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特表2022-551769チエノ［２，３－ｃ］ピリダジン－４（１Ｈ）－オン系化合物の結晶形及びその製造方法並びに使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-12-13
(54)【発明の名称】チエノ［２，３－ｃ］ピリダジン－４（１Ｈ）－オン系化合物の結晶形及びその製造方法並びに使用
(51)【国際特許分類】
C07D 495/04 20060101AFI20221206BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20221206BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20221206BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20221206BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20221206BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20221206BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20221206BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20221206BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20221206BHJP
【ＦＩ】
C07D495/04 105Z
C07D495/04 CSP
A61P43/00 111
A61K31/519
A61P3/10
A61P1/16
A61P3/06
A61P3/04
A61P9/10 101
A61P35/00
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022534302
(86)(22)【出願日】2020-12-04
(85)【翻訳文提出日】2022-06-06
(86)【国際出願番号】 CN2020133897
(87)【国際公開番号】W WO2021110138
(87)【国際公開日】2021-06-10
(31)【優先権主張番号】201911235372.1
(32)【優先日】2019-12-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】520089004
【氏名又は名称】▲ザン▼州片仔▲ファン▼薬業股▲フン▼有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＺＨＡＮＧＺＨＯＵ ＰＩＥＮ ＴＺＥ ＨＵＡＮＧ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．
(71)【出願人】
【識別番号】516304780
【氏名又は名称】メッドシャイン ディスカバリー インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110001519
【氏名又は名称】弁理士法人太陽国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ユイ、チュアン
(72)【発明者】
【氏名】チェン、チーリャン
(72)【発明者】
【氏名】ワン、シーツォン
(72)【発明者】
【氏名】イン、ティンティン
(72)【発明者】
【氏名】チエン、カイリー
(72)【発明者】
【氏名】チョン、シアオピン
(72)【発明者】
【氏名】チアン、チーカン
(72)【発明者】
【氏名】ホー、ハイイン
【テーマコード（参考）】
4C071
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C071AA01
4C071BB01
4C071CC02
4C071CC21
4C071DD12
4C071EE13
4C071FF05
4C071GG06
4C071HH08
4C071JJ06
4C071LL01
4C086AA01
4C086AA03
4C086AA04
4C086CB26
4C086GA13
4C086GA15
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA03
4C086NA05
4C086ZA45
4C086ZA70
4C086ZA75
4C086ZB26
4C086ZC20
4C086ZC33
4C086ZC35
4C086ZC41
(57)【要約】
チエノ［２，３－ｃ］ピリダジン－４（１Ｈ）－オン系化合物の結晶形及びその製造方法、並びにＡＣＣ１及びＡＣＣ２阻害剤としての医薬の製造における使用。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角７．９０±０．２０°、１７．３５±０．２０°、及び２１．５０±０．２０°で特徴的な回折ピークがある、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂ。【化1】
【請求項2】
粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角５．７９±０．２０°、７．９０±０．２０°、１３．４５±０．２０°、１６．５１±０．２０°、１７．３５±０．２０°、１８．３８±０．２０°、２１．５０±０．２０°、及び２５．０８±０．２０°で特徴的な回折ピークがある、請求項１に記載の結晶形Ｂ。
【請求項3】
粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角５．７９°、６．８９°、７．９０°、８．５１°、９．３９°、１１．５９°、１２．２５°、１３．４５°、１３．７９°、１５．６０°、１６．５１°、１７．３５°、１８．３８°、１９．４７°、２１．５０°、２３．４７°、２４．６９°、２５．０８°、及び２９．１９°で特徴的な回折ピークがある、請求項１に記載の結晶形Ｂ。
【請求項4】
ＸＲＰＤパターンは、図１に示されるすとおりである、請求項３に記載の結晶形Ｂ。
【請求項5】
熱重量分析曲線は１２０．０±３℃で重量損失が１１．０７％であり、１２０．０±３℃～２００．０±３℃で重量損失が４．８４％である、請求項１～４のいずれか１項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項6】
ＴＧＡ曲線は図２に示されるとおりである、請求項５に記載の結晶形Ｂ。
【請求項7】
ＡＣＣ１及びＡＣＣ２阻害剤としての医薬の製造における請求項１～６のいずれか１項に記載の結晶形Ｂの使用。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の詳細な説明
関連出願の相互参照
本願は、出願日が２０１９年１２月５日であるＣＮ２０１９１１２３５３７２．１の優先権を出張する。
関連出願の相互参照
本願は、出願日が２０１９年１２月５日であるＣＮ２０１９１１２３５３７２．１の優先権を出張する。
【0002】
本発明は、チエノ［２，３－ｃ］ピリダジン－４（１Ｈ）－オン系化合物の結晶形及びその製造方法、並びにＡＣＣ１及びＡＣＣ２阻害剤としての医薬の製造における使用に関する。
【背景技術】
【0003】
脂肪酸の合成増加、脂肪酸の酸化低減、又はその両方が引き起こす脂肪酸の代謝異常は、インスリン抵抗性、肝の脂肪変性、脂質異常症、肥満、メタボリックシンドローム（ＭｅｔＳｙｎ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）などの様々な代謝障害の特徴である。また、２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）の進行、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アテローム性動脈硬化症などの血管疾患を引き起こす可能性がある。脂肪酸の代謝障害はがんの特徴でもあり、異常で持続的な悪性腫瘍細胞を増殖させる可能性があるため、脂肪酸の合成阻害及び／又は脂肪酸の酸化的代謝の刺激は、これらの疾患を好転させる可能性がある（ＰＮＡＳ，２０１６，Ｅ１７９６－Ｅ１８０５）。
【0004】
アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）はアセチルＣｏＡのマロニルＣｏＡへの変換を触媒し、これは脂肪酸合成の最初のステップで、律速段階でもある。ＡＣＣにはＡＣＣ１とＡＣＣ２の２つのサブタイプがある。ＡＣＣ１は主に肝臓と脂肪組織に分布し、ＡＣＣ２は主に肝臓、心臓と筋肉組織に分布する。肝臓では、細胞質内のＡＣＣ１が触媒して生成されるマロニルＣｏＡが、主に脂肪酸の合成と伸長に関与し、ミトコンドリアの表面のＡＣＣ２が触媒して生成されるマロニルＣｏＡは主にカルニチンアシルトランスフェラーゼＩを阻害することにより、脂肪酸の酸化的代謝を調節する（ＰＮＡＳ，２０１６，Ｅ１７９６－Ｅ１８０５）。したがって、ＡＣＣの２つのサブタイプを同時に阻害することにより、脂肪酸の合成を低減し、脂肪酸の酸化的代謝を刺激することができる。
【0005】
ＷＯ２０１３０７１１６９Ａ１には関連の疾患の治療におけるＡＣＣ阻害剤Ｉ－１８１の使用が開示されている。
【化1】
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明に係る式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂの粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角７．９０±０．２０°、１７．３５±０．２０°、及び２１．５０±０．２０°で特徴的な回折ピークがある。
【化2】
【0007】
本発明のいくつかの実施形態において、上記の結晶形Ｂの粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角５．７９±０．２０°、７．９０±０．２０°、１３．４５±０．２０°、１６．５１±０．２０°、１７．３５±０．２０°、１８．３８±０．２０°、２１．５０±０．２０°、及び２５．０８±０．２０°で特徴的な回折ピークがある。
【0008】
本発明のいくつかの実施形態において、上記の結晶形Ｂの粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角５．７９°、６．８９°、７．９０°、８．５１°、９．３９°、１１．５９°、１２．２５°、１３．４５°、１３．７９°、１５．６０°、１６．５１°、１７．３５°、１８．３８°、１９．４７°、２１．５０°、２３．４７°、２４．６９°、２５．０８°、及び２９．１９°で特徴的な回折ピークがある。
【0009】
本発明のいくつかの実施形態において、上記の結晶形ＢのＸＲＰＤパターンは図１に示されるとおりである。
【0010】
本発明のいくつかの実施形態において、上記の結晶形ＢのＸＲＰＤパターンの解析データは表１に示されるとおりである。
【表1】
【0011】
本発明のいくつかの実施形態において、上記の結晶形Ｂの熱重量分析曲線は１２０．０±３℃で重量損失が１１．０７％であり、１２０．０±３℃～２００．０±３℃で重量損失が４．８４％である。
【0012】
本発明のいくつかの実施形態において、上記の結晶形ＢのＴＧＡ曲線は図２に示されるとおりである。
【発明の効果】
【0013】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂは安定的であり、照度、温度と湿度からの影響が小さく、しかも本発明の式（Ｉ）で表される化合物及びその結晶形Ｂは生体内投与有効性が良く、薬物になる可能性が高い。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【発明を実施するための形態】
【0015】
「定義と説明」
特に説明がある場合を除いて、本明細書で使用する下記の用語と表現は次の意味を有する。特定の表現又は用語は、特に定義がなければ、確定しない又は不明瞭なものとしてではなく、通常の意味で理解する。本明細書で商品名が記載される場合に、対応する商品又はその有効成分を指す。
特に説明がある場合を除いて、本明細書で使用する下記の用語と表現は次の意味を有する。特定の表現又は用語は、特に定義がなければ、確定しない又は不明瞭なものとしてではなく、通常の意味で理解する。本明細書で商品名が記載される場合に、対応する商品又はその有効成分を指す。
【0016】
本発明に係る中間体化合物は、下記の特定の実施形態、他の化学合成方法と組み合わせてなされる実施形態と当業者に熟知される同等な代替案を含む実施形態であって、好ましくは本発明の実施例を含み、ただし限定されない実施形態など、当業者に熟知される様々な合成方法で製造することができる。
【0017】
本発明の特定の実施形態に係る化学反応は適切な溶媒において行われ、前記溶媒は本発明に係る化学変化と必要な試薬及び原料に適合するものでなければならない。本発明に係る化合物を得るために、当業者が従来の実施形態を踏まえ合成ステップ又は反応経路について改変又は選択を行うことが必要である。
【0018】
以下、実施例で本発明を詳細に説明し、これらの実施例は本発明的への限定と認めるものではない。
【0019】
本発明で使用する溶媒は全て市販品であり、更なる精製をしなくても使用できる。
【0020】
本発明で溶媒は市販品を使用することができる。本発明で次の略語を使用する。ＥｔＯＨはエタノールである。ＭｅＯＨはメタノールである。ＴＦＡはトリフルオロ酢酸である。ＴｓＯＨはｐ－トルエンスルホン酸である。ｍｐは融点である。ＥｔＳＯ３Ｈはエタンスルホン酸である。ＭｅＳＯ３Ｈはメタンスルホン酸である。ＴＨＦはテトラヒドロフランである。ＥｔＯＡｃは酢酸エチルである。ＲｕＰｈｏｓは２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，６’－ジイソプロポキシビフェニルである。ＡｃＣｌはアセチルクロリドである。ＤＣＭはジクロロメタンである。ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドである。
【0021】
化合物は人力で又はソフトウェアＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）で命名し、市販化合物はメーカーのカタログの名称を採用する。
【0022】
本発明に係る粉末Ｘ線回折（Ｘ－ｒａｙ ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ、ＸＲＰＤ）法
装置モデル：ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ（パナリティカル）社のＸ’Ｐｅｒｔ３／Ｅｍｐｙｒｅａｎ Ｘ線回折計
試験方法：約１０ｍｇのサンプルでＸＲＰＤ検出を行う。
装置モデル：ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ（パナリティカル）社のＸ’Ｐｅｒｔ３／Ｅｍｐｙｒｅａｎ Ｘ線回折計
試験方法：約１０ｍｇのサンプルでＸＲＰＤ検出を行う。
【0023】
ＸＲＰＤパラメータの詳細は次のとおりである。
線源：Ｃｕ，ｋα（Ｋα１＝１．５４０５９８Å、Ｋα２＝１．５４４４２６Å、Ｋα２／Ｋα１強度比：０．５）。
管電圧：４５ｋＶ、管電流：４０ｍＡ。
発散スリット：固定１／８°。
第１ソーラースリット：０．０４ｒａｄ、第２ソーラースリット：０．０４ｒａｄ。
受光スリット：なし、飛散防止スリット：７．５ｍｍ。
測定時間：５分。
走査角度範囲：３～４０°。
角度ステップ：０．０２６３°（Ｘ’Ｐｅｒｔ３）／０．０１６７°（Ｅｍｐｙｒｅａｎ）。
ステップ幅：４６．６６５秒（Ｘ’Ｐｅｒｔ３）／１７．７８０秒（Ｅｍｐｙｒｅａｎ）。
サンプルトレイ回転数：１５ｒｐｍ。
線源：Ｃｕ，ｋα（Ｋα１＝１．５４０５９８Å、Ｋα２＝１．５４４４２６Å、Ｋα２／Ｋα１強度比：０．５）。
管電圧：４５ｋＶ、管電流：４０ｍＡ。
発散スリット：固定１／８°。
第１ソーラースリット：０．０４ｒａｄ、第２ソーラースリット：０．０４ｒａｄ。
受光スリット：なし、飛散防止スリット：７．５ｍｍ。
測定時間：５分。
走査角度範囲：３～４０°。
角度ステップ：０．０２６３°（Ｘ’Ｐｅｒｔ３）／０．０１６７°（Ｅｍｐｙｒｅａｎ）。
ステップ幅：４６．６６５秒（Ｘ’Ｐｅｒｔ３）／１７．７８０秒（Ｅｍｐｙｒｅａｎ）。
サンプルトレイ回転数：１５ｒｐｍ。
【0024】
本発明に係る熱重量分析（Ｔｈｅｒｍａｌ Ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ、ＴＧＡ）法
装置モデル：ＴＡ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＴＧＡ ５５００熱重量分析装置
