(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-11-25
(54)【発明の名称】細胞培養培地錠剤および製造方法
(51)【国際特許分類】
C12N 1/00 20060101AFI20221117BHJP
C12N 5/00 20060101ALI20221117BHJP
【ＦＩ】
C12N1/00 F
C12N5/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022518225
(86)(22)【出願日】2020-09-17
(85)【翻訳文提出日】2022-05-17
(86)【国際出願番号】 US2020051236
(87)【国際公開番号】W WO2021055579
(87)【国際公開日】2021-03-25
(31)【優先権主張番号】62/902,703
(32)【優先日】2019-09-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】502221282
【氏名又は名称】ライフ テクノロジーズ コーポレーション
(74)【代理人】
【識別番号】100094569
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 伸一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100103610
【弁理士】
【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦
(74)【代理人】
【識別番号】100109070
【弁理士】
【氏名又は名称】須田 洋之
(74)【代理人】
【識別番号】100119013
【弁理士】
【氏名又は名称】山崎 一夫
(74)【代理人】
【識別番号】100123777
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 さつき
(74)【代理人】
【識別番号】100111796
【弁理士】
【氏名又は名称】服部 博信
(74)【代理人】
【識別番号】100123766
【弁理士】
【氏名又は名称】松田 七重
(74)【代理人】
【識別番号】100162422
【弁理士】
【氏名又は名称】志村 将
(72)【発明者】
【氏名】フェルプス ムウィタ
【テーマコード（参考）】
4B065
【Ｆターム（参考）】
4B065BB01
4B065BB02
4B065BB03
4B065BB14
4B065BB19
4B065BB20
(57)【要約】
細胞または微生物の培養に有用な乾燥細胞培養培地、フィード、サプリメント、培地サブグループ、緩衝液濃縮物、または培地成分の錠剤を効率的に溶解すること、製造方法、および使用方法が、本明細書に記載されている。特に、錠剤化された細胞培養培地フィード、サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液濃縮物の製剤が記載されている。
【選択図】図１Ｂ
【選択図】図１Ｂ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
細胞培養培地、フィード、またはサプリメントを含む錠剤化された組成物であって、アミノ酸、塩、緩衝液、微量ミネラル、ビタミン、炭水化物、脂質、核酸、タンパク質と、
滑沢剤、増量剤、結合剤、またはそれらの組み合わせと
を含む、組成物。
【請求項2】
前記錠剤化された組成物が２５℃の水に約１０～３０分以内に溶解する、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記組成物が、９５～９９質量パーセントのアミノ酸、塩、緩衝液、微量ミネラル、ビタミン、炭水化物、脂質、核酸、タンパク質と、
１～５質量パーセントのステアリン酸マグネシウムを含む滑沢剤と
を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項4】
前記組成物が、９０～９９質量パーセントのアミノ酸、塩、緩衝液、微量ミネラル、ビタミン、炭水化物、脂質、核酸、タンパク質と、
１～５質量パーセントのクロスカルメロースナトリウムを含む崩壊剤と、
１～５質量パーセントのステアリン酸マグネシウムを含む滑沢剤と
を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項5】
錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメント組成物を含む組成物であって、２０～６５質量パーセントの炭水化物、
２０～４０質量パーセントのアミノ酸、
２～１０質量パーセントの無機塩または緩衝液、
１～５質量パーセントのビタミン、
０．０１～０．０５質量パーセントの微量ミネラル、を含む培地成分と、
１～１０質量パーセントの滑沢剤、増量剤、結合剤、またはそれらの組み合わせを含む錠剤化成分とを含む、組成物。
【請求項6】
前記組成物が、（ａ）２０～６５質量パーセントのグルコース、フルクトース、ラクトース、トレハロース、マルトース、またはスクロースを含む単糖類または二糖類と、
（ｂ）２０～４０質量パーセントのアラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、バリン、チロシン、システイン、リジン、それらの塩、またはそれらの組み合わせを含むアミノ酸と、
（ｃ）２～１０質量パーセントのナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、リン酸塩、炭酸塩、硫酸塩、またはそれらの組み合わせの塩と、
（ｄ）１～５質量パーセントのレチノール（Ａ）、チアミン（Ｂ１）、リボフラビン（Ｂ２）、ナイアシンアミド（Ｂ３）、パントテン酸（Ｂ５）、ピリドキサミン（Ｂ６）、ビオチン（Ｂ７）、葉酸（Ｂ９）、コバラミン（Ｂ１２）、アスコルビン酸（Ｃ）、コレカルシフェロール（Ｄ）、トコフェロール（Ｅ）、フィロキノン（Ｋ）、コリン、イノシトール、リポ酸、パラアミノ安息香酸、それらの塩、またはそれらの組み合わせを含むビタミンと、
（ｅ）０．０１～０．０５質量パーセントの鉄、マンガン、銅、ヨウ素、亜鉛、コバルト、フッ化物、クロム、モリブデン、セレン、ニッケル、ケイ素、バナジウム、それらの塩、またはそれらの組み合わせを含む微量元素と、
（ｆ）１～５質量パーセントのステアリン酸マグネシウムと、
（ｇ）１～５質量パーセントのクロスカルメロースナトリウムと
を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項7】
前記培地成分が凝集乾燥粉末を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項8】
前記錠剤化された培地が２５℃の水に約１０～３０分以内に溶解する、請求項５～７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項9】
前記錠剤化された培地が約１８～２２ｋｐの硬度を有する、請求項５～８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項10】
前記錠剤化された培地が約２．０～５．０ｇの質量を有する、請求項５～９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項11】
前記錠剤化された培地が、水で再構成されたときに、類似の錠剤化されていない培地に見合った細胞生存率レベルおよび発現タンパク質レベルを示す、請求項５～１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項12】
錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメント組成物を製造するための方法であって、前記方法が、（ａ）細胞培養培地、フィード、もしくはサプリメント粉末または凝集粉末を調製することと、
（ｂ）前記培地粉末または凝集粉末を１つ以上の滑沢剤、増量剤、結合剤、またはそれらの組み合わせと組み合わせることと、
（ｃ）錠剤化装置を使用して、細胞培養培地、フィード、またはサプリメント錠剤を製造することと
を含む、方法。
【請求項13】
前記細胞培養培地、フィード、またはサプリメントが、流動床凝集によって製造された凝集粉末である、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記細胞培養培地、フィード、もしくはサプリメント粉末または凝集粉末が滑沢剤と組み合わされる、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項15】
前記錠剤化された組成物が、９５～９９質量パーセントの細胞培養培地、フィード、もしくはサプリメント粉末または凝集粉末と、１～５パーセントの１つ以上の滑沢剤とを含む、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記滑沢剤がステアリン酸マグネシウムを含む、請求項１２～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記細胞培養培地、フィード、もしくはサプリメント粉末または凝集粉末が、滑沢剤および崩壊剤と組み合わされる、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記錠剤化された組成物が、９５～９９質量パーセントの細胞培養培地、フィード、もしくはサプリメント粉末または凝集粉末と、１～５パーセントの１つ以上の滑沢剤と、１～５パーセントの１つ以上の崩壊剤とを含む、請求項１２～１４または１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記滑沢剤がステアリン酸マグネシウムを含み、前記崩壊剤がクロスカルメロースナトリウムを含む、請求項１２～１４または１７～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記錠剤が２．０～５．０ｇの質量を有する、請求項１２～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記錠剤が１８～２２ｋｐの硬度を有する、請求項１２～２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記錠剤が２５℃の水に１０～３０分以内に溶解する、請求項１２～２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
請求項１２～２２のいずれか一項に記載の方法によって製造された錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメント。
【請求項24】
前記錠剤が、２０～６５質量パーセントの炭水化物、
２０～４０質量パーセントのアミノ酸、
２～１０質量パーセントの無機塩または緩衝液、
１～５質量パーセントのビタミン、
０．０１～０．０５質量パーセントの微量ミネラル、
を含む培地成分と、
１～１０質量パーセントの滑沢剤、増量剤、結合剤、またはそれらの組み合わせ
を含む錠剤化成分と
を含む、請求項２３に記載の錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメント。
【請求項25】
前記錠剤が、９５～９９質量パーセントの細胞培養培地、フィード、またはサプリメントと、１～５パーセントの１つ以上の滑沢剤とを含む、請求項２４に記載の錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメント。
【請求項26】
前記錠剤が、９０～９９質量パーセントの細胞培養培地、フィード、またはサプリメントと、１～５質量パーセントのクロスカルメロースナトリウムを含む崩壊剤と、１～５質量パーセントのステアリン酸マグネシウムを含む滑沢剤とを含む、請求項２４に記載の錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメント。
【請求項27】
前記錠剤が２．０～５．０ｇの質量を有する、請求項２３～２６のいずれか一項に記載の錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメント。
【請求項28】
前記錠剤が１８～２２ｋｐの硬度を有する、請求項２３～２７のいずれか一項に記載の錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメント。
【請求項29】
前記錠剤が２５℃の水に１０～３０分以内に溶解する、請求項２３～２８のいずれか一項に記載の錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメント。
【請求項30】
細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液の１つ以上の錠剤と、希釈剤と、細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液の１つ以上の１つ以上の錠剤を再構成するのに適した容器と、使用説明書とを含むパッケージを含むキット。
【請求項31】
錠剤化された細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液組成物から細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液を作製するための方法であって、前記方法が、（ａ）細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液の１つ以上の錠剤を、溶解するまで水と組み合わせることと、
（ｂ）任意に、アミノ酸、抗生物質、血清、または他の細胞培養培地サプリメントを含むサプリメントを添加することと、
（ｃ）任意に、再構成された前記細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液を滅菌することと
を含む、方法。
【請求項32】
前記滅菌が濾過またはガンマ線照射を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記錠剤が２５℃の水に約１０～３０分以内に溶解する、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項34】
請求項３１～３３のいずれか一項に記載の方法によって調製された細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液。
【請求項35】
細胞と、請求項３４に記載の細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液とを含む系。
【請求項36】
錠剤化された細胞培養培地から再構成された液体中で細胞を培養する方法であって、錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメントを適切な液体または緩衝液で再構成することと、
増殖に有利な条件下で、再構成された培地で前記細胞を培養することと
を含む、方法。
【請求項37】
細胞培養培地成分の濃度を最適化する方法であって、細胞培養物中の１つ以上の培地成分の濃度を測定することと、
前記１つ以上の培地成分が許容可能な濃度範囲内にあるかどうかを決定することと、
必要に応じて、前記細胞培養物中の前記１つ以上の培地成分に錠剤化された細胞培養培地組成物を補充することと
を含む、方法。
【請求項38】
前記測定することが、ＨＰＬＣ、質量分析、ＥＬＩＳＡ、または標準曲線アッセイから選択される方法を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
前記補充が、前記錠剤化された培地組成物を前記培養物に直接添加すること、または前記錠剤化された培地組成物を溶媒に溶解し、次いで溶解した前記錠剤化された培地組成物を前記細胞培養物に添加することを含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項40】
細胞培養培地、フィード、またはサプリメントを調製するための錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメントの使用。
【請求項41】
細胞を培養するための錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメントの使用。
【請求項42】
前記培養するための錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメントが再構成され、前記細胞が好ましい増殖条件下で培養される、請求項４１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月１９日に出願された米国仮出願第６２／９０２，７０３号の米国特許法第１１９条（ｅ）に基づく優先権の権益を主張する。
本出願は、２０１９年９月１９日に出願された米国仮出願第６２／９０２，７０３号の米国特許法第１１９条（ｅ）に基づく優先権の権益を主張する。
【0002】
細胞または微生物の培養に有用な乾燥細胞培養培地、フィード、サプリメント、培地サブグループ、緩衝液濃縮物、または培地成分の錠剤を効率的に溶解すること、製造方法、および使用方法が本明細書に記載される。特に、錠剤化された細胞培養培地フィード、サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液濃縮物の製剤が記載される。
【背景技術】
【0003】
細胞培養培地は、制御されたインビトロ環境で細胞を維持または増殖させるための栄養素を提供する。細胞培養培地の特性および組成は、細胞が培養される特定の細胞要件および機能に応じて異なる。培地は通常、乾燥粉末、液体、濃縮液、凝集培地、または凝集培地ペレットとして製造される。例えば、米国特許第６，３８３，８１０号および同第６，６２７，４２６号、ならびに米国特許出願公開第２０１８／０１４２２０３Ａ１号および同第２０１９／００４８３１２Ａ１号を参照されたい。これらはそれぞれ、細胞培養培地に関連する教示のために参照により本明細書に組み込まれる。これらの培地の形式にはそれぞれ、特定の長所および短所がある。例えば、乾燥粉末は使いやすく保管も簡単であるが、潜在的に危険な粉塵が発生し、一部の成分は溶解しにくい場合がある。液体培地および液体培地濃縮物は「すぐに使用できる」が、多くの場合、サプリメントが必要であり、貯蔵寿命が短く、大量に滅菌するのが難しい。凝集培地およびペレット培地は、乾燥粉末培地の多くの欠点を克服した。これらの培地の形式は、必要に応じてエンドユーザによって溶解および滅菌され、最長２年間保存できる。凝集およびペレット化された培地の唯一の欠点は、目標とする量とスケールアップに対して均一な質量を達成するためにそれらを秤量する必要があり、それらの製造生産速度が変動することである。
