特表 2022-547809 ＷＴ－１に特異的なＴ細胞免疫療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-11-16

(54)【発明の名称】ＷＴ－１に特異的なＴ細胞免疫療法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20221109BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20221109BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20221109BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20221109BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20221109BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20221109BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20221109BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20221109BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20221109BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20221109BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20221109BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221109BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20221109BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221109BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20221109BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20221109BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20221109BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20221109BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20221109BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C07K16/28

C07K19/00

A61K48/00

A61K35/17 Z

A61K31/7088

A61P43/00 121

A61P35/02

A61P35/00

A61K38/19

A61K38/20

A61K45/00

A61K35/12

A61P37/02

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022510984

(86)(22)【出願日】2020-08-19

(85)【翻訳文提出日】2022-04-15

(86)【国際出願番号】 US2020047071

(87)【国際公開番号】W WO2021034976

(87)【国際公開日】2021-02-25

(31)【優先権主張番号】62/889,519

(32)【優先日】2019-08-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522256406

【氏名又は名称】フレッド ハッチンソン キャンサー センター

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】シュミット，トーマス・エム

(72)【発明者】

【氏名】シャピュイ，オード・ジー

(72)【発明者】

【氏名】グリーンバーグ，フィリップ・ディー

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA90X

4B065AA94X

4B065AB01

4B065BA02

4B065BB19

4B065CA24

4B065CA44

4C084AA13

4C084AA19

4C084BA44

4C084DA01

4C084DA12

4C084DA14

4C084MA02

4C084MA55

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB071

4C084ZB261

4C084ZB271

4C084ZC751

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA03

4C086MA04

4C086MA55

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZB07

4C086ZB26

4C086ZB27

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB43

4C087BB65

4C087CA12

4C087MA02

4C087MA55

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZB07

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZC75

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA50

4H045EA20

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、ヒトウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ－１）エピトープに特異的な結合性タンパク質のほか、結合性タンパク質を発現する宿主細胞を提示する。また、結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチド及びポリヌクレオチドを含むベクターも提供される。多様ながんなど、ＷＴ－１の発現と関連する疾患又は障害を処置するための、本明細書において開示される組成物に関連する方法及び使用も提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

結合性タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変免疫細胞であって、前記コードされる結合性タンパク質が、
（ａ）配列番号２８、１９、２２若しくは２５のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３α）を含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン又はその変異体及びＴＣＲ β鎖可変（Ｖβ）ドメイン、或いは
（ｂ）配列番号４０、３１、３４若しくは３７のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３β）を含むＴＣＲ Ｖβドメイン又はその変異体及びＴＣＲ Ｖαドメイン、或いは
（ｃ）（ａ）のＴＣＲ Ｖαドメイン及び（ｂ）のＴＣＲ Ｖβドメイン
を含み、
前記コードされる結合性タンパク質が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体に結合することが可能であり、任意に、前記ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１を含む、
前記改変免疫細胞。

【請求項2】

前記コードされる結合性タンパク質が、４．０以上又は４．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、前記ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である、請求項１に記載の改変免疫細胞。

【請求項3】

前記コードされる結合性タンパク質が、５．０以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、前記ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である、請求項１又は２に記載の改変免疫細胞。

【請求項4】

前記コードされる結合性タンパク質が、５．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、前記ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である、請求項１～３のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項5】

前記コードされる結合性タンパク質が、６．０以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、前記ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である、請求項１～４のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項6】

前記コードされる結合性タンパク質が、６．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、前記ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である、請求項１～５のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項7】

前記ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊２０１を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項8】

前記改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－４μＭ、１０^－５μＭ又は１０^－６μＭとして、前記アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に、４時間にわたり共培養される場合に、集団中の前記改変免疫細胞のうちの５０％以上が、ＩＦＮ－γを産生し、前記抗原提示細胞が、任意に、Ｔ２細胞を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項9】

前記改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－２μＭとして、前記アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に共培養される場合に、集団中の前記改変免疫細胞のうちの１０％以上が、Ｎｕｒ７７^＋であり、前記抗原提示細胞が、任意に、Ｔ２細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞又はこれらの両方を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項10】

前記改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－２μＭとして、前記アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に共培養される場合に、集団中の前記改変免疫細胞のうちの１５％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、請求項９に記載の改変免疫細胞。

【請求項11】

前記改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－２μＭとして、前記アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に共培養される場合に、集団中の前記改変免疫細胞のうちの２０％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、請求項９又は１０に記載の改変免疫細胞。

【請求項12】

前記改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－２μＭとして、前記アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に共培養される場合に、集団中の前記改変免疫細胞のうちの４０％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、請求項９～１１のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項13】

前記改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－２μＭとして、前記アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に共培養される場合に、集団中の前記改変免疫細胞のうちの５０％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、請求項９～１２のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項14】

前記改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－３μＭとして、前記アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に共培養される場合に、集団中の前記改変免疫細胞のうちの１０％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項15】

前記改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－３μＭとして、前記アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に共培養される場合に、集団中の前記改変免疫細胞のうちの１５％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、請求項１４に記載の改変免疫細胞。

【請求項16】

前記改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を約１０^－３μＭとして、前記アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に共培養される場合に、集団中の前記改変免疫細胞のうちの２０％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、請求項１４又は１５に記載の改変免疫細胞。

【請求項17】

前記改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に３０：１の比で存在する場合に、試料中の前記ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの１１％以上を死滅させることが可能である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項18】

前記改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に３０：１の比で存在する場合に、試料中の前記ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの１２％以上を死滅させることが可能である、請求項１７に記載の改変免疫細胞。

【請求項19】

前記改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に３０：１の比で存在する場合に、試料中の前記ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの１４％以上を死滅させることが可能である、請求項１７又は１８に記載の改変免疫細胞。

【請求項20】

前記改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に３０：１の比で存在する場合に、試料中の前記ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの１５％以上を死滅させることが可能である、請求項１７～１９のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項21】

前記改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に３０：１の比で存在する場合に、試料中の前記ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの２０％以上を死滅させることが可能である、請求項１７～２０のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項22】

前記改変免疫細胞と、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に３０：１の比で存在する場合に、試料中の前記ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの２５％以上を死滅させることが可能である、請求項１７～２１のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項23】

前記改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に１０：１の比で存在する場合に、試料中の前記ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの１０％以上を死滅させることが可能である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項24】

前記改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に１：１の比で存在する場合に、試料中の前記ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの約５％以上を死滅させることが可能である、請求項１～２３のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項25】

前記改変免疫細胞とＰａｎｃ１細胞とが３０：１の比で存在する場合に、試料中のＰａｎｃ１細胞のうちの２１％以上を死滅させることが可能である、請求項１～２４のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項26】

前記改変免疫細胞とＰａｎｃ１細胞とが３０：１の比で存在する場合に、試料中の前記Ｐａｎｃ１細胞のうちの２２％以上を死滅させることが可能である、請求項２５に記載の改変免疫細胞。

【請求項27】

前記改変免疫細胞とＰａｎｃ１細胞とが３０：１の比で存在する場合に、試料中の前記Ｐａｎｃ１細胞のうちの２３％以上を死滅させることが可能である、請求項２５又は２６に記載の改変免疫細胞。

【請求項28】

前記改変免疫細胞とＰａｎｃ１細胞とが３０：１の比で存在する場合に、試料中の前記Ｐａｎｃ１細胞のうちの２４％以上を死滅させることが可能である、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項29】

前記改変免疫細胞とＰａｎｃ１細胞とが３０：１の比で存在する場合に、試料中の前記Ｐａｎｃ１細胞のうちの２５％以上を死滅させることが可能である、請求項２５～２８のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項30】

配列番号８２に示されるアミノ酸配列を有するＴＣＲα鎖及び配列番号８３に示されるアミノ酸配列を有するＴＣＲβ鎖を含むＴ細胞受容体をコードするポリヌクレオチドを含む参照免疫細胞と比較して、４時間にわたる共培養において、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞及び／又はＰａｎｃ１細胞に対する増大した死滅活性を有する、請求項１～２９のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項31】

前記コードされる結合性タンパク質が、ＣＤ８に非依存的に、又はＣＤ８の非存在下において、細胞表面におけるＷＴ－１ペプチド：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である、請求項１～３０のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項32】

（ｉ）前記コードされるＶβドメインが、配列番号１６、５、６、７、８、１３、１４若しくは１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、及び／又は
（ｉｉ）前記コードされるＶαドメインが、配列番号１２、１、２、３、４、９、１０若しくは１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、
請求項１～３１のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項33】

（ｉ）前記ＣＤＲのうちの少なくとも３つ又は４つが、変異を有さず、
（ｉｉ）変異を有する前記ＣＤＲが、２つ以下のみのアミノ酸置換、５つ以下の連続アミノ酸の欠失又はこれらの組合せを有し、
（ｉｉｉ）前記コードされる結合性タンパク質が、任意に、４．０以上のインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮγ）産生ｐＥＣ_５０を伴って、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合する能力を保持する
ことを条件として、前記コードされるＶβドメインが、配列番号１６、５、６、７、８、１３、１４若しくは１５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、及び／又は前記コードされるＶαドメインが、配列番号１２、１、２、３、４、９、１０若しくは１１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、請求項１～３２のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項34】

（ｉ）前記コードされるＣＤＲ３βが、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、前記コードされるＣＤＲ３αが、配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、
（ｉｉ）前記コードされるＣＤＲ３βが、配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、前記コードされるＣＤＲ３αが、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、
（ｉｉｉ）前記コードされるＣＤＲ３βが、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、前記コードされるＣＤＲ３αが、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、又は
（ｉｖ）前記コードされるＣＤＲ３βが、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、前記コードされるＣＤＲ３αが、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、
請求項１～３３のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項35】

（ｉ）前記コードされるＶβドメインが、配列番号３８、２９、３２若しくは３５のうちのいずれか１つのＣＤＲ１βアミノ酸配列及び／又は配列番号３９、３０、３３若しくは３６のうちのいずれか１つのＣＤＲ２βアミノ酸配列を含む、並びに／或いは
（ｉｉ）前記コードされるＶαドメインが、配列番号２６、１７、２０若しくは２３のうちのいずれか１つのＣＤＲ１αアミノ酸配列及び／又は配列番号２７、１８、２１若しくは２４のうちのいずれか１つのＣＤＲ２αアミノ酸配列を含む、
請求項１～３４のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項36】

前記コードされるＴＣＲ Ｖαドメイン及びＴＣＲ Ｖβドメインが、
（ｉ）それぞれ、配列番号２６～２８及び３８～４０、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号２３、２７、２８及び３８～４０、
（ｉｉｉ）それぞれ、配列番号１７～１９及び２９～３１、
（ｉｖ）それぞれ、配列番号２０～２２及び３２～３４、又は
（ｖ）それぞれ、配列番号２３～２５及び３５～３７
のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含む、請求項１～３５のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項37】

前記コードされるＴＣＲ Ｖβドメインが、
（ｉ）ＴＲＢＪ０２－０３遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列、及び／又は
（ｉｉ）ＴＲＢＶ０６－０５遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列、ＴＲＢＶ０７－０９遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列若しくはＴＲＢＶ２０－０１遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列
を含む、請求項１～３６のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項38】

前記コードされるＴＣＲ Ｖαドメインが、
（ｉ）ＴＲＡＪ４３遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列、及び／又は
（ｉｉ）ＴＲＡＶ２０－０２遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列、ＴＲＡＶ３８ＤＶ０８遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列若しくはＴＲＡＶ３８－０１遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列
を含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項39】

（ｉ）前記コードされるＴＣＲ Ｖβドメインが、ＴＲＢＪ０２－０３遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）前記コードされるＴＣＲ Ｖαドメインが、ＴＲＡＪ４３遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む、
請求項３８に記載の改変免疫細胞。

【請求項40】

（ｉ）前記コードされるＴＣＲ Ｖβドメインが、ＴＲＢＶ０６－０５遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）前記コードされるＴＣＲ Ｖαドメインが、ＴＲＡＶ２０遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む、
請求項３８に記載の改変免疫細胞。

【請求項41】

（ｉ）前記コードされるＴＣＲ Ｖβドメインが、ＴＲＢＶ０７－０９遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）前記コードされるＴＣＲ Ｖαドメインが、ＴＲＡＶ３８ＤＶ０８遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む、
請求項３８に記載の改変免疫細胞。

【請求項42】

（ｉ）前記コードされるＴＣＲ Ｖβドメインが、ＴＲＢＶ２０－０１遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）前記コードされるＴＣＲ Ｖαドメインが、ＴＲＡＶ３８－０１遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む、
請求項３８に記載の改変免疫細胞。

【請求項43】

（ｉ）前記コードされるＶβドメインが、配列番号１６若しくは８に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、コードされるＶαドメインが、配列番号１２若しくは４に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、
（ｉｉ）前記コードされるＶβドメインが、配列番号１３若しくは５に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、コードされるＶαドメインが、配列番号９若しくは１に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、
（ｉｉｉ）前記コードされるＶβドメインが、配列番号１４若しくは６に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、コードされるＶαドメインが、配列番号１０若しくは２に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、又は
（ｉｖ）前記コードされるＶβドメインが、配列番号１５若しくは７に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、コードされるＶαドメインが、配列番号１１若しくは３に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる
請求項１～４２のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項44】

前記コードされる結合性タンパク質が、
（ｉ）ＴＣＲα鎖定常ドメイン（Ｃα）若しくはその断片、及び／又は
（ｉｉ）ＴＣＲβ鎖定常ドメイン（Ｃβ）若しくはその断片
をさらに含む、請求項１～４３のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項45】

前記コードされるＣαが、配列番号４１～４４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項４４に記載の改変免疫細胞。

【請求項46】

前記コードされるＣβが、配列番号４５に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項４４又は４５に記載の改変免疫細胞。

【請求項47】

前記コードされる結合性タンパク質が、
（ｉ）配列番号６１若しくは５７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性をを有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号５３若しくは４９に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、これらを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲα鎖、
（ｉｉ）配列番号５８若しくは５４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号５０若しくは４６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲα鎖、
（ｉｉｉ）配列番号５９若しくは５５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号５１若しくは４７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性をを有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲα鎖、又は
（ｉｖ）配列番号６０若しくは５６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性をを有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号５２若しくは４８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲα鎖
を含む、請求項４４～４６のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項48】

前記コードされる結合性タンパク質が、ＴＣＲ、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）である、請求項１～４７のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項49】

ヒト免疫系細胞である、請求項１～４８のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項50】

Ｔ細胞、任意に、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^－ＣＤ８^－ダブルネガティブＴ細胞若しくはγδ Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、樹状細胞又はこれらの任意の組合せである、請求項１～４９のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項51】

前記Ｔ細胞が、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞又はこれらの任意の組合せである、請求項５０に記載の改変免疫細胞。

【請求項52】

前記結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、前記免疫細胞での発現についてコドン最適化されている、請求項１～５１のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項53】

前記結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、配列番号６２～７７のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチドを含む、請求項１～５２のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項54】

前記結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、
（ｉ）配列番号７７に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド及び配列番号６９に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド、
（ｉｉ）配列番号７４に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド及び配列番号６６に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）配列番号７５に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド及び配列番号６７に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド、又は
（ｉｖ）配列番号７６に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド及び配列番号６８に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド
を含む、請求項５３に記載の改変免疫細胞。

【請求項55】

結合性タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチドが、前記Ｖβコードポリヌクレオチドと前記Ｖαコードポリヌクレオチドとの間に配置された自己切断型ペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１～５４のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項56】

前記コードされる自己切断型ペプチドが、配列番号８４～８８のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項５５に記載の改変免疫細胞。

【請求項57】

自己切断型ペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、配列番号８９～９３のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる、請求項５５又は５６に記載の改変免疫細胞。

【請求項58】

結合性タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチドが、５’末端から３’末端への（ＴＣＲβ鎖コードポリヌクレオチド）－（自己切断型ペプチドコードポリヌクレオチド）－（ＴＣＲα鎖コードポリヌクレオチド）の構造を有する、請求項５５～５７のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項59】

結合性タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチドが、配列番号８１又は７８～８０のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチドを含む、請求項５５～５８のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項60】

結合性タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチドが、配列番号８１又は７８～８０のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなるポリヌクレオチドを含む、請求項５３に記載の改変免疫細胞。

【請求項61】

（ｉ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、前記コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体α鎖であるか、若しくはそれを含む、前記異種ポリヌクレオチド、
（ｉｉ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、前記コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体β鎖であるか、若しくはそれを含む、前記異種ポリヌクレオチド、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）のポリヌクレオチド及び（ｉｉ）のポリヌクレオチド
をさらに含み、任意に、宿主細胞が、ＣＤ４＋ Ｔ細胞を含む、請求項１～６０のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項62】

（ａ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、前記コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体α鎖であるか、又はそれを含む、前記異種ポリヌクレオチド、
（ｂ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、前記コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体β鎖であるか、又はそれを含む、前記異種ポリヌクレオチド、及び
（ｃ）（ａ）のポリヌクレオチドと（ｂ）のポリヌクレオチドとの間に配置された自己切断型ペプチドをコードするポリヌクレオチド
を含む、請求項６１に記載の宿主細胞。

【請求項63】

ＰＤ－１遺伝子、ＬＡＧ３遺伝子、ＴＩＭ３遺伝子、ＣＴＬＡ４遺伝子、ＨＬＡ構成要素遺伝子、ＴＣＲ構成要素遺伝子又はこれらの任意の組合せの染色体遺伝子ノックアウトを含む、請求項１～６２のいずれか一項に記載の改変免疫細胞。

【請求項64】

前記染色体遺伝子ノックアウトが、α１マクログロブリン遺伝子、α２マクログロブリン遺伝子、α３マクログロブリン遺伝子、β１ミクログロブリン遺伝子又はβ２ミクログロブリン遺伝子又はこれらの任意の組合せから選択されるＨＬＡ構成要素遺伝子のノックアウトを含む、請求項６３に記載の改変免疫細胞。

【請求項65】

前記染色体遺伝子ノックアウトが、ＴＣＲα可変領域遺伝子、ＴＣＲβ可変領域遺伝子、ＴＣＲ定常領域遺伝子又はこれらの任意の組合せから選択されるＴＣＲ構成要素遺伝子のノックアウトを含む、請求項６３又は６４に記載の改変免疫細胞。

【請求項66】

結合性タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記コードされる結合性タンパク質が、ＴＣＲ Ｖαドメイン及びＴＣＲ Ｖβドメインを含み、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能であり、任意に、前記ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１を含み、
（ｉ）前記コードされるＶαドメインが、配列番号２８、１９、２２若しくは２５のうちのいずれか１つに示されるＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、
（ｉｉ）前記コードされるＶβドメインが、配列番号４０、３１、３４若しくは３７のうちのいずれか１つに示されるＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、
（ｉｉｉ）前記コードされるＶαドメインが、配列番号２６、１７、２０若しくは２３のうちのいずれか１つに示されるＣＤＲ１アミノ酸配列を含む、
（ｉｖ）前記コードされるＶβドメインが、配列番号３８、３２若しくは３５のうちのいずれか１つに示されるＣＤＲ１アミノ酸配列を含む、
（ｖ）前記コードされるＶαドメインが、配列番号２７、１８、２１若しくは２４のうちのいずれか１つに示されるＣＤＲ２アミノ酸配列を含む、
（ｖｉ）前記コードされるＶβドメインが、配列番号３９、３０、３３若しくは３６のうちのいずれか１つに示されるＣＤＲ２アミノ酸配列を含む、 （ｖｉｉ）前記コードされるＶαドメインが、配列番号４、１～３、１２若しくは９～１１のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、
（ｖｉｉｉ）前記コードされるＶβドメインが、配列番号８、５～７、１６若しくは１３～１５のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、
（ｉｘ）前記コードされるＴＣＲ Ｖαが、ＴＣＲα鎖中に含まれ、前記ＴＣＲα鎖が、配列番号５３及び４６～５２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、
（ｘ）前記コードされるＴＣＲ Ｖβが、ＴＣＲβ鎖中に含まれ、前記ＴＣＲβ鎖が、配列番号６１及び５４～６０のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、又は
（ｘｉ）（ｉ）～（ｘ）の任意の組合せである、
前記単離ポリヌクレオチド。

【請求項67】

前記ポリヌクレオチドが、宿主細胞での発現についてコドン最適化されており、任意に、前記宿主細胞が、ヒトＴ細胞、ヒトＮＫ細胞又はヒトＮＫ－Ｔ細胞である、請求項６６に記載の単離ポリヌクレオチド。

【請求項68】

配列番号６２～８１のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチドを含む、請求項６６又は６７に記載の単離ポリヌクレオチド。

【請求項69】

請求項６６～６８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。

【請求項70】

レンチウイルスベクター又はレトロウイルスベクターである、請求項６９に記載のベクター。

【請求項71】

請求項６６～６８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含み、前記コードされる結合性タンパク質を発現することが可能な、宿主細胞。

【請求項72】

（ｉ）請求項１～６５のいずれか一項に記載の改変免疫細胞、
（ｉｉ）請求項６６～６８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）請求項６９若しくは７０に記載のベクター、及び／又は
（ｉｖ）請求項７１に記載の宿主細胞、
並びに薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤
を含む、組成物。

【請求項73】

（ｉ）請求項１～６５のいずれか一項に記載の改変免疫細胞、並びに
（ｉｉ）ＴＣＲ Ｖα及びＴＣＲ Ｖβを含み、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号１００）：ＨＬＡ複合体に特異的に結合することが可能である結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む免疫細胞であって、任意に、前記ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１を含み、任意に、（ｉ）の改変免疫細胞及び（ｉｉ）の免疫細胞が、各々独立に、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及びＮＫ－Ｔ細胞から選択される、前記免疫細胞
を含む、請求項７２に記載の組成物。

【請求項74】

（ｉｉ）における前記免疫細胞の前記結合性タンパク質が、
（ａ）それぞれ、配列番号１０１～１０３及び１０５～１０７のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）前記Ｖαが、配列番号１０４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）前記Ｖβが、配列番号１０８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、
（ｂ）それぞれ、配列番号１０９～１１０及び１１３～１１５のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）前記Ｖαが、配列番号１１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）前記Ｖβが、配列番号１１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、或いは
（ｃ）それぞれ、配列番号１１７～１１９及び１２１～１２３のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）前記Ｖαが、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）前記Ｖβが、配列番号１２４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはこれからなる、
請求項７３に記載の組成物。

【請求項75】

ＷＴ－１の発現と関連する疾患又は障害を有する対象を処置するための方法であって、有効量の、（ｉ）請求項１～６５のいずれか一項に記載の改変免疫細胞、（ｉｉ）請求項６６～６８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）請求項６９若しくは７０に記載のベクター、（ｉｖ）請求項７１に記載の宿主細胞、及び／又は（ｖ）請求項７２～７４のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与するステップを含む、前記方法。

【請求項76】

ＴＣＲ Ｖα及びＴＣＲ Ｖβを含み、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号１００）：ＨＬＡ複合体に特異的に結合することが可能である結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む免疫細胞を受けたことがあるか、それを受けているか、又はそれを受ける対象に、請求項１～６５のいずれか一項に記載の改変免疫細胞を投与するステップを含み、任意に、前記ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１を含み、任意に、前記改変免疫細胞及び前記免疫細胞が、各々独立に、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及びＮＫ－Ｔ細胞から選択される、請求項７５に記載の方法。

【請求項77】

前記ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号１００）：ＨＬＡ複合体に特異的に結合することが可能な前記結合性タンパク質が、
（ａ）それぞれ、配列番号１０１～１０３及び１０５～１０７のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）前記Ｖαが、配列番号１０４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）前記Ｖβが、配列番号１０８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、
（ｂ）それぞれ、配列番号１０９～１１０及び１１３～１１５のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）前記Ｖαが、配列番号１１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）前記Ｖβが、配列番号１１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、或いは
（ｃ）それぞれ、配列番号１１７～１１９及び１２１～１２３のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）前記Ｖαが、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）前記Ｖβが、配列番号１２４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、
請求項７６に記載の方法。

【請求項78】

前記疾患又は障害が、血液悪性腫瘍又は固形がんである、請求項７５～７７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項79】

前記血液悪性腫瘍が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病（難治性ＡＭＬ及び再発性ＡＭＬを含み、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病（例えば、好酸球増多症を伴う、又はこれを伴わない）、急性単球性白血病、急性赤白血病、及び急性巨核芽球性白血病を含む、ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄球性白血病、慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）又は多発性骨髄腫（難治性ＭＭ及び再発性ＭＭを含むＭＭ）から選択される、請求項７８に記載の方法。

【請求項80】

前記固形がんが、胆管がん、膀胱がん、骨軟部組織癌、脳腫瘍、乳がん、乳癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸腺癌、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、胚性がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、胃腺癌、多形性膠芽腫、膠芽腫、黒色腫、びまん性腹膜中皮腫、悪性胸膜中皮腫、神経膠腫、星状細胞腫、婦人科腫瘍、頭頸部扁平上皮癌、肝がん、肝細胞癌、肺がん、非小細胞肺がん、悪性黒色腫、骨肉腫、卵巣がん（例えば、上皮卵巣がん、卵巣癌）、卵管がん、子宮内膜癌、膵がん、膵管腺癌、原発星状細胞腫瘍、原発甲状腺がん、前立腺がん、腎がん、腎細胞癌腫、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、骨原性肉腫、精巣生殖細胞腫瘍、尿路上皮がん、子宮肉腫、子宮癌肉腫又は子宮がんから選択される、請求項７８に記載の方法。

【請求項81】

前記改変免疫細胞が、前記異種ポリヌクレオチドを含むようにエクスビボで改変される、請求項７５～８０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項82】

前記改変免疫細胞が、前記対象に対して、同種、同系又は自家である、請求項７５～８１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項83】

前記改変免疫細胞が、造血前駆細胞又はヒト免疫系細胞である、請求項７５～８２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項84】

前記免疫系細胞が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^－ＣＤ８^－ダブルネガティブＴ細胞、γδ Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞又はこれらの任意の組合せである、請求項８３に記載の方法。

【請求項85】

前記Ｔ細胞が、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞又はこれらの任意の組合せである、請求項８４に記載の方法。

【請求項86】

前記改変免疫細胞の複数回用量を前記対象に投与するステップを含む、請求項７５～８５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項87】

前記複数回用量が、約２～約４週間の投与間隔で投与される、請求項８６に記載の方法。

【請求項88】

前記改変免疫細胞が、約１０^４個の細胞／ｋｇ～約１０^１１個の細胞／ｋｇの用量で前記対象に投与される、請求項７５～８７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項89】

サイトカインを前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項７５～８８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項90】

前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１又はこれらの任意の組合せである、請求項８９に記載の方法。

【請求項91】

前記サイトカインが、ＩＬ－２であり、前記改変免疫細胞と共に同時に又は逐次的に投与される、請求項９０に記載の方法。

【請求項92】

、前記対象に、サイトカイン投与前に少なくとも３回又は４回、改変免疫細胞が投与されることを条件として、前記サイトカインが逐次的に投与される、請求項９１に記載の方法。

【請求項93】

前記サイトカインが、ＩＬ－２であり、皮下投与される、請求項８９～９２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項94】

前記対象が、免疫抑制治療を受けている、請求項７５～９３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項95】

前記免疫抑制治療が、カルシニューリン阻害剤、コルチコステロイド、微小管阻害剤、低用量のミコフェノール酸プロドラッグ又はこれらの任意の組合せから選択される、請求項９４に記載の方法。

【請求項96】

前記対象が、非骨髄破壊的造血細胞移植又は骨髄破壊的造血細胞移植を受けたことがある、請求項７５～９５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項97】

前記対象に、前記非骨髄破壊的造血細胞移植の少なくとも３カ月後に前記改変免疫細胞が投与される、請求項９６に記載の方法。

【請求項98】

前記対象に、前記骨髄破壊的造血細胞移植の少なくとも２カ月後に前記改変免疫細胞が投与される、請求項９７に記載の方法。

【請求項99】

前記対象が、ＡＭＬの治療を以前に受けたことがある、請求項７５～９８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項100】

ＷＴ－１の発現と関連する疾患又は障害の処置における使用のための、
（ｉ）請求項１～６５のいずれか一項に記載の改変免疫細胞、
（ｉｉ）請求項６６～６８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）請求項６９若しくは７０に記載のベクター、及び／又は
（ｉｖ）請求項７１に記載の宿主細胞
を含む組成物。

【請求項101】

ＷＴ－１の発現と関連する疾患又は障害の処置のための医薬の製造における使用のための、
（ｉ）請求項１～６５のいずれか一項に記載の改変免疫細胞、
（ｉｉ）請求項６６～６８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）請求項６９若しくは７０に記載のベクター、及び／又は
（ｉｖ）請求項７１に記載の宿主細胞
を含む組成物。

【請求項102】

前記疾患又は障害が、血液悪性腫瘍又は固形がんである、請求項１００又は１０１に記載の使用のための組成物。

【請求項103】

前記血液悪性腫瘍が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病（難治性ＡＭＬ及び再発性ＡＭＬを含み、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病（例えば、好酸球増多症を伴う、又はこれを伴わない）、急性単球性白血病、急性赤白血病、及び急性巨核芽球性白血病を含む、ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄球性白血病、慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）又は多発性骨髄腫（難治性ＭＭ及び再発性ＭＭを含むＭＭ）から選択される、請求項１０２に記載の使用のための組成物。

【請求項104】

前記固形がんが、胆管がん、膀胱がん、骨軟部組織癌、脳腫瘍、乳がん、乳癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸腺癌、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、胚性がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、胃腺癌、多形性膠芽腫、膠芽腫、黒色腫、びまん性腹膜中皮腫、悪性胸膜中皮腫、神経膠腫、星状細胞腫、婦人科腫瘍、頭頸部扁平上皮癌、肝がん、肝細胞癌、肺がん、非小細胞肺がん、悪性黒色腫、骨肉腫、卵巣がん（例えば、上皮卵巣がん、卵巣癌）、卵管がん、子宮内膜癌、膵がん、膵管腺癌、原発星状細胞腫瘍、原発甲状腺がん、前立腺がん、腎がん、腎細胞癌腫、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、骨原性肉腫、精巣生殖細胞腫瘍、尿路上皮がん、子宮肉腫、子宮癌肉腫又は子宮がんから選択される、請求項１０２に記載の使用のための組成物。

【請求項105】

Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含む結合性タンパク質であって、
前記Ｖαドメインが、
（ｉ）配列番号２８、１９、２２又は２５若しくは２８のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３α）又はその変異体、
（ｉｉ）配列番号２６、１７、２０若しくは２３のうちのいずれか１つのＣＤＲ１アミノ酸配列（ＣＤＲ１α）、
（ｉｉｉ）配列番号２７、１８、２１若しくは２４のうちのいずれか１つのＣＤＲ２アミノ酸配列（ＣＤＲ２α）、
（ｉｖ）配列番号１～４又は９～１２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組合せ
を含み、
前記Ｖβドメインが、
（ｖｉ）配列番号４０、３１、３４若しくは３７のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３β）又はその変異体、
（ｖｉｉ）配列番号３８、２９、３２又は３５のうちのいずれか１つのＣＤＲ１アミノ酸配列（ＣＤＲ１β）、
（ｖｉｉｉ）配列番号３９、３０、３３又は３６のうちのいずれか１つのＣＤＲ２アミノ酸配列（ＣＤＲ２β）、
（ｉｘ）配列番号５～８又は１３～１６のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（ｘ）（ｖｉ）～（ｘ）の任意の組合せ
を含み、
前記結合性タンパク質が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能であり、任意に、前記ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１を含む、
前記結合性タンパク質。

【請求項106】

（１）ＴＣＲα鎖定常ドメイン（Ｃα）若しくはその断片、及び／又は
（２）ＴＣＲβ鎖定常ドメイン（Ｃβ）若しくはその断片
をさらに含む、請求項１０５に記載の結合性タンパク質。

【請求項107】

前記Ｃαが、配列番号４１～４４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項１０６に記載の結合性タンパク質。

【請求項108】

前記Ｃβが、配列番号４５のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項１０６又は１０７に記載の結合性タンパク質。

【請求項109】

請求項１０５～１０８のいずれか一項に記載の結合性タンパク質をコードする、単離ポリヌクレオチド。

【請求項110】

宿主細胞での発現についてコドン最適化されている、請求項１０９に記載のポリヌクレオチド。

【請求項111】

請求項１０９～１１０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む改変免疫細胞であって、前記ポリヌクレオチドが、前記免疫細胞に対して異種である、前記改変免疫細胞。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願と関連する配列表は、印刷物の代わりに、テキストフォーマットで提供され、参照により本明細書へ組み込む。配列表を含有するテキストファイルの名称は、３６００５６＿４７３ＷＯ＿ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔである。テキストファイルは、１０９ＫＢであり、２０２０年８月１７日に作成され、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して、電子的に提出されている。

【背景技術】

【0002】

Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）遺伝子治療は、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞を単離し、特徴付け、拡大するのに要求される膨大な時間及び労力などの、従来のＴ細胞養子免疫療法と関連する障害を克服するためにデザインされた、新興の処置法である（Ｓｃｈｍｉｔｔら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０：１２４０、２００９）。別の難関は、Ｔ細胞免疫療法によりターゲティングされる、同定された腫瘍抗原の大半は、過剰発現された自己タンパク質であるので、これらの抗原に特異的な高アフィニティーＴ細胞は、一般に、胸腺選択時に消失させられ、末梢レパートリー内において希少であるか、又は存在しないことである。

【0003】

ＴＣＲ遺伝子治療における使用が意図されるＴＣＲのアフィニティーを増強するための戦略が考えられている（例えば、Ｕｄｙａｖａｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２：４４３９、２００９；Ｚｈａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：５８４５、２００７；Ｒｉｃｈｍａｎ及びＫｒａｎｚ、Ｂｉｏｍｏｌ．Ｅｎｇ．２４：３６１、２００７）。

