特表2022-552503ＨＢＶおよび／またはＨＤＶ感染症、肝疾患を予防および／または処置するため、ならびにＮＴＣＰを標的化するための、コンジュゲート化合物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-12-16
(54)【発明の名称】ＨＢＶおよび／またはＨＤＶ感染症、肝疾患を予防および／または処置するため、ならびにＮＴＣＰを標的化するための、コンジュゲート化合物
(51)【国際特許分類】
C07K 14/02 20060101AFI20221209BHJP
C07K 1/13 20060101ALI20221209BHJP
A61K 47/66 20170101ALI20221209BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20221209BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20221209BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20221209BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20221209BHJP
【ＦＩ】
C07K14/02 ZNA
C07K1/13
A61K47/66
A61K45/00
A61P1/16
A61P35/00
A61P3/06
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022521499
(86)(22)【出願日】2020-10-09
(85)【翻訳文提出日】2022-06-06
(86)【国際出願番号】 EP2020078464
(87)【国際公開番号】W WO2021069692
(87)【国際公開日】2021-04-15
(31)【優先権主張番号】19202397.6
(32)【優先日】2019-10-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
２．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】520146628
【氏名又は名称】ウニヴェルジテート ハイデルベルク
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＥＴ ＨＥＩＤＥＬＢＥＲＧ
(74)【代理人】
【識別番号】100099623
【弁理士】
【氏名又は名称】奥山 尚一
(74)【代理人】
【識別番号】100125380
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 綾子
(74)【代理人】
【識別番号】100142996
【弁理士】
【氏名又は名称】森本 聡二
(74)【代理人】
【識別番号】100166268
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 祐
(74)【代理人】
【識別番号】100180231
【弁理士】
【氏名又は名称】水島 亜希子
(74)【代理人】
【識別番号】100096769
【氏名又は名称】有原 幸一
(72)【発明者】
【氏名】アーバン，シュテファン
(72)【発明者】
【氏名】ミアー，ヴァルター
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076BB01
4C076BB13
4C076BB15
4C076BB16
4C076BB25
4C076BB27
4C076BB29
4C076BB31
4C076CC16
4C076CC27
4C076CC41
4C076EE59
4C084AA17
4C084AA19
4C084MA52
4C084MA55
4C084MA59
4C084MA60
4C084MA63
4C084MA65
4C084MA66
4C084NA13
4C084NA14
4C084ZA751
4C084ZB072
4C084ZB261
4C084ZC331
4C084ZC422
4C084ZC751
4H045AA10
4H045BA01
4H045BA55
4H045BA56
4H045FA33
4H045GA25
(57)【要約】
本発明は、好ましくはＢ型肝炎ウイルスの疎水性修飾ｐｒｅＳ由来ペプチドまたはそれぞれの環状ペプチドである、ペプチド部分（ａ）、および好ましくは胆汁酸である、ＮＴＣＰ基質部分（ｂ）を含む、コンジュゲート化合物に関する。本発明はさらに、少なくとも１つのコンジュゲート化合物を含む医薬組成物に関する。本発明はさらに、肝疾患または肝臓の状態の診断、予防および／もしくは処置、ならびに／またはＨＢＶおよび／もしくはＨＤＶ感染の阻害等における、該コンジュゲート化合物および医薬組成物の医学的使用に関する。本発明はさらに、該疾患および／または感染症の診断、予防および／または処置の方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ａ）ペプチド部分、および（ｂ）ナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）の胆汁酸結合部位に対応するＮＴＣＰ基質部分
を含むコンジュゲート化合物であって、（ａ）および（ｂ）は互いに、好ましくはリンカーまたはアミノ酸側鎖を介して、共有結合している、コンジュゲート化合物。
【請求項2】
前記ペプチド部分（ａ）が、一般式Ｉ：
Ｈ－［（Ｘ）ｍ－Ｐ－（Ｙ）ｎ］－Ｒ （Ｉ）
のＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の疎水性修飾ｐｒｅＳ由来ペプチド
（式中、
Ｐはアミノ酸配列ＮＰＬＧＦＸａａＰ（配列番号１）であり、ＸａａはＦもしくはＬであり、
Ｘはアミノ酸ｍ個の長さを有するアミノ酸配列であり、
ここでｍは０もしくは少なくとも１であり；
Ｙはアミノ酸ｎ個の長さを有するアミノ配列であり、
ここでｎは０もしくは少なくとも１であり；
ここでｍ＋ｎは５～２５、好ましくは８～２０、より好ましくは８～１５であり；
Ｈは疎水性修飾であって、
ＰのＮ末端またはＸ内もしくはＹ内に位置し、かつ
アシル化および疎水性部分の付加から選択され、
ＲはＣ末端修飾であって、
好ましくは、アミド、Ｄ－アミノ酸、修飾アミノ酸、環状アミノ酸；ＰＥＧ、グリカン等の天然および合成ポリマーから選択される、分解から保護する部分である）；
もしくは
一般式Ｉａ：
シクロ［（Ｘ）ｍ－Ｐ－（Ｙ）ｎ］ （Ｉａ）
の環状ペプチド
（式中、
Ｐ、Ｘ、Ｙ、ｍおよびｎは上で定義された通りであり、
Ｘおよび／もしくはＹのアミノ酸側鎖に少なくとも１つの疎水性修飾を保持し、
ここで、前記環状ペプチドは配列番号１のＰのアミノ酸配列内で環状化されておらず、かつ、Ｐのアミノ酸側鎖を介しておらず、
前記疎水性修飾はアシル化もしくは疎水性部分の付加である）；
または薬学的に許容され得るその塩
から選択される、請求項１に記載のコンジュゲート化合物。
【請求項3】
前記ペプチド部分（ａ）の前記疎水性修飾が、カプリン酸（Ｃ１０）、ラウリン酸（Ｃ１２）、ミリストイル（Ｃ１４）、パルミトイル（Ｃ１６）もしくはステアロイル（Ｃ１８）、好ましくはミリストイル（Ｃ１４）等のＣ８～Ｃ２２脂肪酸でのアシル化であるか、または１つもしくは複数の前記疎水性部分が、コレステロール、コレステロール誘導体、リン脂質、糖脂質、グリセロールエステル、ステロイド、セラミド、イソプレン誘導体から選択される、請求項１または２に記載のコンジュゲート化合物。
【請求項4】
前記ペプチド部分（ａ）が前記一般式Ｉのペプチドであり、式中ｍ＝０～１８および／もしくはｎ＝０～７、好ましくはｍ＝０～７および／もしくはｎ＝０～６（ｍ＝７およびｎ＝６等）である、または前記ペプチド部分（ａ）が前記一般式Ｉａの環状ペプチドであり、式中ｍ＝０～１８および／もしくはｎ＝０～７、好ましくはｍ＝０～７および／もしくはｎ＝０～６であり、但しｍ＋ｎは少なくとも１である、請求項１～３のいずれか１項に記載のコンジュゲート化合物。
【請求項5】
前記ペプチド部分（ａ）が、配列番号２～２５、好ましくは配列番号２～１７および／もしくは配列番号１８～２５の群から選択されるアミノ酸配列を含む、または該アミノ酸配列からなる、請求項１～４のいずれか１項に記載のコンジュゲート化合物。
【請求項6】
前記ペプチド部分（ａ）が、胆汁酸部分を共有結合するためのさらなるアミノ酸を含み、ここで前記さらなるアミノ酸は、リジン（Ｋ）、Ｄ－リジン（ｋ）、Ｄ－チロシン（ｙ）、システイン（Ｃ）、プロパルギルグリシン、アジドフェニルアラニン、アジドリジン、アジドフェニルアラニン、ホモアリルグリシン、ホモプロパルギルグリシン、アジドホモアラニン、アジドノルロイシン、アジドフェニルアラニン、プロパルギルオキシフェニルアラニンおよびアセチルフェニルアラニン等の、Ｌ－もしくはＤ－アミノ酸であり、天然もしくは非天然アミノ酸であり得、ならびに／または、前記ペプチド部分（ａ）が、環状化のためのさらなるアミノ酸を含む環状ペプチドであり、ここで前記環状化のためのさらなるアミノ酸は、システイン（Ｃ）、アリルグリシン、プロパルギルグリシン、アジドフェニルアラニン等の天然もしくは非天然アミノ酸であり得る、
請求項１～５のいずれか１項に記載のコンジュゲート化合物。
【請求項7】
前記ＮＴＣＰ基質部分（ｂ）が、ナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）の天然基質、
好ましくは胆汁酸、胆汁酸ダイマーおよび多量体；または
ＮＴＣＰの非天然基質
例えば、エゼチミブ、イルベサルタン、ロシグリタゾン、ザフィルルカスト、ＴＲＩＡＣ、スルファサラジン等の薬物；
から選択される、請求項１～６のいずれか１項に記載のコンジュゲート化合物。
【請求項8】
前記ＮＴＣＰ基質部分（ｂ）が、コール酸（ＣＡ）；ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）；
リトコール酸（ＬＣＡ）；
タウロコール酸（ＴＣＡ）
グリココール酸
タウロデオキシコール酸（ＴＤＣＡ）
タウロケノデオキシコール酸（ＴＣＤＣ）
タウロウロソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）
等のタウリン－またはグリシンコンジュゲート胆汁酸およびその塩（タウリン－またはグリシンコンジュゲートジヒドロキシおよびトリヒドロキシ胆汁酸）；
硫酸抱合型胆汁酸およびその塩；
ＵＤＣＡ－ＵＤＣＡ等のウルソデオキシコール酸のダイマー；
【化1】
ＣＡ－ＵＤＣＡのような胆汁酸の混合ダイマー等の、モノマーおよび重合体胆汁酸から選択される胆汁酸を含み、
好ましくは、前記胆汁酸は、ステロイド骨格の環Ａの３－ヒドロキシル基を介して前記ペプチド部分（ａ）に結合していない、請求項１～８のいずれか１項に記載のコンジュゲート化合物。
【請求項9】
薬物またはそれらのそれぞれのプロドラッグ；タグ；
蛍光色素、放射性同位体および造影剤等の標識；
組換えウイルス；
薬物、プロドラッグまたは標識のための担体またはデポー；
免疫原性エピトープ；
ホルモン；
阻害剤；
毒素、
等の１つまたは複数のさらなる部分を含み、好ましくは、リンカー、スペーサーおよび／またはアンカー基、例えば切断可能リンカー等を介して共有結合している、請求項１～８のいずれか１項に記載のコンジュゲート化合物。
【請求項10】
（ｉ）請求項１～９のいずれか１項に記載の、少なくとも１つのコンジュゲート化合物、（ｉｉ）場合により、薬学的に許容され得る担体および／または賦形剤
を含む、医薬組成物。
【請求項11】
医薬品における使用のための、請求項１～９のいずれか１項に記載のコンジュゲート化合物または請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項12】
肝疾患または肝臓の状態の診断、予防および／または処置における使用のための、請求項１～９のいずれか１項に記載のコンジュゲート化合物または請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項13】
前記肝疾患または肝臓の状態が、肝炎、硬変、ヘモクロマトーシス、好ましくはＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧおよびＨ型肝炎ウイルスによって引き起こされた肝炎もしくは複数種のウイルスによって引き起こされる同時肝炎から選択され、ならびに／または前記肝疾患もしくは肝障害が、熱帯病、マラリア、住血吸虫症、リーシュマニア症、ウィルソン病等の、ウイルスもしくは非ウイルス病原体の肝臓期を伴う疾患であり、ならびに／または
前記肝疾患または肝障害が、肝腫瘍、好ましくは肝細胞がん（ＨＣＣ）である、請求項１２に記載の使用のためのコンジュゲート化合物または医薬組成物。
【請求項14】
前記肝疾患または肝障害が、胆汁経路内の胆汁酸塩蓄積に関する、肝移植後の移植後合併症であり、ならびに／または前記肝疾患もしくは肝臓の状態が、肝細胞への化合物のナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）仲介輸送に関するか、または前記疾患もしくは状態の部位もしくは位置への薬物もしくは標識の化合物の送達を必要とし、ならびに好ましくは
肝内胆汁うっ滞、
肝臓の中毒（肝臓毒素による）／肝毒性、
薬物性胆汁うっ滞性肝疾患、
高脂血症、
肝炎後胆汁うっ滞、
メタボリックシンドローム、
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、
糖原病
から選択される肝臓関連代謝疾患であり、ならびに
