特表 2022-548239 水溶性昆虫タンパク質の加水分解物及びその調製方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-11-17

(54)【発明の名称】水溶性昆虫タンパク質の加水分解物及びその調製方法

(51)【国際特許分類】

   C12P 21/06 20060101AFI20221110BHJP

   A23J 3/04 20060101ALI20221110BHJP

   A23L 33/18 20160101ALI20221110BHJP

   A23L 27/21 20160101ALI20221110BHJP

   A23L 23/00 20160101ALI20221110BHJP

   A23K 10/20 20160101ALI20221110BHJP

   A23K 20/189 20160101ALI20221110BHJP

   A23K 20/163 20160101ALI20221110BHJP

   C07K 14/435 20060101ALN20221110BHJP

【ＦＩ】

C12P21/06

A23J3/04

A23L33/18

A23L27/21 B

A23L23/00

A23K10/20

A23K20/189

A23K20/163

C07K14/435

【審査請求】未請求

【予備審査請求】有

(21)【出願番号】P 2022516070

(86)(22)【出願日】2020-09-16

(85)【翻訳文提出日】2022-05-09

(86)【国際出願番号】 NL2020050572

(87)【国際公開番号】W WO2021054824

(87)【国際公開日】2021-03-25

(31)【優先権主張番号】2023838

(32)【優先日】2019-09-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】NL

(31)【優先権主張番号】2024481

(32)【優先日】2019-12-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】NL

(31)【優先権主張番号】2025546

(32)【優先日】2020-05-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】NL

(31)【優先権主張番号】2025547

(32)【優先日】2020-05-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】NL

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520220755

【氏名又は名称】プロティックス ビー．ブイ．

【氏名又は名称原語表記】ＰＲＯＴＩＸ Ｂ．Ｖ．

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100123995

【弁理士】

【氏名又は名称】野田 雅一

(72)【発明者】

【氏名】ポール， アマン

【テーマコード（参考）】

2B150

4B018

4B036

4B047

4B064

4H045

【Ｆターム（参考）】

2B150AA06

2B150AA07

2B150AA08

2B150AB03

2B150AB10

2B150AB20

2B150BA01

2B150BB03

2B150BB04

2B150BC03

2B150BD01

2B150BD10

2B150BE01

2B150BE02

2B150CD34

2B150CJ04

2B150CJ07

2B150DC13

2B150DC14

2B150DF10

4B018LB06

4B018LB09

4B018LB10

4B018MD22

4B018MD76

4B036LF01

4B036LF03

4B036LG04

4B036LH15

4B036LH42

4B047LB09

4B047LF04

4B047LF08

4B047LF10

4B047LG19

4B064AG01

4B064BA01

4B064BA02

4B064BA03

4B064BA04

4B064BA05

4B064BA06

4B064BA07

4B064BA08

4B064BA09

4B064BE01

4B064CA21

4B064CB01

4B064CE03

4B064CE16

4B064DA10

4B064DA11

4H045AA10

4H045AA30

4H045CA51

4H045EA01

4H045EA07

4H045FA65

4H045GA15

(57)【要約】

本発明は、特にタンパク質源としてのアメリカミズアブの幼虫から、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法に関する。特にタンパク質源としてのアメリカミズアブの幼虫からの、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質及び酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物に関する。酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の使用又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の使用に関する。酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなるペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分に関し、また酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなる人間用食品又は人間用食物成分に関する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法であって、
ａ）少なくとも１種の水溶性タンパク質を含む水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップであって、前記組成物のｐＨがｐＨ４～ｐＨ８であり、前記水溶性タンパク質組成物中の前記少なくとも１種の水溶性タンパク質が可溶化されるステップ、及び少なくとも１種のペプチダーゼをさらに用意するステップと；
ｂ）ステップａ）の前記少なくとも１種のペプチダーゼを、ステップａ）の前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物と混合して、タンパク質／ペプチダーゼ混合物を用意するステップと；
ｃ）前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物中の前記少なくとも１種の水溶性タンパク質が前記少なくとも１種のペプチダーゼにより酵素加水分解されるように、ステップｂ）の前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物を７５℃未満の温度で加熱して、酵素加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を用意するステップと；
ｄ）前記少なくとも１種のペプチダーゼが加熱により熱不活性化されるように、加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を７５℃～１１０℃の温度で加熱することにより、ステップｃ）の前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液中の酵素加水分解を停止して、前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を用意するステップと
を含む方法。

【請求項2】

ステップａ）の前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、２種以上の水溶性タンパク質、好ましくは２種より多い異なる水溶性タンパク質、より好ましくは３種より多い異なる水溶性タンパク質、最も好ましくは４種より多い異なる水溶性タンパク質を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

ステップｃ）において、前記加熱が３５℃～６０℃の温度で行われ、及び／又は前記加熱が２時間～１２時間の期間行われ、好ましくは、ステップｃ）において、前記加熱が３５℃～６０℃の温度で２時間～１２時間の期間行われる、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

ステップｃ）において、前記加熱が４０℃～５５℃の温度で行われ、及び／又は前記加熱が４時間～９時間の期間行われ、好ましくは、ステップｃ）において、前記加熱が４０℃～５５℃の温度で４時間～９時間の期間行われ、より好ましくは、ステップｃ）において、前記加熱が４５℃～５３℃の温度で５時間～７時間の期間行われ、最も好ましくは、前記加熱が５０℃の温度で６時間の期間行われる、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

ステップａ）において、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物のｐＨが５～７．７、好ましくは６～７．５である、より好ましくはｐＨが７．０である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

ステップａ）で用意される前記少なくとも１種のペプチダーゼが、アミノペプチダーゼ、好ましくはエンドペプチダーゼ若しくはエクソペプチダーゼ、又はそれらの混合物であるか又はそれらを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

ステップａ）において、前記少なくとも１種のペプチダーゼが、ロイシルアミノペプチダーゼ、パパイン、プロナーゼ、セリンプロテアーゼ、アルカラーゼ、サブチリシン、サブチリシンＡ、α－キモトリプシン、カテプシンＩＩＩ、エスペラーゼ、ニュートラーゼ、ペプシン、サーモリシン、トリプシンを含むか又はそれらから選択され、好ましくは、前記少なくとも１種のペプチダーゼが、ロイシルアミノペプチダーゼであるか又はそれを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

ステップｂ）において、前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物中の前記少なくとも１種のペプチダーゼの量が、前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物の総重量の０．０５重量％～７重量％、好ましくは前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物の総重量の０．１重量％～６重量％、より好ましくは０．２重量％～５重量％、最も好ましくは０．５重量％～３重量％、例えば１．０重量％～２．０重量％である、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

ステップｄ）において、ステップｃ）の前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液中の前記酵素加水分解が、前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を３０秒～３０分、好ましくは４５秒～２０分、より好ましくは１分～１５分、最も好ましくは２分～１０分の期間加熱することにより停止される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

ステップｄ）において、ステップｃ）の前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液中の前記酵素加水分解が、前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を８０℃～１０５℃、好ましくは８５℃～１０３℃、より好ましくは９０℃～１００℃の温度に加熱することにより停止される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

ステップｄ）の後、任意選択のさらなるステップｅ）において、ステップｄ）の前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が、前記酵素加水分解されたタンパク質中に修飾アミノ基を提供するためにメイラード反応に供され、前記メイラード反応は、
ｅ１）炭水化物を用意し、前記炭水化物をステップｄ）の前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質と混合して、酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物を用意するサブステップと；
ｅ２）ステップｅ１）の前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物を加熱し、酵素加水分解された昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を用意するサブステップとを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

ステップｅ１）において、添加された炭水化物の最終濃度が、前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物の総重量の０．０５重量％～６．０重量％、好ましくは前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物の総重量の０．１重量％～５．０重量％、より好ましくは０．２重量％～３重量％、最も好ましくは０．３重量％～１．０重量％である、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

ステップｅ２）において、ステップｅ１）の前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物が、１００℃～１７０℃、好ましくは１２０℃～１６８℃、より好ましくは１３５℃～１６６℃、例えば１４０℃～１６５℃の温度で加熱される、請求項１１又は１２に記載の方法。

【請求項14】

ステップｅ２）において、ステップｅ１）の前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物が、１分～１２０分、好ましくは２分～６０分、より好ましくは３分～３０分、最も好ましくは５分～２０分、例えば１０分～１７分又は約１５分の期間加熱される、請求項１１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

ステップｅ１）において、用意される炭水化物が、スクロース若しくはグルコース、又はそれらの混合物、好ましくはスクロースである、請求項１１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

ステップｄ）の後、任意選択のさらなるステップｆ１）において、ステップｄ）の前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が、好ましくは、噴霧乾燥、流動床乾燥による乾燥、凍結乾燥、屈折式乾燥のうちのいずれか１つ若しくは複数を適用することにより乾燥される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法、又は、任意選択のステップｅ２）の後、任意選択のさらなるステップｆ２）において、ステップｅ２）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物が乾燥され、好ましくは、噴霧乾燥、流動床乾燥による乾燥、凍結乾燥、屈折式乾燥のうちのいずれか１つ若しくは複数を適用することにより乾燥される、請求項１１～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

ステップｄ）の後、任意選択のさらなるステップｆ３）において、ステップｄ）の前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が濃縮される、好ましくは、濃縮された酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の乾燥物質含量が、濃縮ステップｆ３）の後に前記濃縮された酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として少なくとも３０重量％、好ましくは少なくとも５０重量％であるように濃縮される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法、又は、任意選択のステップｅ２）の後、任意選択のさらなるステップｆ４）において、ステップｅ２）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物が濃縮される、好ましくは、ステップｅ２）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の濃縮されたメイラード反応生成物の乾燥物質含量が、濃縮ステップ４）の後に酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記濃縮されたメイラード反応生成物の総重量を基準として少なくとも３０重量％、例えば少なくとも５０重量％であるように濃縮される、請求項１１～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

任意選択の濃縮ステップｆ３）の後に、前記濃縮された酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の乾燥物質含量が、前記濃縮された酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として３０重量％～８０重量％である、好ましくは４５重量％～７５重量％、より好ましくは５０重量％～７０重量％である、又は、任意選択の濃縮ステップｆ４）の後に、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の濃縮されたメイラード反応生成物の乾燥物質含量が、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記濃縮されたメイラード反応生成物の総重量を基準として３０重量％～８０重量％、好ましくは４５重量％～７５重量％、より好ましくは６０重量％～７０重量％である、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

ステップｂ）の前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物中の水溶性昆虫タンパク質の量が、前記タンパク質／酵素混合物の総重量を基準として０．２重量％～３０重量％、好ましくは前記タンパク質／酵素混合物の総重量を基準として０．５重量％～２５重量％、より好ましくは１重量％～２０重量％、より好ましくは２重量％～１５重量％、最も好ましくは３重量％～１０重量％、例えば３．５重量％～７重量％、又は３重量％～５重量％である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

ステップａ）において、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、甲虫の幼虫、イエバエ、アメリカミズアブ、イナゴ、バッタ、コオロギ、ゴキブリの幼虫、ヤシオオオサゾウムシの幼虫、カイコ、タガメ、セミ、タケムシ、アリ、キリギリス、チョウ、ヨコバイ、ウンカ及びハチの幼虫のうちのいずれか１つ又は複数に由来する水性水溶性昆虫タンパク質組成物であり、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、好ましくはアメリカミズアブに由来し、好ましくは、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、アメリカミズアブの幼虫に由来する水性水溶性タンパク質組成物である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

ステップａ）において、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、水等の水溶液中に溶解した水溶性昆虫タンパク質組成物、好ましくはアメリカミズアブの幼虫に由来する水溶性昆虫タンパク質組成物であり、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、
（ｉ）昆虫、好ましくはアメリカミズアブの幼虫を用意するステップと、
（ｉｉ）好ましくはみじん切りにすることにより、ステップ（ｉ）の前記昆虫のサイズを低減するステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の低減されたサイズを有する前記昆虫からパルプを得るステップと、
次いで
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の前記パルプを７０～１００℃の温度に加熱するステップと、次いで
（ｖ）ステップ（ｉｖ）の加熱されたパルプを、好ましくはデカンテーション及び／又は遠心分離を包含する物理的分離ステップに供して、それにより前記昆虫タンパク質組成物を用意するステップと、次いで
（ｖｉ）ステップ（ｖ）の前記昆虫タンパク質組成物を、水又は緩衝水溶液等の水溶液中、好ましくは水中で混合して、ステップａ）の前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップと
により、又は少なくともそれらのステップにより、昆虫を少なくとも１種の水性水溶性昆虫タンパク質組成物に変換することによって用意される、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

ステップａ）において、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、アメリカミズアブの幼虫に由来し、水中に溶解した水溶性昆虫タンパク質組成物であり、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、
（ｉ）アメリカミズアブの幼虫、好ましくは１２～３０日齢、好ましくは１４～２８日齢、より好ましくは１４～２６日齢、最も好ましくは幼虫が前蛹に変態する１２時間～３日前、例えば変態の１～２日前の、アメリカミズアブの幼虫を用意するステップと、
（ｉｉ）好ましくはみじん切りすることにより、ステップ（ｉ）の前記アメリカミズアブの幼虫のサイズを低減するステップであって、ステップａ）のパルプ中の前記昆虫の残骸の平均粒径が１０ミクロン～５００ミクロンの範囲である、ステップと、次いで
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の低減されたサイズを有する前記昆虫からパルプを得るステップと、
次いで
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の前記パルプを８０～９５℃の温度、好ましくは８５～９２℃の温度に加熱する、好ましくは７０秒～１００秒、より好ましくは７５秒～９０秒の期間加熱するステップと、次いで
（ｖ）ステップ（ｉｖ）の加熱されたパルプを、好ましくはデカンテーション及び／又は遠心分離を包含する物理的分離ステップに供して、それにより前記昆虫タンパク質組成物を用意するステップと、次いで
（ｖｉ）ステップ（ｖ）の前記昆虫タンパク質組成物を、水又は緩衝水溶液中、好ましくは水中で混合して、ステップａ）の前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップと
により、又は少なくともそれらのステップにより、好ましくはそれらのステップにより前記アメリカミズアブの幼虫を少なくとも１種の水性水溶性昆虫タンパク質組成物に変換することによって用意される、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

ステップｄ）で用意される前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が、ステップｄ）で用意される前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総量の重量を基準として少なくとも６０重量％、好ましくは少なくとも７０重量％、例えば７０重量％～１００重量％の程度まで水若しくは緩衝水溶液等の水溶液中に可溶である、請求項１～１０、１６～２２のいずれか一項に記載の方法、及び／又は、ステップｅ２）で用意される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物が、ステップｅ２）で用意される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物の総量の重量を基準として少なくとも６０重量％、好ましくは少なくとも７０重量％、例えば７０重量％～１００重量％の程度まで水若しくは緩衝水溶液等の水溶液中に可溶である、請求項１１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

請求項１～１０若しくは１６～２３のいずれか一項に記載の方法により得られる、又は請求項１～１０若しくは１６～２３のいずれか一項に記載の方法により得ることができる、又は請求項１～１０若しくは１６～２３のいずれか一項に記載の方法により提供される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質、或いは請求項１１～２３のいずれか一項に記載の方法により得られる、又は請求項１１～２３のいずれか一項に記載の方法により得ることができる、又は請求項１～１０若しくは１６～２３のいずれか一項に記載の方法により提供される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項25】

昆虫タンパク質源が、請求項２０に記載のアメリカミズアブの幼虫である、及び／又は、昆虫タンパク質源が、請求項２２のステップ（ｉ）～（ｖｉ）に従って用意される、請求項２４に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は請求項２４に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項26】

酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物であって、前記タンパク質の総重量を基準として前記タンパク質の少なくとも５０重量％、好ましくは５５重量％～１００重量％、より好ましくは６５重量％～１００重量％、最も好ましくは７５重量％～１００重量％、例えば８０重量％～９５重量％又は８５重量％～１００重量％が１，０００ダルトン未満の分子量を有する、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項27】

前記タンパク質の総重量を基準として前記タンパク質の少なくとも１０重量％、好ましくは１５重量％～６０重量％、より好ましくは２０重量％～５５重量％、最も好ましくは３０重量％～５０重量％、例えば２５重量％～４０重量％、又は３５重量％～５０重量％が遊離アミノ酸残基である、請求項２６に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項28】

前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として、又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物の総重量を基準として少なくとも２．５重量％が遊離アルギニンであり、及び／又は少なくとも２．５重量％が遊離グルタミン酸であり、及び／又は少なくとも１．２５重量％が遊離ロイシンであり、及び／又は少なくとも２．２重量％が遊離リシンであり、好ましくは、少なくとも３．７重量％が遊離アルギニンであり、少なくとも３．０重量％が遊離グルタミン酸であり、少なくとも１．５重量％が遊離ロイシンであり、少なくとも２．６重量％が遊離リシンであり、好ましくは、４．７重量％未満が遊離アルギニンであり、及び／又は４．０重量％未満が遊離グルタミン酸であり、及び／又は３．０重量％未満が遊離ロイシンであり、及び／又は４．０重量％未満が遊離リシンであり、好ましくは、４．５重量％未満が遊離アルギニンであり、３．７重量％未満が遊離グルタミン酸であり、２．７重量％未満が遊離ロイシンであり、３．６重量％未満が遊離リシンである、請求項２６又は２７に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項29】

前記水溶性タンパク質が、大腸菌については５０未満、例えば１０若しくは１０未満、及び／又はサルモネラ菌については１未満、例えば０、及び／又はセレウス菌については５００未満、例えば１５０未満若しくは１０未満、及び／又はウェルシュ菌については５００未満、例えば５０未満、好ましくは１０未満のｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数を含み、好ましくは、ｃｆｕ／ｇタンパク質での前記微生物数が、大腸菌については１０未満、及び／又はサルモネラ菌については０．１未満、好ましくはサルモネラ菌は存在せず、及び／又はセレウス菌については１０未満、及び／又はウェルシュ菌については１０未満であり、より好ましくは、前記水溶性タンパク質が、大腸菌については１０未満のｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数を含み、２５グラムの加水分解されたタンパク質が評価された場合サルモネラ菌は存在せず、セレウス菌については１０未満、及びウェルシュ菌については１０未満のｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数を含む、請求項２６～２８のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は請求項２６～２８のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項30】

前記水溶性タンパク質が、請求項１～１０若しくは１６～２３のいずれか一項に記載の方法により得られるか若しくは提供される、請求項２６～２９のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質、又は、前記水溶性タンパク質が、請求項１１～２３のいずれか一項に記載の方法により得られるか若しくは提供される、請求項２６～２９のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項31】

前記昆虫タンパク質源が、アメリカミズアブの幼虫のタンパク質である、請求項３０の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は請求項３０の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項32】

食味増強剤及び保湿剤のうちのいずれか１つ又は複数、又はそれらの任意の組合せをさらに含む、請求項２４～３１のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は請求項２４～３１のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項33】

前記食味増強剤が、ピロリン酸金属塩、２－メチルフラン、２－メチルピロール、ジメチルジスルフィドであり、並びに／又は前記保湿剤が、プロピレングリコール、グリセリン、コーンシロップ及び無機塩から選択される、請求項３２に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は請求項３２に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項34】

ペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品若しくは動物飼料成分の製造、又は人間用食品若しくは人間用食物成分の製造、好ましくはネコ用飼料、イヌ用飼料又はエビ用飼料、例えばバナメイエビ用飼料の製造における、請求項２４～３３のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の、使用。

【請求項35】

前記ペットがイヌ若しくはネコ、好ましくはイヌである、又は前記動物がイヌ、ネコ若しくはエビ、好ましくはバナメイエビ（リトペニウス・バナメイ）である、請求項３３に記載の使用。

【請求項36】

製造されるペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分が、ペット、ネコ、イヌ、魚、エビ、例えばバナメイエビ、マグロ、タラ、養殖海洋生物、養殖淡水生物、ターボット、サケ、コイ、離乳期の動物、離乳後の動物用、好ましくは、ネコ、イヌ、エビ、例えばバナメイエビ用の、食物若しくは食物成分又は飼料若しくは飼料成分、請求項２０及び請求項２０に従属する範囲での請求項２１～３５のいずれか一項に記載の昆虫種とは異なる昆虫種、例えば受粉媒介者等、例えばこれらに限定されないがハチ又は生物防除に使用される益虫、例えばこれらに限定されないがテントウムシ、並びに例えばマルハナバチ、カ、シロアリ及びミバエ用の飼料のいずれかであるか；又は飼料若しくは食物香味剤又は飼料若しくは食物香味増強剤であり、或いは、製造される人間用食品又は製造される人間用食物成分が、ブロス、ソース、香味剤、食物香味剤、食物香味増強剤、スープ、肉代用製品若しくは成分、又は肉代替製品若しくは成分、例えば煮た牛肉、牛ブロス、豚ブロス、牛肉、調理肉の代用品のいずれかである、請求項３４又は３５に記載の使用。

【請求項37】

請求項２４～３３のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなる、動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分、好ましくは、ネコ用飼料製品若しくは成分、イヌ用飼料製品若しくは成分、又はエビ用飼料製品若しくは成分、例えばバナメイエビ用飼料製品若しくは成分、又は請求項２４～３３のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなる、人間用食品若しくは人間用食物成分。

【請求項38】

前記ペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分が、ペット、ネコ、イヌ、魚、エビ、マグロ、タラ、養殖海洋生物、養殖淡水生物、ターボット、サケ、コイ、離乳期の動物、離乳後の動物、好ましくは、ネコ、イヌ又はエビ、例えばバナメイエビ用の食物若しくは飼料又は食物成分若しくは飼料成分のいずれかであるか、或いは、食物香味剤若しくは食物香味増強剤又は飼料香味剤若しくは飼料香味増強剤である、請求項３７に記載のペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分、又は、請求項３７に記載の人間用食品若しくは人間用食物成分であり、前記人間用食品又は人間用食物成分が、ブロス、ソース、香味剤、食物香味剤又は食物香味増強剤、スープ、麺、バーガー、肉代用製品若しくは成分又は肉代替製品若しくは成分、例えば煮た牛肉、牛ブロス、麺、牛肉ベースのスープ、牛肉ベースのバーガー、ハンバーガー、豚ブロス、牛肉、調理肉の代用品のいずれかである、製品又は成分。

【請求項39】

請求項２４～３３のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の、酸化防止剤としての使用。

【請求項40】

請求項３７又は３８に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の、酸化防止剤としての使用。

【請求項41】

請求項３７又は３８に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の、健康増進能を有する成分としての使用。

【請求項42】

酸化防止能を有する、請求項３７又は３８に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の使用。

【請求項43】

細胞の酸化的損傷の防止及び／又は抑制のための方法における使用のための、請求項３７又は３８に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分。

【請求項44】

活性酸素種により誘発される炎症誘発性応答の防止及び／又は抑制のための方法における使用のための、請求項３７又は３８に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法に関する。さらに、本発明は、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質及び酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物に関する。さらに、本発明は、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の使用又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の使用に関する。最後に、本発明は、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなるペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分に関し、また酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなる人間用食品又は人間用食物成分に関する。

【0002】

［背景技術］
香味剤は、動物による食物の受容において重要な役割を果たす（Ｃｌａｒｋ、１９９８；Ｄｏｎｇら、２０１６；Ｋａｔｏら、１９８９）。いくつかの特定された化合物のうち、遊離アミノ酸及びペプチドベース香味剤が食物の香味を増強するためによく使用される。遊離アミノ酸又は短鎖ペプチドの集合体の組み合わせは、特定の香味を生成する（Ｋａｔｏら、１９８９）。

【0003】

肉タンパク質加水分解物及び海洋タンパク質加水分解物は、ペットフード配合物及び水産養殖飼料配合物において香味を増強する目的で一般的に使用される。製造方法に応じて、そのようなタンパク質加水分解物は、「消化物」（酵素加水分解により得られる）又は「パラタント」（酵素加水分解に続く第２の香味生成ステップにより、例えば（加水分解された）タンパク質をメイラード反応に供することにより得られる）と呼ばれ得る（Ａｎｕａｒら、２０１７）。香味増強とは別に、タンパク質加水分解物は高い消化性（Ｅｖｅｒｓｏｎ、２００８）を有し得、またいくつかの健康増進特性（Ｓｅｎｅｖｉｒａｔｈｎｅ及びＫｉｍ、２０１２）を有し得る。タンパク質加水分解物は、未発達の消化管及び免疫系を有する若い動物を育てるのに特に有益である。遊離アミノ酸及び（短鎖）ペプチドは消化が容易であり、その体にすぐに吸収される（Ｈｏｕら、２０１７）。

【0004】

タンパク質加水分解は、魅力並びに一定の味、臭い、香味及び食味等の制御及び操作の側面を考慮した場合、比較的複雑なプロセスである。タンパク質を加水分解に供すると、異臭、機能性の低下、及び製品を商業的に実現不可能にする他の因子がもたらされ得る（Ｗｉｓｕｔｈｉｐｈａｅｔら、２０１６）。しかしながら、加水分解されたオキアミミール等の製品は、異臭の問題なしに水産養殖及びペットフードに使用される（Ｔａｎｔｉｋｉｔｔｉ、２０１４）。残念ながら、魚の乱獲により、ナンキョクオキアミの数が大幅に減少した（ＰＥＷ Ｃｈａｒｉｔａｂｌｅ Ｔｒｕｓｔｓ、２０１４）。多くの場合、好適な代替製品の提供は、達成可能であるとしても煩わしい課題である。

【0005】

ほとんどの疎水性Ｌ－アミノ酸は苦味がある（Ｋａｔｏら、１９８９）。いくつかの場合において、タンパク質の酵素加水分解（特にエンドペプチダーゼを使用）は、加水分解後に得られる生成物の苦味に寄与する遊離アミノ酸又は小ペプチドをもたらし、これは大きな不利益を意味する。そのような生成物のために、食品加工業は、最終生成物のコスト及び複雑性に寄与するだけでなく最終生成物の香味プロファイルを改変する、さらなる苦味除去ステップ（例えば酵素苦味除去）を使用する必要がある（Ｔｃｈｏｒｂａｎｏｖら、２０１１）。

【0006】

昆虫は、世界中の多くの文化で食物として一般的に消費されている。欧州諸国では、昆虫タンパク質は、動物の食事における高価値のタンパク質成分として急速に受け入れられている。欧州連合は、ペットフード及び水産養殖飼料配合物における昆虫タンパク質の含有をすでに承認している。チキンミール及びフィッシュミールは、それぞれペットフード及び水産養殖飼料調製物において一般的な成分である。これらの市場では、昆虫タンパク質が次第にチキンミール及びフィッシュミールの代替品として考えられてきている。工業規模で生産されている全ての昆虫のうち、アメリカミズアブ（ヘルメチア・イルセンス（Ｈｅｒｍｅｔｉａ ｉｌｌｕｃｅｎｓ））の幼虫が、高範囲の有機残渣及び独特の栄養組成で成長する能力によって特に注目を集めている。水産養殖及びペットの餌におけるアメリカミズアブの幼虫（ＢＳＦ）のタンパク質の栄養学的な好適性は、十分に実証されている。

【0007】

ペットは、年齢と共に広範な健康障害を生じる。老化は、ペットの体内でのフリーラジカルによる損傷を加速させ得、これは認知及び運動系機能不全をもたらし得る。同様に、免疫応答の結果としての魚における酸化ストレスは、健康障害をもたらし得る。好中球（白血球）は、体の一次防御メカニズムを担っている。信号を受け取ると、好中球は病原微生物の侵入部位に急行する。次いで好中球は、食作用及び活性酸素種（ＲＯＳ）の放出により病原体を不活性化する。ＲＯＳの生成は、宿主の防御に極めて重要である。しかしながら、長期的には、好中球による過度のＲＯＳ生成は動物細胞を損傷し得、細胞の老化、がん、免疫の低下等をもたらし得る。ＲＯＳを捕捉し得る食事介入は、動物の体内での酸化的損傷を低減し、健康状態を得ることを補助し得る。この分野は、そのような食事介入を必要としている。

