▶ イッサム・リサーチ・ディベロップメント・カンパニー・オブ・ザ・ヘブルー・ユニバーシティ・オブ・エルサレム・リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-12-05
(54)【発明の名称】リポソームカンナビノイドおよびその使用
(51)【国際特許分類】
A61K 31/05 20060101AFI20221128BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20221128BHJP
A61K 9/127 20060101ALI20221128BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20221128BHJP
A61K 47/10 20060101ALI20221128BHJP
A61K 47/18 20060101ALI20221128BHJP
A61K 47/42 20170101ALI20221128BHJP
A61K 47/40 20060101ALI20221128BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20221128BHJP
【ＦＩ】
A61K31/05
A61P43/00 111
A61K9/127
A61K47/26
A61K47/10
A61K47/18
A61K47/42
A61K47/40
A61K9/08
A61P43/00 171
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022520067
(86)(22)【出願日】2020-10-01
(85)【翻訳文提出日】2022-05-24
(86)【国際出願番号】 IL2020051068
(87)【国際公開番号】W WO2021064730
(87)【国際公開日】2021-04-08
(31)【優先権主張番号】62/910,097
(32)【優先日】2019-10-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】504000281
【氏名又は名称】イッサム・リサーチ・ディベロップメント・カンパニー・オブ・ザ・ヘブルー・ユニバーシティ・オブ・エルサレム・リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110000855
【氏名又は名称】弁理士法人浅村特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】バーレンホルツ、イェヘッケル
(72)【発明者】
【氏名】セルン、アフヴァ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076AA19
4C076BB11
4C076BB15
4C076BB16
4C076CC29
4C076DD08E
4C076DD37
4C076DD38
4C076DD52
4C076EE23
4C076EE23E
4C076EE39
4C076EE41
4C076FF31
4C206AA01
4C206AA02
4C206CA19
4C206KA01
4C206MA02
4C206MA05
4C206MA37
4C206MA61
4C206MA86
4C206NA10
4C206ZC41
4C206ZC61
(57)【要約】
本開示は、カンナビノイドの持続放出製剤を提供する。製剤は、脂質膜と、リポソーム内水性コアとを有するリポソームを含み、上記リポソームは、捕捉されたカンナビノイドと、上記カンナビノイドの少なくとも１つの分散剤とを含み、上記分散剤は、シクロデキストリン（ＣＤ）化合物；または捕捉されたカンナビノイド以外であり、上記カンナビノイドの少なくとも一部は、上記脂質膜に捕捉されており、上記脂質膜は、１～１０の範囲の、上記カンナビノイドと上記１つ以上のリポソーム形成脂質とのモル比を有する。カンナビノイドの持続送達のための製剤の調製方法および使用、ならびにそれを使用する治療的処置も開示される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
脂質膜と、リポソーム内水性コアとを有するリポソームを含む持続放出製剤であって、前記リポソームが、捕捉されたカンナビノイドと、前記カンナビノイドの少なくとも１つの分散剤とを含み、前記分散剤が、シクロデキストリン（ＣＤ）化合物以外である持続放出製剤。
【請求項2】
前記リポソームが、捕捉されたカンナビジオールＣＢＤまたはその機能的ホモログを含む、請求項１に記載の持続放出製剤。
【請求項3】
前記カンナビノイドの少なくとも一部が、前記リポソーム内水性コア内に捕捉されている、請求項１または２に記載の持続放出製剤。
【請求項4】
ＣＤ以外の前記分散剤が、前記リポソーム内水性コア内に捕捉されている、請求項１から３のいずれか一項に記載の持続放出製剤。
【請求項5】
前記分散剤が、可溶化剤を含むか、または可溶化剤である、請求項１から４のいずれか一項に記載の持続放出製剤。
【請求項6】
前記可溶化剤が、モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンおよびプロパン－１，２，３－トリオール：オキシラン（１：１）から選択される、請求項５に記載の持続放出製剤。
【請求項7】
前記分散剤が、共溶媒を含むか、または共溶媒である、請求項１から４のいずれか一項に記載の持続放出製剤。
【請求項8】
前記共溶媒が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）３００、プロピレングリコール（ＰＧ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）およびエタノールから選択される、請求項７に記載の持続放出製剤。
【請求項9】
前記分散剤が、タンパク質を含むか、またはタンパク質である、請求項１から４のいずれか一項に記載の持続放出製剤。
【請求項10】
前記タンパク質が血清タンパク質である、請求項９に記載の持続放出製剤。
【請求項11】
前記血清タンパク質が、ヒト血清アルブミンおよび免疫グロブリンから選択される、請求項１０に記載の持続放出製剤。
【請求項12】
前記分配剤に加えて、シクロデキストリン（ＣＤ）化合物を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の持続放出製剤。
【請求項13】
前記ＣＤ化合物が、２－ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）、２－ヒドロキシプロピル－γ－シクロデキストリン（ＨＰγＣＤ）およびソルホブチルエーテル（ＳＢＥ）シクロデキストリンからなる群から選択される、請求項１２に記載の持続放出製剤。
【請求項14】
前記ＣＤ化合物がＨＰβＣＤである、請求項１３に記載の持続放出製剤。
【請求項15】
脂質膜と、リポソーム内水性コアとを有するリポソームを含む持続放出製剤であって、前記脂質膜が、１つ以上のリポソーム形成脂質を含み、前記リポソームが、捕捉されたカンナビノイドを含み、前記カンナビノイドの少なくとも一部が、前記脂質膜に捕捉されており、前記脂質膜が、１～１０の範囲の、前記カンナビノイドと前記１つ以上のリポソーム形成脂質とのモル比を有する持続放出製剤。
【請求項16】
前記カンナビノイドの少なくとも一部が、前記リポソーム内水性コア内に捕捉されている、請求項１５に記載の持続放出製剤。
【請求項17】
前記カンナビノイドが、ＣＢＤを含むか、またはＣＢＤである、請求項１５または１６に記載の持続放出製剤。
【請求項18】
シクロデキストリン（ＣＤ）化合物以外の少なくとも１つの分散剤を含む、請求項１５から１７のいずれか一項に記載の持続放出製剤。
【請求項19】
前記分散剤が、界面活性剤、共溶媒、タンパク質から選択される、請求項１８に記載の持続放出製剤。
【請求項20】
前記分散剤に加えて、シクロデキストリン（ＣＤ）化合物を含む、請求項１３から１９のいずれか一項に記載の持続放出製剤。
【請求項21】
注射可能な製剤として使用するための、請求項１から２０のいずれか一項に記載の持続放出製剤。
【請求項22】
注射による哺乳動物対象の治療に使用するための、請求項１から２０のいずれか一項に記載の持続放出製剤。
【請求項23】
前記哺乳動物対象がヒト対象である、請求項１から２２のいずれか一項に記載の持続放出製剤。
【請求項24】
治療を必要とする対象に、脂質膜と、リポソーム内水性コアとを有するリポソームを含む持続放出製剤を投与することを含む治療方法であって、前記リポソームが、捕捉されたカンナビノイドと、前記カンナビノイドの少なくとも１つの分散剤とを含み、前記分散剤が、シクロデキストリン（ＣＤ）化合物以外である治療方法。
【請求項25】
前記リポソームが、捕捉されたカンナビジオール（ＣＢＤ）またはその機能的ホモログを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項26】
前記カンナビノイドの少なくとも一部が、前記リポソーム内水性コア内に捕捉されている、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項27】
ＣＤ以外の前記分散剤が、前記リポソーム内水性コア内に捕捉されている、請求項２４から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
治療を必要とする対象に、脂質膜と、リポソーム内水性コアとを有するリポソームを含む持続放出製剤を投与することを含む治療方法であって、前記脂質膜が、１つ以上のリポソーム形成脂質を含み、前記リポソームが、捕捉されたカンナビノイドを含み、前記カンナビノイドの少なくとも一部が、前記脂質膜に捕捉されており、前記脂質膜が、１～１０の範囲の、前記カンナビノイドと前記１つ以上のリポソーム形成脂質とのモル比を有する治療方法。
【請求項29】
前記カンナビノイドの少なくとも一部が、前記リポソーム内水性コア内に捕捉されている、請求項２８に記載の方法。
【請求項30】
前記カンナビノイドが、ＣＢＤを含むか、またはＣＢＤである、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項31】
シクロデキストリン（ＣＤ）化合物以外の少なくとも１つの分散剤を含む、請求項２８から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記投与が、前記持続放出製剤の注射を含む、請求項２４から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
前記投与が筋肉内注射を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
前記投与が皮下投与を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項35】
ヒト治療のための、請求項２８から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項36】
獣医学的治療のための、請求項２８から３４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、リポソームカンナビノイドに関する。
【0002】
本開示の主題の背景として関連すると考えられる参考文献を以下に列挙する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【特許文献1】国際特許出願公開国際公開第２０１７２０３５２９号パンフレット
【特許文献2】国際特許出願公開国際公開第２００１００３６６８号パンフレット
【特許文献3】米国特許出願公開第２０１７００４４０９２号明細書
【特許文献4】国際特許出願公開国際公開第２０１８１４５２１３号パンフレット
【特許文献5】米国特許出願公開第２０１８０１９３３９９号明細書
【特許文献6】米国特許第９，０９５，５５５号明細書
【特許文献7】米国特許第１，０１１，７８８３号明細書
【特許文献8】米国特許出願公開第２０１７０２８１７０１号明細書
【特許文献9】米国特許出願公開第２０１８０３１８２３７号明細書
【特許文献10】米国特許出願公開第２０１８０２７１９２４号明細書
【特許文献11】米国特許出願公開第２０１７０１０７２８０号明細書
【特許文献12】国際特許出願公開国際公開第２０１７１９１６３０号パンフレット
【特許文献13】米国特許出願公開第２０１８０３０３７９１号明細書
【特許文献14】米国特許出願公開第２０１８００４２８４５号明細書
【特許文献15】米国特許出願公開第２０１８０１８５３２４号明細書
【特許文献16】米国特許出願公開第２０１８０２８９６６５号明細書
【特許文献17】米国特許第９６５５９１０号明細書
【特許文献18】米国特許第８２４２１７８号明細書
【特許文献19】米国特許出願公開第２０１８０２２１３０４号明細書
