特表 2022-549901 ＧＬＰ－１化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-11-29

(54)【発明の名称】ＧＬＰ－１化合物

(51)【国際特許分類】

   C07K 14/605 20060101AFI20221121BHJP

   A61K 38/22 20060101ALI20221121BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20221121BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20221121BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20221121BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20221121BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20221121BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20221121BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20221121BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20221121BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20221121BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20221121BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221121BHJP

【ＦＩ】

C07K14/605 ZNA

A61K38/22

A61P3/10

A61P3/04

A61P3/06

A61P25/28

A61P9/10 101

A61P9/10

A61P9/00

A61P1/04

A61P1/00

A61P1/16

A61P11/00

A61P43/00 107

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022519351

(86)(22)【出願日】2020-09-15

(85)【翻訳文提出日】2022-03-30

(86)【国際出願番号】 CN2020115221

(87)【国際公開番号】W WO2021057540

(87)【国際公開日】2021-04-01

(31)【優先権主張番号】201910908304.0

(32)【優先日】2019-09-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522118274

【氏名又は名称】ベイジン・レプ・ファーマシューティカル・テクノロジー・カンパニー・リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＢＥＩＪＩＮＧ ＬＥＰＵ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯ．， ＬＴＤ

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100150500

【弁理士】

【氏名又は名称】森本 靖

(74)【代理人】

【識別番号】100176474

【弁理士】

【氏名又は名称】秋山 信彦

(74)【代理人】

【識別番号】100136696

【弁理士】

【氏名又は名称】時岡 恭平

(72)【発明者】

【氏名】ジョウ，シュリアン

(72)【発明者】

【氏名】ワン，ポン

(72)【発明者】

【氏名】デン，ラン

【テーマコード（参考）】

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084BA09

4C084BA19

4C084BA23

4C084DB37

4C084NA14

4C084ZA151

4C084ZA361

4C084ZA401

4C084ZA421

4C084ZA451

4C084ZA591

4C084ZA661

4C084ZA681

4C084ZA701

4C084ZA751

4C084ZB221

4C084ZC331

4C084ZC351

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA18

4H045BA50

4H045CA40

4H045DA30

4H045EA20

4H045FA33

4H045GA21

(57)【要約】

本発明は、医薬合成分野に関し、ＧＬＰ－１化合物を開示した。上記のＧＬＰ－１化合物は、疾患を治療するための医薬組成物を調製するために使用される。前記医薬組成物は、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥胖、高血圧、メタボリックシンドローム、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心疾患、心血管疾患、脳卒中、炎症性腸症候群及び／又は消化不良又は胃潰瘍、肝線維症及び肺線維症を含む疾患の少なくとも１つを治療するための医薬品を調製するために使用される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記の構造式Ｉを有するＧＬＰ－１化合物。
［構造Ｉ］
ＡＡ１－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（Ｒ）－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－ＡＡ２
［構造Ｉ中、
ＡＡ１は、

【化1】

であり、
式中、Ｘ_１及びＸ_２は、Ｈであり、
又はＣＨ_３、ＣＨ（ＣＨ_３）_２、Ｃ（ＣＨ_３）_３、ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、Ｃ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_３、ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、Ｃ（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）_３、ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ_３））_２、Ｃ（ＣＨ（ＣＨ_３））_３であり、
又はＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_３、ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）_３、ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ_３））_２、ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ（ＣＨ_３））_３であり、
ＡＡ２は、ＮＨ_２またはＯＨであり、
Ｒは、ＨＯ_２Ｃ（ＣＨ_２）_ｎ１ＣＯ－（γＧｌｕ）_ｎ２－（ＰＥＧ_ｎ３（ＣＨ２）_ｎ４ＣＯ）_ｎ５－であり、
ここで、ｎ１は、１０から２０の整数であり、
ｎ２は、１から５の整数であり、
ｎ３は、１から３０の整数であり、
ｎ４は、１から５の整数であり、
ｎ５は、１から５の整数である。］

