特表 2022-553493 患者におけるヒトウイルス関連障害を予防するための方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-12-23

(54)【発明の名称】患者におけるヒトウイルス関連障害を予防するための方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20221216BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20221216BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20221216BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221216BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20221216BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221216BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20221216BHJP

   A61K 31/706 20060101ALI20221216BHJP

   A61K 31/436 20060101ALI20221216BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20221216BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20221216BHJP

   C07H 15/04 20060101ALN20221216BHJP

   C07D 498/18 20060101ALN20221216BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20221216BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20221216BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N

A61K45/00

A61P31/12

A61P35/00

A61P35/02

A61K39/395 D

A61P43/00 121

A61K38/16

A61K31/706

A61K31/436

A61K9/19

A61K9/08

C07H15/04 B

C07D498/18

C12N15/13 ZNA

C07K16/28

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022515685

(86)(22)【出願日】2019-09-11

(85)【翻訳文提出日】2022-03-09

(86)【国際出願番号】 IB2019057658

(87)【国際公開番号】W WO2021048595

(87)【国際公開日】2021-03-18

(81)【指定国・地域】

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り （１）公開日： 平成３０年１０月３０日～３１日（２）集会の名前と場所：２０１８ ＢｉｏＳａｆｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ａｎｎｕａｌ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｅｍｂｅｒｓｈｉｐ Ｍｅｅｔｉｎｇ（スイス国 バーゼル リヒトシュトラーセ ３５シーエイチ４０５６） （３） 公開者： ルービック－シュナイダー，ティナ （４） 公開された発明の内容： ルービック－シュナイダー，ティナが、２０１８ ＢｉｏＳａｆｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ａｎｎｕａｌ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｅｍｂｅｒｓｈｉｐ Ｍｅｅｔｉｎｇにおいて、ルービック－シュナイダー，ティナ、トラジアイ，エリザベッタおよびウルリッヒ，ペーターが発明した、本願発明の一部を含む、「Ａｎｔｉ－ＣＤ４０ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｉｍｐａｉｒ ＥＢＶ ｃｏｎｔｒｏｌ ｉｎｖｉｔｒｏ」を公開した。

(71)【出願人】

【識別番号】504389991

【氏名又は名称】ノバルティス アーゲー

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山 英二

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100196966

【弁理士】

【氏名又は名称】植田 渉

(72)【発明者】

【氏名】ルービック－シュナイダー，ティナ

(72)【発明者】

【氏名】トラジアイ，エリザベッタ

(72)【発明者】

【氏名】ウルリッヒ，ペーター

【テーマコード（参考）】

4C057

4C072

4C076

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C057BB02

4C057DD02

4C057JJ03

4C072AA03

4C072BB03

4C072CC01

4C072CC12

4C072DD07

4C072EE09

4C072FF15

4C072GG07

4C072HH01

4C072UU01

4C076AA11

4C076AA30

4C076CC27

4C076CC35

4C076FF01

4C076FF11

4C084AA02

4C084AA03

4C084BA25

4C084BA44

4C084DA11

4C084MA02

4C084MA16

4C084MA44

4C084NA05

4C084ZB26

4C084ZB27

4C084ZB33

4C084ZC75

4C085AA13

4C085AA14

4C085EE01

4C085EE03

4C086AA01

4C086AA02

4C086CB22

4C086EA04

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA07

4C086MA16

4C086MA44

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZB33

4C086ZC75

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045DA76

4H045EA29

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、ヒトウイルス関連障害、特にＥＢＶ関連障害を予防する方法及び対象、特に固形臓器移植患者のようなかかる障害を発症するリスクがある対象におけるＥＢＶ負荷を制御する方法に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象におけるＥＢＶ関連障害を予防する方法であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。

【請求項2】

前記対象は、小児患者である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記対象は、臓器又は組織移植を受けることになる、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

前記対象は、ＥＢＶ血清陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ血清陰性移植患者である、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記患者は、肝移植患者である、請求項３に記載の方法。

【請求項6】

前記対象は、免疫抑制されている、請求項３に記載の方法。

【請求項7】

前記ＥＢＶ関連障害は、癌又はリンパ増殖性疾患である、請求項３に記載の方法。

【請求項8】

対象がＥＢＶ関連障害を発症する可能性を低減する方法であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。

【請求項9】

前記患者は、小児患者である、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

前記対象は、臓器又は組織移植を受けることになる、請求項８又は９に記載の方法。

【請求項11】

前記対象は、ＥＢＶ陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ血清陰性移植患者である、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記患者は、肝移植患者である、請求項１０に記載の方法。

【請求項13】

前記対象は、免疫抑制されている、請求項１０に記載の方法。

【請求項14】

前記ＥＢＶ関連障害は、癌又はリンパ増殖性疾患である、請求項１０に記載の方法。

【請求項15】

移植後リンパ増殖性疾患の可能性を低減する、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

固形臓器を、それを必要とする患者に移植する方法であって、ＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。

【請求項17】

前記患者は、小児患者である、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記対象は、ＥＢＶ陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ血清陰性移植患者である、請求項１６又は１７に記載の方法。

【請求項19】

前記患者は、肝移植患者である、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記対象は、免疫抑制されている、請求項１８に記載の方法。

【請求項21】

対象におけるＥＢＶ感染を制御する方法であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。

【請求項22】

前記患者は、小児患者である、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記対象は、臓器又は組織移植を受けることになる、請求項２１又は２２に記載の方法。

【請求項24】

前記対象は、ＥＢＶ陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ血清陰性移植患者である、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記患者は、肝移植患者である、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記対象は、免疫抑制されている、請求項２４に記載の方法。

【請求項27】

前記ＣＤ４０アンタゴニストは、抗ＣＤ４０抗体である、請求項１、８、１６又は２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記ＣＤ４０アンタゴニストは、ＡＳＫＰ１２４０、ＢＩ６５５０６４及びＦＦＰ１０４からなる抗ＣＤ４０抗体の群から選択される、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記抗体は、ＡＤＣＣ活性が抑制された抗ＣＤ４０抗体である、請求項２７に記載の方法。

【請求項30】

前記抗体は、
ｅ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｆ．配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｇ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、及び
ｈ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。

【請求項31】

前記抗体は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項２８又は３０に記載の方法。

【請求項32】

前記抗体は、ＣＦＺ５３３である、請求項２７に記載の方法。

【請求項33】

前記抗体ＣＦＺ５３３は、ＣｓＡ、タクロリムス又はエベロリムスなどのｍＴｏｒ阻害剤と組み合わせて使用される、請求項３２に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、感染のリスクがある個体におけるウイルス関連障害を予防するための方法に関する。

【背景技術】

【0002】

エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）は、成人集団の９０％超が持続感染した、ヒトにおいて最も成功した病原体の１つである（Ｃｅｓａｒｍａｎ ２０１４，Ｃｏｈｅｎ ２０１５）。免疫不全個体におけるＥＢＶ感染は、すべての種類の疾患、例えば悪性腫瘍、例えば癌（胃若しくは鼻咽頭）又はリンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫）に関連し得る。末期臓器不全を有する患者の場合、移植は、選択される治療である。しかし、移植の成功は、臓器拒絶反応を予防するための免疫抑制薬に依存する。ＥＢＶ関連移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）は、ＥＢＶ一次感染又は再活性化に関連する。免疫適格個体では、抗ウイルスＴ細胞応答は、感染を制御するが、ＥＢＶは、メモリーＢ細胞及び他のいくつかの細胞型において潜伏したままである。移植患者では、現行の免疫抑制療法は、抗ＥＢＶ Ｔ細胞応答を弱め、ＥＢＶ誘導Ｂ細胞増殖を制御不能状態にする。ＥＢＶ血清陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ移植患者、特にＥＢＶナイーブ患者は、ＥＢＶ関連移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）を発症するリスクがある。さらに、ＥＢＶ陽性レシピエントは、かかる重篤な障害を発症する増加したリスクをたとえ小さいとしても有する。別のウイルス、ＪＣウイルスは、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）の恐るべき合併症に関与する。ＥＢＶの場合、ＪＣウイルス感染細胞は、抗ウイルス性のＴ細胞制御を受ける。Ｔ細胞機能に影響する現行の免疫抑制剤は、ＥＢ及びＪＣのような潜伏ウイルスの活性化についてのリスクを増加させる。腎移植後の良好な短期結果にもかかわらず、中期結果では、残念ながら、主にシクロスポリンＡ（ＣｓＡ）又はタクロリムス毒性のようなカルシニューリン阻害剤（ＣＮＩ）に起因して患者の３０％が５年目、５０％が１０年目にその腎機能を失う。市場化されている１つのＣＮＩフリーのレジメンは、ベラタセプト（抗ＣＴＬＡ－４ Ｉｇ）とミコフェノール酸との組み合わせ投与である。ベラタセプトは、ＣＤ８０／ＣＤ８６を遮断し、それによりＴ細胞共刺激、したがってＴ細胞活性化を阻害する（Ｌａｒｓｅｎ ２００５，Ｖｉｎｃｅｎｔｉ ２００５）。ベラタセプトの使用は、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）のリスクが増加することから、ＥＢＶ血清陰性移植患者では禁忌である（Ｈａｒｄｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｒｅｎｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｄｉｓｅａｓｅ ２０１６：９ １３９－１５０）。タクロリムスを置換（ＣＮＩフリー）又は還元（ＣＮＩ相乗効果）することで、新しいレジメンは、より優れた安全性特性及びより優れた長期移植片生存とともに標準治療の有効性を提供し得る。したがって、ＥＢＶ又はＪＣＶ感染のようなウイルス感染及び関連疾患を調節、予防又は阻害する、特にＥＢＶ陽性又はＥＢＶナイーブ移植患者におけるＰＴＬＤ又はＪＣウイルス（ＪＣ ｖｉｒｕｓ）によって引き起こされるＰＭＬを発症する可能性を予防又は低減する新規な治療法が緊急に求められている。

【発明の概要】

【0003】

移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）のようなエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）関連障害は、ＥＢＶ一次感染又は再活性化に関連する。免疫適格性個体では、抗ウイルスＴ細胞応答は、感染を制御するが、ＥＢＶは、Ｂ細胞及びいくつかの他の細胞型において潜伏したままである。移植患者であれば、免疫抑制は、抗ＥＢＶ Ｔ細胞応答を弱め、ＥＢＶ誘導Ｂ細胞増殖を制御不能状態にし得る。本発明者らは、ＣＤ４０アンタゴニストが、ＥＢＶ関連障害の、かかる障害を発症するリスクがある対象における予防にとって好適な治療であることを見出した。シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ融合タンパク質（ベラタセプト）及び抗ＣＤ４０ ｍＡｂ（ＣＦＺ５３３／イスカリマブ）を試験するＥＢＶ制御アッセイでは、本発明者らは、意外にも、ＣＤ４０アンタゴニストが、ＣｓＡ及びベラタセプトと対照的に、インビトロでＥＢＶ制御を損なわないことを見出した。したがって、ＣＤ４０アンタゴニスト、特にＣＦＺ５３３／イスカリマブのような抗ＣＤ４０抗体の使用は、リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）のようなＥＢＶ関連移植後障害のリスクを低減する新しい移植方法のための基盤を提供する。本明細書で開示される本発明は、ＥＢＶ血清陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶナイーブ移植患者がＰＴＬＤのようなＥＢＶ関連疾患を発症するリスクを低減するという長年にわたる要求に対する解決策を提供する。

【0004】

本開示の第１の態様によると、ヒトウイルス関連障害を、かかる障害を発症するリスクがある対象において予防する方法であって、ＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法が提供される。

【0005】

本開示の第１の態様の一実施形態では、ウイルスは、ＥＢＶ若しくはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）のようなヒトヘルペスウイルス又はジョンカニンガムウイルス（ＪＣＶ）のようなベータポリオーマウイルスである。

【0006】

本開示の第１の態様によると、ＥＢＶ関連障害を、かかる障害を発症するリスクがある対象において予防する方法であって、ＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法が提供される。

【0007】

本開示の第２の態様は、固形臓器を、それを必要とするＥＢＶ血清陰性患者に移植する方法であって、ＣＤ４０アンタゴニストを対象に投与することを含む方法に関する。

【0008】

第３の態様では、本開示は、対象におけるＥＢＶ感染を制御する方法であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法に関する。

【0009】

一実施形態では、本開示の上記の第１、第２又は第３の態様のいずれかに従う方法は、対象がＥＢＶ関連障害を発症する可能性を低減する方法であって、ＣＤ４０抗体を対象に投与することを含む方法である。

【0010】

別の実施形態では、本開示の上記の第１、第２又は第３の態様のいずれかに従う上記実施形態のいずれかに従う方法は、ＥＢＶ関連障害を発症するリスクがある対象が臓器又は組織移植を受けることになる、方法である。

【0011】

一実施形態では、本開示の第１、第２又は第３の態様の上記実施形態のいずれかに従う方法は、対象が、（ｉ）ＥＢＶ血清陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶナイーブ血清陰性移植患者、又は（ｉｉ）ＥＢＶナイーブドナーから臓器を受けるＥＢＶナイーブ患者、又は（ｉｉｉ）ＥＢＶ血清陽性若しくは血清陰性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ血清陽性患者である、方法である。

【0012】

さらなる実施形態では、本開示の第１、第２又は第３の態様の上記実施形態のいずれかに従う方法は、患者が小児患者である、方法である。別の実施形態では、小児患者は、肝移植患者である。

【0013】

別の実施形態では、本開示の第１、第２又は第３の態様の上記実施形態のいずれかに従う方法は、ＥＢＶ関連疾患を発症するリスクがある対象が免疫抑制されているか又は免疫調節薬を受けている、方法である。

【0014】

一実施形態では、本開示の第１、第２又は第３の態様の上記実施形態のいずれかに従う方法は、ＥＢＶ関連障害が癌又はリンパ増殖性疾患である、方法である。

【0015】

本開示の第１、第２又は第３の態様のさらなる実施形態、例えばそのすべての上記実施形態では、方法は、移植後リンパ増殖性疾患を発症する可能性を低減する。

【0016】

さらなる実施形態では、本開示の第１、第２又は第３の態様、例えばそのすべての上記実施形態に従う方法は、ＥＢＶ血清陽性ドナーからＥＢＶ血清陰性レシピエントへの固形臓器の移植を含む。

【0017】

別の実施形態では、本開示の第１、第２又は第３の態様、例えばそのすべての上記実施形態に従う方法は、ＥＢＶ関連障害を発症するリスクがある対象が臓器又は組織移植を受けることになる、方法である。

【0018】

一実施形態では、本開示の第１、第２又は第３の態様、例えばそのすべての上記実施形態に従う方法は、対象が、ＥＢＶ陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶナイーブ血清陰性移植患者である、方法である。

【0019】

さらなる実施形態では、本開示の第１、第２又は第３の態様、例えばそのすべての上記実施形態に従う方法は、患者が小児患者である、方法である。別の実施形態では、小児患者は、肝移植患者である。

【0020】

別の実施形態では、本開示の第１、第２又は第３の態様、例えばそのすべての上記実施形態に従う方法は、対象が免疫抑制されている、方法である。

【0021】

本開示の第４の態様では、上記態様のいずれか、例えばそのすべての実施形態に従う方法は、ＣＤ４０アンタゴニストが抗体である、方法である。一実施形態では、ＣＤ４０抗体は、例えば、米国特許第８５６８７２５Ｂ２号明細書に記載のＡＳＫＰ１２４０、例えば米国特許第８５９１９００号明細書に記載のＢＩ６５５０６４、例えば米国特許第８６６９３５２号明細書に記載のＦＦＰ１０４又はＭＥＤＩ４９２０である。

【0022】

本開示の上記の第４の態様の一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＤＣＣ活性が抑制された抗体である。

【0023】

別の実施形態では、本開示の第４の態様の上記実施形態のいずれかに従う方法において使用される抗体は、
ａ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｂ．配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｃ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、及び
ｄ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される。

【0024】

一実施形態では、上記態様のいずれか１つ、例えばそのすべての実施形態に従う方法で使用するための抗体は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む抗体からなる群から選択される。

【0025】

本発明の一態様では、上記態様のいずれか１つ、例えばそのすべての実施形態に従う方法において使用される抗体は、ＣＦＺ５３３である。

【0026】

本開示の第５の態様では、上記態様のいずれか１つ、例えばそれらのすべての実施形態に従う方法で使用するための、治療有効量のＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３及び１つ以上の薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物が提供される。

【0027】

本開示の第５の態様の一実施形態では、ＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３を含む医薬組成物の投与経路は、皮下若しくは静脈内又は皮下若しくは静脈内の組み合わせであり、用量は、抗体の血漿又は血清濃度が少なくとも４０μｇ／ｍＬであるように調節され得る。

【0028】

第５の態様に従う別の実施形態、例えばそのすべての実施形態では、ＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３を含む医薬組成物は、ヒト対象の１ｋｇあたり３ｍｇを超える活性成分（ｍｇ／ｋｇ）、例えば１０ｍｇ／ｋｇ以上、１１ｍｇ／ｋｇ以上、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２３ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２６ｍｇ／ｋｇ、２７ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、２９ｍｇ／ｋｇ又は３０ｍｇ／ｋｇであり得る用量で投与される。

【0029】

第５の態様に従う別の実施形態、例えばそのすべての実施形態では、ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物の投与される用量は、ヒト対象の１ｋｇあたり約３ｍｇ～約３０ｍｇの活性成分、例えば静脈内投与時（ＩＶ）で約３ｍｇ～約３０ｍｇの活性成分／ｋｇである。

【0030】

第５の態様のさらなる実施形態、例えばそのすべての実施形態では、ＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３を含む医薬組成物の投与される用量は、ヒト対象の１ｋｇあたり約１０ｍｇの活性成分、例えばＩＶで約１０ｍｇの活性成分／ｋｇである。

【0031】

第５の態様の一実施形態、例えばそのすべての実施形態では、ＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３を含む医薬組成物の投与される用量は、約１５０ｍｇ～約６００ｍｇの活性成分、例えば皮下投与時（ＳＣ）で約１５０ｍｇ～約６００ｍｇである。

【0032】

第５の態様の一実施形態、例えばそのすべての実施形態では、ＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３を含む医薬組成物の投与される用量は、約３００ｍｇ又は約４５０ｍｇの活性成分、例えばＳＣで約３００ｍｇ又は約４５０ｍｇである。

【0033】

第５の態様のさらなる実施形態、例えばそのすべての実施形態では、ＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３は、最初に負荷投与レジメン、続いて維持投与レジメンを通して投与される。

【0034】

第５の態様の一実施形態、例えばそのすべての実施形態は、ＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３を含む医薬組成物の負荷投与が初回用量の１週、２週、３週又は４週ごとの静脈内又は皮下注射からなり、且つ維持投与が２回目用量の毎週又は隔週の皮下注射からなり、初回用量が２回目用量よりも高い、方法に関する。

【0035】

第５の態様の別の実施形態、例えばそのすべての実施形態は、ＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３を含む医薬組成物の初回用量が約３００ｍｇ～約６００ｍｇであり、且つ２回目用量が約３００ｍｇ、約４５０ｍｇ又は約６００ｍｇである、方法に関する。

【0036】

第５の態様の一実施形態、例えばそのすべての実施形態では、ＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３を含む医薬組成物の負荷投与は、初回用量の１又は２の静脈内投与からなり、且つ維持投与は、２回目用量の毎週又は隔週の皮下注射からなる。

【0037】

第５の態様の別の実施形態、例えばそのすべての実施形態では、ＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３を含む医薬組成物の初回用量は、約１０ｍｇ／ｋｇ又は約３０ｍｇ／ｋｇであり、且つ２回目用量は、約３００ｍｇ～約６００ｍｇである。

【0038】

本開示のさらなる第６の態様は、ＥＢＶ関連障害を、かかる障害を発症するリスクがある対象において予防するための薬剤の製造における、抗ＣＤ４０抗体であって、
ａ．第１の負荷投与レジメンで静脈内又は皮下に投与され；及び
ｂ．続いて第２の維持投与レジメンで投与され、維持用量は、負荷用量と異なり、前記抗ＣＤ４０抗体は、
ｉ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメイン及び配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｉｉ．配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される超可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される超可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｉｉｉ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｖ．サイレントＦｃ ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体：及び
ｖｉ．配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される、抗ＣＤ４０抗体を含む液体医薬組成物の使用に関する。

