特表 2022-549328 細胞外小胞組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-11-24

(54)【発明の名称】細胞外小胞組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/12 20150101AFI20221116BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20221116BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20221116BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20221116BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20221116BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20221116BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221116BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221116BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20221116BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20221116BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20221116BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20221116BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20221116BHJP

   A61K 47/20 20060101ALI20221116BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20221116BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20221116BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20221116BHJP

   A61K 47/65 20170101ALI20221116BHJP

   A61K 31/7084 20060101ALI20221116BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20221116BHJP

   C12N 5/10 20060101ALN20221116BHJP

   C12N 15/113 20100101ALN20221116BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20221116BHJP

【ＦＩ】

A61K35/12

A61P3/06

A61P3/10

A61P7/04

A61P21/00

A61P27/02

A61P35/00

A61P43/00 105

A61P35/02

A61K47/02

A61K47/26

A61K9/08

A61K47/36

A61K47/20

A61K47/22

A61K47/42

A61K47/64

A61K47/65

A61K31/7084

A61K45/00

C12N5/10 ZNA

C12N15/113 Z

C07K14/705

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022518957

(86)(22)【出願日】2020-09-25

(85)【翻訳文提出日】2022-05-17

(86)【国際出願番号】 US2020052935

(87)【国際公開番号】W WO2021062317

(87)【国際公開日】2021-04-01

(31)【優先権主張番号】62/906,018

(32)【優先日】2019-09-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/906,485

(32)【優先日】2019-09-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520170759

【氏名又は名称】コディアック バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】オニール， コンリン

(72)【発明者】

【氏名】ブルドー， レイモンド

(72)【発明者】

【氏名】ハリソン， レーン

(72)【発明者】

【氏名】ドハーティ， マイク

(72)【発明者】

【氏名】ノイス， アーロン

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AB01

4B065CA23

4B065CA44

4C076AA12

4C076AA95

4C076BB01

4C076BB11

4C076BB21

4C076CC09

4C076CC10

4C076CC14

4C076CC21

4C076CC27

4C076DD23

4C076DD26

4C076DD26Z

4C076DD38

4C076DD56S

4C076DD59S

4C076DD67

4C076EE30

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF36

4C076FF51

4C076FF63

4C084AA19

4C084MA52

4C084MA55

4C084NA05

4C084ZA331

4C084ZA332

4C084ZA531

4C084ZA532

4C084ZA941

4C084ZA942

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC331

4C084ZC332

4C084ZC351

4C084ZC352

4C084ZC412

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA18

4C086MA03

4C086MA05

4C086MA52

4C086MA55

4C086NA03

4C086NA05

4C086ZA33

4C086ZA53

4C086ZA94

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC33

4C086ZC35

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB63

4C087MA52

4C087MA55

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZA33

4C087ZA53

4C087ZA94

4C087ZB21

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZC03

4C087ZC33

4C087ZC35

4H045AA10

4H045CA40

4H045DA50

4H045EA20

(57)【要約】

本開示は、足場タンパク質及び１つ以上（例えば、１、２、３、４、５またはそれ以上）の外因性の生物学的活性部分を含むことができる細胞外小胞（エキソソーム）の保存及び投与のための組成物に関する。また、本明細書において、エキソソームを産生するための方法、及びエキソソームを使用してある範囲の医学的障害を治療及び／または予防するための方法を提供する。本明細書で提供されるのは、細胞外小胞、例えば、エキソソームの保存及び投与のための組成物である。本開示の組成物は、ＥＶの凝集の減少、ＥＶの安定性の改善、ＥＶ構造の完全性の改善、ＥＶ上またはＥＶに含まれる操作されたタンパク質の安定性の改善、及び小分子薬物またはタンパク質などの受動的にロードされたかまたは複合体化された材料の安定性の改善を提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

医薬組成物であって、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）糖類と；
（ｃ）塩化ナトリウムと；
（ｄ）リン酸カリウムと；
（ｅ）リン酸ナトリウムと、を含み、
約７．２のｐＨの溶液中にある、前記組成物。

【請求項2】

前記細胞外小胞が、エキソソームである、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記組成物が、４℃の温度で、少なくとも約４時間、少なくとも約５時間、少なくとも約６時間、少なくとも約７時間、少なくとも約８時間、少なくとも約９時間、少なくとも約１０時間、少なくとも約１１時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１５時間、少なくとも約２０時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、または少なくとも約７日保存され得る、請求項１または請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

前記組成物を凍結及び解凍することができ、前記解凍された組成物が、約７．２のｐＨを有する、請求項１～３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項5】

前記組成物が、７．０、７．１、７．２、７．３、または７．４のｐＨを有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項6】

前記組成物が、７．２のｐＨを有する、請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項7】

ｐＩが約１～約６．５の範囲にある、請求項１～６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項8】

前記組成物が、（ｉ）凝集の減少、（ｉｉ）前記細胞外小胞（ＥＶ）の安定性の改善、（ｉｉｉ）前記ＥＶ構造の完全性の改善、（ｉｖ）前記ＥＶ上または前記ＥＶ内に含まれる操作されたタンパク質の安定性の改善を有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項9】

前記糖類が、単糖、二糖、三糖、オリゴ糖、多糖、糖アルコール、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項10】

前記糖類が、約１８０．００ｇ／モル～約３８０．００ｇ／モルの分子量を有する、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項11】

前記糖類が、ラクトース、グルコース、スクロース、トレハロース、及び／またはそれらの組み合わせを含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項12】

前記糖類が、約９０．００ｇ／モル～約１９０．００ｇ／モルの分子量を有する糖アルコールである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項13】

前記糖アルコールが、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、及び／またはそれらの組み合わせを含む、請求項９～１２のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項14】

前記糖類が、スクロースまたはトレハロースである、請求項１～１３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項15】

前記糖類が、約５％ｗ／ｖの濃度で前記組成物中に存在する、請求項１～１４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項16】

（ｉ）細胞外小胞及び（ｉｉ）約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースまたはトレハロースである糖類を含む、医薬組成物。

【請求項17】

前記組成物が、１％ｗ／ｖ～４％ｗ／ｖの濃度でスクロースまたはトレハロースを含む参照組成物と比較して、改善された安定性を有する、請求項１６に記載の組成物。

【請求項18】

前記組成物が、約６ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約１０ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％の導電率を有する、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項19】

前記導電率が、６ｍＳ／ｃｍ～約７ｍＳ／ｃｍ、約７ｍＳ／ｃｍ～約８ｍＳ／ｃｍ、約８ｍＳ／ｃｍ～約９ｍＳ／ｃｍ、または約９ｍＳ／ｃｍ～約１０ｍＳ／ｃｍである、請求項１８に記載の組成物。

【請求項20】

前記導電率が、約６ｍＳ／ｃｍ、約７ｍＳ／ｃｍ、約８ｍＳ／ｃｍ、約９ｍＳ／ｃｍ、または約１０ｍＳ／ｃｍである、請求項１８または１９に記載の組成物。

【請求項21】

塩化ナトリウムをさらに含む、請求項１６～２０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項22】

前記塩化ナトリウムが、約１０ｍＭ～約１３４ｍＭの濃度で前記組成物中に存在する、請求項１～１５、または１６～２１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項23】

前記塩化ナトリウムの前記濃度が、約１０ｍＭ～約１３０ｍＭ、約２０ｍＭ～約１２０ｍＭ、約３０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約４０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４５ｍＭ～約９５ｍＭ、約４５ｍＭ～約８０ｍＭ、約４５ｍＭ～約７０ｍＭ、約４５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、または約５１ｍＭ～約５４ｍＭである、請求項２２に記載の組成物。

【請求項24】

前記塩化ナトリウムの前記濃度が、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、または約１００ｍＭである、請求項２２または２３に記載の組成物。

【請求項25】

前記塩化ナトリウムの前記濃度が、約３９ｍＭ、約４０ｍＭ、約４１ｍＭ、約４２ｍＭ、約４３ｍＭ、約４４ｍＭ、約４５ｍＭ、約４６ｍＭ、約４７ｍＭ、約４８ｍＭ、約４９ｍＭ、または約５０ｍＭである、請求項２２～２４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項26】

前記組成物が、リン酸緩衝液をさらに含む、請求項１６～２５のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項27】

前記リン酸緩衝液が、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二カリウム、及び／またはそれらの組み合わせを含む少なくとも１つのリン酸化合物を含む、請求項２６に記載の組成物。

【請求項28】

前記リン酸緩衝液が、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを約１：約２、約１：約３、約１：約４、または約１：約５の比率で含む、請求項２７に記載の組成物。

【請求項29】

前記リン酸緩衝液が、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを約１：約３の比率で含む、請求項２７または２８に記載の組成物。

【請求項30】

前記リン酸緩衝液が、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを約１：約２の比率で含む、請求項２７～２９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項31】

（ｉ）細胞外小胞と、（ｉｉ）リン酸カリウムと、（ｉｉｉ）リン酸ナトリウムと、を含む溶液を含む医薬組成物であって、前記リン酸カリウム及び前記リン酸ナトリウムの比率が、約１～約３または約１～約２である、前記組成物。

【請求項32】

前記溶液が７．１～７．３のｐＨを有する、請求項１６～３１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項33】

前記リン酸カリウムが、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約２ｍＭ～約１９ｍＭ、約３ｍＭ～約１８ｍＭ、約４ｍＭ～約１７ｍＭ、約５ｍＭ～約１６ｍＭ、または約５ｍＭ～約１５ｍＭの濃度で前記組成物中に存在する、請求項１～１５または２７～３２のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項34】

前記リン酸カリウムの前記濃度が、約４．５ｍＭ、約４．６ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．８ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．２ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．４ｍＭ、または約５．５ｍＭである、請求項３３に記載の組成物。

【請求項35】

前記リン酸カリウムの前記濃度が５．１５ｍＭである、請求項３３または３４に記載の組成物。

【請求項36】

前記リン酸カリウムの前記濃度が、約１５．０ｍＭ、約１５．１ｍＭ、約１５．２ｍＭ、約１５．３ｍＭ、約１５．４ｍＭ、約１５．５ｍＭ、約１５．６ｍＭ、約１５．７ｍＭ、約１５．８ｍＭ、約１５．９ｍＭ、約１６．０、約１６．１ｍＭ、約１６．２ｍＭ、約１６．３ｍＭ、約１６．４ｍＭ、または約１６．５ｍＭである、請求項３３に記載の組成物。

【請求項37】

前記リン酸カリウムの前記濃度が、１５．４ｍＭである、請求項３３または３６に記載の組成物。

【請求項38】

前記リン酸カリウムが一塩基性リン酸カリウムである、請求項１～１５または２７～３７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項39】

前記リン酸ナトリウムが、約１０ｍＭ～約３０、約１１ｍＭ～約２９ｍＭ、約１２ｍＭ～約２８ｍＭ、約１３ｍＭ～約２７ｍＭ、または約１４ｍＭ～約２６ｍＭの濃度で前記組成物中に存在する、請求項１～１５または２７～３８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項40】

前記リン酸ナトリウムが、約１４．５ｍＭ、約１４．６ｍＭ、約１４．７ｍＭ、約１４．８ｍＭ、約１４．９ｍＭ、約１５．０ｍＭ、約１５．１ｍＭ、約１５．２ｍＭ、約１５．３ｍＭ、約１５．４ｍＭ、または約１５．５ｍＭの濃度で前記組成物中に存在する、請求項３９に記載の組成物。

【請求項41】

前記リン酸ナトリウムの前記濃度が、１４．９ｍＭである、請求項３９または４０に記載の組成物。

【請求項42】

前記リン酸ナトリウムが、約２６．５ｍＭ、約２６．６ｍＭ、約２６．７ｍＭ、約２６．８ｍＭ、約２６．９ｍＭ、約２７．０ｍＭ、約２７．１ｍＭ、約２７．２ｍＭ、約２７．３ｍＭ、約２７．４ｍＭ、または約２７．５ｍＭの濃度で前記組成物中に存在する、請求項３９に記載の組成物。

【請求項43】

前記リン酸ナトリウムの前記濃度が、２７．１ｍＭである、請求項３９または４２に記載の組成物。

【請求項44】

前記リン酸ナトリウムが、二塩基性リン酸ナトリウム七水和物である、請求項１～１５または２７～４３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項45】

抗酸化剤をさらに含む、請求項１～４４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項46】

前記抗酸化剤が、Ｄ－メチオニン、Ｌ－メチオニン、アスコルビン酸、エリソルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、チオグリセロール、システイン、アセチルシステイン、シスチン、ジチオエリスレイトール、グルタチオン、トコフェロール、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、重硫酸ナトリウム、ジチオン酸ナトリウム、Α－トコフェロール、γ－トコフェロール、没食子酸プロピル、パルミチン酸アスコルビル、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ尿素、チオ硫酸ナトリウム、没食子酸プロピル、及びチオグリコール酸ナトリウムを含む、請求項４５に記載の組成物。

【請求項47】

前記組成物が、凍結乾燥されていない、請求項１～４６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項48】

前記組成物がキレート剤を含まない、請求項１～４７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項49】

前記組成物が、アルブミンを含まない、請求項１～４８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項50】

ａ．約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースと；
ｂ．約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
ｃ．約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
ｄ．約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、
ｐＨ７．２の溶液中にあり、導電率７．２３ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である、請求項１～４９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項51】

ａ．約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースと；
ｂ．約４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
ｃ．約１５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
ｄ．約２７ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、
ｐＨ７．２の溶液中にあり、導電率８．８ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である、請求項１～４９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項52】

前記組成物を、約－２０℃～約－８０℃の温度で保存することができ、前記細胞外小胞の安定性は、低下しない、請求項１～５１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項53】

前記組成物が、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１年間、約２年間、約３年間、または約４年間保存できる、請求項５２に記載の組成物。

【請求項54】

前記細胞外小胞がエキソソームである、請求項１６～５３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項55】

前記細胞外小胞が、足場タンパク質をさらに含む、請求項１～１５または１６～５４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項56】

前記足場タンパク質が、足場Ｘである、請求項５５に記載の組成物。

【請求項57】

ペイロードが、前記足場タンパク質に連結されている、請求項５５または５６に記載の組成物。

【請求項58】

前記ペイロードが、リンカーによって、前記足場タンパク質に連結されている、請求項５７に記載の組成物。

【請求項59】

前記リンカーが、ポリペプチドである、請求項５８に記載の組成物。

【請求項60】

前記リンカーが、非ポリペプチド部分である、請求項５８に記載の組成物。

【請求項61】

足場Ｘが、前記細胞外小胞の外面に前記ペイロードを固定することができる足場タンパク質である、請求項５６～６０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項62】

前記足場タンパク質が、プロスタグランジンＦ２受容体の負の調節因子（ＰＴＧＦＲＮタンパク質）を含む、請求項５６～６１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項63】

前記足場タンパク質が、前記ＰＴＧＦＲＮタンパク質またはその断片を含む、請求項５５～６２のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項64】

前記足場タンパク質が、配列番号１～７または３３のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、請求項５５～６２に記載の組成物。

【請求項65】

前記足場タンパク質が、配列番号１と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５５～６４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項66】

前記細胞外小胞が、生物学的活性部分を含む、請求項１～６７に記載の組成物。

【請求項67】

前記足場タンパク質が、前記生物学的活性部分に融合されている、請求項５５～６８に記載の組成物。

【請求項68】

前記足場タンパク質が、前記生物学的活性部分に融合されていない、請求項５５～６８に記載の組成物。

【請求項69】

前記生物学的活性部分が、ＳＴＩＮＧアゴニストを含む、請求項６８～７１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項70】

前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、ＣＬ６５６を含む、請求項７１に記載の組成物。

【請求項71】

前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、ＣＬ６５６の異性体Ａ、異性体Ｂ、異性体Ｃ、または異性体Ｄである、請求項７２に記載の組成物。

【請求項72】

前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、前記足場タンパク質に融合されていない、請求項７１～７３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項73】

前記生物学的活性部分が、ＩＬ－１２、ＣＤ４０Ｌ、ＦＬＴ３Ｌ、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項６８～７０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項74】

前記生物学的活性部分が、前記足場タンパク質に融合されている、請求項７５に記載の組成物。

【請求項75】

前記組成物が、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、皮内、経皮、直腸内、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、筋肉内経路または吸入剤によって投与され得る、請求項１～７６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項76】

（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）糖類と；
（ｃ）塩化ナトリウムと；
（ｄ）リン酸カリウムと；
（ｅ）リン酸ナトリウムと、
を組み合わせることを含む、請求項１～７７のいずれか１項に記載の医薬組成物を調製する方法。

【請求項77】

前記細胞外小胞がエキソソームである、請求項７８に記載の方法。

【請求項78】

細胞外小胞及び糖類を組み合わせることを含む、医薬組成物を調製する方法であって、前記糖類は、約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースまたはトレハロースであり、前記組成物は、１～４％の濃度のスクロースまたはトレハロースを含む組成物と比較して、改善された安定性を呈する、前記方法。

【請求項79】

細胞外小胞とリン酸化合物とを組み合わせることを含む、医薬組成物を調製する方法であって、前記リン酸化合物は、７．１～７．３のｐＨを生じさせる比率でリン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを含む、前記方法。

【請求項80】

前記組成物の導電率がさらに調整される、請求項７８～８１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項81】

前記組成物の前記導電率が、約７．１～約７．３ｍＳ／ｃｍである、請求項９７に記載の方法。

【請求項82】

前記導電率が、７．２３ｍＳ／ｃｍである、請求項８３に記載の方法。

【請求項83】

対象に請求項１～７７のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、疾患または状態の治療を、それを必要とする前記対象において行う方法。

【請求項84】

前記疾患または状態が、がん、線維症、血友病、糖尿病、成長因子欠乏症、眼疾患、ポンペ病、リソソーム蓄積障害、ムコビシドーシス、嚢胞性線維症、デュシェンヌ型及びベッカー型筋ジストロフィー、トランスチレチンアミロイドーシス、血友病Ａ、血友病Ｂ、アデノシンデアミナーゼ欠損症、リーバー先天性黒内障、Ｘ連鎖副腎白血病、異染性白質ジストロフィー、ＯＴＣ欠損症、糖原病１Ａ、クリグラー－ナジャー症候群、原発性シュウ酸過剰尿１型、急性間欠性ポルフィリン症、フェニルケトン尿、家族性高コレステロール血症、ムコ多糖症タイプＶＩ、α１アンチトリプシン欠損症、及び高コレステロール血症である、請求項８５に記載の方法。

【請求項85】

前記がんが、膀胱癌、子宮頸癌、腎細胞癌、精巣癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頸部癌、卵巣癌、リンパ腫、肝臓癌、神経膠芽腫、黒色腫、骨髄腫、白血病、膵臓癌、またはそれらの組み合わせである、請求項８６に記載の方法。

【請求項86】

それを必要とする対象の疾患または状態を治療するための、請求項１～７７のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項87】

疾患または状態を治療するための薬剤の製造における、請求項１～７７のいずれか１項に記載の組成物の使用。

【請求項88】

（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約４％ｗ／ｖ～約６％ｗ／ｖの濃度、例えば５％ｗ／ｖのスクロースと；
（ｃ）３０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭ～約２５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭ～約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約６．７～約７．７である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項89】

（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースと；
（ｃ）約４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約１５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約２７ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約７．２である、請求項８８に記載の組成物。

【請求項90】

前記細胞外小胞が、ＳＴＩＮＧアゴニストを含む、請求項８８または８９に記載の組成物。

【請求項91】

（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約３００ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）少なくとも約１ｍＭ～少なくとも約２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと；を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約６．７～約７．７である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項92】

（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約７．２である、請求項９１に記載の組成物。

【請求項93】

（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）少なくとも約１％～少なくとも約１０％の濃度のスクロースと；
（ｃ）少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）少なくとも約１ｍＭ～少なくとも約２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと；を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約６．７～約７．７である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項94】

（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約７．２である、請求項９３に記載の組成物。

【請求項95】

前記細胞外小胞が、ＩＬ－１２部分を含む、請求項９１～９４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項96】

前記ＩＬ－１２部分が、配列番号１１、１２または１３に示されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項９５に記載の組成物。

【請求項97】

前記ＩＬ－１２部分が、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項９５または９６に記載の組成物。

【請求項98】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞と；
（ｂ）スクロースと；
（ｃ）塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約７．２であり；
前記スクロースは、約７３ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４６ｍＭ、または約１５０ｍＭから選択される濃度であり；
前記塩化ナトリウムは、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４６ｍＭ、及び約１５０ｍＭから選択される濃度である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項99】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞と；
（ｂ）スクロースと；
（ｃ）塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約７．２であり；
前記スクロースは、約２．５％、約２．６％、約２．７％、約２．８％、約２．９％、約３．０％、約３．１％、約３．２％、約３．３％、約３．４％、約３．５％、約３．６％、約３．７％、約３．８％、約３．９％、約４．０％、約４．１％、約４．２％、約４．３％、約４．４％、約４．５％、約４．６％、約４．７％、約４．８％、約４．９％、及び約５．０％から選択される濃度であり；
前記塩化ナトリウムは、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４６ｍＭ、及び約１５０ｍＭから選択される濃度である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項100】

前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、請求項９８または９９に記載の組成物。

【請求項101】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、前記細胞外小胞と；
（ｂ）約７３ｍＭ～約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約７．２である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項102】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、前記細胞外小胞と；
（ｂ）約２．５％～約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約７．２である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項103】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、前記細胞外小胞と；
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約７．２である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項104】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、前記細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約７．２である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項105】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、前記細胞外小胞と；
（ｂ）約２．５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約７．２である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項106】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、前記細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約１００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約７．２である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項107】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、前記細胞外小胞と；
（ｂ）約２．５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約１００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）前記組成物のｐＨが、約７．２である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項108】

前記ＡＳＯが、配列番号１４４に示される核酸配列を含む、請求項９８～１０７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項109】

前記ＡＳＯが、配列番号１４５に示される核酸配列を含む、請求項９８～１０７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項110】

前記ＡＳＯが、配列番号１９３に示される核酸配列を含む、請求項９８～１０７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項111】

前記ＡＳＯが、配列番号１８５に示される核酸配列を含む、請求項９８～１０７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項112】

前記ＡＳＯが、リンカーによって前記細胞外小胞に会合する、請求項９８～１１１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項113】

前記リンカーが、コレステロール、トコフェロール、脂肪酸、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１１２に記載の組成物。

【請求項114】

前記リンカーが、開裂可能なリンカーである、請求項１１２または１１３に記載の組成物。

【請求項115】

前記リンカーが、開裂可能なリンカーである、請求項５８～６０のいずれか１項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

ＥＦＳ－ＷＥＢにより電子的に提出された配列表への参照
本出願中に提出される電子的に提出された配列表（名称：４０００＿０６９ＰＣ０２＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５；サイズ：６８，９１１バイト；及び作成日：２０２０年９月２４日）の内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0002】

関連出願の相互参照
このＰＣＴ出願は、２０１９年９月２５日に出願された米国仮出願第６２／９０６，０１８号及び２０１９年９月２６日に出願された同６２／９０６，４８５号の優先権を主張し、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0003】

開示の分野
本開示は、１つ以上の外因性の生物学的活性部分を含むことができる細胞外小胞（ＥＶ）、例えば、エキソソームの保存及び投与のための組成物、ならびにそのような組成物を調製及び使用する方法に関する。

【背景技術】

【0004】

ＥＶ、例えば、エキソソームは、細胞間コミュニケーションの重要な媒介因子である。それらはまた、がんなどの多くの疾患の診断及び予後における重要なバイオマーカーである。薬物送達ビヒクルとして、ＥＶは、多くの治療分野における新規治療モディティとして、従来の薬物送達方法（例えば、ペプチド免疫、ＤＮＡワクチン）よりも利点をもたらす。研究分野の１つは、ＥＶの有効性を損なうことなく、患者投与前の長期保存期間中にＥＶを安定的に含むことができる組成物の製剤である。既知の製剤には、欠点がある。例えば、ある特定の製剤、例えば、ＴＲＩＳ緩衝液を含む製剤は、様々な温度（すなわち、製剤が凍結または解凍されたとき）において、ｐＨの変動を防ぐことはない。ｐＨのわずかな変動でさえ、ＥＶの凝集を誘導し、それによってＥＶの機能を低下させ得るかまたは妨げ得る。さらに、既知の組成物には、外因的に添加されたポリペプチド、例えば、ヒト血清アルブミン、またはキレート剤などの外因性成分が含まれる。

【0005】

したがって、既知の製剤の欠点を克服し、したがってＥＶベースの技術の治療的使用及び他の用途をよりよく可能にすることができる、ＥＶの保存及び投与のための有効な組成物が必要とされている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0006】

本明細書で提供されるのは、細胞外小胞、例えば、エキソソームの保存及び投与のための組成物である。本開示の組成物は、ＥＶの凝集の減少、ＥＶの安定性の改善、ＥＶ構造の完全性の改善、ＥＶ上またはＥＶに含まれる操作されたタンパク質の安定性の改善、及び小分子薬物またはタンパク質などの受動的にロードされたかまたは複合体化された材料の安定性の改善を提供する。そのような組成物は、組成物中に含まれるＥＶの安定性を損なうことなく、凍結され、様々な時間長にわたってある範囲の温度で保存され、解凍され得る。本開示のＥＶは、生物学的活性部分を含むことができ、その結果、本組成物は、ＥＶ、例えば、本明細書に開示される生物学的活性部分を含むように改変されたＥＶの投与が対象に対して有益な効果を有する複数の疾患または状態を治療するために使用することができる。

【0007】

いくつかの態様では、本開示は、（ａ）細胞外小胞；（ｂ）糖類；（ｃ）塩化ナトリウム；（ｄ）リン酸カリウム；及び（ｅ）リン酸ナトリウムを含む医薬組成物を提供し、本組成物は、約７．２のｐＨの溶液中にある。いくつかの態様では、細胞外小胞は、エキソソームである。

【0008】

いくつかの態様では、組成物は、４℃の温度で、少なくとも約４時間、少なくとも約５時間、少なくとも約６時間、少なくとも約７時間、少なくとも約８時間、少なくとも約９時間、少なくとも約１０時間、少なくとも約１１時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１５時間、少なくとも約２０時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、または少なくとも約７日保存され得る。

【0009】

いくつかの態様では、組成物は、凍結及び解凍することができ、解凍された組成物は、約７．２のｐＨを有する。いくつかの態様では、組成物は、７．０、７．１、７．２、７．３、または７．４のｐＨを有する。

【0010】

いくつかの態様では、ｐＩは約１～約６．５の範囲にある。

【0011】

いくつかの態様では、組成物は、（ｉ）凝集の減少、（ｉｉ）ＥＶの安定性の改善、（ｉｉｉ）ＥＶ構造の完全性の改善、（ｉｖ）ＥＶ上またはＥＶに含まれる操作されたタンパク質の安定性の改善、及び（ｖ）小分子薬物またはタンパク質などの受動的にロードされたかまたは複合体化された材料の安定性の改善を有する。

【0012】

いくつかの態様では、糖類は、単糖、二糖、三糖、オリゴ糖、多糖、糖アルコール、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、糖類は、約３４０．００ｇ／モル～約３８０．００ｇ／モルの分子量を有する。いくつかの態様では、糖類は、ラクトース、グルコース、スクロース、トレハロース、デキストロース、及び／またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、糖類は、約９０．００ｇ／モル～約１９０．００ｇ／モルの分子量を有する糖アルコールである。いくつかの態様では、糖アルコールは、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、及び／またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、糖類は、スクロースまたはトレハロースである。いくつかの態様では、糖類は、約５％ｗ／ｖの濃度で組成物中に存在する。

【0013】

いくつかの態様では、本開示は、（ｉ）細胞外小胞及び（ｉｉ）約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースまたはトレハロースである糖類含む医薬組成物を提供する。いくつかの態様では、組成物は、１％ｗ／ｖ～４％ｗ／ｖの濃度でスクロースまたはトレハロースを含む参照組成物と比較して、改善された安定性を有する。

【0014】

いくつかの態様では、組成物は、約６ｍＳ／ｃｍ～約１０ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。いくつかの態様では、導電率は、６ｍＳ／ｃｍ～約７ｍＳ／ｃｍ、約７ｍＳ／ｃｍ～約８ｍＳ／ｃｍ、約８ｍＳ／ｃｍ～約９ｍＳ／ｃｍ、または約９ｍＳ／ｃｍ～約１０ｍＳ／ｃｍである。いくつかの態様では、導電率は、約６ｍＳ／ｃｍ、約７ｍＳ／ｃｍ、約８ｍＳ／ｃｍ、約９ｍＳ／ｃｍ、または約１０ｍＳ／ｃｍである。

【0015】

いくつかの態様では、組成物は、塩化ナトリウムをさらに含む。いくつかの態様では、塩化ナトリウムは、約１０ｍＭ～約１３４ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭ～約１３０ｍＭ、約２０ｍＭ～約１２０ｍＭ、約３０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約４０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４５ｍＭ～約９５ｍＭ、約４５ｍＭ～約８０ｍＭ、約４５ｍＭ～約７０ｍＭ、約４５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、または約５１ｍＭ～約５４ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、または約１００ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約３９ｍＭ、約４０ｍＭ、約４１ｍＭ、約４２ｍＭ、約４３ｍＭ、約４４ｍＭ、約４５ｍＭ、約４６ｍＭ、約４７ｍＭ、約４８ｍＭ、約４９ｍＭ、または約５０ｍＭである。

【0016】

いくつかの態様では、組成物は、リン酸緩衝液をさらに含む。いくつかの態様では、リン酸緩衝液は、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二カリウム、及び／またはそれらの組み合わせを含む少なくとも１つのリン酸化合物を含む。

【0017】

いくつかの態様では、リン酸緩衝液は、約１：約２、約１：約３、約１：約４、または約１：約５の比率でリン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを含む。いくつかの態様では、リン酸緩衝液は、約１：約３の比率でリン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを含む。いくつかの態様では、リン酸緩衝液は、約１：約２の比率でリン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを含む。

【0018】

いくつかの態様では、本開示は、（ｉ）細胞外小胞、（ｉｉ）リン酸カリウム、及び（ｉｉｉ）リン酸ナトリウムを含む溶液を含む医薬組成物を提供し、ここで、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムの比率は、約１～約３または約１～約２である。

