特表 2022-552819 遺伝子改変自己Ｔ細胞免疫療法を使用する治療方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-12-20

(54)【発明の名称】遺伝子改変自己Ｔ細胞免疫療法を使用する治療方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/15 20150101AFI20221213BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20221213BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20221213BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20221213BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221213BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20221213BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20221213BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20221213BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20221213BHJP

   A61K 47/20 20060101ALI20221213BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20221213BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20221213BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20221213BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20221213BHJP

   C07K 14/725 20060101ALN20221213BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20221213BHJP

【ＦＩ】

A61K35/15 Z

C12N5/10 ZNA

C12N5/0783

C12N15/12

A61P35/00

A61P37/04

A61K47/42

A61K47/12

A61K47/02

A61K47/20

A61K45/00

A61K38/19

A61K38/20

A61K39/395 U

C07K14/725

C12N15/09 100

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022520963

(86)(22)【出願日】2020-10-08

(85)【翻訳文提出日】2022-05-13

(86)【国際出願番号】 US2020054732

(87)【国際公開番号】W WO2021072044

(87)【国際公開日】2021-04-15

(31)【優先権主張番号】62/912,545

(32)【優先日】2019-10-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ジップロック

(71)【出願人】

【識別番号】520032608

【氏名又は名称】パクト ファーマ インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＰＡＣＴ ＰＨＡＲＭＡ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】センニノ， バーバラ

(72)【発明者】

【氏名】プランダレ， バーミニ

(72)【発明者】

【氏名】マンデル－キャッシュマン， ステファニー

(72)【発明者】

【氏名】ファイン， グレッグ ディー．

(72)【発明者】

【氏名】ラオ， アラティ ヴィー．

(72)【発明者】

【氏名】スタリングス－シュミット， トッド

(72)【発明者】

【氏名】フローリヒ， マーク ウォルター

(72)【発明者】

【氏名】フランズソフ， アレックス

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA94X

4B065AB01

4B065AC14

4B065AC20

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4B065CA46

4C076CC27

4C076DD21

4C076DD41

4C076DD55

4C076EE41

4C084AA01

4C084AA02

4C084AA19

4C084DA01

4C084DA13

4C084DA14

4C084MA02

4C084NA05

4C084ZB26

4C084ZC75

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC23

4C085EE01

4C085EE03

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087NA05

4C087ZB26

4C087ZC75

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA50

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

精密ゲノム改変ＮｅｏＴＣＲ生成物を用いてがんを治療する方法がここに記載される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ａ． 第一のネオ抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲを含む第一のＮｅｏＴＣＲ細胞集団；
ｂ． 第一のネオ抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲを含む第一のＮｅｏＴＣＲ細胞集団、及び第二のネオ抗原に結合する第二のＮｅｏＴＣＲを含む第二のＮｅｏＴＣＲ細胞集団；又は
ｃ． 第一のネオ抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲを含む第一のＮｅｏＴＣＲ細胞集団、第二のネオ抗原に結合する第二のＮｅｏＴＣＲを含む第二のＮｅｏＴＣＲ細胞集団、及び第三のネオ抗原に結合する第三のＮｅｏＴＣＲを含む第三のＮｅｏＴＣＲ細胞集団
を含み；
各ＮｅｏＴＣＲが互いに異なり、かつ
各ＮｅｏＴＣＲが患者に由来する、組成物。

【請求項2】

第一、第二、及び／又は第三のネオ抗原が、単一の遺伝子によって発現される、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

第一、第二、及び／又は第三のネオ抗原が、異なる遺伝子によって発現される、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

第一、第二、及び／又は第三のネオ抗原のうちの二つが、単一の遺伝子によって発現される、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

第一、第二、及び／又は第三のＮｅｏＴＣＲが、単一の主要組織適合遺伝子複合体に結合する、請求項１から４の何れか一項に記載の組成物。

【請求項6】

第一、第二、及び／又は第三のＮｅｏＴＣＲが、異なる主要組織適合遺伝子複合体に結合する、請求項１から４の何れか一項に記載の組成物。

【請求項7】

第一、第二、及び／又は第三のＮｅｏＴＣＲのうちの二つが、単一の主要組織適合遺伝子複合体に結合する、請求項１から４の何れか一項に記載の組成物。

【請求項8】

組成物が、薬学的に許容される担体を含む、請求項１から７の何れか一項に記載の組成物。

【請求項9】

組成物が凍結保存剤を含む、請求項１から８の何れか一項に記載の組成物。

【請求項10】

組成物が血清アルブミンを含む、請求項１から９の何れか一項に記載の組成物。

【請求項11】

組成物が晶質液を含む、請求項１から１０の何れか一項に記載の組成物。

【請求項12】

組成物が、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ヒト血清アルブン（ＨＡＳ）、及びＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０を含む、請求項１から１１の何れか一項に記載の組成物。

【請求項13】

治療を必要とする対象におけるがんを治療する方法において、請求項１から１２の何れか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項14】

組成物が、約４×１０^８細胞、１．３３×１０^９細胞、又は約４×１０^９細胞の量のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

組成物が、約４×１０^８細胞より多くかつ約１．３３×１０^９細胞より少なく、約１．３３×１０^９細胞より多くかつ約４×１０^９細胞より少なく、又は約４×１０^９細胞より多い量のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

組成物が、表４による量のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む、請求項１３から１５の何れか一項に記載の方法。

【請求項17】

組成物が、表５による量のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む、請求項１３から１５の何れか一項に記載の方法。

【請求項18】

組成物が単回投与で投与される、請求項１３から１７の何れか一項に記載の方法。

【請求項19】

組成物が複数回投与で投与される、請求項１３から１７の何れか一項に記載の方法。

【請求項20】

組み合わせ薬剤を投与することを更に含む、請求項１３から１９の何れか一項に記載の方法。

【請求項21】

組み合わせ薬剤が、サイトカイン、ＰＤ軸結合剤、ＰＤ－１結合剤、ＰＤ－Ｌ１結合剤、ＰＤ－Ｌ２結合剤、又はそれらの組み合わせである、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

サイトカインが、ＩＬ－２剤、ＩＬ－７剤、ＩＬ－１０剤、ＩＬ－１２剤、ＩＬ－１５剤、ＩＬ－１８剤、ＩＬ－２１剤、又はそれらの組み合わせである、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

サイトカインがＩＬ－２剤である、請求項２０又は２１に記載の方法。

【請求項24】

サイトカインがＩＬ－１５剤である、請求項２０又は２１に記載の方法。

【請求項25】

ＰＤ軸結合剤が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、又はアテゾリズマブを含む、請求項２１から２４の何れか一項に記載の方法。

【請求項26】

がんが液性がん又は固形がんである、請求項１３から２５の何れか一項に記載の方法。

【請求項27】

組成物が、フルダラビン及びシクロホスファミドの前処置レジメンの後に投与される、請求項１３から２５の何れか一項に記載の方法。

【請求項28】

請求項１から１２の何れか一項に記載の組成物を製造する方法。

【請求項29】

請求項１から１２の何れか一項に記載の組成物の投与のためのキット。

【請求項30】

ａ． 第一の抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲをコードする第一の外因性ポリヌクレオチドを含む第一の改変細胞であって、第一の外因性ポリヌクレオチドが、第一の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第一の改変細胞；
ｂ． 第二の抗原に結合する第二のＮｅｏＴＣＲをコードする第二の外因性ポリヌクレオチドを含む第二の改変細胞であって、第二の外因性ポリヌクレオチドが、第二の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第二の改変細胞；
ｃ． 第三の抗原に結合する第三のＮｅｏＴＣＲをコードする第三の外因性ポリヌクレオチドを含む第三の改変細胞であって、第三の外因性ポリヌクレオチドが、第三の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第三の改変細胞；又は
ｄ． それらの組み合わせ
を含む複数の細胞であって、ここで、第一、第二及び第三のＮｅｏＴＣＲが患者由来であり、第一、第二及び第三の改変細胞が患者由来の初代細胞である、複数の細胞。

【請求項31】

第一、第二、及び第三の抗原が、がん抗原である、請求項３０に記載の複数の細胞。

【請求項32】

がん抗原がネオ抗原である、請求項３１に記載の複数の細胞。

【請求項33】

初代細胞がリンパ球である、請求項３０から３２の何れか一項に記載の複数の細胞。

【請求項34】

初代細胞がＴ細胞であり、場合によっては、Ｔ細胞が、
ａ． ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５－、ＣＣＲ７＋、及びＣＤ２７＋；
ｂ． ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５＋、ＣＤ２７＋、ＣＣＲ７＋；又は
ｃ． ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ１２７＋
である、請求項３０から３３の何れか一項に記載の複数の細胞。

【請求項35】

請求項３０から３４の何れか一項に記載の複数の細胞を含む組成物。

【請求項36】

薬学的に許容される添加物を更に含む、請求項３５に記載の組成物。

【請求項37】

組成物が、がんの治療のためにそれを必要とする患者に投与される、請求項３５又は３６に記載の組成物。

【請求項38】

組成物が凍結保存剤を含む、請求項３５から３７の何れか一項に記載の組成物。

【請求項39】

組成物が血清アルブミンを含む、請求項３５から３８の何れか一項に記載の組成物。

【請求項40】

組成物が晶質液を含む、請求項３５から３９の何れか一項に記載の組成物。

【請求項41】

組成物が、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ヒト血清アルブン（ＨＡＳ）、及びＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０を含む、請求項３５から４０の何れか一項に記載の組成物。

【請求項42】

治療を必要とする対象においてがんを治療する方法において、
ａ．ｉ）第一の抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲをコードする第一の外因性ポリヌクレオチドを含む第一の改変細胞であって、第一の外因性ポリヌクレオチドが、第一の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第一の改変細胞；
ｉｉ）第二の抗原に結合する第二のＮｅｏＴＣＲをコードする第二の外因性ポリヌクレオチドを含む第二の改変細胞であって、第二の外因性ポリヌクレオチドが、第二の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第二の改変細胞；
ｉｉｉ）第三の抗原に結合する第三のＮｅｏＴＣＲをコードする第三の外因性ポリヌクレオチドを含む第三の改変細胞であって、第三の外因性ポリヌクレオチドが、第三の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第三の改変細胞；又は
ｉｖ）それらの組み合わせ
を含み、ここで、第一、第二及び第三のＮｅｏＴＣＲが患者由来であり、第一、第二及び第三の改変細胞が患者由来の初代細胞である、複数の細胞を投与し、それによって対象におけるがんを治療することを含む、方法。

【請求項43】

第一、第二、及び第三の抗原が、がん抗原である、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

がん抗原がネオ抗原である、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

初代細胞がリンパ球である、請求項４２から４４の何れか一項に記載の方法。

【請求項46】

初代細胞がＴ細胞であり、場合によっては、Ｔ細胞が、
ａ． ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５－、ＣＣＲ７＋、及びＣＤ２７＋；
ｂ． ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５＋、ＣＤ２７＋、ＣＣＲ７＋；又は
ｃ． ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ１２７＋
である、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

組み合わせ薬剤を投与することを更に含む、請求項４２から４６の何れか一項に記載の方法。

【請求項48】

組み合わせ薬剤が、サイトカイン、ＰＤ軸結合剤、ＰＤ－１結合剤、ＰＤ－Ｌ１結合剤、ＰＤ－Ｌ２結合剤、又はそれらの組み合わせである、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

サイトカインが、ＩＬ－２剤、ＩＬ－７剤、ＩＬ－１０剤、ＩＬ－１２剤、ＩＬ－１５剤、ＩＬ－１８剤、ＩＬ－２１剤、又はそれらの組み合わせである、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

サイトカインがＩＬ－２剤である、請求項４７又は４８に記載の方法。

【請求項51】

サイトカインがＩＬ－１５剤である、請求項４７又は４８に記載の方法。

【請求項52】

ＰＤ軸結合剤が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、又はアテゾリズマブを含む、請求項４７から５１の何れか一項に記載の方法。

【請求項53】

がんが液性がん又は固形がんである、請求項４２から５２の何れか一項に記載の方法。

【請求項54】

治療を必要とする対象においてがんを治療する方法において、
ａ． 腫瘍抗原に結合するＮｅｏＴＣＲをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む有効量の改変細胞を投与することであって、外因性ポリヌクレオチドが改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、改変細胞を投与すること；並びに
ｂ． 有効量の組み合わせ薬剤を投与すること；
を含み、それにより、対象におけるがんを治療する、方法。

【請求項55】

組み合わせ薬剤が、化学療法剤、抗ホルモン剤、内分泌治療剤、細胞傷害性剤、サイトカイン、ＰＤ軸結合剤、ＰＤ－１結合剤、ＰＤ－Ｌ１結合剤、ＰＤ－Ｌ２結合剤、又はそれらの組み合わせを含む、請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

サイトカインが、ＩＬ－２剤、ＩＬ－７剤、ＩＬ－１０剤、ＩＬ－１２剤、ＩＬ－１５剤、ＩＬ－１８剤、ＩＬ－２１剤、又はそれらの組み合わせである、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

サイトカインがＩＬ－２剤である、請求項５５又は５６に記載の方法。

【請求項58】

サイトカインがＩＬ－１５剤である、請求項５５又は５６に記載の方法。

【請求項59】

ＰＤ軸結合剤が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、又はアテゾリズマブを含む、請求項５４から５８の何れか一項に記載の方法。

【請求項60】

がんが液性がん又は固形がんである、請求項５４から６０の何れか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

［関連出願との相互参照］
この出願は、その内容がその全体について出典明示により援用され、且つ優先権が主張される、２０１９年１０月８日に出願された米国仮特許出願第６２／９１２５４５号に基づく優先権を主張する。

【0002】

［配列表］
本明細書では、（２０２０年１０月８日に「０８７５２００１５３ＳＬ．ｔｘｔ」との名称のｔｘｔファイルとして電子的に提出された）配列表が参照される。ｔｘｔファイルは２０２０年１０月８日に作成され、サイズは１０３０バイトである。配列表の全内容が出典明示によりここに援用される。

【背景技術】

【0003】

多様なヒトがんの制御におけるＴ細胞免疫の臨床的関連性が確立されている。免疫腫瘍学治験及び承認薬で観察される臨床活動は、多くの場合、各がん患者における既存の内因性Ｔ細胞免疫応答の解放に依存している。抗ＰＤ１／抗ＰＤ－Ｌ１抗体薬による治療後の内因性Ｔ細胞免疫応答の解放は、治療開始後の速く持続性のある腫瘍の減少として常套的に観察されている。これらの免疫チェックポイント阻害療法による患者の治療は、様々な腫瘍型の進行悪性腫瘍の患者の全生存期間に改善をもたらした（Ｒｏｂｅｒｔ等，２０１５）（Ｈｅｒｂｓｔ等，２０１４）（Ｗｏｌｃｈｏｋ等，２０１３）（Ｈａｍｉｄ等，２０１３）（Ｂｒａｈｍｅｒ等，２０１２）（Ｔｏｐａｌｉａｎ等，２０１２）。しかし、免疫療法のこれらの成功にもかかわらず、固形腫瘍の治療を受けた患者の相当な割合が反応しておらず、免疫療法への新規アプローチからの臨床的利益を達成する患者の高い満たされていないニーズを表している。

【発明の概要】

【0004】

本開示は、ａ）第一のネオ抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲを含む第一のＮｅｏＴＣＲ細胞集団；ｂ）第一のネオ抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲを含む第一のＮｅｏＴＣＲ細胞集団、及び第二のネオ抗原に結合する第二のＮｅｏＴＣＲを含む第二のＮｅｏＴＣＲ細胞集団；又はｃ）第一のネオ抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲを含む第一のＮｅｏＴＣＲ細胞集団、第二のネオ抗原に結合する第二のＮｅｏＴＣＲを含む第二のＮｅｏＴＣＲ細胞集団、及び第三のネオ抗原に結合する第三のＮｅｏＴＣＲを含む第三のＮｅｏＴＣＲ細胞集団を含み；各ＮｅｏＴＣＲが互いに異なり、かつ各ＮｅｏＴＣＲが患者に由来する、組成物を提供する。

【0005】

所定の実施態様では、第一、第二、及び／又は第三のネオ抗原が、単一の遺伝子によって発現される。所定の実施態様では、第一、第二、及び／又は第三のネオ抗原が、異なる遺伝子によって発現される。所定の実施態様では、第一、第二、及び／又は第三のネオ抗原のうちの二つが、単一の遺伝子によって発現される。所定の実施態様では、第一、第二、及び／又は第三のＮｅｏＴＣＲが、単一の主要組織適合遺伝子複合体に結合する。所定の実施態様では、第一、第二、及び／又は第三のＮｅｏＴＣＲが、異なる主要組織適合遺伝子複合体に結合する。所定の実施態様では、第一、第二、及び／又は第三のＮｅｏＴＣＲのうちの二つが、単一の主要組織適合遺伝子複合体に結合する。

【0006】

所定の実施態様では、組成物は、薬学的に許容される担体を含む。所定の実施態様では、組成物は凍結保存剤を含む。所定の実施態様では、組成物は血清アルブミンを含む。所定の実施態様では、組成物は晶質液を含む。所定の実施態様では、組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ヒト血清アルブミン（ＨＡＳ）、及びＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０を含む。

【0007】

本開示は、ここに開示される組成物を投与することを含む、治療を必要とする対象におけるがんを治療する方法を提供する。

【0008】

所定の実施態様では、組成物は、約４×１０^８細胞、１．３３×１０^９細胞、又は約４×１０^９細胞の量のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、組成物は、約４×１０^８細胞より多くかつ約１．３３×１０^９細胞より少なく、約１．３３×１０^９細胞より多くかつ約４×１０^９細胞より少なく、又は約４×１０^９細胞より多い量のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、組成物は、表４による量のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、組成物は、表５による量のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、組成物は、単回投与で投与される。所定の実施態様では、組成物は、複数回投与で投与される。

【0009】

所定の実施態様では、本方法は、組み合わせ薬剤を投与することを更に含む。所定の実施態様では、組み合わせ薬剤は、サイトカイン、ＰＤ軸結合剤、ＰＤ－１結合剤、ＰＤ－Ｌ１結合剤、ＰＤ－Ｌ２結合剤、又はそれらの組み合わせである。所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－２剤、ＩＬ－７剤、ＩＬ－１０剤、ＩＬ－１２剤、ＩＬ－１５剤、ＩＬ－１８剤、ＩＬ－２１剤、又はそれらの組み合わせである。所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－２剤である。所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－１５剤である。所定の実施態様では、ＰＤ軸結合剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、又はアテゾリズマブを含む。

【0010】

所定の実施態様では、がんは、液性がん又は固形がんである。所定の実施態様では、組成物が、フルダラビン及びシクロホスファミドの前処置レジメンの後に投与される。

【0011】

本開示は、ここに開示される組成物を製造する方法を提供する。本開示はまたここに開示される組成物の投与のためのキットを提供する。

【0012】

本開示は、第一の抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲをコードする第一の外因性ポリヌクレオチドを含む第一の改変細胞であって、第一の外因性ポリヌクレオチドが、第一の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第一の改変細胞；第二の抗原に結合する第二のＮｅｏＴＣＲをコードする第二の外因性ポリヌクレオチドを含む第二の改変細胞であって、第二の外因性ポリヌクレオチドが、第二の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第二の改変細胞；第三の抗原に結合する第三のＮｅｏＴＣＲをコードする第三の外因性ポリヌクレオチドを含む第三の改変細胞であって、第三の外因性ポリヌクレオチドが、第三の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第三の改変細胞；又はそれらの組み合わせを含む複数の細胞を提供し；ここで、第一、第二及び第三のＮｅｏＴＣＲは患者由来であり、第一、第二及び第三の改変細胞は患者由来の初代細胞である。

【0013】

所定の実施態様では、第一、第二、及び第三の抗原は、がん抗原である。所定の実施態様では、がん抗原はネオ抗原である。所定の実施態様では、初代細胞はリンパ球である。所定の実施態様では、初代細胞はＴ細胞であり、場合によっては、Ｔ細胞は、ａ）ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５－、ＣＣＲ７＋、及びＣＤ２７＋；ｂ）ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５＋、ＣＤ２７＋、ＣＣＲ７＋；又はｃ）ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ１２７＋である。

【0014】

本開示は、ここに開示される複数の細胞を含む組成物を提供する。所定の実施態様では、組成物は、薬学的に許容される添加物を更に含む。所定の実施態様では、組成物は、がんの治療のためにそれを必要とする患者に投与される。

【0015】

所定の実施態様では、組成物は凍結保存剤を含む。所定の実施態様では、組成物は、血清アルブミンを含む。所定の実施態様では、組成物は晶質液を含む。所定の実施態様では、組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ヒト血清アルブン（ＨＡＳ）、及びＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０を含む。

【0016】

本開示は、治療を必要とする対象においてがんを治療する方法において、ｉ）第一の抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲをコードする第一の外因性ポリヌクレオチドを含む第一の改変細胞であって、第一の外因性ポリヌクレオチドが、第一の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第一の改変細胞；ｉｉ）第二の抗原に結合する第二のＮｅｏＴＣＲをコードする第二の外因性ポリヌクレオチドを含む第二の改変細胞であって、第二の外因性ポリヌクレオチドが、第二の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第二の改変細胞；ｉｉｉ）第三の抗原に結合する第三のＮｅｏＴＣＲをコードする第三の外因性ポリヌクレオチドを含む第三の改変細胞であって、第三の外因性ポリヌクレオチドが、第三の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第三の改変細胞；又はｉｖ）それらの組み合わせを含み、ここで、第一、第二及び第三のＮｅｏＴＣＲが患者由来であり、第一、第二及び第三の改変細胞が患者由来の初代細胞である、複数の細胞を投与し、それによって対象におけるがんを治療することを含む、方法を提供する。

【0017】

所定の実施態様では、第一、第二、及び第三の抗原は、がん抗原である。所定の実施態様では、がん抗原はネオ抗原である。所定の実施態様では、初代細胞はリンパ球である。所定の実施態様では、初代細胞はＴ細胞であり、場合によっては、Ｔ細胞は、ａ）ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５－、ＣＣＲ７＋、及びＣＤ２７＋；ｂ）ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５＋、ＣＤ２７＋、ＣＣＲ７＋；又はｃ）ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ１２７＋である。

【0018】

所定の実施態様では、本方法は、組み合わせ薬剤を投与することを更に含む。所定の実施態様では、組み合わせ薬剤は、サイトカイン、ＰＤ軸結合剤、ＰＤ－１結合剤、ＰＤ－Ｌ１結合剤、ＰＤ－Ｌ２結合剤、又はそれらの組み合わせである。所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－２剤、ＩＬ－７剤、ＩＬ－１０剤、ＩＬ－１２剤、ＩＬ－１５剤、ＩＬ－１８剤、ＩＬ－２１剤、又はそれらの組み合わせである。所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－２剤である。所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－１５剤である。所定の実施態様では、ＰＤ軸結合剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、又はアテゾリズマブを含む。所定の実施態様では、がんは、液性がん又は固形がんである。

【0019】

本開示は、治療を必要とする対象においてがんを治療する方法において、ａ）腫瘍抗原に結合するＮｅｏＴＣＲをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む有効量の改変細胞であって、外因性ポリヌクレオチドが改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている改変細胞を投与すること；並びにｂ）有効量の組み合わせ薬剤を投与することを含み；それにより、対象におけるがんを治療する、方法を提供する。

【0020】

所定の実施態様では、組み合わせ薬剤は、化学療法剤、抗ホルモン剤、内分泌治療剤、細胞傷害性剤、サイトカイン、ＰＤ軸結合剤、ＰＤ－１結合剤、ＰＤ－Ｌ１結合剤、ＰＤ－Ｌ２結合剤、又はそれらの組み合わせを含む。所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－２剤、ＩＬ－７剤、ＩＬ－１０剤、ＩＬ－１２剤、ＩＬ－１５剤、ＩＬ－１８剤、ＩＬ－２１剤、又はそれらの組み合わせである。所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－２剤である。所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－１５剤である。所定の実施態様では、ＰＤ軸結合剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、又はアテゾリズマブを含む。所定の実施態様では、がんは、液性がん又は固形がんである。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1】図１は、タイムラプスライブ顕微鏡（０、１、及び２日目）で得られた代表的な画像を示し、同族ｎｅｏ１２ペプチド－ＨＬＡ（右の列）を発現する標的Ｔ細胞と共培養したｎｅｏ１２－ＴＣＲ Ｔ細胞（代表的なＮｅｏＴＣＲ生成物）による抗原特異的細胞傷害活性及び増殖を示すが、無関係なペプチド（左の列）を発現する標的Ｔ細胞と共培養した場合はそうではない。Ｎｅｏ１２は、腫瘍及び血液スクリーニングによって同定され、後にＴ細胞に精密ゲノム改変され、ＮｅｏＴＣＲ生成物に作製されたＮｅｏＴＣＲである。これらの実験において使用した腫瘍細胞は、安定した均一な形で緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ又はＺｓＧｒｅｅｎ）のバリアントを発現した。これらの細胞は、蛍光顕微鏡による細胞の同定を可能にする均一な緑色の高蛍光を示す。リアルタイムのアポトーシスを検出するために、高選択性のホスファチジルセリンシアニン蛍光色素（赤色のＩｎｃｕＣｙｔｅアネキシンＶ）を共培養物に加えた。適切な抗原を提示しない腫瘍細胞は、ｎｅｏ１２－ＴＣＲ Ｔ細胞の存在下で増殖し続ける（左の列）。対照的に、腫瘍細胞を提示するｎｅｏ１２抗原の大部分は、２日以内にアポトーシスになり又は死滅する（右の列）。この実験ではＴ細胞は標識されていないが、２日の過程でＴ細胞の数が増加することで、抗原特異的増殖を視覚的に確認できる（右の列）。（単一細胞バーコードチップにロードした）細胞サンプルの生の顕微鏡及びマイクロアレイスキャン、並びにタンパク質分泌データを、Ｉｓｏｐｌｅｘｉｓ画像処理ソフトウェアを使用して解析し、単一細胞を含むチャンバーの位置を決定し、続いてそれらの分泌読み出し情報を抽出した。空の細胞チャンバーからのデータを使用して、分析した各タンパク質のバックグラウンド強度レベルを測定した。次に、バックグラウンドの読み出し情報を使用して単一細胞の読み出し情報を正規化し、有意な分泌を決定し、アッセイにわたってプロファイルを比較した。Ｉｓｏｐｌｅｘｉｓ独自のソフトウェアとＲ統計パッケージを統計データ解析に使用した。この研究で使用したＴ細胞は健康なドナーから作製された。編集されたＴ細胞を、エフェクタータンパク質分泌プロファイル分析のためにＩｓｏＰｌｅｘｉｓプラットフォームにロードする前に、２：１の比率で標的腫瘍細胞と共にインキュベートした。

【図2】図２は、同族抗原に遭遇したときに２、３、４又は５以上のサイトカイン（灰色の陰影）を分泌するｎｅｏ１２又はＦ５ ＴＣＲを発現するように改変されたＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞の割合を示しているグラフを示す。細胞を、ペプチドなし、１０ｎＭ若しくは１００ｎＭの特異的ペプチドをパルスした標的Ｔ細胞、又はそれらの表面にｐＨＬＡを構成的に発現する標的Ｔ細胞と共培養した（Ｎ：ｎｅｏ１２ペプチド－ＨＬＡ－Ａ２受容体発現腫瘍細胞；Ｍ：ＭＡＲＴ１ペプチド－ＨＬＡ－Ａ２受容体発現腫瘍細胞）。分泌されたサイトカインレベルを、２４時間の共培養後に評価した。刺激時に二以上のエフェクター分子を発現するＴ細胞集団全体からの個々のＴ細胞の割合を、各バーに異なる色の陰影として示す。二以上のエフェクタータンパク質を分泌する細胞は多機能性と考えられる。

【図3】図３は、がんワクチンで治療されたメラノーマの患者におけるＮｅｏＥ Ｔ細胞応答の代表的な長期縦断的分析を示す。

【図4A】図４Ａ及び４Ｂは、抗ＰＤ－１抗体による処置に応答してＰＢＭＣから得られた異なるＴＣＲの長期縦断的モニタリングを示す。図４Ａは、１０×１０^６のＣＤ８^＋Ｔ細胞当たりのネオ抗原特異的（ｎｅｏＥ特異的）Ｔ細胞の数を示している。

【図4B】図４Ｂはネオ抗原のｍＲＮＡ発現を示している。

【図5】図５は、自己腫瘍細胞上のＮｅｏＴＣＲ細胞候補の機能的特徴付けの代表的モデルを示す。この機能的特徴付けアプローチを使用して実施した実験では、ｎｅｏＴＣＲ Ｔ細胞を、１０：１の生成物対標的比（Ｐ：Ｔ）で自己腫瘍細胞株と共培養した。ＮｅｏＴＣＲ細胞を、単一のＮｅｏＴＣＲ生成物、二つのＮｅｏＴＣＲ生成物のそれぞれの１／２（つまり、等量の各ＮｅｏＴＣＲ細胞）から構成される２のＮｅｏＴＣＲ生成物、又は三のＴＣＲの各一の１／３（つまり、等量の各ＮｅｏＴＣＲ細胞）から構成される３のＮｅｏＴＣＲ生成物として試験した。ＮｅｏＴＣＲ生成物において使用されるＮｅｏＴＣＲは、異なるネオエピトープ及び／又はＨＬＡを標的とした組み合わせで試験した。自己腫瘍細胞を形質導入して赤色蛍光タンパク質を発現させた後、ＩｎｃｕＣｙｔｅシステムで赤色コンフルエンシーの量を経時的に測定した。赤色蛍光タンパク質陽性細胞の割合の減少を、ＮｅｏＴＣＲ生成物の細胞傷害活性の尺度として使用した。この実験の陰性対照は、（１）培地のみでの腫瘍細胞；（２）異なる患者の腫瘍細胞株と共培養したＮｅｏＴＣＲ細胞；（３）無関係のＮｅｏＴＣＲ（ｎｅｏ１２）生成物と自己腫瘍細胞株との共培養物であった。

【図6】図６Ａ及び６Ｂは、単一のＮｅｏＴＣＲ生成物による自己腫瘍細胞の殺傷が３０：１の試験したＰ：Ｔ比では効率的ではないことを示している。図６Ａは、１のＮｅｏＴＣＲ生成物の何れも１００時間以上の持続的な殺傷を示さないことを示している。対照的に、図６Ｂは、３のＮｅｏＴＣＲ生成物の全てが１００時間以上の持続的な殺傷を示すことを示している。図６Ａ及び６Ｂの両方でＲＰＭＩ Ｍ４９０細胞を対照として使用した。全てのデータが示されているわけではないが、２３の異なるＮｅｏＴＣＲの全てを、１のＮｅｏＴＣＲ生成物、２のＮｅｏＴＣＲ生成物、及び３のＮｅｏＴＣＲ生成物を作製するために使用した。図６Ｂに示されているボックス化した３のＮｅｏＴＣＲ生成物は、図７及び図８で実施例として使用した３のＮｅｏＴＣＲ生成物である。

【図7】図７Ａ－７Ｄは、図６Ｂに示すように、ＮｅｏＴＣＲ４０８、ＮｅｏＴＣＲ４０９、及びＮｅｏＴＣＲ４２９を含む３のＮｅｏＴＣＲ生成物を示している。図７Ａは、対照（ＲＰＭＩ Ｍ４９０及びＮｅｏ１２）と比較し、三つ全てのＮｅｏＴＣＲを含む３のＮｅｏＴＣＲ生成物（それぞれ等量のＮｅｏＴＣＲ４０８細胞、ＮｅｏＴＣＲ４０９細胞、及びＮｅｏＴＣＲ４２９細胞）と比較した、各ＮｅｏＴＣＲの単一のＮｅｏＴＣＲ生成物を示している。図７Ｂ－７Ｄは、対照（ＲＰＭＩ Ｍ４９０及びＮｅｏ１２）と比較し、二のＮｅｏＴＣＲを含む２のＮｅｏＴＣＲ生成物（それぞれ等量の二つのＮｅｏＴＣＲ細胞）と比較した、１のＮｅｏＴＣＲ生成物の比較を示す三つのグラフを示している。図７Ａ及び７Ｂ－７Ｄに示されるように、２のＮｅｏＴＣＲ生成物は殺傷性を示したが、２のＮｅｏＴＣＲの組み合わせは何れも３のＮｅｏＴＣＲ生成物と同じ程度の殺傷性を示さなかった。図７Ｃは、ＮｅｏＴＣＲのそれぞれが異なるネオエピトープを持ち、ＨＬＡの多様性があり、ＮｅｏＴＣＲの生理学的特性に違いがあることを示している。

【図8A-8D】図８Ａ－８Ｄは、図６Ｂに示されるように、ＮｅｏＴＣＲ４０９、ＮｅｏＴＣＲ４２９、及びＮｅｏＴＣＲ４２１を含む３のＮｅｏＴＣＲ生成物を示している。図８Ａは、対照（ＲＰＭＩ Ｍ４９０及びＮｅｏ１２）と比較し、三つ全てのＮｅｏＴＣＲを含む３のＮｅｏＴＣＲ生成物（それぞれ等量のＮｅｏＴＣＲ４０９細胞、ＮｅｏＴＣＲ４２９細胞、及びＮｅｏＴＣＲ４２１細胞）と比較した、各ＮｅｏＴＣＲの単一のＮｅｏＴＣＲ生成物を示している。図８Ｂ－８Ｄは、対照（ＲＰＭＩ Ｍ４９０及びＮｅｏ１２）と比較し、二つのＮｅｏＴＣＲを含む２のＮｅｏＴＣＲ生成物（それぞれ等量の二のＮｅｏＴＣＲ細胞）と比較した、１のＮｅｏＴＣＲ生成物の比較を示している。示されているように、２のＮｅｏＴＣＲ生成物は殺傷性を示したが、左上のグラフに示されているように、２のＮｅｏＴＣＲの組み合わせの何れも３のＮｅｏＴＣＲ生成物と同じ程度の殺傷性を示さなかった。

