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特表2022-547331癌標的薬物ビヒクルとしてのリン脂質エーテルコンジュゲート
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-11-11
(54)【発明の名称】癌標的薬物ビヒクルとしてのリン脂質エーテルコンジュゲート
(51)【国際特許分類】
C07F 9/09 20060101AFI20221104BHJP
C07H 15/203 20060101ALI20221104BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20221104BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20221104BHJP
A61K 47/54 20170101ALI20221104BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20221104BHJP
A61K 47/65 20170101ALI20221104BHJP
A61K 31/505 20060101ALI20221104BHJP
A61K 38/07 20060101ALI20221104BHJP
A61K 31/47 20060101ALI20221104BHJP
A61K 31/343 20060101ALI20221104BHJP
C12N 9/99 20060101ALI20221104BHJP
【ＦＩ】
C07F9/09 V
C07H15/203 CSP
A61P35/00
A61P35/04
A61K47/54
A61K45/00
A61K47/65
A61K31/505
A61K38/07
A61K31/47
A61K31/343
C12N9/99
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022516159
(86)(22)【出願日】2020-09-11
(85)【翻訳文提出日】2022-05-10
(86)【国際出願番号】 US2020050459
(87)【国際公開番号】W WO2021050917
(87)【国際公開日】2021-03-18
(31)【優先権主張番号】62/956,907
(32)【優先日】2020-01-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/899,615
(32)【優先日】2019-09-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/956,844
(32)【優先日】2020-01-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/899,611
(32)【優先日】2019-09-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/946,870
(32)【優先日】2019-12-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/899,618
(32)【優先日】2019-09-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】517171163
【氏名又は名称】セレクター・バイオサイエンシズ・インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100117019
【弁理士】
【氏名又は名称】渡辺 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100141977
【弁理士】
【氏名又は名称】中島 勝
(74)【代理人】
【識別番号】100138210
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 達則
(72)【発明者】
【氏名】ジャロッド ロングカー
(72)【発明者】
【氏名】アナトリー ピンチュク
(72)【発明者】
【氏名】ランドル フーバー
(72)【発明者】
【氏名】チョンピン ホアン
【テーマコード（参考）】
4C057
4C076
4C084
4C086
4H050
【Ｆターム（参考）】
4C057AA18
4C057BB02
4C057CC01
4C057DD01
4C057JJ23
4C076AA95
4C076BB11
4C076CC27
4C076CC41
4C076EE59
4C076FF70
4C084AA02
4C084AA07
4C084AA17
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA16
4C084BA23
4C084BA31
4C084BA44
4C084MA05
4C084NA13
4C084NA14
4C084ZB26
4C084ZC20
4C084ZC41
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BA05
4C086BC28
4C086BC42
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA13
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZC20
4H050AA01
4H050AA03
4H050AB28
(57)【要約】
本発明では、広範囲の腫瘍細胞を標的にすることができる治療用化合物が開示される。本開示は、治療用化合物を含む組成物、治療用化合物の製造方法、および治療用化合物を投与することを含む癌治療方法をさらに対象とする。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記化学式（Ｉ）の化合物、【化1】
（式中、ｎは２～２０であり；
Ｑ1は結合または下記化学式
【化2】
Ｌは下記化学式
【化3】
Ｑ2は結合または自壊性（self-immolative）スペーサーであり；および
Ｚは抗癌剤である）、
化学式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
Ｑ1が結合または下記化学式【化4】
Ｌ－Ｑ2が下記化学式
【化5】
【請求項3】
Ｚがポロ様キナーゼ１（ＰＬＫ－１）阻害剤、チューブリンポリメラーゼ阻害剤、チューブリン安定化剤、抗腫瘍薬、真核生物翻訳開始因子４（ＥＩＦ４）阻害剤、コンブレタスタチンＡ－４アナログ、またはフラバグリンアナログである、請求項１から２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項4】
Ｑ1が下記化学式【化6】
Ｌ－Ｑ2が下記化学式
【化7】
および
ＺがＰＬＫ－１阻害剤、チューブリンポリメラーゼ阻害剤、チューブリン安定化剤、抗腫瘍薬、または真核生物翻訳開始因子４（ＥＩＦ４）阻害剤である、化学式（Ｉ－ａ）の構造を有する、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項5】
ＺがモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、およびモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＤ）からなる群から選択されるＰＬＫ－１阻害剤または抗腫瘍薬である、請求項４に記載の化合物。
【請求項6】
ｎが１８であり；Ｑ1が下記化学式
【化8】
Ｌ－Ｑ2が下記化学式
【化9】
ＺがコンブレタスタチンＡ－４アナログである、
化学式（Ｉ－ｂ）の構造を有する、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項7】
ｎが１８であり；Ｑ1が結合または下記化学式
【化10】
Ｌ－Ｑ2が下記化学式
【化11】
Ｚがフラバグリンアナログである、
化学式（Ｉ－ｃ）の構造を有する、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項8】
下記化学式【化12-1】
【化12-2】
【化12-3】
【請求項9】
請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、およびその薬学的に許容されるキャリアを含む、医薬組成物。
【請求項10】
請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を有効量で投与することを含む、癌治療を必要とする対象の癌治療方法。
【請求項11】
前記癌がメラノーマ、肺癌、大腸癌、乳癌、またはその組み合わせである、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記肺癌が小細胞肺癌、非小細胞性肺癌、またはその組み合わせを含み；前記メラノーマが、表在拡大型（superficial spreading）メラノーマ、結節型（nodular）メラノーマ、悪性黒子型（lentigo）メラノーマ、末端黒子型（acral lentiginous）メラノーマ、無色素性(amelanotic)メラノーマ、母斑様（nevoid）メラノーマ、スピッツ（spitzoid）メラノーマ、線維形成性（desmoplastic）メラノーマ、またはその組み合わせを含み、
前記大腸癌が、腺癌を含み；または
前記乳癌が、浸潤性乳管癌、転移性乳癌、炎症性乳癌、トリプルネガティブ乳癌、非浸潤性乳管癌、またはその組み合わせを含む、
請求項１０から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記癌が癌幹細胞を含む、請求項１０から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記癌が転移性癌細胞を含む、請求項１０から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記癌が循環腫瘍細胞を含む、請求項１０から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記癌がメラノーマ、肺癌、大腸癌、またはその組み合わせであり、および前記化合物が化学式（Ｉ－ａ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１０から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記癌が乳癌であり、ここで前記対象（１）がエストロゲン受容体陽性であり、（２）がエストロゲン受容体陰性かつプロゲステロン受容体陰性の両方であり、（３）がＨＥＲ２を発現し（ＨＥＲ２＋）、（４）がＨＥＲ２を発現していない（ＨＥＲ２－）、またはその組み合わせである、請求項１０から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記癌が乳癌であり、および前記化合物が化学式（Ｉ－ｂ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１０から１５および１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記癌が、癌がメラノーマ、肺癌、大腸癌、乳癌、またはその組み合わせであり、および前記化合物が化学式（Ｉ－ｃ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１０から１５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／８９９，６１１号、２０１９年９月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／８９９，６１５号、２０１９年９月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／８９９，６１８号、２０１９年１２月１１日に出願された米国仮特許出願第６２／９４６，８７０号、２０２０年１月３日に出願された米国仮特許出願第６２／９５６，８４４号、および２０２０年１月３日に出願された米国仮特許出願第６２／９５６，９０７号の優先権を主張し、その内容は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１９年９月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／８９９，６１１号、２０１９年９月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／８９９，６１５号、２０１９年９月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／８９９，６１８号、２０１９年１２月１１日に出願された米国仮特許出願第６２／９４６，８７０号、２０２０年１月３日に出願された米国仮特許出願第６２／９５６，８４４号、および２０２０年１月３日に出願された米国仮特許出願第６２／９５６，９０７号の優先権を主張し、その内容は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
分野
本開示は、広範囲の腫瘍細胞を標的にできる治療用化合物に関する。本開示は、治療用化合物を含む組成物、治療用化合物の製造方法、および治療用化合物を投与することを含む癌治療方法をさらに対象とする。
本開示は、広範囲の腫瘍細胞を標的にできる治療用化合物に関する。本開示は、治療用化合物を含む組成物、治療用化合物の製造方法、および治療用化合物を投与することを含む癌治療方法をさらに対象とする。
【背景技術】
【0003】
イントロダクション
２０１８年、世界中で１，８００万人が癌と診断され、および９６０万人が癌で死亡した。米国では、全人口の大体４０％が彼らの生涯の間に癌と診断されることになる。２０１８年現在、肺癌（２０９万例）、乳癌（２０９万例）、大腸癌（１８０万例）、前立腺癌（１２８万例）、皮膚癌（非メラノーマ）（１０４万例）、および胃癌（１０３万例）は最も一般的な種類の癌である。多くの利用可能な治療があるにもかかわらず、癌は依然として世界で２番目に多い死因である。
２０１８年、世界中で１，８００万人が癌と診断され、および９６０万人が癌で死亡した。米国では、全人口の大体４０％が彼らの生涯の間に癌と診断されることになる。２０１８年現在、肺癌（２０９万例）、乳癌（２０９万例）、大腸癌（１８０万例）、前立腺癌（１２８万例）、皮膚癌（非メラノーマ）（１０４万例）、および胃癌（１０３万例）は最も一般的な種類の癌である。多くの利用可能な治療があるにもかかわらず、癌は依然として世界で２番目に多い死因である。
【0004】
癌は細胞分裂の結果であるが、これに限定されるものではない。健常細胞は無制限の細胞分裂を防ぐチェックポイントを有する。これらのチェックポイントのいくつかの例には、栄養素利用性(nutrient availability）、ＤＮＡ損傷および接触阻害（すなわち、細胞が別の細胞と接触する）がある。さらに、ほとんどの細胞は有限の回数しか複製できないことから、特定の回数の細胞分裂後に死亡するようにプログラムされている。
【0005】
癌は、これらの固有のチェックポイントを克服し、そして制御できないほど増殖した結果の細胞である。この制御されていない増殖は、腫瘍の形成をもたらす。腫瘍には、良性および悪性の２種類がある。良性腫瘍は組織種類間の自然な境界を乗り越えることができない。一方で、悪性腫瘍は近くの組織に浸潤し、または血中に入り、異なる部位に転移することができる。悪性腫瘍のみが癌とみなされる。癌をこのような致命的な疾患にするのはこの浸潤および転移の能力である。さらに、脂質代謝は癌転移に大きな役割を担うことがある。癌細胞は根本的に変化した細胞代謝をしばしば示す。しかしながら、悪性癌の発症における脂質代謝の役割は不明なままである。
【0006】
癌に対する闘いをさらに複雑にしていることは、悪性腫瘍は性質が異なる細胞の種類を有することである。特に厄介な種類の一つが癌幹細胞（「ＣＳＣ'ｓ」）である。ＣＳＣ'ｓは、自己複製し、そして悪性腫瘍に見られる異なる種類の癌細胞に分化することができる。したがって、ＣＳＣ'ｓは、腫瘍の転移能における主要な要因である。ＣＳＣ'ｓは、しばしば放射線および化学療法で生き残る。放射線および化学療法後の癌の再発は、放射線および化学療法がすべてのＣＳＣ'ｓを殺すことができないことと、ＣＳＣ'ｓが新しい腫瘍を形成する能力が組み合わさった結果であると仮説が立てられる。
【0007】
化学療法とは、細胞傷害性抗癌剤を使用することを含む特定の種類の癌治療を説明するために使用される用語である。化学療法中に使用される細胞傷害性薬はアルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、および有糸分裂阻害剤を含むいくつかの主要なカテゴリーに分類することができる。細胞傷害性抗癌剤は、典型的には細胞分裂を停止させ、したがって健常組織ならびに癌組織にも影響を及ぼす。アルキル化剤は癌細胞のＤＮＡを損傷することにより癌細胞の分裂を停止する。癌治療に使用されるいくつかの一般的なアルキル化剤には、ナイトロジェンマスタード（例えば、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）；シトキサンはＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌの登録商標である）、ニトロソウレア、アルキルスルホネート、トリアゼイン、およびエチレンイミンがある。シスプラチンおよびカルボプラチンなどのプラチナ薬は、アルキル化剤と同様に作用する。代謝拮抗剤はＤＮＡおよびＲＮＡ合成を阻害することにより癌細胞の分裂を停止する。癌治療に使用されるいくつかの一般的な代謝拮抗剤には、６－メルカプトプリン、ゲムシタビン（ジェムザール（登録商標）；ジェムザールはＥｌｉＬｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙの登録商標である）、メトトレキサートおよびペメトレキセド（アリムタ（登録商標）；アリムタはＥｌｉＬｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙの登録商標である）がある。トポイソメラーゼ阻害剤には、トポイソメラーゼ酵素が複製のためにＤＮＡを分離するのを阻害することにより、癌細胞の分裂を停止する。いくつかの一般的なトポイソメラーゼ阻害剤には、トポテカン、イリノテカン、エトポシド、およびテニポシドがある。有糸分裂阻害剤は、主要な細胞分裂酵素を阻害することにより、癌細胞の分裂を停止する。いくつかの一般的な有糸分裂阻害剤には、タキサン類（例えば、パクリタキセル（タキソール（登録商標）；タキソールはＢｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙの登録商標である）およびドセタキセル（タキソテール（登録商標）；タキソテールはＡｖｅｎｔｉｓ Ｐｈａｒｍａ ＳＡの登録商標である））、エポチロン、およびビンカアルカロイドがある。