【0039】

第６の態様のさらなる実施形態、例えばそのすべての実施形態は、移植後リンパ増殖性疾患の可能性を低減するための薬剤の製造における、抗ＣＤ４０抗体を含む液体医薬組成物の使用に関する。

【0040】

第６の態様の別の実施形態、例えばそのすべての実施形態は、固形臓器を、それを必要とするＥＢＶ血清陰性患者に移植する方法で使用するための薬剤の製造における、抗ＣＤ４０抗体を含む液体医薬組成物の使用に関する。別の実施形態では、本開示の第６の態様は、ＥＢＶ血清陽性ドナーからの固形臓器をＥＢＶ血清陰性レシピエントに移植する方法で使用するための薬剤の製造における、抗ＣＤ４０抗体の使用に関する。

【0041】

第７の態様では、本開示は、上記態様のいずれか、例えばそのすべての実施形態に従う使用のための抗ＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３に関し、ここで、抗ＣＤ４０抗体治療は、移植後に実施され、抗体は、抗体の血漿又は血清濃度が少なくとも４０μｇ／ｍＬであるように投与される。

【0042】

一実施形態では、本開示は、第７の態様、例えばそのすべての実施形態に従う使用のためのＣＦＺ５３３に関し、ここで、抗体は、ヒト対象の１ｋｇあたり約３ｍｇ～約３０ｍｇの活性成分の用量として投与される。

【0043】

一実施形態では、本開示は、第７の態様、例えばそのすべての実施形態に従う使用のためのＣＦＺ５３３に関し、ここで、抗体の用量は、ヒト対象の１ｋｇあたり約１０ｍｇの活性成分である。

【0044】

別の実施形態では、本開示は、第７の態様、例えばそのすべての実施形態に従う使用のためのＣＦＺ５３３に関し、ここで、抗体は、約１５０ｍｇ～約６００ｍｇの活性成分の用量として投与される。

【0045】

第７の態様の一実施形態では、本開示は、上記態様のいずれか１つ、例えばそのすべての実施形態に従う使用のためのＣＦＺ５３３に関し、ここで、用量は、約３００ｍｇ、約４５０ｍｇ又は約６００ｍｇの活性成分である。代わりに、用量は、３００ｍｇ、４５０ｍｇ又は６００ｍｇの活性成分である。

【0046】

第７のものの一実施形態では、本開示は、上記態様のいずれか１つ、例えばそのすべての実施形態に従う使用のためのＣＦＺ５３３に関し、ここで、抗体は、負荷投与及び維持投与で投与される。

【0047】

第７の態様の一実施形態では、本開示は、上記態様のいずれか１つ、例えばそのすべての実施形態に従う方法で使用するためのＣＦＺ５３３に関し、ここで、負荷投与は、初回用量の１週、２週、３週又は４週ごとの皮下注射（複数）からなり、且つ維持投与は、２回目用量の毎週又は隔週の皮下注射からなり、初回用量は、２回目用量よりも高い。

【0048】

第７の態様の別の実施形態では、本開示は、上記態様のいずれか１つ、例えばそのすべての実施形態に従う方法で使用するためのＣＦＺ５３３に関し、ここで、初回用量は、約３００ｍｇ～約６００ｍｇであり、且つ２回目用量は、約３００ｍｇ、約４５０又は約６００ｍｇである。代わりに、用量は、３００ｍｇ～６００ｍｇであり、且つ２回目用量は、３００ｍｇ、４５０又は６００ｍｇである。

【0049】

加えて、第７の態様の一実施形態では、本開示は、第５及び第６の上記態様のいずれか１つ、例えばそのすべての実施形態に従う方法で使用するためのＣＦＺ５３３に関し、ここで、負荷投与は、初回用量の１、２、３又は４回の静脈内投与（複数）からなり、且つ維持投与は、２回目用量の毎週の皮下注射からなる。

【0050】

第７の態様の別の実施形態では、本開示は、第５及び第６の上記態様のいずれか１つ、例えばそのすべての実施形態に従う方法で使用するためのＣＦＺ５３３に関し、ここで、初回用量は、約１０ｍｇ／ｋｇであり、且つ２回目用量は、約３００ｍｇ、約４５０又は約６００ｍｇの活性成分である。代わりに、初回用量は、１０ｍｇ／ｋｇであり、且つ２回目用量は、３００ｍｇ、４５０又は６００ｍｇの活性成分である。

【0051】

第８の態様では、本開示は、上記態様のいずれか１つ、例えばそのすべての実施形態に従う使用のためのＣＦＺ５３３に関し、ここで、固形臓器移植は、腎移植、肝移植、心臓移植、肺移植、膵移植、腸移植、複合組織移植、骨髄移植又は同種造血幹細胞移植である。

【0052】

本開示の第９の態様によると、ＪＣＶ関連障害を、かかる障害を発症するリスクがある対象において予防する方法であって、ＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法が提供される。

【0053】

本開示の第１０の態様は、固形臓器を、それを必要とするＪＣＶ血清陰性患者に移植する方法であって、ＣＤ４０アンタゴニストを対象に投与することを含む方法に関する。

【0054】

第１１の態様では、本開示は、対象におけるＪＣＶ感染を制御する方法であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法に関する。

【0055】

一実施形態では、本開示の上記の第９、第１０又は第１１の態様のいずれかに従う方法は、対象がＪＣＶ関連障害を発症する可能性を低減する方法であって、ＣＤ４０抗体を対象に投与することを含む方法である。

【0056】

別の実施形態では、上記実施形態９、１０又は１１のいずれかに従う方法は、ＪＣＶ関連障害を発症するリスクがある対象が臓器又は組織移植を受けることになる、方法である。

【0057】

一実施形態では、本開示の第９、第１０又は第１１の態様の上記実施形態のいずれかに従う方法は、対象が、ＪＣＶ陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶナイーブ血清陰性移植患者である、方法である。

【0058】

さらなる実施形態では、本開示の第９、第１０又は第１１の態様の上記実施形態のいずれかに従う方法は、患者が小児患者である、方法である。別の実施形態では、小児患者は、肝移植患者である。

【0059】

別の実施形態では、本開示の第９、第１０又は第１１の態様の上記実施形態のいずれかに従う方法は、ＪＣＶ関連疾患を発症するリスクがある対象が免疫抑制されている、方法である。

【0060】

一実施形態では、本開示の第９、第１０又は第１１の態様の上記実施形態のいずれかに従う方法は、ＪＣＶ関連障害が進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）である、方法である。

【0061】

本開示の第９、第１０又は第１１の態様のさらなる実施形態、例えばそのすべての上記実施形態では、方法は、ＰＭＬを発症する可能性を低減する。

【0062】

さらなる実施形態では、本開示の第９、第１０又は第１１の態様、例えばそのすべての上記実施形態に従う方法は、ＪＣＶ血清陽性ドナーからＪＣＶ血清陰性レシピエントへの固形臓器の移植を含む。

【0063】

別の実施形態では、本開示の第９、第１０又は第１１の態様、例えばそのすべての上記実施形態に従う方法は、ＪＣＶ関連障害を発症するリスクがある対象が臓器又は組織移植を受けることになる、方法である。

【0064】

一実施形態では、本開示の第９、第１０又は第１１の態様、例えばそのすべての上記実施形態に従う方法は、対象が、ＪＣＶ陽性ドナーから臓器を受けるＪＣＶナイーブ血清陰性移植患者である、方法である。

【0065】

さらなる実施形態では、本開示の第９、第１０又は第１１の態様、例えばそのすべての上記実施形態に従う方法は、患者が小児患者である、方法である。別の実施形態では、小児患者は、肝移植患者である。

【0066】

別の実施形態では、本開示の第９、第１０又は第１１の態様、例えばそのすべての上記実施形態に従う方法は、対象が免疫抑制されている、方法である。

【0067】

本開示の第１２の態様では、第９、第１０又は第１１の態様、例えばそのすべての実施形態のいずれかに従う方法は、ＣＤ４０アンタゴニストが本明細書中の上記の抗体である、方法である。

【0068】

別の実施形態では、第１２の態様に従う抗体は、第４の上記態様に記載の抗体の群から選択される。本発明の一態様では、第９、第１０又は第１１の態様のいずれか１つ、例えばそのすべての実施形態に従う方法において使用される抗体は、ＣＦＺ５３３である。

【0069】

本開示の第１３の態様では、第９、第１０又は第１１の態様のいずれか１つ、例えばそのすべての実施形態に従う方法で使用するための、治療有効量のＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３及び１つ以上の薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物が提供される。

【0070】

本開示の第１３の態様の一実施形態では、ＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３を含む医薬組成物の投与経路は、上記のように第５の態様、例えばそのすべての実施形態における皮下若しくは静脈内又は皮下若しくは静脈内の組み合わせである。

【0071】

本開示の第１４の態様は、ＪＣＶ関連障害を、かかる障害を発症するリスクがある対象において予防するための薬剤の製造における、抗ＣＤ４０抗体を含む液体医薬組成物の使用に関し、ここで、抗ＣＤ４０抗体は、上記の本発明の第６の態様に記載の抗体である。

【0072】

第１５の態様では、本開示は、第９～第１４の態様のいずれか、例えばそのすべての実施形態に従う使用のための抗ＣＤ４０抗体、例えばＣＦＺ５３３に関し、ここで、抗ＣＤ４０抗体治療は、移植後に実施され、抗体は、抗体の血漿又は血清濃度が少なくとも４０μｇ／ｍＬであるように投与される。

【図面の簡単な説明】

【0073】

【図1-1】代表的なフローサイトメトリー分析フローサイトメトリーによるＣＤ３^＋Ｔ細胞及びＣＤ１９^＋Ｂ細胞におけるゲーティング方法。細胞は、ＣＤ３及びＣＤ１９抗体で染色され、フローサイトメトリーにより分析された。第１に、前方散乱（ＦＣＳ）／側方散乱（ＳＳＣ）で得られた全細胞がドットプロットにプロットされ、次にＣＤ３^＋Ｔ細胞又はＣＤ１９^＋Ｂ細胞のいずれかでさらにゲーティングされた（紫色の丸）。１名の代表的ドナーから、異なる条件が示される（（第１列：ＰＢＭＣ＋培地－ＥＢＶ（左プロット）、ＰＢＭＣ＋培地＋ＥＢＶ（右プロット）；第２列：ＰＢＭＣ＋０．１μＭ ＣｓＡ＋ＥＢＶ（左プロット）、ＰＢＭＣ＋５０μｇ／ｍＬのベラタセプト＋ＥＢＶ（右プロット）；第３列：ＰＢＭＣ＋５０μｇ／ｍＬのｈＩｇＧ１＋ＥＢＶ（左プロット）、ＰＢＭＣ＋５０μｇ／ｍＬのＣＦＺ５３３＋ＥＢＶ（右プロット））。

【図1-2】（上記の通り。）

【図1-3】（上記の通り。）

【図2】４名の異なるドナーからのＣＤ３^＋Ｔ細胞数：培養１４日後のＰＢＭＣ退行アッセイからのＣＤ３^＋Ｔ細胞数がフローサイトメトリーにより測定された。抗体（μｇ／ｍＬ単位）及びＣｓＡ（μＭ単位）がＥＢＶ上清と組み合わせて投与された（陰性対照＝ＥＢＶを有しない培地を除く）。点線は、「培地＋ＥＢＶ」条件に対して設けられた。データは、平均＋ＳＥＭ（ｎ＝４）で示される。

【図3】４名の異なるドナーからのＣＤ１９^＋Ｂ細胞数：培養１４日後のＰＢＭＣ退行アッセイからのＣＤ１９^＋Ｂ細胞数がフローサイトメトリーにより測定された。抗体（μｇ／ｍＬ単位）及びＣｓＡ（μＭ単位）がＥＢＶ上清と組み合わせて投与された（陰性対照＝ＥＢＶを有しない培地を除く）。点線は、「培地＋ＥＢＶ」条件に対して設けられた。データは、平均＋ＳＥＭ（ｎ＝４）で示される。

【図4】試験開始前に予めシミュレートされた薬物動態特性を示すグラフである。

【図5-1】フローサイトメトリーによるＴ細胞増殖に対するゲーティング方法を示す。細胞は、生存度マーカーを含むＣＤ３、ＣＤ４及びＣＤ８について染色され、Ｔ細胞増殖についてフローサイトメトリーにより分析された。第１列を左から右に：得られた全細胞がＦＣＳ／ＳＳＣドットプロットで示され、全生細胞（生存度マーカー）に対してヒストグラムプロットでゲーティングされる。生細胞からＣＤ３^＋Ｔ細胞が選択され、Ｔ細胞増殖がＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅｒ Ｖｉｏｌｅｔ陽性細胞に対するゲーティングにより同定された。第２列：全生細胞から象限が設けられ、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞が同定され、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅｒ Ｖｉｏｌｅｔの標識について分析された。

【図5-2】（上記の通り。）

【図5-3】（上記の通り。）

【図5-4】（上記の通り。）

【図6】インビトロＥＢＶ－Ｂ細胞／Ｔ細胞共培養モデルを概説する。共培養モデルは、２相：「プライミング」相（７日培養）及び「リコール」相（さらに４日培養）からなる。ＥＢＶ－Ｂ細胞又は一次Ｂ細胞が自己Ｔ細胞と一緒に使用され、４つの異なる濃度（１０、５０、１００及び２００μｇ／ｍＬ又は培地）のＩｇＧ１アイソタイプ、抗ＣＤ４０（ＣＦＺ５３３）又は抗ＣＴＬ－Ａ４抗体（ベラタセプト）のいずれかとともにインキュベートされた。培地又は抗体は、「プライミング」相、「リコール」相又は両方の相（「プライミング及びリコール」）のいずれかで添加された。１１日の共培養後、細胞は、Ｔ細胞増殖に対してフローサイトメトリーにより、またＩＦＮγ産生に対してＥＬＩＳＡにより分析された。

【図7-1】ＣＤ３^＋Ｔ細胞増殖データを、フローサイトメトリーにより測定された、培養１１日後の、ＥＢＶ血清陽性ＥＢＶ Ｂ細胞及び自己Ｔ細胞を使用する、対応する共培養物の対照に対する比として表したものを提示する。抗体（μｇ／ｍＬ）は、「プライミング」相（左側）、「リコール」相（中央部）又は「プライミング及びリコール」相（左側）のいずれかで投与された。点線は、１つ（陰性対照；０μｇ／ｍＬ）に対して設けられた。データは、平均＋ＳＥＭで示される（ｎ＝３～１０）。各カラムの上の数は、試験個体の総数を表す。

【図7-2】（上記の通り。）

【図7-3】（上記の通り。）

【図8-1】ＣＤ４^＋Ｔ細胞増殖データを、フローサイトメトリーにより測定された、培養１１日後の、ＥＢＶ血清陽性ＥＢＶ Ｂ細胞及び自己Ｔ細胞を使用する、対応する共培養物の対照に対する比として表したものを提示する。抗体（μｇ／ｍＬ）は、「プライミング」相（左側）、「リコール」相（中央部）又は「プライミング及びリコール」相（左側）のいずれかで投与された。点線は、１つ（陰性対照；０μｇ／ｍＬ）に対して設けられた。データは、平均＋ＳＥＭで示される（ｎ＝３～１０）。各カラムの上の数は、試験個体の総数を表す。

【図8-2】（上記の通り。）

【図8-3】（上記の通り。）

【図9】ＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖データを、フローサイトメトリーにより測定された、培養１１日後の、ＥＢＶ血清陽性ＥＢＶ Ｂ細胞及び自己Ｔ細胞を使用する、対応する共培養物の対照に対する比として表したものを提示する。抗体（μｇ／ｍＬ）は、「プライミング」相（左側）、「リコール」相（中央部）又は「プライミング及びリコール」相（左側）のいずれかで投与された。点線は、１つ（陰性対照；０μｇ／ｍＬ）に対して設けられた。データは、平均＋ＳＥＭで示される（ｎ＝３～１０）。各カラムの上の数は、試験個体の総数を表す。

【図10】ＣＤ３^＋Ｔ細胞増殖データを、フローサイトメトリーにより測定された、培養１１日後の、ＥＢＶ血清陰性ＥＢＶ Ｂ細胞及び自己Ｔ細胞を使用する、対応する共培養物の対照に対する比として表したものを提示する。抗体（μｇ／ｍＬ）は、「プライミング」相（左側）、「リコール」相（中央部）又は「プライミング及びリコール」相（左側）のいずれかで投与された。点線は、１つ（陰性対照；０μｇ／ｍＬ）に対して設けられた。データは、平均＋ＳＥＭで示される（ｎ＝３～７）。各カラムの上の数は、試験個体の総数を表す。

【図11】ＥＢＶ血清陰性ドナーの細胞から調製された培養物におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞増殖データを提示する。ＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖を分析すると（図１２）、ベラタセプトは、１０及び５０μｇ／ｍＬで「リコール」のみ及び「プライミング及びリコール」条件に限って減少効果を有した一方、１００及び２００μｇ／ｍＬは、媒体対照（０μｇ／ｍＬ）とされた。興味深いことに、ベラタセプトが「プライミング」相に限って添加されたとき、ベラタセプトは、１００及び２００μｇ／ｍＬの用量でＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖を増加させた。ＣＦＺ５３３は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞増殖について認められた、１０μｇ／ｍＬ（「プライミング」のみ及び「プライミング及びリコール」条件）及び５０μｇ／ｍＬ（「リコール」のみの条件）での媒体対照（０μｇ／ｍＬ）と比較してのわずかな有意でない増加を除いて、ＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖に対してそれほど効果を有しなかった。

【図12】ＥＢＶ血清陰性ドナーの細胞から調製された培養物におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖データを提示する。ＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖データを、フローサイトメトリーにより測定された、培養１１日後の、ＥＢＶ血清陰性ＥＢＶ Ｂ細胞及び自己Ｔ細胞を使用する、対応する共培養物の対照に対する比として表したものを提示する。抗体（μｇ／ｍＬ）は、「プライミング」相（左側）、「リコール」相（中央部）又は「プライミング及びリコール」相（左側）のいずれかで投与された。点線は、１つ（陰性対照；０μｇ／ｍＬ）に対して設けられた。データは、平均＋ＳＥＭで示される（ｎ＝３～７）。各カラムの上の数は、試験個体の総数を表す。

【図13】ＥＢＶ血清陽性ドナーの細胞から調製された培養物におけるＩＦＮγサイトカインレベルを提示する。インキュベーション１１日後の、ＥＢＶ血清陽性ＥＢＶ－Ｂ細胞／自己Ｔ細胞共培養上清のＩＦＮγサイトカインレベルは、対応する対照に対する比として表される。抗体は、「プライミング」相（左側）又は「リコール」相（中央部）又は両方の相（「プライミング及びリコール」；左側）のいずれかで投与された。抗体濃度は、μｇ／ｍＬで使用された。点線は、陰性対照（０μｇ／ｍＬ）に対して設けられた。データは、平均＋ＳＥＭで示される（ｎ＝３～９）。各カラムの上の数は、試験個体の総数を表す。

【図14】ＥＢＶ血清陰性ドナーの細胞から調製された培養物におけるＩＦＮγサイトカインレベルを提示する。インキュベーション１１日後の、ＥＢＶ血清陰性ＥＢＶ－Ｂ細胞／自己Ｔ細胞共培養上清のＩＦＮγサイトカインレベルは、対応する対照に対する比として表される。抗体は、「プライミング」相（左側）又は「リコール」相（中央部）又は両方の相（「プライミング及びリコール」；左側）のいずれかで投与された。抗体濃度は、μｇ／ｍＬで使用された。点線は、陰性対照（０μｇ／ｍＬ）に対して設けられた。データは、平均＋ＳＥＭで示される（ｎ＝３～６）。各カラムの上の数は、試験個体の総数を表す。

【図15】フローサイトメトリーにより測定された、培養１４日後のＰＢＭＣ退行アッセイからのＣＤ３^＋Ｔ細胞数を提示する。抗体（μｇ／ｍＬ単位）及びＣｓＡ（μＭ単位）がＥＢＶ上清と組み合わせて投与された（陰性対照＝ＥＢＶを有しない培地を除く）。水平点線は、「培地＋ＥＢＶ」条件に対して設けられた。データは、平均＋ＳＥＭ（ｎ＝４）で示される。

