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特表2022-550111グルコン酸亜鉛およびヒアルロン酸エステルをベースとするヒドロゲル
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-11-30
(54)【発明の名称】グルコン酸亜鉛およびヒアルロン酸エステルをベースとするヒドロゲル
(51)【国際特許分類】
A61K 33/30 20060101AFI20221122BHJP
A61K 31/728 20060101ALI20221122BHJP
A61K 9/06 20060101ALI20221122BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20221122BHJP
A61K 47/36 20060101ALI20221122BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20221122BHJP
A61P 17/10 20060101ALI20221122BHJP
A61P 17/16 20060101ALI20221122BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20221122BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20221122BHJP
A61K 8/04 20060101ALI20221122BHJP
A61K 8/27 20060101ALI20221122BHJP
A61K 8/365 20060101ALI20221122BHJP
A61K 8/73 20060101ALI20221122BHJP
A61Q 17/00 20060101ALI20221122BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20221122BHJP
A61Q 19/08 20060101ALI20221122BHJP
【ＦＩ】
A61K33/30
A61K31/728
A61K9/06
A61K47/12
A61K47/36
A61P17/02
A61P17/10
A61P17/16
A61P19/02
A61P27/02
A61K8/04
A61K8/27
A61K8/365
A61K8/73
A61Q17/00
A61Q19/00
A61Q19/08
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022519349
(86)(22)【出願日】2020-09-25
(85)【翻訳文提出日】2022-05-09
(86)【国際出願番号】 EP2020076840
(87)【国際公開番号】W WO2021058715
(87)【国際公開日】2021-04-01
(31)【優先権主張番号】102019000017387
(32)【優先日】2019-09-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】IT
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522118252
【氏名又は名称】ビーエムジー ファーマ ソシエタ ペル アチオニ
【氏名又は名称原語表記】ＢＭＧ ＰＨＡＲＭＡ Ｓ．Ｐ．Ａ．
(74)【代理人】
【識別番号】100123788
【弁理士】
【氏名又は名称】宮崎 昭夫
(74)【代理人】
【識別番号】100127454
【弁理士】
【氏名又は名称】緒方 雅昭
(72)【発明者】
【氏名】マストロドナト、 マルコ
(72)【発明者】
【氏名】ストゥッチ、 ルカ
(72)【発明者】
【氏名】セチ、 アレッサンドラ
(72)【発明者】
【氏名】ピコッティ、 フェブリジオ
(72)【発明者】
【氏名】ジアンニ、 リタ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C083
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C076AA09
4C076BB11
4C076BB24
4C076BB31
4C076BB32
4C076CC09
4C076CC10
4C076CC18
4C076CC19
4C076DD23Z
4C076DD43
4C076EE37G
4C076EE37P
4C076FF17
4C076FF32
4C076FF35
4C076GG41
4C083AB211
4C083AB212
4C083AC301
4C083AC302
4C083AD331
4C083AD332
4C083CC02
4C083DD27
4C083DD41
4C083EE13
4C083EE14
4C083FF01
4C083FF05
4C086AA01
4C086AA10
4C086EA25
4C086GA13
4C086HA03
4C086HA20
4C086HA28
4C086MA02
4C086MA03
4C086MA05
4C086MA09
4C086MA28
4C086MA58
4C086MA63
4C086MA66
4C086NA12
4C086ZA33
4C086ZA89
4C086ZA96
4C086ZB35
4C086ZC37
(57)【要約】
グルコン酸亜鉛およびヒアルロン酸エステルを含有するヒドロゲル、その調製方法、それを含有する組成物、ならびに医薬および化粧品分野における、または局所または注射可能な医療デバイスとしてのヒドロゲルおよびその組成物の使用が開示される。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
－ リポ酸により、またはリポ酸およびギ酸によりその遊離ヒドロキシル上でエステル化されているヒアルロン酸、またはその薬学的に許容される塩、および－ グルコン酸亜鉛、
を含有するヒドロゲル。
【請求項2】
前記ヒアルロン酸が、１ｋＤａ～４×１０３ｋＤａの範囲の分子量を有する、請求項１に記載のヒドロゲル。
【請求項3】
ヒアルロン酸のＧｌｃＮＡｃ－ＧｌｃＵＡ二糖単位当たりのリポ酸残基の数が０．０１～０．５の範囲である請求項１～２のいずれかに記載のヒドロゲル。
【請求項4】
ヒアルロン酸のＧｌｃＮＡｃ－ＧｌｃＵＡ二糖単位当たりのギ酸残基の数が０～０．１の範囲である請求項１～３のいずれかに記載のヒドロゲル。
【請求項5】
エステル化ヒアルロン酸塩がナトリウム塩である請求項１～４のいずれかに記載のヒドロゲル。
【請求項6】
グルコン酸亜鉛の量が、ヒアルロン酸リポ酸ナトリウム、またはヒアルロン酸リポ酸およびギ酸ナトリウムの０．１重量％～２５重量％の範囲である請求項１～５のいずれかに記載のヒドロゲル。
【請求項7】
以下の工程、(a) 粘稠な溶液が得られるまで、グルコン酸亜鉛とエステル化ヒアルロン酸またはその塩との水中で混合する工程；および
(b) (a)で得られた粘性溶液を１～４８時間放置する工程、
を含む、請求項１～６のいずれかに記載のヒドロゲルの調製方法。
【請求項8】
ヒドロゲルの滅菌をさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
前記水中での混合が、２０℃～３０℃の範囲の温度で行われる、請求項７に記載の方法。
【請求項10】
請求項７～９のいずれかに記載の方法によって得られるヒドロゲル。
【請求項11】
必要に応じて生物学的に活性な化合物と組み合わせて、請求項１～６および１０のいずれかに記載のヒドロゲルを含む、医薬若しくは化粧品組成物または医療デバイス。
【請求項12】
前記化合物が、リドカイン、ビタミンおよびアミノ酸から選択される、請求項１１に記載の組成物またはデバイス。
【請求項13】
眼への適用；注射可能な投与、特に皮内、中胚葉内、関節内または眼内注射；および眼への投与から選択される局所投与に適した形態である請求項１１～１２に記載の組成物。
【請求項14】
皮膚疾患、特にざ瘡、紅斑および熱傷の治療において、または関節炎症の治療において使用するための、請求項１～６および１０のいずれかに記載のヒドロゲルまたは請求項１１～１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項15】
皮膚の傷を治療するための、または老化防止剤もしくは汚染防止剤としての、請求項１～６および１０のいずれかに記載のヒドロゲルの使用、または請求項１１～１３のいずれかに記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、グルコン酸亜鉛およびヒアルロン酸エステルを含有するヒドロゲル、その調製方法、それを含有する組成物、ならびに医薬および化粧品分野における、または局所または注射可能な医療デバイスとしてのヒドロゲルおよびその組成物の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
