特表 2022-548018 放射性標識化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-11-16

(54)【発明の名称】放射性標識化合物

(51)【国際特許分類】

   C07D 498/04 20060101AFI20221109BHJP

   A61K 31/5383 20060101ALI20221109BHJP

   A61K 51/04 20060101ALI20221109BHJP

   G01T 1/161 20060101ALN20221109BHJP

【ＦＩ】

C07D498/04 112T

C07D498/04 CSP

A61K31/5383

A61K51/04 200

G01T1/161 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022516027

(86)(22)【出願日】2020-09-10

(85)【翻訳文提出日】2022-05-10

(86)【国際出願番号】 EP2020075259

(87)【国際公開番号】W WO2021048241

(87)【国際公開日】2021-03-18

(31)【優先権主張番号】19196878.3

(32)【優先日】2019-09-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】591003013

【氏名又は名称】エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー

【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ－ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ

(71)【出願人】

【識別番号】508139000

【氏名又は名称】エーテーハー・チューリッヒ

【氏名又は名称原語表記】ＥＴＨ Ｚｕｒｉｃｈ

(74)【代理人】

【識別番号】110001508

【氏名又は名称】弁理士法人 津国

(72)【発明者】

【氏名】コラン，リュドヴィク

(72)【発明者】

【氏名】エデルマン，マーティン

(72)【発明者】

【氏名】ゴッビ，ルカ

(72)【発明者】

【氏名】グレター，ウーヴェ

(72)【発明者】

【氏名】ハルトゥンク，トーマス

(72)【発明者】

【氏名】ヘ，インファン

(72)【発明者】

【氏名】ホーナー，ミハエル

(72)【発明者】

【氏名】ホルンスペルガー，ブノワ

(72)【発明者】

【氏名】クロール，カールステン

(72)【発明者】

【氏名】ムゥ，リンジン

(72)【発明者】

【氏名】ムーリ，ディーター

(72)【発明者】

【氏名】オハラ，フィオン

(72)【発明者】

【氏名】リヒター，ハンス

(72)【発明者】

【氏名】リッター，マルティン

【テーマコード（参考）】

4C072

4C085

4C086

4C188

【Ｆターム（参考）】

4C072AA01

4C072BB02

4C072CC02

4C072CC11

4C072EE07

4C072FF07

4C072GG07

4C072GG09

4C072HH02

4C072HH07

4C072UU10

4C085HH03

4C085JJ02

4C085KA29

4C085KB56

4C085LL13

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB22

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA20

4C086ZC20

4C086ZC78

4C188EE02

4C188EE03

(57)【要約】

本発明は、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）および／またはオートラジオグラフィー等の医療イメージングに有用な新しい放射性標識モノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）阻害剤を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２－フルオロ－６－メトキシ－フェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２，６－ジフルオロフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２－メトキシフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［４－（シクロペントキシ）フェニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－イソブトキシフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［（Ｚ）－２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；および
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［（Ｅ）－２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
からなる群から選択される、１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２－フルオロ－６－メトキシ－フェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；および
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２，６－ジフルオロフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
からなる群から選択される、請求項１に記載の１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；および
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２－フルオロ－６－メトキシ－フェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
からなる群から選択される、請求項１に記載の１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

前記１つまたは複数の放射性同位体が、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）および／またはオートラジオグラフィーのための画像化同位体である、請求項１～３のいずれか一項に記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項5】

前記１つまたは複数の放射性同位体が、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｏおよび^１８Ｆからなる群から独立して選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項6】

前記１つまたは複数の放射性同位体が、^３Ｈ、^１１Ｃおよび^１８Ｆからなる群から独立して選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項7】

前記１つまたは複数の放射性同位体が、^１１Ｃ、および^１８Ｆからなる群から独立して選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項8】

１～４つの放射性同位体、例えば１、２、３または４つの放射性同位体を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項9】

１～３つの放射性同位体、例えば１、２、または３つの放射性同位体を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項10】

１つの放射性同位体を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項11】

【化1】

からなる群から選択される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項12】

【化2】

からなる群から選択される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項13】

モノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）占有率試験に使用するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物。

【請求項14】

哺乳動物の脳におけるモノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）の画像診断に使用するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物。

【請求項15】

請求項１～１２のいずれか一項に記載の１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。

【請求項16】

哺乳動物の脳におけるモノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）の画像診断方法であって、
（ａ）検出可能な量の請求項１～１２のいずれか一項に記載の放射性標識化合物または請求項１５に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与すること、および
（ｂ）ＭＡＧＬと会合している場合、前記放射性標識化合物を検出すること
を含む、方法。

【請求項17】

哺乳動物の脳におけるモノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）の画像診断のための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の放射性標識化合物の使用。

【請求項18】

哺乳動物の脳におけるモノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）の画像診断用の医薬の調製のための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の放射性標識化合物の使用。

【請求項19】

本明細書で上述した発明。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、放射性標識有機化合物に関する。より詳細には、本発明は、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）および／またはオートラジオグラフィー等の医療イメージングに有用な放射性標識モノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）阻害剤に関する。

【背景技術】

【0002】

本明細書に記載の放射性標識化合物は、モノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）の分子イメージングに使用できることが見出された。分子イメージングは、ＰＥＴ、核磁気共鳴、近赤外または他の方法によって視覚化される、分子プローブ（例えば、放射性トレーサ）と生物学的標的（例えば、受容体、酵素、イオンチャネル、ミスフォールドタンパク質、または分子プローブに結合もしくは保持することができる任意の他の細胞もしくは細胞外成分）との選択的および特異的な相互作用に基づいている。核医療イメージングモダリティであるＰＥＴは、所与の器官における生物学的標的の分布、またはそのような器官もしくは細胞の代謝活性、または薬物がそのような器官に入り、生物学的標的に結合し、および／または生物学的プロセスを改変する能力に関する重要な情報を提供する三次元画像を生成するのに理想的に適している。ＰＥＴは非侵襲的イメージング技術であるため、疾患の病態生理学、ならびにヒトおよび動物における所与の分子標的または細胞プロセスに対する薬物の作用を調査するために使用することができる。所与の分子標的に特異的なＰＥＴ放射性トレーサの利用可能性は、疾患の結果として起こる病態生理学的変化を実証および定量化することによって、疾患の診断および進行のモニタリングを容易にすることができる。さらに、ＰＥＴ放射性トレーサは、患者の層別化および薬物の作用機序の理解を支援することによって、薬物開発を容易にすることができる。

【0003】

ヒトの脳は、数百万の相互通信するニューロンからなる複雑な器官である。疾患に関連する異常性の理解は、効果的な診断および新規治療法の将来の開発の鍵である。ヒトにおける生化学的異常性の研究は、創薬および開発プロセスの不可欠および必須の構成要素に急速になりつつある。近年、病状、疾患プロセスおよび薬物作用を評価するためのヒト医療イメージングの使用が増加している。これらのイメージングモダリティには、ＰＥＴ、ＭＲＩ、ＣＴ、超音波、ＥＥＧ、ＳＰＥＣＴおよびその他（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，２００３，６５，１６９－１７７）が含まれる。したがって、非侵襲的イメージングモダリティ、例えばＰＥＴの使用は、将来の薬物開発のための貴重なツールである。非侵襲的核イメージング技術を使用して、種々の生体対象の生理学および生化学に関する基本的および診断的情報を得ることができる。これらの技術は、そのような生体対象に投与された放射性トレーサから放出された放射線を検出することができる高度なイメージング機器の使用に依存している。得られた情報を再構成して、放射性トレーサの分布を時間の関数として明らかにする平面画像および断層画像を提供することができる。放射性トレーサの使用は、対象の構造、機能、および最も重要なことには、生理学および生化学に関する情報を含む画像をもたらすことができる。この情報の多くは、他の手段によって取得することができない。これらの研究で使用される放射性トレーサは、対象の生理学または生化学に関する特定の情報の決定を可能にするインビボでの定義された挙動を有するように設計されている。現在、心機能、心筋血流、肺灌流、肝機能、脳血流、局所脳のグルコースおよび酸素の代謝、いくつかの脳受容体および酵素の機能、ならびにアルツハイマー病におけるアミロイドベータプラークおよびタウ沈着物の可視化に関する有用な情報を得るために、放射性トレーサが利用可能である（ＰＥＴ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｄｓ．Ｍｉｃｈａｅｌ Ｅ．Ｐｈｅｌｐｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００４、Ａｍｅｔａｍｙ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，２００８，１０８，１５０１－１５１６、Ｎｏｒｄｂｅｒｇ Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｌ．，２０１０，６，７８－８７）。

【0004】

さらに、ＰＥＴイメージングは、治療薬の効率的および効果的な発見を促進するために、薬物開発の初期段階におけるヒトにおける正常および異常な神経化学の非侵襲的かつ定量的なアッセイを提供する。非侵襲的技術を使用したヒトにおける疾患機構の理解は、疾患および新規治療薬の診断および管理における将来の開発と密接に関連している。標識化合物のトレーサ用量は、薬物投与レジームを最適化し、薬物作用の下流応答を特徴付けるための、例えば生体内分布試験または受容体占有試験による新規薬物の早期評価を可能にする。

【0005】

ＰＥＴで一般的に使用される放射性核種には、^１１Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｏまたは^１８Ｆが含まれる。原則として、親化合物原子の１つをＰＥＴ核種で置換することによって全ての薬物を標識することが可能であるが、ヒトにおいてインビボでイメージング剤として適用可能であることが見出されているのはごくわずかである。^１１Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｏおよび^１８Ｆの放射性半減期は、それぞれ２０、１０、２および１１０分である。これらの短い半減期は、ＰＥＴを使用してインビボで生物学的プロセスをプローブするためのトレーサとしてのそれらの使用に多くの利点を与える。同じ対象における同日内の反復試験が可能になる。

【0006】

トリチウム標識化合物は特に価値があり、高分解能オートラジオグラフィーを含む試験に広く使用されている。トリチウムの物理的（核）特性、放射線の低い最大ベータエネルギー（１８ｋｅＶ）、および高い最大特異的活性（２９Ｃｉ／ｍｇ水素原子）によって、トリチウムは、例えば生物学的標本における化合物、薬物、およびホルモンの正確な局在化を決定するための理想的な同位体となっている。

【0007】

本放射性標識化合物は、ＭＡＧＬ阻害剤である。ＭＡＧＬの作用および／または活性化の抑制は、神経炎症、神経変性疾患、疼痛、癌および精神障害の処置または予防のための有望な新しい治療戦略である。さらに、ＭＡＧＬの作用および／または活性化の抑制は、神経保護およびミエリン再生をもたらすための有望な新しい治療戦略である。

【0008】

いくつかのＰＥＴトレーサがＭＡＧＬの選択的イメージングのために報告されているが、これらのほとんどは共有結合阻害剤構造に基づく。放射性トレーサの共有結合性および不可逆的結合は、動的モデリングによるシグナルの定量化の困難さと関連しており、したがって、放射性トレーサにとって望ましくない属性であると考えられる。そのようなトレーサの例としては、［^１１Ｃ］ＳＡＲ １２３０３（Ｔ．Ｙａｍａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，ＮｅｕｒｏＩｍａｇｅ １７６（２０１８）３１３－３２０）、［^１１Ｃ］ＭＡ－ＰＢ－１（Ａ．Ｍｕｎｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １３６（２０１７）１０４－１１３）、１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロプロパン－２－イル－３－（１－ベンジル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アゼチジン－１－［^１１Ｃ］カルボキシレート（Ｗ．Ｍｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７（２０１９）３５６８－３５７３）またはＡｂｉｄｅによる特許出願に記載された化合物（国際公開第２０１７／１４３２８３号Ａ１）が挙げられる。

【0009】

［^１８Ｆ］Ｔ－４０１は、ＭＡＧＬ（Ｙ．Ｈａｔｔｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．６２（２０１９），２３６２－２３７５）を標的とする非共有結合性可逆的ＰＥＴトレーサの例外的な場合を表す。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

結論として、治療的ＭＡＧＬ阻害剤の標的係合を検証するため、ならびに正常および疾患条件下でのＭＡＧＬレベルを検討するための代替的な非共有結合性可逆的ＰＥＴトレーサが依然として必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0011】

第１の態様において、本発明は、
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２－フルオロ－６－メトキシ－フェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２，６－ジフルオロフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２－メトキシフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［４－（シクロペントキシ）フェニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－イソブトキシフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［（Ｚ）－２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；および
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［（Ｅ）－２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
からなる群から選択される、１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0012】

さらなる態様において、本発明は、モノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）占有率試験で使用するための本明細書に記載の放射性標識化合物を提供する。

【0013】

さらなる態様において、本発明は、モノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）の画像診断において使用するための本明細書に記載の放射性標識化合物を提供する。

【0014】

さらなる態様では、本発明は、本明細書に記載の放射性標識化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】［^３Ｈ］１、［^３Ｈ］２、［^３Ｈ］３および［^３Ｈ］４のＭＡＧＬに対するインビトロ結合を、ＭＡＧＬに対する高い選択性および低い非特異的結合を示す矢状マウス脳切片において示す。上段：ｗｔ動物。最下段：ＭＡＧＬ ｋｏ動物。

【図2】Ｗｉｓｔａｒラットの矢状脳切片に対する［^１１Ｃ］１（Ａ）および［^１１Ｃ］５（Ｂ）のＭＡＧＬへのインビトロ結合を示す。選択性および非特異的結合を、高濃度の冷ＭＡＧＬ阻害剤との共インキュベーションによって評価する。

【図3】ＣＤ（ＳＤ）ラットにおけるエクスビボオートラジオグラフィーによって評価される［^３Ｈ］２のインビボ結合を示す。

【図4】ＭＡＧＬ ｋｏマウスおよび対応するＷＴにおける［^１１Ｃ］１からの全脳の時間活性曲線を示す。

【発明を実施するための形態】

【0016】

定義
本発明の特定の態様、実施形態または実施例に関連して記載される特徴、整数、特色、化合物、化学的部分または基は、それらと両立しない場合を除き、本明細書に記載の任意の他の態様、実施形態または実施例に適用可能であると理解されるべきである。本明細書（任意の添付の特許請求の範囲、要約および図面を含む）に開示された特徴の全て、および／またはそのように開示された任意の方法もしくはプロセスの工程の全ては、そのような特徴および／または工程の少なくとも一部が相互に排他的である組合せを除き、任意の組合せで組み合わせることができる。本発明は、前述のいずれの実施形態の詳細にも限定されない。本発明は、本明細書（任意の添付の特許請求の範囲、要約および図面を含む）に開示された特徴の任意の新規なものもしくは任意の新規な組合せ、またはそのように開示された任意の方法もしくはプロセスの工程の任意の新規なものもしくは任意の新規な組合せに及ぶ。

