▶ ドラゴンフライ セラピューティクス， インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-12-13
(54)【発明の名称】ＦＬＴ３を標的とする抗体およびその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/62 20060101AFI20221206BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20221206BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20221206BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20221206BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20221206BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20221206BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20221206BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20221206BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20221206BHJP
C07K 14/55 20060101ALN20221206BHJP
C07K 14/54 20060101ALN20221206BHJP
C07K 14/56 20060101ALN20221206BHJP
C07K 14/525 20060101ALN20221206BHJP
C12N 5/0783 20100101ALN20221206BHJP
【ＦＩ】
C12N15/62 Z
C07K16/28 ZNA
C07K19/00
C12N15/12
C12N15/13
C12N15/63 Z
C12N5/10
A61P35/02
A61K39/395 N
C07K14/55
C07K14/54
C07K14/56
C07K14/525
C12N5/0783
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022522653
(86)(22)【出願日】2020-10-14
(85)【翻訳文提出日】2022-06-13
(86)【国際出願番号】 US2020055480
(87)【国際公開番号】W WO2021076554
(87)【国際公開日】2021-04-22
(31)【優先権主張番号】62/915,120
(32)【優先日】2019-10-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
２．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】519288755
【氏名又は名称】ドラゴンフライ セラピューティクス， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100122301
【弁理士】
【氏名又は名称】冨田 憲史
(74)【代理人】
【識別番号】100157956
【弁理士】
【氏名又は名称】稲井 史生
(74)【代理人】
【識別番号】100170520
【弁理士】
【氏名又は名称】笹倉 真奈美
(74)【代理人】
【識別番号】100221545
【弁理士】
【氏名又は名称】白江 雄介
(72)【発明者】
【氏名】バルアー，ヘマンタ
(72)【発明者】
【氏名】チャン，グレゴリー ピー
(72)【発明者】
【氏名】チョン，アン エフ
(72)【発明者】
【氏名】グリンバーグ，アシャ
(72)【発明者】
【氏名】ジュオ，ゾン ショーン
(72)【発明者】
【氏名】マッケイド，トーマス ジェイ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AA94X
4B065AA94Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA44
4C085AA14
4C085CC23
4C085GG01
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA41
4H045BA72
4H045CA40
4H045DA02
4H045DA04
4H045DA16
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
対となって細胞上のＦＬＴ３を標的とする抗原結合部位を形成することができる抗体重鎖可変ドメインおよび抗体軽鎖可変ドメインを備えるタンパク質と、かかるタンパク質を含む医薬組成物と、がんの処置のためを含めて、かかるタンパクおよび医薬組成物を使用する治療方法とが開示される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５５のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、および相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位。
【請求項2】
前記ＶＨの前記ＣＤＲ３が配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗原結合部位。
【請求項3】
前記ＶＨの前記ＣＤＲ３が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗原結合部位。
【請求項4】
前記ＶＨが配列番号３７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＬが配列番号３８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
【請求項5】
前記ＶＨが配列番号５３のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＬが配列番号４２のアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
【請求項6】
前記ＶＨおよび前記ＶＬが、それぞれ、配列番号９および１０；１３および１０；１７および１０；９および２２；９および２６；９および３０；９および３４；３７および３８；４１および４２；４５および４２；または４９および４２のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗原結合部位。
【請求項7】
（ａ）それぞれ、配列番号５９、６３、および５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；（ｂ）それぞれ、配列番号８６、６６、および６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位。
【請求項8】
前記ＶＨが、それぞれ、配列番号７８、６３、７９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬが、それぞれ、配列番号８０、６６、６７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、請求項７に記載の抗原結合部位。
【請求項9】
前記ＶＨが、それぞれ、配列番号６２、６３、６４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＬが、配列番号６５、６６、６７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、請求項７に記載の抗原結合部位。
【請求項10】
前記ＶＨが配列番号７６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＬが配列番号７７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の抗原結合部位。
【請求項11】
前記ＶＨが配列番号２９のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＬが配列番号８４のアミノ酸配列を含む、請求項７～１０のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
【請求項12】
前記ＶＨおよび前記ＶＬが、それぞれ、配列番号６８および６９；７２および７３；または７６および７７のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の抗原結合部位。
【請求項13】
（ａ）それぞれ、配列番号８７、８８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；（ｂ）それぞれ、配列番号９１、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位。
【請求項14】
（ａ）それぞれ、配列番号９７、９９、および１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；（ｂ）それぞれ、配列番号１０１、１０２、および１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位。
【請求項15】
（ａ）それぞれ、配列番号８７、９８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；（ｂ）それぞれ、配列番号１０６、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位。
【請求項16】
（ａ）それぞれ、配列番号１０９、１１０、および１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；（ｂ）それぞれ、配列番号１１２、１１３、および１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位。
【請求項17】
（ａ）それぞれ、配列番号１１７、１１８、および１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；（ｂ）それぞれ、配列番号１２０、１２１、および１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位。
【請求項18】
（ａ）それぞれ、配列番号８７、９８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；（ｂ）それぞれ、配列番号１０６、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位。
【請求項19】
（ａ）それぞれ、配列番号６２、３３、および１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；（ｂ）それぞれ、配列番号１２８、１２９、および１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位。
【請求項20】
（ａ）それぞれ、配列番号１３２、１３３、および１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；（ｂ）それぞれ、配列番号６５、６６、および４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位。
【請求項21】
請求項１３～１５および１８～１９のいずれか一項に記載の抗原結合部位と競合する抗原結合部位。
【請求項22】
表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）によって測定して、２０ｎＭよりも小さいかまたはこれに等しい解離定数（ＫＤ）でヒトＦＬＴ３と結合する、先行請求項のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
【請求項23】
ＳＰＲによって測定して１０ｎＭよりも小さいかまたはこれに等しいＫＤでヒトＦＬＴ３と結合する、請求項１～６、１３、１４、および１８のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
【請求項24】
配列番号２５のアミノ酸配列を含むヒトＦＬＴ３変異体と結合する、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
【請求項25】
配列番号１８のアミノ酸配列を含むヒトＦＬＴ３変異体と結合する、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
【請求項26】
カニクイザルＦＬＴ３と結合する、請求項１～１６および１８～２５のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
【請求項27】
ＦＬＴ３との結合にあたりＦＬＴ３Ｌと競合しない、請求項１～１５および１７～２６のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
【請求項28】
単鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）として存在する、先行請求項のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
【請求項29】
前記ｓｃＦｖが、配列番号３、１２、１５、１６、１９、２０、２３、２４、２７、２８、３１、３２、３５、３６、３９、４０、４３、４４、４７、４８、５１、５２、７０、７１、７４、７５、８１、および８２から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の抗原結合部位。
【請求項30】
先行請求項のいずれか一項に記載の抗原結合部位を含むタンパク質。
【請求項31】
抗体重鎖定常領域をさらに含む、請求項３０に記載のタンパク質。
【請求項32】
前記抗体重鎖定常領域がヒトＩｇＧ重鎖定常領域である、請求項３１に記載のタンパク質。
【請求項33】
前記抗体重鎖定常領域がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域である、請求項３２に記載のタンパク質。
【請求項34】
前記抗体重鎖定常領域の各ポリペプチド鎖が、配列番号２１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３２または３３に記載のタンパク質。
【請求項35】
前記抗体重鎖定常領域の少なくとも１つのポリペプチド鎖が、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１、およびＫ４３９から選択される１つまたは複数の位置に、配列番号２１に対する１つまたは複数の突然変異を含む、請求項３２～３４のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項36】
前記抗体重鎖定常領域の少なくとも１つのポリペプチド鎖が、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｙ３４９Ｓ、Ｙ３４９Ｋ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｄ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｃ、Ｌ３５１Ｋ、Ｌ３５１Ｄ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｋ、Ｅ３５７Ｑ、Ｅ３５７Ｌ、Ｅ３５７Ｗ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３６０Ｗ、Ｑ３６２Ｅ、Ｓ３６４Ｋ、Ｓ３６４Ｅ、Ｓ３６４Ｈ、Ｓ３６４Ｄ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｉ、Ｔ３６６Ｌ、Ｔ３６６Ｍ、Ｔ３６６Ｋ、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｅ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｄ、Ｋ３７０Ｓ、Ｎ３９０Ｄ、Ｎ３９０Ｅ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｆ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ３９２Ｅ、Ｔ３９４Ｆ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｖ、Ｓ４００Ｋ、Ｓ４００Ｒ、Ｄ４０１Ｋ、Ｆ４０５Ａ、Ｆ４０５Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｉ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ｆ、Ｋ４０９Ｗ、Ｋ４０９Ｄ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｋ４３９Ｄ、およびＫ４３９Ｅから選択される、配列番号２１に対する１つまたは複数の突然変異を含む、請求項３２～３５のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項37】
前記抗体重鎖定常領域の一方のポリペプチド鎖が、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１およびＫ４３９から選択される１つまたは複数の位置に、配列番号２１に対する１つまたは複数の突然変異を含み；かつ前記抗体重鎖定常領域の他方のポリペプチド鎖は、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１、およびＫ４３９から選択される１つまたは複数の位置に、配列番号２１に対する１つまたは複数の突然変異を含む、請求項３２～３６のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項38】
前記抗体重鎖定常領域の一方のポリペプチド鎖が、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、配列番号２１に対するＫ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗの置換を含み；かつ前記抗体重鎖定常領域の他方のポリペプチド鎖は、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、配列番号２１に対するＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔの置換を含む、請求項３７に記載のタンパク質。
【請求項39】
前記抗体重鎖定常領域の一方のポリペプチド鎖が、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、配列番号２１に対するＹ３４９Ｃの置換を含み；かつ前記抗体重鎖定常領域の他方のポリペプチド鎖は、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、配列番号２１に対するＳ３５４Ｃの置換を含む、請求項３７または３８に記載のタンパク質。
【請求項40】
請求項３０～３９のいずれか一項に記載のタンパク質および薬物部分を含む抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項41】
前記薬物部分が、オーリスタチン、Ｎ－アセチル－γカリケアマイシン、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピン、およびＳＮ－３８からなる群から選択される、請求項４０に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項42】
請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗原結合部位およびサイトカインを含む免疫サイトカイン。
【請求項43】
前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＮＦ、およびＩＦＮαからなる群から選択される、請求項４２に記載の免疫サイトカイン。
【請求項44】
請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗原結合部位およびＣＤ３と結合する抗原結合部位を含む二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー。
【請求項45】
（ａ）請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗原結合部位と；（ｂ）膜貫通ドメインと；
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインと
を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項46】
前記膜貫通ドメインが、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＦＬＴ３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、およびＣＤ１５４の膜貫通領域から選択される、請求項４５に記載のＣＡＲ。
【請求項47】
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ、共通ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２の機能性シグナル伝達ドメインを含む一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項４５または４６に記載のＣＡＲ。
【請求項48】
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、共刺激受容体の機能性シグナル伝達ドメインを含む共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項４５～４７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項49】
前記共刺激受容体が、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２５８、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３に結合するリガンド、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳおよび４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項４８に記載のＣＡＲ。
【請求項50】
請求項４５～４９のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする分離された核酸。
【請求項51】
請求項５０に記載の分離された核酸を含む発現ベクター。
【請求項52】
請求項５０に記載の核酸または請求項５１に記載の発現ベクターを含む免疫エフェクター細胞。
【請求項53】
請求項４５～４９のいずれか一項に記載のＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞。
【請求項54】
Ｔ細胞である、請求項５２または５３に記載の免疫エフェクター細胞。
【請求項55】
前記Ｔ細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＮＫＴ細胞である、請求項５４に記載の免疫エフェクター細胞。
【請求項56】
ＮＫ細胞である、請求項５２または５３に記載の免疫エフェクター細胞。
【請求項57】
請求項３０～３９のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項４０または４１に記載の抗体－薬物コンジュゲート、請求項４２または４３に記載の免疫サイトカイン、請求項４４に記載の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、または請求項５２～５６のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞；および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項58】
がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、請求項３０～３９のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項４０または４１に記載の抗体－薬物コンジュゲート、請求項４２または４３に記載の免疫サイトカイン、請求項４４に記載の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、請求項５２～５６のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞、または請求項５７に記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む方法。
【請求項59】
前記がんが血液悪性腫瘍である、請求項５８に記載の方法。
【請求項60】
前記血液悪性腫瘍が白血病である、請求項５９に記載の方法。
【請求項61】
前記がんが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成、急性Ｔリンパ芽球性白血病、および急性前骨髄球性白血病からなる群から選択される、請求項５９または６０に記載の方法。
【請求項62】
前記がんがＦＬＴ３を発現する、請求項５８～６１のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本願は、２０１９年１０月１５日に出願された米国仮出願第６２／９１５，１２０号の優先権を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表
本願には、ＡＳＣＩＩテキスト形式のコンピュータ読み取り可能な形式（ＣＲＦ）の配列表が参照によりにその全体が組み入れられる。配列表のテキストファイルは「１４２４７－４７３－８８８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ」という名称で、２０２０年１０月５日に作成したものであり、サイズは１５２，３２７バイトである。
本願には、ＡＳＣＩＩテキスト形式のコンピュータ読み取り可能な形式（ＣＲＦ）の配列表が参照によりにその全体が組み入れられる。配列表のテキストファイルは「１４２４７－４７３－８８８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ」という名称で、２０２０年１０月５日に作成したものであり、サイズは１５２，３２７バイトである。
【0003】
本発明は、対となって細胞上のＦＬＴ３を標的とする抗原結合部位を形成することができる抗体重鎖可変ドメインおよび抗体軽鎖可変ドメインを備えるタンパク質と、かかるタンパク質を含む医薬組成物と、がんの処置のためを含めて、かかるタンパクおよび医薬組成物を使用する治療方法とを提供する。
【背景技術】
【0004】
がんは、相当な研究努力および科学的進歩が本疾患を処置するために文献で報告されているにもかかわらず、重大な健康問題であり続けている。成人において最も頻繁に診断されるがんの一部としては、前立腺がん、乳がん、および肺がんが挙げられる。血液悪性腫瘍は、固形がんよりも頻度は少ないが、低い生存率を有する。これらのがんに対する現在の処置オプションは、すべての患者にとって有効なわけではなく、かつ／または実質的な有害な副作用を有するおそれがある。他の種類のがんも、既存の治療オプションを使用して処置するには難しい課題のままである。
【0005】
ＦＬＫ２、ＳＴＫ１、またはＣＤ１３５とも呼ばれるＦｍｓ関連チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）は、クラスＩＩＩ受容体チロシンキナーゼである。ＦＬＴ３は、細胞外領域に５つの免疫グロブリン様ドメインを含む膜貫通タンパク質である。ＦＬＴ３はＦＬＴ３ＬＧの結合によって活性化され得るが、このことによってＦＬＴ３のホモ二量体化および自己リン酸化が誘導される。活性化されたＦＬＴ３は次いで、Ａｋｔ、ＥｒｋおよびｍＴＯＲなどの複数の細胞質エフェクター分子をリン酸化および活性化し、それによって細胞増殖を促進するとともにアポトーシスを減少させる。ＦＬＴ３の構成的活性化をもたらす突然変異は、急性骨髄性白血病および急性リンパ芽球性白血病で観察されてきた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
