特表 2022-547550 ＰＤ－１軸阻害剤及び抗ペリオスチン抗体の使用により癌を処置する方法。

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-11-14

(54)【発明の名称】ＰＤ－１軸阻害剤及び抗ペリオスチン抗体の使用により癌を処置する方法。

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/06 20060101AFI20221107BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221107BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221107BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20221107BHJP

   C07K 16/46 20060101ALN20221107BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20221107BHJP

   C07K 19/00 20060101ALN20221107BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20221107BHJP

【ＦＩ】

A61K45/06 ZNA

A61P35/00

A61P43/00 121

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K39/395 T

C07K16/46

C07K16/28

C07K19/00

C12N15/13

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022515822

(86)(22)【出願日】2020-08-27

(85)【翻訳文提出日】2022-05-10

(86)【国際出願番号】 CA2020051164

(87)【国際公開番号】W WO2021046634

(87)【国際公開日】2021-03-18

(31)【優先権主張番号】62/899,066

(32)【優先日】2019-09-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＵＮＩＸ

２．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】521258005

【氏名又は名称】ベーリンガー・インゲルハイム・イオ・カナダ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＢＯＥＨＲＩＮＧＥＲ ＩＮＧＥＬＨＥＩＭ ＩＯ ＣＡＮＡＤＡ ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】110001508

【氏名又は名称】弁理士法人 津国

(72)【発明者】

【氏名】ジェサ，アリフ

(72)【発明者】

【氏名】フランソン，ヨハン

(72)【発明者】

【氏名】マクグレイ，エージェイ・ロバート

(72)【発明者】

【氏名】ヒューム，ジョアン

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA20

4C084NA14

4C084ZB26

4C084ZC75

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB11

4C085BB36

4C085BB41

4C085BB43

4C085DD62

4C085EE03

4H045AA30

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本明細書中に記載するのは、個体に（ａ）ＰＤ－１軸阻害剤；及び（ｂ）ペリオスチンの阻害剤を投与することを含む、癌を処置する方法である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

個体に（ａ）ＰＤ－１軸阻害剤；及び（ｂ）ペリオスチン阻害剤を投与することを含む、癌に罹患している個体を処置する方法。

【請求項2】

前記ペリオスチン阻害剤が、ペリオスチンに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ペリオスチン阻害剤が、ペリオスチンに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含み、ペリオスチンに結合する前記抗体又は抗原結合フラグメントが以下を含む、請求項２に記載の方法：
ａ）配列番号１（ＧＹＴＦＴＳＹＧ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）；
ｂ）配列番号２（ＩＳＡＹＮＧＮＴ）、３（ＩＳＡＹＳＧＮＴ）、４（ＩＳＡＹＱＧＮＴ）、５（ＩＳＡＹＴＧＮＴ）、又は６（ＩＳＡＹＤＧＮＴ）のいずれか１つにおいて示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）；
ｃ）配列番号７（ＤＩＬＶＶＰＦＤＹ）、８（ＤＶＬＶＶＰＦＤＹ）、又は９（ＤＭＬＶＶＰＦＤＹ）のいずれか１つにおいて示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）；
ｄ）配列番号１０（ＳＳＤＩＧＳＮＲ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）；
ｅ）配列番号１１（ＳＮＤ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）；及び
ｆ）配列番号１２（ＡＡＷＤＤＳＬＳＴＹＶ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）。

【請求項4】

ペリオスチンに結合する前記組換え抗体又はその抗原結合フラグメントがキメラである又はヒト化されている、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

ペリオスチンに結合する前記組換え抗体又はその抗原結合フラグメントがＩｇＧ抗体である、請求項３又は４に記載の方法。

【請求項6】

ペリオスチンに結合する前記組換え抗体又はその抗原結合フラグメントがＦａｂ、Ｆ（ａｂ）_２、単一ドメイン抗体、又は単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項３又は４に記載の方法。

【請求項7】

ペリオスチンに結合する前記抗体又は抗原結合フラグメントが、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を含み、ａ）前記免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号１３において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み；ならびに
ｂ）前記免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１４において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み、配列番号１３の５５番目のアスパラギンは、アスパラギン、セリン、グルタミン、スレオニン、又はアスパラギン酸であり、及び、配列番号１３の１００番目のメチオニンは、メチオニン、イソロイシン、又はバリンである
請求項３～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

個体に（ａ）ＰＤ－１軸阻害剤；及び（ｂ）ペリオスチンの阻害剤を投与することを含む、癌に罹患している個体を処置する方法。

【請求項9】

ペリオスチンの前記阻害剤が、ペリオスチンに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

前記ペリオスチン阻害剤が、ペリオスチンに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含み、ペリオスチンに結合する前記抗体又はその抗原結合フラグメントが免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を含み、
ａ）前記免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号１３において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み；ならびに
ｂ）前記免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１４において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み、配列番号１３の５５番目のアスパラギンは、アスパラギン、セリン、グルタミン、スレオニン、又はアスパラギン酸であり、及び、配列番号１３の１００番目のメチオニンは、メチオニン、イソロイシン、又はバリンである
請求項９に記載の方法。

【請求項11】

ペリオスチンに結合する前記抗体又はその抗原結合フラグメントがキメラである又はヒト化されている、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

ペリオスチンに結合する前記抗体又はその抗原結合フラグメントがＩｇＧ抗体である、請求項１０又は１１に記載の方法。

【請求項13】

ペリオスチンに結合する前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）_２、単一ドメイン抗体、又は単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項１０又は１１に記載の方法。

【請求項14】

ペリオスチンに結合する前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、ヒト肺線維芽細胞及び／又はマウス線維芽細胞を用いて実施される細胞接着アッセイにおいて約５０ナノモル未満のＩＣ５０を有する、請求項３～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記ＰＤ－１軸阻害剤がＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２シグナル伝達の阻害剤である、ＰＤ－１に結合する抗体又はそのフラグメントである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記ＰＤ－１軸阻害剤が、ＰＤ－１に結合する抗体又はそのフラグメントである、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

ＰＤ－１に結合する前記抗体又はそのフラグメントが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項18】

ＰＤ－１に結合する前記抗体又はそのフラグメントが、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、ＡＭＰ－５１４（ＭＥＤＩ０６８０）、又はエザベンリマブ、あるいはそれらのＰＤ－１結合フラグメントを含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項19】

前記ＰＤ－１軸阻害剤が、ＰＤＬ－１又はＰＤＬ－２に特異的に結合する抗体である、請求項１５に記載の方法。

【請求項20】

ＰＤＬ－１又はＰＤＬ－２に特異的に結合する前記抗体が、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５）、ＡＭＰ－２２４、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、トリパリマブ（ＪＳ００１－ＰＤ－１）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２）、セトレリマブ（ＪＮＪ－６３７２３２８３）、又はＦＡＺ０５３、あるいはそれらのＰＤＬ－１又はＰＤＬ－２結合フラグメントを含む、請求項９の方法。

【請求項21】

ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２シグナル伝達の前記阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２に結合するＦｃ－融合タンパク質を含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項22】

前記Ｆｃ－融合タンパク質がＡＭＰ－２２４又はそのＰＤ－１結合フラグメントを含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２シグナル伝達の前記阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２の小分子阻害剤を含む、請求項８に記載の方法。

【請求項24】

ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２を介したシグナル伝達の前記小分子阻害剤が、以下の１つ又は複数を含む、請求項２３に記載の方法：Ｎ－｛２－［（｛２－メトキシ－６－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］ピリジン－３－イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ ２０２）；（２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）－５－メチルベンジル）－Ｄ－セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）－１－（５－クロロ－２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）ベンジル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボン酸；３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニルインドール；３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニル－１ｈ－インドール；Ｌ－α－グルタミン、Ｎ２，Ｎ６－ビス（Ｌ－セリル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－スレオニル－Ｌ－セリル－Ｌ－α－グルタミル－Ｌ－セリル－Ｌ－フェニルアラニル）－Ｌ－リシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－バリル－Ｌ－スレオニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－リシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－イソロイシル－Ｌ－リシル；（２Ｓ）－１－［［２，６－ジメトキシ－４－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］フェニル］メチル］－２－ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ－（２－メルカプトアセチル）－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－メチル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－ヒスチジル－Ｌ－ロイシル－Ｎ－メチルグリシル－Ｌ－トリプトフィル－Ｌ－セリル－Ｌ－トリプトフィル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－システイニル－、環状（１→１４）－チオエーテル；又はその誘導体もしくは類似体。

【請求項25】

前記個体が、単剤療法としてのチェックポイント阻害剤を用いた処置後に進行性疾患を発生している、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記チェックポイント阻害剤がＰＤ－１軸阻害剤を含む、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記ＰＤ－１軸阻害剤及びペリオスチンの前記阻害剤が別々に投与される、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記ＰＤ－１軸阻害剤及びペリオスチンの前記阻害剤が同じ日に投与される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記ＰＤ－１軸阻害剤及びペリオスチンの前記阻害剤が異なる日に投与される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記癌が、膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頚部癌、卵巣癌、結腸癌、頚部癌、前立腺癌、又は肺癌を含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

ＰＤ－１軸阻害剤によっても処置されている患者における使用のための、ペリオスチンに結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。

【請求項32】

ペリオスチンに結合する前記抗体又はその抗原結合フラグメントが以下を含む、請求項３１に記載の使用：
ａ）配列番号１（ＧＹＴＦＴＳＹＧ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）；
ｂ）配列番号２（ＩＳＡＹＮＧＮＴ）、３（ＩＳＡＹＳＧＮＴ）、４（ＩＳＡＹＱＧＮＴ）、５（ＩＳＡＹＴＧＮＴ）、又は６（ＩＳＡＹＤＧＮＴ）のいずれか１つにおいて示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）；
ｃ）配列番号７（ＤＩＬＶＶＰＦＤＹ）、８（ＤＶＬＶＶＰＦＤＹ）、又は９（ＤＭＬＶＶＰＦＤＹ）のいずれか１つにおいて示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）；
ｄ）配列番号１０（ＳＳＤＩＧＳＮＲ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）；
ｅ）配列番号１１（ＳＮＤ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）；及び
ｆ）配列番号１２（ＡＡＷＤＤＳＬＳＴＹＶ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）。

【請求項33】

ペリオスチンに結合する前記組換え抗体又はその抗原結合フラグメントが、キメラである又はヒト化されている、請求項３１に記載の使用。

【請求項34】

ペリオスチンに結合する前記組換え抗体又はその抗原結合フラグメントがＩｇＧ抗体である、請求項３１から３３のいずれか一項に記載の使用。

【請求項35】

ペリオスチンに結合する前記組換え抗体又はその抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）_２、単一ドメイン抗体、又は単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項３１～３３のいずれか一項に記載の使用。

【請求項36】

ペリオスチンに結合する前記組換え抗体又はその抗原結合フラグメントが、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を含み、ａ）前記免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号１３において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み；ならびに
ｂ）前記免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１４において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み、配列番号１３の５５番目のアスパラギンは、アスパラギン、セリン、グルタミン、スレオニン、又はアスパラギン酸であり、及び、配列番号１３の１００番目のメチオニンは、メチオニン、イソロイシン、又はバリンである
請求項３１～３５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項37】

ＰＤ－１軸阻害剤によっても処置されている患者における使用のための、ペリオスチンに結合する組換え抗体又はその抗原結合フラグメントであって、ペリオスチンに結合する前記組換え抗体又はその抗原結合フラグメントは、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を含み：
ａ）前記免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号１３において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み；ならびに
ｂ）前記免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１４において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み、配列番号１３の５５番目のアスパラギンは、アスパラギン、セリン、グルタミン、スレオニン、又はアスパラギン酸であり、及び、配列番号１３の１００番目のメチオニンは、メチオニン、イソロイシン、又はバリンである
ペリオスチンに結合する前記組換え抗体又はその抗原結合フラグメント。

【請求項38】

ペリオスチンに結合する前記組換え抗体又はその抗原結合フラグメントが、キメラである又はヒト化されている、請求項３７に記載の使用。

【請求項39】

ペリオスチンに結合する前記組換え抗体又はその抗原結合フラグメントがＩｇＧ抗体である、請求項３７又は３８に記載の使用。

【請求項40】

ペリオスチンに結合する前記組換え抗体又はその抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）_２、単一ドメイン抗体、又は単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項３７又は３８に記載の使用。

【請求項41】

ペリオスチンに結合する前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、ヒト肺線維芽細胞及び／又はマウス線維芽細胞を用いて実施される細胞接着アッセイにおいて約５０ナノモル未満のＩＣ５０を有する、請求項３１～４０のいずれか一項に記載の使用。

【請求項42】

前記ＰＤ－１軸阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２シグナル伝達の阻害剤である、請求項３１～４１のいずれか一項に記載の使用。