【0004】
本明細書における上記の参考文献の承認は、これらが本開示の主題の特許性に何らかの形で関連することを意味すると推測されるべきではない。
【背景技術】
【0005】
様々なリポソームと会合したＣＢＤの使用を記載した刊行物はほとんどなく、例えば、国際公開第２０１７２０３５２９号パンフレットには、カンナビジオール（ＣＢＤ）またはその誘導体とヒアルロン酸またはその塩との組合せ、リン脂質、および場合により生理学的に許容される担体を含む組成物が記載されている。ＣＢＤは、リン脂質によって形成されたリポソームに組み込まれ得る。組成物は、炎症性関節疾患、またはそのような疾患に関連する疼痛もしくは炎症の治療に使用するために記載されている。組成物は、局所注射用に製剤化される。
【0006】
リポソームＣＢＤを記載する他の刊行物には、リポソーム封入カンナビノイドの肺送達を記載している国際公開第２００１００３６６８号パンフレット、場合によりリポソーム内のカンナビノイドの局所投与を記載する米国特許第２０１８０３１８２３７号明細書、ステロイド用量を減少させ、炎症性疾患および自己免疫疾患を治療するための、場合によりリポソーム内のカンナビジオールの使用を記載している国際公開第２０１７１９１６３０号パンフレット、多発性骨髄腫を治療するためのカンナビノイドの使用を記載しており、カンナビノイドはリポソーム内にあり得る米国特許第２０１８０３０３７９１号明細書、米国特許第２０１８００４２８４５号明細書および米国特許第２０１８０１８５３２４号明細書、中毒を治療するための、場合によりリポソーム内のカンナビノイドの使用を記載している米国特許第９６５５９１０号明細書、自己免疫性肝炎を治療するための、場合によりリポソーム内のカンナビジオールの使用を記載している米国特許第８２４２１７８号明細書、ならびに肥満細胞関連炎症性障害または好塩基球媒介性炎症性障害を治療するためのカンナビノイド含有複合体混合物を記載しており、リポソームは局所送達のための手段として示唆されている米国特許第２０１８０２２１３０４号明細書が含まれる。
【発明の概要】
【0007】
本開示は、脂質膜と、リポソーム内水性コアとを有するリポソームを含む持続放出製剤であって、リポソームは、１つ以上のリポソーム形成脂質、捕捉されたカンナビノイド（例えばカンナビジオール（ＣＢＤ））またはその機能的ホモログと、シクロデキストリン（ＣＤ）化合物ではない、カンナビノイドの少なくとも１つの分散剤（例えば、ＰＧ、ＨＳＡ、ＩＶＩｇ）とを含む持続放出製剤を提供する。リポソーム内コアは、ＣＤも含み得る。
【0008】
脂質膜と、リポソーム内水性コアとを有するリポソームを含む持続放出製剤であって、脂質膜は、１つ以上のリポソーム形成脂質を含み、上記リポソームは、捕捉されたカンナビノイドを含み、上記カンナビノイドの少なくとも一部は、上記脂質膜に捕捉されており、上記脂質膜は、１～１０の範囲の、上記カンナビノイドと上記１つ以上のリポソーム形成脂質とのモル比を有する持続放出製剤も本開示によって提供される。
【0009】
必要とする対象に、脂質膜と、リポソーム内水性コアとを有するリポソームを含む持続放出製剤の治療有効量を投与することを含む治療方法であって、リポソームは、１つ以上のリポソーム形成脂質と、捕捉されたカンナビノイド化合物と、ＣＤ化合物ではない、カンナビノイドの少なくとも１つの分散剤とを含む治療方法も本開示によって提供される。
【0010】
さらに、治療を必要とする対象に、脂質膜と、リポソーム内水性コアとを有するリポソームを含む持続放出製剤を投与することを含む治療方法であって、脂質膜は、１つ以上のリポソーム形成脂質を含み、上記リポソームは、捕捉されたカンナビノイドを含み、上記カンナビノイドの少なくとも一部は、上記脂質膜に捕捉されており、上記脂質膜は、１～１０の範囲の、上記カンナビノイドと上記１つ以上のリポソーム形成脂質とのモル比を有する治療方法が本開示によって提供される。
【0011】
いくつかの例では、製剤は、捕捉されたＣＤ化合物も含む。
【0012】
本明細書に開示される主題をさらによく理解し、それを実際にどのように実行することができるかを例示するために、添付の図面を参照して、非限定的な例としてのみ実施形態を説明する。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【図1A】リポソームＣＢＤ（Ｆ１、図１Ａ）、リポソームＣＢＤ－ＨＳＡ ５０ｍｇ／ｍｌ（図１Ｂ）、リポソームＣＢＤ－ＨＳＡ １００ｍｇ／ｍｌ（図１Ｃ）を含む様々なＣＢＤ製剤の顕微鏡画像（Ｚｅｉｓｓ ＳＮ ２２１２０９、倍率２００倍）である。
【図1B】リポソームＣＢＤ（Ｆ１、図１Ａ）、リポソームＣＢＤ－ＨＳＡ ５０ｍｇ／ｍｌ（図１Ｂ）、リポソームＣＢＤ－ＨＳＡ １００ｍｇ／ｍｌ（図１Ｃ）を含む様々なＣＢＤ製剤の顕微鏡画像（Ｚｅｉｓｓ ＳＮ ２２１２０９、倍率２００倍）である。
【図1C】リポソームＣＢＤ（Ｆ１、図１Ａ）、リポソームＣＢＤ－ＨＳＡ ５０ｍｇ／ｍｌ（図１Ｂ）、リポソームＣＢＤ－ＨＳＡ １００ｍｇ／ｍｌ（図１Ｃ）を含む様々なＣＢＤ製剤の顕微鏡画像（Ｚｅｉｓｓ ＳＮ ２２１２０９、倍率２００倍）である。
【図2A】２つの別個のインビボ試験で異なるＩＭ製剤（ｎ＝３、平均±ＳＤ、外れ値なし）と対比した、１２ｍｇ／ｋｇ用量のＩＶ投与後の血漿ＣＢＤ濃度（ｎｇ／ｍｌ）を示すグラフである。
【図2B】２つの別個のインビボ試験で異なるＩＭ製剤（ｎ＝３、平均±ＳＤ、外れ値なしと対比した、１２ｍｇ／ｋｇ用量のＩＶ投与後の血漿ＣＢＤ濃度（ｎｇ／ｍｌ）を示すグラフである。
【図3A】異なる製剤（ｎ＝３、平均±ＳＤ、外れ値なし）のＩＭ投与後に筋肉から放出された絶対ＣＢＤ（ｍｇ）（図３Ａ）、および異なる製剤（ｎ＝３、平均±ＳＤ、外れ値なし）のＩＭ投与後に筋肉から放出されたＣＢＤ（パーセント）（図３Ｂ）を示すグラフである。
【図3B】異なる製剤（ｎ＝３、平均±ＳＤ、外れ値なし）のＩＭ投与後に筋肉から放出された絶対ＣＢＤ（ｍｇ）（図３Ａ）、および異なる製剤（ｎ＝３、平均±ＳＤ、外れ値なし）のＩＭ投与後に筋肉から放出されたＣＢＤ（パーセント）（図３Ｂ）を示すグラフである。
【図4】ＤＭＰＣ：ＤＰＰＣ－ＣＢＤリポソームの顕微鏡画像（Ｚｅｉｓｓ ＳＮ ２２１２０９、倍率２００倍）である。
【発明を実施するための形態】
【0014】
本開示は、リポソーム二重層に捕捉されたＣＢＤの存在が、リポソームからのＣＢＤの放出速度に影響を及ぼし（低下させ／減速し）、リポソーム製剤からのＣＢＤの持続送達を可能にするという予想外の知見に基づく。本開示はまた、（リポソーム内水性環境内のＣＢＤの有無にかかわらず）リポソーム内水性環境内の分散剤（ＣＢＤを均一に分配することができる）の存在が、リポソームからのＣＢＤの放出速度を低下させることもできるという知見に根拠を見出す。
【0015】
したがって、その第１の態様によれば、本開示は、脂質膜と、リポソーム内水性コアとを有するリポソームを含む持続放出製剤であって、リポソームは、１つ以上のリポソーム形成脂質と、捕捉されたカンナビノイド化合物と、シクロデキストリン（ＣＤ）化合物以外の（すなわち、シクロデキストリン（ＣＤ）化合物ではない）少なくとも１つのカンナビノイド分散剤とを含む持続放出製剤を提供する。
【0016】
第２の態様によれば、本開示は、脂質膜と、リポソーム内水性コアとを有するリポソームを含む持続放出製剤であって、脂質膜は、１つ以上のリポソーム形成脂質を含み、上記リポソームは、捕捉されたカンナビノイドまたはその機能的ホモログを含み、上記カンナビノイドの少なくとも一部は、脂質膜に捕捉されており、上記脂質膜は、１～１０の範囲の、上記カンナビノイドと上記１つ以上のリポソーム形成脂質とのモル比を有する持続放出製剤を提供する。
【0017】
カンナビノイド化合物の持続送達を必要とする状態を治療するために上述の持続リポソーム製剤を使用する方法であって、したがって、上記対象への持続放出製剤の投与を含む方法も本開示によって提供される。
【0018】
本明細書に開示される製剤は、少なくとも１つのカンナビノイドを含む。本開示の文脈では、カンナビノイドに言及する場合、単一の化合物、またはカンナビノイド化合物の組合せを包含すると理解されるべきである（すなわち、本明細書で使用される該用語は、単一または複数のそのような化合物を包含する）。いくつかの例では、カンナビノイドの組合せは、植物抽出物の成分、すなわち、複数のカンナビノイドならびに場合により植物フラボノイドおよびテルペノイドを含む。
【0019】
いくつかの例では、カンナビノイドは、カンナビジオール（ＣＢＤ）であるか、またはそれを含む。
【0020】
いくつかの他の例では、カンナビノイドは、テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）（Ｄｅｌｔａ９－ＴＨＣおよび／またはＤｅｌｔａ８－ＴＨＣ）であるか、またはそれを含む。
【0021】
本開示の範囲内に入る他のカンナビノイドには、それぞれ本開示の別個の実施形態を構成する、カンナビゲロール（ＣＢＧ）、カンナビゲロール酸（ＣＢＧＡ）、カンナビゲロールモノメチルエーテル（ＣＢＧＭ）、カンナビクロメン（ＣＢＣ）、カンナビクロマノン（ＣＢＣＮ）、カンナビクロメン酸（ＣＢＣＡ）、カンナビバリクロメン（ＣＢＣＶ）、カンナビクロメバリン酸（ＣＢＣＶＡ）、イソテトラヒドロカンナビノール（ｉｓｏ－ＴＨＣ）、カンナビノール（ＣＢＮ）、カンナビノール酸（ＣＢＮＡ）、カンナビノールメチルエーテル（ＣＢＮＭ）、カンナビノールＣ４（ＣＢＮ－Ｃ４）、カンナビノールＣ２（ＣＢＮ－Ｃ２）、カンナビノールＣ１（ＣＢＮ－Ｃ１）、カンナビノジオール（ＣＢＮＤ）、カンナビエルソイン（ＣＢＥ）、カンナビエルソン酸Ａ（ＣＢＥＡ－Ａ）、カンナビエルソン酸Ｂ（ＣＢＥＡ－Ｂ）、カンナビシクロル（ｃａｎｎａｂｉｃｙｃｌｏｌ）（ＣＢＬ）、カンナビシクロ酸（ｃａｎｎａｂｉｃｙｃｌｏｉｃ ａｃｉｄ）（ＣＢＬＡ）、カンナビシクロバリン（ＣＢＬＶ）、カンナビトリオール（ＣＢＴ）、カンナビトリオールバリン（ＣＢＴＶ）、エトキシ－カンナビトリオールバリン（ＣＢＴＶＥ）、カンナビバリン（ＣＢＶ）、カンナビノジバリン（ＣＢＶＤ）、テトラヒドロカンナビバリン（ＴＨＣＶ）、カンナビジバリン（ＣＢＤＶ）、カンナビゲロバリン（ＣＢＧＶ）、カンナビゲロバリン酸（ＣＢＧＶＡ）、カンナビフラン（ＣＢＦ）、デヒドロカンナビフラン（ＤＣＢＦ）、カンナビリスポール（ｃａｎｎａｂｉｒｉｓｐｏｌ）（ＣＢＲ）からなる群から選択される１つのカンナビノイド、または２つ以上のカンナビノイドの任意の組合せが含まれる。
【0022】
いくつかの例では、カンナビノイドは、ＣＢＤと上記のカンナビノイドのうちのいずれか１つ以上との組合せであるか、またはそれを含む。
【0023】
いくつかの好ましい例では、製剤内のカンナビノイドはＣＢＤである。
【0024】
ＣＢＤ化合物という用語は、本開示の文脈では、ＣＢＤおよびその機能的ホモログを包含する。ＣＢＤ機能的ホモログに言及する場合、それは、ＣＢＤと同様の物理化学的特性を有する化合物として理解されるべきである。
【0025】
いくつかの例では、ＣＢＤ機能的ホモログは、少なくとも１つのベンゼン環と、４を超えるｌｏｇＰとを含む、ＣＢＤの化学的類似体である。
【0026】
いくつかの例では、ＣＢＤ機能的ホモログには、ＣＢＤと同様にテトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）の精神作用を欠く、ＣＢＤの構造ホモログ（異性体を含む）が含まれる。
【0027】
いくつかの例では、ＣＢＤ化合物は、天然のフィトカンナビノイドである。
【0028】
いくつかの例では、ＣＢＤ化合物は合成ＣＢＤホモログである。
【0029】
ＣＢＤ化合物の非限定的な例には、名称２－［（１Ｒ，６Ｒ）－６－イソプロペニル－３－メチルシクロヘキサ－２－エン－１－イル］－５－ペンチルベンゼン－１，３－ジオール（ＣＢＤ）、合成カンナビジオール－ジメチルヘプチル（ＣＢＤ－ＤＮＨ）、フィトカンナビノイドカンナビジバリン（ＣＢＤＶ）、カンナビジバリノール酸（Ｃａｎｎａｂｉｄｉｖａｒｉｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ）（ＣＢＤＶＡ）、カンナビジオールモノメチルエーテル（ＣＢＤＭ）［Ｐａｕｌａ Ｍｏｒａｌｅｓ，Ｐａｔｒｉｃｉａ Ｈ．Ｒｅｇｇｉｏ，ａｎｄ Ｎａｄｉｎｅ Ｊａｇｅｒｏｖｉｃ ’’Ａｎ Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ａｎｄ Ｎａｔｕｒａｌ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｏｆ Ｃａｎｎａｂｉｄｉｏｌ’’ Ｆｒｏｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．’’８：４２２，（２０１７）］が挙げられる。
【0030】
いくつかの例では、活性成分は、その化学名２－［（１Ｒ，６Ｒ）－６－イソプロペニル－３－メチルシクロヘキサ－２－エン－１－イル］－５－ペンチルベンゼン－１，３－ジオールによって知られるＣＢＤである。