【0019】

いくつかの態様では、溶液は、７．１～７．３のｐＨを有する。

【0020】

いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約２ｍＭ～約１９ｍＭ、約３ｍＭ～約１８ｍＭ、約４ｍＭ～約１７ｍＭ、約５ｍＭ～約１６ｍＭ、または約５ｍＭ～約１５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。

【0021】

いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約４．５ｍＭ、約４．６ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．８ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．２ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．４ｍＭ、または約５．５ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、５．１５ｍＭである。

【0022】

いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１５．０ｍＭ、約１５．１ｍＭ、約１５．２ｍＭ、約１５．３ｍＭ、約１５．４ｍＭ、約１５．５ｍＭ、約１５．６ｍＭ、約１５．７ｍＭ、約１５．８ｍＭ、約１５．９ｍＭ、約１６．０、約１６．１ｍＭ、約１６．２ｍＭ、約１６．３ｍＭ、約１６．４ｍＭ、または約１６．５ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、１５．４ｍＭである。

【0023】

いくつかの態様では、リン酸カリウムは、一塩基性リン酸カリウムである。

【0024】

いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１０ｍＭ～約３０、約１１ｍＭ～約２９ｍＭ、約１２ｍＭ～約２８ｍＭ、約１３ｍＭ～約２７ｍＭ、または約１４ｍＭ～約２６ｍＭの濃度で組成物中に存在する。

【0025】

いくつかの態様では、請求項３９に記載の組成物であって、リン酸ナトリウムが、約１４．５ｍＭ、約１４．６ｍＭ、約１４．７ｍＭ、約１４．８ｍＭ、約１４．９ｍＭ、約１５．０ｍＭ、約１５．１ｍＭ、約１５．２ｍＭ、約１５．３ｍＭ、約１５．４ｍＭ、または約１５．５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。

【0026】

いくつかの態様では、リン酸ナトリウムの濃度は、１４．９ｍＭである。

【0027】

いくつかの態様では、リン酸ナトリウムが、約２６．５ｍＭ、約２６．６ｍＭ、約２６．７ｍＭ、約２６．８ｍＭ、約２６．９ｍＭ、約２７．０ｍＭ、約２７．１ｍＭ、約２７．２ｍＭ、約２７．３ｍＭ、約２７．４ｍＭ、または約２７．５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムの濃度は、２７．１ｍＭである。

【0028】

いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、二塩基性リン酸ナトリウム七水和物である。

【0029】

いくつかの態様では、組成物は、抗酸化剤をさらに含む。いくつかの態様では、抗酸化剤は、Ｄ－メチオニン、Ｌ－メチオニン、アスコルビン酸、エリソルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、チオグリセロール、システイン、アセチルシステイン、シスチン、ジチオエリスレイトール（ｄｉｔｈｉｏｅｒｙｔｈｒｅｉｔｏｌ）、グルタチオン、トコフェロール、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、重硫酸ナトリウム、ジチオン酸ナトリウム、Α－トコフェロール、γ－トコフェロール、没食子酸プロピル、パルミチン酸アスコルビル、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ尿素、チオ硫酸ナトリウム、没食子酸プロピル、及びチオグリコール酸ナトリウムを含む。

【0030】

いくつかの態様では、組成物は凍結乾燥されていない。

【0031】

いくつかの態様では、組成物はキレート剤を含まない。

【0032】

いくつかの態様では、組成物は、アルブミンを含まない。

【0033】

いくつかの態様では、本開示は、（ａ）約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；（ｂ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウム；（ｃ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウム；及び（ｄ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む組成物を提供し、組成物は、ｐＨ７．２及び導電率８．８ｍＳ／ｃｍの溶液中にある。

【0034】

いくつかの態様では、本開示は、（ａ）約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；（ｂ）約４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウム；（ｃ）約１５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウム；及び（ｄ）約２７ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む組成物を提供し、組成物は、ｐＨ７．２及び導電率７．２ｍＳ／ｃｍの溶液中にある。

【0035】

いくつかの態様では、組成物は、約－２０℃～約－８０℃の温度で保存することができ、細胞外小胞の安定性は低下しない。いくつかの態様では、組成物は、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間保存できる。

【0036】

いくつかの態様では、細胞外小胞は、エキソソームである。

【0037】

いくつかの態様では、細胞外小胞は、足場タンパク質をさらに含む。いくつかの態様では、足場タンパク質は足場Ｘである。いくつかの態様では、ペイロードは、足場タンパク質に連結されている。いくつかの態様では、ペイロードは、リンカーによって足場タンパク質に連結されている。いくつかの態様では、リンカーは、ポリペプチドである。いくつかの態様では、リンカーは、非ポリペプチド部分である。いくつかの態様では、足場Ｘは、細胞外小胞の外面にペイロードを固定することができる足場タンパク質である。

【0038】

いくつかの態様では、足場タンパク質は、プロスタグランジンＦ２受容体の負の調節因子（ＰＴＧＦＲＮタンパク質）を含む。

【0039】

いくつかの態様では、足場タンパク質は、ＰＴＧＦＲＮタンパク質またはその断片を含む。いくつかの態様では、足場タンパク質は、配列番号１～７及び３３のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、足場タンパク質は、配列番号１と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0040】

いくつかの態様では、細胞外小胞は、生物学的活性部分を含む。いくつかの態様では、足場タンパク質は、生物学的活性部分に融合されている。いくつかの態様では、足場タンパク質は、生物学的活性部分に融合されていない。

【0041】

いくつかの態様では、生物学的活性部分は、ＳＴＩＮＧアゴニストを含む。いくつかの態様では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６５６を含む。いくつかの態様では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６５６の異性体Ａ、異性体Ｂ、異性体Ｃ、または異性体Ｄである。いくつかの態様では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、足場タンパク質に融合されていない。

【0042】

いくつかの態様では、生物学的活性部分は、ＩＬ－１２である。いくつかの態様では、生物学的活性部分は、ＣＤ４０Ｌである。他の態様では、生物学的活性部分は、ＦＴＬ３Ｌである。

【0043】

いくつかの態様では、生物学的活性部分は、足場タンパク質に融合されている。

【0044】

いくつかの態様では、組成物は、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、皮内、経皮、直腸内、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、筋肉内経路によってまたは吸入剤として投与され得る。

【0045】

いくつかの態様では、本開示は、（ａ）細胞外小胞；（ｂ）糖類；（ｃ）塩化ナトリウム；（ｄ）リン酸カリウム；及び（ｅ）リン酸ナトリウムを組み合わせることを含む医薬組成物を調製する方法を提供する。いくつかの態様では、細胞外小胞は、エキソソームである。

【0046】

いくつかの態様では、本開示は、細胞外小胞及び糖類を組み合わせることを含む医薬組成物を調製する方法を提供し、ここで、糖類は、約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースまたはトレハロースであり、組成物は、１～４％の濃度のスクロースまたはトレハロースを含む組成物と比較して、改善された安定性を呈する。

【0047】

いくつかの態様では、本開示は、細胞外小胞とリン酸化合物とを組み合わせることを含む医薬組成物を調製する方法を提供し、ここで、リン酸化合物は、７．１～７．３のｐＨを生じさせる比率でリン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを含む。

【0048】

いくつかの態様では、組成物の導電率は調節され得る。いくつかの態様では、組成物の導電率は、約７．１～約７．３ｍＳ／ｃｍである。いくつかの態様では、本開示は、導電率が７．２３ｍＳ／ｃｍであることを提供する。

【0049】

いくつかの態様では、本開示は、本明細書に開示される組成物を対象に投与することを含む、疾患または状態の治療を、それを必要とする対象において行う方法を提供する。いくつかの態様では、疾患または状態は、がん、線維症、血友病、糖尿病、成長因子欠乏症、眼疾患、ポンペ病、リソソーム蓄積障害、ムコビシドーシス、嚢胞性線維症、デュシェンヌ型及びベッカー型筋ジストロフィー、トランスチレチンアミロイドーシス、血友病Ａ、血友病Ｂ、アデノシンデアミナーゼ欠損症、リーバー先天性黒内障、Ｘ連鎖副腎白血病、異染性白質ジストロフィー、ＯＴＣ欠損症、糖原病１Ａ、クリグラー－ナジャー症候群、原発性高シュウ酸尿症Ｉ型、急性間欠性ポルフィリン症、フェニルケトン尿、家族性高コレステロール血症、ムコ多糖症タイプＶＩ、α１アンチトリプシン欠乏症、及び高コレステロール血症である。いくつかの態様では、がんは、膀胱癌、子宮頸癌、腎細胞癌、精巣癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頸部癌、卵巣癌、リンパ腫、肝臓癌、神経膠芽腫、黒色腫、骨髄腫、白血病、膵臓癌、またはそれらの組み合わせである。

【0050】

いくつかの態様では、本開示は、疾患または状態の治療をそれを必要とする対象において行うための医薬組成物を提供する。

【0051】

いくつかの態様では、本開示は、疾患または状態を治療するための薬剤の製造における本明細書に開示される組成物の使用を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0052】

【図1A】本開示の一態様による、タンパク質Ｘ及び生物学的活性部分を含むエキソソームの概略図である。表面タンパク質ＣＤ９、ＣＤ８１、及びＴＳＧ１０１、及びスフィンゴミエリン脂質ドメインが示されている。エキソソーム成分のｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、及び代謝物がさらに示されている。

【図1B】本開示の一態様による、天然（黒い四角）及びタンパク質Ｘ含有エキソソーム（円）のゼータ電位（ｍＶ）を示すグラフである。Ｘ軸は、ｐＨである。Ｙ軸は、ゼータ電位（ｍＶ）である。

【図2A】本開示の一態様による、異なるｐＨ値での天然エキソソーム（黒い四角）及びタンパク質Ｘエキソソーム（円）のＺ平均（ｎｍ）を示すグラフである。Ｘ軸は、ｐＨである。Ｙ軸は、Ｚ平均（ｎｍ）である。

【図2B】本開示の一態様による、ＥＶの安定なｐＨ範囲（角が丸い四角）を示す概略図である。示されている安定したｐＨ範囲は７～８である。矢印は、ｐＨが低すぎる（ＥＶ凝集）または高すぎる（脂質加水分解）場合のＥＶのｐＨ変動の結果を示している。

【図2C】本開示の一態様による、タンパク質Ｘ ＥＶを示す極低温透過電子顕微鏡写真の拡大画像である。エキソソームは、水中でガラス化され、乾燥していない。この画像は、氷の結晶のない水中のエキソソームを示している。タンパク質Ｘ ＥＶの理論上の等電点（ｐＩ）は、６．２と記載されている。タンパク質Ｘ含有ＥＶのサイズは、約１００ｎｍと記載されている。

【図2D】本開示の態様による、様々な組成物を含むマイクロ遠心チューブの写真である。チューブＡには、３回凍結融解したスクロース＋緩衝液が含まれている。チューブＢには、３回凍結及び解凍した緩衝液のみが含まれている。チューブＣには、３回凍結及び解凍したＭｉｌｌｉ－Ｑ水のみが含まれている。これらのチューブは、色の変化及び濁りの両方の存在を示しているまた、塩は、純水サンプルと比較して、ある程度の保護をもたらすことも示されている。

【図3A】開示の一態様により、上清中のＳＴＩＮＧアゴニストと比較して、－８０℃、４℃、及び２２℃の温度で０時間～１２時間の期間保存したエキソソーム含有緩衝液と共に、エキソソーム中のＳＴＩＮＧアゴニスト濃度（μＭ）の分布を示すグラフである。このグラフは、図３Ｂの０～１２時間の時点を示している。Ｘ軸は、時間（時間単位）である。Ｙ軸は、ＳＴＩＮＧアゴニストの濃度（μＭ）である。

【図3B】本開示の一態様により、上清中のＳＴＩＮＧアゴニストと比較して、－８０℃、４℃、及び２２℃の温度で１２時間～７２時間の期間保存したエキソソーム含有緩衝液と共に、エキソソーム中のＳＴＩＮＧアゴニスト濃度（μＭ）の分布を示すグラフである。Ｘ軸は、時間（時間単位）である。Ｙ軸は、ＳＴＩＮＧアゴニストの濃度（μＭ）である。

【図3C】本開示の一態様による、投与後４時間での、リン酸緩衝生理食塩水、天然エキソソームを含む緩衝液、及びＳＴＩＮＧアゴニストを含むエキソソームを含む緩衝液の投与が、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける遺伝子発現に及ぼす影響を示す棒グラフである。エキソソーム含有緩衝液は、４℃及び２２℃で２４時間または７２時間保存した。Ｘ軸は、様々な試験対象項目である。Ｙ軸は、正規化遺伝子発現のレベルである。

【図3D】本開示の一態様による、Ｃ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６－Ｆ１０黒色腫腫瘍における遊離ＳＴＩＮＧアゴニスト（破線、下）及びエキソソームカプセル化ＳＴＩＮＧアゴニスト（実線、上）の腫瘍内濃度を経時的に示すグラフである。Ｘ軸は、時間（分単位）である。Ｙ軸は、ＳＴＩＮＧアゴニストの濃度（ｎＭ）である。

【図4】本開示の一態様による、エキソソームにカプセル化されたＳＴＩＮＧアゴニストを調製するためのプロセスの概略図である。Ａは、ＳＴＩＮＧの一部がエキソソームに拡散するように、ＳＴＩＮＧアゴニストによりエキソソームを含む緩衝液を飽和させることによる、ＳＴＩＮＧアゴニストのエキソソームへのロードを示している。Ｂは、エキソソームの精製（すなわち、エキソソームに拡散しなかったＳＴＩＮＧアゴニストの除去）を示している。Ｃは、ＳＴＩＮＧアゴニストを含むエキソソームの平衡化（すなわち、エキソソームから周囲の緩衝液へのＳＴＩＮＧアゴニストの受動拡散）を示している。

【図5】エキソソームに会合するＩＬ－１２含有量（ｎｇ／ｍＬ）を示すグラフである。Ｘ軸は、エキソソームが保存されている時間（日数）である。Ｙ軸は、ＩＬ－１２の含有量（ｎｇ／ｍＬ）である。左から右に、棒グラフは、以下を示す：（１）対照、過酸化物なし；（２）対照、０．０５％過酸化物；（３）チオ硫酸塩、過酸化物なし；（４）チオ硫酸塩、０．０５％過酸化物；（５）アスコルビン酸塩、過酸化物なし；（６）アスコルビン酸塩、０．０５％過酸化物；（７）グルタチオン、過酸化物なし；（８）グルタチオン、０．０５％過酸化物；（９）メチオニン、過酸化物なし；（１０）メチオニン、０．０５％過酸化物。

【図6】異なる時間長後のエキソソームの直径（ｎｍ）を示すグラフである。Ｘ軸は、エキソソームが保存されている時間（日数）である。Ｙ軸は、エキソソームの直径（ｎｍ）である。左から右に、棒グラフは、以下を示す；（１）対照；（２）対照及び過酸化水素；（３）チオ硫酸塩；（４）チオ硫酸塩及び過酸化水素；（５）アスコルビン酸塩；（６）アスコルビン酸塩及び過酸化水素；（７）グルタチオン；（８）グルタチオン及び過酸化水素；（９）メチオニン；（１０）メチオニン及び過酸化水素。

【図7】異なる時間長後のエキソソーム溶液のＰＤＩを示すグラフである。Ｘ軸は、エキソソームが保存されている時間（日数）である。Ｙ軸は、多分散度指数である。

【発明を実施するための形態】

【0053】

本開示は、ＥＶ及びペイロードの安定性及び完全性が様々な期間及び温度（凍結及び解凍など）において維持される１つ以上の生物学的活性部分を含むことができるＥＶ（例えば、エキソソーム）の保存及び投与のための組成物に関する。複数の生物学的活性部分は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の外面上の１つ以上の足場部分に付着（または連結）することができる。様々な態様の非限定的な例が本明細書に開示されている。

【0054】

Ｉ．定義
本記載を、より容易に理解することができるように、特定の用語を最初に定義する。さらなる定義は、発明を実施するための形態の全体を通して記載されている。

【0055】

用語「ａ」または「ａｎ」実体とは、その実体の１つ以上を指すことに留意されたい；例えば、「ヌクレオチド配列」は、１つ以上のヌクレオチド配列を表すと理解される。したがって、用語「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」は、本明細書中では同じ意味で用いられる。

【0056】

さらに、本明細書中で使用する「及び／または」は、他方を伴うまたは伴わない、指定された２つの機能または成分のそれぞれの特定の開示として解釈される。したがって、本明細書中の「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される用語「及び／または」とは、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことを意図する。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される用語「及び／または」は、以下の各態様を包含することを意図している：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。

【0057】

態様が「含む」という言語で本明細書に記載されている場合は常に、「からなる」及び／または「本質的にからなる」に関して記載されている類似の態様も提供されることが理解される。

【0058】

他に定義されない限り、本明細書中で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本開示に関連する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される多くの用語の一般的な辞書とともに技術の１つを提供する。

【0059】

単位、接頭辞、及び記号は、Ｓｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）で承認された形式で示される。数値範囲は、その範囲を定義する数を含むものとする。特に明記しない限り、ヌクレオチド配列は、左から右へ５’から３’の向きで記述される。アミノ酸配列は、左から右へアミノからカルボキシの方向で記述される。本明細書中で提供する見出しは、本明細書全体を参照することによって有し得る本開示の様々な態様を制限するものではない。したがって、すぐ下で定義される用語は、明細書全体を参照することにより、より完全に定義される。

【0060】

用語「約」とは、本明細書中では、およそ、ほぼ、大まかに、または近位を意味するために使用される。用語「約」を数値範囲と併用して使用する場合、この用語は、記載の数値の境界を上下に引き伸ばすことによって、その範囲を修飾する。一般的に、用語「約」は、記載の値の上下の数値を、例えば上下１０％の変動（より高くまたはより低く）で、修飾することができる。

【0061】

本明細書中で使用する場合、用語「細胞外小胞」すなわち「ＥＶ」とは、内部空間を封入する膜を含む細胞由来小胞を指す。細胞外小胞は、それらが由来する細胞よりも小さい直径を有するすべての膜結合小胞（例えば、エキソソーム、ナノ小胞）を含む。いくつかの態様では、細胞外小胞は、直径が２０ｎｍ～１０００ｎｍの範囲であり、内部空間（すなわち、内腔）内で、細胞外小胞の外部表面に提示されて、及び／または膜にわたってのいずれかで、様々な高分子ペイロードを含み得る。いくつかの態様では、ペイロードは、核酸、タンパク質、炭水化物、脂質、小分子、及び／またはそれらの組み合わせを含み得る。いくつかの態様では、ＥＶは、複数の（例えば、２つ以上の）ペイロードまたは他の外因性の生物学的活性部分を含む。ある特定の態様では、細胞外ビヒクルは、１つ以上の足場部分をさらに含むことができる。例として、かつ限定することなく、細胞外小胞は、アポトーシス小体、細胞の断片、直接的操作または間接的操作による細胞由来の小胞（例えば、連続押出またはアルカリ溶液での処理による）、小胞化オルガネラ、及び生細胞により産生される小胞（例えば、直接原形質膜出芽または後期エンドソームの原形質膜との融合による）を含む。細胞外小胞は、生きているもしくは死んだ生物、外植された組織もしくは器官、原核細胞または真核細胞、及び／または培養された細胞に由来し得る。いくつかの態様では、細胞外小胞は、１つ以上の導入遺伝子産物を発現する細胞によって生成される。本明細書に開示されるＥＶは改変されており、したがって、天然に存在するＥＶを含まない。

【0062】

本明細書中で使用する場合、用語「エキソソーム」とは、２０～３００ｎｍ（例えば、４０～２００ｎｍ）の直径を有する細胞外小胞を指す。エキソソームは、内部空間（すなわち、内腔）を囲む膜を含み、いくつかの態様では、直接の原形質膜出芽によって、または後期エンドソームと原形質膜との融合によって、細胞（例えば、プロデューサー細胞）から生成され得る。いくつかの態様では、エキソソームは、複数の（例えば、２つ以上の）外因性の生物学的活性部分（例えば、本明細書に記載される）を含む。ある特定の態様では、エキソソームは、１つ以上の足場部分をさらに含む。以下に記載するように、エキソソームは、プロデューサー細胞に由来することができ、そのサイズ、密度、生化学的パラメータ、またはそれらの組み合わせに基づいてプロデューサー細胞から単離され得る。いくつかの態様では、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つ以上の導入遺伝子産物を発現する細胞によって産生される。本開示のエキソソームは改変されており、したがって、天然に存在するエキソソームを含まない。

【0063】

本明細書中で使用する場合、用語「ナノ小胞」とは、２０～２５０ｎｍ（例えば、３０～１５０ｎｍ）の直径を有する細胞外小胞を指し、細胞（例えば、プロデューサー細胞）から、操作なしでは細胞によってナノ小胞が産生されないような、直接または間接の操作によって生成される。ナノ小胞を産生するための細胞の適切な操作には、連続押出、アルカリ溶液での処理、超音波処理、またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、ナノ小胞の産生は、プロデューサー細胞の破壊を生じ得る。いくつかの態様では、本明細書に記載のナノ小胞の集団は、原形質膜からの直接出芽または後期エンドソームの原形質膜との融合により、細胞に由来する小胞を実質的に含まない。いくつかの態様では、ナノ小胞は、複数の（例えば、少なくとも２つの）外因性の生物学的活性部分を含む。ある特定の態様では、ナノ小胞は、１つ以上の足場部分をさらに含む。以前にプロデューサー細胞に由来したナノ小胞は、そのサイズ、密度、生化学的パラメータ、またはそれらの組み合わせに基づいてプロデューサー細胞から単離され得る。本明細書で使用されるように、ナノ小胞は改変されており、したがって、天然に存在するナノ小胞を含まない。

【0064】

本明細書中で使用する場合、用語「表面操作ＥＶ、例えば、エキソソーム」（例えば、足場Ｘ操作ＥＶ、例えば、エキソソーム）とは、操作ＥＶ（例えばエキソソーム）の膜または表面が、改変前のＥＶの表面、または天然のＥＶの表面とは異なっているように、その組成が改変された膜または表面を有するＥＶ（例えばエキソソーム）を指す。操作は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上、またはＥＶ（例えばエキソソーム）の膜内に対して行うことができ、その結果、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面が変化する。例えば、膜は、そのタンパク質、脂質、小分子、炭水化物などの組成が改変される。組成は、化学的、物理的、もしくは生物学的方法によって、または化学的、物理的、もしくは生物学的方法によって、あらかじめまたは同時に改変した細胞から産生させることによって、変更することができる。具体的には、組成は、遺伝子工学によって、または遺伝子工学によってあらかじめ改変した細胞から産生させることによって、変更することができる。いくつかの態様では、表面操作されたＥＶ、例えば、エキソソームは、複数の（例えば、少なくとも２つの）外因性の生物学的活性部分を含む。ある特定の態様では、外因性の生物学的活性部分は、外因性タンパク質（すなわち、ＥＶ（例えばエキソソーム）が天然に発現しないタンパク質）またはその断片もしくはバリアントを含み、これらは、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面に露出し得るか、またはＥＶ（例えばエキソソーム）の表面に露出した部分の固定点（接着部）であり得る。他の態様では、表面操作されたＥＶ（例えばエキソソーム）は、より高発現（例えば、より多数）の、天然のエキソソームタンパク質（例えば、足場Ｘ）またはその断片もしくはバリアントを含み、これらは、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面に露出し得るか、またはＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面に露出した部分の固定点（接着部）であり得る。

【0065】

用語「改変された」とは、本明細書に記載のＥＶ（例えば、エキソソーム）に関して使用される場合、改変されたＥＶ（例えば、エキソソーム）が天然のＥＶ（例えば、エキソソーム）とは異なっているように、ＥＶ（例えば、エキソソーム）及び／またはそのプロデューサー細胞を改変または操作することを指す。いくつかの態様では、本明細書に記載の改変ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、天然のＥＶ（例えば、エキソソーム）の膜と比較して、タンパク質、脂質、小分子、炭水化物などの組成が異なる膜を含む（例えば、膜は、より高い密度または数の天然エキソソームタンパク質を含み、及び／または膜は、エキソソームには天然に見出されない複数の（少なくとも２つの）生物学的活性部分を含む。本明細書で使用される場合、エキソソームに天然に見出されない生物学的活性部分は、「外因性の生物学的活性部分」とも記載される。特定の態様では、膜に対するそのような改変は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）（例えば、本明細書に記載の表面操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム））の外面を変化させる。

【0066】

本明細書中で使用する場合、用語「足場部分」とは、ペイロードまたは任意の他の目的の外因性の生物学的活性部分を、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の内腔表面または外面のいずれかにおいて、ＥＶ（例えばエキソソーム）に固定するために使用することができる分子を指す。特定の態様では、足場部分は、合成分子を含む。いくつかの態様では、足場部分は、非ポリペプチド部分を含む。他の態様では、足場部分は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）中に天然に存在する脂質、炭水化物、またはタンパク質を含む。いくつかの態様では、足場部分は、ＥＶ（例えばエキソソーム）に天然には存在しない脂質、炭水化物、またはタンパク質を含む。特定の態様では、足場部分は、足場Ｘである。さらなる態様では、足場部分は、足場Ｘ及び別の足場部分を含む。本開示で使用することができる他の足場部分の非限定的な例としては、アミノペプチダーゼＮ（ＣＤ１３）、ネプリライシン、別名メンブレンメタロエンドペプチダーゼ（ＭＭＥ）；エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー１（ＥＮＰＰ１）；ニューロピリン－１（ＮＲＰ１）；ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリン、ＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂが挙げられる。

【0067】

本明細書で使用する場合、「足場Ｘ」という用語は、エキソソームの表面で最近同定されたエキソソームタンパク質を指す。例えば、米国特許第１０，１９５，２９０号を参照されたい（その全体が参照により本明細書に援用される）。足場Ｘタンパク質の非限定的な例には、以下が含まれる：プロスタグランジンＦ２受容体の負の調節因子（「ＰＴＧＦＲＮタンパク質」）。バシギン（「ＢＳＧタンパク質」）；免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバー２（「ＩＧＳＦ２タンパク質」）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（「ＩＧＳＦ３タンパク質」）；免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバー８（「ＩＧＳＦ８タンパク質」）；インテグリンベータ１（「ＩＴＧＢ１タンパク質」）；インテグリンアルファ４（「ＩＴＧＡ４タンパク質」）；４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（「ＳＬＣ３Ａ２タンパク質」）；及びＡＴＰトランスポータータンパク質のクラス（「ＡＴＰ１Ａ１タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ２タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ３タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ４タンパク質」、「ＡＴＰ１Ｂ３タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ１タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ２タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ３タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂタンパク質」）。いくつかの態様では、足場Ｘタンパク質は、完全タンパク質またはその断片（例えば、機能的断片、例えば、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の外面または内腔表面上に別の部分を固定することができる最小断片）であり得る。いくつかの態様では、足場Ｘは、部分（例えば、ペイロード）を、エキソソームの外面または内腔表面に固定することができる。

【0068】

本明細書で使用される場合、「足場Ｙ」という用語は、エキソソームの内腔表面内で新たに同定されたエキソソームタンパク質を指す。例えば、国際公開番号ＷＯ／２０１９／０９９９４２を参照されたい（その全体が参照により本明細書に援用される）。足場Ｙタンパク質の非限定的な例として：ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質（「ＭＡＲＣＫＳタンパク質」）；ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質様１（「ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質」）；及び脳酸可溶性タンパク質１（「ＢＡＳＰ１タンパク質」）が挙げられる。いくつかの態様では、足場Ｙタンパク質は、完全タンパク質またはその断片（例えば、機能的断片、例えば、ＥＶの内腔表面上に部分を固定することができる最小断片、例えば、エキソソーム）であり得る。いくつかの態様では、足場Ｙは、任意の部分（例えば、ＳＴＩＮＧアゴニスト及び／またはＩＬ－１２部分）をＥＶ（例えば、エキソソーム）の内腔に固定することができる。

【0069】

本明細書中で使用する場合、タンパク質（例えば、治療用タンパク質または足場Ｘ）の用語「断片」とは、天然のタンパク質と比較して、天然の配列よりも短いか、Ｎ末端及び／またはＣ末端を欠失させるか、またはタンパク質のいずれかの部分を欠失させたタンパク質のアミノ酸配列を指す。本明細書で使用する場合、「機能的断片」という用語は、タンパク質機能を保持するタンパク質断片を指す。したがって、いくつかの態様では、足場Ｘタンパク質の機能的断片は、部分をＥＶ（例えば、エキソソーム）の内腔表面及び／または外面に固定する能力を保持する。断片が機能的断片であるかどうかは、ウエスタンブロット、ＦＡＣＳ分析、及び断片と、例えばＧＦＰなどの自家蛍光タンパク質との融合を含む、ＥＶ（例えば、エキソソーム）のタンパク質含有量を決定するための任意の既知の方法によって評価することができる。特定の態様では、足場Ｘタンパク質の機能的断片は、天然の足場Ｘタンパク質の能力、例えば、部分を固定する能力の、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または少なくとも約１００％を保持している。

【0070】

本明細書中で使用する場合、分子（例えば、機能性分子、抗原、または足場Ｘ）の用語「バリアント」とは、当技術分野で公知の方法によって比較する際に、別の分子と特定の構造的及び機能的同一性を共有する分子を指す。例えば、タンパク質のバリアントは、別のタンパク質における置換、挿入、欠失、フレームシフトまたは再構成を含み得る。

【0071】

いくつかの態様では、足場Ｘのバリアントは、全長の成熟ＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、もしくはＡＴＰトランスポータータンパク質、またはＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、もしくはＡＴＰトランスポータータンパク質の断片（例えば、機能的断片）に対して、少なくとも約７０％の同一性を有するバリアントを含む。いくつかの態様では、ＰＴＧＦＲＮのバリアントまたはＰＴＧＦＲＮの断片のバリアントは、配列番号１に記載のＰＴＧＦＲＮまたはその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。