試験方法：サンプル（１～５ｍｇ程度）をＴＧＡアルミニウムパンに入れて試験を行い、１０ｍＬ／ｍｉｎ Ｎ２の条件下で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度でサンプルを室温から３５０℃に加熱する。
装置モデル：ＴＡ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＴＧＡ ５５００熱重量分析装置
試験方法：サンプル（１～５ｍｇ程度）をＴＧＡアルミニウムパンに入れて試験を行い、１０ｍＬ／ｍｉｎ Ｎ２の条件下で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度でサンプルを室温から３５０℃に加熱する。
【実施例】
【0025】
以下、本発明の内容の一層の理解のために、特定の実施例で更に説明し、当該特定の実施形態は本発明の内容を限定するためのものではない。
【0026】
実施例１：式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂの製造
【化3】
【0027】
ステップ１：化合物Ｉ－０２の調製
２０℃下で、乾燥した三つ口フラスコに原料Ｉ－０１（６５０ｇ、６．６２ｍｏｌ）、ＤＣＭ（１．５Ｌ）を加えた。０℃に冷却して、約１時間で早くＳＯ２Ｃｌ２（１．８８ｋｇ、１３．９０ｍｏｌ）を滴加し、温度を０～１０℃に保持した。滴加が完了したら、混合物を１５～２０℃下で１６時間攪拌した（滴加する間に溶液が徐々に黒くなり、持続的にガスが放出され、水酸化ナトリウム水溶液で排ガスを吸収した）。反応液を４０℃下で減圧下濃縮して、黄色い液体粗生成物Ｉ－０２を得てそのまま次のステップに使用した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ ６．６２（ｓ，１Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ）。
２０℃下で、乾燥した三つ口フラスコに原料Ｉ－０１（６５０ｇ、６．６２ｍｏｌ）、ＤＣＭ（１．５Ｌ）を加えた。０℃に冷却して、約１時間で早くＳＯ２Ｃｌ２（１．８８ｋｇ、１３．９０ｍｏｌ）を滴加し、温度を０～１０℃に保持した。滴加が完了したら、混合物を１５～２０℃下で１６時間攪拌した（滴加する間に溶液が徐々に黒くなり、持続的にガスが放出され、水酸化ナトリウム水溶液で排ガスを吸収した）。反応液を４０℃下で減圧下濃縮して、黄色い液体粗生成物Ｉ－０２を得てそのまま次のステップに使用した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ ６．６２（ｓ，１Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ）。
【0028】
ステップ２：化合物Ｉ－０３の調製
乾燥した５Ｌ三つ口フラスコに化合物Ｉ－０２（５００ｇ、２．９９ｍｏｌ）、ＡｃＣｌ（４８１．６ｇ、２．０５ｅｑ）、ＤＣＭ（２．５Ｌ）を加え、０℃に冷却した。その後、数回に分けて（１回当たり約１００ｇ）ＡｌＣｌ３（４７８．４ｇ、３．５９ｍｏｌ）を加え、内部温度を０～１０℃に限定して、約１時間で終えた。反応系の温度をゆっくりと２０℃に上げて、１２時間攪拌した。反応液をゆっくりと約２ｋｇの砕氷に注入してクエンチし、注入と同時に攪拌し、反応系には常にたくさんの砕氷を保持した。氷が全て溶けたら分液した。水相をＤＣＭ（５００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相を水（１Ｌ×２）と飽和食塩水（１Ｌ×２）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して黄色い液体生成物Ｉ－０３を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ ２．５３（ｓ，３Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ）。
乾燥した５Ｌ三つ口フラスコに化合物Ｉ－０２（５００ｇ、２．９９ｍｏｌ）、ＡｃＣｌ（４８１．６ｇ、２．０５ｅｑ）、ＤＣＭ（２．５Ｌ）を加え、０℃に冷却した。その後、数回に分けて（１回当たり約１００ｇ）ＡｌＣｌ３（４７８．４ｇ、３．５９ｍｏｌ）を加え、内部温度を０～１０℃に限定して、約１時間で終えた。反応系の温度をゆっくりと２０℃に上げて、１２時間攪拌した。反応液をゆっくりと約２ｋｇの砕氷に注入してクエンチし、注入と同時に攪拌し、反応系には常にたくさんの砕氷を保持した。氷が全て溶けたら分液した。水相をＤＣＭ（５００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相を水（１Ｌ×２）と飽和食塩水（１Ｌ×２）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して黄色い液体生成物Ｉ－０３を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ ２．５３（ｓ，３Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ）。
【0029】
ステップ３：化合物Ｉ－０４の調製
２０℃下で、乾燥した５Ｌ三つ口フラスコに原料Ｉ－０３（５００ｇ、２．３９ｍｏｌ）、ＤＭＳＯ（２．５Ｌ）を加え、その後、ＨＢｒ（１．４５ｋｇ、７．１７ｍｏｌ）の水溶液を早く滴加し、滴加は約１時間で完了した（滴加する間に温度が上昇し、反応系の温度は５２℃に上がった）。混合物の温度がゆっくりと６０℃に上がって、１２時間攪拌した。反応液にゆっくりと約５ｋｇの砕氷を注入してクエンチし、石油エーテル（１．５Ｌ）を加えて、約２０分間早く攪拌すると、たくさんの黄色い固体が析出し、濾過した。フィルターケーキを石油エーテル（５００ｍＬ×３）で洗浄した後、減圧下で乾燥して黄色い固体生成物Ｉ－０４を得、粗生成物をそのまま次のステップに使用した。
２０℃下で、乾燥した５Ｌ三つ口フラスコに原料Ｉ－０３（５００ｇ、２．３９ｍｏｌ）、ＤＭＳＯ（２．５Ｌ）を加え、その後、ＨＢｒ（１．４５ｋｇ、７．１７ｍｏｌ）の水溶液を早く滴加し、滴加は約１時間で完了した（滴加する間に温度が上昇し、反応系の温度は５２℃に上がった）。混合物の温度がゆっくりと６０℃に上がって、１２時間攪拌した。反応液にゆっくりと約５ｋｇの砕氷を注入してクエンチし、石油エーテル（１．５Ｌ）を加えて、約２０分間早く攪拌すると、たくさんの黄色い固体が析出し、濾過した。フィルターケーキを石油エーテル（５００ｍＬ×３）で洗浄した後、減圧下で乾燥して黄色い固体生成物Ｉ－０４を得、粗生成物をそのまま次のステップに使用した。
【0030】
ステップ４：化合物Ｉ－０５の調製
２０℃下で、乾燥した５Ｌ三つ口フラスコに原料Ｉ－０４（３００ｇ、１．２５ｍｏｌ）、２－ＭｅＴＨＦ（３Ｌ）を加え、その後、ＨＯＡｃ（７５ｇ、１．２５ｍｏｌ）、ＢｏｃＮＨＮＨ２（１６５．２ｇ、１．２５ｍｏｌ）を加えて、混合物を１６時間攪拌した。反応液を水（１Ｌ）、２０％炭酸カリウム水溶液（５００ｍＬ×２）、そして飽和食塩水（１Ｌ×２）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して黒い油性液体生成物Ｉ－０５を得、粗生成物をそのまま次のステップに使用した。
２０℃下で、乾燥した５Ｌ三つ口フラスコに原料Ｉ－０４（３００ｇ、１．２５ｍｏｌ）、２－ＭｅＴＨＦ（３Ｌ）を加え、その後、ＨＯＡｃ（７５ｇ、１．２５ｍｏｌ）、ＢｏｃＮＨＮＨ２（１６５．２ｇ、１．２５ｍｏｌ）を加えて、混合物を１６時間攪拌した。反応液を水（１Ｌ）、２０％炭酸カリウム水溶液（５００ｍＬ×２）、そして飽和食塩水（１Ｌ×２）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して黒い油性液体生成物Ｉ－０５を得、粗生成物をそのまま次のステップに使用した。
【0031】
ステップ５：化合物Ｉ－０６の調製
２０℃下で、乾燥した５Ｌ三つ口フラスコに原料Ｉ－０５（５６０ｇ、１．６６ｍｏｌ）、ＤＭＳＯ（２．５Ｌ）を加え、その後、Ｋ２ＣＯ３（２２９．５ｇ、１．６６ｍｏｌ）を加えて、混合物の温度を１００℃に上げて１６時間攪拌した。反応液を室温に冷却し、その後、それを水（４Ｌ）と石油エーテル・酢酸エチル（４／１、１Ｌ）の液体混合物に注入して、５分間攪拌し、その後、飽和硫酸水素カリウム水溶液でｐＨを３に調整し、砂状の固体が析出すると、濾過して、黒い固体粗生成物を得た。さらにアセトニトリル（１Ｌ）を加えて室温下で１時間攪拌して、褐色の固体生成物Ｉ－０６を得、粗生成物をそのまま次のステップに使用した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ｐｐｍ ２．４７（ｓ，３Ｈ）。
