(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-12-28
(54)【発明の名称】がんを処置する方法
(51)【国際特許分類】
A61K 45/06 20060101AFI20221221BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20221221BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20221221BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20221221BHJP
A61K 31/7068 20060101ALI20221221BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20221221BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20221221BHJP
G01N 33/574 20060101ALI20221221BHJP
【ＦＩ】
A61K45/06
A61P35/00
A61P43/00 121
A61P35/02
A61K31/7068
A61K39/395 T
A61K31/519
A61P43/00 111
G01N33/574 A
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022523890
(86)(22)【出願日】2020-10-23
(85)【翻訳文提出日】2022-06-20
(86)【国際出願番号】 EP2020079856
(87)【国際公開番号】W WO2021078925
(87)【国際公開日】2021-04-29
(31)【優先権主張番号】62/926,055
(32)【優先日】2019-10-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】391008951
【氏名又は名称】アストラゼネカ・アクチエボラーグ
【氏名又は名称原語表記】ＡＳＴＲＡＺＥＮＥＣＡ ＡＫＴＩＥＢＯＬＡＧ
(74)【代理人】
【識別番号】100106518
【弁理士】
【氏名又は名称】松谷 道子
(74)【代理人】
【識別番号】100156144
【弁理士】
【氏名又は名称】落合 康
(72)【発明者】
【氏名】レオ，エリザベッタ
(72)【発明者】
【氏名】ウィンクラー，クラウディア
(72)【発明者】
【氏名】オコナー，マーク ジェイムズ
(72)【発明者】
【氏名】ジョーンズ，ジェマ ニコール
(72)【発明者】
【氏名】ピアス，アンドリュー ジェイムズ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA19
4C084AA20
4C084NA05
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZB271
4C084ZB272
4C084ZC201
4C084ZC202
4C084ZC751
4C085AA14
4C085CC23
4C085EE03
4C086AA01
4C086AA02
4C086CB06
4C086EA17
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA05
4C086ZB26
4C086ZB27
4C086ZC20
4C086ZC75
(57)【要約】
ＳＬＦＮ１１機能欠損がん細胞を有する患者においてＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤の組合せによりがんを処置する方法を、本明細書において開示する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
患者においてがんを処置する方法であって、ａ）がんと診断された患者を選択することと；
ｂ）前記患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損であるかどうかを決定することと；
ｃ）前記患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を前記患者に同時投与することと
を含む、方法。
【請求項2】
患者においてがんを処置する方法であって、ａ）がんと診断された患者を選択することと；
ｂ）ＳＬＦＮ１１発現が、前記患者のＳＬＦＮ１１発現非がん細胞に対して前記患者のがん細胞においてより低いかどうかを決定することと；
ｃ）ＳＬＦＮ１１発現が、前記患者のＳＬＦＮ１１発現非がん細胞に対して前記患者のがん細胞においてより低い場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を前記患者に同時投与することと
を含む、方法。
【請求項3】
前記患者のがん細胞が、ＳＬＦＮ１１発現について陰性である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
ＳＬＦＮ１１の発現レベルが、免疫組織化学、質量分析法、ｉｎ ｓｉｔｕでのハイブリダイゼーション、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ、逆転写定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ｑＰＣＲ）、マイクロアレイ分析、亜硫酸水素塩配列決定、又は定量的メチル化特異的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ－ＭＳＰ）によって決定される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
ＳＬＦＮ１１の発現レベルが、免疫組織化学によって決定される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
患者においてがんを処置する方法であって、ａ）がんと診断された患者を選択することと；
ｂ）前記患者のがん細胞においてＳＬＦＮ１１の発現レベルを決定することと；
ｃ）ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜１０％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を前記患者に同時投与することと
を含む、方法。
【請求項7】
ＳＬＦＮ１１の発現レベルが、０％である、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
ＳＬＦＮ１１の発現レベルが、免疫組織化学、質量分析法、ｉｎ ｓｉｔｕでのハイブリダイゼーション、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ、逆転写定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ｑＰＣＲ）、マイクロアレイ分析、亜硫酸水素塩配列決定、又は定量的メチル化特異的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ－ＭＳＰ）によって決定される、請求項６又は７に記載の方法。
【請求項9】
ＳＬＦＮ１１の発現レベルが、免疫組織化学によって決定される、請求項６又は７に記載の方法。
【請求項10】
ＤＮＡ損傷剤による処置に対して耐性である患者においてがんを処置する方法であって、ａ）前記患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損であるかどうかを決定することと；
ｂ）前記患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損である場合、ＷＥＥ１阻害剤及び前記ＤＮＡ損傷剤を前記患者に同時投与することと
を含む、方法。
【請求項11】
ＤＮＡ損傷剤による処置に対して耐性である患者においてがんを処置する方法であって、ａ）ＳＬＦＮ１１発現が、前記患者のＳＬＦＮ１１発現非がん細胞に対して前記患者のがん細胞においてより低いかどうかを決定することと；
ｂ）ＳＬＦＮ１１発現が、前記患者のＳＬＦＮ１１発現非がん細胞に対して前記患者のがん細胞においてより低い場合、ＷＥＥ１阻害剤及び前記ＤＮＡ損傷剤を前記患者に同時投与することと
を含む、方法。
【請求項12】
前記患者のがん細胞が、ＳＬＦＮ１１発現について陰性である、請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項13】
