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特表2022-553549慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の予防または治療用の組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-12-23
(54)【発明の名称】慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の予防または治療用の組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/5377 20060101AFI20221216BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/496 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/454 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/5375 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/495 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/4439 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/551 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/4427 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/4453 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/4525 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/445 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/4025 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/397 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/40 20060101ALI20221216BHJP
A61K 31/553 20060101ALI20221216BHJP
【ＦＩ】
A61K31/5377
A61P11/00
A61K31/496
A61K31/454
A61K31/5375
A61K31/495
A61K31/4439
A61K31/551
A61K31/4427
A61K31/4453
A61K31/4525
A61K31/445
A61K31/4025
A61K31/397
A61K31/40
A61K31/553
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022523982
(86)(22)【出願日】2020-10-22
(85)【翻訳文提出日】2022-04-22
(86)【国際出願番号】 IB2020059919
(87)【国際公開番号】W WO2021079300
(87)【国際公開日】2021-04-29
(31)【優先権主張番号】10-2019-0132501
(32)【優先日】2019-10-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】514052597
【氏名又は名称】チョン クン ダン ファーマシューティカル コーポレーション
(74)【代理人】
【識別番号】110002860
【氏名又は名称】弁理士法人秀和特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】チェ，ヨンイル
(72)【発明者】
【氏名】ハ，ニナ
(72)【発明者】
【氏名】ソ，ドンヒョン
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC02
4C086BC07
4C086BC17
4C086BC21
4C086BC37
4C086BC42
4C086BC50
4C086BC54
4C086BC73
4C086BC75
4C086BC82
4C086GA02
4C086GA07
4C086GA10
4C086GA12
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA52
4C086NA14
4C086ZA59
(57)【要約】
本発明は、化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む慢性閉塞性肺疾患の予防または治療用の薬学的組成物、前記化合物または組成物を用いた慢性閉塞性肺疾患の予防または治療方法、および慢性閉塞性肺疾患を治療するための薬剤の製造における前記化合物または組成物の使用に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する慢性閉塞性肺疾患の予防または治療用の医薬組成物：【化1】
前記式中、
Ａは
【化2】
であり、
ＸａおよびＸｂは各々独立にＣＨまたはＮであり、
Ｌ１およびＬ２は各々独立に水素、ハロゲン、－ＣＦ３、または－Ｃ１－３の直鎖または分岐鎖アルキルであり、
ＱはＣ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）２、Ｓ（＝Ｏ）またはＣ（＝ＮＨ）であり、
Ｙは下記グループから選択され
【化3】
、
ＭはＣ、Ｎ、Ｏ、ＳまたはＳ（＝Ｏ）２であり（この際、ＭがＣである場合、ｌおよびｍは１であり、ＭがＮである場合、ｌは１であり、ｍは０であり、ＭがＯ、ＳまたはＳ（＝Ｏ）２である場合、ｌおよびｍは０である）、
Ｒａ１およびＲａ２は各々独立に水素；ヒドロキシ；非置換または一つ以上のハロゲンで置換された－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖アルキル；－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖アルコール；ベンズヒドリル；Ｎ、Ｏ、Ｓのうち１～３個のヘテロ原子を環員として含む飽和または不飽和の５～７員複素環式化合物で置換された－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖アルキル（この際、複素環式化合物は、非置換または一つ以上の水素が任意にＯＨ、ＯＣＨ３、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、またはハロゲンで置換されてもよい）；Ｎ、Ｏ、Ｓのうち１～３個のヘテロ原子を環員として含む飽和または不飽和の５～７員複素環式化合物（この際、複素環式化合物は、非置換または一つ以上の水素が任意にＯＨ、ＯＣＨ３、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、またはハロゲンで置換されてもよい）；非置換または一つ以上の水素がハロゲン、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ１－２アルキルまたはヒドロキシで置換されたフェニル；非置換または一つ以上の水素がハロゲン、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ１－２アルキルまたはヒドロキシで置換されたベンジル；－Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ３；ハロゲン；－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシ；－Ｃ２－６アルコキシアルキル；－Ｃ（＝Ｏ）Ｒｘ、ここで、Ｒｘは直鎖または分岐鎖のＣ１－３アルキルまたはＣ３－１０のシクロアルキルである；
【化4】
、ここで、ＲｃおよびＲｄは独立に水素、Ｃ１－３の直鎖または分岐鎖アルキルである；
【化5】
または
【化6】
であり、
ｎは０、１または２の整数であり、
Ｒｂは水素；ヒドロキシ；非置換または一つ以上の水素がハロゲンで置換された－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルキル；－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３；－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖ヒドロキシアルキル；－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシ；－Ｃ２－６の直鎖または分岐鎖アルコキシアルキル；－ＣＦ３；ハロゲン；または
【化7】
であり、
ＲｅおよびＲｆは各々独立に水素または－Ｃ１－３の直鎖または分岐鎖アルキルであり、かつ
Ｚは下記のグループから選択され
【化8】
、
ＰａおよびＰｂは各々独立に
【化9】
；水素；ヒドロキシ；非置換または一つ以上の水素がハロゲンで置換された－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖アルキル；ハロゲン；－ＣＦ３；－ＯＣＦ３；－ＣＮ；－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシ；－Ｃ２－６の直鎖または分岐鎖アルキルアルコキシ；－ＣＨ２Ｆ；または－Ｃ１－３のアルコールであり、
ここで、
【化10】
はフェニル、ピリジン、ピリミジン、チアゾール、インドール、インダゾール、ピペラジン、キノリン、フラン、テトラヒドロピリジン、ピペリジンまたは下記グループから選択された環であり
【化11】
、
ｘ、ｙおよびｚは各々独立に０または１の整数であり、
Ｒｇ１、Ｒｇ２およびＲｇ３は各々独立に水素；ヒドロキシ；－Ｃ１－３アルキル；－ＣＦ３；－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシ；－Ｃ２－６の直鎖または分岐鎖アルキルアルコキシ；－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３；－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖ヒドロキシアルキル；－Ｎ（ＣＨ３）２；ハロゲン；フェニル；－Ｓ（（＝Ｏ）２）ＣＨ３；または下記グループから選択される
【化12】
。
【請求項2】
前記化学式Ｉで表される化合物は、下記化学式Ｉａで表される化合物である、請求項１に記載の医薬組成物：【化13】
前記式中、
Ｙは下記グループから選択され
【化14】
、
この際、Ｍ、ｌ、ｍ、ｎ、Ｒａ１、Ｒａ２、およびＲｂは各々請求項１で定義されたものと同様であり、
Ｚは
【化15】
であり、
ＰａおよびＰｂは各々独立に水素；ヒドロキシ；非置換または一つ以上の水素がハロゲンで置換された－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖アルキル；ハロゲン；－ＣＦ３；－ＯＣＦ
３；－ＣＮ；－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシ；－Ｃ２－６の直鎖または分岐鎖アルキルアルコキシ；－ＣＨ２Ｆ；または－Ｃ１－３のアルコールである。
【請求項3】
Ｙは下記グループから選択され【化16】
、
この際、ｎおよびＲｂは各々請求項１で定義されたものと同様であり、
Ｚは
【化17】
であり、
ＰａおよびＰｂは各々独立に水素；ハロゲン；－ＣＦ３；または－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシである、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記化学式Ｉで表される化合物は、下記表に記載された化合物である、請求項１に記載の医薬組成物：【表1-1】
【表1-2】
【表1-3】
【表1-4】
【表1-5】
【表1-6】
【表1-7】
【表1-8】
【表1-9】
【表1-10】
【表1-11】
【表1-12】
【表1-13】
【請求項5】
前記化学式Ｉで表される化合物は、下記表に記載された化合物である、請求項１に記載の医薬組成物：【表2】
【請求項6】
前記医薬組成物は、経口投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項7】
請求項１に記載の化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の治療学的に有効な量を個体に投与するステップを含む、慢性閉塞性肺疾患の予防または治療方法。
【請求項8】
慢性閉塞性肺疾患を予防または治療するための、請求項１に記載の化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項9】
慢性閉塞性肺疾患を治療するための薬剤の調製における、請求項１に記載の化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む慢性閉塞性肺疾患の予防または治療用の医薬組成物、前記化合物または組成物を用いた慢性閉塞性肺疾患の予防または治療方法、および慢性閉塞性肺疾患を治療するための薬剤の製造における前記化合物または組成物の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
慢性閉塞性肺疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ；ＣＯＰＤ）は、気道および肺実質炎症による細気管支および肺実質の病理学的変化によって発生する疾病であり、閉塞性細気管支炎および肺気腫（肺実質破壊）を特徴とする。慢性閉塞性肺疾患の種類としては、慢性閉塞性気管支炎（ｃｈｒｏｎｉｃ
ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、慢性細気管支炎（ｃｈｒｏｎｉｃ
ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｉｔｉｓ）および肺気腫（ｅｍｐｈｙｓｅｍａ）などが挙げられる。
ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、慢性細気管支炎（ｃｈｒｏｎｉｃ
ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｉｔｉｓ）および肺気腫（ｅｍｐｈｙｓｅｍａ）などが挙げられる。
【0003】
喫煙は、ＣＯＰＤの最も重要な原因であると考えられている。喫煙は、肺組織内で強い毒性物質として作用して、酸化物質、前炎症性因子および化学走化性因子の生成を促進し、これは、好中球のような炎症細胞の過度なマイグレーションを促進することになる。肺組織内に移動した炎症細胞は、多くの炎症性媒介物質を分泌し、肺組織内の炎症をさらに悪化させることになる。かかる炎症反応を促進する媒介物質としてはＴＮＦ－αなどが主に知られており、タバコ煙による炎症反応時に重要なマーカーとして活用されている。
【0004】
最近の研究において、上皮間葉転換（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｔｏ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｓｉｔｉｏｎ；ＥＭＴ）が慢性閉塞性疾患の病原性機構（ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ）の一つであり得ることが報告され（Ｃｏｕｒｔｎｅｙ ＪＭ、ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌｓ Ｔｉｓｓｕｅｓ Ｏｒｇａｎｓ．２０１７；２０３（２）：９９－１０４）、また、細胞外マトリックス（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ；ＥＣＭ）の主要タンパク質の一つであるＦＮ－ＥＤＡ（ｅｘｔｒａ ｄｏｍａｉｎ－Ａ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）がＣＯＰＤ患者の気道で発見されることが報告された（Ａｎｎｏｎｉ Ｒ、ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ．２０１２；４０（６）：１３６２－７３）。
