(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-11-24
(54)【発明の名称】抗体組成物を製造する方法
(51)【国際特許分類】
C07K 1/00 20060101AFI20221116BHJP
C07K 16/00 20060101ALI20221116BHJP
C07K 1/16 20060101ALI20221116BHJP
C12Q 1/06 20060101ALI20221116BHJP
【ＦＩ】
C07K1/00 ZNA
C07K16/00
C07K1/16
C12Q1/06
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022518964
(86)(22)【出願日】2020-09-28
(85)【翻訳文提出日】2022-03-24
(86)【国際出願番号】 US2020053090
(87)【国際公開番号】W WO2021062372
(87)【国際公開日】2021-04-01
(31)【優先権主張番号】62/906,709
(32)【優先日】2019-09-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】500203709
【氏名又は名称】アムジェン インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(72)【発明者】
【氏名】ダフ， ロバート ジェイ．
(72)【発明者】
【氏名】ファン， ゼ
(72)【発明者】
【氏名】ラミレス， ホセ ジー．
【テーマコード（参考）】
4B063
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B063QQ79
4B063QR77
4B063QS10
4H045AA20
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
4H045GA21
(57)【要約】
抗体組成物の製品品質を決定する方法であって、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルが、抗体組成物の製品品質の基礎とする基準である方法が、本明細書において提供される。例示的な実施形態では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルの総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン含量を決定する工程；並びに（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内である場合に、製品品質を、許容できる、及び／又はＡＤＣＣ活性レベル基準を達成していると決定する工程を含む。製品品質をモニターする関連方法及び抗体組成物を製造する方法が、本明細書においてさらに提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗体組成物の製品品質を決定する方法であって、前記抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルが、前記抗体組成物の製品品質の基礎となる基準であり、前記方法が、ｉ．抗体組成物のサンプルの総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン含量を決定する工程、並びに
ｉｉ．（ｉ）で決定された前記ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内である場合に、前記抗体組成物の前記製品品質を、許容できる、及び／又はＡＤＣＣ活性レベル基準を達成していると決定する工程
を含み、
ＴＡＦグリカン含量の前記目標範囲は、（１）参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲、及び（２）前記抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを前記抗体組成物の前記ＴＡＦグリカン含量と相関させる第１のモデルに基づき、
前記第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣが、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣの約９５％～約１０５％であり、ここで、前記第２のモデルが、前記抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを、前記抗体組成物の高マンノース（ＨＭ）グリカン含量及び前記抗体組成物の非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量と相関させる、方法。
【請求項2】
前記第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣが、前記第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣの約１００％である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記第１のモデルのｐ値が０．０００１未満であり、及び／又は前記第２のモデルのｐ値が０．０００１未満である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルが約１２Ｑ×ＴＡＦ％であり、ここで、Ｑは前記抗体が結合する抗原の抗体結合部位の数であり、ＴＡＦ％が前記抗体組成物のＴＡＦグリカン含量である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
Ｑが２である、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
前記第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルが、約２４×ＴＡＦ％である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルが、約２７×ＨＭ％＋約２２×ＡＦ％であり、ここで、ＡＦ％は前記抗体組成物のＡＦグリカン含量であり、ＨＭ％が前記抗体組成物のＨＭグリカン含量である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
Ｑが１である、請求項４に記載の方法。
【請求項9】
前記第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルが、約１２×ＴＡＦ％である、請求項１～４及び８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルが、約１４．８×ＨＭ％＋約１２．８×ＡＦ％である、請求項１～３、７及び８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
前記参照抗体がリツキシマブである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記参照抗体がインフリキシマブである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記方法が品質管理（ＱＣ）アッセイである、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記方法がインプロセスＱＣアッセイである、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記サンプルが、インプロセス材料のサンプルである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記ＴＡＦグリカン含量が、回収前又は回収後に決定される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記ＴＡＦグリカン含量が、クロマトグラフィ工程後に決定される、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記クロマトグラフィ工程が、キャプチャークロマトグラフィ、中間クロマトグラフィ、及び／又はポリッシュクロマトグラフィを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
前記ＴＡＦグリカン含量が、ウイルス不活化及び中和、ウイルス濾過、又は緩衝液交換の後に決定される、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項20】
前記方法がロットリリースアッセイである、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記サンプルが製造ロットから得られる、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内である場合、前記抗体組成物を下流プロセスのために選択する工程をさらに含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が前記目標範囲内でない場合、細胞培養の１つ以上の条件を改変して、改変細胞培養物を得る、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項24】
前記細胞培養の１つ以上の条件を改変した後に得られる前記抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程をさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項25】
（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が前記目標範囲内でない場合、前記方法が、（ｉｉｉ）前記細胞培養の１つ以上の条件を改変して改変細胞培養物を得る工程、及び（ｉｖ）前記改変細胞培養物から得られる前記抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程をさらに含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が前記目標範囲内でない場合、前記方法が、（ｉｖ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が前記目標範囲内になるまで、（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）をさらに含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
前記抗体組成物のＡＤＣＣ活性を直接測定するアッセイが、前記ＴＡＦグリカン含量が前記目標範囲外である場合にのみ、前記抗体組成物に対して実施される、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記抗体組成物のＡＤＣＣ活性を直接測定するアッセイが、前記ＴＡＦグリカン含量が前記目標範囲内である場合、前記抗体組成物に対して実施されない、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
抗体組成物のＡＤＣＣ活性を直接測定する前記アッセイが、抗原発現細胞及びエフェクター細胞の両方に結合する抗体に結合するエフェクター細胞によって、検出可能な薬剤を含む抗原発現細胞の溶解時の前記検出可能な薬剤の放出を測定する細胞ベースのアッセイである、請求項２３又は２４に記載の方法。
【請求項30】
請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法に従って、第１の時点で得られた第１のサンプルと、前記第１の時点とは異なる第２の時点で採取された第２のサンプルとを用いて、抗体組成物の製品品質を決定する工程を含む、抗体組成物の製品品質をモニターする方法。
【請求項31】
前記第１のサンプル及び前記第２のサンプルのそれぞれが、インプロセス材料のサンプルである、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
前記第１のサンプルがインプロセス材料のサンプルであり、前記第２のサンプルが製造ロットのサンプルである、請求項３０に記載の方法。
【請求項33】
前記第１のサンプルが、前記細胞培養の１つ以上の条件を改変する前に得られるサンプルであり、前記第２のサンプルが、前記細胞培養の１つ以上の条件を改変した後に得られるサンプルである、請求項３０に記載の方法。
【請求項34】
抗体組成物を製造する方法であって、前記抗体組成物の製品品質を決定する工程を含み、前記抗体組成物の製品品質は請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法に従って決定され、前記サンプルはインプロセス材料であり、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が前記目標範囲でない場合、前記方法は、（ｉｉｉ）前記細胞培養の１つ以上の条件を改変して改変細胞培養物を得る工程、及び（ｉｖ）前記改変細胞培養物から得られた前記抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程、任意選択で、前記ＴＡＦグリカン含量が前記目標範囲内になるまで、工程（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）を繰り返す工程をさらに含む方法。
【請求項35】
前記ＴＡＦグリカン含量の目標範囲を達成するため、前記細胞培養の１つ以上の条件を改変して、主にＨＭグリカン含量を改変する、請求項３４に記載の方法。
【請求項36】
前記ＴＡＦグリカン含量の目標範囲を達成するため、前記細胞培養の１つ以上の条件を改変して、主にＡＦグリカン含量を改変する、請求項３４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／９０６，７０９号の米国特許法第１１９条（ｅ）の下での利益を主張し、その開示は全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１９年９月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／９０６，７０９号の米国特許法第１１９条（ｅ）の下での利益を主張し、その開示は全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
電子的に提出された資料の参照による組み込み
本明細書と同時に提出されたコンピュータにより読み込み可能なヌクレオチド／アミノ酸の配列表は、その全体が参照により組み込まれ、下記のように識別される：２０２０年９月２４日作成の「Ａ－２４５１－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」というファイル名の２６，６６０バイトのＡＳＣＩＩ（Ｔｅｘｔ）ファイル。
本明細書と同時に提出されたコンピュータにより読み込み可能なヌクレオチド／アミノ酸の配列表は、その全体が参照により組み込まれ、下記のように識別される：２０２０年９月２４日作成の「Ａ－２４５１－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」というファイル名の２６，６６０バイトのＡＳＣＩＩ（Ｔｅｘｔ）ファイル。
【背景技術】
【0003】
グリコシル化は、例えばタンパク質折り畳み、クオリティコントロール、分子輸送及び局在化及び細胞表面受容体相互作用を含む多くの細胞機能に関与するので、最も一般的で、また重要な翻訳後修飾の１つである。グリコシル化は、治療用糖タンパク質の生理活性、薬物動態、免疫原性、溶解度、及びインビボクリアランスに影響を与えるため、組換えタンパク質薬の治療効果に影響を及ぼす。特に、Ｆｃグリコフォームプロファイルは、抗体の臨床効果及び薬物動態に直接影響を及ぼすので、組換え抗体に対して重要な製品品質特性である。
【0004】
Ｆｃ－ＣＨ２ドメイン中の保存された二分枝型グリカンに関連する特定のグリカン構造は、抗体エフェクター機能、例えば抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）を介在するＦｃγＲとの相互作用に強く影響し得る（Ｒｅｕｓｃｈ Ｄ，Ｔｅｊａｄａ ＭＬ．Ｆｃ ｇｌｙｃａｎｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｑｕａｌｉｔｙ ａｔｔｒｉｂｕｔｅｓ．Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０１５；２５：１３２５－３４を参照）。例えば、コアフコースがＦｃγＲＩＩＩａ結合親和性に対して非常に大きな影響を有し、ＡＤＣＣ活性に実質的な変化をもたらすことが示されている（Ｏｋａｚａｋｉ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｆｕｃｏｓｅ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｂｉｎｄｉｎｇ ｅｎｔｈａｌｐｙ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＩｇＧ１ ａｎｄ ＦｃｇａｍｍａＲＩＩＩａ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ２００４；３３６：１２３９－４９、Ｆｅｒｒａｒａ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｕｎｉｑｕｅ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ－ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ａｒｅ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｅｔｗｅｅｎ ＦｃｇａｍｍａＲＩＩＩ ａｎｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｌａｃｋｉｎｇ ｃｏｒｅ ｆｕｃｏｓｅ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ ２０１１；１０８：１２６６９－７４を参照）。また、高マンノースもまた、コアフコースよりはるかに小さく、且つ予測しにくい程度ではあるが、ＡＤＣＣ活性を調節する役割を果たすことが示されている（Ｔｈｏｍａｎｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｆｃ－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０１６；７３：６９－７５）。
【0005】
様々な要因がグリカン構造に影響し、したがってタンパク質（糖タンパク質）の最終的なグリコシル化形態（グリコフォーム）に影響する。例えば、抗体を発現する細胞株、細胞培養培地、フィード培地組成、及び細胞培養中の供給のタイミングは、タンパク質のグリコフォームの産生に影響し得る。研究グループは抗体の特定のグリコフォームのレベルに影響を及ぼす多くの方法を示唆しているが、バイオ医薬産業において、特定の抗体組成物がその抗体組成物の所与のグリコフォームプロファイルに基づいて示すエフェクター機能のレベルを予測する簡単且つ効率的な方法が依然として必要とされている。さらに、所望のレベルのエフェクター機能を達成する特定のグリカン（例えば、非フコシル化グリカン、高マンノースグリカン）のレベルを決定する方法が、当該技術分野において必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0006】
本開示は、抗体組成物の製品品質を決定する方法であって、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルが、抗体組成物の製品品質の基礎となる基準である方法を提供する。方法は、種々の態様において、ＡＤＣＣ活性レベル基準に関して製品品質を決定する。例示的な実施形態では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルの総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン含量を決定する工程；並びに（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内である場合に、製品品質を、許容できる、及び／又はＡＤＣＣ活性レベル基準を達成していると決定する工程を含む。例示的な態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲は、（１）参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲、及び（２）抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを抗体組成物のＴＡＦグリカン含量と相関させる第１のモデルに基づく。例示的な態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣは、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣの約９５％～約１０５％であり、ここで、第２のモデルは、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを、抗体組成物のＨＭグリカン含量及び抗体組成物のＡＦグリカン含量と相関させる。本明細書で使用される場合、ＡＤＣＣ活性レベルと関連した「予測される」という用語は、計算されたＡＤＣＣ活性レベルを指し、ここで、ＡＤＣＣ活性レベルは、モデル、例えば第１のモデル、第２のモデルによって計算される。有利には、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣは、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣと統計的に有意に類似している。例えば、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルの約９５％～約１０５％である。第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、任意選択により、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルの約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％、約１０１％、約１０２％、約１０３％、約１０４％、又は約１０５％である。第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、種々の例において、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣの約１００％である。特定の態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣと、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣとの間に１対１の対応がある。種々の例では、第１のモデル及び／又は第２のモデルは、統計的に有意である。例えば、第１のモデルのｐ値は０．０００１未満であり、及び／又は第２のモデルのｐ値は０．０００１未満である。任意選択で、第１のモデル及び第２のモデルのそれぞれは、０．０００１未満のｐ値を有する。例示的な態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは約１２Ｑ×ＴＡＦ％であり、ここで、Ｑは抗体が結合する抗原の抗体結合部位の数であり、ＴＡＦ％は抗体組成物のＴＡＦグリカン含量である。例示的な事例では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ～ｎであり、ここで、ｍは［ＡＤＣＣｍｉｎ／１２Ｑ］であり（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎは参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小である）、ｎは［ＡＤＣＣｍａｘ］／１２Ｑである（ここで、ＡＤＣＣｍａｘは、参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大である）。種々の例では、Ｑは２である。種々の例では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、約２４×ＴＡＦ％である。種々の例では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ～ｎである（ここで、ｍは［ＡＤＣＣｍｉｎ／２４］であり、ｎは［ＡＤＣＣｍａｘ］／２４である）。種々の例では、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは約２７×ＨＭ％＋約２２×ＡＦ％であり、ここで、ＡＦ％は抗体組成物のＡＦグリカン含量であり、ＨＭ％は抗体組成物のＨＭグリカン含量である。種々の例では、Ｑは１である。種々の態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、約１２×ＴＡＦ％である。種々の例では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ～ｎであり、ここで、ｍは［ＡＤＣＣｍｉｎ／１２］であり、ｎは［ＡＤＣＣｍａｘ］／１２である。種々の例では、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、約１４．８×ＨＭ％＋約１２．８×ＡＦ％である。好適な代替の第１のモデル及び第２のモデルを本明細書に記載する。例示的な事例では、第１のモデルは、ＡＤＣＣとＴＡＦグリカン含量を相関させる本明細書に記載のモデル（例えば、方程式）の１つのいずれかであり、例えば、方程式１、３、５、及び７、並びに方程式Ａが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な事例では、第２のモデルは、ＡＤＣＣとＨＭグリカン含量及びＡＦグリカン含量とを相関させる本明細書に記載のモデル（例えば、方程式）の１つのいずれかであり、例えば、方程式２、４、６、及び８、並びに方程式Ｂが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ°～ｎ°であり、ここで、ｍ°は［［ＡＤＣＣｍｉｎ－ｙ］／ｘ］と定義され（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小値である）、ｎ°は［［ＡＤＣＣｍａｘ－ｙ］／ｘ］と定義される（ここで、ＡＤＣＣｍａｘはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大値である）。任意選択で、ｘは約２０．４～約２７．７であり、ｙは約－１１．４～約１６．７である。或いは、ｘは約９．７～約１５．２であり、ｙは約－１５．６～約３４．２である。種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ’～ｎ’であり、ここで、ｍ’は［ＡＤＣＣｍｉｎ／ｘ’］であり（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小である）、ｎ’は［ＡＤＣＣｍａｘ］／ｘ’である（ここで、ＡＤＣＣｍａｘはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大である）。任意選択により、ｘ’は約２４．１～約２５．４である。或いは、ｘ’は約１３．０～約１３．９５である。種々の例では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約１３．５％±０．５％であり、ここで、任意選択により、抗体組成物の抗体は、１つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する。種々の態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約２４．７４％±０．６２５％であり、ここで、任意選択により、抗体組成物の抗体は、２つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する。例示的な態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約１２％±１．５％×Ｑであり、Ｑは抗原上に存在する抗体結合部位の数である。例示的な事例では、参照抗体はインフリキシマブである。例示的な態様では、参照抗体はリツキシマブである。例示的な態様では、方法は品質管理（ＱＣ）アッセイである。例示的な態様では、方法はインプロセスＱＣアッセイである。種々の態様では、サンプルは、インプロセス材料のサンプルである。種々の例では、ＴＡＦグリカン含量は、回収前又は回収後に決定される。例示的な事例では、ＴＡＦグリカン含量は、クロマトグラフィ工程後に決定される。任意選択により、クロマトグラフィ工程は、キャプチャークロマトグラフィ、中間クロマトグラフィ、及び／又は研磨クロマトグラフィを含む。いくつかの態様では、ＴＡＦグリカン含量は、ウイルス不活化及び中和、ウイルス濾過、又は緩衝液交換の後に決定される。種々の例では、方法は、ロットリリースアッセイである。いくつかの態様では、サンプルは、製造ロットのサンプルである。種々の態様では、方法は、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内である場合、その抗体組成物を下流プロセスのために選択する工程をさらに含む。（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内でない場合、種々の態様では、細胞培養の１つ以上の条件を改変して、改変細胞培養物を得る。方法は、いくつかの態様では、細胞培養の１つ以上の条件を改変した後に得られる抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程をさらに含む。種々の態様では、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内でない場合、方法は、（ｉｉｉ）細胞培養の１つ以上の条件を改変して改変細胞培養物を得る工程、及び（ｉｖ）改変細胞培養物から得られる抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程をさらに含む。例示的な態様では、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内にない場合、方法は、（ｉｖ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内になるまで、（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）をさらに含む。例示的な事例では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性を直接測定するアッセイは、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内でない場合、例えば目標範囲外である場合にのみ、抗体組成物に対して実施される。ＡＤＣＣ活性を直接測定するアッセイとしては、例えば、抗原発現細胞及びエフェクター細胞の両方に結合する抗体に結合するエフェクター細胞によって、検出可能な薬剤を含む抗原発現細胞の溶解時の検出可能な薬剤の放出を測定する細胞ベースのアッセイが挙げられる。例示的な事例では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性を直接測定するアッセイは、抗体組成物に対して行われない。種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量を決定する工程は、ＡＤＣＣ活性レベル基準に関する製品品質を決定するために必要とされる唯一の工程である。理論に束縛されるものではないが、第１のモデル及び第２のモデルの統計的に有意な相関により、ＴＡＦグリカン含量がＡＤＣＣ活性レベルを示すことを可能になり、ＡＤＣＣ活性レベルを直接測定するアッセイの必要がなくなる。したがって、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを直接測定することは必要でなくなり、このため本明細書に開示される方法の種々の態様では実施されない。
【0007】
本開示はまた、抗体組成物の製品品質をモニターする方法であって、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルが、抗体組成物の製品品質の基礎とする基準である方法を提供する。例示的な実施形態では、方法は、本開示の方法に従って、第１の時点で得られた第１のサンプルと、第１の時点とは異なる第２の時点で採取された第２のサンプルとを用いて、抗体組成物の製品品質を決定する工程を含む。種々の例では、第１のサンプル及び第２のサンプルのそれぞれは、インプロセス材料のサンプルである。種々の態様では、第１のサンプルはインプロセス材料のサンプルであり、第２のサンプルは製造ロットのサンプルである。任意選択により、第１のサンプルは、細胞培養の１つ以上の条件を改変する前に得られるサンプルであり、第２のサンプルは、細胞培養の１つ以上の条件を改変した後に得られるサンプルである。例示的な事例では、ＴＡＦグリカン含量は、第１のサンプル及び第２のサンプルのそれぞれについて決定される。抗体組成物の製品品質は、ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内にあるかどうかに依存する。例示的な態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲は、（１）参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲、及び（２）抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを抗体組成物のＴＡＦグリカン含量と相関させる第１のモデルに基づく。例示的な態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣは第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣの約９５％～約１０５％であり、ここで、第２のモデルは、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを、抗体組成物のＨＭグリカン含量及び抗体組成物のＡＦグリカン含量と相関させる。
【0008】
本開示は、抗体組成物を製造する方法を提供する。例示的な実施形態では、方法は、抗体組成物の製品品質を決定する工程を含み、ここで、抗体組成物の製品品質は、本開示の方法に従って決定される。任意選択により、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程を含み、そのサンプルはインプロセス材料のサンプルである。種々の例では、方法は、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が本明細書で定義されているような目標範囲内である場合に、抗体組成物の製品品質を、許容できる、及び／又はＡＤＣＣ活性レベル基準を達成していると決定する工程を含む。例示的な態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲は、（１）参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲、及び（２）抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを抗体組成物のＴＡＦグリカン含量と相関させる第１のモデルに基づく。例示的な態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣは第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣの約９５％～約１０５％であり、ここで、第２のモデルは、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを、抗体組成物のＨＭグリカン含量及び抗体組成物のＡＦグリカン含量と相関させる。種々の態様では、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内でない場合に、方法は、（ｉｉｉ）細胞培養の１つ以上の条件を改変して改変細胞培養物を得る工程、及び（ｉｖ）改変細胞培養物から得られる抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程をさらに含み、任意選択により、ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内になるまで、工程（ｉｉｉ）及び工程（ｉｖ）を繰り返す。種々の例では、サンプルは、抗体組成物の抗体を発現する細胞を含む細胞培養物のサンプルである。種々の例では、細胞培養の１つ以上の条件は、ＴＡＦグリカン含量を改変するために改変される。種々の態様では、抗体組成物のＴＡＦグリカン含量は、ＡＦグリカン含量を改変することによって達成される。例示的な態様では、細胞培養の１つ以上の条件は、抗体組成物のＡＦグリカン含量を改変するために改変される。例示的な態様では、１つ以上の条件は、主にＡＦグリカン含量を改変する。種々の例では、１つ以上の条件はＡＦグリカン含量を改変し、ＨＭグリカン含量を改変しない。例示的な態様では、方法は、抗体組成物のＴＡＦグリカン含量がＨＭグリカン含量を改変することによって達成されることを含む。任意選択により、細胞培養の１つ以上の条件は、抗体組成物のＨＭグリカン含量を改変するために改変される。いくつかの例では、１つ以上の条件は、主にＨＭグリカン含量を改変する。いくつかの態様では、１つ以上の条件はＨＭグリカン含量を改変し、ＡＦグリカン含量を改変しない。種々の例では、方法は、ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内になるまで、非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量の改変を繰り返す工程、及び／又は高マンノース（ＨＭ）グリカン含量の改変を繰り返す工程を含む。
【0009】