【0008】

したがって、例えばオキアミベースタンパク質加水分解物、及び様々な（希少な）タンパク質源に由来する加水分解物を、例えば味、香味、臭い、食味を考慮した場合に少なくとも同様の品質特性を有するタンパク質加水分解物で置き換えることを可能にする解決策を見出すことが依然として必要である。本発明はまた、昆虫から得られる食物及び飼料成分の提供を目的とし、それらの成分は有益な健康特性を有する。

【0009】

［発明の概要］
本発明は、オキアミタンパク質ベース加水分解物、肉タンパク質由来加水分解物、魚タンパク質加水分解物等の現在一般的に適用されているタンパク質加水分解物を置き換えるのに好適な代替製品の増加する必要性に対する解決策を提供することを目的とする。さらに、本発明は、肉を含まない食事への用途、並びに例えば畜産及び水産養殖に由来する肉の生産及び消費の低減に関連する用途での、肉代用製品及び肉代替製品の増加する需要に対する解決策を提供することを目的とする。

【0010】

本発明によれば、上で定義されたタンパク質加水分解物が提供されるが、タンパク質の源は、タンパク質源としてのヘルメチア・イルセンス昆虫バイオマスから単離されたタンパク質、例えばアメリカミズアブに由来するタンパク質、特にアメリカミズアブの幼虫から得られるタンパク質等の昆虫タンパク質である。

【0011】

昆虫は現在、食物タンパク質及び飼料タンパク質の新規な源と考えられている（Ｓｍｅｔａｎａら、２０１９）。アメリカミズアブの幼虫等の昆虫は、例えば農産業からの副生成物を餌とし、サーキュラーエコノミーにおいて重要な役割を果たすことになる。例えば、幼虫は、農産業副生成物をタンパク質及び脂質の有益な源に作り替えることができる。特に、アメリカミズアブの幼虫は、農産業副生成物をタンパク質及び脂質の有益な源に作り替えることができ、それらの農産業副生成物は、従来の家畜用の飼料源として好適ではない。一般に、そのような昆虫は比較的多量のタンパク質、及びそれに伴いアミノ酸（必須アミノ酸及び非必須アミノ酸の両方）を含む。したがって、本発明の態様によれば、そのような昆虫ベースタンパク質源は、特にアメリカミズアブの幼虫がタンパク質源として適用された場合、昆虫タンパク質加水分解物の製造のための原料として役立つ。例えば、アメリカミズアブの幼虫に由来するタンパク質は、例えば現在のペットフード用途のオキアミタンパク質ベース加水分解物等を置き換えるのに好適なタンパク質加水分解物の提供に好適である。例えば、アメリカミズアブを含むいくつかの昆虫は、乾燥物質基準で６０％超のタンパク質を含み、これは、例えば大豆（４０％）、牛肉（４０％）及び鶏肉（５５％）のタンパク質含量と比べると比較的高い（Ｐａｕｌら、２０１６）。ここで、列挙されたタンパク質含量のパーセンテージは、必須及び非必須アミノ酸の合計含量のパーセンテージに関連する。本発明者らは、タンパク質加水分解物を提供するための源として昆虫由来タンパク質を適用することが、今日の一般的な加水分解物に関する現在の問題（現在の実践におけるいくつかの欠点を挙げると、天然資源の減少；煩わしい製造及び安定した品質の生成物の制御）の多くに対応する有益な手法であることを見出した。したがって、本発明により、昆虫タンパク質ベース加水分解物の源としての昆虫の可能性が探求の機会へと変わる。

【0012】

したがって、本発明は、いくつかのさらなる態様のうち、昆虫タンパク質加水分解物の製造の方法であって、タンパク質がタンパク質源としてのアメリカミズアブの幼虫、ゴミムシダマシ、コオロギ及びイナゴ等の昆虫から得られる、特にアメリカミズアブの幼虫から得られる方法；本発明の方法により得られるか又は得ることができる加水分解生成物を含む飼料成分組成物及び食物成分組成物；並びに例えばペットフード、動物飼料、人間による消費用の食品の調製等におけるそのような組成物の適用に関する。

【0013】

本発明の第１の態様は、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法に関し、方法は、
ａ）少なくとも１種の水溶性タンパク質を含む水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップであって、前記組成物のｐＨがｐＨ４～ｐＨ８であり、前記水溶性タンパク質組成物中の少なくとも１種の水溶性タンパク質が可溶化されるステップ、及び少なくとも１種のペプチダーゼをさらに用意するステップと；
ｂ）ステップａ）の少なくとも１種のペプチダーゼを、ステップａ）の水性水溶性昆虫タンパク質組成物と混合して、タンパク質／ペプチダーゼ混合物を用意するステップと；
ｃ）タンパク質／ペプチダーゼ混合物中の少なくとも１種の水溶性タンパク質が少なくとも１種のペプチダーゼにより酵素加水分解されるように、ステップｂ）のタンパク質／ペプチダーゼ混合物を７５℃未満の温度で加熱して、酵素加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を用意するステップと；
ｄ）少なくとも１種のペプチダーゼが加熱により熱不活性化されるように、加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を７５℃～１１０℃の温度で加熱することにより、ステップｃ）の加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液中の酵素加水分解を停止して、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を用意するステップと
を含む。

【0014】

典型的には、水性水溶性昆虫タンパク質組成物は、タンパク質源としてのアメリカミズアブの幼虫に由来する。本発明の方法のステップａ）の水性水溶性昆虫タンパク質組成物の用意を可能にするために、アメリカミズアブの幼虫がタンパク質抽出手段及び方法に供される場合、アメリカミズアブの幼虫は、１２～３０日齢、好ましくは１４～２８日齢、より好ましくは１４～２６日齢、最も好ましくは幼虫が前蛹に変態する１２時間～３日前、例えば変態の１～２日前であるのが好適である。

【0015】

本発明によれば、水溶液中に提供される水溶性昆虫タンパク質組成物の源として、例えばみじん切りされたアメリカミズアブの幼虫の肉が適用される。みじん切りされた昆虫の残骸の平均粒径が１０～５００ミクロンの範囲である場合、有益である。水性水溶性昆虫タンパク質組成物は、例えば、欧州特許出願ＥＰ２９５３４８７の実施例の項、特に実施例１、１２頁、８～１３行目及び１３頁、３～５行目に記載のアメリカミズアブの幼虫からタンパク質画分を単離するための方法を適用することによりアメリカミズアブの幼虫から得られる水溶性昆虫タンパク質組成物である。いくつかの実施形態において、本発明の方法により提供される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質は、添加された炭水化物の存在下でタンパク質加水分解物を加熱することによりメイラード反応に供される。しかしながら、本発明の方法のステップａ）において用意される水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、アメリカミズアブの幼虫からタンパク質画分を単離するための以下の幼虫処理方法ステップ（ｉ）～（ｖｉ）を適用することによりアメリカミズアブの幼虫から得られる水溶性昆虫タンパク質組成物である場合が好ましい：
（ｉ）アメリカミズアブの幼虫、好ましくは１２～３０日齢、好ましくは１４～２８日齢、より好ましくは１４～２６日齢、最も好ましくは幼虫が前蛹に変態する１２時間～３日前、例えば変態の１～２日前のアメリカミズアブの幼虫を用意するステップと、
（ｉｉ）好ましくはみじん切りすることにより、ステップ（ｉ）のアメリカミズアブの幼虫のサイズを低減するステップであって、ステップａ）のパルプ中の昆虫の残骸の平均粒径が１０ミクロン～５００ミクロンの範囲である、ステップと、次いで
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の低減されたサイズを有する昆虫からパルプを得るステップと、
次いで
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）のパルプを８０～９５℃の温度、好ましくは８５～９２℃の温度に加熱する、好ましくは７０秒～１００秒、より好ましくは７５秒～９０秒の期間加熱するステップと、次いで
（ｖ）ステップ（ｉｖ）の加熱されたパルプを、好ましくはデカンテーション及び／又は遠心分離を包含する物理的分離ステップに供して、それにより昆虫タンパク質組成物を用意するステップと、次いで
（ｖｉ）ステップ（ｖ）の昆虫タンパク質組成物を、水又は緩衝水溶液中、好ましくは水中で混合して、本発明による酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法のステップａ）の水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップ。

【0016】

本発明者らは、方法のステップａ）において、本発明の方法の一部としてこの幼虫処理方法ステップを適用することにより、タンパク質源としてのアメリカミズアブの幼虫から得られるタンパク質パルプが得られることを実証したが、このパルプは、当技術分野において知られている代替的なアメリカミズアブの幼虫の処理方法、例えば欧州特許出願ＥＰ２９５３４８７の実施例の項、特に実施例１、１２頁、８～１３行目及び１３頁、３～５行目に概説される方法を適用することによりそのような幼虫から得られるパルプと比較して、驚くほど改善された特徴及び構造特性を有する。特に、本発明の方法のステップ（ｉｖ）において、１００秒未満の比較的短い加熱時間が、改善された幼虫パルプを得るために必須であると考えられる。本発明者らは、時間と温度の組合せを使用することによって、より少ない油がタンパク質画分内に取り込まれ、タンパク質源としてのアメリカミズアブの幼虫からタンパク質パルプを単離するための代替的な現在の手段及び方法を用いて提供されるタンパク質源と比較して、本発明の方法のステップａ）においてより純粋なタンパク質源が提供されることを見出した。また、メイラード反応による（タンパク質の）パルプの変色が大幅に回避され、それにより得られる生成物の品質が改善されることを見出した。例えば、みじん切りされたアメリカミズアブの幼虫が９０℃で８０秒間、又は９０℃±２℃の温度で７５～８５秒間加熱された場合、脂肪含量が低減されたタンパク質が得られる。ＥＰ２９５３４８７では、加熱時間は少なくとも５分、さらには３０分である。さらに、みじん切りされたアメリカミズアブのパルプの最大１００秒、好ましくは約７０～９０秒の比較的短い加熱時間により、当技術分野において知られている現在の方法において適用されるより長い加熱時間と比較して、顆粒化がより少なく凝集性がより低い昆虫パルプが得られる。顆粒化がより少ない幼虫パルプは、パルプに含まれるタンパク質の酵素加水分解に有益である。粒子状物質は酵素分子によりアクセスしにくいため、顆粒化は酵素効率を低減する。本発明の方法の一部として幼虫処理方法ステップを適用することにより、アメリカミズアブの幼虫のパルプが１００秒を超える、例えば５分～３０分間の加熱に供された場合に得られるより大きいタンパク質凝集体及び粒子と比較して、短い加熱時間によってより小さいタンパク質クラスタ、凝集体、粒子、又はさらには（主に）タンパク質モノマー及び／若しくは小マルチマーからなるタンパク質組成物が得られる。

【0017】

本発明の第２の態様は、本発明の方法により得られる酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質、又は本発明の方法により得ることができる酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質に関し、又は本発明の方法により得られる酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物に関し、又は本発明の方法により得ることができる酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物に関する。

【0018】

本発明の第３の態様は、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物に関し、前記タンパク質の総重量を基準として前記タンパク質の少なくとも５０％、好ましくは５５％～１００％、より好ましくは６５％～１００％、最も好ましくは７５％～１００％、例えば８０％～９５％、又は８５％～１００％、又は８５％～９０％が１，０００ダルトン未満の分子量を有する。

【0019】

本発明の第４の態様は、ペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品若しくは動物飼料成分の製造、又は人間用食品若しくは人間用食物成分の製造における、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の使用に関する。

【0020】

本発明の第５の態様は、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなる動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分、或いは、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなる人間用食品又は人間用食物成分に関する。

【0021】

本発明の第６の態様は、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の、酸化防止剤としての使用に関する。特に、酸化防止活性を有する食物又は飼料成分としての使用に関する。したがって、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質及び酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物は、酸化防止特性を有する。

【0022】

本発明の第７の態様は、本発明の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の、酸化防止剤及び／又は健康増進能を有する成分としての使用に関する。

【0023】

本発明の一態様は、細胞の酸化的損傷の防止及び／又は抑制のための方法における使用のための、本発明の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分に関する。

【0024】

本発明のさらなる態様は、本発明による酸化防止活性を有する、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含む動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分に関する。酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含む動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の酸化防止活性は、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の酸化防止特性によるものである。

【0025】

以下、添付の図面を参照しながら本発明をより詳細に説明する。

【図面の簡単な説明】

【0026】

【図1】アメリカミズアブの幼虫に由来する水性水溶性タンパク質組成物からタンパク質加水分解物を製造するための製造フローチャートを示す図である。

【図2】人間による消費に好適な生成物中の微生物数の目標限界値及び臨界限界値を示す表である。

【図3】３０分のインキュベーション後のＢＳＦ水性タンパク質加水分解物（ＢＳＦ－ＡＰＨ）、チキンミール（ＣＭ）及びフィッシュミール（ＦＭ）のＤＰＰＨラジカル捕捉活性を示すグラフである（ｎ＝３）。

【図4】６０分のインキュベーション後のＢＳＦ水性タンパク質加水分解物（ＢＳＦ－ＡＰＨ）、チキンミール（ＣＭ）及びフィッシュミール（ＦＭ）のＤＰＰＨラジカル捕捉活性を示すグラフである（ｎ＝３）。

【図5】３０分のインキュベーション後のＢＳＦ水性タンパク質加水分解物（ＢＳＦ－ＡＰＨ）、チキンミール（ＣＭ）及びフィッシュミール（ＦＭ）のＡＢＴＳカチオンラジカル捕捉活性を示すグラフである（ｎ＝３）。

【図6】ＳＩＥＦＥＤアッセイを使用したＢＳＦ水性タンパク質加水分解物（ＢＳＦ－ＡＰＨ）、チキンミール（ＣＭ）及びフィッシュミール（ＦＭ）のＭＰＯ応答調節活性を示すグラフである（ｎ＝３）。

【図7】古典的測定を使用したＢＳＦ水性タンパク質加水分解物（ＢＳＦ－ＡＰＨ）、チキンミール（ＣＭ）及びフィッシュミール（ＦＭ）のＭＰＯ応答調節活性を示すグラフである（ｎ＝３）。

【図8】ＢＳＦ水性タンパク質加水分解物（ＢＳＦ－ＡＰＨ）、チキンミール（ＣＭ）及びフィッシュミール（ＦＭ）の好中球応答調節活性を示すグラフである（ｎ＝３）。

【図9A】ドッグフード食味試験（０．５％ＨＩＥ２）のグラフである。

【図9B】ドッグフード食味試験（１．２５％ＨＩＥ２）のグラフである。

【図9C】ドッグフード食味試験（２．５０％ＨＩＥ２）のグラフである。

【図10A】経時的な各餌に対する予測性能フィッティング（矢印で示される）を伴う各時間間隔でのジッタ数観察を示すグラフである。

【図10B】食餌開始時間を示すグラフである。１匹のエビが餌を食べ始める平均的な時間の長さであり、標準誤差が示されている。様々な上付き文字は、餌群間で統計的に有意な差（ｐ＜０．０５）が記録された場合を示す。

【0027】

［実施形態の説明］
本発明の第１の目標は、タンパク質加水分解物を提供するための改善された方法を提供することである。本発明の第２の目標は、現在のタンパク質加水分解物の代用製品を提供することであり、代用製品は、現在のタンパク質加水分解物と比較してより持続可能である。

【0028】

本発明の目的は、タンパク質加水分解物を製造するためのより持続可能な方法を提供し、それよって、より持続可能なタンパク質加水分解物でありながら、現在のタンパク質加水分解物、例えばペットフード、人間用食物成分、家畜飼料又は農業飼料等の製造において現在適用されているタンパク質加水分解物の代替製品としてのタンパク質加水分解物の適用を可能にする品質基準及び特性に少なくとも適合するタンパク質加水分解物を提供することである。

【0029】

上記目的の少なくとも１つは、本発明の昆虫ベースタンパク質加水分解物を提供することにより達成される。

【0030】

具体的な実施形態に関して本発明を説明するが、本発明はそれに限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。

【0031】

さらに、明細書及び特許請求の範囲における第１、第２、第３等の用語は、例えば同様の要素、組成物中の構成物質、又は別個の方法ステップを区別するために使用され、順番又は時系列を説明するために使用されているとは限らない。これらの用語は適切な状況下で交換可能であり、本発明の実施形態は、別段に指定されない限り、本明細書において説明又は例示されたもの以外の順序で行われてもよい。

【0032】

本明細書に記載の本発明の実施形態は、別段に指定さない限り、組み合わせて、及び連携して行われてもよい。

【0033】

さらに、「好ましい」又は「例えば（ｅ．ｇ．）」又は「例えば（ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ）」又は「特に」と呼ばれているとしても、様々な実施形態は例示的な様式で解釈されるべきであり、本発明は、本発明の範囲を限定するものとしてではなく実践され得る。

【0034】

特許請求の範囲において使用される「含む」という用語は、例えばその後に列挙される要素又は方法ステップ又は組成物の構成物質に限定されるものとして解釈されるべきではなく、他の要素又は方法ステップ又はある特定の組成物中の構成物質を除外しない。これは、言及されるような述べられた特徴、整数、（方法）ステップ又は構成要素の存在を指定するものであるが、１つ以上の他の特徴、整数、ステップ若しくは構成要素、又はそれらの群の存在又は追加を除外しないものとして解釈される必要がある。したがって、「ステップＡ及びＢを含む方法」という表現の範囲は、ステップＡ及びＢのみからなる方法に限定されるべきではなく、むしろ、本発明に関連して、方法の列挙されているステップがＡ及びＢであるに過ぎず、さらに特許請求の範囲はそれらの方法ステップの均等物を含むものとして解釈されるべきである。したがって、「構成要素Ａ及びＢを含む組成物」という表現の範囲は、構成要素Ａ及びＢのみからなる組成物に限定されるべきではなく、むしろ、本発明に関連して、組成物の列挙されている構成要素がＡ及びＢであるに過ぎず、さらに特許請求の範囲はそれらの構成要素の均等物を含むものとして解釈されるべきである。

【0035】

さらに、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」による要素又は構成要素の言及は、文脈上明確にその要素又は構成要素が１つのみ存在すると解すべき場合を除いて、その要素又は構成要素の２つ以上が存在する可能性を除外しない。したがって、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」は、通常、「少なくとも１つ」を意味する。

【0036】

本発明の第１の態様は、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法に関し、方法は、
ａ）少なくとも１種の水溶性タンパク質を含む水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップであって、前記組成物のｐＨがｐＨ４～ｐＨ８であり、前記水溶性タンパク質組成物中の少なくとも１種の水溶性タンパク質が可溶化されるステップ、及び少なくとも１種のペプチダーゼをさらに用意するステップと；
ｂ）ステップａ）の少なくとも１種のペプチダーゼを、ステップａ）の水性水溶性昆虫タンパク質組成物と混合して、タンパク質／ペプチダーゼ混合物を用意するステップと；
ｃ）、タンパク質／ペプチダーゼ混合物中の少なくとも１種の水溶性タンパク質が少なくとも１種のペプチダーゼにより酵素加水分解されるように、ステップｂ）のタンパク質／ペプチダーゼ混合物を７５℃未満の温度で加熱して、酵素加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を用意するステップと；
ｄ）少なくとも１種のペプチダーゼが加熱により熱不活性化されるように、加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を７５℃～１１０℃の温度で加熱することにより、ステップｃ）の加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液中の酵素加水分解を停止して、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を用意するステップと
を含む。

【0037】

典型的には、水性水溶性昆虫タンパク質組成物は、タンパク質源としてのアメリカミズアブの幼虫に由来する。本発明の方法のステップａ）の水性水溶性昆虫タンパク質組成物の用意を可能にするために、アメリカミズアブの幼虫がタンパク質抽出手段及び方法に供される場合、アメリカミズアブの幼虫は、１２～３０日齢、好ましくは１４～２８日齢、より好ましくは１４～２６日齢、最も好ましくは幼虫が前蛹に変態する１２時間～３日前、例えば変態の１～２日前であるのが好適である。

【0038】

本発明によれば、水溶液中に提供される水溶性昆虫タンパク質組成物の源として、例えばみじん切りされたアメリカミズアブの幼虫の肉が適用される。みじん切りされた昆虫の残骸の平均粒径が１０～５００ミクロンの範囲である場合、有益である。水性水溶性昆虫タンパク質組成物は、例えば、欧州特許出願ＥＰ２９５３４８７の実施例の項、特に実施例１、１２頁、８～１３行目及び１３頁、３～５行目に記載のアメリカミズアブの幼虫からタンパク質画分を単離するための方法を適用することによりアメリカミズアブの幼虫から得られる水溶性昆虫タンパク質組成物である。いくつかの実施形態において、本発明の方法により提供される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質は、添加された炭水化物の存在下でタンパク質加水分解物を加熱することによりメイラード反応に供される。しかしながら、本発明の方法のステップａ）において用意される水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、アメリカミズアブの幼虫からタンパク質画分を単離するための以下の幼虫処理方法ステップ（ｉ）～（ｖｉ）を適用することによりアメリカミズアブの幼虫から得られる水溶性昆虫タンパク質組成物である場合が好ましい：
（ｉ）アメリカミズアブの幼虫、好ましくは１２～３０日齢、好ましくは１４～２８日齢、より好ましくは１４～２６日齢、最も好ましくは幼虫が前蛹に変態する１２時間～３日前、例えば変態の１～２日前のアメリカミズアブの幼虫を用意するステップと、
（ｉｉ）好ましくはみじん切りすることにより、ステップ（ｉ）のアメリカミズアブの幼虫のサイズを低減するステップであって、ステップａ）のパルプ中の昆虫の残骸の平均粒径が１０ミクロン～５００ミクロンの範囲である、ステップと、次いで
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の低減されたサイズを有する昆虫からパルプを得るステップと、
次いで
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）のパルプを８０～９５℃の温度、好ましくは８５～９２℃の温度に加熱する、好ましくは７０秒～１００秒、より好ましくは７５秒～９０秒の期間加熱するステップと、次いで
（ｖ）ステップ（ｉｖ）の加熱されたパルプを、好ましくはデカンテーション及び／又は遠心分離を包含する物理的分離ステップに供して、それにより昆虫タンパク質組成物を用意するステップと、次いで
（ｖｉ）ステップ（ｖ）の昆虫タンパク質組成物を、水又は緩衝水溶液中、好ましくは水中で混合して、本発明による酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法のステップａ）の水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップ。

【0039】

本発明者らは、方法のステップａ）において、本発明の方法の一部としてこの幼虫処理方法ステップを適用することにより、タンパク質源としてのアメリカミズアブの幼虫から得られるタンパク質パルプが得られることを実証したが、このパルプは、当技術分野において知られている代替的なアメリカミズアブの幼虫の処理方法、例えば欧州特許出願ＥＰ２９５３４８７の実施例の項、特に実施例１、１２頁、８～１３行目及び１３頁、３～５行目に概説される方法を適用することによりそのような幼虫から得られるパルプと比較して、驚くほど改善された特徴及び構造特性を有する。特に、本発明の方法のステップ（ｉｖ）において、１００秒未満の比較的短い加熱時間が、改善された幼虫パルプを得るために必須であると考えられる。本発明者らは、時間と温度の組合せを使用することによってより少ない油がタンパク質画分内に取り込まれ、タンパク質源としてのアメリカミズアブの幼虫からタンパク質パルプを単離するための代替的な現在の手段及び方法を用いて提供されるタンパク質源と比較して、本発明の方法のステップａ）においてより純粋なタンパク質源が提供されることを見出した。また、メイラード反応による（タンパク質の）パルプの変色が大幅に回避され、それにより得られる生成物の品質が改善されることを見出した。例えば、みじん切りされたアメリカミズアブの幼虫が９０℃で８０秒間、又は９０℃±２℃の温度で７５～８５秒間加熱された場合、脂肪含量が低減されたタンパク質が得られる。ＥＰ２９５３４８７では、加熱時間は少なくとも５分、さらには３０分である。さらに、みじん切りされたアメリカミズアブのパルプの最大１００秒、好ましくは約７０～９０秒の比較的短い加熱時間により、当技術分野において知られている現在の方法において適用されるより長い加熱時間と比較して、顆粒化がより少なく凝集性がより低い昆虫パルプが得られる。顆粒化がより少ない幼虫パルプは、パルプに含まれるタンパク質の酵素加水分解に有益である。粒子状物質は酵素分子によりアクセスしにくいため、顆粒化は酵素効率を低減する。本発明の方法の一部として幼虫処理方法ステップを適用することにより、アメリカミズアブの幼虫のパルプが１００秒を超える、例えば５分～３０分間の加熱に供された場合に得られるより大きいタンパク質凝集体及び粒子と比較して、短い加熱時間によってより小さいタンパク質クラスタ、凝集体、粒子、又はさらには（主に）タンパク質モノマー及び／若しくは小マルチマーからなるタンパク質組成物が得られる。

【0040】

本発明による方法には、ステップａ）の水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、２種以上の水溶性タンパク質、好ましくは２種より多い異なる水溶性タンパク質、より好ましくは３種より多い異なる水溶性タンパク質、最も好ましくは５種以上の異なる水溶性タンパク質を含むことが好ましい。本発明によれば、昆虫に存在する任意の数の異なる水溶性タンパク質が、方法のステップａ）において用意される水性水溶性昆虫タンパク質組成物に選択され得る。したがって、昆虫に存在する全ての水溶性タンパク質が、方法のステップａ）において用意される水性水溶性昆虫タンパク質組成物の一部であることも、本発明の一部である。代替として、少なくとも１種の水溶性昆虫タンパク質を包含する選択された数のタンパク質及び／又は選択された組の特定のタンパク質が、本発明の方法ａ）において少なくとも１種の水溶性タンパク質を含む水性水溶性昆虫タンパク質組成物として用意され得る。昆虫源に由来する全ての水溶性昆虫タンパク質を含む水溶性タンパク質組成物が好ましい。例えば、本発明の方法のステップａ）において用意される少なくとも１種の水溶性タンパク質を含む水性水溶性昆虫タンパク質組成物は、本発明によれば、みじん切りされた若しくは純粋な昆虫の肉、例えばアメリカミズアブの肉、又は好ましくはみじん切りされたアメリカミズアブの幼虫の肉に由来するタンパク質組成物である。本発明の方法のステップａ）において用意される少なくとも１種の水溶性タンパク質を含む水性水溶性昆虫タンパク質組成物は、アメリカミズアブの幼虫から得られるタンパク質組成物であることが好ましい。典型的には、これらの幼虫は、１４～２４日齢、例えば１９～２２日齢である。典型的には、そのようなアメリカミズアブの幼虫は、前記幼虫の総質量を基準として約３５重量％～６５重量％のタンパク質を含む。

