▶ アイビーアイ－エージー イノベイティブ バイオ インセクティサイズ リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-01-17
(54)【発明の名称】昆虫防除ナノボディおよびその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20230110BHJP
C07K 16/40 20060101ALI20230110BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20230110BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230110BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230110BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230110BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230110BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230110BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20230110BHJP
A01H 5/00 20180101ALI20230110BHJP
A01P 7/04 20060101ALI20230110BHJP
A01N 63/60 20200101ALI20230110BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13 ZNA
C07K16/40
C07K16/18
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
A01H5/00 A
A01P7/04
A01N63/60
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022553234
(86)(22)【出願日】2020-11-11
(85)【翻訳文提出日】2022-07-07
(86)【国際出願番号】 IL2020051170
(87)【国際公開番号】W WO2021095031
(87)【国際公開日】2021-05-20
(31)【優先権主張番号】62/933,533
(32)【優先日】2019-11-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】522184246
【氏名又は名称】アイビーアイ－エージー イノベイティブ バイオ インセクティサイズ リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＩＢＩ－ＡＧ ＩＮＮＯＶＡＴＩＶＥ ＢＩＯ ＩＮＳＥＣＴＩＣＩＤＥＳ ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｔｈｅ Ｔｒｅｎｄｌｉｎｅｓ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ， Ｍｉｓｇａｖ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｐａｒｋ， １７ Ｔｃｈｅｌｅｔ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｄｏａｒ－Ｎａ Ｍｉｓｇａｖ， Ｉｓｒａｅｌ
(74)【代理人】
【識別番号】110002952
【氏名又は名称】弁理士法人鷲田国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】オーレン－ベナロヤ ロニー
(72)【発明者】
【氏名】アヤリ アミル
(72)【発明者】
【氏名】モンセラッテ ジェシカ
(72)【発明者】
【氏名】ヴァン リー イェロン
【テーマコード（参考）】
2B030
4B064
4B065
4H011
4H045
【Ｆターム（参考）】
2B030AA02
2B030AB04
2B030AD04
2B030CA14
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA12
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA87X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA48
4H011AC01
4H011BB21
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045DA76
4H045EA06
4H045FA74
(57)【要約】
昆虫防除ナノボディが提供される。従って、キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）、Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ、トレハラーゼ、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、キチン脱アセチル化酵素、キチンシンターゼおよびＮＰＣ１ステロール輸送体から成る群より選ばれる昆虫ポリペプチドに特異的に結合するナノボディであって、ナノボディの昆虫ポリペプチドへの結合が、ナノボディに昆虫防除活性を付与する、ナノボディが提供される。ナノボディをコードするポリヌクレオチド、ナノボディを発現する宿主細胞、およびその用途も提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
昆虫ポリペプチドに特異的に結合するナノボディであって、前記昆虫ポリペプチドが、下記：（ｉ）キチンシンターゼ、
（ｉｉ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）ＮＰＣ１ステロール輸送体；
（ｖｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチドであって、ＣＢＤに前記ナノボディが結合するもの、および
（ｖｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃであって、但し前記ナノボディが、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、または配列番号１８０～１８２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、からなる群より選ばれ、
前記ナノボディの前記昆虫ポリペプチドへの結合が、前記ナノボディに昆虫防除活性を付与する、ナノボディ。
【請求項2】
昆虫ポリペプチドに特異的に結合するナノボディと、昆虫防除活性を有する毒素部分とを含み、前記昆虫ポリペプチドは、下記：（ｉ）キチンシンターゼ、
（ｉｉ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）ＮＰＣ１ステロール輸送体、
（ｖｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチドであって、ＣＢＤに前記ナノボディが結合するもの、および
（ｖｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃであって、但し前記ナノボディが、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、配列番号１８０～１８２、配列番号１８７～１８９、または配列番号１９１～１９３で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
からなる群より選ばれる、組成物。
【請求項3】
前記ナノボディの前記昆虫ポリペプチドへの結合が、前記ナノボディに昆虫防除活性を付与する、請求項２に記載の組成物。
【請求項4】
前記ナノボディが前記昆虫ポリペプチドの活性を下方制御する、請求項１に記載のナノボディまたは請求項３に記載の組成物。
【請求項5】
散布、灌水および／または燻蒸による送達用に処方されている、請求項１～４のいずれか一項に記載のナノボディまたは組成物。
【請求項6】
前記ＣＢＤが２型キチン結合ドメイン（ＣｈｔＢＤ２）である、請求項１～５のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項7】
前記ＣＢＤが、配列番号３～７より選ばれるアミノ酸配列を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項8】
前記ナノボディが、前記ＣＢＤに特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１５～１７、配列番号１９～２１、配列番号２３～２５、または配列番号１５と２８～２９で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項9】
前記ナノボディが、前記ＣＢＤに特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１５～１７、配列番号１９～２１、配列番号２３～２５、配列番号１５と２８～２９、配列番号３１～３３、配列番号３５～３７、配列番号３９～４１、配列番号４３～４５、配列番号４７～４９、配列番号５１～５３、配列番号５５～５７、配列番号５９～６１、配列番号６３～６５、配列番号６７～６９、配列番号７１～７３、配列番号７５～７７、配列番号７９～８１、配列番号８３～８５、配列番号８７～８９、配列番号９１、８０と９３、配列番号９５～９７、配列番号９９～１０１、配列番号１０３～１０５、配列番号１０７～１０９、配列番号１１１～１１３、配列番号１１５～１１７、配列番号１１９～１２１、配列番号１２３～１２５、配列番号１２７～１２９、配列番号１３１～１３３、配列番号１３５～１３７、配列番号１３９～１４１、配列番号１４３～１４５、配列番号１４７～１４９、配列番号１５１～１５３、配列番号１５と１５６～１５７、配列番号１５９～１６１、または配列番号１６３～１６５で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項２および５～７のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項10】
前記ナノボディが前記Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃに特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、または配列番号１８０～１８２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項２～４のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項11】
前記ナノボディが、前記トレハラーゼに特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１９５～１９７、配列番号１９９と１９６～１９７、配列番号２０１～２０３、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２と２０９～２１０、配列番号２１５～２１７、配列番号２１９～２２１、配列番号２２３～２２５、配列番号２２７～２２９、配列番号２３１、２２８と２３２、配列番号２３４～２３６、配列番号２３８～２４０、配列番号２４２～２４４、配列番号２４６～２４８、配列番号２５０～２５２、配列番号２５４～２５６、配列番号２５８～２６０、配列番号５８８～５９０、配列番号５８８９～５８９と５９２、または配列番号５９５、５８９と５９２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１～３および５のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項12】
前記ナノボディが、前記トレハラーゼに特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１９５～１９７、配列番号１９９と１９６～１９７、配列番号２０１～２０３、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２と２０９～２１０、配列番号２１５～２１７、配列番号２１９～２２１、配列番号２２３～２２５、配列番号２２７～２２９、配列番号２３１、２２８と２３２、配列番号２３４～２３６、配列番号２３８～２４０、配列番号２４２～２４４、配列番号２４６～２４８、配列番号２５０～２５２、配列番号２５４～２５６、または配列番号２５８～２６０で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１～３および５のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項13】
前記ナノボディが、前記トレハラーゼに特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２と２０９～２１０、配列番号２２３～２２５、配列番号２３８～２４０、配列番号２４２～２４４、配列番号２４６～２４８、配列番号５８８～５９０、または配列番号５９５、５８と５９２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１～３および５のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項14】
前記ナノボディが、前記チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２６２～２６４、配列番号２６２～２６３と２６６、配列番号２６２、２７０と２６４、配列番号２７４～２７６、配列番号２８０と２７５～２７６、配列番号２８２と２７５～２７６、配列番号２８２、２７５と２８５、配列番号２８７、２２０と２８９、配列番号２９１、２２０と２８９、配列番号２３９～２９４と２８９、配列番号２９６～２９８、配列番号３００～３０２、配列番号３０４～３０６、配列番号３０８～３１０、配列番号３１２～３１４、または配列番号３１６～３１８で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１～３および５のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項15】
前記ナノボディが、前記チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２６２～２６４、配列番号２８７、２２０と２８９、配列番号２９６～２９８、配列番号３００～３０２、配列番号３０４～３０６、または配列番号３１２～３１４で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１～３および５のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項16】
前記ナノボディが、前記キチン脱アセチル化酵素に特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３２０～３２２、配列番号３２０と３２４～３２５、配列番号３２７、３２１と３２８、配列番号３２０～３２１と３３２、配列番号２０８と３３６～３３７、配列番号３２０、３２４と３３９、配列番号３４３～３４５、配列番号３４７～３４９、配列番号３５１～３５３、配列番号３５１、３４７と３５６、配列番号３５８～３６０、配列番号３５８～３５９と３６２、配列番号３６５、３５９と３６６、配列番号３６８～３７０、配列番号３７２と３６９～３７０、配列番号３７４、３６９と３７５、配列番号３７７～３７９、配列番号３８１～３８３、配列番号３８５と３８２～３８３、配列番号３８７～３８９、配列番号３８７、３９１と３８９、配列番号３９４～３９６、配列番号３９８～４００、配列番号４０２～４０４、または配列番号４０６～４０８で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１～３および５のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項17】
前記ナノボディが、前記キチン脱アセチル化酵素に特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３２０～３２２、配列番号３２０と３２４～３２５、配列番号３７２と３６９～３７０、配列番号３７４、３６９と３７５、配列番号３７７～３７９、配列番号３８７～３８９、または配列番号３９８～４００で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１～３および５のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項18】
前記ナノボディが、前記キチンシンターゼに特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４１２～４１４、配列番号４１８～４２０、配列番号４２２～４２４、配列番号４２６～４２８、配列番号４２６～４２７と４３０、配列番号４３２～４３４、配列番号４３６、１４０と４３７、配列番号４３９～４４１、配列番号４４３～４４５、配列番号４４７～４４９、配列番号３５６と４５１～４５２、配列番号４５４～４５６、配列番号４５８～４６０、配列番号４６２～４６４、配列番号４６６～４６８、配列番号４７０～４７２、配列番号４７４～４７６、配列番号４７８～４８０、配列番号４８２、４７９と４８３、配列番号４８５～４８７、配列番号４８９～４９１、配列番号４９３～４９５、配列番号４２６と４９７～４９８、配列番号５００～５０２、配列番号５０４～５０６、または配列番号５０８～５１０で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１～３および５のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項19】
前記ナノボディが、前記キチンシンターゼに特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４１２～４１４、配列番号４１８～４２０、配列番号４２６～４２８、配列番号４３２～４３４、配列番号４４３～４４５、配列番号４４７～４４９、配列番号４６６～４６８、配列番号４８２、４７９と４８３、配列番号４２６と４９７～４９８、または配列番号５０４～５０６で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１～３および５のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項20】
前記ナノボディが、前記ＮＰＣ１ステロール輸送体に特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号５１２～５１４、配列番号５１７と５１３～５１４、配列番号５２１～５２３、配列番号５２１～５２２と５２６、配列番号５３１～５３３、配列番号５３９～５４１、配列番号４８５と５４０～５４１、配列番号５４５と５４０～４５１、配列番号５４７～５４９、配列番号５５２～５５４、配列番号５５６～５５８、配列番号５６１～５６３、配列番号５６５～５６７、配列番号５６９～５７１、配列番号５７３～５７５、配列番号４８５と５７７～５７８、配列番号５８０～５８２、または配列番号５８４～５８６で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１～３および５のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項21】
前記ナノボディが、前記ＮＰＣ１ステロール輸送体に特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号５１７と５１３～５１４、配列番号４８５と５４０～５４１、配列番号５４５と５４０～５４１、配列番号５５６～５５８、配列番号５６５～５６７、配列番号５７３～５７５、配列番号４８５と５７７～５７８、または配列番号５８０～５８２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１～３および５のいずれか一項に記載のナノボディ。
【請求項22】
請求項１～２１のいずれか一項に記載のナノボディまたは組成物をコードするポリヌクレオチド。
【請求項23】
請求項２２に記載のポリヌクレオチドと、前記ポリヌクレオチドの発現を管理するためのシス作用調節エレメントとを含む、核酸構築物。
【請求項24】
請求項１～２１のいずれか一項に記載のナノボディまたは組成物、あるいはそれをコードするポリヌクレオチドまたは核酸構築物を含む、宿主細胞。
【請求項25】
昆虫防除ナノボディの製造方法であって、請求項２２に記載のポリヌクレオチドまたは請求項２３に記載の核酸構築物を宿主細胞内で発現させることを含む、方法。
【請求項26】
前記ナノボディの単離を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
昆虫に、請求項１～２１のいずれか一項に記載のナノボディまたは組成物、それをコードするポリヌクレオチドまたは核酸構築物、あるいはそれを発現する宿主細胞を接触させる、昆虫防除の方法。
【請求項28】
前記接触が、前記ナノボディまたは組成物を昆虫に直接付与することを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
前記接触が、前記昆虫が接触し得る生物または表面に前記ナノボディまたは組成物を付与することを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項30】
前記ナノボディまたは前記組成物が液状製剤として処方されている、請求項１～２９のいずれか一項に記載のナノボディ、組成物または方法。
【請求項31】
前記ナノボディまたは前記組成物が乾燥製剤として処方されている、請求項１～２９のいずれか一項に記載のナノボディ、組成物または方法。
【請求項32】
請求項１～２１のいずれか一項に記載のナノボディまたは組成物、あるいはそれをコードするポリヌクレオチドまたは核酸構築物を含む、植物。
【請求項33】
トランスジェニック植物である、請求項３２に記載の植物。
【請求項34】
請求項１～２１のいずれか一項に記載のナノボディまたは組成物を含む、産業製品。
【請求項35】
前記産業製品が、請求項３２～３３のいずれか一項に記載の植物から製造されたものである、請求項３４に記載の産業製品。
【請求項36】
ナノボディの製造方法であって、下記：（ｉ） キチンシンターゼ、
（ｉｉ） キチン脱アセチル化酵素、
（ｉｉｉ） トレハラーゼ、
（ｉｖ） チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ） ＮＰＣ１ステロール輸送体、
（ｖｉ） キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチド、および
（ｖｉｉ） Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ
からなる群より選ばれる組み換えまたは精製昆虫ポリペプチドでラクダ類を免役することを含み、昆虫ポリペプチド調製物中の前記昆虫ポリペプチドの純度が少なくとも８０％である、方法。
【請求項37】
免疫に続く抗体の単離を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項38】
前記ラクダ類がラマである、請求項３６～３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項39】
前記昆虫が、蛾、カメムシ、バッタ、甲虫、アブラムシ、およびミツバチからなる群より選ばれる、請求項１～３８のいずれか一項に記載のナノボディ、組成物、ポリヌクレオチド、核酸構築物、宿主細胞、植物、製品または方法。
【請求項40】
前記昆虫が蛾である、請求項１～３８のいずれか一項に記載のナノボディ、組成物、ポリヌクレオチド、核酸構築物、宿主細胞、植物、製品または方法。
【請求項41】
前記蛾が、Helicoverpa armigeraおよびSpodoptera frugiperdaからなる群より選ばれる、請求項３９または４０に記載のナノボディ、組成物、ポリヌクレオチド、核酸構築物、宿主細胞、植物、製品または方法。
【請求項42】
前記蛾がHelicoverpa armigeraである、請求項３９または４０に記載のナノボディ、組成物、ポリヌクレオチド、核酸構築物、宿主細胞、植物、製品または方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願
本願は、２０１９年１１月１１日に出願した米国特許出願第６２／９３３，５３３号の優先権を主張するものであり、本参照をもってその内容の全てをここに援用する。
本願は、２０１９年１１月１１日に出願した米国特許出願第６２／９３３，５３３号の優先権を主張するものであり、本参照をもってその内容の全てをここに援用する。
【0002】
配列表に関する陳述
２０２０年１１月９日に作成した、８３６７２＿ＳＴ２５．ｔｘｔとした３８７，５９２ビットのＡＳＣＩＩファイルを本出願と同時に提出し、本参照をもってここに援用する。
２０２０年１１月９日に作成した、８３６７２＿ＳＴ２５．ｔｘｔとした３８７，５９２ビットのＡＳＣＩＩファイルを本出願と同時に提出し、本参照をもってここに援用する。
【0003】
技術分野
本発明は、そのいくつかの実施形態において、昆虫防除ナノボディおよびその使用に関する。
本発明は、そのいくつかの実施形態において、昆虫防除ナノボディおよびその使用に関する。
【背景技術】
【0004】
過去７０年間の害虫の防除は、主として合成殺虫剤の適応により達成されてきた。１９３９年にポール・ミューラーによりＤＤＴの殺昆虫性能が発見されて以来、数百もの殺昆虫化合物が開発され、それらは殺虫剤使用の比較的安定な増加を伴っていた。近年使用されている化学殺虫剤の大部分が生態系破壊の高い可能性を秘めており、直接または食物連鎖を通じてヒトに対して毒性であり、その使用は遺伝的昆虫耐性の発達によっても妨げられている。現在使用されている最も卓越した生物学的解決手段には、昆虫による被害を減少させる有益生物または天敵、おとりと機能するか生殖に有害なフェロモン、不妊のオスの放出、Bacillus thuringiensis毒素の散布、あるいは昆虫には毒性であるがヒトには無毒のBacillus thuringiensis毒素の遺伝子を保有する遺伝子修飾植物が含まれる。しかし、これらの生物学的解決手段は、低効率、天然の生態系の均衡を乱す危険性、および遺伝的昆虫耐性の発生（例：バチルス毒素の使用の場合）を含む不利な点もある。
【0005】
ＶＨＨ抗体としても知られるナノボディは、抗体（ＨＣＡｂ）の重鎖を有し、完全に軽鎖を損失した単一ドメイン抗体である。これらは、ラクダの血液から発見され、１９８９年にブリュッセル自由大学（Vrije Universiteit Brussel）においてレイモンド・ハマーズ（Ｒａｙｍｏｎｄ Ｈａｍｅｒｓ）が発見者として認められている。ナノボディは現存する最も小さなインタクトな抗原結合断片であり（Cortez-Retamozo et al., 2004、Revets et al., 2005）、そのサイズは約１５ｋＤａである。ナノボディには、広範囲にわたる発現系における高生産収率、これらが最小サイズ故に可能となるそれらのエピトープへの高アクセシビリティ、高い物理的および化学的安定性、可逆的なリフォールディングと水溶液に対する高い溶解性、突発的二量体化の兆候の無い高い均一性、およびサブナノモルレベルの親和性を有する独自のエピトープを特異的に認識する能力を含む有意な利点がある。ナノボディの殺虫剤としての使用は既に示唆されている（例えば、欧州特許出願公開第３４１５０１０号および第２６０９１１６号明細書、米国特許第９５１６８７９号明細書、米国特許第９８０３００３号、国際公開第２０１４１９１１４６号参照）。
【発明の概要】
【0006】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によると、昆虫ポリペプチドに特異的に結合するナノボディであって、前記昆虫ポリペプチドが、下記：
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチドであって、ＣＢＤに前記ナノボディが結合するもの、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃであって、但しナノボディが、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、または配列番号１８０～１８２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体
からなる群より選ばれ、ナノボディの昆虫ポリペプチドへの結合が、ナノボディに昆虫防除活性を付与する、ナノボディが提供される。
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチドであって、ＣＢＤに前記ナノボディが結合するもの、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃであって、但しナノボディが、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、または配列番号１８０～１８２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体
からなる群より選ばれ、ナノボディの昆虫ポリペプチドへの結合が、ナノボディに昆虫防除活性を付与する、ナノボディが提供される。
【0007】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によると、昆虫ポリペプチドに特異的に結合するナノボディと、昆虫防除活性を有する毒素部分とを含み、昆虫ポリペプチドは、下記：
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチドであって、ＣＢＤに前記ナノボディが結合するもの、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃであって、但し前記ナノボディが、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、配列番号１８０～１８２、配列番号１８７～１８９、または配列番号１９１～１９３で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体
からなる群より選ばれる、組成物が提供される。
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチドであって、ＣＢＤに前記ナノボディが結合するもの、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃであって、但し前記ナノボディが、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、配列番号１８０～１８２、配列番号１８７～１８９、または配列番号１９１～１９３で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体
からなる群より選ばれる、組成物が提供される。
【0008】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディの昆虫ポリペプチドへの結合は、ナノボディに昆虫防除活性を付与する。本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは昆虫ポリペプチドの活性を下方制御する。
【0009】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディまたは組成物は、散布、灌水および／または燻蒸による送達用に処方されている。本発明のいくつかの実施形態によると、ＣＢＤは２型キチン結合ドメイン（ＣｈｔＢＤ２）である。
【0010】
本発明のいくつかの実施形態によると、ＣＢＤは配列番号３～７より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0011】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディはＣＢＤに特異的に結合し、且つナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１５～１７、配列番号１９～２１、配列番号２３～２５、または配列番号１５と２８～２９で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0012】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは、ＣＢＤに特異的に結合し、且つナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１５～１７、配列番号１９～２１、配列番号２３～２５、配列番号１５と２８～２９、配列番号３１～３３、配列番号３５～３７、配列番号３９～４１、配列番号４３～４５、配列番号４７～４９、配列番号５１～５３、配列番号５５～５７、配列番号５９～６１、配列番号６３～６５、配列番号６７～６９、配列番号７１～７３、配列番号７５～７７、配列番号７９～８１、配列番号８３～８５、配列番号８７～８９、配列番号９１、８０と９３、配列番号９５～９７、配列番号９９～１０１、配列番号１０３～１０５、配列番号１０７～１０９、配列番号１１１～１１３、配列番号１１５～１１７、配列番号１１９～１２１、配列番号１２３～１２５、配列番号１２７～１２９、配列番号１３１～１３３、配列番号１３５～１３７、配列番号１３９～１４１、配列番号１４３～１４５、配列番号１４７～１４９、配列番号１５１～１５３、配列番号１５と１５６～１５７、配列番号１５９～１６１、または配列番号１６３～１６５で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0013】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは、Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃに特異的に結合し、且つ前記ナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、または配列番号１８０～１８２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む
【0014】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは、トレハラーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１９５～１９７、配列番号１９９と１９６～１９７、配列番号２０１～２０３、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２と２０９～２１０、配列番号２１５～２１７、配列番号２１９～２２１、配列番号２２３～２２５、配列番号２２７～２２９、配列番号２３１、２２８と２３２、配列番号２３４～２３６、配列番号２３８～２４０、配列番号２４２～２４４、配列番号２４６～２４８、配列番号２５０～２５２、配列番号２５４～２５６、配列番号２５８～２６０、配列番号５８８～５９０、配列番号５８８９～５８９と５９２、または配列番号５９５、５８９と５９２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0015】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは、トレハラーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１９５～１９７、配列番号１９９と１９６～１９７、配列番号２０１～２０３、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２と２０９～２１０、配列番号２１５～２１７、配列番号２１９～２２１、配列番号２２３～２２５、配列番号２２７～２２９、配列番号２３１、２２８と２３２、配列番号２３４～２３６、配列番号２３８～２４０、配列番号２４２～２４４、配列番号２４６～２４８、配列番号２５０～２５２、配列番号２５４～２５６、または配列番号２５８～２６０で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0016】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは、トレハラーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２と２０９～２１０、配列番号２２３～２２５、配列番号２３８～２４０、配列番号２４２～２４４、配列番号２４６～２４８、配列番号５８８～５９０、または配列番号５９５、５８と５９２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0017】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２６２～２６４、配列番号２６２～２６３と２６６、配列番号２６２、２７０と２６４、配列番号２７４～２７６、配列番号２８０と２７５～２７６、配列番号２８２と２７５～２７６、配列番号２８２、２７５と２８５、配列番号２８７、２２０と２８９、配列番号２９１、２２０と２８９、配列番号２３９～２９４と２８９、配列番号２９６～２９８、配列番号３００～３０２、配列番号３０４～３０６、配列番号３０８～３１０、配列番号３１２～３１４、または配列番号３１６～３１８で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0018】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２６２～２６４、配列番号２８７、２２０と２８９、配列番号２９６～２９８、配列番号３００～３０２、配列番号３０４～３０６、または配列番号３１２～３１４で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0019】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは、キチン脱アセチル化酵素に特異的に結合し、且つナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３２０～３２２、配列番号３２０と３２４～３２５、配列番号３２７、３２１と３２８、配列番号３２０～３２１と３３２、配列番号２０８と３３６～３３７、配列番号３２０、３２４と３３９、配列番号３４３～３４５、配列番号３４７～３４９、配列番号３５１～３５３、配列番号３５１、３４７と３５６、配列番号３５８～３６０、配列番号３５８～３５９と３６２、配列番号３６５、３５９と３６６、配列番号３６８～３７０、配列番号３７２と３６９～３７０、配列番号３７４、３６９と３７５、配列番号３７７～３７９、配列番号３８１～３８３、配列番号３８５と３８２～３８３、配列番号３８７～３８９、配列番号３８７、３９１と３８９、配列番号３９４～３９６、配列番号３９８～４００、配列番号４０２～４０４、または配列番号４０６～４０８で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0020】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは、キチン脱アセチル化酵素に特異的に結合し、且つナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３２０～３２２、配列番号３２０と３２４～３２５、配列番号３７２と３６９～３７０、配列番号３７４、３６９と３７５、配列番号３７７～３７９、配列番号３８７～３８９、または配列番号３９８～４００で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0021】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは、キチンシンターゼに特異的に結合し、且つナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４１２～４１４、配列番号４１８～４２０、配列番号４２２～４２４、配列番号４２６～４２８、配列番号４２６～４２７と４３０、配列番号４３２～４３４、配列番号４３６、１４０と４３７、配列番号４３９～４４１、配列番号４４３～４４５、配列番号４４７～４４９、配列番号３５６と４５１～４５２、配列番号４５４～４５６、配列番号４５８～４６０、配列番号４６２～４６４、配列番号４６６～４６８、配列番号４７０～４７２、配列番号４７４～４７６、配列番号４７８～４８０、配列番号４８２、４７９と４８３、配列番号４８５～４８７、配列番号４８９～４９１、配列番号４９３～４９５、配列番号４２６と４９７～４９８、配列番号５００～５０２、配列番号５０４～５０６、または配列番号５０８～５１０で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0022】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは、キチンシンターゼに特異的に結合し、且つナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４１２～４１４、配列番号４１８～４２０、配列番号４２６～４２８、配列番号４３２～４３４、配列番号４４３～４４５、配列番号４４７～４４９、配列番号４６６～４６８、配列番号４８２、４７９と４８３、配列番号４２６と４９７～４９８、または配列番号５０４～５０６で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0023】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは、ＮＰＣ１ステロール輸送体に特異的に結合し、且つナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号５１２～５１４、配列番号５１７と５１３～５１４、配列番号５２１～５２３、配列番号５２１～５２２と５２６、配列番号５３１～５３３、配列番号５３９～５４１、配列番号４８５と５４０～５４１、配列番号５４５と５４０～４５１、配列番号５４７～５４９、配列番号５５２～５５４、配列番号５５６～５５８、配列番号５６１～５６３、配列番号５６５～５６７、配列番号５６９～５７１、配列番号５７３～５７５、配列番号４８５と５７７～５７８、配列番号５８０～５８２、または配列番号５８４～５８６で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0024】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディは、ＮＰＣ１ステロール輸送体に特異的に結合し、且つナノボディ上でＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号５１７と５１３～５１４、配列番号４８５と５４０～５４１、配列番号５４５と５４０～５４１、配列番号５５６～５５８、配列番号５６５～５６７、配列番号５７３～５７５、配列番号４８５と５７７～５７８、または配列番号５８０～５８２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0025】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によると、ナノボディまたは組成物をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【0026】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によると、ポリヌクレオチドと、当該ポリヌクレオチドの発現を管理するためのシス作用調節エレメントとを含む、核酸構築物が提供される。
【0027】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によると、ナノボディまたは組成物、あるいはそれをコードするポリヌクレオチドまたは核酸構築物を含む、宿主細胞が提供される。
【0028】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によると、昆虫防除ナノボディの製造方法であって、ポリヌクレオチドまたは核酸構築物を宿主細胞内で発現させることを含む、方法が提供される。
【0029】
本発明のいくつかの実施形態によると、方法はナノボディの単離を含む。