【請求項43】

前記ＰＤ－１軸阻害剤が、ＰＤ－１に結合する抗体又はそのフラグメントである、請求項４２に記載の使用。

【請求項44】

ＰＤ－１に結合する前記抗体又はそのフラグメントが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項４２に記載の使用。

【請求項45】

ＰＤ－１に結合する前記抗体又はそのフラグメントが、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、ＡＭＰ－５１４（ＭＥＤＩ０６８０）、又はエザベンリマブ、あるいはそれらのＰＤ－１結合フラグメントを含む、請求項４２に記載の使用。

【請求項46】

前記ＰＤ－１軸阻害剤が、ＰＤＬ－１又はＰＤＬ－２に特異的に結合する抗体である、請求項４２に記載の使用。

【請求項47】

ＰＤＬ－１又はＰＤＬ－２に特異的に結合する前記抗体が、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５）、ＡＭＰ－２２４、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、トリパリマブ（ＪＳ００１－ＰＤ－１）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２）、セトレリマブ（ＪＮＪ－６３７２３２８３）、あるいはそれらのＰＤＬ－１又はＰＤＬ－２結合フラグメントを含む、請求項４６に記載の使用。

【請求項48】

ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２シグナル伝達の前記阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２に結合するＦｃ－融合タンパク質を含む、請求項３１～４１のいずれか一項に記載の使用。

【請求項49】

前記Ｆｃ－融合タンパク質がＡＭＰ－２２４又はそのＰＤ－１結合フラグメントを含む、請求項４８に記載の使用。

【請求項50】

ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２シグナル伝達の前記阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２の小分子阻害剤を含む、請求項４２に記載の使用。

【請求項51】

ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２を介したシグナル伝達の前記小分子阻害剤が、以下の１つ又は複数を含む、請求項５０に記載の使用：Ｎ－｛２－［（｛２－メトキシ－６－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］ピリジン－３－イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ ２０２）；（２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）－５－メチルベンジル）－Ｄ－セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）－１－（５－クロロ－２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）ベンジル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボン酸；３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニルインドール；３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニル－１ｈ－インドール；Ｌ－α－グルタミン、Ｎ２，Ｎ６－ビス（Ｌ－セリル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－スレオニル－Ｌ－セリル－Ｌ－α－グルタミル－Ｌ－セリル－Ｌ－フェニルアラニル）－Ｌ－リシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－バリル－Ｌ－スレオニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－リシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－イソロイシル－Ｌ－リシル；（２Ｓ）－１－［［２，６－ジメトキシ－４－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］フェニル］メチル］－２－ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ－（２－メルカプトアセチル）－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－メチル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－ヒスチジル－Ｌ－ロイシル－Ｎ－メチルグリシル－Ｌ－トリプトフィル－Ｌ－セリル－Ｌ－トリプトフィル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－システイニル－、環状（１→１４）－チオエーテル；又はその誘導体もしくは類似体。

【請求項52】

前記個体が癌に罹患している、請求項３１～５１のいずれか一項に記載の使用。

【請求項53】

前記癌が膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頚部癌、卵巣癌、結腸癌、頚部癌、前立腺癌、又は肺癌を含む、請求項５２に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本願は、ＡＳＣＩＩフォーマットにおいて電子的に提出され、参照によりその全体において本明細書により組み入れられる配列リストを含む。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２０年８月１１日に作成され、０１－３４３５－ＷＯ－１＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられており、サイズは１９，１５５バイトである。
背景

【0002】

ペリオスチンは、多様な生理学的過程（上皮間葉転換、細胞－マトリクス相互作用、及び炎症を含む）を調節すると仮定されてきたマトリクス細胞タンパク質である。その発現は、いくつかの病理（癌及び線維症を含む）において調節不全となっていることが示されてきたが、そこでは、ペリオスチンの過剰発現が負の転帰と相関する。他のマトリクス細胞タンパク質、例えばフィブロネクチン及びコラーゲンなどに結合することにより細胞外リモデリングを調節することに加えて、ペリオスチン媒介性のインテグリンシグナル伝達は、腫瘍形成状況における癌細胞の遊走及び免疫細胞の動員の両方について重大な意味を持つことが示されてきた。
概要

【0003】

本明細書中に記載するのは、癌の処置のためのＰＤ－１軸阻害剤及びペリオスチン阻害剤の方法、使用、及び併用である。本明細書中に記載する方法によって、腫瘍のコラーゲン含量が減少し、抑制性骨髄細胞集団、例えば顆粒球細胞及び腫瘍関連マクロファージなどの浸潤が低下する一方で、Ｍ１表現型へのマクロファージ極性化が増加し、腫瘍浸潤Ｔ細胞の抗腫瘍特性が増加する。

【0004】

本明細書中に記載する一態様では、癌に罹患している個体を処置する方法であって、この方法は、個体に（ａ）ＰＤ－１軸阻害剤；及び（ｂ）ペリオスチンの阻害剤を投与することを含む。特定の実施形態では、ペリオスチンの阻害剤は、ペリオスチンに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。特定の実施形態では、ペリオスチンの阻害剤は、ペリオスチンに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含み、ペリオスチンに結合する抗体又は抗原結合フラグメントは、以下を含む：（ａ）配列番号１（ＧＹＴＦＴＳＹＧ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）；（ｂ）配列番号２（ＩＳＡＹＮＧＮＴ）、３（ＩＳＡＹＳＧＮＴ）、４（ＩＳＡＹＱＧＮＴ）、５（ＩＳＡＹＴＧＮＴ）、又は６（ＩＳＡＹＤＧＮＴ）のいずれか１つにおいて示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）；（ｃ）配列番号７（ＤＩＬＶＶＰＦＤＹ）、８（ＤＶＬＶＶＰＦＤＹ）、又は９（ＤＭＬＶＶＰＦＤＹ）のいずれか１つにおいて示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）；（ｄ）配列番号１０（ＳＳＤＩＧＳＮＲ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）；（ｅ）配列番号１１（ＳＮＤ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）；及び（ｆ）配列番号１２（ＡＡＷＤＤＳＬＳＴＹＶ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）。特定の実施形態では、ペリオスチンに結合する組換え抗体又はその抗原結合フラグメントは、キメラである又はヒト化されている。特定の実施形態では、ペリオスチンに結合する組換え抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、ペリオスチンに結合する組換え抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）_２、単一ドメイン抗体、又は単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態では、ペリオスチンに結合する組換え抗体又はその抗原結合フラグメントは、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を含み：（ａ）免疫グロブリン重鎖は、配列番号１３において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み；及び（ｂ）免疫グロブリン軽鎖は、配列番号１４において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み、配列番号１３の５５番目のアスパラギンは、アスパラギン、セリン、グルタミン、スレオニン、又はアスパラギン酸であり、及び、配列番号１３の１００番目のメチオニンは、メチオニン、イソロイシン、又はバリンである。特定の実施形態では、ペリオスチンに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒト肺線維芽細胞及び／又はマウス線維芽細胞を用いて実施される細胞接着アッセイにおいて、約５０ナノモル未満のＩＣ５０を有する。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２シグナル伝達の阻害剤であり、ＰＤ－１に結合する抗体又はそのフラグメントである。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤は、ＰＤ－１に結合する抗体又はそのフラグメントである。

【0005】

本発明の及びその実施形態の全ての意味内でのＰＤ－１経路阻害剤は、ＰＤ－１とその受容体との相互作用を阻害する化合物である。ＰＤ－１経路阻害剤は、ＰＤ－１経路のシグナル伝達を損なうことが可能であり、好ましくはＰＤ－１受容体により媒介される。ＰＤ－１阻害剤は、ＰＤ－１経路のシグナル伝達に拮抗することが可能なＰＤ－１経路の任意のメンバーに対して向けられた任意の阻害剤でありうる。この阻害剤は、ＰＤ－１経路の任意のメンバーを標的化する拮抗性抗体でありうるが、好ましくはＰＤ－１受容体、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２に対して向けられる。また、ＰＤ－１経路阻害剤は、ＰＤ－１受容体又はＰＤ－１リガンドの活性を遮断するＰＤ－１受容体のフラグメントでありうる。

【0006】

ＰＤ－１拮抗薬は、当技術分野において周知であり、Li et al., Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1151（参照により本明細書中に組み入れられる）により概説されている。任意のＰＤ－１拮抗薬、特に抗体、例えばLi et al.により開示されている抗体など、ならびに、本明細書中で以下に開示するさらなる抗体を、本発明に従って使用することができる。好ましくは、本発明及び全てのその実施形態のＰＤ－１拮抗薬は、以下の抗体からなる群より選択される：ペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１抗体）；ニボルマブ（抗ＰＤ－１抗体）；ピジリズマブ（抗ＰＤ－１抗体）；チスレリズマブ（抗ＰＤ－１）；スパルタリズマブ（ＰＤＲ－００１）（抗ＰＤ－１抗体）；、好ましくはエザベンリマブ（抗ＰＤ－１抗体）。

【0007】

特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤は、ＰＤＬ－１又はＰＤＬ－２に特異的に結合する抗体である。特定の非限定的な実施形態では、ＰＤＬ－１又はＰＤＬ－２に特異的に結合する抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＡＭＰ－２２４、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５）、トリパリマブ（ＪＳ００１－ＰＤ－１）、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２）、セトレリマブ（ＪＮＪ－６３７２３２８３）、又はＦＡＺ０５３、あるいはそれらのＰＤＬ－１又はＰＤＬ－２結合フラグメントを含む。特定の実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２シグナル伝達の阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２に結合するＦｃ－融合タンパク質を含む。特定の実施形態では、Ｆｃ－融合タンパク質は、ＡＭＰ－２２４又はそのＰＤ－１結合フラグメントを含む。特定の実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２シグナル伝達の阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２の小分子阻害剤を含む。特定の実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２を介したシグナル伝達の小分子阻害剤は、以下の１つ又は複数を含む：Ｎ－｛２－［（｛２－メトキシ－６－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］ピリジン－３－イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ ２０２）；（２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）－５－メチルベンジル）－Ｄ－セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）－１－（５－クロロ－２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）ベンジル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボン酸；３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニルインドール；３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニル－１ｈ－インドール；Ｌ－α－グルタミン、Ｎ２，Ｎ６－ビス（Ｌ－セリル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－スレオニル－Ｌ－セリル－Ｌ－α－グルタミル－Ｌ－セリル－Ｌ－フェニルアラニル）－Ｌ－リシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－バリル－Ｌ－スレオニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－リシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－イソロイシル－Ｌ－リシル；（２Ｓ）－１－［［２，６－ジメトキシ－４－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］フェニル］メチル］－２－ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ－（２－メルカプトアセチル）－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－メチル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－ヒスチジル－Ｌ－ロイシル－Ｎ－メチルグリシル－Ｌ－トリプトフィル－Ｌ－セリル－Ｌ－トリプトフィル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－システイニル－、環状（１→１４）－チオエーテル；又はその誘導体もしくは類似体。

【0008】

特定の実施形態では、個体は、単剤療法としてのチェックポイント阻害剤を用いた処置後に進行性疾患を発生している。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１軸阻害剤を含む。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤及びペリオスチンの阻害剤は、別々に投与される。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤及びペリオスチンの阻害剤は、同じ日に投与される。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤及びペリオスチンの阻害剤は、異なる日に投与される。特定の実施形態では、癌は、膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頚部癌、卵巣癌、結腸癌、頚部癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。

【0009】

本明細書中に記載する別の態様では、また、ＰＤ－１軸阻害剤を用いて処置されている患者における使用のための、ペリオスチンに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントである。特定の実施形態では、ペリオスチンに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントは、以下を含む：（ａ）配列番号１（ＧＹＴＦＴＳＹＧ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）；（ｂ）配列番号２（ＩＳＡＹＮＧＮＴ）、３（ＩＳＡＹＳＧＮＴ）、４（ＩＳＡＹＱＧＮＴ）、５（ＩＳＡＹＴＧＮＴ）、又は６（ＩＳＡＹＤＧＮＴ）のいずれか１つにおいて示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）；（ｃ）配列番号７（ＤＩＬＶＶＰＦＤＹ）、８（ＤＶＬＶＶＰＦＤＹ）、又は９（ＤＭＬＶＶＰＦＤＹ）のいずれか１つにおいて示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）；（ｄ）配列番号１０（ＳＳＤＩＧＳＮＲ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）；（ｅ）配列番号１１（ＳＮＤ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）；及び（ｆ）配列番号１２（ＡＡＷＤＤＳＬＳＴＹＶ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）。

