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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-01-11
(54)【発明の名称】関節炎の処置
(51)【国際特許分類】
A61K 31/415 20060101AFI20221228BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20221228BHJP
A61P 19/06 20060101ALI20221228BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20221228BHJP
【ＦＩ】
A61K31/415
A61P19/02
A61P19/06
A61P29/00 101
A61P29/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022526156
(86)(22)【出願日】2020-11-06
(85)【翻訳文提出日】2022-05-20
(86)【国際出願番号】 EP2020081291
(87)【国際公開番号】W WO2021089783
(87)【国際公開日】2021-05-14
(31)【優先権主張番号】1916237.9
(32)【優先日】2019-11-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520004395
【氏名又は名称】インフレイゾーム リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】クーパー，マシュー
(72)【発明者】
【氏名】オーネイル，ルーク
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC36
4C086GA13
4C086GA15
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA52
4C086NA10
4C086NA14
4C086ZA96
4C086ZB11
4C086ZB15
4C086ZC31
(57)【要約】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
関節炎の処置または予防における使用のための、式（Ｉ）：【化1】
【請求項2】
前記関節炎が、痛風である、請求項１に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項3】
前記関節炎が、偽痛風である、請求項１に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項4】
前記関節炎が、関節リウマチである、請求項１に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項5】
前記関節炎が、変形性関節症である、請求項１に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項6】
前記処置または予防が、炎症の処置または予防を含む、いずれかの前記請求項に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項7】
前記処置または予防が、前記化合物または前記その塩の経口投与を含む、いずれかの前記請求項に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項8】
前記化合物または塩が、ナトリウム塩である、いずれかの前記請求項に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項9】
前記化合物または塩が、一ナトリウム塩である、いずれかの前記請求項に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項10】
前記化合物または塩が、一水和物である、いずれかの前記請求項に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項11】
前記化合物または塩が、結晶性である、いずれかの前記請求項に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項12】
前記化合物または塩が、結晶性一ナトリウム一水和物塩である、任意の前記請求項に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項13】
４．３°２θ、８．７°２θ、および２０．６°２θ（全て±０．２°２θ）にピークを含むＸＲＰＤスペクトルを有する、請求項１２に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項14】
