特表 2022-553908 ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２二重結合剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-12-27

(54)【発明の名称】ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２二重結合剤

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20221220BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20221220BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20221220BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20221220BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20221220BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20221220BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20221220BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20221220BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20221220BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20221220BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20221220BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20221220BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20221220BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20221220BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221220BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20221220BHJP

   A61P 33/00 20060101ALI20221220BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20221220BHJP

   A61P 31/10 20060101ALI20221220BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20221220BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20221220BHJP

   C12N 15/113 20100101ALN20221220BHJP

   C12N 9/16 20060101ALN20221220BHJP

   C12N 9/12 20060101ALN20221220BHJP

   C12N 9/90 20060101ALN20221220BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20221220BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C07K19/00

C12P21/08

A61K45/00

A61K47/68

A61K48/00

A61P37/02

A61P37/04

A61P35/00

A61P31/12

A61P33/00

A61P31/04

A61P31/10

A61P31/18

A61K39/395 D

A61K39/395 E

A61K39/395 C

A61K39/395 S

A61K39/395 R

A61K39/395 T

A61K39/395 Y

A61K39/395 L

C12N15/113 Z

C12N9/16 B

C12N9/12

C12N9/90

C12N15/62 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022521074

(86)(22)【出願日】2020-10-09

(85)【翻訳文提出日】2022-06-01

(86)【国際出願番号】 EP2020078427

(87)【国際公開番号】W WO2021069670

(87)【国際公開日】2021-04-15

(31)【優先権主張番号】1914747.9

(32)【優先日】2019-10-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(31)【優先権主張番号】2013180.1

(32)【優先日】2020-08-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520284090

【氏名又は名称】ウルトラヒューマン エイト リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100079108

【弁理士】

【氏名又は名称】稲葉 良幸

(74)【代理人】

【識別番号】100109346

【弁理士】

【氏名又は名称】大貫 敏史

(74)【代理人】

【識別番号】100117189

【弁理士】

【氏名又は名称】江口 昭彦

(74)【代理人】

【識別番号】100134120

【弁理士】

【氏名又は名称】内藤 和彦

(72)【発明者】

【氏名】フィンレー，ウィリアム ジェームズ ジョナサン

【テーマコード（参考）】

4B050

4B064

4B065

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B050CC07

4B050KK07

4B050LL01

4B064AG27

4B064CA02

4B064CA05

4B064CA06

4B064CA08

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA01X

4B065AA01Y

4B065AA57X

4B065AA57Y

4B065AA72X

4B065AA72Y

4B065AA83X

4B065AA83Y

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA44

4C076AA95

4C076BB13

4C076BB16

4C076CC07

4C076CC27

4C076CC31

4C076CC32

4C076CC34

4C076CC35

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF02

4C076FF04

4C076FF68

4C084AA13

4C084AA17

4C084MA05

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA13

4C084ZB07

4C084ZB26

4C084ZB32

4C084ZB33

4C084ZB35

4C084ZB37

4C084ZC55

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB31

4C085BB33

4C085BB34

4C085BB35

4C085BB36

4C085BB37

4C085BB41

4C085BB43

4C085CC22

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG02

4C085GG04

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA09

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

プログラム細胞死１（ＰＤ１）および血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、関連する核酸分子、ベクターおよび宿主細胞に特異的に結合する抗体分子が本明細書において提供される。本明細書において、かかる抗体分子の医療用途も提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２の両方に特異的に結合する抗体または前記抗体の抗原結合部分であって、前記抗体または抗原結合部分が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
（ａ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｂ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｃ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号８）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｄ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含む、
（ｅ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含む、
（ｆ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号８）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含む、
（ｇ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＴのＬＣＤＲ１（配列番号９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含む、
（ｈ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＴのＬＣＤＲ１（配列番号９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｉ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含む、
（ｊ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含む、
（ｋ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＧのＬＣＤＲ１（配列番号１２）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含む、
（ｌ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｍ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｎ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｏ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４０）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｐ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４１）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｑ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｒ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４０）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｓ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４１）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、または
（ｔ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＶＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号６４）を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、抗体または抗原結合部分。

【請求項2】

（ａ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４４を含む、
（ｂ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含む、
（ｃ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２４を含む、
（ｄ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１４を含む、
（ｅ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１５を含む、
（ｆ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１６を含む、
（ｇ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１７を含む、
（ｈ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１８を含む、
（ｉ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１９を含む、
（ｊ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２０を含む、
（ｋ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２１を含む、
（ｌ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２２を含む、
（ｍ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２３を含む、
（ｎ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４４を含む、
（ｏ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４５を含む、
（ｐ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４６を含む、
（ｑ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含む、
（ｒ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４５を含む、
（ｓ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４６を含む、または
（ｔ）前記ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号７３を含み、前記ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含む、請求項１に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項3】

前記抗体または抗原結合部分が、ＰＤ１－ＰＤＬ１およびＶＥＧＦＲ２－ＶＥＧＦシグナル伝達経路の両方を拮抗することができる、請求項１または２に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項4】

ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２の両方に特異的に結合する抗体または前記抗体の抗原結合部分であって、前記抗体または抗原結合部分が、ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２の両方への結合について、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分と交差競合し、
（ａ）完全生殖系列ヒトフレームワークアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ヒトＰＤ１、カニクイザルＰＤ１、ヒトＶＥＧＦＲ２、およびアカゲザルＶＥＧＦＲ２に特異的に結合し、
（ｃ）ヒトＰＤ１のヒトＰＤ－Ｌ１への結合に拮抗し、ヒトＶＥＧＦに応答してヒトＶＥＧＦＲ２のシグナル伝達に拮抗する、抗体または抗原結合部分。

【請求項5】

前記抗体は、ヒト、ヒト化またはキメラである、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項6】

前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、または前記ＶＨ領域および前記ＶＬ領域の両方が、一つ以上のヒトフレームワーク領域アミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項7】

前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、または前記ＶＨ領域および前記ＶＬ領域の両方が、前記ＣＤＲが挿入されているヒト可変領域フレームワーク足場アミノ酸配列を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項8】

前記ＶＨ領域が、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列が挿入されているＩＧＨＶ３－７ヒト生殖系列足場アミノ酸配列を含む、請求項１または３に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項9】

前記ＶＬ領域が、前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列が挿入されているＩＧＫＶ１－３９ヒト生殖系列足場アミノ酸配列を含む、請求項１、３および８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項10】

前記抗体が免疫グロブリン定常領域を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項11】

前記免疫グロブリン定常領域が、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＹである、請求項１０に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項12】

前記免疫グロブリン定常領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である、請求項１１に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項13】

前記免疫グロブリン定常領域が、免疫学的に不活性である、請求項１０に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項14】

前記免疫グロブリン定常領域が、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域、または野生型ヒトＩｇＧ２定常領域である、請求項１０に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項15】

前記免疫グロブリン定常領域が、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、請求項１３に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項16】

前記抗体または抗原結合部分が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディまたはｂｉｓ－ｓｃＦｖである、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗原結合部分。

【請求項17】

前記抗体はモノクローナルである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項18】

前記抗体が四量体抗体、四価抗体または多選択性抗体である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項19】

前記抗体または抗原結合部分が、（ａ）ヒトＰＤ１、または（ｂ）ヒトＰＤ１およびカニクイザルＰＤ１、または（ｃ）ヒトＰＤ１およびアカゲザルＰＤ１、または（ｄ）ヒトＰＤ１、カニクイザルＰＤ１およびアカゲザルＰＤ１に特異的に結合する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項20】

前記抗体または抗原結合部分が（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ２、または（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ２およびカニクイザルＶＥＧＦＲ２、または（ｃ）ヒトＶＥＧＦＲ２およびアカゲザルＶＥＧＦＲ２、または（ｄ）ヒトＶＥＧＦＲ２、カニクイザルＶＥＧＦＲ２およびアカゲザルＶＥＧＦＲ２に特異的に結合する、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。

【請求項21】

治療剤に連結される請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分を含む免疫コンジュゲート。

【請求項22】

前記治療剤が、サイトトキシン、放射性同位元素、化学療法剤、免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤、アポトーシス促進剤、細胞分裂酵素、細胞溶解酵素、治療用核酸、抗血管新生剤、抗増殖剤またはアポトーシス促進剤である、請求項２１に記載の免疫コンジュゲート。

【請求項23】

請求項１～２０のいずれか一項の抗体または抗原結合部分または請求項２１もしくは２２に記載の免疫コンジュゲートならびに薬学的に許容可能な担体、希釈剤もしくは賦形剤を含む、医薬組成物。

【請求項24】

請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分の
（ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列、
（ｂ）ＶＬ領域アミノ酸配列または
（ｃ）ＶＨおよびＶＬ領域アミノ酸配列の両方
をコードする、核酸分子。

【請求項25】

請求項２４に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。

【請求項26】

請求項２４に記載の核酸分子または請求項２５に記載の発現ベクターを含む、組換え宿主細胞。

【請求項27】

抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合部分を作製する方法であって、
前記核酸分子が発現される条件下で、請求項２５に記載の発現ベクターを含む組換え宿主細胞を培養し、それによって前記抗体または抗原結合部分を産生すること、および
前記宿主細胞または培養物から前記抗体または抗原結合部分を単離することを含む、方法。

【請求項28】

対象において免疫応答を強化するための方法であって、治療有効量の請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分、請求項２１または２２に記載の免疫コンジュゲートまたは請求項２３に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項29】

対象における癌、感染性疾患または免疫疾患を治療または予防する方法であって、治療有効量の請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分、請求項２１または２２に記載の免疫コンジュゲートまたは請求項２３に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項30】

前記癌は、膵癌、黒色腫、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

前記感染性疾患は、ウイルス、細菌、真菌または寄生虫によるものである、請求項２９に記載の方法。

【請求項32】

前記感染性疾患が、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染である、請求項２９に記載の方法。

【請求項33】

癌、感染性疾患または免疫疾患の治療に使用するための、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分、請求項２１もしくは２２に記載の免疫コンジュゲートまたは請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項34】

前記癌は、膵癌、黒色腫、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である、請求項３３に記載の使用のための抗体または抗原結合部分、免疫コンジュゲートまたは医薬組成物。

【請求項35】

前記感染性疾患が、ウイルス、細菌、真菌または寄生虫によるものである、請求項３３に記載の使用のための抗体または抗原結合部分、免疫コンジュゲートまたは医薬組成物。

【請求項36】

前記感染性疾患がヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染である、請求項３３に記載の使用のための抗体または抗原結合部分、免疫コンジュゲートまたは医薬組成物。

【請求項37】

医薬として使用するための、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分、請求項２１もしくは２２に記載の免疫コンジュゲートまたは請求項２３に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年８月２４日に出願された英国特許出願第２０１３１８０．１号および２０１９年１０月１１日に出願された英国特許出願第１９１４７４７．９号の利益を主張し、その各開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

電子的に提出されたテキストファイルの説明
本明細書に電子的に提出されたテキストファイルの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。配列表のコンピュータ可読形式のコピー（ファイル名：ＵＨＥＬ＿００２＿０２ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録日：２０２０年１０月９日、ファイルサイズ約８６，７０７バイト）。

【0003】

本発明は、ＰＤ１（プログラム細胞死１、ＰＤＣＤ１、ＣＤ２７９、ＰＤ－１、ＳＬＥＢ２、ＰＤ－ｌ、ＳＬＥ１としても知られる）およびＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ、ＣＤ３０９、ＦＬＫ１、キナーゼ挿入ドメイン受容体としても知られる）の両方に特異的に結合する抗体分子ならびにそれらの医療用途に関する。

【背景技術】

【0004】

ＰＤ１は、免疫性「チェックポイント」メディエーターであることが示されている細胞表面受容体である。ＰＤ１チェックポイント活性は、自己抗原に反応性であるリンパ節に常駐するＴ細胞においてアポトーシス（プログラム細胞死）を促進し、制御性（抗炎症性）Ｔ細胞の生存を促進することによって、自己免疫リスクを最小化する。ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体によるＰＤ１活性の拮抗は、腫瘍におけるＴ細胞の再活性化につながる可能性があるため、複数の形態の癌の治療に対する成功した治療アプローチであることが実証されている。この臨床的な成功は、臨床試験で検討されている抗ＰＤ１抗体分子の増殖につながっているが、患者の大部分は抗ＰＤ１薬単独で治療しても持続的な抗癌応答をまだ担っていない。

【0005】

抗ＰＤ１抗体療法に応答する患者の数を増やすことは、大きな課題である。抗ＰＤ１抗体に対する臨床応答率を改善するための可能な戦略は、抗血管新生剤などの以前に実証された癌療法と組み合わせることである。そのような薬剤クラスの一つは、抗ＶＥＧＦＲ２または抗ＶＥＧＦ抗体などのＶＥＧＦシグナル伝達経路を遮断する抗体である。しかしながら、このような併用療法は、それぞれに独自の毒性リスクを有する、二つの別個の費用のかかる薬剤の使用を必要とする。二つの別個の薬剤を組み合わせることの不利益を伴わずに併用療法の有益性を提供する単一の薬剤に対するニーズが依然として存在する。

【発明の概要】

【0006】

本発明は、いくつかの抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２二重拮抗抗体ならびにその医療用途を提供する。

【0007】

本発明の一態様によれば、ヒトＰＤ１およびヒトＶＥＧＦＲ２に特異的に結合し、任意選択的に、カニクイザルＰＤ１およびカニクイザルＶＥＧＦＲ２、またはその抗原結合部分にも特異的に結合する抗体分子が提供される。

【0008】

一部の態様では、本発明は、ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２の両方または抗体の抗原結合部分に特異的に結合する抗体を提供し、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
（ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｂ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｃ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号８）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｄ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含む、
（ｅ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含む、
（ｆ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号８）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含む、
（ｇ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＴのＬＣＤＲ１（配列番号９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含む、
（ｈ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＴのＬＣＤＲ１（配列番号９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｉ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含む、
（ｊ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含む、
（ｋ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＧのＬＣＤＲ１（配列番号１２）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含む、
（ｌ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｍ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｎ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｏ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４０）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｐ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４１）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｑ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｒ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４０）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｓ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４１）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、または
（ｔ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＶＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号６４）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む。

【0009】

一部の態様では、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合部分が本明細書に開示され、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＨ領域アミノ酸配列が、
（ａ）配列番号１のＨＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号２、配列番号３８または配列番号４２のＨＣＤＲ２および
（ｃ）配列番号３または配列番号６４のＨＣＤＲ３を含み、
ＶＬ領域アミノ酸配列が、
（ａ’）配列番号４、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１２または配列番号３９のＬＣＤＲ１；
（ｂ’）配列番号５、配列番号４０、配列番号４１または配列番号４３のＬＣＤＲ２および
（ｃ’）配列番号６、配列番号１０または配列番号１１のＬＣＤＲ３を含む。

【0010】

一部の態様では、ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２の両方に特異的に結合する抗体または抗体の抗原結合部分が本明細書に開示され、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
（ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４４を含む、
（ｂ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含む、
（ｃ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２４を含む、
（ｄ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１４を含む、
（ｅ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１５を含む、
（ｆ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１６を含む、
（ｇ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１７を含む、
（ｈ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１８を含む、
（ｉ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１９を含む、
（ｊ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２０を含む、
（ｋ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２１を含む、
（ｌ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２２を含む、
（ｍ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２３を含む、
（ｎ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４４を含む、
（ｏ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４５を含む、
（ｐ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４６を含む、
（ｑ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含む、
（ｒ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４５を含む、
（ｓ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４６を含む、または
（ｔ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号７３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含む。

【0011】

本発明の一部の態様では、抗体分子または抗原結合部分のＨＣＤＲ１は、配列ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳ（配列番号１；ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１に開示されるＭＡｂ００５マウス／ヒト化抗体ＨＣＤＲ１、ＵＳ２０１６／３７６３６７Ａ１）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＨＣＤＲ２は、配列ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２；ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１に開示されるＭＡｂ００５マウス／ヒト化抗体ＨＣＤＲ２、ＵＳ２０１６／３７６３６７Ａ１）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＨＣＤＲ３は、配列ＱＬＹＹＦＤＹ（配列番号３；ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１に開示されるＭＡｂ００５マウス／ヒト化抗体ＨＣＤＲ３、ＵＳ２０１６／３７６３６７Ａ１）を除外してもよい。