【0004】
したがって、処理ステップを減らして大量生産でき、通常の滅菌方法、計量なしの目標量、および迅速なスケールアップが可能な、錠剤化された、乾燥した、安定した、効率的に溶解する細胞培養培地製品が必要である。
【発明の概要】
【0005】
本明細書に記載される一実施形態は、アミノ酸、塩、緩衝液、微量ミネラル、ビタミン、炭水化物、脂質、核酸、タンパク質、および滑沢剤、増量剤、結合剤、またはそれらの組み合わせを含む細胞培養培地、フィード、またはサプリメントを含む錠剤化された組成物である。一態様では、錠剤化された組成物は、２５℃の水に約１０～３０分以内に溶解する。別の態様では、組成物は、９５～９９質量パーセントのアミノ酸、塩、緩衝液、微量ミネラル、ビタミン、炭水化物、脂質、核酸、タンパク質と、１～５質量パーセントのステアリン酸マグネシウムを含む滑沢剤と、を含む。別の態様では、組成物は、９０～９９質量パーセントのアミノ酸、塩、緩衝液、微量ミネラル、ビタミン、炭水化物、脂質、核酸、タンパク質と、１～５質量パーセントのクロスカルメロースナトリウムを含む崩壊剤と、１～５質量パーセントのステアリン酸マグネシウムを含む滑沢剤と、を含む。
【0006】
本明細書に記載の別の実施形態は、錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメント組成物を含む組成物であって、２０～６５質量パーセントの炭水化物、２０～４０質量パーセントのアミノ酸、２～１０質量パーセントの無機塩または緩衝液、１～５質量パーセントのビタミン、０．０１～０．０５質量パーセントの微量ミネラルを含む培地成分と、１～１０質量パーセントの滑沢剤、増量剤、結合剤、またはそれらの組み合わせを含む錠剤化成分と、を含む、組成物である。一態様では、組成物は以下を含む：（ａ）２０～６５質量パーセントの、グルコース、フルクトース、ラクトース、トレハロース、マルトース、またはスクロースを含む単糖または二糖、（ｂ）２０～４０質量パーセントの、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、バリン、チロシン、システイン、リジン、それらの塩、またはそれらの組み合わせを含むアミノ酸、（ｃ）２～１０質量パーセントの、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、リン酸塩、炭酸塩、硫酸塩、またはそれらの組み合わせの塩、（ｄ）１～５質量パーセントの、レチノール（Ａ）、チアミン（Ｂ１）、リボフラビン（Ｂ２）、ナイアシンアミド（Ｂ３）、パントテン酸（Ｂ５）、ピリドキサミン（Ｂ６）、ビオチン（Ｂ７）、葉酸（Ｂ９）、コバラミン（Ｂ１２）、アスコルビン酸（Ｃ）、コレカルシフェロール（Ｄ）、トコフェロール（Ｅ）、フィロキノン（Ｋ）、コリン、イノシトール、リポ酸、パラアミノ安息香酸、それらの塩、またはそれらの組み合わせを含むビタミン、（ｅ）０．０１～０．０５質量パーセントの、鉄、マンガン、銅、ヨウ素、亜鉛、コバルト、フッ化物、クロム、モリブデン、セレン、ニッケル、ケイ素、バナジウム、それらの塩、またはそれらの組み合わせを含む微量元素、（ｆ）１～５質量パーセントのステアリン酸マグネシウム、（ｇ）１～５質量パーセントのクロスカルメロースナトリウム。
【0007】
別の態様では、培地成分は、凝集した乾燥粉末を含む。別の態様では、錠剤化された培地は、２５℃の水に約１０～３０分以内に溶解する。別の態様では、錠剤化された培地は、約１８～２２ｋｐの硬度を有する。別の態様では、錠剤化された培地は、約２．０～５．０ｇの質量を有する。別の態様では、錠剤化された培地は、水で再構成されたときに、類似の錠剤化されていない培地に見合った細胞生存率レベルおよび発現タンパク質レベルを示す。
【0008】
本明細書に記載の別の実施形態は、錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメント組成物を製造するための方法であって、方法が、（ａ）細胞培養培地、フィード、またはサプリメント粉末もしくは凝集粉末を調製することと、（ｂ）培地粉末または凝集粉末を１つ以上の滑沢剤、増量剤、結合剤、またはそれらの組み合わせと組み合わせることと、（ｃ）錠剤化装置を使用して、細胞培養培地、フィード、またはサプリメント錠剤を製造することと、を含む、方法である。一態様では、細胞培養培地、フィード、またはサプリメントは、流動床凝集によって製造された凝集粉末である。別の態様では、細胞培養培地、フィード、またはサプリメント粉末または凝集粉末は、滑沢剤と組み合わされる。別の態様では、錠剤化された組成物は、９５～９９質量パーセントの細胞培養培地、フィード、またはサプリメント粉末または凝集粉末と、１～５パーセントの１つ以上の滑沢剤と、を含む。別の態様では、滑沢剤はステアリン酸マグネシウムを含む。別の態様では、細胞培養培地、フィード、またはサプリメント粉末または凝集粉末は、滑沢剤および崩壊剤と組み合わされる。別の態様では、錠剤化された組成物は、９５～９９質量パーセントの細胞培養培地、フィード、またはサプリメント粉末または凝集粉末と、１～５パーセントの１つ以上の滑沢剤と、１～５パーセントの１つ以上の崩壊剤と、を含む。別の態様では、滑沢剤はステアリン酸マグネシウムを含み、崩壊剤はクロスカルメロースナトリウムを含む。別の態様では、錠剤の質量は２．０～５．０ｇである。別の態様では、錠剤は１８～２２ｋｐの硬度を有する。別の態様では、錠剤は、２５℃の水に１０～３０分以内に溶解する。
【0009】
本明細書に記載の別の実施形態は、本明細書に記載の方法のいずれかによって製造される錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメントである。一態様では、錠剤は、２０～６５質量パーセントの炭水化物、２０～４０質量パーセントのアミノ酸、２～１０質量パーセントの無機塩または緩衝液、１～５質量パーセントのビタミン、０．０１～０．０５質量パーセントの微量ミネラルを含む培地成分と、１～１０質量パーセントの滑沢剤、増量剤、結合剤、またはそれらの組み合わせを含む錠剤化成分と、を含む、組成物である。別の態様では、錠剤は、９５～９９質量パーセントの細胞培養培地、フィード、またはサプリメントと、１～５パーセントの１つ以上の滑沢剤と、を含む。別の態様では、錠剤は、９０～９９質量パーセントの細胞培養培地、フィード、またはサプリメントと、１～５質量パーセントのクロスカルメロースナトリウムを含む崩壊剤と、１～５質量パーセントのステアリン酸マグネシウムを含む滑沢剤と、を含む。別の態様では、錠剤の質量は２．０～５．０ｇである。別の態様では、錠剤は１８～２２ｋｐの硬度を有する。別の態様では、錠剤は、２５℃の水に１０～３０分以内に溶解する。
【0010】
本明細書に記載の別の実施形態は、細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液の１つ以上の錠剤と、希釈剤と、細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液の１つ以上の１つ以上の錠剤を再構成するのに適した容器と、使用説明書と、を含むパッケージを含むキットである。
【0011】
本明細書に記載の別の実施形態は、錠剤化された細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液組成物から細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液を作製するための方法であって、方法が、（ａ）細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液の錠剤の１つ以上を、溶解するまで水と組み合わせることと、（ｂ）任意選択で、アミノ酸、抗生物質、血清、または他の細胞培養培地サプリメントを含む任意のサプリメントを添加することと、（ｃ）任意選択で、再構成された細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液を滅菌することと、を含む、方法である。一態様では、滅菌は、濾過またはガンマ線照射を含む。別の態様では、錠剤は、２５℃の水に約１０～３０分以内に溶解する。
【0012】
本明細書に記載の別の実施形態は、本明細書に記載の方法によって調製された細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液である。
本明細書に記載の別の実施形態は、本明細書に記載の細胞および細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液を含む系である。
本明細書に記載の別の実施形態は、本明細書に記載の細胞および細胞培養培地、フィード、サプリメント、または緩衝液を含む系である。
【0013】
本明細書に記載の別の実施形態は、錠剤化された細胞培養培地から再構成された液体中で細胞を培養する方法であって、錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメントを再構成することと、増殖に有利な条件下で、再構成された培地中で細胞を培養することと、を含む、方法である。
【0014】
本明細書に記載の別の実施形態は、細胞培養培地成分の濃度を最適化する方法であって、方法が、細胞培養物中の１つ以上の培地成分の濃度を測定することと、１つ以上の培地成分が許容可能な濃度範囲内にあるかどうかを決定することと、必要に応じて、細胞培養物中の１つ以上の培地成分に錠剤化された細胞培養培地組成物を補充することと、を含む、方法である。一態様では、測定することは、ＨＰＬＣ、質量分析、ＥＬＩＳＡ、または標準曲線アッセイから選択される方法を含む。別の態様では、補充は、錠剤化された培地組成物を培養物に直接添加すること、または錠剤化された培地組成物を溶媒に溶解し、次いで溶解した錠剤化された培地組成物を細胞培養物に添加することを含む。
【0015】
本明細書に記載される別の実施形態は、細胞培養培地、フィード、またはサプリメントを調製するための錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメントの使用である。
【0016】
本明細書に記載される別の実施形態は、細胞を培養するための錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメントの使用である。別の態様では、培養用の錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメントが再構成され、細胞が好ましい増殖条件下で培養される。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1A】ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ （ＧＩＢＣＯ）と様々な量のステアリン酸マグネシウムから形成された例示的な培地錠剤を示す。錠剤は約２．５ｇの培地を含み、１６ｍｍ×９．９ｍｍで、硬度は約１９ｋｐである。表４を参照されたい。
【図1B】ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ）と２％ステアリン酸マグネシウムから形成された例示的な培地錠剤と、２５℃の水中でのそれらの崩壊を示す。崩壊は、９２６ｍＬの水に５０ｇ（２０錠）を加えて実施した。これは、推奨される培地調製手順である。２質量パーセントのステアリン酸マグネシウムを含む錠剤は２８分以内に崩壊し、５質量パーセントのステアリン酸マグネシウムを含む錠剤は３８分以内に崩壊した。表５を参照されたい。
【図2A】振とうフラスコ内の、グルコースを含むＣＤ ＯＰＴＩＣＨＯ（ＧＩＢＣＯ）（陰性対照）、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ （ＧＩＢＣＯ）（陽性対照）、または２質量パーセントもしくは５質量パーセントのステアリン酸マグネシウムを含むＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ錠剤（「錠剤飼料（Tablet Feed）」）で増殖するＣＨＯ ＤＧ４４ ＬＨ細胞を示す。錠剤飼料を添加した細胞培養物は、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ（すなわち、錠剤化されていない飼料（non-tableted feed）、陽性対照）を補充した細胞培養物に匹敵する生細胞数（例えば、約１４×１０6細胞／ｍＬ）を示した。グルコースのみを含む補充されていない細胞培養物は、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴを補充した細胞培養物と比較して低い、約１０×１０6細胞／ｍＬ（陰性対照）の生細胞数を示した。
【図3A】図２Ａ～２Ｂで論じた細胞培養物からのＩｇＧ力価を示す。錠剤飼料を添加した細胞培養物は、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ（すなわち、錠剤化されていない飼料、陽性対照）を補充した細胞培養物に匹敵するＩｇＧ産生（約２３０μｇ／ｍＬ）を示した。グルコースのみを含む補充されていない細胞培養物は、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴを補充した細胞培養物と比較して低いＩｇＧ産生（約１１５μｇ／ｍＬ）を示した。
【図4】培地錠剤製造の大規模製造プロセスのフローチャートを示す。
【図5A】１６．０ｍｍ（２．４ｇ）のＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ錠剤の物性を示す。図５Ａは錠剤の質量を、図５Ｂは錠剤の厚さを、図５Ｃは錠剤硬度を、それぞれ、制御限界と比較して示す。表８～１０を参照されたい。
【図5B】１６．０ｍｍ（２．４ｇ）のＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ錠剤の物性を示す。図５Ａは錠剤の質量を、図５Ｂは錠剤の厚さを、図５Ｃは錠剤硬度を、それぞれ、制御限界と比較して示す。表８～１０を参照されたい。
【図5C】１６．０ｍｍ（２．４ｇ）のＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ錠剤の物性を示す。図５Ａは錠剤の質量を、図５Ｂは錠剤の厚さを、図５Ｃは錠剤硬度を、それぞれ、制御限界と比較して示す。表８～１０を参照されたい。
【図6A】２２．０ｍｍ（３．７ｇ）のＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ錠剤の物性を示す。図６Ａは錠剤の質量を、図６Ｂは錠剤の厚さを、図６Ｃは錠剤硬度を、それぞれ、制御限界と比較して示す。表８～１０を参照されたい。
【発明を実施するための形態】
【0018】
別途規定されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。例えば、本明細書に記載の細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、ならびにタンパク質、および核酸化学に関連して使用される命名法、およびそれらの技術は、当該技術分野で知られており、一般的に使用されるものである。矛盾が生じる場合には、定義を含む、本文書が優先されるものとする。好ましい組成物、方法、または材料が本明細書に記載されているが、本明細書に記載されているものと類似または同等の代替の組成物、方法、または材料を、本明細書に記載されている実施形態の実施または試験に使用することができる。
【0019】
本明細書で使用される場合、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含むこと（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」などは、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を意味する。本開示はまた、明示的に記載されているか否かにかかわらず、本明細書に提示される実施形態または要素を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」、および「本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」他の実施形態を企図する。
【0020】
本明細書で使用される場合、本開示の文脈で（特に特許請求の範囲の文脈で）使用される用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」および同様の用語は、別段の指示がない限りまたは文脈によって明らかに矛盾しない限り、単数形および複数形の両方をカバーすると解釈されるべきである。また、特に断りのない限り、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」は「１つ以上」を意味する。
【0021】
本明細書で使用される場合、「または」という用語は、接続詞または論理和であり得る。
【0022】
開示されているすべての範囲には、離散値としての両方の端点が含まれ、同じ精度で範囲内に指定されているすべての整数と分数が明示的に考慮されている。例えば、０．１～２．０の範囲には、０．１、０．２、０．３、０．４が含まれる。．．２．０．端点が「約」という用語で修飾される場合、指定された範囲は、端点を含む範囲内の任意の値の最大±１０パーセントの変動によって拡張される。
【0023】