【請求項2】

前記化合物を含んでなる薬学的に許容される塩、溶媒和物、キレート又は非共有複合体、該化合物に基づくプロドラッグ、または上記の形態の任意の混合物である、請求項１に記載のＧＬＰ－１化合物。

【請求項3】

請求項１または請求項２に記載のＧＬＰ－１化合物から調製された疾患を治療するための医薬組成物。

【請求項4】

２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、メタボリックシンドローム、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心疾患、心血管疾患、脳卒中、炎症性腸症候群及び／又は消化不良又は胃潰瘍、肝線維症及び肺線維症を含む疾患の少なくとも１つを治療するための医薬品を調製するために使用される、請求項３に記載の医薬組成物。

【請求項5】

２型糖尿病の薬効遅延を治療する及び／又は２型糖尿病の悪化を予防するための医薬品を調製するために使用される、請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項6】

食物摂取量を減らし、βアポトーシスを減らし、膵島β細胞機能を高め、β－細胞塊を増やし、及び／又はグルコースに対するβ－細胞の感受性を回復させる医薬品を調製するために使用される、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項7】

請求項１に記載のＧＬＰ－１化合物を使用して体内の血糖を調節するための方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本願は、発明の名称が「セマグルチド類似体」である、２０１９年９月２５日に中国特許庁へ提出された中国特許出願２０１９１０９０８３０４．０に基づく優先権を主張し、その全内容は、全体として援用により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）誘導体であるＧＬＰ－１化合物及びその用途に関する。

【背景技術】

【0003】

糖尿病は、心臓・脳血管疾患及び腫瘍に続く３番目の非感染性疾患となっており、世界保健機関（ＷＨＯ）により、２０３０年に世界中で糖尿病患者が３億６０００万人以上も超え、そのうちの９０％以上は２型糖尿病であると予測する。ＧＬＰ－１は、腸のＬ細胞から分泌されるセクレチンであり、インスリン分泌の促進、グルカゴン放出の抑制、膵島Ｂ細胞増殖の刺激、膵島Ｂ細胞再生の誘導、膵島Ｂアポトーシスの阻害、インスリン感受性の改善、及びグルコース利用の向上などの作用として働いており、２型糖尿病の発生と発症における重要な役割を果たしている。２型糖尿病患者は、「インクレチン効果」が損なわれ、主に食後のＧＬＰ－１濃度の上昇が健常者より低いことで表され、インスリン分泌の促進及び血糖降下の作用はそれほど損なわれていないため、ＧＬＰ－１は、２型糖尿病治療の重要な標的として使用することができる。また、ＧＬＰ－１は、グルコース濃度依存性を有し、その血糖降下特性がその臨床応用の安全性の基と保証になっており、従って、既存の糖尿病治療薬及び治療案が患者に重度の低血糖を引き起こす心配を和らげ、糖尿病治療の領域においては幅広い応用の見通しがある。

【0004】

しかしながら、ＧＬＰ－１の臨床応用にも大きな問題があり、人体が産生するＧＬＰ－１が非常に不安定であり、体内のジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－ＩＶ）により分解されやすく、その血漿半減期はわずか１～２ｍｉｎであり、つまり、効果を生み出すには、継続的な静脈内注入または継続的な皮下注射が必要であり、ＧＬＰ－１の臨床応用を大きく制限する。
多くの２型糖尿病患者が毎日の注射投薬に消極的であるため、週に１回投与できる安全で効果的なＧＬＰ－１化合物の開発にはより大きな展望がある。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明は、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）誘導体であるＧＬＰ－１化合物及びその用途を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0006】

上記の目的を達成するために、まず、本発明は、構造Ｉで示される化合物、この化合物により形成される薬学的に許容される塩、溶媒和物、キレート、又は非共有複合体、この化合物に基づくプロドラッグ、又はそれらの形態の任意的な混合物を提供する。

【0007】

［構造Ｉ］
ＡＡ１－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（Ｒ）－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－ＡＡ２