【0012】

本発明の一部の態様では、抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ１は、配列ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＴ（配列番号９；ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１に開示されるＭＡｂ００５マウス／ヒト化抗体ＬＣＤＲ１、ＵＳ２０１６／３７６３６７Ａ１）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ２は、配列ＴＡＴＳＬＡＤ（配列番号５；ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１に開示されるＭＡｂ００５マウス／ヒト化抗体ＬＣＤＲ２、ＵＳ２０１６／３７６３６７Ａ１）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ３は、配列ＱＱＶＹＳＩＰＷＴ（配列番号６；ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１に開示されるＭＡｂ００５マウス／ヒト化抗体ＬＣＤＲ３、ＵＳ２０１６／３７６３６７Ａ１）を除外してもよい。

【0013】

本発明によれば、治療剤に連結、融合または抱合された本明細書に定義される抗体分子またはその抗原結合部分を含む免疫コンジュゲートも提供される。

【0014】

別の態様では、本発明は、本明細書に定義される抗体分子またはその抗原結合部分をコードする核酸分子を提供する。
本発明の核酸分子を含むベクターがさらに提供される。

【0015】

また、本明細書に定義される本発明の核酸分子またはベクターを含む宿主細胞が提供される。

【0016】

さらなる態様では、抗ＰＤ１／ＶＥＧＦＲ２抗体および／またはその抗原結合部分を産生する方法が提供され、この方法は、抗体および／またはその抗原結合部分の発現および／または産生をもたらす条件下で本発明の宿主細胞を培養することと、抗体および／またはその抗原結合部分を宿主細胞または培養物から単離することと、を含む。

【0017】

本発明の別の態様では、本明細書に定義される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される本発明の核酸分子または本明細書に定義される本発明のベクターを含む医薬組成物が提供される。

【0018】

さらに、有効量の本明細書に定義される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される本発明の免疫コンジュゲートまたは本明細書に定義される本発明の核酸分子または本明細書に定義される本発明のベクターまたは本明細書に定義される本発明の医薬組成物を投与することを含む、対象における免疫応答を強化する方法が提供される。

【0019】

さらなる態様において、有効量の本明細書に定義される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される本発明の免疫コンジュゲートまたは本明細書に定義される本発明の核酸分子または本明細書に定義される本発明のベクターまたは本明細書に定義される本発明の医薬組成物を投与することを含む、対象における癌を治療または予防する方法が提供される。

【0020】

医薬として使用するための、本明細書に定義される抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される免疫コンジュゲートまたは本明細書に定義される核酸分子または本明細書に定義されるベクターまたは本明細書に定義される医薬組成物がさらに本明細書に提供される。本発明は、癌の治療に使用するための、本明細書に定義される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される本発明の免疫コンジュゲートまたは本明細書に定義される本発明の核酸分子または本明細書に定義される本発明のベクターまたは本明細書に定義される本発明の医薬組成物も提供する。

【0021】

別の態様では、本発明は、第二の治療剤、例えば、抗癌剤と組み合わせた組み合わせにおける別個の、連続的なまたは同時的な使用のために、抗体分子またはその抗原結合部分または免疫コンジュゲートまたは核酸分子または使用のためのベクターまたは本明細書に定義される本発明の治療方法を提供する。

【0022】

さらなる態様において、本発明は、癌の治療に使用するための医薬の製造において、本明細書に定義される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される本発明の免疫コンジュゲートまたは本明細書に定義される本発明の核酸分子または本明細書に定義される本発明のベクターまたは本明細書に定義される本発明の医薬組成物の使用を提供する。

【0023】

本発明は、有効量の本明細書に定義される抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される免疫コンジュゲートまたは本明細書に定義される核酸分子または本明細書に定義されるベクターまたは本明細書に定義される医薬組成物を投与することを含む、対象における感染性疾患を治療または予防する方法も提供する。

【0024】

感染性疾患は、全ての態様において、ウイルス性、細菌性、真菌性または寄生性からなる群から選択されることができる。一実施形態では、感染性疾患はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染である。

【0025】

感染性疾患の治療に使用するための、本明細書に定義される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に定義される免疫コンジュゲート、または本明細書に定義される核酸分子、または本明細書に定義されるベクター、または本明細書に定義される医薬組成物も提供される。

【0026】

さらに、感染性疾患の治療に使用するための医薬の製造における、本明細書に定義される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に定義される免疫コンジュゲート、または本明細書に定義される核酸分子、または本明細書に定義されるベクター、または本明細書に定義される医薬組成物も提供される。

【0027】

本発明は、有効量の本明細書に定義される抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される免疫コンジュゲートまたは本明細書に定義される核酸分子または本明細書に定義されるベクターまたは本明細書に定義される医薬組成物を投与することを含む、対象における感染性疾患を治療または予防する方法も提供する。

【0028】

本発明は、ヒトＰＤ１およびヒトＶＥＧＦＲ２に特異的に結合し、任意選択的に、カニクイザルＰＤ１およびサルＶＥＧＦＲ２またはその抗原結合部分にも特異的に結合する抗体分子を製造する方法も提供され、
（１）非ヒトソースからヒトｖドメインフレームワークに抗ＰＤ１ ＣＤＲを移植して、ヒト化抗ＰＤ１抗体分子またはその抗原結合部分を製造するステップ、
（２）ＣＤＲ中に一つ以上の変異を含む、ヒト化抗ＰＤ１抗体分子またはその抗原結合部分のクローンのライブラリを生成するステップ、
（３）ヒトＰＤ１およびヒトＶＥＧＦＲ２に結合し、任意選択的に、カニクイザルＰＤ１およびアカゲザルＶＥＧＦＲ２にも結合するライブラリをスクリーニングするステップ；
（４）ヒトＰＤ１およびヒトＶＥＧＦＲ２に対する結合特異性を有し、任意選択的に、カニクイザルＰＤ１およびアカゲザルＶＥＧＦＲ２に対する結合特異性も有するクローンをスクリーニングステップ（３）から選択するステップ、および
（５）ステップ（４）から選択されるクローンから、ヒトＰＤ１およびヒトＶＥＧＦＲ２に特異的に結合し、任意選択的に、カニクイザルＰＤ１およびアカゲザルＶＥＧＦＲ２にも特異的に結合する抗体分子またはその抗原結合部分を製造するステップ、を含む。

【0029】

方法は、ステップ（４）において選択されたクローンに基づいて、例えば、ステップ（４）において選択されたクローンのＣＤＲの特定の位置におけるさらなる探索的変異誘発に基づいて、追加のクローンを製造して、ヒト化を高め、および／またはヒトＴ細胞エピトープ量を最小にし、および／またはステップ（５）において製造された抗体分子またはその抗原結合部分における製造特性を改善するさらなるステップを含んでいてもよい。

【図面の簡単な説明】

【0030】

【図1】図１ ヒトおよびカニクイザルＰＤ１ならびにヒトおよびアカゲザルＶＥＧＦＲ２タンパク質に対するライブラリ由来の抗ＰＤ１ Ｆａｂの直接結合ＥＬＩＳＡ。クローンは、複数のファージライブラリ選択ブランチに由来し、ここでファージ集団が各ラウンドのビオチン化標的タンパク質上で選択された。選択の各ラウンドの後、ライブラリ由来のクローン（黒丸）を、ヒト（ｈｕ）およびカニクイザル（ｃｙ）ＰＤ１ならびにヒト（ｈｕ）およびアカゲザル（ｒｈ）ＶＥＧＦＲ２に対して、ペリプラズム的に発現されたＦａｂタンパク質としてスクリーニングした。ヒトＩｇＧ１ Ｆａｂとして発現されたｈＭＡｂ００５ ｖドメインを、各プレート（灰色のひし形）上でポジティブコントロールとして使用した。

【図2】図２Ａ～図２Ｂ アルファスクリーンにおけるＦａｂタンパク質のエピトープ競合分析Ａｎｔｉ－ＰＤ１クローンは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）にＦａｂとして発現され、ペリプレップ（ｐｅｒｉｐｒｅｐ）は、アルファスクリーン技術を使用したエピトープ競合アッセイに適用された。このアッセイでは、ライブラリ由来のＦａｂを、溶液においてヒトＰＤ１タンパク質に結合しているｈＭＡｂ００５ ＩｇＧ１ヌルについて競合することによって、親ｈＭＡｂ００５エピトープの相対的な親和性および保持について分析した。

【図3A】図３Ａ～図３Ｂ ヒトおよびカニクイザルＰＤ１－Ｆｃ、ヒトおよびアカゲザルＶＥＧＦＲ２タンパク質に結合している精製されたＩｇＧ１ヌルについての直接滴定ＥＬＩＳＡ。ヒトＩｇＧ１ヌルフォーマットのｈＭａｂ００５、アイソタイプコントロールＩｇＧ１およびライブラリ由来のクローンを、ヒトおよびカニクイザルＰＤ１タンパク質（図３Ａ）に対する、ならびにヒトおよびアカゲザルＶＥＧＦＲ２タンパク質（図３Ｂ）に対する直接結合ＥＬＩＳＡにおいて（ｎＭで）滴定した。

【図3B】同上。

【図4】図４ 細胞ベースのＶＥＧＦＲ２拮抗アッセイ。ヒトＩｇＧ１ヌルフォーマットのｈＭａｂ００５、アイソタイプコントロールＩｇＧ１およびライブラリ由来のクローンを、ヒトＶＥＧＦＲ２シグナル伝達アッセイで（ｎＭで）滴定し、ヒトＶＥＧＦ－１６５タンパク質を添加して、ＶＥＧＦＲ２シグナル伝達を誘導した。ｈＭａｂ００５およびアイソタイプＩｇＧ１コントロールタンパク質のいずれかも、いかなる濃度依存性ＶＥＧＦＲ２拮抗も示さなかった。１１個のリードクローン全てとポジティブコントロール抗ＶＥＧＦＲ２ ＩｇＧ１ラムシルマブは、ｎＭの範囲で強力な拮抗を示した。

【図5A】図５Ａ～図５Ｋ 細胞ベースのＶＥＧＦＲ２拮抗アッセイ－単一クローン分析。図４に示されるリードクローンのＶＥＧＦＲ２拮抗を、クローンごとにクローン上で再分析した。１１個のリードクローン全てが強力な拮抗を示したが、１クローン当たり１個のＣＤＲのみに見られる突然変異を有するライブラリ由来のクローン（図 ５Ａ～図 ５Ｅ）は、ＬＣＤＲ１およびＬＣＤＲ３の両方における突然変異を組み合わせたクローンよりも強力ではないことが判明した（図５Ｆ～図５Ｋ）。

【図5B】同上。

【図5C】同上。

【図5D】同上。

【図5E】同上。

【図5F】同上。

【図5G】同上。

【図5H】同上。

【図5I】同上。

【図5J】同上。

【図5K】同上。

【図6】図６ 細胞ベースのＰＤ１拮抗アッセイ。ｈＭａｂ００５（ＳＨＲ－１２１０ ＩｇＧ１－３Ｍ）、アイソタイプ対照ＩｇＧ１、ニボルマブＩｇＧ４およびクローンＭＡＢ０６．１－ＭＡＢ０６．８（ヒトＩｇＧ１ヌルフォーマット）をヒトＰＤ１シグナル伝達アッセイで滴定し、ヒトＰＤ１＋細胞とヒトＰＤ－Ｌ１＋細胞が混合され、ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１相互作用の拮抗がシグナルの増加をもたらす。アイソタイプＩｇＧ１コントロールタンパク質は、いかなる濃度依存性ＰＤ１拮抗も示さなかった。クローンＭＡＢ０６．１－ＭＡＢ０６．８、ｈＭａｂ００５およびポジティブコントロール抗－ＰＤ１ ＩｇＧ４ニボルマブは、ｎＭ範囲で強力な拮抗を示した。

【図7】図７ 細胞ベースのＶＥＧＦＲ２拮抗アッセイ。ＩｇＧ１ｈＭａｂ００５（ＳＨＲ－１２１０ ＩｇＧ１－３Ｍ）、アイソタイプコントロールＩｇＧ１、ニボルマブＩｇＧ４およびクローンＭＡＢ０６．１－ＭＡＢ０６．８（ヒトＩｇＧ１ヌルフォーマットの）を、ヒトＶＥＧＦＲ２シグナル伝達アッセイで滴定し、ヒトＶＥＧＦ－１６５タンパク質を添加して、ＶＥＧＦＲ２シグナル伝達を誘導した。ｈＭａｂ００５およびアイソタイプＩｇＧ１コントロールタンパク質のいずれかも、いかなる濃度依存性ＶＥＧＦＲ２拮抗も示さなかった。クローンＭＡＢ０６．１－ＭＡＢ０６．８およびポジティブコントロール抗ＶＥＧＦＲ２ ＩｇＧ１ラムシルマブは、ｎＭの範囲で強力な拮抗を示した。

【図8A】図８Ａ～図８Ｈ 細胞ベースのＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２拮抗アッセイ－単一クローン分析。図７に示されるリードクローンについてのＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２拮抗を、クローンごとにクローン上で再分析した。クローンＭＡＢ０６．５（図８Ａ、図８Ｂ）、ＭＡＢ０６．６（図８Ｃ、図８Ｄ）、ＭＡＢ０６．７（図８Ｅ、図８Ｆ）およびＭＡＢ０６．８（図８Ｇ、図８Ｈ）に対するＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２拮抗の比較分析は、クローンＭＡＢ０６の配列がＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＨＣＤＲ２の複数の残基の変異を受け入れることができる一方で、両方の受容体のシグナル伝達に拮抗する能力を保持することを示した。

【図8B】同上。

【図8C】同上。

【図8D】同上。

【図8E】同上。

【図8F】同上。

【図8G】同上。

【図8H】同上。

【図9】図９ 二重ＰＤ１－ＶＥＧＦＲ２拮抗。腫瘍浸潤免疫細胞は、ＰＤ１とＶＥＧＦＲ２の両方を発現することができる。腫瘍における癌細胞（または間質細胞、その他の免疫細胞など）は、ＰＤ－Ｌ１および／またはＶＥＧＦを発現することができる。これらのシグナルは、腫瘍微小環境における免疫機能を抑制するために協力する。したがって、ＰＤ１とＶＥＧＦＲ２の両方のシグナル伝達を効果的に遮断することができる二重拮抗薬抗体（同じまたは異なる細胞上の）は、したがって、ＰＤ１またはＶＥＧＦＲ２遮断抗体単独よりも改善された抗腫瘍能力を有し得る。

【図10】図１０ 細胞ベースのＶＥＧＦＲ２アゴニズムアッセイ。ラムシルマブ、アイソタイプコントロールヒトＩｇＧ１、ＭＡＢ０６．５、ＭＡＢ０６．８およびＶＥＧＦ－１６５タンパク質を、ヒトＶＥＧＦＲ２シグナル伝達アッセイで滴定した。ラムシルマブ、アイソタイプおよびクローンＭＡＢ０６．５およびＭＡＢ０６．８のいずれも、任意の濃度依存性ＶＥＧＦＲ２アゴニズムを示さなかった。ポジティブコントロールのＶＥＧＦ－１６５は、ｎＭの範囲で強力な拮抗を惹起した。

【図11A】図１１Ａ～図１１Ｆ 一方向ヒトＤＣ：Ｔ細胞混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ。ＭＡＢ０６．５、ＭＡＢ０６．８およびニボルマブ（抗ＰＤ１）を、ヒトＭＬＲアッセイで、３つの別個のヒトドナー対を用いて、二回の反復ランで滴定した（ｎＭ）。ＭＡＢ６．５およびＭＡＢ６．８は、ＰＤ１遮断駆動型ＩＦＮ－γシグナル伝達における濃度依存的な能力を示し、これはニボルマブと同等であった。これは、ドナーペア１（図１１Ａ、１１Ｂ）、ドナーペア２（図１１Ｃ、１１Ｄ）およびドナーペア３（図１１Ｅ、１１Ｆ）の両方のランで発見された。