本明細書で使用される場合、目的の１つ以上の値に適用される「約」または「ほぼ」という用語は、記載された参照値に類似する値、または当業者によって決定される特定の値の許容誤差範囲内の値を指し、それは、測定システムの制限など、値がどのように測定または決定されるかに一部依存する。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、「約」という用語によって修飾された値の最大±１０パーセントの変動内にある整数および小数成分の両方を含む任意の値を指す。特定の態様では、「約」という用語は、特に明記されていない限り、またはコンテキストから明らかである限り（そのような数が可能な値の１００パーセントを超える場合を除いて）、記載されている参照値のいずれかの方向（より大きいまたは小さい）で、２０パーセント、１９パーセント、１８パーセント、１７パーセント、１６パーセント、１５パーセント、１４パーセント、１３パーセント、１２パーセント、１１パーセント、１０パーセント、９パーセント、８パーセント、７パーセント、６パーセント、５パーセント、４パーセント、３パーセント、２パーセント、１パーセント、またはそれ以下の範囲内にある値の範囲を指す。代替的に、「約」は、当該技術分野の慣行に従って、３以内または３を超える標準偏差を意味することができる。代替的に、生物系またはプロセスに関してなど、「約」という用語は、値の１桁以内、いくつかの実施形態では５倍以内、およびいくつかの実施形態では２倍以内を意味することができる。本明細書で使用される場合、任意の値の前にある記号「～」は「約」を意味する。
【0024】
本明細書で使用される場合、「実質的に」という用語は、大部分またはかなりの程度を意味するが、完全ではない。
【0025】
本明細書で使用される場合、「対照」または「参照」という用語は互換的に使用され、測定結果を評価するためのベンチマークとして使用される所定の値または範囲を指す。
【0026】
本明細書で使用される場合、「凝集」、「高度な造粒技術（商標）（Advanced Granulation Technology TM）」、または「ＡＧＴ」（ＧＩＢＣＯ）という用語は、乾燥形式の、様々な無血清、タンパク質フリー、既知組成培地で完全な培地製剤を製造するための高度な製造プロセスを通じて製造される粒状乾燥培地の形式を指す。培地は、典型的には、出発材料から強化された特性（例えば、強化された溶解性）を有する凝集粉末を製造する流動床技術を使用して調製される。このプロセスは、上向きに移動する空気柱に粉末を懸濁すると同時に、制御され定義された量の液体を粉末の流れに注入して、粉末の湿った状態を生成し、次いで、穏やかな熱を使用して材料を乾燥させ、凝集した粉末を生成することからなる。凝集培地、フィード、栄養粉末、サプリメントなどの調製、それらの特性、および凝集培地、フィード、栄養粉末、サプリメントなどの自動ｐＨおよび自動浸透圧を調製する方法は、とりわけ、米国特許第６，３８３，８１０号および同第６，６２７，４２６号、ならびに米国特許出願公開第２０１９／００４８３１２Ａ１号に記載され、これらのそれぞれは、凝集した培地に関連する教示のために参照により組み込まれている。
【0027】
本明細書で使用される場合、「錠剤」または「錠剤化された」という用語は、錠剤形式に圧縮された培地、フィード、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液を指す。錠剤は、定義された重量を有し、迅速に大量生産され、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、コーティングなどの従来の薬学的に許容される賦形剤を含み得るという点でペレットとは異なる。例えば、米国特許公開第２０１８／０１４２２０３Ａ１号を参照されたい。追加的に、錠剤は圧縮プロセスを使用して製造されるのに対し、ペレットは回転流動床プロセスを使用して製造されるため、錠剤を製造するための方法またはプロセスはペレットとは異なる。
【0028】
本明細書で使用される場合、「粉末」または「乾燥粉末」という用語は、乾燥顆粒形態で存在し、その全体的な外観が自由流動性であり得る細胞培養用の培地粉末または粉末化培地組成物を指す。「粉末」という用語は、本明細書に記載されるように、凝集した粉末を含む。本明細書で使用される場合、「基本粉末」または「乾燥基本粉末」という用語は、錠剤化される前の乾燥粉末組成物を指す。
【0029】
「成分」という用語は、化学または生物起源に関係なく、細胞の増殖または増殖を維持または促進するために、細胞培養培地において使用され得る任意の化合物を指す。「構成成分」、「栄養素」、および「成分」という用語は、互換的に使用されてもよく、すべてそのような化合物を指すことを意味する。細胞培養培地において使用される典型的な成分としては、アミノ酸、塩、金属、糖、脂質、核酸、ホルモン、ビタミン、脂肪酸、タンパク質などが挙げられる。エクスビボでの細胞の培養を促進または維持する他の成分は、特定の必要性によって、当業者によって選択され得る。
【0030】
本明細書で使用される場合、「細胞培養」または「培養」という用語は、人工的な、例えば、インビトロ環境での細胞の維持を指す。しかしながら、「細胞培養」という用語は総称であり、個々の原核生物（例えば、細菌）または真核生物（例えば、動物、植物および真菌）細胞の培養だけでなく、「組織培養」、「器官培養」、「器官系培養」または「器官型培養」という用語が「細胞培養」という用語と互換的に使用され得る組織、器官、器官系または全生物も包含するように使用され得る。
【0031】
本明細書で使用される場合、「細胞培養培地」、「培養培地」、「培地製剤」、または「培地」（それぞれの場合に複数の「培地」）という語句は、細胞の培養および／または増殖をサポートする栄養溶液を指し、これらの語句は互換的に使用され得る。細胞培養培地は、基本培地（細胞増殖をサポートするために追加の成分を必要とする一般的な培地）または細胞増殖をサポートするためのすべてまたはほとんどすべての成分を有する完全培地であり得る。細胞培養培地は、無血清、タンパク質フリー（一方または両方）であり得、効率的で堅牢な細胞性能のために、増殖因子、添加物、フィード、サプリメントなどの追加の成分を必要とする場合と必要としない場合がある。
【0032】
栄養培地はまた、本明細書に記載されるように調製および使用することができる様々な「サブグループ」に分割することができる。このようなサブグループを組み合わせて、栄養培地を生成することができる。互換性のあるサブグループおよび関連する考慮事項の例については、米国特許第５，４７４，９３１号および同第５，６８１，７４８号を参照されたい。これらは、このような教示について参照により本明細書に組み込まれる。
【0033】
本明細書で使用される場合、「組み合わせる」という用語は、細胞培養培地製剤における成分の混合または混合を指す。組み合わせは、液体または粉末の形で、または１つ以上の粉末と１つ以上の液体で行うことができる。別の例では、２つ以上の粉末成分を混合し、次いで凝集させて、培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液などの複雑な混合物を生成することができる。組み合わせには、乾燥成分と液体成分の混合も含まれる。
【0034】
「濃縮フィードサプリメント培地」または「濃縮フィードサプリメント培地」という語句は互換的に使用され、補充される細胞培養培地において所望される濃度よりも高い濃度である少なくとも１つの成分を含む培地を指す。
【0035】
本明細書で使用される場合、「接触する」という用語は、培養される細胞を、細胞が培養される培地とともに培養容器に播種することを指す。「接触する」という用語は、とりわけ、細胞を培地と混合すること、細胞を培地で灌流すること、培地を培養容器内の細胞にピペッティングすること、および細胞を培養培地に沈めることを包含する。
【0036】
本明細書で使用される場合、「培養」という用語は、細胞の活性または静止状態での増殖、分化、または継続的な生存に有利な条件下での人工環境における細胞の維持を指す。したがって、「培養」は、「細胞培養」または上記の同義語のいずれかと互換的に使用することができる。
【0037】
本明細書で使用される場合、「培養容器」という用語は、細胞を保持するための容器を指す。容器は、細胞を培養、保持、または保存するための無菌環境を提供することができるガラス、プラスチック、金属、または他の材料であり得る。
【0038】
本明細書で使用される場合、「抽出物」という用語は、典型的には、機械的（例えば、圧力処理による）または化学的（例えば、蒸留、沈殿、酵素的活性、または高塩分処理）のいずれかによる物質の処理によって形成される、物質のサブグループの濃縮調製物を含む組成物または濃縮された調製物を指す。
【0039】
「有効量」または「有効濃度」という用語は、使用可能な成分の量を指す。一例は、培養培地中のビタミンの量である。これは、通常そのビタミンに関連する生物学的プロセスで使用するために細胞が利用できる。したがって、有効量には、細胞が代謝するために利用可能な細胞培養成分（例えば、ビタミンまたは糖）の量が含まれる。成分の有効量は、例えば、当業者に利用可能な知識から、および／または実験的決定によって決定することができる。
【0040】
本明細書で使用される場合、「フィード」または「サプリメント」は、標準培養において細胞に添加される場合、その維持、または拡大、または増殖、または生存に有益であるか、またはその細胞性能に影響を及ぼすか、または培養寿命を増加させるか、または生成物の発現が継続するかもしくは最終生成物の力価が大幅に増加する疑似定常期に細胞を維持する場合の組成物を指す。フィードまたはサプリメントは、本開示において互換的に使用され得、培養中の細胞または細胞培養系の増殖または性能のバランスを取り直したり、補充したり、調整したりするために必要な１つ以上のアミノ酸、糖、ビタミン、緩衝液、時にはペプチド、加水分解物、画分、増殖因子、ホルモンなどを含む培地成分の錠剤化および液体フォーマット（凝集フォーマットを含む）を指す。フィードまたはサプリメントは、細胞を培養することができる細胞培養培地に添加されるという点で、細胞培養培地と区別することができる。当業者によって理解されるように、しばしば、フィード／サプリメントは、培養中の細胞または細胞培養系の増殖または性能をリバランスまたは補充または調節するために必要なアミノ酸、糖、ビタミン、緩衝液などを主に含むことがある。フィードまたはサプリメントは、濃縮されている場合とされていない場合があり、特定の成分についてのみ部分的に濃縮されている場合がある。
【0041】
細胞培養培地は、いくつかの成分から構成され、これらの成分は培養培地ごとに異なる。「１×製剤」という用語は、作業用濃度で細胞培養培地中に見出される一部またはすべての成分を含む、任意の水溶液を指すことを意味する。「１×製剤」は、例えば、細胞培養培地、またはその培地の成分の任意のサブグループを指し得る。１×溶液中の成分の濃度は、インビトロで細胞を維持または増殖するために使用された細胞培養製剤において見出されるその成分の濃度とほぼ同じである。細胞のインビトロ増殖に使用される細胞培養培地は、定義上、１×製剤である。多数の成分が存在する場合、１×製剤中のそれぞれの成分は、細胞培養培地中のそれらの成分の濃度にほぼ等しい濃度を有する。例えば、ＲＰＭＩ－１６４０培養培地は、他の成分の中でも、０．２ｇ／ＬのＬ－アルギニン、０．０５ｇ／ＬのＬ－アスパラギン、および０．０２ｇ／ＬのＬ－アスパラギン酸を含有する。これらのアミノ酸の「１×製剤」は、溶液中にほぼ同じ濃度のこれらの成分を含む。したがって、「１×製剤」に言及する場合、溶液中のそれぞれの成分は、説明される細胞培養培地において見出される濃度と同じまたはほぼ同じ濃度を有することが意図される。細胞培養培地の１×製剤中の成分の濃度は当業者に周知である。Ｂａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｄｉａ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ ａｎｄ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｆｏｒ Ｓｅｒｕｍ－Ｆｒｅｅ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８４）を参照されたい。これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。しかしながら、容積モル濃度および／またはｐＨは、特に１×製剤に含まれる成分が少ない場合、培養培地と比較して１×製剤では異なる可能性がある。成分の１×濃度は、様々な培地製剤にわたって必ずしも一定ではない。したがって、１×は、異なる培地を指す場合、単一成分の異なる濃度を示す可能性がある。しかしながら、一般的に使用される場合、１×は、言及される培地のタイプで一般的に見られる典型的な作業濃度を示す。１×の量は、関連する量の培地に対して１×の濃度になる成分の量である。
【0042】
本明細書で使用される場合、「１０×製剤」は、その溶液中の各成分が、細胞培養培地中の同じ成分よりも約１０倍濃縮されている溶液を指す。例えば、ＲＰＭＩ－１６４０培養培地の１０×製剤は、他の成分の中でも、２．０ｇ／ＬのＬ－アルギニン、０．５ｇ／ＬのＬ－アスパラギン、および０．２ｇ／ＬのＬ－アスパラギン酸を含み得る（上述の１×製剤と比較して）。「１０×製剤」は、１×培養培地に見られる濃度の約１０倍の濃度でいくつかの追加の成分を含み得る。容易に明らかなように、「２０×製剤」、「２５×製剤」、「５０×製剤」および「１００×製剤」は、それぞれ、作業中の１×細胞培養培地と比較して、約２０倍、２５倍、５０倍、または１００倍の濃度の成分を含む溶液を示す。同様に、培地製剤および濃縮溶液の浸透圧およびｐＨは異なる場合がある。米国特許公開第５，４７４，９３１号を参照されたい。これは、培養培地濃縮技術を対象としており、そのような教示については参照により本明細書に組み込まれる。
【0043】
本明細書で使用される場合、「生理学的ｐＨ」は、約４より大きく、約９未満である。他のまたは特定のｐＨ値または範囲、例えば、４．２、４．５、４．８、５．０、５．２、５．５、５．７、５．８、６．０、６．２、６．５、６．７、６．８、７．０、７．２、７．４、７．５、７．８、８．０、８．２、８．４、８．５、８．７、８．８などを超える最小または最大ｐＨ、または約４．０～約９．０、約４．０～約５．０、約５．０～約６．０、約６．０～約７．０、約８．０～約９．０、約４．０～約６．０、約５．０～約７．０、約６．０～約８．０、約７．０～約９．０、約６．０～約９．０、または約４．０～約７．０の最小または最大ｐＨを、サプリメントを溶解するのに使用できる。一部のサプリメントは、好ましくはないが、これらの範囲外でのみ完全に溶解できる。
【0044】
本明細書に記載の「自動ｐＨ」または「自動ｐＨ処理」培地、培地サプリメント、または緩衝液は、溶媒で再水和すると、得られる培地、培地サプリメント、または緩衝液が望ましいｐＨであり、使用前に酸または塩基でｐＨを調整する必要がないように製剤化された製剤である。例えば、ｐＨ７．４で使用するように製剤化された自動ｐＨ錠剤化培養培地は、溶媒で再水和するとｐＨ ７．４になるため、ｐＨをさらに調整しなくてもすぐに使用できる。
【0045】
本明細書で使用される場合、「生物学的および生化学的活性の有意な損失なし」という語句は、新たに作成された栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、緩衝液、または同じ処方のサンプルと比較した場合、栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、緩衝液、または目的のサンプルの、生物学的活性または生化学的活性の、約３０パーセント未満、好ましくは約２５パーセント未満、より好ましくは約２０パーセント未満、さらにより好ましくは約１５パーセント未満、最も好ましくは約１０パーセント未満の減少を指す。
【0046】
本明細書で使用される場合、「溶媒」は、培地の別の成分を溶解するかまたは溶解した液体である。溶媒は、培地の調製、培地錠剤の調製、サブグループの錠剤、またはサプリメントまたは他の製剤の調製、ならびに細胞培養の調製における錠剤の再構成または濃縮物の希釈に使用することができる。溶媒は、極性、例えば、水性溶媒、または非極性、例えば、有機溶媒であり得る。溶媒は複雑、すなわち成分を可溶化するために複数の成分が必要になる場合がある。複雑な溶媒は、アルコールおよび水などの２つの液体の単純な混合物である場合もあれば、液体中の塩または他の固体の混合物である場合もある。場合によっては、可溶性混合物を形成するために、２、３、４、５、６、またはそれ以上の成分が必要になることがある。エタノールまたはメタノールおよび水の混合物などの単純な溶媒は、調製と取り扱いが容易なため、好ましい。
【0047】
本明細書で使用される場合、「滑沢剤」は、錠剤への顆粒の圧縮およびダイプレスからの錠剤の排出を助けるために錠剤にプレスされる組成物に添加される。滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、定常フマル酸ナトリウム、ステアリン酸、タルク、ベヘン酸グリセリル、またはそれらの組み合わせが挙げられる。一態様では、滑沢剤はステアリン酸マグネシウムである。
【0048】
本明細書で使用される場合、「流動促進剤」は、組成物に増強された流動特性を付与する錠剤成分である。流動促進剤の例としては、コロイド状シリカ、ヒュームドシリカ、またはタルクが挙げられる。
【0049】
本明細書で使用される場合、「崩壊剤」は、水和、崩壊、分散、および溶解を助ける錠剤成分である。崩壊剤の例としては、クロスポビドン、クロスカルメロースナトリウム、アルギン酸、微結晶性セルロース、ポラクリリンカリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、デンプン、アルファ化デンプン、またはそれらの組み合わせが挙げられる。一態様では、崩壊剤は、特定の粒子サイズを有するクロスポビドン（例えば、Ｎ－ビニル－２－ピロリドンの架橋ホモポリマー）である。別の態様では、崩壊剤はデンプングリコール酸ナトリウムである。別の態様では、崩壊剤はクロスカルメロースナトリウム（例えば、ＡＣ－ＤＩ－ＳＯＬ、ＤｕＰｏｎｔ）である。
【0050】
本明細書で使用される場合、「増量剤」または「希釈剤」は、組成物にかさ高さを加える成分である。増量剤または希釈剤の例としては、ラクトース、ラクトース一水和物、グルコース、フルクトース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、リン酸二カルシウム二水和物、セルロース、エチルセルロース、メチルセルロース、微結晶性セルロース、クロスポビドン、またはそれらの組み合わせが挙げられる。一実施形態では、増量剤または希釈剤は微結晶性セルロースである。別の態様では、増量剤または希釈剤は、それぞれ５０μｍまたは１００μｍの粒子サイズを有するＡＶＩＣＥＬ ＰＨ－１０１またはＰＨ－１０２（ＦＭＣ）などの微結晶性セルロースである。