ＸＲＰＤスペクトルを有しその中の１０個の最も強いピークが４．３°２θ、６．２°２θ、６．７°２θ、７．３°２θ、８．７°２θ、９．０°２θ、１２．１°２θ、１５．８°２θ、１６．５°２θ、１８．０°２θ、１８．１°２θ、２０．６°２θ、２１．６°２θ、および２４．５°２θ（全て±０．２°２θ）から選択される２θ値を有する５個以上のピークを含む、請求項１２または１３に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項15】
医薬的に許容できる賦形剤といずれかの前記請求項に記載の使用のための化合物または塩とを含む医薬組成物。
【請求項16】
経口投与に適する、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項17】
それを必要とする患者における関節炎の処置または予防のための方法であって、式（Ｉ）：【化2】
【請求項18】
前記関節炎が、痛風である、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
前記関節炎が、偽痛風である、請求項１７に記載の方法。
【請求項20】
前記関節炎が、関節リウマチである、請求項１７に記載の方法。
【請求項21】
前記関節炎が、変形性関節症である、請求項１７に記載の方法。
【請求項22】
前記処置または予防が、炎症の処置または予防を含む、請求項１７～２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項23】
前記処置または予防が、前記化合物または前記その塩の経口投与を含む、請求項１７～２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項24】
前記化合物または塩が、ナトリウム塩である、請求項１７～２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項25】
前記化合物または塩が、一ナトリウム塩である、請求項１７～２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項26】
前記化合物または塩が、一水和物である、請求項１７～２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項27】
前記化合物または塩が、結晶性である、請求項１７～２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項28】
前記化合物または塩が、結晶性一ナトリウム一水和物塩である、請求項１７～２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項29】
前記結晶性一ナトリウム一水和物塩が、４．３°２θ、８．７°２θ、および２０．６°２θ（全て±０．２°２θ）にピークを含むＸＲＰＤスペクトルを有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項30】
前記結晶性一ナトリウム一水和物塩が、ＸＲＰＤスペクトルを有しその中の１０個の最も強いピークが４．３°２θ、６．２°２θ、６．７°２θ、７．３°２θ、８．７°２θ、９．０°２θ、１２．１°２θ、１５．８°２θ、１６．５°２θ、１８．０°２θ、１８．１°２θ、２０．６°２θ、２１．６°２θ、および２４．５°２θ（全て±０．２°２θ）から選択される２θ値を有する５個以上のピークを含む、請求項２８または２９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、関節炎の処置または予防における使用のための、式（Ｉ）：
の化合物に関する。
【化1】
【背景技術】
【0002】
関節炎は、痛風、偽痛風、関節リウマチおよび変形性関節症を含む。
【0003】
ＮＬＲＰ３は、痛風および偽痛風の病原性に関連づけられている（Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， １３： ３５２－３５７， ２０１２； Ｄｕｅｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ４６４： １３５７－１３６１， ２０１０； Ｓｔｒｏｗｉｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ４８１： ２７８－２８６， ２０１２；およびＫｌｕｃｋ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ， ２（５）： Ｅ２７０－Ｅ２８０， ２０２０）。痛風は、比較的一般的な疾患であり、欧州では１～２％、および米国では３～４％の有病率である。現行の薬物療法は、抗炎症的／鎮痛的処置および血清尿酸塩濃度の低下に重点を置いている。慢性処置相では、最大処置に適切に応答しない患者の下位集団が存在する。これは、薬物への過敏症または有害事象が原因である可能性がある。「難治性痛風患者」と呼ばれるこれらの患者は、著しいアンメットニーズを有する。偽痛風は、ＮＬＲＰ３を活性化するピロリン酸カルシウム結晶により介在されると考えられる。