【図11B】同上。

【図11C】同上。

【図11D】同上。

【図11E】同上。

【図11F】同上。

【図12A】図１２Ａ～図１２Ｄ ヒトおよびカニクイザルのＰＤ１－Ｆｃ、ヒトおよびカニクイザルＶＥＧＦＲ２タンパク質に結合している精製されたＩｇＧ１ヌルについての直接滴定ＥＬＩＳＡ。ヒトＩｇＧ１ヌルフォーマットのＳＨＲ－１２１０ ＩｇＧ１－３Ｍ、アイソタイプコントロールＩｇＧ１および７個の第３世代クローンを、ヒトおよびカニクイザルＰＤ１タンパク質（図１２Ａ、図１２Ｂ）ならびにヒトおよびカニクイザルＶＥＧＦＲ２タンパク質（図１２Ｃ、図１２Ｄ）に対する直接結合ＥＬＩＳＡにおいて（ｎＭで）滴定した。

【図12B】同上。

【図12C】同上。

【図12D】同上。

【図13A】図１３Ａ～図１３Ｂ 細胞ベースのＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２拮抗アッセイ。ヒトＩｇＧ１ヌルフォーマットにおけるクローンＳＨＲ－１２１０ ＩｇＧ１－３Ｍ、ニボルマブ、アイソタイプコントロールＩｇＧ１および７個の第３世代クローンについてのＰＤ１（図１３Ａ）およびＶＥＧＦＲ２（図１３Ｂ）拮抗の比較分析。

【図13B】同上。

【発明を実施するための形態】

【0031】

本発明は、ＰＤ１経路およびＶＥＧＦ経路の両方に予想外に拮抗する抗体の発見に基づいている。ＶＥＧＦシグナル伝達経路の阻害は、ＰＤ１経路の阻害と効果的な組み合わせを提供することができる。ＶＥＧＦ－ＶＥＧＦＲ２シグナル伝達は、血管新生を促進するだけでなく、腫瘍微小環境における免疫抑制を増強することも示されており、ＶＥＧＦＲ２は複数の免疫細胞型で発現される。しかしながら、二重阻害剤抗体の生成は、二つの標的タンパク質、例えば、アミノ酸配列および構造がかなり異なるＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２の強力な調節を有する単一抗体の生成を伴うため、複雑で予測不可能な課題である。二つの標的間のこの配列および構造上の非類似性は、そのような抗体の生成の成功を妨げるものである。

【0032】

ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１は、拮抗性マウス抗ＰＤ１ ＩｇＧ分子を「ＭＡｂ００５」と名付け、またＭＡｂ００５のヒト化形態の調製についても記載している。ヒト化ＭＡｂ００５（ｈＭＡｂ００５）は、臨床試験において、血管腫を誘発する非常にまれな副作用を有することが示された。Ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験では、ＶＥＧＦＲ２の結合を含む、オフターゲット抗体の反応性にまでこの問題をトレースバックすることに成功した（Ｆｉｎｌａｙら（２０１９）ｍＡｂｓ、１１：１、２６－４４）。重要なことに、ＶＥＧＦＲ２に対するｈＭＡｂ００５（ＳＨＲ－１２１０としても知られる）の結合は、受容体の強力なアゴニズム（活性化）につながることが示され、これはおそらく、血管腫の副作用の主要な要因である。上述の理由により、ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１に記載されるかかるヒト化形態のＭＡｂ００５は、理想的ではない。さらに、分子特性の変化が、Ｍａｂ００５などの拮抗薬／アゴニスト性抗体を、ＰＤ１経路とＶＥＧＦＲ２経路の両方の二重拮抗薬に変換できることを先験的に予測することはできない。本発明は、強力なＰＤ１拮抗を維持するが、ＶＥＧＦＲ２にも強力に拮抗する抗体を提供する。かかる抗体は、相乗的臨床的利益を提供し得る。

【0033】

本明細書において、ＰＤ１に特異的に結合し、ＶＥＧＦ－ＶＥＧＦＲ２シグナル伝達に拮抗するｈＭＡｂ００５に由来する抗体を生成する方法が提供される。例えば、かかる抗体は、抗体ｈＭＡｂ００５の一つ以上のＣＤＲ配列に変異を導入することによって生成することができる。一部の実施形態では、変異は、抗体ｈＭＡｂ００５のＬＣＤＲ１配列および／またはＬＣＤＲ２配列および／またはＨＣＤＲ２配列に導入される。

【0034】

一部の態様では、ヒトＰＤ１とヒトＶＥＧＦＲ２の両方またはこの抗体の抗原結合部分に特異的に結合する抗体が提供される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＰＤ１－ＰＤＬ１シグナル伝達経路とＶＥＧＦＲ２－ＶＥＧＦシグナル伝達経路の両方と拮抗することができる。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＰＤ１のヒトＰＤ－Ｌ１への結合に拮抗し、ヒトＶＥＧＦに応答してヒトＶＥＧＦＲ２のシグナル伝達に拮抗する。

【0035】

一部の態様では、本明細書に提供される抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体または抗原結合部分は、配列番号３２または配列番号３３を含む、またはからなるＰＤ１タンパク質に特異的に結合する。一部の態様では、本明細書に提供される抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体または抗原結合部分は、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列番号３２または配列番号３３と同一であるアミノ酸配列を有するＰＤ１タンパク質に特異的に結合する。

【0036】

一部の態様では、本明細書に提供される抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体または抗原結合部分は、配列番号３４または配列番号３５を含む、またはからなるＶＥＧＦＲ２タンパク質に特異的に結合する。一部の態様では、本明細書に提供される抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体または抗原結合部分は、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列番号３４または配列番号３５と同一であるアミノ酸配列を有するＶＥＧＦＲ２タンパク質に特異的に結合する。

【0037】

本発明の一部の態様では、抗体分子または抗原結合部分のＨＣＤＲ１は、配列ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳ（配列番号１；ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１に開示されるＭＡｂ００５マウス／ヒト化抗体ＨＣＤＲ１、ＵＳ２０１６／３７６３６７Ａ１）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＨＣＤＲ２は、配列ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２；ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１に開示されるＭＡｂ００５マウス／ヒト化抗体ＨＣＤＲ２、ＵＳ２０１６／３７６３６７Ａ１）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＨＣＤＲ３は、配列ＱＬＹＹＦＤＹ（配列番号３；ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１に開示されるＭＡｂ００５マウス／ヒト化抗体ＨＣＤＲ３、ＵＳ２０１６／３７６３６７Ａ１）を除外してもよい。

【0038】

本発明の一部の態様では、抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ１は、配列ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＴ（配列番号９；ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１に開示されるＭＡｂ００５マウス／ヒト化抗体ＬＣＤＲ１、ＵＳ２０１６／３７６３６７Ａ１）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ２は、配列ＴＡＴＳＬＡＤ（配列番号５；ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１に開示されるＭＡｂ００５マウス／ヒト化抗体ＬＣＤＲ２、ＵＳ２０１６／３７６３６７Ａ１）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ３は、配列ＱＱＶＹＳＩＰＷＴ（配列番号６；ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１に開示されるＭＡｂ００５マウス／ヒト化抗体ＬＣＤＲ３、ＵＳ２０１６／３７６３６７Ａ１）を除外してもよい。

【0039】

一部の実施形態では、本発明の抗ＰＤ１抗体は、ヒトＰＤ１とカニクイザルＰＤ１の両方に対する結合特異性および親和性における等価性を有するように選択される（霊長類の毒性および薬物動態研究を最大に正確に促進するため）。本明細書に記載される最適化された抗体分子のさらなる精製は、ＰＤ１のカニクイザルオルソログへの結合の改善および／またはＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達の中和における能力の維持または改善をもたらした。決定的なことに、これらの抗体は、ヒト受容体ＶＥＧＦＲ２の強力な拮抗薬になることによって、ＭＡｂ００５（ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１；ＵＳ２０１６／３７６３６７Ａ１）と比較して、潜在的な臨床活性を劇的に改善し、血管腫を誘発するリスクも低減した。

【0040】

一部の態様では、本発明の抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体分子は、対応するマウスＣＤＲまたは他の（フレームワークなどの）アミノ酸位置におけるヒト生殖系列置換の最大数を必ずしも有しない。一部の実施形態では、抗ＰＤ１または抗ＶＥＧＦＲ２結合特性および／または他の望ましい特徴に関して、「最大ヒト化」抗体分子は、必ずしも「最大最適化」されない。

【0041】

本発明は、本明細書に定義される抗体分子またはその抗原結合部分のアミノ酸配列に対する改変を包含する。例えば、本発明は、抗体分子およびその対応する抗原結合部分を含み、抗体分子およびその対応する抗原結合部分は、その特性に有意な影響を与えない機能的に等価な可変領域およびＣＤＲならびに活性および／または親和性を増加または減少させたバリアントを含む。例えば、アミノ酸配列を変異させて、ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２に対する所望の結合親和性を有する抗体を得ることができる。１個の残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドまでの長さに及ぶアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合物、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む挿入が想定される。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体分子またはエピトープタグに融合された抗体分子が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントとして、血液循環における抗体の半減期を増加させる酵素またはポリペプチドの抗体のＮ末端またはＣ末端への融合を含む。

【0042】

本発明の抗体分子または抗原結合部分は、グリコシル化ポリペプチドおよび非グリコシル化ポリペプチド、ならびに例えば、異なる糖とのグリコシル化、アセチル化およびリン酸化などの他の翻訳後修飾を有するポリペプチドを含んでいてもよい。本発明の抗体分子または抗原結合部分は、例えば、一つ以上のアミノ酸残基を追加、除去または置換して、グリコシル化部位を形成または除去することによって、かかる翻訳後修飾を変化させるために変異することができる。

【0043】

本発明の抗体分子または抗原結合部分は、例えば、アミノ酸置換によって改変されて、抗体における潜在的なタンパク質分解部位を除去することができる。

【0044】

本発明の一部の態様では、ＰＤ１とＶＥＧＦＲ２の両方に結合する抗体または抗体の抗原結合部分を提供し、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
（ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含み、［ＭＡＢ０２Ａ０３］
（ｂ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含み、［ＭＡＢ０２Ｂ０３］
（ｃ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号８）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含み、［ＭＡＢ０２Ｄ０８］
（ｄ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＴのＬＣＤＲ１（配列番号９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含み、［ＭＡＢ０５Ｇ０３］
（ｅ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＴのＬＣＤＲ１（配列番号９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０５Ｅ０８］
（ｆ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含み、［ＭＡＢ０１］
（ｇ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含み、［ＭＡＢ０２］
（ｈ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＧのＬＣＤＲ１（配列番号１２）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含み、［ＭＡＢ０３］
（ｉ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０４］
（ｊ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０５］または
（ｋ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号８）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６］または
（ｌ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．１］または
（ｍ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４０）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．２］または
（ｎ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４１）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．３］または
（ｏ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．４］または
（ｐ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．５］または
（ｑ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）、およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４０）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．６］または
（ｒ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４１）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．７］または
（ｓ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．８］または
（ｔ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＬＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号６１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．８．１］または
（ｕ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＬＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号６１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号６４）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．８．２］または
（ｖ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＬＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号６１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＧＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号６５）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．８．３］または
（ｗ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＬＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号６１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＡＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号６６）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．８．４］または
（ｘ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＬＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号６１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＦＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号６２）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．８．５］または
（ｙ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＬＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号６１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＹＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号６３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．８．６］または
（ｚ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＶＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号６４）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．８．７］または
（ａａ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＡＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号６６）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、［ＭＡＢ０６．８．８］または
（ｙ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＹＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号６３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む。〔ＭＡＢ０６．８．９〕
一部の態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分が本明細書に開示され、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＬＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１３）を含む、またはこれらからなる。

【0045】

一部の態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分が本明細書に開示され、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１３を含む、またはこれから成り、ＶＬ領域は、表５または表８のＶＬ領域アミノ酸配列のいずれか一つを含む、またはそれらからなる。

【0046】

一部の態様では、ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２の両方に特異的に結合する抗体または抗体の抗原結合部分が本明細書に開示され、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
（ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１４を含み、
（ｂ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１５を含み、
（ｃ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１６を含み、
（ｄ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１７を含み、
（ｅ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１８を含み、
（ｆ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１９を含み、
（ｇ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２０を含み、
（ｈ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２１を含み、
（ｉ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２２を含み、
（ｊ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２３を含み、
（ｋ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２４を含み、
（ｌ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４４を含み、
（ｍ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４５を含み、
（ｎ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４６を含み、
（ｏ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含み、
（ｐ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４４を含み、
（ｑ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４５を含み、
（ｒ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４６を含み、
（ｓ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含み、
（ｔ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号６７を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含み、
（ｕ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号６８を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含み、
（ｖ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号６９を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含み、
（ｗ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号７０を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含み、
（ｘ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号７１を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含み、
（ｙ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号７２を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含み、
（ｚ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号７３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含み、
（ａａ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号７４を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含み、または
（ｂｂ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号７５を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含む。

【0047】

一部の態様では、抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分が本明細書に開示され、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
（ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１３に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１４に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｂ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１３に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１５に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｃ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１３に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１６に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｄ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１３に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１７に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｅ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１３に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１８に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｆ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１３に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１９に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｇ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１３に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号２０に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｈ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１３に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号２１に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｉ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１３に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号２２に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｊ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１３に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号２３に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｋ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１３に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号２４に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｌ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号４８に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号４４に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｍ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号４８に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号４５に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｎ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号４８に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号４６に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｏ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号４８に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号４７に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｐ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号４９に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号４４に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｑ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号４９に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号４５に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｒ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号４９に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号４６に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、
（ｓ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号４９に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であり、ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号４７に、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一である。一部の態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体のＣＤＲアミノ酸配列は、列挙された配列のＣＤＲアミノ酸配列と１００％同一であり、一方でＦＲアミノ酸配列は、列挙された配列のＦＲアミノ酸配列と１００％未満同一である。

【0048】

一部の態様では、本明細書に定義される抗体または抗原結合部分は、単離されてもよい。

【0049】

本明細書に定義される抗体分子または抗原結合部分は、本明細書に開示されるＣＤＲのセットを含む抗体またはその抗原結合部分と、ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２への結合について交差競合し得る。一部の実施形態では、本発明は、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分を提供し、抗体または抗原結合部分が、本明細書に開示されるＣＤＲのセットを含む抗体または抗原結合部分と、ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２への結合について交差競争し、（ａ）完全生殖系列ヒトフレームワークアミノ酸配列を含み、（ｂ）ヒトＰＤ１、カニクイザルＰＤ１、ヒトＶＥＧＦＲ２およびアカゲザルＶＥＧＦＲ２に特異的に結合し、（ｃ）ヒトＰＤ１のヒトＰＤ－Ｌ１への結合に拮抗し、ヒトＶＥＧＦに応答してヒトＶＥＧＦＲ２のシグナル伝達に拮抗する。

【0050】

一部の実施形態では、抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体または抗原結合部分は、最小限の免疫原性を有する。特定の事例では、抗体または抗原結合部分は、配列番号１のＨＣＤＲ１、配列番号２のＨＣＤＲ２、配列番号３のＨＣＤＲ、配列番号９のＬＣＤＲ１、配列番号５のＬＣＤＲ２、および配列番号６のＬＣＤＲ３を含む抗ＰＤ１抗体に比べて免疫原性の減少を示す。一部の例では、抗体または抗原結合部分の免疫原性リスクは、抗体または部分（例えば、抗体または部分の可変領域における）のＴ細胞エピトープの位置を特定することによって、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏで決定されてもよい。