【0004】

随伴する免疫毒性を最小限としながら、最大の臨床効果を達成する、ターゲティングされたＴ細胞療法のための前提条件は、例えば、悪性細胞コンパートメント内の高発現及びこれによる提示を伴うが、正常組織内の著明な発現を伴わない疾患関連抗原を同定することを伴う。例えば、いくつかの急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）関連抗原について記載されており、ウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ－１）は、ＡＭＬ患者の大部分の白血病幹細胞（ＬＳＣ）コンパートメント内において、生理学的造血幹細胞（ＨＳＣ）内より著明に高度のレベルにおいて発現されることが示されている。ＷＴ－１は、養子Ｔ細胞移入及びペプチドワクチン接種のいずれを伴う臨床試験においてもターゲティングされている（例えば、米国特許第７，３４２，０９２号；同第７，６０８，６８５号；同第７，６２２，１１９号を参照）。加えて、形態的寛解下にあるＡＭＬを伴う患者における転写物レベルの上昇が、明白な臨床的再発を予測したため、ＷＴ－１の発現は、微小残存疾患のマーカーであることが報告されている（Ｉｎｏｕｅら、Ｂｌｏｏｄ、８４：３０７１、１９９４；Ｏｇａｗａら、Ｂｌｏｏｄ、１０１：１６９８、２００３）。

【0005】

ＷＴ－１は、細胞内（通例、核内）タンパク質であるので、ＷＴ－１をターゲティングする免疫療法は、ＭＨＣクラスＩ分子により、細胞表面において提示されたペプチドを認識するＷＴ－１特異的ＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）による応答の発生を目的とする細胞法を使用してきた。ＣＴＬ応答を誘導するために、細胞内タンパク質が、通例、プロテアソーム又はエンドソーム／リソソームにより分解され、結果として得られるペプチド断片は、ＭＨＣクラスＩ又はクラスＩＩ分子に結合する。これらのペプチド－ＭＨＣ複合体は、細胞表面上に提示され、ここで、ペプチド－ＭＨＣ－ＴＣＲ間相互作用を介して、Ｔ細胞の結合を受ける。ＷＴ－１タンパク質に由来するペプチドは、理論的に、腫瘍細胞を死滅させることが可能な、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）拘束細胞傷害性ＣＤ８^＋Ｔ細胞を誘導するように、ヒトにおけるワクチン中において使用されうる。しかし、ＷＴ－１は、自己タンパク質であるため、免疫化は、ＴＣＲのアフィニティーが小さいＴ細胞による応答を誘発するにとどまる可能性がある。加えて、ＷＴ－１に対する抗体は、造血悪性腫瘍及び充実性腫瘍を伴う患者において検出可能であり、これは、ＷＴ－１が、高度に免疫原性の抗原でありうることも示す（Ｇａｉｇｅｒら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７（増刊３号）：７６１、２００１）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】米国特許第７，３４２，０９２号明細書

【特許文献2】米国特許第７，６０８，６８５号明細書

【特許文献3】米国特許第７，６２２，１１９号明細書

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】Ｓｃｈｍｉｔｔら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０：１２４０、２００９

【非特許文献2】Ｕｄｙａｖａｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２：４４３９、２００９

【非特許文献3】Ｚｈａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：５８４５、２００７

【非特許文献4】Ｒｉｃｈｍａｎ及びＫｒａｎｚ、Ｂｉｏｍｏｌ．Ｅｎｇ．２４：３６１、２００７

【非特許文献5】Ｉｎｏｕｅら、Ｂｌｏｏｄ、８４：３０７１、１９９４

【非特許文献6】Ｏｇａｗａら、Ｂｌｏｏｄ、１０１：１６９８、２００３

【非特許文献7】Ｇａｉｇｅｒら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７（増刊３号）：７６１、２００１

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

白血病及び腫瘍など、多様ながんに対して方向付けられた、高度に特異的なＷＴ－１ターゲティングされた免疫療法としての使用のための代替的遺伝子療法が必要とされていることが明らかである。本明細書において開示される実施形態は、この必要に取り組み、他の関連する利点を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0009】

（要旨）
ある特定の実施形態に従い、本開示は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体に結合することが可能な結合性タンパク質であって、（ａ）配列番号１９、２２、２５若しくは２８のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３α）を含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン又はその変異体及び、配列番号５～８若しくは１３～１６のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を任意に含むか若しくはそれからなる、ＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメイン；（ｂ）配列番号３１、３４、３７若しくは４０のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３β）を含むＴＣＲ Ｖβドメイン若しくはその変異体及び、配列番号１～４若しくは９～１２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を任意に含むか若しくはそれからなる、ＴＣＲ Ｖαドメイン、又は（ｃ）（ａ）のＴＣＲ Ｖαドメイン及び（ｂ）のＴＣＲ Ｖβドメインを含む、結合性タンパク質を提示する。

【0010】

ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、４．０、４．５、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体に結合することが可能である（例えば、結合性タンパク質を含む免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞又はＮＫ細胞など）は、配列番号９４：ＨＬＡに対する、４．０、４．５、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を有する。）。

【0011】

ある特定の実施形態において、ＨＬＡは、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１を含む。

【0012】

ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、ヒト結合性タンパク質、ヒト化結合性タンパク質又はキメラ結合性タンパク質である。

【0013】

本明細書において開示される実施形態のうちのいずれかにおいて、結合性タンパク質は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体に結合することが可能であり、この場合、結合性タンパク質は、ＴＣＲ Ｖβドメイン及びＴＣＲ Ｖαドメインを含み、（ｉ）Ｖβドメインは、配列番号５～８若しくは１３～１６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなる、及び／又は（ｉｉ）Ｖαドメインは、配列番号１～４若しくは９～１２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる。

【0014】

ある特定の実施形態において、コードされる結合性タンパク質は、ＴＣＲ、ＣＡＲ又はｓｃＴＣＲである。

【0015】

本明細書においてまた、本明細書において開示される結合性タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変免疫細胞も提示される。ある特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞又はこれらの任意の組合せを含む。ある特定の実施形態において、本明細書において開示される結合性タンパク質を発現する免疫細胞は、配列番号９４に従うペプチド（例えば、ペプチド：ＨＬＡ複合体内に含まれる）の存在下で活性化される。ある特定の実施形態において、本明細書において開示される結合性タンパク質を発現する免疫細胞は、配列番号９４：ＨＬＡ複合体を発現する標的細胞を死滅させることが可能である。

【0016】

また、本開示に従う結合性タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチドも提供される。ある特定の実施形態において、コードされる結合性タンパク質は、（ｉ）配列番号１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７若しくは４０のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５若しくは３８のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列；（ｉｉｉ）配列番号１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６若しくは３９のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号１～４若しくは９～１２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、若しくはこれらに対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の同一性を有するアミノ酸配列；（ｖ）配列番号５～８若しくは１３～１６のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、若しくはこれらに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；（ｖｉ）配列番号４６～５３のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、若しくはこれらに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；（ｖｉｉ）配列番号５４～６１のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、若しくはこれらに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列又は（ｖｉｉｉ）（ｉ）～（ｖｉｉ）の任意の組合せを含む。

【0017】

ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号６２～８１のうちのいずれか１つに示されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％（例えば、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の同一性を有するポリヌクレオチドを含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、免疫細胞（例えば、ヒトＴ細胞）などの宿主細胞内の発現についてコドン最適化されている。

【0018】

本明細書において記載されるポリヌクレオチドを含有するベクターのほか、本明細書において開示される改変細胞、結合性タンパク質、ポリヌクレオチド及び／又はベクターを含む組成物もまた提供される。

【0019】

また、ＷＴ－１の発現又は活性と関連する疾患又は障害を有する対象を処置するための方法であって、有効量の、本明細書において開示される改変免疫細胞、結合性タンパク質、ポリヌクレオチド又はベクターを、対象へと投与するステップを含む方法も提供される。

【0020】

ある特定の実施形態において、疾患又は障害は、血液悪性腫瘍又は固形がんである。例えば、処置される血液悪性腫瘍は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病（難治性ＡＭＬ及び再発性ＡＭＬを含み、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病（例えば、好酸球増多症を伴う、又はこれを伴わない）、急性単球性白血病、急性赤白血病、及び急性巨核芽球性白血病を含むＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄球性白血病、慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）又は多発性骨髄腫（難治性ＭＭ及び再発性ＭＭを含むＭＭ）でありうる。処置される例示的固形がんは、胆管がん、膀胱がん、骨軟部組織癌、脳腫瘍、乳がん、乳癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸腺癌、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、胚性がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、胃腺癌、多形性膠芽腫、膠芽腫、黒色腫、びまん性腹膜中皮腫、悪性胸膜中皮腫、神経膠腫、星状細胞腫、婦人科腫瘍、頭頸部扁平上皮癌、肝がん、肝細胞癌、肺がん、非小細胞肺がん、悪性黒色腫、骨肉腫、卵巣がん（例えば、上皮卵巣がん、卵巣癌）、卵管がん、子宮内膜癌、膵がん、膵管腺癌、原発星状細胞腫瘍、原発甲状腺がん、前立腺がん、腎がん、腎細胞癌腫、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、骨原性肉腫、精巣生殖細胞腫瘍、尿路上皮がん、子宮肉腫、子宮癌肉腫又は子宮がんでありうる。

【0021】

以下の「発明を実施するための形態」及び添付の図面を参照すると、本開示の、これらの態様及び実施形態並びに他の態様及び実施形態がさらに理解される。本明細書において言及される、かつ／又は出願データシートにおいて列挙されている、米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願及び非特許刊行物の全ては、各々が、個別に組み込まれた場合と同様に、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込む。本開示の態様及び実施形態は、必要な場合、多様な特許、出願及び刊行物の概念を利用して、なおさらなる実施形態をもたらすように改変されうる。

【図面の簡単な説明】

【0022】

【図1】ＷＴ－１特異的Ｔ細胞系の同定を示す図である。略述すると、４例の健常ドナーから得られたＷＴ－１特異的ポリクローナルＴ細胞系（ＣＤ８＋）を、ペプチドをパルスされた自家樹状細胞と共に培養し、ＣＤ８非依存性（ＣＤ８ｉ）ＷＴ－１ペプチド／ＨＬＡ－Ａ四量体で染色し、高四量体染色細胞について分取した。２４のＷＴ－１特異的クローン型を同定した。シーケンシングにより、ＴＣＲレパートリー解析を実施した。各クローン型の、非分取集団と対比したエンリッチメント倍数（ｙ軸）及び各クローン型によるＣＤ３の表面発現（ｘ軸）を示す。

【図2A】例示的なＷＴ－１特異的結合性タンパク質の、形質導入された宿主細胞内の発現を示す図である。図１に示される２４のクローン型に由来する、１０のＷＴ－１特異的ＴＣＲを使用して、ＴＣＲα／ＴＣＲβ欠損Ｊ７６ Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞へと形質導入した。形質導入された細胞（明るいグレーで示される）による、ＷＴ－１：ＨＬＡ－Ａ四量体への結合及びＣＤ３の発現を、Ｓｃｈｍｉｔｔら（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３５：１１８８、２０１７）により記載されている、配列番号８２に従うα鎖及び配列番号８３に従うβ鎖を有するＷＴ－１特異的参照ＴＣＲ（暗いグレーで示される）により形質導入された細胞と比較した。

【図2B】例示的なＷＴ－１特異的結合性タンパク質の、形質導入された宿主細胞内の発現を示す図である。図１に示される２４のクローン型に由来する、１０のＷＴ－１特異的ＴＣＲを使用して、ＴＣＲα／ＴＣＲβ欠損Ｊ７６ Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞へと形質導入した。形質導入された細胞（明るいグレーで示される）による、ＷＴ－１：ＨＬＡ－Ａ四量体への結合及びＣＤ３の発現を、Ｓｃｈｍｉｔｔら（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３５：１１８８、２０１７）により記載されている、配列番号８２に従うα鎖及び配列番号８３に従うβ鎖を有するＷＴ－１特異的参照ＴＣＲ（暗いグレーで示される）により形質導入された細胞と比較した。

【図2C】例示的なＷＴ－１特異的結合性タンパク質の、形質導入された宿主細胞内の発現を示す図である。図１に示される２４のクローン型に由来する、１０のＷＴ－１特異的ＴＣＲを使用して、ＴＣＲα／ＴＣＲβ欠損Ｊ７６ Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞へと形質導入した。形質導入された細胞（明るいグレーで示される）による、ＷＴ－１：ＨＬＡ－Ａ四量体への結合及びＣＤ３の発現を、Ｓｃｈｍｉｔｔら（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３５：１１８８、２０１７）により記載されている、配列番号８２に従うα鎖及び配列番号８３に従うβ鎖を有するＷＴ－１特異的参照ＴＣＲ（暗いグレーで示される）により形質導入された細胞と比較した。

【図3A】本開示の結合性タンパク質が、形質導入された宿主細胞内において機能的であることを示す図である。（Ａ）Ｎｕｒ７７－ｄｔＴｏｍａｔｏレポーター（ヒトＴ細胞内の抗原特異的シグナル伝達を報告する；Ａｈｓｏｕｒｉ及びＷｅｉｓｓ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９８（２）：６５７～６６８ （２０１７）を参照）を発現するＪｕｒｋａｔ細胞へと、ＷＴ－１特異的ＴＣＲを形質導入し、ＷＴ－１ペプチドをロードされた、表示の濃度のＡＰＣと共に、２４時間にわたりインキュベートした。

【図3B】本開示の結合性タンパク質が、形質導入された宿主細胞内において機能的であることを示す図である。（Ｂ）Ｎｕｒ７７活性化ペプチドに対する、表示のＴＣＲによるＥＣ_５０値。

【図4A】本開示の例示的な結合性タンパク質についての、さらなる機能的特徴付けを示す図である。（Ａ）表示のＷＴ－１特異的ＴＣＲを発現するように形質導入されたＣＤ８＋ Ｔ細胞による、ペプチド／ＭＨＣ四量体への結合。

【図4B】本開示の例示的な結合性タンパク質についての、さらなる機能的特徴付けを示す図である。（Ｂ）滴定濃度のペプチドをパルスされたＴ２標的細胞との、４時間にわたる共培養において拡大された抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞によるＩＦＮγの産生（フローサイトメトリーにより決定される）である。ＩＦＮ－γ＋ Ｔ細胞の百分率が示される。

【図4C】本開示の例示的な結合性タンパク質についての、さらなる機能的特徴付けを示す図である。（Ｃ）線形回帰により、ＩＦＮγ産生細胞の百分率を、用量反応曲線へと当てはめることにより各ＴＣＲについて、ＩＦＮγペプチドに対するＥＣ_５０を決定した。

【図5A】本開示の例示的な結合性タンパク質（ＴＣＲ ＤＬ６又はＤＬ１０）を発現するＴ細胞による腫瘍細胞の、参照ＴＣＲ（配列番号８２に従うα鎖；配列番号８３に従うβ鎖）を発現するＴ細胞による溶解と比較した溶解を示す図である。（Ａ）ＨＬＡ－Ａ２形質導入腫瘍細胞系であるＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞の溶解。（Ａ）及び（Ｂ）の両方は、標的細胞に、^５１Ｃｒをロードし、腫瘍細胞標的に対する漸減用量のエフェクターＴ細胞（Ｅ：Ｔ；ｘ軸）に応答するＣｒ放出を測定することにより、ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞媒介性殺滅を計算した、４時間アッセイからの結果を示す。

【図5B】本開示の例示的な結合性タンパク質（ＴＣＲ ＤＬ６又はＤＬ１０）を発現するＴ細胞による腫瘍細胞の、参照ＴＣＲ（配列番号８２に従うα鎖；配列番号８３に従うβ鎖）を発現するＴ細胞による溶解と比較した溶解を示す図である。（Ｂ）年々のＨＬＡ－Ａ２＋腫瘍細胞系であるＰａｎｃ－１細胞の溶解。（Ａ）及び（Ｂ）の両方は、標的細胞に、^５１Ｃｒをロードし、腫瘍細胞標的に対する漸減用量のエフェクターＴ細胞（Ｅ：Ｔ；ｘ軸）に応答するＣｒ放出を測定することにより、ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞媒介性殺滅を計算した、４時間アッセイからの結果を示す。

【図6】ペプチドをパルスされたＴ２標的細胞の存在下における参照ＴＣＲ（配列番号８２に従うα鎖；配列番号８３に従うβ鎖）と比較した、本開示の例示的なＴＣＲ ＤＬ１０によるＩＦＮ－γの産生を示す図である。

【図7】本開示の例示的なＴＣＲ ＤＬ１０を発現するＴ細胞の存在下における、Ｐａｎｃ－１腫瘍細胞の増殖の、腫瘍細胞単独又は参照ＴＣＲ（配列番号８２に従うα鎖；配列番号８３に従うβ鎖）を発現するＴ細胞の存在下と比較した低減を示す図である。細胞の増殖／生存を、ＩｎｃｕＣｙｔｅアッセイにおいて、７日間にわたりモニタリングした。誤差バーは、平均値の標準誤差を指し示す。

【発明を実施するための形態】

【0023】

ある特定の態様において、本開示は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）（例えば、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ））と会合したＷＴ－１ペプチド抗原に対する特異性を有する結合性タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＣＡＲ、ｓｃＴＣＲ）、結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチド、結合性タンパク質をコードしかつ／又はこれらを発現させるベクター、改変免疫細胞並びに関連する組成物を提示する。本明細書において開示されるＷＴ－１特異的組成物は、例えば、がんを処置する養子免疫療法において有用である。背景として述べると、Ｔ細胞ベースの免疫療法のための腫瘍標的の大半は、腫瘍が、かつて正常であった組織から生じるので、自己抗原である。例えば、このような腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）は、がん細胞内、高レベルにおいて発現されうるが、他の細胞内において発現されないか、又は発現が最小限でありうる。胸腺内におけるＴ細胞の発生時に、自己抗原への結合が弱いＴ細胞は、胸腺内において存続することが可能とされ、これにより、外来侵入物に対する特異性を増大させるように、さらなる発生を経る場合があるのに対し、自己抗原に強力に結合するＴ細胞は、所望されない自己免疫応答を惹起するので、免疫系により消失させられる。よって、Ｔ細胞は、抗原に結合して、同時に、自己免疫応答を防止しながら（すなわち、自己抗原の認識）、外来侵入物に対して応答する（すなわち、非自己抗原の認識）ように免疫系を準備するそれらの相対的能力により分取される。この寛容機構は、腫瘍（自己）抗原を、高アフィニティーにより認識しうる、天然に存在するＴ細胞を制限するので、腫瘍細胞を効果的に消失させるＴ細胞を消失させる。結果として、腫瘍抗原に特異的な高アフィニティーＴＣＲを有するＴ細胞を単離することは、このような細胞が、免疫系により、本質的に消失させられるため、困難である。

【0024】

本開示の利点は、ＷＴ－１ペプチドに特異的な結合性タンパク質を提示することであり、この場合、結合性タンパク質は、ＷＴ－１（配列番号９４）：ＨＬＡ（例えば、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１）複合体に結合することが可能である。ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、ＣＤ８に非依存的なＷＴ－１への結合又はＣＤ８の非存在下におけるＷＴ－１への結合が可能である内因性ＴＣＲと比較して、ＣＤ３タンパク質とより効率的に会合することが可能である結合性タンパク質を発現してサイトカインを産生するように、宿主細胞に対するシグナルを誘発することが可能であるか、又はこれらの任意の組合せである。ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、４．０、４．５、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能であり、そして／又は結合性タンパク質は、配列番号８２のα鎖アミノ酸配列及び配列番号８３のβ鎖アミノ酸配列を含むＴＣＲと比較して、より高値のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である。

【0025】

ある特定の実施形態において、本明細書において記載される組成物及び方法は、ＷＴ－１の発現（例えば、正常細胞内又は無病細胞内において検出可能なＷＴ－１の発現レベルより高レベル、統計学的に有意な形において検出可能なＷＴ－１の発現）と関連する疾患及び状態の処置のための治療的有用性を有する。このような疾患は、血液悪性腫瘍及び固形がんなど、多様な疾患及び障害を含む。本明細書において、これらの組成物及び方法並びに関連する使用についての非限定例が記載されており、ＷＴ－１ペプチド（例えば、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ；配列番号９４）に特異的な、異種結合性タンパク質をコードする及び／又は発現するＴ細胞など、組換え免疫細胞の使用などによる、ＷＴ－１抗原特異的Ｔ細胞応答の、インビトロにおける刺激、エクスビボにおける刺激及びインビボにおける刺激を含む。

【0026】

本開示をより詳細に明示する前に、本明細書において使用される、ある特定の用語の定義を提示することが、その理解の一助となりうる。さらなる定義は、本開示の全体を通して明示される。

【0027】

本記載において、そうでないことが指し示されない限りにおいて、任意の濃度範囲、百分率の範囲、比の範囲又は整数の範囲は、列挙された範囲内の任意の整数の値、適切な場合は、その分数（整数の１０分の１及び１００分の１など）を含むと理解されるものとする。また、そうでないことが指し示されない限りにおいて、ポリマーのサブユニット、サイズ又は厚さなど、任意の物理的特徴に関して、本明細書において列挙される任意の数の範囲も、列挙された範囲内の任意の整数を含むと理解されたい。そうでないことが指し示されない限りにおいて、本明細書において使用される「約」という用語は、表示の範囲、値若しくは構造に対する±２０％を意味する。本明細書において使用される「ある（ａ）」及び「ある（ａｎ）」という用語は、列挙された構成要素のうちの「１つ以上」を指すことを理解されたい。選言詞（例えば、「又は」）の使用は、代替物のうちの一方、両方又はこれらの任意の組合せを意味するものと理解されたい。本明細書において使用される「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有する」、及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は、同義に使用され、これらの用語及び変化形は、非限定的であるものとみなされることが意図される。

【0028】

加えて、本明細書において記載される構造及び置換基の多様な組合せに由来する、個々の化合物又は化合物の群は、各化合物又は化合物の群が、個別に示される場合と同じ程度に、本出願により開示されることを理解されたい。したがって、特定の構造又は特定の置換基の選択は、本開示の範囲内にある。

【0029】

「～から本質的になること」という用語は、「～を含むこと」と同義ではなく、指定された材料若しくはステップ又は特許請求される発明の基本特徴に、材料的に影響を及ぼさない、材料若しくはステップを指す。例えば、タンパク質ドメイン、領域又はモジュール（例えば、結合性ドメイン、ヒンジ領域、リンカーモジュール）又はタンパク質（１つ以上のドメイン、領域又はモジュールを有しうる）は、ドメイン、領域、モジュール又はタンパク質のアミノ酸配列が、組合せにおいて、ドメイン、領域、モジュール又はタンパク質の長さのうちの２０％以下（例えば、１５％以下、１０％、８％、６％、５％、４％、３％、２％又は１％）に寄与し、ドメイン（複数可）、領域（複数可）、モジュール（複数可）又はタンパク質の活性（例えば、結合性タンパク質の標的結合アフィニティー）に実質的に影響を及ぼさない（すなわち、活性の低減が４０％以下、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％又は１％であるなど、活性を、５０％を超えて低減しない）、伸長、欠失、突然変異又はこれらの組合せ（例えば、アミノ末端又はカルボキシ末端又はドメイン間におけるアミノ酸）を含む場合に、特定のアミノ酸配列「から本質的になる」。

【0030】

本明細書において使用される「宿主」という用語は、目的のポリペプチド（例えば、アフィニティーが増強された抗ＷＴ－１ ＴＣＲ）を産生するように、異種核酸分子又は外因性核酸分子による遺伝子改変のためにターゲティングされる細胞（例えば、Ｔ細胞）又は微生物を指す。ある特定の実施形態において、宿主細胞は、任意に、異種タンパク質又は外因性タンパク質の生合成と関連するか又は関連しない、所望の特性（例えば、検出用マーカーの組入れ；内因性ＴＣＲの欠失、変更又は切断；共刺激性因子の発現の増大）を付与する、他の遺伝子改変を、既に保有する場合もあり、これらを含むように改変される場合もある。ある特定の実施形態において、宿主細胞は、ＷＴ－１抗原ペプチドに特異的なＴＣＲα鎖をコードする異種核酸分子又は外因性核酸分子により形質導入された、ヒト造血前駆細胞である。

【0031】

本明細書において使用される「免疫系細胞」とは、２つの主要な系統である、骨髄前駆細胞（単球、マクロファージ、樹状細胞、巨核球及び顆粒球などの骨髄性細胞を発生させる）及びリンパ系前駆細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ系細胞を発生させる）を発生させる、骨髄内の造血幹細胞に由来する、免疫系の任意の細胞を意味する。例示的な免疫系細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^－ＣＤ８^－ダブルネガティブＴ細胞、γδ Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞及び樹状細胞を含む。マクロファージ及び樹状細胞は、ＡＰＣの表面上の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）受容体が、Ｔ細胞の表面上のＴＣＲと相互作用する場合に、Ｔ細胞を活性化させうる特化細胞である、「抗原提示細胞」又は「ＡＰＣ」と称されうる。ある特定の実施形態において、免疫系細胞は、ヒト免疫系細胞である。

【0032】

本明細書において使用される「造血前駆細胞」とは、造血幹細胞又は胚組織に由来しうる細胞であり、成熟細胞型（例えば、免疫系細胞）へのさらなる分化が可能である。例示的な造血前駆細胞は、ＣＤ２４^Ｌｏ Ｌｉｎ^－ＣＤ１１７^＋表現型を伴う細胞又は胸腺内に見出される細胞（胸腺前駆細胞と称される）を含む。

【0033】

「主要組織適合性複合体」（ＭＨＣ）とは、ペプチド抗原を、細胞表面へと送達する糖タンパク質を指す。ＭＨＣクラスＩ分子は、膜貫通型α鎖を有する（３つのαドメインを伴う）ヘテロ二量体であり、β２ミクログロブリンと、非共有結合的に会合している。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、それらの両方が膜を貫通する、２つの膜貫通糖タンパク質である、α及びβから構成される。各鎖は、２つのドメインを有する。ＭＨＣクラスＩ分子は、細胞質ゾルに由来するペプチドを、細胞表面へと送達し、この場合、ペプチド：ＭＨＣ複合体は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞により認識される。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、血管系に由来するペプチドを、細胞表面へと送達し、この場合、ペプチド：ＭＨＣ複合体は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞により認識される。ヒトＭＨＣは、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）と称される。

【0034】

「Ｔ細胞」とは、胸腺内において成熟し、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を産生する免疫系細胞である。Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞（抗原へと曝露されておらず；Ｔ_ＣＭと比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ１２７及びＣＤ４５ＲＡの発現が増大しており、ＣＤ４５ＲＯの発現が低下している）、メモリーＴ細胞（Ｔ_Ｍ）（抗原経験があり、長寿命である）及びエフェクター細胞（抗原経験があり、細胞傷害性である）でありうる。Ｔ_Ｍは、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔ_ＣＭ：ナイーブＴ細胞と比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ１２７、ＣＤ４５ＲＯ及びＣＤ９５の発現が増大し、ＣＤ５４ＲＡの発現が低下している）、幹細胞様メモリーＴ細胞及びエフェクターメモリーＴ細胞（Ｔ_ＥＭ：ナイーブＴ細胞又はＴ_ＣＭと比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＡの発現が低下し、ＣＤ１２７の発現が増大している）のサブセットへとさらに分けられうる。エフェクターＴ細胞（Ｔ_Ｅ）とは、Ｔ_ＣＭと比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８の発現が低下し、グランザイム及びパーフォリンについて陽性である、抗原経験があるＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔリンパ球を指す。

【0035】

「Ｔ細胞受容体」（ＴＣＲ）とは、ＭＨＣ受容体に結合した抗原ペプチドに特異的に結合することが可能な、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー（可変結合性ドメイン、定常ドメイン、膜貫通領域及び短い細胞質テールを有する；例えば、Ｊａｎｅｗａｙら、「Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ」、第３版、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、４～３３頁、１９９７を参照）を指す。ＴＣＲは、細胞の表面上に見出される場合もあり、可溶性形態において見出される場合もあり、一般に、α鎖及びβ鎖（それぞれ、ＴＣＲα及びＴＣＲβとしてもまた公知である）又はγ鎖及びδ鎖（それぞれ、ＴＣＲγ及びＴＣＲδとしてもまた公知である）を有するヘテロ二量体から構成される。他の免疫グロブリン（例えば、抗体）と同様に、ＴＣＲ鎖の細胞外部分（例えば、α鎖、β鎖）は、Ｎ末端における、可変ドメイン（例えば、α鎖可変ドメイン又はＶα、β鎖可変ドメイン又はＶβ；典型的に、Ｋａｂａｔによる番号付けに基づく、アミノ酸１～１１６；Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、ＵＳ Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、１９９１、第５版）及び細胞膜に隣接する、１つの定常ドメイン（例えば、α鎖定常ドメイン又はＣα、典型的に、Ｋａｂａｔに基づく、アミノ酸１１７～２５９、β鎖定常ドメイン又はＣβ、典型的に、Ｋａｂａｔに基づく、アミノ酸１１７～２９５）である、２つの免疫グロブリンドメインを含有する。これもまた、他の免疫グロブリンと同様に、可変ドメインは、フレームワーク領域（ＦＲ）により隔てられた相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有する（例えば、Ｊｏｒｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：９１３８、１９９０；Ｃｈｏｔｈｉａら、ＥＭＢＯ Ｊ．７：３７４５、１９８８；を参照。また、Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５、２００３も参照）。ある特定の実施形態において、ＴＣＲは、Ｔ細胞（又はＴリンパ球）の表面上に見出され、ＣＤ３複合体と会合する。本開示において使用されるＴＣＲの供給源は、ヒト、マウス、ラット、ラビット又は他の哺乳動物など、多様な動物種に由来しうる。

【0036】

「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、免疫グロブリンスーパーファミリー結合性タンパク質（例えば、ＴＣＲ）の、抗原への結合に関与する、免疫グロブリンスーパーファミリー結合性タンパク質のドメイン（例えば、ＴＣＲα鎖又はＴＣＲβ鎖（又はγδＴＣＲについてのγ鎖及びδ鎖））を指す。ＴＣＲの場合、α鎖及びβ鎖の可変ドメイン（それぞれ、Ｖα及びＶβ）は、一般に、各ドメインが、４つの保存的フレームワーク領域（ＦＲ）及び３つのＣＤＲを含む、同様の構造を有する。Ｖαドメインは、２つの個別のＤＮＡセグメントである、Ｖ（ｖａｒｉａｂｌｅ）遺伝子セグメント及びＪ（ｊｏｉｎｉｎｇ）遺伝子セグメント（Ｖ－Ｊ）によりコードされ、Ｖβドメインは、３つの個別のＤＮＡセグメントである、Ｖ（ｖａｒｉａｂｌｅ）遺伝子セグメント、Ｄ（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）遺伝子セグメント及びＪ（ｊｏｉｎｉｎｇ）遺伝子セグメント（Ｖ－Ｄ－Ｊ）によりコードされる。単一のＶαドメイン若しくはＶβドメイン又はこれらの機能的断片若しくは機能的部分が、抗原結合特異性を付与するのに十分な場合もある。さらに、抗原に結合するＴＣＲに由来するＶαドメイン又はＶβドメインを使用して、相補性Ｖαドメイン又は相補性Ｖβドメインそれぞれのライブラリーをスクリーニングして、特定の抗原に結合するＴＣＲを単離することもできる。

【0037】

「相補性決定領域」及び「ＣＤＲ」という用語は、「超可変領域」又は「ＨＶＲ」と同義であり、当技術分野において、免疫グロブリン（例えば、ＴＣＲ）可変領域内において、抗原特異性及び／又は結合アフィニティーを付与し、フレームワーク領域により、互いから隔てられたアミノ酸の配列を指すことが公知である。一般に、各ＴＣＲα鎖可変領域内において、３つのＣＤＲ（αＣＤＲ１、αＣＤＲ２、αＣＤＲ３）が存在し、各ＴＣＲβ鎖可変領域内において、３つのＣＤＲ（βＣＤＲ１、βＣＤＲ２、βＣＤＲ３）が存在する。ＴＣＲ内において、ＣＤＲ３は、プロセシングされた抗原の認識の一因となる、主要なＣＤＲであると考えられる。典型的に、ＣＤＲ１及びＣＤＲ２は、主に、ＭＨＣと相互作用する。

【0038】

ＣＤＲ１及びＣＤＲ２が、ＴＣＲ可変領域コード配列のＶ（ｖａｒｉａｂｌｅ）遺伝子セグメント内においてコードされるのに対し、ＣＤＲ３は、Ｖαについて、Ｖ（ｖａｒｉａｂｌｅ）セグメント及びＪ（ｊｏｉｎｉｇ）セグメントにわたる領域又はＶβについて、Ｖ（ｖａｒｉａｂｌｅ）セグメント、Ｄ（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）セグメント及びＪ（ｊｏｉｎｉｇ）セグメントにわたる領域によりコードされる。したがって、Ｖα又はＶβのＶ（ｖａｒｉａｂｌｅ）遺伝子セグメントの識別が既知である場合、それらの対応するＣＤＲ１及びＣＤＲ２の配列は推定されうる。ＣＤＲ１及びＣＤＲ２と比較して、ＣＤＲ３は、典型的に、組換え工程時における、ヌクレオチドの付加及び喪失のために、著明により多様である。

【0039】

番号付けスキーム（例えば、ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、増強型Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ及びＡｈｏ）に照らして、ＴＣＲ可変ドメイン配列をアライメントし、例えば、ＡＮＡＲＣＩソフトウェアツール（２０１６、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １５：２９８～３００）を使用して、同等な残基位置をアノテーションし、異なる分子を比較することを可能とすることができる。番号付けスキームは、ＴＣＲ可変ドメイン内のフレームワーク領域及びＣＤＲの標準化画定をもたらす。したがって、ＴＣＲ Ｖα領域若しくはＴＣＲ Ｖβ領域又はＴＣＲ Ｖαドメイン若しくはＴＣＲ Ｖβドメインに由来するＣＤＲは、特定の番号付けスキームに従う、特定の配列を有することが可能であり、異なる番号付けスキームに従う、わずかに短い配列、延長された配列又はシフトされた（例えば、部分的に重複する）配列を有しうることが理解される。本明細書において開示される、ある特定の実施形態において、ＣＤＲは、ＩＭＧＴ番号付けスキームを使用して、例えば、ＩＭＧＴ Ｖ－Ｑｕｅｓｔ（ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴｉｎｄｅｘ／Ｖ－ＱＵＥＳＴ．ｐｈｐ）を使用して決定される。