亜鉛は、身体に不可欠な微量元素である。これは、炎症誘発性サイトカイン調節機構に関与し、活性酸素種（ＲＯＳ）に対してラジカルスカベンジャー活性を示す［A.S.Prasad、Frontiers in Nutrition,2014、Vol.1 pp．1－10］。フリーラジカルの大量産生を伴う変形性関節症などの疾患に重要な役割を果たしており、当該疾患に罹患している患者では亜鉛濃度の低値が認められている［A.Mierzecki.Biol Trace Elem. Res.,2011,143.pp.854-862]。グルコン酸亜鉛［WO 2016／141946］は、その抗菌特性および創傷治癒過程を促進するその効果のために使用される。亜鉛は通常、経口的に投与され、腸で吸収され、タンパク質によって血漿中に迅速に隔離され；非常に速い代謝回転を有し、体内に蓄積しない［M.Jarosz,InflaｍＭopharmacol,2017,25.pp.11－24］。
【0003】
ヒアルロン酸はグルクロン酸とＮ－アセチルグルコサミンの繰り返し単位からなるグリコサミノグリカンであり、グリコシド結合β１→４とβ１→３を介して結合している。結合組織の必須元素であり、滑液、硝子体液および臍帯にも存在する。
【0004】
WO2009／098127は、ヒアルロン酸亜鉛またはグルコン酸亜鉛などの糖亜鉛塩をマトリックス中に分散させた、亜鉛送達のための生体適合性注射用製品を開示している。この製品は、医療用デバイスにおいて、または例えばしわ、関節炎および炎症の処置のための医薬または化粧用調製物において使用され得る。
【0005】
ヒアルロン酸リポ酸エステル、またはヒアルロン酸リポ酸／ギ酸エステルは、ヒアルロン酸のヒドロキシル基が異なる置換度（ＤＳ）で、リポ酸、またはリポ酸およびギ酸の残基でエステル化されているエステル誘導体である。ＤＳは、ヒアルロン酸の繰り返し二糖ユニット当たりのリポ酸またはリポ酸／ギ酸残基とのエステル結合に関与するヒドロキシルの数を意味する。ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸エステルは、抗炎症性、抗酸化性および皮膚保護性を有することが知られており（WO2009080220）、トリコロジー分野におけるその使用も報告されている（WO2012080223）。
【0006】
リポ酸（またはチオクチン酸）は哺乳動物肝臓において単離された天然分子であり、これは、クレブスサイクルにおけるピルビン酸のアセチル－ＣoＡへの変換を含む、多くの酵素反応に必須の補因子として作用する。体内のリポ酸は、抗酸化ビタミンＣおよびＥ、ならびにグルタチオンの産生を支配する。それはまた、脂質組織においてラジカルスカベンジャー活性を示す。それは金属に対して高い親和性を有し、それと安定な水不溶性複合体を形成する［J.Fuchs、健康および疾病でのリポ酸]。遷移金属、特に亜鉛に対するリポ酸の親和性は、体内での金属の滞留時間を延長する系の調製、および抗炎症活性およびフリーラジカル吸収に関するその好ましい生物学的活性の性能を可能にする。しかしながら、この錯体の低い水溶性は、前記使用を非常に困難にする。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明の目的は亜鉛を送達するのに特に好適であり、化粧品および医薬品分野または医療装置において有用である局所および注射（中胚葉、皮下および関節内）用途に最適な粘弾性を特徴とする系を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明の目的は、以下を含むヒドロゲルである：
－ 遊離ヒドロキシル基上でリポ酸、またはリポ酸およびギ酸でエステル化されたヒアルロン酸、またはその薬学的に許容される塩；および
－ グルコン酸亜鉛。
－ 遊離ヒドロキシル基上でリポ酸、またはリポ酸およびギ酸でエステル化されたヒアルロン酸、またはその薬学的に許容される塩；および
－ グルコン酸亜鉛。
【発明を実施するための形態】
【0009】
ヒドロキシル官能基のレベルでエステル化反応を伴っての、リポ酸残基および任意選択でギ酸残基を導入することによって修飾された、ヒアルロン酸またはその塩などの強親水性担体の使用は、水性溶媒に可溶なリポ残基と亜鉛との間の複合体の形成のための理想的な系を構成する。ヒアルロン酸ヒドロキシルのレベルでのエステル化に関与するので、金属との錯体の形成に通常関与するリポ酸のカルボキシル残基の不在は、亜鉛とグルコン酸との間の塩を使用することによって回避される。ヒアルロン酸カルボキシル基は含まれないので、水溶性は変化しないままである。
【0010】
エステル化ヒアルロン酸は、好ましくは１ｋＤａ～４×１０３ｋＤａの範囲の分子量を有する。
【0011】
好ましい実施形態によれば、ヒアルロン酸のＧｌｃＮＡｃ－ＧｌｃＵＡ二糖単位当たりのリポ酸残基の数は０．０１～０．５の範囲であり、ヒアルロン酸のＧｌｃＮＡｃ－ＧｌｃＵＡ二糖単位当たりのギ酸残基の数は０～０．１の範囲である。
【0012】
さらなる好ましい実施形態によれば、グルコン酸亜鉛の量は、ヒアルロン酸リポ酸ナトリウムまたはヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムに対して０．１～２５重量倍である。
【0013】
エステル化ヒアルロン酸は、好ましくは薬理学的に許容される塩、より好ましくはナトリウム塩の形態をとる。
【0014】
ヒアルロン酸リポ酸およびギ酸エステルの特性および調製は、WO2009／080220に記載されており、これは参照のために完全に本明細書に組み込まれる。合成に関しては、WO2009/080220の５頁、２０～７行、５行および実施例１～５を特に参照されたい。
【0015】
本発明の別の態様はヒドロゲルの製造方法に関し、この方法は、エステル化ヒアルロン酸またはその塩とグルコン酸亜鉛との水中で、粘性溶液が得られ、その後、１～４８時間の範囲の時間で放置され、その間、ヒドロゲルに典型的な粘弾性溶液が形成されるまで、混合することを含む。本方法はまた、ヒドロゲル滅菌工程を含むことができる。好ましい実施形態において、生成物は、２０℃～３０℃の範囲の温度で混合される。
【0016】
本発明の別の態様は、上記の方法によって得られるヒドロゲルに関する。
【0017】
本発明のさらなる局面は本明細書中に記載されるヒドロゲルを含み、任意選択で、麻酔剤、特にリドカインなどの生物学的活性を有する化合物または物質と組み合わされた、医薬または化粧品組成物、サプリメント、または医療デバイスに関する。
【0018】
組成物またはデバイスは、ヒドロゲルの局所的、眼科的または注射可能な投与または適用、特に皮内、中胚葉または関節内投与に適した形態または構成を有する。局所適用のために、ヒドロゲルは、好ましくは水中油型（Ｏ／Ｗ）または油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルジョン、またはゲル、発泡体、もしくは未添加剤として処方される。
【0019】
ヒドロゲルの使用は、種々の生物学的活性成分の存在と相関する；ヒアルロン酸ナトリウムに典型的な修復および維持活性が（i）タンパク質、特にチオネイン（活性化内皮細胞における亜鉛の抗酸化様特性）との相互作用に関して、リポ酸の抗酸化特性およびグルコン酸亜鉛の種々の生物学的活性と組み合わされる;Hennig BおよびMcClain GJ,Journal of American College of Nutrition,18（2）:152－158.1999)、5－α－レダクターゼ（皮脂送達に対する局所エリスロマイシン－亜鉛製剤の効果、Sebutapeによる複合光度測定の-マルチ-ステップ・サンプリングによる評価、Pierard GE およびPierard-Franchimont C,Clinical and Experimental Dermatology,18(5):410－4131993);（ii）抗刺激活性および酸化ストレスの減少(活性化内皮細胞での亜鉛の酸化防止剤のような特性、Hennig B and McClain GJ、Journal of American College of Nutrition、18(2)：152－158.1999)。
【0020】
特に、局所医療デバイスとして使用可能な組成物は、５－α－レダクターゼに対するグルコン酸亜鉛の調節活性による皮脂産生を減少させることによって、座瘡のような皮膚障害；ヒアルロン酸リポ酸ナトリウムエステルおよびグルコン酸亜鉛のような抗刺激剤の組み合わせの存在による発疹および火傷を処置するために使用され得る。