例示的な実施形態では、抗体組成物を製造する方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程；及び（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量に基づいて、下流プロセスのための抗体組成物を選択する工程を含む。種々の態様では、サンプルは、抗体組成物の抗体を発現する細胞を含む細胞培養物から採取される。種々の例では、方法は、抗体組成物のＴＡＦグリカン含量を改変する工程、及び改変されたＴＡＦグリカン含量を決定する工程をさらに含む。任意選択により、細胞培養の１つ以上の条件は、ＴＡＦグリカン含量を改変するために改変される。例示的な態様では、方法は、ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内になるまで、改変を繰り返すことを含む。例示的な事例では、目標範囲は、抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲に基づく。理論に束縛されるものではないが、ＴＡＦグリカン含量は抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルと相関し、したがって、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは抗体組成物のＴＡＦグリカン含量に基づいて予測され得る。抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物を下流プロセスに選択すべきかどうかを決定する際に考慮する価値のある基準であり得る。したがって、種々の態様では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程；（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量に基づいて、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを決定する工程；及び、任意選択により、（ｉｉｉ）（ｉｉ）で決定された抗体組成物のＡＤＣＣレベルがＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲内である場合に、その抗体組成物を下流プロセスのために選択する工程を含む。種々の態様では、ＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲は、抗体組成物の抗体について知られている。抗体組成物の抗体は、種々の態様では、参照抗体のバイオシミラーである。種々の例では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲は、既知のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲に基づくか、又はそれに基づいて決定される（例えば、算出される）。したがって、例示的な態様では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程；及び（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内である場合、その抗体組成物を下流プロセスのために選択する工程を含む。方法が抗体組成物のＴＡＦグリカン含量を改変する工程をさらに含む場合、方法は、種々の例では、ＴＡＦグリカン含量を改変するために非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量を改変する工程を含む。任意選択により、細胞培養の１つ以上の条件が抗体組成物のＡＦグリカン含量を改変するために改変され、これは次にＴＡＦグリカン含量を改変する。或いは、又はさらに、方法が抗体組成物のＴＡＦグリカン含量を改変する工程を含む場合、方法は、種々の例では、ＴＡＦグリカン含量を改変するために高マンノース（ＨＭ）グリカン含量を改変する工程を含む。任意選択により、細胞培養の１つ以上の条件が抗体組成物のＨＭグリカン含量を改変するために改変され、これは次にＴＡＦグリカン含量を改変する。例示的な態様では、１つ以上の条件は、主にＡＦグリカン含量を改変する。例示的な事例では、１つ以上の条件は、主にＨＭグリカン含量を改変する。例示的な態様では、１つ以上の条件はＡＦグリカン含量を改変し、ＨＭグリカン含量を改変しない。例示的な事例では、１つ以上の条件はＨＭグリカン含量を改変し、ＡＦグリカン含量を改変しない。方法は、任意選択により、ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内になるまで、非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量の改変を繰り返す工程、及び／又は高マンノース（ＨＭ）グリカン含量の改変を繰り返す工程を含む。例示的な態様では、抗体組成物の抗体はＩｇＧ、任意選択によりＩｇＧ１である。種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ～ｎであり、ここで、ｍは［［ＡＤＣＣｍｉｎ－ｙ］／ｘ］であり（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小である）、ｎは［［ＡＤＣＣｍａｘ－ｙ］／ｘ］である（ここで、ＡＤＣＣｍａｘはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大である）。任意選択で、ｘは約２０．４～約２７．７であり、ｙは約－１１．４～約１６．７である。或いは、ｘは約９．７～約１５．２であり、ｙは約－１５．６～約３４．２である。種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ’～ｎ’であり、ここで、ｍ’は［ＡＤＣＣｍｉｎ／ｘ’］であり（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小である）、ｎ’は［ＡＤＣＣｍａｘ］／ｘ’である（ここで、ＡＤＣＣｍａｘはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大である）。任意選択により、ｘ’は約２４．１～約２５．４である。或いは、ｘ’は約１３．０～約１３．９５である。種々の例では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約１３．５％±０．５％であり、任意選択により、抗体組成物の抗体は、１つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する。種々の態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約２４．７４％±０．６２５％であり、任意選択により、抗体組成物の抗体は、２つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する。例示的な態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約１２％±１．５％×Ｑであり、Ｑは抗原上に存在する抗体結合部位の数である。例示的な事例では、Ｑは１であり、任意選択で、抗体はインフリキシマブ又はそのバイオシミラーである。任意選択で、Ｑは２であり、任意選択で、抗体はリツキシマブ又はそのバイオシミラーである。
【0010】
例示的な実施形態では、抗体組成物を製造する方法は、（ｉ）抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、（ｉｉ）方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、Ｘは工程（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％である）
を使用して、ＴＡＦ％に基づいて抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を算出する工程、
及び（ｉｉｉ）Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、Ｘは工程（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％である）
を使用して、ＴＡＦ％に基づいて抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を算出する工程、
及び（ｉｉｉ）Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。
【0011】
本開示はまた、抗体組成物を製造する方法を提供し、その方法は、（ｉ）抗体組成物の高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％を決定する工程、（ｉｉ）方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
を使用して、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に基づいて抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を算出する工程；
並びに（ｉｉｉ）Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
を使用して、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に基づいて抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を算出する工程；
並びに（ｉｉｉ）Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。
【0012】
本開示はさらに、目標ＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法を提供する。例示的な実施形態では、方法は、（ｉ）方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、Ｙは目標ＡＤＣＣ％であり、Ｘは目標ＴＡＦグリカン％である）
を使用して、目標ＡＤＣＣ％のための目標総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を算出する工程：
及び（ｉｉ）目標ＴＡＦグリカン％、Ｘを有する抗体組成物を製造するために細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞を維持する工程を含む。
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、Ｙは目標ＡＤＣＣ％であり、Ｘは目標ＴＡＦグリカン％である）
を使用して、目標ＡＤＣＣ％のための目標総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を算出する工程：
及び（ｉｉ）目標ＴＡＦグリカン％、Ｘを有する抗体組成物を製造するために細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞を維持する工程を含む。
【0013】
本開示はさらに、目標ＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法を提供し、その方法は、（ｉ）方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、Ｙは目標ＡＤＣＣ％であり、ＨＭは目標高マンノースグリカン％であり、ＡＦは目標非フコシル化グリカン％である）
を使用して、目標ＡＤＣＣ％のための目標非フコシル化グリカン％及び目標高マンノースグリカン％を算出する工程、
並びに（ｉｉ）目標高マンノースグリカン％及び目標非フコシル化グリカン％を有する抗体組成物を製造するために細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞を維持する工程を含む。
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、Ｙは目標ＡＤＣＣ％であり、ＨＭは目標高マンノースグリカン％であり、ＡＦは目標非フコシル化グリカン％である）
を使用して、目標ＡＤＣＣ％のための目標非フコシル化グリカン％及び目標高マンノースグリカン％を算出する工程、
並びに（ｉｉ）目標高マンノースグリカン％及び目標非フコシル化グリカン％を有する抗体組成物を製造するために細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞を維持する工程を含む。
【0014】
本開示の方法の例示的な態様では、目標ＡＤＣＣ％は、目標ＡＤＣＣ％範囲内にある。任意選択で、目標ＡＤＣＣ％範囲は、約４０以上約１７０以下である。種々の態様では、目標ＡＤＣＣ％範囲は、約４４以上約１６５以下である。種々の例では、目標ＡＤＣＣ％範囲は、約６０以上約１３０以下である。例示的な態様では、目標ＡＤＣＣ％範囲は、Ｙ±２０、例えば、Ｙ±１７又はＹ±１８である。
【0015】
さらに、任意選択で約４０以上約１７０以下のＡＤＣＣ％、Ｙを有する抗体組成物を製造する方法が提供され、前記方法は、（ｉ）抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、Ｘを決定する工程、及び（ｉｉ）Ｘが（Ｙ－２．６）／２４．１に等しい場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。例示的な態様では、Ｘは約１．５５％以上約６．９５％以下である。様々な態様では、Ｙは約４４％以上約１６５％以下であり、任意選択により、Ｘは約１．７２％～約６．７４％である。
【0016】
本開示はＡＤＣＣ％、Ｙを有する抗体組成物を製造する方法を提供し、前記方法は、（ｉ）抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、Ｘを決定する工程、及び（ｉｉ）Ｘが（Ｙ－２．６）／２４．１に等しい場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含み、ここで、任意選択により、Ｘは約Ｘ－０．４以上約Ｘ＋０．４以下であり、ＡＤＣＣ％は約Ｙ－１７以上約Ｙ＋１７である。また、ＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法が提供され、前記方法は、（ｉ）抗体組成物の非フコシル化グリカン％及び高マンノースグリカン％を決定する工程、並びに（ｉｉ）ＡＦ及びＨＭが方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
に従ってＹに関連している場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。例示的な態様では、Ｙは約４０以上約１７５以下、任意選択で約４１～約１７１であり、ＡＦは約１～約４であり、ＨＭは約４０～約１７５である。任意選択により、Ｙは約３０～約１８５、任意選択で約３２～約１８０であり、ＨＭは約１～約４であり、ＡＦは約３０～約１８５である。例示的な事例では、抗体組成物のＡＤＣＣ％はＹによって規定される範囲内である。任意選択で、抗体組成物のＡＤＣＣ％は、Ｙ±１８の範囲内である。例示的な態様では、ＡＦは約１～約４である。任意選択で、高マンノースグリカン％はＨＭによって規定される範囲内の値であり、任意選択で、その範囲はＨＭ±１である。種々の例では、ＨＭは約１～約４である。任意選択で、非フコシル化グリカン％はＡＦによって規定される範囲内の値であり、任意選択で、その範囲はＡＦ±１である。
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
に従ってＹに関連している場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。例示的な態様では、Ｙは約４０以上約１７５以下、任意選択で約４１～約１７１であり、ＡＦは約１～約４であり、ＨＭは約４０～約１７５である。任意選択により、Ｙは約３０～約１８５、任意選択で約３２～約１８０であり、ＨＭは約１～約４であり、ＡＦは約３０～約１８５である。例示的な事例では、抗体組成物のＡＤＣＣ％はＹによって規定される範囲内である。任意選択で、抗体組成物のＡＤＣＣ％は、Ｙ±１８の範囲内である。例示的な態様では、ＡＦは約１～約４である。任意選択で、高マンノースグリカン％はＨＭによって規定される範囲内の値であり、任意選択で、その範囲はＨＭ±１である。種々の例では、ＨＭは約１～約４である。任意選択で、非フコシル化グリカン％はＡＦによって規定される範囲内の値であり、任意選択で、その範囲はＡＦ±１である。
【0017】
例示的な実施形態では、抗体組成物を製造する本開示の方法は、細胞培養物の細胞によって産生される抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン含量を改変する工程を含む。種々の例では、細胞培養の１つ以上の条件は、ＴＡＦグリカン含量を改変するために改変される。種々の態様では、方法は、改変されたＴＡＦグリカン含量を決定する工程を含む。任意選択で、改変は、決定されたＴＡＦグリカン含量がＴＡＦの目標範囲内になるまで繰り返される。特定の理論に束縛されるものではないが、ＴＡＦグリカン含量は、それぞれがＴＡＦグリカン含量に影響を及ぼすので、非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量若しくは高マンノース（ＨＭ）含量、又はこれらの組み合わせを変化させることによって改変され得る。したがって、これらの方法は、有利なことに、複数の方法でＴＡＦグリカン含量の目標範囲を達成することを可能にする。例えば、細胞培養の１つ以上の条件は、ＴＡＦグリカン含量を改変するために、ＡＦグリカン含量を改変するように改変される。或いは、細胞培養の１つ以上の条件は、ＴＡＦグリカン含量を改変するために、ＨＭグリカン含量を改変するように改変される。種々の例では、細胞培養の１つ以上の条件は、ＴＡＦグリカン含量を改変するために、ＡＦグリカン含量及びＨＭグリカン含量を改変するように改変される。したがって、本開示はさらに、細胞培養物の細胞によって産生される抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン含量を改変する方法を提供する。例示的な実施形態では、方法は、ＡＦグリカン含量を改変することを含む。例示的な実施形態では、方法は、ＨＭグリカン含量を改変することを含む。種々の態様では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルの非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量及び高マンノース（ＨＭ）グリカン含量を決定する工程；（ｉｉ）ＨＭグリカン含量が一定であると仮定して、抗体組成物の抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲に基づいてＡＦグリカン含量の目標範囲を決定する工程；並びに（ｉｉｉ）ＡＦグリカン含量がＡＦグリカン含量の目標範囲内である場合、その抗体組成物を下流プロセスのために選択する工程を含む。種々の例では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルの非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量及び高マンノース（ＨＭ）グリカン含量を決定する工程；（ｉｉ）ＡＦグリカン含量が一定であると仮定して、抗体組成物の抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲に基づいてＨＭグリカン含量の目標範囲を決定する工程；並びに（ｉｉｉ）ＨＭグリカン含量がＨＭグリカン含量の目標範囲内である場合、その抗体組成物を下流プロセスのために選択する工程を含む。種々の例では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルのＡＦグリカン含量及びＨＭグリカン含量を決定する工程、並びに（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＨＭグリカン含量に基づいてＡＦグリカン含量の目標範囲を決定する工程、並びに（ｉｉｉ）ＡＦグリカン含量がＡＦグリカン含量の目標範囲内になるまでＡＦグリカン含量を改変する工程を含み、ここで、ＨＭグリカン含量は改変されない。或いは、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルのＡＦグリカン含量及びＨＭグリカン含量を決定する工程、並びに（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＡＦグリカン含量に基づいてＨＭグリカン含量の目標範囲を決定する工程、並びに（ｉｉｉ）ＨＭグリカン含量がＨＭグリカン含量の目標範囲内になるまでＨＭグリカン含量を改変する工程を含み、ここで、ＡＦグリカン含量は改変されない。例示的な態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを抗体組成物のＴＡＦグリカン含量と相関させるモデルは、ＡＤＣＣをＨＭ及びＡＦグリカン含量と相関させるモデルによって予測されるレベルと実質的に同じＡＤＣＣ活性レベルを予測する。
【0018】
本開示の方法の種々の態様では、ＴＡＦグリカン％は、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％の合計を計算することによって決定される。種々の例では、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％は、親水性相互作用クロマトグラフィにより決定される。任意選択により、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％は、実施例１に記載の方法によって決定される。種々の態様では、ＡＤＣＣ％は、抗体の抗原を発現し、抗体のＦｃドメインを介してエフェクター細胞上のＦｃ－γＲＩＩＩＡ受容体に関与する細胞における、用量依存的に細胞障害性を媒介する抗体組成物の抗体の能力を測定する、定量的な細胞ベースのアッセイによって決定される。種々の例では、ＡＤＣＣ％は、実施例２に記載のアッセイによって決定される。例示的な態様では、決定工程は、回収工程の後に実行される。任意選択により、決定工程は、クロマトグラフィ工程の後に実施される。種々の態様では、クロマトグラフィ工程は、プロテインＡクロマトグラフィ工程である。本開示の方法の種々の例では、１つ以上の下流プロセス工程は、希釈工程、充填工程、濾過工程、製剤化工程、クロマトグラフィ工程、ウイルス濾過工程、ウイルス不活化工程、又はこれらの組み合わせを含む。任意選択により、クロマトグラフィ工程は、イオン交換クロマトグラフィ工程であり、任意選択により、陽イオン交換クロマトグラフィ工程又は陰イオン交換クロマトグラフィ工程である。
【0019】
本開示の種々の態様では、抗体組成物の各抗体はＩｇＧであり、任意選択により、抗体組成物の各抗体はＩｇＧ１である。例示的な事例では、抗体組成物の各抗体は、腫瘍関連抗原に結合する。例示的な態様では、腫瘍関連抗原は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。３に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９１％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９３％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一又は少なくとも９９％同一である。例示的な態様では、抗体組成物の各抗体は、抗ＣＤ２０抗体である。種々の例では、抗体組成物の各抗体は、（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号４の変異アミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列、又は配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号５の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列、又は配列番号６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号６の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号７のアミノ酸配列、又は配列番号７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号７の変異アミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号８のアミノ酸配列、又は配列番号８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号８の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ２、及び／或いは（ｖｉ）配列番号９のアミノ酸配列、又は配列番号９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号９の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ３を含む。
【0020】
例示的な態様では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１０の変異アミノ酸配列を含むＬＣ可変領域を含む。任意選択により、抗体組成物の各抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列、配列番号１１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１１の変異アミノ酸配列を含むＨＣ可変領域を含む。例示的な態様では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１２の変異アミノ酸配列を含む軽鎖を含む。例示的な事例では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列、配列番号１３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１３の変異アミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【0021】
例示的な態様では、腫瘍関連抗原は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。１４で示されるＶＨ領域からなる群から選択されるＶＨ領域を含むことも好ましい。例示的な態様では、抗体組成物の各抗体は、抗ＴＮＦα抗体であり、任意選択により、インフリキシマブ又はそのバイオシミラーである。例示的な態様では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列、配列番号１５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１５の変異アミノ酸配列を含むＬＣ可変領域を含む。任意選択により、抗体組成物の各抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１６の変異アミノ酸配列を含むＨＣ可変領域を含む。
【0022】
本開示はさらに、目標ＡＤＣＣ％範囲内の抗体組成物を製造する方法を提供し、前記方法は、（ｉ）抗体の様々なグリコフォームを含む一連のサンプルのＡＤＣＣ％を測定する工程、（ｉｉ）一連のサンプルのそれぞれについて総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、（ｉｉｉ）一連の試料のそれぞれについて、工程（ｉ）で測定されたＡＤＣＣ％を工程（ｉｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％の関数としてプロットするグラフの最良適合線の線形方程式を決定する工程、（ｉｖ）抗体組成物のＴＡＦ％を決定し、次いで工程（ｉｉｉ）の線形方程式を使用してＡＤＣＣ％を算出する工程、及び（ｖ）工程（ｉｖ）で算出されたＡＤＣＣ％が目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合に、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。
【0023】
ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内である抗体組成物を製造する方法が提供され、前記方法は、（ｉ）抗体の様々なグリコフォームを含む一連のサンプルのＡＤＣＣ活性レベルを測定する工程、（ｉｉ）一連のサンプルのそれぞれについてＴＡＦグリカン％を決定する工程、（ｉｉｉ）ＡＤＣＣ活性レベルをＴＡＦグリカン含量に相関させるモデルを作成する工程、（ｉｖ）抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを決定し、次いで、モデルを使用してＴＡＦグリカン含量を算出するか、又は抗体組成物のＴＡＦグリカン含量を決定し、モデルを使用してＡＤＣＣ活性レベルを算出する工程、及び（ｖ）工程（ｉｖ）で算出されたＴＡＦグリカン含量がＴＡＦグリカン含量の目標範囲内である場合、又は工程（ｉｖ）で算出されたＡＤＣＣ活性レベルがＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。
【0024】
ＴＡＦ％が目標範囲内である抗体組成物を製造する方法が提供され、前記方法は、（ｉ）抗体の様々なグリコフォームを含む一連のサンプルのＡＤＣＣ％を測定する工程、（ｉｉ）一連のサンプルのそれぞれについて総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、（ｉｉｉ）一連の試料のそれぞれについて、工程（ｉ）で測定されたＡＤＣＣ％を工程（ｉｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％の関数としてプロットするグラフの最良適合線の線形方程式を決定する工程、（ｉｖ）抗体組成物のＡＤＣＣ％を決定し、次いで工程（ｉｉｉ）の線形方程式を使用してＴＡＦ％を算出する工程、及び（ｖ）工程（ｉｖ）で算出されたＴＡＦ％が目標ＴＡＦ％範囲内である場合に、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。また、目標ＴＡＦ％範囲内の抗体組成物を製造する方法が提供され、この方法は、以下の工程を含む：（ｉ）細胞培養条件下で製造された一連の少なくとも５つの参照抗体組成物のＡＤＣＣ％及びＴＡＦグリカン％をプロットすることによって、最良適合線の線形方程式を生成する工程（各参照抗体組成物は、抗体組成物と同じアミノ酸配列を有する）、（ｉｉ）工程（ｉ）で生成された線形方程式及び所望のＡＤＣＣ活性％に基づいて目標ＴＡＦグリカン％範囲を選択する工程、（ｉｉｉ）細胞培養条件下で抗体組成物を培養する工程、（ｉｖ）抗体組成物を精製する工程、（ｖ）抗体組成物をサンプリングして、ＴＡＦ％を決定する工程、及び（ｖｉ）抗体組成物のＴＡＦ％が工程（ｉｉ）の目標％ＴＡＦ％範囲内であるかどうかを決定する工程。例示的な態様では、方法は、工程（ｖ）で算出されたＴＡＦ％が目標ＴＡＦ％範囲内である場合に、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程をさらに含む。
【0025】
また、抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を決定する方法が提供され、前記方法は、（ｉ）抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、及び（ｉｉ）方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、Ｘは工程（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％である）
を使用して、ＴＡＦ％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程を含む。
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、Ｘは工程（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％である）
を使用して、ＴＡＦ％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程を含む。
【0026】
さらに、抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を決定する方法が提供され、前記方法は、（ｉ）抗体組成物の高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％を決定する工程、並びに（ｉｉ）方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
を使用して、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程を含む。
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
を使用して、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程を含む。
【0027】
例示的な事例では、方法は、Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択することをさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【0028】
【図1A】３種類のＮ－グリカン（オリゴマンノース、複合型及びハイブリッド型）及びこのような糖類に対して一般的に使用されている記号の図解である。
【図1B】例示的なグリカン構造の図解である。
【図2A】代表的なグリカンマップクロマトグラム（フルスケールビュー）である。
【図2B】代表的なグリカンマップクロマトグラム（拡大スケールビュー）である。
【図3】実施例２に記載のＮＫ９２ ＡＤＣＣアッセイの概略図である。
【図4】ＮＫ９２ ＡＤＣＣアッセイの代表的な用量反応曲線である。各投与点は３反復の平均±標準偏差である。アッセイシグナル＝蛍光
【図5C-5D】［図５Ｃ］図５Ｂに示す予測方程式を用いて算出された予測ＡＤＣＣ（％）の関数としてプロットされた実ＡＤＣＣ（％）（実施例２に記載のアッセイによって決定）のグラフである。［図５Ｄ］９５％信頼帯（灰色で陰影）を示す図５Ａのグラフである。
【図5E】方程式１のｙ切片及び傾きの両方についての９５％信頼域のグラフを提供する。
【図6A-6B】［図６Ａ］ＨＭ（％）の関数としてプロットされた実ＡＤＣＣ（％）のグラフである。最良適合線が示されている。［図６Ｂ］ＡＦ（％）の関数としてプロットされた実ＡＤＣＣ（％）のグラフである。最良適合線が示されている。
【図6C-6D】［図６Ａ］図６Ａ及び６Ｂに示す最良適合線の統計的パラメータの表である。［図６Ｄ］図６Ｃに示す予測方程式を用いて算出された予測ＡＤＣＣ（％）の関数としてプロットされた実ＡＤＣＣ（％）（実施例２に記載のアッセイによって決定）のグラフである。
【図7A-7B】［図７Ａ］ガラクトシル化（％）の関数としてプロットされた実ＡＤＣＣ（％）のグラフである。最良適合線が赤色で示されている。［図７Ｂ］ＡＤＣＣとガラクトシル化とを相関させる予測方程式（図示せず）を用いて計算した予測ＡＤＣＣ（％）の関数としてプロットされた実ＡＤＣＣ（％）（実施例２に記載のアッセイにより決定）のグラフである。
【図8C-8D】［図８Ｃ］図８Ｂに示す予測方程式を用いて算出された予測ＡＤＣＣ（％）の関数としてプロットされた実ＡＤＣＣ（％）（実施例２に記載されるアッセイによって決定）のグラフである。［図８Ｄ］９５％信頼帯（灰色で陰影）を示す図８Ａのグラフである。
【図8E】方程式３のｙ切片及び傾きの両方についての９５％信頼領域のグラフを示す。
【図9A-9B】［図９Ａ］ＨＭ（％）の関数としてプロットされた実ＡＤＣＣ（％）のグラフである。最良適合線が示されている。［図９Ｂ］ＡＦ（％）の関数としてプロットされた実ＡＤＣＣ（％）のグラフである。最良適合線が示されている。
【発明を実施するための形態】
【0029】
抗体組成物のＡＤＣＣレベルとその抗体組成物のＴＡＦグリカンレベルとの間の統計的に有意な関連性を示すデータが、本明細書において初めて提供される。また、抗体組成物のＡＤＣＣレベルとその抗体組成物の高マンノースグリカン及び非フコシル化グリカンレベルとの間の統計的に有意な関連性を示すデータが、本明細書において初めて提供される。本明細書にさらに記載されるように、方程式Ａ及び方程式Ｂは、抗体組成物のＡＤＣＣ％を、抗体組成物のＴＡＦグリカン％（方程式Ａ）又は高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％（方程式Ｂ）と関連付ける。本開示のこれらの関連性及び方程式などは、グリカンレベルに基づく抗体組成物のＡＤＣＣのレベルを予測する方法に有用である。種々の態様では、予測ＡＤＣＣレベルは、抗体組成物が治療閾値を満たすという点で許容可能であると確認され、したがって、１つ以上の下流の製造プロセス工程において使用されるべきものであるとする、或いは、抗体組成物は許容できないと確認され、そのような製造プロセスに進ませるべきではないとするマーカーとして役立つ。本明細書に開示される関連性及び方程式は、所望の抗体組成物の糖プロファイルを特定する際にもまた有用である。本明細書に示される関連性及び方程式を用い、そして目標ＡＤＣＣレベルが与えられると、目標ＡＤＣＣレベルを有する抗体組成物の糖プロファイル（例えば、ＴＡＦグリカン、ＨＭグリカン、非フコシル化グリカンのプロファイル）が特定される。目標ＡＤＣＣレベルを有する抗体組成物のＴＡＦグリカン、ＨＭグリカン、非フコシル化グリカンの特定されたプロファイルを用いて、その特定されたプロファイルを目標として、製造プロセス、例えば、細胞培養工程が実施され得る。
【0030】
したがって、本開示は、抗体組成物の製品品質を決定する方法であって、抗体組成物の許容基準の少なくとも１つは、ＡＤＣＣ活性レベルである方法を提供する。抗体組成物の製品品質をモニターする方法も提供される。本開示はさらに、抗体組成物を製造する方法を提供し、例えば、目標ＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法、目標ＡＤＣＣ％範囲内のＡＤＣＣ％又は特定されたＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法、及び目標ＴＡＦ％範囲内の抗体組成物を製造する方法が本明細書において提供される。
【0031】
グリコシル化、グリカン、及びグリカン測定方法
多くの分泌タンパク質が、翻訳後グリコシル化され、このプロセスで、糖部分（例えば、グリカン、糖類）がタンパク質の特定のアミノ酸に共有結合される。真核細胞においては、次の２種類のグリコシル化反応が起こる：（１）グリカンが認識配列Ａｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒ／Ｓｅｒ（ここで、「Ｘ」はプロリン以外の任意のアミノ酸である）のアスパラギンに連結されるＮ結合型グリコシル化、及び（２）グリカンがセリン又はスレオニンに連結されるＯ結合型グリコシル化。グリコシル化のタイプ（Ｎ結合型又はＯ結合型）にかかわらず、各部位（Ｏ又はＮ）と結合されるグリカン構造は広範囲にわたるため、タンパク質グリコフォームには微小不均一性がある。
