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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-01-18
(54)【発明の名称】心血管疾患の治療のための内皮リパーゼ抗体
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20230111BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20230111BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20230111BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20230111BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230111BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20230111BHJP
C07K 16/18 20060101ALN20230111BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N
A61P9/00
A61K39/395 D
A61P9/10
A61K45/00
A61P43/00 121
C12N15/13
C07K16/18
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022526524
(86)(22)【出願日】2020-11-06
(85)【翻訳文提出日】2022-06-23
(86)【国際出願番号】 US2020059458
(87)【国際公開番号】W WO2021092421
(87)【国際公開日】2021-05-14
(31)【優先権主張番号】62/932,257
(32)【優先日】2019-11-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/940,164
(32)【優先日】2019-11-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/104,410
(32)【優先日】2020-10-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】511007314
【氏名又は名称】メディミューン，エルエルシー
(74)【代理人】
【識別番号】110000796
【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】グリムズビー ジョセフ サムエル
(72)【発明者】
【氏名】ジン チャオ－ユー
(72)【発明者】
【氏名】ファルーン ジュディス
(72)【発明者】
【氏名】シア ジュディス アン
(72)【発明者】
【氏名】カラタナシス ソティリオス ケー．
(72)【発明者】
【氏名】ジョージ リチャード トーマス ジュニア
(72)【発明者】
【氏名】リ レイ ジョン エドワード
(72)【発明者】
【氏名】ハマー ブライアン ティモシー
(72)【発明者】
【氏名】フアン ユエ
(72)【発明者】
【氏名】ローゼンバウム アントン アイ．
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA19
4C084MA17
4C084MA65
4C084MA66
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZA36
4C084ZA45
4C084ZC75
4C085AA13
4C085AA14
4C085AA16
4C085BB36
4C085BB41
4C085BB43
4C085BB44
4C085CC23
4C085DD62
4C085EE01
4C085EE03
4C085GG01
4C085GG04
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA42
4H045DA76
4H045EA23
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、ヒト内皮リパーゼ（ＥＬ）に特異的に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントを、それを必要とする対象、例えば、心血管疾患を有する対象に投与する方法を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
何が主張されているか：対象における心血管疾患を治療する方法であって、ヒト内皮リパーゼ（ＥＬ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを約１００ｍｇから約３５０ｍｇを対象に投与することを含む方法。
対象におけるアテローム性動脈硬化症を軽減する方法であって、ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの約１００ｍｇから約３５０ｍｇを対象に投与することを含む方法。
アテローム性動脈硬化症を軽減する方法であって、ＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む方法であって、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与：
（a）被験者の高密度リポタンパク質コレステロール（HDL-C）を増加させます。
（b）被験者の高密度リポタンパク質（HDL）粒子数を増加させます。
（c）被験者のHDL粒子サイズを増加させます。
（d）被験者のHDLリン脂質を増加させます。
（e）対象のアポリポタンパク質A1（ApoA1）を増加させる。および/または
（f）被験者のコレステロール流出能力（CEC）を増加させます。
投与が、以前の急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する対象における心血管死、非致死的心筋梗塞（ＭＩ）、非致死的脳卒中、および／または冠状動脈血行再建術のリスクを低減する、請求項３に記載の方法。
投与が対象における二次的な心血管イベントを予防する、請求項３または４に記載の方法。
ＭＡＣＥ ）のリスクを低減する、請求項３～５のいずれか一項に記載の方法。
急性冠症候群（ＡＣＳ）の既往のある対象において、心血管死、非致命的心筋梗塞（ＭＩ）、非致命的脳卒中、および／または冠状動脈血行再建術のリスクを低減する方法。この方法は、対象に投与することを含む。ヒトELに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
8.対象における二次的心血管イベントを予防する方法であって、ヒトELに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む方法。
9.対象における主要心血管イベント（MACE）のリスクを低減する方法。この方法は、ヒトELに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、請求項７～９のいずれか一項に記載の方法である、請求項７から９のいずれか一項に記載の方法。
（a）被験者の高密度リポタンパク質コレステロール（HDL-C）を増加させます。
（b）被験者の高密度リポタンパク質（HDL）粒子数を増加させます。
（c）被験者のHDL粒子サイズを増加させます。
（d）被験者のHDLリン脂質を増加させます。
（e）被験者のApoA1を増加させます。および/または
（f）被験者のコレステロール流出能力（CEC）を増加させる
11.対象においてHDL-C、HDL粒子数、HDL粒子サイズ、HDLリン脂質、ApoA1、および/またはCECを増加させる方法。この方法は、特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。 EL。
約１００ｍｇから約３５０ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、請求項３～１０のいずれか一項に記載の方法。
約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇを投与することを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。 約175mg、約180mg、約190mg、約200mg、約210mg、約220mg、約225mg、約230mg、約240mg、約250mg、約260mg、約270mg、約抗体またはその抗原結合フラグメントの275mg、約280mg、約290mg、約300mg、約310mg、約320mg、約325mg、約330mg、約340mg、または約350mg。
２５０ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
２５０ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
２００ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
２００～２５０ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
約１２５ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
１２５ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントが月に１回投与される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントが、月に１回、少なくとも３ヶ月間投与される、請求項２０に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントが、月に１回、少なくとも１２ヶ月または少なくとも２４ヶ月間投与される、請求項２１に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントが非経口的に投与される、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントが皮下投与される、請求項２３に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントが、付属のプレフィルドシリンジ（ＡＰＦＳ）または自動注射器を介して投与される、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、対象のＥＬを３０日間阻害する、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、対象におけるＨＤＬ-Ｃを少なくとも３０％増加させる、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、対象におけるＨＤＬ-Ｃを少なくとも３５％増加させる、請求項２７に記載の方法。
ＨＤＬ -Ｃを少なくとも４０％増加させる、請求項２８に記載の方法。
３０日以内に対象のＨＤＬ-Ｃを増加させる、請求項２６～２９のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、最初の投与から９０日以内に対象のＨＤＬ-Ｃを増加させる、請求項２６～２９のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、対象におけるＡｐｏＡ１を少なくとも３０％増加させる、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、対象におけるＡｐｏＡ１を少なくとも３５％増加させる、請求項３２に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、最初の投与から３０日以内に対象においてＡｐｏＡ１を増加させる、請求項３２または３３に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、最初の投与から９０日以内に対象においてＡｐｏＡ１を増加させる、請求項３２または３３に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、対象における非ＡＴＰ結合カセットトランスポーターＡ１（ＡＢＣＡ１）コレステロール流出能力を少なくとも３０％増加させる、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。
ＡＢＣＡ１コレステロール流出能力を少なくとも３５％増加させる、請求項３６に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、最初の投与から３０日以内に対象における非ＡＢＣＡ１コレステロール流出能力を増加させる、請求項３６または３７に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、最初の投与から９０日以内に対象における非ＡＢＣＡ１コレステロール流出能力を増加させる、請求項３６または３７に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、対象におけるＨＤＬ粒子数を少なくとも５％増加させる、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。
ＨＤＬ粒子数を少なくとも８％増加させる、請求項４０に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、最初の投与から３０日以内に対象のＨＤＬ粒子数を増加させる、請求項４０または４１に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、最初の投与から９０日以内に対象のＨＤＬ粒子数を増加させる、請求項４０または４１に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、対象におけるＨＤＬ粒子サイズを少なくとも３％増加させる、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。
ＨＤＬ粒子サイズを少なくとも５％増加させる、請求項４４に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、最初の投与から３０日以内に対象のＨＤＬ粒子サイズを増加させる、請求項４４または４５に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、最初の投与から９０日以内に対象のＨＤＬ粒子サイズを増加させる、請求項４４または４５に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、対象中のＨＤＬリン脂質を少なくとも５０％増加させる、請求項１～４７のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、最初の投与から３０日以内に対象のＨＤＬリン脂質を増加させる、請求項４７に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、最初の投与から９０日以内に対象のＨＤＬリン脂質を増加させる、請求項４７に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、対象の血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）レベルを少なくとも１００％または少なくとも２５０％増加させる、請求項１～５０のいずれか一項に記載の方法。
増加した血漿ＰＩレベルが増加したＰＩ（１４：２／２０：０）、ＰＩ（１４：２／２２：０）、ＰＩ（１４：２／２２：１）、ＰＩである、請求項５１に記載の方法。 （14：2/22：2）、PI（16：0/16：1）、PI（16：0/18：0）、PI（16：0/18：2）、PI（16：0/20 ：2）、PI（16：0/20：3）、PI（16：0/20：4）、PI（16：0/22：4）、PI（16：1/18：0）、PI（ 16：1/18：1）、PI（18：0/18：0）、PI（18：0/18：1）、PI（18：0/18：2）、PI（18：0/18： 3）、PI（18：0/20：2）、PI（18：0/20：3）、PI（18：0/20：4）、PI（18：0/22：4）、PI（18 ：0/22：5）、PI（18：0/22：6）、PI（18：1/16：0）、PI（18：1/18：1）、PI（18：1/18：2 ）、PI（18：1/20：2）、PI（18：1/20：3）、PI（18：1/20：4）、および/またはPI（18：2/18：2）レベル。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与が、最初の投与から９０日以内に対象の血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）レベルを増加させる、請求項５１または５２に記載の方法。
対象が心血管疾患を有する、請求項２～５３に記載のいずれか一項に記載の方法。
冠状動脈疾患、冠状動脈性心臓病、慢性動脈疾患、脳血管疾患、アテローム性動脈硬化性心血管疾患、または末梢動脈疾患である、請求項１または５４に記載の方法。
対象が安定した冠状動脈疾患または安定した冠状動脈性心臓病を有する、請求項１～５３のいずれか一項に記載の方法。
対象が以前に急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する、請求項１～５３のいずれか一項に記載の方法。
対象がスタチン療法を受けている、請求項１～５７のいずれか一項に記載の方法。
対象がスタチン療法を受けていない、請求項１～５７のいずれか一項に記載の方法。
対象が投与前にトリグリセリドレベルが５００ｍｇ ／ ｄＬ以下である、請求項１～５９のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ≦１００ｍｇ ／ ｄＬを有する、請求項１～６０のいずれか一項に記載の方法。
対象がヒトである、請求項１～６１のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントがＥＬ活性を中和する、請求項１～６２のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントがエフェクター機能を低下させている、請求項１～６３のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントが抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有さない、請求項１～６４のいずれか一項に記載の方法。
抗体が補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）活性を有さない、請求項１～６５のいずれか一項に記載の方法。
抗体がカニクイザルＥＬに結合する、請求項１～６６のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨおよび以下を含むＶＬを含む抗体のＥＬへの結合を競合的に阻害する、請求項１～６７のいずれか一項に記載の方法。配列番号8に記載のアミノ酸配列。
抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体およびＥＬの同じエピトープに結合する、請求項１～６８に記載のいずれか一項に記載の方法。配列番号8に記載のアミノ酸配列を含むVL。
抗体またはその抗原結合フラグメントが、重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２を含む、請求項１～６９のいずれか一項に記載の方法。 、およびMEDI5884の配列のVLCDR3。
ＣＤＲが、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲ、またはＡｂＭ定義のＣＤＲである、請求項７０に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２を含む、請求項１～６９のいずれか一項に記載の方法。：２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号6のアミノ酸配列を含むVLCDR3。
抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨおよび／または記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１～７２のいずれか一項に記載の方法。配列番号8の。
抗体または抗原結合フラグメントがIgG重鎖定常領域を含む、請求項1～76のいずれか一項に記載の方法。
ＩｇＧ重鎖定常領域がＩｇＧ４重鎖定常領域である、請求項７４に記載の方法。
ＩｇＧ４重鎖定常領域がＩｇＧ４Ｐ重鎖定常領域である、請求項７５に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントがカッパ軽鎖定常領域を含む、請求項１～７６のいずれか一項に記載の方法。
抗体または抗原結合フラグメントが、重鎖定常領域および／または軽鎖定常領域を含む、請求項１～７６のいずれか一項に記載の方法。
重鎖定常領域がヒトＩｇＧ４Ｐ重鎖定常領域であり、および／または軽鎖定常領域がヒトＩｇＧκ軽鎖定常領域である、請求項７８に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１～７９のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域および／または軽鎖定常領域を含む、請求項１～８０のいずれか一項に記載の方法。配列番号13に記載のアミノ酸配列。
抗体が、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項１～８１のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントが完全長抗体である、請求項１～８２のいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合フラグメントが抗原結合フラグメントである、請求項１～８０のいずれか一項に記載の方法。
抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、二硫化物結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディを含む、請求項８４に記載の方法。 F（ab'）3、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、（scFv）2、またはscFv-Fc。
86.対象の心血管疾患を治療する方法であって、250mgの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に1回皮下投与することを含む方法であって、抗体または抗原結合フラグメントがヒトELに特異的に結合し、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ。
87.急性冠症候群（ACS）の既往のある被験者において、心血管死、非致死的心筋梗塞（MI）、非致死的脳卒中、および/または冠状動脈血行再建術のリスクを低減する方法。250mgを皮下投与する方法。抗体またはその抗原結合フラグメントの対象への月1回の投与。抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、配列番号7に記載のアミノ酸配列を含むVHおよび以下を含むVLを含む。配列番号8に記載のアミノ酸配列。
88.対象の心血管疾患を治療する方法であって、約200mgの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に1回皮下投与することを含む方法であって、抗体または抗原結合フラグメントがヒトELに特異的に結合し、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
89.急性冠症候群（ACS）の既往のある被験者において、心血管死、非致死的心筋梗塞（MI）、非致死的脳卒中、および/または冠状動脈血管再生のリスクを低減する方法。この方法は、約200を皮下投与することを含む。月に１回、対象に対する抗体またはその抗原結合フラグメントのｍｇ。ここで、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトＥＬに特異的に結合し、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨおよびＶＬを含む。配列番号8に記載のアミノ酸配列を含む。
90.対象の心血管疾患を治療する方法であって、200～250mgの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に1回皮下投与することを含む方法であって、抗体または抗原結合フラグメントがヒトELに特異的に結合する方法。配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
91.急性冠症候群（ACS）の既往のある被験者において、心血管死、非致死的心筋梗塞（MI）、非致死的脳卒中、および/または冠状動脈血管再生のリスクを低減する方法。対象に対する抗体またはその抗原結合フラグメント250mgを月に1回、ここで、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、配列番号7に記載のアミノ酸配列を含むVHおよび配列番号8に記載のアミノ酸配列を含むVL。
抗体が、配列番号９に示される重鎖定常領域アミノ酸配列および配列番号１０に示される軽鎖定常領域アミノ酸配列を含む、請求項８６～９１のいずれか一項に記載の方法。
ＰＣＳＫ９の阻害剤を投与することをさらに含む、請求項１～９２のいずれか一項に記載の方法。
ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの投与およびＰＣＳＫ９の阻害剤の投与が同時に行われる、請求項９３に記載の方法。
ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントおよびＰＣＳＫ９の阻害剤が、別個の医薬組成物で投与される、請求項９４に記載の方法。
ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの投与およびＰＣＳＫ９の阻害剤の投与が連続している、請求項９３に記載の方法。
ＰＣＳＫ９の阻害剤が抗ＰＣＳＫ９抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項９３～９６に記載の方法１ 。
ＰＣＳＫ９の阻害剤がＨＳ９、エボロクマブ、アリロクマブ、またはボコシズマブである、請求項９７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連するアプリケーションへの相互参照
104,410号、2019年11月25日に出願された62 / 940,164、および2019年11月7日に出願された62/932,257の利益を主張する。参照によりその全体が組み込まれる。
1.フィールド
本開示は、一般に、疾患または障害、例えば、心血管疾患および障害の治療のために、ヒト内皮リパーゼ（ＥＬ）に特異的に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントを使用する方法に関する。有利な投与計画が提供されます。
104,410号、2019年11月25日に出願された62 / 940,164、および2019年11月7日に出願された62/932,257の利益を主張する。参照によりその全体が組み込まれる。
1.フィールド
本開示は、一般に、疾患または障害、例えば、心血管疾患および障害の治療のために、ヒト内皮リパーゼ（ＥＬ）に特異的に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントを使用する方法に関する。有利な投与計画が提供されます。
【背景技術】
【0002】
2.背景
内皮リパーゼ（ＥＬ）は、トリグリセリドリパーゼファミリーのメンバーとして同定されている循環ホスホリパーゼである。 ELは、ホスホリパーゼとトリグリセリドリパーゼの両方の活性を持ち、高密度リポタンパク質（HDL）を他のリポタンパク質よりも効率的に加水分解します。血漿HDLコレステロール（HDL-C）レベルの調節に重要な役割を果たすと考えられています。 ELはHDLリン脂質を加水分解することにより、HDL粒子の不安定化と腎臓による急速なクリアランスを引き起こします。
血漿ＥＬ濃度の増加は、血漿トリグリセリドおよびアポリポタンパク質Ｂ濃度の上昇、ならびにより小さな低密度リポタンパク質粒子サイズとともに、リポタンパク質－脂質プロファイルの悪化と関連している。 （Paradis et al。、Can J Cardiol 22：31B-34B（2006））。炎症性サイトカイン濃度の上昇とメタボリックシンドロームの有病率の上昇も、血漿EL濃度が上昇した個人で観察されています。 （同上）これらおよびその他の要因を考慮すると、ELは心血管疾患において重要な役割を果たすと考えられてきました。 （Id。）
高力価スタチンなどの心血管疾患に対する現在の治療法の有効性にもかかわらず、急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する患者における主要な心血管（ＣＶ）有害事象の有意な残存リスクが依然として存在する。心筋梗塞（MI）の大部分は、正常な低密度リポタンパク質（LDL）レベルの患者で発生し、高用量で非常に強力なスタチン、PCSK9阻害剤、および/またはMI後のエゼチミブによる治療にもかかわらず、2回目のCVの残存リスクイベントは高いままです。たとえば、IMPROVE-IT研究（エゼチミブ+スタチン）では、7年間の追跡調査でCVイベントのリスクが33％でした。さらに、ODYSSEY（PCSK9阻害剤+スタチン）には、2。8年間で9.5％の残存リスクがあります。
ＨＤＬ -Ｃレベルは、アテローム性動脈硬化症のＣＶイベントおよび冠状動脈性心臓病（ＣＨＤ）の危険因子の予測因子として同定されている。また、HDLの粒子サイズと粒子数がHDLおよび関連疾患の有用な臨床マーカーである可能性があるという仮説も立てられています。
HDLレベルを薬理学的に上昇させるいくつかの試みが、異なる作用機序を使用して試みられてきた。特に、コレステロール伝達タンパク質（CETP）阻害剤の4つの試験が完了しました。 CETP阻害剤はHDLコレステロールを上昇させますが、4つの試験のうち3つはCVの結果を改善せず、CVイベントを減少させた1つの試験では、効果は中程度で、相対リスクは9％しか減少しませんでした。 CETPの阻害がLDL受容体を介したコレステロール逆輸送の遮断を引き起こすため、このアプローチは批判されてきました。
内皮リパーゼ（ＥＬ）は、トリグリセリドリパーゼファミリーのメンバーとして同定されている循環ホスホリパーゼである。 ELは、ホスホリパーゼとトリグリセリドリパーゼの両方の活性を持ち、高密度リポタンパク質（HDL）を他のリポタンパク質よりも効率的に加水分解します。血漿HDLコレステロール（HDL-C）レベルの調節に重要な役割を果たすと考えられています。 ELはHDLリン脂質を加水分解することにより、HDL粒子の不安定化と腎臓による急速なクリアランスを引き起こします。