ＦＬＴ３と結合する抗体が開発中であるが、ＦＬＴ３関連がんのための新しくかつ有用な処置に対する当分野での必要性が依然としてある。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明は、ヒトＦＬＴ３と結合しかつカニクイザルＦＬＴ３と結合してもよい抗原結合部位を提供する。これらの抗原結合部位は、ＦＬＴ３の細胞外ドメイン中の種々のエピトープと結合し、それらの一部は、かかる結合にあたりＦＬＴ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）と競合しない。本明細書に開示の抗原結合部位の一部は、当技術分野での既知の１つまたは複数の抗ＦＬＴ３抗体によって標的とされるエピトープと比較して、ユニークなエピトープと結合する。かかる抗原結合部位を含有するタンパク質およびタンパク質コンジュゲート、例えば抗体、抗体－薬物コンジュゲート、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（T-cell engagers）（ＢｉＴＥ）、ならびに免疫サイトカインとともに、かかる抗原結合部位を含有するタンパク質［例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）］を発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）も、がんなどのＦＬＴ３関連疾患を処置するのに有用である。
【0008】
したがって、一態様では、本発明は：
（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５５のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、および相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；
（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５５のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、および相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；
（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
【0009】
ある特定の実施形態では、ＶＨのＣＤＲ３が配列番号５のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨのＣＤＲ３が配列番号５０のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨが、配列番号３７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、かつＶＬが、配列番号３８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨが配列番号５３のアミノ酸配列を含み、かつＶＬが配列番号４２のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨおよびＶＬが、それぞれ、配列番号９および１０；１３および１０；１７および１０；９および２２；９および２６；９および３０；９および３４；３７および３８；４１および４２；４５および４２；または４９および４２のアミノ酸配列を含む。
【0010】
別の態様では、本発明は：
（ａ）それぞれ、配列番号５９、６３、および５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号８６、６６、および６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
（ａ）それぞれ、配列番号５９、６３、および５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号８６、６６、および６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
【0011】
ある特定の実施形態では、ＶＨが、それぞれ、配列番号７８、６３、７９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、かつＶＬが、それぞれ、配列番号８０、６６、６７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨが、それぞれ、配列番号６２、６３、６４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、かつＶＬが、配列番号６５、６６、６７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨが、配列番号７６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、かつＶＬが、配列番号７７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨが配列番号２９のアミノ酸配列を含み、かつＶＬが配列番号８４のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨおよびＶＬが、それぞれ、配列番号６８および６９；７２および７３；または７６および７７のアミノ酸配列を含む。
【0012】
別の態様では、本発明は：
（ａ）それぞれ、配列番号８７、８８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号９１、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
（ａ）それぞれ、配列番号８７、８８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号９１、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
【0013】
別の態様では、本発明は、
（ａ）それぞれ、配列番号９７、９９、および１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号１０１、１０２、および１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
（ａ）それぞれ、配列番号９７、９９、および１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号１０１、１０２、および１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
【0014】
別の態様では、本発明は、
（ａ）それぞれ、配列番号８７、９８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号１０６、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
（ａ）それぞれ、配列番号８７、９８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号１０６、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
【0015】
別の態様では、本発明は：
（ａ）それぞれ、配列番号１０９、１１０、および１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号１１２、１１３、および１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
（ａ）それぞれ、配列番号１０９、１１０、および１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号１１２、１１３、および１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
【0016】
別の態様では、本発明は：
（ａ）それぞれ、配列番号１１７、１１８、および１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号１２０、１２１、および１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
（ａ）それぞれ、配列番号１１７、１１８、および１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号１２０、１２１、および１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
【0017】
別の態様では、本発明は：
（ａ）それぞれ、配列番号８７、９８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号１０６、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
（ａ）それぞれ、配列番号８７、９８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号１０６、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
【0018】
別の態様では、本発明は：
（ａ）それぞれ、配列番号６２、３３、および１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号１２８、１２９、および１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
（ａ）それぞれ、配列番号６２、３３、および１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号１２８、１２９、および１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
【0019】
別の態様では、本発明は：
（ａ）それぞれ、配列番号１３２、１３３、および１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号６５、６６、および４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
（ａ）それぞれ、配列番号１３２、１３３、および１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと；
（ｂ）それぞれ、配列番号６５、６６、および４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬと
を含む、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。
【0020】
別の態様では、本発明は、上に開示の抗原結合部位と競合する抗原結合部位を提供する。
【0021】
前述の態様のある特定の実施形態では、抗原結合部位が、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）によって測定して２０ｎＭよりも小さいかまたはこれに等しい解離乗数（ＫＤ）でヒトＦＬＴ３と結合する。ある特定の実施形態では、抗原結合部位が、ＳＰＲによって測定して１０ｎＭよりも小さいかまたはこれに等しいＫＤでヒトＦＬＴ３と結合する。ある特定の実施形態では、抗原結合部位が、配列番号２５のアミノ酸配列を含むヒトＦＬＴ３変異体と結合する。ある特定の実施形態では、抗原結合部位が、配列番号１８のアミノ酸配列を含むヒトＦＬＴ３変異体と結合する。ある特定の実施形態では、抗原結合部位がカニクイザルＦＬＴ３と結合する。ある特定の実施形態では、抗原結合部位が、ＦＬＴ３との結合にあたりＦＬＴ３Ｌと競合しない。
【0022】
ある特定の実施形態では、抗原結合部位が単鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）として存在する。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖが、配列番号３、１２、１５、１６、１９、２０、２３、２４、２７、２８、３１、３２、３５、３６、３９、４０、４３、４４、４７、４８、５１、５２、７０、７１、７４、７５、８１、および８２から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0023】
別の態様では、本発明は、本明細書に開示の抗原結合部位を含むタンパク質を提供する。ある特定の実施形態では、タンパク質が抗体重鎖定常領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、抗体重鎖定常領域がヒトＩｇＧ重鎖定常領域である。ある特定の実施形態では、抗体重鎖定常領域がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域である。ある特定の実施形態では、抗体重鎖定常領域の各ポリペプチド鎖が、配列番号２１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0024】
ある特定の実施形態では、抗体重鎖定常領域の少なくとも１つのポリペプチド鎖が、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１、およびＫ４３９から選択される１つまたは複数の位置に、配列番号２１に対する１つまたは複数の突然変異を含む。ある特定の実施形態では、抗体重鎖定常領域の少なくとも１つのポリペプチド鎖が、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｙ３４９Ｓ、Ｙ３４９Ｋ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｄ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｃ、Ｌ３５１Ｋ、Ｌ３５１Ｄ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｋ、Ｅ３５７Ｑ、Ｅ３５７Ｌ、Ｅ３５７Ｗ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３６０Ｗ、Ｑ３６２Ｅ、Ｓ３６４Ｋ、Ｓ３６４Ｅ、Ｓ３６４Ｈ、Ｓ３６４Ｄ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｉ、Ｔ３６６Ｌ、Ｔ３６６Ｍ、Ｔ３６６Ｋ、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｅ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｄ、Ｋ３７０Ｓ、Ｎ３９０Ｄ、Ｎ３９０Ｅ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｆ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ３９２Ｅ、Ｔ３９４Ｆ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｖ、Ｓ４００Ｋ、Ｓ４００Ｒ、Ｄ４０１Ｋ、Ｆ４０５Ａ、Ｆ４０５Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｉ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ｆ、Ｋ４０９Ｗ、Ｋ４０９Ｄ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｋ４３９Ｄ、およびＫ４３９Ｅから選択される、配列番号２１に対する１つまたは複数の突然変異を含む。ある特定の実施形態では、抗体重鎖定常領域の一方のポリペプチド鎖が、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１およびＫ４３９から選択される１つまたは複数の位置に、配列番号２１に対する１つまたは複数の突然変異を含み；かつ抗体重鎖定常領域の他方のポリペプチド鎖は、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１、およびＫ４３９から選択される１つまたは複数の位置に、配列番号２１に対する１つまたは複数の突然変異を含む。ある特定の実施形態では、抗体重鎖定常領域の一方のポリペプチド鎖が、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、配列番号２１に対するＫ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗの置換を含み；かつ抗体重鎖定常領域の他方のポリペプチド鎖は、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、配列番号２１に対するＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔの置換を含む。ある特定の実施形態では、抗体重鎖定常領域の一方のポリペプチド鎖が、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、配列番号２１に対するＹ３４９Ｃの置換を含み；かつ抗体重鎖定常領域の他方のポリペプチド鎖は、ＥＵナンバリングシステムに従って番号づけされた、配列番号２１に対するＳ３５４Ｃの置換を含む。
【0025】
別の態様では、本発明は、本明細書に開示のタンパク質および薬物部分を含む抗体－薬物コンジュゲートを提供する。ある特定の実施形態では、薬物部分が、オーリスタチン、Ｎ－アセチル－γカリケアマイシン、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピン、およびＳＮ－３８からなる群から選択される。
【0026】
別の態様では、本発明は、本明細書に開示の抗原結合部位およびサイトカインを含む免疫サイトカインを提供する。ある特定の実施形態では、サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＮＦ、およびＩＦＮαからなる群から選択される。
【0027】
別の態様では、本発明は、本明細書に開示の抗原結合部位およびＣＤ３と結合する抗原結合部位を含む二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーを提供する。
【0028】
別の態様では、本発明は：
（ａ）本明細書に開示の抗原結合部位と；
（ｂ）膜貫通ドメインと；
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインと
を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
（ａ）本明細書に開示の抗原結合部位と；
（ｂ）膜貫通ドメインと；
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインと
を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
【0029】
ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインが、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＦＬＴ３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、およびＣＤ１５４の膜貫通領域から選択される。ある特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ、共通ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２の機能性シグナル伝達ドメインを含む一次シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインが、共刺激受容体の機能性シグナル伝達ドメインを含む共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む。ある特定の実施形態では、共刺激受容体が、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２５８、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３に結合するリガンド、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳおよび４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【0030】
別の態様では、本発明は、本明細書に開示のＣＡＲをコードする分離された核酸を提供する。
【0031】
別の態様では、本発明は、本明細書に開示の分離された核酸を含む発現ベクターを提供する。
【0032】
別の態様では、本発明は、本明細書に開示の核酸または発現ベクターを含む免疫エフェクター細胞を提供する。
【0033】
別の態様では、本発明は、本明細書に開示のＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を提供する。ある特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞がＴ細胞である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＮＫＴ細胞である。ある特定の実施形態では免疫エフェクター細胞がＮＫ細胞である。
【0034】
別の態様では、本発明は、本明細書に開示の、タンパク質、抗体－薬物コンジュゲート、免疫サイトカイン、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、または免疫エフェクター細胞；および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【0035】
別の態様では、本発明は、がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に開示の、タンパク質、抗体－薬物コンジュゲート、免疫サイトカイン、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、免疫エフェクター細胞、または医薬組成物の有効量を投与することを含む方法を提供する。
【0036】
ある特定の実施形態では、がんが血液悪性腫瘍である。ある特定の実施形態では、血液悪性腫瘍が白血病である。ある特定の実施形態では、がんが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成、急性Ｔリンパ芽球性白血病、および急性前骨髄球性白血病からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、がんがＦＬＴ３を発現する。
【0037】
本発明のこれらおよびその他の態様および利点を、以下の図、発明を実施するための形態および特許請求の範囲によって例示する。
【0038】
本発明は、以下の図面を参照することにより、より完全に理解することができる。
【図面の簡単な説明】
【0039】
【図4-2】同上。
【図6-1】図６Ａ～６Ｄは、ＴｒｉＮＫＥＴ Ｆ３’－１１５８およびその親モノクローナル抗体の存在下での、ＦＬＴ３－発現がん細胞株であるＥＯＬ－１（図６Ａ）、ＲＥＨ（図６Ｂ）、ＲＳ４－１１（図６Ｃ）、およびＭＶ４－１１（図６Ｄ））のＮＫ細胞媒介性溶解を示す棒グラフである。
【図6-2】同上。
【発明を実施するための形態】
【0040】
本発明は、ヒトＦＬＴ３と結合しかつカニクイザルＦＬＴ３と結合してもよい抗原結合部位を提供する。これらの抗原結合部位は、ＦＬＴ３の細胞外ドメイン中の種々のエピトープと結合し、いくつかのこれらの抗原結合部位は、かかる結合にあたりＦＬＴ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）と競合しない。かかる抗原結合部位を含有するタンパク質およびタンパク質コンジュゲート、例えば抗体、抗体－薬物コンジュゲート、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、ならびに免疫サイトカインとともに、かかる抗原結合部位を含有するタンパク質［例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）］を発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）も、がんなどのＦＬＴ３関連疾患を処置するのに有用である。
【0041】
本発明は、がん細胞上のＦＬＴ３と結合する抗原結合タンパク質と、かかるタンパク質を含む医薬組成物と、がんの処置のためを含めて、かかるタンパク質および医薬組成物を使用する治療法とを提供する。本発明の種々の態様について下のセクションに記載する；しかし、特定の一セクションに記載されている本発明の態様は、特定のいずれのセクションにも限定されるものではない。
【0042】
本発明の理解を容易にするために、いくつかの用語および語句について、下に定義する。
【0043】
本明細書で使用される「ａ」および「ａｎ」という用語は、「１つまたは複数」を意味し、文脈が不適切でない限り、複数形を含む。
【0044】
本明細書で使用される場合、「抗原結合部位」という用語は、抗原結合に関与する、免疫グロブリン分子の部分を指す。ヒト抗体では、抗原結合部位は、重鎖（「Ｈ」）および軽鎖（「Ｌ」）のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成される。重鎖および軽鎖のＶ領域内の高度に多岐にわたる３つのストレッチは、「超可変領域」と呼ばれており、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」として知られるより保存的な隣接しているストレッチどうしの間に、挿入されている。したがって、「ＦＲ」という用語は、免疫グロブリンの超可変領域どうしの間におよびこれに隣接して天然で見出されるアミノ酸配列を指す。ヒト抗体分子では、軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域は、三次元空間で互いに相対して配置されて、抗原結合表面を形成する。抗原結合表面は、結合抗原の三次元表面に対して相補的であり、重鎖および軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる。ラクダおよび軟骨魚類などのある特定の動物では、抗原結合部位は、「単一ドメイン抗体」をもたらす単一の抗体鎖によって形成される。抗原結合部位は、インタクトな抗体中に、抗原結合表面を保持する抗体の抗原結合断片中に、または、単一ポリペプチド内で重鎖可変ドメインを軽鎖可変ドメインに接続するペプチドリンカーを使用した、ｓｃＦｖなどの組み換えポリペプチド中に、存在することができる。本明細書に開示の重鎖または軽鎖の可変領域のすべてのアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って番号づけされている。
【0045】
抗原結合部位のＣＤＲは、Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977)およびKabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991)、Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)、およびMacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)に記載の方法によって決定することができる。これらの定義により決定されるＣＤＲは通常には、互いに対して比較して、アミノ酸残基の重複または部分集団を含む。ある特定の実施形態では、「ＣＤＲ」という用語は、MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)およびMartin A., Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains, in Antibody Engineering, Kontermann and Dubel, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001)によって定義されるＣＤＲである。ある特定の実施形態では、「ＣＤＲ」という用語は、Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977)およびKabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991)によって定義されるＣＤＲである。ある特定の実施形態では、抗体の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲは、異なる協定を使用して定義される。例えば、ある特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ（上掲）に従って定義され、軽鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ（上掲）に従って定義される。ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、重鎖ＣＤＲを表し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３は、軽鎖ＣＤＲを表す。
【0046】
