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特表2023-500326骨髄増殖性腫瘍の治療のためのヤヌスキナーゼ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤の使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-01-05
(54)【発明の名称】骨髄増殖性腫瘍の治療のためのヤヌスキナーゼ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤の使用
(51)【国際特許分類】
A61K 45/06 20060101AFI20221223BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20221223BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20221223BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20221223BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20221223BHJP
A61K 31/506 20060101ALI20221223BHJP
A61K 31/529 20060101ALI20221223BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20221223BHJP
A61K 31/5377 20060101ALI20221223BHJP
A61K 31/7125 20060101ALI20221223BHJP
C12N 15/113 20100101ALN20221223BHJP
【ＦＩ】
A61K45/06
A61P35/00
A61P35/02
A61P43/00 121
A61K31/519
A61K31/506
A61K31/529
A61K31/7088
A61K31/5377
A61K31/7125
C12N15/113 130Z
C12N15/113 ZNA
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022525704
(86)(22)【出願日】2020-11-03
(85)【翻訳文提出日】2022-06-08
(86)【国際出願番号】 US2020058718
(87)【国際公開番号】W WO2021091904
(87)【国際公開日】2021-05-14
(31)【優先権主張番号】62/930,251
(32)【優先日】2019-11-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】595161223
【氏名又は名称】ジェロン・コーポレーション
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＲＯＮ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】504320190
【氏名又は名称】アイカーン スクール オブ メディシン アット マウント シナイ
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(72)【発明者】
【氏名】ワン， シャオリ
(72)【発明者】
【氏名】ファン， フェイ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA20
4C084MA02
4C084NA05
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZB271
4C084ZB272
4C084ZC751
4C084ZC752
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC42
4C086BC73
4C086CB05
4C086CB22
4C086EA16
4C086GA07
4C086GA09
4C086GA12
4C086GA16
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZB27
4C086ZC75
(57)【要約】
本開示の態様は、骨髄増殖性腫瘍を治療するための方法を含む。特定の実施形態による方法は、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤と、オリゴヌクレオチドならびにオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合した脂質部分を含むテロメラーゼ阻害剤と、を対象に共投与することを含む。アポトーシスを誘導するのに十分な量のＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤と細胞を接触させることによって骨髄増殖性腫瘍細胞のアポトーシスを誘導するための方法も、記載される。本方法を実施するためのＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤を有する組成物も提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
骨髄増殖性腫瘍を有する対象を治療する方法であって、前記方法が、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤と、オリゴヌクレオチドならびに前記オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合した脂質部分を含むテロメラーゼ阻害剤と、を対象に共投与することを含む、方法。
【請求項2】
前記ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤が、同時に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ＪＡＫ阻害剤および前記テロメラーゼ阻害剤が、順次投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
前記テロメラーゼ阻害剤が、前記ＪＡＫ阻害剤が投与された後に投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
前記ＪＡＫ阻害剤が、前記テロメラーゼ阻害剤の後に投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項6】
前記テロメラーゼ阻害剤が、前記ＪＡＫ阻害剤が前記対象に投与される同じ日に、前記対象に投与される、請求項３～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記テロメラーゼ阻害剤が、前記ＪＡＫ阻害剤が前記対象に投与された約０～約１３日後に、前記対象に投与される、請求項３または４に記載の方法。
【請求項8】
前記方法が、１日目にＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与量およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与量を投与することと、
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与量を前記１日目の後に約２０日～約２７日の期間にわたって１日当たり１回または２回投与することと、を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項9】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記１日目の後に約２０日～約２７日の期間にわたって１日当たり１回投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の前記投与量が、前記１日目に２回投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項11】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記１日目の後に約２０日～約２７日の期間にわたって１日当たり２回投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記方法が、２１日を含む、請求項８～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記方法が、２８日を含む、請求項８～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記方法が、１回以上繰り返される、請求項８～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記方法が、５回以上繰り返される、請求項８～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記方法が、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を約１４日～２１日の期間にわたって１日当たり１回または２回前記対象に投与することと、
ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量後約１日～約７日の期間中に１つ以上の用量のテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することと、を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項17】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記対象に１日当たり１回投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記対象に１日当たり２回投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項19】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記対象に１４日間投与される、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記対象に２１日間投与される、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記方法が、１回以上繰り返される、請求項１６～２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記方法が、５回以上繰り返される、請求項１６～２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
前記方法が、１日目にテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与量を投与することと、
ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与量を前記１日目の後に約２０日～約２７日の期間にわたって１日当たり１回または２回投与することと、を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項24】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記１日目の後に約２０日～約２７日の期間にわたって１日当たり１回投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項25】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記１日目の後に約２０日～約２７日の期間にわたって１日当たり２回投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項26】
前記方法が、２１日を含む、請求項２３～２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項27】
前記方法が、２８日を含む、請求項２３～２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記方法が、１回以上繰り返される、請求項２３～２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
前記方法が、５回以上繰り返される、請求項２３～２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
前記ＪＡＫ阻害剤が、約５ｍｇ／日～約６００ｍｇ／日の投与量で前記対象に投与される、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記ＪＡＫ阻害剤が、約１０ｍｇ／日～約４００ｍｇ／日の投与量で前記対象に投与される、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
前記テロメラーゼ阻害剤が、約４ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの投与量で前記対象に投与される、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
前記テロメラーゼ阻害剤が、約７．５ｍｇ／ｋｇ～約９．４ｍｇ／ｋｇの投与量で前記対象に投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
前記テロメラーゼ阻害剤が、約９．４ｍｇ／ｋｇの投与量で前記対象に投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項35】
前記テロメラーゼ阻害剤が、約１時間～約３時間の期間をかけて静脈内注入によって前記対象に投与される、請求項３２～３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項36】
前記テロメラーゼ阻害剤が、約２時間の期間をかけて静脈内注入によって前記対象に投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
前記ＪＡＫ阻害剤が、前記対象に１日当たり１回投与される、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項38】
前記ＪＡＫ阻害剤が、約１日～約２１日の期間にわたって１日当たり１回前記対象に投与される、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
前記ＪＡＫ阻害剤が、約７日～約１４日の期間にわたって１日当たり１回前記対象に投与される、請求項３８に記載の方法。
【請求項40】
前記ＪＡＫ阻害剤が、前記対象に１日当たり２回投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項41】
前記ＪＡＫ阻害剤が、約１日～約２１日の期間にわたって１日当たり２回前記対象に投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項42】
前記ＪＡＫ阻害剤が、約７日～約１４日の期間にわたって１日当たり２回前記対象に投与される、請求項４１に記載の方法。
【請求項43】
前記ＪＡＫ阻害剤が、ルキソリチニブ、フェドラチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、またはそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項44】
前記ＪＡＫ阻害剤が、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩である、請求項４３に記載の方法。
【請求項45】
前記ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩が、対象に、前記対象が約１００×１０９／Ｌ血小板未満のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回５ｍｇ、
前記対象が約１００×１０９／Ｌ血小板～約２００×１０９／Ｌ血小板のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回１５ｍｇ、かつ
前記対象が約２００×１０９／Ｌ血小板超のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回２０ｍｇの投与量で投与される、請求項４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項46】
前記テロメラーゼ阻害剤が、前記対象に３週間ごとに１回投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項47】
前記テロメラーゼ阻害剤が、前記対象に４週間ごとに１回投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項48】
前記テロメラーゼ阻害剤の前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホラミデートヌクレオシド間結合を含む、請求項１～４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項49】
前記テロメラーゼ阻害剤の前記脂質部分が、リンカーを介して前記オリゴヌクレオチドの前記５’および／または３’末端に結合している、請求項１～４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項50】
前記リンカーが、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーである、請求項４９に記載の方法。
【請求項51】
前記テロメラーゼ阻害剤の前記脂質部分が、パルミトイル（Ｃ１６）部分である、請求項１～５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項52】
前記テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１～５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項53】
前記テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットナトリウムである、請求項５２に記載の方法。
【請求項54】
前記方法が、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を０日～２１日の期間にわたって１日当たり１回または２回前記対象に投与することと、
ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の７日以内に、１用量以上のイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することと、を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項55】
ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩が、前記対象に１日当たり１回投与される、請求項５４に記載の方法。
【請求項56】
ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩が、前記対象に１日当たり２回投与される、請求項５４に記載の方法。
【請求項57】
イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩が、３週間ごとに１回投与される、請求項５４～５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項58】
イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩が、４週間ごとに１回投与される、請求項５４～５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項59】
前記骨髄増殖性腫瘍が、骨髄線維症（ＭＦ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性多血症（ＰＶ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病、および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）から選択される、請求項１～５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項60】
前記骨髄増殖性腫瘍が、骨髄線維症である、請求項５９に記載の方法。
【請求項61】
前記骨髄増殖性腫瘍が、原発性骨髄線維症である、請求項６０に記載の方法。
【請求項62】
骨髄増殖性腫瘍を有すると対象を診断することをさらに含む、請求項１～６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項63】
前記方法が、骨髄線維症を有すると対象を診断することを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項64】
前記方法が、原発性骨髄線維症を有すると対象を診断することを含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項65】
骨髄増殖性腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、前記方法が、アポトーシスを誘導するのに十分な量のヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤、ならびにオリゴヌクレオチドと前記オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合した脂質部分とを含む、テロメラーゼ阻害剤と、前記細胞を接触させることを含む、方法。
【請求項66】
前記骨髄増殖性腫瘍細胞が、骨髄線維症造血幹細胞（ＨＳＣ）または悪性造血前駆細胞（ＨＰＣ）である、請求項６５に記載の方法。
【請求項67】
前記ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤および前記テロメラーゼ阻害剤が、前記骨髄増殖性腫瘍細胞とインビトロで接触する、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項68】
前記ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤が、対象における前記骨髄増殖性腫瘍細胞と接触し、前記方法が、前記ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤および前記テロメラーゼ阻害剤を前記対象に共投与することを含む、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項69】
前記ＪＡＫ阻害剤および前記テロメラーゼ阻害剤が、同時に投与される、請求項６８に記載の方法。
【請求項70】
前記ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤が、順次投与される、請求項６８に記載の方法。
【請求項71】
前記テロメラーゼ阻害剤が、前記ＪＡＫ阻害剤が投与された後に投与される、請求項７０に記載の方法。
【請求項72】
前記ＪＡＫ阻害剤が、前記テロメラーゼ阻害剤の後に投与される、請求項７０に記載の方法。
【請求項73】
前記テロメラーゼ阻害剤が、前記ＪＡＫ阻害剤が前記対象に投与される同じ日に、前記対象に投与される、請求項７０～７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項74】
前記テロメラーゼ阻害剤が、前記ＪＡＫ阻害剤が前記対象に投与された約０～約１３日後に、前記対象に投与される、請求項７０～７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項75】
前記方法が、１日目にＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与量およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与量を投与することと、