【0004】
変形性関節症（ＯＡ）は、世界の関節炎の最も一般的な形態であり、人口のおよそ３．５％が冒されている。変形性関節症は、炎症性タンパク質およびプロテアーゼが関節破壊を引き起こすと、引き起こされる。ＮＬＲＰ３活性化は、炎症成分を駆動することが示されており、その阻害は、疾患進行を停止し得る（Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ， １０８（３６）： １４８６７－１４８７２， ２０１１； Ｇｕｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ， １９４（２）： ２３１－２４３， ２０１８； Ｂｒａｄｄｏｃｋ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ， ３： １－１０， ２００４； ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｃａｒｔｉｌａｇｅ， ２６（５）： ６１２－６１９， ２０１８；およびＲｉｄｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ３７７： １１１９－１１３１， ２０１７）。
【0005】
関節リウマチ（ＲＡ）もまた、比較的一般的であり、人口のおよそ１％が冒されており、関節リウマチもまた、ＮＬＲＰ３に関与することが示されている（Ｍａｓｔｅｒｓ， Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ， １４７（３）： ２２３－２２８， ２０１３； Ｂｒａｄｄｏｃｋ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ， ３： １－１０， ２００４； Ｉｎｏｕｅ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， １３９： １１－１８， ２０１３； Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ， ３４（１）： ８８－９３， ２０１６； Ｇｕｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ， １９４（２）： ２３１－２４３， ２０１８；およびＤｏｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌｕｌａｒ ＆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， １７： ２６１－２７１， ２０２０）。
【発明の概要】
【0006】
本発明は、式（Ｉ）の化合物が、最も特別には経口経路を介して、関節炎の処置において特に効果的である、という発見に基づく。
【0007】
本発明の第一の態様において、関節炎の処置または予防における使用のための、式（Ｉ）：
の化合物またはその医薬的に許容できる塩が提供される。
【化2】
【0008】
一実施形態において、関節炎は、難治性痛風などの痛風である。別の実施形態において、関節炎は、偽痛風である。別の実施形態において、関節炎は、関節リウマチである。別の実施形態において、関節炎は、変形性関節症である。
【0009】
一実施形態において、処置または予防は、炎症の処置または予防を含む。典型的には、炎症の処置または予防は、ＮＬＲＰ３阻害を介して実現される。本明細書で用いられる用語「ＮＬＲＰ３阻害」は、ＮＬＲＰ３の活性レベルの完全な、または部分的な低減を指し、例えば活性ＮＬＲＰ３の阻害および／またはＮＬＲＰ３活性化の阻害を包含する。
【0010】
一実施形態において、処置または予防は、化合物またはその塩の経口投与を含む。
【0011】