血漿ＥＬ濃度の増加は、血漿トリグリセリドおよびアポリポタンパク質Ｂ濃度の上昇、ならびにより小さな低密度リポタンパク質粒子サイズとともに、リポタンパク質－脂質プロファイルの悪化と関連している。 （Paradis et al。、Can J Cardiol 22：31B-34B（2006））。炎症性サイトカイン濃度の上昇とメタボリックシンドロームの有病率の上昇も、血漿EL濃度が上昇した個人で観察されています。 （同上）これらおよびその他の要因を考慮すると、ELは心血管疾患において重要な役割を果たすと考えられてきました。 （Id。）
高力価スタチンなどの心血管疾患に対する現在の治療法の有効性にもかかわらず、急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する患者における主要な心血管（ＣＶ）有害事象の有意な残存リスクが依然として存在する。心筋梗塞（MI）の大部分は、正常な低密度リポタンパク質（LDL）レベルの患者で発生し、高用量で非常に強力なスタチン、PCSK9阻害剤、および/またはMI後のエゼチミブによる治療にもかかわらず、2回目のCVの残存リスクイベントは高いままです。たとえば、IMPROVE-IT研究（エゼチミブ+スタチン）では、7年間の追跡調査でCVイベントのリスクが33％でした。さらに、ODYSSEY（PCSK9阻害剤+スタチン）には、2。8年間で9.5％の残存リスクがあります。
ＨＤＬ -Ｃレベルは、アテローム性動脈硬化症のＣＶイベントおよび冠状動脈性心臓病（ＣＨＤ）の危険因子の予測因子として同定されている。また、HDLの粒子サイズと粒子数がHDLおよび関連疾患の有用な臨床マーカーである可能性があるという仮説も立てられています。
HDLレベルを薬理学的に上昇させるいくつかの試みが、異なる作用機序を使用して試みられてきた。特に、コレステロール伝達タンパク質（CETP）阻害剤の4つの試験が完了しました。 CETP阻害剤はHDLコレステロールを上昇させますが、4つの試験のうち3つはCVの結果を改善せず、CVイベントを減少させた1つの試験では、効果は中程度で、相対リスクは9％しか減少しませんでした。 CETPの阻害がLDL受容体を介したコレステロール逆輸送の遮断を引き起こすため、このアプローチは批判されてきました。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0003】
ＥＬをコードする遺伝子に部分的および完全な機能喪失変異を有するヒトは、ＨＤＬ-Ｃの上昇、コレステロール流出能力（ＣＥＣ）の増加、およびＣＶリスクの低下の傾向を示す。したがって、ELの中和は有望な治療メカニズムを表しています。しかし、現在、ELを標的とする、またはCVリスクを十分に低減する承認された治療法はありません。したがって、疾患および障害、例えば、ＣＶ疾患および障害を効果的に治療するために、抗ＥＬ抗体およびその抗体フラグメントを使用する方法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【0004】
3.まとめ
本明細書で提供されるのは、対象における心血管疾患を治療する方法である。特定の態様では、この方法は、ヒト内皮リパーゼ（ＥＬ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの約１００ｍｇから約３５０ｍｇを対象に投与することを含む。
本明細書で提供されるのは、対象におけるアテローム性動脈硬化症を軽減する方法である。特定の態様では、この方法は、ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの約１００ｍｇから約３５０ｍｇを対象に投与することを含む。
本明細書で提供されるのは、対象における心血管疾患を治療するか、またはアテローム性動脈硬化症を軽減する方法である。特定の局面において、この方法は、ELに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、以下を含む：（a）高密度リポタンパク質コレステロール（HDL- C）主題で; （b）被験者の高密度リポタンパク質（HDL）粒子数を増加させます。 （c）被験者のHDL粒子サイズを増加させます。 （d）被験者のHDLリン脂質を増加させます。 （e）被験者のApoA1を増加させます。および/または（f）対象のコレステロール流出能力（CEC）を増加させる。特定の局面において、投与は、以前の急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する対象における心血管死、非致死的心筋梗塞（ＭＩ）、非致死的脳卒中、および／または冠状動脈血行再建術のリスクを低減する。特定の局面において、対象における二次的な心血管イベントを予防する投与。特定の局面において、投与は、対象における主要な心血管有害事象（MACE）のリスクを低減する。
本明細書で提供されるのは、以前の急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する対象における心血管死、非致死的心筋梗塞（ＭＩ）、非致死的脳卒中、および／または冠状動脈血行再建術のリスクを低減する方法である。特定の態様では、この方法は、ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。
本明細書で提供されるのは、対象における二次的な心血管イベントを予防する方法である。特定の態様では、この方法は、ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。
本明細書で提供されるのは、対象における主要な心血管有害事象（ＭＡＣＥ）のリスクを低減する方法である。特定の態様では、この方法は、ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、以下のことを行う。（ａ）対象における高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）を増加させる。 （b）被験者の高密度リポタンパク質（HDL）粒子数を増加させます。 （c）被験者のHDL粒子サイズを増加させます。 （d）被験者のHDLリン脂質を増加させます。 （e）被験者のApoA1を増加させます。および/または（f）対象のコレステロール流出能力（CEC）を増加させる。
本明細書で提供されるのは、対象において、HDL-C、HDL粒子数、HDL粒子サイズ、HDLリン脂質、ApoA1、および/またはCECを増加させる方法である。特定の態様では、この方法は、ＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。
本開示の特定の態様は、約１００ｍｇから約３５０ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。本開示の特定の態様は、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１８０を投与することを含む。 mg、約190mg、約200mg、約210mg、約220mg、約225mg、約230mg、約240mg、約250mg、約260mg、約270mg、約275mg、約280mg、約290mg、約300mg、約310mg、約320mg、約325mg、約330mg、約340mg、または約350mgの抗体またはその抗原結合フラグメント。本開示の特定の態様は、約１２５ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。本開示の特定の態様は、１２５ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。本開示の特定の態様は、約２５０ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。本開示の特定の態様は、２５０ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。本開示の特定の態様は、約２００ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。本開示の特定の態様は、２００～２５０ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、月に１回投与される。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも３ヶ月間、月に１回投与される。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、月に１回、少なくとも１２ヶ月または少なくとも２４ヶ月間投与される。
本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、非経口的に投与される。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは皮下投与される。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、付属のプレフィルドシリンジ（ＡＰＦＳ）または自動注射器を介して投与される。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象のＥＬを３０日間阻害する。
本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDL-Cを少なくとも30％増加させる。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDL-Cを少なくとも35％増加させる。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDL-Cを少なくとも40％増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から３０日以内に対象のＨＤＬ－Ｃを増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に対象のＨＤＬ－Ｃを増加させる。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるＡｐｏＡ１を少なくとも３０％増加させる。本開示の特定の態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるＡｐｏＡ１を少なくとも３５％増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から３０日以内に対象のＡｐｏＡ１を増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に対象のＡｐｏＡ１を増加させる。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象における非ＡＢＣＡ１コレステロール流出能力を少なくとも３０％増加させる。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象における非ＡＢＣＡ１コレステロール流出能力を少なくとも３５％増加させる。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与の３０日以内に対象における非ＡＢＣＡ１コレステロール流出能力を増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に、対象における非ＡＢＣＡ１コレステロール流出能力を増加させる。
本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDL粒子数を少なくとも5％増加させる（例えば、NMRを使用して測定される場合）。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDL粒子数を少なくとも8％増加させる（例えば、NMRを使用して測定される場合）。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から３０日以内に対象のＨＤＬ粒子数を増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に対象のＨＤＬ粒子数を増加させる。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるＨＤＬ粒子サイズを少なくとも３％増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象のＨＤＬ粒子サイズを少なくとも５％増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から３０日以内に対象のＨＤＬ粒子サイズを増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に対象のＨＤＬ粒子サイズを増加させる。
本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDLリン脂質を少なくとも50％増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から３０日以内に対象のＨＤＬリン脂質を増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に対象のＨＤＬリン脂質を増加させる。
本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象における血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）レベルを少なくとも１００％または少なくとも２５０％増加させる。本開示の特定の態様では、増加した血漿ＰＩレベルは、増加したＰＩ（１４：２／２０：０）、ＰＩ（１４：２／２２：０）、ＰＩ（１４：２／２２：１）、ＰＩ（ 14：2/22：2）、PI（16：0/16：1）、PI（16：0/18：0）、PI（16：0/18：2）、PI（16：0/20： 2）、PI（16：0/20：3）、PI（16：0/20：4）、PI（16：0/22：4）、PI（16：1/18：0）、PI（16 ：1/18：1）、PI（18：0/18：0）、PI（18：0/18：1）、PI（18：0/18：2）、PI（18：0/18：3 ）、PI（18：0/20：2）、PI（18：0/20：3）、PI（18：0/20：4）、PI（18：0/22：4）、PI（18： 0/22：5）、PI（18：0/22：6）、PI（18：1/16：0）、PI（18：1/18：1）、PI（18：1/18：2）、PI（18：1/20：2）、PI（18：1/20：3）、PI（18：1/20：4）、および/またはPI（18：2/18：2）レベル。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に対象の血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）レベルを増加させる。
本開示の特定の態様では、対象は心血管疾患を患っている。本開示の特定の態様では、心血管疾患は、冠状動脈疾患、冠状動脈心臓疾患（ＣＨＤ）、慢性動脈疾患、脳血管疾患、アテローム性動脈硬化性心血管疾患、または末梢動脈疾患である。
本開示の特定の態様では、対象は、安定した冠状動脈疾患または安定した冠状動脈性心臓病を患っている。本開示の特定の態様では、対象は以前に急性冠症候群（ＡＣＳ）を患っている。
本開示の特定の態様では、対象はスタチン療法を受けている。本開示の特定の態様では、対象はスタチン療法を受けていない。
本開示の特定の態様では、対象は、投与前にトリグリセリドレベルが５００ｍｇ ／ ｄＬ以下である。本開示の特定の態様では、対象は、投与前にＬＤＬ－Ｃ≦１００ｍｇ ／ ｄＬを有する。
本開示の特定の態様では、対象はヒトである。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＥＬ活性を中和する。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、エフェクター機能が低下している。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有さない。本開示の特定の局面において、抗体は、補体依存性細胞毒性（CDC）活性を有さない。
本開示の特定の態様では、抗体はカニクイザルＥＬに結合する。
本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよびアミノ酸を含むＶＬを含む抗体のＥＬへの結合を競合的に阻害する。配列番号8に記載の配列。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよびアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と同じＥＬのエピトープに結合する。配列番号8に記載されている。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびMEDI5884の配列の軽鎖可変領域（VL）CDR3。本開示の特定の態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲ、またはＡｂＭ定義のＣＤＲである。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含む。配列番号３のアミノ酸配列を含む、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、およびアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む配列番号6の。
本開示の特定の態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび／または配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。 NO：8。
本開示の特定の態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ重鎖定常領域を含む。本開示の特定の態様では、ＩｇＧ重鎖定常領域は、ＩｇＧ４重鎖定常領域である。本開示の特定の態様では、ＩｇＧ４重鎖定常領域は、ＩｇＧ４Ｐ重鎖定常領域である。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、カッパ軽鎖定常領域を含む。
本開示の特定の態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、重鎖定常領域および／または軽鎖定常領域を含む。本開示の特定の態様において、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ４Ｐ重鎖定常領域であり、および／または軽鎖定常領域は、ヒトＩｇＧκ軽鎖定常領域である。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。
本開示の特定の態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域および／またはアミノ酸を含む軽鎖定常領域を含む。配列番号13に記載の配列。
本開示の特定の態様において、抗体は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、全長抗体である。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗原結合フラグメントである。本開示の特定の態様では、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、二硫化物結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、 F（ab'）3、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、（scFv）2、またはscFv-Fc。
本明細書で提供されるのは、対象における心血管疾患を治療する方法である。特定の局面において、この方法は、250mgの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に1回皮下投与することを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、アミノ酸配列セットを含むVHを含む。配列番号７に記載の第４のアミノ酸配列および配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ。特定の態様では、この方法は、約２００ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に１回皮下投与することを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトＥＬに特異的に結合し、アミノ酸配列を含むＶＨを含む。配列番号７に示される、および配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ。特定の局面において、この方法は、200～250mgの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に1回皮下投与することを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、アミノ酸を含むVHを含む。配列番号７に示される配列および配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ。本明細書で提供されるのは、以前の急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する対象における心血管死、非致死的心筋梗塞（ＭＩ）、非致死的脳卒中、および／または冠状動脈血行再建術のリスクを低減する方法である。特定の局面において、この方法は、250mgの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に1回皮下投与することを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、アミノ酸配列セットを含むVHを含む。配列番号７に記載の第４のアミノ酸配列および配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ。特定の態様では、この方法は、約２００ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に１回皮下投与することを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトＥＬに特異的に結合し、アミノ酸配列を含むＶＨを含む。配列番号７に示される、および配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ。特定の局面において、この方法は、200～250mgの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に1回皮下投与することを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、アミノ酸を含むVHを含む。配列番号７に示される配列および配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ。
本開示の特定の態様において、抗体は、配列番号９に示される重鎖定常領域アミノ酸配列および配列番号１０に示される軽鎖定常領域アミノ酸配列を含む。
本開示の特定の態様では、この方法は、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）の阻害剤を投与することをさらに含む。特定の態様では、ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの投与と、ＰＣＳＫ９の阻害剤の投与は同時に行われる。特定の態様では、ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントおよびＰＣＳＫ９の阻害剤は、別個の医薬組成物で投与される。特定の局面において、ヒトELに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの投与およびPCSK9の阻害剤の投与は連続的である。
ＰＣＳＫ９の阻害剤は、抗ＰＣＳＫ９抗体またはその抗原結合フラグメントである。特定の態様では、ＰＣＳＫ９の阻害剤は、ＨＳ９、エボロクマブ、アリロクマブ、またはボコシズマブである。
本明細書で提供されるのは、対象における心血管疾患を治療する方法である。特定の態様では、この方法は、ヒト内皮リパーゼ（ＥＬ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの約１００ｍｇから約３５０ｍｇを対象に投与することを含む。
本明細書で提供されるのは、対象におけるアテローム性動脈硬化症を軽減する方法である。特定の態様では、この方法は、ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの約１００ｍｇから約３５０ｍｇを対象に投与することを含む。
本明細書で提供されるのは、対象における心血管疾患を治療するか、またはアテローム性動脈硬化症を軽減する方法である。特定の局面において、この方法は、ELに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、以下を含む：（a）高密度リポタンパク質コレステロール（HDL- C）主題で; （b）被験者の高密度リポタンパク質（HDL）粒子数を増加させます。 （c）被験者のHDL粒子サイズを増加させます。 （d）被験者のHDLリン脂質を増加させます。 （e）被験者のApoA1を増加させます。および/または（f）対象のコレステロール流出能力（CEC）を増加させる。特定の局面において、投与は、以前の急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する対象における心血管死、非致死的心筋梗塞（ＭＩ）、非致死的脳卒中、および／または冠状動脈血行再建術のリスクを低減する。特定の局面において、対象における二次的な心血管イベントを予防する投与。特定の局面において、投与は、対象における主要な心血管有害事象（MACE）のリスクを低減する。
本明細書で提供されるのは、以前の急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する対象における心血管死、非致死的心筋梗塞（ＭＩ）、非致死的脳卒中、および／または冠状動脈血行再建術のリスクを低減する方法である。特定の態様では、この方法は、ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。
本明細書で提供されるのは、対象における二次的な心血管イベントを予防する方法である。特定の態様では、この方法は、ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。
本明細書で提供されるのは、対象における主要な心血管有害事象（ＭＡＣＥ）のリスクを低減する方法である。特定の態様では、この方法は、ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、以下のことを行う。（ａ）対象における高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）を増加させる。 （b）被験者の高密度リポタンパク質（HDL）粒子数を増加させます。 （c）被験者のHDL粒子サイズを増加させます。 （d）被験者のHDLリン脂質を増加させます。 （e）被験者のApoA1を増加させます。および/または（f）対象のコレステロール流出能力（CEC）を増加させる。
本明細書で提供されるのは、対象において、HDL-C、HDL粒子数、HDL粒子サイズ、HDLリン脂質、ApoA1、および/またはCECを増加させる方法である。特定の態様では、この方法は、ＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。
本開示の特定の態様は、約１００ｍｇから約３５０ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。本開示の特定の態様は、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１８０を投与することを含む。 mg、約190mg、約200mg、約210mg、約220mg、約225mg、約230mg、約240mg、約250mg、約260mg、約270mg、約275mg、約280mg、約290mg、約300mg、約310mg、約320mg、約325mg、約330mg、約340mg、または約350mgの抗体またはその抗原結合フラグメント。本開示の特定の態様は、約１２５ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。本開示の特定の態様は、１２５ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。本開示の特定の態様は、約２５０ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。本開示の特定の態様は、２５０ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。本開示の特定の態様は、約２００ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。本開示の特定の態様は、２００～２５０ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、月に１回投与される。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも３ヶ月間、月に１回投与される。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、月に１回、少なくとも１２ヶ月または少なくとも２４ヶ月間投与される。
本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、非経口的に投与される。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは皮下投与される。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、付属のプレフィルドシリンジ（ＡＰＦＳ）または自動注射器を介して投与される。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象のＥＬを３０日間阻害する。
