特表2022-551680Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１およびその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-12-13
(54)【発明の名称】Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１およびその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 1/20 20060101AFI20221206BHJP
A61K 35/745 20150101ALI20221206BHJP
A61K 35/747 20150101ALI20221206BHJP
A61K 35/744 20150101ALI20221206BHJP
A61K 35/74 20150101ALI20221206BHJP
A61K 36/06 20060101ALI20221206BHJP
A61K 9/20 20060101ALI20221206BHJP
A61K 9/14 20060101ALI20221206BHJP
A61K 9/48 20060101ALI20221206BHJP
A61K 9/16 20060101ALI20221206BHJP
A61K 9/28 20060101ALI20221206BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20221206BHJP
A61P 3/02 20060101ALI20221206BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20221206BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20221206BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20221206BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20221206BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20221206BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20221206BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20221206BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20221206BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20221206BHJP
A61P 31/16 20060101ALI20221206BHJP
A61P 13/02 20060101ALI20221206BHJP
A61P 15/02 20060101ALI20221206BHJP
A61P 15/00 20060101ALI20221206BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20221206BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20221206BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20221206BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20221206BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20221206BHJP
A23L 33/135 20160101ALI20221206BHJP
A23C 9/127 20060101ALI20221206BHJP
A23C 19/032 20060101ALI20221206BHJP
A23L 2/52 20060101ALI20221206BHJP
A23L 2/38 20210101ALI20221206BHJP
【ＦＩ】
C12N1/20 A
A61K35/745
A61K35/747
A61K35/744
A61K35/74
A61K36/06
A61K9/20
A61K9/14
A61K9/48
A61K9/16
A61K9/28
A61K9/08
A61P3/02
A61K35/74 G
A61P29/00
A61P37/02
A61P31/12
A61P31/04
A61P37/08
A61P27/02
A61P17/00
A61P11/00
A61P1/00
A61P31/16
A61P13/02 105
A61P15/02
A61P15/00
A61P3/10
A61P19/02
A61P29/00 101
A61P11/06
A61P43/00 107
A61K45/00
A23L33/135
A23C9/127
A23C19/032
A23L2/00 F
A23L2/38 C
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022517399
(86)(22)【出願日】2021-02-02
(85)【翻訳文提出日】2022-06-16
(86)【国際出願番号】 CN2021074857
(87)【国際公開番号】W WO2022041658
(87)【国際公開日】2022-03-03
(31)【優先権主張番号】202010858666.6
(32)【優先日】2020-08-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】521165585
【氏名又は名称】バイヘルス・カンパニー，リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100122644
【弁理士】
【氏名又は名称】寺地 拓己
(74)【代理人】
【識別番号】100220098
【弁理士】
【氏名又は名称】宮脇 薫
(72)【発明者】
【氏名】ゼ，シヤオレイ
(72)【発明者】
【氏名】ジャーン，シュウグワーン
(72)【発明者】
【氏名】ヘ，ルイクン
(72)【発明者】
【氏名】ヘ，ファーン
【テーマコード（参考）】
4B001
4B018
4B065
4B117
4C076
4C084
4C087
【Ｆターム（参考）】
4B001AC01
4B001AC03
4B001AC05
4B001AC15
4B001AC25
4B001AC31
4B001AC32
4B001AC46
4B001AC99
4B001BC14
4B001EC05
4B018LB01
4B018LB07
4B018LB08
4B018LB10
4B018LE01
4B018LE02
4B018LE03
4B018LE05
4B018MD01
4B018MD08
4B018MD14
4B018MD20
4B018MD23
4B018MD47
4B018MD81
4B018MD85
4B018MD86
4B018MD87
4B018ME11
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4B117LK23
4C076AA11
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4C076AA53
4C076BB01
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4C087AA01
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4C087ZB21
4C087ZB33
4C087ZB35
4C087ZC21
4C087ZC35
(57)【要約】
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１およびそれを含む組成物、培養物、食品製品または栄養補助食品、ならびに薬品またはヘルスケア製品の調製におけるその使用を提供する。
【選択図】図３
【選択図】図３
【特許請求の範囲】
【請求項1】
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫、これに関し、該Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託されており、ＧＤＭＣＣ番号６０９６２の受託番号を有する。
【請求項2】
請求項１に記載のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫を含む組成物；好ましくは、該組成物は、細菌、真菌（例えば、酵母）、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される微生物をさらに含み；
好ましくは、微生物はプロバイオティクスであり；
好ましくは、細菌は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、酵母は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【請求項3】
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．の細菌が、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項２に記載の組成物。
【請求項4】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．の細菌が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｅｒｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｋｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；好ましくは、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．の細菌が、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．の細菌が、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｈｅｒｍａｎｉｉ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．の細菌が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．の細菌が、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓであり；
好ましくは、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．の細菌が、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、
請求項２に記載の組成物。
【請求項5】
組成物が追加的な添加剤をさらに含む、請求項２に記載の組成物、好ましくは、追加的な添加剤は、他の栄養素（例えば、食物繊維、プレバイオティクス、タンパク質、脂質、ミネラル、ビタミン、植物成分（例えば、抽出物およびポリフェノール）、ミネラル、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、組成物は、スターター培養物（例えば、植物発酵製品のためのスターター培養物、乳製品のためのスターター培養物）として使用され；
好ましくは、組成物中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、発酵プロセスに関与するためのスターター培養物として使用され；
好ましくは、組成物は、食品製品および／または栄養補助食品（例えば、ヘルスケア食品）を調製するために使用され；
好ましくは、食品製品は、固形飲料、キャンディ、もしくは果汁からなる群より選択されるか、または食品製品は乳製品（例えば、ヨーグルト、フレーバー発酵乳、乳酸菌飲料、チーズ）であり；
好ましくは、栄養補助食品は、経口投与のために製剤化され；
好ましくは、栄養補助食品は、丸剤、粉末、カプセル剤、錠剤、顆粒粉末、オペルキュラム、経口溶解顆粒、サシェ剤、糖衣錠または液体の形態にあり；
好ましくは、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、１０６～１０１２ＣＦＵ／用量（例えば、１０８～１０１２ＣＦＵ／用量）の量で組成物中に存在する。
【請求項6】
請求項１に記載のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または請求項２～５のいずれか一項に記載の組成物を含む、食品製品または栄養補助食品；好ましくは、食品製品は、固形飲料、キャンディ、もしくは果汁からなる群より選択されるか、または食品製品は乳製品（例えば、ヨーグルト、フレーバー発酵乳、乳酸菌飲料、チーズ）であり；
好ましくは、栄養補助食品は、経口投与のために製剤化され；
好ましくは、栄養補助食品は、丸剤、粉末、カプセル剤、錠剤、顆粒粉末、オペルキュラム、経口溶解顆粒、サシェ剤、糖衣錠または液体の形態にあり；