【0005】
現在、慢性閉塞性肺疾患の治療に用いられる物質は、肺組織内の炎症を改善することを重点的に開発してきており、主にステロイド製剤、抗炎剤などが用いられている。しかし、かかる物質は、免疫抑制および耐性などのさまざまな副作用をもたらすため、長期間の治療が必要な慢性閉塞性肺疾患患者には適していない。そこで、ＣＯＰＤを効果的に治療できる薬剤を開発することが急務である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【特許文献1】韓国公開特許第１０－２０１４－０１２８８８６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明は、化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、慢性閉塞性肺疾患の予防または治療用の医薬組成物を提供する。
本発明は、前記 医薬組成物を個体に投与するステップを含む、慢性閉塞性肺疾患の予
防または治療方法を提供する。
本発明は、慢性閉塞性肺疾患を予防または治療するための薬剤の製造における前記組成物の使用を提供する。
本発明は、前記 医薬組成物を個体に投与するステップを含む、慢性閉塞性肺疾患の予
防または治療方法を提供する。
本発明は、慢性閉塞性肺疾患を予防または治療するための薬剤の製造における前記組成物の使用を提供する。
【0008】
本発明は、化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の治療学的に有効な量を個体に投与するステップを含む、慢性閉塞性肺疾患の予防または治療方法を提供する。
本発明は、慢性閉塞性肺疾患を予防または治療するための、化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
本発明は、慢性閉塞性肺疾患の予防または治療用の薬剤を製造するための、化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
本発明は、慢性閉塞性肺疾患を予防または治療するための、化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
本発明は、慢性閉塞性肺疾患の予防または治療用の薬剤を製造するための、化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0009】
上記のような背景下、本発明者らは、慢性閉塞性肺疾患の治療剤を開発するために鋭意努力研究した結果、本発明に係る化合物がＣＯＰＤ誘導マウスにおいて、免疫細胞の浸潤抑制、炎症細胞の浸潤抑制、および肺組織内の炎症性サイトカインの発現抑制効果を示すだけでなく、ＴＧＦ－β１－誘導ＥＭＴの抑制効果および主要ＥＣＭタンパク質であるＦＮ－ＥＤＡの発現抑制効果を示すことを確認し、本発明を完成するに至った。
【0010】
これを具体的に説明すれば次のとおりである。一方、本発明に開示された各々の説明および実施形態は、各々に対する他の説明および実施形態にも適用 できる。すなわち、本
発明に開示されたさまざまな要素の全ての組み合わせが本発明の範囲に属する。また、下記に記述された具体的な記載により本発明の範囲が限定されるとは限らない。
発明に開示されたさまざまな要素の全ての組み合わせが本発明の範囲に属する。また、下記に記述された具体的な記載により本発明の範囲が限定されるとは限らない。
【0011】
本発明は、下記化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、慢性閉塞性肺疾患の予防または治療用の医薬組成物を提供する：
前記式中、
Ａは
であり、
ＸａおよびＸｂは各々独立にＣＨまたはＮであり、
Ｌ１およびＬ２は各々独立に水素、ハロゲン、－ＣＦ３、または－Ｃ１－３の直鎖または分岐鎖アルキルであり、
ＱはＣ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）２、Ｓ（＝Ｏ）またはＣ（＝ＮＨ）であり、
Ｙは下記グループから選択され
、
ＭはＣ、Ｎ、Ｏ、ＳまたはＳ（＝Ｏ）２であり（この際、ＭがＣである場合、ｌおよびｍは１であり、ＭがＮである場合、ｌは１であり、ｍは０であり、ＭがＯ、ＳまたはＳ（＝Ｏ）２である場合、ｌおよびｍは０である）、
【化1】
前記式中、
Ａは
【化2】
であり、
ＸａおよびＸｂは各々独立にＣＨまたはＮであり、
Ｌ１およびＬ２は各々独立に水素、ハロゲン、－ＣＦ３、または－Ｃ１－３の直鎖または分岐鎖アルキルであり、
ＱはＣ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）２、Ｓ（＝Ｏ）またはＣ（＝ＮＨ）であり、
Ｙは下記グループから選択され
【化3】
、
ＭはＣ、Ｎ、Ｏ、ＳまたはＳ（＝Ｏ）２であり（この際、ＭがＣである場合、ｌおよびｍは１であり、ＭがＮである場合、ｌは１であり、ｍは０であり、ＭがＯ、ＳまたはＳ（＝Ｏ）２である場合、ｌおよびｍは０である）、
【0012】
Ｒａ１およびＲａ２は各々独立に水素；ヒドロキシ；非置換または一つ以上のハロゲンで置換された－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖アルキル；－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖アルコール；ベンズヒドリル；Ｎ、Ｏ、Ｓのうち１～３個のヘテロ原子を環員として含む飽和または不飽和の５～７員複素環式化合物で置換された－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖アルキル（この際、複素環式化合物は、非置換または一つ以上の水素が任意にＯＨ、ＯＣＨ３、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、またはハロゲンで置換されてもよい）；Ｎ、Ｏ、Ｓのうち１～３個のヘテロ原子を環員として含む飽和または不飽和の５～７員複素環式化合物（この際、複素環式化合物は、非置換または一つ以上の水素が任意にＯＨ、ＯＣＨ３、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、またはハロゲンで置換されてもよい）；非置換または一つ以上の水素がハロゲン、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ１－２アルキルまたはヒドロキシで置換されたフェニル；非置換または一つ以上の水素がハロゲン、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ１－２アルキルまたはヒドロキシで置換されたベンジル；－Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ３；ハロゲン；－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシ；－Ｃ２－６アルコキシアルキル；－Ｃ（＝Ｏ）Ｒｘ、ここで、Ｒｘは直鎖または分岐鎖のＣ１－３アルキルまたはＣ３－１０のシクロアルキルである；
、ここで、ＲｃおよびＲｄは独立に水素、Ｃ１－３の直鎖または分岐鎖アルキルである；
または
であり、
ｎは０、１または２の整数であり、
【化4】
、ここで、ＲｃおよびＲｄは独立に水素、Ｃ１－３の直鎖または分岐鎖アルキルである；
【化5】
または
【化6】
であり、
ｎは０、１または２の整数であり、
【0013】
Ｒｂは水素；ヒドロキシ；非置換または一つ以上の水素がハロゲンで置換された－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルキル；－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３；－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖ヒドロキシアルキル；－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシ；－Ｃ２－６の直鎖または分岐鎖アルコキシアルキル；－ＣＦ３；ハロゲン；または
であり、
ＲｅおよびＲｆは各々独立に水素または－Ｃ１－３の直鎖または分岐鎖アルキルであり、かつ
Ｚは下記のグループから選択され
、
ＰａおよびＰｂは各々独立に
；水素；ヒドロキシ；非置換または一つ以上の水素がハロゲンで置換された－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖アルキル；ハロゲン；－ＣＦ３；－ＯＣＦ３；－ＣＮ；－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシ；－Ｃ２－６の直鎖または分岐鎖のアルキルアルコキシ；－ＣＨ２Ｆ；または－Ｃ１－３のアルコールであり、
【化7】
であり、
ＲｅおよびＲｆは各々独立に水素または－Ｃ１－３の直鎖または分岐鎖アルキルであり、かつ
Ｚは下記のグループから選択され
【化8】
、
ＰａおよびＰｂは各々独立に
【化9】
；水素；ヒドロキシ；非置換または一つ以上の水素がハロゲンで置換された－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖アルキル；ハロゲン；－ＣＦ３；－ＯＣＦ３；－ＣＮ；－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシ；－Ｃ２－６の直鎖または分岐鎖のアルキルアルコキシ；－ＣＨ２Ｆ；または－Ｃ１－３のアルコールであり、
【0014】
ここで、
はフェニル、ピリジン、ピリミジン、チアゾール、インドール、インダゾール、ピペラジン、キノリン、フラン、テトラヒドロピリジン、ピペリジンまたは下記グループから選択された環であり
、
ｘ、ｙおよびｚは各々独立に０または１の整数であり、
Ｒｇ１、Ｒｇ２およびＲｇ３は各々独立に水素；ヒドロキシ；－Ｃ１－３アルキル；－ＣＦ３；－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシ；－Ｃ２－６の直鎖または分岐鎖アルキルアルコキシ；－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３；－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖ヒドロキシアルキル；－Ｎ（ＣＨ３）２；ハロゲン；フェニル；－Ｓ（（＝Ｏ）２）ＣＨ３；または下記グループから選択される
。
【化10】
はフェニル、ピリジン、ピリミジン、チアゾール、インドール、インダゾール、ピペラジン、キノリン、フラン、テトラヒドロピリジン、ピペリジンまたは下記グループから選択された環であり
【化11】
、
ｘ、ｙおよびｚは各々独立に０または１の整数であり、
Ｒｇ１、Ｒｇ２およびＲｇ３は各々独立に水素；ヒドロキシ；－Ｃ１－３アルキル；－ＣＦ３；－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシ；－Ｃ２－６の直鎖または分岐鎖アルキルアルコキシ；－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３；－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖ヒドロキシアルキル；－Ｎ（ＣＨ３）２；ハロゲン；フェニル；－Ｓ（（＝Ｏ）２）ＣＨ３；または下記グループから選択される
【化12】
。
【0015】
本発明において、前記化学式Ｉで表される化合物は、下記化学式Ｉａで表される化合物であってもよい：
前記式中、
Ｙは下記グループから選択され
、
この際、Ｍ、ｌ、ｍ、ｎ、Ｒａ１、Ｒａ２、およびＲｂは各々前記化学式Ｉで定義されたものと同様であり、
Ｚは
であり、
ＰａおよびＰｂは各々独立に水素；ヒドロキシ；非置換または一つ以上の水素がハロゲンで置換された－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖アルキル；ハロゲン；－ＣＦ３；－ＯＣＦ３；－ＣＮ；－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシ；－Ｃ２－６の直鎖または分岐鎖アルキルアルコキシ；－ＣＨ２Ｆ；または－Ｃ１－３のアルコールである。
本発明の一実施態様によれば、
Ｙは下記グループから選択され
、
この際、ｎおよびＲｂは各々前記化学式Ｉで定義されたものと同様であり、
Ｚは
であり、
ＰａおよびＰｂは各々独立に水素；ハロゲン；－ＣＦ３；または－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシである。
【化13】
前記式中、
Ｙは下記グループから選択され
【化14】
、
この際、Ｍ、ｌ、ｍ、ｎ、Ｒａ１、Ｒａ２、およびＲｂは各々前記化学式Ｉで定義されたものと同様であり、
Ｚは
【化15】
であり、
ＰａおよびＰｂは各々独立に水素；ヒドロキシ；非置換または一つ以上の水素がハロゲンで置換された－Ｃ１－４の直鎖または分岐鎖アルキル；ハロゲン；－ＣＦ３；－ＯＣＦ３；－ＣＮ；－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシ；－Ｃ２－６の直鎖または分岐鎖アルキルアルコキシ；－ＣＨ２Ｆ；または－Ｃ１－３のアルコールである。
本発明の一実施態様によれば、
Ｙは下記グループから選択され
【化16】
、
この際、ｎおよびＲｂは各々前記化学式Ｉで定義されたものと同様であり、
Ｚは
【化17】
であり、
ＰａおよびＰｂは各々独立に水素；ハロゲン；－ＣＦ３；または－Ｃ１－６の直鎖または分岐鎖アルコキシである。
【0016】
本発明において、「ハロゲン」はＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを示す。
本発明の具体例によれば、前記化学式Ｉで表される化合物は、下記表に記載された化合物であってもよい。
本発明の具体例によれば、前記化学式Ｉで表される化合物は、下記表に記載された化合物であってもよい。
【表1-1】
【表1-2】
【表1-3】
【表1-4】
【表1-5】
【表1-6】
【表1-7】
【表1-8】
【表1-9】
【表1-10】
【表1-11】
【表1-12】
【表1-13】
【0017】
本発明の具体例によれば、前記化学式Ｉで表される化合物は、下記表に記載された化合物であってもよい。
【表2】
【0018】
本発明において、前記化学式Ｉで表される化合物は、大韓民国公開特許公報第２０１４－０１２８８８６号に開示された方法により製造されてもよいが、これに限定されるものではない。
【0019】
本発明の用語、「薬学的に許容される」とは、生理学的に許容され、個体に投与される際、通常、胃腸障害、めまいのようなアレルギー反応またはそれと類似した反応を起こさないことを意味する。
本発明の薬学的に許容される塩は、当業界の通常の技術者に公知された通常の方法により製造されてもよい。
本発明の薬学的に許容される塩は、当業界の通常の技術者に公知された通常の方法により製造されてもよい。
【0020】
本発明の薬学的に許容される塩は、例えば、カルシウム、カリウム、ナトリウム、マグネシウムなどから製造された無機イオン塩、塩酸、硝酸、リン酸、臭素酸、ヨウ素酸、過塩素酸、硫酸、ヨウ化水素酸などから製造された無機酸塩、酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、コハク酸、シュウ酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸、マンデル酸、プロピオン酸、乳酸、グリコール酸、グルコン酸、ガラクツロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、グルクロン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、カルボン酸、バニリン酸などから製造された有機酸塩、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸などから製造されたスルホン酸塩、グリ