【図16】フローサイトメトリーにより測定された、培養１４日後のＮＫ細胞枯渇ＰＢＭＣ退行アッセイからのＣＤ３^＋Ｔ細胞数を提示する。抗体（μｇ／ｍＬ単位）及びＣｓＡ（μＭ単位）がＥＢＶ上清と組み合わせて投与された（陰性対照＝ＥＢＶを有しない培地を除く）。水平点線は、「培地＋ＥＢＶ」条件に対して設けられた。データは、平均＋ＳＥＭ（ｎ＝４）で示される。

【図17-1】フローサイトメトリーにより測定された、培養１４日後のＰＢＭＣ退行アッセイからのＣＤ１９^＋Ｂ細胞数を提示する。抗体（μｇ／ｍＬ単位）及びＣｓＡ（μＭ単位）がＥＢＶ上清と組み合わせて投与された（陰性対照＝ＥＢＶを有しない培地を除く）。水平点線は、「培地＋ＥＢＶ」条件に対して設けられた。データは、平均＋ＳＥＭ（ｎ＝４）で示され；培養１４日後のＮＫ細胞枯渇ＰＢＭＣ退行アッセイからのＣＤ１９^＋Ｂ細胞数がフローサイトメトリーにより測定される。抗体（μｇ／ｍＬ単位）及びＣｓＡ（μＭ単位）がＥＢＶ上清と組み合わせて投与された（陰性対照＝ＥＢＶを有しない培地を除く）。水平点線は、「培地＋ＥＢＶ」条件に対して設けられた。データは、平均＋ＳＥＭ（ｎ＝４）で示される。

【図17-2】（上記の通り。）

【発明を実施するための形態】

【0074】

一般的定義
本明細書で使用する場合、ＣＤ４０は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５とも呼ばれる表面抗原分類４０を指す。用語ＣＤ４０は、別段の記述がない限り、配列番号１９において定義される通りのヒトＣＤ４０を指す。

【0075】

数値ｘに関する用語「約」は、例えば、＋／－１０％を意味する。数値範囲又は数の列挙の前に使用される場合、用語「約」は、系列内のそれぞれの数に適用される。例えば、表現「約１～５」は、「約１～約５」と解釈されるべきであるか、又は例えば、表現「約１、２、３、４」は、「約１、約２、約３、約４など」と解釈されるべきである。

【0076】

単語「実質的に」は、「完全に」を排除しない。例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まない可能性がある。必要に応じて、単語「実質的に」は、本開示の定義から省くことができる。

【0077】

用語「含む」は、「包含する」並びに「からなる」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、専らＸのみからなる可能性があるか、又は何らかの追加のものが含まれる（例えば、Ｘ＋Ｙ）可能性がある。

【0078】

本明細書で使用される用語「抗体」又は「抗ＣＤ４０抗体」などは、ＣＤ４０と（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布によって）相互作用する抗体全体を指す。天然起源の「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖とを含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｈと略される）及び重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｌと略される）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存される領域に割り込まれた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される高頻度可変性の領域にさらに細分化することができる。各Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配列される３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含めた宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。用語「抗体」には、例えば、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ抗体又はキメラ抗体が含まれる。抗体は、あらゆるアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスのもの、好ましくはＩｇＧ、最も好ましくはＩｇＧ１であり得る。例示的な抗体としては、表１に記述した通り、ＣＦＺ５３３（本明細書ではｍＡｂ１とも称される）及びｍＡｂ２が挙げられる。

【0079】

軽鎖及び重鎖の両方は、構造的及び機能的相同性の領域に分けられる。用語「定常」及び「可変」は、機能に関して使用される。この点に関して、軽（ＶＬ）鎖部分と重（ＶＨ）鎖部分との両方の可変ドメインが抗原認識及び特異性を決定することを理解されたい。逆に、軽鎖（ＣＬ）及び重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２又はＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的性質を与える。慣例により、定常領域ドメインの付番は、抗体の抗原結合部位又はアミノ末端から遠位になるにつれて増加する。Ｎ末端は、可変領域であり、Ｃ末端は、定常領域であり、ＣＨ３及びＣＬドメインは、それぞれ重鎖及び軽鎖のカルボキシ末端を事実上含む。具体的には、用語「抗体」には、特にＩｇＧ－ｓｃＦｖ型が含まれる。

【0080】

さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈは、別の遺伝子によってコードされるが、これらが単一のタンパク質鎖（ここで、Ｖ_Ｌ領域とＶ_Ｈ領域とが対合して、一価の分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５８７９－５８８３を参照されたい）を形成する）として振る舞うことを可能にする合成のリンカーにより、組換え方法を使用してこれらを連結することができる。

【0081】

本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、単一分子組成の抗体分子の調製を指す。用語「ヒト抗体」には、本明細書で使用する場合、そのフレームワークもＣＤＲ領域もヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体が含まれることが意図される。「ヒト抗体」は、ヒト、ヒト組織又はヒト細胞によって産生される必要はない。本開示のヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム又は部位特異的変異誘発により、抗体遺伝子の組換え中のインビボでのジャンクションでのＮ－ヌクレオチド付加により、又はインビボでの体細胞変異により導入される変異）を含むことができる。

【0082】

「Ｆｃ領域」という用語は、本明細書で用いられるとき、抗体の定常ドメインのＣＨ３、ＣＨ２及びヒンジ領域の少なくとも一部を含むポリペプチドを指す。任意選択的に、Ｆｃ領域は、一部の抗体クラス中に存在するＣＨ４ドメインを含み得る。Ｆｃ領域は、抗体の定常ドメインのヒンジ領域全体を含み得る。一実施形態では、本発明の方法において使用される結合分子は、抗体のＦｃ領域及びＣＨ１領域を含む。一実施形態では、本発明の方法において使用される結合分子は、抗体のＦｃ領域ＣＨ３領域を含む。別の実施形態では、本発明の方法において使用される結合分子は、抗体の定常ドメインからのＦｃ領域、ＣＨ１領域及びＣ_{カッパ／ラムダ}領域を含む。一実施形態では、本発明の方法において使用される結合分子は、定常領域、例えば重鎖定常領域を含む。

【0083】

本明細書で使用する場合、用語「ＡＤＣＣ」又は「抗体依存性細胞傷害」活性は、細胞枯渇活性を指す。ＡＤＣＣ活性は、当業者に周知のＡＤＣＣアッセイによって測定することができる。

【0084】

本明細書で使用する場合、用語「サイレント」抗体は、ＡＤＣＣアッセイにおいて測定された場合にＡＤＣＣ活性を呈さないか又は低いＡＤＣＣ活性を呈する抗体を指す。

【0085】

一実施形態では、用語「ＡＤＣＣ活性なし又は低いＡＤＣＣ活性」は、サイレント抗体が、標準のＡＤＣＣアッセイにおいて測定された場合に５０％未満の特異的細胞溶解、例えば１０％未満の特異的細胞溶解であるＡＤＣＣ活性を呈することを意味する。「ＡＤＣＣ活性なし」は、サイレント抗体が、１％未満であるＡＤＣＣ活性（特異的細胞溶解）を呈することを意味する。

【0086】

エフェクター機能の抑制は、抗体のＦｃ領域内の変異によって得ることができ、当技術分野において記載されている：ＬＡＬＡ及びＮ２９７Ａ（Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．ｖｏｌ．２０（６）：６８５－６９１）；並びにＤ２６５Ａ（Ｂａｕｄｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．１８１：６６６４－６９；Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．，上記）。サイレントＦｃ ＩｇＧ１抗体の例は、ＩｇＧ１ Ｆｃアミノ酸配列内のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異を含む、いわゆるＬＡＬＡ変異体を含む。サイレントＩｇＧ１抗体の別の例は、Ｄ２６５Ａ変異を含む。別のサイレントＩｇＧ１抗体は、グリコシル化／非グリコシル化抗体をもたらすＮ２９７Ａ変異を含む。

【0087】

「治療」又は「治療する」という用語は、例えば、本発明に従う抗ＣＤ４０抗体若しくはタンパク質、例えばｍＡｂ１若しくはｍＡｂ２抗体の対象への適用若しくは投与、又は前記抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物の、対象から単離された組織若しくは細胞株への適用若しくは投与として本明細書で定義され、ここで、その目的は、ＥＢＶ感染を制御すること又はＥＢＶ感染を予防することである。

【0088】

「治療」は、例えば、ｍＡｂ１若しくはｍＡｂ２抗体を含む医薬組成物の対象への適用若しくは投与、又は前記抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物の、対象から単離された組織若しくは細胞株への適用若しくは投与も意図され、ここで、対象は、ＥＢＶ関連疾患を発症するリスクがある。

【0089】

本明細書で用いられるとき、対象は、かかる対象がかかる治療から生物学的に、医学的に又は生活の質において恩恵を受ける場合、治療「を必要とする」。「対象」という用語は、本明細書で用いられるとき、哺乳動物、例えば霊長類、好ましくは高級霊長類、例えばヒト（例えば、移植患者のような、本明細書に記載の障害を有するか又は有するリスクがある患者）であり得る。

【0090】

本明細書で用いられるとき、対象化合物の「投与」又は「投与すること」という用語は、ＣＤ４０アンタゴニスト、例えばＣＦＺ５３３を、治療を必要とする対象に提供することを意味する。１つ以上のさらなる治療薬「と組み合わせた」投与は、任意の順序における且つ任意の投与経路での同時（併用）及び連続投与を含む。

【0091】

本明細書で用いられるとき、「治療有効量」は、ＥＢＶ感染を制御すること又はＥＢＶ感染を予防することを目的とする、患者（ヒトなど）への単回又は複数回用量投与時に有効である、ＣＤ４０アンタゴニスト、例えば抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片、例えばｍＡｂ１の量を指す。

【0092】

単独投与される個別の活性成分（例えば、抗ＣＤ４０抗体、例えばｍＡｂ１）に適用されるとき、この用語は、その成分単独を指す。組み合わせに適用されるとき、この用語は、組み合わせ投与、連続投与又は同時投与にかかわらず、治療効果をもたらす活性成分の組み合わせ量を指す。

【0093】

「治療レジメン」という語句は、疾病を治療するか又は病状若しくは疾患の発症を予防するために使用されるレジメン、例えばＥＢＶ負荷又はＥＢＶ関連疾患の発症を低減するための、ＥＢＶ感染の予防中に使用される投与を意味する。治療レジメンは、誘導レジメン、負荷レジメン及び維持レジメンを含み得る。

【0094】

「負荷レジメン」又は「負荷期間」という語句は、疾患の初期治療に使用される治療レジメン（又は治療レジメンの一部）を指す。いくつかの実施形態では、開示される方法、使用、キット、プロセス及びレジメン（例えば、固形臓器移植における移植片喪失を予防する方法）では、負荷レジメンが用いられる。いくつかの場合、負荷期間は、最大有効性の達成に至る期間である。負荷レジメンの一般的目標は、治療レジメンの初期期間中に高レベルの薬剤を患者に提供することである。誘導レジメンでは、（部分的又は全体的に）「負荷レジメン」又は「負荷投与」が用いられ得、誘導レジメンは、医師が維持レジメン中に用いる場合よりも高い用量の薬剤を投与すること、医師が維持レジメン中に薬剤を投与する場合よりも頻繁に薬剤を投与すること又は両方を含み得る。用量漸増は、誘導レジメン中又は後に実施され得る。

【0095】

表現「維持レジメン」又は「維持期間」は、病気の治療中の患者の維持のため、例えば患者を誘導期間後に長期間（数か月又は数年）、寛解状態に維持するために使用される治療レジメン（又は治療レジメンの一部）を指す。いくつかの実施形態では、開示した方法、使用及びレジメンは、維持レジメンを用いる。維持レジメンは、継続療法（例えば、一定の間隔で、例えば毎週、毎月［４週おき］、毎年などで薬物を投与すること）又は間欠療法（例えば、断続的治療、間欠治療、再発時の治療又は特定のあらかじめ定められた基準の到達［例えば、疼痛、疾患顕在化など］時の治療）を用いることができる。用量漸増は、維持レジメン中に行うことができる。

【0096】

表現「投与するための手段」は、限定はされないが、プレフィルドシリンジ、バイアル及びシリンジ、ペン型注射器、自己注射器、点滴静注バッグ、ポンプ、パッチ式ポンプなどを含めた、患者に薬物を全身的に投与するためのあらゆる利用可能な道具を示すために使用される。こうしたものを用いて、患者が薬物を自己投与する（すなわち薬物を自分自身のために投与する）ことができるか、又は医師が薬物を投与することができる。

【0097】

エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）は、ヒトヘルペスウイルス４（ｈｕｍａｎ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ４）（ＨＨＶ４）であり、ガンマヘルペスウイルスのサブファミリー中のリンホクリプトウイルス属（Ｌｙｍｐｈｏｃｒｙｐｔｏｖｉｒｕｓ）に属する。これらのウイルスは、それらの宿主細胞の潜伏感染を樹立し、潜伏感染細胞の増殖を誘導する（Ｒｏｉｚｍａｎ Ｂ．Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ：ｇｅｎｅｒａｌ ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，ｔａｘｏｎｏｍｙ ａｎｄ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｉｎ：Ｒｏｉｚｍａｎ Ｂ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｔｈｅ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｅｓ．Ｌｏｎｄｏｎ：Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９９６：１＿／２３．でレビュー）。ＥＢＶは、急性及び慢性炎症性疾患からリンパ系及び上皮悪性腫瘍に及ぶ、さらに拡大する臨床的障害のスペクトルに関連する。エプスタイン・バーウイルスは、Ｔ細胞、Ｂ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のようなリンパ系細胞の異なるタイプがエプスタイン・バーウイルスに感染される疾患タイプのリンパ増殖性疾患に関連する。感染細胞は、過剰に分裂し、様々なリンパ増殖性障害（ＬＰＤ、非癌性、前癌性及び癌性）を発症する。これらのＬＰＤは、感染性単核球症、したがってその後、発症することがある障害を含む。ＥＢＶ関連疾患を除く非ＬＰＤは、悪性腫瘍、肉腫、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、鼻咽頭癌、胃癌、平滑筋肉腫及び「不思議の国のアリス症候群」を含む（Ｍｉｄｄｅｌｄｏｒｐ ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ／Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ４５（２００３）１－／３６ ２００３）。

【0098】

本発明は、ＣＤ４０アンタゴニストが、ＣｓＡ及びベラタセプトと対照的に、インビトロでＥＢＶ制御を損なわないという驚くべき知見に基づく。ＣＤ４０アンタゴニストは、現在、移植臓器拒絶の阻害及び自己免疫疾患の治療のために臨床開発中である。したがって、免疫抑制性ＣＤ４０アンタゴニストがＥＢＶ制御を損なわないという驚くべき知見は、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）のようなＥＢＶ関連疾患を発症するリスクがある患者における、臓器移植についての方法のような治療方法の開発における前提条件及び基盤である。したがって、本開示は、ＥＢＶ関連障害を予防する方法及び対象、特にかかる障害を発症するリスクがある対象におけるＥＢＶ負荷を制御する方法であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法に関する。

【0099】

「ＥＢＶ制御」又は「ＥＢＶ感染を制御する」という用語は、本明細書で用いられるとき、治療有効量の本明細書で開示されるようなＣＤ４０アンタゴニスト（例えば、ＣＦＺ５３３）による、対象の治療、特に患者、より特徴的には免疫抑制を必要とする患者、さらにより特徴的には臓器又は組織移植を受ける患者の治療の転帰を指し、ここで、ＥＢＶ制御は、以下の基準：（ｉ）患者におけるＥＢＶ潜伏０状態（Ｒｕｆ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ＆Ｖｏｌｕｍｅ ９７，Ｎｕｍｂｅｒ ９，Ｍａｙ １５，２０１４）、（ｉｉ）ＥＢＶ潜伏Ｉ状態、又は（ｉｉｉ）活性ＥＢＶ感染の血清学的証拠がない（例えば、特異抗体を使用し、ＥＢＶ抗体又は発現されたＥＢＶタンパク質が検出されない）ことのいずれかが満たされる場合に達成される。好ましい実施形態では、上に列挙されたＥＢＶ制御基準（ｉ）、（ｉｉ）及び／又は（ｉｉｉ）／潜伏状態は、移植が実施されてから少なくとも６か月の期間、又は少なくとも９か月の期間、又は少なくとも１２か月の期間、又は少なくとも１５か月の期間、又は少なくとも１８か月の期間、又は少なくとも２１か月の期間、又は少なくとも２４か月の期間、又は少なくとも３年の期間、又は少なくとも４年の期間、又は少なくとも５年の期間、又は少なくとも６年の期間、又は少なくとも７年の期間、又は少なくとも８年の期間又はそれを超えて維持される。

【0100】

ＥＢＶ制御又はＥＢＶ感染を制御するという用語は、治療対象の全血中のＥＢＶ負荷がＥＢＶゲノムの５０００コピー／μｇ ＤＮＡ未満、又は４５００コピー／μｇ ＤＮＡ未満、又は４０００コピー／μｇ ＤＮＡ未満、又は３５００コピー／μｇ ＤＮＡ未満、又は３０００コピー／μｇ ＤＮＡ未満、又は２５００コピー／μｇ ＤＮＡ未満、又は２０００コピー／μｇ ＤＮＡ未満、又は１５００コピー／μｇ ＤＮＡ未満、又は１０００コピー／μｇ ＤＮＡ未満である、上記治療の転帰も指す。好ましい実施形態では、全血中の上記ＥＢＶ負荷は、移植が実施されてから少なくとも６か月の期間、又は少なくとも９か月の期間、又は少なくとも１２か月の期間、又は少なくとも１５か月の期間、又は少なくとも１８か月の期間、又は少なくとも２１か月の期間、又は少なくとも２４か月の期間、又は少なくとも３年の期間、又は少なくとも４年の期間、又は少なくとも５年の期間、又は少なくとも６年の期間、又は少なくとも７年の期間、又は少なくとも８年の期間又はそれを超えて維持される。

【0101】

ＥＢＶ制御又はＥＢＶ感染を制御するという用語は、血漿中のＥＢＶ負荷が３０００コピー／１００μｌ未満、又は２５００コピー／１００μｌ未満、又は２０００コピー／１００μｌ未満、又は１５００コピー／１００μｌ未満、又は１０００コピー／１００μｌ未満である、上記治療の転帰も指す。好ましい実施形態では、血漿中の上記ＥＢＶ負荷は、移植が実施されてから少なくとも６か月の期間、又は少なくとも９か月の期間、又は少なくとも１２か月の期間、又は少なくとも１５か月の期間、又は少なくとも１８か月の期間、又は少なくとも２１か月の期間、又は少なくとも２４か月の期間、又は少なくとも３年の期間、又は少なくとも４年の期間、又は少なくとも５年の期間、又は少なくとも６年の期間、又は少なくとも７年の期間、又は少なくとも８年の期間又はそれを超えて維持される。

【0102】

さらに、ＥＢＶ制御又はＥＢＶ感染を制御するという用語は、本明細書で用いられるとき、対象の治療の転帰も指し、特に、対象は、患者、より特徴的には免疫抑制を必要とする患者、さらにより特徴的には治療有効量の本明細書で開示されるようなＣＤ４０アンタゴニスト（例えば、ＣＦＺ５３３）とともに臓器又は組織移植を受ける患者であり、ここで、転帰は、免疫抑制を必要とする患者、より特徴的には臓器又は組織移植を受けたが、本明細書で開示される方法に従って治療されていない患者と比較して減少したＥＢＶ力価、又はＥＢＶ負荷、又はＥＢＶ感染状態であり、ＥＢＶ負荷（例えば、ＥＢＶ ＤＮＡ負荷）は、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は９０％超低減される。好ましい実施形態では、減少したＥＢＶ負荷は、移植が実施されてから少なくとも６か月の期間、又は少なくとも９か月の期間、又は少なくとも１２か月の期間、又は少なくとも１５か月の期間、又は少なくとも１８か月の期間、又は少なくとも２１か月の期間、又は少なくとも２４か月の期間、又は少なくとも３年の期間、又は少なくとも４年の期間、又は少なくとも５年の期間、又は少なくとも６年の期間、又は少なくとも７年の期間、又は少なくとも８年の期間又はそれを超えて維持される。