【0030】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によると、昆虫に、ナノボディまたは組成物、それをコードするポリヌクレオチドまたは核酸構築物、あるいはそれを発現する宿主細胞を接触させる、昆虫防除の方法が提供される。
【0031】
本発明のいくつかの実施形態によると、接触は、ナノボディまたは組成物を昆虫に直接付与することを含む。
【0032】
本発明のいくつかの実施形態によると、接触は、昆虫が接触し得る生物または表面にナノボディまたは組成物を付与することを含む。
【0033】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディまたは組成物は液状製剤として処方されている。
【0034】
本発明のいくつかの実施形態によると、ナノボディまたは組成物は、乾燥製剤として処方されている。
【0035】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によると、ナノボディまたは組成物、あるいはそれをコードするポリヌクレオチドまたは核酸構築物を含む、植物が提供される。
【0036】
本発明のいくつかの実施形態によると、植物はトランスジェニック植物である。
【0037】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によると、ナノボディまたは組成物を含む、産業製品が提供される。
【0038】
本発明のいくつかの実施形態によると、産業製品は植物から製造されたものである。
【0039】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によると、ナノボディの製造方法であって、下記：
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチド、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体
からなる群より選ばれる組み換えまたは精製昆虫ポリペプチドでラクダ類を免役することを含み、昆虫ポリペプチド調製物中の前記昆虫ポリペプチドの純度が少なくとも８０％である、方法が提供される。
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチド、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体
からなる群より選ばれる組み換えまたは精製昆虫ポリペプチドでラクダ類を免役することを含み、昆虫ポリペプチド調製物中の前記昆虫ポリペプチドの純度が少なくとも８０％である、方法が提供される。
【0040】
本発明のいくつかの実施形態によると、方法は、免疫に続く抗体の単離を含む。
【0041】
本発明のいくつかの実施形態によると、ラクダ類はラマである。
【0042】
本発明のいくつかの実施形態によると、昆虫は、蛾、カメムシ、バッタ、甲虫、アブラムシ、およびミツバチからなる群より選ばれる。
【0043】
本発明のいくつかの実施形態によると、昆虫は蛾である。
【0044】
本発明のいくつかの実施形態によると、蛾は、Helicoverpa armigeraおよびSpodoptera frugiperdaからなる群より選ばれる。
【0045】
本発明のいくつかの実施形態によると、蛾はHelicoverpa armigeraである。
【0046】
特に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術および／または科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により通常理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様のまたは等価な方法および材料を、本発明の実施形態の実践または試験に使用することができるが、例示的な方法および／または材料を下記に記載する。矛盾する場合、定義を含む特許明細書が優先する。加えて、材料、方法、および実施例は単なる例示であり、必ずしも限定を意図するものではない。
【0047】
本発明のいくつかの実施形態について、その例示のみを目的として添付の図面を参照して本明細書に記載する。
以下、特に図面を詳細に参照して示す細部は、例示を目的とし、また本発明の実施形態の詳細な説明を目的とすることを強調する。同様に、図面と共に説明を見ることで、本発明の実施形態をどのように実践し得るかが当業者には明らかとなる。
以下、特に図面を詳細に参照して示す細部は、例示を目的とし、また本発明の実施形態の詳細な説明を目的とすることを強調する。同様に、図面と共に説明を見ることで、本発明の実施形態をどのように実践し得るかが当業者には明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【0048】
【図1】図１は、ＥＬＩＳＡで決定した、本明細書においてＣＢ２０５０１、ＣＢ２０８０１、ＣＢ２０９０１、およびＣＢ２０１１０１と称する、作製した抗ＣＢＤナノボディの標的ＣＢＤ抗原に対する特異的結合を示すグラフである。各実験を５回実施し、データを平均±ＳＥで示した。
【図2】図２は、ＥＬＩＳＡで決定した、H. armigeraの幼虫から回収した幼虫消化管液と１時間インキュベーションした後の、作製した抗ＣＢＤナノボディＣＢ２０５０１、ＣＢ２０８０１、ＣＢ２０９０１、およびＣＢ２０１１０１の安定性を、対照であるＰＢＳと比較したグラフである。各実験を３回実施し、データを平均±ＳＥで示した。
【図3】図３は、ＥＬＩＳＡで決定した、野外様の環境下で１～３時間インキュベーションした後の、作製した抗ＣＢＤナノボディＣＢ２０５０１、ＣＢ２０８０１、ＣＢ２０９０１およびＣＢ２０１１０１の安定性を、対照である室温（ＲＴ）条件と比較したグラフである。各処理は５回の繰り返しを含み、データを平均±ＳＥで示した。
【図4-1】図４の（Ａ）～（Ｃ）は、示したナノボディの４０μｇの単一量による給餌後の、H. armigeraの体長（図４の（Ａ））、体重（図４の（Ｂ））および死亡率（図４の（Ｃ））に対する抗ＣＢＤナノボディＣＢ２０５０１、ＣＢ２０８０１、ＣＢ２０９０１、およびＣＢ２０１１０の効果を示す。測定は７日目に行い、死亡率については７日目と１４日目に行った。各実験には１２匹の幼虫が含まれ、３～５回繰り返され、エラーバーは標準誤差を示す。ここに示されているのは、ＰＢＳを給餌した幼虫対照の体長に対する、指定したナノボディを給餌した幼虫の体長のパーセンテージ（図４の（Ａ））、ＰＢＳを給餌した幼虫対照の体重に対する、指定したナノボディを給餌した幼虫の体重のパーセンテージ（図４の（Ｂ））、ならびに７日および１４日後の死滅幼虫のパーセンテージ（図４の（Ｃ））である。統計的有意差はａ（Ｐ＜０．０５）およびｂ（Ｐ＜０．０１）で表されている。
【図4-2】同上
【図5-1】図５の（Ａ）～（Ｃ）は、蛍光的にＣｙ３標識したＣＢ２０９０１を含有する人工飼料と共にインキュベーションした後の昆虫消化管中の作製した抗ＣＢＤナノボディＣＢ２０９０１の存在を示す。図５の（Ａ）は、幼虫との４８時間および６日間のインキュベーション後に、幼虫の飼料から追跡した蛍光標識ナノボディを示す。上のパネルは、明視野の画像を示し、下のパネルは幼虫に給餌した飼料のＣｙ３シグナルを反映した画像を示す。さらに黄色の破線は２つの異なる領域、即ち、破線の右側はインタクトな飼料のシグナルを示し、破線の左側は幼虫の糞のシグナルを示す。飼料と糞との間の蛍光強度の差が、幼虫の消化管による取り込みを表す。図５の（Ｂ）は、表示したＣｙ３標識ナノボディを含む飼料との４８時間のインキュベーション、あるいはＣｙ３標識ナノボディを含む飼料との３６時間のインキュベーションと、続くナノボディを含まない飼料との１２時間のインキュベーションの後の、生きた幼虫の消化管におけるＣｙ５標識ＣＢ２０９０１ナノボディの存在を示す。
【図5-2】図５の（Ｃ）は、ナノボディを含まない飼料を４８時間与えたときと比較した、表示したＣｙ３標識ナノボディを含む飼料との３６時間のインキュベーションと、続くナノボディを含まない飼料との１２時間のインキュベーションの後の、幼虫の消化管、特に囲食膜におけるＣｙ５標識ＣＢ２０９０１ナノボディの存在を示す。上のパネルは、明視野の画像を示し、下のパネルは幼虫に給餌した飼料のＣｙ３シグナルを反映した画像を示す。
【図6】図６は、ＥＬＩＳＡで決定した、本明細書においてＶＡＴ０１０１Ａ、ＶＡＴ０１０１Ｂ、ＶＡＴ０１０１Ｃ、ＶＡＴ０１０１Ｄ、ＶＡＴ０１０１Ｅ、ＶＡＴ０１０１Ｆ、およびＶＡＴ０１０１Ｇと称する、作製した抗ＡＴＰアーゼＶ・サブユニットｃ（本明細書において「ＶＡＴ」と称する）ナノボディの標的ＶＡＴ抗原に対する特異的結合を示すグラフである。各実験を５回実施し、データを平均±ＳＥで示した。
【図7】図７は、ＥＬＩＳＡで決定した、H. armigeraの幼虫から回収した幼虫消化管液と１時間インキュベーションした後の、作製した抗ＶＡＴナノボディＶＡＴ０１０１ＡおよびＶＡＴ０１０１Ｇの安定性を、対照であるＰＢＳと比較したグラフである。各実験を３回実施し、データを平均±ＳＥで示した。
【図8】図８は、ＥＬＩＳＡで決定した、野外様の環境下で１～３時間インキュベーションした後の、作製した抗ＶＡＴナノボディＶＡＴ０１０１Ａ、ＶＡＴ０１０１Ｂ、ＶＡＴ０１０１Ｃ、ＶＡＴ０１０１Ｄ、ＶＡＴ０１０１Ｅ、ＶＡＴ０１０１Ｆ、およびＶＡＴ０１０１Ｇの安定性を、対照である室温（ＲＴ）条件と比較したグラフである。各処理は３回の繰り返しを含み、データを平均±ＳＥで示した。
【図9-1】図９の（Ａ）～（Ｃ）は、示したナノボディの４０μｇの単一量による給餌後の、H. armigeraの体長（図９の（Ａ））、体重（図９の（Ｂ））および死亡率（図９の（Ｃ））に対する抗ＶＡＴナノボディＶＡＴ０１０１Ａ、ＶＡＴ０１０１Ｂ、ＶＡＴ０１０１Ｃ、ＶＡＴ０１０１Ｄ、ＶＡＴ０１０１Ｅ、ＶＡＴ０１０１Ｆ、ＶＡＴ０１０１Ｇ、およびＶＡＴ０２０１の効果を示す。測定は表示したように７日目または１４日目に行った。各実験には１２匹の幼虫が含まれ、３～５回繰り返され、エラーバーは標準誤差を示す。ここに示されているのは、ＰＢＳを給餌した幼虫対照の体長に対する、指定したナノボディを給餌した幼虫の体長のパーセンテージ（図９の（Ａ））、ＰＢＳを給餌した幼虫対照の体重に対する、指定したナノボディを給餌した幼虫の体重のパーセンテージ（図９の（Ｂ））、ならびに７日および１４日後の死滅幼虫のパーセンテージ（図９の（Ｃ））である。統計的有意差はａ（Ｐ＜０．０５）およびｂ（Ｐ＜０．０１）で表されている。
【図9-2】同上
【図10】図１０は、ＥＬＩＳＡで決定した、本明細書においてＴＲＨ１Ａ、ＴＲＨ１２、ＴＲＨ１３、およびＴＲＨ１４と称する、作製した抗トレハラーゼ（本明細書において「ＴＲＨ」と称する）ナノボディの標的ＴＲＨ抗原に対する特異的結合を示すグラフである。各実験を５回実施し、データを平均±ＳＥで示した。
【図11-1】図１１の（Ａ）～（Ｂ）は、ＥＬＩＳＡで決定した、野外様の環境下で６時間または一晩インキュベーションした後（図１１の（Ａ））、および５０℃で６時間または一晩インキュベーションした後（図１１の（Ｂ））の、本明細書においてＴＲＨ１Ａ、ＴＲＨ１Ｄ、ＴＲＨ３Ｂ、ＴＲＨ５Ａ、およびＴＲＨ５Ｃと称する、作製した抗ＴＲＨナノボディの安定性を、対照である室温（ＲＴ）条件と比較したグラフである。各処理は３回の繰り返しを含み、データを平均±ＳＥで示した。
【図11-2】同上
【図12A】図１２Ａは、示したナノボディを最終濃度０．４ｍｇ／ｍｌで含有する人工飼料を０日目および７日目に給餌した際の、抗ＴＲＨナノボディＴＲＨ１Ａ、ＴＲＨ１Ｄ、ＴＲＨ３Ｂ、ＴＲＨ５Ａ、ＴＲＨ５Ｂ、ＴＲＨ５ＣおよびＴＲＨ８のH. armigeraの死亡率に対する効果を示す。測定は、７日目および１４日目に示したように実施した。各実験には１２匹の幼虫が含まれ、３回繰り返され、エラーバーは標準誤差を示す。統計的有意差はａ（Ｐ＜０．０５）で表されている。
【図12B】図１２Ｂは、０．４または１ｍｇ／ｍｌの濃度のナノボディを円盤状の綿葉と共に０日目に給餌した際の、抗ＴＲＨ３ＢナノボディのH. armigeraの死亡率に対する効果を示す。幼虫は、４日目および７日目に同様の濃度の示したナノボディで処理した新鮮な円盤状の綿葉に移した。死亡率の測定を、４日目、７日目、および１０日目に示したように実施した。各実験には１２匹の幼虫が含まれ、２回繰り返され、エラーバーは標準誤差を示す。
【図13】図１３は、ＥＬＩＳＡで決定した、本明細書においてＰ４５００１Ａ、Ｐ４５００３Ａ、Ｐ４５００４、Ｐ４５００５、およびＰ４５００６と称する、作製した抗チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ（本明細書において「Ｐ４５０」と称する）ナノボディの標的Ｐ４５０抗原に対する特異的結合を示すグラフである。各実験を５回実施し、データを平均±ＳＥで示した。
【図14】図１４は、示したナノボディを最終濃度０．４ｍｇ／ｍｌで含有する人工飼料を０日目および７日目に給餌した際の、本明細書においてＰ４５００８と称する、作製した抗Ｐ４５０ナノボディのH. armigeraの死亡率に対する効果を示す。測定は、７日目および１４日目に示したように実施した。各実験には１２匹の幼虫が含まれ、３回繰り返され、エラーバーは標準誤差を示す。
【図15】図１５は、ＥＬＩＳＡで決定した、本明細書においてＣＤＡ０１Ａ、ＣＤＡ０５、ＣＤＡ０７Ａ、およびＣＤＡ１０と称する、作製した抗キチン脱アセチル化酵素（本明細書において「ＣＤＡ」と称する）ナノボディの標的ＣＤＡ抗原に対する特異的結合を示すグラフである。各実験を５回実施し、データを平均±ＳＥで示した。
【図16】図１６の（Ａ）～（Ｂ）は、ＥＬＩＳＡで決定した、野外様の環境下で６時間または一晩インキュベーションした後（図１６の（Ａ））、および５０℃で６時間または一晩インキュベーションした後（図１６の（Ｂ））の、作製したＣＤＡ７Ａナノボディの安定性を、対照である室温（ＲＴ）条件と比較したグラフである。各処理は３回の繰り返しを含み、データを平均±ＳＥで示した。
【図17A】図１７Ａは、示したナノボディを最終濃度０．４ｍｇ／ｍｌで含有する人工飼料を０日目および７日目に給餌した際の、本明細書においてＣＤＡ１Ｂ、ＣＤＡ４Ｂ、ＣＤＡ４Ｃ、およびＣＤＡ７Ａと称する、抗ＣＤＡナノボディのH. armigeraの死亡率に対する効果を示す。測定は、７日目および１４日目に示したように実施した。各実験には１２匹の幼虫が含まれ、３回繰り返され、エラーバーは標準誤差を示す。統計的有意差はａ（Ｐ＜０．０５）で表されている。
【図17B】図１７Ｂは、増加する濃度（示したように、０．２、０．４、１、２、または４ｍｇ／ｍｌ）のナノボディを円盤状の綿葉と共に０日目に給餌した際の、ＣＤＡ７ＡナノボディのH. armigeraの死亡率に対する効果を示す。幼虫は、４日目および７日目に同様の濃度の示したナノボディで処理した新鮮な円盤状の綿葉に移した。死亡率の測定を、４日目、７日目、および１０日目に示したように実施した。各実験には１２匹の幼虫が含まれ、２回繰り返され、エラーバーは標準誤差を示す。
【図18】図１８は、ＥＬＩＳＡで決定した、本明細書においてＣＨＳ０１Ａ、ＣＨＳ０２Ａ、ＣＨＳ０８、ＣＨＳ１３、ＣＨＳ１８、ＣＨＳ２２、およびＣＨＳ２４と称する、作製した抗キチンシンターゼ（本明細書において「ＣＨＳ」と称する）ナノボディの標的ＣＨＳ抗原に対する特異的結合を示すグラフである。各実験を５回実施し、データを平均±ＳＥで示した。
【図19-1】図１９の（Ａ）～（Ｂ）は、ＥＬＩＳＡで決定した、野外様の環境下で６時間または一晩インキュベーションした後（図１９の（Ａ））、および５０℃で６時間または一晩インキュベーションした後（図１９の（Ｂ））の、本明細書においてＣＨＳ３Ａと称する、作製した抗ＣＨＳナノボディの安定性を、対照である室温（ＲＴ）条件と比較したグラフである。各処理は３回の繰り返しを含み、データを平均±ＳＥで示した。
【図19-2】同上
【図20A】図２０Ａは、示したナノボディを最終濃度０．４ｍｇ／ｍｌで含有する人工飼料を０日目および７日目に給餌した際の、本明細書においてＣＨＳ３Ａ、ＣＨＳ４、およびＣＨＳ７と称する、抗ＣＨＳナノボディのH. armigeraの死亡率に対する効果を示す。測定は、７日目および１４日目に示したように実施した。各実験には１２匹の幼虫が含まれ、３回繰り返され、エラーバーは標準誤差を示す。統計的有意差はａ（Ｐ＜０．０５）で表されている。
【図20B】図２０Ｂは、増加する濃度（示したように、０．２、０．４、１、２、または４ｍｇ／ｍｌ）のナノボディを円盤状の綿葉と共に０日目に給餌した際の、ＣＨＳ３ＡナノボディのH. armigeraの死亡率に対する効果を示す。幼虫は、４日目および７日目に同様の濃度の示したナノボディで処理した新鮮な円盤状の綿葉に移した。死亡率の測定を、４日目、７日目、および１０日目に示したように実施した。各実験には１２匹の幼虫が含まれ、３回繰り返され、エラーバーは標準誤差を示す。統計的有意差はａ（Ｐ＜０．０５）で表されている。
【0049】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、昆虫防除ナノボディおよびその使用に関する。
【0050】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、必ずしもその用途が、以下の記載に示す、および／または図面および／または実施例で例示する、構成の詳細および要素の配置および／または方法に限定されるものではないことを理解するべきである。本発明は、他の実施形態が可能であり、また、さまざまな手段で実施または実行することが可能である。
【0051】
過去７０年間の害虫の防除は、主として合成殺虫剤の適応により達成されており、その大部分が生態系破壊の高い可能性を秘めており、直接または食物連鎖を通じてヒトに対して毒性であり、その使用は遺伝的昆虫耐性の発達によっても妨げられている。現在使用されている最も卓越した生物学的解決手段にも、低効率、天然の生態系の均衡を乱す危険性、および遺伝的昆虫耐性の発生を含む不利な点もある。
【0052】
本発明を実施するに当たり、本発明者らは、昆虫防除活性を有するいくつかの昆虫ポリペプチドを標的とするナノボディをここで開発した。その結果、本願の教示の特定の実施形態はそれらの殺虫剤としての使用を示唆する。
【0053】
よって、本発明の第一の実施態様によると、昆虫ポリペプチドに特異的に結合するナノボディであって、前記昆虫ポリペプチドが、下記：
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチドであって、ＣＢＤに前記ナノボディが結合するもの、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃであって、但し前記ナノボディが、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、または配列番号１８０～１８２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体
からなる群より選ばれ、ナノボディの前記昆虫ポリペプチドへの結合が、ナノボディに昆虫防除活性を付与する、ナノボディが提供される。
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチドであって、ＣＢＤに前記ナノボディが結合するもの、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃであって、但し前記ナノボディが、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、または配列番号１８０～１８２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体
からなる群より選ばれ、ナノボディの前記昆虫ポリペプチドへの結合が、ナノボディに昆虫防除活性を付与する、ナノボディが提供される。
【0054】
さらなるまたは代わりの実施態様によると、昆虫ポリペプチドに特異的に結合するナノボディと、昆虫防除活性を有する毒素部分とを含み、昆虫ポリペプチドは、下記：
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチドであって、ＣＢＤに前記ナノボディが結合するもの、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃであって、但し前記ナノボディが、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、配列番号１８０～１８２、配列番号１８７～１８９、または配列番号１９１～１９３で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体
からなる群より選ばれる、組成物が提供される。
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチドであって、ＣＢＤに前記ナノボディが結合するもの、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃであって、但し前記ナノボディが、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、配列番号１８０～１８２、配列番号１８７～１８９、または配列番号１９１～１９３で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体
からなる群より選ばれる、組成物が提供される。
【0055】
本願において使用する「ナノボディ」という用語は、単一ドメイン抗原結合断片を意味する。
【0056】
特定の実施形態によると、ナノボディは、天然に発生した抗体の重鎖から誘導された単一可変ドメインである。ナノボディは、通常、ラクダ類に見られる、（軽鎖を欠損した）重鎖のみの抗体から誘導され（Hamers-Casterman et al., 1993, Nature 363: 446-448、Desmyter et al., 1996, Nat. Struct. Biol. 803-811）、その結果、多くの場合、ＶＨＨ抗体またはＶＨＨ配列と称される。ラクダ類には旧世界ラクダ類（Camelus bactrianusおよびCamelus dromedarius）並びに新世界ラクダ類（例えば、Lama paccos、Lama glama、Lama guanicoeおよびLama vicugna）がある。ラクダ類の非限定的な例としては、ヒトコブラクダ、フタコブラクダ、野性フタコブラクダ、ラマ、アルパカ、ビキューナ、およびグアナコが挙げられる。特定の実施形態によると、ラクダ類はラマである。
【0057】
ＮＡＮＯＢＯＤＹ（登録商標）およびＮＡＮＯＢＯＤＩＥＳ（登録商標）はＡｂｌｙｎｘ ＮＶ（ベルギー国）の登録商標である。
【0058】
ＶＨＨまたはナノボディのさらなる説明については、教科書である“Single Domain Antibodies,” Methods in Molecular Biology, Eds. Saerens and Muyldermans, 2012, Vol. 911、特にVinckeとMuyldermansによる章（２０１２）や、一般的な背景技術として列挙する非限定的な以下の特許文献：ブリュッセル自由大学の国際公開第９４／０４６７８号、第９５／０４０７９号、および第９６／３４１０３号、ユニリーバ－社の国際公開第９４／２５５９１号、第９９／３７６８１号、第００／４０９６８号、第００／４３５０７号、第００／６５０５７号、第０１／４０３１０号、第０１／４４３０１号、欧州特許第１１３４２３１号明細書、および国際公開第０２／４８１９３号、フラマン・バイオテクノロジー研究所（Ｖｌａａｍｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｕｔ ｖｏｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ）（ＶＩＢ）の国際公開第９７／４９８０５号、第０１／２１８１７号、第０３／０３５６９４号、第０３／０５４０１６号、および第０３／０５５５２７号、Ａｂｌｙｎｘ ＮＶの国際公開第０４／０４１８６７号、第０４／０４１８６２号、第０４／０４１８６５号、第０４／０４１８６３号、第０４／０６２５５１号、第０５／０４４８５８号、第０６／４０１５３号、第０６／０７９３７２号、第０６／１２２７８６号、第０６／１２２７８７号、および第０６／１２２８２５号や、Ａｂｌｙｎｘ Ｎ．Ｖ．の公開済みの他の特許出願に参照する。当業者には明らかなように、ナノボディは、特に１以上の（Ｋａｂａｔの番号付による）フレームワーク配列中にラクダ類の「ホールマーク残基」が存在することによって特徴づけられる。これは、例えば、国際公開第０８／０２００７９号、７５頁、表Ａ－３に記載されており、参照によって本明細書に援用する。
【0059】
特定の実施形態によると、ナノボディは、インタクトな分子（即ち、４つのフレームワーク領域と３つの相補性決定領域を含む）、またはインタクトな分子が結合する抗原のエピトープに結合可能なその機能的断片を意味する。
【0060】
本願において使用する「エピトープ」という用語は、ナノボディのパラトープが結合する抗原の任意の抗原決定基を意味する。エピトープ性決定基は、通常、アミノ酸または炭水化物側鎖などの化学的に活性な表面基からなり、特異的な三次元構造特性と共に特異的な電荷特性を通常は有す。
【0061】
特定の実施形態によると、ナノボディは完全またはインタクトなナノボディである。
【0062】
特定の実施形態によると、ナノボディはナノボディ断片である。
【0063】
特定の実施形態によると、ナノボディのサイズは、５～３０ｋＤａ、１０～３０ｋＤａまたは１０～２０ｋＤａである。
【0064】
特定の実施形態によると、ナノボディのサイズは約１５ｋＤａである。
【0065】
「ナノボディ」という用語は、ナノボディの天然または合成の類似体、相似体、変異体およびバリアントも包含する。
【0066】
通常、インタクトなナノボディは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む。
【0067】
本願において使用する「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、重鎖ポリペプチドの可変領域内に見いだされる抗原結合領域を表すために代替的に使用される。特定のナノボディ内のＣＤＲを形成するアミノ酸残基の特徴は、当業界で公知の方法によって決定することができ、そのような方法としては、Riechmann and Muyldermans (1999)の論文でラクダ類のＶＨＨドメインに適応した、Kabat et al.（例えば、Kabat et al., 1992, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, NIH, Washington D.C.を参照）によって定義された配列多様性、Chothia et al.（例えば、Chothia et al., Nature 342:877-883, 1989を参照）によって定義された構造ループの位置、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ社のＡｂＭ抗体モデリングソフトウエアを用いたKabatとChothiaとの折衷法（現在はＡｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標）、Martin et al., 1989, Proc. Natl Acad Sci USA. 86:9268、およびワールドワイド・ウェブ・サイトwww(dot)bioinf-org(dot)uk/absを参照）、接触定義によって定義された入手可能な複合結晶構造（MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745, 1996を参照）、および「立体配座の定義」（例えば、Makabe et al., Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166, 2008を参照）が挙げられる。
【0068】
本願において使用する「ＣＤＲ」は、当業界で公知の手段（複数の手段の組み合わせも含む）によって定義されたＣＤＲを意味し得る。
【0069】
特定の実施形態によると、ＣＤＲは、Riechmann and Muyldermans (1999)の論文でラクダ類のＶＨＨドメインに適応したKabat et al.の定義と同じである。
【0070】
ナノボディは単一特異性（１種のエピトープまたはタンパク質を認識可能）、二特異性（２種のエピトープまたはタンパク質を結合可能）、または多特異性（複数種のエピトープまたはタンパク質を認識可能）であり得る。
【0071】
特定の実施形態によると、ナノボディは単一特異性ナノボディである。
【0072】
特定の実施形態によると、ナノボディは多特異性（例えば、二特異性、三特異性、四特異性）である。
【0073】
特定の実施形態によると、ナノボディは二特異性ナノボディである。二特異性ナノボディの作製方法は当業界で公知であり、例えば、Deffar K, Shi H, Li L, Wang X, Zhu X (2009) Afr J Biotechnol 8(12):2645-2652、およびZhu, Y. et al. (2017). Scientific reports, 7(1), 2602に開示されており、これらの内容は本参照をもってここに全体を援用する。
【0074】
本願で開示するナノボディは、本願に記載した昆虫ポリペプチドに特異的に結合する。
【0075】
好ましくは、ナノボディは、本願に記載した昆虫ポリペプチドの少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する。
【0076】
結合を試験する方法は当業界で公知であり、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、フローサイトメトリー、ＢｉａＣｏｒｅ、バイオレイヤ・インターフェロメトリーＢｌｉｔｚ（登録商標）アッセイ、ＨＰＬＣが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【0077】
特定の実施形態によると、ナノボディは昆虫ポリペプチドにＫｄが≦１０－６Ｍ、≦１０－７Ｍ、≦１０－８Ｍ、≦１０－９Ｍで結合し、各可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【0078】
特定の実施形態によると、ナノボディは、野外または制御された条件、例えば、温室内で、昆虫ポリペプチドに結合することができる。
【0079】
本願で使用する「昆虫」という用語は、広く一般的な意味で使用されており、汎節足動物上門（分類法はSystema Naturae, Brands, S.J. (comp.) 1989-2005. Systema Naturae 2000. オランダ国、アムステルダム、[www(dot)sn2000(dot)taxonomy(dot)nl/]）に属する全ての種を含み、節足動物門、緩歩動物門、および有爪動物門を含み、卵、幼虫、若虫、蛹、および成虫に限定されない生活環の種々の段階の全てを含む。特定の実施形態によると、昆虫は節足動物門に属し（古顎目、シミ目、旧翅目、および新翅目、さらにはマダニ、ダニ、および蜘蛛を含むが、これらに限定されない）、六脚上綱に属するものがより好ましく、昆虫綱に属するものが最も好ましい。特定の実施形態によると、昆虫はチョウ目に属する。昆虫の非限定的な例としては、トコジラミ、イエバエ、蛾、甲虫、バッタ、毛虫、アブラムシ、蚊、蚤、ウシアブ、スズメバチ、ゴキブリ、および蟻が挙げられるが、これらに限定されるものではなく、以下も挙げられる。
【0080】
・チョウ目としては、例えば、Acleris spp.、Adoxophyes spp.、Agrotis spp.、Alabama argillacea、Amyelois spp.、Anticarsia gemmatalis、Archips spp.、Argyrotaenia spp.、Autographa spp.、Busseola fusca、Cadra cautella、Carposina nipponensis、Chilo suppressalis、Chilo spp.、Choristoneura conflictana、Choristoneura fumiferana、Choristoneura occidentalis、Choristoneura rosaceana、Choristoneura spp.、Clysia ambiguella、Cnaphalocrocis spp.、Cnephasia spp.、Cochylis spp.、Coleophora spp.、Crocidolomia binotalis、Cryptophlebia leucotreta、Cydalima perspectalis、Cydia inopinata、Cydia spp.、Diatraea spp.、Diparopsis castanea、Earias spp.、Ephestia spp.、Eucosma spp.、Eupoecilia ambiguella、Euproctis spp.、Euxoa spp.、Grapholita prunivora、Grapholita spp.、Hedya nubiferanal、Helicoverpa armigera、Helicoverpa zea、Helicoverpa spp.、Heliothis spp.、Hellula undalis、Hyphantria cunea、Keiferia lycopersicella、Leucoptera scitella、Lithocolletis spp.、Lobesia botrana、Lymantria spp.、Lyonetia spp.、Malacosoma spp.、Mamestra brassicae、Manduca sexta、Numonia pyrivorella、Operophtera spp.、Opogona sacchari、Ostrinia nubilalis、Pammene spp.、Pandemis spp.、Panolis flammea、Paysandisia archon、Pectinophora gossypiella、Phthorimaea operculella、Phyllonorycter spp.、Pieris rapae、Pieris spp.、Platynota rostrana、Plutella xylostella、Prays spp.、Scirpophaga spp.、Sesamia spp.、Sesia spp.、Sparganothis spp.、Spodoptera dolichos、Spodoptera eridania、Spodoptera exigua、Spodoptera frugiperda、Spodoptera littoralis、Spodoptera litura、Spodoptera spp.、Synanthedon spp.、Tecia solanivora、Thaumatotibia leucotreta、Thaumetopoea processionea、Thaumetopoea spp.、Tortrix spp.、Trichoplusia ni、およびYponomeuta spp.が挙げられる。
【0081】
・鞘翅目としては、例えば、Agrilus anxius、Agrilus planipennis、Agriotes spp.、Anomala orientalis、Anoplophora chinensis、Anoplophora glabripennis、Anoplophora spp.、Anthonomus bisignifer、Anthonomus eugenii、Anthonomus grandis、Anthonomus quadrigibbus、Anthonomus signatus、Anthonomus spp.、Apriona spp.、Arrhenodes minutus、Atomaria linearis、Chaetocnema tibialis、Conotrachelus nenuphar、Cosmopolites spp.、Curculio spp.、Dendroctonus micans、Dendrolimus sibiricus、Dermestes spp.、Diabrotica virgifera、Diabrotica virgifera zeae、Diabrotica virgifera、Diabrotica balteata、Diabrotica barberi、Diabrotica undecimpunctata howardi、Diabrotica undecimpunctata tenella、Diabrotica undecimpunctata、Diabrotica undecimpunctata、Diabrotica spp.、Epilachna varivestis、Epilachna spp.、Epitrix cucumeris、Eremnus cerealis、Eremnus spp.、Gonipterus scutellatus、Ips amitinus、Ips cembrae、Ips duplicatus、Ips sexdentatus、Ips typographus、Ips spp.、Leptinotarsa decemlineata、Leptinotarsa juncta、Leptinotarsa texana、Lissorhoptrus spp.、Listronotus bonariensis、Melolontha spp.、Monochamus spp.、Naupactus leucoloma、Oryzaephilus spp.、Otiorhynchus spp.、Phlyctinus spp.、Pissodes nemorensis、Pissodes strobi、Pissodes terminalis、Pissodes spp.、Popilia japonica、Popilia spp.、Premnotrypes spp.、Pseudopityophthorus minutissimus、Pseudopityophthorus pruinosus、Psylliodes spp.、Rhizopertha spp.、Rhynchophorus ferrugineus、Rhynchophorus palmarum、コガネムシ科の種、キクイムシ科の種、Sitophilus spp.、Sitotroga spp.、Sternochetus mangiferae、Tenebrio spp.、Tribolium castaneum、Tribolium spp.、およびTrogoderma spp.が挙げられる。
【0082】
・直翅目としては、例えば、 Gryllotalpa spp.、Locusta spp.、およびSchistocerca spp.が挙げられる。
【0083】
・ゴキブリ目としては、例えば、Blatta spp.、Blattella spp.、Periplaneta spp.、およびLeucophaea maderaeが挙げられる。
【0084】
・等翅目としては、例えば、Coptotermes spp.およびReticulitermes spp.が挙げられる。
【0085】
・チャタテムシ目としては、例えば、Liposcelis spp.が挙げられる。
【0086】
・シラミ目シラミ亜目としては、例えば、Haematopinus spp.、Linognathus spp.、およびPediculus spp.、およびTrichodectes spp.が挙げられる。
【0087】
・シラミ目ホソツノハジラミ亜目としては、例えば、Damalinia spp.が挙げられる。
【0088】
・アザミウマ目としては、例えば、Frankliniella occidentalis、Frankliniella platensis、Frankliniella spp.、Hercinothrips spp.、Taeniothrips spp.、Thrips palmi、Thrips tabaci、Scirtothrips aurantii、Scirtothrips citri、Scirtothrips dorsalis、およびScirtothrips spp.が挙げられる。
【0089】
・半翅目カメムシ亜目としては、例えば、Cimex spp.、Distantiella theobroma、Dysdercus spp.、Euschistus spp.、Eurygaster spp.、Leptocorisa spp.、Nezara spp.、Piesma spp.、Rhodnius spp.、Sahlbergella singularis、Scotinophara spp.、Triatoma spp.、メクラカメムシ科の種（Lygus hesperusおよびLygus lineoloris等）、ナガカメムシ科の種（Blissus leucopterus等）、およびカメムシ科が挙げられる。
【0090】
・半翅目腹吻亜目としては、例えば、Aleurocanthus spiniferus、Aleurocanthus woglumi、Aleurocanthus spp.、Aleurothrixus floccosus、Aleyrodes brassicae、Aonidella citrina、Aonidiella spp.、アブラムシ科の種、 Acyrthosiphon spp.、Aphis fabae、Aphis glycines、Aphis gossypii、Aphis spp.、Aspidiotus spp.、Bemisia tabaci、Ceroplastes spp.、Chrysomphalus aonidium、Chrysomphalus dictyospermi、Coccus hesperidum、Daktulosphaira vitifoliae、Diaphorina citri、Eriosoma larigerum、Gascardia spp.、Lacanium corni、Lepidosaphes spp.、Lopholeucaspis japonica、Macrosiphus spp.、Margarodes prieskaensis、Margarodes vitis、Margarodes vredendalensis、Myzus persicae、Myzus spp.、Parasaissetia nigra、Pemphigus spp.、Phylloxera spp.、Planococcus spp.、Pseudaulacaspis spp.、Pseudococcus spp.、Psylla spp.、Pulvinaria aethiopica、Quadraspidiotus spp.、Rhopalosiphum spp.、Ripersiella hibisci、Saissetia spp.、Schizaphis spp.、Sitobion spp.、Toxoptera citricida、Trialeurodes vaporariorum、Trioza erytreae、およびUnaspis citriが挙げられる。
【0091】
・半翅目頚吻亜目としては、例えば、Circulifer haematoceps、Circulifer tenellus、Draeculacephala minerva、Empoasca spp.、Erythroneura spp.、Graphocephala atropunctata、Hishimonus phycitis、Myndus crudus、Laodelphax spp.、Nephotettix spp.、Nilaparvata spp.、Scaphoideus luteolus、Scaphoideus spp.、およびXyphon fulgidaが挙げられる。
【0092】
・膜翅目としては、例えば、Acromyrmex、Atta spp.、Cephus spp.、マツハバチ科の種（Diprion spp.およびGilpinia polytoma等）、Hoplocampa spp.、Lasius spp.、Monomorium pharaonis、Neodiprion spp.、アリ科の種（Solenopsis spp.およびVespa spp.等）が挙げられる。
【0093】
・双翅目としては、例えば、Aedes albopictus、Aedes cinereus、Aedes polynesiensis、Aedes spp.、Amauromyza maculosa、Anastrepha fraterculus、Anastrepha ludens、Anastrepha obliqua、Anastrepha suspensa、Anastrepha spp.、Anopheles gambiae、Anopheles spp.、Aschistonyx eppoi、Atherigona soccata、Bactrocera spp.、Bibio hortulanus、Calliphora erythrocephala、Cephalcia lariciphila、Ceratitis rosa、Ceratitis spp.、Chrysomyia spp.、Culex spp.、Cuterebra spp.、Dacus spp.、Drosophila melanogaster、Dryocosmus kuriphilus、Euphranta canadensis、Euphranta japonica、Fannia spp.、Gastrophilus spp.、Gilpinia hercyniae、Glossina spp.、Hypoderma spp.、Hippobosca spp.、Liriomyza bryoniae、Liriomyza huidobrensis、Liriomyza sativae、Liriomyza trifolii、Liriomyza spp.、Lucilia spp.、Melanagromyza spp.、Musca spp.、Oestrus spp.、Orseolia spp.、Oscinella frit、Pardalaspis cyanescens、Pardalaspis quinaria、Pegomyia hyoscyami、Phorbia spp.、Rhagoletis pomonella、Rhagoletis spp.、Sciara spp.、Stomoxys spp.、Tabanus spp.、およびTipula spp. が挙げられる。