本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDL-Cを少なくとも30％増加させる。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDL-Cを少なくとも35％増加させる。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDL-Cを少なくとも40％増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から３０日以内に対象のＨＤＬ－Ｃを増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に対象のＨＤＬ－Ｃを増加させる。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるＡｐｏＡ１を少なくとも３０％増加させる。本開示の特定の態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるＡｐｏＡ１を少なくとも３５％増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から３０日以内に対象のＡｐｏＡ１を増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に対象のＡｐｏＡ１を増加させる。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象における非ＡＢＣＡ１コレステロール流出能力を少なくとも３０％増加させる。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象における非ＡＢＣＡ１コレステロール流出能力を少なくとも３５％増加させる。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与の３０日以内に対象における非ＡＢＣＡ１コレステロール流出能力を増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に、対象における非ＡＢＣＡ１コレステロール流出能力を増加させる。
本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDL粒子数を少なくとも5％増加させる（例えば、NMRを使用して測定される場合）。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDL粒子数を少なくとも8％増加させる（例えば、NMRを使用して測定される場合）。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から３０日以内に対象のＨＤＬ粒子数を増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に対象のＨＤＬ粒子数を増加させる。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるＨＤＬ粒子サイズを少なくとも３％増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象のＨＤＬ粒子サイズを少なくとも５％増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から３０日以内に対象のＨＤＬ粒子サイズを増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に対象のＨＤＬ粒子サイズを増加させる。
本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDLリン脂質を少なくとも50％増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から３０日以内に対象のＨＤＬリン脂質を増加させる。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に対象のＨＤＬリン脂質を増加させる。
本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象における血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）レベルを少なくとも１００％または少なくとも２５０％増加させる。本開示の特定の態様では、増加した血漿ＰＩレベルは、増加したＰＩ（１４：２／２０：０）、ＰＩ（１４：２／２２：０）、ＰＩ（１４：２／２２：１）、ＰＩ（ 14：2/22：2）、PI（16：0/16：1）、PI（16：0/18：0）、PI（16：0/18：2）、PI（16：0/20： 2）、PI（16：0/20：3）、PI（16：0/20：4）、PI（16：0/22：4）、PI（16：1/18：0）、PI（16 ：1/18：1）、PI（18：0/18：0）、PI（18：0/18：1）、PI（18：0/18：2）、PI（18：0/18：3 ）、PI（18：0/20：2）、PI（18：0/20：3）、PI（18：0/20：4）、PI（18：0/22：4）、PI（18： 0/22：5）、PI（18：0/22：6）、PI（18：1/16：0）、PI（18：1/18：1）、PI（18：1/18：2）、PI（18：1/20：2）、PI（18：1/20：3）、PI（18：1/20：4）、および/またはPI（18：2/18：2）レベル。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、最初の投与から９０日以内に対象の血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）レベルを増加させる。
本開示の特定の態様では、対象は心血管疾患を患っている。本開示の特定の態様では、心血管疾患は、冠状動脈疾患、冠状動脈心臓疾患（ＣＨＤ）、慢性動脈疾患、脳血管疾患、アテローム性動脈硬化性心血管疾患、または末梢動脈疾患である。
本開示の特定の態様では、対象は、安定した冠状動脈疾患または安定した冠状動脈性心臓病を患っている。本開示の特定の態様では、対象は以前に急性冠症候群（ＡＣＳ）を患っている。
本開示の特定の態様では、対象はスタチン療法を受けている。本開示の特定の態様では、対象はスタチン療法を受けていない。
本開示の特定の態様では、対象は、投与前にトリグリセリドレベルが５００ｍｇ ／ ｄＬ以下である。本開示の特定の態様では、対象は、投与前にＬＤＬ－Ｃ≦１００ｍｇ ／ ｄＬを有する。
本開示の特定の態様では、対象はヒトである。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＥＬ活性を中和する。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、エフェクター機能が低下している。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有さない。本開示の特定の局面において、抗体は、補体依存性細胞毒性（CDC）活性を有さない。
本開示の特定の態様では、抗体はカニクイザルＥＬに結合する。
本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよびアミノ酸を含むＶＬを含む抗体のＥＬへの結合を競合的に阻害する。配列番号8に記載の配列。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよびアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と同じＥＬのエピトープに結合する。配列番号8に記載されている。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびMEDI5884の配列の軽鎖可変領域（VL）CDR3。本開示の特定の態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲ、またはＡｂＭ定義のＣＤＲである。本開示の特定の局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含む。配列番号３のアミノ酸配列を含む、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、およびアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む配列番号6の。
本開示の特定の態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび／または配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。 NO：8。
本開示の特定の態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ重鎖定常領域を含む。本開示の特定の態様では、ＩｇＧ重鎖定常領域は、ＩｇＧ４重鎖定常領域である。本開示の特定の態様では、ＩｇＧ４重鎖定常領域は、ＩｇＧ４Ｐ重鎖定常領域である。本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、カッパ軽鎖定常領域を含む。
本開示の特定の態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、重鎖定常領域および／または軽鎖定常領域を含む。本開示の特定の態様において、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ４Ｐ重鎖定常領域であり、および／または軽鎖定常領域は、ヒトＩｇＧκ軽鎖定常領域である。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。
本開示の特定の態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域および／またはアミノ酸を含む軽鎖定常領域を含む。配列番号13に記載の配列。
本開示の特定の態様において、抗体は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、全長抗体である。
本開示の特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗原結合フラグメントである。本開示の特定の態様では、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、二硫化物結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、 F（ab'）3、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、（scFv）2、またはscFv-Fc。
本明細書で提供されるのは、対象における心血管疾患を治療する方法である。特定の局面において、この方法は、250mgの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に1回皮下投与することを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、アミノ酸配列セットを含むVHを含む。配列番号７に記載の第４のアミノ酸配列および配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ。特定の態様では、この方法は、約２００ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に１回皮下投与することを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトＥＬに特異的に結合し、アミノ酸配列を含むＶＨを含む。配列番号７に示される、および配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ。特定の局面において、この方法は、200～250mgの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に1回皮下投与することを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、アミノ酸を含むVHを含む。配列番号７に示される配列および配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ。本明細書で提供されるのは、以前の急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する対象における心血管死、非致死的心筋梗塞（ＭＩ）、非致死的脳卒中、および／または冠状動脈血行再建術のリスクを低減する方法である。特定の局面において、この方法は、250mgの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に1回皮下投与することを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、アミノ酸配列セットを含むVHを含む。配列番号７に記載の第４のアミノ酸配列および配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ。特定の態様では、この方法は、約２００ｍｇの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に１回皮下投与することを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトＥＬに特異的に結合し、アミノ酸配列を含むＶＨを含む。配列番号７に示される、および配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ。特定の局面において、この方法は、200～250mgの抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に月に1回皮下投与することを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、アミノ酸を含むVHを含む。配列番号７に示される配列および配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ。
本開示の特定の態様において、抗体は、配列番号９に示される重鎖定常領域アミノ酸配列および配列番号１０に示される軽鎖定常領域アミノ酸配列を含む。
本開示の特定の態様では、この方法は、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）の阻害剤を投与することをさらに含む。特定の態様では、ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの投与と、ＰＣＳＫ９の阻害剤の投与は同時に行われる。特定の態様では、ヒトＥＬに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントおよびＰＣＳＫ９の阻害剤は、別個の医薬組成物で投与される。特定の局面において、ヒトELに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの投与およびPCSK9の阻害剤の投与は連続的である。
ＰＣＳＫ９の阻害剤は、抗ＰＣＳＫ９抗体またはその抗原結合フラグメントである。特定の態様では、ＰＣＳＫ９の阻害剤は、ＨＳ９、エボロクマブ、アリロクマブ、またはボコシズマブである。
【図面の簡単な説明】
【0005】
4.図の簡単な説明
【図1A】1Aは、MEDI5584への曝露の用量依存的な増加を示しています。 （例4および5を参照してください。）
【図7】図７は、ＭＥＤＩ５８８４の薬物動態（ＰＫ）および薬力学的（ＰＤ）モデリングを示している。 CLd=コンパートメント間クリアランス; CL=見かけの全身クリアランス; conc=濃度; dHDL（t）/dt=時間の経過に伴うHDLの変化。 HDL=高密度リポタンパク質コレステロール; HDL（t）=時間tでのHDLレベル。 IC50 =最大効果の50％に達する濃度（Kmと同時に推定）。 IH=MEDI5884による阻害効果。 Imax=最大抑制効果; Ka=吸収率; Kin=HDL産生率; Km = Vmaxの50％に達する濃度。 Kout=HDL除去率; SC=皮下; Vmax=用量依存の非線形クリアランスの最大寄与。 （例5を参照してください。）
【図10】図１０は、カニクイザルのＬＤＬ－ＣおよびＨＤＬ－Ｃレベルに対するＥＬおよびＰＣＳＫ９の複合阻害の効果を示している。データは、ベースライン（0日目）の測定値からの平均変化+/-SEMとして表されます。平均ベースライン値（n = 16）が各プロットに示されています。 （例6を参照してください。）
【図11】図１１は、カニクイザルのＡｐｏＢおよびＡｐｏＡ１レベルに対するＥＬおよびＰＣＳＫ９の複合阻害の効果を示している。データは、ベースライン（0日目）の測定値からの平均変化+/-SEMとして表されます。平均ベースライン値（n = 16）が各プロットに示されています。 （例6を参照してください。）
【図13A】図１３Ａ～Ｃは、健康な患者および冠状動脈疾患（ＣＡＤ）患者における単一上昇用量（ＳＡＤ）および複数上昇用量（ＭＡＤ）を用いた試験における選択された用量に対する血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）種の時間経過および用量反応を示す。 （例7を参照してください。）
【図13B】図１３Ａ～Ｃは、健康な患者および冠状動脈疾患（ＣＡＤ）患者における単一上昇用量（ＳＡＤ）および複数上昇用量（ＭＡＤ）を用いた試験における選択された用量に対する血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）種の時間経過および用量反応を示す。 （例7を参照してください。）
【図13C】図１３Ａ～Ｃは、健康な患者および冠状動脈疾患（ＣＡＤ）患者における単一上昇用量（ＳＡＤ）および複数上昇用量（ＭＡＤ）を用いた試験における選択された用量に対する血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）種の時間経過および用量反応を示す。 （例7を参照してください。）
【図14A】図１４Ａ～Ｃは、健康な患者および冠状動脈疾患（ＣＡＤ）患者における単一上昇用量（ＳＡＤ）および複数上昇用量（ＭＡＤ）を用いた試験におけるすべての用量についての血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）種の時間経過および用量反応を示す。 （例7を参照してください。）
【図14B】図１４Ａ～Ｃは、健康な患者および冠状動脈疾患（ＣＡＤ）患者における単一上昇用量（ＳＡＤ）および複数上昇用量（ＭＡＤ）を用いた試験におけるすべての用量についての血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）種の時間経過および用量反応を示す。 （例7を参照してください。）
【図14C】図１４Ａ～Ｃは、健康な患者および冠状動脈疾患（ＣＡＤ）患者における単一上昇用量（ＳＡＤ）および複数上昇用量（ＭＡＤ）を用いた試験におけるすべての用量についての血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）種の時間経過および用量反応を示す。 （例7を参照してください。）
【図16】図16は、健康なボランティアおよび冠状動脈疾患（CAD）患者の血漿ホスファチジルイノシトール（PI）種に対するMEDI5884の効果をすべての日で示しています。 （例7を参照してください。）
【図17A】図１７Ａ～Ｅは、様々な用量のＭＥＤＩ５８８４またはプラセボで治療された冠状動脈疾患（ＣＡＤ）患者における様々な血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）種のベースラインからの変化率を示す。 （例7を参照してください。）
【図17B】図１７Ａ～Ｅは、様々な用量のＭＥＤＩ５８８４またはプラセボで治療された冠状動脈疾患（ＣＡＤ）患者における様々な血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）種のベースラインからの変化率を示す。 （例7を参照してください。）
【図17C】図１７Ａ～Ｅは、様々な用量のＭＥＤＩ５８８４またはプラセボで治療された冠状動脈疾患（ＣＡＤ）患者における様々な血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）種のベースラインからの変化率を示す。 （例7を参照してください。）
【発明を実施するための形態】
【0006】
5.詳細な説明
本明細書で提供されるのは、内皮リパーゼ（ＥＬ、例えば、ヒトＥＬ）に特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体）およびその抗原結合フラグメントを投与する方法である。抗ＥＬ抗体およびその抗原結合フラグメントは、例えば、対象の心血管疾患を治療するために投与することができる。抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントは、高密度リポタンパク質コレステロール（HDL-C）を増加させ、HDL粒子数を増加させ、HDL粒子サイズを増加させ、HDLリン脂質を増加させ、ApoA1を増加させ、および/またはコレステロール流出能力を増加させることができます。主題。本開示のいくつかの局面において、約１００ｍｇから約３５０ｍｇ（例えば、約２５０ｍｇ）の抗体またはその抗原結合フラグメントが、例えば、投与が約毎月１回行われる（ＱＭ）対象に投与される。 ）。
5.1用語
本明細書で使用される場合、「内皮リパーゼ」または「ＥＬ」という用語は、天然のＥＬポリペプチドおよびＥＬポリペプチドのアイソフォームを含むがこれらに限定されない哺乳動物のＥＬポリペプチドを指す。 「ＥＬ」は、完全長の未処理のＥＬポリペプチド、ならびに細胞内での処理から生じるＥＬポリペプチドの形態を包含する。本明細書で使用される場合、「ヒトＥＬ」という用語は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。 「ＥＬポリヌクレオチド」、「ＥＬヌクレオチド」、または「ＥＬ核酸」は、ＥＬをコードするポリヌクレオチドを指す。
抗体」という用語は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または前述の組み合わせなどの標的を認識し、標的内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。免疫グロブリン分子の可変領域。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、抗体が所望の生物学的活性を示す限り、インタクトなポリクローン抗体、インタクトなモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体を含む融合タンパク質、および任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、免疫グロブリンの5つの主要なクラス、IgA、IgD、IgE、IgG、IgM、またはそのサブクラス（アイソタイプ）（IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2など）のいずれかになります。それらの重鎖定常ドメインは、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれます。免疫グロブリンの異なるクラスは、異なるよく知られたサブユニット構造と三次元構成を持っています。抗体は裸であるか、毒素、放射性同位元素などの他の分子に結合している可能性があります。
「抗体フラグメント」という用語は、無傷の抗体の一部を指す。「抗原結合フラグメント」、「抗原結合ドメイン」、または「抗原結合領域」は、抗原に結合する無傷の抗体の一部を指す。抗原結合フラグメントは、インタクトな抗体の抗原認識部位（例えば、抗原に特異的に結合するのに十分な相補性決定領域（CDR））を含むことができる。抗体の抗原結合フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ ' 、Ｆ（ａｂ'）２、およびＦｖフラグメント、線状抗体、および単鎖抗体が含まれるが、これらに限定されない。抗体の抗原結合フラグメントは、齧歯動物（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）およびヒトなどの任意の動物種に由来するか、または人工的に産生することができる。
「抗ＥＬ抗体」、「ＥＬ抗体」および「ＥＬに結合する抗体」という用語は、抗体が診断および／または診断薬として有用であるように、十分な親和性でＥＬに特異的に結合することができる抗体を指す。 ELを標的とする治療薬。本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、および「特異的に認識する」という用語は、抗体またはその抗原結合フラグメントの文脈における類似の用語である。これらの用語は、抗体またはその抗原結合フラグメントがその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、および結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間のある程度の相補性を伴うことを示す。したがって、ヒトＥＬに「特異的に結合する」抗体（配列番号１１）はまた、他の種（例えば、カニクイザル）からのＥＬおよび／または他のヒト対立遺伝子から産生されるＥＬタンパク質に結合することができるが、無関係の非ELタンパク質（例えば、肝リパーゼまたはリポタンパク質リパーゼなどの他のリパーゼ）は、例えば、インビトロ中和アッセイによって測定されるように、ELへの抗体の結合の約10％未満である。
モノクローナル」抗体またはその抗原結合フラグメントは、単一の抗原決定基またはエピトープの高度に特異的な結合に関与する均一な抗体または抗原結合フラグメント集団を指す。これは、通常、異なる抗原決定基に対して向けられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的です。 「モノクローナル」抗体またはその抗原結合フラグメントという用語は、インタクトなおよび完全長のモノクローナル抗体、ならびに抗体フラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）変異体の両方を包含する。 、抗体部分を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む他の任意の修飾免疫グロブリン分子。さらに、「モノクローナル」抗体またはその抗原結合フラグメントは、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、および遺伝子改変動物を含むがこれらに限定されない任意の数の方法で作製されたそのような抗体およびその抗原結合フラグメントを指す。
本明細書で使用される場合、「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は交換可能に使用され、当技術分野で一般的である。可変領域は、典型的には、抗体の一部、一般に、軽鎖または重鎖の一部、典型的には、成熟重鎖のアミノ末端約１１０から１２０アミノ酸または１１０から１２５アミノ酸、および約９０から１１５を指す。成熟した軽鎖のアミノ酸。抗体間で配列が異なり、特定の抗原に対する特定の抗体の結合と特異性に使用されます。シーケンスの変動性は、相補性決定領域（CDR）と呼ばれる領域に集中し、可変ドメイン内のより高度に保存された領域はフレームワーク領域（FR）と呼ばれます。特定のメカニズムまたは理論に拘束されることを望まないが、軽鎖および重鎖のCDRは、抗体と抗原との相互作用および特異性に主に関与していると考えられている。本開示のいくつかの態様では、可変領域はヒト可変領域である。本開示のいくつかの態様では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲおよびヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。本開示の特定の態様では、可変領域は霊長目（例えば、非ヒト霊長目）可変領域である。本開示のいくつかの態様では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲおよび霊長目（例えば、非ヒト霊長目）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
ＶＬ 」および「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すために交換可能に使用される。
ＶＨ 」および「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すために交換可能に使用される。
「カバットナンバリング」という用語および同様の用語は、当技術分野で認識されており、抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸残基にナンバリングするシステムを指す。いくつかの局面において、CDRは、Kabatナンバリングシステムに従って決定することができる（例えば、Kabat EA＆Wu TT（1971）Ann NY Acad Sci 190：382-391およびKabat EA et al。、（1991）Sequences of Proteins of Immunological Interest、Fifth Edition、US Department of Health and Human Services、NIH Publication No.91-3242）。 Kabatナンバリングシステムを使用すると、抗体重鎖分子内のCDRは通常、アミノ酸位置31～35に存在し、35に続く1つまたは2つの追加アミノ酸をオプションで含めることができます（Kabatナンバリングスキームでは35Aおよび35Bと呼ばれます）。 （CDR1）、アミノ酸位置50～65（CDR2）、およびアミノ酸位置95～102（CDR3）。 Kabatナンバリングシステムを使用すると、抗体軽鎖分子内のCDRは、通常、アミノ酸位置24～34（CDR1）、アミノ酸位置50～56（CDR2）、およびアミノ酸位置89～97（CDR3）に存在します。本開示のいくつかの態様では、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームに従って決定されている。
チョチアは、構造ループの位置を指す（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１９１７（１９８７））。 Kabatの番号付け規則を使用して番号を付けた場合のChothiaCDR-H1ループの終了は、ループの長さに応じてH32とH34の間で異なります（これは、Kabatの番号付けスキームが挿入をH35AとH35Bに配置するためです。存在する場合、ループは32で終了します。35Aのみが存在する場合、ループは33で終了します。35Aと35Bの両方が存在する場合、ループは34で終了します。 AbM超可変領域は、Kabat CDRとChothia構造ループの間の妥協点を表しており、OxfordMolecularのAbM抗体モデリングソフトウェアによって使用されます。
本明細書で使用される場合、「一定領域」および「一定ドメイン」という用語は交換可能であり、当技術分野でそれらの共通の意味を有する。定常領域は、抗体部分、例えば、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、Fc受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示すことができる軽鎖および/または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する。
本明細書で使用される場合、抗体に関して使用される場合の「重鎖」という用語は、任意の別個のタイプ、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびmu（μ）、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいており、IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMクラスの抗体をそれぞれ生成します。これには、IgGのサブクラス（IgG1、IgG2、IgG3、 IgG4。重鎖アミノ酸配列は当技術分野でよく知られている。本開示のいくつかの局面において、重鎖はヒト重鎖である。