【0040】

当技術分野において、「ＣＤ３」は、６つの鎖による多重タンパク質複合体として公知である（Ａｂｂａｓ及びＬｉｃｈｔｍａｎ、２００３；Ｊａｎｅｗａｙら、１７２及び１７８頁、１９９９を参照されたい）。哺乳動物において、複合体は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖及びＣＤ３ζ鎖のホモ二量体を含む。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖及びＣＤ３ε鎖は、単一の免疫グロブリンドメインを含有する、免疫グロブリンスーパーファミリーの細胞表面タンパク質との類縁性が高い。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖及びＣＤ３ε鎖の膜貫通領域は、負に帯電しており、これは、これらの鎖が、正に帯電したＴ細胞受容体鎖の領域と会合することを可能とすると考えられる特徴である。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖及びＣＤ３ε鎖の細胞内テールの各々が、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして公知の、単一の保存性モチーフを含有するのに対し、各ＣＤ３ζ鎖は、３つの保存性モチーフを含有する。理論に束縛されることを望まずに述べると、ＩＴＡＭは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達能のために重要であると考えられている。本開示において使用されるＣＤ３は、ヒト、マウス、ラット又は他の哺乳動物を含む、多様な動物種に由来しうる。

【0041】

本明細書において使用される「ＴＣＲ複合体」とは、ＣＤ３の、ＴＣＲとの会合により形成される複合体を指す。例えば、ＴＣＲ複合体は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖、ＣＤ３ζ鎖のホモ二量体、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖から構成されうる。代替的に、ＴＣＲ複合体は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖、ＣＤ３ζ鎖のホモ二量体、ＴＣＲγ鎖及びＴＣＲδ鎖から構成されうる。

【0042】

本明細書において使用される「ＴＣＲ複合体の構成要素」とは、ＴＣＲ鎖（すなわち、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ又はＴＣＲδ）、ＣＤ３鎖（すなわち、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε又はＣＤ３ζ）又は２つ以上のＴＣＲ鎖又はＣＤ３鎖により形成される複合体（例えば、ＴＣＲαとＴＣＲβとの複合体、ＴＣＲγとＴＣＲδとの複合体、ＣＤ３εとＣＤ３δとの複合体、ＣＤ３γとＣＤ３εとの複合体又はＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δと、２つのＣＤ３ε鎖とのＴＣＲサブ複合体）を指す。

【0043】

本明細書において使用される「ＣＤ８共受容体」又は「ＣＤ８」という用語は、２つのＣＤ８α鎖を含むホモ二量体として、又はα鎖及びβ鎖を含むヘテロ二量体として、Ｔ細胞により発現されうる細胞表面糖タンパク質であるＣＤ８を意味する。ＣＤ８共受容体は、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８^＋）の機能及びその細胞質チロシンリン酸化経路（Ｇａｏ及びＪａｋｏｂｓｅｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：６３０～６３６、２０００；Ｃｏｌｅ及びＧａｏ、Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：８１～８８、２００４）を介するシグナル伝達による機能の一助となると考えられる。特に、理論に束縛されることを望まずに述べると、ＣＤ８共受容体は、抗原発現細胞の表面上において発現されたＭＨＣ－Ｉタンパク質複合体に結合し、ＴＣＲ：抗原－ＭＨＣ間結合の文脈におけるこの結合は、抗原発現細胞に対する免疫応答（例えば、サイトカインの転写及び発現、カルシウムの分泌、細胞溶解活性など）をもたらす、Ｔ細胞シグナル伝達経路を誘発するか、又はこの一助となることが考えられる。ヒトにおいて、８つの異なるＣＤ８ベータ鎖アイソフォームが公知であり（「Ｍ１」～「Ｍ８」；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別番号：Ｐ１０９６６－１、２、３、４、６、７、８及び９を参照）；これらのうち、アイソフォーム１、２、４及び５が、天然において、細胞膜と会合すると考えられるのに対し、アイソフォーム３、６、７及び８は、細胞外領域と会合するか、又は分泌されると考えられる。ヒトにおいてまた、３つのＣＤ８アルファ鎖アイソフォームも公知である（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別番号Ｐ０１７３２－１、２及び３を参照）。

【0044】

「ＣＤ４」とは、ＴＣＲの、抗原提示細胞との相互作用の一助となる免疫グロブリン共受容体糖タンパク質（Ｃａｍｐｂｅｌｌ及びＲｅｅｃｅ、Ｂｉｏｌｏｇｙ ９０９（Ｂｅｎｊａｍｉｎ Ｃｕｍｍｉｎｇｓ、第６版、２００２）；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ０１７３０を参照）を指す。ＣＤ４は、ヘルパーＴ細胞、単球、マクロファージ及び樹状細胞など、免疫細胞の表面において見出され、典型的に、細胞表面において発現される、４つの免疫グロブリンドメイン（Ｄ１（Ｉｇ様Ｖ型ドメインを含む）、Ｄ２、Ｄ３及びＤ４（それぞれ、Ｉｇ様Ｃ２型ドメイン１、２及び３を含む））を含む。抗原提示時に、ＣＤ４は、ＭＨＣＩＩ分子の異なる領域に結合するように、ＴＣＲ複合体と共に動員される（ＣＤ４が、ＭＨＣＩＩ β２に結合するのに対し、ＴＣＲ複合体は、ＭＨＣＩＩ α１／β１に結合する。）。理論に束縛されることを望まずに述べると、ＴＣＲ複合体への近接は、ＣＤ４関連キナーゼ分子が、ＣＤ３の細胞質ドメイン上に存在する免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をリン酸化することを可能とすると考えられる。この活性は、多様な種類のヘルパーＴ細胞をもたらすために、活性化ＴＣＲにより発生させられたシグナルを増幅すると考えられる。

【0045】

本明細書において使用される「結合性ドメイン」（「結合性領域」又は「結合性部分」とも称される）とは、標的（例えば、ＷＴ－１又はＷＴ－１ペプチド：ＭＨＣ複合体）と、特異的であるが、非共有結合的に会合する、一体化するか、又は複合する能力を保有するペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド又はタンパク質を指す。結合性ドメインは、生体分子、分子複合体（すなわち、２つ以上の生体分子を含む複合体）又は他の目的の標的に対する、任意の天然に存在する結合パートナー、合成の結合パートナー、半合成の結合パートナー又は組換えにより作製される結合パートナーを含む。例示的な結合性ドメインは、生体分子、分子複合体又は他の目的の標的に結合する特異的能力について選択された、単鎖免疫グロブリン可変領域（例えば、ｓｃＴＣＲ、ｓｃＦｖ）、受容体細胞外ドメイン、リガンド（例えば、サイトカイン、ケモカイン）又は合成ポリペプチドを含む。

【0046】

本明細書において使用される「～に特異的に結合する」又は「～に特異的」とは、結合性タンパク質（例えば、ＴＣＲ受容体）又は結合性ドメイン（又はこれらの融合タンパク質）の、試料中の他の任意の分子又は構成要素と、著明には会合又は一体化しないが、標的分子への、１０^５Ｍ^－１（この会合反応についての、オン速度［ｋ_ｏｎ］の、オフ速度［ｋ_ｏｆｆ］に対する比が等しい）以上のアフィニティー又はＫ_ａ（すなわち、１／Ｍを単位とする、特定の結合相互作用の平衡会合定数）による会合又は一体化を指す。結合性タンパク質又は結合性ドメイン（又はこれらの融合タンパク質）は、「アフィニティーが大きい」結合性タンパク質若しくは結合性ドメイン（又はこれらの融合タンパク質）又は「アフィニティーが小さい」の結合性タンパク質若しくは結合性ドメイン（又はこれらの融合タンパク質）として分類されうる。「アフィニティーが大きい」結合性タンパク質又は結合性ドメインとは、少なくとも１０^７Ｍ^－１、少なくとも１０^８Ｍ^－１、少なくとも１０^９Ｍ^－１、少なくとも１０^１０Ｍ^－１、少なくとも１０^１１Ｍ^－１、少なくとも１０^１２Ｍ^－１又は少なくとも１０^１３Ｍ^－１のＫ_ａを有する結合性タンパク質又は結合性ドメインを指す。「アフィニティーが小さい」の結合性タンパク質又は結合性ドメインとは、１０^７Ｍ^－１以下、１０^６Ｍ^－１以下、１０^５Ｍ^－１以下のＫ_ａを有する結合性タンパク質又は結合性ドメインを指す。代替的に、アフィニティーは、特定の結合相互作用についての、Ｍを単位とする平衡解離定数（Ｋ_ｄ）として規定されうる（例えば、１０^－５Ｍ～１０^－１３Ｍ）。

【0047】

ある特定の実施形態において、受容体又は結合性ドメインは、「アフィニティーが増強されている」場合があり、これは、標的抗原への結合が、野生型（又は親）結合性ドメインより強力である、選択又は操作された受容体又は結合性ドメインを指す。例えば、アフィニティーの増強は、標的抗原に対する、野生型結合性ドメインより高値のＫ_ａ（平衡会合定数）による場合もあり、標的抗原に対する、野生型結合性ドメインのＫ_ｄ未満のＫ_ｄ（解離定数）による場合もあり、標的抗原に対する、野生型結合性ドメインのｋ_ｏｆｆ未満のオフ速度（ｋ_ｏｆｆ）による場合もあり、これらの組合せによる場合もある。ある特定の実施形態において、アフィニティー増強ＴＣＲは、Ｔ細胞など、特定の宿主細胞内の発現を増強するように、コドン最適化される場合がある（Ｓｃｈｏｌｔｅｎら、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１９：１３５、２００６）。

【0048】

「機能的アビディティー」という用語は、インビトロにおける免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞）の、所与の濃度のリガンドに対する応答についての生物学的尺度又は活性化閾値を指し、この場合、生物学的尺度は、サイトカインの産生（例えば、ＩＦＮγの産生、ＩＬ－２産生など）、細胞傷害活性、活性化及び増殖を含みうる。例えば、インビトロにおいて、サイトカインを産生する、細胞傷害性である、活性化マーカーを発現するか、又は増殖することにより、低抗原用量に対して生物学的に（免疫学的に）応答するＴ細胞が、機能的アビディティーが大きいと考えられるのに対し、機能的アビディティーがより小さなＴ細胞は、アビディティーの大きなＴ細胞と同様の免疫応答が誘発されるに至るには、より高量の抗原が必要とされる。機能的アビディティーは、アフィニティー及びアビディティーと異なることが理解される。アフィニティーとは、結合性タンパク質と、その抗原／リガンドとの間における、任意の所与の結合の強度を指す。一部の結合性タンパク質は、多価であり、複数の抗原に結合し、この場合、全体的な接合の強度は、アビディティーである。

【0049】

機能的アビディティーと免疫応答の有効性との間には、多数の相関が存在する。一部のエクスビボ研究は、顕著に異なるＴ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生など）が、異なる閾値で誘発されうることを示している（例えば、Ｂｅｔｔｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：６４０７、２００４；Ｌａｎｇｅｎｋａｍｐら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：２０４６、２００２を参照）。機能的アビディティーに影響を及ぼしうる因子は、（ａ）ＴＣＲの、ｐＭＨＣ複合体に対するアフィニティー、すなわち、ＴＣＲとｐＭＨＣとの間にある相互作用の強度（Ｃａｗｔｈｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：２５７７、２００１）、（ｂ）ＴＣＲ及びＣＤ４又はＣＤ８共受容体の発現レベル並びに（ｃ）シグナル伝達分子の分布及び組成（Ｖｉｏｌａ及びＬａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７３：１０４、１９９６）のほか、Ｔ細胞機能及びＴＣＲシグナル伝達を弱める分子の発現レベルを含む。

【0050】

指定された曝露時間の後、ベースライン値と最大値応答との間の半値応答を誘導するのに必要とされる抗原の濃度は、「５０％有効濃度」又は「ＥＣ_５０」と称される。ＥＣ_５０値は、一般に、モル量（１リットル当たりのモル数）として提示されるが、以下：－ｌｏｇ_１０（ＥＣ_５０）の通りに、対数値へと変換されることが多い（例えば、図４（Ｃ）を参照）。例えば、ＥＣ_５０が、１μＭ（１０^－６Ｍ）に等しい場合、ｌｏｇ_１０（ＥＣ_５０）値は、－６である。使用される別の値は、ＥＣ_５０の負の対数（－ｌｏｇ_１０（ＥＣ_５０））として規定される、ｐＥＣ_５０である。上記の例において、１μＭに等しいＥＣ_５０は、ｐＥＣ_５０値として６を有する。ある特定の実施形態において、本開示の結合性タンパク質の機能的アビディティーは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ細胞）によるＩＦＮγの産生を促進するその能力の尺度となり、これは、当技術分野で公知のアッセイ及び／又は本明細書において記載されるアッセイを使用して測定されうる。「機能的アビディティーが大きい」ＴＣＲ又はその結合性ドメインとは、少なくとも１０^－４Ｍ、少なくとも約１０^－５Ｍ又は少なくとも約１０^－６ＭのＥＣ_５０を有する、ＴＣＲ又はその結合性ドメインを指す。

【0051】

一部の実施形態において、ｐＥＣ_５０は、免疫細胞のうちの５０％が、活性化マーカーであるＮｕｒ７７を発現するのに要求されるペプチド抗原の量について記載するのに使用される。

【0052】

ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、解析的超遠心分離、分光法及び表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））解析（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０、１９４９；Ｗｉｌｓｏｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９５：２１０３、２００２；Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：２５６０、１９９３；及び米国特許第５，２８３，１７３号、同５，４６８，６１４号又は同等の文献を参照）並びにペプチド：ＭＨＣ四量体染色など、特定の標的に特異的に結合する、本開示の結合性ドメインを同定するほか、結合性ドメイン又は融合タンパク質のアフィニティーを決定するための、様々なアッセイが公知である。

【0053】

ある特定の実施形態において、「免疫グロブリンスーパーファミリーＷＴ－１特異的結合性タンパク質」又は「ＷＴ－１特異的結合性タンパク質」という用語は、ＷＴ－１又は、任意に、ＨＬＡ分子と複合体化したそのペプチドに特異的結合する、本開示のタンパク質又はポリペプチドを指す。「ＷＴ－１結合性ドメイン」又は「ＷＴ－１結合性断片」という用語は、ＷＴ－１特異的結合性タンパク質のうちの、ＷＴ－１への特異的結合の一因となるドメイン又は部分を指す。単独における（すなわち、ＷＴ－１特異的結合性タンパク質の他の任意の部分を伴わない）ＷＴ－１特異的結合性ドメインは、可溶性でありうる。例示的なＷＴ－１特異的結合性ドメインは、ＴＣＲ内又はｓｃＴＣＲ（例えば、Ｖα－Ｌ－Ｖβ、Ｖβ－Ｌ－Ｖα、Ｖα－Ｃα－Ｌ－Ｖα又はＶα－Ｌ－Ｖβ－Ｃβ［配列中、Ｖα及びＶβは、それぞれ、ＴＣＲα及びＴＣＲβの可変ドメインであり、Ｃα及びＣβは、それぞれ、ＴＣＲα及びＴＣＲβの定常ドメインであり、Ｌは、リンカーである］などの単鎖αβＴＣＲタンパク質）内において見出されうるＷＴ－１特異的ＴＣＲ由来のＷＴ－１特異的結合性ドメイン、及び抗ＷＴ－１ ＴＣＲ又は抗ＷＴ－１抗体に由来しうる、本明細書において記載されるｓｃＦｖ断片に由来するＷＴ－１特異的結合性ドメインを含む。

【0054】

「ＷＴ－１抗原」又は「ＷＴ－１ペプチド抗原」とは、ＭＨＣ（例えば、ＨＬＡ）分子と共に複合体を形成することが可能であり、このような複合体が、ＷＴ－１ペプチド：ＭＨＣ（例えば、ＨＬＡ）複合体に特異的なＴＣＲに結合しうる、約７アミノ酸～約１５アミノ酸の長さの範囲の、天然であるか、又は合成により作製された、ＷＴ－１タンパク質の部分を指す。抗原提示細胞（ＡＰＣ）（樹状細胞、マクロファージ、リンパ球又は他の細胞型など）による抗原プロセシング及びＡＰＣによる、Ｔ細胞への抗原提示であって、免疫適合性である（例えば、抗原提示に関連するＭＨＣ遺伝子の、少なくとも１つの対立遺伝子形態を共有する）ＡＰＣと、Ｔ細胞との間の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）拘束提示を含む抗原提示の原理は、十分に確立されている（例えば、Ｍｕｒｐｈｙ、Ｊａｎｅｗａｙ’ｓ Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（第８版）２０１１ Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ、ＮＹ、６、９及び１６章を参照）。例えば、細胞質ゾルに由来する、プロセシングされた抗原ペプチド（例えば、腫瘍抗原、細胞内病原体）が、一般に、約７アミノ酸～約１１アミノ酸の長さであり、クラスＩ ＭＨＣ分子と会合するのに対し、血管系においてプロセシングされたペプチド（例えば、細菌性、ウイルス）は、約１０アミノ酸～約２５アミノ酸の長さにおいて変動し、クラスＩＩ ＭＨＣ分子と会合する。ＷＴ－１は、内部宿主タンパク質であるので、ＷＴ－１抗原ペプチドは、クラスＩ ＭＨＣの文脈において提示される。特定の実施形態において、ＷＴ－１ペプチドは、ヒトクラスＩ ＨＬＡ（及び、より具体的に述べると、対立遺伝子であるＨＬＡ－Ａ^＊２０１と会合する）と会合することが公知である、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）である。

【0055】

「リンカー」とは、２つのタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ドメイン、領域又はモチーフを接続し、結果として得られるポリペプチドが、標的分子に対する特異的結合アフィニティー（例えば、ｓｃＴＣＲ）を保持するか、又はシグナル伝達活性（例えば、ＴＣＲ複合体）を保持するように、２つの結合性サブドメインの相互作用と適合性のスペーサー機能をもたらしうるアミノ酸配列を指す。ある特定の実施形態において、リンカーは、約２～約３５アミノ酸、例えば、又は約４～約２０アミノ酸又は約８～約１５アミノ酸又は約１５～約２５アミノ酸から構成される。

【0056】

本明細書において使用される「融合タンパク質」とは、単鎖内に、天然において、タンパク質中に一体では見出されない、少なくとも２つの顕著に異なるドメイン又はモチーフを有するタンパク質を指す。融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、ＰＣＲを使用して構築される場合もあり、組換えにより操作されるなどもあり、このような融合タンパク質が、合成される場合もある。融合タンパク質は、タグ、リンカー又は形質導入マーカーなど、他の構成要素をさらに含有しうる。ある特定の実施形態において、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞など、例えば、免疫細胞）により発現される、又は産生される融合タンパク質は、細胞表面へと局在化し、ここで、融合タンパク質は、細胞膜（例えば、膜貫通構成要素又は膜貫通ドメインを介して）へとアンカリングされ、細胞外構成要素（例えば、ＭＨＣ分子と会合することが可能である）及び細胞内構成要素（例えば、シグナル伝達ドメイン若しくはシグナル伝達部分、エフェクタードメイン若しくはエフェクター部分、共刺激ドメイン若しくは共刺激部分又はこれらの組合せを含有する）を含む。

【0057】

「接合部アミノ酸」又は「接合部アミノ酸残基」とは、例えば、結合性ドメインと隣接する定常ドメインとの間又はＴＣＲ鎖と隣接する自己切断型ペプチドとの間など、ポリペプチドの、２つの隣接するモチーフ、領域又はドメインの間における、１つ以上の（例えば、約２つ～１０の）アミノ酸残基を指す。接合部アミノ酸は、融合タンパク質の構築デザインから生じうる（例えば、融合タンパク質をコードする核酸分子の構築時における制限酵素部位の使用から生じるアミノ酸残基）。

【0058】

「変更ドメイン」又は「変更タンパク質」とは、野生型のモチーフ、領域、ドメイン、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質（例えば、野生型のＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＴＣＲα定常ドメイン、ＴＣＲβ定常ドメイン）に対する、少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％）の配列同一性を伴うモチーフ、領域、ドメイン、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質を指す。

【0059】

本明細書において使用される「核酸」又は「核酸分子」又は「ポリヌクレオチド」とは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、オリゴヌクレオチド、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により、又はインビトロにおける翻訳により作出される断片及びライゲーション、切断、エンドヌクレアーゼ作用又はエクソヌクレアーゼ作用のうちのいずれかにより作出される断片のうちのいずれかを指す。ある特定の実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、ＰＣＲにより作製される。ポリヌクレオチドは、天然に存在するヌクレオチドである単量体（デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドなど）からなる場合もあり、天然に存在するヌクレオチドのアナログ（例えば、天然に存在するヌクレオチドのα－光学異性形態）からなる場合もあり、これらの両方の組合せからなる場合もある。修飾ヌクレオチドは、糖部分又はピリミジン塩基部分若しくはプリン塩基部分の修飾又は置きかえを有しうる。核酸の単量体は、ホスホジエステル結合又はこのような連結の類似物により連結されうる。ホスホジエステル連結の類似物は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホルアニリデート、ホスホルアミデートなどを含む。ポリヌクレオチドは、一本鎖の場合もあり、二本鎖の場合もある。

【0060】

「単離された」という用語とは、素材が、その元の環境（例えば、素材が天然に存在する場合は、天然の環境）から取り出されていることを意味する。例えば、生存動物において存在する、天然に存在する核酸又はポリペプチドは、単離されていないが、天然の系内に共存する材料の一部又は全部から分離された、同じ核酸又はポリペプチドは、単離されている。このような核酸は、ベクターの一部でありうる、かつ／又はこのような核酸若しくはポリペプチドは、組成物（例えば、細胞溶解物）の一部でありうるが、このようなベクター又は組成物は、核酸又はポリペプチドに対して、天然環境の一部ではないという意味で、やはり単離されている場合がある。「遺伝子」という用語とは、ポリペプチド鎖の産生に関与するＤＮＡのセグメントを意味し、コード領域に先行する領域及びコード領域後続する領域である、「リーダー及びトレーラー」のほか、個々のコードセグメント（エクソン）の間に介在する配列（イントロン）を含む。

【0061】

本開示の任意の宿主細胞、結合性タンパク質、ポリヌクレオチド又はベクターは、「分離／単離」されうる。

【0062】

本明細書において使用される「組換え」、「操作」及び「改変」という用語は、外因性核酸分子の導入により改変された細胞、微生物、核酸分子若しくはベクターを指す、又は内因性核酸分子又は内因性遺伝子の発現が、制御される、脱調節される、又は構成的とされるように、変更された細胞又は微生物を指し、この場合、このような変更又は改変は、遺伝子操作により導入されうる。遺伝子変更は、例えば、１つ以上のタンパク質若しくは酵素をコードする核酸分子（プロモーターなどの発現制御エレメントを含みうる）又は他の核酸分子の付加、欠失、置換又は細胞の遺伝子素材に対する、他の機能的な破壊若しくは細胞の遺伝子素材への機能的な付加を導入する改変を含みうる。例示的な改変は、参照分子又は親分子に由来する異種ポリペプチド又は相同ポリペプチドのコード領域内又はその機能的断片内の改変を含む。

【0063】

本明細書において使用される「突然変異」とは、核酸分子又はポリペプチド分子の配列の、参照核酸分子若しくは野生型核酸分子又は参照ポリペプチド分子若しくは野生型ポリペプチド分子のそれぞれと比較した変化を指す。突然変異は、ヌクレオチド（複数可）又はアミノ酸（複数可）の置換、挿入又は欠失を含む、いくつかの異なる種類の配列の変化を結果としてもたらしうる。ある特定の実施形態において、突然変異は、１つ又は３つのコドン又はアミノ酸の置換、１つ～約５つのコドン又はアミノ酸の欠失又はこれらの組合せである。

【0064】

当技術分野において、「保存的置換」は、類似の特性を有する、１つのアミノ酸の、別のアミノ酸への置換として認識されている。当技術分野において、例示的な保存的置換が周知である（例えば、ＷＯ９７／０９４３３、１０頁；Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ、「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第２版、Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｉｎｃ．ＮＹ、ＮＹ、７１～７７頁、１９７５；Ｌｅｗｉｎ、「Ｇｅｎｅｓ ＩＶ」、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｐｒｅｓｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ、８頁、１９９０を参照）。当業者に公知の様々な基準は、ペプチド内又はポリペプチド内の特定の位置において置換されるアミノ酸が、保存的である（又は類似する）かどうかを指し示す。例えば、類似のアミノ酸置換又は保存的アミノ酸置換とは、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基により置きかえられる置換である。類似のアミノ酸は、以下の類型：塩基性側鎖を伴うアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を伴うアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非帯電極性側鎖を伴うアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、ヒスチジン）、非極性側鎖を伴うアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ－分枝状側鎖を伴うアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖を伴うアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン）に含まれうる。分類が難しいと考えられるプロリンは、脂肪族側鎖（例えば、ロイシン、バリン、イソロイシン及びアラニン）を有するアミノ酸と、特性を共有する。ある特定の状況下において、グルタミンによるグルタミン酸の置換又はアスパラギンによるアスパラギン酸の置換は、グルタミン及びアスパラギンが、それぞれ、グルタミン酸及びアスパラギン酸のアミド誘導体であるという点において、同様の置換であると考えられる。当技術分野において理解される通り、２つのポリペプチドの間の「類似性」は、ポリペプチドのアミノ酸配列及びこれに代替的な保存されているアミノ酸配列を、第２のポリペプチドの配列と比較することにより決定される（例えば、ＧＥＮＥＷＯＲＫＳ、Ａｌｉｇｎ、ＢＬＡＳＴアルゴリズム又は本明細書において記載され、当技術分野において実施されている、他のアルゴリズムを使用して）。

【0065】

ある特定の実施形態において、本開示に従うタンパク質（例えば、結合性タンパク質）は、参照配列と比較した変異体配列（例えば、本明細書において開示される参照ＴＣＲ ＣＤＲと比較した、変異体ＴＣＲ ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態において、本開示の変異体タンパク質、変異体ペプチド、変異体ポリペプチド及び変異体アミノ酸配列は、参照アミノ酸配列と比べた、１つ以上の保存的置換を含みうる。本開示のポリヌクレオチド及びポリペプチドの変異体もまた想定される。変異体の核酸分子又はポリペプチドは、本明細書において記載される規定ポリヌクレオチド若しくは規定ポリペプチド又は参照ポリヌクレオチド若しくは参照ポリペプチドのそれぞれと、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％同一であり、好ましくは、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．９％同一であるか、又はポリヌクレオチドについて、約６５～６８℃における０．０１５Ｍの塩化ナトリウム、０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム若しくは約４２℃における０．０１５Ｍの塩化ナトリウム、０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム及び５０％のホルムアミドの厳密なハイブリダイゼーション条件下において、参照ポリヌクレオチドとハイブリダイズする、変異体である。核酸分子の変異体は、標的分子への特異的な結合など、本明細書において記載される機能性を有する結合性タンパク質又はその結合性ドメインをコードする能力を保持する。ハイブリダイゼーション反応の厳密性についてのさらなる詳細及び説明について、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．（１９９５）、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃを参照されたい。さらに、当業者は、どのようにして、ハイブリダイゼーションにより、ＤＮＡ配列を同定するのかについて、マニュアルである、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ ＧｍｂＨ（１９９３） 「Ｔｈｅ ＤＩＧ Ｓｙｓｔｅｍ Ｕｓｅｒｓ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｆｉｌｔｅｒ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ ＧｍｂＨ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ及びｉｎ Ｌｉｅｂｌ，Ｗ．、Ｅｈｒｍａｎｎ，Ｍ．、Ｌｕｄｗｉｇ，Ｗ．及びＳｃｈｌｅｉｆｅｒ，Ｋ．Ｈ．（１９９１） Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ４１：２５５～２６０において与えられている指示に従うこともできる。

【0066】

変異体はまた、規定配列又は参照配列の断片（例えば、部分は、切断（ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎ、ｃｌｅａｖａｇｅ）などから生じる。）も指す場合があり、断片は、規定配列又は参照配列の長さより短い任意の長さでありうる。本明細書において使用される「機能的部分」又は「機能的断片」とは、親化合物又は参照化合物のドメイン、部分又は断片のみを含むポリペプチド又はポリヌクレオチドを指し、ポリペプチド又はコードされるポリペプチドは、親化合物又は参照化合物のドメイン、部分又は断片と関連する、少なくとも５０％の活性、好ましくは、親ポリペプチドの活性に対する、少なくとも５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％若しくは１００％のレベルの活性を保持するか、又は生物学的利益（例えば、エフェクター機能）をもたらす。本開示のポリペプチド又はコードされるポリペプチドの「機能的部分」又は「機能的断片」は、機能的部分又は機能的断片が、結合アフィニティーを測定するか、又はエフェクター機能（例えば、サイトカインの放出）を測定するためのアッセイなどの選択されたアッセイにおける機能性の、親ポリペプチド又は参照ポリペプチドと比較した、５０％以下の低減（アフィニティーに関して、親又は参照と比較して、好ましくは２０％以下若しくは１０％又は対数値以下の差違）を提示する場合に、「同様の結合」又は「同様の活性」を有する。ある特定の実施形態において、機能的部分とは、エフェクター分子、エフェクタードメイン、共刺激分子又は共刺激ドメインの「シグナル伝達部分」を指す。

【0067】

ある特定の実施形態において、変異体の結合性タンパク質又はその部分（例えば、結合性ドメイン）若しくは断片は、親結合性タンパク質若しくは親結合性ドメイン又は参照結合性タンパク質若しくは参照結合性ドメインと比べて、１つ以上のアミノ酸置換を含む場合があり、この場合、１つ以上のアミノ酸置換は、親結合性ドメイン内若しくは親結合性タンパク質内又は参照結合性ドメイン内若しくは参照結合性タンパク質内に存在する場合における、潜在的な所望されない特色又は特徴；例えば、潜在的に免疫原性であるアミノ酸配列又は所望されないグリコシル化部位、所望されない脱アミド化部位、所望されない酸化部位、所望されない異性体化部位若しくは熱力学的安定性の低減をもたらす場合もあり、結合性タンパク質内の誤対合又はミスフォールディングを結果としてもたらす場合（例えば、近接する不対システイン残基）もあるアミノ酸配列を除去する、変化させる、又は弱める。所望されない特色又は特徴をもたらしうる、アミノ酸の配列、パターン及びモチーフは公知である（例えば、Ｓｅｅｌｉｇｅｒら、ｍＡｂｓ、７（３）：５０５～５１５（２０１５）を参照）。

【0068】

ある特定の実施形態において、アミノ酸置換は、例えば、生殖細胞系列により発現されるアミノ酸への復帰など、体細胞突然変異を除去する置換を含む。例えば、ある特定の実施形態において、参照ＣＤＲアミノ酸配列又はＴＣＲ可変ドメイン配列若しくはＴＣＲ定常領域配列の変異体は、潜在的な所望されない特色又は特徴を除去するか、又は弱める置換を含む。このような変異体は、所望の機能（例えば、ＷＴ－１抗原：ＨＬＡ複合体に対する結合特異性及び／又は結合アフィニティー）を損なう、又は実質的に損なわないように選択されることが理解される。

【0069】

「構築物」という用語は、組換え核酸を含有する、任意のポリヌクレオチドを指す。構築物は、ベクター内に存在する場合（例えば、細菌性ベクター、ウイルスベクター）もあり、ゲノムへと組み込む場合もある。「ベクター」とは、別の核酸を運ぶことが可能な核酸分子である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス、ＲＮＡベクター又は染色体核酸、非染色体核酸、半合成核酸若しくは合成核酸を含みうる、直鎖状若しくは環状のＤＮＡ分子若しくはＲＮＡ分子でありうる。例示的なベクターは、自己複製が可能なベクター（エピソームベクター）又はそれらが連結された核酸の発現が可能なベクター（発現ベクター）である。

【0070】

ウイルスベクターは、レトロウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、コロナウイルス、オルトミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス及び水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹ウイルス及びセンダイウイルス）などのマイナス鎖ＲＮＡウイルス、ピコルナウイルス及びアルファウイルスなどのプラス鎖ＲＮＡウイルス並びにアデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、１型単純ヘルペスウイルス及び２型単純ヘルペスウイルス、エプスタインン－バーウイルス、サイトメガロウイルス）を含む、二本鎖ＤＮＡウイルス並びにポックスウイルス（例えば、ワクシニアウイルス、鶏痘ウイルス及びカナリア痘ウイルス）を含む。他のウイルスは、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポバウイルス、ヘパドナウイルス及び肝炎ウイルスを含む。レトロウイルスの例は、トリ白血病肉腫ウイルス、哺乳動物Ｃ型ウイルス、哺乳動物Ｂ型ウイルス、哺乳動物Ｄ型ウイルス、ＨＴＬＶ－ＢＬＶ群、レンチウイルス、スプマウイルスを含む（Ｃｏｆｆｉｎ，Ｊ．Ｍ．、「Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ：Ｔｈｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ」、「Ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ」、第３版、Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓら編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、１９９６）。

【0071】

本明細書において使用される「レンチウイルスベクター」とは、組込型の場合もあり、非組込型の場合もあり、パッケージング容量が比較的大きな場合があり、ある範囲にわたる、異なる細胞型へと形質導入しうる、遺伝子送達のための、ＨＩＶベースのレンチウイルスベクターを意味する。レンチウイルスベクターは通例、３つ以上のプラスミド（パッケージングプラスミド、エンベローププラスミド及び導入プラスミド）の、産生細胞への一過性のトランスフェクションの後に作出される。ＨＩＶと同様に、レンチウイルスベクターも、ウイルス表面の糖タンパク質の、細胞表面上の受容体との相互作用を介して標的細胞に侵入する。侵入すると、ウイルスＲＮＡは、逆転写を経るが、これは、ウイルス逆転写酵素複合体により媒介される。逆転写の産物は、二本鎖直鎖状のウイルスＤＮＡであり、これは、感染細胞のＤＮＡへのウイルスの組込みのための基質である。

【0072】

「作動可能に連結された」という用語は、一方の核酸分子の機能が、他方の核酸分子の影響を受けるような、単一の核酸断片上における、２つ以上の核酸分子の会合を指す。例えば、プロモーターは、そのコード配列の発現に影響を及ぼすことが可能である（すなわち、コード配列は、プロモーターの転写制御下にある）場合に、コード配列と作動可能に連結されている。「連結されていない」とは、関連の遺伝子エレメントが、互いと緊密に会合しておらず、一方の機能が、他方に影響を及ぼさないことを意味する。