【0008】
これらの全ての抗癌剤の欠点の一つは、それらが健常組織にも損傷を与えることである。薬物は正常細胞の機能を阻害することによって癌を治療するため、血球、粘膜表面および皮膚などの一定の細胞分裂に依存する健常組織にもまた深刻な損傷を与えることがある。この損傷は重大な病的状態をもたらし、安全に送達できる化学療法の量を制限することがある。化学療法治療中に生じる副作用の一例には、低血球数、脱毛、筋肉および関節の痛み、吐き気、嘔吐、下痢、口内炎、発熱、および悪寒を含む。この問題を克服するために、標的の増加を提供し、癌細胞でのみ生じるタンパク質および細胞機能に影響を与える、作用の独自メカニズムを持つ新規薬剤が開発され続けている。例えば、抗体薬物複合体（ＡＤＣｓ）は、腫瘍細胞の表面にある特異的なエピトープに結合し、関連する毒性を低減するために腫瘍細胞を標的とする代替の方法を提供するように設計されている。非常に選択的であるものの、それらはわずかな細胞内取り込み（注入された薬剤の＜１％）しか達成せず、細胞死活性も限られていることから、治療上有用なＡＤＣｓはほとんどない。いくつかの特定の抗癌剤には、イマチニブ（グリベック（登録商標）；グリベックはＮｏｖａｒｔｉｓ ＡＧの登録商標である）、ゲフィチニブ（イレッサ（登録商標）、イレッサはＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ ＵＫ Ｌｉｍｉｔｅｄの登録商標である）、スニチニブ（スーテント（登録商標）、スーテントはＣ.Ｐ. Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＣＶの登録商標である）、およびボルテゾミブ（ベルケイド（登録商標）；ベルケイドはＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．の登録商標である）がある。しかしながら、これらの薬剤はすべての癌種には承認されておらず、そして治療抵抗性の発現に普遍的に関連している。加えて、これらの化合物の多くは、依然として絶対的な腫瘍選択性を欠いており、オフターゲット効果のためにそれらの治療上の利用が制限され続けている。
【0009】
近年、リン脂質エーテル（「ＰＬＥ」）アナログが、抗癌剤送達のための効果的な分子プラットフォームであると実証された。米国特許第９，４８０，７５４号およびＷｅｉｃｈｅｒｔｅｔａｌら(Sci TranslMed,2014,6(240),240ra75)を参照し、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。それに見られるように、臨床で使用される抗癌剤の大部分は、全ての増殖細胞に対するそれらの毒性および／またはすべての腫瘍細胞におけるそれらの効果を発揮できないため、有用性が限定されている。したがって、当業界では、健常細胞による薬物の実質的な取り込みを回避しながら、強力で、効果的な、広域スペクトルの抗癌剤をＣＳＣ'ｓを含む癌細胞に送達することができる代替の抗癌剤送達ビヒクルの必要性が依然としてある。さらに、抗癌剤送達ビヒクルは、血液脳関門（ＢＢＢ）などのバリアを通過できるべきである。
【発明の概要】
【0010】
概要
一態様において、本開示は下記化学式（Ｉ）
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、
ここで、
ｎは２～２０であり；
Ｑ1は結合または下記化学式
であり、ここでｍは０～１００であり；
Ｌは下記化学式
であり、ここでＲxはＨまたはハロゲンであり；
Ｑ2は結合または自壊性(self-immolative）スペーサーであり；および
Ｚは抗癌剤である。
一態様において、本開示は下記化学式（Ｉ）
【化1】
ここで、
ｎは２～２０であり；
Ｑ1は結合または下記化学式
【化2】
Ｌは下記化学式
【化3】
Ｑ2は結合または自壊性(self-immolative）スペーサーであり；および
Ｚは抗癌剤である。
【0011】
別の実施形態において、本開示は本明細書に記載される化合物、またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、それを必要とする対象を治療する方法を提供する。
【0012】
本開示では、次に示す詳細な説明および添付の図面に照らして明らかになることになる他の態様および実施形態を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0013】
図面の簡単な説明
【0014】
【0015】
【0016】
【0017】
【0018】
【0019】
【0020】
【0021】
【0022】
【0023】
【0024】
【0025】
【0026】
【0027】
【0028】
【0029】
【0030】
【0031】
【図19A-19C】図１９Ａ～１９Ｆは、腸腫瘍におけるＣＬＲ１５０２の選択的取り込みを示す。図１９Ａは、マウスあたり５０μｇのＣＬＲ１５０２の投与９６時間後に剖検で除去された結腸全体である。図１９Ｂは、マウスあたり５０μｇのＣＬＲ１５０２の投与９６時間後に剖検で除去された小腸の末端部分である。ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍを使用して、シグナル強度が増加した領域を観察した。これらの領域は非侵襲的（結腸 図１９Ｃ；小腸末端部分 図１９Ｆ）および侵襲的（結腸 図１９Ｄ；小腸末端 図１９Ｅ）腫瘍である。図１９Ｃ、図１９Ｄ、図１９Ｅ、および図１９Ｆは、黒四角により示されるように拡大されている。矢印は、腸の筋肉組織内の悪性腺を指す。バー：１ｍｍ。
【0032】
【図20A】図２０Ａ～２０Ｈは、脳におけるＣＬＲ１５０１の取り込みを示す。図２０Ｃ、図２０Ｄ、および図２０Ｅは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ；図２０Ｃ、Ｔ２強調画像）によって検証され、ＴｏＰｒｏ３核対比染色（図２０Ｄ）と共にＣＬＲ１５０１（図２０Ｅ）で標識されたＵ２５１由来の同所性脳腫瘍を示す。図２０Ｆ、図２０Ｇ、および図２０Ｈは、ＣＬＲ１５０１（緑色）で標識された２２Ｔ多形性膠芽腫由来の同所性異種移植における脳腫瘍の境界の組織学的解析である。図２０Ｆは青色ＤＡＰＩ核対比染色による異種移植の脳境界の落射蛍光の可視化である。図２０Ｇは、ＣＬＲ１５０１で標識された異種移植片の共焦点画像である。図２０Ｈは、異種移植および隣接する正常な脳の共焦点および明視野画像である。Ｎは正常な脳を示し；ＲＦＵは相対蛍光単位を示し；Ｔは腫瘍を示す。
【図20B】図２０Ａ～２０Ｈは、脳におけるＣＬＲ１５０１の取り込みを示す。図２０Ｃ、図２０Ｄ、および図２０Ｅは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ；図２０Ｃ、Ｔ２強調画像）によって検証され、ＴｏＰｒｏ３核対比染色（図２０Ｄ）と共にＣＬＲ１５０１（図２０Ｅ）で標識されたＵ２５１由来の同所性脳腫瘍を示す。図２０Ｆ、図２０Ｇ、および図２０Ｈは、ＣＬＲ１５０１（緑色）で標識された２２Ｔ多形性膠芽腫由来の同所性異種移植における脳腫瘍の境界の組織学的解析である。図２０Ｆは青色ＤＡＰＩ核対比染色による異種移植の脳境界の落射蛍光の可視化である。図２０Ｇは、ＣＬＲ１５０１で標識された異種移植片の共焦点画像である。図２０Ｈは、異種移植および隣接する正常な脳の共焦点および明視野画像である。Ｎは正常な脳を示し；ＲＦＵは相対蛍光単位を示し；Ｔは腫瘍を示す。
【図20C】図２０Ａ～２０Ｈは、脳におけるＣＬＲ１５０１の取り込みを示す。図２０Ｃ、図２０Ｄ、および図２０Ｅは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ；図２０Ｃ、Ｔ２強調画像）によって検証され、ＴｏＰｒｏ３核対比染色（図２０Ｄ）と共にＣＬＲ１５０１（図２０Ｅ）で標識されたＵ２５１由来の同所性脳腫瘍を示す。図２０Ｆ、図２０Ｇ、および図２０Ｈは、ＣＬＲ１５０１（緑色）で標識された２２Ｔ多形性膠芽腫由来の同所性異種移植における脳腫瘍の境界の組織学的解析である。図２０Ｆは青色ＤＡＰＩ核対比染色による異種移植の脳境界の落射蛍光の可視化である。図２０Ｇは、ＣＬＲ１５０１で標識された異種移植片の共焦点画像である。図２０Ｈは、異種移植および隣接する正常な脳の共焦点および明視野画像である。Ｎは正常な脳を示し；ＲＦＵは相対蛍光単位を示し；Ｔは腫瘍を示す。
【図20D】図２０Ａ～２０Ｈは、脳におけるＣＬＲ１５０１の取り込みを示す。図２０Ｃ、図２０Ｄ、および図２０Ｅは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ；図２０Ｃ、Ｔ２強調画像）によって検証され、ＴｏＰｒｏ３核対比染色（図２０Ｄ）と共にＣＬＲ１５０１（図２０Ｅ）で標識されたＵ２５１由来の同所性脳腫瘍を示す。図２０Ｆ、図２０Ｇ、および図２０Ｈは、ＣＬＲ１５０１（緑色）で標識された２２Ｔ多形性膠芽腫由来の同所性異種移植における脳腫瘍の境界の組織学的解析である。図２０Ｆは青色ＤＡＰＩ核対比染色による異種移植の脳境界の落射蛍光の可視化である。図２０Ｇは、ＣＬＲ１５０１で標識された異種移植片の共焦点画像である。図２０Ｈは、異種移植および隣接する正常な脳の共焦点および明視野画像である。Ｎは正常な脳を示し；ＲＦＵは相対蛍光単位を示し；Ｔは腫瘍を示す。
【図20E】図２０Ａ～２０Ｈは、脳におけるＣＬＲ１５０１の取り込みを示す。図２０Ｃ、図２０Ｄ、および図２０Ｅは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ；図２０Ｃ、Ｔ２強調画像）によって検証され、ＴｏＰｒｏ３核対比染色（図２０Ｄ）と共にＣＬＲ１５０１（図２０Ｅ）で標識されたＵ２５１由来の同所性脳腫瘍を示す。図２０Ｆ、図２０Ｇ、および図２０Ｈは、ＣＬＲ１５０１（緑色）で標識された２２Ｔ多形性膠芽腫由来の同所性異種移植における脳腫瘍の境界の組織学的解析である。図２０Ｆは青色ＤＡＰＩ核対比染色による異種移植の脳境界の落射蛍光の可視化である。図２０Ｇは、ＣＬＲ１５０１で標識された異種移植片の共焦点画像である。図２０Ｈは、異種移植および隣接する正常な脳の共焦点および明視野画像である。Ｎは正常な脳を示し；ＲＦＵは相対蛍光単位を示し；Ｔは腫瘍を示す。
【図20F】図２０Ａ～２０Ｈは、脳におけるＣＬＲ１５０１の取り込みを示す。図２０Ｃ、図２０Ｄ、および図２０Ｅは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ；図２０Ｃ、Ｔ２強調画像）によって検証され、ＴｏＰｒｏ３核対比染色（図２０Ｄ）と共にＣＬＲ１５０１（図２０Ｅ）で標識されたＵ２５１由来の同所性脳腫瘍を示す。図２０Ｆ、図２０Ｇ、および図２０Ｈは、ＣＬＲ１５０１（緑色）で標識された２２Ｔ多形性膠芽腫由来の同所性異種移植における脳腫瘍の境界の組織学的解析である。図２０Ｆは青色ＤＡＰＩ核対比染色による異種移植の脳境界の落射蛍光の可視化である。図２０Ｇは、ＣＬＲ１５０１で標識された異種移植片の共焦点画像である。図２０Ｈは、異種移植および隣接する正常な脳の共焦点および明視野画像である。Ｎは正常な脳を示し；ＲＦＵは相対蛍光単位を示し；Ｔは腫瘍を示す。
【0033】
【0034】
【0035】
【0036】
【0037】
【0038】
【発明を実施するための形態】
【0039】
詳細な説明
本明細書で記載されることは、広範囲の腫瘍細胞を標的にできる治療用化合物である。本明細書で開示される化合物は、脂質ラフトなどの腫瘍細胞膜の特殊な構造を標的にできる。したがって、本明細書で開示される化合物は、高い特異性で腫瘍細胞を標的とすることに使用することができる。特に、本明細書で開示される化合物は、癌治療に使用することができる。
本明細書で記載されることは、広範囲の腫瘍細胞を標的にできる治療用化合物である。本明細書で開示される化合物は、脂質ラフトなどの腫瘍細胞膜の特殊な構造を標的にできる。したがって、本明細書で開示される化合物は、高い特異性で腫瘍細胞を標的とすることに使用することができる。特に、本明細書で開示される化合物は、癌治療に使用することができる。
【0040】
１．定義
別段に記載されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および化学的用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾が生じた場合は、定義を含む本文書が優先となることになる。好ましい方法および材料を以下に記載するが、本明細書に記載されたものと同様または同等の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができる。本明細書で説明された全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。本明細書に開示された材料、方法、および実施例は、実例となるのみで、限定することを意図していない。
別段に記載されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および化学的用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾が生じた場合は、定義を含む本文書が優先となることになる。好ましい方法および材料を以下に記載するが、本明細書に記載されたものと同様または同等の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができる。本明細書で説明された全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。本明細書に開示された材料、方法、および実施例は、実例となるのみで、限定することを意図していない。
【0041】
本明細書で使用される「含む（複数可）（comprise(s)）」、「含む（複数可）（include(s)）」、「有する（having）」、「有する（has）」、「できる（can）」、「含む（複数可）（contain(s)）」という用語およびその変形は、追加の行為または構造の可能性を排除しない、制限のない移行句、用語、または言葉であることが意図される。単数形の「a」、「および」、および「その」は、文脈上明らかな指示がない限り、複数形の参照を含む。本開示はまたは、明示されているかどうかにかかわらず、本明細書に提示される実施形態または要素を「含む(comprising)」、「からなる（consisting of）」および「実質的にからなる（consisting essentially of)」他の実施形態も企図する。
【0042】
本明細書における数値範囲の記述について、同程度の精度でその間の各介在値が明確に考えられる。例えば、６～９の範囲では、６および９に加えて７および８の数値が考えられ、および６．０～７．０の範囲では、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９および７．０の数値が明確に考えられる。
【0043】
関心のある一つまたは複数の値に適用される本明細書で使用される「約」または「おおよそ」という用語は、記載された参照値（reference value）と同様の値、または当業者によって決定される特定の値の許容誤差範囲内の値を指し、これは測定システムの限界など、値が測定または決定される方法に部分的に依存することになる。特定の態様において、「約」という用語は、別段の記載がない限り、またはそうでなければ文脈上から明らかな場合でない限り、記載された参照値に対して２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下のいずれかの方向（以上または以下）内に収まる値の範囲を指す（ただし、かかる数が可能値の１００％を超えてしまう場合を除く）。あるいは、「約」は、当業者の慣例により、３標準偏差以内またはそれ以上を意味することができる。あるいは、生物学的システムまたは工程に関してなど、「約」という用語は、ある値の１桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味することができる。
【0044】
特定の官能基および化学用語の定義は、より詳細に以下に記載される。本開示の目的のために、化学元素は、元素周期表(CAS version，Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed., inside cover）によって同定され、そして特定の官能基はそれに記載されているように一般的に定義される。さらに、有機化学の一般原則、ならびに特定の官能部分および反応性は、Organic Chemistry, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith and March March's Advanced Organic Chemistry, 5th Edition, John Wiley & Sons, Inc., New York, 2001; Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., New York, 1989; Carruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3rd Edition, Cambridge University Press, Cambridge, 1987に記載される；これらのそれぞれの全体の内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【0045】
