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特表2022-552179コナカイガラムシのための組成物および方法、モニタリングと制御に関する。
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-12-15
(54)【発明の名称】コナカイガラムシのための組成物および方法、モニタリングと制御に関する。
(51)【国際特許分類】
A01N 65/22 20090101AFI20221208BHJP
A01P 19/00 20060101ALI20221208BHJP
A01M 1/02 20060101ALI20221208BHJP
【ＦＩ】
A01N65/22
A01P19/00
A01M1/02 B
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022520821
(86)(22)【出願日】2019-10-04
(85)【翻訳文提出日】2022-06-03
(86)【国際出願番号】 IL2019051086
(87)【国際公開番号】W WO2021064719
(87)【国際公開日】2021-04-08
(81)【指定国・地域】
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 発行社名 Ｓｐｒｉｎｇｅｒ 刊行物名 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｃｏｌｏｇｙ（２０１９）４５：４５５－４６３．Ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１０８８６－０１９－０１０７５－３． 発行日 令和１年５月２９日
(71)【出願人】
【識別番号】509219903
【氏名又は名称】ザ ステイト オブ イスラエル ミニストリー オブ アグリカルチャー アンド ルーラル ディベロップメント アグリカルチュラル リサーチ オーガニゼイション （エー．アール．オー．） （ボルカニ センター）
【氏名又は名称原語表記】ＴＨＥ ＳＴＡＴＥ ＯＦ ＩＳＲＡＥＬ， ＭＩＮＩＳＴＲＹ ＯＦ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＥ ＆ ＲＵＲＡＬ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ， ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＯＲＧＡＮＩＺＡＴＩＯＮ （ＡＲＯ）（ＶＯＬＣＡＮＩ ＣＥＮＴＥＲ）
【住所又は居所原語表記】Ｖｏｌｃａｎｉ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｐ．Ｏ． Ｂｏｘ １５１５９， Ｒｉｓｈｏｎ－ＬｅＺｉｏｎ， Ｉｓｒａｅｌ
(74)【代理人】
【識別番号】110002952
【氏名又は名称】弁理士法人鷲田国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ザダ バイヤーズ アナット
(72)【発明者】
【氏名】カスピ ロイ
(72)【発明者】
【氏名】ステイナー サラ
(72)【発明者】
【氏名】フェファー ダニエラ
【テーマコード（参考）】
2B121
4H011
【Ｆターム（参考）】
2B121AA11
2B121CC14
2B121CC31
2B121EA26
2B121FA08
4H011AC07
4H011BB22
(57)【要約】
γ－ネクロジルイソブチレートおよび農業的に許容される担体を含む調製物が、コナカイガラムシのモニタリングおよび制御のために開示される。ネクロダン構造を特徴とする調製物および他のコナカイガラムシフェロモンを合成する方法も開示される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
γ－ネクロジルイソブチレートと、農業的に許容される担体とを含む、調製物。
【請求項2】
前記γ－ネクロジルイソブチレートは、Lavandula luisieriの精油から合成される、請求項１記載の調製物。
【請求項3】
前記調製物は、抗酸化剤、および／または防腐剤を含む、請求項１に記載の調製物。
【請求項4】
γ－ネクロジルイソブチレートを含む、害虫防除装置。
【請求項5】
Nipaecoccus viridis コナカイガラムシの集団の個体数を制御する方法であって、前記集団を有効量のγ－ネクロジルイソブチレートに曝露し、それによってNipaecoccus viridisの個体数を制御する工程を含む、
方法。
【請求項6】
前記曝露は、前記Nipaecoccus viridisが頻繁に訪れる場所で、前記γ－ネクロジルイソブチレートを放出することによって行われる、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
前記場所は、畑、ブドウ園または果樹園である、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
前記γ－ネクロジルイソブチレートは、トラップに含まれる、請求項５～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記γ－ネクロジルイソブチレートは、徐放性調製物中に含まれる、請求項５～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記果樹園は、柑橘類、マンゴー、タマリンドおよびザクロからなる群から選択される種の樹木を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項11】
Nipaecoccus viridisが頻繁に訪れる場所に存在するNipaecoccus viridisコナカイガラムシの量をモニタリングする方法であって、（ａ）前記場所に、γ－ネクロジルイソブチレートを含むトラップを設定し、
（ｂ）前記トラップ内のコナカイガラムシの量を決定し、それによって、Nipaecoccus viridisコナカイガラムシの量をモニターする、方法。
【請求項12】
前記決定する工程は、前記トラップ内のNipaecoccus viridisコナカイガラムシの数をカウントすることを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
γ－ネクロドールを合成する方法であって、α－ネクロドールを、前記α－ネクロドールの転位をもたらす条件に供し、それによってγ－ネクロドールを生成する工程を含む、方法。
【請求項14】
前記α－ネクロドールは、Lavandula luisieriの精油から抽出される、請求項１３に記載の方法。
【請求項15】
前記α－ネクロドールは、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールである、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項16】
γ－ネクロジルイソブチレートを合成する方法であって、以下の工程を含む、方法：（ａ）請求項１３～１５のいずれか１項に記載の方法でγ－ネクロドールを合成する工程、および
（ｂ）γ－ネクロドールを、γ－ネクロジルイソブチレートを生成する条件下で、イソ酪酸クロリド、イソ酪酸および／またはイソ酪酸無水物と反応させ、それによって前記γ－ネクロジルイソブチレートを合成する工程。
【請求項17】
前記反応に続いて、前記γ－ネクロジルイソブチレートを精製する工程をさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールイソブチレートを合成する方法であって、以下の工程を含む、方法：（ａ）Lavandula luisieriの精油からｔｒａｎｓ－α－ネクロドールを生産する工程、および
（ｂ）前記ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールを、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールイソブチレートを生成する条件下で、イソ酪酸、ハロゲン化イソブチリルおよび／または無水イソブチリルと反応させ、それによって前記ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールイソブチレートを合成する工程。
【請求項19】
ネクロダン骨格を特徴とするコナカイガラムシフェロモンを合成する方法であって、以下の工程を含む、方法：
少なくとも１０％のネクロドール化合物および／またはそのエステルを含む植物の精油からネクロドール化合物を生成する工程、
前記ネクロドール化合物を、ネクロドールの転位および／またはエステル化をもたらす条件に供し、それによって、前記コナカイガラムシフェロモンを合成する工程。
【請求項20】
前記植物は、Lavandula luisieriであり、前記ネクロドール化合物は、α－ネクロドールである、
請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
前記コナカイガラムシフェロモンは、α－ネクロドールのエステルであり、前記化合物は、前記ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールを、前記α－ネクロドールのエステル化をもたらす条件に供することによって合成される、
請求項２０に記載の方法。
【請求項22】
前記コナカイガラムシフェロモンは、前記ネクロドールのエステルであり、前記ネクロドールを、前記ネクロドールのエステル化をもたらす条件に供することによって合成される、請求項１９に記載の方法。
【請求項23】
前記ネクロドール化合物は、α－ネクロドールおよび／またはβ－ネクロドールであり、前記コナカイガラムシフェロモンは、γ－ネクロドールまたはそのエステルであり、
前記α－ネクロドールおよび／またはβ－ネクロドールを、前記ネクロドール化合物の転位をもたらす条件に供し、それによって前記γ－ネクロドールを得て、任意にさらに前記γ－ネクロドールを、エステル化をもたらす条件に供し、それによって前記γ－ネクロドールのエステルを得る工程を含む、
請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、コナカイガラムシのモニタリングおよび制御のために使用可能な合成フェロモンを調製する方法、ならびにコナカイガラムシ、より具体的には、Nipaecoccus viridis種のコナカイガラムシのモニタリングおよび制御のための合成フェロモンの使用に関する。
【背景技術】
【0002】
球形コナカイガラムシNipaecoccus viridis（Newstead）（半翅目：コナカイガラムシ科）は、多食性の害虫であり、熱帯及び亜熱帯に広く分布し、多数の植物種を攻撃する。N. viridisに侵される主な作物には、大豆、柑橘類、マンゴー、タマリンド、ザクロおよびブドウの木が含まれる。コナカイガラムシは、インド亜大陸から世界の他の地域に広がっており（Sharaf and Meyerdirk 1987）、多くの場合、地中海南岸及び東岸、オーストラリア、フロリダ、及びアジアの温暖地域の柑橘類の果樹園に相当な被害をもたらしている（Griffiths and Derksen 2010）。主要な柑橘類の害虫として、それ多くの柑橘類品種を攻撃し、樹木の全ての部分、すなわち茎、葉および果実に見られる。柑橘類の樹上にコナカイガラムシが多く生息していると、落果、成長の歪み、および時には樹木の変性などの損傷が発生する。しかし、被害のほとんどは幼虫が果実を食べることによるものである。熟した果実には、コナカイガラムシが口の部分を突き刺す箇所に緑色の痕が付く。このマークは、販売のための果実を不適格にし、著しい経済的損失を引き起こす。
【0003】
未交尾無翅雌の空中揮発性物質採集（エアレーション）に対して、Ｎ.viridisコナカイガラムシの短命な有翅雄が誘引されることが以前に示されている（Ｍｅｎｄｅｌら、２０１２）。
【0004】
２７０属（ファミリーPseudococcidae) (Gerson and Applebaum 2015）には約２０００種のコナカイガラムシが存在する。現在までに、これらのコナカイガラムシ種フェロモンのうち２１種のみが同定されており、これに比べて、蛾の害虫種で同定された数百種のフェロモンが同定されている（Ｅｌ－Ｓａｙｅｄ ２０１９）。この差異の１つの理由は、コナカイガラムシ種の未交尾雌が、蛾よりも少量のフェロモンを放出すること（ナノグラムのオーダーで産生することがよく知られている）であり、これは、揮発性収集の前に何千ものコナカイガラムシの性別を分離することを必要とする。もう一つの理由は、コナカイガラムシがフェロモンを抽出できる蛾のような腺を持っているかどうかは依然として不明であることである。さらに、雌のコナカイガラムシは揮発性物質を放出するために宿主植物上での給餌を必要とするが、雌の蛾は必要としない。これらの宿主植物の揮発性物質は、何千もの未交尾雌が使用されている場合でも、一般的にコナカイガラムシのフェロモンを覆い隠す。さらに、コナカイガラムシフェロモンは、典型的には、独特の構造を示し、したがって、化学標準またはＧＣ保持指数が利用可能であることはまれである。これらはすべて、溶媒抽出または吸着剤抽出の「古典的」方法を使用するコナカイガラムシフェロモンの単離をはるかに複雑にする。
【0005】
Ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールとβ－ネクロドールは、赤いシデムシNecrodes surinamensisの直腸腺で生成される防御分泌物で同定されている（Eisner and Meinwald1982）。ｔｒａｎｓ－α－ネクロジルイソブチレートは、ブドウのコナカイガラムシPseudococcus marinusの雌のフェロモンとして発見された（Figadere et al.2007）。最近、珍しいβ－ネクロドール骨格（４，５，５－トリメチル－３－メチレンシクロペント－１－エン－１－イル）酢酸メチルを持つネクロダンが、Delottococcus aberiae（De Lotto）（半翅目：コナカイガラムシ科（Vacas et al.2019））の柑橘類コナカイガラムシの雌で同定された。
【0006】
現在までに、コナカイガラムシのわずか２１種類のフェロモンが、テルペンアルコールおよびカルボン酸のエステルとして同定されている（Unelius et al. 2010; Tabata and Ichiki 2017）。これらのフェロモンの大部分は独特の構造をもっているので、同定および合成は難しい。このように、コナカイガラムシフェロモンを用いて集団をモニターすることは、蛾とカブトガムシ病害虫の餌を用いた広範なモニタリングと比較して、依然として範囲が限定されている。
【0007】
ネクロダン構造を特徴とするコナカイガラムフェロモンを調製する合成プロセスは、Zou et al.、J. Agric. Food Chem. 2010, 58, 4977-4982、およびVacas et al., J. Agric. Food Chem. 2019, 67, 9441-9449に記載されている。
【0008】
さらなる背景技術には、Pamingle et al. Helv Chim Acta 74: 543-548; and Kashima and Miyazawa, Chemistry & Biodiversity, Vol. 11, page 396 (2014)が含まれる。
【発明の概要】
【0009】
本発明のいくつかの態様の態様によれば、γ－ネクロジルイソブチレート、および任意に農業的に許容される担体を含む調製物が提供される。
【0010】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、γ－ネクロジルイソブチレートは、Lavandula luisieriの精油から合成される。
【0011】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、調製物は、抗酸化剤、および／または防腐剤を含む。
【0012】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、γ－ネクロジルイソブチレートを含む害虫防除装置が提供される。
【0013】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、Nipaecoccus viridis コナカイガラムシ集団の個体数を制御する方法であって、該集団を有効量のγ－ネクロジルイソブチレートに曝露し、それによってNipaecoccus viridisの個体数を制御する工程を含む方法が提供される。
【0014】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、曝露は、Nipaecoccus viridisが頻繁に訪れる場所で、γ－ネクロジルイソブチレートを放出することによって行われる。