【0010】

特定の実施形態では、ペリオスチンに結合する組換え抗体又はその抗原結合フラグメントは、キメラである又はヒト化されている。特定の実施形態では、ペリオスチンに結合する組換え抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、ペリオスチンに結合する組換え抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）_２、単一ドメイン抗体、又は単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態では、ペリオスチンに結合する組換え抗体又はその抗原結合フラグメントは、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を含み：（ａ）免疫グロブリン重鎖は、１３において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み；及び（ｂ）免疫グロブリン軽鎖は、配列番号１４において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み、配列番号１３の５５番目のアスパラギンは、アスパラギン、セリン、グルタミン、スレオニン、又はアスパラギン酸であり、及び、配列番号１３の１００番目のメチオニンは、メチオニン、イソロイシン、又はバリンである。特定の実施形態では、ペリオスチンに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒト肺線維芽細胞及び／又はマウス線維芽細胞を用いて実施される細胞接着アッセイにおいて、約５０ナノモル未満のＩＣ５０を有する。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２シグナル伝達の阻害剤であり、ＰＤ－１に結合する抗体又はそのフラグメントである。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤は、ＰＤ－１に結合する抗体又はそのフラグメントである。特定の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体又はそのフラグメントは、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ－５１４、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、好ましくはエザベンリマブ、又はそれらのＰＤ－１結合フラグメントを含む。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤は、ＰＤＬ－１又はＰＤＬ－２に特異的に結合する抗体である。特定の実施形態では、ＰＤＬ－１又はＰＤＬ－２に特異的に結合する抗体は、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５）、ＡＭＰ－２２４、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、トリパリマブ（ＪＳ００１－ＰＤ－１）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２）、セトレリマブ（ＪＮＪ－６３７２３２８３）、又はＦＡＺ０５３、あるいはそれらのＰＤＬ－１又はＰＤＬ－２結合フラグメントを含む。特定の実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２シグナル伝達の阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２に結合するＦｃ－融合タンパク質を含む。特定の実施形態では、Ｆｃ－融合タンパク質は、ＡＭＰ－２２４又はそのＰＤ－１結合フラグメントを含む。特定の実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２シグナル伝達の阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２の小分子阻害剤を含む。特定の実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、又はＰＤＬ－２を介したシグナル伝達の小分子阻害剤は、以下の１つ又は複数を含む：Ｎ－｛２－［（｛２－メトキシ－６－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］ピリジン－３－イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ ２０２）；（２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）－５－メチルベンジル）－Ｄ－セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）－１－（５－クロロ－２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）ベンジル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボン酸；３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニルインドール；３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニル－１ｈ－インドール；Ｌ－α－グルタミン、Ｎ２，Ｎ６－ビス（Ｌ－セリル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－スレオニル－Ｌ－セリル－Ｌ－α－グルタミル－Ｌ－セリル－Ｌ－フェニルアラニル）－Ｌ－リシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－バリル－Ｌ－スレオニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－リシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－イソロイシル－Ｌ－リシル；（２Ｓ）－１－［［２，６－ジメトキシ－４－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］フェニル］メチル］－２－ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ－（２－メルカプトアセチル）－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－メチル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－ヒスチジル－Ｌ－ロイシル－Ｎ－メチルグリシル－Ｌ－トリプトフィル－Ｌ－セリル－Ｌ－トリプトフィル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－システイニル－、環状（１→１４）－チオエーテル；又はその誘導体もしくは類似体。特定の実施形態では、個体は癌に罹患している。特定の実施形態では、癌は、膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頚部癌、卵巣癌、結腸癌、頚部癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。

【図面の簡単な説明】

【0011】

本明細書中に記載する新規の特色を、特に添付の特許請求の範囲において示す。本明細書中に記載する特色及び特色の利点のより良好な理解が、例証的な実施例を示す以下の詳細な説明への参照により得られるであろうが、それにおいて、本明細書中に記載する特色の原理が利用されており、その添付の図面は以下である：

【図1】図１は、５００nMの単一濃度でテストされた７８の配列固有ＩｇＧによるペリオスチン媒介性細胞接着の阻害を例証する。

【図2】図２は、ＮＢ０８２８又は賦形剤コントロールを用いた処置後のマウスＭＢ４９膀胱癌モデルにおける腫瘍成長を例証する。

【図3】図３は、腫瘍内骨髄細胞の蓄積に対するＮＢ０８２８処置の影響を例証する。ＭＢ４９担癌マウスを、図２において記載するように、ＮＢ０８２８又は賦形剤を用いて処置した。データを、全ＣＤ４５＋免疫浸潤のパーセントとして提示する。

【図4】図４は、ＮＢ０８２８を用いた処置後の全腫瘍コラーゲン含量における変化を例証する。ＭＢ４９担癌マウスを、図２において記載するように処置し、エンドポイントＭＢ４９腫瘍の全腫瘍コラーゲン含量を、方法において記載するように評価した。

【図5】図５は、ＮＢ０８２８又は賦形剤コントロールを用いた処置後のマウスＣＴ２６結腸癌モデルにおける腫瘍成長を例証する。

【図6】図６は、ＮＢ０８２８処置されたＣＴ２６担癌マウスにおける顆粒球細胞／ＴＡＭ（腫瘍関連マクロファージ）の低下した腫瘍内蓄積及びＭ１表現型に向かって傾斜しているマクロファージを例証する。

【図7】図７は、ＮＢ０８２８処置されたＣＴ２６担癌マウスにおけるＣＤ８＋及びＣＤ４＋腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の増加した蓄積ならびに増強したＣＤ８＋ ＴＩＬ機能を例証する。

【図8】図８は、ＮＢ０８２８又は賦形剤コントロールを用いた処置後のマウスＭＣ３８結腸癌モデルにおける腫瘍成長を例証する。

【図9】図９Ａ～９Ｄは、ＭＣ３８結腸癌モデルにおいて、ＮＢ０８２８が腫瘍関連マクロファージ（９Ａ）の全体量を減少させる一方で、炎症誘発性Ｉ型マクロファージ（９Ｂ）、及びＣＤ８＋Ｔ細胞（９Ｃ）を増加させること、ならびに腫瘍有効性がＣ８＋Ｔ細胞（９Ｄ）に依存的であることを例証する。

【図10】図１０Ａ～１０Ｃは、ＰＤ－１及びＮＢ０８２８の併用によって、腫瘍サイズ（１０Ａ）及び生存（１０Ｂ）の両方に関した制御において、ＰＤ－１単独と比較し、ＭＣ３８結腸癌モデルにおける応答が改善され；最初のチャレンジを生き延びた動物は、再チャレンジから保護される（１０Ｃ）ことを例証する。

【図11】図１１は、ＮＢ０８２８が、樹立されたＭＣ３８腫瘍における抗ＰＤ－１への耐性を克服することを例証する。

【図12】図１２Ａ～１２Ｄは、ＰＤ－１耐性腫瘍において、ＮＢ０８２８がＣＤ８＋ ＴＩＬの頻度（１２Ａ）及び機能（１２Ｂ）を改善する一方で、全ＴＡＭ（１２Ｃ）を低下させ、免疫刺激性Ｍ１ ＴＡＭ（１２Ｄ）の蓄積を促進することを例証する。詳細な説明

【0012】

以下の説明では、特定の具体的な詳細を、種々の実施形態の徹底的な理解を提供するために示している。しかし、当業者は、提供する実施形態が、これらの詳細を伴わずに実行されうることを理解するであろう。文脈が別に要求しない限り、本明細書及び続く特許請求の範囲を通して、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及びその変形、例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などは、オープンで包括的な意味において、すなわち、「含むが、しかし、限定しない」として解釈すべきである。本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用するように、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、内容が明らかに別に指示しない限り、複数の指示対象を含む。また、用語「又は」は、内容が明らかに別に指示しない限り、その意味（「及び／又は」を含む）において一般的に用いられることに注意すべきである。さらに、本明細書中で提供する見出しは、便宜だけのためであり、請求する実施形態の範囲又は意味を解釈するものではない。

【0013】

本明細書中で使用するように、用語「約」は、１０%又はそれ以下だけ、記述する量に近い。

【0014】

本明細書中で使用するように、用語「個体」、「患者」、又は「対象」は、記載する組成物及び方法が処置するために有用である少なくとも１つの疾患と診断された、それに罹患していることが疑われる、又はそれを発生するリスクがある個体を指す。特定の実施形態では、個体は哺乳動物である。特定の実施形態では、哺乳動物は、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ラマ、アルパカ、又はヤクである。特定の実施形態では、個体はヒトである。

【0015】

本明細書中で使用するように、用語「併用」又は「併用処置」は、併用される物品の同時投与又は併用される物品の連続投与のいずれかを指すことができる。本明細書中に記載するように、併用が物品の連続投与を指す場合、物品は、任意の時間的順序において投与することができる。物品は、バイオアベイラビリティを最大化し、副作用を低下させ、治療の可能性を最大化する（又はそれらの任意の併用）スケジュールに従って、異なる日又は同じ日に別々に各々の物品を投与することができる。

【0016】

用語「癌」及び「腫瘍」は、調節解除された細胞成長により特徴付けられる、哺乳動物における生理学的状態に関連する。癌は、細胞の群が制御されない成長又は望まれない成長を呈する疾患のクラスである。癌細胞はまた、他の位置に伝播することができ、それによって転移の形成に導くことができる。身体における癌細胞の伝播は、例えば、リンパ液又は血液を介して生じることができる。制御されない成長、侵入、及び転移の形成はまた、癌の悪性特性と呼ばれる。これらの悪性特性によって、癌は良性腫瘍から区別され、それらは、典型的には、浸潤又は転移しない。

【0017】

本明細書中で使用するように、用語「有効量」は、哺乳動物に投与された場合に生物学的効果を起こす治療薬の量を指す。生物学的効果は、受容体リガンド相互作用の阻害又は遮断、標的の酵素活性における低下、低下した腫瘍成長、低下した腫瘍転移、腫瘍部位へのＣＤ８＋ Ｔ細胞の増加した浸潤、腫瘍部位における低下した全マクロファージ、Ｍ１マクロファージの増加した浸潤、Ｍ１／Ｍ２比率における増加、又は腫瘍を持つ動物の延長した生存を含むが、これらに限定しない。「治療量」は、治療効果を発揮するように算出された薬物の濃度である。治療量は、個体の集団における治療応答を誘導することが可能な投与量の範囲を包含する。哺乳動物はヒト個体でありうる。ヒト個体は、腫瘍に罹患している、又は罹患していることが疑われうる。

【0018】

提供する抗体の間には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体及び多反応性抗体）、及び抗体フラグメントがある。抗体は、抗体複合体及び分子（抗体、例えばキメラ分子などを含む）を含む。このように、抗体は、全長及び天然抗体、ならびにそれらの結合特異性を保持するそれらのフラグメント及び部分、例えば、それらの任意の特異的結合部分（任意の数の免疫グロブリンクラス及び／又はアイソタイプ（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭ）を有する特異的結合部分を含む）；ならびに生物学的に関連する（抗原結合）フラグメント又はそれらの特異的結合部分（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ（単鎖又は関連実体）を含む）を含むが、それらに限定しない。モノクローナル抗体は、一般的に、実質的に均質な抗体の組成物内のモノクローナル抗体であり；このように、モノクローナル抗体組成物内に含まれる任意の個々の抗体は、微量で存在しうる可能な天然変異を除いて同一である。ポリクローナル抗体は、一般的に２つ又はそれ以上の異なる決定基（エピトープ）に対して向けられる、変動する配列の異なる抗体を含む調製物である。モノクローナル抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含むことができる。モノクローナル抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含むことができる。

【0019】

本明細書中の用語「抗体」は、最も広い意味において使用され、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体（インタクトな抗体及びそれらの機能的（抗原結合）抗体フラグメント（フラグメント抗原結合（Ｆａｂ）フラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆｖフラグメント、組換えＩｇＧ（ｒＩｇＧ）フラグメント、単鎖抗体フラグメント（単鎖可変フラグメント（ｓＦｖ又はｓｃＦｖ）を含む）、及び単一ドメイン抗体（例、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ）フラグメントを含む））を含む。この用語は、遺伝子操作された及び／又は別の方法で改変された形態の免疫グロブリン、例えばイントラボディ、ペプチボディ、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、及びヘテロ複合体抗体など、多特異性、例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディ、タンデムジ－ｓｃＦｖ、タンデムトリ－ｓｃＦｖなどを包含する。別に記述しない限り、用語「抗体」は、それらの機能的抗体フラグメントを包含すると理解すべきである。この用語はまた、インタクトな抗体又は全長抗体（任意のクラス又はサブクラス（ＩｇＧならびにそのサブクラス、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、及びＩｇＤを含む）の抗体を含む）を包含する。抗体はヒトＩｇＧ１定常領域を含むことができる。抗体はヒトＩｇＧ４定常領域を含むことができる。