本明細書で使用される「癌」という用語は、転移可能な制御されていない細胞分裂の結果として生じる任意の疾患を指す。本明細書で使用される「癌」という用語は、男性の乳癌を含む乳癌;肛門癌、虫垂癌、肝外胆管癌、消化管カルチノイド、結腸癌、食道癌、胆嚢癌、胃癌、消化管間質腫瘍（「ｇｉｓｔ」）、膵島細胞腫瘍、成人原発性肝癌、小児肝癌、膵臓癌、直腸癌、小腸癌、および胃(stomach)（胃（gastric））癌を含む消化器／胃腸癌；膵臓腺癌、副腎皮質癌、膵臓神経内分泌腫瘍、メルケル細胞癌、非小細胞性肺神経内分泌腫瘍、小細胞肺神経内分泌腫瘍、副甲状腺癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍および甲状腺癌を含む内分泌および神経内分泌癌；眼内黒色腫および網膜芽細胞腫を含む眼癌；膀胱癌、腎臓（腎細胞）癌、陰茎癌、前立腺癌、移行細胞腎盂および尿管癌、精巣癌、尿道癌、およびウィルムス腫瘍を含む泌尿生殖器癌；小児中枢神経系癌、小児頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣胚細胞腫瘍、および精巣癌を含む胚細胞癌；子宮頸癌、子宮内膜癌、妊娠性絨毛腫瘍、上皮性卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、子宮肉腫、膣癌、および外陰癌を含む婦人科癌；下咽頭癌、喉頭癌、口唇および口腔癌、潜伏性原発を伴う転移性扁平上皮頸部癌、口腔癌、上咽頭癌、中咽頭癌、副鼻腔および鼻腔癌、副甲状腺癌、咽頭癌、唾液腺癌および咽喉癌を含む頭頸部癌；成人急性リンパ芽球性白血病、小児急性リンパ芽球性白血病、成人急性骨髄性白血病、小児急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、および有毛細胞白血病を含む白血病；悪性形質細胞を含む多発性骨髄腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、成人ホジキンリンパ腫、小児ホジキンリンパ腫、妊娠中のホジキンリンパ腫、菌状息肉腫、成人非ホジキンリンパ腫、小児非ホジキンリンパ腫、妊娠中の非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経性リンパ腫、セザリー症候群およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含むリンパ腫；ユーイング肉腫、骨肉腫および骨の悪性線維性組織球腫、小児横紋筋肉腫および軟部肉腫を含む筋骨格系癌；成人脳腫瘍、小児脳腫瘍、星細胞腫、脳幹グリオーマ、中枢神経系非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍、中枢神経系胎児性腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、神経芽細胞腫、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）原発悪性リンパ腫を含む神経系癌；非小細胞肺癌、小細胞肺癌、悪性中皮腫、胸腺腫および胸腺癌含む呼吸器／胸部癌；およびカポジ肉腫、メラノーマおよび扁平上皮癌を含む皮膚癌を含む様々な種類の癌を指すが、これらに限定されるものではない。
【0046】
本明細書で使用される「癌幹細胞」という用語は、自己複製および悪性腫瘍に見られる異なる種類の癌細胞への分化が可能な癌細胞を指す。
【0047】
「化学療法薬」、「抗癌剤」および「抗腫瘍薬」という用語は、本明細書を通して互換的に使用される。
【0048】
一般に、「循環腫瘍細胞(circulating tumor cell)」への参照は、単一細胞を指すことを意図し、一方で「循環腫瘍細胞(circulating tumor cells)」または「循環腫瘍細胞のクラスター」への参照は、一つ以上の癌細胞を指すことを意図する。しかしながら、当業者は「循環腫瘍細胞(circulating tumor cells)」への参照は、一つまたは複数の循環腫瘍細胞を含む循環腫瘍細胞の集団を含むことを意図し、一方で「循環腫瘍細胞(circulating tumor cell)」への参照は、一つ以上の循環腫瘍細胞を含み得ることを理解することになる。本明細書で使用される「循環腫瘍細胞(circulating tumor cell)」または「循環腫瘍細胞(circulating tumor cells)」という用語は、対象の血液または血清試料に見られる任意の癌細胞または癌細胞のクラスターを指す。ＣＴＣｓはまた、対象の血液または血清試料に見られる癌幹細胞または癌幹細胞のクラスターを含む、またはそれらから構成され得る。
【0049】
本明細書で使用されるとき、「組成物」という用語は、特定の量の特定の成分を含む製品、ならびに特定の量の特定の成分の組み合わせから、直接的または間接的に、結果として生じる任意の製品を包含することを意図する。
【0050】
「コントロール」、「参照レベル(reference level)」、および「参照（reference）」という用語は、本明細書では互換的に使用される。参照レベル(reference level)とは、測定結果を評価するベンチマークとして使用され、所定の値または範囲であり得る。本明細書で使用される「コントロール群」とは、コントロール対象の群を指す。所定のレベルは、コントロール群からのカットオフ値であり得る。所定のレベルとは、コントロール群からの平均であり得る。カットオフ値（または所定のカットオフ値）とは適応的指標モデル（Adaptive Index Model）（ＡＩＭ）方法論により決定され得る。カットオフ値（または所定のカットオフ値）は、患者群の生物学的サンプルからの受信者動作曲線（ＲＯＣ）解析により決定され得る。生物学的分野で一般的に知られているように、ＲＯＣ解析は、ある状態を別の状態から区別する試験の能力の決定であり、例えば、ＩＬ－１Ｒａ療法を受ける理想的な患者を特定する際の各マーカーのパフォーマンスを決定する。ＲＯＣ解析の説明は、Ｐ．Ｊ．Ｈｅａｇｅｒｔｙｅｔａｌら（Biometrics 2000,56,337-44）により提供され、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。あるいは、カットオフ値は、患者群の生物学的サンプルの四分位数解析によって決定され得る。例えば、カットオフ値は、２５～７５パーセンタイル範囲の任意の値に対応する値、好ましくは２５パーセンタイル、５０パーセンタイルまたは７５パーセンタイル、およびより好ましくは７５パーセンタイルに対応する値を選択することによって決定され得る。このような統計解析は、当業界で知られている任意の方法を使用して実行されることができ、任意の数の市販のソフトウェアパッケージ（例えば、Ａｎａｌｙｓｅ－ｉｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｌｔｄ．， Ｌｅｅｄｓ， ＵＫ；ＳｔａｔａＣｏｒｐ ＬＰ，Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｓｔａｔｉｏｎ，ＴＸ；ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．， Ｃａｒｙ，ＮＣ．から)を通して実装されることができる。標的またはタンパク質活性のための健常または正常なレベルまたは範囲は、標準的な慣行に従って定義され得る。コントロールは、本明細書に詳述されるように、腫瘍が無い対象または細胞であり得る。コントロールは、その病状が既知の対象、またはそれらからの試料であり得る。対象、またはそれからの試料は、健常である、罹患している、治療前に罹患している、治療中で罹患している、または治療後に罹患している、またはその組み合わせであり得る。
【0051】
本明細書で使用される「用量」という用語は、少なくとも単回投与で治療効果を生み出すのに十分な量を含む任意の形態の有効成分製剤または組成物を意味する。「製剤」および「化合物」は、本明細書では互換的に使用される。
【0052】
本明細書で使用される「投与量」という用語は、特定の期間にわたる用量の任意の量、数、および頻度での投与を指す。
【0053】
本明細書で使用される「有効量」または「治療有効量」という用語は、治療されている疾患または状態の一つまたは複数の症状をある程度緩和することになる、投与されている任意の量の薬剤または薬学的に許容される組成物または化合物を指す。その結果は、病気の兆候、症状、または原因の減少および/または緩和、または生物学的システムの他の望ましい変化であることがある。例えば、治療用途の「有効量」は、疾患症状の臨床的に有意な減少を提供するために必要とされる、本明細書に開示される化合物を含む組成物の量である。任意の個々の症例における適切な「有効な」量は、用量漸増試験などの技術を使用して決定することができる。
【0054】
本明細書で使用される「ハロゲン」という用語は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、Ａｔ、またはテネシン（Ｔｓ）などの合成ハロゲンを意味する。
【0055】
本明細書で使用される「ヘテロシクロアルキル」という用語は、炭素、窒素、硫黄、ホスフェートおよび酸素から選択される３～２４個の原子（Ｃ３～Ｃ２４）の環状基を指し、ここで少なくとも一つの原子が炭素である。
【0056】
本明細書で記載されるように、「異性体」という用語は、光学異性体およびアナログ、構造異性体およびアナログ、立体配座異性体およびアナログなどを含むが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、本開示は、本明細書に詳述されるように異なる光学異性体の使用を包含する。本発明において有用な抗癌化合物が少なくとも一つの不斉中心（steriogenic center）を含み得ることが当業者に理解されることになる。したがって、本発明の方法で使用される化合物は、光学活性体またはラセミ体で存在し、および単離され得る。いくつかの化合物もまた、ポリモーフィズムを示すことがある。
【0057】
「悪性腫瘍細胞」「腫瘍細胞」および「癌細胞」という用語は、本明細書を通して互換的に使用される。「悪性腫瘍幹細胞」「腫瘍幹細胞」および「癌幹細胞」という用語は、本明細書を通して互換的に使用される。
【0058】
本明細書で使用される「試料」または「試験試料」は、標的の存在および／またはレベルが検出または測定される任意の試料を意味することができる。試料には、液体、溶液、エマルション、または懸濁液を含み得る。試料には、医療用試料を含み得る。試料には、血液、全血、血漿および血清などの血液の画分、軟骨、靭帯、腱、筋肉、間質液、汗、唾液、尿、涙、滑液、滑膜、半月板、骨髄、脳脊髄液、鼻汁、痰、羊水、気管支肺胞洗浄液、胃洗浄、嘔吐、糞便、肺組織、末梢血単核細胞、総白血球、リンパ節細胞、脾臓細胞、扁桃腺細胞（tonsil cells）、癌細胞、腫瘍細胞、胆汁、消化液、皮膚、またはその組み合わせなどの任意の生体液または組織を含み得る。いくつかの実施形態において、試料はアリコートを含む。他の実施形態において、試料は生体液を含む。試料は、当業界で知られている任意の手段によって得ることができる。試料は、患者から得たものとして直接的に使用することができ、または本明細書で論じられるような、またはそうでなければ当業界で知られているようないくつかの方法で、ろ過、蒸留、抽出、濃縮、遠心分離、干渉成分の不活性化、試薬の添加などによって前処理して、試料の特性を変更することもできる。
【0059】
本明細書で互換的に使用される「対象」および「患者」という言葉は、本明細書に記載の組成物または方法を欲するまたは必要としている哺乳類を含む任意の脊椎動物を指すが、これらに限定されるものではない。対象は、ヒトまたは非ヒトであり得る。対象は、脊椎動物であり得る。対象は、哺乳類であり得る。哺乳類は、霊長類または非霊長類であり得る。哺乳類は、例えば、牛、豚、ラクダ、ラマ、ハリネズミ、アリクイ、カモノハシ、ゾウ、アルパカ、馬、ヤギ、ウサギ、羊、ハムスター、モルモット、猫、犬、ラット、およびマウスなどの非霊長類であり得る。哺乳類は、ヒトなどの霊長類であり得る。哺乳類は、例えば、サル、カニクイザル（cynomolgous monkey）、アカゲザル、チンパンジー、ゴリラ、オランウータン、テナガザルなどの非ヒト霊長類であり得る。対象は、例えば、成人、思春期、または幼児など、任意の年齢または発達段階であり得る。対象は、男性であり得る。対象は、女性であり得る。いくつかの実施形態において、対象は特定の癌を有する。対象は、他の形態の治療中でもよい。
【0060】
本明細書で使用される「治療用化合物」という用語は、癌治療を提供可能な任意の化合物を指す。
【0061】
「治療する」または「治療すること」または「治療」という用語は、疾患の悪化を抑制(suppressing)、抑制(repressing)、逆転、緩和、改善、または阻害すること、または疾患を完全に排除することを意味する。治療は、急性または慢性のいずれかの状態で実行され得る。この用語はまた、疾患またはかかる疾患に関連する症状の重症度を軽減することも指す。
【0062】
本明細書で別段に定義されない限り、本開示に関連して使用される科学的および技術的用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。例えば、本明細書に記載の細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、およびタンパク質および核酸化学およびハイブリダイゼーションに関連して使用される任意の専門用語、およびそれらの技術は、当業界では周知であり、一般的に使用されるものである。用語の意味および範囲は明確であるべきである；ただし、任意の潜在的なあいまいさが生じたときは、本明細書で提供される定義が任意の辞書または外部の定義よりも優先される。さらに、文脈上別段の必要性がない限り、単数形には複数形が含まれ、かつ複数形には単数形が含まれるものとする。
【0063】
２．化合物
一態様において、本開示は、下記化学式（Ｉ）
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、
式中、
ｎは２～２０であり；
Ｑ1は結合または下記化学式
であり、ここでｍは０～１００であり；
Ｌは下記化学式
であり、ここでＲxはＨまたはハロゲンであり；
Ｑ2は結合または自壊性（self-immolative）スペーサーであり；および
Ｚは抗癌剤である。
一態様において、本開示は、下記化学式（Ｉ）
【化4】
式中、
ｎは２～２０であり；
Ｑ1は結合または下記化学式
【化5】
Ｌは下記化学式
【化6】
Ｑ2は結合または自壊性（self-immolative）スペーサーであり；および
Ｚは抗癌剤である。
【0064】
数「ｎ」は、２～２０の任意の整数であり得る。いくつかの実施形態において、ｎは、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、または２０である。特定の実施形態において、ｎは１８である。
【0065】
数「ｍ」は、０～１００の任意の整数であり得る。いくつかの実施形態において、ｍは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。いくつかの実施形態において、ｍは１０～２０の整数、１０～４０の整数、１０～６０の整数、または１０～８０の整数である。いくつかの実施形態において、ｍは０であり、およびＱ1は結合または下記化学式
である。
【化7】
【0066】
Ｑ2は、例えば、パラ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）を含む、任意の既知の自壊性（self-immolative）スペーサーであってよい。
【0067】
いくつかの実施形態において、ＲxはＨである。いくつかの実施形態において、ＲxはＣｌである。
【0068】
いくつかの実施形態において、ｎは２～２０であり、Ｑ1は結合または下記化学式
であり、およびＬ－Ｑ2部分は
であり、ＲxはＨまたはハロゲンであり、およびＺは抗癌剤である。
【化8】
【化9】
【0069】
Ｚは様々な既知の化学療法薬を含む、任意の抗癌剤であってよい。
【0070】
いくつかの実施形態において、Ｚはポロ様キナーゼ１（ＰＬＫ－１）阻害剤である。適切なＰＬＫ－１阻害剤は、例えば、ＢＩ２５３６、ＢＩ６７２７（ボラセルチブ）、ＤＡＰ－８１およびＤＡＰ－８３などのジアミノピリミジン（ＤＡＰ）誘導体、ならびにＫｕｍａｒら(Biomed Res Int. 2015, 2015: 705745)およびＰｅｔｅｒｓら(Nat Chem Biol. 2006, 2(11):618-26)に開示された化合物を含み、その内容はそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【0071】
いくつかの実施形態において、Ｚはノコダゾールなどのチューブリンポリメラーゼ阻害剤である。
【0072】
いくつかの実施形態において、Ｚはタッカノライド（taccalonolides）などのチューブリン安定化剤である。
【0073】
いくつかの実施形態において、ＺはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルアウリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）などの抗腫瘍薬である。
【0074】
いくつかの実施形態において、Ｚは、ＥＩＦ４ＡおよびＥＩＦ４Ｅ阻害剤などの真核生物翻訳開始因子４（ＥＩＦ４）阻害剤である。いくつかの実施形態において、ＺはＥＩＦ４Ｅ阻害剤である。適切なＥＩＦ４阻害剤には、例えば、リバビリンおよびＤ'Ａｂｒｏｎｚｏら（Neoplasia、2018、20（6）、563-573）により開示されている化合物、および米国特許第１０，５７７，３７８号を含み、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0075】
いくつかの実施形態において、ＺはコンブレタスタチンＡ－４ホスフェートまたはオンブラブリンなどのコンブレタスタチンＡ－４アナログである。適切なコンブレタスタチンＡ－４アナログはまた、例えば、Ｂｅｉｌｉｎａら(Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2006, 16(22), 5757-5762)により開示されている化合物も含み、その内容はその全体が本明細書に組み込まれる。
【0076】
いくつかの実施形態において、Ｚはフラバグリンアナログである。適切なフラバグリンアナログは、例えば米国特許出願公開ＵＳ ２０１８／００８６７２９に開示されている化合物を含み、その内容はその全体が本明細書に組み込まれる。
【0077】
特定の実施形態において、Ｚは例えば、（ｉ）アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、抗有糸分裂剤などの他の抗増殖性／抗腫瘍薬；およびトポイソメラーゼ阻害剤；（ｉｉ）抗エストロゲン剤、抗アンドロゲン剤、ＬＨＲＨアンタゴニストまたはＬＨＲＨアゴニスト、プロゲストゲン、およびアロマターゼ阻害剤などの細胞分裂阻害剤；（ｉｉｉ）抗浸潤剤（例えば、ｃ－Ｓｒｃキナーゼファミリー阻害剤）；（ｉｖ）チロシンキナーゼ阻害剤などの成長因子機能阻害剤；（ｖ）抗血管新生剤；（ｖｉ）血管損傷剤；および（ｖｉｉ）エンドセリン受容体アンタゴニストを含む、他の既知の抗癌剤一つである。
【0078】