【0017】

用語「薬学的に許容される塩」とは、生物学的にまたは別様に望ましくないものではない、遊離塩基または遊離酸の生物学的有効性および特性を保持する塩を指す。塩は、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等、特に塩酸、ならびに有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸、Ｎ－アセチルシステイン等と共に形成される。また、これらの塩は、遊離酸に無機塩基や有機塩基を添加して調製してもよい。無機塩基に由来する塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウムおよびマグネシウム塩等が含まれるがこれらに限定されない。有機塩基に由来する塩には、第一級、第二級および第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環式アミンおよび塩基性イオン交換樹脂、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、リジン、アルギニン、Ｎ－エチルピペリジン、ピペリジン、ポリイミン樹脂等の塩が含まれるがこれらに限定されない。

【0018】

略語「ＭＡＧＬ」とは、酵素モノアシルグリセロールリパーゼを指す。用語「ＭＡＧＬ」および「モノアシルグリセロールリパーゼ」とは、本明細書において互換的に使用される。

【0019】

用語「１つまたは複数」は、１つの置換基から化学的に可能な最高の置換数まで、すなわち１つの原子の置換から全ての原子までのそれぞれの放射性同位体による置換を意味する。

【0020】

用語「哺乳動物」は、ヒト、非ヒト霊長類、例えばチンパンジーおよび他の類人猿およびサル種、家畜、例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギおよびブタ、家畜、例えばウサギ、イヌおよびネコ、実験動物、例えばげっ歯類、例えばラット、マウスおよびモルモットを含む。特定の実施形態において、哺乳動物はヒトである。哺乳動物という用語は、特定の年齢または性別を意味しない。

【0021】

「薬学的に許容される賦形剤」、および「治療的に不活性な賦形剤」という用語は、互換的に使用可能であり、例えば、医薬製品を製造する際に使用される崩壊薬、結合剤、充填剤、溶媒、緩衝剤、等張化剤、安定剤、抗酸化剤、界面活性剤、担体、希釈剤または潤滑剤といった、治療活性を有さず、投与される対象に対して非毒性である、医薬組成物中の任意の薬学的に許容される成分を指す。

【0022】

イメージング同位体およびイメージング
核医学における診断技術は、体内からガンマ線を放出する放射性トレーサを使用する。これらのトレーサは、一般的に、特定の生理学的プロセスを精査することを可能にする化学化合物に連結された短寿命同位体である。それらは、注入、吸入または経口によって投与することができる。第１のタイプは、多くの異なる角度から器官を見ることができるガンマカメラによって単一光子が検出される場合である。カメラは、放射線が放出される点から画像を構築し、この画像は、コンピュータによって強調され、異常状態の表示のために医師によってモニタ上で見られる。

【0023】

陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）は、サイクロトロンで生成された同位体を使用する精密で精巧な技術である。陽電子放出放射性核種は、通常は注入によって導入され、標的組織に蓄積する。崩壊すると、それは陽電子を放出し、これがすぐ近くの電子と結合し、それによって２つの識別可能なガンマ線を反対方向に同時に放出する。これらはＰＥＴカメラによって検出され、それらの起源の非常に正確な指示を与える。ＰＥＴは殆どの癌を検出および評価する最も正確な非侵襲的方法であることが証明されているため、ＰＥＴの最も重要な臨床的役割は、腫瘍学におけるトレーサとしてフッ素－１８フルオロデオキシグルコース（［^１８Ｆ］ＦＤＧ）を用いたものである。心臓および脳のイメージングにもよく使用されている。

【0024】

ＰＥＴおよびＳＰＥＣＴを含むいくつかの医療診断手順は、放射性標識化合物を利用し、当技術分野で周知である。ＰＥＴおよびＳＰＥＣＴは非常に高感度の技術であり、トレーサと呼ばれる少量の放射性標識化合物を必要とする。標識化合物は、対応する非放射性標識化合物と同様の方法でインビボで輸送、蓄積および変換される。トレーサまたはプローブは、ＰＥＴイメージングに有用な放射性核種、例えば^１１Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｏ、^１８Ｆ、^６４Ｃｕおよび^１２４Ｉで、またはＳＰＥＣＴイメージングに有用な放射性核種、例えば^９９Ｔｃ、^７７Ｂｒ、^６１Ｃｕ、^１５３Ｇｄ、^１２３Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉおよび^３２Ｐで放射性標識することができる。これらは、本明細書で使用される用語「放射性同位体」（イメージングアイソトープとしても知られる）の非限定的な例である。

【0025】

ＰＥＴは、患者の組織内の陽電子放出同位体を担持する分子イメージングトレーサの分布に基づいて画像を作成する。ＰＥＴ法は、調査された組織または器官の細胞レベルの機能不全を検出する可能性を有する。ＰＥＴは、腫瘍および転移のイメージング等の臨床腫瘍学において使用されており、特定の脳疾患の診断ならびに脳および心臓の機能のマッピングに使用されている。同様に、ＳＰＥＣＴを使用して任意のガンマイメージング研究を補完することができ、ここで、真の３Ｄ表現は、例えば、腫瘍、感染（白血球）、甲状腺または骨のイメージングに有用であり得る。

【0026】

放射性ハロゲンに関して、^１２５Ｉ同位体は実験室試験に有用であるが、１２５^Ｉの比較的長い半減期（６０日間）および低いガンマ放出（３０～６５ｋｅＶ）のために、一般的に診断目的には有用ではない。同位体１２３^Ｉは、１３時間の半減期および１５９ｋｅＶのガンマエネルギーを有し、したがって、診断目的で使用されるリガンドの標識化は、この同位体または^１８Ｆ（２時間の半減期）によるものであることが典型的である）。使用され得る他のイメージング同位体としては、^１３１Ｉ、^７７Ｂｒおよび^７６Ｂｒが挙げられる。

【0027】

他の実施形態において、本発明の化合物は、放射性標識として炭素の放射性同位体を含有する。これは、１つまたは複数の放射性炭素原子、好ましくは^１１Ｃを含み、その原子のバックグラウンドレベルよりも高い特異的活性を有する化合物を指す。天然に存在する元素は種々の同位体の形態で存在し、その一部は放射性であることはよく知られている。天然に存在する元素の放射活性は、これらの同位体の天然の分布または存在量の結果であり、一般的にバックグラウンドレベルと呼ばれる。本発明の炭素標識化合物は、天然存在量よりも高い、したがってバックグラウンドレベルよりも高い特異的活性を有する。本発明の炭素標識組成物は、トレーシング、イメージング、および放射線療法等に使用することができる。

【0028】

当技術分野の当業者は、イメージング目的で標識化合物を検出するための種々の方法に精通している。例えば、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）または単一光子放射型断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を使用して、放射性標識化合物を検出することができる。化合物に導入される標識は、所望の検出方法に依存し得る。当技術分野の当業者は、^１８Ｆ等の陽電子放出原子のＰＥＴ検出に精通している。本発明はまた、^１８Ｆ原子が非放射性標識フッ素原子で置換されている本明細書に記載の特定の化合物に関する。当技術分野の当業者は、^１２３Ｉまたは^９９Ｔｃ等の光子放出原子のＳＰＥＣＴ検出に精通している。

【0029】

放射性診断剤または検出剤は、信頼できる診断および検出を保証することができる十分な放射活性および放射活性濃度を有するべきである。所望のレベルの放射活性は、化合物を調製するための本明細書で提供される方法によって達成することができる。

【0030】

典型的には、脳のインビボイメージングの必要条件は、インタクトな血液脳関門を通過する能力である。イメージング方法の第１の工程において、標識化合物が検出可能な量で組織または患者に導入される。化合物は、典型的には医薬組成物の一部であり、当技術分野の当業者に周知の方法によって組織または患者に投与される。典型的には、投与は静脈内である。

【0031】

本発明の他の実施形態において、標識化合物を検出可能な量で患者に導入し、化合物がＭＡＧＬと会合するのに十分な時間が経過した後、標識化合物を非侵襲的に検出する。本発明の他の実施形態において、標識化合物が患者に導入され、化合物がＭＡＧＬと会合するのに十分な時間が与えられ、次いで、患者からの組織のサンプルが除かれ、組織中の標識化合物が患者から離れて検出される。本発明の他の実施形態において、組織サンプルを患者から取り出し、標識化合物を組織サンプルに導入する。化合物がＭＡＧＬに結合するのに十分な時間の後、化合物を検出する。

【0032】

検出可能な量は、選択された検出方法によって検出されるのに必要な標識化合物の量である。検出を提供するために患者に導入される標識化合物の量は、当技術分野の当業者によって容易に決定することができる。例えば、化合物が選択された検出方法によって検出されるまで、漸増量の標識化合物を患者に与えることができる。標識を化合物に導入して、化合物の検出を提供する。

【0033】

必要な時間量は、検出可能な量の標識化合物を患者に導入し、次いで投与後の種々の時点で標識化合物を検出することによって容易に決定することができる。

【0034】

患者への標識化合物の投与は、一般的または局所的な投与経路によるものであり得る。例えば、標識化合物は、全身に送達されるように患者に投与され得る。あるいは、標識化合物は、目的の特定の器官または組織に投与することができる。例えば、患者における、例えば神経炎症の進行を診断または追跡するために、脳内のＭＡＧＬタンパク質レベルを位置特定および定量することが望ましい。

【0035】

１つまたは複数のイメージング同位体は、ＭＡＧＬ阻害剤中の１つまたは複数の原子（例えば、水素または炭素原子）をイメージング同位体で置換することによって、本明細書中に記載のＭＡＧＬ阻害剤に組み込まれ得る。イメージング同位体の組み込みは、公知の技術を使用して行うことができる。例えば、技術は、例えば、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ Ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｌａｃｋｅｙ，Ｒｏｔｈ Ｅｄｓ）、Ｃｈａｐｔｅｒ １２（Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、ＩＳＢＮ ９７８－３－５２７－３３３９４－３）に概説されているように、適切な前駆体の求核または求電子^１８Ｆ－フッ素化に基づいていてもよい。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１１／０１８２８１２号も参照されたい。さらに^１１Ｃ（Ｐｅｔｅｒ Ｊ．Ｈ．Ｓｃｏｔｔ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００９，４８，６００１－６００４）または^１８Ｆ（Ｓｅａｎ Ｐｒｅｓｈｌｏｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１６，１１６，７１９－７６６、Ｆｒｅｄｅｒｉｃ Ｄｏｌｌe（２００８）Ｆｌｕｏｒｉｎｅ－１８ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍａｇｉｎｇ ｗｉｔｈ ｐｏｓｉｔｒｏｎ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ．Ｉｎ Ｆｌｕｏｒｉｎｅ ａｎｄ Ｈｅａｌｔｈ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ，Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｔｒｅｓｓａｕｄ，Ａ．ａｎｄ Ｈａｕｆｅ，Ｇ．，ｅｄｓ），ｐｐ．３－６６，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）を化合物に組み込むためのいくつかの方法が存在する。

【0036】

同位体標識化合物は、１つまたは複数の原子が、選択された原子質量または質量数を有する原子によって置換されることを除いて、本明細書に記載される式によって示される構造を有する。本発明の化合物に組み込むことができる例示的な放射性標識としては水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、塩素、およびヨウ素の同位体、それぞれ例えば^３Ｈ、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１８Ｏ、^１７Ｏ、^３１Ｐ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^１８Ｆ、^３６Ｃｌ、および^１２５Ｉが挙げられる。重水素、（すなわち^２Ｈ）のようなより重い同位体による置換は、より高い代謝安定性から生じる特定の治療上の利点、例えばインビボ半減期の延長または必要投与量の低減をもたらし得る。^２Ｈによる置換は、特に、望ましくない放射性代謝物の形成を防止するため、または放射性脱フッ素化を阻止するために使用し得る。

【0037】

本発明の化合物
第１の態様（Ａ１）において、本発明は、
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［［２－フルオロ－６－（メトキシ）フェニル］メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２ーカルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２，６－ジフルオロフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６［（２－メトキシフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［４－（シクロペントキシ）フェニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－イソブトキシフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［（Ｚ）－２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；および
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［（Ｅ）－２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
からなる群から選択される、１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0038】

本発明はまた、本発明の第１の態様（Ａ１）の以下の列挙された実施形態（Ｅ）を提供する。

【0039】

Ｅ１． （４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［［２－フルオロ－６－（メトキシ）フェニル］メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２ーカルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；および
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２，６－ジフルオロフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
からなる群から選択される、Ａ１に記載の１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【0040】

Ｅ２． （４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；および
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［［２－フルオロ－６－（メトキシ）フェニル］メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２ーカルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン；
からなる群から選択される、Ａ１に記載の１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【0041】

Ｅ３． 前記１つまたは複数の放射性同位体が、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）および／またはオートラジオグラフィーのためのイメージング同位体である、Ａ１およびＥ１～Ｅ２のいずれか１つに記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【0042】

Ｅ４． 前記１つまたは複数の放射性同位体が、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｏおよび^１８Ｆからなる群から独立して選択される、Ａ１およびＥ１～Ｅ３のいずれか１つに記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【0043】

Ｅ５． 前記１つまたは複数の放射性同位体が、^３Ｈ、^１１Ｃ、および^１８Ｆからなる群から独立して選択される、Ａ１およびＥ１～Ｅ３のいずれか１つに記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【0044】

Ｅ６． 前記１つまたは複数の放射性同位体が、^１１Ｃおよび^１８Ｆからなる群から独立して選択される、Ａ１およびＥ１～Ｅ３のいずれか１つに記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【0045】

Ｅ７． １～４つの放射性同位体、例えば１、２、３または４つの放射性同位体を含む、Ａ１およびＥ１～Ｅ６のいずれか１つに記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【0046】

Ｅ８． １～３つの放射性同位体、例えば１、２、または３つの放射性同位体を含む、Ａ１およびＥ１～Ｅ６のいずれか１つに記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【0047】

Ｅ９． １つの放射性同位体を含む、Ａ１およびＥ１～Ｅ６のいずれか１つに記載の放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【0048】

Ｅ１０．

【化1】

からなる群から選択される、Ａ１およびＥ１～Ｅ９のいずれか１つに記載の１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【0049】

Ｅ１１．

【化2】

からなる群から選択される、Ａ１およびＥ１～Ｅ９のいずれか１つに記載の１つまたは複数の放射性同位体を含む放射性標識化合物またはその薬学的に許容される塩。

【0050】

本発明の化合物の使用
本発明の放射性標識化合物を、例えば、非共有結合性可逆的ＰＥＴトレーサとして使用して、治療的ＭＡＧＬ阻害剤の標的係合を検証し、ならびに正常および疾患条件下でＭＡＧＬレベルを検討することができる。