一実施形態において、化合物または塩は、一ナトリウム塩などの、ナトリウム塩である。一実施形態において、化合物または塩は、一水和物である。一実施形態において、化合物または塩は、結晶性である。一実施形態において、化合物または塩は、結晶性一ナトリウム一水和物塩である。一実施形態において、結晶性一ナトリウム一水和物塩は、４．３°２θ、８．７°２θ、および２０．６°２θ（全て±０．２°２θ）にピークを含むＸＲＰＤスペクトルを有する。一実施形態において、結晶性一ナトリウム一水和物塩は、ＸＲＰＤスペクトルを有し、その中の１０個の最も強いピークは、４．３°２θ、６．２°２θ、６．７°２θ、７．３°２θ、８．７°２θ、９．０°２θ、１２．１°２θ、１５．８°２θ、１６．５°２θ、１８．０°２θ、１８．１°２θ、２０．６°２θ、２１．６°２θ、および２４．５°２θ（全て±０．２°２θ）から選択される２θ値を有する５個以上のピークを含む。ＸＲＰＤスペクトルは、全体として参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２０１９／２０６８７１号に記載された通り得られてよい。
【0012】
一実施形態において、結晶性一ナトリウム一水和物塩は、全体として参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２０１９／２０６８７１号に記載される通りである。一実施形態において、結晶性一ナトリウム一水和物塩は、全体として参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２０１９／２０６８７１号に記載される多形体を有する。一実施形態において、結晶性一ナトリウム一水和物塩は、全体として参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２０１９／２０６８７１号に記載される方法に従って調製される。
【0013】
本発明の第二の態様において、医薬的に許容できる賦形剤と、本発明の第一の態様の化合物または塩とを含む医薬組成物が提供される。一実施形態において、医薬組成物は、経口投与に適する。
【0014】
本発明の第三の態様において、それを必要とする患者における関節炎の処置または予防のための方法であって、式（Ｉ）：
の化合物またはその医薬的に許容できる塩の治療的または予防的に効果的な量を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法が提供される。
【化3】
【0015】
一実施形態において、関節炎は、難治性痛風などの痛風である。別の実施形態において、関節炎は、偽痛風である。別の実施形態において、関節炎は、関節リウマチである。別の実施形態において、関節炎は、変形性関節症である。
【0016】
一実施形態において、処置または予防は、炎症の処置または予防を含む。典型的には、炎症の処置または予防は、ＮＬＲＰ３阻害を介して実現される。
【0017】
一実施形態において、処置または予防は、化合物またはその塩の経口投与を含む。
【0018】
一実施形態において、化合物または塩は、一ナトリウム塩などの、ナトリウム塩である。一実施形態において、化合物または塩は、一水和物である。一実施形態において、化合物または塩は、結晶性である。一実施形態において、化合物または塩は、結晶性一ナトリウム一水和物塩である。一実施形態において、結晶性一ナトリウム一水和物塩は、４．３°２θ、８．７°２θ、および２０．６°２θ（全て±０．２°２θ）にピークを含むＸＲＰＤスペクトルを有する。一実施形態において、結晶性一ナトリウム一水和物塩は、ＸＲＰＤスペクトルを有し、その中の１０個の最も強いピークは、４．３°２θ、６．２°２θ、６．７°２θ、７．３°２θ、８．７°２θ、９．０°２θ、１２．１°２θ、１５．８°２θ、１６．５°２θ、１８．０°２θ、１８．１°２θ、２０．６°２θ、２１．６°２θ、および２４．５°２θ（全て±０．２°２θ）から選択される２θ値を有する５個以上のピークを含む。ＸＲＰＤスペクトルは、全体として参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２０１９／２０６８７１号に記載された通り得られてもよい。
【0019】
一実施形態において、結晶性一ナトリウム一水和物塩は、全体として参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２０１９／２０６８７１号に記載される通りである。一実施形態において、結晶性一ナトリウム一水和物塩は、全体として参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２０１９／２０６８７１号に記載される多形体を有する。一実施形態において、結晶性一ナトリウム一水和物塩は、全体として参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２０１９／２０６８７１号に記載される方法に従って調製される。
【図面の簡単な説明】
【0020】
【発明を実施するための形態】
【0021】
実験 － 予防的有効性
目的
雄ウィスターラットのげっ歯類モデルＭＳＵ誘発膝炎症（痛風）において式（Ｉ）の化合物での予防的処置の経口抗炎症的および抗侵害受容的有効性を決定することである。