【0051】

例えば、抗体または抗原結合部分のＴ細胞エピトープは、ｉＴｏｐｅ（商標）を使用することによって特定され得る。ｉＴｏｐｅ（商標）は、ヒトＭＨＣクラスＩＩへの無差別の高親和性の結合を有するペプチドのＶＬ領域配列およびＶＨ領域配列を分析するために使用することができる。無差別高親和性ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドは、薬剤タンパク質の臨床免疫原性の高リスク指標であるＴ細胞エピトープの存在と相関すると考えられる。ｉＴｏｐｅ（商標）ソフトウェアは、３４個のヒトＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子のオープンエンド結合溝内のペプチドのアミノ酸側鎖と特異的結合ポケット（特にポケット位置；ｐ１、ｐ４、ｐ６、ｐ７およびｐ９）との間の好ましい相互作用を予測する。これらの対立遺伝子は、世界中で見出される最も一般的なＨＬＡ－ＤＲ対立遺伝子を表し、任意の特定の民族集団において最も広く見出されるものに起因する重み付けはない。２０個の対立遺伝子は、「オープン」ｐ１構成および１４個の対立遺伝子は、８３位のグリシンがバリンで置き換えられる「クローズ」構成を含む。重要な結合残基の位置は、試験タンパク質配列にわたる８つのアミノ酸によってオーバーラップする９ｍｅｒのペプチドのｉｎ ｓｉｌｉｃｏ生成によって達成される。このプロセスは、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する、または結合しないペプチド間で、高精度で区別することに成功した。

【0052】

抗体または抗原結合部分のＴ細胞エピトープは、ＴＣＥＤ（商標）（Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｄａｔａｂａｓｅ（商標））を使用してＶＬおよびＶＨ領域配列を解析することによって特定され、他のタンパク質配列のｉｎ ｖｉｔｒｏなヒトＴ細胞エピトープマッピング解析によって以前に特定されたＴ細胞エピトープに対する一致を検索することができる。ＴＣＥＤ（商標）は、無関係なタンパク質配列および抗体配列に由来するペプチドの大規模（＞１０，０００ペプチド）データベースに対する任意の試験配列を検索するために使用される。

【0053】

一部の実施形態では、抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体または抗原結合部分は、抗体または部分が、その配列において以下のペプチドの一つ以上の少ない数しか有しないため、低い免疫原性を呈し得る：高親和性外来（「ＨＡＦ」－高免疫原性リスク）、低親和性外来（「ＬＡＦ」－低免疫原性リスク）、および／またはＴＣＥＤ＋（ＴＣＥＤ（商標）データベースにおいて以前に特定されたエピトープ）。

【0054】

一部の実施形態では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体または抗原結合部分は、その配列において生殖系列エピトープ（ＧＥ）の高い含量を有し得る。一部の例では、抗ＰＤ１抗体または抗原結合部分は、その配列（例えば、ＶＬおよび／またはＶＨ領域配列）に、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０（または２０超）の生殖系列エピトープを有する。生殖系列エピトープは、高いＭＨＣクラスＩＩ結合親和性を有するヒト生殖系列ペプチド配列として定義され得る。生殖系列エピトープ９ｍｅｒのペプチドは、これまでの広範な生殖系列ペプチドを用いた研究で検証されているように、Ｔ細胞耐性により免疫原性を有する可能性は低い。重要なことに、このような生殖系列ｖドメインエピトープ（ヒト抗体定常領域内の類似の配列によりさらに支援される）は、抗原提示細胞の膜においてＭＨＣクラスＩＩ占有率について競合し、Ｔ細胞刺激に必要な「活性化閾値」を達成するのに十分である外来ペプチド提示のリスクを低減する。したがって、高いＧＥ含有量は、抗体治療薬の臨床開発において有益な品質であり、低い免疫原性を提供することができる。

【0055】

特定の実施形態では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体または抗原結合部分は、抗体Ｍａｂ００５の可変ドメイン配列を含む抗ＰＤ１抗体と比較して、重鎖可変領域および軽鎖可変領域の両方のフレームワークに見られるＨＡＦ、ＬＡＦおよび／またはＴＣＥＤ＋エピトープの数が減少し得る（表１および表２）。一部の実施形態では、ＨＡＦ、ＬＡＦおよび／またはＴＣＥＤ＋エピトープは、抗ＰＤ１抗体または抗原結合部分のＶＬおよび／またはＶＨ領域配列に存在しない。

【0056】

本明細書において、「交差競合する」、「交差競合」、「交差ブロック」、「交差ブロックされる」および「交差ブロッキング」という用語は、本発明の抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体の標的ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２（例えば、ヒトＰＤ１、ヒトＶＥＧＦＲ２）へのアロステリック調節を介して、直接的または間接的に結合を阻害する抗体またはその部分の能力を意味するために、互換的に使用される。抗体またはその部分が別の抗体またはその部分の標的に対する結合を妨害することができる範囲は、したがって、本発明に記載の交差ブロックまたは交差競合と言うことができるかどうかにかかわらず、競合結合アッセイを使用して決定することができる。結合競合アッセイの一例は、Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ Ｔｉｍｅ Ｒｅｓｏｌｖｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＨＴＲＦ）である。一つの特に適切な定量的交差競合アッセイは、標的への結合について、標識された（例えば、Ｈｉｓタグされた、ビオチニル化または放射性標識された）抗体またはその部分と他の抗体又はその部分との間の競合を測定するＦＡＣＳまたはＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎベースのアプローチを使用する。一般的に、交差競合抗体またはその部分は、例えば、アッセイの間、第二の抗体またはその部分の存在下で、本発明に記載の免疫グロブリン単一可変ドメインの記録された転置が、所与の量で存在する潜在的に交差競合する抗体またはその断片によって、理論最大置換（例えば、強さブロックされる必要のあるコールド（例えば、標識されていない）抗体またはその断片）の（例えば、ＦＡＣＳベースの競合アッセイにおいて）１００％までであるように、交差競合アッセイにおいて標的に結合する交差競合抗体またはその部分である。交差競合抗体またはその部分は、１０％～１００％、または５０％～１００％である記録された転置を有することが好ましい。

【0057】

本明細書に定義される抗体分子または抗原結合部分は、翻訳後修飾（ＰＴＭ）部位、例えば、グリコシル化部位（Ｎ結合またはＯ結合）、脱アミノ化部位、リン酸化部位または異性化／断片化部位を除去する、一つ以上の置換、欠失および／または挿入を含み得る。

【0058】

３５０種類以上のＰＴＭが知られている。ＰＴＭの主要な形態として、リン酸化、グリコシル化（Ｎ結合およびＯ結合）、スモイル化、パルミトイル化、アセチル化、硫酸化、ミリストイル化、プレニル化およびメチル化（Ｋ残基およびＲ残基の）が挙げられる。特定のＰＴＭに関与する推定アミノ酸部位を特定する統計的方法は、当該技術分野で周知である（Ｚｈｏｕら、２０１６、Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ１：１３１８－１３２１を参照）。置換、欠失および／または挿入によるこうした部位の除去ならびに（ａ）結合活性および／または（ｂ）ＰＴＭの喪失について（実験的におよび／または理論的に）任意で試験することが企図される。

【0059】

抗体分子またはその抗原結合部分は、ヒト、ヒト化またはキメラであってもよい。

【0060】

抗体分子またはその抗原結合部分は、ＣＤＲが挿入された一つ以上のヒト可変ドメインフレームワーク足場を含み得る。例えば、ＶＨ領域、ＶＬ領域、またはＶＨ領域とＶＬ領域の両方は、一つ以上のヒトフレームワーク領域アミノ酸配列を含んでもよい。

【0061】

抗体分子またはその抗原結合部分は、対応するＨＣＤＲ配列が挿入されたＩＧＨＶ３－７ヒト生殖系列足場を含んでもよい。抗体分子またはその抗原結合部分は、対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入された、ＩＧＨＶ３－７ヒト生殖系列足場アミノ酸配列を含むＶＨ領域を含んでもよい。

【0062】

抗体分子またはその抗原結合部分は、対応するＬＣＤＲ配列が挿入されたＩＧＫＶ１－３９ヒト生殖系列足場を含んでもよい。抗体分子またはその抗原結合部分は、対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されたＩＧＫＶ１－３９ヒト生殖系列足場アミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでもよい。

【0063】

抗体分子またはその抗原結合部分は、対応するＨＣＤＲ配列が挿入されたＩＧＨＶ３－７ヒト生殖系列足場および対応するＬＣＤＲ配列が挿入されたＩＧＫＶ１－３９ヒト生殖系列足場を含んでもよい。抗体分子またはその抗原結合部分は、対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されたＩＧＨＶ３－７ヒト生殖系列の足場アミノ酸配列を含むＶＨ領域および対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されたＩＧＫＶ１－３９ヒト生殖系列の足場のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでもよい。ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列は、以下のクローン（ＭＡＢ０２Ａ０３、ＭＡＢ０２Ｂ０３、ＭＡＢ０２Ｄ０８、ＭＡＢ０５Ｇ０３、ＭＡＢ０５Ｅ０８、ＭＡＢ０１、ＭＡＢ０２、ＭＡＢ０３、ＭＡＢ０４、ＭＡＢ０５、ＭＡＢ０６、ＭＡＢ０６．１、ＭＡＢ０６．２、ＭＡＢ０６．３、ＭＡＢ０６．４、ＭＡＢ０６．５、ＭＡＢ０６．６、ＭＡＢ０６．７、ＭＡＢ０６．８、ＭＡＢ０６．８．１、ＭＡＢ０６．８．２、ＭＡＢ０６．８．３、ＭＡＢ０６．８．４、ＭＡＢ０６．８．５、ＭＡＢ０６．８．６、ＭＡＢ０６．８．７、ＭＡＢ０６．８．８またはＭＡＢ０６．８．９）のいずれか一つのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列であってもよい（６個のＣＤＲ配列の全ては同じクローンに由来する）。

【0064】

一部の態様では、抗体分子またはその抗原結合部分は、免疫グロブリン定常領域を含んでもよい。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である。追加の実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である。抗体分子またはその抗原結合部分は、免疫学的に不活性な定常領域を含んでもよい。一部の態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域を含む免疫グロブリン定常領域、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含み得る。一部の態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分は、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域または野生型ヒトＩｇＧ４定常領域を含む免疫グロブリン定常領域を含み得る。一部の態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体は、表６のアミノ酸配列のいずれか一つを含む免疫グロブリン定常領域を含み得る。表６のＦｃ領域配列は、ＣＨ１ドメインから始まる。一部の態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体は、ヒトＩｇＧ４、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ１－３ＭまたはヒトＩｇＧ１－４ＭのＦｃ領域のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン定常領域を含み得る。例えば、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｆｃ領域は、野生型ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域と比較して、以下の置換を含む：Ｓ２２８Ｐ。例えば、ヒトＩｇＧ１－３Ｍ Ｆｃ領域は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、以下の置換を含む：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ１－４Ｍ Ｆｃ領域は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、以下の置換を含む：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓ。一部の態様では、免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸残基の位置は、ＥＵ命名法に従って番号付けされる（Ｗａｒｄら、１９９５ Ｔｈｅｒａｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：７７－９４）。一部の態様では、免疫グロブリン定常領域は、ＲＤＥＬＴ（配列番号３６）モチーフまたはＲＥＥＭ（配列番号３７）モチーフ（表６に下線を引く）を含んでもよい。ＲＥＥＭ（配列番号３７）のアロタイプは、ＲＤＥＬＴ（配列番号３６）のアロタイプよりも小さなヒト集団において見出される。一部の態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む免疫グロブリン定常領域を含み得る。一部の態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体は、以下のクローン（ＭＡＢ０２Ａ０３、ＭＡＢ０２Ｂ０３、ＭＡＢ０２Ｄ０８、ＭＡＢ０５Ｇ０３、ＭＡＢ０５Ｅ０８、ＭＡＢ０１、ＭＡＢ０２、ＭＡＢ０３、ＭＡＢ０４、ＭＡＢ０５、ＭＡＢ０６、ＭＡＢ０６．１、ＭＡＢ０６．２、ＭＡＢ０６．３、ＭＡＢ０６．４、ＭＡＢ０６．５、ＭＡＢ０６．６、ＭＡＢ０６．７、ＭＡＢ０６．８、ＭＡＢ０６．８．１、ＭＡＢ０６．８．２、ＭＡＢ０６．８．３、ＭＡＢ０６．８．４、ＭＡＢ０６．８．５、ＭＡＢ０６．８．６、ＭＡＢ０６．８．７、ＭＡＢ０６．８．８またはＭＡＢ０６．８．９）のいずれか一つの六つのＣＤＲアミノ酸配列（６個のＣＤＲ配列の全ては同じクローンに由来する）および表６のＦｃ領域アミノ酸配列のうちのいずれか一つを含んでいてもよい。一部の態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体は、表６のＦｃ領域アミノ酸配列のいずれか一つを含む免疫グロブリン重鎖定常領域およびカッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域である免疫グロブリン軽鎖定常領域を含み得る。

【0065】

一部の態様では、抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分が本明細書に開示され、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域および重鎖定常領域を含み、
（ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｂ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｃ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号８）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｄ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＴのＬＣＤＲ１（配列番号９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｅ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＴのＬＣＤＲ１（配列番号９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｆ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｇ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｈ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＧのＬＣＤＲ１（配列番号１２）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｉ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｊ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｋ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号８）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｌ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｍ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４０）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｎ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４１）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｏ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｐ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｑ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）、およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４０）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、重鎖定常領域は配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｑ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）、およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４１）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、重鎖定常領域は配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、または
（ｓ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含み、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む。一部の実施形態では、抗体は、カッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域である免疫グロブリン軽鎖定常領域をさらに含む。

【0066】

一部の態様では、抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分が本明細書に開示され、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域および重鎖定常領域を含み、
ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１４を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｂ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１５を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｃ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１６を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｄ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１７を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｅ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１８を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｆ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１９を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｇ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２０を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｈ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２１を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｉ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２２を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｊ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２３を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｋ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２４を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｌ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４４を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｍ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４５を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｎ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４６を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｏ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｐ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４４を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｑ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４５を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、
（ｒ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４６を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、または
（ｓ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、またはからなり；ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含み、またはからなり；重鎖定常領域は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域を含み、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域；アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域；またはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む。

【0067】

一部の態様では、抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分が本明細書に開示され、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域および重鎖定常領域を含み、
ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１４を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｂ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１５を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｃ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１６を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｃ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１７を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｅ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１８を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｆ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１９を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｇ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２０を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｈ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２１を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｉ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２２を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｊ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２３を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｋ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２４を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｌ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４４を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｍ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４５を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｎ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４６を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｏ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｐ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４４を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｑ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４５を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、
（ｒ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４６を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、または
（ｓ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含む、またはからなり、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含む、またはからなり、重鎖定常領域は、配列番号２５～３１のいずれか一つを含む。

【0068】

一部の態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体は、免疫エフェクターヌルであってもよい。一部の態様では、抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分は、免疫エフェクター機能を誘導せず、任意に、免疫エフェクター機能を抑制する。一部の態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体は、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂ受容体への測定可能な結合を欠くが、ヒトＦｃγＲＩＩｂ受容体への結合を維持し、任意選択的にヒトＦｃＲｎ受容体への結合を維持することができる。ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂは、活性化受容体の例である。ＦｃγＲＩＩｂは、阻害性受容体の例である。ＦｃＲｎは、リサイクル受容体の一例である。一部の態様では、ヒトＦｃ受容体について抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分の結合親和性は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析によって測定することができる。一部の態様では、Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ Ｔｉｍｅ Ｒｅｓｏｌｖｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＨＴＲＦ）を使用して、ヒトＦｃ受容体への抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体の結合を試験することができる。ＨＴＲＦの一例では、ヒトＩｇＧ１（野生型）は、Ｆｃガンマ受容体の全群であるように標識され、次いで操作されたＦｃ断片を有する抗体は、滴定競合に使用される。一部の態様では、ＰＤ１陽性細胞および／またはＶＥＧＦＲ２陽性細胞をヒト白血球細胞および抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体と混合し、ＣＤＣ、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰによる細胞死滅を測定することができる。一部の態様では、ヒトＩｇＧ１－３ＭのＦｃ領域のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体（表６を参照）は、エフェクターヌルである。一部の態様では、ヒトＩｇＧ１－３ＭのＦｃ領域のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体（表６を参照）は、エフェクターヌルではない。