本明細書で使用される場合、「対象」および「患者」という用語は、本明細書に記載の方法および組成物によって処置される生物体を指す。かかる生物体としては、好ましくは、それらに限定されないが、哺乳動物（例えば、ネズミ、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ科動物、ネコ科動物等）が挙げられるが、より好ましくはヒトが挙げられる。
【0047】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、有益な結果または所望の結果を達成するのに十分な化合物（例えば、本発明の化合物）の量を指す。有効量は、１回または複数の投与、適用または投薬量で投与してもよく、特定の製剤または投与経路に限定されることを意図するものではない。本明細書で使用される場合、「処置すること」という用語には、状態、疾患、障害等の改善またはそれらの症状の軽快をもたらす任意の効果、例えば、緩和すること、軽減すること、調節すること、軽快させることもしくは排除することが含まれる。
【0048】
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、活性薬剤と不活性担体または活性担体との組合せを指し、これにより、組成物が、インビボ（in vivo）またはエクスビボでの診察用途または治療用途に特に適したものとなっている。
【0049】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、リン酸緩衝生理食塩水、水、エマルジョン（例えば、油／水または水／油エマルジョンなどの）、および種々の種類の湿潤剤などの、標準的な医薬担体のいずれかを指す。組成物はまた、安定剤および保存剤を含むことができる。担体、安定剤およびアジュバントの例については、例えば、Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA [1975]を参照されたい。
【0050】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物の任意の薬学的に許容される塩（例えば、酸または塩基）を指し、この塩は、対象に投与する場合、本発明の化合物またはその活性な代謝産物もしくは残留物を供給することができる。当業者に知られるように、本発明の化合物の「塩」は、無機酸または有機酸および塩基に由来することができる。例示的な酸としては、それらに限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン－ｐ－スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸等が挙げられる。シュウ酸などの他の酸は、それ自体は薬学的に許容されるものではないが、本発明の化合物およびその薬学的に許容される酸付加塩を得る際の中間体として有用な塩の調製において用いることができる。
【0051】
例示的な塩基としては、それらに限定されないが、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）の水酸化物、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）の水酸化物、アンモニア、および式ＮＷ４
＋の化合物（式中、Ｗは、Ｃ１～４アルキルである）等が挙げられる。
【0052】
例示的な塩としては、それらに限定されないが：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、フルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸、トシル酸塩、ウンデカン酸塩等が挙げられる。塩の他の例としては、Ｎａ＋、ＮＨ４
＋、およびＮＷ４
＋（式中、ＷはＣ１～４アルキル基である）等などの適切なカチオンと配合された本発明の化合物のアニオンが挙げられる。
【0053】
治療用途の場合、本発明の化合物の塩は、薬学的に許容されるものとして企図される。しかし、薬学的に許容されない酸および塩基の塩も、例えば、薬学的に許容される化合物の調製または精製において、用途が見出される場合もある。
【0054】
本明細書で使用される場合、「ＦＬＴ３」（ＦＬＫ２、ＳＴＫ１、またはＣＤ１３５としても知られる）とは、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｐ３６８８８のタンパク質および関連するアイソフォームを指す。
【0055】
本明細書で使用される場合、「ＦＬＴ３Ｌ」（ＦＬＴ３リガンドとしても知られる）とは、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｐ４９７７１のタンパク質および関連するアイソフォームを指す。
【0056】
本明細書全体を通して、組成物が特定の構成成分を有する（ｈａｖｉｎｇ）、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）ものとして記載される場合、または方法（ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ）および方法（ｍｅｔｈｏｄｓ）が特定の工程を有する（ｈａｖｉｎｇ）、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）ものとして記載される場合、列挙される構成成分から本質的になるかまたはそれらからなる本発明の組成物が存在すること、ならびに、列挙される処理工程から本質的になるかまたはそれらからなる本発明による方法（ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ）および方法（ｍｅｔｈｏｄｓ）が存在することが、付加的に、企図される。
【0057】
一般的事項として、パーセンテージを明記する組成物は、特に指定がない限り、重量による。さらに、変数が定義を伴わない場合には、当該変数の先の定義が優先する。
【0058】
本発明の種々の特性および態様について、下でより詳細に論じる。
【0059】
Ｉ． 抗原結合部位
一態様では、本発明は、ヒトＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。例示的な抗原結合部位のＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ、およびｓｃＦｖの配列を表１に列記する。ＣＤＲ配列は、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに従って特定されている。
一態様では、本発明は、ヒトＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を提供する。例示的な抗原結合部位のＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ、およびｓｃＦｖの配列を表１に列記する。ＣＤＲ配列は、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに従って特定されている。
【0060】
【表1】
【表2】
【表3】
【表4】
【表5】
【表6】
【表7】
【表8】
【表9】
【表10】
【表11】
【表12】
【表13】
【表14】
【表15】
【0061】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、表１に開示の抗体のＶＨと少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、表１に開示の同じ抗体のＶＨと少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、表１に開示の抗体のＶＨ配列およびＶＬ配列の、Ｋａｂａｔ［Kabat et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, NIH Publication No. 91-3242, Bethesda)を参照されたい］、Ｃｈｏｔｈｉａ［例えば、Chothia C & Lesk A M, (1987), J Mol Biol 196: 901-917を参照されたい］、ＭａｃＣａｌｌｕｍ［MacCallum R M et al., (1996) J Mol Biol 262: 732-745を参照されたい］により決定される、または当技術分野で知られる他の任意のＣＤＲ決定方法により決定される、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、表１に開示の抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む。
【0062】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、１２Ｈ１０．Ｇ７に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0063】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＧＢ８７またはＧＢ９５に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１０と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号３または１２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0064】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＧＢ８８またはＧＢ９６に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１０と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号１５または１６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0065】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＧＢ８９またはＧＢ９７に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１０と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号１９または２０と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0066】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＧＢ９０およびＧＢ９８に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号２２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号２３または２４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0067】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＧＢ９１およびＧＢ９９に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号２６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号２７または２８と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0068】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＧＢ９２またはＧＢ１００に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号３０と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号３１または３２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0069】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＧＢ９３またはＧＢ１０１に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号３４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号３５または３６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0070】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＧＢ９４またはＧＢ１０２に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号３８と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号３９または４０と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0071】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＧＢ１０２ Ｄ１０１Ｅに関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号４２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号４３または４４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0072】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＧＢ１０２ Ｍ３４Ｉに関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号４２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号４７または４８と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0073】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＧＢ１０２ Ｍ３４Ｉ／Ｄ１０１Ｅに関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号４２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号５１または５２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0074】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ヒト化１２Ｈ１０．Ｇ７に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号４２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0075】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ヒト化１２Ｈ１０．Ｇ７に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号５７と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0076】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ヒト化１２Ｈ１０．Ｇ７に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号４２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１、４、および５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１、４、および５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0077】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、１４Ａ５．Ｅ８に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号６１と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号６２、６３、および６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６５、６６、および６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号６２、６３、および６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６５、６６、および６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0078】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ｍＡｂ １５５１または１５５２に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号６９と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号６２、６３、および６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６５、６６、および６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号６２、６３、および６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６５、６６、および６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号７０または７１と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0079】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ｍＡｂ １５５３または１５５４に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号７３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号６２、６３、および６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６５、６６、および６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号６２、６３、および６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６５、６６、および６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号７４または７５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0080】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ｍＡｂ １６８９に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号７７と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号７８、６３、および７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号８０、６６、および６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号７８、６３、および７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号８０、６６、および６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位はｓｃＦｖとして存在し、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号８１または８２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
【0081】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ヒト化１４Ａ５．Ｅ８に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号８４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号５９、６３、および５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号８６、６６、および６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号５９、６３、および５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号８６、６６、および６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0082】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、１１Ｆ４．Ｂ９に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号９０と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号８７、８８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号９１、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号８７、８８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号９１、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0083】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ヒト化１１Ｆ４．Ｂ９に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号９４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号８７、８８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号９１、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号８７、８８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号９１、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0084】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、４Ａ４．Ａ３に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号９５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号９６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号９７、９９、および１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号１０１、１０２、および１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号９７、９９、および１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号１０１、１０２、および１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0085】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、４Ａ４．Ｈ７に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号１０４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１０５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号８７、９８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号１０６、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号８７、９８、および８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号１０６、９２、および９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0086】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、１５Ａ１１．Ｃ８に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号１０７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１０８と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１０９、１１０、および１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号１１２、１１３、および１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１０９、１１０、および１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号１１２、１１３、および１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0087】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、１２Ｃ９．Ｅ５に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号１１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１１６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１１７、１１８、および１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号１２０、１２１、および１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１１７、１１８、および１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号１２０、１２１、および１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0088】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、１Ａ２．Ａ３に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１２４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号８７、９８、８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号１０６、９２、９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号８７、９８、８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号１０６、９２、９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0089】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、４Ｈ２．Ｅ３に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１２６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号６２、３３、および１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号１２８、１２９、および１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号６２、３３、および１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号１２８、１２９、および１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0090】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、１４Ｈ８．Ｅ７に関連する。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号８３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、それぞれ、配列番号１３２、１３３、および１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、それぞれ、配列番号６５、６６、および４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ、配列番号１３２、１３３、および１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨと、（ｂ）それぞれ、配列番号６５、６６、および４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【0091】
