医薬組成物」という用語は、組成物をｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏでの診断または治療用途に特に適したものにする、活性薬剤と不活性または活性の担体との組合せを指す。「医薬的に許容される担体」は、対象に投与した後または投与したことで、望ましくない生理学的作用を引き起こさない。医薬組成物中の担体は、有効成分に適合性であり、それを安定化させることが可能であるという意味においても「許容」されなければならない。１つ以上の可溶化剤を活性薬剤の送達のための医薬担体として利用してもよい。医薬的に許容される担体の例としては、限定されるものではないが、剤形として使用可能な組成物を達成するための生体適合性のビヒクル、アジュバント、添加剤、及び希釈剤が挙げられる。他の担体の例としては、コロイド状酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、及びラウリル硫酸ナトリウムが挙げられる。別の好適な医薬用担体及び希釈剤、ならびにそれらを使用するための医薬的必需品については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。

【0160】

いくつかの実施形態において、本開示に従う免疫学的組成物（例えば、ポリヌクレオチド及びそのコードされたポリペプチドを含むＲＮＡワクチン）は、ｈＣＭＶ感染症の治療または予防のために使用することができる。ｈＣＭＶ免疫学的組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、健康な個体または潜伏器官中の感染初期または症状発現後の活動性感染中に、積極的な免疫化スキームの一環として予防的または治療的に投与することができる。いくつかの実施形態において、細胞、組織、または対象に提供される本開示のＲＮＡワクチンの量は、免疫予防に有効な量であり得る。

【0161】

ｈＣＭＶ免疫学的組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、他の予防または治療化合物と共に投与することができる。非限定的な例として、予防または治療化合物は、アジュバントまたはブースターであり得る。本明細書で使用する場合、予防組成物（例えば、ワクチン）に言及する場合、「ブースター」という用語は、予防（ワクチン）組成物の追加投与を指す。ブースター（またはブースターワクチン）は、予防組成物を先に投与した後に投与することができる。予防組成物の初回投与とブースターとの間の投与時間は、限定されるものではないが、１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１５分、２０分、３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日、３６時間、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、１０日、２週間、３週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１年、１８か月、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、２５年、３０年、３５年、４０年、４５年、５０年、５５年、６０年、６５年、７０年、７５年、８０年、８５年、９０年、９５年、または９９年超であり得る。例示的な実施形態において、予防組成物の初回投与とブースターとの間の投与時間は、限定されるものではないが、１週間、２週間、３週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、または１年であり得る。

【0162】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫学的組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、当技術分野で知られている不活化ワクチンの投与と同様に、筋肉内（例えば、三角筋）、経鼻、または皮内に投与することができる。

【0163】

ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、感染の有病率またはアンメット・メディカル・ニーズの程度もしくはレベルに応じて、様々な設定で利用され得る。非限定的な例として、ＲＮＡワクチンは、様々な感染性疾患を治療及び／または予防するために利用することができる。ＲＮＡワクチンは、市販のワクチンよりもはるかに大きな抗体力価、より良好な中和免疫をもたらし、より持続性のある免疫応答、及び／またはより早期の応答をもたらすという点において優れた特性を有する。

【0164】

本明細書では、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）及び／または複合体を、任意選択で１つ以上の医薬的に許容される賦形剤と組み合わせて含む、医薬的組成物を提供する。

【0165】

ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、単独で、または１つ以上の他の構成要素と組み合わせて、製剤化または投与することができる。例えば、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、他の構成要素（限定されるものではないが、アジュバントを含む）を含んでもよい。

【0166】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）はアジュバントを含まない（アジュバントフリーである）。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）はアジュバントを含む。ワクチンでの使用に適した任意の既知のアジュバントを使用することができる。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、ＭＦ５９アジュバント系（例えば、Ｏ’Ｈａｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ．２００７ Ｏｃｔ；６（５）：６９９－７１０（参照により本明細書に援用される）に記載の通り）を含む。

【0167】

ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、１つ以上の医薬的に許容される賦形剤と組み合わせて製剤化または投与することができる。いくつかの実施形態において、ワクチン組成物は、少なくとも１つの追加の活性物質（例えば、治療活性物質、予防活性物質、または両方の組合せ）を含む。ワクチン組成物は、無菌、パイロジェンフリー、または無菌及びパイロジェンフリーの両方であり得る。医薬薬剤（例えば、ワクチン組成物）の製剤化及び／または製造における全般的考慮事項は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５（参照によりその全体が本明細書に援用される）に見出され得る。

【0168】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、ヒト（例えば、ヒト患者または対象）に投与される。本開示の目的において、「有効成分」という表現は、概して、ＲＮＡワクチンまたはそれに含まれるポリヌクレオチド、例えば、抗原をコードするＲＮＡポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）を指す。

【0169】

本明細書に記載のワクチン組成物の製剤は、薬理学の分野で知られているまたは今後開発される任意の方法によって、調製することができる。概して、このような調製方法は、活性成分（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）を、賦形剤及び／または１つ以上の補助成分と会合させるステップと、次に必要に応じて及び／または所望により、生成物を所望の単回または多回用量単位に分割、成形、及び／またはパッケージングするステップとを含む。

【0170】

本開示に従う医薬組成物中の活性成分、医薬的に許容される賦形剤、及び／または任意のさらなる成分の相対量は、治療する対象の固有性、サイズ、及び／または状態に応じて、また当該組成物の投与に用いる経路に応じて変動する。例として、組成物は、０．１％～１００％、例えば、０．５～５０％、１～３０％、５～８０％、少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。

【0171】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、（１）安定性を高めるために、（２）細胞形質移入を増加するために、（３）（例えば、デポ剤からの）持続放出または遅延放出を可能にするために、（４）体内分布を変化させる（例えば、特定の組織もしくは細胞タイプに標的化する）ために、（５）コードされたタンパク質のｉｎ ｖｉｖｏでの翻訳を増加するために、及び／または（６）ｉｎ ｖｉｖｏでのコードされたタンパク質（抗原）の放出プロファイルを変化させるために、１つ以上の賦形剤を用いて製剤化される。従来の賦形剤（例えば、あらゆる溶媒、分散媒体、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散または懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、防腐剤）に加えて、賦形剤には、限定されるものではないが、リピドイド（ｌｉｐｉｄｏｉｄ）、リポソーム、脂質ナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、コアシェルナノ粒子、ペプチド、タンパク質、（例えば、対象への移植用に）ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）を形質移入した細胞、ヒアルロニダーゼ、ナノ粒子模倣物、及びこれらの組合せが含まれ得る。

【0172】

投薬／投与
本明細書では、ヒト及び他の哺乳類におけるｈＣＭＶ感染症の予防及び／または治療のための組成物（例えば、医薬組成物）、方法、キット、及び試薬を提供する。本発明のｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、治療または予防薬剤として使用することができる。いくつかの態様において、本開示のＲＮＡワクチンは、ｈＣＭＶからの予防的防御を提供するために使用される。いくつかの態様において、本開示のＲＮＡワクチンは、ｈＣＭＶ感染症を治療するために使用される。いくつかの実施形態において、本開示のｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、免疫エフェクター細胞のプライミングで、例えば、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をｅｘ ｖｉｖｏで活性化し、次にこれを対象に注入（再注入）するために、使用される。

【0173】

対象は、任意の哺乳類（非ヒト霊長類及びヒトを含む）とすることができる。典型的には、対象はヒト対象である。

【0174】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、抗原特異的免疫応答を誘導するのに有効な量で対象（例えば、ヒト対象などの哺乳類対象）に投与される。ｈＣＭＶ抗原をコードするＲＮＡがｉｎ ｖｉｖｏで発現及び翻訳されて抗原が産生され、これが対象内の免疫応答を刺激する。対象は、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）を投与される前に、ｈＣＭＶ血清反応陽性（例えば、以前に自然ｈＣＭＶ感染症にかかったことがある）であっても、ｈＣＭＶ血清反応陰性（例えば、以前に自然ｈＣＭＶ感染症にかかったことがない）であってもよい。

【0175】

ｈＣＭＶからの予防的防御は、本開示のｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）の投与の後に達成され得る。ワクチンは１回、２回、３回、４回、またはそれ以上投与することができるが、１回のワクチンの投与（任意選択でその後に１回以上のブースター）で十分な可能性がある。望ましいものではないが、ワクチンを感染した個体に投与して治療応答を達成することも可能である。それに応じて用量設定を調整する必要があり得る。

【0176】

ｈＣＭＶに対する対象内の免疫応答を引き出す方法を本開示の諸態様で提供する。本方法は、少なくとも１つのｈＣＭＶ抗原をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含むｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）を対象に投与することを含み、それにより、対象内でｈＣＭＶ抗原に特異的な免疫応答を誘導し、対象内の抗抗原抗体力価は、ワクチン接種後、ｈＣＭＶに対する従来のワクチンの予防有効用量をワクチン接種した対象内の抗抗原抗体力価よりも増加する。「抗抗原抗体」とは、抗原に特異的に結合する血清抗体である。

【0177】

いくつかの実施形態において、予防有効用量とは、臨床的に許容されるレベルでウイルス感染を予防する有効用量である。いくつかの実施形態において、有効用量とは、ワクチンの添付文書に列記されている用量である。いくつかの実施形態において、有効量は、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）を投与してから１～７２時間後（例えば、１～７２時間後、１～６０時間後、１～４５時間後、１～３０時間後、１～１５時間後、１５～７２時間後、１５～６０時間後、１５～４５時間後、１５～３０時間後、３０～７２時間後、３０～６０時間後、３０～４５時間後、４５～７２時間後、４５～６０時間後、または６０～７２時間後）の対象の血清中の測定において、検出可能なレベルのｈＣＭＶ抗原（例えば、ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ、及び／またはｇＢポリペプチド）を産生するのに十分である。いくつかの実施形態において、有効量は、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）を投与してから１～７２時間後（例えば、１～７２時間後、１～６０時間後、１～４５時間後、１～３０時間後、１～１５時間後、１５～７２時間後、１５～６０時間後、１５～４５時間後、１５～３０時間後、３０～７２時間後、３０～６０時間後、３０～４５時間後、４５～７２時間後、４５～６０時間後、または６０～７２時間後）の対象の血清中の測定において、ｈＣＭＶ抗原（例えば、ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ、及び／またはｇＢポリペプチド）に対する中和抗体によって産生される中和力価を産生するのに十分である。

【0178】

本明細書で使用する場合、従来のワクチンとは、本開示のｍＲＮＡワクチン以外のワクチンを指す。例えば、従来のワクチンとしては、限定されるものではないが、微生物生ワクチン、微生物不活化ワクチン、サブユニットワクチン、タンパク質抗原ワクチン、ＤＮＡワクチン、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）ワクチンなどが挙げられる。例示的な実施形態において、従来のワクチンは、国の薬物規制機関（例えば、米国の食品医薬品局（ＦＤＡ）または欧州医薬品庁（ＥＭＡ））によって規制上の承認を達成し、及び／または登録されているワクチンである。

【0179】

いくつかの実施形態において、対象内の抗抗原抗体力価は、ワクチン接種後、ｈＣＭＶに対する従来のワクチンの予防有効用量をワクチン接種した対象またはワクチン未接種の対象内の抗抗原抗体力価よりも１ｌｏｇ～１０ｌｏｇ増加する。いくつかの実施形態において、対象内の抗抗原抗体力価は、ワクチン接種後、ｈＣＭＶに対する従来のワクチンの予防有効用量をワクチン接種した対象またはワクチン未接種の対象内の抗抗原抗体力価よりも１ｌｏｇ、２ｌｏｇ、３ｌｏｇ、４ｌｏｇ、５ｌｏｇ、または１０ｌｏｇ増加する。

【0180】

対象内のｈＣＭＶに対する免疫応答を引き出す方法は、本開示の他の態様で提供する。本方法は、少なくとも１つのｈＣＭＶ抗原をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドを含むｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンを対象に投与することを含み、それにより、対象内でｈＣＭＶ抗原に特異的な免疫応答を誘導し、対象内の免疫応答は、ＲＮＡワクチンに対し２倍～１００倍の薬用量レベルでｈＣＭＶに対する従来のワクチンを接種した対象内の免疫応答と同等である。

【0181】

いくつかの実施形態において、対象内の免疫応答は、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）に対し２倍の薬用量レベルで従来のワクチンを接種した対象内の免疫応答と同等である。いくつかの実施形態において、対象内の免疫応答は、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）に対し３倍の薬用量レベルで従来のワクチンを接種した対象内の免疫応答と同等である。いくつかの実施形態において、対象内の免疫応答は、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）に対し４倍、５倍、１０倍、５０倍、または１００倍の薬用量レベルで従来のワクチンを接種した対象内の免疫応答と同等である。いくつかの実施形態において、対象内の免疫応答は、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）に対し１０倍～１０００倍の薬用量レベルで従来のワクチンを接種した対象内の免疫応答と同等である。いくつかの実施形態において、対象内の免疫応答は、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）に対し１００倍～１０００倍の薬用量レベルで従来のワクチンを接種した対象内の免疫応答と同等である。

【0182】

他の実施形態において、免疫応答は、対象内での［タンパク質］抗体力価を決定することによって評価される。他の実施形態において、免疫化された対象からの血清または抗体の能力の試験は、ウイルス取込みを中和する能力またはヒトＢリンパ球のｈＣＭＶ形質転換を低減する能力に対し行われる。他の実施形態において、ロバストなＴ細胞応答（複数可）を促進する能力は、当技術分野で認識されている技法を用いて測定される。

【0183】

本開示の他の態様は、少なくとも１つのｈＣＭＶ抗原をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドを含むｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）を対象に投与して、対象内でｈＣＭＶ抗原に特異的な免疫応答を誘導することにより、対象内でｈＣＭＶに対する免疫応答を引き出す方法を提供し、対象内の免疫応答は、ｈＣＭＶに対する従来のワクチンの予防有効量を接種した対象内で誘導される免疫応答よりも２日～１０週間早く誘導される。いくつかの実施形態において、対象内の免疫応答は、ＲＮＡワクチンに対し２倍～１００倍の薬用量レベルで従来のワクチンの予防有効用量を接種した対象内で誘導される。

【0184】

いくつかの実施形態において、対象内の免疫応答は、従来のワクチンの予防有効用量でワクチン接種した対象内で誘導される免疫応答よりも２日、３日、１週間、２週間、３週間、５週間、または１０週間早く誘導される。

【0185】

また、本明細書では、第１の抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）を対象に投与することにより、ｈＣＭＶに対する対象内の免疫応答を引き出す方法であって、ＲＮＡポリヌクレオチドが安定化エレメントを含まず、アジュバントがワクチンと同時製剤化または同時投与されない、方法を提供する。

【0186】

ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、治療的に有効な転帰をもたらす任意の経路で投与することができる。このような経路には、限定されるものではないが、皮内、筋肉内、鼻腔内、及び／または皮下の投与が含まれる。本開示は、ＲＮＡワクチンを投与することをそれを必要とする対象に行うことを含む方法を提供する。必要とされる正確な量は、対象の人種、年齢、及び概況、疾患の重症度、特定の組成物、その投与様式、その活性様式などに応じて対象ごとに異なる。ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンは、典型的には、投与しやすさ及び薬用量の均一性のために、単位剤形で製剤化される。ただし、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンの１日合計使用量は妥当な医学的判断の範囲内で主治医によって決定され得ることが理解されよう。いかなる特定の患者に対する具体的な治療有効用量レベル、予防有効用量レベル、または適切なイメージング用量レベルも、治療する障害、障害の重症度、用いる具体的化合物の活性、用いる具体的組成物、患者の年齢、体重、全体の健康状態、性別、及び食事、用いる具体的化合物の投与時間、投与経路、及び排泄率、治療の期間、用いる具体的化合物と組み合わせでまたは同時に使用する薬物、ならびに医学分野で周知されている類似の因子を含めた様々な因子に依存する。

【0187】

例えば、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）は、約１μｇ、２μｇ、３μｇ、４μｇ、５μｇ、６μｇ、７μｇ、８μｇ、９μｇ、１０μｇ、１１μｇ、１２μｇ、１３μｇ、１４μｇ、１５μｇ、１６μｇ、１７μｇ、１８μｇ、１９μｇ、２０μｇ、２１μｇ、２２μｇ、２３μｇ、２４μｇ、２５μｇ、２６μｇ、２７μｇ、２８μｇ、２９μｇ、３０μｇ、３１μｇ、３２μｇ、３３μｇ、３４μｇ、３５μｇ、３６μｇ、３７μｇ、３８μｇ、３９μｇ、４０μｇ、４１μｇ、４２μｇ、４３μｇ、４４μｇ、４５μｇ、４６μｇ、４７μｇ、４８μｇ、４９μｇ、５０μｇ、５１μｇ、５２μｇ、５３μｇ、５４μｇ、５５μｇ、５６μｇ、５７μｇ、５８μｇ、５９μｇ、６０μｇ、６１μｇ、６２μｇ、６３μｇ、６４μｇ、６５μｇ、６６μｇ、６７μｇ、６８μｇ、６９μｇ、７０μｇ、７１μｇ、７２μｇ、７３μｇ、７４μｇ、７５μｇ、７６μｇ、７７μｇ、７８μｇ、７９μｇ、８０μｇ、８１μｇ、８２μｇ、８３μｇ、８４μｇ、８５μｇ、８６μｇ、８７μｇ、８８μｇ、８９μｇ、９０μｇ、９５μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、１６０μｇ、１７０μｇ、１８０μｇ、１９０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、３５０μｇ、４００μｇ、４５０μｇ、または５００μｇ（これらの間の全ての値を含む）の用量で投与される。いくつかの実施形態では１回用量のみ投与され、一方他の実施形態では複数回用量が投与される。複数回用量が投与される実施形態において、用量は、最初の用量とその後の用量との間で同じでも異なってもよい。