【0073】

本明細書において使用される「発現ベクター」とは、適切な宿主内の核酸分子の発現をもたらすことが可能な、適切な制御配列へと作動可能に連結された核酸分子を含有する、ＤＮＡ構築物を指す。このような制御配列は、転写をもたらすプロモーター、このような転写を制御する任意選択のオペレーター配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合性部位をコードする配列並びに転写及び翻訳の終結を制御する配列を含む。ベクターは、プラスミドの場合もあり、ファージ粒子の場合もあり、ウイルスの場合もあり、単なる潜在的なゲノムインサートの場合もある。適切な宿主へと形質転換されると、ベクターは、複製され、宿主ゲノムと独立に機能する場合もあり、場合によって、ゲノム自体へと組み込まれる場合もある。本明細書においては、「プラスミド」、「発現プラスミド」、「ウイルス」及び「ベクター」は、互換的に使用されることが多い。

【0074】

本明細書において使用される「発現」という用語は、ポリペプチドが、遺伝子の核酸配列に基づき産生される過程を指す。工程は、転写及び翻訳の両方を含む。

【0075】

核酸配列を、細胞へと挿入する文脈における、「導入された」という用語は、「トランスフェクション」又は「形質転換」又は「形質導入」を意味し、核酸配列の、真核細胞又は原核細胞への組込みに対する言及を含み、この場合、核酸分子は、細胞のゲノムへと組み込まれる場合（例えば、染色体、プラスミド、プラスチド、又はミトコンドリアＤＮＡ）もあり、自己複製レプリコンへと転換される、又は一過性に発現される場合（例えば、トランスフェクトｍＲＮＡ）もある。

【0076】

本明細書において使用される「異種」核酸分子、「異種」構築物若しくは「異種」配列又は「外因性」核酸分子、「外因性」構築物若しくは「外因性」配列とは、宿主細胞に対して天然ではない核酸分子若しくは核酸分子の部分を指すが、宿主細胞に由来する核酸分子若しくは核酸分子の部分と相同でありうる。異種核酸分子、異種構築物若しくは異種配列又は外因性核酸分子、外因性構築物若しくは外因性配列の供給源は、異なる属又は種に由来しうる。ある特定の実施形態では、異種核酸分子又は外因性核酸分子は、例えば、コンジュゲーション、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔などにより、宿主細胞又は宿主ゲノムへと付加される（すなわち、内因性又は天然ではない）が、この場合、付加された分子は、宿主ゲノムへと組み込まれる場合もあり、染色体外遺伝子素材（例えば、プラスミド又は他の形態の自己複製型ベクターとして）として存在する場合もあり、複数のコピーにおいて存在しうる。加えて、「異種」とは、宿主細胞が、相同なタンパク質又は活性をコードする場合であってもなお、宿主細胞へと導入された外因性核酸分子によりコードされる、非天然の酵素、タンパク質又は他の活性を指す。さらに、「修飾」ポリヌクレオチド若しくは「修飾」結合性タンパク質又は「異種」ポリヌクレオチド若しくは「異種」結合性タンパク質を含む細胞は、後代が、それら自体、形質導入されるのか、トランスフェクトされるのか、他の形で操作又は変化させられるのかに関わらず、この細胞の後代を含む。

【0077】

本明細書において記載される、１つを超える異種核酸分子又は外因性核酸分子は、宿主細胞へと、別個の核酸分子として導入される場合もあり、個別に制御される複数の遺伝子として導入される場合もあり、ポリシストロニックの核酸分子として導入される場合もあり、単一の融合タンパク質をコードする核酸分子として導入される場合もあり、これらの任意の組合せとして導入される場合もある。例えば、本明細書において開示される通り、宿主細胞は、ＷＴ－１抗原ペプチドに特異的な、所望のＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及びＴＣＲβ）をコードする、２つ以上の異種核酸分子又は外因性核酸分子を発現するように改変されうる。２つ以上の外因性核酸分子が、宿主細胞へと導入される場合、２つ以上の外因性核酸分子は、単一の核酸分子（例えば、単一のベクター上の）として導入される場合もあり、別個のベクター上に導入される場合もあり、単一の部位又は複数の部位において、宿主染色体へと組み込まれる場合もある。言及される異種核酸分子又は異種タンパク質の活性の数とは、コード核酸分子の数又はタンパク質活性の数を指すものであり、宿主細胞へと導入される別個の核酸分子の数を指すものではない。外因性核酸分子（例えば、本開示の結合性タンパク質又はＣＤ８共受容体をコードする）はまた、例えば、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系、メガヌクレアーゼなどを使用する遺伝子編集法によっても、宿主細胞のゲノムへと導入される場合がある。

【0078】

本明細書において使用される「内因性」又は「天然」という用語は、宿主細胞内に通常存在する、遺伝子、タンパク質又は活性を指す。さらに、親の遺伝子、タンパク質又は活性と比較して、突然変異した、過剰発現された、シャフリングされた、重複した、又は他の形で変更された遺伝子、タンパク質又は活性もやはり、この特定の宿主細胞に内因性又は天然であると考えられる。例えば、第１の遺伝子に由来する内因性制御配列（例えば、プロモーター、翻訳抑制配列）は、第２の天然の遺伝子又は核酸分子の発現を変更又は調節するのに使用される場合があり、この場合、第２の天然の遺伝子又は核酸分子の発現又は調節は、親細胞内の正常な発現又は調節と異なる。

【0079】

「相同」又は「ホモログ」という用語は、宿主細胞、宿主種又は宿主株において見出される、又はこれらに由来する分子又は活性を指す。例えば、異種核酸分子又は外因性核酸分子は、天然の宿主細胞遺伝子と相同な場合があり、任意に、発現レベルが変更されている場合もあり、配列が異なる場合もあり、活性が変更されている場合もあり、これらの任意の組合せである場合もある。

【0080】

本明細書において使用される「配列同一性」とは、最大の配列同一性パーセントを達成するように、配列をアライメントし、必要な場合、ギャップを導入し、保存的置換を配列同一性の一部と考えずにおいた後における、１つの配列内の、別の参照ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一なアミノ酸残基の百分率を指す。配列同一性の百分率値は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９７）「Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ ａｎｄ ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ：ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａｔａｂａｓｅ ｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒａｍｓ」、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９～３４０２により規定される通り、パラメータを、デフォルト値へと設定した、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ２．０ソフトウェアを使用して生成されうる。

【0081】

当技術分野において理解される通り、２つのポリペプチドの間の「類似性」は、ポリペプチドのアミノ酸配列及びこれに代替的な保存されているアミノ酸配列を、第２のポリペプチドの配列と比較すること（例えば、ＧＥＮＥＷＯＲＫＳ（商標）、Ａｌｉｇｎ、Ｃｌｕｓｔａｌ（商標）、ＢＬＡＳＴアルゴリズムなどを使用して）により決定される。

【0082】

本明細書において使用される「過剰増殖性障害」とは、正常細胞又は非罹患細胞と比較した、過剰な増殖（ｇｒｏｗｔｈ）又は増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を指す。例示的な過剰増殖性障害は、腫瘍、がん、新生物性組織、癌腫、前悪性細胞のほか、非新生物性過剰増殖性障害又は非悪性過剰増殖性障害（例えば、腺腫、線維芽細胞種、脂肪腫、平滑筋腫、血管腫、再狭窄のほか、関節リウマチ、骨関節炎、乾癬、炎症性腸疾患などの自己免疫疾患）を含む。過剰増殖性疾患の文脈における場合よりも緩徐に生じる、増殖の異常又は過剰を伴う、ある特定の疾患は、「増殖性疾患」と称される場合があり、ある特定の腫瘍、がん、新生物性組織、癌腫、肉腫、悪性細胞、前悪性細胞のほか、非新生物性障害又は非悪性障害を含む。

【0083】

ＷＴ－１抗原ペプチドに特異的な結合性タンパク質
ある特定の実施形態において、本開示は、（ａ）配列番号１９、２２、２５若しくは２８のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３α）を含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン又はその変異体及びＴＣＲ Ｖβドメイン；（ｂ）配列番号３１、３４、３７若しくは４０のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３β）を含むＴＣＲ Ｖβドメイン又はその変異体及びＴＣＲ Ｖαドメイン；又は（ｃ）（ａ）のＴＣＲ Ｖαドメイン及び（ｂ）のＴＣＲ Ｖβドメインを含み、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体に結合することが可能であり、任意に、ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１を含む結合性タンパク質を提示する。

【0084】

ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に、４．０、４．５、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って結合することが可能である。

【0085】

ある特定の実施形態において、（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）のＶβドメインは、配列番号５～８若しくは１３～１６のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、かつ／又は（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）のＶαドメインは、配列番号１～４若しくは９～１２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる。

【0086】

ある特定の実施形態において、ＣＤＲ３βは、配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＣＤＲ３αは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態において、ＣＤＲ３βは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＣＤＲ３αは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態において、ＣＤＲ３βは、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＣＤＲ３αは、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態において、ＣＤＲ３βは、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＣＤＲ３αは、配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

【0087】

ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α及びＣＤＲ３αを含むＶαドメイン並びにＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βを含むＶβドメインを含む。

【0088】

ある特定の実施形態において、Ｖβドメインは、配列番号２９、３２、３５若しくは３８のうちのいずれか１つによるＣＤＲ１βアミノ酸配列又はその変異体及び／又は配列番号３０、３３、３６若しくは３９のうちのいずれか１つによるＣＤＲ２βアミノ酸配列又はその変異体を含む。ある特定の実施形態において、Ｖαドメインは、配列番号１７、２０、２３若しくは２６のうちのいずれか１つによるＣＤＲ１αアミノ酸配列又はその変異体及び／又は配列番号１８、２１、２４若しくは２７のうちのいずれか１つによるＣＤＲ２αアミノ酸配列又はその変異体を含む。

【0089】

特定の実施形態において、ＴＣＲ Ｖαドメイン及びＴＣＲ Ｖβドメインは、それぞれ、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α及びＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、ＣＤＲ３β並びに（ｉ）それぞれ、配列番号２６～２８及び３８～４０；（ｉｉ）それぞれ、配列番号２３、２７、２８及び３８～４０；（ｉｉｉ）それぞれ、配列番号１７～１９及び２９～３１；（ｉｖ）それぞれ、配列番号２０～２２及び３２～３４又は（ｖ）それぞれ、配列番号２３～２５及び３５～３７のアミノ酸配列を含む。

【0090】

本明細書において開示される実施形態のうちのいずれかにおいて、結合性タンパク質は、ＷＴ－１ペプチド：ＨＬＡ－Ａ^＊２０１複合体に結合する。本明細書において開示される実施形態のうちのいずれかにおいて、結合性タンパク質は、ＣＤ８に非依存的に、又はＣＤ８の非存在下において、細胞表面におけるＷＴ－１ペプチド：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である。

【0091】

ある特定の実施形態において、本明細書において記載される結合性タンパク質は、本明細書において提示される配列番号１～６１の配列と比べて、アミノ酸配列内に、１つ以上のアミノ酸置換、挿入又は欠失を有する、変異体ポリペプチド分子種を含む。ある特定の実施形態において、置換は、保存的置換であるか、又はこれを含む。アミノ酸の保存的置換は、周知であり、天然において生じる場合もあり、結合性タンパク質が、組換えにより作製される場合に導入される場合もある。当技術分野において公知の突然変異誘発法を使用して、アミノ酸置換、欠失及び付加は、タンパク質へと導入されうる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ、２００１を参照）。オリゴヌクレオチド指向部位特異的（又はセグメント特異的）突然変異誘発手順は、所望の置換、欠失又は挿入に従い変更された特定のコドンを有する、変更ポリヌクレオチドをもたらすように利用されうる。代替的に、アラニンスキャニング突然変異誘発、エラープローンポリメラーゼ連鎖反応突然変異誘発及びオリゴヌクレオチド指向突然変異誘発などの、ランダム突然変異誘発法又は飽和突然変異誘発法も、免疫原ポリペプチド変異体を調製するのに使用されうる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出を参照）。

【0092】

ある特定の実施形態において、ＷＴ－１に特異的な、特定の結合性タンパク質の分子種（又は変異体）は、本明細書において開示される例示的なアミノ酸配列（例えば、配列番号１～６１）のうちのいずれかに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸配列同一性を有するタンパク質を含みうる。

【0093】

ある特定の実施形態において、配列番号１～４若しくは９～１２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するＶβドメイン及び／又は配列番号５～８若しくは１３～１６のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶαドメインを含み、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である、結合性タンパク質が提供される。さらなる実施形態において、本明細書において提示される、βＣＤＲアミノ酸配列又はαＣＤＲアミノ酸配列のうちのいずれか１つ以上は、それぞれ、Ｖβドメイン内及び／又はＶαドメイン内に存在しうる。

【0094】

ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、（ａ）ＣＤＲのうちの少なくとも３つ又は４つが、突然変異を有さず、（ｂ）突然変異を有するＣＤＲが、２つ以下のみのアミノ酸置換、５つ以下の連続アミノ酸欠失又はこれらの組合せを有し、（ｃ）結合性タンパク質が、任意に、４．０、４．５、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合するその能力を保持することを条件として、配列番号５～８若しくは１３～１６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなるＶβドメイン及び／又は配列番号１～４若しくは９～１２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなるＶαドメインを含む。

【0095】

ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、ヒトＴＣＲ Ｖ対立遺伝子、ヒトＴＣＲ Ｄ対立遺伝子及び／又はヒトＴＣＲ Ｊ対立遺伝子によりコードされるアミノ酸配列を含む、ＴＣＲ可変ドメインを含む。背景として述べると、リンパ球発生時に、Ｖαエクソンは、異なるＶ（ｖａｒｉａｂｌｅ）遺伝子セグメント及びＪ（ｊｏｉｎｉｎｇ）遺伝子セグメント（Ｖ－Ｊ）からアセンブルされ、Ｖβエクソンは、異なるＶ（ｖａｒｉａｂｌｅ）遺伝子セグメント、Ｄ（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）遺伝子セグメント及びＪ（ｊｏｉｎｉｎｇ）遺伝子セグメント（Ｖ－Ｄ－Ｊ）からアセンブルされる。ＴＣＲα染色体遺伝子座は、７０～８０のＶ（ｖａｒｉａｂｌｅ）遺伝子セグメント及び６１のＪ（ｊｏｉｎｉｎｇ）遺伝子セグメントを有する。ＴＣＲβ染色体遺伝子座は、５２のＶ（ｖａｒｉａｂｌｅ）遺伝子セグメント及び、各々が、単一のＤ（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）遺伝子セグメントを、６つ又は７つのＪ（ｊｏｉｎｉｎｇ）遺伝子セグメントと共に含有する、２つの個別のクラスターを有する。機能的なＶα遺伝子エクソン及びＶβ遺伝子エクソンは、Ｖαについて、Ｖ（ｖａｒｉａｂｌｅ）遺伝子セグメントの、Ｊ（ｊｏｉｎｉｎｇ）遺伝子セグメントによる組換え並びにＶβについて、Ｖ（ｖａｒｉａｂｌｅ）遺伝子セグメントの、Ｄ（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）遺伝子セグメント及びＪ（ｊｏｉｎｉｎｇ）遺伝子セグメントによる組換えにより作出される。当技術分野において、多様な対立遺伝子のＴＣＲ遺伝子セグメントに従うヌクレオチド配列及びアミノ酸配列が公知であり、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓウェブサイト上、例えば、ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／ＬｏｃｕｓＧｅｎｅｓ／ｌｉｓｔＩＧ＿ＴＲ／ＴＲ／ｈｕｍａｎ／Ｈｕ＿ＴＲｇｒｏｕｐ．ｈｔｍｌにおいて見出されうる。

【0096】

結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、本明細書において開示されるＴＣＲ遺伝子セグメントに従う、同じヌクレオチド配列を含みうるが、本開示の文脈内においては、遺伝子セグメントのアミノ酸配列をコードする、任意のヌクレオチド配列が使用されうることが理解される。

【0097】

ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、（ｉ）ＴＲＢＪ０２－０３遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列及び／又は（ｉｉ）ＴＲＢＶ０６－０５遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列、ＴＲＢＶ０７－０９遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列若しくはＴＲＢＶ２０－０１遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含むＶβドメインを含む。ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、（ｉ）ＴＲＡＪ４３遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列及び／又は（ｉｉ）ＴＲＡＶ２０－０２遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列；ＴＲＡＶ３８ＤＶ０８遺伝子セグメントによりコードされるアミノ酸配列若しくはＴＲＡＶ３８－０１遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含むＶαドメインを含む。関連する実施形態において、Ｖβドメインは、ＴＲＢＪ０２－０３遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含み、Ｖαドメインは、ＴＲＡＪ４３遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む；Ｖβドメインは、ＴＲＢＶ０６－０５遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含み、Ｖαドメインは、ＴＲＡＶ２０－０２遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む；Ｖβドメインは、ＴＲＢＶ０７－０９遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含み、Ｖαドメインは、ＴＲＡＶ３８ＤＶ０８遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む；又はＶβドメインは、ＴＲＢＶ２０－０１遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含み、Ｖαドメインは、ＴＲＡＶ３８－０１遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む。

【0098】

上述の実施形態において、ＴＲＡ遺伝子セグメント又はＴＲＢ遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列は、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５又は１５０アミノ酸の長さであり、これらの例示的な長さ（例えば、１１、１２、１３、１４アミノ酸など）の間の任意の長さのアミノ酸を含む。

【0099】

ある特定の実施形態において、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能な結合性タンパク質であって、ＴＣＲ Ｖαドメイン及びＴＣＲ Ｖβドメインを含む結合性タンパク質が提供される。ある特定の実施形態において、Ｖαドメインは、配列番号１又は９に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、Ｖβドメインは、配列番号５又は１３に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態において、Ｖαドメインは、配列番号２又は１０に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、Ｖβドメインは、配列番号６又は１４に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態において、Ｖαドメインは、配列番号３又は１１に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、Ｖβドメインは、配列番号７又は１５に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態において、Ｖαドメインは、配列番号４又は１２に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、Ｖβドメインは、配列番号８又は１６に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

【0100】

本明細書において開示される実施形態のうちのいずれかにおいて、結合性タンパク質は、α鎖定常ドメイン（Ｃα）若しくはその断片及び／又はβ鎖定常ドメイン（Ｃβ）又はその断片若しくは部分を含みうる。ある特定の実施形態において、Ｃαは、配列番号４１～４４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態において、Ｃβは、配列番号４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

【0101】

さらなる実施形態において、ＴＣＲ Ｃβは、アミノ酸５７位における天然のセリンの代わりに、システインアミノ酸（例えば、ＧＶ（Ｓ→Ｃ）ＴＤ）を含み、ＴＣＲ Ｃαは、アミノ酸４８位における天然のトレオニンの代わりに、システインアミノ酸（例えば、ＤＫ（Ｔ→Ｃ）ＶＬ；例えば、Ｃｏｈｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６７（８）：３８９８～３９０３（２００７）を参照）を含む。

【0102】

ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、それらのうちのいずれかが、キメラ結合性タンパク質の場合もあり、ヒト化結合性タンパク質の場合もあり、ヒト結合性タンパク質の場合もある、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体又はＴＣＲの抗原結合性断片である。さらなる実施形態において、ＴＣＲの抗原結合性断片は、単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。

【0103】

「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）とは、天然で生じない、又は天然の宿主細胞内において生じない形において、一体に連結された、２つ以上の天然に存在するアミノ酸配列を含有するように操作された融合タンパク質であって、細胞の表面上に存在する場合に、受容体として機能しうる融合タンパク質を指す。ＣＡＲは、膜貫通ドメイン及び１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン（任意に、共刺激性ドメイン（複数可）を含有する）へと連結された、抗原結合性ドメインを含む細胞外部分（例えば、がん抗原に特異的なＴＣＲに由来する、若しくはこれらから得られるＴＣＲ結合性ドメイン、抗体に由来する、若しくはこれらから得られるｓｃＦｖ又はＮＫ細胞に由来するキラー免疫受容体に由来する、若しくはこれらから得られる抗原結合性ドメインなど、免疫グロブリン若しくは免疫グロブリン様分子から得られる、若しくはこれらに由来する細胞外部分）（例えば、Ｓａｄｅｌａｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．、３（４）：３８８（２０１３）を参照；また、それらのＣＡＲ構築物及びこれらの作製法が、参照により本明細書に組み込む、Ｈａｒｒｉｓ及びＫｒａｎｚ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．、３７（３）：２２０（２０１６）、Ｓｔｏｎｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、６３（１１）：１１６３（２０１４）並びにＷａｌｓｅｎｇら、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ７：１０７１３（２０１７）も参照）を含みうる。ＷＴ－１抗原（例えば、ペプチド：ＨＬＡ複合体の文脈における）に特異的に結合する、本開示のＣＡＲは、ＴＣＲ Ｖαドメイン及びＴＣＲ Ｖβドメイン又はこれらの機能的断片若しくは機能的部分を含む。

【0104】

ある特定の実施形態において、ＷＴ－１特異的結合性タンパク質は、ＴＣＲである。関連する実施形態において、結合性タンパク質は、（ａ）配列番号５０若しくは４６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲα鎖及び配列番号５８若しくは５４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲβ鎖を含む；（ｂ）配列番号５１若しくは４７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲα鎖及び配列番号５９若しくは５５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲβ鎖を含む；（ｃ）配列番号５２若しくは４８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲα鎖及び配列番号６０若しくは５６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲβ鎖を含む；又は（ｄ）配列番号５３又は４９に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲα鎖及び配列番号６１若しくは５７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲβ鎖を含む。

【0105】

ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、（ｉ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）β鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、Ｖαドメインが、配列番号１９、２２、２５若しくは２８のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３α）又はその変異体を含み、ＴＣＲ Ｖβドメインが、配列番号３１、３４、３７若しくは４０のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３β）又はその変異体を含む結合性ドメインを含む細胞外構成要素；（ｉｉ）細胞内構成要素；及び（ｉｉｉ）細胞外構成要素と細胞内構成要素との間に配置された膜貫通構成要素を含む融合タンパク質を含む。ある特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＡＲである。

【0106】

ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、（ｉ）ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）ペプチド：ＨＬＡ複合体に特異的に結合し、結合性ドメインが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）β鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、任意に、（ａ）ＣＤＲのうちの少なくとも３つ又は４つが、突然変異を有さず、（ｂ）突然変異を有するＣＤＲが、２つ以下のみのアミノ酸置換、５つ以下の連続アミノ酸欠失又はこれらの組合せを有し；（ｃ）融合タンパク質が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合するその能力を保持することを条件として、Ｖαドメインが、配列番号１、２、３、４、９、１０、１１若しくは１２又はその変異体のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、Ｖβドメインが、配列番号５、６、７、８、１３、１４、１５若しくは１６又はその変異体のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる結合性ドメインを含む細胞外構成要素；（ｉｉ）細胞内構成要素；及び（ｉｉｉ）細胞外構成要素と細胞内構成要素との間に配置された膜貫通構成要素を含む融合タンパク質を含む。

【0107】

例示的なＣＤＲ配列及び可変ドメイン配列並びにその変異体を含む、本明細書において開示される結合性ドメインのうちのいずれかは、本開示に従う融合タンパク質内に含まれうることが理解される。

【0108】

本明細書において記載される実施形態のうちのいずれかにおいて、本開示の、コードされるポリペプチドは、「シグナルペプチド」（また、リーダー配列、リーダーペプチド又はトランジットペプチドとしても公知である）を含みうる。シグナルペプチドは、新規に合成されたポリペプチドを、細胞内又は細胞外にそれらの適切な位置へとターゲティングする。シグナルペプチドを含む、例示的な本開示のタンパク質又はポリペプチドのアミノ酸配列は、例えば、配列番号１～８、４６～４９及び５４～５７において提示されている。シグナルペプチドは、局在化時若しくは分泌時に、又は局在化若しくは分泌が完了したら、ポリペプチドから除去されうる。本明細書において、シグナルペプチドを有するポリペプチドは、「プレタンパク質」と称され、本明細書において、それらのシグナルペプチドが除去されたポリペプチドは、「成熟」タンパク質又は「成熟」ポリペプチドと称される。本明細書において開示される実施形態のうちのいずれかにおいて、結合性タンパク質又は融合タンパク質は、成熟タンパク質を含むか、若しくは成熟タンパク質であるか、又はプレタンパク質であるか、若しくはプレタンパク質を含む。本開示の例示的な成熟タンパク質又は成熟ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号９～１６、５０～５３及び５８～６１に提示されている。

【0109】

ある特定の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、１つ以上の接合部アミノ酸を含む。

【0110】

ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、リンカーを含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、約２～約３５アミノ酸、例えば、又は約４～約２０アミノ酸又は約８～約１５アミノ酸又は約１５～約２５アミノ酸から構成される。例示的なリンカーは、グリシン－セリンリンカー（例えば、配列番号９５及び９６）を含む。

【0111】

ある特定の実施形態において、上述の実施形態のうちのいずれか１つに従うＷＴ特異的結合性タンパク質と、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤とを含む組成物が提供される。

【0112】

ある特定の実施形態において、ＷＴ－１特異的結合性タンパク質は、可溶性形態（例えば、Ｗａｌｓｅｎｇら、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１１９５５９（２０１５）を参照）で用意され、任意に、細胞傷害剤及び／又は検出剤へとコンジュゲートされうる。例を挙げると、組換え作製された可溶性ＴＣＲを単離及び精製するために有用な方法は、組換え可溶性ＴＣＲを培養培地へと分泌する、適切な宿主細胞／ベクター系から上清を得、次いで、市販のフィルターを使用して培地を濃縮するステップを含みうる。濃縮の後、濃縮物を、単一の適切な精製マトリックス又はアフィニティーマトリックス若しくはイオン交換樹脂など、一連の適切なマトリックスへと適用することができる。１つ以上の逆相ＨＰＬＣステップを利用して、組換えポリペプチドをさらに精製することができる。これらの精製法はまた、免疫原を、その天然環境から単離する場合にも利用されうる。本明細書において記載される単離／組換え可溶性ＴＣＲのうちの１つ以上の、大スケールにおける作製のための方法は、適切な培養条件を維持するようにモニタリング及び制御されるバッチ式細胞培養法を含む。可溶性ＴＣＲの精製は、本明細書において記載され、当技術分野で公知であり、国内外の規制機関による法規及びガイドラインに準拠する方法に従い実施されうる。

【0113】

ある特定の実施形態において、ＷＴ－１に特異的な結合性タンパク質をコードする核酸分子は、養子移入療法における使用のために、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）にトランスフェクトする／宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）へと形質導入するのに使用される。ＴＣＲシーケンシングにおける利点については、記載されており（例えば、Ｒｏｂｉｎｓら、２００９、Ｂｌｏｏｄ、１１４：４０９９；Ｒｏｂｉｎｓら、２０１０、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌａｔ．Ｍｅｄ．２：４７～６４、ＰＭＩＤ：２０８１１０４３；Ｒｏｂｉｎｓら、２０１１年（９月１０日）、Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．Ｅｐｕｂ、出版先行版、ＰＭＩＤ：２１９４５３９５；Ｗａｒｒｅｎら、２０１１、Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．２１：７９０）、本開示に従う実施形態を実施する過程において利用されうる。同様に、これらの方法の、本明細書において開示される実施形態への適合が、本明細書における教示に基づき想定されるように、所望の抗原特異性のＴ細胞を使用する養子移入手順（例えば、Ｓｃｈｍｉｔｔら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎ．２０：１２４０、２００９；Ｄｏｓｓｅｔｔら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７：７４２、２００９；Ｔｉｌｌら、Ｂｌｏｏｄ、１１２：２２６１、２００８；Ｗａｎｇら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１８：７１２、２００７；Ｋｕｂａｌｌら、Ｂｌｏｏｄ １０９：２３３１、２００７；ＵＳ２０１１／０２４３９７２；ＵＳ２０１１／０１８９１４１；Ｌｅｅｎら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：２４３、２００７）と同様に、Ｔ細胞に所望の核酸をトランスフェクトする／所望の核酸をＴ細胞へと形質導入するための方法であって、ＨＬＡと複合体化されたＷＴ－１ペプチド抗原ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）に特異的な、アフィニティー増強型ＴＣＲへと方向付けられた方法を含む方法についても記載されている（例えば、ＵＳ２００４／００８７０２５）。

【0114】

ある特定の実施形態において、本明細書において記載される、ＷＴ－１特異的結合性タンパク質又はＷＴ－１特異的結合性ドメインは、宿主Ｔ細胞により発現される場合があり、Ｔ細胞の結合、活性化又は誘導の決定を含み、また、抗原特異的であるＴ細胞応答の決定も含む、Ｔ細胞活性についてアッセイするための、当技術分野で許容される多数の方法のうちのいずれかに従い、機能的に特徴づけられうる。ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、ヒトＷＴ－１に対する抗原特異的Ｔ細胞応答を、クラスＩ ＨＬＡ拘束的に促進することが可能である。さらなる実施形態において、クラスＩ ＨＬＡ拘束応答は、輸送体関連抗原プロセシング（ＴＡＰ）非依存性である。ある特定の実施形態において、抗原特異的Ｔ細胞応答は、ＣＤ４^＋ヘルパーＴリンパ球（Ｔｈ）応答及びＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答のうちの少なくとも１つを含む。関連する実施形態において、ＣＴＬ応答は、ＷＴ－１過剰発現細胞に対して方向付けられる。Ｔ細胞活性についてアッセイするための方法のさらなる例は、Ｔ細胞の増殖、Ｔ細胞によるサイトカインの放出、抗原特異的Ｔ細胞の刺激、Ｔ細胞のＭＨＣ拘束的刺激、ＣＴＬ活性（例えば、プレロードされた標的細胞からの^５１Ｃｒの放出を検出することによる）、Ｔ細胞表現型マーカー発現の変化及びＴ細胞機能についての他の尺度の決定を含む。これらのアッセイ及び同様アッセイを実施するための手順は、例えば、Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ（「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍａｎｕａｌ：Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｓｏｕｒｃｅｂｏｏｋ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、１９９８）において見出されうる。また、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」；Ｗｅｉｒ、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ（１９８６）；Ｍｉｓｈｅｌｌ及びＳｈｉｇｉｉ（編）、「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ（１９７９）；Ｇｒｅｅｎ及びＲｅｅｄ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８１：１３０９（１９９８）並びにこれらの中で引用されている参考文献も参照されたい。

【0115】

「ＭＨＣペプチド四量体染色」とは、各々が、少なくとも１つの抗原（例えば、ＷＴ－１）に対してコグネイトである（例えば、これと同一又は類縁である）アミノ酸配列を有する、同一なペプチドを含む、ＭＨＣ分子の四量体を特徴とする抗原特異的Ｔ細胞を検出するのに使用されるアッセイを指し、この場合、複合体は、コグネイト抗原に特異的なＴ細胞受容体に結合することが可能である。ＭＨＣ分子の各々は、ビオチン分子でタグ付けされる場合がある。ビオチン化ＭＨＣ／ペプチドは、ストレプトアビジンの付加により四量体化され、これは、蛍光的に標識付けされうる。四量体は、蛍光標識を介するフローサイトメトリーにより検出されうる。ある特定の実施形態において、ＭＨＣ－ペプチド四量体アッセイは、本開示のアフィニティー増強ＴＣＲを検出又は選択するのに使用される。

【0116】

サイトカインのレベルは、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞内サイトカイン染色及びフローサイトメトリー並びにこれらの組合せ（例えば、細胞内サイトカイン染色及びフローサイトメトリー）を含む、本明細書において記載され、当技術分野で実施される方法に従い決定されうる。免疫応答の抗原特異的誘発又は抗原特異的刺激から生じる、免疫細胞の増殖及びクローン的拡大は、末梢血細胞又はリンパ節に由来する細胞の試料中の循環リンパ球などのリンパ球を単離すること、細胞を抗原で刺激すること及びトリチウム化チミジンの取込み又はＭＴＴアッセイなどの非放射性アッセイなどにより、サイトカイン産生、細胞増殖及び／又は細胞生存率を測定することにより決定されうる。本明細書において記載される免疫原の、Ｔｈ１免疫応答とＴｈ２免疫応答との間の平衡に対する影響は、例えば、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、ＩＬ－２及びＴＮＦ－βなどのＴｈ１サイトカイン並びにＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－９、ＩＬ－１０及びＩＬ－１３などの２型サイトカインのレベルを決定することにより検討されうる。

【0117】

ポリヌクレオチド及びベクター
また、本開示に従う結合性タンパク質又はその断片若しくは部分をコードするポリヌクレオチド（例えば、単離ポリヌクレオチド）も提供される。本明細書において記載される、ＷＴ－１に特異的な結合性タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチド又は組換えポリヌクレオチドは、分子的生物学又はポリペプチド精製技術分野の多様な方法及び技法に従い作製及び調製されうる。

【0118】

ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、標的宿主細胞内の効率的発現のために、コドン最適化される。コドン最適化は、公知の技法及びツールを使用して、例えば、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＯｐｔｉｍｕｍＧｅｎｅ（商標）ツール；ＧｅｎｅＡｒｔ（登録商標）ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（商標）（Ｓｉｇｍａ）などを使用して実施されうる。コドン最適化配列は、部分的にコドン最適化された（すなわち、少なくとも１つのコドンが、宿主細胞内の発現に最適化された）配列及び完全にコドン最適化された配列を含む。ある特定の宿主免疫細胞での発現のためのコドン最適化については、例えば、Ｓｃｈｏｌｔｅｎら、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１９：１３５、２００６において開示されている。

【0119】

当業者が認識する通り、ポリヌクレオチドとは、任意の形態にある、一本鎖又は二本鎖のＤＮＡ、ｃＤＮＡ又はＲＮＡを指す場合があり、アンチセンスのＤＮＡ、ｃＤＮＡ及びＲＮＡを含む、互いに相補的な核酸のプラス鎖及びマイナス鎖を含みうる。また、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ＲＮＡ－ＤＮＡハイブリッド体、リボザイム、及びＤＮＡ又はＲＮＡの他の多様な天然に存在する形態又は合成形態も含まれる。

【0120】

一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６２～８１のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％（例えば、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の同一性を有するポリヌクレオチドを含む。

【0121】

ある特定の実施形態において、結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、（ｉ）配列番号７４に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する、ＴＣＲβ鎖コードポリヌクレオチド及び配列番号６６に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する、ＴＣＲα鎖コードポリヌクレオチド；（ｉｉ）配列番号７５に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する、ＴＣＲβ鎖コードポリヌクレオチド及び配列番号６７に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する、ＴＣＲα鎖コードポリヌクレオチド；（ｉｉｉ）配列番号７６に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する、ＴＣＲβ鎖コードポリヌクレオチド及び配列番号６８に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する、ＴＣＲα鎖コードポリヌクレオチド又は（ｉｖ）配列番号７７に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する、ＴＣＲβ鎖コードポリヌクレオチド及び配列番号６９に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する、ＴＣＲα鎖コードポリヌクレオチドを含む。