【0020】

用語「相補性決定領域」、及び「ＣＤＲ」は、「超可変領域」又は「ＨＶＲ」と同義であり、抗体可変領域内のアミノ酸の非連続配列を指すことが当技術分野において公知であり、それによって、抗原特異性及び／又は結合親和性が付与される。一般的に、各々の重鎖可変領域中の３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）及び各々の軽鎖可変領域中の３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）がある。「フレームワーク領域」及び「ＦＲ」は、重鎖及び軽鎖の可変領域の非ＣＤＲ部分を指すことが当技術分野において公知である。一般的に、各々の全長重鎖可変領域中の４つのＦＲ（ＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、及びＦＲ－Ｈ４）及び各々の全長軽鎖可変領域中の４つのＦＲ（ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４）がある。所与のＣＤＲ又はＦＲの正確なアミノ酸配列境界は、多数の周知のスキーム（Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD（“Ｋａｂａｔ”ナンバリングスキーム）、Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948（“Ｃｈｏｔｈｉａ” ナンバリングスキーム）；MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), “Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography,” J. Mol. Biol. 262, 732-745.”（“Ｃｏｎｔａｃｔ”ナンバリングスキーム）；Lefranc MP et al.,“IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,” Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77（“ＩＭＧＴ”ナンバリングスキーム）；Honegger A and Pluckthun A, “Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,” J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70,（“Ａｈｏ”ナンバリングスキーム）；及びWhitelegg NR and Rees AR, “WAM: an improved algorithm for modelling antibodies on the WEB,” Protein Eng. 2000 Dec;13(12):819-24（“ＡｂＭ”ナンバリングスキーム）により記載されるスキームを含む）のいずれかを使用して容易に決定することができる。

【0021】

所与のＣＤＲ又はＦＲの境界は、同定のために使用されるスキームに依存して変動しうる。例えば、Ｋａｂａｔスキームは構造アラインメントに基づいている一方で、Ｃｈｏｔｈｉａスキームは構造情報に基づいている。Ｋａｂａｔスキーム及びＣｈｏｔｈｉａスキームの両方についてのナンバリングは、最も一般的な抗体領域配列の長さに基づき、挿入文字、例えば、「３０ａ」により順応される挿入、及び一部の抗体において出現する欠失を伴う。２つのスキームによって、特定の挿入及び欠失（「ｉｎｄｅｌ」）が異なる位置に配置され、異なるナンバリングがもたらされる。Ｃｏｎｔａｃｔスキームは、複雑な結晶構造の分析に基づいており、多くの点においてＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームと類似している。

【0022】

用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体を抗原に結合させる際に含まれる抗体重又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは、一般的に、類似の構造を有し、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つのＣＤＲを含む各々のドメインを伴う（例、Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91(2007)を参照のこと）。単一のＶＨドメイン又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分でありうる。さらに、特定の抗原に結合する抗体を、抗原に結合する抗体からのＶＨドメイン又はＶＬドメインを使用し、相補的なＶＬドメイン又はＶＨドメインのライブラリーをそれぞれスクリーニングして単離してもよい（例、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993)；Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照のこと）。

【0023】

提供する抗体の間には、抗体フラグメントがある。「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体フラグメントの例は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２；ダイアボディ；線形抗体；単鎖抗体分子（例、ｓｃＦｖ又はｓＦｖ）；及び抗体フラグメントから形成される多特異性抗体を含むが、それらに限定しない。特定の実施形態では、抗体は、可変重鎖領域及び／又は可変軽鎖領域、例えばｓｃＦｖなどを含む単鎖抗体フラグメントである。

【0024】

抗体フラグメントは、種々の技術（インタクトな抗体のタンパク質分解消化ならびに組換え宿主細胞による産生を含むが、それらに限定しない）により作製することができる。一部の実施形態では、抗体は、組換え産生されたフラグメント、例えば自然に生じない配置を含むフラグメントなど、例えば合成リンカー（例、ポリペプチドリンカー）により連結された２つ又はそれ以上の抗体領域又は鎖を伴うフラグメントなど、ならびに／あるいは天然のインタクトな抗体の酵素消化により産生されないフラグメントである。一部の態様では、抗体フラグメントはｓｃＦｖである。

【0025】

「ヒト化」抗体は、全ての又は実質的に全てのＣＤＲアミノ酸残基が非ヒトＣＤＲから由来し、及び全ての又は実質的に全てのＦＲアミノ酸残基がヒトＦＲから由来する抗体である。ヒト化抗体は、場合により、ヒト抗体から由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含みうる。非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、典型的には、ヒトへの免疫原性を低下させるためにヒト化を受けている一方で、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持する非ヒト抗体のバリアントを指す。一部の実施形態では、ヒト化抗体中の一部のＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性又は親和性を回復又は改善するために、非ヒト抗体（例、ＣＤＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基を用いて置換される。

【0026】

提供する抗体の間には、ヒト抗体がある。「ヒト抗体」は、ヒト又はヒト細胞、あるいはヒト抗体レパートリー又は他のヒト抗体コード配列（ヒト抗体ライブラリーを含む）を利用する非ヒト供給源により産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を伴う抗体である。この用語は、非ヒト抗原結合領域、例えば全ての又は実質的に全てのＣＤＲが非ヒトである非ヒト抗原結合領域などを含むヒト化形態の非ヒト抗体を除外する。

【0027】

ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してインタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を伴うインタクトな抗体を産生するように改変されているトランスジェニック動物に免疫原を投与することにより調製してもよい。そのような動物は典型的には、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含み、それは、内因性免疫グロブリン遺伝子座を交換する、あるいは、それは、染色体外に存在する、又は動物の染色体中にランダムに組み込まれる。そのようなトランスジェニック動物において、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般的に不活性化されている。ヒト抗体はまた、ヒトレパートリーから由来する抗体コード配列を含む、ヒト抗体ライブラリー（ファージディスプレイ及び無細胞ライブラリーを含む）から由来しうる。

【0028】

用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は互換的に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指し、最小の長さに限定されない。ポリペプチド（提供する抗体及び抗体鎖及び他のペプチド、例、リンカー及び結合ペプチドを含む）は、アミノ酸残基（天然及び／又は非天然アミノ酸残基を含む）を含みうる。この用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアル化、アセチル化、リン酸化などを含む。一部の態様では、ポリペプチドは、タンパク質が所望の活性を維持する限り、未変性配列又は天然配列に関して修飾を含みうる。これらの修飾は、計画的（部位特異的変異誘発を通じてなど）でありうる、又は偶発的（例えばタンパク質を産生する宿主の変異又はＰＣＲ増幅に起因するエラーを通じてなど）でありうる。

【0029】

参照ポリペプチド配列に関するパーセント（%）配列同一性は、配列を整列させ、必要な場合、ギャップを導入して最大パーセント配列同一性を達成し、配列同一性の部分として任意の保存的置換を考慮しない後の、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージである。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、例えば、公的に利用可能なコンピューターソフトウェア、例えばBLAST、BLAST-2、ALIGN、又はMegalign（DNASTAR）ソフトウェアなどを使用し、公知である種々の方法において達成することができる。配列を整列させるための適したパラメーターを決定することができる（比較されている配列の全長にわたり最大のアラインメントを達成するために必要とされるアルゴリズムを含む）。本明細書中の目的のために、しかし、%アミノ酸配列同一性値を、配列比較コンピュータプログラムALIGN-2を使用して生成する。ALIGN-2配列比較コンピュータプログラムは、Genentech, Inc.により作成されたが、ソースコードは米国著作権局（ワシントンＤ．Ｃ．、２０５５９）においてユーザー文書と提出されており、ここで、それは米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ALIGN-2プログラムは、Genentech, Inc.（カリフォルニア州サウスサンフランシスコ）から公的に利用可能である、又はソースコードからコンパイルしてもよい。ALIGN-2プログラムは、UNIXオペレーティングシステム（デジタルＵＮＩＸＶ４．０Ｄを含む）での使用のためにコンパイルすべきである。全ての配列比較パラメーターがALIGN-2プログラムにより設定されて、変動しない。

【0030】

ALIGN-2がアミノ酸配列比較のために用いられる状況において、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それと、又はそれに対する所与のアミノ酸配列Ａの%アミノ酸配列同一性（それは、あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それと、又はそれに対して特定の%アミノ酸配列同一性を有する、又はそれを含む所与のアミノ酸配列Ａとして言い表すことができる）を以下のように算出する：分数Ｘ／Ｙの１００倍、式中、Ｘは、配列アラインメントプログラムALIGN-2により、Ａ及びＢのそのプログラムのアラインメントにおける同一マッチとしてスコア化されるアミノ酸残基の数であり、及び、式中、ＹはＢにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＢへのＡの%アミノ酸配列同一性が、ＡへのＢの%アミノ酸配列同一性と等しくならないことが理解されるであろう。別に具体的に記述しない限り、本明細書中で使用する全ての%アミノ酸配列同一性値を、ALIGN-2コンピュータプログラムを使用し、直前の段落において記載するように得る。

【0031】

一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗体のアミノ酸配列バリアントを熟慮する。バリアントは、典型的には、１つ又は複数の置換、欠失、付加、及び／又は挿入において本明細書中で具体的に開示するポリペプチドとは異なる。そのようなバリアントは、天然に生じることができる、あるいは、例えば、本発明の上のポリペプチド配列の１つ又は複数を改変し、本明細書中に記載するポリペプチドの１つ又は複数の生物学的活性を評価すること、ならびに／あるいは多数の公知の技術のいずれかを使用することにより合成的に生成することができる。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましいであろう。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適した改変を導入することにより、又はペプチド合成により調製されうる。そのような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列からの欠失、及び／又はその中への挿入、及び／又はその内の残基の置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の併用を、最終構築物が所望の特徴（例、抗原結合）を持つという条件で作製し、最終構築物に到達することができる。

【0032】

一部の実施形態では、１つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントを提供する。置換による変異誘発のための目的の部位は、ＣＤＲ及びＦＲを含む。アミノ酸置換を目的の抗体中に導入し、産物を所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングしうる。

【0033】

一部の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、１つ又は複数のＣＤＲ内で生じうるが、置換、挿入、又は欠失は、抗原への抗体結合を実質的に低下させない。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的置換をＣＤＲ中に作製してもよい。そのような変化は、ＣＤＲ「ホットスポット」の外部でありうる。一部の実施形態では、バリアントのＶＨ配列及びＶＬ配列、各々のＣＤＲは不変である。

【0034】

変化（例、置換）をＣＤＲ中に作製し、例えば、抗体親和性を改善しうる。そのような変化は、体細胞成熟の間に高い変異率を伴うＣＤＲコードコドン中に作製してもよく（例、Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照のこと）、結果として得られたバリアントを結合親和性についてテストすることができる。親和性成熟（例、エラープローンＰＣＲ、チェーンシャッフリング、ＣＤＲのランダム化、又はオリゴヌクレオチド指定変異誘発を使用する）を使用し、抗体親和性を改善することができる（例、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (2001)を参照のこと）。抗原結合において含まれるＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発又はモデリング（例、Cunningham and Wells Science, 244:1081-1085 (1989)を参照のこと）を使用して特異的に同定されうる。ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３が特にしばしば標的化される。あるいは、又は加えて、抗体と抗原の間の接触点を同定するための抗原－抗体複合体の結晶構造。そのような接触残基及び隣接残基は、置換のための候補として標的化されうる又は排除されうる。バリアントをスクリーニングし、バリアントが所望の特性を含むか否かを決定してもよい。

【0035】

アミノ酸配列の挿入及び欠失は、長さにおいて１つの残基から１００又はそれ以上の残基を含むポリペプチドまでの範囲のアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、ならびに単一の又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入及び欠失を含む。末端挿入の例は、Ｎ末端メチオニル残基を伴う抗体を含む。抗体分子の他の挿入バリアントは、酵素（例、ＡＤＥＰＴについて）又は抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの抗体のＮ末端又はＣ末端への融合物を含む。抗体分子の配列内挿入バリアントの例は、軽鎖における３つのアミノ酸の挿入物を含む。末端欠失の例は、軽鎖の末端での７つ又はそれ以下のアミノ酸の欠失を伴う抗体を含む。