２０℃下で、乾燥した５Ｌ三つ口フラスコに原料Ｉ－０５（５６０ｇ、１．６６ｍｏｌ）、ＤＭＳＯ（２．５Ｌ）を加え、その後、Ｋ２ＣＯ３（２２９．５ｇ、１．６６ｍｏｌ）を加えて、混合物の温度を１００℃に上げて１６時間攪拌した。反応液を室温に冷却し、その後、それを水（４Ｌ）と石油エーテル・酢酸エチル（４／１、１Ｌ）の液体混合物に注入して、５分間攪拌し、その後、飽和硫酸水素カリウム水溶液でｐＨを３に調整し、砂状の固体が析出すると、濾過して、黒い固体粗生成物を得た。さらにアセトニトリル（１Ｌ）を加えて室温下で１時間攪拌して、褐色の固体生成物Ｉ－０６を得、粗生成物をそのまま次のステップに使用した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ｐｐｍ ２．４７（ｓ，３Ｈ）。
【0032】
ステップ６：化合物Ｉ－０７の調製
２０℃下で、乾燥した５０Ｌ反応釜に原料Ｉ－０６（３．０ｋｇ、１５．０ｍｏｌ）、ＤＭＦ（１５Ｌ）を加え、その後、数回に分けて（１回当たり２５０ｇ）ＮＩＳ（２．５ｋｇ、１１．１ｍｏｌ）を加えた。全ての原料を加えた後、液体反応混合物の温度を５０℃に上げて１．５時間攪拌した。反応液を室温に冷却し、その後、それを５００ｇの亜硫酸水素ナトリウムを溶解した水溶液４５Ｌに注入して、５分間攪拌し、褐色の固体が析出すると、濾過して、褐色の粗生成物を得た。さらにアセトニトリル（１５Ｌ）を加えて室温下で１時間攪拌して、濾過し、フィルターケーキを真空乾燥して褐色の固体生成物Ｉ－０７を得、粗生成物をそのまま次のステップに使用した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ｐｐｍ ２．４７（ｓ，３Ｈ）。
２０℃下で、乾燥した５０Ｌ反応釜に原料Ｉ－０６（３．０ｋｇ、１５．０ｍｏｌ）、ＤＭＦ（１５Ｌ）を加え、その後、数回に分けて（１回当たり２５０ｇ）ＮＩＳ（２．５ｋｇ、１１．１ｍｏｌ）を加えた。全ての原料を加えた後、液体反応混合物の温度を５０℃に上げて１．５時間攪拌した。反応液を室温に冷却し、その後、それを５００ｇの亜硫酸水素ナトリウムを溶解した水溶液４５Ｌに注入して、５分間攪拌し、褐色の固体が析出すると、濾過して、褐色の粗生成物を得た。さらにアセトニトリル（１５Ｌ）を加えて室温下で１時間攪拌して、濾過し、フィルターケーキを真空乾燥して褐色の固体生成物Ｉ－０７を得、粗生成物をそのまま次のステップに使用した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ｐｐｍ ２．４７（ｓ，３Ｈ）。
【0033】
ステップ７：化合物Ｉ－０８の調製
２０℃下で、乾燥した５０Ｌジャケット付き反応釜にＤＭＦ（２５Ｌ）を加えて、攪拌を開始し、その後、原料Ｉ－０７（５．２ｋｇ、１５．９ｍｏｌ）、Ｉ－０９（４．０ｋｇ、１２．７ｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１．７５ｋｇ、１２．７ｍｏｌ）を加えた。全ての原料を加えると、温度を１１５℃に上げて２４時間攪拌した。反応液を室温に冷却した。もう一部の原料（Ｉ－０７、４．５ｋｇ）と合わせて処理し、合わせた反応液を水（３７．５Ｌ）と酢酸エチル（８Ｌ）の液体混合物に加え、固体が析出したら、濾過した。濾液を分液して、水相を酢酸エチル（８Ｌ×２）で抽出し、合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥して、濾過し、加圧下で濃縮して残留物を得た。フィルターケーキと濃縮残留物を合わせて、メタノール（１５Ｌ）を加え、室温下で１時間攪拌した後に濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物にｎ－ヘプタン（５Ｌ）を加えて、１時間攪拌した。ｎ－ヘプタンを取り出し、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（４Ｌ）を加えて、６０℃に加熱し、３０分間早く攪拌して、２５℃に冷却し、次に１時間攪拌して濾過した。全てのフィルターケーキを合わせて、４０℃下で真空乾燥して黄色い固体生成物Ｉ－０８を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ｐｐｍ ７．４８－７．４６（ｍ，１Ｈ），７．３６－７．３３（ｍ，１Ｈ），７．０７－７．０２（ｍ，２Ｈ），５．３０（ｄｄ，Ｊ＝９．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４１（ｄｄ，Ｊ＝１４．４，３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｄｄ，Ｊ＝１４．４，９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．３８－３．３６（ｍ，１Ｈ），３．３５－３．２４（ｍ，２Ｈ），３．２４－３．１４（ｍ，２Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），１．６３－１．６２（ｍ，１Ｈ），１．５６－１．５４（ｍ，１Ｈ），１．３４－１．３１（ｍ，１Ｈ），１．０５－１．００（ｍ，１Ｈ）。
２０℃下で、乾燥した５０Ｌジャケット付き反応釜にＤＭＦ（２５Ｌ）を加えて、攪拌を開始し、その後、原料Ｉ－０７（５．２ｋｇ、１５．９ｍｏｌ）、Ｉ－０９（４．０ｋｇ、１２．７ｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１．７５ｋｇ、１２．７ｍｏｌ）を加えた。全ての原料を加えると、温度を１１５℃に上げて２４時間攪拌した。反応液を室温に冷却した。もう一部の原料（Ｉ－０７、４．５ｋｇ）と合わせて処理し、合わせた反応液を水（３７．５Ｌ）と酢酸エチル（８Ｌ）の液体混合物に加え、固体が析出したら、濾過した。濾液を分液して、水相を酢酸エチル（８Ｌ×２）で抽出し、合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥して、濾過し、加圧下で濃縮して残留物を得た。フィルターケーキと濃縮残留物を合わせて、メタノール（１５Ｌ）を加え、室温下で１時間攪拌した後に濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物にｎ－ヘプタン（５Ｌ）を加えて、１時間攪拌した。ｎ－ヘプタンを取り出し、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（４Ｌ）を加えて、６０℃に加熱し、３０分間早く攪拌して、２５℃に冷却し、次に１時間攪拌して濾過した。全てのフィルターケーキを合わせて、４０℃下で真空乾燥して黄色い固体生成物Ｉ－０８を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ｐｐｍ ７．４８－７．４６（ｍ，１Ｈ），７．３６－７．３３（ｍ，１Ｈ），７．０７－７．０２（ｍ，２Ｈ），５．３０（ｄｄ，Ｊ＝９．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４１（ｄｄ，Ｊ＝１４．４，３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｄｄ，Ｊ＝１４．４，９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．３８－３．３６（ｍ，１Ｈ），３．３５－３．２４（ｍ，２Ｈ），３．２４－３．１４（ｍ，２Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），１．６３－１．６２（ｍ，１Ｈ），１．５６－１．５４（ｍ，１Ｈ），１．３４－１．３１（ｍ，１Ｈ），１．０５－１．００（ｍ，１Ｈ）。
【0034】
ステップ８：化合物Ｉ－１０の調製
５０Ｌ反応釜にトルエン（２２Ｌ）、ジシクロヘキシルアミン（１４２２．０ｍＬ、２ｅｑ）を加え、５分間窒素バブリングして、反応釜の温度を－１０～５℃に調整し、窒素保護下でｎ－ブチルリチウム（２．８６Ｌ、２ｅｑ）をゆっくりと反応液に滴加し（内部温度を－１０～５℃に限定した）、反応液の内部温度を－１０～５℃に限定して、５０～７０分間攪拌した。その後、窒素保護下でイソ酪酸メチル（８１７．２ｍＬ、２ｅｑ）をゆっくりと反応液に滴加し（内部温度を－１０～５℃に限定した）、反応液の内部温度を－１０～５℃に限定して、５０～７０分間攪拌した。窒素バブリングしてＩ－０８（２００１．６ｇ、１ｅｑ）を反応液に加え、その後、窒素保護下でＰｄ２（ｄｂａ）３（３２．４ｇ、０．０１ｅｑ）、ＰｔＢｕ３（１０％トルエン溶液、２５１．６ｍＬ、０．０３ｅｑ）を反応液に加え、反応液の温度をゆっくりと２０℃に上げ、その後、２０℃下で５０～７０分間攪拌した。