ＮＴＣＰを介して肝細胞に輸送される化合物が、好ましくは胆汁酸、ステロイド、コンジュゲートおよび非コンジュゲート甲状腺ホルモン、肝臓毒素、タウロコール酸に共有結合している化合物、ブロモスルホフタレイン、薬物である、請求項１２または１３に記載の使用のためのコンジュゲート化合物または医薬組成物。
【請求項15】
免疫調節剤および／またはＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ－５もしくはＴＬＲのアゴニストもしくはアンタゴニスト等の別の治療剤との併用療法を含み、ならびに／または前記コンジュゲート化合物が、治療有効量、好ましくは患者あたり約０．０１ｍｇ～約５０ｍｇ、好ましくは患者あたり約０．１ｍｇ～約１０ｍｇの範囲で投与される、または
１ｋｇあたり１０ｐｍｏｌ～体重１ｋｇあたり２０μｍｏｌの範囲の用量で患者に適用され、ならびに／または
投与の経路が、経口、皮下、静脈内、経鼻、筋肉内、経皮、吸入、座薬によるものから選択される、請求項１～９のいずれか１項に記載のコンジュゲート化合物または請求項１０に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、好ましくはＢ型肝炎ウイルスの疎水性修飾ｐｒｅＳ由来ペプチドまたはそれぞれの環状ペプチドである、ペプチド部分（ａ）、および好ましくは胆汁酸である、ＮＴＣＰ基質部分（ｂ）を含む、コンジュゲート化合物に関する。本発明はさらに、少なくとも１つのコンジュゲート化合物を含む医薬組成物に関する。本発明はさらに、肝疾患または肝臓の状態の診断、予防および／もしくは処置、ならびに／またはＨＢＶおよび／もしくはＨＤＶ感染の阻害等における、該コンジュゲート化合物および医薬組成物の医学的使用に関する。本発明はさらに、該疾患および／または感染症の診断、予防および／または処置の方法に関する。
【背景技術】
【0002】
今日、約２０億の人々が、ＨＢＶの血清学的マーカーを保持している。そのうち約２億６千万人が、慢性的にＨＢＶに感染している。疾病管理センター（ＣＤＣ：Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ）によると、慢性的にＨＢＶ感染した人々の１５～２５％は、適切な処置を受けていない場合、１０年以内に肝細胞がん（ＨＣＣ：ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）を発症しやすい（Ｓｈｅｐｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．，２００６）。ＨＢＶ関連ＨＣＣは予後不良を有し、そのためＨＢＶは、世界保健機関（ＷＨＯ：ｗｏｒｌｄ ｈｅａｌｔｈ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）によって、最も重要な天然ヒト発がん物質として分類されている。予防ワクチンの存在にもかかわらず、根治療法の欠如、増加する世界人口、および貧困国において未だ限定されている予防法のために、近い将来感染症の数は全く低下しないであろう。
【0003】
ＨＢＶは、主に非経口的経路を介して伝播する。実際に感染した免疫応答性の個体の９０～９５％はウイルスを排除し、それによって終生免疫保護（ｌｉｆｅ－ｌｏｎｇ ｉｍｍｕｎｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）を獲得する。感染した人々の約５～１０％は慢性Ｂ型肝炎を発症する（ドイツで３００，０００～５００，０００人）。対照的に、高度な流行地、特に中央アフリカおよび東アジアでは、主な伝播様式は周産期における母親から子への伝播である。不幸にも、免疫応答性が完全ではない子の感染は、９０～９８％の慢性的な疾患の経過をもたらす。従って、Ｂ型肝炎関連ＨＣＣは、これらの国の多くにおいて最も一般的な悪性腫瘍である。
【0004】
慢性デルタ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ：Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｄｅｌｔａ Ｖｉｒｕｓ）感染症は、ＨＢＶ単独感染（ｍｏｎｏ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）と比較した場合に硬変および肝細胞がんの割合のさらなる増大をもたらす、最も深刻な形態のウイルス肝炎を表す。ＨＤＶはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ：Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ Ｖｉｒｕｓ）のサテライトウイルスであり、慢性的にＨＤＶに感染している患者が常にＨＢＶに同時感染していることを意味する。現在、推定１５００万～２５００万人がＨＢＶ／ＨＤＶに同時感染している。しかしながら、これらの数は、信頼できる疫学的データの不足のために、未だ漠然としている。現在、ＨＤＶ感染患者を処置するために承認された薬物はない。侵入阻害剤ミルクルデックスＢ／ブレビルチドは、第ＩＩ相臨床試験において、見込みのある結果を示した（Ｍｅｎｔｈａ ｅｔ ａｌ．，２０１９）。
【0005】
慢性Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染症の処置のための、現在承認されている最適治療計画は、既に確立された感染症の後のウイルスゲノムの複製ステップに対応する（ラミブジン、アデフォビル、エンテカビル、テノホビル）か、または免疫系の調節因子として作用する（インターフェロンα）かのいずれかである。不幸にも、患者の１０～２５％しか、かかる治療の際に持続性のウイルス学的応答を維持しない。従って、ウイルス排除と感染治癒を助け得る、未感染時点での複製ステップ（例えば、ウイルス侵入）を標的化する新規の治療法を開発することが最も重要である。
【0006】
予防ワクチンおよび逆転写酵素（ＲＴ：ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ）阻害剤の可用性にもかかわらず、世界中でＨＢＶ感染者の数およびＨＢＶ関連死の数（現在１年あたり約３５０，０００）は増大している。原発性肝がんの約３分の２は持続的なＨＢＶ感染に起因する（Ｃｈａｎ ＆ Ｓｕｎｇ，２００６）。
【0007】
ウイルス侵入の特異的な阻害は、異なるウイルスによる急性および慢性感染症を制御し、最終的に排除するための魅力的な治療的概念である。ＨＢＶ／ＨＤＶ同時感染患者における侵入阻害は、インターフェロンαと組み合わせて投与された場合の患者のサブセットにおける治療能力を含み（Ｍｙｒ ２０３試験、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０３８５２７１９、Ｗｅｄｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１８；Ｗｅｄｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１９参照）、単独療法において非常に見込みのある結果を示した（Ｍｙｒ ２０２試験、Ｗｅｄｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１７；Ｗｅｄｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１８参照）。
【0008】
ヒトＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、ヘパドナウイルス科の一員である。ヘパドナウイルスは、ｐｇＲＮＡ中間体の逆転写を介して自身のＤＮＡゲノムを複製する、最小のエンベロープＤＮＡウイルスである。集合の間に、ヌクレオカプシドは、ラージ（Ｌ：ｌａｒｇｅ）、ミドル（Ｍ：ｍｉｄｄｌｅ）およびスモール（Ｓ：ｓｍａｌｌ）という名の３種のウイルスエンベロープタンパク質を獲得する。それらは、１つのオープンリーディングフレーム中にコードされ、膜アンカーに必要なＳドメインを共有する。Ｓドメインに加えて、Ｍは、アミノ酸５５個のＮ末端親水性伸長部（ｐｒｅＳ２）を含有し、一方、Ｌは、ｐｒｅＳ１とよばれる１０７、１１７または１１８個のアミノ酸（遺伝子型依存性）によってさらに伸長されている（Ｕｒｂａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）は、肝細胞への侵入のためにＨＢＶエンベロープタンパク質を利用するサテライトウイルソイドである。Ｌのミリストイル化ｐｒｅＳ１ドメインは、肝細胞特異的受容体であるナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ：ｓｏｄｉｕｍ ｔａｕｒｏｃｈｏｌａｔｅ ｃｏ－ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）との特異的相互作用によって、ＨＢＶおよびＨＤＶの感染性に重要な役割を果たす（Ｌｅｍｐｐ ＆ Ｕｒｂａｎ，２０１７）。
【0009】
本発明者らは、以前に、ＰＨＨおよびＨｅｐａＲＧ細胞のＨＢＶおよびＨＤＶ感染をブロックするＨＢＶのＬタンパク質由来リポペプチドを同定した（Ｇｒｉｐｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００５、Ｓｃｈｕｌｚｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０、例えばＷＯ２００９／０９２６１１ Ａ１、ＵＳ１０，３２３，０６８）。それらはＨＢＶ遺伝子型ＤのｐｒｅＳ１ドメインのＮ末端のアミノ酸４７個（ＨＢＶｐｒｅＳ／２－４８ｍｙｒ）に由来し、ミリスチン酸での自然発生の修飾を含む。主な化合物はミルクルデックスＢである（例えば、Ｂｏｇｏｍｏｌｏｖ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｂｌａｎｋ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｗｅｄｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１８参照）。
【0010】
参照によって本明細書にその内容全体が援用されているＷＯ２００９／０９２６１２およびＷＯ２０１２／１０７５７９において、本発明者らは、ＨＢＶの疎水性修飾ｐｒｅＳ由来ペプチド、および肝臓への化合物の特異的送達のためのビヒクルとしてのそれらの使用を記載している。
【0011】
本発明者らはさらに、これらＨＢＶのＬタンパク質由来リポペプチド、すなわちナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチドの結合の要因である受容体を同定した（ＮＴＣＰ／ＳＬＣ１０Ａ１）（ＷＯ２０１４／０７２５２６、ＷＯ２０１４／０７２５２４およびＷＯ２０１５／０１４８３０）。Ｎｉ ｅｔ ａｌ．（２０１４）およびＹａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１２）も参照。参照によって本明細書にその内容全体が援用されているＷＯ２０１７／１０２９０６ Ａ１において、本発明者らは、環状形態のミルクルデックスＢ等の環状ＮＴＣＰ標的化ペプチド、および侵入阻害剤としてのそれらの使用を記載している。
【0012】
よって、ＮＴＣＰ仲介輸送に関する肝疾患等の肝疾患の診断、予防および／または処置のための改良された手段および方法を提供することは、本発明の目的である。
【0013】
本発明はさらに、従来技術に存在するようなＨＢＶ感染および他のＨＢＶ関連疾患の阻害、予防および／または処置のための方法および手段を改良することを狙い、よって、ＨＢＶ感染および関連疾患の、標的化された有効な阻害、予防および／または処理を可能にする改良された方法および手段を提供することは、本発明の目的である。
【0014】
ＨＤＶ感染およびＨＤＶ関連疾患の阻害、予防および／または処置のための改良された手段および方法を提供することは、本発明のさらなる目的である。
【0015】
本発明は、ＨＢＶおよびＨＤＶ受容体としてのＮＴＣＰならびに天然基質およびさらなる化合物のＮＴＣＰ仲介輸送の阻害のための、改良された手段および方法を提供することを狙う。
【発明の概要】
【0016】
本発明によると、この課題は、
（ａ）ペプチド部分、および
（ｂ）ナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）の胆汁酸結合部位に対応するＮＴＣＰ基質部分
を含むコンジュゲート化合物であって、（ａ）および（ｂ）は互いに、好ましくはリンカーまたはアミノ酸側鎖を介して、共有結合している、コンジュゲート化合物を提供することによって、解決される。
（ａ）ペプチド部分、および
（ｂ）ナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）の胆汁酸結合部位に対応するＮＴＣＰ基質部分
を含むコンジュゲート化合物であって、（ａ）および（ｂ）は互いに、好ましくはリンカーまたはアミノ酸側鎖を介して、共有結合している、コンジュゲート化合物を提供することによって、解決される。
【0017】
本発明によると、この課題は、
（ｉ）少なくとも１つの本発明のコンジュゲート化合物、
（ｉｉ）場合により、薬学的に許容され得る担体および／または賦形剤
を含む医薬組成物を提供することによって、解決される。
（ｉ）少なくとも１つの本発明のコンジュゲート化合物、
（ｉｉ）場合により、薬学的に許容され得る担体および／または賦形剤
を含む医薬組成物を提供することによって、解決される。
【0018】