【0103】

「予防する」又は「予防すること」という用語は、一般に予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）又は予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）治療を指し；それに関連する疾患、障害及び／又は症状の発症を遅延させること又は発症を予防することに関与する。「ＥＢＶ関連疾患を予防する」という用語は、本明細書で用いられるとき、対象の治療の転帰を指し、特に、対象は、患者、より特徴的には免疫抑制を必要とする患者、さらにより特徴的には治療有効量の本明細書で開示されるようなＣＤ４０アンタゴニスト（例えば、ＣＦＺ５３３）とともに臓器又は組織移植を受ける患者であり、ここで、患者は、ＥＢＶ関連疾患を発症せず、特に、患者は、リンパ増殖性障害（ＬＰＤ、非癌性、前癌性及び癌性、例えば感染性単核球症、したがってその後、発症することがある障害又はＥＢＶ関連疾患を除く非ＬＰＤ、例えば悪性腫瘍、肉腫、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、移植後リンパ増殖性疾患及び「不思議の国のアリス症候群」を発症しない。「ＥＢＶ関連疾患を予防する」という用語は、上記のような対象の治療の転帰も指し、ここで、臓器又は組織移植後の患者は、本明細書に記載のようなＥＢＶ関連疾患を少なくとも１２か月の期間、又は少なくとも１８か月の期間、又は少なくとも２４か月の期間、又は少なくとも３年の期間、又は少なくとも４年の期間、又は少なくとも５年の期間又は少なくとも６年の期間、又は少なくとも７年の期間、又は少なくとも８年の期間又はそれを超えて発症しない。「ＥＢＶ関連疾患を予防する」という用語は、臓器移植後の患者が移植後リンパ増殖性疾患を少なくとも１２か月の期間、又は少なくとも１８か月の期間、又は少なくとも２４か月の期間、又は少なくとも３年の期間、又は少なくとも４年の期間、又は少なくとも５年の期間又は少なくとも６年の期間、又は少なくとも７年の期間、又は少なくとも８年の期間又はそれを超えて発症しない状況も指す。

【0104】

ＥＢＶ関連疾患の予防の効果を、従来技術のアッセイ及び技術を用いて、医師及び他の当業者によって実施される標準的な通常の健康診断により評価することで、ＥＢＶ関連疾患を診断及び監視することが可能である。当業者は、上記目的に適用可能な各々の従来技術の診断技術を理解している。ＥＢＶウイルス負荷測定は、ＰＴＬＤが高リスクである移植レシピエントを監視するための通常の検査になっている。ＰＴＬＤ患者は、ほぼ常に全血中及び血漿中に高レベルのＥＢＶ ＤＮＡを有する（Ｇｕｌｌｅｙ Ｍ．Ｌ．，Ｔａｎｓ Ｗ．，ＣＬＩＮＩＣＡＬＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ ＲＥＶＩＥＷＳ，Ａｐｒ．２０１０，ｐ．３５０－３６６；Ｗａｇｎｅｒ，Ｈ．Ｊ ｅｔ ａｌ．，２００１．Ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｔ ｒｉｓｋ ｆｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｐｏｓｔｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ：ｐｌａｓｍａ ｖｅｒｓｕｓ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌ ｆｏｒ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒａｌ ｌｏａｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ７２：１０１２－１０１９）。実際に、高い循環ＥＢＶレベルは、治療中に監視可能な腫瘍量の尺度として役立つ（Ｇｒｅｅｎ，Ｍ．２００１．Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｏｒｇａｎ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１：１０３－１０８；Ｔｓａｉ，Ｄ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，２００８．ＥＢＶ ＰＣＲ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ｐｏｓｔｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ：ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ ｔｗｏ－ａｒｍ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｔｒｉａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．８：１０１６－１０２４）。徴候及び症状の発症前でも、高いＥＢＶレベルは、切迫しているＰＴＬＤの前兆として役立ち、したがって予防的介入により疾病を予防し、疾患進行を停止させることが可能である。

【0105】

ＥＢＶ力価、ＥＢＶ負荷又はＥＢＶ感染状態は、例えば、ＥＢＶ ＤＮＡ負荷を測定することにより分析可能であり、ここで、ＥＢＶ ＤＮＡの定量化は、全血、血漿及び／又はＢ細胞において分析可能である（Ｒｕｆ ｅｔ．ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ＆Ｖｏｌｕｍｅ ９７，Ｎｕｍｂｅｒ ９，Ｍａｙ １５，２０１４）。当業者は、患者におけるＥＢＶ負荷及び感染状態を分析するための技術を理解している。ＥＢＶ ＤＮＡ負荷は、ＥＢＶ遺伝子ＬＭＰ２、ＬＭＰ１、ＥＢＮＡ２及び／又はＢＺＬＦ１の発現を分析することにより評価可能である。ＬＭＰ２の発現分析は、Ｂ細胞又は全血におけるウイルス負荷とＬＭＰ２との間に最も強い相関が認められたために好ましい（Ｒｕｆ ｅｔ．ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ＆Ｖｏｌｕｍｅ ９７，Ｎｕｍｂｅｒ ９，Ｍａｙ １５，２０１４）。

【0106】

この２０年にわたり、いくつかの試験では、移植患者におけるＥＢＶ遺伝子発現が分析された（Ｑｕ Ｌ，Ｒｏｗｅ ＤＴ．Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｌａｔｅｎｔ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ １９９２；６６：３７１５．９；Ｑｕ Ｌ，Ｇｒｅｅｎ Ｍ，Ｗｅｂｂｅｒ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｖｉｒｕｓ ｌｏａｄｓ．Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ２０００；１８２：１０１３．；Ｇｏｔｏｈ Ｋ，Ｉｔｏ Ｙ，Ｏｈｔａ Ｒ，ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｎｄｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｎａｌｙｓｅｓｉｎｐｅｄｉａｔｒｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃｈｒｏｎｉｃ ｈｉｇｈ Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｌｏａｄｓ．Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ２０１０；２０２：４６１．；Ｋａｓｚｔｅｌｅｗｉｃｚ Ｂ，Ｊａｎｋｏｗｓｋａ Ｉ，Ｐａｗｌｏｗｓｋａ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ．Ｊ Ｍｅｄ Ｖｉｒｏｌ ２０１１；８３：２１８２．）。

【0107】

一実施形態では、本開示は、対象における移植後リンパ増殖性疾患を予防する方法であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニスト（例えば、ＣＦＺ５３３のようなＣＤ４０抗体）を前記対象に投与することを含む方法に関し、ここで、対象は、臓器移植を受けており、前記患者は、移植後リンパ増殖性疾患を少なくとも１２か月の期間、又は少なくとも１８か月の期間、又は少なくとも２４か月の期間、又は少なくとも３年の期間、又は少なくとも４年の期間、又は少なくとも５年の期間又は少なくとも６年の期間、又は少なくとも７年の期間、又は少なくとも８年の期間又はそれを超えて発症しない。

【0108】

別の実施形態では、本開示は、対象における移植後リンパ増殖性疾患を予防する方法であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニスト（例えば、ＣＦＺ５３３のようなＣＤ４０抗体）を前記対象に投与することを含む方法に関し、ここで、対象は、腎移植、肝移植、心臓移植、肺移植、膵移植、腸移植、骨髄移植又は同種造血幹細胞移植を受けており、前記患者は、移植後リンパ増殖性疾患を少なくとも１２か月の期間、又は少なくとも１８か月の期間、又は少なくとも２４か月の期間、又は少なくとも３年の期間、又は少なくとも４年の期間、又は少なくとも５年の期間又は少なくとも６年の期間、又は少なくとも７年の期間、又は少なくとも８年の期間又はそれを超えて発症しない。

【0109】

本開示は、対象がＥＢＶ関連障害を発症する可能性を低減する方法であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを対象に投与することを含む方法にさらに関する。「可能性を低減する」という用語は、ＥＢＶ関連障害の発症との関連で本明細書において用いられるとき、対象の治療の転帰を指し、特に、対象は、患者、より特徴的には免疫抑制を必要とする患者、さらにより特徴的には治療有効量の本明細書で開示されるようなＣＤ４０アンタゴニスト（例えば、ＣＦＺ５３３のようなＣＤ４０抗体）とともに臓器又は組織移植を受ける患者であり、ここで、患者は、ＥＢＶ関連障害を発症する低下したリスクを有し、低下したリスクは、免疫抑制を必要とする患者、より特徴的には臓器又は組織移植を受けたが、本明細書で開示される方法に従って治療されていない患者と比較して減少したＥＢＶ力価、又はＥＢＶ負荷、又はＥＢＶ感染状態を特徴とし、（例えば、ＥＢＶ力価、又はＥＢＶ負荷、又はＥＢＶ感染状態のＥＢＶ ＤＮＡ負荷に基づく）ＥＢＶ力価、又はＥＢＶ負荷、又はＥＢＶ感染状態は、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は９０％超減少する。好ましい実施形態では、上記の減少したＥＢＶ負荷は、移植が実施されてから少なくとも６か月の期間、又は少なくとも９か月の期間、又は少なくとも１２か月の期間、又は少なくとも１５か月の期間、又は少なくとも１８か月の期間、又は少なくとも２１か月の期間、又は少なくとも２４か月の期間、又は少なくとも３年の期間、又は少なくとも４年の期間、又は少なくとも５年の期間、又は少なくとも６年の期間、又は少なくとも７年の期間、又は少なくとも８年の期間又はそれを超えて維持される。

【0110】

本明細書で開示される方法に従って治療されている患者を、同じ治療を受けていない患者と比較し、ＥＢＶ関連障害を発症するリスクの低下を評価するため、当業者は、ＥＢＶ関連障害を発症する移植患者に対して、本明細書で開示される方法に従う治療の転帰を利用可能な臨床統計学と比較することに何らの問題も有しないであろう。前記臨床統計学は、個別のＥＢＶ関連疾患の発生率を、より大きい集団における移植後リンパ増殖性疾患を予防するように概説する。前記疾患の平均発生率及びタイムリーな発症は、本明細書で開示される治療方法の転帰と比較され得る。

【0111】

上記方法は、特に臓器又は組織移植を受けることになる対象に適する。好ましい実施形態では、臓器又は組織移植は、固形臓器の移植である。一実施形態では、固形臓器は、腎臓である。別の実施形態では、固形臓器は、肝臓である。さらなる実施形態では、固形臓器は、心臓、肺、膵臓又は腸である。好ましい組織移植は、複合組織移植である。

【0112】

ＥＢＶ血清陽性ドナーから臓器を受けているＥＢＶ血清陰性の腎移植患者は、高リスク患者と考えられ、グローバルアウトカムガイドライン（Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ Ｇｌｏｂａｌ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ（ＫＤＩＧＯ）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｗｏｒｋ Ｇｒｏｕｐ．ＫＤＩＧＯ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｒｅ ｏｆ ｋｉｄｎｅｙ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ．Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２００９；９（Ｓｕｐｐｌ３）：Ｓ１－Ｓ１５５）は、増加するＥＢＶウイルス負荷を有するＥＢＶ血清陰性患者において免疫抑制薬を低減することを推奨している。したがって、本明細書で開示される方法は、特にＥＢＶナイーブである患者に適し、ここで、固形臓器ドナーは、ＥＢＶ血清陽性である。ＥＢＶ陰性、ＥＢＶナイーブ及びＥＢＶ血清陰性という用語は、本明細書で互換可能に用いられる。

【0113】

免疫抑制又は免疫抑制されているとは、計画的に誘導された免疫系の低下を指す。免疫抑制は、移植患者における臓器拒絶反応を低減するために実施される。免疫抑制剤は、免疫介在性疾患及び移植の治療において広範に使用される。当業者は、利用可能な方法及び技術を十分に理解している（Ｗｉｓｅｍａｎ Ａ．，Ｃｌｉｎ Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ １１：３３２－３４３．Ｆｅｂ，２０１６）。意図されない結果は、移植患者におけるＥＢＶ感染を抑制できず、ＥＢＶ関連疾患の発症をもたらすことである。したがって、本明細書で開示される方法は、特に免疫抑制剤を受けている患者に適し、当業者にとって周知である。

【0114】

ＰＴＬＤの発生率は、腎移植を有する成人において１％であり、認められたより高いＥＢＶ血清陰性状態を有する小児患者においてより高い（それぞれ４９％対８％（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ Ｔ，Ｚｗｉｃｋ ＤＬ，Ｒｏｔｈｂｅｒｇ ＰＧ，Ｗａｒａｄｙ ＢＡ．Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ ｉｎ ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｒｅｎａｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｐｅｄｉａｔｒ Ｎｅｐｈｒｏｌ．１９９９；１３：７４８－５４）。したがって、本明細書で開示される方法は、特に小児患者に適する。

【0115】

抗ＣＤ４０抗体
ＣＤ４０は、Ｂ細胞及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば単球、マクロファージ及び樹状細胞（ＤＣ）で構成的に発現される膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ４０は、血小板でも発現され、特定の条件下において、好酸球及び活性化された実質細胞で発現され得る。Ｂ細胞上のＣＤ４０のライゲーションは、下流シグナル伝達をもたらし、増強されたＢ細胞生存及び重要なエフェクター機能、例えばクローン増殖、サイトカイン分泌、分化、胚中心形成、メモリーＢ細胞の発生、親和性成熟、免疫グロブリン（Ｉｇ）アイソタイプスイッチング、抗体産生及び抗原提示の延長をもたらす。さらに、抗原提示細胞（ＡＰＣ）のＣＤ１５４媒介性活性化は、サイトカイン分泌の誘導並びにＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞及びＣＤ８^＋Ｔ細胞のクロスプライミング及び活性化の調節に関与するＣＤ６９、ＣＤ５４、ＣＤ８０及びＣＤ８６を含む表面活性化分子の発現をもたらす。

【0116】

ＣＤ１５４は、２つの形態、膜結合型及び可溶型で存在する。膜結合型ＣＤ１５４は、活性化されたＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋及びＴリンパ球、マスト細胞、単球、好塩基球、好酸球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、活性化された血小板で発現される膜貫通糖タンパク質であり、Ｂ細胞上で報告されている。それは、血管内皮細胞でも低レベルで発現され、局所炎症中に上方制御されることがある。可溶性ＣＤ１５４（ｓＣＤ１５４）は、膜結合型ＣＤ１５４のタンパク質加水分解後に形成され、細胞活性化後にリンパ球及び血小板から放出される。放出されると、ｓＣＤ１５４は、機能性を維持し、ＣＤ４０受容体に結合するその能力を保持する。

【0117】

インビボでのＣＤ４０／ＣＤ１５４相互作用の決定的役割は、最適には、ＣＤ４０又はそのリガンドにおける機能欠失突然変異の結果として高免疫グロブリンＭ（ＨＩＧＭ）に罹患している患者により例示される。ＨＩＧＭを有する患者は、Ｔ細胞依存性抗体応答の重度の障害、メモリーＢ細胞の欠如及び皆無又はそれに近い循環ＩｇＧ、ＩｇＡ又はＩｇＥを呈する。ＣＤ４０シグナル伝達における突然変異を有する患者では、類似表現型及び疾患提示について記載がなされている（ｖａｎ Ｋｏｏｔｅｎ ａｎｄ Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ ２０００）。

【0118】

本開示の一実施形態では、（本明細書で開示される異なる態様、例えばそのすべての実施形態において記載される）本明細書で開示される方法において使用されるＣＤ４０アンタゴニストは、ＣＤ４０抗体である。特に好ましい実施形態では、ＣＤ４０抗体は、ＡＤＣＣ活性が抑制された抗体である。

【0119】

ＡＤＣＣ活性が抑制された抗ＣＤ４０ ｍＡｂは、特許米国特許第８８２８３９６号明細書及び米国特許第９２２１９１３号明細書（それらの全体が参照により本明細書に援用される）で開示されている。ＡＤＣＣ活性が抑制された抗ＣＤ４０ ｍＡｂは、他の抗ＣＤ４０抗体と比較して改善された安全性特性を有することが予測される。ＣＤ４０抗体は、固形臓器移植における移植片拒絶の予防、特に腎移植又は肝移植における移植片拒絶の予防に適することが知られている。本明細書で開示される抗ＣＤ４０抗体は、固形臓器移植における移植片拒絶の予防、特に腎移植、肝移植、心臓移植、肺移植、膵移植、腸移植又は複合組織移植における移植片拒絶の予防に適し、同時に本明細書で開示される方法において使用されることに適する。

【0120】

本発明者らの拘束力のない仮説によると、特許米国特許第８８２８３９６号明細書及び米国特許第９２２１９１３号明細書からの、ｍＡｂ１及びｍＡｂ２と名付けられた２つのｍＡｂは、本明細書で開示される、ＥＢＶ関連障害を予防する方法又はＥＢＶ負荷を制御する方法において使用されることに適する。ＣＦＺ５３３とも称される抗体ｍＡｂ１が特に好ましい。

【0121】

当業者が本発明を実施することを可能にするために、ｍＡｂ１及びｍＡｂ２のアミノ酸及びヌクレオチド配列が以下の表１に提示される。

【0122】

本明細書に記載される方法に応じて使用可能である、当技術分野で公知の別の抗ＣＤ４０ ｍＡｂは、例えば、参照により本明細書に援用される米国特許第８５６８７２５Ｂ２号明細書に記載されている、Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ／Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｉｒｉｎ Ｃｏ製のＡＳＫＰ１２４０である。

【0123】

当技術分野で公知のさらに別の抗ＣＤ４０ ｍＡｂは、例えば、参照により本明細書に援用される米国特許第８５９１９００号明細書に記載されている、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ製のＢＩ６５５０６４である。

【0124】

当技術分野で公知のさらなる抗ＣＤ４０ ｍＡｂは、例えば、参照により本明細書に援用される米国特許第８６６９３５２号明細書に記載されている、Ｆａｓｔ Ｆｏｒｗａｒｄ ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによるＦＦＰ１０４である。

【0125】

上記抗体と同じ作用様式を有する抗体、いわゆるバイオシミラーも、当業者によって理解される通り本開示により包含される。

【0126】

【表1】

【0127】

【表2】

【0128】

【表3】

【0129】

【表4】

【0130】

【表5】

【0131】

【表6】

【0132】

一実施形態では、開示される方法で使用するために提供される抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメイン及び配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインを含む。

【0133】

一実施形態では、開示される方法で使用するために提供される抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む。

【0134】

一実施形態では、開示される方法で使用するために提供される抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む。

【0135】

一実施形態では、開示される方法で使用するために提供される抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む。

【0136】

一実施形態では、開示される方法で使用するための上記の抗ＣＤ４０抗体は、サイレントＦｃ ＩｇＧ１領域を含む。

【0137】

好ましい実施形態では、ｍＡｂ１と称される抗ＣＤ４０抗体が、開示される方法で使用するために提供される。具体的には、ｍＡｂ１は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列を含み、且つｍＡｂ２は、配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む。

【0138】

ＣＦＺ５３３／イスカリマブは、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）誘導ＣＤ４０シグナル伝達を遮断し、且つ抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を媒介する能力がない完全ヒトモノクローナルＦｃサイレント、非枯渇性抗ＣＤ４０抗体（ＩｇＧ１／κ）である。現在、ＣＦＺ５３３／イスカリマブは、移植臓器拒絶の阻害及び自己免疫疾患の治療のために臨床開発中である。

【0139】

さらなる実施形態では、本開示は、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３又はｍＡｂ２をＣｓＡ、（Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）と組み合わせて使用する、ＥＢＶ関連障害を予防する方法又はＥＢＶ負荷を制御する方法を提供する。

【0140】

別のさらなる実施形態では、本開示は、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３又はｍＡｂ２をタクロリムス（Ｔａｃ、ＦＫ５０６、Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標）、Ａｓｔｅｌｌａｓ）と組み合わせて使用する、ＥＢＶ関連障害を予防する方法又はＥＢＶ負荷を制御する方法を提供する。

【0141】

さらなる実施形態では、本開示は、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３又はｍＡｂ２をエベロリムス（Ｚｏｒｔｒｅｓｓ（登録商標）、Ｃｅｒｔｉｃａｎ（登録商標）、ＮｏｖａｒｔｉｓなどのｍＴｏｒ阻害剤と組み合わせて使用する、ＥＢＶ関連障害を予防する方法又はＥＢＶ負荷を制御する方法を提供する。