【0072】

「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されているものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーは、当該技術分野において定義されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。したがって、ポリペプチドのアミノ酸が同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸に置換されている場合、その置換は保存的であると見なされる。別の態様では、アミノ酸のストリングを、側鎖ファミリーメンバーの順序及び／または組成が異なる構造的に類似したストリングに保存的に置き換えることができる。

【0073】

２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の用語「配列同一性のパーセント」または「同一性のパーセント」とは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入しなければならない付加または欠失（すなわち、ギャップ）を考慮に入れ、比較ウィンドウ上で配列によって共有される同一の一致した位置の数を指す。一致した位置とは、標的配列と参照配列の両方で同一のヌクレオチドまたはアミノ酸が提示されている任意の位置である。ギャップはヌクレオチドまたはアミノ酸ではないため、標的配列に存在するギャップはカウントしない。同様に、参照配列由来のヌクレオチドまたはアミノ酸ではなく、標的配列のヌクレオチドまたはアミノ酸をカウントするため、参照配列に提示されるギャップはカウントしない。

【0074】

配列同一性のパーセントは、両方の配列において同一のアミノ酸残基または核酸塩基が生じる位置の数を決定して、一致した位置の数を取得し、比較ウィンドウ内の一致した位置の数を位置の総数で除し、結果に１００を乗じて、配列同一性のパーセントを取得することによって計算される。２つの配列間の配列の比較と配列同一性のパーセントの決定は、オンラインでの使用とダウンロード用の両方において、容易に利用可能なソフトウェアを使用して達成できる。好適なソフトウェアプログラムは、様々な供給元から入手可能であり、タンパク質配列とヌクレオチド配列の両方のアラインメントに利用可能である。配列同一性のパーセントを決定するための１つの好適なプログラムは、米国政府の国立バイオテクノロジー情報センターＢＬＡＳＴ Ｗｅｂサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なプログラムのＢＬＡＳＴ ｓｕｉｔｅの一部であるｂｌ２ｓｅｑである。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して２つの配列間の比較を実行する。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用され、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するために使用される。他の好適なプログラムは、例えば、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒであり、バイオインフォマティクスプログラムのＥＭＢＯＳＳスイートの一部であり、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）（ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ）からも入手可能である。

【0075】

ポリヌクレオチドまたはポリペプチド参照配列とアラインメントする単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域は、それぞれ、それら自身の配列同一性のパーセントを有し得る。配列同一性のパーセントの値は、最も近似の１０分の１に丸められることに留意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は、８０．１に切り捨てられ、一方、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は、８０．２に切り上げられる。また、長さの値は常に整数になることに留意されたい。

【0076】

配列同一性のパーセントの計算のための配列アラインメントの生成が、一次配列データによって排他的に行われる一対での配列－配列比較に限定されない。配列アラインメントは、多重配列アラインメントから導き出すことができる。多重配列アラインメントを生成するための好適なプログラムの１つは、ｗｗｗ．ｃｌｕｓｔａｌ．ｏｒｇから入手可能なＣｌｕｓｔａｌＷ２である。別の好適なプログラムは、ＭＵＳＣＬＥであり、ｗｗｗ．ｄｒｉｖｅ５．ｃｏｍ／ｍｕｓｃｌｅ／から入手可能である。ＣｌｕｓｔａｌＷ２及びＭＵＳＣＬＥは、例えば、ＥＢＩなどから代替的に入手可能である。

【0077】

配列アラインメントは、配列データを、構造データ（例えば、結晶学的タンパク質構造）、機能データ（例えば、突然変異の位置）、または系統発生データなどの異種ソースからのデータと統合することによって生成できることも理解されよう。異種データを統合して多重配列アラインメントを生成する好適なプログラムは、Ｔ－Ｃｏｆｆｅｅであり、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで入手可能であり、あるいは、例えば、ＥＢＩから入手可能である。配列同一性のパーセントを計算するために使用される最終アラインメントが、自動または手動のいずれかでキュレートされ得ることも理解されよう。

【0078】

ポリヌクレオチドバリアントは、コード領域、非コード領域、またはその両方に改変を含み得る。一態様では、ポリヌクレオチドバリアントは、サイレント置換、付加、または欠失を生じるが、コードされたポリペプチドの特性または活性を変化させない改変を含む。別の態様では、ヌクレオチドバリアントは、遺伝暗号の縮重によるサイレント置換によって生成される。他の態様では、５～１０、１～５、または１～２アミノ酸が、任意の組み合わせで置換、欠失、または付加されているバリアントである。ポリヌクレオチドバリアントは、例えば、特定の宿主のコドン発現を最適化するためなど（ヒトｍＲＮＡ中のコドンを他の宿主、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌宿主に変更する）、様々な理由で生成され得る。

【0079】

天然のバリアントは「対立遺伝子バリアント」と呼ばれ、生物の染色体上の所与の遺伝子座を占める遺伝子のいくつかの代替形態の１つを指す（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ，Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立遺伝子バリアントは、ポリヌクレオチド及び／またはポリペプチドレベルのいずれかで様々に異なっていてもよく、また、本開示に含まれる。あるいは、非天然のバリアントを、変異誘発技術または直接合成によって生成することができる。

【0080】

タンパク質工学及び組換えＤＮＡ技術の既知の方法を使用して、バリアントを生成してポリペプチドの特徴を向上または改変することができる。例えば、生物学的機能を実質的に失わせることなく、分泌されたタンパク質のＮ末端またはＣ末端から１つ以上のアミノ酸を欠失させることができる。Ｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２９８４－２９８８（１９９３）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、３、８、または２７個のアミノ末端アミノ酸残基を欠失させた後であっても、バリアントＫＧＦタンパク質がヘパリン結合活性を有することを報告した。同様に、インターフェロンγは、このタンパク質のカルボキシ末端から８～１０アミノ酸残基を欠失させた後、最大１０倍高い活性を示した（Ｄｏｂｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９－２１６（１９８８）（参照によりその全体が本明細書に援用される））。

【0081】

さらに、多くのエビデンスが、バリアントがしばしば天然のタンパク質と同様の生物学的活性を保持していることを示している。例えば、Ｇａｙｌｅと共同研究者（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５－２２１１１（１９９３）、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、ヒトサイトカインＩＬ－１ａの広範な突然変異分析を行った。彼らはランダム変異誘発を使用して、分子の全長にわたってバリアントあたり平均２．５アミノ酸の変化を示す３，５００を超える個々のＩＬ－１ａ変異体を生成した。考えられるすべてのアミノ酸位置で複数の変異を調べた。研究者らは、「分子のほとんどは、［結合または生物活性］にほとんど影響を与えることなく変更することができる」ことを発見した。（要約を参照のこと。）実際、調べた３，５００を超えるヌクレオチド配列のうち、２３の固有のアミノ酸配列のみが、野生型とは活性が有意に異なるタンパク質を生成した。

【0082】

上記のとおり、ポリペプチドバリアントには、例えば、修飾ポリペプチドが含まれる。修飾には、例えば、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、γ－カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ化（Ｍｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１６：２７０－７９（２０１０）、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、タンパク質へのアミノ酸の転移－ＲＮＡ媒介付加例えばアルギニル化、ユビキチン化などが挙げられる。いくつかの態様では、足場Ｘは、任意の便利な場所で修飾される。

【0083】

本明細書中で使用する場合、用語「に連結される」または「に複合体化される」及び「に固定される」は同じ意味で使用され、第１の部分と第２の部分、例えば、それぞれ、足場Ｘ及び外因性の生物学的活性部分、例えば、それぞれ、細胞外小胞内またはその上で発現される足場部分と抗原、例えば、細胞外小胞の内腔表面または外面における足場Ｘ（例えば、ＰＴＧＦＲＮタンパク質）との間に形成される共有または非共有結合を指す。

【0084】

用語「カプセル化された」、またはこの用語の文法的に異なる形式（例えば、カプセル化、またはカプセル化すること）は、２つの部分を化学的または物理的に連結することなく、第１の部分（例えば、外因性の生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニスト）が第２の部分（例えば、ＥＶ、例えば、エキソソーム）の内部にある状態またはプロセスを指す。いくつかの態様では、「カプセル化された」という用語は、「内腔の」と同じ意味で使用することができる。第１の部分（例えば、外因性の生物学的活性部分、例えば、抗原、アジュバント、または免疫調節剤）を第２の部分（例えば、ＥＶ、例えば、エキソソーム）にカプセル化する非限定的な例は、本明細書の他の場所に開示されている。

【0085】

本明細書中で使用する場合、用語「プロデューサー細胞」とは、ＥＶ（例えば、エキソソーム）を生成するために使用する細胞を指す。プロデューサー細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養された細胞、またはｉｎ ｖｉｖｏでの細胞であり得る。プロデューサー細胞には、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の生成に有効であることが知られている細胞、例えば、ＨＥＫ２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、ＢＪヒト包皮線維芽細胞、ｆＨＤＦ線維芽細胞、ＡＧＥ．ＨＮ（登録商標）神経前駆細胞、ＣＡＰ（登録商標）羊膜細胞、脂肪間葉系幹細胞、ＲＰＴＥＣ／ＴＥＲＴ１細胞が含まれるが、これらに限定されない。特定の態様では、プロデューサー細胞は、抗原提示細胞ではない。いくつかの態様では、プロデューサー細胞は、樹状細胞、Ｂ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、クッパー－ブロウィッツ細胞、これらの細胞のいずれかに由来する細胞、またはそれらの任意の組み合わせではない。いくつかの態様では、本開示で有用なＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＥＶ（例えばエキソソーム）の表面に露出したＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩ分子上の抗原を保有しておらず、代わりに、足場Ｘへの接着により、ＥＶ（例えばエキソソーム）の内腔内、またはＥＶ（例えばエキソソーム）の表面上の抗原を保有し得る。

【0086】

本明細書中で使用する場合、用語「単離する」、「単離された」、及び「単離すること」または「精製する」、「精製された」、及び「精製すること」、同様に「抽出された」及び「抽出すること」は、同じ意味で使用され、精製、例えば、所望のＥＶ調製物の選択または濃縮の１つ以上のプロセスを経た所望のＥＶの調製（例えば、複数の既知または未知の量及び／または濃度）の状態を指す。いくつかの態様では、本明細書中で使用される単離することまたは精製することは、プロデューサー細胞を含有する試料からＥＶを除去する、部分的に除去する（例えば、分画）プロセスである。いくつかの態様では、単離されたＥＶ組成物は、検出可能な望ましくない活性を有しないか、または、代替的には、望ましくない活性のレベルもしくは量は、許容されるレベルもしくは量であるか、または許容されるレベルもしくは量未満である。他の態様では、単離されたＥＶ組成物は、許容される量及び／または濃度以上の所望のＥＶの量及び／または濃度を有する。他の態様では、単離されたＥＶ組成物は、組成物が得られる出発材料（例えば、プロデューサー細胞調製物）と比較して濃縮される。この濃縮は、出発材料と比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、９９．９９９％、９９．９９９９％、または９９．９９９９％超であり得る。いくつかの態様では、単離されたＥＶ調製物は、残留生物学的産物を実質的に含まない。いくつかの態様では、単離されたＥＶ調製物は、いかなる汚染生物物質も１００％含まないか、９９％含まないか、９８％含まないか、９７％含まないか、９６％含まないか、または９５％含まないか、９４％含まないか、９３％含まないか、９２％含まないか、９１％含まないか、または９０％含まない。残留生物学的産物は、非生物物質（化学物質を含む）または不要な核酸、タンパク質、脂質、もしくは代謝産物を含み得る。残留生物学的産物を実質的に含まないことはまた、ＥＶ組成物が検出可能なプロデューサー細胞を含有しないことと、ＥＶのみが検出可能であることとを意味し得る。

【0087】

本明細書中で使用される場合、「免疫調節剤」という用語は、細胞外小胞と接触する標的（例えば、標的細胞）に作用し、免疫系を調節する剤を指す。ＥＶ（例えば、エキソソーム）及び／またはプロデューサー細胞に導入することができる免疫調節剤の非限定的な例としては、チェックポイント阻害剤の調節剤、チェックポイント阻害剤のリガンド、サイトカイン、それらの誘導体、またはそれらの任意の組み合わせなどの剤が挙げられる。免疫調節剤はまた、アゴニスト、アンタゴニスト、抗体、抗原結合断片、ポリヌクレオチド、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、または小分子を含み得る。

【0088】

本明細書中では、用語「ペイロード」とは、ＥＶと接触する標的（例えば、標的細胞）に作用する剤を指す。ＥＶ、例えば、エキソソームに含めることができるペイロードの非限定的な例は、生物学的活性分子、例えば、治療用分子、アジュバント、及び／または免疫調節剤である。ＥＶ（例えばエキソソーム）及び／またはプロデューサー細胞中に導入され得るペイロードとして、ヌクレオチド（例えば、検出可能な部分もしくは毒素を含むか、または転写を妨害するヌクレオチド）、核酸（例えば、酵素などのポリペプチドをコードするＤＮＡもしくはｍＲＮＡ分子、またはｍｉＲＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、及びｓｉＲＮＡなどの制御機能を有するＲＮＡ分子）、アミノ酸（例えば、検出可能な部分もしくは毒素を含むか、または翻訳を妨害するアミノ酸）、ポリペプチド（例えば、酵素）、脂質、炭水化物、及び小分子（例えば、小分子薬物及び毒素）などの剤が挙げられる。特定の態様では、ペイロードは、外因性の生物学的活性部分（例えば、本明細書に開示されるもの）を含む。いくつかの態様では、ペイロードは、標的化部分を含む。いくつかの態様では、ペイロードは、例えば、エキソソームなどのＥＶ上またはＥＶ内に「受動的にロード」される。本明細書で使用される場合、「受動的にロードされる」という用語は、ＥＶ、例えば、エキソソームと、同じ溶液中に存在するペイロードとの間の会合を指す。受動的ロード下では、ペイロードは、例えば、自然拡散及び／または引力によってＥＶに会合される。

【0089】

本明細書で使用される場合、「標的化部分」という用語は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ（例えば、異なる種類の細胞の混合培養において）で細胞外小胞（例えば、エキソソーム、ナノ小胞）の分布を改変することができる剤を指す。標的化部分は、タンパク質、ペプチド、脂質、または炭水化物などの生体分子、または合成分子であり得る。例えば、標的化部分は、抗体（例えば、抗ＣＤ１９ナノボディ、抗ＣＤ２２ナノボディ）、合成ポリマー（例えば、ＰＥＧ）、天然リガンド（例えば、ＣＤ４０Ｌ、アルブミン）、組換えタンパク質（例えば、ＸＴＥＮ）であり得るがこれらに限定されない。特定の態様では、標的化部分は、ＥＶの表面に提示される。標的化部分は、足場タンパク質（例えば、足場Ｘ）に融合されることによって（例えば、遺伝的にコードされた融合分子として）、ＥＶ表面に提示させ得る。いくつかの態様では、標的化部分は、標的化部分をＥＶ表面分子に付着させる化学反応によってＥＶ表面上に提示され得る。非限定的な例は、ＰＥＧ化である。いくつかの態様では、本明細書に開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ペイロードに加えて）標的化部分をさらに含むことができる。いくつかの態様では、上記の標的化部分は、小分子（例えば、ＳＴＩＮＧ、ＡＳＯ）、薬物、及び／または治療用タンパク質（例えば、抗ＣＤ３／抗ＣＤ１９抗体、抗メソテリン抗体／アポトーシス促進性タンパク質）などの機能的部分と組み合わせることができる。

【0090】

本明細書で使用される場合、「生物学的活性部分」という用語は、これらに限定されないが、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチド、これらに限定されないが、構造タンパク質、酵素、サイトカイン（インターフェロン及び／またはインターロイキンなど）、抗生物質、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体、またはその有効部分（Ｆｖ断片など）などの生物学的系（例えば、細胞またはヒト対象）において活性を有する剤（抗体またはその一部は、天然、合成またはヒト化、ペプチドホルモン、受容体、シグナル伝達分子または他のタンパク質であり得る）；以下に定義される核酸、これらに限定されないが、オリゴヌクレオチドもしくは修飾オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくは修飾アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、人工もしくは天然染色体（例えば、酵母人工染色体）またはその一部、ＲＮＡ（ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡもしくはリボザイムなど）、またはペプチド核酸（ＰＮＡ）；ウイルスまたはウイルス様粒子；ヌクレオチドまたはリボヌクレオチドまたはそれらの合成類似体（修飾されていてもされていなくてもよい）；アミノ酸またはその類似体（修飾されていてもされていなくてもよい）；非ペプチド（例えば、ステロイド）ホルモン；プロテオグリカン；脂質；または炭水化物を指す。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドとして、ホスホロジアミデートモルフォリノオリゴマー（ＰＭＯ）またはペプチド結合ホスホロジアミデートモルフォリノオリゴマー（ＰＰＭＯ）が挙げられる。特定の態様では、生物学的活性部分は、治療用分子（例えば、抗原）、標的化部分（例えば、抗体またはその抗原結合断片）、アジュバント、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、生物学的活性部分は、高分子（例えば、タンパク質、抗体、酵素、ペプチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、生物学的活性部分は、小分子（例えば、アンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）、ｓｉＲＮＡ、ＳＴＩＮＧ、医薬品、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、生物学的活性部分は、エキソソームに対して外因性であり、すなわち、エキソソーム中に自然に見出されない。

【0091】

本明細書で使用される場合、「治療用分子」という用語は、対象（例えば、ヒト対象）の疾患または障害を治療及び／または予防することができる任意の分子を指す。いくつかの態様では、治療用分子は抗原を含む。本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、対象に導入されたときにそれ自体に対する免疫応答（細胞性または体液性）を誘発する任意の剤を指す。

【0092】

本明細書中で使用されるとき、「抗体」という用語は、天然または部分的もしくは完全に合成により生成された免疫グロブリン、及びその断片を包含する。この用語はまた、免疫グロブリン結合ドメインに相同である結合ドメインを有する任意のタンパク質を網羅する。「抗体」は、抗原に特異的に結合し認識する免疫グロブリン遺伝子またはその断片からのフレームワーク領域を含むポリペプチドを更に含む。抗体という用語の使用は、全抗体、ポリクローナル、モノクローナル、及び組換え抗体、それらの断片を含むことを意図し、例えば、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）_２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ１）_２、Ｆｖ、ｄＡｂ、及びＦｄ断片、ダイアボディ、及び抗体関連ポリペプチド等の、一本鎖抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ、マウス－ヒト、マウス－霊長類、霊長類－ヒトモノクローナル抗体、抗イディオタイプ抗体、抗体断片をさらに含む。抗体は、それらが所望の生物学的活性または機能を呈する限り、二重特異性抗体及び多重特異性抗体を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ－Ｆｃ、ナノボディ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、アゴニスト抗体、遮断抗体、標的化抗体、それらの断片、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、アゴニスト抗体は、ＣＤ４０Ｌアゴニストである。いくつかの態様では、遮断抗体は、プログラム死１（ＰＤ－１）、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４、及びそれらの任意の組み合わせから選択される標的タンパク質に結合する。いくつかの態様では、標的化抗体は、ＣＤ３及び／またはＣＤ１９に結合する。

【0093】

「個体」「対象」「宿主」及び「患者」という用語は、本明細書において互換的に使用され、診断、治療または治療法が所望される任意の哺乳類動物対象、特にヒトを指す。本明細書に記載される本組成物及び本方法は、ヒトの治療及び獣医学的用途の両方に適用可能である。いくつかの態様では、対象は哺乳動物であり、他の態様では、対象はヒトである。本明細書中で使用される場合、「哺乳動物対象」には、ヒト、家畜（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）、及び実験室動物（例えば、サル、ラット、マウス、ウサギ、モルモットなど）を含むがこれらに限定されないすべての哺乳動物が含まれる。

【0094】

本明細書中で使用する場合、用語「実質的に含まない」とは、ＥＶ（例えばエキソソーム）を含む試料が、質量／体積（ｍ／ｖ）パーセント濃度で１０％未満の高分子を含むことを意味する。一部の画分は、０．００１％未満、０．０１％未満、０．０５％未満、０．１％未満、０．２％未満、０．３％未満、０．４％未満、０．５％未満、０．６％未満、０．７％未満、０．８％未満、０．９％未満、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、６％未満、７％未満、８％未満、９％未満、または１０％（ｍ／ｖ）未満の高分子を含み得る。

【0095】

本明細書中で使用する場合、用語「高分子」とは、核酸、夾雑タンパク質、脂質、炭水化物、代謝産物、またはそれらの組み合わせを意味する。

【0096】

本明細書中で使用する場合、用語「従来のエキソソームタンパク質」とは、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリンＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂを含むがこれらに限定されない、エキソソーム内で豊富であることが以前に知られているタンパク質、その断片、またはそれに結合するペプチドを意味する。

【0097】

本明細書中で使用する「投与」とは、薬学的に許容される経路を介して、本明細書に開示するＥＶ（例えばエキソソーム）を含む組成物を対象に与えることを意味する。投与経路は、静脈内投与、例えば、静脈内注射及び静脈内注入であり得る。追加の投与経路として、例えば、皮下、筋肉内、経口、経鼻、及び肺への投与が挙げられる。ＥＶ（例えばエキソソーム）は、少なくとも１つの賦形剤を含む医薬組成物の一部として投与することができる。

【0098】

本明細書中で使用されるとき、「免疫応答」は、外来物質または異常な、例えば癌性細胞に対する脊椎動物内の生物学的応答を指し、この応答は、これらの剤及びそれらによって引き起こされる疾患から生物を保護する。免疫応答は、免疫系の１つ以上の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、樹状細胞または好中球）及び可溶性高分子の作用によって媒介され、これらは、これらの細胞または肝臓（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）のいずれかによって生成され、結果として、侵入する病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、癌性もしくは他の異常な細胞、または自己免疫もしくは病理学的炎症の場合は、正常なヒトの細胞もしくは組織の脊椎動物の身体への選択的標的化、結合、損傷、またはそれらの破壊、及び／または排除をもたらす。免疫反応には、例えば、エフェクターＴ細胞、Ｔｈ細胞、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、もしくはＴｒｅｇ細胞などのＴ細胞の活性化もしくは阻害、または免疫系の他の任意の細胞、例えば、ＮＫ細胞の活性化もしくは阻害が含まれる。したがって、免疫応答は、体液性免疫応答（例えば、Ｂ細胞によって媒介される）、細胞性免疫応答（例えば、Ｔ細胞によって媒介される）、または体液性及び細胞性免疫応答の両方を含み得る。いくつかの態様では、免疫応答は「阻害性」免疫応答である。阻害性免疫応答は、刺激（例えば、抗原）の効果を遮断または減少させる免疫応答である。特定の態様では、阻害性免疫応答は、刺激に対する阻害性抗体の産生を含む。いくつかの態様では、免疫応答は「刺激性」免疫応答である。刺激性免疫応答は、標的抗原（例えば、腫瘍抗原またはウイルス）を破壊及び除去することができるエフェクター細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球）の生成をもたらす免疫応答である。

【0099】

本明細書中で使用する「治療する」、「治療」、または「治療すること」とは、例えば、疾患または病態の重症度の低下、疾患の経過期間の短縮、疾患または病態に関連する１つ以上の症状の改善または排除、疾患または病態を必ずしも治癒させることなく、疾患または病態を有する対象に有益な効果を提供することを意味する。この用語はまた、疾患または状態またはその症状の防御または予防を含む。一態様では、「治療する」または「治療」という用語は、抗原に対する対象において免疫応答を誘導することを意味する。

【0100】

本明細書中で使用する場合、用語「予防する」または「予防」とは、特定の結果の発生または重症度を低減または低下させることを指す。いくつかの態様では、結果の予防は、防御的治療を通じて達成される。

【0101】

ＩＩ．医薬組成物
本明細書で提供されるのは、細胞外小胞、例えば、エキソソームの保存及び投与のための組成物である。上記のとおり、本開示の組成物は、これらに限定されないが、ＥＶの凝集の減少、ＥＶの安定性の改善、ＥＶ構造の完全性の改善、及びＥＶ上またはＥＶ内に含まれる操作されたタンパク質の安定性の改善、及び小分子薬物またはタンパク質などの受動的にロードまたは複合体化された材料の安定性の改善など、複数の利点を提供する。本開示の組成物は、組成物中に含まれるＥＶの安定性を損なうことなく、凍結され、様々な時間長にわたってある範囲の温度で保存され、解凍され得る。

【0102】

本開示の組成物の製剤化に関する様々な構成要素及び考慮事項を以下に記載する。

【0103】

ＩＩ．Ａ．ＥＶ組成物
本開示は、細胞外小胞を含む医薬組成物を提供し、ここで、医薬組成物は、凍結及び／または保存に対して安定であり、及び／または哺乳動物、例えば、ヒトへの投与に好適である。保存中の生物製剤の不安定性は、凝集、脱アミノ化、異性化、加水分解、酸化、及び／または変性によって引き起こされ得る。これらの構造改変は、様々な異なる因子；生物製剤の特性、及び／または生物製剤及び生物製剤で製剤化された元素の温度、ｐＨ、及びイオン強度などの他の因子によって発生し得る。

【0104】

いくつかの態様では、本開示の医薬組成物は、組成物がキレート剤及び／またはアルブミン、例えば、組換えヒトアルブミンを必要としないように、安定して製剤化される。

【0105】

ヒトアルブミンは、血液中に最も遍在するタンパク質であり、約４０ｇ／Ｌの量で存在する。血液中のその役割は、金属、ホルモン、脂肪酸、及び毒素などの多数のより小さな実体を往復輸送することである。しかし、それはまた、血液のコロイド膠質浸透圧（またはコロイド浸透圧）の約７５％を構成し、アルブミンの単一の遊離システイン（３４位）は、血液中に存在する還元等価物の大部分を構成する。これらの特性はすべて、製剤中にアルブミンを使用する際に機能する形質である。

【0106】

アルブミンは、歴史的に様々な製剤中で使用されている。元来、血漿を供給源とするヒト血清アルブミンが使用されていたが、本業界では化学的に定義された（組換え）ヒト血清アルブミンの使用に移行した。組換え生成物は、動物由来生成物がない、供給の確実性、高純度、宿主由来のプロテアーゼがない、高い均質性、高い遊離チオール含有量、既知または未知のヒト病原体がない、バッチ間の一貫性、及び確立された規制経路が存在するなどの要因により有利である。

【0107】

製剤中のアルブミンは、表面吸着、凝集、フィブリル化、及び酸化を予防し、溶解性、凍結乾燥ケーキの形成、及び／または凍結乾燥粉末からのＡＰＩの溶解特性を改善することが報告されている。これらの既知の利点にもかかわらず、本開示は、細胞外小胞を含む安定なアルブミン非含有医薬組成物を提供する。

【0108】

キレート剤は、金属イオンと結合する成分であり、医薬製剤の安定性及び有効性に重要な役割を果たす。キレート化のプロセスは、金属イオンが任意の他の物質と化学的に反応するのを予防することにより、金属イオンを安定させる。本組成物は、キレート剤を含まないことを特徴とすることができる。

【0109】

いくつかの態様では、本明細書に開示の組成物は、約１～約６．５の範囲のｐＩを有する。本明細書に開示のとおり、表面高分子、例えば、ＰＴＧＦＲＮが過剰発現される、本明細書に開示のＥＶのｐＩ範囲により、生理学的ｐＨ値でコロイド的に安定なアニオン性エキソソームが可能になる。いくつかの態様では、表面分子は、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、または炭水化物であり得る。いくつかの態様では、６．５を超えるｐＩは、ＥＶ、例えば、エキソソームが、中性電荷（不安定）、または毒性もしくは制限された生体内分布をもたらし得る有用なｐＨ範囲でのカチオン電荷のいずれかを有するようになる。

【0110】

いくつかの態様では、本開示の組成物は、液体状態で製剤化され、組成物の温度を凍結温度及び亜凍結温度まで低下させることにより、保存用に凍結することができる。脱水または凍結乾燥を介して組成物を凍結することは企図されていない。いくつかの態様では、組成物は凍結乾燥されていない。

【0111】

ＩＩ．Ｂ．組成物Ｉ（ｐＨ）
一態様では、本開示は、ＥＶを安定して製剤化することができるｐＨを提供する。ｐＨは、約７．０～約７．４、例えば、約７．１～約７．３の範囲、例えば、約７．２であり得る。いくつかの態様では、本開示の医薬組成物は、（ａ）細胞外小胞；（ｂ）糖類；（ｃ）塩化ナトリウム；（ｄ）リン酸カリウム；及び（ｅ）リン酸ナトリウムを含む。いくつかの態様では、組成物は、約７．２のｐＨの溶液中にある。ＥＶは、本明細書の他の場所に開示されており、糖は、単糖、二糖、三糖、または任意の他の糖であり得る。塩化ナトリウムは、以下に示す。リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムは、以下に示す。

【0112】

いくつかの態様では、凍結前及び凍結後の組成物は依然として同じである。例えば、凍結前及び凍結後の組成物のｐＨは、約７．１である。いくつかの態様では、凍結前及び凍結後の組成物は、約７．２のｐＨを有する。いくつかの態様では、凍結前及び凍結後の組成物は、約７．３のｐＨを有する。いくつかの態様では、凍結前及び凍結後の組成物は、約７．４のｐＨを有する。

【0113】

いくつかの態様では、組成物のｐＨは、リン酸塩の濃度を変更することによって調整することができる。いくつかの態様では、組成物のｐＨは、リン酸カリウムの濃度を変更することによって調整することができる。いくつかの態様では、組成物のｐＨは、リン酸カリウムを加えるまたはその濃度を増大させることによって増加させることができる。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、リン酸ナトリウムの濃度より高い。