【0188】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供するｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａ／ｇＢをコードするｍＲＮＡを含むｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は９０μｇのように低くてもよく、例えば、単回用量として、または３回の３０μｇ用量として投与される。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、２５μｇ～５００μｇまたは３０μｇ～４５０μｇの単回用量である。例えば、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、１μｇ、２μｇ、３μｇ、４μｇ、５μｇ、６μｇ、７μｇ、８μｇ、９μｇ、１０μｇ、１１μｇ、１２μｇ、１３μｇ、１４μｇ、１５μｇ、１６μｇ、１７μｇ、１８μｇ、１９μｇ、２０μｇ、２１μｇ、２２μｇ、２３μｇ、２４μｇ、２５μｇ、２６μｇ、２７μｇ、２８μｇ、２９μｇ、３０μｇ、３１μｇ、３２μｇ、３３μｇ、３４μｇ、３５μｇ、３６μｇ、３７μｇ、３８μｇ、３９μｇ、４０μｇ、４１μｇ、４２μｇ、４３μｇ、４４μｇ、４５μｇ、４６μｇ、４７μｇ、４８μｇ、４９μｇ、５０μｇ、５１μｇ、５２μｇ、５３μｇ、５４μｇ、５５μｇ、５６μｇ、５７μｇ、５８μｇ、５９μｇ、６０μｇ、６１μｇ、６２μｇ、６３μｇ、６４μｇ、６５μｇ、６６μｇ、６７μｇ、６８μｇ、６９μｇ、７０μｇ、７１μｇ、７２μｇ、７３μｇ、７４μｇ、７５μｇ、７６μｇ、７７μｇ、７８μｇ、７９μｇ、８０μｇ、８１μｇ、８２μｇ、８３μｇ、８４μｇ、８５μｇ、８６μｇ、８７μｇ、８８μｇ、８９μｇ、９０μｇ、９５μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、１６０μｇ、１７０μｇ、１８０μｇ、１９０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、３５０μｇ、４００μｇ、４５０μｇ、または５００μｇ（これらの間の全ての値を含む）の単回用量とすることができる。

【0189】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、３０μｇ～１８０μｇの単回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、３０μｇの単回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、９０μｇの単回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、１８０μｇの単回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、３００μｇ～４５０μｇの単回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、３００μｇの単回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、４５０μｇの単回用量である。

【0190】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、２５μｇ～５００μｇまたは３０μｇ～４５０μｇの２回用量である。例えば、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、１μｇ、２μｇ、３μｇ、４μｇ、５μｇ、６μｇ、７μｇ、８μｇ、９μｇ、１０μｇ、１１μｇ、１２μｇ、１３μｇ、１４μｇ、１５μｇ、１６μｇ、１７μｇ、１８μｇ、１９μｇ、２０μｇ、２１μｇ、２２μｇ、２３μｇ、２４μｇ、２５μｇ、２６μｇ、２７μｇ、２８μｇ、２９μｇ、３０μｇ、３１μｇ、３２μｇ、３３μｇ、３４μｇ、３５μｇ、３６μｇ、３７μｇ、３８μｇ、３９μｇ、４０μｇ、４１μｇ、４２μｇ、４３μｇ、４４μｇ、４５μｇ、４６μｇ、４７μｇ、４８μｇ、４９μｇ、５０μｇ、５１μｇ、５２μｇ、５３μｇ、５４μｇ、５５μｇ、５６μｇ、５７μｇ、５８μｇ、５９μｇ、６０μｇ、６１μｇ、６２μｇ、６３μｇ、６４μｇ、６５μｇ、６６μｇ、６７μｇ、６８μｇ、６９μｇ、７０μｇ、７１μｇ、７２μｇ、７３μｇ、７４μｇ、７５μｇ、７６μｇ、７７μｇ、７８μｇ、７９μｇ、８０μｇ、８１μｇ、８２μｇ、８３μｇ、８４μｇ、８５μｇ、８６μｇ、８７μｇ、８８μｇ、８９μｇ、９０μｇ、９５μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、１６０μｇ、１７０μｇ、１８０μｇ、１９０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、３５０μｇ、４００μｇ、４５０μｇ、または５００μｇ（これらの間の全ての値を含む）の２回用量とすることができる。

【0191】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、３０μｇ～１８０μｇの２回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、３０μｇの２回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、９０μｇの２回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、１８０μｇの２回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、３００μｇ～４５０μｇの２回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、３００μｇの２回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、４５０μｇの２回用量である。

【0192】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、２５μｇ～５００μｇまたは３０μｇ～４５０μｇの３回以上の用量である。例えば、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、１μｇ、２μｇ、３μｇ、４μｇ、５μｇ、６μｇ、７μｇ、８μｇ、９μｇ、１０μｇ、１１μｇ、１２μｇ、１３μｇ、１４μｇ、１５μｇ、１６μｇ、１７μｇ、１８μｇ、１９μｇ、２０μｇ、２１μｇ、２２μｇ、２３μｇ、２４μｇ、２５μｇ、２６μｇ、２７μｇ、２８μｇ、２９μｇ、３０μｇ、３１μｇ、３２μｇ、３３μｇ、３４μｇ、３５μｇ、３６μｇ、３７μｇ、３８μｇ、３９μｇ、４０μｇ、４１μｇ、４２μｇ、４３μｇ、４４μｇ、４５μｇ、４６μｇ、４７μｇ、４８μｇ、４９μｇ、５０μｇ、５１μｇ、５２μｇ、５３μｇ、５４μｇ、５５μｇ、５６μｇ、５７μｇ、５８μｇ、５９μｇ、６０μｇ、６１μｇ、６２μｇ、６３μｇ、６４μｇ、６５μｇ、６６μｇ、６７μｇ、６８μｇ、６９μｇ、７０μｇ、７１μｇ、７２μｇ、７３μｇ、７４μｇ、７５μｇ、７６μｇ、７７μｇ、７８μｇ、７９μｇ、８０μｇ、８１μｇ、８２μｇ、８３μｇ、８４μｇ、８５μｇ、８６μｇ、８７μｇ、８８μｇ、８９μｇ、９０μｇ、９５μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、１６０μｇ、１７０μｇ、１８０μｇ、１９０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、３５０μｇ、４００μｇ、４５０μｇ、または５００μｇ（これらの間の全ての値を含む）の３回用量とすることができる。

【0193】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、３０μｇ～１８０μｇの３回以上の用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、３０μｇの３回以上の用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、９０μｇの３回以上の用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、１８０μｇの３回以上の用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、３００μｇ～４５０μｇの３回以上の用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、３００μｇの３回以上の用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量は、４５０μｇの３回以上の用量である。

【0194】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供するｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えばｐｐ６５ｍｕｔをコードするｍＲＮＡを含むｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は３０μｇ前後とすることができ、例えば、単回用量として、または３回の１０μｇ用量として投与される。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、５μｇ～１００μｇまたは１０μｇ～８０μｇの単回用量である。例えば、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、５μｇ、１０μｇ、１５μｇ、２０μｇ、２５μｇ、３０μｇ、３５μｇ、４０μｇ、４５μｇ、５０μｇ、５５μｇ、６０μｇ、６５μｇ、７０μｇ、７５μｇ、８０μｇ、８５μｇ、９０μｇ、９５μｇ、または１００μｇの単回用量とすることができる。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、１０μｇ～８０μｇの単回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、１０μｇの単回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、４０μｇの単回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、８０μｇの単回用量である。

【0195】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、５μｇ～１００μｇまたは１０μｇ～８０μｇの２回用量である。例えば、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、５μｇ、１０μｇ、１５μｇ、２０μｇ、２５μｇ、３０μｇ、３５μｇ、４０μｇ、４５μｇ、５０μｇ、５５μｇ、６０μｇ、６５μｇ、７０μｇ、７５μｇ、８０μｇ、８５μｇ、９０μｇ、９５μｇ、または１００μｇの２回用量とすることができる。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、１０μｇ～８０μｇの２回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、１０μｇの２回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、４０μｇの２回用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、８０μｇの２回用量である。

【0196】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、５μｇ～１００μｇまたは１０μｇ～８０μｇの３回以上の用量である。例えば、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、５μｇ、１０μｇ、１５μｇ、２０μｇ、２５μｇ、３０μｇ、３５μｇ、４０μｇ、４５μｇ、５０μｇ、５５μｇ、６０μｇ、６５μｇ、７０μｇ、７５μｇ、８０μｇ、８５μｇ、９０μｇ、９５μｇ、または１００μｇの３回以上の用量であり得る。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、１０μｇ～８０μｇの３回以上の用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、１０μｇの３回以上の用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、４０μｇの３回以上の用量である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量は、８０μｇの３回以上の用量である。

【0197】

いくつかの実施形態において、（本明細書に記載の任意の用量の）１回、２回、３回、または３回超の用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及び／またはｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢが対象に投与される。いくつかの実施形態において、（本明細書に記載の任意の用量の）１回、２回、または３回の用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢが対象に投与される。いくつかの実施形態において、用量は、１日目、２か月目の初め頃（例えば、２９日目）、及び６か月目の初め頃（例えば、１６９日目）に投与される。

【0198】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及び／またはｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢの用量は、１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１２日目、１３日目、１４日目、１５日目、１６日目、１７日目、１８日目、１９日目、２０日目、２１日目、２２日目、２３日目、２４日目、２５日目、２６日目、２７日目、２８日目、２９日目、３０日目、３１日目、３２日目、３３日目、３４日目、３５日目、３６日目、３７日目、３８日目、３９日目、４０日目、４１日目、４２日目、４３日目、４４日目、４５日目、４６日目、４７日目、４８日目、４９日目、５０日目、５１日目、５２日目、５３日目、５４日目、５５日目、５６日目、５７日目、５８日目、５９日目、６０日目、６１日目、６２日目、６３日目、６４日目、６５日目、６６日目、６７日目、６８日目、６９日目、７０日目、７１日目、７２日目、７３日目、７４日目、７５日目、７６日目、７７日目、７８日目、７９日目、８０日目、８１日目、８２日目、８３日目、８４日目、８５日目、８６日目、８７日目、８８日目、８９日目、９０日目、９１日目、９２日目、９３日目、９４日目、９５日目、９６日目、９７日目、９８日目、９９日目、１００日目、１０１日目、１０２日目、１０３日目、１０４日目、１０５日目、１０６日目、１０７日目、１０８日目、１０９日目、１１０日目、１１１日目、１１２日目、１１３日目、１１４日目、１１５日目、１１６日目、１１７日目、１１８日目、１１９日目、１２０日目、１２１日目、１２２日目、１２３日目、１２４日目、１２５日目、１２６日目、１２７日目、１２８日目、１２９日目、１３０日目、１３１日目、１３２日目、１３３日目、１３４日目、１３５日目、１３６日目、１３７日目、１３８日目、１３９日目、１４０日目、１４１日目、１４２日目、１４３日目、１４４日目、１４５日目、１４６日目、１４７日目、１４８日目、１４９日目、１５０日目、１５１日目、１５２日目、１５３日目、１５４日目、１５５日目、１５６日目、１５７日目、１５８日目、１５９日目、１６０日目、１６１日目、１６２日目、１６３日目、１６４日目、１６５日目、１６６日目、１６７日目、１６８日目、１６９日目、１７０日目、１７１日目、１７２日目、１７３日目、１７４日目、１７５日目、１７６日目、１７７日目、１７８日目、１７９日目、１８０日目、１８１日目、１８２日目、１８３日目、１８４日目、１８５日目、１８６日目、１８７日目、１８８日目、１８９日目、１９０日目、１９１日目、１９２日目、１９３日目、１９４日目、１９５日目、１９６日目、１９７日目、１９８日目、１９９日目に対象に投与される。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及び／またはｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢの用量は、１９９日目以後に対象に投与される。

【0199】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）の有効量は、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）の少なくとも１回用量（例えば、本明細書に記載の任意の薬用量レベル（例えば、３０μｇ、９０μｇ、または１８０μｇ）の１回、２回、３回用量）である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）の有効量は、少なくとも１回用量（例えば、本明細書に記載の任意の薬用量レベル（例えば、１０μｇ、４０μｇ、または８０μｇ）の１回、２回、３回用量）である。

【0200】

本明細書に記載のｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、本明細書に記載の剤形、例えば、鼻腔内、気管内、または注射用（例えば、静脈内、眼内、硝子体内、筋肉内、皮内、心臓内、腹腔内、及び皮下）の剤形で製剤化することができる。

【0201】

ワクチン効果
本開示のいくつかの態様は、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）の製剤であって、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）が、対象内で抗原特異的免疫応答（例えば、抗ｈＣＭＶ抗原に特異的な抗体の産生）をもたらすのに有効な量で製剤化される、製剤を提供する。「有効量」とは、抗原特異的免疫応答をもたらすのに有効なｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）の用量である。また、本明細書では、対象内の抗原特異的免疫応答を誘導する方法も提供する。

【0202】

本明細書で使用する場合、本開示のワクチンまたはＬＮＰに対する免疫応答は、ワクチン中に存在する（１つ以上の）ｈＣＭＶタンパク質（複数可）に対する対象内での液性及び／または細胞性免疫応答の発生を意味する。本開示の目的において、「液性」免疫応答とは、抗体分子（例えば、分泌（ＩｇＡ）またはＩｇＧ分子を含む）によって媒介される免疫応答を指し、一方、「細胞性」免疫応答とは、Ｔ－リンパ球（例えば、ＣＤ４＋ヘルパー及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、ＣＴＬ）及び／または他の白血球）によって媒介される免疫応答を指す。細胞性免疫における１つの重要な態様は、細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）による抗原特異的応答を含む。ＣＴＬは、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）によってコードされたタンパク質と共に提示され細胞表面に発現するペプチド抗原に対し特異性を有する。ＣＴＬは、細胞内微生物の破壊またはこのような微生物に感染した細胞の溶解を誘導及び促進する一助となる。細胞性免疫のもう１つの側面は、ヘルパーＴ細胞による抗原特異的応答を含む。ヘルパーＴ細胞は、ペプチド抗原をＭＨＣ分子と共に表面に提示した細胞に対する非特異的エフェクター細胞の機能を刺激し、その活性に焦点を合わせる一助となるように作用する。細胞性免疫応答は、活性化Ｔ細胞及び／または他の白血球（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞由来のものを含む）によって産生されるサイトカイン、ケモカイン、及び他のこのような分子の産生も引き起こす。

【0203】

いくつかの実施形態において、抗原特異的免疫応答は、本明細書で提供するｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンを投与された対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価を測定することにより、特性評価される。抗体力価とは、対象内にある抗体（例えば、特定の抗原（例えば、抗ｈＣＭＶ抗原）または抗原のエピトープに特異的な抗体）の量の測定値である。抗体力価は、典型的には、陽性結果をもたらす最大希釈度の逆数として表される。例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）は、抗体力価を定量するための一般的なアッセイである。

【0204】

いくつかの実施形態において、抗体力価は、対象が感染症にかかったかどうかを評価するため、または免疫化が必要かどうかを判断するために使用される。いくつかの実施形態において、抗体力価は、自己免疫応答の強さを定量するため、ブースター免疫が必要かを判断するため、以前のワクチンが有効だったかを判断するため、及び最近または過去の感染を確認するために使用される。本開示によれば、抗体力価は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンによって対象内で誘導された免疫応答の強さを定量するために使用することができる。

【0205】

いくつかの実施形態において、対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも少なくとも１ｌｏｇ増加する。例えば、対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも少なくとも１．５、少なくとも２、少なくとも２．５、少なくとも３ｌｏｇ、少なくとも４ｌｏｇ、または少なくとも５ｌｏｇ、またはそれ以上増加し得る。いくつかの実施形態において、対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、または５ｌｏｇ増加する。いくつかの実施形態において、対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも１～５ｌｏｇ増加する。例えば、対象に産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも１～１．５、１～２、１～２．５、１～３、１～４、１～５、１．５～２、１．５～２．５、１．５～３、１．５～４、１．５～５、２～２．５、２～３、２～４、２～５、２．５～３、２．５～４、２．５～５、３～４、３～５、または４～５ｌｏｇ増加し得る。

【0206】

いくつかの実施形態において、対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも少なくとも２倍増加する。例えば、対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、または少なくとも１０倍増加し得る。いくつかの実施形態において、対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも２、３、４、５、６、７、８、９、または１０倍増加する。いくつかの実施形態において、対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも２～１０倍増加する。例えば、対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、２～３、３～１０、３～９、３～８、３～７、３～６、３～５、３～４、４～１０、４～９、４～８、４～７、４～６、４～５、５～１０、５～９、５～８、５～７、５～６、６～１０、６～９、６～８、６～７、７～１０、７～９、７～８、８～１０、８～９、または９～１０倍増加し得る。