多くの分泌タンパク質が、翻訳後グリコシル化され、このプロセスで、糖部分（例えば、グリカン、糖類）がタンパク質の特定のアミノ酸に共有結合される。真核細胞においては、次の２種類のグリコシル化反応が起こる：（１）グリカンが認識配列Ａｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒ／Ｓｅｒ（ここで、「Ｘ」はプロリン以外の任意のアミノ酸である）のアスパラギンに連結されるＮ結合型グリコシル化、及び（２）グリカンがセリン又はスレオニンに連結されるＯ結合型グリコシル化。グリコシル化のタイプ（Ｎ結合型又はＯ結合型）にかかわらず、各部位（Ｏ又はＮ）と結合されるグリカン構造は広範囲にわたるため、タンパク質グリコフォームには微小不均一性がある。
【0032】
全てのＮ－グリカンは、共通のコア糖配列：Ｍａｎα１－６（Ｍａｎα１－３）Ｍａｎβ１－４ＧｌｃＮＡｃβ１－４ＧｌｃＮＡｃβ１－Ａｓｎ－Ｘ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２Ａｓｎ）を有し、次の３つのタイプのうちの１つに分類される：（Ａ）２個のＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｕＮＡｃ）部分及び多数（例えば５、６、７、８又は９個）のマンノース（Ｍａｎ）残基からなる高マンノース（ＨＭ）又はオリゴマンノース（ＯＭ）型、（Ｂ）３個以上のＧｌｃＮＡｃ部分及び任意の数の他の糖タイプを含む複合型、又は（Ｃ）分枝の一方にＭａｎ残基を、複合枝の基部にＧｌｃＮＡｃを含むハイブリッド型。図１Ａ（Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ８：Ｎ－Ｇｌｙｃａｎｓ，Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；２００９から得た）は、Ｎ－グリカンの３つのタイプを示す。
【0033】
Ｎ結合型グリカンは、一般的には、ガラクトース（Ｇａｌ）、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、ガラクトサミン（ＧａｌＮ）、グルコース（ＧＬｃ）、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、グルコサミン（ＧｌｃＮ）、マンノース（Ｍａｎ）、Ｎ－アセチルマンノサミン（ＭａｎＮＡｃ）、マンノサミン（ＭａｎＮ）、キシロース（Ｘｙｌ）、Ｎ－アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）、Ｎ－グリコリルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ｇｃ）、２－ケト－３－デオキシノノン酸（Ｋｄｎ）、フコース（Ｆｕｃ）、グルクロン酸（ＧＬｃＡ）、イズロン酸（ＩｄｏＡ）、ガラクツロン酸（ＧａｌＡ）、マヌロン酸（ＭａｎＡ）のうちの１つ以上の単糖類を含む。このような糖類に対して一般に使用されている記号を、図１Ａに示す。例示的なグリカン及びそれらの個々の特性を図１Ｂに示す。
【0034】
Ｎ結合型グリコシル化は小胞体（ＥＲ）において開始され、複雑な一連の反応の結果、基本的に２個のＧｌｃＮＡｃ残基及び３個のＭａｎ残基から作られるコアグリカン構造の連結が起こる。ＥＲにおいて形成されたグリカン複合体は、ゴルジ装置において酵素の作用により修飾される。糖類が酵素に比較的接近しにくい場合、これは、一般的には元来のＨＭ形態にとどまる。酵素が糖類に接近し得る場合、Ｍａｎ残基の多くは切り離され、糖類がさらに修飾され、その結果、複合型のＮ－グリカン構造が生じる。例えば、ｃｉｓ－ゴルジに位置するマンノシダーゼ－１は、ＨＭグリカンを切断又は加水分解し得、一方、メディアル－ゴルジに位置するフコシルトランスフェラーゼＦＵＴ－８はグリカンをフコシル化する（Ｈａｒｕｅ Ｉｍａｉ－Ｎｉｓｈｉｙａ（２００７），ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，７：８４）。
【0035】
したがって、グリカン構造の糖組成及び構造立体配置は、とりわけ、ＥＲ及びゴルジ装置におけるグリコシル化機構、その機構の酵素のグリカン構造への到達性、各酵素の作用の順序及びタンパク質がグリコシル化機構から放出される段階に依って変動する。
【0036】
糖タンパク質含有組成物中に存在するグリカンを評価するため、又は糖タンパク質を含む特定のサンプルのグリコフォームプロファイル（例えば、グリコプロファイル）を決定、検出若しくは測定するために、様々な方法が当該技術分野で知られている。好適な方法としては、陽イオンＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ分析、陰イオンＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ分析、弱陰イオン交換（ＷＡＸ）クロマトグラフィ、順相クロマトグラフィ（ＮＰ－ＨＰＬＣ）、エキソグリコシダーゼ消化、Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－４クロマトグラフィ、陰イオン交換クロマトグラフィ及び一次元ｎ．ｍ．ｒ．分光法、並びにこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｍａｔｔｕ ｅｔ ａｌ．，ＪＢＣ ２７３：２２６０－２２７２（１９９８）；Ｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ２９９（Ｐｔ １）：２６１－２７５（１９９４）；Ｙｏｏ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ２（３）：３２０－３３４（２０１０）Ｗｕｈｒｅｒ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｂ，２００５，Ｖｏｌ．８２５，Ｉｓｓｕｅ ２，１２４－１３３頁；Ｒｕｈａａｋ Ｌ．Ｒ．，Ａｎａｌ Ｂｉｏａｎａｌ Ｃｈｅｍ，２０１０，Ｖｏｌ．３９７：３４５７－３４８１及びＧｅｏｆｆｒｅｙ，Ｒ．Ｇ．ｅｔ．ａｌ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９６，Ｖｏｌ．２４０，ｐａｇｅｓ ２１０－２２６を参照されたい。また、本明細書中に示す実施例１に、糖タンパク質含有組成物、例えば、抗体組成物中に存在するグリカンを評価するのに好適な方法を記載する。実施例１の方法は、組成物のグリコシル化タンパク質、例えば、抗体組成物の抗体に結合したグリカンをタンパク質（例えば、抗体）から酵素により切断するアッセイを記載する。グリカンは続いて親水性相互作用液体クロマトグラフィ（ＨＩＬＩＣ）によって分離され、いくつかのピークを有するクロマトグラムが作成される。クロマトグラムの各ピークは、異なるグリカンの平均分布（量）を示す。異なるグリカンのピークを含む代表的なＨＩＬＩＣクロマトグラムの２つの図を、図２Ａ及び２Ｂに提供する。これらの目的のため、ピーク面積％＝ピーク面積／総ピーク面積×１００％、及び％総ピーク面積＝サンプルの総面積／標準の総面積×１００％。したがって、特定のグリカン（又はグリカンの群）のレベルを％として報告する。例えば、抗体組成物が３０％のＭａｎ６レベルを有すると特徴付けられる場合、組成物の抗体から切断された全てのグリカンの３０％がＭａｎ６であることを意味する。
【0037】
本明細書中に提示される関連性及び方程式を含む本開示は、抗体組成物の総非フコシル化グリカン、高マンノースグリカン、及び非フコシル化グリカンに関する。本明細書で使用される場合、「総非フコシル化グリカン」又は「ＴＡＦグリカン」は、高マンノース（ＨＭ）グリカン及び非フコシル化グリカンの合計量を指す。本明細書で使用される場合、「高マンノースグリカン」又は「ＨＭグリカン」という用語は、それぞれＭａｎ５、Ｍａｎ６、Ｍａｎ７、Ｍａｎ８及びＭａｎ９と略称される、５、６、７、８又は９個のマンノース残基を含むグリカンを包含する。種々の態様では、ＨＭグリカンのレベルは、Ｍａｎ５％、Ｍａｎ６％、Ｍａｎ７％、Ｍａｎ８％、及びＭａｎ９％を合計することによって得られる。本明細書で使用される場合、「非フコシル化グリカン」又は「ＡＦグリカン」という用語は、コアフコース、例えば、Ｎ－グリコシル化部位のＡｓｎとのアミド結合において含まれるＧｌｃＮＡｃ残基上のα１，６－結合型フコースを欠くグリカンを指す。非フコシル化グリカンとしては、Ａ１Ｇ０、Ａ２Ｇ０、Ａ２Ｇ１ａ、Ａ２Ｇ１ｂ、Ａ２Ｇ２及びＡ１Ｇ１Ｍ５が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる非フコシル化グリカンとしては、例えば、Ａ１Ｇ１ａ、Ｇ０［Ｈ３Ｎ４］、Ｇ０［Ｈ４Ｎ４］、Ｇ０［Ｈ５Ｎ４］、ＦＯ－Ｎ［Ｈ３Ｎ３］が挙げられる。例えば、Ｒｅｕｓｃｈ ａｎｄ Ｔｅｊａｄａ，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ２５（１２）：１３２５－１３３４（２０１５）を参照されたい。非フコシル化グリカンのレベルは、種々の態様では、Ａ１Ｇ０％、Ａ２Ｇ０％、Ａ２Ｇ１Ａ％、Ａ２Ｇ１ｂ％、Ａ２Ｇ２、Ａ１Ｇ１Ｍ５％、Ａ１Ｇ１Ａ％、Ｇ０［Ｈ３Ｎ４］％、Ｇ０［Ｈ４Ｎ４］％、Ｇ０［Ｈ５Ｎ４］％、及びＦＯ－Ｎ［Ｈ３Ｎ３］％を合計することによって得られる。
【0038】
例示的な態様では、グリカンのレベル（例えば、任意選択により％で表されるグリカン含量、例えば、ＴＡＦグリカン％、ＨＭグリカン％、ＡＦグリカン％）は、糖タンパク質含有組成物中に存在するグリカンを評価するための、又は糖タンパク質を含む特定のサンプルのグリコフォームプロファイル（例えば、グリコプロファイル）を決定、検出又は測定するための、当該技術分野で知られている種々の方法のいずれかによって決定（例えば、測定）される。例示的な事例では、抗体組成物のグリカンレベル（例えば、ＴＡＦグリカン％、ＨＭグリカン％、ＡＦグリカン％）は、クロマトグラフィに基づく方法、例えば、ＨＩＬＩＣによって、抗体組成物のサンプル中のそのようなグリカンのレベルを測定することによって決定され、そのグリカンレベルは、本明細書に記載されるように、％で表される。例えば、実施例１を参照されたい。例示的な事例では、抗体組成物のグリカンレベルは、組成物の抗体から切断された全てのグリカンの％として表される。種々の局面において、ＴＡＦグリカン％は、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％の合計を計算することによって決定され、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％は親水性相互作用クロマトグラフィ（例えば、実施例１に記載の方法）によって決定される。種々の態様では、グリカンレベル（例えば、ＴＡＦグリカン％、ＨＭグリカン％、ＡＦグリカン％）は、抗体組成物のサンプル中のそのようなグリカンのレベルを測定することによって決定（例えば、測定）される。例示的な事例では、抗体組成物の少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、又は少なくとも９個のサンプルを採取し、各サンプルについて、グリカンレベル（例えば、ＴＡＦグリカン％、ＨＭグリカン％、ＡＦグリカン％）を決定（例えば、測定）する。種々の態様では、ＴＡＦグリカン％、ＨＭグリカン％、及び／又はＡＦグリカン％の平均（ｍｅａｎ）又は平均（ａｖｅｒａｇｅ）が決定される。
【0039】
例示的な態様では、グリカンレベル（例えば、ＴＡＦグリカン％、ＨＭグリカン％、ＡＦグリカン％）は、本明細書でさらに説明されるように、方程式Ａ又は方程式Ｂを使用して計算される。
【0040】
ＡＤＣＣ
本明細書に提示される関連性及び方程式を含む本開示は、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベル（例えば、ＡＤＣＣ％）に対する、抗体組成物の総非フコシル化グリカン％、又は高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に関する。
本明細書に提示される関連性及び方程式を含む本開示は、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベル（例えば、ＡＤＣＣ％）に対する、抗体組成物の総非フコシル化グリカン％、又は高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に関する。
【0041】
「ＡＤＣＣ」又は「抗体依存性細胞介在性細胞障害」又は「抗体依存性細胞傷害」という用語は、免疫系のエフェクター細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、マクロファージ、好中球、好酸球）が、膜表面抗原に特定の抗体が結合している標的細胞を活発に溶解する機序を指す。ＡＤＣＣは適応免疫反応の一部であり、抗原特異的抗体が（１）その抗原結合領域を介して標的細胞の膜表面抗原に結合し、且つ（２）そのＦｃ領域を介してエフェクター細胞表面のＦｃ受容体に結合したときに生じる。抗体のＦｃ領域のＦｃ受容体への結合は、エフェクター細胞に、（例えば、細胞溶解又は細胞脱顆粒を介して）標的細胞の死をもたらす細胞傷害性因子を放出させる。
【0042】
Ｆｃ受容体は、Ｂリンパ球、濾胞樹状細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球、血小板、及び肥満細胞の表面にある受容体であり、抗体のＦｃ領域に結合する。Ｆｃ受容体は、それらが結合する抗体のタイプに基づいて異なるクラスに分類される。例えば、Ｆｃガンマ受容体はＩｇＧ抗体のＦｃ領域に対する受容体であり、Ｆｃアルファ受容体はＩｇＡ抗体のＦｃ領域に対する受容体であり、Ｆｃイプシロン受容体はＩｇＥ抗体のＦｃ領域に対する受容体である。
【0043】
「ＦｃγＲ」又は「Ｆｃ－ガンマ受容体」という用語は、オプソニン化された細胞又は微生物の食作用の誘導に関与するＩｇＧスーパーファミリーに属するタンパク質である。例えば、Ｆｒｉｄｍａｎ ＷＨ．Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｆａｃｔｏｒｓ．ＦＡＳＥＢ Ｊｏｕｒｎａｌ．５（１２）：２６８４－９０（１９９１）を参照されたい。Ｆｃガンマ受容体ファミリーのメンバーには、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）及びＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）が含まれる。ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＩＢの配列は、多くの配列データベース、例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）のアクセッション番号Ｐ１２３１４（ＦＣＧＲ１＿ＨＵＭＡＮ）、Ｐ１２３１８（ＦＣＧ２Ａ＿ＨＵＭＡＮ）、Ｐ３１９９４（ＦＣＧ２Ｂ＿ＨＵＭＡＮ）、Ｐ０８６３７（ＦＣＧ３Ａ＿ＨＵＭＡＮ）及びＰ０８６３７（ＦＣＧ３Ａ＿ＨＵＭＡＮ）の下にそれぞれ見出すことができる。
【0044】
「ＡＤＣＣ活性」、「ＡＤＣＣレベル」又は「ＡＤＣＣ活性レベル」は、ＡＤＣＣが活性化されるか又は刺激される程度を指す。抗体組成物のＡＤＣＣレベルを測定又は決定する方法（ＡＤＣＣレベルを測定又は決定するための市販のアッセイ及びキットを含む）は、Ｙａｍａｓｈｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ６：ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ １９７７２（２０１６），ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ１９７７２；Ｋａｎｔａｋａｍａｌａｋｕｌ ｅｔ ａｌ．，“Ａ ｎｏｖｅｌ ＥＧＦＰ－ＣＥＭ－ＮＫｒ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ－ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ（ＡＤＣＣ）ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ＨＩＶ－１ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ”，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３１５（Ｉｓｓｕｅｓ １－２）：１－１０；（２００６）；Ｇｏｍｅｚ－Ｒｏｍａｎ ｅｔ ａｌ．，“Ａ ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ”，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３０８（Ｉｓｓｕｅｓ １－２）：５３－６７（２００６）；Ｓｃｈｎｕｅｒｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，：Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ，ｃｅｌｌ－ｌｉｎｅ ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ＡＤＣＣ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”，Ｍｏｌｅｃ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３８（Ｉｓｓｕｅｓ １２－１３）：１５１２－１５１７（２０１１）；及びＭａｔａ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｎ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ（ＡＤＣＣ）ａｎｄ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ（ＮＫ）ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ５１Ｃｒ－ｒｅｌｅａｓｅ ａｎｄ ＣＤ１０７ａ ａｓｓａｙｓ”，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ４０６：１－９（２０１４）（これらの文献は全てあらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、当該技術分野でよく知られている。「ＡＤＣＣアッセイ」又は「ＦｃγＲレポーター遺伝子アッセイ」という用語は、抗体のＡＤＣＣ活性の決定に有用なアッセイ、キット又は方法を指す。本明細書に記載の方法における抗体組成物のＡＤＣＣ活性を測定又は決定する例示的な方法には、実施例２に記載のＡＤＣＣアッセイ、又はＰｒｏｍｅｇａから市販されているＡＤＣＣレポーターアッセイ（カタログ番号Ｇ７０１０及びＧ７０１８）が含まれる。いくつかの実施形態では、ＡＤＣＣ活性は、以下の１つ以上を含むカルセイン放出アッセイを使用して測定又は決定される：エフェクター細胞としてＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｖ）発現ＮＫ９２（Ｍ１）細胞、及びカルセイン－ＡＭで標識した標的細胞としてＨＣＣ２２１８細胞又はＷＩＬ２－Ｓ細胞。
【0045】
例示的な態様では、抗体組成物のＡＤＣＣレベルは、抗体の抗原を発現し、抗体のＦｃドメインを介してエフェクター細胞上のＦｃ－ガンマＲＩＩＩＡ受容体に関与する細胞において、用量依存的に細胞障害を媒介する抗体組成物の抗体の能力を測定する、定量的な細胞ベースのアッセイによって決定される。種々の実施形態では、この方法は、標的細胞がエフェクター細胞によって溶解されると放出される検出可能な標識を有する標的細胞の使用を含む。標的細胞から放出される検出可能な標識の量は、抗体組成物のＡＤＣＣ活性の尺度である。いくつかの態様では、標的細胞から放出される検出可能な標識の量は、ベースラインと比較される。また、ＡＤＣＣレベルは、対照ＡＤＣＣ％に対するＡＤＣＣ％として報告され得る。種々の態様では、ＡＤＣＣ％は相対ＡＤＣＣ％であり、これは、任意選択で、コントロールＡＤＣＣ％に対して相対的である。種々の態様では、対照ＡＤＣＣ％は、参照抗体のＡＤＣＣ％である。種々の態様では、参照抗体はリツキシマブである。例示的な事例では、対照ＡＤＣＣ％が約６０％～約１３０％の範囲内である。任意選択により、ＡＤＣＣ％は、実施例２に記載のアッセイによって決定される。
【0046】
本開示は、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルに対する抗体組成物のＴＡＦグリカン含量、ＨＭグリカン含量、及び／又はＡＦグリカン含量に関する。本明細書で実証されるように、抗体組成物のＴＡＦグリカン％、ＨＭグリカン％、及び／又はＡＦグリカン％は、抗体組成物のＡＤＣＣ％活性に関連する。種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量をＡＤＣＣ活性レベルに相関させる第１のモデルに基づいて、（ａ）ＡＤＣＣ活性レベルをＴＡＦグリカン含量に基づいて計算する（例えば、ＴＡＦグリカン含量を測定する）か、又は（ｂ）ＴＡＦグリカン含量をＡＤＣＣ活性レベルに基づいて計算する（例えば、ＡＤＣＣ活性レベルを測定する）。種々の例では、抗体組成物の特定の抗体が産生されるとすると、目標ＡＤＣＣ活性レベル又はＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲は既知である。例えば、抗体は参照抗体のバイオシミラーであり得、目標ＡＤＣＣ活性レベル又はその範囲は参照抗体について知られている。例示的な態様では、目標ＴＡＦグリカン含量又はＴＡＦグリカン含量の目標範囲は、第１のモデルに基づいて計算することができる。種々の例では、第１のモデルは線形回帰モデルである。種々の例では、第１のモデルは、ｙ切片のない線形回帰モデルの単純化されたバージョンである。種々の態様では、ＡＤＣＣとＴＡＦグリカン含量を相関させる第１のモデルは、その低いｐ値によって実証されるように、統計的に有意である。種々の態様では、ｐ値は０．０００１未満である。
【0047】
種々の態様では、第１のモデルは、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦグリカン含量毎に約１３．５％±０．５％と相関させる（任意選択により、抗体組成物の抗体は、１つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する）。種々の態様では、第１のモデルは、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦグリカン含量毎に約２４．７４％±０．６２５％と相関させ、ここで、任意選択により、抗体組成物の抗体は、２つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する。例示的な態様では、第１のモデルは、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦグリカン％含量毎に約１２％±１．５％×Ｑと相関させる（ここで、Ｑは、抗原に存在する抗体結合部位の数である）。例示的な事例では、Ｑは１であり、任意選択で、抗体はインフリキシマブ又はそのバイオシミラーである。或いは、Ｑは２であり、任意選択で、抗体はリツキシマブ又はそのバイオシミラーである。
【0048】
種々の態様では、ＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲は既知であるか、予め選択されているか、又は予め決定されており、第１のモデルは、ＡＤＣＣ活性レベルのこの目標範囲に基づいて、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲の計算を可能にする。例示的な事例では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ～ｎである（ここで、ｍは［ＡＤＣＣｍｉｎ／１２Ｑ］であり、ＡＤＣＣｍｉｎは参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小であり、ｎは［ＡＤＣＣｍａｘ］／１２Ｑ］であり、ＡＤＣＣｍａｘは、参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大である）。種々の例では、Ｑは２である。種々の例では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、約２４×ＴＡＦ％である。種々の例では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ～ｎである（ここで、ｍは［ＡＤＣＣｍｉｎ／２４］であり、ｎは［ＡＤＣＣｍａｘ］／２４である）。種々の例では、Ｑは１である。種々の態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、約１２×ＴＡＦ％である。種々の例では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ～ｎである（ここで、ｍは［ＡＤＣＣｍｉｎ／１２］であり、ｎは［ＡＤＣＣｍａｘ］／１２である）。種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ°～ｎ°であり、ここで、ｍ°は［［ＡＤＣＣｍｉｎ－ｙ］／ｘ］であり（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小である）、ｎ°は［［ＡＤＣＣｍａｘ－ｙ］／ｘ］である（ここで、ＡＤＣＣｍａｘはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大である）。任意選択で、ｘは約２０．４～約２７．７であり、ｙは約－１１．４～約１６．７である。或いは、ｘは約９．７～約１５．２であり、ｙは約－１５．６～約３４．２である。種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ’～ｎ’であり、ここで、ｍ’は［ＡＤＣＣｍｉｎ／ｘ’］であり（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小である）、ｎ’は［ＡＤＣＣｍａｘ］／ｘ’である（ここで、ＡＤＣＣｍａｘはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大である）。任意選択により、ｘ’は約２４．１～約２５．４である。或いは、ｘ’は約１３．０～約１３．９５である。種々の例では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約１３．５％±０．５％であり、ここで、任意選択により、抗体組成物の抗体は、１つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する。種々の態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約２４．７４％±０．６２５％であり、ここで、任意選択により、抗体組成物の抗体は、２つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する。例示的な態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約１２％±１．５％×Ｑであり、Ｑは抗原上に存在する抗体結合部位の数である。例示的な事例では、参照抗体はインフリキシマブである。例示的な態様では、参照抗体はリツキシマブである。
【0049】
ＡＤＣＣ活性又はＡＤＣＣ％は、ＴＡＦグリカン％、ＨＭグリカン％、及び／又はＡＦグリカン％を所与の抗体組成物のＡＤＣＣ％活性に関連付ける方程式を使用して算出することができる。種々の態様では、方程式は、ＴＡＦグリカン％をＡＤＣＣ％に関連付ける。例示的な態様では、方程式は、方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＸはＴＡＦグリカン％である）
である。
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＸはＴＡＦグリカン％である）
である。
【0050】
種々の例では、方程式は、ＨＭグリカン％及びＡＦグリカン％を抗体組成物のＡＤＣＣ％に関連付ける。例示的な態様では、方程式は、方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは高マンノースグリカン％であり、ＡＦは非フコシル化グリカン％である）
である。
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは高マンノースグリカン％であり、ＡＦは非フコシル化グリカン％である）
である。
【0051】
例示的な態様では、方法は、ＴＡＦグリカン％を決定（例えば、測定）する工程を含み、この決定（例えば、測定）されたＴＡＦグリカン％を使用して、方程式ＡによりＡＤＣＣ％を算出することができる。したがって、例示的な事例では、方法は、方程式Ａを使用し、決定（例えば、測定）されたＴＡＦグリカン％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程を含む。種々の態様では、このような方法で算出されたＡＤＣＣ％は、抗体組成物のＡＤＣＣ％を実験的に決定（例えば、測定）する必要がないために有用である。
【0052】
例示的な態様では、方法は、ＨＭグリカン％及びＡＦグリカン％を決定（例えば、測定）する工程を含み、この決定（例えば、測定）されたＨＭグリカン％及びＡＦグリカン％を使用して、方程式ＢによりＡＤＣＣ％を算出することができる。したがって、例示的な事例では、方法は、方程式Ｂを使用し、決定（例えば、測定）されたＨＭグリカン％及びＡＦグリカン％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程を含む。種々の態様では、このような方法で算出されたＡＤＣＣ％は、抗体組成物のＡＤＣＣ％を実験的に決定（例えば、測定）する必要がないために有用である。
【0053】
種々の態様では、ＡＤＣＣ％及びＴＡＦグリカン％、ＨＭグリカン％、及び／又はＡＦグリカン％に関連する本明細書で開示される方程式は、例えば、方程式を使用してＴＡＦグリカン％を決定し得るように、再表現することができる。例えば、方程式Ａは、以下のように再表現することができる：
Ｘ＝（Ｙ－２．６）／２４．１
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＸはＴＡＦグリカン％である）。
Ｘ＝（Ｙ－２．６）／２４．１
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＸはＴＡＦグリカン％である）。
【0054】
或いは、方程式Ｂは、以下のように再表現することができる：
（Ｙ－０．２４）＝２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ、又は
［（Ｙ－０．２４）－２２．１×ＡＦ］／２７＝ＨＭ、又は
［（Ｙ－０．２４）－２７×ＨＭ］／２２．１＝ＡＦ
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは高マンノースグリカン％であり、ＡＦは非フコシル化グリカン％である）。
（Ｙ－０．２４）＝２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ、又は
［（Ｙ－０．２４）－２２．１×ＡＦ］／２７＝ＨＭ、又は
［（Ｙ－０．２４）－２７×ＨＭ］／２２．１＝ＡＦ
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは高マンノースグリカン％であり、ＡＦは非フコシル化グリカン％である）。
【0055】
例示的な事例では、ＡＤＣＣ％が決定（例えば、測定）され、この決定されたＡＤＣＣ％を再表現された方程式Ａで使用することによって、決定されたＡＤＣＣ％に関連付けられたＴＡＦ％が算出され得る。方程式Ａ及び決定されたＡＤＣＣ％を使用して算出されたＴＡＦ％は、特定のＡＤＣＣ％を達成するための目標ＴＡＦ％を特定するのに有用である。また、例示的な態様では、ＡＤＣＣ％が決定（例えば、測定）され、この決定されたＡＤＣＣ％を再表現された方程式Ｂで使用することによって、ＨＭグリカン％又はＡＦグリカン％が算出され得る。
【0056】
種々の態様では、ＡＤＣＣ％は目標ＡＤＣＣ％であり、この方法は、目標ＡＤＣＣレベルを使用して目標ＴＡＦグリカン％を特定する。種々の態様において、この方法は、グリコシル化コンピテント細胞を細胞培養物中に維持して、方程式Ａを使用して計算されるように、目標ＴＡＦ％レベルを有する抗体組成物を製造する工程を含む。この方法は、抗体組成物が目標ＴＡＦレベルを達成すると、この抗体組成物を用いて１つ以上の下流プロセス工程を実行する工程を含み得る。種々の態様では、この方法は、任意選択により、抗体組成物の実ＴＡＦ％を確認する工程を含む。
【0057】
種々の態様では、方法は、方程式Ａを用いて決定されたＴＡＦグリカン％を使用して算出されたＹ、又は式Ｂを用いて決定されたＨＭグリカン％及びＡＦグリカン％を使用して算出されたＹが目標ＡＤＣＣ範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。
【0058】
製品品質を決定及び／又はモニターする方法
これらの相関関係に基づいて、抗体組成物の製品品質を決定及び／又はモニターすることができる。したがって、本開示は、本開示は、抗体組成物の製品品質を決定する方法であって、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルが、抗体組成物の製品品質の基礎とする基準である方法を提供する。例示的な実施形態では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルの総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン含量を決定する工程；並びに（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内である場合に、製品品質を、許容できる、及び／又はＡＤＣＣ活性レベル基準を達成していると決定する工程を含む。例示的な態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲は、（１）参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲、及び（２）抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを抗体組成物のＴＡＦグリカン含量と相関させる第１のモデルに基づく。例示的な態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣは第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣの約９５％～約１０５％であり、ここで、第２のモデルは、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを、抗体組成物のＨＭグリカン含量及び抗体組成物のＡＦグリカン含量と相関させる。
これらの相関関係に基づいて、抗体組成物の製品品質を決定及び／又はモニターすることができる。したがって、本開示は、本開示は、抗体組成物の製品品質を決定する方法であって、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルが、抗体組成物の製品品質の基礎とする基準である方法を提供する。例示的な実施形態では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルの総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン含量を決定する工程；並びに（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内である場合に、製品品質を、許容できる、及び／又はＡＤＣＣ活性レベル基準を達成していると決定する工程を含む。例示的な態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲は、（１）参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲、及び（２）抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを抗体組成物のＴＡＦグリカン含量と相関させる第１のモデルに基づく。例示的な態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣは第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣの約９５％～約１０５％であり、ここで、第２のモデルは、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを、抗体組成物のＨＭグリカン含量及び抗体組成物のＡＦグリカン含量と相関させる。
【0059】
有利には、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣは、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣと統計的に有意に類似している。例えば、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルの約９５％～約１０５％である。第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、任意選択により、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルの約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％、約１０１％、約１０２％、約１０３％、約１０４％、又は約１０５％である。第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、種々の例において、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣの約１００％である。特定の態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣと、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣとの間に１対１の対応がある。種々の例では、第１のモデル及び／又は第２のモデルは、統計的に有意である。例えば、第１のモデルのｐ値は０．０００１未満であり、且つ／又は第２のモデルのｐ値は０．０００１未満である。任意選択で、第１のモデル及び第２のモデルのそれぞれは、０．０００１未満のｐ値を有する。
【0060】