５０Ｌ反応釜にトルエン（２２Ｌ）、ジシクロヘキシルアミン（１４２２．０ｍＬ、２ｅｑ）を加え、５分間窒素バブリングして、反応釜の温度を－１０～５℃に調整し、窒素保護下でｎ－ブチルリチウム（２．８６Ｌ、２ｅｑ）をゆっくりと反応液に滴加し（内部温度を－１０～５℃に限定した）、反応液の内部温度を－１０～５℃に限定して、５０～７０分間攪拌した。その後、窒素保護下でイソ酪酸メチル（８１７．２ｍＬ、２ｅｑ）をゆっくりと反応液に滴加し（内部温度を－１０～５℃に限定した）、反応液の内部温度を－１０～５℃に限定して、５０～７０分間攪拌した。窒素バブリングしてＩ－０８（２００１．６ｇ、１ｅｑ）を反応液に加え、その後、窒素保護下でＰｄ２（ｄｂａ）３（３２．４ｇ、０．０１ｅｑ）、ＰｔＢｕ３（１０％トルエン溶液、２５１．６ｍＬ、０．０３ｅｑ）を反応液に加え、反応液の温度をゆっくりと２０℃に上げ、その後、２０℃下で５０～７０分間攪拌した。
【0035】
反応液に水（８Ｌ）を加え、分液して水相を分離し、その後、塩酸水溶液（３Ｍ、５Ｌ）をゆっくりと反応液に加えて、ｐＨを約４～５に調整し、珪藻土で濾過して、フィルターケーキを酢酸エチル（１５Ｌ）で洗浄し、濾液を静置して層化させ、水相を分離した。有機相を塩酸水溶液（１Ｍ、１０Ｌ）で洗浄し、その後、炭酸カリウム水溶液（０．２Ｍ、１０Ｌ）で洗浄して、水相を分離し、水相には生成物を含んだ絮状物がたくさんあったため、珪藻土で濾過し、酢酸エチル（１０Ｌ）でフィルターケーキを洗浄して、分液して水相を分離した。有機相を合わせて飽和塩化ナトリウム水溶液（１５Ｌ）で洗浄し、有機相を減圧下で濃縮して粗生成物を得た（当該手順により、他に２ｋｇと１．４ｋｇの原料を加えて反応させ、それぞれ後処理をして粗生成物を得た）。それぞれの粗生成物を合わせて、酢酸エチルとｎ－ヘプタンを溶離液とするカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン：酢酸エチル＝１０：１～３：１）により精製して、黄色い固体Ｉ－１０を得た。
ＬＣＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３１．３。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ ７．５１（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３６－７．３２（ｍ，１Ｈ），７．０５－７．０２（ｍ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４４（ｄｄ，Ｊ＝８．８，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．８０－３．７４（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．５８－３．５２（ｍ，１Ｈ），３．４３－３．２３（ｍ，３Ｈ），２．５６（ｓ，３Ｈ），１．７６－１．７２（ｍ，１Ｈ），１．６０－１．４５（ｍ，８Ｈ），１．２８－１．２０（ｍ，１Ｈ）。
ＬＣＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３１．３。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ ７．５１（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３６－７．３２（ｍ，１Ｈ），７．０５－７．０２（ｍ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４４（ｄｄ，Ｊ＝８．８，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．８０－３．７４（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．５８－３．５２（ｍ，１Ｈ），３．４３－３．２３（ｍ，３Ｈ），２．５６（ｓ，３Ｈ），１．７６－１．７２（ｍ，１Ｈ），１．６０－１．４５（ｍ，８Ｈ），１．２８－１．２０（ｍ，１Ｈ）。
【0036】
ステップ９：化合物Ｉ－１１の調製
１０Ｌ三つ口フラスコに２－メチルテトラヒドロフラン（１Ｌ）、オキサゾール（９６．０ｍＬ、４．０ｅｑ）をこの順に加え、５分間窒素バブリングして、反応フラスコ内の温度を－３０～－１５℃に調整し、窒素保護下でＴＭＰＭｇＣｌ・ＬｉＣｌ（１．８Ｌ、４．８ｅｑ）をゆっくりと反応液に滴加し（内部温度を－３０～－１５℃に限定した）、反応液の内部温度を－３０～－１５℃に限定して、３０～４０分間攪拌した。その後、窒素保護下でＺｎＣｌ２（１．５Ｌ、８ｅｑ）をゆっくりと反応液に滴加し（内部温度を－３０～－１５℃に限定した）、滴加が完了したら、冷却浴を撤去し、反応液を攪拌してゆっくりと温度を１５～２０℃に上げて、オキサゾールの亜鉛試薬を得た。
１０Ｌ三つ口フラスコに２－メチルテトラヒドロフラン（１Ｌ）、オキサゾール（９６．０ｍＬ、４．０ｅｑ）をこの順に加え、５分間窒素バブリングして、反応フラスコ内の温度を－３０～－１５℃に調整し、窒素保護下でＴＭＰＭｇＣｌ・ＬｉＣｌ（１．８Ｌ、４．８ｅｑ）をゆっくりと反応液に滴加し（内部温度を－３０～－１５℃に限定した）、反応液の内部温度を－３０～－１５℃に限定して、３０～４０分間攪拌した。その後、窒素保護下でＺｎＣｌ２（１．５Ｌ、８ｅｑ）をゆっくりと反応液に滴加し（内部温度を－３０～－１５℃に限定した）、滴加が完了したら、冷却浴を撤去し、反応液を攪拌してゆっくりと温度を１５～２０℃に上げて、オキサゾールの亜鉛試薬を得た。
【0037】
もう１つの１０Ｌ三つ口フラスコに、２－メチルテトラヒドロフラン（２Ｌ）、中間体Ｉ－１０（２００ｇ）をこの順に加え、５分間窒素バブリングして、窒素保護下でＰｄ２（ｄｂａ）３（３４．６ｇ、０．１ｅｑ）、ＲｕＰｈｏｓ（３４．９ｇ、０．３ｅｑ）を反応フラスコに加え、その後、反応液の温度を６０～７０℃に上げて、３０～５０分間攪拌し、その後、オキサゾールの亜鉛試薬を反応液に加え、反応液の温度を９０～９５℃に上げて、当該温度下で１３～１６時間攪拌した。
【0038】
５反応釜分の反応液を合わせて処理し、反応液を室温に冷却し、その後、反応液を塩酸水溶液（１Ｍ、２０Ｌ、０～５℃）に加えて、ｐＨを３～４に調整し、分液して水相を分離し、水相を酢酸エチル（５Ｌ）で抽出し、有機相を合わせて飽和塩化ナトリウム水溶液（１０Ｌ×２）で洗浄し、有機相を減圧下で濃縮して粗生成物を得（当該手順により、他に１５反応釜に各２００ｇの原料を加えて反応させ、３ロットに分け各１ｋｇを処理して、粗生成物を得た）、カラムクロマトグラフィーにより精製した。精製した固体をイソプロパノール（４Ｌ）に加え、温度を５０～５５℃に上げて固体が完全に溶解したまで攪拌し、さらに３０～４０分間攪拌し、その後、２５～３０℃に自然冷却して、２．０～２．５時間攪拌し、ｎ－ヘプタン（４Ｌ）を反応液に加え、２５～３０℃下で１２～１３時間攪拌して、濾過し、ｎ－ヘプタン（２Ｌ）でフィルターケーキを洗い流した後に乾燥し、フィルターケーキを減圧下で濃縮して黄色い固体Ｉ－１１を得た。
ＬＣＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５６８．３。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ ７．７５（ｓ，１Ｈ），７．５４（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｔｄ，Ｊ＝７．８，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），７．０６－７．０４（ｍ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄｄ，Ｊ＝８．８，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４１（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），４．２３－４．１２（ｍ，１Ｈ），３．７８－３．７１（ｍ，１Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），３．５６－３．４９（ｍ，１Ｈ），３．４５－３．２１（ｍ，３Ｈ），３．００（ｓ，３Ｈ），１．７１－１．７０（ｍ，１Ｈ），１．６４－１．４８（ｍ，８Ｈ），１．２７－１．２１（ｍ，１Ｈ）。
ＬＣＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５６８．３。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ ７．７５（ｓ，１Ｈ），７．５４（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｔｄ，Ｊ＝７．８，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），７．０６－７．０４（ｍ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄｄ，Ｊ＝８．８，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４１（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），４．２３－４．１２（ｍ，１Ｈ），３．７８－３．７１（ｍ，１Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），３．５６－３．４９（ｍ，１Ｈ），３．４５－３．２１（ｍ，３Ｈ），３．００（ｓ，３Ｈ），１．７１－１．７０（ｍ，１Ｈ），１．６４－１．４８（ｍ，８Ｈ），１．２７－１．２１（ｍ，１Ｈ）。
【0039】
ステップ１０：式（Ｉ）で表される化合物の粗生成物の調製
５０Ｌ反応釜にエタノール（２５Ｌ）、中間体Ｉ－１１をこの順に加え、温度を５５～６０℃に上げて、固体が完全に溶解するまで攪拌し、調製したＮａＯＨ（１０９１．１ｇ）の水（５Ｌ）溶液を反応釜に加え、反応釜の温度を７０～８０℃に上げて、当該温度で１７～１９時間攪拌した。
５０Ｌ反応釜にエタノール（２５Ｌ）、中間体Ｉ－１１をこの順に加え、温度を５５～６０℃に上げて、固体が完全に溶解するまで攪拌し、調製したＮａＯＨ（１０９１．１ｇ）の水（５Ｌ）溶液を反応釜に加え、反応釜の温度を７０～８０℃に上げて、当該温度で１７～１９時間攪拌した。
【0040】
反応液を室温に冷却して、減圧下で濃縮してエタノールを除去した。その後、３Ｍ塩酸水溶液（１０Ｌ）でｐＨを２～３に調整し（調整する間に内部温度は１５～２５℃であった）、濾過し、粗生成物を得て０．３Ｍ塩酸の脱イオン水溶液（１０Ｌ）を加え、且つ２５～３０℃下で５０～６０分間攪拌して、濾過し、固体を得てエタノール（２Ｌ）を加えて１５～２０分間攪拌して、濾過し、固体を得て減圧下で濃縮して式（Ｉ）で表される化合物の粗生成物としてほぼ白い固体を得た。
ＬＣＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５５４．３。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ ７．７６（ｓ，１Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３７－７．３０（ｍ，１Ｈ），７．２７（ｓ，１Ｈ），７．０６－７．０２（ｍ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄｄ，Ｊ＝８．８，４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．７９－３．７０（ｍ，１Ｈ），３．６１－３．４９（ｍ，１Ｈ），３．４７－３．２０（ｍ，３Ｈ），３．０２（ｓ，３Ｈ），１．７４－１．７０（ｍ，１Ｈ），１．６３－１．５０（ｍ，８Ｈ），１．２８－１．２０（ｍ，１Ｈ）。
ＬＣＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５５４．３。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ ７．７６（ｓ，１Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３７－７．３０（ｍ，１Ｈ），７．２７（ｓ，１Ｈ），７．０６－７．０２（ｍ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄｄ，Ｊ＝８．８，４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．７９－３．７０（ｍ，１Ｈ），３．６１－３．４９（ｍ，１Ｈ），３．４７－３．２０（ｍ，３Ｈ），３．０２（ｓ，３Ｈ），１．７４－１．７０（ｍ，１Ｈ），１．６３－１．５０（ｍ，８Ｈ），１．２８－１．２０（ｍ，１Ｈ）。
【0041】
ステップ１１：式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂの製造
１０Ｌ三つ口フラスコにエタノール（２．５Ｌ）、式（Ｉ）で表される化合物の粗生成物（８５０．０ｇ）をこの順に加え、その後、反応液を７５～８０℃に加熱して３０～３５分間攪拌し、その後、室温（２５～３０℃）に自然冷却して、濾過し、エタノール（３００ｍＬ×４）でフィルターケーキを洗浄し、フィルターケーキを減圧下で濃縮して、固体を得て一定重量になるまで真空乾燥して、式（Ｉ）で表される化合物を得た。約１５ｍｇの式（Ｉ）で表される化合物を秤量して５ｍＬバイアル瓶に加え、０．１ｍＬのＤＭＳＯと３ｍＬのトルエンを加えて、透明な溶液を得、室温にして揮発させて、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂを得た。
ＬＣＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５５４．２。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ ７．７６（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝７．２，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３５－７．３１（ｍ，１Ｈ），７．２７（ｓ，１Ｈ），７．０６－７．０２（ｍ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄｄ，Ｊ＝８．８，４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．７９－３．７０（ｍ，１Ｈ），３．５９－３．４９（ｍ，１Ｈ），３．４４－３．２０（ｍ，３Ｈ），３．０２（ｓ，３Ｈ），１．７４－１．６９（ｍ，１Ｈ），１．６４－１．５０（ｍ，８Ｈ），１．３０－１．１９（ｍ，１Ｈ）。
１０Ｌ三つ口フラスコにエタノール（２．５Ｌ）、式（Ｉ）で表される化合物の粗生成物（８５０．０ｇ）をこの順に加え、その後、反応液を７５～８０℃に加熱して３０～３５分間攪拌し、その後、室温（２５～３０℃）に自然冷却して、濾過し、エタノール（３００ｍＬ×４）でフィルターケーキを洗浄し、フィルターケーキを減圧下で濃縮して、固体を得て一定重量になるまで真空乾燥して、式（Ｉ）で表される化合物を得た。約１５ｍｇの式（Ｉ）で表される化合物を秤量して５ｍＬバイアル瓶に加え、０．１ｍＬのＤＭＳＯと３ｍＬのトルエンを加えて、透明な溶液を得、室温にして揮発させて、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂを得た。
ＬＣＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５５４．２。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ ７．７６（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝７．２，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３５－７．３１（ｍ，１Ｈ），７．２７（ｓ，１Ｈ），７．０６－７．０２（ｍ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄｄ，Ｊ＝８．８，４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．７９－３．７０（ｍ，１Ｈ），３．５９－３．４９（ｍ，１Ｈ），３．４４－３．２０（ｍ，３Ｈ），３．０２（ｓ，３Ｈ），１．７４－１．６９（ｍ，１Ｈ），１．６４－１．５０（ｍ，８Ｈ），１．３０－１．１９（ｍ，１Ｈ）。