【図8E】図８Ｅは２つの図表を示している：最初の図表は、ＮｅｏＴＣＲ生成物で使用された３のＮｅｏＴＣＲが図７Ａ－７Ｄにおいて、異なるネオエピトープを持ち、ＨＬＡの多様性があり、ＮｅｏＴＣＲの生理学的特性に差異があることを示しており；２番目の図表は、図８Ａ－８Ｄに示されたＮｅｏＴＣＲ生成物で使用される各ＮｅｏＴＣＲが、異なるネオエピトープ、異なるＨＬＡ、及びＮｅｏＴＣＲの生理学的特性の違いを有していることを示している。

【図9A-9B】図９Ａ－９Ｃは、ＩＦＮγで前処理することによりＭ４９０細胞株のＨＬＡ発現レベルを高めて、腫瘍細胞のＨＬＡ発現をよりよく模倣できることを示している。図９Ａは、ＩＦＮγ前処理なしの場合のＭ４９０細胞での内因性ＨＬＡ発現を示している。図９Ｂは、ＩＦＮγ前処理がＨＬＡ発現をアップレギュレートすることを示している（ＦＭＯは染色なしの対照である）。

【図9C】図９Ｃは、Ｍ４８６細胞及びＭ４９０細胞の両方でＩＦＮγ前処理を行った後のＨＬＡクラスＩのアップレギュレーションのヒートマッププロットを示すＲＮＡｓｅｑデータを提示する。これらの実験では、Ｍ４９０細胞株を、ＮｅｏＴＣＲを発現するように改変した。従って、図９Ｂ及び９Ｃは、ＩＦＮγ前処理を使用して、ＨＬＡクラス１及びネオ抗原提示をアップレギュレートすることにより、がん細胞のより自然な表現型を誘導できることを示している。

【図10】図１０Ａ及び１０Ｂは、ＩＦＮγ前処理がＭ４９０細胞株に細胞増殖抑制効果を及ぼすが（図１０Ａ）、細胞生存率には影響を与えないことを示している（図１０Ｂ）。

【図11】図１１Ａ及び１１Ｂは、ＮｅｏＴＣＲ生成物がＩＦＮγで前処理した場合に高度の細胞傷害性を示すことを示している。図１１Ａは、１のＮｅｏＴＣＲ生成物（及び対照としてＮｅｏＴＣＲでトランスフェクトされていないＭ４９０細胞株）を使用した腫瘍殺傷アッセイを示している。示されているように、１のＮｅｏＴＣＲ生成物の一部は殺傷性を示さない（ＮｅｏＴＣＲ４２３、ＮｅｏＴＣＲ４１８、及びＮｅｏＴＣＲ４３３は、殺傷性をまた示さない対照Ｍ４９０細胞と一致して殺傷性を示さない）。図１１Ｂは、図１１Ａに示したものと同じ腫瘍殺傷アッセイを示すが、ＩＦＮγ前処理を伴う。これは、ＩＦＮγ前処理がＮｅｏＴＣＲ生成物の殺傷能力を増加させることを示している。

【図12】図１２は、ペプチドパルス実験の実験セットアップを示している。示されているように、腫瘍細胞（患者の生検から培養されたメラノーマ細胞）に、ＮｅｏＴＣＲ生成物で発現されるネオエピトープに特異的なネオペプチド（すなわち、ＮｅｏＴＣＲに対する同族ネオペプチド）がパルスされる。殺傷アッセイを、ＩＦＮγ前処理を伴って、また伴わないで実施し、殺傷をＩｎｃｕＣｙｔｅアッセイによって測定した。これらの実験では、Ｐ：Ｔ比（ＮｅｏＴＣＲ細胞：腫瘍細胞比）は１０：１であった。

【図13A】図１３Ａ及び１３Ｂは、ＮｅｏＴＣＲがＨＬＡ－Ａ０２制限である、ＮｅｏＴＣＲ４０９を含むＮｅｏＴＣＲ生成物（図１３Ａ）及びＮｅｏＴＣＲ４２２を含むＮｅｏＴＣＲ生成物（図１３Ｂ）が、同族ネオペプチドでのペプチドパルス後に自己腫瘍細胞の優れた細胞傷害性を示すことを示している。

【図13B】上記

【図14A】図１４Ａ－１４Ｃは、それぞれのＮｅｏＴＣＲがＨＬＡ－Ｂ１５制限である、ＮｅｏＴＣＲ４１８を含むＮｅｏＴＣＲ生成物（図１４Ａ）、ＮｅｏＴＣＲ４３３を含むＮｅｏＴＣＲ生成物（図１４Ｂ）、及びＮｅｏＴＣＲ４２３を含むＮｅｏＴＣＲ生成物（図１４Ｃ）が、ＩＦＮγ前処理と同族ネオペプチドによるペプチドパルスで自己腫瘍細胞の殺傷性を示すことを示している。図１３Ａ及び１３Ｂに示されたＨＬＡ－Ａ０２制限ＮｅｏＴＣＲ生成物とは対照的に、図１４Ａ－１４Ｃに示されたＨＬＡ－Ｂ１５制限ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＩＦＮγで前処理した場合に有意な腫瘍細胞殺傷性の増加を示し、ＨＬＡ提示がＨＬＡに依存することを証明している。

【図14B】上記

【図14C】上記

【図15】図１５は、ＮｅｏＴＣＲプライミング実験の実験デザインを示している。具体的には、二のＮｅｏＴＣＲが相乗的に一緒に作用して腫瘍細胞の殺傷を促進できるという仮説を試験するために実験をデザインした。この実験では、各生成物が、腫瘍細胞（患者の生検から培養されたメラノーマ細胞）に発現される二種のネオ抗原の一つに特異的な二のＮｅｏＴＣＲ生成物を作製した。腫瘍細胞を、最初に第一のＮｅｏＴＣＲ生成物と共に２０時間培養し、ついで第二のＮｅｏＴＣＲ生成物を含めるか又は含めないで培養した。

【図16】図１６は、プライミング実験の結果を示している。使用した二のＮｅｏＴＣＲ生成物は、１）ＮｅｏＴＣＲ４２２を含むＮｅｏＴＣＲ生成物（生成物１）、及び２）ＮｅｏＴＣＲ４２１を含むＮｅｏＴＣＲ生成物（生成物２）であった。仮説は、腫瘍細胞に第一のＮｅｏＴＣＲ生成物をプライミングした場合、それがアポトーシスシグナルを誘導し、腫瘍細胞を第二のＮｅｏＴＣＲ生成物によるその後の殺傷に対してより感受性にするというものであった。腫瘍細胞に、生成物１又は生成物２の何れかを２０時間プライミングした。生成物１又は生成物２を含むプライミング培地を除去した後、細胞をＲＰＭＩ培地のみ又は他の生成物で処理した。この実験において使用されたＰ：Ｔ比は３０：１であった。示されているように、両方のＮｅｏＴＣＲ生成物が、他のＮｅｏＴＣＲ生成物による前処理後に増強された殺傷性を示した。

【図17】図１７Ａ及び１７Ｂは、第一のＮｅｏＴＣＲ生成物での腫瘍細胞のプライミングが、第二のＮｅｏＴＣＲ生成物の殺傷性を増強することを示している。図１７Ａは、ＮｅｏＴＣＲ４２９を発現するＮｅｏＴＣＲ生成物が、ＮｅｏＴＣＲ４２２を発現するＮｅｏＴＣＲ生成物による腫瘍細胞のプライミング後に増強された殺傷性を示すことを示している。図１７Ａは、ＮｅｏＴＣＲ４２９を発現するＮｅｏＴＣＲ生成物が、ＮｅｏＴＣＲ４２１を発現するＮｅｏＴＣＲ生成物による腫瘍細胞のプライミング後に増強された殺傷性を示すことを示している。両方の実験において、プライミング培地が腫瘍細胞の幾らかの殺傷を誘導するが、プライミングと第二のＮｅｏＴＣＲ生成物が有意により多くの殺傷を誘導する。

【図18A-18B】図１８Ａ－１８Ｄは、異なるＮｅｏＴＣＲ細胞間の予想されない相乗効果を示している。図１８Ａは、ＮｅｏＴＣＲ４２２を発現するＮｅｏＴＣＲ生成物（ＮｅｏＴＣＲ生成物１）、ＮｅｏＴＣＲ４２９を発現するＮｅｏＴＣＲ生成物（ＮｅｏＴＣＲ生成物２）、及びＮｅｏＴＣＲ４２１を発現するＮｅｏＴＣＲ生成物（ＮｅｏＴＣＲ生成物３）のそれぞれが腫瘍細胞のある程度の殺傷を示す一方、（ＮｅｏＴＣＲ４２２、ＮｅｏＴＣＲ４２９、又はＮｅｏＴＣＲ４２１の何れかを発現するＮｅｏＴＣＲ細胞を含み；各ＮｅｏＴＣＲ細胞が図５に記載されているＮｅｏＴＣＲ生成物４の全ＮｅｏＴＣＲ細胞の１／３を含む）ＮｅｏＴＣＲ生成物４が有意により多くの腫瘍細胞殺傷を示すことを示しており、ＮｅｏＴＣＲ生成物における３のＮｅｏＴＣＲの相乗効果を証明している。３のＮｅｏＴＣＲ生成物が２のＮｅｏＴＣＲ生成物よりも優れていたかどうかを理解するために、２のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＮｅｏＴＣＲ４２２、ＮｅｏＴＣＲ４２９、又はＮｅｏＴＣＲ４２１の各組み合わせを使用して作製した（図１８Ｂ－１８Ｄ）。これらの実験は、図６Ｂに提示された３のＮｅｏＴＣＲの組み合わせのそれぞれを使用して実施し、３のＮｅｏＴＣＲ対１又は２のＮｅｏＴＣＲの予想されない相乗効果が各実験において示された。

【図18C-18D】上記

【図19】図１９は、１のＮｅｏＴＣＲ生成物が、限られた１０：１のＰ：Ｔ比で自己腫瘍細胞を効果的に殺傷しないことを示しており、またＣＤ８非依存性対ＣＤ８依存性ＮｅｏＴＣＲの有効性を示している。

【図20-1】図２０は、自己腫瘍細胞株に対して患者から単離されたＮｅｏＴＣＲで構成される３のＮｅｏＴＣＲ生成物の細胞傷害性の相乗効果を示している。３のＮｅｏＴＣＲの組み合わせは、異なるネオエピトープと異なるＨＬＡを標的とした。単一のＮｅｏＴＣＲとして試験された場合のＮｅｏＴＣＲは、腫瘍細胞株を制御することができない。組み合わせで試験した場合、ＮｅｏＴＣＲは相乗効果を示し、赤色蛍光細胞の割合の減少によって示されるように、腫瘍細胞株を制御することができた。ＲＰＭＩ又はＮｅｏ１２ＴＣＲ発現Ｔ細胞（対照）では、腫瘍細胞増殖に対する効果は観察されなかった。右側のフロープロットは、ＣＤ４及びＣＤ８細胞のデキストラマー及び２Ａ染色を示している。試験した３のＮｅｏＴＣＲ、ＴＣＲ４０６、ＴＣＲ４１８、及びＴＣＲ４２９は、ＣＤ８依存性ＮｅｏＴＣＲである。これらのＮｅｏＴＣＲでは、ＣＤ４細胞でのデキストラマー結合の割合はＣＤ８細胞でのデキストラマー結合の５０％未満である。

【図20-2】上記

【発明を実施するための形態】

【0022】

本開示は、免疫療法のための増強された活性及び有効性を有する組成物を提供する。本開示は、腫瘍抗原（例えば、ネオ抗原）を標的とし、単独では細胞傷害活性が示されないか若しくは無視できる改変細胞が、組み合わされた場合に増加した活性（例えば、細胞傷害性、細胞増殖性、及び／又は細胞持続性）を有することを示す驚くべき結果に部分的に基づく。本開示はまたここに開示される複数の細胞及び組成物を産生するための方法、並びにがんを治療し及び／又は予防するためにそのような細胞を使用する方法を提供する。

【0023】

本開示の非限定的な実施態様は、本説明と実施例によって記述される。限定ではなく、開示を明確化する目的で、詳細な説明を次のサブセクションに分ける：
１． 定義；
２． ＮｅｏＴＣＲ細胞及びＮｅｏＴＣＲ生成物；
３． 治療組成物及び製造方法；
４． 治療方法；
５． 薬学的製剤；
６． 製造品；
７． ゲノム編集方法；
８． 相同組換え鋳型；及び
９． キット。

【0024】

１． 定義
別段の定義がない限り、ここで使用される全ての技術的及び科学的用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。次の参考文献は、本開示の主題で使用される用語の多くの一般的な定義を当業者に提供する：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ等，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２版 １９９４）；Ｔｈｅ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｋｅｒ編，１９８８）；Ｔｈｅ Ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，５版，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ等（編），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）；並びにＨａｌｅ及びＭａｒｈａｍ，Ｔｈｅ Ｈａｒｐｅｒ Ｃｏｌｌｉｎｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）。ここで使用される場合、次の用語は、特に明記しない限り、以下の定義に帰する意味を有している。

【0025】

ここに記載の発明の態様及び実施態様は、態様及び実施態様を「含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」ことを含むことが理解される。「含む（comprises）」及び「含む（comprising）」という用語は、米国特許法においてそれらに帰する広い意味を有することを意図しており、「含む（includes）」、「含む（including）」などを意味しうる。

【0026】

ここで使用される場合、「約」又は「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味し、値がどのように測定され又は決定されるかに、すなわち、測定系の制限に部分的に依存する。例えば、「約」は、技術分野の慣行に従って、３又は３を超える標準偏差内を意味しうる。あるいは、「約」は、所与の値の最大２０％、例えば、最大１０％、最大５％、又は最大１％の範囲を意味しうる。あるいは、特に生物システム又はプロセスに関して、この用語は、値の一桁分以内、例えば、値の５倍以内又は２倍以内を意味しうる。

【0027】

ここで使用される「アセトアミノフェン」は、アセトアミノフェンと、パラセタモールなどの同じ及び／又は治療的に類似した薬剤の任意の他のブランド化された又はタイムリリース代替物を意味する。

【0028】

ここで使用される「投与する」は、ある投薬量の化合物（例えば、ＮｅｏＴＣＲ生成物、組み合わせ薬剤、又はここに記載の他の薬剤）又は組成物（例えば、ＮｅｏＴＣＲ生成物、組み合わせ薬剤、又はここに記載の他の薬剤の薬学的形成物）を対象に与える方法を意味する。ここに記載の方法で利用される組成物は、例えば、静脈内、腹腔内、小胞内、腫瘍内及び皮下に投与されうる。追加の投与態様には、限定されないが、くも膜下腔内、リンパ節注射、筋肉内、皮内、動脈内、病巣内、頭蓋内、胸膜内、気管内、硝子体内、腹膜、及び臍内が含まれる。ここに開示される任意の投与は、注射、注入、連続注入、標的細胞を直接ベイジングさせる局所灌流、カテーテル、又は洗浄によって実施することができる。投与方法は、様々な要因（例えば、治療されている状態、疾患、又は障害の重症度、及び治療されているがん又は増殖性障害のタイプ）に応じて変わりうる。

【0029】

ここで使用される「抗体」は、最も広い意味で使用され、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性及び三重特異性抗体）、及びそれらが所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片（例えば、ビス－Ｆａｂ）を含む、様々な抗体構造を包含する。ここで使用される「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、限定されないが、ビス－Ｆａｂ；Ｆｖ；Ｆａｂ；Ｆａｂ，Ｆａｂ’－ＳＨ；Ｆ（ａｂ’）_２；ダイアボディ；直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。

【0030】

「がん」及び「腫瘍」という用語は、ここでは交換可能に使用される。ここで使用される場合、「がん」又は「腫瘍」という用語は、悪性か良性かを問わず、全ての新生物細胞の成長及び増殖、並びに全ての前がん性及びがん性細胞及び組織を指す。該用語は、更に、典型的には未制御の細胞成長／増殖を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指し又は記述するために使用される。がんの例には、限定されないが、ここに記載されるものが含まれる。「がん」又は「腫瘍」及び「増殖性障害」という用語は、ここで使用される場合、相互に排他的ではない。

【0031】

ここで使用される「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化合物を指す。化学療法剤の例には、チオテパ、シクロスホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、テモゾロミド（Ｍｅｔｈａｚｏｌａｓｔｏｎｅ（登録商標）、Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））、トレオスルタン（treosultan）、及びベンダムスチン塩酸塩（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン等のアルキルスルホネート；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパ等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミン及びメチラメラミン（methylamelamine）；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）；デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標）；ベータ－ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、イリノテカンリポソーム注射剤（Ｏｎｉｖｙｄｅ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレチン、及び９－アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９及びＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン（ranimnustine）等のニトロソウレア；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマ１Ｉ及びカリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ等，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６（１９９４）を参照）、経口アルファ－４インテグリン阻害剤のＣＤＰ３２３；ダイネミシン（dynemicin）Ａを含むダイネミシン；エスペラマイシン；並びにネオカルチノスタチン発光団及び関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発光団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ Ｄ－９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔ（登録商標））及びネララビン（Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標））などのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フォリン酸（frolinic acid）などの葉酸補充薬；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エフォルニチン（elfornithine）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシン及びアンサマイトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ－２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭ）、カバジタキセル（Ｊｅｖｔａｎａ（登録商標））、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロランブシル；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチンなどの白金剤；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、硫酸ビンクリスチンリポソーム（Ｍａｒｑｉｂｏ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、ビンフルニン（Ｊａｖｌｏｒ（登録商標））及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む、チューブリン重合による微小管の形成を防ぐビンカ；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含む、レチノイン酸などのレチノイド；クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）又はＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、又はリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））などのビスホスホネート；トロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えば、ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）などの異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子治療ワクチンなどのワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ソラフェニブ（例えば、Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））；ＳＵ－１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリホシン、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ又はエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）、例えばカルフィルゾミブ（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ（登録商標））及びイキサゾミブクエン酸エステル（Ｎｉｎｌａｒｏ（登録商標））；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ－７７９；ティピファニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））及びベネトクラクス（Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ（登録商標））などのＢｃｌ－２阻害剤；ピキサントロン；ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））などのＥＧＦＲ阻害剤（以下の定義を参照）；ボスチニブ（Ｂｏｓｕｌｉｆ（登録商標））、カボザンチニブ－ｓ－マレート（Ｃａｂｏｍｅｔｙｘ（登録商標）、Ｃｏｍｅｔｒｉｑ（登録商標））、二マレイン酸アファチニブ（Ｇｉｌｏｔｒｉｆ（登録商標））、メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、ポナチニブ塩酸塩（Ｉｃｌｕｓｉｇ（登録商標））などのチロシンキナーゼ阻害剤（以下の定義を参照）；アキシチニブ（Ｉｎｌｙｔａ（登録商標））、イブルチニブ（Ｉｍｂｒｕｖｉｃａ（登録商標））、ソラフェニブトシル酸塩（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））、ダサチニブ（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標））、オシメルチニブ（Ｔａｇｒｉｓｓｏ（登録商標））、エルロチニブ塩酸塩（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、ニロチニブ（Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標））、ラパチニブ二トシル酸塩（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標））、クリゾチニブ（Ｘａｌｋｏｒｉ（登録商標））及びパゾパニブ塩酸塩（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））；ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））、エベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））、及びテムシロリムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標））などのセリン－スレオニンキナーゼ阻害剤；ロナファルニブ（ＳＣＨ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲＴＭ）などのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；ネツピタント、及びロラピタント塩酸塩（Ｖａｒｕｂｉ（登録商標））などのＮＫ１受容体遮断薬；イミキモド（Ａｌｄａｒａ（登録商標））；アレクチニブ（Ａｌｅｃｅｎｓａ（登録商標））及びセリチニブ（Ｚｙｋａｄｉａ（登録商標））などの未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤；ベリノスタット（Ｂｅｌｅｏｄａｑ（登録商標））及びボリノスタット（Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標））などのヒストンデアセチラーゼ阻害剤；クロファラビンなどのプリンヌクレオシド代謝拮抗剤；コビメチニブ（Ｃｏｔｅｌｌｉｃ（登録商標））及びトラメチニブ（Ｍｅｋｉｎｉｓｔ（登録商標））などのマイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤；デシタビン（Ｄａｃｏｇｅｎ（登録商標））などの核酸合成阻害剤；ビスモデギブ（Ｅｒｉｖｅｄｇｅ（登録商標））及びソニデギブ（Ｏｄｏｍｚｏ（登録商標））などのヘッジホッグシグナル伝達経路阻害剤；パノビノスタット（Ｆａｒｙｄａｋ（登録商標））などのヒストンデアセチラーゼ阻害剤；プララトレキサート（Ｆｏｌｏｔｙｎ（登録商標））、ラルチトレキセド、及びペメトレキセド二ナトリウム
（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））などの葉酸代謝拮抗薬；メシル酸エリブリン（Ｈａｌａｖｅｎ（登録商標））などの有糸分裂阻害剤；パルボシクリブ（Ｉｂｒａｎｃｅ（登録商標））などのサイクリン依存性キナーゼの阻害剤；ロミデプシン（Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標））などのデプシペプチド；イクサベピロン（Ｉｘｅｍｐｒａ（登録商標））などのエポチロンＢ類似体；ルキソリチニブリン酸塩（Ｊａｋａｆｉ（登録商標））などのヤヌスキナーゼ阻害剤；レンバチニブメシル酸塩（Ｌｅｎｖｉｍａ（登録商標））、バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ（登録商標））、レゴラフェニブ（Ｓｔｉｖａｒｇａ（登録商標））、ニンテダニブ（Ｖａｒｇａｔｅｆ（登録商標））などのマルチプルキナーゼ阻害剤；トリフルリジンなどのヌクレオシド類似体；チピラシル塩酸塩などのチミジンホスホリラーゼ阻害剤；オラパリブ（Ｌｙｎｐａｒｚａ（登録商標））などのＰＡＲＰ阻害剤；サリドマイド（Ｓｔｉｖａｒｇａ（登録商標）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標））とその誘導体、例えばポマリドミド（Ｐｏｍａｌｙｓｔ（登録商標））及びレナリドミド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））；プレドニゾンなどの合成コルチコステロイド；ランレオチド酢酸塩（Ｓｏｍａｔｕｌｉｎｅ（登録商標））などのソマトスタチンの類似体；オマセタキシンメペサクシネート（Ｓｙｎｒｉｂｏ（登録商標））などのタンパク質翻訳阻害剤；ダブラフェニブ（Ｔａｆｉｎｌａｒ（登録商標））及びベムラフェニブ（Ｚｅｌｂｏｒａｆ（登録商標））などの関連酵素Ｂ－Ｒａｆの阻害剤；三酸化ヒ素（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標））；ウリジントリアセテート（Ｖｉｓｔｏｇａｒｄ（登録商標））；塩化ラジウム２２３（Ｘｏｆｉｇｏ（登録商標））；トラベクテジン（Ｙｏｎｄｅｌｉｓ）、イデラリシブ（Ｚｙｄｅｌｉｇ（登録商標））などのホスホイノシチド３－キナーゼ阻害剤；ミルファムルチド（Ｍｅｐａｃｔ（登録商標））；及び上記の何れかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体；並びに上記のうちの二以上の組合せ、例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの併用療法の略語であるＣＨＯＰ；及び５－ＦＵ及びロイコボリンと併用されたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ）を用いる治療レジメンの略語であるＦＯＬＦＯＸが含まれる。

【0032】

ここで定義される化学療法剤には、がんの増殖を促進しうるホルモンの効果を調節し、低下させ、遮断し、又は阻害するように作用する「抗ホルモン剤」又は「内分泌治療薬」が含まれる。これらは、それ自体ホルモンであり得、限定されないが、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４－ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン、ケオキシフェン、及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えば、ＳＥＲＭ３を含む、混合アゴニスト／アンタゴニストプロファイルを持つ抗エストロゲン；デガレリクス、リュープロプレリン（leuproprelin）、及びトリプトレリンなどの性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）拮抗薬；アゴニスト特性を有さない純粋な抗エストロゲン、例えば、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、及びＥＭ８００（そのような薬剤は、エストロゲン受容体（ＥＲ）二量化を遮断し、ＤＮＡ結合を阻害し、ＥＲ代謝回転を増加させ、及び／又はＥＲレベルを抑制しうる）；ステロイド性アロマターゼ阻害剤、例えば、ホルメスタン及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））、及び非ステロイド系アロマターゼ阻害剤、例えば、アナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））及びアミノグルテチミドを含む、アロマターゼ阻害剤、並びにボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、メゲストロール酢酸エステル（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、及び４（５）－イミダゾールを含む、その他のアロマターゼ阻害剤；リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、ヒストレリン、及びトリプテレリンを含む、黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト；メゲストロール酢酸エステル及びメドロキシプロゲステロン酢酸エステルなどのプロゲスチン、ジエチルスチルベストロール及びプレマリンなどのエストロゲン、並びにフルオキシメステロン、全トランス型レチノイン酸及びフェンレチニドなどのアンドロゲン／レチノイドを含む、性ステロイド；オナプリストン；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体ダウンレギュレーター（ＥＲＤ）；フルタミド、ニルタミド（例えば、Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標））、アビラテロン酢酸エステル（Ｚｙｔｉｇａ（登録商標））、シプロテロン酢酸エステル（Ｃｙｐｒｏｓｔａｔ（登録商標））、エンザルタミド（Ｘｔａｎｄｉ（登録商標））及びビカルタミドなどの抗アンドロゲン；及び上記の何れかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体；並びに上記の二以上の組み合わせを含む。

【0033】

ここで使用される「組み合わせ薬剤」は、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて同時に又は逐次的に投与することができる任意の他の活性剤を意味する。

【0034】

ここで使用される「完全奏効」は、治療に応答してがんの全ての兆候が消失することを意味する。

【0035】

ここで使用される「細胞傷害性剤」は、細胞機能を阻害又は防止し、及び／又は細胞死若しくは破壊を引き起こす物質を意味する。細胞傷害性剤には、限定されないが、放射性同位体（例えば、Ａｔ^２１１、Ｉ^１３１、Ｉ^１２５、Ｙ^９０、Ｒｅ^１８６、Ｒｅ^１８８、Ｓｍ^１５３、Ｂｉ^２１２、Ｐ^３２、Ｐｂ^２１２及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤又は薬物（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤）；増殖抑制剤；核酸分解酵素などの酵素とその断片；抗生物質；小分子毒素あるいはその断片及び／又はバリアントを含む細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素などの毒素；並びに大分子（例えば、抗体、ペプチド、及びサイトカインなどのタンパク質）、細胞療法剤、及びがんワクチンなどの様々な抗腫瘍若しくは抗がん剤が含まれる。

【0036】

ここで使用される「進行を遅らせる」又は「進行の遅延」は、がんなどの細胞増殖性障害の発生を延期し、妨害し、遅くし、遅延させ、安定化し、及び／又は延ばすことを意味する。この遅延は、病歴及び／又は治療されている個体に応じて、様々な長さの時間になりうる。当業者には明らかなように、十分な又は有意な遅延は、事実上、個体が疾患を発症しないという点で予防を包含しうる。例えば、転移の発生などの後期がんは遅延させられうる。

【0037】

ここに開示されるＮｅｏＴＣＲ生成物（又はそのようなＮｅｏＴＣＲ生成物を含む組み合わせ）の「有効量」又は「治療有効量」は、具体的に述べられた目的を実行するのに十分な量である。「有効量」又は「治療有効量」は、哺乳動物（例えば、ヒト患者）における疾患又は障害を「治療」するのに有効な、ここに開示されるＮｅｏＴＣＲ生成物又はそのようなＮｅｏＴＣＲ生成物を含む組み合わせの量を指す。がん又は他の増殖性障害（限定されないが、ここに記載のがん型の一つを含む）の場合、ＮｅｏＴＣＲ生成物又はそのようなＮｅｏＴＣＲ生成物を含む組み合わせの治療有効量は、１）そのようながんの広がりを減少させ、停止させ又は防ぐために必要な量、２）そのようながんの一又は複数の症状を軽減し、停止させ又は防ぐために必要な量、及び／又は３）がんの全て又は相当量を根絶するために必要な量を指す。所定の実施態様では、有効量のＮｅｏＴＣＲ生成物は、部分奏功をもたらすであろう。所定の実施態様では、有効量のＮｅｏＴＣＲ生成物は、完全奏功をもたらすであろう。

【0038】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物の「有効量」は、特定の障害（例えば、増殖性障害、例えばがん）の測定可能な改善又は予防などの所望の治療又は予防結果を達成するために必要とされるＮｅｏＴＣＲ生成物の少なくとも最小量である。ここにおける有効量は、患者の病状、年齢、性別、及び体重、並びに患者において所望の応答を誘発するＮｅｏＴＣＲ生成物の能力などの要因に応じて変わりうる。有効量はまた治療的に有益な効果が治療の毒性又は有害作用を上回る量である。予防用途の場合、有益な若しくは望ましい結果には、疾患の生化学的、組織学的及び／又は行動的症状、その合併症、及び疾患の進行中に呈する中間の病理学的表現型を含む、疾患のリスクの排除又は低下、重症度の軽減、又は発症の遅延などの結果が含まれる。治療用途の場合、有益な若しくは望ましい結果には、疾患に起因する一又は複数の症状の減少、疾患に罹患した人の生活の質の向上、疾患の治療に必要な他の医薬の用量の減少、ターゲティングを介するなどの別の薬物療法の効果の向上、疾患の進行の遅延化、及び／又は生存期間の延長などの臨床結果が含まれる。がん又は腫瘍の場合、有効量の薬物は、がん細胞の数を減少させ；腫瘍サイズを縮小させ；末梢器官へのがん細胞の浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅くするか、又は望ましくは停止させ）；腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅くし、望ましくは停止させ）；腫瘍増殖をある程度阻害し；及び／又は障害に関連する症状の一又は複数をある程度緩和する効果を有しうる。有効量は一又は複数回の投与で投与されうる。ＮｅｏＴＣＲ生成物の有効量は、予防的又は治療的処置を直接的又は間接的に達成するのに十分な量である。臨床状況で理解されるように、有効量のＮｅｏＴＣＲ生成物は、別の薬物、化合物、又は薬学的組成物と併せて達成される場合と達成されない場合がある。従って、「有効量」は、一又は複数の治療薬を投与するという状況において考慮され得、単一の薬剤は、一又は複数の他の薬剤と併せて、望ましい結果があり得、又は達成されるならば、有効量で与えられると考えられうる。

【0039】

ここで使用される「ＥＬＩＳＡ」は、酵素結合免疫吸着アッセイを意味する。
ここで使用される「ＦＩＳＨ」は、蛍光インサイツハイブリダイゼーションを意味する。

【0040】

ここで使用される「遺伝子回路」は、相互作用してユーザー定義の生物学的プログラムを実行する遺伝子コンストラクトを意味する。所定の実施態様では、遺伝子回路は、細胞内の生物学的部分が機能を遂行する（すなわち、電子回路で観察されるものを模倣する）ようにデザインされている合成生物学の適用である。遺伝子回路の適用には、限定されないが、１）細胞によって天然には産生されないか、又は細胞によって天然に産生される化合物又は分子の産生を増加させる化合物又は分子（例えば、タンパク質、ポリペプチド、サイトカイン、抗体、又は細胞が天然に産生し若しくは産生するように改変されうる任意の他の化合物若しくは分子）の産生を誘導すること、２）細胞に新しいエレメント（例えば、タンパク質、ポリペプチド、サイトカイン、抗体、又は細胞が天然に産生し若しくは産生するように改変されうる任意の他の化合物若しくは分子）を加えること、並びに３）細胞内に新しいシステムを実装することが含まれる。

【0041】

ここで使用される「ＩＬ－２剤」は、任意のＩＬ－２サイトカイン、ＩＬ－２サイトカイン若しくはその機能的断片を含む分子、ＩＬ－２サイトカインの誘導体、改変されたＩＬ－２サイトカイン、ペグ化ＩＬ－２サイトカイン、ＩＬ－２サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された抗体、ＩＬ－２サイトカイン若しくはその機能的断片に融合されたＦｃ、又はＩＬ－２サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された別の抗体断片を意味する。

【0042】

ここで使用される「ＩＬ－７剤」は、任意のＩＬ－７サイトカイン、ＩＬ－７サイトカイン若しくはその機能的断片を含む分子、ＩＬ－７サイトカインの誘導体、改変されたＩＬ－７サイトカイン、ペグ化ＩＬ－７サイトカイン、ＩＬ－７サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された抗体、ＩＬ－７サイトカイン若しくはその機能的断片に融合されたＦｃ、又はＩＬ－７サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された別の抗体断片を意味する。

【0043】

ここで使用される「ＩＬ－１０剤」は、任意のＩＬ－１０サイトカイン、ＩＬ－１０サイトカイン若しくはその機能的断片を含む分子、ＩＬ－１０サイトカインの誘導体、改変されたＩＬ－１０サイトカイン、ペグ化ＩＬ－１０サイトカイン、ＩＬ－１０サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された抗体、ＩＬ－１０サイトカイン若しくはその機能的断片に融合されたＦｃ、又はＩＬ－１０サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された別の抗体断片を意味する。

【0044】

ここで使用される「ＩＬ－１２剤」は、任意のＩＬ－１２サイトカイン、ＩＬ－１２サイトカイン若しくはその機能的断片を含む分子、ＩＬ－１２サイトカインの誘導体、改変されたＩＬ－１２サイトカイン、ペグ化ＩＬ－１２サイトカイン、ＩＬ－１２サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された抗体、ＩＬ－１２サイトカイン若しくはその機能的断片に融合されたＦｃ、又はＩＬ－１２サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された別の抗体断片を意味する。

【0045】

ここで使用される「ＩＬ－１５剤」は、任意のＩＬ－１５サイトカイン、ＩＬ－１５サイトカイン若しくはその機能的断片を含む分子、ＩＬ－１５サイトカインの誘導体、改変されたＩＬ－１５サイトカイン、ペグ化ＩＬ－１５サイトカイン、ＩＬ－１５サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された抗体、ＩＬ－１５サイトカイン若しくはその機能的断片に融合されたＦｃ、又はＩＬ－１５サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された別の抗体断片を意味する。