ＳＬＦＮ１１の発現レベルが、免疫組織化学、質量分析法、ｉｎ ｓｉｔｕでのハイブリダイゼーション、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ、逆転写定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ｑＰＣＲ）、マイクロアレイ分析、亜硫酸水素塩配列決定、又は定量的メチル化特異的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ－ＭＳＰ）によって決定される、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
ＳＬＦＮ１１の発現レベルが、免疫組織化学によって決定される、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
ＤＮＡ損傷剤による処置に対して耐性である患者においてがんを処置する方法であって、ａ）前記患者のがん細胞においてＳＬＦＮ１１の発現レベルを決定することと；
ｂ）ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜１０％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及び前記ＤＮＡ損傷剤を前記患者に同時投与することと
を含む、方法。
【請求項16】
ＳＬＦＮ１１の発現レベルが、０％である、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
ＳＬＦＮ１１の発現レベルが、免疫組織化学、質量分析法、ｉｎ ｓｉｔｕでのハイブリダイゼーション、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ、逆転写定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ｑＰＣＲ）、マイクロアレイ分析、亜硫酸水素塩配列決定、又は定量的メチル化特異的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ－ＭＳＰ）によって決定される、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項18】
ＳＬＦＮ１１の発現レベルが、免疫組織化学によって決定される、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項19】
前記がんが、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、黒色腫、肺がん、結腸直腸がん、結腸がん、直腸がん、前立腺がん、乳がん、脳がん、頭頚部がん、食道がん、甲状腺がん、胃がん、胆嚢がん、肝臓がん、絨毛がん、子宮体がん、子宮頸がん、腎臓がん、膀胱がん、睾丸がん、皮膚がん、神経芽細胞腫、骨肉腫、ユーイング肉腫、白血病、ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、及び頭頸部がんからなる群から選択される、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記がんが、卵巣がんである、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記がんが、プラチナ耐性卵巣がんである、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記がんが、子宮内膜がんである、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
前記がんが、膵臓がんである、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項24】
前記がんが、乳がんである、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項25】
前記ＤＮＡ損傷剤が、ゲムシタビン、エトポシド、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ピコプラチン、メトトレキサート、ドキソルビシン、ダウノルビシン、５－フルオロウラシル、イリノテカン、マイトマイシン、テモゾロミド、トポテカン、カンプトテシン、エピルビシン、イダルビシン、トラベクテジン、カペシタビン、ベンダムスチン、フルダラビン、ヒドロキシ尿素、トラスツズマブデルクステカン、及び薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
前記ＤＮＡ損傷剤が、ゲムシタビン、エトポシド、カンプトテシン、シスプラチン、ヒドロキシ尿素、及び薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項27】
前記ＤＮＡ損傷剤が、ゲムシタビン又は薬学的に許容されるその塩である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記ＤＮＡ損傷剤が、トラスツズマブデルクステカンである、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
前記ＷＥＥ１阻害剤が、アダボセルチブ又は薬学的に許容されるその塩である、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
前記ＤＮＡ損傷剤が、ゲムシタビン又は薬学的に許容されるその塩であり、前記ＷＥＥ１阻害剤が、アダボセルチブ又は薬学的に許容されるその塩である、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記ＤＮＡ損傷剤が、トラスツズマブデルクステカンであり、前記ＷＥＥ１阻害剤が、アダボセルチブ又は薬学的に許容されるその塩である、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
２８日サイクルにおいて、１７５ｍｇのアダボセルチブが、１日目、２日目、８日目、９日目、１５日目、及び１６日目に前記患者に投与され、８００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビン又は薬学的に許容されるその塩が、１日目、８日目、及び１５日目に前記患者に投与される、請求項３０に記載の方法。
【請求項33】
２８日サイクルにおいて、１７５ｍｇのアダボセルチブが、１日目、２日目、８日目、９日目、１５日目、及び１６日目に前記患者に投与され、１，０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビン又は薬学的に許容されるその塩が、１日目、８日目、及び１５日目に前記患者に投与される、請求項３０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は一般に、がんを処置する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
ＷＥＥ１は、タンパク質キナーゼのセリン／トレオニンファミリーに属する核キナーゼである。ＷＥＥ１は、２つの異なる部位（Ｔｙｒ１５及びＴｈｒ１４）上のＣＤＫをリン酸化することによってサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）を阻害する。したがって、ＷＥＥ１は、有糸分裂開始及びＤＮＡ複製の開始、細胞サイズ、並びにＤＮＡ損傷チェックポイントの制御においてある役割を果たす。ＷＥＥ１の阻害剤は、単独療法として及び他のがん処置と組み合わせた、がんの処置のために試験されてきた。
【0003】
Ｓｃｈｌａｆｅｎ１１（ＳＬＦＮ１１）は、タンパク質のＳｃｈｌａｆｅｎファミリーに属し、ヒト及びいくつかの霊長類においてのみ発現する。がん細胞におけるＳＬＦＮ１１の不活性化は、ＤＮＡ損傷及び複製ストレスをもたらす抗がん剤に対する耐性をもたらすことが示されてきた。このように、ＳＬＦＮ１１は、異なるクラスのＤＮＡ損傷剤及びＰＡＲＰ阻害剤に対する感受性の決定要因である。非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３を参照されたい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0004】
【非特許文献1】Ｚｏｐｐｏｌｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ２０１２；１０９：１５０３０－３５
【非特許文献2】Ｍｕｒａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ２０１６；７：７６５３４－５０
【非特許文献3】Ｍｕｒａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ ２０１８；６９：３７１－８４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