【0142】

１．発現系
軽鎖及び重鎖の発現のために、重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクターを標準の技術によって宿主細胞に遺伝子導入させる。様々な形式の用語「遺伝子導入」は、外来性ＤＮＡの原核生物又は真核生物宿主細胞への導入のために一般に使用される非常に様々な技術、例えば電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラン遺伝子導入などを包含することが意図される。本発明の方法で使用される抗体を原核生物宿主細胞又は真核生物宿主細胞のいずれかにおいて発現させることは、理論的に可能である。真核細胞、例えば哺乳類宿主細胞、酵母又は糸状菌における抗体の発現が論じられている。なぜなら、こうした真核細胞、特に哺乳類の細胞が、適切にフォールディングされた免疫学的に活性な抗体を構築及び分泌する可能性は、原核細胞よりも高いからである。

【0143】

具体的には、クローニング又は発現ベクターは、好適なプロモーター配列に動作可能なように連結される、以下のコード配列（ａ）～（ｂ）：
（ａ）ｍＡｂ１の全長重鎖及び軽鎖をそれぞれコードする配列番号１５及び配列番号１６、又は
（ｂ）ｍＡｂ２の全長重鎖及び軽鎖をそれぞれコードする配列番号１７及び配列番号１８
のいずれかの少なくとも１つを含むことができる。

【0144】

本発明の方法で使用される組換え抗体を発現させるための哺乳類宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｒ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ及びＰ．Ａ．Ｓｈａｒｐ，１９８２ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１－６２１に記載されている通りのＤＨ ＦＲ選択可能マーカーとともに使用される、Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ，１９８０ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６－４２２０に記載されているｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞が含まれる）、ＣＨＯＫ１ ｄｈｆｒ＋細胞株、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞が含まれる。特に、ＮＳＯ骨髄腫細胞との使用のために、別の発現系は、ＰＣＴ公報国際公開第８７／０４４６２号パンフレット、国際公開第８９／０１０３６号パンフレット及び欧州特許第０３３８８４１号明細書に示されているＧＳ遺伝子発現系である。

【0145】

抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを哺乳類宿主細胞に導入する場合、抗体は、宿主細胞における抗体の発現又は宿主細胞が成長する培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準のタンパク質精製方法を使用して培養培地から回収することができる（例えば、Ａｂｈｉｎａｖ ｅｔ ａｌ．２００７，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ８４８：２８－３７を参照されたい）。

【0146】

宿主細胞は、ｍＡｂ１又はｍＡｂ２の発現及び産生に適した条件下で培養することができる。

【0147】

２．医薬組成物
治療用抗体は、典型的には、直ちに投与可能な水性の形態又は投与前の好適な希釈剤での再構成のための凍結乾燥物として製剤化される。抗ＣＤ４０抗体は、凍結乾燥物として又は例えばプレフィルドシリンジに入れた水性の組成物として製剤化することができる。

【0148】

好適な製剤は、再構成して、患者への送達のための高濃度の抗体活性成分且つ低レベルの抗体凝集を伴う溶液を与えることができる、水性の医薬組成物又は凍結乾燥物を提供することができる。高濃度の抗体は、これにより、患者に送達されなければならない材料の量が減るために有用である。投薬体積の低下により、患者に一定用量を送達するためにかかる時間が最小限になる。高濃度の抗ＣＤ４０抗体を含む水性組成物は、皮下投与に特に適している。

【0149】

抗ＣＤ４０抗体は、薬学的に許容できる担体と組み合わせた場合、医薬組成物として使用することができる。こうした組成物は、ｍＡｂ１又はｍＡｂ２などの抗ＣＤ４０抗体に加えて、担体、種々の希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤及び当技術分野で周知の他の材料を含有することができる。担体の特性は、投与経路に依存する。開示した方法に使用するための医薬組成物は、標的とされる特定の障害の治療のための追加の治療薬も含有することができる。

【0150】

ある具体的実施形態では、本明細書において開示される方法で使用される組成物は、６．０のｐＨを有し、且つ
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬ ｍＡｂ１又はｍＡｂ２、
（ｉｉ）２７０ｍＭスクロース（安定剤として）、
（ｉｉｉ）３０ｍＭ Ｌ－ヒスチジン（緩衝剤として）、及び
（ｉｖ）０．０６％ポリソルベート２０（界面活性剤として）
を含む、水性製剤から調製される凍結乾燥製剤である。

【0151】

別の具体的実施形態では、本明細書において開示される方法で使用される医薬組成物は、６．０のｐＨを有し、且つ
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬ ｍＡｂ１又はｍＡｂ２、
（ｉｉ）２７０ｍＭスクロース（安定剤として）、
（ｉｉｉ）３０ｍＭ Ｌ－ヒスチジン（緩衝剤として）、及び
（ｉｖ）０．０６％ポリソルベート２０（界面活性剤として）
を含む、水性医薬組成物である。

【0152】

別の具体的な実施形態では、本明細書で開示される方法において使用される組成物は、
（ｉ）ｍＡｂ１又はｍＡｂ２、
（ｉｉ）スクロース（安定剤として）、
（ｉｉｉ）Ｌ－ヒスチジン（緩衝剤として）、及び
（ｉｖ）ポリソルベート２０（界面活性剤として）と、シクロスポリン（例えば、ＣｓＡ、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）若しくはタクロリムス（例えば、Ｔａｃ、ＦＫ５０６、Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標）、Ａｓｔｅｌｌａｓ）などのカルシニューリン阻害剤（ＣＮＩ）、ミコフェノール酸（例えば、ＭＰＡ；Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）若しくはミコフェノール酸モフェチル（例えば、ＭＭＦ；ＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）などのリンパ球増殖阻害剤又はエベロリムス（例えば、Ｚｏｒｔｒｅｓｓ（登録商標）、Ｃｅｒｔｉｃａｎ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）若しくはシロリムス（例えば、Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）などの増殖シグナル阻害剤又はベラタセプト（例えば、Ｎｕｌｏｊｉｘ（登録商標）、ＢＭＳ）などのＴ細胞同時刺激遮断剤からなる群から選択される少なくとも１つの追加の活性医薬成分と
を含む凍結乾燥又は液体製剤である。

【0153】

３．投与経路
典型的には、抗体又はタンパク質は、注射により、例えば静脈内、腹腔内又は皮下に投与される。この投与を実行するための方法は、当業者に公知である。局所的若しくは経口的に投与することができるか、又は粘膜を透過する能力がある可能性がある組成物を得ることも可能である。当業者によって理解されるであろう通り、選択された特定の投与経路に対して適切であるような、投与するのに適したあらゆる手段を使用することができる。

【0154】

可能な投与経路の例としては、非経口（例えば、静脈内（ｉ．ｖ．若しくはＩ．Ｖ．又はｉｖ若しくはＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、皮内、皮下（ｓ．ｃ．若しくはＳ．Ｃ．又はｓｃ若しくはＳＣ）又は注入）、経口及び肺内（例えば、吸入）、経鼻、経皮（局所）、経粘膜及び直腸内投与が挙げられる。非経口、皮内又は皮下適用のために使用される液剤又は懸濁剤は、以下の構成成分を含むことができる：無菌の希釈剤、例えば注射用水、生理食塩溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒、抗菌剤、例えばベンジルアルコール又はメチルパラベン、酸化防止剤、例えばアスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム、キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸、緩衝液、例えば酢酸、クエン酸又はリン酸及び張度の調整のための薬剤、例えば塩化ナトリウム又はデキストロース。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムなどの酸又は塩基を用いて調整することができる。非経口調製物は、ガラス又はプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器又は反復投与バイアルに封入することができる。

【0155】

抗ＣＤ４０療法は、任意選択的に、本発明の方法で使用される抗体又はタンパク質の「負荷用量／レジメン」を、抗ＣＤ４０療法を必要としている対象に投与することによって開始することができる。「負荷用量／レジメン」は、対象に投与される、本発明の方法で使用される抗ＣＤ４０抗体又はタンパク質の初回用量／レジメンを意図し、ここで、投与される、本発明の方法で使用される抗体又はタンパク質の用量は、より高い投薬範囲（すなわち約１０ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、例えば約３０ｍｇ／ｋｇ）の範囲内にある。「負荷投与／レジメン」は、完全な「負荷投与／レジメン」が約２４時間期間内（又は疾患の重症度に基づいて複数の静脈内投与が必要である場合には初月以内）に実施される限り、単回投与、例えば抗体若しくはその抗原結合断片がＩＶ投与される単回注入として又は複数回投与、例えば抗体若しくはその抗原結合断片がＩＶ投与される複数回注入として実施され得る。次いで、「負荷用量／レジメン」の施与後、１種又は複数の追加の治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体を対象に投与する。その後の治療有効用量は、例えば、毎週の投薬スケジュールに従って又は２週に１回（隔週）、３週に１回若しくは４週に１回投与することができる。こうした実施形態では、その後の治療有効用量は、一般に、より低い投薬範囲（すなわち約０．００３ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば１０ｍｇ／ｋｇ）の範囲内にある。

【0156】

代わりに、いくつかの実施形態では、「負荷用量／レジメン」後、その後の治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体が、「維持スケジュール」（ここで、治療有効用量のＣＤ４０抗体は、毎週、隔週又は１か月に１回、６週に１回、２か月に１回、１０週に１回、３か月に１回、１４週に１回、４か月に１回、１８週に１回、５か月に１回、２２週に１回、６か月に１回、７か月に１回、８か月に１回、９か月に１回、１０か月に１回、１１か月に１回若しくは１２か月に１回投与される）に従って投与される。こうした実施形態では、抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量は、特に、その後の用量がより高頻度の間隔、例えば２週に１回～１か月に１回投与される場合、より低い投薬範囲（すなわち約０．００３ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば１０ｍｇ／ｋｇ）の範囲内にあるか、又は特にその後の用量がより低頻度の間隔で投与される場合、例えばその後の用量が１か月～１２か月離れて投与される場合、より高い投薬範囲（すなわち１０ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、例えば３０ｍｇ／ｋｇ）の範囲内にある。

【0157】

投薬のタイミングは、一般に、「ベースライン」としても公知である、活性な化合物（例えば、ｍＡｂ１）の第１の投与の日から測定される。しかし、異なる医療提供者が異なる命名規則を使用する。

【0158】

特に、第０週は、医療提供者によって第１週とみなされる可能性がある一方、第０日は、医療提供者によって第１日とみなされる可能性がある。したがって、異なる医師が、同じ投薬スケジュールを指すのに、例えば３週中／第２１日、３週中／第２２日、４週中／第２１日、４週中／第２２日にある用量が与えられると称する可能性がある。一貫性を保つために、投薬の最初の週は、本明細書では第０週とみなすこととするのに対して、投薬の最初の日は、第１日とみなすこととする。しかし、この命名規則は、単に一貫性を保つために使用され、限定的なものと解釈されるべきではなく、すなわち医師が特定の週を「第１週」と呼ぶか「第２週」と呼ぶかにかかわらず、毎週の投薬は、抗ＣＤ４０抗体（例えば、ｍＡｂ１）の毎週の用量の規定であることが当業者によって理解されるであろう。本明細書に記述する投薬計画の例は、図１及び２において参照される。ある用量が厳密な時点で提供される必要はないことが理解されるであろう。例えば、およそ第２９日の予定である用量は、これが適切な週に提供されるのであれば、例えば第２４日～第３４日、例えば第３０日に提供される可能性がある。

【0159】

本明細書で使用する場合、表現「［指定された用量］の送達を可能にするのに十分な量の抗ＣＤ４０抗体を有する容器」は、所与の容器（例えば、バイアル、ペン（ｐｅｎ）、シリンジ）が、所望される用量を提供するために使用することができる、（例えば、医薬組成物の一部としての）ある体積の抗ＣＤ４０抗体をその中に配置していることを意味するために使用される。一例としては、所望される用量が５００ｍｇである場合、臨床医は、２５０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤を含有する容器からの２ｍｌ、５００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤を含有する容器からの１ｍｌ、１０００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤を含有する容器からの０．５ｍｌなどを使用することができる。こうした各場合において、これらの容器は、所望される５００ｍｇ用量の送達を可能にするのに十分な量の抗ＣＤ４０抗体を有する。

【0160】

本明細書で使用する場合、表現「［指定された用量］の［投与経路］送達を可能にするための投薬量で製剤化される」は、所与の医薬組成物が、指定された投与経路（例えば、ＳＣ又はＩＶ）を介して、所望される用量の抗ＣＤ４０抗体、例えばｍＡｂ１を提供するために使用できることを意味するために使用される。一例として、所望される皮下用量が５００ｍｇである場合、臨床医は、２５０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤の２ｍｌ、５００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤の１ｍｌ、１０００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤の０．５ｍｌなどを使用することができる。こうした各場合において、これらの抗ＣＤ４０抗体製剤は、抗ＣＤ４０抗体の皮下送達を可能にするのに十分に高い濃度である。皮下送達は、典型的には、約１ｍＬ以上（例えば、２ｍＬ）の体積の送達を必要とする。しかし、例えばパッチ／ポンプ機構を使用して、時間をかけてより高い体積を送達することができる。

【0161】

患者におけるＥＢＶ関連障害を予防するため又はＥＢＶ負荷を制御するための薬剤の製造における抗ＣＤ４０抗体（例えば、ｍＡｂ１）の使用が本明細書で開示され、ここで、薬剤は、各容器が、単位用量あたり少なくとも約７５ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ又は６００ｍｇの抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１）の送達を可能にするのに十分な量の抗ＣＤ４０抗体を有するような容器を含むように製剤化される。

【0162】

ＥＢＶ関連障害を予防するため又はＥＢＶ負荷を制御するための薬剤の製造における抗ＣＤ４０抗体（例えば、ｍＡｂ１）の使用が本明細書で開示され、ここで、薬剤は、単位用量あたり７５ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ又は６００ｍｇの抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１）の全身送達（例えば、ＩＶ又はＳＣ送達）を可能にする用量で製剤化される。

【0163】

ある具体的実施形態では、ＥＢＶ関連障害の予防又はＥＢＶ負荷の制御のための医薬品の製造のための、ａ）抗ＣＤ４０抗体、緩衝液、安定剤及び可溶化剤を含む液体医薬組成物、及びｂ）抗ＣＤ４０抗体を、移植患者に皮下投与するための手段の使用が提供され、ここで、抗ＣＤ４０抗体は、
ｉ）ヒト対象の１キログラムあたり約３～約３０ｍｇ、例えば１０ｍｇの活性成分の用量で１週おきに１回を３回、患者に皮下投与され、
ｉｉ）その後、ヒト対象の１キログラムあたり約３～約３０ｍｇ、例えば１０ｍｇの活性成分の毎月の用量として患者に皮下投与され、ここで、前記抗ＣＤ４０抗体は、
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｂ）配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｅ）サイレントＦｃ ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体、及び
ｆ）配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される。

【実施例】

【0164】

実施例２．薬理学
１．第１の薬理学
ｍＡｂ１は、ヒトＣＤ４０と高親和性（０．３ｎＭのＫ_ｄ）で結合する。しかし、これは、Ｆｃγ受容体（ＣＤ１６が含まれる）と結合せず、又は抗体依存性細胞傷害若しくは補体依存性細胞傷害を媒介しない。ｍＡｂ１は、ヒト白血球の組換えＣＤ１５４（ｒＣＤ１５４）誘導性の活性化を阻害するが、単球由来樹状細胞（ＤＣ）によるＰＢＭＣ増殖又はサイトカイン産生を誘発しない。ｍＡｂ１は、非常に類似の親和性でヒト及び非ヒト霊長類ＣＤ４０と結合する。

【0165】

ｍＡｂ１は、インビボで一次及び二次Ｔ細胞依存性抗体反応（ＴＤＡＲ）を阻止し、非ヒト霊長類における腎臓同種移植片の生存を延長させることができる（Ｃｏｒｄｏｂａ ｅｔ ａｌ ２０１５）。さらに、ｍＡｂ１は、構築された胚中心（ＧＣ）をインビボで崩壊させることができる。

【0166】

ＣＤ４０受容体占有率と機能活性を、ヒト全血培養を使用してインビトロで同時に評価した。機能活性は、ＣＤ２０陽性細胞（Ｂ細胞）上のＣＤ６９（活性化マーカー）のＣＤ１５４誘導性の発現を介して定量化し、ＣＤ４０占有は、蛍光標識したｍＡｂ１を使用して観察した。ｒＣＤ１５４誘導性のＣＤ６９発現の十分な阻害のために、ｍＡｂ１によるほぼ完全なＣＤ４０占有が必要であった。

【0167】

２．第２の薬理学
血小板機能及び止血に対するｍＡｂ１の効果を研究し、ｍＡｂ１が血小板凝集反応を誘発せず、むしろ、高濃度で血小板凝集に対するある種の穏やかな抑制効果を呈することが示された。

【0168】

実施例３．非臨床の毒性学及び安全性薬理学
ｍＡｂ１を用いる毒性研究は、抗ＣＤ１５４ ｍＡｂを用いる臨床試験において報告された場合に血栓塞栓症の証拠がなかったことを含めて、いずれの有意な臓器毒性も示さなかった（Ｋａｗａｉ ｅｔ ａｌ ２０００）。１３週のＧＬＰアカゲザル研究（１０、５０及び１５０ｍｇ／ｋｇでの毎週の投薬）では、５／２２匹の動物において、進行中の感染症に起因すると考えられるリンパの細胞充実性の増大が認められ、観察結果は、ｍＡｂ１の薬理学と一致していた。５０ｍｇ／ｋｇの２匹の動物の腎臓及び肺において炎症性病変が認められ、２匹の動物のうちの１匹では眼及び気管における病変も認められた。腎臓及び肺に対するｍＡｂ１の直接的影響は、排除することができないが、日和見病原体の確認を含めた証拠の重みは、これらの所見が、ｍＡｂ１介在性の免疫抑制に続発する可能性が高く、感染症由来のものであることを示唆する。これらの炎症所見を考慮して、１３週の毒性研究についての無毒性量（ＮＯＡＥＬ）を１０ｍｇ／ｋｇに設定した。カニクイザルにおける２６週の慢性毒性研究では、有害なｍＡｂ１関連の所見は発見されなかった。これらのデータに基づいてＮＯＡＥＬを１５０ｍｇ／ｋｇ（２６週）に設定した。平均（全動物）Ｃ_{ｍａｘ，ｓｓ}は、１、５０及び１５０（ＮＯＡＥＬ）ｍｇ／ｋｇ（Ｓ．Ｃ．、毎週）でそれぞれ４４、３２３５及び９６９０μｇ／ｍＬであった。２６週のカニクイザル研究から得られたＮＯＡＥＬは、臨床投薬レジメンを裏付けるために最も適切であると考えられる。

【0169】

死後の組織学的及び免疫組織学的評価は、脾臓の皮質Ｂ細胞領域及びリンパ組織におけるＧＣの低下を示した。回復動物は、正常なＴ細胞領域及び増大したＢ細胞領域を伴うリンパ節細胞充実性の増大といういくつかの症例を示し、これは、退薬後のＧＣの再構成と一致していた。回復動物は、ｍＡｂ１の血中濃度が、十分な受容体占有に必要な濃度未満に低下した直後に、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に対する一次ＴＤＡＲを開始することができた。

【0170】

Ｔ細胞依存性抗体反応（ＴＤＡＲ）の完全な阻害が原因で、ＫＬＨ、すなわちｍＡｂ１に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成が期待されず、したがってｍＡｂ１の濃度が継続的に薬理学的レベルに維持される場合、ＡＤＡ関連の副作用はなさそうであると考えられる。

【0171】

組織交差反応性研究は、ＣＤ４０が、免疫細胞上に存在するだけでなく、様々な組織内にも存在することを示した。これは、主として、内皮及び上皮細胞（ここで、ＣＤ４０は、創傷治癒プロセスに反応することなどのシグナル伝達、ウイルス防御の上方調節及び炎症関連メディエーターに関与する）上でのその発現に起因する。ｍＡｂ１のような拮抗性の抗ＣＤ４０モノクローナル抗体は、炎症プロセスに寄与することが期待されず、これは、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を使用するインビトロ研究によって確認された。