【0051】

したがって、一態様において、本発明は、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）および／またはオートラジオグラフィー等の医療イメージングのための本明細書に記載の放射性標識化合物の使用を提供する。

【0052】

さらなる態様において、本発明は、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）および／またはオートラジオグラフィー等の医療イメージングに使用するための本明細書に記載の放射性標識化合物を提供する。

【0053】

さらなる態様において、本発明は、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）および／またはオートラジオグラフィー等の医療イメージングの方法であって、モノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）を本明細書に記載の放射性標識化合物に接触させることを含む、方法に関する。

【0054】

さらなる態様において、本発明は、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）および／またはオートラジオグラフィー等の医療イメージングのための医薬の製造のための、本明細書に記載の放射性標識化合物の使用を提供する。

【0055】

さらなる態様において、本発明は、モノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）占有率試験で使用するための本明細書に記載の放射性標識化合物を提供する。

【0056】

さらなる態様において、本発明は、モノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）占有率試験のための本明細書に記載の放射性標識化合物の使用を提供する。

【0057】

さらなる態様において、本発明は、モノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）占有率を試験する方法であって、ＭＡＧＬを本明細書に記載の放射性標識化合物に接触させることを含む方法を提供する。

【0058】

さらなる態様において、本発明は、モノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）占有率試験のための医薬の製造のための本明細書に記載の放射性標識化合物の使用を提供する。

【0059】

さらなる態様において、本発明は、哺乳動物の脳におけるモノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）の画像診断において使用するための、本明細書に記載の放射性標識化合物を提供する。

【0060】

さらなる態様において、本発明は、本明細書に記載の放射性標識化合物と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。

【0061】

さらなる態様において、本発明は、哺乳動物の脳におけるモノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）の画像診断の方法であって、
（ａ）検出可能な量の本明細書に記載の放射性標識化合物または本明細書に記載の医薬組成物を哺乳動物に投与すること、および
（ｂ）ＭＡＧＬと会合している場合、放射性標識化合物を検出することを含む、方法を提供する。

【0062】

さらなる態様において、本発明は、哺乳動物の脳におけるモノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）の画像診断のための、本明細書に記載の放射性標識化合物の使用を提供する。

【0063】

さらなる態様において、本発明は、哺乳動物の脳におけるモノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）の画像診断のための医薬の製造のための、本明細書に記載の放射性標識化合物の使用を提供する。

【実施例】

【0064】

本発明は、以下の実施例を参照することにより、より完全に理解されるであろう。しかしながら、特許請求の範囲は、本実施例の範囲に限定されるものと解釈されるべきではない。

【0065】

本明細書では以下の略語が使用される。
ＡｃＯＨ＝酢酸、ＡＣＮ＝アセトニトリル、ＢＥＭＰ＝２－ｔｅｒｔ－ブチルイミノ－２－ジエチルアミノ－１，３－ジメチルペルヒドロ－１，３，２－ジアザホスホリンＢｏｃ＝ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル、ＣＡＳ ＲＮ＝Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ登録番号、Ｃｂｚ＝ベンジルオキシカルボニル、Ｃｓ_２ＣＯ_３＝炭酸セシウム、ＣＯ＝一酸化炭素、ＣｕＣｌ＝塩化銅（Ｉ）、ＣｕＣＮ＝シアン化銅（Ｉ）、ＣｕＩ＝ヨウ化銅（Ｉ）、ＤＭＡＰ＝４－ジメチルアミノピリジン、ＤＭＥ＝ジメトキシエタン、ＤＭＥＤＡ＝Ｎ，Ｎ’－ジメチルエチレンジアミン、ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ｄｐｐｆ＝１，１ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン、ＥＤＣ．ＨＣｌ＝Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩、ＥＩ＝電子衝撃、ＥＳＩ＝エレクトロスプレーイオン化、ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル、ＥｔＯＨ＝エタノール、ｈ＝時間、ＦＡ＝蟻酸、Ｈ_２Ｏ＝水、Ｈ_２ＳＯ_４＝硫酸、Ｈａｌ＝ハロゲン、ＨＡＴＵ＝１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム－３－オキシドヘキサフルオロホスフェート、ＨＢＴＵ＝Ｏ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－ウロニウム－ヘキサフルオロ－ホスフェート、ＨＣｌ＝塩化水素、ＨＯＢｔ＝１－ヒドロキシ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール；ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィ、ｉＰｒＭｇＣｌ＝イソプロピルマグネシウムクロリド、Ｉ_２＝ヨウ素、ＩＰＡ＝２－プロパノール、（Ｉｒ［ｄＦ（ＣＦ_３）ｐｐｙ］_２（ｄｔｂｐｙ））ＰＦ_６＝［４，４’－ビス（１，１－ジメチルエチル）－２，２’－ビピリジン－Ｎ１，Ｎ１’］ビス［３，５－ジフルオロ－２－［５－（トリフルオロメチル）－２－ピリジニル－Ｎ］フェニル－Ｃ］イリジウム（ＩＩＩ）ヘキサフルオロホスフェート、ＩＳＰ＝陽イオンスプレー（モード）、ＩＳＮ＝負イオンスプレー（モード）、Ｋ_２ＣＯ_３＝炭酸カリウム、ＫＨＣＯ_３＝炭酸水素カリウム、ＫＩ＝ヨウ化カリウム、ＫＯＨ＝水酸化カリウム、Ｋ_３ＰＯ_４＝リン酸三塩基性カリウム、ＬｉＡｌＨ_４またはＬＡＨ＝水素化アルミニウムリチウム、ＬｉＨＭＤＳ＝リチウムビス（トリメチルシリル）アミド、ＬｉＯＨ＝水酸化リチウム、ＭｇＳＯ_４＝硫酸マグネシウム、ｍｉｎ＝分、ｍＬ＝ミリリットル、ＭＰＬＣ＝中圧液体クロマトグラフィ、ＭＳ＝質量スペクトル、ＮａＨ＝水素化ナトリウム、ＮａＨＣＯ_３＝炭酸水素ナトリウム、ＮａＮＯ_２＝亜硝酸ナトリウム、ＮａＯＨ＝水酸化ナトリウム、Ｎａ_２ＣＯ_３＝炭酸ナトリウム、Ｎａ_２ＳＯ_４＝硫酸ナトリウム、Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３＝チオ硫酸ナトリウム、ＮＢＳ＝Ｎ－ブロモスクシンイミド、ｎＢｕＬｉ＝ｎ－ブチルリチウム、ＮＥｔ_３＝トリエチルアミン（ＴＥＡ）、ＮＨ_４Ｃｌ＝塩化アンモニウム、ＮｉＣｌ_２ グリム＝塩化ニッケル（ＩＩ）エチレングリコールジメチルエーテル錯体、ＮＭＰ＝Ｎ－メチル－２－ピロリドン、ＯＡｃ＝アセトキシ、Ｔ_３Ｐ＝プロピルホスホン酸無水物、Ｐ２Ｏ５＝五酸化二リン、ＰＥ＝石油エーテル、ＰＧ＝保護基、Ｐｄ－Ｃ＝パラジウム活性炭素、ＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）－ＣＨ_２Ｃｌ_２＝１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン－パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３＝トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２＝酢酸パラジウム（ＩＩ）、Ｐｄ（ＯＨ）_２＝水酸化パラジウム、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４＝テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、ＰＴＳＡ＝ｐ－トルエンスルホン酸、Ｒ＝任意の基、ＲＴ＝室温、ＳＦＣ＝超臨界流体クロマトグラフィ、Ｓ－ＰＨＯＳ＝２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，６’－ジメトキシビフェニル、Ｔ３Ｐ＝プロピルホスホン酸無水物、ＴＢＡＩ＝テトラブチルアンモニウムヨージド、ＴＢＭＥ＝ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル、ＴＥＡ＝トリエチルアミン、ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸、ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン、ＴＭＥＤＡ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルエチレンジアミン、ＺｎＣｌ_２＝塩化亜鉛、キサントホス＝４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン。

【0066】

^３Ｈについての一般的方法
トリチウムガスとの反応は、ＲＣ Ｔｒｉｔｅｃ ＡＧ（Ｔｅｕｆｅｎ、スイス）から購入したステンレス鋼マニホールドで行った。［^３Ｈ］メチルノシレートは、トルエン溶液としてＲＣ Ｔｒｉｔｅｃ ＡＧ（Ｔｅｕｆｅｎ、スイス）から購入した。ＨＩＤＥＸ ３００ ＳＬおよびＵＬＴＩＭＡＴＥ ＧＯＬＤカクテル（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用して、液体シンチレーションカウントを達成した。分析ＨＰＬＣは、ＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｈｅｎｙｌ、Ｃ８またはＣ１８カラム（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、３．５μｍ）、注入活性：１μＣｉを使用するＡｇｉｌｅｎｔ １２００シリーズＨＰＬＣシステムを使用して行った。放射性化学純度は、内部固体シンチレータ（Ｒａｙｔｅｓｔ、Ｓｔｒａｕｂｅｎｈａｒｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を備えたβ放射性ＨＰＬＣ検出器ＲＡＭＯＮＡを使用して測定した。分取ＨＰＬＣをＧｉｌｓｏｎ ＰＬＣ ２０５０機器（Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ、ＭＩ、ＵＳＡ）で行った。モル活性は、４０００ＱＴＲＡＰシステム（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ ＧｍｂＨ、Ｚｕｇ、ＣＨ）、ＣＴＣ ＰＡＬを用いたフロー注入モード、およびＡｇｉｌｅｎｔ １１００マイクロＬＣポンプを分離せずに使用して、質量分析同位体ピーク強度分布によって決定した。

【0067】

^１１Ｃ尿素合成についての一般的手順
^１４Ｎ（ｐ、α）^１１Ｃ核反応によって生成された［^１１Ｃ］ＣＯ_２を、液体窒素を使用してステンレス鋼ループ内のガスターゲットから捕捉した。加温して、アルゴンガス流中の［^１１Ｃ］ＣＯ_２をＰ_２Ｏ_５の乾燥カラムに通し、次いで、１００μＬの無水ＤＭＦ中の（４ａＲ，８ａＳ）－４ａ，５，６，７，８，８ａ－ヘキサヒドロ－４Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（ＢＢ１）（０．６７２ｍｇ、４．３μｍｏｌ）および２－ｔｅｒｔ－ブチルイミノ－２－ジエチルアミノ－１，３－ジメチルペルヒドロ－１，３，２－ジアザホスホリン（ＢＥＭＰ、ＣＡＳ ＮＲ ９８０１５－４５－３）（５μＬ、１７．３μｍｏｌを用いて反応バイアル中にバブリングした。２分後、無水ＡＣＮ（１００μＬ、２．１５μｍｏｌ）中０．２％ ＰＯＣｌ_３（ｖ／ｖ）を反応混合物に添加した。１分後、１００μＬの脱気したＡＣＮ中の対応するアゼチジン（４．７μｍｏｌ）を反応混合物に添加し、室温でさらに２分間撹拌した。反応物をＨ_２Ｏ ２ｍＬで希釈し、半分取ＨＰＬＣ（カラム：ＡＣＥ ５ Ｃ１８－３００ ２５０ｘ１０．０ｍｍ；移動相：ＭｅＣＮ／０．１％ Ｈ_３ＰＯ_４）によって精製した。所望の生成物を回収し、Ｈ_２Ｏ ８ｍＬで希釈し、予備活性化Ｃ－１８ライトカートリッジに充填した。カートリッジをＨ_２Ｏ ５ｍＬで洗浄した後、放射活性をエタノール０．５ｍＬで溶出し、滅菌バイアル内の０．１５ Ｍ ＰＢＳ（９．５ｍＬ）中で製剤化した。最終生成物の同一性および放射性化学純度を確認するために、参照の有無にかかわらず、分析ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＸＤＢ－Ｃ １８ ３．５μｍ、４．６×７５ｍｍ；移動相：ＡＣＮ／０．１％ Ｈ_３ＰＯ_４）において注入を行った。モル活性は、以前に確立された標準曲線に基づいて算出した。

【0068】

構成要素ＢＢ１の合成
（４ａＲ，８ａＳ）－４ａ，５，６，７，８，８ａ－ヘキサヒドロ－４Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化3】

【0069】

ｒａｃ－（４ａＲ，８ａＳ）－ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン二塩酸塩（５００ｍｇ、２．１８ｍｍｏｌ、ＣｈｅｍＢｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）のエナンチオマーを、分取キラルＨＰＬＣ（ＲｅｐｒｏｓｉｌＣｈｉｒａｌ ＮＲカラム）によってＥｔＯＨ（０．０５％のＮＨ４ＯＡｃ含有）：ｎ－ヘプタン（３０：７０）の均一濃度混合物を用いて分離した。

【0070】

第１の溶出エナンチオマー：（＋）－ｃｉｓ－４ａ，５，６，７，８，８ａ－ヘキサヒドロ－４Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（ＢＢ１）。黄色固体（０．１５０ｇ；４４．０％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１５７．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0071】

第２の溶出エナンチオマー：（－）－ｃｉｓ－４ａ，５，６，７，８，８ａ－ヘキサヒドロ－４Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン。黄色固体（０．１５２ｇ；４４．６％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１５７．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0072】

構成要素ＢＢ２の合成
４－ニトロフェニル（４ａＲ，８ａＳ）－３－オキソヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－６（５Ｈ）－カルボキシレート

【化4】

【0073】

（４ａＲ，８ａＳ）－４ａ，５，６，７，８，８ａ－ヘキサヒドロ－４Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（３．０ｇ、１９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３６ｍＬ）中の懸濁液に、ＤＩＰＥＡ（２．４８ｇ、３．３５ｍＬ、１９．２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を氷浴で冷却した。懸濁液に４－ニトロフェニルカルボノクロリデート（４．２６ｇ、２１．１ｍｍｏｌ）を１０分かけて数回に分けて添加し、混合物を氷浴温度で１５分間撹拌し、引き続いて室温で３．２５時間撹拌した。黄色溶液を飽和Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液（３０ｍＬ）およびＤＣＭ（２０ｍＬ）に注ぎ、層を分離した。水層をＤＣＭで２回抽出した（２０ｍＬ）。有機層を水（２×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、蒸発させて粗製生成物を黄色泡状物として得た。生成物を、ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ混合物からの再結晶によって精製した。さらなる生成物を、ＳＦＣ（カラムＩＢ／／２０％ ＭｅＯＨ）による精製によって母液から単離した。合わせた収量４．７８ｇ（７７％）、淡黄色固体。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３２２．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0074】