【0021】
本特許が関連するヒドロゲルおよび組成物は、ヒアルロン酸の粘弾性および湿潤特性、ならびにリポ酸の抗酸化特性のために、眼科用途を有することができる。
【0022】
ヒドロゲルのレオロジー特性、特に、力を加えた後のその粘弾性構造の可逆性はその成分の抗酸化剤、潤滑剤および再生特性と組み合わされて、本発明によるヒドロゲルを、皮膚充填剤としての注射可能な医療デバイスにおいて、または関節における粘増強のために、非常に有用にする。したがって、ヒドロゲルおよび対応する組成物は有利には注射経路によって関節包または真皮に投与することができ、そこで保護作用を行う。さらに、ポリマー鎖にエステル結合を介して結合したリポエート残基を含有する多糖類の特別な分子構造は粘弾性系を作り出すグルコン酸亜鉛との前記残基の相互作用と組み合わされて、ポリマーの三次元構造を改変し、現在市販されている系に典型的な単なる共有結合相互作用からなる架橋よりも、ヒアルロニダーゼによる酵素攻撃に対してより抵抗性にする。
【0023】
さらに、ヒドロゲルおよび対応する組成物はポリマー成分の皮膚軟化剤および保湿特性、ならびに亜鉛およびリポ酸の組み合わせの鎮静および再生特性の組み合わせのために、化粧品分野で使用することができる。特に、化粧品用途は、老化（老化防止剤）または外部因子（汚染防止剤）によってストレスを受けた皮膚の治療を意図している。
【0024】
ヒドロゲルはまた、美容医学用途またはメソセラピーにおいて使用され得る。
【0025】
本明細書中に特定される適用および使用のために、ヒドロゲルは、リドカイン、ビタミンおよびアミノ酸のような物質と組み合わせて使用され得る。
【0026】
以下の実施例は、本発明をより詳細に説明する。
【実施例】
【0027】
方法
使用機器：
－置換度（ＤＳ）を測定するためのｚ勾配を有する５ｍＭ多核逆プローブを備えたVARIAN VNMR 500MHz分光計；
－平行プレート（直径２５ｍＭ、サテン仕上げ）を装備し、２５℃まで温度調整するアントンパール社のMCR 301レオメーター。
使用機器：
－置換度（ＤＳ）を測定するためのｚ勾配を有する５ｍＭ多核逆プローブを備えたVARIAN VNMR 500MHz分光計；
－平行プレート（直径２５ｍＭ、サテン仕上げ）を装備し、２５℃まで温度調整するアントンパール社のMCR 301レオメーター。
【0028】
置換度（ＤＳ）
ヒアルロン酸誘導体上のリポエステルにおける置換度をＮＭＲ分光法により定量した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ｚ勾配を有する５ｍＭ多核リバースプローブを装備したVARIAN VNMR ５００MHz分光計を用いて、Ｄ２Ｏ中で行った。試験は、測定プローブを２９８°Ｋにサーモスタットすることによって行った。
リポ酸エステル中のＤＳの定量は、ＮＭＲチューブ中でＮａＯＤを直接用いて徹底的に加水分解した後に行った。
ヒアルロン酸誘導体上のリポエステルにおける置換度をＮＭＲ分光法により定量した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ｚ勾配を有する５ｍＭ多核リバースプローブを装備したVARIAN VNMR ５００MHz分光計を用いて、Ｄ２Ｏ中で行った。試験は、測定プローブを２９８°Ｋにサーモスタットすることによって行った。
リポ酸エステル中のＤＳの定量は、ＮＭＲチューブ中でＮａＯＤを直接用いて徹底的に加水分解した後に行った。
【0029】
加水分解物の１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、リポ酸（メチレンプロトンおよびメタンプロトン）に起因するシグナルおよびヒアルロン酸（２つのアノマープロトン）に起因するシグナルの積分を可能にし、それらの比率は、置換の程度を決定する。
【0030】
レオロジー試験による弾性率および粘性率の測定
ゲルのレオロジー試験は、２５℃に温度調節された平行プレート（直径２５ｍＭ、サテン仕上げ）を備えたAnton Paar MCR 301レオメーターを用いて行った。
ゲルのレオロジー試験は、２５℃に温度調節された平行プレート（直径２５ｍＭ、サテン仕上げ）を備えたAnton Paar MCR 301レオメーターを用いて行った。
【0031】
振動モード（応力掃引）における各ゲルについて、弾性率Ｇ’および粘度率Ｇ"(測定単位Ｐａ）の決定を可能にする１Ｈｚの一定周波数で機械的スペクトルを記録した；いくつかのゲルについて、適用された力の変動に対する粘度η（測定単位Pa＊s）を測定する流動曲線も記録した。
【0032】
実施例１：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウム（ＭＷ：１５００ｋＤａ、ＤＳｌｉｐ：０．４、ＤＳｆｏｒ：０．０２）の合成
１００ｍＬのホルムアミドおよび１５００ｋＤａの分子量を有する５ｇのＨＡＮａを１リットルの反応器に導入する。混合物を９５℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
１００ｍＬのホルムアミドおよび１５００ｋＤａの分子量を有する５ｇのＨＡＮａを１リットルの反応器に導入する。混合物を９５℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
【0033】
翌日、温度を４０℃に上げ、次に炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３－２６４ｍｇ）を添加し、０．５時間後、アセトン中のリポイル－イミダゾリド（２４．０ｇ；２０％）を約１．５時間で添加する。混合物を同じ温度で０．５時間撹拌し続ける。サーモスタットのスイッチを切って、４０ｍＬの酸性水を添加することによって反応を停止させ、生成物をアセトンでの沈殿およびその後の真空濾過によって単離する。
【0034】
粗反応生成物をアセトンおよびメタノールで数回洗浄し、それぞれ真空濾過することによって精製する。沈殿物を真空下、室温で約１７時間乾燥させる。
【0035】
試料１０ｍｇを重水（Ｄ２Ｏ）０．９ｍＬに溶解し、ＮＭＲ試験管に移す。
ＮａＯＤ(重水素化水酸化ナトリウム）を添加することによるリポ酸およびギ酸エステルの加水分解後、ＮＭＲスペクトルは、リポ酸中０．４およびギ酸中０．０２のＤＳを示した。
ＮａＯＤ(重水素化水酸化ナトリウム）を添加することによるリポ酸およびギ酸エステルの加水分解後、ＮＭＲスペクトルは、リポ酸中０．４およびギ酸中０．０２のＤＳを示した。
【0036】
実施例２：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウム（ＭＷ：３００ｋＤａ、ＤＳｌｉｐ：０．５、ＤＳｆｏｒ：０．０３）の合成
１００ｍＬのホルムアミドおよび３００ｋＤａの分子量を有する１０．０５ｇのＨＡＮａを1リットルの反応器に導入する。混合物を９５℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
１００ｍＬのホルムアミドおよび３００ｋＤａの分子量を有する１０．０５ｇのＨＡＮａを1リットルの反応器に導入する。混合物を９５℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
【0037】
翌日、温度を４０℃に上げ、次に炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３－５２８ｍｇ）を添加し、０．５時間後、アセトン中のリポイル－イミダゾリド（２５．０ｇ；２０％）を約１．５時間で添加する。混合物を同じ温度で０．５時間撹拌し続ける。８０ｍＬの酸性水を添加することによって反応を停止させ、生成物をアセトンで沈殿させ、続いて真空濾過することによって単離する。
【0038】
粗反応生成物をアセトンおよびメタノールで数回洗浄し、それぞれ真空濾過することによって精製する。沈殿物を真空下、室温で約６時間乾燥させる。
【0039】
試料１０ｍｇを重水（Ｄ２Ｏ）０．９ｍＬに溶解し、ＮＭＲ試験管に移す。
ＮａＯＤ(重水素化水酸化ナトリウム）を添加することによるリポ酸およびギ酸エステルの加水分解後、ＮＭＲスペクトルは、リポ酸中で０．５およびギ酸中で０．０３のＤＳを示した。
ＮａＯＤ(重水素化水酸化ナトリウム）を添加することによるリポ酸およびギ酸エステルの加水分解後、ＮＭＲスペクトルは、リポ酸中で０．５およびギ酸中で０．０３のＤＳを示した。
【0040】
実施例３：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウム（ＭＷ：５０ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．５、ＤＳｆｏｒ：０．０３）の合成