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与量を前記１日目の後に約２０日～約２７日の期間にわたって１日当たり１回または２回投与することと、を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項76】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記１日目の後に約２０日～約２７日の期間にわたって１日当たり１回投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項77】
ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の前記投与量が、前記１日目に２回投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項78】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記１日目の後に約２０日～約２７日の期間にわたって１日当たり２回投与される、請求項７７に記載の方法。
【請求項79】
前記方法が、２１日を含む、請求項７５～７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項80】
前記方法が、２８日を含む、請求項７５～７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項81】
前記方法が、１回以上繰り返される、請求項７５～８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項82】
前記方法が、５回以上繰り返される、請求項７５～８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項83】
前記方法が、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を約１４日～２１日の期間にわたって１日当たり１回または２回前記対象に投与することと、
ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量から約１日～約７日の期間中に１用量以上のテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することと、を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項84】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記対象に１日当たり１回投与される、請求項８３に記載の方法。
【請求項85】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記対象に１日当たり２回投与される、請求項８３に記載の方法。
【請求項86】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記対象に１４日間投与される、請求項８３～８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項87】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記対象に２１日間投与される、請求項８３～８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項88】
前記方法が、１回以上繰り返される、請求項８３～８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項89】
前記方法が、５回以上繰り返される、請求項８３～８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項90】
前記方法が、１日目にテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与量を投与することと、
ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与量を前記１日目の後に約２０日～約２７日の期間にわたって１日当たり１回または２回投与することと、を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項91】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記１日目の後に約２０日～約２７日の期間にわたって１日当たり１回投与される、請求項９０に記載の方法。
【請求項92】
前記ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、前記１日目の後に約２０日～約２７日の期間にわたって１日当たり２回投与される、請求項９０に記載の方法。
【請求項93】
前記方法が、２１日を含む、請求項９０～９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項94】
前記方法が、２８日を含む、請求項９０～９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項95】
前記方法が、１回以上繰り返される、請求項９０～９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項96】
前記方法が、５回以上繰り返される、請求項９０～９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項97】
前記ＪＡＫ阻害剤が、約５ｍｇ／日～約６００ｍｇ／日の投与量で前記対象に投与される、請求項６５～９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項98】
前記ＪＡＫ阻害剤が、約１０ｍｇ／日～約４００ｍｇ／日の投与量で前記対象に投与される、請求項９７に記載の方法。
【請求項99】
前記テロメラーゼ阻害剤が、約４ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇの投与量で前記対象に投与される、請求項６５～９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項100】
前記テロメラーゼ阻害剤が、約７．５ｍｇ／ｋｇ～約９．４ｍｇ／ｋｇの投与量で前記対象に投与される、請求項９９に記載の方法。
【請求項101】
前記テロメラーゼ阻害剤が、約９．４ｍｇ／ｋｇの投与量で前記対象に投与される、請求項１００に記載の方法。
【請求項102】
前記テロメラーゼ阻害剤が、約１時間～約３時間の期間をかけて静脈内注入によって前記対象に投与される、請求項９９～１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項103】
前記テロメラーゼ阻害剤が、約２時間の期間をかけて静脈内注入によって前記対象に投与される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項104】
前記ＪＡＫ阻害剤が、前記対象に１日当たり１回投与される、請求項６５～７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項105】
前記ＪＡＫ阻害剤が、約１日～約２１日の期間にわたって１日当たり１回前記対象に投与される、請求項１０４に記載の方法。
【請求項106】
前記ＪＡＫ阻害剤が、約７日～約１４日の期間にわたって１日当たり１回前記対象に投与される、請求項１０５に記載の方法。
【請求項107】
前記ＪＡＫ阻害剤が、前記対象に１日当たり２回投与される、請求項６５～７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項108】
前記ＪＡＫ阻害剤が、約１日～約２１日の期間にわたって１日当たり２回前記対象に投与される、請求項１０７に記載の方法。
【請求項109】
前記ＪＡＫ阻害剤が、約７日～約１４日の期間にわたって１日当たり２回前記対象に投与される、請求項１０８に記載の方法。
【請求項110】
前記ルキソリチニブが、対象に、前記対象が約１００×１０９／Ｌ血小板未満のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回５ｍｇ、
前記対象が約１００×１０９／Ｌ血小板～約２００×１０９／Ｌ血小板のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回１５ｍｇ、かつ
前記対象が約２００×１０９／Ｌ血小板超のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回２０ｍｇの投与量で投与される、請求項６５～７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項111】
前記テロメラーゼ阻害剤が、前記対象に３週間ごとに１回投与される、請求項６５～７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項112】
前記テロメラーゼ阻害剤が、前記対象に４週間ごとに１回投与される、請求項６５～７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項113】
前記テロメラーゼ阻害剤の前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホラミデートヌクレオシド間結合を含む、請求項６５～１１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項114】
前記テロメラーゼ阻害剤の前記脂質部分が、リンカーを介して前記オリゴヌクレオチドの前記５’および／または３’末端に結合している、請求項６５～１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項115】
前記リンカーが、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーである、請求項１１４に記載の方法。
【請求項116】
前記テロメラーゼ阻害剤の前記脂質部分が、パルミトイル（Ｃ１６）部分である、請求項６５～１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項117】
前記テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩である、請求項６５～１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項118】
前記テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットナトリウムである、請求項１１７に記載の方法。
【請求項119】
前記方法が、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を０日～２１日の期間にわたって１日当たり１回または２回前記対象に投与することと、
ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の７日以内に、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することと、を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項120】
ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩が、前記対象に１日当たり１回投与される、請求項１１９に記載の方法。
【請求項121】
ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩が、前記対象に１日当たり２回投与される、請求項１１９に記載の方法。
【請求項122】
イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩が、３週間ごとに１回投与される、請求項１１９～１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項123】
イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩が、４週間ごとに１回投与される、請求項１１９～１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項124】
請求項１～１２３のいずれか一項に記載の方法における使用のための組成物であって、前記組成物が、ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤を含む、組成物。
【請求項125】
前記ＪＡＫ阻害剤が、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１２４に記載の組成物。
【請求項126】
前記テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１２４または１２５に記載の組成物。
【請求項127】
前記テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットナトリウムである、請求項１２６に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１１月４日出願の米国仮特許出願第６２／９３０，２５１号に対する優先権の利益を主張し、その開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１９年１１月４日出願の米国仮特許出願第６２／９３０，２５１号に対する優先権の利益を主張し、その開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
序論
骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）は、体が白血球もしくは赤血球、または血小板を産生しすぎると生じる血液障害の群である。骨髄における血液細胞のこの過剰産生は、血流に問題を生じさせ、様々な症状につながり得る。ＭＰＮは、骨髄における骨髄細胞系列の前駆体から生じ得る。ＭＰＮは、異形成、骨髄細胞過形成、ならびに血栓症、出血、および骨髄線維症の素因を伴わない骨髄増殖を特徴とする。
骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）は、体が白血球もしくは赤血球、または血小板を産生しすぎると生じる血液障害の群である。骨髄における血液細胞のこの過剰産生は、血流に問題を生じさせ、様々な症状につながり得る。ＭＰＮは、骨髄における骨髄細胞系列の前駆体から生じ得る。ＭＰＮは、異形成、骨髄細胞過形成、ならびに血栓症、出血、および骨髄線維症の素因を伴わない骨髄増殖を特徴とする。
【0003】
イメテルスタットまたはイメテルスタットナトリウムは、テロメラーゼのＲＮＡ成分のテンプレート領域に対して高い親和性で結合するテロメラーゼ阻害剤である。研究は、イメテルスタットまたはイメテルスタットナトリウムがテロメラーゼ活性を阻害し、多くの異なるがん細胞株およびヒト腫瘍における細胞増殖に対して有効であることを示している。イメテルスタットまたはイメテルスタットナトリウムは、血液悪性腫瘍を有する患者の臨床試験において使用されている。骨髄線維症を有する患者の臨床試験は、イメテルスタットまたはイメテルスタットナトリウムが特定の患者において完全な臨床的寛解を達成することができたことを示した。これらの患者において、イメテルスタットは、骨髄線維症への拮抗をもたらし、形態学的および分子的寛解を生じた。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0004】
本開示の態様は、骨髄増殖性腫瘍を治療するための方法を含む。特定の実施形態による方法は、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤と、オリゴヌクレオチドならびにオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合した脂質部分を含むテロメラーゼ阻害剤と、を対象に共投与することを含む。アポトーシスを誘導するのに十分な量のＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤と細胞を接触させることによって骨髄増殖性腫瘍細胞のアポトーシスを誘導するための方法も、記載される。本方法を実施するためのＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤を有する組成物も提供される。
【0005】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤は、同時に投与される。他の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤は、順次投与される。いくつかの場合では、テロメラーゼ阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤が対象に投与された後に、対象に投与される。いくつかの事例では、ＪＡＫ阻害剤は、テロメラーゼ阻害剤が対象に投与された後に、対象に投与される。一例では、テロメラーゼ阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤が対象に投与される同じ日に、対象に投与される。別の例では、テロメラーゼ阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤が対象に投与された後１３日以内、例えば、ＪＡＫ阻害剤が対象に投与された後３日以内に対象に投与される。例えば、テロメラーゼ阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤の最後の投与量が対象に投与された後３日以内に投与される。いくつかの事例では、ＪａＫ阻害剤は、テロメラーゼ阻害剤が対象に投与された後１３日以内に対象に投与される。例えば、ＪＡＫ阻害剤は、テロメラーゼ阻害剤の最後の投与量が対象に投与された後３日以内に投与され、その後１日２回投与される。
【0006】
投薬は、ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤の投与のサイクルで投与される。いくつかの実施形態では、サイクルは、２１日であり、いくつかの事例では、サイクルは、２８日以上である。薬物投与のサイクルは、１、２、３、４、５、６、７、８回、または８回を超える投与量サイクル、合計６ヶ月もしくは１年もしくは２年もしくは３年もしくは４年以上の期間にわたって繰り返され得る。
【0007】
特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、約１０ｍｇ／日～約４０ｍｇ／日の投与量で対象に投与される。ＪＡＫ阻害剤は、対象に１日当たり１回または１日２回投与され得る。いくつかの事例では、ＪＡＫ阻害剤は、３０日、２９日、２８日、２７日、２６日、２５日、２４日、２３日、２２日、２１日、２０日、１９日、１８日、１７日、１６日、１５日、１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日、もしくは２日、または１日の期間にわたるサイクルで対象に１日当たり１回または２回投与される。いくつかの事例では、ＪＡＫ阻害剤は、対象に約１日～約３０日の期間にわたって１日当たり１回、例えば、約１日～約２８日、１日～２１日、７日～１４日の期間にわたって１日当たり１回投与される。他の事例では、ＪＡＫ阻害剤は、対象に約１日～約３０日の期間にわたって１日当たり２回、例えば、約１日～約２８日、１日～２１日、７日～１４日の期間にわたって１日当たり２回投与される。
【0008】
特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、ルキソリチニブ、フェドラチニブ、モメロチニブ、およびパクリチニブ、またはそれらの薬学的に許容される塩、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、フェドラチニブまたはその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、モメロチニブまたはその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、パクリチニブまたはその薬学的に許容される塩である。
【0009】
いくつかの実施形態では、本開示の方法によって対象に投与されるＪＡＫ阻害剤の投与量は、約５ｍｇ／日～約５００ｍｇ／日などの範囲であり得る。特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩であり、対象に、対象が約１００×１０９／Ｌ血小板未満のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回５ｍｇ、対象が約１００×１０９／Ｌ血小板～約２００×１０９／Ｌ血小板のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回１５ｍｇ、対象が約２００×１０９／Ｌ血小板超のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回２０ｍｇの投与量で投与される。
【0010】
特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、フェドラチニブまたはその薬学的に許容される塩であり、対象が約５０×１０９／Ｌ以上のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり１回４００ｍｇの投与量で対象に投与される。特定の事例では、フェドラチニブまたはその薬学的に許容される塩は、１日当たり１回３００ｍｇの投与量で対象に投与される。他の事例では、フェドラチニブまたはその薬学的に許容される塩は、対象に２００ｍｇの投与量で１日当たり１回投与される。さらに他の事例では、フェドラチニブまたはその薬学的に許容される塩は、対象に１００ｍｇの投与量で１日当たり１回投与される。さらに他の事例では、フェドラチニブまたはその薬学的に許容される塩は、対象に１００ｍｇ未満の投与量で１日当たり１回投与される。
【0011】
他の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、モメロチニブまたはその薬学的に許容される塩であり、対象に４００ｍｇの投与量で１日当たり１回投与される。特定の事例では、モメロチニブまたはその薬学的に許容される塩は、対象に３００ｍｇの投与量で１日当たり１回投与される。他の事例では、モメロチニブまたはその薬学的に許容される塩は、対象に２００ｍｇの投与量で１日当たり１回投与される。いくつかの事例では、モメロチニブまたはその薬学的に許容される塩は、１５０ｍｇの投与量で１日当たり２回投与される。いくつかの事例では、モメロチニブまたはその薬学的に許容される塩は、１００ｍｇの投与量で１日当たり２回投与される。
【0012】
他の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、パクリチニブまたはその薬学的に許容される塩であり、１日当たり１回約１００ｍｇ～約５００ｍｇなど、１日当たり１回約１５０ｍｇ～約４００ｍｇなど、および１日当たり１回約２００ｍｇ～約３５０ｍｇを含む、１日当たり１回約５０ｍｇ～約６００ｍｇの投与量で対象に投与される。特定の事例では、パクリチニブまたは薬学的に許容される塩は、１日当たり２回約１００ｍｇ～約５００ｍｇなど、１日当たり２回約１５０ｍｇ～約４００ｍｇなど、および１日当たり２回約２００ｍｇ～約３５０ｍｇを含む、１日当たり２回約５０ｍｇ～約６００ｍｇの投与量で対象に投与される。他の事例では、パクリチニブまたは薬学的に許容される塩は、対象に１日当たり１回１００ｍｇ、または１日当たり２回約１００ｍｇ、または１日当たり２回２００ｍｇの投与量で投与される。
【0013】
特定の実施形態による方法はまた、対象にＪＡＫ阻害剤を投与する前に、対象のベースライン血小板数を決定することを含む。これらの実施形態では、方法は、対象のベースライン血小板数を決定することと、対象のベースライン血小板数に基づいて、対象に投与するためのＪＡＫ阻害剤の量を決定することと、を含み得る。
【0014】