適切な抗癌剤の例には、パクリタキセル、イリノテカン、トポテカン、ゲムシタビン、シスプラチン、ゲルダナマイシン、メルタンシン、アビラテロン、アファチニブ、アミノレブリン酸、アプレピタント、アキシチニブ、アザシチジン、ベリノスタット、ベンダムスチン、ベキサロテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボスチニブ、ブスルファン、カバジタキセル、カボザンチニブ、カペシタビン、カルボプラチン、カルフィルゾミブ、カルムスチン、セリチニブ、セツキシマブ、クロラムブシル、クロファラビン、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シタラビン、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、デノスマブ、デクスラゾキサン、ドセタキセル、ドラスタチン（例えば、モノメチルアウリスタチンＥ）、ドキソルビシン、エンザルタミド、エピルビシン、エリブリンメシレート、エルロチニブ、エトポシド、エベロリムス、フロクスウリジン、フルダラビンホスフェート、フルオロウラシル、ガネテスピブ、ゲフィチニブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブチウキセタン、イブルチニブ、イデラリシブ、イホスファミド、イマチニブ、イピリムマブ、イクサベピロン、ラパチニブ、ロイコボリンカルシウム、ロムスチン、メイタンシノイド、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ネララビン、ネルフィナビル、ニロチニブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、オマセタキシンメペスクシネート、オキサリプラチン、パニツムマブ、パゾパニブ、ペグアスパラガーゼ、ペンブロリズマブ、ペメトレキセド、ペントスタチン、ペルツズマブ、プリカマイシン（plicanycin）、ポマリドミド、ポナチニブヒドロクロリド、プララトレキサート、プロカルバジン、ラジウム２２３ジクロリド、ラムシルマブ、レゴラフェニブ、レタスピマイシン、ルキソリチニブ、セムスチン、シルツキシマブ、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、スニチニブマレート、タネスピマイシン、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トレミフェン、トラメチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビスモデギブ、ボリノスタット、およびジブ－アフリベルセプトを含むが、これらに限定されるものではない。
【0079】
いくつかの実施形態において、化学式（Ｉ）の化合物は、化学式（Ｉ－ａ）の構造、またはその薬学的に許容される塩を有し、ここでＱ1は下記化学式
であり、
Ｌ－Ｑ2は下記化学式
であり、およびＺはＰＬＫ－１阻害剤、チューブリンポリメラーゼ阻害剤、チューブリン安定化剤、抗腫瘍薬、または真核生物翻訳開始因子４（ＥＩＦ４）阻害剤である。具体的には、化学式（Ｉ－ａ）は下記化学式
またはその薬学的に許容される塩であり、ここでｎは２～２０であり、およびＺはＰＬＫ－１阻害剤、チューブリンポリメラーゼ阻害剤、チューブリン安定化剤、抗腫瘍薬、または真核生物翻訳開始因子４（ＥＩＦ４）阻害剤である。
【化10】
Ｌ－Ｑ2は下記化学式
【化11】
【化12】
【0080】
いくつかの実施形態において、化合物は、化学式（Ｉ－ａ）の構造を有し、ここでｎは１８である。いくつかの実施形態において、化合物は化学式（Ｉ－ａ）の構造を有し、ここでＺはＰＬＫ－１阻害剤または抗腫瘍薬である。いくつかの実施形態において、化合物は化学式（Ｉ－ａ－１）、（Ｉ－ａ－２）、または（Ｉ－ａ－３）の構造、またはその薬学的に許容される塩を有し、ここでＺはＰＬＫ－１阻害剤である。例えば、Ｚは、下記化学式
であり得る。
【化13】
【0081】
いくつかの実施形態において、化合物は、化学式（Ｉ－ａ－１）、（Ｉ－ａ－２）、または（Ｉ－ａ－３）の構造、またはその薬学的に許容される塩を有し、ここでＺはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、およびモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＤ）からなる群から選択される抗腫瘍薬である。いくつかの実施形態において、化合物は化学式（ｌ－ａ－３）の構造、またはその薬学的に許容される塩を有し、ここでＺは（下記に示す）ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、またはＭＭＡＤ
である。
【化14】
【0082】
いくつかの実施形態において、化学式（Ｉ）の化合物は、化学式（Ｉ－ｂ）の構造、またはその薬学的に許容される塩を有し、ここでｎは１８であり、Ｑ1は下記化学式
であり、Ｌ－Ｑ2は下記化学式
であり、およびＺはコンブレタスタチンＡ－４アナログである。具体的に、化学式（Ｉ－ｂ）は、下記化学式
またはその薬学的に許容される塩であってよく、ここでＺはコンブレタスタチンＡ－４アナログである。
【化15】
【化16】
【化17】
【0083】
いくつかの実施形態において、化合物は化学式（Ｉ－ｂ－ｌ）、（Ｉ－ｂ－２）、または（Ｉ－ｂ－３）の構造、またはその薬学的に許容される塩を有し、ここでＺは、下記化学式
などの、コンブレタスタチンＡ－４アナログである。
【化18】
【0084】
いくつかの実施形態において、化学式（Ｉ）の化合物は化学式（Ｉ－ｃ）の構造、またはその薬学的に許容される塩を有し、ここでｎは１８であり、Ｑ1は結合または下記化学式
であり、Ｌ－Ｑ2は下記化学式
であり、およびＺはフラバグリンアナログである。
具体的に、化学式（Ｉ－ｃ）は、下記化学式
またはその薬学的に許容される塩であってよく、ここでＺはフラバグリンアナログである。
【化19】
【化20】
具体的に、化学式（Ｉ－ｃ）は、下記化学式
【化21】
【0085】
いくつかの実施形態において、化合物は化学式（Ｉ－ｃ－１）、（Ｉ－ｃ－２）、または（Ｉ－ｃ－３）の構造、またはその薬学的に許容される塩を有し、ここでＺは下記化学式
などのフラバグリンアナログである。
【化22】
【0086】
本明細書で開示される適切な化合物には、下記化学式：
またはその薬学的に許容される塩を含む。
【化23-1】
【化23-2】
【0087】
開示される化合物は、薬学的に許容される塩として存在し得る。「薬学的に許容される塩」という用語は、水溶性または油溶性または分散性であり、過度の毒性、刺激、およびアレルギー反応が無い障害の治療に適し、合理的な利益/リスク比に見合った、意図された用途に効果的な化合物の塩または双性イオンを指す。代表的な塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、亜硫酸水素塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ギ酸塩、イセチオン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフチレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、グルタミン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、およびリン酸塩などを含む。化合物のアミノ基はまた、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ラウリル、ミリスチル、ステアリルなどの塩化、臭化、およびヨウ化アルキルにより四級化してもよい。
【0088】
カルボキシル基と、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、またはアルミニウムなどの金属陽イオンの水酸化物、炭酸塩、または炭酸水素塩などの適切な塩基、または第一級、第二級、または第三級の有機アミンとの反応により、開示された化合物の最終的な単離および精製中に、塩基性付加塩を調製してもよい。第四級アミン塩は、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルアニリン、Ｎメチルピペリジン、Ｎ－メチルモルホリン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ，Ｎジベンジルフェネチルアミン、１－エフェナミンおよびＮ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、およびピペラジンに由来するものなどの第四級アミン塩を調製することができる。
【0089】
化合物は、不斉またはキラル中心が存在する立体異性体として存在し得る。立体異性体は、キラル炭素原子の周りの置換基の配置に応じて「Ｒ」または「Ｓ」である。本明細書で使用される「Ｒ」および「Ｓ」という用語は、lUPAC 1974 Recommendations for Section E, Fundamental Stereochemistry, in Pure Appl. Chem., 1976, 45: 13-30に記載されている配置である。本開示は、様々な立体異性体およびその混合物を企図しており、そしてこれらは本開示の範囲内に具体的に含まれる。立体異性体には、エナンチオマーおよびジアステレオマー、およびエナンチオマーまたはジアステレオマーの混合物を含む。化合物の個々の立体異性体は、不斉またはキラル中心を含む市販の出発物質から合成的に、またはラセミ混合物の調製とそれに続く当業者に周知の分離方法によって調製することができる。これらの分離方法は、（１）Furniss, Hannaford, Smith, and Tatchell, “Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry,” 5th edition (1989), Longman Scientific & Technical, Essex CM20 2JE, Englandに記載されているようにエナンチオマーの混合物をキラル補助剤に結合し、得られたジアステレオマーの混合物を再結晶またはクロマトグラフィーによって分離し、補助剤から光学的に純粋な生成物を任意に遊離、または（２）キラルクロマトグラフィーカラムにおいて光学エナンチオマーの混合物の直接的な分離、または（３）分画再結晶法、が例示される。化合物は、互変異性型、ならびに幾何異性体を有していてもよく、そしてこれらはまた本開示の態様を構成する。
【0090】
本開示はまた、一つまたは複数の原子が自然界で通常見られる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子で置換されているという点を除いて、化学式（Ｉ）に記載されたものと同一である、同位体標識化合物を含む。開示の化合物への包含に適切な同位体の例として、それぞれ2Ｈ、3Ｈ、13Ｃ、14Ｃ、15Ｎ、18０、17０、31Ｐ、32Ｐ、35Ｓ、18Ｆ、および36Ｃｌなどの、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、および塩素が挙げられるが、これらに限定されるものではない。重水素、すなわち2Ｈなどのより重い同位体による置換は、例えばｉｎ ｖｉｖｏでの半減期の延長または必要投与量の低減などのより高い代謝安定性に起因する特定の治療上の優位性を提供することができ、したがって、いくつかの状況では好ましいことがある。化合物は、受容体の分布を測定するための医用イメージングおよび陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）研究用の陽電子放出同位体を組み込んでいてもよい。化学式（Ｉ）の化合物に組み込むことができる適切な陽電子放出同位体は、11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、および18Ｆである。化学式（Ｉ）の同位体標識化合物は、一般に、当業者に知られている従来の技術によって、または非同位体標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を使用して、添付の実施例に記載されるものと類似の工程によって調製することができる。
【0091】
本化合物は、本明細書で詳述される合成スキームによって調製されることができる。化合物および中間体は、有機合成の当業者に周知の方法によって単離および精製されることができる。化合物を単離および精製するための従来の方法の例としては、例えば、「Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry」5th edition (1989), Longman Scientific & Technical, Essex CM20 2JE, England に記載されているように、シリカゲル、アルミナ、またはアルキルシラン基で誘導体化したシリカなどの固体支持体上でのクロマトグラフィー、活性炭による任意の前処理を伴う高温または低温での再結晶化、薄層クロマトグラフィー、様々な圧力での蒸留、真空下の昇華、および粉砕などを含むことができるが、これらに限定されるものではない。
【0092】
それぞれの個々の工程の反応条件および反応時間は、使用する特定の反応物および使用する反応物に存在する置換基によって異なることがある。具体的な手順は、実施例の項に提供される。反応は、従来の方法で、例えば、残留物から溶媒を除去することによってワークアップすることができ、結晶化、蒸留、抽出、粉砕およびクロマトグラフィーなどの当業界で一般に知られている方法論に従ってさらに精製することができるが、これらに限定されるものではない。別段の記載がない限り、出発物質および試薬は、市販されているか、または化学文献に記載されている方法を用いて市販の材料から当業者によって調製することができる。出発材料は、市販されていない場合、標準的な有機化学技術、既知の構造的に類似した化合物の合成に類似した技術、または上述のスキームまたは合成の実施例の項に記載される手順に類似した技術から選択される手順によって調製されることができる。
【0093】
反応条件、試薬および合成経路の順序の適切な操作、反応条件に適合できない任意の化学的官能基の保護、および方法の反応順序の適切な点での脱保護を含む日常的な実験は、本発明の範囲に含まれる。適切な保護基およびそのような適切な保護基を使用して異なる置換基を保護および脱保護する方法は、当業者に周知である；その例は、PGM Wuts and TW Greene, in Greene’s book titled Protective Groups in Organic Synthesis (4thed.), John Wiley & Sons, NY (2006)で見つけることができ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本発明の化合物の合成は、合成スキームおよび特定の実施例に記載される方法に類似する方法によって達成されることができる。
【0094】
３．医薬組成物
別の態様において、本開示は、本明細書に開示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物を提供する。
別の態様において、本開示は、本明細書に開示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物を提供する。
【0095】
本医薬組成物は、当業界で知られている工程、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造（dragee-making）、微細化（levigating）、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥工程によって製造することができる。
【0096】
本明細書に記載されるように、薬学的に許容されるキャリアは、所望の特定の投与形態に適した、任意のおよびすべての溶媒、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散剤または懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘または乳化剤、保存剤、固体結合剤、潤滑剤などを含む。薬学的に許容される組成物の製剤化に使用される様々なキャリアおよびその調製技術は、当業界で既知である（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Sixteenth Edition, E.W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980))。
【0097】
薬学的に許容されるキャリアは、ビヒクル、アジュバント、または希釈剤などの機能性分子であり得る。薬学的に許容されるキャリアは、任意のタイプの非毒性で不活性な固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料または製剤補助剤であり得る。薬学的に許容されるキャリアには、例えば、希釈剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、着色剤、香料、甘味料、酸化防止剤、保存剤、滑沢剤、溶媒、懸濁化剤、湿潤剤、界面活性剤、軟化剤、噴射剤(propellants)、保湿剤、粉末、ｐＨ調整剤、およびその組み合わせを含む。
【0098】
薬学的に許容されるキャリアとして機能し得る材料のいくつかの例には、これらに限定されるものではないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質（ヒト血清アルブミンなど）、緩衝物質（リン酸塩など）、グリシン、ソルビン酸、またはソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質（硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩など）、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、ポリアクリレート、ロウ類、ポリエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー、羊毛脂、糖（ラクトース、グルコース、およびスクロースなど）、スターチ（コムスターチ（com starch）およびジャガイモでんぷんなど）、セルロースおよびその誘導体（カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなど）、粉末トラガカント、麦芽、ゼラチン、タルク、賦形剤（ココアバターおよび座剤ワックス（suppository waxes）など）、油（ピーナッツ油、綿実油、紅花油、ごま油、オリーブ油、トウモロコシ油、大豆油など）、グリコール類（プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなど）、エステル（オレイン酸エチル、ラウリン酸エチルなど）、寒天、無毒性適合滑沢剤（ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなど）、着色剤、放出剤、コーティング剤、乳化剤、甘味料、香料、保存料、酸化防止剤を含み、処方者の判断により、組成物に存在させることもできる。