【0041】

特に、本発明による方法では、テップｃ）において、加熱は３５℃～６０℃の温度で行われ、及び／又は加熱は２時間～１２時間の期間行われ、本発明の方法では、好ましくは、ステップｃ）において、加熱は３５℃～６０℃の温度で２時間～１２時間の期間行われる。例えば、本発明の方法が適用されるが、ステップｃ）における加熱は４５℃又は５５℃で行われ、本発明のステップｃ）中の加熱は４時間又は８時間行われた。典型的には、方法の加熱ステップｃ）中の温度は５０℃であり、典型的には、加熱時間は６時間であった。本発明の方法の加熱ステップｃ）中のｐＨは、好ましくはｐＨ６～８であり、典型的には、ｐＨは６．５～７．５、好ましくは６．８～７．２、例えばｐＨ７である。一実施形態は、ステップｃ）において加熱温度が５０℃であり、ステップｃ）における加熱時間が６時間であり、ｐＨが７である本発明の方法である。これらのプロセス条件が本発明による方法で適用された本発明の実施形態が、実施例の項でさらに例示される。当業者には、加熱時間、酵素加水分解ステップｃ）が行われる温度、及び水溶性タンパク質の水溶液のｐＨの組合せが、効率的なタンパク質加水分解のために選択及び最適化される３つのパラメータであることが理解される。すなわち、選択されたタンパク質加水分解酵素に対して、最適なｐＨ条件、酵素活性の点で最適な温度、及びタンパク質の所望の程度の酵素加水分解を考慮した場合の好適な反応時間が、本発明の方法において選択される。特に、水性水溶性タンパク質組成物のｐＨが、本発明に従って酵素加水分解が反応時間内に効率的に進行するようなｐＨであることは、本発明の一部である。同様に、加熱温度は、タンパク質加水分解酵素が選択された反応時間内に効率的に加水分解するように選択される。さらに、酵素加水分解ステップに選択される時間は、選択された酵素、加水分解温度、酵素濃度、ｐＨ及び加水分解時間の組合せを考慮した場合、加水分解されたタンパク質の最大の達成可能な画分を本質的に提供するために好適である限り継続するように選択される。したがって、昆虫タンパク質の酵素加水分解を考慮した場合、ｐＨ、酵素濃度、加水分解の加熱温度、及び加水分解ステップの反応時間の好適な組合せを選択することは、本発明の一部である。本発明者らが驚いたことに、本発明の方法を適用することによって、水溶性昆虫タンパク質は、ほぼ中性のｐＨ又は中性ｐＨで、比較的短い時間内で比較的高い程度まで効率的に加水分解される。すなわち、アメリカミズアブの幼虫のタンパク質等の水溶性昆虫タンパク質組成物を用意し、酵素加水分解のステップにおいて前記タンパク質組成物を約５０℃で約６時間ｐＨ７で本発明の加水分解方法に供することにより、タンパク質の総重量を基準として８５重量％超、例えば９０重量％超、９５重量％超、及び実施形態において最大１００重量％の１０００ダルトン未満の分子量を有するタンパク質を含む、１００％のペプシン消化性の加水分解されたタンパク質が得られた。さらに、遊離アミノ酸残基の含量は、典型的には、タンパク質の総重量を基準として３０重量％超、例えば４０重量％超である。したがって、本発明者らが驚いたことに、アメリカミズアブの幼虫のタンパク質等の昆虫タンパク質のペプシン消化性は極めて高く、すなわち１００％であり、さらに、アメリカミズアブの幼虫のタンパク質を考慮した場合、昆虫タンパク質を酵素消化する方法ステップの後の遊離アミノ酸残基の含量もまた比較的高く、タンパク質の総重量を基準として３４重量％～５０重量％又は４０重量％～５０重量％と高い。実施例の項もまた参照されたい。

【0042】

一実施形態は、方法のステップｃ）において、加熱が４０℃～５５℃の温度で行われ、及び／又は加熱が４時間～９時間の期間行われ、好ましくは、ステップｃ）において、加熱が４０℃～５５℃の温度で４時間～９時間の期間行われ、より好ましくは、ステップｃ）において、加熱が４５℃～５３℃の温度で５時間～７時間の期間行われ、最も好ましくは、加熱が５０℃の温度で６時間の期間行われる、本発明による方法である。

【0043】

実施形態において、本発明による方法はステップａ）を含み、前記ステップａ）において、水性水溶性昆虫タンパク質組成物のｐＨは５～７．７、好ましくは６～７．５である、より好ましくはｐＨは７．０である。水溶性昆虫タンパク質は、約７のｐＨの水溶液中で特に安定である。本発明者らは、タンパク質が本発明の方法に供される場合、約７のｐＨを有する水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、そのようなタンパク質の効率的及び有効な酵素加水分解に好適なタンパク質源であることを実証した。本発明の方法は、一定の加水分解度及びペプシン消化性を有する加水分解されたタンパク質を提供するための安定した手段を提供する。これにより、加水分解された昆虫タンパク質組成物の間のバッチ間変動が最小限となる。選択されたｐＨ、温度、酵素用量、加水分解時間により、本発明の方法は、示されるように、昆虫タンパク質で達成可能なペプシン消化性の程度及び遊離アミノ酸残基の含量が高いだけに、すなわち（ほぼ）１００％のペプシン消化性、及びタンパク質の総重量を基準として３０重量％超、例えば４０重量％超の遊離アミノ酸残基を有することから、一定組成の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を提供する。

【0044】

一実施形態は、方法のステップａ）において用意された少なくとも１種のペプチダーゼがアミノペプチダーゼ、好ましくはエンドペプチダーゼ若しくはエクソペプチダーゼ、又はそれらの混合物である、或いは方法のステップａ）において用意された少なくとも１種のペプチダーゼがアミノペプチダーゼ、好ましくはエンドペプチダーゼ若しくはエクソペプチダーゼ、又はそれらの混合物を含む、本発明による方法である。

【0045】

本発明による方法では、ステップａ）において、少なくとも１種のペプチダーゼが、ロイシルアミノペプチダーゼ、パパイン、プロナーゼ、セリンプロテアーゼ、アルカラーゼ、サブチリシン、サブチリシンＡ、α－キモトリプシン、カテプシンＩＩＩ、エスペラーゼ、ニュートラーゼ、ペプシン、サーモリシン、トリプシンを含むか又はそれらから選択され、本方法では、好ましくは、ステップａ）において、少なくとも１種のペプチダーゼがロイシルアミノペプチダーゼであるか、又は本方法では、好ましくは、ステップａ）において、少なくとも１種のペプチダーゼがロイシルアミノペプチダーゼを含むことが好ましい。本発明者らは、特に、本発明の方法における少なくともロイシルアミノペプチダーゼの適用は、加水分解された昆虫タンパク質組成物の提供に非常に好適であることを実証した。例えば、遊離アミノ酸残基の量は、ロイシルアミノペプチダーゼが適用される場合、本発明の方法の加水分解ステップに供されたタンパク質の総重量を基準として３４重量％超である。驚くべきことに、アメリカミズアブの幼虫のタンパク質、すなわち水溶性幼虫タンパク質を本発明の方法に供すると、１０００ダルトン未満の質量を有するペプチドの量が、タンパク質の総重量を基準として８５重量％超、例えば最大１００重量％であり、さらに、加水分解されたタンパク質中の遊離アミノ酸残基の含量が、タンパク質の総重量を基準として３３重量％超、例えば４５重量％超である、加水分解されたタンパク質組成物が提供される。そのような高い加水分解度は、例えば、人間による消費用、例えばネコ又はイヌの給餌用の食物成分、ペットフード成分及び動物飼料成分としての用途、家畜飼育、畜産、水産養殖等における用途等に好適な加水分解されたタンパク質組成物を提供する。本発明の方法の安定性は、高い消化性並びに高含量の小ペプチド及び遊離アミノ酸残基と共に、食物及び飼料香味剤及びパラタントの好適な源を提供する。

【0046】

ある特定の実施形態は、ステップｂ）において、タンパク質／ペプチダーゼ混合物中の少なくとも１種のペプチダーゼの量が、タンパク質／ペプチダーゼ混合物の総重量の０．０５重量％～７重量％、好ましくはタンパク質／ペプチダーゼ混合物の総重量の０．１重量％～６重量％、より好ましくは０．２重量％～５重量％、最も好ましくは０．５重量％～３重量％、例えば１．０重量％～２．０重量％である、本発明による方法である。典型的には、酵素、例えばロイシルアミノペプチダーゼのそのような選択される量は、アメリカミズアブの幼虫から得られる水溶性タンパク質等の昆虫タンパク質の効率的な酵素加水分解に好適である。典型的には、ペプチダーゼは、本発明の方法において、迅速で効率的なタンパク質加水分解に好適な量で存在し、水溶性昆虫タンパク質は、タンパク質組成物の総重量を基準として２重量％～２５重量％、好ましくは３．５重量％～２０重量％、例えば約３．８％又は約１９％の濃度で提供される。

【0047】

一実施形態は、ステップｄ）において、ステップｃ）の加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液中の酵素加水分解が、加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を３０秒～３０分、好ましくは４５秒～２０分、より好ましくは１分～１５分、最も好ましくは２分～１０分の期間加熱することにより停止される、本発明による方法である。

【0048】

一実施形態は、ステップｄ）において、ステップｃ）の加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液中の酵素加水分解が、加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を８０℃～１０５℃、好ましくは８５℃～１０３℃、より好ましくは９０℃～１００℃の温度に加熱することにより停止される、本発明による方法である。典型的には、本発明の方法の酵素不活性化ステップｄ）は、１．５分～８分、好ましくは２分を要する。典型的には、酵素不活性化ステップは、本発明の方法のステップｄ）において、加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を１００℃で例えば２分間加熱することによって行われる。

【0049】

一実施形態は、ステップｄ）の後、任意選択のさらなるステップｅ）において、ステップｄ）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が、前記酵素加水分解されたタンパク質中に修飾アミノ基を提供するためにメイラード反応に供される、本発明の方法であり、メイラード反応は、
ｅ１）炭水化物を用意し、炭水化物をステップｄ）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質と混合して、酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物を用意するサブステップと；
ｅ２）ステップｅ１）の酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物を加熱し、酵素加水分解された昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を用意するサブステップと
を含む。

【0050】

一実施形態は、任意選択のステップｅ１）において、添加された炭水化物の最終濃度が、酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物の総重量の０．０５重量％～６．０重量％、好ましくは酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物の総重量の０．１重量％～５．０重量％、より好ましくは０．２重量％～３重量％、最も好ましくは０．３重量％～１．０重量％である、本発明による方法である。

【0051】

好ましくは、本発明による方法の一部として、任意選択のステップｅ２）において、任意選択のステップｅ１）の酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物が、１００℃～１７０℃、好ましくは１２０℃～１６８℃、より好ましくは１３５℃～１６６℃、例えば１４０℃～１６５℃の温度で加熱される。任意選択のステップｅ１）の酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物を加熱するために適用される温度は、１４５℃～１６０℃、例えば１５０℃、１５５℃であることが好ましい。好ましい実施形態において、メイラード反応中の温度は１５０℃である。本発明者らは、メイラード反応生成物、すなわち酵素加水分解された昆虫タンパク質のメイラード反応生成物が、例えばキャットフード及びドッグフードにおけるペットフード成分として、又は例えば麺、スープ、ハンバーガー等の人間による使用のための食品における食物成分として適用される場合、１４５℃～１５５℃の加熱温度を好ましくは約１０分～２０分間、例えば１５０℃を２０分間適用することにより、非常に魅力的でおいしい味及び／又は香味及び／又は食味を有するメイラード反応生成物が得られることを実証した。

【0052】

一実施形態は、任意選択の方法ステップｅ２）において、任意選択の方法ステップｅ１）の酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物が、１分～１２０分、好ましくは２分～６０分、より好ましくは３分～３０分、最も好ましくは５分～２０分、例えば１０分～１７分又は約１５分の期間加熱される、本発明による方法である。本発明者らは、本発明の方法により提供される酵素加水分解されたアメリカミズアブの幼虫のタンパク質を、メイラード反応に供される酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物の総重量の０．３重量％～１．０重量％の量の添加されたスクロース又はグルコース、好ましくはスクロース若しくはグルコース、又はそれらの混合物の存在下で約１５分間加熱することにより、驚くほど強く魅力的な牛肉のような味又は豚肉のような味が得られることを実証した。目隠し試験において、本発明の方法により提供されたタンパク質加水分解物を含む、又は酵素加水分解された昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含む食料品の味、香味及び／又は食味が、昆虫タンパク質加水分解物又は酵素加水分解された昆虫タンパク質のメイラード反応生成物で強化されていない食料品の味、香味及び／又は食味より良好でそれを超えていることを、ヒト対象のパネルの全ての人が全員一致で示した。

【0053】

一実施形態は、任意選択の方法ステップｅ１）において、用意される炭水化物が、スクロース若しくはグルコース、又はそれらの混合物、好ましくはスクロースである、本発明による方法である。本発明者らは、アメリカミズアブの幼虫の水溶性タンパク質が本発明の方法に供された場合、本発明の方法が、強い肉のような味及び食味を有するメイラード生成物を一貫して提供することを実証した。グルコース、スクロース又はそれらの混合物とは別に、さらなる炭水化物が、アミノ酸残基側鎖と結合及び反応するのに好適であることが知られていることが、当業者には理解される。一例は、グルコース－６－ホスフェートである。したがって、本発明の方法では、任意選択のステップｅ１）において、スクロース及び／又はグルコースを含むか又は含まない他の炭水化物又はその混合物、例えばグルコース－６－ホスフェートが、酵素加水分解された昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を提供するために適用されることも、本発明の一部である。スクロース及びグルコースとは異なる炭水化物を含めることにより、又はスクロース及び／若しくはグルコースを少なくとも１種の他の炭水化物と組み合わせることにより、本発明の方法は、スクロース又はグルコースが方法において適用された場合に得られる酵素加水分解された昆虫タンパク質のメイラード反応生成物又は糖化最終生成物とは異なる味及び／又は香味及び／又は食味を有する酵素加水分解された昆虫タンパク質のメイラード反応生成物又は糖化最終生成物を提供するのに好適である。したがって、本発明の方法は、選択される（１種又は複数種の）炭水化物の種類、本発明の方法の任意選択のステップｅ１）及びｅ２）中の（１種又は複数種の）炭水化物の濃度、並びにメイラード反応中の加熱時間及び加熱温度を制御することにより、方法に供された酵素加水分解された昆虫タンパク質の味及び／又は香味及び／又は食味を制御及び管理する機会を提供する。典型的には、Ａｒｇアミノ酸残基が、メイラード反応生成物及び／又は糖化最終生成物を形成しやすい。

【0054】

一実施形態は、ステップｄ）の後、任意選択のさらなるステップｆ１）において、ステップｄ）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が、好ましくは、噴霧乾燥、流動床乾燥による乾燥、凍結乾燥、屈折式乾燥のうちのいずれか１つ又は複数を適用することにより乾燥される、本発明による方法である。さらなる実施形態は、任意選択の方法ステップｅ２）の後、任意選択のさらなるステップｆ２）において、ステップｅ２）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物が、好ましくは、噴霧乾燥、流動床乾燥による乾燥、凍結乾燥、屈折式乾燥のうちのいずれか１つ又は複数を適用することにより乾燥される、本発明による方法である。上述のアメリカミズアブの幼虫の水溶性タンパク質組成物等の乾燥した水溶性昆虫タンパク質組成物を提供することの利益は、例えば、貯蔵される際の長い保存期間、及び、タンパク質濃度が制御可能であるように、水溶液中の選択された最終タンパク質濃度で水性水溶性昆虫タンパク質組成物を調製する機会に関連している。タンパク質を溶解するための水溶液の種類、及び所望のｐＨもまた選択され得る。本発明の目的において、以前に乾燥された本発明の方法のステップａ）において用意される水溶性昆虫タンパク質組成物は、典型的には、本発明のステップａ）における溶解したタンパク質の用意の前に水に溶解される。

【0055】

一実施形態は、ステップｄ）の後、任意選択のさらなるステップｆ３）において、ステップｄ）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が濃縮される、好ましくは、濃縮された酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の乾燥物質含量が濃縮ステップｆ３）の後に濃縮された酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として少なくとも３０重量％、好ましくは少なくとも５０重量％であるように濃縮される、本発明による方法である。一実施形態は、任意選択の方法ステップｅ２）の後、任意選択のさらなるステップｆ４）において、ステップｅ２）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物が濃縮される、好ましくは、ステップｅ２）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の濃縮されたメイラード反応生成物の乾燥物質含量が濃縮ステップｆ４）の後に酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の濃縮されたメイラード反応生成物の総重量を基準として少なくとも３０重量％、例えば少なくとも５０重量％であるように濃縮される、本発明の方法である。

【0056】

一実施形態は、方法が任意選択の濃縮ステップｆ３）を含み、前記任意選択の濃縮ステップｆ３）の後に、濃縮された酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の乾燥物質含量が、濃縮された酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として３０重量％～８０重量％、好ましくは４５重量％～７５重量％、より好ましくは５０重量％～７０重量％である、本発明の方法である。一実施形態は、方法が任意選択の濃縮ステップｆ４）を含み、前記任意選択の濃縮ステップｆ４）の後に、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の濃縮されたメイラード反応生成物の乾燥物質含量が、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の濃縮されたメイラード反応生成物の総重量を基準として３０重量％～８０重量％、好ましくは４５重量％～７５重量％、より好ましくは６０重量％～７０重量％である、本発明の方法である。

【0057】

一実施形態は、ステップｂ）のタンパク質／ペプチダーゼ混合物中の水溶性昆虫タンパク質の量が、タンパク質／酵素混合物の総重量を基準として０．２重量％～３０重量％、好ましくはタンパク質／酵素混合物の総重量を基準として０．５重量％～２５重量％、より好ましくは１重量％～２０重量％、より好ましくは２重量％～１５重量％、最も好ましくは３重量％～１０重量％、例えば３．５重量％～７重量％、又は３重量％～５重量％である、本発明による方法である。

【0058】

本発明の実施形態によれば、本発明の方法のステップａ）において用意される水性水溶性昆虫タンパク質組成物は、濃縮されたタンパク質組成物であるか、又は、本発明の方法により提供された加水分解されたタンパク質組成物は、加水分解されたタンパク質が例えばペットフード、人間用食料、家畜飼料等の調製において使用される前に任意選択で濃縮されるか、又はその両方である。本発明の方法のステップａ）において濃縮された水性水溶性昆虫タンパク質を提供することの利益は、タンパク質加水分解の制御可能な速度及び程度に関連する。すなわち、より濃縮されたタンパク質組成物がタンパク質加水分解に供される場合、酵素加水分解はより短い時間枠内で生じ得る。さらに、より濃縮された加水分解されたタンパク質組成物の提供は、食物又は飼料成分としての加水分解物の適用を考慮した場合、より高い柔軟性を提供する。濃縮された加水分解されたタンパク質組成物が本発明の方法に供される場合、食品又は飼料製品の製造中に適用する必要がある加水分解された昆虫タンパク質組成物の量がより少ない。これは、水溶性昆虫タンパク質加水分解物の使用、及び酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の使用の機会及び用途を広げる。濃縮された水性水溶性昆虫タンパク質組成物を本発明の方法に適用することにより、本発明の方法により得られた生成物の添加による食物又は飼料成分の組成物の希釈が制限される。本発明の方法による濃縮された加水分解されたタンパク質の提供についても同じであり、例えば、加水分解されたタンパク質が食物成分、ペットフード成分、動物飼料成分、香味剤、パラタントとして人間による使用のための食料品の製造に適用される前に、加水分解されたタンパク質、又は加水分解されたタンパク質のメイラード反応生成物が濃縮ステップに供される。

【0059】

一実施形態は、方法ステップａ）において、水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、イエバエ、アメリカミズアブ、イナゴ、バッタ及びコオロギに由来する水性水溶性昆虫タンパク質組成物のいずれか１つである、本発明の方法である。一実施形態は、ステップａ）において、水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、甲虫の幼虫、イエバエ、アメリカミズアブ、イナゴ、バッタ、コオロギ、ゴキブリの幼虫、ヤシオオオサゾウムシの幼虫、カイコ、タガメ、セミ、タケムシ、アリ、キリギリス、チョウ、ヨコバイ、ウンカ及びハチの幼虫のうちのいずれか１つ又は複数に由来する水性水溶性昆虫タンパク質組成物であり、水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、好ましくはアメリカミズアブに由来し、好ましくは、水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、アメリカミズアブの幼虫に由来する水性水溶性タンパク質組成物である、本発明の方法である。水性水溶性昆虫タンパク質組成物がアメリカミズアブに由来することが好ましく、より好ましくは、水性水溶性昆虫タンパク質組成物は、アメリカミズアブの幼虫に由来する水性水溶性タンパク質組成物である。典型的には、そのようなアメリカミズアブの幼虫は、幼虫から前蛹期への移行直前の齢である。典型的には、アメリカミズアブの幼虫は、１２日齢～２５日齢、例えば１６～２２日齢である。そのような幼虫は、典型的には、一定の飼料供給条件下、すなわち不断給餌下で、及び２９℃～３２℃、例えば３０．５℃～３１℃の温度で養殖又は飼育される。アメリカミズアブの幼虫は、典型的には、幼虫の総重量を基準として（乾燥物質基準）３５重量％超、例えば４０重量％超、４５重量％超、５０重量％超、５５重量％超、６０重量％超、例えば３５重量％～６５重量％、又は６３重量％未満のタンパク質含量を有する。そのような高タンパク質含量により、アメリカミズアブの幼虫は、水溶性昆虫タンパク質を回収するための源として特に好適であり、そのようなタンパク質を本発明の方法に供するのに好適である。驚くべきことに、アメリカミズアブの幼虫の水性水溶性タンパク質組成物を本発明の方法に適用した場合、タンパク質加水分解物及びタンパク質加水分解物のメイラード反応生成物が得られ、これは、例えば人間対象によりそれ自体が消費された場合、及び例えば麺及びベジタリアンバーガーの成分として組み込まれた際に人間によって消費された場合、及び例えばキャットフードと混合された場合、及びドッグフードと混合された場合に、強い牛肉のような味及び／又は香味及び／又は食味を有する。

【0060】

一実施形態は、方法ステップａ）において、水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、水等の水溶液中に溶解した水溶性昆虫タンパク質組成物、好ましくはアメリカミズアブの幼虫に由来する水溶性昆虫タンパク質組成物であり、水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、
（ｉ）昆虫、好ましくはアメリカミズアブの幼虫を用意するステップと、
（ｉｉ）好ましくはみじん切りにすることにより、ステップ（ｉ）の昆虫のサイズを低減するステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の低減されたサイズを有する昆虫からパルプを得るステップと、
次いで
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）のパルプを７０～１００℃の温度に加熱するステップと、次いで
（ｖ）ステップ（ｉｖ）の加熱されたパルプを、好ましくはデカンテーション及び／又は遠心分離を包含する物理的分離ステップに供して、それにより昆虫タンパク質組成物を用意するステップと、次いで
（ｖｉ）ステップ（ｖ）の昆虫タンパク質組成物を、水又は緩衝水溶液等の水溶液中、好ましくは水中で混合して、ステップａ）の水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップと
により、又は少なくともそれらのステップにより昆虫を少なくとも１種の水性水溶性昆虫タンパク質組成物に変換することによって用意される、本発明による方法である。

【0061】

一実施形態は、ステップａ）において、水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、アメリカミズアブの幼虫に由来する、水中に溶解した水溶性昆虫タンパク質組成物であり、水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、
（ｉ）アメリカミズアブの幼虫、好ましくは１２～３０日齢、好ましくは１４～２８日齢、より好ましくは１４～２６日齢、最も好ましくは幼虫が前蛹に変態する１２時間～３日前、例えば変態の１～２日前のアメリカミズアブの幼虫を用意するステップと、
（ｉｉ）好ましくはみじん切りすることにより、ステップ（ｉ）のアメリカミズアブの幼虫のサイズを低減するステップであって、ステップａ）のパルプ中の昆虫の残骸の平均粒径が１０ミクロン～５００ミクロンの範囲である、ステップと、次いで
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の低減されたサイズを有する昆虫からパルプを得るステップと、
次いで
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）のパルプを８０～９５℃の温度、好ましくは８５～９２℃の温度に加熱する、好ましくは７０秒～１００秒、より好ましくは７５秒～９０秒の期間加熱するステップと、次いで
（ｖ）ステップ（ｉｖ）の加熱されたパルプを、好ましくはデカンテーション及び／又は遠心分離を包含する物理的分離ステップに供して、それにより昆虫タンパク質組成物を用意するステップと、次いで
（ｖｉ）ステップ（ｖ）の昆虫タンパク質組成物を、水又は緩衝水溶液中、好ましくは水中で混合して、ステップａ）の水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップと
により、又は少なくともそれらのステップにより、好ましくはそれらのステップによりアメリカミズアブの幼虫を少なくとも１種の水性水溶性昆虫タンパク質組成物に変換することによって用意される、本発明による方法である。

【0062】

典型的には、水性水溶性昆虫タンパク質組成物は、タンパク質源としてのアメリカミズアブの幼虫に由来する。本発明の方法のステップａ）の水性水溶性昆虫タンパク質組成物の用意を可能にするために、アメリカミズアブの幼虫がタンパク質抽出手段及び方法に供される場合、アメリカミズアブの幼虫は、１２～３０日齢、好ましくは１４～２８日齢、より好ましくは１４～２６日齢、最も好ましくは幼虫が前蛹に変態する１２時間～３日前、例えば変態の１～２日前であるのが好適である。

【0063】

本発明によれば、水溶液中に提供される水溶性昆虫タンパク質組成物の源として、例えばみじん切りされたアメリカミズアブの幼虫の肉が適用される。みじん切りされた昆虫の残骸の平均粒径が１０～５００ミクロンの範囲である場合が有益である。水性水溶性昆虫タンパク質組成物は、例えば、欧州特許出願ＥＰ２９５３４８７の実施例の項、特に実施例１、１２頁、８～１３行目及び１３頁、３～５行目に記載のアメリカミズアブの幼虫からタンパク質画分を単離するための方法を適用することによりアメリカミズアブの幼虫から得られる水溶性昆虫タンパク質組成物である。いくつかの実施形態において、本発明の方法により提供される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質は、添加された炭水化物の存在下でタンパク質加水分解物を加熱することによりメイラード反応に供される。しかしながら、本発明の方法のステップａ）において用意される水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、アメリカミズアブの幼虫からタンパク質画分を単離するための以下の幼虫処理方法ステップ（ｉ）～（ｖｉ）を適用することによりアメリカミズアブの幼虫から得られる水溶性昆虫タンパク質組成物である場合が好ましい：
（ｉ）アメリカミズアブの幼虫、好ましくは１２～３０日齢、好ましくは１４～２８日齢、より好ましくは１４～２６日齢、最も好ましくは幼虫が前蛹に変態する１２時間～３日前、例えば変態の１～２日前のアメリカミズアブの幼虫を用意するステップと、
（ｉｉ）好ましくはみじん切りすることにより、ステップ（ｉ）のアメリカミズアブの幼虫のサイズを低減するステップであって、ステップａ）のパルプ中の昆虫の残骸の平均粒径が１０ミクロン～５００ミクロンの範囲である、ステップと、次いで
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の低減されたサイズを有する昆虫からパルプを得るステップと、
次いで
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）のパルプを８０～９５℃の温度、好ましくは８５～９２℃の温度に加熱する、好ましくは７０秒～１００秒、より好ましくは７５秒～９０秒の期間加熱するステップと、次いで
（ｖ）ステップ（ｉｖ）の加熱されたパルプを、好ましくはデカンテーション及び／又は遠心分離を包含する物理的分離ステップに供して、それにより昆虫タンパク質組成物を用意するステップと、次いで
（ｖｉ）ステップ（ｖ）の昆虫タンパク質組成物を、水又は緩衝水溶液中、好ましくは水中で混合して、本発明による酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法のステップａ）の水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップ。