本発明によると、この課題は、医薬品における使用のための、本発明のコンジュゲート化合物または本発明の医薬組成物を提供することによって解決される。
【0019】
本発明によると、この課題は、肝疾患または肝臓の状態の診断、予防および／または処置における使用のための、本発明のコンジュゲート化合物または本発明の医薬組成物を提供することによって、解決される。
【0020】
本発明によると、この課題は、治療有効量の本発明のコンジュゲート化合物または本発明の医薬組成物の投与を含む、肝疾患または肝臓の状態の診断、予防および／または処置のための方法によって、解決される。
【発明を実施するための形態】
【0021】
本発明を以下により詳細に記載する前に、本明細書中に記載される特定の方法論、プロトコルおよび試薬は変化し得るので、本発明がそれらに限定されないことが理解されるべきである。本明細書中で使用される用語法もまた、特定の実施形態を記載する目的であるだけであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図しないこともまた、理解されるべきである。他に定義されなければ、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本発明の目的のために、本明細書中で引用される全ての参照は、その全体が参照によって援用されている。
【0022】
濃度、量および他の数値データは、範囲形式で表現または表示され得る。かかる範囲形式は、単に簡便性および簡潔さのためであり、よって、範囲の限定として明らかに列挙される数値を含むだけでなく、その範囲内に包含される全ての個々の数値または部分範囲も、各数値および部分範囲が明らかに列挙されているかのように含むと、柔軟に解釈されるべきであることが理解される。実例として、「１～２１」の数値範囲は、明らかに列挙されている値の１～２１を含むだけでなく、示された範囲内の単一値および部分範囲もまた含むと解釈されるべきである。よって、この数値範囲に含まれるのは、１、２、３、４、５．．．．１７、１８、１９、２０、２１等の単一値および２～１０、８～１５等の部分範囲である。この同じ原則は、「少なくとも９０％」等の１つの数値のみを列挙する範囲に適用される。さらに、かかる解釈は、記載されている範囲の幅または特徴にかかわらず適用されるべきである。
【0023】
＜コンジュゲート化合物＞
上で概説したように、本発明は、コンジュゲート化合物を提供する。
上で概説したように、本発明は、コンジュゲート化合物を提供する。
【0024】
本発明のコンジュゲート化合物は、
（ａ）ペプチド部分、および
（ｂ）ナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）の胆汁酸結合部位に対応するＮＴＣＰ基質部分
を含む。
（ａ）ペプチド部分、および
（ｂ）ナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）の胆汁酸結合部位に対応するＮＴＣＰ基質部分
を含む。
【0025】
該ペプチド部分（ａ）およびＮＴＣＰ基質部分（ｂ）は、互いに、好ましくはリンカーまたはアミノ酸側鎖を介して、共有結合している。
【0026】
＜ペプチド部分（ａ）＞
好ましい実施形態において、ペプチド部分（ａ）は、
一般式Ｉ
Ｈ－［（Ｘ）ｍ－Ｐ－（Ｙ）ｎ］－Ｒ （Ｉ）
のＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の疎水性修飾ｐｒｅＳ由来ペプチド
（式中、
Ｐはアミノ酸配列ＮＰＬＧＦＸａａＰ（配列番号１）であり、ＸａａはＦもしくはＬであり、
Ｘはアミノ酸ｍ個の長さを有するアミノ酸配列であり、
ここでｍは０もしくは少なくとも１であり；
Ｙはアミノ酸ｎ個の長さを有するアミノ配列であり、
ここでｎは０もしくは少なくとも１であり；
ここでｍ＋ｎは５～２５、好ましくは８～２０、より好ましくは８～１５であり；
Ｈは疎水性修飾であって、
ＰのＮ末端またはＸ内もしくはＹ内に位置し、
アシル化および疎水性部分の付加から選択される
ＲはＣ末端修飾であって、
好ましくは、アミド、Ｄ－アミノ酸、修飾アミノ酸、環状アミノ酸；ＰＥＧ、グリカン等の天然および合成ポリマーから選択される、分解から保護する部分である）；
もしくは
一般式Ｉａ
シクロ［（Ｘ）ｍ－Ｐ－（Ｙ）ｎ］ （Ｉａ）
の環状ペプチド
（式中、
Ｐ、Ｘ、Ｙ、ｍおよびｎは上で定義された通りであり、
Ｘおよび／もしくはＹのアミノ酸側鎖に少なくとも１つの疎水性修飾を保持し、
ここで、該環状ペプチドは、配列番号１のＰのアミノ酸配列内で環状化されておらず、かつＰのアミノ酸側鎖を介しておらず、
ここで、疎水性修飾はアシル化もしくは疎水性部分の付加である）；
または薬学的に許容され得るその塩
から選択される。
好ましい実施形態において、ペプチド部分（ａ）は、
一般式Ｉ
Ｈ－［（Ｘ）ｍ－Ｐ－（Ｙ）ｎ］－Ｒ （Ｉ）
のＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の疎水性修飾ｐｒｅＳ由来ペプチド
（式中、
Ｐはアミノ酸配列ＮＰＬＧＦＸａａＰ（配列番号１）であり、ＸａａはＦもしくはＬであり、
Ｘはアミノ酸ｍ個の長さを有するアミノ酸配列であり、
ここでｍは０もしくは少なくとも１であり；
Ｙはアミノ酸ｎ個の長さを有するアミノ配列であり、
ここでｎは０もしくは少なくとも１であり；
ここでｍ＋ｎは５～２５、好ましくは８～２０、より好ましくは８～１５であり；
Ｈは疎水性修飾であって、
ＰのＮ末端またはＸ内もしくはＹ内に位置し、
アシル化および疎水性部分の付加から選択される
ＲはＣ末端修飾であって、
好ましくは、アミド、Ｄ－アミノ酸、修飾アミノ酸、環状アミノ酸；ＰＥＧ、グリカン等の天然および合成ポリマーから選択される、分解から保護する部分である）；
もしくは
一般式Ｉａ
シクロ［（Ｘ）ｍ－Ｐ－（Ｙ）ｎ］ （Ｉａ）
の環状ペプチド
（式中、
Ｐ、Ｘ、Ｙ、ｍおよびｎは上で定義された通りであり、
Ｘおよび／もしくはＹのアミノ酸側鎖に少なくとも１つの疎水性修飾を保持し、
ここで、該環状ペプチドは、配列番号１のＰのアミノ酸配列内で環状化されておらず、かつＰのアミノ酸側鎖を介しておらず、
ここで、疎水性修飾はアシル化もしくは疎水性部分の付加である）；
または薬学的に許容され得るその塩
から選択される。
【0027】
ある実施形態において、ペプチド部分（ａ）の疎水性修飾は、カプリン酸（Ｃ１０）、ラウリン酸（Ｃ１２）、ミリストイル（Ｃ１４）、パルミトイル（Ｃ１６）またはステアロイル（Ｃ１８）、好ましくはミリストイル（Ｃ１４）、パルミトイル（Ｃ１６）またはステアロイル（Ｃ１８）、より好ましくはミリストイル（Ｃ１４）等のＣ８～Ｃ２２脂肪酸でのアシル化である。
【0028】
ある実施形態において、１つまたは複数の疎水性部分は、コレステロール、コレステロール誘導体、リン脂質、糖脂質、グリセロールエステル、ステロイド、セラミド、イソプレン誘導体から選択される。
【0029】
好ましくは、ペプチド部分（ａ）は一般式Ｉのペプチドであり、式中ｍ＝０～１８および／またはｎ＝０～７、好ましくはｍ＝０～７および／またはｎ＝０～６（ｍ＝７およびｎ＝６等）である。
【0030】
好ましくは、ペプチド部分（ａ）は一般式Ｉａの環状ペプチドであり、式中ｍ＝０～１８および／またはｎ＝０～７、好ましくはｍ＝０～７および／またはｎ＝０～６であり、但しｍ＋ｎは少なくとも１である。
【0031】
ある実施形態において、
ｍ＋ｎ＝０、ペプチドはアミノ酸７個（すなわちＰ）の長さを有する／アミノ酸７個（すなわちＰ）を含む；
ｍ＋ｎ＝１、ペプチドはアミノ酸８個の長さを有する／アミノ酸８個を含む；
ｍ＋ｎ＝２、ペプチドはアミノ酸９個の長さを有する／アミノ酸９個を含む；
ｍ＋ｎ＝３、ペプチドはアミノ酸１０個の長さを有する／アミノ酸１０個を含む；
ｍ＋ｎ＝４、ペプチドはアミノ酸１１個の長さを有する／アミノ酸１１個を含む；
ｍ＋ｎ＝５、ペプチドはアミノ酸１２個の長さを有する／アミノ酸１２個を含む；
ｍ＋ｎ＝６、ペプチドはアミノ酸１３個の長さを有する／アミノ酸１３個を含む；
ｍ＋ｎ＝７、ペプチドはアミノ酸１４個の長さを有する／アミノ酸１４個を含む；
ｍ＋ｎ＝８、ペプチドはアミノ酸１５個の長さを有する／アミノ酸１５個を含む；
ｍ＋ｎ＝１８、ペプチドはアミノ酸２５個の長さを有する／アミノ酸２５個を含む；
ｍ＋ｎ＝２５、ペプチドはアミノ酸３２個の長さを有する／アミノ酸３２個を含む。
ｍ＋ｎ＝０、ペプチドはアミノ酸７個（すなわちＰ）の長さを有する／アミノ酸７個（すなわちＰ）を含む；
ｍ＋ｎ＝１、ペプチドはアミノ酸８個の長さを有する／アミノ酸８個を含む；
ｍ＋ｎ＝２、ペプチドはアミノ酸９個の長さを有する／アミノ酸９個を含む；
ｍ＋ｎ＝３、ペプチドはアミノ酸１０個の長さを有する／アミノ酸１０個を含む；
ｍ＋ｎ＝４、ペプチドはアミノ酸１１個の長さを有する／アミノ酸１１個を含む；
ｍ＋ｎ＝５、ペプチドはアミノ酸１２個の長さを有する／アミノ酸１２個を含む；
ｍ＋ｎ＝６、ペプチドはアミノ酸１３個の長さを有する／アミノ酸１３個を含む；
ｍ＋ｎ＝７、ペプチドはアミノ酸１４個の長さを有する／アミノ酸１４個を含む；
ｍ＋ｎ＝８、ペプチドはアミノ酸１５個の長さを有する／アミノ酸１５個を含む；
ｍ＋ｎ＝１８、ペプチドはアミノ酸２５個の長さを有する／アミノ酸２５個を含む；
ｍ＋ｎ＝２５、ペプチドはアミノ酸３２個の長さを有する／アミノ酸３２個を含む。
【0032】
好ましい実施形態において、ペプチド部分（ａ）は、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１（Ｂ） GTNLSVPNPLGFFPDHQLDP 配列番号２
ＨＢＶｐｒｅＳ／－１１－２１（Ｂ） GGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDP 配列番号３
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１（Ｄ） GQNLSTSNPLGFFPDHQLDP 配列番号４
ＨＢＶｐｒｅＳ／－１１－２１（Ｄ） GGWSSKPRKGMGQNLSTSNPLGFFPDHQLDP 配列番号５
ＨＢＶｐｒｅＳ／９－１６ NPLGFFPD 配列番号６
ＨＢＶｐｒｅＳ／８－１６ PNPLGFFPD 配列番号７
ＨＢＶｐｒｅＳ９－１７ NPLGFFPDH 配列番号８
ＨＢＶｐｒｅＳ８－１７ PNPLGFFPDH 配列番号９
の群から選択されるアミノ酸配列、
または、Ｐ内のそれぞれの修飾：
を有するアミノ酸配列を含むか、または該アミノ酸配列からなる。
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１（Ｂ） GTNLSVPNPLGFFPDHQLDP 配列番号２
ＨＢＶｐｒｅＳ／－１１－２１（Ｂ） GGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDP 配列番号３
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１（Ｄ） GQNLSTSNPLGFFPDHQLDP 配列番号４
ＨＢＶｐｒｅＳ／－１１－２１（Ｄ） GGWSSKPRKGMGQNLSTSNPLGFFPDHQLDP 配列番号５
ＨＢＶｐｒｅＳ／９－１６ NPLGFFPD 配列番号６
ＨＢＶｐｒｅＳ／８－１６ PNPLGFFPD 配列番号７
ＨＢＶｐｒｅＳ９－１７ NPLGFFPDH 配列番号８
ＨＢＶｐｒｅＳ８－１７ PNPLGFFPDH 配列番号９
の群から選択されるアミノ酸配列、
または、Ｐ内のそれぞれの修飾：
【化1】
【化2】
【化3】
【化4】
【化5】
【化6】
【化7】
【化8】
【0033】
ある実施形態において、ペプチド部分（ａ）は、胆汁酸部分を共有結合するためのさらなるアミノ酸を含み、ここで該さらなるアミノ酸は、リジン（Ｋ）、Ｄ－リジン（ｋ）、Ｄ－チロシン（ｙ）、システイン（Ｃ）、プロパルギルグリシン、アジドフェニルアラニン、アジドリジン、アジドフェニルアラニン、ホモアリルグリシン、ホモプロパルギルグリシン、アジドホモアラニン、アジドノルロイシン、アジドフェニルアラニン、プロパルギルオキシフェニルアラニンおよびアセチルフェニルアラニン等の、Ｌ－またはＤ－アミノ酸であり、天然または非天然アミノ酸であり得る。
【0034】
ある実施形態において、ペプチド部分（ａ）は、環状化のためのさらなるアミノ酸を含む環状ペプチドであり、ここで該環状化のためのさらなるアミノ酸は、システイン（Ｃ）、アリルグリシン、プロパルギルグリシン、アジドフェニルアラニン等の天然または非天然アミノ酸であり得る。
【0035】
＜ＮＴＣＰ基質部分（ｂ）＞
好ましくは、ＮＴＣＰ基質部分（ｂ）は、
ナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）の天然基質、
好ましくは胆汁酸、胆汁酸ダイマーおよび多量体；または
ＮＴＣＰの非天然基質
薬物、例えばエゼチミブ、イルベサルタン、ロシグリタゾン、ザフィルルカスト、ＴＲＩＡＣ、スルファサラジン等；
から選択される。
好ましくは、ＮＴＣＰ基質部分（ｂ）は、
ナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）の天然基質、
好ましくは胆汁酸、胆汁酸ダイマーおよび多量体；または
ＮＴＣＰの非天然基質
薬物、例えばエゼチミブ、イルベサルタン、ロシグリタゾン、ザフィルルカスト、ＴＲＩＡＣ、スルファサラジン等；
から選択される。
【0036】
非天然基質は、Ｄｏｎｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（２０１７）にさらに記載されている。
【0037】
好ましくは、ＮＴＣＰ基質部分（ｂ）は、