【0051】
本明細書で使用される場合、「結合剤」は、増強された凝集力または引張強度（例えば、硬度）を提供する成分である。結合剤の例としては、二塩基性リン酸カルシウム、スクロース、コーン（トウモロコシ）デンプン、微結晶性セルロース、および変性セルロース（例えば、ヒドロキシメチルセルロース）が挙げられる。
【0052】
本明細書で使用される場合、「コーティング剤」は、錠剤をより滑らかにし、崩壊および放出速度を制御し、錠剤を環境に対してより耐性にする（その貯蔵寿命を延ばす）、または外観を向上させる成分である。コーティング剤の例としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、エチルセルロース、ゼラチン、医薬釉薬、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メタクリル酸コポリマー、メチルセルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、シェラック、スクロース、二酸化チタン、カルナウバワックス、微結晶ワックス、ゼイン、またはそれらの組み合わせが挙げられる。
【0053】
本明細書で使用される場合、「着色剤」は、組成物に所望の色を与える成分である。着色剤の例としては、ＦＤ＆Ｃブルー＃１アルミニウムレーキ、ＦＤ＆Ｃブルー＃２、他のＦＤ＆Ｃブルー色、二酸化チタン、酸化鉄、および／またはそれらの組み合わせなどの市販の顔料が挙げられる。着色剤の他の例としては、組織培養培地で使用される典型的なｐＨ指示薬（例えば、フェノールレッド）が挙げられる。
【0054】
本明細書で使用される場合、「界面活性剤」は、組成物に向上した溶解性および／または湿潤性を付与する成分である。界面活性剤の例としては、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、フマル酸ステアリルナトリウム（ＳＳＦ）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）界面活性剤、ＡＤＯＧＥＮ ４６４、ＡＬＫＡＮＯＬ ６１１２、ＢＲＩＪ（登録商標）界面活性剤、ＩＧＥＰＡＬ界面活性剤、ポリ（エチレングリコール）ソルビタンテトラオレエート、ポリ（エチレングリコール）ソルビトールヘキサオレエート、ソルビタン、モノパルミテート、ＮＯＮＩＤＥＴ Ｐ－４０、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標） Ｎ－１０１、ＳＰＡＮ ８０、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標） Ｘ－１００、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標） Ｘ－１１４、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標） Ｘ－４０５、ＴＷＥＥＮ（登録商標） ２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標） ４０、ＴＷＥＥＮ（登録商標） ６０、ＴＷＥＥＮ（登録商標） ８５、ＺＯＮＹＬ ＦＳ－３００、ＺＯＮＹＬ ＦＳＮ、またはそれらの組み合わせが挙げられる。
【0055】
「延長された期間」という用語は、サンプル（例えば、医薬組成物、栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液）が保存される期間よりも長い期間を意味する。したがって、本明細書で使用される場合、「延長された期間」は、約－７０℃～約２５℃、約－２０℃～約２５℃、約０℃～約２５℃、約４℃～約２５℃、約１０℃～約２５℃、または約２０℃～約２５℃の温度での貯蔵を含み得る所与の貯蔵条件下での約１～３６ヶ月、約２～３０ヶ月、約３～２４ヶ月、約６～２４ヶ月、約９～１８ヶ月、または約４～１２ヶ月を意味する。医薬組成物または臨床組成物、細胞培養試薬、栄養素、栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液の生物学的または生化学的活性を決定するためのアッセイは、当該技術分野でよく知られており、当業者にとって周知である。
【0056】
本明細書に記載されるいくつかの実施形態は、栄養培地、細胞培養培地、フィード、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液用の錠剤組成物、栄養培地、培地サプリメント、フィード、培地サブグループ、または緩衝液の錠剤を製造する方法、およびそれによって生産された錠剤製品である。本明細書に記載されるように製造される錠剤化された栄養培地、培地サプリメント、および培地サブグループには、細菌細胞、真菌細胞（特に、酵母細胞）、植物細胞、または動物細胞（特に昆虫細胞、線虫細胞または哺乳動物細胞、最も好ましくはヒト細胞）であり得る、細胞（これらのいずれも体細胞、生殖細胞、正常細胞、罹患細胞、形質転換細胞、変異細胞、幹細胞、前駆細胞、または胚細胞であり得る）の増殖をサポートするために使用され得る任意の培地、培地サプリメントまたは培地サブグループ（無血清または血清含有）が含まれる。好ましいそのような栄養培地としては、細胞培養培地、最も好ましくは細菌細胞培養培地、植物細胞培養培地、または動物細胞培養培地が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい培地サプリメントとしては、細菌、動物または植物細胞、腺、組織または器官の抽出物、特にウシ下垂体抽出物、ウシ脳抽出物、およびニワトリ胚抽出物、ならびに生体液（特に動物血清、最も好ましくはウシ血清、特に胎仔ウシ、新生仔ウシまたは正常仔ウシ血清、ウマ血清、ブタ血清、ラット血清、マウス血清、ウサギ血清、サル血清、サル血清またはヒト血清、そのうちのいずれも胎児血清であり得る）、およびその抽出物（より好ましくは血清アルブミン、最も好ましくはウシ血清アルブミンまたはヒト血清アルブミン）などの組成が既知でないサプリメントが挙げられるが、これらに限定されない。培地サプリメントとしては、上述の組成不明の培地サプリメントの代替品として使用できる、ＳＴＥＭＰＲＯ ＬＩＰＯＭＡＸ代替品、ＯＰＴＩＭＡＢ ＫＮＯＣＫ－ＯＵＴ血清代替品（ＧＩＢＣＯ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）などの既知組成代替品も含まれ得る。そのようなサプリメントはまた、ホルモン、サイトカイン、神経伝達物質、脂質、接着因子、タンパク質などを含むがこれらに限定されない、既知組成成分を含み得る。
【0057】
一実施形態では、錠剤化された培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液は、培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液の凝集粉末を含む。本明細書に記載される一態様では、凝集栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、および緩衝液は、培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液の溶液を凝集させる流体床技術を使用して生成される。流動床技術は、出発物質から特性（特に、例えば、溶解度）が変化した凝集粉末を製造するプロセスである。この技術の一般的な適用では、粉末は上向きに移動する空気柱に懸濁され、同時に制御され定義された量の液体が粉末の流れに注入されて、粉末の湿った状態を生成し、次いで、穏やかな熱を使用して材料を乾燥させ、凝集した粉末を生成する。一態様では、凝集培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液は、独自の高度造粒技術（ＡＧＴ乾式培地フォーマット）（ＧＩＢＣＯ）を使用して製造される。Ｓｅｅ Ｊａｙｍｅ ｅｔ ａｌ．，“Ａ Ｎｏｖｅｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｔｏ Ｉｍｐｒｏｖｅ Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ Ｐｏｗｄｅｒｅｄ Ｓｅｒｕｍ－Ｆｒｅｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｍｅｄｉａ，”Ｉｎ：Ｓｈｉｒａｈａｔａ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ）Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｂａｓｉｃ ＆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ａｓｐｅｃｔｓ，Ｖｏｌ．１２（２００２），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ．特定の市販の凝集培地、サプリメント、フィード、および添加物としては、ＣＤ ＣＨＯ ＡＧＴ、ＣＤ ＯＰＴＩＣＨＯ ＡＧＴ、ＣＤ ＦＯＲＴＩＣＨＯ ＡＧＴ、ＶＰ－ＳＦＭ ＡＧＴ、ＯｐｔｉＰｒｏ ＡＧＴ、ＣＤ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ＡＧＴ、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ａ、ＢおよびＣ ＡＧＴ、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ａ ＋、Ｂ＋およびＣ＋ ＡＧＴ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ、ならびにＦＵＮＣＴＩＯＮＭＡＸ ＴｉｔｅｒＥｎｈａｎｃｅｒ Ａｄｄｉｔｉｖｅ（すべてＧＩＢＣＯから；それぞれの製品の説明は、そのような教えのために参照により本明細書にそれぞれ組み込まれる）が挙げられる。
【0058】
本明細書に記載の製剤および方法を使用して、任意の栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液の錠剤を調製し、生物学的活性または生化学的活性を著しく失うことなく長期間保存することができる。
【0059】
任意の栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液を錠剤に形成するか、または本明細書に記載の方法によって調製することができる。本明細書に記載されるように調製され得る特に好ましい栄養培地、培地サプリメント、および培地サブグループとしては、動物細胞、植物細胞、細菌細胞、または酵母細胞の増殖をサポートする細胞培養培地、培地サプリメント、および培地サブグループが挙げられる。本明細書に記載されるように調製され得る特に好ましい緩衝液としては、動物細胞、植物細胞、細菌細胞、または酵母細胞に対して等張である平衡塩類溶液が挙げられる。
【0060】
本明細書に記載されるように調製され得る動物細胞培養培地の例としては、限定されないが、ケラチノサイト、内皮細胞、肝細胞、メラノサイト、ＣＨＯ細胞、２９３細胞、ＰｅｒＣ６、ハイブリドーマ、造血細胞、胚細胞、神経細胞などの培養をサポートするように設計されたものなどの、ＤＭＥＭ、ＲＰＭＩ－１６４０、ＭＣＤＢ ３１１、ＭＣＤＢ １５３、ＭＤＥＭ、ＩＭＤＭ、ＭＥＭ、Ｍ１９９、マッコイ５Ａ、ウィリアムズ培地Ｅ、ライボビッツＬ－１５培地、グレース昆虫培地、ＩＰＬ－４１昆虫培地、ＴＣ－１００昆虫培地、シュナイダーＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ培地、Ｗｏｌｆ＆Ｑｕｉｍｂｙ’ｓ Ａｍｐｈｉｂｉａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｕｍ、Ｆ１０ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｍｉｘｔｕｒｅ、Ｆ１２ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｍｉｘｔｕｒｅ、および細胞特異的無血清培地（ＳＦＭ）が挙げられる。特定の既知組成培地製品としては、ＣＤ ＣＨＯ培地（ＧＩＢＣＯ）、ＣＤ ＯＰＴＩＣＨＯ培地（ＧＩＢＣＯ）、ＥＸ－ＣＥＬＬ ＡＤＶＡＮＣＥＤ ＣＨＯ培地（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＨＹＣＬＯＮＥ ＡＣＴＩＰＲＯ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）が挙げられる。特定のフィードサプリメントとしては、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ａ（またはＢ）ＡＧＴ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ）、ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｃ ＡＧＴ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ）、ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ａ＋ＡＧＴ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ）、ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ＋ ＡＧＴ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ）、ＲＥＳＵＲＥＧＥ ＣＤ１ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ）、ＨＹＣＬＯＮＥ Ｃｅｌｌ Ｂｏｏｓｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ（種々のバージョン）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＥＸ－ＣＥＬＬ ＡＤＶＡＮＣＥＤ ＣＨＯ Ｆｅｅｄ １（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）などが挙げられる。調製に適したその他の培地、培地サプリメント、および培地サブグループは市販されている。これらの培地、培地サプリメントおよび培地サブグループ、ならびに他の多くの一般的に使用される動物細胞培養培地、培地サプリメントおよび培地サブグループの製剤は、当該技術分野でよく知られており、文献に記載されており、例えばＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商業的供給業者から入手可能である。
【0061】
本明細書に記載されるように調製され得る植物細胞培養培地の例としては、アンダーソンの植物培養培地、ＣＬＣ基礎培地、ガンボルグの培地、ギラードの海洋植物培養培地、プロバソリの海洋培地、カオおよびミカイルクの培地、ムラシゲおよびスクーグ培地、マッカウンの木本植物培地、クヌードソンラン培地、リンデマンラン培地、またはヴァシンとウェントの培地が挙げられるが、これらに限定されない。市販されているこれらの培地、ならびに他の多くの一般的に使用される植物細胞培養培地用の製剤は、当該技術分野で知られており、商業的製造業者から入手可能である。
【0062】
本明細書に記載されるように調製され得る細菌細胞培養培地の例としては、トリプチケースソイ培地、ブレインハートインフュージョン培地、酵母抽出培地、ペプトン－酵母抽出培地、牛肉注入培地、赤痢菌培地、硝酸インドール培地、ＭＲ－ＶＰ培地、シモンズのクエン酸培地、ＣＴＡ培地、胆汁エスクリン培地、ボルデー・ジャング培地、木炭酵母抽出物（ＣＹＥ）培地、マンニット食塩培地、マッコンキー培地、エオシン－メチレンブルー（ＥＭＢ）培地、セイヤー－マーチン培地、サルモネラ菌・赤痢菌培地、およびウレアーゼ培地が挙げられるが、これらに限定されない。市販されているこれらの培地、ならびに他の多くの一般的に使用される細菌細胞培養培地用の製剤は、当該技術分野でよく知られており、例えば、ＤＩＦＣＯ ＆ ＢＢＬ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ ｅｄ．（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，２００９）および臨床微生物学のマニュアル（（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）に見出すことができる。
【0063】
本明細書に記載されるように調製され得る真菌細胞培養培地、特に酵母細胞培養培地の例としては、サブロー培地および酵母形態学培地（ＹＭＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。これらの培地用の製剤は市販されており、当該技術分野で知られている。
【0064】
本明細書に記載される一実施形態は、錠剤化された培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液である。例示的な錠剤組成物を表１に示す。最小の錠剤組成物は、培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液および滑沢剤を含む。崩壊剤、増量剤、流動促進剤、コーティング、着色剤などの他の錠剤賦形剤を任意選択で添加して、溶解または崩壊速度、および安定性などの錠剤の特性を調整することができる。一態様では、培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液は、凝集した培地、培地サプリメント、培地サブグループである。驚くべきことに、凝集した培地は圧縮して錠剤にすることができることがわかった。錠剤は、典型的な凝集培地に匹敵する時間で溶解した。少量の滑沢剤（０．５～５質量パーセント）を添加して、錠剤化プロセスを改善し、錠剤ダイへの付着を防ぐことができる。驚くべきことに、この量の滑沢剤は、再構成された錠剤培地で培養された哺乳動物細胞による細胞増殖またはタンパク質産生に影響を及ぼさなかった。培地錠剤は、正確な重量の培地を保管し、正確に分配するための便利な方法を提供する。例えば、２．５ｇの２０錠を水で再構成して、１Ｌの培地を生成することができる。これにより、乾燥粉末や凝集培地を計量する必要がなくなり、取り扱いが減り、時間が節約され、迅速なスケールアップが可能になる。