【0046】

ここで使用される「ＩＬ－１８剤」は、任意のＩＬ－１８サイトカイン、ＩＬ－１８サイトカイン若しくはその機能的断片を含む分子、ＩＬ－１８サイトカインの誘導体、改変されたＩＬ－１８サイトカイン、ペグ化ＩＬ－１８サイトカイン、ＩＬ－１８サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された抗体、ＩＬ－１８サイトカイン若しくはその機能的断片に融合されたＦｃ、又はＩＬ－１８サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された別の抗体断片を意味する。

【0047】

ここで使用される「ＩＬ－２１剤」は、任意のＩＬ－２１サイトカイン、ＩＬ－２１サイトカイン若しくはその機能的断片を含む分子、ＩＬ－２１サイトカインの誘導体、改変されたＩＬ－２１サイトカイン、ペグ化ＩＬ－２１サイトカイン、ＩＬ－２１サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された抗体、ＩＬ－２１サイトカイン若しくはその機能的断片に融合されたＦｃ、又はＩＬ－２１サイトカイン若しくはその機能的断片に融合された別の抗体断片を意味する。

【0048】

「ラベル」又は「添付文書」は、治療薬の市販パッケージに通例含まれており、適応症、使用法、投与量、投与、併用療法、そのような治療薬の使用に関する禁忌及び／又は警告に関する情報を含んでいる説明書を指すために使用される。ここで特定されていない限り、「ラベル」又は「添付文書」とは、ＮｅｏＴＣＲ生成物のラベル又は添付文書を指す。

【0049】

ここで使用される場合、「ネオ抗原」、「ネオエピトープ」又は「ｎｅｏＥ」という用語は、例えば、体細胞変異から生じ、「非自己」として認識される、新しく形成された抗原決定基を指す。「ネオ抗原」、「ネオエピトープ」又は「ｎｅｏＥ」を生じさせる変異には、フレームシフト又は非フレームシフトインデル、ミスセンス又はナンセンス置換、スプライス部位変化（例えば、選択的スプライシングされた転写物）、ゲノム再編成又は遺伝子融合、何らかのゲノム又は発現変化、又は何らかの翻訳後修飾が含まれうる。

【0050】

「ＮｅｏＴＣＲ」及び「ＴＣＲ」は交換可能に使用され、ここで使用される場合はネオエピトープ特異的Ｔ細胞受容体を意味する。

【0051】

ここで使用される「ＮｅｏＴＣＲ細胞（NeoTCR cells）」又は「ＮｅｏＴＣＲ細胞（NeoTCR Cells）」は、一又は複数のＮｅｏＴＣＲを発現するように精密改変された一又は複数の細胞を意味する。所定の実施態様では、細胞はＴ細胞である。所定の実施態様では、Ｔ細胞はＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞である。所定の実施態様では、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞（つまり、ＮｅｏＴＣＲ細胞）は、ＮｅｏＴＣＲ生成物が投与される患者の自己細胞である。

【0052】

ここで使用される「ＮｅｏＴＣＲ細胞集団」は、集団内の細胞の各々が同じＮｅｏＴＣＲを発現するように精密改変されたＮｅｏＴＣＲ細胞の集団を意味する。

【0053】

ここで使用される「ＮｅｏＴＣＲ生成物」又は「ＴＣＲ生成物」は、一又は複数のＮｅｏＴＣＲを含む薬学的製剤を意味する。ＮｅｏＴＣＲ生成物は、自己の精密ゲノム改変されたＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞を含む。例えば、標的ＤＮＡを介した非ウイルス精密ゲノム改変アプローチを使用して、内因性ＴＣＲの発現が排除され、腫瘍排他的ネオエピトープを標的とする末梢ＣＤ８＋Ｔ細胞から単離された患者特異的ＮｅｏＴＣＲによって置換される。所定の実施態様では、得られた改変ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞は、天然配列、天然発現レベル、及び天然ＴＣＲ機能のＮｅｏＴＣＲをその表面に発現する。ＮｅｏＴＣＲ外部結合ドメインと細胞質シグナル伝達ドメインの配列は、天然ＣＤ８＋Ｔ細胞から単離されたＴＣＲから未修飾である。ＮｅｏＴＣＲ遺伝子発現の調節は、ＮｅｏＴＣＲ遺伝子カセットがゲノムに組み込まれている場所の上流に位置する天然の内因性ＴＣＲプロモーターによって駆動される。このアプローチにより、ＮｅｏＴＣＲ発現の天然レベルが、未刺激の抗原活性化Ｔ細胞状態で観察される。

【0054】

各患者向けに製造されたＮｅｏＴＣＲ生成物は、その同じ患者の末梢血から個別に単離されたｎｅｏＥ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞からクローン化された単一のｎｅｏＥ特異的ＴＣＲを発現するように精密ゲノム改変された自己ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞の定まった用量を表す。

【0055】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲ細胞の複数の異なる集団を含み、各集団は異なるネオ抗原を標的とする。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲ細胞の一集団を含む（すなわち、集団のＮｅｏＴＣＲ細胞の全てが同じネオ抗原を標的とする）。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲ細胞の二集団を含む（すなわち、第一のＮｅｏＴＣＲ細胞集団の全てのＮｅｏＴＣＲ細胞が一つのネオ抗原を標的とし、第二のＮｅｏＴＣＲ細胞集団の全てのＮｅｏＴＣＲ細胞が第二のネオ抗原を標的とする）。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲ細胞の三集団を含む（すなわち、第一のＮｅｏＴＣＲ細胞集団の全てのＮｅｏＴＣＲ細胞が一つのネオ抗原を標的とし、第二のＮｅｏＴＣＲ細胞集団の全てのＮｅｏＴＣＲ細胞が第二のネオ抗原を標的とし、第三のＮｅｏＴＣＲ細胞集団の全てのＮｅｏＴＣＲ細胞が第三のネオ抗原を標的とする）。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、二以上のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、三以上のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、五以上のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ細胞の二以上の集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物中の各ＮｅｏＴＣＲ細胞集団の各ＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、互いにほぼ等しい（すなわち、三のＮｅｏＴＣＲ細胞集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、１／３の第一のＮｅｏＴＣＲ細胞集団、１／３の第二のＮｅｏＴＣＲ集団、及び１／３の第三のＮｅｏＴＣＲ集団を含む）。

【0056】

ＮｅｏＴＣＲ生成物とは、限定されないが、以下に定義される一のＮｅｏＴＣＲ生成物、二のＮｅｏＴＣＲ生成物、及び三のＮｅｏＴＣＲ生成物を含む全てのＮｅｏＴＣＲ生成物を指す。

【0057】

ここで使用される「一のＮｅｏＴＣＲ生成物」又は「１のＮｅｏＴＣＲ生成物」は、単一のＮｅｏＴＣＲのみを発現する細胞を含むＮｅｏＴＣＲ生成物を指す。

【0058】

ここで使用される「二のＮｅｏＴＣＲ生成物」又は「２のＮｅｏＴＣＲ生成物」は、二つの細胞集団、すなわち第一のＮｅｏＴＣＲを発現する一つの集団と第二のＮｅｏＴＣＲを発現する第二集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物を指す。所定の実施態様では、２のＮｅｏＴＣＲ生成物は、それぞれがほぼ等しい数の二つの細胞集団を有する。所定の実施態様では、２のＮｅｏＴＣＲ生成物は、二つの細胞集団のそれぞれはほぼ等しい数を有さない。所定の実施態様では、細胞の各集団は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と考えることができ、二つの細胞集団のそれぞれの組み合わせもまたＮｅｏＴＣＲ生成物と考えられる。

【0059】

ここで使用される「三のＮｅｏＴＣＲ生成物」又は「３のＮｅｏＴＣＲ生成物」は、三つの細胞集団、すなわち第一のＮｅｏＴＣＲを発現する一つの集団、第二のＮｅｏＴＣＲを発現する第二集団、及び第三のＮｅｏＴＣＲを発現する第三集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物を指す。所定の実施態様では、３のＮｅｏＴＣＲ生成物は、それぞれがほぼ等しい数の三つの細胞集団を有する。所定の実施態様では、３のＮｅｏＴＣＲ生成物は、三つの細胞集団のそれぞれはほぼ等しい数を有さない。所定の実施態様では、細胞の各集団は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と考えることができ、三つの細胞集団のそれぞれの組み合わせもまたＮｅｏＴＣＲ生成物と考えられる。

【0060】

「２Ａ」及び「２Ａペプチド」は、ここでは交換可能に使用され、真核細胞での翻訳中にペプチドの切断を媒介することができる１８～２２アミノ酸長のウイルスの自己切断型ペプチドのクラスを意味する。２Ａペプチドクラスの四種のよく知られたメンバーは、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、及びＦ２Ａである。Ｔ２Ａペプチドは、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａにおいて最初に同定された。Ｐ２Ａペプチドは、ブタのテッショウウイルス－１ ２Ａで最初に同定された。Ｅ２Ａペプチドは、ウマ鼻炎Ａウイルスで最初に同定された。Ｆ２Ａペプチドは、口蹄疫ウイルスで最初に同定された。

【0061】

ここで使用される「と組み合わせて」とは、ここに開示される複数の細胞と、一又は複数の薬剤、例えば、ＰＤ－１軸結合剤が、治療レジメン又は計画の一部として対象に投与されることを意味する。
ここで使用される「部分奏功」とは、治療に応答した、腫瘍のサイズ、又は体内のがんの程度の減少を意味する。

【0062】

ここで使用される「ＰＤ」は、薬力学を意味する。

【0063】

「ＰＤ－１軸結合剤」という用語は、ＰＤ－１シグナル伝達軸でのシグナル伝達から生じるＴ細胞機能障害を除去するように、ＰＤ－１軸結合パートナーとその結合パートナーの一又は複数との相互作用を阻害し、その結果、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞殺傷）を回復し又は増強する分子を指す。ここで使用される場合、ＰＤ－１軸結合剤は、ＰＤ－１結合剤、ＰＤ－Ｌ１結合剤及びＰＤ－Ｌ２結合剤を含む。

【0064】

「ＰＤ－１結合剤」という用語は、ＰＤ－１とその結合パートナーの一又は複数、例えばＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、抑止し又は妨害する分子を指す。幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合剤は、ＰＤ－１の一又は複数のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤は、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２への結合を阻害する。例えば、ＰＤ－１結合剤には、抗ＰＤ－１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、抑止し又は妨害する他の分子が含まれる。一実施態様では、ＰＤ－１結合剤は、機能障害性Ｔ細胞をより機能障害にしないようにする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ようにＰＤ－１を介したシグナル伝達を介してＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって又はそれを介して負の共刺激シグナルを低減する。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤は抗ＰＤ－１抗体である。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤は、ＭＤＸ－１１０６（ニボルマブ）である。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はＭＫ－３４７５（ペムブロリズマブ）である。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はセミプリマブである。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はＪＴＸ－４０１４である。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はスパルタリズマブである。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はシンチリマブである。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はチスレリズマブ（tislelizumab）である。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はトリパリマブである。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はドスタルリマブである。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はＭＧＡ０１２である。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はＡＭＰ－５１４である。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤は、ＣＴ－０１１（ピジリズマブ）である。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はＡＭＰ－２２４である。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はＭＥＤ１－０６８０である。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はＰＤＲ００１である。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はＲＥＧＮ２８１０である。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はＢＧＢ－１０８である。

【0065】

「ＰＤ－Ｌ１結合剤」という用語は、ＰＤ－Ｌ１とその結合パートナーの何れか一又は複数、例えば、ＰＤ－１、Ｂ７－１との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、抑止し又は妨害する分子を指す。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合剤は、ＰＤ－Ｌ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合剤は、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１及び／又はＢ７－１への結合を阻害する。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合剤には、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ－１、Ｂ７－１などの一又は複数の結合パートナーとのＰＤ－Ｌ１の相互作用から生じるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、抑止し又は妨害する他の分子が含まれる。一実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合剤は、機能障害性Ｔ細胞をより機能障害にしないようにする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ようにＰＤ－Ｌ１を介したシグナル伝達を介してＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって又はそれを介して負の共刺激シグナルを低減する。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。更に別の特定の実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ、ＷＨＯ医薬品情報（医薬品の国際一般名）でＴＥＣＥＮＴＲＩＱ^ＴＭとして市販）、推奨ＩＮＮ：Ｌｉｓｔ７４、Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．３，２０１５（３８７ページ参照））である。特定の実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の特定の実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＤＸ－１１０５である。別の特定の実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＳＢ００１５７１８Ｃである。更に別の特定の実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＥＤ１４７３６である。

【0066】

「ＰＤ－Ｌ２結合剤」という用語は、ＰＤ－Ｌ２とその結合パートナーの何れか一又は複数、例えば、ＰＤ－１との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、抑止し又は妨害する分子を指す。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合剤は、ＰＤ－Ｌ２のその結合パートナーの一又は複数への結合を阻害する分子である。特定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合剤は、ＰＤ－Ｌ２のＰＤ－１への結合を阻害する。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合剤には、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ－１などの何れか一又は複数の結合パートナーとのＰＤ－Ｌ２の相互作用から生じるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、抑止し又は妨害する他の分子が含まれる。一実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合剤は、機能障害性Ｔ細胞をより機能障害にしないようにする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ようにＰＤ－Ｌ２を介したシグナル伝達を介してＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって又はそれを介して負の共刺激シグナルを低減する。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合剤はイムノアドヘシンである。

【0067】

「薬学的製剤」は、そこに含まれる活性成分の生物学的活性が有効であることを可能にする形態であり、製剤が投与される対象に許容できないほど毒性がある追加の成分を含まない調製物を指す。明確にするために、ＮｅｏＴＣＲ生成物において使用される量のＤＭＳＯは許容できないほど毒性があるとは考えられない。

【0068】

ここで使用される「増殖性障害」は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を意味する。所定の実施態様では、増殖性障害はがんである。

【0069】

治療の目的での「対象」、「患者」、又は「個体」とは、ヒト、家畜及び農場動物、動物園、スポーツ、又はペット動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、ウシ等々を含む、哺乳動物として分類される任意の動物を指す。好ましくは、哺乳動物はヒトである。

【0070】

ここで使用される「ＴＣＲ」は、Ｔ細胞受容体を意味する。
ここで使用される「ＴＬＡ」は、標的遺伝子座増幅を意味する。

【0071】

「治療する（Treat）」、「治療（Treatment）」、及び「治療すること（treating）」は互換的に使用され、ここで使用される場合、臨床結果を含む有益な又は望ましい結果を得ることを意味する。治療の望ましい効果には、限定されないが、疾患の発症又は再発の予防、症状の緩和、疾患の直接的又は間接的な病理的帰結の減少、転移の予防、疾患の進行速度の低下、病状の回復又は緩和、及び寛解又は予後の改善が含まれる。幾つかの実施態様では、本発明のＮｅｏＴＣＲ生成物は、増殖性障害（例えば、がん）の発症を遅らせるために、又はそのような疾患の進行を遅らせるために使用される。

【0072】

ここで使用される「トランカル」又は「トランカル変異」は、腫瘍の全てのクローンによって共有される系統樹の幹における祖先変異を意味し、対照的に「サブクローン」は、幹から分岐した系統における変異を指す。あらゆる患者の腫瘍には、共通の進化的起源を示す固有の共有変異セットがある。従って、ここで使用される場合、患者のトランカル変異は、患者の同じ系統の全ての腫瘍にわたる共有変異を指す。

【0073】

ここで使用される「ポリヌクレオチド」及び「核酸分子」という用語は、各ヌクレオチドの３’及び５’末端がホスホジエステル結合によって結合されているヌクレオチドの一本鎖又は二本鎖共有結合配列を指す。核酸分子は、デオキシリボヌクレオチド塩基又はリボヌクレオチド塩基を含み得、インビトロで合成的に製造することができ、又は天然源から単離されうる。

【0074】

ここで交換可能に使用される「ポリペプチド」、「ペプチド」、「アミノ酸配列」及び「タンパク質」という用語は、少なくとも二つのアミノ酸の連結から形成される分子を指す。あるアミノ酸残基と次のアミノ酸残基の間の結合はアミド結合であり、ペプチド結合と呼ばれることもある。ポリペプチドは、天然源からの単離、組換え発現系での発現、化学合成又は酵素合成を含む、当該技術分野で知られている適切な方法によって得ることができる。該用語は、一又は複数のアミノ酸残基が対応する天然に生じるアミノ酸の人工的な化学的ミメティックであるアミノ酸ポリマー、並びに天然に生じるアミノ酸ポリマー及び天然には生じないアミノ酸ポリマーに適用することができる。

【0075】

ここで使用される「内因性」という用語は、通常は、細胞又は組織において発現される核酸分子又はポリペプチドを指す。

【0076】

ここで使用される「外因性」という用語は、細胞内に内因的には存在しない核酸分子又はポリペプチドを指す。従って、「外因性」という用語は、外来、異種、及び過剰発現された核酸分子及びポリペプチドなど、細胞内で発現される任意の組換え核酸分子又はポリペプチドを包含するであろう。「外因性」核酸とは、天然の野生型細胞に存在しない核酸を意味する；例えば、外因性核酸は、配列、位置（position）／位置（location）、又はその両方によって内因性の対応物とは異なりうる。明確にするために、外因性核酸は、その天然の内因性対応物と比較して同じ又は異なる配列を有しうる；それは、遺伝子工学によって細胞自体又はその前駆細胞に導入され得、任意選択的に、非天然プロモーター又は分泌配列などのオルタナティブ制御配列に連結されうる。

【0077】

ここで使用される「液性がん」という用語は、血液、リンパ液及び骨髄などの体液中に存在するがん細胞を指す。所定の非限定的な実施態様では、例えば、液性がんは、濾胞性リンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を含む。

【0078】

ここで使用される場合、「固形がん」という用語は、体液領域を含まない組織から生じるがん細胞を指す。所定の非限定的な実施態様では、例えば、固形がんには、メラノーマ、胸部がん、肺がん、卵巣がん、乳がん、膵臓がん、頭頸部がん、前立腺がん、婦人科がん、中枢神経系がん、皮膚がん、ＨＰＶ＋がん、食道がん、甲状腺がん、胃がん、肝細胞がん、胆管がん、腎細胞がん、膀胱がん、精巣がん、肉腫、及び結腸直腸がんが含まれる。

【0079】

Ｔ細胞に関連する場合、「幼若」又は「より幼若の」又は「幼若Ｔ細胞」は、メモリー幹細胞（Ｔ_ＭＳＣ）及びセントラルメモリー細胞（Ｔ_ＣＭ）を意味する。これらの細胞は、特異的活性化時にＴ細胞増殖を示し、複数の細胞分裂に対してコンピテントである。それらはまた、再注入後に生着し、それらの同族抗原への曝露時にエフェクターＴ細胞に迅速に分化し、腫瘍細胞を標的にして殺すだけでなく、進行中のがんの監視及び制御のために持続する能力を有する。

【0080】

２． ＮｅｏＴＣＲ細胞及びＮｅｏＴＣＲ生成物
本開示は、各細胞が腫瘍抗原（例えば、ネオ抗原）を標的とする、複数のゲノム改変細胞を提供する。所定の実施態様では、ゲノム改変細胞は、異なる腫瘍抗原を標的とする他のゲノム改変細胞と組み合わされた場合、改善された活性（例えば、細胞傷害性）を示す。所定の実施態様では、複数のゲノム改変細胞は、相乗効果を示す。相乗効果は、一緒に使用された活性成分（例えば、二以上のＮｅｏＴＣＲ細胞）が、活性成分を別々に使用した場合の効果の合計よりも大きい生物学的応答を示す場合に達成される。

【0081】

所定の実施態様では、その全体が出典明示によりここに援用される国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０１７８８７号及び国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０２５４１５号に記載されている遺伝子編集技術及びｎｅｏＴＣＲ単離技術を使用して、ＮｅｏＴＣＲは、同じがん患者からの自己ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞に、自己ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞がｎｅｏＴＣＲを発現するように精密ゲノム改変によってクローン化される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲは腫瘍特異的である。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲは、がん患者において同定される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲをコードするポリヌクレオチドは、クローン化され、免疫細胞において発現される。所定の実施態様では、細胞はＴ細胞である。所定の実施態様では、Ｔ細胞は幼若Ｔ細胞である。

【0082】

所定の実施態様では、複数の細胞は、がん患者のＴ細胞から出発して製造される。所定の実施態様では、複数の細胞の各細胞は、同等の遺伝子編集効率を有する。所定の実施態様では、複数の細胞の各細胞は、同等の活性（例えば、抗原依存性細胞傷害性、増殖、サイトカイン産生）を有する。所定の実施態様では、複数の細胞は、安全な忍容性プロファイルを示す。

【0083】

所定の実施態様では、複数の細胞の遺伝子編集は、リボ核タンパク質（ＲＮＰ）複合体を用いた細胞のエレクトロポレーションを含む。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、ガイドＲＮＡを含む。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、ヌクレアーゼを含む。所定の実施態様では、ヌクレアーゼは、Ｃａｓ９ヌクレアーゼである。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、内因性遺伝子座を標的とする。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、ＴＣＲ遺伝子座を標的とする。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、ＴＲＡＣ遺伝子座を標的とする。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、ＴＲＢＣ遺伝子座を標的とする。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、ＴＲＡＣ及びＴＲＢＣ遺伝子座を標的とする。

【0084】

所定の実施態様では、本開示は、ここに開示される複数の細胞の安全性プロファイルを決定するための方法を含む。所定の非限定的な実施態様では、例えば、安全性プロファイルは、ゲノム不安定性を検出することによって（例えば、標的遺伝子座増幅（ＴＬＡ）若しくは標準的ＦＩＳＨ細胞遺伝学分析を実施することによって）、又はオフターゲット組込みを検出することによって（例えば、Ｇｕｉｄｅ－Ｓｅｑ分析によって）評価されうる。

【0085】

所定の非限定的な実施態様では、本開示は、ＮｅｏＴＣＲ生成物中に異なる腫瘍抗原を標的とする複数のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物の第一のＮｅｏＴＣＲ細胞は、第一腫瘍抗原を標的とし、第二腫瘍抗原を標的とする第二のＮｅｏＴＣＲ細胞と組み合わせると、改善された活性（例えば、細胞傷害性）を示す。所定の実施態様では、複数のＮｅｏＴＣＲ細胞は相乗効果を示す。

【0086】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、がん患者のＴ細胞から出発して製造される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物の複数のＮｅｏＴＣＲ細胞は、同等の遺伝子編集効率を有する。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物の複数のＮｅｏＴＣＲ細胞は、同等の活性（例えば、抗原依存性細胞傷害性、増殖、サイトカイン産生）を有する。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、安全な忍容性プロファイルを示す。

【0087】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ細胞の遺伝子編集は、リボ核タンパク質（ＲＮＰ）複合体を用いた細胞のエレクトロポレーションを含む。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、ガイドＲＮＡを含む。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、ヌクレアーゼを含む。所定の実施態様では、ヌクレアーゼは、Ｃａｓ９ヌクレアーゼである。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、内因性遺伝子座を標的とする。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、ＴＣＲ遺伝子座を標的とする。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、ＴＲＡＣ遺伝子座を標的とする。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、ＴＲＢＣ遺伝子座を標的とする。所定の実施態様では、ＲＮＰ複合体は、ＴＲＡＣ及びＴＲＢＣ遺伝子座を標的とする。

【0088】

所定の実施態様では、本開示は、ここに開示されるＮｅｏＴＣＲ生成物の安全性プロファイルを決定するための方法を含む。所定の非限定的な実施態様では、例えば、安全性プロファイルは、ゲノム不安定性を検出することによって（例えば、標的遺伝子座増幅（ＴＬＡ）若しくは標準的ＦＩＳＨ細胞遺伝学分析を実施することによって）、又はオフターゲット組込みを検出することによって（例えば、Ｇｕｉｄｅ－Ｓｅｑ分析によって）評価されうる。

【0089】

ここに記載のゲノム改変アプローチは、固形及び液性腫瘍を有する患者のための個別化された養子細胞治療法のための特注のＮｅｏＴＣＲ Ｔ細胞（すなわち、ＮｅｏＴＣＲ生成物）の非常に効率的な作製を可能にする。更に、改変手法はＴ細胞での使用に限定されず、ナチュラルキラー細胞及び造血幹細胞を含む他の初代細胞型にも適用されうる。

【0090】

３． 治療組成物及び製造方法
［成分］
ここに記載されるように、ＮｅｏＴＣＲ生成物の優良製造規範（ＧＭＰ）製造のためのプラスミドＤＮＡ媒介（非ウイルス）精密ゲノム改変法を開発した。例えば、限定ではないが、患者特異的ｎｅｏＴＣＲの標的組込みを、プラスミドＤＮＡによってコードされた、個別化されたｎｅｏＴＣＲ遺伝子カセットと共にＣＲＩＳＰＲエンドヌクレアーゼリボヌクレオタンパク質（ＲＮＰ）を電気穿孔することによって、達成することができる。

【0091】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ここに記載の臨床製造方法を使用して医薬品に製剤化される。これらの方法では、ＮｅｏＴＣＲ生成物はＣｒｙｏＭＡＣＳ凍結バッグで凍結保存される。患者の必要性に応じて、一又は複数のバッグが各患者のために現場に出荷されうる。所定の実施態様では、この生成物は、その患者の腫瘍細胞の表面に例えば主に又は排他的に提示される内因性ＨＬＡ受容体の一つと複合体を形成したネオエピトープを標的とする一又は複数の自己ＮｅｏＴＣＲを発現するように精密ゲノム改変されている、アフェレーシス由来の患者自己ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔ細胞で構成されている。

【0092】

所定の実施態様では、最終ＮｅｏＴＣＲ生成物は、５％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヒト血清アルブミン及びＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅを含む。所定の実施態様では、最終ＮｅｏＴＣＲ生成物は、表１に提供されるリストの成分を含む。

【0093】

［製品包装］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物の最終医薬品は、３０～７０ｍＬの推奨充填量内にＮｅｏＴＣＲ生成物が充填された一又は複数のＣｒｙｏＭＡＣＳ２５０凍結バッグで各臨床部位に提供される。

【0094】

ＣｒｙｏＭＡＣＳ凍結バッグは、エチレン酢酸ビニル管状フィルム製である。バッグは、注入ポートとオスメスのルアーロックアセンブリを含む統合チューブセットを介して充填され、これにより、様々な使い捨てトランスファーセット、シリンジ又は無菌処理のための滅菌連結機器を使用する柔軟性がもたらされる。バッグアセンブリの一部として、滅菌輸注アセンブリの取り付けによって、生成物の治療的使用のためにバッグ内容物にアクセスできるようにする二つのスパイクポートが利用可能である。これらのスパイクポートには、二次汚染を防ぐために密封されたネジ切り保護キャップが固定され、解凍された細胞生成物の除去中に凍結バッグの穿孔を防ぐ内部保護チューブが含まれている。

【0095】

所定の実施態様では、生成物ラベルがバッグに取り付けられ、特定の患者への生成物のトレーサビリティを確保するために凍結前に、保管カセットに取り付けられた複製ラベルと共にバッグの表面に直接貼付される。加えて、所定の実施態様では、重要な情報（すなわち、患者に指定されたＩＤ）を含む切り詰めラベルが凍結バッグのラベルポケットに挿入され、基本ラベルが何らかの理由でなくなり又は判読できない場合の識別が可能になる。

【0096】

所定の実施態様では、制御された速度の凍結プロセスが、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために開発された。このプロセスの重要な要素は、ＣｒｙｏＭＡＣＳ凍結バッグに設けられたオーバーラップを使用しないことである。従って、ＮｅｏＴＣＲ生成物を凍結保存する例示的な方法は、ＣｒｙｏＭＡＣＳ凍結バッグにＮｅｏＴＣＲ生成物を充填し、ＣｒｙｏＭＡＣＳ凍結バッグオーバーラップを使用せずに制御された速度の凍結プロファイルを使用してＮｅｏＴＣＲ生成物を凍結保存することを含む。これは、クリニックでのＣｒｙｏＭＡＣＳバッグの使用方法には影響しない。所定の実施態様では、金属の保管カセットが、凍結保存及び輸送中に凍結バッグを保護する。

【0097】

［非臨床薬理学］
ＮｅｏＴＣＲ生成物を評価するために実施された薬力学研究のリストを表２に提示する。安全性薬理学研究を表３に記載する。

【0098】

［薬力学］
ここに記載の薬力学研究は、精密ゲノム改変されたヒトＮｅｏＴＣＲ－Ｔ細胞（すなわち、ＮｅｏＴＣＲ生成物）のエクスビボアッセイを使用して、抗原特異的Ｔ細胞増殖、サイトカイン産生、及び標的Ｔ細胞殺傷活性を再現する。

【0099】

ＰＡＣＴ ＮｅｏＴＣＲ生成物の作用機序を裏付ける薬力学的研究を、ＮｅｏＴＣＲ細胞を用いて実施した。試薬には、Ｔ細胞の選択に使用される抗体、精密ゲノム改変のための試薬、培地、及びサイトカインが含まれる。出発物質は、ロイコパック（leukopak）又は採血の何れかから選択されうる。Ｔ細胞の増殖は、Ｇ－Ｒｅｘ容器又はＣｅｎｔｒｉＣｕｌｔ容器などの容器で行った。細胞増殖の追加の方法は、Ｔフラスコ、培養バッグ、閉鎖系バイオリアクター（非限定的な例には、Ｘｕｒｉシステム（Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ）、Ａｍｂｒシステム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）、Ｑｕａｎｔｕｍシステム（Ｔｅｒｕｍｏ ＣＶＴ）、及びＣｏｃｏｏｎシステム（Ｌｏｎｚａ）が含まれる）、場合によっては非付着性細胞用に最適化された細胞スタック、及び場合によっては非付着性細胞用に最適化された細胞工場で行うことができる。

【0100】

実験室規模の製造と臨床規模の製造の間で、それらが最終生成物の表現型と機能に及ぼす影響の直接的な比較を実施した。最終生成物の表現型と機能は、二つの製造プロセス間で同等である。実験室規模の生産と臨床規模の生産の間で観察された一つの違いは、実験室規模のプロセスを使用して製造されたＮｅｏＴＣＲ細胞は、臨床規模の製造プロセスを使用して産生された細胞と比較してＣＤ８Ｔ細胞の割合が高いことである。ＣＤ８対ＣＤ４ Ｔ細胞比のこの違いは、同族ＨＬＡ抗原に遭遇すると、ＮｅｏＴＣＲ－Ｔ細胞の数が増殖するため、インビボでの生成物の機能に影響を与えるとは予想されない。これらの研究に基づいて、実験室規模で産生されたＮｅｏＴＣＲ－Ｔ細胞を使用して作成されたデータは、臨床用途のために患者のロイコパックから製造されたＮｅｏＴＣＲ生成物の薬力学的効果を表すと結論付けられる。

【0101】

４． 治療方法
［ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与］
所定の実施態様では、患者に投与される細胞の全用量は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入当たり４×１０^８である。所定の実施態様では、患者に投与される細胞の全用量は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入当たりおよそ約４×１０^８である。
所定の実施態様では、患者に投与される細胞の全用量は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入当たり１．３×１０^９である。所定の実施態様では、患者に投与される細胞の全用量は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入当たりおよそ約１．３×１０^９である。

【0102】

所定の実施態様では、患者に投与される細胞の全用量は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入当たり４×１０^９である。所定の実施態様では、患者に投与される細胞の全用量は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入当たりおよそ約４×１０^９である。
所定の実施態様では、患者に投与される細胞の全用量は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入当たり４×１０^８と注入当たり１．３×１０^９の間である。所定の実施態様では、患者に投与される細胞の全用量は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入当たりおよそ約４×１０^８と注入当たりおよそ約１．３×１０^９の間である。

【0103】

所定の実施態様では、患者に投与される細胞の全用量は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入当たり１．３×１０^９と注入当たり４×１０^９の間である。所定の実施態様では、患者に投与される細胞の全用量は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入当たりおよそ約１．３×１０^９と注入当たりおよそ約４×１０^９の間である。
所定の実施態様では、患者に投与される細胞の全用量は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入当たり４×１０^９より多い。

【0104】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、細胞の一集団を含む（すなわち、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、全てが同じＮｅｏＴＣＲを発現するＮｅｏＴＣＲ細胞を含む）。

【0105】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、細胞の二集団を含む（すなわち、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲ細胞の二集団を含む：第一のＮｅｏＴＣＲを発現する一の集団と第二のＮｅｏＴＣＲを発現する第二の集団）。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲの二集団のそれぞれは、同じ遺伝子に特異的なＮｅｏＴＣＲを発現する（例えば、同じ遺伝子に対する異なるＮｅｏＴＣＲの実施例については図４Ａ及び８Ｅを参照し、同じ遺伝子に対するＮｅｏＴＣＲ細胞の２集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物の実施例については図７Ｂを参照のこと）。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲの二集団のそれぞれは、二つの異なる遺伝子に特異的なＮｅｏＴＣＲを発現する（例えば、図７Ｃ、７Ｄ、及び８Ｅを参照のこと）。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲの二集団のそれぞれは、同じＨＬＡに特異的なＮｅｏＴＣＲを発現する（例えば、同じＨＬＡに対する異なるＮｅｏＴＣＲの実施例については図４Ａ及び８Ｅを参照し、同じＨＬＡに対するＮｅｏＴＣＲ細胞の２集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物の実施例については図７Ｂを参照のこと）。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲの二集団のそれぞれは、二つの異なるＨＬＡに特異的なＮｅｏＴＣＲを発現する（例えば、図７Ｃ、７Ｄ、及び８Ｅを参照のこと）。