前述の実施形態のそれぞれでは、ＦＬＴ３と一緒に結合するＶＨ配列および／またはＶＬ配列は、ＦＬＴ３に結合するそれらの能力に有意に影響を与及ぼすことなく、ＶＨおよび／またはＶＬのフレームワーク領域においてアミノ酸の変更（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、または１０個のアミノ酸置換、欠失、または付加）を含有することができることが、本明細書で企図される。
【0092】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）（例えば、下に実施例１で記載の方法を使用して）によってまたはバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定して、１ｎＭもしくはこれ未満、５ｎＭもしくはこれ未満、または１０ｎＭもしくはこれ未満、１５ｎＭもしくはこれ未満、または２０ｎＭもしくはこれ未満のＫＤ（すなわち、解離定数）でＦＬＴ３（例えば、ヒトＦＬＴ３）と結合するか、かつ／または対象の体液、組織、および／または細胞由来のＦＬＴ３と結合する。ある特定の実施形態では、前述の分離された抗体のいずれもが、ＳＰＲによって（例えば、下に実施例１で記載の方法を使用して）またはＢＬＩによって測定して、１×１０－５、１×１０－４、１×１０－３、５×１０－３、０．０１、０．０２、または０．０５ １／ｓに等しいかまたはこれら未満のＫｄ［すなわち、解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）、Ｋｏｆｆとも呼ばれる］を有する。
【0093】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位、例えば、上に開示の、１２Ｈ１０．Ｇ７、ＧＢ８７、ＧＢ８８、ＧＢ８９、ＧＢ９０、ＧＢ９１、ＧＢ９２、ＧＢ９３、ＧＢ９４、ＧＢ９５、ＧＢ９６、ＧＢ９７、ＧＢ９８、ＧＢ９９、ＧＢ１００、ＧＢ１０１、ＧＢ１０２、ＧＢ１０２ Ｍ３４Ｉ、ＧＢ１０２ Ｄ１０１Ｅ、ＧＢ１０２ Ｍ３４Ｉ／Ｄ１０１Ｅ、またはヒト化１２Ｈ１０．Ｇ７に関連する抗原結合部位が、Ｔ２２７Ｍ突然変異を有するヒトＦＬＴ３変異体またはその細胞外領域と結合する。ｈＦＬＴ３－Ｔ２２７Ｍの細胞外領域のアミノ酸配列は、ＮＱＤＬＰＶＩＫＣＶＬＩＮＨＫＮＮＤＳＳＶＧＫＳＳＳＹＰＭＶＳＥＳＰＥＤＬＧＣＡＬＲＰＱＳＳＧＴＶＹＥＡＡＡＶＥＶＤＶＳＡＳＩＴＬＱＶＬＶＤＡＰＧＮＩＳＣＬＷＶＦＫＨＳＳＬＮＣＱＰＨＦＤＬＱＮＲＧＶＶＳＭＶＩＬＫＭＴＥＴＱＡＧＥＹＬＬＦＩＱＳＥＡＴＮＹＴＩＬＦＴＶＳＩＲＮＴＬＬＹＴＬＲＲＰＹＦＲＫＭＥＮＱＤＡＬＶＣＩＳＥＳＶＰＥＰＩＶＥＷＶＬＣＤＳＱＧＥＳＣＫＥＥＳＰＡＶＶＫＫＥＥＫＶＬＨＥＬＦＧＭＤＩＲＣＣＡＲＮＥＬＧＲＥＣＴＲＬＦＴＩＤＬＮＱＴＰＱＴＴＬＰＱＬＦＬＫＶＧＥＰＬＷＩＲＣＫＡＶＨＶＮＨＧＦＧＬＴＷＥＬＥＮＫＡＬＥＥＧＮＹＦＥＭＳＴＹＳＴＮＲＴＭＩＲＩＬＦＡＦＶＳＳＶＡＲＮＤＴＧＹＹＴＣＳＳＳＫＨＰＳＱＳＡＬＶＴＩＶＥＫＧＦＩＮＡＴＮＳＳＥＤＹＥＩＤＱＹＥＥＦＣＦＳＶＲＦＫＡＹＰＱＩＲＣＴＷＴＦＳＲＫＳＦＰＣＥＱＫＧＬＤＮＧＹＳＩＳＫＦＣＮＨＫＨＱＰＧＥＹＩＦＨＡＥＮＤＤＡＱＦＴＫＭＦＴＬＮＩＲＲＫＰＱＶＬＡＥＡＳＡＳＱＡＳＣＦＳＤＧＹＰＬＰＳＷＴＷＫＫＣＳＤＫＳＰＮＣＴＥＥＩＴＥＧＶＷＮＲＫＡＮＲＫＶＦＧＱＷＶＳＳＳＴＬＮＭＳＥＡＩＫＧＦＬＶＫＣＣＡＹＮＳＬＧＴＳＣＥＴＩＬＬＮＳＰＧＰＦＰＦＩＱＤＮＩＳ（配列番号２５）である。
【0094】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位、例えば、上に開示の、１２Ｈ１０．Ｇ７、ＧＢ８７、ＧＢ８８、ＧＢ８９、ＧＢ９０、ＧＢ９１、ＧＢ９２、ＧＢ９３、ＧＢ９４、ＧＢ９５、ＧＢ９６、ＧＢ９７、ＧＢ９８、ＧＢ９９、ＧＢ１００、ＧＢ１０１、ＧＢ１０２、ＧＢ１０２ Ｍ３４Ｉ、ＧＢ１０２ Ｄ１０１Ｅ、ＧＢ１０２ Ｍ３４Ｉ／Ｄ１０１Ｅ、またはヒト化１２Ｈ１０．Ｇ７に関連する抗原結合部位が、ＩＴＤ突然変異を有するヒトＦＬＴ３変異体またはその細胞外領域と結合する。ｈＦＬＴ３－ＩＴＤの細胞外領域のアミノ酸配列は、ＮＱＤＬＰＶＩＫＣＶＬＩＮＨＫＮＮＤＳＳＶＧＫＳＳＳＹＰＭＶＳＥＳＰＥＤＬＧＣＡＬＲＰＱＳＳＧＴＶＹＥＡＡＡＶＥＶＤＶＳＡＳＩＴＬＱＶＬＶＤＡＰＧＮＩＳＣＬＷＶＦＫＨＳＳＬＮＣＱＰＨＦＤＬＱＮＲＧＶＶＳＭＶＩＬＫＭＴＥＴＱＡＧＥＹＬＬＦＩＱＳＥＡＴＮＹＴＩＬＦＴＶＳＩＲＮＴＬＬＹＴＬＲＲＰＹＦＲＫＭＥＮＱＤＡＬＶＣＩＳＥＳＶＰＥＰＩＶＥＷＶＬＣＤＳＱＧＥＳＣＫＥＥＳＰＡＶＶＫＫＥＥＫＶＬＨＥＬＦＧＴＤＩＲＣＣＡＲＮＥＬＧＲＥＣＴＲＬＦＴＩＤＬＮＱＴＰＱＴＴＬＰＱＬＦＬＫＶＧＥＰＬＷＩＲＣＫＡＶＨＶＮＨＧＦＧＬＴＷＥＬＥＮＫＡＬＥＥＧＮＹＦＥＭＳＴＹＳＴＮＲＴＭＩＲＩＬＦＡＦＶＳＳＶＡＲＮＤＴＧＹＹＴＣＳＳＳＫＨＰＳＱＳＡＬＶＴＩＶＥＫＧＦＩＮＡＴＮＳＳＥＤＹＥＩＤＱＹＥＥＦＣＦＳＶＲＦＫＡＹＰＱＩＲＣＴＷＴＦＳＲＫＳＦＰＣＥＱＫＧＬＤＮＧＹＳＩＳＫＦＣＮＨＫＨＱＰＧＥＹＩＦＨＡＥＮＤＤＡＱＦＴＫＭＦＴＬＮＩＲＲＫＰＱＶＬＡＥＡＳＡＳＱＡＳＣＦＳＤＧＹＰＬＰＳＷＴＷＫＫＣＳＤＫＳＰＮＣＴＥＥＩＴＥＧＶＷＮＲＫＡＮＲＫＶＦＧＱＷＶＳＳＳＴＬＮＭＳＥＡＩＫＧＦＬＶＫＣＣＡＹＮＳＬＧＴＳＣＥＴＩＬＬＮＳＰＧＰＦＰＦＩＱＤＮＩＳ（配列番号１８）である。
【0095】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位、例えば、上に開示の、１２Ｈ１０．Ｇ７、ＧＢ８７、ＧＢ８８、ＧＢ８９、ＧＢ９０、ＧＢ９１、ＧＢ９２、ＧＢ９３、ＧＢ９４、ＧＢ９５、ＧＢ９６、ＧＢ９７、ＧＢ９８、ＧＢ９９、ＧＢ１００、ＧＢ１０１、ＧＢ１０２、ＧＢ１０２ Ｍ３４Ｉ、ＧＢ１０２ Ｄ１０１Ｅ、ＧＢ１０２ Ｍ３４Ｉ／Ｄ１０１Ｅ、ヒト化１２Ｈ１０．Ｇ７、１４Ａ５．Ｅ８、１５５１、１５５２、１５５３、１５５４、１６８９、ヒト化１４Ａ５．Ｅ８、１１Ｆ４．Ｂ９、４Ａ４．Ａ３、４Ａ４．Ｈ７、１５Ａ１１．Ｃ８、１Ａ２．Ａ３、４Ｈ２．Ｅ３、または１４Ｈ８．Ｅ７に関連する抗原結合部位が、カニクイザルＦＬＴ３と結合する。
【0096】
ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位、例えば、上に開示の、１２Ｈ１０．Ｇ７、ＧＢ８７、ＧＢ８８、ＧＢ８９、ＧＢ９０、ＧＢ９１、ＧＢ９２、ＧＢ９３、ＧＢ９４、ＧＢ９５、ＧＢ９６、ＧＢ９７、ＧＢ９８、ＧＢ９９、ＧＢ１００、ＧＢ１０１、ＧＢ１０２、ＧＢ１０２ Ｍ３４Ｉ、ＧＢ１０２ Ｄ１０１Ｅ、ＧＢ１０２ Ｍ３４Ｉ／Ｄ１０１Ｅ、ヒト化１２Ｈ１０．Ｇ７、１４Ａ５．Ｅ８、１５５１、１５５２、１５５３、１５５４、１６８９、ヒト化１４Ａ５．Ｅ８、１１Ｆ４．Ｂ９、４Ａ４．Ａ３、４Ａ４．Ｈ７、１２Ｃ９．Ｅ５、１Ａ２．Ａ３、４Ｈ２．Ｅ３、または１４Ｈ８．Ｅ７に関連する抗原結合部位が、ＦＬＴ３との結合にあたりＦＬＴ３Ｌと競合しない。
【0097】
別の態様では、本発明は、ＦＬＴ３（例えば、ヒトＦＬＴ３、カニクイザルＦＬＴ３）への結合にあたり上記の抗原結合部位と競合する抗原結合部位を提供する。ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＦＬＴ３への結合にあたり上に開示の１Ａ２．Ａ３に関連する抗原結合部位と競合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＦＬＴ３への結合にあたり１Ａ２．Ａ３と競合する。ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＦＬＴ３への結合にあたり上に開示の４Ａ４．Ａ３に関連する抗原結合部位と競合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＦＬＴ３への結合にあたり４Ａ４．Ａ３と競合する。ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＦＬＴ３への結合にあたり上に開示の４Ｈ２．Ｅ３に関連する抗原結合部位と競合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＦＬＴ３への結合にあたり４Ｈ２．Ｅ３と競合する。ある特定の実施形態では、本発明の抗原結合部位は、ＦＬＴ３への結合にあたり上に開示の１１Ｆ４．Ｂ９に関連する抗原結合部位と競合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＦＬＴ３への結合にあたり１１Ｆ４．Ｂ９と競合する。
【0098】
抗原結合部位を備えるタンパク質
本明細書に開示の抗原結合部位は、抗体中に存在する場合もありまたはその抗原結合断片中に存在する場合もある。抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ダイアボディ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、もしくはＦ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ、二重特異性抗体、二重特異性Ｆａｂ２、二重特異性（ｍａｂ）２、ヒト化抗体、人工生成ヒト抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、二重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー、単鎖抗体（例えば、単鎖Ｆｖ断片またはｓｃＦｖ）、トリオマブ（triomab）、共通の軽鎖を有するノブ－イントゥー－ホール（knobs-into-holes）（ｋｉｈ）ＩｇＧ、クロスマブ（crossmab）、オルト－Ｆａｂ ＩｇＧ、ＤＶＤ－Ｉｇ、２ ｉｎ １－ＩｇＧ、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ２－Ｆｃ、バイナノボディ、ｔａｎｄＡｂ、二重アフィニティリターゲティング抗体（ＤＡＲＴ）、ＤＡＲＴ－Ｆｃ、ｓｃＦｖ－ＨＳＡ－ｓｃＦｖ（式中、ＨＳＡ＝ヒト血清アルブミン）、またはドックアンドロック（dock-and-lock）（ＤＮＬ）－Ｆａｂ３、とすることができる。
本明細書に開示の抗原結合部位は、抗体中に存在する場合もありまたはその抗原結合断片中に存在する場合もある。抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ダイアボディ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、もしくはＦ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ、二重特異性抗体、二重特異性Ｆａｂ２、二重特異性（ｍａｂ）２、ヒト化抗体、人工生成ヒト抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、二重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー、単鎖抗体（例えば、単鎖Ｆｖ断片またはｓｃＦｖ）、トリオマブ（triomab）、共通の軽鎖を有するノブ－イントゥー－ホール（knobs-into-holes）（ｋｉｈ）ＩｇＧ、クロスマブ（crossmab）、オルト－Ｆａｂ ＩｇＧ、ＤＶＤ－Ｉｇ、２ ｉｎ １－ＩｇＧ、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ２－Ｆｃ、バイナノボディ、ｔａｎｄＡｂ、二重アフィニティリターゲティング抗体（ＤＡＲＴ）、ＤＡＲＴ－Ｆｃ、ｓｃＦｖ－ＨＳＡ－ｓｃＦｖ（式中、ＨＳＡ＝ヒト血清アルブミン）、またはドックアンドロック（dock-and-lock）（ＤＮＬ）－Ｆａｂ３、とすることができる。
【0099】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗原結合部位は、抗体定常領域と、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡｌ、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥの重鎖定常領域と；特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４の（例えば、ヒト）重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域と、少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一である、アミノ酸配列に連結されている。別の実施形態では、本明細書に開示の抗原結合部位は、例えば、カッパまたはラムダの（例えば、ヒト）軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域に連結させることができる。定常領域を変更させて、例えば、突然変異させて、抗体の特性を改変することができる（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、および／または補体機能のうちの１つまたは複数を増減することができる）。一実施形態では、抗体は、エフェクター機能を有するとともに、補体を固定することができる。他の実施形態では、抗体は、エフェクター細胞を動員することも補体を固定することもない。別の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体と結合する能力が減少しているか、または全くない。例えば、抗体は、Ｆｃ受容体への結合をサポートしないアイソタイプまたはサブタイプ、断片またはその他の突然変異体であり、例えば、突然変異誘発または欠失のあるＦｃ受容体結合領域を有する。
【0100】
ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、ＣＨ１ドメインの有無にかかわらず、ヒンジ、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン含めて、ＩｇＧ定常領域に連結されている。一部の実施形態では、定常領域のアミノ酸配列は、ヒト抗体定常領域と、例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域、ヒトＩｇＧ２定常領域、ヒトＩｇＧ３定常領域、またはヒトＩｇＧ４定常領域と、少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一である。一実施形態では、抗体ＦｃドメインまたはＣＤ１６と結合するのに十分なその一部は、野生型ヒトＩｇＧ１Ｆｃ配列
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２１）と、少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一である、アミノ酸配列を含む。他の一部の実施形態では、定常領域のアミノ酸配列は、ウサギ、イヌ、ネコ、マウス、またはウマなどの別の哺乳動物に由来する抗体定常領域と、少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一である。１つまたは複数の突然変異を、ヒトＩｇＧ１定常領域と比較して定常領域に、例えば、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１および／またはＫ４３９に、組み込むことができる。例示的な置換としては、例えば、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｙ３４９Ｓ、Ｙ３４９Ｋ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｄ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｋ、Ｌ３５１Ｄ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｋ、Ｅ３５７Ｑ、Ｅ３５７Ｌ、Ｅ３５７Ｗ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３６０Ｗ、Ｑ３６２Ｅ、Ｓ３６４Ｋ、Ｓ３６４Ｅ、Ｓ３６４Ｈ、Ｓ３６４Ｄ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｉ、Ｔ３６６Ｌ、Ｔ３６６Ｍ、Ｔ３６６Ｋ、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｅ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｄ、Ｋ３７０Ｓ、Ｎ３９０Ｄ、Ｎ３９０Ｅ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｆ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ３９２Ｅ、Ｔ３９４Ｆ、Ｔ３９４Ｗ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｖ、Ｓ４００Ｋ、Ｓ４００Ｒ、Ｄ４０１Ｋ、Ｆ４０５Ａ、Ｆ４０５Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｉ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ｆ、Ｋ４０９Ｗ、Ｋ４０９Ｄ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｋ４３９Ｄ、およびＫ４３９Ｅが挙げられる。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２１）と、少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一である、アミノ酸配列を含む。他の一部の実施形態では、定常領域のアミノ酸配列は、ウサギ、イヌ、ネコ、マウス、またはウマなどの別の哺乳動物に由来する抗体定常領域と、少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一である。１つまたは複数の突然変異を、ヒトＩｇＧ１定常領域と比較して定常領域に、例えば、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１および／またはＫ４３９に、組み込むことができる。例示的な置換としては、例えば、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｙ３４９Ｓ、Ｙ３４９Ｋ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｄ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｋ、Ｌ３５１Ｄ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｋ、Ｅ３５７Ｑ、Ｅ３５７Ｌ、Ｅ３５７Ｗ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３６０Ｗ、Ｑ３６２Ｅ、Ｓ３６４Ｋ、Ｓ３６４Ｅ、Ｓ３６４Ｈ、Ｓ３６４Ｄ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｉ、Ｔ３６６Ｌ、Ｔ３６６Ｍ、Ｔ３６６Ｋ、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｅ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｄ、Ｋ３７０Ｓ、Ｎ３９０Ｄ、Ｎ３９０Ｅ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｆ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ３９２Ｅ、Ｔ３９４Ｆ、Ｔ３９４Ｗ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｖ、Ｓ４００Ｋ、Ｓ４００Ｒ、Ｄ４０１Ｋ、Ｆ４０５Ａ、Ｆ４０５Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｉ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ｆ、Ｋ４０９Ｗ、Ｋ４０９Ｄ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｋ４３９Ｄ、およびＫ４３９Ｅが挙げられる。
【0101】
ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、ＣＤ１６と結合するのに十分な抗体Ｆｃドメインの一部に連結されている。Ｆｃドメイン内では、ＣＤ１６結合はヒンジ領域とＣＨ２ドメインによって媒介される。例えば、ヒトＩｇＧ１内では、ＣＤ１６との相互作用は主として、アミノ酸残基Ａｓｐ２６５～Ｇｌｕ２６９、Ａｓｎ２９７～Ｔｈｒ２９９、Ａｌａ３２７～Ｉｌｅ３３２、Ｌｅｕ２３４～Ｓｅｒ２３９、およびＣＨ２ドメイン中の炭水化物残基Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンに焦点が当てられている［Sondermann et al., Nature, 406 (6793):267-273を参照されたい］。既知のドメインに基づいて、突然変異については、ファージディスプレイライブラリまたは酵母表面ディスプレイｃＤＮＡライブラリを使用することによるなど、ＣＤ１６への結合親和性を増強または低減するように選択することができるか、または、相互作用の既知の三次元構造に基づいて設計することができる。
【0102】
ある特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域のＣＨ１へと組み込むことができる突然変異は、アミノ酸Ｖ１２５、Ｆ１２６、Ｐ１２７、Ｔ１３５、Ｔ１３９、Ａ１４０、Ｆ１７０、Ｐ１７１、および／またはＶ１７３のアミノ酸に存在することができる。ある特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域のＣκへと組み込むことができる突然変異は、Ｅ１２３、Ｆ１１６、Ｓ１７６、Ｖ１６３、Ｓ１７４、および／またはＴ１６４のアミノ酸に存在することができる。
【0103】
一部の実施形態では、抗体定常ドメインは、ＩｇＧ抗体、例えば、ヒトＩｇＧ１抗体のＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。一部の実施形態では、突然変異が、抗体定常ドメインに導入されて、別の抗体定常ドメインとのヘテロ二量体化が可能となる。例えば、抗体定常ドメインがヒトＩｇＧ１の定常ドメインに由来する場合、抗体定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１抗体のアミノ酸２３４～３３２と、少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）と同一であるアミノ酸配列を含むことができるとともに、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１、およびＫ４３９からなる群から選択される１つまたは複数の位置で異なる。本明細書に開示のＦｃドメインまたはヒンジ領域のすべてのアミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに従って番号づけされている。
【0104】
非対称タンパク質の形成を容易にするために、Ｆｃドメインヘテロ二量体化が企図される。ヘテロ二量体化を促進するＦｃドメイン中の突然変異（例えば、アミノ酸置換）が、例えば、国際出願公開第ＷＯ２０１９１５７３６６号に記載されているが、これは参照により本明細書に組み込まれない。
【0105】
上記のタンパク質を、当業者によく知られた組換えＤＮＡ技術を使用して作製することができる。例えば、第１の免疫グロブリン重鎖をコードする第１の核酸配列を、第１の発現ベクターにクローニングすることができる；第２の免疫グロブリン重鎖をコードする第２の核酸配列を、第２の発現ベクターにクローニングすることができる；第１の免疫グロブリン軽鎖をコードする第３の核酸配列を、第３の発現ベクターにクローニングすることができる；第２の免疫グロブリン軽鎖をコードする第４の核酸配列を、第４の発現ベクターにクローニングすることができる；第１の、第２の、第３のおよび第４の発現ベクターを、宿主細胞に一緒に安定的にトランスフェクトして、多量体タンパク質を産生させることができる。
【0106】
タンパク質の最高の収量を得るために、第１の、第２の、第３のおよび第４の発現ベクターの様々な比率を探索して、宿主細胞へのトランスフェクション向けの最適な比率を決定することができる。トランスフェクション後、限界希釈、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、顕微鏡法、またはＣｌｏｎｅｐｉｘなどの当技術分野で知られる方法を使用して、細胞バンク生成のために単一クローンを分離することができる。
【0107】
クローンは、バイオリアクターでのスケールアップに適した条件下で培養することができ、本明細書に開示の抗原結合部位を含むタンパク質の発現を維持した。タンパク質を、遠心分離、デプス濾過、細胞溶解、ホモジナイゼーション、凍結融解、アフィニティー精製、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用交換クロマトグラフィー、および混合モードクロマトグラフィーを含めて、当技術分野で知られる方法を使用して、分離および精製することができる。
【0108】
したがって、別の態様では、本発明は、前述の抗体のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖および／または免疫グロブリン軽鎖の可変領域をコードする配列を含む１つまたは複数の分離された核酸を提供する。本発明は、前述の抗体のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖および／または免疫グロブリン軽鎖の可変領域を発現する１つまたは複数の発現ベクターを提供する。同様に、本発明は、前述の発現ベクターおよび／または分離された核酸のうちの１つまたは複数を含む宿主細胞を提供する。
【0109】
ある特定の実施形態では、抗体は、標準的な結合アッセイ、例えば、表面プラズモン共鳴法またはバイオレイヤー干渉法を使用して測定して、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭもしくはこれ未満のＫＤでＦＬＴ３と結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、対象の体液、組織、および／または細胞由来のＥＢＩ３と結合する。
【0110】
ある抗体が、開示の抗体と同じエピトープに結合するかそれとも結合にあたり開示の抗体と競合するかを判定するための競合アッセイは、当技術分野で知られる。例示的な競合アッセイとしては、イムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＲＩＡアッセイ）、表面プラズモン共鳴法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ解析）、バイオレイヤー干渉法、およびフローサイトメトリーが挙げられる。
【0111】
通常には、競合アッセイは、固体表面に結合させたかまたは細胞表面で発現させた抗原（例えば、ヒトＦＬＴ３タンパク質またはその断片）、試験ＦＬＴ３－結合抗体および参照抗体の使用を伴う。参照抗体が標識され、試験抗体は非標識である。競合阻害は、試験抗体の存在下で固体表面または細胞に結合した標識参照抗体の量を決定することによって、測定される。通例には、試験抗体は、過剰に存在する（例えば、１×、５×、１０×、２０×または１００×）。競合アッセイによって特定される抗体（例えば、競合抗体）には、参照抗体と同じエピトープまたは類似の（例えば、重複する）エピトープに結合する抗体、および、立体障害が生じることから、参照抗体が結合するエピトープに対して十分に近位である隣接エピトープに結合する抗体が含まれる。