シン、アルギニン、リジンなどから製造されたアミノ酸塩、およびトリメチルアミン、トリエチルアミン、アンモニア、ピリジン、ピコリンなどから製造されたアミン塩などが挙げられるが、これに限定されるものではない。本発明における好ましい塩は、塩酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、臭素酸、マレイン酸、リン酸、硫酸、酒石酸を含む。
シン、アルギニン、リジンなどから製造されたアミノ酸塩、およびトリメチルアミン、トリエチルアミン、アンモニア、ピリジン、ピコリンなどから製造されたアミン塩などが挙げられるが、これに限定されるものではない。本発明における好ましい塩は、塩酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、臭素酸、マレイン酸、リン酸、硫酸、酒石酸を含む。
【0021】
本発明の用語、「慢性閉塞性肺疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ；ＣＯＰＤ）」は、不可逆的な気道の閉塞を伴い、気道および肺実質炎症による細気管支および肺実質の病理学的変化によって発生する疾患を意味し、慢性閉塞性気管支炎、慢性細気管支炎および肺気腫（肺実質破壊）などを全て含む。
【0022】
本発明の用語、「予防」は、本発明の化学式Ｉの化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の投与により、疾患の発病を抑制または遅延させる全ての行為を意味する。
本発明の用語、「治療」は、本発明の化学式Ｉの化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の投与により、疾患の疑いおよび発病個体の症状が好転または有益に変更される全ての行為を意味する。
本発明の用語、「治療」は、本発明の化学式Ｉの化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の投与により、疾患の疑いおよび発病個体の症状が好転または有益に変更される全ての行為を意味する。
【0023】
本発明の化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体、またはその薬学的に許容される塩は、慢性閉塞性肺疾患の予防または治療に有用に使用することができる。
【0024】
本発明の化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体、またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含む医薬組成物は、慢性閉塞性肺疾患の予防または治療に有用に使用することができる。
【0025】
これに関し、本発明の具体的な一実施形態においては、本発明の化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体、またはその薬学的に許容される塩が免疫細胞の浸潤を抑制し（図２）、総細胞、マクロファージ、および好中球の数を減少させて炎症細胞の浸潤を抑制し（図３）、炎症性サイトカイン、具体的にはＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＭＣＰ－１、およびＴＮＦ－αの発現を減少させることを確認した（図４）。
【0026】
また、上皮マーカータンパク質であるＥ－Ｃａｄの発現を顕著に増加させ、間葉マーカータンパク質であるＮ－Ｃａｄの発現を顕著に減少させてＴＧＦ－β１誘導ＥＭＴを抑制し（図５）、主要ＥＣＭタンパク質であるＦＮ－ＥＤＡの発現を減少させることを確認した（図６）。
【0027】
本発明の医薬組成物は、従来の周知のＣＯＰＤ治療用組成物と類似または実質的に同一であると見られるレベルまたはさらに優れたレベルの慢性閉塞性肺疾患の予防または治療効果を示すことができる。
【0028】
本発明の医薬組成物は、前記化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の他に、薬学的に許容される担体を１種以上さらに含むことができる。薬学的に許容される担体は、当業界で通常用いられるものとして、具体的に、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリジン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ミネラル、またはオイルであってもよいが、これに限定されるものではない。本発明の医薬組成物は、前記成分の他に、潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤、分散剤、安定化剤などをさらに含むことができる。また、本発明の薬学的組成
物は、薬学的に許容可能な担体および賦形剤を用いて錠剤、散剤、顆粒剤、丸剤、カプセル剤、懸濁液、エマルション、内用液剤、乳剤、シロップなどの経口用剤形、外用剤、坐剤または滅菌注射溶液の形態に製剤化して単位用量の形態に製造されるか、または多用量容器内に入れて製造されてもよい。製剤は、当業界で製剤化に用いられる通常の方法またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９ｔｈ
ｅｄ．、１９９５）に開示された方法により製造することができ、各疾患または成分に応じてさまざまな製剤に製剤化することができる。
物は、薬学的に許容可能な担体および賦形剤を用いて錠剤、散剤、顆粒剤、丸剤、カプセル剤、懸濁液、エマルション、内用液剤、乳剤、シロップなどの経口用剤形、外用剤、坐剤または滅菌注射溶液の形態に製剤化して単位用量の形態に製造されるか、または多用量容器内に入れて製造されてもよい。製剤は、当業界で製剤化に用いられる通常の方法またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９ｔｈ
ｅｄ．、１９９５）に開示された方法により製造することができ、各疾患または成分に応じてさまざまな製剤に製剤化することができる。
【0029】
本発明の医薬組成物を用いた経口投与用製剤の非限定的な例としては、錠剤、トローチ剤（ｔｒｏｃｈｅｓ）、ロゼンジ（ｌｏｚｅｎｇｅ）、水溶性懸濁液、油性懸濁液、調製粉末、顆粒、エマルション、ハードカプセル、ソフトカプセル、シロップまたはエリキシル剤などが挙げられる。本発明の医薬組成物を経口投与用に製剤化するために、ラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アミロペクチン、セルロースまたはゼラチンなどのような結合剤；ジカルシウムホスフェートなどのような賦形剤；トウモロコシデンプンまたはサツマイモデンプンなどのような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリルフマル酸ナトリウムまたはポリエチレングリコールワックスなどのような潤滑油などを用いることができ、甘味剤、芳香剤、シロップ剤なども用いることができる。さらに、カプセル剤の場合は、上記で言及した物質の他に、脂肪油のような液体担体などをさらに用いることができる。
【0030】
本発明の医薬組成物を用いた非経口用製剤の非限定的な例としては、注射液、坐剤、呼吸器吸入用粉末、スプレー用エアロゾル剤、軟膏、塗布用パウダー、オイル、クリームなどが挙げられる。本発明の医薬組成物を非経口投与用に製剤化するために、滅菌水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、外用剤などを用いることができ、前記非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性オイル、エチルオレエートのような注射可能なエステルなどを用いることができるが、これに限定されるものではない。
【0031】
本発明の医薬組成物は、目的とする方法に応じて経口投与（ｏｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）または非経口投与（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）してもよく、好ましくは経口投与してもよいが、これに限定されるものではない。
【0032】
本発明の化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体、薬学的に許容可能な塩の１日投与量は、具体的には、約０．１～約１０，０００ｍｇ／ｋｇ、約１～約８，０００ｍｇ／ｋｇ、約５～約６，０００ｍｇ／ｋｇ、または約１０～約４，０００ｍｇ／ｋｇであってもよく、より具体的には、約５０～約２，０００ｍｇ／ｋｇであってもよいが、これに限定されるものではなく、１日に１回～数回に分けて投与されてもよい。
【0033】
本発明の医薬組成物の薬学的有効量、有効投与量は、薬学的組成物の製剤化方法、投与方式、投与時間および／または投与経路などに応じて様々であり、薬学組成物の投与により達成しようとする反応の種類と程度、投与対象となる個体の種類、年齢、体重、一般的な健康状態、疾病の症状や程度、性別、食餌、排泄、当該個体に同時または異時にともに用いられる薬物、その他の組成物の成分などをはじめとする種々の因子および医薬分野で周知の類似因子に応じて さまざまであり、当該技術分野で通常の知識を有する者であれ
ば、目的とする治療に効果的な投与量を容易に決めて処方することができる。
ば、目的とする治療に効果的な投与量を容易に決めて処方することができる。
【0034】
本発明の医薬組成物の投与は、１日に１回投与されてもよく、数回に分けて投与されてもよい。本発明の医薬組成物は、個別治療剤として投与されるか、または他の治療剤と併用して投与されてもよく、従来の治療剤とは順次または同時に投与されてもよい。前記要素を全て考慮して副作用なしに最小限の量で最大の効果が得られる量で投与することがで
き、これは、本発明が属する技術分野の通常の技術者により容易に決定できるものである。
き、これは、本発明が属する技術分野の通常の技術者により容易に決定できるものである。
【0035】
本発明の医薬組成物は、単独で用いても優れた効果を発揮することができるが、治療効率を増加させるために、さらにホルモン治療、薬物治療などの様々な方法と併用して用いてもよい。
【0036】
本発明は、前記医薬組成物を個体に投与するステップを含む、慢性閉塞性肺疾患の予防または治療方法を提供する。
【0037】
本発明は、化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の治療学的に有効な量を個体に投与するステップを含む、慢性閉塞性肺疾患の予防または治療方法を提供する。
【0038】
前記用語、「慢性閉塞性肺疾患」、「予防」、および「治療」は、前述したものと同様である。
【0039】
本発明の用語、「投与」は、適切な方法により個体に所定の物質を導入することを意味する。
本発明の用語、「個体」は、慢性閉塞性肺疾患が発病したかまたは発病し得る、ヒトを含むネズミ、マウス、家畜などの全ての動物を意味し、具体的に、ヒトを含む哺乳動物であってもよいが、これに限定されるものではない。
本発明の用語、「個体」は、慢性閉塞性肺疾患が発病したかまたは発病し得る、ヒトを含むネズミ、マウス、家畜などの全ての動物を意味し、具体的に、ヒトを含む哺乳動物であってもよいが、これに限定されるものではない。
【0040】
本発明の慢性閉塞性肺疾患の予防または治療方法は、前記医薬組成物を治療学的に有効な量で投与するものであってもよい。
【0041】
本発明の用語、「治療学的に有効な量」とは、医学的治療に適用できる合理的な受恵／リスクの比で疾患を治療するのに十分であり、且つ、副作用を起こさない程度の量を意味し、これは、患者の性別、年齢、体重、健康状態、疾病の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する感受性、投与方法、投与時間、投与経路、排出比率、治療期間、配合または同時に用いられる薬物を含む要素およびその他の医学分野で周知の要素に応じて当業者により決定できるものである。特定の患者に対する具体的な治療的有効量は、達成しようとする反応の種類と程度、場合によっては他の製剤が用いられるか否かをはじめとする具体的な組成物、患者の年齢、体重、一般的な健康状態、性別および食餌、投与時間、投与経路および組成物の分泌率、治療期間、具体的な組成物とともに用いられるかまたは同時に用いられる薬物をはじめとするさまざまな因子と医薬分野で周知の類似因子に応じて異に適用することが好ましい。
【0042】
本発明の慢性閉塞性肺疾患の予防または治療方法は、前記化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩を投与することにより、兆候の発現前に疾病自体を扱うだけでなく、その兆候を阻害するかまたは避けることも含む。疾患の管理において、特定の活性成分の予防的または治療学的用量は、疾病または状態の特性と深刻度、そして活性成分が投与される経路に応じてさまざまである。用量および用量の頻度は、個別患者の年齢、体重および反応に応じてさまざまである。好適な用量用法は、かかる因子を当然考慮する、この分野の通常の知識を有する者により容易に選択することができる。また、本発明の慢性閉塞性肺疾患の予防または治療方法は、前記化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩とともに、疾患の予防または治療に役立つさらなる活性製剤の治療学的に有効な量の投与をさらに含むことができ、さらなる活性剤制は、前記化学式Ｉの化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩とともに相乗効果または相加効果を示すことができる。
【0043】
本発明は、慢性閉塞性肺疾患を予防または治療するための、化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【0044】
本発明は、慢性閉塞性肺疾患の予防または治療用の薬剤を製造するための、化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【0045】
本発明は、慢性閉塞性肺疾患を予防または治療するための薬剤の製造における本発明の薬学的組成物の使用を提供する。
【0046】
前記用語、「慢性閉塞性肺疾患」、「予防」、および「治療」は、前述したものと同様である。
【0047】
薬剤を製造するために、本発明の化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩に薬学的に許容される補助剤、希釈剤、担体などを混合することができ、その他の活性製剤とともに複合製剤に製造されて相乗作用を有してもよい。
【0048】
本発明の医薬組成物、治療方法および使用で言及された事項は、互いに矛盾しない限り、同様に適用される。
【発明の効果】
【0049】
本発明の化学式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩は、ＣＯＰＤ誘導マウスにおいて、優れた免疫細胞の浸潤抑制、炎症細胞の浸潤抑制、および抗炎症効果を示すだけでなく、ＴＧＦ－β１－誘導ＥＭＴの抑制効果および主要ＥＣＭタンパク質であるＦＮ－ＥＤＡの発現抑制効果を示すので、慢性閉塞性肺疾患の予防または治療に有用に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【0050】
【図1】肺組織の細胞浸潤程度を判別するための参考画像を示す図である。
【図2】比較の組成物と実施例の組成物を各々投与したグループの細胞浸潤程度を観察して測定されたスコアを示すグラフである。
【図3】比較の組成物と実施例の組成物を各々投与したグループの総細胞（ｔｏｔａｌ ｃｅｌｌｓ）、マクロファージ（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）、および好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ）の数を示すグラフである。