【0069】

抗体分子またはその抗原結合部分は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）_２断片、Ｆｖ断片、四量体抗体、四価抗体、多重特異性抗体（例えば、二価抗体）、ドメイン特異性抗体、単一ドメイン抗体、モノクローナル抗体または融合タンパク質であってもよい。一実施形態では、抗体は、二つ以上の抗原結合ドメインを含む多重特異性抗体であってもよい。一部の実施形態では、第一の抗原結合ドメインは、ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２に特異的に結合し、第二の抗原結合ドメインは、ＰＤ１でもＶＥＧＦＲ２でもない抗原に特異的に結合する。それらの構築および使用のための抗体分子および方法は、例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ＆Ｈｕｄｓｏｎ（２００５、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（９）：１１２６－１１３６）に記載されている。

【0070】

本発明の別の態様では、治療剤を連結した、本明細書に定義される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分を含む免疫コンジュゲートが提供される。

【0071】

好適な治療剤の例としては、サイトトキシン、放射性同位元素、化学療法剤、免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤、アポトーシス促進剤および細胞分裂停止酵素および細胞溶解酵素（例えば、リボヌクレアーゼ）が挙げられる。さらなる治療剤は、免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤またはアポトーシス促進剤をコードする遺伝子などの治療用核酸を含む。これらの薬剤記述子は相互に排他的ではなく、したがって、治療剤を、上記用語のうちの一つ以上を使用して記載してもよい。

【0072】

免疫コンジュゲートに使用するための適切な治療剤の例としては、タキサン、メイタンシン、ＣＣ－１０６５およびデュオカルマイシン、カリチアミシンおよびその他のエネジインおよびオーリスタチンが挙げられる。他の例としては、抗葉酸、ビンカアルカロイドおよびアントラサイクリンが挙げられる。植物毒素、他の生理活性タンパク質、酵素（すなわち、ＡＤＥＰＴ）、放射性同位元素、光増感剤も、免疫コンジュゲートに使用され得る。さらに、コンジュゲートは、リポソームまたはポリマーなどの細胞傷害性薬剤として二次担体を使用して作製することができ、適切なサイトトキシンは、細胞の機能を阻害するかまたは妨げ、および／または細胞の破壊をもたらす薬剤を含む。代表的なサイトトキシンには、抗生物質、チューブリン重合の阻害剤、ＤＮＡに結合し、ＤＮＡを破壊するアルキル化剤およびタンパク質合成またはタンパク質キナーゼ、ホスファターゼ、トポイソメラーゼ、酵素およびサイクリンなどの必須細胞タンパク質の機能を破壊する薬剤が含まれる。

【0073】

代表的なサイトトキシンとして、限定されるものではないが、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、アクラビシン、ゾルビシン、ミトキサントロン、エピルビシン、カルビシン、ノガラマイシン、メノガリル、ピタルビシン、バルルビシン、シタラビン、ゲムシタビン、トリフルリジン、アンシタビン、エノシタビン、アザシチジン、ドキシフルジン、ペントスタチン、ブロクサフジン、カペシタビン、クラドビン、デシタビン、フロキスフジン、フルダラビン、グゲロチン、ピューロマイシン、テガフル、チアゾフン、アドハマイシン、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、メクロルエタミン、プレドニゾン、プロカルバジン、メトトレキサート、フルオロウラシル、エトポシド、タキソール、タキソール類似体、シスプラチンおよびカルボプラチンなどのプラチン、ミトマイシン、チオテパ、タキサン、ビンクリスチン、ダウノルビシン、エピルビシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、タモキシフェン、イダルビシン、ドラスタチン／オーリスタチン、ヘミアステリン、エスペルアマイシンおよびメイタンシノイドが挙げられる。

【0074】

適切な免疫調節剤には、腫瘍に対するホルモン作用を遮断する抗ホルモン剤およびサイトカイン産生を抑制し、自己抗原発現を下方制御し、またはＭＨＣ抗原をマスクする免疫抑制剤が挙げられる。

【0075】

本明細書に定義される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分をコードする核酸分子も提供される。核酸分子は、（ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列、（ｂ）ＶＬ領域アミノ酸配列または（ｃ）本明細書に記載される抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体もしくはその抗原結合部分のＶＨおよびＶＬ領域アミノ酸配列の両方をコードしてもよい。一部の態様では、本明細書に定義される核酸分子は単離されてもよい。

【0076】

本明細書に定義される本発明の核酸分子を含むベクターがさらに提供される。ベクターは発現ベクターであってもよい。

【0077】

また、本明細書に定義される本発明の核酸分子またはベクターを含む宿主細胞が提供される。宿主細胞は、組換え宿主細胞であってもよい。一部の態様では、宿主細胞は、本明細書に記載される抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分のＶＨ領域アミノ酸配列およびＶＬ領域アミノ酸配列の両方をコードする核酸分子を含むベクターを含み得る。一部の態様では、宿主細胞は、ＶＨ領域アミノ酸配列をコードする核酸分子を含む第一のベクターおよび本明細書に定義される抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分のＶＬ領域アミノ酸配列をコードする核酸分子を含む第二のベクターを含んでいてもよい。

【0078】

さらなる態様では、抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体および／またはその抗原結合部分を産生する方法が提供され、この方法は、抗体および／またはその抗原結合部分の発現および／または産生をもたらす条件下で本発明の宿主細胞を培養することと、抗体および／またはその抗原結合部分を宿主細胞または培養物から単離することと、を含む。

【0079】

本発明の別の態様では、本明細書に定義される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される本発明の核酸分子または本明細書に定義される本発明のベクターを含む医薬組成物が提供される。

【0080】

さらに、有効量の本明細書に定義される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される本発明の免疫コンジュゲートまたは本明細書に定義される本発明の核酸分子または本明細書に定義される本発明のベクターまたは本明細書に定義される本発明の医薬組成物を対象に投与することを含む、対象における免疫応答を強化する方法が提供される。

【0081】

さらなる態様において、有効量の本明細書に定義される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される本発明の免疫コンジュゲートまたは本明細書に定義される本発明の核酸分子または本明細書に定義される本発明のベクターまたは本明細書に定義される本発明の医薬組成物を対象に投与することを含む、対象における癌を治療または予防する方法が提供される。一部の実施形態では、癌は、ＰＤ１および／またはＶＥＧＦＲ２の発現または過剰発現に関連している。

【0082】

例えば、癌は、膵癌、黒色腫、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌であってもよい。

【0083】

本発明は、癌の治療に使用するための、本明細書に定義される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される本発明の免疫コンジュゲートまたは本明細書に定義される本発明の核酸分子または本明細書に定義される本発明のベクターまたは本明細書に定義される本発明の医薬組成物も提供する。

【0084】

別の態様では、本発明は、第二の治療剤、例えば、抗癌剤と組み合わせた組み合わせにおける別個の、連続的なまたは同時的な使用のために、抗体分子またはその抗原結合部分または免疫コンジュゲートまたは核酸分子または使用のためのベクターまたは本明細書に定義される本発明の治療方法を提供する。

【0085】

さらなる態様において、本発明は、癌の治療に使用するための医薬の製造において、本明細書に定義される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される本発明の免疫コンジュゲートまたは本明細書に定義される本発明の核酸分子または本明細書に定義される本発明のベクターまたは本明細書に定義される本発明の医薬組成物の使用を提供する。

【0086】

本発明は、有効量の本明細書に定義される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分または本明細書に定義される免疫コンジュゲートまたは本明細書に定義される核酸分子または本明細書に定義されるベクターまたは本明細書に定義される本発明の医薬組成物を対象に投与することを含む、対象における癌または免疫疾患を治療または予防する方法も提供する。

【0087】

一実施形態では、本発明は、治療における使用のために本明細書に開示されるアミノ酸配列を含む抗ＰＤ１抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはその抗原結合部分を提供する。

【0088】

本発明の医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤を含み得る。薬学的に許容可能な賦形剤は、二次反応を誘発せず、例えば、抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体分子の投与の円滑化、その寿命の増加および／または体内での有効性の増加または溶液中の溶解性の増加を可能にする、医薬組成物に入る化合物または化合物の組み合わせであってもよい。これらの薬学的に許容可能なビヒクルは周知であり、抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体分子の投与様式の機能として、当業者によって適合されるであろう。

【0089】

一部の実施形態では、抗ＰＤ１抗体分子および抗ＶＥＧＦＲ２抗体分子は、投与前に再構成するために凍結乾燥形態で提供されてもよい。例えば、凍結乾燥された抗体分子は、個体への投与前に、滅菌水中で再構成され、生理食塩水と混合されてもよい。

【0090】

抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体分子は通常、医薬組成物の形態で投与され、抗体分子に加えて少なくとも一つの成分を含んでもよい。したがって、医薬組成物は、抗ＰＤ１抗体分子および抗ＶＥＧＦＲ２抗体分子に加えて、当業者に周知の薬学的に許容可能な賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤またはその他の物質を含んでもよい。かかる材料は、非毒性であるべきであり、抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体分子の有効性に干渉するべきではない。担体または他の材料の正確な性質は、以下に論じるように、ボーラス投与、注入、注射または任意の他の適切な経路によってなりうる投与経路に依存する。

【0091】

非経口では、例えば、皮下注射または静脈内投与、例えば、注射によって、抗ＰＤ１抗体分子および抗ＶＥＧＦＲ２抗体分子を含む医薬組成物は、パイロジェンを含まず、適切なｐＨ、等張性および安定性を有する非経口的に許容可能な水溶液の形態であってもよい。当業者であれば、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸リンゲル注射液などの等張性ビヒクルを使用して、適切な溶液を調製することができる。保存剤、安定剤、緩衝液、抗酸化物質および／または他の添加剤は、リン酸塩、クエン酸塩およびその他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンなどの抗酸化物質；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３’－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む単糖類、二糖類および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；および／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。

【0092】

抗ＰＤ１抗体分子および抗ＶＥＧＦＲ２抗体分子を含む医薬組成物は、単独で、または他の治療剤との組み合わせで、治療される状態に依存して、同時にまたは連続して投与することができる。

【0093】

本明細書に記載される抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体分子は、ヒトまたは動物の体の治療方法に使用されてもよく、予防的治療または予防治療（例えば、個体における状態の発症リスクを減少させるために個体における状態の発症前の治療；その発症の遅延；または発症後の重症度の低減）が含まれる。治療方法は、抗ＰＤ１抗体分子および抗ＶＥＧＦＲ２抗体分子を、それを必要とする個体に投与することを含み得る。

【0094】

投与は通常、患者に利益を示すのに十分である、「治療有効量」にある。こうした利益は、少なくとも一つの症状の少なくとも改善でありうる。実際の投与量、ならびに投与速度および投与時間コースは、治療されるものの性質および重症度、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、組成物の送達部位、投与方法、投与のスケジューリングおよび医療従事者に公知の他の要因に依存する。治療の処方、例えば、用量の決定などは、一般開業医および他の医師の責任内であり、治療される疾患の症状および／または進行の重症度に依存しうる。抗体分子の適切な用量は当該技術分野で周知である（Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ Ｊ．Ａ．ら、１９９１、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ４７：６５９－６６４；Ｂａｇｓｈａｗｅ Ｋ．Ｄ．ら、１９９１、Ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ４：９１５－９２２）。特定の用量は、投与される薬剤の種類が適切に使用されるように、本明細書またはＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（２００３）に示されていてもよい。抗体分子の治療有効量または適切な用量は、動物モデルにおけるそのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性およびｉｎ ｖｉｖｏ活性を比較することによって決定されうる。マウスおよび他の試験動物における有効用量をヒトに外挿する方法が知られている。正確な用量は、抗体が予防または治療のためのものであるか、治療される領域のサイズおよび位置、抗体（例えば、全抗体、断片）の正確な性質および抗体に付着された任意の検出可能な標識または他の分子の性質を含む、いくつかの因子に依存する。

【0095】

典型的な抗体用量は、全身適用では１００μｇ～１ｇの範囲であり、局所適用では１μｇ～１ｍｇの範囲内である。より高い初期負荷用量に続いて、１回以上の低用量が投与されてもよい。典型的には、抗体は、全抗体、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプである。これは、成人患者の単一治療のための用量であり、小児および幼児については比例的に調整されてもよく、また分子量に比例して他の抗体フォーマットについても調整されてもよい。治療は、医師の裁量で、毎日、週２回、週１回、または月１回の間隔で繰り返されてもよい。個体の治療スケジュールは、抗体組成物の薬物動態および薬力学特性、投与経路および治療される状態の性質に依存し得る。

【0096】

治療は、周期的であってもよく、投与間の期間は、約２週間以上、例えば、約３週間以上、約４週間以上、約１カ月以上、約５週間以上または約６週間以上であってもよい。例えば、治療は、２～４週間毎または４～８週間毎であってもよい。治療は、手術前および／または手術後に行われてもよく、および／または外科手術または侵襲的処置の解剖学的部位に直接投与または適用されてもよい。適切な製剤および投与経路は、上記に記載されている。

【0097】

一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦ抗体分子は、皮下注射として投与されてもよい。皮下注射は、例えば、長期予防／治療のために、自動注射器を使用して投与されうる。

【0098】

一部の実施形態では、抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦ抗体分子の治療効果は、用量に応じて、いくつかの半減期にわたって持続し得る。例えば、抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦ抗体分子の単回投与の治療効果は、個体において、１ヵ月以上、２ヵ月以上、３ヵ月以上、４ヵ月以上、５ヵ月以上または６ヵ月以上、持続し得る。

【0099】

本発明は、ヒトＰＤ１およびヒトＶＥＧＦＲ２に特異的に結合し、任意選択的に、カニクイザルＰＤ１およびサルＶＥＧＦＲ２またはその抗原結合部分にも特異的に結合する抗体分子を製造する方法も提供され、
（１）非ヒトソースからヒトｖドメインフレームワークに抗ＰＤ１ ＣＤＲを移植して、ヒト化抗ＰＤ１抗体分子またはその抗原結合部分を製造するステップ、
（２）ＣＤＲ中に一つ以上の変異を含む、ヒト化抗ＰＤ１抗体分子またはその抗原結合部分のクローンのライブラリを生成するステップ、
（３）ヒトＰＤ１、および任意選択的にカニクイザルＰＤ１への結合について、ヒトＶＥＧＦＲ２およびアカゲザルＶＥＧＦＲ２への結合についてもライブラリをスクリーニングするステップ、
（４）ヒトＰＤ１に対する結合特異性、任意選択的にカニクイザルＰＤ１およびヒトＶＥＧＦＲ２およびアカゲザルＶＥＧＦＲ２に対する結合特異性も有するクローンをスクリーニングステップ（３）から選択するステップ、
（５）ステップ（４）から選択されるクローンから、ヒトＰＤ１に特異的に結合する抗体分子ならびに任意選択的にカニクイザルＰＤ１ヒトＶＥＧＦＲ２およびアカゲザルＶＥＧＦＲ２またはこれらの抗原結合部分に特異的に結合する抗体分子を製造するステップ、
（６）抗体の分子的質をさらに改善する可能性を確認するために、ＣＤＲにおいて生殖細胞変異誘発試験を実施するステップ、を含む。

【0100】

方法は、ステップ（４）において選択されたクローンに基づいて、例えば、ステップ（４）において選択されたクローンのＣＤＲの特定の位置におけるさらなる探索的変異誘発に基づいて、追加のクローンを製造して、ヒト化を高め、および／またはヒトＴ細胞エピトープ量を最小にし、および／またはステップ（５）において製造された抗体分子またはその抗原結合部分における製造特性を改善するさらなるステップを含んでいてもよい。

【0101】

本明細書で使用される場合、「ＰＤ１」という用語は、ＰＤ１の生物活性の少なくとも一部を保持するプログラム細胞死タンパク質１およびそのバリアントを指す。本明細書で使用される場合、ＰＤ１は、ヒト、ラット、マウスおよびニワトリを含む、天然配列ＰＤ１のすべての種を含み得る。「ＰＤ１」という用語は、ヒトＰＤ１のバリアント、アイソフォームおよび種相同体を含むように使用されうる。

【0102】

一部の実施形態では、「ＰＤ１」は、ＰＤ１の野生型ヒト形態を指す。本発明の抗体は、ヒト以外の種由来のＰＤ１、特にカニクイザル由来のＰＤ１（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）と交差反応し得る。ヒトおよびカニクイザルＰＤ１アミノ酸配列の例を表７に提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＰＤ１に完全に特異的であってもよく、非ヒト交差反応を示さなくてもよい。