１００ｍＬのホルムアミドおよび５０ｋＤａの分子量を有する１０．０ｇのＨＡＮａを1リットルの反応器に導入する。混合物を９５℃で温度調節し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
１００ｍＬのホルムアミドおよび５０ｋＤａの分子量を有する１０．０ｇのＨＡＮａを1リットルの反応器に導入する。混合物を９５℃で温度調節し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
【0041】
翌日、温度を４０℃に上げ、次に炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３－５００ｍｇ）を添加し、０．５時間後にリポイル－イミダゾリドのＤＭＳＯ溶液（２０．０ｇ；２０％）を約１．５時間で添加する。混合物を同じ温度で０．５時間撹拌し続ける。４０ｍＬの酸性水を添加することによって反応を停止させ、生成物をアセトンで沈殿させ、続いて真空濾過することによって単離する。
【0042】
粗反応生成物をアセトンおよびメタノールで数回洗浄し、それぞれ真空濾過することによって精製する。沈殿物を真空下、室温で約１８時間乾燥させる。
【0043】
試料１０ｍｇを重水（Ｄ２Ｏ）０．９ｍＬに溶解し、ＮＭＲ試験管に移す。
【0044】
ＮａＯＤ(重水素化水酸化ナトリウム）を添加することによるリポ酸およびギ酸エステルの加水分解後、ＮＭＲスペクトルは、リポ酸中で０．５およびギ酸中で０．０３のＤＳを示した。
【0045】
実施例４：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウム（ＭＷ：１５００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．３、ＤＳｆｏｒ：０．０２）の合成
２００ｍＬのホルムアミドおよび１５００ｋＤａの分子量を有する１０．０ｇのＨＡＮａを1リットルの反応器に導入する。混合物を９５℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で1時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
２００ｍＬのホルムアミドおよび１５００ｋＤａの分子量を有する１０．０ｇのＨＡＮａを1リットルの反応器に導入する。混合物を９５℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で1時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
【0046】
翌日、温度を４０℃に上げ、次に炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３－５２７ｍｇ）を添加し、０．５時間後、アセトン中のリポイル－イミダゾリド（４７．２ｇ；２０％）を約１．７５時間で添加する。混合物を同じ温度で０．５時間撹拌し続ける。８０ｍＬの酸性水を添加することによって反応を停止させ、生成物をアセトンで沈殿させ、続いて真空濾過することによって単離する。
【0047】
粗反応生成物をアセトンおよびメタノールで数回洗浄し、それぞれ真空濾過することによって精製する。
【0048】
沈殿物を真空下、室温で約１８時間乾燥させる。試料１０ｍｇを重水（Ｄ２Ｏ）０．９ｍＬに溶解し、ＮＭＲ試験管に移す。
【0049】
ＮａＯＤ(重水素化水酸化ナトリウム）を添加することによるリポ酸およびギ酸エステルの加水分解後、ＮＭＲスペクトルは、リポ酸中で０．３およびギ酸中で０．０２のＤＳを示した。
【0050】
実施例５：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウム（ＭＷ：３００ｋＤａ、ＤＳｌｉｐ：０．３、ＤＳｆｏｒ：０．０１）の合成
１６０ｍＬのホルムアミドおよび８ｇの分子量３００ｋＤａのＨＡＮａを１リットルの反応器に導入する。混合物を９５℃に温度調節し、ポリマーが完全に溶解するまで一定温度で１．５時間撹拌し続ける。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
１６０ｍＬのホルムアミドおよび８ｇの分子量３００ｋＤａのＨＡＮａを１リットルの反応器に導入する。混合物を９５℃に温度調節し、ポリマーが完全に溶解するまで一定温度で１．５時間撹拌し続ける。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
【0051】
翌日、炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３－４００ｍｇ）を添加し、０．５時間後、アセトン（１５ｇ；２０％）中のリポイル－イミダゾリドの水溶液を約１．７５時間で添加する。混合物を同じ温度で１時間撹拌し続ける。１６ｍＬの酸性水を添加することによって反応を停止させ、生成物をアセトンで沈殿させ、続いて真空濾過することによって単離する。
【0052】
粗反応生成物をアセトンおよびメタノールで数回洗浄し、それぞれ真空濾過することによって精製する。沈殿物を真空下、室温で約１８時間乾燥させる。
【0053】
試料１０ｍｇを重水（Ｄ２Ｏ）０．９ｍＬに溶解し、ＮＭＲ試験管に移す。
【0054】
ＮａＯＤ(重水素化水酸化ナトリウム）を添加することによるリポ酸およびギ酸エステルの加水分解後、ＮＭＲスペクトルは、リポ酸中で０．３およびギ酸中で０．０１のＤＳを示した。
【0055】
実施例６：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウム（ＭＷ：５０ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．３、ＤＳｆｏｒ：０．０１）の合成
３０ｍＬのホルムアミドおよび３ｇの５０ｋＤａの分子量を有するＨＡＮａを５００ｍＬの３つ口フラスコに導入する。混合物を９５℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
３０ｍＬのホルムアミドおよび３ｇの５０ｋＤａの分子量を有するＨＡＮａを５００ｍＬの３つ口フラスコに導入する。混合物を９５℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
【0056】
翌日、温度を４０℃に上げ、次に炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３－１５０ｍｇ）を添加し、０．５時間後にリポイル－イミダゾリドのＤＭＳＯ溶液（1５．０ｇ；２０％）を約１．５時間で添加する。混合物を同じ温度で０．５時間撹拌し続ける。１０ｍＬの酸性水を添加することによって反応を停止させ、生成物をアセトンで沈殿させ、続いて真空濾過することによって単離する。
【0057】
粗反応生成物をアセトンおよびメタノールで数回洗浄し、それぞれ真空濾過することによって精製する。沈殿物を真空下、室温で約１８時間乾燥させる。
【0058】
試料１０ｍｇを酸化重水素（Ｄ２Ｏ）０．９ｍＬに溶解し、ＮＭＲ試験管に移す。
【0059】
ＮａＯＤ(重水素化水酸化ナトリウム）を添加することによるリポ酸およびギ酸エステルの加水分解後、ＮＭＲスペクトルは、リポ酸中で０．３およびギ酸中で０．０１のＤＳを示した。
【0060】
実施例７：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウム（８０ＭＷ １５００ｋＤａ：２０ＭＷ３００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．３、ＤＳｆｏｒ：０．０２）の合成
１００ｍＬのホルムアミド、続いて４ｇの分子量１５００ｋＤａのＨＡＮａおよび１ｇの分子量３００ｋＤａのＨＡＮａを1リットルの反応器に導入する。混合物を９０℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
１００ｍＬのホルムアミド、続いて４ｇの分子量１５００ｋＤａのＨＡＮａおよび１ｇの分子量３００ｋＤａのＨＡＮａを1リットルの反応器に導入する。混合物を９０℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
【0061】
翌日、温度を４０℃に上げ、次に炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３－２６４ｍｇ）を添加し、０．５時間後、アセトン中のリポイル－イミダゾリド（３１．５ｇ；２０％）を約１．５時間で添加する。混合物を同じ温度で０．５時間撹拌し続ける。４０ｍＬの酸性水を添加することによって反応を停止させ、生成物をアセトンで沈殿させ、続いて真空濾過することによって単離する。