【0094】
・隠翅目としては、例えば、Ceratophyllus spp.およびXenopsylla cheopisが挙げられる。
【0095】
・シミ下綱シミ目としては、例えば、Lepisma saccharinaが挙げられる。
【0096】
特定の実施形態によると、昆虫は害虫とみなされる。本願において使用する「害虫」という用語は、農業的に有害な生物（アブラムシ、バッタ、芋虫、甲虫、蛾、カメムシ、アザミウマ、コナジラミ等）、家庭有害生物（ゴキブリ、蟻、スズメバチ、ハエ、イエコオロギ、トコジラミ、シバンムシの幼虫、ゴミムシダマシ、ハサミムシ、セイヨウシミ、シロアリ等）、吸血性害虫（蚊、蚤、シラミ等）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態によると、昆虫は農業的に有害な生物である。
【0097】
特定の実施形態によると、昆虫は、蛾、カメムシ、バッタ、甲虫、アブラムシ、およびミツバチからなる群より選ばれる。
【0098】
特定の実施形態によると、昆虫は蛾である。
【0099】
特定の実施形態によると、昆虫は夜蛾である。
【0100】
蛾の非限定的な例には、Helicoverpa armigera、Cydia pomonellaおよびSpodoptera frugiperdaが含まれる。
【0101】
特定の実施形態によると、蛾はHelicoverpa armigeraおよび／またはSpodoptera frugiperdaである。
【0102】
特定の実施形態によると、蛾はHelicoverpa armigeraである。
【0103】
特定の実施形態によると、昆虫は、Helicoverpa armigera、Spodoptera frugiperda、Nezara viridula、Nilaraparvata lugens、Aphis gossypii、Cydia pomonella、食葉性甲虫（例えば、Leptinotarsa decemlineataまたはPhaedon cochleariae）およびミツバチからなる群より選ばれる。
【0104】
特定の実施形態によると、ナノボディは下記からなる群より選ばれる昆虫ポリペプチドに結合する。
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチドであって、ＣＢＤに前記ナノボディが結合するもの、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃであって、但し前記ナノボディが、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、配列番号１８０～１８２、配列番号１８７～１８９、または配列番号１９１～１９３で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体。
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチドであって、ＣＢＤに前記ナノボディが結合するもの、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃであって、但し前記ナノボディが、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、配列番号１８０～１８２、配列番号１８７～１８９、または配列番号１９１～１９３で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体。
【0105】
本願において使用する「特異的に結合する」という用語は、ナノボディが標的昆虫ポリペプチドに生理学的環境下、例えば、昆虫の体内の生理学的条件下で、当該環境に存在する他のポリペプチドよりも高い親和性をもって結合することを意味する。
【0106】
特定の実施形態によると、ナノボディは、非昆虫（例えば、植物、ヒト）ポリペプチドとの交差反応なしに、昆虫ポリペプチドに結合する。
【0107】
特定の実施形態によると、ナノボディは、昆虫ポリペプチド（ｉ）～（ｖｉｉ）の１種に特異的に結合し、他の昆虫ポリペプチドとは交差反応しない。
【0108】
特定の実施形態によると、ナノボディは、昆虫ポリペプチド（ｉ）～（ｖｉｉ）の少なくとも２種と、例えば、二特異性等の多特性によって、結合する。
【0109】
特定の実施形態によると、ナノボディは、昆虫ポリペプチド（ｉ）～（ｖｉｉ）からなる群より選ばれる異なる昆虫ポリペプチドのそれぞれが結合する少なくとも２種のナノボディの組み合わせである。
【0110】
特定の実施形態によると、ナノボディまたはナノボディの組み合わせは、（ｉ）＋（ｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｖ）、（ｉ）＋（ｖ）、（ｉ）＋（ｖｉ）、（ｉ）＋（ｖｉｉ）、（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）、（ｉｉ）＋（ｉｖ）、（ｉｉ）＋（ｖ）、（ｉｉ）＋（ｖｉ）、（ｉｉ）＋（ｖｉｉ）、（ｉｉｉ）＋（ｉｖ）、（ｉｉｉ）＋（ｖ）、（ｉｉｉ）＋（ｖｉ）、（ｉｉｉ）＋（ｖｉｉ）、（ｉｖ）＋（ｖ）、（ｉｖ）＋（ｖｉ）、（ｉｖ）＋（ｖｉｉ）、（ｖ）＋（ｖｉ）、（ｖ）＋（ｖｉｉ）、（ｖｉ）＋（ｖｉｉ）を結合する。
【0111】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチドを結合し、当該ナノボディは当該ＣＢＤに結合する。
【0112】
本明細書において使用する「キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）」という用語は、昆虫キチン（大部分がＮ－アセチル化されている（１→４）ベータ結合Ｄ－グルコサミン残基からな直鎖状多糖）またはその抗原性断片に結合可能であって、当該断片に対する特異的免疫応答を生じさせることが可能な昆虫アミノ酸ドメインを意味する。ＣＢＤの非限定的な例には、２型キチン結合ドメイン（ＣｈｔＢＤ２）およびRebers and Riddiformのコンセンサス配列が含まれる。他の特定の実施形態によると、ＣＢＤはRebers and Riddiformのコンセンサス配列を含む。
【0113】
本明細書において使用する「Rebers and Riddiformのコンセンサス配列」という用語は、Ｐｆａｍデータベースの登録番号ｐｆａｍ００３７９（Rebers and Riddiford, 1988、Anderson, 2010、 Karouzou et al., 2007、Willis, 2010を参照、これらの内容は本参照をもって完全に本願に組み込まれたものとする）に記載のコンセンサス配列を意味する
【0114】
特定の実施形態によると、ＣＢＤは２型キチン結合ドメイン（ＣｈｔＢＤ２）である。
【0115】
本願において使用する「２型キチン結合ドメイン（ＣｈｔＢＤ２）」という用語は、ペリトロフィンＡドメインとも称され、３つのジスルフィド結合を形成する６個のシステインを有するアミノ酸配列を意味する。このようなＣＢＤは当業界で知られており、Tetreau, Guillaume, et al. Insect biochemistry and molecular biology 62 (2015): 127-141に開示されている。特定の実施形態によると、ＣｈｔＢＤ２は、ＣＸ１１－３０ＣＸ５－６ＣＸ９－２４ＣＸ１２－１７ＣＸ６－１２Ｃ（配列番号４０９）のコンセンサス配列を有する。
【0116】
特定の実施形態によると、ＣｈｔＢＤ２は、配列番号３～７からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0117】
特定の実施形態によると、ＣｈｔＢＤ２は、ＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号ＸＰ＿０２１１８１７７４（配列番号４１０）で提供されるアミノ酸配列と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0118】
配列同一性または相同性は、Ｂｌａｓｔ、ＣｌｕｓｔａｌＷ、およびＭＵＳＣＬＥ等の任意のタンパク質または核酸配列アライメントアルゴリズムを用いて決定することができる。
【0119】
特定の実施形態によると、ＣｈｔＢＤ２は配列番号３～７からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0120】
ＣｈｔＢＤ２を含むポリペプチドの非限定的な例には、ＴｃＰＭＰ５－ＢやＨａＩＩＭ８６等の囲食膜（Ｐｅｒｉｔｒｏｐｈｉｃ Ｍａｔｒｉｘ）タンパク質（ＰＭＰ）、ならびにＢｍＣＰＡＰ３－Ａ１、ＢｍＣＰＡＰ３－Ａ２、ＢｍＣＰＡＰ３－Ｂ、ＢｍＣＰＡＰ３－Ｃ、ＢｍＣＰＡＰ３－Ｄ１、およびＢｍＣＰＡＰ３－Ｄ２等のペリトロフィンに類似したキューティクルタンパク質（ＣＰＡＰ）が挙げられる。
【0121】
特定の実施形態によると、ＣｈｔＢＤ２を含むポリペプチドは、ＰＭＰタンパク質である。
【0122】
特定の実施形態によると、ＣｈｔＢＤ２を含むポリペプチドは、ＴｃＰＭＰ５－Ｂ（Tribolium castaneumのＰＭＰ５－Ｂ）である。
【0123】
特定の実施形態によると、ＣｈｔＢＤ２を含むポリペプチドは、配列番号１～２からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0124】
特定の実施形態によると、ＣｈｔＢＤ２を含むポリペプチドは、配列番号１～２からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0125】
ＣｈｔＢＤ２に特異的に結合するナノボディの非限定的な例と、それらの対応するＣＤＲを下記の表２Ａと２Ｂに示した。
【0126】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＣｈｔＢＤ２に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１５～１７、配列番号１９～２１、配列番号２３～２５、配列番号１５と２８～２９、配列番号３１～３３、配列番号３５～３７、配列番号３９～４１、配列番号４３～４５、配列番号４７～４９、配列番号５１～５３、配列番号５５～５７、配列番号５９～６１、配列番号６３～６５、配列番号６７～６９、配列番号７１～７３、配列番号７５～７７、配列番号７９～８１、配列番号８３～８５、配列番号８７～８９、配列番号９１、８０と９３、配列番号９５～９７、配列番号９９～１０１、配列番号１０３～１０５、配列番号１０７～１０９、配列番号１１１～１１３、配列番号１１５～１１７、配列番号１１９～１２１、配列番号１２３～１２５、配列番号１２７～１２９、配列番号１３１～１３３、配列番号１３５～１３７、配列番号１３９～１４１、配列番号１４３～１４５、配列番号１４７～１４９、配列番号１５１～１５３、配列番号１５と１５６～１５７、配列番号１５９～１６１、または配列番号１６３～１６５に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0127】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＣｈｔＢＤ２に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１５～１７、配列番号１９～２１、配列番号２３～２５、または配列番号１５と２８～２９に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0128】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＣｈｔＢＤ２に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１５～１７、配列番号１９～２１、配列番号２３～２５、配列番号１５と２８～２９、配列番号３１～３３、配列番号３５～３７、配列番号３９～４１、配列番号４３～４５、配列番号４７～４９、配列番号５１～５３、配列番号５５～５７、配列番号５９～６１、配列番号６３～６５、配列番号６７～６９、配列番号７１～７３、配列番号７５～７７、配列番号７９～８１、配列番号８３～８５、配列番号８７～８９、配列番号９１、８０および９３、配列番号９５～９７、配列番号９９～１０１、配列番号１０３～１０５、配列番号１０７～１０９、配列番号１１１～１１３、配列番号１１５～１１７、配列番号１１９～１２１、配列番号１２３～１２５、配列番号１２７～１２９、配列番号１３１～１３３、配列番号１３５～１３７、配列番号１３９～１４１、配列番号１４３～１４５、配列番号１４７～１４９、配列番号１５１～１５３、配列番号１５と１５６～１５７、配列番号１５９～１６１、または配列番号１６３～１６５に示したアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0129】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＣｈｔＢＤ２に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１５～１７、配列番号１９～２１、配列番号２３～２５、又は配列番号１５と２８～２９に示したＣＤＲを含む。
【0130】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＣｈｔＢＤ２に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１５～１７に示したＣＤＲを含む。
【0131】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＣｈｔＢＤ２に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１９～２１に示したＣＤＲを含む。
【0132】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＣｈｔＢＤ２に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２３～２５に示したＣＤＲを含む。
【0133】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＣｈｔＢＤ２に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１５と２８～２９に示したＣＤＲを含む。
【0134】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８および１６２からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【0135】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１４、１８、２２、および２６からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0136】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８および１６２からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0137】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１４、１８、２２および２６からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0138】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１４を含む。
【0139】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１８を含む。
【0140】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２２を含む。
【0141】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号を２６含む。
【0142】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８および１６２からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0143】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号１４、１８、２２または２６からなる。
【0144】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号１４からなる。
【0145】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号１８からなる。
【0146】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号２２からなる。
【0147】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号２６からなる。
【0148】
特定の実施形態によると、ナノボディはＶ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃを結合する。
【0149】
ＶーＡＴＰアーゼ・サブユニットｃに特異的に結合するナノボディの非限定的な例と、その対応するＣＤＲを下記の表３Ａ～Ｂに示した。
【0150】
特定の実施形態によると、ナノボディはＶーＡＴＰアーゼ・サブユニットｃを結合し、当該ナノボディは、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、配列番号１８０－１８２、配列番号１８７～１８９、または、配列番号１９１～１９３で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0151】
特定の実施形態によると、ナノボディはＶーＡＴＰアーゼ・サブユニットｃを結合し、当該ナノボディは、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、配列番号１７１と１６８～１６９、配列番号１７４と１６８～１６９、配列番号１６７、１７８と１６９、または配列番号１８０～１８２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0152】
特定の実施形態によると、ナノボディはＶーＡＴＰアーゼ・サブユニットｃを結合し、当該ナノボディは、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９、または配列番号１６７、１７８と１６９で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0153】
特定の実施形態によると、ナノボディはＶーＡＴＰアーゼ・サブユニットｃを結合し、当該ナノボディは、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７～１６９で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0154】
特定の実施形態によると、ナノボディはＶーＡＴＰアーゼ・サブユニットｃを結合し、当該ナノボディは、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１７１と１６８～１６９で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0155】
特定の実施形態によると、ナノボディはＶーＡＴＰアーゼ・サブユニットｃを結合し、当該ナノボディは、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１７４と１６８～１６９で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0156】
特定の実施形態によると、ナノボディはＶーＡＴＰアーゼ・サブユニットｃを結合し、当該ナノボディは、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１６７、１７８と１６９で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0157】
特定の実施形態によると、ナノボディはＶーＡＴＰアーゼ・サブユニットｃを結合し、当該ナノボディは、ナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１８０～１８２で表される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0158】
本願において使用する「Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ」という用語は、プロトンの電子化学ポテンシャルの勾配を触媒する昆虫の酵素であるＰｆａｍ ＰＦ０３２２３、またはその抗原断片であって、当該断片に対する免疫応答を生じさせることのできる断片のアミノ酸配列を意味する。
【0159】
特定の実施形態によると、Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃは、ＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号ＸＰ＿０２１１９８２６４等で提供される、Helicoverpa armigeraのＶ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃである。
【0160】
特定の実施形態によると、Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃは配列番号８を含む。
【0161】
特定の実施形態によると、Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ配列番号８からなる。
【0162】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１６６、１７０、１７２、１７３、１７５、１７６、１７７、１７９、１８３、１８５、１８６および１９０からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【0163】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１６６、１７０、１７２、１７３、１７５、１７６、１７７および１７９からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0164】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１７６および１７７からなる群より選ばれるアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0165】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１６６、１７０、１７２、１７３、１７５、１７６、１７７、１７９、１８３、１８５、１８６および１９０からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0166】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１６６、１７０、１７２、１７３、１７５、１７６、１７７および１７９からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１７６および１７７からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１７６および１７７からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0167】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１６６を含む。
【0168】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１７０を含む。
【0169】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１７２を含む。
【0170】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１７３を含む。
【0171】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１７５を含む。
【0172】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１７６を含む。
【0173】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１７７を含む。
【0174】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１７９を含む。
【0175】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１６６、１７０、１７２、１７３、１７５、１７６、１７７、１７９、１８３、１８５、１８６および１９０からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0176】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１６６、１７０、１７２、１７３、１７５、１７６、１７７および１７９からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0177】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１７６および１７７からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0178】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号１６６からなる。
【0179】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号１７０からなる。
【0180】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号１７２からなる。
【0181】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号１７３からなる。
【0182】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号１７５からなる。
【0183】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号１７６からなる。
【0184】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号１７７からなる。
【0185】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号１７９からなる。
【0186】
特定の実施形態によると、ナノボディはトレハラーゼに結合する。
【0187】
本願において使用する「トレハラーゼ」という用語は、トレハロースのグルコースへの変換を触媒する酵素である、昆虫の酵素Ｅ．Ｃ．３．２．１．２、またはその抗原断片であって、当該断片に対する免疫応答を生じさせることのできる断片のアミノ酸配列を意味する。
【0188】
特定の実施形態によると、トレハラーゼは、ＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号ＡＪＫ２９９７９で提供される、Helicoverpa armigeraのトレハラーゼである。
特定の実施形態によると、トレハラーゼは配列番号１０を含む。
特定の実施形態によると、トレハラーゼは配列番号１０からなる。
トレハラーゼに特異的に結合するナノボディの非限定的な例と、その対応するＣＤＲを下記の表４に示した。
特定の実施形態によると、トレハラーゼは配列番号１０を含む。
特定の実施形態によると、トレハラーゼは配列番号１０からなる。
トレハラーゼに特異的に結合するナノボディの非限定的な例と、その対応するＣＤＲを下記の表４に示した。
【0189】
特定の実施形態によると、ナノボディは、トレハラーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１９５～１９７、配列番号１９９および１９６～１９７、配列番号２０１～２０３、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２と２０９～２１０、配列番号２１５～２１７、配列番号２１９～２２１、配列番号２２３～２２５、配列番号２２７～２２９、配列番号２３１、２２８と２３２、配列番号２３４～２３６、配列番号２３８～２４０、配列番号２４２～２４４、配列番号２４６～２４８、配列番号２５０～２５２、配列番号２５４～２５６、配列番号２５８～２６０、配列番号５８８～５９０、配列番号５８８９～５８９と５９２、または配列番号５９５、５８９と５９２に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0190】
特定の実施形態によると、ナノボディは、トレハラーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１９５～１９７、配列番号１９９と１９６～１９７、配列番号２０１～２０３、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２および２０９～２１０、配列番号２１５～２１７、配列番号２１９～２２１、配列番号２２３～２２５、配列番号２２７～２２９、配列番号２３１、２２８および２３２、配列番号２３４～２３６、配列番号２３８～２４０、配列番号２４２～２４４、配列番号２４６～２４８、配列番号２５０～２５２、配列番号２５４～２５６、または配列番号２２５８～２６０に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0191】
特定の実施形態によると、ナノボディは、トレハラーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２と２０９～２１０、配列番号２２３～２２５、配列番号２３８～２４０、配列番号２４２～２４４、配列番号２４６～２４８、配列番号５８８～５９０、または配列番号５９５、５８９と５９２に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0192】
特定の実施形態によると、ナノボディは、トレハラーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２と２０９～２１０、配列番号２２３～２２５、配列番号５８８～５９０、または配列番号５９５、５８９と５９２に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0193】
特定の実施形態によると、ナノボディは、トレハラーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２２３～２２５、または配列番号５８８～５９０に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0194】
特定の実施形態によると、ナノボディは、トレハラーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１９５～１９７、配列番号１９９と１９６～１９７、配列番号２０１～２０３、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２と２０９～２１０、配列番号２１５～２１７、配列番号２１９～２２１、配列番号２２３～２２５、配列番号２２７～２２９、配列番号２３１、２２８と２３２、配列番号２３４～２３６、配列番号２３８～２４０、配列番号２４２～２４４、配列番号２４６～２４８、配列番号２５０～２５２、配列番号２５４～２５６、配列番号２５８～２６０、配列番号５８８～５９０、配列番号５８８９～５８９と５９２、または配列番号５９５、５８９と５９２に示したＣＤＲを含む。
【0195】
特定の実施形態によると、ナノボディは、トレハラーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号１９５～１９７、配列番号１９９と１９６～１９７、配列番号２０１～２０３、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２と２０９～２１０、配列番号２１５～２１７、配列番号２１９～２２１、配列番号２２３～２２５、配列番号２２７～２２９、配列番号２３１、２２８と２３２、配列番号２３４～２３６、配列番号２３８～２４０、配列番号２４２～２４４、配列番号２４６～２４８、配列番号２５０～２５２、配列番号２５４～２５６、または配列番号２５８～２６０に示したＣＤＲを含む。
【0196】
特定の実施形態によると、ナノボディは、トレハラーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２および２０９～２１０、配列番号２２３～２２５、配列番号２３８～２４０、配列番号２４２～２４４、配列番号２４６～２４８、配列番号５８８～５９０、または配列番号５９５、５８９と５９２に示したＣＤＲを含む。
【0197】
特定の実施形態によると、ナノボディは、トレハラーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２１２と２０９～２１０、配列番号２２３～２２５、配列番号５８８～５９０、または配列番号５９５、５８９と５９２に示したＣＤＲを含む。
【0198】
特定の実施形態によると、ナノボディは、トレハラーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２０１と２０５～２０６、配列番号２０８～２１０、配列番号２２３～２２５、または配列番号５８８～５９０に示したＣＤＲを含む。
【0199】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１９４、１９８、２００、２０４、２０７、２１１、２１３、２１４、２１８、２２２、２２６、２３０、２３３、２３７、２４１、２４５、２４９、２５３、２５７、５８７、５９１、５９３、５９４および５９６からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性のアミノ酸配列を含み、各可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【0200】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１９４、１９８、２００、２０４、２０７、２１１、２１３、２１４、２１８、２２２、２２６、２３０、２３３、２３７、２４１、２４５、２４９、２５３および２５７からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【0201】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２０４、２０７、２１１、２１３、２２２、２３７、２４１、２４５、５８７および５９４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0202】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２０４、２０７、２１１、２１３、２２２、５８７および５９４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0203】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２０４、２０７、２２２および５８７からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0204】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１９４、１９８、２００、２０４、２０７、２１１、２１３、２１４、２１８、２２２、２２６、２３０、２３３、２３７、２４１、２４５、２４９、２５３、２５７、５８７、５９１、５９３、５９４および５９６からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１９４、１９８、２００、２０４、２０７、２１１、２１３、２１４、２１８、２２２、２２６、２３０、２３３、２３７、２４１、２４５、２４９、２５３および２５７からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１９４、１９８、２００、２０４、２０７、２１１、２１３、２１４、２１８、２２２、２２６、２３０、２３３、２３７、２４１、２４５、２４９、２５３および２５７からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0205】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２０４、２０７、２１１、２１３、２２２、２３７、２４１、２４５、５８７および５９４からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0206】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２０４、２０７、２１１、２１３、２２２、５８７および５９４からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0207】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２０４、２０７、２２２および５８７からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0208】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２０４を含む。
【0209】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２０７を含む。
【0210】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２１１を含む。
【0211】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２１３を含む。
【0212】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２２２を含む。
【0213】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号５８７を含む。
【0214】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号５９４を含む。
【0215】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号１９４、１９８、２００、２０４、２０７、２１１、２１３、２１４、２１８、２２２、２２６、２３０、２３３、２３７、２４１、２４５、２４９、２５３、２５７、５８７、５９１、５９３、５９４および５９６からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0216】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号か１９４、１９８、２００、２０４、２０７、２１１、２１３、２１４、２１８、２２２、２２６、２３０、２３３、２３７、２４１、２４５、２４９、２５３および２５７らなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0217】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２０４、２０７、２１１、２１３、２２２、２３７、２４１、２４５、５８７および５９４からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0218】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２０４、２０７、２１１、２１３、２２２、５８７および５９４からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0219】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２０４、２０７、２２２および５８７からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0220】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号２０４からなる。
【0221】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号２０７からなる。
【0222】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号２１１からなる。
【0223】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号２１３からなる。
【0224】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号２２２からなる。
【0225】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号５８７からなる。
【0226】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号５９４からなる。
【0227】
特定の実施形態によると、ナノボディは、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに結合する。
【0228】
本願において使用する「チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ」という用語は、補因子としてヘムを含有し、１つのヒドロキシル基を基質に導入した結果、付随するＮＡＤ（Ｐ）Ｈの酸化によって、二原子酸素の２つの原子を１つのヒドロキル基と１つのＨ２Ｏ分子に還元する酵素である、昆虫の酵素ＥＣ１．１４、またはその抗原断片であって、当該断片に対する免疫応答を生じさせることのできるアミノ酸配列を意味する。
【0229】
特定の実施形態によると、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼは、ＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号ＡＫＳ４８８８９等で提供される、Helicoverpa armigeraチトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼである。
【0230】
特定の実施形態によると、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼは配列番号１１を含む。
【0231】
特定の実施形態によると、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼは配列番号１１からなる。
【0232】
チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに特異的に結合するナノボディの非限定的な例、およびそれらの対応するＣＤＲを下記表５に示した。