【0112】
競合アッセイを両方向で実施して、標識の存在が結合を妨害しないかまたはさもなければ阻害しないことを確実にすることができる。例えば、第１の方向では、参照抗体が標識され、試験抗体は非標識であり、そして第２の方向では、試験抗体が標識され、参照抗体は非標識である。
【0113】
試験抗体は、過剰な一方の抗体（例えば、１×、５×、１０×、２０×または１００×）が、例えば、競合結合アッセイで測定して少なくとも５０％、７５％、９０％、９５％または９９％だけ、他方の抗体の結合を阻害する場合、抗原への特異的な結合にあたり、参照抗体と競合する。
【0114】
２種の抗体は、一方の抗体の結合を減少または排除する、抗原中の本質的にすべてのアミノ酸の突然変異が他方の結合を減少させるかまたは排除する場合、同じエピトープに結合すると判定することができる。２種の抗体は、一方の抗体の結合を減少させるかまたは排除するアミノ酸の突然変異の部分集団のみが他方の結合を減少させるかまたは排除する場合、重複するエピトープに結合すると判定することができる。
【0115】
本明細書に開示の抗体は、親和性および／もしくは特異性を含めて生化学的特徴を改善するために、凝集、安定性、沈殿および／もしくは非特異的相互作用を含めて生物物理学的特性を改善するために、ならびに／または免疫原性を減少させるために、更に最適化（例えば、親和性成熟）することができる。親和性成熟の手順は、当技術分野の通常技術の範囲内である。例えば、多様性が、ＤＮＡシャフリング、鎖シャフリング、ＣＤＲシャフリング、ランダム突然変異誘発および／または部位特異的突然変異誘発によって、免疫グロブリン重鎖および／または免疫グロブリン軽鎖へと導入することができる。
【0116】
ある特定の実施形態では、分離されたヒト抗体は、１つまたは複数の体細胞突然変異を含有する。これらの場合では、抗体をヒト生殖細胞系列配列に改変して、抗体を最適化することができる（例えば、生殖細胞系列化と呼ばれるプロセスによる）。
【0117】
一般に、最適化抗体は、これが由来した非最適化（または親）抗体と、抗原に対する同じ親和性または実質的に同じ親和性を、少なくとも有する。好ましくは、最適化抗体は、親抗体と比較して、抗原に対してより高い親和性を有する。
【0118】
抗体は、治療薬として使用される場合、標準的なインビトロ（in vitro）コンジュゲーション化学（conjugation chemistries）を使用して、低分子毒素または放射性核種などのエフェクター剤にコンジュゲートすることができる。エフェクター剤がポリペプチドである場合、抗体は、エフェクターに化学的にコンジュゲートされてもよく、融合タンパク質としてエフェクターに連結されてもよい。融合タンパク質の構築は、当技術分野の通常技術の範囲内である。
【0119】
抗体は、標準的なインビトロコンジュゲーション化学を使用して、低分子毒素または放射性核種などのエフェクター部分にコンジュゲートすることができる。エフェクター部分がポリペプチドである場合、抗体は、エフェクターに化学的にコンジュゲートされてもよいし、融合タンパク質としてエフェクターに連結されてもよい。融合タンパク質の構築は、当技術分野の通常技術の範囲内である。
【0120】
ある特定の実施形態では、本開示のタンパク質（例えば、抗体）は、ＦＬＴ３－発現細胞によって実質的に内在化されていない。内在化レベルが低いと、タンパク質の薬物動態が改善され、それにより、ＦＬＴ３－発現標的細胞とエフェクター細胞（例えば、ＮＫ細胞）をエンゲージさせるのに必要な用量を減少させることができる。内在化は、当技術分野で知られる任意の方法、例えば、本開示の実施例７に記載の方法によって測定することができる。例えば、ある特定の実施形態では、ＲＯＨ細胞またはＥＯＬ－１細胞によるタンパク質の内在化は、本明細書に開示の方法によって評価して、２時間のインキュベーション後で１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、または５０％未満である。
【0121】
ＣＡＲ Ｔ細胞、ＦＬＴ３／ＣＤ３－指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、免疫サイトカイン、抗体－薬物コンジュゲート、および免疫毒素
本発明の別の態様は、本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を含む分子または複合体を提供する。例示的な分子または複合体には、それらに限定されないが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞エンゲージャー（例えば、ＦＬＴ３／ＣＤ３－指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）、免疫サイトカイン、抗体－薬物コンジュゲート、および免疫毒素が含まれる。
本発明の別の態様は、本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を含む分子または複合体を提供する。例示的な分子または複合体には、それらに限定されないが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞エンゲージャー（例えば、ＦＬＴ３／ＣＤ３－指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）、免疫サイトカイン、抗体－薬物コンジュゲート、および免疫毒素が含まれる。
【0122】
本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する任意の抗原結合部位を使用することができる。ある特定の実施形態では、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位のＶＨ、ＶＬ、および／またはＣＤＲの配列を、表１に提供する。ある特定の実施形態では、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位は、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３、１２、１５、１６、１９、２０、２３、２４、２７、２８、３１、３２、３５、３６、３９、４０、４３、４４、４７、４８、５１、５２、７０、７１、７４、７５、８１、および８２から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３、１２、１５、１６、１９、２０、２３、２４、２７、２８、３１、３２、３５、３６、３９、４０、４３、４４、４７、４８、５１、５２、７０、７１、７４、７５、８１、および８２から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0123】
ある特定の実施形態では、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位は、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変ドメインと；それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと；配列番号３８のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、配列番号４０または配列番号３９と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。
【0124】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位（例えば、表１を参照されたい）を含むＦＬＴ３－標的指向性ＣＡＲを提供する。ＦＬＴ３－標的指向性ＣＡＲは、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖを含むことができる。
ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位（例えば、表１を参照されたい）を含むＦＬＴ３－標的指向性ＣＡＲを提供する。ＦＬＴ３－標的指向性ＣＡＲは、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖを含むことができる。
【0125】
「キメラ抗原受容体」または代替的に「ＣＡＲ」という用語は、少なくとも、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメイン（本明細書では「一次シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）を含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含む組み換えポリペプチドコンストラクトを指す。
【0126】
したがって、ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する細胞外抗原結合部位と、膜貫通ドメインと、一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つまたは複数の機能性シグナル伝達ドメイン（「共刺激シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）をさらに含む。
【0127】
一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインとして表１に列記される重鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ならびに軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＦＬＴ３－結合ドメイン（例えば、ＦＬＴ３－結合ｓｃＦｖドメイン）と、膜貫通ドメインと、一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインとして表１に列記される重鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ならびに軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＦＬＴ３－結合ドメイン（例えば、ＦＬＴ３－結合ｓｃＦｖドメイン）と、膜貫通ドメインと、共刺激シグナル伝達ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインとして表１に列記される重鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ならびに軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＦＬＴ３－結合ドメイン（例えば、ＦＬＴ３－結合ｓｃＦｖドメイン）と、膜貫通ドメインと、２つの共刺激シグナル伝達ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインとして表１に列記される重鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ならびに軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＦＬＴ３－結合ドメインと、膜貫通ドメインと、少なくとも２つの共刺激シグナル伝達ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。
【0128】
例えば、ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ、配列番号１１、４、および５のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む重鎖可変ドメインと；それぞれ、配列番号６、７、および８のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む抗原結合部位（例えば、ｓｃＦｖ）を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと；配列番号３８のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、配列番号４０または配列番号３９と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。
【0129】
膜貫通ドメインに関して、種々の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合されている膜貫通ドメインを含むように設計される。一実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ中のドメインのうちの１つと自然に会合するものである。一部の場合では、膜貫通ドメインは、かかるＣＡＲのドメインが同一または異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに結合することを回避して、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるように、選択することができるか、またはアミノ酸置換によって改変することができる。別の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ Ｔ細胞表面の別のＣＡＲとホモ二量体化することが可能である。別の実施形態では、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、同じＣＡＲ Ｔ細胞中に存在する天然結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小限に抑えるように、改変することができるかまたは置換することができる。
【0130】
膜貫通ドメインは、天然に存在する任意の膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来することができる。一実施形態では、膜貫通領域は、ＣＡＲが標的に結合した場合はいつでも、細胞内ドメイン（複数可）へのシグナル伝達が可能である。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＴＣＲζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＦＬＴ３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、およびＣＤ１５４からなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の膜貫通領域（複数可）を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、およびＮＫＧ２Ｃからなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の膜貫通領域（複数可）を含む。
【0131】
細胞外ＦＬＴ３－結合ドメイン（例えば、ＦＬＴ３－結合ｓｃＦｖドメイン）ドメインを、ヒンジ領域によって、膜貫通ドメインに接続することができる。様々なヒンジを用いることができ、これには、それらに限定されないが、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ（例えば、ＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＤヒンジ）、Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカー、（Ｇ４Ｓ）４リンカー、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジ、およびＣＤ８αヒンジが含まれる。
【0132】
本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが配置された免疫細胞の特化した機能（例えば、Ｔ細胞の、サイトカインの分泌を含めて、細胞溶解活性またはヘルパー活性、）の少なくとも１つの活性化を担う。したがって、本明細書で使用される場合、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、特化した機能を実行するように細胞を方向付ける、タンパク質の部分を指す。通例には、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を用いることができるが、多くの場合、必ずしも鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの短縮化部分を使用するという点で、かかる短縮化部分は、エフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクトな鎖の代わりに使用することができる。したがって、細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な、細胞内シグナル伝達ドメインの任意の短縮化部分を含むことになる。
【0133】
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン（すなわち、刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメイン）と１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメイン（すなわち、少なくとも１つの共刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメイン）とを含む。
【0134】
本明細書で使用される場合、「刺激分子」という用語は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＢ細胞によって発現される分子を指し、免疫細胞シグナル伝達経路の少なくとも一部の側面に対して刺激性に、免疫細胞の活性化を調節する細胞質シグナル伝達配列（複数可）を提供する。一実施形態では、シグナルとは、例を挙げると、ペプチドが負荷されたＭＨＣ分子とのＴＣＲ／ＣＤ３複合体の結合によって開始される一次シグナルであり、これによって、それらに限定されないが、増殖、活性化、分化等を含めてＴ細胞応答の媒介がもたらされる。
【0135】
刺激性様式で作用する一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフまたはＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含有することができる。本発明において特に有用である細胞質シグナル伝達配列を含有するＩＴＡＭの例としては、ＣＤ３ゼータ、共通ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２に由来するものが挙げられる。一実施形態では、本発明の任意の１つまたは複数のＣＡＲ中の一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ゼータに由来する細胞質シグナル伝達配列を含む。
【0136】
一部の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、４－１ＢＢ、および／またはＣＤ３－ゼータの機能性シグナル伝達ドメインである。一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、共通ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、および／またはＤＡＰ１２の機能性シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体複合体と会合するゼータ鎖の機能性シグナル伝達ドメインである。
【0137】
本明細書で使用される場合、「共刺激分子」という用語は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それにより、それに限定されないが増殖などのＴ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上のコグネート結合パートナーを指す。共刺激分子とは、抗原に対するリンパ球の効率的な応答にとって必要である、抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。かかる分子の例には、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンド等が含まれる。かかる共刺激分子のさらなる例には、ＣＤ５、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドが含まれる。一部の実施形態では、ＣＡＲの共刺激シグナル伝達ドメインは、本明細書に記載の共刺激分子、例えば、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２５８、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３に結合するリガンド、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳおよび４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、またはそれらの任意の組合せの機能性シグナル伝達ドメインである。
【0138】
本明細書で使用される場合、「シグナル伝達ドメイン」という用語は、第２のメッセンジャーを生成することによって、またはかかるメッセンジャーに応答することによりエフェクターとして機能することによって、規定されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節するように、細胞内で情報を伝達することによって作用する、タンパク質の機能性部分を指す。
【0139】
本発明のＣＡＲの細胞質シグナル伝達部分内の細胞質シグナル伝達配列は、ランダムな順序または特定の順序で互いに連結させることができる。例えば、２から１０個の間のアミノ酸長の短いオリゴペプチドまたはポリペプチドのリンカーが連鎖を形成する場合があってもよい。
【0140】
本発明の別の態様は、本明細書に開示の、ＦＬＴ３－標的指向性ＣＡＲをコードする核酸を提供する。核酸は、当該核酸を細胞に導入することによって、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）中でＣＡＲを発現させるのに有用である。
【0141】
配列中に改変を加えて、例えば、コドンの１つまたは複数をコドン縮重表に従って変化させることによって、本発明の等価物または改善された変異体を作出することができる。ＤＮＡコドン縮重表を表２に提供する。
【0142】
【表16】
【0143】
ある特定の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡ分子）である。ある特定の実施形態では、核酸は、ＣＡＲコード配列に作動可能に連結された発現制御配列（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）をさらに含む。ある特定の実施形態では、本発明は、核酸を含むベクターを提供する。ベクターは、ウイルスベクター（例えば、ＡＡＶベクター、レンチウイルスベクター、またはアデノウイルスベクター）であっても非ウイルスベクター（例えば、プラスミド）であってもよい。
【0144】
ある特定の実施形態では、核酸は、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）である。トランスフェクションでの使用向けのｍＲＮＡを生成するための方法は、特別に設計されたプライマーを備える鋳型のインビトロ転写と、これに続くポリＡ付加を伴い、したがって、３’および５’非翻訳配列、５’キャップおよび／または配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、発現される核酸、ならびに典型的には５０～２０００塩基長のポリＡテールを含有するＲＮＡコンストラクトを作製することができる。ＲＮＡ分子は、例えば、米国特許第８，２７８，０３６号；同第８，８８３，５０６号、および同第８，７１６，４６５号に開示されているように、翻訳効率および／または安定性を高めるためにさらに改変することができる。このようにして作製されたＲＮＡ分子は、様々な種類の細胞に効率的にトランスフェクトすることができる。
【0145】
一実施形態では、核酸は、ＣＡＲのアミノ末端にシグナルペプチドを含むアミノ酸配列をコードする。かかるシグナルペプチドは、エフェクター細胞で発現される場合、ＣＡＲの細胞表面局在化を容易にすることができ、細胞プロセシング過程でＣＡＲから切断される。一実施形態では、核酸は、細胞外ＦＬＴ３－結合ドメイン（例えば、ＦＬＴ３－結合ｓｃＦｖドメイン）のＮ末端にシグナルペプチドを含むアミノ酸配列をコードする。
【0146】
ＲＮＡまたはＤＮＡは、いくつかの様々な方法のいずれかを使用して、例を挙げると、それらに限定されないが、エレクトロポレーション、リポフェクションを使用したカチオン性リポソーム媒介性トランスフェクション、ポリマーカプセル化、ペプチド媒介性トランスフェクション、または「遺伝子銃」などのバイオリスティック微粒子銃デリバリーシステム［例えば、Nishikawa, et al. Hum Gene Ther., 12(8):861-70 (2001)を参照されたい］が挙げられる、商業的に利用可能な方法を使用して、標的細胞へと導入することができる。
【0147】
本発明の別の態様は、ＦＬＴ３－標的指向性ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を提供する。ＦＬＴ３－標的指向性ＣＡＲをコードする核酸を含む免疫エフェクター細胞もまた提供される。免疫エフェクター細胞には、それらに限定されないが、Ｔ細胞およびＮＫ細胞が含まれる。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＮＫＴ細胞から選択される。Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、初代細胞であっても細胞株であってもよい。
【0148】
免疫エフェクター細胞は、当技術分野において知られる方法によって、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含めて、いくつかの供給源から得ることができる。免疫エフェクター細胞はまた、多能性（pluripotent）細胞または複能性（multipotent）細胞（例えば、造血幹細胞）からインビトロで分化させることもできる。一部の実施形態では、本発明は、ＦＬＴ３－標的指向性ＣＡＲを発現するか（例えば、原形質膜上で上記ＣＡＲを発現するか）、または本明細書に開示の核酸を含む多能性細胞または複能性細胞（例えば、造血幹細胞）を提供する。
【0149】
ある特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞を、分離および／または精製する。例えば、制御性Ｔ細胞を、ＣＤ２５－結合リガンドを使用して、Ｔ細胞集団から取り出すことができる。チェックポイントタンパク質（例えば、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、またはＴＩＭ－３）を発現するエフェクター細胞を、類似の方法によって取り出すことができる。ある特定の実施形態では、エフェクター細胞を、ポジティブ選択工程によって分離する。例えば、Ｔ細胞の集団を、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８のコンジュゲートビーズとのインキュベーションによって分離することができる。ＩＦＮ－７、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、グランザイムＢ、およびパーフォリンなどの他の細胞表面マーカーもポジティブ選択に使用することができる。
【0150】
免疫エフェクター細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号；同第６，５３４，０５５号；同第６，９０５，６８０号；同第６，６９２，９６４号；同第５，８５８，３５８号；同第６，８８７，４６６号；同第６，９０５，６８１号；同第７，１４４，５７５号；同第７，０６７，３１８号；同第７，１７２，８６９号；同第７，２３２，５６６号；同第７，１７５，８４３号；同第５，８８３，２２３号；同第６，９０５，８７４号；同第６，７９７，５１４号；同第６，８６７，０４１；ならびに米国特許出願公開第２００６／０１２１００５号および同第２０１６／０３４０４０６号に記載の、当技術分野において知られる方法を概ね使用して、活性化および増やすことができる。例えば、ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適当な条件下で、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体との接触によって、増やすことおよび／または活性化することができる。細胞は、数時間（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、１８、２１時間）～約１４日（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４日）の期間の培養中で増やすことができる。一実施形態では、細胞は、４～９日の期間で増やされる。長期間の細胞培養（例えば、６０日またはこれを超える期間の培養）にとっては、複数サイクルの刺激が望ましい場合がある。ある特定の実施形態では、細胞培養物は、血清（例えば、ウシ胎児血清またはヒト血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＧＦβ、ＴＮＦ－α、またはそれらの組合せを含む。当業者に知られる細胞の増殖用の他の添加物、例えば、界面活性剤、プラスマネート、ならびにＮ－アセチル－システインおよび２－メルカプトエタノールなどの還元剤もまた細胞培養物中に含めてもよい。ある特定の実施形態では、本発明の免疫エフェクター細胞は、インビトロ増殖から得られる細胞である。