【0062】
粗反応生成物をアセトンおよびメタノールで数回洗浄し、それぞれ真空濾過することによって精製する。沈殿物を真空下、室温で約１９時間乾燥させる。
【0063】
試料１０ｍｇを重水（Ｄ２Ｏ）０．９ｍＬに溶解し、ＮＭＲ試験管に移す。
【0064】
ＮａＯＤ(重水素化水酸化ナトリウム）を添加することによるリポ酸およびギ酸エステルの加水分解後、ＮＭＲスペクトルは、リポ酸中で０．３およびギ酸中で０．０２のＤＳを示した。
【0065】
実施例８：ヒアルロン酸リポ酸ナトリウム／ギ酸ナトリウム（２０ＭＷ１５００ｋＤａ：８０ＭＷ ３００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．３、ＤＳｆｏｒ：０．０２）の合成
１００ｍＬのホルムアミド、続いて１ｇの分子量１５００ｋＤａのＨＡＮａおよび４ｇの分子量３００ｋＤａのＨＡＮａを1リットルの反応器に導入する。混合物を９５℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
１００ｍＬのホルムアミド、続いて１ｇの分子量１５００ｋＤａのＨＡＮａおよび４ｇの分子量３００ｋＤａのＨＡＮａを1リットルの反応器に導入する。混合物を９５℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
【0066】
翌日、温度を４０℃に上げ、次に炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３－２６４ｍｇ）を添加し、０．５時間後、アセトン中のリポイル－イミダゾリド（３１．５ｇ；２０％）を約２．５時間で添加する。４０ｍＬの酸性水を添加することによって反応を停止させ、生成物をアセトンで沈殿させ、続いて真空濾過することによって単離する。
【0067】
粗反応生成物をアセトンおよびメタノールで数回洗浄し、それぞれ真空濾過することによって精製する。沈殿物を真空下、室温で約１９時間乾燥させる。
【0068】
試料１０ｍｇを酸化重水素（Ｄ２Ｏ）０．９ｍＬに溶解し、ＮＭＲ試験管に移す。
【0069】
ＮａＯＤ(重水素化水酸化ナトリウム）を添加することによるリポ酸およびギ酸エステルの加水分解後、ＮＭＲスペクトルは、リポ酸中で０．３およびギ酸中で０．０２のＤＳを示した。
【0070】
実施例９：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；ＭＷ：１５００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．４、ＤＳｆｏｒ：０．０２;Ｚｎ０．１ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、４．６ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例１のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、４．６ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例１のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0071】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ＝６８０００Ｐａ＊ｓ；Ｇ':３９９．６Ｐａ;Ｇ":８８．７Ｐａ。
【0072】
いくつかのシリンジは、オートクレーブ中で滅菌サイクルを受ける（１２１℃；１５分）。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ＝４２０００Ｐａ＊ｓ；Ｇ':９８．１Ｐａ；Ｇ":２９．７Ｐａ。
【0073】
実施例１０：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；ＭＷ：３００ｋＤａ；ＤＳｌｉｐ：０．５；ＤＳｆｏｒ：０．０３；Ｚｎ０．１ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、４．５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例２のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、４．５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例２のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0074】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。以下の特性を有するゲルが得られる：Ｇ':１１７．９；Ｐａ；Ｇ”：３３．１Ｐａ。
【0075】
いくつかのシリンジは、オートクレーブ中で滅菌サイクルを受ける（１２１℃；１５分）。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ＝２０００００Ｐａ＊ｓ;Ｇ':１３４．３Ｐａ；Ｇ":７．７Ｐａ。
【0076】
実施例１１：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；ＭＷ：５０ｋＤａ； ＤＳｌｉｐ：０．５；ＤＳｆｏｒ：０．０３；Ｚｎ０．１ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、４．５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例3のサンプル2ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、４．５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例3のサンプル2ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0077】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。
【0078】
実施例１２：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；ＭＷ：１５００ｋＤａ；ＤＳｌｉｐ：０．４;ＤＳｆｏｒ：０．０２；Ｚｎ０．２ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、９．１ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例１のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、９．１ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例１のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0079】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。
【0080】
いくつかのシリンジは、オートクレーブ中で滅菌サイクルを受ける（１２１℃；１５分）。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ＝４００００Ｐａ＊ｓ；Ｇ’：４６．８Ｐａ；Ｇ":１２．６Ｐａ。
【0081】
実施例１３：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；ＭＷ： ３００ｋＤａ；ＤＳｌｉｐ：０．５；ＤＳｆｏｒ：０．０３；Ｚｎ０．２ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、９．１ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例２のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、９．１ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例２のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0082】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。