【0233】
特定の実施形態によると、ナノボディは、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２６２～２６４、配列番号２６２～２６３および２６６、配列番号２６２、２７０および２６４、配列番号２７４～２７６、配列番号２８０および２７５～２７６、配列番号２８２および２７５～２７６、配列番号２８２、２７５および２８５、配列番号２８７、２２０および２８９、配列番号２９１、２２０および２８９、配列番号２３９～２９４および２８９、配列番号２９６～２９８、配列番号３００～３０２、配列番号３０４～３０６、配列番号３０８～３１０、配列番号３１２～３１４、または配列番号３１６～３１８に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0234】
特定の実施形態によると、ナノボディは、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２６２～２６４、配列番号２８７、２２０および２８９、配列番号２９６～２９８、配列番号３００～３０２、配列番号３０４～３０６、または配列番号３１２～３１４に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0235】
特定の実施形態によると、ナノボディは、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３００～３０２、または配列番号３１２～３１４に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0236】
特定の実施形態によると、ナノボディは、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３１２～３１４に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0237】
特定の実施形態によると、ナノボディは、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２６２～２６４、配列番号２６２～２６３および２６６、配列番号２６２、２７０および２６４、配列番号２７４～２７６、配列番号２８０および２７５～２７６、配列番号２８２および２７５～２７６、配列番号２８２、２７５および２８５、配列番号２８７、２２０および２８９、配列番号２９１、２２０および２８９、配列番号２３９～２９４および２８９、配列番号２９６～２９８、配列番号３００～３０２、配列番号３０４～３０６、配列番号３０８～３１０、配列番号３１２～３１４、または配列番号３１６～３１８に示したＣＤＲを含む。
【0238】
特定の実施形態によると、ナノボディは、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号２６２～２６４、配列番号２８７、２２０および２８９、配列番号２９６～２９８、配列番号３００～３０２、配列番号３０４～３０６、または配列番号３１２～３１４に示したＣＤＲを含む。
【0239】
特定の実施形態によると、ナノボディは、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３００～３０２、または配列番号３１２～３１４に示したＣＤＲを含む。
【0240】
特定の実施形態によると、ナノボディは、チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３１２－３１４に示したＣＤＲを含む。
【0241】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２６１、２６５、２６７、２６８、２６９、２７１、２７２、２７３、２７７、２７８、２７９、２８１、２８３、２８４、２８６、２９、２９２、２９５、２９９、３０３、３０７、３１１および３１５からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【0242】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２６１、２８６、２９５、２９９、３０３および３１１からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0243】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２９９および３１１からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0244】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２６１、２６５、２６７、２６８、２６９、２７１、２７２、２７３、２７７、２７８、２７９、２８１、２８３、２８４、２８６、２９、２９２、２９５、２９９、３０３、３０７、３１１および３１５からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0245】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２６１、２８６、２９５、２９９、３０３および３１１からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0246】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２９９および３１１からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0247】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３１１を含む。
【0248】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２９９を含む。
【0249】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２６１、２６５、２６７、２６８、２６９、２７１、２７２、２７３、２７７、２７８、２７９、２８１、２８３、２８４、２８６、２９、２９２、２９５、２９９、３０３、３０７、３１１および３１５からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0250】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２６１、２８６、２９５、２９９、３０３および３１１からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0251】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号２９９および３１１からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0252】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号３１１からなる。
【0253】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号２９９からなる。
【0254】
特定の実施形態によると、ナノボディはキチン脱アセチル化酵素に結合する。
【0255】
本願において使用する「キチン脱アセチル化酵素」という用語は、キチンとＨ２Ｏをキトサンと酢酸に変換する酵素である、昆虫の酵素ＥＣ３．５．１．４１、またはその抗原断片であって、当該断片に対する免疫応答を生じさせることのできるアミノ酸配列を意味する。
【0256】
特定の実施形態によると、キチン脱アセチル化酵素は、ＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号ＡＪＡ３０４３５等で提供される、Helicoverpa armigeraのキチン脱アセチル化酵素である。
【0257】
特定の実施形態によると、キチン脱アセチル化酵素は、配列番号９を含む。
【0258】
特定の実施形態によると、キチン脱アセチル化酵素は、配列番号９からなる。
【0259】
キチン脱アセチル化酵素に特異的に結合するナノボディの非限定的な例と、それらの対応するＣＤＲを下記の表６に示した。
【0260】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチン脱アセチル化酵素に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３２０～３２２、配列番号３２０と３２４～３２５、配列番号３２７、３２１と３２８、配列番号３２０～３２１と３３２、配列番号２０８と３３６～３３７、配列番号３２０、３２４と３３９、配列番号３４３～３４５、配列番号３４７～３４９、配列番号３５１～３５３、配列番号３５１、３４７と３５６、配列番号３５８～３６０、配列番号３５８～３５９と３６２、配列番号３６５、３５９と３６６、配列番号３６８～３７０、配列番号３７２と３６９～３７０、配列番号３７４、３６９と３７５、配列番号３７７～３７９、配列番号３８１～３８３、配列番号３８５と３８２～３８３、配列番号３８７～３８９、配列番号３８７、３９１と３８９、配列番号３９４～３９６、配列番号３９８～４００、配列番号４０２～４０４、または配列番号４０６～４０８に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0261】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチン脱アセチル化酵素に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３２０～３２２、配列番号３２０と３２４～３２５、配列番号３７２と３６９～３７０、配列番号３７４、３６９と３７５、配列番号３７７～３７９、配列番号３８７～３８９、または配列番号３９８～４００に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0262】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチン脱アセチル化酵素に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３２０と３２４～３２５、配列番号３７２と３６９～３７０、配列番号３７４、３６９と３７５、または配列番号３８７～３８９に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0263】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチン脱アセチル化酵素に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３２０と３２４～３２５、配列番号３７４、３６９と３７５、または配列番号３８７～３８９に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0264】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチン脱アセチル化酵素に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３２０～３２２、配列番号３２０と３２４～３２５、配列番号３２７、３２１と３２８、配列番号３２０～３２１と３３２、配列番号２０８と３３６～３３７、配列番号３２０、３２４と３３９、配列番号３４３～３４５、配列番号３４７～３４９、配列番号３５１～３５３、配列番号３５１、３４７と３５６、配列番号３５８～３６０、配列番号３５８～３５９と３６２、配列番号３６５、３５９と３６６、配列番号３６８～３７０、配列番号３７２と３６９～３７０、配列番号３７４、３６９と３７５、配列番号３７７～３７９、配列番号３８１～３８３、配列番号３８５と３８２～３８３、配列番号３８７～３８９、配列番号３８７、３９１と３８９、配列番号３９４～３９６、配列番号３９８～４００、配列番号４０２～４０４、または配列番号４０６～４０８に示したＣＤＲを含む。
【0265】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチン脱アセチル化酵素に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３２０～３２２、配列番号３２０と３２４～３２５、配列番号３７２と３６９～３７０、配列番号３７４、３６９と３７５、配列番号３７７～３７９、配列番号３８７～３８９、または配列番号３９８～４００に示したＣＤＲを含む。
【0266】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチン脱アセチル化酵素に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３２０と３２４～３２５、配列番号３７２と３６９～３７０、配列番号３７４、３６９と３７５、または配列番号３８７～３８９に示したＣＤＲを含む。
【0267】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチン脱アセチル化酵素に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号３２０と３２４～３２５、配列番号３７４、３６９と３７５、または配列番号３８７～３８９に示したＣＤＲを含む。
【0268】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３１９、３２３、３２６、３２９、３３１、３３３、３３４、３３８、３４０、３４１、３４２、３４６、３５０、３５４、３５５、３５７、３６１、３６３、３６４、３６７、３７１、３７３、３７６、３８０、３８４、３８６、３９０、３９２、３９３、３９７、４０１および４０５からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【0269】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３１９、３２３、３７１、３７３、３７６、３８６および３９７からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0270】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号配列番号３２３、３７１、３７３および３８６からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0271】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３２３、３７３および３８６からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0272】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３１９、３２３、３２６、３２９、３３１、３３３、３３４、３３８、３４０、３４１、３４２、３４６、３５０、３５４、３５５、３５７、３６１、３６３、３６４、３６７、３７１、３７３、３７６、３８０、３８４、３８６、３９０、３９２、３９３、３９７、４０１および４０５からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0273】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３１９、３２３、３７１、３７３、３７６、３８６および３９７からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0274】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３２３、３７１、３７３および３８６からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0275】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３２３、３７３および３８６からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0276】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３２３を含む。
【0277】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３７１を含む。
【0278】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３７３を含む。
【0279】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３８６を含む。
【0280】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３１９、３２３、３２６、３２９、３３１、３３３、３３４、３３８、３４０、３４１、３４２、３４６、３５０、３５４、３５５、３５７、３６１、３６３、３６４、３６７、３７１、３７３、３７６、３８０、３８４、３８６、３９０、３９２、３９３、３９７、４０１および４０５からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0281】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３１９、３２３、３７１、３７３、３７６、３８６および３９７からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0282】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号３２３、３７１、３７３および３８６からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0283】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号３２３からなる。
【0284】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号３７１からなる。
【0285】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号３７３からなる。
【0286】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号３８６からなる。
【0287】
特定の実施形態によると、ナノボディはキチンシンターゼに結合する。
【0288】
本願において使用する「キチンシンターゼ」という用語は、ＵＤＰ－Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンと［１，４－（Ｎ－アセチル－ベータ－Ｄ－グルコサミニル）］ｎをＵＤＰ＋［１，４－（Ｎ－－アセチル－ベータ－Ｄ－グルコサミニル）］ｎ＋１に変換する酵素である、昆虫の酵素番号（ＥＣ）がＥＣ２．４．１．１６のもの、またはその抗原断片であって、当該断片に対する免疫応答を生じさせることのできるアミノ酸配列を意味する。
【0289】
特定の実施形態によると、キチンシンターゼは、ＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号ＡＫＺ０８５９４等で提供される、Helicoverpa armigeraのキチン脱アセチル化酵素である。
【0290】
特定の実施形態によると、キチンシンターゼは配列番号１２を含む。
【0291】
特定の実施形態によると、キチンシンターゼは、配列番号１２からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0292】
キチンシンターゼに特異的に結合するナノボディの非限定的な例、およびそれらの対応するＣＤＲを下記の表７に示した。
【0293】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチンシンターゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４１２～４１４、配列番号４１８～４２０、配列番号４２２～４２４、配列番号４２６～４２８、配列番号４２６～４２７と４３０、配列番号４３２～４３４、配列番号４３６、１４０と４３７、配列番号４３９～４４１、配列番号４４３～４４５、配列番号４４７～４４９、配列番号３５６と４５１～４５２、配列番号４５４～４５６、配列番号４５８～４６０、配列番号４６２～４６４、配列番号４６６～４６８、配列番号４７０～４７２、配列番号４７４～４７６、配列番号４７８～４８０、配列番号４８２、４７９と４８３、配列番号４８５～４８７、配列番号４８９～４９１、配列番号４９３～４９５、配列番号４２６と４９７～４９８、配列番号５００～５０２、配列番号５０４～５０６、または配列番号５０８～５１０に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0294】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチンシンターゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４１２～４１４、配列番号４１８～４２０、配列番号４２６～４２８、配列番号４３２～４３４、配列番号４４３～４４５、配列番号４４７～４４９、配列番号４６６～４６８、配列番号４８２、４７９と４８３、配列番号４２６と４９７～４９８、または配列番号５０４～５０６に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0295】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチンシンターゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４２６～４２８、配列番号４３２～４３４、または配列番号４４３～４４５に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0296】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチンシンターゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４２６～４２８、または配列番号４４３～４４５に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0297】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチンシンターゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４１２～４１４、配列番号４１８～４２０、配列番号４２２～４２４、配列番号４２６～４２８、配列番号４２６～４２７と４３０、配列番号４３２～４３４、配列番号４３６、１４０と４３７、配列番号４３９～４４１、配列番号４４３～４４５、配列番号４４７～４４９、配列番号３５６と４５１～４５２、配列番号４５４～４５６、配列番号４５８～４６０、配列番号４６２～４６４、配列番号４６６～４６８、配列番号４７０～４７２、配列番号４７４～４７６、配列番号４７８～４８０、配列番号４８２、４７９と４８３、配列番号４８５～４８７、配列番号４８９～４９１、配列番号４９３～４９５、配列番号４２６と４９７～４９８、配列番号５００～５０２、配列番号５０４～５０６、または配列番号５０８～５１０に示したＣＤＲを含む。
【0298】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチンシンターゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４１２～４１４、配列番号４１８～４２０、配列番号４２６～４２８、配列番号４３２～４３４、配列番号４４３～４４５、配列番号４４７～４４９、配列番号４６６～４６８、配列番号４８２、４７９と４８３、配列番号４２６と４９７～４９８、または配列番号５０４～５０６に示したＣＤＲを含む。
【0299】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチンシンターゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４２６～４２８、配列番号４３２～４３４、または配列番号４４３～４４５に示したＣＤＲを含む。
【0300】
特定の実施形態によると、ナノボディは、キチンシンターゼに特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４２６～４２８、または配列番号４４３～４４５に示したＣＤＲを含む。
【0301】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４１１、４１５、４１６、４１７、４２１、４２５、４２９、４３１、４３５、４３８、４４２、４４６、４５０、４５３、４５７、４６１、４６５、４６９、４７３、４７７、４８１、４８４、４８８、４９２、４９６、４９９、５０３と５０７からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【0302】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４１１、４１７、４２５、４３１、４４２、４４６、４６５、４８１、４９６、および５０３からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0303】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４２５、４３１、および４４２からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0304】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４２５および４４２からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0305】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４１１、４１５、４１６、４１７、４２１、４２５、４２９、４３１、４３５、４３８、４４２、４４６、４５０、４５３、４５７、４６１、４６５、４６９、４７３、４７７、４８１、４８４、４８８、４９２、４９６、４９９、５０３および５０７からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0306】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４１１、４１７、４２５、４３１、４４２、４４６、４６５、４８１、４９６および５０３からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0307】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４２５、４３１および４４２からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0308】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４２５および４４２からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0309】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４２５を含む。
【0310】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４３１を含む。
【0311】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４４２を含む。
【0312】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４１１、４１５、４１６、４１７、４２１、４２５、４２９、４３１、４３５、４３８、４４２、４４６、４５０、４５３、４５７、４６１、４６５、４６９、４７３、４７７、４８１、４８４、４８８、４９２、４９６、４９９、５０３および５０７からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0313】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４１１、４１７、４２５、４３１、４４２、４４６、４６５、４８１、４９６および５０３からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0314】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４２５、４３１および４４２からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0315】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号４２５および４４２からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0316】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号４２５からなる。
【0317】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号４３１からなる。
【0318】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号４４２からなる。
【0319】
特定の実施形態によると、ナノボディはＮＰＣ１ステロール輸送体に結合する。
【0320】
本願において使用する「ＮＰＣ１ステロール輸送体」という用語は、ＮＰＣ１遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：４８６４）によってコードされる昆虫タンパク質、またはその抗原断片であって、当該断片に対する免疫応答を生じさせることのできるアミノ酸配列を意味する。
【0321】
特定の実施形態によると、ＮＰＣ１ステロール輸送体は、ＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号ＸＰ＿０２１１８６１１等で提供される、Helicoverpa armigeraのＮＰＣ１ステロール輸送体である。
【0322】
特定の実施形態によると、ＮＰＣ１ステロール輸送体は配列番号１３を含む。
【0323】
特定の実施形態によると、ＮＰＣ１ステロール輸送体配列番号１３からなる。
【0324】
ＮＰＣ１ステロール輸送体に特異的に結合するナノボディの非限定的な例、およびそれらの対応するＣＤＲを下記の表８に示した。
【0325】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＮＰＣ１ステロール輸送体に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号５１２～５１４、配列番号５１７と５１３～５１４、配列番号５２１～５２３、配列番号５２１～５２２と５２６、配列番号５３１～５３３、配列番号５３９～５４１、配列番号４８５と５４０～５４１、配列番号５４５と５４０～４５１、配列番号５４７～５４９、配列番号５５２～５５４、配列番号５５６～５５８、配列番号５６１～５６３、配列番号５６５～５６７、配列番号５６９～５７１、配列番号５７３～５７５、配列番号４８５と５７７～５７８、配列番号５８０～５８２、または配列番号５８４～５８６に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0326】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＮＰＣ１ステロール輸送体に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号５１７と５１３～５１４、配列番号４８５と５４０～５４１、配列番号５４５と５４０～５４１、配列番号５５６～５５８、配列番号５６５～５６７、配列番号５７３～５７５、配列番号４８５と５７７～５７８、または配列番号５８０～５８２に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0327】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＮＰＣ１ステロール輸送体に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４８５と５４０～５４１、または配列番号５４５と５４０～５４１に示したアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【0328】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＮＰＣ１ステロール輸送体に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号５１２～５１４、配列番号５１７と５１３～５１４、配列番号５２１～５２３、配列番号５２１～５２２と５２６、配列番号５３１～５３３、配列番号５３９～５４１、配列番号４８５と５４０～５４１、配列番号５４５と５４０～４５１、配列番号５４７～５４９、配列番号５５２～５５４、配列番号５５６～５５８、配列番号５６１～５６３、配列番号５６５～５６７、配列番号５６９～５７１、配列番号５７３～５７５、配列番号４８５と５７７～５７８、配列番号５８０～５８２、または配列番号５８４～５８６に示したＣＤＲを含む。
【0329】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＮＰＣ１ステロール輸送体に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号５１７と５１３～５１４、配列番号４８５と５４０～５４１、配列番号５４５と５４０～５４１、配列番号５５６～５５８、配列番号５６５～５６７、配列番号５７３～５７５、配列番号４８５と５７７～５７８、または配列番号５８０～５８２に示したＣＤＲを含む。
【0330】
特定の実施形態によると、ナノボディは、ＮＰＣ１ステロール輸送体に特異的に結合し、且つナノボディ上にＮからＣへの方向に連続的に配置された、配列番号４８５と５４０～５４１、または配列番号５４５と５４０～５４１に示したＣＤＲを含む。
【0331】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号５１１、５１５、５１６、５１８、５１９、５２０、５２４、５２５、５２７、５２８、５２９、５３０、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５４２、５４３、５４４、５４６、５５０、５５１、５５５、５５９、５６０、５６４、５６８、５７２、５７６、５７９、および５８３からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【0332】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号５１６、５４３、５４４、５５５、５６４、５７２、５７６および５７９からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0333】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号５４３および５４４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0334】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号５１１、５１５、５１６、５１８、５１９、５２０、５２４、５２５、５２７、５２８、５２９、５３０、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５４２、５４３、５４４、５４６、５５０、５５１、５５５、５５９、５６０、５６４、５６８、５７２、５７６、５７９および５８３からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0335】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号５１６、５４３、５４４、５５５、５６４、５７２、５７６および５７９からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0336】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号５４３および５４４からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む。
【0337】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号５４３を含む。
【0338】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号５４４を含む。
【0339】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号５１１、５１５、５１６、５１８、５１９、５２０、５２４、５２５、５２７、５２８、５２９、５３０、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５４２、５４３、５４４、５４６、５５０、５５１、５５５、５５９、５６０、５６４、５６８、５７２、５７６、５７９および５８３からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0340】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号５１６、５４３、５４４、５５５、５６４、５７２、５７６および５７９からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0341】
特定の実施形態によると、ナノボディは、配列番号５４３および５４４からなる群より選ばれるアミノ酸配列からなる。
【0342】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号５４３からなる。
【0343】
特定の実施形態によると、ナノボディは配列番号５４４からなる。
【0344】
本発明のいくつかの実施形態のナノボディは、そのもっとも広い解釈において、特定の生物学的原料や特定の調製方法に限定されるものではない点に着目されたい。例えば、ナノボディは、次のようにして得られる。（１）天然に発生した重鎖抗体のＶＨＨドメインの単離、（２）天然に発生したＶＨＨドメインをコードするヌクレオチド配列の発現、（３）天然に発生したＶＨＨドメインの「ヒト化」、あるいはこのようなヒト化ＶＨＨドメインをコードする核酸の発現、（４）任意の動物種、特に哺乳動物種、例えばヒトに由来する天然に発生したＶＨドメインの「ラクダ化」、あるいはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現、（５）当業界で知られる「ドメイン抗体」または「Ｄａｂ」の「ラクダ化」、あるいはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現、（６）合成または半合成技術を用いたタンパク質、ポリペプチドまたはそれ自体が公知の他のアミノ酸配列の製造、（７）それ自体が公知の核酸合成のための技術を用いたナノボディをコードする核酸の製造と、続く得られた核酸の発現、および／または（８）上記の１以上の任意の組み合わせ。ヒト化および／またはラクダ化ナノボディを含むナノボディに関する説明は、本願に加えて、例えば、国際公開第０８／１０１９８５号および第０８／１４２１６４号から得ることができる。最近報告された完全にｉｎ ｖｉｔｒｏのプラットホームに基づくナノボディの酵母表面ディスプレイに関する発見は、McMahon, Conor, et al. "Nature structural & molecular biology" 25.3 (2018): 289に開示されている。
【0345】
特定の実施形態によると、ナノボディは「ラクダ化」されている。例えば、天然に発生したＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列を提供し、新しいヌクレオチド配列がそれぞれ「ラクダ化」ナノボディをコードするように、それ自体公知の手段で、ヌクレオチド配列中の１以上のコドンを変更することで、「ラクダ化」することができる。この核酸を次に、所望のナノボディを提供するように、それ自体公知の手段で発現させる。
【0346】
天然に発生したＶＨ配列、好ましくはＶＨＨ配列、から出発して、ナノボディおよび／またはそれをコードする核酸配列を得るための他の適切な方法および技術は当業者には明らかであるが、例えば、天然に発生したＶＨ配列の１以上の部分（１以上のＦＲ配列および／またはＣＤＲ配列等）、１以上の天然に発生したＶＨＨ配列の１以上の部分（１以上のＦＲ配列またはＣＤＲ配列等）、および／または１以上の合成または半合成配列を適切な手順で組み合わせて、ナノボディまたはそれをコードする核酸配列を提供することを含み得る。
【0347】
ナノボディを作製するための特定の方法が本明細書に記載されている。
【0348】
本発明の一態様によると、ナノボディの製造方法であって、下記：
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチド、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体
からなる群より選ばれる組み換えまたは精製昆虫ポリペプチドでラクダ類を免役することを含み、昆虫ポリペプチド調製物中の昆虫ポリペプチドの純度が少なくとも８０％である、方法が提供される。
（ｉ）キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を含むポリペプチド、
（ｉｉ）Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ、
（ｉｉｉ）トレハラーゼ、
（ｉｖ）チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ、
（ｖ）キチン脱アセチル化酵素、
（ｖｉ）キチンシンターゼ、および
（ｖｉｉ）ＮＰＣ１ステロール輸送体
からなる群より選ばれる組み換えまたは精製昆虫ポリペプチドでラクダ類を免役することを含み、昆虫ポリペプチド調製物中の昆虫ポリペプチドの純度が少なくとも８０％である、方法が提供される。
【0349】
本願において使用する「精製昆虫ポリペプチド」という句は、昆虫から精製されたポリペプチドであって、タンパク質調製物中に存在する他のポリペプチドと比べて、その純度が少なくとも８０％であるものを意味する。
【0350】
特定の実施形態によると、精製昆虫タンパク質調製物中の昆虫ポリペプチドの純度は、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％であり、各可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【0351】
特定の実施形態によると、本方法は、ナノボディの単離をさらに含む。
【0352】
ナノボディの単離方法は当業界で知られており、例えば、本参照をもってその内容は完全に本願に組み込まれたものとするPardon et al. Nat Protoc. 2014 Mar, 9(3): 674-693、および後述する実施例に開示されている。
【0353】
一度ナノボディが得られたら、ナノボディの結合および／または生物活性（例：昆虫防除活性）をｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで解析することができる。このような方法は当業界で公知であり、上記および下記でも開示されている。
【0354】
よって、特定の実施形態によると、方法は、生物アッセイにおいて昆虫防除活性を示すナノボディの選択をさらに含む。このようなアッセイは当業界で公知であり、下記でさらに説明する。
【0355】
特定の実施形態によると、ナノボディはそのまま（ｎａｋｅｄ）のナノボディである。
【0356】
本願において使用する「そのままのナノボディ」という用語は、毒素部分、検出部分等の異種エフェクター部分を含まないナノボディを意味する。