【0031】
カンナビノイド、好ましくはＣＢＤ化合物は、リポソームに捕捉／会合される。本開示の文脈では、リポソームへの化合物の捕捉に言及する場合、それは、カンナビノイドとリポソーム自体との間の任意の形態の物理的会合または化学的会合を定義するものとして理解されるべきである。ただし、リン脂質がリポソームの形態であることのみによる物理的会合、およびカンナビノイドとリン脂質自体との間の化学的会合はないことは明らかであるはずである。会合は、カンナビノイドをリポソーム内水性コア／媒体内に封入することによる、および／またはカンナビノイドを少なくとも部分的に脂質膜内に包埋することによる（例えば、カンナビノイドの疎水性に起因して）、および／またはカンナビノイドをリポソームの外面と会合させることによる（例えば、物理的な力によって）ものであり得る。
【0032】
リポソームに捕捉されたカンナビノイドの量は、市販のクロマトグラフィー技術を使用して決定することができる。いくつかの例では、カンナビノイドの濃度は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）／ＵＶ法を使用して決定される。
【0033】
いくつかの例では、脂質膜に捕捉されたカンナビノイドは、当技術分野で公知の方法によって決定される。例えば、限定するものではないが、脂質膜内の１つ以上のリポソーム形成脂質とＣＢＤとの比は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって決定することができる。
【0034】
カンナビノイドのリポソーム内濃度を計算するためには、以前に記載されたように計算され得る水性リポソーム内捕捉体積も必要である［Ｂａｎｇｈａｍ ＡＤ，ｅｔ．ａｌ．（１９６５）Ｊ ＭｏＩ Ｂｉｏｌ．１３（ｌ）：２３８－５２］。
【0035】
いくつかの例では、リポソームによって捕捉されるカンナビノイド、好ましくはＣＢＤ化合物の量は、少なくとも３０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも４０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも６０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも７０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも８０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも９０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも１１０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも１２０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも１３０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも１４０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも１５０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも１６０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも１７０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも１８０ｍｇ／ｍｌ、時に少なくとも１９０ｍｇ／ｍｌ、さらには少なくとも２０ｍｇ／ｍｌである。
【0036】
いくつかの例では、リポソームによって捕捉されるカンナビノイド、好ましくはＣＢＤ化合物の量は、最大４００ｍｇ／ｍｌ、時に最大３５０ｍｇ／ｍｌ、時に最大３３０ｍｇ／ｍｌ、時に最大３１０ｍｇ／ｍｌ、時に最大３００ｍｇ／ｍｌ、時に最大２８０ｍｇ／ｍｌ、時に最大２６０ｍｇ／ｍｌ、時に最大２４０ｍｇ／ｍｌ、時に最大２２０ｍｇ／ｍｌ、時に最大２００ｍｇ／ｍｌ、時に最大１９０ｍｇ／ｍｌ、時に最大１８０ｍｇ／ｍｌ、時に最大１７０ｍｇ／ｍｌ、時に最大１６０ｍｇ／ｍｌ、時に最大１５０ｍｇ／ｍｌ、時に最大１４０ｍｇ／ｍｌ、時に最大１３０ｍｇ／ｍｌ、時に最大１２０ｍｇ／ｍｌである。
【0037】
いくつかの例では、リポソームによって捕捉されるカンナビノイド、好ましくはＣＢＤ化合物の量は、３０～４００ｍｇ／ｍｌの範囲、時に３０～３５０ｍｇ／ｍｌの範囲、時に３０～３５０ｍｇ／ｍｌの範囲、時に３０～３５０ｍｇ／ｍｌの範囲、時に３０～３５０ｍｇ／ｍｌの範囲、時に３０～２００ｍｇ／ｍｌの範囲、時に５０～２５０ｍｇ／ｍｌの範囲、時に４０～１８０ｍｇ／ｍｌの範囲、時に４０～２５０ｍｇ／ｍｌの範囲、時に３０～１２０ｍｇ／ｍｌの範囲、時に４０～１５０ｍｇ／ｍｌの範囲、時に５０～３００ｍｇ／ｍｌの範囲、または上記で特定された下限濃度および上限濃度内の任意の範囲である。
【0038】
いくつかの例では、カンナビノイド対脂質のモル比が決定される。
【0039】
いくつかの例では、カンナビノイド化合物／脂質モル比は、１～１０、時に１～９、時に１～８、時に１～７、時に１～６、時に１～５である。
【0040】
本開示の独特の特徴は、リポソーム内区画の、シクロデキストリン（ＣＤ）ではない少なくとも１つのカンナビノイド分散剤と組み合わせたカンナビノイド、好ましくはＣＢＤ化合物の存在下にある。これは、様々な分散剤を使用して達成される、水溶液中のＣＢＤ（７．０３の予測ｌｏｇＰを有するＣＢＤ）などのカンナビノイドの非常に低い溶解度に起因して独特である。理論によって束縛されるものではないが、分散剤（ＣＤ化合物ではないが、ＣＤ化合物と組み合わされ得る）は、リポソーム内水性コア内のリポソーム内に存在する場合、溶解した、または均一に分散した形態のカンナビノイドの量を維持し、それによって、リポソーム内のカンナビノイドの持続可能性を改善すると考えられる。
【0041】
本開示の文脈では、用語「カンナビノイド分散剤」は、リポソームへのカンナビノイドのローディング（好ましくは、排他的ではないが、受動的ローディングによって）に使用される液体媒体中のカンナビノイド（１つのカンナビノイド、またはカンナビノイドの組合せ）の分散性を促進または増強する任意の化学的実体を包含すると理解されるべきである。理論によって束縛されるものではないが、カンナビノイド分散剤は、カンナビノイドと物理的に会合し、それによって、非共有結合性複合体の形態でリポソーム内に捕捉されるようになる。
【0042】
いくつかの例では、分散剤は可溶化剤（可溶化促進剤という用語によっても認識される）である。可溶化剤に言及する場合、ＣＤではない少なくとも１つの化合物を包含すると理解されるべきである。したがって、本開示の文脈では、用語「ＣＤ以外の可溶化剤」は、ＣＤではない任意の可溶化増強化合物として理解されるべきであるが、追加の可溶化増強化合物としてＣＤと組み合わされ得る。
【0043】
可溶化剤は、特に不溶性薬物、または溶解度が低い薬物を使用する場合、薬物溶解度を改善するために使用されることが知られている。本開示のいくつかの例では、カンナビノイドは脂質相および水相の両方に加えられるため、カンナビノイド化合物は、脂質相（脂質膜）と水性リポソーム内相との間に分布し、したがって、活性成分（すなわち、ＣＢＤ化合物などのカンナビノイド）の２つの異なるプールを提供すると考えられる。
【0044】
換言すれば、理論によって束縛されるものではないが、分散剤は、リポソーム内水性媒体中にカンナビノイドを維持し、リポソームからの活性成分、例えばＣＢＤ化合物の制御された（具体的には、例えば最大３週間まで持続する）放出を促進すると考えられる。
【0045】
様々な種類の可溶化剤が存在する。可溶化剤は、共溶媒、すなわち、難溶性化合物の溶解度を増大／改善するために一次溶媒（有機溶媒または水であるかにかかわらず）に少量で加えられる物質、例えば、限定するものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えば、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、プロピレングリコール（ＰＧ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、エタノールであり得るか、または界面活性剤、例えば、限定するものではないが、Ｔｗｅｅｎ８０（モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（プロパン－１，２，３－トリオール：オキシラン（１：１））として認識されてもよいか、または錯化剤、例えば、シクロデキストリンファミリーの化合物のメンバーとして認識されてもよい。
【0046】
いくつかの例では、可溶化剤は共溶媒である。好ましい共溶媒はＰＥＧである。別の好ましい共溶媒はＰＧである。
【0047】
分散剤は、可溶化剤以外であってよい。いくつかの例では、分散剤は、カンナビノイド、好ましくはＣＢＤを、それが溶解している水性媒体に分散させる能力によって選択されるタンパク質である。
【0048】
いくつかの例では、分散タンパク質は血清タンパク質である。
【0049】
いくつかの例では、血清タンパク質はアルブミンである。
【0050】
いくつかの例では、血清タンパク質はヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である。
【0051】
いくつかの例では、血清タンパク質はグロブリンである。
【0052】
いくつかの例では、血清タンパク質は免疫グロブリンである。
【0053】
分散剤とカンナビノイドとは、非共有結合によって会合する。いくつかの例では、分散剤とカンナビノイドとは、好適な条件下で分散剤からのカンナビノイドの放出を可能にするように、物理的複合体を形成する。したがって、分散剤とカンナビノイドとは、いくつかの例では、互いに非共有結合している。
【0054】
いくつかの例では、製剤は、２つ以上の分散剤の組合せを含む。
【0055】
いくつかの例では、２つ以上の分散剤の組合せは、少なくともシクロデキストリン（ＣＤ）化合物を含む。
【0056】
いくつかの例では、分散剤の組合せは、そのいずれもＣＤ化合物ではない２つ以上のそのような化合物を含む。
【0057】
上記のように、リポソームは、ＣＤ化合物も含み得る。ＣＤ化合物は、（α－１，４）結合α－Ｄ－グルコピラノース単位からなる環状オリゴ糖として認識されており、親油性の中心空洞と、親水性の外面とを含む。本開示の文脈では、ＣＤは、天然に存在するＣＤ、および天然に存在するＣＤの誘導体であり得る。天然のＣＤには、それぞれ６、７および８個のグルコピラノース単位からなるα－、β－またはγ－シクロデキストリン（αＣＤ、βＣＤまたはγＣＤ）が含まれる。天然ＣＤの誘導体（一般用語「ＣＤ化合物」の下にも包含される）に言及する場合、それは、親油性の中心空洞と、親水性の外面とを有する（α－１，４）結合α－Ｄ－グルコピラノース単位からなる任意の環状オリゴ糖として理解されるべきである。
【0058】
いくつかの例では、ＣＤ化合物は２－ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）である。
【0059】
いくつかの例では、ＣＤ化合物は２－ヒドロキシプロピル－γ－シクロデキストリン（ＨＰγＣＤ）である。
【0060】
いくつかの例では、ＣＤ化合物はソルホブチルエーテル（Ｓｏｌｆｏｂｕｔｙｌ ｅｔｈｅｒ）（ＳＢＥ）シクロデキストリンである。
【0061】
好ましい一例では、ＣＤは、ＨＰβＣＤまたは略してＨＰＣＤである。
【0062】
製剤は、リポソームも含む。
【0063】
リポソームは、少なくとも１つのリポソーム形成脂質を用いて事前に調製される。本発明の文脈では、用語「リポソーム形成脂質」は、以下でさらに説明されるように、水中で、限定するものではないが、リポソームなどの小胞になるグリセロリン脂質またはスフィンゴミエリンを主に示す。
【0064】
グリセロリン脂質に言及する場合、それは、頭部基のヒドロキシル基のうちの少なくとも１つ、好ましくは２つが、アシル鎖、アルキル鎖もしくはアルケニル鎖、ホスファート基、または上記のいずれかの組合せ、および／またはこれらの誘導体のうちの１つまたは２つによって置換されており、頭部基に化学反応性基（アミン、酸、エステル、アルデヒドまたはアルコールなど）を含み、それによって、極性頭部基を有する脂質を提供し得る、グリセロール骨格を有する脂質として理解されるべきである。スフィンゴミエリンは、１位に結合したホスホリルコリン部分を有するセラミド単位からなり、したがって、実際にはＮ－アシルスフィンゴシンである。スフィンゴミエリン内のホスホコリン部分は、スフィンゴミエリンの極性頭部基に寄与する。
【0065】