【0065】
別の実施形態は、培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液と、崩壊剤と、滑沢剤と、を含む錠剤化培地組成物である。一態様では、崩壊剤はクロスカルメロースナトリウムである。別の態様では、滑沢剤はステアリン酸マグネシウムである。
【0066】
一態様では、錠剤化された培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液組成物は、約６０～約９９質量パーセントの培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液と、約１～約４０質量パーセントの細胞培養と互換性のある１つ以上の許容可能な錠剤化賦形剤と、を含む。一態様では、組成物は、１つ以上の滑沢剤、１つ以上の増量剤または希釈剤、１つ以上の崩壊剤、または細胞培養と適合性のある１つ以上の他の薬学的に許容される賦形剤を含む。一態様では、組成物は、培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液と、１つ以上の滑沢剤と、を含む。一態様では、錠剤化された培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液は、表１のような組成物を含む。
【表1】
【0067】
例示的な培地製剤を表２に提供する。例示的な培地組成物は、使用前に再構成または水に溶解される液体または乾燥粉末として製剤化することができる。ウシ胎仔血清などの液体成分は、典型的には、乾燥粉末の溶解後に添加される。培地は、流動床技術を使用して凝集顆粒として調製することもできる。乾燥粉末培地および凝集培地は、本明細書に記載されるように錠剤に圧縮することができる。
【表2】
【0068】
表２に示される例示的な培地製剤は、表１に示されるように、細胞培養と適合性のある１つ以上の滑沢剤、増量剤、または希釈剤、崩壊剤、または他の薬学的に許容される賦形剤を加えることによって錠剤に製剤化することができる。一態様では、例示的な培地は、少なくとも１～５質量パーセントの１つ以上の滑沢剤と組み合わされて、錠剤を形成する。別の態様では、例示的な培地は、少なくとも１～５質量パーセントの１つ以上の滑沢剤および１～５質量パーセントの１つ以上の崩壊剤と組み合わされて、錠剤を形成する。別の態様では、培地は、流動床技術を使用して凝集されている。次いで、凝集した培地を、少なくとも１～５質量パーセントの１つ以上の滑沢剤および１～５質量パーセントの１つ以上の崩壊剤と組み合わせ、次いで標準的な錠剤化技術（例えば、Ｋｏｒｓｈ錠剤化プレス）を使用して錠剤化する。
【0069】
本明細書に記載されるように調製することができる上述の培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液のいずれも、指示剤または選択剤（例えば、染料、抗生物質、アミノ酸、酵素、基質等）、フィルター（例えば、木炭）、塩、多糖類、イオン、洗浄剤、安定剤などの１つ以上の追加成分も含み得る。この実施形態は、現在製剤化されている培地に限定されず、細胞を培養するための任意の培地製剤またはサプリメントに広く適用可能である。
【0070】
本明細書に記載の別の実施形態において、錠剤化された培養培地は、培養培地に最適な緩衝能力を提供するのに十分な濃度で、１つ以上の緩衝塩、好ましくは重炭酸ナトリウムを含み得る。一態様では、１つ以上の緩衝液としては、酢酸、アセチルサリチル酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、重硫酸、ホウ酸、ブタン酸、酪酸、樟脳酸、樟脳スルホン酸を、炭酸、クエン酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジグルコン酸、ドデシル硫酸、エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、グリセリン酸、グリセロリン酸、グリシン、グリグリシン、グルコヘプタン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グルタル酸、グリコール酸、ヘミ硫酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、ヒプリン酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフチル酸、ニコチン酸、亜硝酸、シュウ酸、ペラルゴン、リン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サッカリン、サリチル酸、ソルビン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、チオシアン酸、チオグリコール酸、チオ硫酸、トシル酸、ウンデシレン酸、ＭＥＳ、ビス－トリスメタン、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、ビス－トリスプロパン、ＰＩＰＥＳ、ＭＯＰＳＯ、塩化コラミン、ＭＯＰＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、アセトアミドグリシン、ＴＡＰＳＯ、ＴＥＡ、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＥＰＳ、ＨＥＰＰＳ、トリシン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トロメタミン）、グリシンアミド、グリシルグリシン、ＨＥＰＢＳ、ビシン、ＴＡＰＳ、ＡＭＰＢ、ＣＨＥＳ、ＡＭＰ、ＡＭＰＳＯ、ＣＡＰＳＯ、ＣＡＰＳ、ＣＡＢＳ、それらの組み合わせ、またはそれらの塩が挙げられる。一態様では、緩衝液としては、リン酸塩、硫酸塩、炭酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、ブタン酸塩、乳酸塩、グリシン、マレイン酸塩、ピルビン酸塩、クエン酸塩、アコニット酸塩、イソクエン酸塩、α－ケトグルタル酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、オキサロ酢酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トロメタミン）、それらの組み合わせ、またはそれらの塩の１つ以上が挙げられる。一態様では、緩衝液は炭酸ナトリウムまたは重炭酸ナトリウムである。
【0071】
本明細書に記載の一態様によれば、重炭酸ナトリウムなどの緩衝塩を、錠剤化の前の培地の凝集の前、最中、または後に培地に添加することができる。本明細書に記載のこの態様の一例では、重炭酸ナトリウムは、適切な溶媒（水、血清、または酸（例えば、１Ｍ～５Ｍ、０．１Ｍ～５Ｍ、または好ましくは１Ｍの濃度のＨＣｌ）または塩基（例えば、１Ｍ～５Ｍ、０．１Ｍ～５Ｍ、または好ましくは１Ｍの濃度のＮａＯＨ）などのｐＨ調整剤）での凝集の前、最中、または後に、培養培地に添加され得、凝集培地を再構成の際、培養培地は、様々な細胞型の培養に最適または実質的に最適なｐＨになる。例えば、本発明の方法によって調製された細菌細胞培養培地は、再構成時に、好ましくは約４～１０、より好ましくは約５～９、または約６～８．５のｐＨを有するであろう。本発明の方法によって調製された真菌（例えば、酵母）細胞培養培地は、再構成時に、好ましくは約３～８、より好ましくは約４～８または約４～７．５のｐＨを有するであろう。本発明の方法によって調製された動物細胞培養培地は、再構成時に、好ましくは約６～８または約７～８、より好ましくは約７～７．５または約７．２～７．４のｐＨを有するであろう。本発明の方法によって調製された植物細胞培養培地は、再構成時に、好ましくは約４～８、好ましくは約４．５～７、５～６または５．５～６のｐＨを有するであろう。当然ながら、特定の細胞型で使用される所与の培養培地に最適なｐＨはまた、当該技術分野で知られている方法を使用する当業者によって経験的に決定され得る。例えば、胃細胞は、他の細胞のｐＨよりもはるかに低いｐＨ、例えば、ｐＨ１～３で培養され得る。当業者は、過酷な環境に適応した他の細胞には、一般的に培養される細胞の培養条件を満たす通常の範囲外の特別な許容範囲またはニーズがある可能性があることを理解している。
【0072】
別の例では、１つ以上の緩衝塩、例えば、重炭酸ナトリウムを、錠剤の形態によって栄養培地に直接添加することができる。関連する態様では、酸（例えば、ＨＣｌ）または塩基（例えば、ＮａＯＨ）などのｐＨ調整剤を、１つ以上の緩衝塩（重炭酸ナトリウムなど）を含み得る栄養培地に、流体床装置においてｐＨ調整剤を栄養培地に凝集させることにより、ｐＨ調整剤を粉末もしくは凝集した栄養培地上に噴霧乾燥することにより、またはそれらの組み合わせにより添加することができ、このアプローチは、粉末培地の再構成後のその後のｐＨ調整剤の添加を不要にする。次いで、この組成物は、本明細書に記載されるように錠剤に形成することができる。したがって、本明細書に記載の錠剤栄養培養培地は、溶媒（例えば、水または血清）で再構成すると、液体培地のｐＨを調整する必要がなく、細胞の培養または増殖をサポートするのに最適なｐＨを有する、インビトロでの細胞の培養または増殖に有用である。したがって、本明細書で「自動的にｐＨ調整する培地」として定義されるこのタイプの培地は、再構成後に培地に緩衝液を添加し、緩衝液の溶解後に培地のｐＨを調整するという時間のかかるエラーが発生しやすいステップを不要にする。例えば、これらの方法に従って調製された哺乳動物細胞培養培地は、再構成時に、約７．１～約７．５、より好ましくは約７．１～約７．４、最も好ましくは約７．２～約７．４または約７．２～約７．３のｐＨを有し得る。
【0073】
別の実施形態において、自動的にｐＨ調整する培地は、緩衝系またはｐＨ調整剤を添加することなく、再構成された培地を調製することによって製造され得る。好ましいそのような態様では、自動ｐＨ培地は、培地中に存在する緩衝系を調整することによって提供され得る。例えば、当業者が知っているように、培養培地には典型的には、緩衝液または緩衝系が含まれている。培地中のそのような緩衝液のｐＨ反対形態を調整することにより、自動ｐＨ培地が作成され、使用前の培地の再構成前または再構成時に適切なｐＨレベルを達成するために追加の緩衝液またはｐＨ調整剤を追加する必要がなくなる。本明細書に記載されるそのような態様の１つでは、特定の培地成分（特にリン酸塩または他の緩衝塩）のｐＨ反対形態が次に培養培地で使用され、粉末培地の再構成時に所望のｐＨを提供する。成分のｐＨ反対形態は、共役酸－塩基ペアであり、ペアのメンバーはｐＨを上げるか下げるかして、溶液の目的のｐＨを達成できる。ナトリウムＨＥＰＥＳ（ｐＨ上昇）およびＨＥＰＥＳ－ＨＣｌ（ｐＨ低下）は、ｐＨ反対成分の例である。例えば、ｐＨが４．５～７．２の再構成培地を調製する場合、最初のステップは、望ましいｐＨを得るために一塩基性（ｐＨを下げる）と二塩基性（ｐＨを上げる）のリン酸の正しいバランスを決定することである。典型的には、一塩基性および二塩基性リン酸塩は、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．２ｍＭ～約９ｍＭ、約０．３ｍＭ～約８．５ｍＭ、約０．４ｍＭ～約８ｍＭ、約０．５ｍＭ～約７．５ｍＭ、約０．６ｍＭ～約７ｍＭ、または好ましくは約０．７ｍＭ～約７ｍＭの濃度で使用される。製剤に他の緩衝系を使用する場合、塩基性（通常はナトリウムまたは一塩基性）緩衝塩と対応する酸性（またはｐＨ反対、通常はＨＣｌまたは二塩基性）緩衝塩の適切な比率またはバランスを同様に決定して、製剤が、溶媒で再構成する際に、望ましい最終ｐＨになることを確実にする。溶液中に存在する実際のリン酸分子種は、塩基性（例えば、ナトリウムまたは一塩基）または酸性（例えば、ＨＣｌまたは二塩基）の形態が添加されても、所与のｐＨで同じであるため、この調整は緩衝能に影響を及ぼすとは予想されない。適切な緩衝液のｐＨ反対形態の適切な比率が決定されると、これらの成分を培地（例えば、乾燥粉末培地）に添加して、再構成時および使用前に適切なｐＨレベルの培養培地を提供することができる。
【0074】
一実施形態では、錠剤化された培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液は、２５℃の水に約１０～３０分以内に溶解する。一態様では、錠剤化された培地の完全な溶解までの時間（例えば、完全溶解速度またはｔ１００）は、約１分、約２．５分、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、または約３０分以内である。別の態様では、完全溶解速度は、約２分、約３分、約４分、約５分、約６分、約７分、約８分、約９分、約１０分、約１１分、約１２分、約１３分、約１４分、約１５分、約１６分、約１７分、約１８分、約１９分、約２０分、約２１分、約２２分、約２３分、約２４分、約２５分、約２６分、約２７分、約２８分、約２９分、約３０分、約３１分、約３２分、約３３分、約３４分、約３５分、約３６分、約３７分、約３８分、約３９分、または約４０分以内である。
【0075】
別の実施形態では、錠剤化された培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液の約５０パーセントが、２５℃の水に約１０～３０分以内に溶解する。一態様では、錠剤化された培地の５０パーセント溶解までの時間（例えば、ｔ５０）は、約１分、約２．５分、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、または約３０分以内である。別の態様では、５０パーセント溶解速度は、約２分、約３分、約４分、約５分、約６分、約７分、約８分、約９分、約１０分、約１１分、約１２分、約１３分、約１４分、約１５分、約１６分、約１７分、約１８分、約１９分、約２０分、約２１分、約２２分、約２３分、約２４分、約２５分、約２６分、約２７分、約２８分、約２９分、約３０分、約３１分、約３２分、約３３分、約３４分、約３５分、約３６分、約３７分、約３８分、約３９分、または約４０分以内である。
【0076】
別の態様では、単一の錠剤化された培地は、２５℃で約５０ｍＬの水に約２０～３０分以内に完全に溶解する。別の態様では、２０個の培地錠剤は、２５℃で約９３０ｍＬの水に約２０～３０分以内に完全に溶解する。一態様では、崩壊は、米国薬局方（ＵＳＰ）法＜７０１＞崩壊に従って実施され、これは、そのような教示について参照により本明細書に組み込まれる。
【0077】
別の実施形態は、使用前に培地にいずれのサプリメント栄養成分を添加する必要もなしに、溶媒で培地錠剤を再構成したときにインビトロで細胞の培養をサポートする錠剤化された完全乾燥粉末培養培地製剤である。したがって、本明細書に記載のこの態様による培地は、好ましくは、インビトロでの細胞の培養に必要な栄養成分を含み、その結果、追加の栄養成分が溶媒に含まれるか、または再構成時および使用前に培地に添加される必要がない。したがって、本明細書に記載のそのような完全培地は、水または緩衝食塩水などの代替の非栄養素含有溶媒で再構成したときにインビトロで細胞を培養する際に使用するのに適している。このような完全培地は、自動的にｐＨ調整する培地であり得、１つ以上の培養培地サプリメント（血清を含むがこれに限定されない）、１つ以上のアミノ酸（ｌ－グルタミンを含むがこれに限定されない）、インスリン、トランスフェリン、１つ以上のホルモン、１つ以上の脂質、１つ以上の増殖因子、１つ以上のサイトカイン、１つ以上の神経伝達物質、１つ以上の動物組織、臓器または腺の抽出物、１つ以上の酵素、１つ以上のタンパク質、１つ以上微量元素、１つ以上の細胞外マトリックス成分、１つ以上の抗生物質、１つ以上のウイルス阻害剤、１つ以上の緩衝液、またはそれらの組み合わせを含み得る。
【0078】
本発明の方法によって錠剤として調製され得る、または本明細書に記載の培養培地に含まれ得る培地サプリメントの例には、ウシ血清、胎仔ウシ、新生仔ウシおよび仔ウシ血清、ヒト血清、ウマ血清、ブタ血清、サル血清、エイプ血清、ラット血清、マウス血清、ウサギ血清、ヒツジ血清などの動物血清、ＳＴＥＭＰＲＯ ＬＩＰＯＭＡＸ、ＯＰＴＩＭＡＢ、ＫＮＯＣＫ－ＯＵＴ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）などの既知組成置換物、ホルモン（コルチコステロイド、エストロゲン、アンドロゲン（例えば、テストステロン）などのステロイドホルモンを含む）、およびインスリン、サイトカイン（増殖因子（例えば、ＥＧＦ、αＦＧＦ、βＦＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦ－１、ＩＧＦ－２、ＮＧＦなど）を含む）、インターロイキン、コロニー刺激因子、インターフェロンなど）などのペプチドホルモン、神経伝達物質、脂質（リン脂質、スフィンゴ脂質、脂肪酸、ＥＸＣＹＴＥ、コレステロールなどを含む）、接着因子（フィブロネクチ、ビトロネクチン、ラミニン、コラーゲン、プロテオグリカン、グリコサミノグリカンなどの細胞外マトリックス成分を含む）、および動物、組織（例えば、植物または細菌組織）、細胞、器官または腺（ウシ下垂体抽出物、ウシ脳抽出物、ニワトリ胚抽出物、ウシ胚抽出物、ニワトリ肉抽出物、ニワトリ組織抽出物、アキレス腱およびそれらの抽出物）など）の抽出物または加水分解物などが含まれるが、これらに限定されない。本発明の方法によって産生され得る、または本明細書に記載の培養培地に含まれ得る他の培地サプリメントには、天然または組換えであり得る様々なタンパク質（血清アルブミン、特にウシまたはヒト血清アルブミン；免疫グロブリンおよびその断片または複合体；アプロチニン；ヘモグロビンなど；ヘミンまたはヘマチン；酵素（トリプシン、コラゲナーゼ、パンクレアチニン、またはジスパーゼなど）；リポタンパク質；フェチュイン；フェリチンなど）；ビタミン；アミノ酸およびそのバリアント（ｌ－グルタミンおよびｌ－システインを含むがこれらに限定されない）、酵素補因子；多糖類；塩またはイオン（モリブデン、バナジウム、コバルト、マンガン、セレンなどの塩またはイオンなどの微量元素を含む）；ならびに、当業者に周知の、インビトロで細胞を培養するのに有用である他のサプリメントおよび組成物が含まれる。本明細書に記載の方法によって生成される培地サプリメントには、動物または哺乳動物（例えば、ヒト、魚、ウシ、ブタ、ウマ、サル、サル、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、昆虫など）由来のサプリメント、成分、または製品が含まれる。これらの血清および他の培地サプリメントは市販されている。代替的に、本明細書に記載の血清および他の培地サプリメントは、当業者にとって日常的である当該技術分野で知られている方法によって、それらの天然源から単離され得るか、または組換え的に産生され得る。Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ． Ｉ．，Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７４－７８（１９８３），ａｎｄ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ ｃｉｔｅｄ ｔｈｅｒｅｉｎ；ｓｅｅ ａｌｓｏ Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．，ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ｄ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎ．Ｙ，１１６－１２０（１９８８）を参照されたい。