【0357】
特定の実施形態によると、ナノボディは異種エフェクター部分、例えば、毒素部分、検出部分を含む。エフェクター部分は、タンパク質性または非タンパク質性（例：小分子化合物）であり得るが、後者は、通常、ナノボディ上のおよびその結合パートナー上の官能基を用いて作製される。
【0358】
よって、例えば、種々の種類の検出可能な部分またはレポーター部分を本発明のナノボディに結合することができる。これらとしては、放射性同位元素（［１２５］ヨウ素等）、リン光性化合物、化学発光性化合物、蛍光性化合物またはポリペプチド（例：フィコエリトリン（ＰＥ）、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、Ｃｙ－クローム、ローダミン、緑蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）、テキサスレッド、Ｃｙ５、ＰＥ－Ｃｙ５等）、酵素（例：西洋ワサビパーオキシダーゼ（ＨＰＲ）、ベータガラクトシダーゼ、およびアルカリホスファターゼ（ＡＰ））、親和性タグ［例：対応する抗体によって同定可能な抗原（例：抗ＤＩＧ抗体によって同定可能なジゴキシゲニン（ＤＩＧ））、あるいはタグに対して高親和性の分子（例：ストレプトアビジンおよびビオチン）］、および陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって検出可能な分子（造影剤）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【0359】
特定の実施形態によると、ナノボディは毒素を含む。
【0360】
本願において使用する「毒素」または「毒素部分」という用語は、（後に定義する）昆虫防除活性を有する化合物を意味し、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、小分子等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【0361】
毒素部分の非限定的な例としては、δ－エンドトキシン［Ｃｒｙ１Ａ、Ｃｒｙ１Ｂ、Ｃｒｙ１Ｃ、Ｃｒｙ１Ｄ、Ｃｒｙ１Ｅ、Ｃｒｙ１Ｆ、Ｃｒｙ１Ｇ、Ｃｒｙ１Ｈ、Ｃｒｙ１Ｉ、Ｃｒｙ１Ｊ、Ｃｒｙ１Ｋ、Ｃｒｙ２Ａ、Ｃｒｙ７Ｂ、Ｃｒｙ８Ｄ、Ｃｒｙ９Ａ、Ｃｒｙ９Ｂ、Ｃｒｙ９Ｃ、Ｃｒｙ９Ｄ、Ｃｒｙ９Ｅ、Ｃｒｙ１５Ａ、Ｃｒｙ２２Ａ、Ｃｒｙ３２Ａ、Ｃｒｙ５１Ａ、Ｃｙｔ１Ａ（Crickmore et al., 1998、 van Frankenhuyzen, 2009）等］、コリシン（コリシンＥ１、コリシンｌａ、コリシンＡ、コリシンＮ等）、アクチノポリン（エクイナトキシンＩＩ、スチコリシンＩＩ、フラガセトキシンＣ等）、ＣｌｙＡファミリー毒素（サイトリシンＡ、非溶血性三部分エンテロトキシン、ヘモリシンＢＬ等）、ヘモリシン（α－ヘモリシン、γ－ヘモリシン、ロイコシジン、壊死性全腸炎毒素Ｂ、δ－トキシン、Vibrio choleraeサイトリシン、Vibrio vulnificusヘモリシン等）、エロリジンファミリー毒素（エロリジン、α－トキシン、ヒドラリシン、ε－トキシン、エンテロトキシン、溶血性レクチン、キセニン等）、コレステロール依存性サイトリシン（パーフリンゴリシン、スイリシン、インターメディリシン、リステリオリシンＯ、レクチノリシン、アンスロリシン、ストレプトリシン等）、膜侵襲複合体成分／パーフォリン（Ｐｌｕ－ＭＡＣＰＦ、Ｂｔｈ－ＭＡＣＰＦ等）、毒素内の繰り返し配列（ｒｅｐｅａｔｓ－ｉｎ－ｔｏｘｉｎ）（ＨｌｙＡ、二官能性ヘモリシン－アデニリルシクラーゼ毒素、ＭＡＲＴＸ等）（Dal Peraro and van der Goot, 2016）、クモ毒素、サソリ毒素、パタチン、Bacillus thuringiensis殺昆虫タンパク質、ゼノラブダス殺昆虫タンパク質、フォトラブダス殺昆虫タンパク質、Bacillus laterosporous殺昆虫タンパク質、Bacillus bombysepticus殺昆虫タンパク質、Bacillus sphaericus殺昆虫タンパク質、および昆虫防除性二本鎖ＲＮＡが挙げられる。
【0362】
エフェクター部分、例えば、毒素部分や検出可能な部分は、環境、用途および目的に応じて、本発明のナノボディに種々の方法で付着または結合することができる。
【0363】
エフェクター部分は、ナノボディに直接または間接的（例：単体に含まれる場合）にカップリングすることができる。カップリングは共有結合でも、非共有結合でもよい。
【0364】
エフェクター部分がポリペプチドの場合、組み換え手法によって免疫複合体を製造することができる。例えば、毒素または蛍光タンパク質をコードする核酸配列を、ナノボディをコードする核酸配列のフレーム内に連結し、組み換え複合抗体を産生するために宿主細胞内で発現させることができる。代わりに、エフェクター部分を化学的に合成する、例えば、１以上のアミノ酸残基を決まった順番に段階的に付加する固相ペプチド合成技術によって製造することもできる。
【0365】
エフェクター部分は、当業界で広く実施されている標準的な化学合成技術［例えば、worldwideweb (dot) chemistry (dot) org/portal/Chemistry)参照］を用いてナノボディに取り付けることもでき、例えば、ペプチド結合を介した、直接または間接的な、適切な化学結合（エフェクター部分がポリペプチドの時）、あるいは介入リンカー因子（リンカーペプチド等）または他の化学部分（有機ポリマー等）への共有結合の使用が挙げられる。キメラペプチドは、ペプチドのカルボキシ（Ｃ）またはアミノ（Ｎ）末端への結合、あるいは直鎖状、分岐状、または環状の側鎖、内部炭素または窒素原子等の内部化学基への結合によって連結することができる。蛍光標識については米国特許番号第３，９４０，４７５号、第４，２８９，７４７号、および第４，３７６，１１０号明細書に詳細が記載されている。
【0366】
ペプチド部分をナノボディに結合するための例示的な方法としては、ＳＰＤＰ結合、グルタルアルデヒド結合、およびカルボジイミド結合が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【0367】
ナノボディは、エフェクター部分を含む粒子または単体に取り付けることもできる。ナノボディを封入粒子に共有結合させる方法は当業界で公知であり、例えば、米国特許番号第５，１７１，５７８号、第５，２０４，０９６号、および第５，２５８，４９９号明細書に開示されている。
【0368】
本明細書に記載の任意のポリペプチド（例えば、ナノボディおよびタンパク質性組成物）は、ポリヌクレオチドによってコードされ得る。これらのポリヌクレオチドは、そのままで、あるいは本願で開示するポリペプチドの組み換え製造に使用することができる。
【0369】
よって、本発明の一態様によると、ナノボディまたはナノボディと毒素とを含む組成物をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【0370】
本明細書において使用する場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、単離され、ＲＮＡ配列、相補的ポリヌクレオチド配列（ｃＤＮＡ）、ゲノムポリヌクレオチド配列、および／または複合ポリヌクレオチド配列（例えば、上記の組み合わせ）の形態で提供される、一本鎖または二本鎖の核酸配列を示す。
【0371】
特定の実施形態によると、本願で開示する任意のポリヌクレオチドおよび核酸配列は、保存性核酸置換を有してもよい。保存的に修飾されたポリヌクレオチドとは、同一または実質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸を指すか、または核酸がアミノ酸配列をコードしない場合は、実質的に同一の、または関連した（例えば、天然に連続した）配列を示す。遺伝コードの縮重のため、多数の機能的に同一な核酸がほとんどのタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、およびＧＣＵはすべて、アミノ酸アラニンをコードする。よって、アラニンがコドンによって特定されるすべての位置において、このコドンは、コードされるポリペプチドを改変することなく、記載した対応するコドンを別のものに改変することができる。このような核酸変異は「サイレント変異（ｓｉｌｅｎｔ ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ）」であり、保存的に修飾されたポリヌクレオチドの一種である。特定の態様において、ポリペプチドをコードする本明細書におけるすべてのポリヌクレオチドおよび核酸配列は、その核酸のサイレント変異のことも表す。ある特定の文脈において、機能的に同一な分子をもたらすように核酸内の各コドン（通常はメチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧ、および通常はトリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧを除く）が修飾され得ることは、当業者には認識されよう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸のサイレント変異は、発現産物に関して記載される配列に黙示されている。
【0372】
特定の実施形態によると、本願で開示する核酸配列は、例えば、哺乳動物または植物による発現のために、コドンが最適化されている。
【0373】
コドン最適化のための方法は当業界で公知であり、例えば、日本国、ＮＩＡＳ（国立研究開発法人農業生物資源研究所）ＤＮＡバンクのコドン使用データベース（ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｋａｚｕｓａ（ｄｏｔ）ｏｒ（ｄｏｔ）ｊｐ／ｃｏｄｏｎ／）、国際公開第９３／０７２７８号、およびGrote et al. Nucleic Acid Res. Nucleic Acids Res. (2005) Jul 1, 33（ウエブ版）：Ｗ５２６－Ｗ５３１）に開示されている。
【0374】
よって、本発明のいくつかの実施形態は、上述した核酸配列、その断片、それらとハイブリダイズ可能な配列、それらと類似した配列、それらとオルソロガスな配列、異なるコドンを使用して同様のポリペプチドをコードする配列、自然に発生したか人の誘導した、ランダムなまたは標的化した変異（１以上のヌクレオチドの欠失、挿入または置換等）によって特徴づけられる改変配列を包含する。
【0375】
細胞において外因性ポリペプチドを発現させるためには、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を、好ましくは、細胞での発現に好適な核酸構築物中にライゲーションする。そのような核酸構築物は、細胞におけるポリヌクレオチド配列の転写を構成的または誘導性の様式で指示するプロモーター配列を含む。
【0376】
よって、本発明の一態様によると、ポリヌクレオチドと、当該ポリヌクレオチドの発現を指導するシス作用調節エレメントとを含む、核酸構築物が提供される。
【0377】
特定の実施形態によると、調節因子は異種調節因子である。
【0378】
本発明のいくつかの実施形態の核酸構築物（本明細書では「発現ベクター」とも呼ばれる）は、このベクターを、原核生物、真核生物、または好ましくは両方（例えば、シャトルベクター）における複製および組み込みに好適なものにする、さらなる配列を含む。加えて、典型的なクローニングベクターは、転写および翻訳開始配列、転写および翻訳ターミネーター、ならびにポリアデニル化シグナルも含有し得る。例として、そのような構築物は、典型的には、５’ＬＴＲ、ｔＲＮＡ結合部位、パッケージングシグナル、第２鎖ＤＮＡ合成起点、および３’ＬＴＲまたはその一部分を含む。
【0379】
本発明のいくつかの実施形態の核酸構築物は、典型的には、構築物が入っている細胞からポリペプチドを分泌させるためのシグナル配列を含む。特定の実施形態によると、シグナル配列は、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチド（例：ナノボディ)の本来のシグナル配列である。
【0380】
真核生物プロモーターは、典型的には、ＴＡＴＡボックスおよび上流プロモーターエレメントという２種類の認識配列を含有する。転写開始部位から２５～３０塩基対上流に位置するＴＡＴＡボックスは、ＲＮＡポリメラーゼによるＲＮＡ合成の開始に関与していると考えられている。他方の上流プロモーターエレメントは、転写開始の頻度を決定する。
【0381】
本発明のいくつかの実施形態の核酸構築物に用いられるプロモーターは、形質転換された特定の細胞集団において活性を示すものが好ましい。細胞型特異的プロモーターおよび／または組織特異的プロモーターの例としては、肝臓特異的であるアルブミンなどのプロモーター［Pinkert et al., (1987) Genes Dev. 1:268-277］、リンパ様特異的プロモーター［Calame et al., (1988) Adv. Immunol. 43:235-275］、特に、Ｔ細胞受容体のプロモーター［Winoto et al., (1989) EMBO J. 8:729-733］および免疫グロブリンのプロモーター［Banerji et al. (1983) Cell 33729-740］、膵臓特異的プロモーター［Edlunch et al. (1985) Science 230:912-916］、または乳腺特異的プロモーター、例えば乳清プロモーター（米国特許第４，８７３，３１６号および欧州特許出願公開第２６４，１６６号）が挙げられる。
【0382】
植物発現ベクターを使用する場合、いくつかのプロモーターによってコード配列の発現を駆動することができる。例えば、ＣａＭＶの３５Ｓ ＲＮＡおよび１９Ｓ ＲＮＡプロモーターなどのウイルスプロモーター［Brisson et al. (1984) Nature 310:511-514］、またはＴＭＶのコートタンパク質プロモーター［Takamatsu et al. (1987) EMBO J. 6:307-311］を使用することができる。代替的には、植物プロモーター、例えばＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニット［Coruzzi et al. (1984) EMBO J. 3:1671-1680およびBrogli et al., (1984) Science 224:838-843］、ＧＲ融合物であるＧＶＧ、およびｐＯｐ／ＬｈＧＲ（デキサメタゾン誘導性）、ＸＶＥ／ＯｌｅｘＡ（ベータ－エストラジオール誘導性）、または熱ショックプロモーター、例えばダイズｈｓｐ１７．５－Ｅまたはｈｓｐ１７．３－Ｂ［Gurley et al. (1986) Mol. Cell. Biol. 6:559-565］を使用してもよい。
【0383】
エンハンサーエレメントは、結合した相同プロモーターまたは異種プロモーターによる転写を最大で１，０００倍まで増加させることができる。エンハンサーは、転写開始部位から下流にあっても上流にあっても活性がある。ウイルスに由来する多くのエンハンサーエレメントが、広い宿主範囲を有し、種々の組織において活性を示す。例えば、ＳＶ４０初期遺伝子エンハンサーは、多くの細胞型に好適である。本発明のいくつかの実施形態に好適な他のエンハンサー／プロモーターの組み合わせとしては、ポリオーマウイルス、ヒトまたはマウスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に由来するものや、マウス白血病ウイルス、マウスまたはラウス肉腫ウイルス、およびＨＩＶなどの様々なレトロウイルスに由来す長い末端反復配列が挙げられる。参照により本明細書に援用する、Enhancers and Eukaryotic Expression, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York, 1983を参照されたい。Ｃｒｅドライバー系なしに特異性を得るためにＡＡＶ発現ベクターに入れることのできる特定の神経細胞型に特異的なエンハンサーも当業界で報告されており、例えば、本参照をもって本明細書に援用する、Hrvatin et al.（doi:www(dot)doi(dot)org/10.1101/570895）に記載されている。
【0384】
発現ベクターの構築において、プロモーターは、その天然の環境における転写開始部位からの距離とほぼ同じ距離だけ異種の転写開始部位から離れた位置にあるのが好ましい。しかしながら、当技術分野で公知であるように、プロモーター機能を失うことなく、この距離のいくらかの差異が許容され得る。
【0385】
ｍＲＮＡ翻訳効率を増加させるために、ポリアデニル化配列を発現ベクターに付加することもできる。正確かつ効率的なポリアデニル化には、２つの特徴的な配列エレメントが必要であり、それらは、ポリアデニル化部位の下流に位置するＧＵリッチ配列またはＵリッチ配列と、１１～３０ヌクレオチド上流に位置する、高度に保存された６つのヌクレオチドからなるＡＡＵＡＡＡ配列である。本発明のいくつかの実施形態に好適な終結シグナルおよびポリアデニル化シグナルとしては、ＳＶ４０に由来するものが挙げられる。
【0386】
本発明のいくつかの実施形態の発現ベクターは、既に記載したエレメントに加えて、典型的には、クローニングされた核酸の発現レベルを上昇させること、または組み換えＤＮＡを有する細胞の識別を容易にすることを目的とした、他の特殊化したエレメントを含有し得る。例えば、いくつかの動物ウイルスは、許容細胞型におけるウイルスゲノムの染色体外複製を促進するＤＮＡ配列を含有する。こうしたウイルスのレプリコンを有するプラスミドは、プラスミド上または宿主細胞のゲノム上の遺伝子によって適切な因子が提供される限り、エピソームとして複製される。
【0387】
ベクターは、真核生物レプリコンを含む場合もあれば、含まない場合もある。真核生物レプリコンが存在する場合、ベクターは、適切な選択可能マーカーを使用して真核細胞において増幅可能である。ベクターが真核生物レプリコンを含まない場合、エピソームの増幅は不可能である。その代わり、組み換えＤＮＡが、工学的に操作された細胞のゲノムに組み込まれ、ここでプロモーターが所望の核酸を発現せしめる。
【0388】
本発明のいくつかの実施形態の発現ベクターは、例えば、単一のｍＲＮＡからいくつかのタンパク質を翻訳することを可能にする、さらなるポリヌクレオチド配列、例えば、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）およびプロモーター・キメラポリペプチドのゲノム組み込みのための配列をさらに含むことができる。
【0389】
発現ベクターに含まれる個々のエレメントが種々の構成で配置され得ることは理解されよう。例えば、エンハンサーエレメント、プロモーターなど、そしてさらにはポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、「ヘッドトゥテール」構成で配置されてもよく、逆相補鎖として、または逆平行鎖中の相補鎖として存在してもよい。このような構成の多様性は、発現ベクターの非コードエレメントで生じる可能性がより高いが、発現ベクターにおけるコード配列の代替的な構成も考えられる。
【0390】
哺乳動物の発現ベクターの例としては、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から入手可能なｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／－）、ｐＧＬ３、ｐＺｅｏＳＶ２（＋／－）、ｐＳｅｃＴａｇ２、ｐＤｉｓｐｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＳｉｎＲｅｐ５、ＤＨ２６Ｓ、ＤＨＢＢ、ｐＮＭＴ１、ｐＮＭＴ４１、ｐＮＭＴ８１、Ｐｒｏｍｅｇａ社から入手可能なｐＣＩ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ社から入手可能なｐＭｂａｃ、ｐＰｂａｃ、ｐＢＫ－ＲＳＶ、およびｐＢＫ－ＣＭＶ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社から入手可能なｐＴＲＥＳ、ならびにこれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【0391】
レトロウイルスなどの真核生物ウイルスに由来する調節エレメントを含有する発現ベクターを使用することもできる。ＳＶ４０ベクターには、ｐＳＶＴ７およびｐＭＴ２が含まれる。ウシパピローマウイルスに由来するベクターとしては、ｐＢＶ－１ＭＴＨＡが挙げられ、エプスタイン・バーウイルスに由来するベクターとしては、ｐＨＥＢＯおよびｐ２Ｏ５が挙げられる。他の例示的なベクターとしては、ｐＭＳＧ、ｐＡＶ００９／Ａ＋、ｐＭＴＯ１０／Ａ＋、ｐＭＡＭｎｅｏ－５、バキュロウイルスｐＤＳＶＥ、および、ＳＶ－４０初期プロモーター、ＳＶ－４０後期プロモーター、メタロチオネインプロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルスプロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ポリヘドリンプロモーター、または真核細胞における発現に有効であることが報告されている他のプロモーターの指示の下で、タンパク質の発現を可能にする任意の他のベクターが挙げられる。
【0392】
前述のように、ウイルスは、多くの場合、宿主の防御機構を回避するように進化してきた、非常に特殊化した感染性因子である。典型的には、ウイルスは特定の細胞型に感染し、伝播する。ウイルスベクターの標的化特異性は、所定の細胞型を特異的に標的とする天然の特異性を用いることにより、組み換え遺伝子を感染細胞に導入する。よって、本発明のいくつかの実施形態によって使用するベクターの種類は、形質転換される細胞型によって決まる。形質転換する細胞型によって好適なベクターを選択する能力は十分に当業者の能力の範疇にあり、したがって本明細書では、選択に関する検討事項の概説は提供しない。
【0393】
細胞は、本発明のいくつかの実施形態の核酸構築物によって安定的にまたは一過性に形質転換され得る。安定な形質転換においては、本発明のいくつかの実施形態の核酸分子は細胞ゲノム内に取り込まれるため、それは安定な遺伝性の性質を表す。一過性形質転換においては、核酸分子は形質転換された細胞によって発現されるものの、ゲノム内に取り込まれないため、それは一過性の性質を表す。
【0394】
本発明のいくつかの実施形態の発現ベクターを細胞に導入するためには、様々な方法を使用することができる。そのような方法は、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory, New York (1989, 1992)、Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Md. (1989)、Chang et al., Somatic Gene Therapy, CRC Press, Ann Arbor, Mich. (1995)、Vega et al., Gene Targeting, CRC Press, Ann Arbor Mich. (1995)、Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, Butterworths, Boston Mass. (1988)、およびGilboa et at. [Biotechniques 4 (6): 504-512, 1986]に概説されており、例えば、安定トランスフェクションまたは一過性トランスフェクション、リポフェクション、電気穿孔、および組み換えウイルスベクターによる感染を含む。加えて、陽性－陰性の選択方法に関しては、米国特許第５，４６４，７６４号および同第５，４８７，９９２号の明細書を参照されたい。植物発現ベクターを使用する場合、構築物は、Ｔｉプラスミド、Ｒｉプラスミド、植物ウイルスベクター、直接ＤＮＡ形質転換、マイクロインジェクション、電気穿孔、および当業者に周知の他の技術を使用して、植物細胞に導入することができる。例えば、Weissbach & Weissbach, 1988, Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, NY, Section VIII, pp 421-463を参照されたい。
【0395】
ウイルス感染による核酸の導入には、リポフェクションおよび電気穿孔などの他の方法と比べていくつかの利点がある。これは、ウイルスの感染性の性質のため、より高いトランスフェクション効率を得ることができるからである。
【0396】
現在好ましいｉｎ ｖｉｖｏでの核酸移入技術としては、アデノウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ型、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、および脂質ベースの系といった、ウイルス構築物または非ウイルス構築物のトランスフェクションが挙げられる。脂質を介した遺伝子の移入に有用な脂質は、例えば、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥ、およびＤＣ－Ｃｈｏｌである［Tonkinson et al., Cancer Investigation, 14 (1): 54-65 (1996)］。遺伝子療法において使用するのに最も好ましい構築物はウイルスであり、最も好ましくはアデノウイルス、ＡＡＶ、レンチウイルス、またはレトロウイルスである。レトロウイルス構築物などのウイルス構築物は、少なくとも１つの転写プロモーター／エンハンサーまたは遺伝子座決定エレメント、またはメッセンジャーの選択的スプライシング、核ＲＮＡ輸送、もしくは翻訳後修飾といった他の手段によって遺伝子発現を制御する他のエレメントを含む。そのようなベクター構築物は、ウイルス構築物に既に存在する場合を除き、パッケージングシグナル、末端反復配列（ＬＴＲ）またはその一部分、ならびに使用されるウイルスに適切なプラス鎖およびマイナス鎖のプライマー結合部位も含む。加えて、そのような構築物は、典型的には、構築物が入っている宿主細胞からペプチドを分泌させるためのシグナル配列を含む。好ましくは、この目的のためのシグナル配列は、哺乳動物のシグナル配列か、または本発明のいくつかの実施形態のポリペプチド変異体のシグナル配列である。任意選択で、構築物は、ポリアデニル化をもたらすシグナル、ならびに１つまたは複数の制限部位および翻訳終結配列を含んでもよい。例として、そのような構築物は、典型的には、５’ＬＴＲ、ｔＲＮＡ結合部位、パッケージングシグナル、第２鎖ＤＮＡ合成起点、および３’ＬＴＲまたはその一部分を含む。カチオン性脂質、ポリリジン、およびデンドリマーなど、ウイルスではない他のベクターを使用してもよい。
【0397】
本発明のいくつかの実施形態の発現構築物は、挿入されるコード配列の転写および翻訳のために必要なエレメントを含有する他にも、発現されるモノマーまたはヘテロダイマーの安定性、生成、精製、収率、または毒性を増進するように工学的に操作された配列を含むこともできる。例えば、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドと異種タンパク質とを含む融合タンパク質または切断可能な融合タンパク質の発現を工学的に操作することができる。そのような融合タンパク質は、アフィニティークロマトグラフィーにより、例えば、異種タンパク質に対して特異的なカラムに固定化することにより、融合タンパク質が容易に単離され得るように設計することができる。ポリペプチドと異種タンパク質との間に切断部位を工学的操作によって設けた場合、切断部位を破壊する適切な酵素または薬剤を用いて処理することにより、クロマトグラフィーカラムからポリペプチドを遊離させることができる［例えば、Booth et al. (1988) Immunol. Lett. 19:65-70、およびGardella et al., (1990) J. Biol. Chem. 265:15854-15859を参照されたい］。
【0398】
本発明は、本明細書に記載のポリペプチド、ポリヌクレオチド、および核酸構築物を含む細胞も企図する。
【0399】
よって、本発明の一態様によると、ナノボディまたはナノボディと毒素とを含む組成物、あるいはそれをコードするポリヌクレオチドまたは核酸構築物を含む、宿主細胞を提供する。
【0400】
本明細書で前述したように、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドを発現させるための宿主発現系として、種々の原核細胞または真核細胞を使用することができる。これらは、コード配列を含有する組み換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換した細菌、コード配列を含有する組み換え酵母発現ベクターで形質転換した酵母などの微生物、コード配列を含有する組み換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルスであるＣａＭＶ、タバコモザイクウイルスであるＴＭＶ）に感染させた、またはＴｉプラスミドなどの組み換えプラスミド発現ベクターで形質転換した、植物細胞系を含むが、これらに限定されない。哺乳動物の発現系を使用して、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドを発現させることもできる。
【0401】
特定の実施形態によると、細胞は哺乳類細胞である。
【0402】
特定の実施形態によると、細胞はラクダ類細胞である。
【0403】
適切な哺乳類細胞には、一次細胞および不死化細胞系が含まれる。
【0404】
他の特定の実施形態によると、哺乳類細胞は不死化細胞系である。
【0405】
適切な哺乳類細胞系としては、ＨｅＬａ細胞（例：アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）番号ＣＣＬ－２）、ＣＨＯ細胞（例：ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、ＨＥＫ２９３細胞（例：ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１５７３）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ ３Ｔ３細胞（例：ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１６５８）、Ｈｕｈ－７細胞、ＢＨＫ細胞（例：ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ－７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児性腎臓（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞、ＮＳ０、Ｓｐ２／０、ＢＨＫ、Ｎａｍａｌｗａ等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【0406】
特定の実施形態によると、細胞は大腸菌（E. coli）、例えば、ＳＨｕｆｆｌｅ Ｔ７ Ｅｘｐｒｅｓｓ ＆ ＢＬ２１である。
【0407】
特定の実施形態によると、細胞は植物細胞である。
【0408】
本発明の一態様によると、昆虫防除ナノボディの製造方法であって、本願で開示するポリヌクレオチドまたは核酸構築物を宿主細胞内で発現させることを含む方法が提供される。
【0409】
特定の実施形態によると、方法は、ナノボディの単離をさらに含む。
【0410】
任意の組み換えポリペプチド（例：ナノボディ)の単離または回収は当業界で公知の任意の方法で実行され得る。特定の実施形態によると、組み換えポリペプチドの単離または回収は、適切な時間に亘り培養した後で実施する。「組み換えポリペプチドの回収」または「組み換えポリペプチドの単離」という句は、ポリペプチドを含有する培養培地全体を収集することを指し、必ずしもさらなる分離または精製のステップを必要とするものではない。上記に関わらず、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドは、限定されるものではないが、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、濾過、電気泳動、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、コンカナバリンＡクロマトグラフィー、ミックスモードクロマトグラフィー、金属アフィニティークロマトグラフィー、レクチンアフィニティークロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、およびＤＳ法（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）など、種々の標準的なタンパク質精製技術を使用して精製することができる。
【0411】
特定の実施形態によると、合成および精製に続き、ナノボディの結合および／または昆虫防除活性は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏのいずれかで検出することができる。このような方法は当業界で知られており、上記および下記でさらに開示する。
【0412】
本願で開示する組成物（例：ナノボディ、ナノボディと毒素とを含む組成物、それをコードするポリヌクレオチドおよび核酸構築物、並びにそれを発現する宿主細胞）は、凍結乾燥、フリーズドライ、乾燥といった適切な手段によって、あるいは水性の担体、培地または適切な希釈剤（生理食塩水または他のバッファー）によって、処方され得る。特定の実施形態によると、処方された組成物は、微粉または粒状材料、粉体、ゲル、クリーム、ペースト、ペレット、錠剤、あるいは油（植物油または鉱物油）中または水中の懸濁液、あるいはｏ／ｗエマルション、カプセルサスペンジョン、乳剤、あるいは水和剤、水和性顆粒、水分散性顆粒、アエロゾル、フォーム、スラリー、またはフロアブル濃縮剤の形態を取り得る。
【0413】
特定の実施形態によると、組成物は、液状濃縮物、乾燥粉末、錠剤、カプセルサスペンジョン、スラリーまたは「ウエットケーキ」に処方され、これらは、エンドユーザーによる最終仕様の前に適切に希釈、分散、懸濁、乳化または他の方法で適切に再構成される。
【0414】
特定の実施形態によると、組成物は液状製剤として処方されている。
【0415】
特定の実施形態によると、組成物は乾燥製剤として処方されている。
【0416】
特定の実施形態によると、組成物は散布、潅水および／または燻蒸による送達用に処方されている。
【0417】
特定の実施形態によると、本願で開示する組成物（例：ナノボディ、ナノボディと毒素とを含む組成物、それをコードするポリヌクレオチドおよび核酸構築物、並びにそれを発現する宿主細胞）は、保存中および使用中の両方において安定であり、これは、組成物の完全な状態が、温度上昇、凍結融解サイクル、ｐＨまたはイオン強度の変化、ＵＶ照射、危険な化学物質の存在等といった、組成物の保存中および／または使用条件下で維持されることを意味する。
【0418】
特定の実施形態によると、組成物の完全な状態および活性が、温度上昇、凍結融解サイクル、ｐＨまたはイオン強度の変化、ＵＶ照射、危険な化学物質の存在等といった、組成物の保存中および／または使用条件下で維持される。
【0419】
特定の実施形態によると、組成物の完全な状態および活性が、野外条件または制御条件、例えば温室内、で維持される。
【0420】
本願で開示する組成物は、例えば、送達性、安定性、浸透性等を向上させるように設計された種々の担体と共に処方することができることに着目されたい。
【0421】
本願において使用する「担体」とは化合物（例：ナノボディおよび／または毒素、これらを含む組成物）を適切に導入する、即ち、固定化、吸着、吸収、結合、封入、包埋、付着または含ませることのできる、固体状、半固体状または液状の担体を意味する。
【0422】
このような担体の非限定的な例には、ナノカプセル、マイクロカプセル、ナノスフィア、マイクロスフィア、ナノ粒子、マイクロ粒子、リポソーム、ベシクル、ビーズ、ゲル、弱いイオン性樹脂粒子、リポソーム、コクリエート送達ベヒクル、小顆粒、顆粒、ナノチューブ、フラーレン（ｂｕｃｋｙ－ｂａｌｌｓ）、Ｗ／Ｏ型乳剤の一部である水滴、Ｏ／Ｗ型乳剤の一部である油滴、コルク、木材または他の植物由来材料等（例：種子の殻、木材チップ、パルプ、球体、ビーズ、シートまたは他の任意の適切な形状）の有機材料、紙または厚紙、タルク、粘土、微結晶セルロース、シリカ、アルミナ、ケイ酸塩およびゼオライト等の無機材料、あるいは微生物細胞（酵母細胞等）またはその適切な画分または断片でさえ含まれる。
【0423】
特定の実施形態によると、担体は、速放性あるいは徐放性または遅延性の特徴を有するものであり、例えば、数分、数時間、数日または数週間にわたり放出される。さらに担体は、時間（例：数分、数時間、数日、または数週間）の経過と共に（例えば、高温または低温、太陽光、高湿または低湿、あるいは他の環境因子または条件によって）崩壊またはゆっくりと分解される材料（例：ポリマー）で形成され、化合物（例：ナノボディおよび／または毒素、またはそれらを含む組成物）を担体から放出することができる。特定の実施形態によると、担体は化合物とカップリング、結合、連結あるいは付着または関連付けられている（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）。特定の実施形態によると、担体は化合物と共有結合によってカップリングされている。
【0424】
本願で開示する組成物（例：ナノボディ、ナノボディと毒素とを含む組成物、それをコードするポリヌクレオチドおよび核酸構築物、並びにそれを発現する宿主細胞）は、組成物を適切な生理学的に許容される担体または賦形剤と混合した、農薬または殺昆虫組成物といった組成物に処方され得る。
【0425】
本明細書において、「活性成分」という用語は、生物学的効果の要因となるナノボディ、ナノボディと毒素とを含む組成物、それをコードするポリヌクレオチドおよび核酸構築物、並びにそれを発現する宿主細胞を意味する。
【0426】
本願において使用する「農薬製剤」という用語は、本願に記載の１以上の活性成分と、農業的に許容される担体や賦形剤といった他の化合物とを含む、農業使用のための組成物である。
【0427】
以降、「生理学的に許容される担体」という表現は、生物に著しい刺激作用をもたらさず、また、投与される化合物の生物学的活性および特性を無効にすることのない、担体または希釈剤を意味する。これらの表現には、アジュバントが含まれる。
【0428】
特定の実施形態によると、組成物は、農業的に許容される担体と共に処方される。適切な農業用担体は固体でも液状でもよく、これらは当業界で広く知られている。「農業的に許容される担体」という用語には、全てのアジュバント、例えば、不活性成分、分散剤、表面活性剤、粘着付与剤、結合剤等の、殺虫製剤技術に通常使用され、当業者によく知られたものが含まれる。
【0429】
本明細書において、「賦形剤」という用語は、活性成分の投与をさらに容易にするために組成物に添加される不活性物質を意味する。限定されるものではないが、賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖類および各種のデンプン、セルロース誘導体、界面活性剤、ゼラチン、植物油、ポリエチレングリコール、湿潤剤、展着剤、緩衝剤、酸性化剤等が挙げられる。
【0430】
特定の実施形態によると、本願で開示する組成物（例：ナノボディ、ナノボディと毒素とを含む組成物、それをコードするポリヌクレオチドおよび核酸構築物、並びにそれを発現する宿主細胞）は、組成物中の唯一の活性成分であり得る。
【0431】
他の特定の実施形態によると、組成物は、本願で開示する組成物（例：ナノボディ、ナノボディと毒素とを含む組成物、それをコードするポリヌクレオチドおよび核酸構築物、並びにそれを発現する宿主細胞）に加えて、１種以上の追加の活性剤を含む。このような成分の非限定的な例には、除草剤、殺虫剤、植物成長調節剤、薬害軽減剤等が含まれる。
【0432】
特定の実施形態によると、本願で開示する組成物と追加の活性剤とは共処方されている。
【0433】
特定の実施形態によると、本願で開示する組成物と追加の活性剤とは個別の容器に入れられている。
【0434】
他の特定の実施形態によると、組成物は昆虫誘引剤を含み得る。誘引剤は、例えば、雄または雌のフェロモン等のフェロモンであり得る。一例として、書籍である“Insect Pheromones and their use in Pest Management”（Howse et al, Chapman and Hall, 1998）に記載のフェロモンを本発明で使用してもよい。
【0435】
誘引剤は製剤に含まれているか、あるいは製剤とは別に与えることで、製剤が与えられた部位への昆虫の誘因を確実にすることもできる。
【0436】
本発明のいくつかの実施形態のナノボディ、並びにナノボディおよび毒素を含む組成物は、昆虫防除活性が付与されている。
【0437】
本願において使用する「昆虫防除」という用語は、昆虫の給餌、成長、移動、蔓延、発生、生存および／または繁殖の防止、阻害または減少、および／または例えば、昆虫の殺滅、昆虫の生存率または寿命の減少、昆虫の多産性および／または繁殖力の減少、昆虫の給餌の減少または阻止、昆虫の成長の減少または阻止、昆虫の発生の減少または阻止、昆虫の移動性の減少または阻止、および／または昆虫による横行の防止によって達成され得る、昆虫関連被害の制限を意味する。特定の実施形態によると、昆虫防除活性は昆虫の殺滅によって達成される。
【0438】
昆虫防除活性を決定するための方法は当業者によく知られており、以下の実施例に開示されている。方法としては、ナノボディまたは組成物の存在下で幼虫をｉｎ ｖｉｔｒｏで飼育し、ナノボディまたは組成物が不存在の条件下と比較した、死亡率、体重、体長、蛹化、および成虫になるタイミングを決定する方法が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【0439】
本願で開示するナノボディは、それ自体が昆虫防除活性を有してもよいし、昆虫に毒素を送達することで昆虫防除活性を発揮してもよい。
【0440】
従って、特定の実施形態によると、ナノボディの昆虫ポリペプチドへの結合が、ナノボディに昆虫防除活性を付与する。
【0441】
特定の実施形態によると、ナノボディは、それが結合する昆虫ポリペプチドの活性を下方制御する。
【0442】
本願において使用する「活性を下方制御する」という語句は、昆虫ポリペプチドの活性を決定するのに適した方法で決定した昆虫ポリペプチドの生物学的機能が、ナノボディの不存在下と比較して、ナノボディの存在下で少なくとも５％減少することを意味する。よって、例えば、ＣＢＤを含むポリペプチドの活性は、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット解析、免疫沈降法、またはフローサイトメトリー等で決定することが可能である。Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃの活性は、ＡＴＰアーゼ活性解析および／またはＡＴＰ依存性プロトントランスポーターアッセイ等で決定することが可能である。トレハラーゼの活性は、還元糖の決定のためのフェリシアン化物／フェロシアン化物反応（ｆｅｒｒｉｃ－ｆｅｒｒｏｃｙａｎｉｄｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ）、またはトレハラーゼとのインキュベーションに続く放出グルコースのグルコースオキシダーゼ／ペルオキシダーゼを用いた定量等で決定することが可能である。チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼの活性は、試薬またはサロゲート化合物の酸化の測定、ヘム定量アッセイ、またはＰ４５０－Ｇｌｏルミネッセンスアッセイ等で決定することが可能である。キチン脱アセチル化酵素の活性は、部分的にＯ－ヒドロキシエチル化されたキチン（グリコールキチン）を基質に用いたＮ－アセチル基の放射線標識の放射測定アッセイ、または種々のキチン性基質に対するキチン脱アセチル化酵素の作用によって放出された酢酸塩を決定するベルグマイヤー酵素アッセイ等で決定することが可能である。キチンシンターゼの活性は、［１４Ｃ］ＵＤＰ－Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を基質とした放射性アッセイと、続く酸沈殿後の不溶性１４Ｃ－標識キチンの定量等で決定することが可能である。ＮＰＣ１ステロール輸送体の活性は、コレステロール吸収アッセイ、ステロール定量アッセイ等で決定することが可能である。
【0443】
他の特定の実施形態によると、減少とは、例えば上記のいずれかの方法で決定した、ナノボディの不存在下と比べて少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の減少である。
【0444】
更なるまたは代替の実施形態によると、ナノボディは、例えば、昆虫に対する昆虫防除活性を有する毒素の特異的送達を提供するために機能する、標的化剤である。