リポソーム形成脂質では、アシル鎖、アルキル鎖またはアルケニル鎖は、典型的には１２～約２４個の炭素原子の長さであり、完全に、部分的にまたは非水素化の天然に存在する脂質、半合成脂質または完全合成脂質である様々な飽和度を有し、飽和度のレベルは、このように形成されたリポソームの剛性に影響を及ぼし得る（典型的には、飽和鎖を有する脂質は、特にシス二重結合を有する不飽和鎖が存在する、同じ鎖長の脂質よりも剛性が高い）。
【0066】
いくつかの例では、リポソームは、単一タイプのリポソーム形成脂質を含む。
【0067】
いくつかの他の例では、リポソームは、リポソーム形成脂質の組合せを含む。
【0068】
いくつかの例では、リポソーム形成脂質はリン脂質である。リポソーム形成脂質がリン脂質である場合、リポソーム内のその量は、改変Ｂａｒｔｌｅｔｔ法［Ｓｈｍｅｅｄａ Ｈ，Ｅｖｅｎ－Ｃｈｅｎ Ｓ，Ｈｏｎｅｎ Ｒ，Ｃｏｈｅｎ Ｒ，Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ Ｃ，Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ Ｙ．２００３．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｎｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ３６７：２７２－９２］によって、有機リンとして決定され得る。脂質は、本開示の不可欠な部分を形成する非限定的な例では、本明細書に記載のＥＬＳＤ／ＨＰＬＣ法を使用して試験することもできる。
【0069】
いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、コリン型リン脂質、例えば、ジアシルグリセロ－ホスホコリンである（アシル鎖、アルキル鎖またはアルケニル鎖は、上で定義した通りである）。
【0070】
いくつかの他の例では、リポソーム形成脂質は、ジ－ラウロイル－ｓｎ－グリセロ－２ホスホコリン（ＤＬＰＣ）である。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）である。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）である。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）である。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１，２－ジヘプタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）である。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１，２－ジノナデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１，２－ジアラキドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＢＰＣ）である。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１，２－ジヘナラキドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１，２－ジベヘノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン１，２－ジトリコサノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１，２－ジリグノセロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１－ミリストイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１－パルミトイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＳＰＣ）である。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１－ステアロイル－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＳＰＰＣ）である。いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、１，２－ジ－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）またはジ－ラウロイル－ｓｎ－グリセロ－２ホスホコリン（ＤＬＰＣ）である。
【0071】
いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、少なくとも水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）を含む。
【0072】
好ましい一例では、リポソーム形成脂質は、水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）を含むか、またはそれからなる。
【0073】
いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、少なくとも１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）を含む。
【0074】
いくつかの例では、リポソーム形成脂質は、少なくとも１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）を含む。
【0075】
好ましい一例では、リポソーム形成脂質は、ＤＭＰＣとＤＰＰＣとの組合せを含むか、またはそれからなる。いくつかの例では、２つのリポソーム形成脂質は、約４５：５５のＤＭＰＣ：ＤＰＰＣモル比である。限定するものではないが、ＤＭＰＣ：ＤＰＰＣ含有製剤は、非ヒト（獣医学的）用途に好適である。
【0076】
いくつかの例では、リポソームは、ステロール、例えばコレステロールを含む。
【0077】
いくつかの例では、コレステロールがリポソーム内に存在する場合、それは４％モル以下の量である。
【0078】
いくつかの追加の例または他の例では、リポソームは、リポポリマー、例えば、ポリエチレングリコール由来脂質（ＰＥＧ化脂質）を含む。
【0079】
リポソームは、任意の形態またはサイズであり得る。
【0080】
いくつかの例では、リポソームは、多層小胞またはオリゴラメラ小胞である。
【0081】
いくつかの例では、リポソームは多胞状小胞である。
【0082】
いくつかの他の例では、リポソームは、単層小胞、好ましくは大型の単層小胞である。
【0083】
リポソームは、小型、中型、大型またはさらには巨大であり得る。小型のリポソームに言及する場合、それは、約２０ｎｍ～１００ｎｍの範囲の平均サイズを有すると理解されるべきである。中型サイズのリポソームに言及する場合、それは、約１００ｎｍ～２００ｎｍの範囲内の平均サイズを有すると理解されるべきである。大型のリポソームに言及する場合、それは、約２００ｎｍを超える平均サイズを有すると理解されるべきである。巨大なリポソーム（典型的には、巨大な単層小胞または多胞状小胞）に言及する場合、それは、１μｍよりも大きいものを指すと理解されるべきである。
【0084】
いくつかの例では、リポソームは多層小胞（ＭＬＶ）である。いくつかの例では、ＭＬＶは、１００ｎｍ以上の最小値を有するサイズ分布を有する。
【0085】
いくつかの例では、リポソームを含む製剤は、乾燥形態である。具体的には、排他的ではないが、リポソームは凍結乾燥される。
【0086】
いくつかの他の例では、製剤は、本明細書で用語「外部媒体」と呼ばれる媒体内に保持されているリポソームを含む。外部媒体は、リポソームをその中に保持するのに適した任意の組成のものであり得る。いくつかの例では、外部媒体は、リポソームの保存に適したものであり、いくつかの他の例では、外部媒体は、リポソームの投与に適したもの、例えば、生理学的に許容される担体である。
【0087】
いくつかの例では、典型的には、外部媒体が投与に適したものである場合、外部媒体は、カンナビノイドを含み得る。カンナビノイドは、リポソームによって捕捉されたカンナビノイドと同じであっても異なっていてもよい。
【0088】
カンナビノイドと分散剤との組合せは、好ましくは制御された方法で、持続放出製剤の形成を可能にする。本開示の文脈では、「制御放出」または「持続放出」に言及する場合、それは、一定期間にわたる制御放出を意味すると理解されるべきである。一定期間には、少なくとも数日間、時に少なくとも３日間、時に少なくとも４日間、時に少なくとも５日間、時に少なくとも６日間、時に少なくとも７日間、時に少なくとも８日間、時に少なくとも９日間、時に少なくとも１０日間、時に少なくとも１１日間、時に少なくとも１２日間、時に少なくとも１３日間、時に少なくとも１４日間、時に少なくとも１５日間、時に少なくとも１６日間、時に少なくとも１７日間、時に少なくとも１８日間、時に少なくとも１９日間、時に少なくとも２０日間、時に少なくとも２１日間、またはさらには３０日間超が含まれる。用語「持続放出」は、即時放出（例えば、最初の２４時間以内に５０％超が放出される場合）以外の任意の形態の制御放出を包含し、長期／持続放出および／または遅延放出を含む。持続放出は、例３に記載のインビトロ放出アッセイによって決定することができる。２時間のインキュベーション後の５０％血清中の≦７０％、時に≦６０％、時に≦５０％の放出は、持続放出と見なされ得る。
【0089】
本開示はまた、製剤内に、注射または注入による投与に適した生理学的に許容される担体を提供する。
【0090】
本発明の文脈では、生理学的に許容される担体とは、一般に安全で、非毒性であり、生物学的にも他の点でも望ましくないものではない医薬製剤を調製するのに有用な任意の担体を意味する。いくつかの例では、生理学的に許容される担体は、注射による投与に適した水性溶液である。いくつかの例では、全身投与に適した生理学的に許容される担体には、抗酸化剤と、緩衝液と、静菌剤と、製剤を意図するレシピエントの血液と等張にする溶質とを含有することができる水性および非水性の等張性滅菌注射／注入溶液が含まれる。いくつかの例では、担体は、生理食塩水、緩衝液、糖水溶液（デキストロース、スクロースなど）などのいずれか１つまたは組合せである。いくつかの例では、担体は、増粘剤、安定剤および保存剤も含み得る。
【0091】
いくつかの例では、投与は、筋肉内（ｉ．ｍ．）注射、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射、静脈内（ｉ．ｖ．）注射および皮下（ｓ．ｃ．）注射のいずれか１つによるものである。
【0092】
好ましい一例では、リポソーム製剤はＩＭ注射用である。ＩＭ注射は、非リポソームカンナビノイド製剤のＩＶ注射を超える利点を提供する持続／長期放出プロファイルを示した。
【0093】
いくつかの例では、投与は、哺乳動物対象に対するものである。
【0094】
いくつかの例では、投与は、ヒト対象に対するものである。
【0095】
いくつかの他の例では、投与は、非ヒト（すなわち、獣医学的）対象に対するものである。
【0096】
リポソーム内のカンナビノイド化合物の量は、対象への製剤の投与時に治療効果を提供するのに十分であるように設計される。
【0097】
投与時に治療効果を達成するのに十分または有効な量は、カンナビノイド化合物、特にＣＢＤによって達成されるかまたはそれに関連することが知られている少なくとも１つの治療効果を含むと理解されるべきである。
【0098】
限定するものではないが、治療効果は、疼痛および／または炎症を治療／改善／低減すること、ならびに特定のカンナビノイド化合物、特にＣＢＤの投与に関連することが知られている任意の他の治療効果のいずれか１つまたは組合せにあり得る。
【0099】
開示されたリポソーム製剤によって送達されるカンナビノイドの量は、当業者に公知の様々なパラメーターに依存し、適切に設計された臨床試験（用量範囲試験）に基づいて決定され得、当業者であれば、有効量を決定するためにそのような試験を適切に行う方法を知っているであろう。その量は、とりわけ、治療される疾患のタイプおよび重症度、ならびに治療レジメン（投与様式）、治療される対象の性別および／または年齢および／または体重などに依存する。
【0100】
製剤内のリポソーム、および製剤自体は、リポソーム製剤の分野で公知の任意の技術または任意のパラメーターによって特徴付けられ得る。これには、限定するものではないが、リポソームサイズおよび／またはサイズ分布（例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用する）、多分散指数（ＰＤＩ）、ゼータ電位、ｐＨメーターを使用した分散液ｐＨの測定などが含まれる。
【0101】