本明細書で使用される場合、抗体に関して使用される場合の「軽鎖」という用語は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づく任意の別個のタイプ、例えばカッパ（κ）またはラムダ（λ）を指すことができる。軽鎖アミノ酸配列は当技術分野でよく知られている。本開示のいくつかの態様では、軽鎖はヒト軽鎖である。
ＭＥＤＩ５８８４ 」という用語は、配列番号９の重鎖および配列番号１０の軽鎖を含む抗ＥＬ抗体を指す。 MEDI5884は「S6F1-4P」とも呼ばれ、h55A1-S6抗体の重鎖可変領域とh55A1-F1抗体の軽鎖可変領域を含み、米国公開出願番号2017/に開示されています。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる０２６０２９０。
「キメラ」抗体またはその抗原結合フラグメントという用語は、アミノ酸配列が２つ以上の種に由来する抗体またはその抗原結合フラグメントを指す。典型的には、軽鎖および重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性、および能力を有する哺乳動物の１つの種（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体またはその抗原結合フラグメントの可変領域に対応する。一方、定常領域は、別の（通常はヒト）に由来する抗体またはその抗原結合フラグメントの配列と相同であり、その種で免疫応答を誘発することを回避します。
フラグメントという用語は、特定の免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、または最小限の非ヒトを含むそれらのフラグメントである非ヒト（例えば、マウス）抗体または抗原結合フラグメントの形態を指す。 （例えば、マウス）配列。典型的には、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、相補性決定領域（CDR）からの残基が、所望の特異性、親和性、および能力（「CDRグラフト化」）（Jones et al。、Nature 321：522-525（1986）; Riechmann et al。、Nature 332：323-327（1988）; Verhoeyen et al。、Science 239：1534-1536（1988））。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの特定のＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種からの抗体またはフラグメント中の対応する残基で置き換えられる。ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、Fvフレームワーク領域内および/または非ヒトCDR残基内のいずれかで追加の残基を置換して、抗体またはその抗原結合フラグメントの特異性、親和性、および/または機能。一般に、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、非ヒト免疫グロブリンに対応するCDR領域のすべてまたは実質的にすべてを含む可変ドメインを含むが、FR領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントはまた、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含み得る。ヒト化抗体を生成するために使用される方法の例は、米国特許第5,059,059号に記載されている。 5,225,539; Roguska et al。、Proc。国立Acad。 Sci。、USA、91（3）：969-973（1994）、およびRoguska et al。、ProteinEng。 9（10）：895-904（1996）。本開示のいくつかの局面において、「ヒト化抗体」は、再表面化された抗体である。
「ヒト」抗体またはその抗原結合フラグメントという用語は、ヒト免疫グロブリン遺伝子遺伝子座に由来するアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントを意味し、そのような抗体または抗原結合フラグメントは、任意の技術を使用して作製される。当技術分野で知られている。ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントのこの定義には、インタクトまたは完全長の抗体およびそのフラグメントが含まれる。
「結合親和性」は、一般に、分子の単一の結合部位（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強さを指す。 ）。特に明記しない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントと抗原）との間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子XのパートナーYに対する親和性は、一般に解離定数（KD）で表すことができます。親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）および平衡会合定数（ＫＡ）を含むがこれらに限定されない、当技術分野で知られている多くの方法で測定および／または表現することができる。 KDはkoff/konの商から計算されますが、KAはkon/koffの商から計算されます。 ｋｏｎは、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントの抗原への会合速度定数を指し、ｋｏｆは、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントの抗原からの解離を指す。コンおよびコフは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡなどの当業者に知られている技術によって決定することができる。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は当技術分野における用語であり、抗体またはその抗原結合フラグメントが特異的に結合することができる抗原の局在化領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの隣接アミノ酸（線形または隣接エピトープ）であり得るか、またはエピトープは、例えば、ポリペプチドまたはポリペプチドの２つ以上の非隣接領域（立体配座、非線形、不連続または非隣接エピトープ）。本開示のいくつかの局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントが特異的に結合するエピトープは、例えば、NMR分光法、X線回折結晶学研究、ELISAアッセイ、質量分析と組み合わせた水素/重水素交換によって決定することができる。 （例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイベースのオリゴペプチドスキャニングアッセイ、および/または突然変異誘発マッピング（例えば、部位特異的突然変異誘発マッピング）。 X線結晶学の場合、結晶化は、当技術分野で知られている方法のいずれかを使用して達成することができる（例えば、GiegeR et al。、（1994）Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50（Pt 4）：339-350; McPherson A（1990） ）Eur J Biochem 189：1-23; Chayen NE（1997）Structure 5：1269-1274; McPherson A（1976）J Biol Chem 251：6300-6303）。その抗体/抗原結合フラグメント：抗原結晶は、よく知られているX線回折技術を使用して研究でき、X-PLOR（Yale University、1992、Molecular Simulations、Inc.が配布）などのコンピューターソフトウェアを使用して精製できます。 、Meth Enzymol（1985）ボリューム114および115、eds Wyckoff HW et al。、; US 2004/0014194）、およびBUSTER（Bricogne G（1993）Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49（Pt 1）：37-60; Bricogne G （1997）Meth Enzymol 276A：361-423、ed Carter CW; Roversi P et al。、（2000）Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56（Pt 10）：1316-1323）。突然変異誘発マッピング研究は、当業者に知られている任意の方法を使用して達成することができる。アラニンスキャニング突然変異誘発技術を含む突然変異誘発技術の説明については、例えば、Champe M et al。、（1995）J Biol Chem 270：1388-1394およびCunningham BC＆Wells JA（1989）Science 244：1081-1085を参照されたい。
参照抗体と「同じエピトープに結合する」抗体は、参照抗体と同じアミノ酸残基に結合する抗体を指す。参照抗体と同じエピトープに結合する抗体の能力は、水素/重水素交換アッセイ（Coales etal。RapidCommun。MassSpectrom。2009;23：639-647を参照）またはX線結晶学によって決定できます。
抗体は、参照抗体の所与のエピトープへの結合をある程度ブロックする程度まで、そのエピトープまたは重複するエピトープに優先的に結合する場合、そのエピトープへの参照抗体の結合を「競合的に阻害する」と言われる。エピトープ。競合阻害は、当技術分野で知られている任意の方法、例えば、競合ELISAアッセイによって決定することができる。抗体は、所与のエピトープへの参照抗体の結合を少なくとも90％、少なくとも80％、少なくとも70％、少なくとも60％、または少なくとも50％競合的に阻害すると言うことができる。
本明細書で使用される場合、「ＰＣＳＫ９の阻害剤」は、ＰＣＳＫ９とＬＤＬ受容体との相互作用を遮断する薬剤である。
「単離された」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、自然界には見られない形態のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞または組成物には、それらが自然界に見られる形態ではなくなった程度まで精製されたものが含まれる。本開示のいくつかの局面において、単離される抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、実質的に純粋である。本明細書で使用される場合、「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（すなわち、汚染物質を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９９％純粋である材料を指す。
本明細書では互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは線状または分枝状であり得、修飾されたアミノ酸を含み得、そしてそれは非アミノ酸によって中断され得る。この用語は、自然にまたは介入によって修飾されたアミノ酸ポリマーも含みます。例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分との結合などの他の操作または修飾。定義には、例えば、アミノ酸の１つまたは複数の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）を含むポリペプチド、ならびに当技術分野で知られている他の修飾も含まれる。本開示のポリペプチドは抗体に基づくので、本開示のいくつかの局面において、ポリペプチドは、一本鎖または関連する鎖として存在し得ることが理解される。
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、任意のタイプの細胞、例えば、初代細胞、培養中の細胞、または細胞株からの細胞であり得る。本開示のいくつかの局面において、「宿主細胞」という用語は、核酸分子でトランスフェクトされた細胞、およびそのような細胞の子孫または潜在的な子孫を指す。そのような細胞の子孫は、例えば、次の世代で起こり得る突然変異または環境の影響、または核酸分子の宿主細胞ゲノムへの組み込みのために、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同一ではない可能性がある。
「製剤」という用語は、有効成分の生物学的活性が有効になることを可能にするような形態であり、製剤が対象となる対象に対して容認できないほど毒性である追加の成分を含まない製剤を指す。投与されます。製剤は無菌にすることができます。
本明細書で使用される「投与する」、「投与する」、「投与」などの用語は、薬物、例えば、抗ＥＬ抗体または抗原結合の送達を可能にするために使用することができる方法を指す。生物学的作用の所望の部位へのその断片（例えば、静脈内投与）。本明細書に記載の薬剤および方法で使用できる投与技術は、例えば、GoodmanおよびGilman、The Pharmacological Basis of Therapeutics、現在の版、ペルガモンに見られる。およびRemington's、Pharmaceutical Sciences、現在の版、Mack Publishing Co.、ペンシルベニア州イーストン。
本明細書で使用される場合、「対象」および「患者」という用語は交換可能に使用される。対象は動物である可能性があります。本開示のいくつかの局面において、対象は、非ヒト動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、サルまたは他の霊長類など）などの哺乳動物である。本開示のいくつかの局面において、対象はカニクイザルである。本開示のいくつかの態様では、対象はヒトである。
本明細書で提供されるのは、内皮リパーゼ（ＥＬ、例えば、ヒトＥＬ）に特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体）およびその抗原結合フラグメントを投与する方法である。抗ＥＬ抗体およびその抗原結合フラグメントは、例えば、対象の心血管疾患を治療するために投与することができる。抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントは、高密度リポタンパク質コレステロール（HDL-C）を増加させ、HDL粒子数を増加させ、HDL粒子サイズを増加させ、HDLリン脂質を増加させ、ApoA1を増加させ、および/またはコレステロール流出能力を増加させることができます。主題。本開示のいくつかの局面において、約１００ｍｇから約３５０ｍｇ（例えば、約２５０ｍｇ）の抗体またはその抗原結合フラグメントが、例えば、投与が約毎月１回行われる（ＱＭ）対象に投与される。 ）。
5.1用語
本明細書で使用される場合、「内皮リパーゼ」または「ＥＬ」という用語は、天然のＥＬポリペプチドおよびＥＬポリペプチドのアイソフォームを含むがこれらに限定されない哺乳動物のＥＬポリペプチドを指す。 「ＥＬ」は、完全長の未処理のＥＬポリペプチド、ならびに細胞内での処理から生じるＥＬポリペプチドの形態を包含する。本明細書で使用される場合、「ヒトＥＬ」という用語は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。 「ＥＬポリヌクレオチド」、「ＥＬヌクレオチド」、または「ＥＬ核酸」は、ＥＬをコードするポリヌクレオチドを指す。
抗体」という用語は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または前述の組み合わせなどの標的を認識し、標的内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。免疫グロブリン分子の可変領域。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、抗体が所望の生物学的活性を示す限り、インタクトなポリクローン抗体、インタクトなモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体を含む融合タンパク質、および任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、免疫グロブリンの5つの主要なクラス、IgA、IgD、IgE、IgG、IgM、またはそのサブクラス（アイソタイプ）（IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2など）のいずれかになります。それらの重鎖定常ドメインは、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれます。免疫グロブリンの異なるクラスは、異なるよく知られたサブユニット構造と三次元構成を持っています。抗体は裸であるか、毒素、放射性同位元素などの他の分子に結合している可能性があります。
「抗体フラグメント」という用語は、無傷の抗体の一部を指す。「抗原結合フラグメント」、「抗原結合ドメイン」、または「抗原結合領域」は、抗原に結合する無傷の抗体の一部を指す。抗原結合フラグメントは、インタクトな抗体の抗原認識部位（例えば、抗原に特異的に結合するのに十分な相補性決定領域（CDR））を含むことができる。抗体の抗原結合フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ ' 、Ｆ（ａｂ'）２、およびＦｖフラグメント、線状抗体、および単鎖抗体が含まれるが、これらに限定されない。抗体の抗原結合フラグメントは、齧歯動物（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）およびヒトなどの任意の動物種に由来するか、または人工的に産生することができる。
「抗ＥＬ抗体」、「ＥＬ抗体」および「ＥＬに結合する抗体」という用語は、抗体が診断および／または診断薬として有用であるように、十分な親和性でＥＬに特異的に結合することができる抗体を指す。 ELを標的とする治療薬。本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、および「特異的に認識する」という用語は、抗体またはその抗原結合フラグメントの文脈における類似の用語である。これらの用語は、抗体またはその抗原結合フラグメントがその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、および結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間のある程度の相補性を伴うことを示す。したがって、ヒトＥＬに「特異的に結合する」抗体（配列番号１１）はまた、他の種（例えば、カニクイザル）からのＥＬおよび／または他のヒト対立遺伝子から産生されるＥＬタンパク質に結合することができるが、無関係の非ELタンパク質（例えば、肝リパーゼまたはリポタンパク質リパーゼなどの他のリパーゼ）は、例えば、インビトロ中和アッセイによって測定されるように、ELへの抗体の結合の約10％未満である。
モノクローナル」抗体またはその抗原結合フラグメントは、単一の抗原決定基またはエピトープの高度に特異的な結合に関与する均一な抗体または抗原結合フラグメント集団を指す。これは、通常、異なる抗原決定基に対して向けられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的です。 「モノクローナル」抗体またはその抗原結合フラグメントという用語は、インタクトなおよび完全長のモノクローナル抗体、ならびに抗体フラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）変異体の両方を包含する。 、抗体部分を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む他の任意の修飾免疫グロブリン分子。さらに、「モノクローナル」抗体またはその抗原結合フラグメントは、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、および遺伝子改変動物を含むがこれらに限定されない任意の数の方法で作製されたそのような抗体およびその抗原結合フラグメントを指す。
本明細書で使用される場合、「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は交換可能に使用され、当技術分野で一般的である。可変領域は、典型的には、抗体の一部、一般に、軽鎖または重鎖の一部、典型的には、成熟重鎖のアミノ末端約１１０から１２０アミノ酸または１１０から１２５アミノ酸、および約９０から１１５を指す。成熟した軽鎖のアミノ酸。抗体間で配列が異なり、特定の抗原に対する特定の抗体の結合と特異性に使用されます。シーケンスの変動性は、相補性決定領域（CDR）と呼ばれる領域に集中し、可変ドメイン内のより高度に保存された領域はフレームワーク領域（FR）と呼ばれます。特定のメカニズムまたは理論に拘束されることを望まないが、軽鎖および重鎖のCDRは、抗体と抗原との相互作用および特異性に主に関与していると考えられている。本開示のいくつかの態様では、可変領域はヒト可変領域である。本開示のいくつかの態様では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲおよびヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。本開示の特定の態様では、可変領域は霊長目（例えば、非ヒト霊長目）可変領域である。本開示のいくつかの態様では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲおよび霊長目（例えば、非ヒト霊長目）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
ＶＬ 」および「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すために交換可能に使用される。
ＶＨ 」および「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すために交換可能に使用される。
「カバットナンバリング」という用語および同様の用語は、当技術分野で認識されており、抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸残基にナンバリングするシステムを指す。いくつかの局面において、CDRは、Kabatナンバリングシステムに従って決定することができる（例えば、Kabat EA＆Wu TT（1971）Ann NY Acad Sci 190：382-391およびKabat EA et al。、（1991）Sequences of Proteins of Immunological Interest、Fifth Edition、US Department of Health and Human Services、NIH Publication No.91-3242）。 Kabatナンバリングシステムを使用すると、抗体重鎖分子内のCDRは通常、アミノ酸位置31～35に存在し、35に続く1つまたは2つの追加アミノ酸をオプションで含めることができます（Kabatナンバリングスキームでは35Aおよび35Bと呼ばれます）。 （CDR1）、アミノ酸位置50～65（CDR2）、およびアミノ酸位置95～102（CDR3）。 Kabatナンバリングシステムを使用すると、抗体軽鎖分子内のCDRは、通常、アミノ酸位置24～34（CDR1）、アミノ酸位置50～56（CDR2）、およびアミノ酸位置89～97（CDR3）に存在します。本開示のいくつかの態様では、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームに従って決定されている。
チョチアは、構造ループの位置を指す（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１９１７（１９８７））。 Kabatの番号付け規則を使用して番号を付けた場合のChothiaCDR-H1ループの終了は、ループの長さに応じてH32とH34の間で異なります（これは、Kabatの番号付けスキームが挿入をH35AとH35Bに配置するためです。存在する場合、ループは32で終了します。35Aのみが存在する場合、ループは33で終了します。35Aと35Bの両方が存在する場合、ループは34で終了します。 AbM超可変領域は、Kabat CDRとChothia構造ループの間の妥協点を表しており、OxfordMolecularのAbM抗体モデリングソフトウェアによって使用されます。
本明細書で使用される場合、抗体に関して使用される場合の「重鎖」という用語は、任意の別個のタイプ、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびmu（μ）、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいており、IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMクラスの抗体をそれぞれ生成します。これには、IgGのサブクラス（IgG1、IgG2、IgG3、 IgG4。重鎖アミノ酸配列は当技術分野でよく知られている。本開示のいくつかの局面において、重鎖はヒト重鎖である。
本明細書で使用される場合、抗体に関して使用される場合の「軽鎖」という用語は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づく任意の別個のタイプ、例えばカッパ（κ）またはラムダ（λ）を指すことができる。軽鎖アミノ酸配列は当技術分野でよく知られている。本開示のいくつかの態様では、軽鎖はヒト軽鎖である。
ＭＥＤＩ５８８４ 」という用語は、配列番号９の重鎖および配列番号１０の軽鎖を含む抗ＥＬ抗体を指す。 MEDI5884は「S6F1-4P」とも呼ばれ、h55A1-S6抗体の重鎖可変領域とh55A1-F1抗体の軽鎖可変領域を含み、米国公開出願番号2017/に開示されています。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる０２６０２９０。
「キメラ」抗体またはその抗原結合フラグメントという用語は、アミノ酸配列が２つ以上の種に由来する抗体またはその抗原結合フラグメントを指す。典型的には、軽鎖および重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性、および能力を有する哺乳動物の１つの種（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体またはその抗原結合フラグメントの可変領域に対応する。一方、定常領域は、別の（通常はヒト）に由来する抗体またはその抗原結合フラグメントの配列と相同であり、その種で免疫応答を誘発することを回避します。
フラグメントという用語は、特定の免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、または最小限の非ヒトを含むそれらのフラグメントである非ヒト（例えば、マウス）抗体または抗原結合フラグメントの形態を指す。 （例えば、マウス）配列。典型的には、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、相補性決定領域（CDR）からの残基が、所望の特異性、親和性、および能力（「CDRグラフト化」）（Jones et al。、Nature 321：522-525（1986）; Riechmann et al。、Nature 332：323-327（1988）; Verhoeyen et al。、Science 239：1534-1536（1988））。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの特定のＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種からの抗体またはフラグメント中の対応する残基で置き換えられる。ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、Fvフレームワーク領域内および/または非ヒトCDR残基内のいずれかで追加の残基を置換して、抗体またはその抗原結合フラグメントの特異性、親和性、および/または機能。一般に、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、非ヒト免疫グロブリンに対応するCDR領域のすべてまたは実質的にすべてを含む可変ドメインを含むが、FR領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントはまた、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含み得る。ヒト化抗体を生成するために使用される方法の例は、米国特許第5,059,059号に記載されている。 5,225,539; Roguska et al。、Proc。国立Acad。 Sci。、USA、91（3）：969-973（1994）、およびRoguska et al。、ProteinEng。 9（10）：895-904（1996）。本開示のいくつかの局面において、「ヒト化抗体」は、再表面化された抗体である。
「ヒト」抗体またはその抗原結合フラグメントという用語は、ヒト免疫グロブリン遺伝子遺伝子座に由来するアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントを意味し、そのような抗体または抗原結合フラグメントは、任意の技術を使用して作製される。当技術分野で知られている。ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントのこの定義には、インタクトまたは完全長の抗体およびそのフラグメントが含まれる。