【0114】

いくつかの態様では、リン酸ナトリウム及びリン酸カリウムの一塩基性及び二塩基性形態の比率を使用して、医薬組成物のｐＨを調整することができる。いくつかの態様では、一塩基性リン酸ナトリウム及び／または一塩基性リン酸カリウムは、医薬組成物のｐＨを上昇させるために使用され得る。いくつかの態様では、二塩基性リン酸ナトリウム及び／または二塩基性リン酸カリウムは、医薬組成物のｐＨを低下させるために使用され得る。いくつかの態様では、開示された組成物のｐＨ範囲は、約６．８～約７．６である。したがって、組成物のｐＨが所望よりも低い場合、塩の一塩基性形態と二塩基性形態（すなわち、カリウムまたはナトリウム）との比率を変更することによって、ｐＨを変更できる。いくつかの態様では、リン酸ナトリウム及びリン酸カリウムの一塩基性と二塩基性形態との比率を使用して、組成物のｐＨが７．０～７．４、例えば、７．１～７．３、例えば、７．２になるまで、組成物のｐＨを調整することができる。いくつかの態様では、ｐＨの上限は、より一般的に鹸化として知られている加水分解を受けるエキソソームなどの、開示されたＥＶの脂質の破壊によるものである。いくつかの態様では、カリウム塩は、凍結時にｐＨを安定化させる。

【0115】

いくつかの態様では、ｐＨ約７．２での医薬組成物のための糖類は、単糖を含む。いくつかの態様では、糖類は、二糖類を含む。いくつかの態様では、糖類は、三糖類を含む。いくつかの態様では、糖類は、オリゴ糖を含む。いくつかの態様では、糖類は、多糖を含む。いくつかの態様では、糖類は、糖アルコールを含む。いくつかの態様では、糖類は、本明細書中に記載の糖類の任意の組み合わせを含む。

【0116】

いくつかの態様では、糖類は、ラクトースを含む。いくつかの態様では、糖類は、グルコースを含む。いくつかの態様では、糖類は、スクロースを含む。いくつかの態様では、糖類は、トレハロースを含む。いくつかの態様では、糖類は、デキストロースを含む。いくつかの態様では、糖類は、本明細書中に記載の糖類の任意の組み合わせを含む。

【0117】

いくつかの態様では、糖類は、糖アルコールである。いくつかの態様では、糖類は、約９０．００ｇ／モル～約１９０．００ｇ／モルの分子量を有する糖アルコールである。いくつかの態様では、糖類は、約１８０．００ｇ／モル～約３８０．００ｇ／モルの分子量を有する。

【0118】

いくつかの態様では、糖アルコールは、グリセロールを含む。いくつかの態様では、糖アルコールは、ソルビトールを含む。いくつかの態様では、糖アルコールは、マンニトールを含む。いくつかの態様では、糖アルコールは、キシリトールを含む。いくつかの態様では、糖アルコールは、本明細書に記載される糖アルコールの任意の組み合わせを含む。

【0119】

いくつかの態様では、糖類は、スクロースまたはトレハロースである。いくつかの態様では、医薬組成物は、スクロースを含む。他の態様では、医薬組成物は、トレハロースを含む。いくつかの態様では、スクロース濃度は、約５％ｗ／ｖである。

【0120】

ＩＩ．Ｃ．組成物ＩＩ（スクロース）
本開示はまた、細胞外小胞を含む医薬組成物中の適切な濃度のスクロースまたはトレハロースに関する。組成物中の好適な量のスクロースまたはトレハロースは、組成物を安定化させ、及び／またはいかなる凝集も減少させる。いくつかの態様では、医薬組成物は、（ｉ）細胞外小胞及び（ｉｉ）約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースまたはトレハロースである糖類を含む。

【0121】

５％ｗ／ｖの濃度の本明細書に開示される糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、１％ｗ／ｖのスクロースを含む組成物に対して、優れた安定性を提供することができる。特に、（ｉ）細胞外小胞、例えば、エキソソーム、及び（ｉｉ）約５％ｗ／ｖの濃度の糖類（スクロースまたはトレハロースである）を含む医薬組成物は、（ｉ）ＥＶの凝集の減少、（ｉｉ）ＥＶの安定性の改善、（ｉｉｉ）ＥＶ構造の完全性の改善、（ｉｖ）ＥＶ上またはＥＶ内に含まれる操作されたタンパク質の安定性の改善、及び（ｖ）小分子薬物またはタンパク質などの受動的にロードまたは複合体化された材料の安定性の改善など、複数の利点を提供する。いくつかの態様では、組成物は、１％ｗ／ｖ～４％ｗ／ｖ、例えば、１％の濃度でスクロースまたはトレハロースを含む参照組成物と比較して、凝集が減少している。いくつかの態様では、組成物は、１％ｗ／ｖ～４％ｗ／ｖ、例えば、１％の濃度でスクロースまたはトレハロースを含む参照組成物と比較して、安定性が改善している。いくつかの態様では、組成物は、１％ｗ／ｖ～４％ｗ／ｖ、例えば、１％の濃度でスクロースまたはトレハロースを含む参照組成物と比較して、ＥＶ構造の完全性が改善している。

【0122】

いくつかの態様では、組成物は、１％ｗ／ｖ～４％ｗ／ｖ、例えば、１％の濃度でスクロースまたはトレハロースを含む参照組成物と比較して、ＥＶ上またはＥＶ内に含まれる操作タンパク質の安定性が改善している。

【0123】

いくつかの態様では、組成物は、１％ｗ／ｖ～４％ｗ／ｖ、例えば、１％の濃度でスクロースまたはトレハロースを含む参照組成物と比較して、小分子薬物またはタンパク質などの受動的にロードされたかまたは複合体化された材料の安定性が改善している。

【0124】

他の態様では、組成物は、５．５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、または１０％ｗ／ｖより高い濃度で、スクロースまたはトレハロースを含む参照組成物と比較して、安定性が改善している。

【0125】

組成物は、塩化ナトリウム、リン酸カリウム、塩化ナトリウム、または本明細書の他の場所に開示されているそれらの任意の組み合わせをさらに含むことができる。

【0126】

ＩＩ．Ｄ．塩化ナトリウム
いくつかの態様では、組成物Ｉまたは組成物ＩＩは、塩化ナトリウムをさらに含む。

【0127】

いくつかの態様では、塩化ナトリウムは、約１０ｍＭ～約２００ｍＭ塩化ナトリウムの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、塩化ナトリウムは、約１０ｍＭ～約１３４ｍＭ、約１０ｍＭ～約１３０ｍＭ、約２０ｍＭ～約１２０ｍＭ、約３０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約４０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４５ｍＭ～約９５ｍＭ、約４５ｍＭ～約８０ｍＭ、約４５ｍＭ～約７０ｍＭ、約４５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、または約５１ｍＭ～約５４ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭ～約１９０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭ～約１８０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭ～約１７０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭ～約１６０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭ～約１５０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭ～約１４０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭ～約１３０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約２０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約３０ｍＭ～約１１０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４０ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約６０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約７０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４５ｍＭ～約９５ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４５ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４５ｍＭ～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約５１ｍＭ～約５４ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４０ｍＭ～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４５ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４８ｍＭ～約５３ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４０ｍＭ～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４５ｍＭ～約５０ｍＭである。

【0128】

いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、または約１００ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約２０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約３０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約６０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約７０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約８０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約９０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１００ｍＭである。

【0129】

いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、または約２００ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１１０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１３０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１４０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１５０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１６０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１７０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１８０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約１９０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約２００ｍＭである。

【0130】

いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約３９ｍＭ、約４０ｍＭ、約４１ｍＭ、約４２ｍＭ、約４３ｍＭ、約４４ｍＭ、約４５ｍＭ、約４６ｍＭ、約４７ｍＭ、約４８ｍＭ、約４９ｍＭ、または約５０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約３９ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４１ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４２ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４３ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４４ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４５ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４６ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４７ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４８ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約４９ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、４０．０である。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、４９．６ｍＭである。

【0131】

本明細書に開示される塩化ナトリウムの濃度はいずれも、体積あたりの重量、例えば、ｍｇ／ｍｌで表すことができる。当業者であれば、本明細書に開示されるｍＭ濃度を体積あたりの重量濃度に容易に変換することができるであろう。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１１．９ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１１．８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１１．７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１１．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１１．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１１．０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約９．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約９ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約８．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約８．０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約７．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約７．０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約６．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約６．０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約５．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約５．０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約４．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約４．０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約３．９ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約３．８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約３．７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約３．６ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約３．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約３．４ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約３．３ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約３．１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約３．０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約２．９ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約２．８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約２．７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約２．６ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約２．４ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約２．３ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約２．１ｍｇ／ｍｌである。

【0132】

いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約３．０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約２．９２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約２．９ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約２．８ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約２．７ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約２．６ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約２．５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約２．４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約２．３４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約２．３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約２．２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約２．１ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約２．０ｍｇ／ｍｌである。

【0133】

いくつかの態様では、組成物ＩＩは、リン酸化合物を含むリン酸緩衝液をさらに含む。リン酸化合物の非限定的な例としては、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二カリウム、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、リン酸化合物は、リン酸カリウムである。他の態様では、リン酸化合物は、リン酸ナトリウムである。

【0134】

ＩＩ．Ｅ．リン酸塩
いくつかの態様では、組成物Ｉまたは組成物ＩＩは、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムをさらに含む。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約２ｍＭ～約２０ｍＭ、約３ｍＭ～約２０ｍＭ、約４ｍＭ～約２０ｍＭ、約５ｍＭ～約２０ｍＭ、約６ｍＭ～約２０ｍＭ、約７ｍＭ～約２０ｍＭ、約８ｍＭ～約２０ｍＭ、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約２ｍＭ～約１９ｍＭ、約３ｍＭ～約１８ｍＭ、約４ｍＭ～約１７ｍＭ、約５ｍＭ～約１６ｍＭ、または約５ｍＭ～約１５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。

【0135】

いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約４．５ｍＭ、約４．６ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．８ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．２ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．４ｍＭ、または約５．５ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約２ｍＭ～約１９ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約３ｍＭ～約１８ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約４ｍＭ～約１７ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約５ｍＭ～約１６ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約５ｍＭ～約１５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約１ｍＭ～約１０ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約２ｍＭ～約９ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約３ｍＭ～約８ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約４ｍＭ～約７ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約４ｍＭ～約６ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約３ｍＭ～約７ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約３ｍＭ～約６ｍＭの濃度で組成物中に存在する。

【0136】

いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、約３．０ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、約３．５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、約４．０ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、約４．１ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、約４．２ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、約４．３ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、約４．４ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、約４．５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約４．６ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約４．７ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約４．８ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約４．９ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約５．０ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約５．１ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約５．２ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約５．３ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約５．４ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約５．５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約５．６ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約５．７ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約５．８ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約５．９ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸カリウムは、約６．０ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、組成物中のリン酸カリウムの濃度は、５．１５ｍＭである。

【0137】

いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約１５．０ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１５．１ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１５．２ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１５．３ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１５．４ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１５．５ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１５．６ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１５．７ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１５．８ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１５．９ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１６．０である。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１６．１ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１６．２ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１６．３ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１６．４ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウムの濃度は、約１６．５ｍＭである。いくつかの態様では、組成物中のリン酸カリウムの濃度は、１５．４ｍＭである。

【0138】

いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約１４．０ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約１４．１ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約１４．２ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約１４．３ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約１４．４ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約１４．５ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約１４．６ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約１４．７ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約１４．８ｍＭである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約１４．９ｍＭである。

【0139】

本明細書に開示される一塩基性リン酸カリウムの濃度のいずれも、体積あたりの重量、例えば、ｍｇ／ｍｌで表すことができる。当業者であれば、本明細書に開示されるｍＭ濃度を体積あたりの重量濃度に容易に変換することができるであろう。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．１４ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約２．７５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．１４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約０．１５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約０．１７ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．２３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．２５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６１ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６６ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６７ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６８ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６９ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．７０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．７１ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．７２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．７３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．７４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．７５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約１．０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約１．２５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約１．５０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約１．７５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．０３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．０４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．０５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．１ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．６ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．７ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．８ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．９ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約３．０ｍｇ／ｍｌである。

【0140】

いくつかの態様では、組成物Ｉまたは組成物ＩＩは、リン酸ナトリウムをさらに含む。いくつかの態様では、リン酸ナトリウム、例えば、二塩基性リン酸ナトリウム七水和物は、約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、約１０ｍＭ～約９０ｍＭ、約１０ｍＭ～約８０ｍＭ、約１０ｍＭ～約７０ｍＭ、約１０ｍＭ～約６０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約４０ｍＭ、約１１ｍＭ～約２９ｍＭ、約１２ｍＭ～約２８ｍＭ、約１３ｍＭ～約２７ｍＭ、または約１４ｍＭ～約２６ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１１ｍＭ～約２９ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１２ｍＭ～約２８ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１３ｍＭ～約２７ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１４ｍＭ～約２６ｍＭの濃度で組成物中に存在する。

【0141】

いくつかの態様では、リン酸ナトリウムが、約１４．５ｍＭ、約１４．６ｍＭ、約１４．７ｍＭ、約１４．８ｍＭ、約１４．９ｍＭ、約１５．０ｍＭ、約１５．１ｍＭ、約１５．２ｍＭ、約１５．３ｍＭ、約１５．４ｍＭ、または約１５．５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１４．５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１４．６ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１４．７ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１４．８ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１４．９ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１５．０ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１５．１ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１５．２ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１５．３ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１５．４ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１５．５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムの濃度は、１４．９ｍＭである。

【0142】

いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１５．６ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１５．７ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１５．８ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１５．９ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１６．０ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１６．１ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１６．２ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１６．３ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１６．４ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１６．５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１６．６ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１６．７ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１６．８ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１６．９ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約１７．０ｍＭの濃度で組成物中に存在する。

【0143】

いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２６．５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２６．６ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２６．７ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２６．８ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２６．９ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２７．０ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２７．１ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２７．２ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２７．３ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２７．４ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２７．５ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２７．６ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２７．７ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２７．８ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２７．９ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、約２８．０ｍＭの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、リン酸ナトリウムの濃度が２７．１ｍＭである濃度で組成物中に存在する。

【0144】

本明細書の一塩基性リン酸ナトリウム濃度のいずれも、体積あたりの重量、例えば、ｍｇ／ｍｌで表すことができる。当業者であれば、本明細書に開示されるｍＭ濃度を体積あたりの重量濃度に容易に変換することができるであろう。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約１．４２ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１４．２ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約１．４ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約１．５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約１．６ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約１．７ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約１．８ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約１．９ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約２．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約２．１ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約２．１３ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約２．２ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約２．２５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約２．３ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約２．４ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約２．５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約２．６ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約２．７ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約２．７５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約２．８ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約２．９ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約３．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約３．２５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約３．５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約３．７５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約３．８ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約３．８３ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約３．８５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約３．９ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約４．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約４．２５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約４．５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約４．７５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約５．５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約６．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約６．５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約７．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約７．５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約８．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約８．５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約９．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約９．５ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約１０．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約１１．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約１２．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約１３．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約１４．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、少なくとも約１４．０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。

【0145】

いくつかの態様では、リン酸ナトリウムは、二塩基性リン酸ナトリウム七水和物である。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６．０ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６．１ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６．２ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６．３ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６．４ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６．５ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６．６ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６．７ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６．８ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６．９ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７．０ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７．１ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７．２ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７．２４ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７．３ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７．４ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７．５ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７．６ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７．７ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７．８ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７．９ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約８．０ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約８．５ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約９．０ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約９．５ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１０．０ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１０．５ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１１．０ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１１．５ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１２．０ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１２．５ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１３．０ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１３．５ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１４．０ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１４．１ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１４．２ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１４．３ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１４．４ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１４．５ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１５．０ｍｇ／ｍｌの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含む。

【0146】

いくつかの態様では、リン酸緩衝液は、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを約１：約２の比率で含む。いくつかの態様では、リン酸緩衝液は、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを約１：約３の比率で含む。いくつかの態様では、リン酸緩衝液は、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを約１：約４の比率で含む。いくつかの態様では、リン酸緩衝液は、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを約１：約５の比率で含む。いくつかの態様では、リン酸緩衝液は、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを約１：約３の比率で含む。いくつかの態様では、リン酸緩衝液は、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムを約１：約２の比率で含む。

【0147】

いくつかの態様では、本開示は、（ｉ）細胞外小胞、（ｉｉ）リン酸カリウム、及び（ｉｉｉ）リン酸ナトリウムを含む溶液を含む医薬組成物を提供し、ここで、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムのモル比は、約１～約３または約１～約２である。

【0148】

ＩＩ．Ｆ．糖類
本開示の特定の態様は、細胞外小胞、糖類、塩化ナトリウム、リン酸カリウム、及びリン酸ナトリウムを含む医薬組成物に関する。上記のとおり、糖類は、単糖類、二糖類、三糖類、または任意の他の糖類であり得る。いくつかの態様では、糖類は、スクロースである。いくつかの態様では、糖類は、トレハロースである。

【0149】

いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約１％～少なくとも約１０％、少なくとも約２％～少なくとも約９％、少なくとも約３％～少なくとも約８％、少なくとも約４％～少なくとも約７％、少なくとも約４％～少なくとも約６％、少なくとも約３％～少なくとも約７％、少なくとも約５％～少なくとも約１０％、少なくとも約５％～少なくとも約９％、少なくとも約５％～少なくとも約８％、または少なくとも約５％～少なくとも約７％の濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約１％の濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約２％の濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約３％の濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約４％の濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約５％の濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約６％の濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約７％の濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約８％の濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約９％の濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約１０％の濃度で組成物中に存在する。

【0150】

いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１％のスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約２％のスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約２．５％のスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約３％のスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約４％のスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約５％のスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６％のスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７％のスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約８％のスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約９％のスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１０％のスクロースを含む。

【0151】

いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１％のトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約２％のトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約３％のトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約４％のトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約５％のトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６％のトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７％のトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約８％のトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約９％のトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１０％のトレハロースを含む。

【0152】

いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約９０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約３０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約８０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約４０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約４０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約３０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約９０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約８０ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約３０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約４０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約８０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約９０ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。いくつかの態様では、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロースは、少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌの濃度で組成物中に存在する。

【0153】

いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約３０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約４０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約８０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約９０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。

【0154】

いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約３０ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約４０ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約８０ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約９０ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様では、組成物は、少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。

【0155】

特定の態様では、組成物は、少なくとも約２．５％のスクロースを含み、本組成物は、約２％未満のスクロースを含む同様の組成物と比較して、改善された安定性を有する。

【0156】

ＩＩ．Ｇ．導電率
いくつかの態様では、本開示の組成物Ｉまたは組成物ＩＩは、約６ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約１０ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％の導電率を有する。いくつかの態様では、導電率は、６ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約７ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、約７ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約８ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、約８ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約９ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、または約９ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約１０ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様では、導電率は、約６ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、約７ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、約８ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、約９ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、または約１０ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。

【0157】

いくつかの態様では、組成物は、約６ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約１０ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％の導電率を有する。いくつかの態様では、導電率は、約６ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様では、導電率は、約７ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様では、導電率は、約８ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様では、導電率は、約９ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様では、導電率は、約１０ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様では、導電率は、約７．２３ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様では、導電率は、約８．８ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。

【0158】

ＩＩ．Ｈ．抗酸化剤
いくつかの態様では、本開示の組成物Ｉまたは組成物ＩＩは、抗酸化剤をさらに含む。いくつかの態様では、抗酸化剤は、Ｄ－メチオニン、Ｌ－メチオニン、アスコルビン酸、エリソルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、チオグリセロール、システイン、アセチルシステイン、シスチン、ジチオエリスレイトール、グルタチオン、トコフェロール、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、重硫酸ナトリウム、ジチオン酸ナトリウム、Α－トコフェロール、γ－トコフェロール、没食子酸プロピル、パルミチン酸アスコルビル、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ尿素、チオ硫酸ナトリウム、没食子酸プロピル、ビタミンＣ、Ｎ－アセチルシステイン、セレン、及びチオグリコール酸ナトリウムを含む。いくつかの態様では、抗酸化剤は、メチオニンである。他の態様では、抗酸化剤は、Ｄ－メチオニンである。他の態様では、抗酸化剤は、Ｌ－メチオニンである。

【0159】

いくつかの態様では、組成物ＩまたはＩＩの抗酸化剤は、チオ硫酸塩またはその塩を含む。いくつかの態様では、チオ硫酸塩またはその塩は、チオ硫酸ナトリウムを含む。

【0160】

いくつかの態様では、本明細書に開示される組成物は、抗還元剤を含む。いくつかの態様では、抗還元剤は、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、ＣｕＳＯ４、Ｓ－アデノシルメチオニン、システイン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0161】

ＩＩ．Ｉ．プロテアーゼ阻害剤
いくつかの態様では、本明細書に開示される組成物は、プロテアーゼ阻害剤を含む。チオレドキシンなどのタンパク質は、ジスルフィド結合を有するタンパク質を還元することができる。ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、及びＣｕＳＯ４などの阻害剤を添加することにより、特にヘキソキナーゼなどのメタロプロテアーゼの活性が低下し得る。二価カチオンをキレート化することによるＥＥＧＴＡ／ＥＤＴＡ阻害。したがって、いくつかの態様では、組成物は、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、ＣｕＳＯ４、及びそれらの任意の組み合わせから選択されるプロテアーゼ阻害剤をさらに含む。いくつかの態様では、温度は、プロテアーゼの活性を低下させるために低下させる。

【0162】

ＩＩ．Ｊ．組成物の特徴
本開示の組成物は、組成物のＥＶが、例えば、凍結及び／または解凍及び／または対象に投与されたときに、変動する温度条件下で安定であるように製剤化されている。束縛することを望むものではないが、現在開示されている特定の比率での、現在開示されている糖類、例えば、約５％ｗ／ｖのスクロースと、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムとの組み合わせは、組成物及びその組成物に含まれるＥＶに優れた安定性をもたらす。例えば、いくつかの態様では、本開示の組成物は、様々な時間長及び様々な温度で保存することができ、細胞外小胞、例えば、エキソソームの安定性が低下することはない。さらに、いくつかの態様では、現在開示されている組成物は、周囲温度で液体として製剤化され、次いで、組成物を－８０℃の冷凍庫に入れることによって凍結され、次いで解凍され得る。したがって、いくつかの態様では、以下に記載するとおり、ＥＶの安定性を損なうことなく、組成物は、凍結前に液体として保存することができ、組成物は、凍結しながら固体として保存することができ、また組成物は、解凍後に液体として保存することができる。

【0163】

いくつかの態様では、組成物は、凍結する前に液体として保存することができる。いくつかの態様では、組成物は、凍結する前に、約２５℃～約１℃の温度で液体として保存することができ、ＥＶ、例えば、エキソソームの安定性が低下することはない。いくつかの態様では、組成物は、ＥＶ、例えば、エキソソームの安定性を損なうことなく、約２５℃～約１℃で、凍結する前に液体として保存することができる。

【0164】

いくつかの態様では、組成物は、凍結する前に、少なくとも約４時間、少なくとも約１０時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１５時間、少なくとも約２０時間、少なくとも約２４時間、液体として保存することができる。いくつかの態様では、組成物は、凍結する前に、約４時間～約１２時間、約５時間～約１２時間、約６時間～約１２時間、約４時間～約２４時間、約６時間～約２４時間、約１２時間～約２４時間、または約４時間～約１６時間、液体として保存される。いくつかの態様では、組成物は、凍結前に、３６時間未満、３０日未満、２４時間未満、２３時間未満、２２時間未満、２１時間未満、２０時間未満、１９時間未満、１８時間未満、１７時間未満、１６時間未満、１５時間未満、１４時間未満、１３時間未満、１２時間未満、１１時間未満、１０時間未満、９時間未満、８時間未満、７時間未満、６時間未満、５時間未満、または４時間未満、液体として保存することができる。

【0165】

いくつかの態様では、組成物は、凍結する前に、約１週間、約４℃で液体として保存することができる。いくつかの態様では、組成物は、４℃で最大１週間安定であり得る。いくつかの態様では、組成物は、凍結する前に約４℃で約１週間液体として保存され得、次いでそれを必要とする対象に投与され得る。

【0166】

いくつかの態様では、組成物は、解凍される前に、ある時間長の間、凍結固体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、ゼロ及びゼロ以下の温度、例えば、約０℃及び／または－８０℃の間の温度で、固体として保存することができ、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の安定性は低下していない。いくつかの態様では、組成物は、約０℃及び／または－８０℃の間の温度で、凍結固体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約０℃及び／または－５０℃の間の温度で、凍結固体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約０℃及び－２０℃の間の温度で、凍結固体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約０℃及び－１５℃の間の温度で、凍結固体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、－８０℃で最大６ヶ月間保存することができる。いくつかの態様では、組成物は、－８０℃で１年間安定であり得る。いくつかの態様では、組成物は、－８０℃で２年間安定であり得る。

【0167】

現在開示されている組成物は、それを必要とする対象への投与の準備に、様々な時間長の間、凍結固体として保存され、その後解凍され得る。いくつかの態様では、解凍された液体は、ＥＶ、例えば、エキソソームの安定性を損なうことなく、投与前に様々な長さ及び様々な温度で保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約１℃～約２５℃の温度で、解凍され、液体として保存され得、ここで、ＥＶ、例えば、エキソソームの安定性は低下しない。

【0168】

いくつかの態様では、組成物は、約１℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約２℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約３℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約４℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約５℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約６℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約７℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約８℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約９℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約１０℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約１１℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約１２℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約１３℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約１４℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約１５℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約１６℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約１７℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約１８℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約１９℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約２０℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約２１℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約２２℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約２３℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約２４℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、約２５℃で、解凍された液体として保存され得る。いくつかの態様では、組成物は、解凍された液体として４℃で約１週間保存され得る。組成物は、４℃で最大１週間、解凍した液体として安定し得る。

【0169】

いくつかの態様では、組成物は、保存され、次いで、それを必要とする対象に直接投与され得る。いくつかの態様では、組成物は、２５℃で最大２４時間保存され得、次いで、それを必要とする対象に直接投与され得る。いくつかの態様では、組成物は、４℃で最大３日間保存され得、次いで、それを必要とする対象に直接投与され得る。いくつかの態様では、組成物は、４℃で最大７日間保存され得、次いで、それを必要とする対象に直接投与され得る。いくつかの態様では、組成物は、－８０℃で最大６ヶ月間保存され、解凍され、次いで、それを必要とする対象に直接投与され得る。

【0170】

ＩＩ．Ｋ．例示的組成物
いくつかの態様では、本開示の組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約４％ｗ／ｖ～約６％ｗ／ｖの濃度、例えば５％ｗ／ｖのスクロースと；
（ｃ）４０ｍＭ～約６０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）４ｍＭ～６ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１０ｍＭ～約２０ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、組成物のｐＨは、約７．２である。いくつかの態様では、本組成物の導電率は、約７．２ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様では、組成物は、例えば、液体製剤などの溶液中にある。

【0171】

いくつかの態様では、本開示の組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、組成物のｐＨは、約７．２である。いくつかの態様では、本組成物の導電率は、約７．２ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様では、組成物は、例えば、液体製剤などの溶液中にある。

【0172】

いくつかの態様では、本開示の組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約４％ｗ／ｖ～約６％ｗ／ｖの濃度、例えば５％ｗ／ｖのスクロースと；
（ｃ）３０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）１０ｍＭ～２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約２０ｍＭ～約４０ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、組成物のｐＨは、約７．２である。いくつかの態様では、本組成物の導電率は、約８．８ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様では、組成物は、例えば、液体製剤などの溶液中にある。

【0173】

いくつかの態様では、本開示の組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースと；
（ｃ）約４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約１５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約２７ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、組成物のｐＨは、約７．２である。いくつかの態様では、本組成物の導電率は、約８．８ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様では、組成物は、例えば、液体製剤などの溶液中にある。

【0174】

いくつかの態様では、本開示の組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約４％ｗ／ｖ～約６％ｗ／ｖの濃度、例えば５％ｗ／ｖのスクロースと；
（ｃ）３０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）１ｍＭ～２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約２０ｍＭ～約４０ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、組成物のｐＨは、約７．２である。いくつかの態様では、組成物は、例えば、液体製剤などの溶液中にある。

【0175】

いくつかの態様では、本開示の組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースと；
（ｃ）約４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約１１ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約３２ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、組成物のｐＨは、約７．２である。いくつかの態様では、組成物は、例えば、液体製剤などの溶液中にある。

【0176】

いくつかの態様では、本開示の組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約４％ｗ／ｖ～約６％ｗ／ｖの濃度、例えば５％ｗ／ｖのスクロースと；
（ｃ）３０ｍＭ～約６０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）１ｍＭ～２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１０ｍＭ～約４０ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、組成物のｐＨは、約７．２である。いくつかの態様では、組成物は、例えば、液体製剤などの溶液中にある。

【0177】

いくつかの態様では、本開示の組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約４％ｗ／ｖ～約６％ｗ／ｖの濃度、例えば５％ｗ／ｖのスクロースと；
（ｃ）４０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）５ｍＭ～１５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭ～約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、組成物のｐＨは、約７．２である。いくつかの態様では、組成物は、例えば、液体製剤などの溶液中にある。

【0178】

ＩＩ．Ｋ．１．例示的組成物０２
いくつかの態様では、本開示の組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約４％ｗ／ｖ～約６％ｗ／ｖの濃度、例えば５％ｗ／ｖのスクロースと；
（ｃ）３０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭ～約２５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭ～約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0179】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースと；
（ｃ）３０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭ～約２５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭ～約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0180】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約４％ｗ／ｖ～約６％ｗ／ｖの濃度、例えば５％ｗ／ｖのスクロースと；
（ｃ）約４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭ～約２５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭ～約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0181】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約４％ｗ／ｖ～約６％ｗ／ｖの濃度、例えば５％ｗ／ｖのスクロースと；
（ｃ）約３０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約１５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭ～約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0182】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約４％ｗ／ｖ～約６％ｗ／ｖの濃度、例えば５％ｗ／ｖのスクロースと；
（ｃ）３０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭ～約２５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約３０ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0183】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約４％ｗ／ｖ～約６％ｗ／ｖの濃度、例えば５％ｗ／ｖのスクロースと；
（ｃ）３０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭ～約２５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約２７ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0184】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約４％ｗ／ｖ～約６％ｗ／ｖの濃度、例えば５％ｗ／ｖのスクロースと；
（ｃ）３０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭ～約２５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭ～約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．０～約７．４である。

【0185】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約４％ｗ／ｖ～約６％ｗ／ｖの濃度、例えば５％ｗ／ｖのスクロースと；
（ｃ）３０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭ～約２５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭ～約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0186】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースと；
（ｃ）約４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約１５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約２７ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウム七水和物と、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0187】

いくつかの態様では、細胞外小胞は、ＳＴＩＮＧアゴニストを含む。いくつかの態様では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）ＳＴＩＮＧアゴニストまたは非環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストを含む。いくつかの態様では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、ｃＧＭＰ、環状ジ－ＧＭＰ（ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ）、ｃＡＭＰ、環状ジ－ＡＭＰ（ｃ－ｄｉ－ＡＭＰ）、環状－ＧＭＰ－ＡＭＰ（ｃＧＡＭＰ）、環状ジ－ＩＭＰ（ｃ－ｄｉ－ＩＭＰ）、環状ＡＭＰ－ＩＭＰ（ｃＡＩＭＰ）、及びそれらの類似体を含み、これらは、患者において、免疫または炎症応答を刺激または増強することが知られている。いくつかの態様では、ＣＤＮは、環状ジヌクレオチドを連結する２’２’、２’３’、２’５’、３’３’、または３’５’結合、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0188】