【0015】
本明細書に記載の実施形態のうちのいくつかによれば、場所は、畑、ブドウ園または果樹園である。
【0016】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、γ－ネクロジルイソブチレートは、トラップに含まれる。
【0017】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、γ－ネクロジルイソ酪酸は、徐放性調製物中に含まれる。
【0018】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、果樹園は、柑橘類、マンゴー、タマリンドおよびザクロからなる群から選択される種の樹木を含む。
【0019】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、Nipaecoccus viridisが頻繁に訪れる場所に存在するNipaecoccus viridisコナカイガラムシの量をモニタリングする方法が提供される:
（ａ）前記場所に、γ－ネクロジルイソブチレートを含むトラップを設定し、
（ｂ）前記トラップ内のコナカイガラムシの量を決定し、それによって、Nipaecoccus viridisコナカイガラムシの量をモニターする。
（ａ）前記場所に、γ－ネクロジルイソブチレートを含むトラップを設定し、
（ｂ）前記トラップ内のコナカイガラムシの量を決定し、それによって、Nipaecoccus viridisコナカイガラムシの量をモニターする。
【0020】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、決定する工程は、前記トラップ内のNipaecoccus viridisコナカイガラムシの数をカウントすることを含む。
【0021】
本発明のいくつかの態様の態様によれば、γ－ネクロドールを合成する方法が提供され、この方法は、α－ネクロドールを、前記α－ネクロドールの転位をもたらす条件に供し、それによってγ－ネクロドールを生成する工程を含む。
【0022】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、α－ネクロドールは、Lavandula luisieriの精油から抽出される。
【0023】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、α－ネクロドールは、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールである。
【0024】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、γ－ネクロジルイソブチレートを合成する方法が提供され、この方法は、
（ａ）それぞれの実施形態のいずれかにおいて、本明細書に記載の方法に従ってγ－ネクロドールを合成する工程、
（ｂ）γ－ネクロドールを、γ－ネクロジルイソブチレートを生成する条件下で、イソ酪酸クロリド、イソ酪酸および／またはイソ酪酸無水物と反応させ、それによってγ－ネクロジルイソブチレートを合成する工程、
を含む。
（ａ）それぞれの実施形態のいずれかにおいて、本明細書に記載の方法に従ってγ－ネクロドールを合成する工程、
（ｂ）γ－ネクロドールを、γ－ネクロジルイソブチレートを生成する条件下で、イソ酪酸クロリド、イソ酪酸および／またはイソ酪酸無水物と反応させ、それによってγ－ネクロジルイソブチレートを合成する工程、
を含む。
【0025】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、方法は、上記反応に続いて、γ－ネクロジルイソブチレートを精製する工程をさらに含む。
【0026】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールイソブチレート塩を合成する方法であって、
（ａ）Lavandula luisieriの精油からｔｒａｎｓ－α－ネクロドールを生産する工程、および
（ｂ）ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールを、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールイソブチレートを生成する条件下で、イソ酪酸、ハロゲン化イソブチリルおよび／または無水イソブチリルと反応させ、それによってｔｒａｎｓ－α－ネクロドールイソブチレートを合成する工程、
を含む方法が提供される。
（ａ）Lavandula luisieriの精油からｔｒａｎｓ－α－ネクロドールを生産する工程、および
（ｂ）ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールを、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールイソブチレートを生成する条件下で、イソ酪酸、ハロゲン化イソブチリルおよび／または無水イソブチリルと反応させ、それによってｔｒａｎｓ－α－ネクロドールイソブチレートを合成する工程、
を含む方法が提供される。
【0027】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、ネクロドール骨格を特徴とするコナカイガラムシフェロモンを合成する方法であって、
少なくとも１０％のネクロドール化合物および／またはそのエステルを含む植物の精油からネクロドール化合物を生成する工程、
ネクロドール化合物を、ネクロドールの転位および／またはエステル化をもたらす条件に付し、それによってコナカイガラムシフェロモンを合成する工程
を含む方法が提供される。
少なくとも１０％のネクロドール化合物および／またはそのエステルを含む植物の精油からネクロドール化合物を生成する工程、
ネクロドール化合物を、ネクロドールの転位および／またはエステル化をもたらす条件に付し、それによってコナカイガラムシフェロモンを合成する工程
を含む方法が提供される。
【0028】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、植物は、ラベンダー・ルイジエリ（Lavandula luisieri）であり、ネクロドール化合物は、α－ネクロドールである。
【0029】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、コナカイガラムシフェロモンは、α－ネクロドールのエステルであり、化合物は、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールをα－ネクロドールのエステル化をもたらす条件に供することによって合成される。
【0030】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、コナカイガラムシフェロモンは、ネクロドールのエステルであり、ネクロドールを、ネクロドールのエステル化をもたらす条件に付すことによって合成される。
【0031】
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、ネクロドール化合物は、α－ネクロドールおよび／またはβ－ネクロドールであり、
コナカイガラムシフェロモンは、γ－ネクロドールまたはそのエステルであり、
この方法は、α－ネクロドールおよび／またはβ－ネクロドールを、ネクロドール化合物の転位をもたらす条件に供し、それによってγ－ネクロドールを得て、任意にさらにγ－ネクロドールを、エステル化をもたらす条件に供し、それによってγ－ネクロドールのエステルを得る工程を含む。
コナカイガラムシフェロモンは、γ－ネクロドールまたはそのエステルであり、
この方法は、α－ネクロドールおよび／またはβ－ネクロドールを、ネクロドール化合物の転位をもたらす条件に供し、それによってγ－ネクロドールを得て、任意にさらにγ－ネクロドールを、エステル化をもたらす条件に供し、それによってγ－ネクロドールのエステルを得る工程を含む。
【0032】
本発明のいくつかの実施形態の他の態様によれば、それぞれの実施形態のいずれかおよびそれらの任意の組み合わせにおいて本明細書に記載されるように、本明細書に記載されるような方法によって調製されたコナカイガラムシフェロモンを含有する装置およびそれを利用する方法が提供される。
【0033】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および／または科学用語は、本発明が関連する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本発明の実施形態の実施または試験において、本明細書に記載されるものと類似または同等の方法および材料を使用することができるが、例示的な方法および／または材料を以下に説明する。矛盾する場合、定義を含む本願明細書が優先される。さらに、材料、方法、および実施例は、例示にすぎず、必ずしも限定することを意図するものではない。
【図面の簡単な説明】
【0034】
【図1A】図１Ａは、連続した４つのサンプリング期間（図１Ａ）中の９～１１日齢の雌における連続的ＳＰＭＥ／ＧＣ－ＭＳ分析によって決定されるジャガイモ芽上の３００匹のＮ．ｖｉｒｉｄｉｓの未交尾雌によるフェロモン放出を示す（毎日の最大ピーク上の数は、同じ雌の日齢を表す）。
【図1B】図１Ｂは、最後の脱皮後の６日間のサンプリング期間（図１Ｂ）中の９～１１日齢の雌における連続的ＳＰＭＥ／ＧＣ－ＭＳ分析によって決定されるジャガイモ芽上の３００匹のＮ．ｖｉｒｉｄｉｓの未交尾雌によるフェロモン放出を示す（毎日の最大ピーク上の数は、同じ雌の日齢を表す）。
【図4】図４は、ペトリ皿選択試験における捕獲された雄の平均数を示す棒グラフである。Ｉ＝γ－ネクロドール（１０ｎｇ）、ＩＩ＝γ－ネクロジルイソブチレート（１０ｎｇ）、混合＝Ｉ＋ＩＩ（各５ｎｇ）、対照＝ｎ－ヘキサン。同じ文字を有する棒は、有意差がなかった（Ｎ＝６）。
【図5】図５は、飼育室内の粘着性トラップにトラップされた飛行中の雄の平均数を示す棒グラフである。Ｉ＝γ－ネクロドール（２０μｇ）、ＩＩ＝γ－ネクロジルブチレート（２０μｇ）、混合＝Ｉ＋ＩＩ（各２０μｇ）、対照＝ｎ－ヘキサン。同じ文字を有する棒は有意差がなかった（Ｎ＝１２）。
【図8】図８Ａ～Ｂは、Nipaecoccus viridisの雌からの空気中コレクションから（図８Ａ）およびLavendula luisieri（Rozeira）精油転位（図８Ｂ）から得られるγ－ネクロドールの高分解能質量スペクトル（ＨＲ－ＭＳ）（７０ｅＶ、７８９０Ｂ ＧＣ／７２５０ Ｑ－ＴＯＦ ＭＳ、Ａｇｉｌｅｎｔ）を提示する。
【図9】図９Ａ～Ｂは、Nipaecoccus viridisの雌からの空気中コレクションから（図９Ａ）およびLavendula luisieri（Rozeira）精油転位から得られたγ－ネクロジルイソブチレートのＨＲ質量スペクトル（７０ｅＶ、７８９０Ｂ ＧＣ／７２５０ Ｑ－ＴＯＦ ＭＳ、Ａｇｉｌｅｎｔ）を示す（図９Ｂ）。
【発明を実施するための形態】
【0035】
本発明のいくつかの実施形態は、例としてのみ、添付の図面を参照して本明細書に記載される。ここで、詳細に図面を具体的に参照すると、示される詳細は、例として、および本発明の実施形態の例示的な議論の目的のためにであることが強調される。この点に関して、図面を用いてなされた説明は、本発明の実施形態がどのように実施され得るかを当業者に明らかにする。
【0036】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、コナカイガラムシ、より詳細には、Nipaecoccus viridis種のコナカイガラムシの制御またはモニタリングのための合成フェロモンの使用に関する。
【0037】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、その出願において、以下の説明に示されるか、または実施例によって例示される詳細に必ずしも限定されないことを理解されたい。本発明は、他の実施形態が可能であるか、または様々な方法で実施または実施することができる。
【0038】
本発明者らは、自動連続ＳＰＭＥ（固相マイクロ抽出）およびＧＣ－ＭＳ（気体ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓセクトロメトリー）分析（ＳＳＧＡ）を用いて、Ｎ．ｖｉｒｉｄｉｓの雌の性フェロモン揮発性物質を単離し、同定した。この方法は、昆虫フェロモンが通常概日リズムで放出されるという事実に依存している。したがって、オートサンプラーを使用してＳＰＭＥファイバーによってこれらの放出揮発分を繰り返し収集し、次いでＧＣ－ＭＳに直接注入して特性評価することにより、微量のフェロモン候補を明らかにし、不純物であり、通常は概日パターンで放出されない多くの他の揮発分の中から区別することができる。次いで、ＳＳＧＡによって検出された化合物は、ＧＣ－ＭＳによってさらに分析され、合成および比較分析によって（図２Ａ～Ｂ、７、８Ａ～Ｂ、９Ａ～Ｂおよび１０参照）、２，２，３，４－テトラメチル－３－シクロペンテン－１－メタノール（γ－ネクロドール）およびγ－ネクロジルイソブチレート（図３参照）であると同定された。これらの分子を合成するために、本発明者らは、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールおよびｔｒａｎｓ－α－ネクロジルアセテート（ラベンダー植物のL.luisieri種の精油中に天然に存在する）をγ－ネクロドールに変換し、次いで、後者をγ－ネクロジルイソブチレートに変換した。
【0039】
本発明を実施に還元する一方で、本発明者らは、Ｎ．ｖｉｒｉｄｉｓの雄が合成γ－ネクロジルイソブチレートに引き付けられることを示した（図４および５参照）。したがって、本発明者らは、γ－ネクロジルイソブチレートをこの害虫のモニタリングおよび制御に使用することができ、当該化合物の簡易な合成法は、コナカイガラムシの処理のための経済的に実現可能な方法を提供することを提案する。
【0040】
したがって、本発明の第１の態様によれば、γ－ネクロジルイソブチレートおよび農業的に許容される担体を含む調製物が提供される。
【0041】
本明細書中で使用される場合、用語「フェロモン」は、個々の雌のコナカイガラムシによって空気中に放出されて、同じ種の雄のコナカイガラムシ（例えば、雌の臭気源の風下）を雌の点源に向かって誘引する誘引物質を指す。
【0042】
調製物は、フェロモン成分γ－ネクロジルイソブチレートを含むことができ、これを本質的に含むことができ、またはこれを含むことができる。調製物に含まれ得るさらなるフェロモン成分は、γ－ネクロドール、およびｔｒａｎｓ－α－ネクロジルイソブチレート、（４，５，５－トリメチル－３－メチレンシクロペント－１－エン－１－イル）酢酸メチル、および任意の他の関連するコナカイガラムシフェロモンを含む。
【0043】
例えば、いくつかの実施形態において、フェロモン誘引物質組成物は、γ－ネクロジルイソブチレートなどの単一のフェロモン成分を含む。いくつかの実施形態では、フェロモン誘引物質組成物は、γ－ネクロジルイソブチレートおよびｔｒａｎｓ－α－ネクロドールイソブチレートの混合物；またはγ－ネクロジルイソブチレートおよびγ－ネクロドールの混合物；またはγ－ネクロジルイソブチレートおよび任意の追加的に同定された関連するコナカイガラムシフェロモンの混合物を含むことができる。
【0044】
調製物のフェロモン成分は、相乗的な様式で相互作用することができる。
【0045】
ある実施形態において、調製物は、γ－ネクロジルイソブチレートを含む。調製物は、組成物中のフェロモン成分の総重量に対して、１重量％、５重量％または１０重量％から、９９重量％まで、さらには１００重量％までの量のγ－ネクロジルイソブチレートを含むことができる。それらの間の任意の中間値および部分範囲、例えば、１～９９重量％、１～９０重量％、１～８０重量％、１～６０重量％、１～５０重量％、１～４０重量％、１～３０重量％、１～３０重量％、１～２０重量％、１～２０重量％、１～１０重量％、１～１０重量％、１０～９９重量％、１０～９０重量％、１０～７０重量％、１０～６０重量％、１０～５０重量％、１０～４０重量％、１０～３０重量％、１０～２０重量％、２０～９０重量％、２０～８０重量％、２０～７０重量％、２０～６０重量％、２０～５０重量％、２０～５０重量％、２０～４０重量％、５０～９９重量％、５０～９０重量％、５０～８０重量％、５０～７０重量％（例えば、２５重量％、５０重量％、または７５重量％）から９９重量％（例えば、７５重量％、５０重量％、または２５重量％）までを含む。いくつかの実施形態において、調製物は、調製物中のフェロモン成分の総重量に対して、２０重量％～８０重量％（例えば、４０重量％～８０重量％、６０重量％～８０重量％、または７０重量％～８０重量％）を含み、それらの間の任意の中間値および部分範囲を含む。いくつかの実施形態において、調製物は、フェロモン成分としてγ－ネクロジルイソブチレートのみを含み、その結果、調製物は、調製物中のフェロモン成分の総重量に対して１００重量％でγ－ネクロジルイソブチレートを含む。