実施例１
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化5】

【0075】

４－ニトロフェニル（４ａＲ，８ａＳ）－３－オキソヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－６（５Ｈ）－カルボキシレート（ＢＢ２）（４２ｍｇ、１３１μｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（４２．３ｍｇ、５７．１μＬ、３２７μｍｏｌ）のＡＣＮ（０．５ｍＬ）中溶液に、３－（２－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェネチル）アゼチジン４－メチルベンゼンスルホネート（６０．３ｍｇ、１４４μｍｏｌ）を添加し、黄色溶液を室温で一晩撹拌した。反応溶液にシリカゲルを添加し、混合物を蒸発させた。化合物を、シリカゲルクロマトグラフィによって４ｇのカラム上で、ｎ－ヘプタン：ＥｔＯＡｃ／エタノール３／１（７０：３０～１０：９０）の勾配で溶出するＭＰＬＣシステムを用いて精製した。表題化合物を、ＡＣＮ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸を含有する）（２０：８０～９８：２）の勾配を用いた分取ＨＰＬＣ（Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸカラム）における第２の精製によって、無色泡状物（０．０３８ｇ、６８％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４３０．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0076】

中間体：
ａ）ジエチル（２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）ベンジル）ホスホネート

【化6】

【0077】

２－（ブロモメチル）－１－フルオロ－３－（トリフルオロメチル）ベンゼン（１．５０ｇ、５．８４ｍｍｏｌ）のトリエチルホスファイト（２．４２ｇ、２．５ｍｌ、１４．６ｍｍｏｌ）中溶液を３時間撹拌しながら還流した。透明で無色の混合物をシリカゲルカラムにストレートにアプライした。化合物を４０ｇカラム（ｎ－ヘプタン：ＥｔＯＡｃ ０～１００％）でシリカゲルクロマトグラフィによって精製した。１．９９ｇ（定量的）、無色油状物。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３１５．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0078】

（ｂ）ｔｅｒｔ－ブチル３－［（Ｅ）－２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］ビニル］アゼチジン－１－カルボキシレート

【化7】

【0079】

０℃においてジエチル（２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）ベンジル）ホスホネート（１．５０ｇ、４．７７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）中溶液に、鉱油中５５％ ＮａＨ（２０８ｍｇ、４．７７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃で３０分間撹拌した。混合物にｔｅｒｔ－ブチル３－ホルミルアゼチジン－１－カルボキシレート（ＣＡＳ ＮＲ ３９８４８９－２６－４）（８８４ｍｇ、４．７７ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を室温で４．５時間続けた。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×）／Ｈ_２Ｏで抽出し、層を分離した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、シリカゲルで吸着させ、蒸発させた。化合物をシリカゲルクロマトグラフィ（ｎヘプト：ＥｔＯＡｃ ０～１００％）によって精製した。９００ｍｇ（５５％）、無色油状物。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２９０．２［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_９＋Ｈ］^＋．

【0080】

ｃ）ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボキシレート

【化8】

【0081】

ｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－３－（２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）スチリル）アゼチジン－１－カルボキシレート（２．８０ｇ、８．１１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５０ｍｌ）と合わせた。Ｐｄ／Ｃ １０％（２８０ｍｇ）を添加し、反応混合物を水素下で一晩撹拌した。触媒を濾別し、溶媒を蒸発させ、生成物を乾燥させ、そのまま次のステップに使用した。

【0082】

ｄ）３－（２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェネチル）アゼチジン４－メチルベンゼンスルホネート

【化9】

【0083】

ｔｅｒｔ－ブチル３－（２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェネチル）アゼチジン－１－カルボキシレート（８００ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）中溶液に、４－メチルベンゼンスルホン酸一水和物（４３８ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１時間加熱還流した。澄んだ無色の溶液を室温まで冷却した。溶媒を蒸発させた。４℃で一晩冷却し、固体が形成された。結晶をＥｔ_２Ｏで洗浄した。この物質の半分をＡｃＯＥｔ／ＤＣＭに溶解し、ペンタン／Ｅｔ_２Ｏで処理した。白色結晶を単離し、ＨＶで乾燥させた。４００ｍｇ（４１％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２４８．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0084】

実施例［^３Ｈ］１
［^３Ｈ］（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化10】

【0085】

４ｍＬのトリチウム化フラスコ中で、（４ａＲ，８ａＳ）－６－（３－（（Ｅ）－２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）スチリル）アゼチジン－１－カルボニル）ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン（２．０ｍｇ、４．６８μｍｏｌ）および活性炭パラジウム（１０％）（４．９８ｍｇ、４．６８μｍｏｌ）をエタノール（１ｍＬ）中で混合した。フラスコをＲＣ Ｔｒｉｔｅｃトリチウムマニホールドに取り付け、３回の凍結融解サイクルによって脱気した。トリチウムガスを導入し、懸濁液をトリチウムガス雰囲気下、６１０ｍｂａｒで４時間激しく撹拌した。溶液を液体窒素で冷却し、反応容器内の過剰のトリチウムガスを廃トリチウム用ウラントラップに再吸収させた。溶媒を凍結乾燥させ、不安定なトリチウムをＭｅＯＨ（３×０．５ｍＬ）による凍結乾燥によって除去した。残りの黒色残渣をエタノール（１０ｍｌ）に懸濁し、１７ｍｍ Ｔｉｔａｎ ＨＰＬＣフィルタ（０．４５μｍ、ＰＴＦＥ）でフィルタにかけ、放射性化学純度９４％の粗製生成物９．３２ＧＢｑ（２５２ｍＣｉ）を得た。粗製生成物を、溶出液（［Ａ］：［Ｂ］３：７～７：３の勾配１－１２分、１２～１２．５分から９：１まで、１５～１８分勾配９：１～３：７までの実行時間２０分、２１５ｎｍでの検出、５５℃のオーブン温度）として［Ａ］ＡＣＮおよび［Ｂ］Ｈ_２Ｏを１０ｍＬ／分の流速で使用する分取ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｈｅｎｙｌカラム、５μｍ、１０ｍｍ×２５０ｍｍ）によって精製した。合わせた純粋なＨＰＬＣ画分を濃縮し、生成物を溶解し、ＥｔＯＨ（５０ｍｌ）中で保存した。ＭＳ分光法によって決定し、放射性化学純度９９．５％およびモル活性１．７ＴＢｑ／ｍｍｏｌ（４４．９Ｃｉ／ｍｍｏｌ）で、表題化合物７．８ＧＢｑ（２１０ｍＣｉ）を得た。標識化合物の同一性は、ＭＳによって、および放射性標識材料との冷却参照標準の同時注入によって確認した。ＭＳ：ｍ／ｚ＝４３０．２［Ｍ（Ｈ）＋Ｈ］^＋（４％），４３２．２［Ｍ（^３Ｈ）＋Ｈ］^＋（３５％），４３４．２［Ｍ（^３Ｈ_２）＋Ｈ］^＋（６０％）．

【0086】

中間体：
ａ）３－［（Ｅ）－２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］ビニル］アゼチジン

【化11】

【0087】

ｔｅｒｔ－ブチル３－［（Ｅ）－２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］エテニル］アゼチジン－１－カルボキシレート（９００ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３７３μｌ）中溶液に、ＴＦＡ（２．３８ｇ、１．６１ｍｌ、２０．８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×）／ＫＨＣＯ_３で抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固させ、表題化合物（７９５ｍｇ、定量的、純度８４％）を灰白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４７４．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0088】

ｄ）（４ａＲ，８ａＳ）－６－（３－（（Ｅ）－２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）スチリル）アゼチジン－１－カルボニル）ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン

【化12】

【0089】

（４ａＲ，８ａＳ）－４ａ，５，６，７，８，８ａ－ヘキサヒドロ－４Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（ＢＢ１）（２２０ｍｇ、８１６μｍｏｌ）および重炭酸ナトリウム（２７４ｍｇ、３．２６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１３ｍｌ）中溶液を０℃に冷却した。次いで、トリホスゲン（１６９ｍｇ、５７１μｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を氷浴中で冷却し、（Ｅ）－３－（２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）スチリル）アゼチジン（２００ｍｇ、８１６μｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（４２２ｍｇ、５７０μｌ、３．２６ｍｍｏｌ）を添加した。懸濁液を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏで抽出し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。生成物を分取ＨＰＬＣによって精製し、表題化合物（３５４ｍｇ、９８％、純度９７％）を白色泡状物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４２８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0090】

実施例［^１１Ｃ］１
［^１１Ｃ］（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化13】

【0091】

第３の工程において、前駆体として３－（２－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）フェネチル）アゼチジン（ギ酸塩、４．７μｍｏｌ、１．１６ｍｇ）を用いて、上記の一般的な手順を適用した。生成物を、放射性化学純度９９％超、およびモル活性が６６～１２６ＧＢｑ／μｍｏｌで得た。

【0092】

実施例２
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化14】

【0093】

丸底フラスコをＨＶ下で加熱ガン乾燥し、アルゴンを戻し充填し、ビス（トリクロロメチル）カーボネート（３９．９ｍｇ、１３４μｍｏｌ）および重炭酸ナトリウム（６４．５ｍｇ、７６８μｍｏｌ）を充填した。ＤＣＭ（１０ｍｌ）を添加して懸濁液を得た。（４ａＲ，８ａＳ）－４ａ，５，６，７，８，８ａ－ヘキサヒドロ－４Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（０．０３ｇ、１９２μｍｏｌ）を０℃で懸濁液に添加した。反応混合物を０℃で５分間、および室温で２０時間撹拌した。６－（２－フルオロ－６－メトキシベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン２，２，２－トリフルオロアセテート（６７．１ｍｇ、１９２μｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（９９．３ｍｇ、１３４μｌ、７６８μｍｏｌ）を添加した。得られた灰白色の懸濁液を室温で１時間撹拌した。反応混合物をＨ_２Ｏ（２０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で濃縮した。粗製物質を、フラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、２０ｇ、ヘプタン中０％～１０％のＤＣＭ中ＭｅＯＨ）により精製した。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４１８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0094】

中間体：
ａ）（２－フルオロ－６－メトキシベンジル）トリフェニルホスホニウムブロミド

【化15】

【0095】

Ａｒ下で、ＰＰｈ_３（１．２０ｇ、４．５７ｍｍｏｌ）をＡＣＮ（１０ｍＬ）に溶解し、２－（ブロモメチル）－１－フルオロ－３－メトキシベンゼン（１．００ｇ、４．５７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を８０℃で３時間撹拌した。得られた懸濁液を室温に冷却した。ＴＢＭＥ（１００ｍＬ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。固体を濾過し、ＴＢＭＥで洗浄し、次いで、高真空で乾燥させて、表題化合物（２．１９ｇ、１００％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４０１．２Ｍ^＋．

【0096】

ｂ）ｔｅｒｔ－ブチル６－（２－フルオロ－６－メトキシベンジリデン）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート

【化16】

【0097】

Ａｒ下－７８℃で、（２－フルオロ－６－メトキシベンジル）トリフェニルホスホニウムブロミド（０．５ｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解し、ＬＨＭＤＳ（２．０８ｍｌ、２．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を－７８℃で２時間撹拌した。次いで、室温で、ｔｅｒｔ－ブチル６－オキソ－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート（ＣＡＳ ＮＲ １１８１８１６－１２－５）（２１９ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８５℃で一晩撹拌した。ＴＢＤＭＥを添加した。得られた沈殿物を濾別した（ＴＰＰＯ）。濾液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、２０ｇ、ヘプタン中０％～８０％ ＥｔＯＡｃ）によって精製した。７８ｍｇ（２２％）、無色油状物。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２７８．２［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ］^＋．

【0098】

ｃ）ｔｅｒｔ－ブチル６－（２－フルオロ－６－メトキシベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート

【化17】

【0099】

ｔｅｒｔ－ブチル６－（２－フルオロ－６－メトキシベンジリデン）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート（７８．０ｍｇ、２３４μｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（２ｍｌ）と合わせて、淡黄色溶液を得た。フラスコをパージし、Ａｒ（３×）を戻し充填した。Ｐｄ－Ｃ １０％（２４．９ｍｇ、２３．４μｍｏｌ）を添加し、反応物をＨ_２下で２時間攪拌した。反応混合物をセライトパッドでフィルタにかけ、ＥｔＯＡｃで洗浄し、高真空で乾燥させた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２８０．２［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ］^＋．

【0100】

ｄ）６－（２－フルオロ－６－メトキシベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン２，２，２－トリフルオロアセテート

【化18】

【0101】

ｔｅｒｔ－ブチル６－（２－フルオロ－６－メトキシベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート（７６．２ｍｇ、２２７μｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍｌ）中溶液に、２，２，２－トリフルオロ酢酸（１３０ｍｇ、８６．９μｌ、１．１４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を真空、次いで高真空によって濃縮し、揮発性物質の共沸除去のためにＴｏｌを添加した。８１ｍｇ（定量的）、無色油状物。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２３６．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0102】

実施例［^３Ｈ］２
［^３Ｈ］（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化19】

【0103】

［^３Ｈ］メチルノシレート（１．８５ＧＢｑ、５０ｍＣｉ、０．６１μｍｏｌ）に、フェノール前駆体（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（０．５４ｍｇ、ｌ．３４μｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０μｌ）中溶液を添加した。炭酸セシウム（１．１ｍｇ、３．３６μｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、Ｈ_２Ｏを添加し、溶媒をアルゴン流下で除去した。粗製生成物をＨＰＬＣ（Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８ ＯＢＤ、１０×２５０ｍｍ、ＡＣＮ［Ａ］／Ｈ_２Ｏ［Ｂ］、勾配：１～１２分３：７～９：１［Ａ］：［Ｂ］、１５～１６分９：１～３：７、運転時間２０分、流速８ｍｌ／分、２３０ｎｍ、オーブン温度６０℃）によって精製した。純粋な画分を合わせ、溶媒を凍結乾燥除去させた。純粋なトリチウム標識化合物を溶解し、エタノール溶液（１０ｍｌ）として貯蔵し、２９６ＭＢｑ（８ｍＣｉ）の量で得た。放射性ＨＰＬＣにより９９．５％超の放射性化学純度が測定され、質量分析（ＭＳ）により３．０ ＴＢｑ／ｍｍｏｌ（８１Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の特異的活性が測定された。標識化合物の同一性は、ＨＰＬＣ（非標識参照標準を同時注入することによって）およびＭＳによって確認した。ＭＳ：ｍ／ｚ＝４１８．２［Ｍ（Ｈ）＋Ｈ］^＋（４％），４２０．２［Ｍ（^３Ｈ）＋Ｈ］^＋（０％），４２２．２［Ｍ（^３Ｈ_２）＋Ｈ］^＋（４％），４２４．２［Ｍ（^３Ｈ_３）＋Ｈ］^＋（９２％）．