好ましくは、食品製品または栄養補助食品中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、１０６～１０１２ＣＦＵ／用量（例えば、１０８～１０１２ＣＦＵ／用量）の量で存在する。
【請求項7】
請求項１に記載のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫を含む医薬組成物；好ましくは、医薬組成物はＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅの製剤を含み；
好ましくは、医薬組成物は医薬的に許容しうるキャリアを含み；
好ましくは、医薬組成物は経口投与のために製剤化され；
好ましくは、医薬組成物は、丸剤、粉末、カプセル剤、錠剤、顆粒粉末、オペルキュラム、経口溶解顆粒、サシェ剤、糖衣錠または液体の形態にあり；
好ましくは、医薬組成物中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、１０６～１０１２ＣＦＵ／用量（例えば、１０８～１０１２ＣＦＵ／用量）の量で存在する。
【請求項8】
請求項１に記載のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫を含む培養物；好ましくは、培養物は、細菌、真菌（例えば、酵母）、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される微生物をさらに含み；
好ましくは、培養物は、栄養提供成分（例えば、固体または液体培地、フィーダー細胞層）をさらに含み；
好ましくは、栄養提供成分は、タンパク質、炭水化物、脂肪、プロバイオティクス、酵素、ビタミン、免疫調節剤、代用乳、ミネラル、アミノ酸、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、培養物は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫の無細胞培養濾液をさらに含み；
好ましくは、培養物は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅの誘導体またはその子孫をさらに含み；
好ましくは、誘導体は、代謝産物、酵素、細胞構造構成要素（例えば、細胞壁またはその構成要素）、細胞外多糖、バクテリオシン、免疫原性構成要素を含有する化合物、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、微生物は、生存または死滅しており、溶解物もしくは抽出物として、または細菌産物として、または上清として存在する。
【請求項9】
請求項１に記載のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または請求項２～５に記載の組成物、または請求項６に記載の医薬組成物、または請求項７に記載の培養物の、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品の製造における使用、ここで、該医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、被験体において炎症を抑制するか、または炎症性疾患を緩和するために、あるいは被験体の免疫を改善するために、あるいは被験体における細菌性もしくはウイルス性感染症または自己免疫疾患を予防するために、あるいは被験体におけるアレルギー反応または症状を改善または緩和するために使用され；好ましくは、炎症性疾患は、網膜炎症によって引き起こされる疾患（例えば、網膜炎、角膜炎）、皮膚炎症によって引き起こされる疾患（例えば、皮膚炎、湿疹）、気道炎症によって引き起こされる疾患（例えば、上気道感染症）、および消化管炎症によって引き起こされる疾患（例えば、炎症性腸疾患）からなる群より選択され；
好ましくは、細菌性またはウイルス性感染症は、細菌性インフルエンザ、ウイルス性インフルエンザ、尿路感染症、膣炎および子宮頸管炎からなる群より選択され；
好ましくは、自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス、糖尿病、関節リウマチ、および自己免疫性脳炎からなる群より選択され；
好ましくは、アレルギー反応またはその症状は、湿疹、アトピー性皮膚炎、喘息、および食物アレルギーからなる群より選択され；
好ましくは、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、免疫細胞の活性化を促進し、サイトカインの産生を促進し、炎症を抑制し、または炎症性疾患を緩和することができ；
好ましくは、サイトカインは、ＩＬ－１０、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＴＮＦ－α、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、抗炎症性サイトカインはＩＬ－１０であり；
好ましくは、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、ＩｇＥレベルを低下させ、ＩｇＥ媒介アレルギー反応を抑制することができ；
好ましくは、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、単独で、または追加的な抗真菌薬、鎮痛薬、抗炎症薬、治癒薬、もしくは保湿剤と組み合わせて使用され；
好ましくは、被験体は哺乳類であり；
好ましくは、被験体はヒトである。
【請求項10】
請求項１に記載のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または請求項２～５に記載の組成物、または請求項７に記載の培養物の、スターター培養物の製造における使用、ここで、該スターター培養物は、固体食品（例えば、チーズ）または液体食品（例えば、ヨーグルト、フレーバー発酵乳、乳酸菌飲料）の発酵に使用される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫に関する。具体的には、本出願は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１およびそれを含む組成物、培養物、食品製品または栄養補助食品に関する。本出願はまた、医薬品またはヘルスケア製品の製造における、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１およびそれを含む組成物、培養物、食品製品または栄養補助食品の使用にも関連する。
【背景技術】
【0002】
人体の免疫細胞の７０％～８０％はヒト腸に存在する。同時に、ヒト腸内の細菌の総数は１００兆に達する可能性があり、全ヒト微生物の約７８％を占める。したがって、腸は宿主免疫系が微生物と相互作用するための重要なプラットフォームを提供する。国際連合食糧農業機関（ＦＡＯ）および世界保健機関（ＷＨＯ）は、プロバイオティクスは、適切な量で投与されると宿主に健康上の利益を与える生きた微生物であると考えている。多数のｉｎ ｖｉｔｒｏ試験および臨床試験により、プロバイオティクスは宿主の腸の健康および免疫調節において良好な適用効果を有することが示されている。
【0003】
プロバイオティクスは、さまざまな機序を介して宿主の免疫機能を調節することができる。粘膜バリア機能の点では、プロバイオティクスは粘膜細胞上の付着部位に関して侵入生物と競合することができ、それによって、細菌が粘膜を貫通して深部組織に入るのを防ぎ；腸上皮細胞間の密着結合を調節して、粘膜細胞のバリア機能を増強し；腸粘膜細胞の溶解およびアポトーシスを抑制し、消化管粘膜の完全性を維持する。プロバイオティクスは、貪食細胞、ＤＣなどの抗原提示細胞（ＡＰＣ）の貪食活性を高め、ＮＫ細胞の殺傷能力を高め、そして、炎症応答の強度を制御するためにサイトカイン（例えば、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－αなどの炎症誘発性因子およびＴＧＦ－β、ＩＬ－１０などの抗炎症因子）の発現レベルを高めることによって、先天性免疫機能を高めることもできる。同時に、プロバイオティクスは、適応免疫を増強することができる。腸粘膜でコロニーを形成したプロバイオティクスは抗原刺激に対するＴおよびＢリンパ球の応答性を促進し、腸粘膜の関連リンパ系組織を刺激し、ｓＩｇＡの分泌を誘発することができる。抗原物質としてのプロバイオティクスは、Ｍ細胞に貪食される可能性がある。Ｍ細胞内の抗原はすぐに放出され、ＤＣに取り込まれる。ＤＣはナイーブＣＤ４＋ Ｔリンパ球に抗原を提示し、Ｔｈ１またはＴｈ２細胞を活性化してＴｈ１の反応とＴｈ２の反応の比率のバランスをとる。
【0004】
さらに、乳酸菌などのプロバイオティクスが上記の健康上の利益を身体に発揮できるかどうかは、菌株が、胃液中の低ｐＨ環境や小腸内の胆汁酸など、体内の消化管の防御機構を忍容しうるかどうかにも依存する。それらは、生きたまま腸に到達し、腸上皮細胞に接着し、腸内でコロニーを形成するときにのみ、有益な代謝産物を産生し、宿主と相互作用することができる。
【0005】
したがって、腸に入り、高い生存力を有することができる乳酸菌の選別は、プロバイオティクスの開発のための主要な考慮事項である。高い生存率のほか、宿主の免疫機能および抗アレルギー機能を調節する能力を有するプロバイオティクスは、いまだに開発されていない。
【発明の概要】
【0006】
本発明では、特に指定のない限り、本明細書で使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有する。同時に、本発明をより良く理解するために、関連する用語の定義および説明を以下に提供する。
【0007】
本明細書中で使用される場合、「子孫」という用語は、増殖（例えば、培養培地での培養による増殖）によって微生物により産生される子孫細胞をさす。微生物、特に細菌の増殖および培養では、特定の変化（例えば、１つまたはいくつかの塩基の変異）が遺伝物質において生じる可能性があり、これらの変化は、自然に起こり得るか、あるいは化学的および／もしくは物理的因子（例えば、変異原）および／または当該分野で公知の組換えＤＮＡ技術での変異誘発の結果であり得ることは、容易に理解される。したがって、本明細書中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅの子孫は、本発明のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅと比較して遺伝物質が変化していないかまたは変化している子孫を包含することが意図される。言うまでもなく、子孫は、それらが由来する菌株の機能を依然として保持する（例えば、免疫を増強すること、アレルギー反応を改善することなどが可能である）。
【0008】
本明細書中で使用される場合、「医薬的に許容しうるキャリア」という用語は、被験体および活性成分と薬理学的および／または生理学的に適合するキャリアをさし、これは、当該分野で周知であり（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ。Ｇｅｎｎａｒｏ ＡＲ編集、第１９版。ペンシルベニア州：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５年参照）、以下を包含するが、これらに限定されない：ｐＨ調整剤、界面活性剤、アジュバント、イオン強度増強剤。例えば、ｐＨ調整剤としては、限定されるものではないが、リン酸緩衝液が挙げられ；界面活性剤としては、限定されるものではないが、カチオン性、アニオン性、または非イオン性界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎ－８０が挙げられ；イオン強度増強剤としては、限定されるものではないが、塩化ナトリウムが挙げられる。
【0009】
本明細書で使用される場合、「栄養補助食品」という用語は、消費者に有益な効果（例えば、栄養学的効果、予防効果、治療効果、または他の有益な効果）を提供することができる食用製品をさす。この文脈において、栄養補助食品は、ヘルスケア製品、栄養製品、サプリメントおよび他の製品を包含する。
【0010】
本明細書中で使用される場合、「医薬品」という用語は、ヒト医学および獣医学においてヒトおよび動物の両方において使用される医薬品、ならびに動物飼料（例えば、家畜飼料および／またはペットフード）に組み込むために使用される医薬品を包含する。さらに、本明細書で使用される「医薬品」という用語は、治療効果、予防効果、および／または有益な効果を提供する任意の物質を意味する。本明細書で使用される「医薬品」という用語は、必ずしも販売承認を必要とする物質に限定されるわけではなく、化粧品、ヘルスケア製品、食品（例えば、飼料および飲料を含む）、プロバイオティック培養物、および栄養補助食品に使用することができる材料を包含する。
【0011】
本明細書で使用する場合、「ＣＦＵ（コロニー形成単位）」という用語は、製品中の細菌、真菌および酵母などの微生物コロニーの総数をさし、通常、生菌数の計算に使用される。
【0012】