いくつかのがん処置が開発され、承認されてきた。しかし、いくつかのがん処置は、患者の一部分においてのみ有効である。さらに、がん患者の一部分は、特定のがん処置に対して耐性となる。このように、がん処置が適当な患者を標的にすることができるように、がん処置に対して応答性である患者を同定する方法が必要とされている。さらに、一部の患者において観察されるがん処置に対する耐性を逆転させる方法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【0006】
上記の必要性は、本明細書に記載の方法によって満たされる。特に、本明細書において開示するのは、ａ）がんと診断された患者を選択することと；ｂ）患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損であるかどうかを決定することと；ｃ）患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、患者のがん細胞は、ＳＬＦＮ１１発現について陰性である。
【0007】
一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）がんと診断された患者を選択することと；ｂ）ＳＬＦＮ１１発現が、患者のＳＬＦＮ１１発現非がん細胞に対して患者のがん細胞においてより低いかどうかを決定することと；ｃ）ＳＬＦＮ１１発現が、患者のＳＬＦＮ１１発現非がん細胞に対して患者のがん細胞においてより低い場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、患者のがん細胞は、ＳＬＦＮ１１発現について陰性である。
【0008】
一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）がんと診断された患者を選択することと；ｂ）患者のがん細胞においてＳＬＦＮ１１の発現レベルを決定することと；ｃ）ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜１０％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルは、０％である。
【0009】
一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損であるかどうかを決定することと；ｂ）患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、ＤＮＡ損傷剤による処置に対して耐性である患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、患者のがん細胞は、ＳＬＦＮ１１発現について陰性である。
【0010】
一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）ＳＬＦＮ１１発現が、患者のＳＬＦＮ１１発現非がん細胞に対して患者のがん細胞においてより低いかどうかを決定することと；ｂ）ＳＬＦＮ１１発現が、患者のＳＬＦＮ１１発現非がん細胞に対して患者のがん細胞においてより低い場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、ＤＮＡ損傷剤による処置に対して耐性である患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、患者のがん細胞は、ＳＬＦＮ１１発現について陰性である。
【0011】
一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）患者のがん細胞においてＳＬＦＮ１１の発現レベルを決定することと；ｂ）ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜１０％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、ＤＮＡ損傷剤による処置に対して耐性である患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルは、０％である。
【0012】
一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルは、免疫組織化学、質量分析法、ｉｎ ｓｉｔｕでのハイブリダイゼーション、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ、逆転写定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ｑＰＣＲ）、マイクロアレイ分析、亜硫酸水素塩配列決定、又は定量的メチル化特異的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ－ＭＳＰ）によって決定される。特定の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルは、免疫組織化学によって決定される。
【0013】
本明細書において開示する方法の一部の実施形態では、がんは、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、黒色腫、肺がん、結腸直腸がん、結腸がん、直腸がん、前立腺がん、乳がん、脳がん、頭頚部がん、食道がん、甲状腺がん、胃がん、胆嚢がん、肝臓がん、絨毛がん、子宮体がん、子宮頸がん、腎臓がん、膀胱がん、睾丸がん、皮膚がん、神経芽細胞腫、骨肉腫、ユーイング肉腫、白血病、ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、及び頭頸部がんからなる群から選択される。
【0014】
本明細書において開示する方法の一部の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、エトポシド、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ピコプラチン、メトトレキサート、ドキソルビシン、ダウノルビシン、５－フルオロウラシル、イリノテカン、マイトマイシン、テモゾロミド、トポテカン、カンプトテシン、エピルビシン、イダルビシン、トラベクテジン、カペシタビン、ベンダムスチン、フルダラビン、ヒドロキシ尿素、トラスツズマブデルクステカン、及び薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される。
【0015】
本明細書において開示する方法の一部の実施形態では、ＷＥＥ１阻害剤は、アダボセルチブ又は薬学的に許容されるその塩である。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【図1A】それぞれ、ＤＵ１４５異種移植片組織（ＳＬＦＮ１１機能保全）及びＨＴ２９異種移植片組織（ＳＬＦＮ１１機能欠損）における、ＳＬＦＮ１１免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイからの陽性及び陰性染色を示す。
【図2A】ＳＬＦＮ１１野生型（ＷＴ）及びノックアウト（ＫＯ）ＤＵ１４５同質遺伝子細胞における、ＳＬＦＮ１１及びＧＡＰＤＨについての免疫ブロットを示す。ＫＯ１及びＫＯ２は、２つの異なるＣＲＩＳＰＲ－ＫＯクローンであった。
【図2B】ゲムシタビン（Ｇｅｍ．）及びアダボセルチブの組合せによる、野生型ＳＬＦＮ１１（ＷＴ）又はＳＬＦＮ１１ノックアウトＤＵ１４５細胞系（ＫＯ１及びＫＯ２）の処置からもたらされる、相乗作用スコア（Ｌｏｅｗｅ）を示す。
【図2C】エトポシド（ＥＴＰ）及びアダボセルチブによる、野生型ＳＬＦＮ１１（ＷＴ）又はＳＬＦＮ１１ノックアウトＤＵ１４５細胞系（ＫＯ１及びＫＯ２）の処置からもたらされる、相乗作用スコア（Ｌｏｅｗｅ）を示す。
【図2D】ＤＵ１４５同質遺伝子細胞における０．３６μＭのアダボセルチブの非存在下又は存在下での、示したＤＮＡ損傷剤（ゲムシタビン、エトポシド、カンプトテシン、シスプラチン、及びヒドロキシ尿素）の生存曲線を示す。
【図3A】ＳＬＦＮ１１機能欠損又はＳＬＦＮ１１機能保全である膵臓細胞系のパネルにおける、ゲムシタビン単独療法のｌｏｇ ＩＣ５０値を示す。
【図3B】ＳＬＦＮ１１機能欠損又はＳＬＦＮ１１機能保全である膵臓細胞系のパネルにおける、アダボセルチブ単独療法のｌｏｇ ＩＣ５０値を示す。
【図3C】ＳＬＦＮ１１機能欠損又はＳＬＦＮ１１機能保全である膵臓細胞系のパネルにおける、ゲムシタビン及びアダボセルチブの組合せについての相乗作用スコアを示す。
【発明を実施するための形態】
【0017】