【0106】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、細胞の三集団を含む（すなわち、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲ細胞の三集団を含む：第一のＮｅｏＴＣＲを発現する一の集団、第二のＮｅｏＴＣＲを発現する第二の集団、及び第三のＮｅｏＴＣＲを発現する第三の集団）。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲの三集団のそれぞれは、同じ遺伝子に特異的なＮｅｏＴＣＲを発現する（例えば、同じ遺伝子に対する異なるＮｅｏＴＣＲの実施例については、図４Ａを参照のこと）。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲの三集団のそれぞれは、二つの異なる遺伝子に特異的なＮｅｏＴＣＲを発現する（例えば、一の遺伝子に特異的な２のＮｅｏＴＣＲ及び第二遺伝子に特異的な１のＮｅｏＴＣＲの実施例については、図７Ａ及び８Ｅを参照のこと）。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲの三集団のそれぞれは、三つの異なる遺伝子に特異的なＮｅｏＴＣＲを発現する（例えば、それぞれが異なる遺伝子に特異的な３のＮｅｏＴＣＲの実施例については、図８Ａ及び８Ｅを参照のこと）。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲの三集団のそれぞれは、同じＨＬＡに特異的なＮｅｏＴＣＲを発現する。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲの三集団のそれぞれは、二つの異なるＨＬＡに特異的なＮｅｏＴＣＲを発現する（例えば、一つのＨＬＡに特異的な２のＮｅｏＴＣＲ及び第二のＨＬＡに特異的な１のＮｅｏＴＣＲの実施例については、図７Ａ及び８Ｅを参照のこと）。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲの三集団のそれぞれは、三つの異なるＨＬＡに特異的なＮｅｏＴＣＲを発現する（例えば、それぞれが異なるＨＬＡに特異的な３のＮｅｏＴＣＲの実施例については、図８Ａ及び８Ｅを参照のこと）。

【0107】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、表４又は表５に記載されている概略の細胞数を含む。

表４と表５の両方において、「４×１０^９超」は、患者への用量制限毒性を生じるＮｅｏＴＣＲ細胞の全数よりも少ない。

【0108】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、細胞の四集団を含む（すなわち、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲ細胞の三集団を含む：第一のＮｅｏＴＣＲを発現する一の集団、第二のＮｅｏＴＣＲを発現する第二の集団、第三のＮｅｏＴＣＲを発現する第三の集団、及び第四のＮｅｏＴＣＲを発現する第四の集団）。所定の実施態様では、細胞の四集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、１）それぞれが同じ遺伝子に対してＮｅｏＴＣＲを発現する細胞の四集団、２）それぞれが異なる遺伝子に対してＮｅｏＴＣＲを発現する細胞の四集団、３）一つが第一遺伝子に対してＮｅｏＴＣＲを発現し、三つが第二遺伝子に対してＮｅｏＴＣＲを発現する、細胞の四集団）、又は４）その二つが第一遺伝子に対してＮｅｏＴＣＲを発現し、その二つが第二遺伝子に対してＮｅｏＴＣＲを発現する、細胞の四集団を含む。所定の実施態様では、細胞の四集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、１）それぞれが同じＨＬＡに対してＮｅｏＴＣＲを発現する細胞の四集団、２）それぞれが異なるＨＬＡに対してＮｅｏＴＣＲを発現する細胞の四集団、３）その一つが第一ＨＬＡに対してＮｅｏＴＣＲを発現し、その三つが第二ＨＬＡに対してＮｅｏＴＣＲを発現する、細胞の四集団、又は４）その二つが第一ＨＬＡに対してＮｅｏＴＣＲを発現し、その二つが第二ＨＬＡに対してＮｅｏＴＣＲを発現する細胞の四集団を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のＮｅｏＴＣＲ細胞の四集団のそれぞれは、ほぼ等しい数の細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のＮｅｏＴＣＲ細胞の四集団のうちの一つは、ＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の全数の１／４未満を含み、ＮｅｏＴＣＲ細胞の他の三集団は、およそ４×１０^８、１．３３×１０^９、４×１０^９に等しく、＞４×１０^８かつ＜１．３３×１０^９、＞１．３３×１０^９かつ＜４×１０^９、又は＜４×１０^９であるが、患者への用量制限毒性を生じるＮｅｏＴＣＲ細胞の全数よりも少なくなるようにＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の全数を提供するように調整される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のＮｅｏＴＣＲ細胞の四集団のうちの二つは、ＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の全数の１／２未満（それぞれ、１／４未満）を含み、ＮｅｏＴＣＲ細胞の他の二集団は、およそ４×１０^８、１．３３×１０^９、４×１０^９に等しく、＞４×１０^８かつ＜１．３３×１０^９、＞１．３３×１０^９かつ＜４×１０^９、又は＜４×１０^９であるが、患者への用量制限毒性を生じるＮｅｏＴＣＲ細胞の全数よりも少なくなるようにＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の全数を提供するように調整される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のＮｅｏＴＣＲ細胞の四集団のうちの三つは、ＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の全数の３／４未満（それぞれ１／４未満）を含み、ＮｅｏＴＣＲ細胞の他の一集団は、およそ４×１０^８、１．３３×１０^９、４×１０^９に等しく、＞４×１０^８かつ＜１．３３×１０^９、＞１．３３×１０^９かつ＜４×１０^９、又は＜４×１０^９であるが、患者への用量制限毒性を生じるＮｅｏＴＣＲ細胞の全数よりも少なくなるようにＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の全数を提供するように調整される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のＮｅｏＴＣＲ細胞の四集団のうちの一つは、ＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の全数の１／４未満を含み、ＮｅｏＴＣＲ細胞の他の三集団は、およそ約４×１０^８、約１．３３×１０^９、約４×１０^９に等しく、約４×１０^８より多くかつ約１．３３×１０^９より少なく、約１．３３×１０^９より多くかつ約４×１０^９より少なく、又は約４×１０^９より少ないが、患者への用量制限毒性を生じるＮｅｏＴＣＲ細胞の全数よりも少なくなるようにＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の全数を提供するように調整される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のＮｅｏＴＣＲ細胞の四集団のうちの二つは、ＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の全数の１／２未満（それぞれ１／４未満）を含み、ＮｅｏＴＣＲ細胞の他の二集団は、およそ約４×１０^８、約１．３３×１０^９、約４×１０^９に等しく、約４×１０^８より多くかつ約１．３３×１０^９より少なく、約１．３３×１０^９より多くかつ約４×１０^９より少なく、又は約４×１０^９より少ないが、患者への用量制限毒性を生じるＮｅｏＴＣＲ細胞の全数よりも少なくなるようにＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の全数を提供するように調整される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のＮｅｏＴＣＲ細胞の四集団のうちの三つは、ＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の全数の３／４未満（それぞれ１／４未満）を含み、ＮｅｏＴＣＲ細胞の他の一集団は、およそ約４×１０^８、約１．３３×１０^９、約４×１０^９に等しく、約４×１０^８より多くかつ約１．３３×１０^９より少なく、約１．３３×１０^９より多くかつ約４×１０^９より少なく、又は約４×１０^９より少ないが、患者への用量制限毒性を生じるＮｅｏＴＣＲ細胞の全数よりも少なくなるようにＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の全数を提供するように調整される。

【0109】

所定の実施態様では、当業者は、ＮｅｏＴＣＲ細胞の全用量をおよそ４×１０^８、１．３３×１０^９、４×１０^９に等しく、＞４×１０^８かつ＜１．３３×１０^９、＞１．３３×１０^９かつ＜４×１０^９、又は＜４×１０^９であるが、患者への用量制限毒性を生じるＮｅｏＴＣＲ細胞の全数よりも少なくなるように維持しながら、ＮｅｏＴＣＲ生成物中の異なるＮｅｏＴＣＲ細胞集団の数を増加させ続けることができる。所定の実施態様では、当業者は、ＮｅｏＴＣＲ細胞の全用量を約４×１０^８、約１．３３×１０^９、約４×１０^９に等しく、約４×１０^８より多くかつ約１．３３×１０^９より少なく、約１．３３×１０^９より多くかつ約４×１０^９より少なく、又は約４×１０^９より少ないが、患者への用量制限毒性を生じるＮｅｏＴＣＲ細胞の全数よりも少なくなるように維持しながら、ＮｅｏＴＣＲ生成物中の異なるＮｅｏＴＣＲ細胞集団の数を増加させ続けることができる。しかしながら、当業者はまた臨床効果をもたらすために必要とされる各ＮｅｏＴＣＲ細胞集団の最小数を考慮しなければならない。従って、ＮｅｏＴＣＲ生成物当たりのＮｅｏＴＣＲ細胞集団の数は、ＮｅｏＴＣＲ細胞の各集団の最小数を提供する必要性によって制限されなければならない。

【0110】

所定の実施態様では、三つの異なるＮｅｏＴＣＲ細胞集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物において発現される三つの異なるＮｅｏＴＣＲは、三つのＮｅｏＴＣＲ間の相乗効果をもたらす。所定の実施態様では、この相乗効果は、一のＮｅｏＴＣＲ又は二のＮｅｏＴＣＲ集団ＮｅｏＴＣＲ生成物と比較しての相乗的な腫瘍細胞殺傷効果である。例えば、図１５、１８Ａ－１８Ｄ、及び２０を参照のこと。

【0111】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、コンディショニング化学療法の後に投与される。所定の実施態様では、コンディショニングＮｅｏＴＣＲ生成物は、フルダラビンとシクロホスファミド（Cycophosphamide）（Ｆｌｕ－Ｃｙ）の組み合わせである。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙは、ＮｅｏＴＣＲ生成物注入の前の－５から－３日目に投与される。

【0112】

所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙは、ＮｅｏＴＣＲ生成物注入の前の－５日目及び－４日目に投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙは、ＮｅｏＴＣＲ生成物注入の前の－４日目及び－３日目に投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与の一又は複数日前に三日間連続して投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与の二日以上前に三日間連続して投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与の三日以上前に三日間連続して投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与の三日前に三日間連続して投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与の一又は複数日前に二日間連続して投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与の二日以上前に二日間連続して投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与の三日以上前に二日間連続して投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与の三日前に二日間連続して投与される。

【0113】

所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙは、ＮｅｏＴＣＲ生成物が投与される日の二日前に、三日間連続して一日一回投与される。

【0114】

所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは３０ｍｇ／ｍ^２体表面積で静脈内投与され、シトホスファミド（cytophosphamide）は３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。所定の実施態様では、フルダラビンは、注入される全量の１０％が減少させられる。所定の実施態様では、フルダラビンは、注入される全量の２０％が減少させられる。所定の実施態様では、フルダラビンは、注入される全量の３０％が減少させられる。所定の実施態様では、フルダラビンは、注入される全量の４０％が減少させられる。所定の実施態様では、フルダラビンは、注入される全量の５０％が減少させられる。所定の実施態様では、フルダラビンは、注入される全量の６０％が減少させられる。所定の実施態様では、フルダラビンは、注入される全量の約１０％が減少させられる。所定の実施態様では、フルダラビンは、注入される全量の約２０％が減少させられる。所定の実施態様では、フルダラビンは、注入される全量の約３０％が減少させられる。所定の実施態様では、フルダラビンは、注入される全量の約４０％が減少させられる。所定の実施態様では、フルダラビンは、注入される全量の約５０％が減少させられる。所定の実施態様では、フルダラビンは、注入される全量の約６０％が減少させられる。所定の実施態様では、シトホスファミドは、フルダラビンの減少に関係なく、３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。

【0115】

所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは２７ｍｇ／ｍ^２体表面積で静脈内投与され、シトホスファミドは３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは体表面積の２４ｍｇ／ｍ^２体表面積で静脈内投与され、シトホスファミドは３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは体表面積の２１ｍｇ／ｍ^２体表面積で静脈内投与され、シトホスファミドは３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは体表面積の１８ｍｇ／ｍ^２体表面積で静脈内投与され、シトホスファミドは３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは体表面積の１５ｍｇ／ｍ^２体表面積で静脈内投与され、シトホスファミドは３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは１２ｍｇ／ｍ^２体表面積で静脈内投与され、シトホスファミドは３００ｍｇ／ｍ^２又は約３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。

【0116】

所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、約２７ｍｇ／ｍ^２体表面積で静脈内投与され、シトホスファミドは３００ｍｇ／ｍ^２又は約３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、約２４ｍｇ／ｍ^２体表面積で静脈内投与され、シトホスファミドは３００ｍｇ／ｍ^２又は約３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、約２１ｍｇ／ｍ^２体表面積で静脈内投与され、シトホスファミドは３００ｍｇ／ｍ^２又は約３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、約１８ｍｇ／ｍ^２体表面積で静脈内投与され、シトホスファミドは３００ｍｇ／ｍ^２又は約３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、約１５ｍｇ／ｍ^２体表面積で静脈内投与され、シトホスファミドは３００ｍｇ／ｍ^２又は約３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、約１２ｍｇ／ｍ^２体表面積で静脈内投与され、シトホスファミドは３００ｍｇ／ｍ^２又は約３００ｍｇ／ｍ^２体表面積で投与される。

【0117】

所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の４日間連続して、３０ｍｇ／ｍ^２又は約３０ｍｇ／ｍ^２体表面積で毎日静脈内投与され、シトホスファミドは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の３日間連続して、６００ｍｇ／ｍ^２又は約６００ｍｇ／ｍ^２体表面積で毎日静脈内投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の４日間連続して、３０ｍｇ／ｍ^２又は約３０ｍｇ／ｍ^２体表面積で毎日静脈内投与され、シトホスファミドは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の３日間連続して、約３００ｍｇ／ｍ^２から約６００ｍｇ／ｍ^２体表面積の間の用量で毎日静脈内投与される。

【0118】

所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の４日間連続して、２５ｍｇ／ｍ^２又は約２５ｍｇ／ｍ^２体表面積で毎日静脈内投与され、シトホスファミドは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の３日間連続して、６０ｍｇ／ｋｇ又は約６０ｍｇ／ｋｇで毎日静脈内投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の４日間連続して、２５ｍｇ／ｍ^２又は約２５ｍｇ／ｍ^２体表面積で毎日静脈内投与され、シトホスファミドは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の３日間連続して、６０ｍｇ／ｋｇ又は約６０ｍｇ／ｋｇで毎日静脈内投与される。

【0119】

所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の５日間連続して、２５ｍｇ／ｍ^２又は約２５ｍｇ／ｍ^２体表面積で毎日静脈内投与され、シトホスファミドは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の２日間連続して、６０ｍｇ／ｋｇ又は約６０ｍｇ／ｋｇで毎日静脈内投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の５日間連続して、２５ｍｇ／ｍ^２又は約２５ｍｇ／ｍ^２体表面積で毎日静脈内投与され、シトホスファミドは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の３日間連続して、６０ｍｇ／ｋｇ又は約６０ｍｇ／ｋｇで毎日静脈内投与される。

【0120】

所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の６日間連続して、２５ｍｇ／ｍ^２又は約２５ｍｇ／ｍ^２体表面積で毎日静脈内投与され、シトホスファミドは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の２日間連続して、６０ｍｇ／ｋｇ又は約６０ｍｇ／ｋｇで毎日静脈内投与される。所定の実施態様では、Ｆｌｕ－Ｃｙが患者に投与される毎日について、フルダラビンは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の６日間連続して、２５ｍｇ／ｍ^２又は約２５ｍｇ／ｍ^２体表面積で毎日静脈内投与され、シトホスファミドは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前の３日間連続して、６０ｍｇ／ｋｇ又は約６０ｍｇ／ｋｇで毎日静脈内投与される。

【0121】

所定の実施態様では、皮下ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与と同時的に投与される。
所定の実施態様では、皮下ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与される。

【0122】

所定の実施態様では、皮下ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、５０００００ＩＵ／ｍ^２の用量で毎日二回（ＢＩＤ）７日間皮下投与される。所定の実施態様では、皮下ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、約５０００００ＩＵ／ｍ^２の用量で毎日二回（ＢＩＤ）７日間皮下投与される。所定の実施態様では、皮下ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、５０００００ＩＵ／ｍ^２又は約５０００００ＩＵ／ｍ^２の用量で毎日二回（ＢＩＤ）５日間皮下投与される。所定の実施態様では、皮下ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、５０００００ＩＵ／ｍ^２又は約５０００００ＩＵ／ｍ^２の用量で毎日二回（ＢＩＤ）６日間皮下投与される。所定の実施態様では、皮下ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、５０００００ＩＵ／ｍ^２又は約５０００００ＩＵ／ｍ^２の用量で毎日二回（ＢＩＤ）８又は９日間皮下投与される。所定の実施態様では、皮下ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、５０００００ＩＵ／ｍ^２又は約５０００００ＩＵ／ｍ^２の用量で毎日二回（ＢＩＤ）１０又は１１日間皮下投与される。所定の実施態様では、皮下ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、５０００００ＩＵ／ｍ^２又は約５０００００ＩＵ／ｍ^２の用量で毎日二回（ＢＩＤ）１２又は３日間皮下投与される。所定の実施態様では、皮下ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、５０００００ＩＵ／ｍ^２又は約５０００００ＩＵ／ｍ^２の用量で毎日二回（ＢＩＤ）１４日間皮下投与される。所定の実施態様では、皮下ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、５０００００ＩＵ／ｍ^２又は約５０００００ＩＵ／ｍ^２の用量で、毎日二回（ＢＩＤ）１５日から２０日の間の任意の期間皮下投与される。所定の実施態様では、皮下ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、５０００００ＩＵ／ｍ^２又は約５０００００ＩＵ／ｍ^２の用量で毎日二回（ＢＩＤ）２０日間皮下投与される。

【0123】

所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、６０００００ＩＵ／ｋｇ又は約６００，ＩＵ／ｋｇの用量で毎日一回７日間静脈内投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、許容範囲まで８時間毎に６０００００ＩＵ／ｋｇ又は約６０００００ＩＵ／ｋｇの用量で静脈内投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入後５日間の過程にわたって１４回までの逐次用量で許容範囲まで８時間毎に７２００００ＩＵ／ｋｇ又は約７２００００ＩＵ／ｋｇの用量で静脈内投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、許容範囲まで８時間毎に７２００００ＩＵ／ｋｇ又は約７２００００ＩＵ／ｋｇの用量で静脈内投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入後５日間の過程にわたって１４回までの逐次用量で許容範囲まで８時間毎に７２００００ＩＵ／ｋｇ又は約７２００００ＩＵ／ｋｇの用量で静脈内投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与され、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入後５日間の過程（サイクル）にわたって１４回までの逐次用量で許容範囲まで８時間毎に約６０００００ＩＵ／ｋｇ又は約７２００００ＩＵ／ｋｇの用量で静脈内投与され、第一のサイクルの完了後の約８～１０日間の休止期間後にＩＬ－２剤の任意選択的な第二のサイクルが続く。
所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、アルデスロイキン又はその生物学的同等物である。
所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ペグ化されたＩＬ－２剤である。

【0124】

［ＮｅｏＴＣＲ生成物の利点と他の治療法の制限］
チェックポイント療法に応答性の固形腫瘍は、より高い体細胞変異負荷を抱える可能性が高く（腫瘍排他的ネオ抗原の発現をもたらし）、腫瘍はより高いＣＤ８ Ｔ細胞浸潤を示し、及び／又は既存の高ＰＤ－Ｌ１腫瘍発現を示すことを示唆する証拠が増加している（Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ及びＳｃｈｒｅｉｂｅｒ，２０１５）。これらの特徴のそれぞれは、これらの腫瘍の内因性免疫原性の可能性が高いこと、つまり、その患者の免疫系は、免疫療法の開始前に有意なＴ細胞免疫応答を開始した可能性があることを表している（Ｌａｗｒｅｎｃｅ等，２０１３）；（Ｔｕｍｅｈ等，２０１４）；（Ｗａｒｇｏ等，２０１７）。腫瘍の次世代ディープシークエンシングと内因性腫瘍標的Ｔ細胞応答の免疫学的分析の適用は、がん免疫療法の利益、腫瘍変異負荷、及びネオ抗原特異的Ｔ細胞の既存の集団の間の関係についての説得力のある証拠を提供した。これらの腫瘍排他的変異（ネオ抗原）を抱える腫瘍細胞を特異的に認識して殺傷するＴ細胞のネオ抗原特異的集団は、臨床的利益を引き起こす効果的ながん免疫療法の主要なメディエーターであると提案されている（Ｔｒａｎ等，２０１７）（Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ及びＳｃｈｒｅｉｂｅｒ，２０１５）。

【0125】

最近、がん患者における腫瘍標的Ｔ細胞の大きさを有意に増大させるために幾つかのアプローチが開発された。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変自己Ｔ細胞による治療は、化学療法抵抗性のリンパ腫及び白血病の患者において、臨床的有用性の驚くべき完全奏効率をもたらした。腫瘍浸潤Ｔ細胞（ＴＩＬ）から増殖させた自己Ｔ細胞の投与は、メラノーマに罹患しチェックポイント阻害剤薬物療法に伝統的には応答性ではない腫瘍型の患者において臨床反応を誘導することが示されている（例えば、胆管細胞がん、マイクロサテライト安定性［ＭＳＳ］結腸直腸がん［ＣＲＣ］、及びホルモン受容体陽性［ＨＲ＋］乳がん（Ｐａｕｌｓｏｎ等，２０１８）；（Ｔｒａｎ等，２０１６）（Ｔｒａｎ等，２０１４）。更に、発現される共有腫瘍又はウイルス抗原（すなわち、各個々の患者の腫瘍に固有のネオ抗原又はネオエピトープとは対照的に、多くの患者で発現される同じ抗原）に対する改変された自己ＴＣＲ－Ｔ細胞の投与は、患者における持続的な応答の証拠を示している。

【0126】

がんネオ抗原を標的とするＲＮＡベース又はペプチドベースのワクチンなどの個別化されたがん変異標的療法は、既存の変異標的Ｔ細胞応答の大きさを増加させ、腫瘍ネオ抗原に対してデノボ免疫応答を生み出す可能性のある有望な新しい治療手法である（Ｓａｈｉｎ及びＴｕｅｒｅｃｉ，２０１８）（Ｏｔｔ等，２０１７）。ネオ抗原がんワクチンは、不十分な数のＴ細胞クローンが腫瘍抗原に内因的にプライミングされる、前立腺、ＭＳＳ ＣＲＣ、又は他の転座駆動腫瘍などの低変異負荷腫瘍型で特に有益でありうる。それにもかかわらず、ネオ抗原がんワクチンの潜在的な利点は、ワクチン投与前に予測される抗原標的を認証できないこと、ヒト集団におけるＴ細胞ワクチンへの変わりやすい応答性、及び抗腫瘍Ｔ細胞免疫応答が徐々に（よって余りにゆっくりと）増える、大きな又は急速に増殖する腫瘍を根絶するという挑戦によって制限されうる。

【0127】

ネオエピトープを標的とする養子ＴＣＲ－Ｔ細胞療法は、上述の制限を克服する可能性がある。ここに記載のＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の個人的な内因性Ｔ細胞がん免疫応答から同定され単離された天然配列の自己ＮｅｏＴＣＲで改変された新規の養子ＴＣＲ－Ｔ細胞療法である。がん病理の「ドライバー」変異を含む、各患者の創始者（トランカル）変異を最初に表す腫瘍特異的ゲノム変化は、数が増え、後期悪性腫瘍の「ブランチ」又は「パッセンジャー」変異として時間と共に多様化する。これらの蓄積された腫瘍特異的変異スペクトラムは、各がん患者（個人ネオ抗原）における免疫認識のための標的の特有の個人シグネチャーを表している。これらの個人及び腫瘍排他的ネオ抗原（ネオエピトープ又はｎｅｏＥ特異的Ｔ細胞）を標的とするＴ細胞は、これらの腫瘍特異的変異を発現しない健康な細胞を無視しながら、腫瘍細胞を排他的に標的にして殺傷する可能性がある。このように、各患者の免疫系は腫瘍に関与し、適切に活用される場合、適切に調整された内因性免疫応答が腫瘍を根絶することが示されている。

【0128】

全てのがんは根底にある創始者又はトランカル変異によって引き起こされるため、トランカルネオエピトープを標的とする養子ＮｅｏＴＣＲ Ｔ細胞療法は、あらゆるがん患者の治療の可能性がある。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物の養子個別化細胞療法は、腫瘍排他的ネオ抗原を既に認識する天然に生じるＮｅｏＴＣＲを発現するように、個体自身のＣＤ８及びＣＤ４ Ｔ細胞を改変することを含む。従って、所定の実施態様では、これらのＮｅｏＴＣＲは、既存の変異標的化ＣＤ８ Ｔ細胞に由来する天然配列であり、各患者における腫瘍排他的ｎｅｏＥ標的を認証する独自の単離技術によって末梢血からキャプチャーされる。製造プロセスでは、同じ患者のロイコパックから新たに得られたＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞が、「天然」自己Ｔ細胞機能を再構成し、選択プロセスを通して自己患者の予測される抗原との相互作用が検証されている形で一つのＮｅｏＴＣＲを発現するように精密ゲノム改変される。従って、がんの参加者への臨床的利益は、エクスビボで改変された、腫瘍変異を標的とした自己ＮｅｏＴＣＲ細胞の単回投与から生じ、よって、一部は根治的治療の選択肢がない患者に迅速で持続性のある反応を引き起こす可能性を提供する。

【0129】

有意な既存のＴ細胞免疫を有する患者は、ＰＤ－１軸結合剤、ＰＤ－１結合剤、ＰＤ－Ｌ１結合剤、又はＰＤ－Ｌ２結合剤の何れか一の投与で恩恵を受ける可能性が高くなりうる。ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与は、がんを患う各研究参加者にとって有意で包括的な腫瘍標的Ｔ細胞免疫応答を示すため、ＰＤ－１軸結合剤、ＰＤ－１結合剤、ＰＤ－Ｌ１結合剤、又はＰＤ－Ｌ２結合剤の包含は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前に腫瘍が既にＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ２免疫耐性を抱えていた患者、又はＮｅｏＴＣＲ生成物投与後にＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ２免疫耐性を迅速に獲得する患者に意味のある臨床的利益をもたらしうる。従って、本開示は、ＰＤ－１軸結合剤、ＰＤ－１結合剤、ＰＤ－Ｌ１結合剤、又はＰＤ－Ｌ２結合剤とＮｅｏＴＣＲ生成物の投与との併用療法を提供する。所定の実施態様では、併用療法は、抗ＰＤ－１抗体とここに開示されるＮｅｏＴＣＲ生成物を含む。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ＭＤＸ－１１０６（ニボルマブ）である。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ＭＫ－３４７５（ペムブロリズマブ）である。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体はセミプリマブである。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ＪＴＸ－４０１４である。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、スパルタリズマブである。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、シンチリマブである。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、チスレリズマブである。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、トリパリマブである。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ドスタルマブである。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ＭＧＡ０１２である。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ＡＭＰ－５１４である。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ＣＴ－０１１（ピジリズマブ）である。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ＡＭＰ－２２４である。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体はＭＥＤ１－０６８０である。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ＰＤＲ００１である。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ＲＥＧＮ２８１０である。所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ＢＧＢ－１０８である。

【0130】

この併用療法は、有意な既存の抗腫瘍Ｔ細胞免疫応答と、より高い腫瘍ＰＤ－１軸発現レベルによる免疫耐性が患者において確認されている場合、免疫チェックポイント療法による臨床的利益の最良の状況下では、免疫耐性を克服すると予測される。

【0131】

所定の非限定的な実施態様では、本開示は、ＩＬ－２剤とここに開示されるＮｅｏＴＣＲ生成物との併用療法を提供する。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、組換えＩＬ－２である。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、改変されたＩＬ－２である。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ペグ化されたＩＬ－２である。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＩＬ－２に融合された抗体である。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、長時間作用性ＩＬ－２である。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、短時間作用性ＩＬ－２である。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤はアルデスロイキンである。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）である。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ベンペガルデスロイキン（bempegaldesleukin）である。

【0132】

所定の非限定的な実施態様では、本開示は、ＩＬ－１５剤とここに開示されるＮｅｏＴＣＲ生成物との併用療法を提供する。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、組換えＩＬ－１５である。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、改変されたＩＬ－１５である。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ペグ化されたＩＬ－１５である。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ＩＬ－１５に融合された抗体である。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、長時間作用性ＩＬ－１５である。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、短時間作用性ＩＬ－１５である。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ＡＬＴ－８０３である。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ＮＫＴＲ－２５５である。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤はＮＬ－２０１である。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤はＳＯＣ１０１である。

【0133】

所定の実施態様では、本開示は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与の前に投与される化学療法プレコンディショニングレジメンを含む。

【0134】

所定の実施態様では、ここに記載されるＮｅｏＴＣＲ生成物は、強力な抗原特異的殺傷、エフェクターサイトカイン分泌、及び同族ネオ抗原を発現する腫瘍細胞との接触時の増殖活性を有するＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。更に、所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、（例えば、バルクＴ細胞及び単一細胞セクレトーム分析によって示されるような）強力な多機能エフェクタータンパク質分泌応答を伴って標的腫瘍細胞に応答する。多機能Ｔ細胞エフェクター表現型は、血液悪性腫瘍の患者に注入された多機能ＣＡＲ－Ｔ細胞で観察されるものと同様の形で、がん患者にＮｅｏＴＣＲ生成物を注入した際の臨床的利益の可能性に寄与すると予測される。

【0135】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ここに記載のエクスビボ製造プロセスの結果として、メモリー幹細胞（Ｔ_ＭＳＣ）及びセントラルメモリー（Ｔ_ＣＭ）Ｔ細胞表現型を含む。これらの「より幼若の」又は低分化Ｔ細胞表現型は、マウスモデルにおいて並びに血液悪性腫瘍の患者における改変ＣＡＲ－Ｔ細胞の臨床試験において、改善された生着可能性及び延長された注入後の持続性をもたらすと記述されている。従って、「より幼若の」Ｔ細胞表現型を含むＮｅｏＴＣＲ生成物の投与は、改善された生着可能性、延長された注入後の持続性、及びエフェクターＴ細胞への迅速な分化によって、体全体の腫瘍細胞を根絶することにより、がん患者に利益をもたらす可能性がある。

【0136】

所定の実施態様では、本開示は、ガイドＲＮＡ配列に結合したＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９ヌクレアーゼの二重リボヌクレオタンパク質種のエレクトロポレーションを含み、各種がゲノムＴＣＲα及びゲノムＴＣＲβ遺伝子座を標的とする、ＮｅｏＴＣＲ生成物製造方法を含む。Ｃａｓ９ヌクレアーゼを各ゲノム遺伝子座にターゲティングする特異性は、以前に文献において高度に特異的であると記載されている。所定の実施態様では、本開示は、可能性のあるオフターゲットゲノム切断部位を調査するＮｅｏＴＣＲ生成物の包括的な試験を含む。例えば、限定しないが、オフターゲット部位は、ＣＯＳＭＩＤ及びＧＵＩＤＥ－ｓｅｑを使用することによって検出できる。

【0137】

精密ゲノム改変法の更なる態様は、安全性について評価されている。所定の実施態様では、ここに開示される組成物は、精密ゲノム改変後のゲノム不安定性の証拠は示さない。所定の非限定的な実施態様では、例えば、ゲノム不安定性は、標的遺伝子座増幅（ＴＬＡ）又は標準的ＦＩＳＨ細胞遺伝学分析によって評価されうる。

【0138】

ＮｅｏＴＣＲ生成物と精密ゲノム改変法の包括的な評価は、ＮｅｏＴＣＲ生成物が患者への注入後に十分に許容されることを示している。

【0139】

５． 薬学的製剤
ＮｅｏＴＣＲ生成物の薬学的製剤は、凍結保存された状態で細胞の「幼若」表現型を保存できる溶液中でＮｅｏＴＣＲ細胞を組み合わせることによって調製される。表１は、そのような一薬学的製剤の例を提供する。あるいは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の薬学的製剤は、生成物を凍結し又は凍結保存する必要なしに、細胞の「幼若」表現型を保存できる溶液中でＮｅｏＴＣＲ細胞を組み合わせることによって調製されうる（つまり、ＮｅｏＴＣＲ生成物は水溶液中に又は非凍結／凍結保存細胞ペレットとして維持される）。

【0140】

追加の薬学的に許容される担体、緩衝液、安定剤、及び／又は保存料もまた、凍結保存溶液又は水性貯蔵溶液（ＮｅｏＴＣＲ生成物が凍結保存されていない場合）に加えることができる。限定されないが、ＣｒｙｏＳｔｏｒ、ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ５、ＣＥＬＬＢＡＮＫＥＲ、及び場合によってはＤＭＳＯを含む特注の凍結保存培地を含む、任意の凍結保存剤及び／又は培地を使用して、ＮｅｏＴＣＲ生成物を凍結保存することができる。

【0141】

所定の実施態様では、本開示の薬学的製剤は、改変された細胞の第一及び第二の集団を含む複数の細胞集団を含む。所定の実施態様では、第一の改変された細胞は、第一抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲを含む。所定の実施態様では、第二の改変された細胞は、第二抗原に結合する第二のＮｅｏＴＣＲを含む。所定の実施態様では、複数の細胞は、第一及び第二抗原を含む細胞に対して細胞傷害活性を示す。所定の実施態様では、複数の細胞は、第三の改変細胞を含む。所定の実施態様では、第三の改変細胞は、第三抗原に結合する第三のＮｅｏＴＣＲを含む。所定の実施態様では、複数の細胞は、第一、第二、及び第三抗原を含む細胞に対して細胞傷害活性を示す。所定の非限定的な実施態様では、複数の細胞は、四以上の改変された細胞、五以上の改変された細胞、十以上の改変された細胞を含む。

【0142】

所定の実施態様では、本開示のＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲ細胞の第一及び第二の集団を含む。所定の実施態様では、第一のＮｅｏＴＣＲ細胞は、第一抗原を標的とする。所定の実施態様では、第二のＮｅｏＴＣＲ細胞は、第二抗原を標的とする。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ細胞は、第一及び第二抗原を含む細胞に対して細胞傷害活性を示す。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、第三のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、第三のＮｅｏＴＣＲ細胞は、第三抗原を標的とする。所定の実施態様では、第一、第二、及び第三のＮｅｏＴＣＲ細胞を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、第一、第二、及び第三抗原を含む細胞に対して細胞傷害活性を示す。所定の非限定的な実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、四以上のＮｅｏＴＣＲ細胞、五以上のＮｅｏＴＣＲ細胞、十以上のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。

【0143】

６． 製造品
ＮｅｏＴＣＲ生成物は、製造品と組み合わせて使用されうる。そのような製造品は、増殖性障害（例えば、がん）の予防又は治療に有用でありうる。製造品の例には、限定されないが、容器（例えば、注入バッグ、ボトル、貯蔵容器、フラスコ、バイアル、注射器、チューブ、及びＩＶ溶液バッグ）、及び容器上の又は容器に付随したラベル又は添付文書が含まれる。所定の実施態様では、容器は、ＮｅｏＴＣＲ生成物内のＮｅｏＴＣＲ細胞の「幼若」状態での貯蔵及び保存に受け入れられる任意の材料で作製されうる。所定の実施態様では、容器は、静脈内溶液バッグ又は皮下注射針で貫通可能なストッパーを有するバイアルである。所定の実施態様では、容器は、ＣｒｙｏＭＡＣＳ凍結バッグである。所定の実施態様では、ラベル又は添付文書は、ＮｅｏＴＣＲ生成物が、選択された状態及び端緒の患者を治療するために使用されることを示している。ＮｅｏＴＣＲ生成物は自己細胞から作製され、患者特異的な個別化された治療剤として設計されているため、患者はＮｅｏＴＣＲ生成物の容器上で特定される。