【0046】
上記のように、調製物のフェロモン成分は、１つ以上の農業的に許容される担体、抗酸化剤、および／または防腐剤と組み合わせて、製剤を形成することができる。
【0047】
農業的に許容される担体および製剤の例は、米国特許出願公開番号に開示されている。２０１８／０２７１０８８、２００９／０１４８３９９、２０１５／０２５７３７８（その内容は参照により本明細書に組み込まれる）。
【0048】
製剤は、液体（例えば、均一な液体またはエマルジョン）、半固体（例えば、ペースト、ゲル）、または固体（例えば、ゴム、ガラス、ゾルゲル）の形態であり得る。
【0049】
ある実施形態において、製剤は、フェロモン成分がある期間にわたって放出され得るような制御放出製剤である。フェロモン成分の例示的な担体には、油、油中水型エマルジョンまたは水中油型エマルジョン；繊維（例えば、綿繊維、フェルト）などの固体基材；ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリメタクリレート、エチレン－酢酸ビニルゴム状コポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリオレフィン（例えば、ポリプロピレン）、ポリ（ウレタン）、シリコーン、乳酸およびグリコール酸系ポリマー、およびそれらのコポリマー）；ビーズ（例えば、ポリマービーズ）；マイクロカプセル（例えば、シリカマイクロカプセル）；ナノカプセル；ガラス；ゲル；およびセラミックが含まれる。いくつかの実施形態では、担体が繊維、ポリマー、マイクロカプセル、ナノカプセル；ガラス、またはセラミックなどの固体基板である場合、フェロモン誘引組成物を基板に注入して、制御放出組成物を提供することができる。ある実施形態において、ポリマー担体は、多孔質プラスチック基材であり得る。
【0050】
フェロモン成分と共に使用する例示的な油としては、植物油およびナッツ油などの植物由来の油、または鉱油などの非植物由来の油が挙げられるが、これらに限定されない。これらは広く入手可能であり、費用対効果が高い。製剤は、カノーラ油、綿実油、パーム油、ベニバナ油、大豆油、コーン油、オリーブ油、落花生油、ヒマワリ油、ゴマ油、ナッツ油、およびココナッツ油などの油を含むことができる。ナッツ油としては、アーモンド油、カシュー油、ヘーゼルナッツ油、マカダミア油、モンゴンナッツ油、ピーカンナッツ油、パインナッツ油、ピスタチオ油、サチャインチ油、およびクルミ油が挙げられるが、これらに限定されない。メロンおよびゴールド種子油は、非常に一般的であり、安価である。上に列挙した油には、多くの組成物に可溶な飽和、モノ不飽和、およびポリ不飽和脂肪酸が含まれ、特に極性の低いものまたは非極性のものが挙げられる。鉱油は比較的安価であり、より極性の低いまたは非極性フェロモン誘引組成物のための担体として使用することができる。油は、それ自体、または水相と一緒にエマルジョンの形成で使用することができる。
【0051】
いくつかの実施形態において、γ－ネクロジルイソブチレートおよび任意に他のフェロモン成分を含む調製物は、均一な担体と組み合わされて、所望の期間にわたって所望の放出速度を有する組成物を提供する。
【0052】
本明細書中で使用される場合、活性閾値放出速度は、有意な昆虫誘引のための最小放出速度である。活性閾値放出率は、非常に低い～非常に高い範囲の一連の放出速度を有する用量－応答試験によって決定することができる。
【0053】
いくつかの実施形態において、γ－ネクロジルイソブチレートを、γ－ネクロドール、ｔｒａｎｓ－α－ネクロジルイソブチレートおよび／または任意の他の関連するフェロモン成分の１つ以上と組み合わせて含む調製物は、２つ以上の別個の製剤に分離され得る。例えば、フェロモン誘引剤組成物は、第１の製剤中にγ－ネクロジルイソブチレート、および第２の製剤中にγ－ネクロドールを含むことができ、ここで、製剤は、担体および／またはフェロモン濃度においてさらに異なることができる。２つ以上の製剤は、互いに（例えば、隣接して、または直ぐ隣に）近接して配置される限り、相乗的に一緒に働いて、雄のコナカイガラムシを誘引することができる。
【0054】
上記調製物において使用することができる例示的な防腐剤は、例えば、ソルビン酸およびその塩、安息香酸およびその塩、プロピオン酸カルシウム、亜硝酸ナトリウム、亜硫酸塩（二酸化硫黄、重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素カリウムなど）およびエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）を含む。他の例示的な防腐剤には、エタノールおよびメチルクロロイソチアゾリノン、ローズマリー抽出物、ホップ、塩、糖、酢、アルコール、珪藻土およびひまし油、クエン酸およびアスコルビン酸、ビタミンＣ、およびビタミンＥが含まれる。
【0055】
調製物と共に使用するための例示的な抗酸化剤としては、トコフェロール（例えば、α－トコフェロール、γ－トコフェロールなど）、アスコルビン酸、ならびに没食子酸プロピル、ターシャリーブチルヒドロキノン、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、フェノール性アルコール、フラボノイド、カテキン、それらの関連分子、およびアントシアニンおよびそれらのグリコシドなどの合成抗酸化剤が挙げられるが、これらに限定されない。酸化防止剤は、組成物の大部分に可溶であり得、分配システム中の酸素と効率的に反応し得、したがって、フェロモン誘引組成物の酸化、分解、および重合を減少させる方法を提供する。ある実施形態において、酸化剤はまた、防腐剤であり得る。
【0056】
代表的な担体、防腐剤、および酸化防止剤が上に列挙されているが、上に具体的に列挙されていない他の担体、防腐剤、および酸化防止剤も使用することができることを認識されたい。
【0057】
ある実施形態において、製剤は、毒性物質（すなわち、殺虫剤）をさらに含む。典型的な非限定的な毒性物質としては、フィプロニル、ホウ酸、四ホウ酸ナトリウム、ジソジウムオクタボレート四水和物、水和メチルノン、インドキサカルブ、ジノテフラン、アバメクチン、フェノキシカルブ、スピノサド、プロポキサ、メトプレン、またはこれらの任意の組合せが挙げられる。
【0058】
製剤は、種々のディスペンサに含有させることができる。ディスペンサの非限定的な例には、遠心管、スティックパックディスペンサ、ポリエチレンバッグ、多孔質プラスチック、ポリマービーズ、ゴムセプタ、およびシリンジが含まれる。例えば、製剤は、ポリマービーズまたはゴム隔壁に吸収され得る。製剤は、遠心管、スティックパックディスペンサ、またはポリエチレンバッグに装填することができる。
【0059】
ある実施形態において、製剤は、制御放出製剤である。いくつかの実施形態において、制御放出製剤は、γ－ネクロジルイソブチレート、場合によりγ－ネクロドール、ｔｒａｎｓ－α－ネクロジルイソブチレートおよび／または時間とともにゆっくりと蒸発（すなわち、揮発）し得る任意の他の関連するフェロモンと組み合わせて含む。いくつかの実施形態において、制御放出製剤は、代替的に、または追加的に、時間の経過とともにフェロモンのゆっくりとした蒸発を可能にするディスペンサ（例えば、多孔質容器、多孔質バッグ）中に含有され得る。
【0060】
例えば、所与の調製物のフェロモン成分は、０．００１ｍｇ／日（例えば、１０ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、または５００ｍｇ／日）～１ｇ／日（例えば、５００ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、または１０ｍｇ／日）の累積速度で、例えば３日～１８０日（例えば、３日～７日、３日～１０日、３日～２５日、または３日～２０日、または３０日～１８０日、または３０日～１２０日、または３０日～９０日）の期間あるいはそれらの間の任意の中間値および部分範囲を含む期間、にわたって、揮発し得る。いくつかの実施形態において、所与の調製物のフェロモン成分は、例えば、３日～１８０日の期間あるいはそれらの間の任意の中間値および部分範囲を含む期間にわたって、０．１ｍｇ／日～１ｇ／日（例えば、０．１ｍｇ／日～１００ｍｇ／日、０．１ｍｇ／日～１０ｍｇ／日、０．１ｍｇ／日～１５ｍｇ／日、０．１ｍｇ／日～５０ｍｇ／日、０．１ｍｇ／日～１５ｍｇ／日、５ｍｇ／日～１２ｍｇ／日、８ｍｇ／日～１２ｍｇ／日、２７ｍｇ／日～３０ｍｇ／日、３０ｍｇ／日～５０ｍｇ／日、５ｍｇ／日～５００ｍｇ／日、１ｍｇ／日～１００ｍｇ／日、１０ｍｇ／日～１００ｍｇ／日、または２０ｍｇ／日～１００ｍｇ／日）の累積速度で揮発し得る。
【0061】
いくつかの実施形態によれば、調製物またはそれを含有する製剤は、コナカイガラムシをモニターするために使用される。これらの実施形態のいくつかによれば、所与の調製物のフェロモン成分は、１μｇ／日（例えば、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、または５０μｇ／日、例えば、１～５０μｇ／日、１～４０μｇ／日、１０～１００μｇ／日、２０～１００μｇ／日、３０～１００μｇ／日、５０～１００μｇ／日）～１００μｇ／日の累積速度で、例えば１日～４５日（例えば、３日～７日、３日～１０日、３日～２０日、または３日～４５日）の期間にわたって、それらの間の任意の中間値および下位範囲を含めて、揮発することができる。
【0062】
本実施形態によれば、調製物またはそれを含む製剤は、コナカイガラムシの個体数をモニターし、および／または制御するために使用することができる。
【0063】
コナカイガラムシの個体数のモニタリングは、例えば、交配破壊を目的とする調製物／製剤のタイミングおよび／または投薬を決定するように行うことができる。
【0064】
また、交配中断の間にモニタリングを行うことができ、その結果、コナカイガラムシの個体数を制御するためのタイミング、投与および測定を決定することができる。
【0065】
コナカイガラムシの個体数を制御することは、交配破壊によって行うことができ、これは、当技術分野で知られ、本願明細書でさらに記載されるように、例えば大量捕獲または誘惑およびコナカイガラムシの駆除方法などによって、次世代の個体数を減少させ、および／または個体数を減少させる。
【0066】
本明細書および当該技術分野において、「交配破壊」は、フェロモンが、任意でいくつかの地点から処理区域に放出される害虫防除の方法を指す。フェロモンの放出は、応答する個体（例えば、雄のコナカイガラムシ）を、誤った資源を探している間にエネルギーを使い果たして死亡するか、または混乱して仲間を見つけることができなくなり、繁殖を低下させ、その後の個体数を減少させる。
【0067】
いくつかの実施形態によれば、調製物またはそれを含有する製剤は、交配破壊のために使用される。これらの実施形態のいくつかによれば、所与の調製物のフェロモン成分は、１ｍｇ／日（例えば、１ｍｇ／日、５ｍｇ／日、１０ｍｇ／日、または５０ｍｇ／日、例えば、１～４０ｍｇ／日、１０～１００ｍｇ／日、２０～１００ｍｇ／日、３０～１００ｍｇ／日、５０～１００ｍｇ／日）～１００ｍｇ／日の累積速度で、例えば１日～１８０日（例えば、３日～１０日、３日～５０日、３日～１００日、１０日～６０日、１０日～１００日、３０日～１２０日、３０日～１２０日、３０日～９０日、６０日～１２０日）の期間（これらの間の任意の中間値および下位範囲を含む）にわたって揮発することができる。
【0068】
上記の調製物および製剤は、トラップなどの害虫防除装置に組み込むことができる。例えば、装置（例えば、ディスペンサ）は、監視トラップ内であっても、または交配破壊のためであっても、木に吊り下げることができる。他の例では、組成物（例えば、液体）は、スプレーによって葉上に適用される。
【0069】
例示的な害虫防除装置は、公開番号を有する米国特許出願に開示されている。２０１９/０２６９１２０, ２０１９／０２４６６１６、２０１９／０２１６０７５、２０１９／０２０８７５９（その内容は本明細書に組み込まれる）。
【0070】
いくつかの実施形態では、トラップは、コナカイガラムシを捕捉または死滅させるように（すなわち、コナカイガラムシの個体数を制御するために）構成される。トラップは、接着トラップ（すなわち、粘着性トラップ）を含むことができる。いくつかの実施形態では、コナカイガラムシトラップは、電気ザッパーなどの非接着性トラップである。いくつかの実施形態では、コナカイガラムシトラップは、電気の供給源を提供することができ、その結果、コナカイガラムシは、電気との接触時に電気切断されることができる。いくつかの実施形態では、トラップは、フェロモン誘引組成物または製剤を保持および放出するための１つ以上のディスペンサ（例えば、遠心管、スティックパックディスペンサ、ポリエチレンバッグ、ポリマービーズ、またはゴム隔壁などの管）を含む。
【0071】
いくつかの実施形態では、トラップは、独立した餌であり、それぞれが別個のディスペンサ内に１つ以上のフェロモン誘引剤配合物または組成物を含有することができる。例えば、トラップ、餌、または餌ステーションは、第１のディスペンサ中にγ－ネクロジルイソブチレートを含む第１のフェロモン誘引剤配合物または組成物を含むことができる。トラップ、餌または餌ステーションは、第２のディスペンサ中にγ－ネクロドールまたはｔｒａｎｓ－α－ネクロドールイソブチレートをさらに含むことができる。第１および第２のディスペンサは、別個のディスペンサに含まれるフェロモン成分が、単一の点源から発する単一の組成物であるとみなすことができるように、互いに隣接して配置することができる。
【0072】
具体的な実施形態によれば、毒性物質は、モニタリング（例えば、漏斗トラップ）、大量トラップ、またはコナカイガラムシの防除方法を誘惑および殺すために含まれる。典型的な毒性物質としては、限定されるものではないが、フィプロニル、ホウ酸、四ホウ酸ナトリウム、ジソジウムオクタボレート四水和物、水和メチルノン、インドキサカルブ、ジノテフラン、アバメクチン、フェノキシカルブ、スピノサド、プロポキサ、メトプレン、またはこれらの任意の組合せが挙げられる。
【0073】
上述のように、開示された調製物は、トラップまたは独立型餌の一部として使用することができる。いくつかの実施形態では、フェロモン誘引組成物を含有するトラップは、コナカイガラムシ（より具体的には、Nipaecoccus viridis種のコナカイガラムシ）が見出される領域の近くに配置され、その結果、それらは、トラップに誘引され、その中に封入され得る。このトラップは、侵入性のコナカイガラムシの分散および侵入をモニターするために、またはコナカイガラムシを殺すために、そして前述のようにコナカイガラムシを制御するために使用され得る。
【0074】
本発明の態様によれば、Nipaecoccus viridis コナカイガラムシ集団の個体数を制御する方法が提供される。これらの実施形態のいくつかによれば、本方法は、コナカイガラムシの集団を有効量のγ－ネクロジルイソブチレートに曝露する工程を含み、それによってNipaecoccus viridisの個体数を制御する。
【0075】
本明細書で使用される「制御」または「制御する」とは、所定の期間にわたって、本明細書に記載されるように、所定の領域（例えば、オープンフィールド、温室、植物またはその一部）での、コナカイガラムシ集団のサイズを、コナカイガラムシ制御処理の非存在下でのサイズと比較して減少させることを指す。特定の実施形態によれば、個体数の減少は、交配破壊の結果であり、次世代において明らかである。記述のように、本発明のいくつかの実施形態による制御は、局在化フェロモン放出による交配破壊によって達成される。あるいは、または加えて、制御は、本明細書および当技術分野に記載されるように、例えば、大量トラップまたは誘惑と殺害の方法によって達成される。
【0076】
本明細書で使用される場合、「減少する」または「減少する」は、少なくとも１０％、１０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上である。
【0077】
本発明の別の態様によれば、Nipaecoccus viridisが頻繁に訪れる場所に存在するNipaecoccus viridis コナカイガラムシの量を監視する方法が提供される：
（ａ）前記位置にγ－ネクロジルイソブチレートを含むトラップを設定する工程、および
（ｂ）前記トラップ内のコナカイガラムシの量を決定し、それによってNipaecoccus viridis コナカイガラムシの量をモニターする工程。
（ａ）前記位置にγ－ネクロジルイソブチレートを含むトラップを設定する工程、および
（ｂ）前記トラップ内のコナカイガラムシの量を決定し、それによってNipaecoccus viridis コナカイガラムシの量をモニターする工程。