本発明の実施形態を本明細書において示し、記載する一方で、このような実施形態はほんの一例として提供されることは当業者には明らかであろう。多数の変動、変更及び置換は、本発明から逸脱することなく、当業者には思い当たる。本明細書に記載されている実施形態に対する様々な代替物を用い得ることを理解すべきである。本明細書において使用されるセクションの見出しは単に編成の目的のためであり、記載する主題を限定するものとは解釈されない。
【0018】
定義
用語「処置する」、「処置すること」又は「処置」及び他の文法的同等物は、本明細書において使用する場合、疾患若しくは状態又はその１つ若しくは複数の症状を緩和、寛解若しくは改善させること、根底にある症状の代謝的原因を改善させること、疾患若しくは状態を阻害すること、疾患若しくは状態を軽減すること、疾患若しくは状態の退行をもたらすこと、疾患若しくは状態によってもたらされる状態を軽減すること、又は疾患若しくは状態の症状を停止することを含む。
用語「処置する」、「処置すること」又は「処置」及び他の文法的同等物は、本明細書において使用する場合、疾患若しくは状態又はその１つ若しくは複数の症状を緩和、寛解若しくは改善させること、根底にある症状の代謝的原因を改善させること、疾患若しくは状態を阻害すること、疾患若しくは状態を軽減すること、疾患若しくは状態の退行をもたらすこと、疾患若しくは状態によってもたらされる状態を軽減すること、又は疾患若しくは状態の症状を停止することを含む。
【0019】
用語「投与する」、「投与すること」、「投与」及びそれらの文法的同等物は、本明細書において使用する場合、本明細書において開示する医薬組成物を生物学的作用の望ましい部位に送達するために使用される方法を指す。
【0020】
用語「同時投与する」、「同時投与」、「と組み合わせて投与される」及びそれらの文法的同等物は、本明細書において使用する場合、単一の個体への活性剤の投与を包含することを意味し、他に特定しない限り、薬剤が同じ若しくは異なる投与経路によって、又は同じ若しくは異なる時間において投与される処置レジメンを含む。これらには、別々の組成物中での同時投与、別々の組成物中での異なる時間における投与、又は１種若しくは複数の活性剤が存在する組成物での投与が含まれる。
【0021】
用語「薬学的に許容される」は、本明細書において使用する場合、生物活性又は活性剤の特性を抑制せず、且つ相対的に無毒性である材料、例えば、担体又は賦形剤を指し、すなわち、材料は、望ましくない生物学的効果をもたらすか、又はそれが含有されている組成物の構成要素のいずれかと有害な様式で相互作用することを伴わずに個体へと投与し得る。
【0022】
用語「薬学的に許容される塩」は、本明細書において使用する場合、活性剤の遊離酸又は遊離塩基の生物学的有効性を保持し、且つ生物学的又はその他の点で望ましくなくはない塩を指す。活性剤は、無機塩基若しくは有機塩基、又は無機酸若しくは有機酸と反応して、薬学的に許容される塩を形成し得る。これらの塩は、最終的な単離及び精製の間にｉｎ ｓｉｔｕで、或いは別々に、精製された化合物を適切な無機塩基若しくは有機塩基、又は無機酸若しくは有機酸と反応させ、このように形成された塩を単離することによって調製することができる。
【0023】
用語「患者」、「対象」及び「個体」は、本明細書において互換的に使用される。本明細書において使用する場合、これらは、がんを患っているヒトを指す。
【0024】
本明細書において使用する場合、用語「ＳＬＦＮ１１の発現レベルは」ある量、例えば、０％であるとは、患者のがん組織における記述した量のがん細胞がＳＬＦＮ１１を発現していることを意味する。同様に、本明細書において使用する場合、用語「ＳＬＦＮ１１の発現レベルは、＜」ある量、例えば、１０％であるとは、患者のがん組織において記述した量未満のがん細胞がＳＬＦＮ１１を発現していることを意味する。
【0025】
本明細書において使用する場合、用語「ＳＬＦＮ１１機能欠損」は、遺伝子と関連する正常な表現型を示すのに、又はタンパク質について、その生理機能を示すのに不十分である、関連性のある患者、動物、組織、細胞などにおけるＳＬＦＮ１１の発現レベルを指す。前臨床モデルの状況において、ＳＬＦＮ１１遺伝子がノックアウト（ＫＯ）されている細胞又は動物は、「ＳＬＦＮ１１機能欠損」の例である。
【0026】
本明細書において使用する場合、用語「ＳＬＦＮ－１１機能保全」は、遺伝子と関連する正常な表現型を示すのに、又はタンパク質について、その生理機能を示すのに十分である、関連性のある患者、動物、組織、細胞などにおけるＳＬＦＮ１１の発現レベルを指す。前臨床モデルの状況において、ＳＬＦＮ１１遺伝子が正常レベルで発現している細胞又は動物、すなわち、野生型（ＷＴ）細胞又は動物は、「ＳＬＦＮ１１機能保全」の例である。
【0027】
処置の方法
一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）がんと診断された患者を選択することと；ｂ）患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損であるかどうかを決定することと；ｃ）患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、方法である。一部の実施形態では、患者のがん細胞は、ＳＬＦＮ１１発現について陰性である。
一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）がんと診断された患者を選択することと；ｂ）患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損であるかどうかを決定することと；ｃ）患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、方法である。一部の実施形態では、患者のがん細胞は、ＳＬＦＮ１１発現について陰性である。
【0028】
一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）がんと診断された患者を選択することと；ｂ）ＳＬＦＮ１１発現が、患者のＳＬＦＮ１１発現非がん細胞に対して患者のがん細胞においてより低いかどうかを決定することと；ｃ）ＳＬＦＮ１１発現が、患者のＳＬＦＮ１１発現非がん細胞に対して患者のがん細胞においてより低い場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、患者のがん細胞は、ＳＬＦＮ１１発現について陰性である。
【0029】
一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）がんと診断された患者を選択することと；ｂ）患者のがん細胞においてＳＬＦＮ１１の発現レベルを決定することと；ｃ）ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜２５％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）がんと診断された患者を選択することと；ｂ）患者のがん細胞においてＳＬＦＮ１１の発現レベルを決定することと；ｃ）ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜２０％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）がんと診断された患者を選択することと；ｂ）患者のがん細胞においてＳＬＦＮ１１の発現レベルを決定することと；ｃ）ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜１５％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）がんと診断された患者を選択することと；ｂ）患者のがん細胞においてＳＬＦＮ１１の発現レベルを決定することと；ｃ）ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜１０％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜９％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜８％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜７％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜６％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜５％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜４％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜３％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜２％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜１％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが０％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。