【0099】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は実質的に、本明細書に開示されるような治療有効量の化合物、またはその薬学的に許容される塩からなる。
【0100】
液体剤形には、薬学的に許容されるエマルション、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシルを含むが、これらに限定されるものではない。固形製剤には、カプセル、錠剤、ピル、粉末、セメント、パテ、および顆粒を含むが、これらに限定されるものではない。本化合物の局所または経皮投与のための剤形には、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤またはパッチを含むが、これらに限定されるものではない。
【0101】
液体キャリアまたはビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、植物油、無毒性のグリセリルエステル、およびその適切な混合物を含む溶媒または液体の分散媒であり得る。
【0102】
医薬組成物は、無菌の注射用または注入用の溶液または分散液の用事調製に適合した有効成分（複数可）を含む無菌の水溶液または分散液または無菌の粉末などの、注射または注入に適した剤形であり得る。最終的な剤形は、無菌で、流動性があり、および製造および保存条件下で安定であるべきである。無菌注射溶液は、少なくとも本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容される塩を、必要に応じて他の様々な成分とともに適切な溶媒中に必要量取り込み、任意にその後フィルター滅菌を行うことにより調製することができる。無菌注射溶液の調製のための無菌粉末の場合、調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥技術を含んでもよく、活性成分（複数可）＋無菌溶液中に存在する任意の追加の所望の成分の粉末を得ることができる。
【0103】
いくつかの実施形態において、組成物は、注入または注射による投与に適した溶液などの溶液である。溶液は、無毒の界面活性剤と任意に混合し、水中で調製することができる。分散液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、トリアセチン、およびその混合物、および油中で調製することもできる。これらの製剤には、微生物の増殖を防ぐための防腐剤が含まれていることがある。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによってもたらすことができる。
【0104】
注射製剤は、ポリ乳酸－ポリグリコリドなどの生分解性ポリマーにおいて、本明細書に開示の化合物（複数可）、またはその薬学的に許容される塩のマイクロカプセルマトリックスを形成することにより製造することができる。化合物とポリマーの比率および特定のポリマーの性質に依存して、薬物放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）を含む。注射剤はまた、体内組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルション内に薬物を封入することにより調製される。
【0105】
いくつかの実施形態において、組成物は、本明細書に記載された少なくとも一つの化合物および、少なくとも一つの追加の抗癌剤を含んでよい。本開示で有用な抗癌剤には、パクリタキセル、イリノテカン、トポテカン、ゲムシタビン、シスプラチン、ゲルダナマイシン、メルタンシン、アビラテロン、アファチニブ、アミノレブリン酸、アプレピタント、アキシチニブ、アザシチジン、ベリノスタット、ベンダムスチン、ベキサロテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボスチニブ、ブスルファン、カバジタキセル、カボザンチニブ、カペシタビン、カルボプラチン、カーフィルゾミブ、カルムスチン、セリチニブ、セツキシマブ、クロラムブシル、クロファラビン、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シタラビン、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、デノスマブ、デクスラゾキサン、ドセタキセル、ドラスタチン（例えば、モノメチルアウリスタチンＥ）、ドキソルビシン、エンザルタミド、エピルビシン、エリブリンメシレート、エルロチニブ、エトポシド、エベロリムス、フロクスリジン、フルダラビンホスフェート、フルオロウラシル、ガネテスピブ、ゲフィチニブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブチウキセタン、イブルチニブ、イデラリシブ、イホスファミド、イマチニブ、イピリムマブ、イクサベピロン、ラパチニブ、ロイコボリンカルシウム、ロムスチン、メイタンシノイド、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ネララビン、ネルフィナビル、ニロチニブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、オマセタキシンメペスクシナート、オキサリプラチン、パニツムマブ、パゾパニブ、ペグアスパラガーゼ、ペムブロリズマブ、ペメトレキセド、ペントスタチン、ペルツズマブ、プリカマイシン（plicanycin）、ポマリドミド、ポナチニブヒドロクロリド、プララトレキサート、プロカルバジン、ラジウム２２３ジクロリド、ラムシルマブ、レゴラフェニブ、レタスピマイシン、ルキソリチニブ、セムスチン、シルツキシマブ、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、スニチニブマレート、タネスピマイシン、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トレミフェン、トラメチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビスモデギブ、ボリノスタット、およびジブ－アフリベルセプトを含むが、これらに限定されるものではない。現在、抗癌剤として知られている、または作用することが可能な任意の化合物もまた、本開示に有用である。
【0106】
４．方法
本明細書に詳述される化合物の選択的腫瘍ターゲティングの基礎は、ほとんどの正常細胞のものと比較した癌細胞の細胞膜間の違いにある。リン脂質エーテル（ＰＬＥ）分子は、腫瘍細胞が急速な細胞分裂に必要なエネルギーを生成するために受ける代謝シフトを利用する。腫瘍は、長鎖脂肪酸（ＬＣＦＡ）をエネルギーに変換するためのベータ酸化経路の利用を促進する。ＬＣＦＡの取り込みを増加させるために、腫瘍細胞は「脂質ラフト」として知られる特殊なマイクロドメインを形成して、細胞膜を変化させる。脂質ラフトは、代謝シフトおよびリン脂質の必要性のために形成される。腫瘍細胞内では、これらの領域が過剰になり、安定化して、潜在的な腫瘍特異的ターゲットとなることができる。特に、癌細胞膜は脂質ラフトに非常に富む。正常組織では、脂質ラフトの存在は制限されており、一時的である（～２ナノ秒）。腫瘍では、脂質ラフトの存在が増加し、安定化する（最大１０日）。癌細胞は、正常細胞よりも５～１０倍多くの脂質ラフトを有する。さらに、脂質ラフトは、ほぼすべての腫瘍種で非常に豊富であり、試験された個々の癌細胞の１００％であることが実証されている。脂質ラフトは、高度に組織化され、およびリン脂質膜二重層の特殊な領域であり、様々なシグナル伝達分子、スフィンゴ脂質、グリコスフィンゴ脂質およびコレステロールを高濃度で含み、そして細胞表面および細胞内シグナル伝達分子（例えば、成長因子およびサイトカイン受容体、ホスファチジルイノシトール ３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／Ａｋｔ生存経路）を組織化する働きをする。データは、脂質ラフトがリン脂質エーテル（ＰＬＥｓ）の入り口として機能することを示唆する。癌細胞対非癌細胞のためのこれらの化合物の顕著な選択性は、コレステロールに対するＰＬＥｓの高い親和性および癌細胞におけるコレステロールに富む脂質ラフトの豊富さに起因する。脂質ラフトが果たす極めて重要な役割は、脂質ラフトの構造の破壊が癌細胞へのＰＬＥｓの取り込みを抑制するという事実によって強調される。脂質ラフトの形成が阻止される場合、ＰＬＥｓの取り込みが６０％減少することが示されている。リン脂質薬物コンジュゲートの迅速な内在化を提供する脂質ラフトと組み合わされたこれらの機能は、それらを理想的な標的にする。
本明細書に詳述される化合物の選択的腫瘍ターゲティングの基礎は、ほとんどの正常細胞のものと比較した癌細胞の細胞膜間の違いにある。リン脂質エーテル（ＰＬＥ）分子は、腫瘍細胞が急速な細胞分裂に必要なエネルギーを生成するために受ける代謝シフトを利用する。腫瘍は、長鎖脂肪酸（ＬＣＦＡ）をエネルギーに変換するためのベータ酸化経路の利用を促進する。ＬＣＦＡの取り込みを増加させるために、腫瘍細胞は「脂質ラフト」として知られる特殊なマイクロドメインを形成して、細胞膜を変化させる。脂質ラフトは、代謝シフトおよびリン脂質の必要性のために形成される。腫瘍細胞内では、これらの領域が過剰になり、安定化して、潜在的な腫瘍特異的ターゲットとなることができる。特に、癌細胞膜は脂質ラフトに非常に富む。正常組織では、脂質ラフトの存在は制限されており、一時的である（～２ナノ秒）。腫瘍では、脂質ラフトの存在が増加し、安定化する（最大１０日）。癌細胞は、正常細胞よりも５～１０倍多くの脂質ラフトを有する。さらに、脂質ラフトは、ほぼすべての腫瘍種で非常に豊富であり、試験された個々の癌細胞の１００％であることが実証されている。脂質ラフトは、高度に組織化され、およびリン脂質膜二重層の特殊な領域であり、様々なシグナル伝達分子、スフィンゴ脂質、グリコスフィンゴ脂質およびコレステロールを高濃度で含み、そして細胞表面および細胞内シグナル伝達分子（例えば、成長因子およびサイトカイン受容体、ホスファチジルイノシトール ３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／Ａｋｔ生存経路）を組織化する働きをする。データは、脂質ラフトがリン脂質エーテル（ＰＬＥｓ）の入り口として機能することを示唆する。癌細胞対非癌細胞のためのこれらの化合物の顕著な選択性は、コレステロールに対するＰＬＥｓの高い親和性および癌細胞におけるコレステロールに富む脂質ラフトの豊富さに起因する。脂質ラフトが果たす極めて重要な役割は、脂質ラフトの構造の破壊が癌細胞へのＰＬＥｓの取り込みを抑制するという事実によって強調される。脂質ラフトの形成が阻止される場合、ＰＬＥｓの取り込みが６０％減少することが示されている。リン脂質薬物コンジュゲートの迅速な内在化を提供する脂質ラフトと組み合わされたこれらの機能は、それらを理想的な標的にする。
【0107】
ＰＬＥアナログなどの本明細書で記載される化合物は、ＬＣＦＡ模倣物であり得る。本明細書に開示される分子は、腫瘍細胞上の脂質ラフトを標的とすることに関連する広範な構造活性相関（ＳＡＲ）解析を受けており、これらの領域に特異的に結合することが示されている。本明細書に開示される分子は、細胞質への直接的な侵入を提供し、細胞質内のゴルジ装置ネットワークに沿って小胞体およびミトコンドリアに移動する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるリン脂質薬物コンジュゲート（ＰＤＣｓ）は、切断可能なリンカーを介して新規コンブレタスタチンＡ（ＣＢＡ）アナログにコンジュゲートされた独自に設計されたリン脂質エーテルを含む。ＣＢＡｓは強力な細胞毒素であり、腫瘍細胞内のチューブリン重合の阻害、ならびに腫瘍の周囲／内の局所血管系を破壊する能力が実証されている。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される化合物は、切断可能なリンカーを介してフラバグリン（ＦＬＶ）アナログにコンジュゲートされた独自に設計されたリン脂質エーテルを含む。ＦＬＶｓは、翻訳、細胞周期の進行を阻害し、アポトーシスを誘導する強力な細胞毒素である。
【0108】
本明細書に詳述される化合物、またはその薬学的に許容される塩、または本明細書に詳述される化合物を含む組成物は、癌を治療するために使用することができる。一態様において、本開示は、本明細書に詳述される化合物、またはその薬学的に許容される塩、または本明細書に詳述される化合物を含む組成物を有効量で投与することを含む、それを必要とする対象において癌を治療する方法を提供する。
【0109】
別の態様において、本開示はそれを必要とする対象における癌治療に使用するための、本明細書で開示される化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0110】
別の態様において、本開示はそれを必要とする対象における癌治療のための薬剤を製造するための、本明細書で開示される化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0111】
本明細書に詳述される化合物、またはその薬学的に許容される塩、または本明細書で詳述される化合物を含む組成物で治療することができる癌は：男性の乳癌を含む乳癌;肛門癌、虫垂癌、肝外胆管癌、消化管カルチノイド、結腸癌、食道癌、胆嚢癌、胃癌、消化管間質腫瘍（「ｇｉｓｔ」）、膵島細胞腫瘍、成人原発性肝癌、小児肝癌、膵臓癌、直腸癌、小腸癌、および胃(stomach)（胃（gastric））癌を含む消化器／胃腸癌；膵臓腺癌、副腎皮質癌、膵臓神経内分泌腫瘍、メルケル細胞癌、非小細胞性肺神経内分泌腫瘍、小細胞肺神経内分泌腫瘍、副甲状腺癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍および甲状腺癌を含む内分泌および神経内分泌癌；眼内黒色腫および網膜芽細胞腫を含む眼癌；膀胱癌、腎臓（腎細胞）癌、陰茎癌、前立腺癌、移行細胞腎盂および尿管癌、精巣癌、尿道癌、およびウィルムス腫瘍を含む泌尿生殖器癌；小児中枢神経系癌、小児頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣胚細胞腫瘍、および精巣癌を含む胚細胞癌；子宮頸癌、子宮内膜癌、妊娠性絨毛腫瘍、上皮性卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、子宮肉腫、膣癌、および外陰癌を含む婦人科癌；下咽頭癌、喉頭癌、口唇および口腔癌、潜伏性原発を伴う転移性扁平上皮頸部癌、口腔癌、上咽頭癌、中咽頭癌、副鼻腔および鼻腔癌、副甲状腺癌、咽頭癌、唾液腺癌および咽喉癌を含む頭頸部癌；成人急性リンパ芽球性白血病、小児急性リンパ芽球性白血病、成人急性骨髄性白血病、小児急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、および有毛細胞白血病を含む白血病；ＡＩＤＳ関連リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、成人ホジキンリンパ腫、小児ホジキンリンパ腫、妊娠中のホジキンリンパ腫、菌状息肉腫、成人非ホジキンリンパ腫、小児非ホジキンリンパ腫、妊娠中の非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経性リンパ腫、セザリー症候群およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含むリンパ腫；ユーイング肉腫、骨肉腫および骨の悪性線維性組織球腫、小児横紋筋肉腫および軟部肉腫を含む筋骨格系癌；成人脳腫瘍、小児脳腫瘍、星細胞腫、脳幹グリオーマ、中枢神経系非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍、中枢神経系胎児性腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、神経芽細胞腫、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）原発悪性リンパ腫を含む神経系癌；非小細胞肺癌、小細胞肺癌、悪性中皮腫、胸腺腫および胸腺癌含む呼吸器／胸部癌；およびカポジ肉腫、メラノーマおよび扁平上皮癌を含む皮膚癌を含むが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態において、がんはメラノーマ、肺癌、大腸がん、乳癌、またはその組み合わせであり得る。
【0112】
別の実施形態において、癌は一つまたは複数のＣＴＣｓを含み得る。一つまたは複数のＣＴＣｓは乳癌、肺癌、甲状腺癌、子宮頸癌、メラノーマ、扁平上皮癌、前立腺癌、膵臓癌、大腸癌、および癌幹細胞、および悪性形質細胞からなる群から選択され得る。
【0113】
別の実施形態において、癌は転移性であり得る。特定の実施形態において、転移性癌は乳癌、肺癌、メラノーマ、および大腸癌からなる群から選択され得る。
【0114】
別の実施形態において、癌は癌幹細胞であり得る。特定の実施形態において、癌幹細胞は乳癌、肺癌、メラノーマ、および大腸癌からなる群に由来し得る。
【0115】
いくつかの実施形態において、肺癌は、小細胞肺癌、非小細胞性肺癌、またはその組み合わせを含み得る。
【0116】
いくつかの実施形態において、メラノーマは、表在拡大型（superficial spreading）メラノーマ、結節型（nodular）メラノーマ、悪性黒子型（lentigo）メラノーマ、末端黒子型（acral lentiginous）メラノーマ、無色素性(amelanotic)メラノーマ、母斑様（nevoid）メラノーマ、スピッツ（spitzoid）メラノーマ、線維形成性（desmoplastic）メラノーマ、またはその組み合わせを含み得る。
【0117】
いくつかの実施形態において、大腸癌は腺癌を含み得る。
【0118】