【0008】

［構造Ｉ中、
ＡＡ１は、

【化1】

式中、Ｘ_１及びＸ_２は、Ｈであり、
又はＣＨ_３、ＣＨ（ＣＨ_３）_２、Ｃ（ＣＨ_３）_３、ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、Ｃ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_３、ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、Ｃ（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）_３、ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ_３））_２、Ｃ（ＣＨ（ＣＨ_３））_３であり、
又はＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_３、ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）_３、ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ_３））_２、ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ（ＣＨ_３））_３であり、
ＡＡ２は、ＮＨ_２又はＯＨであり、
Ｒは、ＨＯ_２Ｃ（ＣＨ_２）_ｎ１ＣＯ－（γＧｌｕ）_ｎ２－（ＰＥＧ_ｎ３（ＣＨ２）_ｎ４ＣＯ）_ｎ５－であり、
ここで、ｎ１は、１０から２０の整数であり、
ｎ２は、１から５の整数であり、
ｎ３は、１から３０の整数であり、
ｎ４は、１から５の整数であり、
ｎ５は、１から５の整数である。］

【0009】

さらに、本発明は、本発明に係る化合物による医薬組成物、及び疾患を治療するための医薬品の調製における本発明に係る化合物の医薬組成物の使用を提供する。

【0010】

好ましくは、前記医薬組成物は、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、メタボリックシンドローム、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心疾患、心血管疾患、脳卒中、炎症性腸症候群及び／又は消化不良或胃潰瘍、肝線維症及び肺線維症を含む疾患の少なくとも１つを治療するための医薬品を調製するために使用される。

【0011】

好ましくは、前記医薬組成物は、２型糖尿病の薬効遅延を治療する、及び／又は２型糖尿病の悪化を予防するための医薬品を調製するために使用される。

【0012】

好ましくは、前記医薬組成物は、食物摂取量を減らし、βアポトーシスを減らし、膵島β細胞機能を高め、β－細胞塊を増やし、及び／又はグルコースに対するβ－細胞の感受性を回復させる医薬品を調製するために使用される。

【0013】

好ましくは、前記化合物は、２型糖尿病の薬効遅延を治療する、及び／又は２型糖尿病の悪化を予防するための医薬品を調製するために使用される。

【0014】

さらに、本発明は、インビボで血糖を調節するために治療対象に前記化合物を投与する方法を提供する。

【0015】

本発明係るより多くの内容は、以下に詳細に説明するか、又はそれらのいくつかを本発明の実施例で実現することもできる。

【0016】

特に断りのない限り、本明細書に用いられる様々な成分の量および反応条件は、いずれの場合も「略」または「おおよそ」の意味と解釈することができる。同様に、特に明記しない限り、以下及び特許請求の範囲に引用される数値パラメータは、いずれも近似パラメータであり、それぞれの実験条件下での標準誤差の違いにより、異なる数値のパラメータが得られる可能性がある。

【0017】

本明細書では、化合物の化学構造式と化学名称の間に不一致や疑いがある場合、化学構造式によって該化合物が正確に定義される。本明細書に記載されている化合物は、１つ又は複数のキラル中心、及び／又は二重結合、並びにその類似構造を含み得、二重結合異性体（例えば、幾何異性体）、光学エナンチオ異性体又はジアステレオ異性体を包含する立体異性体としても存在し得る。したがって、本明細書の範囲内の任意の化学構造は、その一部または全体に上記の類似構造を含むかどうかに関わらず、この化合物の全ての可能なエナンチオ異性体とジアステレオ異性体を含み、純粋な任意の立体異性体（例えば、純粋な幾何異性体、純粋なエナンチオ異性体、又は純粋なジアステレオ異性体）、及びそれらの異性体の任意の混合物も含む。これらのラセミ体及び立体異性体の混合物は、さらに当業者がよく用いられている分離手段またはキラル分子の合成手段によりそれらの構成成分であるエナンチオ異性体または立体異性体に分割することができる。