【0036】

一部の実施形態では、抗体を、それらのグリコシル化を増加又は減少させるように変化させる（例、１つ又は複数のグリコシル化部位が作製又は除去されるようにアミノ酸配列を変化させることによる）。抗体のＦｃ領域に付着されている糖を変化させてもよい。哺乳動物細胞からの天然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ連結により付着された分岐した二分岐オリゴ糖を含む（例、Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照のこと）。オリゴ糖は、種々の糖、例えば、マンノース、Ｎアセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、二分岐オリゴ糖構造のステムにおいてＧｌｃＮＡｃに付着されたフコースでありうる。抗体中のオリゴ糖の修飾を、例えば、特定の改善された特性を伴う抗体バリアントを作製するために作ることができる。抗体グリコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ機能を有することができる。一部の実施形態では、抗体バリアントが提供され、Ｆｃ領域に（直接的又は間接的に）付着されたフコースを欠く糖構造を有する。例えば、そのような抗体中でのフコースの量は、１%～８０%、１%～６５%、５%～６５%、又は２０%～４０%でありうる。フコースの量は、Ａｓｎ２９７に付着された全ての糖構造の合計と比べて、Ａｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を算出することにより決定する（例、ＷＯ０８／０７７５４６を参照のこと）。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域中のおよその位置２９７に位置付けられるアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング；例、Edelman et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 1969 May; 63(1):78-85を参照のこと）。しかし、Ａｓｎ２９７はまた、抗体中での小さな配列変動に起因して、位置２９７の上流又は下流、即ち、位置２９４と３００の間の約±３アミノ酸に位置付けられうる。そのようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有することができる（例、Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004)；及びYamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)を参照のこと）。細胞株（例、ノックアウト細胞株）及びそれらの使用の方法を使用し、脱フコシル化抗体を産生することができる（例、タンパク質フコシル化において欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞及びアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）ノックアウトＣＨＯ細胞）（例、Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)；Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)を参照のこと）。他の抗体グリコシル化バリアントも含まれる（例、米国特許第６，６０２，６８４号を参照のこと）。

【0037】

一部の実施形態では、１つ又は複数のアミノ酸修飾を、本明細書中で提供する抗体のＦｃ領域中に導入してもよく、それにより、Ｆｃ領域バリアントを生成する。本明細書中のＦｃ領域は、定常領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域である。Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。Ｆｃ領域バリアントは、１つ又は複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含みうる。

【0038】

一部の実施形態では、本開示の抗体は、一部の（しかし、全てではない）のエフェクター機能を持つバリアントであり、それによって、適用のための望ましい候補になり、それにおいて、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、しかし、特定のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣなど）は不要又は有害である。インビトロ及び／又はインビボ細胞毒性アッセイを行い、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低下／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行い、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（それ故に、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、しかし、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例が、米国特許第５，５００，３６２号及び第５，８２１，３３７号において記載されている。あるいは、非放射性アッセイ方法（例、ＡＣＴＩ（商標）及びCytoTox96（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ）を用いてもよい。そのようなアッセイのために有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、単球、マクロファージ、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。

【0039】

抗体は、増加した半減期及び新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有しうる（例、ＵＳ ２００５／００１４９３４を参照のこと）。そのような抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つ又は複数の置換をその中に伴うＦｃ領域を含むことができ、ＥＵナンバリングシステム（例、米国特許第７，３７１，８２６号を参照のこと）に従ったＦｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５ 、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、又は４３４の１つ又は複数に置換を伴う抗体を含む。Ｆｃ領域バリアントの他の例も熟慮されている（例、Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)；米国特許第５，６４８，２６０号及び第５，６２４，８２１号；ならびにＷＯ９４／２９３５１を参照のこと）。

【0040】

一部の実施形態では、システイン操作抗体、例えば、「チオＭＡｂ」を作製することが望ましいであろうが、それにおいて、抗体の１つ又は複数の残基がシステイン残基で置換されている。一部の実施形態では、置換された残基は、抗体の接近可能部位で生じる。反応性チオール基を、他の部分、例えば薬物部分又はリンカー薬物部分などへの複合体化のための部位に配置し、免疫複合体を作製することができる。一部の実施形態では、以下の残基の任意の１つ又は複数をシステインで置換してもよい：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）；重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。

【0041】

一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗体をさらに修飾し、公知であり利用可能な追加の非タンパク質性部分を含んでもよい。抗体の誘導体化のために適切な部分は、水溶性ポリマーを含むが、それに限定しない。水溶性ポリマーの非限定的な例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレン（ｐｏｌｙｐｒｏｌｙｌｅｎ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びそれらの混合物を含むが、それらに限定しない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中での安定性に起因して、製造において利点を有しうる。ポリマーは任意の分子量でありうる、及び分岐又は非分岐でありうる。抗体に付着されているポリマーの数は変動しうるが、２つ又はそれ以上のポリマーが付着している場合、それらは同じ又は異なる分子でありうる。

【0042】

本明細書中に記載する抗体は、核酸によりコードされうる。核酸は、２つ又はそれ以上のヌクレオチド塩基を含むポリヌクレオチドの型である。特定の実施形態では、核酸は、ポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドを細胞中に移すために使用することができるベクターの成分である。本明細書中で使用するように、用語「ベクター」は、それが連結されている別の核酸を輸送することが可能な核酸分子を指す。ベクターの１つの型は、ゲノム組込みベクター、又は「組込みベクター」であり、それは、宿主細胞の染色体ＤＮＡ中に組み込むことができる。ベクターの別の型は、「エピソーム」ベクター、例えば、染色体外複製が可能な核酸である。作動可能に連結されている遺伝子の発現を方向づけることが可能なベクターを、本明細書中で「発現ベクター」として言及する。適切なベクターは、プラスミド、細菌人工染色体、酵母人工染色体、ウイルスベクターなどを含む。発現ベクターにおいて、転写を制御する際での使用のための調節エレメント、例えばプロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナルなどは、哺乳動物、微生物、ウイルス、又は昆虫の遺伝子から由来しうる。宿主において複製する能力（通常は複製起点により付与される）、及び形質転換体の認識を促進するための選択遺伝子をさらに組み入れてもよい。ウイルス、例えばレンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスなどから由来するベクターを用いてもよい。プラスミドベクターは、染色体位置中への組込みのために線形化することができる。ベクターは、ゲノム中の定義された位置又は制限された一組の部位中への部位特異的組込みを方向づける配列を含むことができる（例、ＡｔｔＰ－ＡｔｔＢ組換え）。加えて、ベクターは、転移性エレメントから由来する配列を含むことができる。

【0043】

本明細書中で使用するように、用語「相同」、「相同性」、又は「パーセント相同性」は、参照配列と比べて、アミノ酸配列又は核酸配列を記載するために本明細書で使用される場合、Karlin及びAltschul（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 2264-2268, 1990、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877, 1993におけるように改変）により記載される式を使用して決定することができる。そのような式は、Altschulらの基本的なローカルアラインメント検索ツール（BLAST）プログラム中に組み入れられている（J. Mol. Biol. 215: 403-410, 1990）。配列のパーセント相同性は、本願の出願日の時点で、BLASTの最新バージョンを使用して決定することができる。

【0044】

本明細書中に記載する抗体をコードする核酸を使用し、適切な細胞を核酸について感染させる、トランスフェクトする、形質転換する、又は別の方法でトランスジェニックにすることができ、このように、商業的又は治療的使用のための抗体の産生を可能にする。大規模な細胞培養物からの抗体の産生のための標準的な細胞株及び方法は、当技術分野において公知である。例えば、Li et al., “Cell culture processes for monoclonal antibody production.” Mabs. 2010 Sep-Oct; 2(5): 466-477を参照のこと。特定の実施形態では、細胞は真核細胞である。特定の実施形態では、真核細胞は哺乳動物細胞である。特定の実施形態では、哺乳動物細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、又はPER.C6（登録商標）細胞である。特定の実施形態では、抗体をコードする核酸を、抗体を産生するために有用な細胞のゲノム遺伝子座中に組み込む。特定の実施形態では、本明細書中に記載するのは、抗体をコードする核酸を含む細胞を、前記抗体の産生及び分泌を可能にするのに十分なインビトロの条件下で培養することを含む、抗体を作製する方法である。

【0045】

特定の実施形態では、本明細書中に記載するのは、以下を含むマスターセルバンクである：（ａ）ゲノム位置に組み込まれた、本明細書中に記載する抗体をコードする１つ又は複数の核酸を含む哺乳動物細胞株；及び（ｂ）抗凍結剤。特定の実施形態では、抗凍結剤はグリセロールを含む。特定の実施形態では、マスターセルバンクは以下を含む：（ａ）（ｉ）配列番号１３により示すものと少なくとも９０%同一である重鎖アミノ酸配列；及び（ｉｉ）ゲノム位置に組み込まれた配列番号１４により示すものと少なくとも９０%同一である軽鎖アミノ酸配列を伴う抗体をコードする核酸を含むＣＨＯ細胞株；ならびに（ｂ）抗凍結剤。特定の実施形態では、抗凍結剤はグリセロールを含む。特定の実施形態では、マスターセルバンクは、液体窒素による凍結に耐えることができる適切なバイアル又は容器中に含まれる。

【0046】

また、本明細書中に記載するのは、本明細書中に記載する抗体を作製する方法である。そのような方法は、抗体の発現及び分泌を可能にするのに十分な条件下で、細胞培養培地中で、抗体をコードする核酸を含む細胞又は細胞株をインキュベートし、さらに細胞培養培地から抗体を収集することを含む。収集は、生細胞、細胞デブリ、非抗体タンパク質又はポリペプチド、望ましくない塩、緩衝剤、及び培地成分を除去するための１つ又は複数の精製工程をさらに含むことができる。特定の実施形態では、追加の精製工程は、遠心分離、超遠心分離、透析、脱塩、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、もしくはプロテインＬ精製、及び／又はイオン交換クロマトグラフィーを含む。
抗ペリオスチン抗体

【0047】

本明細書中に記載するのは、ペリオスチン機能を遮断する抗体である。そのような抗体は、癌の処置のために有用である。本明細書中に記載する抗体によって、腫瘍のコラーゲン含量が減少し、顆粒球及び腫瘍関連マクロファージの浸潤が低下する一方で、マクロファージの極性化がＭ１表現型に増加し、腫瘍浸潤Ｔ細胞の蓄積及び抗腫瘍特性が増加する。特定の実施形態では、抗ペリオスチン抗体によって、未処置の又はコントロール処置の個体と比較し、腫瘍コラーゲン含量が少なくとも約５%、１０%、１５%、２０%、２５%、３０%、３５%、又は４０%だけ減少する。特定の実施形態では、抗ペリオスチン抗体によって、未処置の又はコントロール処置の個体と比較し、顆粒球及び腫瘍関連マクロファージの浸潤が少なくとも約２０%、２５%、３０%、３５%、４０%、４５%、又は５０%だけ減少する。特定の実施形態では、抗ペリオスチン抗体によって、未処置の又はコントロール処置の個体と比較し、ＣＤ１１ｂ＋細胞の浸潤が少なくとも約２０%、２５%、３０%、３５%、４０%、４５%、又は５０%だけ減少する。特定の実施形態では、抗ペリオスチン抗体によって、未処置の又はコントロール処置の個体と比較し、Ｍ１型（ＣＤ１１ｂ＋、ＭＨＣクラスＩＩ＋、ＣＤ２０６－）への腫瘍関連マクロファージの分極化が少なくとも約２０%、２５%、３０%、３５%、４０%、４５%、又は５０%だけ増加する。特定の実施形態では、抗ペリオスチン抗体によって、未処置の又はコントロール処置の個体と比較し、腫瘍中でのＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋ Ｔ細胞の蓄積が少なくとも約２０%、２５%、３０%、３５%、４０%、４５%、又は５０%だけ増加する。特定の実施形態では、抗ペリオスチン抗体によって、未処置の又はコントロール処置の個体と比較し、腫瘍浸潤性ＣＤ８＋ Ｔ細胞のインターフェロンガンマの産生が少なくとも約２０%、２５%、３０%、３５%、４０%、４５%、又は５０%だけ増加する。

【0048】

本明細書中に記載するのは、ペリオスチンに結合する組換え抗体又はその抗原結合フラグメントであって、抗体又はその抗原結合フラグメントは、以下を含む：（ａ）配列番号１（ＧＹＴＦＴＳＹＧ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）；（ｂ）配列番号２（ＩＳＡＹＮＧＮＴ）、３（ＩＳＡＹＳＧＮＴ）、４（ＩＳＡＹＱＧＮＴ）、５（ＩＳＡＹＴＧＮＴ）、又は６（ＩＳＡＹＤＧＮＴ）のいずれか１つにおいて示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）；（ｃ）配列番号７（ＤＩＬＶＶＰＦＤＹ）、８（ＤＶＬＶＶＰＦＤＹ）、又は９（ＤＭＬＶＶＰＦＤＹ）のいずれか１つにおいて示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）；（ｄ）配列番号１０（ＳＳＤＩＧＳＮＲ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）；（ｅ）配列番号１１（ＳＮＤ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）；及び（ｆ）配列番号１２（ＡＡＷＤＤＳＬＳＴＹＶ）において示すアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）。特定の実施形態では、抗体はヒト化又はキメラ抗体である。特定の実施形態では、抗体はＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、本明細書中に記載する抗体は、エフェクター機能の欠如を伴うＦｃ部分を含むことができる。特定の実施形態では、抗体は、ヒト肺線維芽細胞及び／又はマウス線維芽細胞を用いて実施される細胞接着アッセイにおいて、約５０ナノモル未満のＩＣ５０を有する。特定の実施形態では、抗体は、ヒト肺線維芽細胞及び／又はマウス線維芽細胞を用いて実施される細胞接着アッセイにおいて、約４０ナノモル未満のＩＣ５０を有する。特定の実施形態では、抗体は、ヒト肺線維芽細胞及び／又はマウス線維芽細胞を用いて実施される細胞接着アッセイにおいて、約３０ナノモル未満のＩＣ５０を有する。