本開示はまた、カンナビノイドを用いて対象を治療する投与方法を提供し、該方法は、本明細書に開示されるリポソーム製剤のそのような治療を必要とする対象への投与を含む。
【0102】
上記を考慮して、本開示の文脈では、本明細書に開示される製剤またはリポソームによる治療に言及する場合、それは、疾患に関連する望ましくない症状を改善すること、そのような症状の発現をそれらが起こる前に予防すること、疾患の進行を遅らせること、症状の悪化を遅らせること、疾患の寛解期間の開始を増強すること、疾患の進行性慢性段階で引き起こされる不可逆的な損傷を遅らせること、進行性段階の開始を遅らせること、疾患の重症度を低下させるか、もしくは疾患を治癒させること、生存率、もしくは疾患からのさらに迅速な回復を改善すること、疾患の発生を予防すること、または上記のうちの２つ以上の組合せを包含すると理解されるべきである。
【0103】
本明細書で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」という形態は、文脈上他に明確に指示されない限り、単数および複数の言及を含む。例えば、用語「カンナビノイド」は、１つ以上のカンナビノイドを含む。
【0104】
さらに、本明細書で使用される場合、用語「含む」は、リポソームが、カンナビノイドおよび分配剤を含むが、生理学的に許容される担体および賦形剤ならびに他の薬剤などの他の要素を除外しないことを意味することを意図している。用語「から本質的になる」は、例えば、列挙された要素を含むが、カンナビノイドの送達に本質的な意義を有し得る他の要素を除外するリポソームを定義するために使用される。したがって、「からなる」は、そのような他の要素の微量を超える要素を除外することを意味するものとする。これらの移行用語の各々によって定義される実施形態は、本発明の範囲内である。
【0105】
さらに、例えば、リポソームを構成する要素、およびリポソームを含む製剤の量または範囲に言及する場合、すべての数値は、記載された値から（＋）または（－）最大２０％、時に最大１０％変化する近似値である。常に明示的に述べられているとは限らないが、すべての数値指定の前に用語「約」があることを理解されたい。
【0106】
ここで、本発明に従って実施された非限定的な例によって本発明を説明する。これらの例は、限定ではなく例示の性質であることを意図していることを理解されたい。上記の教示に照らして、これらの例の多くの修正および変更が明らかに可能である。したがって、添付の特許請求の範囲内で、本発明は、本明細書で以下に具体的に説明される以外に、無数の可能な方法で実施され得ることを理解されたい。
【0107】
実施形態の説明
例１－ＣＢＤリポソーム製剤
リポソームの調製および特性評価
材料
ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（ＨＰＣＤ）をｒｏｑｕｅｔｔｅから入手した
水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）および１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）をＬｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ（Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した
カンナビジオール（ＣＢＤ）をＴＨＣ Ｐｈａｒｍ（バッチ：ＣＢＤＡＰＩ１８０２）から入手した
無水エタノールをメルクから購入した
可溶化促進剤：ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）３００、プロピレングリコール（ＰＧ）、Ｔｗｅｅｎ ８０およびジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）をＭｅｒｃｋから購入し、ＣｒｅｍｏｐｈｏｒをＳｉｇｍａから入手した。
例１－ＣＢＤリポソーム製剤
リポソームの調製および特性評価
材料
ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（ＨＰＣＤ）をｒｏｑｕｅｔｔｅから入手した
水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）および１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）をＬｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ（Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した
カンナビジオール（ＣＢＤ）をＴＨＣ Ｐｈａｒｍ（バッチ：ＣＢＤＡＰＩ１８０２）から入手した
無水エタノールをメルクから購入した
可溶化促進剤：ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）３００、プロピレングリコール（ＰＧ）、Ｔｗｅｅｎ ８０およびジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）をＭｅｒｃｋから購入し、ＣｒｅｍｏｐｈｏｒをＳｉｇｍａから入手した。
【0108】
方法：
リポソーム調製
アシル鎖組成が異なる様々なタイプのホスファチジルコリンを使用し、試験した。これらには、コレステロールを含まないまたはコレステロールを含む（５または１０％）ＨＳＰＣ（大部分がステアロイル、Ｃ１８）、ＤＰＰＣジパルミトイル、Ｃ１６ ＤＭＰＣ（ジミリストイル、Ｃ１４）およびＤＯＰＣ（ジオレオイル、Ｃ１８：１）が含まれる。
リポソーム調製
アシル鎖組成が異なる様々なタイプのホスファチジルコリンを使用し、試験した。これらには、コレステロールを含まないまたはコレステロールを含む（５または１０％）ＨＳＰＣ（大部分がステアロイル、Ｃ１８）、ＤＰＰＣジパルミトイル、Ｃ１６ ＤＭＰＣ（ジミリストイル、Ｃ１４）およびＤＯＰＣ（ジオレオイル、Ｃ１８：１）が含まれる。
【0109】
ＤＯＰＣを含む製剤はあまり好ましくないリポソームを生成したため、これらをその後の調査から除外した。
【0110】
調製した様々なリポソームを表１に詳述する。
【0111】
製剤Ｆ１を以下のように調製した：ＨＳＰＣ（Ｓ ＰＣ－３、Ｌｉｐｏｉｄ、バッチ：５２５６００－２１８０６６２－０１／０４２）およびＣＢＤ（バッチ：ＣＢＤＡＰＩ１８０２）を秤量してバイアルに入れた。無水エタノール（Ｍｅｒｃｋ）をバイアルに加え、溶液が透明になるまで６５℃の水浴に入れた。次いで、１ｍｌの等張水溶液（例えばデキストロース５％）を水浴に入れた。脂質相が透明になったらすぐに、これを６５℃で３０分間撹拌しながら、加温した水に加えた。
【0112】
Ｆ１について調製したものと同様の脂質相を用いて、水相中にＣＢＤを含有する製剤を調製した。特定の水相の全成分を混合し、続いて、濃縮ＣＢＤのエタノール溶液（７００ｍｇ／ｍｌ）を加えることによって、水相を調製した。エタノール溶液を撹拌しながら、続いて場合によっては短時間加熱することによって、ゆっくりと加える。水相が透明になるか、または均一に分散するとすぐに、脂質相を６５℃でゆっくりと加え、撹拌を６５℃で３０分間継続する。
【0113】
放出アッセイ
２５％スクロース中２５％ウシ血清の存在下、３７℃でのインキュベーションの０、１時間（場合によっては）および２４時間後の時点で、リポソームからのＣＢＤの放出を決定した。各時点で、総ＣＢＤおよび遊離ＣＢＤを以下に記載されるように決定した。
２５％スクロース中２５％ウシ血清の存在下、３７℃でのインキュベーションの０、１時間（場合によっては）および２４時間後の時点で、リポソームからのＣＢＤの放出を決定した。各時点で、総ＣＢＤおよび遊離ＣＢＤを以下に記載されるように決定した。
【0114】
総ＣＢＤアッセイ
リポソームＣＢＤを２５％血清および２５％スクロースで２０倍希釈し、これをメタノールでさらに希釈し、ＨＰＬＣによるＣＢＤの検出のために当技術分野で公知の条件下でＨＰＬＣによって分析した。
リポソームＣＢＤを２５％血清および２５％スクロースで２０倍希釈し、これをメタノールでさらに希釈し、ＨＰＬＣによるＣＢＤの検出のために当技術分野で公知の条件下でＨＰＬＣによって分析した。
【0115】
遊離ＣＢＤアッセイ
リポソームＣＢＤを２５％血清および２５％スクロースで２０倍希釈した。この希釈物を遠心分離し、リポソームを透明相の上に浮遊させた。低透明相（遊離ＣＢＤ）をメタノールで希釈し、ＨＰＬＣによって分析した。
リポソームＣＢＤを２５％血清および２５％スクロースで２０倍希釈した。この希釈物を遠心分離し、リポソームを透明相の上に浮遊させた。低透明相（遊離ＣＢＤ）をメタノールで希釈し、ＨＰＬＣによって分析した。
【0116】
脂質濃度
改変Ｂａｒｔｌｅｔｔ法によって、場合によっては蒸発光散乱（ＥＬＳＤ）検出器を有するＨＰＬＣ法によって、脂質濃度を決定した。
改変Ｂａｒｔｌｅｔｔ法によって、場合によっては蒸発光散乱（ＥＬＳＤ）検出器を有するＨＰＬＣ法によって、脂質濃度を決定した。
【0117】
結果
脂質相にコレステロールを含有する製剤。
脂質相にコレステロールを含有するＣＢＤ製剤を調製した。ＣＢＤを脂質相に可溶化した。試験した全製剤の脂質相は１２５ｍｇ／ｍｌ（ＣＢＤを含む）であり、ＣＢＤは脂質相含有量の７０％モルであった。製剤には、コレステロールを含まない、ならびに５および１０％モルのコレステロールを含むＨＳＰＣおよびＤＭＰＣを含有させた。これらの製剤は、脂質相にのみＣＢＤを含有した（水相には含有せず）。これらの製剤を表１に記載する。
脂質相にコレステロールを含有する製剤。
脂質相にコレステロールを含有するＣＢＤ製剤を調製した。ＣＢＤを脂質相に可溶化した。試験した全製剤の脂質相は１２５ｍｇ／ｍｌ（ＣＢＤを含む）であり、ＣＢＤは脂質相含有量の７０％モルであった。製剤には、コレステロールを含まない、ならびに５および１０％モルのコレステロールを含むＨＳＰＣおよびＤＭＰＣを含有させた。これらの製剤は、脂質相にのみＣＢＤを含有した（水相には含有せず）。これらの製剤を表１に記載する。
【0118】
結果は、ＨＳＰＣが、ＤＭＰＣリポソームと比較してわずかに遅い放出プロファイルを示すことを示している。コレステロールはリポソームからのＣＢＤの放出を増加させ、この効果は、ＤＭＰＣの方が顕著であった。
【0119】
このため、脂質相（１２５ｍｇ／ｍｌの脂質相、７０％モルのＣＢＤ）中のＨＳＰＣ、および水相中のＣＢＤの可溶化または分散を可能にする異なる組成の水相を用いて、追加の製剤を調製した。
【0120】
表２は、ＨＰＣＤのみを含有する水相中にＣＢＤを有する２つのＣＢＤ製剤を示す。製剤は、Ｆ１製剤（表１に記載）と同様のローディング（Ｄ／Ｌ比に関して）および放出プロファイルをもたらした。これはおそらく、ＨＰＣＤ（８ｍｇ／ｍｌ）のみを含有する水相にロードすることができた低ＣＢＤ濃度の結果である。
【0121】
表３は、２１ｍｇ／ｍｌのＣＢＤの分散を可能にする、水相中にＨＰＣＤおよび界面活性剤（ｃｒｅｍｐｈｏｒ ＥＬおよびＴｗｅｅｎ ８０）を有するＣＢＤ製剤を記載する。これらの製剤は、Ｄ／Ｌ比を高めず、本発明者らの放出方法によって分離されなかったかなりの量の小型のリポソームをもたらしたため、それらの放出プロファイルを定義することができなかった。
【0122】
表４は、１４ｍｇ／ｍｌのＣＢＤ分散を可能にする、水相中にＨＰＣＤおよび２５％ＰＥＧ ３００を有する製剤を示す。ＨＰＣＤ含有量が異なる２つの製剤（Ａ３９およびＡ４２）は、Ｄ／Ｌ比を実質的に高め、放出プロファイルを遅くした。これらの製剤と、水相中にＣＢＤを含まない同じ水性組成を有するリポソームとを比較すると、Ｄ／Ｌ比がはるかに低くなり、放出プロファイルが速くなった。水性リザーバー内に実質的なＣＢＤ画分を有することが放出を減速させたことを実証する。
【0123】
表５は、２１ｍｇ／ｍｌのＣＢＤ分散を可能にする、水相中にＨＰＣＤおよび１０～１５％ＰＧを有するＣＢＤ製剤を記載する。各製剤について、ＣＢＤを含まない同じ水相組成を有する対照製剤も調製した。結果は、いずれの場合も、水相中にＣＢＤを有する製剤の方が放出が遅く、Ｄ／Ｌ比が対照よりも実質的に高い場合の方が放出が顕著であることを示した。
【0124】
束縛されるものではないが、本明細書に示されるデータから、共溶媒（分散剤）または界面活性剤を加えることによって可能にされる水相へのＣＢＤの添加が、リポソームからのＣＢＤの放出の遅延を助けることが明らかである。
【0125】
さらに、束縛されるものではないが、本明細書に示されるデータから、４％モルを超える量、例えば、５～１０％モルの量のコレステロールの存在下で脂質相にＣＢＤを加えると、リポソームからＣＢＤが迅速に放出されることが明らかである（表１を参照、水相はＤＤＷである）。
【0126】