【0030】
一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損であるかどうかを決定することと；ｂ）患者のがん細胞がＳＬＦＮ１１機能欠損である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、ＤＮＡ損傷剤による処置に対して耐性である患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、患者のがん細胞は、ＳＬＦＮ１１発現について陰性である。
【0031】
一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）ＳＬＦＮ１１発現が、患者のＳＬＦＮ１１発現非がん細胞に対して患者のがん細胞においてより低いかどうかを決定することと；ｂ）ＳＬＦＮ１１発現が、患者のＳＬＦＮ１１発現非がん細胞に対して患者のがん細胞においてより低い場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、ＤＮＡ損傷剤による処置に対して耐性である患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、患者のがん細胞は、ＳＬＦＮ１１発現について陰性である。
【0032】
一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）患者のがん細胞においてＳＬＦＮ１１の発現レベルを決定することと；ｂ）ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜２５％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、ＤＮＡ損傷剤による処置に対して耐性である患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）患者のがん細胞においてＳＬＦＮ１１の発現レベルを決定することと；ｂ）ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜２０％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、ＤＮＡ損傷剤による処置に対して耐性である患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）患者のがん細胞においてＳＬＦＮ１１の発現レベルを決定することと；ｂ）ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜１５％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、ＤＮＡ損傷剤による処置に対して耐性である患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、本明細書において開示するのは、ａ）患者のがん細胞においてＳＬＦＮ１１の発現レベルを決定することと；ｂ）ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜１０％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を患者に同時投与することとを含む、ＤＮＡ損傷剤による処置に対して耐性である患者においてがんを処置する方法である。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜９％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜８％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜７％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜６％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜５％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜４％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜３％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜２％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが＜１％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルが０％である場合、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＮＡ損傷剤が同時投与される。
【0033】
本明細書において開示する方法において、ＳＬＦＮ１１の発現レベルは、当業者には公知の任意の適切な方法によって決定し得る。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルは、ｍＲＮＡ転写物レベル又はＤＮＡプロモーター過剰メチル化によって決定される。一部の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルは、免疫組織化学、質量分析法、ｉｎ ｓｉｔｕでのハイブリダイゼーション、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ、逆転写定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ｑＰＣＲ）、マイクロアレイ分析、亜硫酸水素塩配列決定、又は定量的メチル化特異的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ－ＭＳＰ）によって決定される。特定の実施形態では、ＳＬＦＮ１１の発現レベルは、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定される。
【0034】
疾患
本明細書に記載の方法は、種々のがんの処置に適用可能である。一部の実施形態では、がんは、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、黒色腫、肺がん、結腸直腸がん、結腸がん、直腸がん、前立腺がん、乳がん、脳がん、頭頚部がん、食道がん、甲状腺がん、胃がん、胆嚢がん、肝臓がん、絨毛がん、子宮体がん、子宮頸がん、腎臓がん、膀胱がん、睾丸がん、皮膚がん、神経芽細胞腫、骨肉腫、ユーイング肉腫、白血病、ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、及び頭頸部がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは、膵臓がんである。一部の実施形態では、がんは、卵巣がんである。一部の実施形態では、がんは、プラチナ耐性卵巣がんである。一部の実施形態では、がんは、子宮内膜がんである。一部の実施形態では、がんは、乳がんである。
本明細書に記載の方法は、種々のがんの処置に適用可能である。一部の実施形態では、がんは、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、黒色腫、肺がん、結腸直腸がん、結腸がん、直腸がん、前立腺がん、乳がん、脳がん、頭頚部がん、食道がん、甲状腺がん、胃がん、胆嚢がん、肝臓がん、絨毛がん、子宮体がん、子宮頸がん、腎臓がん、膀胱がん、睾丸がん、皮膚がん、神経芽細胞腫、骨肉腫、ユーイング肉腫、白血病、ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、及び頭頸部がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは、膵臓がんである。一部の実施形態では、がんは、卵巣がんである。一部の実施形態では、がんは、プラチナ耐性卵巣がんである。一部の実施形態では、がんは、子宮内膜がんである。一部の実施形態では、がんは、乳がんである。
【0035】
ＷＥＥ１阻害剤
アダボセルチブは、化学名２－アリル－（１－［６－（１－ヒドロキシ－１－メチルエチル）ピリジン－２－イル］－６－｛［４－（４－メチルピペラジン－１－イル）フェニル］アミノ｝－１，２－ジヒドロ－３Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－３－オン及び下記の化学構造