【0078】
いくつかの実施形態によれば、モニタリングは、例えば、フェロモン調製物／製剤、および／または農薬の適用のタイミング、投薬、治療領域などのパラメータを決定することを可能にすることによって、本明細書に記載されるように、制御するために使用される。
【0079】
特定の実施形態によれば、モニタリングは、コナカイガラムシの個体数密度を決定するために、およびそれに応じて、制御を開始すべきかどうかを決定するために使用される。例えば、モニタリングの結果、コナカイガラムシの個体数密度が十分高いと判定された場合には、例えば、コナカイガラムシをフェロモン調製物／製剤および／または農薬に曝露すること、および／またはコナカイガラムシの天敵による培養または生物学的制御、または任意の他のコナカイガラムシ制御方法に曝露することによって、制御を開始する。
【0080】
特定の実施形態によれば、モニタリングは、それぞれの実施形態に従って交配破壊を行うタイミングを決定するために（例えば、コナカイガラムシの個体数密度が十分に高いことを決定する際に）、および交配破壊効力をモニタリングするために使用される。交配中断が成功した場合、モニタリングトラップ（トラップのシャットダウン）には、コナカイガラムシは見出されない。
【0081】
トラップ内のコナカイガラムシの量を測定することは、直接的に（すなわち、カウントすることによって）、あるいは、重量測定、または電子走査及び自動計数などによって非直接的に決定することができる。
【0082】
いくつかの実施形態では、調製物を含む餌ステーションは、コナカイガラムシ（より具体的には、Nipaecoccus viridis種のコナカイガラムシ）が頻繁になる領域（例えば、大豆、柑橘類、マンゴー、タマリンドおよびザクロが増殖する畑、ブドウ園または果樹園である）の近くに配置することができる。
【0083】
調製物のフェロモン成分は、ラベンダーの精油（例えば、Lavandula luisieri、Lavandula stoechas subsp．luisieri (Rozeira) Rozeiraとも呼ばれる）、または本明細書に定義されるネクロドール化合物を１０重量％以上含む任意の他の植物の精油から合成することができる。そのような植物の例はEvolvulus alsinoidesであり、これは１２％超のｃｉｓ－α－ネクロドール（鹿島および宮沢（２０１４）、上記）を含むと報告されている。
【0084】
精油は、植物からの揮発性（常温で容易に蒸発する）化合物を含有する濃縮された疎水性液体である。精油は、揮発性油、エーテル性油、エーテルオレアとして、または単にそれらが抽出された植物の油としても知られている。
【0085】
「ネクロドール化合物」は、Ｒがヒドロキシ基を含み、例えばヒドロキシアルキル、好ましくはヒドロキシメチルである、以下に定義されるネクロダン骨格を特徴とする化合物を説明する。ネクロドール化合物は、例えば、α－ネクロドール、β－ネクロドールおよび／またはγ－ネクロドールであり得る。α－ネクロドールおよびγ－ネクロドールは、ヒドロキシ含有基（例えば、ヒドロキシアルキル）によって置換される位置にＲまたはＳ配置を有することができる。α－ネクロドールはまた、シスまたはトランス配置を特徴とし得る。
【0086】
本発明者らは、γ－ネクロジルイソブチレート、γ－ネクロドールおよびｔｒａｎｓ－α－ネクロドールイソブチレート（そのエナンチオマーまたはラセミ体を含む）の各々が、上記に開示された精油から合成され得ることを見出した。
【0087】
本発明の別の態様によれば、γ－ネクロドールを合成する方法が提供され、この方法は、α－ネクロドール（ｔｒａｎｓ－α－ネクロドール）を、α－ネクロドールの転位をもたらす条件に供し、それによってγ－ネクロドールを生成する工程を含む。
【0088】
これらの態様のいくつかによれば、上記条件は、α－ネクロドールをルイス酸と接触させることを含む。
【0089】
「ルイス酸」とは、当技術分野で一般に受け入れられているように、電子対の受容体である化合物または種を意味する。
【0090】
本実施形態の文脈において使用可能な例示的なルイス酸は、アルミニウム、ホウ素、ケイ素、スズ、チタン、ジルコニウム、鉄、銅、および亜鉛などの金属に基づくものであり、それらは、典型的には、１つ以上の電子吸引基、最も一般的には１つ以上のハロ原子（例えば、フルオロ、クロロ、またはブロモ）によって置換される。典型的なルイス酸は、ＢＦ３、Ａｌ２Ｃｌ３、ＴｉＣｌ４、ＺｎＣｌ２、ＢＣｌ３、およびより複雑なルイス酸を含む。
【0091】
例示的な実施形態では、ルイス液はＢＦ３である（例えば、ＢＦ３エーテラートの形態）。
【0092】
接触は、室温または高温で行うことができる。
【0093】
これらの実施形態のいずれかによれば、α－ネクロドールは、ｃｉｓ－α－ネクロドールおよび／またはｔｒａｎｓ－α－ネクロドールであり得る。
【0094】
ある実施形態において、α－ネクロドールは、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールであり、ある実施形態において、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールは、（－）－ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールである。
【0095】
α－ネクロドールは、潜在的な商業的販売業者から得ることができ、例えば、Zou et al.J. Agric. Food Chem．2010, 58, 4977-4982（その内容は、参照により本明細書に組み込まれるか、または好ましくは、天然源から得ることができる）に記載されているように、合成的に調製することができる。
【0096】
本発明者らは、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールがラベンダー（例えば、Lavandula luisieri）の精油から、おそらく（－）エナンチオマーとして得ることができることを明らかにした。同様に、ｃｉｓ－α－ネクロドールは、同じ植物とEvolvulus alsinoides (Kashima and Miyazawa 2014）から得ることができる。
【0097】
ある実施形態において、本方法は、転位反応の前に、本明細書中に記載されるラベンダーの精油を処理して、それによって、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールを、単一のエナンチオマーとして、またはラセミ体として提供することをさらに含む。ある実施形態において、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールは、（－）－ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールとして提供される。
【0098】
好ましくは、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールおよびｔｒａｎｓ－α－ネクロジルアセテートを含むラベンダー（例えば、Lavandula luisieri）の精油の留分を収集し、次いで、そこに含まれるｔｒａｎｓ－α－ネクロジルアセテートがｔｒａｎｓ－α－ネクロドールに変換される条件に付す。このような条件としては、例えば、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールアセテートの脱エステル化（加水分解）をもたらす条件が挙げられ、例えば、塩基性条件下で酸触媒脱エステル化または脱エステル化をもたらすことが知られている条件（例えば、アルコールなどの極性有機溶媒中のＫＯＨおよび／またはＮａＯＨ）であり得る。得られたｔｒａｎｓ－α－ネクロドールは、転位反応前に、例えば、さらなる蒸留および／またはクロマトグラフィーにより精製に供することができる。
【0099】
任意にまたは加えて、ｃｉｓ－α－ネクロドールおよび／またはそのエステルを含むラベンダーの精油の留出物を収集する。エステルが存在する場合は、上記のようにｃｉｓ－α－ネクロドールに変換される。
【0100】
得られたｃｉｓ－α－ネクロドールは、転位反応前に、例えば、さらなる蒸留および／またはクロマトグラフィーにより精製に供することができる。
【0101】
ある実施形態において、Evolvulus alsinoidesおよびラベンダーの精油からそれぞれ単離されたｃｉｓ－α－ネクロドールおよびｔｒａｎｓ－α－ネクロドールを一緒に混合し、転位条件に供し、それによってγ－ネクロドールを提供する。
【0102】
合成後、γ－ネクロドールは、例えば、蒸留および／またはクロマトグラフィー（例えば、液体クロマトグラフィー）によって精製され得る。
【0103】
精製されたγ－ネクロドールが得られると、当該分野で周知の条件下でのエステル化により、γ－ネクロジルイソブチレートに変換することができる。イソ酪酸、そのハロゲン化アシルまたはその無水物を使用することができる。例示的な実施形態では、γ－ネクロドールは、γ－ネクロジルイソブチレートを生成する条件下で、イソ酪酸無水物と反応される。γ－ネクロジルイソブチレートは、例えば、クロマトグラフィー（例えば、液体クロマトグラフィー）によって任意に精製することができる。
【0104】
言及したように、ラベンダーの精油の留分は、トランス－α－ネクロドールの種々のエステル、例えば、トランス－α－ネクロドールイソブチレートを合成するために使用することもできる。合成は、ラベンダーの精油を蒸留して得られるｔｒａｎｓ－α－ネクロドールまたはそのｔｒａｎｓ－α－ネクロジルアセテートとの混合物を、エステル化をもたらす条件下で、選択されたカルボン酸、そのハロゲン化アシルまたはその無水物と反応させる工程を含む。例示的な実施形態では、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールまたはそのｔｒａｎｓ－α－ネクロジルアセテートとの混合物を、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールイソブチレートを生成する条件下で、塩基（例えば、Ｅｔ３Ｎ）および適当な触媒（例えば、ＤＭＡＰ）の存在下で、塩化イソブチリルと反応させる。例えば、Zou et al. J. Agric. Food Chem．2010, 58, 4977-4982を参照されたい（その内容は参照により本明細書に組み込まれる）。
【0105】
例えば、ラベンダーの精油から、および任意にEvolvulus alsinoidesからも得ることができるα－ネクロドールからの可能なコナカイガラムシフェロモンの例示的合成の概略図を、本明細書に記載するように、図１１Ａに提示する。この提示によれば、α－ネクロドール、γ－ネクロドールおよびそれらのエステルのエステルを容易にかつ費用効果的に調製することができる。
【0106】
ラベンダーの精油から得られる、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドール、ｃｉｓ－α－ネクロドールまたはそれらのエステル（例えば、酢酸エステル）の転位および／またはエステル化（またはトランス－エステル化）を利用する本明細書に提供される合成アプローチは、α－ネクロダン（シスまたはトランス）、β－ネクロダンまたはγ－ネクロダン骨格（例えば、それぞれのネクロドール化合物およびそのエステルとして）を特徴とするコナカイガラムシの他の種のフェロモンを調製するために利用され得る。
【0107】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、ネクロダン骨格を特徴とするコナカイガラムフェロモンの合成方法が提供される：
ネクロドール化合物（例えば、植物の精油から得られるｔｒａｎｓ－α－ネクロドールおよび／またはｃｉｓ－α－ネクロドールおよび／またはβ－ネクロドールおよび／またはγ－ネクロドール）を、前記ネクロドール化合物の転位および／またはエステル化を行う条件に付し、それによって、コナカイガラムシフェロモンを合成する工程。
ネクロドール化合物（例えば、植物の精油から得られるｔｒａｎｓ－α－ネクロドールおよび／またはｃｉｓ－α－ネクロドールおよび／またはβ－ネクロドールおよび／またはγ－ネクロドール）を、前記ネクロドール化合物の転位および／またはエステル化を行う条件に付し、それによって、コナカイガラムシフェロモンを合成する工程。
【0108】
いくつかの実施形態において、ネクロダン骨格を特徴とするコナカイガラムシフェロモンの合成方法は、以下を含む：
ネクロドール化合物またはそのエステルを少なくとも１０％含む植物の精油からネクロドール化合物を製造する工程、および
前記ネクロドール化合物を、前記ネクロドールの転位および／またはエステル化を行う条件に供し、それによって、コナカイガラムシフェロモンを合成する工程。
ネクロドール化合物またはそのエステルを少なくとも１０％含む植物の精油からネクロドール化合物を製造する工程、および
前記ネクロドール化合物を、前記ネクロドールの転位および／またはエステル化を行う条件に供し、それによって、コナカイガラムシフェロモンを合成する工程。
【0109】
これらの態様のいくつかにおいて、植物はLavandula luisieriであり、ネクロドール化合物は、本明細書中に記載されるように、α－ネクロドールである。ある実施形態において、それは、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールであり、ある実施形態において、それは、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールの単一エナンチオマー（例えば、（－）エナンチオマー）である。
【0110】
これらの態様のうちのいくつかにおいて、α－ネクロドールを製造する工程は、精油から得られたα－ネクロドールのエステルを変換すること、およびエステルをα－ネクロドールに変換することを含む。
【0111】
これらの実施形態のいくつかにおいて、コナカイガラムシフェロモンは、α－ネクロドールのエステルであり、コナカイガラムシフェロモンは、α－ネクロドールのエステル化をもたらす条件にα－ネクロドールを供することによって合成される。
【0112】
あるいは、ネクロドール化合物は、例えば、β－ネクロドールまたはそのエステルなどのネクロドール化合物を含む植物の精油から得られる。
【0113】
さらに、別法として、α－ネクロドール（シスおよび／またはトランス）は、ラベンダー以外の植物、またはLavandula luisieri以外の植物から得られる。
【0114】
これらの実施形態のいくつかにおいて、コナカイガラムシフェロモンは、このようなネクロドールのエステルであり、精油から生成されたネクロドールを、ネクロドールのエステル化をもたらす条件に付すことによって合成される。
【0115】
このような実施形態は、例えば、図１１Ｂに提示される。植物の精油に対して５重量％以上、または１０重量％以上、または２０重量％以上のα－ネクロドールおよび／またはβ－ネクロドールを含む植物の精油を使用して、これらの化合物を生成し（例えば、抽出または蒸留または両方によって）、ネクロドール化合物を本明細書に記載のようにエステル化に供する。
【0116】
任意にまたは加えて、植物の精油は、α－ネクロドールおよび／またはβ－ネクロドールの１つ以上のエステルを含み、これらのエステルは、図１１Ｂに示されるように、本明細書に記載されるような脱エステル化によってα－ネクロドールおよび／またはβ－ネクロドールに変換される。
【0117】
例えば、上記のようなｔｒａｎｓ－α－ネクロドールのエステルであるコナカイガラムシフェロモンは、これらの実施形態に従って、Lavandula luisieriの精油からｔｒａｎｓ－α－ネクロドールおよびｔｒａｎｓ－α－ネクロジルアセテートを（例えば、蒸留によって）得ることによって得られ、任意に、この混合物を、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールを得るための酢酸エステルの脱エステル化（加水分解）をもたらす条件に付し、得られたｔｒａｎｓ－α－ネクロドールを、コナカイガラムシフェロモンである望ましいエステルを提供する任意のカルボキシレート、ハロゲン化アシル、または無水物を使用して、そのエステル化をもたらす条件に付すことによって得ることができる。
【0118】
いくつかの実施形態において、コナカイガラムシフェロモンは、γ－ネクロドールのエステルである。
【0119】
これらの実施形態のいくつかにおいて、植物の精油は、少なくとも５重量％、または少なくとも１０重量％、または少なくとも２０重量％のγ－ネクロドールを含み、方法は、γ－ネクロドールを単離し、本明細書中に記載されるようにエステル化に供することを含む。
【0120】