【図4】比較の組成物と実施例の組成物を各々投与したグループの炎症性サイトカイン（ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＭＣＰ－１、およびＴＮＦ－α）の発現程度を示すグラフである。
【図5】比較の組成物と実施例の組成物を各々処理したグループの上皮マーカータンパク質（Ｅ－Ｃａｄ）および間葉マーカータンパク質（Ｎ－Ｃａｄ）の発現程度を示すグラフである。
【図6】比較の組成物と実施例の組成物を各々処理したグループの主要ＥＣＭタンパク質（ＦＮ－ＥＤＡ）の発現程度を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0051】
以下、実施例を参照して本発明をより詳細に説明する。これらの実施例は単に本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲がこれらの実施例によって限定されるものではないことは、当業界で通常の知識を有する者にとって自明である。
【0052】
製造例１．Ｎ－（４－（ヒドロキシカルバモイル）ベンジル）－Ｎ－（３－（トリフルオロメチル）フェニル）モルホリン－４－カルボキサミドの合成［化合物３７４］
［ステップ１］メチル４－（（３－（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチル）ベンゾエート）の合成
３－（トリフルオロメチル）ベンゼンアミン（０．３０ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．７６ｇ、５．５３ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（５ｍＬ）に溶かした後、メチル４－（ブロモメチル）ベンゾエート（０．４２ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）を入れた。常温で１日間反応し、エチルアセテートで希釈した。反応物を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過し減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％）で精製して表題化合物（０．３７ｇ、６５％）を得た。
［ステップ１］メチル４－（（３－（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチル）ベンゾエート）の合成
【化18】
３－（トリフルオロメチル）ベンゼンアミン（０．３０ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．７６ｇ、５．５３ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（５ｍＬ）に溶かした後、メチル４－（ブロモメチル）ベンゾエート（０．４２ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）を入れた。常温で１日間反応し、エチルアセテートで希釈した。反応物を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過し減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％）で精製して表題化合物（０．３７ｇ、６５％）を得た。
【0053】
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９３ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ）， ７．４９ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ）， ７．２４ （ｔ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ）， ６．８８－６．７８ （ｍ， ４ Ｈ）， ４．４２ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ）， ３．８３ （ｓ， ３Ｈ）， ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３１０ （Ｍ＋ ＋ Ｈ）。
【0054】
［ステップ２］メチル４－（（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）（３－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）メチル）ベンゾエートの合成
メチル４－（（３－（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチル）ベンゾエート（０．２６ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）および４－ニトロフェニルカルボノクロリデート（０．３３ｇ、１．６５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶かし、炭酸カリウム（０
．３４ｇ、２．４７ｍｍｏｌ）を入れた。常温で１日間反応し、エチルアセテートで希釈した。反応物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過し減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％）で精製して無色オイルの表題化合物（０．３５ｇ、８９％）を得た。
【化19】
メチル４－（（３－（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチル）ベンゾエート（０．２６ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）および４－ニトロフェニルカルボノクロリデート（０．３３ｇ、１．６５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶かし、炭酸カリウム（０
．３４ｇ、２．４７ｍｍｏｌ）を入れた。常温で１日間反応し、エチルアセテートで希釈した。反応物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過し減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％）で精製して無色オイルの表題化合物（０．３５ｇ、８９％）を得た。
【0055】
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２０ （ｄ， ２ Ｈ，
Ｊ ＝ １０．２ Ｈｚ）， ８．０１ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ）， ７．５６－７．４６ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３５ （ｄ， ３ Ｈ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ）， ７．２６ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ）， ５．０１ （ｂｓ， ２Ｈ）， ３．９０ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｊ ＝ １０．２ Ｈｚ）， ８．０１ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ）， ７．５６－７．４６ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３５ （ｄ， ３ Ｈ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ）， ７．２６ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ）， ５．０１ （ｂｓ， ２Ｈ）， ３．９０ （ｓ， ３Ｈ）。
【0056】
［ステップ３］メチル４－（（Ｎ－（３－（トリフルオロメチル）フェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエートの合成
メチル４－（（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）（３－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（０．２９ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶かし、炭酸カリウム（０．２５ｇ、１．８１ｍｍｏｌ）およびモルホリン（０．０５ｍＬ、０．６０ｍｍｏｌ）を入れた。６０℃で２日間反応させた後、飽和塩化アンモニウム溶液で希釈した。エチルアセテートで抽出した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過し減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝５０％）で精製して表題化合物（０．１５ｇ、６０％）を得た。
【化20】
メチル４－（（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）（３－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（０．２９ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶かし、炭酸カリウム（０．２５ｇ、１．８１ｍｍｏｌ）およびモルホリン（０．０５ｍＬ、０．６０ｍｍｏｌ）を入れた。６０℃で２日間反応させた後、飽和塩化アンモニウム溶液で希釈した。エチルアセテートで抽出した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過し減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝５０％）で精製して表題化合物（０．１５ｇ、６０％）を得た。
【0057】
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９７ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ）， ７．４３－７．３２ （ｍ， ５Ｈ）， ７．２０ （ｄ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ）， ４．９４ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９０
（ｓ， ３Ｈ）， ３．５０ （ｔ， ４ Ｈ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ）， ３．２５ （ｔ， ４ Ｈ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ）； ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４２３
（Ｍ＋ ＋ Ｈ）。
（ｓ， ３Ｈ）， ３．５０ （ｔ， ４ Ｈ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ）， ３．２５ （ｔ， ４ Ｈ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ）； ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４２３
（Ｍ＋ ＋ Ｈ）。
【0058】
［ステップ４］Ｎ－（４－（ヒドロキシカルバモイル）ベンジル）－Ｎ－（３－（トリフルオロメチル）フェニル）モルホリン－４－カルボキサミドの合成
メチル４－（（Ｎ－（３－（トリフルオロメチル）フェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエート（０．１５ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）に溶かし、ヒドロキシルアミン水溶液（５０ｗｔ％、１ｍＬ）および水酸化カリウム（０．１０ｇ、１．８１ｍｍｏｌ）を入れて一晩撹拌した。反応終了後、メタノールを減圧蒸留して除去し、エチルアセテートおよび水を用いて抽出（ｗｏｒｋ ｕｐ）した。無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過し減圧濃縮した。残渣をジエチルエーテルにおいて撹拌して固体生成物を作り、濾過した後に乾燥して白色固体の表題化合物（０．０８２ｇ、５４％）を得た。
【化21】
メチル４－（（Ｎ－（３－（トリフルオロメチル）フェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエート（０．１５ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）に溶かし、ヒドロキシルアミン水溶液（５０ｗｔ％、１ｍＬ）および水酸化カリウム（０．１０ｇ、１．８１ｍｍｏｌ）を入れて一晩撹拌した。反応終了後、メタノールを減圧蒸留して除去し、エチルアセテートおよび水を用いて抽出（ｗｏｒｋ ｕｐ）した。無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過し減圧濃縮した。残渣をジエチルエーテルにおいて撹拌して固体生成物を作り、濾過した後に乾燥して白色固体の表題化合物（０．０８２ｇ、５４％）を得た。
【0059】
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ－ｄ３） δ １１．１４ （ｂｒｓ，
１ Ｈ）， ８．９９ （ｂｒｓ， １ Ｈ）， ７．８５ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ）， ７．６６－７．２７ （ｍ， ６ Ｈ）， ４．９４ （ｓ， ２ Ｈ）， ３．４１ （ｓ， ２ Ｈ）， ３．１５ （ｓ， ２ Ｈ）。 ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４２４ （Ｍ＋ ＋ Ｈ）。
１ Ｈ）， ８．９９ （ｂｒｓ， １ Ｈ）， ７．８５ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ）， ７．６６－７．２７ （ｍ， ６ Ｈ）， ４．９４ （ｓ， ２ Ｈ）， ３．４１ （ｓ， ２ Ｈ）， ３．１５ （ｓ， ２ Ｈ）。 ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４２４ （Ｍ＋ ＋ Ｈ）。
【0060】
製造例２．Ｎ－（２，４－ジフルオロフェニル）－Ｎ－（４－（ヒドロキシカルバモイル）ベンジル）モルホリン－４－カルボキサミドの合成［化合物４１３］
［ステップ１］メチル４－（（２，４－ジフルオロフェニルアミノ）メチル）ベンゾエートの合成
２，４－ジフルオロベンゼンアミン（３．０ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）およびメチル４－ホルミルベンゾエート（３．８１ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）をメタノール（５００ｍＬ）に溶かした後、室温で２時間撹拌した後、酢酸（１．３３ｍＬ、２３．２ｍｍｏｌ）およびナトリウムシアノボロヒドリド（１．４６ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）を添加して１日間撹拌
した。メタノールをエアーにより若干除去すると固体が析出され、それをフィルタ乾燥して表題化合物（２．９ｇ、４５％）を白色固体として得た。
［ステップ１］メチル４－（（２，４－ジフルオロフェニルアミノ）メチル）ベンゾエートの合成
【化22】