【0042】
実験例１：インビトロ評価
実験目的：
ＩＣ５０値を測定してアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）に対する被験化合物の阻害能力を評価する。
実験目的：
ＩＣ５０値を測定してアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）に対する被験化合物の阻害能力を評価する。
【0043】
実験材料：
１．タンパク質：ヒトアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ１（ｈＡＣＣ１）、ヒトアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ２（ｈＡＣＣ２）。
２．基質：ＮａＨＣＯ３。
３．補因子：アセチルＣｏＡ、ＡＴＰ（アデノシン三リン酸）。
４．活性化剤：クエン酸カリウム。
１．タンパク質：ヒトアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ１（ｈＡＣＣ１）、ヒトアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ２（ｈＡＣＣ２）。
２．基質：ＮａＨＣＯ３。
３．補因子：アセチルＣｏＡ、ＡＴＰ（アデノシン三リン酸）。
４．活性化剤：クエン酸カリウム。
【0044】
実験方法：
１．マイクロプレートのウェルに１×酵素／基質／補因子を加えた。
２．音響学的手法により、上記の酵素混合物に化合物のＤＭＳＯ溶液を加え、１５分間プレインキュベートした。
３．ＡＴＰを加えて反応を開始させて、振り混ぜた。
４．室温下で１時間インキュベートした。
５．反応をクエンチした後、４０分間インキュベートした。
６．検出試薬を加えて、３０分間インキュベートした。
７．蛍光を検出した。
１．マイクロプレートのウェルに１×酵素／基質／補因子を加えた。
２．音響学的手法により、上記の酵素混合物に化合物のＤＭＳＯ溶液を加え、１５分間プレインキュベートした。
３．ＡＴＰを加えて反応を開始させて、振り混ぜた。
４．室温下で１時間インキュベートした。
５．反応をクエンチした後、４０分間インキュベートした。
６．検出試薬を加えて、３０分間インキュベートした。
７．蛍光を検出した。
【0045】
８．データ分析：ＡＤＰ標準曲線に基づいて、蛍光信号をＡＤＰ生成物濃度に変換して酵素活性を計算した。ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍを利用して曲線を当てはめ、ＩＣ５０値を得た。実験結果は表２に示すとおりである。
【表2】
【0046】
結論：本発明に係る化合物はヒトＡＣＣ１／ＡＣＣ２酵素に高い阻害活性を有する。
【0047】
実験例２：化合物の薬物動態学評価
実験目的：
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける化合物のインビボ薬物動態学を測定する
実験目的：
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける化合物のインビボ薬物動態学を測定する
【0048】
実験材料：
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（雄、１８～３０ｇ、７～９週齢、上海霊暢生物科技有限公司）。
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（雄、１８～３０ｇ、７～９週齢、上海霊暢生物科技有限公司）。
【0049】
実験手順：
被験化合物の透明な溶液（０．５ｍｇ／ｍＬ ＤＭＳＯ１０％、ポリエチレングリコールステアレート１０％、水８０％）を尾静脈より４匹の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（一晩絶食、７～９週齢）に注射し、投与量は２．０ｍｇ／ｋｇであった。被験化合物の懸濁液又は透明な溶液（１ｍｇ／ｍＬ ＰＥＧ４００１０％、（０．５％メチルセルロース＋０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）９０％）を４匹の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（一晩絶食、７～９週齢）に強制経口投与し、投与量は１０ｍｇ／ｋｇであった。
被験化合物の透明な溶液（０．５ｍｇ／ｍＬ ＤＭＳＯ１０％、ポリエチレングリコールステアレート１０％、水８０％）を尾静脈より４匹の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（一晩絶食、７～９週齢）に注射し、投与量は２．０ｍｇ／ｋｇであった。被験化合物の懸濁液又は透明な溶液（１ｍｇ／ｍＬ ＰＥＧ４００１０％、（０．５％メチルセルロース＋０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）９０％）を４匹の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（一晩絶食、７～９週齢）に強制経口投与し、投与量は１０ｍｇ／ｋｇであった。
【0050】
２匹のマウスを１群とし、各マウスは４～５の時点で交互に採血した。マウスに静脈内投与又は強制経口投与した後、０．０８３３時間（ＩＶ組のみ）、０．２５時間、０．５時間、１．０時間、２．０時間、４．０時間、６．０時間、８．０時間、２４時間に伏在静脈穿刺により約３０μＬ採血してＥＤＴＡ－Ｋ２抗凝固剤入り管に入れ、遠心分離して血漿を得た。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法で血中濃度を測定し、薬物動態ソフトウェアＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（商標）バージョン６．３（米国カリフォルニア州マウンテンビュー、Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ）を利用し、ノンコンパートメントモデルで対数線形台形法より関連の薬物動態パラメータを計算した。
【0051】
実験結果は表３に示すとおりである。
【表3】
【0052】
結論：本発明の式（Ｉ）で表される化合物はマウスの薬物動態指標の１つ又はいくつかを有意に改善することができる。
【0053】
実験例３：ＨＦＤ＋ＣＣｌ４誘発ＮＡＳＨマウスモデルにおけるインビボ薬力学研究
実験目的：
この研究の目的は、ＨＦＤ＋ＣＣｌ４マウスモデルにおけるＮＡＳＨと肝線維化に対する化合物の改善効果を検討することであり、Ｉ－１８１を参照化合物とする。
実験目的：
この研究の目的は、ＨＦＤ＋ＣＣｌ４マウスモデルにおけるＮＡＳＨと肝線維化に対する化合物の改善効果を検討することであり、Ｉ－１８１を参照化合物とする。
【0054】
Ｉ－１８１はアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（Ａｃｅｔｙｌ－ＣｏＡ Ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ）阻害剤であり、今は非アルコール性脂肪性肝疾患（Ｎｏｎ Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ＦａｔｔｙＬｉｖｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ、ＮＡＦＬＤ）に関する第ＩＩ相臨床試験が行われている。この研究で使用するＨＦＤ＋ＣＣｌ４マウスモデルはヒト非アルコール性脂肪性肝疾患がＮＡＳＨに進行する過程をシミュレートする動物モデルであり、高脂肪食は肝細胞における脂肪の蓄積と変性を引き起こし、ＣＣｌ４（腹腔内注射、週２回）で肝臓損傷の「二重化」をシミュレートした。当該モデルは安定しており信頼性が高く、ヒトＮＡＳＨの病因と類似性が高く、脂肪変性、アポトーシス、炎症、線維化などＮＡＳＨの主な病理学的特徴を有し、血漿アミノ基転移酵素（ＡＬＴとＡＳＴ）レベルの上昇も示している。
【0055】
実験設計：