【0049】

また、本明細書中に記載するのは、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を含む、ペリオスチンに結合する組換え抗体又はその抗原結合フラグメントであって：（ａ）免疫グロブリン重鎖は、配列番号１３において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み；及び（ｂ）免疫グロブリン軽鎖は、配列番号１４において示すアミノ酸配列と少なくとも約９０%、９５%、９７%、９９%、又は１００%同一のアミノ酸配列を含み、配列番号１３の５５番目のアスパラギンは、アスパラギン、セリン、グルタミン、スレオニン、又はアスパラギン酸であり、及び、配列番号１３の１００番目のメチオニンは、メチオニン、イソロイシン、又はバリンである。特定の実施形態では、抗体はＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、本明細書中に記載する抗体は、エフェクター機能の欠如を伴うＦｃ部分を含むことができる。特定の実施形態では、抗体は、ヒト肺線維芽細胞及び／又はマウス線維芽細胞を用いて実施される細胞接着アッセイにおいて、約５０ナノモル未満のＩＣ５０を有する。特定の実施形態では、抗体は、ヒト肺線維芽細胞及び／又はマウス線維芽細胞を用いて実施される細胞接着アッセイにおいて、約４０ナノモル未満のＩＣ５０を有する。特定の実施形態では、抗体は、ヒト肺線維芽細胞及び／又はマウス線維芽細胞を用いて実施される細胞接着アッセイにおいて、約３０ナノモル未満のＩＣ５０を有する。
ＰＤ－１軸阻害剤

【0050】

ＰＤ－１軸は、ＰＤ－１がＴ細胞応答に対して阻害効果を発揮するシグナル伝達経路であって、ＰＤＬ－１又はＰＤＬ－２とのＰＤ－１相互作用を含む。本明細書中に記載するペリオスチン結合ポリペプチド及び抗体を、ＰＤ－１軸阻害剤と併用し、腫瘍、癌、又は他の新生物を処置するための方法において配置することができる。特定の実施形態では、本明細書中に記載するペリオスチン結合ポリペプチド及び抗体を、癌、腫瘍、又は他の新生物を処置するために有用な医薬組成物中でＰＤ－１軸阻害剤と併用することができる。本明細書中に記載するＮＢ０８２８抗体をＰＤ－１軸阻害剤と併用し、腫瘍、癌、又は他の新生物を処置するための方法において配置することができる。特定の実施形態では、本明細書中に記載するＮＢ０８２８抗体を、癌、腫瘍、又は他の新生物を処置するために有用な医薬組成物中でＰＤ－１軸阻害剤と併用することができる。

【0051】

本明細書中の組成物及び方法において利用されるＰＤ－１軸阻害剤は、ＰＤ－１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ－１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ－２（ＣＤ２７３）を介したシグナル伝達を阻害することができる。この阻害剤は、抗体又は抗体フラグメント、可溶性リガンド－Ｆｃ融合構築物、又は小分子阻害剤でありうる。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤は、抗体又はそのＰＤ－１結合フラグメントを含む。特定の実施形態では、ＰＤ－１（ＣＤ２７９）に特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントは、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ－５１４（ＭＥＤＩ０６８０）、スパルタリズマブ、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、ピジリズマブ、好ましくはエザベンリマブ（ＣＡＳ＃２２４９８８２－５４－８）（抗ＰＤ－１抗体）、又はそのＰＤ－１（ＣＤ２７９）結合フラグメントを含む。

【0052】

具体的には、本明細書中に記載する抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むエザベンリマブである。

【0053】

特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤はＰＤ－Ｌ２ Ｆｃ融合タンパク質（例、ＡＭＰ－２２４）である。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤は、ＰＤＬ－１（ＣＤ２７４）に特異的に結合する抗体又はＰＤＬ－１結合フラグメントを含む。特定の実施形態では、ＰＤＬ－１（ＣＤ２７４）に特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントは、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ ４３７６）、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、トリパリマブ（ＪＳ００１－ＰＤ－１）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２）、セトレリマブ（ＪＮＪ－６３７２３２８３）、もしくはＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ－１（ＣＤ２７４）結合フラグメントを含む。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤は、ＰＤＬ－２（ＣＤ２７３）に特異的に結合する抗体又はそのＰＤＬ－２結合フラグメントを含む。

【0054】

特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤は、１つ又は複数の小分子阻害剤、例えばＮ－ ｛２－［（｛２－メトキシ－６－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］ピリジン－３－イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ ２０２）；（２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）－５－メチルベンジル）－Ｄ－セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）－１－（５－クロロ－２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）ベンジル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボン酸；３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニルインドール；３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニル－１ｈ－インドール；Ｌ－α－グルタミン、Ｎ２，Ｎ６－ビス（Ｌ－セリル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－スレオニル－Ｌ－セリル－Ｌ－α－グルタミル－Ｌ－セリル－Ｌ－フェニルアラニル）－Ｌ－リシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－バリル－Ｌ－スレオニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－リシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－イソロイシル－Ｌ－リシル；（２Ｓ）－１－［［２，６－ジメトキシ－４－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］フェニル］メチル］－２－ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ－（２－メルカプトアセチル）－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－メチル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－ヒスチジル－Ｌ－ロイシル－Ｎ－メチルグリシル－Ｌ－トリプトフィル－Ｌ－セリル－Ｌ－トリプトフィル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－システイニル－、環状（１→１４）－チオエーテル；又はその誘導体もしくは類似体などを含む。

【0055】

特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤は、小分子ポリペプチド又は抗体含有医薬組成物の投与のために適切な任意の経路、例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、脳内、又は経口などにより投与することができる。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害抗体は静脈内投与される。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害抗体は、適切な投薬スケジュール、例えば、毎週、毎週２回、毎月、毎月２回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、又は４週間毎に１回投与される。抗体は、任意の治療的に有効な量で投与することができる。特定の実施形態では、治療的に許容可能な量は、約０．１mg/kg～約５０mg/kgの間である。特定の実施形態では、治療的に許容可能な量は、約１mg/kg～約４０mg/kgの間である。特定の実施形態では、治療的に許容可能な量は、約５mg/kg～約３０mg/kgの間である。特定の実施形態では、治療的に許容可能な量は、約５mg/kg～約２０mg/kgの間である。特定の実施形態では、治療的に許容可能な量は、約５mg/kg～約１５mg/kgの間である。特定の実施形態では、治療的に許容可能な量は、約５mg/kg、６mg/kg、７mg/kg、８mg/kg、９mg/kg、１０mg/kg、１１mg/kg、１２mg/kg、１３mg/kg、１４mg/kg、１５mg/kg、１６mg/kg、１７mg/kg、１８mg/kg、１９mg/kg、又は２０mg/kgである。一例では、デュルバルマブは、２週間毎に１回、約１０mg/kgの投与量で投与することができる。

【0056】

特定の実施形態では、個体へのＰＤ－１軸阻害剤の投与は、約１００ミリグラム～約１０００ミリグラムの間の一律の投与量レベルでありうる。特定の実施形態では、個体へのＰＤ－１軸阻害剤の投与は、約２００ミリグラム～約８００ミリグラムの間、約２００ミリグラム～約６００ミリグラムの間、約２００ミリグラム～約５００ミリグラムの間、約３００ミリグラム～約５００ミリグラムの間の一律の投薬レベルでありうる。特定の実施形態では、個体へのＰＤ－１軸阻害剤の投与は、約１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、又は１０００ミリグラムの一律の投与量レベルでありうる。特定の実施形態では、個体へのＰＤ－１軸阻害剤の投与は、単剤療法のために適切なレベルでありうる。例えば、ニボルマブを、２週間毎に約２４０ミリグラム又は４週間毎に約４８０ミリグラムの投与量で投与することができる。別の例では、ペムブロリズマブを、３週間毎に１回、約２００ミリグラムで投与することができる。
治療方法

【0057】

本明細書中に開示する抗体は、癌又は腫瘍の処置のために有用な抗体である。処置は、処置されている状態を改善又は寛解させようとする方法を指す。癌処置に関しては、腫瘍容積の低下、腫瘍容積の成長における低下、無増悪生存期間における増加、又は全体的な平均余命を含むが、それらに限定しない。特定の実施形態では、処置は、処置されている癌の緩解に影響するであろう。特定の実施形態では、処置は、以前に処置される癌又は腫瘍の再発又は進行を防止することが意図される予防的又は維持用量としての使用を包含する。抗体は安全で有効でありうる一方で、全ての個体が施された処置に等しく応答するわけではないであろうが、それにもかかわらず、これらの個体は処置されたと考えられることが当業者により理解される。

【0058】

本明細書中に記載する方法はまた、ＰＤ－１軸阻害剤及びペリオスチン結合抗体の併用を投与することにより、癌（ｃａｎｅｒ）を伴う個体を処置する方法を包含する。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤及びペリオスチン結合抗体は、別々に投与することができる。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤及びペリオスチン結合抗体は、処置の同じ日に別々に投与することができる。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤及びペリオスチン結合抗体は、それ自体の投与スケジュールに従って、各々、別々に投与することができる。特定の実施形態では、別々の投与スケジュールは、各々の阻害剤のＰＫ／ＰＤ特徴を最大化するように設計される。特定の実施形態では、ペリオスチン結合抗体は、ＮＢ０８２８又はＮＢ０８２８のＣＤＲを伴う抗体を含む。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤は、エザベンリマブ（ＣＡＳ＃２２４９８８２－５４－８）又は本明細書中に開示するエザベンリマブ（ｅｚａｂｅｎｌｉｍａｂａｓ）のＣＤＲを伴う抗体を含む。

【0059】

特定の実施形態では、癌又は腫瘍は、固形癌又は腫瘍である。特定の実施形態では、癌又は腫瘍は、血液癌又は腫瘍である。特定の実施形態では、癌又は腫瘍は、乳房、心臓、肺、小腸、結腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭部、頚部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、骨髄、血液、胸腺、子宮、精巣、又は肝臓の腫瘍を含む。特定の実施形態では、本発明の抗体を用いて処置することができる腫瘍又は癌は、腺腫、腺癌、血管肉腫、星状細胞腫、上皮癌、胚細胞腫、膠芽腫、膠腫、血管内皮腫、血管肉腫、血腫、肝芽腫、白血病、リンパ腫、黒色腫、神経芽腫、骨肉腫、網膜芽腫、横紋筋肉腫、肉腫、及び／又は奇形腫を含む。特定の実施形態において、腫瘍／癌は、末端黒子型黒色腫、日光角化症、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺肉腫、腺扁平上皮癌、星細胞腫瘍、バルトリン腺癌、基底細胞癌、気管支腺癌、毛細血管カルチノイド、癌腫、癌肉腫、胆管癌、軟骨肉腫、嚢胞腺腫、内胚葉洞腫瘍、子宮内膜増殖症、子宮内膜間質肉腫、類内膜腺癌、上衣肉腫、スウィング肉腫、限局性結節性過形成、ガストリノーマ（ｇａｓｔｒｏｎｏｍａ）、生殖細胞腫瘍、膠芽腫、グルカゴノーマ、血管芽細胞腫、血管内皮腫、血管腫、肝腺腫、肝腺腫症、肝細胞癌、インスリナイト（ｉｎｓｕｌｉｎｉｔｅ）、上皮内新生物、上皮内扁平上皮新生物、浸潤性扁平上皮癌、大細胞癌、脂肪肉腫、肺癌、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、平滑筋肉腫、黒色腫、悪性黒色腫、悪性中皮腫、神経鞘腫瘍、髄芽腫、髄上皮腫、中皮腫、粘液性類表皮癌、骨髄性白血病、神経芽腫、神経上皮腺癌、結節型黒色腫、骨肉腫、卵巣癌、漿液性乳頭状腺癌、下垂体腫瘍、形質細胞腫、偽肉腫、前立腺癌、肺芽腫、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、漿液性癌、有棘細胞癌、小細胞癌、軟組織癌、ソマトスタチン分泌腫瘍、扁平上皮癌、有棘細胞癌、未分化癌、ブドウ膜黒色腫、疣状癌、膣／外陰癌、ＶＩＰ産生腫瘍（ＶＩＰｐｏｍａ）、及びウィルムス腫瘍の群より選択される。特定の実施形態では、本発明の１つ又は複数の抗体を用いて処置される腫瘍／癌は、脳癌、頭頚部癌、結腸直腸癌、急性骨髄性白血病、プレＢ細胞急性リンパ芽球性白血病、膀胱癌、星状細胞腫、好ましくは グレードＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶの星状細胞腫、膠芽腫、多形性膠芽腫、小細胞癌、及び非小細胞癌、好ましくは非小細胞肺癌、肺腺癌、転移性黒色腫、アンドロゲン非依存性転移性前立腺癌、アンドロゲン依存性転移性前立腺 癌、前立腺癌、及び乳癌、好ましくは乳管癌、及び／又は乳癌を含む。特定の実施形態では、本開示の抗体を用いて処置される癌は、膠芽腫を含む。特定の実施形態では、本開示の１つ又は複数の抗体を用いて処置される癌は、膵臓癌を含む。特定の実施形態では、本開示の１つ又は複数の抗体を用いて処置される癌は、卵巣癌を含む。特定の実施形態では、本開示の１つ又は複数の抗体を用いて処置される癌は、肺癌を含む。特定の実施形態では、本開示の１つ又は複数の抗体を用いて処置される癌は、前立腺癌を含む。特定の実施形態では、本開示の１つ又は複数の抗体を用いて処置される癌は、結腸癌を含む。特定の実施形態では、処置される癌は、膠芽腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。特定の実施形態では、癌は他の処置に抵抗性である。特定の実施形態では、処置される癌は再発する。特定の実施形態では、癌は、再発性／難治性膠芽腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、又は肺癌である。