【0018】

構造式Ｉの化合物には、これらの化合物の光学異性体、ラセミ体及び／又は他の混合物が含まれるが、これらに限られない。上記の場合、例えば光学活性異性体などの単純のエナンチオ異性体又はジアステレオ異性体は、不斉合成法又はラセミ体分離法によって得ることができる。ラセミ体の分割は、例えば、分離促進剤を用いた従来の再結晶やクロマトグラフィーなどの様々な方法により実現される。また、構造式Ｉの化合物には、二重結合を持つシス及び／又はトランス異性体も含まれる。

【0019】

本発明に係る化合物には、構造式Ｉで示される化合物及びそれらの薬学的に使用可能な全ての形態が含まれるが、これらに限られない。これらの化合物の薬学的に使用可能な様々形態には、様々な薬学的に許容される塩、溶媒和物、錯体、キレート、非共有結合複合体、上記の物質に基づくプロドラッグ、及びこれらの形態の任意の混合物が含まれる。

【発明の効果】

【0020】

本発明で提供される構造Ｉで示される化合物は、性質が安定であり、インビボでジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－ＩＶ）に分解されにくく、長時間作用型ＧＬＰ－１化合物であり、有意な血糖降下作用を有する。

【発明を実施するための形態】

【0021】

本発明は、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）誘導体及びその使用を開示したが、当業者が本明細書の内容を参照し、関連するパラメータを適切に調整すれば達成することができる。なお、全ての類似の置換および改変が当業者にとって自明なもので、本発明に含まれるとみなされることを特に指摘すべきである。本発明に係る方法を好ましい実施例を通じて説明したが、関係者は、本発明の内容、精神および範囲から逸脱することなく、本明細書に記載された化合物及び調製方法を修正または適切な変更および組み合わせを行うことで、本発明の技術を実施および適用できることが明らかである。

【0022】

本発明に言及される英語の略語に対応する日本語の名称は、下表に示す。

【表1】

実施例１ 化合物１の調製

【0023】

【化2】

【0024】

調製方法：ポリペプチド固相合成法によりペプチド樹脂を調製し、ペプチド樹脂を酸分解して粗生成物を得、最後に粗生成物を精製して純粋な生成物を得た。ここで、ポリペプチド固相合成法によりペプチド樹脂を調製するステップは、カップリング固相合成法によって担体樹脂上に下記の配列における対応保護アミノ酸又は断片を順に連結し、ペプチド樹脂を調製する。

【0025】

上記の調製方法では、前記Ｆｍｏｃ－保護アミノ酸又は保護アミノ酸断片の使用量が使用された樹脂の総モル数の１．２～６倍であり、好ましくは２．５～３．５倍である。

【0026】

上記の調製方法では、前記担体樹脂の置換値は、０．２～１．０ｍｍｏｌ／ｇの樹脂であり、好ましくは０．３～０．５ｍｍｏｌ／ｇの樹脂である。

【0027】

本発明の好適な実施形態としては、前記カップリング固相合成法は、前のステップで得られた保護アミノ酸－樹脂がＦｍｏｃ保護基を除去した後、次の保護アミノ酸とカップリング反応させる。前記のＦｍｏｃ保護を除去する脱保護時間は、１０～６０分であり、好ましくは１５～２５分である。前記のカップリング反応時間は、６０～３００分であり、好ましくは１００～１４０分である。

【0028】

前記のカップリング反応は縮合試薬を添加する必要がある。縮合試薬は、ＤＩＣ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド）、Ｎ，Ｎ－ジシクロヘキシルカルボジイミド、ヘキサフルオロリン酸（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウム、２－（７－アザ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、又はＯ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラートから選ばれた１つであり、好ましくは、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミドである。前記縮合試薬のモル使用量は、アミノ樹脂中のアミノ基の総モル数の１．２～６倍であり、好ましくは、２．５～３．５倍である。

【0029】

前記のカップリング反応は、活性化試薬を添加する必要がある。活性化試薬は、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール又はＮ－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾールから選ばれ、好ましくは１－ヒドロキシベンゾトリアゾールである。活性化試薬の使用量は、アミノ樹脂のアミノ基総モル数に対する１．２～６倍であり、好ましくは２．５～３．５倍である。