例示的な態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは約１２Ｑ×ＴＡＦ％である（ここで、Ｑは抗体が結合する抗原の抗体結合部位の数であり、ＴＡＦ％は抗体組成物のＴＡＦグリカン含量である）。例示的な事例では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ～ｎであり、ここで、ｍは［ＡＤＣＣｍｉｎ／１２Ｑ］であり（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎは参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小である）、ｎは［ＡＤＣＣｍａｘ］／１２Ｑである（ここで、ＡＤＣＣｍａｘは、参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大である）。種々の例では、Ｑは２である。種々の例では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、約２４×ＴＡＦ％である。種々の例では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ～ｎである（ここで、ｍは［ＡＤＣＣｍｉｎ／２４］であり、ｎは［ＡＤＣＣｍａｘ］／２４である）。種々の例では、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは約２７×ＨＭ％＋約２２×ＡＦ％である（ここで、ＡＦ％は抗体組成物のＡＦグリカン含量であり、ＨＭ％は抗体組成物のＨＭグリカン含量である）。種々の例では、Ｑは１である。種々の態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、約１２×ＴＡＦ％である。種々の例では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ～ｎである（ここで、ｍは［ＡＤＣＣｍｉｎ／１２］であり、ｎは［ＡＤＣＣｍａｘ］／１２である）。種々の例では、第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣ活性レベルは、約１４．８×ＨＭ％＋約１２．８×ＡＦ％である。好適な代替の第１のモデル及び第２のモデルを本明細書に記載する。例示的な事例では、第１のモデルは、ＡＤＣＣとＴＡＦグリカン含量を相関させる本明細書に記載のモデル（例えば、式）の１つのいずれかであり、例えば、式１、３、５、及び７、並びに式Ａが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な事例では、第２のモデルは、ＡＤＣＣとＨＭグリカン含量及びＡＦグリカン含量とを相関させる本明細書に記載のモデル（例えば、式）の１つのいずれかであり、例えば、式２、４、６、及び８、並びに式Ｂが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ°～ｎ°であり、ここで、ｍ°は［［ＡＤＣＣｍｉｎ－ｙ］／ｘ］と定義され（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小値である）、ｎ°は［［ＡＤＣＣｍａｘ－ｙ］／ｘ］と定義される（ここで、ＡＤＣＣｍａｘはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大値である）。任意選択で、ｘは約２０．４～約２７．７であり、ｙは約－１１．４～約１６．７である。或いは、ｘは約９．７～約１５．２であり、ｙは約－１５．６～約３４．２である。種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ’～ｎ’であり、ここで、ｍ’は［ＡＤＣＣｍｉｎ／ｘ’］であり（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小である）、ｎ’は［ＡＤＣＣｍａｘ］／ｘ’である（ここで、ＡＤＣＣｍａｘはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大である）。任意選択により、ｘ’は約２４．１～約２５．４である。或いは、ｘ’は約１３．０～約１３．９５である。種々の例では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約１３．５％±０．５％であり、ここで、任意選択により、抗体組成物の抗体は、１つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する。種々の態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約２４．７４％±０．６２５％であり、ここで、任意選択により、抗体組成物の抗体は、２つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する。例示的な態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約１２％±１．５％×Ｑであり、Ｑは抗原上に存在する抗体結合部位の数である。
【0061】
例示的な態様では、抗体は１つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する。例示的な事例では、参照抗体はインフリキシマブである。例示的な態様では、抗体は２つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する。例示的な態様では、参照抗体はリツキシマブである。
【0062】
例示的な態様では、方法は品質管理（ＱＣ）アッセイである。例示的な態様では、方法はインプロセスＱＣアッセイである。種々の態様では、サンプルは、インプロセス材料のサンプルである。種々の例では、ＴＡＦグリカン含量は、回収前又は回収後に決定される。例示的な事例では、ＴＡＦグリカン含量は、クロマトグラフィ工程後に決定される。任意選択により、クロマトグラフィ工程は、キャプチャークロマトグラフィ、中間クロマトグラフィ、及び／又は研磨クロマトグラフィを含む。いくつかの態様では、ＴＡＦグリカン含量は、ウイルス不活化及び中和、ウイルス濾過、又は緩衝液交換の後に決定される。種々の例では、方法は、ロットリリースアッセイである。いくつかの態様では、サンプルは、製造ロットのサンプルである。
【0063】
種々の態様では、方法は、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内である場合、その抗体組成物を下流プロセスのために選択する工程をさらに含む。（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内でない場合、種々の態様では、細胞培養の１つ以上の条件を改変して、改変細胞培養物を得る。この方法は、いくつかの態様では、細胞培養の１つ以上の条件が改変された後に得られる抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程、例えば、改変された細胞培養物の抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程をさらに含む。種々の態様では、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内でない場合、方法は、（ｉｉｉ）細胞培養の１つ以上の条件を改変して改変細胞培養物を得る工程、及び（ｉｖ）改変細胞培養物から得られる抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程をさらに含む。例示的な態様では、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内でない場合、方法は、（ｉｖ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内になるまで、（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）をさらに含む。例示的な事例では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性を直接測定するアッセイは、（ｉ）において決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内でない場合、例えば目標範囲外である場合にのみ、抗体組成物に対して実施される。ＡＤＣＣ活性を直接測定するアッセイとしては、例えば、抗原発現細胞及びエフェクター細胞の両方に結合する抗体に結合するエフェクター細胞によって、検出可能な薬剤を含む抗原発現細胞の溶解時の検出可能な薬剤の放出を測定する細胞ベースのアッセイが挙げられる。例示的な事例では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性を直接測定するアッセイは、抗体組成物に対して行われない。種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量を決定する工程は、ＡＤＣＣ活性レベル基準に関する製品品質を決定するために必要とされる唯一の工程である。理論に束縛されるものではないが、第１のモデル及び第２のモデルの統計的に有意な相関は、ＴＡＦグリカン含量がＡＤＣＣ活性レベルを示すことを可能にし、したがってＡＤＣＣ活性レベルを直接測定するアッセイは必要とされない。したがって、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを直接測定することは必要でなくなり、このため本明細書に開示される方法の種々の態様では実施されない。
【0064】
方法は、種々の態様において、ＡＤＣＣ活動レベル基準に関して製品品質を決定する。種々の態様では、ＡＤＣＣ活性レベル基準は、抗体組成物の許容基準の１つである。本開示の方法は、種々の態様では、２１ ＣＦＲ ２１１．１６５に準じて、薬物製品のバッチが、承認及び販売の条件として、適切な規格及び適切な統計的品質管理基準のそれぞれを満たすことを保証することを目的とする。様々な態様では、製品品質を決定する本開示の方法は、適切な許容レベル及び／又は適切な拒絶レベルを含む統計的品質管理基準を満たす。「許容基準」、「ロット」及び「インプロセス」（これらに限定されない）を含む用語は、連邦規則集（ＣＦＲ）第２１章第２１０．３項に定義されるその意味に従う。
【0065】
本開示はまた、抗体組成物の製品品質をモニターする方法であって、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルが、抗体組成物の製品品質の基礎とする基準である方法を提供する。例示的な実施形態では、方法は、本開示の方法にしたがって、第１の時点で得られた第１のサンプルと、第１の時点とは異なる第２の時点で採取された第２のサンプルとを用いて、抗体組成物の製品品質を決定する工程を含む。種々の例では、第１のサンプル及び第２のサンプルのそれぞれは、インプロセス材料のサンプルである。種々の態様では、第１のサンプルはインプロセス材料のサンプルであり、第２のサンプルは製造ロットのサンプルである。任意選択により、第１のサンプルは、細胞培養の１つ以上の条件を改変する前に得られるサンプルであり、第２のサンプルは、細胞培養の１つ以上の条件を改変した後に得られるサンプルである。例示的な事例では、ＴＡＦグリカン含量は、第１のサンプル及び第２のサンプルのそれぞれについて決定される。抗体組成物の製品品質を決定するため、及びＴＡＦグリカン含量を決定するために、追加の試料を得ることができる。抗体組成物の製品品質は、ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内であるかどうかに依存する。例示的な態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲は、（１）参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲、及び（２）抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを抗体組成物のＴＡＦグリカン含量と相関させる第１のモデルに基づく。例示的な態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣは第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣの約９５％～約１０５％であり、ここで、第２のモデルは、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを、抗体組成物のＨＭグリカン含量及び抗体組成物のＡＦグリカン含量と相関させる。
【0066】
抗体組成物を製造する方法
本開示は、抗体組成物を製造する方法を提供する。例示的な実施形態では、方法は、抗体組成物の製品品質を決定する工程を含み、ここで、抗体組成物の製品品質は、本開示の方法に従って決定される。任意選択により、方法は、抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程を含み、そのサンプルはインプロセス材料のサンプルである。種々の例では、方法は、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が本明細書で定義されているような目標範囲内である場合に、抗体組成物の製品品質を、許容できる、及び／又はＡＤＣＣ活性レベル基準を達成していると決定する工程を含む。例示的な態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲は、（１）参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲、及び（２）抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを抗体組成物のＴＡＦグリカン含量と相関させる第１のモデルに基づく。例示的な態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣは第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣの約９５％～約１０５％であり、ここで、第２のモデルは、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを、抗体組成物のＨＭグリカン含量及び抗体組成物のＡＦグリカン含量と相関させる。種々の態様では、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内でない場合に、方法は、（ｉｉｉ）細胞培養の１つ以上の条件を改変して改変細胞培養物を得る工程、及び（ｉｖ）改変細胞培養物から得られる抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程をさらに含み、任意選択により、ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内になるまで、工程（ｉｉｉ）及び工程（ｉｖ）を繰り返す。種々の例では、サンプルは、抗体組成物の抗体を発現する細胞を含む細胞培養物のサンプルである。種々の例では、細胞培養の１つ以上の条件は、ＴＡＦグリカン含量を改変するために改変される。種々の態様では、抗体組成物のＴＡＦグリカン含量は、ＡＦグリカン含量を改変することによって達成される。例示的な態様では、細胞培養の１つ以上の条件は、抗体組成物のＡＦグリカン含量を改変するために改変される。例示的な態様では、１つ以上の条件は、主にＡＦグリカン含量を改変する。種々の例では、１つ以上の条件はＡＦグリカン含量を改変し、ＨＭグリカン含量を改変しない。例示的な態様では、方法は、抗体組成物のＴＡＦグリカン含量がＨＭグリカン含量を改変することによって達成されることを含む。任意選択により、細胞培養の１つ以上の条件は、抗体組成物のＨＭグリカン含量を改変するために改変される。いくつかの例では、１つ以上の条件は、主にＨＭグリカン含量を改変する。いくつかの態様では、１つ以上の条件はＨＭグリカン含量を改変し、ＡＦグリカン含量を改変しない。種々の例では、方法は、ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内になるまで、非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量の改変を繰り返す工程、及び／又は高マンノース（ＨＭ）グリカン含量の改変を繰り返す工程を含む。
本開示は、抗体組成物を製造する方法を提供する。例示的な実施形態では、方法は、抗体組成物の製品品質を決定する工程を含み、ここで、抗体組成物の製品品質は、本開示の方法に従って決定される。任意選択により、方法は、抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程を含み、そのサンプルはインプロセス材料のサンプルである。種々の例では、方法は、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が本明細書で定義されているような目標範囲内である場合に、抗体組成物の製品品質を、許容できる、及び／又はＡＤＣＣ活性レベル基準を達成していると決定する工程を含む。例示的な態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲は、（１）参照抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲、及び（２）抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを抗体組成物のＴＡＦグリカン含量と相関させる第１のモデルに基づく。例示的な態様では、第１のモデルによって予測されるＡＤＣＣは第２のモデルによって予測されるＡＤＣＣの約９５％～約１０５％であり、ここで、第２のモデルは、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを、抗体組成物のＨＭグリカン含量及び抗体組成物のＡＦグリカン含量と相関させる。種々の態様では、（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内でない場合に、方法は、（ｉｉｉ）細胞培養の１つ以上の条件を改変して改変細胞培養物を得る工程、及び（ｉｖ）改変細胞培養物から得られる抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程をさらに含み、任意選択により、ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内になるまで、工程（ｉｉｉ）及び工程（ｉｖ）を繰り返す。種々の例では、サンプルは、抗体組成物の抗体を発現する細胞を含む細胞培養物のサンプルである。種々の例では、細胞培養の１つ以上の条件は、ＴＡＦグリカン含量を改変するために改変される。種々の態様では、抗体組成物のＴＡＦグリカン含量は、ＡＦグリカン含量を改変することによって達成される。例示的な態様では、細胞培養の１つ以上の条件は、抗体組成物のＡＦグリカン含量を改変するために改変される。例示的な態様では、１つ以上の条件は、主にＡＦグリカン含量を改変する。種々の例では、１つ以上の条件はＡＦグリカン含量を改変し、ＨＭグリカン含量を改変しない。例示的な態様では、方法は、抗体組成物のＴＡＦグリカン含量がＨＭグリカン含量を改変することによって達成されることを含む。任意選択により、細胞培養の１つ以上の条件は、抗体組成物のＨＭグリカン含量を改変するために改変される。いくつかの例では、１つ以上の条件は、主にＨＭグリカン含量を改変する。いくつかの態様では、１つ以上の条件はＨＭグリカン含量を改変し、ＡＦグリカン含量を改変しない。種々の例では、方法は、ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内になるまで、非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量の改変を繰り返す工程、及び／又は高マンノース（ＨＭ）グリカン含量の改変を繰り返す工程を含む。
【0067】
例示的な実施形態では、抗体組成物を製造する方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルの総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン含量を決定する工程；及び（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量に基づいて、下流プロセスのための抗体組成物を選択する工程を含む。種々の態様では、サンプルは、抗体組成物の抗体を発現する細胞を含む細胞培養物から採取される。種々の例では、方法は、抗体組成物のＴＡＦグリカン含量を改変する工程、及び改変されたＴＡＦグリカン含量を決定する工程をさらに含む。任意選択により、細胞培養の１つ以上の条件は、ＴＡＦグリカン含量を改変するために改変される。例示的な態様では、方法は、ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内になるまで、改変を繰り返すことを含む。例示的な事例では、目標範囲は、抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲に基づく。理論に束縛されるものではないが、ＴＡＦグリカン含量は抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルと相関し、したがって、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは抗体組成物のＴＡＦグリカン含量に基づいて予測され得る。抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物を下流プロセスに選択すべきかどうかを決定する際に考慮する価値のある基準であり得る。したがって、種々の態様では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程；（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量に基づいて、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを決定する工程；及び、任意選択により、（ｉｉｉ）（ｉｉ）で決定された抗体組成物のＡＤＣＣレベルがＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲内である場合に、その抗体組成物を下流プロセスのために選択する工程を含む。種々の態様では、ＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲は、抗体組成物の抗体について知られている。抗体組成物の抗体は、種々の態様では、参照抗体のバイオシミラーである。種々の例では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲は、既知のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲に基づくか、又はそれに基づいて決定される（例えば、算出される）。したがって、例示的な態様では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルのＴＡＦグリカン含量を決定する工程；及び（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン含量が目標範囲内である場合、その抗体組成物を下流プロセスのために選択する工程を含む。方法が抗体組成物のＴＡＦグリカン含量を改変する工程をさらに含む場合、方法は、種々の例では、非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量を改変してＴＡＦグリカン含量を改変する工程を含む。任意選択により、細胞培養の１つ以上の条件が抗体組成物のＡＦグリカン含量を改変するために改変され、これは次にＴＡＦグリカン含量を改変する。或いは、又はさらに、方法が抗体組成物のＴＡＦグリカン含量を改変する工程を含む場合、方法は、種々の例では、ＴＡＦグリカン含量を改変するために高マンノース（ＨＭ）グリカン含量を改変する工程を含む。任意選択により、細胞培養の１つ以上の条件が抗体組成物のＨＭグリカン含量を改変するために改変され、これは次にＴＡＦグリカン含量を改変する。例示的な態様では、１つ以上の条件は、主にＡＦグリカン含量を改変する。例示的な事例では、１つ以上の条件は、主にＨＭグリカン含量を改変する。例示的な態様では、１つ以上の条件はＡＦグリカン含量を改変し、ＨＭグリカン含量を改変しない。例示的な事例では、１つ以上の条件はＨＭグリカン含量を改変し、ＡＦグリカン含量を改変しない。方法は、任意選択により、ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内になるまで、非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量の改変を繰り返す工程、及び／又は高マンノース（ＨＭ）グリカン含量の改変を繰り返す工程を含む。例示的な態様では、抗体組成物の抗体はＩｇＧ、任意選択によりＩｇＧ１である。種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ～ｎであり、ここで、ｍは［［ＡＤＣＣｍｉｎ－ｙ］／ｘ］であり（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小である）、ｎは［［ＡＤＣＣｍａｘ－ｙ］／ｘ］である（ここで、ＡＤＣＣｍａｘはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大である）。任意選択で、ｘは約２０．４～約２７．７であり、ｙは約－１１．４～約１６．７である。或いは、ｘは約９．７～約１５．２であり、ｙは約－１５．６～約３４．２である。種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ’～ｎ’であり、ここで、ｍ’は［ＡＤＣＣｍｉｎ／ｘ’］であり（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小である）、ｎ’は［ＡＤＣＣｍａｘ］／ｘ’である（ここで、ＡＤＣＣｍａｘはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大である）。任意選択により、ｘ’は約２４．１～約２５．４である。或いは、ｘ’は約１３．０～約１３．９５である。種々の例では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約１３．５％±０．５％であり、任意選択により、抗体組成物の抗体は、１つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する。種々の態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約２４．７４％±０．６２５％であり、ここで、任意選択により、抗体組成物の抗体は、２つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合する。例示的な態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約１２％±１．５％×Ｑであり、Ｑは抗原上に存在する抗体結合部位の数である。例示的な事例では、Ｑは１であり、任意選択で、抗体はインフリキシマブ又はそのバイオシミラーである。任意選択で、Ｑは２であり、任意選択で、抗体はリツキシマブ又はそのバイオシミラーである。
【0068】
抗体組成物を製造する本開示の方法は、細胞培養物の細胞によって産生される抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン含量を改変する工程を含む。種々の例では、細胞培養の１つ以上の条件は、ＴＡＦグリカン含量を改変するために改変される。種々の態様では、方法は、改変されたＴＡＦグリカン含量を決定する工程を含む。任意選択で、改変は、決定されたＴＡＦグリカン含量がＴＡＦの目標範囲内になるまで繰り返される。特定の理論に束縛されるものではないが、ＴＡＦグリカン含量は、それぞれがＴＡＦグリカン含量に影響を及ぼすので、非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量若しくは高マンノース（ＨＭ）含量、又はこれらの組み合わせを変化させることによって改変され得る。したがって、これらの方法は、有利なことに、複数の方法でＴＡＦグリカン含量の目標範囲を達成することを可能にする。例えば、細胞培養の１つ以上の条件は、ＴＡＦグリカン含量を改変するために、ＡＦグリカン含量を改変するように改変される。或いは、細胞培養の１つ以上の条件は、ＴＡＦグリカン含量を改変するために、ＨＭグリカン含量を改変するように改変される。種々の例では、細胞培養の１つ以上の条件は、ＴＡＦグリカン含量を改変するために、ＡＦグリカン含量及びＨＭグリカン含量を改変するように改変される。したがって、本開示はさらに、細胞培養物の細胞によって産生される抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン含量を改変する方法を提供する。例示的な実施形態では、方法は、ＡＦグリカン含量を改変することを含む。例示的な実施形態では、方法は、ＨＭグリカン含量を改変することを含む。種々の態様では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルの非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量及び高マンノース（ＨＭ）グリカン含量を決定する工程；（ｉｉ）ＨＭグリカン含量が一定であると仮定して、抗体組成物の抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲に基づいてＡＦグリカン含量の目標範囲を決定する工程；並びに（ｉｉｉ）ＡＦグリカン含量がＡＦグリカン含量の目標範囲内である場合、その抗体組成物を下流プロセスのために選択する工程を含む。種々の例では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルの非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量及び高マンノース（ＨＭ）グリカン含量を決定する工程；（ｉｉ）ＡＦグリカン含量が一定であると仮定して、抗体組成物の抗体のＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲に基づいてＨＭグリカン含量の目標範囲を決定する工程；並びに（ｉｉｉ）ＨＭグリカン含量がＨＭグリカン含量の目標範囲内である場合、その抗体組成物を下流プロセスのために選択する工程を含む。種々の例では、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルのＡＦグリカン含量及びＨＭグリカン含量を決定する工程、並びに（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＨＭグリカン含量に基づいてＡＦグリカン含量の目標範囲を決定する工程、並びに（ｉｉｉ）ＡＦグリカン含量がＡＦグリカン含量の目標範囲内になるまでＡＦグリカン含量を改変する工程を含み、ここで、ＨＭグリカン含量は改変されない。或いは、方法は、（ｉ）抗体組成物のサンプルのＡＦグリカン含量及びＨＭグリカン含量を決定する工程、並びに（ｉｉ）（ｉ）で決定されたＡＦグリカン含量に基づいてＨＭグリカン含量の目標範囲を決定する工程、並びに（ｉｉｉ）ＨＭグリカン含量がＨＭグリカン含量の目標範囲内になるまでＨＭグリカン含量を改変する工程を含み、ここで、ＡＦグリカン含量は改変されない。例示的な態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを抗体組成物のＴＡＦグリカン含量と相関させるモデルは、ＡＤＣＣをＨＭ及びＡＦグリカン含量と相関させるモデルによって予測されるレベルと実質的に同じＡＤＣＣ活性レベルを予測する。ＡＦグリカン含量及び／又はＨＭグリカン含量を改変する好適な方法は、当該技術分野で知られている。例えば、国際公開第２０１９／１９１１５０号パンフレットは、抗体組成物の非フコシル化グリカンのレベルを改変する方法、及び抗体組成物の高マンノースグリカンのレベルを改変する方法を教示する。このような方法においては、細胞培養の１つ以上の条件、例えば、ｐＨ、フコース濃度、グルコース濃度は、ＡＦグリカン及び／又はＨＭグリカンの所望のレベルを達成するように改変される。また、国際公開第２０１３／１１４１６４号パンフレット、国際公開第２０１６／０８９９１９号パンフレット、国際公開第２０１３／１１４２４５号パンフレット、国際公開第２０１５／１２８７９３号パンフレット及び国際公開第２０１３／１１４１６７号パンフレット、米国特許出願公開第２０１４／０３５６９１０号明細書、及びＫｏｎｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈ ６４：２４９－２６５（２０１２）のそれぞれは、増加した脱フコシル化グリカンを得るための方法を教示する。
【0069】
例示的な実施形態では、抗体組成物を製造する方法は、（ｉ）抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、（ｉｉ）方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、Ｘは工程（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％である）
を使用して、ＴＡＦ％に基づいて抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を算出する工程、及び
（ｉｉｉ）Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、Ｘは工程（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％である）
を使用して、ＴＡＦ％に基づいて抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を算出する工程、及び
（ｉｉｉ）Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。
【0070】
例示的な実施形態では、抗体組成物を製造する方法は、（ｉ）抗体組成物の高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％を決定する工程、（ｉｉ）方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
を使用して、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に基づいて抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を算出する工程、並びに
（ｉｉｉ）Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
を使用して、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に基づいて抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を算出する工程、並びに
（ｉｉｉ）Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。
【0071】
例示的な実施形態では、目標ＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法は、（ｉ）方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、Ｙは目標ＡＤＣＣ％であり、Ｘは目標ＴＡＦグリカン％である）
を使用して、目標ＡＤＣＣ％のための目標総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を算出する工程、及び
（ｉｉ）目標ＴＡＦグリカン％、Ｘを有する抗体組成物を製造するために細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞を維持する工程を含む。
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、Ｙは目標ＡＤＣＣ％であり、Ｘは目標ＴＡＦグリカン％である）
を使用して、目標ＡＤＣＣ％のための目標総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を算出する工程、及び
（ｉｉ）目標ＴＡＦグリカン％、Ｘを有する抗体組成物を製造するために細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞を維持する工程を含む。
【0072】
例示的な実施形態では、目標ＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法は、（ｉ）式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、Ｙは目標ＡＤＣＣ％であり、ＨＭは目標高マンノースグリカン％であり、ＡＦは目標非フコシル化グリカン％である）
を使用して、目標ＡＤＣＣ％のための目標非フコシル化グリカン％及び目標高マンノースグリカン％を算出する工程、並びに
並びに（ｉｉｉ）目標高マンノースグリカン％及び目標非フコシル化グリカン％を有する抗体組成物を製造するために細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞を維持する工程を含む。
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、Ｙは目標ＡＤＣＣ％であり、ＨＭは目標高マンノースグリカン％であり、ＡＦは目標非フコシル化グリカン％である）
を使用して、目標ＡＤＣＣ％のための目標非フコシル化グリカン％及び目標高マンノースグリカン％を算出する工程、並びに
並びに（ｉｉｉ）目標高マンノースグリカン％及び目標非フコシル化グリカン％を有する抗体組成物を製造するために細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞を維持する工程を含む。
【0073】
例示的な態様では、目標ＡＤＣＣ％は、目標ＡＤＣＣ％範囲内である。任意選択で、目標ＡＤＣＣ％範囲は、約４０以上約１７０又は約１７５未満である。例えば、目標ＡＤＣＣ％範囲は、約４０～約１７５、約５０～約１７５、約６０～約１７５、約７０～約１７５、約８０～約１７５、約９０～約１７５、約１００～約１７５、約１１０～約１７５、約１２０～約１７５、約１３０～約１７５、約１４０～約１７５、約１５０～約１７５、約１６０～約１７５、若しくは約１７０～約１７５、又は約４０～約１７０、約４０～約１６０、約４０～約１５０、約４０～約１４０、約４０～約１３０、約４０～約１２０、約４０～約１１０、約４０～約１００、約４０～約９０、約４０～約８０、約４０～約７０、約４０～約６０、若しくは約４０～約５０である。いくつかの態様では、目標ＡＤＣＣ％範囲は、約４４以上約１６５未満（例えば、約４５～約１６５、約５０～約１６５、約６０～約１６５、約１００～約１６５、約４５～約１００、約４５～約６０、約１００～約１５０、約１００～約１２５、約１２５～約１５０）である。種々の例では、目標ＡＤＣＣ％範囲は、約６０以上約１３０以下である。