【0064】

本発明者らは、方法のステップａ）において、本発明の方法の一部としてこの幼虫処理方法ステップを適用することにより、タンパク質源としてのアメリカミズアブの幼虫から得られるタンパク質パルプが得られることを実証したが、このパルプは、当技術分野において知られている代替的なアメリカミズアブの幼虫の処理方法、例えば欧州特許出願ＥＰ２９５３４８７の実施例の項、特に実施例１、１２頁、８～１３行目及び１３頁、３～５行目に概説される方法を適用することによりそのような幼虫から得られるパルプと比較して、驚くほど改善された特徴及び構造特性を有する。特に、本発明の方法のステップ（ｉｖ）において、１００秒未満の比較的短い加熱時間が、改善された幼虫パルプを得るために必須であると考えられる。本発明者らは、時間と温度の組合せを使用することによって、より少ない油がタンパク質画分内に取り込まれ、タンパク質源としてのアメリカミズアブの幼虫からタンパク質パルプを単離するための代替的な現在の手段及び方法を用いて提供されるタンパク質源と比較して、本発明の方法のステップａ）においてより純粋なタンパク質源が提供されることを見出した。また、メイラード反応による（タンパク質の）パルプの変色が大幅に回避され、それにより得られる生成物の品質が改善されることを見出した。例えば、みじん切りされたアメリカミズアブの幼虫が９０℃で８０秒間、又は９０℃±２℃の温度で７５～８５秒間加熱された場合、脂肪含量が低減されたタンパク質が得られる。ＥＰ２９５３４８７では、加熱時間は少なくとも５分、さらには３０分である。さらに、みじん切りされたアメリカミズアブのパルプの最大１００秒、好ましくは約７０～９０秒の比較的短い加熱時間により、当技術分野において知られている現在の方法において適用されるより長い加熱時間と比較して、顆粒化がより少なく凝集性がより低い昆虫パルプが得られる。顆粒化がより少ない幼虫パルプは、パルプに含まれるタンパク質の酵素加水分解に有益である。粒子状物質は酵素分子によりアクセスしにくいため、顆粒化は酵素効率を低減する。本発明の方法の一部として幼虫処理方法ステップを適用することにより、アメリカミズアブの幼虫のパルプが１００秒を超える、例えば５分～３０分間の加熱に供された場合に得られるより大きいタンパク質凝集体及び粒子と比較して、短い加熱時間によってより小さいタンパク質クラスタ、凝集体、粒子、又はさらには（主に）タンパク質モノマー及び／若しくは小マルチマーからなるタンパク質組成物が得られる。

【0065】

本発明の方法に供されるアメリカミズアブは、アメリカミズアブの幼虫であることが好ましい。アメリカミズアブの幼虫等の昆虫を、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための本発明の方法における適用に好適な水性水溶性昆虫タンパク質組成物に変換するための典型的な方法は、欧州特許出願ＥＰ２９５３４８７の実施例の項、特に実施例１、１２頁、８～１３行目及び１３頁、３～５行目に記載されている。加熱ステップ（ｉｖ）は、典型的には、５０秒～１２０秒間、好ましくは８０秒間継続し、典型的には、ステップ（ｉｖ）における加熱温度は、８０℃～９５℃、好ましくは約９０℃である。本発明の方法によれば、ステップ（ｉ）においてアメリカミズアブの幼虫が用意された場合、昆虫パルプがステップ（ｉｖ）において９０℃で８０秒間加熱されると、高いタンパク質収量が達成され得る。いくつかの実施形態において、本発明の方法により提供される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質は、添加された炭水化物の存在下でタンパク質加水分解物を加熱することによりメイラード反応に供される。いくつかの実施形態において、水溶性昆虫タンパク質の源は、例えば、ＥＰ２９５３４８７の実施例の項、特に実施例１、１２頁、８～１３行目及び１３頁、３～５行目に記載の方法により提供される水性水溶性昆虫タンパク質組成物でもあり、これは、本発明の方法の方法ステップａ）～ｄ）に供されてから本発明による方法ステップｅ１）及びｅ２）にさらに供され、メイラード反応生成物及び／又は糖化最終生成物が提供される。本発明の方法による水性水溶性昆虫タンパク質組成物の提供、並びに加水分解されたタンパク質及び加水分解されたタンパク質のメイラード反応生成物の提供のためのステップの概要に関しては、図１も参照されたい。

【0066】

一実施形態は、方法ステップｄ）で用意される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が、ステップｄ）で用意される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総量の重量を基準として少なくとも６０重量％、好ましくは少なくとも７０重量％、例えば７０重量％～１００重量％の程度まで水若しくは緩衝水溶液等の水溶液中に可溶である、本発明による方法である。一実施形態は、方法のステップｅ２）で用意される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物が、ステップｅ２）で用意される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の総量の重量を基準として少なくとも６０重量％、好ましくは少なくとも７０重量％、例えば７０重量％～１００重量％の程度まで水若しくは緩衝水溶液等の水溶液中に可溶である、本発明による方法である。アメリカミズアブの幼虫に由来するタンパク質を考慮した場合、ｐＨ７の水等の水溶液へのタンパク質溶解度は、本明細書において上記で概説されたステップ（ｉ）～（ｖ）に従ってアメリカミズアブの幼虫から得られたタンパク質中に存在するタンパク質の総重量を基準として少なくとも９０重量％であり、本質的に１００重量％である。

【0067】

本発明の一態様は、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法により得られる、又は本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法により得ることができる酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質に関する。本発明のさらなる態様は、メイラード反応生成物を用意するさらなるステップを含む本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法により得られる、又はメイラード反応生成物を用意するさらなるステップを含む本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法により得ることができる酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物に関する。

【0068】

一実施形態は、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法により得られる、若しくは本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法により得ることができる酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質、又はメイラード反応生成物を用意するさらなるステップを含む本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法により得られる、若しくはメイラード反応生成物を用意するさらなるステップを含む本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法により得ることができる酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物であり、昆虫タンパク質源は、本発明の実施形態によるアメリカミズアブの幼虫のタンパク質であり、及び／又は、昆虫タンパク質源は、本発明の幼虫処理方法のステップ（ｉ）～（ｖｉ）に従って提供される。

【0069】

本発明の一態様は、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質に関し、又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物に関し、前記タンパク質の総重量を基準として前記タンパク質の少なくとも５０重量％、好ましくは５５重量％～１００重量％、より好ましくは６５重量％～１００重量％、最も好ましくは７５重量％～１００重量％、例えば８０重量％～９５重量％、又は８５重量％～９０重量％、又は８５重量％～１００重量％が１，０００ダルトン未満の分子量を有する。昆虫タンパク質は、好ましくはアメリカミズアブの幼虫の水溶性タンパク質、例えばアメリカミズアブの幼虫の水性水溶性タンパク質組成物である。アメリカミズアブの幼虫等の幼虫に由来するそのようなタンパク質組成物は、好ましくは、欧州特許出願ＥＰ２９５３４８７の実施例の項、実施例１、１２頁、８～１３行目及び１３頁、３～５行目に記載の方法を適用することにより得られる。

【0070】

一実施形態は、本発明による酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質であり、前記タンパク質の総重量を基準としてタンパク質の少なくとも１０重量％、好ましくは１５重量％～６０重量％、より好ましくは２０重量％～５５重量％、最も好ましくは３５重量％～５０重量％、例えば２５重量％～４０重量％、又は４５重量％～５５重量％が遊離アミノ酸残基である。一実施形態は、本発明による酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物であり、前記タンパク質の総重量を基準としてタンパク質の少なくとも１０重量％、好ましくは１５重量％～６０重量％、より好ましくは２０重量％～５０重量％、最も好ましくは２５重量％～３５重量％、例えば２５重量％～４０重量％、又は３５重量％～５０重量％が遊離アミノ酸残基である。典型的には、水溶性昆虫タンパク質組成物を本発明の方法に供することにより、タンパク質組成物中のタンパク質の総重量を基準として３３重量％～４８重量％の遊離アミノ酸残基を含む酵素加水分解された昆虫タンパク質組成物が得られる。酵素加水分解された昆虫タンパク質を本発明によるメイラード反応の任意選択の方法ステップｅ１）及びｅ２）に供することにより、タンパク質組成物中のタンパク質の総重量を基準として典型的には３３重量％～４８重量％の遊離アミノ酸残基が得られ、ここで、前記遊離アミノ酸残基の画分が、Ａｒｇ残基等のメイラード反応生成物として提供される。一実施形態は、本発明による酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物であり、前記タンパク質の総重量を基準としてタンパク質の少なくとも１０重量％、好ましくは１５重量％～６０重量％、より好ましくは２０重量％～５５重量％、最も好ましくは３０重量％～５０重量％、例えば２５重量％～４０重量％、又は３５重量％～５０重量％が遊離アミノ酸残基である。

【0071】

一実施形態は、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質であり、前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として少なくとも２．５重量％が遊離アルギニンであり、及び／又は少なくとも２．５重量％が遊離グルタミン酸であり、及び／又は少なくとも１．２５重量％が遊離ロイシンであり、及び／又は少なくとも２．２重量％が遊離リシンである、好ましくは前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として少なくとも３．７重量％が遊離アルギニンであり、少なくとも３．０重量％が遊離グルタミン酸であり、少なくとも１．５重量％が遊離ロイシンであり、少なくとも２．６重量％が遊離リシンである、好ましくは前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として４．７重量％未満が遊離アルギニンであり、及び／又は４．０重量％未満が遊離グルタミン酸であり、及び／又は３．０重量％未満が遊離ロイシンであり、及び／又は４．０重量％未満が遊離リシンである、好ましくは前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として４．５重量％未満が遊離アルギニンであり、３．７重量％未満が遊離グルタミン酸であり、２．７重量％未満が遊離ロイシンであり、３．６重量％未満が遊離リシンである。

【0072】

一実施形態は、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物であり、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物の総重量を基準として少なくとも２．５重量％が遊離アルギニンであり、及び／又は少なくとも２．５重量％が遊離グルタミン酸であり、及び／又は少なくとも１．２５重量％が遊離ロイシンであり、及び／又は少なくとも２．２重量が遊離リシンである、好ましくは酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物の総重量を基準として少なくとも３．７重量％が遊離アルギニンであり、少なくとも３．０重量％が遊離グルタミン酸であり、少なくとも１．５重量％が遊離ロイシンであり、少なくとも２．６重量％が遊離リシンである、好ましくは酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物の総重量を基準として４．７重量％未満が遊離アルギニンであり、及び／又は４．０重量％未満が遊離グルタミン酸であり、及び／又は３．０重量％未満が遊離ロイシンであり、及び／又は４．０重量％未満が遊離リシンである、好ましくは酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物の総重量を基準として４．５重量％未満が遊離アルギニンであり、３．７重量％未満が遊離グルタミン酸であり、２．７重量％未満が遊離ロイシンであり、３．６重量％未満が遊離リシンである。

【0073】

一実施形態は、前記水溶性タンパク質が、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）については５０未満、例えば１０若しくは１０未満、及び／又はサルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）については１未満、例えば０、及び／又はセレウス菌（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）については５００未満、例えば１５０未満若しくは１０未満、及び／又はウェルシュ菌（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）については５００未満、例えば５０未満、好ましくは１０未満のｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数を含み、好ましくは、ｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数が、大腸菌については１０未満、及び／又はサルモネラ菌については０．１未満、好ましくはサルモネラ菌は存在せず、及び／又はセレウス菌については１０未満、及び／又はウェルシュ菌については１０未満であり、より好ましくは、前記水溶性タンパク質が、大腸菌については１０未満、セレウス菌については１０未満、及びウェルシュ菌については１０未満のｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数を含み、２５グラムの酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質中でサルモネラ菌数が測定された場合サルモネラ菌については微生物数は０ｃｆｕ／ｇタンパク質である（サルモネラ菌は２５グラムの酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の試料中では検出不可能である）、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質である。

【0074】

一実施形態は、前記水溶性タンパク質が、大腸菌については５０未満、例えば１０若しくは１０未満、及び／又はサルモネラ菌については１未満、例えば０、及び／又はセレウス菌については５００未満、例えば１５０未満若しくは１０未満、及び／又はウェルシュ菌については５００未満、例えば５０未満、好ましくは１０未満のｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数を含み、好ましくは、ｃｆｕ／ｇタンパク質での前記微生物数が、大腸菌については１０未満、及び／又はサルモネラ菌については０．１未満、好ましくはサルモネラ菌は存在せず、及び／又はセレウス菌については１０未満、及び／又はウェルシュ菌については１０未満であり、より好ましくは、前記水溶性タンパク質が、大腸菌については１０未満、セレウス菌については１０未満、及びウェルシュ菌については１０未満のｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数を含み、２５グラムの酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質中でサルモネラ菌数が測定された場合サルモネラ菌については微生物数は０ｃｆｕ／ｇタンパク質である（サルモネラ菌は２５グラムの酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の試料中では検出不可能である）、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物である。

【0075】

本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質及び本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物は両方とも、人間による使用のための食品又は食物成分としての加水分解されたタンパク質の用途を考慮した場合、欧州委員会により許可される指定の微生物の上限未満のｃｆｕ／ｇタンパク質で表現される微生物数を有する。図２もまた参照されたい。

【0076】

一実施形態は、水溶性タンパク質が本発明による方法によって提供される、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質である。一実施形態は、水溶性タンパク質が本発明による方法によって提供される、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物である。一実施形態は、昆虫タンパク質源が、アメリカミズアブの幼虫のタンパク質である、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物である。特に、タンパク質源は、本発明の方法のステップａ）において、本発明のアメリカミズアブの幼虫の処理方法のステップ（ｉ）～（ｖｉ）を適用することにより提供される。

【0077】

一実施形態は、食味増強剤及び保湿剤のうちのいずれか１つ又は複数、又はそれらの任意の組合せをさらに含む、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質である。一実施形態は、食味増強剤及び保湿剤のうちのいずれか１つ又は複数、又はそれらの任意の組合せをさらに含む、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物である。

【0078】

一実施形態は、食味増強剤が、ピロリン酸金属塩、２－メチルフラン、２－メチルピロール、ジメチルジスルフィドであり、並びに／又は保湿剤が、プロピレングリコール、グリセリン、コーンシロップ及び無機塩から選択される、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質である。一実施形態は、食味増強剤が、ピロリン酸金属塩、２－メチルフラン、２－メチルピロール、ジメチルジスルフィドであり、並びに／又は保湿剤が、プロピレングリコール、グリセリン、コーンシロップ及び無機塩から選択される、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物である。

【0079】

本発明の一態様は、ペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品若しくは動物飼料成分の製造、又は人間用食品若しくは人間用食物成分の製造、好ましくはネコ用飼料、イヌ用飼料又はエビ用飼料、例えばバナメイエビ用飼料の製造における、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の使用に関する。本発明のさらなる態様は、ペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品若しくは動物飼料成分の製造、又は人間用食品若しくは人間用食物成分の製造、好ましくはネコ用飼料、イヌ用飼料又はエビ用飼料、例えばバナメイエビ用飼料の製造における、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物に関する。一実施形態は、ペットがイヌ若しくはネコ、好ましくはイヌである、又は動物がイヌ、ネコ若しくはエビ、好ましくはバナメイエビ（リトペニウス・バナメイ（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ））である、上述の使用である。

【0080】

一実施形態は、製造されるペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分が、ペット、ネコ、イヌ、魚、エビ、例えばバナメイエビ、マグロ、タラ、養殖海洋生物、養殖淡水生物、ターボット、サケ、コイ、離乳期の動物、離乳後の動物用、好ましくは、ネコ、イヌ、エビ、例えばバナメイエビ用の食物若しくは食物成分又は飼料若しくは飼料成分のいずれかであるか、又は飼料若しくは食物香味剤又は飼料若しくは食物香味増強剤であり、或いは、製造される人間用食品又は製造される人間用食物成分が、ブロス、ソース、香味剤、食物香味剤、食物香味増強剤、スープ、肉代用製品若しくは成分、又は肉代替製品若しくは成分、例えば煮た牛肉、牛ブロス、豚ブロス、牛肉、調理肉の代用品のいずれかである、本発明による使用である。一実施形態は、製造されるペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分が、ペット、ネコ、イヌ、魚、エビ、マグロ、タラ、養殖海洋生物、養殖淡水生物、ターボット、サケ、コイ、離乳期の動物、離乳後の動物用の食物若しくは食物成分又は飼料若しくは飼料成分、本発明の方法において適用される昆虫種とは異なり、本発明による酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が得られた、及び由来した、また本発明による酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物が得られた、及び由来した昆虫種とは異なる昆虫種用の飼料、例えば受粉媒介者等、例えばこれらに限定されないがハチ又は生物防除に使用される益虫、例えばこれらに限定されないがテントウムシ、並びに例えばマルハナバチ、カ、シロアリ及びミバエ用の飼料のいずれかであるか；又は飼料若しくは食物香味剤又は飼料若しくは食物香味増強剤であり、或いは、製造される人間用食品又は製造される人間用食物成分が、ブロス、ソース、香味剤、食物香味剤、食物香味増強剤、スープ、肉代用製品若しくは成分、又は肉代替製品若しくは成分、例えば煮た牛肉、牛ブロス、豚ブロス、牛肉、調理肉の代用品のいずれかである、本発明による使用である。典型的には、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は本発明による酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物は、ＢＳＦの幼虫から得られる、及び由来する。本発明の方法において適用される昆虫種とは異なり、本発明による酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が得られた、及び由来した、又は本発明による酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物が得られた、及び由来した昆虫種とは異なる昆虫種用の飼料の場合、そのような昆虫種はこのように典型的には甲虫の幼虫、イエバエ、アメリカミズアブ、イナゴ、バッタ、コオロギ、ゴキブリの幼虫、ヤシオオオサゾウムシの幼虫、カイコ、タガメ、セミ、タケムシ、アリ、キリギリス、チョウ、ヨコバイ、ウンカ及びハチの幼虫とは異なり、好ましくは、イエバエ、アメリカミズアブ、イナゴ、バッタ、コオロギ、ゴキブリの幼虫、ヤシオオオサゾウムシの幼虫、カイコ、タガメ、セミ、タケムシ、アリ、キリギリス、チョウ、ヨコバイ、ウンカ及びハチの幼虫とは異なり、好ましくは、ＢＳＦ、特にＢＳＦの幼虫とは異なる。

【0081】

本発明の一態様は、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなる、動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分、好ましくは、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなる、ネコ用飼料製品若しくは成分、イヌ用飼料製品若しくは成分、又はエビ用飼料製品若しくは成分、例えばバナメイエビ用飼料製品若しくは成分、又は人間用食品若しくは人間用食物成分に関する。

【0082】

一実施形態は、ペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分が、ペット、ネコ、イヌ、魚、エビ、マグロ、タラ、養殖海洋生物、養殖淡水生物、ターボット、サケ、コイ、離乳期の動物、離乳後の動物、好ましくは、ネコ、イヌ又はエビ、例えばバナメイエビ用の食物若しくは飼料又は食物成分若しくは飼料成分のいずれかであるか、或いは、食物香味剤若しくは食物香味増強剤又は飼料香味剤若しくは飼料香味増強剤、又は本発明による人間用食品若しくは人間用食物成分であり、人間用食品又は人間用食物成分が、ブロス、ソース、バーガー、ハンバーガー、麺、香味剤、食物香味剤又は食物香味増強剤、スープ、肉代用製品若しくは成分又は肉代替製品若しくは成分、例えば煮た牛肉、牛ブロス、豚ブロス、牛肉、調理肉、牛肉ベースのハンバーガー、牛肉ベースのバーガー、牛肉ベースのスープ、麺等のいずれかである、本発明によるペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分である。

【0083】

本発明の第６の態様は、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の、酸化防止剤としての使用に関する。特に、酸化防止活性を有する食物又は飼料成分としての使用に関する。したがって、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質及び酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物は、酸化防止特性を有する。

【0084】

本発明の第７の態様は、本発明の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の、酸化防止剤及び／又は健康増進能を有する成分としての使用に関する。

【0085】

本発明の態様は、細胞の酸化的損傷の防止及び／又は抑制のための方法における使用のための、本発明の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分に関する。

【0086】

本発明のさらなる態様は、本発明による酸化防止活性を有する、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含む動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分に関する。酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含む動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の酸化防止活性は、本発明の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の酸化防止特性によるものである。

【0087】

本発明者らは、驚くべきことに、ＢＳＦの幼虫から得られるアメリカミズアブの水性タンパク質加水分解物のｉｎ ｖｉｔｒｏ酸化防止活性を実証及び分析したが、アメリカミズアブ－水性タンパク質加水分解物（ＢＳＦ－ＡＰＨ）の酸化防止活性は、ラジカル捕捉モデル（ＤＰＰＨ及びＡＢＴＳアッセイ）、ミエロペルオキシダーゼ応答が関与する酵素モデル（古典的及びＳＩＥＦＥＤアッセイ）、並びに好中球応答が関与する細胞モデルを使用して分析された（以降の実施例の項を参照されたい）。市販のフィッシュミール及びチキンミールが比較例において業界基準として使用された。比較例では、試験結果において、フィッシュミール及びチキンミールが、好中球及びミエロペルオキシダーゼ応答の結果として生じる酸化的損傷の抑制に関する利点をほとんど又は全く提供しないことが明らかとなった。さらに、フィッシュミール及びチキンミールはまた、この研究で使用されたモデルのいくつかにおいて酸化促進挙動を示す。結果は、驚くべきことに、アメリカミズアブの水性タンパク質加水分解物が、宿主の好中球及びミエロペルオキシダーゼ応答から生じる細胞（酸化的）損傷に対する保護において効果的であることを示している。したがって、本発明のアメリカミズアブの水性タンパク質加水分解物（ＡＰＨ）は、ペットフード及び水産養殖飼料配合物における成分としての、例えば食物又は飼料成分としての含有に関して、チキンミール及びフィッシュミールを超える利点を示す。

【0088】

本発明者らは、ＢＳＦの水性タンパク質加水分解物が、１０００Ｄａ未満のタンパク質の有意なシェアを有することを実証した。これは、短鎖ペプチド及び遊離アミノ酸の混合物を含む。いくつかの短鎖ペプチド及び遊離アミノ酸は、酸化防止活性を有することが知られている。これらの分子は、ＲＯＳ及びフリーラジカルを活発に捕捉し得る。Ｆｉｒｍａｎｓｙａｈ及びＡｂｄｕｈ［３］は、ＢＳＦタンパク質加水分解物のＤＰＰＨ（２，２－ジフェニル－１－ピクリルヒドラジル）捕捉活性を評価した。Ｚｈｕら［４］は、ＢＳＦタンパク質加水分解物のＤＰＰＨ、ＡＢＴＳ（２，２’－アジノ－ビス（３－エチルベンゾチアゾリン－６－スルホン酸）、スーパーオキシド及びヒドロキシルラジカル捕捉活性を評価した。本発明者らの知る限り、加水分解されたＢＳＦの幼虫のタンパク質（ＢＳＦ－ＡＰＨ）による驚くほど高い酸化防止活性並びに酸化ストレス及び／又は損傷に対する驚くほど高い保護を示す、基礎的酵素及び細胞モデルを使用してＢＳＦタンパク質加水分解物の酸化防止活性を実証した研究は、現在まで実現していない。したがって、このたび実証された発明の前には、ＢＳＦタンパク質加水分解物の酸化防止能は、基礎的レベルでよく理解されておらず、まだ開示されておらず、予想されておらず、期待されてもいなかった。本発明によれば、ＢＳＦタンパク質加水分解物のｉｎ ｖｉｔｒｏ酸化防止活性に関する詳細な調査により、これらのタンパク質誘導体の新たな用途が切り開かれ、動物の健康が改善される。

【0089】

本発明者らは、（１）ＤＰＰＨ及びＡＢＴＳが関与するラジカル捕捉モデル；（２）ミエロペルオキシダーゼ応答が関与する酵素モデル；並びに（２）好中球応答が関与する細胞モデルを使用して、ＢＳＦタンパク質加水分解物の驚くほど高い酸化防止能及び活性を見出した。本発明によるＢＳＦタンパク質加水分解物の酸化防止活性との比較のために、チキンミール及びフィッシュミールが比較例において業界基準として使用された。

【0090】

本発明の一態様は、活性酸素種により誘発される炎症誘発性応答の防止及び／又は抑制のための方法における使用のための、本発明の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分に関する。

【0091】

本発明の一態様は、酸化防止能を有する本発明の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の使用に関する。

【0092】

「酸化防止特性」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、抗炎症応答等の酸化防止活性を有する酸化防止剤からなるか又はそれを含む、本発明の加水分解されたタンパク質等の化合物又は組成物を指す。典型的には、そのような抗炎症応答は、例えばペット等の哺乳動物若しくは人間対象の細胞、又は魚の細胞における、例えば活性酸素種により誘発される炎症応答に対する応答である。例えば、「Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ： Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」（Ｊａｎ Ｐｏｋｏｒｎｙ、Ｎｅｄｙａｌｋａ Ｙａｎｉｓｈｌｉｅｖａ及びＭｉｃｈａｅｌ Ｇｏｒｄｏｎ（編集者）、２００１、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ： ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｌｔｄ． ＩＳＢＮ １ ８５５７３ ４６３ Ｘ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、ＩＳＢＮ ０－８４９３－１２２１－１）の第１章、第５章及び第６章を参照されたい。酸化防止剤は、宿主免疫応答から生じる酸化的損傷に対する活性等の酸化防止活性を有する化合物、又は酸化防止活性を有する組成物、又は酸化防止活性を有する化合物を含む組成物である。酸化防止剤は、例えば酸化を阻害する。例えば、対象における酸化、例えば活性酸素種は、細胞（酸化的）損傷を誘発する。

【0093】

「健康増進食物」、「健康増進活性」、「健康増進特性」、及び「健康増進能」等における「健康増進」という用語は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、動物、例えばペット動物等の哺乳動物又は人間対象の健康に対する、化合物又は組成物、例えば本発明の加水分解されたタンパク質の、そのような化合物又は組成物が動物により消費された際の効果を指す。健康増進能を有する化合物又は組成物の消費は、動物、例えばペット動物等の哺乳動物又は人間対象の健康状態に寄与するか、又はそれを補助するか、又はそれを増進するか、又はそれを増加させるか、又はそれを維持する。例えば、「Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ： Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」（Ｊａｎ Ｐｏｋｏｒｎｙ、Ｎｅｄｙａｌｋａ Ｙａｎｉｓｈｌｉｅｖａ及びＭｉｃｈａｅｌ Ｇｏｒｄｏｎ（編集者）、２００１、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ： ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｌｔｄ． ＩＳＢＮ １ ８５５７３ ４６３ Ｘ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、ＩＳＢＮ ０－８４９３－１２２１－１）の第１章、第５章及び第６章を参照されたい。

【0094】

上記において、いくつかの例示的実施形態を参照しながら本発明を説明した。修正が可能であり、添付の特許請求の範囲において定義される保護の範囲に含まれる。本発明を以下の実施例によってさらに例示するが、実施例は決して本発明を制限するものとして解釈されるべきではない。

【0095】

［実施例］
実施例１
欧州特許出願ＥＰ２９５３４８７の実施例の項、実施例１、１２頁、８～１３行目及び１３頁、３～５行目に記載の方法に従ってアメリカミズアブの幼虫からタンパク質画分を単離することにより、水溶性タンパク質が実質的に完全に水等の水溶液に溶解している水性水溶性タンパク質組成物又は乾燥水溶性タンパク質組成物を得た。簡潔に説明すると、アメリカミズアブの幼虫を用意し、以降に実質的に概説される昆虫又は芋虫を栄養物ストリームに変換する方法に供した（図１もまた参照されたい）：
昆虫又は芋虫を栄養物ストリームに変換する方法であって、
（ａ１）昆虫又は芋虫、ここではアメリカミズアブの幼虫を用意するステップと、
（ａ２）昆虫又は芋虫のサイズを低減するステップと、
（ａ３）昆虫又は芋虫からパルプを得るステップと、
次いで
（ｂ）パルプを７０～１００℃の温度に加熱するステップと、次いで
（ｃ）加熱されたパルプを物理的分離ステップに供して、それにより脂肪画分、水性タンパク質画分（「幼虫水」と呼ばれる）、及び固体含有画分を得るステップと
を含む方法。