【0104】

中間体：
ａ）２－（（２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－６－イル）メチル）－３－フルオロフェノール

【化20】

【0105】

ｔｅｒｔ－ブチル６－（２－フルオロ－６－メトキシベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート（３５０ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（７ｍｌ）と合わせて、無色の溶液を得た。ＢＢｒ_３（５２３ｍｇ、１９７μｌ、２．０９ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液の添加によってクエンチし、ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦで抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で濃縮した。２３１ｍｇ（１００％）、黄色固体。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２２２．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0106】

ａ）（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２－フルオロ－６－ヒドロキシ－フェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化21】

【0107】

（４ａＲ，８ａＳ）－４ａ，５，６，７，８，８ａ－ヘキサヒドロ－４Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－６－イウム－３－オン；（２Ｓ，３Ｓ）－２，３－ビス［（４－メチルベンゾイル）オキシ］ブタン二酸；（２Ｓ，３Ｓ）－４－ヒドロキシ－２，３－ビス［（４－メチルベンゾイル）オキシ］－４－オキソブタノエート；水和物（ＢＢ１の塩）（３００ｍｇ、４３１μｍｏｌ）をＡＣＮ（７ｍｌ）に懸濁し、室温で撹拌しながらトリエチルアミン（３０５ｍｇ、４２０μｌ、３．０１ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、ビス（１，２，４トリアゾール－１－イル）メタノン（７０．７ｍｇ、４３１μｍｏｌ）を一度に添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＡＣＮ（３５０μｌ）に溶解した２－（（２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－６－イル）メチル）－３－フルオロフェノール（１１４ｍｇ、５１７μｍｏｌ）を室温で滴加した。反応混合物を５０℃で１０分間撹拌し、室温で３時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、Ｈ_２Ｏ ２ｍＬでクエンチし、次いで、ＴＢＭＥ ４ｍＬで抽出した。有機層を５％ ＮａＨＣＯ_３ ２ｍＬで洗浄し、次いで０．５Ｍ ＨＣｌ １ｍＬで洗浄した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮した（黄色油状物、８．１５ｇ）。粗製物質を、フラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、２０ｇ、ヘプタン中０％～１０％のＤＣＭ中ＭｅＯＨ）により精製し、濃縮し、ＡＣＮ／Ｈ_２Ｏに溶解し、凍結乾燥させた。１３４ｍｇ（９４％）、白色固体。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４０４．３［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0108】

実施例３
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化22】

【0109】

３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチル］アゼチジン；２，２，２－トリフルオロ酢酸（１００ｍｇ、０．３３０ｍｍｏｌ）、（４－ニトロフェニル）（４ａＲ，８ａＳ）－３－オキソ－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－６－カルボキシレート（ＢＢ２）（１２５ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１２６ｍｇ、０．９８０ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（６ｍＬ）中混合物を８０℃で１２時間撹拌した。混合物を減圧濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（ＮＨ_４ＨＣＯ_３）により精製し、次いで、凍結乾燥し、（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（５０ｍｇ、４１％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３７６．０［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0110】

中間体：
ａ）ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチニル］アゼチジン－１－カルボキシレート

【化23】

【0111】

ｔｅｒｔ－ブチル３－エチニルアゼチジン－１－カルボキシレート（ＣＡＳ ＮＲ ２８７１９３－０１－５）（１．００ｇ、５．５２ｍｍｏｌ）および４－ブロモ－３－フルオロトルエン（ＣＡＳ ＮＲ ４５２－７４－４）（１．２５ｇ、６．６２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の溶液に、２５℃で、［Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４］（５３１ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（８８ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（４．６４ｇ、４６．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ_２で１分間パージし、次いで６０℃、Ｎ_２雰囲気下において１２時間撹拌した。混合物をＮＨ_４Ｃｌ（飽和、５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。溶媒蒸発後、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２０：１～１０：１）によって精製し、ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチニル］アゼチジン－１－カルボキシレート（６５０ｍｇ、４１％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ－ｄ）δ＝７．３３－７．２８（ｍ，１Ｈ），６．９４－６．８５（ｍ，２Ｈ），４．２６－４．１９（ｍ，２Ｈ），４．０５（ｄｄ，Ｊ＝６．４，８．１ Ｈｚ，２Ｈ），３．６６－３．４９（ｍ，１Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）．

【0112】

ｂ）ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチル］アゼチジン－１－カルボキシレート

【化24】

【0113】

２５℃のｔｅｒｔ－ブチル３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチニル］アゼチジン－１－カルボキシレート（５００ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中溶液に、Ｐｄ／Ｃ １０％（２５０ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＨ_２バルーン（１５ｐｓｉ）下、４０℃で６時間撹拌した。反応混合物を前のバッチ（０．２ｍｍｏｌスケール）と合わせ、混合物をセライトパッドでフィルタにかけ、濾液を減圧濃縮し、残渣を真空で乾燥させた。３５０ｍｇ、無色油状物。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２３８．１ ［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ］^＋．

【0114】

ｃ）３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチル］アゼチジン；２，２，２－トリフルオロ酢酸

【化25】

【0115】

ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチル］アゼチジン－１－カルボキシレート（３５０ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の溶液に、２５℃でＴＦＡ（１．０ｍＬ、１．１９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、残渣を真空で乾燥させ、３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチル］アゼチジン；２，２，２－トリフルオロ酢酸（２６０ｍｇ、７１％）を無色油状物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１９４．０ ［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0116】

実施例［^３Ｈ］３
［^３Ｈ］（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化26】

【0117】

４ｍＬのトリチウム化フラスコ中で、（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［（Ｅ）－２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（２．０ｍｇ、５．３６μｍｏｌ）および活性炭パラジウム（１０％ Ｐｄ基準）（６．２７ｍｇ、５．８９μｍｏｌ）をエタノール（１ｍＬ）中で混合した。フラスコをＲＣ Ｔｒｉｔｅｃトリチウムマニホールドに取り付け、３回の凍結融解サイクルによって脱気した。トリチウムガスを導入し、懸濁液をトリチウムガス雰囲気下、６００ｍｂａｒで３時間激しく撹拌した。溶液を液体窒素によって冷却し、反応容器内の過剰のトリチウムガスを廃トリチウム用ウラントラップに再吸収させた。溶媒を凍結乾燥して除き、不安定なトリチウムをＭｅＯＨ（３×０．５ｍＬ）による凍結乾燥によって除去した。残りの反応混合物をＥｔＯＨで希釈し、黒色パラジウム残渣からフィルタにかけた。粗製生成物を、溶出液（［Ａ］：［Ｂ］９：１～３：７勾配６－２０分、実行時間２３分）として［Ａ］Ｈ_２Ｏおよび［Ｂ］ＡＣＮを６ｍＬ／分の流速で使用する分取ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ８カラム、５μｍ、１０ｍｍ×２５０ｍｍ）によって精製した。ＭＳ分光法によって決定し、放射性化学純度９９．１％およびモル活性１．８ＴＢｑ／ｍｍｏｌ（４９．５Ｃｉ／ｍｍｏｌ）で、表題化合物３．３ＧＢｑ（８９ｍＣｉ）を得た。標識化合物の同一性は、ＭＳ、および放射性標識材料との冷却参照標準の同時注入によって確認した。ＭＳ：ｍ／ｚ＝３７６．２［Ｍ（Ｈ）＋Ｈ］^＋（５％），３７８．２［Ｍ（^３Ｈ）＋Ｈ］^＋（２４％），３８０．２［Ｍ（^３Ｈ_２）＋Ｈ］^＋（６５％），３８２．２［Ｍ（^３Ｈ_３）＋Ｈ］^＋（６％）．

【0118】

中間体：
ａ）１－（ジエトキシホスホリルメチル）－２－フルオロ－４－メチル－ベンゼン

【化27】

【0119】

１－（ブロモメチル）－２－フルオロ－４－メチルベンゼン（１ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）のトリエチルホスファイト（２．０５ｇ、２．１４ｍｌ、１２．３ｍｍｏｌ）中の溶液を２．５時間還流撹拌した。透明および無色の混合物をシリカゲルカラムに直接的にアプライした。化合物を、シリカゲルクロマトグラフィによって４０ｇのカラム上にてｎ－ヘプタン：ＥｔＯＡｃ（１００：０～０：１００）の勾配で溶出するＭＰＬＣ（ＩＳＣＯ）システムを用いて２回精製し、所望の化合物を無色の液体として得た（１．０９ｇ、８５％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２６１．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0120】

ｂ）ｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－３－（２－フルオロ－４－メチルスチリル）アゼチジン－１－カルボキシレート

【化28】

【0121】

１－（ジエトキシホスホリルメチル）－２－フルオロ－４－メチル－ベンゼン（１．０９ｇ、４．１９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７ｍＬ）中氷冷溶液に、鉱油（１８３ｍｇ、４．１９ｍｍｏｌ）中５５％ ＮａＨを添加し、混合物をこの温度で３０分間撹拌した。淡褐色混合物に、ＴＨＦ（５ｍＬ）中ｔｅｒｔ－ブチル３－ホルミルアゼチジン－１－カルボキシレート（ＣＡＳ ＮＲ ３９８４８９－２６－４）（７７６ｍｇ、４．１９ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。撹拌を室温で一晩、次いで５０℃で３日間続けた。反応混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液およびＥｔＯＡｃに注ぎ、層を分離した。水層をＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、シリカゲルで処理し、蒸発させた。化合物を、シリカゲルクロマトグラフィによって４０ｇのカラム上にてｎ－ヘプタン：ＥｔＯＡｃ（１００：０～０：１００）の勾配で溶出するＭＰＬＣシステムを用いて精製して、所望の化合物を無色の油状物として得た（８５ｍｇ；７％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２３６．２［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_９＋Ｈ］^＋．

【0122】

ｃ）（Ｅ）－３－（２－フルオロ－４－メチルスチリル）アゼチジン４－メチルベンゼンスルホネート

【化29】

【0123】

ｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－３－（２－フルオロ－４－メチルスチリル）アゼチジン－１－カルボキシレート（１２９ｍｇ、４４３μｍｏｌ）および４－メチルベンゼンスルホン酸水和物（８８．４ｍｇ、４６５μｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１．５ｍＬ）中溶液を２時間還流撹拌した。懸濁液を４°Ｃで冷却し、次いでフィルタにかけた。フィルタケーキをＥｔＯＡｃで洗浄して、所望の生成物を無色固体として得た（１４０ｍｇ、８７％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１９２．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0124】

ｄ）（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［（Ｅ）－２－（２－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化30】

【0125】

（４ａＲ，８ａＳ）－４ａ，５，６，７，８，８ａ－ヘキサヒドロ－４Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－６－イウム－３－オン；（２Ｓ，３Ｓ）－２，３－ビス［（４－メチルベンゾイル）オキシ］ブタン二酸；（２Ｓ，３Ｓ）－４－ヒドロキシ－２，３－ビス［（４－メチルベンゾイル）オキシ］－４－オキソブタノエート；水和物（ＢＢ１の塩）（２５９ｍｇ、３７１μｍｏｌ）のＭｅＣＮ（１．５ｍＬ）中の懸濁液にＴＥＡ（２６３ｍｇ、３６２μＬ、２．６ｍｍｏｌ）を添加し、その後、ビス（１，２，４トリアゾール－１－イル）メタノン（６１ｍｇ、３７１μｍｏｌ）を一度に加えた。混合物を室温で４０分間撹拌した。溶液に（Ｅ）－３－（２－フルオロ－４－メチルスチリル）アゼチジン４－メチルベンゼンスルホネート（１３５ｍｇ、３７１μｍｏｌ）を添加し、混合物を５０℃で３時間撹拌し、引き続いて７０℃で一晩撹拌した。冷却後、反応混合物を水およびＥｔＯＡｃに注ぎ入れ、層を分離した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、シリカゲルで処理し、蒸発させた。化合物を、シリカゲルクロマトグラフィによって４ｇのカラム上にてｎ－ヘプタン：ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ ３／１（１００：０～０：１００）の勾配で溶出するＭＰＬＣシステムを用いて精製し、所望の化合物を無色の泡状物として得た（１０８ｍｇ；７８％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３７４．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0126】

実施例４
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化31】

【0127】

３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン；２，２，２－トリフルオロ酢酸（１５０ｍｇ、０．４００ｍｍｏｌ）、（４ａＲ，８ａＳ）－３－オキソヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－６（５Ｈ）－カルボキシレート（ＢＢ２）（１５５ｍｇ、０．４８０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１５６ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（１２ｍＬ）中混合物を８０℃で１２時間撹拌した。混合物を減圧濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（ＮＨ_４ＨＣＯ_３）によって精製し、次いで、凍結乾燥させ、（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（４４ｍｇ、３６％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４４２．３［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0128】

中間体：
ａ）ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチニル］アゼチジン－１－カルボキシレート

【化32】

【0129】

ｔｅｒｔ－ブチル３－エチニルアゼチジン－１－カルボキシレート（ＣＡＳ ＮＲ ２８７１９３－０１－５）（８００ｍｇ、４．４１ｍｍｏｌ）および３－トリフルオロメチル－４－ブロモアニソール（ＣＡＳ ＮＲ ４００－７２－６）（１．３ｇ、５．３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（３０ｍＬ）中溶液に、２５℃で、［Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４］（５０９ｍｇ、０．４４０ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（８４ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（４．４６ｍｇ、４４．１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ_２で１分間パージし、次いで、これを６０℃で１２時間撹拌した。混合物をＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液、１００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ ２０：１～１０：１）によって精製し、ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチニル］アゼチジン－１－カルボキシレート（１６０ｍｇ、８．１％）を無色油状物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３００．１［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ］^＋．

【0130】

ｂ）ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボキシレート

【化33】

【0131】

ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチニル］アゼチジン－１－カルボキシレート（２３０ｍｇ、０．６５０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中溶液に、２５℃でＰｄ／Ｃ １０％（１５０．０ｍｇ）を添加し、混合物をＨ_２のバルーン下、４０℃で１２時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドでフィルタにかけ、濾液を減圧濃縮し、残渣を真空で乾燥させ、表題化合物（１８０ｍｇ、７７％）を無色油状物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３０４．１［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ］^＋．

【0132】

ｃ）３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン；２，２，２－トリフルオロ酢酸

【化34】

【0133】

ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボキシレート（１８０ｍｇ、０．５００ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の溶液に、２５℃でＴＦＡ（１．０ｍＬ、１．１９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、残渣を真空で乾燥させ、３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン；２，２，２－トリフルオロ酢酸（１５０ｍｇ、８０％）を無色油状物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２６０．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0134】