【0122】

一部の実施形態において、単一のポリヌクレオチドが、本明細書において記載される結合性タンパク質をコードするか、又は、代替的に、結合性タンパク質が、１つを超えるポリヌクレオチドによりコードされる場合もある。言い換えれば、結合性タンパク質の構成要素又は部分は、単一の核酸分子上に含有される場合もあり、２つ以上の核酸分子上に含有される場合もある、２つ以上のポリヌクレオチドによりコードされうる。

【0123】

ある特定の実施形態において、本開示の結合性タンパク質の、２つ以上の構成要素又は部分をコードするポリヌクレオチドは、単一のオープンリーディングフレーム内において作動可能に会合する、２つ以上のコード配列を含む。このような配置は、例えば、ＴＣＲのアルファ鎖及びベータ鎖が約１：１の比で産生されるようなそれらの共時的発現など、所望の遺伝子産物の協調的発現を可能としうるので有利である。ある特定の実施形態において、ＴＣＲ（例えば、アルファ鎖及びベータ鎖）又はＣＡＲなど、本開示の結合性タンパク質の、２つ以上の代替的遺伝子産物は、別個の分子として発現され、翻訳後に会合する。さらなる実施形態において、本開示の結合性タンパク質の、２つ以上の代替的遺伝子産物は、部分が、切断可能セグメント又は除去可能セグメントにより隔てられた、単一のポリペプチドとして発現される。例えば、当技術分野において、単一のポリヌクレオチド又はベクターによりコードされる、分離型ポリペプチドの発現に有用な、自己切断型ペプチドが公知であり、例えば、１型ブタテッショウウイルス２Ａ（Ｐ２Ａ－１）ペプチド、２型ブタテッショウウイルス２Ａ（Ｐ２Ａ－２）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａ）ウイルス２Ａ（Ｔ２Ａ）ペプチド、Ａ型ウマ鼻炎ウイルス（ＥＲＡＶ）２Ａ（Ｅ２Ａ）ペプチド及び２Ａ型口蹄疫ウイルス（Ｆ２Ａ）ペプチドを含む。自己切断型ペプチドの、例示的なヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は、配列番号８４～９３に提示されている。ある特定の実施形態において、自己切断型ペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号８９～９３のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチドを含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態において、コードされる自己切断型ペプチドは、配列番号８４～８８のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

【0124】

自己切断型ペプチドにより隔てられた、２つの目的のポリペプチド（例えば、β鎖コードポリヌクレオチド－自己切断型ペプチド－α鎖コードポリヌクレオチド；α鎖コードポリヌクレオチド－自己切断型ペプチド－β鎖コードポリヌクレオチド）をコードするポリヌクレオチドの多様な配置が想定されることが理解される。

【0125】

したがって、一部の実施形態において、結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、５’末端から３’末端の、（ＴＣＲβドメイン（例えば、鎖）コードポリヌクレオチド）－（自己切断型ペプチドコードポリヌクレオチド）－（ＴＣＲαドメイン（例えば、鎖）コードポリヌクレオチド）を含むか又は有する構造を有する。

【0126】

ある特定の実施形態において、結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号７８～８１のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％（例えば、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号７８～８１のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列を含むか又はそれからなるポリヌクレオチド配列を含む。

【0127】

さらなる態様において、コードされる結合性タンパク質が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能であり、（ｉ）配列番号１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７若しくは４０のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５若しくは３８のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列；（ｉｉｉ）配列番号１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６若しくは３９のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号１～４若しくは９～１２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、若しくはこれらに対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の同一性を有するアミノ酸配列；（ｖ）配列番号５～８若しくは１３～１６のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、若しくはこれらに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；（ｖｉ）配列番号４６～５３のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、若しくはこれらに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；（ｖｉｉ）配列番号５４～６１のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、若しくはこれらに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列又は（ｖｉｉｉ）（ｉ）～（ｖｉｉ）の任意の組合せを含むＴＣＲ Ｖαドメイン及びＴＣＲ Ｖβドメインを含む、結合性タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチドが提供される。

【0128】

さらなる実施形態において、コードされる結合性タンパク質は、安全性スイッチタンパク質；タグ、選択マーカー、ＣＤ８共受容体β鎖；ＣＤ８共受容体α鎖若しくはこれらの両方又はこれらの任意の組合せなど、１つ以上のさらなるアクセサリータンパク質をコードする、トランス遺伝子構築物の一部としても発現される場合もあり、改変免疫細胞がこれらを発現する場合もある。結合性タンパク質及びアクセサリー構成要素（例えば、安全性スイッチタンパク質、選択マーカー、ＣＤ８共受容体β鎖又はＣＤ８共受容体α鎖のうちの１つ以上）をコードし、発現させるために有用なポリヌクレオチド及びトランス遺伝子構築物については、そのヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を含むポリヌクレオチド、トランス遺伝子構築物及びアクセサリー構成要素が、参照により組み込む、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／０５８００２において記載されている。本開示の結合性タンパク質、安全性スイッチタンパク質、タグ、選択マーカー、ＣＤ８共受容体β鎖又はＣＤ８共受容体α鎖のうちのいずれか又は全ては、単一の核酸分子によりコードされる場合もあり、別個の核酸分子であるか、又はこの上に存在するポリヌクレオチド配列によりコードされる場合もあることが理解される。

【0129】

例示的な安全性スイッチタンパク質は、例えば、細胞外Ｎ末端リガンド結合性ドメイン及び細胞内受容体チロシンキナーゼ活性を欠くが、その天然のアミノ酸配列を保持し、Ｉ型膜貫通タンパク質の細胞表面局在を示し、医薬グレードの抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体であるセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）によるｔＥＧＦ受容体（ｔＥＧＦｒ；Ｗａｎｇら、Ｂｌｏｏｄ １１８：１２５５～１２６３、２０１１）；カスパーゼポリペプチド（例えば、ｉＣａｓｐ９；Ｓｔｒａａｔｈｏｆら、Ｂｌｏｏｄ １０５：４２４７～４２５４、２００５；Ｄｉ Ｓｔａｓｉら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６５：１６７３～１６８３、２０１１；Ｚｈｏｕ及びＢｒｅｎｎｅｒ、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．ｐｉｉ：Ｓ０３０１－４７２Ｘ（１６）３０５１３－６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｅｘｐｈｅｍ．２０１６．０７．０１１）、ＲＱＲ８（Ｐｈｉｌｉｐら、Ｂｌｏｏｄ １２４：１２７７～１２８７、２０１４）；ヒトｃ－ｍｙｃタンパク質（Ｍｙｃ）に由来する、１０アミノ酸のタグ（Ｋｉｅｂａｃｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０５：６２３～６２８、２００８）；及びＲＱＲなどのマーカー／安全性スイッチポリペプチド（ＣＤ２０＋ＣＤ３４；Ｐｈｉｌｉｐら、２０１４）について、コンフォメーション的に無傷の結合性エピトープを有する、切断型ＥＧＦ受容体ポリペプチド（ｈｕＥＧＦＲｔ）を含む。

【0130】

本開示の改変免疫細胞に有用な、他のアクセサリー構成要素は、細胞が、同定、分取、単離、エンリッチ又は追跡されることを可能とする、タグ又は選択マーカーを含む。例えば、所望の特徴（例えば、抗原特異的ＴＣＲ及び安全性スイッチタンパク質）を有する、マーキングされた免疫細胞は、試料中のマーキングされていない細胞からの分取が可能であり、所望の純度を有する生成物への組入れのために、より効率的な活性化及び拡大が可能である。

【0131】

本明細書において使用される、「選択マーカー」という用語は、選択マーカーを含むポリヌクレオチドにより形質導入された免疫細胞の検出及び陽性選択を可能とする同定可能な変化を、細胞へと付与する核酸構築物（及びコードされる遺伝子産物）を含む。ＲＱＲとは、主要なＣＤ２０の細胞外ループ及び２つの最小限のＣＤ３４結合性部位を含む選択マーカーである。一部の実施形態において、ＲＱＲコードポリヌクレオチドは、１６アミノ酸の最小限のＣＤ３４のエピトープをコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、最小限のＣＤ３４のエピトープは、ＣＤ８共受容体ストークドメイン（Ｑ８）のアミノ末端位置に組み込まれる。さらなる実施形態において、最小限のＣＤ３４結合性部位配列は、Ｔ細胞に対するコンパクトマーカー／自殺遺伝子（ＲＱＲ８）（参照により本明細書に組み込む、Ｐｈｉｌｉｐら、２０１４）を形成するように、ＣＤ２０に対する標的エピトープと組み合わされうる。この構築物は、例えば、磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）に結合させたＣＤ３４特異的抗体により、構築物を発現する免疫細胞の選択を可能とし、トランス遺伝子を発現する操作Ｔ細胞の選択的除去を可能とする（Ｐｈｉｌｉｐら、２０１４）、臨床的に許容された医薬抗体であるリツキシマブを用いる。

【0132】

さらなる例示的な選択マーカーはまた、通常、Ｔ細胞上では発現されない、いくつかの切断型のＩ型膜貫通タンパク質：切断型低アフィニティー神経増殖因子、切断型ＣＤ１９及び切断型ＣＤ３４（例えば、各々が、その全体において本明細書に組み込む、Ｄｉ Ｓｔａｓｉら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６５：１６７３～１６８３、２０１１；Ｍａｖｉｌｉｏら、Ｂｌｏｏｄ ８３：１９８８～１９９７、１９９４；Ｆｅｈｓｅら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１：４４８～４５６、２０００を参照）も含む。ＣＤ１９及びＣＤ３４の有用な特色は、臨床グレードの分取のために、これらのマーカーをターゲティングしうる市販品である、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ製のＣｌｉｎｉＭＡＣｓ（商標）選択系が入手可能であることである。しかし、ＣＤ１９及びＣＤ３４は、ベクターにパッケージング容量及びベクター組込み転写効率の負荷をかける、比較的大型の表面タンパク質である。細胞外の非シグナル伝達ドメイン又は多様なタンパク質（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＬＮＧＦＲ）を含有する表面マーカーもまた、利用されうる。任意の選択マーカーが利用されうるが、医薬品適正製造基準に許容可能であるものとする。ある特定の実施形態において、選択マーカーは、目的の遺伝子産物（例えば、ＴＣＲ又はＣＡＲなど、本開示の結合性タンパク質）をコードするポリヌクレオチドと共に発現される。選択マーカーのさらなる例は、例えば、ＧＦＰ、ＥＧＦＰ、β－ｇａｌ又はクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）などのレポーターを含む。ある特定の実施形態において、例えば、ＣＤ３４などの選択マーカーは、細胞により発現され、ＣＤ３４は、本明細書において記載される方法における使用のために、目的の形質導入細胞を、選択的にエンリッチ又は単離する（例えば、免疫磁気選択により）のに使用されうる。本明細書において使用されるＣＤ３４マーカーは、抗ＣＤ３４抗体、又は、例えば、ＣＤ３４に結合するｓｃＦｖ、ＴＣＲ若しくは他の抗原認識部分と区別される。

【0133】

ある特定の実施形態において、選択マーカーは、ＲＱＲポリペプチド、切断型低アフィニティー神経増殖因子（ｔＮＧＦＲ）、切断型ＣＤ１９（ｔＣＤ１９）、切断型ＣＤ３４（ｔＣＤ３４）又はこれらの任意の組合せを含む。

【0134】

背景として述べると、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の、免疫療法細胞生成物への組入れは、抗原誘導性ＩＬ－２分泌をもたらし、移入される細胞傷害性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の存続及び機能を強化しうる（例えば、Ｋｅｎｎｅｄｙら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２２：１２９（２００８）；Ｎａｋａｎｉｓｈｉら、Ｎａｔｕｒｅ ４６２（７２７２）：５１０（２００９）を参照）。ある特定の状況下において、ＣＤ４^＋Ｔ細胞内のクラスＩ拘束ＴＣＲは、ＴＣＲの、クラスＩ ＨＬＡペプチド複合体に対する感受性を増強するのに、ＣＤ８共受容体の導入を要求する場合がある。ＣＤ４共受容体は、ＣＤ８共受容体と構造が異なり、ＣＤ８共受容体に対する、有効な代替物であることが示されている（例えば、Ｓｔｏｎｅ及びＫｒａｎｚ、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、４：２４４（２０１３）を参照；また、Ｃｏｌｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１３７（２）：１３９（２０１２）も参照）。したがって、本開示の組成物及び方法における使用のための、別のアクセサリータンパク質は、ＣＤ８共受容体又はその構成要素を含む。

【0135】

ある特定の実施形態において、本開示の結合性タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む操作免疫細胞は、ＣＤ８共受容体タンパク質又はそのベータ鎖構成要素若しくはアルファ鎖構成要素をコードする異種ポリヌクレオチドをさらに含みうる。

【0136】

一部の実施形態において、コードされるＣＤ８共受容体は、α鎖又はその断片又は変異体を含む。ヒトＣＤ８共受容体α鎖前駆体のアミノ酸配列は、公知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ３０４３３（また、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ３１７８３；－Ｐ１０７３２；及び－Ｐ１０７３１も参照）において提供されている。

【0137】

一部の実施形態において、コードされるＣＤ８共受容体は、β鎖又はその断片又は変異体を含む。ヒトＣＤ８共受容体β鎖前駆体のアミノ酸配列は、公知であり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１０９６６（また、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＵＱ５６；－Ｅ９ＰＤ４１；Ｑ８ＴＤ２８；及び－Ｐ３０４３４；及び－Ｐ０５５４１も参照）において提供されている。

【0138】

理論に束縛されることを望まずに述べると、宿主細胞表面からの距離は、ＲＱＲポリペプチドが、選択マーカー／安全性スイッチ（Ｐｈｉｌｉｐら、２０１０（前出））として機能するために重要であることが考えられる。一部の実施形態において、コードされるＲＱＲポリペプチドは、コードされるＣＤ８共受容体の一方又は両方の、β鎖、α鎖又はこれらの両方若しくは断片若しくは変異体の中に含有される。具体的な実施形態において、改変免疫細胞は、ｉＣａｓｐ９をコードする異種ポリヌクレオチド及びＲＱＲポリペプチドを含有するβ鎖を含む組換えＣＤ８共受容体タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含み、ＣＤ８ α鎖をさらに含む。

【0139】

本開示の単離ポリヌクレオチドは、本明細書において開示される安全性スイッチタンパク質、選択マーカー、ＣＤ８共受容体ベータ鎖又はＣＤ８共受容体アルファ鎖をコードするポリヌクレオチドをさらに含む場合もあり、これらの任意の組合せをコードするポリヌクレオチドを含む場合もある。

【0140】

ある特定の実施形態において、本開示の改変免疫細胞は、（ｉ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体α鎖であるか、又はこれを含む；（ｉｉ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体β鎖であるか、若しくはこれを含む；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のポリヌクレオチド及び（ｉｉ）のポリヌクレオチドであって、任意に、宿主細胞が、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、ＣＤ８＋ Ｔ細胞若しくはこれらの両方を含む、（ｉ）のポリヌクレオチド及び（ｉｉ）のポリヌクレオチドをさらに含む。

【0141】

さらなる実施形態において、改変免疫細胞は、（ａ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体α鎖であるか、又はこれを含む異種ポリヌクレオチド；（ｂ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体β鎖であるか、又はこれを含む異種ポリヌクレオチド及び（ｃ）（ａ）のポリヌクレオチドと（ｂ）のポリヌクレオチドとの間に配置された自己切断型ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。

【0142】

一部の実施形態において、結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、選択マーカーをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。

【0143】

組換えＤＮＡ、ペプチド合成及びオリゴヌクレオチド合成、イムノアッセイ並びに組織培養並びに形質転換（例えば、電気穿孔、リポフェクション）のための標準的な技法が使用されうる。酵素反応及び精製法は、製造元の仕様書に従い実施される場合もあり、当技術分野で一般に達成される、又は本明細書において記載される通りに実施される場合もある。これらの技法及び手順並びに関連する技法及び手順は、一般に、当技術分野において周知であり、微生物学、分子生物学、生化学、分子遺伝学、細胞生物学、ウイルス学及び免疫学による技法における、多様な一般的参考文献及びより特殊な参考文献であって、本明細書を通じて引用され、論じられる参考文献において記載されている、従来の方法に従い実施されうる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、２００８年７月改定）；「Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｌｏｖｅｒ、「ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」、Ｉ及びＩＩ巻（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ ＵＳＡ、１９８５）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ、Ａｄａ Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ、Ｄａｖｉｄ Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ、Ｅｔｈａｎ Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ編、Ｗａｒｒｅｎ Ｓｔｒｏｂｅｒ ２００１ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ、ＮＹ）；「Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｊｕｌｉｅ Ｌｏｇａｎ、Ｋｉｒｓｔｉｎ Ｅｄｗａｒｄｓ ａｎｄ Ｎｉｃｋ Ｓａｕｎｄｅｒｓ編、２００９、Ｃａｉｓｔｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｏｒｆｏｌｋ、ＵＫ；Ａｎａｎｄ、「Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｇｅｎｏｍｅｓ」、（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９２）；Ｇｕｔｈｒｉｅ及びＦｉｎｋ、「Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｙｅａｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１）；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｎ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；「Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」（Ｂ．Ｈａｍｅｓ及びＳ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編、１９８５）；「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」（Ｂ．Ｈａｍｅｓ及びＳ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編、１９８４）；「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ、「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」（１９８４）；「Ｎｅｘｔ－Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ」（Ｊａｎｉｔｚ、２００８ Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ）；「ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」（「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」）（Ｐａｒｋ編、第３版、２０１０ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ）；「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ」（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８６）；「Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、 Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．）に所収の論考；「Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ」（Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ及びＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９９８）；「Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ｍａｙｅｒ及びＷａｌｋｅｒ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ、１９８７）；「Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｉ～ＩＶ巻（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ及びＣＣ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編、１９８６）；Ｒｏｉｔｔ、「Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、第６版（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、１９８８）；「Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｋｕｒｓｔａｄ Ｔｕｒｋｓｅｎ編、２００２）；「Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ｖｏｌｕｍｅ Ｉ：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ」（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｋｕｒｓｔａｄ Ｔｕｒｋｓｅｎ編、２００６）；「Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ｖｏｌｕｍｅ ＩＩ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ Ｍｏｄｅｌｓ」（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｋｕｒｓｔａｄ Ｔｕｒｋｓｅｎ編、２００６）；「Ｈｕｍａｎ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｋｕｒｓａｄ Ｔｕｒｋｓｅｎ編、２００６）；「Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｄａｒｗｉｎ Ｊ．Ｐｒｏｃｋｏｐ、Ｄｏｎａｌｄ Ｇ．Ｐｈｉｎｎｅｙ及びＢｒｕｃｅ Ａ．Ｂｕｎｎｅｌｌ編、２００８）；「Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ Ａ．Ｋｌｕｇ及びＣｒａｉｇ Ｔ．Ｊｏｒｄａｎ編、２００１）；「Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｋｅｖｉｎ Ｄ．Ｂｕｎｔｉｎｇ編、２００８）；「Ｎｅｕｒａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｌｅｓｌｉｅ Ｐ．Ｗｅｉｎｅｒ編、２００８）を参照。

【0144】

ある特定の実施形態は、ベクター内に含有されるポリヌクレオチドを含む。当業者は、本明細書において開示される、ある特定の実施形態による使用に適するベクターをたやすく確認しうる。典型的なベクターは、それが連結された別の核酸を輸送することが可能であるか、又は宿主生物における複製が可能なポリヌクレオチドを含みうる。ベクターの一部の例は、プラスミド、ウイルスベクター、コスミドなどを含む。一部のベクターが、それらが導入される宿主細胞における自律的な複製が可能であるのに対し（例えば、細菌性の複製起点を有する細菌性ベクター及び哺乳動物エピソームベクター）、他のベクターは、宿主細胞へと導入されると、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、これにより、宿主ゲノムと共に複製される可能性がある。加えて、一部のベクターは、それらが作動可能に連結された遺伝子の発現を方向付けることが可能である。関連する実施形態に従い、１つ以上の薬剤（例えば、本明細書において記載される、ＷＴ－１に特異的な結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチド又はその変異体）が、対象へと共投与される場合、この各薬剤は、別個のベクター内に存在する場合もあり、同じベクター内に存在する場合もあり、複数のベクター（各々が異なる薬剤又は同じ薬剤を含有する。）が、細胞又は細胞集団へと導入される場合もあり、対象へと投与される場合もあることがさらに理解される。

【0145】

特定の実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、ベクターの、ある特定のエレメントへと、作動可能に連結されうる。例えば、それらがライゲーションされたコード配列の発現及びプロセシングがなされるために必要とされるポリヌクレオチド配列が、作動可能に連結されうる。発現制御配列は、適切な転写開始配列、転写終結配列、プロモーター配列及びエンハンサー配列；スプライシングシグナル及びポリアデニル化シグナルなど、有効なＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳の効率を増強する配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を増強する配列を含む可能性があり、おそらくは、タンパク質の分泌を増強する配列を含みうる。発現制御配列は、それらが、目的の遺伝子及び目的の遺伝子を制御するように、トランスにおいて、又はある距離において作用する発現制御配列と隣接する場合に、作動可能に連結されうる。

【0146】

ある特定の実施形態において、ベクターは、プラスミドベクター又はウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター又はγ－レトロウイルスベクターから選択されるベクター）を含む。ウイルスベクターは、レトロウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、コロナウイルス、オルトミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス及び水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹ウイルス及びセンダイウイルス）などのマイナス鎖ＲＮＡウイルス、ピコルナウイルス及びアルファウイルスなどのプラス鎖ＲＮＡウイルス並びにアデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、１型単純ヘルペスウイルス及び２型単純ヘルペスウイルス、エプスタインン－バーウイルス、サイトメガロウイルス）を含む、二本鎖ＤＮＡウイルス並びにポックスウイルス（例えば、ワクシニアウイルス、鶏痘ウイルス及びカナリア痘ウイルス）を含む。他のウイルスは、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポバウイルス、ヘパドナウイルス及び肝炎ウイルスを含む。レトロウイルスの例は、トリ白血病肉腫ウイルス、哺乳動物Ｃ型レトロウイルス、哺乳動物Ｂ型レトロウイルス、哺乳動物Ｄ型レトロウイルス、ＨＴＬＶ－ＢＬＶ群レトロウイルス、レンチウイルス、スプマウイルスを含む（Ｃｏｆｆｉｎ，Ｊ．Ｍ．、「Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ：Ｔｈｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ」、「Ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ」、第３版、Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓら編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、１９９６）。

【0147】

「レトロウイルス」とは、ＲＮＡゲノムを有するウイルスであり、これは、逆転写酵素を使用して、ＤＮＡへと逆転写され、次いで、逆転写されたＤＮＡは、宿主細胞ゲノムへと組み込まれる。「ガンマレトロウイルス」とは、レトロウイルス科（ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）の属を指す。ガンマレトロウイルスの例は、マウス幹細胞ウイルス、マウス白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス及びトリ網状赤血球増加症ウイルスを含む。本明細書において使用される「レンチウイルスベクター」とは、組込型の場合もあり、非組込型の場合もあり、パッケージング容量が比較的大きな場合があり、ある範囲にわたる、異なる細胞型へと形質導入しうる、遺伝子送達のための、ＨＩＶベースのレンチウイルスベクターを意味する。レンチウイルスベクターは通例、３つ以上のプラスミド（パッケージングプラスミド、エンベローププラスミド及び導入プラスミド）の、産生細胞への一過性のトランスフェクションの後に作出される。ＨＩＶと同様に、レンチウイルスベクターも、ウイルス表面の糖タンパク質の、細胞表面上の受容体との相互作用を介して標的細胞に侵入する。侵入すると、ウイルスＲＮＡは、逆転写を経るが、これは、ウイルス逆転写酵素複合体により媒介される。逆転写の産物は、二本鎖直鎖状のウイルスＤＮＡであり、これは、感染細胞のＤＮＡへのウイルスの組込みのための基質である。

【0148】

ある特定の実施形態において、ウイルスベクターは、ガンマレトロウイルス、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクターでありうる。他の実施形態において、ウイルスベクターは、より複雑なレトロウイルス由来ベクター、例えば、レンチウイルス由来ベクターでありうる。ＨＩＶ－１由来ベクターは、この類型に属する。他の例は、ＨＩＶ－２、ＦＩＶ、ウマ感染性貧血症ウイルス、ＳＩＶ及びマエディ－ビスナウイルス（ヒツジレンチウイルス）に由来するレンチウイルスベクターを含む。当技術分野において、ＴＣＲトランス遺伝子又はＣＡＲトランス遺伝子を含有するウイルス粒子を、哺乳動物宿主細胞へと形質導入するために、レトロウイルスベクター及びレンチウイルスウイルスベクター並びにパッケージング細胞を使用する方法が公知であり、例えば、米国特許第８，１１９，７７２号；Ｗａｌｃｈｌｉら、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ６：３２７９３０、２０１１；Ｚｈａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：４４１５、２００５；Ｅｎｇｅｌｓら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１４：１１５５、２００３；Ｆｒｅｃｈａら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８：１７４８、２０１０及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５０６：９７、２００９において既に記載されている。レトロウイルスベクター構築物及びレンチウイルスベクター構築物及び発現系はまた、市販もされている。ポリヌクレオチド送達のために、例えば、アデノウイルスベースのベクター及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベースのベクターを含むＤＮＡウイルスベクター；単位複製配列ベクター、複製欠損ＨＳＶ及び弱毒化ＨＳＶを含む、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）由来ベクターを含む、他のウイルスベクターもまた、使用されうる（Ｋｒｉｓｋｙら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．５：１５１７、１９９８）。

【0149】

遺伝子治療における使用のために開発された他のベクターもまた、本開示の組成物及び方法と共に使用されうる。このようなベクターは、バキュロウイルス及びα－ウイルスに由来するベクター（Ｊｏｌｌｙ，Ｄ Ｊ．１９９９、「Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒ」、２０９～４０頁、Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ Ｔ．編、「Ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ）又はプラスミドベクター（Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ又は他のトランスポゾンベクターなど）を含む。

【0150】

ウイルスベクターゲノムが、宿主細胞内において、別個の転写物として発現される、複数のポリヌクレオチドを含む場合、ウイルスベクターはまた、２つ（以上）の転写物の間に、バイシストロニックの発現又はマルチシストロニックの発現を可能とする、さらなる配列も含みうる。ウイルスベクター内において使用されるこのような配列の例は、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、フーリン切断部位、ウイルス２Ａペプチド又はこれらの任意の組合せを含む。

【0151】

ある特定の実施形態において、ベクターは、ポリヌクレオチド構築物又はトランス遺伝子構築物を、宿主細胞（例えば、造血前駆細胞又はヒト免疫系細胞）へと送達することが可能である。具体的な実施形態において、ベクターは、ポリヌクレオチド構築物又はトランス遺伝子構築物を、例えば、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－ダブルネガティブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、γδ Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞又はこれらの任意の組合せなどのヒト免疫系細胞へと送達することが可能である。さらなる実施形態において、ベクターは、トランス遺伝子構築物を、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞又はこれらの任意の組合せへと送達することが可能である。一部の実施形態において、本開示のポリヌクレオチド構築物又はトランス遺伝子構築物をコードするベクターは、宿主細胞内において染色体のノックアウトを実施するのに使用される場合もあり、遺伝子置換療法又は遺伝子修復療法において、治療用ポリヌクレオチド若しくはトランス遺伝子又はこれらの部分を、宿主細胞へと送達するのに使用される場合もあるヌクレアーゼ（例えば、本明細書において開示されるＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓエンドヌクレアーゼ又は別のエンドヌクレアーゼ）をコードするポリヌクレオチドをさらに含みうる。代替的に、染色体のノックアウト又は遺伝子置換療法若しくは遺伝子修復療法のために使用されるヌクレアーゼは、本開示のポリヌクレオチド構築物又はトランス遺伝子構築物をコードするベクターから独立に、宿主細胞へと送達されうる。

【0152】

宿主細胞
本明細書においてまた、本開示の異種ポリヌクレオチド（例えば、本明細書において開示される任意の結合性タンパク又は融合タンパク質をコードし、任意に、選択マーカー自己切断型ペプチド、ＣＤ８共受容体ポリペプチド又はこれらの任意の組合せなど、１つ以上のさらなるタンパク質をコードする。）を含む宿主細胞及び／又は本明細書において開示される任意の結合性タンパク質を発現する宿主細胞も提示される。このような宿主細胞は、例えば、本開示のベクターのトランスフェクション若しくは本開示のベクターによる形質導入及び／又は遺伝子編集により作出されうる。

【0153】

一部の実施形態において、宿主細胞は、本明細書において記載される例示的な免疫系細胞など、任意のヒト免疫系細胞でありうる免疫系細胞を含む。ある特定の実施形態において、宿主細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞又はこれらの任意の組合せを含む。さらなる実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞又はこれらの両方を含む。

【0154】

したがって、特定の実施形態において、改変免疫細胞は、コードされる結合性タンパク質が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体に結合することが可能である本開示に従う結合性タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む。

【0155】

ある特定の実施形態において、コードされる結合性タンパク質は、配列番号９４：ＨＬＡ複合体に、４．０、４．５、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って結合することが可能である。

【0156】

ある特定の実施形態において、ペプチド：ＨＬＡ複合体は、ペプチド：ＨＬＡ－Ａ^＊２０１複合体を含む。

【0157】

本明細書において開示される実施形態のうちのいずれかにおいて、改変免疫細胞の集団は、共培養物中のペプチド濃度を１０^－４μＭ又は１０^－５μＭ又は１０^－６μＭとして、アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞（例えば、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１などのＨＬＡを発現するＴ２細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、樹状細胞）と共に、４時間にわたり共培養される場合に、集団中の改変免疫細胞のうちの５０％以上が、インターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－γ）を産生する。ある特定に実施形態において、改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を約１０^－２μＭとして、アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞（一部の文脈ではまた、「標的細胞」とも呼ばれる）と共に共培養される場合に、集団中の改変免疫細胞のうちの１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％以上が、Ｎｕｒ７７^＋（すなわち、Ｎｕｒ７７を発現する。）であり、この場合、抗原提示細胞は、任意に、Ｔ２細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞又はこれらの両方を含み、任意に、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１＋である。

【0158】

一部の実施形態において、改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－３μＭとして、アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に共培養する場合に、集団中の改変免疫細胞のうちの１０％、１５％、２０％以上は、Ｎｕｒ７７^＋である。

【0159】

一部の実施形態において、結合性タンパク質は、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６以上のＮｕｒ７７発現ｐＥＣ５０（配列番号９４：ＨＬＡ（ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１など））複合体を有する。

【0160】

本明細書において開示される実施形態のうちのいずれかにおいて、改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に３０：１の比で存在する場合に、改変免疫細胞は、試料中のＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの少なくとも１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、２０％、２５％以上を死滅させることが可能である。ある特定の実施形態において、改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に１０：１の比で存在する場合に、改変免疫細胞は、試料中のＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの１０％以上を死滅させることが可能である。ある特定の実施形態において、改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に１：１の比で存在する場合に、改変免疫細胞は、試料中のＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの約５％以上を死滅させることが可能である。

【0161】

本明細書において開示される実施形態のうちのいずれかにおいて、殺滅は、任意に、本明細書において記載される通り、標識化クロム（例えば、^５１Ｃｒ）を使用する、４時間共培養物アッセイを使用して測定されうる。

【0162】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞とＰａｎｃ１細胞とが３０：１の比で存在する場合に、改変免疫細胞は、試料中のＰａｎｃ１細胞のうちの２１％、２２％、２３％、２４％、２５％以上を死滅させることが可能である。さらなる実施形態において、改変免疫細胞と、Ｐａｎｃ１細胞とが、１０：１の比で存在する場合に、改変免疫細胞は、試料中のＰａｎｃ１細胞のうちの１０％、１５％以上を死滅させることが可能である。さらなる実施形態において、改変免疫細胞と、Ｐａｎｃ１細胞とが、９：１、８：１、７：１、６：１又は５：１の比で存在する場合に、改変免疫細胞は、試料中のＰａｎｃ１細胞のうちの１０％、１５％以上を死滅させることが可能である。

【0163】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を有するＴＣＲα鎖及び配列番号８３に示されるアミノ酸配列を有するＴＣＲβ鎖を含むＴ細胞受容体をコードするポリヌクレオチドを含む参照免疫細胞と比較して、４時間にわたる共培養において、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞に対する及び／又はＰａｎｃ１細胞に対する殺滅活性を増大させた、及び／又はペプチドをパルスされた標的細胞との４時間にわたる共培養において、ＩＦＮ－γの産生を改善した、及び／又はＰａｎｃ－１がん細胞の増殖を、さらに低減した（例えば、エフェクター：標的細胞比を８：１とするＩｎｃｕＣｙｔｅアッセイを使用して測定される通り、６０、７５、１００、１２５、１５０時間以上にわたり）。

【0164】

一部の実施形態において、本開示の改変免疫細胞は、Ｐａｎｃ－１がん細胞の増殖（ｇｒｏｗｔｈ）及び／又は増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を、５０、１００、１５０時間以上にわたり防止するか、又はこれを実質的に防止し、この場合、任意に、改変免疫細胞と、Ｐａｎｃ－１がん細胞とは、８：１のエフェクター：標的細胞比で存在する。

【0165】

本明細書において開示される実施形態のうちのいずれかにおいて、殺滅は、任意に、本明細書において記載される通り、標識化クロム（例えば、^５１Ｃｒ）を使用する、４時間共培養物アッセイを使用して測定されうる。

【0166】

「参照」免疫細胞は、コードされる結合性タンパク質を除き、同じ免疫細胞型であり、対象の改変免疫細胞と、表現型的に同一であるか、又は実質的に同一であることが理解される。例えば、改変ＣＤ８＋ヒトＴ細胞において、参照免疫細胞は、ＣＤ８＋ヒトＴ細胞であり、例えば、改変免疫細胞と同じ供給源又はドナーに由来しうる。

【0167】

上述の実施形態のうちのいずれかにおいて、コードされる結合性タンパク質は、ＴＣＲ、ＣＡＲ又はｓｃＴＣＲでありうる。上述の実施形態のうちのいずれかにおいて、コードされる結合性タンパク質は、ＣＤ８に非依存的に、又はＣＤ８の非存在下において、細胞表面におけるＷＴ－１ペプチド（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である。