【0096】

水性タンパク質画分は、昆虫を栄養物ストリームに変換する方法にアメリカミズアブの幼虫が供された場合の水性水溶性タンパク質画分である。水性水溶性タンパク質画分は、いくつかの実施形態において、噴霧乾燥を使用してステップ（ｃ）の後に乾燥され、乾燥したアメリカミズアブの幼虫のタンパク質が得られる。方法は、方法のステップのいずれにおいても、パルプの酵素処理を含まない。任意選択で、方法は、幼虫パルプの酵素処理を含むが、本実施例では、アメリカミズアブの幼虫を栄養物ストリームに変換する方法において酵素消化ステップは適用されない。方法のステップ（ｂ）において、みじん切りされたアメリカミズアブの幼虫は、パルプ（又は「ピューレ」）を９０℃で８０秒間加熱することにより低温殺菌され、幼虫の低温殺菌「肉」が得られる。低温殺菌肉は、その後ステップ（ｃ）において機械的に分離されて、液体タンパク質画分（幼虫水）が得られる。水性タンパク質画分は、酵素加水分解された昆虫若しくは芋虫タンパク質の提供及び酵素加水分解された昆虫若しくは芋虫タンパク質のメイラード反応生成物の提供のための本発明の方法のステップ（ａ）において、少なくとも１種のタンパク質を含む水性昆虫若しくは芋虫タンパク質組成物として提供される前に、さらなる処理ステップ（例えば乾燥若しくは濃縮）なしで「そのまま」直接使用されるか、或いは、水性タンパク質画分（幼虫水）が最初に例えば３倍～１２倍、例えば５～１０倍濃縮されるか、又は例えば噴霧乾燥を使用して最初に乾燥されてから水等の水溶液への溶解に供され、次いで本発明の方法のステップ（ａ）において少なくとも１種のタンパク質を含む水性昆虫若しくは芋虫タンパク質組成物として提供される。

【0097】

上で概説された昆虫又は芋虫を栄養物ストリームに変換する方法のステップ（ｃ）で得られた粗タンパク質含量は、幼虫水の総重量を基準として３．８重量％であった。粗脂肪含量は、幼虫水の総重量を基準として０．３重量％であった。得られた幼虫水に関して、３０℃での好気性中温菌数（ＩＳＯ４８３３）として評価される総プレート数は２６０００ｃｆｕ／ｇであり、３０℃でのセレウス菌数（ＩＳＯ７９３２）は４０ｃｆｕ／ｇ未満であり、３７℃でのウェルシュ菌数（ＩＳＯ７９３７）は１０ｃｆｕ／ｇ未満であり、４４℃での大腸菌数は１０ｃｆｕ／ｇ未満であり、サルモネラ菌はＰＣＲ迅速方法（ＩＳＯ６５７９）を使用して２５ｇの生成物中で検出されなかった。したがって、幼虫水において、微生物数は、セレウス菌については４０ｃｆｕ／ｇタンパク質未満であり、ウェルシュ菌については１０ｃｆｕ／ｇタンパク質未満であり、大腸菌については１０ｃｆｕ／ｇタンパク質未満であり、サルモネラ菌数は２５ｇの幼虫水を評価した場合０ｃｆｕ／ｇタンパク質であった。これにより、微生物数は、食品又は食物成分における幼虫水の用途のために達成されるべき境界値内であった。

【0098】

水性水溶性タンパク質画分（幼虫水）は、濃縮されていてもいなくても、又は最初に乾燥され、次いで再び溶解されたものであっても、アメリカミズアブの幼虫の水溶性タンパク質画分中の少なくとも１種のタンパク質の酵素加水分解のための基質として適用される。液体水性水溶性タンパク質画分は、水性タンパク質画分（幼虫水）の総重量を基準として約９１重量％の水分含量、約４重量％のタンパク質を含有するが、液体水性タンパク質画分は低い脂肪含量（水性タンパク質画分の総重量を基準として１重量％未満、すなわち現在の調製においては０．３％）を有していた。幼虫水は、水溶性タンパク質の酵素加水分解の前にいかなる希釈ステップも必要としない溶解した水溶性タンパク質の原液である。水性水溶性タンパク質画分（幼虫水）は、非水溶性キチンを含まない。

【0099】

酵素加水分解
温度制御（３０℃～１００℃）、ｐＨ制御（ｐＨは４～９である）、及び連続撹拌（最大１２５０ｒｐｍ）を備えるバイオリアクタ内で、水性水溶性タンパク質画分（幼虫水）を酵素加水分解に供した。いくつかの例では単一のアミノペプチダーゼを使用して、またさらなる例ではエンドペプチダーゼ及びエクソペプチダーゼ活性を有するアミノペプチダーゼの組合せを使用して、タンパク質を酵素加水分解した。酵素濃度は、１種又は複数種のアミノペプチダーゼについて、（１種又は複数種の）酵素を含む水性水溶性タンパク質画分の総重量を基準として０．１重量％～２重量％であった。例えば、フレーバーザイム（Ｆｌａｖｏｕｒｚｙｍｅ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ、デンマーク）は、（１種又は複数種の）酵素を含む水性タンパク質画分の総重量を基準として１重量％で使用された。

【0100】

反応条件
酵素加水分解中、反応のｐＨ（典型的には４～８）、反応温度（典型的には３５℃～６０℃）、及び酵素加水分解時間（典型的には２時間～１２時間）は、選択された（１種又は複数種の）酵素の種類に依存した。フレーバーザイムでは、ｐＨ７（これはまた幼虫水のｐＨでもあった）、５０℃の温度で６時間の間、水性水溶性タンパク質画分を加水分解した。

【0101】

酵素不活性化を誘発するための加熱
酵素加水分解反応は、７５℃～１１０℃で１分～１０分間の（１種又は複数種の）酵素の熱不活性化により停止した。一般に、酵素加水分解反応は、（１種又は複数種の）酵素を含む水性水溶性タンパク質画分の反応混合物を１００℃で２分間加熱することにより停止し、酵素加水分解されたアメリカミズアブの幼虫の水溶性タンパク質を得た。フレーバーザイム酵素を適用した場合、酵素加水分解されたタンパク質は、加水分解された昆虫の抽出物１（「ＨＩＥ１」又は「ＨＩＥ １」）と呼ばれる。

【0102】

任意選択のステップ
メイラード反応を誘発するための酵素加水分解されたタンパク質の調理
炭水化物が添加混合された酵素加水分解されたタンパク質の総重量を基準として０．０５重量％～１重量％のグルコース又はスクロースを添加した後、得られた酵素加水分解された昆虫タンパク質を１００℃～１７０℃で５分～６０分間慎重に加熱することにより、メイラード反応を行う。メイラード反応は、例えば、スクロースと混合されたＨＩＥ１の総重量を基準として１重量％のスクロースと混合されたＨＩＥ１を、１５０℃で１５分間加熱することにより行った。このメイラード反応により、酵素加水分解されたアメリカミズアブの幼虫のタンパク質のメイラード反応生成物が得られ、これは加水分解された昆虫の抽出物２（「ＨＩＥ２」又は「ＨＩＥ ２」）と呼ばれる。

【0103】

最終生成物
酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を提供するため、若しくは酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を提供するための本発明の方法によって提供された溶液を使用することにより、組成物ＨＩＥ １及びＨＩＥ ２をその後香味、食味等を試験する為の実験に供するか、又は、乾燥物質含量が濃縮されたＨＩＥ １若しくはＨＩＥ ２の総重量の例えば少なくとも３０重量％、例えば少なくとも５０重量％等であるように水溶液を蒸発させることにより、ＨＩＥ １及び／若しくはＨＩＥ ２を最初に濃縮ステップに供する。代替として、乾燥ＨＩＥ １又は乾燥ＨＩＥ ２の乾燥物質（ＤＭ）含量が、乾燥ＨＩＥ １の総重量を基準として、又は乾燥ＨＩＥ ２の総重量を基準として少なくとも９２重量％のＤＭであるように、ＨＩＥ １又はＨＩＥ ２を用いて実行される蒸発ステップ、並びに例えば流動床乾燥機を使用した、及び／又は噴霧乾燥機を使用した乾燥ステップによって、ＨＩＥ １又はＨＩＥ ２を乾燥加水分解タンパク質として、例えば粉末として適用する。

【0104】

組成物
酵素加水分解されたアメリカミズアブの幼虫の水溶性タンパク質ＨＩＥ １及び酵素加水分解されたアメリカミズアブの幼虫の水溶性タンパク質のメイラード反応生成物ＨＩＥ ２の化学組成を、表１に概説する。さらに、アメリカミズアブの幼虫の水性水溶性タンパク質画分（幼虫水）の化学組成を表１に示す。アメリカミズアブの幼虫の水性水溶性タンパク質画分（幼虫水）の遊離アミノ酸組成を表２に概説する。表３では、一部の病原性微生物の数が言及されている。

【0105】

【表1】

【0106】

【表2】

【0107】

ＨＩＥ １及びＨＩＥ ２中に存在するタンパク質の総重量を基準として５０重量パーセント超の加水分解されたタンパク質（すなわちそれぞれ１００％及び８７．５％）が、超短鎖ペプチドとして検出された。「超短鎖ペプチド」とは、本明細書において、約６アミノ酸残基～約２０アミノ酸残基のアミノ酸残基鎖長を有するペプチドとして定義される。

【0108】

【表3】

【0109】

「好気性中温菌数３０℃」（ＩＳＯ４８３３と同等）とも呼ばれる総プレート数はＮｕｔｒｉｌａｂ（Ｒｉｊｓｗｉｊｋ、オランダ）により決定し；セレウス菌数は３０℃で評価し（ＩＳＯ７９３２と同等）；ウェルシュ菌数は３７℃で決定し（ＩＳＯ７９３７と同等）；大腸菌プレート数は４４℃で評価し；サルモネラ菌数はＰＣＲ迅速方法を使用して評価した（ＩＳＯ６５７９と同等）。したがって、２つの生成物ＨＩＥ １及びＨＩＥ ２において、微生物数は、セレウス菌については１０ｃｆｕ／ｇタンパク質未満であり、ウェルシュ菌については１０ｃｆｕ／ｇタンパク質未満であり、大腸菌については１０ｃｆｕ／ｇタンパク質未満であり、サルモネラ菌数は２５ｇのＨＩＥ １又はＨＩＥ ２を評価した場合０ｃｆｕ／ｇタンパク質であった。これにより、ＨＩＥ １及びＨＩＥ ２の両方の微生物数は、食品又は食物成分における幼虫水の適用のために達成されるべき境界値内であった。すなわち、欧州委員会の「ＯＥＣＤ ｉｓｓｕｅ ｐａｐｅｒ ｏｎ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔｓ ｌｉｍｉｔｓ ｆｏｒ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｅｓｔ ｃｏｎｔｒｏｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ」によれば、示された微生物に対して検出されたプレート数は、欧州委員会のガイドラインに従う許容限界内であった。図２もまた参照されたい。

【0110】

本発明の方法による上記プロセスから得られた生成物、すなわち酵素加水分解されたアメリカミズアブの幼虫の水溶性タンパク質ＨＩＥ １及び酵素加水分解されたアメリカミズアブの幼虫の水溶性タンパク質のメイラード反応生成物ＨＩＥ ２を、官能パラメータ、すなわち香味プロファイル、香味スコア、芳香スコア及び苦味について調査し、アメリカミズアブの幼虫の水性水溶性タンパク質画分と比較した。香味プロファイルは説明的であり；人間の応答者（応答者１～３）に、形成された生成物に最も近い比較を示すように依頼した。他のパラメータについては、３人の人間の応答者により、生成物を１（非常に嫌い）～５（非常に好き）のスケールに基づいてスコア化した。結果を表４に示す。本発明者らが驚いたことに、ＨＩＥ １もＨＩＥ ２も苦い香味を有していた。さらに驚いたことに、アメリカミズアブの幼虫の水性水溶性タンパク質画分（幼虫水）の最初に存在していた昆虫のような風味は、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を提供するための方法に供した後に、肉のような風味（牛肉の香味及び味に類似）へと変化した。ＨＩＥ １をメイラード反応に供した結果として形成されたＨＩＥ ２は、ＨＩＥ １及び幼虫水と比較して、より顕著に調理された肉の香味を有していた。驚くべきことに、ＨＩＥ １及びＨＩＥ ２の肉のような味の強さは、牛肉自体の肉の味の強さよりも数倍高かった。ＨＩＥ １及びＨＩＥ ２のそのような肉のような香味は、明らかにＨＩＥ １及びＨＩＥ ２の遊離アミノ酸組成に関連している。

【0111】

【表4】

【0112】

ＨＩＥ １及びＨＩＥ ２の官能プロファイルを考慮して、これらの酵素タンパク質分解されたアメリカミズアブの幼虫の水溶性タンパク質は、以下のような用途に好適である。

【0113】

１．食物の受容において味が中心的役割を担う、ネコ及びイヌの両方、より具体的にはネコのペットフード香味増強剤。ＨＩＥ １及びＨＩＥ ２の遊離アミノ酸レベル及び全組成の両方、さらには特定の強い肉のようなプロファイルは、飼料組成物の調製における加水分解物の高い好適性に寄与する。

【0114】

２．養殖海洋及び淡水生物等の水産養殖飼料パラタント。より具体的には、ＨＩＥ １及びＨＩＥ ２は、エビ用飼料の飼料添加剤として好適であり、飼料の受容性を増加させるために特定の遊離アミノ酸の組合せがすでにエビ用の餌に添加されている。

【0115】

３．人間用の食物調製物の構成物質。人間は、一方では肉を食べるのが好きであり、また一方では食事中の動物肉のレベルを低減するのに懸命となる。そのようなＨＩＥ １又はＨＩＥ ２配合物は、肉のような香味を付与することにより、人間用食物の魅力を増強する。生成物中の微生物数（表３を参照されたい）もまた、生成物が人間による消費のための安全な微生物数以内であることを示している。

【0116】

４．飼育動物用の飼料の添加剤又は構成物質。離乳期及び離乳後の動物（特にペット及び離乳期の豚、孵化後の家禽及び魚）は、複雑な食物の消化における問題のために、胃の障害に悩まされる。ＨＩＥ １及びＨＩＥ ２は、１０００Ｄａ未満の分子質量を有する多量のタンパク質を有する（表２を参照されたい）。これらのタンパク質は、容易に、及び極めて消化されやすい。これはまた、高いペプシン消化性により示される（表２を参照されたい）。そのような比較的高い消化性（１００％）を有するそのような生成物は、若い動物用の栄養補助食品として有益に使用される。確かに、実用的なコーンよび大豆ミールベースの食事におけるある特定の量（例えば２～８％）の動物タンパク質加水分解物（例えば豚の腸、豚の粘膜、サケの内臓、若しくは家禽組織の加水分解物）又は大豆タンパク質加水分解物の含有は、離乳期の豚、若い子牛、孵化後の家禽、及び魚における望ましい成長能力の速度及び飼料効率を確実にし得る（Ｈｏｕら、２０１７）。これにより、そのような哺乳動物／魚／家禽ベースのタンパク質加水分解物は、家畜及びコンパニオンアニマルの栄養、並びにその健康（特に消化管の健康）及び福利の最適化に有望である。

【0117】

［実施例］
官能試験（目隠しされた人間の消費者）
実施例１．目隠しされた人間における試験（麺のレシピにおけるＨＩＥ １の適用）
生成物ＨＩＥ １及びＨＩＥ ２（上記を参照されたい）の最初の味試験から、加水分解された昆虫の抽出物１及び加水分解された昆虫の抽出物２が両方とも牛肉のような香味を有することが明らかであった。したがって、実施例１の目的は、官能受容試験において牛肉麺の牛肉又は牛肉香味成分を加水分解された昆虫の抽出物１により置き換えることの効果を研究することであった。

【0118】

【表5】

【0119】

材料及び方法
ａｌｌｒｅｃｉｐｅｓ．ｃｏｍから４．５／５評価のレシピを選択した（Ｌｏｏｐ、ｎ．ｄ．）。原材料は全て地元のスーパーから調達した。原材料の詳細は、表Ａで言及されている。試験レシピでは、ビーフシチュー用肉及び牛肉の顆粒を加水分解された昆虫の抽出物１、ＨＩＥ １で置き換えた。

【0120】

レシピは両方とも、大型のソースパンで製造した。対照レシピ肉の場合、タマネギ及びセロリを中火～強火で５分間（又は肉の全ての面が茶色になるまで）加熱した。他の原材料は、低温加熱でかき混ぜながら煮て、３０分間煮込んだ。試験レシピに関しては、タマネギ及びセロリを、茶色になるまで同じ加熱レベルで５分間加熱した。その後、パセリ、コショウ、ニンジン、水、加水分解された昆虫の抽出物１及び卵麺を加えた。生成物を低温加熱で調理し、３０分間煮込んだ。

【0121】

官能応答者のバイアス挙動を回避するために、対照レシピから牛肉キューブを取り除いた。官能パネルは６名からなっていた（全て２５～４０歳）。１００ｇ分量の各スープ麺を、各応答者に目隠しで与えた。２回の試食の間の味覚パレットを洗浄するために、各応答者にコップの水を与えた。９ポイントの快不快尺度（９－非常に好き、５－好きでも嫌いでもない、１－非常に嫌い）を使用して、受容試験を考慮した。

【0122】

結果及び考察
応答者の目隠し官能応答を表Ｂに示す。応答者には、対照レシピの一部及び試験レシピの一部を目隠し状態で与えた。応答者は、対照レシピを食べているのか、又は試験レシピを食べているのか、及びどの順番かを事前に知らされていなかった。

【0123】

【表6】

【0124】

全ての応答者は、試験レシピを好んだ。これはまた、平均スコアからも明らかであった。試験レシピは、対照レシピよりも有意に良好な味を有していた（ｔ－試験、ｐ＜０．０５）。ほとんどの応答者は、試験レシピが対照レシピと比較してより高い牛肉の香味を有していたことを目隠し状態で示した。

【0125】

結論
麺試験の結果は、加水分解された昆虫の抽出物１（ＨＩＥ １）が食物調製物の食物原材料として好適であること、及びＨＩＥ １が試験した食品、例えば麺の牛肉のような香味を増強するか、又はさらにその香味を与えることを示している。

【0126】

実施例２－非肉調製物における加水分解された昆虫の抽出物２（ＨＩＥ ２）の香味増強能
材料及び方法
ａｌｌｒｅｃｉｐｅｓ．ｃｏｍから４．５／５評価のキノア黒豆バーガーのレシピを選択した（ＤｏｗｎＨｏｍｅＣｉｔｙＳｉｓｔｅｒｓ、ｎ．ｄ．；２０１９年９月にアクセス）。原材料は全て地元のスーパーから購入した。表５で言及されている原材料を使用して、ベースレシピ組成物を作製した。キノアを水中で煮、次いで中火加熱で水の全てが吸収されキノアが軟らかくなるまで煮込んだ。黒豆を潰してペーストにした。この後に、全ての原材料をボウル内で混合した。混合物を２つの等しい部分に分割した。ベースレシピと呼ばれる組成物の対照部分を１２．５ｇの水と混合し、一方ベースレシピ組成物の試験部分を１２．５ｇの加水分解された昆虫の抽出物２（ＨＩＥ ２）と混合したが、これは事前に５倍濃縮されていた（タンパク質含量は、ＨＩＥ ２の総重量を基準として約２０重量％であった）。両方の部分を４℃で１時間マリネードに漬けた。このステップの後、直径（約）２．５ｃｍの小さいバーガーを、対照レシピ及び試験レシピの両方から作製した。これらのバーガーを、濃いキツネ色のクラストが得られるまでオリーブ油で炒めた（弱火を使用）。

【0127】

【表7】

【0128】

官能パネル（「応答者」）は、７名の人間からなっていた（全て２５～４５歳）。各応答者に、ＨＩＥ ２を含む試験レシピ及び対照レシピからのバーガーを目隠しで与えた。したがって、応答者は、どのバーガーが対照レシピでどのバーガーが試験レシピかを知らなかった。２回の試食の間の味覚パレットを洗浄するために、各応答者にコップの水を与えた。５ポイントの快不快尺度（５－非常に好き、３－好きでも嫌いでもない、１－非常に嫌い）を使用して、受容試験を考慮した。

【0129】

結果及び考察
応答者の官能応答を表６に示す。

【0130】

【表8】

【0131】

表６のスコアカードから明らかなように、全ての応答者が対照レシピより試験レシピ（加水分解された昆虫の抽出物２を含む）を好んだ。試験レシピは、対照レシピよりも味が有意に良好であった（ｔ－試験、ｐ＜０．０５）。全ての応答者が、試験レシピが牛肉のような味を有することを示した。何人かの応答者はまた、試験レシピが強い肉の香味を有するだけでなく、スパイスの香味が対照レシピと比較して良好であることも示した。

【0132】

結論
上記の目隠し試験から、加水分解された昆虫の抽出物２が、ベジタリアン調製物において肉の香味を、すなわち牛肉の香味を効率的及び十分に付与すると結論付けられる。ＨＩＥ ２を含む組成物において、ＨＩＥ ２の存在はまた、試験レシピにおける他の原材料の香味も増強する。これにより、非肉食品における香味剤及び／又は香味増強食物成分としてのＨＩＥ ２タンパク質加水分解物の適用は、肉の消費（牛肉、豚肉及び家禽肉）を低減する可能性を有し、この肉の消費の低減は、持続可能な畜産及び食物生産、並びに食物消費に寄与するであろう。ここで、本発明により、現在限定されている持続可能なタンパク質源（例えば植物タンパク質）の備蓄に幼虫タンパク質加水分解物が加えられるが、これは例えばＨＩＥ １及びＨＩＥ ２加水分解物の食品成分としての適用が、そのような食物調製物における動物肉の香味を、人間による大量生産及び大量消費に好適な有益な程度まで増強するためである。

【0133】

実施例３
２．材料及び方法
２．１．試薬
試薬は全て分析グレードのものであった。ジメチルスルホキシド、メタノール、エタノール、塩化カルシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、過酸化水素及びＴｗｅｅｎ－２０は、Ｍｅｒｃｋ（ＶＷＲ、Ｌｅｕｖｅｎ、ベルギー）から購入した。亜硝酸ナトリウム、ウシ血清アルブミン、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート及びパーコール（Ｐｅｒｃｏｌｌ）（商標）は、Ｓｉｇｍａ（Ｂｏｒｎｅｍ、ベルギー）から購入した。水性抽出物及び水溶液は、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＵＳＡ）を使用して得られたＭｉｌｌｉ－Ｑ水中で作製した。ビシンコニン酸及び硫酸銅（ＩＩ）溶液は、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、ドイツ）から購入した。Ｗｈａｔｍａｎ濾紙グレード４（２７０ｍｍ）は、Ａｍｅｒｓｈａｍ（Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、ＵＫ）から購入した。Ｓｔｅｒｌｉｐ３０ｍｌ使い捨て真空フィルタシステムは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＵＳＡ）から購入した。２，２－ジフェニル－１－ピクリルヒドラジル及び２’－アジノ－ビス（３－エチルベンズチアゾリン－６－スルホン酸）は、Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）から購入した。８－アミノ－５－クロロ－７－フェニルピリド［３，４－ｄ］ピリダジン－１，４（２Ｈ，３Ｈ）ジオン（Ｌ－０１２）は、Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｎｅｕｓｓ、ドイツ）から購入した。

【0134】

２．２．原料
チキンミール（ＣＭ）及びフィッシュミール（ＦＭ）は、２０１９年９月にオンラインウェブショップから購入した。供給業者により公表されている両方の原材料の化学組成を、表７に示す。

【0135】

【表9】

【0136】

ＢＳＦ ＰｕｒｅｅＸ（商標）（ＢＳＦ－Ｐ）とも呼ばれるＢＳＦの幼虫のピューレは、２０１９年１０月にＰｒｏｔｉｘ Ｂ．Ｖ．（Ｄｏｎｇｅｎ、オランダ）により調製された。ピューレは、以下の方法に従って得られた。１４日齢の洗浄した生きたアメリカミズアブの幼虫を収集した後、すぐに肉挽き機に供して幼虫をみじん切りにし（幼虫パルプが得られる）、その後使用するまで４℃で保存した。幼虫は、実験毎に新しくみじん切りにした。みじん切りにされた幼虫を分離ステップに供し、本発明によるＢＳＦの幼虫の水溶性タンパク質を得た。本発明の方法に従い、ＢＳＦの幼虫の水溶性タンパク質を、タンパク質の質量を基準として１ｗｔ％のフレーバーザイムで、連続撹拌下５０℃（±２℃）で６時間処理した。フレーバーザイム（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ、デンマーク）は、エンドペプチダーゼ及びエクソペプチダーゼ活性を有するアミノペプチダーゼの組合せである。その後、本発明の方法に従い、酵素処理されたＢＳＦの幼虫の水溶性タンパク質を加熱して酵素を不活性化した。

【0137】

上述のようにして得られた水性タンパク質加水分解物（ＢＳＦ－ＡＰＨ）は、２０１９年１０月にＰｒｏｔｉｘ Ｂ．Ｖ．（Ｄｏｎｇｅｎ、オランダ）により提供された。Ｐｒｏｔｉｘによれば、ＢＳＦ－ＡＰＨは、本発明の方法に従い調製された水溶性ＢＳＦタンパク質の加水分解物である。ＢＳＦ－ＡＰＨは水に対する高い溶解度（＞９５％）を有することが実証されている。供給業者又はＰｒｏｔｉｘ（本発明者ら）により公表されている３つ全ての原材料の化学組成を、表８に示す。

【0138】

【表10】

【0139】

ＣＭ及びＦＭに対して水溶性抽出物を調製した。各乾燥物質含量を基準としてこれらの生成物（各１００ｇ）を６倍体積のＭｉｌｌｉ－Ｑ水で溶解し、磁気撹拌機で２時間撹拌した。遠心分離（４℃、１０００×ｇで３０分）後、上部の脂肪層を取り出し、Ｗｈａｔｍａｎフィルタ（グレード４）を使用して上清を濾過した。遠心分離及び濾過ステップを再度繰り返して、全ての不溶性残渣を除去した。最後に、Ｓｔｅｒｌｉｐフィルタ（５０ｍＬ、０．２２μｍ）を使用して上清を濾過し、２日間の期間にわたりフリーズドライして、それぞれの水溶性抽出物粉末を得た。ＢＳＦ－ＡＰＨは９５％超の水溶解度を有するため、直接使用した。４つ全ての水溶性抽出物及びＢＳＦ－ＡＰＨ粉末を、さらなる使用までデシケータ内に保存した（１８℃）。

【0140】

２．３．タンパク質定量
ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイ［２４］を使用して、４つの水溶性抽出物及びＢＳＦ－ＡＰＨ粉末の総タンパク質含量を分析した。０、０．１２５、０．２５、０．５及び１ｍｇ／ｍｌの濃度のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を標準として使用して、較正曲線を得た。３ｍｇ／ｍｌの水溶性抽出物及びＢＳＦ－ＡＰＨの原液を分析に使用した。４９００μｌのＢＣＡ（４９／５０）及び１００μｌの硫酸銅（ＩＩ）（１／５０）を溶解することにより、試験溶液を作製した。試料原液（１０μｌ）及び試験溶液（２００μｌ）を９６ウェルプレートのウェルに加えた。このプレートを３７℃で３０分間インキュベートし、マルチスキャンアセント（Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ Ａｓｃｅｎｔ）（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ａｓｓｅ、ベルギー）を使用して４５０ｎｍで吸光度を測定した。