コール酸（ＣＡ：ｃｈｏｌａｔｅ）；ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ：ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）；
リトコール酸（ＬＣＡ：ｌｉｔｈｏｃｈｏｌａｔｅ）；
タウロコール酸（ＴＣＡ：ｔａｕｒｏｃｈｏｌａｔｅ）
グリココール酸
タウロデオキシコール酸（ＴＤＣＡ：ｔａｕｒｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）
タウロケノデオキシコール酸（ＴＣＤＣ：ｔａｕｒｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）
タウロウロソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ：ｔａｕｒｏｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）
等の
タウリン－またはグリシンコンジュゲート胆汁酸およびその塩
（タウリン－またはグリシンコンジュゲートジヒドロキシおよびトリヒドロキシ胆汁酸塩）；
硫酸抱合型胆汁酸およびその塩；
ＵＤＣＡ－ＵＤＣＡ
コール酸（ＣＡ：ｃｈｏｌａｔｅ）；ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ：ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）；
リトコール酸（ＬＣＡ：ｌｉｔｈｏｃｈｏｌａｔｅ）；
タウロコール酸（ＴＣＡ：ｔａｕｒｏｃｈｏｌａｔｅ）
グリココール酸
タウロデオキシコール酸（ＴＤＣＡ：ｔａｕｒｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）
タウロケノデオキシコール酸（ＴＣＤＣ：ｔａｕｒｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）
タウロウロソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ：ｔａｕｒｏｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）
等の
タウリン－またはグリシンコンジュゲート胆汁酸およびその塩
（タウリン－またはグリシンコンジュゲートジヒドロキシおよびトリヒドロキシ胆汁酸塩）；
硫酸抱合型胆汁酸およびその塩；
ＵＤＣＡ－ＵＤＣＡ
【0038】
【化9】
【0039】
等のウルソデオキシコール酸のダイマー、
またはビス（５β－コラン－２４－オイック酸３β－イル）ジエチレングリコール（例えばＧｏｕｉｎ ａｎｄ Ｚｈｕ，１９９６参照）
またはビス（５β－コラン－２４－オイック酸３β－イル）ジエチレングリコール（例えばＧｏｕｉｎ ａｎｄ Ｚｈｕ，１９９６参照）
【0040】
【化10】
【0041】
；
ＣＡ－ＴＵＤＣＡ
ＣＡ－ＴＵＤＣＡ
【0042】
【化11】
【0043】
等のタウロウロソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）を含むダイマー；
【0044】
ＣＡ－ＵＤＣＡ
【0045】
【化12】
【0046】
等の、胆汁酸の混合ダイマー；
等のモノマーおよび重合体胆汁酸から選択される、胆汁酸を含む。
等のモノマーおよび重合体胆汁酸から選択される、胆汁酸を含む。
【0047】
＜（ａ）および（ｂ）の結合＞
コンジュゲート化合物において、ペプチド部分（ａ）およびＮＴＣＰ基質部分（ｂ）は、互いに、好ましくはリンカーまたはアミノ酸側鎖を介して、共有結合している。
コンジュゲート化合物において、ペプチド部分（ａ）およびＮＴＣＰ基質部分（ｂ）は、互いに、好ましくはリンカーまたはアミノ酸側鎖を介して、共有結合している。
【0048】
胆汁酸部分の結合部位は、好ましくは、胆汁酸部分のカルボン酸基またはスルホン酸基である。
【0049】
結合はまた、胆汁酸部分の環構造を介しても可能である。
【0050】
好ましくは、胆汁酸は、ステロイド骨格の環Ａの３－ヒドロキシル基を介してペプチド部分（ａ）に結合していない。
【0051】
胆汁酸部分（ｂ）は、好ましくは、リジン（Ｋ）の側鎖に結合している。該実施形態において、ペプチド部分は、リジンへのリンカーとして働くための、Ｄ－チロシン（ｙ）等の追加のＤ－アミノ酸を含み得る。
【0052】
好ましいコンジュゲート化合物は：
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｄ）、
より好ましくは
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｂ）
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｂ）
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｂ）
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｂ）
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｂ）
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｂ）
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｂ）
である。
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｄ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｂ）、
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｋ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｄ）、
より好ましくは
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｂ）
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＣＡ（遺伝子型Ｂ）
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＬＣＡ（遺伝子型Ｂ）
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｂ）
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－ＵＤＣＡ（遺伝子型Ｂ）
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－Ｋ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｂ）
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１－ｙＫ－ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２（遺伝子型Ｂ）
である。
【0053】
【表1】
【0054】
胆汁酸部分（ｂ）は、好ましくは、リジン（Ｋ）の側鎖に結合している。ある実施形態において、アミノ酸置換が行われて、リジン（Ｋ）がペプチド部分（ａ）のアミノ酸配列に導入される。
【0055】
かかるアミノ酸置換に好ましい位置は：
である。
【化13】
【化14】
【化15】
【化16】
【0056】
好ましい環状コンジュゲート化合物の例は：
Ｍｙｒ－シクロ－［ＨＢＶｐｒｅＳ２－２１（Ｂ）］－ｙＫ （配列番号２）
ｍｙｒ－シクロ Ｃ［ＧＴＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰｙＫ］Ｃ
Ｍｙｒ－シクロ－［ＨＢＶｐｒｅＳ２－２１（Ｂ）］－Ｋ （配列番号２）
ｍｙｒ－シクロ Ｃ［ＧＴＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＫ］Ｃ
Ｍｙｒ－シクロ－［ＨＢＶｐｒｅＳ２－２１（Ｂ）］－ｋ （配列番号２）
ｍｙｒ－シクロ Ｃ［ＧＴＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰｋ］Ｃ
Ｍｙｒ－シクロ－［ＨＢＶｐｒｅＳ２－２１（Ｄ）］－ｙＫ （配列番号４）
ｍｙｒ－シクロ Ｃ［ＧＱＮＬＳＴＳＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰｙＫ］Ｃ
Ｍｙｒ－シクロ－［ＨＢＶｐｒｅＳ２－２１（Ｄ）］－Ｋ （配列番号４）
ｍｙｒ－シクロ Ｃ［ＧＱＮＬＳＴＳＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＫ］Ｃ
Ｍｙｒ－シクロ－［ＨＢＶｐｒｅＳ２－２１（Ｄ）］－ｋ （配列番号４）
ｍｙｒ－シクロ Ｃ［ＧＱＮＬＳＴＳＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰｋ］Ｃ
である。
Ｍｙｒ－シクロ－［ＨＢＶｐｒｅＳ２－２１（Ｂ）］－ｙＫ （配列番号２）
ｍｙｒ－シクロ Ｃ［ＧＴＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰｙＫ］Ｃ
Ｍｙｒ－シクロ－［ＨＢＶｐｒｅＳ２－２１（Ｂ）］－Ｋ （配列番号２）
ｍｙｒ－シクロ Ｃ［ＧＴＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＫ］Ｃ
Ｍｙｒ－シクロ－［ＨＢＶｐｒｅＳ２－２１（Ｂ）］－ｋ （配列番号２）
ｍｙｒ－シクロ Ｃ［ＧＴＮＬＳＶＰＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰｋ］Ｃ
Ｍｙｒ－シクロ－［ＨＢＶｐｒｅＳ２－２１（Ｄ）］－ｙＫ （配列番号４）
ｍｙｒ－シクロ Ｃ［ＧＱＮＬＳＴＳＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰｙＫ］Ｃ
Ｍｙｒ－シクロ－［ＨＢＶｐｒｅＳ２－２１（Ｄ）］－Ｋ （配列番号４）
ｍｙｒ－シクロ Ｃ［ＧＱＮＬＳＴＳＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰＫ］Ｃ
Ｍｙｒ－シクロ－［ＨＢＶｐｒｅＳ２－２１（Ｄ）］－ｋ （配列番号４）
ｍｙｒ－シクロ Ｃ［ＧＱＮＬＳＴＳＮＰＬＧＦＦＰＤＨＱＬＤＰｋ］Ｃ
である。
【0057】
【表2】
【0058】
＜コンジュゲート化合物のさらなる部分＞
本発明のコンジュゲート化合物は、
薬物またはそれらのそれぞれのプロドラッグ；
タグ；
蛍光色素、放射性同位体および造影剤等の標識；
組換えウイルス；
薬物、プロドラッグまたは標識のための担体またはデポー；
免疫原性エピトープ；
ホルモン；
阻害剤；
毒素
等の
１つまたは複数のさらなる部分を含み得る。
本発明のコンジュゲート化合物は、
薬物またはそれらのそれぞれのプロドラッグ；
タグ；
蛍光色素、放射性同位体および造影剤等の標識；
組換えウイルス；
薬物、プロドラッグまたは標識のための担体またはデポー；
免疫原性エピトープ；
ホルモン；
阻害剤；
毒素
等の
１つまたは複数のさらなる部分を含み得る。
【0059】
該１つまたは複数のさらなる部分は、好ましくは、リンカー、スペーサーおよび／またはアンカー基、
例えば切断可能リンカー
等を介して共有結合している。
例えば切断可能リンカー
等を介して共有結合している。
【0060】
本発明者らは、本発明のコンジュゲート化合物が、ナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ／ＳＬＣ１０Ａ１）の標的化を介した、侵入阻害の二価阻害剤であることを見出した。特に：
コンジュゲートのペプチド部分は、その必須ドメインＮＰＬＧＦＸａａＰ（配列番号１）によってＮＴＣＰとアロステリックに相互作用する；
胆汁酸はＮＴＣＰの天然基質／リガンドであるため、コンジュゲートのＮＴＣＰ基質部分は、ＮＴＣＰの胆汁酸部位（基質結合部位）と相互作用する。
コンジュゲートのペプチド部分は、その必須ドメインＮＰＬＧＦＸａａＰ（配列番号１）によってＮＴＣＰとアロステリックに相互作用する；
胆汁酸はＮＴＣＰの天然基質／リガンドであるため、コンジュゲートのＮＴＣＰ基質部分は、ＮＴＣＰの胆汁酸部位（基質結合部位）と相互作用する。
【0061】
広範な変異解析によって、本発明者らは、ペプチド（ＮＰＬＧＦ（Ｆ／Ｌ）Ｐ）の必須結合部位が胆汁酸結合部位と直接相互作用しないことを示した。本発明者らは、胆汁酸結合が、新しい基質の必須ペプチド性部分との相互作用を排除しないことを証明した。特に、両方の結合部位のブロックは、受容体のより遅い回転率をもたらし、従って肝細胞の表面の受容体の半減期を延長する。このことと、ペプチドによる胆汁酸塩基質の固定によって、両方の部分の相乗効果がもたらされる。
【0062】
＜医薬組成物および医療用途＞
上で概説したように、本発明は、医薬組成物を提供する。
上で概説したように、本発明は、医薬組成物を提供する。
【0063】
本発明の医薬組成物は、
（ｉ）少なくとも１つの本発明のコンジュゲート化合物、
（ｉｉ）場合により、薬学的に許容され得る担体および／または賦形剤
を含む。
（ｉ）少なくとも１つの本発明のコンジュゲート化合物、
（ｉｉ）場合により、薬学的に許容され得る担体および／または賦形剤
を含む。
【0064】
上述したように、本発明は、医薬品における使用のための、本発明のコンジュゲート化合物または本発明の医薬組成物を提供する。