２，４－ジフルオロベンゼンアミン（３．０ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）およびメチル４－ホルミルベンゾエート（３．８１ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）をメタノール（５００ｍＬ）に溶かした後、室温で２時間撹拌した後、酢酸（１．３３ｍＬ、２３．２ｍｍｏｌ）およびナトリウムシアノボロヒドリド（１．４６ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）を添加して１日間撹拌
した。メタノールをエアーにより若干除去すると固体が析出され、それをフィルタ乾燥して表題化合物（２．９ｇ、４５％）を白色固体として得た。
【0061】
［ステップ２］メチル４－（（（２，４－ジフルオロフェニル）（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエートの合成
メチル４－（（２，４－ジフルオロフェニルアミド）メチル）ベンゾエート（２ｇ、７．２１ｍｍｏｌ）および４－ニトロフェニルクロロホルメート（１．４５ｇ、７．２１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶かした後、３日間室温で撹拌した後に水を添加し、有機層を抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。残渣を乾燥して表題化合物（２．５ｇ、７８％）を黄色オイルとして得た。
【化23】
メチル４－（（２，４－ジフルオロフェニルアミド）メチル）ベンゾエート（２ｇ、７．２１ｍｍｏｌ）および４－ニトロフェニルクロロホルメート（１．４５ｇ、７．２１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶かした後、３日間室温で撹拌した後に水を添加し、有機層を抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。残渣を乾燥して表題化合物（２．５ｇ、７８％）を黄色オイルとして得た。
【0062】
［ステップ３］メチル４－（（Ｎ－（２，４－ジフルオロフェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエートの合成
メチル４－（（（２，４－ジフルオロフェニル）（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（０．５０ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）およびモルホリン（０．０９８ｍＬ、１．１３ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶かし、６０℃で２日間加熱撹拌を行った。ジメチルホルムアミドを減圧除去し、反応混合物に水を注ぎ、エチルアセテートで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー法（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝３０％）で精製および濃縮して表題化合物（０．４４ｇ、９８％）を無色オイルとして得た。
【化24】
メチル４－（（（２，４－ジフルオロフェニル）（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（０．５０ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）およびモルホリン（０．０９８ｍＬ、１．１３ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶かし、６０℃で２日間加熱撹拌を行った。ジメチルホルムアミドを減圧除去し、反応混合物に水を注ぎ、エチルアセテートで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー法（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝３０％）で精製および濃縮して表題化合物（０．４４ｇ、９８％）を無色オイルとして得た。
【0063】
［ステップ４］Ｎ－（２，４－ジフルオロフェニル）－Ｎ－（４－（ヒドロキシカルバモイル）ベンジル）モルホリン－４－カルボキサミドの合成
メチル４－（（Ｎ－（２，４－ジフルオロフェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエート（０．１０ｇ、０．２５６ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍＬ
）に溶かした後、ヒドロキシルアミン塩酸（０．０８９ｇ、１．２８ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム（０．１４４ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）を添加し撹拌した後、ヒドロキシルアミン（５０ｗｔ％水溶液；０．３２９ｍＬ、５．１２ｍｍｏｌ）を滴加した後、３時間室温撹拌を行った。反応終了後、メタノールを減圧除去し、反応混合物に水を注ぎ、エチルアセテートで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。その後、ジクロロメタンに溶かした後にヘキサンを添加して固体を析出させ、それをフィルタ乾燥して表題化合物（０．０７６ｇ、７６％）を薄い黄色固体として得た。
【化25】
メチル４－（（Ｎ－（２，４－ジフルオロフェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエート（０．１０ｇ、０．２５６ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍＬ
）に溶かした後、ヒドロキシルアミン塩酸（０．０８９ｇ、１．２８ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム（０．１４４ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）を添加し撹拌した後、ヒドロキシルアミン（５０ｗｔ％水溶液；０．３２９ｍＬ、５．１２ｍｍｏｌ）を滴加した後、３時間室温撹拌を行った。反応終了後、メタノールを減圧除去し、反応混合物に水を注ぎ、エチルアセテートで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。その後、ジクロロメタンに溶かした後にヘキサンを添加して固体を析出させ、それをフィルタ乾燥して表題化合物（０．０７６ｇ、７６％）を薄い黄色固体として得た。
【0064】
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ－ｄ３） δ ７．６５ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ）， ７．４１ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ）， ７．２７ － ７．２５ （ｍ， １ Ｈ）， ７．０４ － ６．９６ （ｍ，
２ Ｈ）， ４．８０ （ｓ， ２ Ｈ）， ３．４６ － ３．４３ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．２２ － ３．１９ （ｍ， ４ Ｈ）； ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３９２．１ （Ｍ＋ ＋ Ｈ）。
２ Ｈ）， ４．８０ （ｓ， ２ Ｈ）， ３．４６ － ３．４３ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．２２ － ３．１９ （ｍ， ４ Ｈ）； ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３９２．１ （Ｍ＋ ＋ Ｈ）。
【0065】
製造例３．Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－Ｎ－（４－（ヒドロキシカルバモイル）ベンジル）モルホリン－４－カルボキサミドの合成［化合物４５８］
［ステップ１］メチル４－（（３－クロロ－４－フルオロフェニルアミノ）メチル）ベンゾエートの合成
３－クロロ－４－フルオロベンゼンアミン（２．０ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）およびメチル４－ホルミルベンゾエート（２．２６ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）をメタノール（５００ｍＬ）に溶かした後、室温で３時間撹拌した後、酢酸（０．７８６ｍＬ、１３．７ｍｍｏｌ）およびナトリウムシアノボロヒドリド（０．８６ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）を添加して１日間撹拌した。メタノールをエアーにより若干除去すると固体が析出され、それをフィルタ乾燥して表題化合物（２．９ｇ、７２％）を灰色固体として得た。
［ステップ１］メチル４－（（３－クロロ－４－フルオロフェニルアミノ）メチル）ベンゾエートの合成
【化26】
３－クロロ－４－フルオロベンゼンアミン（２．０ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）およびメチル４－ホルミルベンゾエート（２．２６ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）をメタノール（５００ｍＬ）に溶かした後、室温で３時間撹拌した後、酢酸（０．７８６ｍＬ、１３．７ｍｍｏｌ）およびナトリウムシアノボロヒドリド（０．８６ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）を添加して１日間撹拌した。メタノールをエアーにより若干除去すると固体が析出され、それをフィルタ乾燥して表題化合物（２．９ｇ、７２％）を灰色固体として得た。
【0066】
［ステップ２］メチル４－（（（３－クロロ－４－フルオロフェニル）（（４－ニトロ
フェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエートの合成
メチル４－（（３－クロロ－４－フルオロフェニルアミド）メチル）ベンゾエート（２．５ｇ、８．５１ｍｍｏｌ）および４－ニトロフェニルクロロホルメート（２．０６ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶かした後、３日間室温で撹拌した後に水を添加し、有機層を抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。残渣を乾燥して表題化合物（２．５ｇ、６４％）を紫色オイルとして得た。
フェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエートの合成
【化27】
メチル４－（（３－クロロ－４－フルオロフェニルアミド）メチル）ベンゾエート（２．５ｇ、８．５１ｍｍｏｌ）および４－ニトロフェニルクロロホルメート（２．０６ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶かした後、３日間室温で撹拌した後に水を添加し、有機層を抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。残渣を乾燥して表題化合物（２．５ｇ、６４％）を紫色オイルとして得た。
【0067】
［ステップ３］メチル４－（（Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエートの合成
メチル４－（（（３－クロロ－４－フルオロフェニル）（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（０．２０ｇ、０．４３６ｍｍｏｌ）およびモルホリン（０．０３８ｍＬ、０．４３６ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶かし、６０℃で１２時間加熱撹拌を行った。ジメチルホルムアミドを減圧除去し、反応混合物に水を注き、エチルアセテートで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー法（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％）で精製および濃縮して表題化合物（０．０２２ｇ、１２％）を無色オイルとして得た。
【化28】
メチル４－（（（３－クロロ－４－フルオロフェニル）（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（０．２０ｇ、０．４３６ｍｍｏｌ）およびモルホリン（０．０３８ｍＬ、０．４３６ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶かし、６０℃で１２時間加熱撹拌を行った。ジメチルホルムアミドを減圧除去し、反応混合物に水を注き、エチルアセテートで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー法（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％）で精製および濃縮して表題化合物（０．０２２ｇ、１２％）を無色オイルとして得た。
【0068】
［ステップ４］Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－Ｎ－（４－（ヒドロキシカルバモイル）ベンジル）モルホリン－４－カルボキサミドの合成
メチル４－（（Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエート（０．０５０ｇ、０．１２３ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）に溶かした後、ヒドロキシルアミン塩酸（０．０４３ｇ、０．６１４ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム（０．０６９ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を添加し撹拌した後、ヒドロキシルアミン（５０ｗｔ％水溶液；０．１５８ｍＬ、２．４６ｍｍｏｌ）を滴加した後、３時間室温撹拌を行った。反応終了後、メタノールを減圧除去し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を添加すると固体が形成され、それをフィルタ乾燥して表題化合物（０．０１７ｇ、３４％）を白色固体として得た。
【化29】
メチル４－（（Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエート（０．０５０ｇ、０．１２３ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）に溶かした後、ヒドロキシルアミン塩酸（０．０４３ｇ、０．６１４ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム（０．０６９ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を添加し撹拌した後、ヒドロキシルアミン（５０ｗｔ％水溶液；０．１５８ｍＬ、２．４６ｍｍｏｌ）を滴加した後、３時間室温撹拌を行った。反応終了後、メタノールを減圧除去し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を添加すると固体が形成され、それをフィルタ乾燥して表題化合物（０．０１７ｇ、３４％）を白色固体として得た。
【0069】