対象に投与されるテロメラーゼ阻害剤の投与量は、約４．０ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ～９．４ｍｇ／ｋｇなどの範囲であり得る。特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．１ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．３ｍｇ／ｋｇ、４．４ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．６ｍｇ／ｋｇ、４．７ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、４．９ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．２ｍｇ／ｋｇ、５．３ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、５．６ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ、５．８ｍｇ／ｋｇ、５．９ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．１ｍｇ／ｋｇ、６．２ｍｇ／ｋｇ、６．３ｍｇ／ｋｇ、６．４ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、６．６ｍｇ／ｋｇ、６．７ｍｇ／ｋｇ、６．８ｍｇ／ｋｇ、６．９ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．１ｍｇ／ｋｇ、７．２ｍｇ／ｋｇ、７．３ｍｇ／ｋｇ、７．４ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、７．６ｍｇ／ｋｇ、７．７ｍｇ／ｋｇ、７．８ｍｇ／ｋｇ、７．９ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．１ｍｇ／ｋｇ、８．２ｍｇ／ｋｇ、８．３ｍｇ／ｋｇ、８．４ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、８．６ｍｇ／ｋｇ、８．７ｍｇ／ｋｇ、８．８ｍｇ／ｋｇ、８．９ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．１ｍｇ／ｋｇ、９．２ｍｇ／ｋｇ、９．３ｍｇ／ｋｇ、９．４ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、９．６ｍｇ／ｋｇ、９．７ｍｇ／ｋｇ、９．８ｍｇ／ｋｇ、９．９ｍｇ／ｋｇ、１０．０ｍｇ／ｋｇの投与量で対象に投与される。
【0015】
テロメラーゼ阻害剤の投与量は、テロメラーゼ阻害剤が１週間ごとに１回、２週間（１４日）ごとに１回、３週間（２１日）ごとに１回、または４週間（２８日）ごとに１回、６週間ごとに１回、８週間ごとに１回、１０週間ごとに１回、１２週間ごとに１回投与されるサイクルで対象に投与され得る。特定の実施形態では、イメテルスタットまたは薬学的に許容される塩は、１、２、３、４、５、６、７、８回、または８回を超える投与サイクルにわたって投与され得る。特定の実施形態では、各サイクルは、３週間ごとに１回約４～１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットもしくは薬学的に許容される塩の静脈内投与、４週間ごとに１回約４～１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットもしくはイメテルスタットナトリウムの静脈内投与、２週間ごとに１回約４～１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットもしくはイメテルスタットナトリウムの静脈内投与、または３週間ごとに１回約７．５～９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットもしくはイメテルスタットナトリウムの静脈内投与を含む。特定の事例では、各投与量サイクルは、約７．５～９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットまたはイメテルスタットナトリウムの４週間ごとに１回の静脈内投与を含む。いくつかの場合では、各投与量サイクルは、約９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットまたはイメテルスタットナトリウムの約３週間ごとに１回の静脈内投与を含む。
【0016】
いくつかの事例では、テロメラーゼ阻害剤のオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホラミデートヌクレオシド間結合を含む。いくつかの事例では、テロメラーゼ阻害剤の脂質部分は、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーなどの、リンカーを介してオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合される。いくつかの事例では、テロメラーゼ阻害剤の脂質部分は、パルミトイル（Ｃ１６）部分である。特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩、例えば、イメテルスタットナトリウムである。
【0017】
特定の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍を治療することは、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩およびイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩の２１日投与サイクルで対象を治療することを含み、方法は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を２１日間１日当たり１回または２回投与することと、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を２１日投与サイクルの１日目に対象に投与することと、を含む（すなわち、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩およびイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩はともに、２１日サイクルの１日目に対象に投与される）。特定の事例では、方法は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩およびイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩の２１日投与サイクルを含み、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩は、２１日間１日当たり１回投与され、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩は、２１日サイクルの１日目に投与される。他の事例では、方法は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩およびイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩の２１日投与サイクルを含み、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩は、２１日間１日当たり２回投与され、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩は、２１日サイクルの１日目に投与される。これらの実施形態によるルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩、続いてイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を投与する２１日投与サイクルは、２回以上など、３回以上など、４回以上など、５回以上など、６回以上など、７回以上など、８回以上など、９回以上など、および１０回以上を含む、１回以上繰り返すことができる。ルキソリチニブおよびイメテルスタットの２１日投与サイクルが１回以上繰り返される場合、各２１日投与サイクル間の期間は、１日以上など、２日以上など、３日以上など、４日以上など、５日以上など、６日以上など、および７日以上を含む、０日以上であり得る。使用されるルキソリチニブおよびイメテルスタットの２１日投与サイクルの数ならびに各サイクル間の期間に応じて、これらの実施形態による対象の治療の期間は、３ヶ月以上など、６ヶ月以上など、１年以上など、２年以上など、３年以上など、４年以上など、５年以上など、６年以上など、７年以上など、８年以上など、９年以上など、および１０年間以上を含む、約１．５ヶ月以上であり得る。
【0018】
特定の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍を治療することは、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩およびイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩の２８日投与サイクルで対象を治療することを含む。これらの実施形態では、方法は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を２８日間１日当たり１回または２回投与することと、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を２８日サイクルの１日目に対象に投与することと、を含む（すなわち、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩およびイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩はともに、２８日サイクルの１日目に対象に投与される）。特定の事例では、方法は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩およびイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩の２８日投与サイクルを含み、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩は、２８日間１日当たり１回投与され、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩は、２８日サイクルの１日目に投与される。他の事例では、方法は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩およびイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩の２８日投与サイクルを含み、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩は、２８日間１日当たり２回投与され、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩は、２８日サイクルの１日目に投与される。
【0019】
これらの実施形態によるルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩、続いてイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を投与する２８日投与サイクルは、２回以上など、３回以上など、４回以上など、５回以上など、６回以上など、７回以上など、８回以上など、９回以上など、および１０回以上を含む、１回以上繰り返すことができる。ルキソリチニブおよびイメテルスタットの２８日投与サイクルが１回以上繰り返される場合、各２８日投与サイクル間の期間は、１日以上など、２日以上など、３日以上など、４日以上など、５日以上など、６日以上など、および７日以上を含む、０日以上であり得る。使用されるルキソリチニブおよびイメテルスタットの２８日投与サイクルの数ならびに各サイクル間の期間に応じて、これらの実施形態による対象の治療の期間は、４ヶ月以上など、６ヶ月以上など、１年以上など、２年以上など、３年以上など、４年以上など、５年以上など、６年以上など、７年以上など、８年以上など、９年以上など、および１０年間以上を含む、約２ヶ月以上であり得る。
【0020】
特定の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍を治療することは、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩およびイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩の投与サイクルで対象を治療することを含み、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩が、対象に１４日または２１日間１日当たり１回または２回投与され、続いて１用量以上のイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩が、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩のその投与サイクルの最後に投与された投与量の１日～７日後に対象に投与される。一例では、方法は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩が、対象に１４日間１日当たり１回投与され、続いて１用量以上のイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩が、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の１日～７日後に投与される、投与サイクルを含む。別の例では、方法は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩が、対象に２１日間１日当たり１回投与され、続いて１用量以上のイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩が、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の１日～７日後に投与される、投与サイクルを含む。さらに別の例では、方法は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩が、対象に１４日間１日当たり２回投与され、続いて１用量以上のイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩が、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の１日～７日後に投与される、投与サイクルを含む。また別の例では、方法は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩が、対象に２１日間１日当たり２回投与され、続いて１用量以上のイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩が、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の１日～７日後に投与される、投与サイクルを含む。これらの実施形態では、１用量以上のイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の１日後など、２日後など、３日後など、４日後など、５日後など、６日後など、およびその７日後に１用量のイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の１日～７日後に対象に投与される。これらの実施形態によるルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩、続いてイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩の投与サイクルは、２回以上など、３回以上など、４回以上など、５回以上など、６回以上など、７回以上など、８回以上など、９回以上など、および１０回以上を含む、１回以上繰り返すことができる。
【0021】
特定の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍を治療することは、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩およびルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の２１日投与サイクルで対象を治療することを含み、方法は、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を２１日投与サイクルの１日目に対象に投与し、続いてルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を２１日サイクルのその後の各日に１日当たり１回または２回対象に投与することを含む（すなわち、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩は、２１日サイクルの１日目に対象に投与され、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩は、２１日投与サイクルの２～２１日目に１日当たり１回または２回投与される）。特定の事例では、方法は、２１日投与サイクルの１日目にイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を対象に投与し、続いて２１日サイクルのその後の各日に１日当たり１回ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む。他の事例では、方法は、２１日投与サイクルの１日目にイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を対象に投与し、続いて２１日サイクルのその後の各日に１日当たり２回ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む。これらの実施形態によるイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩、続いてルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与する２１日投与サイクルは、２回以上など、３回以上など、４回以上など、５回以上など、６回以上など、７回以上など、８回以上など、９回以上など、および１０回以上を含む、１回以上繰り返すことができる。イメテルスタットおよびルキソリチニブの２１日投与サイクルが１回以上繰り返される場合、各２１日投与サイクル間の期間は、１日以上など、２日以上など、３日以上など、４日以上など、５日以上など、６日以上など、および７日以上を含む、０日以上であり得る。使用されるイメテルスタットおよびルキソリチニブの２１日投与サイクルの数ならびに各サイクル間の期間に応じて、これらの実施形態による対象の治療の期間は、３ヶ月以上など、６ヶ月以上など、１年以上など、２年以上など、３年以上など、４年以上など、５年以上など、６年以上など、７年以上など、８年以上など、９年以上など、および１０年間以上を含む、約１．５ヶ月以上であり得る。
【0022】
他の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍を治療することは、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩およびルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の２８日投与サイクルで対象を治療することを含み、方法は、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を２８日投与サイクルの１日目に対象に投与し、続いてルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を２８日サイクルのその後の各日に１日当たり１回または２回対象に投与することを含む（すなわち、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩は、２８日サイクルの１日目に対象に投与され、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩は、２８日投与サイクルの２～２８日目に１日当たり１回または２回投与される）。特定の事例では、方法は、２８日投与サイクルの１日目にイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を対象に投与し、続いて２８日サイクルのその後の各日に１日当たり１回ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む。他の事例では、方法は、２８日投与サイクルの１日目にイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を対象に投与し、続いて２８日サイクルのその後の各日に１日当たり２回ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む。これらの実施形態によるイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩、続いてルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与する２８日投与サイクルは、２回以上など、３回以上など、４回以上など、５回以上など、６回以上など、７回以上など、８回以上など、９回以上など、および１０回以上を含む、１回以上繰り返すことができる。イメテルスタットおよびルキソリチニブの２８日投与サイクルが１回以上繰り返される場合、各２８日投与サイクル間の期間は、１日以上など、２日以上など、３日以上など、４日以上など、５日以上など、６日以上など、および７日以上を含む、０日以上であり得る。使用されるイメテルスタットおよびルキソリチニブの２８日投与サイクルの数ならびに各サイクル間の期間に応じて、これらの実施形態による対象の治療の期間は、４ヶ月以上など、６ヶ月以上など、１年以上など、２年以上など、３年以上など、４年以上など、５年以上など、６年以上など、７年以上など、８年以上など、９年以上など、および１０年間以上を含む、約２ヶ月以上であり得る。
【0023】
他の実施形態では、方法は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を所定の期間（１日～２１日）投与することと、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の投与を中止することと、対象に投与されたルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の最後の投与量の７日（例えば、２日、１日、または同日）以内にイメテルスタットを投与することと、を含む。この投与サイクルは、２回以上など、３回以上など、４回以上など、５回以上など、６回以上など、７回以上など、８回以上など、９回以上など、および１０回以上を含み、繰り返され得る。
【0024】
いくつかの実施形態では、骨髄増殖性腫瘍は、骨髄線維症（ＭＦ）、例えば、原発性骨髄線維症、または以前のＥＴもしくはＰＶ後の骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦもしくはＰＶ後ＭＦ）である。他の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍は、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性多血症（ＰＶ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病、および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を含む。他の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。さらに他の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍は、単離されたｄｅｌ（５ｑ）を伴う骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）には、不応性貧血、過剰芽球を伴う不応性貧血、多血球系異形成を伴う不応性血球減少症、単血球系異形成を伴う不応性血球減少症、および慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）などの疾患が含まれる。特定の実施形態による方法は、骨髄増殖性腫瘍を有する対象を診断することも含む。一例では、方法は、原発性骨髄線維症などの骨髄線維症を有する対象を診断することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、以前にＪＡＫ阻害剤を投与されていない（すなわち、ＪＡＫ阻害剤ナイーブである）。他の実施形態では、対象は、以前にテロメラーゼ阻害剤を投与されていない（例えば、テロメラーゼ阻害剤ナイーブである）。さらに他の実施形態では、対象は、以前にＪＡＫ阻害剤またはテロメラーゼ阻害剤を投与されていない（すなわち、ＪＡＫ阻害剤ナイーブおよびテロメラーゼ阻害剤ナイーブの両方である）。