【0065】
よって、本発明のコンジュゲート化合物または本発明の医薬組成物は、疾患の診断、予防および／または処置に適しており、そのためそれらのために提供される。
【0066】
上述したように、本発明は、ＨＢＶおよび／またはＨＤＶ感染の阻害における使用のための、本発明のコンジュゲート化合物または本発明の医薬組成物を提供する。
【0067】
上述したように、本発明は、ＨＢＶおよび／またはＨＤＶ一次感染の予防における使用のための、本発明のコンジュゲート化合物または本発明の医薬組成物を提供する。
【0068】
上述したように、本発明は、ＨＢＶおよび／またはＨＤＶ侵入阻害剤としての使用のための、本発明のコンジュゲート化合物または本発明の医薬組成物を提供する。
【0069】
好ましくは、任意の遺伝子型のＨＢＶ感染が阻害または予防される。
【0070】
好ましくは、任意の遺伝子型のＨＤＶ、すなわち任意のタイプのＨＢＶエンベロープタンパク質を有するＨＤＶの、ＨＤＶ感染が阻害または予防される。
【0071】
好ましくは、侵入阻害は、ナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ／ＳＬＣ１０Ａ１）の標的化、すなわち「ＮＴＣＰ標的化」を介する。
【0072】
上述したように、ある実施形態において、コンジュゲート化合物はさらに、
（ｉ）特に二価阻害剤として（上述したように）、ＮＴＣＰに対応し、阻害し、かつ
（ｉｉ）ＮＴＣＰとの相互作用によって肝臓を標的化し、その後にヌクレオカプシドに第二の活性ドメインを作用させることを介して、ウイルス複製に干渉する、
組み合わせ阻害剤として作用し得る。
（ｉ）特に二価阻害剤として（上述したように）、ＮＴＣＰに対応し、阻害し、かつ
（ｉｉ）ＮＴＣＰとの相互作用によって肝臓を標的化し、その後にヌクレオカプシドに第二の活性ドメインを作用させることを介して、ウイルス複製に干渉する、
組み合わせ阻害剤として作用し得る。
【0073】
上述したように、本発明は、肝疾患または肝臓の状態の診断、予防および／または処置における使用のための、本発明のコンジュゲート化合物または本発明の医薬組成物を提供する。
【0074】
ある実施形態において、肝疾患または肝臓の状態は、肝炎、硬変、ヘモクロマトーシス、好ましくはＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧおよびＨ型肝炎ウイルスによって引き起こされた肝炎または複数種のウイルスによって引き起こされる同時肝炎（ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）から選択される。
【0075】
ある実施形態において、肝疾患または肝障害は、熱帯病、マラリア、住血吸虫症、リーシュマニア症、ウィルソン病等の、ウイルスまたは非ウイルス病原体の肝臓期を伴う疾患である。
【0076】
ある実施形態において、肝疾患または肝障害は、肝腫瘍、好ましくは肝細胞がん（ＨＣＣ）である。
【0077】
ある実施形態において、肝疾患または肝障害は、胆汁経路内の胆汁酸塩蓄積／移植後関連肝機能障害に関する、肝移植後の移植後合併症である。
【0078】
ある実施形態において、肝疾患または肝臓の状態は、肝細胞への化合物のナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）仲介輸送に関するか、または疾患もしくは状態の部位もしくは位置への薬物もしくは標識の化合物の送達を必要とする。
【0079】
好ましくは、該肝疾患または肝臓の状態は、
肝内胆汁うっ滞、
肝臓の中毒（肝臓毒素による）／肝毒性、
薬物性胆汁うっ滞性肝疾患、
高脂血症、
肝炎後胆汁うっ滞、
メタボリックシンドローム、
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ：ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）
糖原病
から選択される肝臓関連代謝疾患（ｌｉｖｅｒ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ）である。
肝内胆汁うっ滞、
肝臓の中毒（肝臓毒素による）／肝毒性、
薬物性胆汁うっ滞性肝疾患、
高脂血症、
肝炎後胆汁うっ滞、
メタボリックシンドローム、
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ：ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）
糖原病
から選択される肝臓関連代謝疾患（ｌｉｖｅｒ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ）である。
【0080】
好ましくは、ＮＴＣＰを介して肝細胞に輸送される化合物は、好ましくは胆汁酸、ステロイド、コンジュゲートおよび非コンジュゲート甲状腺ホルモン、肝臓毒素、タウロコール酸に共有結合している化合物、ブロモスルホフタレイン、薬物である。
【0081】
ある実施形態において、本発明のコンジュゲート化合物または本発明の医薬組成物は、
免疫調節剤（ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ）、
例えば、インターフェロン（ＩＦＮ：ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ）、インターフェロンλ、
および／または
ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ－５もしくはＴＬＲのアゴニストもしくはアンタゴニスト、
例えば、イナリギビル、ＴＬＲ－７アゴニスト、ＴＬＲ－８アゴニスト；
等の別の治療剤との併用療法において使用される。
免疫調節剤（ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ）、
例えば、インターフェロン（ＩＦＮ：ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ）、インターフェロンλ、
および／または
ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ－５もしくはＴＬＲのアゴニストもしくはアンタゴニスト、
例えば、イナリギビル、ＴＬＲ－７アゴニスト、ＴＬＲ－８アゴニスト；
等の別の治療剤との併用療法において使用される。
【0082】
研究者らによる最近のインビトロ研究および臨床試験（Ｍｙｒ－２０３）研究から、ＩＦＮが侵入阻害剤と強い相乗作用を示すことを示した。ＨＤＶ感染症の場合、ＩＦＮは、ミルクルデックスＢによってブロックし得ないＨＤＶ－ＲＮＡの有糸分裂仲介細胞間拡散（ｍｉｔｏｓｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｔｏ ｃｅｌｌ ｓｐｒｅａｄ）を予防する。従って、両方の薬物の投与は、ウイルス血症のより強い抑制を同時に示す。さらに、ミルクルデックスによる侵入阻害は、免疫変調成分ＩＦＮが適応免疫系の再構築を助け（Ｍｙｒ－２０３試験、Ｗｅｄｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１９；Ｗｅｄｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１８参照）、ＨＢＶおよびＨＤＶ排除を助けることを可能にすることが示されている。
【0083】
本発明者らは、ナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）を、標的として、ならびに、肝細胞への（胆汁酸等の）化合物のＮＴＣＰ仲介輸送に関する肝疾患または肝臓の状態等の、ある肝疾患または肝臓の状態、好ましくは肝臓関連代謝疾患（例えば、肝内胆汁うっ滞、肝臓の中毒（肝臓毒素による）／肝毒性、薬物性胆汁うっ滞性肝疾患、高脂血症等）および心血管疾患の予防および／または処置における使用のために、同定および記載している。全体が本明細書の一部をなす、ＷＯ２０１４／０７２５２４およびＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０６６２６２参照。
【0084】
「肝臓関連代謝疾患」は、本明細書中で使用される場合、脂質および胆汁酸の肝臓代謝の影響を受ける、内臓肥満、糖尿病および脂質異常症を含む代謝障害をいう。
【0085】
一般に、「胆汁うっ滞」は、肝細胞から胆管へ胆汁成分が分泌できないか、または胆汁が肝臓から十二指腸へ流れられない状態であり、肝細胞内での肝細胞胆汁酸蓄積をもたらす。
【0086】
「胆汁うっ滞」または「肝内胆汁うっ滞」は、本明細書中で使用される場合、胆管側膜の胆汁酸塩ポンプ（ＢＳＥＰまたはＭＲＰのような）の不十分な発現および／または活性に関する肝細胞胆汁酸蓄積の肝内毒作用をいう。
【0087】
「肝炎後胆汁うっ滞」は、本明細書中で使用される場合、大胆管の閉塞による胆汁うっ滞性肝疾患をいう。
【0088】
「肝臓の中毒」または「肝毒性」または「中毒性肝疾患」は、本明細書中で使用される場合、胆汁酸蓄積と無関係な薬物の毒作用をいう。これらの薬物は、ＮＴＣＰ仲介輸送を介して肝細胞に浸透し、ミトコンドリアに損傷を与えることによって、またはチトクロムＰ－４５０系において酵素を活性化し、酸化ストレスをもたらすことによって、いくつかの直接の毒作用を引き起こす。
【0089】
「薬物性胆汁うっ滞性肝疾患」は、本明細書中で使用される場合、胆汁酸塩排出ポンプ（ＢＳＥＰ：ｂｉｌｅ ｓａｌｔ ｅｘｐｏｒｔ ｐｕｍｐ）に対する薬物効果による、肝細胞からの胆汁酸の排出の阻害をいう。
【0090】
薬物性胆汁うっ滞は、リファマイシン、シクロスポリンＡ、リファマイシンＳＶ、ボセンタン、トログリタゾン、エリスロマイシンエストレートおよびグリベンクラミド等の、ＢＳＥＰを阻害するいくつかの薬物によって引き起こされ得る（Ｆａｔｔｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１；Ｆｕｎｋ ｅｔ ａｌ．，２００１；Ｆｕｎｋ ｅｔ ａｌ．，２００１；Ｓｔｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０００；Ｄａｗｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｍｏｒｇａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｏｇｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。ＢＳＥＰは、トランスポーターのＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ：ＡＴＰ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ）ファミリーの一員であり（ＢＳＥＰはまた、ＡＢＣＢ１１として同定される）、胆汁酸を肝細胞の外に排出して、そのためこれらの細胞に対するその毒性を減少させるプロセスに関与する。ＢＳＥＰを介した胆汁酸の排出ができなくなるので、上述の薬物は、過剰な胆汁酸蓄積の毒作用を引き起こす。リポペプチドベースの化合物（ＭｙｒＢ等）およびＮＴＣＰを介したＮＴＣＰ仲介胆汁酸取り込みの阻害は、ＢＳＥＰ阻害を相殺し、それによって肝毒性を予防するか、または、処置および／もしくは診断に適している。
【0091】
「高脂血症」（または高リポタンパク血症、または高脂血症）は、血中の、異常に上昇したレベルの任意または全ての脂質および／またはリポタンパク質を伴う。
【0092】
高脂血症は、原発性および二次性サブタイプに分けられる。原発性高脂血症は、通常、遺伝的原因によるが（受容体タンパク質の変異等）、二次性高脂血症は、糖尿病等の、他の根底にある原因によって起こる。脂質およびリポタンパク質の異常は、一般集団において一般的であり、アテローム性動脈硬化に対するその影響によって、心血管疾患の、変更可能な危険因子と見なされている。
【0093】
「高コレステロール血症（ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ）」（または高コレステロール血症（ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉａ））は、血中の高レベルのコレステロールの存在である。これは「高脂血症」の一形態である。
【0094】
「高脂血症」は、本明細書中で使用される場合、好ましくは、上昇したＬＤＬコレステロール、減少したＨＤＬコレステロール、上昇したトリグリセリド、高血圧をもたらす詰まった動脈、心血管疾患（ＣＶＤ：ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、心臓発作および脳卒中を含む、高コレステロール血症をいう。
【0095】
「メタボリックシンドローム」は、以下の５つの医学的状態：腹部（中心性）肥満、血圧上昇、空腹時血糖値上昇、高血清トリグリセリドおよび低い高密度コレステロール（ＨＤＬ）レベルのうちの３つの同時発生（ｃｏ－ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ）によって診断される、エネルギー利用および貯蔵の障害をいう。メタボリックシンドロームは、心血管疾患、特に心不全、および糖尿病を発症するリスクを高める。メタボリックシンドロームはまた、メタボリックシンドロームＸ、心血管代謝症候群、シンドロームＸ、インスリン抵抗性症候群、リーベン症候群およびＣＨＡＯＳとしても公知である。
【0096】