【0141】

２．４．ＤＰＰＨアッセイ
Ｂｒａｎｄ－Ｗｉｌｌａｍｓら［２５］のプロトコルに一部修正を加えて、ＤＰＰＨラジカル捕捉活性を分析した。１０．５ｍｇのＤＰＰＨを４０ｍｌのエタノールに溶解することにより、ＤＰＰＨ試験溶液を作製した。試験溶液は新しく作製し、さらなる使用まで暗所で保存した。試験溶液を１０倍のエタノールで希釈することにより、ＤＰＰＨ希釈標準溶液を作製した（５１７ｎｍで０．６～０．８の吸光度が得られる）。ＤＰＰＨ希釈標準溶液（１９２０μｌ）を２０μｌの試料希釈液（Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水中の４つの水溶性抽出物及びＢＳＦ－ＡＰＨ）と混合して、０．０１２５、０．０２５、０．０５、０．１及び０．２ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得た。暗所での３０分及び６０分のインキュベーション後の吸光度の減少が、ＨＰ ８４５３ ＵＶ－ｖｉｓ分光光度計（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｗａｌｄｂｒｏｎｎ、ドイツ）を使用して５１０ｎｍで記録された。対照の場合、試料希釈液の代わりにＭｉｌｌｉ－Ｑ水のみを使用した。

【0142】

２．５．ＡＢＴＳアッセイ
Ａｒｎａｏら［２６］のプロトコルに一部修正を加えて、ＡＢＴＳカチオンラジカル捕捉活性を分析した。Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水に７．０ｍｍｏｌ／ｌのＡＢＴＳ及び２．４５ｍｍｏｌ／ｌの過硫酸カリウムを溶解することにより、ＡＢＴＳ試験溶液を作製した。試験溶液を室温で一晩暗所で保管した。メタノールで希釈することによりＡＢＴＳ希釈標準溶液を作製し、７３４ｎｍで０．７～０．８の吸光度を得た。ＡＢＴＳ希釈標準溶液（１９２０μｌ）を２０μｌの試料希釈液（Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水中の４つの水溶性抽出物及びＢＳＦ－ＡＰＨ）と混合して、０．０１２５、０．０２５、０．０５、０．１及び０．２ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得た。暗所での３０分のインキュベーション後の吸光度の減少が、ＨＰ ８４５３ ＵＶ－ｖｉｓ分光光度計（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｗａｌｄｂｒｏｎｎ、ドイツ）を使用して７３４ｎｍで記録された。対照の場合、試料希釈液の代わりにＭｉｌｌｉ－Ｑ水のみを使用した。

【0143】

２．６．特異的免疫抽出に続く酵素検出（ＳＩＥＦＥＤ）アッセイを使用したミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性
ＳＩＥＦＥＤアッセイは、動物起源ＭＰＯの特異的検出のためのＦｒａｎｃｋら［２７］により開発された実施許諾を得た方法である。ヒトＭＰＯを２０ｍＭのリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）、５ｇ／ｌのＢＳＡ及び０．１％のＴｗｅｅｎ－２０中に希釈することにより、ＭＰＯ溶液を作製した。０．０１２５、０．０２５、０．０５、０．１及び０．２ｍｇ／ｍｌの最終濃度の試料希釈液を、ＭＰＯ溶液と共に２５ｎｇ／ｍｌの最終濃度で１０分間（３７℃）インキュベートした。インキュベーション後、ウマＭＰＯに対するウサギポリクローナル抗体（３μｌ／ｍｌ）で被覆された９６ウェルマイクロタイタープレートのウェルに混合物を入れ、３７℃で２時間暗所でインキュベートした。ウェルを洗浄した後、過酸化水素（１０μＭ）、ＮＯ_２ ^－（１０ｍＭ）及びアンプレックス（Ａｍｐｌｅｘ）（商標）レッド（４０μＭ）を添加することによって、抗体により捕獲された酵素の活性を測定した。フルオロスキャンアセント（Ｆｌｕｏｒｏｓｃｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ）（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ａｓｓｅ、ベルギー）を用いて、アンプレックス（商標）レッドの蛍光性付加物レゾルフィンへの酸化を３７℃で３０分間監視した。対照の場合、試料希釈液の代わりにＭｉｌｌｉ－Ｑ水のみを使用した。

【0144】

２．７．古典的測定を使用したミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性
２．６項で言及したようにＭＰＯ溶液を調製した。０．０１２５、０．０２５、０．０５、０．１及び０．２ｍｇ／ｍｌの最終濃度の試料希釈液を、ＭＰＯ溶液と共に２５ｎｇ／ｍｌの最終濃度で１０分間（３７℃）インキュベートした。インキュベーション後、混合物（１００μｌ）を速やかに９６ウェルマイクロタイタープレートに移した。これに続いて、１０μｌのＮＯ_２ ^－（１０ｍＭ）及び１００μｌのアンプレックス（商標）レッド及び過酸化水素混合物（２．６項で言及した濃度）を添加した。上記混合物の添加直後、フルオロスキャンアセント（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ａｓｓｅ、ベルギー）を用いて、アンプレックス（商標）レッドの蛍光性付加物レゾルフィンへの酸化を３７℃で３０分間監視した。対照の場合、試料希釈液の代わりにＭｉｌｌｉ－Ｑ水のみを使用した。

【0145】

２．８．細胞酸化防止活性
Ｐａｕｌら［１７］に従い、好中球及びホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）溶液の調製を行った。Ｔｓｕｍｂｕら［１６］のプロトコルを使用して、試料の好中球応答調節活性を分析した。好中球懸濁液（１００万細胞／１４３μｌ ＰＢＳ）を、９６ウェルマイクロタイタープレートのウェルに入れ、０．０１２５、０．０２５、０．０５、０．１及び０．２ｍｇ／ｍｌの最終濃度の試料のリン酸緩衝生理食塩水溶液と共に１０分間（暗所で３７℃）インキュベートした。インキュベーション後、２５μｌの塩化カルシウム（１０μＭ）及び２０μｌのＬ－０１２（１００μＭ）をウェルに加えた。好中球を１０μｌ のＰＭＡ（１６μＭ）で活性化した直後に、フルオロスキャンアセント（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ａｓｓｅ、ベルギー）を使用して、好中球の化学発光応答を３７℃で３０分間監視した。対照の場合、試料希釈液の代わりにリン酸緩衝生理食塩水のみを使用した。

【0146】

２．９．統計分析
分析は全て３回行った。タンパク質定量については、直線回帰を使用して、フィッティングされた線の方程式及びＲ二乗値を計算した。酸化防止アッセイについて得られた濃度と阻害との間の関係は、非単調な性質のものであった。これに対応するために、局所推定散布図平滑化（ＬＯＥＳＳ）回帰技術を使用して、関係をモデル化した［２８］。モデルは、Ｒ統計ソフトウェアを使用してフィッティングした［２９］。これらのモデルでは、局所回帰の平滑化感度を定義するスパンパラメータが必要である。目視検査により、０．４のスパンパラメータ値が、全ての濃度及び阻害関係曲線に好適であることが判明した。関心のある予測阻害パーセンテージを有する濃度、例えばＩＣ_５０（５０％阻害が達成される濃度）は、数値探索ルーチンと組み合わせてフィッティングされたモデルを使用して見出された。

【0147】

３．結果
３．１．タンパク質定量
ＢＳＡを使用して得られる較正曲線、線の方程式及びＲ二乗値が確立される。試料の光学密度及びタンパク質の相対濃度（線の方程式を使用して計算される）は、表９で言及されている。ビシンコニン酸アッセイを使用すると、試験された溶液のうちＣＭ抽出溶液（３ｍｇ／ｍｌ）が最も高いタンパク質濃度を示し、一方ＢＳＦ－ＡＰＨ溶液が最も低いタンパク質濃度を示している。

【0148】

【表11】

【0149】

３．２．ＤＰＰＨアッセイ
３０分及び６０分のインキュベーション後の５つ全ての試料のＤＰＰＨラジカル捕捉活性を、それぞれ図３及び図４に示す。プロットは、測定値及びＬＯＥＳＳから得られたフィッティング曲線を示す。ＣＭは、３０分及び６０分のインキュベーション後、全ての試験濃度において酸化促進挙動を示した。一方、ＦＭは、３０分のインキュベーション後は５つの試験濃度のうち４つにおいて、また６０分のインキュベーション後は全ての試験濃度において酸化促進挙動を示した。試料が酸化促進活性を示したか、又はアッセイ中に５０％阻害が達成されなかったため、全ての試料（３０分又は６０分のインキュベーション後）に対してＩＣ_５０を計算することは不可能であった。３０分のインキュベーション後の全ての試料のＥ_ｍａｘ（アッセイ中に達成される最大阻害）もまた表１１に示されており、ＢＳＦ－ＡＰＨ＞ＦＭの順である。

【0150】

【表12】

【0151】

【表13】

【0152】

３．３．ＡＢＴＳアッセイ
３０分のインキュベーション後の試料のＡＢＴＳカチオンラジカル捕捉活性を図５に示す（測定値及びＬＯＥＳＳから得られたフィッティング曲線）。全ての試料が同様の阻害パターンを示し、すなわち％阻害は増加する濃度の関数として増加した。試料のＩＣ_５０は表１０で言及されており、ＦＭ＞ＣＭ＞ＢＳＦ－ＡＰＨの順である。ＩＣ_５０が低いほど、ＡＢＴＳカチオンラジカル捕捉活性が高い。全ての試料のＥ_ｍａｘ（アッセイ中に達成される最大阻害）が表１１に示されており、ＢＳＦ－ＡＰＨ＞ＦＭ＞ＣＭの順である。

【0153】

３．４．特異的免疫抽出に続く酵素検出（ＳＩＥＦＥＤ）アッセイを使用したミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性
ＳＩＥＦＥＤアッセイを使用して得られた試料のＭＰＯ応答調節活性を図６に示す（測定値及びＬＯＥＳＳから得られたフィッティング曲線）。試料のＩＣ_５０は表１０で言及されている。試料のＥ_ｍａｘを表１１に示す。ＦＭ及びＣＭは、全ての試験濃度において酸化促進挙動を示す。

【0154】

３．５．古典的アッセイを使用したミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性
古典的アッセイを使用して得られた試料のＭＰＯ応答調節活性を図７に示す（測定値及びＬＯＥＳＳから得られたフィッティング曲線）。ＣＭ及びＦＭは、全ての試験濃度において酸化促進挙動を示した。試験した全ての試料のＥ_ｍａｘを表１１に示す。ＢＳＦ－ＡＰＨは７５％超のＥ_ｍａｘを示した。試料のＩＣ_５０は表１０で言及されている。

【0155】

３．５．細胞酸化防止活性
試料の好中球応答調節活性（測定値及びＬＯＥＳＳから得られたフィッティング曲線）並びにＥ_ｍａｘを、それぞれ図８及び表１１に示す。全ての試験試料が０％超のＥ_ｍａｘを示した。ＢＳＦ－ＡＰＨ、ＦＭ及びＣＭは、４０％未満のＥ_ｍａｘを示した。ＣＭは、５つの試験濃度のうち３つにおいて酸化促進挙動を示した。試料のＩＣ_５０は表１０で言及されている。

【0156】

４．考察
４．１．タンパク質定量
ビシンコニン酸アッセイを使用して推定されたＢＳＦ－ＡＰＨ及び２つの水溶性抽出物のタンパク質濃度を表９に示す。ＢＳＦ－ＡＰＨでは、３ｍｇ／ｍｌの溶液が０．７０２ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度をもたらしたが、これはＢＳＦ－ＡＰＨのグラム当たり０．２３５ｍｇのタンパク質（又は２３．５％のタンパク質）に換算される。本発明者ら（Ｐｒｏｔｉｘ）によれば、ＢＳＦ－ＡＰＨの平均タンパク質含量は４５．５％である（表８を参照されたい、Ｄｕｍａｓ法を使用して分析）。分析方法に起因してタンパク質含量の差が生じる。ビシンコニン酸アッセイは、Ｃｙｓ、Ｔｒｐ及びＴｙｒに特異的な結合の検出に基づく。一方、Ｄｕｍａｓアッセイは、全有機窒素の推定に基づく。したがって、Ｄｕｍａｓ法を用いて推定されたタンパク質含量は、ビシンコニン酸アッセイを使用して推定されたものより常に高い。しかしながら、２つのタンパク質推定法の比較は、本発明の態様ではない。ＦＭとＣＭとの間のアミノ酸パターンの類似性を考慮すると、２つの水溶性抽出物のタンパク質含量は、ＣＭ＞ＦＭ＞４５．５％の順であると結論付けられる。

【0157】

４．２．ＤＰＰＨラジカル捕捉活性
ＤＰＰＨ及びＡＢＴＳアッセイは、食品及び飼料製品の酸化防止能を分析するために一般的に使用される。ＤＰＰＨラジカル捕捉活性は、フリーラジカルを安定化させるために試料が水素原子を供与する（水素原子移動と呼ばれる）か又は電子を供与する（単一電子移動と呼ばれる）能力を表す。全ての試験試料に対するＤＰＰＨアッセイＩＣ_５０及びＥ_ｍａｘは、それぞれ表１０及び表１１で言及されている。３０分のインキュベーション後、全ての試験試料が５０％未満のＥ_ｍａｘを示し、ＢＳＦ－ＡＰＨは少なくとも９８％の１０００Ｄａ未満のタンパク質を含む。本発明者らは、ＦＭ及びＣＭの分子量分布に関するいかなる代表的文献も見つけることができなかった。しかしながら、文献によれば、ＦＭ及びＣＭは、それぞれ２．２％及び１．１％の遊離アミノ酸（全タンパク質のうち）を含有する［Ｌｉ， Ｐ．、Ｗｕ， Ｇ． Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｎｉｔｒｏｇｅｎｏｕｓ ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ ｉｎ ｆｅｅｄｓｔｕｆｆｓ ｆｏｒ ａｎｉｍａｌ ｄｉｅｔｓ． Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ ２０２０、１－２０、ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００７２６－０２０－０２８３３－４］。これは、それぞれ少なくとも２．２％及び１．１％の１０００Ｄａ未満のタンパク質を含有するＦＭ及びＣＭに換算される。フリーラジカルを捕捉するタンパク質性材料の能力は、タンパク質分子量分布に依存する。低分子量ペプチドを有するタンパク質は、より効率的にフリーラジカルを捕捉することができる。しかしながら、これは、ＢＳＦ－ＡＰＨがより多量の１０００Ｄａ未満のタンパク質を含有するものの、示されるＤＰＰＨフリーラジカルの阻害がより低いことを説明していない。タンパク質性分子のフリーラジカル捕捉活性はまた、以下によって影響される：（１）アミノ酸組成：疎水性アミノ酸（例えばＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｈｉｓ及びＬｅｕ）は親水性アミノ酸と比較して優れたラジカル捕捉活性を有する。（２）アミノ酸配列：両親媒性の性質を有するペプチドは、試料のラジカル捕捉活性を増強し得る。化学分析では、Ｔｙｒが水素原子移動メカニズムを介して酸化防止挙動を示すことが示されている。一方、Ｃｙｓ、Ｔｒｐ及びＨｉｓ等のアミノ酸は、単一電子移動メカニズムを介して酸化防止挙動を示す。

【0158】

ＦＭ及びＣＭは、３０分及び６０分のインキュベーション後、試験したほとんどの濃度で酸化促進挙動を示す（図３及び４を参照されたい）。この挙動は、主に熱処理により生じる。ＦＭ及びＣＭの両方において、熱処理は、一般に原料を高温で１５～２０分間加熱することを含む。ノルウェーでは、フィッシュミール製造中、腸内細菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）数及びサルモネラ菌数の１００ ｌｏｇ_１０の低減を達成するために、天然魚が７０℃以上の温度で２０分以上加熱に供される。そのような厳密な熱処理条件は、脂肪及びタンパク質の酸化をもたらし得る。フィッシュミールは、より熱的酸化を受けやすい多価不飽和脂肪酸に富む脂質を含有する。多価不飽和脂肪酸の酸化を防止するために、フィッシュミールには酸化防止剤が一般的に添加される（表７でも見られる）。アミノ酸の熱誘発酸化は、広範な酸化生成物の発生をもたらす。生成物によるアミノ酸酸化の酸化促進挙動はすでに知られている。それらは動物の体に広範な健康状態をもたらし得る。供給業者によれば、本研究において使用されたアメリカミズアブのタンパク質誘導体は全て、１００℃未満の温度で１．５分未満熱処理された。供給業者はまた、これらの熱処理時間－温度の組合せが、栄養物（タンパク質及び脂肪）に対する最小限の損傷及び病原性微生物の適正な不活性化を確実にするように採用されたことを示した。これは、ＦＭ及びＣＭの酸化促進挙動が、厳しい生成方法に主に起因して生じることを暗に意味している。

【0159】

４．３．ＡＢＴＳカチオンラジカル捕捉活性
ＡＢＴＳカチオンラジカル捕捉は、電子を供与してフリーラジカルを安定化する試料の能力を指す。全ての試料のＡＢＴＳアッセイＩＣ_５０を表１０に示す。それらはＦＭ＞ＣＭ＞ＢＳＦ－ＡＰＨの順である。ＩＣ_５０が高いほど、酸化防止活性が低い。このアッセイでは、ＦＭ及びＣＭでも酸化防止活性を示す。（１つ又は複数の）フリーラジカルが単一電子移動メカニズムを用いて安定化され得る場合、ＦＭ及びＣＭ抽出物は効率的であり得ると思われる。しかしながら、それらはまだＢＳＦ－ＡＰＨと比較するとより低い捕捉活性を示す。

【0160】

ＢＳＦ－ＡＰＨは、少なくとも９８％の１０００Ｄａ（全ての試験試料のうち最も低いタンパク質分子量）未満のタンパク質を有し、また最も低いＡＢＴＳ ＩＣ_５０を示した。ラジカル捕捉活性のタンパク質分子量に対する依存性は、すでに４．２項で説明されている。

【0161】

Ｚｈｕら［２３］は、広範な市販の酵素を使用してＢＳＦタンパク質加水分解物を開発した。加水分解物は、限外濾過を使用して群１（＜３０００Ｄａ）、群２（３０００～１０，０００Ｄａ）及び群３（＞１０，０００Ｄａ）の群にさらに分画された。これらの加水分解された画分の活性もまた、ＡＢＴＳカチオンラジカル捕捉活性について調査された。この研究において、アスコルビン酸が参照分子として使用された。興味深いことに、最も良好な画分及びアスコルビン酸は、０．０５ｍｇ／ｍｌの濃度でＡＢＴＳカチオンラジカルのそれぞれ８５．６７％及び９２．１１％を阻害することができた。ここで、本発明者らは、ＢＳＦ－ＡＰＨが（０．２ｍｇ／ｍｌで）９１％のＡＢＴＳカチオンラジカル捕捉Ｅ_ｍａｘを示すことを実証した。これは、ＢＳＦ－ＡＰＨの分画が非常に強い酸化防止能を有する画分をもたらすことを示す。

【0162】

４．４．好中球応答調節活性
ＢＳＦ誘導体の強いフリーラジカル捕捉活性は、４．２項及び４．３項から明らかである。さらに、全ての試料を好中球応答調節活性についても試験した。好中球は、動物（人間、ペット、魚、家禽及びブタを含む）の体内に存在する白血球である。それらは、病原体に対する一次防御に関与する。病原性微生物が動物の体内に入ると、好中球は侵入部位に急行して防御を開始する。肉芽形成の間、好中球は、スーパーオキシドアニオン及び副生成物（例えば過酸化水素）の生成を担うＮＡＤＰＨオキシダーゼを含む広範な酸化酵素を放出する。スーパーオキシドアニオンは、酸化窒素ラジカルとさらに反応して過酸化亜硝酸を生成し得る。このプロセスはまた、（過酸化水素と金属イオンとの反応により）ヒドロキシルラジカルを生成する。この一連の酸化反応は、宿主動物の防御に極めて重要である。しかしながら、宿主防御の間に生成されたこれらのＲＯＳは、体細胞の酵素、タンパク質、脂質等と反応し、様々な健康状態（例えば細胞の老化、がん等）の発生をもたらし得る。この研究において行われた好中球アッセイは、好中球活性の結果生成されたＲＯＳを捕捉するタンパク質性分子の能力を決定する。ＰＭＡは、ＲＯＳ生成の触媒を担うＮＡＤＰＨオキシダーゼの生成をもたらす、好中球内に存在するタンパク質キナーゼＣを活性化するために使用された。系におけるＲＯＳ生成は、ルシゲニン増幅化学発光を伴う。ＲＯＳ（特にスーパーオキシドアニオン）を捕捉するタンパク質性試料の能力は、化学発光の低下を特徴とする。本発明者らの知る限り、これは、ＢＳＦ誘導体のｉｎ ｖｉｔｒｏ好中球応答調節活性の初の分析及び決定である。ＣＭは、５つの試験濃度のうち３つにおいて酸化促進挙動を示し、Ｅ_ｍａｘは０．２ｍｇ／ｍｌでわずか５％であった（図８及び表１１を参照されたい）。ＣＭは、ペットフード調製物において一般的に使用される。しかしながら、ここで本発明者らは、ＣＭの含有が、本発明の加水分解物の捕捉活性とは対照的に、好中球により生成されたＲＯＳの捕捉に関連する利益をほとんど又は全く提供しないことを実証した。さらに、ＣＭの含有は、本発明のＢＳＦの幼虫タンパク質加水分解物とは対照的に、宿主細胞に対する炎症性損傷をもたらすことすらある。イヌ又はネコ細胞の反復的な炎症性損傷は、老化の促進、遅い認知機能等の状態となり得る。

【0163】

一方、ＦＭは、このアッセイにおいて穏やかな酸化防止挙動を示し、Ｅ_ｍａｘは２２％である（表１１を参照されたい）。０．２ｍｇ／ｍｌでは、ＦＭは５％の阻害を示す。水産養殖用飼育培地（すなわち水）は、病原性細菌の連続緩衝液を提供する。したがって、水産養殖生物は、病原性細菌の侵入の一定のリスク下にある。これは、免疫の低下、老化等の広範な健康状態をもたらす。本発明者らは、反復的好中球活性による炎症性損傷を抑制するＦＭの不適切性を強調する、ＦＭを用いた比較試験を実行した。これはしばしば、抗生物質及び栄養補助食品の使用の結果として生じるコストの増加をもたらす。驚くべきことに、ＢＳＦ－ＡＰＨは、３６．６２％のＥｍａｘを示す（表１１を参照されたい）。したがって、いかなる理論にも束縛されることを望まないが、本発明者らによれば、本発明のＢＳＦ－ＡＰＨは、病原菌侵入から生じる酸化的損傷を抑制するための自然で持続可能な解決策を提供する。

【0164】

４．５．ＭＰＯ応答調節活性（ＳＩＥＦＥＤ及び古典的アッセイ）
好中球応答の一般的メカニズムは既知である。好中球細胞外トラップは、病原性微生物を不活性化するために必要ないくつかの分子を含有する。好中球細胞外トラップに存在するＭＰＯ酵素は、過酸化水素及び塩化物イオンから次亜塩素酸を生成し得る。さらに、ＭＰＯは、チロシンをチロシルフリーラジカルに酸化し得る。ＭＰＯ酸化の生成物（次亜塩素酸及びチロシルフリーラジカル）は両方とも、病原体の不活性化に極めて重要である。ここでも、これらの分子の動物細胞との反復的な相互作用は、炎症性損傷をもたらす。動物の体内において、ＭＰＯ－Ｆｅ（ＩＩＩ）（活性形態）は過酸化水素と反応して、オキソフェリルπカチオンラジカル（ＣｐＩ形態）を形成する。ＣｐＩ形態は再びＭＰＯ－Ｆｅ（ＩＩＩ）に変換され、塩化物イオンが結合して次亜塩素酸に転換する。しかしながら、この実験においては、ＣｐＩ形態からＭＰＯ－Ｆｅ（ＩＩＩ）への還元は、２段階で達成された。第１の還元は、亜硝酸イオンによる電子移動を介したＣｐＩからＭＰＯ－Ｆｅ（ＩＶ）＝Ｏへの還元である。次いで、ＭＰＯ－Ｆｅ（ＩＶ）＝ＯをＭＰＯ－Ｆｅ（ＩＩＩ）形態に変換する電子供与が行われた（アンプレックス（商標）レッドからレゾルフィンへの酸化反応による）。タンパク質性分子は、ＣｐＩ形態と直接反応させてハロゲン化を停止することにより、又はＭＰＯ活性の結果として生成されたＲＯＳに水素を供与（水素原子移動）することにより、ＭＰＯから生じる酸化的損傷を防止することができた。古典的アッセイ及びＳＩＥＦＥＤアッセイを用いて、ＭＰＯ応答調節活性を分析した。古典的アッセイは、ＣｐＩ形態と複合してＲＯＳを安定化する試料の能力を測定する。一方、ＳＩＥＦＥＤアッセイではＭＰＯはウサギポリクローナル抗体に結合するため（化合物の残りは洗い流される）、このアッセイは試料がＣｐＩ形態に複合する能力を純粋に測定する。

【0165】

好中球応答調節活性と同様に、ＢＳＦ誘導体である加水分解されたＢＳＦの幼虫タンパク質のＭＰＯ応答調節活性もまた、本発明者らによって初めて見出されるものである。ＦＭ及びＣＭは、両方のアッセイで酸化促進挙動を示す（図６及び７を参照されたい）。酸化促進応答を開始し得るＦＭ及びＣＭにおける酸化反応生成物の存在（生成プロセスの結果として）は、４．２項においてすでに考察されている。本発明者らにより実現される比較例における詳細なｉｎ ｖｉｔｒｏ調査は、動物の餌におけるＦＭ及びＣＭの含有が、ＢＳＦ－ＡＰＨで見られる効果とは対照的に炎症性損傷をもたらし得ることを示している。

【0166】

古典的アッセイでは、ＢＳＦ－ＡＰＨは、驚くほど強い酸化防止能を示す。ＢＳＦ－ＡＰＨは、古典的アッセイでは強い酸化防止能を示す（表１０を参照されたい）。これらの観察は、ＢＳＦ－ＡＰＨがＭＰＯ活性から生じる炎症性損傷を効果的に抑制するためのペットフード及び水産養殖配合物における使用に、例えば食物又は飼料成分としての使用に非常に好適であることを示している。

【0167】

本発明者らは、驚くべきことに、ＢＳＦタンパク質誘導体がＦＭ及びＣＭに勝る酸化防止上の利点を提供することを見出した。

【0168】

実施例４
タンパク質加水分解物－ネコ食味試験
緒論
本発明のタンパク質加水分解物、すなわち酵素加水分解されたアメリカミズアブの幼虫のタンパク質ＨＩＥ １（ＨＩＥ １の調製に関する詳細は、例えば上記実施例１に概説されている）を提供する本発明の方法に従って、タンパク質加水分解物を調製した。実施例４において適用されたタンパク質加水分解物は、１０００Ｄａ未満の分子量を有するタンパク質（短鎖ペプチド）を１００％含有していた。さらに、タンパク質加水分解物中のタンパク質の最大４５％は、遊離アミノ酸の形態で存在する。

【0169】

短鎖ペプチド及び遊離アミノ酸残基（アミノ酸組成及び配置に依存する）は両方とも、ペットフード調製物に香味を与えることができる。実施例４は、キャットフード調製物におけるタンパク質加水分解物ＨＩＥ １の香味増強能の評価を示す。