【0207】

いくつかの実施形態において、抗原特異的免疫応答は、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体力価の幾何平均力価（ＧＭＴ）の比（幾何平均比（ＧＭＲ）と称される）として測定される。幾何平均力価（ＧＭＴ）とは、全ての値を掛け合わせ、その数値のｎ乗根（ｎは利用可能なデータを有する対象数である）をとることによって算出される、対象の群における平均抗体力価である。

【0208】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＡ）の有効量またはｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチンＢ）の有効量の投与は、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体力価を引き出す。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの単回用量（例えば、本明細書に記載の任意の用量）もしくは複数回用量、またはｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢの単回用量（例えば、本明細書に記載の任意の用量）もしくは複数回用量の投与は、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体力価を引き出す。

【0209】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象内で、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも少なくとも３倍または少なくとも４倍増加する。例えば、対象内で、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、または少なくとも１０倍増加し得る。いくつかの実施形態において、血清中和抗体は、上皮細胞感染に対する抗体である。他の実施形態において、血清中和抗体は、線維芽細胞感染に対する抗体である。

【0210】

いくつかの実施形態において、単回用量（例えば、３０μｇ以上（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇ）の単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与した後、対象内で、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも２倍～１０倍（例えば、少なくとも３倍）増加する。いくつかの実施形態において、血清中和抗体は、上皮細胞感染に対する抗体である。他の実施形態において、血清中和抗体は、線維芽細胞感染に対する抗体である。

【0211】

いくつかの実施形態において、２回用量（例えば、３０μｇ以上（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇ）の２回用量、または３０～２００μｇの２回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与した後、対象内で、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも２倍～１０倍（例えば、少なくとも３倍）増加する。いくつかの実施形態において、３回用量（例えば、３０μｇ以上（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇ）の３回用量、または３０～２００μｇの３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与した後、対象内で、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも２倍～１０倍増加する。いくつかの実施形態において、血清中和抗体は、上皮細胞感染に対する抗体である。他の実施形態において、血清中和抗体は、線維芽細胞感染に対する抗体である。

【0212】

いくつかの実施形態において、２回用量（例えば、３０μｇ以上（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇ）の２回用量、または３０～２００μｇの２回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与した後、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象内で、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも９倍～２０倍（例えば、９～２０、１０～２０、１５～２０、９～１５、１０～１５、または９～１０倍）増加する。例えば、２回用量（例えば、３０μｇ以上（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇ）の２回用量、または３０～２００μｇの２回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与した後、対象内で、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、または２０倍増加し得る。いくつかの実施形態において、血清中和抗体は、上皮細胞感染に対する抗体である。他の実施形態において、血清中和抗体は、線維芽細胞感染に対する抗体である。

【0213】

いくつかの実施形態において、３回用量（例えば、３０μｇ以上（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇ）の３回用量、または３０～２００μｇの３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与した後、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象内で、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも最大４０倍（例えば、最大４０倍、最大３５倍、最大３０倍、最大２５倍）増加する。例えば、３回用量（例えば、３０μｇ以上（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇ）の３回用量、または３０～２００μｇの３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与した後、対象内で、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも２０倍～４０倍（例えば、２０～４０倍、２０～３５倍、２０～３０倍、２０～２５倍、２５～４０倍、２５～３５倍、３０～４０倍、３０～３５倍、または３５～４０倍）増加し得る。いくつかの実施形態において、３回用量（例えば、３０μｇ以上（例えば３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇ）の３回用量、または３０～２００μｇの３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与した後、対象内で、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体のＧＭＴは、ベースラインよりも２０倍、２１倍、２２倍、２３倍、２４倍、２５倍、２６倍、２７倍、２８倍、２９倍、３０倍、３１倍、３２倍、３３倍、３４倍、３５倍、３６倍、３７倍、３８倍、３９倍、または４０倍増加し得る。いくつかの実施形態において、血清中和抗体は、上皮細胞感染に対する抗体である。他の実施形態において、血清中和抗体は、線維芽細胞感染に対する抗体である。

【0214】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、もしくは１８０μｇの１回、２回、もしくは３回用量、または３０～２００μｇの１回、２回、もしくは３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは０．６～１１の範囲内にある。例えば、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、もしくは１８０μｇの１、２、もしくは３回用量、または３０～２００μｇの１、２、もしくは３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約０．６、０．８、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１であり得る。

【0215】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、もしくは１８０μｇの１回、２回、もしくは３回用量、または３０～２００μｇの１回、２回、もしくは３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは３０～１８０の範囲内にある。例えば、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、もしくは１８０μｇの１、２、もしくは３回用量、または３０～２００μｇの１、２、もしくは３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、または１８０であり得る。いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、もしくは１８０μｇ用量の１回、２回、もしくは３回用量、または３０～２００μｇの１回、２回、もしくは３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対する平均ＧＭＲは約１２０である。

【0216】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回（例えば、１回または２回）用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは３０～４０（例えば、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０）である。いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回（例えば、１回または２回）用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約３８．１５である。いくつかの実施形態において、９０μｇ以上の少なくとも１回（例えば、１回または２回）用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは１３０～１５０（例えば、１３０、１３５、１４０、１４５、または１５０）である。いくつかの実施形態において、９０μｇ以上の少なくとも１回（例えば、１回または２回）用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約１４２．５７である。いくつかの実施形態において、１８０μｇ以上の少なくとも１回（例えば、１回または２回）用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは１４０～１６０（例えば、１４０、１４５、１５０、１５５、または１６０）である。いくつかの実施形態において、１８０μｇ以上の少なくとも１回（例えば、１回または２回）用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約１５７．９６である。

【0217】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの１回、２回、もしくは３回用量、または３０～２００μｇの１回、２回、もしくは３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは３８０～４０００の範囲内にある。例えば、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの１、２、もしくは３回用量、または３０～２００μｇの１、２、もしくは３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約３８０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、または４０００であり得る。いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの１回、２回、もしくは３回用量、または３０～２００μｇの１回、２回、もしくは３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対する平均ＧＭＲは約２１００である。

【0218】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回（例えば、１回または２回）用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは３８０～４２０（例えば、３８０、３９０、４００、４１０、または４２０）である。いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回（例えば、１回または２回）用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約４０７．８６である。いくつかの実施形態において、９０μｇ以上の少なくとも１回（例えば、１回または２回）用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは１８００～２１００（例えば、１８００、１９００、２０００、または２１００）である。いくつかの実施形態において、９０μｇ以上の少なくとも１回（例えば、１回または２回）用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約１９１３．１７である。いくつかの実施形態において、１８０μｇ以上の少なくとも１回（例えば、１回または２回）用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは３６００～４１００（例えば、３６００、３７００、３８００、３９００、４０００、または４１００）である。いくつかの実施形態において、１８０μｇ以上の少なくとも１回（例えば、１回または２回）用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陰性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約３８４２．８７である。

【0219】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは９～４１の範囲内にある。例えば、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、または４１であり得る。いくつかの実施形態において、ＧＭＲは、上皮細胞感染に対する中和抗体のものである。

【0220】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは４～８の範囲内にある。例えば、少なくとも１回用量の３０μｇ以上（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約４、５、６、７、８、９、または１０であり得る。いくつかの実施形態において、ＧＭＲは、線維芽細胞感染に対する中和抗体のものである。

【0221】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは２～３の範囲内にある。例えば、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与した対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、または３であり得る。いくつかの実施形態において、３０μｇの少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対する平均ＧＭＲは約２．７である。

【0222】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の単回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは２．３～２．５（例えば、２．３、２．４、または２．５）である。いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の単回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約２．４３である。いくつかの実施形態において、９０μｇ以上の単回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは２．５～２．８（例えば、２．５、２．６、２．７、または２．８）である。いくつかの実施形態において、９０μｇ以上の単回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約２．６６である。いくつかの実施形態において、１８０μｇ以上の単回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは２．６～３（例えば、２．６、２．７、２．８、２．９、または３）である。いくつかの実施形態において、１８０μｇ以上の単回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約２．８３である。

【0223】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは６～１０の範囲内にある。例えば、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、もしくは１８０μｇの単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０であり得る。いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも１回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対する平均ＧＭＲは約７．７である。

【0224】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の単回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは６～７（例えば、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、または７）である。いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の単回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約６．８５である。いくつかの実施形態において、９０μｇ以上の単回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶのＧＭＲは６～７（例えば、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、または７）である。いくつかの実施形態において、９０μｇ以上の単回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約６．９３である。いくつかの実施形態において、１８０μｇ以上の単回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは９～１０（例えば、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、または１０）である。いくつかの実施形態において、１８０μｇ以上の単回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約９．２６である。

【0225】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも２回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、もしくは１８０μｇの単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは２～５の範囲内にある。例えば、３０μｇ以上の少なくとも２回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、もしくは１８０μｇの単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約２、２．５、３、３．５、４、４．５、または５であり得る。いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも２回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、もしくは１８０μｇの単回用量、または３０～２００μｇの単回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対する平均ＧＭＲは約３．２である。

【0226】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の２回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは１２～１４（例えば、１２、１２．５、１３、１３．５、または１４）である。いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の２回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約１３．１５である。いくつかの実施形態において、９０μｇ以上の２回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶのＧＭＲは８～１０（例えば、８、８．５、９、９．５、または１０）である。いくつかの実施形態において、９０μｇ以上の２回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約９．９１である。いくつかの実施形態において、１８０μｇ以上の２回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは１８～２０（例えば、１８、１８．５、１９、１９．５、または２０）である。いくつかの実施形態において、１８０μｇ以上の２回用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約１９．３６である。

【0227】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも２回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの少なくとも２回用量、または３０～２００μｇの少なくとも２回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは１０～２０の範囲内にある。例えば、３０μｇ以上の少なくとも２回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの少なくとも２回用量、または３０～２００μｇの少なくとも２回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０であり得る。いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも２回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの少なくとも２回用量、または３０～２００μｇの少なくとも２回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対する平均ＧＭＲは約１４．２である。

【0228】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも２回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの少なくとも２回用量、または３０～２００μｇの少なくとも２回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは、ベースラインよりも少なくとも２．５倍（例えば、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも３．５倍）増加する。例えば、３０μｇ以上の少なくとも２回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの少なくとも２回用量、または３０～２００μｇの少なくとも２回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは、ベースラインよりも２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、３倍、３．１倍、３．２倍、３．３倍、３．４倍、３．５倍、３．６倍、３．７倍、または３．８倍増加し得る。

【0229】

いくつかの実施形態において、３０μｇ以上の少なくとも３回用量（例えば３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの少なくとも３回用量、または３０～２００μｇの少なくとも３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは、ベースラインよりも少なくとも３．９倍（例えば、少なくとも３．９倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍）増加する。例えば、３０μｇ以上の少なくとも３回用量（例えば、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、もしくは３００μｇの少なくとも３回用量、または３０～２００μｇの少なくとも３回用量）のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与された対象（例えば、血清反応陽性対象）内で、ｈＣＭＶに対するＧＭＲは、ベースラインよりも３．９倍、４倍、４．１倍、４．２倍、４．３倍、４．４倍、４．５倍、４．６倍、４．７倍、４．８倍、４．９倍、または５倍増加し得る。

【0230】

対照／ベースラインは、いくつかの実施形態においては、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンを投与されていない対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価である。いくつかの実施形態において、対照／ベースラインは、自然ｈＣＭＶ感染を有する対象（すなわち、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンを投与される前にｈＣＭＶ血清反応陽性の対象）内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価である。いくつかの実施形態において、対照／ベースラインは、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンを投与される前はｈＣＭＶ血清反応陰性の対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価である。いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶに対する血清中和抗体のＧＭＴは、用量依存的に増加する。

【0231】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）が有効となる能力は、マウスモデルで測定される。例えば、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）は、マウスモデルに投与することができ、マウスモデルを中和抗体力価の誘導について評価する。また、ウイルスチャレンジ試験も、本開示のワクチンの効果を評価するために使用することができる。例えば、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）をマウスモデルに投与し、マウスモデルをｈＣＭＶで攻撃し、マウスモデルを生存及び／または免疫応答（例えば、中和抗体応答、Ｔ細胞応答（例えば、サイトカイン応答））について評価することができる。

【0232】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）の有効量は、組換えｈＣＭＶタンパク質ワクチンの標準治療用量と比較して低減された用量である。本明細書で使用する「標準治療」とは、医学的または心理学的な治療ガイドラインを指し、一般的な場合も特定的な場合もある。「標準治療」は、科学的根拠に基づいた適切な治療及び所与の条件の治療に関与する医療従事者間の協力を規定する。それは、医師／臨床医がある特定のタイプの患者、病気、及び臨床状況に対し従うべき診断及び治療のプロセスである。本明細書で使用する「標準治療用量」とは、医師／臨床医または他の医療専門家が、ｈＣＭＶ、またはｈＣＭＶに関連する状態を治療または予防するための標準治療ガイドラインに従いながら、ｈＣＭＶ、またはｈＣＭＶに関連する状態を治療または予防するために対象に投与すると考えられる組換えもしくは精製ｈＣＭＶタンパク質ワクチン、弱毒生もしくは不活化ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチン、またはｈＣＭＶ ＶＬＰワクチンの用量を指す。

【0233】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ免疫原性組成物（例えば、ｍＲＮＡワクチン）の有効量を投与された対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、組換えもしくは精製ｈＣＭＶタンパク質ワクチン、または弱毒生もしくは不活化ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチン、またはｈＣＭＶ ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与された対照対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価と同等である。

【0234】

ワクチン効果は、標準的な解析を用いて評価することができる（例えば、Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２０１０ Ｊｕｎ １；２０１（１１）：１６０７－１０を参照）。例えば、ワクチン効果は、二重盲検ランダム化対照臨床試験で測定することができる。ワクチン効果は、ワクチン非接種試験コホートの罹患率（ＡＲＵ）とワクチン接種試験コホートの罹患率（ＡＲＶ）との間の疾患罹患率（ＡＲ）の比例的減少として表すことができ、以下の式を用いてワクチン接種群の疾患の相対リスク（ＲＲ）から算出することができる。

【数1】

【0235】

同様に、ワクチン有効性は標準的解析を用いて評価することができる（例えば、Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２０１０ Ｊｕｎ １；２０１（１１）：１６０７－１０を参照）。ワクチンの有効性とは、ワクチン（高いワクチン効果を有することが既に判明している場合もある）が集団の中でどのように疾患を低減するかを評価するものである。この尺度は、対照臨床試験ではなく自然のフィールド条件下で、ワクチン自体にとどまらず、ワクチン接種プログラムの利益及び有害作用の本質的なバランスを評価することができる。ワクチン有効性はワクチンの効果（効力）に比例するが、集団内の標的群がどの程度免疫化しているか、及び「実世界」の転帰に影響を及ぼすワクチンとは無関係な要因（例えば、入院、外来受診、または費用）による影響も受ける。例えば、後ろ向きケースコントロール解析を使用して、感染症例のセット及び適切な対照におけるワクチン接種率を比較することができる。ワクチン有効性は、ワクチン接種したにもかかわらず感染症を発症したオッズ比（ＯＲ）の使用により、割合の差として表すことができる。

【数2】

【0236】

いくつかの実施形態において、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンの効果は、ワクチン未接種対照対象に対し少なくとも６０％である。例えば、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンの効果は、ワクチン未接種対照対象に対し少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または１００％であり得る。

【0237】

殺菌免疫。殺菌免疫とは、宿主への有効な病原体感染を防止する固有の免疫状態を指す。いくつかの実施形態において、本開示のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンの有効量は、少なくとも１年間、対象内の殺菌免疫をもたらすのに十分である。例えば、本開示のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンの有効量は、少なくとも２年間、少なくとも３年間、少なくとも４年間、または少なくとも５年間、対象内の殺菌免疫をもたらすのに十分であり得る。いくつかの実施形態において、本開示のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンの有効量は、対照よりも少なくとも５倍低い用量で対象内の殺菌免疫をもたらすのに十分である。例えば、有効量は、対照よりも少なくとも１０倍、１５倍、または２０倍低い用量で対象内の殺菌免疫をもたらすのに十分であり得る。

【0238】

検出可能な抗原。いくつかの実施形態において、本開示のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンの有効量は、投与してから１～７２時間後の対象の血清中の測定において、検出可能なレベルのｈＣＭＶ抗原を産生するのに十分である。

【0239】

力価。抗体力価とは、対象内の抗体（例えば、特定の抗原（例えば、抗ｈＣＭＶ抗原）に特異的な抗体）の量の測定値である。抗体力価は、典型的には、陽性結果をもたらす最大希釈度の逆数として表される。例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）は、抗体力価を定量するための一般的なアッセイである。

【0240】

いくつかの実施形態において、本開示のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンの有効量は、投与してから１～７２時間後の対象の血清中の測定において、ｈＣＭＶ抗原に対する中和抗体によって産生される１，０００～１０，０００の中和抗体力価を産生するのに十分である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与してから１～７２時間後の対象の血清中の測定において、ｈＣＭＶ抗原に対する中和抗体によって産生される１，０００～５，０００の中和抗体力価を産生するのに十分である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与してから１～７２時間後の対象の血清中の測定において、ｈＣＭＶ抗原に対する中和抗体によって産生される５，０００～１０，０００の中和抗体力価を産生するのに十分である。

【0241】

いくつかの実施形態において、中和抗体力価は、少なくとも１００ＮＴ_５０である。例えば、中和抗体力価は、少なくとも２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００ＮＴ_５０であり得る。いくつかの実施形態において、中和抗体力価は、少なくとも１０，０００ＮＴ_５０である。