【0074】
例示的な事例では、目標ＡＤＣＣ％範囲は、方程式Ａ又は方程式ＢのＹに依存する。例えば、いくつかの態様では目標ＡＤＣＣ％範囲はＹ±２０、任意選択で、Ｙ±１７又はＹ±１８である。いくつかの態様では、目標ＡＤＣＣ％範囲は、方程式ＡではＹ±１７であり、方程式ＢではＹ±１８である。
【0075】
目標ＡＤＣＣ％範囲は、抗体組成物について記載されるもののいずれか１つであり得る。例えば、組成物を参照されたい。
【0076】
例示的な実施形態では、さらに、任意選択で約４０以上約１７０以下のＡＤＣＣ％、Ｙを有する抗体組成物を製造する方法は、（ｉ）抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、Ｘを決定する工程、及び（ｉｉ）Ｘが（Ｙ－２．６）／２４．１に等しい場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。種々の態様では、Ｘは、約１．５５以上約６．９５未満、任意選択で、約１．６～約６．９、又は約１．６～約６．５、約１．６～約６．０、約１．６～約５．５、約１．６～約５．０、約１．６～約４．５、約１．６～約４．０、約１．６～約３．５、約１．６～約３．０、約１．６～約２．５、約１．６～約２．０、約２．０～約６．９５、約２．５～約６．９５、約３．０～約６．９５、約３．５～約６．９５、約４．０～約６．９５、約４．５～約６．９５、約５．０～約６．９５、約５．５～約６．９５、約６．０～約６．９５、又は約６．５～約６．９５である。種々の態様では、Ｙは約４４以上約１６５以下であり、任意選択により、Ｘは約１．７２～約６．７４である。
【0077】
例示的な実施形態では、方法は、ＡＤＣＣ％、Ｙを有する抗体組成物を製造する方法であり、前記方法は、（ｉ）抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、Ｘを決定する工程、及び（ｉｉ）Ｘが（Ｙ－２．６）／２４．１に等しい場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含み、ここで、任意選択により、Ｘは約Ｘ－０．４以上約Ｘ＋０．４以下であり、ＡＤＣＣ％は約Ｙ－１７以上約Ｙ＋１７である。種々の例では、ＸはＸ±０．３、Ｘ±０．２若しくはＸ±０．１であり、且つ／又はＹはＹ±１６、Ｙ±１５、Ｙ±１２、Ｙ±９、Ｙ±６、Ｙ±３、Ｙ±２若しくはＹ±１である。
【0078】
例示的な実施形態では、方法は、ＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法であり、前記方法は、（ｉ）抗体組成物の非フコシル化グリカン％及び高マンノースグリカン％を決定する工程、並びに（ｉｉ）ＡＦ及びＨＭが方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
に従ってＹに関連している場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
に従ってＹに関連している場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。
【0079】
例示的な事例では、Ｙは約４０以上約１７５未満、又は本明細書に記載される任意の部分的範囲、任意選択で、約４１～約１７１である。いくつかの態様では、ＡＦは、約１～約４、又は約１～約３、又は約１～約２であり、ＨＭは、約４０～約１７５、又はその任意の部分的範囲である。任意選択により、Ｙは約３０～約１８５、任意選択で約３２～約１８０であり、ＨＭは約１～約４であり、ＡＦは約３０～約１８５である。例示的な態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ％はＹによって規定される範囲内である。任意選択で、抗体組成物のＡＤＣＣ％は、Ｙ±１８の範囲内である。例示的な態様では、ＡＦは約１～約４である。いくつかの態様では、高マンノースグリカン％はＨＭによって規定される範囲内の値であり、任意選択で、その範囲はＨＭ±１である。任意選択で、ＨＭは約１～約４である。いくつかの例では、非フコシル化グリカン％はＡＦによって規定される範囲内の値であり、任意選択で、その範囲はＡＦ±１である。
【0080】
ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内である抗体組成物を製造する方法が提供され、前記方法は、（ｉ）抗体の様々なグリコフォームを含む一連のサンプルのＡＤＣＣ活性レベルを測定する工程、（ｉｉ）一連のサンプルのそれぞれについてＴＡＦグリカン％を決定する工程、（ｉｉｉ）ＡＤＣＣ活性レベルをＴＡＦグリカン含量に相関させるモデルを作成する工程、（ｉｖ）抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルを決定し、次いで、モデルを使用してＴＡＦグリカン含量を算出するか、又は抗体組成物のＴＡＦグリカン含量を決定し、モデルを使用してＡＤＣＣ活性レベルを算出する工程、及び（ｖ）工程（ｉｖ）で算出されたＴＡＦグリカン含量がＴＡＦグリカン含量の目標範囲内である場合、又は工程（ｉｖ）で算出されたＡＤＣＣ活性レベルがＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む。いくつかの態様では、ＡＤＣＣ活性レベルは、基本的に実施例２に記載されるように測定される。いくつかの態様では、ＴＡＦグリカン含量は、基本的に実施例１に記載されるように測定される。モデルは、当該技術分野で知られている任意の方法によって作成することができる。種々の態様では、モデルは線形回帰モデルであり、基本的に実施例３及び／又は実施例５に記載されるように作成される。
【0081】
ＡＤＣＣ％が目標範囲内である抗体組成物を製造する方法が提供され、前記方法は、
ｉ．抗体の様々なグリコフォームを含む一連のサンプルのＡＤＣＣ％を測定する工程、
ｉｉ．一連の各サンプルについて総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉｉ．一連の各サンプルについて工程（ｉ）で測定されたＡＤＣＣ％を工程（ｉｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％の関数としてプロットするグラフの最良適合線の線形方程式を決定する工程、
ｉｖ．抗体組成物のＴＡＦ％を決定し、次いで、工程（ｉｉｉ）の線形方程式を用いてＡＤＣＣ％を算出する工程、及び
ｖ．工程（ｉｖ）で算出されたＡＤＣＣ％が目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む。
ｉ．抗体の様々なグリコフォームを含む一連のサンプルのＡＤＣＣ％を測定する工程、
ｉｉ．一連の各サンプルについて総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉｉ．一連の各サンプルについて工程（ｉ）で測定されたＡＤＣＣ％を工程（ｉｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％の関数としてプロットするグラフの最良適合線の線形方程式を決定する工程、
ｉｖ．抗体組成物のＴＡＦ％を決定し、次いで、工程（ｉｉｉ）の線形方程式を用いてＡＤＣＣ％を算出する工程、及び
ｖ．工程（ｉｖ）で算出されたＡＤＣＣ％が目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む。
【0082】
また、ＴＡＦ％が目標範囲内である抗体組成物を製造する方法が提供され、前記方法は、
ｉ．抗体の様々なグリコフォームを含む一連のサンプルのＡＤＣＣ％を測定する工程、
ｉｉ．一連の各サンプルについて総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．一連の各サンプルについて総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉｉ．一連の各サンプルについて工程（ｉ）で測定されたＡＤＣＣ％を（ｉｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％の関数としてプロットするグラフの最良適合線の線形方程式を決定する工程、
ｉｖ．抗体組成物のＡＤＣＣ％を決定し、次いで、工程（ｉｉｉ）の線形方程式を用いてＴＡＦ％を算出する工程、及び
ｖ．工程（ｉｖ）で算出されたＴＡＦ％が目標ＴＡＦ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む。
ｉ．抗体の様々なグリコフォームを含む一連のサンプルのＡＤＣＣ％を測定する工程、
ｉｉ．一連の各サンプルについて総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．一連の各サンプルについて総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉｉ．一連の各サンプルについて工程（ｉ）で測定されたＡＤＣＣ％を（ｉｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％の関数としてプロットするグラフの最良適合線の線形方程式を決定する工程、
ｉｖ．抗体組成物のＡＤＣＣ％を決定し、次いで、工程（ｉｉｉ）の線形方程式を用いてＴＡＦ％を算出する工程、及び
ｖ．工程（ｉｖ）で算出されたＴＡＦ％が目標ＴＡＦ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む。
【0083】
最初の３つの工程を実施する例示的な方法は、実施例３においてさらに詳細に記載する。
【0084】
本開示はさらに、ＴＡＦグリカン含量が目標範囲内である抗体組成物を製造する方法であって、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲を決定する工程、及びＴＡＦグリカン含量がＴＡＦグリカン含量の目標範囲内である場合に、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程を含む方法を提供する。種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ～ｎであり、ここで、ｍは［［ＡＤＣＣｍｉｎ－ｙ］／ｘ］であり（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小である）、ｎは［［ＡＤＣＣｍａｘ－ｙ］／ｘ］である（ここで、ＡＤＣＣｍａｘはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大である）。任意選択で、ｘは約２０．４～約２７．７であり、ｙは約－１１．４～約１６．７である。或いは、ｘは約９．７～約１５．２であり、ｙは約－１５．６～約３４．２である。種々の態様では、ＴＡＦグリカン含量の目標範囲はｍ’～ｎ’であり、ここで、ｍ’は［ＡＤＣＣｍｉｎ／ｘ’］であり（ここで、ＡＤＣＣｍｉｎはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最小である）、ｎ’は［ＡＤＣＣｍａｘ］／ｘ’である（ここで、ＡＤＣＣｍａｘはＡＤＣＣ活性レベルの目標範囲の最大である）。任意選択により、ｘ’は約２４．１～約２５．４である。或いは、ｘ’は約１３．０～約１３．９５である。
【0085】
本開示はさらに、ＴＡＦ％が目標範囲内である抗体組成物を製造する方法を提供し、前記方法は以下の工程を含む：（ｉ）細胞培養条件下で製造された一連の少なくとも５つの参照抗体組成物のＡＤＣＣ％及びＴＡＦグリカン％をプロットすることによって、最良適合グラフの線形方程式を生成する工程（各参照抗体組成物は、抗体組成物と同じアミノ酸配列を有する）、（ｉｉ）工程（ｉ）で生成された線形方程式及び所望のＡＤＣＣ活性％に基づいて目標ＴＡＦグリカン％範囲を選択する工程、（ｉｉｉ）細胞培養条件下で抗体組成物を培養する工程、（ｉｖ）抗体組成物を精製する工程、（ｖ）抗体組成物をサンプリングして、ＴＡＦ％を決定する工程、及び（ｖｉ）抗体組成物のＴＡＦ％が工程（ｉｉ）の目標ＴＡＦ％範囲内であるかどうかを決定する工程。例示的な態様では、方法は、工程（ｖ）で算出されたＴＡＦ％が目標ＴＡＦ％範囲内である場合に、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程をさらに含む。
【0086】
本開示はまた、抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を決定する方法を提供する。
【0087】
例示的な実施形態では、方法は、
ｉ．抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、Ｘは工程（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％である）
を使用して、ＴＡＦ％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程
を含む。
ｉ．抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、Ｘは工程（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％である）
を使用して、ＴＡＦ％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程
を含む。
【0088】
抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を決定する方法がさらに提供される。例示的な実施形態では、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
を使用して、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程
を含む。
ｉ．抗体組成物の高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
を使用して、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程
を含む。
【0089】
種々の態様では、この方法は、Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程をさらに含む。
【0090】
プロセス工程
総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、高マンノースグリカン％、及び／又は非フコシル化グリカン％を決定（例えば、測定）して、抗体組成物の抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％についてより十分な情報を提供する。決定工程（例えば、測定工程）は、製造中の任意の工程で行うことができる。特に、測定は、回収前又は回収後、キャプチャークロマトグラフィ、中間クロマトグラフィ、及び／若しくはポリッシュクロマトグラフィ単位操作；ウイルスの不活化及び中和、ウイルス濾過；並びに／又は最終製剤化を含む、任意のクロマトグラフィ単位操作などに続く下流プロセス中の任意の段階で、行うことができる。種々の態様では、総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、高マンノースグリカン％、及び／又は非フコシル化グリカン％はリアルタイム、準リアルタイム、及び／又は事後に決定（例えば、測定）される。モニタリング及び測定は、既知の手法及び市販の装置を使用して行うことができる。
総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、高マンノースグリカン％、及び／又は非フコシル化グリカン％を決定（例えば、測定）して、抗体組成物の抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％についてより十分な情報を提供する。決定工程（例えば、測定工程）は、製造中の任意の工程で行うことができる。特に、測定は、回収前又は回収後、キャプチャークロマトグラフィ、中間クロマトグラフィ、及び／若しくはポリッシュクロマトグラフィ単位操作；ウイルスの不活化及び中和、ウイルス濾過；並びに／又は最終製剤化を含む、任意のクロマトグラフィ単位操作などに続く下流プロセス中の任意の段階で、行うことができる。種々の態様では、総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、高マンノースグリカン％、及び／又は非フコシル化グリカン％はリアルタイム、準リアルタイム、及び／又は事後に決定（例えば、測定）される。モニタリング及び測定は、既知の手法及び市販の装置を使用して行うことができる。
【0091】
本開示の種々の態様において、総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、高マンノースグリカン％、及び／又は非フコシル化グリカン％を決定（例えば、測定）する工程は、回収工程の後に行われる。本明細書で使用される場合、用語「回収する（ｈａｒｖｅｓｔ）」は、目的の組換えタンパク質を含有する細胞培養培地が収集され、細胞培養物の少なくとも細胞から分離される工程を指す。回収は連続的に行うことができる。いくつかの態様では、回収は、遠心分離を使用して行われ、沈殿、濾過などをさらに含み得る。種々の態様では、決定工程は、クロマトグラフィ工程後、任意選択でプロテインＡクロマトグラフィ後に行われる。種々の態様では、決定工程は、回収後、及びクロマトグラフィ工程後、任意選択でプロテインＡクロマトグラフィ工程後に行われる。
【0092】
本開示の方法に関して、抗体組成物は、種々の態様では、さらなるプロセス工程、例えば、１つ以上の下流プロセス工程のために選択され、この選択は特定のパラメータ、例えば、ＡＤＣＣ％、％総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン、高マンノースグリカン％、及び／又は非フコシル化グリカン％に基づく。種々の例では、本明細書に開示される方法は、特定のパラメータ、例えば、ＡＤＣＣ％、総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、高マンノースグリカン％、及び／又は非フコシル化グリカン％に基づいて、さらなるプロセス工程、例えば、１つ以上の下流プロセス工程において、抗体組成物を使用する工程を含む。種々の例では、本明細書に開示される方法は、特定のパラメータ、例えば、ＡＤＣＣ％、総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、高マンノースグリカン％、及び／又は非フコシル化グリカン％に基づく抗体組成物を用いて、さらなるプロセス工程、例えば、１つ以上の下流プロセス工程を行う工程を含む。
【0093】
例示的な事例では、１つ以上の下流プロセス工程は、総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、高マンノースグリカン％、及び／又は非フコシル化グリカン％を決定（例えば、測定）するプロセス工程の後に（又は、その下流で）行われる任意のプロセス工程である。 例えば、総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、高マンノースグリカン％、及び／又は非フコシル化グリカン％が回収時に決定（例えば、測定）された場合、１つ以上の下流プロセス工程は回収工程の後に（又は、その下流で）行われる任意のプロセス工程であり、種々の態様では、以下を含む：希釈工程、充填工程、濾過工程、製剤化工程、クロマトグラフィ工程、ウイルス濾過工程、ウイルス不活化工程、又はこれらの組み合わせ。また、例えば、総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、高マンノースグリカン％、及び／又は非フコシル化グリカン％がクロマトグラフィ工程後、例えば、プロテインＡクロマトグラフィ後に決定（例えば、測定）された場合、１つ以上の下流プロセス工程はそのクロマトグラフィ工程後に（又は、その下流で）行われる任意のプロセス工程であり、種々の態様では、以下を含む：希釈工程、充填工程、濾過工程、製剤化工程、さらなるクロマトグラフィ工程、ウイルス濾過工程、ウイルス不活化工程、又はこれらの組み合わせ。例示的な事例では、さらなるクロマトグラフィ工程は、イオン交換クロマトグラフィ工程（例えば、陽イオン交換クロマトグラフィ工程又は陰イオン交換クロマトグラフィ工程）である。
【0094】
下流のプロセス中に使用されるクロマトグラフィの段階／タイプには、他のタンパク質、凝集体、ＤＮＡ、ウイルス及び他のそのような不純物から組換え産物を分離するために使用されるキャプチャークロマトグラフィ又はアフィニティークロマトグラフィが含まれる。例示的な事例では、最初のクロマトグラフィ工程はプロテインＡ（例えば、樹脂に結合したプロテインＡ）を用いて実施される。種々の態様では、中間及びポリッシュクロマトグラフィは、組換えタンパク質をさらに精製し、バルク汚染物質、外来性ウイルス、微量不純物、凝集体、アイソフォームなどを除去する。クロマトグラフィは、目的の組換えタンパク質がクロマトグラフィ媒体に結合し、不純物が流れる結合及び溶出モード、又は不純物が結合し、組換えタンパク質が流れるフロースルーモードで行うことができる。このようなクロマトグラフィ方法の例としては、陰イオン交換クロマトグラフィ（ＡＥＸ）及び陽イオン交換クロマトグラフィ（ＣＥＸ）などのイオン交換クロマトグラフィ（ＩＥＸ）；疎水性相互作用クロマトグラフィ（ＨＩＣ）；混合様式又は多様式クロマトグラフィ（ＭＭ）、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィ（ＨＡ）；逆相クロマトグラフィ及びゲル濾過が挙げられる。
【0095】
種々の態様では、下流工程は、ウイルス不活性化工程である。エンベロープウイルスは、リポタンパク質膜又は「エンベロープ」で囲まれたカプシドを有し、したがって、不活化を受けやすい。種々の例では、ウイルス不活化工程として、熱不活化／低温殺菌、ｐＨ不活化、ＵＶ及びガンマ線照射、高強度広域スペクトル白色光の使用、化学不活化剤の添加、界面活性物質、及び溶媒／界面活性剤処理が挙げられる。
【0096】
種々の態様では、下流工程はウイルス濾過工程である。種々の態様では、ウイルス濾過工程は、ノンエンベロープウイルスを除去する工程を含む。種々の態様では、ウイルス濾過工程は、マイクロフィルター又はナノフィルターの使用を含む。
【0097】
種々の態様では、下流プロセス工程は、１つ以上の製剤化工程を含む。種々の態様では、クロマトグラフィ工程の完了後、精製された組換えタンパク質は、製剤化バッファにバッファ交換される。例示的な態様では、バッファ交換は、限外濾過及びダイアフィルトレーション（ＵＦ／ＤＦ）を使用して行われる。例示的な態様では、組換えタンパク質は、ダイアフィルトレーションを用いて所望の製剤化バッファにバッファ交換され、限外濾過を用いて所望の最終製剤濃度に濃縮される。種々の態様では、ＵＦ／ＤＦ製剤化工程に続いて、さらなる安定性増強賦形剤が添加される。
【0098】
組換えグリコシル化タンパク質
本開示の方法は、組換えグリコシル化タンパク質を含む組成物に関する。種々の態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、式：
Ａｓｎ－Ｘａａ１－Ｘａａ２
（式中、Ｘａａ１はＰｒｏを除く任意のアミノ酸であり、Ｘａａ２はＳｅｒ又はＴｈｒである）
の１つ以上のＮ－グリコシル化コンセンサス配列を含むアミノ酸配列を含む。
本開示の方法は、組換えグリコシル化タンパク質を含む組成物に関する。種々の態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、式：
Ａｓｎ－Ｘａａ１－Ｘａａ２
（式中、Ｘａａ１はＰｒｏを除く任意のアミノ酸であり、Ｘａａ２はＳｅｒ又はＴｈｒである）
の１つ以上のＮ－グリコシル化コンセンサス配列を含むアミノ酸配列を含む。
【0099】
例示的な実施形態では、組換えグリコシル化タンパク質は、結晶性断片（Ｆｃ）ポリペプチドを含む。「Ｆｃポリペプチド」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体のＦｃ領域由来のポリペプチドの天然及びムテイン形態を含む。二量体化を促進するヒンジ領域を含有するこのようなポリペプチドのトランケート型も含まれる。Ｆｃ部分（及びそれから形成されるオリゴマー）を含む融合タンパク質は、プロテインＡ又はプロテインＧカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィによる容易な精製の長所をもたらす。例示的な実施形態では、組換えグリコシル化タンパク質は、ＩｇＧ、例えば、ヒトＩｇＧのＦｃを含む。例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、ＩｇＧ１又はＩｇＧ２のＦｃを含む。例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、抗体、抗体タンパク質生成物、ペプチボディ、又はＦｃ－融合タンパク質である。
【0100】
例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は抗体である。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、重鎖及び軽鎖を含み、且つ可変領域及び定常領域を含む、従来の免疫グロブリン型を有するタンパク質を指す。例えば、抗体は、ポリペプチド鎖の２つの同一のペアからなるの「Ｙ型」構造であるＩｇＧであり得、各ペアは、１本の「軽」鎖（一般的には分子量が約２５ｋＤａ）及び１本の「重」鎖（一般的には分子量が約５０～７０ｋＤａ）を有する。抗体は、可変領域及び定常領域を有する。ＩｇＧ構造では、可変領域は、一般に約１００～１１０個以上のアミノ酸であり、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、主に抗原認識に関与し、異なる抗原に結合する他の抗体間において実質的に異なる。例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇｅｎｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ，４ｔｈ ｅｄ．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．／Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，（１９９９）を参照されたい。
【0101】
簡潔に説明すると、抗体の骨格において、ＣＤＲは、重鎖及び軽鎖の可変領域中のフレームワーク内に埋め込まれており、そこで抗原結合及び抗原認識に大きい役割を果たす領域を構成する。可変領域は、少なくとも３つの重鎖又は軽鎖のＣＤＲを含み（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎ．Ｉ．Ｈ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３も参照されたい）、これらは、フレームワーク領域（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１によりフレームワーク領域１～４、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４と呼ばれている；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７、前掲も参照されたい）内にある。
【0102】
ヒト軽鎖は、カッパ及びラムダ軽鎖として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ又はイプシロンに分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥと定義する。ＩｇＧはいくつかのサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４が挙げられるが、これらに限定されない）を有する。ＩｇＭはサブクラス（例えば、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２が挙げられるが、これらに限定されない）を有する。本開示の実施形態は、抗体の全てのこのようなクラス又はアイソタイプを含む。軽鎖定常領域は、例えば、カッパ型又はラムダ型の軽鎖定常領域、例えばヒトカッパ型又はヒトラムダ型の軽鎖定常領域であり得る。重鎖定常領域は、例えば、アルファ型、デルタ型、イプシロン型、ガンマ型又はミュー型の重鎖定常領域、例えばヒトアルファ型、ヒトデルタ型、ヒトイプシロン型、ヒトガンマ型又はヒトミュー型の重鎖定常領域であり得る。したがって、例示的な実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のいずれか１つを含むアイソタイプＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ又はＩｇＭの抗体である。
【0103】
種々の態様では、抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であり得る。例示的な事例では、抗体は、哺乳動物抗体、例えば、マウス抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、ヤギ抗体、ウマ抗体、ニワトリ抗体、ハムスター抗体、ブタ抗体、ヒト抗体などである。特定の態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、モノクローナルヒト抗体である。
【0104】
抗体は、種々の態様では、例えば、パパイン及びペプシンなどの酵素により断片へ切断される。パパインは、抗体を切断して、２個のＦａｂ断片及び１個のＦｃ断片を生じる。ペプシンは、抗体を切断して、Ｆ（ａｂ’）２断片及びｐＦｃ’断片を生じる。例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、少なくとも１個のグリコシル化部位を保持する抗体断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆｃ、Ｆ（ａｂ’）２又はｐＦｃ’である。本開示の方法に関して、抗体は、抗体のある特定の部分を欠く場合があり、抗体断片であってもよい。種々の態様では、抗体断片は、グリコシル化部位を含む。いくつかの態様では、断片は、真核細胞において翻訳後修飾によりグリコシル化される抗体のＦｃ領域の少なくとも一部を含む「グリコシル化Ｆｃ断片」である。種々の例では、組換えグリコシル化タンパク質はグリコシル化Ｆｃ断片である。
【0105】
少なくとも又は約１２～１５０ｋＤａの分子量範囲及び単量体（ｎ＝１）、二量体（ｎ＝２）及び三量体（ｎ＝３）から四量体（ｎ＝４）及び場合によってはそれより高い結合価（ｎ）範囲に広がる代替的な抗体形式の範囲を増大させるために抗体の構造が利用されており、このような代替的な抗体形式は、本明細書では「抗体タンパク質生成物」又は「抗体結合タンパク質」と呼ばれる。
【0106】
抗体タンパク質生成物は、完全な抗原結合能を保持する、抗体断片、例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ及びＶＨＨ／ＶＨに基づく抗原結合形式であってもよい。その完全な抗原結合部位を保持する最小の抗原結合断片はＦｖ断片であり、これは完全に可変（Ｖ）領域からなる。可溶性で柔軟なアミノ酸ペプチドリンカーを使用して、Ｖ領域をｓｃＦｖ（単鎖可変断片）断片に連結させて分子を安定化させるか、又は定常（Ｃ）ドメインをＶ領域に加えて、Ｆａｂ断片［断片、抗原結合性］を生成する。ｓｃＦｖ及びＦａｂの両方は、原核宿主において容易に作製され得る広く使用される断片である。他の抗体タンパク質生成物としては、オリゴマー化ドメインに連結されるｓｃＦｖからなる異なる形式を含むダイアボディ、トリアボディ及びテトラボディ又はミニボディ（ミニＡｂ）のようなジスルフィド結合で安定化されるｓｃＦｖ（ｄｓ－ｓｃＦｖ）、単鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）並びに二量体及び多量体抗体形式が挙げられる。最小の断片は、ラクダ類重鎖Ａｂ及び単一ドメインＡｂ（ｓｄＡｂ）のＶＨＨ／ＶＨである。新規の抗体型を作製するために最も頻繁に使用される構築ブロックは、約１５個のアミノ酸残基のペプチドリンカーにより連結された重鎖及び軽鎖由来のＶドメイン（ＶＨドメイン及びＶＬドメイン）を含む単鎖可変（Ｖ）ドメイン抗体断片（ｓｃＦｖ）である。ペプチボディ又はペプチド－Ｆｃ融合体は、さらに別の抗体タンパク質生成物である。ペプチボディの構造は、Ｆｃドメインにグラフトされた生物学的に活性なペプチドからなる。ペプチボディは、当該技術分野で十分に説明されている。例えば、Ｓｈｉｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ ４（５）：５８６－５９１（２０１２）を参照されたい。
【0107】
他の抗体タンパク質生成物としては、単鎖抗体（ＳＣＡ）、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ及び二重特異性抗体又は三重特異性抗体などが挙げられる。二重特異性抗体は、次の５つの主要なクラスに分類され得る：ＢｓＩｇＧ、付加ＩｇＧ、ＢｓＡｂ断片、二重特異性融合タンパク質及びＢｓＡｂコンジュゲート。例えば、Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７（２）Ｐａｒｔ Ａ：９７－１０６（２０１５）を参照されたい。
【0108】
例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、これらの抗体タンパク質生成物（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ ＶＨＨ／ＶＨ、Ｆｖ断片、ｄｓ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、二量体抗体、多量体抗体（例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ）、ミニＡｂ、ラクダ科動物の重鎖抗体のペプチボディＶＨＨ／ＶＨ、ｓｄＡｂ、ダイアボディ；トリアボディ；テトラボディ；二重特異性又は三重特異性抗体、ＢｓＩｇＧ、付加ＩｇＧ、ＢｓＡｂ断片、二重特異性融合タンパク質、及びＢｓＡｂコンジュゲート）のいずれか１つを含み、且つ１つ以上のＮ－グリコシル化コンセンサス配列、任意選択により、１つ以上のＦｃポリペプチドを含む。種々の態様では、抗体断片は、グリコシル化部位を含む。例示的な態様では、抗体タンパク質生成物は、抗体結合断片にコンジュゲートされたグリコシル化Ｆｃ断片（「グリコシル化Ｆｃ断片抗体生成物」）であってもよい。
【0109】
組換えグリコシル化タンパク質は、単量体形態、又は重合体、オリゴマー、若しくは多量体形態の抗体タンパク質生成物であり得る。抗体が２つ以上の個別の抗原結合領域断片を含む特定の実施形態では、抗体は、抗体により認識され、結合される個別のエピトープの数に依って、二重特異性、三重特異性若しくは多重特異性、又は二価、三価若しくは多価とみなされる。
【0110】
種々の態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、キメラ抗体又はヒト化抗体である。「キメラ抗体」という用語は、本明細書では、ある１つの種由来の定常ドメイン及び第２の種由来の可変ドメインを含有するか、又はより一般には少なくとも２種由来のアミノ酸配列のストレッチを含有する抗体を指すために使用される。「ヒト化」という用語は、抗体に関して使用される場合、元の起源の抗体よりも真のヒト抗体と類似している構造及び免疫学的機能を有するように操作されている非ヒト起源由来の少なくともＣＤＲ領域を有する抗体を指す。例えば、ヒト化は、マウス抗体などの非ヒト抗体由来のＣＤＲをヒト抗体に移植することを含み得る。ヒト化はまた、非ヒト配列をよりヒト配列に見えるようにするためのアミノ酸置換の選択を含み得る。
【0111】
例示的な態様では、抗体組成物の抗体は１つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合し、任意選択で、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約１３．５％±０．５％である。種々の態様では、抗体組成物の抗体は２つの抗体結合部位のみを含む抗原に結合し、任意選択で、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦ毎に約２４．７４％±０．６２５％である。例示的な態様では、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％ＴＡＦ毎に約１２％±１．５％×Ｑであり、Ｑは、抗原上に存在する抗体結合部位の数である。例示的な事例では、Ｑは１であり、任意選択で、抗体はインフリキシマブ又はそのバイオシミラーである。任意選択で、Ｑは２であり、任意選択で、抗体はリツキシマブ又はそのバイオシミラーである。種々の態様では、Ｑは３であり、したがって、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦグリカン含量毎に約３６％～約４０．５％である。また、いくつかの例では、Ｑは４であり、したがって、抗体組成物のＡＤＣＣ活性レベルは、抗体組成物中に存在する１％のＴＡＦグリカン含量毎に約４８％～約５４％である。
【0112】