【0103】

本明細書で使用される場合、「ＶＥＧＦＲ２」という用語は、ＶＥＧＦＲ２の生物学的活性の少なくとも一部を保持する血管内皮増殖因子受容体２（ＫＤＲまたはＦＬＫ１としても知られる）およびそのバリアントを指す。本明細書で使用される場合、ＶＥＧＦＲ２は、ヒト、ラット、マウスおよびニワトリを含む、天然配列ＶＥＧＦＲ２のすべての種を含み得る。「ＶＥＧＦＲ２」という用語は、ヒトＶＥＧＦＲ２のバリアント、アイソフォームおよび種相同体を含むように使用されうる。一部の実施形態では、「ＶＥＧＦＲ２」は、ＶＥＧＦＲ２の野生型ヒト形態を指す。本発明の抗体は、ヒト以外の種のＶＥＧＦＲ２、特にアカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）由来のＶＥＧＦＲ２と交差反応し得る。ヒトおよびアカゲザルＶＥＧＦＲ２アミノ酸配列の例を表７に提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＶＥＧＦＲ２に完全に特異的であってもよく、非ヒト交差反応を示さなくてもよい。

【0104】

本明細書で使用される場合、本発明の抗体の文脈において使用される「拮抗薬」または「抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２アンタゴニスト抗体」（同義の用語として「抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体」）は、ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２に結合することができ、ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２生物活性ならびに／またはＰＤ１および／もしくはＶＥＧＦＲ２シグナル伝達によって媒介される下流経路を阻害することができる抗体を指す。抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２拮抗薬抗体は、受容体結合および／またはＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２に対する細胞応答の誘発などのＰＤ１および／またはＶＥＧＦＲ２によって媒介される下流経路を含む、（著しくを含む）ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２生物活性を遮断する、拮抗する、抑制するまたは減少させることができる抗体を含む。本発明の目的のために、「抗ＰＤ１および抗ＶＥＧＦＲ２拮抗薬抗体」という用語は、全ての用語、タイトルおよび機能的状態および特徴を含み、それによってＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２そのものおよびＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２生物活性（限定されないが、Ｔ細胞の抗腫瘍細胞活性の活性化を抑制するその能力を含む）または活性もしくは生物活性の結果が、任意の意味のある程度に実質的に無効になる、減少するまたは中和されることは明示的に理解される。

【0105】

抗体は、他の受容体に結合するより大きい親和性、結合活性で結合し、より容易に、および／またはより長く結合する場合、ＰＤ１またはＶＥＧＦＲ２に「特異的に結合する」、「特異的に相互作用する」、「優先的に結合する」、「結合する」または「相互作用する」。

【0106】

「抗体分子」は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも一つの抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書で使用される場合、「抗体分子」という用語は、無傷のポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を含むだけでなく、任意の抗原結合断片（例えば、「抗原結合部分」）またはその単鎖、抗体を含む融合タンパク質ならびに例えば、限定されないが、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（例えば、サメおよびラクダ抗体）、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲおよびｂｉｓ－ｓｃＦｖを含む抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変された構成も含む。

【0107】

「抗体分子」は、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ（またはそのサブクラス）などの任意のクラスの抗体を包含し、抗体は、任意の特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンには五つの主要なクラスがあり：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭならびにこれらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えばｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、ｌｇＧ４、ｌｇＡ１およびｌｇＡ２にさらに分けられてもよい。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常領域は、それぞれアルファ、デルタ、エプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構成は周知である。

【0108】

本明細書に使用される場合、抗体分子の「抗原結合部分」という用語は、ＰＤ１に特異的に結合する能力を保持するインタクトな抗体の一つ以上の断片を指す。抗体分子の抗原結合機能は、インタクトな抗体の断片によって実施され得る。抗体分子の用語「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片および単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。

【0109】

「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を画定するために使用される。「Ｆｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域またはバリアントのＦｃ領域であってもよい。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化する場合があるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、位置Ｃｙｓ２２６のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０からそのカルボキシル末端に伸びるように画定される。Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、ＫａｂａｔにあるＥＵ指数のものである。免疫グロブリンのＦｃ領域は、概して、ＣＨ２およびＣＨ３の二つの定常ドメインを含む。当技術分野で公知のように、Ｆｃ領域は、二量体または単量体形態で存在し得る。

【0110】

抗体の「可変領域」は、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を、単独でまたは組み合わせて指す。技術分野で公知のように、重鎖および軽鎖の可変領域はそれぞれ、超可変領域としても知られる三つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続される四つのフレームワーク領域（ＦＲ）から構成され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲに隣接するＦＲを選択する場合、例えば、抗体をヒト化または最適化する場合、同じ標準クラスのＣＤＲ配列を含有する抗体由来のＦＲが好ましい。

【0111】

本出願に使用されるＣＤＲの定義は、多くの異なる、フィールドにおいて作製された相克することの多いスキームに使用されるドメインを組み合わせ、免疫グロブリンレパートリー分析と、単離した抗体および抗原との共結晶の構造的分析の組み合わせに基づいている（Ｓｗｉｎｄｅｌｌｓら、２０１６，ａｂＹｓｉｓ：Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ， Ａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｄ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．［ＰＭＩＤ：２７５６１７０７；Ｅｐｕｂ ２２ Ａｕｇｕｓｔ ２０１６］）。本明細書で使用されるＣＤＲ定義（「統合」定義）は、そのような過去の全ての知見の教訓を組み込み、標的結合相補性を媒介する可能性のある完全な残基ランドスケープをサンプリングするために必要な全ての適切なループ位置を含む。

【0112】

表１は、本明細書で定義されるＣＤＲを有するＭＡｂ００５ヒト化抗ＰＤ１抗体のＶＬドメインのアミノ酸配列を示す。表２は、本明細書で定義されるＣＤＲを有するＭＡｂ００５ヒト化抗ＰＤ１抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列を示す。

【0113】

本明細書で使用される場合、「保存的置換」という用語は、機能活性を著しく有害なほど変化させない別のアミノ酸によるアミノ酸の置換を指す。「保存的置換」の好ましい例は、一つのアミノ酸を、以下のＢＬＯＳＵＭ ６２置換マトリックスにおいて０以上の値を有する別のアミノ酸と置換することである（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ＆ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ、１９９２、ＰＮＡＳ ８９：１０９１５－１０９１９を参照）：

【表1】

【0114】

「モノクローナル抗体」（Ｍａｂ）という用語は、例えば、任意の真核、原核またはファージクローンを含み、それが産生される方法を含まない、単一コピーまたはクローンに由来する抗体またはその抗原結合部分を指す。本発明のモノクローナル抗体は、均質な集団または実質的に均質な集団に存在することが好ましい。

【0115】

「ヒト化」抗体分子は、非ヒト（例えばマウス）抗体分子またはその抗原結合部分の形態を指し、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖または非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むこれらの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合サブ配列）である。ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲからの残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置換される、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であってもよい。

【0116】

「ヒト抗体または完全ヒト抗体」は、ヒト抗体遺伝子を担持するトランスジェニックマウスまたはヒト細胞に由来する抗体分子またはその抗原結合部分を指す。

【0117】

「キメラ抗体」という用語は、抗体分子またはその抗原結合部分を指し、可変領域配列は一つの種に由来し、定常領域配列は抗体分子などの別の種に由来し、可変領域配列はマウス抗体に由来し、定常領域配列はヒト抗体に由来する。

【0118】

「抗体薬物コンジュゲート」および「免疫コンジュゲート」は、ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２に結合し、細胞傷害性薬剤、細胞分裂阻害剤および／または治療剤に抱合される抗体誘導体を含む、抗体分子またはその抗原結合部分を指す。

【0119】

本発明の抗体分子またはその抗原結合部分は、技術分野で周知の技術、例えば、組換え技術、ファージ表示技術、合成技術またはそのような技術の組み合わせ、または当技術分野で容易に知られている他の技術を使用して作製することができる。

【0120】

「単離分子」という用語（分子が例えばポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは抗体である）は、その起源または導出源によって、（１）その天然状態で付随する天然関連成分と関連しない、（２）同じ種由来の他の分子が実質的に存在しない、（３）異なる種由来の細胞によって発現される、または（４）自然界では発生しない分子である。したがって、化学的に合成された、またはそれが天然由来の細胞とは異なる細胞系で発現された分子は、その天然関連成分から「単離」される。分子はまた、技術分野で周知の精製技術を使用して、単離によって天然関連成分を実質的に含まないようにしてもよい。分子の純度または均質性は、当技術分野で周知のいくつかの手段によって分析されてもよい。例えば、ポリペプチドサンプルの純度は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動およびゲルの染色を使用して分析され、当該技術分野で周知の技術を使用してポリペプチドを可視化することができる。特定の目的のために、ＨＰＬＣまたは精製のために技術分野で周知の他の手段を使用することによって、より高い解像度が提供されてもよい。

【0121】

「エピトープ」という用語は、一つ以上の抗体分子の抗原結合領域における抗体分子によって認識され、結合することができる分子の部分またはその抗原結合部分を指す。エピトープは、一次、二次または三次タンパク質構造の定義された領域からなり得、抗体の抗原結合領域またはその抗原結合部分によって認識される標的の二次構造単位または構造ドメインの組み合わせを含む。同様に、エピトープは、アミノ酸または糖側鎖などの分子の定義された化学的に活性な表面グループからなり得、特定の三次元構造特性ならびに特定の荷電特性を有する。本明細書で使用される場合、「抗原エピトープ」という用語は、例えば、従来のイムノアッセイ、抗体競合結合アッセイまたはＸ線結晶構造解析法もしくは関連する構造決定方法（例えばＮＭＲ）など、技術分野で周知の任意の方法によって決定されるように、抗体分子が特異的に結合することができるポリペプチドの一部分として定義される。

【0122】

「結合親和性」または「ＫＤ」という用語は、特定の抗原－抗体相互作用の解離速度を指す。ＫＤは、解離の速度の比であり、解離の速度は、関連速度に対する「オフレート（ｋ_ｏｆｆ）」、または「オンレート（ｋ_ｏｎ）」とも呼ばれる。したがって、Ｋ_Ｄは、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎに等しく、モル濃度（Ｍ）として表される。次に、Ｋ_Ｄが小さいほど、結合の親和性が強い。したがって、１μＭのＫ_Ｄは、１ｎＭのＫ_Ｄと比較して弱い結合親和性を示す。抗体のＫＤ値は、技術分野で確立された方法を使用して決定することができる。抗体のＫＤを決定する一つの方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用することであり、典型的には、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用する。

【0123】

「力価」という用語は、ＩＣ_５０として示され、または本明細書に記載のＰＤ１またはＶＥＧＦＲ２活性アッセイにおいて測定された活性の５０％を阻害する抗原ＰＤ１またはＶＥＧＦＲ２に対する抗体または抗体薬物コンジュゲートの効果的な濃度として示すことができる。

【0124】

本明細書で使用される場合、語句「有効量」または「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために必要な量（用量および期間ならびに投与手段）を指す。有効量は、対象に治療的利益を与えるために必要な活性剤の少なくとも最小量であるが毒性量未満である。

【0125】

本発明の抗体分子の生物活性に関して本明細書で使用される用語「阻害する」または「中和する」は、例えば、ＰＤ１またはＶＥＧＦＲ２に対する抗体分子の生物活性または結合相互作用を含むがこれに限定されない、阻害される進行または重症度を、抗体が実質的に拮抗する、禁止する、防止する、制限する、減速する、除去する、停止する、低減するまたは逆転する能力を意味する。

【0126】

「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入の組み込みのためのベクターのレシピエントであり得るか、またはこれまであった個々の細胞または細胞培養を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、子孫は、自然突然変異、偶発的な突然変異または故意の突然変異により、元の親細胞と完全に同一であるとは限らない（形態学的またはゲノムＤＮＡ補体において）。宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチドを用いてｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトされた細胞を含む。

【0127】

本明細書で使用される場合、「ベクター」は、宿主細胞に一つ以上の対象の遺伝子または配列を送達し、好ましくは発現することができる構築物を意味する。ベクターの例としては、以下に限定されないが、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性凝縮剤と関連付けられたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソームに封入されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、およびプロデューサー細胞などの特定の真核細胞が挙げられる。

【0128】

本明細書で使用される場合、別段の示唆が無い限り、用語「治療すること」は、かかる用語が適用される障害もしくは状態またはかかる障害もしくは状態の一つ以上の症状の逆転、緩和、進行の阻害、進行の遅延、発症の遅延または予防を意味する。本明細書で使用される場合、別段の示唆がない限り、用語「治療」は、上記に定義される治療行為を指す。用語「治療すること」はまた、対象のアジュバントおよびネオアジュバント治療を含む。疑義を避けるために付言すると、本明細書の「治療」への言及には、治癒的、緩和的および予防的治療への言及が含まれる。疑義を避けるために付言すると、本明細書の「治療」への複数の言及にも、治癒的、緩和的および予防的治療への複数の言及が含まれる。

【0129】

実施形態が本明細書に「含む」という文言で記述されている場合、そうでなければ、「からなる」および／または「本質的にからなる」という用語で記述された類似の実施形態も提供されることが理解される。

【0130】

本発明の態様または実施形態が、Ｍａｒｋｕｓｈグループまたは他の代替のグループの観点から記述される場合、本発明は、全体として列挙されたグループ全体だけでなく、個別にグループの各メンバーおよび主要グループの可能性のあるすべてのサブグループを包含するだけでなく、一つ以上のグループメンバーが存在しない主要グループも包含する。本発明はまた、特許請求の範囲の発明における一つ以上のグループメンバーを明示的に除外することを想定する。

【0131】

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。本明細書および特許請求の範囲全体を通して、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」、または「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」または「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」などの変形は、指定された整数または整数の群を含むが、その他の任意の整数または整数の群を排除しないことを暗示するものとして理解されるであろう。文脈上別段の定めがない限り、単数形は複数形を含み、複数形は単数形を含むものとする。用語「例えば」に続く任意の例 は、網羅的または限定的であることを意味するものではない。

【0132】

本発明の実践は、別段の示唆がない限り、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来的な技術を採用する。

【0133】

本発明の特定の非限定的な実施形態を、添付図面を参照してこれから説明する。

【実施例】

【0134】

実施例１ 最適化された抗ＰＤ１治療用抗体の生成
はじめに
この実施例では、同時にＶＥＧＦＲ２のアンタゴニストでもある拮抗性の最適化された抗ＰＤ１抗体のパネルの生成に成功している。これらの抗ＰＤ１抗体は、良好に発現され、生物物理学的に安定し、高度に可溶性であり、好ましいヒト生殖細胞系に対する同一性が最大化された。

【0135】

材料および方法
ＰＤ１ライブラリの生成と選択
ＰＤ１ Ｆａｂレパートリーを、質量オリゴ合成およびＰＣＲによって構築した。ＶＬ（表１）ドメインおよびＶＨ（表２）ドメインのＣＤＲおよびＣＤＲ近位領域に変異誘発を適用した。次いで、増幅されたＦａｂレパートリーを、制限－ライゲーションを介してファージミドベクターにクローニングし、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＧ－１細胞に形質転換し、ファージレパートリーを、前述した詳細に記載されるように本質的に救済した（Ｆｉｎｌａｙら、２０１１、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ６８１： ３８３－４０１）。

【0136】

ストレプトアビジン磁気マイクロビーズをビオチン化ＰＤ１またはＶＥＧＦＲ２標的タンパク質（ヒトまたはサルのいずれか）で被覆し、ビーズをＰＢＳで３回洗浄し、ＰＢＳ ｐＨ７．４および５％スキム乳タンパク質に再懸濁することによって、ファージ選択を行った。これらのビーズを、ラウンド１の選択で１００ｎＭの標的タンパク質で被覆し、続いて３回連続で抗原濃度を減少させた。各ラウンドで、ファージをトリプシンを使用して溶出し、その後ＴＧ１細胞に再感染させた。

【0137】

周辺質外抽出物の産生（小規模）
個々の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）クローンにおける可溶性Ｆａｂの製造を実施した。対数増殖期における大腸菌ＴＧ１細胞を、イソプロピル１－チオ－Ｄ－β－ガラクトピラノシドで誘導した。可溶性Ｆａｂを含有する周辺質抽出物を、凍結／融解サイクルによって生成した：細菌細胞ペレットを－２０℃で一晩凍結し、次いで室温で解凍し、ＰＢＳ ｐＨ７．４中に再懸濁した。可溶性Ｆａｂを含有する上清を、室温で振とうし、遠心分離した後に収集した。