【0030】

本発明の好適な実施形態としては、前記のＦｍｏｃ保護を除去する試薬は、ＰＩＰ／ＤＭＦ（ピペリジン／Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド）の混合溶液である。該混合溶液はピペリジンを１０～３０％（Ｖ）含む。Ｆｍｏｃ保護を除去する試薬の使用量は、アミノ樹脂１グラムあたり５～１５ｍＬであり、好ましくはアミノ樹脂１グラムあたり８～１２ｍＬである。

【0031】

好ましくは、ペプチド樹脂を酸分解することで、樹脂および側鎖の保護基を同時に除去して粗生成物を得る。

【0032】

さらに好ましくは、前記ペプチド樹脂の酸分解中に使用される酸分解剤は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と１，２－エタンジチオール（ＥＤＴ）と水の混合溶媒である。該混合溶媒の体積比は、ＴＦＡが８０～９５％、ＥＤＴが１～１０％、残部が水である。

【0033】

より好ましくは、該混合溶媒の体積比は、ＴＦＡが８９～９１％、ＥＤＴが４～６％、残部が水である。最も好ましくは、混合溶媒の体積比は、ＴＦＡが９０％、ＥＤＴが５％、残部が水である。

【0034】

前記酸分解剤の使用量は、ペプチド樹脂１グラムあたり４～１５ｍＬの酸分解剤が必要であり、好ましくは、ペプチド樹脂１グラムあたり７～１０ｍＬの酸分解剤が必要である。

【0035】

酸分解剤を用いた分解時間は、室温条件下で１～６時間であり、好ましくは３～４時間である。

【0036】

さらには、粗生成物を高速液体クロマトグラフィーで精製し、凍結乾燥して純粋な生成物を得る。具体的な方法は以下の通りである。

【0037】

粗生成物を取り、水を加えて攪拌し、ｐＨを調整して完全に溶解し、溶液を０．４５μｍの混合ミクロポーラス膜でろ過し、精製し、用意した。

【0038】

精製には、高速液体クロマトグラフィーを使用し、１０μｍの逆相Ｃ１８を精製用クロマトグラフィーパッキングとして使用し、０．１％ＴＦＡ／水溶液－０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル溶液を移動相システムとし、７７ｍｍ×２５０ｍｍのクロマトカラムの流速を９０ｍＬ／ｍｉｎとし、グラジエント溶離を使用し、サイクリックサンプルローディング法で精製を行った。粗生成物の溶液を取り、クロマトカラムに注入し、移動相溶離を開始し、メインピークを収集し、アセトニトリルを蒸発させた後、精製された中間体濃縮液を得た。

【0039】

精製された中間体濃縮液を０．４５μｍのフィルター膜でろ過して用意した。

【0040】

高速液体クロマトグラフィーにより塩交換を行い、移動相システムを１％酢酸／水溶液－アセトニトリルとし、精製用クロマトグラフィーパッキングを１０μｍの逆相Ｃ１８とし、７７ｍｍ×２５０ｍｍのクロマトカラムの流速を９０ｍＬ／ｍｉｎ（クロマトカラムの仕様に応じて流速を調整できる）とした。グラジエント溶離及びサイクリックサンプルローディング法でクロマトカラムにロードし、移動相溶離を開始し、クロマトグラフを収集し、吸光度の変化を観察し、塩交換のメインピークを収集し、液相を分析して純度を検出し、塩交換のメインピーク溶液を合わせ、減圧下で濃縮させ、純粋な酢酸水溶液を得、凍結乾燥させ、純粋な生成物を得た。

１．ペプチド樹脂の合成

【0041】

Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＢＨＨＡ樹脂を担体樹脂として使用し、Ｆｍｏｃ脱保護とカップリング反応を通じて、下表に示される保護アミノ酸と順にカップリングさせて、ペプチド樹脂を得る。本実施例に使用された保護アミノ酸に対応する保護アミノ酸は、以下の通りである。