本明細書中で使用される場合、「ＣＦＵ／用量」という用語は、被験体に毎日または毎回提供される組成物／食品製品または栄養補助食品／医薬組成物中に存在する細菌の量をさす。例えば、特定の態様において、食品製品または栄養補助食品中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、１０６～１０１２ＣＦＵ／用量（例えば、１０８～１０１２ＣＦＵ／用量）の量で存在する。この態様において、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅが食品製品（例えば、固形飲料、ヨーグルト）中に適用される場合、被験体に毎日または毎回提供される食品製品（例えば、固形飲料、ヨーグルト）は、約１０６～１０１２ＣＦＵのＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅを含有することができる。あるいは、言うまでもなく、このような細菌の量は、複数のバッチに分けて投与することもできる。被験体が任意の特定時間（例えば、２４時間毎の期間）に受け取るＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅの総量が約１０６～約１０１２ＣＦＵである限り、上記食品製品または栄養補助食品の要件である、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅが１０６～１０１２ＣＦＵ／用量（例えば、１０８～１０１２ＣＦＵ／用量）の量で存在するということに合致する。
【0013】
本出願の発明者らは、多数の実験により、健康な新生児の腸管に由来する２６５菌株から、顕著な菌株特異的プロバイオティクス能力を有するＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅの菌株を選択した。本出願の発明者らは、多数の実験により、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅが胃液および胆汁酸塩の酸性環境に対して良好な忍容性を有し、腸管への接着能が高く、免疫を増強してアレルギー症状を改善または緩和することができることを確認し、本発明を完成させた。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【発明を実施するための形態】
【0015】
したがって、第１の観点において、本出願はＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫を提供し、該Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託されており、ＧＤＭＣＣ番号６０９６２の受託番号を有する。
【0016】
第２の観点において、本出願は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫を含む組成物を 提供する。
特定の態様において、組成物は、細菌、真菌（例えば、酵母）、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される微生物をさらに含む。
特定の態様において、組成物は、細菌、真菌（例えば、酵母）、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される微生物をさらに含む。
【0017】
特定の態様において、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、１以上の他の微生物種と組み合わせて使用することができ、該他の微生物種は、それが投与される宿主の健康に対し有益な効果を有することができる。
【0018】
特定の態様において、微生物はプロバイオティクスである。
特定の態様において、プロバイオティクスは、プロバイオティクス細菌、酵母、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。
特定の態様において、プロバイオティクスは、プロバイオティクス細菌、酵母、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。
【0019】
本明細書中で使用される場合、「プロバイオティクス細菌」という用語は、任意の非病原性細菌として定義され、生きた細菌として宿主に十分な量で投与される場合、宿主の健康に対し有益な効果を有することができる。
【0020】
特定の態様において、細菌は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【0021】
特定の態様において、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．の細菌は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【0022】
いくつかの態様において、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．の細菌は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｅｒｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｋｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【0023】
特定の態様において、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．の細菌は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【0024】
特定の態様において、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．の細菌は、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｈｅｒｍａｎｉｉ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【0025】
特定の態様において、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．の細菌は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【0026】
特定の態様において、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．の細菌は、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓである。
特定の態様において、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．の細菌は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
特定の態様において、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．の細菌は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【0027】
特定の態様において、酵母は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【0028】
特定の態様において、組成物は、追加的な添加剤をさらに含む。
当業者なら、必要に応じて追加的な添加剤を選択し、適合させることができる。特定の態様において、追加的な添加剤は、他の栄養素、ミネラル、ビタミン、またはそれらの任意の組合せからなる群より選択される。
当業者なら、必要に応じて追加的な添加剤を選択し、適合させることができる。特定の態様において、追加的な添加剤は、他の栄養素、ミネラル、ビタミン、またはそれらの任意の組合せからなる群より選択される。
【0029】
特定の態様において、追加的な添加剤は、それが投与される宿主の健康に対し有益な効果を有することができる。
特定の態様において、他の栄養素は、食物繊維、プレバイオティクス、タンパク質（例えば、酵素）、炭水化物、脂質（例えば、脂肪）、ミネラル、ビタミン、植物成分（例えば、植物抽出物）、アミノ酸、免疫調節剤、代用乳、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
特定の態様において、他の栄養素は、食物繊維、プレバイオティクス、タンパク質（例えば、酵素）、炭水化物、脂質（例えば、脂肪）、ミネラル、ビタミン、植物成分（例えば、植物抽出物）、アミノ酸、免疫調節剤、代用乳、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【0030】
特定の態様において、ミネラルは、鉄、亜鉛、カリウム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
特定の態様において、ビタミンは、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、およびそれらの任意の組合せからなる群より選択される。
特定の態様において、ビタミンは、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、およびそれらの任意の組合せからなる群より選択される。
【0031】
いくつかの態様において、組成物は、スターター培養物（例えば、植物発酵製品のためのスターター培養物、乳製品のためのスターター培養物）として働く。このような態様において、組成物中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、発酵プロセスに関与するためのスターター培養物として使用される。例えば、ヨーグルトを調製するプロセスでは、プロバイオティクスとしてのＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅを新鮮な牛乳と一緒に発酵させてヨーグルトを調製する。
【0032】
特定の態様において、組成物は、食品製品および／または栄養補助食品（例えば、ヘルスケア食品）を調製するために使用される。
特定の態様において、食品製品は、固形飲料、キャンディ、もしくは果汁からなる群より選択され；または、食品製品は乳製品（例えば、ヨーグルト、フレーバー発酵乳、乳酸菌飲料、チーズ）である。
特定の態様において、食品製品は、固形飲料、キャンディ、もしくは果汁からなる群より選択され；または、食品製品は乳製品（例えば、ヨーグルト、フレーバー発酵乳、乳酸菌飲料、チーズ）である。
【0033】
特定の態様において、栄養補助食品は、経口投与のために製剤化される。
特定の態様において、栄養補助食品は、丸剤、粉末、カプセル剤、錠剤、顆粒粉末、オペルキュラム(operculum)、経口溶解顆粒、サシェ剤、糖衣錠または液体の形態にある。
特定の態様において、栄養補助食品は、丸剤、粉末、カプセル剤、錠剤、顆粒粉末、オペルキュラム(operculum)、経口溶解顆粒、サシェ剤、糖衣錠または液体の形態にある。
【0034】
いくつかの態様において、好ましくは、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは１０６～１０１２ＣＦＵ／用量（例えば、１０８～１０１２ＣＦＵ／用量）の量で組成物中に存在する。
【0035】
第３の観点において、本出願は、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫または上記組成物を含む食品製品または栄養補助食品を提供する。
文脈において、「食品」という用語は、ヒト用の食品および飲料、ならびに動物用の食品および飲料（すなわち、飼料）を含む広義である。特定の態様において、食品製品はヒトの消費に適しており、ヒトの消費のために設計されている。
文脈において、「食品」という用語は、ヒト用の食品および飲料、ならびに動物用の食品および飲料（すなわち、飼料）を含む広義である。特定の態様において、食品製品はヒトの消費に適しており、ヒトの消費のために設計されている。
【0036】
使用、適用様式または投与様式に応じて、本出願の食品製品は、液体、固体、懸濁液または粉末の形態にあることができることを、理解することができる。
特定の態様において、食品製品は、固形飲料、キャンディ、もしくは果汁からなる群より選択されるか、または、食品製品は乳製品（例えば、ヨーグルト、フレーバー発酵乳、乳酸菌飲料、チーズ）である。
特定の態様において、食品製品は、固形飲料、キャンディ、もしくは果汁からなる群より選択されるか、または、食品製品は乳製品（例えば、ヨーグルト、フレーバー発酵乳、乳酸菌飲料、チーズ）である。
【0037】
特定の態様において、栄養補助食品は、経口投与のために製剤化される。
特定の態様において、栄養補助食品は、丸剤、粉末、カプセル剤、錠剤、顆粒粉末、オペルキュラム、経口溶解顆粒、サシェ剤、糖衣錠または液体の形態にある。
特定の態様において、栄養補助食品は、丸剤、粉末、カプセル剤、錠剤、顆粒粉末、オペルキュラム、経口溶解顆粒、サシェ剤、糖衣錠または液体の形態にある。
【0038】
特定の態様において、食品製品または栄養補助食品はまた、以下の物質のうちの１つまたは任意の組み合わせを含むことができる（ただし、これらに限定されない）：プロバイオティクス（例えば、プロバイオティクス細菌）、食物繊維、プレバイオティクス、タンパク質（例えば、酵素）、炭水化物、脂質（例えば、脂肪）、ビタミン、ミネラル、植物成分（例えば、植物抽出物）、アミノ酸、免疫調節剤、代用乳、またはＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫の代謝産物もしくは抽出物。いくつかの態様において、本発明の組成物はまた、食品において許容され得るさまざまな甘味料または香味剤、調色物質、安定剤、流動促進剤、充填剤および他の補助材料と組み合わせることもできる。
【0039】
特定の態様において、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫は濃縮物の形態で存在する。