この実験のモデル作成は高脂肪食とＣＣｌ４誘発と２つの段階を含み、最初に高脂肪食でマウスに非アルコール性脂肪性肝疾患を誘発し、体重が３８ｇを超えるマウスを選択し、引き続き高脂肪食を与えると同時に、２５％ＣＣｌ４を０．５ｍｇ／ｋｇで週２回、４週間にわたり腹腔内注射投与した。ＣＣｌ４投与を開始する日を０日目とし、ＣＣｌ４投与を始める時を０時間とし、ＣＣｌ４投与の開始日に、強制経口投与を開始し、各群の投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、１日１回で４週間（２８日）持続した。ＣＣｌ４の注射時間は当日の１回目の投与時間と４時間以上隔たなければならない。実験では、健常コントロール群、モデル群、参照化合物群（ＧＳ－０９７６）、被験化合物群（式（Ｉ）で表される化合物、３通りの用量）と６群を設けた。健常コントロール群は１０匹の健常マウスであり、実験中に通常食を与え、ＣＣｌ４を注射しない。５０匹の肥満マウスをモデル群と投与群に振り分け、各群は１０匹のマウスであり、群分けした後にＣＣｌ４の腹腔内注射を開始しそれぞれ異なる用量の薬物を投与した。群と用量の設定は表４に示すとおりである。
この実験のモデル作成は高脂肪食とＣＣｌ４誘発と２つの段階を含み、最初に高脂肪食でマウスに非アルコール性脂肪性肝疾患を誘発し、体重が３８ｇを超えるマウスを選択し、引き続き高脂肪食を与えると同時に、２５％ＣＣｌ４を０．５ｍｇ／ｋｇで週２回、４週間にわたり腹腔内注射投与した。ＣＣｌ４投与を開始する日を０日目とし、ＣＣｌ４投与を始める時を０時間とし、ＣＣｌ４投与の開始日に、強制経口投与を開始し、各群の投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、１日１回で４週間（２８日）持続した。ＣＣｌ４の注射時間は当日の１回目の投与時間と４時間以上隔たなければならない。実験では、健常コントロール群、モデル群、参照化合物群（ＧＳ－０９７６）、被験化合物群（式（Ｉ）で表される化合物、３通りの用量）と６群を設けた。健常コントロール群は１０匹の健常マウスであり、実験中に通常食を与え、ＣＣｌ４を注射しない。５０匹の肥満マウスをモデル群と投与群に振り分け、各群は１０匹のマウスであり、群分けした後にＣＣｌ４の腹腔内注射を開始しそれぞれ異なる用量の薬物を投与した。群と用量の設定は表４に示すとおりである。
【表4】
【0056】
実験結果：
高脂肪食とＣＣｌ４の組合せによる誘発マウスモデルで、式（Ｉ）で表される化合物はＮＡＳと線維化の両方において参照化合物のより高い用量と同じ効果を得ていた。
高脂肪食とＣＣｌ４の組合せによる誘発マウスモデルで、式（Ｉ）で表される化合物はＮＡＳと線維化の両方において参照化合物のより高い用量と同じ効果を得ていた。
【図1】
【図2】
【手続補正書】
【提出日】2022-06-15
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角７．９０±０．２０°、１７．３５±０．２０°、及び２１．５０±０．２０°で特徴的な回折ピークがある、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂ。【化1】
【請求項2】
粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角５．７９±０．２０°、７．９０±０．２０°、１３．４５±０．２０°、１６．５１±０．２０°、１７．３５±０．２０°、１８．３８±０．２０°、２１．５０±０．２０°、及び２５．０８±０．２０°で特徴的な回折ピークがある、請求項１に記載の結晶形Ｂ。
【請求項3】
粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角５．７９°、６．８９°、７．９０°、８．５１°、９．３９°、１１．５９°、１２．２５°、１３．４５°、１３．７９°、１５．６０°、１６．５１°、１７．３５°、１８．３８°、１９．４７°、２１．５０°、２３．４７°、２４．６９°、２５．０８°、及び２９．１９°で特徴的な回折ピークがある、請求項１に記載の結晶形Ｂ。
【請求項4】
熱重量分析曲線は１２０．０±３℃で重量損失が１１．０７％であり、１２０．０±３℃～２００．０±３℃で重量損失が４．８４％である、請求項１～３のいずれか１項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項5】
ＡＣＣ１及びＡＣＣ２阻害剤としての医薬の製造における請求項１～４のいずれか１項に記載の結晶形Ｂの使用。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0056】
実験結果：
高脂肪食とＣＣｌ４の組合せによる誘発マウスモデルで、式（Ｉ）で表される化合物はＮＡＳと線維化の両方において参照化合物のより高い用量と同じ効果を得ていた。
本発明の態様は以下を含む。
＜１＞
粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角７．９０±０．２０°、１７．３５±０．２０°、及び２１．５０±０．２０°で特徴的な回折ピークがある、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂ。
＜２＞
粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角５．７９±０．２０°、７．９０±０．２０°、１３．４５±０．２０°、１６．５１±０．２０°、１７．３５±０．２０°、１８．３８±０．２０°、２１．５０±０．２０°、及び２５．０８±０．２０°で特徴的な回折ピークがある、＜１＞に記載の結晶形Ｂ。
＜３＞
粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角５．７９°、６．８９°、７．９０°、８．５１°、９．３９°、１１．５９°、１２．２５°、１３．４５°、１３．７９°、１５．６０°、１６．５１°、１７．３５°、１８．３８°、１９．４７°、２１．５０°、２３．４７°、２４．６９°、２５．０８°、及び２９．１９°で特徴的な回折ピークがある、＜１＞に記載の結晶形Ｂ。
＜４＞
ＸＲＰＤパターンは、図１に示されるすとおりである、＜３＞に記載の結晶形Ｂ。
＜５＞
熱重量分析曲線は１２０．０±３℃で重量損失が１１．０７％であり、１２０．０±３℃～２００．０±３℃で重量損失が４．８４％である、＜１＞～＜４＞のいずれか１項に記載の結晶形Ｂ。
＜６＞
ＴＧＡ曲線は図２に示されるとおりである、＜５＞に記載の結晶形Ｂ。
＜７＞
ＡＣＣ１及びＡＣＣ２阻害剤としての医薬の製造における＜１＞～＜６＞のいずれか１項に記載の結晶形Ｂの使用。
高脂肪食とＣＣｌ４の組合せによる誘発マウスモデルで、式（Ｉ）で表される化合物はＮＡＳと線維化の両方において参照化合物のより高い用量と同じ効果を得ていた。
本発明の態様は以下を含む。
＜１＞
粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角７．９０±０．２０°、１７．３５±０．２０°、及び２１．５０±０．２０°で特徴的な回折ピークがある、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂ。
＜２＞
粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角５．７９±０．２０°、７．９０±０．２０°、１３．４５±０．２０°、１６．５１±０．２０°、１７．３５±０．２０°、１８．３８±０．２０°、２１．５０±０．２０°、及び２５．０８±０．２０°で特徴的な回折ピークがある、＜１＞に記載の結晶形Ｂ。
＜３＞
粉末Ｘ線回折パターンに、２θ角５．７９°、６．８９°、７．９０°、８．５１°、９．３９°、１１．５９°、１２．２５°、１３．４５°、１３．７９°、１５．６０°、１６．５１°、１７．３５°、１８．３８°、１９．４７°、２１．５０°、２３．４７°、２４．６９°、２５．０８°、及び２９．１９°で特徴的な回折ピークがある、＜１＞に記載の結晶形Ｂ。
＜４＞
ＸＲＰＤパターンは、図１に示されるすとおりである、＜３＞に記載の結晶形Ｂ。
＜５＞
熱重量分析曲線は１２０．０±３℃で重量損失が１１．０７％であり、１２０．０±３℃～２００．０±３℃で重量損失が４．８４％である、＜１＞～＜４＞のいずれか１項に記載の結晶形Ｂ。
＜６＞
ＴＧＡ曲線は図２に示されるとおりである、＜５＞に記載の結晶形Ｂ。
＜７＞
ＡＣＣ１及びＡＣＣ２阻害剤としての医薬の製造における＜１＞～＜６＞のいずれか１項に記載の結晶形Ｂの使用。
【国際調査報告】