【0242】

いくつかの実施形態において、中和抗体力価は、少なくとも１００中和単位／ミリリットル（ＮＵ／ｍＬ）である。例えば、中和抗体力価は、少なくとも２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００ＮＵ／ｍＬであり得る。いくつかの実施形態において、中和抗体力価は、少なくとも１０，０００ＮＵ／ｍＬである。

【0243】

いくつかの実施形態において、対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも少なくとも１ｌｏｇ増加する。例えば、対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｌｏｇ増加し得る。

【0244】

いくつかの実施形態において、対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも少なくとも２倍増加する。例えば、対象内で産生される抗ｈＣＭＶ抗原抗体力価は、対照よりも少なくとも３、４、５、６、７、８、９、または１０倍増加する。

【0245】

いくつかの実施形態において、ｎ個の数の積のｎ乗根である幾何平均は、比例成長を説明するために一般的に使用される。幾何平均は、いくつかの実施形態においては、対象内で産生される抗体力価を特性評価するために使用される。

【実施例】

【0246】

本明細書に記載の発明をより十分に理解できるようにするため、以下の実施例を示す。本出願に記載の実施例は、本出願で提供するシステム及び方法を例示するために提供されるものであり、いかなる形においてもそれらの範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

【0247】

実施例１．サイトメガロウイルスワクチンｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢを健康な成人に投与したときの安全性、反応原性、及び免疫原性を評価するためのフェーズＩランダム化観察者盲検プラセボ対照用量設定試験
このフェーズＩ試験は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの安全性、反応原性、及び免疫原性、ならびにｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢの安全性及び反応原性を評価することを目的とした。

【0248】

ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡは、全長ＣＭＶ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）及び五量体のｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａ糖タンパク質複合体（五量体）をコードする配列を有する別々のｍＲＮＡ分子からなる。ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢは、ｐｐ６５タンパク質のリン酸化変異体（アミノ酸４３５～４３８欠損）をコードする配列を有するｍＲＮＡ分子からなり、Ｔ細胞応答を引き出すことを目的としている。リン酸化部位は、野生型ｐｐ６５タンパク質を発現するあらゆる理論上の安全性の懸念を軽減するため、欠失させている。

【0249】

ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢはいずれも、非臨床的な安全性及び免疫原性が確認されており、そのためヒトのＣＭＶ一次感染及びＣＭＶ陽性個体のＣＭＶ再感染／再活性化を防止する潜在的可能性を有する。

【0250】

試験集団の選択
血清反応陰性である対象の治験ＣＭＶワクチンに対する免疫応答は、血清反応陽性である対象の応答とは異なる可能性がある。安全性及び免疫原性の潜在的な違いを調べるため、本試験では、本試験の用量選択フェーズＢ及びセンチネル拡大フェーズＣの拡大コホートに、ほぼ同数のＣＭＶ血清反応陰性の健康な対象及びＣＭＶ血清反応陽性の健康な対象を登録した。

【0251】

レジメン及び用量
このフェーズＩ試験では、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの５つの用量レベル（３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、３００μｇ、及び２４０μｇまたは４５０μｇのいずれか［フェーズＣ第１群の安全性審査に応じて決定］）と、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢの３つの用量レベル（１０μｇ、４０μｇ、及び８０μｇ）とを試験する。

【0252】

双方の化合物の初期用量は、非臨床の安全性及び免疫原性のデータが評価された範囲内である。毒性作用は認められなかったが、いくつかの軽度及び予想される局所性炎症反応が認められた。また、最大１８０μｇの用量レベルは、フェーズ１／２ ｍＲＮＡワクチン試験で良好な安全性プロファイルを有し免疫応答を誘導した用量範囲内にもある（Ｂａｈｌ ｅｔ ａｌ ２０１７）。

【0253】

他の治験用ＣＭＶワクチンによるこれまでの知見から、ロバストで持続的な免疫応答を誘導するには、２回用量または３回用量のワクチン接種シリーズの必要性が示された（Ｐａｓｓ ｅｔ ａｌ ２００９；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ ２０１６）。したがって、本臨床試験では３回接種シリーズを評価した。

【0254】

計画された用量スケジュール（１日目、２か月目、及び６か月目）は、組換えタンパク質ワクチンの最適なワクチン接種スケジュールであることが予め分かっていた。また、このスケジュールであれば、標的集団にヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ；Ｇａｒｄａｓｉｌ ２０１５）またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ；Ｅｎｇｅｒｉｘ－Ｂ ２０１６）のワクチンを同時接種することも可能であった。免疫応答の評価を、各治験ワクチン接種後に加えて、２回目ワクチン接種の４か月後及び３回目ワクチン接種の６か月後に行った。

【0255】

安全性モニタリング計画
ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢは、初めてヒトに投与するため、順次登録、用量漸増、及び継続的な安全性評価などの安全性の考慮を施す。治験ワクチンは、最初は少数の対象に投与し、許容できる忍容性を確認した後、その後登録を拡大する。試験休止のルールが定義され、本試験の安全性評価は、内部安全性チーム（ＩＳＴ）及び非盲検下の独立した安全性モニタリング委員会（ＳＭＣ）が監督する。本試験は、後述のように複数のフェーズで行う。

【0256】

プラセボの使用
現時点では認可済みＣＭＶワクチンが存在しないため、安全性、反応原性、及び免疫原性の評価のためにプラセボ群を対照として使用した。

【0257】

試験の盲検化
プラセボの物理的外観はｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢと異なるため、またｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢは投与前に希釈が必要となるため、本試験は観察者盲検法で行った。バイアスを最小限に抑えるため、非盲検の医療担当者が、対象及び盲検下の現場担当者の両方から見えないようにして用量を投与した。非盲検の医療担当者は、いかなるパープロトコルの臨床評価にも参加しなかった。

【0258】

リスク／ベネフィット評価
本試験では、対象およそ１７０例をｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡまたはｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢに曝露し、対象およそ４６例にプラセボを投与した。

【0259】

試験目的
主要目的
本試験の主要目的は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢを３回用量ワクチン接種スケジュールに従って異なる用量で投与し、これらの安全性及び反応原性を評価することであった。

【0260】

副次的目的
本試験の副次的目的は以下の通り。
１．異なる用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを接種した後の上皮細胞及び線維芽細胞の感染に対する抗ＣＭＶ中和抗体応答を評価すること。
２．酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）による測定において、異なる用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを接種した後のｇＢ及び五量体に対する抗原特異的抗体応答を評価すること。
３．異なる用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡによって２回目及び３回目のワクチン接種後に引き出される抗体媒介免疫応答を比較して、さらなる評価のためにこのワクチンの最適な用量レベルの選択の情報を提供すること。
４．ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡによって２回目ワクチン接種の４か月後及び３回目ワクチン接種の６か月後に引き出される抗体媒介免疫応答を比較すること。
５．ベースラインのＣＭＶ血清状態によってｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの免疫原性を評価すること。

【0261】

探索的目的
本試験の探索的目的は以下の通り。
１．異なる用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを接種した後の抗体応答の質を調べること。
２．酵素結合免疫スポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイによる定量において、異なる用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡに対する抗原特異的Ｔ細胞応答を評価すること。
３．ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによる検出において、異なる用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡに対する抗原特異的メモリーＢ細胞応答を評価すること。
４．フローサイトメトリーによる測定において、異なる用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを接種した後のｇＢ特異的及び五量体特異的な形質芽球を評価すること。
５．細胞内サイトカイン染色解析による定量において、異なる用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡに対する抗原特異的Ｔ細胞応答を評価すること。
６．ＥＬＩＳＡによる測定において、異なる用量のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの抗ｇＢ及び抗五量体アビディティー指数を評価すること。

【0262】

試験方法
実験設計：
本試験は、健康な成人に投与したｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの安全性、反応原性、及び免疫原性ならびにｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢの安全性及び反応原性を評価するためのランダム化観察者盲検プラセボ対照用量設定ヒト初回投与試験であった。

【0263】

本試験の期間
本試験の期間は、各対象ごとにおよそ１８ヵ月であった。

【0264】

試験のフェーズ
ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢをヒトに投与するのは本試験が初めてとなるため、３つの低用量レベルについては用量漸増及び用量選択フェーズへの登録、他の２つの用量レベルについてはセンチネル拡大コホートへの登録を利用することにより、安全性を考慮した。

【0265】

用量漸増フェーズＡ：ＣＭＶ血清反応陰性対象２７例を、３つの低用量レベルの治験ワクチンまたはプラセボに順次登録。各用量レベル当たり９例の対象を、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ（３０、９０、１８０μｇ）、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢ（１０、４０、８０μｇ）、またはプラセボの投与に４：４：１の比でランダムに割り当てた。内部安全性チーム（ＩＳＴ）の安全性審査により、各用量レベル内での用量継続及び次の用量レベルへの用量漸増が許可された。安全性モニタリング委員会（ＳＭＣ）は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢの６３日目（１８０μｇ／８０μｇ用量レベルにおける２回目ワクチン接種の６日後）までの全ての安全性及び反応原性データを審査し、本試験の用量選択フェーズＢで評価したｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ用量レベルを確認し、６３日目までの用量漸増フェーズＢのＳＭＣ安全性審査を保留した。また、ＳＭＣは、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢの１７５日目（１８０μｇ／８０μｇ用量レベルにおける３回目ワクチン接種の６日後）までの全ての利用可能な安全性データも審査して、用量選択フェーズＢでのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの３回目ワクチン接種の投与を許可する。

【0266】

用量漸増フェーズＢ：ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを用量選択フェーズＢで実施するため、ＣＭＶ血清反応陰性対象１５例を、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの３つの低用量レベルまたはプラセボに順次登録した。各用量レベル当たり５例の対象を、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡまたはプラセボに４：１の比でランダムに割り当てた。ＩＳＴによる安全性審査により、各用量レベル内での用量継続及び次の用量への漸増が許可される。ＳＭＣは、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの６３日目（１８０μｇの用量レベルにおける２回目ワクチン接種の６日後）までの全ての用量レベルの安全性及び反応原性データを審査し、次に、本試験の用量選択フェーズＢで評価するｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの用量レベルを確認する。また、ＳＭＣは、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの１７５日目（１８０μｇ用量レベルにおける３回目ワクチン接種の６日後）までの全ての利用可能な安全性データも審査して、用量選択フェーズＢでの３回目ワクチン接種の投与を許可する。

【0267】

用量選択フェーズＢ：ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの３つの低用量レベルまたはプラセボにおよそ１０４例（試験群ごとに２６例）の対象を並行登録する。対象を１：１：１：１の比でランダムに割り付けて、３０、９０、及び１８０μｇのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡまたはプラセボを投与した。各用量レベルに、ほぼ同数のＣＭＶ血清反応陰性及びＣＭＶ血清反応陽性の対象を登録した。安全性及び反応原性は、非盲検下のＳＭＣによって定期的に審査を受ける。

【0268】

センチネル拡大フェーズＣ：用量、忍容性、及び免疫原性の関係をより十分に理解するため、このフェーズでは、最大７０例の対象（最大２群、各群３５例）を、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの２つの他の用量レベルまたはプラセボに登録する。各群について、登録をセンチネルコホート（ＣＭＶ血清反応陰性対象５例を４：１の比でランダムに割り付け、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡまたはプラセボを投与）及び拡張コホート（最大３０例を４：１の比でランダムに割り付け、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡまたはプラセボを投与）に分け、ＣＭＶ血清反応陰性対象及びＣＭＶ血清反応陽性対象をほぼ同じ数にする。

【0269】

第１群：センチネル対象は、用量漸増フェーズＢからの６３日目（２回目ワクチン接種の６日後）までの安全性データに基づき、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ ３００μｇまたはプラセボの投与にランダムに割り付ける。ＳＭＣは、第１群センチネルコホートの７日目（１回目ワクチン接種の６日後）までの全ての安全性及び反応原性データを審査して、第１群拡大コホートの登録を許可する。次に、ＳＭＣは、全ての第１群の対象からの７日目までの安全性及び反応原性のデータを審査して、第２群への登録を許可する。

【0270】

第２群：第１群からの７日目（１回目ワクチン接種の６日後）までの安全性及び忍容性のデータに基づき、対象をｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡまたはプラセボにランダムに割り付ける。第２群におけるｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの用量レベルは、以下の方法で決定する。

【0271】

７日目までの全ての第１群の対象に対するＳＭＣ審査で安全性の懸念が生じなければ、第２群の対象をｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ ４５０μｇの用量レベルまたはプラセボにランダムに割り付ける。

【0272】

第１群の登録中、または７日目までの全ての第１群の対象に対するＳＭＣ審査後に生じた安全性の懸念のため、第２群の対象は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ ２４０μｇの用量レベルまたはプラセボを投与するようにランダムに割り付ける。

【0273】

ＩＳＴは、第２群センチネルコホートの７日目（１回目ワクチン接種の６日後）までの全ての安全性及び反応原性データを審査して、第２群拡大コホートの登録を許可する。

【0274】

ワクチン接種スケジュール：１日目、２か月目、及び６か月目に３回注射（１か月＝２８日）
対照：食塩水プラセボ
試験群：
用量漸増フェーズＡ（ＣＭＶ血清反応陰性対象）：
●４：４：１の比でランダムに割り付けた９例の対象に、３０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ、１０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢ、またはプラセボを投与した
●４：４：１の比でランダムに割り付けた対象９例に、９０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ、４０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢ、またはプラセボを投与した
●４：４：１の比でランダムに割り付けた対象９例に、１８０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ、８０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢ、またはプラセボを投与した
用量漸増フェーズＢ（ＣＭＶ血清反応陰性対象）：
●３０μｇ用量レベル：４：１の比でランダムに割り付けた５例の対象に、３０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡまたはプラセボを投与
●９０μｇ用量レベル：４：１の比でランダムに割り付けた５例の対象に、９０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡまたはプラセボを投与
●１８０μｇ用量レベル：４：１の比でランダムに割り付けた５例の対象に、１８０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡまたはプラセボを投与
用量選択フェーズＢ：
ＣＭＶ血清反応陽性対象及びＣＭＶ血清反応陰性対象がほぼ同数となるように１：１：１：１の比でランダムに割り付けた１０４例の対象を各用量レベルに登録した。
●およそ２６例の対象に３０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与
●およそ２６例の対象に９０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与
●およそ２６例の対象に１８０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与
●およそ２６例の対象にプラセボを投与

【0275】

本試験の用量選択フェーズＢで評価したｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ用量レベルは、ＳＭＣにより、用量漸増フェーズＢからの安全性及び反応原性データを審査した後に確認された。

【0276】

センチネル拡大フェーズＣ：
最大７０例の対象（最大２群、群当たり対象３５例）をセンチネル拡大法で登録し、４：１の比でランダムに割り付けて、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの他の２つの用量レベルまたはプラセボを投与するようにする。センチネルコホートはＣＭＶ血清反応陰性対象を登録し、拡張コホートはＣＭＶ血清反応陰性対象及びＣＭＶ血清反応陽性対象をほぼ同数登録する。
●第１群：４：１の比でランダムに割り付けたおよそ３５例の対象に、３００μｇのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡまたはプラセボを投与する。
●第２群：４：１の比でランダムに割り付けたおよそ３５例の対象に、（フェーズＣ第１群の安全性審査に応じて）２４０μｇもしくは４５０μｇのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡまたはプラセボを投与する。第２群の用量レベルは、全ての第１群の対象の７日目までの安全性データに基づいている。

【0277】

ランダム化
本試験では、双方向応答技術を使用した。用量選択フェーズＢの群数及びランダム化比は、用量漸増フェーズからの安全性及び反応原性データの審査に基づき、ＳＭＣの勧告に従って調整した。

【0278】

盲検化
本試験は観察者盲検試験であった。

【0279】

血液試料スケジュール
スクリーニング臨床検査用の血液試料をスクリーニング来院時に採取した。安全性の臨床検査値評価に用いる血液試料を１日目、７日目、１か月目、２か月目、６３日目、３か月目、６か月目、１７５日目、及び７か月目の来院時に採取する。抗体媒介免疫原性に用いる血液試料を１日目、１か月目、３か月目、６か月目、７か月目、及び１２か月目の来院時に採取する。細胞媒介免疫原性の評価に用いる血液試料を１日目、７日目、２か月目、６３日目、６か月目、１７５日目、及び１２か月目の来院時に用量漸増フェーズＢ、用量選択フェーズＢ、及びセンチネル拡大フェーズＣの対象から採取する。

【0280】

データ収集：電子症例報告書（ｅＣＲＦ）。

【0281】

試験来院
スクリーニング、１日目、７日目、１か月目、２か月目、６３日目、３か月目、６か月目、１７５日目、７か月目、及び１２か月目の１１回の病院への来院。

【0282】

安全性に関する電話連絡
用量漸増フェーズＡ及びＢの全ての対象ならびにセンチネル拡大フェーズＣのセンチネルコホートにおいて、各治験ワクチン接種（２、３、５８、５９、１７０、及び１７１日目）のおよそ２４時間後及び４８時間後に、安全性に関する電話連絡を６回行い、非自発有害事象（ＡＥ）及びその他の安全性情報を収集する。加えて、本試験の全ての対象に対して安全性に関する電話連絡を７回（４及び５か月目、８～１１か月目、１８か月目）行い、全ての診療を要した有害事象（ＡＥ）、試験中止に至ったＡＥ、重篤なＡＥ（ＳＡＥ）、特記されるＡＥ（ＡＥＳＩ）、これらの事象に関連する併用薬の情報、及び任意のワクチン接種について収集する。