【0170】

材料
キャットフード食味試験は、Ｄｅ Ｍｏｒｇｅｎｓｔｏｎｄ社（Ｄｕｓｓｅｎ、オランダ）で行った。タンパク質加水分解物ＨＩＥ １は、本発明者らによって調製及び提供された。２つの市販のキャットフード食味増強剤（「香味剤Ａ」及び「香味剤Ｂ」と呼ばれる）は、最大手の香味剤企業により提供された。これらのキャットフード食味増強剤は、加水分解されたタンパク質（Ｇｉｖａｕｄａｎ、オランダ）の溶液からなる。非常に低濃度の食味増強剤を含むＰｕｒｉｎａ Ｆｅｌｉｘ（ウェットキャットフード）は地元で調達した。

【0171】

方法
タンパク質加水分解物ＨＩＥ １の粉末を水に溶解して、乾燥物質を基準として２５％の最終溶液を作製した（これを試験に使用した）。香味剤Ａ及びＢはすでに液体として供給されていた。この実施例４の研究に使用した食味増強剤の用量は、表１２で言及されている。

【0172】

【表14】

【0173】

１％濃度の香味剤Ａ及び香味剤Ｂは、１．２５％のタンパク質加水分解物ＨＩＥ １と比較して、最終レシピの乾燥物質含量を釣り合わせるように使用された。両方の試験設定において、２０匹の適格なネコにレシピ１（１．１又は２．１）及びレシピ２（１．２又は２．２）を合計４日間給餌した。食味増強を、消費された餌のパーセンテージ及び第１選択のパーセンテージの関数として測定した。

【0174】

結果
この試験の結果は、表１３で言及されている。

【0175】

【表15】

【0176】

両方の場合において、タンパク質加水分解物ＨＩＥ １を含有する餌は、同等量（乾燥物質基準）の市販の香味剤Ａ及び香味剤Ｂで強化されたキャットフードよりも多く消費された。さらに、本発明のタンパク質加水分解物ＨＩＥ １を含有する餌はまた、試験ネコの第１選択であった。

【0177】

結論
タンパク質加水分解物ＨＩＥ １は、キャットフード中に同じ用量で適用された場合、現在入手可能なキャットフード食味増強剤と比較して改善されたキャットフード食味増強剤である。

【0178】

実施例５
タンパク質加水分解物－イヌ食味試験

【0179】

実施例５の目的
ドッグフード食味増強剤としてのＨＩＥ ２の可能性を示すこと

【0180】

材料及び方法
飼料製造の詳細は、以下で言及される。
乾燥飼料（キブル）をイヌ食味試験に使用した。
キブル（比較的低濃度のパラタントを含む）を地元のスーパー（オランダ）から購入した。これらのキブルを対照として使用した。
希釈ＨＩＥ ２溶液（ＨＩＥ ２は水に希釈されている）の総体積を基準として０．５％、１．２５％及び２．５％の濃縮ＨＩＥ ２（エバポレータを使用して５倍濃縮）をキブルにコーティングすることにより、試験用イヌ飼料調製物を製造した。コーティング後１週間、試験調製物を室温で乾燥及びテンパリングした。

【0181】

食味増強試験の詳細は以下の通りである：
対照調製物及び試験調製物を、食味試験のためにイヌに提供した。
デザイン：
イヌの数：２０
試験期間：４日
分量：それぞれ１００ｇ／イヌ／日の試験調製物及び対照調製物
朝に２回分の分量（１回分の試験調製物及び１回分の対照調製物）をイヌに提供した。翌日の朝（厳密に２４時間後）に残された飼料の重量を測定及び記録した。残された量がより少なかった分量を、よりおいしいと判断した。

【0182】

結果及び考察
０．５％、１．２５％及び２．５％の濃縮ＨＩＥ ２を含む餌、すなわち試験調製物に関連する飼料消費の％の結果及びイヌの第１選択の％の結果を、それぞれ図９Ａ、図９Ｂ及び図９Ｃに示す。

【0183】

試験調製物を含む３つ全ての試験において、試験調製物であるＨＩＥ ２を含有する餌の％消費は、対照餌の消費より高かった。同様に、３つ全ての試験ケースにおいて、ＨＩＥ ２を含有する餌の第１選択の％もまた、対照餌の第１選択の％より高かった。これらの結果は、従来のイヌ用飼料と比較した場合、イヌ用の餌におけるＨＩＥ ２の比較的強い食味増強能を実証している。食味効果は、例えば、及びとりわけ、ＨＩＥ ２中の高レベルの遊離アミノ酸及び短鎖ペプチドの存在に起因する。

【0184】

結論
ＨＩＥ ２は、イヌ用の餌における食味増強能を有し、例えば、現在使用されている従来のイヌ用飼料と比較した場合、イヌ用の餌における比較的強い食味増強能を有する。

【0185】

実施例６
バナメイエビ（Ｌ．バナメイ）用の飼料における食味増強剤としてのＨＩＥ １の評価
緒論
この例において、Ｐｏｎｔｕｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（英国）は、本発明の加水分解されたタンパク質ＨＩＥ １（実施例６では「ＨＳＷ」とも呼ばれる）の、バナメイエビ（Ｌ．バナメイ）用の飼料における食味増強剤としての強度及び有効性及び好適性を実証した。

【0186】

試験デザイン及び方法
加水分解されたタンパク質ＨＩＥ １のバナメイエビ（Ｌ．バナメイ）用の飼料における食味増強剤としての強度及び有効性及び好適性の実証は、以下の表Ａ～Ｇに概説される試験詳細に従って行われた。

【0187】

【表16】

【0188】

【表17】

【0189】

【表18】

【0190】

【表19】

【0191】

【表20】

【0192】

【表21】

【0193】

【表22】

【0194】

データ計算及び統計処理
以下のプロトコルを用い、Ｒバージョン４．０．２を使用して全てのデータを統計的に分析して、平均値間の差の有意性を決定した：
食味データは、分散パラメータを追加したポアソン回帰モデルを使用して分析した。オキアミ油を含む処理をダミー変数として含め、ＨＳＷを含む処理を連続変数として処理した。
食餌開始時間のデータは、分散分析コマンドを使用して分析し、正規性についてはＳｈａｐｉｒｏ－Ｗｉｌｋ検定を、また等分散性についてはＬｅｖｅｎｅ検定を用いた。
正規性及び等分散性が確認された場合、ＡＮＯＶＡの結果を認めた。
統計的に有意なＡＮＯＶＡの結果が決定された場合（ｐ＜０．０５）、Ｔｕｋｅｙｓの対のある事後分析を行って、どの処理が他のどの処理とｐ＜０．０５で異なるかを決定した。
正規性及び等分散性が確認されなかった場合、Ｋｒｕｓｋａｌｌ－Ｗａｌｌａｃｅノンパラメトリック検定をデータに対して行い、Ｃｏｎｏｖｅｒ－Ｉｍａｎの対のある事後分析を行って、どの処理が他のどの処理と異なるかを決定した。

【0195】

この情報は、以下の記号の１つとして示される：
ＮＤ－統計的差異なし、ＡＮＯＶＡ又はＫｒｕｓｋａｌｌ－Ｗａｌｌａｃｅ ｐ＞０．０５
ｐ＜０．０５－対のある事後分析は、ｐ＜０．０５の信頼度で有意な統計的差異を示す
外れ値と判断されるデータはいずれもデータから除外した。

【0196】

結果
食味
表１４に、食味の結果を要約する。

【0197】

【表23】

【0198】

図１０Ａは、各時間間隔でのジッタ数観察に基づく、経時的な各餌に対する予測性能フィッティング（矢印で示される）を示す。

【0199】

食餌開始時間
表１５は、エビの食餌開始時間を要約している。

【0200】

【表24】

【0201】

図１０Ｂに、食餌開始時間が示されている。１匹のエビが餌を食べ始める平均的な時間の長さであり、標準誤差が示されている。様々な上付き文字は、餌群間で統計的に有意な差（ｐ＜０．０５）が記録された場合を示す。

【0202】

０％ＨＳＷ＋イカミール＋オキアミ油と０％ＨＳＷ－イカミール－オキアミ油との間にはエビ数に有意差は観察されなかった（ｐ＞０．０５）。
１％ＨＳＷ－イカミール－オキアミ油は、０％ＨＳＷ－イカミール－オキアミ油と比較して有意に多いエビ数を有していた（ｐ＜０．０５）。
２％ＨＳＷ－イカミール－オキアミ油は、０％ＨＳＷ－イカミール－オキアミ油と比較して有意に多いエビ数を有していた（ｐ＜０．０５）。
０％ＨＳＷ＋イカミール＋オキアミ油及び０％ＨＳＷ－イカミール－オキアミ油（ｐ＞０．０５）（ｐ＞０．０５）の餌の両方と比較して、１％ＨＳＷ－イカミール－オキアミ油の群及び２％ＨＳＷ－イカミール－オキアミ油の群においてより速い食餌開始時間が観察された。

【0203】

考察及び結論
ＨＩＥ １（本明細書においてＨＳＷと呼ばれる）の１％及び２％の含有は、両方の対照餌と比較してエビ数を有意に増加させたが、オキアミ油の含有はエビ数に対する有意な効果を有さなかった。ＨＩＥ １及びオキアミ油を含有する処理では食餌開始時間が減少し、２％ＨＳＷ（＝ＨＩＥ １）を含む試験飼料は、陰性対照と比較して食餌開始時間を４２．６％減少させることにより、最大の効果を有していた。

【0204】

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Ｈｏｕ， Ｙ．， Ｗｕ， Ｚ．， Ｄａｉ， Ｚ．， Ｗａｎｇ， Ｇ．， Ｗｕ， Ｇ．， ２０１７． Ｐｒｏｔｅｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ ｉｎ ａｎｉｍａｌ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ： Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ， ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ， ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ． Ｊ Ａｎｉｍ Ｓｃｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ８． ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８６／ｓ４０１０４－０１７－０１５３－９
Ｋａｔｏ， Ｈ．， Ｒｈｕｅ， Ｍ．Ｒ．， Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ， Ｔ．， １９８９． Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｆｒｅｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ Ｔａｓｔｅ， ｉｎ： Ｆｌａｖｏｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ． Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ， ｐｐ． １５８－１７４． ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０２１／ｂｋ－１９８９－０３８８．ｃｈ０１３
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３． Ｆｉｒｍａｎｓｙａｈ， Ｍ．； Ａｂｄｕｈ， Ｍ．Ｙ． Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｆｒｏｍ Ｈｅｒｍｅｔｉａ ｉｌｌｕｃｅｎｓ． Ｈｅｌｉｙｏｎ ２０１９， ５， ｅ０２００５， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｈｅｌｉｙｏｎ．２０１９．ｅ０２００５．
４． Ｚｈｕ， Ｄ．； Ｈｕａｎｇ， Ｘ．； Ｔｕ， Ｆ．； Ｗａｎｇ， Ｃ．； Ｙａｎｇ， Ｆ． Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ， ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｐｅｐｔｉｄｅ ｆｒｏｍ ｂｌａｃｋ ｓｏｌｄｉｅｒ ｆｌｙ （Ｈｅｒｍｅｔｉａ ｉｌｌｕｃｅｎｓ Ｌ．） ｌａｒｖａｅ． Ｊ． Ｆｏｏｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２０２０， ｅ１３１８６， ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊｆｂｃ．１３１８６．
１６． Ｔｓｕｍｂｕ， Ｃ．Ｎ．； Ｄｅｂｙ－Ｄｕｐｏｎｔ， Ｇ．； Ｔｉｔｓ， Ｍ．； Ａｎｇｅｎｏｔ， Ｌ．； Ｆｒｅｄｅｒｉｃｈ， Ｍ．； Ｋｏｈｎｅｎ， Ｓ．； Ｍｏｕｉｔｈｙｓ－Ｍｉｃｋａｌａｄ， Ａ．； Ｓｅｒｔｅｙｎ， Ｄ．； Ｆｒａｎｃｋ， Ｔ． Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｓｏｍｅ ｔｒｏｐｉｃａｌ ｄｉｅｔａｒｙ ｐｌａｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ． Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ ２０１２， １３， ６２８－６５０， ｄｏｉ：１０．３３９０／ｉｊｍｓ１３０１０６２８．
１７． Ｐａｕｌ， Ａ． Ｆｉｅｌｄ ｂｏｒｄｅｒ ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ ｓｔｒｉｐｓ ａｓ ａ ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｖａｌｕａｂｌｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ， Ｇｅｍｂｌｏｕｘ Ａｇｒｏ－Ｂｉｏ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｅｇｅ， Ｇｅｍｂｌｏｕｘ， Ｂｅｌｇｉｑｕｅ， ２０１７．
２０． Ｆｉｒｍａｎｓｙａｈ， Ｍ．； Ａｂｄｕｈ， Ｍ．Ｙ． Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｆｒｏｍ Ｈｅｒｍｅｔｉａ ｉｌｌｕｃｅｎｓ． Ｈｅｌｉｙｏｎ ２０１９， ５， ｅ０２００５， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｈｅｌｉｙｏｎ．２０１９．ｅ０２００５．
２３． Ｚｈｕ， Ｄ．； Ｈｕａｎｇ， Ｘ．； Ｔｕ， Ｆ．； Ｗａｎｇ， Ｃ．； Ｙａｎｇ， Ｆ． Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ， ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｐｅｐｔｉｄｅ ｆｒｏｍ ｂｌａｃｋ ｓｏｌｄｉｅｒ ｆｌｙ （Ｈｅｒｍｅｔｉａ ｉｌｌｕｃｅｎｓ Ｌ．） ｌａｒｖａｅ． Ｊ． Ｆｏｏｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２０２０， ｅ１３１８６， ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊｆｂｃ．１３１８６．
２４． Ｓｍｉｔｈ， Ｐ．Ｋ．； Ｋｒｏｈｎ， Ｒ．Ｉ．； Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ， Ｇ．Ｔ．； Ｍａｌｌｉａ， Ａ．Ｋ．； Ｇａｒｔｎｅｒ， Ｆ．Ｈ．； Ｐｒｏｖｅｎｚａｎｏ， Ｍ．Ｄ．； Ｆｕｊｉｍｏｔｏ， Ｅ．Ｋ．； Ｇｏｅｋｅ， Ｎ．Ｍ．； Ｏｌｓｏｎ， Ｂ．Ｊ．； Ｋｌｅｎｋ， Ｄ．Ｃ． Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｕｓｉｎｇ ｂｉｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃ ａｃｉｄ． Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． １９８５， １５０， ７６－８５， ｄｏｉ：１０．１０１６／０００３－２６９７（８５）９０４４２－７．
２５． Ｂｒａｎｄ－Ｗｉｌｌｉａｍｓ， Ｗ．； Ｃｕｖｅｌｉｅｒ， Ｍ．Ｅ．； Ｂｅｒｓｅｔ， Ｃ． Ｕｓｅ ｏｆ ａ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ． ＬＷＴ － Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １９９５， ２８， ２５－３０， ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ００２３－６４３８（９５）８０００８－５．
２６． Ａｒｎａｏ， Ｍ．Ｂ．； Ｃａｎｏ， Ａ．； Ａｃｏｓｔａ， Ｍ． Ｔｈｅ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ａｎｄ ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｔｏ ｔｏｔａｌ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００１， ７３， ２３９－２４４， ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ０３０８－８１４６（００）００３２４－１．
２７． Ｆｒａｎｃｋ， Ｔ．； Ｋｏｈｎｅｎ， Ｓ．； Ｂｏｕｄｊｅｌｔｉａ， Ｋ．Ｚ．； Ｖａｎ Ａｎｔｗｅｒｐｅｎ， Ｐ．； Ｂｏｓｓｅｌｏｉｒ， Ａ．； Ｎｉｅｓｔｅｎ， Ａ．； Ｇａｃｈ， Ｏ．； Ｎｙｓ， Ｍ．； Ｄｅｂｙ－Ｄｕｐｏｎｔ， Ｇ．； Ｓｅｒｔｅｙｎ， Ｄ． Ａ ｎｅｗ ｅａｓｙ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｔｉｖｅ ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｌｕｉｄｓ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ． Ｔａｌａｎｔａ ２００９， ８０， ７２３－７２９， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｔａｌａｎｔａ．２００９．０７．０５２．
２８． Ｚｈａｎｇ， Ｈ．； Ｈｏｌｄｅｎ－Ｗｉｌｔｓｅ， Ｊ．； Ｗａｎｇ， Ｊ．； Ｌｉａｎｇ， Ｈ． Ａ Ｓｔｒａｔｅｇｙ ｔｏ Ｍｏｄｅｌ Ｎｏｎｍｏｎｏｔｏｎｉｃ Ｄｏｓｅ－Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｃｕｒｖｅ ａｎｄ Ｅｓｔｉｍａｔｅ ＩＣ５０． ＰＬＯＳ ＯＮＥ ２０１３， ８， ｅ６９３０１， ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００６９３０１．
２９． Ｒ Ｃｏｒｅ Ｔｅａｍ Ｒ： Ａ ｌａｎｇｕａｇｅ ａｎｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｆｏｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ； Ｒ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ： Ｖｉｅｎｎａ， Ａｕｓｔｒｉａ， ２０１７；

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図10A】

【図10B】

【手続補正書】

【提出日】2022-05-12

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を製造するための方法であって、
ａ）少なくとも１種の水溶性タンパク質を含む水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップであって、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物がアメリカミズアブに由来し、前記組成物のｐＨがｐＨ４～ｐＨ８であり、前記水溶性タンパク質組成物中の前記少なくとも１種の水溶性タンパク質が可溶化されるステップ、及び少なくとも１種のペプチダーゼをさらに用意するステップと；
ｂ）ステップａ）の前記少なくとも１種のペプチダーゼを、ステップａ）の前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物と混合して、タンパク質／ペプチダーゼ混合物を用意するステップと；
ｃ）前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物中の前記少なくとも１種の水溶性タンパク質が前記少なくとも１種のペプチダーゼにより酵素加水分解されるように、ステップｂ）の前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物を７５℃未満の温度で加熱して、酵素加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を用意するステップであって、前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として、前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の少なくとも５０重量％が１，０００ダルトン未満の分子量を有する、ステップと、
ｄ）前記少なくとも１種のペプチダーゼが加熱により熱不活性化されるように、加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を７５℃～１１０℃の温度で加熱することにより、ステップｃ）の前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液中の酵素加水分解を停止して、前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を用意するステップと
を含む方法。

【請求項2】

前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、アメリカミズアブの幼虫に由来する水性水溶性タンパク質組成物である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

ステップａ）において、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、水等の水溶液中に溶解した水溶性昆虫タンパク質組成物、好ましくはアメリカミズアブの幼虫に由来する水溶性昆虫タンパク質組成物であり、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、
（ｉ）昆虫、好ましくはアメリカミズアブの幼虫を用意するステップと、
（ｉｉ）好ましくはみじん切りにすることにより、ステップ（ｉ）の前記昆虫のサイズを低減するステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の低減されたサイズを有する前記昆虫からパルプを得るステップと、
次いで
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の前記パルプを７０～１００℃の温度に加熱するステップと、次いで
（ｖ）ステップ（ｉｖ）の加熱されたパルプを、好ましくはデカンテーション及び／又は遠心分離を包含する物理的分離ステップに供して、それにより前記昆虫タンパク質組成物を用意するステップと、次いで
（ｖｉ）ステップ（ｖ）の前記昆虫タンパク質組成物を、水又は緩衝水溶液等の水溶液中、好ましくは水中で混合して、ステップａ）の前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップと
により、又は少なくともそれらのステップにより昆虫を少なくとも１種の水性水溶性昆虫タンパク質組成物に変換することによって用意される、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

ステップａ）において、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、アメリカミズアブの幼虫に由来し、水中に溶解した水溶性昆虫タンパク質組成物であり、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、
（ｉ）アメリカミズアブの幼虫、好ましくは１２～３０日齢、好ましくは１４～２８日齢、より好ましくは１４～２６日齢、最も好ましくは幼虫が前蛹に変態する１２時間～３日前、例えば変態の１～２日前のアメリカミズアブの幼虫を用意するステップと、
（ｉｉ）好ましくはみじん切りすることにより、ステップ（ｉ）の前記アメリカミズアブの幼虫のサイズを低減するステップであって、ステップａ）のパルプ中の前記昆虫の残骸の平均粒径が１０ミクロン～５００ミクロンの範囲である、ステップと、次いで
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の低減されたサイズを有する前記昆虫からパルプを得るステップと、
次いで
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の前記パルプを８０～９５℃の温度、好ましくは８５～９２℃の温度に加熱する、好ましくは７０秒～１００秒、より好ましくは７５秒～９０秒の期間加熱するステップと、次いで
（ｖ）ステップ（ｉｖ）の加熱されたパルプを、好ましくはデカンテーション及び／又は遠心分離を包含する物理的分離ステップに供して、それにより前記昆虫タンパク質組成物を用意するステップと、次いで
（ｖｉ）ステップ（ｖ）の前記昆虫タンパク質組成物を、水又は緩衝水溶液中、好ましくは水中で混合して、ステップａ）の前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップと
により、又は少なくともそれらのステップにより、好ましくはそれらのステップにより前記アメリカミズアブの幼虫を少なくとも１種の水性水溶性昆虫タンパク質組成物に変換することによって用意される、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

ステップａ）の前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、２種以上の水溶性タンパク質、好ましくは２種より多い異なる水溶性タンパク質、より好ましくは３種より多い異なる水溶性タンパク質、最も好ましくは４種より多い異なる水溶性タンパク質を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

ステップｃ）において、前記加熱が３５℃～６０℃の温度で行われ、及び／又は前記加熱が２時間～１２時間の期間行われ、好ましくは、ステップｃ）において、前記加熱が３５℃～６０℃の温度で２時間～１２時間の期間行われる、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

ステップｃ）において、前記加熱が４０℃～５５℃の温度で行われ、及び／又は前記加熱が４時間～９時間の期間行われ、好ましくは、ステップｃ）において、前記加熱が４０℃～５５℃の温度で４時間～９時間の期間行われ、より好ましくは、ステップｃ）において、前記加熱が４５℃～５３℃の温度で５時間～７時間の期間行われ、最も好ましくは、前記加熱が５０℃の温度で６時間の期間行われる、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

ステップａ）において、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物のｐＨが５～７．７、好ましくは６～７．５である、より好ましくはｐＨが７．０である、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

ステップａ）で用意される前記少なくとも１種のペプチダーゼが、アミノペプチダーゼ、好ましくはエンドペプチダーゼ若しくはエクソペプチダーゼ、又はそれらの混合物であるか又はそれらを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

ステップａ）において、前記少なくとも１種のペプチダーゼが、ロイシルアミノペプチダーゼ、パパイン、プロナーゼ、セリンプロテアーゼ、アルカラーゼ、サブチリシン、サブチリシンＡ、α－キモトリプシン、カテプシンＩＩＩ、エスペラーゼ、ニュートラーゼ、ペプシン、サーモリシン、トリプシンを含むか又はそれらから選択され、好ましくは、前記少なくとも１種のペプチダーゼが、ロイシルアミノペプチダーゼであるか又はそれを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

ステップｂ）において、前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物中の前記少なくとも１種のペプチダーゼの量が、前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物の総重量の０．０５重量％～７重量％、好ましくは前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物の総重量の０．１重量％～６重量％、より好ましくは０．２重量％～５重量％、最も好ましくは０．５重量％～３重量％、例えば１．０重量％～２．０重量％である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

ステップｄ）において、ステップｃ）の前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液中の前記酵素加水分解が、前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を３０秒～３０分、好ましくは４５秒～２０分、より好ましくは１分～１５分、最も好ましくは２分～１０分の期間加熱することにより停止される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

ステップｄ）において、ステップｃ）の前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液中の前記酵素加水分解が、前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を８０℃～１０５℃、好ましくは８５℃～１０３℃、より好ましくは９０℃～１００℃の温度に加熱することにより停止される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

ステップｄ）の後、さらなるステップｅ）において、ステップｄ）の前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が、前記酵素加水分解されたタンパク質中に修飾アミノ基を提供するためにメイラード反応に供され、前記メイラード反応は、
ｅ１）炭水化物を用意し、前記炭水化物をステップｄ）の前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質と混合して、酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物を用意するサブステップと；
ｅ２）ステップｅ１）の前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物を加熱し、酵素加水分解された昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を用意するサブステップとを含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

ステップｅ１）において、添加された炭水化物の最終濃度が、前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物の総重量の０．０５重量％～６．０重量％、好ましくは前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物の総重量の０．１重量％～５．０重量％、より好ましくは０．２重量％～３重量％、最も好ましくは０．３重量％～１．０重量％である、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

ステップｅ２）において、ステップｅ１）の前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物が、１００℃～１７０℃、好ましくは１２０℃～１６８℃、より好ましくは１３５℃～１６６℃、例えば１４０℃～１６５℃の温度で加熱される、請求項１４又は１５に記載の方法。

【請求項17】

ステップｅ２）において、ステップｅ１）の前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物が、１分～１２０分、好ましくは２分～６０分、より好ましくは３分～３０分、最も好ましくは５分～２０分、例えば１０分～１７分又は約１５分の期間加熱される、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

ステップｅ１）において、用意される炭水化物が、スクロース若しくはグルコース、又はそれらの混合物、好ましくはスクロースである、請求項１４～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

ステップｄ）の後、さらなるステップｆ１）において、ステップｄ）の前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が、好ましくは、噴霧乾燥、流動床乾燥による乾燥、凍結乾燥、屈折式乾燥のうちのいずれか１つ若しくは複数を適用することにより乾燥される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法、又は、ステップｅ２）の後、さらなるステップｆ２）において、ステップｅ２）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物が乾燥され、好ましくは、噴霧乾燥、流動床乾燥による乾燥、凍結乾燥、屈折式乾燥のうちのいずれか１つ若しくは複数を適用することにより乾燥される、請求項１４～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

ステップｄ）の後、さらなるステップｆ３）において、ステップｄ）の前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が濃縮される、好ましくは、濃縮された酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の乾燥物質含量が、濃縮ステップｆ３）の後に前記濃縮された酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として少なくとも３０重量％、好ましくは少なくとも５０重量％であるように濃縮される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法、又は、ステップｅ２）の後、さらなるステップｆ４）において、ステップｅ２）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物が濃縮される、好ましくは、ステップｅ２）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の濃縮されたメイラード反応生成物の乾燥物質含量が、濃縮ステップ４）の後に酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記濃縮されたメイラード反応生成物の総重量を基準として少なくとも３０重量％、例えば少なくとも５０重量％であるように濃縮される、請求項１４～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

濃縮ステップｆ３）の後に、前記濃縮された酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の乾燥物質含量が、前記濃縮された酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として３０重量％～８０重量％である、好ましくは４５重量％～７５重量％、より好ましくは５０重量％～７０重量％である、又は、濃縮ステップｆ４）の後に、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の濃縮されたメイラード反応生成物の乾燥物質含量が、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記濃縮されたメイラード反応生成物の総重量を基準として３０重量％～８０重量％、好ましくは４５重量％～７５重量％、より好ましくは６０重量％～７０重量％である、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

ステップｂ）の前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物中の水溶性昆虫タンパク質の量が、前記タンパク質／酵素混合物の総重量を基準として０．２重量％～３０重量％、好ましくは前記タンパク質／酵素混合物の総重量を基準として０．５重量％～２５重量％、より好ましくは１重量％～２０重量％、より好ましくは２重量％～１５重量％、最も好ましくは３重量％～１０重量％、例えば３．５重量％～７重量％、又は３重量％～５重量％である、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