【表2】

（１）主鎖の第１の保護アミノ酸の連結

【0042】

第１の保護アミノ酸０．０３ｍｏｌとＨＯＢｔ０．０３ｍｏｌを取り、適量のＤＭＦで溶解し、ＤＩＣ０．０３ｍｏｌを取り、撹拌しながら保護アミノ酸のＤＭＦ溶液に撹拌しながらゆっくりと加え、室温で攪拌しながら３０分間反応させ、活性化した保護アミノ酸溶液を得て用意した。

【0043】

Ｒｉｎｋ ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂０．０１ｍｏｌ（置換値が約０．４ｍｍｏｌ／ｇ）を取り、２０％ ＰＩＰ／ＤＭＦ溶液で２５分間脱保護し、洗浄、ろ過し、Ｆｍｏｃを除去した樹脂を得た。

【0044】

活性化した第１の保護アミノ酸溶液をＦｍｏｃを除去した樹脂に加え、６０～３００分間カップリング反応させ、ろ過、洗浄し、１個の保護アミノ酸を含む樹脂を得た。
（２）主鎖の第２～３１の保護アミノ酸の連結

【0045】

上記の主鎖の第１の保護アミノ酸を連結する方法と同じ方法を使用して順に上記の対応する第２～３１の保護アミノ酸を連結し、主鎖に３１個のアミノ酸を含む樹脂を得た。
（３）側鎖の第１の保護アミノ酸の連結

【0046】

側鎖の第１の保護アミノ酸０．０３ｍｏｌとＨＯＢｔ０．０３ｍｏｌを適量のＤＭＦで溶解し、別にＤＩＣ０．０３ｍｏｌを取り、撹拌しながら保護アミノ酸ＤＭＦ溶液にゆっくりと加え、室温で攪拌しながら３０分間反応させ、活性化した保護アミノ酸溶液を得た。

【0047】

テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム２．５ｍｍｏｌとフェニルシラン２５ｍｍｏｌを適量のジクロロメタンに溶解し、４時間脱保護し、ろ過、洗浄し、Ａｌｌｏｃを除去した樹脂を得て用意した。

【0048】

活性化した側鎖の第１の保護アミノ酸溶液をＡｌｌｏｃを除去した樹脂に加え、６０～３００分間カップリング反応させ、ろ過、洗浄し、側鎖の第１の保護アミノ酸を含む樹脂を得た。
（４）側鎖の第２～４の保護アミノ酸の連結

【0049】

上記の主鎖第１の保護アミノ酸を連結する方法と同じ方法を使用し、順に側鎖に対応する第２～４の保護アミノ酸と単保護脂肪酸を連結し、ペプチド樹脂を得た。

２．粗生成物の調製

【0050】

上記のペプチド樹脂を取り、体積比がＴＦＡ：水：ＥＤＴ＝９５：５：５の切断試薬（切断試薬１０ｍＬ／ｇの樹脂）に加え、よく攪拌し、室温で攪拌しながら３時間反応させ、反応混合物をサンドコアファンネルでろ過し、ろ液を収集し、樹脂を少量のＴＦＡで３回洗浄し、ろ液を合わせた後、減圧下で濃縮させ、ジエチルエーテル（無水）を加えて沈殿させ、沈殿物をジエチルエーテル（無水）で３回洗浄し、真空乾燥し、白ぽい粉末、即ち粗生成物を得た。

３．純粋な生成物の調製

【0051】

上記の粗生成物に水を加えて攪拌し、アンモニア水でｐＨ８．０に調整して完全に溶解し、溶液を０．４５μｍの混合ミクロポーラス膜でろ過し、精製し、用意した。

【0052】

精製には、高速液体クロマトグラフィーを使用し、１０μｍの逆相Ｃ１８を精製用クロマトグラフィーパッキングとして使用し、０．１％ＴＦＡ／水溶液－０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル溶液を移動相システムとし、３０ｍｍ×２５０ｍｍのクロマトカラムの流速を２０ｍＬ／ｍｉｎとし、グラジエント溶離を使用し、サイクリックサンプルローディング法で精製した。粗生成物の溶液を取り、クロマトカラムに注入し、移動相溶離を開始し、メインピークを収集し、アセトニトリルを蒸発させた後、精製された中間体濃縮液を得た。