【0445】
毒素およびそれをナノボディにカップリングするための方法の非限定的な例についてはさらに後述する。
【0446】
本発明のいくつかの実施形態のナノボディ、およびナノボディと毒素とを含む組成物は昆虫防除活性を付与されていることから、本発明は昆虫防除の方法も包含する。
【0447】
よって、本発明の一態様によると、昆虫防除の方法であって、昆虫を、ナノボディまたはナノボディと毒素とを含む組成物、ポリヌクレオチド、またはそれをコードする核酸構築物、またはそれを発現する宿主細胞と接触させることを含む方法が提供される。
【0448】
特定の実施形態によると、接触は、ナノボディ、またはナノボディと毒素とを含む組成物を昆虫に直接付与することを含む。
【0449】
特定の実施形態によると、接触は、ナノボディ、またはナノボディと毒素とを含む組成物を、前記昆虫と接触し得る生物または表面に付与することを含む。
【0450】
別の実施態様によると、産業製品への昆虫の浸入を防止するための方法であって、ナノボディまたはナノボディと毒素とを含む組成物を製品に添加することを含む方法が提供される。
【0451】
別の実施態様によると、産業製品への昆虫の浸入を防止するための方法であって、ナノボディまたはナノボディと毒素とを含む組成物を含むパッケージング材料に製品を梱包することを含む方法が提供される。
【0452】
上記の接触または添加は、当業界で知られる任意の適切な方法によって実施され得るが、このような方法としては、散布（大容量（ＨＶ）、小容量（ＬＶ）および微量（ＵＬＶ）散布を含む）、噴霧、刷毛塗り、被覆、滴下、塗装、浸し塗り、浸漬、水没化、外殻化、塗布、発泡、曇化、射出、培地への添加、灌水、液滴、ミストまたはエアロゾルとしての付与、（既にさらに開示した）生物の細胞内での核酸構築物の組み換え発現が挙げられるが、これらに限定されない。
【0453】
特定の実施形態によると、接触および付与は、散布、灌水および／または燻蒸によって実施する。
【0454】
特定の実施形態によると、接触および付与は、ポリヌクレオチドまたは核酸構築物の生物の細胞への導入によって実施する。
【0455】
特定の実施形態によると、生物は植物である。
【0456】
本願において使用する「表面」という用語は、昆虫と接触し得る任意の物体を意味する。表面の非限定的な例としては、網（例：蚊帳）、光源、色付きの物体、対照的な背景の温室で目立つ形状又は輪郭、野外キャンプ用品、土、等が挙げられる。
【0457】
特定の実施形態によると、産業製品は植物から製造されたものである。
【0458】
本願で使用する「植物」という用語は、植物全体、穂木、植物および植物部分の祖先または子孫を包含し、具体的には、種子、芽、茎、根（根茎を含む）、台木、接ぎ穂、果実、野菜、花、並びに植物の細胞、組織および器官が含まれる。植物は、懸濁培養物、胚、成長領域、カルス組織、葉、配偶体、胞子体、花粉、および小胞子を含む任意の形状であり得る。
【0459】
特定の実施形態によると、植物は作物である。本願において使用する「作物」という用語は、食物、家畜の飼料、燃料用原料、または他の経済的目的で栽培される植物の種または品種を意味する。作物の非限定的な例としては、トウモロコシ、小麦、ライ麦、大麦、オーツ麦などの穀物、モロコシ、米、テンサイと飼料ビート、ナシ状果（例：リンゴおよびナシ）、柑橘類（例：オレンジ、レモン、ライム、グレープフルーツ、またはミカン）、核果類（例：桃、ネクタリン、またはプラム）、堅果類（例：アーモンド、またはクルミ）、軟果類（例：サクランボ、イチゴ、ブラックベリー、またはラズベリー）等の果実、オオバコ科またはブドウの蔦、豆類、レンズ豆、エンドウ豆、および大豆等のマメ科作物、ヒマワリ、ベニバナ、ナタネ、キャノーラ、エゴマ、またはオリーブ等の油料植物、キュウリ、メロン、またはカボチャ等のウリ科作物、綿、亜麻、またはヘンプ等の繊維用作物、サトウキビ、ススキ、またはスイッチグラス等の燃料用作物、ジャガイモ、トマト、ピーマン、レタス、ホウレンソウ、タマネギ、ニンジン、ナス、アスパラガス、またはキャベツ等の野菜類、花類（例：ペチュニア、ゼラニウム、バラ、チューリップ、ユリ、またはキク）、低木、広葉樹（例：ポプラまたはヤナギ）、および常緑樹（例：針葉樹）等の観賞用植物、芝生、芝草、またはイネ科牧草等の草類、あるいはコーヒー、茶葉、タバコ、ホップ、コショウ、ゴム、またはラテックス植物等の他の有用な植物が挙げられる。
【0460】
特定の実施形態によると、植物は以下からなる群より選ばれ得る。トウモロコシ、ダイズ、アルアルファ、綿花、ヒマワリ、Brassica napus（例：カノーラ、セイヨウアブラナ）、Brassica rapa、Brassica juncea（例：カラシナ）およびBrassica carinata等のナタネ油用種子、ヤシ属種（例：アブラヤシ、ココナッツ）、コメ、コムギ、テンサイ、サトウキビ、オーツムギ、オオムギ、キビおよびモロコシ、ライコムギ、アマ、堅果類、ブドウとツタ、並びに種々の植物分類群に属する果物と野菜、例えば、バラ属種（例：リンゴおよびナシといった仁果類のみならず、アンズ、サクランボ、アーモンド、プラム、およびモモといった石果類、イチゴ、ラズベリー、レッドカラントとブラックカラント、およびグーズベリーといったベリー類）、リベシオイダエ属種、クルミ属種、カバノキ属種、ウルシ属種、ブナ属種、クワ属種、モクセイ属種（例：オリーブの木）、マタタビ属種、クスノキ属種（例：アボカド、シナモン、樟脳）、バショウ属種（例：バナナの木およびバナナ園（ｂａｎａｎａｔｒｅｅｓ ａｎｄ ｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓ））、アカネ属種（例：コーヒー）、ツバキ属種（例：チャ）、アオギリ属種、ミカン属種（例：レモン、オレンジ、ミカンおよびグレープフルーツ）、ナス属種（（例：トマト、ジャガイモ、コショウ、トウガラシ、ナス、タバコ）、ユリ属種、キク属種（例えば、レタス、チョウセンアザミおよびチコリ（これは根チコリ、エンダイブまたはキクニガナを含む））、セリ属種（例：ニンジン、パセリ、セロリおよび根セロリ）、ウリ属種（例：ガーキンを含むキュウリ、カボチャ、スイカ、ヒョウタンおよびメロン）、ネギ属種（例：リーキおよびタマネギ）、アブラナ属種（例：白キャベツ、赤キャベツ、ブロッコリー、カリフラワー、芽キャベツ、チンゲンサイ、コールラビ、ラディッシュ、セイヨウワサビ、セリ、およびハクサイ）、マメ属種（例：ラッカセイ、エンドウマメ、レンズマメおよびマメ類（例：インゲンマメおよびソラマメ））、アカザ属種（例：スイスチャード、飼料用ビート、ホウレンソウ、ビートの根）、アマ属種（例：ヘンプ）、タイマ属種（例：カンナビス）、アオイ属種（例：オクラ、カカオ）、ケシ科（例：ケシ)、クサスギカズラ科（例：アスパラガス）、庭や森の有用植物および観賞用植物、例えば、芝生、芝地、イネ科草本およびStevia rebaudiana、およびこれらの遺伝子組み換え植物などである。
【0461】
特定の実施形態によると、植物は、果実、花、堅果、野菜、アボカド、バナナ、オオバコ、レモン、グレープフルーツ、メロン、オレンジ、パイナップル、キウイフルーツ、グァバ、ミカン、マンゴ、およびカボチャからなる群より選ばれる植物の収穫可能な部分であり得る。
【0462】
特定の実施形態によると、植物は、例えば、ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｆａｏ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／３／ｉ０６４０ｅ／ｉ０６４０ｅ１３．ｐｄｆに記載されているような、森林植物である。
【0463】
特定の実施形態によると、植物は、観賞用植物である。
【0464】
特定の実施形態によると、植物は観賞用植物の切り花であり得、アリストロメリア、カーネーション、キク、フリージア、ガーベラ、グラジオラス、カスミソウ（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａ ｓｐｐ．）、ヒマワリ、アジサイ、ユリ、トルコキキョウ、バラおよび夏花から選ばれるものが好ましい。
【0465】
特定の実施形態によると、植物は刈り取った草または木である。
【0466】
特定の実施形態によると、植物は綿である。
【0467】
特定の実施形態によると、植物はトランスジェニック植物である。
【0468】
特定の実施形態によると、植物は、ナノボディ、またはナノボディと毒素とを含む組成物を組み換えにより発現するトランスジェニック植物である。
【0469】
トランスジェニック植物の作製方法は当業界で広く知られており、本明細書においても上述した。
【0470】
次に、本発明は、ナノボディまたはナノボディと毒素とを含む組成物、それをコードするポリヌクレオチドまたは核酸構築物、あるいはそれを発現する宿主細胞を含む製品も包含する。
【0471】
特定の実施形態によると、このような製品は、ナノボディまたはナノボディと毒素とを含む組成物、それをコードするポリヌクレオチドまたは核酸構築物、あるいはそれを発現する宿主細胞を含まない製品と比べて、昆虫の蔓延や被害に対してより耐性である。
【0472】
従って、本発明の一態様によると、ナノボディまたはナノボディと毒素とを含む組成物、それをコードするポリヌクレオチドまたは核酸構築物を含む植物が提供される。
【0473】
別の実施態様によると、ナノボディまたはナノボディと毒素とを含む組成物を含む産業製品が提供される。
【0474】
別の実施態様によると、ナノボディまたはナノボディと毒素とを含む組成物で被覆された表面が提供される。
【0475】
別の実施態様によると、梱包材の中に含まれた産業製品を含み、ナノボディまたはナノボディと毒素とを含む組成物を含む、梱包済み製品が提供される。
【0476】
以下の表１～８は、本発明の特定の実施形態に使用可能なポリペプチドおよびナノボディを列挙する。
【0477】
【表1-1】
【0478】
【表1-2】
【0479】
【表2-1】
【0480】
【表2-2】
【0481】
【表2-3】
【0482】
【表2-4】
【0483】
【表2-5】
【0484】
【表3-1】
【0485】
【表3-2】
【0486】
【表4-1】
【0487】
【表4-2】
【0488】
【表4-3】
【0489】
【表5-1】
【0490】
【表5-2】
【0491】
【表5-3】
【0492】
【表6-1】
【0493】
【表6-2】
【0494】
【表6-3】
【0495】
【表6-4】
【0496】
【表7-1】
【0497】
【表7-2】
【0498】
【表7-3】
【0499】
【表8-1】
【0500】
【表8-2】
【0501】
【表8-3】
【0502】
【表8-4】
【0503】
本明細書で使用する「約」は、±１０％を指す。
【0504】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」およびその活用形は、「限定されるものではないが、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」を意味する。
【0505】
「からなる」という用語は、「含み、限定される」ことを意味する。
【0506】
「から実質的になる」という用語は、組成物、方法または構造が追加の成分、工程および／または部分を含み得ることを意味する。但しこれは、追加の成分、工程および／または部分が、請求項に記載の組成物、方法または構造の基本的かつ新規な特性を実質的に変更しない場合に限られる。
【0507】
本明細書において、単数形を表す「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他を示さない限り、複数をも対象とする。例えば、「化合物（a compound）」または「少なくとも１種の化合物」には、複数の化合物が含まれ、それらの混合物をも含み得る。
【0508】
本願全体を通して、本発明のさまざまな実施形態は、範囲形式にて示され得る。範囲形式での記載は、単に利便性および簡潔さのためであり、本発明の範囲の柔軟性を欠く制限ではないことを理解されたい。したがって、範囲の記載は、可能な下位の範囲の全部、およびその範囲内の個々の数値を特異的に開示していると考えるべきである。例えば、１～６といった範囲の記載は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６等の部分範囲のみならず、その範囲内の個々の数値、例えば１、２、３、４、５および６も具体的に開示するものとする。これは、範囲の大きさに関わらず適用される。
【0509】
本明細書において数値範囲を示す場合、それは常に示す範囲内の任意の引用数（分数または整数）を含むことを意図する。第１の指示数と第２の指示数「との間の範囲」という表現と、第１の指示数「から」第２の指示数「までの範囲」という表現は、本明細書で代替可能に使用され、第１の指示数および第２の指示数と、それらの間の分数および整数の全部を含むことを意図する。
【0510】
本明細書で使用する「方法」という用語は、所定の課題を達成するための様式、手段、技術および手順を意味し、化学、薬理学、生物学、生化学および医療の各分野の従事者に既知のもの、または既知の様式、手段、技術および手順から従事者が容易に開発できるものが含まれるが、これらに限定されない。
【0511】
特定の配列表を参照する場合、そのような参照は、例えば、シーケンシングエラー、クローニングエラー、または塩基置換、塩基欠失、もしくは塩基付加をもたらす他の改変に起因する、わずかな配列変化を含む相補的配列に実質的に対応する配列も包含するものと理解されたい。ただし、そのような変化の頻度は、５０ヌクレオチド中１未満、代替的には１００ヌクレオチド中１未満、代替的には２００ヌクレオチド中１未満、代替的には５００ヌクレオチド中１未満、代替的には１０００ヌクレオチド中１未満、代替的には５，０００ヌクレオチド中１未満、代替的には１０，０００ヌクレオチド中１未満であることを条件とする。
【0512】
本発明の特徴であって、明確にするために個別の実施形態のとして記載したものは、組み合わせて１つの実施形態としても提供可能であることを理解されたい。逆に、簡潔にするために１つの実施形態として記載した本発明の様々な特徴を、個別に、または任意の適切な部分組合せで、または本発明で記載した他の実施形態との適切な組み合わせとして提供することもできる。様々な実施形態に関連して記載された特徴は、その特徴なしでは実施形態が動作不能でない限り、それらの実施形態の必須要件とは見なさない。
【0513】
上記で列挙し、下記の特許請求の範囲に記載した本発明の種々の実施形態および態様について、次の実施例が実験的根拠を示す。
【実施例】
【0514】
ここで、上記の記載と共に本発明を限定することなく説明する以下の実施例に参照する。
【0515】
本明細書において使用される命名法および本発明に使用する実験手順としては、通常、分子的技術、生化学的技術、微生物学的技術および組み換えＤＮＡ技術が挙げられる。このような技術は、文献において十分に説明されている。例えば、"Molecular Cloning: A laboratory Manual" Sambrook et al., (1989)、"Current Protocols in Molecular Biology" Volumes I-III Ausubel, R. M., ed. (1994)、Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1989)、Perbal, "A Practical Guide to Molecular Cloning", John Wiley & Sons, New York (1988)、Watson et al., "Recombinant DNA", Scientific American Books, New York、Birren et al. (eds) "Genome Analysis: A Laboratory Manual Series", Vols. 1-4, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1998)、米国特許第４，６６６，８２８号明細書、第４，６８３，２０２号明細書、第４，８０１，５３１号明細書、第５，１９２，６５９号明細書、および第５，２７２，０５７号明細書に記載された方法、"Cell Biology: A Laboratory Handbook", Volumes I-III Cellis, J. E., ed. (1994)、"Culture of Animal Cells - A Manual of Basic Technique" by Freshney, Wiley-Liss, N. Y. (1994), Third Edition、"Current Protocols in Immunology" Volumes I-III Coligan J. E., ed. (1994)、Stites et al. (eds), "Basic and Clinical Immunology" (8th Edition), Appleton & Lange, Norwalk, CT (1994)、Mishell and Shiigi (eds), "Selected Methods in Cellular Immunology", W. H. Freeman and Co., New York (1980)を参照されたい。利用可能なイムノアッセイは、特許および科学文献に広く記載されており、例えば、米国特許第３，７９１，９３２号、同第３，８３９，１５３号、同第３，８５０，７５２号、同第３，８５０，５７８号、同第３，８５３，９８７号、同第３，８６７，５１７号、同第３，８７９，２６２号、同第３，９０１，６５４号、同第３，９３５，０７４号、同第３，９８４，５３３号、同第３，９９６，３４５号、同第４，０３４，０７４号、同第４，０９８，８７６号、同第４，８７９，２１９号、同第５，０１１，７７１号、および同第５，２８１，５２１号の明細書、"OligoヌクレオチドSynthesis" Gait, M. J., ed. (1984)、”核酸Hybridization" Hames, B. D., and Higgins S. J., eds. (1985)、"Transcription and Translation" Hames, B. D., and Higgins S. J., Eds. (1984)、"Animal Cell Culture" Freshney, R. I., ed. (1986)、"Immobilized Cells and Enzymes" IRL Press, (1986)、"A Practical Guide to Molecular Cloning" Perbal, B., (1984)および"Methods in Enzymology" Vol. 1-317, Academic Press、"PCR Protocols: A Guide To Methods And Applications", Academic Press, San Diego, CA (1990)、Marshak et al., "Strategies for Protein Purification and Characterization - A Laboratory Course Manual" CSHL Press (1996)を参照されたい。上記文献の全てが、本参照により本明細書に完全に援用されるものとする。その他の一般的な参考文献は、本明細書を通じて提供される。それらに記載の手順は、当技術分野で周知であると考えられ、読者の便宜のために提供する。それらに含まれるすべての情報が、本参照により本明細書に援用される。
【0516】
材料および方法
免疫のための標的タンパク質の調整－Helicoverpa armigera（上記表１参照）の標的タンパク質のＤＮＡ配列を最適化し、合成した。合成した配列をＨｉｓタグと共にｐＥＴ－２８ａベクターまたはｐＥＴ－３０ａベクターにクローニングし、大腸菌ＢＬ２１ Ｓｔａｒ（ＤＥ３）株で発現させた。単一コロニーをカナマイシン含有ＬＢ培地に接種し、培養物を３７℃、２００ｒｐｍでインキュベートし、その後、イソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）で誘導した。タンパク質発現をモニタリングするためにＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析を使用した。続いて、グリセロール中に保存したＢＬ２１ Ｓｔａｒ （ＤＥ３）をカナマイシン含有ＴＢ培地に接種し、３７℃で培養した。ＯＤ６００が１．２に達したら、細胞培養物を１５℃で１６時間、ＩＰＴＧで誘導した。細胞を遠心分離で回収し、ペレットを溶解バッファー（２０ｍＭのＮａＰｉ，ｐＨ７．４、５００ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのイミダゾール、プロテアーゼ阻害剤カクテルであるｃＯｍｐｌｅｔｅ（商標）、ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤カクテルであるＲｏｃｈｅ社、ｃａｔ＃４６９３１３２００１）に再懸濁し、続いて超音波処理および遠心分離を実施した。尿素を使って沈殿物を溶解し、変性した上清をさらなる精製のために保持した。続いて、Ｎｉ－ＮＴＡカラム（ＧＥ－Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、Ｃａｔ Ｎｏ． １７－５３１８－０２）を用いて上清からタンパク質を精製した。カラムを総容積の１０倍の洗浄バッファー（２０ｍＭのＮａＰｉ，ｐＨ７．４、５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのイミダゾール）で洗浄し、タンパク質を溶出バッファー（２０ｍＭのＮａＰｉ，ｐＨ７．４、５００ｍＭのＮａＣｌ、５００ｍＭのイミダゾール）で溶出した。溶出に続き、メンブランのカットオフ値が３．５ｋＤａであるＭＥＧＡチューブ（Ｔｉｖａｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ社のＭＥＧＡ３－５０）に画分を入れて、１ＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）に対して４℃で一晩透析し、続いて同じ条件で２回目の透析を行った。いくつかの標的タンパク質（例：Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ標的タンパク質）はさらにリフォールディングさせ、等量での保存の前に０．２２μｍのフィルターで滅菌した。濃度はＮａｎｏ－ｄｒｏｐを用いて決定した。タンパク質の純度および分子量は標準的なＳＤＳ－ＰＡＧＥで決定した。
免疫のための標的タンパク質の調整－Helicoverpa armigera（上記表１参照）の標的タンパク質のＤＮＡ配列を最適化し、合成した。合成した配列をＨｉｓタグと共にｐＥＴ－２８ａベクターまたはｐＥＴ－３０ａベクターにクローニングし、大腸菌ＢＬ２１ Ｓｔａｒ（ＤＥ３）株で発現させた。単一コロニーをカナマイシン含有ＬＢ培地に接種し、培養物を３７℃、２００ｒｐｍでインキュベートし、その後、イソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）で誘導した。タンパク質発現をモニタリングするためにＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析を使用した。続いて、グリセロール中に保存したＢＬ２１ Ｓｔａｒ （ＤＥ３）をカナマイシン含有ＴＢ培地に接種し、３７℃で培養した。ＯＤ６００が１．２に達したら、細胞培養物を１５℃で１６時間、ＩＰＴＧで誘導した。細胞を遠心分離で回収し、ペレットを溶解バッファー（２０ｍＭのＮａＰｉ，ｐＨ７．４、５００ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのイミダゾール、プロテアーゼ阻害剤カクテルであるｃＯｍｐｌｅｔｅ（商標）、ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤カクテルであるＲｏｃｈｅ社、ｃａｔ＃４６９３１３２００１）に再懸濁し、続いて超音波処理および遠心分離を実施した。尿素を使って沈殿物を溶解し、変性した上清をさらなる精製のために保持した。続いて、Ｎｉ－ＮＴＡカラム（ＧＥ－Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、Ｃａｔ Ｎｏ． １７－５３１８－０２）を用いて上清からタンパク質を精製した。カラムを総容積の１０倍の洗浄バッファー（２０ｍＭのＮａＰｉ，ｐＨ７．４、５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのイミダゾール）で洗浄し、タンパク質を溶出バッファー（２０ｍＭのＮａＰｉ，ｐＨ７．４、５００ｍＭのＮａＣｌ、５００ｍＭのイミダゾール）で溶出した。溶出に続き、メンブランのカットオフ値が３．５ｋＤａであるＭＥＧＡチューブ（Ｔｉｖａｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ社のＭＥＧＡ３－５０）に画分を入れて、１ＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）に対して４℃で一晩透析し、続いて同じ条件で２回目の透析を行った。いくつかの標的タンパク質（例：Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ標的タンパク質）はさらにリフォールディングさせ、等量での保存の前に０．２２μｍのフィルターで滅菌した。濃度はＮａｎｏ－ｄｒｏｐを用いて決定した。タンパク質の純度および分子量は標準的なＳＤＳ－ＰＡＧＥで決定した。
【0517】
免疫化－０、７、１４、２１、２８および３５日目にラマに皮下注射を行い、各注射は、約１２５または１５０μｇの標的タンパク質とＧｅｒｂｕアジュバントＰ（Ｇｅｒｂｕ Ｂｉｏｔｅｃｈ社、＃３１１１－００２５）との組み合わせであった。４０日目には、リンパ球の調製ために約１００ｍｌの抗凝固化血液をラマから採取した。
【0518】
ＶＨＨライブラリーの構築－抗原特異的ナノボディの存在をスクリーニングするために、ＶＨＨライブラリーをラマのリンパ球から構築した。この目的のために、オリゴ（ｄＴ）プライマーによる第１鎖ｃＤＮＡ合成用テンプレートとして、末梢血リンパ球由来の総ＲＮＡを使用した。このｃＤＮＡを用いて、ＶＨＨコード配列をＰＣＲにより増幅し、ＰｓｔＩ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｃｈｅｒ社の＃ＥＲ０６１１）およびＮｏｔＩ（Ｓｉｇｍａ社の＃１１０３７６６８００１）で消化し、ファージミド・ベクターｐＭＥＣＳのＰｓｔＩサイトとＮｏｔＩサイトにクローニングした。ＶＨＨライブラリーは約１０８個の独立した形質転換体を含み、形質転換体の約８０～９２％は正しいサイズの挿入物を含むベクターを保有していた。
【0519】
特異的標的ナノボディの単離とシーケンシング－標的抗原（１００ｍＭのＮａＨＣＯ３（ｐＨ８．２）中に１００μｇ／ｍｌ）で被覆した固相上でライブラリーのパニングを３周行った。各周期のパニングにおける抗原特異的ファージの富化は、抗原被覆ウェルから溶出されたファージミドの数を、陰性対照（被覆せずブロッキングした）ウェルから溶出されたファージミドの数と比べることで求めた。これらの実験は、ファージ集団内の抗原特異的ファージが３周で富化されたことを示した。パニングおよびＥＬＩＳＡによるスクリーニングに使用した抗原は、免疫に使用したものと同一であり、被覆せずにブロッキングしたウェルを陰性の対照とした。作製したナノボディのアミノ酸配列を上記表２Ａ～表６に示した。
【0520】
ナノボディの発現および精製－ナノボディのＤＮＡ配列を最適化し、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔで合成した。合成した配列をＨｉｓタグと共に大腸菌内のタンパク質発現用のｐＥＴ－２８ｂ＋ベクターにクローニングした。続いて、大腸菌ＳＨｕｆｆｌｅ Ｔ７を組み換えプラスミドで形質転換した。単一コロニーをカナマイシン含有ＬＢ培地に接種し、培養物を３７℃、２２０ｒｐｍでインキュベートし、そして１ＭのＩＰＴＧで誘導した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析を発現のモニタリングに用いた。続いて、グリセロール中に保存していたＳＨｕｆｆｌｅ Ｔ７をカナマイシン含有ＴＢ培地に接種し、３７℃で培養した。ＯＤ６００が約１．２に達したら、細胞培養物を３０℃で２０～２２時間、１ＭのＩＰＴＧで誘導した。細胞を遠心分離で回収し、ペレットを溶解バッファー（２０ｍＭのＮａＰｉ，ｐＨ７．５、５００ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのイミダゾール）に再懸濁し、続いて超音波処理および遠心分離を実施した。尿素を使って沈殿物を溶解し、変性した上清をさらなる精製のために保持した。続いて、Ｎｉ－ＮＴＡカラムを用いて上清からタンパク質を精製した。カラムを総容積の１０倍の洗浄バッファー（２０ｍＭのＮａＰｉ，ｐＨ７．５、５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのイミダゾール）で洗浄し、タンパク質を溶出バッファー（２０ｍＭのＮａＰｉ，ｐＨ７．５、５００ｍＭのＮａＣｌ、５００ｍＭのイミダゾール）で溶出した。続いて、溶出された画分を透析バッファー（ＰＢＳ，ｐＨ７．４）に対して４℃で一晩透析した。
濃度はＮａｎｏ－ｄｒｏｐを用いて決定した。タンパク質の純度および分子量は標準的なＳＤＳ－ＰＡＧＥで決定した。
濃度はＮａｎｏ－ｄｒｏｐを用いて決定した。タンパク質の純度および分子量は標準的なＳＤＳ－ＰＡＧＥで決定した。
【0521】
作製したナノボディの標的タンパク質への結合－インキュベーション（４℃で一晩）によって、Ｍａｘｉｓｏｒｂ ９６ウェルプレートを１０μｇ／ｍｌの標的タンパク質で被覆した。被覆したプレートをＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ＋０．５％のｔｗｅｅｎ＋１％のＢＳＡを含むブロッキングバッファー中、３７℃で１時間のブロッキングを行い、続いて２μｇ／ｍｌの試験ナノボディと室温で１時間インキュベートした。ＰＢSによる洗浄に続き、ブロッキングバッファー中のＭｏｎｏＲａｂ（商標）ウサギ抗ラクダ類ＶＨＨ抗体－ＨＲＰ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ社、Ｃａｔ ｎｏ．Ａ０１８６０）でプレートをインキュベートした。最後に、プレートをＰＢＳで洗浄し、ＴＭＢ溶液と共に３０分インキュベートし、続いてＨ２ＳＯ４を添加し、４５０ｎｍの吸光度を測定した。
【0522】
安定性のアッセイ－作製したナノボディを自然な太陽光、自然なＵＶ照射、および夏場の屋外／野外の高温下でインキュベートすることで、それらの安定性を「野外様」の条件下で試験した。加えて、４齢（４ｔｈ）のH. armigeraの初期幼虫消化管（ｓｔａｒｔ ｌａｒｖａｅ ｇｕｔｓ）から回収した内腔液とインキュベートすることで、酵素的タンパク質分解活性および高ｐＨに対する安定性も評価した［例えば、Purcell, John P., John T. Greenplate, and R. Douglas Sammons. Insect Biochemistry and Molecular Biology22.1 (1992): 41-47、Pang, A. S., & Gringorten, J. L. (1998). FEMS microbiology letters, 167(2), 281-285、およびMa, Gang, et al. Insect biochemistry and molecular biology 35.7 (2005): 729-739参照］。具体的には、４℃で一晩のインキュベーションによって、Ｍａｘｉｓｏｒｂ ９６ウェルプレートを２μｇ／ｍｌの試験ナノボディで被覆した。被覆したプレートをＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ＋０．５％のｔｗｅｅｎ＋１％のＢＳＡを含むブロッキングバッファー中、３７℃で１時間のブロッキングを行った。被覆したプレートをＰＢＳと共に「野外様条件」で１～３時間、または内腔消化管液の存在下、室温で１時間インキュベートした。インキュベーションに続き、プレートをＰＢＳで洗浄し、ブロッキングバッファー中のＭｏｎｏＲａｂ（商標）ウサギ抗ラクダ類ＶＨＨ抗体－ＨＲＰと共にインキュベートした。最後に、プレートをＰＢＳで洗浄し、ＴＭＢ溶液と共に３０分インキュベートし、続いてＨ２ＳＯ４を添加し、４５０ｎｍの吸光度を測定した。
【0523】
昆虫の培養－アメリカタバコガの幼虫（Ｃｏｔｔｏｎ ｂｏｌｌｗｏｒｍｓ）をイスラエル国の綿畑から採取し、２４℃、相対湿度７０％、明：１０時間／暗：１４時間の条件下、実験室で飼育した。集めた幼虫は、ビタミン混合物（ニコチン酸：４０μＭ、パントテン酸カルシウム：５μＭ、リボフラビン：５μＭ、塩酸チアミン：４μＭ、塩酸ピリドキシン：５μＭ、葉酸：２．５μＭ、Ｄ－ビオチン：４μＭ、およびシアノコバラミン：５ｎＭ）、ソルビン酸：０．２％、メチルパラベン：０．４％、アスコルビン酸：０．２５％、ビール酵母：１％、白酢：４％、および亜麻仁油：０．５％を添加したＷａｒｄ社の飼料粉末、カワゲラ類キンウワバ属用飼料（Ｗａｒｄ’ｓ ｄｉｅｔ ｐｏｗｄｅｒ Ｓｔｏｎｅｆｌｙ Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ Ｄｉｅｔ）（製品番号３８－０６００、ニューヨーク州、ロチェスター、Ｗａｒｄ’ｓ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ社）である人工飼料で飼育した。
【0524】
飼料のバイオアッセイ－０．５グラムのキンウワバ属用人工飼料を２４ウェルプレートの各ウェルに加え、濃度０．４ｍｇ／ｍｌの試験ナノボディまたは陰性対照としてのＰＢＳを含む１００μｌの懸濁液を重ねた。各ウェルに２４～４８時間齢の幼虫を一匹加えたものを１２組用意した。プレートをポリオフィン（ｐｏｌｙｏｆｉｎ）シーリングホイル（ＨＪ－ＢＩＯＡＮＡＬＩＴＩＣ社、Ｃａｔ Ｎｏ．９００３７１）で被覆し、２４℃、相対湿度７０％、暗条件下の実験室でインキュベートした。各ナノボディに関する各研究を３～５回繰り返した。７日間のインキュベーションに続き、ナノボディの添加なしの同じ人工飼料の入ったより大きな、直径５ｃｍのペトリ皿に幼虫を移動した。インキュベーションの７日目および１４日目に各幼虫の体長および体重を測定し、蛹化および成虫発生時期を観察した。
【0525】
綿の栽培－日／夜が２５℃／１８℃の制御条件下で綿の栽培品種Ａｋａｌｐｉ（G. hirsutumとG. barbadenseとの間の種間雑種（ＩＳＨ）、１４３２ Ｉｎｔｅｒｃｏｔｔ Ｈａｚｅｒａ）を栽培した。温度のモニタリングを行い、ＳＡＳオートメーションシステムで維持した。加えて、Ｓｈｅｆｆｅｒ７－７－７プラスカルシウムを使用し、浸出画分を３０％に維持して施肥潅漑を行った。害虫防除は、粘着性で色付きの罠のみを用いて機械的に実施した。栽培サイクルの期間は６～８週の間であった。この期間の経過後、バイオアッセイ実験の植物モデルとして使用するために、植物を実験室に移動した。
【0526】
葉のバイオアッセイ－１ｍｌの滅菌済みアガーを１２ウェルプレートの各ウェルに添加し、直径２ｃｍの円盤状の綿植物の葉を各ウェル内のアガーの上に配置した。０．４、１、２または４ｍｇ／ｍｌの濃度の試験したナノボディ、あるいは陰性対照としてのＰＢＳを含む５０μｌの懸濁液を各円盤状の葉に重層した。各ウェルに２４～４８時間齢の幼虫一匹を加えたものを１２組用意した。プレートをポリオフィン（ｐｏｌｙｏｆｉｎ）シーリングホイル（ＨＪ－ＢＩＯＡＮＡＬＩＴＩＣ社、Ｃａｔ Ｎｏ．９００３７１）で被覆し、２４℃、相対湿度７０％の条件下、実験室でインキュベートした。４日間のインキュベーションに続き、新鮮な円盤状の綿の葉の入った新しいプレートに幼虫を移動し、同じ濃度のナノボディまたはＰＢＳで処理し、７日目には、アガーと、１００μｌの同じ濃度の同じナノボディで処理した新鮮な直径２．８ｃｍの円盤状の綿植物の葉とを添加したより大きなウェル（６ウェルプレート）に幼虫を再び移動した。幼虫の死亡率を４、７および１０日目に評価した。各ナノボディに関する各研究を２～３回繰り返した。
【0527】
免疫蛍光－１ｍｇ／ｍｌの濃度の本明細書で「ＣＢ２０９０１」と称する精製抗ＣＢＤナノボディを、製造者の説明書に従って、蛍光標識Ｃｙ３（ａｂ１８８２８７－Ｃｙ３ Ｆａｓｔ コンジュゲーションキット、英国、ケンブリッジ）に結合させた。飼料のバイオアッセイを上述したように実施した。具体的には、１２匹の幼虫に１００μｌのＣｙ３－蛍光標識ナノボディを給餌し、１００μｌのＰＢＳを給餌した１２匹の幼虫を対照とした。３６時間のインキュベーションに続き、擬陽性シグナルを除くために、処理した幼虫を清潔な用意したばかりのキンウワバ属用人工飼料に移動してさらに１２時間飼育し、続いて第１の画像化セッションを実施した。次の工程においては、６日齢になるまで幼虫をナノボディ／ＰＢＳ－飼料に戻し、ナノボディを含まない飼料を次の１２時間は給餌し、最後に、生幼虫および抽出した消化管の第２の画像化セッションを実施した。有効な画像比較のために以下の設定を維持した。Ｎｉｋｏｎ社Ｅｃｌｉｐｓｅ ８０ｉ顕微鏡、ＮＩＳ－素子ソフトウエア、カメラＤＳ－Ｒｉ２、レンズ１Ｘ＿ズーム２．０ｘ＿露出１０ｍｓ＿ゲイン＿７．６ｘ（飼料の画像化用）、レンズ１Ｘ＿ズーム１．４ｘ＿露出２００ｍｓ＿ゲイン＿２．０ｘ（４８時間齢の幼虫用）およびレンズ１ｘ＿ズーム１．４Ｘ＿露出４００ｍｓ＿ゲイン＿６．２ｘ（６日齢の幼虫および抽出した消化管用）。
【0528】
実際例１
抗キチン結合ドメインナノボディ
本明細書ではＨａ－ＰＭＰ５Ｂ１およびＨａ－ＰＭＰ５Ｂ２と称するHelicoverpa armigeraのキチン結合ドメイン（ＣＢＤ）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表２Ａと２Ｂ参照）。Ｈａ－ＰＭＰ５Ｂ１タンパク質は、Helicoverpa armigera由来の５つの異なるＣＢＤを含む５０６個のアミノ酸を含み、Ｈａ－ＰＭＰ５Ｂ２タンパク質は、Ｈａ－ＰＭＰ５Ｂ１の部分タンパク質であって、２つのＣＢＤを含む１９２個のアミノ酸を含む。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイは、作製したナノボディが標的ＣＢＤ抗原に結合することを立証した（図１）。特定の実施形態が、Helicoverpa armigeraの幼虫に経口送達によってナノボディを投与すると、幼虫の消化管の囲食膜内の標的部位に到達するまでに、幼虫の消化管の（高いｐＨを有し、多量のタンパク質分解酵素を含む）内腔でナノボディが吸収されることを開示することから、内腔内の抗ＣＢＤナノボディの安定性について研究した。作製した抗ＣＢＤナノボディで被覆し、採取した内腔液の存在下で１時間インキュベートしたプレートを用いるＥＬＩＳＡアッセイは、１時間のインキュベーション後にも４０～７０％のナノボディがインタクトであったことを示し（図２）、作製した抗ＣＢＤナノボディが内腔条件下で生存可能であることを示した。加えて、野外の自然太陽光下、３０℃の高い外気温度で１～３時間のインキュベーションによって、作製した抗ＣＢＤナノボディの野外条件を模倣する条件下における安定性も試験した。結果は、３０℃、湿度６０～７０％、ＵＶ指数４～５の野外様条件下で３時間のインキュベーション後に、対照と比べてわずかなナノボディ含有量の低下しか生じなかったことを示した（図３）。
抗キチン結合ドメインナノボディ
本明細書ではＨａ－ＰＭＰ５Ｂ１およびＨａ－ＰＭＰ５Ｂ２と称するHelicoverpa armigeraのキチン結合ドメイン（ＣＢＤ）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表２Ａと２Ｂ参照）。Ｈａ－ＰＭＰ５Ｂ１タンパク質は、Helicoverpa armigera由来の５つの異なるＣＢＤを含む５０６個のアミノ酸を含み、Ｈａ－ＰＭＰ５Ｂ２タンパク質は、Ｈａ－ＰＭＰ５Ｂ１の部分タンパク質であって、２つのＣＢＤを含む１９２個のアミノ酸を含む。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイは、作製したナノボディが標的ＣＢＤ抗原に結合することを立証した（図１）。特定の実施形態が、Helicoverpa armigeraの幼虫に経口送達によってナノボディを投与すると、幼虫の消化管の囲食膜内の標的部位に到達するまでに、幼虫の消化管の（高いｐＨを有し、多量のタンパク質分解酵素を含む）内腔でナノボディが吸収されることを開示することから、内腔内の抗ＣＢＤナノボディの安定性について研究した。作製した抗ＣＢＤナノボディで被覆し、採取した内腔液の存在下で１時間インキュベートしたプレートを用いるＥＬＩＳＡアッセイは、１時間のインキュベーション後にも４０～７０％のナノボディがインタクトであったことを示し（図２）、作製した抗ＣＢＤナノボディが内腔条件下で生存可能であることを示した。加えて、野外の自然太陽光下、３０℃の高い外気温度で１～３時間のインキュベーションによって、作製した抗ＣＢＤナノボディの野外条件を模倣する条件下における安定性も試験した。結果は、３０℃、湿度６０～７０％、ＵＶ指数４～５の野外様条件下で３時間のインキュベーション後に、対照と比べてわずかなナノボディ含有量の低下しか生じなかったことを示した（図３）。
【0529】
作製したナノボディの殺昆虫活性を求めるために、４８時間齢以下の若いHelicoverpa armigera幼虫を、抗ＣＢＤ作製ナノボディの単一用量を添加した人工飼料上で飼育した。昆虫の全生活環に渡り観察を実行し、ここには７日目および１４日目の幼虫の体重および体長の測定、並びにその後に蛹から成虫に変態した個体数の観測も含まれていた。結果は、数種の抗ＣＢＤナノボディを７日間給餌した幼虫では体長（図４の（Ａ））および／または体重の減少（図４の（Ｂ））および／または死亡率の上昇 （図４の（Ｃ））が、試験したナノボディに応じて生じることを示した。
【0530】
幼虫の消化管におけるナノボディの軌跡を追うために、蛍光標識Ｃｙ３抗ＣＢＤナノボディＣＢ１２９０１を添加した人工飼料でHelicoverpa armigera幼虫を飼育した。図５の（Ａ）が示すように、標識ナノボディは飼料中で少なくとも１週間は安定であった。
加えて、蛍光シグナルの減少が、給餌に続いて飼料と幼虫の糞との間で見られ、幼虫の消化管による標識ナノボディの取り込みが示唆された（図５の（Ａ））。さらに、標識ナノボディは、ナノボディを含まない飼料に幼虫を移動した１２時間後にも幼虫から検出され、標識ナノボディが幼虫の消化管に保持されることを示唆した（図５Ｂ）。
さらに、標識ナノボディが囲食膜に到達する能力が給餌から６日目に確認され、このタイミングで陽性シグナルが消化管の全て、特に囲食膜と内腔消化管との分離に続いて囲食膜から観察された（図５の（Ｃ））。
加えて、蛍光シグナルの減少が、給餌に続いて飼料と幼虫の糞との間で見られ、幼虫の消化管による標識ナノボディの取り込みが示唆された（図５の（Ａ））。さらに、標識ナノボディは、ナノボディを含まない飼料に幼虫を移動した１２時間後にも幼虫から検出され、標識ナノボディが幼虫の消化管に保持されることを示唆した（図５Ｂ）。
さらに、標識ナノボディが囲食膜に到達する能力が給餌から６日目に確認され、このタイミングで陽性シグナルが消化管の全て、特に囲食膜と内腔消化管との分離に続いて囲食膜から観察された（図５の（Ｃ））。
【0531】
実施例２
抗Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ・ナノボディ
Helicoverpa armigeraのＶ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットＣ（本明細書では「ＶＡＴ」と称する）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表３Ａ～３Ｂを参照）。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイによって、作製したナノボディが標的ＶＡＴ抗原に結合することが立証された（図６）。続いて、内腔条件および野外様条件における抗ＶＡＴナノボディの安定性について検討した（図７と図８）。結果は、内腔液の存在下で１時間のインキュベーション後に４０～７０％のナノボディがインタクトであることを示し、これは作製した抗ＶＡＴナノボディの内腔条件下で生き残る性質を示した。加えて、結果は、３０℃、湿度６０～７０％、ＵＶ指数が４～５の野外様条件下で３時間のインキュベーションに続き、ナノボディ含量に対照と比べてわずかな減少しか見られないことを示した。
抗Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ・ナノボディ