【0079】
最終製剤にμｇ／ｍＬまたはμｇ／Ｌの量でさえも存在することが多い成分は、均一性および／または安定性の懸念から、典型的には、標準的な粉末培地から除外されており、代わりに、典型的には、再構成された１×培地に濃縮物として添加することにより、貯蔵コストが増加し、完成した培養培地の生産がより高価になり、効率が低下する。一態様では、そのような低レベル成分は、最初に成分の濃縮物を作製し、次にそれらを濃縮物で造粒される粉末培地の一部に噴霧することによって、基本粉末に添加することができる。次いで、これは、ブレンド用のバルクと同じ一般的なサイズ範囲の粒子サイズに粉砕される。少量の成分を噴霧する能力は、微量元素、ビタミン、ウイルス阻害剤、増殖因子、サイトカインなどを含む培地の開発に特に役立つ可能性がある。具体的には、とりわけ、粉末培地に添加される成分としては、レチノール（Ａ）、チアミン（Ｂ１）、リボフラビン（Ｂ２）、ナイアシンアミド（Ｂ３）、パントテン酸（Ｂ５）、ピリドキサミン（Ｂ６）、ビオチン（Ｂ７）、葉酸（Ｂ９）、コバラミン（Ｂ１２）、アスコルビン酸（Ｃ）、コレカルシフェロール（Ｄ）、トコフェロール（Ｅ）、フィロキノン（Ｋ）、コリン、イノシトール、リポ酸、パラアミノ安息香酸、それらの塩を含むビタミン、および鉄、マンガン、銅、ヨウ素、亜鉛、コバルト、フッ化物、クロム、モリブデン、セレン、ニッケル、ケイ素、バナジウム、それらの塩、またはそれらの組み合わせを含む微量元素が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載の培養培地に少量添加される追加の成分には、例えば、増殖因子（例えば、ＥＧＦ、αＦＧＦ、βＦＧＦ、ＫＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦ－１、ＩＧＦ－２、ＮＧＦ、インスリンなど）、インターロイキン、コロニー刺激因子、インターフェロン、接着因子、細胞外マトリックス成分（例えば、コラーゲン、ラミニン、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン、フィブロネクチン、ビトロネクチンなど）、脂質（リン脂質、コレステロール、ウシコレステロール濃縮物、脂肪酸、スフィンゴ脂質など）；動物の組織、腺または臓器の抽出物；ＧＥＮＥＴＩＣＩＮカルベニシリン、セフォタキシム、抗ＰＰＬＯ、ＦＵＮＧＩＺＯＮＥ、ハイグロマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ナイスタチン、ペニシリン、またはストレプトマイシンなどの抗生物質、およびウイルス阻害剤（例えば、当該技術分野で知られているプロテアーゼ阻害剤、ヌクレオシド類似体など）が含まれ得る。
【0080】
本明細書に記載されるように調製され得る、および／または培養培地に含まれ得る緩衝液の例には、緩衝塩類溶液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）製剤、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）製剤、ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（ＨＢＳ）製剤、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）、ダルベッコＰＢＳ（ＤＰＢＳ）、アールズ平衡塩類溶液、パック塩類溶液、ムラシゲおよびスクーグ植物基礎塩類溶液、ケラー海洋植物基礎塩類溶液、プロバソリ海洋植物の基礎塩類溶液、およびカオおよびミカイルクの基礎塩類溶液などが含まれるが、これらに限定されない。市販されているこれらの緩衝液、および他の多くの一般的に使用される緩衝液の製剤は、当該技術分野でよく知られており、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ中、ＤＩＦＣＯ ＆ ＢＢＬ Ｍａｎｕａｌ，２ｎ ｅｄ．（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，２００９）中、およびＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅカタログ中に見出すことができる。
【0081】
臨床溶液の錠剤、特に非経口栄養、電解質バランス、または静脈内（ＩＶ）溶液に使用される錠剤も記載されている。このような臨床溶液としては、リンガー、乳酸リンガー、水中の５質量パーセントのデキストロース、通常の生理食塩水（０．９質量パーセントのＮａＣｌ）、低張食塩水（０．４５質量パーセントのＮａＣｌ）、生理食塩水中の５質量パーセントのデキストロースなどが挙げられるが、これらに限定されない。臨床溶液は、１つ以上の医薬組成物またはその成分をさらに含み得る。
【0082】
所望のまたは有効な量または濃度の成分を含む、錠剤化された栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、緩衝液、またはサンプルを調製するための方法も記載され、ここで、糖（例えば、グルコース）、ビタミン、アミノ酸、塩、微量元素、増殖因子および／またはアミン（例えば、エタノールアミン、スペルミン、スペルミジン、プトレシーンまたはパラアミノ安息香酸）などの少なくとも１つの成分は、最終製品と比較してより多くの量で製造プロセスに投入される。凝集プロセス中の少なくとも１つの成分の有効濃度の損失または減少を補償する方法であって、本明細書に記載のプロセスに添加される成分の量を計算または決定して、最終的な所望のまたは有効な量をもたらす方法。
【0083】
試験培養培地中の化合物（例えば、ビタミン）の有効濃度を決定するための１つの方法は、以下の通りである。説明の目的でビタミンを使用して、既知の濃度のビタミンを、ビタミンを欠く培養培地に段階希釈する。段階希釈の２番目のセットは、試験培養培地がビタミンを欠く培養培地に段階希釈されるように設定される。次いで、増殖にビタミンを必要とする細胞を、段階希釈したサンプルの両方のセットに加え、適切な条件下で培養する。一定期間後、細胞複製が測定される（例えば、細胞カウントまたは光学密度の測定によって）。既知の濃度の測定値をグラフ化して標準曲線を作成し、これに試験培養培地希釈液からの測定値を比較して、試験培養培地液中のビタミンの有効濃度を決定する。細胞代謝に利用できるサンプル中の代謝物の量を決定するために、任意の数の同様のアッセイを使用することができる。
【0084】
別の実施形態は、本明細書に記載の栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループおよび緩衝液を滅菌するための方法、ならびにボールミル粉砕または凍結乾燥などの標準的な方法によって調製された粉末栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループおよび緩衝液を滅菌するための方法である。本明細書に記載の栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、および緩衝液を含むサンプルを滅菌または実質的に滅菌するための方法も記載されている。そのような追加の方法には、濾過、熱滅菌、照射、または他の化学的または物理的方法が含まれ得る。錠剤化された栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液（本明細書に記載されるように調製される）は、滅菌に有利な条件下で照射され得る。栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、および緩衝液は通常、大量の溶液で調製され、熱に不安定な成分を含むことが多いため、照射または加熱による滅菌には適していない。したがって、栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、および緩衝液は、一般に、濾過などの汚染物質除去方法によって滅菌され、そのような培地、培地サプリメント、培地サブグループ、および緩衝液を製造するために必要な費用および時間を大幅に増加させる。
【0085】
本明細書に記載の方法に従って調製された錠剤化栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液は、より安価でより効率的な方法によって滅菌することができる。例えば、粉末栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液は、これらの粉末の滅菌に有利な条件下で照射され得る。好ましくは、この照射はバルクで達成され（すなわち、サンプル、栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液の包装後）、最も好ましくは、この照射は、粉末化されたサンプル培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液に存在する可能性のある細菌、真菌、胞子またはウイルスが不活性化される（すなわち、複製が防止される）ような条件下で、本明細書に記載のバルク包装されたサンプル、培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液をガンマ線源に対する曝露によって達成される。代替的に、照射は、包装の前に、サンプル、粉末培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液をガンマ線源または紫外線源に曝露することによって達成することができる。本明細書に記載のサンプル、培地、培地サプリメント、培地サブグループおよび緩衝液は、代わりに、例えば、瞬間殺菌またはオートクレーブによる熱処理によって滅菌することができる（サブグループ、またはサンプル、栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液の成分が熱安定性である場合）。当業者によって理解されるように、滅菌に必要な照射の線量または熱、および曝露時間は、滅菌される材料の大部分に依存し、本明細書に記載されているものなどの当業者の既知の技術を使用して過度の実験を行わずに当業者によって容易に決定され得る。
【0086】
本明細書に記載される一実施形態では、バルクサンプル（例えば、栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液）（好ましくは粉末形態である）は、約１０～１００キログレイ（ｋＧｙ）の総線量、好ましくは約１５～７５ｋＧｙ、１５～５０ｋＧｙ、１５～４０ｋＧｙ、２０～４０ｋＧｙ、または２５～４５ｋＧｙの総線量、より好ましくは約２０～３０ｋＧｙの総線量、最も好ましくは約２５～３５ｋＧｙの総線量で、約１時間～約７日間、より好ましくは約１時間～約５日、１時間～約３日、約１～２４時間または約１～５時間、最も好ましくは約１～３時間（「通常の線量率」）、照射源（例えば、γ（ガンマ）放射線）に曝露される。代替的に、本明細書に記載のバルク粉末は、約１～５日の期間にわたって約２５～１００ｋＧｙの総累積線量の「低速線量率」で滅菌され得る。照射中、栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液（好ましくは粉末形態である）は、好ましくは約－７０℃からほぼ室温（約２０～２５℃）の温度で、最も好ましくは約－７０℃で保存される。当然ながら、当業者は、照射される材料のかさおよび／または質量に応じて、放射線量および曝露時間が調整され得ることを理解するであろう。照射または熱処理による粉末材料の滅菌に必要な典型的な最適な照射量、曝露時間および貯蔵温度は、当該技術分野で知られている。
【0087】
滅菌後、包装されていない錠剤化栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループおよび緩衝液は、無菌条件下で、例えば、滅菌チューブ、バイアル、ボトル、バッグ、ポーチ、ボックス、カートン、ドラムなどの容器に、真空包装、または本明細書に記載の一体化粉末／溶媒包装で包装することによって包装され得る。次いで、培地、培地サプリメント、培地サブグループ、および緩衝液などの滅菌包装されたサンプルを、本明細書に記載されるように長期間保存することができる。
【0088】
本明細書に記載の錠剤化された栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、および緩衝液は、再水和溶媒に容易に溶解し、実質的にほこりがない。使用するために、錠剤化された培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液は、溶媒和培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液の特定の使用に必要な所望の栄養素、電解質、イオンおよびｐＨ条件を生成するのに十分な量の溶媒中で「再水和」または「再構成」され得る。粉末状の栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液とは異なり、錠剤化された培地、培地サプリメント、培地サブグループ、および緩衝液は容易に溶解し、ほこりや不溶性物質があったとしてもほとんど生成しないため、この再構成は特に容易になる。
【0089】
本明細書に記載の錠剤化栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、緩衝液、またはサンプルを再構成する際に使用するための溶媒には、蒸留水および／または脱イオン水などの水、血清（ウシまたはヒト血清、特にウシ胎仔血清またはウシ血清）、有機溶媒（ジメチルスルホキシド、アセトン、エタノールなど）、またはそれらの任意の組み合わせなどの本明細書に記載の溶媒が含まれるが、これらに限定されない。これらのいずれも、１つ以上の追加成分（例えば、塩、多糖類、イオン、洗浄剤、安定剤など）を含み得る。例えば、錠剤化された培地サプリメント（動物血清など）および緩衝液は、好ましくは、水中で１倍の最終濃度、または任意選択でストック溶液の調製または保管用より高い濃度（例えば、２倍、２．５倍、５倍、１０倍、２０倍、２５倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍など）である。代替的に、錠剤化された培養培地は、培地サプリメントが、例えば、水中の体積パーセント（ｖｏｌ／ｖｏｌ）で０．５パーセント、１パーセント、２パーセント、２．５パーセント、５パーセント、７．５パーセント、１０パーセント、１５パーセント、２０パーセント、２５パーセント、５０パーセント、またはそれ以上の濃度で存在する溶液などの、水中の培地サプリメント（例えば、ＦＢＳなどの血清）の溶液で再構成され得る。
【0090】
錠剤化されたサンプル（例えば、栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液）の再構成は、典型的には、無菌条件下で行われ、再構成されたサンプルの滅菌を維持するが、再構成されたサンプルは、再水和後、当該技術分野でよく知られている濾過または他の滅菌方法によって滅菌することができる。それらの再構成に続いて、培地、培地サプリメント、培地サブグループおよび緩衝液または他のサンプルは、使用するまで、約１０℃未満の温度、好ましくは約０～４℃の温度で保存されるべきである。
【0091】
再構成された錠剤化栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループおよび緩衝液を使用して、当業者に知られている標準的な細胞培養技術に従って細胞を培養または操作することができる。そのような技術において、培養される細胞は、細胞の培養または操作に有利な条件（制御された温度、湿度、照明、および大気条件など）の下で、本明細書に記載の再構成培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液と接触させられる。そのような方法による培養に特に適している細胞には、細菌細胞、魚細胞、酵母細胞、植物細胞、および動物細胞が含まれるが、これらに限定されない。そのような細菌細胞、酵母細胞、植物細胞および動物細胞は、既知の培養保管所、例えば、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．）および当業者に周知の他のものから商業的に入手可能である。これらの方法による培養に好ましい動物細胞としては、昆虫細胞（最も好ましくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ細胞、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ細胞およびＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ細胞）、線虫細胞（最も好ましくはＣ．ｅｌｅｇａｎｓ細胞）および哺乳動物細胞（最も好ましくはＣＨＯ細胞、 ＣＯＳ細胞、ＶＥＲＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＡＥ－１細胞、ＳＰ２／０細胞、Ｌ５．１細胞、ハイブリドーマ細胞、およびヒト細胞（２９３細胞、ＰＥＲ－Ｃ６細胞、ＨｅＬａ細胞など）が挙げられるこれらに限定されず、それらのいずれも、体細胞、胚芽細胞、正常細胞、罹患細胞、形質転換細胞、変異細胞、幹細胞、前駆細胞または胚細胞、胚幹細胞（ＥＳ細胞）、ウイルスまたはベクター産生に使用される細胞（すなわち、２９３、ＰｅｒＣ ６）、細胞または遺伝子治療に使用される初代ヒト部位に由来する細胞、すなわち、リンパ球、造血細胞、他の白血球（ＷＢＣ）、マクロファージ、好中球、樹状細胞であり得、これらのいずれも足場依存性または足場非依存性（すなわち、「懸濁」）細胞であり得る。別の態様は、組織または器官の移植または操作のための細胞および／または組織、すなわち、肝細胞、膵島、骨芽細胞、破骨細胞／軟骨細胞、皮膚または筋肉または他の結合組織、上皮細胞、ケラチノサイトのような組織、神経、角膜、皮膚、器官起源の細胞、およびワクチンとして使用される細胞、すなわち、血液細胞、造血細胞、他の幹細胞または前駆細胞、ならびに様々な組織型の不活化または改変された腫瘍細胞の操作または培養である。