目的
雄ウィスターラットのげっ歯類モデルＭＳＵ誘発膝炎症（痛風）において式（Ｉ）の化合物での予防的処置の経口抗炎症的および抗侵害受容的有効性を決定することである。
【0022】
プロトコル
Ａ．ＭＳＵ結晶の調製
１．４ｇの尿酸を、０．０３Ｎ ＮａＯＨ ８００ｍｌに溶解し、６０℃に加熱した。ＮａＯＨを、必要に応じて添加して、ｐＨ８．９を維持した。溶液を、４～８℃で一晩貯蔵した。
２．結晶を、濾過し、洗浄し、乾燥させた。
３．結晶を、使用の直前に、滅菌生理食塩水に懸濁した。
Ａ．ＭＳＵ結晶の調製
１．４ｇの尿酸を、０．０３Ｎ ＮａＯＨ ８００ｍｌに溶解し、６０℃に加熱した。ＮａＯＨを、必要に応じて添加して、ｐＨ８．９を維持した。溶液を、４～８℃で一晩貯蔵した。
２．結晶を、濾過し、洗浄し、乾燥させた。
３．結晶を、使用の直前に、滅菌生理食塩水に懸濁した。
【0023】
Ｂ．有効性試験：
１．ラットを、各群が類似の平均体重を有するように、群あたり１０匹で５群に分配した。
２．－１日目。ベースラインの読み取りを行った。ベースラインの膝径（ｋｎｅｅ ｄｉａｍｅｔｅｒｓ）を、デジタルキャリパーにより測定した。フォン・フライファイバーにより測定される、機械的アロディニアへのベースライン応答を、記録した。
３．０日目：
ａ．ラットを、体重測定し、ビヒクル、プレドニゾロン（１０ｍｇ／ｋｇ）または式（Ｉ）の化合物（１、３または１０ｍｇ／ｋｇ）での強制経口投与により投薬した。
ｂ．投薬の１時間後に、群１～５のラットに、麻酔をかけ、生理食塩水５０μｌ中の２ｍｇのＭＳＵを左膝にＩＡ注射した。
４．１日目：
ａ．ラットを、０日目と同様に体重測定し投薬した。
ｂ．投薬の１時間後に、機械的アロディニアおよび膝径を、測定し記録した。
５．２日目：
ａ．ラットを、０日目と同様に体重測定し投薬した。
ｂ．投薬の１時間後に、機械的アロディニアおよび膝径を測定し記録した。
ｃ．最終投薬の４時間後に、終末血を収集した。
１．ラットを、各群が類似の平均体重を有するように、群あたり１０匹で５群に分配した。
２．－１日目。ベースラインの読み取りを行った。ベースラインの膝径（ｋｎｅｅ ｄｉａｍｅｔｅｒｓ）を、デジタルキャリパーにより測定した。フォン・フライファイバーにより測定される、機械的アロディニアへのベースライン応答を、記録した。
３．０日目：
ａ．ラットを、体重測定し、ビヒクル、プレドニゾロン（１０ｍｇ／ｋｇ）または式（Ｉ）の化合物（１、３または１０ｍｇ／ｋｇ）での強制経口投与により投薬した。
ｂ．投薬の１時間後に、群１～５のラットに、麻酔をかけ、生理食塩水５０μｌ中の２ｍｇのＭＳＵを左膝にＩＡ注射した。
４．１日目：
ａ．ラットを、０日目と同様に体重測定し投薬した。
ｂ．投薬の１時間後に、機械的アロディニアおよび膝径を、測定し記録した。
５．２日目：
ａ．ラットを、０日目と同様に体重測定し投薬した。
ｂ．投薬の１時間後に、機械的アロディニアおよび膝径を測定し記録した。
ｃ．最終投薬の４時間後に、終末血を収集した。
【0024】
結果（図１および２）
疾患の発症
１ｍｇ／ｋｇのＰＢＳの１日１回の経口投与は、動物の健康状態に影響を有しなかった。罹患したラットにおいて、左膝への２ｍｇのＭＳＵの関節内注射は、０日目の１２．２ｍｍから２日目の１５．８ｍｍへの有意な左膝径増加をもたらした。罹患したラットにおける機械的アロディニアヘの応答は、０日目の圧力１３．０ｇから２日目の圧力４．８ｇに降下し、疼痛応答の増加を示した。
疾患の発症
１ｍｇ／ｋｇのＰＢＳの１日１回の経口投与は、動物の健康状態に影響を有しなかった。罹患したラットにおいて、左膝への２ｍｇのＭＳＵの関節内注射は、０日目の１２．２ｍｍから２日目の１５．８ｍｍへの有意な左膝径増加をもたらした。罹患したラットにおける機械的アロディニアヘの応答は、０日目の圧力１３．０ｇから２日目の圧力４．８ｇに降下し、疼痛応答の増加を示した。
【0025】
プレドニゾロンでの処置の影響
２ｍｇのＭＳＵでの関節内チャレンジの１時間前に開始した、１０ｍｇ／ｋｇプレドニゾロンの１日１回経口投与は、動物の体重への有意な影響を有しなかった。この処置は、ＭＳＵ刺激による膝浮腫の有意な５２％阻害をもたらした。この処置レジメンはまた、応答の誘起に必要とされる圧力量の有意な増加により反映される通り、疼痛への有意な非感受性をもたらした。
２ｍｇのＭＳＵでの関節内チャレンジの１時間前に開始した、１０ｍｇ／ｋｇプレドニゾロンの１日１回経口投与は、動物の体重への有意な影響を有しなかった。この処置は、ＭＳＵ刺激による膝浮腫の有意な５２％阻害をもたらした。この処置レジメンはまた、応答の誘起に必要とされる圧力量の有意な増加により反映される通り、疼痛への有意な非感受性をもたらした。
【0026】
式（Ｉ）の化合物での処置の影響