【0151】
ＦＬＴ３－標的指向性ＣＡＲ（例えば、制御可能なＣＡＲ）、上記ＣＡＲをコードする核酸、および上記ＣＡＲを発現するかまたは上記核酸を含むエフェクター細胞に関するさらなる実施形態は、米国特許第７，４４６，１９０号および同第９，１８１，５２７号、米国特許出願公開第２０１６／０３４０４０６号および同第２０１７／００４９８１９号、ならびに国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／１４０７２５号に提供されている。
【0152】
ＦＬＴ３／ＣＤ３－指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー
ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を含む、ＦＬＴ３／ＣＤ３－指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーを提供する。ある特定の実施形態では、ＦＬＴ３／ＣＤ３－指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーは、配列番号３、１２、１５、１６、１９、２０、２３、２４、２７、２８、３１、３２、３５、３６、３９、４０、４３、４４、４７、４８、５１、５２、７０、７１、７４、７５、８１、および８２から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、サイトカインは直接にまたはリンカーを介してＦｃドメインに接続されている。
ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を含む、ＦＬＴ３／ＣＤ３－指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーを提供する。ある特定の実施形態では、ＦＬＴ３／ＣＤ３－指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーは、配列番号３、１２、１５、１６、１９、２０、２３、２４、２７、２８、３１、３２、３５、３６、３９、４０、４３、４４、４７、４８、５１、５２、７０、７１、７４、７５、８１、および８２から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、サイトカインは直接にまたはリンカーを介してＦｃドメインに接続されている。
【0153】
ある特定の実施形態では、ＦＬＴ３／ＣＤ３－指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ３と結合する抗原結合部位をさらに含む。ＣＤ３と結合する例示的な抗原結合部位は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１４／０５１４３３号および同第ＷＯ２０１７／０９７７２３号に開示されている。
【0154】
本発明の別の態様は、ＦＬＴ３／ＣＤ３－指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーの少なくとも１つのポリペプチドをコードする核酸を提供し、ここで、ポリペプチドはＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を含む。ある特定の実施形態では、核酸は、シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含み、シグナルペプチドは、発現される場合、ＦＬＴ３／ＣＤ３－指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーのポリペプチドのうちの１つまたは複数のＮ末端に存在する。また、核酸を含むベクター（例えば、ウイルスベクター）、核酸またはベクターを含む産生細胞、およびＦＬＴ３／ＣＤ３－指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーを発現する産生細胞も提供される。
【0155】
免疫サイトカイン
ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位と、サイトカインとを含む免疫サイトカインを提供する。それらに限定されないが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＮＦ、ＩＦＮα、ＩＦＮγ、およびＧＭ－ＣＳＦを含めて、当技術分野において知られる任意のサイトカイン（例えば、炎症誘発性サイトカイン）を使用することができる。より多くの例示的なサイトカインが、米国特許第９，５６７，３９９号に開示されている。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、化学コンジュゲーション（例えば、共有結合のまたは非共有結合の化学コンジュゲーション）によってサイトカインに接続されている。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、ポリペプチドの融合によってサイトカインに接続されている。免疫サイトカインは、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位に接続されたＦｃドメインをさらに含むことができる。ある特定の実施形態では、免疫サイトカインは、配列番号３、１２、１５、１６、１９、２０、２３、２４、２７、２８、３１、３２、３５、３６、３９、４０、４３、４４、４７、４８、５１、５２、７０、７１、７４、７５、８１、および８２から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、サイトカインは直接にまたはリンカーを介してＦｃドメインに接続されている。
ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位と、サイトカインとを含む免疫サイトカインを提供する。それらに限定されないが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＮＦ、ＩＦＮα、ＩＦＮγ、およびＧＭ－ＣＳＦを含めて、当技術分野において知られる任意のサイトカイン（例えば、炎症誘発性サイトカイン）を使用することができる。より多くの例示的なサイトカインが、米国特許第９，５６７，３９９号に開示されている。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、化学コンジュゲーション（例えば、共有結合のまたは非共有結合の化学コンジュゲーション）によってサイトカインに接続されている。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は、ポリペプチドの融合によってサイトカインに接続されている。免疫サイトカインは、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位に接続されたＦｃドメインをさらに含むことができる。ある特定の実施形態では、免疫サイトカインは、配列番号３、１２、１５、１６、１９、２０、２３、２４、２７、２８、３１、３２、３５、３６、３９、４０、４３、４４、４７、４８、５１、５２、７０、７１、７４、７５、８１、および８２から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、サイトカインは直接にまたはリンカーを介してＦｃドメインに接続されている。
【0156】
本発明の別の態様は、免疫サイトカインの少なくとも１つのポリペプチドをコードする核酸を提供し、ここで、ポリペプチドはＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を含む。ある特定の実施形態では、核酸は、シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含み、シグナルペプチドは、発現される場合、免疫サイトカインのポリペプチドのうちの１つまたは複数のＮ末端に存在する。また、核酸を含むベクター（例えば、ウイルスベクター）、核酸またはベクターを含む産生細胞、および免疫サイトカインを発現する産生細胞も提供される。
【0157】
抗体－薬物コンジュゲート
ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位と、細胞傷害性薬物部分とを含む、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。例示的な細胞傷害性薬物部分が、国際特許出願公開第ＷＯ２０１４／１６０１６０号および同第ＷＯ２０１５／１４３３８２号に開示されている。ある特定の実施形態では、細胞傷害性薬物部分は、オーリスタチン、Ｎ－アセチル－γカリケアマイシン、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピン、およびＳＮ－３８から選択される。抗原結合部位は、化学コンジュゲーション（例えば、共有結合のまたは非共有結合の化学コンジュゲーション）によって、細胞傷害性薬物部分に接続することができる。ある特定の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位に接続されたＦｃドメインをさらに含む。ある特定の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、配列番号３、１２、１５、１６、１９、２０、２３、２４、２７、２８、３１、３２、３５、３６、３９、４０、４３、４４、４７、４８、５１、５２、７０、７１、７４、７５、８１、および８２から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、細胞傷害性薬物部分は直接にまたはリンカーを介してＦｃドメインに接続されている。
ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位と、細胞傷害性薬物部分とを含む、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。例示的な細胞傷害性薬物部分が、国際特許出願公開第ＷＯ２０１４／１６０１６０号および同第ＷＯ２０１５／１４３３８２号に開示されている。ある特定の実施形態では、細胞傷害性薬物部分は、オーリスタチン、Ｎ－アセチル－γカリケアマイシン、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピン、およびＳＮ－３８から選択される。抗原結合部位は、化学コンジュゲーション（例えば、共有結合のまたは非共有結合の化学コンジュゲーション）によって、細胞傷害性薬物部分に接続することができる。ある特定の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位に接続されたＦｃドメインをさらに含む。ある特定の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、配列番号３、１２、１５、１６、１９、２０、２３、２４、２７、２８、３１、３２、３５、３６、３９、４０、４３、４４、４７、４８、５１、５２、７０、７１、７４、７５、８１、および８２から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、細胞傷害性薬物部分は直接にまたはリンカーを介してＦｃドメインに接続されている。
【0158】
免疫毒素
ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位と、細胞傷害性ペプチド部分とを含む、免疫毒素を提供する。当技術分野において知られる任意の細胞傷害性ペプチド部分を使用することができ、これには、それらに限定されないが、リシン、ジフテリア毒素、およびシュードモナス外毒素Ａが含まれる。より多くの例示的な細胞傷害性ペプチドが、国際特許出願公開第ＷＯ２０１２／１５４５３０号および同第ＷＯ２０１４／１６４６８０号に開示されている。ある特定の実施形態では、細胞傷害性ペプチド部分は、化学コンジュゲーション（例えば、共有結合のまたは非共有結合の化学コンジュゲーション）によって、タンパク質に接続されている。ある特定の実施形態では、細胞傷害性ペプチド部分は、ポリペプチドの融合によって、タンパク質に接続されている。免疫毒素は、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位に接続されたＦｃドメインをさらに含むことができる。ある特定の実施形態では、免疫毒素は、配列番号３、１２、１５、１６、１９、２０、２３、２４、２７、２８、３１、３２、３５、３６、３９、４０、４３、４４、４７、４８、５１、５２、７０、７１、７４、７５、８１、および８２から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、細胞傷害性ペプチド部分は、直接にまたはリンカーを介してＦｃドメインに接続されている。
ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に開示の、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位と、細胞傷害性ペプチド部分とを含む、免疫毒素を提供する。当技術分野において知られる任意の細胞傷害性ペプチド部分を使用することができ、これには、それらに限定されないが、リシン、ジフテリア毒素、およびシュードモナス外毒素Ａが含まれる。より多くの例示的な細胞傷害性ペプチドが、国際特許出願公開第ＷＯ２０１２／１５４５３０号および同第ＷＯ２０１４／１６４６８０号に開示されている。ある特定の実施形態では、細胞傷害性ペプチド部分は、化学コンジュゲーション（例えば、共有結合のまたは非共有結合の化学コンジュゲーション）によって、タンパク質に接続されている。ある特定の実施形態では、細胞傷害性ペプチド部分は、ポリペプチドの融合によって、タンパク質に接続されている。免疫毒素は、ＦＬＴ３と結合する抗原結合部位に接続されたＦｃドメインをさらに含むことができる。ある特定の実施形態では、免疫毒素は、配列番号３、１２、１５、１６、１９、２０、２３、２４、２７、２８、３１、３２、３５、３６、３９、４０、４３、４４、４７、４８、５１、５２、７０、７１、７４、７５、８１、および８２から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、細胞傷害性ペプチド部分は、直接にまたはリンカーを介してＦｃドメインに接続されている。
【0159】
本発明の別の態様は、免疫毒素の少なくとも１つのポリペプチドをコードする核酸を提供し、ここで、ポリペプチドはＦＬＴ３と結合する抗原結合部位を含む。ある特定の実施形態では、核酸は、シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含み、シグナルペプチドは、発現される場合、免疫毒素のポリペプチドのうちの１つまたは複数のＮ末端に存在する。また、核酸を含むベクター（例えば、ウイルスベクター）、核酸またはベクターを含む産生細胞、および免疫毒素を発現する産生細胞も提供される。
【0160】
ＩＩ． 治療用組成物およびその使用
本発明は、本明細書に開示の抗原結合部位を含むタンパク質、コンジュゲート、もしくは細胞および／または本明細書に記載の医薬組成物を使用してがんを処置するための方法を提供する。方法は、それを必要とする患者に、本明細書に開示の抗原結合部位を含むタンパク質、コンジュゲート、または細胞の治療有効量を投与することによって、ＦＬＴ３を発現する様々ながんを処置するのに使用することができる。
本発明は、本明細書に開示の抗原結合部位を含むタンパク質、コンジュゲート、もしくは細胞および／または本明細書に記載の医薬組成物を使用してがんを処置するための方法を提供する。方法は、それを必要とする患者に、本明細書に開示の抗原結合部位を含むタンパク質、コンジュゲート、または細胞の治療有効量を投与することによって、ＦＬＴ３を発現する様々ながんを処置するのに使用することができる。
【0161】
治療方法は、処置されるがんに応じて特徴づけることができる。例えば、ある特定の実施形態では、がんは血液悪性腫瘍または白血病である。ある特定の実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成、骨髄異形成症候群、急性Ｔリンパ芽球性白血病、または急性前骨髄球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、または慢性骨髄性白血病の骨髄性芽球危機である。
【0162】
ある特定の実施形態では、ＡＭＬは、微小残存病変（ＭＲＤ）である。ある特定の実施形態では、ＭＲＤは、ＦＬＴ３－ＩＴＤ［（Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３）－遺伝子内縦列重複（ＩＴＤ）］、ＮＰＭ１（ヌクレオフォスミン１）、ＤＮＭＴ３Ａ（ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ遺伝子ＤＮＭＴ３Ａ）、およびＩＤＨ［イソクエン酸デヒドロゲナーゼ１および２（ＩＤＨ１およびＩＤＨ２）］から選択される突然変異の有無によって特徴づけられる。ある特定の実施形態では、ＭＤＳは、多血球系異形成を伴うＭＤＳ（ＭＤＳ－ＭＬＤ）、単一血球系統の異形成を伴うＭＤＳ（ＭＤＳ－ＳＬＤ）、環状鉄芽球を伴うＭＤＳ（ＭＤＳ－ＲＳ）、芽球増加を伴うＭＤＳ（ＭＤＳ－ＥＢ）、単独ｄｅｌ（５ｑ）を伴うＭＤＳ、および未分類型ＭＤＳ（ＭＤＳ－Ｕ）から選択される。ある特定の実施形態では、ＭＤＳは、原発性ＭＤＳまたは二次性ＭＤＳである。
【0163】
ある特定の実施形態では、ＡＬＬは、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）およびＴ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）から選択される。ある特定の実施形態では、ＭＰＮは、真性赤血球増加症、本態性血小板血症（ＥＴ）、および骨髄線維症から選択される。ある特定の実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、Ｂ細胞リンパ腫およびＴ細胞リンパ腫から選択される。ある特定の実施形態では、リンパ腫は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＰＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、毛様細胞性白血病、形質細胞骨髄腫（ＰＣＭ）または多発性骨髄腫（ＭＭ）、成熟Ｔ／ＮＫ細胞腫瘍、および組織球腫瘍から選択される。
【0164】
ある特定の実施形態では、がんは固形腫瘍である。ある特定の他の実施形態では、がんは、脳がん、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、白血病、肺がん、肝臓がん、黒色腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、胃がん、精巣がん、または子宮がんである。さらに他の実施形態では、がんは、血管化腫瘍、扁平上皮癌、腺癌、小細胞癌、黒色腫、神経膠腫、神経芽細胞腫、肉腫（例えば、血管肉腫または軟骨肉腫）、喉頭がん、耳下腺がん、胆管がん、甲状腺がん、末端黒子型悪性黒色腫、光線角化症、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、腺様嚢胞癌、腺腫、腺肉腫、腺扁平上皮癌、肛門管がん、肛門がん、肛門直腸がん、星細胞腫、バルトリン腺癌、基底細胞癌、胆道がん、骨がん、骨髄がん、気管支がん、気管支腺癌、カルチノイド、胆管癌、軟骨肉腫、脈絡叢乳頭腫／脈絡叢癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、明細胞癌、結合組織がん、嚢腺腫、消化器系がん、十二指腸がん、内分泌系がん、内胚葉洞腫瘍、子宮内膜増殖症、子宮内膜間質肉腫、子宮内膜様腺癌、内皮細胞がん、上衣がん、上皮細胞がん、ユーイング肉腫、眼および眼窩がん、女性生殖器がん、限局性結節性過形成、胆嚢がん、幽門洞がん、胃底がん、ガストリノーマ、膠芽腫、グルカゴノーマ、心臓がん、血管芽細胞腫、血管内皮腫、血管腫、肝細胞腺腫、肝細胞腺腫症、肝胆道がん、肝細胞癌、ホジキン病、回腸がん、インスリノーマ、子宮頸部上皮内腫瘍、子宮頸部扁平上皮細胞腫瘍、肝内胆管がん、侵襲性扁平上皮癌、空腸がん、関節がん、カポジ肉腫、骨盤がん、大細胞癌、大腸がん、平滑筋肉腫、悪性黒子型黒色腫、リンパ腫、男性生殖器がん、悪性黒色腫、悪性中皮腫、髄芽腫、髄上皮腫、髄膜がん、中皮がん、転移性癌、口のがん、粘膜表皮癌、多発性骨髄腫、筋肉がん、鼻腔がん、神経系がん、神経上皮腺癌結節型黒色腫、非上皮性皮膚がん、非ホジキンリンパ腫、燕麦細胞癌、乏突起膠細胞がん、口腔がん、骨肉腫、漿液性乳頭状癌、陰茎がん、咽頭がん、下垂体腫瘍、形質細胞腫、偽肉腫、肺芽腫、直腸がん、腎細胞癌、呼吸器系がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、漿液性癌、副鼻腔がん、皮膚がん、小細胞癌、小腸がん、平滑筋がん、軟組織がん、ソマトスタチン産生腫瘍、脊椎がん、扁平上皮癌、横紋筋がん、中皮下細胞がん、表在性拡大型黒色腫、Ｔ細胞白血病、舌がん、未分化癌、尿管がん、尿道がん、膀胱がん、泌尿器系がん、子宮頸がん、子宮体がん、ブドウ膜黒色腫、膣がん、疣状癌、ＶＩＰｏｍａ、外陰がん、高分化癌、またはウィルムス腫瘍、である。
【0165】
ある特定の他の実施形態では、がんは、Ｂ細胞リンパ腫またはＴ細胞リンパ腫などの非ホジキンリンパ腫である。ある特定の実施形態では、非ホジキンリンパ腫はＢ細胞リンパ腫であり、例えば、びまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、毛様細胞性白血病、または中枢神経系（ＣＮＳ）原発リンパ腫、である。ある特定の他の実施形態では、非ホジキンリンパ腫はＴ細胞リンパ腫であり、例えば、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、節外性ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫、腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞性リンパ腫、または末梢性Ｔ細胞リンパ腫である。
【0166】
処置されるがんは、がん細胞の表面で発現する特定の抗原の存在に応じて特徴付けることができる。ある特定の実施形態では、がん細胞は、ＦＬＴ３に加えて、以下のうちの１つまたは複数を発現することができる：ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５２、ＣＤ７０、ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＨＥＲ３／ＥＲＢＢ３、ＨＥＲ４／ＥＲＢＢ４、ＭＵＣ１、ＴＲＯＰ２、ｃＭＥＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＰＳＣＡ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４、およびＰＤ１。
【0167】
本発明の実施形態では、処置されるがんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、および古典的ホジキンリンパ腫から選択される。
【0168】
本発明の一部の実施形態では、処置されるがんはＡＭＬである。本発明の一部の実施形態では、ＡＭＬは、未分化型急性骨髄芽球性白血病、最小分化型急性骨髄芽球性白血病、分化型急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、急性骨髄単球性白血病、好酸球増加症を伴う急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤白血病、急性巨核芽球性白血病（ＡＭＫＬ）、急性好塩基球性白血病、線維症を伴う急性汎骨髄症、および芽球形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＢＰＤＣＮ）から選択される。本発明の一部の実施形態では、ＡＭＬは、ＡＭＬ白血病幹細胞（ＬＳＣ）上のＣＬＬ－１の発現によって特徴づけられる。本発明の一部の実施形態では、ＡＭＬ対象におけるＬＳＣは、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＴＩＭ３、ＣＤ２５、ＣＤ３２、およびＣＤ９６から選択される細胞膜マーカーをさらに発現する。本発明の一部の実施形態では、ＡＭＬは微小残存病変（ＭＲＤ）として特徴づけられる。本発明の一部の実施形態では、ＡＭＬのＭＲＤは、ＦＬＴ３－ＩＴＤ［（Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３）－遺伝子内縦列重複（ＩＴＤ）］、ＮＰＭ１（ヌクレオフォスミン１）、ＤＮＭＴ３Ａ（ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ遺伝子ＤＮＭＴ３Ａ）、およびＩＤＨ［イソクエン酸デヒドロゲナーゼ１および２（ＩＤＨ１およびＩＤＨ２）］から選択される突然変異の有無によって特徴づけられる。
【0169】
本発明のある特定の実施形態では、がんは、多血球系異形成を伴うＭＤＳ（ＭＤＳ－ＭＬＤ）、単一血球系統の異形成を伴うＭＤＳ（ＭＤＳ－ＳＬＤ）、環状鉄芽球を伴うＭＤＳ（ＭＤＳ－ＲＳ）、芽球増加を伴うＭＤＳ（ＭＤＳ－ＥＢ）、単独ｄｅｌ（５ｑ）を伴うＭＤＳ、および未分類型ＭＤＳ（ＭＤＳ－Ｕ）から選択されるＭＤＳである。
【0170】
本開示のタンパク質、コンジュゲート、細胞、および／または医薬組成物は、がん細胞がＦＬＴ３を発現するがんに限定されず、様々ながんを処置するのに使用することができることが企図される。例えば、ある特定の実施形態では、本明細書に開示のタンパク質、コンジュゲート、細胞、および／または医薬組成物は、ＦＬＴ３－発現免疫細胞に関連するがんを処置するのに使用することができる。ＦＬＴ３は、多くの骨髄細胞系列上で発現しており、腫瘍浸潤性骨髄系細胞（例えば、腫瘍関連マクロファージ）は、がんの進行および転移の原因である可能性がある。したがって、本明細書に開示の方法は、がん細胞上であろうと免疫細胞上であろうと、ＦＬＴ３が発現する様々ながんを処置するのに使用することができる。
【0171】
ＩＩＩ． 併用療法
本発明の別の態様は、併用療法を提供する。本明細書に記載の抗原結合部位を含むタンパク質、コンジュゲート、および細胞は、がんを処置するためのさらなる治療薬と組み合わせて使用することができる。
本発明の別の態様は、併用療法を提供する。本明細書に記載の抗原結合部位を含むタンパク質、コンジュゲート、および細胞は、がんを処置するためのさらなる治療薬と組み合わせて使用することができる。
【0172】
がん処置する上で併用療法の一部として使用することができる例示的な治療薬には、例えば、以下が含まれる：放射線、マイトマイシン、トレチノイン、リボムスチン、ゲムシタビン、ビンクリスチン、エトポシド、クラドリビン、ミトブロニトール、メトトレキサート、ドキソルビシン、カルボコン、ペントスタチン、ニトラクリン、ジノスタチン、セトロレリクス、レトロゾール、ラルチトレキセド、ダウノルビシン、ファドロゾール、フォテムスチン、サイマルファシン、ソブゾキサン、ネダプラチン、シタラビン、ビカルタミド、ビノレルビン、ベスナリノン、アミノグルテチミド、アムサクリン、プログルミド、エリプチニウム酢酸塩、ケタンセリン、ドキシフルリジン、エトレチナート、イソトレチノイン、ストレプトゾシン、ニムスチン、ビンデシン、フルタミド、ドロゲニル、ブトシン、カルモフール、ラゾキサン、シゾフィラン、カルボプラチン、ミトラクトール、テガフール、イホスファミド、プレドニムスチン、ピシバニール、レバミゾール、テニポシド、インプロスルファン、エノシタビン、リスリド、オキシメトロン、タモキシフェン、プロゲステロン、メピチオスタン、エピチオスタノール、ホルメスタン、インターフェロン－アルファ、インターフェロン－２アルファ、インターフェロン－ベータ、インターフェロン－ガンマ、コロニー刺激因子－１、コロニー刺激因子－２、デニロイキンジフチトクス、インターロイキン－２、黄体形成ホルモン放出因子、ならびにそのコグネート受容体に対して差次的な結合および血清半減期の増減を呈することができる上述の薬剤の変形形態。
【0173】