【0144】

所定の実施態様では、製造品は、１）ＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第一の容器を含む。
所定の実施態様では、製造品は、１）ＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第一の容器；及び２）第一の容器と同じＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第二の容器を含む。場合によっては、所定の実施態様では、第一の容器及び第二の容器と同じＮｅｏＴＣＲ生成物を含む追加の容器が準備され作製される。場合によっては、所定の実施態様では、異なる細胞傷害性又は他の治療剤を含む組成物を含む追加の容器がまた、上述の容器と組み合わせられる。

【0145】

所定の実施態様では、製造品は、１）ＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第一の容器；及び２）組成物がその中に含まれる第二の容器であって、組成物が更なる細胞傷害性又は他の治療剤を含む、第二の容器を含む。

【0146】

所定の実施態様では、製造品は、１）二種のＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第一の容器（すなわち、ＮｅｏＴＣＲ細胞の各集団が異なるＮｅｏＴＣＲを発現するＮｅｏＴＣＲ細胞の二集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物（例えば、表４を参照））；及び２）組成物がその中に含まれる第二の容器であって、組成物が更なる細胞傷害性又は他の治療剤を含む、第二の容器を含む。明確にするために、ＮｅｏＴＣＲ細胞の二集団を含む生成物の場合、各集団をそれぞれＮｅｏＴＣＲ生成物と呼ぶことができ、又は組み合わせたＮｅｏＴＣＲ細胞の二集団（単一の容器に組み合わされるか、又は別々の容器にパッケージ化される）をＮｅｏＴＣＲ生成物と呼ぶことができる。

【0147】

所定の実施態様では、製造品は、１）ＮｅｏＴＣＲ細胞の第一集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第一の容器；２）ＮｅｏＴＣＲ細胞の第二集団を含む第二のＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第二の容器；及び３）場合によっては、組成物がその中に含まれる第三の容器であって、組成物が更なる細胞傷害性又は他の治療剤を含む、第三の容器を含む。所定の実施態様では、第一及び第二のＮｅｏＴＣＲ生成物は異なるＮｅｏＴＣＲ生成物であり、第一のＮｅｏＴＣＲ生成物は第一のＮｅｏＴＣＲを発現するＮｅｏＴＣＲ細胞を含み、第二のＮｅｏＴＣＲ生成物はＮｅｏＴＣＲ細胞の第一集団とは異なるＮｅｏＴＣＲを発現するＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、第一及び第二のＮｅｏＴＣＲ生成物は同じＮｅｏＴＣＲ生成物である。

【0148】

所定の実施態様では、製造品は、１）三種のＮｅｏＴＣＲ生成物（すなわち、ＮｅｏＴＣＲ細胞の三集団を含み、ＮｅｏＴＣＲ細胞の各集団が異なるＮｅｏＴＣＲを発現するＮｅｏＴＣＲ生成物（例えば、表５を参照））がその中に含まれる第一の容器；及び２）場合によっては、組成物がその中に含まれる第二の容器であって、組成物が更なる細胞傷害性又は他の治療剤を含む、第二の容器を含む。

【0149】

所定の実施態様では、製造品は、１）ＮｅｏＴＣＲ細胞の第一集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第一の容器；２）ＮｅｏＴＣＲ細胞の第二集団を含む第二のＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第二の容器；３）ＮｅｏＴＣＲ細胞の第三集団を含む第三のＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第三の容器；及び４）場合によっては、組成物がその中に含まれる第四の容器であって、組成物が更なる細胞傷害性又は他の治療剤を含む、第四の容器を含む。所定の実施態様では、第一、第二、第三のＮｅｏＴＣＲ生成物は、異なるＮｅｏＴＣＲ生成物であり、第一のＮｅｏＴＣＲ生成物は第一のＮｅｏＴＣＲを発現するＮｅｏＴＣＲ細胞を含み、第二のＮｅｏＴＣＲ生成物はＮｅｏＴＣＲ細胞の第一集団とは異なるＮｅｏＴＣＲを発現するＮｅｏＴＣＲ細胞を含み、かつ第三のＮｅｏＴＣＲ生成物はＮｅｏＴＣＲ細胞の第一及び第二集団とは異なるＮｅｏＴＣＲを発現するＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、第一、第二、及び第三のＮｅｏＴＣＲ生成物は、同じＮｅｏＴＣＲ生成物である。所定の実施態様では、第一、第二、及び第三のＮｅｏＴＣＲ生成物のうち二種は同じＮｅｏＴＣＲ生成物である。明確にするために、ＮｅｏＴＣＲ細胞の三集団を含む生成物の場合、各集団をそれぞれＮｅｏＴＣＲ生成物と呼ぶことができ、又は組み合わせたＮｅｏＴＣＲ細胞の三集団（単一の容器に組み合わされるか、又は別々の容器にパッケージ化される）をＮｅｏＴＣＲ生成物と呼ぶことができる。

【0150】

所定の実施態様では、製造品は、１）四種のＮｅｏＴＣＲ生成物（すなわち、四ＮｅｏＴＣＲ細胞集団）がその中に含まれる第一の容器；及び２）場合によっては、組成物がその中に含まれる第二の容器であって、組成物が更なる細胞傷害性又は他の治療剤を含む、第二の容器を含む。

【0151】

所定の実施態様では、製造品は、１）ＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第一の容器；２）第二のＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第二の容器；３）第三のＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第三の容器；４）第四のＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第四の容器；及び５）場合によっては、組成物がその中に含まれる第五の容器であって、組成物が更なる細胞傷害性又は他の治療剤を含む、第五の容器を含む。所定の実施態様では、第一、第二、第三、第四のＮｅｏＴＣＲ生成物は、異なるＮｅｏＴＣＲ生成物である。所定の実施態様では、第一、第二、第三、第四のＮｅｏＴＣＲ生成物は、同じＮｅｏＴＣＲ生成物である。所定の実施態様では、第一、第二、第三、第四のＮｅｏＴＣＲ生成物のうち二種は同じＮｅｏＴＣＲ生成物である。所定の実施態様では、第一、第二、第三、第四のＮｅｏＴＣＲ生成物のうち三種は同じＮｅｏＴＣＲ生成物である。明確にするために、ＮｅｏＴＣＲ細胞の四集団を含む生成物の場合、各集団をそれぞれＮｅｏＴＣＲ生成物と呼ぶことができ、又は組み合わせたＮｅｏＴＣＲ細胞の四集団（単一の容器に組み合わされるか、又は別々の容器にパッケージ化される）をＮｅｏＴＣＲ生成物と呼ぶことができる。

【0152】

所定の実施態様では、製造品は、１）五種以上のＮｅｏＴＣＲ生成物（すなわち、五ＮｅｏＴＣＲ細胞集団）がその中に含まれる第一の容器；及び２）場合によっては、組成物がその中に含まれる第二の容器であって、組成物が更なる細胞傷害性又は他の治療剤を含む、第二の容器を含む。

【0153】

所定の実施態様では、製造品は、１）ＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第一の容器；２）第二のＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第二の容器；３）第三のＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第三の容器；４）第四のＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第四の容器；５）第五のＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第五の容器；６）場合によっては、第六以上のＮｅｏＴＣＲ生成物がその中に含まれる第六以上の追加の容器；及び７）場合によっては、組成物がその中に含まれる追加の容器であって、組成物が更なる細胞傷害性又は他の治療剤を含む、追加の容器を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物の容器の全てが、異なるＮｅｏＴＣＲ生成物である。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物の容器の全てが、同じＮｅｏＴＣＲ生成物である。所定の実施態様では、患者の腫瘍サンプル中の検出可能なＮｅｏＴＣＲの利用可能性、患者のための複数のＮｅｏＴＣＲ生成物の必要性及び／又は要望、及び一又は複数の容器を必要とするかそれから利益をうる何れか一種のＮｅｏＴＣＲ生成物の利用可能性に基づいて、五以上の容器内に同じ又は異なるＮｅｏＴＣＲ生成物の任意の組み合わせが存在しうる。明確にするために、ＮｅｏＴＣＲ細胞の五集団を含む生成物の場合、各集団をそれぞれＮｅｏＴＣＲ生成物と呼ぶことができ、又は組み合わせたＮｅｏＴＣＲ細胞の五集団（単一の容器に組み合わされるか、又は別々の容器にパッケージ化される）をＮｅｏＴＣＲ生成物と呼ぶことができる。

【0154】

更に、所定の実施態様では、ここに記載のＮｅｏＴＣＲ生成物の任意の容器は、複数の投与時点のために、及び／又は患者のための適切な用量に基づいて、二、三、又は四の別個の容器に分割できる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物はキットで提供される。キットには、非限定的な例として、添付文書、ラベル、ＮｅｏＴＣＲ生成物の使用説明書、注射器、廃棄説明書、投与説明書、チューブ、針、及びＮｅｏＴＣＲ生成物を適切に管理するために臨床医が必要とするその他のものを含めることができる。

【0155】

７． ゲノム編集方法
所定の実施態様では、本開示は、部分的に、ヒト細胞を改変する方法、例えば、改変されたＴ細胞又は改変されたヒト幹細胞を含む。所定の実施態様では、本開示は、部分的に、ヒト細胞、例えば、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、造血幹細胞（ＨＳＣ）、ＨＳＣに由来する細胞、又は樹状／抗原提示細胞を改変する方法を含む。所定の実施態様では、そのような改変はゲノム編集を含む。例えば、限定ではないが、そのようなゲノム編集は、一又は複数の内因性遺伝子座、例えば、ＴＣＲアルファ（ＴＣＲα）遺伝子座及びＴＣＲベータ（ＴＣＲβ）遺伝子座を標的とするヌクレアーゼを用いて達成することができる。所定の実施態様では、ヌクレアーゼは、内因性標的配列に一本鎖ＤＮＡニック又は二本鎖ＤＮＡ切断を生成しうる。所定の実施態様では、ヌクレアーゼは、ゲノムのコーディング部分又は非コーディング部分、例えば、エクソン、イントロンを標的としうる。所定の実施態様では、ここで考えられるヌクレアーゼは、ホーミングエンドヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、メガＴＡＬヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、及びＣｌｕｓｔｅｒｅｄ Ｒｅｇｕｌａｒｌｙ Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ Ｓｈｏｒｔ Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ Ｒｅｐｅａｔｓ（クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート）（ＣＲＩＳＰＲ）／Ｃａｓヌクレアーゼを含む。所定の実施態様では、ヌクレアーゼは、切断活性の効率を高めるために、例えば、アミノ酸置換及び／又は欠失の導入により、それ自体が改変されうる。

【0156】

所定の実施態様では、ゲノム編集は、非ウイルス送達系を使用して実施される。例えば、リポフェクションの存在下での核酸の投与（Ｆｅｉｇｎｅｒ等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４：７４１３，１９８７；Ｏｎｏ等，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｅｔｔｅｒｓ １７：２５９，１９９０；Ｂｒｉｇｈａｍ等，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．２９８：２７８，１９８９；Ｓｔａｕｂｉｎｇｅｒ等，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １０１：５１２，１９８３）、アシアロオロソムコイド－ポリリジンコンジュゲーション（Ｗｕ等，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６３：１４６２１，１９８８；Ｗｕ等，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６４：１６９８５，１９８９）、又は手術条件下でのマイクロインジェクション（Ｗｏｌｆｆ等，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１４６５，１９９０）により、核酸分子を細胞に導入することができる。遺伝子導入のための他の非ウイルス手段には、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、及びプロトプラスト融合を使用したインビトロでのトランスフェクションが含まれる。リポソームはまた、細胞へのＤＮＡの送達に潜在的に有益でありうる。対象の罹患組織への正常遺伝子の移植はまた、正常核酸をエクスビボで培養可能な細胞型（例えば、自己又は異種の初代細胞又はその子孫）に導入することによって達成することができ、その後、細胞（又はその子孫）は標的組織に注入されるか、又は全身的に注入される。

【0157】

所定の実施態様では、ゲノム編集は、ウイルス送達系を使用して実施される。所定の実施態様では、ウイルス法には、標的組込み（限定されないが、ＡＡＶを含む）とランダム組込み（限定されないが、レンチウイルスアプローチを含む）が含まれる。所定の実施態様では、ウイルス送達は、ヌクレアーゼの組込みなしに達成されるであろう。そのような実施態様では、ウイルス送達系は、Ｌｅｎｔｉｆｌａｓｈ又は別の同様の送達系でありうる。

【0158】

本開示の文脈において有用なゲノム編集方法に関する追加の情報は、その内容があらゆる目的のために出典明示によりここに援用される国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５８２３０号の例えば段落［００２１９］～［００２２６］に見出すことができる。

【0159】

８． 相同組換え鋳型
所定の実施態様では、本開示は、相同組換え（ＨＲ）鋳型核酸配列を細胞の内因性遺伝子座に導入して組換えることによる、細胞のゲノム編集方法を提供する。所定の実施態様では、ＨＲ鋳型核酸配列は直鎖状である。所定の実施態様では、ＨＲ鋳型核酸配列は環状である。所定の実施態様では、環状ＨＲ鋳型は、プラスミド、ミニサークル、又はナノプラスミドでありうる。所定の実施態様では、ＨＲ鋳型核酸配列は、第一の相同性アーム及び第二の相同性アームを含む。所定の実施態様では、相同性アームは、約３００塩基から約２０００塩基でありうる。例えば、各相同性アームは１０００塩基でありうる。所定の実施態様では、相同性アームは、細胞の第一の内因性配列及び第二の内因性配列に相同でありうる。所定の実施態様では、内因性遺伝子座はＴＣＲ遺伝子座である。例えば、第一の内因性配列及び第二の内因性配列は、ＴＣＲアルファ遺伝子座又はＴＣＲベータ遺伝子座内にある。所定の実施態様では、ＨＲ鋳型はＴＣＲ遺伝子配列を含む。非限定的な実施態様では、ＴＣＲ遺伝子配列は、患者特異的なＴＣＲ遺伝子配列である。非限定的な実施態様では、ＴＣＲ遺伝子配列は腫瘍特異的である。非限定的な実施態様では、ＴＣＲ遺伝子配列は、その内容が出典明示によりここに援用されるＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０１７８８７に記載された方法を使用して同定され取得されうる。所定の実施態様では、ＨＲ鋳型は、ＴＣＲアルファ遺伝子配列とＴＣＲベータ遺伝子配列を含む。

【0160】

所定の実施態様では、ＨＲ鋳型はポリシストロニックポリヌクレオチドである。所定の実施態様では、ＨＲ鋳型は、可動性ポリペプチド配列（例えば、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）をコードする配列を含む。所定の実施態様では、ＨＲ鋳型は、配列内リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）をコードする配列を含む。所定の実施態様では、ＨＲ鋳型は２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、及びＦ２Ａ）をコードする配列含む。所定の実施態様では、ＨＲ鋳型は、同じアミノ酸配列をコードするがコドンが相違する配列を含む。例えば、限定しないが、ＨＲ鋳型は、例えばＰ２Ａなど、同じアミノ酸配列を有する第一及び第二の２Ａペプチドをコードする第一及び第二のコドンが相違する配列を含む。ＨＲ鋳型核酸及びその細胞を改変する方法に関する追加の情報は、その内容が出典明示によりここに援用される国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５８２３０号に見出すことができる。

【0161】

９． キット
本開示は、それを必要とする対象における免疫応答を誘導し、及び／又は増強し、及び／又はがんを治療し、及び／又は予防するためのキットを提供する。所定の実施態様では、キットは、有効量の本開示の複数の細胞又はそれを含む薬学的組成物を含む。所定の実施態様では、キットは滅菌容器を含み；そのような容器は、ボックス、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、ポーチ、ブリスターパック、又は当該技術分野で知られている他の適切な容器形態でありうる。そのような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔、又は医薬を保持するのに適した他の材料で作製されうる。所定の非限定的な実施態様では、キットは、本開示のＨＲ鋳型をコードする単離された核酸分子を含む。

【0162】

所定の実施態様では、キットは、限定されないが、１）ルアーロックコネクター、ローラークランプ、ＰＶＣチューブ、及び注入ポートを含む充填アセンブリ、及び２）場合によってはオーバーラップバッグに更に含まれ、ＮｅｏＴＣＲ生成物が個人的にデザインされ製造された患者に確実に注入されるようにするための患者識別情報がラベル付けされている、ＮｅｏＴＣＲ生成物が充填されたＣｒｙｏＭＡＣＳバッグ（又は同等のバッグ）を含む、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入に必要とされる消耗品を含む。所定の実施態様では、キットは、温水浴中でＮｅｏＴＣＲ生成物を如何に解凍するか、及びＣｒｙｏＭＡＣＳバッグ（又は同等のバッグ）内の解凍されたＮｅｏＴＣＲ生成物にＮｅｏＴＣＲ細胞を如何に均一に懸濁させるかについての説明書を更に含む。

【0163】

所望されるならば、複数の細胞は、がんの治療及び／又は予防のための使用に関する情報を含む説明書と共に提供される。所定の実施態様では、説明書は、次のうちの少なくとも一を含む：治療剤の説明；新生物、病原体感染、又は免疫障害若しくはその症状の治療又は予防のための投与スケジュール及び投与；注意；警告；適応症；禁忌；過剰投与情報；有害反応；動物薬理；臨床試験；及び／又は参考文献。説明書は、容器（存在する場合）に直接に印刷され、又は容器に貼付されるラベルとして、又は容器内に若しくは容器と共に提供される別のシート、パンフレット、カード、又はフォルダーとして印刷されうる。

【0164】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、１０－１００×１０^４細胞／ｍＬの全生細胞濃度でＣｒｙｏＭＡＣＳバッグ（又は同等のバッグ）に充填され、保存される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、１０－１００×１０^４細胞／ｍＬの全生細胞濃度、３５ｍＬの全量でＣｒｙｏＭＡＣＳバッグ（又は同等のバッグ）に充填され、保存される。所定の実施態様では、一つのバッグが充填され保存される。所定の実施態様では、二つのバッグが充填され保存される。

【0165】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、１０－１００×１０^４細胞／ｍＬの全生細胞濃度でＣｒｙｏＭＡＣＳバッグ（又は同等のバッグ）で出荷される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、１０－１００×１０^４細胞／ｍＬの全生細胞濃度、３５ｍＬの全量でＣｒｙｏＭＡＣＳバッグ（又は同等のバッグ）で出荷される。所定の実施態様では、一つのバッグが充填され出荷される。所定の実施態様では、二つのバッグが充填され出荷される。

【0166】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のラベルには「全生細胞濃度１０－１００×１０^４細胞／ｍＬ」と記載される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のラベルには、「全生細胞濃度１０－１００×１０^４細胞／ｍＬ、３５ｍＬ」と記載される。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、表４及び５に示される細胞数及び用量を注入するために患者に注入する生成物の正しいミリリットルを如何に計算するかについての説明書を含むキットで提供される。

【0167】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、凍結保存された生成物を如何に解凍するかに関する説明書を含むキットで提供される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を如何に解凍するかについての説明は、一又は複数の次の工程を含む（同じ意味の別の表現が許容される）：
１）カセット付きの液体窒素冷凍庫から１バッグのＮｅｏＴＣＲ生成物を取り出し、ドライアイス上に置いて水浴まで輸送する。
２）ＮｅｏＴＣＲ生成物を含んでいるクライオバッグ（例えば、ＣｒｙｏＭＡＣＳバッグ）をカセットから取り出す。
３）ＮｅｏＴＣＲ生成物のクライオバッグを新しい再封可能な（例えば、ジップロックスタイルの）プラスチックバッグに入れる。ＮｅｏＴＣＲ生成物を含んでいる再封可能なバッグを密封する。
４）ＮｅｏＴＣＲ生成物のクライオバッグ（再封可能なバッグ内に密封されている）を３７℃±２℃の温度の水浴に沈める。水浴に浸した後は、バッグを動かさない。
５）ＮｅｏＴＣＲ生成物クライオバッグの解凍の進行状況を観察し、小さな氷が残ったら水浴から取り出す。ＮｅｏＴＣＲ生成物が完全に解凍されるまで、バッグを穏やかに揺動させる。
６）ＮｅｏＴＣＲ生成物のクライオバッグを再封可能なバッグから取り出す。
７）吸収性の使い捨てワイプでバッグの外側を穏やかに乾かし、凝縮物を取り除く。クライオバッグに漏れがないか観察し、クライオバッグの完全性が視覚的に検証されていることを確認する。完全性が損なわれている場合は、注入を続行しないこと。
８）必要に応じて、ＮｅｏＴＣＲ生成物の追加のクライオバッグに対して解凍手順を繰り返し、規定の用量を達成する。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物には、解凍から４時間以内に生成物を使用する説明書が提供される。

【0168】

１０． 例示的な実施態様
所定の実施態様では、本開示は、ａ）第一のネオ抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲを含む第一のＮｅｏＴＣＲ細胞集団；ｂ）第一のネオ抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲを含む第一のＮｅｏＴＣＲ細胞集団、及び第二のネオ抗原に結合する第二のＮｅｏＴＣＲを含む第二のＮｅｏＴＣＲ細胞集団；又はｃ）第一のネオ抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲを含む第一のＮｅｏＴＣＲ細胞集団、第二のネオ抗原に結合する第二のＮｅｏＴＣＲを含む第二のＮｅｏＴＣＲ細胞集団、及び第三のネオ抗原に結合する第三のＮｅｏＴＣＲを含む第三のＮｅｏＴＣＲ細胞集団を含み；各ＮｅｏＴＣＲが互いに異なり、かつ各ＮｅｏＴＣＲが患者に由来する、組成物を提供する。

【0169】

ここに記載された組成物の所定の実施態様では、第一、第二、及び／又は第三のネオ抗原が、単一の遺伝子によって発現される。ここに記載された組成物の所定の実施態様では、第一、第二、及び／又は第三のネオ抗原が、異なる遺伝子によって発現される。ここに記載された組成物の所定の実施態様では、第一、第二、及び／又は第三のネオ抗原が、単一の遺伝子によって発現される。ここに記載された組成物の所定の実施態様では、第一、第二、及び／又は第三のＮｅｏＴＣＲが、単一の主要組織適合遺伝子複合体に結合する。ここに記載された組成物の所定の実施態様では、第一、第二、及び／又は第三のＮｅｏＴＣＲは、異なる主要組織適合遺伝子複合体に結合する。ここに記載された組成物の所定の実施態様では、第一、第二、及び／又は第三のＮｅｏＴＣＲのうちの二つが、単一の主要組織適合遺伝子複合体に結合する。

【0170】

ここに記載された組成物の所定の実施態様では、組成物は、薬学的に許容される担体を含む。ここに記載された組成物の所定の実施態様では、組成物は凍結保存剤を含む。ここに記載された組成物の所定の実施態様では、組成物は血清アルブミンを含む。ここに記載された組成物の所定の実施態様では、組成物は晶質液を含む。ここに記載された組成物の所定の実施態様では、組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ヒト血清アルブミン（ＨＡＳ）、及びＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０を含む。

【0171】

所定の実施態様では、本開示は、ここに開示される組成物の何れかを投与することを含む、治療を必要とする対象におけるがんを治療する方法を提供する。

【0172】

ここに記載の方法の所定の実施態様では、組成物は、約４×１０^８細胞、１．３３×１０^９細胞、又は約４×１０^９細胞の量のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。ここに記載の方法の所定の実施態様では、組成物は、約４×１０^８細胞より多くかつ約１．３３×１０^９細胞より少なく、約１．３３×１０^９細胞より多くかつ約４×１０^９細胞より少なく、又は約４×１０^９細胞より多い量のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。ここに記載の方法の所定の実施態様では、組成物は、表４による量のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。ここに記載の方法の所定の実施態様では、組成物は、表５による量のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。ここに記載の方法の所定の実施態様では、組成物は、単回投与で投与される。ここに記載の方法の所定の実施態様では、組成物は、複数回投与で投与される。

【0173】

ここに記載の方法の所定の実施態様では、本方法は、組み合わせ薬剤を投与することを更に含む。ここに記載の方法の所定の実施態様では、組み合わせ薬剤は、サイトカイン、ＰＤ軸結合剤、ＰＤ－１結合剤、ＰＤ－Ｌ１結合剤、ＰＤ－Ｌ２結合剤、又はそれらの組み合わせである。ここに記載の方法の所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－２剤、ＩＬ－７剤、ＩＬ－１０剤、ＩＬ－１２剤、ＩＬ－１５剤、ＩＬ－１８剤、ＩＬ－２１剤、又はそれらの組み合わせである。ここに記載の方法の所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－２剤である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－１５剤である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、ＰＤ軸結合剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、又はアテゾリズマブを含む。

【0174】

ここに記載の方法の所定の実施態様では、がんは、液性がん又は固形がんである。ここに記載の方法の所定の実施態様では、患者にはここに記載のＦｌｕ－Ｃｙコンディショニング治療が提供される。

【0175】

所定の実施態様では、本開示は、ここに記載される組成物の何れかを製造する方法を提供する。所定の実施態様では、本開示はここに記載される組成物の何れかの投与のためのキットを提供する。

【0176】

所定の実施態様では、本開示は、ａ）第一の抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲをコードする第一の外因性ポリヌクレオチドを含む第一の改変細胞であって、第一の外因性ポリヌクレオチドが、第一の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第一の改変細胞；及びｂ）第二の抗原に結合する第二のＮｅｏＴＣＲをコードする第二の外因性ポリヌクレオチドを含む第二の改変細胞であって、第二の外因性ポリヌクレオチドが、第二の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第二の改変細胞を含む複数の細胞を提供する。

【0177】

ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、本組成物は、第三の抗原に結合する第三のＮｅｏＴＣＲをコードする第三の外因性ポリヌクレオチドを含む第三の改変細胞であって、第三の外因性ポリヌクレオチドが、第三の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第三の改変細胞を更に含む。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、第一、第二及び第三のＮｅｏＴＣＲは患者由来である。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、第一、第二及び第三の抗原はがん抗原である。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、がん抗原はネオ抗原である。

【0178】

ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、がん抗原は患者特異的抗原である。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、第一、第二、及び第三の改変細胞は初代細胞である。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、初代細胞は患者由来の細胞である。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、初代細胞はリンパ球である。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、初代細胞はＴ細胞である。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５－、ＣＣＲ７＋、及びＣＤ２７＋である。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５＋、ＣＤ２７＋、ＣＣＲ７＋である。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ１２７＋である。

【0179】

ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、第一、第二、及び第三の外因性ポリヌクレオチドは、シグナル配列、第一及び第二の２Ａコード配列、及びＴＣＲ遺伝子配列を含む。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、第一、第二、及び第三の外因性ポリヌクレオチドのＴＣＲ遺伝子配列は、第一及び第二の２Ａコード配列の間に位置される。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、第一及び第二の２Ａコード配列は、同じアミノ酸配列をコードし、互いにコドンが相違している。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、第一及び第二の２Ａコード配列は、Ｐ２Ａコード配列である。

【0180】

ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、外因性ポリヌクレオチドは、第一及び／又は第二の２Ａコード配列の直ぐ上流に位置するアミノ酸配列Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙをコードする配列を更に含む。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、外因性ポリヌクレオチドは、第二の２Ａコード配列の上流に位置するフューリン切断部位をコードする配列を更に含む。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、第一、第二、及び第三の外因性ポリヌクレオチドは、第二のＴＣＲ遺伝子を更に含む。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、第一、第二、及び第三の外因性ポリヌクレオチドの第二のＴＣＲ遺伝子は、第二の２Ａコード配列の下流に位置する。ここに記載の複数の細胞の所定の実施態様では、第一、第二、及び第三の外因性ポリヌクレオチドは環状ポリヌクレオチドである。

【0181】

所定の実施態様では、本開示は、ここに開示される複数の細胞を含む組成物を提供する。ここに記載の組成物の所定の実施態様では、組成物は、薬学的に許容される添加物を更に含む。ここに記載の組成物の所定の実施態様では、組成物は、がんの治療のためにそれを必要とする患者に投与される。

【0182】

ここに記載の組成物の所定の実施態様では、組成物は凍結保存剤を含む。ここに記載の組成物の所定の実施態様では、組成物は、血清アルブミンを含む。ここに記載の組成物の所定の実施態様では、組成物は晶質液を含む。ここに記載の組成物の所定の実施態様では、組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ヒト血清アルブン（ＨＡＳ）、及びＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０を含む。

【0183】

所定の実施態様では、本開示は、治療を必要とする対象においてがんを治療する方法において、第一の抗原に結合する第一のＮｅｏＴＣＲをコードする第一の外因性ポリヌクレオチドを含む第一の改変細胞であって、第一の外因性ポリヌクレオチドが、第一の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第一の改変細胞；及び第二の抗原に結合する第二のＮｅｏＴＣＲをコードする第二の外因性ポリヌクレオチドを含む第二の改変細胞であって、第二の外因性ポリヌクレオチドが、第二の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第二の改変細胞を含む、複数の細胞を投与し；それによって対象におけるがんを治療することを含む、方法を提供する。

【0184】

ここに記載の方法の所定の実施態様では、複数の細胞は、第三の抗原に結合する第三のＮｅｏＴＣＲをコードする第三の外因性ポリヌクレオチドを含む第三の改変細胞であって、第三の外因性ポリヌクレオチドが、第三の改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている、第三の改変細胞を更に含む。

【0185】

ここに記載の方法の所定の実施態様では、第一、第二及び第三のＮｅｏＴＣＲは患者由来である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、第一、第二及び第三の抗原はがん抗原である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、がん抗原はネオ抗原である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、がん抗原は患者特異的抗原である。

【0186】

ここに記載の方法の所定の実施態様では、第一、第二及び第三の改変細胞は初代細胞である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、初代細胞は患者由来の細胞である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、初代細胞はリンパ球である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、初代細胞はＴ細胞である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５－、ＣＣＲ７＋、及びＣＤ２７＋である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５＋、ＣＤ２７＋、ＣＣＲ７＋である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ９５＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ１２７＋である。

【0187】

ここに記載の方法の所定の実施態様では、第一、第二、及び第三の外因性ポリヌクレオチドは、シグナル配列、第一及び第二の２Ａコード配列、及びＴＣＲ遺伝子配列を含む。ここに記載の方法の所定の実施態様では、第一、第二、及び第三の外因性ポリヌクレオチドのＴＣＲ遺伝子配列は、第一及び第二の２Ａコード配列の間に位置される。ここに記載の方法の所定の実施態様では、第一及び第二の２Ａコード配列は、同じアミノ酸配列をコードし、互いにコドンが相違している。ここに記載の方法の所定の実施態様では、第一及び第二の２Ａコード配列は、Ｐ２Ａコード配列である。

【0188】

ここに記載の方法の所定の実施態様では、外因性ポリヌクレオチドは、第一及び／又は第二の２Ａコード配列の直ぐ上流に位置するアミノ酸配列Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙをコードする配列を更に含む。ここに記載の方法の所定の実施態様では、外因性ポリヌクレオチドは、第二の２Ａコード配列の上流に位置するフューリン切断部位をコードする配列を更に含む。

【0189】

ここに記載の方法の所定の実施態様では、第一、第二、及び第三の外因性ポリヌクレオチドは、第二のＴＣＲ遺伝子を更に含む。ここに記載の方法の所定の実施態様では、第一、第二、及び第三の外因性ポリヌクレオチドの第二のＴＣＲ遺伝子は、第二の２Ａコード配列の下流に位置する。ここに記載の方法の所定の実施態様では、第一、第二、及び第三の外因性ポリヌクレオチドは環状ポリヌクレオチドである。

【0190】

ここに記載の方法の所定の実施態様では、本方法は、組み合わせ薬剤を投与することを更に含む。ここに記載の方法の所定の実施態様では、組み合わせ薬剤は、サイトカイン、ＰＤ軸結合剤、ＰＤ－１結合剤、ＰＤ－Ｌ１結合剤、ＰＤ－Ｌ２結合剤、又はそれらの組み合わせである。ここに記載の方法の所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－２剤、ＩＬ－７剤、ＩＬ－１０剤、ＩＬ－１２剤、ＩＬ－１５剤、ＩＬ－１８剤、ＩＬ－２１剤、又はそれらの組み合わせである。ここに記載の方法の所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－２剤である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－１５剤である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、ＰＤ軸結合剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、又はそれらの組み合わせである。

【0191】

ここに記載の方法の所定の実施態様では、がんは液性がんである。ここに記載の方法の所定の実施態様では、液性がんは、濾胞性リンパ腫、白血病、及び多発性骨髄腫からなる群から選択される。ここに記載の方法の所定の実施態様では、がんは固形がんである。ここに記載の方法の所定の実施態様では、固形がんは、メラノーマ、胸部がん、肺がん、卵巣がん、乳がん、膵臓がん、頭頸部がん、前立腺がん、婦人科がん、中枢神経系がん、皮膚がん、ＨＰＶ＋がん、食道がん、甲状腺がん、胃がん、肝細胞がん、胆管がん、腎細胞がん、膀胱がん、精巣がん、肉腫、及び結腸直腸がんからなる群から選択される。

【0192】

所定の実施態様では、本開示は、治療を必要とする対象においてがんを治療する方法において、腫瘍抗原に結合するＮｅｏＴＣＲをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む有効量の改変細胞であって、外因性ポリヌクレオチドが改変細胞の内因性ＴＲＡＣ及び／又はＴＲＢＣ遺伝子座に組み込まれている改変細胞を投与すること；並びに有効量の組み合わせ薬剤を投与することを含み；それにより、対象におけるがんを治療する、方法を提供する。ここに記載の方法の所定の実施態様では、組み合わせ薬剤は、化学療法剤、抗ホルモン剤、内分泌治療剤、細胞傷害性剤、サイトカイン、ＰＤ軸結合剤、ＰＤ－１結合剤、ＰＤ－Ｌ１結合剤、ＰＤ－Ｌ２結合剤、又はそれらの組み合わせを含む。