２ｍｇのＭＳＵでの関節内チャレンジの１時間前に開始した、ＰＢＳ中の式（Ｉ）の化合物（ナトリウム塩）の１日１回経口投与は、動物の体重への有意な影響を有しなかった。この処置レジメンは、ＭＳＵ刺激による応答の有意な用量依存的阻害をもたらした。高用量（１０ｍｇ／ｋｇ、群３）では、ＭＳＵ刺激による膝浮腫が、プレドニゾロンで観察された影響と類似して４９％低減された。式（Ｉ）の化合物のこの用量はまた、ＭＳＵ刺激による膝浮腫に関連した疼痛の完全な遮断をもたらした。式（Ｉ）の化合物の中間用量（３ｍｇ／ｋｇ、群４）と高用量の間に、有意差はなかった。低用量（１ｍｇ／ｋｇ、群５）では、膝浮腫が有意に３４％低減され、疼痛応答が６６％低減された。過去の試験では、式（Ｉ）の化合物の３０ｍｇ／ｋｇ経口用量が、１０ｍｇ／ｋｇ用量と類似の有効性を与えた。
２ｍｇのＭＳＵでの関節内チャレンジの１時間前に開始した、ＰＢＳ中の式（Ｉ）の化合物（ナトリウム塩）の１日１回経口投与は、動物の体重への有意な影響を有しなかった。この処置レジメンは、ＭＳＵ刺激による応答の有意な用量依存的阻害をもたらした。高用量（１０ｍｇ／ｋｇ、群３）では、ＭＳＵ刺激による膝浮腫が、プレドニゾロンで観察された影響と類似して４９％低減された。式（Ｉ）の化合物のこの用量はまた、ＭＳＵ刺激による膝浮腫に関連した疼痛の完全な遮断をもたらした。式（Ｉ）の化合物の中間用量（３ｍｇ／ｋｇ、群４）と高用量の間に、有意差はなかった。低用量（１ｍｇ／ｋｇ、群５）では、膝浮腫が有意に３４％低減され、疼痛応答が６６％低減された。過去の試験では、式（Ｉ）の化合物の３０ｍｇ／ｋｇ経口用量が、１０ｍｇ／ｋｇ用量と類似の有効性を与えた。
【0027】
結論
式（Ｉ）の化合物の連日経口投与は、ＭＳＵ誘発浮腫および疼痛の有意な用量依存的低減をもたらした。３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇでは、その影響は、１０ｍｇ／ｋｇプレドニゾロンでの観察と類似していた。
式（Ｉ）の化合物の連日経口投与は、ＭＳＵ誘発浮腫および疼痛の有意な用量依存的低減をもたらした。３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇでは、その影響は、１０ｍｇ／ｋｇプレドニゾロンでの観察と類似していた。
【0028】
実験 － 治療的有効性
目的
雄ウィスターラットのげっ歯類モデルＭＳＵ誘発膝炎症（痛風）において式（Ｉ）の化合物での治療的処置の経口抗炎症的および抗侵害受容的有効性を決定することである。
目的
雄ウィスターラットのげっ歯類モデルＭＳＵ誘発膝炎症（痛風）において式（Ｉ）の化合物での治療的処置の経口抗炎症的および抗侵害受容的有効性を決定することである。
【0029】
プロトコル
０日目
３００ｍｇのＭＳＵ結晶を、７．５ｍｌのＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ．Ｄ８６６２、ｌｏｔ．ＲＮＢＧ０４０５、ｅｘｐ．４／２０１９）に懸濁して、４０ｍｇ／ｍｌ懸濁液を調製した。材料を、音波処理中の水浴の中に保持して、注射間隔での均質な懸濁を維持した。ラットを、体重測定した。
０日目
３００ｍｇのＭＳＵ結晶を、７．５ｍｌのＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ．Ｄ８６６２、ｌｏｔ．ＲＮＢＧ０４０５、ｅｘｐ．４／２０１９）に懸濁して、４０ｍｇ／ｍｌ懸濁液を調製した。材料を、音波処理中の水浴の中に保持して、注射間隔での均質な懸濁を維持した。ラットを、体重測定した。
【表1】
【0030】
ラットに、麻酔をかけ（ＳＯＰ １８１０）、膝を剃毛し、１ｍｌシリンジに取り付けた２５Ｇ針を用いて、左膝に５０μｌのＭＳＵ（２ｍｇ）結晶を注射した。
【0031】
１～３日目 連日投与
群１＝ＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ．Ｄ８６６２、ｌｏｔ．ＲＮＢＧ０４０５、ｅｘｐ．４／２０１６）。１ｍｇ／ｋｇ，ＰＯで投薬。
群２＝アナキンラ（１００ｍｇ／０．６７ｍｌ、Ｓｏｂｉ、ｌｏｔ３１３０１－１Ｂ、ｅｘｐ．３／２０２０）。０．３３５ｍｌ／ｋｇ，ＩＰで投薬。
群３＝３７ｍｇの式（Ｉ）の化合物を、３．７ｍｌのＰＢＳに溶解して、１０ｍｇ／ｍｌ溶液を調製した。１ｍｇ／ｋｇ，ＰＯで投薬。
群１＝ＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ．Ｄ８６６２、ｌｏｔ．ＲＮＢＧ０４０５、ｅｘｐ．４／２０１６）。１ｍｇ／ｋｇ，ＰＯで投薬。
群２＝アナキンラ（１００ｍｇ／０．６７ｍｌ、Ｓｏｂｉ、ｌｏｔ３１３０１－１Ｂ、ｅｘｐ．３／２０２０）。０．３３５ｍｌ／ｋｇ，ＩＰで投薬。
群３＝３７ｍｇの式（Ｉ）の化合物を、３．７ｍｌのＰＢＳに溶解して、１０ｍｇ／ｍｌ溶液を調製した。１ｍｇ／ｋｇ，ＰＯで投薬。