いくつかの実施形態において、本明細書に詳述される化学式（Ｉ－ａ）、（Ｉ－ａ－１）、（Ｉ－ａ－２）、または（Ｉ－ａ－３）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、または本明細書に詳述される化合物を含む組成物は、メラノーマ、肺癌、大腸癌、またはその組み合わせを治療するために使用することができる。
【0119】
いくつかの実施形態において、乳癌は、浸潤性乳管癌、転移性乳癌、炎症性乳癌、トリプルネガティブ乳癌、非浸潤性乳管癌、またはその組み合わせを含み得る。さらなる実施形態において、癌は乳癌であり、対象は、エストロゲン受容体陽性、エストロゲン受容体陰性およびプロゲステロン受容体陰性の両方、ＨＥＲ２発現（ＨＥＲ２＋）、ＨＥＲ２発現無し（ＨＥＲ２－）、またはその組み合わせであり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に詳述される化学式（Ｉ－ｂ）、（Ｉ－ｂ－１）、（Ｉ－ｂ－２）、または（ｌ－ｂ－３）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、または本明細書に詳述される化合物を含む組成物は、乳癌を治療することに使用することができる。
【0120】
いくつかの実施形態において、本明細書に詳述される化学式（Ｉ－ｃ）、（Ｉ－ｃ－１）、（Ｉ－ｃ－２）、または（Ｉ－ｃ－３）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、または本明細書に詳述される化合物を含む組成物は、メラノーマ、肺癌、大腸癌、乳癌、またはその組み合わせを治療するために使用することができる。
【0121】
いくつかの実施形態において、対象は、成人および幼児などのヒトである。いくつかの実施形態において、その対象は、哺乳類などの動物である。
【0122】
方法は、本明細書に詳述される化合物、またはその薬学的に許容される塩、または本明細書に詳述される量で本明細書に詳述される化合物を含む組成物を投与することを含み得る。いくつかの実施形態において、その方法は、本明細書に詳述されるように約０．０００１～約１０００ｍｇ／ｋｇの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【0123】
組成物中の化合物（複数可）の有用な投与量は、その動物モデルにおけるそれらのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性およびｉｎ ｖｉｖｏ活性を比較することにより決定することができる。げっ歯動物、ブタ、および他の動物におけるヒトへの有効な投与量の推定方法は、当業界で知られており；例えば、米国特許第４，９３８，９４９号を参照されたい。
【0124】
本明細書で詳述される治療用組成物における化合物の実際の投与量レベルは、特定の患者、組成物および投与様式に対する所望の治療応答を達成するのに有用な化合物（複数可）の量を得るように変更することができる。治療に用いるための、選択された投与量レベルおよび本化合物、またはその薬学的に許容される塩の量は、選択された特定の化合物または塩、投与経路、治療される疾患または状態、治療される対象の年齢および状態、治療される状態の重症度、および治療される患者の状態および以前の病歴によって変化し得る。薬学的に許容される塩を投与する場合、投与量は遊離塩基として計算することができる。しかし、所望の治療効果を得るために求められるものよりも低いレベルで化合物の投与を開始し、所望の効果が得られるまで投与量を徐々に増加させることは当業者の技術範囲内である。特定の状況において、開示された化合物は、特に積極的な疾患または状態を効果的かつ積極的に治療するために、本明細書に記載される投与量範囲を超える量で投与されることがある。
【0125】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、または医薬組成物は、経口投与または静脈内投与により投与されることができる。しかしながら、一般に、適切な用量は、しばしば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１０．０ｍｇ／ｋｇなどの、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１０００ｍｇ／ｋｇの範囲であることになる。例えば、適切な容量は、一日当たりレシピエントの約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇ体重、一日当たりレシピエントの約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇ体重、一日当たりレシピエントの約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５．０ｍｇ／ｋｇ体重、一日当たりレシピエントの約０．２ｍｇ／ｋｇ～４．０ｍｇ／ｋｇなどの、一日当たり約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約５．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であってよい。化合物は、単位剤形で投与することができ；例えば、単位剤形あたり有効成分の１～１００ｍｇ、１０～１００ｍｇ、または５～５０ｍｇを含む。
【0126】
所望の用量は、好都合には、単回用量で、または適切な間隔で投与される分割用量として、例えば、一日当たり２、３、４つ、またはそれ以上のサブ用量として提示され得る。サブ用量自体は、例えば、多くの個別のゆるい間隔の投与にさらに分割することができる。
【0127】
投与される特定のｉｎ ｖｉｖｏ投与量および特定の投与様式は、治療される年齢、体重、苦痛の重症度、および哺乳動物種、特定の適用される化合物、およびこれらの化合物に適用される特定の用途に応じて変化し得る。所望の結果を達成するための有効な投与量レベルの決定は、既知の方法、例えば、ヒトの臨床試験、ｉｎ ｖｉｖｏ研究またはｉｎ ｖｉｔｒｏ研究によって成し遂げることができる。例えば、本明細書で開示される化合物、またはその薬学的に許容される塩の有効投与量は、動物モデルのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性、およびｉｎ ｖｉｖｏ活性を比較することにより決定することができる。かかる比較は、確立された薬物に対して比較することにより行われてもよい。
【0128】
投与量および間隔は、調節効果（modulating effects）を維持するのに十分な活性部分の血漿レベル、または最小有効濃度（ＭＥＣ）を提供するように個別に調整されることができる。ＭＥＣは化合物ごとに異なることになるが、ｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏのデータから推定されることができる。ＭＥＣを達成するために必要な投与量は、個々の特性および投与経路に依存することになる。しかしながら、血漿濃度の測定のためにはＦＩＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイを使用することができる。投与間隔はまた、ＭＥＣ値を使用して決定することもできる。組成物は、血漿レベルが１０～９０％の時間、好ましくは３０～９０％、および最も好ましくは５０～９０％の間、好ましくは３０～９０％間およびより好ましくは５０～９０％の間、ＭＥＣ値を超えて維持されるレジメンを使用して投与されるべきである。局所投与または選択的取り込みの場合、薬物の有効局所濃度は血漿濃度と関連がないこともある。
【0129】
本明細書で開示される化合物、塩、および組成物は、既知の方法を使用して有効性および毒性を評価することができる。例えば、特定の化合物、または特定の化学部位を共有するその化合物のサブセットの毒性は、哺乳類、および好ましくはヒト、細胞株などの細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ毒性を測定することより確立することができる。かかる研究の結果は、哺乳類、またはより具体的には、ヒトなどの動物における毒性をしばしば予測するものである。あるいは、マウス、ラット、ウサギ、イヌまたはサルなどの動物モデルにおける特定の化合物の毒性は、既知の方法によって測定することができる。特定の化合物の有効性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法、動物モデル、またはヒト臨床試験などのいくつかの認識された方法を使用して確立することができる。有効性を測定するモデルを選択するには、当業者は、適切なモデル、用量、投与経路および／または体制（regime）を選択するために、当業者の状態によって誘導されることができる。
【0130】
本明細書で詳述される化合物（複数可）、またはその薬学的に許容される塩、または本明細書に詳述される化合物（複数可）を含む組成物は、経口、直腸、非経口、大槽内（intracisternally）、膣内、経皮（例えば、パッチを使用）、経粘膜、舌下、肺、腹腔内、局所（粉末、軟膏または点滴剤（drops）による）、バッカルまたは口腔または鼻腔スプレーとして、様々な既知の経路によってヒトおよび他の哺乳動物に投与することができるが、これらに限定されるものではない。本明細書で使用される「非経口の（parenteral）」または「非経口で(parenterally)」という用語は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および関節内注射および注入を含む投与様式を指す。
【0131】
本明細書に記載される組成物は、組成物の安定性、送達性、および／または活性を延長するために追加の組成物とともに投与するか、または追加の治療薬と組み合わせて、または追加の治療薬の投与の前または後に提供することができる。併用療法は、本明細書に記載される一つまたは複数の化合物および一つまたは複数の追加の医薬品を含む単一の医薬剤形の投与、ならびにそれ自体の別個の医薬剤形における化合物および各追加の医薬品の投与を含む。 例えば、本明細書に詳述される化合物は、本明細書に詳述される追加の抗癌剤と共に対象に投与され得る。
【0132】
本明細書に詳述される化合物、またはその薬学的に許容される塩はまた、リポソームの形態で投与されることもできる。当業界で既知のように、リポソームは一般的にリン脂質または他の脂質物質に由来される。リポソームは、水性媒体において分散される単層または多重層の水和液晶により形成される。任意に、リポソームを形成することができる生理学的に許容かつ代謝される脂質を使用することができる。リポソーム形態の本組成物は、本明細書に記載の化合物に加えて、抗癌剤、安定化剤、保存剤、添加剤などを含むことができる。好ましい脂質には、別々にまたは一緒に使用される天然および合成リン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）がある。リポソームを形成する方法は、当業界において既知である。例えば、Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y.(1976), p.33および以下の頁を参照されたい。かかる組成物は、物理的状態、溶解性、安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ放出速度、およびｉｎ ｖｉｖｏクリアランスの速度に影響を与えることになる。
【0133】
本開示の一つの方法において、薬学的に許容される組成物は、放出制御システムにおいて送達されることができる。例えば、薬剤は、静脈内注入、埋め込み型浸透圧ポンプ、経皮パッチ、リポソーム、または他の投与様式を使用して投与されることができる。一実施形態において、ポンプを使用することができる(Langer, supra; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201(1987); Buchwaldら, Surgery 88:507 (1980); Saudekら, N. Engl. J. Med. 321:574(1989) 参照) 。別の実施形態において、高分子材料を使用することができる。さらに別の実施形態において、放出制御システムは、治療標的、例えば肝臓の近傍に配置されることができ、したがって全身用量の一部分しか必要としない（例えば、Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984) 参照）。他の放出制御システムは、Langerによる総説論文(Science 249:1527-1533 (1990))において議論されている。
【実施例】
【0134】
５．実施例
上記は、例示の目的で提示され、本発明の範囲を限定することを意図されていない以下の実施例を参照することによってよりよく理解され得る。本開示は、添付の非限定的な実施例によって説明される、複数の態様および実施形態を有する。
上記は、例示の目的で提示され、本発明の範囲を限定することを意図されていない以下の実施例を参照することによってよりよく理解され得る。本開示は、添付の非限定的な実施例によって説明される、複数の態様および実施形態を有する。
【0135】
実施例１．材料および方法
ＣＬＲ２００００４５のｉｎ ｖｉｔｒｏ取り込みは、ＭＣＦ－７乳癌細胞および正常ヒト皮膚線維芽（ＮＨＤＦ）細胞を使用して評価し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを介して測定した。乳癌細胞は、１０％ＦＢＳを添加した最小必須培地で維持した。すべての細胞は３７℃および５％ＣＯ2で維持した。細胞を１μＭの薬物でインキュベートし、報告値は３回の評価の平均であった。Ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性は、ＭＣＦ－７乳癌細胞およびＨｓ５７８Ｔトリプルネガティブ乳癌細胞を使用して、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイにより測定した。
ＣＬＲ２００００４５のｉｎ ｖｉｔｒｏ取り込みは、ＭＣＦ－７乳癌細胞および正常ヒト皮膚線維芽（ＮＨＤＦ）細胞を使用して評価し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを介して測定した。乳癌細胞は、１０％ＦＢＳを添加した最小必須培地で維持した。すべての細胞は３７℃および５％ＣＯ2で維持した。細胞を１μＭの薬物でインキュベートし、報告値は３回の評価の平均であった。Ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性は、ＭＣＦ－７乳癌細胞およびＨｓ５７８Ｔトリプルネガティブ乳癌細胞を使用して、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイにより測定した。
【0136】
ＣＬＲ１８００９９のｉｎ ｖｉｔｒｏ取り込みおよび放出性を、Ａ５４９腫瘍細胞、ＨＣＴ１１６腫瘍細胞、および正常ヒト皮膚線維芽（ＮＨＤＦ）細胞を使用して評価し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを介して測定した。細胞を１μＭの薬物でインキュベートし、そして報告値は３回の評価の平均であった。Ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性は、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイにより測定した。
【0137】
ニワトリ胚を使用するｉｎ ｖｉｖｏ有効性スクリーニングモデルにおいて、７２μＭのＣＬＲ２００００４５を投与してＭＣＦ－７腫瘍に対する有効性を測定し、そして５０μＭでのビヒクルコントロールおよびパクリタキセルポジティブコントロールと比較した。ＣＬＲ２００００４５は胚のケーシングに局所的に適用した。白色レグホンの受精卵を３７．５℃、相対湿度５０％で９日間培養した。その瞬間（Ｅ９）、卵殻に小さな穴を開けて気嚢に絨毛尿膜（ＣＡＭ）を落とし、ＣＡＭ上の卵殻に１ｃｍ2の窓を開けた。各群には、少なくとも２０個の卵（９日間の発生後の胚の生存率に応じて、群あたり２０個以上の卵が存在し得る）を使用した。いくつかの胚死は腫瘍移植後に発生するか、または腫瘍移植の欠陥に関連し得ることから、データは群あたり２０個未満の卵（群あたり最低１５個の卵）で収集され得る。腫瘍細胞は、１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを添加したＤＭＥＭで培養した。Ｅ９日目にトリプシンで細胞を剥離し、完全培地で洗浄した後、移植用培地に懸濁した。３×１０6個の細胞の接種物を群ごとに各卵（Ｅ１０）のＣＡＭ上に適宜添加し、その後卵を無作為に群に分けた。
【0138】
胚の生存率は毎日確認した。Ｅ１８に死亡した胚の数を、最終的な目に見える肉眼的異常の観察と併せて数え、治療によって誘発された胚の毒性を評価した。最終的な死亡率およびカプラン－マイヤー曲線を全群について算出した。観察された任意の目に見える異常も認められた。Ｅ１８日目に、腫瘍を有するすべての生存胚からＣＡＭの上部（腫瘍を有する）を除去し、ＰＢＳ緩衝液で洗浄した後、直接ＰＦＡに移した（４８時間固定）。その後、腫瘍を正常なＣＡＭ組織から注意深く切り離し、重量を測定した。
【0139】
Ｉｎ ｖｉｖｏ有効性は、ＨＣＣ７０トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）異種移植Ｒ２Ｇ２マウスでさらに評価した。ＣＬＲ２００００４５を２週間にわたり週に１回、２回、または３回投与する３用量（１ｍｇ／ｋｇ）で評価した。ＣＬＲ２００００４５は尾静脈注射により全身投与された。各群には１０匹のマウスが含まれた。有効性評価のために腫瘍体積、忍容性評価のために体重を記録した。生存率もまた記録した。
【0140】
ＣＬＲ１８００９９を健常Ｃ５７ＢＬ／６マウスに静脈内投与（ＩＶ）して、ＦＬＶ分子単独と比較した最大耐用量（ＭＴＤ）を測定した。この場合、ＣＬＲ１８００９９を投与するために使用されたビヒクルはＰＢＳであったが、任意の薬学的に適切なビヒクルを使用することができる。各群には５匹のマウスが含まれた。Ｉｎ ｖｉｖｏ有効性は、ＨＣＴ１１６異種移植胸腺欠損ヌードマウスで評価した。マウスは、５ｍｌの１．２％メチルセルロースに再懸濁された約１×１０6個の細胞をマウスの後部脇腹に注射することによって開発された側面モデルであった。試験は、群の平均腫瘍体積が約１２０ｍｍ3に達したときに開始された。腫瘍体積はノギスを使用して測定し、腫瘍の長さ、幅、および深さの測定値は腫瘍体積を算出するために使用した。ＣＬＲ１８００９９の２用量（２ｍｇ／ｋｇを２回投与または２ｍｇ／ｋｇを３回投与）を評価した。各群には１０匹のマウスが含まれた。有効性評価のために腫瘍体積、忍容性評価のために体重を記録した。すべてコンジュゲートされたＣＬＲ１８００９９および遊離ＦＬＶを質量分析により測定した。