【図面の簡単な説明】
【0025】
【図1】特定の実施形態によるルキソリチニブと組み合わされたイメテルスタット治療でのインビボ治療設計を示す。
【図2】特定の実施形態によるルキソリチニブとインビトロで組み合わされたイメテルスタット治療での、造血前駆細胞（ＨＰＣ）アッセイを示す。
【図3】特定の実施形態によるルキソリチニブと組み合わされたイメテルスタット治療でのインビトロ治療設計を示す。
【図4】特定の実施形態によるイメテルスタットおよびルキソリチニブの投与による正常なＣＤ３４＋細胞の短期インビトロ併用治療を示す。正常なＣＢ ＣＤ３４＋細胞を、ビヒクル単独、ルキソリチニブ（Ｒｕｘ、５０ｎＭ）単独、ミスマッチオリゴヌクレオチド（ＭＭ、１．８ｕＭ）またはイメテルスタット（Ｉｍｅ、１．８ｕＭ）単独、ＲｕｘおよびＭＭまたはＩｍｅで、本文に記載されるように同時および順次治療した。細胞をＲｕｘに３日間、ＭＭまたはＩｍｅに７日間曝露した。培養物中で生成された細胞を表現型的に特徴付け、ＨＰＣについてアッセイした。対応するビヒクル単独に曝露された培養物中で生成されたものと比較して、様々な治療に曝露された正常なＣＤ３４＋細胞の培養物中で生成されたＬｉｎ－ＣＤ３４＋細胞（図４、パネルＡ）、アッセイ可能なＨＰＣのすべてのクラス（図４、パネルＢ）、およびＣＤ１５＋ＣＤ３４－（図４、パネルＣ）の絶対数のパーセンテージを示す。ｎ＝３。Ｐすべて＞０．０５、ビヒクル単独を含有する培養物対Ｒｕｘを含有する培養物、ＭＭを含有する培養物対Ｉｍｅを含有する対応する培養物。
【図5】特定の実施形態によるイメテルスタットおよびルキソリチニブによるインビトロでの長期併用治療で観察される正常なＨＳＣ／ＨＰＣに対する付加的な阻害効果の欠如を示す。正常なＣＢ ＣＤ３４＋細胞を、ビヒクル単独、ルキソリチニブ（Ｒｕｘ、５０ｎＭ）単独、ミスマッチオリゴヌクレオチド（ＭＭ、１．８ｕＭ）またはイメテルスタット（Ｉｍｅ、１．８ｕＭ）単独、ＲｕｘおよびＭＭまたはＩｍｅで、本文に記載されるように同時および順次治療した。細胞をＲｕｘに３日間、ＭＭまたはＩｍｅに１４日間曝露した。対応するビヒクル単独に曝露された培養物中で生成されたものと比較して、様々な治療に曝露された正常なＣＤ３４＋細胞の培養物中で生成されたＬｉｎ－ＣＤ３４＋細胞（図５、パネルＡ）、アッセイ可能なＨＰＣのすべてのクラス（図５、パネルＢ）、およびＣＤ１５＋ＣＤ３４－（図５、パネルＣ）の絶対数のパーセンテージを示す。ｎ＝３。Ｐすべて＞０．０５、ビヒクル単独を含有する培養物対Ｒｕｘを含有する培養物、指示がない限り、ＭＭを含有する培養物対Ｉｍｅを含有する対応する培養物。
【図6】特定の実施形態によるイメテルスタットおよびルキソリチニブによるインビトロでの同時または順次短期併用治療によるＭＦ ＨＳＣ／ＨＰＣに対する付加的な阻害効果の欠如を示す。ＭＦ脾臓ＣＤ３４＋細胞を、ＣＢ ＣＤ３４＋細胞と同一の方法で２つの薬物で治療した。細胞をＲｕｘに３日間、ＭＭまたはＩｍｅに７日間曝露した。培養後に生成された細胞を表現型的に特徴付け、ＨＰＣについてアッセイした。対応するビヒクル単独に曝露された培養物中で生成されたものと比較して、様々な治療に曝露されたＭＦ脾臓ＣＤ３４＋細胞の培養物中で生成されたＬｉｎ－ＣＤ３４＋細胞（図６、パネルＡ）、アッセイ可能なＨＰＣのすべてのクラス（図６、パネルＢ）、およびＣＤ１５＋ＣＤ３４－（図６、パネルＣ）の絶対数のパーセンテージを示す。ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ＋ＭＦ、ｎ＝３、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ－ＭＦ、ｎ＝４。Ｐすべて＞０．０５、ビヒクル単独を含有する培養物対Ｒｕｘを含有する培養物、指示がない限り、ＭＭを含有する培養物対Ｉｍｅを含有する対応する培養物。
【図7】特定の実施形態によるイメテルスタットおよびルキソリチニブによるインビトロでの順次長期併用治療でのＭＦ ＨＳＣ／ＨＰＣに対する付加的な阻害活性を示す。ＭＦ脾臓ＣＤ３４＋細胞を、ＣＢ ＣＤ３４＋細胞と同一の方法で単独および組み合わされた２つの薬物で治療した。細胞をＲｕｘに３日間、ＭＭまたはＩｍｅに１４日間曝露した。培養後に生成された細胞を表現型的に特徴付け、ＨＰＣについてアッセイした。対応するビヒクル単独に曝露された培養物中で生成されたものと比較して、様々な治療に曝露されたＭＦ脾臓ＣＤ３４＋細胞の培養物中で生成されたＬｉｎ－ＣＤ３４＋細胞（図７、パネルＡ）、アッセイ可能なＨＰＣのすべてのクラス（図７、パネルＢ）、およびＣＤ１５＋ＣＤ３４－（図７、パネルＣ）の絶対数のパーセンテージを示す。ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ＋ＭＦ、ｎ＝３、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ－ＭＦ、ｎ＝４。Ｐ値は、示される通りであり、そうでなければＰ＞０．０５、パネルＡ：ビヒクル対Ｒｕｘ単独、Ｒｕｘ＋ＭＭ対Ｒｕｘ＋Ｉｍｅ、パネルＣ：Ｒｕｘ＋ＭＭ対Ｒｕｘ＋Ｉｍｅ。
【図8】特定の実施形態によるイメテルスタットおよびルキソリチニブによるインビトロでの順次長期併用治療でのＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ＋造血前駆細胞の低減を示す。（図８、パネルＡ）様々な治療に曝露された２人のＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ＋ＭＦ患者からの個々のコロニー（ＣＦＵ－ＧＭ）を取り出し、ネステッド対立遺伝子特異的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用してＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆについて遺伝子型決定した。次いで、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ＋ＣＦＵ－ＧＭのパーセンテージを決定した。（図８、パネルＢおよびＣ）ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ＋ ＣＦＵ－ＧＭの絶対数は、各培養物中で生成されたＣＦＵ－ＧＭの合計数に、パネルＡに示されるＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ＋ ＣＦＵ－ＧＭのパーセンテージを乗じることによって計算した。両患者からの脾臓ＣＤ３４＋細胞の、Ｒｕｘ、続いてイメテルスタットでの順次長期併用治療は、悪性ＭＦ ＨＰＣに対する付加的な阻害活性を有する。
【図9-1】特定の実施形態によるイメテルスタットおよびルキソリチニブによるインビボでの同時または順次併用治療による正常なＮＳＧ再増殖細胞（ＳＲＣ）に対する効果の欠如を示す。（図９、パネルＡおよびＤ）マウスの骨髄において生成されたヒト（ｈ）ＣＤ４５＋細胞キメラ現象（図９、パネルＡ）およびｈＣＤ３４＋細胞（図９、パネルＤ）を示す代表的なＦＡＣＳプロットである。（図９、パネルＢ～Ｃ、図９、パネルＥ～Ｆ）移植の４ヶ月後のＮＳＧマウスの骨髄（図９、パネルＢおよびＥ）および脾臓（図９、パネルＣおよびＦ）において生成されたｈＣＤ４５＋（図９、パネルＢ～Ｃ）およびｈＣＤ３４＋細胞（図９、パネルＥ～Ｆ）の絶対数である。ＮＳＧマウスに正常なＣＢ ＣＤ３４＋細胞を移植し、移植の１週間後に様々な薬物単独または組み合わせで治療した。これらの治療は、レシピエントマウスの骨髄および脾臓におけるｈＣＤ４５＋細胞キメラ現象およびｈＣＤ３４＋細胞生成の程度における最小限の低減（脾臓におけるｈＣＤ４５＋細胞：Ｒｕｘ＋Ｉｍｅ、脾臓におけるｈＣＤ３４＋細胞：Ｉｍｅ単独、Ｒｕｘ＋Ｉｍｅ）をもたらした。
【図9-2】同上。
【図10-1】特定の実施形態によるイメテルスタットおよびルキソリチニブによるインビボでの併用治療による骨髄線維症ＮＳＧ再増殖細胞（ＳＲＣ）の枯渇に対する付加的な効果を示す。（図１０、パネルＡおよびＤ）マウスの骨髄において生成されたヒト（ｈ）ＣＤ４５＋細胞キメラ現象（図１０、パネルＡ）およびｈＣＤ３４＋細胞（図１０、パネルＤ）を示すＦＡＣＳプロットである。（図１０、パネルＢ～Ｃ、図１０、パネルＥ）移植の４ヶ月後のＮＳＧマウスの骨髄（図１０、パネルＢおよびＥ）および脾臓（図１０、パネルＣ）において生成されたｈＣＤ４５＋（図１０、パネルＢ～Ｃ）およびｈＣＤ３４＋細胞（図１０、パネルＥ）の絶対数である。ビヒクル単独を受けるマウスにおいて生成されたものと比較して、各薬物治療を受けるマウスの骨髄および脾臓において生成されたｈＣＤ４５＋およびｈＣＤ３４＋細胞の絶対数のパーセンテージを示す。ＮＳＧマウスにＰｔ５の脾臓ＣＤ３４＋細胞を移植し、本文に記載されるように移植の１週間後に様々な薬物単独または組み合わせで治療した。Ｒｕｘ、続いてイメテルスタットによる順次治療は、Ｐｔ５のＭＦ長期ＳＲＣの枯渇において付加的な活性を有した。
【図10-2】同上。
【図10-3】同上。
【図11】特定の実施形態によるイメテルスタットおよびルキソリチニブによるインビボでの併用治療による骨髄線維症ＮＳＧ再増殖細胞（ＳＲＣ）の枯渇における相乗的な効果を示す。ＮＳＧマウスにＰｔ１０の脾臓ＣＤ３４＋細胞を移植し、この患者からのＣＤ３４＋細胞の限られた入手可能性のため、Ｒｕｘ単独、Ｉｍｅ単独、およびＲｕｘ、続いてイメテルスタットで治療した。ビヒクル単独を受けるマウスにおいて生成されたものと比較して、薬物治療を受けるマウスの骨髄において検出されたｈＣＤ４５＋細胞の絶対数を示す。Ｒｕｘ、続いてイメテルスタットによる順次治療は、Ｐｔ１０のＭＦ長期ＳＲＣの枯渇において相乗的な活性を有した。
【図12A】［図１２Ａおよび図１２Ｂ］特定の実施形態によるイメテルスタットおよびルキソリチニブのインビボ併用治療とイメテルスタット単独との副作用の比較を示す。（図１２Ａ、図１２Ｂ）ＮＳＧマウスに正常ＣＢ（図１２Ａ）またはＭＦ（図１２Ｂ）膵臓ＣＤ３４＋細胞を移植した。移植の１週間後、マウスをビヒクル単独で、４５ｍｇ／ｋｇのＲｕｘ単独で７日間、または１０ｍｇ／ｋｇのＭＭもしくはイメテルスタット単独で４週間、またはＲｕｘおよびＭＭもしくはイメテルスタットを同時もしくは順次組み合わせて治療し始めた。マウスを、移植の４ヶ月後（Ｗ１７）に屠殺した。正常なＣＢ（図１２Ａ）またはＭＦ（図１２Ｂ）脾臓ＣＤ３４＋細胞のいずれかを受けるマウスの順次併用療法は、同等の１０ｍｇ／ｋｇ用量のイメテルスタット単独治療と比較して、マウスのさらなる体重減少をもたらさなかった。また、ＭＦ脾臓ＣＤ３４＋細胞（Ｐｔ５）が移植されたマウスが屠殺された時点で、順次４５ｍｇ／ｋｇのＲｕｘおよび１０ｍｇ／ｋｇ用量のイメテルスタット（６．５％）を受けるマウスの体重減少の程度は、同等用量のイメテルスタット単独（９．６％）または３０ｍｇ／ｋｇ用量のイメテルスタット単独（１３．１％）未満であった。Ｘ軸は、移植後の週数を示す。
【図12B】同上。
【発明を実施するための形態】
【0026】
定義を選択する
「ヌクレオシド」という用語は、一般的な構造：
を有する部分を指し、式中、Ｂは、核酸塩基を表し、２’炭素は、以下に記載されるように置換することができる。オリゴマーまたはポリマーに組み込まれる場合、３’炭素は、酸素または窒素原子にさらに結合される。ヌクレオシドは、２’－デオキシおよび２’－ヒドロキシル（すなわち、デオキシリボースおよびリボース）形態、ならびにそれらの類似体を含み得る。特定の事例では、５’－ＮＨ基は、５’－酸素に置換することができる。「類似体」は、ヌクレオシドに関して、修飾核酸塩基部分（以下の「核酸塩基」の定義を参照されたい）および／または他の類似体のなかでも、２’－フルオロ糖などの、修飾糖部分を有する合成ヌクレオシドを含む。そのような類似体は、典型的には、結合特性、例えば、安定性、特異性などに影響を与えるように設計される。ヌクレオシドという用語は、例えば、Ｋｏｍｂｅｒｇ ａｎｄ Ｂａｋｅｒ，ＤＮＡ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，２ｎｄ Ｅｄ．（Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，１９９２）に記載されるような、２’－でオキシおよび２’－ヒドロキシ形態を含む、天然ヌクレオシド、ならびに類似体を含む。「類似体」は、ヌクレオシドに関して、修飾核酸塩基部分（以下の「核酸塩基」の定義を参照されたい）および／または一般にＳｃｈｅｉｔ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ａｎａｌｏｇｓ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８０）によって記載される、修飾糖部分を有する合成ヌクレオシドを含む。そのような類似体は、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ ａｎｄ Ｐｅｙｍａｎ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ９０：５４３－５８４，１９９０）によって開示されるような、結合特性、例えば、安定性、特異性などを増強するように設計された合成ヌクレオシドを含む。そのようなヌクレオシドを含有し、典型的には合成ヌクレアーゼ耐性ヌクレオシド間結合を含有するオリゴヌクレオチドは、それ自体が「類似体」と称され得る。
「ヌクレオシド」という用語は、一般的な構造：
【化1】
【0027】
「ポリヌクレオチド」または「オリゴヌクレオチド」は、約２～約２００個の連続したサブユニットを有する、リボースおよび／またはデオキシリボースヌクレオシドサブユニットポリマーまたはオリゴマーを指す。ヌクレオシドサブユニットは、これらに限定されないが、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、Ｐ３’→Ｎ５’ホスホラミデート、Ｎ３’→Ｐ５’ホスホラミデート、Ｎ３’→Ｐ５’チオホスホラミデート、およびホスホロチオエート結合を含む、様々なサブユニット間結合によって結合することができる。用語には、糖（例えば、２’置換）、塩基、ならびに３’および５’末端などへの修飾を有するそのようなポリマーまたはオリゴマーも含まれる。オリゴヌクレオチド部分が複数のサブユニット間結合を含む実施形態では、各結合は同じ化学物質を使用して形成してもよく、または結合化学物質の混合物を使用してもよい。オリゴヌクレオチドが「ＡＴＧＵＣＣＴＧ」などの一連の文字によって表される場合、ヌクレオチドが左から右へ５’→３’の順序であることが理解されるであろう。この方法でオリゴヌクレオチドの塩基配列を表すことは、オリゴヌクレオチドにおける任意の特定のタイプのヌクレオシド間サブユニットの使用を意味しない。
【0028】
「核酸塩基」としては、（ｉ）天然ＤＮＡおよびＲＮＡ核酸塩基（ウラシル、チミン、アデニン、グアニン、およびシトシン）、（ｉｉ）修飾核酸塩基または核酸塩基類似体（例えば、５－メチルシトシン、５－ブロモウラシル、またはイノシン）、ならびに（ｉｉｉ）核酸塩基類似体が挙げられる。核酸塩基類似体は、その分子構造が典型的なＤＮＡまたはＲＮＡ塩基の分子構造を模倣する化合物である。
【0029】
「脂質」という用語は、本明細書では、有機溶媒中に可溶性であるが、水中に存在する場合、難溶性である物質を包含するために広く使用される。脂質という用語には、これらに限定されないが、炭化水素、油、脂肪（脂肪酸およびグリセリドなど）、ステロール、ステロイド、およびこれらの化合物の誘導体形態が含まれる。いくつかの実施形態では、脂質は、脂肪酸およびそれらの誘導体、炭化水素およびそれらの誘導体、ならびにコレステロールなどのステロールである。脂肪酸は、通常、直鎖（一般的には１２～２４個の炭素）に偶数個の炭素原子を含有し、飽和であっても不飽和であってもよく、様々な置換基を含有することができるか、または含有するように修飾され得る。単純化するために、「脂肪酸」という用語はまた、脂肪またはエステルなどの、脂肪酸誘導体を包含する。いくつかの実施形態では、「脂質」という用語は、脂質部分および親水性部分の両方を含有する両親媒性化合物も含む。
【0030】
「個体」または「患者」または「対象」は、任意の一般的な実験室モデル生物などの、哺乳動物であり得る。哺乳動物としては、ヒトおよび非ヒト霊長類、農場動物、スポーツ動物、ペット、マウス、ラット、ならびに他のげっ歯類が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、個体または患者または対象は、ヒトである。特定の実施形態では、対象または患者は、特定の実施形態の前に、ＪＡＫ阻害剤療法および／またはテロメラーゼ阻害剤療法を以前に受けたことがなく、そのような患者は、それぞれ、「ＪＡＫ阻害剤ナイーブ」または「テロメラーゼ阻害剤ナイーブ」である。
【0031】
「有効量」または「治療有効量」または「臨床有効量」は、所望の治療効果をもたらすのに有効である、哺乳動物対象に、単一用量として、または一連の用量の一部としてのいずれかで投与される、ＪＡＫ阻害剤またはテロメラーゼ阻害剤などの、治療用化合物の量を指す。本発明の１つの利点は、テロメラーゼ阻害剤が、ＪＡＫ阻害剤と組み合わせて投与されるとき、単剤用量よりも低い用量で投与され得、よって同等または優れた治療効果を達成しながら、化合物の副作用および全体的な毒性を低減することである。特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤が、本明細書に記載される実施形態によるＪＡＫ阻害剤と共投与される場合、治療上有効な応答を達成するために必要であるＪＡＫ阻害剤の量は、１重量％以上、例えば２重量％以上、例えば３重量％以上、例えば５重量％以上、例えば１０重量％以上、例えば１５重量％以上、例えば２５重量％以上低減され得、治療上有効な応答を達成するために必要なＪＡＫ阻害剤の量を５０重量％以上低減させることを含む。言い換えれば、治療上有効な応答を達成するために必要なＪＡＫ阻害剤の量は、治療上有効な応答を達成するために必要であるＪＡＫ阻害剤単独の量と比較して１重量％以上低減される。他の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤が、本明細書に記載される実施形態によるテロメラーゼ阻害剤と共投与される場合、治療上有効な応答を達成するために必要であるテロメラーゼ阻害剤の量は、１重量％以上、例えば２重量％以上、例えば３重量％以上、例えば５重量％以上、例えば１０重量％以上、例えば１５重量％以上、例えば２５重量％以上低減され得、治療上有効な応答を達成するために必要なテロメラーゼ阻害剤の量を５０重量％以上低減させることを含む。言い換えれば、治療上有効な応答を達成するために必要なテロメラーゼ阻害剤の量は、治療上有効な応答を達成するために必要であるテロメラーゼ阻害剤単独の量と比較して、例えば２重量％以上、例えば３重量％以上、例えば５重量％以上、例えば１０重量％以上、例えば１５重量％以上、例えば２５重量％以上、および５０重量％以上を含む、１重量％以上低減される。
【0032】
本明細書で使用される場合、「腫瘍細胞」は、細胞増殖の制御の著しい喪失を特徴とする異常な増殖表現型を示すように、比較的自律的な増殖を示す細胞を指す。腫瘍細胞は、能動的に複製し得るか、または一時的な非複製静止状態（Ｇ１またはＧ０）にあり得る細胞を含み、同様に、腫瘍細胞は、よく分化した表現型、あまり分化していない表現型、または両方のタイプの細胞の混合物を有する細胞を含み得る。よって、すべての腫瘍細胞が、所与の時点で複製細胞であるとは限らない。「腫瘍細胞」は、良性腫瘍におけるそのような細胞および悪性腫瘍における細胞を包含する。
【0033】
本明細書で使用される場合、「腫瘍性前駆細胞」は、腫瘍性になる能力を有する細胞組成物の細胞を指す。
【0034】
本明細書で使用される場合、「腫瘍」または「腫瘍形成」または「腫瘍性」という用語は、異常な新規細胞成長を指す。過形成とは異なり、腫瘍性増殖は、元の刺激の不在下でも継続する。
【0035】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、別段に示されない限り、複数の参照物を含む。
【0036】
本明細書全体を通して与えられるすべての最大数値制限は、そのような下限数値制限が本明細書に明示的に記述されたかのように、すべての下限数値制限を含むことが意図される。本明細書全体を通して与えられるすべての最小数値制限は、そのような上限数値制限が本明細書に明示的に記述されたかのように、すべての上限数値制限を含むであろう。本明細書全体を通して与えられるすべての数値範囲は、そのようなより狭い数値範囲がすべて本明細書に明示的に記述されたかのように、そのようなより広い数値範囲内に収まるすべてのより狭い数値範囲を含むであろう。
【0037】
本発明をさらに記載する前に、そのようなものは当然ながら変動し得るので、本発明は記載の特定の実施形態に限定されないことが理解されるべきである。本発明の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ制限されるので、本明細書で使用される用語は、単に特定の実施形態を記載する目的のためであり、制限することを意図しないことも理解されるべきである。
【0038】
値の範囲が提供される場合、別段文脈が明確に指示しない限り、上限と下限との間の各介在値、およびその記載された範囲の任意の他の値または介在値の下限の単位の１０分の１までが、本発明内に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限および下限は、独立して、より小さい範囲に含まれ得、また、発明内に包含され、記載された範囲の任意の具体的に除外される制限の対象となる。記載された範囲が、制限の一方または両方を含む場合、それらの含まれる制限の一方または両方を除外する範囲もまた、発明に含まれる。
【0039】
明確にするために、別個の実施形態の文脈に記載される発明のある特定の特色はまた、単一の実施形態で組み合わせて提供され得ることが理解される。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈に記載される発明の様々な特色はまた、別個にまたは任意の好適な部分的組み合わせで提供され得る。発明に関連する実施形態のすべての組み合わせは、本発明によって具体的に包含され、各々およびすべての組み合わせが個々にかつ明示的に開示されたかのように、そのような組み合わせが、例えば、安定な化合物である化合物（すなわち、生物学的活性について作製、単離、特徴評価、および試験され得る化合物）である主題を包含する程度まで、本明細書に開示される。加えて、様々な実施形態およびそれらの要素（例えば、そのような変数を記載する実施形態に列挙される化学基の要素）のすべての部分的組み合わせもまた、本発明によって具体的に包含され、各々およびすべてのそのような部分的組み合わせが本明細書で個々にかつ明示的に開示されたかのように、本明細書に開示される。
【0040】
別段定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似のまたは同等な任意の方法および材料もまた、本発明の実施または試験に使用することができるが、目的の方法および材料は、以下記載される。本明細書で言及されるすべての刊行物は、引用された刊行物に関連する方法および／または材料を開示および記載するために、参照により本明細書に組み込まれる。
【0041】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、別段文脈が明らかに他のことを指示しない限り、複数の指示対象を含むことが留意されるべきである。特許請求の範囲は、あらゆる任意選択的な要素を排除するように記載され得ることにさらに留意されたい。したがって、この記述は、特許請求の範囲の要素の記載に関連する「単に」、「のみ」などの排他的な用語の使用、または「否定的」な限定の使用の先行詞として機能することが意図される。
【0042】
明確にするために、別個の実施形態の文脈に記載される発明のある特定の特色はまた、単一の実施形態で組み合わせて提供され得ることが理解される。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈に記載される発明の様々な特色はまた、別個にまたは任意の好適な部分的組み合わせで提供され得る。