特定の態様において、食品製品または栄養補助食品中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、１０６～１０１２ＣＦＵ／用量（例えば、１０８～１０１２ＣＦＵ／用量）の量で存在する。
特定の態様において、食品製品または栄養補助食品中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、１０６～１０１２ＣＦＵ／用量（例えば、１０８～１０１２ＣＦＵ／用量）の量で存在する。
【0040】
第４の観点において、本出願は、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫を含む医薬組成物を提供する。
本明細書中で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、ヒトにおいて使用される医薬組成物、ならびに動物において使用される医薬組成物（例えば、獣医学的適用）を包含する。特定の態様において、医薬組成物は、ヒトにおいて使用するためのものである。
本明細書中で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、ヒトにおいて使用される医薬組成物、ならびに動物において使用される医薬組成物（例えば、獣医学的適用）を包含する。特定の態様において、医薬組成物は、ヒトにおいて使用するためのものである。
【0041】
特定の態様において、医薬組成物はＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅの製剤を含む。
特定の態様において、医薬組成物は医薬的に許容しうるキャリアを含む。
特定の態様において、医薬組成物は医薬的に許容しうるキャリアを含む。
【0042】
特定の態様において、医薬組成物は経口投与のために製剤化される。
いくつかの態様において、医薬組成物は、丸剤、粉末、カプセル剤、錠剤、顆粒粉末、オペルキュラム、経口溶解顆粒、サシェ剤、糖衣錠または液体の形態にある。
いくつかの態様において、医薬組成物は、丸剤、粉末、カプセル剤、錠剤、顆粒粉末、オペルキュラム、経口溶解顆粒、サシェ剤、糖衣錠または液体の形態にある。
【0043】
好ましくは、医薬組成物中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、１０６～１０１２ＣＦＵ／用量（例えば、１０８～１０１２ＣＦＵ／用量）の量で存在する。
第５の観点において、本出願は、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫を含む培養物を提供する。
第５の観点において、本出願は、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫を含む培養物を提供する。
【0044】
特定の態様において、培養物は、細菌、真菌（例えば、酵母）、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される微生物をさらに含む。
特定の態様において、培養物は栄養提供成分（例えば、固体または液体培地、フィーダー細胞層）をさらに含む。
特定の態様において、培養物は栄養提供成分（例えば、固体または液体培地、フィーダー細胞層）をさらに含む。
【0045】
いくつかの態様において、栄養提供成分は、プレバイオティクス、タンパク質（例えば、酵素）、炭水化物、脂質（例えば、脂肪）、プロバイオティクス、ビタミン、免疫調節剤、代用乳、ミネラル、アミノ酸、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【0046】
特定の態様において、培養物はＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫の無細胞培養濾液をさらに含む。
特定の態様において、培養物はＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅの誘導体またはその子孫をさらに含む。
特定の態様において、培養物はＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅの誘導体またはその子孫をさらに含む。
【0047】
特定の態様において、誘導体は、代謝産物、酵素、細胞構造構成要素（例えば、細胞壁またはその構成要素）、細胞外多糖、バクテリオシン、免疫原性構成要素を含有する化合物、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【0048】
特定の態様において、微生物は、生存または死滅しており、溶解物もしくは抽出物として、または細菌産物として、または上清として存在する。
第６の観点において、本出願は、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または上記組成物、または上記医薬組成物、または上記培養物の、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品の製造における使用を提供し、ここで、該医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、被験体において炎症を抑制するか、または炎症性疾患を緩和するために、あるいは被験体の免疫を改善するために、あるいは被験体における細菌性もしくはウイルス性感染症または自己免疫疾患を予防するために、あるいは被験体におけるアレルギー反応または症状を改善または緩和するために使用される。
第６の観点において、本出願は、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または上記組成物、または上記医薬組成物、または上記培養物の、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品の製造における使用を提供し、ここで、該医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、被験体において炎症を抑制するか、または炎症性疾患を緩和するために、あるいは被験体の免疫を改善するために、あるいは被験体における細菌性もしくはウイルス性感染症または自己免疫疾患を予防するために、あるいは被験体におけるアレルギー反応または症状を改善または緩和するために使用される。
【0049】
特定の態様において、炎症性疾患は、網膜炎症によって引き起こされる疾患（例えば、網膜炎、角膜炎）、皮膚炎症によって引き起こされる疾患（例えば、皮膚炎、湿疹）、気道炎症によって引き起こされる疾患（例えば、上気道感染症）、および消化管炎症によって引き起こされる疾患（例えば、炎症性腸疾患）からなる群より選択される。
【0050】
特定の態様において、細菌性またはウイルス性感染症は、細菌性インフルエンザ、ウイルス性インフルエンザ、尿路感染症、膣炎および子宮頸管炎からなる群より選択される。
特定の態様において、自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス、糖尿病、関節リウマチ、および自己免疫性脳炎からなる群より選択される。
特定の態様において、自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス、糖尿病、関節リウマチ、および自己免疫性脳炎からなる群より選択される。
【0051】
特定の態様において、アレルギー反応または症状は、湿疹、アトピー性皮膚炎、喘息、および食物アレルギーからなる群より選択される。
いくつかの態様において、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、免疫細胞の活性化を促進し、サイトカインの産生を促進し、炎症を抑制し、または炎症性疾患を緩和することができる。
いくつかの態様において、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、免疫細胞の活性化を促進し、サイトカインの産生を促進し、炎症を抑制し、または炎症性疾患を緩和することができる。
【0052】
特定の態様において、サイトカインは、ＩＬ－１０、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＴＮＦ－α、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
特定の態様において、抗炎症性サイトカインはＩＬ－１０である。
特定の態様において、抗炎症性サイトカインはＩＬ－１０である。
【0053】
いくつかの態様において、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、ＩｇＥレベルを低下させ、ＩｇＥ媒介アレルギー反応を抑制することができる。
いくつかの態様において、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、単独で、または追加的な抗真菌薬、鎮痛薬、抗炎症薬、治癒薬(healing agent)、もしくは保湿剤と組み合わせて使用される。
いくつかの態様において、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、単独で、または追加的な抗真菌薬、鎮痛薬、抗炎症薬、治癒薬(healing agent)、もしくは保湿剤と組み合わせて使用される。
【0054】
特定の態様において、被験体は哺乳類である。
特定の態様において、被験体はヒトである。
第７の観点において、本発明は、炎症を抑制するか炎症性疾患を緩和するため、あるいは細菌性もしくはウイルス性感染症または自己免疫疾患を予防するため、あるいはアレルギー反応またはその症状を改善または緩和するための方法を提供し、ここで、該方法は、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または上記組成物、または上記医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む。
特定の態様において、被験体はヒトである。
第７の観点において、本発明は、炎症を抑制するか炎症性疾患を緩和するため、あるいは細菌性もしくはウイルス性感染症または自己免疫疾患を予防するため、あるいはアレルギー反応またはその症状を改善または緩和するための方法を提供し、ここで、該方法は、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または上記組成物、または上記医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む。
【0055】
特定の態様において、炎症性疾患は、網膜炎症によって引き起こされる疾患（例えば、網膜炎、角膜炎）、皮膚炎症によって引き起こされる疾患（例えば、皮膚炎、湿疹）、気道炎症によって引き起こされる疾患（例えば、上気道感染症）、および消化管炎症によって引き起こされる疾患（例えば、炎症性腸疾患）からなる群より選択される。
【0056】
特定の態様において、細菌性またはウイルス性感染症は、細菌性インフルエンザ、ウイルス性インフルエンザ、尿路感染症、膣炎および子宮頸管炎からなる群より選択される。
特定の態様において、自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス、糖尿病、関節リウマチ、自己免疫性脳炎などからなる群より選択される。
特定の態様において、自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス、糖尿病、関節リウマチ、自己免疫性脳炎などからなる群より選択される。
【0057】
特定の態様において、アレルギー反応またはその症状は、湿疹、アトピー性皮膚炎、喘息、および食物アレルギーからなる群より選択される。
特定の態様において、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または上記医薬組成物は、経口投与、注射投与（例えば、静脈内注射または筋肉内注射）、局所適用（例えば、塗抹）、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される方法によって投与される。
特定の態様において、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または上記医薬組成物は、経口投与、注射投与（例えば、静脈内注射または筋肉内注射）、局所適用（例えば、塗抹）、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される方法によって投与される。
【0058】
特定の態様において、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または上記医薬組成物は、単独で、または他の抗真菌薬、鎮痛薬、抗炎症薬、治癒薬、もしくは保湿剤と組み合わせて投与される。
【0059】
特定の態様において、被験体は哺乳類である。
特定の態様において、被験体はヒトである。
第８の観点において、本発明は被験体の免疫を改善するための方法を提供し、該方法は、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または上記組成物、または上記医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む。
特定の態様において、被験体はヒトである。