【0193】

ここに記載の方法の所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－２剤、ＩＬ－７剤、ＩＬ－１０剤、ＩＬ－１２剤、ＩＬ－１５剤、ＩＬ－１８剤、ＩＬ－２１剤、又はそれらの組み合わせである。ここに記載の方法の所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－２剤である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、サイトカインは、ＩＬ－１５剤である。ここに記載の方法の所定の実施態様では、ＰＤ軸結合剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、又はアテゾリズマブを含む。

【0194】

ここに記載の方法の所定の実施態様では、がんは、液性がんである。ここに記載の方法の所定の実施態様では、液性がんは、濾胞性リンパ腫、白血病、及び多発性骨髄腫からなる群から選択される。ここに記載の方法の所定の実施態様では、がんは固形がんである。ここに記載の方法の所定の実施態様では、固形がんは、メラノーマ、胸部がん、肺がん、卵巣がん、乳がん、膵臓がん、頭頸部がん、前立腺がん、婦人科がん、中枢神経系がん、皮膚がん、ＨＰＶ＋がん、食道がん、甲状腺がん、胃がん、肝細胞がん、胆管がん、腎細胞がん、膀胱がん、精巣がん、肉腫、及び結腸直腸がんからなる群から選択される。

【実施例】

【0195】

次は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上に提供した一般的な説明を前提として、様々な他の実施態様を実施できることが理解される。

【0196】

実施例１ ＮｅｏＴＣＲ生成物
抗原特異的標的Ｔ細胞の殺傷。 変異を標的とした、個別化された養子Ｔ細胞受容体（ＮｅｏＴＣＲ生成物）療法は、腫瘍排他的変異標的を提示する細胞を特異的に認識し殺傷する免疫系の能力を解放するようにデザインされた免疫療法モダリティである。ＮｅｏＴＣＲ細胞を、メラノーマ患者の血液から単離されたｎｅｏ１２特異的ＣＤ８ Ｔ細胞から作製されたｎｅｏ１２ＴＣＲ（代表的なネオエピトープ）を発現するように改変し、同族又は非対応の腫瘍細胞と数日間共培養し、タイムラプスライブ顕微鏡検査画像を収集した。タイムラプスライブ顕微鏡で得られた代表的な画像（０、１、２日目；図１を参照）は、同族ｎｅｏ１２ペプチド－ＨＬＡを発現する標的Ｔ細胞と共培養したＮｅｏＴＣＲ－Ｔ細胞による強力な抗原特異的細胞傷害活性と増殖を示しているが（右の列）、無関係なペプチドを発現する標的Ｔ細胞と共培養した場合はこれを示していない（左の列）。適切なｎｅｏＥ－ＨＬＡ標的抗原を示さない腫瘍細胞は、ＮｅｏＴＣＲ Ｔ細胞の存在下で増殖し続けた（左の列、緑色）。対照的に、腫瘍細胞を提示するｎｅｏ１２ペプチドの大部分は、ｎｅｏ１２－ＴＣＲ Ｔ細胞との共培養から２日以内にアポトーシスし又は死滅した（右の列、赤色）。

【0197】

健康なドナー及びがん患者のＴ細胞におけるエフェクター機能。 ＮｅｏＴＣＲ製造プロセスで、健康なドナーからだけでなく、がん患者のＴ細胞からでも生成物の作製が成功するようにするために、がん患者から得られた血液に由来するＮｅｏＴＣＲ細胞を作製することにより、エクスビボ作用機序（ＭＯＡ）研究を実施し、同じＮｅｏＴＣＲを発現する健康なドナーから得られた血液から作製されたＴ細胞の活性と直接比較した。抗原特異的活性を、ＮｅｏＴＣＲ－Ｔ細胞を同族又は無関係なＨＬＡ－ペプチド複合体を発現する代替腫瘍標的Ｔ細胞と混合することによって特徴付けた。Ｔ細胞殺傷活性、増殖、及びサイトカイン産生の抗原特異性によって測定された、同等の遺伝子編集効率及び機能的活性を、がん患者及び健康なドナーからのＮｅｏＴＣＲ発現ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞を用いた研究で観察した。ＨＬＡ結合変異標的ペプチドの提示を欠く標的Ｔ細胞との接触時に標的Ｔ細胞の殺傷又はＮｅｏＴＣＲ－Ｔ細胞の増殖は観察されなかったため、応答の特異性が実証された。

【0198】

ＮｅｏＴＣＲ－Ｔ細胞の多機能性。 機能的エフェクターＴ細胞表現型に迅速に変換することに加えて、Ｔ細胞多機能性（複数のエフェクタータンパク質を分泌する単一細胞の能力）は、臨床試験において投与される改変Ｔ細胞のなかで非常に望ましい特性である重要な生成物特質である。注入前に多機能性を示すＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞を投与された非ホジキンリンパ腫の患者は、多機能性を示さなかった改変ＣＡＲ－Ｔ細胞を投与された患者よりも客観的臨床反応を経験する可能性が有意に高かった（Ｒｏｓｓｉ等，２０１８）。活性化ＣＤ８＋ＮｅｏＴＣＲ細胞からのサイトカインの用量依存的な多機能分泌を、単一細胞セクレトーム分析によって実証した（図２）。異なるサイトカイン産生画分の比率もまた刺激用量反応全体で一貫しているように見える。これらのデータは、ＨＬＡクラスＩ制限ＴＣＲを発現するように改変されたＣＤ４ Ｔ細胞が、同族ｎｅｏＥ－ＨＬＡ標的への曝露後に成功裏にエフェクター機能を示すこともまた明らかにしている。しかしながら、ＣＤ４＋Ｔ細胞の場合、標的Ｔ細胞のパルスに使用されるペプチド濃度では用量反応効果は観察されなかった。総合すれば、これらのデータは、同族ｎｅｏＥ－ＨＬＡ標的をその表面に提示する腫瘍細胞で刺激すると、多機能サイトカイン応答が、ＮｅｏＴＣＲを発現するＣＤ８及びＣＤ４ Ｔ細胞によってもたらされることを明らかにしている。

【0199】

より幼若のＴ細胞表現型。 Ｔ細胞分化の線形モデルによると、ナイーブ細胞は、抗原提示細胞からの適切なシグナルで最初に活性化されると、メモリー幹細胞（Ｔ_ＭＳＣ）及びセントラルメモリー（Ｔ_ＣＭ）細胞表現型に分化する。これらの「より幼若の」又は低分化のＴ細胞集団は、リンパ球が枯渇した動物によく生着し、加えて、持続性のためにメモリー細胞プールを維持しながら更なる刺激で活発に増殖することが示されている（Ｋｌｅｂａｎｏｆｆ，Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ及びＲｅｓｔｉｆｏ，２０１２）。Ｔ細胞サブセットの線形分化のモデルを表６に示す。

【0200】

しかしながら、これらの「より幼若の」集団は、同族ｎｅｏＥ－ＨＬＡ発現標的に遭遇したときに、より分化した又は「より高齢の」エフェクターメモリー（ＴＥＭ）及びエフェクターＴ細胞（ＴＥ）から観察される完全なサイトカイン及びエフェクタータンパク質カスケードを分泌しない。しかしながら、「より高齢の」細胞は標的腫瘍細胞の殺傷に非常に効果的であるが、それらは増殖して持続する能力が欠落している。このようにして、それらは、活性化時に標的Ｔ細胞を殺傷する目的で高分化した。

【0201】

動物モデル及び臨床研究からの公表された報告書では、「より幼若の」又は低分化のメモリー幹細胞表現型を有するＴ細胞を含む養子細胞療法が、「より高齢の」又はより分化したＴエフェクター細胞を投与した研究よりも改善された全奏効及び臨床転帰を達成することが示唆されている。マウスモデル及びＣＤ１９を標的としたＣＡＲ－Ｔ細胞の臨床試験のデータは、より幼若の表現型と細胞持続性及び全奏効率との相関関係を証明した（Ｂｕｓｃｈ等，２０１８）；（Ｓａｂａｔｉｎｏ等，２０１６）。従って、「より幼若の」Ｔ細胞表現型の投与は、がん患者に潜在的に高い利益をもたらし、これは、生着可能性の改善、注入後の持続性の延長、及びその同族抗原への曝露時のエフェクターＴ細胞への迅速な分化に関連している。これらの特性は、Ｔメモリー幹細胞（Ｔ_ＭＳＣ）及びＴセントラルメモリー（Ｔ_ＣＭ）表現型を含むＮｅｏＴＣＲ発現Ｔ細胞を注入することの価値を強調している。

【0202】

ここに記載の製造プロセスは、低分化表現型のＴ細胞集団の作製を促進するために意図的に開発した。ＮｅｏＴＣＲ生成物の細胞製造プロセスから生じるＴ細胞表現型の組成を、フローサイトメトリー分析によって調べた。所望される通り、メモリー幹細胞及びセントラルメモリー表現型のＮｅｏＴＣＲ細胞は、ＮｅｏＴＣＲ生成物プロファイルにおいて有意なＴ細胞表現型を表す。

【0203】

総合して、これらのエクスビボＭＯＡ研究では、ＮｅｏＴＣＲ生成物に処方された健康なドナー又はがん患者から生成されたＮｅｏＴＣＲ細胞が、所望のより幼若の表現型サブセット（Ｔ_ＭＳＣ及びＴ_ＣＭ）のＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞を含むことが証明される。同族ペプチド－ＨＬＡに遭遇すると、これらの細胞は、強力なサイトカイン産生、腫瘍殺傷活性、及び増殖能を示す多機能エフェクター細胞に迅速に移行し、身体全体の腫瘍細胞を根絶する可能性がある。

【0204】

実施例２ 単一及び複数ＴＣＲ ＮｅｏＴＣＲ生成物
所定の実施態様では、各ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋ Ｔ細胞に精密ゲノム改変される単一のＮｅｏＴＣＲを含む。トランカル変異を持つＮｅｏＴＣＲを含むＮｅｏＴＣＲ生成物のデザインが与えられると、一（１）のＮｅｏＴＣＲのみを含むＮｅｏＴＣＲ生成物が、増殖性障害（例えば、がん）の治療に十分かつ効果的でありうる。
ＮｅｏＴＣＲ生成物に含めることができるＮｅｏＴＣＲの数に遂行上の制限はない。むしろ、ＮｅｏＴＣＲ生成物に含めることができるＮｅｏＴＣＲの数は、１）患者の腫瘍及び血液サンプルにおいて同定されたＮｅｏＴＣＲの数に基づいて、又は２）与えられる生成物に複数のＮｅｏＴＣＲを含めることが望まれる場合に、選択されうる。

【0205】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、単一のＮｅｏＴＣＲを含む。単一（１）のＮｅｏＴＣＲを含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲについて患者の腫瘍と血液サンプルをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる単一（１）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製された。所定の実施態様では、１－ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される単一（１）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。任意の単一（１）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載の方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0206】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物はポリクローナルであり、二（２）以上のＮｅｏＴＣＲを含む。所定の実施態様では、ポリクローナルＮｅｏＴＣＲ生成物は、単一の容器内に二（２）以上のＮｅｏＴＣＲを含む。所定の実施態様では、ポリクローナルＮｅｏＴＣＲ生成物は、二（２）以上のＮｅｏＴＣＲを含み、ここで、ＮｅｏＴＣＲのそれぞれは、それら自身の別個の容器内にある。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物に含まれるＮｅｏＴＣＲは、がんの治療のために患者に逐次的に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物に含まれるＮｅｏＴＣＲは、がんの治療のために患者に同時に投与される。

【0207】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、二（２）又は三（３）のＮｅｏＴＣＲを含む。二（２）又は三（３）のＮｅｏＴＣＲを含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲについて患者の腫瘍及び血液サンプルをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる二（２）又は三（３）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される二（２）又は三（３）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、二（２）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、二（２）のＮｅｏＴＣＲの両方が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、三（３）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、三（３）のＮｅｏＴＣＲのうちの二（２）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、三（３）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、三（３）のＮｅｏＴＣＲ全てが、トランカル変異を含む。任意の二（２）又は三（３）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0208】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、四（４）のＮｅｏＴＣＲを含む。四（４）のＮｅｏＴＣＲを含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲについて患者の腫瘍と血液サンプルをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる四（４）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される四（４）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、四（４）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、四（４）のＮｅｏＴＣＲ全てが、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、四（４）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、四（４）のＮｅｏＴＣＲのうちの二（２）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、四（４）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、四（４）のＮｅｏＴＣＲのうちの三（３）が、トランカル変異を含む。任意の四（４）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0209】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、五（５）のＮｅｏＴＣＲを含む。五（５）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる五（５）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される五（５）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、五（５）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、五（５）のＮｅｏＴＣＲ全てが、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、五（５）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、五（５）のＮｅｏＴＣＲのうちの二（２）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、五（５）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、五（５）のＮｅｏＴＣＲのうちの三（３）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、五（５）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、五（５）のＮｅｏＴＣＲのうちの四（４）が、トランカル変異を含む。任意の五（５）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0210】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、六（６）のＮｅｏＴＣＲを含む。六（６）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込む六（６）のＮｅｏＴＣＲを選択することにより作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される六（６）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、六（６）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、六（６）のＮｅｏＴＣＲ全てが、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、六（６）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、六（６）のＮｅｏＴＣＲのうちの二（２）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、六（６）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、六（６）のＮｅｏＴＣＲのうちの三（３）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、六（６）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、六（６）のＮｅｏＴＣＲのうちの四（４）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、六（６）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、六（６）のＮｅｏＴＣＲのうちの五（５）が、トランカル変異を含む。任意の六（６）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0211】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、七（７）のＮｅｏＴＣＲを含む。七（７）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる七（７）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される七（７）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、七（７）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、七（７）のＮｅｏＴＣＲ全てが、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、七（７）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、七（７）のＮｅｏＴＣＲのうちの二（２）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、七（７）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、七（７）のＮｅｏＴＣＲのうちの三（３）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、七（７）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、七（７）のＮｅｏＴＣＲのうちの四（４）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、七（７）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、七（７）のＮｅｏＴＣＲのうちの五（５）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、七（７）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、七（７）のＮｅｏＴＣＲのうちの六（６）が、トランカル変異を含む。任意の七（７）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0212】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、八（８）のＮｅｏＴＣＲを含む。八（８）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる八（８）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される八（８）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、八（８）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、八（８）のＮｅｏＴＣＲ全てが、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、八（８）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、八（８）のＮｅｏＴＣＲのうちの二（２）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、八（８）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、八（８）のＮｅｏＴＣＲのうちの三（３）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、八（８）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、八（８）のＮｅｏＴＣＲのうちの四（４）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、八（８）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、八（８）のＮｅｏＴＣＲのうちの五（５）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、八（８）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、八（８）のＮｅｏＴＣＲのうちの六（６）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、八（８）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、八（８）のＮｅｏＴＣＲのうちの七（７）が、トランカル変異を含む。任意の八（８）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0213】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、九（９）のＮｅｏＴＣＲを含む。九（９）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる九（９）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される九（９）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、九（９）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、九（９）のＮｅｏＴＣＲ全てが、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、九（９）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、九（９）のＮｅｏＴＣＲのうちの二（２）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、九（９）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、九（９）のＮｅｏＴＣＲのうちの三（３）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、九（９）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、九（９）のＮｅｏＴＣＲのうちの四（４）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、九（９）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、九（９）のＮｅｏＴＣＲのうちの五（５）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、九（９）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、九（９）のＮｅｏＴＣＲのうちの六（６）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、九（９）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、九（９）のＮｅｏＴＣＲのうちの七（７）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、九（９）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、九（９）のＮｅｏＴＣＲのうちの八（８）が、トランカル変異を含む。任意の九（９）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0214】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、十（１０）のＮｅｏＴＣＲを含む。十（１０）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる十（１０）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される十（１０）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十（１０）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、十（１０）のＮｅｏＴＣＲ全てが、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十（１０）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、十（１０）のＮｅｏＴＣＲのうちの二（２）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十（１０）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、十（１０）のＮｅｏＴＣＲのうちの三（３）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十（１０）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、十（１０）のＮｅｏＴＣＲのうちの四（４）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十（１０）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、十（１０）のＮｅｏＴＣＲのうちの五（５）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十（１０）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、十（１０）のＮｅｏＴＣＲのうちの六（６）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、九（９）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、十（１０）のＮｅｏＴＣＲのうちの七（７）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十（１０）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、十（１０）のＮｅｏＴＣＲのうちの八（８）が、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十（１０）のＮｅｏＴＣＲがＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される場合、十（１０）のＮｅｏＴＣＲのうちの九（９）が、トランカル変異を含む。任意の十（１０）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0215】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、十一（１１）のＮｅｏＴＣＲを含む。十一（１１）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる十一（１１）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される十一（１１）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十一（１１）のＮｅｏＴＣＲの一又は複数が、トランカル変異を含む。任意の十一（１１）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0216】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、十二（１２）のＮｅｏＴＣＲを含む。十二（１２）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる十二（１２）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される十二（１２）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十二（１２）のＮｅｏＴＣＲの一又は複数が、トランカル変異を含む。任意の十二（１２）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0217】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、十三（１３）のＮｅｏＴＣＲを含む。十三（１３）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる十三（１３）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される十三（１３）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十三（１３）のＮｅｏＴＣＲの一又は複数が、トランカル変異を含む。任意の十三（１３）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0218】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、十四（１４）のＮｅｏＴＣＲを含む。十四（１４）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる十四（１４）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される十四（１４）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十四（１４）のＮｅｏＴＣＲの一又は複数が、トランカル変異を含む。任意の十四（１４）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0219】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、十五（１５）のＮｅｏＴＣＲを含む。十五（１５）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる十五（１５）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される十五（１５）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十五（１５）のＮｅｏＴＣＲの一又は複数が、トランカル変異を含む。任意の十五（１５）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0220】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、十六（１６）のＮｅｏＴＣＲを含む。十六（１６）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる十六（１６）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される十六（１６）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十六（１６）のＮｅｏＴＣＲの一又は複数が、トランカル変異を含む。任意の十六（１６）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0221】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、十七（１７）のＮｅｏＴＣＲを含む。十七（１７）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる十七（１７）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される十七（１７）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十七（１７）のＮｅｏＴＣＲの一又は複数が、トランカル変異を含む。任意の十七（１７）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0222】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、十八（１８）のＮｅｏＴＣＲを含む。十八（１８）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる十八（１８）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される十八（１８）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十八（１８）のＮｅｏＴＣＲの一又は複数が、トランカル変異を含む。任意の十八（１８）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0223】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、十九（１９）のＮｅｏＴＣＲを含む。十九（１９）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる十九（１９）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される十九（１９）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、十九（１９）のＮｅｏＴＣＲの一又は複数が、トランカル変異を含む。任意の十九（１９）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0224】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、二十（２０）のＮｅｏＴＣＲを含む。二十（２０）を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる二十（２０）のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される二十（２０）のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、二十（２０）のＮｅｏＴＣＲの一又は複数が、トランカル変異を含む。任意の二十（２０）のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0225】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、二十一（２１）以上のＮｅｏＴＣＲを含む。二十一（２１）以上を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者の腫瘍と血液サンプルのＮｅｏＴＣＲをスクリーニングし、ＮｅｏＴＣＲ生成物に組み込まれる二十一（２１）以上のＮｅｏＴＣＲを選択することによって作製できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物のために選択される二十一（２１）以上のＮｅｏＴＣＲは、トランカル変異を含む。所定の実施態様では、二十一（２１）以上のＮｅｏＴＣＲの一又は複数が、トランカル変異を含む。任意の二十一（２１）以上のＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して、ここに記載されている方法の何れかを使用してがんを治療することができる。

【0226】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物に含まれるＮｅｏＴＣＲの数は、患者の腫瘍及び血液サンプルをスクリーニングすることによって検出されたＮｅｏＴＣＲの数によってのみ制限される。所定の実施態様では、患者の腫瘍及び血液サンプルをスクリーニングすることによって検出された全てのＮｅｏＴＣＲが、ＮｅｏＴＣＲ生成物に含められる。

【0227】

実施例３ ＮｅｏＴＣＲ生成物併用療法
［概要］
ＮｅｏＴＣＲ生成物は、単独で投与することができ、あるいはそれらは併用療法で使用することができる。併用療法には、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与と、１、２、３、４、５、６、又は７以上の追加の治療薬の投与が含まれうる。所定の実施態様では、併用療法は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与と、少なくとも一種の追加の治療薬の投与を含む。所定の実施態様では、併用療法は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与と、少なくとも二種の追加の治療薬の投与を含む。所定の実施態様では、併用療法は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与と、少なくとも三種の追加の治療薬の投与を含む。所定の実施態様では、併用療法は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与と、少なくとも四種の追加の治療薬の投与を含む。所定の実施態様では、併用療法は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与と、少なくとも五種の追加の治療薬の投与を含む。所定の実施態様では、併用療法は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与と、少なくとも六種の追加の治療薬の投与を含む。所定の実施態様では、併用療法は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与と、少なくとも七種の追加の治療薬の投与を含む。

【0228】

上に提供された実施態様の何れにおいても、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、単一のＮｅｏＴＣＲ生成物、あるいは場合によっては同時に又は互いに逐次的に投与される二以上のＮｅｏＴＣＲ生成物でありうる。

【0229】

上に提供された実施態様の何れにおいても、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、単一のＮｅｏＴＣＲ又は二以上のＮｅｏＴＣＲを含みうる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、一又は複数の併用療法剤と同時に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物と一又は複数の併用療法剤は、逐次的に投与される。
所定の実施態様では、組み合わせ薬剤は、化学療法剤である。所定の実施態様では、併用剤は二（２）種の化学療法剤である。所定の実施態様では、併用剤は、三（３）種の化学療法剤である。所定の実施態様では、併用剤は、四（４）種以上の化学療法剤である。

【0230】

所定の実施態様では、併用剤は放射線療法である。
所定の実施態様では、化学療法剤は、ホルモン療法である。
所定の実施態様では、化学療法剤は免疫療法である。
所定の実施態様では、化学療法剤は、白金ベースの抗腫瘍剤である。所定の実施態様では、化学療法剤は、アルキル化剤である。所定の実施態様では、化学療法剤は、白金ベースの薬剤である。所定の実施態様では、白金ベースの薬剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチンからなるものから選択される。所定の実施態様では、化学療法剤は、微小管阻害剤である。所定の実施態様では、化学療法剤は、プリン類似体である。

【0231】

［ＰＤ－１軸結合剤］
免疫チェックポイント遮断による免疫抑制性腫瘍微小環境の調節は、養子移入Ｔ細胞の効力を増強するための有望な戦略である。多くのマウスモデルでの前臨床研究の結果では、養子Ｔ細胞療法をＰＤ１経路遮断と組み合わせることで、腫瘍量の制御を改善でき、生存期間中央値を延長できることが示されている（Ｃｈｅｒｋａｓｓｋｙ等，２０１６）（Ｍｏｏｎ等，２０１５）（Ｋｏｄｕｍｕｄｉ等，２０１６）（Ｒｕｐｐ等，２０１７）。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達の遮断は、ＰＤ－Ｌ１に遭遇するＰＤ－１発現Ｔ細胞の機能を回復させ、よって腫瘍性機能不全に対するＴ細胞感受性を低下させる（Ｇｅｒｎｅｒ等，２０１３）。移入されたＴ細胞の増殖を増強することにより、ＰＤ１阻害は腫瘍微小環境におけるＩＦＮγレベルをまた増加させることができ、ＣＸＣＬ１０産生の増加と、より腫瘍反応性のＴ細胞の動員につながる（Ｐｅｎｇ等，２０１２）。重要なことに、ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１遮断と養子移入腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を組み合わせる利点は、前臨床腫瘍モデルと臨床の場で観察されている（Ｇｏｆｆ等，２０１６）。総合すると、文献研究では、ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１阻害がＮｅｏＴＣＲ生成物の養子移入後の抗腫瘍免疫応答を増強し、クリニックでこの併用療法を探求するための強い理論的根拠を提供するという前提が支持される。

【0232】

所定の実施態様では、組み合わせ薬剤は、ＰＤ－１結合剤である。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤は、ペムブロリズマブである。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤はニボルマブである。所定の実施態様では、ＰＤ－１結合剤は、ここに記載される任意の他のＰＤ－１結合剤である。
所定の実施態様では、組み合わせ薬剤は、ＰＤ－Ｌ１結合剤である。所定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合剤は、アテゾリズマブである。所定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合剤は、ここに記載される任意の他のＰＤ－Ｌ１結合剤である。
所定の実施態様では、組み合わせ薬剤は、ＰＤ－Ｌ２結合剤である。

【0233】

所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与の前に投与される。所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与される。所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と同時に投与される。

【0234】

所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と同じ日に投与される。所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と連続した日に投与される（例えば、ＰＤ－１軸結合剤が月曜日に投与されると、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、１日後の火曜日に投与され；ＮｅｏＴＣＲ生成物は月曜日に投与されると、ＰＤ－１軸結合剤は１日後の火曜日に投与される）。所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与から、二（２）日、三（３）日、四（４）日、五（５）日、六（６）日又は七（７）日後に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＰＤ－１軸結合剤の投与から二（２）日、三（３）日、四（４）日、五（５）日、六（６）日又は七（７）日後に投与される。所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与から二（２）週間後に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＰＤ－１軸結合剤の投与から二（２）週間後に投与される。所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与から一（１）月後に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＰＤ－１軸結合剤の投与から一（１）月後に投与される。

【0235】

［サイトカイン］
所定の実施態様では、がんの治療のための治療上の利益を有するサイトカイン（及びその誘導体／修飾体）を、ＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。
ＩＬ－２は、がん細胞を直接殺傷しないサイトカインである。ＩＬ－２剤には、１）ＩＬ－２と、天然のＩＬ－２と同様にがん細胞を殺傷しないその修飾体及び誘導体、及び２）がん細胞を直接殺傷するように改変され修飾されたＩＬ－２分子が含まれる。ＩＬ－２剤の天然ＩＬ－２及び天然ＩＬ－２成分は、患者の免疫系の所定の細胞を刺激してがん細胞を殺傷することによって機能する。がん細胞は免疫系を逃れることができる（つまり、免疫系はがん細胞を異常又は危険であると認識しない）ので、ＩＬ－２剤を、それを必要とする患者に投与して、免疫系を強化してがん細胞を殺傷し、その増殖を減少させ、又はその増殖を停止させることができる。

【0236】

所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＩＬ－２又はその薬学的に許容される製剤である。所定の実施態様では、ＩＬ－２の薬学的に許容される製剤は、アルデスロイキンである。
所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＣＤ１２２優先的ＩＬ－２経路アゴニストである。
所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ペグ化されたＩＬ－２である。所定の実施態様では、ペグ化されたＩＬ－２は、ＮＫＴＲ－２１４（ベンペガルデスロイキン）である。
所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、改変されたＩＬ－２バリアント（ＩＬ２ｖ）である。所定の実施態様では、ＩＬ２ｖは、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に対する抗体で改変される。所定の実施態様では、ＩＬ２ｖはＲＧ７４６１である。

【0237】

所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＩＬ２ｖ部分を含む改変された抗ＣＥＡ抗体である。所定の実施態様では、ＩＬ２ｖ部分を含む抗ＣＥＡ抗体は、セルグツズマブアムナロイキンである。
所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と同時に投与される。

【0238】

所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と同じ日に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と連続した日に投与される（例えば、ＩＬ－２剤が月曜日に投与されると、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、１日後の火曜日に投与され；ＮｅｏＴＣＲ生成物は月曜日に投与されると、ＩＬ－２剤は１日後の火曜日に投与される）。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与から、二（２）日、三（３）日、四（４）日、五（５）日、六（６）日又は七（７）日後に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＩＬ－２剤の投与から二（２）日、三（３）日、四（４）日、五（５）日、六（６）日又は七（７）日後に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与から二（２）週間後に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＩＬ－２剤の投与から二（２）週間後に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－２剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与から一（１）月後に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＩＬ－２剤の投与から一（１）月後に投与される。

【0239】

所定の実施態様では、ＩＬ－１０剤又はその薬学的に許容される製剤を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＩＬ－１０剤はペギロデカキンである。
所定の実施態様では、ＩＬ－１０剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－１０剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－１０剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と同時に投与される。

【0240】

所定の実施態様では、ＩＬ－１０剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と同じ日に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－１０剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と連続した日に投与される（例えば、ＩＬ－１０剤が月曜日に投与されると、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、１日後の火曜日に投与され；ＮｅｏＴＣＲ生成物は月曜日に投与されると、ＩＬ－１０剤は１日後の火曜日に投与される）。所定の実施態様では、ＩＬ－１０剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与から、二（２）日、三（３）日、四（４）日、五（５）日、六（６）日又は七（７）日後に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＩＬ－１０剤の投与から二（２）日、三（３）日、四（４）日、五（５）日、六（６）日又は七（７）日後に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－１０剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与から二（２）週間後に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＩＬ－１０剤の投与から二（２）週間後に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－１０剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与から一（１）月後に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＩＬ－１０剤の投与から一（１）月後に投与される。

【0241】

所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、持続的な抗腫瘍免疫応答をもたらす長期免疫記憶の形成を増強するＩＬ－１５剤を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。
所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ＩＬ－１５α／ＩＬ－２Ｒγ受容体複合体を標的とする。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ＮＫＴＲ－２５５である。

【0242】

所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、天然のＩＬ－１５である。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、スシドメインを含む。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、効力が低下したＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合物である。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤はＰ２２３３９である。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤はＸｍＡｂ２４３０６である。
所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与後に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と同時に投与される。

【0243】

所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と同じ日に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物と連続した日に投与される（例えば、ＩＬ－１５剤が月曜日に投与されると、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、１日後の火曜日に投与され；ＮｅｏＴＣＲ生成物は月曜日に投与されると、ＩＬ－１５剤は１日後の火曜日に投与される）。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与から、二（２）日、三（３）日、四（４）日、五（５）日、六（６）日又は七（７）日後に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＩＬ－１５剤の投与から二（２）日、三（３）日、四（４）日、五（５）日、六（６）日又は七（７）日後に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与から二（２）週間後に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＩＬ－１５剤の投与から二（２）週間後に投与される。所定の実施態様では、ＩＬ－１５剤は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与から一（１）月後に投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＩＬ－１５剤の投与から一（１）月後に投与される。

【0244】

所定の実施態様では、ＩＬ－７剤を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。
所定の実施態様では、ＩＬ－１２剤を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。
所定の実施態様では、ＩＬ－１８剤を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。
所定の実施態様では、ＩＬ－２１剤を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。

【0245】

［サイトカイン及びＰＤ－１軸結合剤］
所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、１）がんの治療のための治療的利益を有するサイトカイン（及びその修飾体／誘導体）、及び２）ＰＤ－１軸結合剤と組み合わせることができる。
所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－２剤及びＰＤ－１結合剤と組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－２剤及びＰＤ－Ｌ１結合剤と組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－２剤及びＰＤ－Ｌ２結合剤と組み合わせることができる。

【0246】

所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－２剤及びペムブロリズマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－２剤及びニボルマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－２剤及びアテゾリズマブと組み合わせることができる。
非限定的な実施例によって、所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、アルデスロイキン及びペムブロリズマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、アルデスロイキン及びニボルマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、アルデスロイキン及びアテゾリズマブと組み合わせることができる。

【0247】

非限定的な実施例によって、所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、セルグツズマブアムナロイキン及びペムブロリズマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、セルグツズマブアムナロイキン及びニボルマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、セルグツズマブアムナロイキン及びアテゾリズマブと組み合わせることができる。

【0248】

非限定的な実施例によって、所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ベンペガルデスロイキン及びペムブロリズマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ベンペガルデスロイキン及びニボルマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ベンペガルデスロイキン及びアテゾリズマブと組み合わせることができる。
非限定的な実施例によって、所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ２ｖ及びペムブロリズマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ２ｖ及びニボルマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ２ｖ及びアテゾリズマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＩＬ２ｖは、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に対する抗体で改変される。所定の実施態様では、ＩＬ２ｖはＲＧ７４６１である。

【0249】

所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－１０剤及びＰＤ－１結合剤と組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－１０剤及びＰＤ－Ｌ１結合剤と組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－１０剤及びＰＤ－Ｌ２結合剤と組み合わせることができる。
所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－１０剤及びペムブロリズマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－１０剤及びニボルマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－１０剤及びアテゾリズマブと組み合わせることができる。

【0250】

非限定的な実施例によって、所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ペギロデカキン及びペムブロリズマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ペギロデカキン及びニボルマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ペギロデカキン及びアテゾリズマブと組み合わせることができる。
所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－１５剤及びＰＤ－１結合剤と組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－１５剤及びＰＤ－Ｌ１結合剤と組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－１５剤及びＰＤ－Ｌ２結合剤と組み合わせることができる。

【0251】

所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－１５剤及びペムブロリズマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－１５剤及びニボルマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＩＬ－１５剤及びアテゾリズマブと組み合わせることができる。
非限定的な実施例によって、所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＮＫＴＲ－２５５及びペムブロリズマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＮＫＴＲ－２５５及びニボルマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＮＫＴＲ－２５５及びアテゾリズマブと組み合わせることができる。
非限定的な実施例によって、所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＸｍＡｂ２４３０６及びペムブロリズマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＸｍＡｂ２４３０６及びニボルマブと組み合わせることができる。所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＸｍＡｂ２４３０６及びアテゾリズマブと組み合わせることができる。

【0252】

［ＶＥＧＦ剤］
所定の実施態様では、ＶＥＧＦを標的とする薬剤及びその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。
所定の実施態様では、ＶＥＧＦを標的とする薬剤は、抗ＶＥＧＦ抗体である。所定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗体はベバシズマブである。所定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ラニビズマブである。所定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗体はラムシルマブである。
所定の実施態様では、ＶＥＧＦを標的とする薬剤は、抗ＶＥＧＦ小分子である。所定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ小分子はペガプタニブである。所定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ小分子はソラフェニブである。所定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ小分子はスニチニブである。所定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ小分子はパゾパニブである。所定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ小分子は、ジフ－アフリベルセプト（zif-aflibercept）である。所定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ小分子はバンデタニブである。所定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ小分子はアパチニブである。所定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ小分子はカボザンチニブである。