【0060】

特定の実施形態では、抗体は、抗体含有医薬組成物の投与のために適切な任意の経路、例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、又は脳内などにより、それを必要とする対象に投与することができる。特定の実施形態では、抗体を静脈内投与する。特定の実施形態では、抗体を皮下投与する。特定の実施形態では、抗体を腫瘍内投与する。特定の実施形態では、抗体を、適切な投与スケジュールで、例えば、毎週、毎週２回、毎月、毎月２回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、又は１ヶ月に１回などで投与する。特定の実施形態では、抗体を３週間毎に１回投与する。抗体は、任意の治療的に有効な量で投与することができる。特定の実施形態では、治療的に許容可能な量は、約０．１mg/kg～約５０mg/kgの間である。特定の実施形態では、治療的に許容可能な量は、約１mg/kg～約４０mg/kgの間である。特定の実施形態では、治療的に許容可能な量は、約５mg/kg~約30mg/kgの間である。治療的に有効な量は、処置される疾患又は苦痛に関連付けられる１つ又は複数の症状を寛解させるのに十分な量を含む。
併用治療の投薬スケジュール

【0061】

ペリオスチン結合抗体又はポリペプチド及びＰＤ－１軸阻害剤を含む併用処置は、多様な方法で施すことができる。ペリオスチン結合抗体又はポリペプチド及びＰＤ－１軸阻害剤は、同じスケジュールで同時に、又は異なる時間に及び異なるスケジュールで投与することができる。同時に投与される場合、投与は、別々の製剤、又はペリオスチン結合ポリペプチド及びＰＤ－１軸阻害剤の両方を含む単一製剤によることができる。投与の様式は混合することができ、例えば、ペリオスチン結合ポリペプチドを静脈内投与することができる一方で、ＰＤ－１軸阻害剤を経口で又は非経口注射により投与することができる。特定の実施形態では、ペリオスチン結合ポリペプチドを、静脈内、非経口、皮下、腫瘍内、又は経口で投与する。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤を、静脈内、非経口、皮下、腫瘍内、又は経口で投与する。

【0062】

併用処置を同じスケジュールで個体に施す場合、ペリオスチン結合ポリペプチド及びＰＤ－１軸阻害剤を、１週毎に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、又は４週間毎に１回投与することができる。ペリオスチン結合ポリペプチド及びＰＤ－１軸阻害剤を、別々に又は単一の製剤として投与することができる。ＮＢ０８２８及びＰＤ－１軸阻害剤を、別々に又は単一の製剤として投与することができる。

【0063】

併用処置を異なるスケジュールで個体に施す場合、ペリオスチン結合ポリペプチド及びＰＤ－１軸阻害剤を交互にすることができる。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤を、ペリオスチン結合ポリペプチドの投与前に、１回又は複数回個体に投与することができる。ペリオスチン結合ポリペプチドを、ＰＤ－１軸阻害剤の投与の１日、２日、３日、４日、５日、又は６日以内に投与することができる。ペリオスチン結合ポリペプチドを、ＰＤ－１軸阻害剤の投与の１週間、２週間、３週間、又は４週間以内に投与することができる。ＮＢ０８２８抗体を、ＰＤ－１軸阻害剤の投与の１日、２日、３日、４日、５日、又は６日以内に投与することができる。ＮＢ０８２８抗体を、ＰＤ－１軸阻害剤の投与の１週間、２週間、３週間、又は４週間以内に投与することができる。

【0064】

ペリオスチン結合ポリペプチドを、ＰＤ－１軸阻害剤の投与前に１回又は複数回個体に投与することができる。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤を、ペリオスチン結合ポリペプチドの投与の１日、２日、３日、３日、４日、５日、又は６日以内に投与することができる。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤を、ペリオスチン結合ポリペプチドの投与の１週間、２週間、３週間、又は４週間以内に投与することができる。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤を、ＮＢ０８２８抗体の投与の１日、２日、３日、３日、４日、５日、又は６日以内に投与することができる。特定の実施形態では、ＰＤ－１軸阻害剤を、ＮＢ０８２８抗体の投与の１週間、２週間、３週間、又は４週間以内に投与することができる。

【0065】

特定の実施形態では、ペリオスチン結合ポリペプチドを、１週毎に１回個体に投与することができ、ＰＤ１軸阻害剤を、１週毎、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に個体に投与することができる。特定の実施形態では、ペリオスチン結合ポリペプチドを、２週間毎に１回個体に投与することができ、ＰＤ１軸阻害剤を、１週毎、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に個体に投与することができる。特定の実施形態では、ペリオスチン結合ポリペプチドを、３週間毎に１回個体に投与することができ、ＰＤ１軸阻害剤を、１週毎、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に個体に投与することができる。特定の実施形態では、ペリオスチン結合ポリペプチドを、４週間毎に１回個体に投与することができ、ＰＤ１軸阻害剤を、１週毎、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に個体に投与することができる。特定の実施形態では、ＰＤ１軸阻害剤を、１週間毎に１回個体に投与することができ、ペリオスチン結合ポリペプチドを、１週毎、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に個体に投与することができる。特定の実施形態では、ＰＤ１軸阻害剤を、２週間毎に１回個体に投与することができ、ペリオスチン結合ポリペプチドを、１週毎、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に個体に投与することができる。特定の実施形態では、ＰＤ１軸阻害剤を、３週間毎に１回個体に投与することができ、ペリオスチン結合ポリペプチドを、１週毎、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に個体に投与することができる。特定の実施形態では、ＰＤ１軸阻害剤を、４週間毎に個体に投与することができ、ペリオスチン結合ポリペプチドを、１週毎、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に個体に投与することができる。特定の実施形態では、ＮＢ０８２８を、ＰＤ－１軸阻害剤の投与前に１回又は複数回個体に投与することができる。特定の実施形態では、ＮＢ０８２８を、１週毎に１回個体に投与することができ、ＰＤ１軸阻害剤を、１週間毎、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に個体に投与することができる。特定の実施形態では、ＮＢ０８２８を、２週間毎に１回個体に投与することができ、ＰＤ１軸阻害剤を、１週間毎、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に個体に投与することができる。特定の実施形態では、ＮＢ０８２８を、３週間毎に１回個体に投与することができ、ＰＤ１軸阻害剤を、１週間毎、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に個体に投与することができる。特定の実施形態では、ＮＢ０８２８を、４週間毎に１回個体に投与することができ、ＰＤ１軸阻害剤を、１週間毎、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に個体に投与することができる。

【0066】

本開示に従った併用治療は、活性化成分（例、ペリオスチン結合ポリペプチド及びＰＤ－１の阻害剤）の１つ又は両方がそれ自体により有効ではないが、しかし、併用療法の一部として投与された場合に有効である併用を含みうる。特定の実施形態では、ＰＤ－１の阻害剤を、単剤療法については有効ではないが、しかし、ペリオスチン結合ポリペプチドとの併用において有効であるレベルで投与する。特定の実施形態では、ＰＤ－１の阻害剤を、単剤療法については有効ではないが、しかし、ＮＢ０８２８抗体との併用において有効であるレベルで投与する。特定の実施形態では、ペリオスチン結合ポリペプチドを、単剤療法については有効ではないが、しかし、ＰＤ－１の阻害剤との併用において有効であるレベルで投与する。特定の実施形態では、ＮＢ０８２８を、単剤療法については有効ではないが、しかし、ＰＤ－１の阻害剤との併用において有効であるレベルで投与する。特定の実施形態では、ペリオスチン結合ポリペプチド、及びＰＤ－１の阻害剤の両方を、単剤療法については有効ではないが、しかし、併用において有効であるレベルで投与する。特定の実施形態では、ＮＢ０８２８及びＰＤ－１の阻害剤の両方を、単剤療法については有効ではないが、しかし、併用において有効であるレベルで投与する。
医薬的に許容可能な賦形剤、担体、及び希釈剤

【0067】

特定の実施形態では、本開示の抗ペリオスチン抗体は、１つ又は複数の医薬的に許容可能な賦形剤、担体、及び希釈剤を含む医薬組成物中に含まれる。特定の実施形態では、本開示の抗体を、滅菌溶液中に懸濁して投与する。特定の実施形態では、この溶液は０．９%ＮａＣｌを含む。特定の実施形態では、この溶液は、以下の１つ又は複数をさらに含む：緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、及びヒドロキシメチルアミノメタン（Ｔｒｉｓ）；界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０（Tween 80）、ポリソルベート２０（Tween 20）、及びポロキサマー１８８；ポリオール／二糖／多糖、例えば、グルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、及びデキストラン４０；アミノ酸、例えば、グリシン又はアルギニン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、メチオニン；あるいはキレート剤、例えば、ＥＤＴＡ又はＥＧＴＡ。

【0068】

特定の実施形態では、本開示の抗体を、凍結乾燥して輸送／保存し、投与前に戻す。特定の実施形態では、凍結乾燥抗体製剤は、増量剤、例えばマンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、デキストラン４０、又はそれらの併用などを含む。この凍結乾燥製剤は、ガラス又は他の適切な非反応性材料で構成されるバイアル中に含めることができる。抗体は、製剤化された場合、戻されているか否かにかかわらず、特定のｐＨ、一般的には７．０未満で緩衝化することができる。特定の実施形態では、このｐＨは、４．５～６．５、４．５～６．０、４．５～５．５、４．５～５．０、又は５．０～６．０の間でありうる。

【0069】

また、本明細書中に記載するのは、適切な容器中の本明細書中に記載する抗体の１つ又は複数及び以下より選択される１つ又は複数の追加成分を含むキットである：希釈剤、賦形剤、担体、及び投与用の装置。

【0070】

特定の実施形態では、本明細書中に記載するのは、１つ又は複数の医薬的に許容可能な賦形剤、担体、又は希釈剤及び本開示の抗体を混合することを含む、癌処置を調製する方法である。特定の実施形態では、本明細書中に記載するのは、本開示の１つ又は複数の抗体を凍結乾燥することを含む、保存又は輸送のために癌処置を調製する方法である。
実施例

【0071】

以下の例証的な実施例は、本明細書中に記載する組成物及び方法の実施形態を代表しており、任意の方法で限定することを意味しない。
実施例１－抗体生成及びスクリーニング

【0072】

ファージディスプレイ抗体発見キャンペーンを実施し、完全ヒトファージライブラリーを使用してペリオスチンに対する結合剤を単離した。簡単には、３ラウンドのパンニングを、組換えヒトペリオスチン、組換えマウスペリオスチン、又はそれらの併用のいずれかを使用して行い、マウス交差反応性結合剤を同定することに重点を置いた。このパニング戦略から、マウスペリオスチンと交差反応する７８の配列固有ＳｃＦｖを同定し、細胞接着アッセイにおける機能的スクリーニングのためにヒトＩｇＧ１フォーマット中で産生させた。図１を参照のこと。

【0073】

組換えヒト又はマウスペリオスチンを、９６ウェルプレート上に４℃で一晩コーティングした。翌日、プレートを、ＰＢＳを用いて洗浄し、２%ＢＳＡを用いて３７℃で１時間にわたりブロッキングした。ブロッキング後、抗体をプレートに加え、３７℃で３０分間にわたりインキュベートした。インキュベーション後、５０，０００のＩＭＲ９０ヒト肺線維芽細胞又は５０，０００のＭＬＧマウス線維芽細胞を次にウェルに加え、３７℃で２時間にわたりインキュベートした。プレートを次に、ＰＢＳを用いて２回洗浄し、ウェルのコンフルエンシーを、IncuCyteプラットフォームを使用して測定した。５００nMでの高濃度単一用量スクリーニングから、２１のＩｇＧを、図１中に示すように＞５０%阻害を有するとして同定し、結合スクリーンに進め、ヒト及びマウスのペリオスチンへの相対的な親和性を決定した（以下の表１中に示す通り）。