【0168】

本明細書において開示される実施形態のうちのいずれかにおいて、改変免疫細胞により発現される結合性タンパク質は、ＴＣＲ、単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はこれらの任意の組合せを含みうる。

【0169】

例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、マクロファージ、単球又は樹状細胞を含む、任意の適切な免疫細胞は、本開示の異種結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むように改変されうる。一部の実施形態において、改変免疫細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞又はこれらの両方を含む。一部の実施形態において、改変免疫細胞は、ＣＤ４^－ＣＤ８^－ダブルネガティブＴ細胞又はγδ Ｔ細胞を含む。一部の実施形態において、Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞又はこれらの任意の組合せである。これらの方法の、本明細書において開示される実施形態への適合が、本明細書における教示に基づき想定されるように、所望の標的特異性のＴ細胞を使用する養子移入手順（例えば、Ｓｃｈｍｉｔｔら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎ．２０：１２４０、２００９；Ｄｏｓｓｅｔｔら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７：７４２、２００９；Ｔｉｌｌら、Ｂｌｏｏｄ、１１２：２２６１、２００８；Ｗａｎｇら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１８：７１２、２００７；Ｋｕｂａｌｌら、Ｂｌｏｏｄ、１０９：２３３１、２００７；ＵＳ２０１１／０２４３９７２；ＵＳ２０１１／０１８９１４１；Ｌｅｅｎら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：２４３、２００７）と同様に、Ｔ細胞に所望の核酸をトランスフェクトする／所望の核酸をＴ細胞へと形質導入するための方法について記載されている（例えば、米国特許出願公開第２００４／００８７０２５号）。

【0170】

細胞、例えば、Ｔ細胞にトランスフェクトする、若しくはこれへと形質導入するか、又は本方法のポリヌクレオチド又は組成物を投与するのに、任意の適切な方法が使用されうる。ポリヌクレオチドを、宿主細胞へと送達するための公知の方法は、例えば、カチオン性ポリマー、脂質様分子及び例えば、ＩＮ－ＶＩＶＯ－ＪＥＴ ＰＥＩなど、ある特定の市販品の使用を含む。他の方法は、エクスビボにおける形質導入、注射、電気穿孔、ＤＥＡＥ－デキストラン、超音波処理ローディング、リポソーム媒介性トランスフェクション、受容体媒介性形質導入、微粒子銃、トランスポゾン媒介性移入などを含む。宿主細胞にトランスフェクトするか、又は宿主細胞へと形質導入する、なおさらなる方法は、本明細書においてさらに詳細に記載されるベクターを利用する。ある特定の実施形態において、宿主細胞は、そのゲノム内に、本明細書において提示される結合性タンパク質（又は他のタンパク質又はポリペプチド）をコードするポリヌクレオチドを含むように遺伝子編集される。

【0171】

前出の実施形態のうちのいずれかにおいて、改変免疫細胞は免疫シグナル伝達若しくは他の関連する活性に関与するポリペプチドをコードする、１つ以上の内因性遺伝子の発現を低減するか、又は消失させる（例えば、本明細書において記載される染色体遺伝子ノックアウトにより）ように改変される場合もあり、かつ／又は本明細書において提示される異種ポリヌクレオチドを含むように改変される場合もある。例示的な遺伝子ノックアウトは、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＨＬＡ分子、ＴＣＲ分子などをコードする遺伝子ノックアウトを含む。理論に束縛されることを望まずに述べると、免疫細胞のある特定の内因性発現タンパク質は、改変免疫細胞を施される同種宿主により、外来タンパク質と認識される場合があり、これは、改変免疫細胞の消失を結果としてもたらす場合（例えば、ＨＬＡ対立遺伝子）もあり、改変免疫細胞の免疫活性を下方調節する場合（例えば、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ４）もあり、異種発現された本開示の結合性タンパク質の結合活性に干渉する場合（例えば、非ＷＴ－１抗原に結合し、ＷＴ－１抗原を発現する細胞への改変免疫細胞の結合に干渉しうる改変Ｔ細胞の内因性ＴＣＲ）もあり、発現について、異種結合性タンパク質と競合する場合もある。

【0172】

したがって、このような内因性遺伝子又はタンパク質の発現又は活性の低下又は消失は、自家宿主状況下又は同種宿主状況下における、結合性タンパク質の活性、忍容性、発現又は改変免疫細胞の存続を改善することが可能であり、細胞のユニバーサルな投与（例えば、ＨＬＡ型に関わらない、任意のレシピエントへの）を可能としうる。ある特定の実施形態において、改変免疫細胞は、ドナー細胞（例えば、同種細胞）又は自家細胞である。ある特定の実施形態において、本開示の改変免疫細胞は、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＨＬＡ構成要素（例えば、α１マクログロブリン、α２マクログロブリン、α３マクログロブリン、β１ミクログロブリン又はβ２ミクログロブリンをコードする遺伝子）又はＴＣＲの構成要素（例えば、ＴＣＲ可変領域又はＴＣＲ定常領域をコードする遺伝子）（例えば、それらの遺伝子編集法、組成物及び養子細胞療法が、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込む、Ｔｏｒｉｋａｉら、Ｎａｔｕｒｅ Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．６：２１７５７（２０１６）；Ｔｏｒｉｋａｉら、Ｂｌｏｏｄ １１９（２４）：５６９７（２０１２）及びＴｏｒｉｋａｉら、Ｂｌｏｏｄ、１２２（８）：１３４１（２０１３）を参照）をコードする遺伝子のうちの１つ以上に対する染色体遺伝子ノックアウトを含む。

【0173】

本明細書において使用される「染色体遺伝子ノックアウト」という用語は、宿主細胞による、機能的に活性の内因性ポリペプチド産物の産生を防止する（例えば、低減するか、遅延させるか、抑制するか、又は妨げる）、宿主細胞内の遺伝子変更又は阻害性薬剤の導入を指す。染色体遺伝子ノックアウトを結果としてもたらす変更は、例えば、ナンセンス突然変異（未成熟終止コドンの形成を含む）、ミスセンス突然変異、遺伝子欠失及び鎖切断のほか、宿主細胞内の内因性遺伝子の発現を阻害する阻害性核酸分子の異種発現の導入を含みうる。

【0174】

ある特定の実施形態において、染色体遺伝子ノックアウト又は染色体遺伝子ノックインは、宿主細胞の染色体編集によりなされる。染色体編集は、例えば、エンドヌクレアーゼを使用して実施されうる。本明細書において使用される「エンドヌクレアーゼ」とは、ポリヌクレオチド鎖内のホスホジエステル結合の切断を触媒することが可能な酵素を指す。ある特定の実施形態において、エンドヌクレアーゼは、ターゲティングされた遺伝子を切断し、これにより、ターゲティングされた遺伝子を不活化させるか又は「ノックアウトすること」が可能である。エンドヌクレアーゼは、天然に存在するエンドヌクレアーゼの場合もあり、組換えエンドヌクレアーゼの場合もあり、遺伝子改変エンドヌクレアーゼ又は遺伝子融合エンドヌクレアーゼの場合もある。エンドヌクレアーゼにより引き起こされる核酸鎖の切断は、一般に、相同組換え又は非相同末端接合（ＮＨＥＪ）という、顕著に異なる機構を介して修復される。相同組換え時に、ドナー遺伝子の「ノックイン」、標的遺伝子の「ノックアウト」のために、任意に、ドナー遺伝子ノックインイベント又は標的遺伝子ノックアウトイベントを介して、標的遺伝子を不活化させるように、ドナー核酸分子が使用されうる。ＮＨＥＪは、切断の部位において、ＤＮＡ配列に対する変化、例えば、少なくとも１つのヌクレオチドの置換、欠失又は付加を結果としてもたらすことが多い、エラープローン修復過程である。ＮＨＥＪは、標的遺伝子「をノックアウトする」のに使用されうる。エンドヌクレアーゼの例は、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥ－ヌクレアーゼ、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ及びｍｅｇａＴＡＬを含む。

【0175】

本明細書において使用される「亜鉛フィンガーヌクレアーゼ」（ＺＦＮ）とは、ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼなど、非特異的ＤＮＡ切断ドメインへと融合させた、亜鉛フィンガーＤＮＡ結合性ドメインを含む融合タンパク質を指す。約３０アミノ酸の各亜鉛フィンガーモチーフが、約３塩基対のＤＮＡに結合し、ある特定の残基におけるアミノ酸が、トリップレットの配列特異性を変更するように変化させられうる（例えば、Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：２２５６～２２６０、１９９３；Ｗｏｌｆｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８５：１９１７～１９３４、１９９９を参照）。約９～約１８塩基対の範囲の長さを有する領域など、所望のＤＮＡ配列への結合特異性を創出するように、複数の亜鉛フィンガーモチーフが、タンデムに連結される場合がある。背景として述べると、ＺＦＮは、部位特異的ＤＮＡ二重鎖切断（ＤＳＢ）ゲノムの形成を触媒することにより、ゲノム編集を媒介し、相同性指向修復により、ＤＳＢの部位におけるゲノムに相同なフランキング配列を含む、トランス遺伝子のターゲティングされた組込みが容易とされる。代替的に、ＺＦＮにより作出されるＤＳＢは、切断部位におけるヌクレオチドの挿入又は欠失を結果としてもたらす、細胞内エラープローン修復経路である、非相同末端接合（ＮＨＥＪ）による修復を介する、標的遺伝子のノックアウトを結果としてもたらしうる。ある特定の実施形態において、遺伝子ノックアウトは、ＺＦＮ分子を使用してなされる、挿入、欠失、突然変異又はこれらの組合せを含む。

【0176】

本明細書において使用される「転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ」（ＴＡＬＥＮ）とは、ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合性ドメイン及びＦｏｋＩエンドヌクレアーゼなどのＤＮＡ切断ドメインを含む融合タンパク質を指す。「ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合性ドメイン」又は「ＴＡＬＥ」は、一般に、各々が、１２及び１３番目のアミノ酸が異なる、高度に保存された３３～３５アミノ酸の配列を有する、１つ以上のＴＡＬＥリピートドメイン／単位から構成される。ＴＡＬＥリピートドメインは、標的ＤＮＡ配列へのＴＡＬＥの結合に関与する。反復可変二残基（ＲＶＤ）と称される、異なるアミノ酸残基は、特異的ヌクレオチド認識と相関する。これらのＴＡＬＥによるＤＮＡ認識のための、天然の（カノニカルの）コードは、ＴＡＬＥの１２及び１３位におけるＨＤ（ヒスチジン－アスパラギン酸）配列が、シトシン（Ｃ）に結合するＴＡＬＥをもたらし、ＮＧ（アスパラギン－グリシン）が、Ｔヌクレオチドに結合し、ＮＩ（アスパラギン－イソロイシン）が、Ａに結合し、ＮＮ（アスパラギン－アスパラギン）が、Ｇヌクレオチド又はＡヌクレオチドに結合し、ＮＧ（アスパラギン－グリシン）が、Ｔヌクレオチドに結合するように、決定されている。非標準型（非定型）のＲＶＤもまた、公知である（例えば、その非定型ＲＶＤが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込む、米国特許出願公開第２０１１／０３０１０７３号を参照）。ＴＡＬＥＮは、Ｔ細胞のゲノム内の部位特異的二本鎖切断（ＤＳＢ）を方向付けるのに使用されうる。非相同末端接合（ＮＨＥＪ）は、アニーリングのための配列の重複がほとんど又は全く存在しない、二本鎖切断の両側に由来するＤＮＡをライゲーションし、これにより、遺伝子発現をノックアウトするエラーを導入する。代替的に、相同性指向修復は、トランス遺伝子内に相同なフランキング配列が存在することを条件として、ＤＳＢの部位にトランス遺伝子を導入することが可能である。ある特定の実施形態において、遺伝子ノックアウトは、挿入、欠失、突然変異又はこれらの組合せを含み、ＴＡＬＥＮ分子を使用してなされる。

【0177】

本明細書において使用されるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ（「ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ ｓｈｏｒｔ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ ｒｅｐｅａｔｓ／Ｃａｓ」）ヌクレアーゼ系とは、塩基対合相補性を介して、ゲノム内の標的部位（プロトスペーサーとして公知である。）を認識するように、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）誘導型Ｃａｓヌクレアーゼを利用し、次いで、短い、保存されたプロトスペーサー関連モチーフ（ＰＡＭ）が、相補性標的配列の３’側の直後に後続する場合、ＤＮＡを切断する系を指す。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、Ｃａｓヌクレアーゼの配列及び構造に基づき、３つの型（すなわち、Ｉ型、ＩＩ型及びＩＩＩ型）へと分類される。Ｉ型及びＩＩＩ型におけるｃｒＲＮＡ誘導－監視複合体は、複数のＣａｓサブユニットを必要とする。最もよく研究されているＩＩ型系は、少なくとも３つの構成要素：ＲＮＡ誘導型Ｃａｓ９ヌクレアーゼ、ｃｒＲＮＡ及びトランス活性化ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を含む。ｔｒａｃｒＲＮＡは、二重鎖形成領域を含む。ｃｒＲＮＡと、ｔｒａｃｒＲＮＡとは、Ｃａｓ９ヌクレアーゼと相互作用し、ｃｒＲＮＡ上のスペーサーと、標的ＤＮＡ上の、ＰＡＭから上流におけるプロトスペーサーとの間のワトソン－クリック型塩基対合を介して、Ｃａｓ９／ｃｒＲＮＡ：ｔｒａｃｒＲＮＡ複合体を、標的ＤＮＡ上の特異的部位へと誘導することが可能な二重鎖を形成する。Ｃａｓ９ヌクレアーゼは、ｃｒＲＮＡスペーサーにより規定される領域内において、二本鎖切断を施す。ＮＨＥＪによる修復は、ターゲティングされた遺伝子座の発現を破壊する挿入及び／又は欠失を結果としてもたらす。代替的に、相同性指向修復を介して、ＤＳＢの部位に、相同なフランキング配列を伴うトランス遺伝子が導入される場合もある。ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡは、単鎖ガイドＲＮＡへと操作されうる（ｓｇＲＮＡ又はｇＲＮＡ）（例えば、Ｊｉｎｅｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３７：８１６～２１、２０１２を参照）。さらに、ガイドＲＮＡの、標的部位と相補性の領域は、所望の配列をターゲティングするように変更又はプログラムされうる（それらの各々が、参照により組み込む、Ｘｉｅら、ＰＬＯＳ Ｏｎｅ ９：ｅ１００４４８、２０１４；米国特許出願公開第２０１４／００６８７９７号、米国特許出願公開第２０１４／０１８６８４３号；米国特許第８，６９７，３５９号及びＰＣＴ公開ＷＯ２０１５／０７１４７４）。ある特定の実施形態において、遺伝子ノックアウトは、挿入、欠失、突然変異又はこれらの組合せを含み、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼ系を使用してなされる。

【0178】

例示的なｇＲＮＡ配列及びこれを使用して、免疫細胞のタンパク質をコードする内因性遺伝子をノックアウトする方法は、それらのｇＲＮＡ、Ｃａｓ９ ＤＮＡ、ベクター及び遺伝子ノックアウト法が、参照によりその全体において本明細書に組み込む、Ｒｅｎら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２３（９）：２２５５～２２６６（２０１７）に記載されている、ｇＲＮＡ配列及びノックアウト法を含む。

【0179】

Ｃａｓ１２、Ｃａｓ１３及びＣａｓ１４ヌクレアーゼ並びにその変異体を含むがこれらに限定されない、代替的なＣａｓヌクレアーゼを使用されうる。例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込む、ＷＯ２０１９／１７８４２７において開示されるＣａｓヌクレアーゼ（この中で開示される、Ｃａｓヌクレアーゼ、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系及び関連する方法を含む）が用いられうる。

【0180】

「ホーミングエンドヌクレアーゼ」ともまた称される、本明細書において使用される「メガヌクレアーゼ」とは、大型の認識部位（約１２～約４０塩基対の二本鎖ＤＮＡ配列）により特徴づけられるエンドデオキシリボヌクレアーゼを指す。メガヌクレアーゼは、配列及び構造モチーフ：ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ（配列番号９７）、ＧＩＹ－ＹＩＧ（配列番号９８）、ＨＮＨ、Ｈｉｓ－Ｃｙｓボックス及びＰＤ－（Ｄ／Ｅ）ＸＫ（配列番号９９）に基づき、５つのファミリーへと分けられうる。例示的なメガヌクレアーゼは、それらの認識配列が公知である（例えば、米国特許第５，４２０，０３２号及び同第６，８３３，２５２号；Ｂｅｌｆｏｒｔら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３７９～３３８８、１９９７；Ｄｕｊｏｎら、Ｇｅｎｅ ８２：１１５～１１８、１９８９；Ｐｅｒｌｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２２：１１２５～１１２７、１９９４；Ｊａｓｉｎ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．１２：２２４～２２８、１９９６；Ｇｉｍｂｌｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：１６３～１８０、１９９６；Ａｒｇａｓｔら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８０：３４５～３５３、１９９８を参照）、Ｉ－ＳｃｅＩ、Ｉ－ＣｅｕＩ、ＰＩ－ＰｓｐＩ、ＰＩ－Ｓｃｅ、Ｉ－ＳｃｅＩＶ、Ｉ－ＣｓｍＩ、Ｉ－ＰａｎＩ、Ｉ－ＳｃｅＩＩ、Ｉ－ＰｐｏＩ、Ｉ－ＳｃｅＩＩＩ、Ｉ－ＣｒｅＩ、Ｉ－ＴｅｖＩ、Ｉ－ＴｅｖＩＩ及びＩ－ＴｅｖＩＩＩを含む。

【0181】

ある特定の実施形態において、天然に存在するメガヌクレアーゼは、ＰＤ－１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＧＩＴ、ＨＬＡのコード遺伝子又はＴＣＲ構成要素のコード遺伝子から選択される標的の部位特異的ゲノム改変を促進するのに使用されうる。他の実施形態において、標的遺伝子に対する、新規の結合特異性を有する、操作メガヌクレアーゼは、部位特異的ゲノム改変（例えば、Ｐｏｒｔｅｕｓら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：９６７～７３、２００５；Ｓｕｓｓｍａｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４２：３１～４１、２００４；Ｅｐｉｎａｔら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３１：２９５２～６２、２００３；Ｃｈｅｖａｌｉｅｒら、Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ １０：８９５～９０５、２００２；Ａｓｈｗｏｒｔｈら、Ｎａｔｕｒｅ ４４１：６５６～６５９、２００６；Ｐａｑｕｅｓら、Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．７：４９～６６、２００７；米国特許出願公開第２００７／０１１７１２８号；同第２００６／０２０６９４９号；同第２００６／０１５３８２６号；同第２００６／００７８５５２号及び同第２００４／０００２０９２号を参照）のために使用される。さらなる実施形態において、ｍｅｇａＴＡＬとして公知の融合タンパク質を作製するように、ＴＡＬＥＮのモジュラーＤＮＡ結合性ドメインにより改変されたホーミングエンドヌクレアーゼを使用して、染色体遺伝子のノックアウトがもたらされる。ｍｅｇａＴＡＬは、目的のポリペプチドをコードする外因性ドナー鋳型と組み合わせて使用される場合に、１つ以上の標的遺伝子をノックアウトするだけではなく、目的のポリペプチドをコードする外因性ドナー鋳型と組み合わせて使用される場合、異種又は外因性ポリヌクレオチドを導入する（ノックインする）のにも用いられうる。

【0182】

ある特定の実施形態において、染色体遺伝子ノックアウトは、腫瘍関連抗原に特異的に結合する抗原特異的受容体をコードする異種ポリヌクレオチドを含む宿主細胞（例えば、免疫細胞）へと導入される阻害性核酸分子を含み、この場合、阻害性核酸分子は、標的特異的阻害剤をコードし、コードされた標的特異的阻害剤は、宿主免疫細胞内の、内因性遺伝子（すなわち、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＧＩＴ、ＨＬＡの構成要素若しくはＴＣＲの構成要素又はこれらの任意の組合せ）の発現を阻害する。

【0183】

染色体遺伝子ノックアウトは、ノックアウト手順又は薬剤を使用した後における、宿主免疫細胞のＤＮＡシーケンシングにより、直接確認されうる。染色体遺伝子ノックアウトは、ノックアウト後における、遺伝子発現の非存在（例えば、遺伝子によりコードされるｍＲＮＡ産物又はポリペプチド産物の非存在）からもまた推測されうる。

【0184】

前出の遺伝子編集法のうちのいずれかは、本開示のポリヌクレオチド（例えば、結合性タンパク質及び／又はＣＤ８共受容体ポリペプチドをコードする）を、宿主細胞ゲノムへと導入するのに使用されうる。一部の実施形態において、異種ポリヌクレオチドは、内因性ＴＣＲ構成要素、ＨＬＡ構成要素をコードする遺伝子座、ＰＤ－１遺伝子座、ＬＡＧ－３遺伝子座、ＣＴＬＡ４遺伝子座、ＴＩＭ３遺伝子座若しくはＴＩＧＩＴ遺伝子座又はＲｏｓａ２６、ＡＡＶＳ１、ＣＣＲ５などのセーフハーバー遺伝子座へと導入される。ある特定の実施形態において、結合性タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチド及び／又はＣＤ８共受容体ポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドは、宿主細胞ＴＲＡＣ遺伝子座へと導入される。さらなる実施形態において、宿主細胞のＴＲＢＣ遺伝子座の染色体ノックアウトが導入される。

【0185】

したがって、ある特定の実施形態において、内因性ＴＲＡＣ遺伝子座内に、本開示の結合性タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチド、本開示のＣＤ８共受容体又はこれらの両方を含む宿主細胞（例えば、改変免疫細胞）が提供される。さらなる実施形態において、宿主細胞は、内因性ＴＲＢＣ遺伝子座の染色体ノックアウトを含む。

【0186】

別の態様において、本開示の改変免疫細胞（及び／又はポリヌクレオチド、ベクター又は結合性タンパク質）と、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤とを含む組成物が本明細書において提示される。

【0187】

本明細書においてまた、有効量の改変免疫細胞又は改変免疫細胞を含む組成物を含む単位用量も提示される。ある特定の実施形態において、単位用量は、（ｉ）少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％又は少なくとも約９５％の改変ＣＤ４＋ Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％又は少なくとも約９５％の改変ＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて、約１：１の比で含み、この場合、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含有するか、又はナイーブＴ細胞を実質的に含有しない（すなわち、単位用量中に存在するナイーブＴ細胞の集団が、同等数のＰＢＭＣを有する患者試料と比較して、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、約５％未満又は約１％未満である。）。

【0188】

一部の実施形態において、単位用量は、（ｉ）少なくとも約５０％の改変ＣＤ４＋ Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約５０％の改変ＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて、約１：１の比で含み、この場合、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含有するか、又はナイーブＴ細胞を実質的に含有しない。さらなる実施形態において、単位用量は、（ｉ）少なくとも約６０％の改変ＣＤ４＋ Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約６０％の改変ＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて、約１：１の比で含み、この場合、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含有するか、又はナイーブＴ細胞を実質的に含有しない。なおさらなる実施形態において、単位用量は、（ｉ）少なくとも約７０％の改変ＣＤ４＋ Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約７０％の改変ＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて、約１：１の比で含み、この場合、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含有するか、又はナイーブＴ細胞を実質的に含有しない。一部の実施形態において、単位用量は、（ｉ）少なくとも約８０％の改変ＣＤ４＋ Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約８０％の改変ＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて、約１：１の比で含み、この場合、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含有するか、又はナイーブＴ細胞を実質的に含有しない。一部の実施形態において、単位用量は、（ｉ）少なくとも約８５％の改変ＣＤ４＋ Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約８５％の改変ＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて、約１：１の比で含み、この場合、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含有するか、又はナイーブＴ細胞を実質的に含有しない。一部の実施形態において、単位用量は、（ｉ）少なくとも約９０％の改変ＣＤ４＋ Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約９０％の改変ＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて、約１：１の比で含み、この場合、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含有するか、又はナイーブＴ細胞を実質的に含有しない。

【0189】

本開示の単位用量は、本明細書において記載される改変免疫細胞（すなわち、配列番号９４に従う、ＷＴ－１抗原に特異的な結合性タンパク質を発現する）及び異なる抗原（例えば、異なるＷＴ－１抗原（例えば、配列番号１００を含む）又は例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、ＣＥＡＣＡＭ６、ｃ－Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥｐｈＡ２、ＩＧＦ１Ｒ、ＧＤ２、Ｏ－アセチルＧＤ２、Ｏ－アセチルＧＤ３、ＧＨＲＨＲ、ＧＨＲ、ＦＬＴ１、ＫＤＲ、ＦＬＴ４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ１５１、ＣＡ１２５、ＣＥＡ、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、ＢＴＬＡ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ１、ＩＬ６Ｒ、ｇｐ１３０、Ｌｅｗｉｓ Ａ、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＨＶＥＭ、ＭＡＧＥ－Ａ（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３及びＭＡＧＥ－Ａ４を含む）、メソテリン、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫ、ＲＯＲ１、ＴＮＦＲＳＦ４、ＣＤ４０、ＣＤ１３７、ＴＷＥＡＫ－Ｒ、ＨＬＡ、ＨＬＡに結合した腫瘍関連ペプチド若しくは病原体関連ペプチド、ＨＬＡに結合したｈＴＥＲＴペプチド、ＨＬＡに結合したチロシナーゼペプチド、ＨＬＡに結合したＫＲＡＳペプチド、ＬＴβＲ、ＬＩＦＲβ、ＬＲＰ５、ＭＵＣ１、ＯＳＭＲβ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、ＣＤ１７１、ＣＤ２７６、Ｂ７Ｈ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＰＴＣＨ１、ＨＡ１－Ｈ、Ｒｏｂｏ１、α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ、ＯＸ４０、ＰＲＡＭＥ、ＢＲＡＦ、コア結合因子、ＭＲ－１（Ｃｒｏｗｔｈｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１７５～１８５（２０２０））及びＳＳＸ－２など、異なるタンパク質又は標的に由来する抗原）に特異的な結合性タンパク質を発現する改変免疫細胞を含みうることが理解される。例えば、単位用量は、ＷＴ－１：ＨＬＡ複合体に特異的に結合する結合性タンパク質を発現する改変ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＣＤ１９抗原に特異的に結合する結合性タンパク質（例えば、ＣＡＲ）を発現する改変ＣＤ４^＋Ｔ細胞（及び／又は改変ＣＤ８＋ Ｔ細胞）を含みうる。

【0190】

本明細書において記載される実施形態のうちのいずれかにおいて、単位用量は、同等数又はほぼ同等数の、操作ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ３^＋ＣＤ８^＋ＴＭ細胞及び改変ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ３^＋ＣＤ４^＋ＴＭ細胞を含む。

【0191】

一部の実施形態において、（ｉ）本明細書において開示される改変免疫細胞を含み、（ｉｉ）ＴＣＲ Ｖα及びＴＣＲ Ｖβを含み、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号１００）：ＨＬＡ複合体に特異的に結合することが可能であり、任意に、ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１を含み、任意に、（ｉ）の改変免疫細胞と、（ｉｉ）の免疫細胞とが、各々独立に、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及びＮＫ－Ｔ細胞から選択される、結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む免疫細胞をさらに含む組成物が提供される。

【0192】

ある特定のさらなる実施形態において、（ｉｉ）における免疫細胞の結合性タンパク質は、（ａ）配列番号１０１～１０３及び１０５～１０７のそれぞれの、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）Ｖαが、配列番号１０４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）Ｖβが、配列番号１０８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる；（ｂ）配列番号１０９～１１０及び１１３～１１５のそれぞれの、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）Ｖαは、配列番号１１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）Ｖβが、配列番号１１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる又は（ｃ）配列番号１１７～１１９及び１２１～１２３のそれぞれの、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）Ｖαが、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）Ｖβが、配列番号１２４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる。

【0193】

使用
ある特定の態様において、本開示は、それを必要とするヒト対象へと、有効量の、本明細書において開示される任意の実施形態に従う結合性タンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物を投与することにより、ＷＴ－１の発現と関連する疾患又は障害を処置するための方法を対象とする。

【0194】

「～を処置する」又は「処置」又は「～を改善する」とは、対象（例えば、ヒト又は霊長動物、ウマ、ネコ、イヌ、ヤギ、マウス若しくはラットなどの非ヒト哺乳動物）の疾患、障害又は状態の医学的管理を指す。治療的利益又は予防的／防止的利益は、臨床転帰の改善；疾患と関連する症状の軽減若しくは緩和；症状の発生の低下；生活の質の改善；無疾患状態の延長；疾患の程度の減弱、疾患状態の安定化；疾患進行の遅延；寛解；生存；生存の延長又はこれらの任意の組合せを含む。

【0195】

本明細書において使用される「治療有効量」又は「有効量」とは、統計学的に有意な形において、臨床転帰の改善；疾患と関連する症状の軽減若しくは緩和；症状の発生の低下；生活の質の改善；無疾患状態の延長；疾患の程度の減弱、疾患状態の安定化；疾患進行の遅延；寛解；生存又は生存の延長を含む治療効果を結果としてもたらすのに十分な改変免疫細胞の量を指す。

【0196】

本明細書において使用される「統計学的に有意な」とは、スチューデントのｔ検定を使用して計算される場合の、０．０５０以下のｐ値を指し、測定される特定のイベント又は結果が、偶然生じた可能性が小さいことを指し示す。

【0197】

本開示の方法に従い処置されうる対象は、一般に、ヒト並びに獣医学及び／又は研究目的のためのサル及び類人猿など、他の霊長動物対象である。マウス又はラットもまた、研究目的で使用されうる。上述の実施形態のうちのいずれかにおいて、対象は、ヒト対象でありうる。対象は、男性の場合もあり、女性の場合もあり、乳児対象、小児対象、若齢対象、成年及び高齢対象を含む、任意の適切な年齢でありうる。本開示に従う細胞は、医療技術分野における当業者により決定される通り、処置される疾患、状態又は障害に適切な形で投与されうる。上記の実施形態のうちのいずれかにおいて、本明細書において記載される改変免疫細胞又は単位用量は、標的細胞（例えば、白血病細胞）に遭遇するように、静脈内投与される、腹腔内投与される、腫瘍内投与される、骨髄へと投与される、リンパ節へと投与される、又は脳脊髄液へと投与される。組成物の投与の適切な用量、投与の適切な持続期間及び投与頻度は、患者の状態；疾患、状態又は障害のサイズ、種類及び重症度；特定の形態の有効成分；及び投与の方法などの因子により決定される。

【0198】

単独で投与される、個々の有効成分又は単一の有効成分を発現する細胞に言及する場合に、治療有効量とは、単独における、この成分又はこの成分を発現する細胞の効果を指す。組合せに言及する場合に、治療有効量とは、逐次的に投与されるのであれ、同時に投与されるのであれ、有効成分又は治療効果を結果としてもたらす、有効成分を発現する細胞と組み合わされた補助的有効成分の組合せ量を指す。組合せはまた、１つを超える有効成分を発現する細胞でもありうる。

【0199】

本明細書において使用される「養子免疫療法（ａｄｏｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ）」又は「養子免疫療法（ａｄｏｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）」という用語は、天然に存在するか、又は遺伝子操作された疾患特異的免疫細胞又は抗原特異的免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の投与を指す。養子細胞免疫療法は、自家細胞免疫療法（免疫細胞は、レシピエントに由来する。）の場合もあり、同種細胞免疫療法（免疫細胞は、同じ種のドナーに由来する。）の場合もあり、同系細胞免疫療法（免疫細胞は、レシピエントと遺伝子的に同一なドナーに由来する。）の場合もある。

【0200】

ＷＴ－１の発現と関連する状態は、過小活性、過剰活性又は不適正活性のＷＴ－１の細胞イベント又は分子イベントが存在し、典型的に、罹患細胞（例えば、白血病性細胞）内の、正常細胞内と比べて、通例、高レベル（統計学的有意性を伴う）のＷＴ－１の発現から生じる、任意の障害又は状態を含む。このような障害又は状態を有する対象は、本明細書において記載される実施形態の組成物又は方法による処置から利益を得る。したがって、ＷＴ－１の過剰発現と関連する、一部の状態は、対象に、特定の障害に対する素因を与える病理学的状態など、急性障害及び急性疾患のほか、慢性障害及び慢性疾患を含みうる。

【0201】

ＷＴ－１の発現と関連する疾患及び障害は、当技術分野において公知であり、診断及び分類のための基準が確立されている、対象における、例えば、新生物性細胞、腫瘍細胞、非接触阻害細胞又は腫瘍原性形質転換細胞などを含む、異形成性細胞、がん性細胞及び／又は形質転換細胞（例えば、固形がん；リンパ腫及び急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病などの白血病を含む血液がん）の存在（例えば、Ｈａｎａｈａｎ及びＷｅｉｎｂｅｒｇ、２０１１ Ｃｅｌｌ １４４：６４６；Ｈａｎａｈａｎ及びＷｅｉｎｂｅｒｇ ２０００ Ｃｅｌｌ １００：５７；Ｃａｖａｌｌｏら、２０１１ Ｃａｎｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６０：３１９；Ｋｙｒｉｇｉｄｅｉｓら、２０１０ Ｊ．Ｃａｒｃｉｎｏｇ．９：３）を含む。ある特定の実施形態において、このようながん細胞は、これらの種類のがんのうちのいずれかを誘発し、逐次的に移植することが可能ながん幹細胞（例えば、Ｐａｒｋら、２００９ Ｍｏｌｅｃ．Ｔｈｅｒａｐ． １７：２１９を参照）を含む、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞リンパ芽球性白血病、Ｔ細胞リンパ芽球性白血病又は骨髄腫の細胞でありうる。ある特定の実施形態に従い、ＷＴ－１の過剰発現により特徴づけられる、事実上、任意の種類のがんは、血液がん（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を含む白血病、Ｔ細胞性リンパ腫又はＢ細胞性リンパ腫、骨髄腫など）を含む、本明細書において開示される組成物及び方法の使用を介して処置されうる。さらに、「がん」とは、充実性腫瘍、腹水腫瘍、血液又はリンパ性悪性腫瘍若しくは他の悪性腫瘍；結合組織悪性腫瘍；転移性疾患；臓器又は幹細胞の移植後における微小残存疾患；多剤耐性がん、原発悪性腫瘍若しくは続発悪性腫瘍、悪性腫瘍と関連する血管新生又は他の形態のがんを含む、細胞増殖の任意の加速化を指す場合がある。本明細書において開示される実施形態内においてまた、ＷＴ－１の過剰発現により特徴づけられるのか否かに関わらず、上記の種類の疾患のうちの１つだけが含まれるか、又は具体的状態が除外されうる、具体的実施形態も想定される。