「結合親和性」は、一般に、分子の単一の結合部位（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強さを指す。 ）。特に明記しない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントと抗原）との間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子XのパートナーYに対する親和性は、一般に解離定数（KD）で表すことができます。親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）および平衡会合定数（ＫＡ）を含むがこれらに限定されない、当技術分野で知られている多くの方法で測定および／または表現することができる。 KDはkoff/konの商から計算されますが、KAはkon/koffの商から計算されます。 ｋｏｎは、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントの抗原への会合速度定数を指し、ｋｏｆは、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントの抗原からの解離を指す。コンおよびコフは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡなどの当業者に知られている技術によって決定することができる。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は当技術分野における用語であり、抗体またはその抗原結合フラグメントが特異的に結合することができる抗原の局在化領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの隣接アミノ酸（線形または隣接エピトープ）であり得るか、またはエピトープは、例えば、ポリペプチドまたはポリペプチドの２つ以上の非隣接領域（立体配座、非線形、不連続または非隣接エピトープ）。本開示のいくつかの局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントが特異的に結合するエピトープは、例えば、NMR分光法、X線回折結晶学研究、ELISAアッセイ、質量分析と組み合わせた水素/重水素交換によって決定することができる。 （例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイベースのオリゴペプチドスキャニングアッセイ、および/または突然変異誘発マッピング（例えば、部位特異的突然変異誘発マッピング）。 X線結晶学の場合、結晶化は、当技術分野で知られている方法のいずれかを使用して達成することができる（例えば、GiegeR et al。、（1994）Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50（Pt 4）：339-350; McPherson A（1990） ）Eur J Biochem 189：1-23; Chayen NE（1997）Structure 5：1269-1274; McPherson A（1976）J Biol Chem 251：6300-6303）。その抗体/抗原結合フラグメント：抗原結晶は、よく知られているX線回折技術を使用して研究でき、X-PLOR（Yale University、1992、Molecular Simulations、Inc.が配布）などのコンピューターソフトウェアを使用して精製できます。 、Meth Enzymol（1985）ボリューム114および115、eds Wyckoff HW et al。、; US 2004/0014194）、およびBUSTER（Bricogne G（1993）Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49（Pt 1）：37-60; Bricogne G （1997）Meth Enzymol 276A：361-423、ed Carter CW; Roversi P et al。、（2000）Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56（Pt 10）：1316-1323）。突然変異誘発マッピング研究は、当業者に知られている任意の方法を使用して達成することができる。アラニンスキャニング突然変異誘発技術を含む突然変異誘発技術の説明については、例えば、Champe M et al。、（1995）J Biol Chem 270：1388-1394およびCunningham BC＆Wells JA（1989）Science 244：1081-1085を参照されたい。
参照抗体と「同じエピトープに結合する」抗体は、参照抗体と同じアミノ酸残基に結合する抗体を指す。参照抗体と同じエピトープに結合する抗体の能力は、水素/重水素交換アッセイ（Coales etal。RapidCommun。MassSpectrom。2009;23：639-647を参照）またはX線結晶学によって決定できます。
抗体は、参照抗体の所与のエピトープへの結合をある程度ブロックする程度まで、そのエピトープまたは重複するエピトープに優先的に結合する場合、そのエピトープへの参照抗体の結合を「競合的に阻害する」と言われる。エピトープ。競合阻害は、当技術分野で知られている任意の方法、例えば、競合ELISAアッセイによって決定することができる。抗体は、所与のエピトープへの参照抗体の結合を少なくとも90％、少なくとも80％、少なくとも70％、少なくとも60％、または少なくとも50％競合的に阻害すると言うことができる。
本明細書で使用される場合、「ＰＣＳＫ９の阻害剤」は、ＰＣＳＫ９とＬＤＬ受容体との相互作用を遮断する薬剤である。
「単離された」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、自然界には見られない形態のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞または組成物には、それらが自然界に見られる形態ではなくなった程度まで精製されたものが含まれる。本開示のいくつかの局面において、単離される抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、実質的に純粋である。本明細書で使用される場合、「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（すなわち、汚染物質を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９９％純粋である材料を指す。
本明細書では互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは線状または分枝状であり得、修飾されたアミノ酸を含み得、そしてそれは非アミノ酸によって中断され得る。この用語は、自然にまたは介入によって修飾されたアミノ酸ポリマーも含みます。例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分との結合などの他の操作または修飾。定義には、例えば、アミノ酸の１つまたは複数の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）を含むポリペプチド、ならびに当技術分野で知られている他の修飾も含まれる。本開示のポリペプチドは抗体に基づくので、本開示のいくつかの局面において、ポリペプチドは、一本鎖または関連する鎖として存在し得ることが理解される。
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、任意のタイプの細胞、例えば、初代細胞、培養中の細胞、または細胞株からの細胞であり得る。本開示のいくつかの局面において、「宿主細胞」という用語は、核酸分子でトランスフェクトされた細胞、およびそのような細胞の子孫または潜在的な子孫を指す。そのような細胞の子孫は、例えば、次の世代で起こり得る突然変異または環境の影響、または核酸分子の宿主細胞ゲノムへの組み込みのために、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同一ではない可能性がある。
「製剤」という用語は、有効成分の生物学的活性が有効になることを可能にするような形態であり、製剤が対象となる対象に対して容認できないほど毒性である追加の成分を含まない製剤を指す。投与されます。製剤は無菌にすることができます。
本明細書で使用される「投与する」、「投与する」、「投与」などの用語は、薬物、例えば、抗ＥＬ抗体または抗原結合の送達を可能にするために使用することができる方法を指す。生物学的作用の所望の部位へのその断片（例えば、静脈内投与）。本明細書に記載の薬剤および方法で使用できる投与技術は、例えば、GoodmanおよびGilman、The Pharmacological Basis of Therapeutics、現在の版、ペルガモンに見られる。およびRemington's、Pharmaceutical Sciences、現在の版、Mack Publishing Co.、ペンシルベニア州イーストン。
本明細書で使用される場合、「対象」および「患者」という用語は交換可能に使用される。対象は動物である可能性があります。本開示のいくつかの局面において、対象は、非ヒト動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、サルまたは他の霊長類など）などの哺乳動物である。本開示のいくつかの局面において、対象はカニクイザルである。本開示のいくつかの態様では、対象はヒトである。
【0007】
「治療有効量」という用語は、対象の疾患または障害を治療するのに有効な薬物、例えば、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの量を指す。 「治療する」、「治療する」、「治療する」、「軽減する」、および「軽減する」などの用語は、病的状態または障害の進行を治癒、減速、軽減、および／または停止させる治療手段を指す。したがって、治療が必要な人には、すでに障害があると診断された人、またはその疑いがある人が含まれます。 １つまたは複数のさらなる治療薬と「組み合わせて」投与することは、任意の順序での同時（同時）または連続投与を含む。
本開示および特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを示さない限り、複数形を含む。
本開示および特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを示さない限り、複数形を含む。
【0008】
本開示の態様が「含む」という言葉で本明細書に記載される場合はいつでも、そうでなければ「からなる」および／または「本質的になる」に関して記載される類似の態様も提供されることが理解される。
【0009】
本明細書で使用されるように、具体的に述べられているか、文脈から明らかでない限り、「または」という用語は包括的であると理解される。本明細書の「Ａおよび／またはＢ」などの句で使用される「および／または」という用語は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」、および「Ｂ」の両方を含むことを意図している。同様に、「A、B、および/またはC」などの句で使用される「および/または」という用語は、以下の各側面を包含することを意図している。 A、B、またはC; AまたはC; AまたはB; BまたはC; AとC; AとB; BおよびC; A（単独）; B（単独）;およびC（単独）。
本明細書で使用される場合、「約」および「およそ」という用語は、数値または数値範囲を変更するために使用される場合、値または範囲より５％から１０％上および５％から１０％下の偏差が残ることを示す。記載されている値または範囲の意図された意味の範囲内。
本明細書で使用される場合、「約」および「およそ」という用語は、数値または数値範囲を変更するために使用される場合、値または範囲より５％から１０％上および５％から１０％下の偏差が残ることを示す。記載されている値または範囲の意図された意味の範囲内。
【0010】
本明細書で提供される任意の組成物または方法は、本明細書で提供される他の組成物および方法のいずれか１つまたは複数と組み合わせることができる。
5.2抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントを使用した治療方法
5.2抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントを使用した治療方法
【0011】
本明細書に記載の抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたは本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要とする対象に投与する方法が本明細書に提供される。
本明細書で提供されるように、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の投与は、対象（例えば、ヒト対象）の心血管疾患を治療することができる。心血管疾患は、例えば、冠状動脈疾患、冠状動脈性心臓病、脳血管疾患、または末梢動脈疾患であり得る。
本明細書で提供されるように、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の投与は、対象（例えば、ヒト対象）の心血管疾患を治療することができる。心血管疾患は、例えば、冠状動脈疾患、冠状動脈性心臓病、脳血管疾患、または末梢動脈疾患であり得る。
【0012】
抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の投与は、対象（例えば、ヒト対象）におけるアテローム性動脈硬化症を軽減または予防することができる。
【0013】
抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の投与は、対象（例えば、ヒト対象）における二次的な心血管イベントのリスクを予防または低減することができる。
【0014】
抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の投与は、心血管死、非致死的心筋梗塞（ＭＩ）、非致死的脳卒中、冠状動脈血行再建術、またはそれらの任意の組み合わせのリスクを低減し得る。被験者（例えば、人間の被験者）で。対象は、例えば、以前に急性冠症候群（ＡＣＳ）を患っている対象であり得る。
【0015】
抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の投与は、対象（例えば、ヒト対象）における主要な心血管イベント（ＭＡＣＥ）のリスクを予防または低減することができる。
【0016】
抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の投与は、（ｉ）高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）を増加させることができる。 （ii）高密度リポタンパク質（HDL）粒子数を増やす。 （iii）HDL粒子サイズを大きくします。 （iv）HDLリン脂質を増やす。 （v）ApoA1を増やす。 （vi）コレステロール流出能力（CEC）を増加させる;または（vii）それらの任意の組み合わせ。
【0017】
抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の投与はまた、血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）レベルを増加させることができる。
【0018】
いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、ELを阻害する。
【0019】
いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDL-Cを増加させる。抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、例えば、少なくとも30％、少なくとも35％、または少なくとも40％までHDL-Cを増加させることができる。したがって、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、ＨＤＬ－Ｃを約３０％から約１２５％、約３０％から約１００％、約３０％から約７５％、約３０％から約７５％増加させることができる。 30％から約50％、約30％から約45％、または約30％から約40％。 HDL-Cの増加は、最初の投与から30日以内、最初の投与から60日以内、または最初の投与から90日以内に発生する可能性があります。
【0020】
いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDL粒子数を増加させる。抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、HDL粒子数を、例えば、少なくとも5％、少なくとも8％、少なくとも10％、または少なくとも15％増加させることができる（例えば、以下を使用して測定した場合）。 NMR）。したがって、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、ＨＤＬ粒子数を約５％から約２０％または約５％から約１８％（例えば、ＮＭＲを使用して測定した場合）増加させることができる。 HDL粒子数の増加は、最初の投与から30日以内、最初の投与から60日以内、または最初の投与から90日以内に発生する可能性があります。
【0021】
いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDL粒子サイズを増加させる。抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、ＨＤＬ粒子サイズを、例えば、少なくとも３％または少なくとも５％増加させることができる。したがって、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、ＨＤＬ粒子サイズを約３％から約１０％または約３％から約７％増加させることができる。 HDL粒子サイズの増加は、最初の投与から30日以内、最初の投与から60日以内、または最初の投与から90日以内に発生する可能性があります。
【0022】
いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるHDLリン脂質を増加させる。抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、ＨＤＬリン脂質を、例えば、少なくとも５０％増加させることができる。 HDLリン脂質の増加は、最初の投与から30日以内、最初の投与から60日以内、または最初の投与から90日以内に発生する可能性があります。
【0023】
いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるアポリポタンパク質A1（apoA1）を増加させる。抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、ａｐｏＡ１を、例えば、少なくとも３０％増加させることができる。したがって、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、ａｐｏＡ１を約３０％から約４０％または約３０％から約３５％増加させることができる。 apoA1の増加は、最初の投与から30日以内、最初の投与から60日以内、または最初の投与から90日以内に発生する可能性があります。
【0024】
いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象におけるコレステロール流出能力（CEC）を増加させる。 CECは、例えば、Thacker et al。、Journal of Lipid Research 56：1282-1295（2015）で提供されている方法を使用して測定することができます。抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、非ＡＴＰ結合カセットトランスポーターＡ１（ＡＢＣＡ１）コレステロール流出能力を、例えば、少なくとも３０％または少なくとも３５％増加させることができる。したがって、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、非ＡＢＣＡ１コレステロール流出能力を約３０％から約４０％または約３０％から約３５％増加させることができる。
【0025】
いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象における血漿ホスファチジルイノシトール（PI）レベルを増加させる。いくつかの態様では、増加したＰＩレベルは、増加したＰＩ（１４：２／２０：０）、ＰＩ（１４：２／２２：０）、ＰＩ（１４：２／２２：１）、ＰＩ（１４：２／２２： 2）、PI（16：0/16：1）、PI（16：0/18：0）、PI（16：0/18：2）、PI（16：0/20：2）、PI（16 ：0/20：3）、PI（16：0/20：4）、PI（16：0/22：4）、PI（16：1/18：0）、PI（16：1/18：1 ）、PI（18：0/18：0）、PI（18：0/18：1）、PI（18：0/18：2）、PI（18：0/18：3）、PI（18： 0/20：2）、PI（18：0/20：3）、PI（18：0/20：4）、PI（18：0/22：4）、PI（18：0/22：5）、PI（18：0/22：6）、PI（18：1/16：0）、PI（18：1/18：1）、PI（18：1/18：2）、PI（18：1 / 20：2）、PI（18：1/20：3）、PI（18：1/20：4）、および/またはPI（18：2/18：2）レベル。いくつかの態様では、増加したＰＩレベルは、増加したＰＩ（１４：２／２２：２）、ＰＩ（１６：０／１６：１）、ＰＩ（１６：０／１８：２）、ＰＩ（１６：０／２０： 3）、PI（16：0/20：4）、PI（18：0/18：1）、PI（18：0/18：2）、PI（18：0/20：2）、PI（18 ：0/20：3）、PI（18：0/20：4）、PI（18：0/22：6）、および/またはPI（18：1/16：0）レベル。抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、例えば、より豊富なＰＩ種については少なくとも数百パーセント、そしてより豊富でないＰＩ種についてはベースラインから数百から数千パーセント変化して血漿ＰＩレベルを増加させることができる。したがって、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、ＰＩ種に応じて血漿ＰＩを約１００～１０００％増加させることができる。場合によっては、抗ＥＬ抗体またはその抗体結合フラグメントの投与は、少なくとも１０個の血漿ＰＩ種のレベルを、例えば、少なくとも１００％または１００～１０００％増加させる。場合によっては、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、少なくとも12の血漿PI種のレベルを増加させる（例えば、PI（14：2/22：2）、PI（16：0/16：1）、PI（16：0/18：2）、PI（16：0/20：3）、PI（16：0/20：4）、PI（18：0/18：1）、PI（18：0 / 18：2）、PI（18：0/20：2）、PI（18：0/20：3）、PI（18：0/20：4）、PI（18：0/22：6）、およびPI（18：1/16：0））たとえば、少なくとも100％または100-1000％。場合によっては、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、少なくとも３０の血漿ＰＩ種（例えば、ＰＩ（１４：２／２０：０）、ＰＩ（１４：２／２２：０））のレベルを増加させる。 、PI（14：2/22：1）、PI（14：2/22：2）、PI（16：0/16：1）、PI（16：0/18：0）、PI（16：0 / 18：2）、PI（16：0/20：2）、PI（16：0/20：3）、PI（16：0/20：4）、PI（16：0/22：4）、 PI（16：1/18：0）、PI（16：1/18：1）、PI（18：0/18：0）、PI（18：0/18：1）、PI（18：0 / 18：2）、PI（18：0/18：3）、PI（18：0/20：2）、PI（18：0/20：3）、PI（18：0/20：4）、PI （18：0/22：4）、PI（18：0/22：5）、PI（18：0/22：6）、PI（18：1/16：0）、PI（18：1/18 ：1）、PI（18：1/18：2）、PI（18：1/20：2）、PI（18：1/20：3）、PI（18：1/20：4）、およびPI （18：2/18：2）たとえば、少なくとも100％または100-1000％。
【0026】
場合によっては、抗ＥＬ抗体またはその抗体結合フラグメントの投与は、少なくとも１０個の血漿ＰＩ種のレベルを少なくとも２５０％または２５０～１０００％増加させる。場合によっては、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、少なくとも12の血漿PI種のレベルを増加させる（例えば、PI（14：2/22：2）、PI（16：0/16：1）、PI（16：0/18：2）、PI（16：0/20：3）、PI（16：0/20：4）、PI（18：0/18：1）、PI（18：0 / 18：2）、PI（18：0/20：2）、PI（18：0/20：3）、PI（18：0/20：4）、PI（18：0/22：6）、およびPI（18：1/16：0））少なくとも250％または250-1000％。場合によっては、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、少なくとも３０の血漿ＰＩ種（例えば、ＰＩ（１４：２／２０：０）、ＰＩ（１４：２／２２：０））のレベルを増加させる。 、PI（14：2/22：1）、PI（14：2/22：2）、PI（16：0/16：1）、PI（16：0/18：0）、PI（16：0 / 18：2）、PI（16：0/20：2）、PI（16：0/20：3）、PI（16：0/20：4）、PI（16：0/22：4）、 PI（16：1/18：0）、PI（16：1/18：1）、PI（18：0/18：0）、PI（18：0/18：1）、PI（18：0 / 18：2）、PI（18：0/18：3）、PI（18：0/20：2）、PI（18：0/20：3）、PI（18：0/20：4）、PI （18：0/22：4）、PI（18：0/22：5）、PI（18：0/22：6）、PI（18：1/16：0）、PI（18：1/18 ：1）、PI（18：1/18：2）、PI（18：1/20：2）、PI（18：1/20：3）、PI（18：1/20：4）、およびPI （18：2/18：2）、少なくとも250％または250-1000％。
【0027】
血漿ＰＩの増加は、最初の投与から９０日以内に起こり得る。
【0028】
いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約１００ｍｇから約３５０ｍｇの用量で投与される。いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約１００ｍｇから約２５０ｍｇの用量で投与される。いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約１００ｍｇから約２００ｍｇの用量で投与される。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の用量は、非経口的に、例えば、皮下投与することができる。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の用量は、付属のプレフィルドシリンジ（ＡＰＦＳ）または自動注射器を使用して投与することができる。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の用量は、約月に１回投与することができる。
【0029】
いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約２００ｍｇから約３５０ｍｇの用量で投与される。いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約２００ｍｇから約３００ｍｇの用量で投与される。いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約２００ｍｇから約２５０ｍｇの用量で投与される。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の用量は、非経口的に、例えば、皮下投与することができる。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の用量は、付属のプレフィルドシリンジ（ＡＰＦＳ）または自動注射器を使用して投与することができる。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の用量は、約月に１回投与することができる。
【0030】
いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約２５０ｍｇから約３００ｍｇの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約250mgから約350mgの用量で投与される。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の用量は、非経口的に、例えば、皮下投与することができる。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の用量は、付属のプレフィルドシリンジ（ＡＰＦＳ）または自動注射器を使用して投与することができる。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の用量は、約月に１回投与することができる。
【0031】
いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約１００ｍｇの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約110mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約120mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約125mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約130mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約140mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約１５０ｍｇの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約160mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約170mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約175mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約180mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約190mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約200mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約210mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約220mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約２２５ｍｇの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約230mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約240mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約250mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約260mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約２７０ｍｇの用量で投与される。いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約２７５ｍｇの用量で投与される。いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約２８０ｍｇの用量で投与される。いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約２９０ｍｇの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約300mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約３１０ｍｇの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約320mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約325mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約330mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約340mgの用量で投与される。いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約350mgの用量で投与される。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の用量は、非経口的に、例えば、皮下投与することができる。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の用量は、付属のプレフィルドシリンジ（ＡＰＦＳ）または自動注射器を使用して投与することができる。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の用量は、約月に１回投与することができる。