あるいは、植物の精油は、本明細書に記載されるように、α－ネクロドールおよび／またはβ－ネクロドール、またはそのエステルを含み、この方法は、精油から得られるα－ネクロドールおよび／またはβ－ネクロドール（任意に、そのエステルの脱エステル化の際に）を、α－ネクロドールおよび／またはβ－ネクロドールの転位をもたらす条件に供し、それによってγ－ネクロドールを得、任意にさらにγ－ネクロドールをエステル化をもたらす条件に供し、それによって、図１１Ｂにも提示されるように、γ－ネクロドールのエステルを得る工程を含む。
【0121】
ネクロドール、そのエステル、またはネクロダンが本明細書中に示される場合、それは、該当する場合、その単一のエナンチオマー、またはラセミ体を包含し得ることに留意されたい。典型的には、植物の精油から製造される場合、このような化合物は、典型的には、適用可能な場合（例えば、α－ネクロドールおよびそのエステルの場合）、（－）配置を特徴とする単一のエナンチオマーとして製造される。
【0122】
以下の脱エステル化（必要な場合）、転位（必要な場合）およびエステル化（必要な場合）は、典型的には、精油から得られる化合物の立体配置を維持するようなものである。ある実施形態において、本方法は、当技術分野で公知の方法を用いて、ネクロドール、そのエステル、またはネクロダンのエナンチオマーを他のエナンチオマーに、またはラセミ体に変換することをさらに含むことができる。
【0123】
「ネクロダン構造」とは、以下の骨格を有するモノテルペンを意味し；
下記式で表すことができる。
【化1】
【化2】
【0124】
破線（－－）は任意の二重結合を表し、３位の炭素間（β－ネクロダンの場合）、または、２位と３位の炭素間（α－ネクロダンの場合）、または、３位と４位の炭素間（γ－ネクロダンの場合）に存在することができる。
【0125】
波線は、それぞれ独立して、ＲまたはＳ配置（適用可能な場合）、および／またはシスもしくはトランス配置（適用可能な場合）を表す。
【0126】
Ｒは、典型的には、ヒドロキシ含有基、好ましくはヒドロキシアルキル、好ましくはヒドロキシメチル、またはそのエステルであるが、チオアルキル、アミノアルキル、アルキル、チオール、アミンなどの任意の他の部分であり得るが、これらに限定されない。
【0127】
Ｒがヒドロキシアルキルなどのヒドロキシ含有基である場合、それは、本明細書でネクロドール化合物と称され、それは、Ｒ’Ｃ（＝Ｏ）Ｘ（図１１Ａおよび１１Ｂ参照）と反応した場合、それぞれのエステルを提供する。Ｘは、ＯＨ（カルボン酸）、ＯＺ（エステル、ここで、Ｚはアルキルまたはシクロアルキルまたはアリールである）、ＯＹ（Ｙは、ハロゲン化物（例えば、クロロ）である）（ハロゲン化アシル）、または－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’（無水物）である。
【0128】
Ｒ’は、望ましいエステルを提供するそれぞれのアルキレンであり、好ましくは、直鎖状または分岐鎖状であり得る、１～８、１～７、または１～６個の炭素原子の長さの短鎖アルキルなどのアルキルである。Ｒ’は、別法として、不飽和（例えば、１つ以上の二重結合を有する）である、本明細書に定義および記載されるアルキルであるアルケンであり得る。適切なアルキレンの例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ブテニル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、イソペンチル、イソバレリル、セネチオイル、ヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【0129】
本明細書に記載の実施形態のいずれかのいくつかによれば、本明細書に記載の方法に従って合成されたコナカイガラムシフェロモン、およびα－ネクロジルイソブチレートに関連するそれぞれの実施形態のいずれかに本明細書に記載されるように、それを含む調製物が提供される。
【0130】
本明細書中に記載される実施形態のいずれかのいくつかによれば、それぞれの実施形態のいずれかにおいて本明細書中に記載されるように、本明細書中に記載される方法に従って合成されるコナカイガラムシフェロモンの調製物と、農業的に許容される担体などの担体とを含む製剤が提供される。
【0131】
いくつかの実施形態によれば、コナカイガラムシフェロモン調製物または製剤は、それぞれの実施形態のいずれかにおいて本明細書に記載されるように、モニタリングおよび／または制御する方法のいずれかにおいて使用される。
【0132】
この出願から成熟する特許の存続期間中に、関連するコナカイガラムシフェロモン、ネクロダンまたはネクロドール化合物を含む植物の精油、およびネクロドール／ネクロダン化合物が追加的に同定され、これらの用語の各々の範囲は、そのような新たに発見された全ての成分を事前に含む。
【0133】
本明細書で使用される場合、用語「約」は、±１０％を指す。
【0134】
用語「含む」（comprises）、「含む」（comprising）、「含む」（includes）、「含む」（including）、「有する」（having）およびそれらの結合は、「含むが、これらに限定されない」を意味する。
【0135】
「から成る」（consisting of）という用語は、「含み、これに限定される」を意味する。
【0136】
用語「から本質的になる」（consisting essentially of）は、組成物、方法又は構造が、追加の成分、工程及び／又は部分を含むことができるが、追加の成分、工程及び／又は部分が、クレームされた組成物、方法又は構造の基本的及び新規な特徴を実質的に変更しない場合に限ることを意味する。
【0137】
本明細書中で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が別段の明確な指示をしない限り、複数形の参照を含む。例えば、用語「化合物」または「少なくとも１つの化合物」は、それらの混合物を含む複数の化合物を含むことができる。
【0138】
本出願全体を通して、本発明の様々な実施形態は、範囲形式で提示され得る。範囲形式での説明は、単に便宜上および簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、その範囲内の個々の数値と同様に、可能なすべての部分範囲を具体的に開示したものと考えるべきである。例えば、１～６などの範囲の説明は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などの特定的に開示された部分範囲、ならびにその範囲内の個々の数、例えば、１、２、３、４、５、および６などを有すると考えられるべきである。これは、範囲の幅に関係なく適用される。
【0139】
数値範囲が本明細書中に示される場合、必ず、示される範囲内の任意の引用された数字（分数または整数）を含むことが意味される。第１の指示数と第２の指示数との間の「範囲／範囲」（”ranging/ranges between” a first indicate number and a second indicate number）および、第１の指示数から第２の指示数までの間の「範囲／範囲」（“ranging/ranges from” a first indicate number “to” a second indicate number）は、本明細書では互換的に使用され、第１の指示数と第２の指示数を含み、第１の指示数と第２の指示数との間のすべての分数および整数を含むことを意味する。
【0140】
本明細書中で使用される用語「方法」は、所与の作業を達成するための方法、手段、技術および手順を指し、これらの方法、手段、技術および手順は、化学的、薬理学的、生物学的、生化学的および医学的分野の実務者による既知の方法、手段、技術および手順のいずれか、または既知の方法、手段、技術および手順から容易に開発される方法、手段、技術および手順を含むが、これらに限定されない。
【0141】
用語「アルキル」は、直鎖および分枝鎖を含む飽和脂肪族炭化水素を表す。好ましくは、アルキル基の炭素数は１～３０、又は１～２０である。数値範囲（例えば、「１～２０」）が本明細書に記載される場合、基（この場合、アルキル基）は、２０個までの炭素原子を含み、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子などを含み得ることを意味する。
【0142】
アルキル基は、末端基（ここで、それは、１つの隣接原子に結合している）、または連結基（この語句は、本明細書中上記で定義されるように、２つ以上の部分を、その鎖中の少なくとも２つの炭素を介して連結する）であり得る。アルキルが連結基である場合、本明細書では「アルキレン」または「アルキレン鎖」とも呼ばれる。
【0143】
アルケンおよびアルキンは、本明細書で使用される場合、本明細書で定義されるアルキルであり、それぞれ１つ以上の二重結合または三重結合を含有する。
【0144】
用語「シクロアルキル」は、１つ以上のリングが完全に共役したπ電子系を有さない、全炭素単環式環または縮合環（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を表す。例としては、シクロヘキサン、アダマンチン、ノルボルニル、イソボルニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。シクロアルキル基は、上記で定義されるように単一の隣接原子に結合する末端基、または、本上記で定義されるように、その２つ以上の位置で２つ以上の部分を連結する連結基でありうる。
【0145】
用語「複素脂環式」は、環（単数または複数）中に窒素、酸素および硫黄などの１つ以上の原子を有する単環式または縮合環基を表す。環はまた、１つ以上の二重結合を有してもよい。しかし、環は完全に共役したπ電子系をもたない。代表的な例は、ピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、モルホリノ、オキサリジンなどである。ヘテロ脂環式基は、上記で定義されるように単一の隣接原子に結合する末端基、または、上記で定義されるように、その２つ以上の位置に２つ以上の部分を連結する連結基でありうる。
【0146】
用語「アリール」は、完全に共役したπ電子系を有する全炭素単環式または縮合環多環式（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を表す。アリール基は、上記で定義されているように、１つの隣接原子に結合する末端基、または、上記で定義されているように、その２つ以上の位置に２つ以上の部分を連結する連結基でありうる。
【0147】
用語「ヘテロアリール」は、例えば、窒素、酸素および硫黄などの１つ以上の原子をリング内に有し、加えて、完全に共役したπ電子系を有する、単環式または縮合環（すなわち、隣接する原子対を共有する環）基を表す。ヘテロアリール基の例としては、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリンおよびプリンが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリール基は、上記で定義されているように単一の隣接原子に結合する末端基、または、上記で定義されているようにその２つ以上の位置で２つ以上の部分を連結する連結基でありうる。代表的な例は、ピリジン、ピロール、オキサゾール、インドール、プリンなどである。
【0148】
用語「ハロゲン化物」および「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を表す。
【0149】
用語「ハロアルキル」は、１つ以上のハロゲン化物によってさらに置換された、上記で定義されたアルキル基を表す。
【0150】
用語「ヒドロキシル」は、－ＯＨ基を表す。
【0151】
用語「アルコキシ」は、本明細書に定義されるように、－Ｏ－アルキル基および－Ｏ－シクロアルキル基の両方を表す。「アルコキシド」とは、－Ｒ’Ｏ－基をいい、本明細書中で定義したＲ’を伴う。
【0152】
用語「アリールオキシ」は、本明細書に定義されるように、－Ｏ－アリール基および－Ｏ－ヘテロアリール基の両方を表す。
【0153】
用語「チオヒドロキシ」または「チオール」は、－ＳＨ基を表す。「チオレート」（ｔｈｉｏｌａｔｅ）という語は、－Ｓ－基を表す。
【0154】
用語「チオアルコキシ」は、本明細書で定義されるように、－Ｓ－アルキル基および－Ｓ－シクロアルキル基の両方を表す。
【0155】
用語「チオアリールオキシ」は、本明細書に定義されるように、－Ｓ－アリール基および－Ｓ－ヘテロアリール基の両方を記載する。
【0156】
「ヒドロキシアルキル」は、本明細書では「アルコール」とも呼ばれ、本明細書で定義されるように、ヒドロキシ基によって置換されたアルキルを表す。
【0157】
用語「ハロゲン化アシル」は、－（Ｃ＝Ｏ）Ｒ”基を記載し、ここで、Ｒ”は、本明細書中上記で定義されるように、ハロゲン化物である。
【0158】
本明細書中で使用される用語「カルボキシレート」は、Ｃ－カルボキシレートおよびＯ－カルボキシレートを包含する。
【0159】
用語「Ｃ－カルボキシレート」は、上記で定義されているように、－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＲ’末端基または－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－連結基を表し、Ｒ’は、本明細書中で定義される通りである。
【0160】
用語「Ｏ－カルボキシレート」は、上記で定義されているように、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’末端基または－ＯＣ（＝Ｏ）－連結基を表し、Ｒ’は、本明細書中で定義される通りである。
【0161】
カルボキシレートは、直鎖状または環状であり得る。環状の場合、Ｒ’と炭素原子が結合して環を形成する。Ｃ－カルボキシレートでは、この基はラクトンとも呼ばれる。あるいは、Ｒ’およびＯは互いに連結されて、Ｏ－カルボキシレート中で環を形成する。環状カルボキシレートは、例えば、形成された環中の原子が別の基に連結されている場合、連結基として機能することができる。
【0162】
本明細書中で使用される用語「チオカルボキシレート」は、Ｃ－チオカルボキシレートおよびＯ－チオカルボキシレートを包含する。
【0163】
用語「Ｃ－チオカルボキシレート」は、上記で定義されているように、－Ｃ（＝Ｓ）－ＯＲ’末端基または－Ｃ（＝Ｓ）－Ｏ－連結基を表し、Ｒ’は、本明細書中で定義される通りである。
【0164】
用語「Ｏ－チオカルボキシレート」は、上記で定義されているように、－ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’末端基または－ＯＣ（＝Ｓ）－連結基を表し、Ｒ’は、本明細書中で定義される通りである。
【0165】
チオカルボキシレートは、直鎖状または環状であり得る。環状の場合、Ｃ－チオカルボキシレートでは、Ｒ’と炭素原子が互いに連結して環を形成し、この基はチオラクトンとも呼ばれる。あるいは、Ｒ’およびＯは互いに連結されて、Ｏ－チオカルボキシレート中で環を形成する。環状チオカルボキシレートは、例えば、形成された環中の原子が別の基に連結されている場合、連結基として機能することができる。
【0166】
明確にするために、別個の実施形態の文脈で記載されている本発明の特定の特徴は、単一の実施形態において組み合わせて提供することもできることが理解される。逆に、本発明の種々の特徴は、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈で記載されるが、別個に、または任意の適切なサブコンビネーションで、または本発明の任意の他の記載された実施形態において適切なように、提供されてもよい。様々な実施形態の文脈で説明されている特定の特徴は、実施形態がそれらの要素を有さない限り、それらの実施形態の本質的な特徴と見なされるべきではない。
【0167】
本明細書において上記され、以下の特許請求の範囲のセクションにおいて特許請求される本発明の様々な実施形態および態様は、以下の実施例において実験的裏付けを見出す。
【実施例】
【0168】
次に、以下の実施例を参照するが、これらの実施例は、上記の説明と共に、本発明のいくつかの実施形態を非限定的な方法で例示する。
【0169】
一般に、本明細書で使用される命名法および本発明で使用される実験室手順は、分子的、生化学的、微生物学的および組換えＤＮＡ技術を含む。このような技術は、文献において完全に説明されている。