さらに、束縛されるものではないが、本明細書に示されるデータから、ＣＢＤリポソームが水相のみのＣＢＤを用いて調製され、脂質相が脂質のみ、例えばＨＳＰＣ（ＣＢＤなし）のみから構成された場合も、リポソームからのＣＢＤの放出は迅速であった（２４時間後に７８％遊離）ことが明らかである。理論によって束縛されるものではないが、これは、脂質膜がＣＢＤまたはいくらかの量のコレステロールを含有しない場合、膜安定化の欠如の結果であり得る。
【0127】
脂質膜内のＣＢＤが膜を安定化し、それによって、リポソームからのＣＢＤの制御放出（持続）を可能にするという本明細書に開示される知見から生じ得る１つの結論。
【表1】
【表2】
【表3】
【表4】
【表5】
【0128】
例２－ＣＢＤ－ＨＳＡを含有するリポソーム
水相としてＣＢＤ－ＨＳＡを含有するリポソーム製剤を開発した（リポソーム－ＣＢＤ－ＨＳＡ）。この製剤では、ＣＢＤをバイアルに秤量し５％ＨＳＡ溶液を加えて５％でＣＢＤ分散させることによって水相を調製した。バイアルの壁に粒子が観察されない均質な懸濁液が得られるまで、分散液を４Ｃで少なくとも２日間撹拌した。この分散液を加温したＨＳＰＣ粉末に加え、６５℃で１５分間撹拌した。リポソーム結合ＣＢＤとＨＳＡ結合ＣＢＤとを区別することができる分析方法を開発した。懸濁液中のリポソームの体積は余分なリポソーム体積よりも低いが、ＣＢＤの大部分はリポソームに結合していることが見出された。以下の表６は、様々なリポソーム－ＣＢＤ－ＨＳＡ製剤内のリポソームＣＢＤ（％）を示す。したがって、リポソームおよびＨＳＡに対するＣＢＤの親和性を以下に詳述するように試験した。
水相としてＣＢＤ－ＨＳＡを含有するリポソーム製剤を開発した（リポソーム－ＣＢＤ－ＨＳＡ）。この製剤では、ＣＢＤをバイアルに秤量し５％ＨＳＡ溶液を加えて５％でＣＢＤ分散させることによって水相を調製した。バイアルの壁に粒子が観察されない均質な懸濁液が得られるまで、分散液を４Ｃで少なくとも２日間撹拌した。この分散液を加温したＨＳＰＣ粉末に加え、６５℃で１５分間撹拌した。リポソーム結合ＣＢＤとＨＳＡ結合ＣＢＤとを区別することができる分析方法を開発した。懸濁液中のリポソームの体積は余分なリポソーム体積よりも低いが、ＣＢＤの大部分はリポソームに結合していることが見出された。以下の表６は、様々なリポソーム－ＣＢＤ－ＨＳＡ製剤内のリポソームＣＢＤ（％）を示す。したがって、リポソームおよびＨＳＡに対するＣＢＤの親和性を以下に詳述するように試験した。
【0129】
２つの製剤を調製した：
・空のＭＬＶ（５％デキストロース中４０ｍｇ／ｍｌ ＨＳＰＣ）を含む、１：１の体積比のＣＢＤ－ＨＳＡ調製物
・ＨＳＡ溶液を含む、１：１の体積比のＦ１製剤（ＣＢＤは膜脂質内にのみ存在する）。
・空のＭＬＶ（５％デキストロース中４０ｍｇ／ｍｌ ＨＳＰＣ）を含む、１：１の体積比のＣＢＤ－ＨＳＡ調製物
・ＨＳＡ溶液を含む、１：１の体積比のＦ１製剤（ＣＢＤは膜脂質内にのみ存在する）。
【0130】
混合物を５０ｒｐｍで振盪しながら３７℃のインキュベーターに２時間入れた。結果を表７に示す。ＨＳＡとインキュベートしたＦ１製剤は、リポソームからＨＳＡに移された１％のみの総ＣＢＤを示した。空のＭＬＶとインキュベートしたＣＢＤ－ＨＳＡの場合、３５％のＣＢＤがリポソームに移され、脂質に対するＣＢＤのはるかに高い親和性が示された。これらの結果は、ＣＢＤが主にリポソーム性であることを示す、リポソーム－ＣＢＤ－ＨＳＡ製剤について得られた結果（表６）と一致していた。
【0131】
リポソームにＨＳＡを加えると、リポソーム内で高いＤ／Ｌモル比に達することが可能になった。
【表6】
【表7】
【0132】
５０％成体ウシ血清において、様々な製剤からのＣＢＤの放出を試験した。５０ｍｇの製剤を秤量してＨＰＬＣバイアルに入れ、９５０ｕｌの５０：５０の血清：デキストロース５％溶液を加えた。混合物をボルテックスし、３７Ｃおよび５０ｒｐｍで振盪するインキュベーターに２時間入れた。メタノールで２５倍希釈した後、混合物を総ＣＢＤ含有量について試験した。混合物の残りをエッペンドルフに移し、遠心分離し（３０分、１４，０００ｒｐｍ、４℃）、上相をメタノールで１０倍希釈し、ＨＰＬＣ分析した。脂質およびＣＢＤ含有量が異なるいくつかのリポソーム－ＣＢＤ－ＨＳＡ製剤のインビトロ放出を試験し、表８に記載した。インビトロ放出試験では、製剤内のＣＢＤ濃度が増加すると、放出が遅くなることが示された。
【表8】
【0133】
例３－ＣＢＤ製剤のインビボＰＫ試験
２つのインビボ試験を行って、様々なＣＢＤ製剤のＩＭ注射後の筋肉内の血漿プロファイルおよび残留ＣＢＤを試験した：第１の試験では４つの製剤を最大３日間試験し、第２の試験では４つの製剤を最大３週間試験した。各試験の詳細な説明は以下に見出される。
２つのインビボ試験を行って、様々なＣＢＤ製剤のＩＭ注射後の筋肉内の血漿プロファイルおよび残留ＣＢＤを試験した：第１の試験では４つの製剤を最大３日間試験し、第２の試験では４つの製剤を最大３週間試験した。各試験の詳細な説明は以下に見出される。
【0134】
第１の試験
製剤の調製および特性評価
製剤の調製に使用した材料に関する詳細を表９に要約する。製剤はいずれも、無菌調製を確実にするためにオートクレーブ装置を使用して生物学的フード内の無菌条件下で調製した。
ａ．ＰＧ中の遊離ＣＢＤ：ＣＢＤをＰＧ １ｇ当たり５０ｍｇの濃度で調製し、透明な溶液が得られるまでボルテックスした。
ｂ．Ｆ１：ＣＢＤがリポソームの膜リン脂質内でのみ可溶化される、ＣＢＤのリポソーム製剤：透明な溶液が得られるまで、ＣＢＤおよびＨＳＰＣを６５℃でエタノール中で一緒に可溶化した（脂質相）。脂質相を撹拌しながら６５℃の５％デキストロース溶液に加え、３０分間（６５℃で）撹拌したままにした。次いで、調製物の重量オスモル濃度が等張になるまで、得られた多層リポソーム（ＭＬＶ）製剤を５％デキストロース溶液を用いて洗浄した。
ｃ．Ｆ－ＨＰＣＤ－ＰＥＧ：ＣＢＤがリポソーム膜リン脂質内で可溶化され、可溶化剤、ＨＰＣＤおよびＰＥＧ ３００を使用するリポソーム内水相にも分散された、ＣＢＤのリポソーム製剤。透明な溶液が得られるまで、ＣＢＤおよびＨＳＰＣを６５℃でエタノール中で可溶化した（脂質相）。２７％（ｗ／ｗ）ＨＰＣＤおよび１０％（ｗ／ｗ）ＰＥＧ ３００を含有する溶液にＣＢＤのエタノール溶液を６５℃で加えることによって、水相を調製した。水相はほぼ透明であった。脂質相を撹拌しながら６５℃の水相に加え、３０分間（６５℃で）撹拌したままにした。次いで、調製物の重量オスモル濃度が等張になるまで、得られた製剤を５％デキストロース溶液を用いて洗浄した。
ｄ．リポソーム－ＣＢＤ－ＨＳＡ：ＣＢＤを５％ＨＳＡ溶液に最初に分散させた。この分散液を加温したＨＳＰＣに加え、６５℃で１５分間撹拌した。
製剤の調製および特性評価
製剤の調製に使用した材料に関する詳細を表９に要約する。製剤はいずれも、無菌調製を確実にするためにオートクレーブ装置を使用して生物学的フード内の無菌条件下で調製した。
ａ．ＰＧ中の遊離ＣＢＤ：ＣＢＤをＰＧ １ｇ当たり５０ｍｇの濃度で調製し、透明な溶液が得られるまでボルテックスした。
ｂ．Ｆ１：ＣＢＤがリポソームの膜リン脂質内でのみ可溶化される、ＣＢＤのリポソーム製剤：透明な溶液が得られるまで、ＣＢＤおよびＨＳＰＣを６５℃でエタノール中で一緒に可溶化した（脂質相）。脂質相を撹拌しながら６５℃の５％デキストロース溶液に加え、３０分間（６５℃で）撹拌したままにした。次いで、調製物の重量オスモル濃度が等張になるまで、得られた多層リポソーム（ＭＬＶ）製剤を５％デキストロース溶液を用いて洗浄した。
ｃ．Ｆ－ＨＰＣＤ－ＰＥＧ：ＣＢＤがリポソーム膜リン脂質内で可溶化され、可溶化剤、ＨＰＣＤおよびＰＥＧ ３００を使用するリポソーム内水相にも分散された、ＣＢＤのリポソーム製剤。透明な溶液が得られるまで、ＣＢＤおよびＨＳＰＣを６５℃でエタノール中で可溶化した（脂質相）。２７％（ｗ／ｗ）ＨＰＣＤおよび１０％（ｗ／ｗ）ＰＥＧ ３００を含有する溶液にＣＢＤのエタノール溶液を６５℃で加えることによって、水相を調製した。水相はほぼ透明であった。脂質相を撹拌しながら６５℃の水相に加え、３０分間（６５℃で）撹拌したままにした。次いで、調製物の重量オスモル濃度が等張になるまで、得られた製剤を５％デキストロース溶液を用いて洗浄した。
ｄ．リポソーム－ＣＢＤ－ＨＳＡ：ＣＢＤを５％ＨＳＡ溶液に最初に分散させた。この分散液を加温したＨＳＰＣに加え、６５℃で１５分間撹拌した。
【表9】
【0135】
製剤の特性評価
ＣＢＤに関するアッセイ
ＨＰＬＣ法によって、総ＣＢＤおよび遊離ＣＢＤの含有量を決定した。使用したクロマトグラフィー条件は、ドロナビノールに関するＵＳＰ法に基づいており、表１０に要約した。
ＣＢＤに関するアッセイ
ＨＰＬＣ法によって、総ＣＢＤおよび遊離ＣＢＤの含有量を決定した。使用したクロマトグラフィー条件は、ドロナビノールに関するＵＳＰ法に基づいており、表１０に要約した。
【0136】
分析のための試料調製は製剤ごとに異なり、以下に記載される。
・総ＣＢＤ濃度は、いずれの製剤についても同様であった。具体的には、１０～２０ｍｇの製剤を秤量して１０ｍｌメスフラスコに入れた。メタノールをラインまで加えた。ボルテックス後、試料を遠心分離し、上相を分析した。
・Ｆ１およびリポソームＣＢＤ－ＨＳＡでは、遊離ＣＢＤ含有量を試験した：２００μｌの製剤をエッペンドルフに入れ、４０℃、１４，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。次いで、透明な上相をメタノールで１０倍希釈し、続いてボルテックスおよび遠心分離（１４，０００ｒｐｍ、１０分、４０Ｃ）を行った。上相をＨＰＬＣ分析した。
・リポソームＣＢＤ－ＨＳＡ製剤では、アルブミン結合ＣＢＤを定量した：この方法は、リポソーム結合ＣＢＤとアルブミン結合ＣＢＤとの間の分離を可能にするために開発された。この目的のために、密度に基づく分離を可能にする等張性媒体を使用した。５０ｍｌのＤＤＷ（メスフラスコ）中で可溶化した１．５ｇのデキストロース（Ｓｉｇｍａ、Ｄ９４３４、バッチ１１９Ｋ００４２）および１０ｇのＦｉｃｏｌｌ ４００（Ｓｉｇｍａ、Ｆ－４３７５、ロット２９Ｃ－００９５）を用いて媒体を調製した。媒体の重量オスモル濃度は２９０ｍＯｓｍ／ｋｇであった。５０ｍｇの製剤をエッペンドルフチューブに入れ、１．５ｍｌの媒体を加えた。チューブをボルテックスし、次いで遠心分離した（４℃、３０分、１４，０００ｒｐｍ）。チューブの上相を切り取り、沈殿物を含有する下部に残っている液体をいずれも除去した。沈殿物を別のエッペンドルフに移し、１ｍｌのメタノールを加えた。ボルテックスおよび遠心分離後、上相をメタノールで１０倍希釈した。
・Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ：エタノール中のＩＶ製剤を、総ＣＢＤ濃度について上記のように総含有量について試験した。生理食塩水で希釈した後の外観を調査して、注射のための製剤挙動を追跡し、沈殿がないことを確実にした。製剤を生理食塩水で１０倍希釈し、１時間後（製剤が調製後に注射されるのに許容される時間）、外観を記録した。
・総ＣＢＤ濃度は、いずれの製剤についても同様であった。具体的には、１０～２０ｍｇの製剤を秤量して１０ｍｌメスフラスコに入れた。メタノールをラインまで加えた。ボルテックス後、試料を遠心分離し、上相を分析した。
・Ｆ１およびリポソームＣＢＤ－ＨＳＡでは、遊離ＣＢＤ含有量を試験した：２００μｌの製剤をエッペンドルフに入れ、４０℃、１４，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。次いで、透明な上相をメタノールで１０倍希釈し、続いてボルテックスおよび遠心分離（１４，０００ｒｐｍ、１０分、４０Ｃ）を行った。上相をＨＰＬＣ分析した。
・リポソームＣＢＤ－ＨＳＡ製剤では、アルブミン結合ＣＢＤを定量した：この方法は、リポソーム結合ＣＢＤとアルブミン結合ＣＢＤとの間の分離を可能にするために開発された。この目的のために、密度に基づく分離を可能にする等張性媒体を使用した。５０ｍｌのＤＤＷ（メスフラスコ）中で可溶化した１．５ｇのデキストロース（Ｓｉｇｍａ、Ｄ９４３４、バッチ１１９Ｋ００４２）および１０ｇのＦｉｃｏｌｌ ４００（Ｓｉｇｍａ、Ｆ－４３７５、ロット２９Ｃ－００９５）を用いて媒体を調製した。媒体の重量オスモル濃度は２９０ｍＯｓｍ／ｋｇであった。５０ｍｇの製剤をエッペンドルフチューブに入れ、１．５ｍｌの媒体を加えた。チューブをボルテックスし、次いで遠心分離した（４℃、３０分、１４，０００ｒｐｍ）。チューブの上相を切り取り、沈殿物を含有する下部に残っている液体をいずれも除去した。沈殿物を別のエッペンドルフに移し、１ｍｌのメタノールを加えた。ボルテックスおよび遠心分離後、上相をメタノールで１０倍希釈した。
・Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ：エタノール中のＩＶ製剤を、総ＣＢＤ濃度について上記のように総含有量について試験した。生理食塩水で希釈した後の外観を調査して、注射のための製剤挙動を追跡し、沈殿がないことを確実にした。製剤を生理食塩水で１０倍希釈し、１時間後（製剤が調製後に注射されるのに許容される時間）、外観を記録した。
【表10】
【0137】