いくつかの態様では、組成物は、凍結乾燥されている。

【0189】

ＩＩ．Ｋ．１．例示的組成物０３
特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約３００ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）少なくとも約１ｍＭ～少なくとも約２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと；を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0190】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）少なくとも約１ｍＭ～少なくとも約２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと；を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0191】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約３００ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）少なくとも約１ｍＭ～少なくとも約２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと；を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0192】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約３００ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと；を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0193】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約３００ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）少なくとも約１ｍＭ～少なくとも約２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0194】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約３００ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）少なくとも約１ｍＭ～少なくとも約２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと；を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0195】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0196】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）少なくとも約１％～少なくとも約１０％の濃度のスクロースと；
（ｃ）少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）少なくとも約１ｍＭ～少なくとも約２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと；を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0197】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）少なくとも約１ｍＭ～少なくとも約２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと；を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0198】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）少なくとも約１％～少なくとも約１０％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）少なくとも約１ｍＭ～少なくとも約２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと；を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0199】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）少なくとも約１％～少なくとも約１０％の濃度のスクロースと；
（ｃ）少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと；を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0200】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）少なくとも約１％～少なくとも約１０％の濃度のスクロースと；
（ｃ）少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）少なくとも約１ｍＭ～少なくとも約２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約６．７～約７．７である。

【0201】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）少なくとも約１％～少なくとも約１０％の濃度のスクロースと；
（ｃ）少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）少なくとも約１ｍＭ～少なくとも約２０ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約３５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと；を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0202】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0203】

いくつかの態様では、細胞外小胞は、ＩＬ－１２部分を含む。特定の態様では、本明細書に開示されるＩＬ－１２部分。特定の態様では、ＩＬ－１２部分は、配列番号１１、１２、または１３に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一性であるアミノ酸配列を含む（表１Ａ）。特定の態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一性であるアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む。

【0204】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）ＩＬ－１２部分を含む細胞外小胞であって、ＩＬ－１２部分が、配列番号１１、１２、または１３に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外小胞と；
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0205】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＩＬ－１２部分を含む細胞外小胞であって、ＩＬ－１２部分が、配列番号１１、１２、または１３に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0206】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）ＩＬ－１２部分を含む細胞外小胞であって、ＩＬ－１２部分が、配列番号１３に示されるアミノ酸を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0207】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＩＬ－１２部分を含む細胞外小胞であって、ＩＬ－１２部分が、配列番号１３に記載のアミノ酸を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0208】

いくつかの態様では、細胞外小胞は、ＡＳＯを含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物（配列番号２３；表１Ｂ）内の核酸配列に相補的である長さ１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、核酸配列ＧＡＡＡＧＧＴＴＣＣＧＴＣＧＧＧＣ（配列番号１４４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、核酸配列ＣＴＧＡＧＴＣＧＣＴＧＡＡＧＣＧＧ（配列番号１４５）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、核酸配列ＧＣＣＣＴＴＧＴＡＣＴＴＴＴＧＣＡＴＡＧ（配列番号１９３）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、核酸配列ＧＣＡＡＧＡＴＣＣＣＧＧＡＴＴＣＧＧＴＣ（配列番号１８５）を含む。

【0209】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的な長さ１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）スクロースと；
（ｃ）塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり；
スクロースは、約７３ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４６ｍＭ、及び約１５０ｍＭから選択される濃度であり；
塩化ナトリウムは、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４６ｍＭ、及び約１５０ｍＭから選択される濃度である。

【0210】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞と；
（ｂ）スクロースと；
（ｃ）塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり；
スクロースは、約７３ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４６ｍＭ、及び約１５０ｍＭから選択される濃度であり；
塩化ナトリウムは、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４６ｍＭ、及び約１５０ｍＭから選択される濃度である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む。

【0211】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞と；
（ｂ）スクロースと；
（ｃ）塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり；
スクロースは、約２．５％、約２．６％、約２．７％、約２．８％、約２．９％、約３．０％、約３．１％、約３．２％、約３．３％、約３．４％、約３．５％、約３．６％、約３．７％、約３．８％、約３．９％、約４．０％、約４．１％、約４．２％、約４．３％、約４．４％、約４．５％、約４．６％、約４．７％、約４．８％、約４．９％、及び約５．０％から選択される濃度であり；
塩化ナトリウムは、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４６ｍＭ、及び約１５０ｍＭから選択される濃度である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む。

【0212】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的な長さ１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約７３ｍＭ～約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0213】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的な長さ１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約２．５％～約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0214】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約７３ｍＭ～約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0215】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約２．５％～約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0216】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的な長さ１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0217】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的な長さ１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0218】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的な長さ１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約１００ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0219】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的な長さ１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0220】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的な長さ１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約２．５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0221】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号９１～９３から選択される核酸配列を含む。

【0222】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0223】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0224】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約４．５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0225】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約４％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0226】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約３．５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0227】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約３％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0228】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約２．５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0229】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、核酸配列ＧＡＡＡＧＧＴＴＣＣＧＴＣＧＧＧＣ（配列番号１４４）を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0230】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、核酸配列ＧＡＡＡＧＧＴＴＣＣＧＴＣＧＧＧＣ（配列番号１４４）を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0231】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、核酸配列ＣＴＧＡＧＴＣＧＣＴＧＡＡＧＣＧＧ（配列番号１４５）を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0232】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、核酸配列ＣＴＧＡＧＴＣＧＣＴＧＡＡＧＣＧＧ（配列番号１４５）を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0233】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、核酸配列ＧＣＣＣＴＴＧＴＡＣＴＴＴＴＧＣＡＴＡＧ（配列番号１９３）を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0234】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、核酸配列ＧＣＣＣＴＴＧＴＡＣＴＴＴＴＧＣＡＴＡＧ（配列番号１９３）を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0235】

特定の態様では、本組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、核酸配列ＧＣＡＡＧＡＴＣＣＣＧＧＡＴＴＣＧＧＴＣ（配列番号１８５）を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0236】

いくつかの態様では、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、核酸配列ＧＣＡＡＧＡＴＣＣＣＧＧＡＴＴＣＧＧＴＣ（配列番号１８５）を含む、細胞外小胞と；
（ｂ）約５％の濃度のスクロースと；
（ｃ）約５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムと；
（ｄ）約５ｍＭの濃度の一塩基性リン酸カリウムと；
（ｅ）約１５ｍＭの濃度の二塩基性リン酸ナトリウムと、を含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２である。

【0237】

いくつかの態様では、組成物は、凍結乾燥されている。

【0238】

ＩＩＩ．細胞外小胞、例えば、エキソソーム
本明細書に開示されるのは、対象の免疫系を調節することができる改変されたＥＶ、例えば、エキソソームである。本開示において有用なＥＶ、例えば、エキソソームは、少なくとも１つの外因性の生物学的活性部分を生成するように操作されている。いくつかの態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、２つの外因性の生物学的活性部分を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、３つの外因性の生物学的活性部分を含む。他の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、４つの外因性の生物学的活性部分を含む。さらなる態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、５つ以上の外因性の生物学的活性部分を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上の外因性の生物学的活性部分を含む。

【0239】

上記のように、本明細書に記載のＥＶ（例えばエキソソーム）は、直径が約２０～３００ｎｍの細胞外小胞である。特定の態様では、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、約２０～２９０ｎｍ、２０～２８０ｎｍ、２０～２７０ｎｍ、２０～２６０ｎｍ、２０～２５０ｎｍ、２０～２４０ｎｍ、２０～２３０ｎｍ、２０～２２０ｎｍ、２０～２１０ｎｍ、２０～２００ｎｍ、２０～１９０ｎｍ、２０～１８０ｎｍ、２０～１７０ｎｍ、２０～１６０ｎｍ、２０～１５０ｎｍ、２０～１４０ｎｍ、２０～１３０ｎｍ、２０～１２０ｎｍ、２０～１１０ｎｍ、２０～１００ｎｍ、２０～９０ｎｍ、２０～８０ｎｍ、２０～７０ｎｍ、２０～６０ｎｍ、２０～５０ｎｍ、２０～４０ｎｍ、２０～３０ｎｍ、３０～３００ｎｍ、３０～２９０ｎｍ、３０～２８０ｎｍ、３０～２７０ｎｍ、３０～２６０ｎｍ、３０～２５０ｎｍ、３０～２４０ｎｍ、３０～２３０ｎｍ、３０～２２０ｎｍ、３０～２１０ｎｍ、３０～２００ｎｍ、３０～１９０ｎｍ、３０～１８０ｎｍ、３０～１７０ｎｍ、３０～１６０ｎｍ、３０～１５０ｎｍ、３０～１４０ｎｍ、３０～１３０ｎｍ、３０～１２０ｎｍ、３０～１１０ｎｍ、３０～１００ｎｍ、３０～９０ｎｍ、３０～８０ｎｍ、３０～７０ｎｍ、３０～６０ｎｍ、３０～５０ｎｍ、３０～４０ｎｍ、４０～３００ｎｍ、４０～２９０ｎｍ、４０～２８０ｎｍ、４０～２７０ｎｍ、４０～２６０ｎｍ、４０～２５０ｎｍ、４０～２４０ｎｍ、４０～２３０ｎｍ、４０～２２０ｎｍ、４０～２１０ｎｍ、４０～２００ｎｍ、４０～１９０ｎｍ、４０～１８０ｎｍ、４０～１７０ｎｍ、４０～１６０ｎｍ、４０～１５０ｎｍ、４０～１４０ｎｍ、４０～１３０ｎｍ、４０～１２０ｎｍ、４０～１１０ｎｍ、４０～１００ｎｍ、４０～９０ｎｍ、４０～８０ｎｍ、４０～７０ｎｍ、４０～６０ｎｍ、４０～５０ｎｍ、５０～３００ｎｍ、５０～２９０ｎｍ、５０～２８０ｎｍ、５０～２７０ｎｍ、５０～２６０ｎｍ、５０～２５０ｎｍ、５０～２４０ｎｍ、５０～２３０ｎｍ、５０～２２０ｎｍ、５０～２１０ｎｍ、５０～２００ｎｍ、５０～１９０ｎｍ、５０～１８０ｎｍ、５０～１７０ｎｍ、５０～１６０ｎｍ、５０～１５０ｎｍ、５０～１４０ｎｍ、５０～１３０ｎｍ、５０～１２０ｎｍ、５０～１１０ｎｍ、５０～１００ｎｍ、５０～９０ｎｍ、５０～８０ｎｍ、５０～７０ｎｍ、５０～６０ｎｍ、６０～３００ｎｍ、６０～２９０ｎｍ、６０～２８０ｎｍ、６０～２７０ｎｍ、６０～２６０ｎｍ、６０～２５０ｎｍ、６０～２４０ｎｍ、６０～２３０ｎｍ、６０～２２０ｎｍ、６０～２１０ｎｍ、６０～２００ｎｍ、６０～１９０ｎｍ、６０～１８０ｎｍ、６０～１７０ｎｍ、６０～１６０ｎｍ、６０～１５０ｎｍ、６０～１４０ｎｍ、６０～１３０ｎｍ、６０～１２０ｎｍ、６０～１１０ｎｍ、６０～１００ｎｍ、６０～９０ｎｍ、６０～８０ｎｍ、６０～７０ｎｍ、７０～３００ｎｍ、７０～２９０ｎｍ、７０～２８０ｎｍ、７０～２７０ｎｍ、７０～２６０ｎｍ、７０～２５０ｎｍ、７０～２４０ｎｍ、７０～２３０ｎｍ、７０～２２０ｎｍ、７０～２１０ｎｍ、７０～２００ｎｍ、７０～１９０ｎｍ、７０～１８０ｎｍ、７０～１７０ｎｍ、７０～１６０ｎｍ、７０～１５０ｎｍ、７０～１４０ｎｍ、７０～１３０ｎｍ、７０～１２０ｎｍ、７０～１１０ｎｍ、７０～１００ｎｍ、７０～９０ｎｍ、７０～８０ｎｍ、８０～３００ｎｍ、８０～２９０ｎｍ、８０～２８０ｎｍ、８０～２７０ｎｍ、８０～２６０ｎｍ、８０～２５０ｎｍ、８０～２４０ｎｍ、８０～２３０ｎｍ、８０～２２０ｎｍ、８０～２１０ｎｍ、８０～２００ｎｍ、８０～１９０ｎｍ、８０～１８０ｎｍ、８０～１７０ｎｍ、８０～１６０ｎｍ、８０～１５０ｎｍ、８０～１４０ｎｍ、８０～１３０ｎｍ、８０～１２０ｎｍ、８０～１１０ｎｍ、８０～１００ｎｍ、８０～９０ｎｍ、９０～３００ｎｍ、９０～２９０ｎｍ、９０～２８０ｎｍ、９０～２７０ｎｍ、９０～２６０ｎｍ、９０～２５０ｎｍ、９０～２４０ｎｍ、９０～２３０ｎｍ、９０～２２０ｎｍ、９０～２１０ｎｍ、９０～２００ｎｍ、９０～１９０ｎｍ、９０～１８０ｎｍ、９０～１７０ｎｍ、９０～１６０ｎｍ、９０～１５０ｎｍ、９０～１４０ｎｍ、９０～１３０ｎｍ、９０～１２０ｎｍ、９０～１１０ｎｍ、９０～１００ｎｍ、１００～３００ｎｍ、１１０～２９０ｎｍ、１２０～２８０ｎｍ、１３０～２７０ｎｍ、１４０～２６０ｎｍ、１５０～２５０ｎｍ、１６０～２４０ｎｍ、１７０～２３０ｎｍ、１８０～２２０ｎｍ、または１９０～２１０ｎｍの直径を有する。本明細書に記載のＥＶ（例えば、エキソソーム）のサイズは、以下に記載する方法に従って測定することができる。

【0240】

いくつかの態様では、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、内面及び外面を含む二脂質膜（「ＥＶ（例えば、エキソソーム）膜」）を含む。ある特定の態様では、内面は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の内側コア（すなわち、内腔）に面する。特定の態様では、外面は、プロデューサー細胞または標的細胞のエンドソーム、多小胞体、または膜／細胞質と接触し得る。

【0241】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）膜は、脂質及び脂肪酸を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）膜は、リン脂質、糖脂質、脂肪酸、スフィンゴ脂質、ホスホグリセリド、ステロール、コレステロール、及びホスファチジルセリンを含む。

【0242】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）膜は、内側のリーフレット及び外側のリーフレットを含む。内部及び外部リーフレットの組成物は、当技術分野で公知のトランスバイレイヤー（ｔｒａｎｓｂｉｌａｙｅｒ）分布アッセイによって決定することができ、例えば、Ｋｕｙｐｅｒｓ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １９８５ ８１９：１７０を参照されたい。いくつかの態様では、外部リーフレットの組成物は、およそ７０～９０％のコリンリン脂質、およそ０～１５％の酸性リン脂質、及びおよそ５～３０％のホスファチジルエタノールアミンである。いくつかの態様では、内部リーフレットの組成物は、およそ１５～４０％のコリンリン脂質、およそ１０～５０％の酸性リン脂質、及びおよそ３０～６０％のホスファチジルエタノールアミンである。

【0243】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）膜は、グリカンなどの１つ以上の多糖類を含む。

【0244】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）膜は、１つ以上の足場部分をさらに含み、これは、複数の外因性の生物学的活性部分をＥＶ（例えば、エキソソーム）に（例えば、内腔表面または外腔表面のいずれかに）固定することができる。いくつかの態様では、足場部分は、複数の外因性の生物学的活性部分のうちの少なくとも１つをＥＶに固定または連結する。いくつかの態様では、足場部分は、複数の（例えば、少なくとも２つの）外因性の生物学的活性部分をそれぞれＥＶに固定または連結する。特定の態様では、足場部分は、ポリペプチド（「エキソソームタンパク質」）である。他の態様では、足場部分は、非ポリペプチド部分である。いくつかの態様では、エキソソームタンパク質は、膜貫通タンパク質、内在性タンパク質及び末梢タンパク質などの、エキソソーム膜上で濃縮された様々な膜タンパク質を含む。それらには、様々なＣＤタンパク質、トランスポーター、インテグリン、レクチン、及びカドヘリンが含まれる。特定の態様では、足場部分（例えば、エキソソームタンパク質）は、足場Ｘを含む。さらなる態様では、足場部分（例えば、エキソソームタンパク質）は、複数の足場Ｘ部分を含む。

【0245】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つ以上のペイロード（例えば、生物学的活性部分）を標的に送達することができる。したがって、特定の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上の異なるペイロードを含む。ペイロードは、ＥＶと接触する標的（例えば、標的細胞）に作用する剤である。接触は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、または対象において発生できる。ＥＶに導入され得るペイロードの非限定的例として、ヌクレオチド（例えば、検出可能な部分もしくは毒素を含むか、または転写を妨害するヌクレオチド）、核酸（例えば、酵素などのポリペプチドをコードするＤＮＡもしくはｍＲＮＡ分子、またはｍｉＲＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、またはｓｉＲＮＡなどの制御機能を有するＲＮＡ分子）、ＭＳ２などのＲＮＡ結合タンパク質、アミノ酸（例えば、検出可能な部分または翻訳を妨害する毒素を含むアミノ酸）、ポリペプチド（例えば、酵素）、脂質、炭水化物、及び小分子（例えば、小分子薬物及び毒素）などの剤が挙げられる。いくつかの態様では、ペイロードは、外因性の生物学的活性部分（例えば、本明細書に開示されるもの）を含む。

【0246】

ＩＩＩＡ．ペイロード、例えば、生物学的活性部分
いくつかの態様では、ペイロードは、生物学的活性部分を含む。いくつかの態様では、ペイロードは、治療用分子を含む。特定の態様では、治療用分子は、対象において免疫応答を誘導することができる抗原を含む。特定の態様では、抗原は、腫瘍抗原を含む。腫瘍抗原の非限定的例としては、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、ムチン１（ＭＵＣ１）、Ｔｎ－ＭＵＣ１、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、チロシナーゼ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ｃＭＥＴ、ＥＧＦＲ、メソセリン、ＶＥＧＦＲ、アルファ葉酸受容体、ＣＥ７Ｒ、ＩＬ－３、がん精巣抗原（ＣＴＡ）、ＭＡＲＴ－１ ｇｐ１００、及びＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ（黒色腫で優先的に発現する抗原（ＰＲＡＭＥ））、またはそれらの組み合わせが挙げられる。さらなる態様では、抗原は、新抗原を含み得る。本明細書で使用される場合、「新抗原」という用語は、腫瘍特異的変異遺伝子によってコードされる抗原を指す。いくつかの態様では、抗原は、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、抗原は発がん性ウイルスに由来する。さらなる態様では、抗原は、ヒトガンマヘルペスウイルス４（Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒｒウイルス）、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、サイトメガロウイルス、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、コロナウイルス（例えば、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ及びＳＡＲＳ ＣｏＶ）、フィロウイルス（例えば、Ｍａｒｂｕｒｇ及びＥｂｏｌａ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉａ種（例えば、ｖｉｖａｘ及びｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、Ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ、Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ、ヒトヘルペスウイルス８、単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ２）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐ．、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．、Ｐｒｏｔｅｕｓ ｓｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．、コアグラーゼ陰性ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ（ＣｏＮＳ）、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｓｐ．，またはそれらの組み合わせからなる群由来である。

【0247】

いくつかの態様では、抗原は、細胞性及び／または体液性免疫応答を誘導するために、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに由来する。いくつかの態様では、抗原は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ＴＢ抗原）の１つ以上のエピトープを含む。ＥＳＡＴ－６、ＴＢ１０．４、ＣＦＰ１０、Ｒｖ２０３１（ｈｓｐＸ）、Ｒｖ２６５４ｃ（ＴＢ７．７）、及びＲｖ１０３８ｃ（ＥｓｘＪ）など、様々な抗原がＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染に関連する。例えば、Ｌｉｎｄｅｓｔａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８８（１０）：５０２０－３１（２０１２）を参照されたい。これは、その全体が本明細書に組み込まれる。

【0248】

いくつかの態様では、抗原は、自己抗原を含む。本明細書で使用される場合、「自己抗原」という用語は、宿主細胞または組織によって発現される抗原を指す。

【0249】

いくつかの態様では、治療用分子は、抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの態様では、治療用分子は、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つの抗体またはそれらの抗原結合断片を含む。いくつかの態様では、生物学的活性部分は、細胞表面タンパク質を標的とする抗体である。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ－Ｆｃ、ナノボディ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、アゴニスト抗体、遮断抗体、標的化抗体、それらの断片、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、アゴニスト抗体は、ＣＤ４０Ｌアゴニストである。いくつかの態様では、遮断抗体は、プログラム死１（ＰＤ－１）、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４、及びそれらの任意の組み合わせから選択される標的タンパク質に結合する。いくつかの態様では、標的化抗体は、ＣＤ３及び／またはＣＤ１９に結合する。いくつかの態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、抗ＩＬ１２抗体またはその抗原結合断片、ならびに抗ＣＤ４０Ｌ抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ＢＩＴＥＳ、例えば、抗ＣＤ３抗体及び抗がん剤、例えば、抗ＣＤ１９抗体を含む。

【0250】

いくつかの態様では、治療用分子は、抗体の断片、例えば、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）_２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ１）_２、Ｆｖ、ｄＡｂ、またはＦｄ標的化抗原、例えば、ＣＤ３３、ＩＣＡＭ４、ＣＤ４０、ＣＤＬＥＣ９Ａ、ＤＥＣ２０５、及びＴｆＲ、及びそれらの任意の組み合わせを含む。

【0251】

いくつかの態様では、治療用分子は、血液凝固因子、例えば、ＦＶＩＩＩである。

【0252】

いくつかの態様では、治療用分子は、標的化ペプチド、例えば、システインノットペプチドである。

【0253】

いくつかの態様では、治療用分子は、Ｃａｓ９及びジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、及びリソソーム酸性グルコシルセラミダーゼなどの酵素である。

【0254】

いくつかの態様では、治療用分子は、ＦＲＢ－ＦＫＢＰなどのタンパク質二量体化システムである。

【0255】

上記のとおり、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、アジュバントを含むことができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１、２、３、４、５、またはそれ以上の異なるアジュバントを含む。本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、ペイロードの治療効果を増強する（例えば、抗原に対する免疫応答を増大させる）任意の物質を指す。したがって、本明細書に記載のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、参照（例えば、アジュバントを含まない対応するＥＶまたは抗原及びアジュバントを含む非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、またはそれ以上、抗原に対する免疫応答を増大させることができる。アジュバントの非限定的例としては、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、炎症性メディエーター、及びそれらの組み合わせが挙げられる。

【0256】

いくつかの態様では、アジュバントは、細胞質ゾルパターン認識受容体の活性化を誘導する。細胞質ゾルパターン認識受容体の非限定的な例としては、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）、レチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ（ＲＩＧ－１）、黒色腫分化関連タンパク質５（ＭＤＡ５）、ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン、ロイシンリッチリピート及びピリンドメイン含有（ＮＬＲＰ）、インフラマソーム、またはそれらの組み合わせが挙げられる。特定の態様では、アジュバントは、ＳＴＩＮＧアゴニストである。インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）は、典型的には細菌によって産生される環状ジヌクレオチドの細胞質ゾルセンサーである。活性化すると、Ｉ型インターフェロンの産生をもたらし、免疫応答を開始する。特定の態様では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストまたは非環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストを含む。

【0257】

環状プリンジヌクレオチド、例えば、これらに限定されないが、ｃＧＭＰ、環状ジ－ＧＭＰ（ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ）、ｃＡＭＰ、環状ジ－ＡＭＰ（ｃ－ｄｉ－ＡＭＰ）、環状－ＧＭＰ－ＡＭＰ（ｃＧＡＭＰ）、環状ジ－ＩＭＰ（ｃ－ｄｉ－ＩＭＰ）、環状ＡＭＰ－ＩＭＰ（ｃＡＩＭＰ）、及びそれらの類似体などは、患者の免疫応答または炎症応答を刺激または増強することが知られている。ＣＤＮは、環状ジヌクレオチドを連結する２’２’、２’３’、２’５’、３’３’、または３’５’結合、あるいはそれらの任意の組み合わせを有し得る。

【0258】

環状プリンジヌクレオチドは、標準的な有機化学技術を介して修飾して、プリンジヌクレオチドの類似体を産生することができる。好適なプリンジヌクレオチドとしては、これらに限定されないが、アデニン、グアニン、イノシン、ヒポキサンチン、キサンチン、イソグアニン、または当技術分野で公知である他の適切なプリンジヌクレオチドが挙げられる。環状ジヌクレオチドは修飾された類似体であり得る。これらに限定されないが、ホスホロチオエート、ビホスホロチオエート、フルオリネート、及びジフルオリネート修飾など、当技術分野において公知である任意の適切な修飾を使用することができる。

【0259】

５，６－ジメチルキサンテノン－４－酢酸（ＤＭＸＡＡ）、または当技術分野において公知である任意の他の非環状ジヌクレオチドアゴニストなどの非環状ジヌクレオチドアゴニストも使用することができる。

【0260】

本開示と共に使用され得るＳＴＩＮＧアゴニストの非限定的例としては、ＤＭＸＡＡ、ＳＴＩＮＧアゴニスト－１、ＭＬ ＲＲ－Ｓ２ ＣＤＡ、ＭＬ ＲＲ－Ｓ２ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ、ＭＬ－ＲＲ－Ｓ２ ｃＧＡＭＰ、２’３’－ｃ－ｄｉ－ＡＭ（ＰＳ）２、２’３’－ｃＧＡＭＰ、２’３’－ｃＧＡＭＰｄＦＨＳ、３’３’－ｃＧＡＭＰ、３’３’－ｃＧＡＭＰｄＦＳＨ、ｃＡＩＭＰ、ｃＡＩＭ（ＰＳ）２、３’３’－ｃＡＩＭＰ、３’３’－ｃＡＩＭＰｄＦＳＨ、２’２’－ｃＧＡＭＰ、２’３’－ｃＧＡＭ（ＰＳ）２、３’３’－ｃＧＡＭＰ、またはそれらの組み合わせが挙げられる。ＳＴＩＮＧアゴニストの非限定的な例は、米国特許第９，６９５，２１２号、ＷＯ２０１４／１８９８０５（Ａ１）、ＷＯ２０１４／１７９３３５（Ａ１）、ＷＯ２０１８／１００５５８（Ａ１）、米国特許第１０，０１１，６３０（Ｂ２）、ＷＯ２０１７／０２７６４６（Ａ１）、ＷＯ２０１７／１６１３４９（Ａ１）、及びＷＯ２０１６／０９６１７４（Ａ１）に見出すことができる。これらは、それぞれ参照によりその全体が組み込まれる。

【0261】

いくつかの態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＷＯ２０１６／０９６１７４、ＷＯ２０１６／０９６１７４（Ａ１）、ＷＯ２０１４／０９３９３６、ＷＯ２０１４／１８９８０５、ＷＯ２０１５／０７７３５４（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む。Ｃｅｌｌ ｒｅｐｏｒｔｓ １１，１０１８～１０３０（２０１５）も参照されたい。

【0262】

いくつかの態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ｃ－ｄｉ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＩＭＰ、ｃ－ＡＭＰ－ＧＭＰ、ｃ－ＡＭＰ－ＩＭＰ、及びｃ－ＧＭＰ－ＩＭＰを含む。これらは、ＷＯ２０１３／１８５０５２及びＳｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２８３，２８３ｒａ５２（２０１５）に記載され、これらは、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。

【0263】

いくつかの態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＷＯ２０１４／１８９８０６、ＷＯ２０１５／１８５５６５、ＷＯ２０１４／１７９７６０、ＷＯ２０１４／１７９３３５、ＷＯ２０１５／０１７６５２、ＷＯ２０１６／０９６５７７、ＷＯ２０１６／１２０３０５、ＷＯ２０１６／１４５１０２、ＷＯ２０１７／０２７６４６、ＷＯ２０１７／０７５４７７、ＷＯ２０１７／０２７６４５、ＷＯ２０１８／１００５５８、ＷＯ２０１７／１７５１４７、またはＷＯ２０１７／１７５１５６に開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩を含む。これらの各内容は、その全体を参照することによって本明細書に組み込まれる。

【0264】

一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６０６、ＣＬ６１１、ＣＬ６０２、ＣＬ６５５、ＣＬ６０４、ＣＬ６０９、ＣＬ６１４、ＣＬ６５６、ＣＬ６４７、ＣＬ６２６、ＣＬ６２９、ＣＬ６０３、ＣＬ６３２、ＣＬ６３３、ＣＬ６５９、またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６０６またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６１１またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６０２またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６５５またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６０４またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６０９またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６１４またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６４７またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６２６またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６２９またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６０３またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６３２またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６３３またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６５９またはその薬学的に許容される塩である。

【0265】

一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６５６またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６５６の異性体Ａまたはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６５６の異性体Ｂまたはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６５６の異性体Ｃまたはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６５６の異性体Ｄまたはその薬学的に許容される塩である。

【0266】

本開示のＳＴＩＮＧアゴニストはまた、細胞外小胞またはエキソソームにおけるアゴニストのカプセル化を増加または制御させるように修飾され得る。この修飾には、アゴニストを化学物質または酵素で処理することにより、または物理的もしくは化学的にＳＴＩＮＧアゴニストの極性または電荷を変化させることによる脂質結合タグの付加が含まれ得る。ＳＴＩＮＧアゴニストは、単一の治療によって、または治療の組み合わせによって、例えば、脂質結合タグのみを追加すること、または脂質結合タグを追加して極性を変更することによって修飾することができる。上記の例は、非限定的な例示的な例であることを意図している。本開示では、修飾の任意の組み合わせを実施できることが企図される。修飾は、非修飾アゴニストのカプセル化と比較して、エキソソームにおけるアゴニストのカプセル化を２倍～１０，０００倍、１０倍～１，０００倍、または１００倍～５００倍増加または制御させることができる。修飾により、エキソソームにおけるアゴニストのカプセル化が、未修飾アゴニストのカプセル化と比較して、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍、２０００倍、３０００倍、４０００倍、５０００倍、６０００倍、７０００倍、８０００倍、９０００倍、または１０，０００倍増大し得る。