【0172】

実施例４．非臨床の薬物動態及び薬力学
１．薬物動態（ＰＫ）
ＩｇＧ免疫グロブリンに典型的であるが、ｍＡｂ１の排除の主要な経路は、血漿と平衡状態にある部位で起こるタンパク質分解性の異化作用を介する可能性が高い。さらに、ｍＡｂ１－ＣＤ４０複合体の結合及び内在化は、迅速な飽和性のクリアランス経路をもたらした。これは、約１０～２０μｇ／ｍＬでの屈曲点を示す非線形のｍＡｂ１血清中濃度－時間プロフィールによって示された。クリアランス全体に対するＣＤ４０介在性のクリアランスの寄与は、ＣＤ４０発現、内在化及び受容体代謝回転速度のレベルとともにｍＡｂ１濃度に依存する。ｍＡｂ１＞１０～２０μｇ／ｍＬの血清中濃度について線形の動態が予想されるのに対して、より低い濃度では非線形動態が明らかになる。

【0173】

２．薬力学（ＰＤ）
カニクイザルにおけるＰＫ／ＰＤ研究では、ＰＫプロフィールにおける屈曲点（約１０μｇ／ｍＬ）は、独立したリンパ球標的飽和アッセイにおいて決定される場合のＣＤ４０飽和の低下と関係があった。したがって、この屈曲点は、ＣＤ４０の飽和のレベルについてのマーカー及び標的エンゲージメントを示す証拠とみなされる。

【0174】

ＣＤ４０占有率と薬力学的活性との関連を、ＫＬＨで免疫を受けたアカゲザルにおいてさらに実証した。サルは、ＫＬＨで３回免疫を受けた（１回目は、投薬の約３週前であり、２回目は、ｍＡｂ１投与の２週後であり、３回目は、ｍＡｂ１の完全なウォッシュアウト後であった）。第２のＫＬＨワクチン接種時の血漿中濃度＞４０μｇ／ｍＬのｍＡｂ１によるＣＤ４０占有は、リコール抗体反応を完全に予防した。ｍＡｂ１がなくなると、すべての動物は、第３のＫＬＨに対する十分なメモリー抗体反応を開始した。これらの結果は、既存のメモリーＢ細胞の機能が影響を受けなかったことを示唆する。ｍＡｂ１の完全な排除後、破傷風トキソイド（ＴＴｘ）での免疫化は、治療されていない動物と同様の抗ＴＴｘ－ＩｇＧ／ＩｇＭ力価をもたらし、ｍＡｂ１排除後に十分なＴＤＡＲが回復したことを実証した。

【0175】

実施例５．ヒト安全性及び忍容性データ
ｍＡｂ１の安全性、忍容性、ＰＫ及びＰＤ活性は、健康な対象及び関節リウマチ（ＲＡ）を患う患者における、ｍＡｂ１の進行中の、無作為化された、二重盲検の、プラセボ対照の単一用量漸増研究において評価されている。合計４８人の対象が登録されている：最大３ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ又はＳ．Ｃ．）の単一用量のｍＡｂ１を受けた３６人の健康な対象及びＲＡを有する１２人の患者（そのうちの６人は、１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）の単一用量のｍＡｂ１を受けた）。全体的に見ると、健康なボランティアにおける最大３ｍｇ／ｋｇ ｍＡｂ１までの単一用量及びＲＡ患者における単一の１０ｍｇ／ｋｇ ｍＡｂ１は、安全且つ良好な耐容性を示しており、重篤な有害事象の疑い（ＳＡＥ）は発生していない。３０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）用量の研究は、ＲＡ患者において進行中である。この研究は、依然として進行中であるため、すべての臨床データは、事実上、予備的であり、ＲＡ患者において最大１０ｍｇ／ｋｇの用量で行われた中間解析に基づいている。

【0176】

実施例６．ヒト薬物動態及び薬力学（健康なボランティア及び関節リウマチ患者）
単回ＩＶ又はＳＣ投与後の、健康な対象並びに関節リウマチを患う患者では、ＣＦＺ５３３ ＰＫプロフィールは、標的介在性の消失と一致しており、ＣＤ４０受容体占有率がおよそ９０％未満に低下した場合、非線形ＰＫプロフィール及びより急速なクリアランスがもたらされた。

【0177】

中国人対象からのＰＫプロフィールにおけるいくらかの個人間の変動性はあるものの、中国人対象におけるＣＦＺ５３３の消失は、概して、非中国人対象と同様であり、３ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）ＣＦＺ５３３後の標的エンゲージメントも同様（約４週）であった。この用量レベルにおいて、血漿中の遊離ＣＦＺ５３３プロフィール、遊離ＣＤ４０及び総ＣＤ４０を測定する末梢Ｂ細胞上のＣＤ４０占有率並びに血漿中の総ＣＤ４０濃度を通して同様のＰＫ／ＰＤプロフィールが示された。

【0178】

健康な対象におけるＳＣ投与後、ＣＦＺ５３３は、急速に吸収され、ヒトにおける典型的なＩｇＧ１抗体について予測されるものと一致して分配された。３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）では、ＣＦＺ５３３は、概して、投与後３日（２人の対象について７日）でピークになり、投薬の１週後、血漿中濃度は、ＩＶ後と同じ範囲であった。３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）では、標的エンゲージメントの期間は、やはり約４週であった。

【0179】

関節リウマチを患う１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）の患者では、投与前平均と比較される全血Ｂ細胞上の遊離ＣＤ４０及び血漿中の総ｓＣＤ４０プロフィールによって測定された場合、十分なＣＤ４０占有は、概して、８週間維持された。３０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）では、ＰＫ及び血漿中の総ｓＣＤ４０プロフィールは、１６週の標的エンゲージメントの期間と一致していた。

【0180】

健康な対象では、ＣＦＺ５３３によるＣＤ４０エンゲージメントは、Ｂ細胞上の遊離ＣＤ４０によって測定される場合のＢ細胞上のＣＤ４０占有率を追跡すると、概して、末梢Ｂ細胞上の総ＣＤ４０の約５０％の減少をもたらした。これは、ＣＦＺ５３３への結合時の膜結合型ＣＤ４０の内在化及び／又はシェディングに起因する可能性が高い。関節リウマチを患う患者では、末梢Ｂ細胞上の総ＣＤ４０の減少は確認されなかった。

【0181】

血漿中のＣＦＺ５３３と、全血Ｂ細胞上のＣＤ４０占有率（Ｂ細胞上の遊離ＣＤ４０）との関係が明らかにされ、０．３～０．４μｇ／ｍＬのＣＦＺ５３３濃度は、全血Ｂ細胞上の十分な（≧９０％と定義される）ＣＤ４０占有と関係があった。

【0182】

より一般的には、ＣＦＺ５３３について、非特異的及び特異的な排除経路が特定されている。ＦｃＲｎ受容体によって介在される非特異的な高容量の経路は、一般に、内在性ＩｇＧによって共有される。ＣＦＺ５３３の特異的な標的介在性の消失は、（その後のリソソーム分解を伴って）部分的に内在化され、且つ／又は膜からシェディングされるＣＦＺ５３３－ＣＤ４０複合体の形成をもたらした。標的介在性のプロセスは、ＣＦＺ５３３の飽和性の及び非線形消失をもたらした。ＣＦＺ５３３－ＣＤ４０複合体の形成は、用量／濃度－依存性であり、高濃度のＣＦＺ５３３で飽和が生じた。

【0183】

全体的に見ると、ＣＦＺ５３３の消失は、ＣＦＺ５３３のクリアランス全体に対する、特異的な（標的介在性の）及び非特異的な排除経路の相対的寄与に依存する。ＣＦＺ５３３濃度が標的の濃度よりも低い場合、非線形ＰＫ挙動が観察されたのに対して、ＣＤ４０受容体が飽和しているより高い濃度では非特異的経路が優勢であり、ＣＦＺ５３３の排除が線形であった。

【0184】

膜結合型受容体を標的にし、且つ標的介在性の消失を示す典型的なＩｇＧ１抗体について予測される通り、ＣＦＺ５３３の曝露の程度（ＡＵＣｌａｓｔ）は、用量の増大よりも大きく（比例を超えて）増大した。したがって、これは、より高い用量でのＣＦＺ５３３の分布容積及びクリアランスの低下と関係があることが予測される。

【0185】

３ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ及びＳＣ）の単一用量のＣＦＺ５３３は、十分な（≧９０％）受容体占有率に相当するＣＦＺ５３３濃度において、第１のＫＬＨ免疫化に対する抗ＫＬＨ反応を一時的に抑制した（約３～４週間）。抗ＫＬＨ一次反応は、ＣＦＺ５３３濃度としてすべての対象において検出され、それに伴って受容体占有率が低下した。すべての対象は、第２のＫＬＨ免疫化（受容体占有の喪失が予測された後に投与される）に対するリコール反応を開始することができた。

【0186】

データは、ＣＦＺ５３３によるＣＤ４０エンゲージメントがヒト全血における組換え型ヒトＣＤ１５４（ｒＣＤ１５４）介在性のＢ細胞活性化を防止することを示唆する。Ｂ細胞上のｒＣＤ１５４誘導性ＣＤ６９発現は、概して、Ｂ細胞上の十分なＣＤ４０占有に相当する期間中に抑制された。ＣＤ４０占有が不完全であった場合、ｒＣＤ１５４の機能活性は回復した。

【0187】

ヒトにおいて確認される安全性及び忍容性：単一用量漸増（０．０３～３０ｍｇ／ｋｇ）のＣＦＺ５３３（ｉ．ｖ．）及び３ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）を試験する第１相研究（ＣＣＦＺ５３３Ｘ２１０１）が完了し、試験された最大用量（１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．））まで、安全上の大きい懸念は示されなかった。今までの臨床経験に基づくと、１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）の投薬レジメンは、安全であり且つ移植患者において容認できると予測される。

【0188】

前臨床毒性学的研究から得られる適切な安全域：これまでのＧＬＰ毒性研究は、（ｉ）アカゲザルにおける１０、５０及び１５０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．及びｉ．ｖ．）での１３週間の毎週のｓ．ｃ．投薬、並びに（ｉｉ）カニクイザルにおける１、５０及び１５０ｍｇ／ｋｇでの２６週間の毎週のｓ．ｃ．投薬でＣＦＺ５３３を試験している。これらの研究は、１２週又は２４週間の提案された静脈内レジメンでのＣＦＺ５３３の使用を妨げることになるいかなる主要所見も示さなかった。カニクイザルにおける２６週の毒性研究では、定常状態で、１５０ｍｇ／ｋｇ（ＮＯＡＥＬ）での毎週の投薬後、８３００μｇ／ｍＬ（Ｃａｖ，ｓｓ）の平均濃度が得られた。１か月の期間にわたる相当する全身曝露（ＡＵＣ、定常状態条件）は、２３２４００日＊μｇ／ｍＬであろう。これは、最初の１か月にわたる予測される全身的血漿曝露よりも約５７倍高い（ＡＵＣ０－２８日；図３）。２６週の毒性研究では、ＮＯＡＥＬで、Ｃｍａｘ，ｓｓは、９４９５μｇ／ｍＬであった。これは、移植患者における提案された静脈内レジメンについての予測されるＣ_ｍａｘ（約４００μｇ／ｍＬ）よりも２４倍高い（図４）。

【0189】

図４は、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内に与えられるＣＦＺ５３３（コホート２）についての予測される平均血漿中濃度－時間プロフィールを示す。研究第１日、１５日、２９日及び５７日（プラセボ対照期間）並びに研究第８５日、９９日、１１３日及び１４１日（非盲検期間）に与えられる１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）ＣＦＺ５３３についての平均ＰＫプロフィールをシミュレートした。健康な対象におけるＦＩＨ研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２１０１からのコホート５（３ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．））ＰＫデータの予備的モデルに基づく集団分析から得られたパラメータを使用して、ミカエリスメンテンモデルを適用した。抗ＣＤ４０遮断剤を用いた以前の経験は、ヒトｔｘに存在せず、また健康な対象とｔｘ患者との間のＣＤ４０（発現、ターンオーバー）の生物学のいかなる潜在的な違いも不明であった。提案されたｉ．ｖ．レジメンは、治療期間全体を通して、ｔｘ患者における標的組織におけるＣＤ４０発現の増大について予測するための、４０μｇ／ｍＬを超えて維持される血漿中濃度を提供することが期待された。４０μｇ／ｍＬでの水平な点線は、標的組織における十分なＣＤ４０占有及び経路遮断が期待される濃度を超える血漿中濃度を表している（カニクイザル－１ｍｇ／ｋｇ用量群における２６週の毒性研究からのＰＤデータに基づく）。最初の１か月（より高い投薬頻度）中の予測される全身曝露は、４０８７日＊μｇ／ｍＬであり（カニクイザル－毎週の１５０ｍｇ／ｋｇのＮＯＡＥＬにおける２６週の毒性研究における定常状態での１か月にわたって観察された全身的血漿曝露よりも５７倍低い）、予測されるＣ_ｍａｘは、約４００μｇ／ｍＬである。

【0190】

非ヒト霊長類における組織における関連するＰＤ効果：２６週の毒性学的研究（１ｍｇ／ｋｇ用量群）では、平均の定常状態血漿中濃度が≧３８μｇ／ｍＬである動物は、リンパ節の皮質Ｂ細胞領域における胚中心の完全な抑制を有していた。１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）レジメンは、治療期間全体（プラセボ対照及び非盲検、図３を参照されたい）を通して、ｔｘ患者における、より高いＣＤ４０発現について予測するための、４０μｇ／ｍＬを超えて維持される血漿中濃度並びに標的飽和の喪失に起因する標的組織における不完全なＰＤ効果を提供することが期待された。

【0191】

材料及び方法

【0192】

【表7】

【0193】

【表8】

【0194】

【表9】

【0195】

【表10】

【0196】

【表11】

【0197】

抗体

【0198】

【表12】

【0199】

化合物

【0200】

【表13】

【0201】

機器及び補足材料

【0202】

【表14】

【0203】

【表15】

【0204】

培地、緩衝液及び試薬
細胞培地：４２５ｍＬのＲＰＭＩ－１６４０培地、５ｍＬのピルビン酸ナトリウム（最終１ｍＭ）、５ｍＬのＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（１×）、５ｍＬのカナマイシン（１×）、５ｍＬのＭＥＭ－ＮＥＡＡ（最終１ｍＭ）、５ｍＬのＬ－グルタミン（最終２ｍＭ）、０．５ｍＬのβメルカプトエタノール（最終５０μＭ）、５０ｍＬのＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ；最終１０％）；ＥＢＶ培地：１５ｍＬの細胞培地、１５ｍＬのＥＢＶ上清（最終２５％）、０．６ｍＬのトランスフェリン（最終３０ｎｇ／ｍＬ；ストック６μｇ／ｍＬ）；ＦＡＣＳ緩衝液：５００ｍＬのＤＰＢＳ、１０ｍＬのＦＢＳ（最終２％）、２ｍＬのＥＤＴＡ（最終２ｍＭ）；ブロッキング緩衝液：１３．５ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液、１．５ｍＬのヒト血清（最終１０％）。

【0205】

「完全培地」（上記を参照されたい）を、最終濃度が２．５μｇ／ｍＬのＣｐＧ２００６、３０ｎｇ／ｍＬのトランスフェリン及び３０％ＥＢＶ上清と混合することにより、Ｂ細胞不死化培地を作製した。自家作製したＥＢＶ－Ｂ細胞株及び細胞共培養物を、１０％Ｈｙｃｌｏｎｅ－ＦＢＳ、１×ペニシリン／ストレプトマイシン、１×カナマイシン、１×ＮＥＡＡ、１×ピルビン酸ナトリウム及び５０μＭのβメルカプトエタノールを添加したＲＰＭＩ－１６４０培地（＝完全培地）中で維持した。凍結培地は、１０％ＤＭＳＯ及び９０％ＦＢＳからなった。ＭＡＣＳ緩衝液は、０．５％ＢＳＡ（ＭＡＣＳ ＢＳＡ保存液をａｕｔｏＭＡＣＳリンス液で１：２０に希釈した）及び２ｍＭ ＥＤＴＡを添加したＰＢＳからなった。１ｍｇ／ｍＬのＤＮＡｓｅをＰＢＳで希釈し、１０μｇ／ｍＬの最終濃度（ストック濃度）を得て、０．２２μｍのフィルターを通して濾過し、アリコートし、－２０℃で貯蔵した。１ｍＬの完全培地あたり１０μＬのストック濃度を使用した。１．２ｍｇの凍結乾燥した組換えヒト（ｒｈ）ＩＬ－２を１．２ｍＬの細胞培養グレード水で希釈した（ストック濃度：１ｍｇ／ｍＬ＝１８ＭＩＯ ＩＵ／１．２ｍＬ＝１５ＭＩＯ ＩＵ／ｍＬ）。一定分量を作成し、－２０℃で貯蔵した。各実験では、新規の一定分量を解凍し、実験期間中に４℃で維持した。１つのＣＦＳＥバイアルを１８μＬのＤＭＳＯで希釈した（ストック濃度：５ｍＭ）。実験手順では、ＰＢＳ中、１：５０００を使用した（最終濃度：１μＭ）。１つのＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔバイアルを２０μＬのＤＭＳＯで希釈した（ストック濃度：５ｍＭ）。実験手順では、ＰＢＳ中、１：２０００を使用した（最終濃度：２．５μＭ）。

【0206】

バフィーコートからのヒトドナーの選択：１４０の健常ボランティアからのバフィーコートは、インフォームドコンセントに署名後、Ｂｌｕｔｓｐｅｎｄｅｚｅｎｔｒｕｍ Ｂｅｒｎから入手した。ＮＢＣ（ＮＩＢＲ），Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄにより、これらのドナーからの末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及び血漿を単離し、貯蔵した。実験を開始する前に、血漿中のエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）に対するＩｇＧクラス抗体を、ヒト抗ＥＢＶ ＩｇＧ ＥＬＩＳＡキット（ＥＢＶ－ＥＢＮＡ）を製造業者の使用説明書に従って使用し、測定することにより、すべてのドナーを分析した。

【0207】

ＥＢＶ－Ｂ細胞株の作製：ＥＢＶ－Ｂ細胞株の作製は、ＥＢＶ血清陽性（１回目：ドナー８８、１５３及び１３９；２回目：ドナー９０、１２５及び１７１；３回目：ドナー６３３、６４８、６３８、６５２、６３７及び６６０）及びＥＢＶ血清陰性（１回目：ドナー７３、１１１及び１７３；２回目：ドナー２８９及び４３７；３回目：ドナー６７０、６２４、５８３及び６３５）である選択されたドナーのＰＢＭＣを使用することにより実施した。

【0208】

まず、ＥａｓｙＳｅｐヒトＢ細胞濃縮カクテルを使用し、製造業者のプロトコルに従い、Ｂ細胞を選択されたＰＢＭＣから精製し、無希釈ＥＢＶ上清（Ｅ．Ｔｒａｇｇｉａｉ，ＮＢＣ，Ｎｏｖａｒｔｉｓから入手）中で１×１０６個の細胞／ｍＬに調節した。遠心分離（４２５×ｇ、３時間、３７℃）後、感染Ｂ細胞の上清を慎重に除去し、１×１０６個の細胞／ｍＬのＢ細胞不死化培地にペレットを懸濁した（３．５）。並行して、支持細胞を非自家ドナーから調製した。したがって、ＰＢＭＣを単離し、５０グレイで照射し、使用するまで４℃で維持した。遠心分離（４２５×ｇ、１０分、４℃）後、上清を慎重に除去し、細胞を完全培地中で１×１０６個の細胞／ｍＬに調整した。１ｍＬの支持細胞及び１ｍＬの感染Ｂ細胞を１２ウェルプレート内においてウェルごとに分布させた（最終２×１０６個の細胞／ウェル／２ｍＬ）。次に、その細胞を３７℃、５％ＣＯ２で培養した。拡大のため、細胞を完全培地により１：２に分割した。細胞を最初に６ウェルプレート、次いでＴ－７５フラスコに移したとき、培地が黄色になった。感染ＥＢＶ－Ｂ細胞は、凍結培地でさらに使用するために凍結した。