【0253】

所定の実施態様では、ＶＥＧＦ（ここに開示される抗ＶＥＧＦ剤の何れかを含む）を標的とする薬剤及びその薬学的に許容される形成物を、１）一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物、及び２）サイトカイン（及びその修飾体／誘導体）と組み合わせることができる。
所定の実施態様では、ＶＥＧＦ（ここに開示される抗ＶＥＧＦ剤の何れかを含む）を標的とする薬剤及びその薬学的に許容される形成物を、１）一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物、及び２）ＰＤ－１軸結合剤と組み合わせることができる。

【0254】

所定の実施態様では、ＶＥＧＦ（ここに開示される抗ＶＥＧＦ剤の何れかを含む）を標的とする薬剤及びその薬学的に許容される形成物を、１）一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物、２）サイトカイン（及びその修飾体／誘導体）、及び３）ＰＤ－１軸結合剤と組み合わせることができる。
所定の実施態様では、ＶＥＧＦ（ここに開示される抗ＶＥＧＦ剤の何れかを含む）を標的とする薬剤及びその薬学的に許容される形成物を、１）一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物、２）場合によってはサイトカイン（及びその修飾体／誘導体）、３）場合によってはＰＤ－１軸結合剤、及び４）別の化学療法剤と組み合わせることができる。

【0255】

［ＣＴＬＡ－４剤］
所定の実施態様では、ＣＴＬＡ－４を標的とする薬剤（限定されないが、抗ＣＴＬＡ－４抗体を含む）及びその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。
所定の実施態様では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブである。所定の実施態様では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、ＣＴＬＡ－４－Ｆｃ融合タンパク質である。所定の実施態様では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、ＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１を標的とする二重特異性抗体である。所定の実施態様では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、ＣＴＬＡ－４及びＰＤ－Ｌ１を標的とする二重特異性抗体である。

【0256】

［ＴＩＧＩＴ剤］
所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴを標的とする薬剤（限定されないが、抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む）及びその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。

【0257】

［４－１ＢＢ剤］
所定の実施態様では、４－１ＢＢを標的とする薬剤（限定されないが、抗４－１ＢＢ抗体を含む）及びその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。
所定の実施態様では、４－１ＢＢ剤は、ＦＡＰ－４－１ＢＢ二重特異性抗体でありうる。所定の実施態様では、４－１ＢＢ剤は、４－１ＢＢ及び腫瘍表面抗原を標的とする任意の二重特異性抗体でありうる。所定の実施態様では、４－１ＢＢ剤は、４－１ＢＢ、ＮＫ細胞メーカー、及び場合によっては腫瘍表面抗原を標的とする任意の多重特異性抗体でありうる。多重特異性４－１ＢＢ抗体の非限定的な例は、ＣＤ１９及び４－１ＢＢに結合する二重特異性抗体である。
所定の実施態様では、４－１ＢＢ剤は、ＣＡＲ Ｔ細胞療法でありうる。所定の実施態様では、ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有するＣＤ１９標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

【0258】

［がん胎児抗原（ＣＥＡ）剤］
所定の実施態様では、ＣＥＡを標的とする薬剤（限定されないが、抗ＣＥＡ抗体を含む）及びその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＣＥＡ剤は、ＩＬ２ｖ部分に融合された抗ＣＥＡ抗体（限定されないが、セルグツズマブアムナロイキンを含む）である。所定の実施態様では、ＣＥＡ剤は、二重特異性抗体がＣＤ３及びＣＥＡに結合する二重特異性抗体である。

【0259】

［ＣＥＡＣＡＭ剤］
所定の実施態様では、ＣＥＡＣＡＭを標的とする薬剤（限定されないが、抗ＣＥＡＣＡＭ抗体を含む）及びその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。

【0260】

［ＧＰＣ３剤］
所定の実施態様では、ＧＰＣ３を標的とする薬剤（限定されないが、抗ＧＰＣ３抗体を含む）及びその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。

【0261】

［ＴＩＭ３剤］
所定の実施態様では、ＴＩＭ３を標的とする薬剤（限定されないが、抗ＴＩＭ３抗体及び二重特異性抗ＴＩＭ３＋抗ＰＤ－１抗体を含む）及びその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。

【0262】

［ＰＩ３Ｋ阻害剤］
所定の実施態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤及びその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。

【0263】

［ＢＥＴ阻害剤］
所定の実施態様では、ＢＥＴ阻害剤及びその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。

【0264】

［選択的エストロゲン受容体分解薬］
所定の実施態様では、選択的エストロゲン受容体分解薬及びその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。

【0265】

［個別化ネオ抗原ワクチン］
所定の実施態様では、個別化されたネオ抗原ワクチンを、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ワクチンは、ＤＮＡワクチンである。所定の実施態様では、ワクチンは、ＲＮＡワクチンである。

【0266】

［ＨＥＲ２剤］
所定の実施態様では、ＨＥＲ２剤とその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＨＥＲ２剤は、抗ＨＥＲ２抗体である。所定の実施態様では、抗ＨＥＲ２剤は、抗ＨＥＲ２＋抗ＣＤ３二重特異性抗体である。所定の実施態様では、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブである。所定の実施態様では、抗ＨＥＲ２抗体は、アドトラスツズマブエムタンシン（ado-trastuzumab emtansine）である。所定の実施態様では、抗ＨＥＲ２抗体は、ペルツズマブである。

【0267】

［ＣＤ２０剤］
所定の実施態様では、ＣＤ２０剤とその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＣＤ２０剤は、抗ＣＤ２０抗体である。所定の実施態様では、抗ＣＤ２０抗体は、リツクスマブ（rituxumab）である。所定の実施態様では、抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブである。所定の実施態様では、抗ＣＤ２０抗体は、抗ＣＤ２０＋抗ＣＤ３二重特異性抗体である。

【0268】

［ＭＥＫ阻害剤］
所定の実施態様では、ＭＥＫ阻害剤とその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＭＥＫ阻害剤はコビメチニブである。

【0269】

［ＢＲＡＦ阻害剤］
所定の実施態様では、ＢＲＡＦ阻害剤とその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。

【0270】

［ＭＥＫ阻害剤及びＢＲＡＦ阻害剤］
所定の実施態様では、ＢＲＡＦ阻害剤とその薬学的に許容される形成物、並びにＭＥＫ阻害剤とその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブであり、ＭＥＫ阻害剤はコビメチニブである。

【0271】

［ＡＫＴ阻害剤］
所定の実施態様では、ＡＫＴ阻害剤とその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＡＫＴ阻害剤は、イパタセルチブである。

【0272】

［ＡＬＫ阻害剤］
所定の実施態様では、ＡＬＫ阻害剤とその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＡＬＫ阻害剤は、アレクタニブである。

【0273】

［ＥＧＦＲ阻害剤］
所定の実施態様では、ＥＧＦＲ阻害剤とその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＥＧＦＲ阻害剤は、エルロチニブである。

【0274】

［Ｂｃｌ２阻害剤］
所定の実施態様では、ＡＫＴ阻害剤とその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＡＫＴ阻害剤はベネトクラクスである。

【0275】

［ＭＤＭ２阻害剤］
所定の実施態様では、ＡＫＴ阻害剤とその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＡＫＴ阻害剤は、イダサヌトリンである。

【0276】

［ＮＴＲＫ／ＲＯＳ１阻害剤］
所定の実施態様では、ＮＴＲＫ／ＲＯＳ１阻害剤とその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。所定の実施態様では、ＮＴＲＫ／ＲＯＳ１阻害剤は、エントレクタニブである。

【0277】

［抗ＣＤ４０抗体］
所定の実施態様では、抗ＣＤ４０抗体とその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。

【0278】

［抗ＣＤ７９ｂ抗体］
所定の実施態様では、抗ＣＤ４０抗体とその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。

【0279】

［カペシタビン］
所定の実施態様では、カペシタビンとその薬学的に許容される形成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせることができる。

【0280】

実施例４ 固形腫瘍の適応症
ＮｅｏＴＣＲ生成物は、一又は複数のＮｅｏＴＣＲを検出することができるあらゆるがんの治療に使用できる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、固形腫瘍の治療に使用することができる。
所定の実施態様では、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物を、固形腫瘍の治療のために、一又は複数の化学療法剤又は放射線療法と組み合わせることができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、固形腫瘍の治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ剤を、固形腫瘍の治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0281】

［乳がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、乳がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、ホルモン受容体（ＥＲ＋及び／又はＰＲ＋）陽性乳がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、Ｈｅｒ２陰性（Ｈｅｒ２－）乳がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、ホルモン受容体陽性（ＥＲ＋及び／又はＰＲ＋）乳がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、Ｈｅｒ２陽性（Ｈｅｒ２＋）乳がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、ホルモン受容体陰性（ＥＲ－）乳がんを治療するために使用することができる。

【0282】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、ホルモン受容体陰性（ＥＲ－）及びＨｅｒ２陰性（Ｈｅｒ２－）（すなわち、トリプルネガティブ）乳がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、ホルモン受容体（ＥＲ＋及び／又はＰＲ＋）陽性及びＨｅｒ２陰性（Ｈｅｒ２－）乳がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、ホルモン受容体陽性（ＥＲ＋及び／又はＰＲ＋）及びＨｅｒ２陽性（Ｈｅｒ２＋）乳がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、ホルモン受容体陰性（ＥＲ－）及びＨｅｒ２陽性（Ｈｅｒ２＋）乳がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＢＲＣＡ陽性（ＢＲＣＡ＋）乳がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、乳がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、乳がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0283】

［胸部がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、肺がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、肺がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。所定の実施態様では、非小細胞肺がんは扁平上皮がんである。所定の実施態様では、非小細胞肺がんは腺がんである。所定の実施態様では、非小細胞肺がんは、大細胞がんである。所定の実施態様では、非小細胞肺がんは腺扁平上皮がんである。所定の実施態様では、非小細胞肺がんは未分化がんである。所定の実施態様では、非小細胞肺がんは、一を超えるタイプのＮＳＣＬＣの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、ＮＳＣＬＣの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、ＮＳＣＬＣの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0284】

所定の実施態様では、肺がんは、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）である。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、ＳＣＬＣの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、ＳＣＬＣの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。
所定の実施態様では、肺がんは中皮腫である。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、中皮腫の治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、中皮腫の治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0285】

［前立腺がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、前立腺がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、前立腺がんは腺房腺がんである。所定の実施態様では、前立腺がんは、導管腺がんである。所定の実施態様では、前立腺がんは、移行上皮（又は尿路上皮）がんである。所定の実施態様では、前立腺がんは扁平上皮がんである。所定の実施態様では、前立腺がんは、小細胞前立腺がんである。所定の実施態様では、前立腺がんは神経内分泌がんである。所定の実施態様では、前立腺がんは肉腫である。所定の実施態様では、前立腺がんは、一を超えるタイプの前立腺がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、前立腺がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、前立腺がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0286】

［結腸直腸がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、結腸直腸がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、結腸直腸がんは、マイクロサテライト安定である。所定の実施態様では、結腸直腸がんは、マイクロサテライト不安定性である。
所定の実施態様では、結腸直腸がんは、結腸直腸腺がんである。所定の実施態様では、結腸直腸がんは、消化管カルチノイド腫瘍である。所定の実施態様では、結腸直腸がんは、原発性結腸直腸リンパ腫である。所定の実施態様では、結腸直腸がんは、消化管間質腫瘍である。所定の実施態様では、結腸直腸がんは、平滑筋肉腫である。所定の実施態様では、結腸直腸がんは、一を超えるタイプの結腸直腸がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、結腸直腸がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、結腸直腸がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0287】

［婦人科がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、卵巣がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、卵巣がんは、腺房上皮性卵巣がんである。所定の実施態様では、卵巣がんは、生殖細胞卵巣がんである。所定の実施態様では、卵巣がんは、間質細胞卵巣がんである。所定の実施態様では、卵巣がんは小細胞がんである。所定の実施態様では、卵巣がんは、白金感受性の卵巣がんである。所定の実施態様では、卵巣がんは、白金耐性がんである。所定の実施態様では、卵巣がんは、一を超えるタイプの卵巣がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、卵巣がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、卵巣がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0288】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、子宮がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、子宮がんは子宮内膜がんである。所定の実施態様では、子宮がんは子宮肉腫である。所定の実施態様では、子宮内膜がんは、漿液性腺がんである。所定の実施態様では、子宮内膜がんは腺扁平上皮がんである。所定の実施態様では、子宮内膜がんは、子宮癌である。所定の実施態様では、子宮肉腫は子宮平滑筋肉腫である。所定の実施態様では、子宮肉腫は子宮内膜間質肉腫である。所定の実施態様では、子宮肉腫は未分化肉腫である。所定の実施態様では、子宮がんは、一を超えるタイプの卵巣がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、子宮がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、子宮がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0289】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、子宮頸がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、子宮頸がんは扁平上皮がんである。所定の実施態様では、子宮頸がんは腺がんである。所定の実施態様では、子宮頸がんは、一を超えるタイプの子宮頸がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、子宮がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、子宮がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0290】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、膣がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、膣がんは扁平上皮がんである。所定の実施態様では、膣がんは腺がんである。所定の実施態様では、膣がんは、明細胞腺がんである。所定の実施態様では、膣がんはメラノーマである。所定の実施態様では、膣がんは、一を超えるタイプの膣がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、膣がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、膣がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0291】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、外陰がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、外陰がんは、外陰扁平上皮がんである。所定の実施態様では、外陰がんはメラノーマである。所定の実施態様では、外陰がんは、一を超えるタイプの外陰がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、外陰がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、外陰がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0292】

［膵臓がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、膵臓がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、膵臓がんは外分泌腫瘍である。所定の実施態様では、膵臓がんは内分泌腫瘍である。所定の実施態様では、内分泌腫瘍は、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ（gastinoma）、ソマトスタチノーマ、ＶＩＰ産生腫瘍、又はＰＰ産生腫瘍でありうる。所定の実施態様では、膵臓がんは、一を超えるタイプの膵臓がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、膵臓がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。 所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、膵臓がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0293】

［メラノーマを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、メラノーマを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、メラノーマは、表在拡大型メラノーマである。所定の実施態様では、メラノーマは結節型メラノーマである。所定の実施態様では、メラノーマは悪性黒子型メラノーマである。所定の実施態様では、メラノーマは末端性黒子型メラノーマである。所定の実施態様では、メラノーマは、線維形成性メラノーマである。所定の実施態様では、メラノーマは、眼メラノーマである。所定の実施態様では、メラノーマは直腸肛門部メラノーマである。所定の実施態様では、メラノーマは、一を超えるタイプのメラノーマの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、メラノーマの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、メラノーマの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0294】

［中枢神経系がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、中枢神経系がん（ＣＮＳがん）を治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、ＣＮＳがんは脳腫瘍である。所定の実施態様では、ＣＮＳがんは、ＣＮＳ転移である。所定の実施態様では、ＣＮＳがんは、ＣＮＳ腫瘍である。所定の実施態様では、ＣＮＳがんは多形性神経膠芽腫である。所定の実施態様では、ＣＮＳがんは髄膜腫である。所定の実施態様では、ＣＮＳがんは頭蓋底がんである。所定の実施態様では、ＣＮＳがんは脊髄腫瘍である。所定の実施態様では、ＣＮＳがんは神経膠腫である。所定の実施態様では、ＣＮＳがんは星状細胞腫である。所定の実施態様では、ＣＮＳがんは、脳幹神経膠腫である。所定の実施態様では、ＣＮＳがんは上衣腫である。所定の実施態様では、ＣＮＳがんは胚細胞腫瘍である。所定の実施態様では、ＣＮＳがんは髄芽腫である。所定の実施態様では、ＣＮＳがんは、一を超えるタイプのＣＮＳがんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、ＣＮＳがんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、ＣＮＳがんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0295】

［皮膚がんを治療する方法］
上記のメラノーマの治療に加えて、所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、他の皮膚がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、皮膚がんは皮膚メラノーマである。所定の実施態様では、皮膚がんは粘膜メラノーマである。所定の実施態様では、皮膚がんは末端性メラノーマである。所定の実施態様では、皮膚がんは基底細胞がんである。所定の実施態様では、皮膚がんはメルケル細胞がんである。所定の実施態様では、皮膚がんは扁平上皮がんである。所定の実施態様では、皮膚がんは、一を超えるタイプの皮膚がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、皮膚がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、皮膚がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0296】

［頭頸部がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、頭頸部がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、頭頸部がんは唾液腺腫瘍である。所定の実施態様では、頭頸部がんは、頭頸部扁平上皮がんである。所定の実施態様では、頭頸部がんは上咽頭がんである。所定の実施態様では、頭頸部がんは、一を超えるタイプの頭頸部がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、頭頸部がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、頭頸部がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0297】

［ＨＰＶ＋がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、ＨＰＶ＋がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、ＨＰＶ＋がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、ＨＰＶ＋がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0298】

［食道がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、食道がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、食道がんは腺がんである。所定の実施態様では、食道がんは扁平上皮がんである。所定の実施態様では、食道がんは、一を超えるタイプの食道がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、食道がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、食道がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0299】

［甲状腺がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、甲状腺がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、甲状腺がんは乳頭がんである。所定の実施態様では、甲状腺がんは濾胞性である。所定の実施態様では、甲状腺がんは未分化がんである。所定の実施態様では、甲状腺がんは髄質性である。所定の実施態様では、甲状腺がんは、一を超えるタイプの甲状腺がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、甲状腺がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、甲状腺がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0300】

［胃がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、胃がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、胃がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、胃がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0301】

［肝細胞がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、肝細胞がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、肝細胞がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、肝細胞がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0302】

［胆管細胞がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、胆管細胞がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、胆管細胞がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、胆管細胞がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0303】

［腎細胞がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、腎細胞がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、腎細胞がんは、明細胞腎がんである。所定の実施態様では、腎細胞がんは、非明細胞腎がんである。所定の実施態様では、腎細胞がんは、一を超えるタイプの腎細胞がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、腎細胞がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、腎細胞がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0304】

［膀胱がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、膀胱がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、膀胱がんは尿路上皮がんである。所定の実施態様では、膀胱がんは扁平上皮がんである。所定の実施態様では、膀胱がんは腺がんである。所定の実施態様では、膀胱がんは、一を超えるタイプの膀胱がんの組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、膀胱がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、膀胱がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0305】

［精巣がんを治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、精巣がんを治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、精巣がんの治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、精巣がんの治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0306】

［肉腫を治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、肉腫を治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、肉腫の治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、肉腫の治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0307】

実施例５ 液性腫瘍の適応症
ＮｅｏＴＣＲ生成物を、一又は複数のＮｅｏＴＣＲが検出されうるあらゆるがんの治療に使用することができる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、液性又は血液腫瘍の治療に使用することができる。

【0308】

［濾胞性リンパ腫を治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、濾胞性リンパ腫を治療するために使用することができる。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、濾胞性リンパ腫の治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、濾胞性リンパ腫の治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0309】

［白血病を治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、白血病に使用することができる。
所定の実施態様では、白血病は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）である。所定の実施態様では、白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。所定の実施態様では、白血病は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。所定の実施態様では、白血病は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である。所定の実施態様では、白血病は、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）である。所定の実施態様では、白血病は、骨髄異形成症候群白血病（ＭＤＳ）である。所定の実施態様では、白血病は、一を超えるタイプの白血病の組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、白血病の治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、白血病の治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0310】

［多発性骨髄腫を治療する方法］
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、多発性骨髄腫に使用することができる。
所定の実施態様では、多発性骨髄腫はくすぶり型インドレント多発性骨髄腫である。所定の実施態様では、多発性骨髄腫は、高二倍体多発性骨髄腫である。所定の実施態様では、多発性骨髄腫は、非高二倍体（低二倍体）多発性骨髄腫である。所定の実施態様では、多発性骨髄腫は軽鎖骨髄腫である。所定の実施態様では、多発性骨髄腫は非分泌性骨髄腫である。所定の実施態様では、多発性骨髄腫は孤立性形質細胞腫である。所定の実施態様では、多発性骨髄腫は髄外形質細胞腫である。所定の実施態様では、多発性骨髄腫は、意義不明の単クローン性γグロブリン血症である。所定の実施態様では、多発性骨髄腫は、一を超えるタイプの多発性骨髄腫の組み合わせである。
所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、白血病の治療のために一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と組み合わせて使用することができる。所定の実施態様では、実施例３に記載される一又は複数の組み合わせ薬剤を、白血病の治療のために、一又は複数のＮｅｏＴＣＲ生成物及び放射線と組み合わせて使用することができる。

【0311】

実施例６ ＮｅｏＴＣＲ生成物を投与する方法
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者に静脈内投与することができる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、動脈内、腹腔内、頭蓋内、関節内、胸膜内、硝子体内、又は血管内で患者に投与することができる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、注射、注入、持続注入、標的細胞を直接ベイジングさせる局所灌流、カテーテル、又は洗浄によって患者に投与することができる。
ＮｅｏＴＣＲ生成物は「幼若」細胞表現型を含むため、ＮｅｏＴＣＲ細胞は、それを必要とする患者に投与された場合、患者においてメモリーＴ細胞として残り、同族ネオ抗原に応答して増殖できるはずである。従って、所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者に一（１）回だけ投与される。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、必要に応じて、患者に二（２）回以上投与されうる。

【0312】

所定の実施態様では、それを必要とする患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、約１０００００のＮｅｏＴＣＲ細胞である。所定の実施態様では、それを必要とする患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１０００００のＮｅｏＴＣＲ細胞と５０００００のＮｅｏＴＣＲ細胞との間である。所定の実施態様では、それを必要とする患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、５０００００のＮｅｏＴＣＲ細胞と１００００００のＮｅｏＴＣＲ細胞との間である。所定の実施態様では、それを必要とする患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１，００，０００のＮｅｏＴＣＲ細胞と２００００００のＮｅｏＴＣＲ細胞との間である。所定の実施態様では、それを必要とする患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、２，００，０００のＮｅｏＴＣＲ細胞と５００００００のＮｅｏＴＣＲ細胞との間である。所定の実施態様では、それを必要とする患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、５，００，０００のＮｅｏＴＣＲ細胞と１０００００００のＮｅｏＴＣＲ細胞との間である。所定の実施態様では、それを必要とする患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１０００００００を超えるＮｅｏＴＣＲ細胞である。所定の実施態様では、それを必要とする患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、５０００００００から１５０００００００のＮｅｏＴＣＲ細胞である。所定の実施態様では、それを必要とする患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１５０００００００から３００００００００のＮｅｏＴＣＲ細胞である。所定の実施態様では、それを必要とする患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、３００００００００から５００００００００のＮｅｏＴＣＲ細胞である。

【0313】

所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、患者に対して１０００００００の細胞の一律用量でありうる。所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、患者に対して１００００００の細胞の一律用量でありうる。所定の実施態様では、そのような固定用量に対する患者のおおよその体重は５０ｋｇである。
所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、患者に対して４００００００００の細胞の一律用量でありうる。所定の実施態様では、そのような固定用量に対する患者のおおよその体重は５０ｋｇである。

【0314】

所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１ｋｇ当たり１００００００細胞で投与することができる。所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１ｋｇ当たり２００００００細胞で投与することができる。所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１ｋｇ当たり３００００００細胞で投与することができる。所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１ｋｇ当たり４００００００細胞で投与することができる。所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１ｋｇ当たり５００００００細胞で投与することができる。所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１ｋｇ当たり６００００００細胞で投与することができる。所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１ｋｇ当たり７００００００細胞で投与することができる。所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１ｋｇ当たり８００００００細胞で投与することができる。所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１ｋｇ当たり９００００００細胞で投与することができる。所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１ｋｇ当たり１０００００００細胞で投与することができる。所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１ｋｇ当たり１０００００００を超える細胞で投与することができる。所定の実施態様では、患者に投与されるＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞の数は、１ｋｇ当たり１００００００未満の細胞で投与することができる。

【0315】

所定の実施態様では、ここに記載の患者に投与される細胞の全数の何れかを、単回投与として投与するか、二回の投与に分割（すなわち、二の異なる時点で投与）するか、又は三回以上の投与に分割（すなわち、三以上の異なる時点で投与）できる。

【0316】

実施例７ ＮｅｏＴＣＲ生成物の安全性薬理
ＮｅｏＴＣＲ単離技術を使用して、ｎｅｏＥ特異的Ｔ細胞を、対象の腫瘍排他的変異タンパク質（ネオ抗原）に由来し、対象のＨＬＡ受容体の一つと複合体を形成したネオエピトープペプチドに特異的に結合するその能力によって、対象の末梢血からキャプチャーする。更に、同族ｎｅｏＥペプチド－ＨＬＡとの遭遇に応答して候補のｎｅｏＥ特異的Ｔ細胞が活性化されたという前提に基づいて、抗原を経験したＴ細胞に由来するＮｅｏＴＣＲのみをＮｅｏＴＣＲ生成物開発のために選択する。ｎｅｏＥ－ＨＬＡ標的の腫瘍排他的提示は、ｎｅｏＥ特異的Ｔ細胞の活性化と増殖をもたらしたが、患者において自己免疫応答を引き起こさなかった。個別化のこれらの要素は、養子移入ＮｅｏＴＣＲ細胞の注入後の潜在的な安全性／忍容性プロファイルのリスクを取り除く。

【0317】

精密ゲノム改変プロセスには、二種の非天然タンパク質が関与している：一過性に送達され、その後、分裂中の細胞で分解されるＣａｓ９リボ核タンパク質と、ＮｅｏＴＣＲ遺伝子カセットの一部として導入されるＰ２Ａペプチドである。Ｃａｓ９は、改変プロセス中に一過性に送達される非天然タンパク質であるが、最終生成物中にＣａｓ９タンパク質が残っているという証拠はなく、よってＮｅｏＴＣＲ生成物投与後の抗Ｃａｓ９免疫原性の可能性のリスクが取り除かれる。Ｐ２Ａ配列は、ＮｅｏＴＣＲ遺伝子カセット内の唯一の非ヒト配列であるが、改変されたＴ細胞表面に成熟ＮｅｏＴＣＲポリペプチドの一部として発現されないため、抗体依存性Ｔ細胞媒介性細胞傷害性の機会を表すものではない。

【0318】

ＣＯＳＭＩＤ及びＧＵＩＤＥ－ｓｅｑをそれぞれ使用して、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性ゲノム編集の潜在的なオフターゲット部位を調査するために、包括的なインビトロ及びインシリコ分析が実施された。現在までに、複数の実験室規模又は臨床規模で製造されたＮｅｏＴＣＲ生成物が、ディープシークエンシングによって候補ゲノムオフターゲット部位の切断について評価されており、精密ゲノム改変製造プロセスにおいて使用された選択されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９リボ核タンパク質が高度に特異的であるという公表された証拠を肯定している。

【0319】

ゲノム不安定性などの精密ゲノム改変プロセスの追加の態様は、安全性について評価されている。標的遺伝子座増幅（ＴＬＡ）又は標準蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）細胞遺伝学分析の何れかによる複数のＮｅｏＴＣＲ生成物の評価では、ゲノム不安定性の証拠は見出されなかった。

【0320】

総合すると、精密ゲノム改変プロセスによるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９リボ核タンパク質改変の分析は、オンターゲット編集のための絶妙な特異性を示している。従って、精密ゲノム改変プロセスによって製造された自己ＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者への再注入後に十分に許容されるはずである。

【0321】

実施例８ 薬物動態と生成物代謝
ＮｅｏＴＣＲ生成物は、自己患者生Ｔ細胞を含む。移入された細胞のインビボ分布及び細胞運命は、注入時の適合性及び細胞表現型、注入後の抗原遭遇、及び腫瘍微小環境で受け取られるシグナルなどの複数のパラメーターに依存する。従って、ＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞は、それが長期間投与される患者に記憶と増殖を介して残るはずである。

【0322】

所定の実施態様では、患者に投与されたＮｅｏＴＣＲ細胞は、一（１）年未満の間、患者内に存続するであろう。所定の実施態様では、患者に投与されたＮｅｏＴＣＲ細胞は、一（１）年から二（２）年未満の間、患者内に存続するであろう。所定の実施態様では、患者に投与されたＮｅｏＴＣＲ細胞は、二（２）年から五（５）年未満の間隔で患者内に存続するであろう。所定の実施態様では、患者に投与されたＮｅｏＴＣＲ細胞は、五（５）年から七（７）年未満の間隔で患者内に存続するであろう。所定の実施態様では、患者に投与されたＮｅｏＴＣＲ細胞は、七（７）年から十（１０）年未満の間隔で患者内に存続するであろう。所定の実施態様では、患者に投与されたＮｅｏＴＣＲ細胞は、十（１０）年から十五（１５）年未満の間隔で患者内に存続するであろう。所定の実施態様では、患者に投与されたＮｅｏＴＣＲ細胞は、十五（１５）年から二十（２０）年未満の間隔で患者内に存続するであろう。所定の実施態様では、患者に投与されたＮｅｏＴＣＲ細胞は、患者の寿命の間、患者内に存続するであろう。

【0323】

実施例９ 腫瘍形成性
ＮｅｏＴＣＲ生成物は、一又は複数のＮｅｏＴＣＲが人工プロモーターなしでＴ細胞のゲノムの天然ＴＣＲゲノム部位に組み込まれている精密ゲノム改変Ｔ細胞を含む。その結果、ＮｅｏＴＣＲがＴ細胞において人工プロモーターなしで発現される。
人工配列（例えば、特異的Ｔ細胞に内因的に存在しないプロモーター）が腫瘍形成性を引き起こすことが知られている。従って、ＮｅｏＴＣＲ生成物には人工プロモーターが含まれていないため、腫瘍形成の可能性の危険性が取り除かれる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物に関連する腫瘍形成性はない。

【0324】

実施例１０ プレコンディショニングレジメン
ＮｅｏＴＣＲ生成物は、例えば、単回投与として又は一若しくは複数の医薬品と組み合わせて、静脈内注入によって投与されうる。ＮｅｏＴＣＲ生成物は、骨髄非破壊的（ＮＭＡ）コンディショニング（前処置）レジメンの後、又はＮＭＡコンディショニングレジメンなしで患者に投与されうる。

【0325】

実施例１１ ＮｅｏＴＣＲ生成物で治療された患者における発熱反応又は発熱性好中球減少症のリスク低減及び／又は治療法
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲに対する発熱反応を防止するために、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与前に、患者にアセトアミノフェン及びジフェンヒドラミンを投与することができる。所定の実施態様では、そのようなアセトアミノフェン及びジフェンヒドラミンの用量は、各それぞれの薬物の標準治療に基づくべきである。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を投与された患者が発熱した場合、前記患者は、患者の年齢、体重、及び任意の他の関連要因に基づくアセトアミノフェンの標準治療投薬に基づいて、アセトアミノフェンの一又は複数の用量を更に投与することができる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を投与された患者が発熱した場合、アセトアミノフェンに加えて、追加の標準治療対症手段を施すことができる。

【0326】

所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を投与される患者は、コルチコステロイド又は非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を投与されるべきではない。従って、一実施態様では、コルチコステロイド又はＮＳＡＩＤが投与されていない患者にＮｅｏＴＣＲ生成物を投与することができる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を投与される患者は、敗血性輸注反応及び細菌感染の兆候が観察される。ＮｅｏＴＣＲ生成物を投与された患者が、そのような投与中又は投与直後に１℃を超える発熱を示した場合、その患者は敗血性輸注反応及び細菌感染について監視されうる。所定の実施態様では、敗血性輸注反応又は細菌感染が疑われる場合、患者を、標準治療法に基づいて感染源について評価することができる。
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物が投与され、好中球減少及び発熱がある患者には、標準治療に基づいて、広域スペクトル抗生物質及び任意選択的な静脈内輸液を投与することができる。

【0327】

実施例１２ ＮｅｏＴＣＲ生成物で治療された患者における急性輸注反応及び過敏反応のリスク低減及び／又は治療法
所定の実施態様では、輸注反応は、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与に対して起こりうる反応であり得、一過性の発熱、寒気、悪寒、及び悪心を伴う急性輸注反応からより重度の過敏症反応として現れる場合がある。加えて、過敏症反応と重複する場合がある。
ＮｅｏＴＣＲ生成物はＤＭＳＯ中で凍結保存される。ＤＭＳＯの毒性は、凍結保存された生成物の投与のよく見られる合併症である。ＤＭＳＯの毒性に関連する副作用は、一般的にヒスタミン放出に関連している。兆候と症状には、咳、紅潮、発疹、胸部圧迫感と喘鳴、吐き気と嘔吐、より極端な場合には心血管系の不安定性が含まれる。
アセトアミノフェン／パラセタモール及びジフェンヒドラミン／Ｈ１抗ヒスタミン薬を、注入前に投与することができ、必要に応じて６時間毎に繰り返すことができる。患者が輸注反応を発症した場合、注入速度を遅くしたり停止したりすることができる。コルチコステロイドは、ＮｅｏＴＣＲ細胞に有害作用を与える可能性があるため、既に生理的補充療法を受けている患者、又は生命を脅かす緊急事態の場合にのみ投与されるべきである。

【0328】

実施例１３ ＮｅｏＴＣＲ生成物で治療された患者における神経毒性のリスク低減及び／又は治療法
神経毒性は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法を受けている患者において観察されており、頭痛、錯乱、意識水準変化、喚語困難、構音障害、脳症、そして稀に発作にまで及ぶ場合がある。神経学的変化のタイミングは、解消後のサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）と同時であり得、又は一部の患者ではＣＲＳの症状なしに単独で発症する場合がある。
ＮｅｏＴＣＲ生成物の患者への投与でＣＲＳの兆候及び症状が現れた場合、ガイドラインに従って患者に抗ＩＬ６標的療法又はステロイドを施すことができる。

【0329】

実施例１４ ＮｅｏＴＣＲ生成物で治療された患者における腫瘍崩壊症候群のリスク低減及び／又は治療法
腫瘍崩壊症候群（ＴＬＳ）は、殆どの固形腫瘍では比較的稀であるため、固形腫瘍の患者ではリスクが低い。
ＴＬＳは、多量のカリウム、リン酸塩、及び核酸が体循環中に放出される大量の腫瘍細胞溶解によって引き起こされ、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法で治療された血液悪性腫瘍の患者で記述されている。
臨床検査ＴＬＳは、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入後数日以内に次の値の２つ以上として定義される：１）尿酸≧８ｍｇ／ｄＬ又はベースラインから２５％増加、２）カリウム≧６ｍＥｑ／Ｌ又はベースラインから２５％増加、３）リン≧４．５ｍｇ／ｄＬ又はベースラインから２５％増加、及び４）カルシウム≦７ｍｇ／ｄＬ又はベースラインから２５％減少。