【0074】

組換えヒト又はマウスペリオスチンについての相対的親和性を決定するために、これらのタンパク質をmaxisorpプレート上に４℃で一晩コーティングした。翌日、プレートを、カゼインブロッキング緩衝液を用いて３７℃で１時間にわたりブロッキングした。各々の抗体の滴定をプレートに加え、ＲＴで１時間にわたり結合することを可能にした。プレートを、ＰＢＳＴを用いて４回洗浄し、ＨＲＰ結合抗ヒトＦｃ二次培養物を用いたＲＴで３０分間にわたるインキュベーションが続いた。プレートを次に、４×ＰＢＳＴを用いて再び洗浄し、次にＴＭＢ基質及び１M ＨＣｌを用いて展開した。このスクリーンから、４つのクローンが選択し（太字及び斜体によりマークされた表１）、それらはヒト及びマウスの両方のペリオスチンに＜１nMの結合ＥＣ５０値を有する。

【表1】

実施例２‐ＮＢ０８２８及び配列バリアントの生成。

【0075】

４つの候補を、細胞接着アッセイにおける用量反応において再テストし、ＩＣ５０値を決定した。このスクリーンから、ＮＢ０６２７を特に適切なＩｇＧとして同定した（表２）。

【表2】

【0076】

ＮＢ０６２７を次に、エフェクターサイレントＩｇＧ４ＰＡＡアイソタイプに変換し、リード候補ＮＢ０８２８を生成した。ＮＢ０８２８の配列分析によって、ＶＨ領域中で２つの翻訳後修飾傾向が同定された。第１の脱アミド化部位はＣＤＲ－Ｈ２中に位置付けられ、第２の酸化部位はＣＤＲ－Ｈ３中に位置付けられる。従って、これらの傾向を除去する試みにおいて、いくつかの単一及び二重変異体を生成し、それらの結合及び活性を測定した。ＮＢ０８２８及びそのバリアントについてのＩＣ５０値及びＥＣ５０値についての結果の要約を表３中に列挙する。

【表3】

実施例３－マウス膀胱ＭＢ４９モデル及び結腸ＣＴ２６腫瘍モデルにおけるＮＢ０８２８のインビボ有効性。

【0077】

ＮＢ０８２８の有効性を、２つの別々の腫瘍モデル、膀胱ＭＢ４９モデル及び結腸ＣＴ２６腫瘍モデルにおいてテストした。簡単には、２５０，０００のＭＢ４９細胞を雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスの側腹部中に皮内注射した、又は５０，０００のＣＴ２６細胞を雌Ｂａｌｂ／ｃマウスの側腹部中に皮内注射した。腫瘍移植後の３日、マウスをＮＢ０８２８（５０mg/kg、３ＱＷ）又は賦形剤コントロール（ＰＢＳ）のいずれかを用いて腹腔内処置した。腫瘍容積をキャリパー測定後に週２回評価し、（長さ×幅^２）／２として算出した。マウスを、腫瘍サイズが任意の単一の方向において１５mmを超える場合、又は人道的なエンドポイントとしての腫瘍潰瘍に起因して、安楽死させた。

【0078】

図２及び図５中に示すように、ＮＢ０８２８は、両方のモデルにおいて腫瘍成長を低下させる際に効果を有した。ＭＢ４９モデルでは、腫瘍成長におけるこの低下は、腫瘍内顆粒球骨髄細胞のより低い%（図３中に示す通り）、及びより低いコラーゲン含量（図４中に示す通り）に関連付けられた。ＭＢ４９モデルと同様に、ＣＴ２６モデルは顆粒球骨髄細胞における低下を示した。また、ＮＢ０８２８によって、腫瘍浸潤マクロファージの頻度が低下し、及び存在するマクロファージは、ＮＢ０８２８処置の結果としてＭ１表現型に向かって傾斜されられた（図１中に示す通り）。ＣＴ２６マウスモデルでは、ＮＢ０８２８処置はまた、より高い量の腫瘍浸潤ＣＤ８＋及びＣＤ４＋ Ｔ細胞、ならびに腫瘍浸潤Ｔ細胞におけるインターフェロンガンマの有意により高い分泌に関連付けられた（図７中に示す通り）。
免疫表現型決定

【0079】

ＭＢ４９又はＣＴ２６担癌マウスを、記載するように、３日目に開始し、ＮＢ０８２８又は賦形剤コントロールを用いて処置した。示すデータについて、免疫表現型決定を、腫瘍移植後２０日目及び１８日目に、それぞれＭＢ４９及びＣＴ２６について行った。腫瘍を切除し、皮膚を除去し、Miltenyiマウス腫瘍解離酵素ミックス（Miltenyi Biotec、ＣＡＴ＃１３０－１１０－１８７）を使用して酵素消化させる前に、メスの刃を使用して機械的に破壊した。消化したサンプルを４０μmストレーナーに通し、ＲＰＭＩ中で洗浄し、ＲＰＭＩ＋１０%ＦＢＳ中での２回目の洗浄が続いた。細胞を次に、カウントのために再懸濁し、サンプル当たり最大２×１０^６個の白血球を蒔き、フローサイトメトリーによる分析のために染色した。ＣＴ２６モデルにおけるＣＤ８＋腫瘍浸潤リンパ球機能の評価のために、腫瘍からの消化された単一細胞懸濁液を、ＡＨ１ペプチド［Ｈ２－Ｌｄ制限ｇｐ７０（４２３－４３１）ＭｕＬＶエピトープ、ＣＴ２６細胞により発現される免疫優勢ＣＤ８＋ Ｔ細胞エピトープ］を用いて、抗ＣＤ２８及びブレフェルジンＡの存在において３７℃で５時間にわたり刺激した。刺激後、細胞を染色し、標準的な表面／細胞内染色方法によるフローサイトメトリーを使用し、ＣＤ８＋ Ｔ細胞によるＩＦＮ－γの産生を検出した。示している細胞集団を評価するために使用されるフロー染色パネルを、表４において以下に含める。生死判別染色（Thermo Fisher、Live/Dead Fixable Violet Stain）を使用し、生細胞事象だけの調査を可能にし、汎白血球マーカーＣＤ４５を含めて、免疫コンパートメント内での集団の標準化を可能にする。目的の免疫集団を、表現型的／機能的に以下のように定義した：全骨髄細胞（ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ＋）、顆粒球（ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ＋ Ｇｒ－１ ｈｉ又はＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ＋ Ｌｙ６Ｇ＋ Ｌｙ６Ｃ ｌｏ）、マクロファージ（ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ＋ Ｌｙ６Ｇ－ Ｌｙ６Ｃ ｌｏ／ｎｅｇ Ｆ４／８０＋）、Ｍ１マクロファージ（ＭＨＣ ＩＩ＋ ＣＤ２０６－）、Ｍ２マクロファージ（ＭＨＣ ＩＩ－ ＣＤ２０６＋）、ＣＤ８＋ ＴＩＬ（ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ－ ＣＤ３＋ ＣＤ９０．２＋ ＣＤ８＋）、ＣＤ４＋ ＴＩＬ（ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ－ ＣＤ３＋ ＣＤ９０．２＋ ＣＤ４＋）、ＩＦＮ－γ＋ ＣＤ８＋ ＴＩＬ（ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ－ ＣＤ３＋ ＣＤ８＋ＩＦＮ－γ＋）。蛍光強度の中央値（ＭＦＩ）を、ＩＦＮ－γ＋ ＣＤ８＋ ＴＩＬからのＩＦＮ－γ染色強度の決定のために使用した。

【表4】

コラーゲン含量

【0080】

腫瘍の総コラーゲン含量を、QuickZyme（登録商標）総コラーゲンアッセイ（QuickZyme Biosciences、オランダ、ライデン、カタログ番号：QZBtotcol1）を使用したヒドロキシプロリンの定量化により評価した。。サンプル調製のために、ＭＢ４９腫瘍を、腫瘍がエンドポイントに達した際に担癌マウスから切除し、液体窒素中で急速凍結し、分析前に－８０℃で保存した。腫瘍材料を秤量し、６M ＨＣｌ中に２００mg腫瘍/ml ＨＣｌで再懸濁し、ボルテックスし、９５℃で２０時間にわたりインキュベートした。チューブを冷却し、１３，０００RPMで１０分間にわたり遠心分離し、上清を回収した。上清をＭｉｌｌｉＱ水、それに続く４M ＨＣｌ中で製造業者の推奨プロトコールに従って希釈し、供給された緩衝剤及び検出試薬を使用したヒドロキシプロリンの検出のために技術的な複製物中に蒔いた。ＯＤ５７０nM値を測定し、供給されたコラーゲンを使用して作成された標準曲線と比較し、各々のサンプル中のコラーゲンの量を算出した。各々のサンプルについての算出された総コラーゲン（μg）を、腫瘍入力の総質量（mg）により割り、腫瘍サンプルにわたりデータを標準化した。
実施例４－マウス結腸ＭＣ３８腫瘍モデルにおけるＮＢ０８２８のインビボ有効性

【0081】

ＮＢ０８２８を、マウス結腸ＭＣ３８腫瘍モデルにおいて腫瘍成長を低下させる際でのその有効性についてテストし、図８中に示す結果を伴う。ＮＢ０８２８はまた、腫瘍微小環境を変化させ、ＣＤ８＋ Ｔ細胞を増加させ、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の頻度を減少させ、炎症誘発性１型マクロファージの比率を増加させる際に有効であった（図９Ａ及び９Ｃ中に示す通り）。これらの変化がこのモデルにおけるＮＢ０８２８の有効性について関与していた。なぜなら、ＮＢ０８２８処置の間でのＣＤ８＋ Ｔ細胞の枯渇によって、ＮＢ０８２８の有益な効果が逆転されたためである（図９Ｄ中に示す通り）。全体として、このデータは、ＮＢ０８２８によって、腫瘍部位へのＣＤ８＋ Ｔ細胞の増加が可能になり、ＴＡＭが減少し、浸潤性腫瘍において炎症誘発性Ｍ１マクロファージ表現型が増加することを示す。
実施例５－マウス結腸ＭＣ３８腫瘍モデルにおけるＮＢ０８２８及び抗ＰＤ－１抗体のインビボ有効性。

【0082】

ＮＢ０８２８を、ＰＤ－１機能遮断抗体との併用において投与された場合にマウス結腸ＭＣ３８腫瘍モデルにおいて腫瘍成長を低下させる際でのその有効性についてテストした。図１０Ａ～Ｃは、抗ＰＤ－１単独と比較し、抗ＰＤ－１及びＮＢ０８２８の併用によって、腫瘍成長がさらに低下し（１０Ａ）、全生存が増加したことを示す（８／４２と比較し、１６／４３の１０Ｂ完全奏効（ＣＲ））。ＮＢ０８２８及び抗ＰＤ－１の併用処置への完全奏功を示した生存マウスは、１０×のＭＣ３８腫瘍細胞を用いた再チャレンジから保護され、生存マウスが腫瘍への免疫学的記憶を獲得していたことを示す。

【0083】

抗ＰＤ－１処置単独に耐性である、確立されたＭＣ３８腫瘍を伴うマウスを、抗ＰＤ－１及びＮＢ０８２８の併用で処置した場合、耐性が逆転した（図１１中に示す通り）。図１２中に示すように、ＮＢ０８２８及び抗ＰＤ－１の併用によって、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の浸潤及び機能が増加し（図１２Ａ及び１２Ｂ）、ＴＡＭ蓄積が低下し（図１２Ｃ）、腫瘍内の残りのマクロファージの炎症誘発性表現型の比率が増加した（図１２Ｄ）。腫瘍微小環境におけるこれらの改変は、ＣＤ８ Ｔ細胞応答を改善し、免疫抑制マクロファージを低下させることにより、抗ＰＤ－１耐性を克服するＮＢ０８２８と一致している。

【0084】

本発明の好ましい実施形態を本明細書中に示し、記載している一方で、そのような実施形態が例によってだけ提供されることは当業者には明らかであろう。多数のバリエーション、変化、及び置換を、本発明から逸脱することを伴わず、当業者がすぐに思いつくであろう。本明細書中に記載する、本発明の実施形態への種々の代替物が、本発明を実行する際に用いられることを理解すべきである。

【0085】

本明細書中で言及する全ての刊行物、特許出願、発行された特許、及び他の文書は、各々の個々の刊行物、特許出願、発行された特許、又は他の文書が、参照によりその全体において組み入れられることが具体的に、及び個別に示されているかのように、参照により本明細書中に組み込まれる。参照により組み入れられた本文中に含まれる定義は、それらが本開示中の定義と矛盾する範囲までは除外される。
本明細書中に提供する配列リスト

【表5】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図12D】

【配列表】

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【国際調査報告】