Helicoverpa armigeraのＶ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットＣ（本明細書では「ＶＡＴ」と称する）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表３Ａ～３Ｂを参照）。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイによって、作製したナノボディが標的ＶＡＴ抗原に結合することが立証された（図６）。続いて、内腔条件および野外様条件における抗ＶＡＴナノボディの安定性について検討した（図７と図８）。結果は、内腔液の存在下で１時間のインキュベーション後に４０～７０％のナノボディがインタクトであることを示し、これは作製した抗ＶＡＴナノボディの内腔条件下で生き残る性質を示した。加えて、結果は、３０℃、湿度６０～７０％、ＵＶ指数が４～５の野外様条件下で３時間のインキュベーションに続き、ナノボディ含量に対照と比べてわずかな減少しか見られないことを示した。
【0532】
作製したナノボディの殺昆虫活性を求めるために、４８時間齢以下の若いHelicoverpa armigeraの幼虫を、単一用量の作製した抗ＶＡＴナノボディを添加した人工飼料上で飼育した。７日目よび１４日目の幼虫の体重および体長の測定、並びに後に蛹から成虫に変態した個体数の観察を含む、昆虫の生活環の全体にわたる観察を実行した。結果は、試験したナノボディに応じて、作製した抗ＶＡＴナノボディを７日間給餌した幼虫における体長の減少（図９の（Ａ））および／または体重の減少および／または死亡率の増加（図９の（Ｃ））を示した。
【0533】
加えて、生き残り、幼虫から蛹、その後、成虫の蛾へと変態する完全な生活環を全うした幼虫のパーセンテージを求めた。下記表９に示したように、抗ＶＡＴナノボディで７日間処理した幼虫では、成虫の蛾になって完全な生活環を全うした幼虫のパーセンテージは低下した。重要な点は、２５～３０日という実験期間の内の最初の７日間のみ抗ＶＡＴナノボディに暴露されたにも関わらず、ナノボディがHelicoverpa armigeraに対して長期の安定な効果を発揮し、蛹化および成虫という後期発生段階に対しても影響を与えたことを結果が示したことにある。
【0534】
【表9】
【0535】
実施例３
抗トレハラーゼ・ナノボディ
Helicoverpa armigeraのトレハラーゼ（本明細書では「ＴＲＨ」と称する）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表４を参照）。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイによって、作製したナノボディが標的トレハラーゼ抗原に結合することが立証された（図１０）。続いて、野外様条件および５０℃という高温下における抗ＴＲＨナノボディの安定性について検討した（図１１の（Ａ）～Ｂ）。結果は、３０℃、湿度６０～７０％、ＵＶ指数が４～５の野外様条件下で一晩のインキュベーションは、対照と比べて、ナノボディ含量に対して全く影響がないまたはわずかな減少しか誘導しないことを示した。同様の結果が、５０℃で一晩のインキュベーション後にも示された。
抗トレハラーゼ・ナノボディ
Helicoverpa armigeraのトレハラーゼ（本明細書では「ＴＲＨ」と称する）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表４を参照）。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイによって、作製したナノボディが標的トレハラーゼ抗原に結合することが立証された（図１０）。続いて、野外様条件および５０℃という高温下における抗ＴＲＨナノボディの安定性について検討した（図１１の（Ａ）～Ｂ）。結果は、３０℃、湿度６０～７０％、ＵＶ指数が４～５の野外様条件下で一晩のインキュベーションは、対照と比べて、ナノボディ含量に対して全く影響がないまたはわずかな減少しか誘導しないことを示した。同様の結果が、５０℃で一晩のインキュベーション後にも示された。
【0536】
作製したナノボディの殺昆虫活性を求めるために、４８時間齢以下の若いHelicoverpa armigeraの幼虫を、単一用量の作製した抗ＴＲＨナノボディを添加した人工飼料上で飼育し、７日目よび１４日目の死亡率を測定した。結果は、作製した抗ＴＲＨナノボディによる処理に続く幼虫死亡率の有意な増加を示した（図１２Ａ）。続いて、４８時間齢以下の若いHelicoverpa armigeraの幼虫を、作製した抗ＴＲＨナノボディを０日目、４日目、および７日目に円盤状の綿の葉に添加することで投与して飼育し、４日目、７日目、および１０日目に死亡率を測定した。結果は、抗ＴＲＨナノボディによる処理に続く、有意に用量依存的な幼虫死亡率の増加を示した（図１２Ｂ）。
【0537】
加えて、幼虫の体重および体長の測定、並びに後に蛹から成虫に変態した個体数の観察を含む、昆虫の生活環の全体にわたる観察を実行した。さらに、生き残り、幼虫から蛹、その後、成虫の蛾へと変態する完全な生活環を全うした幼虫のパーセンテージを求めた。
【0538】
実施例４
抗チトクロームＰ４５０モノオキシゲナーゼ・ナノボディ
Helicoverpa armigeraのチトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ（本明細書では「Ｐ４５０」と称する）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表５を参照）。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイによって、作製したナノボディが標的Ｐ４５０抗原に結合することが立証された（図１３）。続いて、内腔条件および野外様条件における抗Ｐ４５０ナノボディの安定性について検討した。
抗チトクロームＰ４５０モノオキシゲナーゼ・ナノボディ
Helicoverpa armigeraのチトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ（本明細書では「Ｐ４５０」と称する）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表５を参照）。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイによって、作製したナノボディが標的Ｐ４５０抗原に結合することが立証された（図１３）。続いて、内腔条件および野外様条件における抗Ｐ４５０ナノボディの安定性について検討した。
【0539】
作製したナノボディの殺昆虫活性を求めるために、４８時間齢以下の若いHelicoverpa armigeraの幼虫を、作製した抗Ｐ４５０ナノボディを添加した人工飼料上で飼育し、７日目よび１４日目の死亡率を測定した。結果は、作製した抗Ｐ４５０ナノボディによる処理に続く幼虫死亡率の有意な増加を示した（図１４）。
【0540】
加えて、幼虫の体重および体長の測定、並びに後に蛹から成虫に変態した個体数の観察を含む、昆虫の生活環の全体にわたる観察を実行した。さらに、生き残り、幼虫から蛹、その後、成虫の蛾へと変態する完全な生活環を全うした幼虫のパーセンテージを求めた。
【0541】
実施例５
抗キチン脱アセチル化酵素・ナノボディ
Helicoverpa armigeraのキチン脱アセチル化酵素（本明細書では「ＣＤＡ」と称する）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表６を参照）。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイによって、作製したナノボディが標的ＣＤＡ抗原に結合することが立証された（図１５）。続いて、野外様条件および５０℃という高温下における抗ＣＤＡナノボディの安定性について検討した（図１６の（Ａ）～Ｂ）。結果は、３０℃、湿度６０～７０％、ＵＶ指数が４～５の野外様条件下で一晩のインキュベーションは、対照と比べて、ナノボディ含量に対して影響がないことを示した。同様の結果が、５０℃で一晩のインキュベーション後にも示された。
抗キチン脱アセチル化酵素・ナノボディ
Helicoverpa armigeraのキチン脱アセチル化酵素（本明細書では「ＣＤＡ」と称する）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表６を参照）。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイによって、作製したナノボディが標的ＣＤＡ抗原に結合することが立証された（図１５）。続いて、野外様条件および５０℃という高温下における抗ＣＤＡナノボディの安定性について検討した（図１６の（Ａ）～Ｂ）。結果は、３０℃、湿度６０～７０％、ＵＶ指数が４～５の野外様条件下で一晩のインキュベーションは、対照と比べて、ナノボディ含量に対して影響がないことを示した。同様の結果が、５０℃で一晩のインキュベーション後にも示された。
【0542】
作製したナノボディの殺昆虫活性を求めるために、４８時間齢以下の若いHelicoverpa armigeraの幼虫を、作製した抗ＣＤＡナノボディを添加した人工飼料上で飼育し、７日目よび１４日目の死亡率を測定した。結果は、抗ＣＤＡナノボディによる処理に続く幼虫死亡率の有意な増加を示した（図１７Ａ）。続いて、４８時間齢以下の若いHelicoverpa armigeraの幼虫を、作製した抗ＣＤＡナノボディを０日目、４日目、および７日目に円盤状の綿の葉に添加することで投与して飼育し、４日目、７日目、および１０日目に死亡率を測定した。結果は、抗ＣＤＡナノボディによる処理に続く、有意に用量依存的な幼虫死亡率の増加を示した（図１７Ｂ）。
【0543】
加えて、幼虫の体重および体長の測定、並びに後に蛹から成虫に変態した個体数の観察を含む、昆虫の生活環の全体にわたる観察を実行した。さらに、生き残り、幼虫から蛹、その後、成虫の蛾へと変態する完全な生活環を全うした幼虫のパーセンテージを求めた。
【0544】
実施例６
抗キチンシンターゼ・ナノボディ
Helicoverpa armigeraのキチンシンターゼ（本明細書では「ＣＨＳ」と称する）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表７を参照）。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイによって、作製したナノボディが標的ＣＨＳに結合することが立証された（図１８）。続いて、野外様条件および５０℃という高温下における抗ＣＨＳナノボディの安定性について検討した（図１９の（Ａ）～Ｂ）。結果は、３０℃、湿度６０～７０％、ＵＶ指数が４～５の野外様条件下で一晩のインキュベーションは、対照と比べて、ナノボディ含量に対してわずかな減少しか誘導しないことを示した。同様の結果が、５０℃で一晩のインキュベーション後にも示された。
抗キチンシンターゼ・ナノボディ
Helicoverpa armigeraのキチンシンターゼ（本明細書では「ＣＨＳ」と称する）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表７を参照）。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイによって、作製したナノボディが標的ＣＨＳに結合することが立証された（図１８）。続いて、野外様条件および５０℃という高温下における抗ＣＨＳナノボディの安定性について検討した（図１９の（Ａ）～Ｂ）。結果は、３０℃、湿度６０～７０％、ＵＶ指数が４～５の野外様条件下で一晩のインキュベーションは、対照と比べて、ナノボディ含量に対してわずかな減少しか誘導しないことを示した。同様の結果が、５０℃で一晩のインキュベーション後にも示された。
【0545】
作製したナノボディの殺昆虫活性を求めるために、４８時間齢以下の若いHelicoverpa armigeraの幼虫を、作製した抗ＣＨＳナノボディを添加した人工飼料上で飼育し、７日目よび１４日目の死亡率を測定した。結果は、作製した抗ＣＨＳナノボディによる処理に続く幼虫死亡率の有意な増加を示した（図２０Ａ）。続いて、４８時間齢以下の若いHelicoverpa armigeraの幼虫を、作製した抗ＣＨＳナノボディを０日目、４日目、および７日目に円盤状の綿の葉に添加することで投与して飼育し、４日目、７日目、および１０日目に死亡率を測定した。結果は、抗ＣＨＳナノボディによる処理に続く、有意に用量依存的な幼虫死亡率の増加を示した（図２０Ｂ）。
【0546】
加えて、幼虫の体重および体長の測定、並びに後に蛹から成虫に変態した個体数の観察を含む、昆虫の生活環の全体にわたる観察を実行した。さらに、生き残り、幼虫から蛹、その後、成虫の蛾へと変態する完全な生活環を全うした幼虫のパーセンテージを求めた。
【0547】
実施例７
抗ＮＰＣ１ステロール輸送体・ナノボディ
Helicoverpa armigeraのＮＰＣ１ステロール輸送体（本明細書では「ＮＰＣ１」と称する）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表８を参照）。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイによって、作製したナノボディが標的ＮＰＣ１抗原に結合することが立証された（図２１）。続いて、内腔条件および野外様条件における抗ＮＰＣ１ステロール輸送体ナノボディの安定性について検討した。
抗ＮＰＣ１ステロール輸送体・ナノボディ
Helicoverpa armigeraのＮＰＣ１ステロール輸送体（本明細書では「ＮＰＣ１」と称する）抗原に対するいくつかのナノボディを作製した（上記表８を参照）。標的抗原を被覆したプレートを用いたＥＬＩＳＡアッセイによって、作製したナノボディが標的ＮＰＣ１抗原に結合することが立証された（図２１）。続いて、内腔条件および野外様条件における抗ＮＰＣ１ステロール輸送体ナノボディの安定性について検討した。
【0548】
作製したナノボディの殺昆虫活性を求めるために、４８時間齢以下の若いHelicoverpa armigeraの幼虫を、作製した抗ＮＰＣ１ナノボディを添加した人工飼料上で飼育し、７日目よび１４日目の死亡率を測定した。結果は、作製した抗ＮＰＣ１ナノボディによる処理に続く幼虫死亡率の有意な増加を示した（図２２）。
【0549】
加えて、７日目および１4日目の幼虫の体重および体長の測定、並びに後に蛹から成虫に変態した個体数の観察を含む、昆虫の生活環の全体にわたる観察を実行した。さらに、生き残り、幼虫から蛹、その後、成虫の蛾へと変態する完全な生活環を全うした幼虫のパーセンテージを求めた。
【0550】
本発明をその特定の実施形態との関連で説明したが、多数の代替、修飾および変種が当業者には明らかであろう。したがって、そのような代替、修飾および変種の全ては、添付の特許請求の範囲の趣旨および広い範囲内に含まれることを意図するものである。
【0551】
本明細書で言及した全ての刊行物、特許および特許出願は、個々の刊行物、特許および特許出願のそれぞれについて具体的且つ個別の参照により本明細書に組み込む場合と同程度に、それらの全体が参照により本明細書に援用される。加えて、本願におけるいかなる参考文献の引用または特定は、このような参考文献が本発明の先行技術として使用できることの容認として解釈されるべきではない。また、各節の表題が使用される範囲において、必ずしも限定として解釈されるべきではない。さらに本願のいかなる基礎出願も本参照をもってその全体をここに援用する。
【配列表フリーテキスト】
【0552】
配列番号１： キチン結合ドメインＣＢＤを含むポリペプチド－ＨａＰＭＰ５Ｂ１
配列番号２： キチン結合ドメインＣＢＤを含むポリペプチド－ＨａＰＭＰ５Ｂ１
配列番号３： キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）
配列番号４： キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）
配列番号５： キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）
配列番号６： キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）
配列番号７： キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）
配列番号８： Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ
配列番号９： キチン脱アセチル化酵素
配列番号１０： トレハラーゼ
配列番号１１： チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ
配列番号１２： キチンシンターゼ
配列番号１３： ＮＰＣ１ステロール輸送体
配列番号１４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号６３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号６７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号７１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号７５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号７９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号８３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号８７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号９０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号９１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号９３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号９４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号９５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号９６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号９７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号９８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号９９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１００： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２： キチン結合ドメインＣＢＤを含むポリペプチド－ＨａＰＭＰ５Ｂ１
配列番号３： キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）
配列番号４： キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）
配列番号５： キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）
配列番号６： キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）
配列番号７： キチン結合ドメイン（ＣＢＤ）
配列番号８： Ｖ－ＡＴＰアーゼ・サブユニットｃ
配列番号９： キチン脱アセチル化酵素
配列番号１０： トレハラーゼ
配列番号１１： チトクロームｐ４５０モノオキシゲナーゼ
配列番号１２： キチンシンターゼ
配列番号１３： ＮＰＣ１ステロール輸送体
配列番号１４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号６３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号６７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号６９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号７１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号７５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号７８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号７９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号８３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号８７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号８９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号９０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号９１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号９３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号９４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号９５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号９６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号９７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号９８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号９９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１００： 相補性決定領域のアミノ酸配列
【0553】
配列番号１０１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１０２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１０３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１０４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１０５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１０６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１０７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１０８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１０９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１１１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１１５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１１９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１２３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１２７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１３１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１３５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１３９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１４３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１４７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１５０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１５１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１５２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１５３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１５４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１５６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１５７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１５８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１５９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１６３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１６７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１７０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１７１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１７２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１７３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１７４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１７５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１７６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１７７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１７８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１７９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１８０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１８１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１８２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１８３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１８５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１８６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１８７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１８８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１８９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１９１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１９５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１９９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２００： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１０２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１０３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１０４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１０５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１０６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１０７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１０８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１０９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１１１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１１５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１１８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１１９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１２３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１２７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１２９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１３１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１３５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１３８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１３９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１４３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１４７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１４９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１５０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１５１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１５２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１５３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１５４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１５６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１５７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１５８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１５９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１６３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１６７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１６９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１７０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１７１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１７２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１７３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１７４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１７５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１７６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１７７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１７８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１７９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１８０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１８１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１８２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１８３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１８５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１８６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１８７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１８８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１８９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１９１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１９５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号１９８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号１９９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２００： ナノボディのアミノ酸配列
【0554】
配列番号２０１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２０５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２０８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２１２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２１４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２１５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２１９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２２３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２２７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２３１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２３４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２３８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２４２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２４６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２５０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２５４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２５８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２６２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２６６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２６８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２６９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２７０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２７１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２７２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２７３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２７４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２７５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２７６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２７７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２７８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２７９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２８０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２８１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２８２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２８３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２８４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２８５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２８６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２８７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２８９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２９１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２９３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２９６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９９： ナノボディのアミノ酸配列
３９位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
配列番号３００： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２０５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２０８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２０９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２１２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２１４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２１５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２１８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２１９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２２３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２２７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２２９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２３１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２３４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２３８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２３９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２４２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２４６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２４９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２５０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２５４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２５８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２５９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２６２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２６６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２６７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２６８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２６９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２７０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２７１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２７２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２７３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２７４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２７５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２７６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２７７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２７８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２７９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２８０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２８１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２８２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２８３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２８４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２８５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２８６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２８７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２８９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２９１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２９３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号２９６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号２９９： ナノボディのアミノ酸配列