放出アッセイ
５０％成体ウシ血清において、様々な製剤からのＣＢＤの放出を試験した。５０ｍｇの製剤を秤量してＨＰＬＣバイアルに入れ、９５０ｕｌの５０：５０の血清：デキストロース５％溶液を加えた。混合物をボルテックスし、３７Ｃおよび５０ｒｐｍで振盪するインキュベーターに２時間入れた。メタノールで２５倍希釈した後、混合物を総ＣＢＤ含有量について試験した。混合物の残りをエッペンドルフに移し、遠心分離し（３０分、１４，０００ｒｐｍ、４℃）、上相をメタノールで１０倍希釈し、ＨＰＬＣ分析した。
５０％成体ウシ血清において、様々な製剤からのＣＢＤの放出を試験した。５０ｍｇの製剤を秤量してＨＰＬＣバイアルに入れ、９５０ｕｌの５０：５０の血清：デキストロース５％溶液を加えた。混合物をボルテックスし、３７Ｃおよび５０ｒｐｍで振盪するインキュベーターに２時間入れた。メタノールで２５倍希釈した後、混合物を総ＣＢＤ含有量について試験した。混合物の残りをエッペンドルフに移し、遠心分離し（３０分、１４，０００ｒｐｍ、４℃）、上相をメタノールで１０倍希釈し、ＨＰＬＣ分析した。
【0138】
粒径測定
Ｃｏｕｌｔｅｒ ＬＳ １３０を使用して粒径を決定した。
Ｃｏｕｌｔｅｒ ＬＳ １３０を使用して粒径を決定した。
【0139】
重量オスモル濃度
Ａｄｖａｎｃｅｄ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、Ｍｏｄｅｌ ３３２０浸透圧計を使用して、凝固点法によって、重量オスモル濃度を測定した。
Ａｄｖａｎｃｅｄ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、Ｍｏｄｅｌ ３３２０浸透圧計を使用して、凝固点法によって、重量オスモル濃度を測定した。
【0140】
脂質濃度
ＨＰＬＣ／ＥＬＳＤ法によって脂質濃度を決定した。
ＨＰＬＣ／ＥＬＳＤ法によって脂質濃度を決定した。
【0141】
顕微鏡観察
光学顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ ＳＮ ２２１２０９）下で製剤を観察した。ほとんど視野が観察されず、各製剤について代表的な写真を撮影した。
光学顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ ＳＮ ２２１２０９）下で製剤を観察した。ほとんど視野が観察されず、各製剤について代表的な写真を撮影した。
【0142】
注入性
１ｍｌシリンジに０．３～０．５ｍｌの製剤を充填した。２５Ｇ針をシリンジに接続し、固着していない製剤の注入量を決定した。このプロセスを３回繰り返した。
１ｍｌシリンジに０．３～０．５ｍｌの製剤を充填した。２５Ｇ針をシリンジに接続し、固着していない製剤の注入量を決定した。このプロセスを３回繰り返した。
【0143】
無菌性
Ｈａｄａｓｓａｈの微生物学ユニットによって、各製剤から１つのバイアルを試験した。各バイアルからのアリコートを血液寒天およびチョコレート寒天上に播種し、室温および３７℃のインキュベーターに置いた。
Ｈａｄａｓｓａｈの微生物学ユニットによって、各製剤から１つのバイアルを試験した。各バイアルからのアリコートを血液寒天およびチョコレート寒天上に播種し、室温および３７℃のインキュベーターに置いた。
【0144】
インビボ試験プロトコル
１２週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス合計３６匹に、全製剤について約５０μｌ（１注射部位で約２．５ｍｌ／ｋｇ）の注射体積で各製剤の単回用量をＩＭ注射した（マウス９匹／群）。ＣＢＤ濃度が低いＦ１を、約１００μｌの総注射体積で２つの注射部位に注射した。投与される正確な用量を確実にするために、注射の前後にシリンジを秤量し、実際の注射量を記録した。
１２週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス合計３６匹に、全製剤について約５０μｌ（１注射部位で約２．５ｍｌ／ｋｇ）の注射体積で各製剤の単回用量をＩＭ注射した（マウス９匹／群）。ＣＢＤ濃度が低いＦ１を、約１００μｌの総注射体積で２つの注射部位に注射した。投与される正確な用量を確実にするために、注射の前後にシリンジを秤量し、実際の注射量を記録した。
【0145】
以下に詳述する時点で、各群のマウス３匹をＣＯ２を用いて安楽死させ、標識した０．５ｍｌ Ｋ３ＥＤＴＡ採血管（Ｍｉｎｉ Ｃｏｌｌｅｃｔ、Ｇｒｅｉｎｅｒ－ｂｉｏ－ｏｎｅ，Ａｕｓｔｒｉａ）内に後眼窩洞から末梢血を直ちに採取した。血液を２０００ｇで１０分間遠心分離した後、血漿を抽出し、標識したチューブに採取し、採取直後に－２０℃で凍結した。次いで、試料を分析まで－８０℃で保存した。
【0146】
採血後、予め秤量した１５ｍｌチューブに大腿四頭筋を採取した。
【0147】
血液および筋肉の採取の時点は、注射後２時間、２４時間および７２時間であった。
【0148】
生物分析アッセイ
血漿中のＣＢＤに関するアッセイ
内部標準（ＩＳ）として使用したカンナビゲロール（ＣＢＧ、メタノール中１ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ、カタログＣ－１４１－１）をスパイクし、続いて血漿をアセトニトリルで５倍希釈した血漿試料からＣＢＤを抽出した。激しくボルテックスした後、遠心分離し、上相を分析した。試料中の最終ＩＳ濃度は１００ｎｇ／ｍｌであった。
血漿中のＣＢＤに関するアッセイ
内部標準（ＩＳ）として使用したカンナビゲロール（ＣＢＧ、メタノール中１ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ、カタログＣ－１４１－１）をスパイクし、続いて血漿をアセトニトリルで５倍希釈した血漿試料からＣＢＤを抽出した。激しくボルテックスした後、遠心分離し、上相を分析した。試料中の最終ＩＳ濃度は１００ｎｇ／ｍｌであった。
【0149】
ＬＣＭＳ法によって血漿抽出物を分析した。具体的には、Ｓｈｉｍａｄｚｕ（Ｋｙｏｔｏ，Ｊａｐａｎ）ＵＨＰＬＣシステムと組み合わせたＳｃｉｅｘ（Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）Ｔｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄ（商標）５５００質量分析計を用いてＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行った。１００ｎｇ／ｍｌのＩＳを有する１～１，０００ｎｇ／ｍｌの範囲での血漿中のＣＢＤの検量線に基づいて濃度を計算した。
【0150】
血漿中の検量線を作成するためのＣＢＤスパイク溶液をアセトニトリル中で調製した。ＣＢＧをメタノール中で調製した。
【0151】
筋肉（注射部位）内のＣＢＤに関するアッセイ
筋肉を外科的に除去し、その重量を記録した。その後、２ｍｌの１５％コラゲナーゼ溶液（Ｓｉｇｍａ、Ｃ７６５７）を加え、チューブを３７℃で一晩インキュベートした。インキュベーション後、８ｍｌのアセトニトリルを加え、ボルテックスし、遠心分離した。上相をＨＰＬＣ分析した。クロマトグラフィー条件を表１０に記載した。
筋肉を外科的に除去し、その重量を記録した。その後、２ｍｌの１５％コラゲナーゼ溶液（Ｓｉｇｍａ、Ｃ７６５７）を加え、チューブを３７℃で一晩インキュベートした。インキュベーション後、８ｍｌのアセトニトリルを加え、ボルテックスし、遠心分離した。上相をＨＰＬＣ分析した。クロマトグラフィー条件を表１０に記載した。
【0152】
アセトニトリル中のＣＢＤの検量線に基づいて、各筋肉内のＣＢＤの濃度を計算した。
【0153】
ＣＢＤ製剤を筋肉にスパイクした後、各製剤について、アセトニトリルにスパイクした場合と比較して、筋肉からのＣＢＤの回収を決定した。
【0154】
結果
総ＣＢＤおよびＨＳＰＣ含有量ならびにそれらのモル比、粒径、および顕微鏡における外観について、製剤を特性評価した。３０ｍｇ／ｇ ＣＢＤ含有量を有するＦ１を除いて、いずれの製剤でもＣＢＤ濃度は５０～６０ｍｇ／ｇの範囲であった。これらの結果を表１１に要約する。
総ＣＢＤおよびＨＳＰＣ含有量ならびにそれらのモル比、粒径、および顕微鏡における外観について、製剤を特性評価した。３０ｍｇ／ｇ ＣＢＤ含有量を有するＦ１を除いて、いずれの製剤でもＣＢＤ濃度は５０～６０ｍｇ／ｇの範囲であった。これらの結果を表１１に要約する。
【0155】
調製した製剤をマウスにＩＭ注射した。注射の前後にシリンジ重量を記録して、注射用量の量を正確に計算した。
【0156】
表１２は、得られた血漿濃度および筋肉濃度を要約している。この試験では、ＣＢＤが、７２時間超にわたって注射部位（筋肉）で保持されることが明らかに示された。また、この間ずっと、筋肉内のデポーは、使用される製剤に依存する速度でＣＢＤを血漿に放出している。
【表11】
【表12-1】
【表12-2】
【0157】
第２の試験
製剤の調製および特性評価
材料および方法
材料
製剤の調製に使用した材料に関する詳細を表１３に要約する。
製剤の調製および特性評価
材料および方法
材料
製剤の調製に使用した材料に関する詳細を表１３に要約する。
【表13】
【0158】
方法
製剤の調製
製剤はいずれも、無菌調製を確実にするためにオートクレーブ装置を使用して生物学的フード内の無菌条件下で調製した。３つの製剤型を筋肉内（ＩＭ）薬物動態（ＰＫ）試験に使用した。
製剤の調製
製剤はいずれも、無菌調製を確実にするためにオートクレーブ装置を使用して生物学的フード内の無菌条件下で調製した。３つの製剤型を筋肉内（ＩＭ）薬物動態（ＰＫ）試験に使用した。
【0159】
ＣＴＲＬ－ＰＧ：プロピレングリコール（ＰＧ）中で可溶化したＣＢＤの対照製剤。ＣＢＤを５０ｍｇ／ｇ ＰＧの濃度で調製し、透明な溶液が得られるまでボルテックスした。
【0160】
Ｆ１：ＣＢＤがリポソームの膜リン脂質内でのみ可溶化される、ＣＢＤのリポソーム製剤。透明な溶液が得られるまで、ＣＢＤおよびＨＳＰＣを６５℃でエタノール中で一緒に可溶化した（脂質相）。脂質相を撹拌しながら６５℃の５％デキストロース溶液に加え、３０分間（６５℃で）撹拌したままにした。次いで、調製物の重量オスモル濃度が等張になるまで、得られた多層リポソーム（ＭＬＶ）製剤を５％デキストロース溶液を用いて洗浄した。
【0161】
リポソーム－ＣＢＤ－ＨＳＡ：ＣＢＤを最初にＨＳＡに分散させ、続いてＣＢＤ－ＨＳＡをリポソームに受動的に封入した、ＣＢＤのリポソーム製剤。ＣＢＤを５％ＨＳＡ溶液に最初に分散させた。この分散液を加温したＨＳＰＣに加え、６５℃で１５分間撹拌した。
【0162】
ＩＶ製剤：ＩＶ投与に使用した製剤は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ：エタノール５０：５０溶液中で可溶化した１０ｍｇ／ｇ ＣＢＤ製剤であった。この製剤を注射前に生理食塩水で１０倍希釈して、１ｍｇ／ｍｌの希釈後濃度を得た。希釈製剤を調製後１時間以内に使用した。
【0163】
以下では、製剤は、常に５０ｍｇのタンパク質を含有する溶液１ｍｌ当たりのＣＢＤ量によって定義される。したがって、例えば、「リポソームＣＢＤ／ＨＳＡ ５０ｍｇ／ｍｌ」は、５０ｍｇのＣＢＤと５０ｍｇのＨＳＡとを含むリポソーム製剤を示す。
【0164】
製剤の特性評価－第１の試験について記載の通り
インビボ試験プロトコル
ＩＶ投与
１２週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス合計１８匹に、ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ：エタノール中１０ｍｇ／ｋｇ ＣＢＤ製剤の単回用量をＩＶ注射した。
インビボ試験プロトコル
ＩＶ投与
１２週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス合計１８匹に、ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ：エタノール中１０ｍｇ／ｋｇ ＣＢＤ製剤の単回用量をＩＶ注射した。
【0165】
以下に詳述する時点で、マウス３匹をＣＯ２を用いて安楽死させ、標識した０．５ｍｌ Ｋ３ ＥＤＴＡ採血管（Ｍｉｎｉ Ｃｏｌｌｅｃｔ、Ｇｒｅｉｎｅｒ－ｂｉｏ－ｏｎｅ，Ａｕｓｔｒｉａ）内に後眼窩洞から末梢血を直ちに採取した。血液を２０００ｘｇで１０分間遠心分離した後、血漿を抽出し、標識したチューブに採取し、採取直後に－２０℃で凍結した。次いで、試料を分析まで－８０℃で保存した。
【0166】
採血の時点：２分、１時間、４時間、８時間、２４時間および４８時間。
【0167】
ＩＭ投与
１２週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス合計３６匹に、ＩＭ製剤の単回用量をＩＭ注射した。１製剤当たりマウス９匹。注射の前後にシリンジを秤量して、正確な体積、したがって各マウスが投与された用量の正確な記録を可能にした。各群の注射体積および推定用量に関する詳細を表１４に要約する。