【0053】

精製中間体濃縮液を０．４５μｍのフィルター膜でろ過し用意した。高速液体クロマトグラフィーにより塩交換を行い、移動相システムを１％酢酸／水溶液－アセトニトリルとし、精製用クロマトグラフィーパッキングを１０μｍの逆相Ｃ１８とし、３０ｍｍ×２５０ｍｍのクロマトカラムの流速を２０ｍＬ／ｍｉｎ（クロマトカラムの仕様によって流速を相応的に調整できる）とした。グラジエント溶離及びサイクリックサンプルローディング法でクロマトカラムに注入し、移動相溶離を開始し、クロマトグラフを収集し、吸光度の変化を観察し、塩交換のメインピークを収集し、液相の純度を検出し、塩交換のメインピーク溶液を合わせ、減圧下で濃縮させ、純粋な酢酸水溶液を得、凍結乾燥させ、純粋な生成物５．６ｇを得た。純度は９８．４％、総収率は１３．６％、分子量は４１１０．８（１００％Ｍ＋Ｈ）であった。

実施例２ 化合物２の調製

【0054】

【化3】

【0055】

調製方法を実施例１と同様にし、下表に示す保護アミノ酸を使用した。

【表3】

【0056】

純粋な生成物８．５ｇを得た。純度は９７．５％、総収率は２０．７％、分子量は４１２４．２（１００％Ｍ＋Ｈ）であった。

実施例３ 化合物３の調製

【0057】

【化4】

【0058】

調製方法を実施例１と同様にし、下表に示す保護アミノ酸を使用した。

【表4】

【0059】

純粋な生成物５．１ｇを得た。純度は９７．０％、総収率は１２．４％、分子量は４０９７．６（１００％ Ｍ＋Ｈ）であった。

実施例４ 化合物４の調製

【0060】

【化5】

【0061】

調製方法を実施例１と同様にし、下表に示す保護アミノ酸を使用した。

【表5】

【0062】

純粋な生成物６．５ｇを得た。純度は９６．２％、総収率は１５．６％、分子量は４１１１．４（１００％Ｍ＋Ｈ）であった。

実施例５ 化合物５の調製

【0063】

【化6】

【0064】

調製方法を実施例１と同様にし、下表に示す保護アミノ酸を使用した。

【表6】

【0065】

純粋な生成物４．５ｇを得た。純度は９６．６％、総収率は１０．４％、分子量は４３１７．２（１００％ Ｍ＋Ｈ）であった。

実施例６ 化合物６の調製

【0066】

【化7】

【0067】

調製方法を実施例１と同様にし、下表に示す保護アミノ酸を使用した。

【表7】

【0068】

純粋な生成物６．１ｇを得た。純度は９６．７％、総収率は１４．１％、分子量は４３３１．６（１００％Ｍ＋Ｈ）であった。

実施例７ 活性測定
１．測定方法

【0069】

ＧＬＰ－１Ｒは、主に膵島β細胞の表面に存在し、Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲｓ）である。ＧＬＰ－１Ｒは、特異的なアゴニストの刺激下で細胞内のアデニル酸シクラーゼ経路を活性化し、ｃＡＭＰのレベルを増加させ、最終的にインスリンの産生と放出をもたらすことができる。ＧＬＰ－１Ｒを安定的にトランスフェクトされた細胞株を被検物で刺激することで、細胞内のｃＡＭＰレベルを急速に上昇させ、化学発光法により各投与量で細胞を刺激した後の相対発光単位（ＲＬＵ）を測定し、アゴニストのＥＣ５０を算出した。この活性測定方法は、現在、国内外で一般的に使用されているＧＬＰ－１受容体アゴニストの活性アッセイ法である。