例えば、「Molecular Cloning: A laboratory Manual」、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）；「Current Protocols in Molecular Biology」、Volumes I～III Ausubel、Ｒ．Ｍ．ｅｄ．（１９９４); Ausubelら、「Current Protocols in Molecular Biology」、John Wiley and Sons、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Maryland (１９８９); Perbal、「A Practical Guide to Molecular Cloning」、John Wiley & Sons、New York (１９８８); Watsonら、「Recombinant DNA」、１－４, Cold Spring Harbor Laboratory Press、New York (１９９８）；米国特許に記載されている方法論。Ｎｏｓ．４，６６６，８２８; ４，６８３，２０２； ４，８０１，５３１；５，１９２，６５９および５，２７２，０５７；「Cell Biology: A Laboratory Handbook」、Ｅ．Ｊ編（１９９４）；「Culture of Animal Cells-A Manual of Basic Technique」，Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９４）；「Current Protocols in Immunology」、Ｅ．編（１９９４）；Stitesら（編），「Basic and Clinical Immunology」，Appleton & Lange，CT（１９９４）；MishellおよびShiigi（編），「Selected Methods in Cellular Immunology」，Freeman and Co.，New York (１９８０）；入手可能なイムノアッセイは、特許および科学文献に広く記載されている（例えば、米国特許を参照のこと）。Ｎｏｓ．３，７９１，９３２; ３，８３９，１５３；３，８５０，７５２； ３，８５０，５７８；３，８５０，７５２；３，８６７，５１７；３，８６７，２６２；３，９０１，６５４；３，９３５，０７４；３，９８４，５３３；３，９９６，３４５；４，０３４，０７４；４，０９８，８７６；４，８７９，２１９；５，０１１，７７１および５，２８１，５２１;"オリゴヌクレオチド合成" Gait、Ｍ．Ｊ．，ｅｄ．（１９８４); "Nucleic Acid Hybridization" Hames，Ｂ．Ｄ．，(１９８５); "Transcription and Translation" Hames、Ｂ．Ｄ．，and Higgins S．Ｊ．，ｅｄｓ．(１９８４)；「動物細胞培養」Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ｒ．Ｉ．，ｅｄ．（１９８６）；「固定化細胞および酵素」IRL Press，（１９８６）；「A Practical Guide to Molecular Cloning」Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．，（１９８４）および「Methods in Enzymology」Ｖｏｌ．１－３１７, Academic Press；"PCR Protocols: A Guide To Methods And Applications"，Academic Press，San Diego，CA（１９９０）；Marshakら、"Strategies for Protein Purification and Characterization - A Laboratory Course Manual" CSHL Press (１９９６）。
これらはすべて、本明細書に完全に記載されているかのように参照により組み込まれる。他の一般的な参照（reference）は、本文書全体を通して提供される。その中の手順は、当技術分野で周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。そこに含まれる全ての情報は、参照により本明細書に組み込まれる。
例えば、「Molecular Cloning: A laboratory Manual」、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）；「Current Protocols in Molecular Biology」、Volumes I～III Ausubel、Ｒ．Ｍ．ｅｄ．（１９９４); Ausubelら、「Current Protocols in Molecular Biology」、John Wiley and Sons、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Maryland (１９８９); Perbal、「A Practical Guide to Molecular Cloning」、John Wiley & Sons、New York (１９８８); Watsonら、「Recombinant DNA」、１－４, Cold Spring Harbor Laboratory Press、New York (１９９８）；米国特許に記載されている方法論。Ｎｏｓ．４，６６６，８２８; ４，６８３，２０２； ４，８０１，５３１；５，１９２，６５９および５，２７２，０５７；「Cell Biology: A Laboratory Handbook」、Ｅ．Ｊ編（１９９４）；「Culture of Animal Cells-A Manual of Basic Technique」，Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９４）；「Current Protocols in Immunology」、Ｅ．編（１９９４）；Stitesら（編），「Basic and Clinical Immunology」，Appleton & Lange，CT（１９９４）；MishellおよびShiigi（編），「Selected Methods in Cellular Immunology」，Freeman and Co.，New York (１９８０）；入手可能なイムノアッセイは、特許および科学文献に広く記載されている（例えば、米国特許を参照のこと）。Ｎｏｓ．３，７９１，９３２; ３，８３９，１５３；３，８５０，７５２； ３，８５０，５７８；３，８５０，７５２；３，８６７，５１７；３，８６７，２６２；３，９０１，６５４；３，９３５，０７４；３，９８４，５３３；３，９９６，３４５；４，０３４，０７４；４，０９８，８７６；４，８７９，２１９；５，０１１，７７１および５，２８１，５２１;"オリゴヌクレオチド合成" Gait、Ｍ．Ｊ．，ｅｄ．（１９８４); "Nucleic Acid Hybridization" Hames，Ｂ．Ｄ．，(１９８５); "Transcription and Translation" Hames、Ｂ．Ｄ．，and Higgins S．Ｊ．，ｅｄｓ．(１９８４)；「動物細胞培養」Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ｒ．Ｉ．，ｅｄ．（１９８６）；「固定化細胞および酵素」IRL Press，（１９８６）；「A Practical Guide to Molecular Cloning」Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．，（１９８４）および「Methods in Enzymology」Ｖｏｌ．１－３１７, Academic Press；"PCR Protocols: A Guide To Methods And Applications"，Academic Press，San Diego，CA（１９９０）；Marshakら、"Strategies for Protein Purification and Characterization - A Laboratory Course Manual" CSHL Press (１９９６）。
これらはすべて、本明細書に完全に記載されているかのように参照により組み込まれる。他の一般的な参照（reference）は、本文書全体を通して提供される。その中の手順は、当技術分野で周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。そこに含まれる全ての情報は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0170】
材料および方法
昆虫：
イスラエルの西ネゲブとガリラヤ地域の２つの柑橘類の果樹園からN. viridisの集団を収集した。これらの集団を用いて、２５±１℃、５０～６０％相対湿度、１４Ｌ：１０Ｄの光周期下の飼育室で、発芽ジャガイモ（Solanum tuberosum）上にコロニーを確立した。第１期幼虫齢期を別のケージに分離し、出現した成虫雄を毎日手動で除去した（Ｌｅｖｉ－Ｚａｄａら、２０１４）。最後の脱皮から約１０日後の成熟雌を、実験でさらなる使用のために清潔なジャガイモ芽に移した。
昆虫：
イスラエルの西ネゲブとガリラヤ地域の２つの柑橘類の果樹園からN. viridisの集団を収集した。これらの集団を用いて、２５±１℃、５０～６０％相対湿度、１４Ｌ：１０Ｄの光周期下の飼育室で、発芽ジャガイモ（Solanum tuberosum）上にコロニーを確立した。第１期幼虫齢期を別のケージに分離し、出現した成虫雄を毎日手動で除去した（Ｌｅｖｉ－Ｚａｄａら、２０１４）。最後の脱皮から約１０日後の成熟雌を、実験でさらなる使用のために清潔なジャガイモ芽に移した。
【0171】
性フェロモンの単離と放出の概日リズムの放出：
性フェロモン成分の候補と考えられる概日リズムで放出される化合物を明らかにするために、市販のＧＣ－ＭＳオートサンプラートレイ（ＭＰＳ２－Ｔｗｉｓｔｅｒ、ドイツ、Ｇｅｒｓｔｅｌ）上の２５０ｍｌ琥珀色バイアルに入れたジャガイモ芽上に３００～５００匹の未交尾雌を用いて自動ＳＳＧＡを行った。オートサンプラーは、ＳＰＭＥシリンジおよび６５μｍポリジメチルシロキサン／ジビニルベンゼンファイバー（Ｓｕｐｅｌｃｏ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、イスラエル）を装備した。オートサンプラーは、ソフトウェア（Ｍａｅｓｔｒｏ、ドイツ、Ｇｅｒｓｔｅｌ）によってプログラムされ、２時間ごとに数日間にわたって雌が放出する揮発物を収集し、各サンプルを直ちにＧＣ－ＭＳ注入ポートに注入した。上記ファイバーは、オートサンプラーのニードルヒーターユニットで２４０℃で少なくとも１０分間、次いでＧＣ－ＭＳインジェクターポートによる揮発性サンプリングの間（２５０℃で６分間）にベーキングすることによって、各シーケンスの前に洗浄した。オートサンプラーは窓の近くに配置されていた。室内の照明は午後２０時に消灯し、翌日は午前６時に点灯して自然な昼光サイクルを模擬した。
性フェロモン成分の候補と考えられる概日リズムで放出される化合物を明らかにするために、市販のＧＣ－ＭＳオートサンプラートレイ（ＭＰＳ２－Ｔｗｉｓｔｅｒ、ドイツ、Ｇｅｒｓｔｅｌ）上の２５０ｍｌ琥珀色バイアルに入れたジャガイモ芽上に３００～５００匹の未交尾雌を用いて自動ＳＳＧＡを行った。オートサンプラーは、ＳＰＭＥシリンジおよび６５μｍポリジメチルシロキサン／ジビニルベンゼンファイバー（Ｓｕｐｅｌｃｏ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、イスラエル）を装備した。オートサンプラーは、ソフトウェア（Ｍａｅｓｔｒｏ、ドイツ、Ｇｅｒｓｔｅｌ）によってプログラムされ、２時間ごとに数日間にわたって雌が放出する揮発物を収集し、各サンプルを直ちにＧＣ－ＭＳ注入ポートに注入した。上記ファイバーは、オートサンプラーのニードルヒーターユニットで２４０℃で少なくとも１０分間、次いでＧＣ－ＭＳインジェクターポートによる揮発性サンプリングの間（２５０℃で６分間）にベーキングすることによって、各シーケンスの前に洗浄した。オートサンプラーは窓の近くに配置されていた。室内の照明は午後２０時に消灯し、翌日は午前６時に点灯して自然な昼光サイクルを模擬した。
【0172】
雌からの空気中揮発性回収物：
空中捕集は、木炭でろ過された空気を、３００～１５００匹の未交尾雌に寄生した芽を有するジャガイモが数個入っているＤｒｅｃｈｓｅｌボトルヘッドを備えた５００ｍｌ幅のネックボトルに通すことによって行った。空気中の揮発性物質を、SuperQ (Altech、ＩＬ、ＵＳＡ）で満たされた４ｍｍ ＩＤ×１０ｃｍ長のガラス管中に捕捉した。ジャガイモに由来する無関係なピークによるバックグラウンド汚染を減少させるために、フェロモン候補がＳＳＧＡに従って放出された１５：００～２０：００ＰＭの間の３日間の各々に曝気を行った。各揮発性収集の後、ガラス管中のＳｕｐｅｒＱを１ｍｌのｎ－ヘキサンで洗浄し、この溶液１００μｌを２０μｌまで濃縮してさらなる分析を行った。
空中捕集は、木炭でろ過された空気を、３００～１５００匹の未交尾雌に寄生した芽を有するジャガイモが数個入っているＤｒｅｃｈｓｅｌボトルヘッドを備えた５００ｍｌ幅のネックボトルに通すことによって行った。空気中の揮発性物質を、SuperQ (Altech、ＩＬ、ＵＳＡ）で満たされた４ｍｍ ＩＤ×１０ｃｍ長のガラス管中に捕捉した。ジャガイモに由来する無関係なピークによるバックグラウンド汚染を減少させるために、フェロモン候補がＳＳＧＡに従って放出された１５：００～２０：００ＰＭの間の３日間の各々に曝気を行った。各揮発性収集の後、ガラス管中のＳｕｐｅｒＱを１ｍｌのｎ－ヘキサンで洗浄し、この溶液１００μｌを２０μｌまで濃縮してさらなる分析を行った。
【0173】
試料のＧＣ－ＭＳ分析：
揮発性物質の分析は、Ｍａｅｓｔｒｏソフトウェア１．４．８．１４（ドイツ、Ｇｅｒｓｔｅｌ）によってプログラムされた市販のオートサンプリング装置（ＭＰＳ２－Ｔｗｉｓｔｅｒ、Ｇｅｒｓｔｅｒ、ドイツ）を搭載したＡｇｉｌｅｎｔ ６８９０Ｎ／５９７３ＧＣ－ＭＳ装置の非極性Ｒｘｉ（登録商標）５ＳｉｌＭＳ（Ｒｅｓｔｅｋ、ＰＡ、ＵＳＡ）カラム（３０ｍ×０．２５ｍｍ ＩＤ×０．２５μｍフィルム）で行った。
カラムを５０℃で５分間保持し、次いで１０℃／分で２３０℃までプログラムし、１０分間保持した。
極性ＶＦ－２３(Varian Inc.，Lake Forest、ＣＡ）カラム（３０ｍ×０．２５ｍｍ ＩＤ×０．２５μｍフィルム）およびキラルカラムＲｔ－βＤＥＸｓｍ（Ｒｅｓｔｅｋ、ＰＡ、ＵＳＡ）についての分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ ７８９０ＡＧＣを用いて行った。Ａｇｉｌｅｎｔ ７８９０ＡＧＣは、MassHunter GC-MS Acquisition B.０７．０２．１９３８ソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ、ＵＳＡ）により操作される市販のオートサンプラー（ＧＣ－ｓａｍｐｌｅｒ ８０、Agilent Technologies、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を有するＡｇｉｌｅｎｔ ５９７５Ｃ ＭＳ検出器および炎イオン化検出器（ＦＩＤ）とインターフェースされている。
極性カラムを５０℃で５分間保持し、次いで１０℃／分で２３０℃までプログラムし、１０分間保持した。キラルカラムを６０℃で１分間保持し、次いで２℃／分で２００℃までプログラムし、２０分間保持した。カラムのヘリウム流量は１．５ｍｌ／ｍｉｎであり、Ａｇｉｌｅｎｔパージ二方向流出スプリッタによって両検出器に等しく分割され、定性的および定量的分析を同時に可能にした。
両機械の分析は、スプリットレスモードで、１分後にスプリットバルブを開け、ＭＳｍ／ｚの範囲を４０－３５０ａ．ｍ．ｕ．とし、入口温度を２３０℃に保った状態で行った。４ｍｍＩＤのライナーを液体注入に使用し、ＳＰＭＥ注入には、０．７５ｍｍＩＤのガラス入口ライナーと交換した。１０μｌシリンジを液体分析に使用した。Ｗｉｌｅｙ ８およびパーソナルＧＣ－ＭＳライブラリーを構造解明のために使用した。電子衝撃（７０ｅＶ）モードでの高分解能（ＨＲ）－ＧＣ－ＭＳ分析（７８９０Ｂ／７２５０ Ｑ－ＴＯＦ ＧＣ－ＭＳ、Ａｇｉｌｅｎｔ）をＨＰ ５ＭＳウルトラカラム（１５ｍ×２５０ｍｍ×０．２５μｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ）で行い、当該カラムは、６０℃で３分間保持した後、次いで１５℃／分で２３０℃までプログラムし、１５分間保持した。カラムのヘリウム流量は１ｍｌ／分であった。
揮発性物質の分析は、Ｍａｅｓｔｒｏソフトウェア１．４．８．１４（ドイツ、Ｇｅｒｓｔｅｌ）によってプログラムされた市販のオートサンプリング装置（ＭＰＳ２－Ｔｗｉｓｔｅｒ、Ｇｅｒｓｔｅｒ、ドイツ）を搭載したＡｇｉｌｅｎｔ ６８９０Ｎ／５９７３ＧＣ－ＭＳ装置の非極性Ｒｘｉ（登録商標）５ＳｉｌＭＳ（Ｒｅｓｔｅｋ、ＰＡ、ＵＳＡ）カラム（３０ｍ×０．２５ｍｍ ＩＤ×０．２５μｍフィルム）で行った。
カラムを５０℃で５分間保持し、次いで１０℃／分で２３０℃までプログラムし、１０分間保持した。