１２週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス合計３６匹に、ＩＭ製剤の単回用量をＩＭ注射した。１製剤当たりマウス９匹。注射の前後にシリンジを秤量して、正確な体積、したがって各マウスが投与された用量の正確な記録を可能にした。各群の注射体積および推定用量に関する詳細を表１４に要約する。
【0168】
マウス２匹に製剤を注射せず、経時的な体重（ＢＷ）変化のための対照として使用した。
【0169】
以下に詳述する時点で、各群のマウス３匹をＣＯ２を用いて安楽死させ、標識した０．５ｍｌ Ｋ３ＥＤＴＡ採血管（Ｍｉｎｉ Ｃｏｌｌｅｃｔ、Ｇｒｅｉｎｅｒ－ｂｉｏ－ｏｎｅ，Ａｕｓｔｒｉａ）内に後眼窩洞から末梢血を直ちに採取した。血液を２０００ｘｇで１０分間遠心分離した後、血漿を抽出し、標識したチューブに採取し、採取直後に－２０℃で凍結した。次いで、試料を分析まで－８０℃で保存した。
【0170】
採血後、予め秤量した１５ｍｌチューブに大腿四頭筋を採取した。
【0171】
採血の時点：注射後７２時間、１週間および３週間。
【0172】
投与前および安楽死前にマウスの体重を記録した。３週間の時点で殺処分したマウスも、投与の２週間後に計量した。
【表14】
【0173】
結果
本例は、ＩＭ投与またはＩＶ投与（文献に基づいて、いくつかの動物モデル１～３で有効であった１２ｍｇ／ｋｇの投与用量）後の３つの粒子ベースのＣＢＤ製剤対ＣＢＤのプロピレングリコール（ＰＧ）溶液の薬物動態プロファイルを定義した。
本例は、ＩＭ投与またはＩＶ投与（文献に基づいて、いくつかの動物モデル１～３で有効であった１２ｍｇ／ｋｇの投与用量）後の３つの粒子ベースのＣＢＤ製剤対ＣＢＤのプロピレングリコール（ＰＧ）溶液の薬物動態プロファイルを定義した。
【0174】
製剤
６５℃でＣＢＤ－ＨＳＡ分散液を用いてＨＳＰＣを水和させることによって、リポソームＣＢＤ－ＨＳＡ製剤を調製した。得られたリポソームは、顕微鏡画像によって観察することができるように球状で均一であった（図１Ｂ～図１Ｃ）。
６５℃でＣＢＤ－ＨＳＡ分散液を用いてＨＳＰＣを水和させることによって、リポソームＣＢＤ－ＨＳＡ製剤を調製した。得られたリポソームは、顕微鏡画像によって観察することができるように球状で均一であった（図１Ｂ～図１Ｃ）。
【0175】
リポソームの平均直径は、５０ｍｇ／ｍｌ製剤については８．１μｍであり、１００ｍｇ／ｍｌ製剤については６．７μｍであった。
【0176】
製剤内のＣＢＤ濃度は、（計算に基づく）予測濃度であった。１００ｍｇ／ｍｌ製剤は、３．０５という高いモル薬物対脂質（Ｄ／Ｌ）比を示した。これらの製剤内のＣＢＤは、リポソームＣＢＤ（膜および内部水相の両方）と、リポソーム外のアルブミン（ＣＢＤ－ＨＳＡ）との間に分布しているように思われた。
【0177】
製剤の特性評価を表１５に示し、粒径を表１６に要約する。
【表15】
【0178】
全製剤が無菌であることも見出されたこと、すなわち、試験した製剤のいずれにも微生物増殖が検出されなかったことに留意されたい。
【0179】
ＩＶ投与用のＣｒｅｍｏｐｈｏｒ：エタノール中のＣＢＤ製剤も特性評価した。濃縮物中のＣＢＤの濃度は、１１．７（ｍｇ／ｍｌ）であった。生理食塩水で希釈した後、溶液は少なくとも１時間透明であった。
【表16】
【0180】
これらの製剤内のリポソーム（膜およびリポソーム内コアの両方）とＣＢＤ－ＨＳＡとの間のＣＢＤの分布を決定し、表１７に要約する。
【表17】
【0181】
表１７は、リポソーム体積はリポソーム外体積よりも低かったが、ＣＢＤの大部分がリポソーム性であり（８６～９１％）、比較的小さな画分がリポソーム外のＨＳＡに結合した（９～１４％）ことを示す。したがって、ＨＳＡに結合したＣＢＤの大部分がリポソーム形成脂質に移されたと考えられた。この観察結果は、例２の表６に記載されるＨＳＡと脂質との間のＣＢＤの分配に合致した。
【0182】
５０％血清の存在下で２時間インキュベートした後、遊離ＣＢＤ濃度は、５０ｍｇ／ｍｌ調製物および１００ｍｇ／ｍｌ調製物では３３および５３ｍｇ／ｍｌであり、７０および５７％の放出（１００－結合（％）＝放出（％））を占めた。この放出速度は、Ｆ１リポソームについて得られた速度に近かった。Ｆ１は、ＣＢＤが膜脂質によって可溶化され、おそらくリポソーム膜にのみ位置するリポソーム製剤であった。この製剤内のＣＢＤ濃度は、製剤からのエタノールの除去に必要な洗浄工程に起因して、他の製剤よりも低い２１．３ｍｇ／ｍｌであった。顕微鏡下でのＦ１の外観は、互いに比較的離れた小さな丸い粒子を示した（図１Ａ）。平均直径は９．２μｍであった（表１６）。血清中の放出は４９％であり、リポソーム－ＨＳＡ製剤の放出と同様であった（表１５）。
【0183】
使用した参照ＩＭ製剤は、ＣＢＤのプロピレングリコール溶液であった。追加の参照には、１２ｍｇ／ｇ用量（注射前に生理食塩水で希釈したＣｒｅｍｏｐｈｏｒｅ：エタノール製剤）でＩＶ投与したマウスの群を含めた。
【0184】
ＰＫプロファイル
１２ｍｇ／ｋｇ ＣＢＤ用量のＩＶ投与後に得られたＰＫプロファイルを表１８に要約する。
１２ｍｇ／ｋｇ ＣＢＤ用量のＩＶ投与後に得られたＰＫプロファイルを表１８に要約する。
【表18】
【0185】
表１８は、ＣＢＤ濃度が、投与の５分後の８，８５６ｎｇ／ｍｌから８時間後の９．５ｎｇ／ｍｌまで急速に低下したことを示す。後期時点（２４時間および４８時間）では、ＣＢＤ濃度は検出限界未満（ＢＬＯＤ）であった。
【0186】
【0187】
表１９Ａ～表１９Ｂおよび図２Ａは、全ＩＭ製剤の投与後、および投与後３週間までの血漿濃度が、投与後１～８時間に得られたＩＶプロファイルの範囲内であったことを示す。これは、製剤のＩＭ注射による持続送達を意味する。図２Ｂはまた、第２の試験で試験した同じ製剤に関して第１の試験（図中で「以前の試験」と呼ばれる）からのＰＫデータを含むが、Ｔ＝２時間および２４時間の時点からのＰＫデータを含むため、ＩＶ投与またはＩＭ投与後のＣＢＤ血漿プロファイルの完全な概要を提供する。
【0188】
興味深いことに、ＩＶ治療用量のＣＢＤのＩＶ投与後、投与直後に高レベルのＣＢＤ血漿が得られるが、血漿レベルは数時間以内に低下する。しかし、高ＣＢＤ用量のＩＭ投与では、血漿ＣＢＤの初期レベルはＩＶ用量のものと同様であり（例えば２時間後）、次いで、レベルは、全ＩＭ製剤について、少なくとも３週間の期間内に本質的に高く維持される。
【0189】
さらに、血漿レベルの低下は非常に遅く、全製剤について、３週間にわたって得られた低下は１桁未満であった。ＩＶ製剤の急速な低下と比較して、この緩やかな低下は、ＩＭプロファイルの最終勾配が排出依存性ではなく、むしろ吸収依存性であることを実証しており、製剤が、この長期間にわたって筋肉からＣＢＤを連続的に放出していることを示している。
【0190】
表２０は、各マウスに投与した最初のＣＢＤと比較した筋肉内のＣＢＤの残留含有量を要約し、図３Ａ～図３Ｂは、最初に投与したＣＢＤと比較した１群当たりの筋肉から放出された平均ＣＢＤを示す。
【表21-1】
【表21-2】
【0191】
１週間の時点で、高用量群では、比較的多くの放出を示す群間に差が見られた。これらの差は３週間の時点では見られなかった。筋肉から放出されたＣＢＤの量を投与からの日数に対して正規化して、１日当たりの放出されたＣＢＤの量、したがって１日当たりの循環に到達したＣＢＤの用量を推定した（マウス２０ｇと仮定）。血漿レベルをこの推定１日用量に対して正規化した場合、平均正規化値は群間で同様であり、１．７～４．５ｎｇ／ｍｌ／ｍｇ／ｋｇの範囲であった。これらの値は、投与後４～８時間後に得られたＩＶ値と同様であり（表１８）、血漿濃度が、筋肉から放出されるＣＢＤに依存し、したがって、製剤によって制御され得ることを実証する。％ＣＢＤ放出データから、各製剤について、筋肉内のＣＢＤリザーバーを計算してもよい。遊離ＣＢＤおよびリポソーム製剤は、３週間の時点でＣＢＤの大部分を放出した（リポソームＣＢＤ－ＨＳＡ １００ｍｇ／ｍｌ、３週間について、解明できない低い値を含まず）。
【表22】
【0192】
ＩＶ投与およびＩＭ投与の両方について薬物動態分析を行った。表２１は、得られたＩＶ ＰＫパラメーターを示す。ＣＢＤの半減期は１．６８時間と急速であり、用量に対して正規化されたＡＵＣでの曝露は４１７時間＊ｎｇ／ｍｌ／ｍｇ／ｋｇであった。第１の試験中にも注射された３つの製剤について、ＩＭ投与後の薬物動態分析を行い、各製剤について５つの時点を可能にした（以前の試験からの２、２４および７２時間ならびに現試験からの１および３週間）。組み合わせたデータセットのＰＫ分析は表２２に見出される。Ｆ１、およびＰＧ中の遊離ＣＢＤは、最も高いＡＵＣをもたらした。これは、これらの２つの群について、筋肉内のＣＢＤの大部分が３週間の期間までに放出され（それぞれ７０および８４％、図３Ｂ）、ＩＶ注射について得られた用量値と同様の用量値に正規化されたＡＵＣが得られた（それぞれ３８８および２９３時間＊ｎｇ／ｍｌ／ｍｇ／ｋｇ）という知見に合致している。リポソーム－ＣＢＤ－ＨＳＡ ５０ｍｇ／ｍｌ製剤の正規化されたＡＵＣ値はさらに低く（１６７時間＊ｎｇ／ｍｌ／ｍｇ／ｋｇ）、この製剤について得られた筋肉からの比較的低い放出（％）に対応した（それぞれ６８％、図３Ｂ）。
【表23】
【0193】
考察
１２ｍｇ／ｋｇ用量のＩＶ投与後のＰＫプロファイルと、ＩＭ経路によって投与されたＣＢＤの長時間作用型製剤の４つの製剤とを比較した。ＩＭ注射製剤の血漿プロファイルは、注射後少なくとも３週間はＩＶ血漿プロファイルの範囲内の血漿レベルを示した。リポソーム－ＣＢＤ－ＨＳＡ製剤およびＦ１製剤は、遊離ＣＢＤ群の筋肉内に残った１４％と比較して、注射用量の≧３０％を含有した。ＩＭ製剤のＣＢＤ血漿レベルがＩＶ有効用量について観察されたものと同様の血漿濃度を維持したという事実は、これらの製剤がインビボで持続したＣＢＤ効果を可能にし得ることを示唆している。ＰＫプロファイルの差は、特定の所望の放出プロファイルのための好ましい製剤を選択的に設計することを可能にする。
１２ｍｇ／ｋｇ用量のＩＶ投与後のＰＫプロファイルと、ＩＭ経路によって投与されたＣＢＤの長時間作用型製剤の４つの製剤とを比較した。ＩＭ注射製剤の血漿プロファイルは、注射後少なくとも３週間はＩＶ血漿プロファイルの範囲内の血漿レベルを示した。リポソーム－ＣＢＤ－ＨＳＡ製剤およびＦ１製剤は、遊離ＣＢＤ群の筋肉内に残った１４％と比較して、注射用量の≧３０％を含有した。ＩＭ製剤のＣＢＤ血漿レベルがＩＶ有効用量について観察されたものと同様の血漿濃度を維持したという事実は、これらの製剤がインビボで持続したＣＢＤ効果を可能にし得ることを示唆している。ＰＫプロファイルの差は、特定の所望の放出プロファイルのための好ましい製剤を選択的に設計することを可能にする。
【0194】
例４－ＤＭＰＣ／ＤＰＰＣ－ＣＢＤリポソームの調製
４５：５５のモル比のＤＭＰＣ：ＤＰＰＣ中のＣＢＤのリポソーム製剤を調製した。
４５：５５のモル比のＤＭＰＣ：ＤＰＰＣ中のＣＢＤのリポソーム製剤を調製した。
【0195】
材料：
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）：Ｌｉｐｏｉｄ、カタログ番号５５６２００（ロット：５５６２００－２１９０３２９－０１）
ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）：Ｌｉｐｏｉｄ カタログ番号５５６３００（ロット：５５６３００－２１７０１４９－０１）
ＣＢＤ：ＴＨＣ Ｐｈａｒｍａ
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）：Ｌｉｐｏｉｄ、カタログ番号５５６２００（ロット：５５６２００－２１９０３２９－０１）
ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）：Ｌｉｐｏｉｄ カタログ番号５５６３００（ロット：５５６３００－２１７０１４９－０１）
ＣＢＤ：ＴＨＣ Ｐｈａｒｍａ
【0196】
結果：
形成されたリポソームは、４５：５５のモル比のＤＭＰＣ：ＤＰＰＣの組合せを含んでいた。脂質相組成を表２３に詳述する。
形成されたリポソームは、４５：５５のモル比のＤＭＰＣ：ＤＰＰＣの組合せを含んでいた。脂質相組成を表２３に詳述する。
【表24】
【0197】
具体的には、この調製物の水相として、ｐＨ６．５のヒスチジン（０．１５５％ｗ／ｖ）－マンニトール（４％ｗ／ｖ）緩衝液（ＨＭＢ）を使用した。脂質相および水相を５５℃で予熱した。次いで、脂質相を水相に加え、５５℃で１５分間撹拌した。４℃での遠心分離によるヒスチジンマンニトール緩衝液を用いた４サイクルの洗浄後にエタノールを製剤から除去した。
【0198】
図４は、顕微鏡（倍率２００倍）による製剤の外観を示す。リポソームの平均サイズは５．５５μｍであり、総ＣＢＤ濃度は２５．３ｍｇ／ｍｌであった。
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【国際調査報告】