【0330】

予防は、腎機能障害及び／又は腎障害、又は正常上限（ＵＬＮ）を超える尿酸、カリウム、又はリン酸塩レベルを有する巨大固形腫瘍の患者に施すことができる。禁忌のない患者には、ＮｅｏＴＣＲ生成物の注入前に施設ガイドラインに従って予防投与（例えば、アロプリノール）を開始することができる。腫瘍崩壊リスクがなくなれば、予防は中止されるべきである。
上記の臨床検査値のゼロ又は一つが異常である場合、患者はアロプリノール又は非アロプリノールの代替品と水分補給を継続して施す必要がある。アロプリノール又は非アロプリノールの代替品に加えて、ＩＶ水分補給を施すことができる。更に、尿酸値が上昇したままの場合、患者にラスブリカーゼを投与することができる。

【0331】

実施例１５ ＮｅｏＴＣＲ生成物で治療された患者における移植片対宿主病及び自己免疫のリスク低減及び／又は治療法
移植片対宿主病のような毒性は、二重ＴＣＲ種、すなわちＮｅｏＴＣＲα及びβ鎖ポリペプチドの発現に加えて内因性ＴＣＲ鎖の一つを持ちうる非常に少ない数の改変ＮｅｏＴＣＲ－Ｔ細胞から起因するかもしれないＮｅｏＴＣＲ生成物の潜在的な毒性である。内因性ＴＣＲとＮｅｏＴＣＲからのポリペプチド鎖の異種性対形成が、予期しない細胞ターゲティング能をもたらしうる。これらのイベントの可能性は非常に稀であると予想されるが、これらのＴ細胞は胸腺選択プロセスを受けておらず、健康な細胞への自己反応を引き起こす可能性があるため、その影響は予測できない。
自己免疫の証拠が現れた場合、コルチコステロイド、シクロスポリン－Ａ、ミコフェノール酸、モフェチル、抗ＴＮＦα抗体、又は抗胸腺細胞グロブリンなどの医薬を使用して、症状の重症度に基づいて臨床的に必要な免疫抑制療法で患者を治療できる。

【0332】

実施例１６ 野生型Ｔ細胞を含むＮｅｏＴＣＲ生成物
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、一又は複数のＮｅｏＴＣＲを発現するように精密改変されていない野生型（ＷＴ）Ｔ細胞及びＮｅｏＴＣＲ細胞の組み合わせを含む。このようなＮｅｏＴＣＲ生成物では、ＷＴ Ｔ細胞と組み合わせての精密改変ＮｅｏＴＣＲ細胞の混合により、エピトープが広がりうる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ細胞とＷＴ Ｔ細胞のそのような組み合わせは、腫瘍殺傷及びＮｅｏＴＣＲ生成物の有効性の増加をもたらしうる。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、少なくとも５％のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、約５％から１０％の間のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、約１０％から１５％の間のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、約１５％から２０％の間のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、約２０％から２５％の間のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、約２５％から３０％の間のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、約３０％から４０％の間のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、約４０％から５０％の間のＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、５０％を超えるＮｅｏＴＣＲ細胞を含む。

【0333】

実施例１７ 遺伝子回路と組み合わせたＮｅｏＴＣＲ生成物
所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物を、遺伝子回路と組み合わせることができる。遺伝子回路は、例えば、ここに記載の一又は複数の組み合わせ薬剤又は化学療法剤の標的化され局在化された発現をもたらすために使用されうる。所定の実施態様では、遺伝子回路は、例えば、ここに記載の一又は複数のサイトカイン（又はその修飾体若しくは誘導体）の標的化され局在化された発現をもたらすために使用されうる。遺伝子回路は、例えば、ここに記載の一又は複数のペプチド又はタンパク質の標的化され局在化された発現をもたらすために使用されうる。遺伝子回路は、例えば、ここに記載の一又は複数の抗体の標的化され局在化された発現をもたらすために使用されうる。所定の実施態様では、遺伝子回路は、例えば、ここに記載の一又は複数の組み合わせ薬剤又は化学療法剤の制御された発現をもたらすために使用されうる。所定の実施態様では、遺伝子回路は、例えば、ここに記載の一又は複数サイトカイン（又はその修飾体若しくは誘導体）の制御された発現をもたらすために使用されうる。所定の実施態様では、遺伝子回路は、例えば、ここに記載の一又は複数のペプチド又はタンパク質の制御された発現をもたらすために使用されうる。遺伝子回路は、例えば、ここに記載の一又は複数の抗体の制御された発現をもたらすために使用されうる。所定の実施態様では、遺伝子回路は、例えば、細胞に複数の作用機序をもたらすために使用されうる。

【0334】

実施例１８ ＮｅｏＴＣＲ生成物の概要
ＮｅｏＴＣＲ生成物の薬理学的評価により、人工プロモーターなしのエクスビボ製造プロセスを使用して産生されたＮｅｏＴＣＲ生成物は、同族ネオ抗原発現腫瘍細胞との接触で、強力な抗原特異的殺傷性、エフェクターサイトカイン分泌、及び増殖活性を有していることが実証された。更に、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、バルクＴ細胞及び単一細胞セクレトーム分析によって示されるように、強力な多機能エフェクタータンパク質分泌応答で標的腫瘍細胞に応答することが示されている。観察された多機能Ｔ細胞エフェクター表現型は、血液悪性腫瘍患者に再注入された改変された多機能の自己ＣＡＲ－Ｔ細胞で観察されるものと同様の形で、ＮｅｏＴＣＲ生成物をがん患者に注入した際の臨床的利益の可能性に寄与することが予測される。

【0335】

ＮｅｏＴＣＲ生成物は、人工プロモーターなしのエクスビボ製造プロセスを使用して達成された有意なＴ細胞表現型を表すＴメモリー幹細胞（Ｔ_ＭＳＣ）及びセントラルメモリー（Ｔ_ＣＭ）表現型を含む。Ｔ_ＭＳＣ及びＴ_ＣＭは「より幼若の」細胞と考えられる。これらの「より幼若の」又は低分化のＴ細胞表現型は、患者の改変ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、改善された生着能と注入後の長期持続性をもたらす。従って、「より幼若の」Ｔ細胞表現型を含むＮｅｏＴＣＲ生成物の投与は、生着能の改善、注入後の持続性の延長、及びエフェクターＴ細胞への迅速な分化により、全身の腫瘍細胞を根絶することにより、がん患者に利益をもたらすことができる。

【0336】

がん患者からのＴ細胞で産生されたＮｅｏＴＣＲ生成物を用いてエクスビボでの作用機序研究をまた実施した。Ｔ細胞殺傷活性、増殖、及びサイトカイン産生の抗原特異性によって測定される、同等の遺伝子編集効率及び機能的活性が観察され、人工プロモーターなしのエクスビボ製造プロセスが、出発物質としてがん患者由来のＴ細胞を用いて生成物を作製することに成功していることを証明している。

【0337】

エクスビボ製造プロセス（人工プロモーターなし）で使用されるＣａｓ９リボ核タンパク質ヌクレアーゼのゲノム切断特異性プロファイルを調べることは重要であった。人工プロモーターを用いないＮｅｏＴＣＲ生成物製造プロセスは、それぞれがゲノムＴＣＲα及びゲノムＴＣＲβ遺伝子座を標的とする、ガイドＲＮＡ配列に結合したＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９ヌクレアーゼの二重リボ核タンパク質種のエレクトロポレーションを含む。Ｃａｓ９ヌクレアーゼを各ゲノム遺伝子座にターゲティングする特異性は、以前に文献に高度に特異的であると記載されている。ＮｅｏＴＣＲ生成物を使用して包括的インビトロ及びインシリコ分析を実施し、ＣＯＳＭＩＤ及びＧＵＩＤＥ－ｓｅｑをそれぞれ使用して、可能性のあるオフターゲットゲノム切断部位を調査した。複数のＮｅｏＴＣＲ生成物と健康なドナーからの同等の細胞生成物を、ディープシークエンシングによって候補オフターゲット部位の切断について評価したが、選択されたヌクレアーゼが高度に特異的であるという公表された証拠を裏付けている。結果は、がん患者に投与されたＮｅｏＴＣＲ生成物の安全性、忍容性、又は有効性を損なうとは予想されないＣａｓ９オフターゲット活性の可能性が非常に低いことを示した。

【0338】

精密ゲノム改変プロセスの更なる態様を安全性について評価した。標的遺伝子座増幅（ＴＬＡ）又は標準的ＦＩＳＨ細胞遺伝学による複数のＮｅｏＴＣＲ生成物の評価では、精密ゲノム改変後のゲノム不安定性の証拠は見出されなかった。ＮｅｏＴＣＲ配列のゲノムへのオフターゲット組込みはどこにも検出されなかった。細胞生成物に残留Ｃａｓ９の証拠は見出されなかった。

【0339】

従って、所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ゲノム的に安定である一又は複数のＮｅｏＴＣＲを発現するように改変されたＴ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲ配列のゲノムへのオフターゲット組込みがない一又は複数のＮｅｏＴＣＲを発現するように改変されたＴ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、残留Ｃａｓ９を含まない。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲ配列のゲノムへのオフターゲット組込みがなく、残留Ｃａｓ９を含まない一又は複数のＮｅｏＴＣＲを発現するように改変されたＴ細胞を含む。所定の実施態様では、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲ配列のゲノムへのオフターゲット組込みがなく、残留Ｃａｓ９を含まない一又は複数のＮｅｏＴＣＲを発現するように改変されたＴ細胞を含み、ＮｅｏＴＣＲ生成物中のＮｅｏＴＣＲ細胞はゲノム的に安定である。

【0340】

ここに記載の方法及び／又は組成物の何れかを使用して、ＮｅｏＴＣＲ生成物の投与は、ＮｅｏＴＣＲ生成物がデザインされ作製された患者の腫瘍細胞を根絶することができるため、がん患者に意味のある臨床的利益をもたらす。更に、現在利用可能な細胞療法とは異なり、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲ生成物がデザインされ作製された患者の腫瘍細胞を根絶することができるため、固形腫瘍の患者に意味のある臨床的利益をもたらす。

【0341】

実施例１９ ＮｅｏＴＣＲ生成物における二以上のＮｅｏＴＣＲの相乗効果
本実施例は、がんの治療のためにＮｅｏＴＣＲ生成物を使用する効率を例証している。
ここに記載されるように、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、患者のＮｅｏＴＣＲを同定し、同じ患者自身のＴ細胞を改変して、がんを治療するためにＮｅｏＴＣＲを発現するようにデザインされる。図４Ａ及び４Ｂは、その全体がここに援用されるＰＣＴ／ＵＳ２０２０／１７８８７に記載されているように実施されるｉｍＰＡＣＴ単離技術分析を示している。図３に記載されるように、ｉｍＰＡＣＴ単離技術を使用して、患者から収集したメラノーマ腫瘍細胞からＮｅｏＴＣＲを同定した。図４Ａ及び４Ｂに示されるように、同じ遺伝子の異なるネオエピトープに特異的な複数のＮｅｏＴＣＲを同定した。具体的には、ＮＡＴ１０遺伝子に特異的であった９つの異なるＮｅｏＴＣＲを同定し、ＰＲＰＳＡＰ２遺伝子に特異的であった２つの異なるＮｅｏＴＣＲを同定し、ＡＴＰ１１Ａ遺伝子に特異的であった４つの異なるＮｅｏＴＣＲを同定し、かつＨＰ１ＢＰ３遺伝子に特異的であった５つの異なるＮｅｏＴＣＲを同定した（図４Ａ）。ＵＶＳＳＡ遺伝子に特異的であったＮｅｏＴＣＲも一つ同定した（図４Ａ）。

【0342】

異なるＮｅｏＴＣＲの同定に基づいて、図５に示されるようにＮｅｏＴＣＲ生成物を作製した。示されているように、ＮｅｏＴＣＲ細胞を、１０：１の生成物対標的比（Ｐ：Ｔ）で自己腫瘍細胞株と共培養した。ＮｅｏＴＣＲ細胞を、単一のＮｅｏＴＣＲ生成物として、又は３のＮｅｏＴＣＲの各一の１／３で構成される３のＮｅｏＴＣＲ生成物として試験した。組み合わせて試験したＮｅｏＴＣＲは、異なるネオエピトープ及び／又はＨＬＡを標的とした（例えば、図６Ａ、６Ｂ、７Ａ－７Ｄ、８Ａ－８Ｅ、１１Ａ、及び１１Ｂを参照）。自己腫瘍細胞を形質導入して赤色蛍光タンパク質を発現させた後、ＩｎｃｕＣｙｔｅシステムで赤色コンフルエンシーの量を経時的に測定した。赤色蛍光タンパク質陽性細胞の割合の減少を、ＮｅｏＴＣＲ生成物の細胞傷害活性の尺度として使用した。この実験の陰性対照は次の通りであった：（１）培地のみを伴う腫瘍細胞；（２）異なる患者からの腫瘍細胞株と共培養されたＮｅｏＴＣＲ細胞（すなわち、非同族抗原を発現する細胞と共に培養されたＮｅｏＴＣＲ細胞）；（３）無関係のＮｅｏＴＣＲ（ｎｅｏ１２）と自己腫瘍細胞株の共培養（すなわち、非同族抗原を発現する細胞と共に培養されたＮｅｏＴＣＲ細胞）。この実験の目的は、異なる集団が同じ遺伝子に対して異なるＮｅｏＴＣＲを発現し、異なる遺伝子に対して異なるＮｅｏＴＣＲを発現するＮｅｏＴＣＲ細胞の一を超える集団と、異なるＨＬＡに特異的なＮｅｏＴＣＲを含むＮｅｏＴＣＲ生成物に相乗効果があるかどうかを決定することであった。

【0343】

最初に、ＮｅｏＴＣＲ細胞の単一集団を含む（すなわち、ＮｅｏＴＣＲ生成物が単一のＮｅｏＴＣＲのみを含む）異なるＮｅｏＴＣＲ生成物の殺傷能力を試験した。図６Ａに示されるように、ＮｅｏＴＣＲ細胞の単一集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物は、腫瘍細胞の増殖を制御する様々な能力を有している。しかし、ＮｅｏＴＣＲ細胞の三集団を含むＮｅｏＴＣＲ生成物（すなわち、ＮｅｏＴＣＲ生成物がＮｅｏＴＣＲ細胞の三種の別個の集団を含み、各集団が異なるＮｅｏＴＣＲを発現する）が、腫瘍細胞の増殖を制御する増強された能力を有しているだけでなく、三種の異なるＮｅｏＴＣＲ細胞集団が実際に協働して相乗効果を引き出し、腫瘍細胞の増殖を制御する（図６Ｂ；この図に見られる唯一の細胞増殖は、ＮｅｏＴＣＲ生成物を含まない培地のみの存在下での腫瘍細胞の増殖である）ことが見出されたことは驚きであった。

【0344】

ＮｅｏＴＣＲ細胞の三集団の組み合わせ（すなわち、ＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＮｅｏＴＣＲ細胞の別個の三集団を含み、各集団が異なるＮｅｏＴＣＲを発現する）がＮｅｏＴＣＲ細胞の二集団よりも高い有効性をもたらすことを証明するために、ＮｅｏＴＣＲ４０８、４０９、及び４２９のあらゆる組み合わせについて実験を実施した（図７Ａ－７Ｄ）。図７Ａは、三のＮｅｏＴＣＲ生成物と比較した各単一のＮｅｏＴＣＲ生成物の比較を示している。図７Ｂ－７Ｄは、二のＮｅｏＴＣＲ生成物と比較した単一のＮｅｏＴＣＲ生成物を示している。示されているように、二のＮｅｏＴＣＲ生成物は腫瘍細胞増殖を制御できたが、制御は限られており、時間の経過と共に幾らかの細胞増殖が生じ得た。対照的に、図７Ａに蒔かれた三のＮｅｏＴＣＲ生成物は、腫瘍増殖の有意に優れた制御を示した。

【0345】

図７Ａ－７Ｄに記載されたものと同じ実験を、図６Ｂに示された三のＮｅｏＴＣＲ生成物のそれぞれに対して実施した。この実験の別の実施例を、ＮｅｏＴＣＲ４０９、４２９、及び４２１を用いて図８Ａ－８Ｄに示す。

【0346】

更に、図６Ｂに示される三のＮｅｏＴＣＲ生成物のそれぞれを試験する別の理由は、三のＮｅｏＴＣＲ生成物における各ＮｅｏＴＣＲの特異性の関連性を探求することであった。ＮｅｏＴＣＲ４０８、４０９、及び４２９の組み合わせ（図７Ａ－７Ｄ）は、ＮＡＴ１０遺伝子及びＨＬＡ－Ａ０１：０１に特異的な二のＮｅｏＴＣＲと、ＵＶＳＳＡ遺伝子及びＨＬＡ－Ｂ５７：０１に特異的な一のＮｅｏＴＣＲから構成された（図８Ｅ）。ＮｅｏＴＣＲ４０９、４２９、及び４２１の組み合わせ（図８Ａ－８Ｄ）は、ＮＡＴ１０遺伝子及びＨＬＡ－Ａ０１：０１に特異的な一のＮｅｏＴＣＲ、ＵＶＳＳＡ遺伝子及びＨＬＡ－Ｂ５７：０１に特異的な一のＮｅｏＴＣＲ、及びＰＲＰＳＡＰ２遺伝子及びＨＬＡ－Ｃ０３：０４に特異的な一のＮｅｏＴＣＲから構成された（図８Ｅ）。実証されているように、腫瘍細胞の増殖を制御するＮｅｏＴＣＲ生成物の能力は、遺伝子及びＨＬＡの多様性に依存しなかった。むしろ、三のＮｅｏＴＣＲ生成物での腫瘍細胞増殖を制御する相乗効果を生み出したのは、ネオエピトープの多様性であったことが示された。

【0347】

ＮｅｏＴＣＲ生成物が腫瘍細胞の増殖を制御する能力の唯一の理由としてＨＬＡ発現レベルを除外するために、ＨＬＡ発現をＭ４９０腫瘍細胞（ＮｅｏＴＣＲが同定され単離された腫瘍細胞株）において測定した（図９Ａ）。Ｍ４９０腫瘍細胞のＨＬＡのクラス間で発現レベルの差が存在するため、細胞をＩＦＮγで２４時間前処理して、ＨＬＡクラスの発現を増加させることが可能かどうかを決定した（図９Ｂ）。図９Ｃに示されるように、ＩＦＮγによる前処理は、ＨＬＡのアップレギュレーションをもたらすだけでなく、Ｍ４９０細胞でのネオ抗原提示のアップレギュレーションもまたもたらした。発現の増加がＭ４９０細胞に限定されていなかったことを確認するために、Ｍ４８６細胞をまた使用し、同様のアップレギュレーションを観察した（図９Ｃ）。

【0348】

ＩＦＮγは、Ｍ４９０細胞の増殖を遅らせるように見えたことが観察された。ＩＦＮγが細胞を死滅させたか又は単に細胞増殖抑制効果を有していたかをよりよく理解するために、細胞コンフルエンスをＩＦＮγでの前処理後に測定し（図１０Ａ）、細胞生存率を同時に測定した（図１０Ｂ）。実証されるように、ＩＦＮγ前処理はＭ４９０細胞に対して増殖抑制効果を有していたのみで、それは細胞生存率に影響を与えなかった。

【0349】

ＩＦＮγ前処理は、細胞生存率に影響を与えることなく、ＨＬＡ及びネオ抗原提示を増加させたことが実証されたので、Ｍ４９０細胞上のＨＬＡ及びネオ抗原発現をアップレギュレートすることが、腫瘍細胞増殖を制御するＮｅｏＴＣＲ生成物の能力を高めることができたかどうかを決定する実験をデザインした。図１１Ａ及び図１１Ｂに示されるように、腫瘍細胞上のＨＬＡ及びネオ抗原の発現を増加させることで、腫瘍細胞増殖の一のＮｅｏＴＣＲ生成物の制御能を高めることができた。このデータは、二及び三のＮｅｏＴＣＲ生成物が、ＩＦＮγを添加することなく、腫瘍細胞増殖を如何により良く制御することができるかという疑問につながる。

【0350】

この疑問を探求するために、ＩＦＮγ前処理の結果を、その結果をペプチドパルス実験と比較することによって確認した。ペプチドパルス実験を図１２に記載する。示されるように、単一のＮｅｏＴＣＲを発現するＮｅｏＴＣＲ生成物にネオペプチドをパルスして、ＩＦＮγ前処理の存在下又は非存在下で腫瘍細胞によって提示されるネオ抗原の量を増加させた。これらの実験の結果を、両方ともＮＡＴ１０遺伝子に対するものであるＮｅｏＴＣＲ４０９（図１３Ａ）及びＮｅｏＴＣＲ４２２（図１３Ｂ）について示す。様々な量のＮＡＴ１０ペプチドをＮｅｏＴＣＲ細胞中にパルスしてＮＡＴ１０ネオエピトープの発現を増加させると、単一のＮｅｏＴＣＲ生成物は、ＩＦＮγ前処理の有無にかかわらず腫瘍細胞増殖を制御するその能力を高めることができた。ＮｅｏＴＣＲの説明を以下の表７に提供する。

【0351】

注目すべきは、ＨＬＡ－Ａが、図９Ａに示されるように、Ｍ４９０腫瘍細胞で最も高発現を示すＨＬＡであることである。従って、ＨＬＡ－Ａに特異的なＮｅｏＴＣＲは、Ｍ４９０腫瘍細胞においてＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃよりも優れていると予想される。従って、上記と同じ実験を、ＨＬＡ－Ｂ制限ＮｅｏＴＣＲ生成物で実施した。図１４Ａ－１４Ｃに示されるように、ＩＦＮγ前処理は、図１３Ａ及び１３Ｂに示されるＨＬＡ－Ａ制限ＮｅｏＴＣＲ生成物よりもＨＬＡ－Ｂ制限ＮｅｏＴＣＲ生成物に大きな効果を有していた。図１４Ａ＝ＮｅｏＴＣＲ４１８を発現するＮｅｏＴＣＲ生成物；図１４Ｂ＝ＮｅｏＴＣＲ４３３を発現するＮｅｏＴＣＲ生成物；図１４Ｃ＝ＮｅｏＴＣＲ４２３を発現するＮｅｏＴＣＲ生成物。ＮｅｏＴＣＲの説明は以下の表８に提供する。

【0352】

ＮｅｏＴＣＲ生成物における二以上のＮｅｏＴＣＲの発現が、ペプチドパルス及びＩＦＮγ前処理と同じ効果をなぜ誘発したかを理解するために、プライミング実験をデザインした（図１５）。プライミング実験は、第一のＮｅｏＴＣＲ生成物（単一のＮｅｏＴＣＲを発現）の存在下でＭ４９０腫瘍細胞を２０時間培養した後、その第一のＮｅｏＴＣＲ生成物を除去し、それを単純培地又は培地と第二のＮｅｏＴＣＲ生成物（単一のＮｅｏＴＣＲを発現）の何れかで置き換えることで構成された。答えるべき疑問は、一のＮｅｏＴＣＲでプライミングされた腫瘍細胞が、ＮｅｏＴＣＲ生成物によるその後のそれらの殺傷を受けやすくするアポトーシスシグナルを誘導するかどうかであった。図１６に示される実験では、腫瘍細胞を、ＮｅｏＴＣＲ４２２又はＮｅｏＴＣＲ４２１を発現するＮｅｏＴＣＲ生成物で２０時間プライミングした。２０時間後、プライミングＮｅｏＴＣＲ生成物を除去し、単純培地又は他のＮｅｏＴＣＲを発現するＮｅｏＴＣＲ生成物で交換した（例えば、ＮｅｏＴＣＲ４２２がプライミングに使用された場合、ＮｅｏＴＣＲ４２１をプライミング後の置換生成物として使用した）。示されているように、両方の場合において、プライミングは、より良い細胞殺傷性及びＭ４９０腫瘍細胞増殖の増加した制御をもたらした。ＮｅｏＴＣＲの説明を、以下の表９に提供する。

【0353】

同様の実験を実施し、データを図１７Ａ（プライマーとしてのＮｅｏＴＣＲ４２２及び治療のためのＮｅｏＴＣＲ生成物のＮｅｏＴＣＲ４２９）及び１７Ｂ（プライマーとしてのＮｅｏＴＣＲ４２１及び治療のためのＮｅｏＴＣＲ生成物のＮｅｏＴＣＲ４２９）に示す。この実験で使用したＮｅｏＴＣＲの説明を、以下の表１０に提供する。

【0354】

最後に、ＮｅｏＴＣＲ生成物中の三の異なるＮｅｏＴＣＲの組み合わせによって相乗効果が生じたかどうかを決定するために、図１７Ａ及び１７Ｂに示される実験のＮｅｏＴＣＲを使用して、組み合わせ研究を実施した（図１７Ａ－１８Ｄ）。図１７Ａは、腫瘍細胞増殖を制御するその能力において、三のＮｅｏＴＣＲ生成物と比較した単一のＮｅｏＴＣＲ生成物を示している。図１８Ｂ－１８Ｄは、ＮｅｏＴＣＲ生成物中の三のＮｅｏＴＣＲのうちの二種の組み合わせの腫瘍細胞増殖を制御する能力を示している。示されているように、単一のＮｅｏＴＣＲ生成物中の二種以上のＮｅｏＴＣＲの組み合わせは、ＮｅｏＴＣＲが相乗的に作用して、腫瘍細胞増殖を制御するＮｅｏＴＣＲ生成物の有効性を増加させることができることを証明するプライミング実験の同じ結果を導き出す。

【0355】

実施例２０ ＮｅｏＴＣＲ生成物の例示的な作製
ここに記載のＮｅｏＴＣＲ生成物は、この実施例に記載された方法に従って作製することができる。
（出典明示によりその全体がここに援用される）ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／１７８８７に記載されたｉｍＰＡＣＴ単離技術によって同定されたネオエピトープ特異的ＴＣＲを使用して、相同組換え（ＨＲ）ＤＮＡ鋳型を作製した。これらのＨＲ鋳型を、部位特異的ヌクレアーゼを用いてタンデムで初代ヒトＴ細胞にトランスフェクトした。単一ステップの非ウイルス精密ゲノム改変により、内因性プロモーターによって発現される患者のネオエピトープ特異的ＴＣＲで内因性ＴＣＲがシームレスに置換された。表面に発現されたＴＣＲは配列が完全に天然である。

【0356】

ｎｅｏＴＣＲ－Ｔ細胞ゲノム改変の精度を、オフターゲット組込みホットスポット又は転座の標的遺伝子座増幅（ＴＬＡ）と、次世代シークエンシングベースのオフターゲット切断アッセイによって評価し、意図しない結果の証拠がないことが見出された。
目的の遺伝子を含むコンストラクトを内因性遺伝子座に挿入した。これは、左右のＨＲアームに隣接して目的の遺伝子のコード配列を含む相同修復鋳型を使用して達成された。ＨＲアームに加えて、目的の遺伝子を、２Ａペプチド、目的の上流の翻訳遺伝子から２Ａペプチドを除去するための２Ａペプチドの上流にあるプロテアーゼ切断部位、及びシグナル配列の間に挟んだ。ゲノムに組み込まれると、目的の発現遺伝子カセットの遺伝子は、単一メッセンジャーＲＮＡとして転写された。メッセンジャーＲＮＡにおけるこの目的の遺伝子の翻訳中に、隣接領域は、自己切断２Ａペプチドによって目的の遺伝子から切り離され、プロテアーゼ切断部位は、翻訳された目的の遺伝子の上流の２Ａペプチドの除去のために切断された。２Ａペプチド及びプロテアーゼ切断部位に加えて、ｇｌｙ－ｓｅｒ－ｇｌｙ（ＧＳＧ）リンカーを各２Ａペプチドの前に挿入して、発現カセット内の他のエレメントからの目的の遺伝子の分離を更に高めた。

【0357】

Ｐ２Ａペプチドは、その効率的な切断のために、細胞生成物の他の２Ａペプチドよりも優れていると判断された。従って、二つ（２）のＰ２Ａペプチド及びコドン分岐を使用して、Ｐ２Ａペプチドからの目的の遺伝子の何れかの末端にある残りのアミノ酸からの如何なる外因性エピトープも導入することなく、目的の遺伝子を発現させた。外因性エピトープを持たない（すなわち、目的の遺伝子の両側に隣接するＰ２Ａペプチドアミノ酸がない）遺伝子編集細胞の利点は、免疫原性が強烈に低下し、遺伝子編集細胞に対して免疫反応を起こす遺伝子編集細胞を含む細胞生成物が患者に注入される可能性が低くなることである。

【0358】

ＰＣＴ／ＵＳ／２０１８／０５８２３０に記載されているように、ＮｅｏＴＣＲをＴ細胞のＴＣＲα遺伝子座に組み込んだ。具体的には、左右のＨＲアームに隣接するＮｅｏＴＣＲコード配列を含む相同修復鋳型を使用した。加えて、内因性ＴＣＲβ遺伝子座を破壊し、ＮｅｏＴＣＲコンストラクトによってコードされるＴＣＲ配列のみを発現させた。一般的な戦略を、環状ＨＲ鋳型並びに直鎖鋳型を使用して適用した。

【0359】

ゲノムに組み込まれると、ＮｅｏＴＣＲ発現遺伝子カセットは、その個々のＴ細胞からの内因性ＴＣＲαポリペプチドの一部をなおも含む、内因性ＴＣＲαプロモーターから単一メッセンジャーＲＮＡとして転写される。この単一のＮｅｏＴＣＲメッセンジャーＲＮＡのリボソームポリペプチド翻訳中に、ＮｅｏＴＣＲ配列は、Ｐ２Ａペプチドでの自己切断によって内因性のＣＲＩＳＰＲ破壊されたＴＣＲαポリペプチドから分離される。コードされたＮｅｏＴＣＲα及びＮｅｏＴＣＲβポリペプチドは内因性細胞性ヒトフューリンプロテアーゼによる切断及びＮｅｏＴＣＲ発現遺伝子カセットに含まれる第二の自己切断Ｐ２Ａ配列モチーフを通して互いにまた分離される。ＮｅｏＴＣＲα及びＮｅｏＴＣＲβポリペプチドは、多量体構築及びＴ細胞表面へのＮｅｏＴＣＲタンパク質複合体の輸送のために、シグナルリーダー配列（ヒト成長ホルモン、ＨＧＨに由来）によって別々に小胞体に標的化される。フューリンプロテアーゼ切断部位を含めることにより、上流のＴＣＲβ鎖からの２Ａ配列の除去が容易になり、ＴＣＲβ機能との潜在的な干渉が減少する。各２Ａの前にｇｌｙ－ｓｅｒ－ｇｌｙリンカーを含めると、三つのポリペプチドの分離が更に増強される。

【0360】

加えて、三つの反復タンパク質配列は、ゲノム安定性を促進するためにＨＲ鋳型内でコドン分岐される。二つのＰ２Ａは、エクスビボ改変Ｔ細胞のゲノム内に導入されたＮｅｏＴＣＲカセット配列の安定性を促進するためにＴＣＲ遺伝子カセット内で、二つのＨＧＨシグナル配列も互いに同様に、互いにコドン分岐される。同様に、ＴＲＡＣエクソン１の再導入された５’末端は、二つの直接反復の介在配列を除去することにより、カセット全体が経時的に失われる可能性を低減させる。

【0361】

Ｉｎ－Ｏｕｔ ＰＣＲを使用して、ＮｅｏＥ ＴＣＲカセットの精密な標的組込みを確認した。アガロースゲルは、組込みカセットに特異的なプライマーを使用し、部位がヌクレアーゼ及びＤＮＡ鋳型（ＫＯＫＩ及びＫＯＫＩＫＯ）の両方で処理された細胞に対してのみ予想されるサイズの生成物を生成するＰＣＲの結果を示しており、部位特異的で精密な組込みを証明している。

【0362】

更に、標的遺伝子座増幅（ＴＬＡ）を使用して、標的組込みの特異性を確認した。架橋、ライゲーション、及びＮｅｏＴＣＲ挿入断片に特異的なプライマーの使用によって、組込み部位周辺の配列を取得した。ゲノムにマッピングされたリードを、１０ｋｂ間隔でビニングする。有意なリードデプスが、１４番染色体上の組込み部位の目的の部位周囲でのみ得られており、一般的なオフターゲット挿入部位の証拠がないことが示される。

【0363】

内因性ＴＣＲの抗体染色及びｎｅｏＴＣＲのペプチド－ＨＬＡ染色は、改変がＮｅｏＴＣＲの高頻度のノックインをもたらし、幾らかのＴＣＲ細胞と少しのＷＴ Ｔ細胞が残っていることを明らかにした。ノックインは、外因性プロモーターの非存在下でのｎｅｏＴＣＲ発現によって証明される。同じｎｅｏＴＣＲを使用して改変を複数回実施したところ、同様の結果になった。従って、改変されたＴ細胞におけるＮｅｏＴＣＲの効率的且つ一貫した発現と内因性ＴＣＲのノックアウトが達成された。

【0364】

本発明は、ある程度の長さで、幾つかの記載された実施態様に関してある程度の特殊性をもって記載されたが、何らかのそのような詳細又は実施態様又は何らかの特定の実施態様に限定されるべきとは意図されておらず、先行技術に照らしてそのような特許請求の範囲の可能な限り広い解釈を提供し、よって、本発明の意図された範囲を効果的に包含するように、添付の特許請求の範囲を参照して、解釈されるべきである。

【0365】

ここで言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、それらの全体が出典明示により援用される。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先する。加えて、セクションの見出し、材料、方法、及び実施例は、例示に過ぎず、限定を意図するものではない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A-8D】

【図8E】

【図9A-9B】

【図9C】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18A-18B】

【図18C-18D】

【図19】

【図20-1】

【図20-2】

【配列表】

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【国際調査報告】