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．６３ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ）， ７．４４ － ７．４２ （ｍ， １ Ｈ）， ７．３３ － ７．２９ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．１５ － ７．１１ （ｍ， １ Ｈ）， ４．８４ （ｓ， ２ Ｈ）， ３．４１ － ３．４０ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．１４ － ３．１２ （ｍ， ４ Ｈ）； ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ４０８．１ （Ｍ＋ ＋ Ｈ）。
【0070】
製造例４．Ｎ－（４－（ヒドロキシカルバモイル）ベンジル）－Ｎ－（３－メトキシフェニル）モルホリン－４－カルボキサミドの合成［化合物４８４］
［ステップ１］メチル４－（（（３－メトキシフェニル）アミノ）メチル）ベンゾエートの合成
ｍ－アニシジン（３．２３ｇ、２６．２ｍｍｏｌ）、メチル４－（ブロモメチル）ベンゾエート（５．００ｇ、２１．８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５０ｍＬ）に溶かした後、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５．８０ｍＬ、３２．７ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１６時間撹拌した。反応が終結すれば、エチルアセテートおよび飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後に濾過した。濾液を減圧濃縮した後、残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝５％）で精製および濃縮して表題化合物（５．１４ｇ、８７％）を明るい黄色液体として得た。
［ステップ１］メチル４－（（（３－メトキシフェニル）アミノ）メチル）ベンゾエートの合成
【化30】
ｍ－アニシジン（３．２３ｇ、２６．２ｍｍｏｌ）、メチル４－（ブロモメチル）ベンゾエート（５．００ｇ、２１．８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５０ｍＬ）に溶かした後、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５．８０ｍＬ、３２．７ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１６時間撹拌した。反応が終結すれば、エチルアセテートおよび飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後に濾過した。濾液を減圧濃縮した後、残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝５％）で精製および濃縮して表題化合物（５．１４ｇ、８７％）を明るい黄色液体として得た。
【0071】
［ステップ２］メチル４－（（（３－メトキシフェニル）（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエートの合成
メチル４－（（（３－メトキシフェニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（５．１４ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）、４－ニトロフェニルクロロホルメート（４．２０ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１００ｍＬ）に溶かした後、炭酸カリウム（３．９３ｇ、２
８．４ｍｍｏｌ）を添加し、室温で３時間撹拌した。反応が終結すれば、エチルアセテートおよび飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後に濾過した。濾液を減圧濃縮した後、残渣をカラムクロマトグラフィー法（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％）で精製および濃縮して表題化合物（５．８８ｇ、７１％）を黄色液体として得た。
【化31】
メチル４－（（（３－メトキシフェニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（５．１４ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）、４－ニトロフェニルクロロホルメート（４．２０ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１００ｍＬ）に溶かした後、炭酸カリウム（３．９３ｇ、２
８．４ｍｍｏｌ）を添加し、室温で３時間撹拌した。反応が終結すれば、エチルアセテートおよび飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後に濾過した。濾液を減圧濃縮した後、残渣をカラムクロマトグラフィー法（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％）で精製および濃縮して表題化合物（５．８８ｇ、７１％）を黄色液体として得た。
【0072】
［ステップ３］メチル４－（（Ｎ－（３－メトキシフェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエートの合成
メチル４－（（（３－メトキシフェニル）（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（５．８８ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）に溶かした後、モルホリン（２．３５ｇ、２７．０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（５．６０ｇ、４０．５ｍｍｏｌ）を添加し、６０℃で１６時間撹拌した。反応が終結すれば、エチルアセテートおよび飽和塩化アンモニウム水溶液で抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後に濾過した。濾液を減圧濃縮した後、残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝３０％）で精製および濃縮して表題化合物（３．６９ｇ、７１％）を黄色固体として得た。
【化32】
メチル４－（（（３－メトキシフェニル）（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（５．８８ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）に溶かした後、モルホリン（２．３５ｇ、２７．０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（５．６０ｇ、４０．５ｍｍｏｌ）を添加し、６０℃で１６時間撹拌した。反応が終結すれば、エチルアセテートおよび飽和塩化アンモニウム水溶液で抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後に濾過した。濾液を減圧濃縮した後、残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝３０％）で精製および濃縮して表題化合物（３．６９ｇ、７１％）を黄色固体として得た。
【0073】
［ステップ４］Ｎ－（４－（ヒドロキシカルバモイル）ベンジル）－Ｎ－（３－メトキシフェニル）モルホリン－４－カルボキサミドの合成
メチル４－（（Ｎ－（３－メトキシフェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエート（０．１８０ｇ、０．４６８ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶かし、室温でヒドロキシルアミン（５０．０ｗｔ％水溶液；１．４３ｍＬ、２３．４ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、水酸化カリウム（０．２６３ｇ、４．６８ｍｍｏｌ）を添加した後、同じ温度で３０分間撹拌した。その後、反応混合物を減圧下で溶媒を除去した。得られた濃縮物に飽和塩化アンモニウム水溶液を注ぎ、エチルアセテートで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。残渣を室温でジクロロメタン（２ｍＬ）およびヘキサン（１０ｍＬ）で結晶化して表題化合物（０．１４０ｇ、７８％）を白色固体として得た。
【化33】
メチル４－（（Ｎ－（３－メトキシフェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエート（０．１８０ｇ、０．４６８ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶かし、室温でヒドロキシルアミン（５０．０ｗｔ％水溶液；１．４３ｍＬ、２３．４ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、水酸化カリウム（０．２６３ｇ、４．６８ｍｍｏｌ）を添加した後、同じ温度で３０分間撹拌した。その後、反応混合物を減圧下で溶媒を除去した。得られた濃縮物に飽和塩化アンモニウム水溶液を注ぎ、エチルアセテートで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。残渣を室温でジクロロメタン（２ｍＬ）およびヘキサン（１０ｍＬ）で結晶化して表題化合物（０．１４０ｇ、７８％）を白色固体として得た。
【0074】
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．６３ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ）， ７．３２ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．１９ （ｔ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ）， ６．６９ － ６．６７ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．６２ （ｍ， １ Ｈ）， ４．８４ （ｓ， ２ Ｈ）， ３．６９ （ｓ， ３
Ｈ）， ３．３９ － ３．３６ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．１５ － ３．１２ （ｍ， ４ Ｈ）。 ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３８６ （Ｍ＋ ＋ Ｈ）。
Ｈ）， ３．３９ － ３．３６ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．１５ － ３．１２ （ｍ， ４ Ｈ）。 ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３８６ （Ｍ＋ ＋ Ｈ）。
【0075】
製造例５．（Ｎ－（３－フルオロフェニル）－Ｎ－（４－ヒドロキシカルバモイル）ベンジル）モルホリン－４－カルボキサミドの合成［化合物５３０］
［ステップ１］メチル４－（（３－フルオロフェニルアミノ）メチル）ベンゾエートの合成
メチル４－ホルミルベンゾエート（１．４７ｇ、８．９９ｍｍｏｌ）をメタノール（５０ｍＬ）に溶かした後、３－フルオロベンゼンアミン（１．０ｇ、８．９９ｍｍｏｌ）を入れる。常温で３時間反応し、ナトリウムシアノボロヒドリド（ＮａＣＮＢＨ３）（０．５６ｇ、８．９９ｍｍｏｌ）および酢酸（１．０３ｍＬ、１７．９９ｍｍｏｌ）を入れる。反応物を常温で１日間反応した後、反応溶媒を減圧して除去し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を注ぎ、エチルアセテートで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％）で精製して表題化合物（１．８４ｇ、７９％）を得た。
［ステップ１］メチル４－（（３－フルオロフェニルアミノ）メチル）ベンゾエートの合成
【化34】
メチル４－ホルミルベンゾエート（１．４７ｇ、８．９９ｍｍｏｌ）をメタノール（５０ｍＬ）に溶かした後、３－フルオロベンゼンアミン（１．０ｇ、８．９９ｍｍｏｌ）を入れる。常温で３時間反応し、ナトリウムシアノボロヒドリド（ＮａＣＮＢＨ３）（０．５６ｇ、８．９９ｍｍｏｌ）および酢酸（１．０３ｍＬ、１７．９９ｍｍｏｌ）を入れる。反応物を常温で１日間反応した後、反応溶媒を減圧して除去し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を注ぎ、エチルアセテートで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％）で精製して表題化合物（１．８４ｇ、７９％）を得た。
【0076】
［ステップ２］メチル４－（（（３－フルオロフェニル）（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエートの合成
メチル４－（（３－フルオロフェニルアミノ）メチル）ベンゾエート（２．７ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）および４－ニトロフェニルクロロホルメート（４．２０ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１００ｍＬ）に溶かし、炭酸カリウム（４．３２ｇ、３１．２ｍｍｏｌ）を入れる。常温で１日間反応し、エチルアセテートで希釈する。反応物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過し減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％）で精製して無色オイルの表題化合物（２．６５ｇ、６０％）を得た。
【化35】
メチル４－（（３－フルオロフェニルアミノ）メチル）ベンゾエート（２．７ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）および４－ニトロフェニルクロロホルメート（４．２０ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１００ｍＬ）に溶かし、炭酸カリウム（４．３２ｇ、３１．２ｍｍｏｌ）を入れる。常温で１日間反応し、エチルアセテートで希釈する。反応物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過し減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％）で精製して無色オイルの表題化合物（２．６５ｇ、６０％）を得た。
【0077】
［ステップ３］メチル４－（（Ｎ－（３－フルオロフェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエートの合成
メチル４－（（（３－フルオロフェニル）（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（０．３２ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶かし、炭酸カリウム（０．３１ｇ、２．２４ｍｍｏｌ）およびモルホリン（０．１３ｍＬ、１．４９ｍｍｏｌ）を入れる。６０℃で１日間反応させた後、飽和塩化アンモニウム溶液で希釈する。エチルアセテートで抽出した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過し減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝３０％）で精製して表題化合物（０．１３ｇ、４５％）を得た。
【化36】