有利には、本方法は、抗体、グリコシル化Ｆｃ断片、抗体タンパク質生成物、キメラ抗体、又はヒト化抗体の抗原特異性に限定されない。したがって、抗体、グリコシル化Ｆｃ断片、抗体タンパク質生成物、キメラ抗体、又はヒト化抗体は、実質的に任意の抗原に対して任意の結合特異性を有する。例示的な態様では、抗体は、ホルモン、増殖因子、サイトカイン、細胞表面受容体又はその任意のリガンドに結合する。例示的な態様では、抗体は、免疫細胞の細胞表面に発現するタンパク質に結合する。例示的な態様では、抗体は、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１１Ｂ、ＣＤ１１Ｃ、ＣＤｗ１２、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１５ｓ、ＣＤ１６、ＣＤｗ１７、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１，ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４２ａ、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ４２ｃ、ＣＤ４２ｄ、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤｗ６０、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６５、ＣＤ６６ａ、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ６６ｃ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ６６ｆ、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７６、ＣＤ７９α、ＣＤ７９β、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８７、ＣＤ８８、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ９１、ＣＤｗ９２、ＣＤ９３、ＣＤ９４、ＣＤ９５、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤ１００、ＣＤ１０１、ＣＤ１０２、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、ＣＤｗ１０８、ＣＤ１０９、ＣＤ１１４、ＣＤ１１５、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１１８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１２１ａ、ＣＤｗ１２１ｂ、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１２８、ＣＤ１２９、ＣＤ１３０、ＣＤｗ１３１、ＣＤ１３２、ＣＤ１３４、ＣＤ１３５、ＣＤｗ１３６、ＣＤｗ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１３９、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１４１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４３、ＣＤ１４４、ＣＤ１４５、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ１５１、ＣＤ１５２、ＣＤ１５３、ＣＤ１５４、ＣＤ１５５、ＣＤ１５６、ＣＤ１５７、ＣＤ１５８ａ、ＣＤ１５８ｂ、ＣＤ１６１、ＣＤ１６２、ＣＤ１６３、ＣＤ１６４、ＣＤ１６５、ＣＤ１６６、及びＣＤ１８２からなる群から選択される表面抗原分類分子に結合する。
【0113】
例示的な態様では、抗体、グリコシル化Ｆｃ断片、抗体タンパク質生成物、キメラ抗体、又はヒト化抗体は、米国特許第７９４７８０９号明細書及び米国特許出願公開第２００９００４１７８４号明細書（グルカゴン受容体）、米国特許第７９３９０７０号明細書、米国特許第７８３３５２７号明細書、米国特許第７７６７２０６号明細書及び米国特許第７７８６２８４号明細書（ＩＬ－１７受容体Ａ）、米国特許第７８７２１０６号明細書及び米国特許第７５９２４２９号明細書（スクレロスチン）、米国特許第７８７１６１１号明細書、米国特許第７８１５９０７号明細書、米国特許第７０３７４９８号明細書、米国特許第７７００７４２号明細書及び米国特許出願公開第２０１００２５５５３８号明細書（ＩＧＦ－１受容体）、米国特許第７８６８１４０号明細書（Ｂ７ＲＰ１）、米国特許第７８０７１５９号明細書及び米国特許出願公開第２０１１００９１４５５号明細書（ミオスタチン）、米国特許第７７３６６４４号明細書、米国特許第７６２８９８６号明細書、米国特許第７５２４４９６号明細書及び米国特許出願公開第２０１００１１１９７９号明細書（上皮成長因子受容体の欠失変異体）、米国特許第７７２８１１０（ＳＡＲＳコロナウイルス）、米国特許第７７１８７７６号明細書及び米国特許出願公開第２０１００２０９４３５号明細書（ＯＰＧＬ）、米国特許第７６５８９２４号明細書及び米国特許第７５２１０５３号明細書（アンジオポイエチン２）、米国特許第７６０１８１８号明細書、米国特許第７７９５４１３号明細書、米国特許出願公開第２００９０１５５２７４号明細書、米国特許出願公開第２０１１００４００７６号明細書（ＮＧＦ）、米国特許第７５７９１８６号明細書（ＴＧＦ－βＩＩ型受容体）、米国特許第７５４１４３８号明細書（結合組織増殖因子）、米国特許第７４３８９１０号明細書（ＩＬ１－Ｒ１）、米国特許第７４２３１２８号明細書（ｐｒｏｐｅｒｄｉｎ）、米国特許第７４１１０５７号明細書、米国特許第７８２４６７９号明細書、米国特許第７１０９００３号明細書、米国特許第６６８２７３６号明細書、米国特許第７１３２２８１号明細書及び米国特許第７８０７７９７号明細書（ＣＴＬＡ－４）、米国特許第７０８４２５７号明細書、米国特許第７７９０８５９号明細書、米国特許第７３３５７４３号明細書、米国特許第７０８４２５７号明細書及び米国特許出願公開第２０１１００４５５３７号明細書（インターフェロン－ガンマ）、米国特許第７９３２３７２（ＭＡｄＣＡＭ）号明細書、米国特許第７９０６６２５号明細書、米国特許出願公開第２００８０２９２６３９号明細書及び米国特許出願公開第２０１１００４４９８６号明細書（アミロイド）、米国特許第７８１５９０７号明細書及び米国特許第７７００７４２号明細書（インシュリン用成長因子Ｉ）、米国特許第７５６６７７２号明細書及び米国特許第７９６４１９３号明細書（インターロイキン１β）、米国特許第７５６３４４２号明細書、米国特許第７２８８２５１号明細書、米国特許第７３３８６６０号明細書、米国特許第７６２６０１２号明細書、米国特許第７６１８６３３号明細書及び米国特許出願公開第２０１０００９８６９４号明細書（ＣＤ４０）、米国特許第７４９８４２０号明細書（ｃ－Ｍｅｔ）、米国特許第７３２６４１４号明細書、米国特許第７５９２４３０号明細書及び米国特許第７７２８１１３号明細書（Ｍ－ＣＳＦ）、米国特許第６９２４３６０号明細書、米国特許第７０６７１３１号明細書及び米国特許第７０９０８４４号明細書（ＭＵＣ１８）、米国特許第６２３５８８３号明細書、米国特許第７８０７７９８号明細書及び米国特許出願公開第２０１００３０５３０７号明細書（上皮成長因子受容体）、米国特許第６７１６５８７号明細書、米国特許第７８７２１１３号明細書、米国特許第７４６５４５０号明細書、米国特許第７１８６８０９号明細書、米国特許第７３１７０９０号明細書及び米国特許第７６３８６０６（インターロイキン４受容体）、米国特許出願公開第２０１１０１３５６５７号明細書（ベータ－クロトー）、米国特許第７８８７７９９号明細書及び米国特許第７８７９３２３号明細書（線維芽細胞増殖因子様ポリペプチド）、米国特許第７８６７４９４号明細書（ＩｇＥ）、米国特許出願公開第２０１００２５４９７５号明細書（アルファ－４ベータ－７）、米国特許出願公開第２０１００１９７００５号明細書及び米国特許第７５３７７６２号明細書（アクチビン受容体様キナーゼ１）、米国特許第７５８５５００号明細書及び米国特許出願公開第２０１０００４７２５３号明細書（ＩＬ－１３）、米国特許出願公開第２００９０２６３３８３号明細書及び米国特許第７４４９５５５号明細書（ＣＤ１４８）、米国特許出願公開第２００９０２３４１０６号明細書（アクチビンＡ）、米国特許出願公開第２００９０２２６４４７号明細書（アンジオポイエチン１及びアンジオポイエチン２）、米国特許出願公開第２００９０１９１２１２号明細書（アンジオポイエチン２）、米国特許出願公開第２００９０１５５１６４号明細書（Ｃ－ＦＭＳ）、米国特許第７５３７７６２号明細書（アクチビン受容体様キナーゼ１）、米国特許第７３７１３８１号明細書（ガラニン）、米国特許出願公開第２００７０１９６３７６号明細書（インシュリン用成長因子）、米国特許第７２６７９６０号明細書及び米国特許第７７４１１１５号明細書（ＬＤＣＡＭ）、ＵＳ７２６５２１２（ＣＤ４５ＲＢ）、米国特許第７７０９６１１号明細書、米国特許出願公開第２００６０１２７３９３号明細書及び米国特許出願公開第２０１０００４０６１９号明細書（ＤＫＫ１）、米国特許第７８０７７９５号明細書、米国特許出願公開第２００３０１０３９７８号明細書及び米国特許第７９２３００８号明細書（オステオプロテゲリン）、米国特許出願公開第２００９０２０８４８９号明細書（ＯＶ０６４）、米国特許出願公開第２００８０２８６２８４号明細書（ＰＳＭＡ）、米国特許第７８８８４８２、米国特許出願公開第２０１１０１６５１７１号明細書及び米国特許出願公開第２０１１００５９０６３号明細書（ＰＡＲ２）、米国特許出願公開第２０１１０１５０８８８号明細書（ヘプシジン）、米国特許第７９３９６４０号明細書（Ｂ７Ｌ－１）、米国特許第７９１５３９１号明細書（ｃ－Ｋｉｔ）、米国特許第７８０７７９６号明細書、米国特許第７１９３０５８号明細書及び米国特許第７４２７６６９号明細書（ＵＬＢＰ）、米国特許第７７８６２７１号明細書、米国特許第７３０４１４４号明細書及び米国特許出願公開第２００９０２３８８２３号明細書（ＴＳＬＰ）、米国特許第７７６７７９３号明細書（ＳＩＧＩＲＲ）、米国特許第７７０５１３０号明細書（ＨＥＲ－３）、米国特許第７７０４５０１号明細書（アタキシン１様ポリペプチド）、米国特許第７６９５９４８号明細書及び米国特許第７１９９２２４（ＴＮＦ－α変換酵素）、米国特許出願公開第２００９０２３４１０６号明細書（アクチビンＡ）、米国特許出願公開第２００９０２１４５５９号明細書及び米国特許第７４３８９１０号明細書（ＩＬ１－Ｒ１）、米国特許第７５７９１８６号明細書（ＴＧＦ－βＩＩ型受容体）、米国特許第７５６９３８７号明細書（ＴＮＦ受容体様分子）、米国特許第７５４１４３８号明細書（結合組織増殖因子）、米国特許第７５２１０４８号明細書（ＴＲＡＩＬ受容体２）、米国特許第６３１９４９９号明細書、米国特許第７０８１５２３号明細書及び米国特許出願公開第２００８０１８２９７６号明細書（エリスロポイエチン受容体）、米国特許出願公開第２００８０１６６３５２号明細書及び米国特許第７４３５７９６号明細書（Ｂ７ＲＰ１）、米国特許第７４２３１２８号明細書（プロペルジン）、米国特許第７４２２７４２号明細書及び米国特許第７１４１６５３号明細書（インターロイキン５）、米国特許第６７４０５２２号明細書及び米国特許第７４１１０５０号明細書（ＲＡＮＫＬ）、米国特許第７３７８０９１号明細書（炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡ ＩＸ）腫瘍抗原）、米国特許第７３１８９２５号明細書及び米国特許第７２８８２５３号明細書（副甲状腺ホルモン）、米国特許第７２８５２６９号明細書（ＴＮＦ）、米国特許第６６９２７４０号明細書及び米国特許第７２７０８１７号明細書（ＡＣＰＬ）、米国特許第７２０２３４３号明細書（単球走化性タンパク質１）、米国特許第７１４４７３１号明細書（ＳＣＦ）、米国特許第６３５５７７９号明細書及び米国特許第７１３８５００号明細書（４－１ＢＢ）、米国特許第７１３５１７４号明細書（ＰＤＧＦＤ）、米国特許第６６３０１４３号明細書及び米国特許第７０４５１２８号明細書（Ｆｌｔ－３リガンド）、米国特許第６８４９４５０号明細書（メタロプロテアーゼ阻害剤）、米国特許第６５９６８５２号明細書（ＬＥＲＫ－５）、米国特許第６２３２４４７号明細書（ＬＥＲＫ－６）、米国特許第６５００４２９号明細書（脳由来神経栄養因子）、米国特許第６１８４３５９号明細書（上皮由来Ｔ細胞因子）、米国特許第６１４３８７４号明細書（神経栄養因子ＮＮＴ－１）、米国特許出願公開第２０１１００２７２８７号明細書（プロタンパク質転換酵素サブチリシン・ケキシン９型（ＰＣＳＫ９））、米国特許出願公開第２０１１００１４２０１号明細書（ＩＬ－１８ＲＥＣＥＰＴＯＲ）及び米国特許出願公開第２００９０１５５１６４号明細書（Ｃ－ＦＭＳ）に記載されている抗体の１つである。上記の特許及び公開特許出願は、可変ドメインポリペプチド、可変ドメインをコードする核酸、宿主細胞、ベクター、前記の可変ドメインをコードするポリペプチドを作製する方法、医薬組成物、及び可変ドメイン含有抗原結合タンパク質又は抗体の個々の標的に付随する疾患を処置する方法のそれらの開示の目的のために、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0114】
例示的な実施形態では、グリコシル化Ｆｃ断片、抗体タンパク質生成物、キメラ抗体、又はヒト化抗体は、ムロモナブ－ＣＤ３（商品名Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ Ｏｋｔ３（登録商標）で市販の製品）、アブシキシマブ（商品名Ｒｅｏｐｒｏ（登録商標）で市販の製品）、リツキシマブ（商品名ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）で市販の製品）、バシリキシマブ（商品名Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標）で市販の製品）、ダクリズマブ（商品名Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標）で市販の製品）、パリビズマブ（商品名Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）で市販の製品）、インフリキシマブ（商品名Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）で市販の製品）、トラスツズマブ（商品名Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）で市販の製品）、アレムツズマブ（商品名ＭａｂＣａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｃａｍｐａｔｈ－１Ｈ（登録商標）で市販の製品）、アダリムマブ（商品名Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）で市販の製品）、トシツモマブ－Ｉ１３１（商品名Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）で市販の製品）、エファリズマブ（商品名Ｒａｐｔｉｖａ（登録商標）で市販の製品）、セツキシマブ（商品名Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）で市販の製品）、イブリツモマブチウキセタン（商品名Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）で市販の製品）、オマリズマブ（商品名Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）で市販の製品）、ベバシズマブ（商品名Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）で市販の製品）、ナタリズマブ（商品名Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）で市販の製品）、ラニビズマブ（商品名Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）で市販の製品）、パニツムマブ（商品名Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）で市販の製品）、エクリズマブ（商品名Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標）で市販の製品）、セルトリズマブペゴル（商品名Ｃｉｍｚｉａ（登録商標）で市販の製品）、ゴリムマブ（商品名Ｓｉｍｐｏｎｉ（登録商標）で市販の製品）、カナキヌマブ（商品名Ｉｌａｒｉｓ（登録商標）で市販の製品）、カツマキソマブ（商品名Ｒｅｍｏｖａｂ（登録商標）で市販の製品）、ウステキヌマブ（商品名Ｓｔｅｌａｒａ（登録商標）で市販の製品）、トシリズマブ（商品名ＲｏＡｃｔｅｍｒａ（登録商標）、Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標）で市販の製品）、オファツムマブ（商品名Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標）で市販の製品）、デノスマブ（商品名Ｐｒｏｌｉａ（登録商標）で市販の製品）、ベリムマブ（商品名Ｂｅｎｌｙｓｔａ（登録商標）で市販の製品）、ラキシバクマブ、イピリムマブ（商品名Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）で市販の製品）及びペルツズマブ（商品名Ｐｅｒｊｅｔａ（登録商標）で市販の製品）のうちの１つである。例示的な実施形態では、抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト、ゴリムマブ、及びセルトリズマブペゴルなどの抗ＴＮＦアルファ抗体；カナキヌマブなどの抗ＩＬ１．ベータ抗体；ウステキヌマブ及びブリアキヌマブなどの抗ＩＬ１２／２３（ｐ４０）抗体；並びにダクリズマブなどの抗ＩＬ２Ｒ抗体のうちの１つである。
【0115】
例示的な態様では、抗体は、腫瘍関連抗原に結合し、且つ抗癌抗体である。好適な抗癌抗体の例としては、ベリムマブなどの抗ＢＡＦＦ抗体；リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体；エプラツズマブなどの抗ＣＤ２２抗体；ダクリズマブなどの抗ＣＤ２５抗体；イラツムマブなどの抗ＣＤ３０抗体、ゲムツズマブなどの抗ＣＤ３３抗体、アレムツズマブなどの抗ＣＤ５２抗体；イピリムマブなどの抗ＣＤ１５２抗体；セツキシマブなどの抗ＥＧＦＲ抗体；トラスツズマブ及びペルツズマブなどの抗ＨＥＲ２抗体；シルツキシマブなどの抗ＩＬ６抗体；並びにベバシズマブなどの抗ＶＥＧＦ抗体；トシリズマブなどの抗ＩＬ６受容体抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【0116】
例示的な態様では、腫瘍関連抗原はＣＤ２０であり、抗体は抗ＣＤ２０抗体、例えば抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。例示的な態様では、腫瘍関連抗原は、配列番号３を含む。例示的な事例では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列及び配列番号２のアミノ酸配列を含む。種々の態様では、ＩｇＧ１抗体は、リツキシマブ、又はそのバイオシミラーである。リツキシマブという用語は、ＣＤ２０抗原に結合するＩｇＧ１カッパキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体を指す（ＣＡＳ番号：１７４７２２－３１－７；ＤｒｕｇＢａｎｋ－ＤＢ０００７３；京都遺伝子ゲノム百科事典（ＫＥＧＧ）エントリーＤ０２９９４を参照）。例示的な態様では、抗体は、表Ａに記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖を含む。例示的な態様では、抗体は、表Ａに記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖を含む。種々の例では、抗体は、表Ａに列挙されるＶＨ及びＶＬを含むか又はＶＨ－ＩｇＧ１及びＶＬ－ＩｇＧカッパ配列を含む。
【0117】
【表A】
【0118】
種々の態様では、抗体は以下を含む：
ｉ．配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号４の変異アミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号５のアミノ酸配列、又は配列番号５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号５の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ２、
ｉｉｉ．配列番号６のアミノ酸配列、又は配列番号６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号６の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ３、
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列、又は配列番号７と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号７の変異アミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、
ｖ．配列番号８のアミノ酸配列、又は配列番号８と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号８の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ２、
ｖｉ．配列番号９のアミノ酸配列、又は配列番号９と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号９の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ３。
ｉ．配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号４の変異アミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号５のアミノ酸配列、又は配列番号５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号５の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ２、
ｉｉｉ．配列番号６のアミノ酸配列、又は配列番号６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号６の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ３、
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列、又は配列番号７と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号７の変異アミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、
ｖ．配列番号８のアミノ酸配列、又は配列番号８と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号８の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ２、
ｖｉ．配列番号９のアミノ酸配列、又は配列番号９と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号９の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ３。
【0119】
種々の例では、抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１０と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１０の変異アミノ酸配列を含むＬＣ可変領域を含む。
【0120】
例示的な態様では、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列、配列番号１１と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１１の変異アミノ酸配列を含むＨＣ可変領域を含む。
【0121】
例示的な事例では、抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１２の変異アミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【0122】
種々の態様では、抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列、配列番号１３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１３の変異アミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【0123】
例示的な態様では、抗体の抗原はＴＮＦαであり、抗体は抗ＴＮＦα抗体（簡潔さのために、単に「抗ＴＮＦ」抗体とも呼ばれ得る）、例えば、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体である。例示的な態様では、抗体の抗原は、配列番号１４を含む。種々の態様では、ＩｇＧ１抗体は、インフリキシマブ、又はそのバイオシミラーである。インフリキシマブという用語は、ヒト定常領域及びマウス可変領域から構成され、ＴＮＦα抗原に結合するキメラモノクローナルＩｇＧ１カッパ抗体を指す（ＣＡＳ番号：１７０２７７－３１－３、ＤｒｕｇＢａｎｋアクセッション番号ＤＢ０００６５を参照）。キメラ抗体ｃＡ２としても知られるインフリキシマブは、Ａ２と呼ばれるマウスモノクローナル抗体に由来した（Ｋｎｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３０（１６）：１４４３－１４５３（１９９３））。ｃＡ２軽鎖の可変領域は、国際公開第２００６／０６５９７５号パンフレットに公開されている。例示的な態様では、抗体は、表Ｂに記載されるインフリキシマブの軽鎖の可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖を含む。例示的な態様では、抗体は、表Ｂに記載されるインフリキシマブの重鎖の可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖を含む。種々の例では、抗体は、インフリキシマブのＶＨ及びＶＬを含むか又はＶＨ－ＩｇＧ１及びＶＬ－ＩｇＧカッパ配列を含む。
【0124】
【表B】
【0125】
種々の例では、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列、配列番号１５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１５の変異アミノ酸配列を含むＬＣ可変領域を含む。例示的な態様では、抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１６の変異アミノ酸配列を含むＨＣ可変領域を含む。
【0126】
組成物
本開示の方法は、組換えグリコシル化タンパク質を含む組成物に関する。種々の態様では、組成物は、１つの型の組換えグリコシル化タンパク質のみを含む。種々の例では、組成物は、組成物の各組換えグリコシル化タンパク質が同一か又は実質的に同一のアミノ酸配列を含む組換えグリコシル化タンパク質を含む。種々の態様では、組成物は組換えグリコシル化タンパク質を含み、組成物の各組換えグリコシル化タンパク質は、組成物の他の全ての組換えグリコシル化タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。種々の態様では、組成物は組換えグリコシル化タンパク質を含み、組成物の各組換えグリコシル化タンパク質が組成物の他の全ての組換えグリコシル化タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。種々の態様では、組成物は組換えグリコシル化タンパク質を含み、組成物の各組換えグリコシル化タンパク質は同一の又は実質的に同一の（例えば、組成物の他の全ての組換えグリコシル化タンパク質のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の）アミノ酸配列を含むが、組成物の組換えグリコシル化タンパク質のグリコプロファイルは互いに相異し得る。
本開示の方法は、組換えグリコシル化タンパク質を含む組成物に関する。種々の態様では、組成物は、１つの型の組換えグリコシル化タンパク質のみを含む。種々の例では、組成物は、組成物の各組換えグリコシル化タンパク質が同一か又は実質的に同一のアミノ酸配列を含む組換えグリコシル化タンパク質を含む。種々の態様では、組成物は組換えグリコシル化タンパク質を含み、組成物の各組換えグリコシル化タンパク質は、組成物の他の全ての組換えグリコシル化タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。種々の態様では、組成物は組換えグリコシル化タンパク質を含み、組成物の各組換えグリコシル化タンパク質が組成物の他の全ての組換えグリコシル化タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。種々の態様では、組成物は組換えグリコシル化タンパク質を含み、組成物の各組換えグリコシル化タンパク質は同一の又は実質的に同一の（例えば、組成物の他の全ての組換えグリコシル化タンパク質のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の）アミノ酸配列を含むが、組成物の組換えグリコシル化タンパク質のグリコプロファイルは互いに相異し得る。
【0127】
例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は抗体断片であり、したがって、組成物は抗体断片組成物であり得る。
【0128】
例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は抗体タンパク質生成物であり、したがって、組成物は抗体タンパク質生成物組成物であり得る。
【0129】
例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質はグリコシル化Ｆｃ断片であり、したがって、組成物はグリコシル化Ｆｃ断片組成物であり得る。
【0130】
例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質はグリコシル化Ｆｃ断片抗体生成物であり、したがって、組成物はグリコシル化Ｆｃ断片抗体生成物組成物であり得る。
【0131】
例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質はキメラ抗体であり、したがって、組成物はキメラ抗体組成物であり得る。
【0132】
例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質はヒト化抗体であり、したがって、組成物はヒト化抗体組成物であり得る。
【0133】
例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は抗体であり、組成物は抗体組成物である。種々の態様では、組成物は、１つの型の抗体のみを含む。種々の例では、組成物は抗体を含み、抗体組成物の各抗体は、同一又は実質的に同一のアミノ酸配列を含む。種々の態様では、抗体組成物は抗体を含む、抗体組成物の各抗体は、抗体組成物の他の全ての抗体のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。種々の態様では、抗体組成物は抗体を含み、抗体組成物の各抗体は、抗体組成物の他の全ての抗体のアミノ酸配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。種々の態様では、抗体組成物は抗体を含み、組成物の各組換えグリコシル化タンパク質は同一の又は実質的に同一の（例えば、抗体組成物の他の全ての抗体のタンパク質のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の）アミノ酸配列を含むが、抗体組成物の抗体のグリコプロファイルは互いに相異し得る。例示的な態様では、抗体組成物は、抗体の異なるグリコフォームの不均一な混合物を含む。種々の例では、抗体組成物は、そのＴＡＦグリカン含量、ＨＭグリカン含量及び／又はそのＡＦグリカン含量に関して特徴付けられ得る。種々の態様では、抗体組成物は、ＴＡＦグリカン％、ＨＭグリカン％、及び／又は非フコシル化グリカン％に関して記載される。任意選択により、抗体組成物は、他の型のグリカン、例えば、ガラクトシル化グリコフォーム、フコシル化グリコフォームなどのその含有量に関して特徴付けられ得る。
【0134】
種々の態様では、抗体組成物の各抗体は、ＩｇＧ、任意選択で、ＩｇＧ１である。例示的な事例では、抗体組成物の各抗体は腫瘍関連抗原、例えばＣＤ２０に結合する。種々の態様では、ＣＤ２０は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。例示的な態様では、抗体組成物の各抗体は、抗ＣＤ２０抗体である。種々の例では、抗体組成物の各抗体は、以下を含む：
ｉ．配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号４の変異アミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号５のアミノ酸配列、又は配列番号５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号５の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ２、
ｉｉｉ．配列番号６のアミノ酸配列、又は配列番号６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号６の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ３、
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列、又は配列番号７と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号７の変異アミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、
ｖ．配列番号８のアミノ酸配列、又は配列番号８と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号８の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ２、及び／或いは
ｖｉ．配列番号９のアミノ酸配列、又は配列番号９と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号９の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ３。
ｉ．配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号４の変異アミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号５のアミノ酸配列、又は配列番号５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号５の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ２、
ｉｉｉ．配列番号６のアミノ酸配列、又は配列番号６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号６の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ３、
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列、又は配列番号７と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号７の変異アミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、
ｖ．配列番号８のアミノ酸配列、又は配列番号８と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号８の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ２、及び／或いは
ｖｉ．配列番号９のアミノ酸配列、又は配列番号９と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号９の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ３。
【0135】
種々の例では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１０と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１０の変異アミノ酸配列を含むＬＣ可変領域を含む。
【0136】
例示的な態様では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列、配列番号１１と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１１の変異アミノ酸配列を含むＨＣ可変領域を含む。
【0137】
例示的な事例では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１２の変異アミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【0138】
種々の態様では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列、配列番号１３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１３の変異アミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【0139】
種々の態様では、抗体組成物の各抗体は、ＩｇＧ、任意選択で、ＩｇＧ１である。種々の例では、抗体組成物の各抗体は腫瘍関連抗原、例えばＴＮＦアルファに結合する。
【0140】
種々の態様では、ＴＮＦアルファは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。例示的な態様では、抗体組成物の各抗体は、抗ＴＮＦアルファ抗体である。種々の例では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列、配列番号１５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１５の変異アミノ酸配列を含むＬＣ可変領域を含む。
【0141】
例示的な態様では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１６の変異アミノ酸配列を含むＨＣ可変領域を含む。
【0142】
例示的な態様では、抗体組成物は、抗体の異なるグリコフォームの不均一な混合物を含む。種々の例では、抗体組成物は、そのＴＡＦグリカン含量、ＨＭグリカン含量及び／又はそのＡＦグリカン含量に関して特徴付けられ得る。種々の態様では、抗体組成物は、ＴＡＦグリカン％、ＨＭグリカン％、及び／又は非フコシル化グリカン％に関して記載される。任意選択により、抗体組成物は、他の型のグリカン、例えば、ガラクトシル化グリコフォーム、フコシル化グリコフォームなどのその含有量に関して特徴付けられ得る。
【0143】