【0092】
別の実施形態は、上記細胞を本明細書に記載の細胞培養試薬、特に再構成された錠剤化された栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液と接触させ、細胞または複数の細胞培養または操作に有利な条件下で上記細胞または複数の細胞を培養することを含む、１つ以上の細胞を操作または培養する方法である。任意の細胞、特に細菌細胞、酵母細胞、植物細胞、動物細胞、および本明細書に記載の他の細胞または細胞株を、本方法に従って培養または操作することができる。本明細書に記載のこの態様に従って培養または操作される細胞は、正常細胞、罹患細胞、形質転換細胞、変異細胞、体細胞、生殖細胞、幹細胞、前駆細胞または胚細胞であり得、これらのいずれも確立された細胞株であるか、または天然の供給源から得ることができる。
【0093】
本発明の方法によって製造される錠剤化栄養培地、培地サプリメントおよび培地サブグループは、細菌細胞、真菌細胞（特に、酵母細胞）、植物細胞、または動物細胞（特に昆虫細胞、線虫細胞または哺乳動物細胞、最も好ましくはヒト細胞）であり得る、細胞（これらのいずれも体細胞、生殖細胞、正常細胞、罹患細胞、形質転換細胞、変異細胞、幹細胞、前駆細胞、または胚細胞であり得る）の増殖を操作またはサポートするために使用され得る任意の培地、培地サプリメントまたは培地サブグループ（無血清または血清含有）である。好ましいそのような栄養培地としては、細胞培養培地、最も好ましくは細菌細胞培養培地、植物細胞培養培地、または動物細胞培養培地が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい培地サプリメントとしては、細菌、動物または植物細胞、腺、組織または器官の抽出物または加水分解物（特にウシ下垂体抽出物、ウシ脳抽出物、およびニワトリ胚抽出物）、ならびに生体液または血液由来産物（特に動物血清、最も好ましくはウシ血清（特に胎仔ウシ、新生仔ウシまたは正常仔ウシ血清）、ウマ血清、ブタ血清、ラット血清、マウス血清、ウサギ血清、サル血清、サル血清またはヒト血清、そのうちのいずれも胎児血清であり得る）、およびその抽出物（より好ましくは血清アルブミン、最も好ましくはウシ血清アルブミンまたはヒト血清アルブミン）などの組成が既知でないサプリメントが挙げられるが、これらに限定されない。培地サプリメントとしては、上述の組成不明の培地サプリメントの代替品として使用できる、ＳＴＥＭＰＲＯ ＬＩＰＯＭＡＸ代替品、ＯＰＴＩＭＡＢ代替品、ＫＮＯＣＫ－ＯＵＴ血清代替品（ＧＩＢＣＯ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）などの既知組成代替品も含まれ得る。そのようなサプリメントはまた、ホルモン、サイトカイン、神経伝達物質、脂質、接着因子、タンパク質、アミノ酸などを含むがこれらに限定されない、既知組成成分を含み得る。
【0094】
本明細書に記載の錠剤化された培地は、溶媒で再構成されると、例えば、糸状菌、トランスジェニック植物（例えば、タバコ、米、およびレムナ）、地衣類、または藻類などの生物、または前述の生物のいずれかに由来する細胞の増殖および／または培養に使用することができる。
【0095】
また、培地サプリメントまたはフィードの錠剤化された形式についても説明する。一態様では、サプリメントは、１つ以上のアミノ酸を含む。別の態様では、アミノ酸の塩が使用される。別の態様では、塩はナトリウム塩である。別の態様では、一塩基性および二塩基性リン酸塩が使用される。好ましいカチオンはナトリウムである。別の態様では、結果として生じるｐＨ、例えば、約８のｐＨが得られるように、一塩基性および二塩基性の塩が提供される。製剤に応じて、一塩基性塩と二塩基性塩の比率は望ましいｐＨによって決定されるが、特に濃縮または高濃度のサプリメントを使用する場合は、溶解度を最適化するために様々な総塩濃度を試す必要がある。塩分濃度を評価する際にもｐＨを確認できる。アミノ酸が塩として提供されていない場合、好ましくは、酸のｐＨ効果は、三塩基性リン酸塩、好ましくはナトリウム三塩基性リン酸塩によって打ち消される。カチオンとしてナトリウムが好ましいが、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどの他の金属を使用することができる。特定の対イオンが必要な場合は、リン酸塩として利用できる場合がある。別の態様では、サプリメント粉末は急速に溶解する。別の態様では、サプリメントは、例えば、補充される培地中のその成分の濃度の約２倍以上、好ましくは３倍、５倍、８倍、１０倍、１２倍、１５倍、２０倍、２５倍、５０倍、７５倍、８５倍、９５倍、または約１００倍またはそれ以上でさえある濃度の１つ以上の成分を含む高濃度混合物として調製および使用することができる。サプリメントのそれぞれの所望の成分の濃度は、独立して選択することができる。別の態様では、サプリメントは、滅菌条件下で水で再構成することによって調製される。別の態様では、サプリメントは濾過によって滅菌される。
【0096】
サプリメントは、補充される培地と共通の成分を持たない場合もあれば、１つ以上の共通の成分を含む場合もある。サプリメントは、１つ以上の成分の異なる濃度、例えば、２つの成分の異なる比率、異なる成分混合物、追加の成分、またはサプリメント中の省略された成分など、少なくとも１つの方法で補充される培地とは異なり得る。例えば、サプリメントは、実行可能な範囲で塩を省略し得、例えば、著しく増強された濃度の増殖因子またはアミノ酸を含み得る。好ましいサプリメント製剤は、少なくとも２つ、より好ましくは３つ、しかしおそらく少なくとも４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、またはそれ以上のアミノ酸（その塩または二量体を含む）を含む。
【0097】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のフィードサプリメントは、細胞を培養するために使用されている、または使用されている培地に補充するために利用される。例えば、細胞が培養されるとき、いくつかの成分は細胞によって培地から除去される。本明細書に記載のいくつかの実施形態では、フィードサプリメントは、とりわけ、これらの成分のいくつかまたはすべてを置き換えるために使用される。いくつかの実施形態において、サプリメントは、補充される元の培地にあった成分の大部分を含むが、フィード培地は、少なくとも１つの成分を欠いている。いくつかの実施形態では、フィードサプリメントは、補充される元の培養培地の濃度と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、またはそれ以上の成分を欠いている。いくつかの実施形態において、フィードサプリメントは、濃縮された形態で、例えば、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、または１０００倍で添加される。濃縮形態とは、フィードサプリメント中の成分の少なくとも１つが、培養培地中の所望の濃度よりも高い濃度であることを意味する。いくつかの実施形態において、フィードサプリメントの成分は、例えば、適合性のあるサブグループに基づいて、複数のフィードサプリメント培地に分割され得る。
【0098】
一実施形態では、フィードサプリメントは錠剤の形態である。錠剤化されたフィードサプリメントは、通常、供給前に再構成される。しかしながら、液体培地に直接滅菌の錠剤化されたサプリメントを追加することは可能である。典型的には、この場合、供給は、錠剤が細胞に接触する前に十分な溶解または混合を受けるように設定される。
【0099】
別の実施形態では、錠剤化された培地、サプリメント、フィード、サブグループ、または緩衝液を培養物に添加して、特定の成分の濃度を最適化し、枯渇または省略された成分を補充し、または培養物によって消費または分解された成分を置き換える。錠剤は、培養物に添加する前に溶媒に溶解するか、または固体の形で添加することができる。
【0100】
別の実施形態では、細胞培養物を分析して、１つ以上の培地成分の濃度を決定する。ＨＰＬＣ、質量分析、ＥＬＩＳＡ、標準曲線アッセイ、および当該技術分野で知られている他の方法などの典型的な分析方法を使用して、成分の濃度を決定することができる。成分の濃度が所望の範囲よりも低い場合、錠剤化されたサプリメントを培養物に添加して、濃度を所望の範囲に増加させることができる。錠剤は、培養物に添加する前に溶媒に溶解するか、錠剤の形態で添加してインサイチュで溶解することができる。
【0101】
いくつかの実施形態では、フィードサプリメントの成分の一部は、錠剤、例えば、凝集した錠剤化サプリメントから再構成される。いくつかの実施形態では、追加の成分が、再構成された培地または錠剤化されたサプリメントまたはフィードの液体形態に添加される。いくつかの実施形態では、錠剤化された追加の成分は、アミノ酸または抗生物質を含む。
【0102】
細胞培養培地の容積モル濃度（浸透圧の尺度）は、細胞に出入りする物質の流れを調節するのに役立つため、重要である。これは典型的には、培養培地中の塩の添加または除去によって制御される。容積モル濃度の急激な増加（例えば、基本増殖培地と比較して容積モル濃度が上昇した濃縮フィードサプリメントの添加）は、ストレスを受けた、損傷した、または死んだ細胞をもたらす可能性がある。細胞培養／増殖中に最適な容積モル濃度範囲を維持することは、細胞機能および／または生物生産の成功にとって望ましいことである。
【0103】
基本増殖培地の容積モル濃度は、一般に２５０ｍＯｓｍｏ／ｋｇ～３５０ｍＯｓｍｏ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の濃縮フィードサプリメントの添加は、容積モル濃度を約２５ｍＯｓｍｏ／ｋｇ、または約０～約１００、約０．０１～約１００、約０．１～約１００、約１～約１００、約１０～約１００、約５０～約１００、約７５～約１００、約１～約１０、約１か～約５０、約１～約７５、約１０～約５０、約１５～約３５、約２５～約５０、または約２０～約３０ｍＯｓｍｏ／ｋｇで増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の濃縮フィードサプリメント培地（例えば、５×濃縮フィードサプリメント培地）の容積モル濃度は、約０～約１５００、１～約１０００、１～約７５０、１～約５００、１～約４００、１～約３００、１～約２００、１～約１００、１～約５０、５０～約１０００、１００～約１０００、３００～約１０００、５００～約１０００、７５０～約１０００、１００～約２００、２００～約３００、３００～約４００、４００～約５００、４５０～約５００、５００～約６００、５５０～約６５０、６００～約７００、７５０～約８５０、７００～約８００、８００～約９００、９００～約１０００、１０００～約１２５０、または約１２５０～約１５００ｍＯｓｍｏ／ｋｇの容積モル濃度を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の濃縮フィードサプリメント培地の容積モル濃度は、補充または供給される培地の容積モル濃度と比較して、約３．０倍～約３．５倍、約３．５倍～約４．５倍、約４．５倍～約５．５倍、約５．５倍～約６．５倍、約６．５倍～約７．５倍、約７．５倍～約８．５倍、約８．５倍～約９．５倍、約９．５倍～約１０．５倍、約１０．５倍～約１１．５倍、約１１．５倍～約１２．５倍、約１２．５倍約１３．５倍、約１３．５倍～約１４．５倍、約１４．５倍～１８．５倍～約１９．５倍、約１９．５倍～約２０．５倍、約３倍～約１０倍、約５倍～約１０倍、約１０倍～約１５倍、約１５倍～約２０倍、約２０倍～約２５倍、または約２５倍～約１００倍である。
【0104】
錠剤化された栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、緩衝液、および細胞を低コストで調製するための方法が、本明細書に記載されている。組成物および方法は、錠剤化された栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、緩衝液、および細胞の調製を、低コストおよび減少した不便性で提供する。コスト削減はいくつかの因子によるものである。例えば、錠剤化された培地、培地サプリメント、培地サブグループ、および緩衝液製剤は、１×製剤に必要な大きな攪拌タンクが必要とされないため、はるかに小さな生産設備で製造することができる。さらに、錠剤化された培地、培地サプリメント、培地サブグループ、および緩衝液製剤は、在庫、保管、および人件費を削減する「ジャストインタイム」製造技術を使用して、必要に応じて調製することができる。培地、培地サプリメント、培地サブグループ、および緩衝液製剤の準備と出荷に必要な時間は、６～８週間からわずか１日に短縮できる。本明細書に記載の自動ｐＨ調整する錠剤培地はまた、大幅なコストおよび時間の節約をもたらし、従来の乾燥粉末またはバルク液体培地を使用する標準的な方法によるｐＨ調整プロセス中に起こり得る再構成培地への汚染の導入の傾向を低減する。
【0105】
また、他の一般的に使用される技術に従って製造された複数のバッチに対する複数の品質管理テストと比較して、１つの品質管理テストのみが必要である、非常に大量の１×培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液（例えば、１００，０００リットル以上）を調製するために使用できる錠剤化された栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液の調製についても説明する。重要なことに、個々の成分がより安定しているため、錠剤化された培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液製剤がバッチ間でより一貫している。さらに、錠剤化された培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液の製剤は、乾燥成分を秤量する必要なしに、特定の容量を製造するために容易に分配することができる。それぞれの錠剤は特定の容量に再構成される。したがって、必要に応じて、スケールアップして非標準容量の培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液を作成するのは簡単である。さらに、錠剤は再構成中のほこりおよび取り扱いを最小限に抑え、曝露や潜在的な汚染を防ぐ。
【0106】
本明細書に記載の別の実施形態は、凝集栄養培地粉末、凝集培地サプリメント粉末、凝集栄養培地サブグループ粉末、または凝集緩衝液粉末の錠剤化された形態を製造するための方法であり、上記記方法は、栄養培地粉末、培地サプリメント粉末、栄養培地サブグループ粉末、または緩衝液粉末を、その中に少なくとも１つの脂質を含む溶媒で凝集させることを含み、上記溶媒は、上記栄養培地粉末、培地サプリメント粉末、栄養培地サブグループ粉末、または緩衝液粉末に組み込むための上記少なくとも１つの脂質を送達する。一態様では、凝集は、流動床凝集を含む。次いで、凝集した栄養培地粉末、培地サプリメント粉末、栄養培地サブグループ粉末、または緩衝液粉末を、１つ以上の滑沢剤、増量剤、結合剤、またはそれらの組み合わせと組み合わせて、錠剤に圧縮する。
【0107】
本明細書に記載の一実施形態は、錠剤化された細胞培養培地、フィード、またはサプリメント組成物を製造するための方法であって、（ａ）細胞培養培地、フィード、またはサプリメント粉末もしくは凝集粉末を調製することと、（ｂ）培地粉末または凝集粉末を１つ以上の滑沢剤、増量剤、結合剤、またはそれらの組み合わせと組み合わせることと、（ｃ）錠剤化装置を使用して、細胞培養培地、フィード、またはサプリメント錠剤を製造することと、を含む、方法である。例示的な製造プロセスが図４に示されている。例示的な製造プロセスが図４に示されている。一実施形態では、錠剤の形状、サイズ、および重量は、例えば、錠剤化装置を介した個別の製造について制御することができる。錠剤化装置には、例えば、ＫＯＲＳＨ ＰＨ１００ロータリー錠剤プレスなどが含まれる（実施例を参照されたい）。
【0108】
本明細書に記載の錠剤化培地、培地サプリメント、培地サブグループ、緩衝液、細胞、および細胞含有組成物は、キットの調製に理想的に適している。そのようなキットは、バイアル、試験管、ボトル、パッケージ、ポーチ、ドラムなどのような１つ以上の容器を含み得る。それぞれの容器は、本明細書に記載の錠剤化された細胞培養試薬、栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、細胞、もしくは緩衝液、またはそれらの組み合わせのうちの１つ以上を含み得る。そのような錠剤化された細胞培養試薬、栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、緩衝液または細胞は、水和または脱水され得るが、典型的には、本明細書に記載の方法によって生成される脱水調製物である。そのような調製物は、滅菌または実質的に滅菌であり得る。
【0109】