【0283】

非自発ＡＥ
全ての対象について、各治験ワクチン接種時からその後の６日間に発生した局所性（注射部位の痛み、紅斑、及び腫脹）ならびに全身性（頭痛、疲労、筋肉痛（全身に及ぶ筋肉の痛み）、関節痛（数箇所の関節の痛み）、悪心、発疹、発熱、及び悪寒）の非自発ＡＥを、日誌を用いて毎日記録する。

【0284】

自発ＡＥ
各治験ワクチン接種の２８日後までに発生し、プロトコルで定義された非自発ＡＥの一部に含まれなかった観察または報告された全てのＡＥを、全ての対象について日誌を用いて記録する。加えて、各ワクチン接種のおよそ２８日後（１か月目、３か月目、及び７か月目の来院時）に、施設の有資格担当者が対象にインタビューを行って任意の自発ＡＥの発生を評価する。

【0285】

診療を要したＡＥ、試験中止に至ったＡＥ、ＡＥＳＩ、及びＳＡＥ
診療を要したＡＥ及び試験中止に至ったＡＥは１日目から収集し、ＡＥＳＩ及びＳＡＥはインフォームドコンセントフォームに署名した時点から収集する。これらのデータを、日誌、来院時及び安全性に関する電話連絡時の対象へのインタビュー、ならびに入手可能な医療記録の審査によって取り込む。

【0286】

書面によるインフォームドコンセント
試験に関わる全ての手順を行う前に、書面によるインフォームドコンセントを得た。

【0287】

予定対象数
本試験には合計でおよそ２１６例を登録し、用量漸増フェーズＡに２７例、用量漸増フェーズＢに１５例、用量選択フェーズＢに１０４例、センチネル拡大フェーズＣに最大７０例とする。全てのスクリーニング手順が完了したら、治験責任医師は各対象について選択／除外基準を検討して試験への登録に適格か判断する。対象のスクリーニング情報は、適切なｅＣＲＦのページに記録する。

【0288】

治験責任医師がそうする理由があると考える場合、以下に規定する臨床検査パラメーターを除き、いくつかのスクリーニング手順を一度繰り返す。

【0289】

適格な対象の再スクリーニングは、当初予定されていた用量レベルが終了し、別の用量レベルが開始する前に２８日間のスクリーニングウインドウを過ぎた場合に許可される。対象には新たなスクリーニング番号が割り当てられ、全てのスクリーニング手順が繰り返される。最初のスクリーニングで全ての登録基準を満たさなかった対象は、再スクリーニング不可とする。

【0290】

スクリーニング不合格は、同意書に署名したものの、その後、試験介入にランダムに割り付けられなかったか、または試験に登録されなかった対象として定義した。全てのスクリーニング不合格の対象について、適格性、人口統計、ＳＡＥ、及びインフォームドコンセントに関する情報を収集した。

【0291】

対象の特徴ならびに主な対象基準及び除外基準
身体検査及び病歴による判断において健康状態が良好であり、全ての指定された適格基準を満たす場合に、対象を本試験に含めた。以下に選択基準及び除外基準を示す。

【0292】

選択基準
スクリーニング時の病歴、臨床検査値、バイタルサイン測定値、及び身体検査所見による判断において、１回目ワクチン接種時に治験責任医師が健康状態良好と判断した成人対象（１８歳～４９歳）。全ての試験来院が可能で、書面によるインフォームドコンセントを提供した対象。ＢＭＩが１８～３５ｋｇ／ｍ^２の対象。試験手順を理解し、遵守に同意し、書面によるインフォームドコンセントを提供した対象。プロトコルの要件（例えば、日誌記入、追跡調査のための再来院、安全性に関する電話連絡に対応可能）を遵守することができ、かつ遵守する見込みがあると治験責任医師が判断した。

【0293】

妊娠不可能な女性対象は試験に登録することができる。妊娠不可能とは、スクリーニングの１年超前の両側卵管結紮、両側卵巣摘出、子宮摘出、閉経として定義される（用語集を参照）。閉経状態を確認するため、治験責任医師の自由裁量で卵胞刺激ホルモンレベルを測定する場合がある。妊娠可能な女性は、スクリーニング時及びワクチン接種日に妊娠検査結果が陰性でなければならず、１回目ワクチン接種の３０日前から妥当な避妊を実行するか、または妊娠につながる全ての活動を控えなければならず、最後のワクチン接種から３か月後まで妥当な避妊を継続することに同意していなければならない。男性対象は、１回目ワクチン接種の３０日前から最終ワクチン接種の３か月後まで、妥当な避妊を行うことに同意しなければならない。

【0294】

除外基準：
治験責任医師が臨床的に重要であると判断した任意の急性または慢性の疾患（免疫媒介疾患または免疫抑制状態を含む）。無症候性の状態または所見（例えば、軽度の高血圧、脂質異常症）は、適切に管理され、臨床的に安定しており、試験期間内に進行する可能性が低いと治験責任医師が判断した場合は除外しないこととした。過去１０年以内に悪性腫瘍の診断を受けたことがある（非黒色腫皮膚癌を除く）。妊娠可能な女性が、妊娠中もしくは授乳中だった、試験参加の少なくとも３０日前から妥当な避妊法を遵守していなかった、または最終ワクチン接種後少なくとも３か月間そうする予定ではなかった。妊娠可能な女性が、妊娠中もしくは授乳中だった、試験参加の少なくとも３０日前から妥当な避妊法を遵守していなかった、または最終ワクチン接種後少なくとも３か月間そうする予定ではなかった。スクリーニング血液検査値が異常（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、アラニンアミノトランスフェラーゼ、もしくはアルカリホスファターゼとして定義される肝機能検査値の上昇、またはクレアチニンの上昇もしくは血小板の減少を含む）であり、スクリーニング時の毒性スコアがグレード１以上である。これらのパラメーターの再検査は不可とした。スクリーニング時の安全性試験（血液学、化学、及び凝固）の毒性スコアがグレード２以上である。臨床的に重要でない（ＮＣＳ）グレード１の臨床検査値異常を有する対象の組み入れは、治験責任医師の判断に基づき許可された。治験ワクチンの１回目投与の３０日前以降に、治験ワクチン以外の治験薬もしくは非登録薬（薬物またはワクチン）を投与された、または試験期間中に投与の予定があった。過去に脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に関する研究試験に参加した。スクリーニング時にＢ型肝炎表面抗原、Ｃ型肝炎ウイルス抗体、またはヒト免疫不全ウイルス１型もしくは２型抗体の検査結果が陽性であった。スクリーニング時に以下の非処方薬物乱用のいずれかの尿中薬物スクリーニングが陽性であった：アンフェタミン、ベンゾジアゼピン、コカイン、メタドン、アヘン、及びフェンシクリジン。他の任意の薬物の検査結果が陽性であった場合は、対象を組み入れる前に治験責任医師の承認を必要とした。アンフェタミン、ベンゾジアゼピン、またはアヘンの尿中薬物スクリーニングが陽性であっても、その陽性結果が処方された併用薬に起因すると治験責任医師が判断した場合は除外されない。肝毒性を有する潜在可能性がある薬物を慢性的に投与していた（１回目ワクチン接種前の３か月以内の１４日超の投与として定義される）、または肝臓に影響を及ぼす他の医学的状態（例えば、アルコール乱用）を有した。特発性蕁麻疹の既往歴があった。各治験ワクチン接種の３０日前から３０日後までの間に、試験プロトコルが予見していないワクチンを投与する予定があった、または投与された。ただし、治験ワクチン接種の１５日以上前または後に投与された任意の認可済みインフルエンザワクチンは除く。１回目ワクチン投与前の６か月以内に免疫抑制剤または免疫修飾薬を慢性的に投与していた（合計１４日超として定義される）（副腎皮質ホルモンの場合、プレドニゾン２０ｍｇ／日以上または同等のものは不可とする）。吸入ステロイド、点鼻ステロイド、及び外用ステロイドは可とする。１回目治験ワクチン投与の３か月前以降に免疫グロブリン及び／または血液製剤を投与された、あるいは試験期間中に投与する予定があった。過去のワクチン接種で過敏性または重篤な反応（例えば、アナフィラキシー、蕁麻疹、医療介入を要する他の重大な反応）の既往歴があった。ＩＭ注射または静脈切開の禁忌とみなされる出血系障害を有した。スクリーニング来院時に急性の病気または発熱があった。発熱は、経口、腋窩、または鼓室経路による３８．０℃／１００．４°Ｆ以上の体温として定義される。この基準に適合する対象は、スクリーニングを後日に再スケジュールすることができる。軽症の病気を有する無熱の対象は、治験責任医師の自由裁量で登録することができる。試験への参加により対象にさらなるリスクをもたらし得る、または治験ワクチンの評価もしくは試験結果の解釈を妨げ得ると治験責任医師が判断する任意の医学的、精神医学的、または業務上の状態。スクリーニング時にＣＭＶ血清反応陽性であった対象は、用量漸増フェーズＡ及びＢ、ならびにセンチネル拡大フェーズＣのセンチネルコホートから除外する。試験担当者の直系家族または世帯員であった。投薬の３０日以内に４５０ｍＬ超の全血または血液製剤を提供した。現在抗痙攣薬が処方されている発作障害の既往歴がある。以下の項目は除外理由としなかった：発作障害の既往歴があるが、過去５年以内に発作がなく、かつ抗痙攣薬が処方されていない場合、及び小児期の熱性発作の既往歴の場合。

【0295】

治験ワクチン
ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤に含まれる６つのｍＲＮＡ薬物物質からなる。ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢは、ＬＮＰ製剤に含まれる１つのｍＲＮＡ薬物物質からなる。

【0296】

各ワクチンのＬＮＰ製剤は、４つの脂質賦形剤、すなわちイオン化可能なアミノ脂質と、市販の脂質であるコレステロールと、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンと、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロール、メトキシポリエチレングリコールとを含む。

【0297】

ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢの各々は、９３ｍＭトリス緩衝液、７％プロピレングリコール、及び１ｍＭ ＤＴＰＡ中、それぞれ１．０及び２．０ｍｇ／ｍＬの濃度で注射用無菌液体として提供する。プラセボは０．９％塩化ナトリウムとする。

【0298】

治験ワクチンは、三角筋（好ましくは利き腕でない方）に筋肉内投与した。

【0299】

評価基準
主要安全性及び反応原性評価項目：
１．各ワクチン接種後７日間の経過観察中（すなわち、ワクチン接種日及びその後の６日間）における各非自発局所性及び全身性ＡＥの発生。
２．各治験ワクチン接種後２９日間の経過観察期間中（すなわち、ワクチン接種日及びその後の２８日間）における任意の自発ＡＥの発生。
３．１日目、７日目、１か月目、２か月目、６３日目、３か月目、６か月目、１７５日目、及び７か月目の来院時の任意の臨床検査値異常の発生。
４．１日目から１８か月目までの任意の診療を要したＡＥの発生。
５．１日目から１８か月目までの任意のＡＥＳＩの発生。
６．１日目から１８か月目までの任意のＳＡＥの発生。

【0300】

副次免疫原性評価項目：
１．１日目、１か月目、３か月目、６か月目、７か月目、及び１２か月目の来院時の上皮細胞感染に対する中和抗ＣＭＶ抗体の幾何平均力価（ＧＭＴ）。
２．１日目、１か月目、３か月目、６か月目、７か月目、及び１２か月目の来院時の線維芽細胞感染に対する中和抗ＣＭＶ抗体の幾何平均力価。
３．１か月目、３か月目、６か月目、７か月目、及び１２か月目の来院時に上皮細胞感染に対する血清中和抗ＣＭＶ抗体が１日目に比べて２倍以上、３倍以上、及び４倍以上増加した対象の割合。
４．１か月目、３か月目、６か月目、７か月目、及び１２か月目の来院時に線維芽細胞感染に対する血清中和抗ＣＭＶ抗体が１日目に比べて２倍以上、３倍以上、及び４倍以上増加した対象の割合。
５．１日目、１か月目、３か月目、６か月目、７か月目、及び１２か月目の来院時に、上皮細胞感染に対する血清中和抗ＣＭＶ抗体力価がカットオフレベル（すなわち、自然ＣＭＶ感染に関連する中和抗体力価）を上回った対象の割合。
６．１日目、１か月目、３か月目、６か月目、７か月目、及び１２か月目の来院時に、線維芽細胞感染に対する血清中和抗ＣＭＶ抗体力価がカットオフレベル（すなわち、自然ＣＭＶ感染に関連する中和抗体力価）を上回った対象の割合。
７．１日目、１か月目、３か月目、６か月目、７か月目、及び１２か月目の来院時の上皮細胞及び線維芽細胞感染に対する血清中和抗体力価の逆累積分布。
８．１日目、１か月目、３か月目、６か月目、７か月目、及び１２か月目の来院時にＥＬＩＳＡによって測定した抗ｇＢ免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）の幾何平均力価。
９．１日目、１か月目、３か月目、６か月目、７か月目、及び１２か月目の来院時にＥＬＩＳＡによって測定した抗五量体ＩｇＧの幾何平均力価。

【0301】

探索的免疫原性評価項目
１．１日目、１か月目、３か月目、６か月目、７か月目、及び１２か月目の来院時にＥＬＩＳＡによって測定した抗ｇＢ及び抗五量体のアビディティー指数。
２．１日目、７日目、２か月目、６３日目、６か月目、１７５日目、及び１２か月目の来院時にＥＬＩＳＰＯＴによって定量したＩＦＮ－γを分泌するｇＢ特異的及び五量体特異的ＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞の頻度。
３．１日目、７日目、２か月目、６３日目、６か月目、１７５日目、及び１２か月目の来院時にＥＬＩＳＰＯＴによって測定したｇＢ特異的及び五量体特異的ＩｇＧメモリーＢ細胞の応答。
４．１日目、７日目、２か月目、６３日目、６か月目、１７５日目、及び１２か月目にフローサイトメトリーによって測定したｇＢ特異的及び五量体特異的な形質芽球。
５．１日目、７日目、２か月目、６３日目、６か月目、１７５日目、及び１２か月目の来院時に細胞内サイトカイン染色によって定量したＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、及び／またはＴＮＦ－αを分泌するｇＢ特異的及び五量体特異的ＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞の頻度。

【0302】

サンプルサイズの正当性：
過去の臨床試験データが利用不可能であり、臨床的に意味のある群間差が確立されていないため、サンプルサイズは、正式な仮説検定のための統計的仮定によって決定されたものではない。加えて、現時点では防御の相関のための数は不明である。しかし、ヒト血清の中和アッセイからのいくつかのデータが利用可能である。提唱された対象数は、用量漸増フェーズＡにおけるｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの安全性及び免疫原性の記述要約ならびにｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢの安全性の記述要約を提供するのに十分であった。

【0303】

対象のおよそ１０％が評価不能（すなわち、追跡調査不能、サンプル数不足、臨床検査結果の不備など）となることを予想して、およそ１９４例の評価可能な対象を得るためにおよそ２１６例の対象を登録する。ＣＭＶ血清反応陽性の対象及びＣＭＶ血清反応陰性の対象をほぼ同数で用量選択フェーズＢ及びセンチネル拡大フェーズＣの拡大コホートに登録する。

【0304】

統計的解析：
各アッセイの定量下限値（ＬＬＯＱ）未満の値をＬＬＯＱの５０％に設定する。ＧＭＴ抗体力価は対数変換（底１０）する。各試験群について、血清中和抗体のＧＭＴはその関連する９５％ＣＩと共に、対応する対数変換済み平均値及び９５％ＣＩをべき乗により算出する。

【0305】

上昇倍率：それぞれのワクチン抗原に対する血清中和抗体力価（ＥＬＩＳＡ抗体濃度）がベースラインから２倍以上、３倍以上、及び４倍以上上昇した対象の割合を、各試験群について、その両側９５％クロッパー・ピアソンＣＩと共に評価した。

【0306】

ＧＭＴの統計解析は、用量レベルを固定効果とし、ベースライン抗体レベルを共変量とした共分散モデルの解析を用いて行う。

【0307】

主要な免疫原性解析は、パープロトコルセットに基づく。最大の解析対象集団（ＦＡＳ）及びパープロトコルセットの対象数の相違（差をＰＰセットの対象総数で割ったものとして定義される）が１０％超の場合、ＦＡＳについても一次免疫原性解析を行う。

【0308】

計画された解析：統計解析は以下のように実施する。
１．来院１日目から３か月目までに収集した安全性、反応原性、及び免疫原性のデータの３か月中間解析が各試験フェーズにつき実施され得る。この解析は、フェーズＣの第１群及び第２群について別々に実施され得る。解析はクリーニング済みデータで行い、治療群レベルで報告する。７か月目及び／または１２か月目までの利用可能な安全性及び免疫原性のデータも、これらの中間解析の一部としてまとめることができる。
２．フェーズＡ、フェーズＢ、ならびにフェーズＣの第１群及び第２群については、１日目から７か月目までに収集した安全性、反応原性、及び免疫原性のデータの７か月中間解析が別々に実施され得る。解析はクリーニング済みデータで行い、治療群レベルで報告する。１２か月目までの利用可能な安全性または免疫原性のデータも、これらの中間解析の一環としてまとめられている。個々の治療割り当てへのアクセスが事前に特定した治験依頼者試験チームメンバーに制限されているため、これらは部分的に非盲検化した解析とする。治験責任医師及び現場担当者は盲検化されたままであった。
３．１日目の来院から試験終了までに収集した安全性、反応原性、及び免疫原性のデータの最終的な非盲検解析は、データベースをクリーニング及びロックした時に行う。