「非アルコール性脂肪性肝疾患」（ＮＡＦＬＤ）は、過剰なアルコール摂取によらずに肝臓に脂肪が堆積した場合（脂肪症）に起こる、脂肪肝の１つの原因をいう。これはインスリン抵抗性およびメタボリックシンドロームに関する。非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ：ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）は、ＮＡＦＬＤの最も極端な形態であり、未知の原因の肝臓の硬変の主な原因と見なされている。
【0097】
好ましくは、ＮＴＣＰ仲介輸送は、本発明のコンジュゲート化合物によって減少するか、またはブロックされる。
【0098】
上述したように、ある実施形態において、コンジュゲート化合物は、
（ｉ）特に二価阻害剤として（上述したように）ＮＴＣＰに対応し、阻害し、かつ
（ｉｉ）ＮＴＣＰとの相互作用によって肝臓を標的化し、およびその後にヌクレオカプシドに第二の活性ドメインを作用させることを介して、ウイルス複製に干渉する
組み合わせ阻害剤として作用し得る。
（ｉ）特に二価阻害剤として（上述したように）ＮＴＣＰに対応し、阻害し、かつ
（ｉｉ）ＮＴＣＰとの相互作用によって肝臓を標的化し、およびその後にヌクレオカプシドに第二の活性ドメインを作用させることを介して、ウイルス複製に干渉する
組み合わせ阻害剤として作用し得る。
【0099】
＜投与の経路＞
好ましくは、本発明のコンジュゲート化合物または医薬組成物の投与の経路は、経口、皮下、静脈内、経鼻、筋肉内、経皮、吸入、座薬によるものから選択される。
好ましくは、本発明のコンジュゲート化合物または医薬組成物の投与の経路は、経口、皮下、静脈内、経鼻、筋肉内、経皮、吸入、座薬によるものから選択される。
【0100】
好ましい投与または適用の経路は経口である。
【0101】
経鼻投与または適用のための好ましい実施形態は、鼻内噴霧である。
【0102】
＜治療有効量＞
本発明のコンジュゲート化合物または医薬組成物は、治療有効量の該環状ペプチドまたは該医薬組成物を含むように提供される。
本発明のコンジュゲート化合物または医薬組成物は、治療有効量の該環状ペプチドまたは該医薬組成物を含むように提供される。
【0103】
「治療有効量」の本発明のコンジュゲート化合物または医薬組成物は、ＮＴＣＰ受容体機能を阻害するのに十分な量をいう。さらに、該「治療有効量」は、それぞれの適用、および阻害、処置またはワクチン接種の所望の結果に依存する。
【0104】
（ｉｉ）例えば胆汁酸、薬物等のＮＴＣＰ仲介輸送の阻害のため等の、ＮＴＣＰの飽和を必要とする使用（例えば、患者あたり１ｍｇまたは１～２ｍｇ／患者）と比較して、
（ｉ）抗ウイルス使用または侵入阻害のための異なる治療有効量（例えば、患者あたり０．０１～０．５ｍｇ、好ましくは０．１～１ｍｇ／患者）が必要である。
（ｉ）抗ウイルス使用または侵入阻害のための異なる治療有効量（例えば、患者あたり０．０１～０．５ｍｇ、好ましくは０．１～１ｍｇ／患者）が必要である。
【0105】
ある実施形態において、該「治療有効量」の本発明のコンジュゲート化合物または医薬組成物は、ＨＢＶおよび／もしくはＨＤＶ感染を阻害する；ＨＢＶおよび／もしくはＨＤＶ一次感染を予防する；Ｂ型肝炎および／もしくはＤを処置ならびに／またはインビボでＨＢＶおよび／もしくはＨＤＶのワクチン接種および／または侵入阻害するのに十分な量をいう。
【0106】
好ましい治療有効量は、体重１ｋｇあたり１０μｇ～１ｍｇ、好ましくは１０μｇ～１００μｇの範囲である。
【0107】
好ましくは、治療有効量は、１日あたりに患者あたり約０．０１ｍｇ～約５０ｍｇ、好ましくは１日あたりに患者あたり約０．１ｍｇ～約１０ｍｇの範囲もしくは１日あたりに１ｋｇあたり１００ｎｍｏｌ～１ｋｇあたり２μｍｏｌの範囲の用量で患者に適用されるか、または１ｋｇあたり１０ｐｍｏｌ～体重１ｋｇあたり２０μｍｏｌの範囲の用量で患者に適用される。
【0108】
約１０ｎＭの、使用される環状ペプチドのＩＣ５０値の場合、好ましい治療有効量は、体重１ｋｇあたり約１００μｇであるか、または患者あたり１～５ｍｇの範囲である。患者あたり１～５ｍｇの範囲の好ましい治療有効量が、１日１回、または他の実施形態においては２～３日毎に１回のみ、投与され得る。
【0109】
当業者は、適切な治療有効量を決定することができよう。
【0110】
＜疾患の診断、予防および／または処置の方法＞
上述したように、本発明は、ＨＢＶおよび／もしくはＨＤＶ感染の阻害ならびに／またはＨＢＶおよび／もしくはＨＤＶ一次感染の予防のための方法を提供する。
上述したように、本発明は、ＨＢＶおよび／もしくはＨＤＶ感染の阻害ならびに／またはＨＢＶおよび／もしくはＨＤＶ一次感染の予防のための方法を提供する。
【0111】
該方法は、治療有効量の本発明のコンジュゲート化合物または本発明の医薬組成物の投与を含む。
【0112】
好ましくは、任意の遺伝子型のＨＢＶ感染が、阻害または予防される。
【0113】
好ましくは、任意の遺伝子型のＨＤＶ、すなわち任意のタイプのＨＢＶエンベロープタンパク質を有するＨＤＶの、ＨＤＶ感染が阻害または予防される。
【0114】
上で概説したように、本発明は、肝疾患または肝臓の状態の、診断、予防および／または処置のための方法を提供する。
【0115】
該方法は、治療有効量の本発明のコンジュゲート化合物または本発明の医薬組成物の投与を含む。
【0116】
ある実施形態において、肝疾患または肝臓の状態は、肝炎、硬変、ヘモクロマトーシス、好ましくはＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧおよびＨ型肝炎ウイルスによって引き起こされた肝炎または複数種のウイルスによって引き起こされる同時肝炎から選択される。
【0117】
ある実施形態において、肝疾患または肝障害は、熱帯病、マラリア、住血吸虫症、リーシュマニア症、ウィルソン病等の、ウイルスまたは非ウイルス病原体の肝臓期を伴う疾患である。
【0118】
ある実施形態において、肝疾患または肝障害は、肝腫瘍、好ましくは肝細胞がん（ＨＣＣ）である。
【0119】
ある実施形態において、肝疾患または肝障害は、胆汁経路内の胆汁酸塩蓄積に関する肝移植後の移植後合併症である。
【0120】
ある実施形態において、肝疾患または肝臓の状態は、肝細胞への化合物のナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）仲介輸送に関するか、または疾患もしくは状態の部位もしくは位置への薬物もしくは標識の化合物の送達を必要とし、
好ましくは、
肝内胆汁うっ滞、
肝臓の中毒（肝臓毒素による）／肝毒性、
薬物性胆汁うっ滞性肝疾患、
高脂血症、
肝炎後胆汁うっ滞、
メタボリックシンドローム、
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）
糖原病
から選択される肝臓関連代謝疾患であり、
ここで、ＮＴＣＰを介して肝細胞に輸送される化合物は、好ましくは胆汁酸、ステロイド、コンジュゲートおよび非コンジュゲート甲状腺ホルモン、肝臓毒素、タウロコール酸に共有結合している化合物、ブロモスルホフタレイン、薬物である。
好ましくは、
肝内胆汁うっ滞、
肝臓の中毒（肝臓毒素による）／肝毒性、
薬物性胆汁うっ滞性肝疾患、
高脂血症、
肝炎後胆汁うっ滞、
メタボリックシンドローム、
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）
糖原病
から選択される肝臓関連代謝疾患であり、
ここで、ＮＴＣＰを介して肝細胞に輸送される化合物は、好ましくは胆汁酸、ステロイド、コンジュゲートおよび非コンジュゲート甲状腺ホルモン、肝臓毒素、タウロコール酸に共有結合している化合物、ブロモスルホフタレイン、薬物である。
【0121】
ある実施形態において、方法は、
免疫調節剤、
例えば、インターフェロン（ＩＦＮ）、インターフェロンλ、
および／または
ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ－５もしくはＴＬＲのアゴニストもしくはアンタゴニスト、
例えば、イナリギビル、ＴＬＲ－７アゴニスト、ＴＬＲ－８アゴニスト；
等との、別の治療剤との併用療法を含む。
免疫調節剤、
例えば、インターフェロン（ＩＦＮ）、インターフェロンλ、
および／または
ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ－５もしくはＴＬＲのアゴニストもしくはアンタゴニスト、
例えば、イナリギビル、ＴＬＲ－７アゴニスト、ＴＬＲ－８アゴニスト；
等との、別の治療剤との併用療法を含む。
【0122】
本発明の方法において、および上述したように、「治療有効量」は、それぞれの適用、および阻害、処置またはワクチン接種の所望の結果に依存する。
【0123】
（ｉｉ）ＮＴＣＰの飽和を必要とする使用（例えば、患者あたり１ｍｇまたは１～２ｍｇ／患者）と比較して、
（ｉ）抗ウイルス使用または侵入阻害のための異なる治療有効量（例えば、患者あたり０．０１～０．５ｍｇ、好ましくは０．１～１ｍｇ／患者）が必要である。
（ｉ）抗ウイルス使用または侵入阻害のための異なる治療有効量（例えば、患者あたり０．０１～０．５ｍｇ、好ましくは０．１～１ｍｇ／患者）が必要である。
【0124】
ある実施形態において、および上述したように、治療有効量は、好ましくは患者あたり約０．０１ｍｇ～約５０ｍｇ、好ましくは患者あたり約１ｍｇ～約１０ｍｇの範囲であるか、
またはここで、コンジュゲート化合物は、好ましくは１ｋｇあたり１０ｐｍｏｌ～体重１ｋｇあたり２０μｍｏｌの範囲の用量で患者に投与される。
またはここで、コンジュゲート化合物は、好ましくは１ｋｇあたり１０ｐｍｏｌ～体重１ｋｇあたり２０μｍｏｌの範囲の用量で患者に投与される。
【0125】
本発明の方法において、および上述したように、投与の経路は、好ましくは、経口、皮下、静脈内、経鼻、筋肉内、経皮、吸入、座薬によるものから選択される。
【0126】
以下の実施例および図面は、本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されない。
【図面の簡単な説明】
【0127】
【図3】図３は、ＨＢＶ／ＨＤＶ感染アッセイを示す図である。胆汁酸コール酸（ＣＡ：ｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ）およびウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）とコンジュゲートされたミルクルデックスＢ（アミノ酸２～２１）の切断されたバリアントを含むコンジュゲート化合物を試験した。それらを、胆汁酸部分を含まない対照ペプチド、すなわちＨＢＶｐｒｅＳ／（－１１）－２１ｍｙｒ（遺伝子型Ｂ）、ならびに２つの胆汁酸ＣＡおよびＵＤＣＡ単独と比較した。コンジュゲート化合物は、ペプチド単独よりも有意に高い活性を示す（１～２ｎＭ対２０～１００ｎＭ）。
【図4】図４は、ＨＢＶ／ＨＤＶ感染アッセイを示す図である。ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）とコンジュゲートされた、コール酸（ＣＡ）および環状ペプチド（アミノ酸２～２１を含む）とコンジュゲートされたミルクルデックスＢ（アミノ酸２～２１）の切断されたバリアントを含むコンジュゲート化合物を試験した。それらを、胆汁酸部分を含まない対照ペプチド、すなわちＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ（遺伝子型Ｂ）と比較した。
【図5】図５は、胆汁酸モノマーおよびダイマーとコンジュゲートされた化合物のＨＢＶ／ＨＤＶ感染アッセイを示す図である。３つの化合物：ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）とコンジュゲートされた２つの化合物およびウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）２のダイマーとコンジュゲートされた１つの化合物を試験し、ここで２つの化合物は直線状にミルクルデックスＢのアミノ酸２～２１を含み、１つの化合物は環状ポリペプチドとして含む。
【図6】図６は、本発明のヨウ素１２５標識化合物のインビボ平面シンチグラフィーイメージングを示す図である。未処置のマウスにおける、注射後の示された時点での１２５Ｉ標識化合物のシンチグラフィーイメージング（平面イメージング）の時間経過。
【図7】図７は、線状ペプチド配列での胆汁酸コンジュゲートの感染阻害を示す図である。Ｈｕｈ７－ｈＮＴＣＰ細胞における種々の胆汁酸コンジュゲート、対照ペプチド、ウルソデオキシコール酸およびコール酸によるＨＤＶ感染の減少。３０分間細胞に基質を前処理させ、次いで基質およびＨＤＶとともに一晩コインキュベートした。感染の５日後に、細胞内ＥＬＩＳＡを行った（ｎ＝３）。
【実施例】
【0128】
［実施例１：ペプチド部分の固相合成］
全てのペプチドは、以前に記載されているように（Ｓｃｈｉｅｃｋ ｅｔ ａｌ．，２０１０）、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３３Ａ合成装置での自動Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ固相ペプチド合成によって合成した。酸化的条件下で環化を達成して、それぞれのジスルフィド架橋を形成した。ペプチド合成の後、ミリスチン酸をペプチドのＮ末端に結合させた。この目的のために、ＮＭＰ中のミリスチン酸（１０等量）、ＨＢＴＵ（９．５等量）およびＤＩＰＥＡ（２０等量）の溶液とともに、２．５時間、樹脂を振とうさせた。次いで、ＮＭＰおよびＤＣＭで樹脂を洗浄した。