【0083】
実施例１４：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（ＭＷ：５０ｋＤａ；ＤＳｌｉｐ：０．５；ＤＳｆｏｒ：０．０３；Ｚｎ＝０．２ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例３のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例３のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0084】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。
【0085】
実施例１５：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；ＭＷ：１５００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．４;ＤＳＦＯＲ：０．０２；Ｚｎ０．１５ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、６．８ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例１のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、６．８ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例１のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0086】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。
【0087】
いくつかのシリンジは、オートクレーブ中で滅菌サイクルを受ける（１２１℃；１５分）。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ＝１６５００Ｐａ＊ｓ；Ｇ’：１７．９Ｐａ;Ｇ":６．３Ｐａ。
【0088】
実施例１６：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；５０：５０;ＭＷ：１５００ｋＤａ；ＤＳｌｉｐ：０．３；ＤＳｆｏｒ：０．０２；＋ＭＷ：３００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．５;ＤＳｆｏｒ：０．０３；Ｚｎ０．１ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、４．６ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入し、１ｇの実施例４の試料および１ｇの実施例２の試料を混合物に添加する。
１００ｍＬの注射用水、４．６ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入し、１ｇの実施例４の試料および１ｇの実施例２の試料を混合物に添加する。
【0089】
この系をUltra－turraxで混合する。
【0090】
遠心分離後、混合物を注射器に分配し、これをオートクレーブ中で滅菌サイクルにかける（１２１℃；１５分）。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ＝２４００Ｐａ＊ｓ；Ｇ':１９．６Ｐａ;Ｇ":５．５Pa。
【0091】
実施例１７：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２w／Ｖ；２０：８０;ＭＷ:１５００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．３;ＤＳｆｏｒ：０．０２;＋ＭＷ：３００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．５;ＤＳｆｏｒ：０．０３;Ｚｎ０．１ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、４．６ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例４のサンプル０．４ｇおよび実施例２のサンプル１．６ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、４．６ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例４のサンプル０．４ｇおよび実施例２のサンプル１．６ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0092】
遠心分離後、混合物を注射器に分配し、これをオートクレーブ中で滅菌サイクルにかける（１２１℃；１５分）。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ＝５７，５００Ｐａ＊ｓ;Ｇ':５３．４Pa;Ｇ":５．７Ｐａ。
【0093】
実施例１８：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；５０：５０;ＭＷ:１５００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．３;ＤＳｆｏｒ：０．０２;＋ＭＷ:３００ｋＤａ； ＤＳｌｉｐ：０．５；ＤＳｆｏｒ：０．０３;Ｚｎ０．２ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例４の試料１ｇおよび実施例２の試料１ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入し、実施例４の試料１ｇおよび実施例２の試料１ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0094】
遠心分離後、混合物を注射器に分配し、これをオートクレーブ中で滅菌サイクルにかける。
【0095】
実施例１９：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ/Ｖ;ＤＳｌｉｐ：０．３;ＤＳｆｏｒ：０．０２;Ｚｎ０．２ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、９．１ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例８のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、９．１ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例８のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0096】
遠心分離後、混合物を注射器に分配し、これをオートクレーブ中で滅菌サイクルにかける（１２１℃；１５分）。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ：１８００Ｐａ＊ｓ；Ｇ':６．０Ｐａ;Ｇ":５．２Pa。
【0097】
実施例２０：ヒアルロン酸ナトリウムリポ酸塩／ギ酸亜鉛グルコン酸塩複合体（８０：２０ＭＷ：１５００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．３;ＤＳｆｏｒ：０．０２;＋ＭＷ:３００ｋＤａ; ＤＳｌｉｐ：０．５;ＤＳｆｏｒ：０．０３;Ｚｎ０．１ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、４．５ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例４のサンプル１．６ｇおよび実施例２のサンプル０．４ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、４．５ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例４のサンプル１．６ｇおよび実施例２のサンプル０．４ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0098】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。
【0099】