【0267】

いくつかの態様では、１つ以上の外因性の生物学的活性部分、例えば、アジュバントは、ＴＬＲアゴニストである。ＴＬＲアゴニストの非限定的な例としては、ＴＬＲ２アゴニスト（例えば、リポタイコ酸、非定型ＬＰＳ、ＭＡＬＰ－２及びＭＡＬＰ－４０４、ＯｓｐＡ、ポリン、ＬｃｒＶ、リポマンナン、ＧＰＩアンカー、リゾホスファチジルセリン、リポホスホグリカン（ＬＰＧ）、グリコホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ））、ザイモサン、ｈｓｐ６０、ｇＨ／ｇＬ糖タンパク質、血球凝集素）、ＴＬＲ３アゴニスト（例えば、二本鎖ＲＮＡ、例えば、ポリ（Ｉ：Ｃ））、ＴＬＲ４アゴニスト（例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）、リポタイコ酸、β－デフェンシン２、フィブロネクチンＥＤＡ、ＨＭＧＢ１、ｓｎａｐｉｎ、テネイシンＣ）、ＴＬＲ５アゴニスト（例えば、フラジェリン）、ＴＬＲ６アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えば、一本鎖ＲＮＡ、ＣｐＧ－Ａ、ポリＧ１０、ポリＧ３、レシキモド）、ＴＬＲ９アゴニスト（例えば、非メチル化ＣｐＧ ＤＮＡ）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。ＴＬＲアゴニストの非限定的例としては、ＷＯ２００８１１５３１９（Ａ２）、ＵＳ２０１３０２０２７０７（Ａ１）、ＵＳ２０１２０２１９６１５（Ａ１）、ＵＳ２０１０００２９５８５（Ａ１）、ＷＯ２００９０３０９９６（Ａ１）、ＷＯ２００９０８８４０１（Ａ２）、及びＷＯ２０１１０４４２４６（Ａ１）に見出すことができ、これらはそれぞれ、参照によりその全体が組み込まれる。

【0268】

いくつかの態様では、１つ以上の外因性の生物学的活性部分、例えば、アジュバントは、炎症性メディエーターである。

【0269】

いくつかの態様では、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つ以上の外因性の生物学的活性部分、例えば、免疫調節因子を含むことができる。特定の態様では、１つ以上の免疫調節因子は、他の活性な生物学的分子、例えば、本明細書に開示されるものと組み合わせて発現される。いくつかの態様では、１つ以上の免疫調節因子は、表面（例えば、外面もしくは内腔表面）またはＥＶ（例えば、エキソソーム）の内腔において発現され得る。したがって、特定の態様では、１つ以上の免疫調節因子は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の外面上、またはＥＶ（例えば、エキソソーム）の内腔表面上の足場部分（例えば、足場Ｘ）に連結されている。さらなる態様では、１つ以上の免疫調節因子は、エキソソームの内腔内にある（すなわち、足場Ｘに連結されていない）。特定の態様では、免疫調節因子は、ポリヌクレオチドである。これらの態様のいくつかでは、ポリヌクレオチドとしては、これらに限定されないが、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、及びｄｓＤＮＡが挙げられる。いくつかの態様では、免疫調節因子は、タンパク質、ペプチド、糖脂質、または糖タンパク質である。

【0270】

いくつかの態様では、本組成物のために製剤化されたＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ＩＬ－１２を含む。いくつかの態様では、本組成物のために製剤化されたＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ＣＤ４０Ｌを含む。いくつかの態様では、本組成物のために製剤化されたＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ＦＬＴ３Ｌを含む。いくつかの態様では、本組成物のために製剤化されたＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ＩＬ－１２及びＣＤ４０Ｌを含む。他の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ＩＬ－１２、ＣＤ４０Ｌ、及びＦＬＴ３Ｌを含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１１、１２、または１３に示されるアミノ酸配列（表１Ａ）に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一性であるアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む。

【表1】

【0271】

いくつかの態様では、ＩＬ－１２部分は、ｐ３５ポリペプチドまたはその断片を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１１に対して、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１１に対して、少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１１に対して、少なくとも約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１１に対して、少なくとも約９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１１に対して、少なくとも約９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１１に対して、少なくとも約９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１１に対して、少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２部分は、シグナルペプチドを含まない（表１Ａを参照されたい）。

【0272】

いくつかの態様では、ＩＬ－１２部分は、ｐ４０ポリペプチドまたはその断片を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１２に対して、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１２に対して、少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１２に対して、少なくとも約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１２に対して、少なくとも約９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１２に対して、少なくとも約９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１２に対して、少なくとも約９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１２に対して、少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２部分は、シグナルペプチドを含まない（表１Ａを参照されたい）。

【0273】

いくつかの態様では、ＩＬ－１２部分は、ｐ３５ポリペプチドまたはその断片及びｐ４０ポリペプチドまたはその断片を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２部分は、ｐ３５ポリペプチドまたはその断片がｐ４０ポリペプチドまたはその断片に連結されている単一のポリペプチドを含む。いくつかの態様では、ｐ３５ポリペプチドまたはその断片は、リンカーによってｐ４０ポリペプチドまたはその断片に連結されている。いくつかの態様では、リンカーは、ペプチドリンカーである。いくつかの態様では、リンカーは、１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの態様では、リンカーは、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ＧＳ）リンカーを含む。いくつかの態様では、ＧＳリンカーは、（Ｇ_４Ｓ）_ｎを含み、ここで、ｎは、１～１０の整数である。いくつかの態様では、ＧＳリンカーは、（Ｇ_３Ｓ）_ｎを含み、ここで、ｎは、１～１０の整数である。

【0274】

特定の態様では、ＩＬ－１２部分は、配列番号１３に対して、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１３に対して、少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１３に対して、少なくとも約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１３に対して、少なくとも約９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１３に対して、少なくとも約９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１３に対して、少なくとも約９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１３に対して、少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１３に示されるアミノ酸配列からなる。いくつかの態様では、ＩＬ－１２は、配列番号１３に示されるアミノ酸配列から本質的になる。いくつかの態様では、ＩＬ－１２部分は、シグナルペプチドを含まない（表１Ａを参照されたい）。

【0275】

いくつかの態様では、本組成物のために製剤化されたＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ＳＴＡＴ６転写物（配列番号２３；表１Ｂ）内の核酸配列に相補的である長さ１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、核酸配列ＧＡＡＡＧＧＴＴＣＣＧＴＣＧＧＧＣ（配列番号１４４）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、核酸配列ＣＴＧＡＧＴＣＧＣＴＧＡＡＧＣＧＧ（配列番号１４５）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、核酸配列ＧＣＣＣＴＴＧＴＡＣＴＴＴＴＧＣＡＴＡＧ（配列番号１９３）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、核酸配列ＧＣＡＡＧＡＴＣＣＣＧＧＡＴＴＣＧＧＴＣ（配列番号１８５）を含む。

【表2-1】

【表2-2】

【0276】

ＩＩＩＢ．足場部分、例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ
いくつかの態様では、本開示のＥＶ（例えばエキソソーム）は、その組成が改変された膜を含む。例えば、それらの膜組成は、膜のタンパク質、脂質、またはグリカン含有量を変更することによって改変することができる。

【0277】

いくつかの態様では、表面操作型ＥＶ（例えばエキソソーム）は、ＰＥＧ誘発融合及び／または超音波融合などの化学的及び／または物理的方法によって生成される。他の実施形態では、表面操作型ＥＶ、例えばエキソソームは、遺伝子操作によって生成される。遺伝子改変されたプロデューサー細胞または遺伝子改変された細胞の子孫から産生されるＥＶ（例えばエキソソーム）は、改変された膜組成物を含み得る。いくつかの態様では、表面操作型ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、より高いまたはより低い密度（例えば、より多い数）で足場部分（例えば、エキソソームタンパク質、例えば、足場Ｘ）を有するか、足場部分のバリアントまたは断片を含む。

【0278】

例えば、表面（例えば、足場Ｘ）操作型ＥＶは、足場部分（例えば、エキソソームタンパク質、例えば、足場Ｘ）をコードする外因性配列で形質転換された細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）またはバリアントまたはその断片から産生され得る。外因性配列から発現される足場部分を含むＥＶは、修飾された膜組成物を含み得る。

【0279】

足場部分の様々な修飾または断片を、本開示の態様に使用することができる。例えば、結合剤への親和性を増強させるように修飾された足場部分は、結合剤を使用して精製することができる表面改変ＥＶを生成するために使用することができる。ＥＶ及び／または膜をより効果的に標的化するように修飾された足場部分を使用できる。エキソソーム膜への特異的かつ効果的な標的化に必要な最小限の断片を含むように修飾された足場部分も使用することができる。

【0280】

足場部分の非限定的例として、プロスタグランジンＦ２受容体の負の調節因子（ＰＴＧＦＲＮ）、ベイシジン（ＢＳＧ）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（ＩＧＳＦ２）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（ＩＧＳＦ３）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（ＩＧＳＦ８）、インテグリンベータ－１（ＩＴＧＢ１）、インテグリンアルファ－４（ＩＴＧＡ４）、４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（ＳＬＣ３Ａ２）、及びＡＴＰトランスポータータンパク質のクラス（ＡＴＰ１Ａ１、ＡＴＰ１Ａ２、ＡＴＰ１Ａ３、ＡＴＰ１Ａ４、ＡＴＰ１Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ１、ＡＴＰ２Ｂ２、ＡＴＰ２Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ）が挙げられる。特定の態様では、足場部分は、完全タンパク質である。他の態様では、足場部分は、タンパク質断片（例えば、機能的断片）である。

【0281】

他の態様では、本発明に有用な足場部分、第１の足場部分、第２の足場部分、及び／または第３の足場部分としては、従来のエキソソームタンパク質、これらに限定されないが、テトラスパニン分子（例えば、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ９など）、リソソーム関連膜タンパク質２（ＬＡＭＰ２及びＬＡＭＰ２Ｂ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリン及びその断片、これらのタンパク質またはその断片のいずれかに親和性を有するペプチド、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0282】

いくつかの態様では、本明細書に記載の表面（例えば、足場Ｘ）操作型ＥＶは、当該技術分野において既知のＥＶと比較して優れた特性を示す。例えば、表面（例えば、足場Ｘ）操作型ＥＶは、天然に存在するＥＶまたは従来のエキソソームタンパク質を使用して産生されるＥＶよりも表面上により高度に濃縮された修飾タンパク質を含む。さらに、本開示の表面（例えば、足場Ｘ）操作型ＥＶは、天然に存在するＥＶ、または従来のエキソソームタンパク質を使用して産生されたＥＶと比較して、より大きい、より特異的な、またはより制御された生物活性を有し得る。

【0283】

いくつかの態様では、足場Ｘは、プロスタグランジンＦ２受容体の負の調節因子（ＰＴＧＦＲＮポリペプチド）を含む。ＰＴＧＦＲＮタンパク質は、ＣＤ９パートナー１（ＣＤ９Ｐ－１）、Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ ＥＷＩモチーフ含有タンパク質Ｆ（ＥＷＩ－Ｆ）、プロスタグランジンＦ２アルファ受容体調節タンパク質、プロスタグランジンＦ２アルファ受容体関連タンパク質、またはＣＤ３１５とも称され得る。ヒトＰＴＧＦＲＮタンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９Ｐ２Ｂ２）の完全長アミノ酸配列は、表２に配列番号１として示されている。ＰＴＧＦＲＮポリペプチドは、シグナルペプチド（配列番号１のアミノ酸１～２５）、細胞外ドメイン（配列番号１のアミノ酸２６～８３２）、膜貫通ドメイン（配列番号１のアミノ酸８３３～８５３）、及び細胞質ドメイン（配列番号１のアミノ酸８５４～８７９）を含む。成熟ＰＴＧＦＲＮポリペプチドは、シグナルペプチドを含まない配列番号１、すなわち、配列番号１のアミノ酸２６～８７９からなる。いくつかの態様では、本開示に有用なＰＴＧＦＲＮポリペプチド断片は、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの膜貫通ドメインを含む。他の態様では、本開示に有用なＰＴＧＦＲＮポリペプチド断片は、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの膜貫通ドメインと、（ｉ）膜貫通ドメインのＮ末端に、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０のアミノ酸、（ｉｉ）膜貫通ドメインのＣ末端に、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、または少なくとも２５のアミノ酸、または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を含む。

【0284】

いくつかの態様では、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの断片は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠いている。

【0285】

他の態様では、足場Ｘは、配列番号１のアミノ酸２６～８７９と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。他の態様では、足場Ｘは、配列番号９と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。他の態様では、足場Ｘは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除く、配列番号９のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの態様では、足場Ｘは、配列番号９のＮ末端及び／またはＣ末端に、配列番号９のアミノ酸配列、及び１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、または２０アミノ酸またはそれ以上を含む。

【0286】

他の態様では、足場Ｘは、配列番号２、３、４、５、６、または７と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。他の態様では、足場Ｘは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除く、配列番号２、３、４、５、６、または７のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの態様では、足場Ｘは、配列番号２、３、４、５、６、または７のＮ末端及び／またはＣ末端に、配列番号２、３、４、５、６、または７のアミノ酸配列、及び１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、または２０アミノ酸またはそれ以上を含む。

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【0287】

他の足場Ｘタンパク質の非限定的な例は、米国特許第１０，１９５，２９０（Ｂ１）号及び第１０，５６１，７４０（Ｂ２）号に見出すことができ、これらのそれぞれは、参照によりその全体が組み込まれる。

【0288】

いくつかの態様では、ＥＶで発現される足場部分は、ペイロード、例えば、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストに融合されていない。

【0289】

いくつかの態様では、足場Ｘは、任意の部分をＥＶ（例えば、エキソソーム）の内腔表面及び／または外面に同時に連結するために使用され得る。例えば、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドを使用して、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の外面に加えて、内腔内（例えば、内腔表面上）の抗原、アジュバント、及び／または免疫調節因子を連結することができる。したがって、特定の態様では、足場Ｘは、例えば、内腔表面上の抗原及びＥＶ（例えば、エキソソーム）の外面のアジュバントまたは免疫調節因子、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の外面上の抗原及び内腔表面上のアジュバントまたは免疫調節因子、内腔表面上のアジュバント及びＥＶ（例えば、エキソソーム）の外面上の免疫調節因子、または内腔表面上の免疫調節因子及びＥＶ（例えば、エキソソーム）の外面上のアジュバントなど、二重の目的に使用することができる。

【0290】

いくつかの態様では、足場タンパク質は、足場Ｙを含む。本明細書に開示の組成物及び方法において使用され得る足場Ｙタンパク質の非限定的な例としては、例えば、国際公開番号ＷＯ／２０１９／０９９９４２またはＷＯ２０２０／１０１７４０に開示されているそれらの足場Ｙタンパク質が挙げられる。これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、足場Ｙタンパク質は、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質（「ＭＡＲＣＫＳタンパク質」）；ミリストイル化されたアラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質様１（「ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質」）；脳の酸可溶性タンパク質１（「ＢＡＳＰ１タンパク質」）から選択される。いくつかの態様では、足場Ｙタンパク質は、完全タンパク質またはその断片（例えば、機能的断片、例えば、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の内腔表面上に任意の部分を固定することができる最小断片）であり得る。いくつかの態様では、足場Ｙは、任意の部分（例えば、ＳＴＩＮＧアゴニスト及び／またはＩＬ－１２部分）をＥＶ（例えば、エキソソーム）の内腔に固定することができる。

【0291】

ＩＩＩＣ．部分の固定
いくつかの態様では、１つ以上のペイロードを固定部分に連結することができる。いくつかの態様では、ペイロードをＥＶ（例えば、エキソソーム）の外面及び／または内腔表面に連結するために使用できる固定部分は、ステロール（例えば、コレステロール）、ＧＭ１、脂質（例えば、脂肪酸）、ビタミン、小分子、ペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。

【0292】

いくつかの態様では、固定部分は、脂質である。脂質固定部分は、当技術分野において公知である任意の脂質、例えば、パルミチン酸またはグリコシルホスファチジルイノシトールであり得る。いくつかの態様では、脂質は、脂肪酸、ホスファチジル、リン脂質（例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、またはホスファチジルエタノールアミン）、またはそれらの類似体（例えば、ホスファチジルコリン、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、セファリン、またはホスファチジルセリンまたはその類似体またはその一部、例えば、その部分的に加水分解された部分）である。

【0293】

一般的に、固定部分は化学的に付着している。しかし、固定部分は、酵素的にペイロードに付着させ得る。

【0294】

本開示の方法を実施するために使用することができるいくつかのタイプの膜アンカーは、以下の表に提示されている：

【表4】

【0295】

いくつかの態様では、本開示の固定部分は、本明細書に開示の２つ以上のタイプの固定部分を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、固定部分は、２つの脂質、例えば、リン脂質と脂肪酸、または２つのリン脂質、または２つの脂肪酸、または脂質とビタミン、またはコレステロールとビタミンを含み得る。

【0296】

いくつかの態様では、本開示に有用な固定部分は、ステロール、ステロイド、ホパノイド、ヒドロキシステロイド、セコステロイド、または親油性を有するそれらの類似体を含む。いくつかの態様では、固定部分は、植物ステロール、菌類ステロール、または動物ステロールなどのステロールを含む。例示的な動物ステロールとしては、コレステロール及び２４Ｓ－ヒドロキシコレステロールが挙げられる。例示的な植物ステロールとしては、エルゴステロール（菌類ステロール）、カンペステロール、シトステロール、及びスチグマステロールが挙げられる。いくつかの態様では、ステロールは、エルゴステロール、７－デヒドロコレステロール、コレステロール、２４Ｓ－ヒドロキシコレステロール、ラノステロール、シクロアルテノール、フコステロール、サリンゴステロール、カンペステロール、β－シトステロール、シトスタノール、コプロスタノール、アベナステロール、またはスチグマステロールから選択される。ステロールは、遊離ステロール、アシル化（ステロールエステル）、アルキル化（ステリルアルキルエーテル）、硫酸化（ステロール硫酸塩）、またはそれ自体がアシル化できるグリコシド部分（ステリルグリコシド）に連結したもの（アシル化ステロールグリコシド）のいずれかとして見出され得る。いくつかの態様では、固定部分は、コレステロールである。

【0297】

いくつかの態様では、固定部分は、ステロイドを含む。いくつかの態様では、ステロイドは、ジヒドロテストステロン、ウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン、プロゲステロン、またはコルチゾールから選択される。

【0298】

いくつかの態様では、固定部分は脂肪酸である。いくつかの態様では、脂肪酸は、短鎖、中鎖、または長鎖脂肪酸である。いくつかの態様では、脂肪酸は、飽和脂肪酸である。いくつかの態様では、脂肪酸は、不飽和脂肪酸である。いくつかの態様では、脂肪酸は、モノ不飽和脂肪酸である。いくつかの態様では、脂肪酸は、オメガ－３またはオメガ－６脂肪酸などの多価不飽和脂肪酸である。

【0299】

いくつかの態様では、固定部分は、リン脂質を含む。リン脂質は、すべての細胞膜の主成分である脂質のクラスである。それらは両親媒性の特徴のために脂質二重層を形成することができる。リン脂質分子の構造は、一般的に、２つの疎水性脂肪酸「テール」とリン酸基からなる親水性「ヘッド」からなる。例えば、リン脂質は、次式に記載の脂質であり得る：

【化1】

式中、Ｒ_ｐは、リン脂質部分を表し、Ｒ_１及びＲ_２は、不飽和を伴うまたは伴わない、同じかまたは異なり得る脂肪酸部分を表す。

【0300】

いくつかの態様では、ペイロードは、リンカーの組み合わせ（開裂性及び／または非開裂性リンカーの任意の組み合わせを含み得る）を介して、本明細書に開示する固定部分に連結される。いずれか１つの理論に拘束されるものではないが、リンカーの組み合わせの機能のうちの１つは、固定部分とペイロードとの間に最適な間隔を提供することである。

【0301】

ＩＩＩＤ．リンカー
上記のとおり、本開示の細胞外小胞（ＥＶ）（例えば、エキソソーム及びナノ小胞）は、本明細書に開示の１つ以上の外因性の生物学的活性部分をＥＶ（例えば、外面または内腔表面）に連結する１つ以上のリンカーを含み得る。いくつかの態様では、１つ以上の外因性の生物学的活性部分は、直接または１つ以上の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介してＥＶに連結されている。例えば、特定の態様では、１つ以上の外因性生物学的活性部分は、足場Ｘを介してエキソソームの外面に連結されている。さらなる態様では、１つ以上の外因性生物学的活性部分は、足場Ｘを介してエキソソームの内腔表面に連結されている。リンカーは、当技術分野において公知である任意の化学部分であり得る。

【0302】

本明細書で使用される場合、「リンカー」という用語は、ペプチドまたはポリペプチド配列（例えば、合成ペプチドもしくはポリペプチド配列）または非ポリペプチド、例えばアルキル鎖を指す。いくつかの態様では、２つ以上のリンカーをタンデムに連結することができる。複数のリンカーが存在する場合、リンカーの各々は、同じであっても異なっていてもよい。一般に、リンカーは柔軟性を提供するか、または立体障害を防止／改善する。リンカーは、典型的には、開裂されない。しかし、特定の態様では、そのような開裂が望ましい場合がある。したがって、いくつかの態様では、リンカーは、リンカーの配列内に位置するか、またはリンカー配列のいずれかの端でリンカーに隣接することができる、１つ以上のプロテアーゼ開裂可能部位を含むことができる。

【0303】

いくつかの態様では、リンカーは、ペプチドリンカーである。いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、または少なくとも約１００アミノ酸を含み得る。

【0304】

いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、合成、すなわち非天然である。一態様では、ペプチドリンカーは、天然には連結していないか、または本来遺伝的に融合していないアミノ酸の第２の直鎖配列に、アミノ酸の第１の直鎖配列を連結させるかまたは遺伝的に融合させるアミノ酸配列を含むペプチド（またはポリペプチド）（例えば、天然または非天然ペプチド）を含む。例えば、一態様では、ペプチドリンカーは、天然ポリペプチドの修飾形態である非天然ポリペプチド（例えば、付加、置換または欠失などの変異を含む）を含み得る。

【0305】

リンカーは開裂しやすい場合があり（「開裂性リンカー」）、それにより、外因性の生物学的活性部分の遊離を促進する。

【0306】

いくつかの態様では、リンカーは「還元感受性リンカー」である。いくつかの態様では、還元感受性リンカーは、ジスルフィド結合を含む。いくつかの態様では、リンカーは、「酸不安定性リンカー」である。いくつかの態様では、酸不安定性リンカーは、ヒドラゾンを含む。好適な酸不安定性リンカーはまた、例えば、ｃｉｓ－アコニット酸リンカー、ヒドラジドリンカー、チオカルバモイルリンカー、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0307】

いくつかの態様では、ＡＳＯは、リンカーを介して、ＥＶ（例えば、エキソソーム）に会合されている。いくつかの態様では、リンカーは、アクリルホスホルアミダイト（例えば、ＡＣＲＹＤＩＴＥ（商標））、アデニル化、アジド（ＮＨＳエステル）、ジゴキシゲニン（ＮＨＳエステル）、コレステロール－ＴＥＧ、Ｉ－ＬＩＮＫＥＲ（商標）、アミノ修飾因子（例えば、アミノ修飾因子Ｃ６、アミノ修飾因子Ｃ１２、アミノ修飾因子Ｃ６ ｄＴ、またはＵｎｉ－Ｌｉｎｋ（商標）アミノ修飾剤）、アルキン、５’ヘキシニル、５－オクタジイニルｄＵ、ビオチン化（例えば、ビオチン、ビオチン（アジド）、ビオチンｄＴ、ビオチン－ＴＥＧ、デュアルビオチン、ＰＣビオチン、またはデスチオビオチン）、チオール修飾（チオール修飾剤Ｃ３ Ｓ－Ｓ、ジチオールまたはチオール修飾剤Ｃ６ Ｓ－Ｓ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0308】

いくつかの態様では、リンカーは、ネロリドール、ファルネソール、リモネン、リナロール、ゲラニオール、カルボン、フェンコン、またはメントールなどのテルペン；パルミチン酸またはミリスチン酸などの脂質；コレステロール；オレイル；レチニル；コレステリル残基；コール酸；アダマンタン酢酸；１－ピレン酪酸；ジヒドロテストステロン；１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール；ゲラニルオキシヘキシル基；ヘキサデシルグリセロール；ボルネオール；１，３－プロパンジオール；ヘプタデシル基；Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸；Ｏ３－（オレオイル）コレン酸；ジメトキシトリチル；フェノキサジン、マレイミド部分、グルコリニダーゼタイプ、ＣＬ２Ａ－ＳＮ３８タイプ、葉酸；炭水化物；ビタミンＡ；ビタミンＥ；ビタミンＫ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。特定の態様では、ＡＳＯは、コレステロールタグを含み、コレステロールタグは、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の膜と会合する。いくつかの態様では、リンカーは、非開裂性リンカーを含む。

【0309】

いくつかの態様では、リンカーは、テトラエチレングリコール（ＴＥＧ）、ヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、スクシンイミド、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、リンカーは、生物学的活性分子をリンカーに連結するためのスペーサーユニットを含む。

【0310】

いくつかの態様では、１つ以上のリンカーは、一緒に連結されたより小さなユニット（例えば、ＨＥＧ、ＴＥＧ、グリセロール、Ｃ２～Ｃ１２アルキルなど）を含む。一態様では、連結は、エステル連結（例えば、ホスホジエステルまたはホスホロチオエートエステル）または他の連結である。

【0311】

いくつかの態様では、リンカーは、式Ｒ^３－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）_ｎ－またはＲ^３－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－を特徴とするポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含み、Ｒ^３は、水素、メチルまたはエチルであり、ｎは、２～２００の値を有する。いくつかの態様では、リンカーは、スペーサーを含み、スペーサーは、ＰＥＧである。

【0312】

いくつかの態様では、ＰＥＧリンカーは、オリゴ－エチレングリコール、例えば、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール（ＴＥＧ）、ペンタエチレングリコール、またはヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）リンカーである。

【0313】

ＩＶ．治療の方法
ＥＶの投与が対象に有益な効果をもたらす複数の疾患または状態を治療するための本開示の医薬組成物の投与がさらに企図される。いくつかの態様では、本明細書に開示される対象における疾患または状態を治療する方法は、対象に医薬組成物を投与することを含む。

【0314】

いくつかの態様では、本開示は、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、皮内、経皮、直腸内、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、筋肉内経路によってまたは吸入剤として投与され得る組成物を提供する。いくつかの態様では、ＥＶを含む医薬組成物を、例えば、注射によって静脈内投与する。経粘膜または経皮投与のために、浸透させる障壁に適切な浸透剤が製剤に使用される。そのような浸透剤は、一般的に当技術分野で公知であり、例えば、経粘膜投与のための、界面活性剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、例えば、点鼻スプレーまたは坐剤の使用を通じて達成され得る。経皮投与の場合、改変されたエキソソームは、当技術分野で一般に知られているように、軟膏、膏薬、ゲル、またはクリームに製剤化される。

【0315】

いくつかの態様では、ＥＶを、対象の循環系に静脈内投与する。いくつかの態様では、ＥＶを、好適な液体に注入し、対象の静脈中に投与する。いくつかの態様では、ＥＶを、対象の循環系に動脈内投与する。いくつかの態様では、ＥＶを、好適な液体に注入し、対象の動脈中に投与する。いくつかの態様では、ＥＶを、髄腔内投与によって対象に投与する。いくつかの態様では、ＥＶが脳脊髄液（ＣＳＦ）に到達するように、脊柱管またはくも膜下腔への注射を介してＥＶを投与する。いくつかの態様では、ＥＶを、対象の１つ以上の腫瘍内に腫瘍内投与する。いくつかの態様では、ＥＶを、鼻腔内投与によって対象に投与する。いくつかの態様では、ＥＶを、局所投与または全身投与のいずれかの形態で、鼻を通して吹き込むことができる。特定の態様では、ＥＶを鼻スプレーとして投与する。

【0316】

いくつかの態様では、ＥＶを、腹腔内投与によって対象に投与する。いくつかの態様では、ＥＶを、好適な液体に注入し、対象の腹腔中に投与する。いくつかの態様では、腹腔内投与は、リンパ管へのＥＶの分布をもたらす。いくつかの態様では、腹腔内投与は、胸腺、脾臓、及び／または骨髄へのＥＶの分布をもたらす。いくつかの態様では、腹腔内投与は、１つ以上のリンパ節へのＥＶの分布をもたらす。いくつかの態様では、腹腔内投与は、頸部リンパ節、鼠径部リンパ節、縦隔リンパ節、または胸骨リンパ節のうちの１つ以上へのＥＶの分布を生じる。いくつかの態様では、腹腔内投与は、膵臓へのＥＶの分布をもたらす。

【0317】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えばエキソソーム）を、眼球周囲投与によって対象に投与する。いくつかの態様では、ｓを、眼球周囲組織に注射する。眼球周囲薬物投与は、結膜下、前テノン嚢下、後テノン嚢下、及び眼球後投与の経路を含む。

【0318】

いくつかの態様では、治療は予防的である。いくつかの態様では、本開示のためのＥＶは、免疫応答を誘導するために使用される。いくつかの態様では、本開示のためのＥＶは、対象にワクチン接種するために使用される。

【0319】

いくつかの態様では、疾患または状態は、がん、線維症、血友病、糖尿病、成長因子欠乏症、眼疾患、ポンペ病、リソソーム蓄積障害、ムコビシドーシス、嚢胞性線維症、デュシェンヌ型及びベッカー型筋ジストロフィー、トランスチレチンアミロイドーシス、血友病Ａ、血友病Ｂ、アデノシンデアミナーゼ欠損症、リーバー先天性黒内障、Ｘ連鎖副腎白血病、異染性白質ジストロフィー、ＯＴＣ欠損症、糖原病１Ａ、クリグラー－ナジャー症候群、原発性シュウ酸過剰尿１型、急性間欠性ポルフィリン症、フェニルケトン尿、家族性高コレステロール血症、ムコ多糖症タイプＶＩ、α１アンチトリプシン欠損症、及び高コレステロール血症である。