全てのペプチドは、以前に記載されているように（Ｓｃｈｉｅｃｋ ｅｔ ａｌ．，２０１０）、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３３Ａ合成装置での自動Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ固相ペプチド合成によって合成した。酸化的条件下で環化を達成して、それぞれのジスルフィド架橋を形成した。ペプチド合成の後、ミリスチン酸をペプチドのＮ末端に結合させた。この目的のために、ＮＭＰ中のミリスチン酸（１０等量）、ＨＢＴＵ（９．５等量）およびＤＩＰＥＡ（２０等量）の溶液とともに、２．５時間、樹脂を振とうさせた。次いで、ＮＭＰおよびＤＣＭで樹脂を洗浄した。
【0129】
リジン側鎖保護基（Ａｌｏｃ）の除去のために、ＤＣＭ中の３ｍｇ Ｐｄ（ＰＰｈ３）および３０ｍｇ ＢＨ３ＮＨＭｅ２の溶液とともに、２０分間、樹脂をインキュベートした。ＤＣＭおよびＭｅＯＨで樹脂を洗浄し、次いで、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０：１）中で３０分間、２回インキュベートした。次いで、ＤＣＭおよびＥｔ２Ｏで樹脂を洗浄し、真空中で乾燥させた。
【0130】
［実施例２：胆汁酸ペプチドコンジュゲートのコンジュゲーション］
異なる胆汁酸または胆汁酸ダイマーの結合のために、樹脂をＮＭＰ中で膨らませた。次いで、ＮＭＰ中の胆汁酸（１０等量）、ＨＢＴＵ（９．５等量）およびＤＩＰＥＡ（２０等量）の溶液を加え、２．５時間振とうした。この後、樹脂をＮＭＰ、ＤＣＭおよびＥｔ２Ｏで洗浄し、真空下で乾燥させた。
異なる胆汁酸または胆汁酸ダイマーの結合のために、樹脂をＮＭＰ中で膨らませた。次いで、ＮＭＰ中の胆汁酸（１０等量）、ＨＢＴＵ（９．５等量）およびＤＩＰＥＡ（２０等量）の溶液を加え、２．５時間振とうした。この後、樹脂をＮＭＰ、ＤＣＭおよびＥｔ２Ｏで洗浄し、真空下で乾燥させた。
【0131】
コンジュゲートを９５％ ＴＦＡ／２．５％ ＴＩＳ／２．５％ Ｈ２Ｏで１時間切断し、次いで冷Ｅｔ２Ｏ中で沈殿させた。次いで、それらを分取逆相ＨＰＬＣによって精製し、分析的ＨＰＬＣ（ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ＨＰＬＣ）によって純度を確認し、その後ＬＣ－ＭＳによって解析した。
【0132】
［実施例３：ＨＤＡｇ細胞内ＥＬＩＳＡ（Ｈｕｈ７－ｈＮＴＣＰ）］
＜Ａ．材料＞
洗浄バッファー： ＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０
透過処理バッファー： ＰＢＳ＋０．２５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００
ブロッキングバッファー： ＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０＋１％ カゼイン
白色の９６ウェル細胞培養プレート： Ｇｒｅｉｎｅｒ ６５５０９８
Ａｄｖａｎｓｔａ ＥＬＩＳＡＢｒｉｇｈｔ化学発光基質（Ｂｉｏｚｙｍ ＃５４１０２５を介して注文）
過酸化水素溶液（３５％、Ｓｉｇｍａ ３４９８８７）
第１の抗体 マウスまたはウサギ抗ＨＤＡｇ（ＦＤ３Ａ７） １：３０００
第２の抗体： ペルオキシダーゼがコンジュゲートされたヤギ抗マウスまたはヤギ抗ウサギ １：５０００
＜Ａ．材料＞
洗浄バッファー： ＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０
透過処理バッファー： ＰＢＳ＋０．２５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００
ブロッキングバッファー： ＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０＋１％ カゼイン
白色の９６ウェル細胞培養プレート： Ｇｒｅｉｎｅｒ ６５５０９８
Ａｄｖａｎｓｔａ ＥＬＩＳＡＢｒｉｇｈｔ化学発光基質（Ｂｉｏｚｙｍ ＃５４１０２５を介して注文）
過酸化水素溶液（３５％、Ｓｉｇｍａ ３４９８８７）
第１の抗体 マウスまたはウサギ抗ＨＤＡｇ（ＦＤ３Ａ７） １：３０００
第２の抗体： ペルオキシダーゼがコンジュゲートされたヤギ抗マウスまたはヤギ抗ウサギ １：５０００
【0133】
＜Ｂ．手順＞
細胞を、白色９６ウェルプレート中で増殖および感染させる。
１）ＲＴで３０分間、５０μｌの４％ ＰＦＡで細胞を固定
２）ＰＢＳ（洗浄バッファーではない）で２回洗浄
３）ＲＴで３０分間、１００μｌの透過処理バッファーで透過処理
４）ＲＴで３０分間、１００μｌのブロッキングバッファーでブロック
５）ＲＴで１時間、振とうしながら、ブロッキングバッファー中に希釈した１００μｌの一次抗体（１：３０００）とともにインキュベート
６）３×１分間、２００μｌで洗浄（洗浄バッファー）
７）ＲＴで１０分間、１００μｌの３％（Ｈｕｈ７由来細胞）過酸化水素溶液（ＰＢＳ中のストックから３％になるように１：１２）とともにインキュベート
８）４×１分間、２００μｌで洗浄（洗浄バッファー）
９）ＲＴで１時間、振とうしながら、ブロッキングバッファー中１：５０００の１００μｌの第二の抗体とともにインキュベート
１０）３×１分間、２００μｌで洗浄（洗浄バッファー）＋２×１０分間、２００μｌで洗浄（洗浄バッファー）＋１×１０分間、２００μｌで洗浄（透過処理バッファー）［非常に重要である］
１１）５０μｌの発光基質を加え（製造業者のプロトコルに従って混合する）、ピペッティングの後、直接プレートリーダーで測定。
（促進されたルシフェラーゼプロトコル（ｅｎｈａｎｃｅｄ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｐｒｏｔｏｃｏｌ）、０．１秒測定）
細胞を、白色９６ウェルプレート中で増殖および感染させる。
１）ＲＴで３０分間、５０μｌの４％ ＰＦＡで細胞を固定
２）ＰＢＳ（洗浄バッファーではない）で２回洗浄
３）ＲＴで３０分間、１００μｌの透過処理バッファーで透過処理
４）ＲＴで３０分間、１００μｌのブロッキングバッファーでブロック
５）ＲＴで１時間、振とうしながら、ブロッキングバッファー中に希釈した１００μｌの一次抗体（１：３０００）とともにインキュベート
６）３×１分間、２００μｌで洗浄（洗浄バッファー）
７）ＲＴで１０分間、１００μｌの３％（Ｈｕｈ７由来細胞）過酸化水素溶液（ＰＢＳ中のストックから３％になるように１：１２）とともにインキュベート
８）４×１分間、２００μｌで洗浄（洗浄バッファー）
９）ＲＴで１時間、振とうしながら、ブロッキングバッファー中１：５０００の１００μｌの第二の抗体とともにインキュベート
１０）３×１分間、２００μｌで洗浄（洗浄バッファー）＋２×１０分間、２００μｌで洗浄（洗浄バッファー）＋１×１０分間、２００μｌで洗浄（透過処理バッファー）［非常に重要である］
１１）５０μｌの発光基質を加え（製造業者のプロトコルに従って混合する）、ピペッティングの後、直接プレートリーダーで測定。
（促進されたルシフェラーゼプロトコル（ｅｎｈａｎｃｅｄ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｐｒｏｔｏｃｏｌ）、０．１秒測定）
【0134】
＜Ｂ．結果＞
結果を図３、４および５に示す（遺伝子型Ｂ配列）。以下のＩＣ５０値を測定した：
ＵＤＣＡ： ７９μＭ
ＣＡ： １１５μＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ： ６２．８ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－ＣＡ： ７．２７ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－ＵＤＣＡ： ８．４５ｎＭ
シクロ２－２１－ＵＤＣＡ： １０．１ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２： ３．５５ｎＭ
結果を図３、４および５に示す（遺伝子型Ｂ配列）。以下のＩＣ５０値を測定した：
ＵＤＣＡ： ７９μＭ
ＣＡ： １１５μＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ： ６２．８ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－ＣＡ： ７．２７ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－ＵＤＣＡ： ８．４５ｎＭ
シクロ２－２１－ＵＤＣＡ： １０．１ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ）２： ３．５５ｎＭ
【0135】
さらなる結果を図７～９に示す。
【0136】
図７および９に示される実験において、以下のＩＣ５０値を測定した：
ＵＤＣＡ： ７９μＭ
ＣＡ： １１５μＭ
ＭｙｒＢ－ＵＤＣＡ： １．５ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ（コンセンサス）： ７０．３ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－ＣＡ： １２．５ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－ＵＤＣＡ： ９．２ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－ＬＣＡ： ７．５ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－ＵＤＣＡ： ９．２ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ－ダイマー）： １２．７ｎＭ
ＵＤＣＡ： ７９μＭ
ＣＡ： １１５μＭ
ＭｙｒＢ－ＵＤＣＡ： １．５ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ（コンセンサス）： ７０．３ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－ＣＡ： １２．５ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－ＵＤＣＡ： ９．２ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－ＬＣＡ： ７．５ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－ＵＤＣＡ： ９．２ｎＭ
ＨＢＶｐｒｅＳ／２－２１ｍｙｒ－（ＵＤＣＡ－ダイマー）： １２．７ｎＭ
【0137】
環状化合物についてのＩＣ５０値は、図８に示されるように、全て１１ｎＭ～１００ｎＭの範囲であった。
【0138】
［実施例４：平面イメージング］
クロラミンＴ法を使用して、ペプチドのチロシン部分で、ヨウ素１２５での放射標識を行った。
クロラミンＴ法を使用して、ペプチドのチロシン部分で、ヨウ素１２５での放射標識を行った。
【0139】
５μＬの１ｍＭペプチド／ペプチドコンジュゲート溶液を、２５μＬのリン酸バッファー（０．２５Ｍ、ｐＨ７．５）に加えた。０．０５Ｍ ＮａＯＨ中の１～２０ＭＢｑのヨウ素１２５を加え、５μＬの新しく調製したクロラミンＴ水溶液（２．８ｍｇ／ｍＬ）を加えることによって、標識反応を開始させた。３０秒間ボルテックスした後、１０μＬの飽和メチオニン水溶液を加えることによって標識反応を停止させた。水中およびアセトニトリル中の０．１％ ＴＦＡの直線勾配で溶出されたＣｈｒｏｍｏｌｉｔｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ＲＰ－１８ｅカラム（１００×４．６ｍｍ；Ｍｅｒｃｋ）を使用した半分取ラジオＨＰＬＣによって、放射標識ペプチド／ペプチドコンジュゲートを精製した。収集された画分の溶媒を真空中で除去し、標識された生成物をＰＢＳ中で再構成した。
【0140】
ヨウ素１２５標識化合物のインビボ平面シンチグラフィーイメージングのために、未処置のＮＭＲＩマウス（２０～２５ｇ）を２％セボフルランで麻酔した。各化合物について、１～５ＭＢｑの放射能の強さを尾静脈に注射した。平行光コリメーター（ｐａｒａｌｌｅｌ ｃｏｌｌｉｍａｔｏｒ）（３５ｍｍ／１．８ｍｍ／０．２ｍｍ）を備えたＧａｍｍａ Ｉｍａｇｅｒ ＳＣＴ（Ｂｉｏｓｐａｃｅ Ｌａｂ、Ｐａｒｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）を使用して、シンチグラフィーイメージングを行った。一連のシンチグラフィーイメージを、注射後の示された時点でスキャンした。図６参照。
【0141】
前述の記載中、特許請求の範囲中、および／または添付の図面中に開示された特徴は、別々でも任意の組み合わせでも、多様な形態で本発明を実現するための材料であり得る。
【0142】
［参考文献］
Blank A, Markert C, Hohmann N, Carls A, Mikus G, Lehr T, Alexandrov A, Haag M, Schwab M, UrbanS, Haefeli WE. First-in-human application of the novel hepatitis B and hepatitis D virus entry inhibitor myrcludex B. J Hepatol. 2016 Sep;65(3):483-9.