メチル４－（（（３－フルオロフェニル）（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（０．３２ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶かし、炭酸カリウム（０．３１ｇ、２．２４ｍｍｏｌ）およびモルホリン（０．１３ｍＬ、１．４９ｍｍｏｌ）を入れる。６０℃で１日間反応させた後、飽和塩化アンモニウム溶液で希釈する。エチルアセテートで抽出した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過し減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素；エチルアセテート／ヘキサン＝３０％）で精製して表題化合物（０．１３ｇ、４５％）を得た。
【0078】
［ステップ４］Ｎ－（３－フルオロフェニル）－Ｎ－（４－ヒドロキシカルバモイル）ベンジル）モルホリン－４－カルボキサミドの合成
メチル４－（（Ｎ－（３－フルオロフェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエート（０．１０８ｇ、０．２９０ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶かし、室温でヒドロキシルアミン（５０．０ｗｔ％水溶液；１．１９ｍＬ、１９．４ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、水酸化カリウム（０．１５６ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）を添加した後、同じ温度で１６時間撹拌した後、反応混合物を減圧下で溶媒を除去して得られた濃縮物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を注ぎ、エチルアセテートで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。析出された固体を濾過し乾燥して表題化合物（０．０６２ｇ、５７％）を白色固体として得た。
【化37】
メチル４－（（Ｎ－（３－フルオロフェニル）モルホリン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエート（０．１０８ｇ、０．２９０ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶かし、室温でヒドロキシルアミン（５０．０ｗｔ％水溶液；１．１９ｍＬ、１９．４ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、水酸化カリウム（０．１５６ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）を添加した後、同じ温度で１６時間撹拌した後、反応混合物を減圧下で溶媒を除去して得られた濃縮物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を注ぎ、エチルアセテートで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。析出された固体を濾過し乾燥して表題化合物（０．０６２ｇ、５７％）を白色固体として得た。
【0079】
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．１４ （ｂｒｓ，
１ Ｈ）， ８．９９ （ｂｒｓ， １ Ｈ）， ７．６５ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ）， ７．３８－７．３０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０５－６．８５ （ｍ， ３Ｈ）， ４．８９ （ｓ， １Ｈ）， ３．４４－３．４２ （ｍ， ４Ｈ）， ３．１８－３．１５ （ｍ， ４Ｈ）， ２．０８ （ｓ， ３Ｈ）。 ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３７４ （Ｍ＋ ＋ Ｈ）。
１ Ｈ）， ８．９９ （ｂｒｓ， １ Ｈ）， ７．６５ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ）， ７．３８－７．３０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０５－６．８５ （ｍ， ３Ｈ）， ４．８９ （ｓ， １Ｈ）， ３．４４－３．４２ （ｍ， ４Ｈ）， ３．１８－３．１５ （ｍ， ４Ｈ）， ２．０８ （ｓ， ３Ｈ）。 ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ３７４ （Ｍ＋ ＋ Ｈ）。
【0080】
製造例６．Ｎ－（３－フルオロフェニル）－Ｎ－（４－ヒドロキシカルバモイル）ベンジル）－１，４－オキサゼパン－４－カルボキサミドの合成［化合物６５２］
［ステップ１］メチル４－（（Ｎ－（３－フルオロフェニル）－１，４－オキサゼパン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエートの合成
製造例５のステップ２で得られたメチル４－（（（３－フルオロフェニル）（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（０．２９０ｇ、０．６８３ｍｍｏｌ）、１，４－オキサゼパン（０．１８８ｇ、１．３６７ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（０．２８３ｇ、２．０５０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶かした反応溶液を６０℃で１日間撹拌した後、反応混合物に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を注ぎ、エチルアセテートで抽出した。有機層を飽和塩酸ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。濃縮物をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素、１５ｇカートリッジ；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％→５０％）で精製および濃縮して表題化合物（０．１１６ｇ、４３．９％）を無色液体として得た。
［ステップ１］メチル４－（（Ｎ－（３－フルオロフェニル）－１，４－オキサゼパン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエートの合成
【化38】
製造例５のステップ２で得られたメチル４－（（（３－フルオロフェニル）（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）ベンゾエート（０．２９０ｇ、０．６８３ｍｍｏｌ）、１，４－オキサゼパン（０．１８８ｇ、１．３６７ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（０．２８３ｇ、２．０５０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶かした反応溶液を６０℃で１日間撹拌した後、反応混合物に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を注ぎ、エチルアセテートで抽出した。有機層を飽和塩酸ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後に減圧下で濃縮した。濃縮物をカラムクロマトグラフィー（二酸化ケイ素、１５ｇカートリッジ；エチルアセテート／ヘキサン＝２０％→５０％）で精製および濃縮して表題化合物（０．１１６ｇ、４３．９％）を無色液体として得た。
【0081】
［ステップ２］Ｎ－（３－フルオロフェニル）－Ｎ－（４－ヒドロキシカルバモイル）ベンジル）－１，４－オキサゼパン－４－カルボキサミドの合成
メチル４－（（Ｎ－（３－フルオロフェニル）－１，４－オキサゼパン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエート（０．１１６ｇ、０．３ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶かし、ヒドロキシルアミン水溶液（５０ｗｔ％、１ｍＬ）および水酸化カリウム（０．１６８ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）を入れて一晩撹拌した。反応終了後、メタノールを減圧蒸留して除去し、エチルアセテートおよび水を用いて抽出（ｗｏｒｋ ｕｐ）した。抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過し減圧濃縮した後、残渣をジエチルエーテルにおいて撹拌して固体生成物を作り、濾過した後に乾燥して表題化合物（０．０３２ｇ、２７．５％）を白色固体として得た。
【化39】
メチル４－（（Ｎ－（３－フルオロフェニル）－１，４－オキサゼパン－４－カルボキシアミド）メチル）ベンゾエート（０．１１６ｇ、０．３ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶かし、ヒドロキシルアミン水溶液（５０ｗｔ％、１ｍＬ）および水酸化カリウム（０．１６８ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）を入れて一晩撹拌した。反応終了後、メタノールを減圧蒸留して除去し、エチルアセテートおよび水を用いて抽出（ｗｏｒｋ ｕｐ）した。抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過し減圧濃縮した後、残渣をジエチルエーテルにおいて撹拌して固体生成物を作り、濾過した後に乾燥して表題化合物（０．０３２ｇ、２７．５％）を白色固体として得た。
【0082】
＜実施例１＞ＣＯＰＤ誘導動物モデルでの治療効果の分析
＜実施例１－１＞ＣＯＰＤ誘導動物モデル（喫煙＋Ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ ＣＯＰＤモデル）の準備
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（雌、７週齢）を密閉された喫煙ボックスに入れ、タバコ煙に一定時間露出させてＣＯＰＤ疾患を誘導した。具体的に、マウスを喫煙ボックスに入れ、タバコに火をつけた後、陰圧がかかっているチューブにタバコフィルタ部分を結合させ、タバコ煙が継続的に出てくるようにした後、喫煙ボックスを遮断して、マウスが呼吸時にタバコ煙を吸い込むようにした。マウスが総４週間喫煙をするようにし、最初の１週の１日目、２日目、および３日目には各々１本、２本、および４本のタバコを１回露出させ、４日目および５日目には４本のタバコを各々２回および３回露出させた。その後、残りの３週間は４本のタバコを３回露出させており、喫煙誘導中に３週目および４週目に週２回Ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ （ｐｏｌｙｉｎｏｃｉｎｉｃ：ｐｏｌｙｃｙｔｉｄｙｌｉｃ ａｃｉｄ）を、麻酔したマウスの鼻腔内に投与して、喫煙＋Ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ ＣＯＰＤ（ｃｈｒ
ｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）モデルを誘導した。
＜実施例１－１＞ＣＯＰＤ誘導動物モデル（喫煙＋Ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ ＣＯＰＤモデル）の準備
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（雌、７週齢）を密閉された喫煙ボックスに入れ、タバコ煙に一定時間露出させてＣＯＰＤ疾患を誘導した。具体的に、マウスを喫煙ボックスに入れ、タバコに火をつけた後、陰圧がかかっているチューブにタバコフィルタ部分を結合させ、タバコ煙が継続的に出てくるようにした後、喫煙ボックスを遮断して、マウスが呼吸時にタバコ煙を吸い込むようにした。マウスが総４週間喫煙をするようにし、最初の１週の１日目、２日目、および３日目には各々１本、２本、および４本のタバコを１回露出させ、４日目および５日目には４本のタバコを各々２回および３回露出させた。その後、残りの３週間は４本のタバコを３回露出させており、喫煙誘導中に３週目および４週目に週２回Ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ （ｐｏｌｙｉｎｏｃｉｎｉｃ：ｐｏｌｙｃｙｔｉｄｙｌｉｃ ａｃｉｄ）を、麻酔したマウスの鼻腔内に投与して、喫煙＋Ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ ＣＯＰＤ（ｃｈｒ
ｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）モデルを誘導した。
【0083】
本発明に係る化合物の薬物投与効果を確認するために、ＣＯＰＤ疾患誘導マウスを１グループ当たりに６匹ずつ分け、各グループを投与物質［ビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ；Ｖｅｈ）、化合物３７４（ＳＭ＋１）、または化合物４５８（ＳＭ＋２）］、投与経路［経口投与（Ｐ．Ｏ．）］、および投与周期［毎日（Ｑ．Ｄ．）］に応じて下記表１のように分類した。
【表3】
【0084】
＜実施例１－２＞免疫細胞の浸潤評価
本発明に係る化合物の慢性閉塞性肺疾患の予防または治療効果を確認するために、免疫細胞の浸潤程度を評価した。各グループのマウスから肺を摘出した後、肺組織切片にＨ＆Ｅ染色をし、病理学的分析を行った。図１の参考画像に従って細胞の浸潤程度を０～３のスコアで判別し、各グループ別にスライドを観察してスコアを測定した［図１；０－なし（ｎｏｎｅ）、１－軽い（ｍｉｌｄ）、２－中等度（ｍｏｄｅｒａｔｅ）、および３－重症（ｓｅｖｅｒｅ）］。
本発明に係る化合物の慢性閉塞性肺疾患の予防または治療効果を確認するために、免疫細胞の浸潤程度を評価した。各グループのマウスから肺を摘出した後、肺組織切片にＨ＆Ｅ染色をし、病理学的分析を行った。図１の参考画像に従って細胞の浸潤程度を０～３のスコアで判別し、各グループ別にスライドを観察してスコアを測定した［図１；０－なし（ｎｏｎｅ）、１－軽い（ｍｉｌｄ）、２－中等度（ｍｏｄｅｒａｔｅ）、および３－重症（ｓｅｖｅｒｅ）］。
【0085】
その結果、図２に示すように、本発明に係る化合物を投与したグループ（ＳＭ＋１およびＳＭ＋２）は、喫煙＋Ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃグループ（ＳＭ＋ｎｏ ｄｒｕｇ）と比べて細胞浸潤スコアが減少した。よって、本発明に係る化合物は、免疫細胞の浸潤抑制効果を示しており、これにより慢性閉塞性肺疾患の予防または治療に有用に使用可能であることが分かった。
【0086】
＜実施例１－３＞気管支肺胞洗浄液（Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ ｌａｖａｇｅ
ｆｌｕｉｄ；ＢＡＬ ｆｌｕｉｄ）の分析
本発明に係る化合物の慢性閉塞性肺疾患の予防または治療効果を確認するために、気管支肺胞洗浄液（Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ ｌａｖａｇｅ ｆｌｕｉｄ；ＢＡＬ ｆｌｕｉｄ）を分析した。各グループのマウスから気管支肺胞洗浄液２ｍＬを分離して遠心分離した。その後、それをリン酸塩緩衝液（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ；ＰＢＳ）に懸濁し、総細胞（ｔｏｔａｌ ｃｅｌｌ）数をカウントし、２×１０５の細胞をサイトスピン（ｃｙｔｏｓｐｉｎ）によりスライドに付けた。ディフ－クイック染色キット（Ｄｉｆｆ－ｑｕｉｃｋ ｓｔａｉｎ ｋｉｔ）を用いて染色した後、染色された細胞の特徴に基づいてマクロファージ（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）、好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ）などを区分してこれらの和３００個をカウントした後、総細胞数値に対して各々の細胞比率を計算してグループ間比較をした。