【0138】

ＩｇＧの発現および精製
リードパネル抗ＰＤ１抗体とＭａｂ００５の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインをコードする哺乳類コドン最適化合成遺伝子を、エフェクター機能ヌルヒトＩｇＧ１（「ＩｇＧ１ｎｕｌｌ」；Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ変異を下側ヒンジに含有し、正常な免疫グロブリンＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよびＣＤＣ機能をそれぞれ抑制するヒトＩｇＧ１）およびヒトＣκドメインを含む哺乳類発現ベクターにクローニングした。哺乳類発現系に重鎖および軽鎖含有ベクターの共トランスフェクションを行い、続いてタンパク質ＡベースのＩｇＧの精製、定量化ならびに変性ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよび非変性ＳＤＳ－ＰＡＧＥに関するＱＣを行った。

【0139】

ＦａｂおよびＩｇＧに対する直接結合ＥＬＩＳＡ
リードパネルの組換えタンパク質への結合および交差反応性は、最初にＥＬＩＳＡを結合することによって評価された。ヒトＰＤ１ヒトＦｃタグ付き組み換えタンパク質およびカニクイザルＰＤ１ヒトＦｃタグ付き組み換えタンパク質を、１μｇ／ｍｌでＭａｘｉＳｏｒｐ（商標）平底９６ウェルプレートの表面に被覆した。精製されたＦａｂまたはＩｇＧサンプルを、５００ｎＭ～０．９８ｎＭで始まる２倍連続希釈で滴定し、被覆された抗原に結合させた。Ｆａｂｓは、マウス抗ｃ－ｍｙｃ抗体、続いて西洋ワサビペルオキシダーゼに結合されたロバ抗マウスＩｇＧを使用して検出された。ＩｇＧは、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合されたマウス抗ヒトＩｇＧを使用して検出された。結合シグナルを、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン基質溶液（ＴＭＢ）および４５０ｎｍで測定された吸光度で可視化した。

【0140】

Ｆａｂペリプレップ（ｐｅｒｉｐｒｅｐ）に対するＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎエピトープ競合アッセイ
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社）を、３８４ウェル白色マイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ社）中、最終容量２５μｌで実施した。反応緩衝液は、１倍のＰＢＳ ｐＨ ７．３（Ｏｘｏｉｄ社，カタログ番号 ＢＲ００１４Ｇ）および０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｐ９４１６）を含んだ。反応緩衝液に希釈されたペリプレップサンプルを、ビオチン化ヒトＰＤ１－Ｈｉｓ／ＡｖｉＴａｇで、０．６ｎＭの最終濃度で、室温で２０分間インキュベートした。０．３ｎＭのｈＭＡｂ００５ ＩｇＧおよび抗ヒトＩｇＧ１アクセプタービーズを２０μｇ／ｍｌ（最終濃度）で添加し、混合物を室温で１時間インキュベートし、続いて、ストレプトアビジンドナービーズを２０μｇ／ｍｌ（最終濃度）で添加し、室温で３０分間インキュベーションした。光の放射を、ＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社）で測定し、ＥｎＶｉｓｉｏｎ管理ソフトウェアを使用して分析した。値は、Ｃｏｕｎｔｓ Ｐｅｒ Ｓｅｃｏｎｄ（ＣＰＳ）として報告され、クロストークについて補正された。シグナル減少率を、無関係なサンプルに対して計算した。

【0141】

ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１細胞ベースの拮抗アッセイ
ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１遮断細胞ベースのバイオアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を使用して、ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１相互作用の遮断における抗体の能力を測定した。アッセイの前日に、ＰＤ－Ｌ１ ａＡＰＣ／ＣＨＯ－Ｋ１細胞を解凍し、細胞回収培地（９０％のＨａｍ’ｓ Ｆ１２／１０％のＦＢＳ）に移した。細胞懸濁液を、二つの９６ウェルの白色の平底アッセイプレートの内部６０ウェルの各々に、ウェル当たり１００μｌで分注した。細胞回収培地を、外側ウェルおよびアッセイプレートの各々に添加し、３７℃／５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。アッセイの日に、サンプルＩｇＧを、アッセイ緩衝液（９９％のＲＰＭＩ １６４０／１％のＦＢＳ）に、３００ｎＭから０，０４ｎＭまで４倍に希釈し、１希釈当たり４０μＬを、ＰＤ－Ｌ１ ａＡＰＣ／ＣＨＯ－Ｋ１細胞を含有するアッセイプレートに添加した。ポジティブ阻害対照には、ＩｇＧ１ヌル型およびニボルマブＩｇＧ４のｍＡｂ００５が含まれた。ネガティブ阻害コントロールとして、無関係なＩｇＧが含まれた。次いでＰＤ１エフェクター細胞をアッセイ緩衝液（９９％のＲＰＭＩ １６４０／１％のＦＢＳ）に解凍し、細胞懸濁液を、ＰＤ－Ｌ１ ａＡＰＣ／ＣＨＯ－Ｋ１細胞およびＩｇＧ滴定サンプルを含有するアッセイプレートのウェルに加えた。アッセイプレートを、３７℃／５％のＣＯ２インキュベーターに６時間インキュベートし、５～１０分間、周囲温度に平衡化させ、次いで、８０μｌのＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を添加した。アッセイプレートを、周囲温度でさらに５～３０分間インキュベートし、その後１０、２０、および３０分で発光シグナルを測定した。

【0142】

一方向ヒトＤＣ：Ｔ細胞混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ
ＣＤ１４＋単球を、３名のドナーからのＰＢＭＣから単離し、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４の存在下でインビトロで培養して、未成熟単球由来樹状細胞（ｍｏ－ＤＣ）を産生した。ｍｏ－ＤＣは、ＴＮＦαの添加により培養物にさらに成熟した。Ｐａｎ－Ｔ細胞を、同種ＰＢＭＣドナーから単離した。一方向ＭＬＲは、１０：１のＴ細胞：ＤＣ比で新たに単離された汎Ｔ細胞を有する成熟ＤＣを、滴定された試験物質の存在下で約５日間共培養することによってセットアップされた。活性は、ＥＬＩＳＡを介してＭＬＲの５日目のＩＦＮ－γ産生を定量化することによって測定された。

【0143】

結果と検討
ライブラリの生成とスクリーニング
拮抗性抗ＰＤ１ ＩｇＧ ｈＭＡｂ００５の可変ドメインを、ヒトＩｇＧ１－カッパＦａｂフォーマットのファージ表示ベクターにクローニングした。ＮＮＫ無作為化を使用したオリゴヌクレオチド変異誘発を、サブライブラリ当たり連続している５～６残基に適用し、５ＶＬサブライブラリ（表１）および６ＶＨ（表２）の生成をもたらした。これらのライブラリを大腸菌に形質転換し、救済し、各ライブラリからのファージ集団を、ヒトおよびカニクイザルＰＤ１ならびにヒトおよびアカゲザルのＶＥＧＦＲ２タンパク質について４ラウンドの選択に供した。

【0144】

次に、ペリプレップフォーマットのＦａｂのＥＬＩＳＡスクリーニングを実施して、ヒトＰＤ１、カニクイザルＰＤ１、ヒトＶＥＧＦＲ２およびカニクイザルＶＥＧＦＲ２への各ライブラリ選択からの個々のクローンの結合を調べた（図１）。これらの解析は、全ての選択ラウンドにおける個々のクローンが、ポジティブコントロールｈＭＡｂ００５ Ｆａｂとシグナルが類似したＰＤ１オルソログの両方への結合を示したことを実証した。重要なことに、結合解析はまた、いくつかのライブラリにおいて、クローンの集団が濃縮され、ＰＤ１活性を保持するだけでなく、ヒトおよび／またはカニクイザルＶＥＧＦＲ２への有意に改善された結合を示したことを実証した。これらの選択された集団からの１６８個のクローンを取り上げ、さらにｈＭＡｂ００５ ＩｇＧとのＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ ＰＤ１エピトープ競合とＶＬドメインおよびＶＨドメインのＤＮＡシーケンシングの両方を特徴付けた。Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ解析は、ＶＥＧＦＲ２への改善された結合を有するＬＣＤＲ１およびＬＣＤＲ３ライブラリの両方の固有の配列（図１）が、ＰＤ１へのｈＭＡｂ００５結合に対するエピトープ競合を維持したことを示す（図２）。対照的に、ＶＥＧＦＲ２への改善された結合を示したＨＣＤＲ１、２および３ライブラリからのクローンは、ｈＭＡｂ００５と有効に競合しなく、ＶＨドメインにおけるＶＥＧＦＲ２親和性改善変異が、ＰＤ１上にエピトープドリフトをもたらしたことを示唆している（図２）。ＰＤ１結合を維持したすべてのＶＥＧＦＲ２改善クローンの配列解析は、ＬＣＤＲ１（表３）とＬＣＤＲ３（表４）の両方で、かなりの数の変異がポジティブに選択されることを実証した。

【0145】

上記の解析に基づいて、ＰＤ１のオルソログとＶＥＧＦＲ２のオルソログの両方に対する高結合（図１）および７５％超のｈＭＡｂ００５／ＰＤ１相互作用のシグナル減少率（図２）を示したＬＣＤＲ１またはＬＣＤＲ３の変異を有する５個の代表的なクローンが、ＩｇＧフォーマットにおける発現および特徴付けのために選択された（表５）。さらに、ＬＣＤＲ１とＬＣＤＲ３の両方に潜在的に利益のある変異を合わせた６個の実験組み合わせのＩｇＧクローンが作製された（クローンＭＡＢ０１－ＭＡＢ０６、表５）。これら１１個のリードＩｇＧクローンを、ヒトＩｇＧ１ヌル形式で作製した。

【0146】

リードＩｇＧの特異性および能力の特徴
表４に概説した１１個の誘導ＩｇＧ１ヌルクローンならびにｈＭＡｂ００５およびアイソタイプＩｇＧ１ヌルを、ヒトおよびカニクイザルＰＤ１への滴定ＥＬＩＳＡ結合で調べた（図３Ａ）。この分析は、１１個のリードクローン全てがｈＭＡｂ００５ ＩｇＧ１と同様のヒトおよびカニクイザルＰＤ１への結合能力を有したが、アイソタイプコントロールはいずれのタンパク質にも結合を示さなかった。対照的に、ＩｇＧをＶＥＧＦＲ２タンパク質への結合について試験した場合、１１個のリードクローン全てが、ｈＭＡｂ００５と比較して、ヒトおよびアカゲザルオルソログの両方に対する結合効力の有意な増加を示した（図３Ｂ）。

【0147】

リードクローンにおけるｈＭａｂ００５に対するこのＶＥＧＦＲ２反応性の増加が、受容体との薬理学的関係を変化させることができるかどうかを調査するために、ヒトＶＥＧＦＲ２レポーターアッセイを使用して、天然のＶＥＧＦ応答要素ＮＦＡＴの制御下でルシフェラーゼ発現の誘導を調査した（Ｐｒｏｍｅｇａ社、製造業者の指示に従って実施）。このアッセイでは、可溶性ＶＥＧＦ－１６５タンパク質をＶＥＧＦＲ２レポーター細胞に添加し、すべてのＩｇＧ１タンパク質を、ＶＥＧＦ－１６５によって誘導されたシグナルに拮抗する能力について調べた（図４）。ＩｇＧ１ ｈＭＡｂ００５およびアイソタイプＩｇＧ１は両方とも、ＶＥＧＦＲ２シグナルの拮抗を示さなかった。しかし驚いたことに、全てのリードＩｇＧ１ヌル抗体はＶＥＧＦ－ＶＥＧＦＲ２シグナル誘導の強力な拮抗を示し、いくつかのクローンは、臨床的に承認された抗ＶＥＧＦＲ２癌薬「ラムシルマブ」と同様の範囲の能力を示した（図４）。ｈＭＡｂ００５ ＩｇＧ１がＶＥＧＦＲ２を強く刺激することが示されているため、非常に予想外の所見であった。上記のデータは、ＰＤ１エピトープ特異性を維持したが、全てのリード抗体に対するＶＥＧＦＲ２薬理学の完全な逆転を示唆した。このデータをさらに検討するために、ライブラリ由来クローン（図５Ａ～５Ｅ）およびＬＣＤＲ１および３の変異を組み合わせたクローン（図５Ｆ～５Ｋ）について、個々の解析を生成した。これらの解析は、抗体ＭＡＢ０１－ＭＡＢ０６が、ＶＥＧＦＲ２シグナル伝達の最も強力な阻害剤であることを示唆し、各ＣＤＲによって媒介されたＶＥＧＦＲ２結合の改善が相乗的に組み合わされ得ることを実証した。

【0148】

本明細書に概説される組み合わせ分析は、驚くべきことに、これらの抗体のＣＤＲにおけるアミノ酸多様性の深いサンプリングが、ＰＤ１とＶＥＧＦＲ２標的結合特異性の同時最適化を可能にし、複数のリード分子における前駆抗体ｈＭＡｂ００５のＶＥＧＦＲ２アゴニスト性表現型の逆転をもたらすことを実証した。得られたリード抗体は、臨床的に関連のあるＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２シグナル伝達経路の二重拮抗の有益な特徴を有する。

【0149】

リードＩｇＧバリアントの生成および分析
クローンＭＡＢ０６（ＭＡＢ０６．１－ＭＡＢ０６．８）の８個のバリアントを生成して、複数のＣＤＲ残基のヒト生殖系配列に変異され、免疫原性リスクを減少させる能力を実験的に調べた。これらのクローンは、ＬＣＤＲ１および２（表８）、ならびにＨＣＤＲ２（表９）において、生殖細胞系列の変異を含んだ。８個のクローン全てがＩｇＧ１ヌル形式で発現され、精製された。すべてのクローンは、タンパク質Ａ親和性カラムを介して容易に発現および精製され、得られたタンパク質は、９４％超の単量体ＩｇＧ％を示した（ＳＥＣにより測定）。

【0150】

ＭＡＢ０６．１－ＭＡＢ０６．８ ＩｇＧは、ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２シグナル伝達の両方に対して拮抗する能力について試験された。８個のクローン全てがＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１細胞シグナル伝達バイオアッセイにおいてＰＤ１シグナル伝達に拮抗する能力を保持し、ＳＨＲ－１２１０ ＩｇＧ１－３Ｍとニボルマブの両方と同様の能力を有した（図６）。同様に、８個のクローン全てがＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ２シグナル伝達バイオアッセイにおいて、ＶＥＧＦＲ２シグナル伝達を拮抗する濃度依存性の能力を保持し、ラムシルマブと同様の能力を有した（図７）。クローンＭＡＢ０６．５（図８Ａ、図８Ｂ）、ＭＡＢ０６．６（図８Ｃ、図８Ｄ）、ＭＡＢ０６．７（図８Ｅ、図８Ｆ）およびＭＡＢ０６．８（図８Ｇ、図８Ｈ）に対するＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２拮抗の比較分析は、クローンＭＡＢ０６の配列がＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２（表８）およびＨＣＤＲ２（表９）の複数の残基のヒト化を受け入れることができる一方で、両方の受容体のシグナル伝達に拮抗する能力を保持することを示した。重要なことに、対照ＳＨＲ－１２１０ ＩｇＧ１３Ｍ（ｈＭａｂ００５）は、図４、５、７および８に示すように、ＶＥＧＦの存在下でＶＥＧＦＲ２シグナル伝達を阻害することができないことが示された。

【0151】

上記の所見は、単一分子におけるＰＤ１経路とＶＥＧＦＲ２経路の両方を拮抗する能力が、腫瘍微小環境において高度に活性であることが知られている二つの重要な免疫抑制シグナルを遮断することによって、抗体ＳＨＲ－１２１０（ｈＭａｂ００５）に対する臨床利益を提供し得ることを示す。実際に、ＰＤ１受容体とＶＥＧＦＲ２受容体は両方とも、ヒト腫瘍の免疫細胞上で共発現することが実証されており、図９に示すように、二重拮抗剤が単一細胞上で二官能性様式で作用する可能性が示唆されている。