がんを処置する上で併用療法の一部として使用することができる薬剤のさらなる種類は、免疫チェックポイント阻害剤である。例示的な免疫チェックポイント阻害剤には、（ｉ）細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）、（ｉｉ）プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、（ｉｉｉ）ＰＤＬ１、（ｉｖ）ＬＡＧ３、（ｖ）Ｂ７－Ｈ３、（ｖｉ）Ｂ７－Ｈ４、および（ｖｉｉ）ＴＩＭ３のうちの１つまたは複数を阻害する薬剤が含まれる。ＣＴＬＡ４阻害剤であるイピリムマブは、黒色腫を処置するために、米国食品医薬品局によって承認されている。
【0174】
がんを処置する上で併用療法の一部として使用することができるさらに他の薬剤は、非チェックポイント標的を標的とするモノクローナル抗体の薬剤（例えば、ハーセプチン）および非細胞傷害性薬剤（例えば、チロシン－キナーゼ阻害剤）である。
【0175】
抗がん剤のさらに他の分類には、例えば、（ｉ）ＡＬＫ阻害剤、ＡＴＲ阻害剤、Ａ２Ａアンタゴニスト、塩基除去修復阻害剤、Ｂｃｒ－Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤、ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤、ＣＤＣ７阻害剤、ＣＨＫ１阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、ＤＮＡ－ＰＫ阻害剤、ＤＮＡ－ＰＫとｍＴＯＲの両方の阻害剤、ＤＮＭＴ１阻害剤、ＤＮＭＴ１阻害剤と２－クロロ－デオキシアデノシン、ＨＤＡＣ阻害剤、ヘッジホッグシグナル伝達経路阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＭＥＬＫ阻害剤、ＭＴＨ１阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ホスホイノシタイド３－キナーゼ阻害剤、ＰＡＲＰ１とＤＨＯＤＨの両方の阻害剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼ－ＩＩ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、およびＷＥＥ１阻害剤から選択される阻害剤；（ｉｉ）ＯＸ４０、ＣＤ１３７、ＣＤ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＴＮＦＲＳＦ２５、またはＩＣＯＳのアゴニスト；ならびに（ｉｉｉ）ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＧ－ＣＳＦから選択されるサイトカインが含まれる。
【0176】
本発明のタンパク質はまた、原発病巣の外科的除去の補助剤としても使用することができる。
【0177】
本明細書に開示のタンパク質、コンジュゲート、または細胞の量、およびさらなる治療薬、ならびに投与の相対的なタイミングは、所望の併用療法効果を得るために選択することができる。例えば、かかる投与を必要とする患者に併用療法を投与する場合、併用中の治療薬、または当該治療薬を含む医薬組成物（複数可）は、例えば、順次に、共に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）、一緒に、同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）等などの任意の順序で投与することができる。さらに、例えば、本明細書に開示のタンパク質、コンジュゲート、または細胞は、さらなる治療薬（複数可）がその予防効果、もしくは治療効果を発揮している間に投与してもよく、その逆も同様である。
【0178】
ＩＶ． 医薬組成物
本開示はまた、治療有効量の本明細書に記載のタンパク質を含有する医薬組成物も特徴とする。組成物は、様々な薬物デリバリーシステムで使用するために製剤化することができる。１つまたは複数の生理学的に許容される賦形剤または担体もまた、適当な製剤化向けに組成物に含めることができる。本開示での使用に適切な製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed., 1985に見出される。薬物デリバリーの方法に関する簡潔な総論については、例えば、Langer (Science 249:1527-1533, 1990)を参照されたい。
本開示はまた、治療有効量の本明細書に記載のタンパク質を含有する医薬組成物も特徴とする。組成物は、様々な薬物デリバリーシステムで使用するために製剤化することができる。１つまたは複数の生理学的に許容される賦形剤または担体もまた、適当な製剤化向けに組成物に含めることができる。本開示での使用に適切な製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed., 1985に見出される。薬物デリバリーの方法に関する簡潔な総論については、例えば、Langer (Science 249:1527-1533, 1990)を参照されたい。
【0179】
一態様では、本開示は、本明細書に記載のＦＬＴ３－結合部位と、薬学的に許容される担体とを含有する、タンパク質の製剤を提供する。
【0180】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３８のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号７７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号９５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号９６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号１０４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１０５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号１０７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１０８のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号１１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４
％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１２６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。
％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１２６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを備える抗原結合部位を含む、タンパク質を含む。
【0181】
組成物は、様々な薬物デリバリーシステムで使用するために製剤化することができる。１つまたは複数の生理学的に許容される賦形剤または担体を、適当な製剤化向けに組成物に含めることができる。本開示での使用に適切な製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed., 1985に見出される。薬物デリバリーの方法に関する簡潔な総論については、例えば、Langer (Science 249:1527-1533, 1990)を参照されたい。
【0182】
例えば、本開示は、製剤を形成する緩衝液中に治療有効量のタンパク質を含む、水性医薬製剤で存在するかもしれない。水性担体としては、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル溶液またはブドウ糖液を挙げることができる。ある特定の実施形態では、水性製剤は、ｐＨ緩衝液中で、本明細書に開示のタンパク質を含んで調製される。調製物のｐＨは典型的には、３から１１の間、より好ましくは５から９の間または６から８の間、最も好ましくは７から８の間、例えば７～７．５である。上記のｐＨとｐＨの中間にある範囲もまた、本開示の一部であることが意図される。例えば、上記値のいずれかの組合せを上限および／または下限として使用した値の範囲が含まれることが意図される。ｐＨをこの範囲内に制御することになる緩衝剤の例には、酢酸塩（例えば、酢酸ナトリウム）、コハク酸塩（例えばコハク酸ナトリウム）、グルコン酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩およびその他の有機酸の緩衝剤が含まれる。ある特定の実施形態では、緩衝剤系は、クエン酸一水和物、クエン酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム二水和物、および／またはリン酸二水素ナトリウム二水和物を含む。ある特定の実施形態では、緩衝剤系は、約１．３ｍｇ／ｍＬのクエン酸（例えば、１．３０５ｍｇ／ｍＬ）、約０．３ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム（例えば、０．３０５ｍｇ／ｍＬ）、約１．５ｍｇ／ｍＬのリン酸二ナトリウム二水和物（例えば、１．５３ｍｇ／ｍＬ）、約０．９ｍｇ／ｍＬのリン酸二水素ナトリウム二水和物（例えば、０．８６）、および約６．２ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム（例えば、６．１６５ｍｇ／ｍＬ）を含む。ある特定の実施形態では、緩衝剤系は、１～１．５ｍｇ／ｍＬのクエン酸、０．２５～０．５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム、１．２５～１．７５ｍｇ／ｍｌのリン酸二ナトリウム二水和物、０．７～１．１ｍｇ／ｍＬのリン酸二水素ナトリウム二水和物、および６．０～６．４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウムを含む。液体製剤のｐＨは、薬学的に許容される酸および／または塩基の添加によって設定することができる。ある特定の実施形態では、薬学的に許容される酸は塩酸とすることができる。ある特定の実施形態では、塩基は水酸化ナトリウムとすることができる。
【0183】
一部の実施形態では、製剤は、薬学的に許容されるとともに（ヒトへの投与向けに安全かつ非毒性である）液体製剤の調製に有用である、水性担体を含む。例示的な担体には、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル溶液またはブドウ糖液が含まれる。
【0184】
等張化剤として働くとともに抗体を安定化することができるポリオールもまた、製剤中に含めることができる。ポリオールは、製剤の所望の等張性に関連して様々である量で製剤に添加される。ある特定の実施形態では、水性製剤は等張性とすることができる。添加されるポリオールの量は、ポリオールの分子量に関連して変更することができる。例えば、二糖（例えばトレハロース）と比較して、より低い量の単糖（例えば、マンニトール）を添加することができる。ある特定の実施形態では、等張化剤として製剤中で使用することができるポリオールは、マンニトールである。ある特定の実施形態では、マンニトール濃度は、約５～約２０ｍｇ／ｍＬとすることができる。ある特定の実施形態では、マンニトールの濃度は、約７．５～１５ｍｇ／ｍＬとすることができる。ある特定の実施形態では、マンニトールの濃度は、約１０～１４ｍｇ／ｍＬとすることができる。ある特定の実施形態では、マンニトールの濃度は、約１２ｍｇ／ｍＬとすることができる。ある特定の実施形態では、ポリオールソルビトールを製剤中に含めることができる。
【0185】
表面活性剤（detergent）または界面活性剤（surfactant）もまた、製剤に添加することができる。例示的な表面活性剤には、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、８０等）またはポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）などの非イオン性表面活性剤が含まれる。添加される表面活性剤の量は、製剤化される抗体の凝集を減少させ、および／または製剤中の微粒子の形成を最小限にし、および／または吸着を減少させるような量である。ある特定の実施形態では、製剤は、ポリソルベートである界面活性剤を含むことができる。ある特定の実施形態では、製剤は、表面活性剤のポリソルベート８０またはＴｗｅｅｎ８０を含有することができる。Ｔｗｅｅｎ８０とは、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートを説明して使用される用語である（Fiedler, Lexikon der Hifsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 4th edi., 1996を参照されたい）。ある特定の実施形態では、製剤は、ポリソルベート８０の約０．１ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬの間、または約０．５ｍｇ／ｍＬから約５ｍｇ／ｍＬの間を含有することができる。ある特定の実施形態では、約０．１％ポリソルベート８０を製剤中に添加することができる。
【0186】
ある特定の実施形態では、本開示の液体製剤は、安定化レベルにての糖と組み合わせて、１０ｍｇ／ｍＬの濃度の溶液として調製することができる。ある特定の実施形態では、液体製剤は、水性担体中で調製することができる。ある特定の実施形態では、安定剤は、静脈内投与に望ましくないかまたは適さない粘性をもたらすおそれのある量以下の量で添加することができる。ある特定の実施形態では、糖は、二糖類、例えば、スクロースとすることができる。ある特定の実施形態では、液体製剤はまた、緩衝化剤、界面活性剤、および保存剤のうちの１つまたは複数を含むことができるが、この保存剤は、細菌作用を低減するために、本明細書の製剤に添加されるものである。保存剤の添加によって、例えば、マルチユース（反復投与）製剤の製造を容易にすることができる。
【0187】
一部の実施形態では、本開示は、マンニトール、クエン酸一水和物、クエン酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、ポリソルベート８０、水、および水酸化ナトリウムと組み合わせて、本開示のタンパク質を含む、貯蔵寿命の延長を備える製剤を提供する。
【0188】
脱アミド化は、発酵、収集／細胞清澄、精製、原薬／医薬品の貯蔵中、および試料分析中に生じる場合がある、ペプチドおよびタンパク質の一般的な製品変異型である。脱アミド化とは、タンパク質からのＮＨ３の喪失であり、スクシンイミド中間体を形成し、これは加水分解を受けることが可能である。スクシンイミド中間体は、親ペプチドの１７ダルトンの質量低下をもたらす。続く加水分解により、１８ダルトンの質量増加がもたらされる。スクシンイミド中間体の分離は、水性条件下では不安定であることに起因して、困難である。したがって、脱アミド化は通常には、１ダルトンの質量増加として検出可能である。アスパラギンの脱アミド化は、アスパラギン酸またはイソアスパラギン酸のいずれかをもたらす。脱アミド化率に影響を及ぼすパラメータには、ｐＨ、温度、溶媒の誘電率、イオン強度、一次配列、局所的なポリペプチドの立体構造および三次構造が含まれる。ペプチド鎖中のＡｓｎに隣接するアミノ酸残基が脱アミド化率に影響を及ぼす。タンパク質配列中のＡｓｎに続くＧｌｙおよびＳｅｒによって、脱アミド化へのより高い感受性がもたらされる。ある特定の実施形態では、本開示の液体製剤は、タンパク質製品の脱アミノ化を防ぐｐＨおよび湿度の条件下で保存することができる。
【0189】
一部の実施形態では、製剤は凍結乾燥製剤である。ある特定の実施形態では、製剤は、フリーズドライ処理（凍結乾燥）され、約１２～６０本のバイアルに収められる。ある特定の実施形態では、製剤は、フリーズドライ処理され、フリーズドライ処理された製剤４５ｍｇを１本のバイアルに収めることができる。ある特定の実施形態では、フリーズドライ処理された製剤約４０ｍｇ～約１００ｍｇが１本のバイアルに収められる。ある特定の実施形態では、１２、２７、または４５本のバイアルからのフリーズドライ処理された製剤を合わせて、静脈内薬物製剤の治療用量のタンパク質を得る。製剤は液体製剤であってもよい。一部の実施形態では、液体製剤は、約２５０ｍｇ／バイアル～約１０００ｍｇ／バイアルとして貯蔵される。ある特定の実施形態では、液体製剤は、約６００ｍｇ／バイアルとして貯蔵される。ある特定の実施形態では、液体製剤は、約２５０ｍｇ／バイアルとして貯蔵される。
【0190】
一部の実施形態では、凍結乾燥製剤は、本明細書に記載のタンパク質および凍結乾燥保護剤を含む。凍結乾燥保護剤は、糖、例えば、二糖類とすることができる。ある特定の実施形態では、凍結乾燥保護剤は、スクロースであってもマルトースであってもよい。凍結乾燥製剤はまた、緩衝剤、界面活性剤、増量剤、および／または保存剤のうちの１つまたは複数を含むことができる。凍結乾燥医薬品の安定化に有用なスクロースまたはマルトースの量は、タンパク質のスクロースまたはマルトースに対する重量比が少なくとも１：２であるようにすることができる。ある特定の実施形態では、タンパク質のスクロースまたはマルトースに対する重量比は、１：２から１：５までとすることができる。
【0191】
ある特定の実施形態では、凍結乾燥前の製剤のｐＨは、薬学的に許容される酸および／または塩基の添加によって設定することができる。ある特定の実施形態では、薬学的に許容される酸は塩酸とすることができる。ある特定の実施形態では、薬学的に許容される塩基は水酸化ナトリウムとすることができる。凍結乾燥前、本開示のタンパク質を含有する溶液のｐＨは、６から８の間に調整することができる。ある特定の実施形態では、凍結乾燥医薬品のｐＨ範囲は７から８までとすることができる。
【0192】
ある特定の実施形態では、「増量剤」を添加してもよい。「増量剤」とは、凍結乾燥混合物に嵩を与え、凍結乾燥ケーキの物理的構造に寄与する（例えば、開孔構造を維持する本質的に均一な凍結乾燥ケーキの生成を容易にする）化合物である。例示的な増量剤には、マンニトール、グリシン、ポリエチレングリコールおよびソルビトールが含まれる。本発明の凍結乾燥製剤は、かかる増量剤を含有する場合がある。
【0193】
ある特定の実施形態では、凍結乾燥のタンパク質製品は水性担体とともに構成される。本明細書で目的の水性担体とは、薬学的に許容される（例えば、ヒトへの投与に安全かつ非毒性である）とともに、凍結乾燥後の液体製剤の調製に有用であるものである。例示的な希釈剤には、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル溶液またはブドウ糖液が含まれる。ある特定の実施形態では、本開示の凍結乾燥医薬品は、ＵＳＰの注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）またはＵＳＰの０．９％塩化ナトリウム注射液のいずれかを用いて復元される。復元の過程で、凍結乾燥粉末が溶液中に溶解する。ある特定の実施形態では、本開示の凍結乾燥のタンパク質製品は、約４．５ｍＬの注射用水へと構成され、０．９％生理食塩水（塩化ナトリウム溶液）で希釈される。
【0194】
タンパク質組成物は、従来の滅菌技法によって滅菌してもよく、滅菌濾過してもよい。生成する水溶液を、そのまま使用向けにパッケージしてもよく、凍結乾燥してもよいが、凍結乾燥の調製物は投与前に滅菌水性担体と合わせられる。固体形態での生成する組成物は、反復の単回投与単位でパッケージしてもよく、そのそれぞれが、一定量の、上述の薬剤（複数可）を含有する。固体形態での組成物はまた、融通性のある分量向けの容器にパッケージすることもできる。
【0195】
本発明の医薬組成物中の有効成分の実際の投薬レベルは、特定の患者、組成物、および投与様式に対して所望の治療応答を、当該患者にとって毒性とはならずに達成するのに有効である有効成分の量が得られるように様々であってもよい。
【0196】
特定の用量は、各患者に対して均一用量、例えば、５０～５０００ｍｇのタンパク質とすることができる。あるいは、患者の用量は、患者のおおよその体重または表面積に合わせて調整することができる。適当な投薬量を決定する際の他の要因としては、処置または予防される疾患または状態、疾患の重症度、投与経路、ならびに患者の年齢、性別および病状を挙げることができる。処置にあたり適当な投薬量を決定するのに必要な算定についてさらなる洗練化が、当業者により、特に、本明細書に開示の投薬量の情報およびアッセイに照らし合わせてルーチン的になされている。投薬量はまた、適当な用量反応データと併せて使用される、投与量を決定するための既知のアッセイを使用して、決定することもできる。個々の患者の投薬量は、疾患の進行をモニタリングしながら調整することができる。患者における標的化可能なコンストラクトまたは複合体の血中レベルを測定して、有効濃度を達成または維持するために投薬量を調整する必要があるかどうかを確かめることができる。薬理ゲノミクスを使用して、どの標的化可能なコンストラクトおよび／または複合体が、ならびにそれらのどういった投薬量が、所与の個体にとって有効である可能性が高いかを判定することができる（Schmitz et al., Clinica. Chimica. Acta. 308: 43-53, 2001；Steimer et al., Clinica. Chimica. Acta. 308: 33-41, 2001）。
【0197】
一般に、体重を基準とした投薬量は、約０．０１μｇから約１００ｍｇ毎体重１ｋｇであり、例えば、約０．０１μｇ～約１００ｍｇ／体重１ｋｇ、約０．０１μｇ～約５０ｍｇ／体重１ｋｇ、約０．０１μｇ～約１０ｍｇ／体重１ｋｇ、約０．０１μｇ～約１ｍｇ／体重１ｋｇ、約０．０１μｇ～約１００μｇ／体重１ｋｇ、約０．０１μｇ～約５０μｇ／体重１ｋｇ、約０．０１μｇ～約１０μｇ／体重１ｋｇ、約０．０１μｇ～約１μｇ／体重１ｋｇ、約０．０１μｇ～約０．１μｇ／体重１ｋｇ、約０．１μｇ～約１００ｍｇ／体重１ｋｇ、約０．１μｇ～約５０ｍｇ／体重１ｋｇ、約０．１μｇ～約１０ｍｇ／体重１ｋｇ、約０．１μｇ～約１ｍｇ／体重１ｋｇ、約０．１μｇ～約１００μｇ／体重１ｋｇ、約０．１μｇ～約１０μｇ／体重１ｋｇ、約０．１μｇ～約１μｇ／体重１ｋｇ、約１μｇ～約１００ｍｇ／体重１ｋｇ、約１μｇ～約５０ｍｇ／体重１ｋｇ、約１μｇ～約１０ｍｇ／体重１ｋｇ、約１μｇ～約１ｍｇ／体重１ｋｇ、約１μｇ～約１００μｇ／体重１ｋｇ、約１μｇ～約５０μｇ／体重１ｋｇ、約１μｇ～約１０μｇ／体重１ｋｇ、約１０μｇ～約１００ｍｇ／体重１ｋｇ、約１０μｇ～約５０ｍｇ／体重１ｋｇ、約１０μｇ～約１０ｍｇ／体重１ｋｇ、約１０μｇ～約１ｍｇ／体重１ｋｇ、約１０μｇ～約１００μｇ／体重１ｋｇ、約１０μｇ～約５０μｇ／体重１ｋｇ、約５０μｇ～約１００ｍｇ／体重１ｋｇ、約５０μｇ～約５０ｍｇ／体重１ｋｇ、約５０μｇ～約１０ｍｇ／体重１ｋｇ、約５０μｇ～約１ｍｇ／体重１ｋｇ、約５０μｇ～約１００μｇ／体重１ｋｇ、約１００μｇ～約１００ｍｇ／体重１ｋｇ、約１００μｇ～約５０ｍｇ／体重１ｋｇ、約１００μｇ～約１０ｍｇ／体重１ｋｇ、約１００μｇ～約１ｍｇ／体重１ｋｇ、約１ｍｇ～約１００ｍｇ／体重１ｋｇ、約１ｍｇ～約５０ｍｇ／体重１ｋｇ、約１ｍｇ～約１０ｍｇ／体重１ｋｇ、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ／体重１ｋｇ、約１０ｍｇ～約５０ｍｇ／体重１ｋｇ、約５０ｍｇ～約１００ｍｇ／体重１ｋｇである。用量は、１日１回もしくは複数回、週１回もしくは複数回、月１回もしくは複数回、または年１回もしくは複数回、またはさらには２～２０年ごとに１回、与えることができる。当業者であれば、体液または組織における、標的可能なコンストラクトまたは複合体の測定滞留時間および濃度に基づいて、投薬の反復率を容易に推測することができる。本発明の投与は、カテーテルを介した灌流によるまたは直接病巣内注射による、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、胸膜内、髄腔内、腔内のものとすることができるであろう。これは、１日１回または複数回、週１回または複数回、月１回または複数回、および年１回または複数回、投与することができる。
【0198】
上の明細書は、本発明の多数の態様および実施形態について記載するものである。本特許出願は、態様および実施形態のすべての組合せおよび入替えを具体的に企図している。
【0199】
本明細書全体を通して、組成物が特定の構成成分を有する（ｈａｖｉｎｇ）、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）ものとして記載される場合、または方法（ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ）および方法（ｍｅｔｈｏｄｓ）が特定の工程を有する（ｈａｖｉｎｇ）、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）ものとして記載される場合、列挙される構成成分から本質的になるかまたはそれらからなる本発明の組成物が存在すること、ならびに、列挙される処理工程から本質的になるかまたはそれらからなる本発明による方法（ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ）および方法（ｍｅｔｈｏｄｓ）が存在することが、付加的に、企図される。
【0200】
本願では、ある要素または構成成分が、列挙された要素または構成成分のリスト中に含まれると、および／または当該リストから選択されると述べられている場合、その要素または構成成分は、列挙された要素または構成成分のうちのいずれか１つとすることができるということ、または、その要素または構成成分は、列挙された要素または構成成分のうちの２つ以上からなる群から選択することができるということを理解されたい。
【0201】
さらに、本明細書に記載の組成物または方法の要素および／または特性は、本明細書で明示的であるか暗黙的であるかどうかにかかわらず、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、様々な方法で組み合わせることができることを理解されたい。例えば、特定の化合物に言及がなされる場合、その化合物は、文脈から別様に理解されない限り、本発明の組成物の種々の実施形態においておよび／または本発明の方法において使用することができる。言い換えれば、本願内では、明確で簡潔な出願を記すことおよび描くことを可能とするように、実施形態を記載および図示してきたが、実施形態は、本教示および本発明（複数可）から分かれることなく、様々に、組み合わせることが可能であること、または別々にすることが可能であることが意図されておりそしてそのことが理解されよう。例えば、本明細書に記載および図示されるすべての特性は、本明細書に記載および図示される本発明（複数可）のすべての態様に適用可能であることが理解されよう。
【0202】
「～の少なくとも１つ」という表現は、文脈および使用から別様に理解されない限り、その表現の前にある列挙された対象物のそれぞれを、ならびに、列挙された対象物のうちの２つ以上の種々の組合せを、個別に含むことを理解されたい。３つ以上の列挙された対象物に関する「および／または」という表現は、文脈から別様に理解されない限り、同じ意味を有するものと理解されたい。
【0203】
「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ、ｉｎｃｌｕｄｅｓ、ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｅ、ｈａｓ、ｈａｖｉｎｇ）」、または「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ、ｃｏｎｔａｉｎｓ、ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」という用語の使用については、それらの文法上の同等物を含めて、特に明記しない限りまたは文脈から別様に理解されない限り、無制限のかつ非限定的なもの、例えば、列挙されていないさらなる要素または工程を除外しないものとして、全体として理解されたい。
【0204】
「約」という用語の使用が定量的値の前にある場合、本発明はまた、特に明記しない限り、その具体的な定量的値自体も含む。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、特に指定のない限りまたは推定がない限り、公称値から±１０％の変動を指す。
【0205】
工程の順序またはある特定の行為を実行するための順序は、本発明が実施可能状態に留まる限り、重要ではないことを理解されたい。さらに、２つ以上の工程または行為を同時に実行してもよい。
【0206】
本明細書におけるあらゆる例、または例示的な文言、例えば、「などの（ｓｕｃｈ ａｓ）」または「含めて（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の使用は、本発明をよりよく例示することを単に意図したものであり、特許請求されない限り、本発明の範囲に制限をもたらすものではない。本明細書のいかなる文言も、特許請求されていない任意の要素が本発明の実践にとって不可欠であることを示すものと解釈されるべきではない。
【0207】
以下の実施例は、単なる例示であり、いかようにも本発明の範囲または内容を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【0208】
［実施例１］
選択されたハイブリドーマクローンの上清の特性評価