【0032】
テスト材料を、毎日新たに調製した。全てのラットを、体重測定し、腹腔内注により、または経口的に投薬した。機械的アロディニア応答および膝径を、投薬の１時間後に記録した。
【0033】
３日目の投薬の４時間後に、ラットに、麻酔をかけ、予備冷却されたＫ２ＥＤＴＡバキュテーナチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｃａｔ．３６７８４４、ｌｏｔ ６２５３６８２、ｅｘｐ．０１／３１／２０１８）中に放血した。血液を、血漿へと処理し、穏やかに混合し、血液収集の１０分以内に４℃、１８００ｇで１０分間遠心分離し、これを２つの９０μｌ最小容量で貯蔵し、４つの２０μｌの分割量を、ラベル表示されたエッペンドルフ管で調製し、直ちに－８０℃で凍結貯蔵した。死骸を、適宜処分した。
【0034】
結果（図３および４）
疾患の発症
１、２および３日目の１ｍｇ／ｋｇのＰＢＳの１日１回の経口投与は、動物の健康状態に影響を有しなかった。罹患したラットにおいて、左膝への２ｍｇのＭＳＵの関節内注射は、ベースラインの１２．２ｍｍから３日目の１５．０ｍｍへの有意な左膝径増加をもたらした。罹患したラットにおける機械的アロディニアヘの応答は、ベースラインでの圧力１４．６グラムから３日目の圧力５．８グラムに降下し、疼痛応答におけるより高い感受性を示した。
疾患の発症
１、２および３日目の１ｍｇ／ｋｇのＰＢＳの１日１回の経口投与は、動物の健康状態に影響を有しなかった。罹患したラットにおいて、左膝への２ｍｇのＭＳＵの関節内注射は、ベースラインの１２．２ｍｍから３日目の１５．０ｍｍへの有意な左膝径増加をもたらした。罹患したラットにおける機械的アロディニアヘの応答は、ベースラインでの圧力１４．６グラムから３日目の圧力５．８グラムに降下し、疼痛応答におけるより高い感受性を示した。
【0035】
アナキンラでの処置の影響（群２）
１、２および３日目の５０ｍｇ／ｋｇのアナキンラの１日１回の腹腔内投与は、動物の健康状態に影響を有しなかった。アナキンラ処置ラットにおいて、左膝への２ｍｇのＭＳＵの関節内注射は、ベースラインの１２．４ｍｍから３日目の１４．０ｍｍへの左膝径増加をもたらした。アナキンラ処置ラットにおける機械的アロディニアヘの応答は、ベースラインでの圧力１３．９グラムから３日目の圧力９．０グラムに増加し、疼痛応答におけるより高い感受性を示した。群２と群１（疾患－ビヒクル）の間に、統計学的有意差がある。
１、２および３日目の５０ｍｇ／ｋｇのアナキンラの１日１回の腹腔内投与は、動物の健康状態に影響を有しなかった。アナキンラ処置ラットにおいて、左膝への２ｍｇのＭＳＵの関節内注射は、ベースラインの１２．４ｍｍから３日目の１４．０ｍｍへの左膝径増加をもたらした。アナキンラ処置ラットにおける機械的アロディニアヘの応答は、ベースラインでの圧力１３．９グラムから３日目の圧力９．０グラムに増加し、疼痛応答におけるより高い感受性を示した。群２と群１（疾患－ビヒクル）の間に、統計学的有意差がある。
【0036】
式（Ｉ）の化合物での処置の影響（群３）
１、２および３日目の１０ｍｇ／ｋｇの式（Ｉ）の化合物の１日１回の経口投与は、動物の健康状態に影響を有しなかった。式（Ｉ）の化合物で処置されたラットにおいて、左膝への２ｍｇのＭＳＵの関節内注射は、ベースラインの１２．３ｍｍから３日目の１３．６ｍｍへの左膝径増加をもたらした。式（Ｉ）の化合物での処置ラットにおける機械的アロディニアヘの応答は、ベースラインでの圧力１４．５グラムから３日目の圧力１２．５グラムに増加し、疼痛応答におけるより高い感受性を示した。群３と群１（疾患－ビヒクル）の間に、統計学的有意差がある。
１、２および３日目の１０ｍｇ／ｋｇの式（Ｉ）の化合物の１日１回の経口投与は、動物の健康状態に影響を有しなかった。式（Ｉ）の化合物で処置されたラットにおいて、左膝への２ｍｇのＭＳＵの関節内注射は、ベースラインの１２．３ｍｍから３日目の１３．６ｍｍへの左膝径増加をもたらした。式（Ｉ）の化合物での処置ラットにおける機械的アロディニアヘの応答は、ベースラインでの圧力１４．５グラムから３日目の圧力１２．５グラムに増加し、疼痛応答におけるより高い感受性を示した。群３と群１（疾患－ビヒクル）の間に、統計学的有意差がある。
【0037】
結論
１０ｍｇ／ｋｇでの式（Ｉ）の化合物の経口連日投与および５０ｍｇ／ｋｇでのアナキンラの腹腔内注射による連日投与は、ＭＳＵ誘発浮腫および疼痛の有意な低減をもたらした。
１０ｍｇ／ｋｇでの式（Ｉ）の化合物の経口連日投与および５０ｍｇ／ｋｇでのアナキンラの腹腔内注射による連日投与は、ＭＳＵ誘発浮腫および疼痛の有意な低減をもたらした。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【国際調査報告】