第８の観点において、本発明は被験体の免疫を改善するための方法を提供し、該方法は、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または上記組成物、または上記医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む。
【0060】
特定の態様において、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または上記医薬組成物は、経口投与、注射投与（例えば、静脈内注射または筋肉内注射）、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される方法によって投与される。
【0061】
特定の態様において、被験体は哺乳類である。
特定の態様において、被験体はヒトである。
第９の観点において、本発明は、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または上記組成物、または上記培養物の、スターター培養物の製造における使用を提供し、ここで、該スターター培養物は、固体食品（例えば、チーズ）または液体食品（例えば、ヨーグルト、フレーバー発酵乳、乳酸菌飲料）の発酵に有用である。
有益な効果
本出願のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、胃液および胆汁酸塩の酸性環境に対して良好な忍容性を有し、腸管への接着能が高く、マクロファージの活性を活性化してサイトカインの発現を促進することができる。とりわけ、本出願のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、抗炎症因子ＩＬ－１０の発現を著しく増加させることができ、炎症を抑制するか、炎症性疾患を緩和することができ、免疫を改善することができる。これに加えて、本出願のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、血清ＩｇＥのレベルを低下させ、アレルギー反応を改善することができる。
特定の態様において、被験体はヒトである。
第９の観点において、本発明は、上記Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または上記組成物、または上記培養物の、スターター培養物の製造における使用を提供し、ここで、該スターター培養物は、固体食品（例えば、チーズ）または液体食品（例えば、ヨーグルト、フレーバー発酵乳、乳酸菌飲料）の発酵に有用である。
有益な効果
本出願のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、胃液および胆汁酸塩の酸性環境に対して良好な忍容性を有し、腸管への接着能が高く、マクロファージの活性を活性化してサイトカインの発現を促進することができる。とりわけ、本出願のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、抗炎症因子ＩＬ－１０の発現を著しく増加させることができ、炎症を抑制するか、炎症性疾患を緩和することができ、免疫を改善することができる。これに加えて、本出願のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、血清ＩｇＥのレベルを低下させ、アレルギー反応を改善することができる。
【0062】
本発明の態様について、添付の図面および実施例と関連させて以下に詳細に記載する。しかしながら、当業者であれば、以下の図面および実施例は、本発明を例示するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するためには使用されないことを理解するであろう。添付の図面および以下の好ましい態様の詳細な説明に照らして、本発明のさまざまな目的および有利な観点が、当業者には明らかになるであろう。
【実施例】
【0063】
生物学的材料の寄託に関する注記
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１は、広州Ｘｉａｎｌｉｅ Ｍｉｄｄｌｅ ＲｏａｄのＢｕｉｌｄｉｎｇ ５９、Ｎｏ．１００の５階に位置するＧｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ（ＧＤＭＣＣ）に寄託されている。これは受託番号ＧＤＭＣＣ Ｎｏ．６０９６２を有し、寄託時点は２０２０年１月１５日である。
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１は、広州Ｘｉａｎｌｉｅ Ｍｉｄｄｌｅ ＲｏａｄのＢｕｉｌｄｉｎｇ ５９、Ｎｏ．１００の５階に位置するＧｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ（ＧＤＭＣＣ）に寄託されている。これは受託番号ＧＤＭＣＣ Ｎｏ．６０９６２を有し、寄託時点は２０２０年１月１５日である。
【0064】
発明を実施するための具体的モデル
ここで、本発明を以下の実施例を参照して説明する。実施例は、本発明を限定するのではなく、本発明を例示することを意図している。
特記しない限り、実施例に記載する実験および方法は、基本的に、当技術分野で周知であり、さまざまな参考文献に記載されている従来の方法に従って行われる。例えば、本発明において使用される免疫学、生化学、化学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、ゲノミクス、および組換えＤＮＡのような従来の技術は、以下に見出すことができる：Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ、「ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ」、第２版（１９８９）；「ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ」、Ｆ．Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．編集、（１９８７）；「ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ」（シリーズ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ）：「ＰＣＲ ２：Ａ ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ ＡＰＰＲＯＡＣＨ」、Ｍ．Ｊ． ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ、Ｂ．Ｄ． Ｈａｍｅｓ、およびＧ．Ｒ． Ｔａｙｌｏｒ編集（１９９５）；およびＡＮＩＭＡＬ ＣＥＬＬ ＣＵＬＴＵＲＥ、Ｒ．Ｉ． Ｆｒｅｓｃｈｅｎｉ編集（１９８７）。
ここで、本発明を以下の実施例を参照して説明する。実施例は、本発明を限定するのではなく、本発明を例示することを意図している。
特記しない限り、実施例に記載する実験および方法は、基本的に、当技術分野で周知であり、さまざまな参考文献に記載されている従来の方法に従って行われる。例えば、本発明において使用される免疫学、生化学、化学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、ゲノミクス、および組換えＤＮＡのような従来の技術は、以下に見出すことができる：Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ、「ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ」、第２版（１９８９）；「ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ」、Ｆ．Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．編集、（１９８７）；「ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ」（シリーズ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ）：「ＰＣＲ ２：Ａ ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ ＡＰＰＲＯＡＣＨ」、Ｍ．Ｊ． ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ、Ｂ．Ｄ． Ｈａｍｅｓ、およびＧ．Ｒ． Ｔａｙｌｏｒ編集（１９９５）；およびＡＮＩＭＡＬ ＣＥＬＬ ＣＵＬＴＵＲＥ、Ｒ．Ｉ． Ｆｒｅｓｃｈｅｎｉ編集（１９８７）。
【0065】
これに加えて、実施例において具体的な条件が明記されていない場合、従来の条件または製造業者が推奨する条件に従って実施するべきである。使用した試薬または器具で、製造業者を示していないものは、すべて商業的に購入することができる従来の製品であった。当業者なら、態様は例示として本発明を説明するものであり、本発明によって特許請求される保護範囲を限定することを意図したものではないことがわかる。本明細書で言及されるすべての刊行物および他の参考文献は、その全体を参考として本出願で援用する。
【0066】
実施例１． 菌株の分離および同定
本出願では、四川大学のＷｅｓｔ Ｃｈｉｎａ Ｗｏｍｅｎ’ｓ ａｎｄ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌで出生した正期産新生児の大便試料から２６５株を分離し、そこからＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅの１株を選別し、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１と命名した。そのうち、新生児の組み入れ基準は以下であった：成都５地区に居住、在胎期間３７～４２週、出生時体重２５００～４０００ｇ、赤ちゃんは先天性異常または出産時欠陥を有していなかった。除外基準は以下であった：出産前１ヶ月以内に母親が抗生物質を使用していた；両親がエイズ、結核、Ｂ型肝炎などの感染性疾患を有していた、および、新生児が、新生児肺炎などの重症疾患のため便の収集に適していなかった。
本出願では、四川大学のＷｅｓｔ Ｃｈｉｎａ Ｗｏｍｅｎ’ｓ ａｎｄ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌで出生した正期産新生児の大便試料から２６５株を分離し、そこからＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅの１株を選別し、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１と命名した。そのうち、新生児の組み入れ基準は以下であった：成都５地区に居住、在胎期間３７～４２週、出生時体重２５００～４０００ｇ、赤ちゃんは先天性異常または出産時欠陥を有していなかった。除外基準は以下であった：出産前１ヶ月以内に母親が抗生物質を使用していた；両親がエイズ、結核、Ｂ型肝炎などの感染性疾患を有していた、および、新生児が、新生児肺炎などの重症疾患のため便の収集に適していなかった。
【0067】
生後１～４ヵ月の乳児から新鮮な便を収集し、無菌の便収集管に入れた。サンプリング後、それを４℃で一時保管し、サンプリング担当者が低温で研究室に送付し、大便試料の希釈および培養を行った。直ちに操作できない場合は４℃の嫌気性条件下で保管し、同日中に培養した。
【0068】
０．５ｇの便を秤量し、４．５ｍＬの便希釈液（４．５ｇのＫＨ２ＰＯ４、６．０ｇのＮａ２ＨＰＯ４、０．５ｇのＬ－システイン塩酸塩、０．５ｇのＴｗｅｅｎ－８０、１．０ｇの寒天を１０００ｍＬの蒸留水と混合し、後で使用するために１２１℃で１５分間オートクレーブ滅菌した）を加え、十分に振り混ぜた後、１０倍系列希釈した。適した希釈度の便混合物１００μＬをＬ字型の棒で採取して、（５％ウマ血液）グルコース、血液、肝臓培地（ＢＬ培地）を有するプレート上に広げ、３７℃で４８時間にわたり嫌気性培養を行った。ＢＬプレート上の疑わしいＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍコロニー（褐色または赤褐色であり、滑らかで湿った表面、丸みを帯びて隆起した形状および整った縁を有し、約３～５ｍｍｍの直径を有するコロニー）を採取し、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ選択性培地、すなわちＴＯＳプロピオン酸寒天を有するプレート上で二次培養し、嫌気性条件下、３７℃で４８時間培養した。その後、コロニーをＴＯＳプレートから採取し、ＭＲＳプレート上に接種し、嫌気性条件下、３７℃で培養した。酸素存在下でのコロニーの増殖も観察した。該菌株でグラム染色および顕微鏡観察を行った。
【0069】
上記実験は、該菌株が厳密に好気性菌株であり、一方または両方の末端が膨潤または分岐しているグラム陽性無芽胞桿菌であることを示した。適用で分離される菌株はＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍであることを、あらかじめ決定する（図１および２に示す）。
【0070】