【0309】

ワクチン応答を調べるために、免疫原性データの追加解析を実施する場合がある。

【0310】

試験安全性監督：ＩＳＴ及び独立したＳＭＣを含む２つの安全性モニタリング委員会が、本試験の安全性を監視するために組織される。

【0311】

結果
３か月中間解析の重要な結果について以下で詳述する。

【0312】

フェーズＡ（ｎ＝２７）
●全ての用量レベルにおける試験終了（３回目ワクチン接種の１２か月後）までの全ての対象に対するｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢの安全性ならびにｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの安全性及び免疫原性
用量漸増フェーズＢ（ｎ＝１５）
●３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ用量レベルにおける７か月目（３回目ワクチン接種の１か月後）までの全ての対象に関する安全性
●３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ用量レベルにおける３か月目（２回目ワクチン接種の１か月後）までの全ての対象に関する免疫原性
用量選択フェーズＢ（ｎ＝１０４）
●３か月目（２回目ワクチン接種の１か月後）までの全ての対象に対する安全性及び免疫原性

【0313】

このフェーズＩヒト初回投与ランダム化観察者盲検プラセボ対照用量設定試験の目的は、１８～４９歳の健康な成人におけるｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの安全性及び免疫原性、ならびにｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢの安全性を評価することである。

【0314】

フェーズＡ及び用量漸増第フェーズＢの全ての対象が登録時にＣＭＶ血清反応陰性であり、用量選択フェーズＢでは、ほぼ同数の対象が登録時にＣＭＶ血清反応陰性またはＣＭＶ血清反応陽性であった。別段の明記がない限り、データは各フェーズごとにまとめている。フェーズＡについては、人口統計学及び安全性のデータをｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢまたはｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの投与ごとに別々に提示する。フェーズＢについては、人口統計データを用量漸増対象及び用量選択対象ごとに別々に提示する。フェーズＢの安全性及び免疫原性データは、用量漸増対象及び用量選択対象を合わせたものによって提示され、ＣＭＶ血清ステータス別及び全体でまとめている。

【0315】

結果の概要
人口統計
人口統計及びベースラインの特徴は、治療群ならびにフェーズＡ及びフェーズＢの全体において概ね均衡していた。女性：男性の比は、フェーズＡとフェーズＢとの間で一貫しており、およそ３：２であった。

【0316】

安全性
非自発安全性データは、各ワクチン接種の７日後まで収集した。これは非自発安全性セットに基づいている。自発事象は、各ワクチン接種の２８日後まで収集した。これは曝露セットに基づいている。

【0317】

全体的結果
フェーズＡでは、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡは、対象数が少ないものの概ね忍容性が良好で、フェーズＢのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡは、２つの低用量レベルで概ね忍容性が良好であった。

【0318】

非自発局所性有害事象
フェーズＡ
フェーズＡでは、３回の各ワクチン接種後、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡのレシピエントの最大１００％で、注射部位の痛みが最も一般的な局所症状として報告された。これは概して用量相関的であり、全てグレード１～２であった。

【0319】

フェーズＢ（用量漸増及び用量選択の統合データ）
フェーズＢ試験でも、注射部位の痛みが最も一般的な局所症状であり、１回目ワクチン接種後に対象の７６．７～１００％、２回目ワクチン接種後に対象の７４．１～８４．６％で報告され、概して用量相関的であった。１回目ワクチン接種後にグレード３の注射部位の痛みを報告した５例のうち４例がＣＭＶ血清反応陽性であり、２回目ワクチン接種後にグレード３の注射部位の痛みを報告した８例は、ＣＭＶ血清反応陰性参加者とＣＭＶ血清反応陽性参加者との間で等しく分布していた。注射部位の紅斑は、１回目ワクチン接種後に最大１５．４％の参加者、２回目ワクチン接種後に最大２１．４％の参加者で報告され、ＣＭＶ血清反応陰性及びＣＭＶ血清反応陽性のいずれの参加者でも１８０μｇ治療群により高い割合で発生した。グレード３の注射部位の紅斑の報告が１件、１８０μｇ治療群のＣＭＶ血清反応陽性の参加者で２回目ワクチン接種後に発生した。注射部位の腫脹の割合は低く、１回目ワクチン接種後に対象３例、２回目ワクチン接種後に対象１例から報告され、全ての参加者がＣＭＶ血清反応陽性であった。

【0320】

フェーズＢにおける３回目ワクチン接種後の非自発局所性ＡＥデータは、用量漸増コホートに限定する。注射部位の痛みが唯一報告されたＡＥであり、全ての用量レベルでＣＭＶ血清反応陰性対象のみに発生し、全てがグレード１～２であった。

【0321】

非自発全身性有害事象
フェーズＡ
頭痛、疲労、筋肉痛、及び関節痛が最も一般的な非自発全身性ＡＥであった。ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢのレシピエントにおいて、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢを投与した対象の非自発全身性ＡＥの割合は、概して用量相関的ではないように思われた。ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与した対象において、非自発全身性ＡＥの割合は、１回目及び２回目ワクチン接種後、９０μｇ及び１８０μｇの用量レベルで概して高かった。１回目ワクチン接種後、非自発全身性ＡＥの全体的な割合は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢ及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡのレシピエント間でほぼ同じであった。２回目ワクチン接種後の頭痛、疲労、筋肉痛、及び関節痛の割合は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢレシピエント（５０～７５％）でｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ（１６．７～３３．３％）に比べて高かった。３回目ワクチン接種後、これらのＡＥの割合は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢレシピエント（３６．４～５４．５％）とｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡレシピエント（３６．４～５４．５％）との間でほぼ同じであった。発熱が報告されたのは、ワクチン接種全体でｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡレシピエント１例のみであった。ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢレシピエントでは、発熱は２回目及び３回目のワクチン接種後にのみそれぞれ５０％と２７．３％に発生し、用量相関的ではないように思われた。また、フェーズＡにおけるグレード３非自発ＡＥの１７件全てが全身性ＡＥであり、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢを投与した対象で２回目または３回目ワクチン接種後に報告された。

【0322】

注目すべきことに、悪寒については、フェーズＡでは非自発全身性ＡＥとして報告されなかったが、フェーズＢでは非自発ＡＥとして報告された。

【0323】

フェーズＢ（用量漸増及び用量選択）
頭痛、疲労、筋肉痛、及び悪寒が最も一般的な非自発全身性ＡＥであり、これらは１回目ワクチン接種（３０．３～４８．７％）に比べて２回目ワクチン接種後に多く（５１．３～６４．７％）、用量相関的に発生し、ＣＭＶ血清反応陽性対象ではＣＭＶ血清反応陰性対象に比べてやや高い割合で発生した。

【0324】

ＣＭＶ血清反応陰性の参加者においては、非自発全身性ＡＥの割合は、１回目ワクチン接種後に比べて２回目ワクチン接種後の方が概して高かった。発熱の割合は用量相関的であり、２回目ワクチン接種後で高くなった。１回目ワクチン接種後は、ＣＭＶ血清反応陰性参加者の２％、ＣＭＶ血清反応陽性参加者の３３．３％で報告され、２回目ワクチン接種後は、ＣＭＶ血清反応陰性参加者の２３．９％、ＣＭＶ血清反応陽性参加者の４１．２％で報告された。１回目ワクチン接種後に報告されたグレード３の発熱の３例全て、ならびに２回目ワクチン接種後に報告されたグレード３の発熱の６例中５例が、ＣＭＶ血清反応陽性参加者で報告された。フェーズＢにおけるグレード３非自発全身性ＡＥ５６件のうち、１９件が１回目ワクチン接種後、３６件が２回目ワクチン接種後であった。１回目ワクチン接種後のグレード３の事象１９件のうちＣＭＶ血清反応陰性参加者で発生したのは１件のみであったが、２回目ワクチン接種後の事象５６件のうち３５件はＣＭＶ血清反応陰性参加者で発生した。ＣＭＶ血清状態に関連する２回目ワクチン接種後と比べた１回目ワクチン接種後のグレード３非自発全身性ＡＥの割合は、ＣＭＶ血清反応陽性参加者では１回目ワクチン接種で即時「ブースト」があったのに対し、ＣＭＶ血清反応陰性参加者では１回目ワクチン接種に「プライム」があった後に２回目ワクチン接種の「ブースト」があったことを反映している可能性がある。

【0325】

フェーズＢにおける３回目ワクチン接種後の非自発全身性ＡＥデータは、用量漸増コホートに限定する。１回目及び２回目のワクチン接種後と同様に、３回目ワクチン接種後でも、頭痛、疲労、筋肉痛、及び悪寒が最も高頻度に報告された非自発全身性ＡＥであった。全てのＡＥはグレード１～２であり、概して用量相関的に発生し、もっぱらＣＭＶ血清反応陰性参加者で報告された。

【0326】

対象２例が発疹を報告し（１例がＣＭＶ血清反応陰性、１例がＣＭＶ血清反応陽性）、いずれの対象も用量選択フェーズＢの１８０μｇ治療群に属した。対象のうち１例は誤って発疹を日誌に報告し、もう１例は大豆アレルギーが原因の発疹が発生し、これは治験ワクチンと無関係であるとみなした。

【0327】

この中間解析のデータカットオフ時点では、登録した対象およそ１８１例のうち、２６例がさらなるワクチン接種を中止した。治験ワクチン接種（複数可）後に発生したＡＥが原因で中止した対象９例のうち、１例を除く全員をフェーズＢ試験に登録した。そのほとんどが２回目ワクチン接種後に中止しており、およそ２／３がＣＭＶ血清反応陽性であった。対象１３例は、ＡＥ以外の理由でさらなるワクチン接種を中止し、対象４例は追跡調査不能となった。

【0328】

自発有害事象
各ワクチン接種の２８日後までの自発ＡＥ
フェーズＡでワクチン治療群にランダム化した対象２４例のうち、１８例が自発ＡＥを報告した。ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢ群では、対象９例が自発ＡＥを２５件報告し、このうち対象８例が報告した自発ＡＥ２３件を治験薬に関連するものとみなした。ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ群では、対象９例が自発ＡＥを１２件報告し、このうち対象６例が報告した自発ＡＥ５件を治験薬に関連するものとみなした。ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢのレシピエント２例及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡのレシピエント１例がグレード３自発ＡＥを報告し、これらの全てを治験薬に関連するものとみなした。試験中止に至るＡＥが発生した対象は認められなかった。最も一般的な自発ＡＥは悪寒であり、参加者１２例（７例はｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢにランダム化、５例はｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡにランダム化）で報告され、各治療群で１例以上の参加者に認められ、これらの全てを治験薬に関連するものとみなした。合計５例の対象が診療を要したＡＥを報告し（３例がｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢにランダム化、２例がｈＣＭＶ ｍＲＮＡ ワクチンＡにランダム化）、治験薬に関連するものとみなした診療を要したＡＥ２件は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢにランダム化した参加者で発生した。プラセボにランダム化した参加者１例が、診療を要した自発ＡＥを１件報告し、これは治験薬とは無関係であった。

【0329】

ワクチン治療群にランダム化したフェーズＢ参加者８９例のうち、３８例（４２．７％）が自発有害事象を９９件報告し、そのうち２２例（２４．７％）が報告した事象６８件を治験薬に関連するものとみなした。グレード３自発ＡＥを報告した参加者１２例（１３．５％）のうち、７例（７．９％）が報告した事象を治験薬に関連するものとみなした。ＣＭＶ血清反応陰性対象とＣＭＶ血清反応陽性対象との間でＡＥカテゴリーの分布にパターンまたは差は認められなかった。

【0330】

試験中止に至るＡＥが発生した対象は認められなかった。

【0331】

最も頻度の高い自発ＡＥ（疲労、関節痛、悪寒、筋肉痛、発熱）は、非自発ＡＥとして収集する基本語カテゴリーに該当するが、日誌収集ツール以外で最初に報告されたため、自発ＡＥに分類した。次に頻度の高い治験薬関連の自発ＡＥは、リンパ節症であった。自発ＡＥを報告したプラセボレシピエント７例のうち、２例がＣＭＶ血清反応陰性、５例がＣＭＶ血清反応陽性であり、ＣＭＶ血清反応陽性群のプラセボレシピエント１例が報告したＡＥ１件を治験薬に関連するものとみなした。診療を要したＡＥを報告した対象８例中６例が、ＣＭＶ血清反応陽性であり、１８０μｇ治療群のＣＭＶ血清反応陽性対象１例が報告した事象１件を、治験薬に関連するものとみなした。プラセボ群にランダム化した対象２例が診療を要した事象を報告したが、いずれもＣＭＶ血清反応陽性群の対象であり、これらの事象は治験薬とは無関係であった。

【0332】

全体では対象９例がリンパ節症状を報告した（フェーズＡで４例、フェーズＢで５例）。これらの全てを治験薬に関連するものとみなした。フェーズＡの対象４例は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢの４０μｇまたは８０μｇいずれかの治療群にランダム化された。フェーズＢでは、ＣＭＶ血清反応陰性参加者２例（９０μｇ及び１８０μｇ治療群でそれぞれ１例）ならびに１８０μｇ治療群のＣＭＶ血清反応陽性参加者３例がリンパ節症を報告した。

【0333】

本試験ではＳＡＥ及び特記されるＡＥ（ＡＥＳＩ）は発生していない。

【0334】

免疫原性
免疫原性データは、パープロトコル（ＰＰ）免疫原性セットに基づき、線維芽細胞感染に対する中和抗体（ｎＡｂ）及び上皮細胞感染に対するｎＡｂとして報告する。

【0335】

全体的結果
１回目及び２回目のワクチン接種後の血清ｎＡｂ応答は用量相関的であり、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与したフェーズＡ対象とｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与したフェーズＢ ＣＭＶ血清反応陰性対象との間で同等の大きさであった。ＣＭＶ血清反応陽性対象のｎＡｂは単回のワクチン接種によってブーストされた。

【0336】

ベースライン中和抗体
フェーズＡの全ての治療群及びフェーズＢのＣＭＶ血清反応陰性対象の全ての治療群における線維芽細胞感染及び上皮細胞感染に対するベースラインｎＡｂ ＧＭＴはＬＬＯＱ未満（８、０．５×ＬＬＯＱとして報告）であり、免疫化前の自然ＣＭＶ感染がないことが示された。

【0337】

フェーズＢのＣＭＶ血清反応陽性群では、線維芽細胞感染に対するｎＡｂのベースラインＧＭＴは１２９５．０７（９５％ＣＩ＝１０２２．３９、１６４０．４８）、上皮細胞感染に対するｎＡｂのベースラインＧＭＴは５５８８．４７（９５％ＣＩ＝４２５２．０６、７３４４．９１）であった。これらの値は、ＣＭＶ血清反応陰性群の免疫応答を比較する際の「自然ＣＭＶ感染」ベンチマークに相当する。ＣＭＶ陽性ベンチマークｎＡｂ ＧＭＴは、公表された報告［Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｖａｃｃｉｎｅ ２０１１：２９］の健康なＣＭＶ血清反応陽性集団と同等である。

【0338】

ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ中和抗体応答
フェーズＡ
フェーズＡ参加者では、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、１回目ワクチン接種後はベースラインでとどまり、２回目ワクチン接種後は用量相関的に全ての対象でベースラインの４倍以上に増加し、３回目ワクチン接種後はベースラインの４倍以上を保ち、用量レベル間でＧＭＴはほぼ同じであった。中和抗体力価の低下は、３回目用量後ゆっくりになった。上皮細胞感染に対する中和抗体は、全てのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群で３回全てのワクチン接種後にベースラインより４倍以上増加した。１２か月目（３回目ワクチン接種の６か月後）には、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴが１８０μｇ治療群で自然ＣＭＶ感染に近づき（３０、９０、及び１８０μｇ治療群でそれぞれ２５１．０、４１８．６、及び１０４７．３）、全ての用量レベルでＧＭＴ範囲が自然ＣＭＶ感染ベンチマークと重なった。１２か月目の上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、９０μｇ及び１８０μｇの用量レベルで自然ＣＭＶ感染ベンチマークを上回った（３０、９０、及び１８０μｇ治療群で、それぞれ５０７８．８、１３０８９．０、及び１８９１５．９）。血清応答（ＧＭＴがベースライン力価の４倍以上である対象のパーセンテージ）は、３か月目（２回目ワクチン接種後）及び７か月目（３回目ワクチン接種後）に、線維芽細胞及び上皮細胞感染のいずれに対するｎＡｂも共に治療群全体で１００％となり、１２か月目（３回目ワクチン接種の６か月後）も１００％で保たれた。

【0339】

フェーズＢのＣＭＶ血清反応陰性参加者
フェーズＢのＣＭＶ血清反応陰性参加者では、１回目及び２回目ワクチン接種後の線維芽細胞感染及び上皮細胞感染に対するＧＭＴは、フェーズＡのものと概ね同じであるか、またはそれを上回った。フェーズＢの線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、１回目ワクチン接種後に用量相関的に増加し、２回目ワクチン接種後にさらに用量相関的に増加して、９０μｇ及び１８０μｇ治療群で自然ＣＭＶ感染ベンチマークとほぼ同じレベル（それぞれ１１４０．６及び１２６３．６）となった。上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴも１回目ワクチン接種後に用量相関的に増加し、２回目ワクチン接種後にはさらに用量相関的に増加し、９０μｇ治療群及び１８０μｇ治療群で自然ＣＭＶ感染ベンチマークを超えるレベル（それぞれ１５，３０５．３及び３０，７４２．９）に達した。