実施例２１：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ/Ｖ;ＤＳｌｉｐ：０．３;ＤＳｆｏｒ：０．０２;Ｚｎ０．２ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例７のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例７のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0100】
実施例２２：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（４ｗ/Ｖ;ＤＳｌｉｐ：０．３;ＤＳｆｏｒ：０．０２;Ｚｎ０．２ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例７のサンプル４ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例７のサンプル４ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0101】
遠心分離後、混合物を注射器に分配し、これをオートクレーブ中で滅菌サイクルにかける（１２１℃；１５分）。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ＝５８８００Ｐａ＊ｓ;Ｇ':１１８．１Ｐａ;Ｇ":４０．０Ｐａ。
【0102】
実施例２３：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（６ｗ/Ｖ;ＤＳｌｉｐ：０．３;ＤＳｆｏｒ：０．０２; Ｚｎ０．２ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを200ｍＬフラスコに導入する。実施例７のサンプル６ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを200ｍＬフラスコに導入する。実施例７のサンプル６ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0103】
遠心分離後、混合物を注射器に分配し、これをオートクレーブ中で滅菌サイクルにかける（１２１℃；１５分）。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ＝６００００Ｐａ＊ｓ;Ｇ':１８４．２Ｐａ;Ｇ":８１．２Ｐａ。
【0104】
実施例２４：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（４ｗ/Ｖ;ＤＳｌｉｐ：０．３;ＤＳｆｏｒ：０．０２;Ｚｎ０．２ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例８のサンプル４ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例８のサンプル４ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0105】
遠心分離後、混合物を注射器に分配し、これをオートクレーブ中で滅菌サイクルにかける（１２１℃；１５分）。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ＝５７０００Ｐａ＊ｓ;Ｇ':１２２．９Ｐａ;Ｇ”：３５．４Ｐａ。
【0106】
実施例２５：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（６ｗ/Ｖ;ＤＳｌｉｐ：０．３；ＤＳｆｏｒ：０．０２;Ｚｎ０．２ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例８のサンプル６ｇを混合物に添加する。このシステムをUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例８のサンプル６ｇを混合物に添加する。このシステムをUltra－turraxで混合する。
【0107】
遠心分離後、混合物を注射器に分配し、これをオートクレーブ中で滅菌サイクルにかける（１２１℃；１５分）。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ＝１７００００Ｐａ＊ｓ；Ｇ’：２８３．０Ｐａ；Ｇ”：８４．３Ｐａ。
【0108】
実施例２６：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；８０：２０ＭＷ：１５００ｋＤａ；ＤＳｌｉｐ：０．３；ＤＳｆｏｒ：０．０２；＋ＭＷ:３００ｋＤａ；ＤＳｌｉｐ：０．５;ＤＳｆｏｒ：０．０３;Ｚｎ０．５ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、２２．５ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例４のサンプル１．６ｇおよび実施例２のサンプル０．４ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、２２．５ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例４のサンプル１．６ｇおよび実施例２のサンプル０．４ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0109】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。
【0110】
実施例２７：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；ＭＷ：３００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．５;ＤＳｆｏｒ：０．０３;Ｚｎ１０ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、４５５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例２のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、４５５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例２のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0111】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ:２０００００Ｐａ＊ｓ；Ｇ':３１４Ｐａ；Ｇ":２９Pa。
【0112】
いくつかのシリンジは、オートクレーブ中で滅菌サイクルを受ける（１２１℃；１５分）。以下の特性を有するゲルが得られる：ηｍａｘ＝１３００００Ｐａ＊ｓ;Ｇ':１０６．５Ｐａ;Ｇ":９．９Ｐａ。
【0113】
実施例２８：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；ＭＷ：１５００ｋＤａ；ＤＳｌｉｐ：０．３；ＤＳｆｏｒ：０．０２;Ｚｎ０．５ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、２２．５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例４のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、２２．５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例４のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0114】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。
【0115】
実施例２９：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；ＭＷ：１５００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ０.４;ＤＳｆｏｒ：０．０２；Ｚｎ０．５ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、２２．５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例１のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、２２．５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例１のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0116】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。