例示的な態様では、抗体組成物は、方程式Ａを使用して算出されるＴＡＦグリカン％を有する。例示的な態様では、抗体組成物は、方程式ＡのＸによって規定される範囲内のＴＡＦグリカン％を有する。例示的な事例では、ＴＡＦグリカン％はＸ±０．４内である。例示的な態様では、抗体組成物は本明細書に開示される方法の決定工程で決定（例えば、測定）されるＴＡＦグリカン％を有する。例示的な態様では、ＴＡＦグリカン％は親水性相互作用クロマトグラフィによって、任意選択で、実施例１に記載の方法によって決定される。例として、種々の例における抗体組成物は、ＴＡＦグリカンが約５０％未満（例えば、約４０％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満）である。例示的な態様では、抗体組成物は、ＴＡＦグリカンが約１０％未満（例えば、約９％以下、約８％以下、約７％以下、約６％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下）である。例示的な態様では、抗体組成物は、ＴＡＦグリカンが約４％～約１０％である。例示的な態様では、抗体組成物は、ＴＡＦグリカンが約２％～約６％である。例示的な態様では、抗体組成物は、ＴＡＦグリカンが約２．５％～約５％である。例示的な態様では、抗体組成物は、ＴＡＦグリカンが約４％以下である。さらなる例示的な態様では、抗体組成物は、ＴＡＦグリカンが約４％以下約２％以上である。種々の態様では、ＴＡＦグリカン％は、約１．５５％以上約６．９５％以下、又は約１．７２％～約６．７４％である。
【0144】
例示的な態様では、抗体組成物は、方程式Ｂを使用して算出される非フコシル化グリカン％を有する。例示的な態様では、抗体組成物は、方程式ＢのＡＦによって規定される範囲内の非フコシル化グリカン％を有する。例示的な事例では、非フコシル化グリカン％はＡＦ±１内である。例示的な態様では、抗体組成物は本明細書に開示される方法の決定工程で決定（例えば、測定）される非フコシル化グリカン％を有する。例示的な態様では、非フコシル化グリカン％は親水性相互作用クロマトグラフィによって、任意選択で、実施例１に記載の方法によって決定される。例として、種々の例における抗体組成物は、非フコシル化グリカンが約５％以下である。例示的な態様では、非フコシル化グリカン％は約１～約４である。例示的な態様では、抗体組成物は、非フコシル化グリカンが約４％以下である。例示的な態様では、抗体組成物は、非フコシル化グリカンが約３．５％以下である。
【0145】
例示的な態様では、抗体組成物は、方程式Ｂを使用して算出される高マンノースグリカン％を有する。例示的な態様では、抗体組成物は、方程式ＢのＨＭによって規定される範囲内の高マンノースグリカン％を有する。例示的な事例では、高マンノースグリカン％はＨＭ±１内である。例示的な態様では、抗体組成物は、本明細書に開示される方法の決定工程で決定（例えば、測定）される高マンノースグリカン％を有する。例示的な態様では、高マンノースグリカン％は親水性相互作用クロマトグラフィによって、任意選択で、実施例１に記載の方法によって決定される。例として、抗体組成物は、例示的な態様では、高マンノースグリカンが約５％以下である。例示的な態様では、高マンノースグリカン％は約１～約４である。例示的な態様では、抗体組成物は、高マンノースグリカンが約４％以下である。例示的な態様では、抗体組成物は、高マンノースグリカンが約３．５％以下である。
【0146】
例示的な態様では、抗体組成物は、方程式Ａ又は方程式Ｂを使用して計算されるＡＤＣＣ％を有する。例示的な態様では、抗体組成物は、決定工程で決定（例えば、測定）されるＡＤＣＣ％を有する。例示的な態様では、ＡＤＣＣ％は、抗体の抗原を発現し、抗体のＦｃドメインを介してエフェクター細胞上のＦｃガンマＲＩＩＩＡ受容体に関与する細胞において、用量依存的に細胞障害を媒介する抗体組成物の抗体の能力を測定する、定量的な細胞ベースのアッセイ、例えば、実施例２に記載される方法によって決定される。例として、種々の例における抗体組成物は、ＡＤＣＣが約４０％～約１７５％、又は約４０％～約１７０％、又は約４４％～約１６５％である。例示的な態様では、抗体組成物は、ＡＤＣＣ％が約４０以上で約１７５以下又は約１７０以下、任意選択で、約４１～約１７１である。例示的な態様では、抗体組成物は、約３０～約１８５、任意選択で、約３２～約１８０であるＡＤＣＣ％を有する。種々の態様では、ＡＤＣＣ％は、約６０以上約１３０以下である。例示的な態様では、抗体組成物は、方程式Ａ又は方程式ＢのＹによって規定される範囲内のＡＤＣＣ％を有する。種々の態様では、ＡＤＣＣ％はＹ±２０内、例えば、Ｙ±１９、Ｙ±１８、又はＹ±１７内である。
【0147】
方程式ＡのＴＡＦグリカン％、Ｘ、及びＡＤＣＣ％、Ｙに関して、いくつかの態様では、Ｙは約４０以上及び約１７０以下であり、Ｘは、約１．５５％以上及び約６．９５％以下である。種々の例では、Ｙは約４４％以上約１６５％以下であり、任意選択により、Ｘは約１．７２％～約６．７４％である。
【0148】
方程式Ｂの非フコシル化グリカン％、ＡＦ、及び高マンノースグリカン％、ＨＭ、及びＡＤＣＣ％、Ｙに関して、いくつかの態様では、Ｙは約４０以上約１７５未満、任意選択で、約４１～約１７１であり、ＡＦは約１～約４であり、ＨＭは約４０～約１７５である。種々の例では、Ｙは約３０～約１８５、任意選択で、約３２～約１８０であり、ＨＭは約１～約４であり、ＡＦは約３０～約１８５である。
【0149】
例示的な実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と組み合わせられる。したがって、本明細書では、本明細書に記載される組換えグリコシル化タンパク質組成物（例えば、抗体組成物又は抗体結合タンパク質組成物）、及び薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む医薬組成物が提供される。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語には、リン酸緩衝生理食塩水、水、油／水又は水／油エマルションなどのエマルション、及び種々のタイプの湿潤剤などの標準的な医薬担体のいずれかが含まれる。
【0150】
例示的な実施形態では、抗体組成物は、本明細書に記載されるように、細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞によって産生される。
【0151】
追加の工程
本明細書に開示する方法は、種々の態様において、追加の工程を含む。例えば、いくつかの態様では、方法は、組換えグリコシル化タンパク質（例えば、抗体）の産生、精製及び製剤化に関与する１つ以上の上流工程又は下流工程を含む。任意選択で、下流工程は、本明細書に記載される、又は当該技術分野で知られる下流プロセス工程のいずれか１つである。例えば、プロセス工程を参照されたい。例示的な実施形態では、方法は、組換えグリコシル化タンパク質（例えば、抗体）を発現する宿主細胞を作製するための工程を含む。宿主細胞は、いくつかの態様では、原核宿主細胞、例えばＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）若しくはバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）であるか、又は宿主細胞は、いくつかの態様では、真核宿主細胞、例えば、酵母細胞、糸状菌細胞、原生動物細胞、昆虫細胞若しくは哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）である。このような宿主細胞は、当該技術分野で記載されている。例えば、Ｆｒｅｎｚｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４：２１７（２０１３）及び本明細書の「細胞」の節を参照されたい。例えば、方法は、いくつかの例では、組換えグリコシル化タンパク質、又はそのポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含むベクターを宿主細胞に導入することを含む。
本明細書に開示する方法は、種々の態様において、追加の工程を含む。例えば、いくつかの態様では、方法は、組換えグリコシル化タンパク質（例えば、抗体）の産生、精製及び製剤化に関与する１つ以上の上流工程又は下流工程を含む。任意選択で、下流工程は、本明細書に記載される、又は当該技術分野で知られる下流プロセス工程のいずれか１つである。例えば、プロセス工程を参照されたい。例示的な実施形態では、方法は、組換えグリコシル化タンパク質（例えば、抗体）を発現する宿主細胞を作製するための工程を含む。宿主細胞は、いくつかの態様では、原核宿主細胞、例えばＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）若しくはバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）であるか、又は宿主細胞は、いくつかの態様では、真核宿主細胞、例えば、酵母細胞、糸状菌細胞、原生動物細胞、昆虫細胞若しくは哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）である。このような宿主細胞は、当該技術分野で記載されている。例えば、Ｆｒｅｎｚｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４：２１７（２０１３）及び本明細書の「細胞」の節を参照されたい。例えば、方法は、いくつかの例では、組換えグリコシル化タンパク質、又はそのポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含むベクターを宿主細胞に導入することを含む。
【0152】
例示的な態様では、方法は、細胞、例えば、グリコシル化コンピテント細胞を細胞培養物中に維持する工程を含む。したがって、方法は、本明細書の細胞培養物中における細胞の維持の節に記載される任意の１つ以上の工程を実施する工程を含み得る。
【0153】
例示的な実施形態では、本明細書で開示される方法は、培養物から組換えグリコシル化タンパク質（例えば、組換え抗体）を単離及び／又は精製する工程を含む。例示的な態様では、方法は、例えば、アフィニティークロマトグラフィ（例えば、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィ）、イオン交換クロマトグラフィ、及び／又は疎水性相互作用クロマトグラフィを含むが、これらに限定されない１つ以上のクロマトグラフィ工程を含む。例示的な態様では、方法は、組換えグリコシル化タンパク質を含む溶液から結晶性生体分子を生成させる工程を含む。
【0154】
本開示の方法は、種々の態様において、組成物、例えば、いくつかの態様では、精製組換えグリコシル化タンパク質を含む医薬組成物を製造するための１つ以上の工程を含む。このような組成物は、本明細書中で説明されている。
【0155】
細胞培養物中における細胞の維持
本開示の抗体組成物を製造する方法に関して、抗体組成物は、細胞培養物中に細胞を維持することによって製造され得る。細胞培養物は、組換えグリコシル化タンパク質の産生に好適な任意の一連の条件に従って維持され得る。例えば、いくつかの態様では、細胞培養物は、特定のｐＨ、温度、細胞密度、培養体積、溶存酸素レベル、圧力、浸透圧などで維持される。例示的な態様では、ＣＯ２インキュベーター中、標準的な加湿条件下にて５％ＣＯ２で播種前の細胞培養物を振盪する（例えば、７０ｒｐｍ）。例示的な態様では、１．５Ｌ培地中約１０６個細胞／ｍＬの播種密度で細胞培養物が播種される。
本開示の抗体組成物を製造する方法に関して、抗体組成物は、細胞培養物中に細胞を維持することによって製造され得る。細胞培養物は、組換えグリコシル化タンパク質の産生に好適な任意の一連の条件に従って維持され得る。例えば、いくつかの態様では、細胞培養物は、特定のｐＨ、温度、細胞密度、培養体積、溶存酸素レベル、圧力、浸透圧などで維持される。例示的な態様では、ＣＯ２インキュベーター中、標準的な加湿条件下にて５％ＣＯ２で播種前の細胞培養物を振盪する（例えば、７０ｒｐｍ）。例示的な態様では、１．５Ｌ培地中約１０６個細胞／ｍＬの播種密度で細胞培養物が播種される。
【0156】
例示的な態様では、本開示の方法は、約６．８５～約７．０５、例えば、様々な態様では、約６．８５、約６．８６、約６．８７、約６．８８、約６．８９、約６．９０、約６．９１、約６．９２、約６．９３、約６．９４、約６．９５、約６．９６、約６．９７、約６．９８、約６．９９、約７．００、約７．０１、約７．０２、約７．０３、約７．０４、又は約７．０５のｐＨで細胞培養培地中においてグリコシル化コンピテント細胞を維持することを含む。
【0157】
例示的な態様において、方法は、３０℃と４０℃の間の温度で細胞培養物を維持することを含む。例示的な実施形態では、温度は、約３２℃～約３８℃又は約３５℃～約３８℃である。
【0158】
例示的な態様において、方法は、約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を維持することを含む。例示的な態様では、方法は、約２２５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ又は約２２５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を維持することを含む。例示的な態様では、方法は、約２２５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を維持することを含む。種々の態様では、浸透圧（ｍＯｓｍ／ｋｇ）は、約２００、約２２５、約２５０、約２７５、約３００、約３２５、約３５０、約３７５、約４００、約４２５、約４５０、約４７５、又は約５００に維持される。
【0159】
例示な態様において、方法は、初期細胞培養期間中、約２０％～約６０％酸素飽和度で細胞培養物の溶解酸素（ＤＯ）レベルを維持することを含む。例示的な事例では、方法は、初期細胞培養期間中、約３０％～約５０％（例えば、約３５％～約４５％）の酸素飽和度に細胞培養物のＤＯレベルを維持することを含む。例示的な事例では、方法は、初期細胞培養期間中、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、又は約６０％の酸素飽和度で細胞培養物のＤＯレベルを維持することを含む。例示的な態様では、ＤＯレベルは、約３５ｍｍＨｇ～約８５ｍｍＨｇ、又は約４０ｍｍＨｇ～約８０ｍｍＨｇ、又は約４５ｍｍＨｇ～約７５ｍｍＨｇである。
【0160】
細胞培養物は、任意の１つ以上の培養培地中で維持される。例示的な態様では、細胞培養物は、細胞増殖に好適な培地中で維持され、且つ／又は任意の好適な供給スケジュールに従って１つ以上の供給培地が与えられる。例示的な態様では、方法は、グルコース、フコース、乳酸塩、アンモニア、グルタミン及び／又はグルタメートを含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様において、方法は、初期細胞培養期間中、約１μＭ以下の濃度のマンガンを含む培地中で細胞培養を維持することを含む。例示的な態様では、方法は、約０．２５μＭ～約１μＭマンガンを含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様では、方法は、無視できる量のマンガンを含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様において、方法は、初期細胞培養期間中、約５０ｐｐｂ以下の濃度の銅を含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様では、方法は、初期細胞培養期間中、約４０ｐｐｂ以下の濃度の銅を含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様では、方法は、初期細胞培養期間中、約３０ｐｐｂ以下の濃度の銅を含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様では、方法は、初期細胞培養期間中、約２０ｐｐｂ以下の濃度の銅を含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様では、培地は、約５ｐｐｂ以上又は約１０ｐｐｂ以上の濃度の銅を含む。例示的な態様において、細胞培養培地は、マンノースを含む。例示的な態様において、細胞培養培地は、マンノースを含まない。
【0161】
例示的な実施形態において、細胞培養のタイプは、流加培養法又は連続灌流培養法である。しかし、本開示の方法は、有利には、いずれの特定のタイプの細胞培養にも限定されない。
【0162】
細胞培養で維持される細胞は、グリコシル化コンピテント細胞であり得る。例示的な態様では、グリコシル化コンピテント細胞は真核細胞であり、例えば、酵母細胞、糸状菌細胞、原生動物細胞、藻類細胞、昆虫細胞又は哺乳動物細胞が挙げられるが、これらに限定されない。このような宿主細胞は、当該技術分野で記載されている。例えば、Ｆｒｅｎｚｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４：２１７（２０１３）を参照されたい。例示的な態様では、真核細胞は哺乳動物細胞である。例示的な態様では、哺乳動物細胞は非ヒト哺乳動物細胞である。いくつかの態様では、細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞及びその派生細胞（例えば、ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ ｐｒｏ－３）、マウス骨髄腫細胞（例えば、ＮＳ０、ＧＳ－ＮＳ０、Ｓｐ２／０）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）活性を欠くように操作された細胞（例えば、ＤＵＫＸ－Ｘ１１、ＤＧ４４）、ヒト胚性腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞又はその派生細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＨＥＫ２９３－ＥＢＮＡ）、アフリカミドリザル腎臓細胞（例えば、ＣＯＳ細胞、ＶＥＲＯ細胞）、ヒト子宮頸癌細胞（例えば、ＨｅＬａ）、ヒト骨の骨肉腫上皮細胞Ｕ２－ＯＳ、腺癌ヒト肺胞基底上皮細胞Ａ５４９、ヒト線維肉腫細胞ＨＴ１０８０、マウス脳腫瘍細胞ＣＡＤ、胚性癌腫細胞Ｐ１９、マウス胚性繊維芽細胞ＮＩＨ ３Ｔ３、マウス繊維芽細胞Ｌ９２９、マウス神経芽腫細胞Ｎ２ａ、ヒト乳癌細胞ＭＣＦ－７、網膜芽腫細胞Ｙ７９、ヒト網膜芽腫細胞ＳＯ－Ｒｂ５０、ヒト肝臓癌細胞Ｈｅｐ Ｇ２、マウスＢ骨髄腫細胞Ｊ５５８Ｌ又は新生児ハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞（Ｇａｉｌｌｅｔ ｅｔ ａｌ．２００７；Ｋｈａｎ，Ａｄｖ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ ３（２）：２５７－２６３（２０１３））である。
【0163】
グリコシル化にコンピテントではない細胞はまた、例えば、グリコシル化に必要な関連酵素をコードする遺伝子をそれらに導入することによって、グリコシル化コンピテント細胞に形質転換され得る。例示的な酵素としては、オリゴサッカリルトランスフェラーゼ、グリコシダーゼ、グルコシダーゼＩ、グルコシダーゼＩＩ、カルネキシン／カルレティキュリン、グリコシルトランスフェラーゼ、マンノシダーゼ、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ、ガラクトシルトランスフェラーゼ、及びシアリルトランスフェラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。
【0164】
例示的な実施形態において、グリコシル化コンピテント細胞は、デノボ経路又はサルベージ経路の酵素の活性を変えるように遺伝的に改変されない。フコース代謝のこれらの２つの経路は、図２に示される。例示的な実施形態において、グリコシル化コンピテント細胞は、フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ、例えば、ＦＵＴ１、ＦＵＴ２、ＦＵＴ３、ＦＵＴ４、ＦＵＴ５、ＦＵＴ６、ＦＵＴ７、ＦＵＴ８、ＦＵＴ９）、フコースキナーゼ、ＧＤＰ－フコースピロホスホリラーゼ、ＧＤＰ－Ｄ－マンノース－４，６－デヒドラターゼ（ＧＭＤ）、及びＧＤＰ－ケト－６－デオキシマンノース－３，５－エピメラーゼ、４－レダクターゼ（ＦＸ）のいずれか１つ以上の活性を変えるように遺伝的に改変されない。例示的な実施形態において、グリコシル化コンピテント細胞は、ＦＸをコードする遺伝子をノックアウトするように遺伝的に改変されない。
【0165】
例示的な実施形態において、グリコシル化コンピテント細胞は、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧＮＴＩＩＩ）又はＧＤＰ－６－デオキシ－Ｄ－リキソ－４－ヘキスロースレダクターゼ（ＲＭＤ）の活性を変えるように遺伝的に改変されない。例示的な態様において、グリコシル化コンピテント細胞は、ＧＮＴＩＩＩ又はＲＭＤを過剰発現するように遺伝的に改変されない。
【0166】
例示的な実施形態
本開示の例示的な実施形態を以下に提供する。
Ｅ１．抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、Ｘは工程（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％である）
を使用して、ＴＡＦ％に基づいて抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を算出する工程、及び
（ｉｉｉ）Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ２．抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
を使用して、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に基づいて抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を算出する工程、並びに
ｉｉｉ．Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ３．目標ＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、Ｙは目標ＡＤＣＣ％であり、Ｘは目標ＴＡＦグリカン％である）
を使用して、目標ＡＤＣＣ％のための目標総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を算出する工程、及び
ｉｉ．目標ＴＡＦグリカン％、Ｘを有する抗体組成物を製造するために細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞を維持する工程
を含む、方法。
Ｅ４．目標ＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、Ｙは目標ＡＤＣＣ％であり、ＨＭは目標高マンノースグリカン％であり、ＡＦは目標非フコシル化グリカン％である）
を使用して、目標ＡＤＣＣ％のための目標非フコシル化グリカン％及び目標高マンノースグリカン％を算出する工程、並びに
ｉｉ．目標高マンノースグリカン％及び目標非フコシル化グリカン％を有する抗体組成物を製造するために細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞を維持する工程
を含む、方法。
Ｅ５．目標ＡＤＣＣ％が目標ＡＤＣＣ％範囲内である、実施形態３又は４に記載の方法。
Ｅ６．目標ＡＤＣＣ％範囲が、約４０以上約１７０以下である、実施形態１、２及び５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７．目標ＡＤＣＣ％範囲は、約４４以上約１６５以下である、実施形態６に記載の方法。
Ｅ８．目標ＡＤＣＣ％範囲は、約６０以上約１３０以下である、実施形態７に記載の方法。
Ｅ９．目標ＡＤＣＣ％範囲はＹ±２０である、実施形態１～４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０．目標ＡＤＣＣ％範囲はＹ±１７である、実施形態１又は実施形態３の方法。
Ｅ１１．目標ＡＤＣＣ％範囲はＹ±１８である、実施形態２又は実施形態４の方法。
Ｅ１２．任意選択で、約４０以上約１７０以下のＡＤＣＣ％、Ｙを有する抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、Ｘを決定する工程、及び
ｉｉ．Ｘが（Ｙ－２．６）／２４．１に等しい場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ１３．Ｘが約１．５５％以上約６．９５％以下である、実施形態１３に記載の方法。
Ｅ１４．Ｙが約４４％以上約１６５％以下であり、任意選択で、Ｘが約１．７２％～約６．７４％である、実施形態１３又は１４に記載の方法。
Ｅ１５．ＡＤＣＣ％、Ｙを有する抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、Ｘを決定する工程、及び
ｉｉ．Ｘが（Ｙ－２．６）／２４．１と等しい場合（ここで、任意選択により、Ｘは約Ｘ－０．４以上約Ｘ＋０．４以下であり、ＡＤＣＣ％は約Ｙ－１７超約Ｙ＋１７以下である）、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ１６．ＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の非フコシル化グリカン％及び高マンノースグリカン％を決定する工程、並びに
ｉｉ．方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
に従ってＹに関連している場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ１７．Ｙは約４０以上約１７５以下、任意選択で約４１～約１７１であり、ＡＦは約１～約４であり、ＨＭは約４０～約１７５である、実施形態１６に記載の方法。
Ｅ１８．Ｙは約３０～約１８５、任意選択で約３２～約１８０であり、ＨＭは約１～約４であり、ＡＦは約３０～約１８５である、実施形態１６に記載の方法。
Ｅ１９．抗体組成物のＡＤＣＣ％は、Ｙによって規定される範囲内である、実施形態１６に記載の方法。
Ｅ２０．抗体組成物のＡＤＣＣ％は、Ｙ±１８の範囲内である、実施形態１９に記載の方法。
Ｅ２１．ＡＦは約１～約４である、実施形態１６、１９及び２０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２．高マンノースグリカン％はＨＭによって規定される範囲内の値であり、任意選択でその範囲はＨＭ±１である、実施形態２１に記載の方法。
Ｅ２３．ＨＭは約１～約４である、実施形態１６、１９及び２０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２４．非フコシル化グリカン％はＡＦによって規定される範囲内の値であり、任意選択でその範囲はＡＦ±１である、実施形態２４に記載の方法。
Ｅ２５．ＴＡＦグリカン％は、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％の合計を算出することによって決定される、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２６．高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％は親水性相互作用クロマトグラフィによって決定される、実施形態１～２５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２７．高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％は実施例１に記載の方法によって決定される、請求項２６に記載の方法。
Ｅ２８．ＡＤＣＣ％は、抗体の抗原を発現し、抗体のＦｃドメインを介してエフェクター細胞上のＦｃガンマＲＩＩＩＡ受容体に関与する細胞において、用量依存的に細胞障害を媒介する抗体組成物の抗体の能力を測定する、定量的な細胞ベースのアッセイによって決定される、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２９．ＡＤＣＣ％は、実施例２に記載のアッセイによって決定される、実施形態２８に記載の方法。
Ｅ３０．決定工程は、回収工程後に実行される、実施形態１、２及び５～１９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３１．決定工程は、クロマトグラフィ工程後に実行される、実施形態３０に記載の方法。
Ｅ３２．クロマトグラフィ工程はプロテインＡクロマトグラフィ工程である、実施形態３１に記載の方法。
Ｅ３３．１つ以上の下流プロセス工程は、希釈工程、充填工程、濾過工程、製剤化工程、クロマトグラフィ工程、ウイルス濾過工程、ウイルス不活化工程、又はこれらの組み合わせを含む、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３４．クロマトグラフィ工程は、イオン交換クロマトグラフィ工程、任意選択で、陽イオン交換クロマトグラフィ工程又は陰イオン交換クロマトグラフィ工程である、実施形態３３に記載の方法。
Ｅ３５．抗体組成物の各抗体はＩｇＧである、実施形態１～３４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３６．抗体組成物の各抗体はＩｇＧ１である、実施形態３５に記載の方法。
Ｅ３７．抗体組成物の各抗体は腫瘍関連抗原に結合する、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３８．腫瘍関連抗原は、配列番号３のアミノ酸配列を含む、実施形態３７に記載の方法。
Ｅ３９．抗体組成物の各抗体は、抗Ｄ２０抗体である、実施形態１～３８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４０．抗体組成物の各抗体は、
ｉ．配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号４の変異アミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号５のアミノ酸配列、又は配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号５の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ２、
ｉｉｉ．配列番号６のアミノ酸配列、又は配列番号６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号６の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ３、
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列、又は配列番号７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号７の変異アミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、
ｖ．配列番号８のアミノ酸配列、又は配列番号８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号８の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ２、及び
ｖｉ．配列番号９のアミノ酸配列、又は配列番号９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号９の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ３
を含む、実施形態１～３９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４１．抗体組成物の各抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１０の変異アミノ酸配列を含むＬＣ可変領域を含む、実施形態１～４０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４２．抗体組成物の各抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列、配列番号１１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１１の変異アミノ酸配列を含むＨＣ可変領域を含む、実施形態１～４１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４３．抗体組成物の各抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１２の変異アミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態１～４２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４４．抗体組成物の各抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列、配列番号１３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１３の変異アミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施形態１～４３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４５．ＡＤＣＣ％が目標範囲内である抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体の様々なグリコフォームを含む一連のサンプルのＡＤＣＣ％を測定する工程、
ｉｉ．一連の各サンプルについて総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉｉ．一連の各サンプルについて工程（ｉ）で測定されたＡＤＣＣ％を工程（ｉｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％の関数としてプロットするグラフの最良適合線の線形方程式を決定する工程、
ｉｖ．抗体組成物のＴＡＦ％を決定し、次いで、工程（ｉｉｉ）の線形方程式を用いてＡＤＣＣ％を算出する工程、及び
ｖ．工程（ｉｖ）で算出されたＡＤＣＣ％が目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ４６．総非フコシル化（ＴＡＦ）％が目標範囲内である抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体の様々なグリコフォームを含む一連のサンプルのＡＤＣＣ％を測定する工程、
ｉｉ．一連の各サンプルについて総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉｉ．一連の各サンプルについて工程（ｉ）で測定されたＡＤＣＣ％を工程（ｉｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％の関数としてプロットするグラフの最良適合線の線形方程式を決定する工程、
ｉｖ．抗体組成物のＡＤＣＣ％を決定し、次いで、工程（ｉｉｉ）の線形方程式を用いてＴＡＦ％を算出する工程、及び
ｖ．工程（ｉｖ）で算出されたＴＡＦ％が目標ＴＡＦ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ４７．抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を決定する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、Ｘは工程（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％である）
を使用して、ＴＡＦ％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程
を含む、方法。
Ｅ４８．抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を決定する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
を使用して、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程
を含む、方法。
Ｅ４９．Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程をさらに含む、実施形態４７又は４８に記載の方法。
Ｅ５０．ＴＡＦ％が目標範囲内である抗体組成物を製造する方法であって、以下の工程を含む、方法。
ｉ．細胞培養条件下で製造された一連の少なくとも５つの参照抗体組成物のＡＤＣＣ％及びＴＡＦグリカン％をプロットすることによって、最良適合グラフの線形方程式を生成する工程（各参照抗体組成物は、抗体組成物と同じアミノ酸配列を有する）、
ｉｉ．工程（ｉ）で生成された線形方程式及び所望のＡＤＣＣ活性％に基づいて目標ＴＡＦグリカン％範囲を選択する工程、
ｉｉｉ：細胞培養条件下で抗体組成物を培養する工程、
ｉｖ．抗体組成物を精製する工程、
ｖ．抗体組成物をサンプリングして、ＴＡＦ％を決定する工程、及び
ｖｉ．抗体組成物のＴＡＦ％が工程（ｉｉ）の目標ＴＡＦ％範囲内であるかどうかを決定する工程。
Ｅ５１．工程（ｖ）で算出されたＴＡＦ％が目標ＴＡＦ％範囲内である場合に、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程をさらに含む、実施形態５０に記載の方法。
本開示の例示的な実施形態を以下に提供する。
Ｅ１．抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、Ｘは工程（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％である）
を使用して、ＴＡＦ％に基づいて抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を算出する工程、及び
（ｉｉｉ）Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ２．抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
を使用して、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に基づいて抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を算出する工程、並びに
ｉｉｉ．Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ３．目標ＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、Ｙは目標ＡＤＣＣ％であり、Ｘは目標ＴＡＦグリカン％である）