【0032】
いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約１２５ｍｇまたは１２５ｍｇの用量で投与される。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の約１２５ｍｇまたは１２５ｍｇの用量は、非経口的に、例えば、皮下投与することができる。約125mgまたは125mgの用量の抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、付属のプレフィルドシリンジ（APFS）または自動注射器を使用して投与することができる。
【0033】
いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約２５０ｍｇまたは２５０ｍｇの用量で投与される。抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物の約２５０ｍｇまたは２５０ｍｇの用量は、非経口的に、例えば、皮下投与することができる。約２５０ｍｇまたは２５０ｍｇの用量の抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、付属のプレフィルドシリンジ（ＡＰＦＳ）または自動注射器を使用して投与することができる。
【0034】
いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約月に１回または月に１回投与される。約月に１回または月に１回投与される抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、非経口的に、例えば、皮下に投与することができる。約月に１回または月に１回投与される抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、付属のプレフィルドシリンジ（ＡＰＦＳ）または自動注射器を使用して投与することができる。
【0035】
いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約月に１回、約１２５ｍｇの用量で投与される。月に約１回投与される約１２５ｍｇの用量は、非経口的に、例えば、皮下に投与することができる。月に約1回投与される約125mgの用量は、付属のプレフィルドシリンジ（APFS）または自動注射器を使用して投与することができます。
【0036】
いくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、約250mgの用量で約月に1回投与される。月に約１回投与される約２５０ｍｇの用量は、非経口的に、例えば、皮下に投与することができる。月に約1回投与される約250mgの用量は、付属のプレフィルドシリンジ（APFS）または自動注射器を使用して投与することができます。
【0037】
いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、月に１回、１２５ｍｇの用量で投与される。月に一度投与される125mgの用量は、非経口的に、例えば皮下に投与することができる。月に約1回投与される約125mgの用量は、付属のプレフィルドシリンジ（APFS）または自動注射器を使用して投与することができます。
【0038】
いくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、月に１回、２５０ｍｇの用量で投与される。月に１回投与される２５０ｍｇの用量は、非経口的に、例えば、皮下に投与することができる。月に約1回投与される約250mgの用量は、付属のプレフィルドシリンジ（APFS）または自動注射器を使用して投与することができます。
【0039】
本明細書で提供される方法によれば、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、または抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物は、非経口的に投与することができる。本開示のいくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、または抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物は、皮下投与される。
【0040】
本開示のいくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも３ヶ月間（例えば、約１ヶ月に１回）投与される。本開示のいくつかの態様では、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも１２ヶ月間（例えば、約１ヶ月に１回）投与される。本開示のいくつかの態様では、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも２４ヶ月間（例えば、約１ヶ月に１回）投与される。
【0041】
本開示のいくつかの局面において、本開示は、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、または薬剤として使用するために本明細書に提供される医薬組成物に関する。 350mgまたは約200mgから約350mg（例えば、250mg）。本開示のいくつかの局面において、本開示は、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、または薬剤として使用するために本明細書に提供される医薬組成物に関する。ここで、薬剤は、約１００ｍｇから約３５０ｍｇでの投与用である。約200mgから約350mg（例えば、約250mg）。
【0042】
本開示のいくつかの局面において、本開示は、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、または薬剤として使用するために本明細書に提供される医薬組成物に関する。 350mgまたは約200mgから約350mg（例えば、250mg）を約月に1回。本開示のいくつかの局面において、本開示は、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、または薬剤として使用するために本明細書に提供される医薬組成物に関する。ここで、薬剤は、約１００ｍｇから約３５０ｍｇでの投与用である。月に一度、約200mgから約350mg（例えば、約250mg）。
【0043】
本明細書で提供される方法によれば、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、または抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物は、ＰＣＳＫ９の阻害剤と組み合わせて投与することができる。 ＰＣＳＫ９の阻害剤は、例えば、Ｃｈａｕｄｈａｒｙら、ワールドＪ．カルジオールに開示されている。 9：76-91（2017）およびChodorge et al。、Sci。 Rep。8：17545（2018）、これらのそれぞれは参照により本明細書に組み込まれる。 ＰＣＳＫ９の阻害剤は、例えば、ＰＣＳＫ９に結合する抗体または抗原結合フラグメントであり得る。 ＰＣＳＫ９を阻害する抗体またはその抗原結合フラグメントには、例えば、ＨＳ９、アリロクマブ、エボロクマブ、およびボコシズマブが含まれる。
【0044】
ＨＳ９抗体（ＭＥＤＩ４１６６と呼ばれるＧＬＰ－１融合タンパク質の文脈において）は、Ｃｈｏｄｏｒｇｅら、Ｓｃｉ。 Rep。8：17545（2018）およびInternational PCT Publication No. WO2015127273。これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。 HS9抗体は、以下の可変重鎖および可変軽鎖配列を含みます。
HS9可変重鎖配列：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGEISPSGGSTSYNQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARERPLYASDLWGQGTTVTVSS（配列番号14）
HS9可変軽鎖配列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDVKTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQRYSLWRTFGQGTKLEIK（配列番号15）。
HS9可変重鎖配列：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGEISPSGGSTSYNQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARERPLYASDLWGQGTTVTVSS（配列番号14）
HS9可変軽鎖配列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDVKTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQRYSLWRTFGQGTKLEIK（配列番号15）。
【0045】
本開示のいくつかの局面において、ＰＣＳＫ９を阻害する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４の可変重鎖配列を含む。本開示のいくつかの局面において、PCSK9を阻害する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号15の可変軽鎖配列を含む。本開示のいくつかの態様において、ＰＣＳＫ９を阻害する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４の可変重鎖配列および配列番号１５の可変軽鎖配列を含む。
【0046】
本開示のいくつかの局面において、PCSK9を阻害する抗体は、ヒトIgG1重鎖を含む。本開示のいくつかの局面において、PCSK9を阻害する抗体は、三重変異L234F / L235E / P331S（「IgG1-TM」）を含むヒトIgG1重鎖を含む。本開示のいくつかの態様では、ＰＣＳＫ９を阻害する抗体は、ヒトカッパ軽鎖を含む。本開示のいくつかの局面において、PCSK9を阻害する抗体は、a）配列番号14の可変重鎖配列を含むIgG1-TM重鎖、およびb）配列番号14の可変軽鎖配列を含むカッパ軽鎖を含む。 ID番号：15。
本開示のいくつかの局面において、PCSK9の阻害剤は、組換えPCSK9で処理されたHepG2細胞におけるLDL-C取り込みを促進することができる（例えば、Chodorge et al。、Sci。Rep。8：17545（2018）に開示されるように）。 ）。
本開示のいくつかの局面において、PCSK9の阻害剤は、組換えPCSK9で処理されたHepG2細胞におけるLDL-C取り込みを促進することができる（例えば、Chodorge et al。、Sci。Rep。8：17545（2018）に開示されるように）。 ）。
【0047】
本明細書で提供されるように、ＰＣＳＫ９の阻害剤は、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントと同時に（同じまたは別個の医薬組成物で）または連続して投与することができる。
5.3EL抗体およびその抗原結合フラグメント
5.3EL抗体およびその抗原結合フラグメント
【0048】
対象に抗体（例えば、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体などのモノクローナル抗体）およびその抗原結合フラグメントを投与することを含む、対象（例えば、ヒト対象）における心血管疾患を治療する方法が本明細書に提供される。 ELに特異的に結合します（例、ヒトEL）。本明細書で提供される方法で使用することができる例示的なＥＬ抗体およびその抗原結合フラグメントは、当技術分野で知られている。ヒトELのアミノ酸配列は当技術分野で知られており、タンパク質の成熟バージョン（リーダー配列を欠いている）は、本明細書では配列番号11の配列として提供されている。
成熟したヒトEL（リーダー配列の欠如）：
SPVPFGPEGRLEDKLHKPKATQTEVKPSVRFNLRTSKDPEHEGCYLSVGHSQPLEDCSFNMTAKTFFIIHGWTMSGIFENWLHKLVSALHTREKDANVVVVDWLPLAHQLYTDAVNNTRVVGHSIARMLDWLQEKDDFSLGNVHLIGYSLGAHVAGYAGNFVKGTVGRITGLDPAGPMFEGADIHKRLSPDDADFVDVLHTYTRSFGLSIGIQMPVGHIDIYPNGGDFQPGCGLNDVLGSIAYGTITEVVKCEHERAVHLFVDSLVNQDKPSFAFQCTDSNRFKKGICLSCRKNRCNSIGYNAKKMRNKRNSKMYLKTRAGMPFRVYHYQMKIHVFSYKNMGEIEPTFYVTLYGTNADSQTLPLEIVERIEQNATNTFLVYTEEDLGDLLKIQLTWEGASQSWYNLWKEFRSYLSQPRNPGRELNIRRIRVKSGETQRKLTFCTEDPENTSISPGRELWFRKCRDGWRMKNETSPTVELP（SEQ ID NO：11）
成熟したヒトEL（リーダー配列の欠如）：
SPVPFGPEGRLEDKLHKPKATQTEVKPSVRFNLRTSKDPEHEGCYLSVGHSQPLEDCSFNMTAKTFFIIHGWTMSGIFENWLHKLVSALHTREKDANVVVVDWLPLAHQLYTDAVNNTRVVGHSIARMLDWLQEKDDFSLGNVHLIGYSLGAHVAGYAGNFVKGTVGRITGLDPAGPMFEGADIHKRLSPDDADFVDVLHTYTRSFGLSIGIQMPVGHIDIYPNGGDFQPGCGLNDVLGSIAYGTITEVVKCEHERAVHLFVDSLVNQDKPSFAFQCTDSNRFKKGICLSCRKNRCNSIGYNAKKMRNKRNSKMYLKTRAGMPFRVYHYQMKIHVFSYKNMGEIEPTFYVTLYGTNADSQTLPLEIVERIEQNATNTFLVYTEEDLGDLLKIQLTWEGASQSWYNLWKEFRSYLSQPRNPGRELNIRRIRVKSGETQRKLTFCTEDPENTSISPGRELWFRKCRDGWRMKNETSPTVELP（SEQ ID NO：11）
【0049】
本開示のいくつかの態様において、本明細書に記載の方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＥＬに特異的に結合する。本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトおよびカニクイザルELに特異的に結合する。
【0050】
本開示のいくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントは、約４．０６ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）（例えば、表面プラズモン共鳴を使用して測定される場合）でヒトＥＬに結合する。本開示のいくつかの態様では、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１．５６ｎＭのＫＤでカニクイザルＥＬに結合する（例えば、表面プラズモン共鳴を使用して測定される場合）。本開示のいくつかの態様では、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントは、約４．０６ｎＭのＫＤ定数でヒトＥＬに結合し、約１．５６ｎＭのＫＤでカニクイザルＥＬに結合する（例えば、表面を使用して測定した場合）。プラズモン共鳴）。
【0051】
本開示のいくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＥＬを中和または阻害することができる。
【0052】
ＥＬを中和する抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの能力は、以下のプロトコルを使用して決定することができる：馴化培地を、アッセイ緩衝液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、 150 mM NaCl、4 mM CaCl2、0.5％BSA）およびHDL（例：ヒトHDL）、1000 nM～31.6pMの範囲の濃度の抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントの存在下または非存在下で37℃で2時間°C。このインキュベーションに続いて、NEFA-HR（2）アッセイキット（Wako Diagnostics、Mountain View、CA）を使用して、各ウェルで遊離脂肪酸の放出を測定します。 550nmと660nmの両方での吸光度は、SpectraMaxM5プレートリーダーを使用して測定されます。 550nmの読み取り値から660nmの読み取り値を差し引いて得られた値は、さらに分析するために使用されます。抗体濃度「x」でのパーセント活性「Ax」は、次の式を使用して計算されます。
Ax = [（Ex-V0）/（E0-V0）]×100
ここで、「Ex」は酵素の存在下での阻害剤ありの吸光度単位の平均値であり、「E0」と「V0」はそれぞれ阻害剤なしと酵素なしの吸光度単位の平均値です。 50％阻害濃度（IC50）は、GraphPadPrismを使用して計算およびプロットされます。
Ax = [（Ex-V0）/（E0-V0）]×100
ここで、「Ex」は酵素の存在下での阻害剤ありの吸光度単位の平均値であり、「E0」と「V0」はそれぞれ阻害剤なしと酵素なしの吸光度単位の平均値です。 50％阻害濃度（IC50）は、GraphPadPrismを使用して計算およびプロットされます。
【0053】
HDL（例えば、ヒトHDL）の代わりにVLDL（例えば、ヒトVLDL）を基質として使用して同じアッセイを実施して、抗EL抗体が肝リパーゼまたはリポタンパク質リパーゼを中和しないことを示すことができる。
【0054】
本開示のいくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトELについて約1.3nMの最大阻害濃度（IC50）の半分を有する。本開示のいくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントは、カニクイザルＥＬに対して約１．７ｎＭのＩＣ ５０を有する。本開示のいくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＥＬについては約１．３ｎＭのＩＣ ５０を有し、カニクイザルＥＬについては約１．７ｎＭのＩＣ ５０を有する。
【0055】
本開示のいくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントは、肝リパーゼまたはリポタンパク質リパーゼのいずれかによって媒介される超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）脂肪分解を阻害しない。
【0056】
本開示のいくつかの局面において、抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントは、HDLからLDL粒子へのコレステロールの交換を遮断しない。
【0057】
本開示のいくつかの局面において、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントは、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）への送達を増加させる。
【0058】
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、表1および2に提供されるようにリストされたMEDI5884抗体の6つのCDRを含む。
【表1】
【表2】
【0059】
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、表3に記載されるMEDI5884抗体のVHを含む。
【表3】
【0060】
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、表4に記載されるMEDI5884抗体のVLを含む。
【表4】
【0061】
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、表3および4に記載されるMEDI5884抗体のVHおよびVLを含む。
【0062】
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、表5に記載されるMEDI5884抗体の重鎖配列を含む。
【表5】
【0063】
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、表6に記載されるMEDI5884抗体の軽鎖配列を含む。
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するための抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトELに特異的に結合し、表5および表5に記載されたMEDI5884抗体の重鎖配列および軽鎖配列を含む。 6.6。
本開示のいくつかの態様では、本明細書に記載の方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、そのＶＬドメインのみ、またはそのＶＨドメインのみ、またはその３つのＶＬ ＣＤＲのみ、または3つのVHCDRのみ。例えば、Rader C et al。、（1998）PNAS 95：8910-8915を参照されたい。これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、相補的な軽鎖または重鎖を同定することによるマウス抗αvβ3抗体のヒト化を記載している。それぞれ、ヒト軽鎖または重鎖ライブラリーからのものであり、元の抗体の親和性と同じかそれよりも高い親和性を有するヒト化抗体変異体をもたらす。特定のＶＬドメイン（またはＶＨドメイン）を使用することによって特定の抗原に特異的に結合する抗体を産生する方法を説明する、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＣｌａｃｋｓｏｎ Ｔら、（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４-６２８も参照されたい。相補的なVHドメインまたは（VLドメイン）についてライブラリをスクリーニングします。このスクリーンは、ELISAによって決定されたように、特定のVHドメインに対して14の新しいパートナー、特定のVLドメインに対して13の新しいパートナーを生成しました。これらは強力なバインダーでした。 Kim SJ＆Hong HJ、（2007）J Microbiol 45：572-577も参照してください。これは、特定のVHドメインを使用して特定の抗原に特異的に結合する抗体を生成し、ライブラリーをスクリーニングする方法を説明しています。 （例えば、ヒトVLライブラリー）相補的VLドメイン用。次に、選択されたVLドメインを使用して、追加の相補的（たとえば、ヒト）VHドメインの選択をガイドすることができます。
いくつかの局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントのCDRは、免疫グロブリン構造ループの位置を参照するChothia番号付けスキームに従って決定することができる（例えば、Chothia C＆Lesk AM、（1987を参照）。 ）、J Mol Biol 196：901-917; Al-Lazikani B et al。、（1997）J Mol Biol 273：927-948; Chothia C et al。、（1992）J Mol Biol 227：799-817; Tramontano A et al。、（1990）J Mol Biol 215（1）：175-82;および米国特許第7,709,226号）。通常、Kabatの番号付け規則を使用する場合、Chothia CDR-H1ループは重鎖アミノ酸26～32、33、または34に存在し、Chothia CDR-H2ループは重鎖アミノ酸52～56に存在し、 Chothia CDR-H3ループは重鎖アミノ酸95～102に存在し、Chothia CDR-L1ループは軽鎖アミノ酸24～34に存在し、Chothia CDR-L2ループは軽鎖アミノ酸50～56に存在します。 、およびChothia CDR-L3ループは軽鎖アミノ酸89～97に存在します。Kabat番号付け規則を使用して番号付けされた場合のChothia CDR-H1ループの終わりは、ループの長さに応じてH32とH34の間で異なります（これはKabatの番号付けスキームは挿入をH35AとH35Bに配置するため、35Aも35Bも存在しない場合、ループは32で終了します。35Aのみが存在する場合、ループは33で終了します。35Aと35Bの両方が存在する場合、ループは終了します。 34で）。
【表6】
本開示のいくつかの態様では、本明細書に記載の方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、そのＶＬドメインのみ、またはそのＶＨドメインのみ、またはその３つのＶＬ ＣＤＲのみ、または3つのVHCDRのみ。例えば、Rader C et al。、（1998）PNAS 95：8910-8915を参照されたい。これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、相補的な軽鎖または重鎖を同定することによるマウス抗αvβ3抗体のヒト化を記載している。それぞれ、ヒト軽鎖または重鎖ライブラリーからのものであり、元の抗体の親和性と同じかそれよりも高い親和性を有するヒト化抗体変異体をもたらす。特定のＶＬドメイン（またはＶＨドメイン）を使用することによって特定の抗原に特異的に結合する抗体を産生する方法を説明する、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＣｌａｃｋｓｏｎ Ｔら、（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４-６２８も参照されたい。相補的なVHドメインまたは（VLドメイン）についてライブラリをスクリーニングします。このスクリーンは、ELISAによって決定されたように、特定のVHドメインに対して14の新しいパートナー、特定のVLドメインに対して13の新しいパートナーを生成しました。これらは強力なバインダーでした。 Kim SJ＆Hong HJ、（2007）J Microbiol 45：572-577も参照してください。これは、特定のVHドメインを使用して特定の抗原に特異的に結合する抗体を生成し、ライブラリーをスクリーニングする方法を説明しています。 （例えば、ヒトVLライブラリー）相補的VLドメイン用。次に、選択されたVLドメインを使用して、追加の相補的（たとえば、ヒト）VHドメインの選択をガイドすることができます。
いくつかの局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントのCDRは、免疫グロブリン構造ループの位置を参照するChothia番号付けスキームに従って決定することができる（例えば、Chothia C＆Lesk AM、（1987を参照）。 ）、J Mol Biol 196：901-917; Al-Lazikani B et al。、（1997）J Mol Biol 273：927-948; Chothia C et al。、（1992）J Mol Biol 227：799-817; Tramontano A et al。、（1990）J Mol Biol 215（1）：175-82;および米国特許第7,709,226号）。通常、Kabatの番号付け規則を使用する場合、Chothia CDR-H1ループは重鎖アミノ酸26～32、33、または34に存在し、Chothia CDR-H2ループは重鎖アミノ酸52～56に存在し、 Chothia CDR-H3ループは重鎖アミノ酸95～102に存在し、Chothia CDR-L1ループは軽鎖アミノ酸24～34に存在し、Chothia CDR-L2ループは軽鎖アミノ酸50～56に存在します。 、およびChothia CDR-L3ループは軽鎖アミノ酸89～97に存在します。Kabat番号付け規則を使用して番号付けされた場合のChothia CDR-H1ループの終わりは、ループの長さに応じてH32とH34の間で異なります（これはKabatの番号付けスキームは挿入をH35AとH35Bに配置するため、35Aも35Bも存在しない場合、ループは32で終了します。35Aのみが存在する場合、ループは33で終了します。35Aと35Bの両方が存在する場合、ループは終了します。 34で）。
【0064】
いくつかの局面において、本明細書に提供されるのは、EL（例えば、ヒトEL）に特異的に結合し、表3および4にリストされたMEDI5884抗体のChothiaVHおよびVLCDRを含む抗体およびその抗原結合フラグメントを投与する方法である。本開示のいくつかの局面において、本明細書に提供されるのは、EL（例えば、ヒトEL）に特異的に結合し、1つまたは複数のCDRを含む抗体またはその抗原結合フラグメントを投与する方法であり、ChothiaおよびKabatCDRは同じアミノを有する。酸配列。本開示のいくつかの態様において、本明細書で提供されるのは、ＥＬ（例えば、ヒトＥＬ）に特異的に結合し、Ｋａｂａｔ ＣＤＲおよびＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの組み合わせを含む抗体およびその抗原結合フラグメントを投与する方法である。