【0152】

親和性の高いシグナル伝達受容体に結合する抗体は、受容体リガンドが存在しない場合、受容体活性の強力なアゴニストとなるリスクがある。これを調べるために、ＶＥＧＦの非存在下でＶＥＧＦＲ２バイオアッセイを繰り返した。高親和性抗ＶＥＧＦＲ２ ＩｇＧ１コントロール抗体であるラムシルマブ、アイソタイプコントロールヒトＩｇＧ１、ＭＡＢ０６．５、ＭＡＢ０６．８およびＶＥＧＦ－１６５タンパク質はすべて、このアッセイで滴定され、抗体タンパク質は１０００ｎＭの濃度から開始された（図１０）。ＶＥＧＦ－１６５のみが濃度依存性受容体活性化を示しており、ＭＡＢ０６．５ ＩｇＧ１およびＭＡＢ０６．８ ＩｇＧ１が、ＶＥＧＦの存在下でＶＥＧＦＲ２の拮抗薬であり（図８）、ＶＥＧＦの非存在下でＶＥＧＦＲ２のアゴニストではないことを確認した（図１０）。

【0153】

ＭＡＢ０６．５およびＭＡＢ０６．８のＰＤ１拮抗効力をさらに確認するために、両方の分子をヒトＤＣ：Ｔ細胞一方向ＭＬＲアッセイにおいて分析し、ポジティブコントロールとしてニボルマブ（抗ＰＤ１）および活性の指標としてＩＦＮ－ガンマを測定した（図１１）。ＭＬＲアッセイを、３つの別個のヒトドナー対を用いて二回の反復ランで実施した。これらの解析は、ＭＡＢ６．５およびＭＡＢ６．８の両方が、ニボルマブと同等のＰＤ１遮断駆動ＩＦＮ－γシグナル伝達において濃度依存的な能力を示したことを実証した。これは、ドナーペア１（図１１Ａ、１１Ｂ）、ドナーペア２（図１１Ｃ、１１Ｄ）およびドナーペア３（図１１Ｅ、１１Ｆ）の両方のランで発見され、Ｔ細胞上のＰＤ１の機能を遮断する高い再現性を示した。

【0154】

第３世代リードＩｇＧバリアントの生成および分析
ＷＯ２０１９１７０８８５Ａ１は、ＰＤ１についての分子の親和性を高める可能性を有するｈＭａｂ００５のＶＨドメインにおいて作製することができるいくつかの変異を開示する。本明細書に記載される新規クローンの文脈で、これらの以前に定義された変異の可能な有用性を調べるために、９種類のクローンＭＡＢ０６．８バリアントを生成し、複数のＶＨ ＣＤＲ残基の変異能力について実験的に調べ、ＰＤ１および／またはＶＥＧＦＲ２への結合を潜在的にさらに改善した。これらのクローンは全て、９個の固有のＶＨ配列で発現されたＭＡＢ０６．８ＶＬ配列（配列番号４７、表８）を含有した（表１０）。８個のクローン全てがＩｇＧ１ヌル形式で発現され、精製された。すべてのクローンは、（ＭＡＢ０６．８．３およびＭＡＢ０６．８．５以外であり、両者は凝集に悩まされる）タンパク質Ａ親和性カラムを介して容易に発現および精製され、得られたタンパク質は、９５％超の単量体ＩｇＧ％を示した（ＳＥＣにより測定）。

【0155】

７個の良好に発現されたＩｇＧ１ヌルクローン（ＭＡＢ０６．８．３およびＭＡＢ０６．８．５は省略）ならびにｈＭＡｂ００５およびアイソタイプＩｇＧ１ヌルを、ヒトおよびカニクイザルＰＤ１への滴定ＥＬＩＳＡ結合で調べた（図１２Ａ、図 １２Ｂ）。この分析は、これらの７個のクローンの多数がヒトおよびカニクイザルＰＤ１に対する結合を保持することを示したが、アイソタイプコントロールはいずれのタンパク質にも結合しないことを示した。一つの顕著な例外は、カニクイザルＰＤ１に結合する能力を失ったＭＡＢ０６．８．４であった（図１２Ｂ）。ＩｇＧをＶＥＧＦＲ２タンパク質への結合について試験した場合、７個のクローン全てがヒトとカニクイザルオルソログの両方への結合を示した（図１２Ｃ、図１２Ｄ）。

【0156】

ほとんどのクローンにおいて、ＰＤ１とＶＥＧＦＲ２の両方に対する明白な結合親和性が保持されているにもかかわらず、７個のバリアントをＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２の拮抗バイオアッセイにおいて調べたところ、ＭＡＢ０６．８の有益性は保持も強化もされなかった。７個のクローンすべては、ポジティブコントロールと比較して、ＭＡＢ０６（図５）、ＭＡＢ０６．５（図８）およびＭＡＢ０６．８（図８）と比較して、ＰＤ１、ＶＥＧＦＲ２、またはその両方に拮抗する能力の減少を示した（図１３Ａ、図１３Ｂ）。

【0157】

特許、特許出願、記事、書籍および論文を含むがこれに限定されない、本明細書に引用されるすべての文書または文書の一部は、任意の目的のためにその全体が参照により明示的に本明細書に組み込まれる。一つ以上の組み込まれた文書または文書の一部が、その用語の適用における定義と矛盾する用語を定義する場合、本発明の適用に表される定義が制御する。しかしながら、本明細書に引用される任意の参照、記事、刊行物、特許、特許公開および特許出願の言及は、世界の任意の国で、有効な先行技術を構成する、または共通の一般知識の一部を成すという承認またはいかなる形態の提案としてなされるものではなく、またなされるべきではない。

【0158】

本発明は、好ましい実施形態または例示的な実施形態を参照して記載されてきたが、当業者は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、それに対する様々な改変および変形が達成可能であり、そのような改変が本明細書に明確に意図されていることを認識する。本明細書に開示され、添付の特許請求の範囲に記載される特定の実施形態に関する制限は意図されておらず、いかなるものも推測されるべきではない。

【0159】

番号付けされた実施形態
添付の特許請求の範囲にかかわらず、本開示は、以下の番号付けされた実施形態を記載する。

【0160】

１．ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２の両方に特異的に結合する抗体または抗体の抗原結合部分であって、抗体または抗原結合部分が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
（ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｂ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｃ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号８）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｄ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含む、
（ｅ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含む、
（ｆ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号８）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＹＳＩＰＷＴのＬＣＤＲ３（配列番号６）を含む、
（ｇ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＴのＬＣＤＲ１（配列番号９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含む、
（ｈ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＴのＬＣＤＲ１（配列番号９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｉ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含む、
（ｊ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含む、
（ｋ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＥＳＧＩＷＬＧのＬＣＤＲ１（配列番号１２）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＡＥＬＰＦＧのＬＣＤＲ３（配列番号１０）を含む、
（ｌ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＧＩＧＰＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｍ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＬＡＳＱＰＬＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号７）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｎ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＴＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｏ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４０）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｐ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４１）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｑ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＡＮＴＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号３８）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｒ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＴＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４０）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、
（ｓ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＬＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号３）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＡＤのＬＣＤＲ２（配列番号４１）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、または
（ｔ）ＶＨ領域アミノ酸配列は、ＧＦＴＦＳＳＹＭＭＳのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＴＩＳＧＧＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧのＨＣＤＲ２（配列番号４２）およびＱＶＹＹＦＤＹのＨＣＤＲ３（配列番号６４）を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は、ＲＡＳＱＥＳＧＩＷＬＳのＬＣＤＲ１（配列番号３９）、ＡＡＳＳＬＱＳのＬＣＤＲ２（配列番号４３）およびＱＱＶＳＶＴＰＦＴのＬＣＤＲ３（配列番号１１）を含む、抗体または抗原結合部分。

【0161】

２．（ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４４を含む、
（ｂ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含む、
（ｃ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２４を含む、
（ｄ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１４を含む、
（ｅ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１５を含む、
（ｆ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１６を含む、
（ｇ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１７を含む、
（ｈ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１８を含む、
（ｉ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号１９を含む、
（ｊ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２０を含む、
（ｋ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２１を含む、
（ｌ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２２を含む、
（ｍ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号１３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号２３を含む、
（ｎ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４４を含む、
（ｏ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４５を含む、
（ｐ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４６を含む、
（ｑ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４８を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含む、
（ｒ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４５を含む、
（ｓ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号４９を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４６を含む、または
（ｔ）ＶＨ領域アミノ酸配列は配列番号７３を含み、ＶＬ領域アミノ酸配列は配列番号４７を含む、実施形態１に記載の抗体または抗原結合部分。

【0162】

３．抗体または抗原結合部分が、ＰＤ１－ＰＤＬ１およびＶＥＧＦＲ２－ＶＥＧＦシグナル伝達経路の両方を拮抗することができる、実施形態１または２に記載の抗体または抗原結合部分。

【0163】

４．ＰＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２の両方に結合する抗体または抗体の抗原結合部分であって、抗体または抗原結合部分が、ＰＤ１およびＶＥＧＦＲ２の両方への結合について、実施形態１～３のいずれか一つの抗体または抗原結合部分と交差競合し、
（ａ）完全生殖系列ヒトフレームワークアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ヒトＰＤ１、カニクイザルＰＤ１、ヒトＶＥＧＦＲ２、およびアカゲザルＶＥＧＦＲ２に特異的に結合し、
（ｃ）ヒトＰＤ１のヒトＰＤ－Ｌ１への結合に拮抗し、ヒトＶＥＧＦに応答してヒトＶＥＧＦＲ２のシグナル伝達に拮抗する、抗体または抗原結合部分。

【0164】

５．抗体は、ヒト、ヒト化またはキメラである、実施形態１～４のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分。

【0165】

６．ＶＨ領域、ＶＬ領域、またはＶＨ領域およびＶＬ領域の両方が、一つ以上のヒトフレームワーク領域アミノ酸配列を含む、実施形態１～５のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分。

【0166】

７．ＶＨ領域、ＶＬ領域、またはＶＨ領域およびＶＬ領域の両方が、ＣＤＲが挿入されているヒト可変領域フレームワーク足場アミノ酸配列を含む、実施形態１～６のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分。

【0167】

８．ＶＨ領域が、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列が挿入されているＩＧＨＶ３－７ヒト生殖系列足場アミノ酸配列を含む、実施形態１または３に記載の抗体または抗原結合部分。

【0168】

９．ＶＬ領域が、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列が挿入されているＩＧＫＶ１－３９ヒト生殖系列足場アミノ酸配列を含む、実施形態１、３および８のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分。

【0169】

１０．抗体が免疫グロブリン定常領域を含む、実施形態１～９のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分。

【0170】

１１．免疫グロブリン定常領域が、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＹである、実施形態１０に記載の抗体または抗原結合部分。

【0171】

１２．免疫グロブリン定常領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である、実施形態１１に記載の抗体または抗原結合部分。

【0172】

１３．免疫グロブリン定常領域が免疫学的に不活性である、実施形態１０に記載の抗体または抗原結合部分。

【0173】

１４．免疫グロブリン定常領域が、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域または野生型ヒトＩｇＧ２定常領域である、実施形態１０に記載の抗体または抗原結合部分。

【0174】

１５．免疫グロブリン定常領域が配列番号２５～３１のいずれか一つを含む、実施形態１３に記載の抗体または抗原結合部分。

【0175】

１６．抗体または抗原結合部分が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディまたはｂｉｓ－ｓｃＦｖである、実施形態１～１５のいずれか一つに記載の抗原結合部分。

【0176】

１７．抗体はモノクローナルである、実施形態１～１６のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分。

【0177】

１８．抗体は四量体抗体、四価抗体または多選択性抗体である、実施形態１～１７のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分。

【0178】

１９．抗体または抗原結合部分は、（ａ）ヒトＰＤ１または（ｂ）ヒトＰＤ１およびカニクイザルＰＤ１、または（ｃ）ヒトＰＤ１およびアカゲザルＰＤ１、または（ｄ）ヒトＰＤ１、カニクイザルＰＤ１およびアカゲザルＰＤ１に特異的に結合する、実施形態１～１８のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分。

【0179】

２０．抗体または抗原結合部分は、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ２または（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ２およびカニクイザルＶＥＧＦＲ２または（ｃ）ヒトＶＥＧＦＲ２およびアカゲザルＶＥＧＦＲ２または（ｄ）ヒトＶＥＧＦＲ２、カニクイザルＶＥＧＦＲ２およびアカゲザルＶＥＧＦＲ２に特異的に結合する、実施形態１～１９のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分。

【0180】

２１．治療剤に連結される実施形態１～２０のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分を含む免疫コンジュゲート。

【0181】

２２．治療剤が、サイトトキシン、放射性同位元素、化学療法剤、免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤、アポトーシス促進剤、細胞分裂酵素、細胞溶解酵素、治療用核酸、抗血管新生剤、抗増殖剤またはアポトーシス促進剤である、実施形態２１に記載の免疫コンジュゲート。

【0182】

２３．実施形態１～２０のいずれか一つの抗体または抗原結合部分または実施形態２１もしくは２２に記載の免疫コンジュゲートならびに薬学的に許容可能な担体、希釈剤もしくは賦形剤を含む、医薬組成物。

【0183】

２４．実施形態１～２０のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分の
（ａ）ＶＨ領域アミノ酸配列、
（ｂ）ＶＬ領域アミノ酸配列または
（ｃ）ＶＨおよびＶＬ領域アミノ酸配列の両方
をコードする核酸分子。

【0184】

２５． 実施形態２４に記載の核酸分子を含む発現ベクター。

【0185】

２６． 実施形態２４に記載の核酸分子または実施形態２５に記載の発現ベクターを含む組換え宿主細胞。

【0186】

２７．抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合部分を作製する方法であって、
核酸分子が発現される条件下で、実施形態２５の発現ベクターを含む組換え宿主細胞を培養し、それによって抗体または抗原結合部分を産生すること、
宿主細胞または培養物から抗体または抗原結合部分を単離することを含む、方法。

【0187】

２８．対象において免疫応答を強化するための方法であって、治療有効量の実施形態１～２０のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分、実施形態２１または２２に記載の免疫コンジュゲートまたは実施形態２３に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。

【0188】

２９．対象における癌、感染性疾患または免疫疾患を治療または予防する方法であって、治療有効量の実施形態１～２０のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分、実施形態２１または２２に記載の免疫コンジュゲートまたは実施形態２３に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。

【0189】

３０．癌は、膵癌、黒色腫、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である、実施形態２９に記載の方法。

【0190】

３１．感染性疾患は、ウイルス、細菌、真菌または寄生虫によるものである、実施形態２９に記載の方法。

【0191】

３２．感染性疾患が、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染である、実施形態２９に記載の方法。

【0192】

３３．癌、感染性疾患または免疫疾患の治療に使用するための、実施形態１～２０のいずれか一つの抗体または抗原結合部分、実施形態２１もしくは２２の免疫コンジュゲートまたは実施形態２３の医薬組成物。

【0193】

３４．癌は、膵癌、黒色腫、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である、実施形態３３に記載の使用のための抗体または抗原結合部分、免疫コンジュゲートまたは医薬組成物。

【0194】

３５．感染性疾患が、ウイルス、細菌、真菌または寄生虫によるものである、実施形態３３に記載の使用のための抗体または抗原結合部分、免疫コンジュゲートまたは医薬組成物。

【0195】

３６．感染性疾患がヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染である、実施形態３３に記載の使用のための抗体または抗原結合部分、免疫コンジュゲートまたは医薬組成物。

【0196】

３７．医薬として使用するための、実施形態１～２０のいずれか一つに記載の抗体または抗原結合部分、実施形態２１もしくは２２に記載の免疫コンジュゲートまたは実施形態２３に記載の医薬組成物。

【表2】

【表3】

【表4】

【表5】

【表6】

【表7】

【表8】

【表9】

【表10】

【表11】

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図5E】

【図5F】

【図5G】

【図5H】

【図5I】

【図5J】

【図5K】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図8E】

【図8F】

【図8G】

【図8H】

【図9】

【図10】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図11D】

【図11E】

【図11F】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図12D】

【図13A】

【図13B】

【配列表】

2022553908000001.app

【国際調査報告】