ＦＬＴ３特異的抗体を、ｈＦＬＴ３－Ｈｉｓ融合タンパク質でマウスを免疫することによって生成した。２２８のハイブリドーマ上清を、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によってＦＬＴ３結合について評価し、９６のハイブリドーマがｈＦＬＴ３－Ｈｉｓタンパク質に非共有結合で結合した。予備的なバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）結合親和性の推定値、ＦＬＴ３を発現するヒト細胞およびカニクイザル細胞への結合、ならびにエピトープの多様性に基づいて、１１のクローンを選択した。これら１１のクローンがｈＦＬＴ３－Ｈｉｓと結合する能力を、高分解能表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）によってさらに解析した。実験を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用して、生理学的温度を模倣して３７℃で実行した。ビアコアセンサーグラムおよびキネティックパラメータを表４に提示し、生データおよび適合を図１に示す。１１のハイブリドーマのうち７つが１０ｎＭ未満のＫＤで結合したが、５つは遅い解離速度定数（ｋｄ＜５×１０－４ｓ－１）を見せている。
選択されたハイブリドーマクローンの上清の特性評価
ＦＬＴ３特異的抗体を、ｈＦＬＴ３－Ｈｉｓ融合タンパク質でマウスを免疫することによって生成した。２２８のハイブリドーマ上清を、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によってＦＬＴ３結合について評価し、９６のハイブリドーマがｈＦＬＴ３－Ｈｉｓタンパク質に非共有結合で結合した。予備的なバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）結合親和性の推定値、ＦＬＴ３を発現するヒト細胞およびカニクイザル細胞への結合、ならびにエピトープの多様性に基づいて、１１のクローンを選択した。これら１１のクローンがｈＦＬＴ３－Ｈｉｓと結合する能力を、高分解能表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）によってさらに解析した。実験を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用して、生理学的温度を模倣して３７℃で実行した。ビアコアセンサーグラムおよびキネティックパラメータを表４に提示し、生データおよび適合を図１に示す。１１のハイブリドーマのうち７つが１０ｎＭ未満のＫＤで結合したが、５つは遅い解離速度定数（ｋｄ＜５×１０－４ｓ－１）を見せている。
【0209】
参照ｍＡｂとのハイブリドーマ融合物のビニングを、ＯｃｅｔｅｔＲｅｄ３８４（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用するＢＬＩによって実施した。簡潔にいえば、ハイブリドーマ上清を抗マウスＩｇＧキャプチャーセンサーチップに１５分間ロードし、ＰＢＳＦ中で５分間平衡化した。センサーを２００ｎＭ ｈＦＬＴ３－Ｈｉｓに浸漬し、１８０秒間会合させ、これに続いて、１００ｎＭ対照ＩｇＧまたは２００ｎＭ ＦＴＬ３リガンド溶液に浸漬した。応答単位の上昇は、ハイブリドーマが参照ｍＡｂに対して非競合物であることを指示したが、一方、シグナルの上昇がないことは、ハイブリドーマが参照ｍＡｂと競合することを指示した。ＦＬ２３（Ａｍｇｅｎ）およびＦＬ３９（Ａｍｇｅｎ）はドメイン１に結合する。既知のＦＬＴ３リガンドブロッカーであるＥＢ１０（ＩｍＣｌｏｎｅ）はドメイン３に結合する。ＦＬ６１（Ａｍｇｅｎ）もドメイン３に結合するが、ＦＬＴ３リガンドブロッカーではない。４Ｇ８（Ｓｙｎｉｍｍｕｎｅ）はドメイン４に結合する。ＮＣ７（Ｉｍｃｌｏｎｅ）はドメイン５に結合する。これら参照抗体のＶＨ配列およびＶＬ配列を表３に提供する。
【0210】
【表17】
【0211】
ハイブリドーマのうちの５つ、すなわち４Ａ４、１１Ｆ４、１Ａ２、４Ｈ２、および１３Ｃ９から産生された抗体は、ｈＦＬＴ３－Ｈｉｓへの結合にあたり参照抗体のいずれとも競合しないことが観察された。カニクイザルＦＬＴ３（ｃＦＬＴ３）との交差反応性を、ｃＦＬＴ３を発現する同質遺伝子ＲＭＡ細胞への抗体の結合を測定することによって評価した。
【0212】
簡潔にいえば、ＲＭＡ細胞に、ｃＦＬＴ３またはヒトＦＬＴ３（ｈＦＬＴ３）をコードするレトロウイルスベクターを形質導入した。粗ハイブリドーマ収集物からのα－ＦＬＴ３ ｍＡｂのｈＦＬＴ３またはｃＦＬＴ３の同質遺伝子細胞株ならびにＦＬＴ３＋がん細胞株への結合を以下のように実施した。９６ウェル丸底プレートのウェルごとに１００，０００個のＲＭＡ、ＲＥＨ、またはＳＥＭの細胞を添加した。細胞を遠沈し、ペレットをボルテックス振とうにより穏やかに分離させた。Ｚｏｍｂｉｅライブ／デッド色素（ＰＢＳ＋１：２０００色素）５０μＬをウェルごとに添加し、暗所で室温で２０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）２００μＬで洗浄した。ハイブリドーマ上清５０μＬを洗浄細胞に添加し、混合物を暗所で氷上で３０分間インキュベートした。細胞を１回洗浄し、次いで、抗マウスＦｃ－ＰＥ二次試薬（１：２００希釈）５０μＬを添加し、暗所で氷上で２０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、４％パラホルムアルデヒド５０μＬで氷上で１５分間固定した。細胞を再度洗浄し、次いで、ＦＡＣＳ緩衝剤２００μＬに再懸濁し、取得の用意ができるまで４℃で保存した。試料を、ＨＴＳ（ハイスループットサンプラー）を備えたＢＤＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａでランさせた。
【0213】
ＦＬＴ３を発現すると報告されているヒトＡＬＬ細胞株であるＲＥＨがん細胞（ＡＴＣＣカタログ番号ＣＲＬ－８２８６）に対するハイブリドーマ上清の結合親和性も測定した。表４に示すように、ほとんどのクローンが、ｈＦＬＴ３を発現するがん細胞への結合親和性およびｃＦＬＴ３との交差反応性を提示した。１４Ａ５および１５Ａ１１に関するカニクイザルＦＬＴ３結合データについては収集しなかった。
【0214】
【表18】
［実施例２］
【0215】
精製抗ＦＬＴ３マウス抗体の解析
上に提示の解析に基づいて、８つのハイブリドーマ（４Ａ４、１１Ｆ４、１２Ｈ１０、１５Ａ１１、１２Ｃ０９、１Ａ２、１４Ａ５、４Ｈ２）をサブクローニングおよび配列決定のために選択した。各親ハイブリドーマからの２つのサブクローンを生成し、解析した。各ハイブリドーマからの配列を、ユニークであると判定した。各サブクローンをハイブリドーマ培養物から精製し、ｈＦＬＴ３－Ｈｉｓへの結合を図２に示すようにＳＰＲによって確認した。精製マウスサブクローンｍＡｂに対するｈＦＬＴ３のキネティック定数および結合親和性を表５に示す。参照抗体によるビニングを、実施例１に記載の方法を使用して実施したが、４つの抗体、すなわち４Ａ４．Ａ３、１１Ｆ４．Ｂ９、１Ａ２．Ａ３、および４Ｈ２．Ｅ３は、ｈＦＬＴ３－Ｈｉｓへの結合にあたり、参照抗体のいずれとも競合しなかった。
上に提示の解析に基づいて、８つのハイブリドーマ（４Ａ４、１１Ｆ４、１２Ｈ１０、１５Ａ１１、１２Ｃ０９、１Ａ２、１４Ａ５、４Ｈ２）をサブクローニングおよび配列決定のために選択した。各親ハイブリドーマからの２つのサブクローンを生成し、解析した。各ハイブリドーマからの配列を、ユニークであると判定した。各サブクローンをハイブリドーマ培養物から精製し、ｈＦＬＴ３－Ｈｉｓへの結合を図２に示すようにＳＰＲによって確認した。精製マウスサブクローンｍＡｂに対するｈＦＬＴ３のキネティック定数および結合親和性を表５に示す。参照抗体によるビニングを、実施例１に記載の方法を使用して実施したが、４つの抗体、すなわち４Ａ４．Ａ３、１１Ｆ４．Ｂ９、１Ａ２．Ａ３、および４Ｈ２．Ｅ３は、ｈＦＬＴ３－Ｈｉｓへの結合にあたり、参照抗体のいずれとも競合しなかった。
【0216】
【表19】
【0217】
精製サブクローニングｍＡｂの細胞結合を、ＲＭＡ細胞株を発現する同質遺伝子のヒトＦＬＴ３およびカニクイザルＦＬＴ３で確認した。１２Ｃ９．Ｅ５を除いて、細胞表面に結合したすべてのクローンは、ヒトおよびカニクイザルのＦＬＴ３を発現した（表６）。同様に、すべてのサブクローンが、ＦＬＴ３を発現すると報告されているヒトＡＬＬ細胞株であるＳＥＭ（ＤＳＭＺカタログ番号ＡＣＣ ５４６）に、高親和性をもって結合した。
【0218】
【表20】
【0219】
選択された抗ＦＬＴ３ネズミ抗体のリガンドブロッキング特性
本実施例を、選択された抗ＦＬＴ３ネズミ抗体がＦＬＴ３リガンドとのＦＬＴ３相互作用をブロックする能力を、特徴づけるように設計した。α－ＦＬＴ３ ｍＡｂがＦＬＴ３－発現ＥＯＬ－１がん細胞（ＤＳＭＺカタログ番号ＡＣＣ ３８６）と結合する能力について、飽和濃度の可溶性ＦＬＴ３リガンドを添加する前後で、試験した。各抗体について、リガンドブロッキング値に関する各抗体のパーセンテージは、指示されたＦＬＴ３リガンドの非存在下で得られたｍＡｂ結合シグナルと比べた、ＦＬＴ３リガンドの存在下で得られた上記シグナルの低下として計算した。既知のＦＬＴ３リガンドブロッカーであるＥＢ１０ ｍＡｂを陽性対照として使用した。図３に示すように、１２Ｈ１０．Ｇ７、１１Ｆ４．Ｂ９および４Ａ４．Ａ３、１４Ａ５．Ｅ８の抗体は、ＦＬＴ３のＦＬＴ３リガンドへの結合を妨害しなかったが、一方、１５Ａ１１．Ｃ８抗体は、ＦＬＴ３リガンドのＦＬＴ３への結合をブロックした。
［実施例４］
本実施例を、選択された抗ＦＬＴ３ネズミ抗体がＦＬＴ３リガンドとのＦＬＴ３相互作用をブロックする能力を、特徴づけるように設計した。α－ＦＬＴ３ ｍＡｂがＦＬＴ３－発現ＥＯＬ－１がん細胞（ＤＳＭＺカタログ番号ＡＣＣ ３８６）と結合する能力について、飽和濃度の可溶性ＦＬＴ３リガンドを添加する前後で、試験した。各抗体について、リガンドブロッキング値に関する各抗体のパーセンテージは、指示されたＦＬＴ３リガンドの非存在下で得られたｍＡｂ結合シグナルと比べた、ＦＬＴ３リガンドの存在下で得られた上記シグナルの低下として計算した。既知のＦＬＴ３リガンドブロッカーであるＥＢ１０ ｍＡｂを陽性対照として使用した。図３に示すように、１２Ｈ１０．Ｇ７、１１Ｆ４．Ｂ９および４Ａ４．Ａ３、１４Ａ５．Ｅ８の抗体は、ＦＬＴ３のＦＬＴ３リガンドへの結合を妨害しなかったが、一方、１５Ａ１１．Ｃ８抗体は、ＦＬＴ３リガンドのＦＬＴ３への結合をブロックした。
［実施例４］
【0220】
推定配列易罹病性の解析
１２Ｈ１０．Ｇ７、１１Ｆ４．Ｂ９および４Ａ４．Ａ３、１４Ａ５．Ｅ８の抗体のＣＤＲ（Ｃｈｏｔｈｉａに基づいて特定）における可能性のある配列易罹病性について調べた。以下の可能性のある易罹病性が考慮に入れられた：Ｍ（可能性のある酸化部位）；ＮＧ、ＮＳおよびＮＴ配列モチーフ（可能性のある脱アミド化部位）；ＤＧ、ＤＳおよびＤＴ配列モチーフ（可能性のある異性化部位）；ＤＰ配列モチーフ（化学加水分解の可能性のある部位）。結果を表７にまとめる。
１２Ｈ１０．Ｇ７、１１Ｆ４．Ｂ９および４Ａ４．Ａ３、１４Ａ５．Ｅ８の抗体のＣＤＲ（Ｃｈｏｔｈｉａに基づいて特定）における可能性のある配列易罹病性について調べた。以下の可能性のある易罹病性が考慮に入れられた：Ｍ（可能性のある酸化部位）；ＮＧ、ＮＳおよびＮＴ配列モチーフ（可能性のある脱アミド化部位）；ＤＧ、ＤＳおよびＤＴ配列モチーフ（可能性のある異性化部位）；ＤＰ配列モチーフ（化学加水分解の可能性のある部位）。結果を表７にまとめる。
【0221】
【表21】
【0222】
加えて、Ｋａｂａｔに基づいた１２Ｈ１０．Ｇ７のＣＤＲＨ１に該当するＭ３４にての推定配列易罹病性もまた特定した。これらの抗体の変異体を、推定上の配列易罹病性モチーフを排除するように設計した。
［実施例５］
［実施例５］
【0223】
ヒト化および親和性成熟
組換えｈＦＬＴ３タンパク質のキネティクスおよび親和性、ヒトおよびカニクイザルサルのＦＬＴ３を発現する細胞株への結合、様々なＡＭＬおよびＡＬＬのがん細胞への結合、ビニングプロファイル、ならびにヒトＦＬＴ３－リガンド結合を阻害しないことに関して収集されたデータに基づいて、４つのマウスハイブリドーマサブクローン、すなわち１２Ｈ１０．Ｇ７、１１Ｆ４．Ｂ９、４Ａ４．Ａ３および１４Ａ５．Ｅ８をヒト化向けに選択した。４Ａ４．Ａ３および１４Ａ５．Ｅ８は、１２Ｈ１０．Ｇ７および１１Ｆ４．Ｂ９よりもｈＦＬＴ３に対してわずかに低い親和性を示したが、これらの抗体は、それぞれ、ＦＬＴ３のユニークエピトープ（参照抗体との交差ブロッキングではない）およびドメイン１に結合するようであり、したがって、エピトープの多様性を探索するためにさらに解析した。
組換えｈＦＬＴ３タンパク質のキネティクスおよび親和性、ヒトおよびカニクイザルサルのＦＬＴ３を発現する細胞株への結合、様々なＡＭＬおよびＡＬＬのがん細胞への結合、ビニングプロファイル、ならびにヒトＦＬＴ３－リガンド結合を阻害しないことに関して収集されたデータに基づいて、４つのマウスハイブリドーマサブクローン、すなわち１２Ｈ１０．Ｇ７、１１Ｆ４．Ｂ９、４Ａ４．Ａ３および１４Ａ５．Ｅ８をヒト化向けに選択した。４Ａ４．Ａ３および１４Ａ５．Ｅ８は、１２Ｈ１０．Ｇ７および１１Ｆ４．Ｂ９よりもｈＦＬＴ３に対してわずかに低い親和性を示したが、これらの抗体は、それぞれ、ＦＬＴ３のユニークエピトープ（参照抗体との交差ブロッキングではない）およびドメイン１に結合するようであり、したがって、エピトープの多様性を探索するためにさらに解析した。
【0224】
１２Ｈ１０．Ｇ７抗体をヒト化して、上掲のようにＧＢ９４およびＧＢ１０２を創り出したが、これらは同じＶＨ配列およびＶＬ配列を共有した。フレームワーク領域に復帰突然変異を導入して、ＧＢ８７～ＧＢ９３およびＧＢ９５～ＧＢ１０１の変異体を創り出した。
【0225】
１１Ｆ４．Ｂ９抗体をヒト化して、上掲のように１１５３および１１５４を創り出したが、これらは同じＶＨ配列およびＶＬ配列を共有した。フレームワーク領域に復帰突然変異を導入して、１１５１および１１５２の変異体を創り出した。１１５３抗体についてはまた、親和性成熟に供した。簡潔にいえば、１５５３ ＦＬＴ３ ｓｃＦｖのＣＤＲに焦点を当てたライブラリを設計し、酵母の表面で提示させた。ＦＡＣＳ選択を、酵母をビオチン化ヒトＦＬＴ３－Ｈｉｓ抗原とインキュベートすることにより、２回行った。ＦＡＣＳ濃縮のアウトプット試料をさらなるＣＤＲ突然変異体と組み合わせて、第２のライブラリを作製した。１００ｎＭから１ｎＭまでビオチン化ヒトＦＬＴ３－Ｈｉｓで滴定することにより、さらなるＦＡＣＳ選択の２ラウンドを行った。ソーティングを１０ｎＭで実行したが、この場合、親と比較して、シグナルの明らかな上昇がライブラリに対して観察された。ソーティングした酵母クローンをプレーティングし、スクリーニングした。
［実施例６］
［実施例６］
【0226】
ヒトがん抗原を発現した細胞への抗体結合の評価
ヒトおよびカニクイザルのＦＬＴ３を異所的に発現する同質遺伝子細胞株を使用して、ヒトＦＬＴ３とカニクイザルＦＬＴ３の間の交差反応性について評価した。ｈＦＬＴ３またはｃＦＬＴ３を発現するヒトがん細胞株ＲＭＡを使用して、ＦＬＴ３－結合抗体の腫瘍抗原結合について評価した。ヒトＡＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１３およびＭＶ４－１１ならびにヒトＡＬＬ細胞株ＲＥＨを使用して、抗体の結合能力について評価した。具体的には、ＦＬＴ３－Ｔ２２７Ｍを発現したＭＯＬＭ－１３細胞を使用して、抗ＦＬＴ３抗体が突然変異型ＦＬＴ３と結合する能力について評価した。
ヒトおよびカニクイザルのＦＬＴ３を異所的に発現する同質遺伝子細胞株を使用して、ヒトＦＬＴ３とカニクイザルＦＬＴ３の間の交差反応性について評価した。ｈＦＬＴ３またはｃＦＬＴ３を発現するヒトがん細胞株ＲＭＡを使用して、ＦＬＴ３－結合抗体の腫瘍抗原結合について評価した。ヒトＡＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１３およびＭＶ４－１１ならびにヒトＡＬＬ細胞株ＲＥＨを使用して、抗体の結合能力について評価した。具体的には、ＦＬＴ３－Ｔ２２７Ｍを発現したＭＯＬＭ－１３細胞を使用して、抗ＦＬＴ３抗体が突然変異型ＦＬＴ３と結合する能力について評価した。
【0227】
ヒトＩｇＧ１フォーマットでの１２Ｈ１０．Ｇ７からヒト化されたモノクローナル抗体である１１５８ ｍＡｂを希釈し、それぞれの細胞とともにインキュベートした。次いで、細胞をフルオロフォアコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ二次抗体とともにインキュベートし、フローサイトメトリーによって解析した。平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を二次抗体のみの対照に対して正規化して、バックグラウンドに対する倍数（fold over background）（ＦＯＢ）値を得た。
【0228】
図４Ａおよび図４Ｂに示すように、１１５８ ｍＡｂは、等価の効力でヒトおよびカニクイザルのＦＬＴ３を異所的に発現するＲＭＡ細胞と結合した。図４Ｃに示すように、１１５８ ｍＡｂは、ヒトＡＬＬ細胞であるＲＥＨ細胞と結合した。図５に示すように、１１５８ ｍＡｂはＦＬＴ３－Ｔ２２７Ｍを発現したＭＯＬＭ－１３細胞と結合した。
【0229】
ＦＬＴ３－ＩＴＤを発現したＭＶ４－１１細胞も使用して、同様の方法を使用して抗ＦＬＴ３抗体が突然変異体ＦＬＴ３と結合する能力について評価した。１１５８ ｍＡｂに由来するｓｃＦｖの形で抗原結合部位を含有する二重特異性抗体が、ＭＶ４－１１細胞と結合することが観察された。
［実施例７］
［実施例７］
【0230】
抗体内在化の評価
好酸球性白血病に由来するＥＯＬ－１ヒトがん細胞株を使用して、１１５８ ｍＡｂとのインキュベーション後のＦＬＴ３の内在化について評価した。重複するプレートでＥＯＬ－１細胞を、１１５８ ｍＡｂまたはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体とともに３７℃で２時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を洗浄し、非競合抗ＦＬＴ３抗体を使用して全ＦＬＴ３を染色した。ＦＬＴ３の内在化を以下のように計算した：
％内在化＝［１－（試料ＭＦＩ ２時間／ｈＩｇＧ１アイソタイプＭＦＩ ２時間）］×１００％
好酸球性白血病に由来するＥＯＬ－１ヒトがん細胞株を使用して、１１５８ ｍＡｂとのインキュベーション後のＦＬＴ３の内在化について評価した。重複するプレートでＥＯＬ－１細胞を、１１５８ ｍＡｂまたはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体とともに３７℃で２時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を洗浄し、非競合抗ＦＬＴ３抗体を使用して全ＦＬＴ３を染色した。ＦＬＴ３の内在化を以下のように計算した：
％内在化＝［１－（試料ＭＦＩ ２時間／ｈＩｇＧ１アイソタイプＭＦＩ ２時間）］×１００％
【0231】
上の方法を使用して測定して、１１５８ ｍＡｂとのインキュベーション後のＲＥＨ細胞へのＦＬＴ３の内在化は、約８．２７％であった。上の方法を使用して測定して、１１５８ ｍＡｂとのインキュベーション後のＥＯＬ－１細胞へのＦＬＴ３の内在化は、約８．３０％であった。
［実施例８］
［実施例８］
【0232】
初代ヒトＮＫ細胞の細胞傷害性アッセイ
標的細胞の溶解を、ＤＥＬＦＩＡ細胞傷害性アッセイによって測定した。簡潔にいえば、ＦＬＴ３を発現するヒトがん細胞株を、培養物から回収し、ＨＢＳで洗浄し、ＢＡＴＤＡ試薬（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｃ１３６－１００）で標識するために１０６／ｍＬで増殖培地に再懸濁した。標的細胞の標識については、製造業者の使用説明書に従った。標識後、細胞をＨＢＳで３回洗浄し、培養培地に０．５～１．０×１０５／ｍＬで再懸濁した。ＢＡＴＤＡ標識細胞１００μｌを９６ウェルプレートの各ウェルに添加した。１１５８ ｍＡｂを培養培地で希釈し、希釈ｍＡｂ ５０μｌを各ウェルに添加した。
標的細胞の溶解を、ＤＥＬＦＩＡ細胞傷害性アッセイによって測定した。簡潔にいえば、ＦＬＴ３を発現するヒトがん細胞株を、培養物から回収し、ＨＢＳで洗浄し、ＢＡＴＤＡ試薬（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｃ１３６－１００）で標識するために１０６／ｍＬで増殖培地に再懸濁した。標的細胞の標識については、製造業者の使用説明書に従った。標識後、細胞をＨＢＳで３回洗浄し、培養培地に０．５～１．０×１０５／ｍＬで再懸濁した。ＢＡＴＤＡ標識細胞１００μｌを９６ウェルプレートの各ウェルに添加した。１１５８ ｍＡｂを培養培地で希釈し、希釈ｍＡｂ ５０μｌを各ウェルに添加した。
【0233】
ＮＫ細胞を調製するために、ＰＢＭＣを、密度勾配遠心分離を使用してヒト末梢血バフィーコートから分離し、洗浄し、ＮＫ細胞分離向けに調製した。ＮＫ細胞を、磁気ビーズを用いたネガティブセレクション技法を使用して分離した。分離ＮＫ細胞の純度は通常には、＞９０％のＣＤ３－ＣＤ５６＋であった。分離ＮＫ細胞を一晩休止させ、培養物から回収した。次いで、細胞を洗浄し、エフェクターの標的（Ｅ：Ｔ）に対する比が５：１となるように、培養培地に１０５～２．０×１０６／ｍＬの濃度で再懸濁した。ＮＫ細胞５０μｌを、培養容量が合計２００μｌとなるようにプレートの各ウェルに添加した。プレートを３７℃で５％ＣＯ２と共に２～３時間インキュベートした。
【0234】
インキュベーション後、プレートをインキュベーターから取り出し、細胞を２００×ｇで５分間の遠心分離によってペレット化した。培養上清２０μｌをクリーンなマイクロプレートに移し、室温のユーロピウム溶液（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｃ１３５－１００）２００μｌを各ウェルに添加した。プレートを光から保護し、プレートシェーカー上で２５０ｒｐｍで１５分間インキュベートし、次いで、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３Ｘ機器を使用して読み取った。
【0235】
ユーロピウムと蛍光キレートを形成することができる物質の自然放出を、ＮＫ細胞の非存在下でインキュベートされた標的細胞において測定した。かかる物質の最大放出を、１％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘで溶解した標的細胞で測定した。特異的溶解の％を以下のように計算した：
特異的溶解の％＝［（実験上の放出－自然放出）／（最大放出－自然放出）］＊１００％。
特異的溶解の％＝［（実験上の放出－自然放出）／（最大放出－自然放出）］＊１００％。
【0236】
図６Ａ～６Ｄに、ヒトＡＭＬまたはＡＬＬ細胞株ＥＯＬ－１（図６Ａ）、Ｒｅｈ（図６Ｂ）、ＲＳ４－１１（図６Ｃ）、およびＭＶ４－１１（図６Ｄ）の初代ＮＫ細胞媒介性殺傷を増強する上での１１５８ ｍＡｂの活性を示す。１１５８ ｍＡｂによって、ＮＫ細胞が用量依存的に標的細胞を殺傷する能力が向上した。
［実施例９］
［実施例９］
【0237】
ヒト全血へのＴｒｉＮＫＥＴまたは ｍＡｂの結合の評価
１１５８ ｍＡｂが様々なタイプの血球と結合する能力について評価した。簡潔にいえば、ヒト全血を１１５８ ｍＡｂまたはヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体とインキュベートした。血球をフローサイトメトリーにより解析し、１１５８ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照抗体の結合を、フルオロフォアコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ二次抗体を使用して検出した。
１１５８ ｍＡｂが様々なタイプの血球と結合する能力について評価した。簡潔にいえば、ヒト全血を１１５８ ｍＡｂまたはヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体とインキュベートした。血球をフローサイトメトリーにより解析し、１１５８ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照抗体の結合を、フルオロフォアコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ二次抗体を使用して検出した。
【0238】
血液中の顆粒球、単球、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、およびＣＤ４＋ Ｔ細胞への１１５８ ｍＡｂの有意な結合は観察されなかった。
［実施例１０］
［実施例１０］
【0239】
ＦＬＴ３シグナル伝達の活性化
ＦＬＴ３シグナル伝達のマーカーであるＦＬＴ３のリン酸化を、ｐＦＬＴ３ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＤＹＣ３６８）によって測定した。ＥＯＬ－１細胞を９６ウェル丸底プレートにプレーティングした。１１５８ ｍＡｂおよび／またはＦＬＴ３Ｌを添加した。試料を室温で５分間インキュベートし、即座に３００×ｇで５分間ペレット化した。細胞をＰＢＳで２回洗浄した。細胞ペレットをＬｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ ＃９ ２００μＬに再懸濁し、氷上で１５分間インキュベートした。試料を２０００×ｇで５分間ペレット化し、上清をクリーンな試験管に移した。タンパク質濃度を、ＢＣＡ総タンパク質アッセイを使用して定量化した。適宜、試料をＩＣ Ｄｉｌｕｅｎｔ ＃１２で希釈した。溶解物を、製造元の使用説明書に従って測定した。各試料のｐＦＬＴ３濃度を、導出した標準曲線からの値の補間によって決定した。既知の標準物質の光学密度値をそれらそれぞれの濃度に対してプロットし、データを線形回帰モデルに適合させた。
ＦＬＴ３シグナル伝達のマーカーであるＦＬＴ３のリン酸化を、ｐＦＬＴ３ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＤＹＣ３６８）によって測定した。ＥＯＬ－１細胞を９６ウェル丸底プレートにプレーティングした。１１５８ ｍＡｂおよび／またはＦＬＴ３Ｌを添加した。試料を室温で５分間インキュベートし、即座に３００×ｇで５分間ペレット化した。細胞をＰＢＳで２回洗浄した。細胞ペレットをＬｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ ＃９ ２００μＬに再懸濁し、氷上で１５分間インキュベートした。試料を２０００×ｇで５分間ペレット化し、上清をクリーンな試験管に移した。タンパク質濃度を、ＢＣＡ総タンパク質アッセイを使用して定量化した。適宜、試料をＩＣ Ｄｉｌｕｅｎｔ ＃１２で希釈した。溶解物を、製造元の使用説明書に従って測定した。各試料のｐＦＬＴ３濃度を、導出した標準曲線からの値の補間によって決定した。既知の標準物質の光学密度値をそれらそれぞれの濃度に対してプロットし、データを線形回帰モデルに適合させた。
【0240】
図７Ａに示すように、ＦＬＴ３Ｌは、ｐＦＬＴ３レベルの３倍の上昇をもたらしたが、一方、１１５８ ｍＡｂは、有意なＦＬＴ３リン酸化を誘導しなかった。図７Ｂに、細胞をＦＬＴ３Ｌと組み合わせて１１５８ ｍＡｂと共にインキュベートした場合、１１５８ ｍＡｂは、ＦＬＴ３Ｌ誘導性のＦＬＴ３リン酸化を阻害しなかったことを示す。これらの結果は、１１５８ ｍＡｂがＦＬＴ３との結合にあたりＦＬＴ３Ｌと競合しないという観察と一致した。
【0241】
参照による組込み
そうでないと指示されていない限り、本明細書において参照される特許文書および科学論文のそれぞれの開示全体は、あらゆる目的のために、参照により組み込まれる。
そうでないと指示されていない限り、本明細書において参照される特許文書および科学論文のそれぞれの開示全体は、あらゆる目的のために、参照により組み込まれる。
【0242】
均等物
本発明は、その精神または本質的な特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具現化することができる。したがって、前述の実施形態は、あらゆる点において、本明細書に記載の本発明に関して限定的というよりもむしろ例示的であると見なすべきである。ゆえに、本発明の範囲は、前述の明細書によってではなく、添付の特許請求の範囲によって指示されるものであり、特許請求の範囲と均等の意味および範囲内にあるすべての変更は特許請求の範囲に包含されるように意図されている。
本発明は、その精神または本質的な特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具現化することができる。したがって、前述の実施形態は、あらゆる点において、本明細書に記載の本発明に関して限定的というよりもむしろ例示的であると見なすべきである。ゆえに、本発明の範囲は、前述の明細書によってではなく、添付の特許請求の範囲によって指示されるものであり、特許請求の範囲と均等の意味および範囲内にあるすべての変更は特許請求の範囲に包含されるように意図されている。
【0243】
【表22】
【表23】
【表24】
【表25】
【表26】
【表27】
【表28】
【表29】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4-1】
【図4-2】
【図5】
【図6-1】
【図6-2】
【図7】
【配列表】
【国際調査報告】