【0065】
本開示のいくつかの局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントのCDRは、Lefranc MP、（1999）The Immunologist 7：132-136およびLefrancMPに記載されているIMGTナンバリングシステムに従って決定することができる。 et al。、（1999）Nucleic Acids Res 27：209-212。 IMGTナンバリングスキームによれば、VH-CDR1は位置26から35にあり、VH-CDR2は位置51から57にあり、VH-CDR3は位置93から102にあり、VL-CDR1は位置27から32にあり、VL-CDR2本開示のいくつかの局面において、本明細書で提供されるのは、EL（例えば、ヒトEL）に特異的に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントを投与する方法である。そして、例えば、上記のＬｅｆｒａｎｃ ＭＰ（１９９９）および上記のＬｅｆｒａｎｃ ＭＰら（１９９９）に記載されているように、表３および４に記載されているＭＥＤＩ５８８４抗体のＩＭＧＴ ＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含む。
【0066】
いくつかの局面において、抗体またはその抗原結合フラグメントのCDRは、MacCallum RM et al。、（1996）J Mol Biol 262：732-745に従って決定することができる。また、例えば、Martin A.「抗体可変ドメインのタンパク質配列および構造分析」、Antibody Engineering、KontermannandDubel編、第31章、pp。422-439、Springer-Verlag、ベルリン（2001）も参照してください。本開示のいくつかの局面において、本明細書に提供されるのは、EL（例えば、ヒトEL）に特異的に結合し、決定されるように表3および4に記載されるMEDI5884抗体のVHおよびVLCDRを含む抗体またはその抗原結合フラグメントを投与する方法である。 MacCallumRMらの方法による。
【0067】
いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントのＣＤＲは、ＡｂＭ番号付けスキームに従って決定することができ、これは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の妥協を表すＡｂＭ超可変領域を指し、オックスフォードモレキュラーのAbM抗体モデリングソフトウェア（オックスフォードモレキュラーグループ社）。本開示のいくつかの局面において、本明細書に提供されるのは、EL（例えば、ヒトEL）に特異的に結合し、決定されるように表3および4に記載されるMEDI5884抗体のVHおよびVLCDRを含む抗体またはその抗原結合フラグメントを投与する方法である。 AbMナンバリングスキームによる。
【0068】
本開示のいくつかの局面において、本明細書に提供されるのは、重鎖および軽鎖を含む抗体を投与する方法である。
【0069】
重鎖に関して、本開示のいくつかの局面において、重鎖はガンマ重鎖である。ヒトIgG4P重鎖の定常領域は、以下のアミノ酸配列を含むことができる：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
（配列番号12）。
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
（配列番号12）。
【0070】
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するためにEL（例えば、ヒトEL）に免疫特異的に結合する抗体は、VHドメインのアミノ酸配列がCDRアミノ酸配列を含む重鎖を含む。表１に示され、ここで、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ４Ｐのアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するためにＥＬに免疫特異的に結合する抗体（例えば、ヒトＥＬ）は、ＶＨドメインのアミノ酸配列がアミノ酸配列セットを含む重鎖を含む。表３に記載されており、ここで、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ４Ｐのアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するためにＥＬに免疫特異的に結合する抗体（例えば、ヒトＥＬ）は、ＶＨドメインのアミノ酸配列がアミノ酸配列セットを含む重鎖を含む。表３に記載されており、ここで、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ４Ｐのアミノ酸配列を含む。
【0071】
軽鎖に関して、本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、カッパ軽鎖である。ヒトCカッパ軽鎖の定常領域は、以下のアミノ酸配列を含むことができる：
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号13）。
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するためにEL（例えば、ヒトEL）に免疫特異的に結合する抗体は、VLドメインのアミノ酸配列がCDRアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。表２に記載されており、軽鎖の定常領域は、ヒトＣカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号13）。
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するためにEL（例えば、ヒトEL）に免疫特異的に結合する抗体は、VLドメインのアミノ酸配列がCDRアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。表２に記載されており、軽鎖の定常領域は、ヒトＣカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。
【0072】
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するためにEL（例えば、ヒトEL）に免疫特異的に結合する抗体は、VLドメインのアミノ酸配列が表４であり、軽鎖の定常領域は、ヒトＣカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。
【0073】
本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するためにＥＬ（例えば、ヒトＥＬ）に免疫特異的に結合する抗体は、ＶＨドメインおよび任意のＶＨおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。本明細書に記載され、定常領域は、ＩｇＧ（例えば、ヒトＩｇＧ）免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載の方法で使用するためにEL（例えば、ヒトEL）に免疫特異的に結合する抗体は、本明細書に記載の任意のVHおよびVLドメインのアミノ酸配列を含むVHドメインおよびVLドメインを含む。ここで、定常領域は、ＩｇＧ４Ｐカッパ（例えば、ヒトＩｇＧ４Ｐカッパ）免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。
【0074】
本明細書で提供されるように、本明細書に記載の方法で使用するためにＥＬ（例えば、ヒトＥＬ）に免疫特異的に結合するそのまたは抗原結合フラグメントは、例えば、抗体または抗原結合フラグメントと比較して、エフェクター機能を低下させることができる。野生型IgG1配列を持つ。エフェクター機能の低下は、例えば、抗体の定常領域またはその抗原結合フラグメントの配列の結果である可能性がある。
【0075】
本明細書で提供されるように、本明細書に記載の方法で使用するためにEL（例えば、ヒトEL）に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、配列の結果として、CDCおよび/またはADCC活性を欠くことができる。定常領域の。
【0076】
本開示のいくつかの局面において、EL（例えば、ヒトEL）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖および軽鎖を含み、ここで、（i）重鎖。表１に列挙されたＭＥＤＩ５８８４抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む。 （ii）軽鎖は、表2に記載されているMEDI5884抗体のVL CDR1、VH CDR2、およびVHCDR3アミノ酸配列を含むVLドメインを含む。 （iii）重鎖は、ヒトIgG4P重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインをさらに含む。 （ｉｖ）軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインをさらに含む。
【0077】
本開示のいくつかの局面において、EL（例えば、ヒトEL）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖および軽鎖を含み、ここで、（i）重鎖。表３に記載されているＭＥＤＩ５８８４抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む。 （ii）軽鎖は、表4に記載されているMEDI5884抗体のVLドメインのアミノ酸配列を含むVLドメインを含む。 （iii）重鎖は、ヒトIgG4P重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインをさらに含む。 （ｉｖ）軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインをさらに含む。
【0078】
特定の態様では、ＥＬ（例えば、ヒトＥＬ）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載の抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、およびＦ（ａｂ'）２からなる群から選択される。ここで、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、またはｓｃＦｖは、本明細書に記載の抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含む。 Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、またはｓｃＦｖは、当業者に知られている任意の技術によって製造することができる。本開示のいくつかの局面において、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、またはｓｃＦｖは、インビボでの抗体の半減期を延長する部分をさらに含む。この部分は「半減期延長部分」とも呼ばれます。インビボでのＦａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、またはｓｃＦｖの半減期を延長するための当業者に知られている任意の部分を使用することができる。例えば、半減期延長部分は、Ｆｃ領域、ポリマー、アルブミン、またはアルブミン結合タンパク質または化合物を含むことができる。ポリマーは、天然または合成の、場合により置換された直鎖または分岐鎖ポリアルキレン、ポリアルケニレン、ポリオキシルアルキレン、多糖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン、またはそれらの誘導体を含むことができる。置換基は、１つ以上のヒドロキシ、メチル、またはメトキシ基を含むことができる。本開示のいくつかの局面において、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、またはｓｃＦｖは、半減期延長部分の付着のための１つ以上のＣ末端アミノ酸の付加によって改変され得る。本開示のいくつかの局面において、半減期延長部分は、ポリエチレングリコールまたはヒト血清アルブミンである。本開示のいくつかの態様では、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、またはｓｃＦｖがＦｃ領域に融合されている。
5.4医薬組成物
本明細書で提供されるのは、生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤において所望の純度を有する抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を投与する方法である（Ｒｅｍｉｎｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、ペンシルベニア州イーストン）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに無毒である。 （例えば、Gennaro、Remington：The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons：Drugfacts Plus、20th ed。（2003）; Ansel et al。、Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems、7th ed。、Lippencott Williams and Wilkins（2004）; Kibbe et al。、Handbook of Pharmaceutical Excipients、3rd ed。、Pharmaceutical Press（2000））。インビボ投与に使用される組成物は、無菌であり得る。これは、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することによって容易に達成される。
本開示のいくつかの局面において、医薬組成物を投与する方法が提供され、ここで、医薬組成物は、（ｉ）ヒトＥＬに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、（ａ）重鎖を含む。鎖可変領域（VH）相補性決定領域（CDR）1、VH CDR2、VH CDR3および軽鎖可変領域（VL）それぞれ配列番号1～6のCDR1、CDR2、およびCDR3配列（b）可変配列番号7のアミノ酸配列を含む重鎖領域および/または配列番号8のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域、または（c）配列番号7のアミノ酸配列を含む重鎖：9および/または配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖、および（ii）薬学的に許容される賦形剤。
5.4医薬組成物
本明細書で提供されるのは、生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤において所望の純度を有する抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を投与する方法である（Ｒｅｍｉｎｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、ペンシルベニア州イーストン）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに無毒である。 （例えば、Gennaro、Remington：The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons：Drugfacts Plus、20th ed。（2003）; Ansel et al。、Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems、7th ed。、Lippencott Williams and Wilkins（2004）; Kibbe et al。、Handbook of Pharmaceutical Excipients、3rd ed。、Pharmaceutical Press（2000））。インビボ投与に使用される組成物は、無菌であり得る。これは、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することによって容易に達成される。
本開示のいくつかの局面において、医薬組成物を投与する方法が提供され、ここで、医薬組成物は、（ｉ）ヒトＥＬに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、（ａ）重鎖を含む。鎖可変領域（VH）相補性決定領域（CDR）1、VH CDR2、VH CDR3および軽鎖可変領域（VL）それぞれ配列番号1～6のCDR1、CDR2、およびCDR3配列（b）可変配列番号7のアミノ酸配列を含む重鎖領域および/または配列番号8のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域、または（c）配列番号7のアミノ酸配列を含む重鎖：9および/または配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖、および（ii）薬学的に許容される賦形剤。
【0079】
本開示のいくつかの局面において、ヒトELに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物はまた、PCSK9の阻害剤を含む。本開示のいくつかの局面において、ヒトELに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物は、PCSK9の阻害剤と組み合わせて投与するためのものである。
5.5抗体産生とポリヌクレオチド
5.5抗体産生とポリヌクレオチド
【0080】
ＥＬに免疫特異的に結合する抗体およびその抗原結合フラグメント（例えば、ヒトＥＬ）は、抗体およびその抗原結合フラグメントの合成のための当技術分野で知られている任意の方法によって、例えば、化学合成によって、または組換え発現技術による。本明細書に記載の方法は、特に明記しない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成および修飾、核酸ハイブリダイゼーション、および当技術分野の関連分野における従来の技術を使用する。これらの技術は、例えば、本明細書で引用された参考文献に記載されており、文献で完全に説明されている。たとえば、Sambrook J et al。、（2001）Molecular Cloning：A Laboratory Manual、Cold Spring Harbour Laboratory Press、Cold Spring Harbour、NY; Ausubel FM et al。、Current Protocols in Molecular Biology、John Wiley＆Sons（1987 and Annual Updates）;免疫学における現在のプロトコル、John Wiley＆Sons（1987年および年次更新）Gait（ed。）（1984）オリゴヌクレオチド合成：実用的なアプローチ、IRL Press; Eckstein（ed。）（1991）オリゴヌクレオチドと類似体：実用的なアプローチ、IRL Press; Birren B et al。、（eds。）（1999）Genome Analysis：A Laboratory Manual、Cold Spring HarbourLaboratoryPress。
【0081】
いくつかの局面において、本明細書に提供されるのは、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメント、またはそのような抗体またはフラグメントを含む医薬組成物を投与する方法であり、抗体またはフラグメントは、ヌクレオチドを含むポリヌクレオチドの組換え発現によって産生される。宿主細胞の配列。
【0082】
いくつかの局面において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗ＥＬ抗体または抗原結合フラグメントは、例えば、によって最適化される抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはそのドメインをコードするポリヌクレオチドによってコードされる。コドン/RNAの最適化、異種シグナル配列による置換、およびmRNA不安定性要素の排除。コドン変化（例えば、コドン）を導入することにより、組換え発現のための抗EL抗体またはその抗原結合フラグメントまたはそのドメイン（例えば、重鎖、軽鎖、VHドメイン、またはVLドメイン）をコードする最適化された核酸を生成する方法遺伝暗号の縮重のために同じアミノ酸をコードする変化）および／またはｍＲＮＡ中の阻害領域を排除することは、例えば、米国特許第５，９６５，７２６号に記載されている最適化方法を適応させることによって実施することができる。 6,174,666; 6,291,664; 6,414,132;それに応じて6,794,498。
【0083】
ポリヌクレオチドは、例えば、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であり得る。 DNAには、cDNA、ゲノムDNA、および合成DNAが含まれます。 DNAは二本鎖または一本鎖にすることができます。一本鎖の場合、DNAはコード鎖または非コード（アンチセンス）鎖になります。本開示のいくつかの局面において、ポリヌクレオチドは、１つ以上のイントロンを欠くｃＤＮＡまたはＤＮＡである。本開示のいくつかの局面において、ポリヌクレオチドは、天然に存在しないポリヌクレオチドである。本開示のいくつかの局面において、ポリヌクレオチドは組換え的に産生される。本開示のいくつかの局面において、ポリヌクレオチドは単離される。本開示のいくつかの局面において、ポリヌクレオチドは実質的に純粋である。本開示のいくつかの局面において、ポリヌクレオチドは、天然成分から精製される。
【0084】
いくつかの局面において、ベクター（例えば、発現ベクター）は、宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞における組換え発現のための、抗ＥＬ抗体およびその抗原結合フラグメントまたはそのドメインをコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの局面において、細胞、例えば宿主細胞は、本明細書に記載の抗EL抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ヒトまたはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント）を組換え発現するためのそのようなベクターを含む。したがって、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するための方法は、宿主細胞においてそのような抗体またはその抗原結合フラグメントを発現させることを含み得る。
【0085】
発現ベクターは、従来の技術によって細胞（例えば、宿主細胞）に移され得、次いで、得られた細胞は、従来の技術によって培養されて、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、抗体または６つのＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨおよびＶＬ、重鎖、軽鎖、またはＭＥＤＩ５８８４の重鎖および軽鎖を含むその抗原結合フラグメント）またはそのドメイン（例えば、ＶＨ、 MEDI5884のVL、VHおよびVL、重鎖、または軽鎖）。
【0086】
本開示のいくつかの態様では、抗ＥＬ抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ＭＥＤＩ５８８４のＣＤＲを含むその抗体または抗原結合フラグメント）は、本明細書で提供される方法に従って投与され、宿主細胞。本開示のいくつかの態様では、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。
【0087】
本開示のいくつかの局面において、本明細書に提供される方法に従って投与される抗体またはその抗原結合フラグメントは、単離または精製される。一般に、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントとは異なる抗原特異性を有する他の抗体またはその抗原結合フラグメントを実質的に含まないものである。例えば、本開示のいくつかの局面において、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントの調製物は、細胞物質および／または化学的前駆体を実質的に含まない。
【実施例】
【0088】
以下の例は、限定としてではなく、例示として提供されている。
6.例
6.例
【0089】
このセクション（すなわち、セクション６）の例は、限定としてではなく、例示として提供されている。
6.1例1：MEDI5884の非臨床薬理学
6.1例1：MEDI5884の非臨床薬理学
【0090】
非臨床のインビボ薬理学研究は、正常な雄のカニクイザルにおける単一の皮下（ＳＣ）用量のＭＥＤＩ５８８４（０．５、６、または３０ｍｇ ／ｋｇ）の投与が、用量依存的に血漿ＨＤＬ－Ｃを増加させることを示した。 0.5、6、および30 mg / kgの用量でベースラインから最大効果までのHDL-Cの増加は、63±14～96±29 mg / dL、60±3.8～111±5.6 mg / dL、および54±7.4～それぞれ122±17mg/dL。総コレステロール（TC）、低密度リポタンパク質コレステロール（LDL-C）、および非HDL-C（TCからHDL-Cを引いたもの）のわずかな増加も観察されました。
【0091】
ＨＤＬの主要なリポタンパク質成分であるアポリポタンパク質Ａ１（ＡｐｏＡ１）もまた、３０ｍｇ ／ｋｇの用量で７５±５．５％増加した。血清リン脂質の用量依存的な増加が観察され、MEDI5884がHDL粒子に含まれるリン脂質の加水分解を阻害したことを示しています。
【0092】
ＡＴＰ結合カセットトランスポーターＡ１（ＡＢＣＡ１）、コレステロール流出能力（ＣＥＣ）、全体的なコレステロール流出、およびＨＤＬ粒子の総数の増加が、最高用量（３０ｍｇ ／ｋｇ）で観察された。総および大きな低密度リポタンパク質（LDL）粒子の平均数の増加も観察されました。コレステロール流出は、投与後0、0.5、1、2、3、7、および14日目に0.5および30 mg /kgMEDI5884治療群の動物から得られたHDLを使用して測定されました。 ABCA1の流出は一時的にベースラインを下回りましたが（0.5日目と1日目）、30 mg / kgのMEDI5884で治療した後、3、7、14日目にベースラインレベルをそれぞれ6％、26％、114％上回りました。同様に、グローバル流出は、0.5日目（-6％）にベースラインを一時的に下回り、2、3、7、および14日目にそれぞれ6％、5％、41％、および53％に増加しました。
【0093】
ＨＤＬ粒子は、ＭＥＤＩ５８８４で処理されたカニクイザルから得られたサンプルにおいて、ＮＭＲ分光法を使用して特徴付けられた。 30 mg / kgのMEDI5884で処理すると、HDL粒子の総数が最大49±6.3％増加し、小さい粒子と大きい粒子の両方の数がそれぞれ最大182±85％と104±10％増加しました。中程度のHDL粒子は2日目に最大で48±14％減少し、49日目までにベースラインに戻りました。これは新しい平衡が確立されるにつれてHDL粒子のスペシエーションまたは相互変換を示唆しています。 HDLサイズは、0.5、6、および30 mg / kgの用量でベースラインからプラトーレベルまで、それぞれ10.0±0.033から10.9±0.17 nm、10±0.23から10.7±0.12 nm、および9.9±0.033から10.7±0.13nmに増加しました。
【0094】
これらのデータは、例えば、二次的な心血管イベントの予防のための、ヒト患者におけるＭＥＤＩ５８８４の使用を支持する。
6.2例2：MEDI5884の非臨床薬物動態と安全性
6.2例2：MEDI5884の非臨床薬物動態と安全性
【0095】
ＭＥＤＩ５８８４は、単回投与の非ＧＬＰ（ＧＬＰ）ＰＫ ／薬力学（ＰＤ）研究および２回の反復投与ＧＬＰ毒物学研究においてカニクイザルに投与された。 30mg/kgまでの単回投与でのMEDI5884のSC投与は十分に許容された。予定外の死亡、有害な臨床観察、注射部位反応、または体重への悪影響はありませんでした。 10、30、または100 mg / kg /用量のMEDI5884を1か月または6か月間SC投与（2週間ごとに1回投与）を繰り返した後、すべての動物は予定された犠牲まで生き残った。臨床観察、眼科評価、体重、行動、神経生理学、呼吸数、注射部位刺激スコア、心拍数、心電図（ECG）、または血圧にMEDI5884関連の変化は観察されませんでした。治療に関連する所見は、すべての用量レベルで、薬理学的に媒介された、TC、HDL-C、LDL-C、およびリン脂質の最小から中程度の増加に限定されていました。顕微鏡的には、最小から中程度の血管周囲リンパ球/混合白血球浸潤の存在が、数匹のMEDI5884治療動物の皮下注射部位で観察されました。治療に関連する組織病理学的所見は、他の組織では観察されませんでした。これらの結果に基づいて、無毒性量（NOAEL）は100mg /kg/用量であると決定されました。
6.3例3：MEDI5884のフェーズ1臨床評価
6.3例3：MEDI5884のフェーズ1臨床評価
【0096】
ＭＥＤＩ５８８４は、健康な状態で皮下（ＳＣ）投与されたＭＥＤＩ５８８４の安全性、ＰＫ、およびＰＤを評価するための第１相、ヒトで初めての盲検、プラセボ対照、単回投与エスカレーション（ＳＤＥ）試験で評価された。スタチン療法を受けていない被験者。被験者は3：1の比率で無作為化され、30、100、300、または600mgのMEDI5884またはプラセボを投与されました。初期コホートは、用量レベルごとに6人のMEDI5884と2人のプラセボ被験者でした。次に、これらのコホートは、日本での臨床研究の実施をサポートするためのデータを提供するために、日本の祖先の主題を使用して複製されました。合計64人の被験者が米国（US）の単一のサイトに登録されました。フォローアップ期間は、投与後28日から90日までコホートによって異なりました。
ＭＥＤＩ５８８４ （またはプラセボ）の単回注射、３００ｍｇの用量で３回のＳＣ注射（各１００ｍｇ）、または６００ｍｇの用量で６回のＳＣ注射（各１００ｍｇ）を受けた。
科目
ＭＥＤＩ５８８４ （またはプラセボ）の単回注射、３００ｍｇの用量で３回のＳＣ注射（各１００ｍｇ）、または６００ｍｇの用量で６回のＳＣ注射（各１００ｍｇ）を受けた。
科目
【0097】
登録された対象の年齢の中央値（ＳＤ）は３５．９（９）歳であった。 93.9％が男性、53.1％がアジア人、28.1％が白人、14.1％が黒人またはアフリカ系アメリカ人、4.7％が複数の民族を報告しました。 90.6％はヒスパニック系ではありませんでした。
薬物動態
薬物動態
【0098】
３０、１００、３００、および６００ｍｇの用量でのＭＥＤＩ５８８４の単回ＳＣ投与に続いて、ＭＥＤＩ５８８４は、おそらく標的媒介薬物動態に起因する非線形ＰＫを示し、用量比例以上のＣｘａｘおよびＡＵＣが観察された。 PKパラメータは表7にまとめられています。