【0117】
実施例３０：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；ＭＷ：５０ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．３;ＤＳｆｏｒ：０．０１;Ｚｎ０．１ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、４．５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例６のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、４．５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例６のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0118】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。
【0119】
実施例３１：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ／Ｖ；ＭＷ：１５００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．３;ＤＳｆｏｒ：０．０２;Ｚｎ０．１ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、４．５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例４のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、４．５ｍｇのグルコン酸亜鉛および０．９ｇのＮａＣｌを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例４のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0120】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。
【0121】
実施例３２：ヒアルロンアルホウトソード（ＭＷ:１５００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ:０．４５;ＤＳｆｏｒ:０．０）の合成
２００ｍＬのホルムアミドおよび１５００ｋＤａの分子量を有する５ｇのＨＡＮａを１リットルの反応器に導入する。混合物を７５℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
２００ｍＬのホルムアミドおよび１５００ｋＤａの分子量を有する５ｇのＨＡＮａを１リットルの反応器に導入する。混合物を７５℃で温度調整し、ポリマーが完全に溶解するまで、一定温度で１時間撹拌下に維持する。次いで、温度を２５℃に下げ、混合物を一晩撹拌下に維持する。
【0122】
翌日、温度を４０℃に上げ、次に炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３－６６０ｍｇ）を添加し、０．５時間後、アセトン中のリポイル－イミダゾリド（４６．９ｇ;２０％）を約１．５時間で添加する。混合物を同じ温度で０．５時間撹拌し続ける。４０ｍＬの酸性水を添加することによって反応を停止させ、生成物をアセトンで沈殿させ、続いて真空濾過することによって単離する。
【0123】
粗反応生成物をアセトンおよびメタノールで数回洗浄し、それぞれ真空濾過することによって精製する。沈殿物を真空下、室温で約１９時間乾燥させる。
【0124】
試料１０ｍｇを重水（Ｄ２Ｏ）０．９ｍＬに溶解し、ＮＭＲ試験管に移す。
【0125】
ＮａＯＤ(重水素化水酸化ナトリウム）を添加することによるリポ酸およびギ酸エステルの加水分解後、ＮＭＲスペクトルは、リポ酸中で０．４５のＤＳおよびギ酸中で０．０のＤＳを示した。
【0126】
実施例３３：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ/Ｖ;ＤＳｌｉｐ：０．３;ＤＳｆｏｒ：０．０;Ｚｎ０．２ｍＭ）を含むヒドロゲルの調製
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例３２のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
１００ｍＬの注射用水、９．２ｍｇのグルコン酸亜鉛、０．９ｇのＮａＣｌおよび０．３ｇのリドカインを２００ｍＬフラスコに導入する。実施例３２のサンプル２ｇを混合物に添加する。この系をUltra－turraxで混合する。
【0127】
遠心分離後、混合物をシリンジに分配する。
【0128】
実施例３４：ヒアルロン酸リポ酸／ギ酸ナトリウムグルコン酸亜鉛複合体（２ｗ/Ｖ;ＭＷ:１５００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．４;ＤＳｆｏｒ：０．０２;Ｚｎ０．１ｍＭ）を含むヒドロゲル、およびＢＤＤＥで架橋されたヒアルロン酸ナトリウムに基づく市販のヒドロゲルの酵素分解
実施例９に示されるようにして調製されたヒドロゲル（１２１℃で１５分間の熱処理周期によって滅菌された、２ｍＬのゲル２ｗ/ｖ;ＭＷ:１５００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．４ ＤＳｆｏｒ:０．０２;Ｚｎ０．１ｍＭを含む注射器）の酵素分解に対する耐性を、経時的な弾性率（Ｇ’）の減少を測定することによって分解速度論に従って評価した。ゲル０．５ｍＬをシリンジからレオメーターの下側プレート上に直接押し出し、弾性率Ｇ’を２５℃の温度で一定周波数（１Ｈｚ）および力（１Ｐａ）で評価した。分解速度論は、３０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ５．５（活性１５００Ｕ／ｍＬ）中のウシ精巣ヒアルロニダーゼの溶液５０μlをゲル０．５ｍＬに添加することによって行った。
ポリマー鎖の切断を示す時間にわたる弾性率Ｇ’の減少を評価し、破壊速度論を、比較目的のために、市販のＢＤＤＥ(１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル）で架橋された一般的なヒドロゲルを用いて、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７）中２％の濃度の１ｍＬシリンジ中で、同じ実験条件下で行った。Ｇ’６０として示されたヒアルロニダーゼの追加後６０分の弾力性の係数を比較パラメータとして使用した。以下の表１はＧ’の測定値を示し、初期弾性率と比較した、６０分後の酵素分解および残留弾性率に対する耐性を特定する。
実施例９に示されるようにして調製されたヒドロゲル（１２１℃で１５分間の熱処理周期によって滅菌された、２ｍＬのゲル２ｗ/ｖ;ＭＷ:１５００ｋＤａ;ＤＳｌｉｐ：０．４ ＤＳｆｏｒ:０．０２;Ｚｎ０．１ｍＭを含む注射器）の酵素分解に対する耐性を、経時的な弾性率（Ｇ’）の減少を測定することによって分解速度論に従って評価した。ゲル０．５ｍＬをシリンジからレオメーターの下側プレート上に直接押し出し、弾性率Ｇ’を２５℃の温度で一定周波数（１Ｈｚ）および力（１Ｐａ）で評価した。分解速度論は、３０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ５．５（活性１５００Ｕ／ｍＬ）中のウシ精巣ヒアルロニダーゼの溶液５０μlをゲル０．５ｍＬに添加することによって行った。
ポリマー鎖の切断を示す時間にわたる弾性率Ｇ’の減少を評価し、破壊速度論を、比較目的のために、市販のＢＤＤＥ(１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル）で架橋された一般的なヒドロゲルを用いて、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７）中２％の濃度の１ｍＬシリンジ中で、同じ実験条件下で行った。Ｇ’６０として示されたヒアルロニダーゼの追加後６０分の弾力性の係数を比較パラメータとして使用した。以下の表１はＧ’の測定値を示し、初期弾性率と比較した、６０分後の酵素分解および残留弾性率に対する耐性を特定する。
【0129】
【表1】
【国際調査報告】