を有する。
アダボセルチブは、化学名２－アリル－（１－［６－（１－ヒドロキシ－１－メチルエチル）ピリジン－２－イル］－６－｛［４－（４－メチルピペラジン－１－イル）フェニル］アミノ｝－１，２－ジヒドロ－３Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－３－オン及び下記の化学構造
【化1】
【0036】
ＷＥＥ１の阻害剤としてのアダボセルチブの活性、様々ながんの処置における有用性、及び合成は、米国特許第７，８３４，０１９号明細書に記載されている。アダボセルチブの様々な結晶形態は、米国特許第８，７０３，７７９号明細書及び同第８，１９８，２８１号明細書に記載されている。一部の実施形態では、本明細書に記載されている方法において投与されるＷＥＥ１阻害剤は、アダボセルチブ又は薬学的に許容されるその塩である。一部の実施形態では、本明細書に記載されている方法において投与されるＷＥＥ１阻害剤は、アダボセルチブである。
【0037】
３－（２，６－ジクロロフェニル）－４－イミノ－７－［（２’－メチル－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－７’－イル）アミノ］－３，４－ジヒドロピリミド［４，５－ｄ］ピリミジン－２（１Ｈ）－オンは、下記の化学構造
を有するＷＥＥ１阻害剤である。
【化2】
【0038】
ＷＥＥ１の阻害剤としての３－（２，６－ジクロロフェニル）－４－イミノ－７－［（２’－メチル－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－７’－イル）アミノ］－３，４－ジヒドロピリミド［４，５－ｄ］ピリミジン－２（１Ｈ）－オンの活性、がんの処置における有用性、及び合成は、米国特許第８，４３６，００４号明細書に記載されている。一部の実施形態では、本明細書に記載されている方法において投与されるＷＥＥ１阻害剤は、３－（２，６－ジクロロフェニル）－４－イミノ－７－［（２’－メチル－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－７’－イル）アミノ］－３，４－ジヒドロピリミド［４，５－ｄ］ピリミジン－２（１Ｈ）－オンである。
【0039】
ＤＮＡ損傷剤
本明細書において使用する場合、「ＤＮＡ損傷剤」又は「ＤＤＡ」は、がん細胞のＤＮＡへの損傷をもたらすことによって機能するがん処置である。ＤＤＡは、ＤＮＡ架橋、ＤＮＡ複製の妨害、及びＤＮＡ合成の阻害を含めた種々の機序を介して作用する。本明細書に記載の方法において使用し得るＤＤＡの非限定的例は、ゲムシタビン、エトポシド、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ピコプラチン、メトトレキサート、ドキソルビシン、ダウノルビシン、５－フルオロウラシル、イリノテカン、マイトマイシン、テモゾロミド、トポテカン、カンプトテシン、エピルビシン、イダルビシン、トラベクテジン、カペシタビン、ベンダムスチン、フルダラビン、ヒドロキシ尿素、トラスツズマブデルクステカン、及び薬学的に許容されるその塩を含む。
本明細書において使用する場合、「ＤＮＡ損傷剤」又は「ＤＤＡ」は、がん細胞のＤＮＡへの損傷をもたらすことによって機能するがん処置である。ＤＤＡは、ＤＮＡ架橋、ＤＮＡ複製の妨害、及びＤＮＡ合成の阻害を含めた種々の機序を介して作用する。本明細書に記載の方法において使用し得るＤＤＡの非限定的例は、ゲムシタビン、エトポシド、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ピコプラチン、メトトレキサート、ドキソルビシン、ダウノルビシン、５－フルオロウラシル、イリノテカン、マイトマイシン、テモゾロミド、トポテカン、カンプトテシン、エピルビシン、イダルビシン、トラベクテジン、カペシタビン、ベンダムスチン、フルダラビン、ヒドロキシ尿素、トラスツズマブデルクステカン、及び薬学的に許容されるその塩を含む。
【0040】
併用療法
一部の実施形態では、本明細書において開示する方法において同時投与されるＷＥＥ１阻害剤及びＤＤＡは、１つ若しくは複数のさらなるがん療法と共に同時投与される。医師は、患者の特定の特徴及び処置されるがんによって、患者に同時投与される１つ若しくは複数のさらなるがん療法を決定することができる。１種若しくは複数のさらなるがん療法は、本明細書に記載の方法によるＷＥＥ１阻害剤及びＤＤＡの投与と同時に、前に、又は後に投与し得る。一部の実施形態では、１つ若しくは複数のさらなるがん療法は、電離放射線、チューブリン相互作用剤、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤、スピンドルチェックポイント阻害剤、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ阻害剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、Ｂｃｌ－２阻害剤、熱ショックタンパク質モジュレーター、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、抗エストロゲン剤、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、抗アンドロゲン剤、ＬＨＲＨアゴニスト、５α－レダクターゼ阻害剤、チトクロムＰ４５０Ｃ１７リアーゼ阻害剤、アロマターゼ阻害剤、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤、ｅｒｂＢ１及びｅｒｂＢ２デュアル阻害剤、ＡＢＬキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦＲ－１阻害剤、ＶＥＧＦＲ－２阻害剤、ポロ様キナーゼ阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ｃ－ＭＥＴキナーゼ阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、並びにｍＴＯＲ阻害剤から選択される。
一部の実施形態では、本明細書において開示する方法において同時投与されるＷＥＥ１阻害剤及びＤＤＡは、１つ若しくは複数のさらなるがん療法と共に同時投与される。医師は、患者の特定の特徴及び処置されるがんによって、患者に同時投与される１つ若しくは複数のさらなるがん療法を決定することができる。１種若しくは複数のさらなるがん療法は、本明細書に記載の方法によるＷＥＥ１阻害剤及びＤＤＡの投与と同時に、前に、又は後に投与し得る。一部の実施形態では、１つ若しくは複数のさらなるがん療法は、電離放射線、チューブリン相互作用剤、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤、スピンドルチェックポイント阻害剤、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ阻害剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、Ｂｃｌ－２阻害剤、熱ショックタンパク質モジュレーター、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、抗エストロゲン剤、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、抗アンドロゲン剤、ＬＨＲＨアゴニスト、５α－レダクターゼ阻害剤、チトクロムＰ４５０Ｃ１７リアーゼ阻害剤、アロマターゼ阻害剤、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤、ｅｒｂＢ１及びｅｒｂＢ２デュアル阻害剤、ＡＢＬキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦＲ－１阻害剤、ＶＥＧＦＲ－２阻害剤、ポロ様キナーゼ阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ｃ－ＭＥＴキナーゼ阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、並びにｍＴＯＲ阻害剤から選択される。
【実施例】
【0041】
下記に提供する実施例は、本開示をさらに例証及び例示し、特許請求の範囲を決して限定しない。
【0042】
実施例１：ＳＬＦＮ１１に対して特異的なＦＦＰＥ ＩＨＣアッセイの開発、及びＤＵ１４５ＳＬＦＮ１１ＫＯ細胞系の特性決定。
方法