【0340】

２回目ワクチン接種後、ベースラインに対するｎＡｂ ＧＭＴの増加は全ての用量レベルにわたってロバストであり、３０、９０、及び１８０μｇ治療群のＧＭＲはそれぞれ、線維芽細胞感染に対するｎＡｂが３８．１５、１４２．５７、及び１５７．９６、上皮細胞感染に対するｎＡｂが４０７．８６、１，９１３．１７、及び３，８４２．８７であった。３か月目の血清応答（ＧＭＴがベースライン力価の４倍以上である対象のパーセンテージ）もロバストであり、線維芽細胞感染に対するｎＡｂは３０、９０、及び１８０μｇ治療群でそれぞれ９２．９％、１００％、及び１００％の対象がベースラインの４倍以上のＧＭＴを有し、全ての治療群で１００％の対象が上皮細胞感染に対するｎＡｂを有した。

【0341】

フェーズＢのＣＭＶ血清反応陽性参加者
フェーズＢのＣＭＶ血清反応陽性対象では、１回目ワクチン接種により、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ及び上皮細胞感染に対するｎＡｂが用量相関的にブーストされ、３０、９０、及び１８０μｇ治療群でそれぞれ、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＲが２．４３、２．６６、及び２．８３、上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＲが６．８５、６．９３、及び９．２６となった。２回目ワクチン接種では、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＲが２つの高用量レベルでわずかに増加し、上皮細胞感染に対するＧＭＲが全ての用量レベルで大幅に増加し、３０、９０、及び１８０μｇ治療群でそれぞれ、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＲが２．３０、３．００、及び４．０８、上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＲが１３．１５、９．９１、及び１９．３６となった。これらの結果から、２回目ワクチン接種は、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ応答にわずかに影響を及ぼし、上皮細胞感染に対するｎＡｂ応答に大幅に影響を及ぼすことが示唆された。

【0342】

結論
これらの中間データは、以下の結論を支持するものである。

【0343】

ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡワクチンの全体的な安全性プロファイルは、認可されたワクチンと同様であるが、１８０μｇ治療群ではグレード３非自発ＡＥの割合がより高かった。ＣＭＶ血清反応陰性対象では、恐らく２回目ワクチン接種の「ブースト」効果により、１回目ワクチン接種に比べて２回目ワクチン接種後の非自発ＡＥの割合が高かった。ＣＭＶ血清反応陽性対象における１回目ワクチン接種後の非自発ＡＥの割合は、ＣＭＶ血清反応陰性対象よりも高く、自然感染個体における１回ワクチン接種後の「ブースト」効果が示唆された。自発ＡＥはリンパ節症／リンパ節痛であり、これはワクチン治療群にランダム化した対象でのみ報告され、事実上一過性であり、通常はワクチン接種後数日以内に発生し、ワクチン接種後の免疫活性化に関連し得るものであった。

【0344】

血清ｎＡｂ ＧＭＴは、各ワクチン接種後、用量相関的に増加し、フェーズＡのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与した対象及びフェーズＢのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡを投与したＣＭＶ血清反応陰性対象と数値的にほぼ同じであった。フェーズＢの２回目ワクチン接種後、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、９０μｇ及び１８０μｇ治療群で自然ＣＭＶ感染ベンチマークに近づき、上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、全ての治療群で自然ＣＭＶ感染ベンチマークを上回った。ＣＭＶ血清反応陽性の対象では、単回ワクチン接種後に中和抗体ＧＭＴが十分にブーストし、２回目ワクチン接種後には上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴがさらに増加した。フェーズＡ及びフェーズＢのＣＭＶ血清反応陰性対象において、血清応答（ＧＭＴがベースライン力価の４倍以上である対象のパーセンテージ）は２回目ワクチン接種までロバストであり、フェーズＡでは１２か月まで継続的にロバストであった。このことから、３回目ワクチン接種後少なくとも６か月までｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡに対する抗体応答が持続することを示唆するものである。

【0345】

ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの安全性及び免疫原性についての７か月中間解析
この中間解析では、以下のデータを検討及び解析した：（ｉ）用量漸増フェーズＢにおける３０、９０、及び１８０μｇ用量群ならびにプラセボの７か月目（３回目ワクチン接種の１か月後）までの安全性及び免疫原性（ｎ＝１５）、（ｉｉ）用量選択フェーズＢにおける３０、９０、及び１８０μｇ用量群及びプラセボの７か月目（３回目ワクチン接種の１か月後）までの安全性及び免疫原性（ｎ＝１０４）、（ｉｉｉ）センチネル拡大フェーズＣにおける３００μｇ用量群及びプラセボの３か月目（２回目ワクチン接種の１か月後）までの安全性及び免疫原性（ｎ＝３５）。

【0346】

免疫原性は、フェーズＢ及びフェーズＣの全ての対象において、上皮細胞及び線維芽細胞に対する中和抗体（ｎＡｂ）として報告した。ＥＬＩＳｐｏｔによりＩＦＮ－γ分泌ｇＢ特異的Ｔ細胞で測定される細胞媒介免疫原性は、用量漸増フェーズＢの対象１３例で報告された。

【0347】

結果の概要
１．人口統計
人口統計学及びベースライン特性は、フェーズＣのプラセボ群で年齢が高かった（プラセボ群４２．５±６．２歳、３００μｇ治療群３３．３±８．７歳）ことを除き、フェーズＢ及びフェーズＣの治療群で概ね均衡していた。フェーズＢ及びフェーズＣに登録した女性の割合は、治療群間で概ね一致していた。フェーズＢ及びフェーズＣ全体で、全ての治療群の少なくとも８０％が白人であった。

【0348】

２．安全性
非自発安全性データは、各ワクチン接種の７日後まで収集した。これは非自発安全性セットに基づいている。自発事象は、各ワクチン接種の２８日後まで収集した。これは曝露セットに基づいている。

【0349】

全体的に見て、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡは、概ね忍容性が良好であった。フェーズＣ（３００μｇ）ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群において、非自発副作用（ＡＲ）を報告した対象の割合は、ＣＭＶ血清反応陰性群及びＣＭＶ血清反応陽性群のいずれも、フェーズＢの１８０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群と同等であった。

【0350】

１．非自発局所性有害反応（ＡＲ）：
１回目または２回目のワクチン接種後に最も一般的に報告された局所性ＡＲは注射部位の痛みであり、概して、ＣＭＶ血清反応陰性対象でもＣＭＶ血清反応陽性対象と同じ頻度で報告され、１８０μｇまたは３００μｇのいずれのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群でも高い割合で報告された。対象は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群全体に概ね分散していた。フェーズＢの３回目ワクチン接種後の対象では、注射部位の痛みを報告した割合及び重症度が、２回目ワクチン接種後に比べて概ね減少した。注射部位の痛みは、治療群全体でプラセボレシピエントの０～１４％で報告され、グレード３重症度の者は認められなかった。

【0351】

１回目または２回目のワクチン接種後に注射部位の紅斑を報告した対象の割合は概ね低く、治療群全体での割合は、ＣＭＶ血清反応陰性対象では０～２２％、ＣＭＶ血清反応陽性対象では０～１８％の範囲であった。１回目または２回目のいずれかのワクチン接種後に注射部位の紅斑を報告した対象７例全てが、１８０μｇまたは３００μｇのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群であった。２回目ワクチン接種後、３００μｇ治療群のＣＭＶ血清反応陰性対象１例、及び１８０μｇ治療群のＣＭＶ血清反応陽性対象１例がグレード３の注射部位の紅斑を報告した。フェーズＢの３回目ワクチン接種後の対象では、３回目ワクチン接種後に注射部位の紅斑を報告した割合及び重症度は、２回目ワクチン接種に比べて大幅には増加しなかった。プラセボ群で注射部位の紅斑を報告した対象はいなかった。

【0352】

また、１回目または２回目のワクチン接種後に注射部位の腫脹を報告した対象の割合も低く、治療群全体での割合は、ＣＭＶ血清反応陰性対象では０～２５％、ＣＭＶ血清反応陽性対象で０～１４％の範囲であった。１８０μｇまたは３００μｇのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群では、１回目または２回目ワクチン接種後に注射部位の腫脹を報告した対象がより多かった。フェーズＢの３回目ワクチン接種後の対象では、注射部位の腫脹の割合は３回目ワクチン接種後も低いままであった。３００μｇ治療群のＣＭＶ血清反応陰性対象１例が、２回目ワクチン接種後にグレード３の注射部位の腫脹を報告した。プラセボ群で注射部位の腫脹を報告した対象はいなかった。

【0353】

２．非自発全身性有害反応：
頭痛、疲労、筋肉痛、及び悪寒は、全てのワクチン接種、ならびに全てのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ ＣＭＶ血清反応陰性及びＣＭＶ血清反応陽性のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群において、最も一般的な非自発全身性ＡＲであった。ＣＭＶ血清反応陽性の対象ではより多くのグレード３のＡＲが報告された。ＣＭＶ血清反応陰性対象では、グレード３ ＡＲの大半が２回目ワクチン接種後に発生したが、ＣＭＶ血清反応陽性対象では、１回目及び２回目のワクチン接種間でより均衡がとれていた。これは、ＣＭＶ血清反応陽性ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡレシピエントで１回目ワクチン接種後に即時「ブースト」があったのに対し、ＣＭＶ血清反応陰性ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡレシピエントでは１回目ワクチン接種の「プライム」後に２回目ワクチン接種の免疫学的「ブースト」があったことを反映している可能性がある。（表１及び表２を参照）

【0354】

この中間解析のデータカットオフ時点では、本試験で登録した対象１８１例のうち１０例がＡＲのためにさらなる接種を中止し、これらの対象全員に引き続き安全性のための試験における追跡調査を行った。対象１０例のうち、３例が３０μｇ治療群（このうち２例はＣＭＶ血清反応陽性）、９０μｇ治療群の対象はゼロ、５例が１８０μｇ治療群（このうち４例はＣＭＶ血清反応陽性）、１例が用量選択フェーズＢのプラセボ群のＣＭＶ血清反応陽性対象、１例がフェーズＡのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＢ治療群のＣＭＶ血清反応陰性対象であった。この１０例のうち７例は、前回の接種後にグレード３の非自発ＡＲを２件以上報告し、残りの３例は、前回の接種後にグレード２以下のＡＲを報告していた。１０例のうち１例を除き全てフェーズＢに登録し、ほとんどの対象が２回目ワクチン接種後に中止となり、大多数がＣＭＶ血清反応陽性であった。

【0355】

試験を中止した対象のうち、１１例がフェーズＢのｍＲＮＡ治療群、６例がフェーズＣのｍＲＮＡ治療群、５例がフェーズＢのプラセボレシピエントであった。対象の中止は治療群全体に分散しており、中止理由の大半は「追跡調査不能」または「対象による中止」であった。

【表1】

【表2】

【0356】

３．自発有害事象：
各ワクチン接種の２８日後までの自発ＡＥ
フェーズＣのＣＭＶ血清反応陰性プラセボレシピエント１例で、自動車事故により、７件の無関係なＳＡＥが発生した。本試験では特記されるＡＥ（ＡＥＳＩ）は発生していない。

【0357】

対象７例でリンパ節の症状が報告され、このうち６例（７％）がフェーズＢの対象であり、１例（３．４％）がフェーズＣの対象であった。７例全ての対象がｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの投与だった。７例中５例の対象が１８０μｇまたは３００μｇ治療群であった。対象７例中４例がＣＭＶ血清反応陰性であり、２回目または３回目のワクチン接種後に症状を報告し、７例中３例がＣＭＶ血清反応陽性であり、１回目または２回目のワクチン接種後に症状を報告した。全ての事象をワクチン接種に関連するものとして評価した。安全性の審査時には、このＡＥは概して軽度～中等度の重症度の一過性の腋窩腫脹±圧痛であり、常にワクチン接種した腕と同じ側に発生したものと説明された。

【0358】

臨床検査値の異常：
フェーズＢでは、以下のように安全性の臨床検査パラメーターでのベースラインからグレード３へのシフトが報告された：ヘモグロビン（プラセボレシピエント２例及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡレシピエント２例）、低血糖（ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡレシピエント２例）、高白血球（プラセボレシピエント１例）、ならびにＰＴＴ上昇（ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡレシピエント１例）。フェーズＣでは、以下のように安全性の臨床検査パラメーターでのベースラインからグレード３のシフトが報告された：ヘモグロビン（プラセボレシピエント１例及びｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡレシピエント１例）、ならびに高血糖（ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡレシピエント２例）。

【0359】

安全性の臨床検査パラメーターについて、ベースラインからグレード４へのシフトを報告した対象が２例認められた。すなわち、ベースラインでグレード３の低血糖を示したフェーズＣのプラセボレシピエント１例での低血糖、及び中間解析で報告されたように、２回目ワクチン接種の７日後に無症候性のグレード４のＰＴＴ上昇を報告した対象が１例であった。後者は関連性があるものとみなされ、試験休止のトリガーとなった。この対象は、グレード４のＰＴＴの前に、持続的なグレード１のＰＴＴ値上昇が指摘されていた。再検査したところ、この対象のＰＴＴ結果は正常限界内であった。安全性モニタリング委員会は、この事象を審査し、修正せずに試験を継続することを勧告した。

【0360】

３．免疫原性
上皮細胞感染及び線維芽細胞感染に対する中和抗体データは、パープロトコル（ＰＰ）免疫原性セットに基づいており、幾何平均力価（ＧＭＴ）及び幾何平均比（ＧＭＲ、ベースライン／ベースライン後の力価の比として定義される）として報告した。マイクロ中和アッセイでは、上皮細胞感染に対するｎＡｂ力価の測定用にはＣＭＶ単離株ＶＲ１８１４及びＡＲＰＥ－１９細胞を利用し、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ力価の測定用にはＣＭＶ単離株ＡＤ１６９及びＨＥＬ２９９細胞を利用した。

【0361】

細胞媒介免疫原性データは、細胞媒介免疫原性セットに基づき、ＳＦＣ／１０^６ＰＢＭＣとして報告した。

【0362】

１．全体的結果
ＣＭＶ血清反応陰性対象では、血清ｎＡｂ力価は、最初の２回のワクチン接種後はｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの用量と共に増加し、フェーズＢの３回目ワクチン接種後も引き続き増加した。ＣＭＶ血清反応陽性対象では、全てのｈＣＭＶ ｍＲＮＡ ワクチンＡ治療群で単回ワクチン接種によって用量相関的にｎＡｂ力価がブーストし、フェーズＢの２回目及び３回目のワクチン接種後、ならびにフェーズＣの２回目ワクチン接種後にさらにブーストした。フェーズＢ用量漸増対象では、全ての用量レベルでワクチン接種後のｇＢ特異的Ｔ細胞活性化が観察された。

【0363】

上皮細胞感染及び線維芽細胞感染に対する中和抗体は、ＣＭＶ血清反応陰性及びＣＭＶ血清反応陽性のいずれの参加者においても、７か月目（３回目ワクチン接種から１か月後）まで、各ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群内で用量相関的に増加し、後続のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの接種に伴って増加した。

【0364】

１２か月目（３回目ワクチン接種から６か月後）のＣＭＶ血清反応陰性参加者において、上皮感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、自然感染ベンチマークの少なくとも３．５倍で保たれ、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、９０μｇ群及び１８０μｇ群で自然感染ベンチマークの値に近似していた。１２か月目のＣＭＶ血清反応陽性参加者において、上皮感染に対するｎＡｂ ＧＭＲはベースラインに対し１４倍～３１倍、線維芽細胞感染に対してはベースラインに対し６倍～８倍であった。

【0365】

２．自然ＣＭＶ感染中和抗体力価ベンチマーク：
フェーズＢ及びＣにおける全パープロトコルＣＭＶ血清反応陽性対象のベースラインｎＡｂ ＧＭＴを、ＣＭＶ血清反応陰性群の免疫応答と比較する「自然感染」ベンチマーク値として使用した。上皮細胞感染に対するベンチマークｎＡｂ ＧＭＴは５，９１７（９５％ＣＩ ４６４４、７５４０）、線維芽細胞感染に対するベンチマークｎＡｂ ＧＭＴは１，４４９（９５％ＣＩ １１６７、１８００）であった。これらの値は、健康なＣＭＶ血清反応陽性集団と同等である。（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｖａｃｃｉｎｅ ２０１１：２９．）

【0366】

全てのＣＭＶ血清反応陰性治療群における線維芽細胞感染及び上皮細胞感染に対するベースラインｎＡｂ ＧＭＴはＬＬＯＱ未満（８、０．５×ＬＬＯＱとして報告）であり、免疫化前の自然ＣＭＶ感染がないことが示された。

【0367】

３．ＣＭＶ血清反応陰性対象：
フェーズＢ及びフェーズＣの全ての治療群における線維芽細胞感染及び上皮細胞感染に対するベースラインｎＡｂ ＧＭＴは定量下限値（ＬＬＯＱ）を下回り、これを８（０．５×ＬＬＱＱ）として報告し、登録前の自然ＣＭＶ感染がないことが示された。中和抗体応答は、フェーズＢでは３回のワクチン接種の各接種後、フェーズＣでは最初の２回のワクチン接種後に報告された（表３、図１０、図１１）。