【0043】
本明細書で論じられる刊行物は、本出願の出願日前のそれらの開示についてのみ提供される。本明細書におけるいかなるものも、本発明が先行発明によってそのような公開に先行する権利がないことを認めるものと解釈されるべきではない。さらに、提供される刊行物の日付は、刊行物の実際の日付とは異なり得、個々に確認される必要があり得る。
【0044】
本明細書に記載の化合物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、分取薄層クロマトグラフィー、フラッシュカラムクロマトグラフィー、およびイオン交換クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィー手段を含む、当該技術分野で既知の手段のうちのいずれかによって精製することができる。順相および逆相、ならびにイオン性樹脂を含む、任意の好適な固定相を使用することができる。例えば、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｍｏｄｅｒｎ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ．Ｌ．Ｒ．Ｓｎｙｄｅｒ ａｎｄ Ｊ．Ｊ．Ｋｉｒｋｌａｎｄ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９７９、およびＴｈｉｎ Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｅｄ Ｅ．Ｓｔａｈｌ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６９を参照されたい。
【0045】
本明細書に記載の化合物は、１つ以上のキラル中心および／または二重結合を含有し得、したがって、二重結合異性体（すなわち、幾何異性体）、鏡像異性体、またはジアステレオマーなどの立体異性体として存在し得る。したがって、立体異性体的に純粋な形態（例えば、幾何学的に純粋、鏡像異性体的に純粋、またはジアステレオマー的に純粋）、ならびに鏡像異性体の混合物および立体異性体の混合物を含む、化合物のすべての可能な鏡像異性体および立体異性体は、本明細書の化合物の記載に含まれる。エナンチオマーの混合物および立体異性体の混合物は、当業者に周知の分離技法またはキラル合成技法を使用して、それらの構成要素のエナンチオマーまたは立体異性体に分解することができる。化合物はまた、エノール形態、ケト形態、およびそれらの混合物を含む、いくつかの互変異性体形態で存在し得る。したがって、本明細書に示される化学構造は、例示される化合物のすべての可能な互変異性形態を包含する。記載の化合物はまた、１つ以上の原子が、自然界で従来見出される原子質量とは異なる原子質量を有する、同位体標識された化合物を含む。本明細書に開示される化合物に組み込むことができる同位体の例としては、限定されないが、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏなどが挙げられる。化合物は、非溶媒和形態、および水和形態を含む、溶媒和形態で存在し得る。一般に、化合物は、水和または溶媒和され得る。ある特定の化合物は、複数の結晶性または非晶質形態で存在し得る。一般に、すべての物理的形態は、本明細書で企図される使用について同等であり、本開示の範囲内であることが意図される。
［発明を実施するための形態］
［発明を実施するための形態］
【0046】
本開示の態様は、骨髄増殖性腫瘍を治療するための方法を含む。特定の実施形態による方法は、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤と、オリゴヌクレオチドならびにオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合した脂質部分を含むテロメラーゼ阻害剤と、を対象に共投与することを含む。いくつかの事例では、骨髄増殖性腫瘍を治療することは、インビトロでの骨髄増殖性腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することなどの、骨髄増殖性腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することを含む。他の事例では、骨髄増殖性腫瘍を治療することは、対象における骨髄増殖性腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することを含む。いくつかの実施形態では、骨髄増殖性腫瘍細胞は、悪性造血幹細胞（ＨＳＣ）である。他の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍細胞は、悪性造血前駆細胞（ＨＰＣ）である。本方法に従って治療される骨髄増殖性腫瘍は、例えば、原発性骨髄線維症などの骨髄線維症（ＭＦ）、または以前のＥＴもしくはＰＶ後の骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦもしくはＰＶ後ＭＦ）を含み得る。他の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍は、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性多血症（ＰＶ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病、および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を含む。他の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。さらに他の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍は、単離されたｄｅｌ（５ｑ）を伴う骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）には、不応性貧血、過剰芽球を伴う不応性貧血、多血球系異形成を伴う不応性血球減少症、単血球系異形成を伴う不応性血球減少症、および慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）などの疾患が含まれる。
【0047】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤を共投与することは、ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤を同時に投与することを含む。ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤が同時に投与されるいくつかの事例では、ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤は、共製剤化され（例えば、錠剤、注射剤、凍結乾燥剤、静脈内流体などのような単一剤形に組み合わされ）、単一用量として対象に投与される。ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤が同時に投与される他の事例では、ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤は、２つの異なる組成物として製剤化され、同時に対象に投与される。
【0048】
他の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤を共投与することは、ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤を順次投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤がまず対象に投与され、続いてテロメラーゼ阻害剤が対象に投与される。一例では、テロメラーゼ阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤が対象に投与される同じ日に、対象に投与される。別の例では、テロメラーゼ阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤が対象に投与された後１３日以内に対象に投与される。例えば、テロメラーゼ阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤の最後の投与量が対象に投与された後３日以内に投与される。
【0049】
実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤を投与した約０～１３日、例えば約１日～約１２日、例えば約２日～約１１日、例えば約３日～約１０日、例えば約４日～約９日、例えば約５日～約８日後に対象にテロメラーゼ阻害剤を投与するなど、およびＪＡＫ阻害剤を投与した約６日～約７日後に対象にテロメラーゼ阻害剤を投与することを含み、ＪＡＫ阻害剤を投与した後約１４日以内に対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤が投与された後３日以内に投与される。特定の事例では、ＪＡＫ阻害剤は、所定の期間にわたって（例えば、以下により詳細に記載されるように、０日～７日の期間にわたって）対象に投与され、テロメラーゼ阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤の最後の用量の約０～１３日、例えば約１日～約１２日、例えば約２日～約１１日、例えば約３日～約１０日、例えば約４日～約９日、例えば約５日～約８日後に対象にテロメラーゼ阻害剤を投与するなど、およびＪＡＫ阻害剤の最後の用量の約６日～約７日後に対象にテロメラーゼ阻害剤を投与することを含み、ＪＡＫ阻害剤の最後の用量後約１４日以内に対象に投与される。いくつかの事例では、テロメラーゼ阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤の最後の用量後３日以内に投与される。
【0050】
いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤がまず対象に投与され、続いてＪＡＫ阻害剤が対象に投与される。いくつかの事例では、ＪＡＫ阻害剤は、テロメラーゼ阻害剤が対象に投与された後１３日以内に対象に投与される。例えば、ＪＡＫ阻害剤は、テロメラーゼ阻害剤の最後の投与量が対象に投与された後３日以内に投与され、その後１日２回投与される。
【0051】
投薬は、ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤の投与のサイクルで投与される。いくつかの実施形態では、サイクルは、２１日であり、いくつかの事例では、サイクルは、２８日以上である。薬物投与のサイクルは、１、２、３、４、５、６、７、８回、または８回を超える投与量サイクル、合計６ヶ月もしくは１年もしくは２年もしくは３年もしくは４年以上の期間にわたって繰り返され得る。
【0052】
特定の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍を治療することは、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の２１日投与サイクルで対象を治療することを含み、方法は、ＪＡＫ阻害剤を２１日間１日当たり１回または２回投与することと、テロメラーゼ阻害剤を２１日投与サイクルの１日目に対象に投与することと、を含む（すなわち、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩はともに、２１日サイクルの１日目に対象に投与される）。特定の事例では、方法は、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の２１日投与サイクルを含み、ＪＡＫ阻害剤は、２１日間１日当たり１回投与され、テロメラーゼ阻害剤は、２１日サイクルの１日目に投与される。他の事例では、方法は、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の２１日投与サイクルを含み、ＪＡＫ阻害剤は、２１日間１日当たり２回投与され、テロメラーゼ阻害剤は、２１日サイクルの１日目に投与される。これらの実施形態によるＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を投与する２１日投与サイクルは、２回以上など、３回以上など、４回以上など、５回以上など、６回以上など、７回以上など、８回以上など、９回以上など、および１０回以上を含む、１回以上繰り返すことができる。ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤の２１日投与サイクルが１回以上繰り返される場合、各２１日投与サイクル間の期間は、１日以上など、２日以上など、３日以上など、４日以上など、５日以上など、６日以上など、および７日以上を含む、０日以上であり得る。使用されるＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤の２１日投与サイクルの数ならびに各サイクル間の期間に応じて、これらの実施形態による対象の治療の期間は、３ヶ月以上など、６ヶ月以上など、１年以上など、２年以上など、３年以上など、４年以上など、５年以上など、６年以上など、７年以上など、８年以上など、９年以上など、および１０年間以上を含む、約１．５ヶ月以上であり得る。
【0053】
特定の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍を治療することは、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の２８日投与サイクルで対象を治療することを含み、方法は、ＪＡＫ阻害剤を２８日間１日当たり１回または２回投与することと、テロメラーゼ阻害剤を２８日投与サイクルの１日目に対象に投与することと、を含む（すなわち、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩はともに、２８日サイクルの１日目に対象に投与される）。特定の事例では、方法は、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の２８日投与サイクルを含み、ＪＡＫ阻害剤は、２８日間１日当たり１回投与され、テロメラーゼ阻害剤は、２８日サイクルの１日目に投与される。他の事例では、方法は、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の２８日投与サイクルを含み、ＪＡＫ阻害剤は、２８日間１日当たり２回投与され、テロメラーゼ阻害剤は、２８日サイクルの１日目に投与される。これらの実施形態によるＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を投与する２８日投与サイクルは、２回以上など、３回以上など、４回以上など、５回以上など、６回以上など、７回以上など、８回以上など、９回以上など、および１０回以上を含む、１回以上繰り返すことができる。ＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤の２８日投与サイクルが１回以上繰り返される場合、各２８日投与サイクル間の期間は、１日以上など、２日以上など、３日以上など、４日以上など、５日以上など、６日以上など、および７日以上を含む、０日以上であり得る。使用されるＪＡＫ阻害剤およびテロメラーゼ阻害剤の２８日投与サイクルの数ならびに各サイクル間の期間に応じて、これらの実施形態による対象の治療の期間は、４ヶ月以上など、６ヶ月以上など、１年以上など、２年以上など、３年以上など、４年以上など、５年以上など、６年以上など、７年以上など、８年以上など、９年以上など、および１０年間以上を含む、約２ヶ月以上であり得る。
【0054】
特定の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍を治療することは、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与サイクルで対象を治療することを含み、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、対象に１４日または２１日間１日当たり１回または２回投与され、続いて１つ以上の用量のテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩のその投与サイクルの最後に投与された投与量の１日～７日後の期間中に対象に投与される。一例では、方法は、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、対象に１４日間１日当たり１回投与され、続いて１つ以上の用量のテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の１日～７日後の期間中に投与される、投与サイクルを含む。別の例では、方法は、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、対象に２１日間１日当たり１回投与され、続いて１つ以上の用量のテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の１日～７日後の期間中に投与される、投与サイクルを含む。さらに別の例では、方法は、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、対象に１４日間１日当たり２回投与され、続いて１つ以上の用量のテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の１日～７日後の期間中に投与される、投与サイクルを含む。また別の例では、方法は、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、対象に２１日間１日当たり２回投与され、続いて１つ以上の用量のテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の１日～７日後の期間中に投与される、投与サイクルを含む。これらの実施形態では、１用量以上のテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩は、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の１日後など、２日後など、３日後など、４日後など、５日後など、６日後など、およびその７日後にテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の１日～７日後に対象に投与される。これらの実施形態によるＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与サイクルは、２回以上など、３回以上など、４回以上など、５回以上など、６回以上など、７回以上など、８回以上など、９回以上など、および１０回以上を含む、１回以上繰り返すことができる。
【0055】
特定の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍を治療することは、テロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の２１日投与サイクルで対象を治療することを含み、方法は、テロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を２１日投与サイクルの１日目に対象に投与し、続いてＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を２１日サイクルのその後の各日に１日当たり１回または２回対象に投与することを含む（すなわち、テロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩は、２１日サイクルの１日目に対象に投与され、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩は、２１日投与サイクルの２～２１日目に１日当たり１回または２回投与される）。特定の事例では、方法は、２１日投与サイクルの１日目にテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を対象に投与し、続いて２１日サイクルのその後の各日に１日当たり１回ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む。他の事例では、方法は、２１日投与サイクルの１日目にテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を対象に投与し、続いて２１日サイクルのその後の各日に１日当たり２回ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む。２１日サイクルでは、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与は、１日に１回または２回のいずれかの投与の前に１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日間遅延され得る。これらの実施形態によるテロメラーゼまたはその薬学的に許容される塩、続いてＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を投与する２１日投与サイクルは、２回以上など、３回以上など、４回以上など、５回以上など、６回以上など、７回以上など、８回以上など、９回以上など、および１０回以上を含む、１回以上繰り返すことができる。テロメラーゼ阻害剤およびＪＡＫ阻害剤の２１日投与サイクルが１回以上繰り返される場合、各２１日投与サイクル間の期間は、１日以上など、２日以上など、３日以上など、４日以上など、５日以上など、６日以上など、および７日以上を含む、０日以上であり得る。使用されるテロメラーゼ阻害剤およびＪＡＫ阻害剤の２１日投与サイクルの数ならびに各サイクル間の期間に応じて、これらの実施形態による対象の治療の期間は、３ヶ月以上など、６ヶ月以上など、１年以上など、２年以上など、３年以上など、４年以上など、５年以上など、６年以上など、７年以上など、８年以上など、９年以上など、および１０年間以上を含む、約１．５ヶ月以上であり得る。
【0056】
特定の実施形態では、骨髄増殖性腫瘍を治療することは、テロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩およびＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の２８日投与サイクルで対象を治療することを含み、方法は、テロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を２８日投与サイクルの１日目に対象に投与し、続いてＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を２８日サイクルのその後の各日に１日当たり１回または２回対象に投与することを含む（すなわち、テロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩は、２８日サイクルの１日目に対象に投与され、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩は、２８日投与サイクルの２～２８日目に１日当たり１回または２回投与される）。特定の事例では、方法は、２８日投与サイクルの１日目にテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を対象に投与し、続いて２８日サイクルのその後の各日に１日当たり１回ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む。他の事例では、方法は、２８日投与サイクルの１日目にテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を対象に投与し、続いて２８日サイクルのその後の各日に１日当たり２回ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む。２８日サイクルでは、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与は、１日に１回または２回のいずれかの投与の前に１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日間遅延され得る。これらの実施形態によるテロメラーゼまたはその薬学的に許容される塩、続いてＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を投与する２８日投与サイクルは、２回以上など、３回以上など、４回以上など、５回以上など、６回以上など、７回以上など、８回以上など、９回以上など、および１０回以上を含む、１回以上繰り返すことができる。テロメラーゼ阻害剤およびＪＡＫ阻害剤の２８日投与サイクルが１回以上繰り返される場合、各２８日投与サイクル間の期間は、１日以上など、２日以上など、３日以上など、４日以上など、５日以上など、６日以上など、および７日以上を含む、０日以上であり得る。使用されるテロメラーゼ阻害剤およびＪＡＫ阻害剤の２８日投与サイクルの数ならびに各サイクル間の期間に応じて、これらの実施形態による対象の治療の期間は、４ヶ月以上など、６ヶ月以上など、１年以上など、２年以上など、３年以上など、４年以上など、５年以上など、６年以上など、７年以上など、８年以上など、９年以上など、および１０年間以上を含む、約２ヶ月以上であり得る。