ステップｄ）で用意される前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が、ステップｄ）で用意される前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総量の重量を基準として少なくとも６０重量％、好ましくは少なくとも７０重量％、例えば７０重量％～１００重量％の程度まで水若しくは緩衝水溶液等の水溶液中に可溶である、請求項１～１３、１９～２２のいずれか一項に記載の方法、及び／又は、ステップｅ２）で用意される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物が、ステップｅ２）で用意される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物の総量の重量を基準として少なくとも６０重量％、好ましくは少なくとも７０重量％、例えば７０重量％～１００重量％の程度まで水若しくは緩衝水溶液等の水溶液中に可溶である、請求項１４～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

請求項１～１３若しくは１９～２３のいずれか一項に記載の方法により得られる、又は請求項１～１３若しくは１９～２３のいずれか一項に記載の方法により得ることができる、又は請求項１～１３若しくは１９～２３のいずれか一項に記載の方法により提供される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質であって、前記タンパク質の総重量を基準として前記タンパク質の少なくとも５０重量％、好ましくは５５重量％～１００重量％、より好ましくは６５重量％～１００重量％、最も好ましくは７５重量％～１００重量％、例えば８０重量％～９５重量％又は８５重量％～１００重量％が１，０００ダルトン未満の分子量を有し、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物がアメリカミズアブに由来する、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質、或いは、請求項１４～２３のいずれか一項に記載の方法により得られる、又は請求項１４～２３のいずれか一項に記載の方法により得ることができる、又は請求項１～１３若しくは１９～２３のいずれか一項の方法により提供される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物であって、前記タンパク質の総重量を基準として前記タンパク質の少なくとも５０重量％、好ましくは５５重量％～１００重量％、より好ましくは６５重量％～１００重量％、最も好ましくは７５重量％～１００重量％、例えば８０重量％～９５重量％又は８５重量％～１００重量％が１，０００ダルトン未満の分子量を有し、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物がアメリカミズアブに由来する、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項25】

昆虫タンパク質源が、請求項２に記載のアメリカミズアブの幼虫である、及び／又は、昆虫タンパク質源が、請求項４のステップ（ｉ）～（ｖｉ）に従って用意される、請求項２４に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は請求項２４に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項26】

前記タンパク質の総重量を基準として前記タンパク質の少なくとも１０重量％、好ましくは１５重量％～６０重量％、より好ましくは２０重量％～５５重量％、最も好ましくは３０重量％～５０重量％、例えば２５重量％～４０重量％、又は３５重量％～５０重量％が遊離アミノ酸残基である、請求項２４に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項27】

前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として、又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物の総重量を基準として少なくとも２．５重量％が遊離アルギニンであり、及び／又は少なくとも２．５重量％が遊離グルタミン酸であり、及び／又は少なくとも１．２５重量％が遊離ロイシンであり、及び／又は少なくとも２．２重量％が遊離リシンであり、好ましくは、少なくとも３．７重量％が遊離アルギニンであり、少なくとも３．０重量％が遊離グルタミン酸であり、少なくとも１．５重量％が遊離ロイシンであり、少なくとも２．６重量％が遊離リシンであり、好ましくは、４．７重量％未満が遊離アルギニンであり、及び／又は４．０重量％未満が遊離グルタミン酸であり、及び／又は３．０重量％未満が遊離ロイシンであり、及び／又は４．０重量％未満が遊離リシンであり、好ましくは、４．５重量％未満が遊離アルギニンであり、３．７重量％未満が遊離グルタミン酸であり、２．７重量％未満が遊離ロイシンであり、３．６重量％未満が遊離リシンである、請求項２４又は２６に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項28】

前記水溶性タンパク質が、大腸菌については５０未満、例えば１０若しくは１０未満、及び／又はサルモネラ菌については１未満、例えば０、及び／又はセレウス菌については５００未満、例えば１５０未満若しくは１０未満、及び／又はウェルシュ菌については５００未満、例えば５０未満、好ましくは１０未満のｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数を含み、好ましくは、ｃｆｕ／ｇタンパク質での前記微生物数が、大腸菌については１０未満、及び／又はサルモネラ菌については０．１未満、好ましくはサルモネラ菌は存在せず、及び／又はセレウス菌については１０未満、及び／又はウェルシュ菌については１０未満であり、より好ましくは、前記水溶性タンパク質が、大腸菌については１０未満のｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数を含み、２５グラムの加水分解されたタンパク質が評価された場合サルモネラ菌は存在せず、セレウス菌については１０未満、及びウェルシュ菌については１０未満のｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数を含む、請求項２４～２７のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は請求項２４～２７のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項29】

前記水溶性タンパク質が、請求項１～１３若しくは１９～２３のいずれか一項に記載の方法により得られるか若しくは提供される、請求項２４～２８のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質、又は、前記水溶性タンパク質が、請求項１４～２３のいずれか一項に記載の方法により得られるか若しくは提供される、請求項２４～２８のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項30】

前記昆虫タンパク質源が、アメリカミズアブの幼虫のタンパク質である、請求項２９の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は請求項２９の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項31】

食味増強剤であって、ピロリン酸金属塩、２－メチルフラン、２－メチルピロール、ジメチルジスルフィドである食味増強剤、及び保湿剤のうちのいずれか１つ又は複数、又はそれらの任意の組合せをさらに含む、請求項２４～３０のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は請求項２４～３０のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項32】

前記保湿剤が、プロピレングリコール、グリセリン、コーンシロップ及び無機塩から選択される、請求項３１に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は請求項３１に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項33】

ペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品若しくは動物飼料成分の製造、又は人間用食品若しくは人間用食物成分の製造、好ましくはネコ用飼料、イヌ用飼料又はエビ用飼料、例えばバナメイエビ用飼料の製造における、請求項２４～３２のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の、使用。

【請求項34】

前記ペットがイヌ若しくはネコ、好ましくはイヌである、又は前記動物がイヌ、ネコ若しくはエビ、好ましくはバナメイエビ（リトペニウス・バナメイ）である、請求項３３に記載の使用。

【請求項35】

製造されるペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分が、ペット、ネコ、イヌ、魚、エビ、例えばバナメイエビ、マグロ、タラ、養殖海洋生物、養殖淡水生物、ターボット、サケ、コイ、離乳期の動物、離乳後の動物用、好ましくは、ネコ、イヌ、エビ、例えばバナメイエビ用の、食物若しくは食物成分又は飼料若しくは飼料成分、請求項２及び請求項２に従属する範囲での請求項３～３５のいずれか一項に記載の昆虫種とは異なる昆虫種、例えば受粉媒介者等、例えばこれらに限定されないがハチ又は生物防除に使用される益虫、例えばこれらに限定されないがテントウムシ、並びに例えばマルハナバチ、カ、シロアリ及びミバエ用の飼料のいずれかであるか；又は飼料若しくは食物香味剤又は飼料若しくは食物香味増強剤であり、或いは、製造される人間用食品又は製造される人間用食物成分が、ブロス、ソース、香味剤、食物香味剤、食物香味増強剤、スープ、肉代用製品若しくは成分、又は肉代替製品若しくは成分、例えば煮た牛肉、牛ブロス、豚ブロス、牛肉、調理肉の代用品のいずれかである、請求項３３又は３４に記載の使用。

【請求項36】

請求項２４～３２のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなる、動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分、好ましくは、請求項２４～３２のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなる、ネコ用飼料製品若しくは成分、イヌ用飼料製品若しくは成分、又はエビ用飼料製品若しくは成分、例えばバナメイエビ用飼料製品若しくは成分、又は人間用食品若しくは人間用食物成分。

【請求項37】

前記ペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分が、ペット、ネコ、イヌ、魚、エビ、マグロ、タラ、養殖海洋生物、養殖淡水生物、ターボット、サケ、コイ、離乳期の動物、離乳後の動物、好ましくは、ネコ、イヌ又はエビ、例えばバナメイエビ用の食物若しくは飼料又は食物成分若しくは飼料成分のいずれかであるか、或いは、食物香味剤若しくは食物香味増強剤又は飼料香味剤若しくは飼料香味増強剤である、請求項３６に記載のペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分、又は、請求項３６に記載の人間用食品若しくは人間用食物成分であり、前記人間用食品又は人間用食物成分が、ブロス、ソース、香味剤、食物香味剤又は食物香味増強剤、スープ、麺、バーガー、肉代用製品若しくは成分又は肉代替製品若しくは成分、例えば煮た牛肉、牛ブロス、麺、牛肉ベースのスープ、牛肉ベースのバーガー、ハンバーガー、豚ブロス、牛肉、調理肉の代用品のいずれかである、製品又は成分。

【請求項38】

請求項２４～３２のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の、酸化防止剤としての使用。

【請求項39】

請求項３６又は３７に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の、酸化防止剤としての使用。

【請求項40】

請求項３６又は３７に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の、健康増進能を有する成分としての使用。

【請求項41】

酸化防止能を有する、請求項３６又は３７に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の使用。

【請求項42】

細胞の酸化的損傷の防止及び／又は抑制のための方法における使用のための、請求項３６又は３７に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分。

【請求項43】

活性酸素種により誘発される炎症誘発性応答の防止及び／又は抑制のための方法における使用のための、請求項３６又は３７に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分。

【請求項44】

酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を製造するための方法であって、
ａ）少なくとも１種の水溶性タンパク質を含む水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップであって、前記組成物のｐＨがｐＨ４～ｐＨ８であり、前記水溶性タンパク質組成物中の前記少なくとも１種の水溶性タンパク質が可溶化されるステップ、及び少なくとも１種のペプチダーゼをさらに用意するステップと；
ｂ）ステップａ）の前記少なくとも１種のペプチダーゼを、ステップａ）の前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物と混合して、タンパク質／ペプチダーゼ混合物を用意するステップと；
ｃ）前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物中の前記少なくとも１種の水溶性タンパク質が前記少なくとも１種のペプチダーゼにより酵素加水分解されるように、ステップｂ）の前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物を７５℃未満の温度で加熱して、酵素加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を用意するステップと；
ｄ）前記少なくとも１種のペプチダーゼが加熱により熱不活性化されるように、加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を７５℃～１１０℃の温度で加熱することにより、ステップｃ）の前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液中の酵素加水分解を停止して、前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質を用意するステップと
を含み、ステップｄ）の後、さらなるステップｅ）において、ステップｄ）の前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質が、前記酵素加水分解されたタンパク質中に修飾アミノ基を提供するためにメイラード反応に供され、前記メイラード反応は、
ｅ１）炭水化物を用意し、前記炭水化物をステップｄ）の前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質と混合して、酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物を用意するサブステップと；
ｅ２）ステップｅ１）の前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物を加熱し、酵素加水分解された昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を用意するサブステップとを含む、方法。

【請求項45】

ステップａ）の前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、２種以上の水溶性タンパク質、好ましくは２種より多い異なる水溶性タンパク質、より好ましくは３種より多い異なる水溶性タンパク質、最も好ましくは４種より多い異なる水溶性タンパク質を含む、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

ステップｃ）において、前記加熱が３５℃～６０℃の温度で行われ、及び／又は前記加熱が２時間～１２時間の期間行われ、好ましくは、ステップｃ）において、前記加熱が３５℃～６０℃の温度で２時間～１２時間の期間行われる、請求項４４又は４５に記載の方法。

【請求項47】

ステップｃ）において、前記加熱が４０℃～５５℃の温度で行われ、及び／又は前記加熱が４時間～９時間の期間行われ、好ましくは、ステップｃ）において、前記加熱が４０℃～５５℃の温度で４時間～９時間の期間行われ、より好ましくは、ステップｃ）において、前記加熱が４５℃～５３℃の温度で５時間～７時間の期間行われ、最も好ましくは、前記加熱が５０℃の温度で６時間の期間行われる、請求項４４～４６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

ステップａ）において、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物のｐＨが５～７．７、好ましくは６～７．５である、より好ましくはｐＨが７．０である、請求項４４～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

ステップａ）で用意される前記少なくとも１種のペプチダーゼが、アミノペプチダーゼ、好ましくはエンドペプチダーゼ若しくはエクソペプチダーゼ、又はそれらの混合物であるか又はそれらを含む、請求項４４～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

ステップａ）において、前記少なくとも１種のペプチダーゼが、ロイシルアミノペプチダーゼ、パパイン、プロナーゼ、セリンプロテアーゼ、アルカラーゼ、サブチリシン、サブチリシンＡ、α－キモトリプシン、カテプシンＩＩＩ、エスペラーゼ、ニュートラーゼ、ペプシン、サーモリシン、トリプシンを含むか又はそれらから選択され、好ましくは、前記少なくとも１種のペプチダーゼが、ロイシルアミノペプチダーゼであるか又はそれを含む、請求項４４～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

ステップｂ）において、前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物中の前記少なくとも１種のペプチダーゼの量が、前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物の総重量の０．０５重量％～７重量％、好ましくは前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物の総重量の０．１重量％～６重量％、より好ましくは０．２重量％～５重量％、最も好ましくは０．５重量％～３重量％、例えば１．０重量％～２．０重量％である、請求項４４～５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

ステップｄ）において、ステップｃ）の前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液中の前記酵素加水分解が、前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を３０秒～３０分、好ましくは４５秒～２０分、より好ましくは１分～１５分、最も好ましくは２分～１０分の期間加熱することにより停止される、請求項４４～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

ステップｄ）において、ステップｃ）の前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液中の前記酵素加水分解が、前記加水分解されたタンパク質／ペプチダーゼ溶液を８０℃～１０５℃、好ましくは８５℃～１０３℃、より好ましくは９０℃～１００℃の温度に加熱することにより停止される、請求項４４～５２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項54】

ステップｅ１）において、添加された炭水化物の最終濃度が、前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物の総重量の０．０５重量％～６．０重量％、好ましくは前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物の総重量の０．１重量％～５．０重量％、より好ましくは０．２重量％～３重量％、最も好ましくは０．３重量％～１．０重量％である、請求項４４～５３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項55】

ステップｅ２）において、ステップｅ１）の前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物が、１００℃～１７０℃、好ましくは１２０℃～１６８℃、より好ましくは１３５℃～１６６℃、例えば１４０℃～１６５℃の温度で加熱される、請求項４４～５４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

ステップｅ２）において、ステップｅ１）の前記酵素加水分解された昆虫タンパク質／添加された炭水化物混合物が、１分～１２０分、好ましくは２分～６０分、より好ましくは３分～３０分、最も好ましくは５分～２０分、例えば１０分～１７分又は約１５分の期間加熱される、請求項４４～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項57】

ステップｅ１）において、用意される炭水化物が、スクロース若しくはグルコース、又はそれらの混合物、好ましくはスクロースである、請求項４４～５６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

ステップｅ２）の後、さらなるステップｆ２）において、ステップｅ２）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物が乾燥され、好ましくは、噴霧乾燥、流動床乾燥による乾燥、凍結乾燥、屈折式乾燥のうちのいずれか１つ若しくは複数を適用することにより乾燥される、請求項５４～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項59】

ステップｅ２）の後、さらなるステップｆ４）において、ステップｅ２）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物が濃縮される、好ましくは、ステップｅ２）の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の濃縮されたメイラード反応生成物の乾燥物質含量が、濃縮ステップ４）の後に酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記濃縮されたメイラード反応生成物の総重量を基準として少なくとも３０重量％、例えば少なくとも５０重量％であるように濃縮される、請求項４４～５８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項60】

濃縮ステップｆ４）の後に、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の濃縮されたメイラード反応生成物の乾燥物質含量が、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記濃縮されたメイラード反応生成物の総重量を基準として３０重量％～８０重量％、好ましくは４５重量％～７５重量％、より好ましくは６０重量％～７０重量％である、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

ステップｂ）の前記タンパク質／ペプチダーゼ混合物中の水溶性昆虫タンパク質の量が、前記タンパク質／酵素混合物の総重量を基準として０．２重量％～３０重量％、好ましくは前記タンパク質／酵素混合物の総重量を基準として０．５重量％～２５重量％、より好ましくは１重量％～２０重量％、より好ましくは２重量％～１５重量％、最も好ましくは３重量％～１０重量％、例えば３．５重量％～７重量％、又は３重量％～５重量％である、請求項４４～６０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項62】

ステップａ）において、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、甲虫の幼虫、イエバエ、アメリカミズアブ、イナゴ、バッタ、コオロギ、ゴキブリの幼虫、ヤシオオオサゾウムシの幼虫、カイコ、タガメ、セミ、タケムシ、アリ、キリギリス、チョウ、ヨコバイ、ウンカ及びハチの幼虫のうちのいずれか１つ又は複数に由来する水性水溶性昆虫タンパク質組成物であり、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、好ましくはアメリカミズアブに由来し、好ましくは、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、アメリカミズアブの幼虫に由来する水性水溶性タンパク質組成物である、請求項４４～６１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項63】

ステップａ）において、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、水等の水溶液中に溶解した水溶性昆虫タンパク質組成物、好ましくはアメリカミズアブの幼虫に由来する水溶性昆虫タンパク質組成物であり、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、
（ｉ）昆虫、好ましくはアメリカミズアブの幼虫を用意するステップと、
（ｉｉ）好ましくはみじん切りにすることにより、ステップ（ｉ）の前記昆虫のサイズを低減するステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の低減されたサイズを有する前記昆虫からパルプを得るステップと、
次いで
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の前記パルプを７０～１００℃の温度に加熱するステップと、次いで
（ｖ）ステップ（ｉｖ）の加熱されたパルプを、好ましくはデカンテーション及び／又は遠心分離を包含する物理的分離ステップに供して、それにより前記昆虫タンパク質組成物を用意するステップと、次いで
（ｖｉ）ステップ（ｖ）の前記昆虫タンパク質組成物を、水又は緩衝水溶液等の水溶液中、好ましくは水中で混合して、ステップａ）の前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップと
により、又は少なくともそれらのステップにより、昆虫を少なくとも１種の水性水溶性昆虫タンパク質組成物に変換することによって用意される、請求項４４～６２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項64】

ステップａ）において、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、アメリカミズアブの幼虫に由来し、水中に溶解した水溶性昆虫タンパク質組成物であり、前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物が、
（ｉ）アメリカミズアブの幼虫、好ましくは１２～３０日齢、好ましくは１４～２８日齢、より好ましくは１４～２６日齢、最も好ましくは幼虫が前蛹に変態する１２時間～３日前、例えば変態の１～２日前のアメリカミズアブの幼虫を用意するステップと、
（ｉｉ）好ましくはみじん切りすることにより、ステップ（ｉ）の前記アメリカミズアブの幼虫のサイズを低減するステップであって、ステップａ）のパルプ中の前記昆虫の残骸の平均粒径が１０ミクロン～５００ミクロンの範囲である、ステップと、次いで
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の低減されたサイズを有する前記昆虫からパルプを得るステップと、
次いで
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の前記パルプを８０～９５℃の温度、好ましくは８５～９２℃の温度に加熱する、好ましくは７０秒～１００秒、より好ましくは７５秒～９０秒の期間加熱するステップと、次いで
（ｖ）ステップ（ｉｖ）の加熱されたパルプを、好ましくはデカンテーション及び／又は遠心分離を包含する物理的分離ステップに供して、それにより前記昆虫タンパク質組成物を用意するステップと、次いで
（ｖｉ）ステップ（ｖ）の前記昆虫タンパク質組成物を、水又は緩衝水溶液中、好ましくは水中で混合して、ステップａ）の前記水性水溶性昆虫タンパク質組成物を用意するステップと
により、又は少なくともそれらのステップにより、好ましくはそれらのステップにより前記アメリカミズアブの幼虫を少なくとも１種の水性水溶性昆虫タンパク質組成物に変換することによって用意される、請求項６３に記載の方法。

【請求項65】

ステップｅ２）で用意される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物が、ステップｅ２）で用意される酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物の総量の重量を基準として少なくとも６０重量％、好ましくは少なくとも７０重量％、例えば７０重量％～１００重量％の程度まで水若しくは緩衝水溶液等の水溶液中に可溶である、請求項４４～６４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項66】

請求項４４～６５のいずれか一項に記載の方法により得られる、又は請求項４４～６５のいずれか一項に記載の方法により得ることができる、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項67】

昆虫タンパク質源が、請求項６２に記載のアメリカミズアブの幼虫である、及び／又は、昆虫タンパク質源が、請求項６４のステップ（ｉ）～（ｖｉ）に従って用意される、請求項６６に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項68】

酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物であって、前記タンパク質の総重量を基準として前記タンパク質の少なくとも５０重量％、好ましくは５５重量％～１００重量％、より好ましくは６５重量％～１００重量％、最も好ましくは７５重量％～１００重量％、例えば８０重量％～９５重量％又は８５重量％～１００重量％が１，０００ダルトン未満の分子量を有する、酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項69】

前記タンパク質の総重量を基準として前記タンパク質の少なくとも１０重量％、好ましくは１５重量％～６０重量％、より好ましくは２０重量％～５５重量％、最も好ましくは３０重量％～５０重量％、例えば２５重量％～４０重量％、又は３５重量％～５０重量％が遊離アミノ酸残基である、請求項６８に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項70】

前記酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の総重量を基準として、又は酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質の前記メイラード反応生成物の総重量を基準として少なくとも２．５重量％が遊離アルギニンであり、及び／又は少なくとも２．５重量％が遊離グルタミン酸であり、及び／又は少なくとも１．２５重量％が遊離ロイシンであり、及び／又は少なくとも２．２重量％が遊離リシンであり、好ましくは、少なくとも３．７重量％が遊離アルギニンであり、少なくとも３．０重量％が遊離グルタミン酸であり、少なくとも１．５重量％が遊離ロイシンであり、少なくとも２．６重量％が遊離リシンであり、好ましくは、４．７重量％未満が遊離アルギニンであり、及び／又は４．０重量％未満が遊離グルタミン酸であり、及び／又は３．０重量％未満が遊離ロイシンであり、及び／又は４．０重量％未満が遊離リシンであり、好ましくは４．５重量％未満が遊離アルギニンであり、３．７重量％未満が遊離グルタミン酸であり、２．７重量％未満が遊離ロイシンであり、３．６重量％未満が遊離リシンである、請求項６８又は６９に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項71】

前記水溶性タンパク質が、大腸菌については５０未満、例えば１０若しくは１０未満、及び／又はサルモネラ菌については１未満、例えば０、及び／又はセレウス菌については５００未満、例えば１５０未満若しくは１０未満、及び／又はウェルシュ菌については５００未満、例えば５０未満、好ましくは１０未満のｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数を含み、好ましくは、ｃｆｕ／ｇタンパク質での前記微生物数が、大腸菌については１０未満、及び／又はサルモネラ菌については０．１未満、好ましくはサルモネラ菌は存在せず、及び／又はセレウス菌については１０未満、及び／又はウェルシュ菌については１０未満であり、より好ましくは、前記水溶性タンパク質が、大腸菌については１０未満のｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数を含み、２５グラムの加水分解されたタンパク質が評価された場合サルモネラ菌は存在せず、セレウス菌については１０未満、及びウェルシュ菌については１０未満のｃｆｕ／ｇタンパク質での微生物数を含む、請求項６８～７０のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項72】

請求項４４～６５のいずれか一項に記載の方法により得られるか又は提供される、請求項６８～７１のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項73】

前記昆虫タンパク質源が、アメリカミズアブの幼虫のタンパク質である、請求項７２に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項74】

食味増強剤であって、ピロリン酸金属塩、２－メチルフラン、２－メチルピロール、ジメチルジスルフィドである食味増強剤、及び保湿剤のうちのいずれか１つ又は複数、又はそれらの任意の組合せをさらに含む、請求項６６～７３のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項75】

前記保湿剤が、プロピレングリコール、グリセリン、コーンシロップ及び無機塩から選択される、請求項７４に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物。

【請求項76】

ペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品若しくは動物飼料成分の製造、又は人間用食品若しくは人間用食物成分の製造、好ましくはネコ用飼料、イヌ用飼料又はエビ用飼料、例えばバナメイエビ用飼料の製造における、請求項６６～７５のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の、使用。

【請求項77】

前記ペットがイヌ若しくはネコ、好ましくはイヌである、又は前記動物がイヌ、ネコ若しくはエビ、好ましくはバナメイエビ（リトペニウス・バナメイ）である、請求項７６に記載の使用。

【請求項78】

製造されるペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分が、ペット、ネコ、イヌ、魚、エビ、例えばバナメイエビ、マグロ、タラ、養殖海洋生物、養殖淡水生物、ターボット、サケ、コイ、離乳期の動物、離乳後の動物用、好ましくは、ネコ、イヌ、エビ、例えばバナメイエビ用の、食物若しくは食物成分又は飼料若しくは飼料成分、請求項６２及び請求項６２に従属する範囲での請求項６３～７７のいずれか一項に記載の昆虫種とは異なる昆虫種、例えば受粉媒介者等、例えばこれらに限定されないがハチ又は生物防除に使用される益虫、例えばこれらに限定されないがテントウムシ、並びに例えばマルハナバチ、カ、シロアリ及びミバエ用の飼料のいずれかであるか；又は飼料若しくは食物香味剤又は飼料若しくは食物香味増強剤であり、或いは、製造される人間用食品又は製造される人間用食物成分が、ブロス、ソース、香味剤、食物香味剤、食物香味増強剤、スープ、肉代用製品若しくは成分、又は肉代替製品若しくは成分、例えば煮た牛肉、牛ブロス、豚ブロス、牛肉、調理肉の代用品のいずれかである、請求項７６又は７７に記載の使用。

【請求項79】

請求項６６～７５のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなる、動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分、好ましくは、ネコ用飼料製品若しくは成分、イヌ用飼料若しくは成分、又はエビ用飼料製品若しくは成分、例えばバナメイエビ用飼料製品若しくは成分、又は請求項６６～７５のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物を含むか又はそれらからなる、人間用食品若しくは人間用食物成分。

【請求項80】

前記ペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分が、ペット、ネコ、イヌ、魚、エビ、マグロ、タラ、養殖海洋生物、養殖淡水生物、ターボット、サケ、コイ、離乳期の動物、離乳後の動物、好ましくは、ネコ、イヌ又はエビ、例えばバナメイエビ用の食物若しくは飼料又は食物成分若しくは飼料成分のいずれかであるか、或いは、食物香味剤若しくは食物香味増強剤又は飼料香味剤若しくは飼料香味増強剤である、請求項７９に記載のペットフード製品、ペットフード成分、動物飼料製品又は動物飼料成分、又は請求項７９に記載の人間用食品若しくは人間用食物成分であり、前記人間用食品又は人間用食物成分が、ブロス、ソース、香味剤、食物香味剤又は食物香味増強剤、スープ、麺、バーガー、肉代用製品若しくは成分又は肉代替製品若しくは成分、例えば煮た牛肉、牛ブロス、麺、牛肉ベースのスープ、牛肉ベースのバーガー、ハンバーガー、豚ブロス、牛肉、調理肉の代用品のいずれかである、製品又は成分。

【請求項81】

請求項６６～７５のいずれか一項に記載の酵素加水分解された水溶性昆虫タンパク質のメイラード反応生成物の、酸化防止剤としての使用。

【請求項82】

請求項７９又は８０に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の、酸化防止剤としての使用。

【請求項83】

請求項７９又は８０に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の、健康増進能を有する成分としての使用。

【請求項84】

酸化防止能を有する、請求項７９又は８０に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分の使用。

【請求項85】

細胞の酸化的損傷の防止及び／又は抑制のための方法における使用のための、請求項７９又は８０に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分。

【請求項86】

活性酸素種により誘発される炎症誘発性応答の防止及び／又は抑制のための方法における使用のための、請求項７９又は８０に記載の動物飼料製品若しくは動物飼料成分又はペットフード製品若しくはペットフード成分。

【国際調査報告】