【0141】
実施例２．リン脂質脂質（Phospholipid lipid）エーテル送達ビヒクルは、広範囲の腫瘍細胞に対して特異性を示す
様々な腫瘍細胞株におけるＰＤＣｓの取り込みを実証するために、ＭＣＴ－１１６、ＭｅＳ ＳＡ／Ｄｘ５、ＭＩａ ＰａＣａ－２、Ｏｖｃａｒ－３およびＵ－８７ＭＧなどの様々な腫瘍細胞株を完全培地中で３７℃で２４時間、５μＭのＣＬＲ１５０１（ＰＬＥ＋ＢＯＤＩＰＹ蛍光ペイロード）でインキュベートした。各細胞株は、増殖を最適化するためにわずかに異なる媒体を有することができ、当業界で知られている任意の適切な媒体を各細胞株に使用することができる。すべての細胞は、１０％ＦＢＳおよび５％ＣＯ2を添加した適切な培地で３７℃に維持した。ＣＬＲ１５０１は励起され、その後Ａｌｅｘａ－Ｆｌｕｏｒ４８８フィルターで検出された。ＣＬＲ１５０１は、すべての異なる腫瘍細胞株において高度に局在していた（図１Ａおよび図１Ｂ）。これは、ＭＭ．ＩＳ、ＭＭ．ＩＲ、ＲＰＭ１８２２６、Ｕ２６６、およびＮＣＩＨ９２９、Ｐａｎｃ－１、Ａ３７５、ＰＣ－３、Ｃａｋｉ－２、ＨＣＴ－１１６、Ａ５４９、転移性ＰＣ－３、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＨＴ－２９、ＳＶ－４０、ＣＮＳ－１、ＢｘＰＣ３、ＭＣＦ－７、Ｌｕｃａｐ、ＬＮＣａｐ、ＭＥＳ ＳＡ／Ｄｘ５、Ｃａｐａｎｌ、ＨＴＢ－７７、Ｌａｎ５、ＣＨＬＡ－２０、ＮＢ１６９１、およびＳＫ－Ｎ－ＡＳなどの１００を超える腫瘍細胞株で同様の結果が報告されている。ＣＬＲ１５０１をｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて異なる癌細胞株および正常ヒト皮膚線維芽細胞株に投与した。２４時間後、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるこれらの癌細胞株において、ＣＬＲ１５０１は正常線維芽細胞と比較して５～９倍優先的に取り込まれることが示された。保持されたＣＬＲ１５０１は、血漿およびオルガネラ膜に関連していた。
様々な腫瘍細胞株におけるＰＤＣｓの取り込みを実証するために、ＭＣＴ－１１６、ＭｅＳ ＳＡ／Ｄｘ５、ＭＩａ ＰａＣａ－２、Ｏｖｃａｒ－３およびＵ－８７ＭＧなどの様々な腫瘍細胞株を完全培地中で３７℃で２４時間、５μＭのＣＬＲ１５０１（ＰＬＥ＋ＢＯＤＩＰＹ蛍光ペイロード）でインキュベートした。各細胞株は、増殖を最適化するためにわずかに異なる媒体を有することができ、当業界で知られている任意の適切な媒体を各細胞株に使用することができる。すべての細胞は、１０％ＦＢＳおよび５％ＣＯ2を添加した適切な培地で３７℃に維持した。ＣＬＲ１５０１は励起され、その後Ａｌｅｘａ－Ｆｌｕｏｒ４８８フィルターで検出された。ＣＬＲ１５０１は、すべての異なる腫瘍細胞株において高度に局在していた（図１Ａおよび図１Ｂ）。これは、ＭＭ．ＩＳ、ＭＭ．ＩＲ、ＲＰＭ１８２２６、Ｕ２６６、およびＮＣＩＨ９２９、Ｐａｎｃ－１、Ａ３７５、ＰＣ－３、Ｃａｋｉ－２、ＨＣＴ－１１６、Ａ５４９、転移性ＰＣ－３、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＨＴ－２９、ＳＶ－４０、ＣＮＳ－１、ＢｘＰＣ３、ＭＣＦ－７、Ｌｕｃａｐ、ＬＮＣａｐ、ＭＥＳ ＳＡ／Ｄｘ５、Ｃａｐａｎｌ、ＨＴＢ－７７、Ｌａｎ５、ＣＨＬＡ－２０、ＮＢ１６９１、およびＳＫ－Ｎ－ＡＳなどの１００を超える腫瘍細胞株で同様の結果が報告されている。ＣＬＲ１５０１をｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて異なる癌細胞株および正常ヒト皮膚線維芽細胞株に投与した。２４時間後、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるこれらの癌細胞株において、ＣＬＲ１５０１は正常線維芽細胞と比較して５～９倍優先的に取り込まれることが示された。保持されたＣＬＲ１５０１は、血漿およびオルガネラ膜に関連していた。
【0142】
細胞毒性ペイロードのｉｎ ｖｉｔｒｏ取り込みおよび放出は、Ａ３７５およびＡ５４９細胞株において、半安定リンカー（ＣＬＲ２２０８、「ＰＤＣ－ＳＭ１」）を持つ２μＭの細胞毒性小分子ＰＤＣと３７℃で４８時間完全培地中でインキュベートすることにより測定した。ＰＤＣ－ＳＭ１の取り込みは、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳで測定した。ＰＤＣ－ＳＭ１は、３０分以内に取り込みが開始することを実証した。細胞に晒したコンジュゲートの２０～４０％は２４時間以内に腫瘍細胞の細胞質において測定した（図２Ａ）。その後、ＣＬＲ２２０６（「ＰＤＣ－ＳＭ２」、切断可能なリンカーを除いたＰＤＣ－ＳＭ１と同様）を利用して、腫瘍細胞内のペイロードの放出を測定した。ＣＬＲ２２００（「ＰＤＣ－ＳＭ３」）も研究した。小分子ペイロードの測定可能な放出は、インキュベーション後１～２時間の間に生じた（図２Ｂ）。ペイロードのわずかな放出が培地中で生じた（＜１ｎＭ）。これらの結果は、リン脂質エーテル分子が広範囲の腫瘍を標的とする能力を有し、ＰＤＣｓが腫瘍細胞株への晒した薬物の２０～４０％の取り込みを達成する能力を有することを示した。
【0143】
腫瘍細胞上の脂質ラフトを介した取り込みを測定するために、多発性骨髄腫細胞をＣＬＲ１５０２（ＰＬＥに結合した近赤外分子）で３７℃で２４時間インキュベートした。翌日、細胞を洗浄し、核染色（ヘキスト３３３４２）で共染色した。コレラ毒素サブユニットＢを使用して、脂質ラフトの存在のためにさらに染色した。細胞をコレラ毒素サブユニットＢで２４時間インキュベートした。さらに、原発腫瘍試料の脂質ラフトを介した取り込みを測定するために、患者由来の多発性骨髄腫細胞をヘキスト３３３４２で染色し、ＣＬＲ１５０１と共にインキュベートした（図３）。これらの結果は、ＰＤＣの取り込みが細胞株および原発腫瘍試料の両方の腫瘍細胞膜上の脂質ラフトに関連していることを実証する。
【0144】
細胞毒性ペイロードによるｉｎ ｖｉｔｒｏ有効性を測定した。ＰＤＣ－ＳＭ２は、メラノーマ（Ａ３７５）および肺癌（Ａ５４９）細胞に対して、サブマイクロモルの活性（細胞上でインキュベートした完全なコンジュゲート濃度に基づいて測定された濃度）を実証した。ＰＤＣ－ＳＭ２は、肺癌よりもメラノーマに対してより低い活性を示したが（ＩＣ５０ ０．１３１対０．０１６）、より強力であった（０％対１２％の生細胞が残存、図４）。ＰＤＣ－ＳＭ２はまた、大腸癌（ＨＣＴ－１１６）細胞に対して、正常な線維芽細胞に対して活性のない肺癌と同様の活性および効力を示した。したがって、ＰＤＣｓはペイロードの放出および腫瘍細胞に対する強力なナノモル活性を示した。
【0145】
ＰＤＣｓの細胞毒性をｉｎ ｖｉｖｏにおいて忍容されるかどうかを測定するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに次の方法で投与した：ＰＤＣ－ＳＭ２を０、３、および７日目に０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、または２．０ｍｇの用量レベルで投与した；ペイロード単独を０日目に０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、または０．５ｍｇ／ｋｇでのみ投与した；ビヒクルは、０、３、および７日目に投与した。ＰＤＣｓおよびビヒクルコントロールは、体重の変化（体重減少なし）によって測定されるように、反復投与中に毒性または有害事象を示さなかった。０．２５および０．４ｍｇ／ｋｇのペイロード用量では忍容されたが、マウスの皮膚および外皮はいくつかの毒性が認められた。０．５ｍｇ／ｋｇのペイロード用量は忍容されず、２匹のマウスは単回注入後４日目までに死亡し、すべてのマウスは５日目に犠牲になった（図５）。これらのＰＤＣｓは、ヒト血漿中で良好な血漿安定性を示した。血漿安定性は、Ｃｙｐｒｏｔｅｘの血漿安定性アッセイを使用して測定した。試料は１μＭの濃度で、０、１５、３０、６０および１２０分でインキュベートした。血漿中で分解を受けるポジティブコントロール化合物を使用した。各インキュベーション時点で残っている化合物のパーセントを測定した。ＰＤＣ－ＳＭ２は、マウス血漿にいくつかの不安定性を示し、いくつかの毒性を引き起こすことがある（表１）。本ＰＤＣｓはｉｎ ｖｉｖｏで十分に忍容される。全体的には、ＰＤＣｓは、小分子を腫瘍細胞に標的化するための新規かつ独創的なアプローチを提供する。
【0146】
【表1】
【0147】
ＣＬＲ１５０２の選択的取り込みはまた、腸腫瘍においてｉｎ ｖｉｖｏで測定した。５０μｇのＣＬＲ１５０２の投与９６時間後の剖検で、結腸全体および小腸の末端部分を除去した（図１９Ａおよび図１９Ｂ）。ＣＬＲ１５０２を尾静脈注射により投与した。シグナル強度が増加した領域は、動物の皮膚を通してＣＬＲ１５０２を直接視覚化できるＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍを使用して観察した。次に、動物を安楽死させた後、顕微解剖によってＩＶＩＳシステムで同定された組織を切除し、組織学を行って、腫瘍組織対非腫瘍組織、および近赤外線標識が生じた場所を確認した。これらの領域は、非侵襲的（結腸 図１９Ｃ；小腸末端 図１９Ｆ）および侵襲的（結腸 図１９Ｄ；小腸末端 図１９Ｅ）な腫瘍を示した。
【0148】
他の研究において、ＣＬＲ１５０２は転移巣および所属リンパ節に蓄積する。腸を除去した後に、腸間膜脂肪、膵臓、および脾臓をまとめて単離した。一つの例では、腸間膜内にサイズが～４ｍｍの２つの転移性腫瘍沈着物が認められた。これらの病変では、Ｆｌｕｏｂｅａｍ近赤外線イメージング装置で簡単に可視化した。これらの病変は、Ｈ＆Ｅで転移性の悪性病変であることを確認した。局所リンパ節腫脹はまた、Ｆｌｕｏｂｅａｍを使用してＣＬＲ１５０２を蓄積することも示した。これらの過形成リンパ節内に悪性細胞は観察されなかった。
【0149】
腫瘍の厚さは、腸癌において認められるシグナル強度の増加の原因にはならない（図２２Ａおよび図２２Ｂ）。部検は、マウスあたり５０μｇのＣＬＲ１５０２を注射した９６時間後のマウスで実施した。組織の厚さの効果を調べるために、正常に見える結腸の切片をお互いに重ね合わせた。放射効率を測定して、正常な結腸および腸腫瘍の１、２、および３層間のシグナル強度を比較した。正常の結腸の一層はおおよそ１ｍｍの厚さであることが認められた。組織の厚さは、腺腫でみられる強度の増加の原因となり得るが、腺癌でみられる違いの原因とはならない。
【0150】
大腸癌モデルにおけるＣＬＲ１５０２取り込みのｉｎｖｉｖｏ光学スキャニングは、正常組織と比較して悪性の優先的な保持を実証した。大腸癌（ＨＣＴ－１１６）異種移植片を有する胸腺欠損ヌードマウスに１ｍｇのＣＬＲ１５０２を静脈内注射し、Ｌｉ－ＣＯＲ Ｐｅａｒｌ（登録商標）インパルスシステムを使用して画像化した（図２３）。蛍光強度（カラーバーで示される）および生体内分布は、経時的にｉｎ ｖｉｖｏで測定した。
【0151】
乳癌モデルマウスにおけるＣＬＲ１５０２の取り込みのｉｎ ｖｉｖｏ光学スキャニングは、正常組織と比較して悪性の優先的な保持を実証した。同所性乳癌異種移植片（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）を有する胸腺欠損ヌードマウスにおおよそ８０μｇのＣＬＲ１５０２を静脈内注射し、Ｆｌｕｏｐｔｉｃｓ Ｆｌｕｏｂｅａｍ（登録商標）およびＩＶＩＳ（登録商標）Ｓｐｅｃｔｒｕｍシステムを使用して、ｉｎ ｖｉｖｏで７日間（１６８時間）毎日画像化した（図２４）。研究結果は、腫瘍内での選択的な取り込みと長期の保持（それぞれＦｌｕｏｂｅａｍおよびＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍの黄色および緑色の矢印）、および時間の経過に伴う正常組織からのクリアランスの相対的な増加を示した。
【0152】
各脇腹に肺癌異種移植片（Ｈ２２６肺）を有する胸腺欠損ヌードマウスにおおよそ５０μｇのＣＬＲ１５０２を静脈内注射し、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍを使用して落射蛍光モードで画像化した（図２５）。黒矢印で示されるように、９６時間では、悪性および正常組織の放射効率の違いにより、腫瘍の縁の光に十分なコントラストが創られることに留意されたい。
【0153】
実施例３．コンブレタスタチンＡ－４アナログを伴うＣＬＲ２００００４５は乳癌治療を改善する
ＣＬＲ２００００４５は、正常組織への取り込みは最小限で、腫瘍細胞への有意な取り込みを示した。薬剤の放出は、各時点でおおよそ５０％の放出を示した。２４時間から４８時間の間に、薬剤の取り込みおよび放出との間の定常状態を達成した（図６）。ＣＬＲ２００００４５は、２つの乳癌細胞株（ＭＣＦ－７およびＨｓ５７８Ｔ）に対して優れた活性および効力を示し、ＩＣ５０はそれぞれ７６ｎＭおよび５１ｎＭであった（図７）。その分子はまた、肺癌、メラノーマおよび大腸癌を含む、いくつかの他の固形腫瘍に対しても活性を実証した。半数最大阻害濃度（ＩＣ５０）は、その細胞株において測定した（表２）。ＣＬＲ２００００４５の血漿安定性もまた測定した（表３）。
ＣＬＲ２００００４５は、正常組織への取り込みは最小限で、腫瘍細胞への有意な取り込みを示した。薬剤の放出は、各時点でおおよそ５０％の放出を示した。２４時間から４８時間の間に、薬剤の取り込みおよび放出との間の定常状態を達成した（図６）。ＣＬＲ２００００４５は、２つの乳癌細胞株（ＭＣＦ－７およびＨｓ５７８Ｔ）に対して優れた活性および効力を示し、ＩＣ５０はそれぞれ７６ｎＭおよび５１ｎＭであった（図７）。その分子はまた、肺癌、メラノーマおよび大腸癌を含む、いくつかの他の固形腫瘍に対しても活性を実証した。半数最大阻害濃度（ＩＣ５０）は、その細胞株において測定した（表２）。ＣＬＲ２００００４５の血漿安定性もまた測定した（表３）。
【0154】
【表2】
【0155】
【表3】
【0156】
白色レグホン鶏の受精卵（２０個／投与群）を９日間３７．５℃でインキュベートした。ＭＣＦ－７細胞を移植前に標準的な条件下で培養した。１０日目に３×１０6個のＭＣＦ－７の接種物を絨毛膜に添加した。その後、卵を無作為に処理群に分けて、次の条件で４回（１１、１３、１５および１７日目）処理した；ビヒクル、用量あたり５０μＭのパクリタキセル、および用量あたり７２μＭのＣＬＲ２００００４５。ＣＬＲ２００００４５は、本スクリーニングモデルにおいてパクリタキセルと同様の活性を示した（図８）。
【0157】
本研究は、群の平均腫瘍体積が～２００ｍｍ3（４日目）に達したときに開始した。ＣＬＲ２００００４５を、次に示す用量でＩＶ投与した：５日目および１２日目または５、８、１２日目および１５日目、または５、７、９、１２、１４、および１６日目のいずれかで１ｍｇ／ｋｇ。ＣＬＲ２００００４５は、用量群１から用量群３への腫瘍体積の用量反応減少を実証し（週に３回、２週間）、試験した最高用量は腫瘍のほぼ１００％の根絶を示した。２つの最高用量群は、ビヒクルコントトールと比較して、統計的に有意な腫瘍体積の減少を示した（それぞれ、ｐ≦０．０５およびｐ≦０．０１）（図９）。カプラン－マイヤー曲線は、ＣＬＲ２００００４５を１ｍｇ／ｋｇで週３回、２週間の治療が、ビヒクルおよび週１回の投与と比較して生存率の有意な増加をもたらしたことを示す（それぞれｐ≦０．００１、ｐ≦０．０５）。１ｍｇ／ｋｇを週に２回、２週間、ビヒクルと比較して有意な増加をもたらした（ｐ≦０．０５；図１０）。治療後の体重の変化を（ＨＣＣ７０）マウス異種移植モデルで測定した（図１１Ａおよび図１１Ｂ）。
【0158】
ＣＬＲ２００００４５は、正常細胞への取り込みは最小限である一方で、腫瘍細胞株における有意なペイロードの取り込みおよび放出（晒した薬物の２０～４０％）を実証した。ＣＬＲ２０００４５は、複数の乳癌細胞株に対して強力なｉｎ ｖｉｔｒｏ活性を示す。ＣＬＲ２００００４５は、トリプルネガティブ乳癌モデル（ＨＣＣ７０）および転移性腺癌乳癌モデル（ＭＣＦ－７）に対して強力なｉｎ ｖｉｖｏ活性を実証した。ＣＬＲ２０００４５は、ＴＮＢＣ（ＨＣＣ７０）モデルにおいて有意な延命効果を提供し、体重減少によって測定されるように二つの最高用量でも十分に忍容することを示した。これらのデータをまとめると、様々な乳癌細胞株および動物モデルに対するＣＬＲ２０００４５の強力なｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ活性を実証し、この継続的なＰＤＣの開発を保証する。
【0159】
実施例４．ＣＬＲ１８００９９は大腸腫瘍に対する抗腫瘍薬の安全性および有効性を改善する
ＣＬＲ１８００９９は、乳癌および肺癌に対して優れた活性および効力を示し、ＩＣ５０はそれぞれ０．０２４および０．０１１であった（図１２）。化合物はまた、メラノーマおよび大腸癌を含む、いくつかの他の固形腫瘍に対しても活性を実証した。ＣＬＲ１８０００９５、ＣＬＲ１８００９９Ａ、およびＣＬＲ１８００９９Ｂの血漿安定性を、マウスおよびヒトにおいて測定した（表４）。ＣＬＲ１８０００９５は、マウス血漿においていくつかの不安定性を示し、いくつかの毒性を引き起こすことがある。
ＣＬＲ１８００９９は、乳癌および肺癌に対して優れた活性および効力を示し、ＩＣ５０はそれぞれ０．０２４および０．０１１であった（図１２）。化合物はまた、メラノーマおよび大腸癌を含む、いくつかの他の固形腫瘍に対しても活性を実証した。ＣＬＲ１８０００９５、ＣＬＲ１８００９９Ａ、およびＣＬＲ１８００９９Ｂの血漿安定性を、マウスおよびヒトにおいて測定した（表４）。ＣＬＲ１８０００９５は、マウス血漿においていくつかの不安定性を示し、いくつかの毒性を引き起こすことがある。
【0160】
【表4】
【0161】
研究は、群の平均腫瘍体積が～１２０ｍｍ3（１日目）に到達したときに開始した。ＣＬＲ１８００９９は、１および４日目または１、３、および５日目のいずれかで２ｍｇ／ｋｇでＩＶ投与した。ドセタキセルは、１および４日目において１０ｍｇ／ｋｇで投与した。ＣＬＲ１８００９９は、ドセタキセルと同等またはそれ以上の腫瘍体積の減少を実証し、そして用量依存的な効果を実証した。ドセタキセル群では、１８日目開始から２６日目の終わりまでに、複数の死亡をもたらした（図１６）。カプラン－マイヤー曲線は、ＣＬＲ１８００９９を２ｍｇ／ｋｇで１および４日目または１、３および５日目に治療することが、ドセタキセルと比較して生存の有意な増加をもたらすことを示した（図１７、ログランク検定、ｐ≦０．００１）。体重減少を測定したところ、ＣＬＲ１８００９９（両方の容量）で治療したすべてのマウスは、試験を通して正常な体重増加を実証した（図１８）。各群５匹のマウスは、各用量レベルにおいて投与した。両方のＰＤＣｓは、全てのマウスが生存している状態で１０ｍｇ／ｋｇの用量で忍容し、末梢器官毒性を示さなかった（表５）。ペイロード単独では、０．５ｍｇ／ｋｇを超える用量で忍容されなかった（すべてのマウスが０．５ｍｇ／ｋｇで死亡した）。