【0202】

ＷＴ－１の過剰発現と関連する状態についての一部の例は、腫瘍、新生物、がん、悪性腫瘍などを含む、対象における過剰増殖性障害及び増殖性障害を含む。活性化細胞又は増殖細胞に加えて、過剰増殖性障害又は増殖性障害はまた、壊死によるのであれ、アポトーシスによるのであれ、細胞死過程の異常又は調節異常も含みうる。細胞死過程のこのような異常は、がん（原発悪性腫瘍、続発悪性腫瘍のほか、転移性悪性腫瘍を含む）又は他の状態を含む、様々な状態と関連しうる。

【0203】

ある特定の実施形態において、本発明における方法は、血液悪性腫瘍又は固形がんを処置するために有用である。例示的な血液悪性腫瘍は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病（難治性ＡＭＬ及び再発性ＡＭＬを含み、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病（例えば、好酸球増多症を伴う、又はこれを伴わない）、急性単球性白血病、急性赤白血病、及び急性巨核芽球性白血病を含むＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄球性白血病、慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）又は多発性骨髄腫（難治性ＭＭ及び再発性ＭＭを含むＭＭ）を含む。

【0204】

ある特定の実施形態において、本明細書において開示される方法は、胆管がん、膀胱がん、骨軟部組織癌、脳腫瘍、乳がん、乳癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸腺癌、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、胚性がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、胃腺癌、多形性膠芽腫、膠芽腫、黒色腫、びまん性腹膜中皮腫、悪性胸膜中皮腫、神経膠腫、星状細胞腫、婦人科腫瘍、頭頸部扁平上皮癌、肝がん、肝細胞癌、肺がん、非小細胞肺がん、悪性黒色腫、骨肉腫、卵巣がん（例えば、上皮卵巣がん、卵巣癌）、卵管がん、子宮内膜癌、膵がん、膵管腺癌、原発星状細胞腫瘍、原発甲状腺がん、前立腺がん、腎がん、腎細胞癌腫、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、骨原性肉腫、精巣生殖細胞腫瘍、尿路上皮がん、子宮肉腫、子宮癌肉腫又は子宮がんなどの固形がんを処置するために有用である。

【0205】

また、本明細書において記載される方法のうちのいずれかに従う使用のための結合性タンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞及び／又は改変免疫細胞を含む医薬組成物（任意に、配列番号１００：ＨＬＡ複合体に結合することが可能な結合性タンパク質を発現する免疫細胞と組み合わせて）も提供される。医薬組成物は、医療技術分野における当業者により決定される通り、処置される（又は防止される）疾患又は状態に適切な形で投与されうる。組成物の投与の適切な用量及び投与の適切な持続期間及び投与頻度は、患者の健康状態、患者のサイズ（すなわち、体重、体格又は体表面積）、患者の状態の種類及び重症度、特定の形態の有効成分及び投与法などの因子により決定される。一般に、適切な用量及び処置レジメンは、組成物（複数可）を、治療利益及び／又は予防利益（完全寛解若しくは部分寛解の頻度の増大又は無病生存及び／若しくは全生存の延長又は症状の重症度の軽減など、臨床転帰の改善を含む、本明細書において記載される治療利益及び／又は予防利益など）をもたらすのに十分な量において施す。

【0206】

医薬組成物の有効量とは、本明細書において記載される、所望の臨床結果又は有益な処置のを達成するのに必要な投与量において、これに必要な期間にわたり十分な量を指す。有効量は、１回以上の投与において送達される場合もある。投与が、疾患又は疾患状態を有することが既知であるか、又はこれが確認されている対象へとなされる場合、処置に言及して、「治療量」という用語が使用されうるのに対し、「予防有効量」は、疾患又は疾患状態（例えば、これらの再発）に対して感受性であるか、又はこれらを発症する危険性がある対象への、防止コースとしての有効量の投与について記載するのに使用されうる。

【0207】

ある特定の実施形態において、方法は、ＴＣＲ Ｖα及びＴＣＲ Ｖβを含み、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号１００）：ＨＬＡ複合体に特異的に結合することが可能であり、任意に、ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１を含み、任意に、改変免疫細胞と、免疫細胞とが、各々独立に、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及びＮＫ－Ｔ細胞から選択される、結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む免疫細胞を施されたことがある、これらを施されている、又はこれらを施される対象へと、本明細書において提示される改変免疫細胞を投与するステップを含む。ある特定の実施形態において、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号１００）：ＨＬＡ複合体に特異的に結合することが可能な結合性タンパク質は、（ａ）配列番号１０１～１０３及び１０５～１０７のそれぞれの、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）Ｖαが、配列番号１０４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）Ｖβが、配列番号１０８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる；
（ｂ）配列番号１０９～１１０及び１１３～１１５のそれぞれの、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）Ｖαが、配列番号１１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）Ｖβが、配列番号１１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる又は（ｃ）配列番号１１７～１１９及び１２１～１２３のそれぞれの、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）Ｖαが、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）Ｖβが、配列番号１２４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる。

【0208】

一般に、適切な投与量及び処置レジメンは、活性の分子又は細胞を、利益をもたらすのに十分な量において施す。このような応答は、処置対象における臨床転帰の、非処置対象と比較した改善（完全寛解若しくは部分寛解の頻度の増大又は無病生存の延長）を確立することによりモニタリングされうる。腫瘍タンパク質に対する、既存の免疫応答の増大は、一般に、臨床転帰の改善と相関する。このような免疫応答は一般に、当技術分野において、常套的であり、処置の前及び後において対象から得られる試料を使用して実施されうる、標準的な増殖アッセイ、細胞傷害アッセイ又はサイトカインアッセイを使用して査定されうる。

【0209】

予防的使用のために、用量は、疾患又は障害の発症を防止する、遅延させる、又はこれらと関連する疾患の重症度を軽減するのに十分な用量であるものとする。本明細書において記載される方法に従い投与される組成物の予防的利益は、前臨床研究（インビトロ及びインビボにおける動物研究を含めた）及び臨床研究を実施し、それらの全てが当業者によりたやすく実施されうる、適切な統計学的方法及び技法、生物学的方法及び技法並びに臨床的方法及び技法を介してこれらから得られるデータを解析することにより決定されうる。

【0210】

本明細書において想定されるある特定の処置法又は防止法は、細胞の染色体へと安定的に組み込まれる、又は染色体外核酸分子として存在する、本明細書において記載される所望の核酸分子を含む宿主細胞（自家の場合もあり、同種の場合もあり、同系の場合もある）を投与するステップを含む。例えば、このような細胞性組成物は、所望の、ＷＴ－１へとターゲティングされたＴ細胞組成物を、対象へと、養子免疫療法として投与するために、自家免疫系細胞、同種免疫系細胞又は同系免疫系細胞（例えば、Ｔ細胞、抗原提示細胞、ナチュラルキラー細胞）を使用して、エクスビボで作出されうる。ある特定の実施形態において、免疫細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^－ＣＤ８^－ダブルネガティブＴ細胞、γδ Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞又はこれらの任意の組合せである。さらなる実施形態において、免疫細胞は、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞又はこれらの任意の組合せである。

【0211】

組成物中又は単位用量中の細胞の量は、少なくとも１つの細胞（例えば、１つの改変ＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団（例えば、任意に、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞及び／又はナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む）；１つの改変ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団（例えば、任意に、メモリーＣＤ４^＋Ｔ細胞及び／又はナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞を含む））であるか、又は、細胞１０^２個、例えば、細胞１０^４個以下、１０^５個以下、１０^６個以下、１０^７個以下、１０^８個以下、１０^９個以下、１０^１０個以下又は１０^１１個以下である、より典型的に、これらの個数を超える。ある特定の実施形態において、細胞は、約１０^４～約１０^１１個の細胞／１ｍ^２の範囲で、好ましくは約１０^５～約１０^９個の細胞／１ｍ^２の範囲で投与される。一部の実施形態において、投与される用量は、約３．３×１０^５個以下の細胞／ｋｇを含む。一部の実施形態において、投与される用量は、約１×１０^６個以下の細胞／ｋｇを含む。一部の実施形態において、投与される用量は、約３．３×１０^６個以下の細胞／ｋｇを含む。一部の実施形態において、投与される用量は、約１×１０^７個以下の細胞／ｋｇを含む。ある特定の実施形態において、改変免疫細胞は、約５×１０^４個以下の細胞／ｋｇ、５×１０^５個の細胞／ｋｇ、５×１０^６個の細胞／ｋｇ又は約５×１０^７個以下の細胞／ｋｇを含む用量で、対象へと投与される。ある特定の実施形態において、改変免疫細胞は、少なくとも約５×１０^４個の細胞／ｋｇ、５×１０^５個の細胞／ｋｇ、５×１０^６個の細胞／ｋｇ又は約５×１０^７個以下の細胞／ｋｇを含む用量で、対象へと投与される。細胞の数は、組成物が意図される最終的使用並びにその中に含まれる細胞の種類に依存する。例えば、結合性タンパク質を含有するように改変された細胞は、少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上の、このような細胞を含有する細胞集団を含む。本明細書において提示される使用のために、細胞は、一般に、１リットル以下、５００ｍｌ以下、２５０ｍｌ以下又は１００ｍｌ以下の容量である。複数の実施形態において、所望の細胞の密度は、典型的に、１ｍｌ当たりの細胞１０^４個を超え、一般に、１ｍｌ当たりの細胞１０^７個を超え、一般に、１ｍｌ当たりの細胞１０^８個以上である。細胞は、単回注入として投与される場合もあり、ある範囲の時間にわたる複数回注入として投与される場合もある。臨床的に関連する数の免疫細胞は、累積的に、細胞１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０又は１０^１１個と同等であるか、又はこれを超える複数回の注入へと分配されうる。ある特定の実施形態において、単位用量の改変免疫細胞は、同種ドナーに由来する造血幹細胞と共に（例えば、これらと同時に又は共時的に）共投与されうる。一部の実施形態において、単位用量中に含まれる改変免疫細胞のうちの１つ以上は、対象に対して自家である。

【0212】

本明細書において記載される医薬組成物は、密封されたアンプル又はバイアルなど、単位用量用の容器又は複数回投与用の容器により提示されうる。このような容器は、使用まで、製剤の安定性を保存するように凍結させられうる。ある特定の実施形態において、単位用量は、本明細書において記載される組換え宿主細胞を、約１０^４個の細胞／１ｍ^２～約１０^１１個の細胞／１ｍ^２の用量で含む。本明細書において記載される特定の組成物を、例えば、非経口投与若しくは静脈内投与又は非経口投与用若しくは静脈内投与用の製剤を含む、様々な処置レジメンにおいて使用するために適する投与レジメン及び処置レジメンの開発が提供される。

【0213】

ある特定の実施形態において、本明細書において開示される改変免疫細胞を含む医薬組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤をさらに含む。「薬学的に許容される賦形剤又は担体」又は「生理学的に許容される賦形剤又は担体」という用語は、本明細書においてより詳細に記載され、ヒト又は他の非ヒト哺乳動物対象への投与に適し、一般に、安全であるか、又は重篤な有害事象を引き起こさないと認識されている、生物学的に適合性の媒体、例えば、生理食塩液を指す。

【0214】

適切な賦形剤は、水、生理食塩液、デキストロース、グリセロールなど及びこれらの組合せを含む。複数の実施形態において、本明細書において開示される融合タンパク質又は宿主細胞を含む組成物は、適切な注入用媒質をさらに含む。適切な注入用媒質は、任意の等張性媒質製剤であることが可能であり、典型的に、通常の生理食塩液、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ）又はＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（Ｂａｘｔｅｒ）、水中に５％のデキストロース、リンゲル乳酸加液が用いられうる。注入用媒質は、ヒト血清アルブミン又は他のヒト血清成分を補充される場合がある。

【0215】

対象の組成物が、非経口投与される場合、組成物はまた、滅菌であり、水性又は油性である、溶液又は懸濁液も含みうる。適切な、非毒性の、非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒は、水、リンゲル液、等張性塩溶液、水との混合物中の、１，３－ブタンジオール、エタノール、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールを含む。水性の溶液又は懸濁液は、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ砂又は酒石酸ナトリウムなど、１つ以上の緩衝剤をさらに含みうる。当然ながら、任意の投与量単位製剤の調製において使用される任意の素材は、薬学的に純粋であり、利用される量において、実質的に非毒性であるものとする。加えて、活性化合物は、持続放出調製物及び持続放出製剤へと組み込まれる場合もある。本明細書において使用される単位剤形とは、処置される対象のための単位投与量として適する、物理的に個別の単位を指し、各単位は、適切な医薬担体と会合して、所望の治療効果をもたらすように計算された所定数量の組換え細胞又は活性化合物を含有しうる。

【0216】

本明細書において使用される、組成物又は治療の投与とは、送達経路又は送達方式に関わりなく、組成物又は治療を、対象へと送達することを指す。投与は、持続的になされる場合もあり、間欠的になされる場合もあり、非経口的になされうる。投与は、認識された状態、疾患若しくは疾患状態を有するものとして、既に確認された対象を処置するか、又はこのような状態、疾患若しくは疾患状態に対して感受性であるか、若しくはこれらを発症する危険性がある対象を処置するための投与でありうる。補助治療との共投与は、任意の順序及び任意の投与スケジュール（例えば、１つ以上のサイトカインを伴う改変免疫細胞；カルシニューリン阻害剤、コルチコステロイド、微小管阻害剤、低用量ミコフェノール酸プロドラッグ又はこれらの任意の組合せなど免疫抑制治療）における、複数の薬剤の同時的送達及び／又は逐次的送達を含みうる。

【0217】

ある特定の実施形態において、本明細書において記載される改変免疫細胞又は結合性タンパク質の、対象への複数回投与が行われるが、複数回投与は、約２～約４週間の投与間隔で行われる。さらなる実施形態において、サイトカインは、対象が、サイトカイン投与の前に、少なくとも３回又は４回にわたり改変免疫細胞を投与されることを条件として、逐次的に投与される。ある特定の実施形態において、サイトカインは、皮下投与される（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１）。なおさらなる実施形態において、処置される対象は、カルシニューリン阻害剤、コルチコステロイド、微小管阻害剤、低用量ミコフェノール酸プロドラッグ又はこれらの任意の組合せなどの免疫抑制治療を受けている。

【0218】

本開示の処置法又は防止法は、本明細書において開示される単位用量、細胞又は組成物の投与の前又は後において、さらなる処置を含みうる、処置コース又は処置レジメンの一部として、対象へと投与されうる。例えば、ある特定の実施形態において、単位用量の改変免疫細胞を施される対象は、造血細胞移植（ＨＣＴ；骨髄破壊的ＨＣＴ及び非骨髄破壊的ＨＣＴを含む。）を受けている、又はこれをかつて受けたことがある。一部の実施形態において、改変免疫細胞は、非骨髄破壊的造血細胞移植の、少なくとも２カ月後～少なくとも３カ月後に投与されうる。当技術分野において、ＨＣＴを実施するための技法及びレジメンが公知であり、臍帯血に由来する細胞、骨髄又は末梢血、造血幹細胞、動員幹細胞又は羊水に由来する細胞など、任意の適切なドナー細胞の移植を含みうる。したがって、ある特定の実施形態において、本開示の改変免疫細胞は、改変ＨＣＴ療法において、造血幹細胞と共に投与される場合もあり、この直後に投与される場合もある。一部の実施形態において、ＨＣＴは、ＨＬＡ構成要素をコードする遺伝子の染色体ノックアウト、ＴＣＲの構成要素又はこれらの両方をコードする遺伝子の染色体ノックアウトを含むドナー造血細胞を含む。

【0219】

一部の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質を施される対象は、かつて、リンパ球枯渇化学療法を受けたことがある。さらなる実施形態において、リンパ球枯渇化学療法は、シクロホスファミド、フルダラビン、抗胸腺細胞グロブリン又はこれらの組合せを含む。

【0220】

ある特定の実施形態において、対象は、かつて、ＡＭＬのための治療を受けたことがある、又はＡＭＬを発症する若しくはＡＭＬを進行させる危険性がある。

【0221】

本開示に従う方法は、１つ以上のさらなる薬剤を投与して、組合せ療法により、疾患又は障害を処置するステップをさらに含みうる。一部の実施形態において、方法は、改変免疫細胞又は結合性タンパク質を、免疫チェックポイント阻害剤と共に（共時的に、同時に、又は逐次的に）投与するステップをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、改変免疫細胞を、刺激性免疫チェックポイント剤のアゴニストと共に投与するステップを含む。さらなる実施形態において、組合せ療法は、改変免疫細胞を、化学療法剤、放射線療法、手術、抗体又はこれらの任意の組合せなどの二次療法と共に投与するステップを含む。

【0222】

本明細書において使用される「免疫抑制剤（ｉｍｍｕｎｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｇｅｎｔ）」又は「免疫抑制剤（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｇｅｎｔ）」という用語は、免疫応答を制御又は抑制する一助となる阻害性シグナルをもたらす、１つ以上の細胞、タンパク質、分子、化合物又は複合体を指す。例えば、免疫抑制剤は、免疫刺激を、部分的に、若しくは全面的に遮断する；免疫活性化を低下させる、これを防止する、若しくはこれを遅延させる；又は免疫抑制を増大させる、これを活性化させる、若しくはこれを上方調節する分子を含む。ターゲティングする（例えば、免疫チェックポイント阻害剤により）例示的な免疫抑制剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、ＰＶＲ１Ｇ（ＣＤ１１２Ｒ）、ＰＶＲＬ２、アデノシン、Ａ２ａＲ、免疫抑制サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－３５）、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５、Ｔｒｅｇ細胞又はこれらの任意の組合せを含む。

【0223】

免疫抑制剤の阻害剤（また、免疫チェックポイント阻害剤とも称される）は、化合物、抗体、抗体断片若しくは融合ポリペプチド（例えば、ＣＴＬＡ４－Ｆｃ又はＬＡＧ３－ＦｃなどのＦｃ融合）、アンチセンス分子、リボザイム若しくはＲＮＡｉ分子又は低分子量有機分子でありうる。本明細書において開示される実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、改変免疫細胞又は結合性タンパク質を、単独における、又は任意の組合せにおける以下の免疫抑制性構成要素のうちのいずれか１つに対する、１つ以上の阻害剤と共に含みうる。

【0224】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、ＰＤ－１阻害剤、例えば、ピジリズマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０（旧称：ＡＭＰ－５１４）、ＡＭＰ－２２４、ＢＭＳ－９３６５５８又はこれらの任意の組合せなど、ＰＤ－１特異的抗体又はその結合性断片と組み合わせて使用される。さらなる実施形態において、本開示の改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、ＢＭＳ－９３６５５９、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アテゾリズマブ（ＲＧ７４４６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ又はこれらの任意の組合せなど、ＰＤ－Ｌ１特異的抗体又はその結合性断片と組み合わせて使用される。

【0225】

ある特定の実施形態において、本開示の改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＩＭＰ７０１、９Ｈ１２、ＢＭＳ－９８６０１６又はこれらの任意の組合せなどのＬＡＧ３阻害剤と組み合わせて使用される。

【0226】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、ＣＴＬＡ４の阻害剤と組み合わせて使用される。特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ融合タンパク質（例えば、アバタセプト、ベラタセプト）又はこれらの任意の組合せなど、ＣＴＬＡ４特異的抗体又はその結合性断片と組み合わせて使用される。

【0227】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、エノブリツズマブ（ＭＧＡ２７１）、３７６．９６又はこれらの両方など、Ｂ７－Ｈ３特異的抗体又はその結合性断片と組み合わせて使用される。Ｂ７－Ｈ４抗体の結合性断片は、例えば、Ｄａｎｇａｊら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７３：４８２０、２０１３において記載されている、ｓｃＦｖ又はその融合タンパク質のほか、米国特許第９，５７４，０００号並びにＰＣＴ公開ＷＯ２０１６／４０７２４Ａ１及び同ＷＯ２０１３／０２５７７９Ａ１において記載されている結合性断片でありうる。

【0228】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、ＣＤ２４４の阻害剤と組み合わせて使用される。

【0229】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、ＢＬＴＡ、ＨＶＥＭ、ＣＤ１６０又はこれらの任意の組合せの阻害剤と組み合わせて使用される。抗ＣＤ－１６０抗体については、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１０／０８４１５８において記載されている。

【0230】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、ＴＩＭ３の阻害剤と組み合わせて使用される。

【0231】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、Ｇａｌ９の阻害剤と組み合わせて使用される。

【0232】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、デコイアデノシン受容体など、アデノシンシグナル伝達の阻害剤と組み合わせて使用される。

【0233】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、Ａ２ａＲの阻害剤と組み合わせて使用される。

【0234】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、イリルマブ（ＢＭＳ－９８６０１５）など、ＫＩＲの阻害剤と組み合わせて使用される。

【0235】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞は、阻害性サイトカイン（典型的に、ＴＧＦβ以外のサイトカイン）又はＴｒｅｇの発生若しくは活性の阻害剤と組み合わせて使用される。

【0236】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、レボ－１－メチルトリプトファン、エパカドスタット（ＩＮＣＢ０２４３６０；Ｌｉｕら、Ｂｌｏｏｄ １１５：３５２０～３０、２０１０）、エブセレン（Ｔｅｒｅｎｔｉｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．４９：５９１～６００、２０１０）、インドキシモド、ＮＬＧ９１９（Ｍａｕｔｉｎｏら、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１３年第１０４回年次大会、２０１３年４月６～１０日）、１－メチル－トリプトファン（１－ＭＴ）－チラ－パザミン又はこれらの任意の組合せなど、ＩＤＯ阻害剤と組み合わせて使用される。

【0237】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、Ｎ（オメガ）－ニトロ－Ｌ－アルギニンメチルエステル（Ｌ－ＮＡＭＥ）、Ｎ－オメガ－ヒドロキシ－ノル－ｌ－アルギニン（ノル－ＮＯＨＡ）、Ｌ－ＮＯＨＡ、２（Ｓ）－アミノ－６－ボロノヘキサン酸（ＡＢＨ）、Ｓ－（２－ボロノエチル）－Ｌ－システイン（ＢＥＣ）又はこれらの任意の組合せなど、アルギナーゼ阻害剤と組み合わせて使用される。

【0238】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、ＣＡ－１７０（Ｃｕｒｉｓ、Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ、Ｍａｓｓ．）など、ＶＩＳＴＡの阻害剤と組み合わせて使用される。

【0239】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞は、例えば、ＣＯＭ９０２（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ、Ｔｏｒｏｎｔｏ、Ｏｎｔａｒｉｏ Ｃａｎａｄａ）など、ＴＩＧＩＴの阻害剤、例えば、ＣＯＭ７０１（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ）など、ＣＤ１５５の阻害剤又はこれらの両方と組み合わせて使用される。

【0240】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、ＰＶＲＩＧ、ＰＶＲＬ２又はこれらの両方の阻害剤と組み合わせて使用される。抗ＰＶＲＩＧ抗体については、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１６／１３４３３３において記載されている。抗ＰＶＲＬ２抗体については、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１７／０２１５２６において記載されている。

【0241】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、ＬＡＩＲ１阻害剤と組み合わせて使用される。

【0242】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５又はこれらの任意の組合せの阻害剤と組み合わせて使用される。

【0243】

ある特定の実施形態において、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、刺激性免疫チェックポイント分子の活性を増大させる（すなわち、アゴニストである）薬剤と組み合わせて使用される。例えば、改変免疫細胞又は結合性タンパク質は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニスト（例えば、ウレルマブなど）、ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）アゴニスト（例えば、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ６３８３又はＭＥＤＩ０５６２など）、レナリドミド、ポマリドミド、ＣＤ２７アゴニスト（例えば、ＣＤＸ－１１２７など）、ＣＤ２８アゴニスト（例えば、ＴＧＮ１４１２、ＣＤ８０又はＣＤ８６など）、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ＣＰ－８７０，８９３、ｒｈｕＣＤ４０Ｌ又はＳＧＮ－４０など）、ＣＤ１２２アゴニスト（例えば、ＩＬ－２など）、ＧＩＴＲのアゴニスト（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１６／０５４６３８において記載されているヒト化モノクローナル抗体など）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）のアゴニスト（例えば、ＧＳＫ３３５９６０９、ｍＡｂ ８８．２、ＪＴＸ－２０１１、Ｉｃｏｓ １４５－１、Ｉｃｏｓ ３１４－８又はこれらの任意の組合せなど）と組み合わせて使用されうる。本明細書において開示される実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、改変免疫細胞又は結合性タンパク質を、前出のうちのいずれかを、単独において、又は任意の組合せにおいて含む、刺激性免疫チェックポイント分子の１つ以上のアゴニストと共に投与するステップを含みうる。

【0244】

ある特定の実施形態において、組合せ療法は、改変免疫細胞又は結合性タンパク質及び非炎症性充実性腫瘍により発現されるがん抗原に特異的な抗体又はその抗原結合性断片、放射線処置、手術、化学療法剤、サイトカイン、ＲＮＡｉ又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上を含む二次療法を含む。

【0245】

ある特定の実施形態において、組合せ療法は、改変免疫細胞又は結合性タンパク質を投与するステップ及び放射線処置又は手術をさらに行うステップを含む。放射線療法は、当技術分野で周知であり、ガンマ照射などのＸ線療法及び放射線医薬療法を含む。対象における所与のがんの処置に適切な手術及び手技は、当業者に周知である。

【0246】

ある特定の実施形態において、組合せ療法は、改変免疫細胞又は結合性タンパク質を投与するステップ及び化学療法剤をさらに投与するステップを含む。化学療法剤は、クロマチン機能阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害薬、ＤＮＡ損傷剤、代謝拮抗剤（葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアナログ、プリンアナログ及び糖修飾アナログなど）ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡ相互作用剤（挿入剤など）及びＤＮＡ修復阻害剤を含むがこれらに限定されない。例示的な化学療法剤は、限定せずに述べると、以下の群：ピリミジンアナログ（５－フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビン及びシタラビン）及びプリンアナログ、葉酸アンタゴニスト及び類縁の阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン及び２－クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））などの代謝拮抗剤／抗がん剤；ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン及びビノレルビン）などの天然生成物、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン及びナベルビンなどの微小管撹乱剤、エピジポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）、ＤＮＡ損傷剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、シトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミン、オキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メルクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テモゾロミド、テニポシド、トリエチレンチオホスホルアミド及びエトポシド（ＶＰ １６））を含む抗増殖剤／抗有糸分裂剤；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）及びマイトマイシンなどの抗生剤；酵素（Ｌ－アスパラギンを、全身的に代謝し、それら自身のアスパラギンを合成する能力を有さない細胞を欠乏させる、Ｌ－アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロホスファミド及びアナログ、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミン及びメチルメラミン（ヘキサメチルメラミン及びチオテパ）、スルホン酸アルキル（ブスルファン）、ニトロソウレア（カルムスチン（ＢＣＮＵ）及びアナログ、ストレプトゾシン）、トリアゼン（ダカルバジン（ＤＴＩＣ））などの抗増殖／抗有糸分裂アルキル化剤；葉酸アナログ（メトトレキセート）などの抗増殖／抗有糸分裂代謝拮抗剤；白金配位錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモンアナログ（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）及びアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾール）；抗凝固剤（ヘパリン、合成ヘパリン塩及び他のトロンビン阻害剤）；線溶剤（組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ及びウロキナーゼなど）、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ；抗遊走剤；抗分泌剤（ブレフェルディン）；免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ－５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；抗血管新生化合物（ＴＮＰ４７０、ゲニステイン）及び増殖因子阻害剤（血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤；線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アンジオテンシン受容体遮断剤；一酸化窒素ドナー；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ、リツキシマブ）；キメラ抗原受容体；細胞周期阻害剤及び分化誘導剤（トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）及びミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン及びプレドニゾロン）；増殖因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；ミトコンドリア機能不全誘導剤、コレラ毒素などの毒素、リシン、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素、ボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）アデニル酸シクラーゼ毒素又はジフテリア毒素及びカスパーゼ活性化因子；並びにクロマチン撹乱剤を含む。

【0247】

サイトカインは、宿主免疫応答を、抗がん活性へと向かうように操作するのに使用されうる。例えば、Ｆｌｏｒｏｓ及びＴａｒｈｉｎｉ、Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．４２（４）：５３９～５４８、２０１５を参照。免疫による抗がん応答又は抗腫瘍応答を促進するために有用なサイトカインは、例えば、ＩＦＮ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２４及びＧＭ－ＣＳＦを、単独において、又は本開示の改変免疫細胞若しくは結合性タンパク質との任意の組合せにおいて含む。

【0248】

なおさらなる態様において、本開示の組成物を製造するための方法が提供される。ある特定の実施形態において、方法は、（ｉ）本開示のベクターにより形質導入された宿主細胞のアリコートを、（ｉｉ）薬学的に許容される担体と組み合わせるステップを含む。ある特定の実施形態において、本開示のベクターは、養子移入療法（例えば、がん抗原をターゲティングする）における使用のために、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）にトランスフェクトする／宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）へと形質導入するのに使用される。

【0249】

一部の実施形態において、方法は、アリコート分割する前に、形質導入された宿主細胞を培養するステップ及び形質導入された細胞を、ベクターを組み込んだ（すなわち、ベクターを発現する）細胞として選択するステップをさらに含む。さらなる実施形態において、方法は、培養及び選択の後において、アリコート分割する前に、形質導入された宿主細胞を拡大するステップを含む。本方法についての実施形態のうちのいずれかにおいて、製造された組成物又は単位用量は、後の使用のために凍結させられうる。例えば、造血幹細胞、Ｔ細胞、初代Ｔ細胞、Ｔ細胞系、ＮＫ細胞又はＮＫ－Ｔ細胞を含む、任意の適切な宿主細胞が、本方法に従う組成物又は単位用量を製造するために使用されうる。具体的な実施形態において、方法は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞又はこれらの両方である宿主細胞を含む。

【0250】

本開示はまた、以下の例示的な実施形態も含む。

【0251】

実施形態１．結合性タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変免疫細胞であって、コードされる結合性タンパク質が、（ａ）配列番号２８、１９、２２若しくは２５のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３α）を含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン又はその変異体及びＴＣＲ β鎖可変（Ｖβ）ドメイン、又は（ｂ）配列番号４０、３１、３４若しくは３７のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３β）を含むＴＣＲ Ｖβドメイン又はその変異体及びＴＣＲ Ｖαドメイン、又は（ｃ）（ａ）のＴＣＲ Ｖαドメイン及び（ｂ）のＴＣＲ Ｖβドメインを含み、コードされる結合性タンパク質が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体に結合することが可能であり、任意に、ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１を含む、改変免疫細胞。

【0252】

実施形態２．コードされる結合性タンパク質が、４．０以上又は４．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である、実施形態１に記載の改変免疫細胞。

【0253】

実施形態３．コードされる結合性タンパク質が、５．０以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である、実施形態１又は２に記載の改変免疫細胞。

【0254】

実施形態４．コードされる結合性タンパク質が、５．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である、実施形態１～３のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0255】

実施形態５．コードされる結合性タンパク質が、６．０以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である、実施形態１～４のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0256】

実施形態６．コードされる結合性タンパク質が、６．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ_５０を伴って、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である、実施形態１～５のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0257】

実施形態７．ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊２０１を含む、実施形態１～６のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0258】

実施形態８．改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－４μＭ、１０^－５μＭ又は１０^－６μＭとして、アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞（例えば、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１＋）と共に、４時間にわたり共培養される場合に、集団中の改変免疫細胞のうちの５０％以上が、ＩＦＮ－γを産生し、抗原提示細胞が、任意に、Ｔ２細胞を含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0259】

実施形態９．改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－２μＭとして、アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に共培養される（例えば、約２４時間にわたり）場合に、集団中の改変免疫細胞のうちの１０％以上が、Ｎｕｒ７７^＋であり、抗原提示細胞が、任意に、Ｔ２細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞又はこれらの両方を含む、実施形態１～８のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0260】

実施形態１０．改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－２μＭとして、アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に（例えば、約２４時間にわたり）共培養される場合に、集団中の改変免疫細胞のうちの１５％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、実施形態９に記載の改変免疫細胞。

【0261】

実施形態１１．改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－２μＭとして、アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に（例えば、約２４時間にわたり）共培養される場合に、集団中の改変免疫細胞のうちの２０％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、実施形態９又は１０に記載の改変免疫細胞。

【0262】

実施形態１２．改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－２μＭとして、アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に（例えば、約２４時間にわたり）共培養される場合に、集団中の改変免疫細胞のうちの４０％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、実施形態９～１１のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0263】

実施形態１３．改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－２μＭとして、アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に（例えば、約２４時間にわたり）共培養される場合に、集団中の改変免疫細胞のうちの５０％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、実施形態９～１２のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0264】

実施形態１４．改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－３μＭとして、アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に（例えば、約２４時間にわたり）共培養される場合に、集団中の改変免疫細胞のうちの１０％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0265】

実施形態１５．改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を１０^－３μＭとして、アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に（例えば、約２４時間にわたり）共培養される場合に、集団中の改変免疫細胞のうちの１５％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、実施形態１４に記載の改変免疫細胞。

【0266】

実施形態１６．改変免疫細胞の集団が、共培養物中のペプチド濃度を約１０^－３μＭとして、アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）を含むか又はそれからなるペプチドをパルスされた抗原提示細胞と共に（例えば、約２４時間にわたり）共培養される場合に、集団中の改変免疫細胞のうちの２０％以上が、Ｎｕｒ７７^＋である、実施形態１４又は１５に記載の改変免疫細胞。

【0267】

実施形態１７．改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に３０：１の比で存在する場合に、試料中のＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの１１％以上を死滅させることが可能である、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0268】

実施形態１８．改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に３０：１の比で存在する場合に、試料中のＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの１２％以上を死滅させることが可能である、実施形態１７に記載の改変免疫細胞。

【0269】

実施形態１９．改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に３０：１の比で存在する場合に、試料中のＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの１４％以上を死滅させることが可能である、実施形態１７又は１８に記載の改変免疫細胞。