【0368】

上皮細胞感染に対する中和抗体ＧＭＴは、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群では、用量相関的に増加し、またその後の各ワクチン接種後に増加した。２回目ワクチン接種の１か月後、上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、及び３００μｇ治療群において、それぞれ３，２６３、１５，３０５、３０，７４３、及び４３，５６４となり、９０μｇ、１８０μｇ、及び３００μｇ治療群の自然感染ベンチマークを上回った。３回目ワクチン接種の１か月後、上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群において、それぞれ１６，５８７、６３，９２９、及び６２，１１８までさらに増加し、全てのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群で自然感染ベンチマークを上回った。

【0369】

線維芽細胞感染に対する中和抗体は、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群では、概して用量相関的に増加し、またその後の各ワクチン接種後に増加した。３回目ワクチン接種の１か月後、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群において、それぞれ１，１３１、１，８９０、及び２，０２９となり、９０μｇ、１８０μｇ治療群の自然感染ベンチマークを上回った。

【0370】

２回目ワクチン接種の１か月後には、上皮細胞感染に対するｎＡｂ血清応答（ｎＡｂ力価がベースライン力価の４倍以上である対象のパーセンテージ）は、フェーズＢ及びフェーズＣ全体において全ての治療群の対象で１００％達成され、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ血清応答は、３０μｇ治療群の対象で９３％、９０μｇ、１８０μｇ、及び３００μｇ治療群の対象で１００％達成された。

【0371】

表３、図１２、及び図１３は、フェーズＢ治療群における１２か月目までのｎＡｂデータをまとめたものである。７か月目（３回目ワクチン接種の１か月後）には、上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群において、１６，５８７（９５％ＣＩ ９，１８６；２９，９５２）、６３，９２９（９５％ＣＩ ３８，４４１；１０６，３１７）、及び６２，１１８（９５％ＣＩ ３３，８２９；１１４，０６５）となり、自然感染ベンチマークより２．８倍、１０．８倍、及び１０．５倍高いＧＭＴに相当した。１２か月目（３回目ワクチン接種の６か月後）には、ＧＭＴは、３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群において、それぞれ６，４１４（９５％ＣＩ ３，４５７；１０，９０８）、２１，２１１（９５％ＣＩ １３，６８９；３２，８６５）、及び２３，０２０（９５％ＣＩ １２，４７３；４２，４８４）となり、最終ワクチン接種から６か月後の９０μｇ及び１８０μｇ治療群の自然感染ベンチマークよりも３．６倍及び３．９倍高く維持されていることが示された（表３）。

【0372】

７か月目（３回目ワクチン接種の１か月後）には、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群において、１，１３１（９５％ＣＩ ５３１；２，４０８）、１，８９０（９５％ＣＩ ９１８；３，８９０）、及び２，０２９（９５％ＣＩ １，０４２；３，９５３）となり、９０μｇ及び１８０μｇ治療群においては自然感染ベンチマークを１．３倍～１．４倍上回った。１２か月目（３回目ワクチン接種から６か月後）には、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは、３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群において、９１１（９５％ＣＩ ４５７；１，８１６）、９７０（９５％ＣＩ ５１６；１，８２３）、及び１，３０８（９５％ＣＩ ６８０；２，５１８）となり、最終ワクチン接種の６か月後の９０μｇ及び１８０μｇ治療群においては自然感染ベンチマークに近似していた（表３）。

【0373】

１２か月目には、３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群において、上皮細胞感染に対するｎＡｂ及び線維芽細胞感染に対するｎＡｂはいずれも、ベースラインの４倍以上の個別の力価が１００％の参加者で維持された。

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【0374】

４．ＣＭＶ血清反応陽性対象：
上皮細胞感染に対するベースラインｎＡｂ ＧＭＴは、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群で３，６１４～７，１７９、プラセボ群で６，９００～８，１６９であり、登録前の自然ＣＭＶ感染の存在が示された。中和抗体応答は、フェーズＢでは３回ワクチン接種後、フェーズＣでは最初の２回のワクチン接種後にそれぞれ報告された（表４、図１０、図１１）。

【0375】

１回目ワクチン接種では、全てのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群で用量相関的にｎＡｂがブーストし、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、及び３００μｇ治療群でそれぞれ、上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴが２４，７５２、３９，０２０、５２，７７５、及び８４，６２８、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴが２，６５４、３，８８５、３，８７９、及び５，４１９となった。その後のワクチン接種によってｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群全体でさらにｎＡｂがブーストし、２回目ワクチン接種の１か月後には、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、及び３００μｇ治療群でそれぞれ、上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴが４９，３９０、６２，４００、１１９，８２９、及び１５６，５８３、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴが２，５１７、３，８９１、５，５７８、及び７，７８８となった。３回目ワクチン接種の１か月後には、３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群でそれぞれ、上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴが７６，９１４、１４１，０２０、及び２１１，５０３、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴが３，４１２、８，４３３、及び６，０９８となった。

【0376】

これに伴い、ＧＭＲも増加した。２回目ワクチン接種の１か月後には、３０μｇ、９０μｇ、１８０μｇ、及び３００μｇ治療群でそれぞれ、上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＲが１４．４、９．９、１９．４、及び１７．３、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＲが２．５、３．０、４．１、及び３．８となった。３回目ワクチン接種後には、３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群でそれぞれ、上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＲが２６．２、２２．４、及び４０．８、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＲが４．０、６．５、及び３．９となった。

【0377】

表４は、フェーズＢ治療群のＣＭＶ血清反応陽性参加者における１２か月目までのｎＡｂデータをまとめたものである。７か月目（３回目ワクチン接種の１か月後）の上皮細胞感染に対するｎＡｂｓ ＧＭＴは、３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群で、７６，９１４（９５％ＣＩ ４９，００１；１２０，７２７）、１４１，０２０（９５％ＣＩ ５７，６４９；３４４，９６０）、及び２１１，５０３（９５％ＣＩ ５８，２０７；７６８，５２５）となり、これに対応するＧＭＲは２６．２、２２．４、及び４０．８となった。１２か月目（３回目ワクチン接種の６か月後）のＧＭＴは、３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群でそれぞれ、４４，１８６（９５％ＣＩ ２６，２８１；７４，２８７）、８７，９９９（９５％ＣＩ ４４，０１２；１７５，９４８）、及び１６２，７４９（９５％ＣＩ ６９，５２９；３８０，９５３）となり、その結果、最終接種の６か月後のＧＭＲはそれぞれ、１４．６、１３．９８、及び３１．４となった（表４）。

【0378】

７か月目（３回目ワクチン接種の１か月後）の線維芽細胞感染に対するｎＡｂｓ ＧＭＴは、３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群でそれぞれ、３，４１２（９５％ＣＩ １，９２４；６，０５２）、８，４３３（９５％ＣＩ ６，５８２；１０，８０４）、及び６，４２７（９５％ＣＩ ３，４２６；１２，０５７）となり、その結果、７か月目の時点でのＧＭＲは４～６．５の範囲となった。１２か月目（３回目ワクチン接種から６か月後）には、ＧＭＴは、３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群でそれぞれ、７，１７０（９５％ＣＩ ４，０５２；１２，６８６）、７，６４０（９５％ＣＩ ４，６０２；１２，６８５）、及び１０，０３０（９５％ＣＩ ７，５７７；１３，２７６）となり、その結果、３回目ワクチン接種後のＧＭＲはそれぞれ、８．１、５．９、及び６．３となった（表４）。

【0379】

全ての参加者について、１２か月目のｎＡｂデータを、それ以前の全ての時点（ベースラインから７か月目まで）のｎＡｂデータを生成するアッセイ実行とは別のアッセイ実行で生成した。ＣＭＶ血清反応陽性の４つのフェーズＢ治療群のうち、３つの群（３０μｇ及び１８０μｇ ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡならびにプラセボ）では、１２か月目の線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＴは７か月目に比べて高い傾向にあり、一方、上皮細胞に対するｎＡｂ ＧＭＴは低い傾向にあった（表４）。

【表4-1】

【表4-2】

【表4-3】

【0380】

５．細胞媒介免疫原性
ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡは、用量漸増フェーズＢの対象１３例の小さなサブセット（３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群）において、検出可能なｇＢ特異的Ｔ細胞応答を引き出した。２回目ワクチン接種から１週間後、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群全体の平均応答は、１５３～７２０ＳＦＣ／１０^６ＰＢＭＣであった（ベースラインに対する平均応答１４６～６８７ＳＦＣ／１０^６ＰＢＭＣ）。３回目ワクチン接種から１週間後、治療群全体の平均応答は７２～９７１ＳＦＣ／１０^６ＰＢＭＣであった（ベースラインに対する平均応答６５～９２２ＳＦＣ／１０^６ＰＢＭＣ）。

【0381】

結論
これらの中間データは、以下の結論を支持するものである。

【0382】

安全性の結論：
ａ．非自発全身性ＡＲの全体的な割合は、概して、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ用量に伴って１８０μｇまで数値的に増加し、１８０μｇ及び３００μｇの治療群間では概してほぼ同じであった。
ｂ．概して、ＣＭＶ血清反応陽性対象は、ＣＭＶ血清反応陰性対象に比べて非自発ＡＲを報告する割合が高かった。
ｃ．ＣＭＶ血清反応陰性対象では、１回目ワクチン接種に比べ２回目ワクチン接種後の非自発ＡＲの出現頻度が概ね数値的に高く、臨床的徴候として考えられるのは、１回目ワクチン接種の「プライム」後の２回目ワクチン接種による免疫学的「ブースト」効果である。
ｄ．ＣＭＶ血清反応陽性対象では、１回目ワクチン接種後に非自発ＡＲの頻度が概ね数値的に高くなった。これは、登録前にＣＭＶ自然感染歴を有する対象で免疫学的な「ブースト」効果が臨床的に発現した可能性がある。
ｅ．対象７例がワクチン接種を受けた腕と同側の一過性の軽度～中等度の腋窩リンパ節症状を報告したが、これはワクチンが誘導した免疫活性化の良性の臨床所見に相当する可能性がある。
ｆ．３回目ワクチン接種後のＣＭＶ血清反応陰性参加者では、非自発局所性及び全身性ＡＲの頻度は、３００μｇ治療群の方が１８０μｇ治療群に比べて概して高かった。重篤な非自発ＡＲを報告した参加者の割合は、１８０μｇ及び３００μｇの治療群間でほぼ同じであった。
ｇ．３回目ワクチン接種後のＣＭＶ血清反応陽性の参加者において、非自発局所性及び全身性ＡＲの頻度は、３００μｇ治療群と１８０μｇ治療群とを比べて全体的な差は認められなかった。重篤な非自発ＡＲを報告した参加者の割合は、３００μｇ治療群の方が１８０μｇ治療群に比べて概して数値的に高かった。

【0383】

免疫原性の結論：
ａ．上皮細胞感染に対する中和抗体（インタクトＣＶ五量体に対する免疫応答の尺度）及び線維芽細胞感染に対する中和抗体（ＣＭＶ ｇＢ抗原に対する免疫応答の尺度）は用量相関的に応答し、各ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群内で後続のｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの接種に伴って増加した。
ｂ．上皮細胞感染に対する中和抗体応答はロバストであった。ＣＭＶ血清反応陰性対象では、２回目ワクチン接種の１か月後に９０μｇ、１８０μｇ、及び３００μｇ治療群で、ならびに３回目ワクチン接種後に全てのフェーズＢ治療群で、ＧＭＴが自然感染ベンチマークを上回った。ＣＭＶ血清反応陽性対象では、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの単回接種でｎＡｂ ＧＭＴが用量相関的にブーストし、２回目ワクチン接種後には全てのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群にわたってＧＭＴがベースラインの１０倍～１９倍、３回目ワクチン接種後にはフェーズＢのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群でＧＭＴがベースラインの最大４０倍さらに増加した。
ｃ．線維芽細胞感染に対する中和抗体応答は用量相関的であり、その後のワクチン接種に伴って増加した。ＣＭＶ血清反応陰性対象では、ｎＡｂ ＧＭＴは、９０μｇ、１８０μｇ、及び３００μｇ治療群で２回目ワクチン接種後に自然感染ベンチマークを概ね満たし、フェーズＢの全てのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群で３回目ワクチン接種後に自然感染ベンチマークを概ね満たすかまたはそれを上回った。ＣＭＶ血清反応陽性対象では、ｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡの単回接種でＧＭＴが用量相関的にブーストし、２回目ワクチン接種では、全てのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群にわたってＧＭＲに対するｎＡｂ力価がベースラインより少なくとも２．５倍さらにブーストし、３回目ワクチン接種後には、フェーズＢのｈＣＭＶ ｍＲＮＡワクチンＡ治療群でＧＭＲに対し少なくとも３．９倍ブーストした。
ｄ．ワクチン接種後のｇＢ特異的Ｔ細胞活性化が、フェーズＢの用量レベル全体で観察された。
ｅ．フェーズＢのＣＭＶ血清反応陰性参加者において、１２か月目（３回目ワクチン接種の６か月後）には、上皮細胞感染に対するｎＡｂのＧＭＴ（インタクトＣＭＶ五量体抗原に対する免疫応答の尺度）が９０μｇ及び１８０μｇ治療群で自然感染ベンチマークよりも３．６倍及び３．９倍高く、線維芽細胞感染に対するｎＡｂのＧＭＴ（ＣＭＶ ｇＢ抗原に対する免疫応答の尺度）が９０μｇ治療群及び１８０μｇ治療群で自然感染ベンチマークに近似していた。
ｆ．フェーズＢのＣＭＶ血清反応陽性対象の１２か月目（３回目ワクチン接種の６か月後）において、上皮細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＲは３０μｇ、９０μｇ、及び１８０μｇ治療群全体で１４～３１の範囲、線維芽細胞感染に対するｎＡｂ ＧＭＲは６～８の範囲であった。

【0384】

配列
本明細書に記載の任意のｍＲＮＡ配列が５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲを含み得ることを理解されたい。ＵＴＲ配列は、以下の配列から選択することができるが、その他の既知のＵＴＲ配列を使用してもよい。また、本明細書に記載の任意のｍＲＮＡコンストラクトがさらに、ポリＡテール及び／またはキャップ（例えば、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ）を含み得ることを理解されたい。さらに、本明細書に記載のいくつかのｍＲＮＡ及びコードされた抗原配列がシグナルペプチド及び／またはペプチドタグ（例えば、Ｃ末端Ｈｉｓタグ）を含み得るが、示されたシグナルペプチド及び／またはペプチドタグが、異なるシグナルペプチド及び／またはペプチドタグに置換されても、シグナルペプチド及び／またはペプチドタグが省略されてもよいことを理解されたい。
５’ＵＴＲ：ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号１３）
３’ＵＴＲ：ＵＧＡＵＡＡＵＡＧＧＣＵＧＧＡＧＣＣＵＣＧＧＵＧＧＣＣＡＵＧＣＵＵＣＵＵＧＣＣＣＣＵＵＧＧＧＣＣＵＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＵＣＣＵＣＣＣＣＵＵＣＣＵＧＣＡＣＣＣＧＵＡＣＣＣＣＣＧＵＧＧＵＣＵＵＵＧＡＡＵＡＡＡＧＵＣＵＧＡＧＵＧＧＧＣＧＧＣ（配列番号１４）

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【表5-4】

【表5-5】

【表5-6】

【表5-7】

【表5-8】

【表5-9】

【表5-10】

【表5-11】

【表5-12】

【表5-13】

【表5-14】

【表5-15】

【表5-16】

【表5-17】

【表5-18】

【0385】

同義語
本明細書に開示する全ての参考文献、特許、及び特許出願は、各々が引用されている主題に関し、参照によって本明細書に援用され、場合によってはそれが文書全体を包含することもある。

【0386】

本明細書において、明細書中及び請求項中の「ａ」及び「ａｎ」という不定冠詞は、反対のことが明確に示されない限り、「少なくとも１つの」を意味するものと理解すべきである。

【0387】

また、明確に反対のことが示されない限り、本明細書で特許請求される２つ以上のステップまたは行為を含む任意の方法において、当該方法のステップまたは行為の順序は、必ずしも当該方法のステップまたは行為が記載されている順序に限定されるとは限らない。

【0388】

請求項及び上記明細書において、全ての移行句、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」「保有する（ｃａｒｒｙｉｎｇ）」「有する（ｈａｖｉｎｇ）」「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」「伴う（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」「保持する（ｈｏｌｄｉｎｇ）」「～から構成される（ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ）」などはオープンエンドであること、すなわち後に続くものを含むがそれに限定されないことを意味するものと理解されるべきである。「～からなる」「～から本質的になる」という移行句のみが、米国特許商標庁審査基準の２１１１．０３節に記載のように、それぞれクローズドまたはセミクローズドな移行句であるものとする。

【0389】

数値の手前にある「約」及び「実質的に」という用語は、記載された数値の±１０％を意味する。

【0390】

値の範囲が示される場合、範囲の上端と下端との間の各値は、本明細書において具体的に企図され記載されている。

【図1-1】

【図1-2】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【配列表】

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【国際調査報告】