ＤＵ１４５前立腺がん細胞におけるＳＬＦＮ１１のノックアウトは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９によって行った。エクソン４（ＧＣＧＴＴＣＣＡＴＧＧＡＣＴＣＡＡＧＡＧＡＧＧ、プロトスペーサー隣接モチーフは太字）におけるＳＬＦＮ１１を標的とするｓｇＲＮＡは、組織内のＣＲＩＳＰＲ３ソフトウェアで設計し、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＩＤＴ）によって合成し、ＣＡＳ９及びＧＦＰカセットを含有するベクター（ａｚＰＧＥ０２－Ｃａｓ９－Ｔ２Ａ－ＧＦＰ）中にクローン化した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ベクターをそれに続いてＤＵ１４５前立腺がん細胞中にトランスフェクトした。４８時間後、最も高い緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）発現を伴う細胞プールを、９６ウェルプレート中に単一細胞ソーティングを行った。それらの野生型対立遺伝子を失ったクローンを増大させ、単一のクローンから細胞系を得た。２つのＳＬＦＮ１１機能欠損クローンを、薬理学的研究（クローンＫＯ１及びクローンＫＯ２）のために特性決定及び選択した。ＳＬＦＮ１１機能保全（ｗｔ）並びにＳＬＦＮ１１機能欠損（ＫＯ１及びＫＯ２）からの細胞ライセートを調製し、標準的なＳＤＳ－ＰＡＧＥ免疫ブロットによって分析した。免疫ブロット検出のために使用した抗体は、抗ＳＬＦＮ１１抗体（ａｂ１２１７３１、１：１０００、Ａｂｃａｍ）及び、ローディングコントロールとして、抗ＧＡＰＤＨ抗体（１４Ｃ１０、１：２０００、ＣＳＴ）であった。
方法
ＤＵ１４５前立腺がん細胞におけるＳＬＦＮ１１のノックアウトは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９によって行った。エクソン４（ＧＣＧＴＴＣＣＡＴＧＧＡＣＴＣＡＡＧＡＧＡＧＧ、プロトスペーサー隣接モチーフは太字）におけるＳＬＦＮ１１を標的とするｓｇＲＮＡは、組織内のＣＲＩＳＰＲ３ソフトウェアで設計し、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＩＤＴ）によって合成し、ＣＡＳ９及びＧＦＰカセットを含有するベクター（ａｚＰＧＥ０２－Ｃａｓ９－Ｔ２Ａ－ＧＦＰ）中にクローン化した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ベクターをそれに続いてＤＵ１４５前立腺がん細胞中にトランスフェクトした。４８時間後、最も高い緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）発現を伴う細胞プールを、９６ウェルプレート中に単一細胞ソーティングを行った。それらの野生型対立遺伝子を失ったクローンを増大させ、単一のクローンから細胞系を得た。２つのＳＬＦＮ１１機能欠損クローンを、薬理学的研究（クローンＫＯ１及びクローンＫＯ２）のために特性決定及び選択した。ＳＬＦＮ１１機能保全（ｗｔ）並びにＳＬＦＮ１１機能欠損（ＫＯ１及びＫＯ２）からの細胞ライセートを調製し、標準的なＳＤＳ－ＰＡＧＥ免疫ブロットによって分析した。免疫ブロット検出のために使用した抗体は、抗ＳＬＦＮ１１抗体（ａｂ１２１７３１、１：１０００、Ａｂｃａｍ）及び、ローディングコントロールとして、抗ＧＡＰＤＨ抗体（１４Ｃ１０、１：２０００、ＣＳＴ）であった。
【0043】
ＤＵ１４５（ＳＬＦＮ１１機能保全）及びＨＴ２９（ＳＬＦＮ１１機能欠損）異種移植片を、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｇｌｏｂａｌ Ｂｉｏｅｔｈｉｃｓ ｐｏｌｉｃｙ、ＵＫ Ｈｏｍｅ Ｏｆｆｉｃｅ ｌｅｇｉｓｌａｔｉｏｎ及びＡｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ Ａｃｔ１９８６（ＡＳＰＡ）に従って成長させた。ＳＬＦＮ１１免疫組織化学を、ホルマリン固定したパラフィンに包埋した組織の４μＭ厚さの腫瘍切片上で行い、ＥＲ１抗原賦活化を使用してＢｏｎｄ ＲＸ（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）上で遂行した。スライドは、異種移植片組織からの切片について０．５μｇ／ｍｌで、及びヒト組織からの切片について２．５μｇ／ｍｌで、一次ウサギポリクローナル抗ＳＬＦＮ１１抗体（Ａｂｃａｍ、ａｂ１２１７３１）で染色した。デジタルスライドをＡｐｅｒｉｏ ＡＴ２スキャナー（Ｌｅｉｃａ）で２０倍対物レンズを使用して取得した。
【0044】
結果
ＳＬＦＮ１１陽性ＤＵ１４５及びＳＬＦＮ１１陰性ＨＴ２９組織のＳＬＦＮ１１免疫組織化学によって、これらの２つのモデルにおけるＳＬＦＮ１１のそれぞれの存在及び不存在を確認した（図１Ａ）。
ＳＬＦＮ１１陽性ＤＵ１４５及びＳＬＦＮ１１陰性ＨＴ２９組織のＳＬＦＮ１１免疫組織化学によって、これらの２つのモデルにおけるＳＬＦＮ１１のそれぞれの存在及び不存在を確認した（図１Ａ）。
【0045】
実施例２：ＤＵ１４５ＳＬＦＮ１１ＫＯ細胞におけるＤＤＡに対する耐性は、ＷＥＥ１阻害剤との併用処置によって逆転させることができる。
方法
アダボセルチブは、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａにおいて合成した。ゲムシタビン、シスプラチン、ヒドロキシ尿素（ＨＵ）、及びエトポシドはＴｏｃｒｉｓから得て、カンプトテシンはＳｉｇｍａから得た。ゲムシタビン（５０ｍＭ）、シスプラチン（１．６７ｍＭ）及びＨＵ（１Ｍ）のストック溶液を、水溶液中で調製した；全ての他の薬物は、１０ｍＭ濃度でジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（１０ｍＭ）に溶解させた。
方法
アダボセルチブは、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａにおいて合成した。ゲムシタビン、シスプラチン、ヒドロキシ尿素（ＨＵ）、及びエトポシドはＴｏｃｒｉｓから得て、カンプトテシンはＳｉｇｍａから得た。ゲムシタビン（５０ｍＭ）、シスプラチン（１．６７ｍＭ）及びＨＵ（１Ｍ）のストック溶液を、水溶液中で調製した；全ての他の薬物は、１０ｍＭ濃度でジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（１０ｍＭ）に溶解させた。
【0046】
ＤＵ１４５同質遺伝子細胞（ＷＴ及びＳＬＦＮ１１ＫＯ）を３８４ウェルプレートにおいて播種し、一晩沈降させた。図２Ａは、実験において使用したＳＬＦＮ１１ＷＴ及びＫＯ ＤＵ１４５同質遺伝子細胞についての免疫ブロットを示す。ＫＯ１及びＫＯ２は、２つの異なるＣＲＩＳＰＲ－ＫＯクローンであった。Ｅｃｈｏ５５５（ＬａｂＣｙｔｅ）を使用して３μＭのアダボセルチブ、０．１μＭのゲムシタビン、及び１μＭのエトポシドの最高用量を伴う６×６の濃度マトリックスで、細胞に化合物溶液を与えた。連続的処置の５日後、細胞生存率を生死判定ＳｙＴｏｘグリーンアッセイ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）によって決定した。生細胞の数は、死亡及び総リードを減算することによって計算した。この方法論を使用して、処置の時点（０日目）におけるウェル毎の細胞数をまた決定した。等式［１－（Ｔｉ－Ｔｚ）／（Ｃ－Ｔｚ）］×１００を使用してデータを示し、値について、Ｔｉ≧Ｔｚ及び［１－（Ｔｉ－Ｔｚ）／Ｔｚ］×１００であり、濃度について、Ｔｉ＜Ｔｚ、×１００であり、式中、Ｔｉ＝化合物処理された細胞であり；Ｔｚ＝０ｈ時点における細胞であり、Ｃ＝対照細胞である。これは、生細胞数の０～２００％のスケールを与え、ここで、０～１００％は、成長阻害を表し、１００～２００％は、細胞死滅を表す。
【0047】
組合せ活性（相乗作用）を、Ｇｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（Ｇｅｎｅｄａｔａ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）ソフトウェアにおいてＬｏｅｗｅ用量相加性モデルを使用して計算した。このモデルは、２つの単独療法に基づいて２つの化合物の効果が相加的であった場合の、予想される結果を計算する。過剰スコアは、実験結果がどのくらい予測される相加効果を上回るかを反映する。このプログラムは組合せについて相乗作用スコアを提供し、これは過剰スコアの強さ及び用量依存性の両方を反映する。スコア＞５は、相乗的であると見なされる。
【0048】