分離した菌株を同定するためにＰＣＲ法を用いた。細菌ＤＮＡを煮沸法により抽出した。Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．に特異的なプライマーおよび８種のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ株（Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ ｇｒｏｕｐ、Ｂ．ａｎｇｕｌａｔｕｍ、Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ、Ｂ．ｂｒｅｖｅ、Ｂ．ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ ｇｒｏｕｐ、Ｂ．ｄｅｎｔｉｕｍ、Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）に特異的なプライマーを、細菌ＤＮＡのＰＣＲ増幅に使用した。プライマーの配列は文献（Ｍａｔｓｕｋｉ Ｔ， ｅｔ ａｌ． ２００４， Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ）に見出すことができ、これを表１に示した。増幅系は、２５μＬの２×Ｔａｑ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｋａｎｇｗｅｉ Ｃｅｎｔｕｒｙ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）、それぞれ２μＬの上流および下流プライマー（１０μｍｏｌ／Ｌ）、４μＬの鋳型ＤＮＡ、および１７μＬのｄｄＨ２Ｏを含んでいた。ＰＣＲ増幅を以下のように実施した：９４℃で２分間の予備変性；９４℃で３０秒間の変性、５５℃で３０秒間のアニーリング、７２℃で３０秒間の伸長（３５サイクル）；７２℃で２分間の最終伸長。ＰＣＲ産物を２％アガロースゲル電気泳動（０．４ｇのアガロースを２０ｍＬの０．５×ＴＢＥ緩衝液に加熱下で溶解し、１μＬのＧｏｌｄｖｉｅｗを加え、添加量は５μＬであり、電気泳動は８０Ｖで２０分間行った）によって同定し、ＣｈｅｍｉＤｏｃ ＸＲＳ＋ Ｓｙｓｔｅｍ（ゲル画像化システム）を用いて、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの同定のための写真を撮影した。
【0071】
ＰＣＲ同定の結果を表２に示した。Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．プライマーおよびＢ．ｂｒｅｖｅプライマーから増幅されたＰＣＲ産物で強い陽性のバンドが観察され、残りのプライマーはＰＣＲ産物をもたらさなかった。したがって、この適用で得た菌株は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅである。
【0072】
さらに、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の全ゲノムをＰａｃＢｉｏ Ｓｅｑｕｅｌ２配列決定プラットフォームを用いて決定したところ、そのゲノム長は２３５２０８９ｂｐであり、ＧＣ含量はそれぞれ５８．８％（ＧＣ含量は、ＤＮＡの４つの塩基におけるグアニンおよびシトシンの比率をさす）であり、染色体ゲノムは２０７７のコード遺伝子、５８のｔＲＮＡ遺伝子、９のｒＲＮＡ遺伝子（５ｓ ｒＲＮＡ、１６ｓ ｒＲＮＡおよび２３ｓ ｒＲＮＡを含む）、および１４の他のタイプのＲＮＡ遺伝子を含有していた。
【0073】
上記ＰＣＲ同定および全ゲノム配列決定実験の結果に基づき、本出願は、新規菌株、すなわち、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１を得た。これを、２０２０年１月１５日に寄託した。
【0074】
【表1】
【0075】
【表2】
【0076】
実施例２． Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１のプロバイオティクス特性に関する研究
１． Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の酸および胆汁酸塩忍容性に関する実験的選別
１．１ 試験細菌懸濁液の調製：Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１をＴＯＳ培地により蘇生させ、後で使用するために２回の継代に付した。４８時間のＴＯＳ培養の後、細菌を２ｍＬの便希釈液中にこすり落とし、ボルテックスしてよく混合し、濃度を大体１０８ ～１０９ＣＦＵ／ｍＬに調整した。
１． Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の酸および胆汁酸塩忍容性に関する実験的選別
１．１ 試験細菌懸濁液の調製：Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１をＴＯＳ培地により蘇生させ、後で使用するために２回の継代に付した。４８時間のＴＯＳ培養の後、細菌を２ｍＬの便希釈液中にこすり落とし、ボルテックスしてよく混合し、濃度を大体１０８ ～１０９ＣＦＵ／ｍＬに調整した。
【0077】
１．２ 模擬的な胃酸および胆汁酸塩培養液の調製
模擬胃酸培養液の調製：ＭＲＳブロス培養液を調製し、滅菌後、１ｍｏｌ／ＬのＨＣＬでｐＨ値を３．０に調整し、これにより模擬胃酸培養液を調製した。
模擬胆汁酸塩培養液の調製：ＭＲＳブロス培養液を調製し、滅菌後、ウシ胆汁酸塩を０．１％の濃度まで添加し、１ｍｏｌ／ＬのＨＣＬでｐＨを８．０に調整した後、０．２２μｍの微孔質膜で濾過滅菌し、これにより胆汁酸塩培養液を調製した。
模擬胃酸培養液の調製：ＭＲＳブロス培養液を調製し、滅菌後、１ｍｏｌ／ＬのＨＣＬでｐＨ値を３．０に調整し、これにより模擬胃酸培養液を調製した。
模擬胆汁酸塩培養液の調製：ＭＲＳブロス培養液を調製し、滅菌後、ウシ胆汁酸塩を０．１％の濃度まで添加し、１ｍｏｌ／ＬのＨＣＬでｐＨを８．０に調整した後、０．２２μｍの微孔質膜で濾過滅菌し、これにより胆汁酸塩培養液を調製した。
【0078】
１．３ 胃酸および胆汁酸塩の忍容試験
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の酸忍容試験：０．９ｍＬの模擬胃酸培養液をＥＰ管に入れ、調製した細菌懸濁液０．１ｍＬを加え、ボルテックスしてよく混合した後、嫌気性インキュベーターに入れ、３７℃で２時間培養した。試験は０時間目および２時間目に行い、各時点での株について３つの平行試験を設定した。ｐＨを調整していないＭＲＳブロス（ｐＨ＝７）を対照として使用し、細菌の増殖を観察し、他の因子によって引き起こされる細菌の死滅を除外した。
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の酸忍容試験：０．９ｍＬの模擬胃酸培養液をＥＰ管に入れ、調製した細菌懸濁液０．１ｍＬを加え、ボルテックスしてよく混合した後、嫌気性インキュベーターに入れ、３７℃で２時間培養した。試験は０時間目および２時間目に行い、各時点での株について３つの平行試験を設定した。ｐＨを調整していないＭＲＳブロス（ｐＨ＝７）を対照として使用し、細菌の増殖を観察し、他の因子によって引き起こされる細菌の死滅を除外した。
【0079】
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の胆汁酸塩忍容試験：０．９ｍＬの胆汁酸塩培養液をＥＰ管に入れ、調製した細菌懸濁液０．１ｍＬを加え、ボルテックスしてよく混合した後、嫌気性インキュベーターに入れ、３７℃で２４時間培養した。試験は０時間目および２４時間目に行い、各時点での株について３つの平行試験を設定した。胆汁酸塩を含まないＭＲＳブロス（ｐＨ＝７）を対照として使用し、細菌の増殖を観察し、他の因子によって引き起こされる細菌の死滅を除外した。
【0080】
上記培養終了後、直ちに１０倍勾配希釈を行い、適切な希釈度の希釈液をＴＯＳプレートにスポット接種し、嫌気性条件下、３７℃で２４～４８時間培養し、計数に付した。０時間目の希釈接種の計数結果を初期細菌濃度として使用した。結果を、以下の式に従って算出した生存率と比較した：
生存率（％）＝培養後の生菌濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）／０時間目の生菌濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）×１００
実験結果は、ｐＨ＝３の模擬胃酸培養溶液中で２時間消化後のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の生存率は８６．３％であり；胆汁酸塩培養溶液中で２４時間培養後の生存率は７３．６％であることを示した。したがって、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１は、胃酸および胆汁酸塩に対し良好な忍容性を有し、上部消化管の極限環境に効果的に耐性を示して、結腸などの下部消化管に到達して健全な機能を発揮できることがわかった。したがって、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１は、プロバイオティクスとしての基本的要件を満たしている。
生存率（％）＝培養後の生菌濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）／０時間目の生菌濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）×１００
実験結果は、ｐＨ＝３の模擬胃酸培養溶液中で２時間消化後のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の生存率は８６．３％であり；胆汁酸塩培養溶液中で２４時間培養後の生存率は７３．６％であることを示した。したがって、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１は、胃酸および胆汁酸塩に対し良好な忍容性を有し、上部消化管の極限環境に効果的に耐性を示して、結腸などの下部消化管に到達して健全な機能を発揮できることがわかった。したがって、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１は、プロバイオティクスとしての基本的要件を満たしている。
【0081】
２． Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の腸粘膜への接着能
２．１ 接着試験法：ＴＯＳプレート上で３世代にわたりＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１を蘇生および二次培養した後、細菌懸濁液のＯＤ６００吸光度を１．０５１±０．００５（１×１０９ＣＦＵ／ｍＬの濃度）に調整した。市販株Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ ｓｕｂｓｐ．Ｌａｃｔｉｓ ＢＢ－１２およびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＧＧを、平行実験のための対照株として使用し、それらの細菌懸濁液を、上記と同じ方法に従って調製した。
２．１ 接着試験法：ＴＯＳプレート上で３世代にわたりＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１を蘇生および二次培養した後、細菌懸濁液のＯＤ６００吸光度を１．０５１±０．００５（１×１０９ＣＦＵ／ｍＬの濃度）に調整した。市販株Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ ｓｕｂｓｐ．Ｌａｃｔｉｓ ＢＢ－１２およびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＧＧを、平行実験のための対照株として使用し、それらの細菌懸濁液を、上記と同じ方法に従って調製した。
【0082】
５００μｇ／ｍＬのムチン溶液を１ウェル当たり１００μＬで９６ウェルのＭａｘｉｓｏｒｐプレート（Ｎｕｎｃ）に加え、４℃の冷蔵庫で一晩インキュベートした。それを取り出し、１ウェル当たり２００μＬのＰＢＳで３回洗浄した後、１％のＴｗｅｅｎ ２０を含有する１ウェル当たり１００μＬのＰＢＳで１時間にわたり遮断した。調製した細菌懸濁液１００μＬを取りマイクロウェルに加え、各株について３つの平行物を設定した。同時に、添加する細菌懸濁液の代わりにＰＢＳをブランク対照として使用し、３つの平行物を設定した。４℃の冷蔵庫でインキュベーションを一晩行った。インキュベーション後、それを取り出し、０．０５％のＴｗｅｅｎ ２０を含有するＰＢＳで３回洗浄して、未接着細菌を除去した。その後、６０℃のオーブンで１時間乾燥した。乾燥したマイクロプレートに１ウェル当たり１００μＬの１％クリスタルバイオレット溶液を加え、４５分間染色した。次いで、ＰＢＳで６回洗浄し、無水エタノールを加え、１０分間そのまま放置して染色液を放出させた。最後に、５９０ｎｍの波長における各ウェルの吸光度をマイクロプレートリーダーにより測定した。
【0083】
２．２ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の接着の結果：Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の接着試験の結果を表３に示した。
【0084】
【表3】
【0085】