【0320】

いくつかの態様では、疾患または障害は、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）である。いくつかの態様では、本開示で治療することができる疾患または障害は、自己免疫疾患である。自己免疫疾患の非限定的な例としては、多発性硬化症、末梢神経炎、シェーグレン症候群、関節リウマチ、脱毛症、自己免疫性膵炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、セリアック病、デビック病（視神経脊髄炎）、糸球体腎炎、ＩｇＡ腎症、各種血管炎、強皮症、糖尿病、関節炎、白斑、潰瘍性大腸炎、刺激性腸症候群、乾癬、ブドウ膜炎、全身性エリテマトーデス、及びそれらの組み合わせが挙げられる。

【0321】

いくつかの態様では、疾患または障害は、感染症である。特定の態様では、疾患または障害は、発がん性ウイルスである。いくつかの態様では、本開示で治療できる感染症としては、これらに限定されないが、ヒトヒトガンマヘルペスウイルス４（Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒｒウイルス）、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、サイトメガロウイルス、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、コロナウイルス（例えば、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ及びＳＡＲＳ ＣｏＶ）、フィロウイルス（例えば、Ｍａｒｂｕｒｇ及びＥｂｏｌａ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉａ種（例えば、ｖｉｖａｘ及びｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、Ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ、Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ、ヒトヘルペスウイルス８、単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ２）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐ．、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．、Ｐｒｏｔｅｕｓ ｓｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．、コアグラーゼ陰性ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ（ＣｏＮＳ）、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｓｐ．，またはそれらの組み合わせが挙げられる。

【0322】

いくつかの態様では、がんは、膀胱癌、子宮頸癌、腎細胞癌、精巣癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頸部癌、卵巣癌、リンパ腫、肝臓癌、神経膠芽腫、黒色腫、骨髄腫、白血病、膵臓癌、またはそれらの組み合わせである。

【0323】

特定の態様では、がんは、ＳＴＡＴ６タンパク質の発現の増加に関連している。本開示で治療することができるがんの非限定的な例としては、結腸直腸癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、膵臓癌（例えば、膵管腺癌（ＰＤＡＣ））、白血病、子宮がん、卵巣がん、膀胱がん、胆管がん、胃がん、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、がんは、結腸腺癌、直腸腺癌、膵臓腺癌、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）、卵巣漿液性嚢胞腺癌、急性骨髄性白血病、精巣癌（例えば、精巣胚細胞腫瘍、セミノーマ、非セミノーマ及び脈絡膜癌）、肺腺癌、脳低悪性度神経膠腫、多形性神経膠芽細胞腫、ブドウ膜黒色腫、甲状腺癌、子宮体子宮内膜癌、子宮癌肉腫、フェオクロモサイトーマ、傍神経節腫、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。ある特定の態様では、がんは、骨髄リッチ癌（ｍｙｅｌｏｉｄ－ｒｉｃｈ ｃａｎｃｅｒ）である。いくつかの態様では、がんは、肝臓癌を含む。いくつかの態様では、がんは、肝細胞癌（ＨＣＣ）を含む。いくつかの態様では、がんは、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）を含み、いくつかの態様では、がんは、結腸直腸癌（ＣＲＣ）を含む。いくつかの態様では、がんは、卵巣癌を含む。いくつかの態様では、がんは、軟髄膜癌を含む。

【0324】

がんを有する対象に投与する場合、特定の態様では、本開示のＥＶは、免疫応答を上方制御し、対象の免疫系の腫瘍標的化を増強することができる。いくつかの態様では、治療しようとするがんは、白血球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球）の腫瘍微小環境への浸潤、すなわち、いわゆる「ｈｏｔ ｔｕｍｏｒ」または「炎症性腫瘍」により特徴付けられる。いくつかの態様では、治療しようとするがんは、腫瘍微小環境への低レベルもしくは検出不可能なレベルの白血球浸潤、すなわち、いわゆる「ｃｏｌｄ ｔｕｍｏｒ」または「非炎症性腫瘍」により特徴付けられる。いくつかの態様では、ＥＶを、「ｃｏｌｄ ｔｕｍｏｒ」を「ｈｏｔ ｔｕｍｏｒ」に変換するのに十分な量及び時間投与し、すなわち、投与により、腫瘍微小環境への白血球（Ｔ細胞など）の浸潤が生じる。特定の態様では、がんは、膀胱癌、子宮頸癌、腎細胞癌、精巣癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頸部癌、及び卵巣癌、リンパ腫、肝臓癌、神経膠芽腫、黒色腫、骨髄腫、白血病、膵臓癌、またはそれらの組み合わせを含む。他の用語では、「遠位腫瘍」または「遠隔腫瘍」とは、元の（すなわち原発性）腫瘍から遠隔にある臓器または遠隔にある組織、例えばリンパ節に広がった腫瘍を指す。いくつかの態様では、本開示のＥＶは、転移性の広がりの後に腫瘍を治療する。

【0325】

Ｖ．操作されたエキソソームを産生する方法
本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは対象の体液で成長した細胞から産生することができる。エキソソームが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養から産生される場合、様々なプロデューサー細胞を使用することができる。

【0326】

いくつかの態様では、プロデューサー細胞は、哺乳動物細胞株、植物細胞株、昆虫細胞株、真菌細胞株、または原核細胞株であり得る。特定の態様では、プロデューサー細胞は、哺乳動物細胞株である。哺乳類細胞株の非限定的な例として：ヒト胎児腎（ＨＥＫ）細胞株、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、ＨＴ－１０８０細胞株、ＨｅＬａ細胞株、ＰＥＲＣ－６細胞株、ＣＥＶＥＣ細胞株、線維芽細胞株、羊膜細胞株、上皮細胞株、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）細胞株、及びそれらの組み合わせが挙げられる。特定の態様では、哺乳動物細胞株は、ＨＥＫ－２９３細胞、ＢＪヒト包皮繊維芽細胞、ｆＨＤＦ線維芽細胞、ＡＧＥ．ＨＮ（登録商標）神経前駆細胞、ＣＡＰ（登録商標）羊膜細胞、脂肪性間葉系幹細胞、またはＲＰＴＥＣ／ＴＥＲＴ１細胞、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、プロデューサー細胞は、初代細胞である。特定の態様では、初代細胞は、初代哺乳動物細胞、初代植物細胞、初代昆虫細胞、初代真菌細胞、または初代原核細胞であり得る。

【0327】

いくつかの態様では、プロデューサー細胞は、抗原提示細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、マクロファージ、Ｔヘルパー細胞、または制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）などの免疫細胞ではない。他の態様では、プロデューサー細胞は、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、マスト細胞、好中球、クッパー－ブロウィッツ細胞、またはそのような細胞のいずれかに由来する細胞）ではない。

【0328】

プロデューサー細胞は、本明細書に記載のエキソソームを産生するために、１つ以上の外因性配列（例えば、本明細書に開示される１つ以上の外因性生物学的活性部分、例えば、免疫調節因子、例えば、ＩＬ－１２、またはＡＳＯ、例えば、ＳＴＡＴ６ ＡＳＯをコードする）を含むように遺伝子改変することができる。遺伝子改変されたプロデューサー細胞は、一過性または安定的な形質転換によって外因性配列を含み得る。外因性配列は、プラスミドとして形質転換することができる。外因性配列は、標的部位またはランダム部位で、プロデューサー細胞のゲノム配列に安定的に組み込むことができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）の産生のために、安定な細胞株が生成される。

【0329】

外因性配列は、エキソソームタンパク質をコードする内在性配列の上流（５’末端）または下流（３’末端）内にあるプロデューサー細胞のゲノム配列に挿入することができる。当技術分野で公知の様々な方法を、外因性配列をプロデューサー細胞に導入するために使用することができる。例えば、様々な遺伝子編集方法（例えば、相同組換え、トランスポゾン媒介系、ｌｏｘＰ－Ｃｒｅ系、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９またはＴＡＬＥＮを使用する方法）を使用して改変する細胞は、本開示の範囲内にある。

【0330】

外因性配列は、本明細書に開示する足場部分またはその断片またはバリアントをコードする配列を含み得る。足場部分をコードする配列の追加のコピーを導入して、本明細書に記載のエキソソーム（例えば、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面または内腔表面上に、より高密度の足場部分を有する、またはそれらの上に複数の異なる足場部分を発現する）を産生することができる。足場部分の改変または断片をコードする外因性配列を導入して、足場部分の改変または断片を含む内腔操作型及び／または表面操作型のエキソソームを生成することができる。

【0331】

いくつかの態様では、プロデューサー細胞は、本明細書に記載の外因性の生物学的活性部分に連結された１つ以上の足場部分をコードする１つ以上のベクターで改変、例えば、トランスフェクトすることができる。

【0332】

ＶＩ．ペイロードを有するＥＶを産生する方法
ＶＩＡ．ペイロードをロードするための方法
ペイロード、例えば、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストは、当技術分野で公知の任意の適切な技術を介して、ＥＶ（例えば、エキソソーム）にカプセル化することができる。生体分子をＥＶ（例えば、エキソソーム）にロードするすべての既知の方法は、本明細書での使用に好適であると見なされると考えられる。そのような技術には、受動拡散、エレクトロポレーション、化学的または高分子トランスフェクション、ウイルス形質導入、機械的膜破壊または機械的剪断、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。ペイロード、例えば、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニスト及びＥＶ（例えば、エキソソーム）は、カプセル化の間、適切な緩衝液中でインキュベートされ得る。

【0333】

一態様では、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストは、受動拡散によってＥＶ（例えばエキソソーム）によってカプセル化される。生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニスト及びＥＶ（例えば、エキソソーム）をまとめて混合し、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストが小胞脂質二重層を通して拡散するのに十分な時間インキュベートし、それによりＥＶ、例えば、エキソソームにカプセル化することができる。生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニスト及びＥＶ（例えばエキソソーム）は、約１～３０時間、２～２４時間、４～１８時間、６～１６時間、８～１４時間、１０～１２時間、６～１２時間、１２～２０時間、１４～１８時間、または２０～３０時間まとめてインキュベートすることができる。ＳＴＩＮＧアゴニスト及びＥＶ（例えばエキソソーム）は、約２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、２６時間、または３０時間まとめてインキュベートすることができる。

【0334】

ＥＶ（例えば、エキソソーム）の溶液の緩衝条件もまた、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストのカプセル化を増加させるまたは制御するために変更され得る。一態様では、緩衝液は、スクロースを含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）であり得る。せん断保護剤、粘度調整剤、及び／または小胞の構造特性に影響を与える溶質など、追加の緩衝液改変物も使用され得る。生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストのカプセル化の効率を改善するために、膜軟化材料及び分子密集剤などの賦形剤を添加することもできる。緩衝液の他の改変物には、特定のｐＨ範囲及び／または濃度の塩、有機溶媒、小分子、界面活性剤、両性イオン、アミノ酸、ポリマー、及び／または複数の濃度などの上記の任意の組み合わせが含まれ得る。

【0335】

インキュベーション中のＥＶ（例えば、エキソソーム）及び生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストの溶液の温度を変更して、生物学的活性部分のカプセル化を増加させるまたは制御することができる。温度は、室温でもよい。温度は、約１５℃～９０℃、１５～３０℃、３０～５０℃、５０～９０℃であり得る。いくつかの態様では、温度は、約１５℃、２０℃、３５℃、３０℃、３５℃、３７℃、４０℃、４５℃、５０℃、５５℃、６０℃、６５℃、７０℃、７５℃、８０℃、８５℃、または９０℃である。

【0336】

ＥＶ（例えば、エキソソーム）との生物学的活性部分のインキュベーション中の生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストの濃度もまた、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストのカプセル化を増加させるまたは制御するように変更され得る。例えば、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストの濃度は、少なくとも０．０１ｍＭ～１００ｍＭのＳＴＩＮＧアゴニストであり得る。生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストの濃度は、少なくとも０．０１～１ｍＭ、１～１０ｍＭ、１０～５０ｍＭ、または５０～１００ｍＭであり得る。アゴニストの濃度は、少なくとも０．０１ｍＭ、０．０２ｍＭ、０．０３ｍＭ、０．０４ｍＭ、０．０５ｍＭ、０．０６ｍＭ、０．０７ｍＭ、０．０８ｍＭ、０．０９ｍＭ、０．１ｍＭ、０．２ｍＭ、０．３ｍＭ、０．４ｍＭ、０．５ｍＭ、０．６ｍＭ、０．７ｍＭ、０．８ｍＭ、０．９ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、または１００ｍＭであり得る。いくつかの態様では、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストの濃度は、少なくとも約１ｍＭである。

【0337】

いくつかの態様では、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストは、少なくとも約５００μＭ、少なくとも約６００μＭ、少なくとも約７００μＭ、少なくとも約８００μＭ、少なくとも約９００μＭ、少なくとも約１０００μＭ、少なくとも約１１００μＭ、少なくとも約１２００μＭ、少なくとも約１３００μＭ、少なくとも約１４００μＭ、少なくとも約１５００μＭ、少なくとも約１６００μＭ、少なくとも約１７００μＭ、少なくとも約１８００μＭ、少なくとも約１９００μＭ、または少なくとも約２０００μＭの濃度で混合物中でインキュベートされる。いくつかの態様では、ＣＤＮは、少なくとも約２５００μＭ、少なくとも約２６００μＭ、少なくとも約２７００μＭ、少なくとも約２８００μＭ、少なくとも約２９００μＭ、少なくとも約３０００μＭ、少なくとも約３１００μＭ、少なくとも約３２００μＭ、少なくとも約３３００μＭ、少なくとも約３４００μＭ、少なくとも約３５００μＭ、少なくとも約３６００μＭ、少なくとも約３７００μＭ、少なくとも約３８００μＭ、少なくとも約３９００μＭ、または少なくとも約３０００μＭの濃度で混合物中でインキュベートされる。

【0338】

いくつかの態様では、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストは、約５００μＭ～約１００ｍＭ、約５００μＭ～約９０ｍＭ、約５００μＭ～約８０ｍＭ、約５００μＭ～約７０ｍＭ、約５００μＭ～約６０ｍＭ、約５００μＭ～約５０ｍＭ、約５００μＭ～約４０ｍＭ、約５００μＭ～約３０ｍＭ、約５００μＭ～約２０ｍＭ、約５００μＭ～約１０ｍＭ、または約５００μＭ～約１ｍＭの濃度で混合物中でインキュベートされる。いくつかの態様では、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストは、約５００μＭ～約１０ｍＭ、約５００μＭ～約９ｍＭ、約５００μＭ～約８ｍＭ、約５００μＭ～約７ｍＭ、約５００μＭ～約６ｍＭ、約５００μＭ～約５ｍＭ、約５００μＭ～約４ｍＭ、約５００μＭ～約３ｍＭ、約５００μＭ～約２ｍＭ、または約５００μＭ～約１ｍＭで混合物中でインキュベートされる。

【0339】

生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストとインキュベートされる細胞外粒子の数もまた、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストのカプセル化を増加させるまたは制御するように改変され得る。精製されたＥＶ（例えば、エキソソーム）の粒子の数は、精製された小胞の総粒子の少なくとも約１０^６～少なくとも約１０^２０であり得る。精製された粒子の数は、精製された小胞の総粒子の約１０^８～１０^１８、１０^１０～１０^１６、１０^８～１０^１４、または１０^１０～１０^１２であり得る。精製された粒子の数は、精製された小胞の総粒子の少なくとも約１０^６、１０^８、１０^１０、１０^１２、１０^１４、１０^１６、１０^１８、または１０^２０であり得る。

【0340】

ＶＩＢ．ＥＶを精製するための方法
本開示のために調製されたＥＶ（例えば、エキソソーム）は、プロデューサー細胞から単離することができる。ＥＶ（例えば、エキソソーム）の単離の全ての既知の様式は、本明細書での使用に適すると思われることが企図される。例えば、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の物理的性質は、電荷（例えば、電気泳動分離）、サイズ（例えば、濾過、分子ふるい等）、密度（例えば、通常遠心分離のまたは勾配遠心分離）、Ｓｖｅｄｂｅｒｇ定数（例えば、外力を伴うまたは伴わない沈降等）に基づく分離を含む、培地または他の供給源材料からそれらを分離するために採用され得る。代替的にまたは追加的に、単離は、１つ以上の生物学的特性に基づくことができ、表面マーカーを使用し得る方法（例えば、沈殿、固相への可逆的結合、ＦＡＣＳ分離、特異的リガンド結合、非特異的リガンド結合など）を含む。さらに企図される方法では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）はまた、ＰＥＧ誘発融合及び／または超音波融合など、化学的方法及び／または物理的方法を使用して融合させ得る。

【0341】

製剤化の前に、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストとのインキュベーション後に精製して、遊離の、カプセル化されていない生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストを組成物から除去することもできる。ＥＶ（例えばエキソソーム）の物理的特性または生物学的特性に基づく分離を含む、以前に開示された方法のすべての方法も、本明細書での使用に適していると見なされる。

【0342】

単離、精製及び濃縮は、（典型的には連続遠心分離を含む、）一般的かつ非選択的様式で行われ得る。あるいは、単離、精製及び濃縮は、より特異的かつ選択的な様式（例えば、プロデューサー細胞特異的表面マーカーを用いて）で行われ得る。例えば、特異的表面マーカーは、免疫沈降、ＦＡＣＳソーティング、アフィニティ精製、及び磁気分離のためのビーズ結合リガンドにおいて使用され得る。

【0343】

いくつかの態様では、サイズ排除クロマトグラフィーは、ＥＶ（例えば、エキソソーム）を単離または精製するために使用され得る。サイズ排除クロマトグラフィー技法は、当技術分野で公知である。例示的で非限定的な技法を、本明細書に提供する。いくつかの態様では、ボイド容積画分は単離され、目的のＥＶ（例えば、エキソソーム）を含む。いくつかの態様では、例えば、密度勾配遠心分離を利用して、ＥＶ（例えば、エキソソーム）をさらに単離することができる。さらに、いくつかの態様では、プロデューサー細胞由来のＥＶ（例えば、エキソソーム）を他の起源のＥＶからさらに分離することが望ましい場合がある。例えば、プロデューサー細胞由来のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、プロデューサー細胞に特異的な抗原抗体を使用する免疫吸着剤捕捉により、非プロデューサー細胞由来のＥＶ（例えば、エキソソーム）から分離され得る。

【0344】

いくつかの態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の単離は、陰イオン交換、陽イオン交換、または混合モードクロマトグラフィーなどのサイズ排除クロマトグラフィーまたはイオンクロマトグラフィーを含み得る。いくつかの態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の単離は、脱塩、透析、接線流濾過、限外濾過、または透析濾過、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。いくつかの態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の単離は、示差遠心分離、サイズベースの膜濾過、濃度及び／または速度ゾーン遠心分離を含むがこれらに限定されない方法の組み合わせを伴い得る。いくつかの態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の単離は、１つ以上の遠心分離ステップを伴い得る。遠心分離は、約５０，０００～１５０，０００ｘｇで実施され得る。遠心分離は、約５０，０００ｘｇ、７５，０００ｘｇ、１００，０００ｘｇ、１２５，０００ｘｇ、または１５０，０００ｘｇで実施され得る。

【0345】

本開示のために調製されたＥＶ（例えばエキソソーム）は、マルチモーダルクロマトグラフィーにより単離することができる。本開示の方法は、生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニスト、例えば、１つ以上の環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニスト）に会合する細胞外小胞を含む組成物を調製するために有用であり、本方法は、細胞外小胞を混合物中の生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニスト、例えば、１つ以上の環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）と共にインキュベートすることと、マルチモーダルクロマトグラフィーを使用して細胞外小胞を分離することと、を含む。

【0346】

マルチモーダルクロマトグラフィーを使用して、ＥＶ調製物から遊離の生物学的活性部分、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストを除去することができる。ＥＶ（例えば、エキソソーム）の単離の全ての既知の様式は、本明細書での使用に適すると思われることが企図される。例えば、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の物理的性質は、電荷（例えば、電気泳動分離）、サイズ（例えば、濾過、分子ふるい等）、密度（例えば、通常遠心分離のまたは勾配遠心分離）、Ｓｖｅｄｂｅｒｇ定数（例えば、外力を伴うまたは伴わない沈降等）に基づく分離を含む、培地または他の供給源材料からそれらを分離するために採用され得る。代替的にまたは追加的に、単離は、１つ以上の生物学的特性に基づくことができ、表面マーカーを使用し得る方法（例えば、沈殿、固相への可逆的結合、ＦＡＣＳ分離、特異的リガンド結合、非特異的リガンド結合など）を含む。さらに企図される方法では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）はまた、ＰＥＧ誘発融合及び／または超音波融合など、化学的方法及び／または物理的方法を使用して融合させ得る。いくつかの態様では、マルチモーダルカラムは、ＣａｐｔｏＣｏｒｅ ７００、Ｃａｐｔｏ ＭＭＣ、またはＣａｐｔｏ ＭＭＣ ＩｍｐＲｅｓを含む群から選択される。いくつかの態様では、マルチモーダルカラムは、Ｃａｐｔｏｃｏｒｅ ７００である。いくつかの態様では、マルチモーダルカラムは、Ｃａｐｔｏｃｏｒｅ ＭＭＣである。いくつかの態様では、マルチモーダルカラムは、Ｃａｐｔｏ ＭＭＣ ＩｍｐＲｅｓである。

【0347】

上記で引用したすべての参考文献、及び本明細書中で引用するすべての参考文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0348】

下記の実施例は、例示として示されており、限定するために示されているものではない。

【実施例】

【0349】

本開示を、以下の実施例でさらに説明する。以下の実施例は、例示目的としてのみ提示し、決して本発明の範囲または内容を限定するように解釈されるものではない。本開示の実施は、別段の指示がない限り、当該技術分野内の、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技法及び薬理学の従来の方法を採用する。かかる技術は、文献において完全に説明される。例えば、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）；Ｇｒｅｅｎ＆Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２０１２）；Ｃｏｌｏｗｉｃｋ＆Ｋａｐｌａｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１２）；Ｓｕｎｄｂｅｒｇ＆Ｃａｒｅｙ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｐａｒｔｓ Ａ ａｎｄ Ｂ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００７）を参照されたい。

【0350】

実施例１：天然及びタンパク質Ｘエキソソームの安定性の評価
異なるｐＨ条件下での天然エキソソーム及びタンパク質Ｘ含有エキソソームの安定性を評価した。安定性を評価するために選択した評価アプローチは、動的光散乱及びゼータ電位分析を介してサイズ及び表面電荷を監視することであった。

【0351】

材料
天然ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞のエキソソームは、操作し、ＭｉｌｌｉＱ超純水中で約５Ｅ１２に調製した。タンパク質Ｘ細胞外小胞（ＣＢ－１０１）は、操作し、リン酸緩衝生理食塩水中で約５Ｅ１２ Ｐ／ｍＬに調製した。カルシウムまたはマグネシウムを含まないＧｉｂｃｏリン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７．２を購入した（ＰＮ ２００１２０２７，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）。滅菌マイクロ遠心チューブ（１．５ｍＬ、低保持）は、購入した（ＰＮ ３４５１，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）。追加の材料としては、クエン酸（ＰＮ Ｃ２４０４，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、クエン酸ナトリウム二水和物（ＰＮ ＢＰ３２７，Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）、及び炭酸塩－重炭酸塩緩衝液（ＰＮ Ｃ３０４１，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）が挙げられる。

【0352】

リン酸塩
２つの固体（８３．０１ｇ Ｎａ_２ＨＰＯ_４／２＝４１．５１ｇ及び１２．２９ｇ ＫＨ_２ＰＯ_４／２＝６．１５ｇ）をビーカーに加え、４００ｍＬのＭｉｌｌｉ－Ｑ水に溶解させた。必要に応じて、１Ｍ ＨＣｌまたは１Ｍ ＮａＯＨでｐＨを７．４に調整した。メスシリンダー中で溶液を５００ｍＬにし、０．２μｍフィルターフラスコを使用して濾過した。安全キャビネット内で、溶液を５０ｍＬの遠心分離管に移し、４℃で保存した。ＫＨ_２ＰＯ_４（カタログ番号３２４８－０１、ロット番号００００１６３２５４）及びＮａ_２ＨＰＯ_４ ７Ｈ_２Ｏ（カタログ番号３８１７－０１、ロット番号００００２０１９０５）は、ＪＴ Ｂａｋｅｒ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）から購入した。

【0353】

動的光散乱（ＤＬＳ）
ＤＬＳは、ＥＶの凝集を測定するために使用した。すなわち、ＤＬＳは、安定性を示すアッセイである。各サンプルは、以下の方法で調製し、実行した。

【0354】

サンプルは、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ動的光散乱装置（ＤＬＳ）、モデルＺＥＮ３６００、シリアル番号ＭＡＬ１０３６１１７（Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で実行し、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒソフトウェアバージョン７．１３（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）で分析した。Ｍａｌｖｅｒｎ ＤＬＳマイクロキュベット及びキャップキット（ＰＮ ＺＥＮ００４０）及びゼータ電位キュベット（ＰＮ ＤＴＳ１０７０）は、購入した（Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）。エキソソームは、Ｇｉｂｃｏ ＰＢＳ １Ｘ ｐＨ７．２で１Ｅ１１ Ｐ／ｍＬから１Ｅ１２ Ｐ／ｍＬに希釈した。サンプルは、少量のＭａｌｖｅｒｎキュベット（ＰＮ ＺＥＮ００４０）を使用して測定し、２５℃で４分間平衡化し、３回測定した。各ＥＶサンプルについて、２０μＬのサンプルをマイクロキュベット内で、１８０μＬの濾過されたＧｉｂｃｏ ＰＢＳに希釈し、ピペッティングを繰り返すことによって混合し、測定した。

【0355】

ここで説明する実験では、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．の以下のＮＩＳＴポリスチレンサイズ標準を使用した。

【表5】

【0356】

外観試験
各サンプルは、マットホワイト及びマットブラックの背景に対して、各表面に対して少なくとも５秒間検査した。チューブを手で穏やかに撹拌し、潜在的な沈殿物をかき混ぜ、マグライトミニＬＥＤ懐中電灯及び５倍拡大鏡を使用して可視粒子を検査した。ｐＨは、Ｏａｋｔｏｎ Ｃｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒ ｐＨ Ｓｐｅａｒ ｗａｔｅｒｐｒｏｏｆ ｐｏｃｋｅｔ ｐＨ Ｔｅｓｔｅｒ（Ｃｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒ，Ｖｅｒｎｏｎ Ｈｉｌｌｓ，ＩＬ）を使用して測定した。

【0357】

試験デザイン
試験デザインは、ｐＨ値３、５、７、９、及び１１を調べた。測定は、ｐＨ調整の直後に行った。天然及びタンパク質Ｘエキソソームの濃縮溶液は、ＭｉｌｌｉＱ水またはＰＢＳのいずれかで調製し、適切な緩衝液でＭｉｌｌｉＱ水で希釈する、及び／または試験開始前に実験室の周囲温度で正しいｐＨに調整した（図２Ｄ）。酸性ｐＨの場合は、クエン酸緩衝液を使用し、中性ｐＨの場合は、リン酸緩衝液を使用し、塩基性ｐＨの場合は、炭酸ナトリウム緩衝液を使用した。目標浸透圧は、３００ｍＯｓｍ／ｋｇであった。ＤＬＳ及びゼータ測定には、１Ｅ１１～１Ｅ１２ Ｐ／ｍＬのＥＶ２０μＬを使用した。天然及びタンパク質Ｘエキソソームの結果データを以下の表２、３、及び４に示す。

【表6】

【表7-1】

【表7-2】

【0358】

これらのデータは、塩を透析し、次に関連する緩衝液中に所望のｐＨで分散させることによって生成された。ＰＢＳの存在により、より広いｐＨ範囲において凝集からエキソソームが保護されることが観察された。上記の表に示されている結果は、図２Ａとして示されている。

【表8】

【0359】

表５に示される結果も、図１Ｂとしてグラフで示される。

【0360】

実施例２：緩衝液Ａの製剤化
ＥＶを保存及び投与するためのエキソソーム緩衝液Ａを以下のとおり調製した。緩衝液Ａ用に製剤化されたＥＶは、ＰＴＧＦＲＮタンパク質を発現するように操作されている。

【0361】

ｐＨ調整のために、５０ｍＬの１Ｎ水酸化ナトリウム及び５０ｍＬの１Ｎ塩酸を調製した。注射用水（０．８Ｌ）を撹拌棒付きの１Ｌビーカーに加えた。撹拌プレート（加熱していない）を使用して撹拌しながら、次の成分を添加した：（ａ）５０．００ｇスクロース、（ｂ）０．７０ｇ一塩基性リン酸カリウム、（ｃ）４．００ｇ二塩基性リン酸ナトリウム七水和物、及び（ｄ）２．９０ｇ塩化ナトリウム。粉末がすべて溶解するまで、ｐＨを調整しなかった。粉末が溶解しなかった場合は、混合速度を上げた。次に、ｐＨを７．１～７．３に調整した。ｐＨが７．３を超える場合は、１Ｎ塩酸を使用して調整した。ｐＨが７．１未満の場合、１Ｎ水酸化ナトリウムを使用して調整した。溶液を１Ｌメスシリンダーに注いだ。注射用水を加えて総量を１Ｌにした。ｐＨ及び導電率を記録した。目標ｐＨは、７．１～７．３であった。目標導電率は、６．５＋／－１０％～８．０＋／－１０％ｍＳ／ｃｍである。次に、溶液を０．２μｍボトルトップフィルタ（カタログ番号５６７－００２０、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）で濾過滅菌した。緩衝液Ａの最終的配合は、以下の表６に示す。