実施例［^３Ｈ］４
［^３Ｈ］（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化35】

【0135】

［^３Ｈ］メチルノシレート（１．８５ＧＢｑ、５０ｍＣｉ、０．６１μｍｏｌ）のＤＭＦ（１００μｌ）中溶液に、ＤＭＦ（１５０μｌ）に溶解したフェノール前駆体（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［４－ヒドロキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（０．５７ｍｇ，ｌ．３３μｍｏｌ）を添加した。炭酸セシウム（１ｍｇ、３．０７μｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した後、Ｈ_２ＯおよびＴＢＭＥで処理した。有機層を分離した後、水層を再びＴＢＭＥで抽出した。合わせた有機層を１ Ｎ ＮａＯＨおよびＨ_２Ｏで連続的に洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥させた。有機溶媒を蒸発させた後、粗製生成物をＨＰＬＣ（Ｘ－Ｔｅｒｒａ Ｐｒｅｐ ＲＰ－１８、１０×１５０ｍｍ、ＡＣＮ／Ｈ_２Ｏ（５％のアセトニトリルを含有）、３ｍｌ／分、２１０ｎｍ）によって精製した。固相抽出（Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ｐｌｕｓ Ｃ１８）によって純粋なトリチウム標識化合物を単離し、エタノール溶液としてカートリッジから溶出し、放射性化学純度９８．２％および特異的活性３．０３ ＴＢｑ／ｍｍｏｌ（８２Ｃｉ／ｍｍｏｌ）で標的化合物６５５ＭＢｑ（１７．７ｍＣｉ）が得られ、これは質量分析（ＭＳ）によって決定された。標識化合物の同一性は、ＨＰＬＣ（非標識参照標準を同時注入することによって）およびＭＳによって確認した。ＭＳ：ｍ／ｚ＝４４２［Ｍ（Ｈ）＋Ｈ］^＋（４％），４４４［Ｍ（^３Ｈ）＋Ｈ］^＋（０％），４４６［Ｍ（^３Ｈ_２）＋Ｈ］^＋（４％），４４８［Ｍ（^３Ｈ_３）＋Ｈ］^＋（９２％）．

【0136】

中間体：
ａ）（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－［４－ヒドロキシ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化36】

【0137】

（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［４－メトキシ－２－（トリフルオロメチル）フェネチル］アゼチジン－１－カルボニル］ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン（２０ｍｇ、４５．３μｍｏｌ）をＤＣＭ（０．５ｍｌ）と合わせた。０℃に冷却した後、ＢＢｒ_３（１１．３ｍｇ、４．２９μｌ、４５．３μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液の添加によってクエンチし、次いで、ＥｔＯＡｃで抽出し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、蒸発乾固させた。粗製化合物を分取ＨＰＬＣにより精製し、標題化合物（８ｍｇ、４１％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４２８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0138】

実施例５
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化37】

【0139】

攪拌棒を備えたバイアルに、［Ｉｒ｛ｄＦ（ＣＦ_３）ｐｐｙ｝２（ｄｔｂｐｙ）］ＰＦ_６（ＣＡＳ ＮＲ ８７０９８７－６３－６）（１．４２ｍｇ、１．２７μｍｏｌ）、ブロモシクロブタン（１７．１ｍｇ、１２７μｍｏｌ）、（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－ブロモフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン（５０ｍｇ、１２７μｍｏｌ）、トリス（トリメチルシリル）シラン（３１．５ｍｇ、３９．１μｌ、１２７μｍｏｌ）および無水炭酸ナトリウム（２６．９ｍｇ、２５４μｍｏｌ）を添加した。バイアルを密封し、Ａｒ下に置いた後、ＤＭＥ（１ｍＬ）を添加した。別のバイアルに、ジクロロニッケル１，２－ジメトキシエタン（２．７９ｍｇ、１２．７μｍｏｌ）および４－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（４－ｔｅｒｔ－ブチル－２－ピリジル）ピリジン（３．４ｍｇ、１２．７μｍｏｌ）を添加した。プレ触媒バイアルを密封し、Ａｒでパージし、ＤＭＥ（４ｍＬ）を添加した。プレ触媒バイアルを５分間超音波処理し、その後、０．４ｍＬ（０．５ｍｏｌ％触媒）をシリンジで反応容器に通した。反応混合物をＡｒで脱気した。反応物を撹拌し、４２０ｎｍランプで１４．５時間照射した。空気への曝露によって反応をクエンチし、フィルタにかけ、少量のＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液をシリカゲルで処理し、蒸発させた。化合物を、シリカゲルクロマトグラフィによって１２ｇのカラム上にてｎ－ヘプタン：ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ ３／１（８０：２０～１０：９０）の勾配で溶出するＭＰＬＣ（ＩＳＣＯ）システムを用いて精製し、所望の化合物を淡褐色ガムとして得た（２２ｍｇ；４７％）。ＡＣＮ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）（３５：６５～１００：０）の勾配を用いた分取ＨＰＬＣ（ＹＭＣ－Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８カラム）でさらに精製し、所望の化合物を無色固体として得た（１５ｍｇ、３２％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３７０．３［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0140】

中間体：
ａ）（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－ブロモフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン

【化38】

【0141】

３－（４－ブロモフェニル）アゼチジン塩酸塩（ＣＡＳ ＮＲ ９０５６１－７４－３）（８３．０ｍｇ、３３４μｍｏｌ）および４－ニトロフェニル（４ａＲ，８ａＳ）－３－オキソヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－６（５Ｈ）－カルボキシレート（ＢＢ２）（１０７ｍｇ、３３４μｍｏｌ）のＡＣＮ（２ｍＬ）中懸濁液に、ＤＩＰＥＡ（１７３ｍｇ、２３３μＬ、１．３４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。黄色溶液を蒸発させた。生成物を、ＡＣＮ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ ＴＥＡ）（２０：８０～９８：２）の勾配を使用する分取ＨＰＬＣ（Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸカラム）で精製し、所望の化合物（１９３ｍｇ、８１％）を無色ゴムとして得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３９４．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0142】

実施例［^１１Ｃ］５
［^１１Ｃ］（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化39】

【0143】

第３の工程において、前駆体として（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン４－メチルベンゼンスルホネート（４．７μｍｏｌ、０．８８ｍｇ）を用いて、上述の一般的な手順を適用した。生成物を、放射性化学純度９９％超、およびモル活性６４～９６ＧＢｑ／μｍｏｌで得た。

【0144】

中間体：
ａ）ｔｅｒｔ－ブチル３－（４－ブロモフェニル）アゼチジン－１－カルボキシレート

【化40】

【0145】

ｔｅｒｔ－ブチル３－ヨードアゼチジン－１－カルボキシレート（ＣＡＳ ＮＲ ２５４４５４－５４－１）（１．２０ｇ、４．２４ｍｍｏｌ）の２－プロパノール（１５ｍＬ）中攪拌溶液に、（４－ブロモフェニル）ボロン酸（１．７０ｇ、８．４８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物に、ＴＨＦ（４．２４ｍＬ、８．４８ｍｍｏｌ）中のｒａｃ－（１Ｒ，２Ｒ）－２－アミノシクロヘキサン－１－オール（２９．３ｍｇ、２５４μｍｏｌ）、ヨウ化ニッケル（ＩＩ）（７９．５ｍｇ、２５４μｍｏｌ）およびナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド２ ＭをＡｒ下で添加した。混合物をマイクロ波オーブン中、８０℃で３０分間加熱した。反応混合物を水およびＥｔＯＡｃに注ぎ入れた。水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、シリカゲルで処理し、蒸発させた。化合物を、ｎ－ヘプタン：ＥｔＯＡｃ（１００：０～５０：５０）の勾配で溶出するＭＰＬＣシステムを使用して、最初に４０ｇで、次いで８０ｇカラムでさらに２回シリカゲルクロマトグラフィによって精製し、所望の化合物（４４０ｍｇ、３３％）を無色油状物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２５６．０［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ］^＋．

【0146】

ｂ）ｔｅｒｔ－ブチル３－（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン－１－カルボキシレート

【化41】

【0147】

表題化合物を、ブロモシクロブタン（３８１ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ－ブチル３－（４－ブロモフェニル）アゼチジン－１－カルボキシレート（４４０ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）から（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（実施例５）と同様に調製した。１２５ｍｇ（３０％）の無色固体。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２３２．１［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ］^＋．

【0148】

ｃ）３－（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン４－メチルベンゼンスルホネート

【化42】

【0149】

ｔｅｒｔ－ブチル３－（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン－１－カルボキシレート（３９０ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（６ｍＬ）中の混合物に、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（２５８ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を密閉管中で１時間還流撹拌した。反応混合物を４℃の冷蔵庫で３０分間冷却し、次いで、固体を濾過によって回収した。フィルタケーキを少量のＥｔＯＡｃで洗浄して乾燥させ、表題化合物（３７７ｍｇ、７３％）を淡褐色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１８８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0150】

実施例６
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２，６－ジフルオロフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化43】

【0151】

ビス（トリクロロメチル）カルボネート（３９．９ｍｇ、１３４μｍｏｌ）および重炭酸ナトリウム（６４．５ｍｇ、７６８μｍｏｌ）をＡｒ下で合わせた。ＤＣＭ（１０ｍｌ）を添加して懸濁液を得た。（４ａＲ，８ａＳ）－ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン（ＢＢ１）（３０ｍｇ、１９２μｍｏｌ）を０℃で懸濁液に添加した。反応混合物を０℃で５分間撹拌した後、室温で２０時間撹拌した。６－（２，６－ジフルオロベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン２，２，２－トリフルオロアセテート（６４．８ｍｇ、１９２μｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（９９．３ｍｇ、１３４μｌ、７６８μｍｏｌ）を添加した。得られた灰白色の懸濁液を室温で１時間撹拌した。反応混合物をＨ_２Ｏ（２０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭで抽出した（２×５０ｍＬ）。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で濃縮した。粗製物質を、フラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、２０ｇ、ヘプタン中０％～１０％のＤＣＭ中ＭｅＯＨ）により精製した。５２ｍｇ（６５％）、白色泡状物。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４０６．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0152】

中間体：
ａ）ｔｅｒｔ－ブチル６－（２，６－ジフルオロベンジリデン）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート

【化44】

【0153】

Ａｒ下－７８℃で、（２，６－ジフルオロベンジル）トリフェニルホスホニウムブロミド（ＣＡＳ ＮＲ １５９７８３－８０－９）（０．５ｇ、１．０７ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解し、ＬＨＭＤＳ（２．１３ｍｌ、２．１３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を－７８℃で２時間撹拌した。次いで、室温で、ｔｅｒｔ－ブチル６－オキソ－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート（ＣＡＳ ＮＲ １１８１８１６－１２－５）（２２５ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８５℃で一晩撹拌した。ＴＢＤＭＥを添加し、沈殿中のＴＰＰＯを濾別した。濾液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、２０ｇ、ヘプタン中０％～８０％ ＥｔＯＡｃ）によって精製した。１１４ｍｇ（３３％）、白色固体。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２６６．２［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ］^＋．

【0154】

ｂ）ｔｅｒｔ－ブチル６－（２，６－ジフルオロベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート

【化45】

【0155】

ｔｅｒｔ－ブチル６－（２，６－ジフルオロベンジリデン）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート（０．１１４ｇ、３５５μｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（２ｍｌ）に溶解した。フラスコをパージし、Ａｒを戻し充填し、Ｐｄ／Ｃ １０％（３７．８ｍｇ、３５．５μｍｏｌ）を添加し、反応物をＨ_２下で２時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドでフィルタにかけ、ＥｔＯＡｃで洗浄し、ＨＶで乾燥させた。１１２ｍｇ（９８％）、無色油状物。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２６８．２［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ］^＋．

【0156】

ｃ）６－（２，６－ジフルオロベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン２，２，２－トリフルオロアセテート

【化46】

【0157】

ｔｅｒｔ－ブチル６－（２，６－ジフルオロベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート（１１２ｍｇ、３４６μｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍｌ）中溶液に、２，２，２－トリフルオロ酢酸（１９７ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混合物を室温で２時間攪拌した後、ＨＶ上で揮発性物質を蒸発させた（Ｔｏｌで洗浄）。１２４ｍｇ（定量的）、無色油状物。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２２４．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0158】

実施例［^１１Ｃ］６
［^１１Ｃ］（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２，６－ジフルオロフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化47】

【0159】

第３の工程において前駆体として６－（２，６－ジフルオロベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン２，２，２－トリフルオロアセテート（４．７μｍｏｌ、１．０５ｍｇ）を使用して、上記の一般的な手順を適用した。生成物を、放射性化学純度９９％超で得た。

【0160】

実施例７
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６［（２－メトキシフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化48】

【0161】

（４ａＲ，８ａＳ）－４ａ，５，６，７，８，８ａ－ヘキサヒドロ－４Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－６－イウム－３－オン；（２Ｓ，３Ｓ）－２，３－ビス［（４－メチルベンゾイル）オキシ］ブタン二酸；（２Ｓ，３Ｓ）－４－ヒドロキシ－２，３－ビス［（４－メチルベンゾイル）オキシ］－４－オキソブタノエート；水和物（ＢＢ１の塩）（１００ｍｇ、１４４μｍｏｌ）をＡＣＮ（２ｍＬ）に懸濁し、ＴＥＡ（１０２ｍｇ、１４０μｌ、１ｍｍｏｌ）を室温で撹拌しながら添加した。次いで、ビス（１，２，４トリアゾール－１－イル）メタノン（２３．６ｍｇ、１４４μｍｏｌ）を一度に添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＡＣＮ（１００μｌ）に溶解した６－（２－メトキシベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン２，２，２－トリフルオロアセテート（５７．１ｍｇ、１７２μｍｏｌ）を室温で滴加した。反応混合物を５０℃で１０分間撹拌し、室温で３時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、水（２ｍＬ）でクエンチし、次いで、ＴＢＭＥ（４ｍＬ）で抽出した。有機層を５％ＮａＨＣＯ_３（２ｍＬ）水溶液、次いで０．５ Ｍ ＨＣｌ（１ｍＬ）およびブラインで洗浄した。Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、溶媒を蒸発させた後、残渣をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、２０ｇ、０％～１０％ ＤＣＭ中ＭｅＯＨ）によって精製した。５２ｍｇ（９１％）、白色泡状物。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４００．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0162】

中間体：
ａ）ｔｅｒｔ－ブチル６－（２－メトキシベンジリデン）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート

【化49】

【0163】

Ａｒ下、－７８℃で、（２－メトキシベンジル）トリフェニルホスホニウムブロミド（ＣＡＳ ＮＲ ６４８２０－０７－１）（０．５ｇ、１．０８ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）に溶解し、ＬＨＭＤＳ（２．１６ｍｌ、２．１６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を－７８℃で２時間撹拌した。次いで、室温で、ｔｅｒｔ－ブチル６－オキソ－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート（ＣＡＳ ＮＲ １１８１８１６－１２－５）（２２８ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８５℃で一晩撹拌した。ＴＢＤＭＥを添加し、沈殿中のＴＰＰＯを濾別した。濾液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、２０ｇ、０％～８０％ ヘプタン中ＥｔＯＡｃ）によって直接精製した。１６６ｍｇ（４９％）、黄色固体。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２６０．２［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ］^＋．

【0164】

ｂ）ｔｅｒｔ－ブチル６－（２－メトキシベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート

【化50】

【0165】

ｔｅｒｔ－ブチル６－（２－メトキシベンジリデン）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート（１６６ｍｇ、５２６μｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（３ｍｌ）に溶解した。フラスコをパージし、Ａｒ（×３）を戻し充填した。Ｐｄ－Ｃ １０％（５６ｍｇ、５２．６μｍｏｌ）を添加し、反応物をＨ_２下で２時間攪拌した。混合物をセライトパッドでフィルタにかけ、ＥｔＯＡｃで洗浄し、ＨＶで乾燥させた。１２０ｍｇ（７２％）、無色油状物。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２６２．２［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ］^＋．

【0166】

ｃ）６－（２－メトキシベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン２，２，２－トリフルオロアセテート

【化51】

【0167】

ｔｅｒｔ－ブチル６－（２－メトキシベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート（１２０ｍｇ、３７８μｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍｌ）中溶液に、２，２，２－トリフルオロ酢酸（２１６ｍｇ、１４５μｌ、１．８９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＨＶ下で濃縮した（Ｔｏｌで洗浄）。１２５ｍｇ（１００％）、無色油状物。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２１８．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0168】

実施例［^３Ｈ］７
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６－［（２－メトキシフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン ＲＯ ７４２５９４５－０００－００１

【化52】

【0169】

［^３Ｈ］メチルノシレート（１．８５ＧＢｑ、５０ｍＣｉ、０．６２５μｍｏｌ）のＤＭＦ（１００μｌ）中溶液に、ＤＭＦ（１５０μｌ）に溶解したフェノール前駆体（４ａＲ，８ａＳ）－６－（６－（２－ヒドロキシベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル）ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン（０．４８ｍｇ、ｌ．２５μｍｏｌ）を添加した。炭酸セシウム（１ｍｇ、３．１３μｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した後、Ｈ_２ＯおよびＴＢＭＥで処理した。有機層を分離した後、水層を再びＴＢＭＥで抽出した。合わせた有機層を１Ｎ ＮａＯＨおよび水で連続的に洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥させた。有機溶媒を蒸発させた後、粗製生成物をＨＰＬＣ（Ｘ－Ｔｅｒｒａ Ｐｒｅｐ ＲＰ－１８、１０×１５０ｍｍ、ＡＣＮ／Ｈ_２Ｏ（５％のＡＣＮを含有）、３ｍｌ／分、２１０ｎｍ）によって精製した。固相抽出（Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ｐｌｕｓ Ｃ１８）によって純粋なトリチウム標識化合物を単離し、エタノール溶液としてカートリッジから溶出し、放射性化学純度９９．５％および特異的活性３．０６ＴＢｑ／ｍｍｏｌ（８２．８Ｃｉ／ｍｍｏｌ）で標的化合物１８５ＭＢｑ（５．０ｍＣｉ）が得られ、これは質量分析（ＭＳ）によって決定された。標識化合物の同一性は、ＨＰＬＣ（非標識参照標準を同時注入することによって）およびＭＳによって確認した。ＭＳ：ｍ／ｚ＝４００［Ｍ（Ｈ）＋Ｈ］^＋（３％），４０２［Ｍ（^３Ｈ）＋Ｈ］^＋（０％），４０４［Ｍ（^３Ｈ_２）＋Ｈ］^＋（４％），４０６［Ｍ（^３Ｈ_３）＋Ｈ］^＋（９３％）．

【0170】

中間体：
ａ）２－（（２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－６－イル）メチル）フェノール

【化53】

【0171】

ｔｅｒｔ－ブチル６－（２－メトキシベンジル）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボキシレート（１０２ｍｇ、３２１μｍｏｌ）をＤＣＭ（２ｍｌ）に溶解した。ＢＢｒ_３（１６１ｍｇ、６０．８μｌ、６４３μｍｏｌ）を０℃で添加した。反応物を室温で一晩攪拌した後、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液を添加してクエンチし、ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦにより抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で濃縮した。６５ｍｇ（９９％）、褐色油状物。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２０４．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．これを、さらに精製することなく次の工程で使用した。

【0172】

ｂ）（４ａＲ，８ａＳ）－６－［６［（２－ヒドロキシフェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化54】

【0173】

（４ａＲ，８ａＳ）－４ａ，５，６，７，８，８ａ－ヘキサヒドロ－４Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－６－イウム－３－オン；（２Ｓ，３Ｓ）－２，３－ビス［（４－メチルベンゾイル）オキシ］ブタン二酸；（２Ｓ，３Ｓ）－４－ヒドロキシ－２，３－ビス［（４－メチルベンゾイル）オキシ］－４－オキソブタノエート；水和物（ＢＢ１の塩）（１７５ｍｇ、２５１μｍｏｌ）をＡＣＮ（４ｍＬ）に懸濁し、ＴＥＡ（１７８ｍｇ、２４５μｌ、１．７６ｍｍｏｌ）を室温で撹拌しながら添加した。次いで、ビス（１，２，４トリアゾール－１－イル）メタノン（４１．２ｍｇ、２５１μｍｏｌ）を一度に添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＡＣＮ（２００μｌ）に溶解した２－（（２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－６－イル）メチル）フェノール（６１．３ｍｇ、３０１μｍｏｌ）を室温で滴加した。反応混合物を５０℃で１０分間撹拌し、室温で３時間撹拌した。室温に冷却した後、水（２ｍＬ）を添加し、生成物をＴＢＭＥ（４ｍＬ）で抽出した。有機層を５％ＮａＨＣＯ_３（２ｍＬ）水溶液、次いで０．５ Ｍ ＨＣｌ（１ｍＬ）およびブラインで洗浄した。Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、溶媒を蒸発させた後、粗製物質をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、２０ｇ、０％～１０％ＤＣＭ中ＭｅＯＨ）によって精製し、表題化合物を得た。４８ｍｇ（４７％、純度９５％）、白色固体。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３８６．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0174】

実施例８
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［４－（シクロペントキシ）フェニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化55】

【0175】

ｔｅｒｔ－ブチル３－（４－（シクロペンチルオキシ）フェニル）アゼチジン－１－カルボキシレート（１５０ｍｇ、４７３μｍｏｌ）を１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロプロパン－２－オール（２ｍｌ）に溶解し、マイクロ波中１５０℃で４０分間攪拌した。次いで、溶液を完全に蒸発させた。粗製中間体をＡＣＮ（１．５ｍｌ）に懸濁し、４－ニトロフェニル（４ａＲ，８ａＳ）－３－オキソヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－６（５Ｈ）－カルボキシレート（ＢＢ２）（１５２ｍｇ、４７３μｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２４４ｍｇ、３３０μｌ、１．８９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。懸濁液を完全に蒸発させた。生成物を、ＡＣＮ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ ＴＥＡ）（２０：８０から４０：６０から５５：４５から０：１００）の勾配を用いた分取ＨＰＬＣ（ＹＭＣ－Ｔｒｉａｒｔカラム）で精製し、所望の化合物を無色固体として得た（３２ｍｇ；１７％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４００．３［Ｍ＋Ｈ］^＋．
中間体：
ａ）ｔｅｒｔ－ブチル３－（４－（シクロペンチルオキシ）フェニル）アゼチジン－１－カルボキシレート

【化56】

【0176】

表題化合物を、１－ブロモ－４－（シクロペンチルオキシ）ベンゼン（ＣＡＳ ＮＲ ３０７５２－３０－８）（４００ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ－ブチル３－（４－ブロモフェニル）アゼチジン－１－カルボキシレート（５８８ｍｇ、２．４９ｍｍｏｌ）から（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（実施例５）と同様に調製した。４４４ｍｇ（８４％）、無色油状物。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２６２．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0177】

実施例９
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－イソブトキシフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化57】

【0178】

（４ａＲ，８ａＳ）－６－（３－（４－ヒドロキシフェニル）アゼチジン－１－カルボニル）ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン（０．０５６ｇ、１６９μｍｏｌ）および炭酸カリウム（２８ｍｇ、２０３μｍｏｌ）のＤＭＦ（０．７ｍＬ）中懸濁液に、１－ヨード－２－メチルプロパン（３７．３ｍｇ、２３．３μＬ、２０３μｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で一晩、次いで、５０℃で３時間撹拌した。さらなる１－ヨード－２－メチルプロパン（３７．３ｍｇ、２３．３μＬ、２０３μｍｏｌ）および炭酸カリウム（２８ｍｇ、２０３μｍｏｌ）を添加し、撹拌を５０℃で一晩続けた。１－ヨード－２－メチルプロパン３分の１（６２．２ｍｇ、３８．９μＬ、３３８μｍｏｌ）を添加し、撹拌を５０℃でさらに２時間続けた。混合物をフィルタにかけ、フィルタケーキを数滴のＤＭＦで洗浄した。生成物を、ＡＣＮ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ＨＣＯＯＨ）（２０：８０～１００：０）の勾配を使用する分取ＨＰＬＣ（Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸカラム）で精製し、所望の化合物を無色固体（８ｍｇ；１２％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３８８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0179】

中間体：
ａ）ｔｅｒｔ－ブチル３－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）フェニル）アゼチジン－１－カルボキシレート

【化58】

【0180】

表題化合物を、１－ブロモ－４－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）ベンゼン（ＣＡＳ ＮＲ ６０８７６－７０－２）（４００ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ－ブチル３－（４－ブロモフェニル）アゼチジン－１－カルボキシレート（６１８ｍｇ、２．６２ｍｍｏｌ）から（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－（４－シクロブチルフェニル）アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（実施例５）と同様に調製した。２４１ｍｇ（４１％、純度９０％）、無色固体。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２５０．２［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ］^＋．

【0181】

ｂ）（４ａＲ，８ａＳ）－６－（３－（４－ヒドロキシフェニル）アゼチジン－１－カルボニル）ヘキサヒドロ－２ Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン

【化59】

【0182】

ｔｅｒｔ－ブチル３－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）フェニル）アゼチジン－１－カルボキシレート（１６１ｍｇ、５２７μｍｏｌ）および４－メチルベンゼンスルホン酸水和物（１００ｍｇ、５２７μｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１ｍｌ）中、溶液を室温で５時間撹拌した。さらなる４－メチルベンゼンスルホン酸水和物（２０．１ｍｇ、１０５μｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で３０分間攪拌した。ＤＩＰＥＡ（２７３ｍｇ、３６８μＬ、２．１１ｍｍｏｌ）を添加し、懸濁液を完全に蒸発させた。中間体をＡＣＮ（１ｍｌ）に懸濁し、４－ニトロフェニル（４ａＲ，８ａＳ）－３－オキソヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３ｂ］［１，４］オキサジン－６（５Ｈ）－カルボキシレート（ＢＢ２）（１９９ｍｇ、５２７μｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。懸濁液を完全に蒸発させた。生成物を、Ｈ_２Ｏ（０．１％ ＴＥＡ）中ＡＣＮ（１０～７０～１００％）の勾配を使用する分取ＨＰＬＣ（Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸカラム）で精製し、所望の化合物を無色固体として得た（４９ｍｇ；２４％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３８８．３［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0183】

実施例１０、１１および１２
（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（１０）

【化60】

【0184】

（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［（Ｚ）－２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（１１）

【化61】

【0185】

（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［（Ｅ）－２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（１２）

【化62】

【0186】

トリホスゲン（１４ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）に溶解した。（４ａＲ，８ａＳ）－４ａ，５，６，７，８，８ａ－ヘキサヒドロ－４Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（ＢＢ１）（２０ｍｇ、０．１２９ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３７ｍｇ、０．２８４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中の混合物をトリホスゲンの撹拌溶液にゆっくり添加した。さらに５分間撹拌した後、３－（２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチルフェニル）ビニル）アゼチジン（２７ｍｇ、０．１２９ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３７ｍｇ、０．２８４ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）中の溶液を一度に添加した。室温で一晩撹拌した後、混合物を蒸発乾固し、ＥｔＯＡｃに再溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液およびブラインを添加し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。濾過および蒸発後、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、１：１０（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製し、（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オンを淡黄色油状物（１８ｍｇ、３７％）として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｆｏｒ Ｃ_２０Ｈ_２３Ｆ_２Ｎ_３ＮａＯ_３ ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋４１４．１６００ｍ／ｚ，ｆｏｕｎｄ ４１４．１５９７ｍ／ｚ．

【0187】

（Ｅ）－異性体および（Ｚ）－異性体は、半分取ＨＰＬＣによって少量で得た。

【0188】

（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［（Ｅ）－２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン：白色粉末；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．２４（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０７－６．９６（ｍ，２Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ－），５．６５（ｄｄ，Ｊ＝１９．９，９．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４２－４．１７（ｍ，４Ｈ），４．０４－３．８０（ｍ，４Ｈ），３．６１－３．４９（ｍ，２Ｈ），３．４８－３．４０（ｍ，１Ｈ），３．１６－３．０５（ｍ，２Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），２．０１－１．９３（ｍ，１Ｈ），１．８９－１．７７（ｍ，１Ｈ）

【0189】

（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［（Ｚ）－２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン：無色油状物；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．２４－７．１０（ｍ，３Ｈ），６．６７（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ－），５．６０（ｄｄ，Ｊ＝３５．８，８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．４０－４．２０（ｍ，４Ｈ），４．０５－３．７５（ｍ，５Ｈ），３．６０－３．４１（ｍ，２Ｈ），３．２０－３．０５（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，３Ｈ），２．０１－１．９４（ｍ，１Ｈ），１．９０－１．７９（ｍ，１Ｈ）．Ｃ_２０Ｈ_２３Ｆ_２Ｎ_３ＮａＯ_３ ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋についてのＨＲＭＳ（ＥＳＩ）算出値４１４．１６００ｍ／ｚ、実測値４１４．１５９７ｍ／ｚ．