【0209】

ＥＢＶ－Ｂ細胞又はＢ細胞及びＴ細胞の共培養：本発明者らの調査のために自家でのＥＢＶ－Ｂ細胞／Ｔ細胞共培養モデルを確立するため、本発明者らは、Ａｎｄｏｒｓｋｙ ｅｔ ａｌ．（Ａｎｄｏｒｓｋｙ ２０１１）によって公表されたプロトコルを改良した。ここで、本発明者らは、ＥＢＶ－Ｂ細胞又は一次Ｂ細胞及び自己Ｔ細胞を使用し、４つの異なる濃度（１０、５０、１００及び２００μｇ／ｍＬ又は媒体対照）でのＩｇＧ１アイソタイプ、抗ＣＤ４０（ＣＦＺ５３３）又は抗ＣＴＬ－Ａ４抗体（ベラタセプト）のいずれかとともにその細胞をインキュベートした。共培養モデルは、２相：「プライミング」相（７日培養）及び「リコール」相（さらに４日培養）からなった。抗体は、「プライミング」相、「リコール」相又は両方の相（「プライミング及びリコール」）のいずれかで添加した。１１日の共培養後、Ｔ細胞増殖に対してフローサイトメトリー及びＩＦＮγ産生に対してＥＬＩＳＡにより細胞を分析した。

【0210】

ＥＢＶ－Ｂ細胞株の解凍：ＥＢＶ－Ｂ細胞を作製し、十分な拡大後に凍結した。実験開始の１～２週前に凍結バイアルを３７℃の水槽又は手での穏やかな撹拌により解凍した。内容物の解凍直後、７０％エタノールを使用することでバイアルの外表面を除染した。解凍細胞を１５ｍＬのファルコンチューブに移し、ＤＮａｓｅを含有する完全培地３ｍＬを徐々に添加した（最終１０μｇ／ｍＬ）。その後、細胞を遠心分離し（３６５×ｇ、５分、ＲＴ）、上清を廃棄し、６ｍＬの完全培地を添加した。次に、６ｍＬの細胞を６ウェルプレートの１ウェルに入れ、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。新しい培地を添加するか、又は６ウェルプレートのいくつかのウェルで継代するか、又は培地を２～３日ごとに交換することにより培養物を維持したとき、培地が橙黄色に変化した。実験では、ＥＢＶ－Ｂ細胞をＣＤ３、ＣＤ１９及びＣＤ２０表面発現についてフローサイトメトリーにより分析した。

【0211】

ポジティブ選択による全Ｂ細胞の単離：実験装置において、ＥＢＶ－Ｂ細胞と並行して一次Ｂ細胞も使用した。したがって、ヒトＣＤ１９マイクロビーズキットを製造業者の使用説明書に従って使用し、磁気自動ＭＡＣＳセパレータを使用することでＣＤ１９陽性Ｂ細胞を単離した。単離後、細胞を遠心分離し（３００×ｇ、５分、ＲＴ）、上清を廃棄し、ペレットを完全培地に再懸濁した。次に、Ｂ細胞を計数し、Ｔ－２５フラスコ内において４℃で維持し、照射した。

【0212】

ＥＢＶ－Ｂ細胞及び一次Ｂ細胞の照射：Ｔ－２５フラスコ内で維持したＥＢＶ－Ｂ細胞及び単離した一次Ｂ細胞をＸ－Ｒａｙ ＲＳ－２０００照射装置により３０グレイですべて同時に照射した。照射により、一次Ｂ細胞及びＥＢＶ－Ｂ細胞がこれらの共培養物中で分離することが阻止される。これにより、Ｔ細胞のみが刺激に応答して分離していることが保証され、ＡＰＣ（ここでは一次Ｂ細胞又はＥＢＶ－Ｂ細胞）は、抗原を提示し、培養物中で数日後に死滅することになる。

【0213】

ポジティブ選択による全Ｔ細胞の単離：Ｂ細胞単離からの非標識細胞により、ＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞濃縮キットを製造業者の使用説明書に従って使用し、Ｔ細胞を単離した。単離後、細胞を遠心分離し（３００×ｇ、５分、ＲＴ）、上清を廃棄し、ペレットを完全培地に再懸濁した。その後、Ｔ細胞を計数し、使用するまで４℃で貯蔵した。

【0214】

７日間のＴ細胞のプライミング：単離したＴ細胞（２×１０５個／５０μＬ／ウェル）を９６ウェルＵ底プレート内において、１０ＩＵ／ｍＬのｒｈＩＬ－２を含有する完全培地に分散した。その後、２×１０４個の照射したＥＢＶ－Ｂ細胞又は一次Ｂ細胞（５０μＬ／ウェル）を各ウェルに添加した。陰性対照条件（Ｂ細胞のみ、ＥＢＶ－Ｂ細胞のみ及びＴ細胞のみ）を５０μＬの完全培地で満たした。次に、１００μＬの異なる抗体及び濃縮物（下記を参照されたい）を細胞の上面に載せ、３７℃、５％ＣＯ２で７日間インキュベートし、ここでは、２日ごとに１５０μＬの古い培地を慎重に除去し、１０ＩＵ／ｍＬのｒｈＩＬ－２を添加した新しい完全培地１５０μＬを上部に添加した。ＩｇＧ１、ベラタセプト及びＣＦＺ５３３において使用した濃度は、１０、５０、１００及び２００μｇ／ｍＬ又は媒体対照であった。

【0215】

ＣｅｌｌＴｒａｃｅ ＣＦＳＥ及びＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ標識：最初に、適合ドナーからのＰＢＭＣを解凍し、ＥａｓｙＳｅｐヒトＢ細胞濃縮キットを製造業者の使用説明書に従って使用し、一次Ｂ細胞をネガティブ選択により単離した。次に、一次Ｂ細胞及び維持したＥＢＶ－Ｂ細胞培養物をＣｅｌｌＴｒａｃｅ ＣＦＳＥ試薬で標識した。すなわち、細胞を遠心分離し（３６５×ｇ、７分、ＲＴ）、上清を廃棄し、ペレットを５ｍＬのＰＢＳ／１％ＦＢＳに再懸濁し、遠心分離した（３６５×ｇ、７分、ＲＴ）。次に、細胞を２ｍＬのＰＢＳ／１％ＦＢＳに再懸濁し、ＰＢＳで希釈した１μＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅ ＣＦＳＥ試薬２ｍＬ（最終濃度０．５μＭ）を細胞に添加し、インキュベートした（８分、３７℃、暗所）。その後、均等な体積（ここでは４ｍＬ）の予備加温したＦＢＳを添加し、蛍光をクエンチし、穏やかに混合した。細胞を遠心分離し（３６５×ｇ、１０分、ＲＴ）、上清を廃棄し、ペレットを５ｍＬの完全培地に再懸濁し、遠心分離した（３６５×ｇ、１０分、ＲＴ）。次に、ペレットを４ｍＬの完全培地に再懸濁し、インキュベートし（１時間、３７℃、暗所）、６ｍＬの完全培地で満たした。細胞を再び遠心分離し（３６５×ｇ、１０分、ＲＴ）、上清を廃棄し、ペレットを５ｍＬの完全培地に再懸濁した。計数後、染色単離した一次Ｂ細胞及びＥＢＶ－Ｂ細胞をＴ－２５フラスコに入れ、上記のように照射した。さらに、少ない一定分量を採取し、十分なＣＦＳＥ標識についてフローサイトメトリーにより細胞を分析した。

【0216】

培養したＴ細胞に対して同じことを実施した。７日培養後、すべての細胞を滅菌した９６ウェルＶ底プレートに移し、遠心分離し（１０００×ｇ、５分、ＲＴ）、ペレットを２００μＬの完全培地に再懸濁した。各条件から５μＬを採取し、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９及びＣＤ２０の発現並びに十分なＣＦＳＥ染色についてフローサイトメトリーにより分析した。残存細胞を遠心分離し（１０００×ｇ、５分、ＲＴ）、上清を廃棄し、ペレットを２．５μＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ試薬１００μＬに再懸濁し、インキュベートした（２０分、３７℃）。次に、細胞を遠心分離し（３６５×ｇ、１０分、ＲＴ）、上清を廃棄し、１００μＬの予備加温したＦＢＳを添加し、蛍光をクエンチし、穏やかに混合した。その後、細胞をインキュベートし（３０分、３７℃）、１５０μＬの完全培地を添加し、遠心分離し（３６５×ｇ、１０分、ＲＴ）、上清を廃棄し、ペレットを２００μＬの完全培地に再懸濁した。すべての細胞を計数し、各ドナーから一定分量を採取し、十分なＣＦＳＥ染色についてＦＡＣＳにより点検した。

【0217】

４日間の共培養のリコール：すべての条件について、２通りの９６ウェルＵ底プレートを使用した。２×１０４個のＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ標識Ｔ細胞（５０μＬ／ウェル）を各ウェルに添加し、２×１０４個の照射したＣｅｌｌＴｒａｃｅ ＣＦＳＥ標識ＥＢＶ－Ｂ細胞又は一次Ｂ細胞（５０μＬ／ウェル）を上面に添加した。異なる濃度の抗体を含有する１００μＬの完全培地（４．３．５を参照されたい）を添加し、４日間培養した（３７℃、５％ＣＯ２）。

【0218】

退行アッセイ
健常ボランティア６名（１８－００１～１８－００６）からのバフィーコートをＢｌｕｔｓｐｅｎｄｅｚｅｎｔｒｕｍ Ｂｅｒｎから入手した。ＬｅｕｃｏＳｅｐチューブを製造業者の使用説明書に従って使用し、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離し、ＴＣ２０で計数し、細胞培地（培地、緩衝液及び試薬）中で調節した。すべての条件（表３－２を参照されたい）は、９６ウェルＵ底プレート内で５回実行し、２×１０５個の細胞／ウェルを含有した。ＰＢＭＣを３７℃で１０～１５分間インキュベートしてから、ＥＢＶ上清及びトランスフェリンを含有する細胞培地（培地、緩衝液及び試薬を参照されたい）を添加した。ベラタセプトを２つの異なる濃度（１０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ）において、アイソタイプｈＩｇＧ及びＣＦＺ５３３を４つの異なる濃度（１０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ）において、且つＣｓＡを４つの異なる濃度（０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ、２０μＭ）において試験した。プレートは、いかなる補充物も添加することなく、１４日間インキュベートした（３７℃、５％ＣＯ２）。１４日後、細胞を９６ウェルＶ底プレートに移し、ＲＴ、１０００×ｇで５分間遠心分離し、さらなる分析のため、得られた上清（２００μＬ）を－８０℃で貯蔵した。細胞ペレットを染色し、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ染色法）により分析した。

【0219】

ＦＡＣＳ染色法
退行アッセイからの細胞ペレットをＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、４℃で２０分間、ブロッキング緩衝液でブロッキングした。洗浄なしにＣＤ３－ＰＥ及びＣＤ１９－ＡＰＣからなる抗体カクテルを添加し、４℃で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、６５μＬの細胞懸濁液をＦｏｒｔｅｓｓａＸ２０でプレート（ＨＴＳリーダー）内において得て、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて分析した。異なる時点で、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９及びＣＤ２０のような表面発現マーカー並びに十分なＣｅｌｌＴｒａｃｅ ＣＦＳＥ又はＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ標識について、フローサイトメトリーにより細胞を分析した。さらに、共培養時間の終了時、生存度マーカーのＣＤ３、ＣＤ４及びＣＤ８を用いてＴ細胞増殖について細胞を分析した。したがって、細胞を採取し、９６ウェルＶ底プレートに入れ、２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。次に、細胞を遠心分離し（１０００×ｇ、５分、ＲＴ）、異なる抗体（補償のための単一又は異なる抗体カクテル）で４℃において３０分間染色した。２つの洗浄及び遠心分離ステップ後、細胞を５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液で再懸濁し、Ｍｉｃｒｏｎｉｃｓチューブに移し、ＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）細胞アナライザで得た。

【0220】

結果：
ヒトドナーの選択：共培養を開始する前に、前述の通り、ＥＬＩＳＡを用いてＥＢＶ血清型について試験した。本発明者らは、１０名のＥＢＶ血清陽性ドナー（ドナー８８、９０、１２５、１３９、１５３、１７１、６３３、６３７、６５２及び６６０）及び８名のＥＢＶ血清陰性ドナー（ドナー７３、１１１、２８９、４３７、５８３、６２４、６３５及び６７０）を同定した。これらのドナーから、ＥＢＶ－Ｂ細胞株を上記のように作製し、異なる細胞を単離し、共培養アッセイに使用した。

【0221】

ＦＡＣＳ結果Ｉ
細胞共培養モデルにおいて、本発明者らは、ＥＢＶ－Ｂ細胞又は一次Ｂ細胞及び自己Ｔ細胞を使用し、その細胞を４つの異なる濃度（１０、５０、１００及び２００μｇ／ｍＬ又は媒体対照）のＩｇＧ１アイソタイプ、抗ＣＤ４０（ＣＦＺ５３３）又は抗ＣＴＬ－Ａ４抗体（ベラタセプト）のいずれかとともにインキュベートした。目的の抗体を「プライミング」相、「リコール」相又は「プライミング及びリコール」相のいずれかで前述のような細胞に添加した。１１日の共培養後、Ｔ細胞増殖に対してフローサイトメトリーにより、またＩＦＮγ産生に対してＥＬＩＳＡにより細胞を分析した。

【0222】

共培養物が一次Ｂ細胞及び自己Ｔ細胞から構成された実験では、顕微鏡的に観察され、フローサイトメトリーにより得られた細胞生存度及び増殖又は細胞集団形成は、低かった（ＥＢＶ血清陽性及びＥＢＶ血清陰性）。したがって、結果は、不確定であったが、この報告では示さない。さらに、これは、すべての条件が検出限界を下回るＩＦＮγサイトカインレベルでも認められた。したがって、Ｔ細胞増殖（図７～図１２）及びＩＦＮγサイトカインレベル結果（図１３及び図１４）は、ＥＢＶ－Ｂ細胞及び自己Ｔ細胞を含有する共培養物の場合に限り示す。

【0223】

ＦＡＣＳ結果ＩＩ
全体的に、６名の異なるドナーを使用し、分析した。本発明者らは、２つの最高ＣｓＡ濃度（１０μＭ及び２０μＭ）を、細胞に対して毒性であったことから分析から除外した。さらに、２名のドナー（１８－００３及び１８－００５）を分析から除外した。なぜなら、ＣｓＡ（本発明者らの陽性対照を担う）がＴ及びＢ細胞増殖に対するいかなる効果も示さなかったからである。

【0224】

他の４名のドナーについて、記載のゲーティング方法（ＣＤ３^＋Ｔ細胞及びＣＤ１９^＋Ｂ細胞分析及び図１におけるゲーティング方法）を用いることで実施した分析の結果を図２及び図３に示す。

【0225】

Ｔ細胞増殖に対するゲーティング方法：１１日の共培養後、細胞を、生存度マーカーを含むＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９及びＣＤ２０について染色し、Ｔ及びＢ細胞増殖についてフローサイトメトリーにより分析した。図６－１では、ＥＢＶ－Ｂ細胞／Ｔ細胞共培養物を使用する、Ｔ細胞増殖に対するゲーティング方法を示す。最初に、前方散乱（ＦＣＳ）／側方散乱（ＳＳＣ）で得られた全細胞をドットプロットにプロットし、次に全生細胞（生存度マーカー）に対してヒストグラムプロットでゲーティングした。生細胞ゲートからＣＤ３^＋Ｔ細胞を選択し、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅｒ Ｖｉｏｌｅｔ陽性細胞に対するゲーティングによりＴ細胞増殖を同定した（第１列、左から右）。次に、全生細胞から象限を設け、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞を同定し、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅｒ Ｖｉｏｌｅｔ標識を有する増殖について分析した（第２列）。

【0226】

ＣＤ３^＋Ｔ細胞及びＣＤ１９^＋Ｂ細胞分析におけるゲーティング方法
１４日後、細胞をＣＤ３及びＣＤ１９抗体で染色し、ＣＤ３^＋Ｔ細胞及びＣＤ１９^＋Ｂ細胞についてフローサイトメトリーにより分析した。図１にゲーティング方法を示す。最初に、前方散乱（ＦＣＳ）／側方散乱（ＳＳＣ）で得られた全細胞をドットプロットにプロットし、次にＣＤ３^＋Ｔ細胞（上の紫色の丸）又はＣＤ１９^＋Ｂ細胞（右の紫色の丸）のいずれかに対してドットプロットにおいてさらにゲーティングした。１名の代表的ドナーからの異なる条件を示す（（第１列：ＰＢＭＣ＋培地－ＥＢＶ（左プロット）、ＰＢＭＣ＋培地＋ＥＢＶ（右プロット）；第２列：ＰＢＭＣ＋０．１μＭのＣｓＡ＋ＥＢＶ（左プロット）、ＰＢＭＣ＋５０μｇ／ｍＬのベラタセプト＋ＥＢＶ（右プロット）；第３列：ＰＢＭＣ＋５０μｇ／ｍＬのｈＩｇＧ１＋ＥＢＶ（左プロット）、ＰＢＭＣ＋５０μｇ／ｍＬのＣＦＺ５３３＋ＥＢＶ（右プロット））。

【0227】

ＥＢＶ血清陽性ＥＢＶ－Ｂ細胞／Ｔ細胞共培養物のＴ細胞増殖：インビトロ試験の全体設計を図６に示す。全ＣＤ３^＋Ｔ細胞（図７）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞（図８）及びＣＤ８^＋Ｔ細胞（図９）のＴ細胞増殖を検討するため、異なる濃度（０、１０、５０、１００又は２００μｇ／ｍＬ）のＣＦＺ５３３又はベラタセプトを、指定された相（「プライミング」、「リコール」、「プライミング及びリコール」）のＥＢＶ血清陽性ＥＢＶ－Ｂ細胞／Ｔ細胞共培養物に投与し、培地又はアイソタイプ対照のような対応する対照に対する比として分析した。３つすべての実験条件において、ＥＢＶ－Ｂ細胞は、Ｔ細胞単独の条件と比較してＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖を誘導した（グラフ内で「０μｇ／ｍＬ」として示した）。ベラタセプトは、抗体を共培養物に２回投与するとき（「プライミング及びリコール」相）に最も強いＥＢＶ－Ｂ細胞の存在下において、「プライミング」及び「リコール」のみの条件と比較してＥＢＶ駆動Ｔ細胞増殖を減少させた。さらに、１０及び５０μｇ／ｍＬのベラタセプトは、３つすべての条件で１００及び２００μｇ／ｍＬのベラタセプトよりもやや強力であるが、有意でない抑制パターンを示していた。加えて、１００及び２００μｇ／ｍＬのベラタセプトは、Ｔ細胞増殖に対する減少効果を「プライミング及びリコール」相に限って有したが、専ら「プライミング」相又は「リコール」相での添加時に有しなかった。それに対して、ＣＦＺ５３３は、４つすべての試験濃度でＣＤ３^＋Ｔ細胞増殖に対する減少効果を有しなかった。

【0228】

ＣＤ４^＋Ｔ細胞増殖を詳細に分析すると（図８）、ベラタセプトは、やはり抗体を「プライミング及びリコール」相で投与するときに最も強いＥＢＶ－Ｂ細胞の存在下において、「プライミング」及び「リコール」のみの条件と比較してＥＢＶ駆動Ｔ細胞増殖を減少させた。加えて、１０及び５０μｇ／ｍＬのベラタセプトは、３つすべての条件で１００及び２００μｇ／ｍＬのベラタセプトよりもやや強力であるが、有意でないＣＤ４^＋Ｔ細胞増殖に対する抑制パターンを誘導していた。さらに、１００及び２００μｇ／ｍＬのベラタセプトは、「プライミング及びリコール」相でＴ細胞増殖に対する強力な減少効果を有し、「プライミング」又は「リコール」のみの相ではより少ない程度で有した。興味深いことに、両方とも、高い用量では、ＣＤ３^＋Ｔ細胞増殖の結果と異なり、Ｔ細胞増殖をやはり低減することが可能であった。再び以前に認めた通り、ＣＦＺ５３３は、４つすべての試験濃度において、「プライミング」のみの相におけるわずかな低下を除き、ＣＤ４^＋Ｔ細胞増殖に対する減少効果を有しなかった。