ムチンは、多量の粘液を産生する腸上皮細胞の主要構成要素である。粘液は病原性微生物との接触から腸粘膜細胞を保護し、病原性細菌が上皮細胞に侵入するのを防ぎ、それによって上皮細胞の正常な機能を保護することができる。プロバイオティクスは、腸粘膜の付着点を占拠することによって、腸上皮細胞に、腸粘膜表面にバイオフィルムを形成するムチンを分泌させて、外来細菌が腸粘膜に付着するのを防ぐことができることが、研究により示されている。ムチンのオリゴ糖鎖は、さまざまなプロバイオティクスに結合する多数の特異的部位を含有し、特に糖鎖末端のエピトープは、腸内プロバイオティクスのフローラを選別および同定し、腸内プロバイオティクスのコロニー形成を補助することもできる。
【0086】
本実験の結果は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１が、市販株Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ ＢＢ１２およびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＬＧＧと比較して、同様のムチン結合能を有することを示した。したがって、出願人は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１は腸粘膜に効果的に付着することができ、優れたコロニー形成能を有すると考える。これに基づき、それは、腸粘膜の表面を占拠し、プロバイオティクスのバリアを形成し、有害細菌のコロニー形成および侵入を抑制し、これにより、腸内フローラを効果的に調節し、腸免疫細胞の正常な免疫機能を保護する。
【0087】
実施例３． 細胞実験によるＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の免疫特性
１． 実験方法
マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７（５×１０５／ｍＬ）を培養し、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１懸濁液を１０９ＣＦＵ／ｍＬの濃度を有するように調整し、１０倍希釈して細胞と共培養し、実験群として用いた；ＰＧＮを陽性対照として用い（ＰＧＮはグラム陽性菌のペプチドグリカンであり、宿主免疫細胞の炎症を刺激および誘導するグラム陽性菌における主要物質であるため、本実験の陽性対照として用いた）、Ｂｂ－１２およびＬＧＧを商業的対照株として用い、ＲＰＭＩ１６４０培地をブランク対照として用い、各群につき３つの平行試料を設定した。２４時間の共培養後、細胞上清を収集し、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）により、表４に示すようなサイトカイン発現タンパク質の分泌レベルを検出した。Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１は、同じ方法によりヒトマクロファージＴＨＰ－１を刺激するためにも使用し、ヒト細胞に対する免疫調節効果が観察された。
１． 実験方法
マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７（５×１０５／ｍＬ）を培養し、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１懸濁液を１０９ＣＦＵ／ｍＬの濃度を有するように調整し、１０倍希釈して細胞と共培養し、実験群として用いた；ＰＧＮを陽性対照として用い（ＰＧＮはグラム陽性菌のペプチドグリカンであり、宿主免疫細胞の炎症を刺激および誘導するグラム陽性菌における主要物質であるため、本実験の陽性対照として用いた）、Ｂｂ－１２およびＬＧＧを商業的対照株として用い、ＲＰＭＩ１６４０培地をブランク対照として用い、各群につき３つの平行試料を設定した。２４時間の共培養後、細胞上清を収集し、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）により、表４に示すようなサイトカイン発現タンパク質の分泌レベルを検出した。Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１は、同じ方法によりヒトマクロファージＴＨＰ－１を刺激するためにも使用し、ヒト細胞に対する免疫調節効果が観察された。
【0088】
２． マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７の実験結果および解析
２．１ 酵素結合免疫吸着測定法の結果および解析
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１とマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７の共培養物のＥＬＩＳＡ実験の結果を表４に示した。
２．１ 酵素結合免疫吸着測定法の結果および解析
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１とマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７の共培養物のＥＬＩＳＡ実験の結果を表４に示した。
【0089】
【表4】
【0090】
結果は、対照群と比較して、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１はサイトカインＩＬ－６、ＩＬ－１０およびＴＮＦ－αの遺伝子の発現レベルの上昇を刺激することができ、マクロファージの活性化を誘導することを示した。とりわけ、ＥＬＩＳＡの結果は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１での刺激後、抗炎症因子ＩＬ－１０のレベルは著しく上昇し、特にＢｂ－１２、ＬＧＧ、ＰＧＮ群および対照群より著しく高いことを示した。Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１はマクロファージを刺激して多量の抗炎症性サイトカインＩＬ－１０を分泌させることができ、このＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍが、抗炎症活性の可能性を有し、炎症を軽減し炎症性疾患を改善することができることを示唆していた。
【0091】
３． ヒトマクロファージＴＨＰ－１の実験結果および解析
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１とヒトマクロファージＴＨＰ－１の共培養物のＥＬＩＳＡ実験の結果を表５に示した。
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１とヒトマクロファージＴＨＰ－１の共培養物のＥＬＩＳＡ実験の結果を表５に示した。
【0092】
【表5】
【0093】
表５の結果から、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１はヒトマクロファージに対し動物細胞に対するのと同様の免疫学的効果を示し、その活性化効果は陽性対照ＰＧＮより著しく高いことがわかった。上記２つの実験から、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１は、マクロファージの免疫応答を刺激してマクロファージに抗炎症性サイトカインＩＬ－１０を分泌させる重要な免疫効果を有することがわかった。
【0094】
実施例４． Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の免疫調節能試験
１. 実験方法：
６週齢、体重１８～２０ｇの雄ＢＡＬＢ／Ｃマウスを合計１８匹選択した。それらを、対照群の６匹、動物実験および臨床試験において最も顕著な免疫調節能を有することが証明されている市販のプロバイオティクス株ＬＧＧの介入対照群の６匹、およびＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の介入対照群の６匹の３群に分けた。対照群の動物には１日当たり０．２ｍＬの正常食塩溶液を与え、プロバイオティクス介入群の動物には１日当たり０．２ｍＬの細菌液を与えた（細菌含量は１０９ｃｆｕであった）。各群の動物を４週間飼育した後、殺処分した。
１. 実験方法：
６週齢、体重１８～２０ｇの雄ＢＡＬＢ／Ｃマウスを合計１８匹選択した。それらを、対照群の６匹、動物実験および臨床試験において最も顕著な免疫調節能を有することが証明されている市販のプロバイオティクス株ＬＧＧの介入対照群の６匹、およびＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の介入対照群の６匹の３群に分けた。対照群の動物には１日当たり０．２ｍＬの正常食塩溶液を与え、プロバイオティクス介入群の動物には１日当たり０．２ｍＬの細菌液を与えた（細菌含量は１０９ｃｆｕであった）。各群の動物を４週間飼育した後、殺処分した。
【0095】
試料収集：経管投与実験の開始前日に、すべてのマウスの体重を測定し、それらの糞を収集した。実験１４日目に、すべてのマウスの体重を測定し、それらの糞を収集した。実験２８日目に、すべてのマウスの体重を測定し、糞を収集した後、殺処分し、臓器（脾臓、肺、胸腺、肝臓）を収集し、秤量した。
指標の測定：脾臓および胸腺の臓器係数を、秤量法の使用により決定した；脾臓組織におけるサイトカイン遺伝子の発現はＲＴ‐ＰＣＲ法により決定した。
指標の測定：脾臓および胸腺の臓器係数を、秤量法の使用により決定した；脾臓組織におけるサイトカイン遺伝子の発現はＲＴ‐ＰＣＲ法により決定した。
【0096】
２． 実験結果：
介入前後で各群の体重に顕著な差はなく、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１はマウスの正常発育に悪影響を及ぼさないことが示された。群間で脾臓係数および胸腺係数に顕著な差はなく、プロバイオティクスの免疫調節効果の発揮が臓器の正常機能に影響しないことが示された。表６に示すように、動物実験は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１がマクロファージを活性化して、さまざまな関連するサイトカインの分泌を刺激することを示した。ＩＬ－１０は、多機能性の負の調節性サイトカインであった；プロバイオティクスが炎症誘発性応答（ＩＬ－６およびＴＮＦ－αの産生）を活性化した場合、大量の抗炎症因子ＩＬ－１０の分泌が促進されたことから、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１は炎症性応答のバランスをとり、細胞性免疫の恒常性を維持できることが示された。マクロファージを活性化してサイトカインを分泌させるＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の能力は、市販株ＬＧＧより高い（表６）。動物実験の結果は、細胞実験の結果と一致していた。
介入前後で各群の体重に顕著な差はなく、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１はマウスの正常発育に悪影響を及ぼさないことが示された。群間で脾臓係数および胸腺係数に顕著な差はなく、プロバイオティクスの免疫調節効果の発揮が臓器の正常機能に影響しないことが示された。表６に示すように、動物実験は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１がマクロファージを活性化して、さまざまな関連するサイトカインの分泌を刺激することを示した。ＩＬ－１０は、多機能性の負の調節性サイトカインであった；プロバイオティクスが炎症誘発性応答（ＩＬ－６およびＴＮＦ－αの産生）を活性化した場合、大量の抗炎症因子ＩＬ－１０の分泌が促進されたことから、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１は炎症性応答のバランスをとり、細胞性免疫の恒常性を維持できることが示された。マクロファージを活性化してサイトカインを分泌させるＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の能力は、市販株ＬＧＧより高い（表６）。動物実験の結果は、細胞実験の結果と一致していた。
【0097】
【表6】
【0098】
実施例５． Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１のアレルギー反応抑制試験
１． 実験方法：
本実験では、卵白アルブミン（ＯＶＡ）を用いてマウス血清ＩｇＥ過敏症モデルを樹立した。動物実験および臨床試験において顕著なアレルギー反応抑制能を有することが示されていた市販のプロバイオティクス株ＬＧＧを対照として用いて、アレルギー反応の抑制に対するＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の効果を試験した。
１． 実験方法：
本実験では、卵白アルブミン（ＯＶＡ）を用いてマウス血清ＩｇＥ過敏症モデルを樹立した。動物実験および臨床試験において顕著なアレルギー反応抑制能を有することが示されていた市販のプロバイオティクス株ＬＧＧを対照として用いて、アレルギー反応の抑制に対するＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の効果を試験した。
【0099】
実験群分け：６週齢、１８～２０ｇの雄ＢＡＬＢ／Ｃマウスを合計６０匹選択し、表７に示すように群分けした：
【0100】
【表7】
【0101】
介入：ＯＶＡ試薬は、４０ｕｇのＯＶＡ＋０．２ｍＬのＡＬ（ＯＨ）３アジュバント（絶対用量は４ｍｇのＡＬ（ＯＨ）３であった）であった。プロバイオティクス群の絶対用量は１０９ＣＦＵであり、経管投与量は０．２ｍＬ／動物／日であった。４２日間の給餌後、４回の腹腔内ＯＶＡ注射介入をそれぞれ７日目、２１日目、２８日目、および３５日目に実施した。