【0057】
他の実施形態では、方法は、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を所定の期間（１日～２１日）投与することと、ＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の投与を中止することと、対象に投与されたＪＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の最後の投与量の７日（例えば、２日、１日、または同日）以内にテロメラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を投与することと、を含む。この投与サイクルは、２回以上など、３回以上など、４回以上など、５回以上など、６回以上など、７回以上など、８回以上など、９回以上など、および１０回以上を含み、繰り返され得る。
【0058】
本明細書で使用されるヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤という用語は、ヤヌスキナーゼ１（ＪＡＫ１）、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）、ヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）、およびチロシンキナーゼ２（ＴＹＫ２）などの１つ以上のヤヌスキナーゼ酵素の活性を阻害する化合物を指す。特定の実施形態では、目的のＪＡＫ阻害剤は、ヤヌスキナーゼ／シグナル伝達兼転写活性化因子（ＪＡＫ－ＳＴＡＴ）経路に干渉する。ＪＡＫ阻害剤の例には、これらに限定されないが、ルキソリチニブ（（３Ｒ）－３－シクロペンチル－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）ピラゾール－１－イル］プロパンニトリル）、トファシチニブ（３－［（３Ｒ，４Ｒ）－４－メチル－３－［メチル（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ］ピペリジン－１－イル］－３－オキソプロパンニトリル）、オクラシチニブ（Ｎ－メチル｛トランス－４－［メチル（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ］シクロヘキシル｝メタンスルホンアミド）、バリシチニブ（２－［１－エチルスルホニル－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル］アセトニトリル）、ペフィシチニブ（４－［［（１Ｒ，３Ｓ）－５－ヒドロキシ－２－アダマンチル］アミノ］－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－５－カルボキサミド）、フェドラチニブ（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－３－｛５－メチル－２－［４－（２－ピロリジン－１－イル－エトキシ）－フェニルアミノ］－ピリミジン－４－イルアミノ｝－ベンゼンスルホンアミド）、ウパダシチニブ（（３Ｓ，４Ｒ）－３－エチル－４－（３Ｈ－イミダゾ［１，２－ａ］ピロロ［２，３］－ｅ］ピラジン－８－イル）－Ｎ－（２，２，２－トリフルオロエチル）ピロリジン－１－カルボキサミド）、フィルゴチニブ（Ｎ－［５－［４－［（１，１－ジオキソ－１，４－チアジナン－４－イル）メチル］フェニル］－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリジン－２－イル］シクロプロパンカルボキサミド）、セルデュラチニブ（４－（シクロプロピルアミノ）－２－［４－（４－エチルスルホニルピペラジン－１－イル）アニリノ］ピリミジン－５－カルボキサミド）、ガンドチニブ（３－（４－クロロ－２－フルオロベンジル）－２－メチル－Ｎ－（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）－８－（モルホリノメチル）イミダゾ［１，２－ｂ］ピリダジン－６－アミン）、レスタウルチニブ（（５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ）－６－ヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－５－メチル－７，８，１４，１５－テトラヒドロ－５Ｈ－１６－オキサ－４ｂ，８ａ，１４－トリアザ－５，８－メタノジベンゾ［ｂ，ｈ］シクロオクタ［ｊｋｌ］シクロペンタ［ｅ］－ａｓ－インダセン－１３（６Ｈ）－オン）、モメロチニブ（Ｎ－（シアノメチル）－４－｛２－［４－（モルホリン－４－イル）アニリノ］ピリミジン－４－イル｝ベンズアミド）、およびパクリチニブ（（１６Ｅ）－１１－［２－（１－ピロリジニル）エトキシ］－１４，１９－ジオキサ－５，７，２６－トリアザテトラシクロ［１９．３．１．１２，６．１８，１２］ヘプタコサ－１（２５），２（２６），３，５，８，１０，１２（２７），１６，２１，２３－デカエン）、ならびにその薬学的に許容される塩が含まれる。特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、ルキソリチニブ、フェドラチニブ、モメロチニブ、およびパクリチニブ、またはそれらの薬学的に許容される塩、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、フェドラチニブまたはその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、モメロチニブまたはその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、パクリチニブまたはその薬学的に許容される塩である。
【0059】
実施形態では、本明細書で使用されるテロメラーゼ阻害剤という用語は、哺乳動物細胞におけるテロメラーゼ逆転写酵素の活性を低減または阻害することができる化合物を指す。目的のテロメラーゼ阻害剤は、いくつかの事例では、オリゴヌクレオチドを含むｈＴＲテンプレート阻害剤を含む。「ｈＴＲテンプレート阻害剤」は、ヒトテロメラーゼのＲＮＡ成分のテンプレート領域を遮断し、酵素の活性を阻害することができる化合物である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列５’－ＣＵＡＡＣＣＣＵＡＡＣ－３’を有する、この領域のより特異的な部分にハイブリダイズするのに有効な配列を含む。
【0060】
目的のテロメラーゼ阻害剤は、オリゴヌクレオチドならびにオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合した脂質部分を含む。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、細胞外および細胞内ヌクレアーゼによる、非ハイブリダイゼーションまたはハイブリダイゼーション形態で、ヌクレアーゼ切断に実質的に耐性であるサブユニット結合を有する骨格を有する「ヌクレアーゼ耐性結合」を有するオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの事例では、オリゴヌクレオチドは、生理的条件下でヌクレアーゼ切断をほとんどまたは全く示さない。
【0061】
ｈＴＲ配列を標的とする治療用オリゴヌクレオチドの領域は、いくつかの実施形態では、対応するｈＴＲ配列に相補的である。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの塩基配列は、ｈＴＲ標的に相補的である８ヌクレオチド以上など、１０ヌクレオチド以上など、１２ヌクレオチド以上など、１５ヌクレオチド以上など、ｈＴＲ標的に相補的である５ヌクレオチド以上の配列を含む。特定の実施形態では、本開示のテロメラーゼ阻害剤中のオリゴヌクレオチドは、ｈＴＲ標的配列に完全に相補的であり、例えば、オリゴヌクレオチドの全長がｈＴＲ標的配列に相補的である。
【0062】
テロメラーゼ阻害剤は、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、Ｐ３’→Ｎ５’ホスホラミデート、Ｎ３’→Ｐ５’ホスホラミデート、Ｎ３’→Ｐ５’チオホスホラミデート、およびホスホロチオエート結合などの、ヌクレオシド間結合を含む。特定の実施形態では、目的のテロメラーゼ阻害剤は、少なくとも１つのＮ３’→Ｐ５’ホスホラミデート（ＮＰ）またはＮ３’→Ｐ５’チオホスホラミデート（ＮＰＳ）結合を含み、この結合は、構造：３’－（－ＮＨ－－Ｐ（＝Ｏ）（－－ＸＲ）－－Ｏ－）－５’によって表され得、式中、ＸＲがＯＨまたはＳＨである場合、Ｘは、ＯまたはＳであり、Ｒは、水素、アルキル、およびアリール、ならびにそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、すべてのＮＰ、またはいくつかの実施形態では、すべてのＮＰＳ結合を含む。一実施形態では、ｈＴＲテンプレート阻害剤オリゴヌクレオチドの配列は、配列番号１のヌクレオチド４２－５４に相補的な配列である（ＧＧＧＵＵＧＣＧＧＡＧＧＧＵＧＧＧＣＣＵＧＧＧＡＧＧＧＧＵＧＧＵＧＧＣＣＡＵＵＵ ＵＵＵＧＵＣＵＡＡＣＣＣＵＡＡＣＵＧＡＧＡＡＧＧＧＣＧＵＡＧＧＣＧＣＣＧＵＧＣＵＵＵＵＧＣＵＣＣＣＣ ＧＣＧＣＧＣＵＧＵＵＵＵＵＣＵＣＧＣＵＧＡＣＵＵＵＣＡＧＣＧＧＧＣＧＧＡＡＡＡＧＣＣＵＣＧＧＣＣＵＧ ＣＣＧＣＣＵＵＣＣＡＣＣＧＵＵＣＡＵＵＣＵＡＧＡＧＣＡＡＡＣＡＡＡＡＡＡＵＧＵＣＡＧＣＵＧＣＵＧＧＣ ＣＣＧＵＵＣＧＣＣＵＣＣＣＧＧＧＧＡＣＣＵＧＣＧＧＣＧＧＧＵＣＧＣＣＵＧＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＧＡＡＣ ＣＣＣＧＣＣＵＧＧＡＧＣＣＧＣＧＧＵＣＧＧＣＣＣＧＧＧＧＣＵＵＣＵＣＣＧＧＡＧＧＣＡＣＣＣＡＣＵＧＣ ＣＡＣＣＧＣＧＡＡＧＡＧＵＵＧＧＧＣＵＣＵＧＵＣＡＧＣＣＧＣＧＧＧＵＣＵＣＵＣＧＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧ ＣＧＡＧＧＵＵＣＡＣＣＧＵＵＵＣＡＧＧＣＣＧＣＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＣＧＧＡＧＣＧＡＧＵＣＣＣＧＣＣ ＧＣＧＧＣＧＣＧＡＵＵＣＣＣＵＧＡＧＣＵＧＵＧＧＧＡＣＧＵＧＣＡＣＣＣＡＧＧＡＣＵＣＧＧＣＵＣＡＣＡ ＣＡＵＧＣＡＧＵＵＣＧＣＵＵＵＣＣＵＧＵＵＧＧＵＧＧＧＧＧＧＡＡＣＧＣＣＧＡＵＣＧＵＧＣＧＣＡＵＣＣ ＧＵＣＡＣＣＣＣＵＣＧＣＣＧＧＣＡＧＵＧＧＧＧＧＣＵＵＧＵＧＡＡＣＣＣＣＣＡＡＡＣＣＵＧＡＣＵＧＡＣ ＵＧＧＧＣＣＡＧＵＧＵＧＣＵ）。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列５’－ＣＵＡＡＣＣＣＵＡＡＣ－３’を有する１１ヌクレオチド領域のいくらかの部分に相補的またはほぼ相補的である配列を含む。この配列（ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡ、配列番号１２）およびＮ３’→Ｐ５’チオホスホラミデート（ＮＰＳ）結合を有するオリゴヌクレオチドは、本明細書ではＧＲＮ１６３と表される。例えば、Ａｓａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６３：３９３１－３９３９（２００３）およびＧｒｙａｚｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ２２（５－８）：５７７－８１（２００３）を参照されたい。別の標的領域は、ｈＴＲのヌクレオチド１３７～１７９にわたる領域である（Ｐｒｕｚａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３０：５５９－５６８，２００２を参照されたい）。この領域内では、１４１～１５３にわたる配列が好ましい標的である。ＰＣＴ公開第９８／２８４４２号は、テロメラーゼを阻害するための少なくとも７ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドの使用を記載しており、オリゴヌクレオチドは、ｈＴＲのヌクレオチド１３７～１９６、２９０～３１９、および３５０～３８０を含む、テンプレート領域の外側のｈＴＲ配列のアクセス可能な部分に相補的であるように設計される。好ましいｈＴＲ標的配列を以下に示し、配列番号２～２２によって特定する。特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤のオリゴヌクレオチドは、ヒトテロメラーゼＲＮＡ（ｈＴＲ）を標的とする配列を有し、以下の配列を含むが、これに限定されない。
【表A】
【0063】
本開示のテロメラーゼ阻害剤は、オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合した脂質部分を含む。いくつかの事例では、構造基は、非修飾形態と比較してより少量のコンジュゲートされたオリゴヌクレオチドを使用して同等の生物学的効果が得られ得るように、優れた細胞取り込み特性を提供する。脂質部分は、炭化水素および脂肪酸の誘導体などの、脂肪族炭化水素または脂肪酸であり得る。例えば、脂質部分は、ミリスチン酸（テトラデカン酸）、パルミチン酸（ヘキサデカン酸）、およびステアリン酸（オクタデカン酸）、ならびにそれらの対応する脂肪族炭化水素形態、テトラデカン、ヘキサデカン、およびオクタデカンなどの１４～２０個の炭素を有する飽和直鎖化合物であり得る。他の脂質部分の例としては、コレステロールなどのステロール、ならびに置換脂肪酸および炭化水素、特にこれらの基のポリフッ素化形態が挙げられる。特定の実施形態では、脂質部分は、脂質部分のアミン、アミド、エステル、およびカルバメート誘導体などの１つ以上の誘導体を含む。一例では、脂質部分は、パルミトイルアミドなどの、パルミトイル（Ｃ１６）部分である。脂質部分は、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーなどの、リンカーを通してオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされ得る。
【0064】
いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、米国特許第９，３７５，４８５号に記載される化合物であり、その開示は参照によって本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタット（配列５’－ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡ－３’で構成される５’パルミトイル化１３－ｍｅｒチオホスホラミデートオリゴヌクレオチド）、またはイメテルスタットナトリウム（ＧＲＮ１６３Ｌ）：
などの、その薬学的に許容される塩である。
【化2】
【0065】
本方法の実施において、対象に投与されるＪＡＫ阻害剤または薬学的に許容される塩の量は、約１０ｍｇ／日～約５５０ｍｇ／日など、１０ｍｇ／日～約４００ｍｇ／日など、約１５ｍｇ／日～約３００ｍｇ／日など、約２０ｍｇ／日～約２００ｍｇ／日など、約２５ｍｇ／日～約１００ｍｇ／日など、および約３０ｍｇ／日～約３５ｍｇ／日を含む、約１ｍｇ／日～約６００ｍｇ／日の範囲で変動し得る。特定の実施形態では、対象に投与されるＪＡＫ阻害剤の量は、約１０ｍｇ／日～約４００ｍｇ／日である。
【0066】
対象に投与されるルキソリチニブまたは薬学的に許容される塩の各投与量は、約７．５ｍｇ～約２７．５ｍｇなど、約１０ｍｇ～約２５ｍｇなど、約１２．５ｍｇ～約２２．５ｍｇなど、および約１５ｍｇ～約２０ｍｇを含む、約５ｍｇ～約４０ｍｇの範囲で変動し得る。特定の実施形態では、対象に投与されるＪＡＫ阻害剤の投与量は、５．０ｍｇ、５．１ｍｇ、５．２ｍｇ、５．３ｍｇ、５．４ｍｇ、５．５ｍｇ、５．６ｍｇ、５．７ｍｇ、５．８ｍｇ、５．９ｍｇ、６．０ｍｇ、６．１ｍｇ、６．２ｍｇ、６．３ｍｇ、６．４ｍｇ、６．５ｍｇ、６．６ｍｇ、６．７ｍｇ、６．８ｍｇ、６．９ｍｇ、７ｍｇ、７．１ｍｇ、７．２ｍｇ、７．３ｍｇ、７．４ｍｇ、７．５ｍｇ、７．６ｍｇ、７．７ｍｇ、７．８ｍｇ、７．９ｍｇ、８ｍｇ、８．１ｍｇ、８．２ｍｇ、８．３ｍｇ、８．４ｍｇ、８．５ｍｇ、８．６ｍｇ、８．７ｍｇ、８．８ｍｇ、８．９ｍｇ、９ｍｇ、９．１ｍｇ、９．２ｍｇ、９．３ｍｇ、９．４ｍｇ、９．５ｍｇ、９．６ｍｇ、９．７ｍｇ、９．８ｍｇ、９．９ｍｇ、１０ｍｇ、１０．１ｍｇ、１０．２ｍｇ、１０．３ｍｇ、１０．４ｍｇ、１０．５ｍｇ、１０．６ｍｇ、１０．７ｍｇ、１０．８ｍｇ、１０．９ｍｇ、１１ｍｇ、１１．１ｍｇ、１１．２ｍｇ、１１．３ｍｇ、１１．４ｍｇ、１１．５ｍｇ、１１．６ｍｇ、１１．７ｍｇ、１１．８ｍｇ、１１．９ｍｇ、１２ｍｇ、１２．１ｍｇ、１２．２ｍｇ、１２．３ｍｇ、１２．４ｍｇ、１２．５ｍｇ、１２．６ｍｇ、１２．７ｍｇ、１２．８ｍｇ、１２．９ｍｇ、１３ｍｇ、１３．１ｍｇ、１３．２ｍｇ、１３．３ｍｇ、１３．４ｍｇ、１３．５ｍｇ、１３．６ｍｇ、１３．７ｍｇ、１３．８ｍｇ、１３．９ｍｇ、１４ｍｇ、１４．１ｍｇ、１４．２ｍｇ、１４．３ｍｇ、１４．４ｍｇ、１４．５ｍｇ、１４．６ｍｇ、１４．７ｍｇ、１４．８ｍｇ、１４．９ｍｇ、または１５ｍｇである。
【0067】
特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤ルキソリチニブは、対象に、対象が約１００×１０９／Ｌ血小板未満のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回５ｍｇ、対象が約１００×１０９／Ｌ血小板～約２００×１０９／Ｌ血小板のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回１５ｍｇ、対象が約２００×１０９／Ｌ血小板超のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回２０ｍｇの投与量で投与される。
【0068】
特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、フェドラチニブまたはその薬学的に許容される塩であり、対象が約５０×１０９／Ｌ以上のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり１回４００ｍｇの投与量で対象に投与される。特定の事例では、フェドラチニブまたはその薬学的に許容される塩は、１日当たり１回３００ｍｇの投与量で対象に投与される。他の事例では、フェドラチニブまたはその薬学的に許容される塩は、対象に２００ｍｇの投与量で１日当たり１回投与される。さらに他の事例では、フェドラチニブまたはその薬学的に許容される塩は、対象に１００ｍｇの投与量で１日当たり１回投与される。さらに他の事例では、フェドラチニブまたはその薬学的に許容される塩は、対象に１００ｍｇ未満の投与量で１日当たり１回投与される。
【0069】
他の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、モメロチニブまたはその薬学的に許容される塩であり、対象に４００ｍｇの投与量で１日当たり１回投与される。特定の事例では、モメロチニブまたはその薬学的に許容される塩は、対象に３００ｍｇの投与量で１日当たり１回投与される。他の事例では、モメロチニブまたはその薬学的に許容される塩は、対象に２００ｍｇの投与量で１日当たり１回投与される。いくつかの事例では、モメロチニブまたはその薬学的に許容される塩は、１５０ｍｇの投与量で１日当たり２回投与される。さらに他の事例では、モメロチニブまたはその薬学的に許容される塩は、対象に１００ｍｇの投与量で１日当たり１回投与される。
【0070】
他の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、パクリチニブまたはその薬学的に許容される塩であり、１日当たり１回約１００ｍｇ～約５００ｍｇなど、１日当たり１回約１５０ｍｇ～約４００ｍｇなど、および１日当たり１回約２００ｍｇ～約３５０ｍｇを含む、１日当たり１回約５０ｍｇ～約６００ｍｇの投与量で対象に投与される。特定の事例では、パクリチニブまたは薬学的に許容される塩は、１日当たり２回約１００ｍｇ～約５００ｍｇなど、１日当たり２回約１５０ｍｇ～約４００ｍｇなど、および１日当たり２回約２００ｍｇ～約３５０ｍｇを含む、１日当たり２回約５０ｍｇ～約６００ｍｇの投与量で対象に投与される。他の事例では、パクリチニブまたは薬学的に許容される塩は、対象に１日当たり１回１００ｍｇ、または１日当たり２回約１００ｍｇ、または１日当たり２回２００ｍｇの投与量で投与される。
【0071】
特定の実施形態による方法はまた、対象にＪＡＫ阻害剤を投与する前に、対象のベースラインまたは治療前血小板数を決定することを含む。これらの実施形態では、方法は、対象のベースラインまたは治療前血小板数を決定することと、対象のベースラインまたは治療前血小板数に基づいて、対象に投与するためのＪＡＫ阻害剤の量を決定することと、を含み得る。任意の便利な血液学プロトコルを使用して、手動もしくは自動血液学分析装置によって、または血球計算盤によってなど、対象のベースラインまたは治療前血小板数を決定することができる。対象のベースラインまたは治療前血小板数（および投与されるＪＡＫ阻害剤の量）は、本明細書に記載される方法の実施形態によって対象にＪＡＫ阻害剤投与量を投与する１分以上、例えば２分以上、例えば５分以上、例えば１０分以上、例えば１５分以上、例えば３０分以上、例えば６０分以上、例えば２時間以上、例えば３時間以上、例えば６時間以上、例えば１２時間以上前に決定され得、対象にＪＡＫ阻害剤を投与する２４時間前に対象のベースラインまたは治療前血小板数を決定することを含む。
【0072】
ＪＡＫ阻害剤の各投与量は、１日当たり２回など、１日当たり３回など、および１日当たり４回を含む、１日当たり１回以上、対象に投与され得る。特定の実施形態では、方法は、ＪＡＫ阻害剤を対象に１日当たり１回投与することを含む。他の実施形態では、方法は、ＪＡＫ阻害剤を対象に１日当たり２回投与することを含む。いくつかの事例では、ＪＡＫ阻害剤は、対象に３０日、２９日、２８日、２７日、２６日、２５日、２４日、２３日、２２日、２１日、２０日、１９日、１８日、１７日、１６日、１５日、１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日、もしくは２日、または１日の期間にわたるサイクルで１日当たり１回以上投与される。いくつかの事例では、ＪＡＫ阻害剤は、対象に約１日～約３０日の期間にわたって１日当たり１回、例えば、約１日～約２８日、１日～２１日、７日～１４日の期間にわたって１日当たり１回投与される。他の事例では、ＪＡＫ阻害剤は、対象に約１日～約３０日の期間にわたって１日当たり２回、例えば、約１日～約２８日、１日～２１日、７日～１４日の期間にわたって１日当たり１回投与される。
【0073】
ＪＡＫ阻害剤は、対象に２日～約２０日など、約３日～約１９日など、約４日～約１８日など、約５日～約１７日など、約６日～約１６日など、および約７日～約１４日を含む、約１日～約２１日の期間にわたって１日当たり１回以上投与され得る。一例では、方法は、対象にＪＡＫ阻害剤を、２日～約２０日など、約３日～約１９日など、約４日～約１８日など、約５日～約１７日など、約６日～約１６日など、約１日～約２１日の期間にわたって１日当たり１回投与することを含み、対象にＪＡＫ阻害剤を約７日～約１４日の期間にわたって１日当たり１回投与することを含む。別の例では、方法は、対象にＪＡＫ阻害剤を、２日～約２０日など、約３日～約１９日など、約４日～約１８日など、約５日～約１７日など、約６日～約１６日など、約１日～約２１日の期間にわたって１日当たり２回投与することを含み、対象にＪＡＫ阻害剤を約７日～約１４日の期間にわたって１日当たり２回投与することを含む。特定の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、対象が約１００×１０９／Ｌ血小板未満のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回約５ｍｇ、対象が約１００×１０９／Ｌ血小板～約２００×１０９／Ｌ血小板のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回約１５ｍｇ、または対象が約２００×１０９／Ｌ血小板超のベースライン血小板数を有する場合、１日当たり２回約２０ｍｇの投与量で対象に投与される。