【0070】

ＧＬＰ－１Ｒを安定して発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株を使用し、安定的にトランスフェクションされた細胞を異なる濃度のアゴニストで刺激した。各投与量で刺激した後の細胞の相対発光単位を測定することにより、アゴニストの生物活性を得た。

２．測定結果

【0071】

測定結果を下表に示す。

【表8】

実施例８ 初歩の薬物動態特性の測定

【0072】

各化合物を２つの投与群に分け、ＳＤラットであり、各群に４匹の雄ラット、合計８匹であった。

【0073】

尾静脈静注群：投与量は１ｍｇ／ｋｇであり、それぞれ投与前（０ｈ）、及び投与後の３０ｍｉｎ、１ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、２４ｈ、４８ｈ、９６ｈ、１４４ｈの時点でラットの眼窩静脈から採血した。血漿サンプルを遠心分離した。

【0074】

皮下投与群：投与量は１ｍｇ／ｋｇであり、それぞれ投与前（０ｈ）、及び投与後の１ｈ、２ｈ、３ｈ、４ｈ、８ｈ、２４ｈ、４８ｈ、９６ｈ、１４４ｈの時点でラットの眼窩静脈から採血した。血漿サンプルを遠心分離した。

【0075】

液体クロマトグラフィー－質量分析法でそれぞれＳＤラットの血漿サンプル中に対応する化合物の血中薬物濃度を測定した。静脈及び皮下投与後の、ＳＤラット皮下（ＳＣ）投与場合の化合物の半減期を下表に示す。

【表9】

【手続補正書】

【提出日】2022-03-30

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記の構造式Ｉを有するＧＬＰ－１化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、幾何異性体、またはそれらのいずれかの混合物。
［構造Ｉ］
ＡＡ１－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（Ｒ）－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－ＡＡ２
［構造Ｉ中、
ＡＡ１は、

【化1】

であり、
式中、Ｘ_１及びＸ_２は、それぞれ独立して、Ｈ、ＣＨ_３、ＣＨ（ＣＨ_３）_２、Ｃ（ＣＨ_３）_３、ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、Ｃ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_３、ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、Ｃ（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）_３、ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ_３））_２、Ｃ（ＣＨ（ＣＨ_３））_３、ＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_３、ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）_３、ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ_３））_２、及びＣＨ_２Ｃ（ＣＨ（ＣＨ_３））_３からなる群から選択され、
ＡＡ２は、ＮＨ_２またはＯＨであり、そして
Ｒは、ＨＯ_２Ｃ（ＣＨ_２）_ｎ１ＣＯ－（γＧｌｕ）_ｎ２－（ＰＥＧ_ｎ３（ＣＨ２）_ｎ４ＣＯ）_ｎ５－であり、
ここで、ｎ１は、１０から２０の整数であり、
ｎ２は、１から５の整数であり、
ｎ３は、１から３０の整数であり、
ｎ４は、１から５の整数であり、そして
ｎ５は、１から５の整数である。］

【請求項2】

請求項１に記載のＧＬＰ－１化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、幾何異性体、またはそれらのいずれかの混合物、を含む、疾患を予防または治療するための医薬組成物であって、疾患が、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、メタボリックシンドローム、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心疾患、心血管疾患、脳卒中、炎症性腸症候群及び／又は消化不良又は胃潰瘍、肝線維症及び肺線維症からなる群から選択される疾患である、医薬組成物。

【請求項3】

２型糖尿病の薬効遅延を治療する、及び／又は２型糖尿病の悪化を予防する、ための、請求項２に記載の医薬組成物。

【請求項4】

請求項１に記載のＧＬＰ－１化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、幾何異性体、またはそれらのいずれかの混合物、を含む、食物摂取量を減らし、βアポトーシスを減らし、膵島β細胞機能を高め、β－細胞塊を増やし、及び／又はグルコースに対するβ－細胞の感受性を回復させるための、医薬組成物。

【請求項5】

請求項１に記載のＧＬＰ－１化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、幾何異性体、またはそれらのいずれかの混合物、を含む、体内の血糖を調節するための医薬組成物。

【国際調査報告】