９６ウェルプレートにおける細胞生存実験のために、ＨＰディスペンサーを使用した化合物投与に続いて細胞を９６ウェルプレートに播種した。７２時間後、エンドポイントＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ発光アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で細胞生存率を決定した。成長百分率は、等式（Ｔ－Ｔ０）／（Ｃ－Ｔ０）×１００を使用して計算したが、式中、Ｔ＝化合物処理された細胞であり；Ｔ０＝０ｈ時点における細胞であり、Ｃ＝対照細胞である。用量応答曲線を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにおいてプロットした。
【0049】
結果
アダボセルチブ及びゲムシタビン又はエトポシドによる併用処置は、野生型ＳＬＦＮ１１機能保全細胞と比較したとき、ＳＬＦＮ１１ＫＯ細胞においてより高い相乗作用スコアを一貫して生じさせた（それぞれ、図２Ｂ及び２Ｃ）。より高い相乗作用スコアは、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＤＡによる併用処置が、野生型細胞に対して、いずれかの薬剤による単独療法の効果に対して、ＳＬＦＮ１１ＫＯ細胞においてより有効であることを示す。組合せ相乗作用実験を、より低いスループットアッセイフォーマットによって検証した。異なる示したＤＤＡ（ゲムシタビン、エトポシド、カンプトテシン、シスプラチン、及びヒドロキシ尿素）とアダボセルチブとの組合せについて、結果を図２Ｄにおいて示す。全ての場合において、ＳＬＦＮ１１ＫＯ細胞（灰色の点線）は、野生型細胞（灰色の実線）と比較したとき、ＤＤＡのそれぞれに対して耐性であることが見出された。ＤＤＡとアダボセルチブの組合せは、ＳＬＦＮ１１機能保全細胞において有意な抗増殖性効果を与えなかった（黒色の実線）。しかし、ＳＬＦＮ１１ＫＯ細胞において、同じ組合せは、ＳＬＦＮ１１機能欠損細胞におけるＤＤＡ単独療法と比較して有意な曲線シフトをもたらした（黒色の点線で示す）が、これらの細胞は、アダボセルチブを同時投与することによって、ＤＤＡ処置に対して完全に再感作させることができることが確認される。
アダボセルチブ及びゲムシタビン又はエトポシドによる併用処置は、野生型ＳＬＦＮ１１機能保全細胞と比較したとき、ＳＬＦＮ１１ＫＯ細胞においてより高い相乗作用スコアを一貫して生じさせた（それぞれ、図２Ｂ及び２Ｃ）。より高い相乗作用スコアは、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＤＡによる併用処置が、野生型細胞に対して、いずれかの薬剤による単独療法の効果に対して、ＳＬＦＮ１１ＫＯ細胞においてより有効であることを示す。組合せ相乗作用実験を、より低いスループットアッセイフォーマットによって検証した。異なる示したＤＤＡ（ゲムシタビン、エトポシド、カンプトテシン、シスプラチン、及びヒドロキシ尿素）とアダボセルチブとの組合せについて、結果を図２Ｄにおいて示す。全ての場合において、ＳＬＦＮ１１ＫＯ細胞（灰色の点線）は、野生型細胞（灰色の実線）と比較したとき、ＤＤＡのそれぞれに対して耐性であることが見出された。ＤＤＡとアダボセルチブの組合せは、ＳＬＦＮ１１機能保全細胞において有意な抗増殖性効果を与えなかった（黒色の実線）。しかし、ＳＬＦＮ１１ＫＯ細胞において、同じ組合せは、ＳＬＦＮ１１機能欠損細胞におけるＤＤＡ単独療法と比較して有意な曲線シフトをもたらした（黒色の点線で示す）が、これらの細胞は、アダボセルチブを同時投与することによって、ＤＤＡ処置に対して完全に再感作させることができることが確認される。
【0050】
実施例３：ＳＬＦＮ１１機能欠損細胞系におけるゲムシタビンに対する耐性は、ＷＥＥ１阻害剤との併用処置によって逆転させることができる。
方法
ＳＬＦＮ１１ＲＮＡ ｓｅｑデータ（ｌｏｇ２ＲＰＫＭ値）は、ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ（ＣＣＬＥ）（Ｂａｒｒｅｔｉｎａ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１２；４８３：６０３－６０７）から、並びに薬物応答データ（ｌｏｇ（ＩＣ５０）及び用量応答曲線下面積（ＡＵＣ））は、がんデータベースにおける薬物感受性（Ｙａｎｇ Ｗ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，２０１３；４１：Ｄ９５５－６１）からダウンロードした。１未満のＣＣＬＥ ＲＮＡ ｓｅｑ ｌｏｇ２ＲＰＫＭ値を有する細胞系は、ＳＬＦＮ１１機能欠損であると定義し、１超のｌｏｇ２ＲＰＫＭ値を有する細胞系は、ＳＬＦＮ１１機能保全であると定義した。３８４ウェルプレートにおける１９の膵臓細胞系に、Ｅｃｈｏ５５５（ＬａｂＣｙｔｅ）を使用して６×６の濃度マトリックスで増加する濃度のアダボセルチブ及びゲムシタビンを与えた。用量範囲は、アダボセルチブについて０～３μＭ、及びゲムシタビンについて０～０．３μＭであった；いずれにしても、最高用量からの１：３希釈を行った。連続的処置の５日後に、細胞生存率を、生死判定ＳｙＴｏｘグリーンアッセイ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）によって決定した。相乗作用は、上記のようなＬｏｅｗｅ用量相加性モデルを使用してＧｅｎｅｄａｔａ ｓｃｒｅｅｎｅｒソフトウェアにおいて分析した。
方法
ＳＬＦＮ１１ＲＮＡ ｓｅｑデータ（ｌｏｇ２ＲＰＫＭ値）は、ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ（ＣＣＬＥ）（Ｂａｒｒｅｔｉｎａ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１２；４８３：６０３－６０７）から、並びに薬物応答データ（ｌｏｇ（ＩＣ５０）及び用量応答曲線下面積（ＡＵＣ））は、がんデータベースにおける薬物感受性（Ｙａｎｇ Ｗ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，２０１３；４１：Ｄ９５５－６１）からダウンロードした。１未満のＣＣＬＥ ＲＮＡ ｓｅｑ ｌｏｇ２ＲＰＫＭ値を有する細胞系は、ＳＬＦＮ１１機能欠損であると定義し、１超のｌｏｇ２ＲＰＫＭ値を有する細胞系は、ＳＬＦＮ１１機能保全であると定義した。３８４ウェルプレートにおける１９の膵臓細胞系に、Ｅｃｈｏ５５５（ＬａｂＣｙｔｅ）を使用して６×６の濃度マトリックスで増加する濃度のアダボセルチブ及びゲムシタビンを与えた。用量範囲は、アダボセルチブについて０～３μＭ、及びゲムシタビンについて０～０．３μＭであった；いずれにしても、最高用量からの１：３希釈を行った。連続的処置の５日後に、細胞生存率を、生死判定ＳｙＴｏｘグリーンアッセイ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）によって決定した。相乗作用は、上記のようなＬｏｅｗｅ用量相加性モデルを使用してＧｅｎｅｄａｔａ ｓｃｒｅｅｎｅｒソフトウェアにおいて分析した。
【0051】
結果
実施例２において提示した結果は、膵臓がん細胞系のパネルにおいて検証した。このパネルにおいて、ゲムシタビン単独療法による用量応答処置によって、ＳＬＦＮ１１機能欠損細胞系は、ＳＬＦＮ１１機能保全細胞より、平均して１００分の１より感受性でないことが見出された（図３Ａ）。ＳＬＦＮ１１機能欠損及びＳＬＦＮ１１機能保全膵臓がん細胞系は、アダボセルチブ単独療法処置に対して同じ応答を示した（図３Ｂ）。しかし、ゲムシタビン及びアダボセルチブによる併用処置は、ＳＬＦＮ１１機能保全膵臓がん細胞よりＳＬＦＮ１１機能欠損膵臓がん細胞において有意により相乗的であった（図３Ｃ）。結果は、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＤＡによる併用療法が、ＷＥＥ１阻害剤又はＤＤＡによる単独療法と比較して、ＳＬＦＮ１１機能欠損がん細胞を有する患者においてより有効であることが予想されることを示す。
実施例２において提示した結果は、膵臓がん細胞系のパネルにおいて検証した。このパネルにおいて、ゲムシタビン単独療法による用量応答処置によって、ＳＬＦＮ１１機能欠損細胞系は、ＳＬＦＮ１１機能保全細胞より、平均して１００分の１より感受性でないことが見出された（図３Ａ）。ＳＬＦＮ１１機能欠損及びＳＬＦＮ１１機能保全膵臓がん細胞系は、アダボセルチブ単独療法処置に対して同じ応答を示した（図３Ｂ）。しかし、ゲムシタビン及びアダボセルチブによる併用処置は、ＳＬＦＮ１１機能保全膵臓がん細胞よりＳＬＦＮ１１機能欠損膵臓がん細胞において有意により相乗的であった（図３Ｃ）。結果は、ＷＥＥ１阻害剤及びＤＤＡによる併用療法が、ＷＥＥ１阻害剤又はＤＤＡによる単独療法と比較して、ＳＬＦＮ１１機能欠損がん細胞を有する患者においてより有効であることが予想されることを示す。
【図1A】
【図2A-2B】
【図2C】
【図2D】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【国際調査報告】