Bogomolov P, Alexandrov A, Voronkova N, Macievich M, Kokina K, Petrachenkova M, Lehr T, Lempp FA, Wedemeyer H, Haag M, Schwab M, Haefeli WE, Blank A, Urban S. Treatment of chronic hepatitis D with the entry inhibitor myrcludex B: First results of a phase Ib/IIa study. J Hepatol. 2016Sep;65(3):490-8.
Chan, HL. & Sung, JJ. Hepatocellular carcinoma and hepatitis B virus. Semin Liver Dis 26, 153-161 (2006).
Donkers JM, ZehnderB, van Westen GJP, Kwakkenbos MJ, IJzerman AP, Oude Elferink RPJ, Beuers U, Urban S, van de Graaf SFJ. Reduced hepatitis B and D viral entry using clinically applied drugs as novel inhibitors of the bile acid transporter NTCP. Sci Rep. 2017 Nov 10;7(1):15307. doi: 10.1038/s41598-017-15338-0.
Gripon P, Cannie I, Urban S. Efficient inhibition of hepatitis B virus infection by acylated peptides derived from the large viral surface protein. J Virol 2005;79:1613-1622.
Lempp FA & Urban A. Hepatitis Delta Virus: Replication Strategy and Upcoming Therapeutic Options for a Neglected Human Pathogen. Viruses. 2017 Jul 4;9(7). pii: E172. doi: 10.3390/v9070172. Review.
Mailly L, Xiao F, Lupberger J, Wilson GK, Aubert P, Duong FH, Calabrese D, Leboeuf C, Fofana I, Thumann C, Bandiera S, Lutgehetmann M, Volz T, Davis C, Harris HJ, Mee CJ, Girardi E, Chane-Woon-Ming B, Ericsson M, Fletcher N, Bartenschlager R, Pessaux P, Vercauteren K, Meuleman P, Villa P, Kaderali L, Pfeffer S, Heim MH, Neunlist M, Zeisel MB, Dandri M, McKeating JA, Robinet E, Baumert TF. Clearance of persistent hepatitis C virus infection in humanized mice using a claudin-1-targeting monoclonal antibody. Nat Biotechnol. 2015;33(5):549-54. doi: 10.1038/nbt.3179. Epub 2015 Mar 23.
Gouin-S & Zhu-XX, Synthesis of 3 alpha- and 3 beta-dimers from selected bile acids. Steroids 1996; 61: 664-669.
Mentha N, Clement S, Negro F, Alfaiate D. A review on hepatitis D: From virology to new therapies. J Adv Res. 2019 Mar 29;17:3-15. doi: 10.1016/j.jare.2019.03.009. eCollection 2019 May.
Ni Y, Lempp FA, Mehrle S, Nkongolo S, Kaufman C, Falth M, Stindt J, et al. Hepatitis B and D Viruses Exploit Sodium Taurocholate Co-transporting Polypeptide for Species-Specific Entry into Hepatocytes. Gastroenterology 2014;146:1070-1083.
Schieck, A., Muller, T., Schulze, A., Haberkorn, U., Urban, S., & Mier, W. (2010). Solid-phase synthesis of the lipopeptide Myr-HBVpreS/2-78, a hepatitis B virus entry inhibitor. Molecules, 15(7), 4773-4783. doi:10.3390/molecules15074773
Schulze A, Schieck A, Ni Y, Mier W, Urban S. Fine mapping of pre-S sequence requirements for hepatitis B virus large envelope protein-mediated receptor interaction. J Virol 2010;84:1989-2000.
Shepard, C.W., Simard, E.P., Finelli, L., Fiore, A.E. & Bell, B.P. Hepatitis B virus infection: epidemiology and vaccination. Epidemiol Rev 28, 112-125 (2006).
Urban S, Bartenschlager R, Kubitz R, Zoulim F. Strategies to Inhibit Entry of HBV and HDV into Hepatocytes. Gastroenterology 2014;147(1):48-64.
Wedemeyer H.,…..& Urban S.. 2018. Interim Results of a multicenter, Open-Label Phase 2 Clinical Trial (MYR203) to Assess Safety and Efficacy of Myrcludex B in Combination with Peg-Interferon Alpha 2a in Patients with Chronic HBV/HDV Co-Infection. Hepatology, 68(1):11A.
Wedemeyer H., ….& Urban S. 2019. Final Results of a Multicenter, Open-Label Phase 2 Clinical Trial (MYR203) to Assess Safety and Efficacy of Myrcludex B in Combination with Peg-Interferon Alpha 2a in Patients with Chronic HBV/HDV Co-Infection. J.Hepatology, 70(1).
Wedemeyer H. ….& Urban S. et al. 2018. Final results of a multicenter, open-label phase 2b clinical trial to assess safety and efficacy of Myrcludex B in combination with Tenofovir in patients with chronic HBV/HDV co-infection. J Hepatol, 68:S3.
Wedemeyer H et al. 2017. Interim results of a multicenter, open-label phase 2b clinical trial to assess safety and efficacy of Myrcludex B in combination with Tenofovir in patients with chronic HBV/HDV co-infection. Hepatology, (2017), 66 S1, 20A-21A.
Yan H, Zhong G, Xu G, He W, Jing Z, Gao Z, Huang Y, et al. Sodium taurocholate cotransporting polypeptide is a functional receptor for human hepatitis B and D virus. elife. 2012;1:e00049.
Blank A, Markert C, Hohmann N, Carls A, Mikus G, Lehr T, Alexandrov A, Haag M, Schwab M, UrbanS, Haefeli WE. First-in-human application of the novel hepatitis B and hepatitis D virus entry inhibitor myrcludex B. J Hepatol. 2016 Sep;65(3):483-9.
Bogomolov P, Alexandrov A, Voronkova N, Macievich M, Kokina K, Petrachenkova M, Lehr T, Lempp FA, Wedemeyer H, Haag M, Schwab M, Haefeli WE, Blank A, Urban S. Treatment of chronic hepatitis D with the entry inhibitor myrcludex B: First results of a phase Ib/IIa study. J Hepatol. 2016Sep;65(3):490-8.
Chan, HL. & Sung, JJ. Hepatocellular carcinoma and hepatitis B virus. Semin Liver Dis 26, 153-161 (2006).
Donkers JM, ZehnderB, van Westen GJP, Kwakkenbos MJ, IJzerman AP, Oude Elferink RPJ, Beuers U, Urban S, van de Graaf SFJ. Reduced hepatitis B and D viral entry using clinically applied drugs as novel inhibitors of the bile acid transporter NTCP. Sci Rep. 2017 Nov 10;7(1):15307. doi: 10.1038/s41598-017-15338-0.
Gripon P, Cannie I, Urban S. Efficient inhibition of hepatitis B virus infection by acylated peptides derived from the large viral surface protein. J Virol 2005;79:1613-1622.
Lempp FA & Urban A. Hepatitis Delta Virus: Replication Strategy and Upcoming Therapeutic Options for a Neglected Human Pathogen. Viruses. 2017 Jul 4;9(7). pii: E172. doi: 10.3390/v9070172. Review.
Mailly L, Xiao F, Lupberger J, Wilson GK, Aubert P, Duong FH, Calabrese D, Leboeuf C, Fofana I, Thumann C, Bandiera S, Lutgehetmann M, Volz T, Davis C, Harris HJ, Mee CJ, Girardi E, Chane-Woon-Ming B, Ericsson M, Fletcher N, Bartenschlager R, Pessaux P, Vercauteren K, Meuleman P, Villa P, Kaderali L, Pfeffer S, Heim MH, Neunlist M, Zeisel MB, Dandri M, McKeating JA, Robinet E, Baumert TF. Clearance of persistent hepatitis C virus infection in humanized mice using a claudin-1-targeting monoclonal antibody. Nat Biotechnol. 2015;33(5):549-54. doi: 10.1038/nbt.3179. Epub 2015 Mar 23.
Gouin-S & Zhu-XX, Synthesis of 3 alpha- and 3 beta-dimers from selected bile acids. Steroids 1996; 61: 664-669.
Mentha N, Clement S, Negro F, Alfaiate D. A review on hepatitis D: From virology to new therapies. J Adv Res. 2019 Mar 29;17:3-15. doi: 10.1016/j.jare.2019.03.009. eCollection 2019 May.
Ni Y, Lempp FA, Mehrle S, Nkongolo S, Kaufman C, Falth M, Stindt J, et al. Hepatitis B and D Viruses Exploit Sodium Taurocholate Co-transporting Polypeptide for Species-Specific Entry into Hepatocytes. Gastroenterology 2014;146:1070-1083.
Schieck, A., Muller, T., Schulze, A., Haberkorn, U., Urban, S., & Mier, W. (2010). Solid-phase synthesis of the lipopeptide Myr-HBVpreS/2-78, a hepatitis B virus entry inhibitor. Molecules, 15(7), 4773-4783. doi:10.3390/molecules15074773
Schulze A, Schieck A, Ni Y, Mier W, Urban S. Fine mapping of pre-S sequence requirements for hepatitis B virus large envelope protein-mediated receptor interaction. J Virol 2010;84:1989-2000.
Shepard, C.W., Simard, E.P., Finelli, L., Fiore, A.E. & Bell, B.P. Hepatitis B virus infection: epidemiology and vaccination. Epidemiol Rev 28, 112-125 (2006).
Urban S, Bartenschlager R, Kubitz R, Zoulim F. Strategies to Inhibit Entry of HBV and HDV into Hepatocytes. Gastroenterology 2014;147(1):48-64.
Wedemeyer H.,…..& Urban S.. 2018. Interim Results of a multicenter, Open-Label Phase 2 Clinical Trial (MYR203) to Assess Safety and Efficacy of Myrcludex B in Combination with Peg-Interferon Alpha 2a in Patients with Chronic HBV/HDV Co-Infection. Hepatology, 68(1):11A.
Wedemeyer H., ….& Urban S. 2019. Final Results of a Multicenter, Open-Label Phase 2 Clinical Trial (MYR203) to Assess Safety and Efficacy of Myrcludex B in Combination with Peg-Interferon Alpha 2a in Patients with Chronic HBV/HDV Co-Infection. J.Hepatology, 70(1).
Wedemeyer H. ….& Urban S. et al. 2018. Final results of a multicenter, open-label phase 2b clinical trial to assess safety and efficacy of Myrcludex B in combination with Tenofovir in patients with chronic HBV/HDV co-infection. J Hepatol, 68:S3.
Wedemeyer H et al. 2017. Interim results of a multicenter, open-label phase 2b clinical trial to assess safety and efficacy of Myrcludex B in combination with Tenofovir in patients with chronic HBV/HDV co-infection. Hepatology, (2017), 66 S1, 20A-21A.
Yan H, Zhong G, Xu G, He W, Jing Z, Gao Z, Huang Y, et al. Sodium taurocholate cotransporting polypeptide is a functional receptor for human hepatitis B and D virus. elife. 2012;1:e00049.
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2A】
【図2B】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【配列表】
【国際調査報告】