極性ＶＦ－２３(Varian Inc.，Lake Forest、ＣＡ）カラム（３０ｍ×０．２５ｍｍ ＩＤ×０．２５μｍフィルム）およびキラルカラムＲｔ－βＤＥＸｓｍ（Ｒｅｓｔｅｋ、ＰＡ、ＵＳＡ）についての分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ ７８９０ＡＧＣを用いて行った。Ａｇｉｌｅｎｔ ７８９０ＡＧＣは、MassHunter GC-MS Acquisition B.０７．０２．１９３８ソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ、ＵＳＡ）により操作される市販のオートサンプラー（ＧＣ－ｓａｍｐｌｅｒ ８０、Agilent Technologies、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を有するＡｇｉｌｅｎｔ ５９７５Ｃ ＭＳ検出器および炎イオン化検出器（ＦＩＤ）とインターフェースされている。
極性カラムを５０℃で５分間保持し、次いで１０℃／分で２３０℃までプログラムし、１０分間保持した。キラルカラムを６０℃で１分間保持し、次いで２℃／分で２００℃までプログラムし、２０分間保持した。カラムのヘリウム流量は１．５ｍｌ／ｍｉｎであり、Ａｇｉｌｅｎｔパージ二方向流出スプリッタによって両検出器に等しく分割され、定性的および定量的分析を同時に可能にした。
両機械の分析は、スプリットレスモードで、１分後にスプリットバルブを開け、ＭＳｍ／ｚの範囲を４０－３５０ａ．ｍ．ｕ．とし、入口温度を２３０℃に保った状態で行った。４ｍｍＩＤのライナーを液体注入に使用し、ＳＰＭＥ注入には、０．７５ｍｍＩＤのガラス入口ライナーと交換した。１０μｌシリンジを液体分析に使用した。Ｗｉｌｅｙ ８およびパーソナルＧＣ－ＭＳライブラリーを構造解明のために使用した。電子衝撃（７０ｅＶ）モードでの高分解能（ＨＲ）－ＧＣ－ＭＳ分析（７８９０Ｂ／７２５０ Ｑ－ＴＯＦ ＧＣ－ＭＳ、Ａｇｉｌｅｎｔ）をＨＰ ５ＭＳウルトラカラム（１５ｍ×２５０ｍｍ×０．２５μｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ）で行い、当該カラムは、６０℃で３分間保持した後、次いで１５℃／分で２３０℃までプログラムし、１５分間保持した。カラムのヘリウム流量は１ｍｌ／分であった。
【0174】
化学物質：
ラベンダー（Lavandula luisieri）精油は、米国カリフォルニア州エデンボタニカルズから購入した。２－イソプロピリデン－５－メチル－４－ヘキセン－１－イルブチレート（イソラバンデュリルブチレート）、ｔｒａｎｓ－３，４，５，５－テトラメチル－２－シクロペンテン－１－メタノール（ｔｒａｎｓ－α－ネクロドール）、ｃｉｓ－３，４，５，５－テトラメチル－２－シクロペンテン－１－メタノール（ｃｉｓ－α－ネクロドール）、ｔｒａｎｓ－２，２，３－トリメチル－４－メチレン－シクロペンタメタノール（ｔｒａｎｓ－β－ネクロドール）及びｃｉｓ－２、２、３－トリメチル－４－メチレン－シクロペンタメタノール（ｃｉｓ－β－ネクロドール）を使用して、以下の表１を作成した。ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ（Sigma-Aldrich、イスラエル）をＣａＨ２粉末（米国ニュージャージー州アクロス）上で一晩乾燥し、次いで、使用前に、乾燥エーテル（２０％ｖ／ｖ、Ｎａ／ベンゾフェノン上で乾燥）を添加し、試薬を混合物から蒸留した。他の全ての試薬は、Sigma-Aldrich (Rehovot、イスラエル）から購入し、他に示さない限り、精製せずに使用した。
ラベンダー（Lavandula luisieri）精油は、米国カリフォルニア州エデンボタニカルズから購入した。２－イソプロピリデン－５－メチル－４－ヘキセン－１－イルブチレート（イソラバンデュリルブチレート）、ｔｒａｎｓ－３，４，５，５－テトラメチル－２－シクロペンテン－１－メタノール（ｔｒａｎｓ－α－ネクロドール）、ｃｉｓ－３，４，５，５－テトラメチル－２－シクロペンテン－１－メタノール（ｃｉｓ－α－ネクロドール）、ｔｒａｎｓ－２，２，３－トリメチル－４－メチレン－シクロペンタメタノール（ｔｒａｎｓ－β－ネクロドール）及びｃｉｓ－２、２、３－トリメチル－４－メチレン－シクロペンタメタノール（ｃｉｓ－β－ネクロドール）を使用して、以下の表１を作成した。ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ（Sigma-Aldrich、イスラエル）をＣａＨ２粉末（米国ニュージャージー州アクロス）上で一晩乾燥し、次いで、使用前に、乾燥エーテル（２０％ｖ／ｖ、Ｎａ／ベンゾフェノン上で乾燥）を添加し、試薬を混合物から蒸留した。他の全ての試薬は、Sigma-Aldrich (Rehovot、イスラエル）から購入し、他に示さない限り、精製せずに使用した。
【0175】
行動バイオアッセイ：
２つの推定される雌性フェロモン成分およびそれらの１：１混合物を、１４ｃｍ直径のガラスペトリ皿アレーン中で試験した（Ｍｅｎｄｅｌら、２０１２）。１０ｎｇのγ－ネクロドール（Ｉ）、１０ｎｇのγ－ネクロジルイソブチレート（ＩＩ）、各５ｎｇのＩ＋ＩＩの混合物、および溶媒のみ（参照）を含む、１μｌのｎ－ヘキサン溶液を含浸させた４つの濾紙ディスク（直径５ｍｍ、Whatman No.１）を、各試験（ｎ＝６）のアリーナの周辺にランダムな順序で等間隔に配置した。２４匹の雄を、各試験でペトリ皿の中央で放出し、１時間後に、各ペーパーディスク上に見出された雄の数を記録した。ノンパラメトリックＫｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ順位和検定（ＰＭＣＭＲパッケージＲ－Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ２．３．２）を用いて、雄の捕獲に有意差のあった処理を決定した。有意差が見出された場合、多重比較のためのＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正を使用した事後ペアワイズＣｏｎｏｖｅｒ検定を実施した（同じＰＭＣＭＲパッケージ）。
２つの推定される雌性フェロモン成分およびそれらの１：１混合物を、１４ｃｍ直径のガラスペトリ皿アレーン中で試験した（Ｍｅｎｄｅｌら、２０１２）。１０ｎｇのγ－ネクロドール（Ｉ）、１０ｎｇのγ－ネクロジルイソブチレート（ＩＩ）、各５ｎｇのＩ＋ＩＩの混合物、および溶媒のみ（参照）を含む、１μｌのｎ－ヘキサン溶液を含浸させた４つの濾紙ディスク（直径５ｍｍ、Whatman No.１）を、各試験（ｎ＝６）のアリーナの周辺にランダムな順序で等間隔に配置した。２４匹の雄を、各試験でペトリ皿の中央で放出し、１時間後に、各ペーパーディスク上に見出された雄の数を記録した。ノンパラメトリックＫｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ順位和検定（ＰＭＣＭＲパッケージＲ－Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ２．３．２）を用いて、雄の捕獲に有意差のあった処理を決定した。有意差が見出された場合、多重比較のためのＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正を使用した事後ペアワイズＣｏｎｏｖｅｒ検定を実施した（同じＰＭＣＭＲパッケージ）。
【0176】
雄のフライトバイオアッセイは、いくつかの開放プラスチック容器中のコナカイガラムシのコロニーが中心の床上に置かれた３×３ｍ２飼育室で、雌が生成した成分の誘引性を比較した。８０％ポリイソブテン接着剤（Ｒｉｍｉｆｏｏｔ、Ｒｉｍｉ、Petah Tikva、イスラエル）で覆われた白色カード（１８×１０ｃｍ２）からなるトラップを、２０μｇのγ－ネクロドール（Ｉ）、γ－ネクロジルイソブチレート（ＩＩ）、それらの混合物（Ｉ＋ＩＩ、それぞれ２０μｇ）のそれぞれ２００μｌのｎ－ヘキサン溶液中、または２００μｌのｎ－ヘキサンのみを含む対照を含む、０．５ｍｌの５×８ｍｍＩＤ×ＯＤポリエチレンバイアル（Just Plastic、Ｎｏｒｆｏｌｋ、英国）で餌を付けた。餌を付けたトラップを、高さ１．２ｍで吊り下げ、２．８ｍ離して、１２日間毎日位置を入れ替えた。上記のＫｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ順位和検定および事後Ｃｏｎｏｖｅｒ検定を用いて、統計的差異について処理の捕獲量を比較した。
【0177】
実施例１
フェロモンの単離および同定
逐次サンプリング分析（図１Ａおよび１Ｂ）から得られた結果は、球状のコナカイガラムシの雌が、概日周期でわずかに特定の時間にのみ２つの化合物を放出し、１７：００ＰＭ±２時間、明期に入ってから約１１時間後にピークを示すことを明らかに示す。２つの化合物の放出量は、最後の脱皮後５日目から１０日目までの雌の年齢と共に～６．８倍増加する（図１Ｂ）。
フェロモンの単離および同定
逐次サンプリング分析（図１Ａおよび１Ｂ）から得られた結果は、球状のコナカイガラムシの雌が、概日周期でわずかに特定の時間にのみ２つの化合物を放出し、１７：００ＰＭ±２時間、明期に入ってから約１１時間後にピークを示すことを明らかに示す。２つの化合物の放出量は、最後の脱皮後５日目から１０日目までの雌の年齢と共に～６．８倍増加する（図１Ｂ）。
【0178】
２つの化合物の３つの異なるカラム上の保持指数（ＲＩ）を、表１に示すように、文献で知られているコナカイガラムシフェロモンのもの、およびこれらの既知フェロモンに類似した構造的特徴を有する化合物と比較した。
【0179】
概日リズム（図１Ａ）で放出される化合物Ｉは、図１に示すように、非極性Ｒｘｉ（登録商標）５ＳｉｌＭＳカラム（Ｒｅｓｔｅｋ、ＰＡ、ＵＳＡ）上で１１８４（表１）のリテンションインデックス（ＲＩ）を有し、図２Ａおよび７に示されるように、以下の特徴的なフラグメントイオンを有する。ｍ／ｚ（ＥＩ、７０ｅＶ）：５５（１４）、６７（１５）、７７（１８）、７９（１８）、８１（１５）、９１（２８）、９３（３２）、１０５（２９）、１０９（３６）、１２１（８９）、１２３（１４）、１３９（１００）、１５４（２９）。
化合物ＩＩは、同じカラム（表１）上に１４４８のＲＩを有し、その特性イオンは、図２Ｂおよび８Ａに示されるように、５５（２）、７１（２）、７７（３）、７９（４）、８１（２）、９１（６）、９３（６）、１０５（７）、１０７（４）、１２１（１００）、１２２（１２）、１３６（１８）、２２４（１）である。
昼間に一貫して増加した主要な化合物、ピークＩＩ（図１Ｂ参照）は、文献で知られている他の２つのコナカイガラムシフェロモンのＭＳと非常に類似した質量スペクトルを有する。それらは不規則なモノテルペノイドを含む：日本のコナカイガラムシPlanococcus kraunhiaeのイソラバンデュリルブチレート（Sugie et al. 2008）とブドウのコナカイガラムシPseudococcus maritimusのトランス-α-ネクロジルイソブチレート（Figadere et al.2007）。ただし、同じＧＣ－ＭＳ条件下では、イソラバンデュリルイソブチレートの合成標準物質は１４９６のＲＩを示し（表１）、したがって、図１Ａ－Ｂ中のピークＩＩを表すことはできない。
化合物ＩＩは、同じカラム（表１）上に１４４８のＲＩを有し、その特性イオンは、図２Ｂおよび８Ａに示されるように、５５（２）、７１（２）、７７（３）、７９（４）、８１（２）、９１（６）、９３（６）、１０５（７）、１０７（４）、１２１（１００）、１２２（１２）、１３６（１８）、２２４（１）である。
昼間に一貫して増加した主要な化合物、ピークＩＩ（図１Ｂ参照）は、文献で知られている他の２つのコナカイガラムシフェロモンのＭＳと非常に類似した質量スペクトルを有する。それらは不規則なモノテルペノイドを含む：日本のコナカイガラムシPlanococcus kraunhiaeのイソラバンデュリルブチレート（Sugie et al. 2008）とブドウのコナカイガラムシPseudococcus maritimusのトランス-α-ネクロジルイソブチレート（Figadere et al.2007）。ただし、同じＧＣ－ＭＳ条件下では、イソラバンデュリルイソブチレートの合成標準物質は１４９６のＲＩを示し（表１）、したがって、図１Ａ－Ｂ中のピークＩＩを表すことはできない。
【0180】
以下の表１は、３つの異なるＧＣカラム（３０ｍ×０．２５ｍｍＩＤ×０．２５μｍフィルム）：非極性Ｒｘｉ（登録商標）５ｓｉｌｍｓカラム（Ｒｅｓｔｅｋ、ＰＡ、米国）、極性ＶＦ－２３ｍｓ（Ｖａｒｉａｎ、ＣＡ、米国）およびキラルＲｔ－βＤＥＸｓｍ（Ｒｅｓｔｅｋ、ＰＡ、米国）における、異なるネクロドールおよび共役エステルの保持指数を示す。
【0181】
【表1】
【0182】
ＲＩが１１８４、分子イオン質量フラグメントが１５４ｍ／ｚの化合物Ｉを、ＧＣ－ＭＳライブラリーに基づいて、テルペン３，４，５，５－テトラメチル－２－シクロペンテン－１－メタノール（α－ネクロドール）と想定した。
化合物ＩのＲＩおよびＭＳとｔｒａｎｓ－α、ｃｉｓ－αおよびｔｒａｎｓ－βおよびｃｉｓ－β－ネクロドールのそれらとの比較は、それらがそれぞれ１１５２、１１６１、１２０２および１２１４の異なるＲＩを示すことを示し（表１）、したがって、化合物Ｉは異なるネクロドール異性体であることを示した。
化合物ＩのＭＳを文献と比較すると（Jacobs et al. 1990; Pamingle et al. 1991）、γ－ネクロドール（２，２，３，４－テトラメチル－３－シクロペンテン－１－メタノール）であることが示唆された（図３）。
さらに、文献ではγ－ネクロドールのＲＩは不明であるが、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールとｔｒａｎｓ－β－ネクロドールとの間のＤＢ－５非極性カラム上でγ－ネクロドールが溶出することが報告された（Zouら、２０１０）。従って、化合物Ｉは、非極性Ｒｘｉ（登録商標）５ＳｉｌＭＳカラム上でｔｒａｎｓ－α－ネクロドール（ＲＩ＝１１５２）とｔｒａｎｓ－β－ネクロドール（ＲＩ＝１２０２）との間に溶出する１１８４のＲＩを有するので、化合物Ｉはγ－ネクロドールであると思われる。
化合物ＩのＲＩおよびＭＳとｔｒａｎｓ－α、ｃｉｓ－αおよびｔｒａｎｓ－βおよびｃｉｓ－β－ネクロドールのそれらとの比較は、それらがそれぞれ１１５２、１１６１、１２０２および１２１４の異なるＲＩを示すことを示し（表１）、したがって、化合物Ｉは異なるネクロドール異性体であることを示した。
化合物ＩのＭＳを文献と比較すると（Jacobs et al. 1990; Pamingle et al. 1991）、γ－ネクロドール（２，２，３，４－テトラメチル－３－シクロペンテン－１－メタノール）であることが示唆された（図３）。
さらに、文献ではγ－ネクロドールのＲＩは不明であるが、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールとｔｒａｎｓ－β－ネクロドールとの間のＤＢ－５非極性カラム上でγ－ネクロドールが溶出することが報告された（Zouら、２０１０）。従って、化合物Ｉは、非極性Ｒｘｉ（登録商標）５ＳｉｌＭＳカラム上でｔｒａｎｓ－α－ネクロドール（ＲＩ＝１１５２）とｔｒａｎｓ－β－ネクロドール（ＲＩ＝１２０２）との間に溶出する１１８４のＲＩを有するので、化合物Ｉはγ－ネクロドールであると思われる。
【0183】
γ－ネクロドールは、以下の実施例３に記載されるように、Lavandula luisieriの精油から蒸留されたｔｒａｎｓ－α－ネクロドールの転位によって生成された。
【0184】
転位反応の生成物であるγ－ネクロドールは、非極性Ｒｘｉ（登録商標）５ＳｉｌＭＳカラム上で化合物Ｉと共溶出し、両方とも、図２Ａ、７および８Ａ－Ｂに示すように、同一のＭＳを有する。γ－ネクロドールはまた、極性ＶＦ－２３ｍｓ（Varian, CA, USA）およびキラルＲｔ－βＤＥＸｓｍ（Restek, PA, USA）カラム上で雌の通気サンプル中に収集された化合物Ｉと共溶出し、ＲＩはそれぞれ１７３１および１３４４である（表１）。したがって、これらのデータから、化合物Ｉはγ－ネクロドールであることが確認された。
【0185】
コナカイガラムシフェロモンは、通常、不規則な非頭尾結合を有するモノテルペンアルコールのカルボン酸エステルであることが知られている（Sugie et al. 2008）。化合物ＩＩは、図２Ｂに示される分子イオン質量フラグメント（Ｍ＋＝２２４ｍ／ｚ）および質量フラグメント（Ｍ＋－Ｃ４Ｈ９ＯＯＨ＝１３６ｍ／ｚ）によれば、酪酸またはイソ酪酸のいずれかの４炭素カルボン酸のエステルである。この化合物は、Ｎ．ｖｉｒｉｄｉｓの雌が概日リズムで、そのアルコール前駆体であるγ－ネクロドール（図３）とともに放出する推定フェロモン成分（図１Ａ～Ｂ）と推定される。
【0186】