【0074】
対象に投与されるイメテルスタットまたはイメテルスタットナトリウムなどの、テロメラーゼ阻害剤の投与量は、約４．０ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇなど、約６ｍｇ／ｋｇ～約１４ｍｇ／ｋｇなど、約７ｍｇ／ｋｇ～約１３ｍｇ／ｋｇなど、約８ｍｇ／ｋｇ～約１２ｍｇ／ｋｇなど、約７．５ｍｇ／ｋｇ～約９．４ｍｇ／ｋｇなど、および約９ｍｇ／ｋｇ～約１１ｍｇ／ｋｇを含む、約４ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇの範囲で変動し得る。いくつかの実施形態では、対象に投与されるテロメラーゼ阻害剤の投与量は、約７．５ｍｇ／ｋｇ～約９．４ｍｇ／ｋｇである。例えば、テロメラーゼ阻害剤の投与量は、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．１ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．３ｍｇ／ｋｇ、４．４ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．６ｍｇ／ｋｇ、４．７ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、４．９ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．２ｍｇ／ｋｇ、５．３ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、５．６ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ、５．８ｍｇ／ｋｇ、５．９ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．１ｍｇ／ｋｇ、６．２ｍｇ／ｋｇ、６．３ｍｇ／ｋｇ、６．４ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、６．６ｍｇ／ｋｇ、６．７ｍｇ／ｋｇ、６．８ｍｇ／ｋｇ、６．９ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．１ｍｇ／ｋｇ、７．２ｍｇ／ｋｇ、７．３ｍｇ／ｋｇ、７．４ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、７．６ｍｇ／ｋｇ、７．７ｍｇ／ｋｇ、７．８ｍｇ／ｋｇ、７．９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、８．１ｍｇ／ｋｇ、８．２ｍｇ／ｋｇ、８．３ｍｇ／ｋｇ、８．４ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、８．６ｍｇ／ｋｇ、８．７ｍｇ／ｋｇ、８．８ｍｇ／ｋｇ、８．９ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、９．１ｍｇ／ｋｇ、９．２ｍｇ／ｋｇ、９．３ｍｇ／ｋｇ、９．４ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、９．６ｍｇ／ｋｇ、９．７ｍｇ／ｋｇ、９．８ｍｇ／ｋｇ、９．９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１０．１ｍｇ／ｋｇ、１０．２ｍｇ／ｋｇ、１０．３ｍｇ／ｋｇ、１０．４ｍｇ／ｋｇ、１０．５ｍｇ／ｋｇ、１０．６ｍｇ／ｋｇ、１０．７ｍｇ／ｋｇ、１０．８ｍｇ／ｋｇ、１０．９ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１１．１ｍｇ／ｋｇ、１１．２ｍｇ／ｋｇ、１１．３ｍｇ／ｋｇ、１１．４ｍｇ／ｋｇ、１１．５ｍｇ／ｋｇ、１１．６ｍｇ／ｋｇ、１１．７ｍｇ／ｋｇ、１１．８ｍｇ／ｋｇ、１１．９ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１２．１ｍｇ／ｋｇ、１２．２ｍｇ／ｋｇ、１２．３ｍｇ／ｋｇ、１２．４ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、１２．６ｍｇ／ｋｇ、１２．７ｍｇ／ｋｇ、１２．８ｍｇ／ｋｇ、１２．９ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇであり得る。特定の実施形態では、対象に投与されるテロメラーゼ阻害剤の投与量は、約９．４ｍｇ／ｋｇである。
【0075】
イメテルスタットまたはイメテルスタットナトリウムなどの、テロメラーゼ阻害剤の投与量は、１週間ごとに１回、２週間（１４日）ごとに１回、３週間（２１日）ごとに１回、または４週間（２８日）ごとに１回、６週間ごとに１回、８週間ごとに１回、１０週間ごとに１回、１２週間ごとに１回のサイクルで対象に投与され得る。方法の特定の実施形態では、イメテルスタットは、１、２、３、４、５、６、７、８、または８を超える投与量サイクルで投与され、各サイクルは、３週間ごとに１回約４～１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットの静脈内投与、４週間ごとに１回約４～１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットの静脈内投与、２週間ごとに１回約４～１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットの静脈内投与、または３週間ごとに１回約７．５～９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットの静脈内投与を含む。特定の事例では、各投与量サイクルは、４週間ごとに１回約７．５～９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットの静脈内投与を含む。いくつかの場合では、各投与量サイクルは、約３週間ごとに１回約９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットの静脈内投与を含む。
【0076】
いくつかの実施形態では、個体に投与される、イメテルスタットまたはイメテルスタットナトリウムなどのテロメラーゼ阻害剤の量は、約０．５～約５ｍｇ、約５～約１０ｍｇ、約１０～約１５ｍｇ、約１５～約２０ｍｇ、約２０～約２５ｍｇ、約２０～約５０ｍｇ、約２５～約５０ｍｇ、約５０～約７５ｍｇ、約５０～約１００ｍｇ、約７５～約１００ｍｇ、約１００～約１２５ｍｇ、約１２５～約１５０ｍｇ、約１５０～約１７５ｍｇ、約１７５～約２００ｍｇ、約２００～約２２５ｍｇ、約２２５～約２５０ｍｇ、約２５０～約３００ｍｇ、約３００～約３５０ｍｇ、約３５０～約４００ｍｇ、約４００～約４５０ｍｇ、または約４５０～約５００ｍｇである。いくつかの実施形態では、個体に投与される有効量（例えば、単位剤形）のテロメラーゼ阻害剤の量は、約５ｍｇ～約５００ｍｇ、例えば、約３０ｍｇ～約３００ｍｇ、または約５０ｍｇ～約２００ｍｇの範囲である。いくつかの実施形態では、個体に投与されるテロメラーゼ阻害剤の濃度は、希釈（約０．１ｍｇ／ｍｌ）または濃縮（約１８０ｍｇ／ｍｌ）であり、例えば、約０．１～約２００ｍｇ／ｍｌ、約０．１～約１８０ｍｇ／ｍｌ、約０．１～約１６０ｍｇ／ｍｌ、約０．１～約１４０ｍｇ／ｍｌ、約０．１～約１２０ｍｇ／ｍｌ、約０．１～約１００ｍｇ／ｍｌ、約０．１～約８０ｍｇ／ｍｌ、約０．１～約６０ｍｇ／ｍｌ、約０．１～約４０ｍｇ／ｍｌ、約０．１～約２０ｍｇ／ｍｌ、約０．１～約１０ｍｇ／ｍｌ、約２～約４０ｍｇ／ｍｌ、約４～約３５ｍｇ／ｍｌ、約６～約３０ｍｇ／ｍｌ、約８～約２５ｍｇ／ｍｌ、約１０～約２０ｍｇ／ｍｌ、約１２～約１５ｍｇ／ｍｌのうちのいずれか、または約０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ、０．７ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、１．１ｍｇ／ｍｌ、１．２ｍｇ／ｍｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ、１．４ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、１．６ｍｇ／ｍｌ、１．７ｍｇ／ｍｌ、１．８ｍｇ／ｍｌ、１．９ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、２．１ｍｇ／ｍｌ、２．２ｍｇ／ｍｌ、２．３ｍｇ／ｍｌ、２．４ｍｇ／ｍｌ、または２．５ｍｇ／ｍｌのうちのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の濃度は、少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１１ｍｇ／ｍｌ、１２ｍｇ／ｍｌ、１３ｍｇ／ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、１６ｍｇ／ｍｌ、１７ｍｇ／ｍｌ、１８ｍｇ／ｍｌ、１９ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２１ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌ、２３ｍｇ／ｍｌ、２４ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、２６ｍｇ／ｍｌ、２７ｍｇ／ｍｌ、２８ｍｇ／ｍｌ、２９ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、３１ｍｇ／ｍｌ、３２ｍｇ／ｍｌ、３３ｍｇ／ｍｌ、３３．３ｍｇ／ｍｌ、３４ｍｇ／ｍｌ、３５ｍｇ／ｍｌ、３６ｍｇ／ｍｌ、３７ｍｇ／ｍｌ、３８ｍｇ／ｍｌ、３９ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１１０ｍｇ／ｍｌ、１２０ｍｇ／ｍｌ、１３０ｍｇ／ｍｌ、１４０ｍｇ／ｍｌ、１５０ｍｇ／ｍｌ、１６０ｍｇ／ｍｌ、１７０ｍｇ／ｍｌ、１８０ｍｇ／ｍｌ、１９０ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、２１０ｍｇ／ｍｌ、２２０ｍｇ／ｍｌ、２３０ｍｇ／ｍｌ、２４０ｍｇ／ｍｌ、または２５０ｍｇ／ｍｌのうちのいずれかである。
【0077】
実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の各投与量は、対象に１０日以上ごとに１回など、１４日以上ごとに１回など、２１日以上ごとに１回など、２８日以上ごとに１回など、および３５日以上ごとに１回を含む、７日以上ごとに１回投与される。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、対象に２週間ごとに１回投与される。他の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、対象に３週間ごとに１回投与される。さらに他の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、４週間ごとに１回投与される。いくつかの事例では、テロメラーゼ阻害剤の各投与量は、約０．５時間～約５時間など、約１時間～約４時間など、および約２時間～約３時間の期間を含む、約０．１時間～約６時間の期間をかけて対象に投与される。特定の事例では、テロメラーゼ阻害剤は、約２時間の期間をかけて対象に投与される。
【0078】
いくつかの実施形態では、骨髄増殖性腫瘍を治療するための方法は、ＪＡＫ阻害剤を対象に所定の時間にわたって投与することと、ＪＡＫ阻害剤の投与を中断することと、ＪＡＫ阻害剤の最後の用量後、所定の期間内にテロメラーゼ阻害剤を対象に投与することと、を含む。これらの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、約１日～約２１日など、約２日～約１４日など、および約２日～約７日を含む、約０日～約２８日の期間にわたって投与され得る。ＪＡＫ阻害剤は、１日当たり１回、１日当たり２回、１日当たり３回、または１日当たり４回投与され得る。テロメラーゼ阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤の投与を中止した後６日以内など、５日以内など、４日以内など、および３日以内を含む、ＪＡＫ阻害剤の最後の用量の７日以内に対象に投与される。
【0079】
いくつかの実施形態では、骨髄増殖性腫瘍を治療するための方法は、テロメラーゼ阻害剤を対象に所定の時間にわたって投与することと、テロメラーゼ阻害剤の投与を中止することと、テロメラーゼ阻害剤の投与を中止した後、所定の期間内にＪＡＫ阻害剤を対象に投与することと、を含む。これらの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、約１日～約２１日など、約２日～約１４日など、および約２日～約７日を含む、約０日～約２８日の期間にわたって投与され得る。ＪＡＫ阻害剤は、１日当たり１回、１日当たり２回、１日当たり３回、または１日当たり４回投与され得る。このサイクルは、２、３、４、５、６回以上繰り返され得る。
【0080】
特定の実施形態では、方法は、対象にルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を０日～１４日の期間にわたって１日当たり１回投与することと、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩の最後に投与された投与量の３日（例えば、２日、１日、または同日）以内にイメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩を対象に投与することと、を含む。次いで、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩は、これらの実施形態では、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、または４週間ごとに１回投与され得る。
【0081】
各薬学的組成物の投与は、約１ヶ月～約７年など、（維持療法中などの）長期間にかけて延長することができる。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤組成物およびテロメラーゼ阻害剤組成物のうちの１つ以上は、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４、３０、３６、４８、６０、７２、または８４ヶ月のうちのいずれかの期間にかけて投与され得る。他の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤組成物およびテロメラーゼ阻害剤組成物のうちの１つ以上は、対象の残りの生涯にわたって投与される。
【0082】
実施形態では、本方法を実施するために適したＪＡＫ阻害剤組成物およびテロメラーゼ阻害剤組成物は、経口、静脈内、皮下、筋肉内、局所、腹腔内、鼻腔内、吸入、または眼内投与のうちの１つ以上に製剤化され得る。本明細書に記載されるＪＡＫ阻害剤組成物およびテロメラーゼ阻害剤組成物、ならびに適切な投与量を投与するために使用される所望のプロトコルは、特定の実施形態では、有資格の医療従事者（例えば、医師）によって決定され得る。
【0083】
薬学的組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体を含み得る。薬学的に許容される賦形剤は、例えば、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ ７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、およびＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄ ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃ．を含む、様々な刊行物に十分に記載されている。例えば、１つ以上の賦形剤は、スクロース、デンプン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウムまたは炭酸カルシウム、結合剤（例えば、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アラビアガム、ポリ（エチレングリコール）、スクロース、またはデンプン）、崩壊剤（例えば、デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルデンプン、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、重炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、またはクエン酸カルシウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、軽質無水ケイ酸、タルク、またはラウリル硫酸ナトリウム）、香味剤（例えば、クエン酸、メントール、グリシン、または橙色粉末）、防腐剤（例えば、安息香酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メチルパラベン、またはプロピルパラベン）、安定剤（例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、または酢酸）、懸濁剤（例えば、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、またはステアリン酸アルミニウム）、分散剤（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、希釈剤（例えば、水）、およびベースワックス（例えば、カカオバター、白色ワセリン、またはポリエチレングリコール）を含み得る。
【0084】
いくつかの実施形態では、目的の組成物は、水性緩衝液を含む。好適な水性緩衝液としては、これらに限定されないが、約５ｍＭ～約１００ｍＭで強度が変動する酢酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、およびリン酸塩緩衝液が挙げられる。いくつかの実施形態では、水性緩衝液は、等張溶液を提供する試薬を含む。そのような試薬としては、限定されないが、塩化ナトリウム、ならびに糖、例えば、マンニトール、デキストロース、スクロースなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、水性緩衝液は、ポリソルベート２０または８０などの非イオン性界面活性剤をさらに含む。いくつかの事例では、目的の組成物は、防腐剤をさらに含む。好適な防腐剤としては、これらに限定されないが、ベンジルアルコール、フェノール、クロロブタノール、塩化ベンザルコニウムなどが挙げられる。多くの場合では、組成物は、約４℃で保存される。製剤はまた、凍結乾燥され得、その場合、それらは一般的に、スクロース、トレハロース、ラクトース、マルトース、マンニトールなどの凍結保護剤を含む。凍結乾燥された製剤は、周囲温度であっても、長期間にわたって保存することができる。
【0085】
いくつかの実施形態では、組成物は、ラクトース、マンニトール、トウモロコシデンプン、またはジャガイモデンプンなどの、他の添加剤を、結晶性セルロース、セルロース誘導体、アカシア、トウモロコシデンプン、またはゼラチンなどの結合剤と、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムなどの崩壊剤と、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤と、ならびに必要に応じて希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、防腐剤、および香味剤とともに含む。
【0086】
組成物が注射用に製剤化される場合、組成物は、植物性または他の類似の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステル、またはプロピレングリコールなどの水性または非水性溶媒中で、必要に応じて、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤、および防腐剤などの従来の添加剤とともに、ＪＡＫ阻害剤またはテロメラーゼ阻害剤を溶解、懸濁、または乳化することによって製剤化され得る。
【実施例】
【0087】
以下の実施例は、当業者に本発明の作製および使用方法の完全な開示および記載を提供するために提示されており、発明者がそれらの発明とみなす範囲を限定することを意図するものではなく、また以下の実験が実施されるすべてまたは唯一の実験であることを表すことを意図するものではない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関する正確性を確保するために努力がなされているが、いくつかの実験誤差および偏差が考慮される必要がある。別段の指示がない限り、部分は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度にあり、圧力はほぼ大気圧にある。「平均」とは、算術平均を意味する。標準的な略語、例えば、ｂｐ、塩基対；ｋｂ、キロベース；ｐｌ、ピコリットル、ｓまたはｓｅｃ、秒；ｍｉｎ、分；ｈまたはｈｒ、時間；ａａ、アミノ酸；ｋｂ、キロベース；ｂｐ、塩基対；ｎｔ、ヌクレオチド；ｉ．ｍ、筋肉内（の）；腹腔内（の）；ｓ．ｃ．、皮下（の）などが使用され得る。
【0088】
材料および方法
化合物。イメテルスタットナトリウム（ＧＲＮ１６３Ｌ）は、配列５’－ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡ－３’で構成される５’パルミトイル化１３－ｍｅｒチオホスホラミデートオリゴヌクレオチドである。ミスマッチオリゴヌクレオチド（ＭＭ）は、配列５’－ＴＡＧＧＴＧＴＡＡＧＣＡＡ－３’で構成される５’パルミトイル化１３－ｍｅｒチオホスホラミデートオリゴヌクレオチドである。両方の化合物は、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＬＬＣ（Ｒａｒｉｔａｎ、ＮＪ、ＵＳＡ）によって提供された。ルキソリチニブ（（３Ｒ）－３－シクロペンチル－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）ピラゾール－１－イル］プロパンニトリル）は、Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ＬＬＣ（Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ、ＵＳＡ）から購入した。
化合物。イメテルスタットナトリウム（ＧＲＮ１６３Ｌ）は、配列５’－ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡ－３’で構成される５’パルミトイル化１３－ｍｅｒチオホスホラミデートオリゴヌクレオチドである。ミスマッチオリゴヌクレオチド（ＭＭ）は、配列５’－ＴＡＧＧＴＧＴＡＡＧＣＡＡ－３’で構成される５’パルミトイル化１３－ｍｅｒチオホスホラミデートオリゴヌクレオチドである。両方の化合物は、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＬＬＣ（Ｒａｒｉｔａｎ、ＮＪ、ＵＳＡ）によって提供された。ルキソリチニブ（（３Ｒ）－３－シクロペンチル－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）ピラゾール－１－イル］プロパンニトリル）は、Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ＬＬＣ（Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ、ＵＳＡ）から購入した。
【0089】