ｆｌｕｉｄ；ＢＡＬ ｆｌｕｉｄ）の分析
本発明に係る化合物の慢性閉塞性肺疾患の予防または治療効果を確認するために、気管支肺胞洗浄液（Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ ｌａｖａｇｅ ｆｌｕｉｄ；ＢＡＬ ｆｌｕｉｄ）を分析した。各グループのマウスから気管支肺胞洗浄液２ｍＬを分離して遠心分離した。その後、それをリン酸塩緩衝液（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ；ＰＢＳ）に懸濁し、総細胞（ｔｏｔａｌ ｃｅｌｌ）数をカウントし、２×１０５の細胞をサイトスピン（ｃｙｔｏｓｐｉｎ）によりスライドに付けた。ディフ－クイック染色キット（Ｄｉｆｆ－ｑｕｉｃｋ ｓｔａｉｎ ｋｉｔ）を用いて染色した後、染色された細胞の特徴に基づいてマクロファージ（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）、好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ）などを区分してこれらの和３００個をカウントした後、総細胞数値に対して各々の細胞比率を計算してグループ間比較をした。
【0087】
その結果、図３に示すように、本発明に係る化合物を投与したグループ（ＳＭ＋１およびＳＭ＋２）は、喫煙＋Ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃグループ（ＳＭ＋ｎｏ ｄｒｕｇ）と比べて総細胞、マクロファージ、および好中球の数が減少した。よって、本発明に係る化合物は、
炎症細胞の浸潤抑制効果を示しており、これにより慢性閉塞性肺疾患の予防または治療に有用に使用可能であることが分かった（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
炎症細胞の浸潤抑制効果を示しており、これにより慢性閉塞性肺疾患の予防または治療に有用に使用可能であることが分かった（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
【0088】
＜実施例１－４＞肺組織内の炎症性サイトカインの発現分析
本発明に係る化合物の慢性閉塞性肺疾患の予防または治療効果を確認するために、肺組織内の炎症性サイトカインの発現を分析した。各グループのマウスから肺を摘出した後、肺組織からＲＮＡを分離した。各ＲＮＡを逆転写酵素（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ）を用いてｃＤＮＡ合成後、ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにより炎症性サイトカインマーカーであるＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＭＣＰ－１、およびＴＮＦ－αの発現を分析し、グループ間の炎症誘発程度を比較した。この際、実験に用いたプライマーの塩基配列は、下記表２に示すとおりである（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
本発明に係る化合物の慢性閉塞性肺疾患の予防または治療効果を確認するために、肺組織内の炎症性サイトカインの発現を分析した。各グループのマウスから肺を摘出した後、肺組織からＲＮＡを分離した。各ＲＮＡを逆転写酵素（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ）を用いてｃＤＮＡ合成後、ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにより炎症性サイトカインマーカーであるＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＭＣＰ－１、およびＴＮＦ－αの発現を分析し、グループ間の炎症誘発程度を比較した。この際、実験に用いたプライマーの塩基配列は、下記表２に示すとおりである（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
【表4】
【0089】
その結果、図４に示すように、本発明に係る化合物を投与したグループ（ＳＭ＋１およびＳＭ＋２）は、喫煙＋Ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃグループ（ＳＭ＋ｎｏ ｄｒｕｇ）と比べてＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＭＣＰ－１、およびＴＮＦ－αの発現が減少した。よって、本発明に係る化合物は、抗炎症効果を示しており、これにより慢性閉塞性肺疾患の予防または治療に有用に使用可能であることが分かった。
【0090】
＜実施例２＞ＴＧＦ－β１－誘導ＥＭＴの抑制効果
本発明に係る化合物の慢性閉塞性肺疾患の予防または治療効果を確認するために、上皮マーカータンパク質（Ｅ－Ｃａｄ）および間葉マーカータンパク質（Ｎ－Ｃａｄ）の発現を分析した。Ａ５４９細胞を１０％ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ；ＦＢＳ）および１％ペニシリン－ストレプトマイシン（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ－ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ；Ｐ／Ｓ）を含むＲＰＭＩ－１６４０培地で培養した。１．５×１０５細胞を６－ウェルプレート（６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅｓ）にプレートし、一晩インキュベーションした。細胞を５ｎｇ／ｍＬの組み換えヒト形質転換成長因子β１（ｔｒａ
ｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｅｔａ １；ＴＧＦ－β１）とともに培養し、上皮間葉転換（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｔｏ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ；ＥＭＴ）を誘導した。ＴＧＦ－β１をＲＰＭＩ－１６４０（１％ ＦＢＳ、１％ Ｐ／Ｓ）で希釈し、４８時間細胞とともにインキュベーションした。５００μＬの培養培地を遠心分離フィルタ（ＡｍｉｃｏｎＲ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ）上にロードし、１４，０００×ｇで１０分間遠心分離した。増菌した培養培地は、１５μＬの４Ｘサンプルバッファとともに１００℃で５分間沸騰した後、ウェスタンブロットを用いて分析した。プロテアーゼ阻害剤カクテル（ｃｏｃｋｔａｉｌ）およびホスファターゼ阻害剤カクテルを含むＲＩＰＡバッファを用いて細胞を溶解した。溶解物は３分間氷でインキュベーションし、１３，０００×ｇ、４℃で２０分間遠心分離した。ＢＣＡタンパク質分析キットを用いて上澄液を定量し、ウェスタンブロットで分析した。製造されたサンプルをＮｕＰＡＧＥ Ｎｏｖｅｘ ４－１２％ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓゲルにロードし、１２０Ｖで分解した。ｉＢｌｏｔ ｍａｃｈｉｎｅを用いてタンパク質をニトロセルロースメンブレインに移した。製造会社の指針に従い、ＥｚＢｌｏｃｋ Ｃｈｅｍｉを用いてメンブレインを遮断した。Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ（Ｅ－Ｃａｄ）、Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ（Ｎ－ｃａｄ）、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ－ＥＤＡ（ＦＮ－ＥＤＡ）などの抗体を用いた。ＨＲＰ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）－結合二次抗体で反応した後、ＡｍｅｒｓｈａｍＴＭ ＥＣＬ ｓｅｌｅｃｔＴＭウェスタンブロット検出試薬を用いて免疫反応性タンパク質を視覚化し、ＣｈｅｍｉＤｏｃＴＭ ＭＰイメージングシステムにより検出した。ＩｍａｇｅＪソフトウェアでバンドの強度（ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）を定量化し、β－アクチン（β－ａｃｔｉｎ）に正規化した。
本発明に係る化合物の慢性閉塞性肺疾患の予防または治療効果を確認するために、上皮マーカータンパク質（Ｅ－Ｃａｄ）および間葉マーカータンパク質（Ｎ－Ｃａｄ）の発現を分析した。Ａ５４９細胞を１０％ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ；ＦＢＳ）および１％ペニシリン－ストレプトマイシン（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ－ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ；Ｐ／Ｓ）を含むＲＰＭＩ－１６４０培地で培養した。１．５×１０５細胞を６－ウェルプレート（６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅｓ）にプレートし、一晩インキュベーションした。細胞を５ｎｇ／ｍＬの組み換えヒト形質転換成長因子β１（ｔｒａ
ｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｅｔａ １；ＴＧＦ－β１）とともに培養し、上皮間葉転換（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｔｏ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ；ＥＭＴ）を誘導した。ＴＧＦ－β１をＲＰＭＩ－１６４０（１％ ＦＢＳ、１％ Ｐ／Ｓ）で希釈し、４８時間細胞とともにインキュベーションした。５００μＬの培養培地を遠心分離フィルタ（ＡｍｉｃｏｎＲ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ）上にロードし、１４，０００×ｇで１０分間遠心分離した。増菌した培養培地は、１５μＬの４Ｘサンプルバッファとともに１００℃で５分間沸騰した後、ウェスタンブロットを用いて分析した。プロテアーゼ阻害剤カクテル（ｃｏｃｋｔａｉｌ）およびホスファターゼ阻害剤カクテルを含むＲＩＰＡバッファを用いて細胞を溶解した。溶解物は３分間氷でインキュベーションし、１３，０００×ｇ、４℃で２０分間遠心分離した。ＢＣＡタンパク質分析キットを用いて上澄液を定量し、ウェスタンブロットで分析した。製造されたサンプルをＮｕＰＡＧＥ Ｎｏｖｅｘ ４－１２％ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓゲルにロードし、１２０Ｖで分解した。ｉＢｌｏｔ ｍａｃｈｉｎｅを用いてタンパク質をニトロセルロースメンブレインに移した。製造会社の指針に従い、ＥｚＢｌｏｃｋ Ｃｈｅｍｉを用いてメンブレインを遮断した。Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ（Ｅ－Ｃａｄ）、Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ（Ｎ－ｃａｄ）、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ－ＥＤＡ（ＦＮ－ＥＤＡ）などの抗体を用いた。ＨＲＰ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）－結合二次抗体で反応した後、ＡｍｅｒｓｈａｍＴＭ ＥＣＬ ｓｅｌｅｃｔＴＭウェスタンブロット検出試薬を用いて免疫反応性タンパク質を視覚化し、ＣｈｅｍｉＤｏｃＴＭ ＭＰイメージングシステムにより検出した。ＩｍａｇｅＪソフトウェアでバンドの強度（ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）を定量化し、β－アクチン（β－ａｃｔｉｎ）に正規化した。
【0091】
その結果、図５に示すように、本発明の化合物を処理したグループ（３７４、４５８、４１３、４８４、５３０および６５２）は、Ｖｈｃｌ（ＴＧＦ－β１）と比べて、上皮マーカータンパク質であるＥ－Ｃａｄの発現は顕著に増加し、間葉マーカータンパク質であるＮ－Ｃａｄの発現は顕著に減少した。
したがって、本発明に係る化合物は、ＴＧＦ－β１誘導ＥＭＴの抑制効果を示しており、これにより慢性閉塞性肺疾患の予防または治療に有用に使用可能であることが分かった（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
したがって、本発明に係る化合物は、ＴＧＦ－β１誘導ＥＭＴの抑制効果を示しており、これにより慢性閉塞性肺疾患の予防または治療に有用に使用可能であることが分かった（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
【0092】
＜実施例３＞ＦＮ－ＥＤＡタンパク質の減少効果
本発明に係る化合物の慢性閉塞性肺疾患の予防または治療効果を確認するために、主要細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質であるＦＮ－ＥＤＡの発現を分析した。前記実施例２に記載された方法と同様の方法により行った。
本発明に係る化合物の慢性閉塞性肺疾患の予防または治療効果を確認するために、主要細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質であるＦＮ－ＥＤＡの発現を分析した。前記実施例２に記載された方法と同様の方法により行った。
【0093】
その結果、図６に示すように、本発明の化合物を処理したグループ（３７４、４５８、４１３、４８４、５３０および６５２）は、Ｖｈｃｌ（ＴＧＦ－β１）と比べて、主要ＥＣＭタンパク質であるＦＮ－ＥＤＡの発現が顕著に減少した。
したがって、本発明に係る化合物は、主要ＥＣＭタンパク質であるＦＮ－ＥＤＡの減少効果を示しており、これにより慢性閉塞性肺疾患の予防または治療に有用に使用可能であることが分かった（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
したがって、本発明に係る化合物は、主要ＥＣＭタンパク質であるＦＮ－ＥＤＡの減少効果を示しており、これにより慢性閉塞性肺疾患の予防または治療に有用に使用可能であることが分かった（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
【0094】
＜実施例４＞統計分析
Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０ソフトウェア（ｐｏｓｔ ｈｏｃ：Ｄｕｎｎｅｔｔ）を用いてｕｎｐａｉｒｅｄ Ｔ－ｔｅｓｔで行い、全てのデータは平均±ＳＥＭで示した。Ｐ＜０．０５は統計的に有意であると見なした。
Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０ソフトウェア（ｐｏｓｔ ｈｏｃ：Ｄｕｎｎｅｔｔ）を用いてｕｎｐａｉｒｅｄ Ｔ－ｔｅｓｔで行い、全てのデータは平均±ＳＥＭで示した。Ｐ＜０．０５は統計的に有意であると見なした。
【0095】
以上、本発明の特定の部分を詳細に記述したが、当業界の通常の知識を有する者にとって、このような具体的な記述は単に好ましい実施形態にすぎず、これにより本発明の範囲
が限定されないことは明白である。よって、本発明の実質的な範囲は、添付の請求項およびその等価物によって定義されるといえる。
が限定されないことは明白である。よって、本発明の実質的な範囲は、添付の請求項およびその等価物によって定義されるといえる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【配列表】
【国際調査報告】