を使用して、目標ＡＤＣＣ％のための目標総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を算出する工程、及び
ｉｉ．目標ＴＡＦグリカン％、Ｘを有する抗体組成物を製造するために細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞を維持する工程
を含む、方法。
Ｅ４．目標ＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、Ｙは目標ＡＤＣＣ％であり、ＨＭは目標高マンノースグリカン％であり、ＡＦは目標非フコシル化グリカン％である）
を使用して、目標ＡＤＣＣ％のための目標非フコシル化グリカン％及び目標高マンノースグリカン％を算出する工程、並びに
ｉｉ．目標高マンノースグリカン％及び目標非フコシル化グリカン％を有する抗体組成物を製造するために細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞を維持する工程
を含む、方法。
Ｅ５．目標ＡＤＣＣ％が目標ＡＤＣＣ％範囲内である、実施形態３又は４に記載の方法。
Ｅ６．目標ＡＤＣＣ％範囲が、約４０以上約１７０以下である、実施形態１、２及び５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７．目標ＡＤＣＣ％範囲は、約４４以上約１６５以下である、実施形態６に記載の方法。
Ｅ８．目標ＡＤＣＣ％範囲は、約６０以上約１３０以下である、実施形態７に記載の方法。
Ｅ９．目標ＡＤＣＣ％範囲はＹ±２０である、実施形態１～４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０．目標ＡＤＣＣ％範囲はＹ±１７である、実施形態１又は実施形態３の方法。
Ｅ１１．目標ＡＤＣＣ％範囲はＹ±１８である、実施形態２又は実施形態４の方法。
Ｅ１２．任意選択で、約４０以上約１７０以下のＡＤＣＣ％、Ｙを有する抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、Ｘを決定する工程、及び
ｉｉ．Ｘが（Ｙ－２．６）／２４．１に等しい場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ１３．Ｘが約１．５５％以上約６．９５％以下である、実施形態１３に記載の方法。
Ｅ１４．Ｙが約４４％以上約１６５％以下であり、任意選択で、Ｘが約１．７２％～約６．７４％である、実施形態１３又は１４に記載の方法。
Ｅ１５．ＡＤＣＣ％、Ｙを有する抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％、Ｘを決定する工程、及び
ｉｉ．Ｘが（Ｙ－２．６）／２４．１と等しい場合（ここで、任意選択により、Ｘは約Ｘ－０．４以上約Ｘ＋０．４以下であり、ＡＤＣＣ％は約Ｙ－１７超約Ｙ＋１７以下である）、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ１６．ＡＤＣＣ％を有する抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の非フコシル化グリカン％及び高マンノースグリカン％を決定する工程、並びに
ｉｉ．方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
に従ってＹに関連している場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ１７．Ｙは約４０以上約１７５以下、任意選択で約４１～約１７１であり、ＡＦは約１～約４であり、ＨＭは約４０～約１７５である、実施形態１６に記載の方法。
Ｅ１８．Ｙは約３０～約１８５、任意選択で約３２～約１８０であり、ＨＭは約１～約４であり、ＡＦは約３０～約１８５である、実施形態１６に記載の方法。
Ｅ１９．抗体組成物のＡＤＣＣ％は、Ｙによって規定される範囲内である、実施形態１６に記載の方法。
Ｅ２０．抗体組成物のＡＤＣＣ％は、Ｙ±１８の範囲内である、実施形態１９に記載の方法。
Ｅ２１．ＡＦは約１～約４である、実施形態１６、１９及び２０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２．高マンノースグリカン％はＨＭによって規定される範囲内の値であり、任意選択でその範囲はＨＭ±１である、実施形態２１に記載の方法。
Ｅ２３．ＨＭは約１～約４である、実施形態１６、１９及び２０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２４．非フコシル化グリカン％はＡＦによって規定される範囲内の値であり、任意選択でその範囲はＡＦ±１である、実施形態２４に記載の方法。
Ｅ２５．ＴＡＦグリカン％は、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％の合計を算出することによって決定される、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２６．高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％は親水性相互作用クロマトグラフィによって決定される、実施形態１～２５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２７．高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％は実施例１に記載の方法によって決定される、請求項２６に記載の方法。
Ｅ２８．ＡＤＣＣ％は、抗体の抗原を発現し、抗体のＦｃドメインを介してエフェクター細胞上のＦｃガンマＲＩＩＩＡ受容体に関与する細胞において、用量依存的に細胞障害を媒介する抗体組成物の抗体の能力を測定する、定量的な細胞ベースのアッセイによって決定される、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２９．ＡＤＣＣ％は、実施例２に記載のアッセイによって決定される、実施形態２８に記載の方法。
Ｅ３０．決定工程は、回収工程後に実行される、実施形態１、２及び５～１９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３１．決定工程は、クロマトグラフィ工程後に実行される、実施形態３０に記載の方法。
Ｅ３２．クロマトグラフィ工程はプロテインＡクロマトグラフィ工程である、実施形態３１に記載の方法。
Ｅ３３．１つ以上の下流プロセス工程は、希釈工程、充填工程、濾過工程、製剤化工程、クロマトグラフィ工程、ウイルス濾過工程、ウイルス不活化工程、又はこれらの組み合わせを含む、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３４．クロマトグラフィ工程は、イオン交換クロマトグラフィ工程、任意選択で、陽イオン交換クロマトグラフィ工程又は陰イオン交換クロマトグラフィ工程である、実施形態３３に記載の方法。
Ｅ３５．抗体組成物の各抗体はＩｇＧである、実施形態１～３４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３６．抗体組成物の各抗体はＩｇＧ１である、実施形態３５に記載の方法。
Ｅ３７．抗体組成物の各抗体は腫瘍関連抗原に結合する、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３８．腫瘍関連抗原は、配列番号３のアミノ酸配列を含む、実施形態３７に記載の方法。
Ｅ３９．抗体組成物の各抗体は、抗Ｄ２０抗体である、実施形態１～３８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４０．抗体組成物の各抗体は、
ｉ．配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号４の変異アミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号５のアミノ酸配列、又は配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号５の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ２、
ｉｉｉ．配列番号６のアミノ酸配列、又は配列番号６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号６の変異アミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ３、
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列、又は配列番号７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号７の変異アミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、
ｖ．配列番号８のアミノ酸配列、又は配列番号８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号８の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ２、及び
ｖｉ．配列番号９のアミノ酸配列、又は配列番号９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号９の変異アミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ３
を含む、実施形態１～３９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４１．抗体組成物の各抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１０の変異アミノ酸配列を含むＬＣ可変領域を含む、実施形態１～４０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４２．抗体組成物の各抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列、配列番号１１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１１の変異アミノ酸配列を含むＨＣ可変領域を含む、実施形態１～４１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４３．抗体組成物の各抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１２の変異アミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態１～４２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４４．抗体組成物の各抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列、配列番号１３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、又は１～１０個のアミノ酸置換を有する配列番号１３の変異アミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施形態１～４３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４５．ＡＤＣＣ％が目標範囲内である抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体の様々なグリコフォームを含む一連のサンプルのＡＤＣＣ％を測定する工程、
ｉｉ．一連の各サンプルについて総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉｉ．一連の各サンプルについて工程（ｉ）で測定されたＡＤＣＣ％を工程（ｉｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％の関数としてプロットするグラフの最良適合線の線形方程式を決定する工程、
ｉｖ．抗体組成物のＴＡＦ％を決定し、次いで、工程（ｉｉｉ）の線形方程式を用いてＡＤＣＣ％を算出する工程、及び
ｖ．工程（ｉｖ）で算出されたＡＤＣＣ％が目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ４６．総非フコシル化（ＴＡＦ）％が目標範囲内である抗体組成物を製造する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体の様々なグリコフォームを含む一連のサンプルのＡＤＣＣ％を測定する工程、
ｉｉ．一連の各サンプルについて総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉｉ．一連の各サンプルについて工程（ｉ）で測定されたＡＤＣＣ％を工程（ｉｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％の関数としてプロットするグラフの最良適合線の線形方程式を決定する工程、
ｉｖ．抗体組成物のＡＤＣＣ％を決定し、次いで、工程（ｉｉｉ）の線形方程式を用いてＴＡＦ％を算出する工程、及び
ｖ．工程（ｉｖ）で算出されたＴＡＦ％が目標ＴＡＦ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程
を含む、方法。
Ｅ４７．抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を決定する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の総非フコシル化（ＴＡＦ）グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．方程式Ａ：
Ｙ＝２．６＋２４．１×Ｘ
［方程式Ａ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、Ｘは工程（ｉ）で決定されたＴＡＦグリカン％である）
を使用して、ＴＡＦ％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程
を含む、方法。
Ｅ４８．抗体組成物の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）％を決定する方法であって、前記方法は、
ｉ．抗体組成物の高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％を決定する工程、
ｉｉ．方程式Ｂ：
Ｙ＝（０．２４＋２７×ＨＭ＋２２．１×ＡＦ）
［方程式Ｂ］
（式中、ＹはＡＤＣＣ％であり、ＨＭは工程（ｉ）で決定された高マンノースグリカン％であり、ＡＦは工程（ｉ）で決定された非フコシル化グリカン％である）
を使用して、高マンノースグリカン％及び非フコシル化グリカン％に基づいて抗体組成物のＡＤＣＣ％を算出する工程
を含む、方法。
Ｅ４９．Ｙが目標ＡＤＣＣ％範囲内である場合、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程をさらに含む、実施形態４７又は４８に記載の方法。
Ｅ５０．ＴＡＦ％が目標範囲内である抗体組成物を製造する方法であって、以下の工程を含む、方法。
ｉ．細胞培養条件下で製造された一連の少なくとも５つの参照抗体組成物のＡＤＣＣ％及びＴＡＦグリカン％をプロットすることによって、最良適合グラフの線形方程式を生成する工程（各参照抗体組成物は、抗体組成物と同じアミノ酸配列を有する）、
ｉｉ．工程（ｉ）で生成された線形方程式及び所望のＡＤＣＣ活性％に基づいて目標ＴＡＦグリカン％範囲を選択する工程、
ｉｉｉ：細胞培養条件下で抗体組成物を培養する工程、
ｉｖ．抗体組成物を精製する工程、
ｖ．抗体組成物をサンプリングして、ＴＡＦ％を決定する工程、及び
ｖｉ．抗体組成物のＴＡＦ％が工程（ｉｉ）の目標ＴＡＦ％範囲内であるかどうかを決定する工程。
Ｅ５１．工程（ｖ）で算出されたＴＡＦ％が目標ＴＡＦ％範囲内である場合に、その抗体組成物を１つ以上の下流プロセス工程のために選択する工程をさらに含む、実施形態５０に記載の方法。
【0167】
以下の実施例は、本発明を単に例示するために示されており、決して本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【0168】
実施例１
この実施例では、抗体のＮ結合型グリコシル化プロファイルを決定する例示的な方法を記載する。
この実施例では、抗体のＮ結合型グリコシル化プロファイルを決定する例示的な方法を記載する。
【0169】
この分析方法の目的は、親水性相互作用クロマトグラフィによって、抗体を含むサンプル中の特定の抗体のＮ結合型グリコシル化プロファイルを決定することである。このグリカンマップ法は、抗体のＮ結合型グリカン分布の定量的純度分析である。簡単に記載すると、Ｎ－グリコシダーゼＦ（ＰＮＧアーゼＦ）を用いてＮ結合型グリカンを酵素により遊離させ、末端のＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）をフルオロフォアで誘導体化する。次いで、親水性相互作用カラム（ＨＩＬＩＣ）を用いて標識されたグリカンを分離する。分析方法は、以下の工程からなる：（１）ＰＮＧアーゼＦ、及び遊離グリカンを特異的に誘導体化することができるフルオロフォアを使用して、参照及び試験サンプルからＮ結合型グリカンを放出させ標識化する工程、（２）ＨＩＬＩＣカラムに有効な線形範囲内のサンプルをロードし、徐々に減少する有機溶媒の勾配を使用して、標識されたＮ連結グリカンを分離する工程、及び（３）蛍光検出器を用いてグリカン種の溶出をモニターする工程。
【0170】
標準及び試験サンプルを、以下の工程を実行することによって製造する：（１）サンプル及び対照を水で希釈する工程、（２）試料及び対照にＧＮＡアーゼＦを添加し、インキュベートして、Ｎ結合型グリカンを放出させる工程、（３）２－アミノ安息香酸などのフルオロフォアを用いてフルオロフォア標識溶液と混合する工程、サンプル及び対照をボルテックスし、インキュベートする工程、（４）遠心分離してタンパク質を沈殿させ、上清を除去する工程、（５）乾燥させ、注射溶液中で標識グリカンを再構成する工程。
【0171】
このアッセイで使用される試薬は、移動相Ａ（１００ｍＭギ酸アンモニウム、目標ｐＨ ３．０）及び移動相Ｂ（アセトニトリル）である。本方法の工程を実行するために使用される装置は、以下の能力を有する：
【0172】
【表B-1】
【0173】
親水性相互作用分析用１．７μｍカラム、内径２．１ｍｍ×１５０ｍｍを用いるＨＰＬＣの機器設定を以下に示す：
【0174】
【表B-2】
【0175】
推奨される勾配を以下に示す：
【0176】
【表B-3】
【0177】
システムの適合性を以下に示す：
【0178】
【表B-4】
【0179】
結果は以下のように報告する：
【0180】
【表B-5】
【0181】
【0182】
実施例２
この実施例では、操作されたエフェクター細胞を使用して抗ＣＤ２０抗体のＡＤＣＣ活性を評価する例示的なアッセイを記載する。
この実施例では、操作されたエフェクター細胞を使用して抗ＣＤ２０抗体のＡＤＣＣ活性を評価する例示的なアッセイを記載する。
【0183】
この分析方法の目的は、抗体の抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）レベル（％で表される）を決定することである。このＡＤＣＣバイオアッセイは、ＷＩＬ２－Ｓ（ヒトＢリンパ球）上のＣＤ２０抗原に結合し、ＮＫ９２－Ｍ１エフェクター細胞上のＦｃγＲＩＩＩＡ（１５８Ｖ）受容体に抗体のＦｃドメインを介して関与することによって、ＣＤ２０発現Ｂリンパ球において用量依存的に細胞毒性を媒介する抗ＣＤ２０抗体の能力を測定する定量的細胞ベースのアッセイである。これにより、エフェクター細胞が活性化され、細胞溶解性顆粒複合体パーフォリン／グランザイムのエキソサイトーシスを介して腫瘍細胞が破壊される。ＡＤＣＣアッセイの概略を図３に示し、ＡＤＣＣアッセイの代表的な用量反応曲線を図４に示す。図４において、各用量点は３回の反復の平均±標準偏差であり、アッセイシグナル＝蛍光である。
【0184】
方法は、以下の工程からなる：
【0185】
【表B-6】
【0186】
標準及び試験サンプルは、検証された用量範囲をカバーするように、参照標準、アッセイ対照、及びサンプルを希釈することによって製造される。
【0187】
このアッセイに使用される試薬には以下のものが含まれ、それぞれの組成を示す：
【0188】
【表B-7】
【0189】
この方法のいくつかの工程は、蛍光容量を有するマイクロプレートリーダーを必要とする。
【0190】
システム適合性は以下の通りである：
【0191】
【表B-8】
【0192】
結果を相対ＡＤＣＣ％として報告する。
【0193】
実施例３
本実施例は、ＡＤＣＣをグリカンレベルに関連付けるモデルの確立につながった研究を記載する。
本実施例は、ＡＤＣＣをグリカンレベルに関連付けるモデルの確立につながった研究を記載する。
【0194】
小規模バイオリアクターで作製した抗ＣＤ２０抗体の代表的なサンプル（Ｎ＝４１）の、次のグリコフォーム：高マンノース、非フコシル化、及びガラクトシル化グリコフォームのレベルを、実施例１に記載の例示的な方法を用いて評価した。総非フコシル化の％（ＴＡＦ％）は、高マンノース％と非フコシル化％の合計である。抗ＣＤ２０抗体の各代表的なサンプルのＡＤＣＣレベルを、実施例２に記載のアッセイによって決定した。結果を表１に示す。
【0195】
【表1-1】
【0196】
【表1-2】
【0197】
表１のデータを、統計解析のためのコンピュータプログラムのＪＭＰスイート（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃａｒｙ、ＮＣ）を用いて分析した。データの回帰プロットを図５Ａに示す。プロットされたデータの最良適合線がこの図に示されており、以下の線形方程式、方程式１で記載され得る：
ＡＤＣＣ％＝２．６１２９６９６４９７＋２４．０７１９４０２９２×ＴＡＦ％
［方程式１］。
ＡＤＣＣ％＝２．６１２９６９６４９７＋２４．０７１９４０２９２×ＴＡＦ％
［方程式１］。
【0198】
追加の統計的パラメータを図５Ｂに示す。この図に示されるように、ＡＤＣＣとＴＡＦとの間の関連の有意性は、ｒ２値（ｒ２＝０．８８）及びｐ値（ｐ＜０．０００１）によって実証された。
【0199】
方程式１及び表１のＴＡＦ値を用いて、予測ＡＤＣＣ％値を表１の各サンプルについて算出した。図５Ｃにおいて、実ＡＤＣＣ％（表１に列挙）を予測ＡＤＣＣ％に対してプロットした。その結果、総非フコシル化とＡＤＣＣとの間に正の相関があり、総非フコシル化のレベルが高くなるとＡＤＣＣ活性が高くなることが確認された。
【0200】
図５Ｄは図５Ａと同じグラフであるが、９５％信頼区間（明るい青色の領域で示す）のグラフ描写を伴う。図５Ｄに示すように、ほとんどのデータ点は９５％信頼区間内に入った。図５Ｅは、方程式１のｙ切片及び傾きの両方の９５％信頼領域のグラフを示す。
【0201】
ＴＡＦの個々の成分（非フコシル化（ＡＦ）及び高マンノース（ＨＭ））による表１のデータもまた、ＪＭＰスイートを使用して分析し、ＡＤＣＣと同様の相関を示した。図６Ａ及び６Ｂは、高マンノース及び非フコシル化に関するこれらのデータについての回帰プロットを示す。プロットされたデータの最良適合線が図６Ａ及び６Ｂのそれぞれに示されており、以下の線形方程式、方程式２で記載され得る：
ＡＤＣＣ％＝０．２３５８４３５４２５＋２７．０３０８２２６３４×ＨＭ％＋２２．１２３９７０４２×ＡＦ％
［方程式２］。
ＡＤＣＣ％＝０．２３５８４３５４２５＋２７．０３０８２２６３４×ＨＭ％＋２２．１２３９７０４２×ＡＦ％
［方程式２］。
【0202】
追加の統計的パラメータを図６Ｃに示す。この図に示されるように、ＡＤＣＣとＴＡＦとの間の関連の有意性は、ｒ２値（ｒ２＝０．８８）及びｐ値（ｐ＜０．０００１）によって実証された。
【0203】
方程式２並びに表１の高マンノース値及び非フコシル化値を用いて、予測ＡＤＣＣ％値を表１の各サンプルについて算出した。図６Ｄにおいて、実ＡＤＣＣ％（表１に列挙）を予測ＡＤＣＣ％に対してプロットした。その結果、非フコシル化グリカン、高マンノースと、ＡＤＣＣとの間に正の相関があり、非フコシル化グリカン及び高マンノースのレベルが高くなるとＡＤＣＣ活性が高くなることが確認された。非フコシル化グリカン及び高マンノースは、ＡＤＣＣ活性に対し同等の寄与を示した。
【0204】
ガラクトシル化は統計的に有意な関連性を示さなかったので、ＡＤＣＣとＨＭ及びＡＦ（又はＴＡＦ）との間の関連性はこれらのグリカンに特異的であった。図７Ａは、ＡＤＣＣとガラクトシル化レベルとの間の回帰プロットである。統計的有意性の欠如は、ｒ２値（ｒ２＝０．０２）及びｐ値（ｐ＜０．３７１５）によって実証された。図７Ｂは、予測ＡＤＣＣの関数としてプロットされた実ＡＤＣＣ％（表１に列挙）のグラフである。これらの図に示されるように、ＡＤＣＣとガラクトシル化との間には非常に弱い関連性が観察されただけであった。
【0205】
統計解析により、ＴＡＦがＡＤＣＣ活性に最も大きく寄与していることが確認された。ＴＡＦレベルとＡＤＣＣ活性レベルとの関連性は、ＡＤＣＣ％と他のグリカンとの関係とは大きく異なっていた。
【0206】
実施例４
この実施例では、ＡＤＣＣをＴＡＦに関連付けるモデルを検証する研究を記載する。
この実施例では、ＡＤＣＣをＴＡＦに関連付けるモデルを検証する研究を記載する。
【0207】
ＡＤＣＣをＴＡＦに関連付ける実施例３に記載のモデルを、表１の大規模バイオリアクターサンプルの同じ抗体の大規模製造サンプルを用いて検証した。各大規模サンプル（Ｎ＝１３）を、実施例１に記載の方法に従って高マンノース及び非フコシル化レベルを測定し、次いで２つ％を合計してＴＡＦ％レベルを得ることによって、ＴＡＦレベルについて特徴付けた。実施例２に記載のアッセイを実施し、１試料当たり３つの値を得るために２回繰り返し、次いで３つの値の平均を記録することによって、各大規模サンプルの実験によるＡＤＣＣレベルを決定した。予測ＡＤＣＣを、方程式１を用いて計算した。結果を以下の表２に示す。
【0208】
【表2】
【0209】
表２のデータによって示されるように、方程式１によって生成された予測ＡＤＣＣ結果は、報告された実験結果とよく一致している。したがって、ＡＤＣＣ及びＴＡＦに関連する信頼性のある正確なモデルが確立された。
【0210】
実施例５
この実施例では、抗ＣＤ２０抗体のＡＤＣＣを予測する基礎を明らかにする新規なグリカンモデルを記載する。
この実施例では、抗ＣＤ２０抗体のＡＤＣＣを予測する基礎を明らかにする新規なグリカンモデルを記載する。
【0211】
抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブのバイオシミラーとして開発されている。Ｂ細胞に発現するＣＤ２０抗原に特異的に結合し、複数の機序を介してＢ細胞の殺滅を促進する組換えキメラマウス／ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体であり、ＡＤＣＣは重要な作用機序の１つである。コアフコースの非存在がＡＤＣＣ活性の増加をもたらす一方で、ガラクトシル化及び高マンノースも役割を果たし得ることが確立されている。抗ＣＤ２０抗体のＡＤＣＣ活性に対するＮ－グリカンの寄与の系統的評価をグリコエンジニアリング研究によって実施し、非フコシル化グリカン、高マンノースと、ＡＤＣＣとの間に正の相関があり、非フコシル化グリカン及び高いマンノースのレベルが高くなるとＡＤＣＣ活性が高くなることを確認した。しかしながら、グリコエンジニアリングによって生成されたサンプルのグリカンプロファイルは、抗ＣＤ２０抗体のグリカン属性範囲を完全には代表していない可能性があり、抗ＣＤ２０抗体の小規模バイオリアクターデータセットの統計的評価を行って、抗ＣＤ２０抗体製造プロセスにおいて全範囲を捕捉することによって代表的なグリカンＡＤＣＣモデルを確立した。このアプローチにより、非フコシル化及び高マンノースがＡＤＣＣに対し同様の相関を示すことが明らかになった。総非フコシル化（非フコシル化と高マンノースの合計）を使用して、抗ＣＤ２０抗体ＡＤＣＣを予測する新規方法論をグリカンモデルに適用した。予測式（ＡＤＣＣ＝２．６＋２４．１×総非フコシル化）を確立し、大規模製造データを用いて検証した。式によって得られた予測ＡＤＣＣ結果は、報告されたＡＤＣＣアッセイ結果とよく一致している。したがって、総非フコシル化とＡＤＣＣの相関は、グリカン－ＡＤＣＣモデルとして確立され、グリカン測定をオルトゴナル法として使用してＡＤＣＣをモニターするプロセスが可能になった。
【0212】
この研究の結果は、グリカンのＡＤＣＣとの相関の基礎を特定し、抗ＣＤ２０抗体とオルトゴナル法（ＨＰＬＣグリカン法）との間の機能的アッセイをもたらした。このデータにより、Ａｍｇｅｎは属性に焦点を当てた開発アプローチと、結果を考慮し、市場アプリケーションのための新規な属性分析を提供するための識別されたメカニズムとを進めることが可能になった。
【0213】
使用したアプローチには、ＨＰＬＣ、ＡＤＣＣアッセイ及び機能横断的コラボレーションが含まれた
【0214】
実施例６
この実施例は、第２の抗体についてＡＤＣＣをグリカンレベルに関連付けるモデルを確立するに至った研究を示す。
この実施例は、第２の抗体についてＡＤＣＣをグリカンレベルに関連付けるモデルを確立するに至った研究を示す。
【0215】
実施例３は、ＣＤ２０に結合するＩｇＧ１についてＡＤＣＣをグリカンレベルに関連付けるモデルを確立するに至った研究を記載している。本研究は、ヒト定常領域及びマウス可変領域から構成され、ＴＮＦα抗原に結合するキメラモノクローナルＩｇＧ１カッパ抗体について、ＡＤＣＣとグリカンレベルとの間の関係を評価する。
【0216】
小規模バイオリアクターで作製した第２の抗体（抗ＴＮＦα抗体）の代表的なサンプルの、次のグリコフォーム：高マンノース及び非フコシル化のレベルを、実施例１に記載の例示的な方法を用いて評価した。総非フコシル化のパーセンテージ（ＴＡＦ％）は、高マンノース％と非フコシル化％の合計である。抗ＴＮＦα抗体の各代表的なサンプルのＡＤＣＣレベルを、実施例２に記載のアッセイによって決定した。データを、統計解析のためのコンピュータプログラムのＪＭＰスイート（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃａｒｙ、ＮＣ）を用いて分析した。データの回帰プロットを図８Ａに示す。プロットされたデータの最良適合線がこの図に示されており、以下の線形方程式、方程式３で記載され得る：
ＡＤＣＣ％＝９．３＋１２．４７×ＴＡＦ％
［方程式３］。
ＡＤＣＣ％＝９．３＋１２．４７×ＴＡＦ％
［方程式３］。
【0217】
追加の統計的パラメータを図８Ｂに示す。この図に示されるように、ＡＤＣＣとＴＡＦとの間の関連の有意性は、ｒ２値（ｒ２＝０．８０）及びｐ値（ｐ＜０．０００１）によって実証された。
【0218】
方程式３及び測定されたＴＡＦ値を用いて、予測ＡＤＣＣ％値を各サンプルについて算出した。図８Ｃにおいて、実ＡＤＣＣ％（実施例２で記載したように測定）を予測ＡＤＣＣ％に対してプロットした。その結果、総非フコシル化とＡＤＣＣとの間に正の相関があり、総非フコシル化のレベルが高くなるとＡＤＣＣ活性が高くなることが確認された。
【0219】
図８Ｄは図８Ａと同じグラフであるが、９５％信頼区間（灰色の陰影領域で示す）のグラフ描写を伴う。図８Ｄに示すように、ほとんどのデータ点は９５％信頼区間内に入った。図８Ｅは、方程式３のｙ切片及び傾きの両方の９５％信頼領域のグラフを示す。
【0220】
ＴＡＦの個々の成分（非フコシル化（ＡＦ）及び高マンノース（ＨＭ））によるデータもまた、ＪＭＰスイートを使用して分析し、ＡＤＣＣと同様の相関を示した。図９Ａ及び９Ｂは、それぞれ、高マンノース及び非フコシル化に関するこれらのデータの回帰プロットを示す。プロットされたデータの最良適合線が図９Ａ及び９Ｂのそれぞれに示されており、以下の線形方程式、方程式４で記載され得る：
ＡＤＣＣ％＝８．６６＋１２．８６×ＨＭ％＋１２．３７×ＡＦ％
［方程式４］。
ＡＤＣＣ％＝８．６６＋１２．８６×ＨＭ％＋１２．３７×ＡＦ％
［方程式４］。
【0221】
追加の統計的パラメータを図９Ｃに示す。この図に示されるように、ＡＤＣＣとＴＡＦとの間の関連の有意性は、ｒ２値（ｒ２＝０．８）及びｐ値（ｐ＜０．０００１）によって実証された。
【0222】
方程式４並びに測定された高マンノース値及び非フコシル化値を用いて、予測ＡＤＣＣ％値を各サンプルについて算出した。図９Ｄにおいて、実ＡＤＣＣ％（実施例２で記載したように測定）を予測ＡＤＣＣ％に対してプロットした。その結果、非フコシル化グリカン、高マンノースと、ＡＤＣＣとの間に正の相関があり、非フコシル化グリカン及び高マンノースのレベルが高くなるとＡＤＣＣ活性が高くなることが確認された。非フコシル化グリカン及び高マンノースは、ＡＤＣＣ活性に対し同等の寄与を示した。
【0223】
この実施例は、第２の抗体（抗ＴＮＦα抗体）について、ＴＡＦがＡＤＣＣ活性に対して非常に有意な寄与を示すことが統計的分析によって確認されたことを実証した。
【0224】
実施例７
この実施例は、ＡＤＣＣをＴＡＦ、ＨＭ及び／又はＡＦグリカンに関連付けるモデルの第２のセットを実証する。
この実施例は、ＡＤＣＣをＴＡＦ、ＨＭ及び／又はＡＦグリカンに関連付けるモデルの第２のセットを実証する。
【0225】
実施例３及び６のそれぞれは、２つの抗体、すなわち抗ＣＤ２０抗体と抗ＴＮＦアルファ抗体について、ＡＤＣＣをＴＡＦグリカン含量に、又はＡＤＣＣをＨＭ及びＡＦグリカン含量に関連付ける線形回帰モデルを確立する：例示的な態様では、ＣＤ２０抗体は、抗ＴＮＦα抗体である。モデルは、方程式１～４で数学的に記述される。これらの方程式のそれぞれについて、ｙ切片の重要性を、各方程式のｙ切片のｐ値を分析することによって評価した。表３は、方程式１～４のそれぞれに対するｙ切片のｐ値を示す。
【0226】
【表3】
【0227】
各ｐ値は０．０５よりも大きいので、方程式１～４の各ｙ切片はゼロに近いと考えられ、式から除外することができた。
【0228】
上記を考慮して、測定されたＡＤＣＣデータ及び測定されたグリカンデータを「ｙ切片なしモデル」に再適合させ、これらのモデルの統計的有意性を評価した。表４は、２つの抗体についてのＡＤＣＣとＴＡＦグリカン、又はＡＤＣＣとＨＭ及びＡＦグリカンの間の関係を記載する、ｙ切片なしモデルの方程式を列挙する。
【0229】
【表4】
【0230】
表４に示すように、ｙ切片なしモデルは統計的に有意であり、ＡＤＣＣをＴＡＦグリカン含量に、又はＡＤＣＣをＨＭ及びＡＦグリカン含量に相関させる代替モデルを表す。
【0231】
表５は、線形回帰モデルとｙ切片なしモデルのそれぞれの傾きを示す。
【0232】
【表5】
【0233】
表５に示すように、２つのモデルは互いに高い一致を示す。線形回帰モデル及びｙ切片なしモデルのそれぞれにおけるＴＡＦのｘ切片（２４．０７０７０対２４．７３５７９）は、値が非常に近かった。同じことが、ＨＭ（２７．０３０８２対２７．１４９４１）グリカン及びＡＦ（２２．１２３９７対２２．１２０１８）グリカンのそれぞれについて観察された。
【0234】
実施例８
この例は、ＡＤＣＣ－ＴＡＦモデルとＡＤＣＣ－ＨＭ／ＡＦモデルとが交換可能であることを実証する。
この例は、ＡＤＣＣ－ＴＡＦモデルとＡＤＣＣ－ＨＭ／ＡＦモデルとが交換可能であることを実証する。
【0235】
ＡＤＣＣをＨＭ及びＡＦグリカン含量に相関させる表４の方程式６を用いて、予測ＡＤＣＣを計算した。予測ＡＤＣＣを、表４の方程式５（これはＡＤＣＣをＴＡＦグリカン含量と相関させる）に従って計算された予測ＡＤＣＣに対してプロットした。結果を図１０Ａのグラフに示す。表４の方程式７及び８について同じ工程を実施し、図１０Ｂにグラフ化した。最良適合線の方程式は、各グラフの下に示す。これらの図及び方程式に示すように、モデルは互いに高い一致を示す（ｐ＜０．０００１）。傾きは、ほぼ１．０（０．９７又は０．９８）である。これらのデータは、抗体組成物のＡＤＣＣが１つのグリカン型（ＴＡＦグリカン）対２つのグリカン型（ＨＭ及びＡＦ）に基づいて予測され得ることを支持する。これらのデータはまた、目標ＡＤＣＣを有する抗体組成物について、目標ＴＡＦが算出され得、且つ目標ＴＡＦを達成するためにＨＭ及びＡＦのいずれかを改変し得ることを示唆する。抗体組成物のＨＭ又はＡＦを改変する方法は、ＨＭ及びＡＦの両方を改変する方法を組み合わせるよりも単純である。
【0236】
本明細書で引用されている全ての参考文献（例えば、刊行物、特許出願及び特許）は、各参考文献が参照により組み込まれると個々に且つ明確に示されており、且つその全体が本明細書に記載されていた場合と同程度まで、参照により本明細書に組み込まれる。
【0237】
本開示の説明に関連して（特に以下の特許請求の範囲に関連して）、用語「１つの（ａ）」、及び「１つの（ａｎ）」、及び「その」並びに類似の指示対象の使用は、別途本明細書で指示されない限り又は文脈と明らかに矛盾しない限り、単数及び複数の両方を包含すると解釈されなければならない。用語「含む」、「有する」、「包含する」及び「含有する」は、特記しない限り、オープンエンドの用語（すなわち「含むが、限定されない」を意味する）と解釈されなければならない。
【0238】
本明細書における値の範囲の列挙は、別途本明細書で指示されない限り、この範囲及び各端点にある別個の値のそれぞれを個々に指す簡略法の役割を果たすことが意図されているに過ぎず、別個の値及び端点のそれぞれは、それが本明細書において個々に列挙されていたかのように本明細書に組み込まれる。
【0239】
本明細書で説明されている方法の全ては、別途本明細書で指示されない限り又は文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施され得る。本明細書で提供されるあらゆる例又は例示的な言語（例えば、「など」）の使用は、本開示をより明らかにすることが意図されているに過ぎず、別途特許請求されない限り、本開示の範囲に限定を課すものではない。本明細書におけるいかなる言語も、任意の特許請求されていない要素を本開示の実施に必須として示していると解釈されるべきではない。
【0240】
本明細書では、本開示の好ましい実施形態が説明されており、例えば本開示を実行するための本発明者らに既知の最良の形態が説明されている。それらの好ましい実施形態の変形形態は、上記の記載を読めば当業者には明らかであろう。本発明者らは、当業者が必要に応じてこのような変形形態を採用することを期待し、また、本発明者らは、本明細書で具体的に記載されている形態以外で本開示が実施されることを意図している。したがって、本開示は、適用される法により認められる通り、本明細書に添付される特許請求の範囲に列挙されている主題の全ての変更形態及び均等物を含む。さらに、上記の要素の任意の組み合わせは、別途本明細書で指示されない限り又は文脈と明らかに矛盾しない限り、その全ての可能な変形形態で本開示に包含される。
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図3】
【図4】
【図5A-5B】
【図5C-5D】
【図5E】
【図6A-6B】
【図6C-6D】
【図7A-7B】
【図8A-8B】
【図8C-8D】
【図8E】
【図9A-9B】
【図9C-9D】
【図10A-10B】
【配列表】
【国際調査報告】