患者検体および細胞調製。単細胞懸濁液は、治療的脾臓摘出術を必要とする進行形態のＭＦを有する１３人の患者の外科的に除去された脾臓から調製した（表１）。これらの患者の各々の変異性ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬを表１に示す。臍帯血（ＣＢ）収集物は、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒによって提供された。ＣＤ３４＋細胞選択キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ、Ｃａｎａｄａ）を使用して、ＣＤ３４＋細胞を単核細胞から選択した。ＦＡＣＳＣａｎｔｏフローサイトメーターを使用して分析される９０％以上の純度を有するＣＤ３４＋細胞を各実験で使用した。
＊各ＭＦ患者のＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ状態は、リアルタイム対立遺伝子特異的ポリメラーゼ連鎖反応（ＡＳ－ＰＣＲ）アッセイを利用してＰＢ顆粒球を分析することによって決定した。ＣＡＬＲの変異分析は、ＣＡＬＲの既知の変異が以前に記載されているＤＮＡの領域を配列決定することによって実施した。ＡＳ－ＰＣＲによって、ＭＰＬＷ５１５Ｌ／Ｋ変異を検出した。ＷＴ：野生型。Ｎ／Ａ：該当なし。
【表1】
【0090】
正常またはＭＦ脾臓ＣＤ３４＋細胞が移植されたＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ２Ｒヌル（ＮＳＧ）マウスを様々な薬物によって単独でまたは組み合わせて直接治療する。ＮＳＧマウスによって忍容され、正常ＣＤ３４＋細胞の挙動に最小限の影響を及ぼしたイメテルスタット単独の用量を特定するために、８～１０ドナーからのＣＢ ＣＤ３４＋細胞をプールし（ｎ＝３）、尾静脈を介して８～９週齢の亜致死的に照射された（２４０ｃＧｙ）ＮＳＧマウスに移植した（５×１０５／マウス）。次いで、これらのマウスに、移植の１週間後、腹腔内（ＩＰ）に、５、１５、３０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットまたはＭＭを４～８週間にわたって毎週３回注射した。イメテルスタットまたはＭＭ投与の中止から２～３ヶ月後、マウスを屠殺し、大腿骨、脛骨、上腕骨の骨髄（ＢＭ）から細胞を回収した。ヒト（ｈ）ＣＤ４５＋、ＣＤ４１ａ＋、およびＣＤ３４＋細胞の存在を、ｍＡｂ染色およびフローサイトメトリー分析によって決定した。
【0091】
ＭＦ ＨＳＣに対するイメテルスタットの効果を調べるために、ＭＦ脾臓ＣＤ３４＋細胞（３～５×１０５／マウス、ｎ＝３）は、ＮＳＧマウスへのそれらの移植が利用された４ヶ月後に著しい程度のヒト細胞キメラ現象を達成することが示された。これらの脾臓からのＣＤ３４＋細胞をＮＳＧマウスに移植し、１週間後、イメテルスタットまたはＭＭによって１５ｍｇ／ｋｇの用量で４週間治療した。薬物治療の中止から３ヶ月後、レシピエントマウスのＢＭ中の様々なヒト造血細胞系統に属する細胞の存在を定量化した。加えて、レシピエントマウスのＢＭ中のｈＣＤ４５＋細胞を、ＦＡＣＳＡｒｉａ細胞選別機を使用して選択した。８５．１％の顆粒球ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ対立遺伝子負荷を有する患者からの脾臓ＣＤ３４＋細胞を受けるマウス由来の選択されたｈＣＤ４５＋細胞のゲノムＤＮＡ中に存在するＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ／ＪＡＫ２合計のパーセンテージを、対立遺伝子判別法での定量的リアルタイム（ＲＴ）－ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて決定した。ｈＣＤ４５＋細胞がマウスＢＭ中の有核細胞の０．１％以上で存在した場合、ヒト生着はＮＳＧマウスにおいて生じたものとして認められた。
【0092】
Ｒｕｘおよびイメテルスタット単独ならびに組み合わせでのインビボ試験を、図１に示されるように行った。１２ドナーからのＣＢ ＣＤ３４＋細胞（ｎ＝１）（２．５×１０５／マウス）またはＭＦ ＨＳＣに対するイメテルスタット単独治療の効果について評価された２人の患者からのＭＦ脾臓ＣＤ３４＋細胞（３～５×１０５／マウス）を、尾静脈を介して８～９週齢の亜致死的に照射された（２４０ｃＧｙ）ＮＳＧマウスに移植した。移植の１週間後、移植されたマウスを２～３匹のマウスの８つの治療コホートに無作為に分け、以下のように治療した。群１：Ｒｕｘ単独、群２：イメテルスタットまたはＭＭ単独、群３：同時ＲｕｘおよびイメテルスタットまたはＭＭ（Ｒｕｘ＋Ｉｍｅ）、群４：Ｒｕｘ、続いてイメテルスタットまたはＭＭ（Ｒｕｘ→ＩｍｅまたはＭＭ）、群５：ビヒクル単独。Ｒｕｘは、４５ｍｇ／ｋｇの用量で１週間にわたって強制経口投与によって１日１回与え、イメテルスタットまたはＭＭは、４週間にわたって１０ｍｇ／ｋｇのＩ．Ｐ．注射によって１週間に３回与えた。移植の４ヶ月後、マウスを屠殺し、上記のように分析した。
【0093】
ウェスタンブロッティング。主要ＣＢおよび脾臓ＭＦ ＣＤ３４＋細胞を溶解した。次いで、タンパク質溶解物を、以前に記載されたように４～２０％のＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析した。ウサギ抗ｈＴＥＲＴ、および対応するＨＲＰコンジュゲート二次抗体をＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，（Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）から調達した。タンパク質を、増強された化学発光検出（ＥＣＬ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）によって可視化した。
【0094】
テロメラーゼ活性（ＴＡ）アッセイ。定量的テロメラーゼ検出キットを利用して、ＴＡを測定した。ＴＡを、テロメア特異的配列オリゴヌクレオチド基質の存在下でテロメア反復合成を監視することによって、０．０１～０．１μｇの細胞溶解物中で測定した。次いで、新たに合成されたＤＮＡをＰＣＲによって検出した。結果を、得られたＰＣＲ生成物への結合から生じるＳＹＢＲ緑色蛍光の検出に必要なリアルタイムＰＣＲ閾値サイクル（ＣＴ）の数としてプロットした。熱不活化テロメラーゼを、各実験条件下での細胞抽出物の陰性対照として使用した。増加したＴＡは、より少ないＰＣＲサイクル（ＣＴ）を必要とした、増加した二本鎖ＤＮＡ合成と関連付けられた（例えば、ＣＴ数が低いほど、ＴＡが高い）。
【0095】
テロメラーゼ長分析。テロメア長の分析のために、フロー蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（Ｆｌｏｗ－ＦＩＳＨ）をフローサイトメトリーのためのテロメアＰＮＡキット／ＦＩＴＣで行った。同数の原発性ＭＦまたは正常ＣＢ ＣＤ３４＋細胞を、ＦＩＴＣコンジュゲートペプチド核酸（ＰＮＡ）テロメアプローブを含まないハイブリダイゼーション溶液の存在下またはプローブを含有するハイブリダイゼーション溶液中のいずれかで、マイクロ遠心チューブにおいて再懸濁させた。チューブを、８２℃に調整された予熱加熱ブロック中に１０分間配置し、試料ＤＮＡを変性させた。次いで、プローブがＴＴＡＧＧＧテロメア反復とハイブリダイズするために、チューブを室温（ＲＴ）で一晩暗所に置いた。ハイブリダイゼーションに続いて、４０℃の洗浄溶液を用いた２回の１０分のハイブリダイゼーション後洗浄を行った。最後の洗浄ステップ後、細胞をＣＤ３４およびＣＤ３８ｍＡｂで染色し、ＤＮＡ溶液とともに２～３時間インキュベートした後、フローサイトメトリー分析を行った。各試料からのＣＤ３４＋、ＣＤ３４＋ＣＤ３８－、およびＣＤ３４＋ＣＤ３８＋細胞のテロメア蛍光強度（ＴＦＩ）を以下のように計算した：ＴＦＩ＝プローブを伴わないＦＩＴＣ－ＰＮＡのプローブ－ＭＦＩを伴うＦＩＴＣ－ＰＮＡの平均蛍光強度（ＭＦＩ）。ＴＦＩが高いほど、テロメアが長くなる。
【0096】
Ｒｕｘおよびイメテルスタット単独および組み合わせの用量を用いたＭＦおよび正常ＣＤ３４＋細胞の治療。インビトロ試験は、ＣＢ ＣＤ３４＋細胞の数が、様々な用量のＲｕｘ（５０～５００ｎＭ）での治療後に限られた程度までのみ減少したが、ＭＦ脾臓ＣＤ３４＋細胞の絶対数が用量依存的に減少したことを示す。ＭＦ ＣＤ３４＋細胞増殖およびＣＦＵ－ＧＭ形成の５０％阻害は、１５０ｎＭのＲｕｘを使用することによって達成された。これらの観察およびイメテルスタットのインビトロ試験からの結果に基づいて、５０ｎＭのＲｕｘおよび１．８μＭのイメテルスタットが選択され、これら２つの薬物の順次または同時併用が、ＭＦ ＨＳＣ／ＨＰＣに対する付加的または相乗的な効果を有したかを決定した。図２はインビトロ併用試験設計の概略図を示し、図３は薬物治療戦略を示す。簡潔に、ＣＢ（ｎ＝３）またはＭＦ（ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ＋、ｎ＝３、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ－、ｎ＝４）（２．５×１０４／ｍＬ）ＣＤ３４＋細胞を、３日間Ｒｕｘ（５０ｎＭ）単独、または７日（短期治療）もしくは１４日（長期治療）間イメテルスタット（１．８ｕＭ）単独の存在下で、５０ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、１００ｎｇ／ｍｌのＦＬＴ－３リガンド（ＦＬＴ－３Ｌ）、１００ｎｇ／ｍｌのＴＰＯ、および５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－３（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏ－Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）が補充された無血清増殖培地（ＳＦＥＭ、ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中でインキュベートした。同時併用治療のために、ＣＤ３４＋細胞をＲｕｘおよびイメテルスタットに３日間曝露し、洗浄した。次いで、細胞を再度イメテルスタットにさらに４日または１１日間曝露した。順次併用治療のために、ＣＤ３４＋細胞を、Ｒｕｘ単独の存在下で３日間、続いてイメテルスタット単独で７日または１４日間インキュベートした。イメテルスタットを含有する３つの治療戦略について、細胞にイメテルスタットを合計３回投与した。Ｒｕｘ単独治療の３日後、およびイメテルスタットによる各治療の７日または１４日後に、細胞を数え、ＣＤ３４、系統カクテル、およびＣＤ１５ｍＡｂで染色し、フローサイトメトリーで分析した。培養物中で生成されたＬｉｎ－ＣＤ３４＋（表現型的に定義されたＨＳＣ／ＨＰＣ）およびＣＤ１５＋ＣＤ３４－（骨髄）細胞の絶対数は、合計生存細胞数にＣＤ３４＋Ｌｉｎ－およびＣＤ１５＋ＣＤ３４－細胞のパーセンテージを乗じることによって計算した。加えて、ＭＭまたはビヒクル単独が添加された並列培養を行った。
【0097】
ＨＰＣアッセイ。上記培養物から採取された細胞の画分も、製造業者の指示（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従ってサイトカインカクテルが添加されたメチルセルロース中で分析した。コロニーの数は、１２～１４日のインキュベーション後に数えた。個々のＣＦＵ－ＧＭコロニー（２０～３８コロニー／治療群／患者）を取り出し、ネステッド対立遺伝子特異的ＰＣＲを使用してＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆの存在について分析した。次いで、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ＋ＣＦＵ－ＧＭのパーセンテージを決定した。
【0098】
統計分析。結果は、平均±ＳＤとして報告される。両側スチューデントｔ検定を用いて、統計学的有意性を決定した。すべてのＰ値は両側であり、０．０５未満のＰ値は有意であると考えられた。
【0099】
結果および考察
Ｒｕｘと組み合わされたイメテルスタットによる順次治療は、ＭＦ ＨＳＣおよびＨＰＣに対する付加的な阻害活性を有する。図４～５に示されるように、Ｒｕｘ単独（５０ｎＭ）、イメテルスタット単独（１．８μＭ）、これらの薬物の組み合わせの同時または順次の短期（図４）または長期（図５）のいずれの用量も、正常な表現型的に定義されたＣＢ ＨＳＣ、ならびに機能的に定義されたＨＰＣ産生および正常な骨髄細胞の生成の数に影響を及ぼさなかった。これらの２つの薬物単独および組み合わせの効果を、ＭＦ ＨＳＣ／ＨＰＣ上で評価した。図６～７に示されるように、Ｒｕｘ単独は、脾臓ＭＦ ＣＤ３４＋細胞の培養物中で生成されたアッセイ可能なＨＰＣの数（ＣＦＵ－ＧＭ＋ＢＦＵ－Ｅ＋ＣＦＵ－ＧＥＭＭ、Ｐ＝９．６９Ｅ－０６、図６～７、パネルＢ）および成熟骨髄細胞の数（図６～７、パネルＣ、Ｐ＝０．００１）を低減した。しかしながら、短期イメテルスタット単独でも、短期同時または順次薬物併用治療でも、表現型的に定義されたＭＦ ＨＳＣ、機能的に定義されたＨＰＣ産生および骨髄細胞生成の数に影響を与えなかった。５０ｎＭ用量のＲｕｘ、続いて１．８μＭ用量のイメテルスタットを用いた脾臓ＭＦ ＣＤ３４＋細胞の順次長期治療は、対照的に、Ｌｉｎ－ＣＤ３４＋細胞、アッセイ可能なＨＰＣ、および成熟骨髄細胞の数の有意な低減をもたらした（図７）。そのような順次併用治療は、ＭＦ Ｌｉｎ－ＣＤ３４＋細胞（Ｐ＝０．００１対Ｒｕｘ単独、Ｐ＝０．０５９対イメテルスタット単独、図７、パネルＡ）およびアッセイ可能なＨＰＣ（Ｐ＝０．０２対Ｒｕｘ単独、Ｐ＝０．０５対イメテルスタット単独、図７、パネルＢ）の産生を、いずれかの薬物単独治療よりもさらに大きな程度に抑制した。同じ薬物併用での順次長期治療に曝露された培養物中で生成されたＣＤ１５＋ＣＤ３４－細胞の数は、Ｒｕｘ単独またはイメテルスタット単独の存在下で培養物中で生成されたものと同様の程度に低減した（図６、パネルＣ、図７、パネルＣ）。しかしながら、Ｌｉｎ－ＣＤ３４＋細胞およびアッセイ可能なＨＰＣに対するそのような阻害効果は、同じ薬物併用での長期同時治療を受けた培養物において観察されなかった（図７）。これらの発見は、Ｒｕｘ、続いてイメテルスタットでの順次治療が、表現型的に定義されたＭＦ ＨＳＣおよび機能的に定義されたＭＦ ＨＰＣに対する付加的な阻害効果をもたらすが、それらの正常な対応物には影響しないことを示す。そのような併用治療が、変異体ＭＦ ＨＰＣに選択的に影響を及ぼしたかを決定するために、生成された個々のＣＦＵ－ＧＭコロニーを選択し、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆの存在について遺伝子型決定した。図８に示されるように、Ｒｕｘおよびイメテルスタットを用いたＳＰ７ ＣＤ３４＋細胞の順次長期併用治療は、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ＋骨髄前駆体のパーセンテージ（ビヒクル単独：９４．２％、Ｒｕｘ→ＭＭ：８８．９％、Ｒｕｘ→イメテルスタット：７５％、図８、パネルＡ）および絶対数（ビヒクル単独：Ｒｕｘ→ＭＭ：５０．３％、Ｒｕｘ→イメテルスタット：２２．７％、図８、パネルＢ）の両方において低減をもたらし、これはイメテルスタット単独（ビヒクル単独に対して：７２．４％、図８、パネルＢ）または同時併用治療（ビヒクル単独に対して：６０．３％、図８、パネルＢ）よりもさらに低かった。ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ＋骨髄前駆体の絶対数の低減は、別の患者細胞（Ｐｔ１３、ビヒクル単独と比較した絶対数：Ｒｕｘ→ＭＭ：９７．５％、Ｒｕｘ→イメテルスタット：４４．１％、図８、パネルＣ）でも見られた。これらの発見は、Ｒｕｘ、続いてイメテルスタットでの順次治療によって、悪性ＭＦ ＨＰＣに対する付加的な阻害活性を達成することができることを示す。
Ｒｕｘと組み合わされたイメテルスタットによる順次治療は、ＭＦ ＨＳＣおよびＨＰＣに対する付加的な阻害活性を有する。図４～５に示されるように、Ｒｕｘ単独（５０ｎＭ）、イメテルスタット単独（１．８μＭ）、これらの薬物の組み合わせの同時または順次の短期（図４）または長期（図５）のいずれの用量も、正常な表現型的に定義されたＣＢ ＨＳＣ、ならびに機能的に定義されたＨＰＣ産生および正常な骨髄細胞の生成の数に影響を及ぼさなかった。これらの２つの薬物単独および組み合わせの効果を、ＭＦ ＨＳＣ／ＨＰＣ上で評価した。図６～７に示されるように、Ｒｕｘ単独は、脾臓ＭＦ ＣＤ３４＋細胞の培養物中で生成されたアッセイ可能なＨＰＣの数（ＣＦＵ－ＧＭ＋ＢＦＵ－Ｅ＋ＣＦＵ－ＧＥＭＭ、Ｐ＝９．６９Ｅ－０６、図６～７、パネルＢ）および成熟骨髄細胞の数（図６～７、パネルＣ、Ｐ＝０．００１）を低減した。しかしながら、短期イメテルスタット単独でも、短期同時または順次薬物併用治療でも、表現型的に定義されたＭＦ ＨＳＣ、機能的に定義されたＨＰＣ産生および骨髄細胞生成の数に影響を与えなかった。５０ｎＭ用量のＲｕｘ、続いて１．８μＭ用量のイメテルスタットを用いた脾臓ＭＦ ＣＤ３４＋細胞の順次長期治療は、対照的に、Ｌｉｎ－ＣＤ３４＋細胞、アッセイ可能なＨＰＣ、および成熟骨髄細胞の数の有意な低減をもたらした（図７）。そのような順次併用治療は、ＭＦ Ｌｉｎ－ＣＤ３４＋細胞（Ｐ＝０．００１対Ｒｕｘ単独、Ｐ＝０．０５９対イメテルスタット単独、図７、パネルＡ）およびアッセイ可能なＨＰＣ（Ｐ＝０．０２対Ｒｕｘ単独、Ｐ＝０．０５対イメテルスタット単独、図７、パネルＢ）の産生を、いずれかの薬物単独治療よりもさらに大きな程度に抑制した。同じ薬物併用での順次長期治療に曝露された培養物中で生成されたＣＤ１５＋ＣＤ３４－細胞の数は、Ｒｕｘ単独またはイメテルスタット単独の存在下で培養物中で生成されたものと同様の程度に低減した（図６、パネルＣ、図７、パネルＣ）。しかしながら、Ｌｉｎ－ＣＤ３４＋細胞およびアッセイ可能なＨＰＣに対するそのような阻害効果は、同じ薬物併用での長期同時治療を受けた培養物において観察されなかった（図７）。これらの発見は、Ｒｕｘ、続いてイメテルスタットでの順次治療が、表現型的に定義されたＭＦ ＨＳＣおよび機能的に定義されたＭＦ ＨＰＣに対する付加的な阻害効果をもたらすが、それらの正常な対応物には影響しないことを示す。そのような併用治療が、変異体ＭＦ ＨＰＣに選択的に影響を及ぼしたかを決定するために、生成された個々のＣＦＵ－ＧＭコロニーを選択し、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆの存在について遺伝子型決定した。図８に示されるように、Ｒｕｘおよびイメテルスタットを用いたＳＰ７ ＣＤ３４＋細胞の順次長期併用治療は、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ＋骨髄前駆体のパーセンテージ（ビヒクル単独：９４．２％、Ｒｕｘ→ＭＭ：８８．９％、Ｒｕｘ→イメテルスタット：７５％、図８、パネルＡ）および絶対数（ビヒクル単独：Ｒｕｘ→ＭＭ：５０．３％、Ｒｕｘ→イメテルスタット：２２．７％、図８、パネルＢ）の両方において低減をもたらし、これはイメテルスタット単独（ビヒクル単独に対して：７２．４％、図８、パネルＢ）または同時併用治療（ビヒクル単独に対して：６０．３％、図８、パネルＢ）よりもさらに低かった。ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ＋骨髄前駆体の絶対数の低減は、別の患者細胞（Ｐｔ１３、ビヒクル単独と比較した絶対数：Ｒｕｘ→ＭＭ：９７．５％、Ｒｕｘ→イメテルスタット：４４．１％、図８、パネルＣ）でも見られた。これらの発見は、Ｒｕｘ、続いてイメテルスタットでの順次治療によって、悪性ＭＦ ＨＰＣに対する付加的な阻害活性を達成することができることを示す。
【0100】
イメテルスタットおよびＲｕｘによる順次併用治療は、ＭＦ ＳＲＣに対する付加的な阻害活性を有する。イメテルスタット（１０ｍｇ／ｋｇ）およびＲｕｘ（４５ｍｇ／ｋｇ）による併用治療が、ＣＢまたはＭＦ ＣＤ３４＋細胞が移植されたＮＳＧマウスをこれら２つの薬物で直接治療することによって、正常またはＭＦ ＨＳＣに対する付加効果を有したかの評価を行った。図９、パネルＡおよびＤは、これらの薬物単独または組み合わせでの治療後のＣＢ ＣＤ３４＋細胞が移植されたマウスの骨髄に存在するｈＣＤ４５＋（図９、パネルＡ）およびｈＣＤ３４＋細胞（図９、パネルＤ）のＦＡＣＳプロットを示す。これらの治療は、正常なＣＢ移植片を受けたレシピエントマウスの骨髄（図９、パネルＢ、Ｅ）および脾臓（図９、パネルＣ、Ｆ）におけるｈＣＤ４５＋細胞キメラ現象およびｈＣＤ３４＋細胞生成の程度を低減しなかったか、または軽度の低減をもたらしただけである。対照的に、同等の用量のＲｕｘおよびイメテルスタットを用いたＰｔ５からの脾臓ＣＤ３４＋細胞が移植されたマウスの同時および順次併用治療の療法は、いずれかの薬物単独治療と比較して、骨髄（図１０、パネルＢ）および脾臓（図１０、パネルＣ）におけるｈＣＤ４５＋細胞の絶対数のより大きな低減をもたらした。また、順次併用治療は、同時併用治療よりもさらに大きなｈＣＤ４５＋細胞の数の低減をもたらした（図１０、パネルＢ～Ｃ）。さらに、Ｐｔ５ ＣＤ３４＋細胞が移植されたマウスの骨髄において、いずれかの薬物単独治療と比較して順次であるが同時ではない併用治療で、ｈＣＤ３４＋細胞の絶対数のより大きな低減が観察された（図１０、パネルＥ）。Ｐｔ５からの移植片が移植されたマウスの脾臓においてｈＣＤ３４＋細胞が検出されなかったため、移植されたマウスの脾臓におけるｈＣＤ３４＋細胞に対するこれらの治療の効果を評価することができなかった。順次併用治療によるＭＦ ＳＲＣの枯渇は、別の患者、Ｐｔ１０（図１１）からの脾臓ＣＤ３４＋細胞を受けるマウスにおいても達成されたが、いずれかの薬物単独での治療は、この患者からのＭＦ ＳＲＣに対する限定された阻害効果を有した。これらの発見は、Ｒｕｘ、続いてイメテルスタットの用量での順次治療が、ＭＦ長期ＨＳＣの枯渇において少なくとも付加的な活性を有することを示す。この同じ順次薬物スキーマは、正常なＨＳＣ機能に影響を与えなかった。加えて、図１２Ａ～１２Ｂに示されるように、各薬物の用量での順次併用治療は、同じ用量（１０ｍｇ／ｋｇ）のイメテルスタット単独を受けるマウスと比較して、正常（図１２Ａ）またはＭＦ脾臓ＣＤ３４＋細胞（図１２Ｂ）のいずれかを受けるマウスにおける体重の同様の低減をもたらした。まとめて、これらの観察は、Ｒｕｘ、続いてイメテルスタットによる順次治療が、許容される毒性プロファイルを有するＭＦ幹細胞を排除することができる有効な治療戦略を表すことを示す。
【0101】
前述の発明は、理解を明確にする目的のために例示および例としていくらか詳細に記載されているが、添付の特許請求の範囲の趣旨または範囲から逸脱することなく、特定の変更および修正が行われ得ることが本発明の教示に照らして当業者には容易に明らかである。
【0102】
したがって、前述は、発明の原理を例示するにすぎない。当業者は、本明細書に明示的に記載または示されていないが、本発明の原理を具現化し、その趣旨および範囲内に含まれる、様々な構成を考案することができるであろうことが理解されるであろう。さらに、本明細書に列挙されるすべての例および条件付き言語は、主に、本発明の原理および発明者によって当該技術分野を促進するために寄与される概念を読者が理解するのを支援することを意図しており、そのような具体的に列挙される例および条件への限定を含まないものとして解釈されるべきである。また、本発明の原理、態様、および実施形態、ならびにそれらの特定の例を列挙する本明細書におけるすべての記述は、それらの構造的および機能的等価物の両方を包含することが意図される。加えて、そのような等価物は、現在既知の等価物および将来開発される等価物の両方、すなわち、構造にかかわらず、同じ機能を行う任意の開発される要素を含むことが意図される。また、本明細書に開示されるいかなるものも、そのような開示が特許請求の範囲で明示的に列挙されるかにかかわらず、公衆に提供されることを意図しない。
【0103】
したがって、本発明の範囲は、本明細書に示され、記載される例示的な実施形態に限定されることが意図されるものではない。むしろ、本発明の範囲および趣旨は、添付の特許請求の範囲によって具現化される。特許請求の範囲では、米国特許法第１１２条（ｆ）または米国特許法第１１２条（６）は、特許請求の範囲における特徴について、特許請求の範囲においてそのような特徴の最初に正確な句「～のための手段」または正確な句「～のためのステップ」が列挙される場合にのみ、援用されると明示的に定義され、そのような正確な句が特許請求の範囲において特徴に使用されない場合、米国特許法第１１２条（ｆ）または米国特許法第１１２条（６）は援用されない。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9-1】
【図9-2】
【図10-1】
【図10-2】
【図10-3】
【図11】
【図12A】
【図12B】
【配列表】
【国際調査報告】