【0270】

実施形態２０．改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に３０：１の比で存在する場合に、試料中のＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの１５％以上を死滅させることが可能である、実施形態１７～１９のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0271】

実施形態２１．改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に３０：１の比で存在する場合に、試料中のＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの２０％以上を死滅させることが可能である、実施形態１７～２０のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0272】

実施形態２２．改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に３０：１の比で存在する場合に、試料中のＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの２５％以上を死滅させることが可能である、実施形態１７～２１のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0273】

実施形態２３．改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に１０：１の比で存在する場合に、試料中のＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの１０％以上を死滅させることが可能である、実施形態１～２２のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0274】

実施形態２４．改変免疫細胞とＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞とが試料中に１：１の比で存在する場合に、試料中のＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のうちの約５％以上を死滅させることが可能である、実施形態１～２３のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0275】

実施形態２５．改変免疫細胞とＰａｎｃ１細胞とが３０：１の比で存在する場合に、試料中のＰａｎｃ１細胞のうちの２１％以上を死滅させることが可能である、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0276】

実施形態２６．改変免疫細胞とＰａｎｃ１細胞とが３０：１の比で存在する場合に、試料中のＰａｎｃ１細胞のうちの２２％以上を死滅させることが可能である、実施形態２５に記載の改変免疫細胞。

【0277】

実施形態２７．改変免疫細胞とＰａｎｃ１細胞とが３０：１の比で存在する場合に、試料中のＰａｎｃ１細胞のうちの２３％以上を死滅させることが可能である、実施形態２５又は２６に記載の改変免疫細胞。

【0278】

実施形態２８．改変免疫細胞とＰａｎｃ１細胞とが３０：１の比で存在する場合に、試料中のＰａｎｃ１細胞のうちの２４％以上を死滅させることが可能である、実施形態２５～２７のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0279】

実施形態２９．改変免疫細胞とＰａｎｃ１細胞とが３０：１の比で存在する場合に、試料中のＰａｎｃ１細胞のうちの２５％以上を死滅させることが可能である、実施形態２５～２８のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0280】

実施形態３０．配列番号８２に示されるアミノ酸配列を有するＴＣＲα鎖及び配列番号８３に示されるアミノ酸配列を有するＴＣＲβ鎖を含むＴ細胞受容体をコードするポリヌクレオチドを含む参照免疫細胞と比較して、４時間にわたる共培養において、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１^＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞及び／又はＰａｎｃ１細胞に対する増大した殺滅活性を有する、実施形態１～２９のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0281】

実施形態３１．コードされる結合性タンパク質が、ＣＤ８に非依存的に、又はＣＤ８の非存在下において、細胞表面におけるＷＴ－１ペプチド：ＨＬＡ複合体に結合することが可能である、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0282】

実施形態３２．（ｉ）コードされるＶβドメインが、配列番号１６、５、６、７、８、１３、１４若しくは１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（ｉｉ）コードされるＶαドメインが、配列番号１２、１、２、３、４、９、１０若しくは１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0283】

実施形態３３．（ｉ）ＣＤＲのうちの少なくとも３つ又は４つが、突然変異を有さず；（ｉｉ）突然変異を有するＣＤＲが、２つ以下のみのアミノ酸置換、５つ以下の連続アミノ酸欠失又はこれらの組合せを有し；（ｉｉｉ）コードされる結合性タンパク質が、任意に、４．０、４．５、５．０、５．１、５．２．、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５以上のインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮγ）産生ｐＥＣ_５０を伴って、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合する能力を保持することを条件として、コードされるＶβドメインが、配列番号１６、５、６、７、８、１３、１４若しくは１５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、及び／又はコードされるＶαドメインが、配列番号１２、１、２、３、４、９、１０若しくは１１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0284】

実施形態３４．（ｉ）コードされるＣＤＲ３βが、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、コードされるＣＤＲ３αが、配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる；（ｉｉ）コードされるＣＤＲ３βが、配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、コードされるＣＤＲ３αが、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる；（ｉｉｉ）コードされるＣＤＲ３βが、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、コードされるＣＤＲ３αが、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、又は（ｉｖ）コードされるＣＤＲ３βが、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、コードされるＣＤＲ３αが、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0285】

実施形態３５．（ｉ）コードされるＶβドメインが、配列番号３８、２９、３２若しくは３５のうちのいずれか１つのＣＤＲ１βアミノ酸配列及び／又は配列番号３９、３０、３３若しくは３６のうちのいずれか１つのＣＤＲ２βアミノ酸配列を含む；並びに／又は（ｉｉ）コードされるＶαドメインが、配列番号２６、１７、２０若しくは２３のうちのいずれか１つのＣＤＲ１αアミノ酸配列及び／又は配列番号２７、１８、２１若しくは２４のうちのいずれか１つのＣＤＲ２αアミノ酸配列を含む、実施形態１～３４のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0286】

実施形態３６．コードされるＴＣＲ Ｖαドメイン及びＴＣＲ Ｖβドメインが、（ｉ）それぞれ、配列番号２６～２８及び３８～４０；（ｉｉ）それぞれ、配列番号２３、２７、２８及び３８～４０；（ｉｉｉ）それぞれ、配列番号１７～１９及び２９～３１；（ｉｖ）それぞれ、配列番号２０～２２及び３２～３４又は（ｖ）それぞれ、配列番号２３～２５及び３５～３７のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含む、実施形態１～３５のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0287】

実施形態３７．コードされるＴＣＲ Ｖβドメインが、（ｉ）ＴＲＢＪ０２－０３遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列及び／又は（ｉｉ）ＴＲＢＶ０６－０５遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列、ＴＲＢＶ０７－０９遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列若しくはＴＲＢＶ２０－０１遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0288】

実施形態３８．コードされるＴＣＲ Ｖαドメインが、（ｉ）ＴＲＡＪ４３遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列及び／又は（ｉｉ）ＴＲＡＶ２０－０２遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列；ＴＲＡＶ３８ＤＶ０８遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列若しくはＴＲＡＶ３８－０１遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む、実施形態１～３７のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0289】

実施形態３９．
（ｉ）コードされるＴＣＲ Ｖβドメインが、ＴＲＢＪ０２－０３遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む；及び（ｉｉ）コードされるＴＣＲ Ｖαドメインが、ＴＲＡＪ４３遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む、実施形態３８に記載の改変免疫細胞。

【0290】

実施形態４０．
（ｉ）コードされるＴＣＲ Ｖβドメインが、ＴＲＢＶ０６－０５遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む；及び（ｉｉ）コードされるＴＣＲ Ｖαドメインが、ＴＲＡＶ２０遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む、実施形態３８に記載の改変免疫細胞。

【0291】

実施形態４１．
（ｉ）コードされるＴＣＲ Ｖβドメインが、ＴＲＢＶ０７－０９遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む；及び（ｉｉ）コードされるＴＣＲ Ｖαドメインが、ＴＲＡＶ３８ＤＶ０８遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む、実施形態３８に記載の改変免疫細胞。

【0292】

実施形態４２．
（ｉ）コードされるＴＣＲ Ｖβドメインが、ＴＲＢＶ２０－０１遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む；及び（ｉｉ）コードされるＴＣＲ Ｖαドメインが、ＴＲＡＶ３８－０１遺伝子セグメントに従うアミノ酸配列を含む、実施形態３８に記載の改変免疫細胞。

【0293】

実施形態４３．（ｉ）コードされるＶβドメインが、配列番号１６若しくは８に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、コードされるＶαドメインが、配列番号１２若しくは４に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる；（ｉｉ）コードされるＶβドメインが、配列番号１３若しくは５に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、コードされるＶαドメインが、配列番号９若しくは１に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる；（ｉｉｉ）コードされるＶβドメインが、配列番号１４若しくは６に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、コードされるＶαドメインが、配列番号１０若しくは２に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、又は（ｉｖ）コードされるＶβドメインが、配列番号１５若しくは７に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、コードされるＶαドメインが、配列番号１１若しくは３に示されるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、実施形態１～４２のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0294】

実施形態４４．コードされる結合性タンパク質が、（ｉ）ＴＣＲα鎖定常ドメイン（Ｃα）若しくはその断片及び／又は（ｉｉ）ＴＣＲβ鎖定常ドメイン（Ｃβ）若しくはその断片をさらに含む、実施形態１～４３のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0295】

実施形態４５．コードされるＣαが、配列番号４１～４４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態４４に記載の改変免疫細胞。

【0296】

実施形態４６．コードされるＣβが、配列番号４５に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態４４又は４５に記載の改変免疫細胞。

【0297】

実施形態４７．コードされる結合性タンパク質が、（ｉ）配列番号６１若しくは５７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号５３若しくは４９に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲα鎖；（ｉｉ）配列番号５８若しくは５４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号５０若しくは４６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲα鎖；（ｉｉｉ）配列番号５９若しくは５５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号５１若しくは５２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲα鎖又は（ｉｖ）配列番号６０若しくは５６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号５２若しくは４８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなるＴＣＲα鎖を含む、実施形態４４～４６のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0298】

実施形態４８．コードされる結合性タンパク質が、ＴＣＲ、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）である、実施形態１～４７のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0299】

実施形態４９．免疫細胞が、ヒト免疫系細胞である、実施形態１～４８のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0300】

実施形態５０．免疫細胞が、Ｔ細胞、任意に、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^－ＣＤ８^－ダブルネガティブＴ細胞若しくはγδ Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、樹状細胞又はこれらの任意の組合せである、実施形態１～４９のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0301】

実施形態５１．Ｔ細胞が、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞又はこれらの任意の組合せである、実施形態５０に記載の改変免疫細胞。

【0302】

実施形態５２．結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、免疫細胞での発現についてコドン最適化されている、実施形態１～５１のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0303】

実施形態５３．結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、配列番号６２～７７のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチドを含む、実施形態１～５２のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0304】

実施形態５４．結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、（ｉ）配列番号７７に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド及び配列番号６９に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｉｉ）配列番号７４に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド及び配列番号６６に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｉｉｉ）配列番号７５に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド及び配列番号６７に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド又は（ｉｖ）配列番号７６に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド及び配列番号６８に示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチドを含む、実施形態５３に記載の改変免疫細胞。

【0305】

実施形態５５．結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、Ｖβコードポリヌクレオチドと、Ｖαコードポリヌクレオチドとの間に配置された自己切断型ペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１～５４のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0306】

実施形態５６．コードされる自己切断型ペプチドが、配列番号８４～８８のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態５５に記載の改変免疫細胞。

【0307】

実施形態５７．自己切断型ペプチドをコードするポリヌクレオチドが、配列番号８９～９３のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる、実施形態５５又は５６に記載の改変免疫細胞。

【0308】

実施形態５８．結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、５’末端から３’末端への（ＴＣＲβ鎖コードポリヌクレオチド）－（自己切断型ペプチドコードポリヌクレオチド）－（ＴＣＲα鎖コードポリヌクレオチド）の構造を有する、実施形態５５～５７のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0309】

実施形態５９．結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、配列番号７８～８１のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチドを含む、実施形態５５～５８のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0310】

実施形態６０．結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、配列番号７８～８１のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列を含むか又はそれからなるポリヌクレオチドを含む、実施形態５３に記載の改変免疫細胞。

【0311】

実施形態６１．（ｉ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体α鎖であるか、若しくはそれを含む異種ポリヌクレオチド；（ｉｉ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体β鎖であるか、若しくはそれを含む異種ポリヌクレオチド又は（ｉｉｉ）（ｉ）のポリヌクレオチド及び（ｉｉ）のポリヌクレオチドをさらに含み、任意に、宿主細胞が、ＣＤ４＋ Ｔ細胞を含む、実施形態１～６０のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0312】

実施形態６２．
（ａ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体α鎖であるか、又はそれを含む異種ポリヌクレオチド；（ｂ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体β鎖であるか、又はそれを含む異種ポリヌクレオチド及び（ｃ）（ａ）のポリヌクレオチドと（ｂ）のポリヌクレオチドとの間に配置された自己切断型ペプチドをコードするポリヌクレオチド
を含む、実施形態６１に記載の宿主細胞。

【0313】

実施形態６３．免疫細胞が、ＰＤ－１遺伝子、ＬＡＧ３遺伝子、ＴＩＭ３遺伝子、ＣＴＬＡ４遺伝子、ＨＬＡ構成要素遺伝子、ＴＣＲ構成要素遺伝子又はこれらの任意の組合せの染色体遺伝子ノックアウトを含む、実施形態１～６２のいずれか１つに記載の改変免疫細胞。

【0314】

実施形態６４．染色体遺伝子ノックアウトが、α１マクログロブリン遺伝子、α２マクログロブリン遺伝子、α３マクログロブリン遺伝子、β１ミクログロブリン遺伝子又はβ２ミクログロブリン遺伝子又はこれらの任意の組合せから選択されるＨＬＡ構成要素遺伝子のノックアウトを含む、実施形態６３に記載の改変免疫細胞。

【0315】

実施形態６５．染色体遺伝子ノックアウトが、ＴＣＲα可変領域遺伝子、ＴＣＲβ可変領域遺伝子、ＴＣＲ定常領域遺伝子又はこれらの任意の組合せから選択されるＴＣＲ構成要素遺伝子のノックアウトを含む、実施形態６３又は６４に記載の改変免疫細胞。

【0316】

実施形態６６．結合性タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチドであって、コードされる結合性タンパク質が、ＴＣＲ Ｖαドメイン及びＴＣＲ Ｖβドメインを含み、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能であり、（ｉ）コードされるＶαドメインが、配列番号２８、１９、２２又は２５のうちのいずれか１つに示される、ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む；（ｉｉ）コードされるＶβドメインが、配列番号４０、３１、３４又は３７のうちのいずれか１つに示される、ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む；（ｉｉｉ）コードされるＶαドメインが、配列番号２６、１７、２０又は２３のうちのいずれか１つに示される、ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む；（ｉｖ）コードされるＶβドメインが、配列番号３８、３２又は３５のうちのいずれか１つに示される、ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む；（ｖ）コードされるＶαドメインが、配列番号２７、１８、２１又は２４のうちのいずれか１つに示される、ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む；（ｖｉ）コードされるＶβドメインが、配列番号３９、３０、３３又は３６のうちのいずれか１つに示される、ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む；（ｖｉｉ）コードされるＶαドメインが、配列番号４、１～３、１２又は９～１１のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる；（ｖｉｉｉ）コードされるＶβドメインが、配列番号８、５～７、１６又は１３～１５のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる；（ｉｘ）コードされるＴＣＲ Ｖαが、ＴＣＲα鎖内に含まれ、ＴＣＲα鎖が、配列番号５３及び４６～５２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる；（ｘ）コードされるＴＣＲ Ｖβが、ＴＣＲβ鎖内に含まれ、ＴＣＲβ鎖が、配列番号６１及び５４～６０のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる、又は（ｘｉ）（ｉ）～（ｘ）の任意の組合せである、単離ポリヌクレオチド。

【0317】

実施形態６７．ポリヌクレオチドが、宿主細胞での発現についてコドン最適化されており、任意に、宿主細胞が、ヒトＴ細胞、ヒトＮＫ細胞又はヒトＮＫ－Ｔ細胞である、実施形態６６に記載の単離ポリヌクレオチド。

【0318】

実施形態６８．ポリヌクレオチドが、配列番号６２～８１のうちのいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチドを含む、実施形態６６又は６７に記載の単離ポリヌクレオチド。

【0319】

実施形態６９．実施形態６６～６８のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。

【0320】

実施形態７０．レンチウイルスベクター又はレトロウイルスベクターである、実施形態６９に記載のベクター。

【0321】

実施形態７１．実施形態６６～６８のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを含み、コードされる結合性タンパク質を発現することが可能な宿主細胞。

【0322】

実施形態７２．（ｉ）実施形態１～６５のいずれか１つに記載の改変免疫細胞；（ｉｉ）実施形態６６～６８のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド；（ｉｉｉ）実施形態６９若しくは７０に記載のベクター及び／又は（ｉｖ）実施形態７１に記載の宿主細胞；並びに薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤を含む組成物。

【0323】

実施形態７３．
（ｉ）実施形態１～６５のいずれか１つに記載の改変免疫細胞；並びに（ｉｉ）ＴＣＲ Ｖα及びＴＣＲ Ｖβを含み、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号１００）：ＨＬＡ複合体に特異的に結合することが可能である結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む免疫細胞であって、任意に、ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１を含み、任意に、（ｉ）の改変免疫細胞と、（ｉｉ）の免疫細胞とが、各々独立に、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及びＮＫ－Ｔ細胞から選択される、免疫細胞を含む、実施形態７２に記載の組成物。

【0324】

実施形態７４．（ｉｉ）における免疫細胞の結合性タンパク質が、（ａ）それぞれ、配列番号１０１～１０３及び１０５～１０７のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）Ｖαが、配列番号１０４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）Ｖβが、配列番号１０８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる；（ｂ）それぞれ、配列番号１０９～１１０及び１１３～１１５のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）Ｖαが、配列番号１１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）Ｖβが、配列番号１１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる又は（ｃ）それぞれ、配列番号１１７～１１９及び１２１～１２３のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）Ｖαが、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）Ｖβが、配列番号１２４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる実施形態７３に記載の組成物。

【0325】

実施形態７５．ＷＴ－１の発現と関連する疾患又は障害を有する対象を処置するための方法であって、有効量の、（ｉ）実施形態１～６５のいずれか１つに記載の改変免疫細胞；（ｉｉ）実施形態６６～６８のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド；（ｉｉｉ）実施形態６９若しくは７０に記載のベクター；（ｉｖ）実施形態７１に記載の宿主細胞及び／又は（ｖ）実施形態７２～７４のいずれか１つに記載の組成物を対象に投与するステップを含む、方法。

【0326】

実施形態７６．ＴＣＲ Ｖα及びＴＣＲ Ｖβを含み、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号１００）：ＨＬＡ複合体に特異的に結合することが可能である結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む免疫細胞を施されたことがある、これらを施されている、又はこれらを施される対象へと、実施形態１～６５のいずれか１つに記載の改変免疫細胞を投与するステップを含み、任意に、ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１を含み、任意に、改変免疫細胞及び免疫細胞が、各々独立に、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及びＮＫ－Ｔ細胞から選択される、実施形態７５に記載の方法。

【0327】

実施形態７７．ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号１００）：ＨＬＡ複合体に特異的に結合することが可能な結合性タンパク質が、（ａ）それぞれ、配列番号１０１～１０３及び１０５～１０７のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）Ｖαが、配列番号１０４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）Ｖβが、配列番号１０８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる；（ｂ）それぞれ、配列番号１０９～１１０及び１１３～１１５のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）Ｖαが、配列番号１１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）Ｖβが、配列番号１１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる又は（ｃ）それぞれ、配列番号１１７～１１９及び１２１～１２３のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βのアミノ酸配列を含み、任意に、（１）Ｖαが、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、及び／又は（２）Ｖβが、配列番号１２４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するか、それを含むか、若しくはそれからなる、実施形態７６に記載の方法。

【0328】

実施形態７８．疾患又は障害が、血液悪性腫瘍又は固形がんである、実施形態７５～７７のいずれか１つに記載の方法。

【0329】

実施形態７９．血液悪性腫瘍が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病（難治性ＡＭＬ及び再発性ＡＭＬを含み、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病（例えば、好酸球増多症を伴う、又はこれを伴わない）、急性単球性白血病、急性赤白血病、及び急性巨核芽球性白血病を含むＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄球性白血病、慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）又は多発性骨髄腫（難治性ＭＭ及び再発性ＭＭを含むＭＭ）から選択される、実施形態７８に記載の方法。

【0330】

実施形態８０．固形がんが、胆管がん、膀胱がん、骨軟部組織癌、脳腫瘍、乳がん、乳癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸腺癌、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、胚性がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、胃腺癌、多形性膠芽腫、膠芽腫、黒色腫、びまん性腹膜中皮腫、悪性胸膜中皮腫、神経膠腫、星状細胞腫、婦人科腫瘍、頭頸部扁平上皮癌、肝がん、肝細胞癌、肺がん、非小細胞肺がん、悪性黒色腫、骨肉腫、卵巣がん（例えば、上皮卵巣がん、卵巣癌）、卵管がん、子宮内膜癌、膵がん、膵管腺癌、原発星状細胞腫瘍、原発甲状腺がん、前立腺がん、腎がん、腎細胞癌腫、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、骨原性肉腫、精巣生殖細胞腫瘍、尿路上皮がん、子宮肉腫、子宮癌肉腫又は子宮がんから選択される、実施形態７８に記載の方法。

【0331】

実施形態８１．改変免疫細胞が、異種ポリヌクレオチドを含むようにエクスビボで改変される、実施形態７５～８０のいずれか１つに記載の方法。

【0332】

実施形態８２．改変免疫細胞が、対象に対して、同種、同系又は自家である、実施形態７５～８１のいずれか１つに記載の方法。

【0333】

実施形態８３．改変免疫細胞が、造血前駆細胞又はヒト免疫系細胞である、実施形態７５～８２のいずれか１つに記載の方法。

【0334】

実施形態８４．免疫系細胞が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^－ＣＤ８^－ダブルネガティブＴ細胞、γδ Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞又はこれらの任意の組合せである、実施形態８３に記載の方法。

【0335】

実施形態８５．Ｔ細胞が、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞又はこれらの任意の組合せである、実施形態８４に記載の方法。

【0336】

実施形態８６．改変免疫細胞の複数回用量を対象に投与するステップを含む、実施形態７５～８５のいずれか１つに記載の方法。

【0337】

実施形態８７．複数回用量が、約２～約４週間の投与間隔で投与される、実施形態８６に記載の方法。

【0338】

実施形態８８．改変免疫細胞が、約１０^４個の細胞／ｋｇ～約１０^１１個の細胞／ｋｇの用量で対象に投与される、実施形態７５～８７のいずれか１つに記載の方法。

【0339】

実施形態８９．サイトカインを対象に投与するステップをさらに含む、実施形態７５～８８のいずれか１つに記載の方法。

【0340】

実施形態９０．サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１又はこれらの任意の組合せである、実施形態８９に記載の方法。

【0341】

実施形態９１．サイトカインが、ＩＬ－２であり、改変免疫細胞と共に同時に又は逐次的に投与される、実施形態９０に記載の方法。

【0342】

実施形態９２．対象に、サイトカイン投与前に少なくとも３回又は４回、改変免疫細胞が投与されることを条件として、サイトカインが逐次的に投与される、実施形態９１に記載の方法。

【0343】

実施形態９３．サイトカインが、ＩＬ－２であり、皮下投与される、実施形態８９～９２のいずれか１つに記載の方法。

【0344】

実施形態９４．対象が、免疫抑制治療を受けている、実施形態７５～９３のいずれか１つに記載の方法。

【0345】

実施形態９５．免疫抑制治療が、カルシニューリン阻害剤、コルチコステロイド、微小管阻害剤、低用量ミコフェノール酸プロドラッグ又はこれらの任意の組合せから選択される、実施形態９４に記載の方法。

【0346】

実施形態９６．対象が、非骨髄破壊的造血細胞移植又は骨髄破壊的造血細胞移植を受けたことがある、実施形態７５～９５のいずれか１つに記載の方法。

【0347】

実施形態９７．対象に、非骨髄破壊的造血細胞移植の少なくとも３カ月後に改変免疫細胞が投与される、実施形態９６に記載の方法。

【0348】

実施形態９８．対象に、骨髄破壊的造血細胞移植の少なくとも２カ月後に改変免疫細胞が投与される、実施形態９７に記載の方法。

【0349】

実施形態９９．対象が、ＡＭＬの治療を以前に受けたことがある、実施形態７５～９８のいずれか１つに記載の方法。

【0350】

実施形態１００．ＷＴ－１の発現と関連する疾患又は障害の処置における使用のための、（ｉ）実施形態１～６５のいずれか１つに記載の改変免疫細胞；（ｉｉ）実施形態６６～６８のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド；（ｉｉｉ）実施形態６９若しくは７０に記載のベクター及び／又は（ｉｖ）実施形態７１に記載の宿主細胞を含む組成物。

【0351】

実施形態１０１．ＷＴ－１の発現と関連する疾患又は障害の処置のための医薬の製造における使用のための、（ｉ）実施形態１～６５のいずれか１つに記載の改変免疫細胞；（ｉｉ）実施形態６６～６８のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド；（ｉｉｉ）実施形態６９若しくは７０に記載のベクター及び／又は（ｉｖ）実施形態７１に記載の宿主細胞を含む組成物。

【0352】

実施形態１０２．疾患又は障害が、血液悪性腫瘍又は固形がんである、実施形態１００又は１０１に記載の使用のための組成物。

【0353】

実施形態１０３．血液悪性腫瘍が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病（難治性ＡＭＬ及び再発性ＡＭＬを含み、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病（例えば、好酸球増多症を伴う、又はこれを伴わない）、急性単球性白血病、急性赤白血病、及び急性巨核芽球性白血病を含むＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄球性白血病、慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）又は多発性骨髄腫（難治性ＭＭ及び再発性ＭＭを含むＭＭ）から選択される、実施形態１０２に記載の使用のための組成物。

【0354】

実施形態１０４．固形がんが、胆管がん、膀胱がん、骨軟部組織癌、脳腫瘍、乳がん、乳癌腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸腺癌、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、胚性がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、胃腺癌、多形性膠芽腫、膠芽腫、黒色腫、びまん性腹膜中皮腫、悪性胸膜中皮腫、神経膠腫、星状細胞腫、婦人科腫瘍、頭頸部扁平上皮癌、肝がん、肝細胞癌、肺がん、非小細胞肺がん、悪性黒色腫、骨肉腫、卵巣がん（例えば、上皮卵巣がん、卵巣癌）、卵管がん、子宮内膜癌、膵がん、膵管腺癌、原発星状細胞腫瘍、原発甲状腺がん、前立腺がん、腎がん、腎細胞癌腫、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、骨原性肉腫、精巣生殖細胞腫瘍、尿路上皮がん、子宮肉腫、子宮癌肉腫又は子宮がんから選択される、実施形態１０２に記載の使用のための組成物。

【0355】

実施形態１０５．Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含む結合性タンパク質であって、Ｖαドメインが、（ｉ）配列番号２８、１９、２２又は２５若しくは２８のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３α）又はその変異体；（ｉｉ）配列番号２６、１７、２０若しくは２３のうちのいずれか１つのＣＤＲ１アミノ酸配列（ＣＤＲ１α）；（ｉｉｉ）配列番号２７、１８、２１若しくは２４のうちのいずれか１つのＣＤＲ２アミノ酸配列（ＣＤＲ２α）；（ｉｖ）配列番号１～４又は９～１２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列又は（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組合せを含む；Ｖβドメインが、（ｖｉ）配列番号４０、３１、３４若しくは３７のうちのいずれか１つに従うＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３β）又はその変異体；（ｖｉｉ）配列番号３８、２９、３２又は３５のうちのいずれか１つのＣＤＲ１アミノ酸配列（ＣＤＲ１β）；（ｖｉｉｉ）配列番号３９、３０、３３又は３６のうちのいずれか１つのＣＤＲ２アミノ酸配列（ＣＤＲ２β）；（ｉｘ）配列番号５～８又は１３～１６のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列又は（ｘ）（ｖｉ）～（ｘ）の任意の組合せを含み、実施形態１０５に記載の結合性タンパク質が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）：ＨＬＡ複合体に結合することが可能であり、任意に、ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１を含む、結合性タンパク質。

【0356】

実施形態１０６．（１）ＴＣＲα鎖定常ドメイン（Ｃα）若しくはその断片及び／又は（２）ＴＣＲβ鎖定常ドメイン（Ｃβ）若しくはその断片をさらに含む、実施形態１０５に記載の結合性タンパク質。

【0357】

実施形態１０７．Ｃαが、配列番号４１～４４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態１０６に記載の結合性タンパク質。

【0358】

実施形態１０８．Ｃβが、配列番号４５のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態１０６又は１０７に記載の結合性タンパク質。

【0359】

実施形態１０９．実施形態１０５～１０８のいずれか１つに記載の結合性タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチド。

【0360】

実施形態１１０．宿主細胞での発現についてコドン最適化されている、実施形態１０９に記載のポリヌクレオチド。

【0361】

実施形態１１１．実施形態１０９～１１０のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを含む改変免疫細胞であって、ポリヌクレオチドが、免疫細胞に対して異種である、改変免疫細胞。

【0362】

配列

【0363】

【化1】

【実施例】

【0364】

［実施例１］
ＷＴ－１ペプチドに特異的なＴＣＲの同定及び特徴付け
４例のドナーに由来するＣＤ８^＋Ｔ細胞を、ＷＴ－１ペプチドであるＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号９４）（Ｈｏ、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇら、２００６）によりパルスされた自家樹状細胞（ＤＣ）と共に培養した。Ｔ細胞系を、ＣＤ８非依存性（ＣＤ８ｉ）ＷＴ－１ペプチド：ＨＬＡ四量体と組み合わせ、染色し、高四量体染色細胞について分取した。四量体染色が高度な、合計４０のポリクローナルＴ細胞系を同定した。各ＴＣＲクローン型を定量するために、分取されたＴ細胞試料及び全非分取試料の画分の両方を、ＴＣＲレパートリー解析（Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により解析した。高四量体染色細胞の画分はまた、単一細胞ＲＮＡシーケンシング及びＴＣＲ対合（１０Ｘ ｇｅｎｏｍｉｃｓ）によっても解析した。分取集団内における各クローン型のエンリッチメント倍数の、非分取集団と対比した比較及び各クローン型によるＣＤ３表面発現により、２４のＴＣＲクローン型を、ＷＴ－１特異的クローン型として同定した（図１）。これらのうち、１０のＴＣＲクローン型を、合成のために選択した。候補ＴＣＲを発現するように、ＴＣＲα／ＴＣＲβ欠損Ｊ７６ Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞への形質導入を行った。相対ＷＴ－１ペプチド：ＨＬＡ四量体染色を、トランスジェニックＴＣＲの全表面発現についてのマーカーであるＣＤ３発現と比較して測定することにより、各候補ＴＣＲの、ＷＴ－１に対するアフィニティーを評価した。結果を、配列番号８２に従うα鎖及び配列番号８３に従うβ鎖を有する、ＷＴ－１ペプチド：ＨＬＡ特異的ＴＣＲを発現する細胞による結果と比較した。データを、図２Ａ～２Ｃに示す。

【0365】

Ｎｕｒ７７－ｔｏｍａｔｏ活性化マーカーを発現するＴＣＲ形質導入Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ペプチドの存在下における活性化について評価した。データを、図３Ａに示す。

【0366】

さらなる研究のために選択された、８つのＴＣＲのうちの１つを発現するように、ドナーＰＭＢＣから単離されたＣＤ８＋ Ｔ細胞への形質導入を行った。１週間後、形質導入された細胞を、ＷＴ－１ペプチド：ＨＬＡ四量体染色及びＣＤ８発現について分取した（図４Ａ）。四量体^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞を拡大し、ＩＦＮγの産生についてアッセイした。拡大された抗原特異的細胞を、滴定濃度のＷＴ－１ペプチドをパルスされたＴ２標的細胞と共に、４時間にわたり培養し、フローサイトメトリーにより、ＩＦＮγの産生を決定した（図４Ｂ）。各ＴＣＲについて、ペプチドに対するＥＣ_５０を計算するために、ＩＦＮγ産生細胞の百分率を、非線形回帰による用量反応曲線へと当てはめた（図４Ｃ）。

【0367】

ＥＣ_５０値が最も小さい２つのＴＣＲを発現するＴ細胞を、腫瘍細胞溶解を誘導する能力について、ＷＴ－１特異的参照ＴＣＲを発現するＴ細胞と比較した。ＨＬＡ－Ａ２を発現するように形質導入された腫瘍細胞系であるＭＤＡ－ＭＢ－４６８及び天然のＨＬＡ＿Ａ２^＋腫瘍細胞系であるＰａｎｃ－１に、^５１Ｃｒをロードした。腫瘍細胞標的に対する漸減用量のエフェクターＴ細胞に応答するＣｒの放出を測定することにより、ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞媒介性殺滅を計算した（図５Ａ及び５Ｂ）。

【0368】

例示的なＴＣＲ ＤＬ１０を発現するＴ細胞を、ＩＦＮ－γの産生（図６）及び腫瘍細胞系細胞の増殖を低減する能力（図７）についてさらに探索した。ＩＦＮ－γの産生のために、初代ＣＤ８＋ Ｔ細胞へと、参照ＴＣＲ又はＴＣＲＤＬ１０を形質導入し、図６に表示のペプチドをパルスされたＴ２標的細胞と共に培養した。４時間後、細胞内フローサイトメトリーにより、ＩＦＮγの産生について評価し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍにおける非線形回帰により、ＩＦＮγ陽性パーセントを、用量反応曲線へと当てはめた。腫瘍の増殖をコントロールする能力について評価するために、参照ＴＣＲ（配列番号８２に示されるアミノ酸配列を有するＴＣＲα鎖及び配列番号８３に示されるアミノ酸配列を有するＴＣＲβ鎖を含む）又はＴＣＲＤＬ１０を、初代ＣＤ８＋ Ｔ細胞へと形質導入し、ＩｎｃｕＣｙｔｅアッセイにおいて、ＨＬＡ－Ａ２＋ ＷＴ１＋膵臓腫瘍細胞系であるＰａｎｃ－１（赤色蛍光タンパク質を発現するように形質導入された）と共に、８：１の比、三連で培養し、細胞の増殖／生存を、７日間にわたりモニタリングした。誤差バーは、平均値の標準誤差を指し示す。

【0369】

上記において記載された多様な実施形態は、さらなる実施形態をもたらすように組み合わされうる。２０１９年８月２０日に出願された、米国特許仮出願第６２／８８９，５１９号を含む、本明細書において言及される、かつ／又は出願データシートにおいて列挙されている、米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願及び非特許刊行物の全ては、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込む。実施形態の態様は、必要な場合、多様な特許、出願及び刊行物の概念を利用して、なおさらなる実施形態をもたらすように改変されうる。

【0370】

上記の「発明を実施するための形態」に照らして、実施形態に対して、これらの変化及び他の変化がなされうる。一般に、以下の特許請求の範囲において、使用される用語は、特許請求の範囲を、本明細書及び特許請求の範囲において開示される、具体的実施形態へと限定するように理解されるべきではなく、このような特許請求の範囲が権利を与えられる均等物の全範囲と共に、全ての可能な実施形態を含むように理解されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示により限定されない。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7】

【配列表】

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【国際調査報告】