３９位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
配列番号３００： 相補性決定領域のアミノ酸配列
【0555】
配列番号３０１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０３： ナノボディのアミノ酸配列
３位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
配列番号３０４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０７： ナノボディのアミノ酸配列
３９位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
配列番号３０８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１１： ナノボディのアミノ酸配列
３位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
配列番号３１２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３１６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３２０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３２４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３２７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３３１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３３２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３３３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３３４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３３６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３３７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３３８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３３９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３４１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３４２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３４３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３４７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３５０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３５１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３５２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３５３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３５４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３５５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３５６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３５７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３５８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３５９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３６２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３６４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３６５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３６８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３７２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３７４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３７７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３８１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３８５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３８７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３９０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３９１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３９２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３９３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３９４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３９５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３９６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３９７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３９８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３９９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４００： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０３： ナノボディのアミノ酸配列
３位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
配列番号３０４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０７： ナノボディのアミノ酸配列
３９位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
配列番号３０８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３０９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１１： ナノボディのアミノ酸配列
３位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
配列番号３１２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３１６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３１９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３２０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３２４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３２７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３２９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３３１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３３２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３３３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３３４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３３６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３３７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３３８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３３９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３４１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３４２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３４３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３４７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３４９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３５０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３５１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３５２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３５３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３５４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３５５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３５６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３５７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３５８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３５９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３６２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３６４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３６５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３６８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３６９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３７２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３７４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３７７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３７９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３８１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３８５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３８７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３８９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３９０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３９１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３９２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３９３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３９４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３９５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３９６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３９７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号３９８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号３９９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４００： 相補性決定領域のアミノ酸配列
【0556】
配列番号４０１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４０２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４０６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０９： ２型キチン結合ドメイン（ＣｈｔＢＤ２）
２～１２位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
４３～４７位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
５４～６２位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
８７～９８位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
１１６～１２１位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
配列番号４１０： ２型キチン結合ドメイン（ＣｈｔＢＤ２）
配列番号４１１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４１２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４１３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４１４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４１５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４１６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４１７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４１８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４１９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４２２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４２６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４３０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４３１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４３２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４３３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４３４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４３５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４３６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４３７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４３８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４３９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４４３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４４７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４５１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４５４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４５８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４６２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４６６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４７０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４７４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４７８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４８２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４８５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４８９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４９３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４９７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５００： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４０６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４０９： ２型キチン結合ドメイン（ＣｈｔＢＤ２）
２～１２位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
４３～４７位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
５４～６２位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
８７～９８位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
１１６～１２１位のＸａａは任意の天然アミノ酸であり得る
配列番号４１０： ２型キチン結合ドメイン（ＣｈｔＢＤ２）
配列番号４１１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４１２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４１３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４１４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４１５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４１６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４１７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４１８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４１９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４２２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４２６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４２９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４３０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４３１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４３２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４３３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４３４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４３５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４３６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４３７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４３８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４３９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４４３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４４７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４４９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４５１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４５４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４５８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４５９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４６２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４６６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４６９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４７０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４７４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４７８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４７９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４８２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４８５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４８８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４８９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４９３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号４９７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号４９９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５００： 相補性決定領域のアミノ酸配列
【0557】
配列番号５０１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５０２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５０３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５０４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５０５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５０６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５０７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５０８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５０９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５１０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５１１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５１２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５１３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５１４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５１５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５１６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５１７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５１８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５１９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５２０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５２１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５２２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５２３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５２４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５２５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５２６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５２７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５２８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５２９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５３２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５３３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５３４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５４３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５４４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５４５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５４７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５５１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５５２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５５６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５６０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５６１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５６５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５６９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５７３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５７７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５８０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５８４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５８８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５９０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５９１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５９２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５９３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５９４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５９５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５９６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５０２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５０３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５０４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５０５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５０６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５０７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５０８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５０９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５１０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５１１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５１２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５１３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５１４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５１５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５１６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５１７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５１８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５１９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５２０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５２１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５２２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５２３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５２４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５２５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５２６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５２７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５２８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５２９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５３２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５３３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５３４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５３９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５４３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５４４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５４５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５４７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５４９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５５１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５５２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５５： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５５６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５５９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５６０： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５６１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５６５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５６８： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５６９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７２： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５７３： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７６： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５７７： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５７９： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５８０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８１： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５８４： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８６： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８７： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５８８： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５８９： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５９０： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５９１： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５９２： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５９３： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５９４： ナノボディのアミノ酸配列
配列番号５９５： 相補性決定領域のアミノ酸配列
配列番号５９６： ナノボディのアミノ酸配列
【図1】
【図2】
【図3】
【図4-1】
【図4-2】
【図5-1】
【図5-2】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9-1】
【図9-2】
【図10】
【図11-1】
【図11-2】
【図12A】
【図12B】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17A】
【図17B】
【図18】
【図19-1】
【図19-2】
【図20A】
【図20B】
【図21】
【図22】
【配列表】
【国際調査報告】