【0162】
【表5】
【0163】
ＣＬＲ１８００９９は、正常細胞では最小限の取り込みである一方で、腫瘍細胞株においては有意なペイロードの取り込みおよび放出（晒した薬物の２０～４０％）を実証した。ＣＬＲ１８００９９は、肺癌（Ａ５４９）、乳癌（ＭＣＦ７）、およびメラノーマ（Ａ３７５）、ならびに他の腫瘍種を含む様々な固形腫瘍に対して強力なｉｎ ｖｉｔｒｏ活性を示した。ＣＬＲ１８００９９の２または３回のｉｎ ｖｉｖｏでの投与は、大腸癌においてドセタキセルと同等またはそれ以上の活性を示した。さらに、ＣＬＲ１８００９９は、ドセタキセルと比較して、両方の用量において延命効果を有意に改善した。忍容性評価は、ＣＬＲ１８００９９が担癌および正常動物の両方において十分な忍容性を示し、ＦＬＶペイロードは、正常および担癌マウスの両方で毒性があることを実証した。ＣＬＲ１８００９９は、ＦＬＣアナログペイロード単独と比較して毒性作用が無いことを示し、当該ペイロードはリン脂質エーテル（ＰＬＥ）による標的デリバリーに有効であり得ることを示した。
【0164】
実施例５．化合物の合成
化学合成工程は以下のように実施した。ＨＰＬＣなどの既知の技術を使用して生成物を単離し、そして得られた構造をＮＭＲおよびＭＳにより検証した。
化学合成工程は以下のように実施した。ＨＰＬＣなどの既知の技術を使用して生成物を単離し、そして得られた構造をＮＭＲおよびＭＳにより検証した。
【0165】
ＣＬＲ２２０８は、下記スキーム１
により合成した。
【化24】
【0166】
ＣＬＲ２２０６はスキーム２により合成した。ヒポホスフェートクロリド１Ａ（２．５当量）をＥｔ3Ｎ（１０当量）およびＴＨＦ中で－４０℃で３時間使用し、化合物１から化合物２を調製した。化合物２をＥｔ3Ｎ（１当量）、ＣＤＩ（１．５当量）、ＺｎＣｌ2（２．６当量）、およびＤＭＦ中で１５℃で１２時間、２Ａ（１当量）と反応させて、化合物３を得た。ピペリジン（５当量ＤＭＦ、１５℃、３時間）中で化合物３を脱プロトン化し、化合物４を提供した。化合物４を、Ｅｔ3Ｎ（４当量）、ＣＯＭＵ（１．１５当量）、およびＣＨＣｌ3中で、４Ａ（１当量）と１５℃で２時間反応させ、ＣＬＲ２２０６を得た。
【化25】
【0167】
ＣＬＲ２２００は、スキーム３により合成した。化合物５は、ピリジン（Ｐｙ、２０当量）、ＨＯＢｔ（０．５当量）、およびＤＭＦ中で室温で１２時間、ＭＭＡＥ（０．８当量）と反応させ、化合物６を得た。化合物６を室温で１２時間）、ピペリジン（１０当量）およびＤＭＦ：ＡｃＮ（１：１）中で脱プロトン化し、化合物７を提供した。化合物７を、７Ａ（１当量）、ＴＥＡ（４．５当量）、ＣＯＭＵ（１．２当量）、およびＣＨＣｌ3で、室温で１２時間反応させ、ＣＬＲ２２００を得た。
【化26】
【0168】
ＣＬＲ２０００４５は、スキーム４によって、またはその代わりにスキーム５によって調製した。
【化27】
【化28】
【0169】
ＣＬＲ２０１３は、スキーム６によって調製した。
【化29】
【0170】
ＣＬＲ１８０００９５は、スキーム７によって調製した。
【化30】
【0171】
ＣＬＲ１８００９９Ｂは、スキーム８によって調製した（ＬＣＭＳ 純度９７％）。
【化31】
【0172】
ＣＬＲ１８００９９Ａは、スキーム９によって調製した。
【化32】
【0173】
完全を期すために、本発明の様々な態様は、以下の番号が付けられた項目に示される。
【0174】
項目１.下記化学式（Ｉ）の化合物、
またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
ｎは２～２０であり；
Ｑ1は結合または下記化学式
であり、ここでｍは０～１００であり；
Ｌは下記化学式
であり、ここでＲxはＨまたはハロゲンであり；
Ｑ2は結合または自壊性（self-immolative）スペーサーであり；および
Ｚは抗癌剤である。
【化33】
式中、
ｎは２～２０であり；
Ｑ1は結合または下記化学式
【化34】
Ｌは下記化学式
【化35】
Ｑ2は結合または自壊性（self-immolative）スペーサーであり；および
Ｚは抗癌剤である。
【0175】
項目２.項目１の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、ここで、
Ｑ1は結合または下記化学式
であり、Ｌ－Ｑ2は
である。
Ｑ1は結合または下記化学式
【化36】
【化37】
【0176】
項目３．項目１～２のいずれか一つに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、ここでＺはポロ様キナーゼ１（ＰＬＫ－１）阻害剤、チューブリンポリメラーゼ阻害剤、チューブリン安定化剤、抗腫瘍薬、真核生物翻訳開始因子４（ＥＩＦ４）阻害剤、コンブレタスタチンＡ－４アナログ、またはフラバグリンアナログである。
【0177】
項目４．化学式（Ｉ－ａ）の構造を有する項目１～３のいずれか一つに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、ここで
Ｑ1は下記化学式
であり、
Ｌ－Ｑ2は下記化学式
であり；
および
ＺはＰＬＫ－１阻害剤、チューブリンポリメラーゼ阻害剤、チューブリン安定化剤、抗腫瘍薬、または真核生物翻訳開始因子４（ＥＩＦ４）阻害剤である。
Ｑ1は下記化学式
【化38】
Ｌ－Ｑ2は下記化学式
【化39】
および
ＺはＰＬＫ－１阻害剤、チューブリンポリメラーゼ阻害剤、チューブリン安定化剤、抗腫瘍薬、または真核生物翻訳開始因子４（ＥＩＦ４）阻害剤である。
【0178】
項目５．項目４に記載の化合物であり、ここでＺはＰＬＫ－１阻害剤またはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、およびモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＤ）からなる群から選択される抗腫瘍薬である。
【0179】
項目６．化学式（Ｉ－ｂ）の構造を有する項目１～３のいずれか一つに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、ここで
ｎは１８であり；
Ｑ1は下記化学式
であり、
Ｌ－Ｑ2は下記化学式
であり；および
ＺはコンブレタスタチンＡ－４アナログである。
ｎは１８であり；
Ｑ1は下記化学式
【化40】
Ｌ－Ｑ2は下記化学式
【化41】
ＺはコンブレタスタチンＡ－４アナログである。
【0180】
項目７．化学式（Ｉ－ｃ）の構造を有する項目１～３のいずれか一つに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、ここで
ｎは１８であり；
Ｑ1は結合または下記化学式
であり；
Ｌ－Ｑ2は下記化学式
であり；および
Ｚはフラバグリンアナログである。
ｎは１８であり；
Ｑ1は結合または下記化学式
【化42】
Ｌ－Ｑ2は下記化学式
【化43】
Ｚはフラバグリンアナログである。
【0181】
項目８．下記化学式
からなる群から選択される、項目１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【化44-1】
【化44-2】
【化44-3】
【0182】
項目９．項目１～８のいずれか一つに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物。
【0183】
項目１０．項目１～８のいずれか一つに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を有効量で投与することを含む、それを必要とする対象における癌治療方法。
【0184】
項目１１．項目１０に記載の方法であり、ここでその癌はメラノーマ、肺癌、大腸癌、乳癌、またはその組み合わせである。
【0185】
項目１２．項目１０～１１のいずれか一つに記載の方法であり、ここで
上記肺癌は、小細胞肺癌、非小細胞性肺癌、またはその組み合わせを含み；
上記メラノーマは、表在拡大型（superficial spreading）メラノーマ、結節型（nodular）メラノーマ、悪性黒子型（lentigo）メラノーマ、末端黒子型（acral lentiginous）メラノーマ、無色素性(amelanotic)メラノーマ、母斑様（nevoid）メラノーマ、スピッツ（spitzoid）メラノーマ、線維形成性（desmoplastic）メラノーマ、またはその組み合わせを含み、
上記大腸癌は腺癌を含み；または
上記乳癌は浸潤性乳管癌、転移性乳癌、炎症性乳癌、トリプルネガティブ乳癌、非浸潤性乳管癌、またはその組み合わせを含む。
上記肺癌は、小細胞肺癌、非小細胞性肺癌、またはその組み合わせを含み；
上記メラノーマは、表在拡大型（superficial spreading）メラノーマ、結節型（nodular）メラノーマ、悪性黒子型（lentigo）メラノーマ、末端黒子型（acral lentiginous）メラノーマ、無色素性(amelanotic)メラノーマ、母斑様（nevoid）メラノーマ、スピッツ（spitzoid）メラノーマ、線維形成性（desmoplastic）メラノーマ、またはその組み合わせを含み、
上記大腸癌は腺癌を含み；または
上記乳癌は浸潤性乳管癌、転移性乳癌、炎症性乳癌、トリプルネガティブ乳癌、非浸潤性乳管癌、またはその組み合わせを含む。
【0186】
項目１３．項目１０～１２のいずれか一つに記載の方法であり、ここでその癌が癌幹細胞を含む。
【0187】
項目１４．項目１０～１３のいずれか一つに記載の方法であり、ここでその癌が転移性癌細胞を含む。
【0188】
項目１５．項目１０～１４のいずれか一つに記載の方法であり、ここでその癌が循環腫瘍細胞を含む。
【0189】
項目１６．項目１０～１５のいずれか一つに記載の方法であり、ここでその癌がメラノーマ、肺癌、大腸癌、またはその組み合わせであり、およびここでその化合物が化学式（Ｉ－ａ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【0190】
項目１７．項目１０～１５のいずれか一つに記載の方法であり、ここでその癌が乳癌であり、ここで対象（１）がエストロゲン受容体陽性であり、（２）がエストロゲン受容体陰性かつプロゲステロン受容体陰性の両方であり、（３）がＨＥＲ２を発現し（ＨＥＲ２＋）、（４）がＨＥＲ２を発現していない（ＨＥＲ２－）、またはその組み合わせである。
【0191】
項目１８．項目１０～１５のいずれか一つに記載の方法であり、ここでその癌が乳癌であり、およびここでその化合物が化学式（Ｉ－ｂ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【0192】
項目１９．項目１０～１５および１７のいずれか一つに記載の方法であり、ここでその癌が、癌がメラノーマ、肺癌、大腸癌、乳癌、またはその組み合わせであり、およびここでその化合物が（Ｉ－ｃ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【0193】
特定の態様に関する上述の説明は、本発明の一般的な性質を十分に明らかにすることから、他の人は、当業者内の知識を適用することによって、過度の実験をすることなく、本開示の一般的な概念から逸脱することなく、かかる特定の態様を容易に修正および／または様々な用途に適合させることができることになる。したがって、そのような適合および修正は、本明細書に提示された態様、および指導に基づいて、開示された態様の意味および等価物の範囲内にあることが意図される。本明細書の用語または語法は、教示およびガイダンスに照らして当業者によって解釈されるように、説明が目的であり、限定するためのものではないことを理解されたい。
【0194】
本開示の幅および範囲は、上記に記載された例示的な態様のいずれによっても限定されるべきではなく、以下の特許請求の範囲およびそれらの等価物に従ってのみ定義されるべきである。
【0195】
本出願で引用されたすべての刊行物、特許、特許出願、および／または他の文書は、個々の刊行物、特許、特許出願、および／または他の文書が個別に参照により組み込まれると示された場合と同じ程度に、すべての目的のために参照によりその全体が組み込まれる。
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19A】
【図19B】
【図19C】
【図19D】
【図19E】
【図19F】
【図20A】
【図20B】
【図20C】
【図20D】
【図20E】
【図20F】
【図21A】
【図21B】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【手続補正書】
【提出日】2022-05-12
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0032】
【図20A】図２０Ａ～２０Ｆは、脳におけるＣＬＲ１５０１の取り込みを示す。図２０Ａ、図２０Ｂ、および図２０Ｃは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ；図２０Ａ、Ｔ２強調画像）によって検証され、ＴｏＰｒｏ３核対比染色（図２０Ｂ）と共にＣＬＲ１５０１（図２０Ｃ）で標識されたＵ２５１由来の同所性脳腫瘍を示す。図２０Ｄ、図２０Ｅ、および図２０Ｆは、ＣＬＲ１５０１（緑色）で標識された２２Ｔ多形性膠芽腫由来の同所性異種移植における脳腫瘍の境界の組織学的解析である。図２０Ｄは青色ＤＡＰＩ核対比染色による異種移植の脳境界の落射蛍光の可視化である。図２０Ｅは、ＣＬＲ１５０１で標識された異種移植片の共焦点画像である。図２０Ｆは、異種移植および隣接する正常な脳の共焦点および明視野画像である。Ｎは正常な脳を示し；ＲＦＵは相対蛍光単位を示し；Ｔは腫瘍を示す。
【図20B】図２０Ａ～２０Ｆは、脳におけるＣＬＲ１５０１の取り込みを示す。図２０Ａ、図２０Ｂ、および図２０Ｃは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ；図２０Ａ、Ｔ２強調画像）によって検証され、ＴｏＰｒｏ３核対比染色（図２０Ｂ）と共にＣＬＲ１５０１（図２０Ｃ）で標識されたＵ２５１由来の同所性脳腫瘍を示す。図２０Ｄ、図２０Ｅ、および図２０Ｆは、ＣＬＲ１５０１（緑色）で標識された２２Ｔ多形性膠芽腫由来の同所性異種移植における脳腫瘍の境界の組織学的解析である。図２０Ｄは青色ＤＡＰＩ核対比染色による異種移植の脳境界の落射蛍光の可視化である。図２０Ｅは、ＣＬＲ１５０１で標識された異種移植片の共焦点画像である。図２０Ｆは、異種移植および隣接する正常な脳の共焦点および明視野画像である。Ｎは正常な脳を示し；ＲＦＵは相対蛍光単位を示し；Ｔは腫瘍を示す。
【図20C】図２０Ａ～２０Ｆは、脳におけるＣＬＲ１５０１の取り込みを示す。図２０Ａ、図２０Ｂ、および図２０Ｃは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ；図２０Ａ、Ｔ２強調画像）によって検証され、ＴｏＰｒｏ３核対比染色（図２０Ｂ）と共にＣＬＲ１５０１（図２０Ｃ）で標識されたＵ２５１由来の同所性脳腫瘍を示す。図２０Ｄ、図２０Ｅ、および図２０Ｆは、ＣＬＲ１５０１（緑色）で標識された２２Ｔ多形性膠芽腫由来の同所性異種移植における脳腫瘍の境界の組織学的解析である。図２０Ｄは青色ＤＡＰＩ核対比染色による異種移植の脳境界の落射蛍光の可視化である。図２０Ｅは、ＣＬＲ１５０１で標識された異種移植片の共焦点画像である。図２０Ｆは、異種移植および隣接する正常な脳の共焦点および明視野画像である。Ｎは正常な脳を示し；ＲＦＵは相対蛍光単位を示し；Ｔは腫瘍を示す。
【図20D】図２０Ａ～２０Ｆは、脳におけるＣＬＲ１５０１の取り込みを示す。図２０Ａ、図２０Ｂ、および図２０Ｃは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ；図２０Ａ、Ｔ２強調画像）によって検証され、ＴｏＰｒｏ３核対比染色（図２０Ｂ）と共にＣＬＲ１５０１（図２０Ｃ）で標識されたＵ２５１由来の同所性脳腫瘍を示す。図２０Ｄ、図２０Ｅ、および図２０Ｆは、ＣＬＲ１５０１（緑色）で標識された２２Ｔ多形性膠芽腫由来の同所性異種移植における脳腫瘍の境界の組織学的解析である。図２０Ｄは青色ＤＡＰＩ核対比染色による異種移植の脳境界の落射蛍光の可視化である。図２０Ｅは、ＣＬＲ１５０１で標識された異種移植片の共焦点画像である。図２０Ｆは、異種移植および隣接する正常な脳の共焦点および明視野画像である。Ｎは正常な脳を示し；ＲＦＵは相対蛍光単位を示し；Ｔは腫瘍を示す。
【図20E】図２０Ａ～２０Ｆは、脳におけるＣＬＲ１５０１の取り込みを示す。図２０Ａ、図２０Ｂ、および図２０Ｃは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ；図２０Ａ、Ｔ２強調画像）によって検証され、ＴｏＰｒｏ３核対比染色（図２０Ｂ）と共にＣＬＲ１５０１（図２０Ｃ）で標識されたＵ２５１由来の同所性脳腫瘍を示す。図２０Ｄ、図２０Ｅ、および図２０Ｆは、ＣＬＲ１５０１（緑色）で標識された２２Ｔ多形性膠芽腫由来の同所性異種移植における脳腫瘍の境界の組織学的解析である。図２０Ｄは青色ＤＡＰＩ核対比染色による異種移植の脳境界の落射蛍光の可視化である。図２０Ｅは、ＣＬＲ１５０１で標識された異種移植片の共焦点画像である。図２０Ｆは、異種移植および隣接する正常な脳の共焦点および明視野画像である。Ｎは正常な脳を示し；ＲＦＵは相対蛍光単位を示し；Ｔは腫瘍を示す。
【図20F】図２０Ａ～２０Ｆは、脳におけるＣＬＲ１５０１の取り込みを示す。図２０Ａ、図２０Ｂ、および図２０Ｃは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ；図２０Ａ、Ｔ２強調画像）によって検証され、ＴｏＰｒｏ３核対比染色（図２０Ｂ）と共にＣＬＲ１５０１（図２０Ｃ）で標識されたＵ２５１由来の同所性脳腫瘍を示す。図２０Ｄ、図２０Ｅ、および図２０Ｆは、ＣＬＲ１５０１（緑色）で標識された２２Ｔ多形性膠芽腫由来の同所性異種移植における脳腫瘍の境界の組織学的解析である。図２０Ｄは青色ＤＡＰＩ核対比染色による異種移植の脳境界の落射蛍光の可視化である。図２０Ｅは、ＣＬＲ１５０１で標識された異種移植片の共焦点画像である。図２０Ｆは、異種移植および隣接する正常な脳の共焦点および明視野画像である。Ｎは正常な脳を示し；ＲＦＵは相対蛍光単位を示し；Ｔは腫瘍を示す。
【国際調査報告】