第１の容器は、例えば、本明細書に記載の錠剤化された栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液、または本明細書に記載の栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液のいずれかなどの本明細書に記載のそれらの任意の成分またはサブグループを含み得る。追加の錠剤化された、乾燥、または液体の栄養培地、緩衝液、抽出物、サプリメント、成分、またはサブグループは、本キットの追加の容器に含まれ得る。キットはまた、１つ以上の追加の容器に、細菌細胞、酵母細胞、植物細胞、または動物細胞などの１つ以上の細胞を含み得る。そのような細胞は、凍結乾燥、乾燥、凍結、または他の方法で保存され得るか、または本明細書に記載の方法に従って噴霧乾燥され得るか、または本明細書に記載の方法によって処理され得る。さらに、本明細書に記載のキットは、例えば、１つ以上の二価カチオンと任意に複合体を形成したｌ－グルタミンを含む１つ以上の追加の容器をさらに含み得る。キットは、乾燥粉末医薬組成物もしくは臨床組成物、細胞培養試薬、栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループおよび／または緩衝液を再構成する際に使用される溶媒を含む１つ以上の追加の容器をさらに含み得る。そのような溶媒は、水性または有機性であり得、緩衝液、生理食塩水、栄養培地溶液、血清を含む栄養培地サプリメント溶液、例えばウシ血清、ウシ胎仔血清、仔ウシ血清、ヒト血清、またはそれらの組み合わせを含む。本明細書に記載の栄養培地、緩衝液、医薬組成物、抽出物、サプリメント、成分、またはサブグループとの混合に適合しない他の成分は、適合しない成分の混合を回避するために１つ以上の追加の容器に含まれ得る。例示的なキットは、再構成用の培地錠剤を含む容器を含み得、任意選択で、再構成溶媒を含むのに十分な容量、再構成の使用説明書、および再構成溶媒を導入するためのティアストリップまたはポートなどの錠剤にアクセスするための手段を含む。
【0110】
所与のキットに含まれる容器の数および種類（例えば、栄養培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液を作製するため）は、調製する所望の製品または医薬組成物もしくは臨床組成物、培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液の種類に応じて変動し得る。典型的には、キットには、特定の医薬組成物もしくは臨床組成物、培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液を作製するために必要なコンポーネントまたはサプリメントを含むそれぞれの容器が含まれる。しかしながら、異なる量の様々な成分、サプリメント、サブグループ、緩衝液、溶媒などを混合することによって、異なる医薬組成物もしくは臨床組成物、培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液を調製して異なる医薬組成物もしくは臨床組成物、培地、培地サプリメント、培地サブグループ、または緩衝液の製剤を作製できるように、本明細書に記載のキットに追加の容器を含めることができる。
【0111】
いずれかの実施形態またはその態様の範囲から逸脱することなく、本明細書に記載の組成物、製剤、方法、プロセス、および用途に対して適切な改変および適合をなし得ることが、関連技術分野の当業者には明らかであろう。提供される組成物、方法、および実験は例示的なものであり、特定の実施形態のいずれかの範囲を限定することを意図するものではない。本明細書に開示される様々な実施形態、態様、およびオプションのすべては、任意の変形または反復で組み合わせることができる。本明細書に記載の組成物、製剤、方法、およびプロセスの範囲には、本明細書に記載の実施形態、態様、オプション、実施例、および選好のすべての実際のまたは潜在的な組み合わせが含まれる。本明細書に記載の例示的な組成物および製剤は、任意の成分を省略し、本明細書に開示される任意の成分を置換し、または本明細書の他の場所に開示される任意の成分を含み得る。本明細書に開示される組成物または製剤のいずれかの任意の成分の質量と、製剤中の他の成分の質量または製剤中の他の成分の総質量との比は、それらが明示的に開示されるかのようにここに開示される。参照により組み込まれる特許または刊行物のいずれかの用語の意味が、本開示で使用される用語の意味と矛盾する場合、本開示の用語または語句の意味が優先する。本明細書で引用されるすべての特許および刊行物は、その特定の教示について参照により本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【0112】
実施例１
典型的なＣＨＯ培地であるＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ）を、錠剤に圧縮する能力について評価した。培地の材料特性を分析した。表３を参照されたい。錠剤は、５００ｇの培地を手動の２ステーションＣａｒｖｅｒ錠剤プレスにロードすることによって製造された。錠剤の質量は２．５～２．６ｇで、直径は１６ ｍｍ（５／８インチ）×９．９ｍｍであった。図１Ａを参照されたい。錠剤の崩壊は、スローアップ／ダウン攪拌を使用する標準的な粉末崩壊装置を使用して実行された。図１Ｂを参照されたい。錠剤を、水９２６ｍＬ当たり５０ｇ（２０錠）の比率で水に加えた。この培地と水の比率は、標準のＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔの推奨溶解率である。２０錠は２５℃で約２２～２３分以内に崩壊した（ｎ＝３回の実験）。
典型的なＣＨＯ培地であるＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ）を、錠剤に圧縮する能力について評価した。培地の材料特性を分析した。表３を参照されたい。錠剤は、５００ｇの培地を手動の２ステーションＣａｒｖｅｒ錠剤プレスにロードすることによって製造された。錠剤の質量は２．５～２．６ｇで、直径は１６ ｍｍ（５／８インチ）×９．９ｍｍであった。図１Ａを参照されたい。錠剤の崩壊は、スローアップ／ダウン攪拌を使用する標準的な粉末崩壊装置を使用して実行された。図１Ｂを参照されたい。錠剤を、水９２６ｍＬ当たり５０ｇ（２０錠）の比率で水に加えた。この培地と水の比率は、標準のＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔの推奨溶解率である。２０錠は２５℃で約２２～２３分以内に崩壊した（ｎ＝３回の実験）。
【表3】
【0113】
実施例２
錠剤滑沢剤であるステアリン酸マグネシウムを使用した場合の効果を評価した。ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ）培地と、１質量パーセントから５質量パーセントまでの様々な量のステアリン酸マグネシウムを使用して、４つの特定の試験が実施された。
錠剤滑沢剤であるステアリン酸マグネシウムを使用した場合の効果を評価した。ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ）培地と、１質量パーセントから５質量パーセントまでの様々な量のステアリン酸マグネシウムを使用して、４つの特定の試験が実施された。
【表4】
【0114】
各製剤について、様々な量の造粒培地を、滑沢剤としてふるいにかけたステアリン酸マグネシウムとブレンドして、５００ｇの総質量で所望の質量パーセントを達成した。表４を参照されたい。ブレンドされた培地滑沢剤混合物は、最大の錠剤重量、最適な硬度、および厚さを達成するために、Ｋｏｒｓｃｈ ＰＨ １００錠剤プレス（１６．０ｍｍダイ）で錠剤（ｎ＝３）へと圧縮された。
【0115】
１質量パーセントのステアリン酸マグネシウムを含むブレンドされた培地滑沢剤混合物は、圧縮時に下部パンチおよび錠剤ダイ壁に付着した。２質量パーセント以上のステアリン酸マグネシウムを含む培地ブレンドは、錠剤プレスに付着しなかった。
【0116】
培地錠剤は、従来のプロペラミキサーと、水９２６ｍＬ当たり５０ｇ（２０錠剤）の比率で室温である約２５℃の水を使用して、崩壊について分析された。表５を参照されたい。この培地と水の比率は、標準のＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔの推奨溶解率である。
【表5】
【0117】
実施例３
培地錠剤は、６０ｍＬの振とうフラスコにバッチ供給して、細胞増殖および免疫グロブリンの生産性を評価した。ＣＨＯ ＤＧ４４ ＬＨ細胞は、ＣＤ ＯＰＴＩＣＨＯ（ＧＩＢＣＯ）で最低３継代培養した。培養物に、グルコース、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ （ＧＩＢＣＯ）（陽性対照）、または２質量パーセントもしくは５質量パーセントのステアリン酸マグネシウムを含むＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ錠剤（「錠剤飼料（Tablet Feed）」）を補充した。錠剤を、水９２６ｍＬ当たり５０ｇ（２０錠）の割合で水中で再構成し、０．１μｍフィルターで濾過し、さらに操作することなく使用した。錠剤の再構成率は、ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴの調製に匹敵する。細胞の生存率とＩｇＧ産生をモニターするために、２日ごとに１２日間サンプルを採取した。錠剤飼料を添加した細胞培養物は、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ（すなわち、錠剤化されていない飼料（non-tableted feed）、陽性対照）を補充した細胞培養物に匹敵する生細胞数（例えば、約１４×１０6細胞／ｍＬ）を示した。グルコースのみを含む補充されていない細胞培養物は、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴを補充した細胞培養物と比較して低い、約１０×１０6細胞／ｍＬ（陰性対照）の生細胞数を示した。図２Ａ～２Ｂを参照されたい。
培地錠剤は、６０ｍＬの振とうフラスコにバッチ供給して、細胞増殖および免疫グロブリンの生産性を評価した。ＣＨＯ ＤＧ４４ ＬＨ細胞は、ＣＤ ＯＰＴＩＣＨＯ（ＧＩＢＣＯ）で最低３継代培養した。培養物に、グルコース、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ （ＧＩＢＣＯ）（陽性対照）、または２質量パーセントもしくは５質量パーセントのステアリン酸マグネシウムを含むＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ錠剤（「錠剤飼料（Tablet Feed）」）を補充した。錠剤を、水９２６ｍＬ当たり５０ｇ（２０錠）の割合で水中で再構成し、０．１μｍフィルターで濾過し、さらに操作することなく使用した。錠剤の再構成率は、ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴの調製に匹敵する。細胞の生存率とＩｇＧ産生をモニターするために、２日ごとに１２日間サンプルを採取した。錠剤飼料を添加した細胞培養物は、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ（すなわち、錠剤化されていない飼料（non-tableted feed）、陽性対照）を補充した細胞培養物に匹敵する生細胞数（例えば、約１４×１０6細胞／ｍＬ）を示した。グルコースのみを含む補充されていない細胞培養物は、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴを補充した細胞培養物と比較して低い、約１０×１０6細胞／ｍＬ（陰性対照）の生細胞数を示した。図２Ａ～２Ｂを参照されたい。
【0118】
錠剤飼料を添加した細胞培養物は、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ（すなわち、錠剤化されていない飼料、陽性対照）を補充した細胞培養物に匹敵するＩｇＧ産生（約２３０μｇ／ｍＬ）を示した。グルコースのみを含む補充されていない細胞培養物は、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴを補充した細胞培養物と比較して低いＩｇＧ産生（約１１５μｇ／ｍＬ）を示した。図３Ａ～３Ｂを参照されたい。
【0119】
実施例４
Ｋｏｒｓｃｈ ＰＨ １００錠剤プレスを使用して、ＢおよびＤタイプのツーリング用の高品質の錠剤を製造する製剤を特定するためにＤＯＥ研究が実施された。各試験は、活性顆粒ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴ Ｂ ＡＧＴと賦形剤を手動でブレンドすることによって実施された。次に、Ｃａｒｖｅｒ Ｐｒｅｓｓ（シングルステーション）を手動で使用して、ブレンドを錠剤に圧縮した。次いで、錠剤の質量、厚さ、硬度、破砕性、および崩壊時間を評価した。崩壊試験は、ビーカーとプロペラミキサーで約９００ｍＬの水（温度２５～３０℃）を使用して実行された。破砕性は、破砕性ドラム内の１錠を１００滴（２５ｒｐｍで４分間）に対して使用して実施した。
Ｋｏｒｓｃｈ ＰＨ １００錠剤プレスを使用して、ＢおよびＤタイプのツーリング用の高品質の錠剤を製造する製剤を特定するためにＤＯＥ研究が実施された。各試験は、活性顆粒ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴ Ｂ ＡＧＴと賦形剤を手動でブレンドすることによって実施された。次に、Ｃａｒｖｅｒ Ｐｒｅｓｓ（シングルステーション）を手動で使用して、ブレンドを錠剤に圧縮した。次いで、錠剤の質量、厚さ、硬度、破砕性、および崩壊時間を評価した。崩壊試験は、ビーカーとプロペラミキサーで約９００ｍＬの水（温度２５～３０℃）を使用して実行された。破砕性は、破砕性ドラム内の１錠を１００滴（２５ｒｐｍで４分間）に対して使用して実施した。
【0120】
表６は、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ錠剤を使用して実施されたＣａｒｖｅｒ Ｔａｂｌｅｔ Ｐｒｅｓｓ（手動圧縮機、シングルステーション）の実験計画（ＤＯＥ）研究から生成された物理データをまとめたものである。
【表6-1】
【表6-2】
【表6-3】
【0121】
表７は、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ錠剤を使用して実施されたＤＯＥ研究に基づいて、ＫＯＲＳＨ ＰＨ１００ロータリー錠剤プレスの小規模試験から生成された物理データをまとめたものである。
【0122】
ＫＯＲＳＨ ＰＨ１００ロータリー錠剤プレスで「Ｂ」タイプ（１６．０ｍｍ）と「Ｄ」タイプ（２２．０ｍｍ）の両方のダイを使用したこれらの小規模な圧縮試験では、ＫＯＲＳＨ ＰＨ１００ロータリー錠剤プレスでより大きなバッチサイズに進む前に、錠剤の重要な品質属性を特定した。
【表7】
【0123】
実施例５
乾燥形式の細胞培養培地フィードのスケールアップ錠剤圧縮
乾燥形式の細胞培養培地フィードのスケールアップ錠剤圧縮
【0124】
表８は、高速ＫＯＲＳＨ ＰＨ１００ロータリー錠剤プレスを使用して製造された１６．０ｍｍおよび２２．０ｍｍ錠剤の大規模バッチの組成をまとめたものである。
【表8】
【0125】
２つの異なるバッチサイズ１８．０ｋｇと３５．９５ｋｇが、それぞれ２．４ｇおよび３．７ｇの錠剤のブレンドおよび圧縮のために選択された。スケールアップの一環として、以下のバッチが完了した。すべてのバッチは、ＣＨＯ ＣＤ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴでの小規模なラボトライアル中に確立された所定の仕様に基づいて製造された。１６．０ｍｍ（２．４ｇ）および２２．０ｍｍ（３．７ｇ）。一般的なプロセスの説明を図４に示し、以下に説明する。
【0126】
スクリーニング
崩壊剤であるクロスカルメロースナトリウム（ＡＣ－ＤＩ－ＳＯＬ）を、＃３０メッシュのステンレス鋼スクリーンを使用してふるいをかけた。次に、滑沢剤であるステアリン酸マグネシウムを、＃３０メッシュのステンレス鋼スクリーンを使用してふるいをかけた。
崩壊剤であるクロスカルメロースナトリウム（ＡＣ－ＤＩ－ＳＯＬ）を、＃３０メッシュのステンレス鋼スクリーンを使用してふるいをかけた。次に、滑沢剤であるステアリン酸マグネシウムを、＃３０メッシュのステンレス鋼スクリーンを使用してふるいをかけた。
【0127】
ブレンド
ＣＤ ＣＨＯ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ原材料の約半分を、固定速度ＰＫ ５ｆｔ３ Ｖブレンダー（２４ｒｐｍ）に入れ、続いてふるいにかけたクロスカルメロースナトリウム（ＡＣ－ＤＩ－ＳＯＬ）に入れた。残りの量のＣＨＯＣＤＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ原材料をブレンダーに追加し、１０分間ブレンドした。次いで、ふるいにかけたステアリン酸マグネシウムをブレンダーに加え、３分間混合して最終的なブレンドを得た。
ＣＤ ＣＨＯ ＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ原材料の約半分を、固定速度ＰＫ ５ｆｔ３ Ｖブレンダー（２４ｒｐｍ）に入れ、続いてふるいにかけたクロスカルメロースナトリウム（ＡＣ－ＤＩ－ＳＯＬ）に入れた。残りの量のＣＨＯＣＤＥＦＦＩＣＩＥＮＴＦＥＥＤ Ｂ ＡＧＴ原材料をブレンダーに追加し、１０分間ブレンドした。次いで、ふるいにかけたステアリン酸マグネシウムをブレンダーに加え、３分間混合して最終的なブレンドを得た。
【0128】
圧縮
次いで、最終ブレンドを６ステーションのＫｏｒｓｈ ＰＨ１００ロータリー錠剤プレスで圧縮した。
次いで、最終ブレンドを６ステーションのＫｏｒｓｈ ＰＨ１００ロータリー錠剤プレスで圧縮した。
【0129】
表９は、高速ＫＯＲＳＨ ＰＨ１００ロータリー錠剤プレスを使用して製造された１６．０ｍｍおよび２２．０ｍｍの錠剤の大規模バッチ製造中に製造された出発粉末および錠剤の量をまとめたものである。
【表9】
【0130】
表１０は、１６ｍｍ（２．４ｇ）錠剤および２２．０ｍｍ（３．７ｇ）錠剤の物理的パラメーターをまとめたものである。
【表10】
【0131】
図５Ａ、５Ｂ、および５Ｃは、表９、バッチ２２に示される１６．０ｍｍ（２．４ｇ）錠剤について、それぞれ、錠剤の重量、厚さ、および硬度を示す。
【0132】
図６Ａ、６Ｂ、および６Ｃは、表９、バッチ２１に示される２２．０ｍｍ（３．７ｇ）錠剤について、それぞれ、錠剤の重量、厚さ、および硬度を示す。
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【国際調査報告】