【表9】

【0362】

実施例３：緩衝液Ｂの配合
ＥＶを保存及び投与するためのエキソソーム緩衝液Ｂを以下のとおり調製した。緩衝液Ｂ用に配合されたＥＶは、ＰＴＧＦＲＮタンパク質を発現し、ＣＬ６５６をさらに含むように操作されている。

【0363】

ｐＨ調整のために、５０ｍＬの１Ｎ水酸化ナトリウム及び５０ｍＬの１Ｎ塩酸を調製した。注射用水（０．８Ｌ）を撹拌棒付きの１Ｌビーカーに加えた。撹拌プレート（加熱していない）を使用して撹拌しながら、次の成分を添加した：（ａ）５０．００ｇスクロース、（ｂ）２．１０ｇ一塩基性リン酸カリウム、（ｃ）７．２６ｇ二塩基性リン酸ナトリウム七水和物、及び（ｄ）２．３４ｇ塩化ナトリウム。粉末がすべて溶解するまで、ｐＨを調整しなかった。粉末が溶解しなかった場合は、混合速度を上げた。次に、ｐＨを７．１～７．３に調整した。ｐＨが７．３を超える場合は、１Ｎ塩酸を使用して調整した。ｐＨが７．１未満の場合、１Ｎ水酸化ナトリウムを使用して調整した。溶液を１Ｌメスシリンダーに注いだ。注射用水を加えて総量を１Ｌにした。ｐＨ及び導電率を記録した。目標ｐＨは、７．１～７．３であった。目標導電率は、６．５～８．０ｍＳ／ｃｍである。次に、溶液を０．２μｍボトルトップフィルタ（カタログ番号５６７－００２０、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）で濾過滅菌した。緩衝液Ｂの最終的配合は、以下の表７に示す。

【表10】

【0364】

実施例４：緩衝液Ｃの配合
エキソソーム緩衝液Ｃは、以下の表８に示す配合に従って調製した。ＥＶは、ＩＬ－１２に融合したＰＴＧＦＲＮタンパク質を発現するように操作している。

【表11】

【0365】

実施例５：経時的なエキソソーム及び上清中のＳＴＩＮＧアゴニスト濃度の分布
エキソソーム及び上清中の生物学的活性部分、すなわちＳＴＩＮＧアゴニストの分布を平衡化試験で調査した。

【0366】

エキソソーム中に存在する場合、生物学的活性部分（図１Ａ）、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストは、経時的にエキソソームから上清に受動拡散させ得る（図４Ａ～４Ｃ）。エキソソーム及び上清中のＳＴＩＮＧアゴニストの分布は、ＳＴＩＮＧアゴニストの濃度を経時的に計算することによって確認した。簡単に説明すると、エキソソームにＳＴＩＮＧアゴニストをロードし、緩衝液Ｂ中に保存した。エキソソームを含む液体緩衝製剤は、－８０℃で凍結させ、４℃で半凍結させるか、または２２℃で７２時間保存した。記載された温度で緩衝液Ｂ中に１２時間保存した後、エキソソーム中のＳＴＩＮＧアゴニストの濃度を計算し、上清中のＳＴＩＮＧアゴニストの濃度と比較した。結果を図３Ａ及び図３Ｂに示す。示すとおり、－８０℃で７２時間保存した場合、エキソソーム中のＳＴＩＮＧアゴニストの最終濃度は、約５μＭであり、上清中のＳＴＩＮＧアゴニストの最終濃度は、約４．３μＭであった。４℃で７２時間保存した場合、エキソソーム中のＳＴＩＮＧアゴニストの最終濃度は、約４．５μＭであり、上清中のＳＴＩＮＧアゴニストの最終濃度は、約４．４μＭであった。２２℃で７２時間保存した場合、エキソソーム中のＳＴＩＮＧアゴニストの最終濃度は、約４．１μＭであり、上清中のＳＴＩＮＧアゴニストの最終濃度は、約６．５μＭであった。図３Ａ及び図３Ｂにグラフ化されたデータは、以下の表９、１０、及び１１に示す。

【0367】

この実施例は、保存温度が、上清中のＳＴＩＮＧアゴニストの濃度と比較して、エキソソーム中のＳＴＩＮＧアゴニストの濃度に有意な影響を与えないことを示す。

【表12】

【表13】

【表14】

【0368】

実施例６：遺伝子発現に対する緩衝液Ｂ中のＳＴＩＮＧアゴニストの効果
ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を含むエキソソームの投与が、Ｃ５７ＢＬ／６肝臓中の遺伝子発現に及ぼす効果について調べた。

【0369】

解凍後、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を含む緩衝液Ｂ組成物中のエキソソームを、実施例５に記載のとおり、４℃及び２２℃で２４時間または７２時間保存した。ＰＢＳ、ＣＬ６５６（２０μｇ）、エキソソーム、または上記のとおりインキュベートしたＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を含む緩衝液Ｂ中のエキソソーム（ＣＬ６５６ ６００ｎｇ／マウス）をＣ５７ＢＬ／６マウスに静脈内投与した。対照として、－８０℃で保存されたＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を含む緩衝液Ｂ組成物中のエキソソーム（マウスあたり６ｎｇ、６０ｎｇ、及び６００ｎｇ）を投与した（０時間と見なす）。４時間後、マウスを安楽死させ、肝臓を採取した。ＲＮｅａｓｙ Ｌｉｐｉｄ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して肝臓からトータルＲＮＡを単離し、ＲＴ－ｑＰＣＲによってＩＦＮβ ｍＲＮＡの発現レベルを測定した。相対的発現は、ハウスキーピング遺伝子ＲＰＳ１３に対して正規化した。図３Ｃは、肝臓研究の結果を提供する。示されているように、１）ＩＦＮβ ｍＲＮＡの用量依存的誘導は、０時間のサンプルで観察された。２）ＩＦＮβ ｍＲＮＡのレベルは、いずれの保存条件においても、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６（マウス注射あたり６００ｎｇ）を含む緩衝液Ｂ組成物中のすべてのエキソソームで類似していた。３）ＳＴＩＮＧアゴニストを含まないエキソソームは、ＩＦＮβ ｍＲＮＡを誘導せず、ＣＬ６５６（２０μｇ）は、低レベルのＩＦＮβ ｍＲＮＡを誘導した。

【0370】

これらの結果は、凍結され、解凍され、かつ対象に投与された緩衝液Ｂ中に含まれるＳＴＩＮＧアゴニストの投与が、いかなる有意差もなく、肝臓組織中においてＩＦＮβ遺伝子の発現の誘導に効果的であることを示している。

【0371】

実施例７：腫瘍内濃度に対するＳＴＩＮＧアゴニスト及びエキソソームカプセル化ＳＴＩＮＧアゴニストの効果
経時的な緩衝液Ｂ中のＳＴＩＮＧアゴニストの腫瘍内濃度を調べた。

【0372】

簡単に説明すると、Ｂ１６－Ｆ１０黒色腫細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下移植した。皮膚腫瘍が見られたとき、各動物には、腫瘍内用量の遊離ＳＴＩＮＧアゴニスト（０．３μｇのＣＬ６５６）またはエキソソームカプセル化ＳＴＩＮＧアゴニスト（０．３μｇのＣＬ６５６）のいずれかを投与した。遊離ＳＴＩＮＧアゴニスト及びエキソソームカプセル化ＳＴＩＮＧアゴニストの腫瘍内濃度は、注射後５分、３０分、１２０分、３６０分、１４４０分、及び２８８０分に測定した。結果を図３Ｄに提供する。示されているように、遊離ＳＴＩＮＧアゴニストの腫瘍内濃度は、投与後に有意に低下し（破線）、約３６０分後には検出できなかった。さらに図３Ｄに示すとおり、エキソソームにカプセル化されたＳＴＩＮＧアゴニストの濃度は、１４４０分で約１００ｎＭまでゆっくりと低下した。その後、エキソソームにカプセル化されたＳＴＩＮＧアゴニストの濃度は、最終測定が２８８０分に行われるまで、約１００ｎＭで安定していた。

【0373】

この実施例は、遊離ＳＴＩＮＧアゴニストと比較して、エキソソームにカプセル化されたＳＴＩＮＧアゴニストを含む組成物を投与することが、ＳＴＩＮＧアゴニストの腫瘍内濃度に対して安定効果を有することを実証している。

【0374】

実施例８：例示的な組成物０２製剤の開発
製剤開発の概要

【0375】

ＳＴＩＮＧアゴニストをロードしたエキソソーム（ｅｘｏＳＴＩＮＧ）組成物０２（Ｃ－０２）医薬品製剤の開発は、精製されたエキソソームを含む中間体－１の製剤開発と同時に行われた。同時製剤開発の目的は、ａ）医薬品中の精製されたエキソソーム有効成分の安定性が、アゴニスト有効成分の安定性とは対照的に、安定化賦形剤の選択に情報を与える可能性が高いことを認識すること、及びｂ）精製されたエキソソーム製剤がＣ－０２医薬品と同じであることにより、これらの賦形剤が医薬品に組み込まれるため、製造が容易になり得ることである。試験に使用された試験方法は、放出試験方法と同一ではないが、類似のものであった。最終的な配合ストレス条件の安定性試験には、最終的に認定された試験方法を使用した。特に明記しない限り、Ｃ－０２医薬品（中間体－１及び中間体－０２を含む）を使用して試験を実施した。

【0376】

最初の医薬品ストレス試験が実施され、機械的、酸化的、及びｐＨストレス条件を含めた。この試験は、１５ｍＭ一塩基性リン酸カリウム、２７ｍＭ二塩基性リン酸ナトリウム緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、５％スクロース（ｗ／ｖ）、ｐＨ７．２を使用して実施した。この試験では、激しい撹拌などの極端な機械的ストレスを除いて、すべてのストレス条件で許容可能な安定性が実証された。データは、５％（ｗ／ｖ）スクロースを含むＰＢＳ製剤が、ストレス状態に対する保護を提供することを示した。

【0377】

中間体－０１を使用して、様々な緩衝液で実施した広いｐＨ範囲試験（ｐＨ３．０～１１．０）では、６．５～９．０のｐＨ範囲が許容可能であると特定し（動的光散乱（ＤＬＳ）により）、リン酸緩衝液の適合性を確認した。ＤＬＳを使用した中間体－０１の９ヶ月の安定性試験及び追加の分析評価により、５％（ｗ／ｖ）スクロースを含むＰＢＳ中の－８０℃での安定性が確認された。

【0378】

中間体－０１及びＣ－０２医薬品の両方の最終製剤組成は、非経口投与に好適である張性を達成するように改変した。所望のスクロースレベル及び張性標的により、ＰＢＳ製剤の塩化ナトリウム濃度を低下させた。製剤の緩衝能力を改善するために、ＰＢＳのリン酸塩濃度を増加させた。さらに、リン酸ナトリウムのみよりも、リン酸ナトリウム及びリン酸カリウム緩衝液の混合物を選択した。

【0379】

選択した製剤組成は、１５ｍＭ一塩基性リン酸カリウム、２７ｍＭ二塩基性リン酸ナトリウム、４０ｍＭ塩化ナトリウム、５％（ｗ／ｖ）スクロース、ｐＨ７．２であった。この製剤は、中間体－０１、Ｃ－０２医薬品、及びＣ－０２のＦＢ－０１希釈剤に使用される。最終製剤緩衝液は、製剤緩衝液０１（ＦＢ－０１）と称する。

【0380】

最終製剤におけるＣ－０２医薬品の安定性の評価は、凍結融解サイクル及び機械的反転に対して、医薬品が安定していることを示している。分解は、極端なストレス条件下でのみ生じる。

【0381】

医薬品の凍結融解安定性に対する凍結防止剤の評価
スクロース、トレハロース、Ｄ－ソルビトールなどの凍結防止剤は、３１０ｍＭ二塩基性リン酸ナトリウム、９０ｍＭ一塩基性リン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．４で製剤化された医薬品開発ロットで、異なる濃度で評価した。この試験では、ＰＴＧＦＲＮ過剰発現エキソソームの開発ロット及び環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストを使用した。凍結防止剤は、１．０％、２．５％、５．０％、７．５％、及び１０．０％（ｗ／ｖ）で評価した。リン酸緩衝液中のすべてのスクロース及びトレハロース製剤の理論浸透圧は、およそ３００ｍＯｓｍ／ｋｇと算出した。Ｄ－ソルビトール製剤の場合、１％～５％（ｗ／ｖ）製剤の浸透圧もおよそ３００ｍＯｓｍ／ｋｇであったが、７．５及び１０．０％Ｄ－ソルビトール製剤は、それぞれ、約４００及び６００ｍＯｓｍ／ｋｇと算出された。すべての製剤は、動的光散乱（ＤＬＳ）による外観及びサイズによって、０回、３回、及び１０回の凍結融解サイクル後に評価した。

【0382】

２つの対照（ＰＢＳのみまたは水）の外観試験の結果は、凍結防止剤を含む製剤と比較して、凍結融解サイクルの増加に関連する、より実質的な外観の変化を示した。変化には、濁度及び色の増加（ＰＢＳ）、または沈降に伴う目に見える粒子の増加（水）を含めた。スクロース及びＤ－ソルビトールの両方の製剤は、いくつかの濃度において、許容できる外観結果を示した。スクロースまたはＤ－ソルビトールと比較して、外観の変化を防ぐために、より高濃度のトレハロースが必要であった。

【0383】

ＤＬＳ試験の結果は、複数の凍結融解サイクル時に、対照製剤（ＰＢＳのみ、水のみ）のサイズ及び多分散性の増加が観察されたことを示した。一般に、より高濃度の凍結防止剤（２．５％（ｗ／ｖ）以上）を使用したときには、３回及び１０回の凍結融解後にサイズまたは多分散性に有意な変化は観察されなかった。

【0384】

この凍結融解試験での外観及びＤＬＳの結果に基づき、２．５％（ｗ／ｖ）以上で存在する場合、スクロース及びＤ－ソルビトールの両方が許容できる凍結防止剤である。５％（ｗ／ｖ）スクロースは、十分な凍結防止をもたらし、以下に説明する初期ストレス研究に含まれる今後の製剤研究のために選択した。

【0385】

スクロースを含むリン酸緩衝生理食塩水のストレス試験－初期試験
選択した凍結防止剤（５％（ｗ／ｖ）スクロース）及び塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液を使用してストレス試験を実施し、異なる機械的ストレス条件下での及び酸化後の安定性を確認した。これらの試験の製剤は、４３ｍＭリン酸緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、５％（ｗ／ｖ）スクロース、ｐＨ７．２であった。

【0386】

機械的ストレス試験では、サンプルは、様々なレベルの機械的ストレス（撹拌、混合）を様々な期間使用して、周囲温度で評価した。サンプルは、外観、ｐＨ、浸透圧、ＤＬＳ、及びナノ粒子追跡分析（ＮＴＡ）によって評価した。サイズ及び多分散度指数は、対照（撹拌なし）と比較して試験を行ったいずれの条件でも変化しなかった。手動で激しく撹拌するのみで、外観試験が変更され、この状態で起泡が観察された。激しい撹拌などの極端な機械的ストレスを除くすべての条件で、医薬品製剤の許容可能な安定性が観察された。複数回の穏やかな反転後の製剤の安定性も観察された。試験サンプルのｐＨ及び浸透圧は一定のままであった。

【0387】

医薬品に対する酸化ストレスの効果は、サンプルを異なる濃度の過酸化水素で３７℃で４時間処理することによって評価した。処理後、サンプルを１００ｍＭアスコルビン酸ナトリウムでクエンチし、周囲温度で１時間保持して、試験前に過酸化水素を中和した。この試験では、ＳＴＩＮＧアゴニストをロードした中間体－０１を使用した。サンプルは、外観、ＤＬＳ、ＮＴＡ、及びｉｎ ｖｉｖｏ効力によって分析した。

【0388】

医薬品は、限られた一連のアッセイで試験された条件下で酸化ストレスにさらされた場合、安定しており、完全に強力である。異なる過酸化水素濃度の曝露で、対照（過酸化水素処理なし）と比較して、外観、サイズ、またはエキソソーム濃度について、実質的な変化は観察されなかった。定性的には、正規化された遺伝子発現によって評価されるように、脾臓内での効力に実質的な差は観察されなかった。過酸化水素試験濃度の増加に伴い肝臓の効力が低下する傾向が観察されたが、アスコルビン酸のみの群では、効力の実質的な喪失が観察され、群間及び群内で比較的広範囲の効力が得られた。したがって、効力は、対照群（ＰＢＳ）を除いて、試験群と対照群との間の肝臓でも同様であった。採用された試験方法により、データは、医薬品が低レベルの酸化ストレスに敏感ではないことを示唆している。

【0389】

その後のストレス試験は、選択された最終製剤中のＣ－０２医薬品の安定性をさらに確認するために設計された。さらに、最終製剤中のＣ－０２医薬品について、加速条件試験を実施した（データは示さず）。

【0390】

ｐＨの選択／中間体－０１の試験
医薬品のｐＨ目標及び範囲の選択は、製剤中のエキソソームの安定性を確保することに焦点が当てられていたため、中間体－０１を使用して試験を実施した。この試験では、ｐＨ値３、５、６、６．５、７、９、及び１１での安定性を評価した。クエン酸／クエン酸ナトリウム二水和物緩衝液を使用してｐＨ値３及び５を達成した。ｐＨ値６、６．５、及び７については、一塩基性リン酸カリウム／二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を使用し、ｐＨ値９及び１１については、炭酸緩衝液を使用した。サンプルは、サイズまたはサイズ分布の変化、及び表面電荷のζ電位について、ＤＬＳによって分析した。これらの限られたデータの組み合わせは、ｐＨ範囲６．５～９．０をサポートするが、実際には、より狭い範囲（±０．５）を、ｐＨ７．２標的周辺の製剤に選択した。これらの結果に基づいて、許容可能なＤＬＳ結果及びリン酸緩衝液の予想される緩衝能力に基づいて、目標ｐＨ７．２を選択した。

【0391】

中間体－０１及びＣ－０２医薬品製剤
中間体－０１のｐＨ試験データは、中間体－０１用のＰＢＳ製剤の選択をサポートする。医薬品の凍結防止剤の試験により、本製剤に５％（ｗ／ｖ）のスクロースが特定された。中間体－０１の同様の試験でも、５％（ｗ／ｖ）スクロースが望ましい凍結防止剤として特定された（データは示していない）。中間体－０１及び医薬品の両方の製剤組成物も、生理液に近い張性を維持する（約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ）。所望のスクロースレベル及び張性標的により、ＰＢＳ製剤の塩濃度を低下させた。製剤の緩衝能力を改善するために、ＰＢＳのリン酸塩濃度を増加させた。さらに、リン酸ナトリウム及びカリウム緩衝液の混合物を選択した。

【0392】

これらの考慮事項に基づいて、Ｃ－０２医薬品用に選択された１つの製剤組成物は、１５ｍＭ一塩基性リン酸カリウム、２７ｍＭ二塩基性リン酸ナトリウム、４０ｍＭ塩化ナトリウム、５％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ７．２であった。この製剤は、中間体－０１、Ｃ－０２医薬品、及びＣ－０２医薬品のＦＢ－０１希釈剤に使用される。製剤緩衝液は、ＦＢ－０１と称する。

【0393】

中間体－０１安定性試験
ＦＢ－０１中の－８０℃での長期保存に対する中間体－０１の安定性を確認するために、開発安定性試験を実施した。

【0394】

最終医薬品製剤におけるストレス試験－フォローアップ試験

【0395】

機械的ストレスの様々な条件下及び酸化後のＣ－０２医薬品の安定性を確認するために、最終製剤組成物でフォローアップストレス試験を実施した。この試験は、最終ＦＢ－０１製剤にＣ－０２医薬品を使用して実施し、初期ストレス試験に関連する追加の分析方法で実施した。

【0396】

この試験には、保持対照（２５℃で最大２４時間）、複数の凍結融解サイクル（－８０℃に凍結して周囲温度で解凍する最大１０サイクル）、極端なｐＨ（ｐＨ５及び９）、酸化ストレス（最大２４時間の３％過酸化水素曝露）、及び最大２４時間の機械的転倒反転を使用した機械的ストレスを含めた。

【0397】

凍結融解サイクルの結果は、１０回の凍結融解サイクルを通じて医薬品の品質属性に変化がないことを示している。

【0398】

実施例９：例示的な組成物０３製剤の開発
ＩＬ－１２をロードしたエキソソーム（ｅｘｏＩＬ－１２）組成物０３（Ｃ－０３）医薬品は、有効成分であるｅｘｏＩＬ－１２を、５ｍＭ一塩基性リン酸カリウム、１５ｍＭ二塩基性リン酸ナトリウム、５０ｍＭ塩化ナトリウム、１４６ｍＭスクロースを含む製剤緩衝液、ｐＨ７．２に含めて構成させる。

【0399】

Ｃ－０３の製剤開発は、いくつかの原則によって誘導された。医薬品製剤は、注射液としての使用を目的とする。また、凍結／解凍操作による分解を最小限に抑えるために、製剤が凍結保存用に最適化されている。製剤開発試験中、最初の分析試験は、溶液中のエキソソームの安定性及び効力に重点を置いた。これらのアッセイには、外観、動的光散乱（ＤＬＳ）、ＩＬ－１２ ＡｌｐｈａＬＩＳＡ、及びヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞ベースのレポーターアッセイを含めた。

【0400】

精製後、ｅｘｏ－ＩＬ－１２製剤は、可視粒子を含まない半透明の溶液として見える。色は、エキソソームサンプルをガラスアンプルの欧州薬局方色基準と比較することにより決定した。ＥｘｏＩＬ－１２エキソソームは、直径が約１７１ｎｍであり、ＰＤＩ値が０．２５未満であることがわかっている。

【0401】

Ｃ－０３の緩衝液及び凍結防止剤の調査により、品質及び安定性を最適化するために、ＣＢ－１０２原薬及びＣ－０３医薬品製剤について、ｐＨ７．２で、１４６ｍＭ（５％ｗ／ｖ）スクロースを含むリン酸ナトリウム／カリウム緩衝液を選択することにした。潜在的な安定性を示すアッセイについて情報を得るために、強制分解試験を実施した。

【0402】

緩衝液の選択
ｐＨ安定性試験は、高温（３７℃及び５０℃）で、ｐＨ３、５、７、及び９の様々な緩衝液を使用して実施した。

【0403】

緩衝液－１０２は、最初にｍｉｌｌｉＱ水に緩衝液交換させ、適切な緩衝液の濃縮ストックにスパイクすることにより、所望のｐＨまで調整した。ｐＨ調整後、サンプルを外観、動的光散乱（ＤＬＳ）により、サイズ及びサイズ分布の変化を分析し、ＩＬ－１２ ＡｌｐｈａＬＩＳＡを使用して、（遊離及びエキソソーム関連）ＩＬ－１２の遊離含有量対総含有量を定量化した。

【0404】

凍結防止剤の選択
ｅｘｏＩＬ－１２を含むリン酸緩衝液を使用して、１４６ｍＭ（５％ｗ／ｖ）スクロースを含む場合と含まない場合とで、凍結融解（Ｆ／Ｔ）サイクルを繰り返して試験を実施した。凍結防止剤の濃度は、十分なリン酸塩緩衝能力（濃度）で生理学的浸透圧（約２９０ｍＯｓｍ／ｋｇ）を達成するように選択した。ＥｘｏＩＬ－１２を含むｍｉｌｌｉＱ水（ＭＱ）及びＰＢＳのみを対照サンプルとして調製し、凍結／解凍サイクル（Ｆ／Ｔ）を３回行った。１４６ｍＭスクロースを含むｅｘｏＩＬ－１２を含むリン酸緩衝液（緩衝液選択試験から選択したもの）を、０、１、３、及び１０ Ｆ／Ｔで評価した。収集されたサンプルは、外観、ＤＬＳ、及びＩＬ－１２ ＡｌｐｈａＬＩＳＡテスト方法によって評価した。

【0405】

スクロースを含む試験サンプルは、約１８０ｎｍの測定で、１０Ｆ／Ｔサイクルを通じてＤＬＳによるサイズに関して依然として安定していた。同様に、分布または多分散度指数（ＰＤＩ）は、０．１５～３Ｆ／Ｔサイクルまで一貫して低いままであったが、１０Ｆ／Ｔサイクル後には０．２まで増加した。色の変化または濁度の増加は観察されなかった。対照のエキソソームは、ｍｉｌｌｉＱ水またはＰＢＳのいずれかに分散され、３Ｆ／Ｔサイクルを行い、凝集及び分解の明らかな兆候を示した。ｍｉｌｌｉＱ対照は濁り、わずかに赤／オレンジ色に変化したが、ＤＬＳによる８００ｎｍより大きいサイズは、明らかな凝集を示した。ＰＢＳのみのエキソソームのサイズは、１８７ｎｍであり、試験サンプルよりもわずかに大きく、ＰＤＩは、スクロースを含む試験群の１０Ｆ／Ｔサンプルのものとほぼ同じであった。ＰＢＳのみのエキソソームは、凝集を示す外観によって濁度の顕著な変化を示したが、色の変化はなかった。

【0406】

ＩＬ－１２ ＡｌｐｈａＬＩＳＡの結果は、スクロースの存在下で１０Ｆ／Ｔ後、会合ＩＬ－１２及び遊離ＩＬ－１２の両方がそれぞれ約２３００ｎｇ／ｍＬ及び１～３％のＩＬ－１２で依然として類似していることを示している。会合ＩＬ－１２の顕著な減少が、ｍｉｌｌｉＱ及びＰＢＳのみのエキソソームの両方で観察され、それぞれ２４％、３７％減少した。遊離ＩＬ－１２の量は、わずかに増加して、それぞれ５％、４％であった。

【0407】

リン酸塩／スクロース緩衝液の最終製剤の浸透圧は、およそ３００ｍＯｓｍ／ｋｇである。

【0408】

強制分解試験
ＩＣＨ Ｑ１Ａ（Ｒ２）に従って強制分解試験を実施し、凍結融解、極端なｐＨ、酸化、及び機械的ストレスのストレス条件下での医薬品の安定性を判定した。

【0409】

凍結融解試験の結果では、一般に、１０回のＦ／Ｔサイクルを通じて有意な傾向を示さなかった。観察されたエキソソームのサイズ及びＰＤＩ値は、１０Ｆ／Ｔ後が最大であったが、絶対差は、エキソソームの安定性に対する真の影響を示すのに十分なほど有意ではなかった。さらに、他の試験結果では、１０Ｆ／Ｔまでに、有意な傾向は示されなかった。控えめに言って、Ｃ－０３の安定性は、最大５回の凍結融解サイクルについて確認される。

【0410】

実施例１０：例示的な組成物０４製剤の開発
アンチセンスオリゴマーをロードしたエキソソーム用の医薬品製剤が開発されるであろう。Ｃ－０３医薬品製剤が出発点として使用される。リン酸緩衝液濃度（５ｍＭ一塩基性リン酸カリウム及び１５ｍＭ二塩基性リン酸ナトリウム）及びｐＨ（ｐＨ７．２）は、Ｃ－０３医薬品と比較して、依然として変化しない。塩化ナトリウム濃度は、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの範囲の濃度で試験され、スクロース濃度は、約２．５％～５％（約７３ｍＭ～約１４６ｍＭ）の濃度で試験される。上記の実施例９及び１０に記載の方法に従って状態を監視する。本明細書に開示のとおり、ＳＴＡＴ６を標的とするＡＳＯがロードされたエキソソームなど、様々なＡＳＯがロードされたエキソソーム構築物が分析される。Ｔｒｉｓ ＥＤＴＡ緩衝水溶液または純水では、ＡＳＯがエキソソームから解離するため、塩化ナトリウムとスクロースとの組み合わせが、ロードされたＡＳＯを保持する役割を果たす可能性がある。

【0411】

発明の概要及び要約の項ではなく、発明を実施するための形態の項が、特許請求の範囲を解釈するために使用されることを意図していることを理解されたい。発明の概要及び要約の項は、本発明者（ら）によって意図されるものとして、本開示の１つ以上ではあるがすべてではない例となる態様を示し得、本開示及び添付の特許請求の範囲を如何様にも限定するものではない。

【0412】

本開示は、特定される機能及びその関係性の実装を例示する機能的構成要素を活用して上記で説明された。これらの機能的構成要素の境界線は、記述上の便宜のためにここに恣意的に定義されたものである。その特定の機能の実現及び関係が適切に遂行される限りにおいて、別の境界線が定義され得る。

【0413】

特定の態様についての上述の説明は、当業者の範囲内の知識を適用することにより、他者が、様々な応用のために、このような特定の態様を、過度な実験をすることなく、本開示の概括的な概念から離脱することなく、容易に変更及び／または改造し得るという本開示の概括的な特徴を十分に公表することになる。したがって、かかる適合及び修正は、本明細書に提示されている教示及び指導に基づき、開示される態様の同等物の範囲及び意味の内にあるように意図される。本明細書の表現または用語は制限ではなく説明を目的としており、ゆえに本明細書のこの用語または表現は、当業者によって教示及び指導に照らして解釈されると理解されるものとする。

【0414】

本開示の広がりや範囲は、上記の例示的な態様のいずれによっても制限されるべきではなく、以下の特許請求の範囲及びそれらの等価物に従ってのみ定義されるべきである。

【0415】

本出願の特許請求の範囲は、親出願または他の関連出願の特許請求の範囲とは異なる。したがって、出願人は、本出願に関連して親出願または任意の先行出願でなされた特許請求の範囲のいかなる免責事項も無効にする。したがって、審査官にむけて、そのような任意の以前の免責事項及びそれが回避されるように作成された引用文献を再検討する必要がある可能性があることを記しておく。さらに、審査官は、本出願で作成されたいかなる免責事項も親出願に読み込む、または親出願に反して読み込むことないにも留意のこと。

【0416】

本出願に引用するすべての刊行物、特許、特許出願、及び他の文献は、あたかも各個別の刊行物、特許、特許出願、または他の文献があらゆる目的のために参照により援用されるように個別に示されるのと同じ範囲まで、あらゆる目的のために、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0417】

様々な特定の態様を示し、記載してきたが、上記明細書は制限的ではない。本開示（複数可）の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更を行うことができることが理解されよう。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【配列表】

2022549328000001.app

【国際調査報告】