γ－ネクロドールを化合物Ｉと同定した後、イソ酪酸および無水酪酸（ピリジン中）と反応させた。得られた２つのエステルを、上記の非極性、極性およびキラルカラム上でＧＣ－ＭＳによって分析した。分析の結果、γ－ネクロジルイソブチレートと化合物ＩＩは共溶離し、同一のＭＳを有することが分かった。これらのカラム上のγ－ネクロジルイソブチレートのＲＩは、それぞれ１４４８、１７７４、および１４７１である（表１）。これらのカラム上のγ－ネクロジルブチレートのＲＩは、それぞれ１４９１、１８５４、および１５２１（表１）であり、したがって、この異性体エステルは化合物ＩＩではない。
【0187】
雌曝気の試料中の化合物ＩのＨＲ－ＧＣ－ＭＳ分析は、Ｃ１０Ｈ１８Ｏの分子式を指す１５４．１３４８ｍ／ｚの分子ピークを与え（図８Ａ）、合成γ－ネクロドールのものと同一であった（図８Ｂ）。雌曝気試料中の化合物ＩＩのＨＲ－ＧＣ－ＭＳ分析は、分子イオンを表示しなかった（図９Ａ）。しかしながら、天然試料中のγ－ネクロジルイソブチレートのＲｔ(保持時間）およびＨＲ質量スペクトルは、合成試料と同一であった（図９Ｂ）。さらに、ＬｉＡｌＨ４（エーテル中）による雌曝気試料のアリコートの加水分解は、ＧＣ－ＭＳ分析においてピークＩＩ（γ－ネクロジルイソブチレート）の消失をもたらし、ピークＩ（γ－ネクロドール）のサイズを増加させた（図１０、上および中パネル）。イソ酪酸無水物（エーテル／ピリジン中）によるピークＩの再エステル化は、もっぱらピークＩＩを与えた（図１０、下パネル）。
【0188】
ＭＳおよびＦＩＤ検出器を並行して稼動させたＧＣに接続した極性カラムでの雌エアレーションからの８つのサンプルの分析は、γ－ネクロドールとγ－ネクロジルイソブチレートとの間の実際の比が４４：５６（±１．７６％ＳＥ）であることを示した。
【0189】
本明細書において上記したように、溶媒抽出または吸着剤抽出の「古典的」方法を使用するコナカイガラムシフェロモンの単離は、非常に複雑である。
【0190】
ここでは、以前に蛾の害虫について記載された自動連続ＳＰＭＥ／ＧＣ－ＭＳサンプリング分析（ＳＳＧＡ）技術を使用することによって（Ｌｅｖｉ－Ｚａｄａら、２０１１）、伝統的な単離方法より有利であり、数百人の未交尾雌のみから球状コナカイガラムシ害虫の天然フェロモン成分を単離および同定することを可能にし、以前のコナカイガラムシ研究よりはるかに少ないことが示される。
【0191】
実施例２
バイオアッセイ
化合物ＩＩを有するペトリ皿バイオアッセイ餌は平均３．１６±０．７（±ＳＥ）匹の雄を誘引し、化合物Ｉを有する餌は０．５±０．２匹の雄を誘引し、化合物ＩとＩＩの混合物を有する餌は４±０．７匹の雄を有し、空の紙ディスク上には全く見出されなかった。Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ順位和検定は、カイ二乗＝１８．６２、ｄｆ＝３、Ｐ＝０．０００４を与え、処理は雄の捕獲において有意に異なることを示した。多重比較のためのＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正を用いた事後ペアワイズＣｏｎｏｖｅｒ試験では、ＩＩまたはＩ＋ＩＩはＩまたは対照と有意に異なっていたが（全てＰ＜０．０００１）、ＩＩはＩ＋ＩＩと差がなく、Ｉと対照とは異なっていなかった（図４）。
バイオアッセイ
化合物ＩＩを有するペトリ皿バイオアッセイ餌は平均３．１６±０．７（±ＳＥ）匹の雄を誘引し、化合物Ｉを有する餌は０．５±０．２匹の雄を誘引し、化合物ＩとＩＩの混合物を有する餌は４±０．７匹の雄を有し、空の紙ディスク上には全く見出されなかった。Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ順位和検定は、カイ二乗＝１８．６２、ｄｆ＝３、Ｐ＝０．０００４を与え、処理は雄の捕獲において有意に異なることを示した。多重比較のためのＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正を用いた事後ペアワイズＣｏｎｏｖｅｒ試験では、ＩＩまたはＩ＋ＩＩはＩまたは対照と有意に異なっていたが（全てＰ＜０．０００１）、ＩＩはＩ＋ＩＩと差がなく、Ｉと対照とは異なっていなかった（図４）。
【0192】
飛行バイオアッセイでは、餌ＩＩは１日当たり平均６５４±１７８（±ＳＥ）匹の雄を捕獲し、餌Ｉ＋ＩＩは１日当たり４８２±１４２匹の雄を捕獲したが、これらの餌はいずれも化合物Ｉで処理した餌（１３９±４１匹）または対照（１６９±６１匹）のいずれよりも有意に多く誘引した。餌ＩＩの１日当たりの捕獲量およびＩ＋ＩＩの混合の捕獲量に有意差はなく、餌Ｉと対照の捕獲量に有意差はなかった（Kruskal-Wallis Ｐ＝０．００１およびα＝０．０５での上記Ｃｏｎｏｖｅｒ試験）（図５）。
【0193】
４つの選択ペトリ皿バイオアッセイの結果は、γ－ネクロドールよりもγ－ネクロジルイソブチレートが、Ｎ．ｖｉｒｉｄｉｓの雄に対してより魅力的であることを示唆する。雄の飛行試験も、γ－ネクロジルイソブチレートがより魅力的なフェロモン成分であることを示唆している。室内のコントロールにおける捕獲はかなりのものであり、これはおそらく、比較的静かな空気と、飼育箱内の雌からの天然フェロモン放出の影響によるものであった。
【0194】
本明細書に記載のフェロモン成分（例えば、γ－ネクロジルイソブチレート、γ－ネクロドール）は、フィールドバイオアッセイにおいて以下のようにさらに試験される：
【0195】
小さなデルタ粘着性トラップは、異なるトラップタイプを比較する試験を除いて、すべての試験において適用される。トラップは、各フェロモン成分１ｍｇと混合物を、ｎ－ヘキサンに溶解したディスペンサ（ゴムまたはポリエチレン）で餌を付ける。フェロモン成分の活性を評価する試験において、全てのブレンドにＢＨＴ（Sigma、５％）を添加する。地上１．５ｍの高さで、餌を付けたトラップと餌を付けていない空のトラップを木に吊り下げる。処理は、無作為化ブロックデザインにおいて５回、トラップ間２０ｍで繰り返され、実験中、各カウント（およそ毎週）後に１つの位置を入れ替える。
【0196】
トラップは定期的にサンプリングされ、個体数密度、雄の飛行の季節学、および害虫地域分布を参照する捕獲された雄の量および／またはレベルを決定する。
【0197】
実施例３
化学的合成
Ｇａｒｃｉａ－Ｖａｌｌｅｊｏら（１９９４）は、Lavandula luisieriの精油中の主成分は、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールおよびｔｒａｎｓ－α－ネクロジルアセテートであることを見出した。Ｐａｍｉｎｇｌｅら（１９９１）は、α－ネクロドールまたはβ－ネクロドールが、Ｌｅｗｉｓ酸転位によってγ－ネクロドールに変換され、二重結合が熱力学的に好ましい位置に移動することを示した（図６参照）。
化学的合成
Ｇａｒｃｉａ－Ｖａｌｌｅｊｏら（１９９４）は、Lavandula luisieriの精油中の主成分は、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールおよびｔｒａｎｓ－α－ネクロジルアセテートであることを見出した。Ｐａｍｉｎｇｌｅら（１９９１）は、α－ネクロドールまたはβ－ネクロドールが、Ｌｅｗｉｓ酸転位によってγ－ネクロドールに変換され、二重結合が熱力学的に好ましい位置に移動することを示した（図６参照）。
【0198】
従って、本発明者らは、Lavandula luisieriの精油からγ－ネクロドールを調製するための新しい合成経路を考案し、成功裏に実践した。
【0199】
γ－ネクロドールは、前述の通り、L. luisieri精油から蒸留したｔｒａｎｓ－α－ネクロドールとｔｒａｎｓ－α－ネクロジルアセテートの転位により合成した。
【0200】
蒸留物をメタノール中ＫＯＨ（２Ｍ）で加水分解した。通常の後処理の後、アルコール（ｔｒａｎｓ－α－ネクロドール、４９％の化学的純度）をＢＦ３・Ｅｔ２Ｏによって異性化した（Ｐａｍｉｎｇｌｅら、１９９１に記載された手法に従う）。反応後、ｔｒａｎｓ－α－ネクロドールの残留物が観察されなくなるまでガスクロマトグラフィーを行い、最終生成物を蒸留（３７℃／０．８ｍｍＨｇ）により精製した。最終生成物γ－ネクロドールの収率は１５％（L. luisieri精油から）、化学的純度は８８％であった。溶離溶剤としてペンタン中の３％エーテルを用いて、ＡｇＮＯ３（１０％）／アルミニウム箔で覆ったＳｉＯ２ガラスカラム上での液体クロマトグラフィーにより、より高い化学純度（９８～９９％）を達成した。
Ｍ／Ｚ（ＥＩ ７０ｅＶ）：５５（１４）、６７（１５）、７７（１８）、７９（１８）、８１（１５）、９１（２８）、９３（３２）、１０５（２９）、１０９（３６）、１２１（８９）、１２３（１４）、１３９（１００）、１５４（２９）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３；６００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）:３．７８（ｄｄ、Ｊ＝５．７，１０．６、２Ｈ）、３．６２（ｄｄ、Ｊ＝７．６、１０．６、１Ｈ）、２．３０（ｍ、１Ｈ）、１．９９（ｍ、２Ｈ）、１．５９（ｓ、３Ｈ）、１．４７（ｓ、１Ｈ）、１．０４（ｓ、３Ｈ）、０．８２（ｓ、３Ｈ）
Ｃ１３ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３；６００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１３９．０５、１２８．４４、６４．８３、５０．８５、４７．８、３９．６６
Ｍ／Ｚ（ＥＩ ７０ｅＶ）：５５（１４）、６７（１５）、７７（１８）、７９（１８）、８１（１５）、９１（２８）、９３（３２）、１０５（２９）、１０９（３６）、１２１（８９）、１２３（１４）、１３９（１００）、１５４（２９）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３；６００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）:３．７８（ｄｄ、Ｊ＝５．７，１０．６、２Ｈ）、３．６２（ｄｄ、Ｊ＝７．６、１０．６、１Ｈ）、２．３０（ｍ、１Ｈ）、１．９９（ｍ、２Ｈ）、１．５９（ｓ、３Ｈ）、１．４７（ｓ、１Ｈ）、１．０４（ｓ、３Ｈ）、０．８２（ｓ、３Ｈ）
Ｃ１３ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３；６００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１３９．０５、１２８．４４、６４．８３、５０．８５、４７．８、３９．６６
【0201】
γ－ネクロジルイソブチレートは、上記で得られたγ－ネクロドール（１ｇ、６．４ｍｍｏｌ、８８％化学純度）から、ピリジン（１ｍｌ）中のイソ酪酸無水物（１．４ｍｌ、８．４ｍｍｏｌ）と反応させることにより合成された。反応混合物を一晩撹拌し、次いで冷たい１Ｍ ＨＣｌ（１０ｍｌ）に注いだ。生成物を１５ｍｌのｎ－ヘキサンで３回抽出し、２０ｍｌのＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥した。溶剤を蒸発させ、残渣を、溶離剤としてｎ－ヘキサンを使用して、アルミニウム箔で覆われたＡｇＮＯ３（１０％）／ＳｉＯ２のカラム上のクロマトグラフィーに付して、L. luisieri精油に対して１１％の収率で０．７８グラムのγ－ネクロジルイソブチレートを得た。合成γ－ネクロジルイソブチレート（上記の９８％γ－ネクロドールから合成）の元素分析により、Ｃ１４Ｈ２４Ｏ２：Ｃ７４．７６％（calc.７４．９４％）、Ｈ１０．４９％（calc.１０．７８％）の分子式を確認した。
Ｍ／Ｚ（ＥＩ ７０ｅＶ、Ａｇｉｌｅｎｔ５９７５Ｃ）：５５（２）、７１（２）、７７（３）、７９（４）、８１（２）、９１（６）、９３（６）、１０５（７）、１０７（４）、１２１（１００）、１２２（１２）、１３６（１８）、２２４（１)（図８Ｂ参照）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３；６００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）:４．０８－４．１５（ｍ、２Ｈ）、２．５４（ｓｅｐ、Ｊ＝７、１Ｈ）、２．２３（ｍ、１Ｈ）、２．１１（ｑｕｉ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、１．９８（ｍ、１Ｈ）、１．５８（ｓ、３Ｈ）、１．４７（ｓ、３Ｈ）、１．１７（ｄ、Ｊ＝０．７、３Ｈ）、１．１６（ｄ、Ｊ＝０．７、３Ｈ）、１．０５（ｓ、３Ｈ）、０．８１（ｓ、３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３；６００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７７．６９、１３８．９１、１２８．２３、６５．９８、４８．０２、４７．０６、３９．４０、３４．４７、２７．３６、２０．２９、１９．３８、１９．３５、１４．４６、９．５８。
Ｍ／Ｚ（ＥＩ ７０ｅＶ、Ａｇｉｌｅｎｔ５９７５Ｃ）：５５（２）、７１（２）、７７（３）、７９（４）、８１（２）、９１（６）、９３（６）、１０５（７）、１０７（４）、１２１（１００）、１２２（１２）、１３６（１８）、２２４（１)（図８Ｂ参照）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３；６００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）:４．０８－４．１５（ｍ、２Ｈ）、２．５４（ｓｅｐ、Ｊ＝７、１Ｈ）、２．２３（ｍ、１Ｈ）、２．１１（ｑｕｉ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、１．９８（ｍ、１Ｈ）、１．５８（ｓ、３Ｈ）、１．４７（ｓ、３Ｈ）、１．１７（ｄ、Ｊ＝０．７、３Ｈ）、１．１６（ｄ、Ｊ＝０．７、３Ｈ）、１．０５（ｓ、３Ｈ）、０．８１（ｓ、３Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３；６００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１７７．６９、１３８．９１、１２８．２３、６５．９８、４８．０２、４７．０６、３９．４０、３４．４７、２７．３６、２０．２９、１９．３８、１９．３５、１４．４６、９．５８。
【0202】
キラルカラムでのＧＣ－ＭＳ分析は、L. luisieri精油についてｔｒａｎｓ－α－ネクロドールの１つのピークのみ、およびN. viridis コナカイガラムシの通気中のγ－ネクロドールについての１つのピークのみを与えた。したがって、それぞれがただ１つのエナンチオマーであると仮定する。したがって、本明細書に記載の合成は、N. viridis コナカイガラムシと同じγ－ネクロドールおよびγ－ネクロジルイソブチレートの１つのエナンチオマーのみを生成し、それぞれが（－）エナンチオマーであると決定された。立体配置は、クロロホルム中の純化合物を約１グラム／１００ｃｍ３の濃度で溶解し、偏光計を用いて特定の比旋光度を試験することにより決定した。
【0203】
ラセミ混合物または（＋）エナンチオマーは、これらの成分が植物中に存在する場合には、それぞれの成分から製造することができ、または植物から製造されたそれぞれの（－）エナンチオマーから、ラセミ化および／またはエナンチオ選択的合成のための当該分野で公知の方法によって生成することができることに留意されたい。
【0204】
本発明は、その特定の実施形態と併せて記載されてきたが、多くの代替、修正および変形が当業者には明らかであることは明らかである。したがって、添付の特許請求の範囲の精神および広い範囲内にあるこのような代替、修正および変形のすべてを包含することが意図される。
【0205】
本明細書において言及されている全ての刊行物、特許および特許出願は、個々の刊行物、特許または特許出願のそれぞれが、参照により本明細書に組み込まれることが具体的かつ個々に示されているのと同程度に、本明細書中に参照によりその全体が組み込まれる。さらに、出願におけるいずれかの参考文献の引用または特定は、そのような参考文献が本発明に対する先行技術として利用可能であることを承認するものと解釈してはならない。セクション見出しが使用される程度まで、それらは必ずしも限定的であると解釈されるべきではない。
【0206】
さらに、本出願の任意の優先権文書は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0207】
参考文献
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【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11A】
【図11B】
【国際調査報告】