【0190】

中間体：
ａ）ジエトキシホスホリル－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）メタノール

【化63】

【0191】

３－フルオロ－４－メチルベンズアルデヒド（３．００ｇ、２１．７２ｍｍｏｌ）、亜リン酸ジエチル（６．００ｇ、４３．４３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（８８ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）の混合物を５０℃で一晩撹拌した。得られた沈殿物を濾過によって単離し、続いてＥｔ_２Ｏで洗浄し、表題化合物を白色粉末（４６０５ｍｇ、７７％）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．２４－７．１４（ｍ，３Ｈ），５．００（ｄ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２１－３．９７（ｍ，４Ｈ），２．３１－２．２８（ｍ，３Ｈ），１．４４－１．１３（ｍ，６Ｈ）．^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ２０．８１．Ｃ_１２Ｈ_１８ＦＮａＯ_４Ｐ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋についてのＨＲＭＳ（ＥＳＩ）算出値２９９．０８１９ｍ／ｚ、実測値２９９．０８１８ｍ／ｚ．

【0192】

ｂ）４－［ジエトキシホスホリル（フルオロ）メチル］－２－フルオロ－１－メチル－ベンゼン

【化64】

【0193】

ジエトキシホスホリル－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）メタノール（１．００ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に、ＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解したジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（８７６ｍｇ、５．４３ｍｍｏｌ）をシリンジを用いて０℃でゆっくりと添加した。混合物を窒素雰囲気下、室温で６時間撹拌した。飽和Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を反応物に注ぎ、混合物をＤＣＭで３回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮した。粗製生成物をカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、１：２（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサン）によって精製し、淡黄色油状物（５１３ｍｇ、５１％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．２６－７．２１（ｍ，１Ｈ），７．２０－７．１４（ｍ，２Ｈ），５．６５（ｄｄ，Ｊ＝４４．７，７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２５－４．０４（ｍ，４Ｈ），２．３３－２．２８（ｍ，３Ｈ），１．４０－１．２６（ｍ，６Ｈ）．Ｃ_１２Ｈ_１７Ｆ_２ＮａＯ_３Ｐ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋についてのＨＲＭＳ（ＥＳＩ）算出値３０１．０７７６ｍ／ｚ、実測値３０１．０７７４ｍ／ｚ．

【0194】

ｃ）ｔｅｒｔ－ブチル３－（２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチルフェニル）ビニル）アゼチジン－１－カルボキシレート

【化65】

【0195】

４－［ジエトキシホスホリル（フルオロ）メチル］－２－フルオロ－１－メチル－ベンゼン（１００ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、－７８℃に冷却した。リチウムジイソプロピルアミド（５０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を窒素下で添加し、反応物を－７８℃で３０分間撹拌した。１－Ｂｏｃ－アゼチジン－３－カルボキシアルデヒド（８７ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を－７８℃で滴加し、混合物をゆっくりと室温に加温し、一晩撹拌した。Ｈ_２Ｏを注いで反応をクエンチし、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、１：１０（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサン）によって精製し、黄色油状物（４４．３ｍｇ、４０％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．２６－７．１３（ｍ，２Ｈ），７．０４－６．９８（ｍ，１Ｈ），５．７１－５．５４（ｍ，１Ｈ），４．２３ ａｎｄ ４．１８（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），３．８５－３．７３（ｍ，２Ｈ），３．５２－３．３９（ｍ，１Ｈ），２．３６－２．２７（ｍ，３Ｈ），１．４８ ａｎｄ １．４６（ｓ，９Ｈ）．Ｃ_１７Ｈ_２１Ｆ_２ＮＮａＯ_２ ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋についてのＨＲＭＳ（ＥＳＩ）算出値３３２．１４３３ｍ／ｚ、実測値３３２．１４３３ｍ／ｚ．

【0196】

ｄ）３－（２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチルフェニル）ビニル）アゼチジン

【化66】

【0197】

ｔｅｒｔ－ブチル３－（２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチルフェニル）ビニル）アゼチジン－１－カルボキシレート（８７ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を室温でＤＣＭ ２ｍＬに溶解し、ＴＦＡ（３８６ｍｇ、３．３９ｍｍｏｌ）で処理した。出発物質が消費されると、反応物をＮａ_２ＣＯ_３飽和水溶液で中和し、ＤＣＭで抽出し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空で濃縮した。残渣は、さらに精製することなく、次の工程で直接使用した。

【0198】

実施例［^１１Ｃ］１０
［^１１Ｃ］（４ａＲ，８ａＳ）－６－［３－［２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチル－フェニル）ビニル］アゼチジン－１－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン

【化67】

【0199】

第３の工程において、前駆体として３－（２－フルオロ－２－（３－フルオロ－４－メチルフェニル）ビニル）アゼチジン（４．７μｍｏｌ、０．９８ｍｇ）を用いて、上述の一般的な手順を適用した。生成物を、放射性化学純度９９％超、およびモル活性３９～５３ＧＢｑ／μｍｏｌで得た。

【0200】

ＭＡＧＬ阻害活性
アラキドン酸を生じる天然基質である２－アラキドノイルグリセロールの加水分解に続いて酵素活性を検出することで、ＭＡＧＬ阻害活性について化合物をプロファイリングし、続いて、質量分析を行ってもよい。このアッセイを、以下「２－ＡＧアッセイ」と略記する。

【0201】

２－ＡＧアッセイを、３８４ウェルのアッセイプレート（ＰＰ、Ｇｒｅｉｎｅｒ、カタログ番号７８４２０１）中で、総体積２０μＬで実施した。化合物希釈物を、ポリプロピレンプレート中、１００％ＤＭＳＯ（ＶＷＲ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ２３５００．２９７）中にて３倍希釈ステップで作成して、アッセイにおける最終濃度範囲を１２．５μＭ～０．８ｐＭとした。０．２５μＬの化合物希釈物（１００％ＤＭＳＯ）を、アッセイ緩衝液（５０ｍＭ ＴＲＩＳ（ＧＩＢＣＯ、１５５６７－０２７）、１ｍＭのＥＤＴＡ（Ｆｌｕｋａ、０３６９０－１００ｍｌ）、０．０１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ）中の９μＬのＭＡＧＬに添加した。振盪後、プレートを室温で１５分間インキュベートした。反応を開始するために、アッセイ緩衝液中の１０μＬの２－アラキドノイルグリセロールを添加した。アッセイにおける最終濃度は、５０ｐＭ ＭＡＧＬおよび８μＭ ２－アラキドノイルグリエロール（ａｒａｃｈｉｄｏｎｏｙｌｇｌｙｅｒｏｌ）であった。振盪後、室温で３０分間インキュベーションした後、４μＭのｄ８－アラキドン酸を含有する４０μＬのアセトニトリルを添加して、反応をクエンチした。アラキドン酸の量を、オンラインＳＰＥシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｒａｐｉｄｆｉｒｅ）をトリプル四重極質量分析計（Ａｇｉｌｅｎｔ ６４６０）と組み合わせて追跡した。Ｃ１８ ＳＰＥカートリッジ（Ｇ９２０５Ａ）を、アセトニトリル／水液体セットアップで使用した。質量分析計は、アラキドン酸について３０３．１→２５９．１、ｄ８－アラキドン酸について３１１．１→２６７．０の質量遷移に従って、負エレクトロスプレーモードで操作した。化合物の活性は、強度比［アラキドン酸／ｄ８－アラキドン酸］に基づいて算出した。

【0202】

【表1】

【0203】

^３Ｈリガンドのインビトロオートラジオグラフィー
受容体オートラジオグラフィーを、ＭＡＧＬ ＷＴおよびｋｏマウス由来の新鮮凍結脳の矢状切片に対して行った（Ｃ５７ＢＬ６／６ＮＴａｃ－Ｍｇｌｌｅｍ４９９３＿０２Ｔａｃ）。脳標本からの組織切片（１０μｍ）を、－１７℃のチャンバー温度および－１５℃の対象物温度でクライオスタット（Ｌｅｉｃａ ＣＭ３０５０）で切断し、顕微鏡ガラススライド（ＨｉｓｔｏＢｏｎｄ、Ｐａｕｌ Ｍａｒｉｅｎｆｅｌｄ ＧｍｂＨ、Ｌａｕｄａ－Ｋoｎｉｇｓｈｏｆｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）上で融解マウントした。脳切片を、１ｎＭの放射性リガンドを含有する室温の０．１％ ＢＳＡを含む５０ｍＭ トリス－ＨＣｌ緩衝液ｐＨ７．４中で３０分間インキュベートした。切片を氷冷５０ｍＭ トリス－ＨＣｌ緩衝液中で１０分間３回リンスし、続いて氷冷Ｈ_２Ｏに３回浸し、４℃で風乾した後、トリチウムマイクロスケールを有するトリチウム感受性イメージングプレート（ＢＡＳ－ＩＰ ＴＲ ２０２５、Ｆｕｊｉｆｉｌｍ、Ｄｉｅｌｓｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に室温で５日間曝露した。イメージングプレートを高解像度蛍光体イメージャ（Ｆｕｊｉ ＢＡＳ－５０００，Ｂｕｃｈｅｒ Ｂｉｏｔｅｃ ＡＧ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）でスキャンし、選択した脳領域の結合強度を、ＭＣＩＤ Ｍ２画像分析ソフトウェア（バージョン７；ＩｎｔｅｒＦｏｃｕｓ Ｉｍａｇｉｎｇ ＧｍｂＨ，Ｍｅｒｉｎｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して定量化した。図１は、矢状マウス脳切片における［^３Ｈ］１、［^３Ｈ］２、［^３Ｈ］３および［^３Ｈ］４のインビトロオートラジオグラフィー結果を示す。４つ全ての放射性リガンドのＭＡＧＬへの選択的結合がｗｔ組織サンプル（トウ列）で観察される。優れた選択性および低い非特異的結合が、ＭＡＧＬ ｋｏ組織切片における結合の非存在によって実証される（下段）。^１１Ｃトレーサのインビトロオートラジオグラフィー

【0204】

Ｗｉｓｔａｒラットからの１０μｍの矢状脳切片をインビトロオートラジオグラフィーで使用した。試験日に、スライス片を氷上で融解し（１０分）、３０ｍＭ ４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、１．２ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１１０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、２．５ｍＭ ＣａＣｌ_２、および１％脂肪酸非含有ウシ血清アルブミン（ｐＨ７．４、０℃）を含有する水性緩衝液中で１０分間プレコンディショニングした。組織サンプルを風乾させ、その後、放射性トレーサまたは放射性トレーサとブロッカーとしての冷ＭＡＧＬ阻害剤との混合物と、周囲温度で３０分間インキュベートした。インキュベート時間が完了すると、切片を上記の水性緩衝液中で３分間１回洗浄し、１％脂肪酸非含有ウシ血清アルブミンを含まない記載する水性緩衝液中で２分間２回洗浄した。蒸留水中に２回急速浸漬した後、切片を風乾させ、蛍光体イメージプレートに１時間曝露した。フィルムをＢＡＳ５０００リーダー（Ｆｕｊｉ）によってスキャンし、ＡＩＤＡソフトウェア、バージョン４．５０．０１０（Ｒａｙｔｅｓｔ Ｉｓｏｔｏｐｅｎｍｅｓｓｇｅｒaｔｅ ＧｍｂＨ）を使用してデータを分析した。［^１１Ｃ］１については、１０μＭ ＳＡＲ１２７３０３および１０μｇ／ｍＬ １０をブロッカーとして使用した。［^１１Ｃ］５については、１０μＭ ＳＡＲ１２７３０３および１０μＭ ＰＦ－０６７９５０７１をブロッカーとして使用した。図２は、矢状ラット脳切片に対する［^１１Ｃ］１（Ａ）および［^１１Ｃ］５（Ｂ）のインビトロオートラジオグラフィー結果を示す。両方の放射性リガンドがＭＡＧＬに選択的に結合し、結合は、高濃度の冷ＭＡＧＬ阻害剤との共インキュベートによって阻止することができ、したがって優れた選択性および特異性を実証する。

【0205】

［^３Ｈ］（４ａＲ，８ａＳ－６－［６－［（２－フルオロ－６－メトキシ－フェニル）メチル］－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボニル］－４，４ａ，５，７，８，８ａ－ヘキサヒドロピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３－オン（実施例［^３Ｈ］２）のＭＡＧＬへのインビボ結合
雄のＣＤ（ＳＤ）ラットをビヒクルまたは選択的ＭＡＧＬ阻害剤で前処理し、６０分後に１ｍＣｉ／ｋｇの［^３Ｈ］２（５．５μｇ／ｋｇの用量に相当）を静脈内投与した。ラットを、放射性リガンドの投与の９０分後に断頭によって屠殺した。脳を迅速に取り出し、その矢状軸に沿って２つに分けた。凍結切除後に、脳の半分をドライアイスで凍結した。半球をクライオスタットに入れ、矢状切片（厚さ１０μｍ）を切断した。脳切片をＨｉｓｔｏｂｏｎｄガラススライド（Ｍａｒｉｅｎｆｅｌｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｇｌａｓｓｗａｒｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）にマウントし、室温で乾燥させ、トリチウムマイクロスケールと共にトリチウム感受性イメージングプレート（ＢＡＳ－ＴＲ２０２５）に５日間曝露した。イメージングプレートをＦｕｊｉｆｉｌｍ ＢＡＳ－５０００高解像度蛍光体イメージャでスキャンし、目的の脳領域に結合した［^３Ｈ］２の量をＭＣＩＤ Ｍ２画像分析システム（Ｉｍａｇｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｃａｔｈｅｒｉｎｅｓ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）で定量した。図３は、［^３Ｈ］２の注入の９０分後に得られた矢状脳切片のエクスビボオートラジオグラフィー画像を示す。ＭＡＧＬへの選択的および特異的な結合（上）は、高用量のＭＡＧＬ阻害剤の共投与によって阻止される（下）。

【0206】

マウスにおけるインビボＰＥＴスキャン
全ての動物をＴａｃｏｎｉｃから購入した。実験中、動物をイソフルランで麻酔した。［^１１Ｃ］１（８．７～１０．８ＭＢｑ）の静脈内注入の１分後に動的ＰＥＴスキャンを開始し、１時間継続し、次いで解剖学的配向についてＣＴを行った。全脳の時間－活性曲線をＰＭＯＤ、バージョン４．００２（ＰＭＯＤ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって算出し、ＳＵＶとして提示し、これは、減衰補正された放射活性／ｃｍ^３を体重１グラム当たりの注入用量で割った値を示した。図４は、ＭＡＧＬ ＫＯマウスおよび対応するＷＴにおける［^１１Ｃ］１からの全脳の時間活性曲線を示す。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【国際調査報告】