試料の収集および検出：４２日目に動物を殺処分し、血清ＩｇＥ含量および脾臓サイトカインの発現を決定した。
試料の収集および検出：４２日目に動物を殺処分し、血清ＩｇＥ含量および脾臓サイトカインの発現を決定した。
【0102】
２． 実験結果：
ＩｇＥはＩ型過敏症の主要メディエーターであり、Ｉ型過敏症はほとんどのアレルギー疾患の主要な生理学的機序である。結果は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１がアレルギーマウスモデルにおいて血清ＩｇＥのレベルを低下させ、ＩｇＥ媒介アレルギー反応を抑制し、アレルギー疾患を緩和することができることを示した（図３）。また、本実験は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の血清ＩｇＥ低減能が市販株ＬＧＧよりも高いことを示した。
ＩｇＥはＩ型過敏症の主要メディエーターであり、Ｉ型過敏症はほとんどのアレルギー疾患の主要な生理学的機序である。結果は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１がアレルギーマウスモデルにおいて血清ＩｇＥのレベルを低下させ、ＩｇＥ媒介アレルギー反応を抑制し、アレルギー疾患を緩和することができることを示した（図３）。また、本実験は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１の血清ＩｇＥ低減能が市販株ＬＧＧよりも高いことを示した。
【0103】
脾臓サイトカインの検出結果は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ ２０７－１が脾臓における抗炎症因子ＩＬ－１０の発現を著しく増加させることを示した（表８）。ＩＬ－１０はＴＨ１およびＴＨ２の調節に関与し得ることを示す報告がある。上記結果の解析に基づき、本出願のプロバイオティクスはＩＬ－１０の発現を誘導し、それによってＴＨ１およびＴＨ２細胞の活性を抑制し、身体の免疫応答レベルをダウンレギュレートし、それによってアレルギー反応を達成し得ると考えられる。
【0104】
【表8】
【図1】
【図2】
【図3】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2022-06-16
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫、これに関し、該Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託されており、ＧＤＭＣＣ番号６０９６２の受託番号を有する。
【請求項2】
請求項１に記載のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫を含む組成物；好ましくは、該組成物は、細菌、真菌（例えば、酵母）、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される微生物をさらに含み；
好ましくは、微生物はプロバイオティクスであり；
好ましくは、細菌は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、酵母は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【請求項3】
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．の細菌が、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項２に記載の組成物。
【請求項4】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．の細菌が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｅｒｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｋｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；好ましくは、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．の細菌が、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．の細菌が、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｈｅｒｍａｎｉｉ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．の細菌が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．の細菌が、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓであり；
好ましくは、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．の細菌が、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、
請求項２に記載の組成物。
【請求項5】
組成物が追加的な添加剤をさらに含む、請求項２に記載の組成物、好ましくは、追加的な添加剤は、他の栄養素（例えば、食物繊維、プレバイオティクス、タンパク質、脂質、ミネラル、ビタミン、植物成分（例えば、抽出物およびポリフェノール）、ミネラル、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、組成物は、スターター培養物（例えば、植物発酵製品のためのスターター培養物、乳製品のためのスターター培養物）として使用され；
好ましくは、組成物中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、発酵プロセスに関与するためのスターター培養物として使用され；
好ましくは、組成物は、食品製品および／または栄養補助食品（例えば、ヘルスケア食品）を調製するために使用され；
好ましくは、食品製品は、固形飲料、キャンディ、もしくは果汁からなる群より選択されるか、または食品製品は乳製品（例えば、ヨーグルト、フレーバー発酵乳、乳酸菌飲料、チーズ）であり；
好ましくは、栄養補助食品は、経口投与のために製剤化され；
好ましくは、栄養補助食品は、丸剤、粉末、カプセル剤、錠剤、顆粒粉末、オペルキュラム、経口溶解顆粒、サシェ剤、糖衣錠または液体の形態にあり；
好ましくは、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、１０６～１０１２ＣＦＵ／用量（例えば、１０８～１０１２ＣＦＵ／用量）の量で組成物中に存在する。
【請求項6】
請求項１に記載のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または請求項２～５のいずれか一項に記載の組成物を含む、食品製品または栄養補助食品；好ましくは、食品製品は、固形飲料、キャンディ、もしくは果汁からなる群より選択されるか、または食品製品は乳製品（例えば、ヨーグルト、フレーバー発酵乳、乳酸菌飲料、チーズ）であり；
好ましくは、栄養補助食品は、経口投与のために製剤化され；
好ましくは、栄養補助食品は、丸剤、粉末、カプセル剤、錠剤、顆粒粉末、オペルキュラム、経口溶解顆粒、サシェ剤、糖衣錠または液体の形態にあり；
好ましくは、食品製品または栄養補助食品中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、１０６～１０１２ＣＦＵ／用量（例えば、１０８～１０１２ＣＦＵ／用量）の量で存在する。
【請求項7】
請求項１に記載のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫を含む医薬組成物；好ましくは、医薬組成物はＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅの製剤を含み；
好ましくは、医薬組成物は医薬的に許容しうるキャリアを含み；
好ましくは、医薬組成物は経口投与のために製剤化され；
好ましくは、医薬組成物は、丸剤、粉末、カプセル剤、錠剤、顆粒粉末、オペルキュラム、経口溶解顆粒、サシェ剤、糖衣錠または液体の形態にあり；
好ましくは、医薬組成物中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅは、１０６～１０１２ＣＦＵ／用量（例えば、１０８～１０１２ＣＦＵ／用量）の量で存在する。
【請求項8】
請求項１に記載のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫を含む培養物；好ましくは、培養物は、細菌、真菌（例えば、酵母）、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される微生物をさらに含み；
好ましくは、培養物は、栄養提供成分（例えば、固体または液体培地、フィーダー細胞層）をさらに含み；
好ましくは、栄養提供成分は、タンパク質、炭水化物、脂肪、プロバイオティクス、酵素、ビタミン、免疫調節剤、代用乳、ミネラル、アミノ酸、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、培養物は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅまたはその子孫の無細胞培養濾液をさらに含み；
好ましくは、培養物は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅの誘導体またはその子孫をさらに含み；
好ましくは、誘導体は、代謝産物、酵素、細胞構造構成要素（例えば、細胞壁またはその構成要素）、細胞外多糖、バクテリオシン、免疫原性構成要素を含有する化合物、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、微生物は、生存または死滅しており、溶解物もしくは抽出物として、または細菌産物として、または上清として存在する。
【請求項9】
請求項１に記載のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または請求項２～５に記載の組成物、または請求項７に記載の医薬組成物、または請求項８に記載の培養物の、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品の製造における使用、ここで、該医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、被験体において炎症を抑制するか、または炎症性疾患を緩和するために、あるいは被験体の免疫を改善するために、あるいは被験体における細菌性もしくはウイルス性感染症または自己免疫疾患を予防するために、あるいは被験体におけるアレルギー反応または症状を改善または緩和するために使用され；好ましくは、炎症性疾患は、網膜炎症によって引き起こされる疾患（例えば、網膜炎、角膜炎）、皮膚炎症によって引き起こされる疾患（例えば、皮膚炎、湿疹）、気道炎症によって引き起こされる疾患（例えば、上気道感染症）、および消化管炎症によって引き起こされる疾患（例えば、炎症性腸疾患）からなる群より選択され；
好ましくは、細菌性またはウイルス性感染症は、細菌性インフルエンザ、ウイルス性インフルエンザ、尿路感染症、膣炎および子宮頸管炎からなる群より選択され；
好ましくは、自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス、糖尿病、関節リウマチ、および自己免疫性脳炎からなる群より選択され；
好ましくは、アレルギー反応またはその症状は、湿疹、アトピー性皮膚炎、喘息、および食物アレルギーからなる群より選択され；
好ましくは、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、免疫細胞の活性化を促進し、サイトカインの産生を促進し、炎症を抑制し、または炎症性疾患を緩和することができ；
好ましくは、サイトカインは、ＩＬ－１０、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＴＮＦ－α、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択され；
好ましくは、抗炎症性サイトカインはＩＬ－１０であり；
好ましくは、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、ＩｇＥレベルを低下させ、ＩｇＥ媒介アレルギー反応を抑制することができ；
好ましくは、医薬品または栄養補助食品またはヘルスケア製品は、単独で、または追加的な抗真菌薬、鎮痛薬、抗炎症薬、治癒薬、もしくは保湿剤と組み合わせて使用され；
好ましくは、被験体は哺乳類であり；
好ましくは、被験体はヒトである。
【請求項10】
請求項１に記載のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅもしくはその子孫、または請求項２～５に記載の組成物、または請求項８に記載の培養物の、スターター培養物の製造における使用、ここで、該スターター培養物は、固体食品（例えば、チーズ）または液体食品（例えば、ヨーグルト、フレーバー発酵乳、乳酸菌飲料）の発酵に使用される。
【国際調査報告】