【0229】

ＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖を分析すると（図９）、ベラタセプト及びＣＦＺ５３３は、以前にＣＤ３^＋Ｔ細胞増殖において認められた場合と同様の効果を有した（図７）。ＥＢＶ血清陰性ＥＢＶ－Ｂ細胞／Ｔ細胞共培養物のＴ細胞増殖である。同じ手法を使用し、ＥＢＶ血清陰性ドナーからの全ＣＤ３^＋Ｔ細胞（図１０）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞（図１１）及びＣＤ８^＋Ｔ細胞（図１２）のＴ細胞増殖を分析した。ＥＢＶ血清陽性ドナーに関して、３つすべての条件において、ＥＢＶ－Ｂ細胞は、Ｔ細胞単独の条件と比較してＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖を誘導した（グラフ内で「０μｇ／ｍＬ」として示した）。ＣＤ３^＋Ｔ細胞増殖（図１０）の場合、ベラタセプトは、抗体を共培養物に２回投与するとき（「プライミング及びリコール」相）に最も強いＥＢＶ－Ｂ細胞の存在下において、「プライミング」及び「リコール」のみの条件と比較してＥＢＶ駆動Ｔ細胞増殖を減少させた。さらに、１０及び５０μｇ／ｍＬのベラタセプトは、３つすべての条件で１００及び２００μｇ／ｍＬのベラタセプトよりもやや強力であるが、有意でない抑制パターンを示していた。加えて、１００及び２００μｇ／ｍＬのベラタセプトは、Ｔ細胞増殖に対する減少効果を「プライミング及びリコール」条件に限って有し、「プライミング」又は「リコール」のみの条件ではわずかにすぎなかった。それに対して、ＣＦＺ５３３は、４つすべての試験濃度でＣＤ３^＋Ｔ細胞増殖に対する減少効果を有しなかった。

【0230】

ＣＤ４^＋Ｔ細胞増殖を詳細に評価すると（図１１）、ベラタセプトは、３つすべての異なる条件で同様に強力であり、且つＥＢＶ血清陽性ドナーの場合よりも強力であるＥＢＶ－Ｂ細胞の存在下でＥＢＶ駆動Ｔ細胞増殖を減少させた。興味深いことに、ＥＢＶ血清陽性ドナーの場合に観察された通り、４つの用量（１０、５０、１００及び２００μｇ／ｍＬ）間で明確な差異は認められなかった。それに対して、ＣＦＺ５３３は、１０μｇ／ｍＬ（「プライミング」のみ及び「プライミング及びリコール」条件）及び５０μｇ／ｍＬ（「リコール」のみの条件）での有意でないわずかな増加を除き、ＣＤ４^＋Ｔ細胞増殖に対する効果を有しなかった。

【0231】

ＣＤ４^＋Ｔ細胞増殖を詳細に評価すると（図１１）、ベラタセプトは、３つすべての異なる条件で同様に強力であり、且つＥＢＶ血清陽性ドナーの場合よりも強力であるＥＢＶ－Ｂ細胞の存在下でＥＢＶ駆動Ｔ細胞増殖を減少させた。興味深いことに、ＥＢＶ血清陽性ドナーの場合に観察された通り、４つの用量（１０、５０、１００及び２００μｇ／ｍＬ）間で明確な差異は認められなかった。それに対して、ＣＦＺ５３３は、１０μｇ／ｍＬ（「プライミング」のみ及び「プライミング及びリコール」条件）及び５０μｇ／ｍＬ（「リコール」のみの条件）での有意でないわずかな増加を除き、ＣＤ４^＋Ｔ細胞増殖に対する効果を有しなかった。

【0232】

異なる刺激を用いたＣＤ３^＋Ｔ細胞及びＣＤ１９^＋Ｂ細胞増殖に対する効果
全ＣＤ３^＋Ｔ細胞（図２）及びＣＤ１９^＋Ｂ細胞（図３）の増殖を検討するため、異なる濃度としてｈＩｇＧ１若しくはＣＦＺ５３３（１０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ又は２００μｇ／ｍＬ）、ベラタセプト（１０μｇ／ｍＬ又は５０μｇ／ｍＬ）又はＣｓＡ（０．１μＭ又は１μＭ）を使用した。既に上記の通り、１０μＭ及び２０μＭのＣｓＡは、細胞に対して毒性であったことから、分析から除外した。「ＥＢＶを有しない培地」を除くすべての条件をＥＢＶ上清及び各々の化合物又は抗体とともにインキュベートした。図２に示す通り、ＰＢＭＣをＥＢＶ上清とともにインキュベートしたとき、ＰＢＭＣを培地のみ（ＥＢＶを有しない培地）とともにインキュベートしたときと比較してＣＤ３^＋Ｔ細胞数に明らかな増加が認められた。さらに、予想通り、０．１μＭ及び１μＭのＣｓＡの場合、それが本発明者らの陽性対照を担うことから、対照条件（培地＋ＥＢＶ）と比較してＣＤ３^＋Ｔ細胞数における強力な減少が認められた。ベラタセプト（１０μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬ）の場合に同じことを認めることができたが、ＣｓＡの場合よりも低い程度であった。ＣＦＺ５３３及び対応するアイソタイプ対照ｈＩｇＧ１は、４つすべての試験濃度においてＣＤ３^＋Ｔ細胞数に対する効果を全く有しなかった。ＣＤ１９^＋Ｂ細胞増殖に注目すると（図３）、ＰＢＭＣをＥＢＶ上清とともにインキュベートしたとき、ＰＢＭＣを培地のみ（ＥＢＶを有しない培地）と培養したときと比較してＣＤ１９^＋Ｂ細胞数における明らかな増加が認められた。さらに、予測通り、０．１μＭ及び１μＭのＣｓＡの場合、対照条件（培地＋ＥＢＶ）と比較してＣＤ１９^＋Ｂ細胞数における強力な増加が認められた。ベラタセプト（１０μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬ）がＣＤ１９^＋Ｂ細胞数の増加をもたらした一方、アイソタイプ対照ｈＩｇＧ１は、４つすべての試験濃度において効果を全く有しなかった。それに対して、ＣＦＺ５３３は、１４日後、おそらく間接的なＮＫ細胞媒介性抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）に起因してＣＤ１９^＋Ｂ細胞数における減少を示した。Ｒｉｓｔｏｖらの公表（Ｒｉｓｔｏｖ ２０１８）では、ＣＦＺ５３３とともに３日間インキュベートされた全血培養物中でＡＤＣＣが認められず、Ｃｏｒｄｏｂａらの公表（Ｃｏｒｄｏｂａ ２０１５）では、ＣＦＺ５３３は、実験期間にわたり有意な末梢性Ｂ細胞枯渇を示さなかった（非ヒト霊長類における腎移植から１００日後、１３及び２６週毒性試験）。ＣＤ１９減少の観点で認められた差異は、異なる実験設定により説明することができた。ＥＢＶ退行アッセイでは、ＮＫ細胞がＥＢＶにより明らかに活性化され、実験期間がそれらの拡大を可能にする一方、特定の活性化を全く伴わない３日アッセイでは、ＡＤＤＣのレベルは、無視できる。ＮＫ細胞の潜在的関与を検討するため、ＮＫ細胞が細胞培養モデルにおいて維持されるか又は枯渇されるかのいずれかである新たな実験セットを実施した。本発明者らは、ＨＣＤ１２２、枯渇ＣＤ４０ ｍＡｂを陽性対照としてさらに含めた。完全又はＮＫ細胞枯渇ＰＢＭＣ培養物中のＣＤ１９^＋Ｂ細胞数を分析したとき、同様の結果が得られた。予想通り、ＨＣＤ１２２はＢ細胞を実際に枯渇させた。再び、ＣＦＺ５３３は、ＰＢＭＣ培養物中のＮＫ細胞と独立のアイソタイプ対照と比較してＣＤ１９^＋Ｂ細胞数における減少を示した。したがって、本発明者らは、ＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣを排除することができる。実際に、ＣＤ４０－ＣＤ４０Ｌ相互作用がインビボでのＥＢＶ－Ｂ細胞リンパ腫の樹立にとって決定的であることが示されている（Ｍａ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。

【0233】

エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）関連の移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）は、ＥＢＶ一次感染又は再活性化に関連する。免疫適格性個体では、抗ウイルスＴ細胞応答は、感染を制御するが、ＥＢＶはＢ細胞及びいくつかの他の細胞型において潜伏したままである。移植患者であれば、免疫抑制は、抗ＥＢＶ Ｔ細胞応答を弱め、ＥＢＶ誘導Ｂ細胞増殖を制御不能状態にし得る。本発明者らは、ＥＢＶ－Ｂ細胞のＴ細胞駆動制御、したがってＢ細胞増殖に対する抗ＣＤ４０ ｍＡｂの効果について試験した。そのため、本発明者らは、抗ＣＤ４０ ｍＡｂ（ＣＦＺ５３３／イスカリマブ）との比較において、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ融合タンパク質（ベラタセプト）とともにインキュベートした末梢血単核球を使用し、ＥＢＶ退行アッセイを実施した。さらに、本発明者らは、Ｔ細胞増殖及びＩＦＮ産生に対してＣＤ４０又はＣＴＬＡ－４を遮断する効果を、Ｔ細胞のＥＢＶ－Ｂ細胞（血清陽性及び血清陰性）又は一次Ｂ細胞との自家共培養物を使用することで評価した。抗ＣＤ４０ ｍＡｂイスカリマブを除くベラタセプト及びＣｓＡは、Ｔ細胞活性を低下させ、インビトロ不死化細胞の異常増殖をもたらした。さらに、イスカリマブを除くベラタセプトは、共培養系を使用したＥＢＶ－Ｂ細胞の存在下でのＥＢＶ媒介性Ｔ細胞増殖及びＩＦＮγ分泌を低減した。結論として、イスカリマブは、ＣｓＡ及びベラタセプトと異なり、インビトロでＥＢＶ制御を損なわず、イスカリマブを投与した移植患者がＰＴＬＤの低下したリスクを有することが示唆される。

【0234】

ＥＢＶ Ｂ細胞／Ｔ細胞共培養モデルでは、ＣＦＺ５３３／イスカリマブを除くベラタセプトは、ＥＢＶ－Ｂ細胞の存在下でのＥＢＶ媒介性Ｔ細胞増殖及びＩＦＮγ分泌を低減した。ベラタセプトの阻害効果は、組み合わされた「プライミング」及び「リコール」培養において、またＣＤ４^＋Ｔ細胞に対して最も顕著であった。

【0235】

ＣＦＺ５３３／イスカリマブを除くベラタセプト及びＣｓＡは、Ｔ細胞活性を低下させ、インビトロ不死化Ｂ細胞の異常増殖をもたらした。これらの結果は、イスカリマブが、腎臓器官移植レシピエントにおいて、ベラタセプトと比較して改善された安全性特性を有することを示す。ＣＦＺ５３３／イスカリマブは、ベラタセプトと異なり、インビトロでＥＢＶ制御を損なわず、ＣＦＺ５３３／イスカリマブを投与した移植患者がＰＴＬＤの低下したリスクを有することが示唆される。ＥＢＶ退行アッセイに基づき、ＣｓＡ／ＣＮＩについて同様の結論を引き出すことができる。これらの結果は、ＥＢＶ感染の発生率増加が認められなかったＣＮＩフリーの治療法としてイスカリマブを使用する現在の臨床腎移植データに一致するように思われる。

【0236】

参考文献
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Ｍａ ＳＤ，Ｘｕ Ｘ，Ｐｌｏｗｓｈａｙ Ｊ ｅｔ ａｌ．（２０１５）．ＬＭＰ１－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｍｕｔａｎｔ ｒｅｑｕｉｒｅｓ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｌｙｍｐｈｏｍａｇｅｎｅｓｉｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，１２５（１）：３０４－３１５．
Ａｎｄｏｒｓｋｙ ＤＪ，Ｙａｍａｄａ ＲＥ，Ｓａｉｄ Ｊ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ ｌｉｇａｎｄ １ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｂｙ ｎｏｎ－ｈｏｄｇｋｉｎ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，Ｊｕｌ １；１７（１３）：４２３２－４２４４．

【図1-1】

【図1-2】

【図1-3】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5-1】

【図5-2】

【図5-3】

【図5-4】

【図6】

【図7-1】

【図7-2】

【図7-3】

【図8-1】

【図8-2】

【図8-3】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17-1】

【図17-2】

【配列表】

2022553493000001.app

【手続補正書】

【提出日】2022-09-02

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象におけるＥＢＶ関連障害を予防するための組成物であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物。

【請求項2】

前記対象は、小児患者である、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記対象は、臓器又は組織移植を受けることになる、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項4】

前記対象は、ＥＢＶ血清陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ血清陰性移植患者である、請求項３に記載の組成物。

【請求項5】

前記患者は、肝移植患者である、請求項３に記載の組成物。

【請求項6】

前記対象は、免疫抑制されている、請求項３に記載の組成物。

【請求項7】

前記ＥＢＶ関連障害は、癌又はリンパ増殖性疾患である、請求項３に記載の組成物。

【請求項8】

対象がＥＢＶ関連障害を発症する可能性を低減するための組成物であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物。

【請求項9】

前記患者は、小児患者である、請求項８に記載の組成物。

【請求項10】

前記対象は、臓器又は組織移植を受けることになる、請求項８又は９に記載の組成物。

【請求項11】

前記対象は、ＥＢＶ陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ血清陰性移植患者である、請求項１０に記載の組成物。

【請求項12】

前記患者は、肝移植患者である、請求項１０に記載の組成物。

【請求項13】

前記対象は、免疫抑制されている、請求項１０に記載の組成物。

【請求項14】

前記ＥＢＶ関連障害は、癌又はリンパ増殖性疾患である、請求項１０に記載の組成物。

【請求項15】

移植後リンパ増殖性疾患の可能性を低減する、請求項１４に記載の組成物。

【請求項16】

固形臓器を、それを必要とする患者に移植するための組成物であって、ＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物。

【請求項17】

前記患者は、小児患者である、請求項１６に記載の組成物。

【請求項18】

前記対象は、ＥＢＶ陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ血清陰性移植患者である、請求項１６又は１７に記載の組成物。

【請求項19】

前記患者は、肝移植患者である、請求項１８に記載の組成物。

【請求項20】

前記対象は、免疫抑制されている、請求項１８に記載の組成物。

【請求項21】

対象におけるＥＢＶ感染を制御するための組成物であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物。

【請求項22】

前記患者は、小児患者である、請求項２１に記載の組成物。

【請求項23】

前記対象は、臓器又は組織移植を受けることになる、請求項２１又は２２に記載の組成物。

【請求項24】

前記対象は、ＥＢＶ陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ血清陰性移植患者である、請求項２３に記載の組成物。

【請求項25】

前記患者は、肝移植患者である、請求項２４に記載の組成物。

【請求項26】

前記対象は、免疫抑制されている、請求項２４に記載の組成物。

【請求項27】

前記ＣＤ４０アンタゴニストは、抗ＣＤ４０抗体である、請求項１、８、１６又は２１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項28】

前記ＣＤ４０アンタゴニストは、ＡＳＫＰ１２４０、ＢＩ６５５０６４及びＦＦＰ１０４からなる抗ＣＤ４０抗体の群から選択される、請求項２７に記載の組成物。

【請求項29】

前記抗体は、ＡＤＣＣ活性が抑制された抗ＣＤ４０抗体である、請求項２７に記載の組成物。

【請求項30】

前記抗体は、
ｅ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｆ．配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｇ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、及び
ｈ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される、請求項２７に記載の組成物。

【請求項31】

前記抗体は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項２８又は３０に記載の組成物。

【請求項32】

前記抗体は、ＣＦＺ５３３である、請求項２７に記載の組成物。

【請求項33】

前記抗体ＣＦＺ５３３は、ＣｓＡ、タクロリムス又はエベロリムスなどのｍＴｏｒ阻害剤と組み合わせて使用される、請求項３２に記載の組成物。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０２３５

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0235】

ＣＦＺ５３３／イスカリマブを除くベラタセプト及びＣｓＡは、Ｔ細胞活性を低下させ、インビトロ不死化Ｂ細胞の異常増殖をもたらした。これらの結果は、イスカリマブが、腎臓器官移植レシピエントにおいて、ベラタセプトと比較して改善された安全性特性を有することを示す。ＣＦＺ５３３／イスカリマブは、ベラタセプトと異なり、インビトロでＥＢＶ制御を損なわず、ＣＦＺ５３３／イスカリマブを投与した移植患者がＰＴＬＤの低下したリスクを有することが示唆される。ＥＢＶ退行アッセイに基づき、ＣｓＡ／ＣＮＩについて同様の結論を引き出すことができる。これらの結果は、ＥＢＶ感染の発生率増加が認められなかったＣＮＩフリーの治療法としてイスカリマブを使用する現在の臨床腎移植データに一致するように思われる。

本発明の様々な実施形態を以下に示す。
１．対象におけるＥＢＶ関連障害を予防する方法であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。
２．前記対象は、小児患者である、上記１に記載の方法。
３．前記対象は、臓器又は組織移植を受けることになる、上記１又は２に記載の方法。
４．前記対象は、ＥＢＶ血清陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ血清陰性移植患者である、上記３に記載の方法。
５．前記患者は、肝移植患者である、上記３に記載の方法。
６．前記対象は、免疫抑制されている、上記３に記載の方法。
７．前記ＥＢＶ関連障害は、癌又はリンパ増殖性疾患である、上記３に記載の方法。
８．対象がＥＢＶ関連障害を発症する可能性を低減する方法であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。
９．前記患者は、小児患者である、上記８に記載の方法。
１０．前記対象は、臓器又は組織移植を受けることになる、上記８又は９に記載の方法。
１１．前記対象は、ＥＢＶ陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ血清陰性移植患者である、上記１０に記載の方法。
１２．前記患者は、肝移植患者である、上記１０に記載の方法。
１３．前記対象は、免疫抑制されている、上記１０に記載の方法。
１４．前記ＥＢＶ関連障害は、癌又はリンパ増殖性疾患である、上記１０に記載の方法。
１５．移植後リンパ増殖性疾患の可能性を低減する、上記１４に記載の方法。
１６．固形臓器を、それを必要とする患者に移植する方法であって、ＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。
１７．前記患者は、小児患者である、上記１６に記載の方法。
１８．前記対象は、ＥＢＶ陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ血清陰性移植患者である、上記１６又は１７に記載の方法。
１９．前記患者は、肝移植患者である、上記１８に記載の方法。
２０．前記対象は、免疫抑制されている、上記１８に記載の方法。
２１．対象におけるＥＢＶ感染を制御する方法であって、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。
２２．前記患者は、小児患者である、上記２１に記載の方法。
２３．前記対象は、臓器又は組織移植を受けることになる、上記２１又は２２に記載の方法。
２４．前記対象は、ＥＢＶ陽性ドナーから臓器を受けるＥＢＶ血清陰性移植患者である、上記２３に記載の方法。
２５．前記患者は、肝移植患者である、上記２４に記載の方法。
２６．前記対象は、免疫抑制されている、上記２４に記載の方法。
２７．前記ＣＤ４０アンタゴニストは、抗ＣＤ４０抗体である、上記１、８、１６又は２１のいずれかに記載の方法。
２８．前記ＣＤ４０アンタゴニストは、ＡＳＫＰ１２４０、ＢＩ６５５０６４及びＦＦＰ１０４からなる抗ＣＤ４０抗体の群から選択される、上記２７に記載の方法。
２９．前記抗体は、ＡＤＣＣ活性が抑制された抗ＣＤ４０抗体である、上記２７に記載の方法。
３０．前記抗体は、
ｅ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｆ．配列番号１、配列番号２及び配列番号３として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５及び配列番号６として記述される高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体、
ｇ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体、及び
ｈ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される、上記２７に記載の方法。
３１．前記抗体は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む、上記２８又は３０に記載の方法。
３２．前記抗体は、ＣＦＺ５３３である、上記２７に記載の方法。
３３．前記抗体ＣＦＺ５３３は、ＣｓＡ、タクロリムス又はエベロリムスなどのｍＴｏｒ阻害剤と組み合わせて使用される、上記３２に記載の方法。

【国際調査報告】