【表7】
【0099】
日系アメリカ人集団と一般的な米国集団（西部コホート）との間で観察された平均ＰＫプロファイルは、一般に重複していた。日系アメリカ人の被験者では300mgの用量でより高い曝露が観察され、日系アメリカ人と一般的な米国の集団の体重の違いが原因である可能性があります。西洋人と日系アメリカ人の両方の被験者のPKプロファイルに対する体重の適度な影響が観察されました。 600mg用量のCL/Fは、一般的な米国（西部コホート）および日系アメリカ人集団で0.378L/日および0.254L/日でした。データは、MEDI5884PKに実質的な民族的差異がないことを示唆しました。
安全性と免疫原性
安全性と免疫原性
【0100】
安全性データは、ＭＥＤＩ５８８４（それぞれ１２人の被験者の４つの用量コホート［３０、１００、３００、または６００ｍｇ］； ２４人は日本人の祖先である）を受けた４８人およびプラセボ（４回の用量）を受けた１６人を含む６４人の被験者について評価された。それぞれ4人の被験者のコホート;8人は日本人の祖先でした）。関連する治療に起因する有害事象（TEAE）、治療に起因する重篤な有害事象（TESAE）、または試験からの離脱につながる死亡はありませんでした。 TEAEは、MEDI5884（16 / 48、33.3％）またはプラセボ（5 / 16、31.3％）を投与された被験者の同様の割合で発生しました。
【0101】
一般的な米国の集団において、陽性のＡＤＡ結果を示した対象はなかった。しかし、陽性の抗薬物抗体（ADA）応答は、1人のプラセボレシピエントを含む32人の日系アメリカ人被験者のうち6人で検出されました。 ADAに関連付けられているAEは報告されていません。一部のADA陽性の日系アメリカ人被験者では、ADAを持たない他の日系アメリカ人被験者と比較して低い曝露が観察されました。これらのADA陽性被験者の曝露は、プールされた集団における同じ用量の被験者の曝露範囲内であり、PDまたは安全性への影響は観察されませんでした。要約すると、ADAはまれであり、有害事象（AE）やPDへの影響とは関連がなく、PKへの臨床的に関連する影響はありませんでした。
薬力学
薬力学
【0102】
全体的なベースライン脂質レベルは、プラセボ対象とＭＥＤＩ５８８４処置対象との間で類似していた。
【0103】
スタチン療法を受けていないこれらの健康な対象において、ＭＥＤＩ５８８４投与後にＨＤＬ－Ｃの実質的な増加が観察された。 28日目のHDL-Cのベースラインからの平均（SD）パーセント変化は、30、100でMEDI5884を投与された被験者で4.1％（17.4）、42.0％（26.9）、39.7％（22.5）、および49.8％（17.3）でした。 、300、または600 mg、プラセボの15.9％（16.8）に対してそれぞれ。
【0104】
ａｐｏＡ１の増加も観察された。プールされた集団では、LDL-CとapoBのわずかな増加が観察されました。これらの増加は用量に関連しているようには見えず、主に投与後遅くに発生しました。トリグリセリドレベルへの明確な影響は観察されませんでした。
6.4例4：MEDI5884のフェーズ2a臨床評価
6.4例4：MEDI5884のフェーズ2a臨床評価
【0105】
ＭＥＤＩ５８８４はまた、安定した冠状動脈性心臓病（ＣＨＤ）を有する対象におけるＭＥＤＩ５８８４の安全性、ＰＫ、ＰＤ、および免疫原性を評価するための第２ａ相、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、並行設計研究において評価された。高強度のスタチン療法を併用し、トリグリセリドレベルが500 mg/dL以下およびLDL-Cが100mg/dL以下の患者。
【0106】
合計１３２人の対象が、５０、１００、２００、３５０、および５００ｍｇの用量で３ヶ月のＳＣ用量のプラセボまたはＭＥＤＩ５８８４を投与された。
科目
科目
【0107】
この研究は、主に男性（８７．０％）の白人（９０．８％）の対象を登録し、登録時の年齢の中央値は６７歳であった。全体的なベースライン特性は、プラセボ被験者とMEDI5884治療被験者の間で類似していた。治験薬の合計3回投与を受けた被験者は次のとおりでした：プラセボ群で22/23（95.7％）、18/20（90％）、22/24（91.7％）、20/22（90.9％）、20 MEDI5584 50、100、200、350、および500 mgグループでそれぞれ/21（95.2％）、および21/22（95.5％）。 MEDI5884 50 mgグループの被験者の1人は、2回目の投与を逃したために2回の投与しか受けなかったにもかかわらず、治療を完了したものとして含まれていました。
薬物動態
薬物動態
【0108】
中間ＰＫ分析は、１１日目までのデータに基づいて実施された。ＭＥＤＩ５８８４の３ヶ月のＳＣ投与後の平均ＭＥＤＩ５８８４濃度－時間プロファイルは、図１Ａの用量コホートによって提示される。非コンパートメント分析に基づくPKパラメーターを表8に要約します。
【表8】
【0109】
ＭＥＤＩ５８８４は、おそらく標的媒介薬物動態のために、非線形ＰＫを示した。しかし、線形範囲のPKは、投与後30日後に350および500mgのMEDI5884用量で観察されました。 CmaxとAUCは、一般的に用量比例よりも大きかった。被験者間の大きな変動とわずかな薬物蓄積が観察された。 500mgでの平均推定CL/Fは0.389L/日でした。
安全性と免疫原性
安全性と免疫原性
【0110】
死亡または関連するＴＥＳＡＥはなく、ＡＥは、ＭＥＤＩ５８８４で治療された群（５９／１０９ ［５４．１％］）とプラセボ群（１７／２３ ［７３．９％］）との間で概ねバランスが取れており、ＭＥＤＩ５８８４の用量に依存しなかった。そして、登録された集団で発生すると予想されるイベントの代表でした。自己申告による注射部位反応は、15/109（14％）のMEDI5884治療を受けた被験者と3/23（13％）のプラセボ治療を受けた被験者で発生しました。研究者が報告した注射部位反応は、9/109（8％）のMEDI5884治療を受けた被験者と3/23（13％）のプラセボ治療を受けた被験者で発生しました。これらの反応は軽度から中等度の重症度でした。 8人の被験者が投薬を中止しました（1人のプラセボと1人のMEDI5884レシピエントが投薬の同意を撤回し、他の6人はプロトコルで義務付けられているように実験室観察のために撤回されました[一部はAEとして記録されました; 4人は上昇したapoB、2人は上昇したトリグリセリド]）。
【0111】
ＡＤＡはまれであり、力価が低く、ＡＥと関連せず、ＰＫに影響を及ぼさなかった。 ADAは、プラセボとMEDI5884の受信者でも同様でした。したがって、観察されたADAは誤検知を表す可能性があります。
薬力学的効果
薬力学的効果
【0112】
全体的なベースライン脂質レベルは、プラセボ対象とＭＥＤＩ５８８４処置対象との間で類似していた。
【0113】
ＥＬの抑制であるＭＥＤＩ５８８４の標的関与は、用量依存的であることが示された（図１Ｂ）。特に、ヒト血漿中のMEDI5884によって結合されるhELの量は、Meso Scale Diagnostics（MSD）ベースのイムノアッセイプラットフォームを使用して測定されました。簡単に説明すると、96ウェルプレートのウェルをMEDI5884でコーティングし、4℃で一晩インキュベートしました。翌日、ウェルを0.05％Tween20洗浄バッファーを含むPBSで洗浄し、I-Blockバッファー（Applied Biosystems）で室温で1時間ブロックしました。プレートを洗浄した。次に、組換えELタンパク質標準（Origene Technologies）とヒト血漿サンプルを対応するウェルに加え、室温で1時間インキュベートしました。洗浄後、ビオチン化EL検出抗体（Origene Technologies）を対応するウェルに添加し、室温で1時間インキュベートしました。プレートを洗浄した後、ストレプトアビジン、スルホ-TAG抗体（MSD）を対応するウェルに添加し、室温で1時間インキュベートしました。洗浄後、ウェルをリードバッファー（MSD）とともにインキュベートしました。 MESO Sector S 600プレートリーダーを使用してプレートを読み取り、MSDDiscoveryWorkbenchソフトウェア分析プログラムを使用してデータを分析しました。
【0114】
これらの患者において、HDL-Cのベースラインからの用量依存的な増加が、MEDI5884処置群で観察された。 91日目のHDL-Cのベースラインからの平均（SD）パーセント変化（最後の観察の繰り越し（LOCF）代入法を使用）は、2.88％（14.86）、21.82％（30.66）、34.41％（34.89）、43.29％でした。 MEDI5884をそれぞれ50、100、200、350、または500 mgで投与された被験者では（31.09）、および48.31％（25.63）でしたが、プラセボでは-3.01％（13.60）でした。図。 2および表9Aおよび9Bは、90日間にわたるHDL-Cのベースラインからの観察された（非LOCF）パーセント変化、および91日目のHDL-Cのベースラインからの観察された（非LOCF）変化を示しています。
【表9A】
【表9B】
【0115】
HDL粒子数およびHDL粒子サイズのベースラインからの用量依存的増加（表10）もまた、プラセボ群と比較してMEDI5884処置群で観察された。
【表10】
【0116】
ａｐｏＡ１（図３および表１１Ａおよび１１Ｂ）ならびに高密度リポタンパク質リン脂質（ＨＤＬ－ＰＬ）（図４および表１２）におけるベースラインからの用量依存的増加もまた、ＭＥＤＩ５８８４処置群において観察された。プラセボグループに。特に、図１は、 3および表11Aおよび11Bは、90日間にわたるApoA1のベースラインからの観察された（非LOCF）パーセント変化、および91日目のApoA1のベースラインからの観察された（非LOCF）変化を示しています。平均（SD）パーセント変化91日目のApoA1のベースラインから（LOCF代入法を使用）は、MEDI5884を投与された被験者で1.32％（14.81）、15.88％（19.66）、24.82％（21.92）、36.26％（27.36）、および36.85％（18.03）でした。プラセボの1.42％（11.20）に対して、それぞれ50、100、200、350、または500mgで。
【表11A】
【表11B】
【表12】
【0117】
ＡＢＣＡ１媒介性流出および全体的流出におけるベースラインからの用量依存的増加はまた、プラセボ群と比較して、ＭＥＤＩ５８８４処置群において観察された。非ABCA1コレステロール流出に対するMEDI5884の効果を図1に示す。 5.5。
【0118】
トリグリセリド、ＬＤＬ－Ｃ、およびａｐｏＢの適度な増加もまた、ＭＥＤＩ５８８４処置群において観察された。低用量群では、MEDI5884投与群のトリグリセリド、LDL-C、およびapoBの増加に明らかな用量依存的な関係はありませんでした。 ApoBの変化は、500mgの用量でのみ有意でした。用量全体で91日目に観察されたApoBレベルを表13に示します。
【表13】
【0119】
トリグリセリドは、３人のＭＥＤＩ５８８４で治療された対象において１０００ｍｇ ／ ｄＬに近いかまたはそれを超えて増加した。これらの被験者には、高トリグリセリド血症の追加の危険因子がありました。トリグリセリドレベルに対するMEDI5884の用量依存的効果は観察されませんでした。
【0120】
２００ｍｇの用量のＭＥＤＩ５８８４は、ベースラインからの平均（中央値）変化を、ＨＤＬ－Ｃで１５．２（１１．０）ｍｇ ／ ｄＬ、ＬＤＬ－Ｃ（直接）で６．１（５．０）ｍｇ ／ ｄＬ、および２をもたらした。 （-1.0）プラセボと比較した91日目のapoBのmg / dL（HDL-Cの場合は-1.6 [-3.0] mg / dL、LDL-Cの場合は-2.6 [-1.0] mg / dL、および-0.5 [0.0] apoBの場合はmg/dL）。
【0121】
主要なＰＫ ／ ＰＤモデルで推定されたパラメータは、表１４に要約されている。
6.5例5：MEDI5884のフェーズ2B臨床評価
【表14】
【0122】
さらなる評価のために、毎月２５０ｍｇのＳＣ ＭＥＤＩ５８８４の用量を選択するために、上記のデータの分析を実施した。
【0123】
より具体的には、データのレビューは、ＭＥＤＩ５８８４の５用量の投与が、患者における曝露の明らかな用量依存的増加を示し（図１Ａ）、それが用量依存的標的関与（すなわち、 ELレベル）（図1B）。 200 mg投与のELレベルは、約30日間一貫して阻害されませんでしたが、350 mg投与のELレベルは、30日の投与間隔の間完全な阻害を維持しました。毎月の投与間隔を考慮すると、最適な投与量は、研究された投与量200mgと350mgの間にあるように見えました。
【0124】
HDL-C、ApoA1、およびHDL-PLなどのバイオマーカーは、EL活性を阻害した後、用量依存性とともに増加した（図2-4）。バイオマーカーの時間経過は、有効量が200mgを超えるべきであることを示しました。 LDL-C、ApoB、TGなどの経路の安全性バイオマーカーは、有効性バイオマーカーと比較して、明確な用量依存性が低くなり、増加しました。 500 mgの用量でのApoBおよびTGの増加が懸念事項として特定されました。これは、500mg未満の用量を最適な用量として選択する必要があることを示しています。
【0125】
多重比較手順モデリング（ＭＣＰ Ｍｏｄ）法を適用して、ＨＤＬ－Ｃ、ＡｐｏＡ１、ＨＤＬ－ＰＬ、ＬＤＬ、ＡｐｏＢ、およびＴＧの効果曲線下面積（ＡＵＥＣ）との関係を評価した。 60日目から90日目までの期間の用量に関して。HDL-C、ApoA1、およびHDL-PLレベルの望ましいバイオマーカーは、用量の増加とともに最大に達し（図2-4）、90％を達成する用量の推定を可能にします。最大バイオマーカーレベル（ED90）の。推定ED90はそれぞれ205、270、265 mgでした（図6）。 LDL、ApoB、TGの望ましくないバイオマーカーはプラトーを達成しませんでしたが、次の傾向を示しました：（1）LDLレベルは50～500 mgの範囲で増加し続け、（2）ApoBレベルは500 mg、および（3）TGレベルは投与量に関係なく一定でした。したがって、MCP Modアプローチの結果は、250 mgの月間投与が、高レベルの望ましくないバイオマーカーを引き起こすことなく、望ましいバイオマーカーの最大有効性の90％のレベルを達成する可能性が高いことを裏付けています。
【0126】
ＭＥＤＩ５８８４の投与後の、ＭＥＤＩ５８８４の薬物動態（ＰＫ）ならびにＨＤＬおよびＡｐｏＡ１のバイオマーカープロファイルを説明するために、数学的モデルが開発された。 PKモデル部分は、線形および非線形の除去経路が平行な2コンパートメントPKモデルでしたが、バイオマーカーモデリングのPDモデル部分は、各バイオマーカーの除去経路が抑制された典型的な間接応答モデルに従い、投与後のバイオマーカーレベル（図7）。モデルにはHDL-Pは含まれていませんが、HDL-CとApoA1を評価することにより、HDL-Pの変化に間接的に対処します。 ApoA1の増加を伴わないHDL-Cの増加は、より大きなHDL粒子に変換されますが、粒子数には変換されません。
【0127】
広い用量範囲（５０～５００ｍｇ）からのＰＫデータを同時に分析した場合、ＭＥＤＩ５８８４は、低用量で飽和する可能性が高い標的媒介薬物動態のために非線形ＰＫを示した。したがって、250 mgでのPKプロファイルのシミュレーションでは、高用量でPKが線形であると想定するのが妥当です。これは、200mgと350mgの投与後に観察されたPKプロファイル間の補間です。
【0128】
高強度スタチン療法を受けていたＣＨＤを有する対象におけるＭＥＤＩ５８８４の第２ａ相研究から観察されたＰＫ ／ ＰＤデータは、モデルによって十分に特徴づけられた。投与後、PK、HDL、およびApoA1で大きな被験者間変動が観察されましたが、MEDI5884曝露と、それに対応するHDL-CおよびApoA1の増加との間に明確な関係がありました。 IC90の計算に使用されたモデル推定50％阻害濃度（IC50）値（つまり、HDL-CおよびApoA1の場合はそれぞれ3.03 ug/mLおよび3.43ug/ mL）。以下のシミュレーションに基づくと、250mgQM後の予測トラフ濃度中央値は約3.46ug/ mLであり、これはHDL-CおよびApoA1のIC90の目標曝露に近い値です。 MEDI5884の月用量250mgの投与後のMEDI5884、HDL、およびApoA1の予測される時間経過を図1に示す。 8.8。
【0129】
まとめると、これらのデータは、２５０ｍｇのＭＥＤＩ５８８４の月用量が以下を示すことを示唆している：（ｉ）投薬後３０日間の線形ＰＫおよび標的関与（ＥＬ抑制）。 （ii）PK / PDモデリングに基づいて、HDL-CおよびApoA1の最大増加のIC90よりも大きいトラフレベルの中央値。 （iii）多重比較手順モデリングアプローチに基づいて、不要なLDL-CおよびapoBの増加を最小限に抑えます。
【0130】
したがって、これらのデータは、高強度スタチン療法を受けている以前の心筋梗塞（ＭＩ）を有する成人における第２ｂ相、無作為化、二重盲検、プラセボ対照試験におけるＭＥＤＩ５８８４の評価を支持する。これらの研究では、MEDI5884（250 mg）またはプラセボを月に1回、24か月間、250 mgの用量で投与し、MEDI5884が心血管死、MI、脳卒中、および冠状動脈血行再建術の発生率を低下させることを示します。
6.6例6：カニクイザルにおけるELおよびPCSK9の阻害
6.6例6：カニクイザルにおけるELおよびPCSK9の阻害
【0131】
ＭＥＤＩ５８８４治療後のリポタンパク質代謝に対するプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）の阻害の影響を評価するための組み合わせ薬理学研究を実施した。研究プロトコルは図１に示されている。 9.すでにLDL-C低下薬を服用している架空の患者集団をよりよく模倣するために、健康なcynomolgusサルを最初に、PCSK9中和モノクローナル抗体（mAb）（10mg / kg; n = 8）またはビヒクルの4回の毎週の皮下注射で治療しました。低LDL-Cのベースラインを確立するために0日目から数週間。使用したPCSK9mAbはHS9（それぞれ配列番号14および15のVHおよびVL配列を含む）でした。 HS9抗体（MEDI4166と呼ばれるGLP-1融合タンパク質の文脈で）は、Chodorge et al。、Sci。 Rep。8：17545（2018）およびInternational PCT Publication No. WO2015127273。これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ＭＥＤＩ５８８４ （１０ｍｇ ／ ｋｇ； ｎ＝ ４）またはビヒクル（ｎ ＝４）の皮下用量を投与した。ＬＤＬ -C、HDL-C、ApoB、およびApoA1は、示された時点で収集された血漿サンプルで測定されました。グローバル流出とABCA1流出も評価されました。
ＭＥＤＩ５８８４ （１０ｍｇ ／ ｋｇ； ｎ＝ ４）またはビヒクル（ｎ ＝４）の皮下用量を投与した。ＬＤＬ -C、HDL-C、ApoB、およびApoA1は、示された時点で収集された血漿サンプルで測定されました。グローバル流出とABCA1流出も評価されました。
【0132】
ＥＬ中和に続いて、ＬＤＬ－Ｃの増加が観察された。ビヒクルで処理した動物と比較して、PCSK9阻害はLDL-Cを75％減少させ（図10、左のグラフ）、4週間の導入期間中そのレベルの減少を維持しましたが、HDL-に感知できるほどの影響はありませんでした。 C（図10、右のグラフ）。導入期間中にビヒクルで治療された動物では、MEDI5884はHDL-CとLDL-Cの両方の増加をもたらしました。 2番目の4週間にPCSK9阻害剤の上に添加すると、MEDI5884はHDL-Cを同程度に上昇させる能力を維持しましたが、LDL-Cの増加の大きさは大幅に鈍化しており、LDL粒子が引き続きＬＤＬ受容体によって取り込まれる（図１０）。 LDL-CとHDL-Cのパターンは、ApoBとApoA1のそれぞれの変化と一致していました（図11）。グローバル流出およびABCA1流出への影響を図1に示す。 12.特に、MEDI5884の投与（MEDI5884 + HS9の投与を含む）に関連して観察された流出の増加は、一般に、HDL-Cの観察された増加を反映しています。
【0133】
これらの結果は、ＬＤＬ受容体によるコレステロール取り込みの証拠を提供し、サルにおけるＭＥＤＩ５８８４治療で観察されたＬＤＬ－Ｃの増加が、ＬＤＬ受容体をアップレギュレートするメカニズムによって軽減され得ることを示す。これらの結果は、MEDI5884をPCSK9の阻害剤と組み合わせて投与できることをさらに示しています。この併用療法は、コレステロール逆輸送の異なる側面を標的とする2つの補完的なメカニズムの複合作用を利用することができます。
6.7例7：安定した冠状動脈性心臓病の被験者の血漿ホスファチジルイノシトール（PI）レベルに対するMEDI5884の漸増用量の効果
6.7例7：安定した冠状動脈性心臓病の被験者の血漿ホスファチジルイノシトール（PI）レベルに対するMEDI5884の漸増用量の効果
【0134】
安定した冠状動脈性心臓病を有する患者における血漿ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）レベルに対するＭＥＤＩ５８８４の効果を定量化した。定量化では、親水性相互作用クロマトグラフィー（HILIC）分離とネガティブモードのマルチプルリアクションモニタリング（MRM）を組み合わせたハイスループットマルチプレックス法を使用しました。合計31の内因性PI種がモニターされました。
試薬
Avanti Polar Lipids（アラバマ州、アラバマ州）から購入した。この研究では、3つのPI標準が使用されました。内部標準（IS）として使用されるPI（12：0/13：0）、PI（17：0/14：1）、およびPI（21：0/22：6）は代理分析物として使用されます。高速液体クロマトグラフィー（HPLC）グレードの水は、Honeywell（Charlotte、NC）から購入しました。 HPLCグレードのイソプロパノール（IPA）、アセトニトリル（ACN）、およびアンモニアはすべてSigma-Aldrich（セントルイス、ミズーリ州）から購入しました。酢酸アンモニウムとウシ血清アルブミン（BSA）は、MilliporeSigma（Burlington、MA）から購入しました。 PBSはLonzaBioWhittaker（Morristown、NJ）から購入しました。特殊なガラスコーティングされた96ウェル抽出プレートとPTFE（ポリテトラフルオロエチレン）ライニングを備えたガラスバイアルは、Thermo-Fisher（マサチューセッツ州、ウォルサム）から入手しました。ヒト血漿（プールおよび個人）はBioIVT（Westbury、NY）から購入しました。
プラズマサンプルの抽出手順
試薬
Avanti Polar Lipids（アラバマ州、アラバマ州）から購入した。この研究では、3つのPI標準が使用されました。内部標準（IS）として使用されるPI（12：0/13：0）、PI（17：0/14：1）、およびPI（21：0/22：6）は代理分析物として使用されます。高速液体クロマトグラフィー（HPLC）グレードの水は、Honeywell（Charlotte、NC）から購入しました。 HPLCグレードのイソプロパノール（IPA）、アセトニトリル（ACN）、およびアンモニアはすべてSigma-Aldrich（セントルイス、ミズーリ州）から購入しました。酢酸アンモニウムとウシ血清アルブミン（BSA）は、MilliporeSigma（Burlington、MA）から購入しました。 PBSはLonzaBioWhittaker（Morristown、NJ）から購入しました。特殊なガラスコーティングされた96ウェル抽出プレートとPTFE（ポリテトラフルオロエチレン）ライニングを備えたガラスバイアルは、Thermo-Fisher（マサチューセッツ州、ウォルサム）から入手しました。ヒト血漿（プールおよび個人）はBioIVT（Westbury、NY）から購入しました。
プラズマサンプルの抽出手順
【0135】
内部標準（ＩＳ）を６０ｎＭ（最終濃度）でイソプロパノール（ＩＰＡ）にスパイクして、ＩＳ－ＩＰＡ溶液を作製した。プールされたヒト血漿の1ロットを品質管理（QC）として使用し、低QC（LQC）（PBS中の40 mg / mLウシ血清アルブミン（BSA）で8倍希釈）と高QC（HQC）（未希釈）の2つのレベルで調製しました。プラズマ）。試験サンプルはすべて40mg/mLBSAで8倍に希釈しました。 HQCとテストサンプルの両方の8倍希釈液は、自動液体処理プラットフォーム、シリーズIII 96 LT使い捨てチップヘッドを備えたAgilentBravo自動液体処理システム（サンタクララ、カリフォルニア州）を使用して調製しました。 20μLのLQC、HQC、またはテストサンプルを、事前に指定されたプレートマップに従って別の抽出プレートに移し、上記の自動化を利用して180μLのIS-IPAで沈殿させました。サンプルは、IKA MTS 2/4デジタルマイクロタイターシェーカー（ノースカロライナ州ウィルミントン）で約10分間（900～1200 rpm）激しく振とうされました。
【0136】
次に、サンプルを２５００ｇで５分間遠心分離した。自動液体処理を再度使用して、IS-IPAで抽出した20μLの血漿を140μLの再構成溶液（90.25％、v / v、アセトニトリル（ACN）、9.75％、v / v、水、10 mM酢酸アンモニウム）に移しました。次に、サンプルを600rpmで5分間振とうしました。
親水性相互作用クロマトグラフィーによる分離
親水性相互作用クロマトグラフィーによる分離
【0137】
クロマトグラフィー分離は、Ａｃｑｕｉｔｙ超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）ＢＥＨ（エチレン架橋ハイブリッド）親水性相互作用で実施された。
Nexera X2 UHPLCシステム（島津、京都、京都府、日本）を備えたクロマトグラフィー（HILIC）カラム（130Å、1.7μm、2.1 mm X 100 mm、ウォーターズ、マサチューセッツ州ミルフォード）。使用した移動相は、移動相A（MPA）（5％水、95％ACN、v / v）および移動相B（MPB）（50％水、50％ACN、v / v）で、両方とも10mMアンモニウムを使用しました。酢酸アンモニウム、pH 8.0～8.5。各サンプルまたはQCについて、10μLの再構成IPA抽出物をカラムに注入しました。分離は、37℃、流速0.5mL/分で行った。分離勾配は、4分間で5％から13％のMPAであり、その後2分間の洗浄期間と4分間の平衡期間が続きました。
質量分析
Nexera X2 UHPLCシステム（島津、京都、京都府、日本）を備えたクロマトグラフィー（HILIC）カラム（130Å、1.7μm、2.1 mm X 100 mm、ウォーターズ、マサチューセッツ州ミルフォード）。使用した移動相は、移動相A（MPA）（5％水、95％ACN、v / v）および移動相B（MPB）（50％水、50％ACN、v / v）で、両方とも10mMアンモニウムを使用しました。酢酸アンモニウム、pH 8.0～8.5。各サンプルまたはQCについて、10μLの再構成IPA抽出物をカラムに注入しました。分離は、37℃、流速0.5mL/分で行った。分離勾配は、4分間で5％から13％のMPAであり、その後2分間の洗浄期間と4分間の平衡期間が続きました。
質量分析
【0138】
質量分析検出は、負のエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）多重反応モニタリング（ＭＲＭ）モードで操作される６５００＋四重極イオントラップ（ＱＴＲＡＰ）質量分析計（Ｓｃｉｅｘ、マサチューセッツ州フレーミングハム）を使用して達成された。上記の合成参照標準PI種を使用して、MS条件を調整し、リテンションタイムを定義しました。 2つのアシル鎖の同定を可能にする負のESIモードでの構造的に特徴的な最高のMRMトランジションは、合成参照標準（代理分析物とIS）のチューニング中に選択されました。次に、LipidView（Sciex、Redwood Shores、CA）を使用して、各内因性PI種の2つのアシル鎖の識別を可能にする構造的に類似したMRMを予測し、表15に示します。合成参照標準を調整した後、すべてに同じソースパラメーターを使用しました。 PI種。取得方法の詳細は表16に記載されています。
データ収集、分析、およびレポート
【表15】
【表16】
【0139】
取得後、各取得バッチからのサンプルを、定義された定量化方法（.qmethod）に従ってMultiQuantソフトウェアで分析した。定量化方法の詳細は、コンポーネントと外れ値の設定について表17に記載されています。統合と回帰の設定は、生成された関心のピークに基づいて、個々のバッチごとに最適化されました。ただし、同じバッチ内のすべてのサンプルに同一の積分および回帰パラメーターが適用されました。内部標準ピーク面積と内因性PI種のピーク面積は、バッチ内のQCサンプルと未知のサンプルについて計算されました。内因性PI種のピーク面積比は、MultiQuantのピーク面積積分に基づいて計算されました。次に、MultiQuant定量化結果ファイル（.qsession）を.txtファイルにエクスポートして、Excel（Microsoft Office 2016）およびSpotfire（TIBCO（R）Spotfire（R）Analyst7.9.2 HF-011ビルドバージョン7.9.2.0.12）を使用してさらにデータを分析しました。各内因性PI種の機器応答の直線性と測定精度を評価するために、以下を評価しました。公称値からのHQC/LQC比の％差。 HQCおよびLQCの場合は％CV。種の大部分は、HQCおよびLQC値の％CVが30％以下であり、HQC / LQC比の公称値との差は70％～130％以内でした。
結果
【表17】
【0140】
安定した冠状動脈性心臓病を有する対象からの合計９７８個の血漿サンプルを上記のように試験した。サンプルは合計15のアッセイで分析されました。一貫して許容できない変動性とHQC/LQC比を持っていたPI（16：0/16：0）を除いて、すべてのPI種について、15のアッセイすべてが許容基準を満たしていました。無効と見なされたアッセイはありませんでした。
【0141】
臨床サンプルもまた、ＭＥＤＩ５８８４を投与された健康なボランティアから得られ、分析された。バッチ間でいくらかの変動が観察された。バッチ間のばらつきを補正し、CAD患者を対象とした臨床研究と健康なボランティアを対象とした臨床研究の間でデータを橋渡しする可能性を探るために、SERRF正規化アルゴリズム（Fan S.、etal。AnalChem Mar 5; 91 5：3590-6（2019））が評価され、このデータセットに対して評価された他の正規化方法よりも優れていることがわかりました。図13A-C、14A-C、15、および16に示す結果は、PIレベルがPI種全体でMEDI5884未治療のCAD患者と比較して健康な被験者で著しく高かったことを示しています。差は、両側の不均一分散t検定によって統計的に有意であると判断されました（12のPI種でp <0.0005）。両方の臨床試験のプラセボ群では、PIレベルは数か月間比較的安定しており、CAD患者の低レベルは検査した12種のPIの健康なボランティアと比較して維持されていました。
【0142】
健康な患者およびＣＡＤを有する患者における様々なＰＩ種のレベル対経時的な訪問日を図１３Ａ～Ｃおよび１４Ａ～Ｃに示す。 21日目の健康なボランティアとCAD患者のPI種レベルの中央値の比較を図15に示し、すべての日のPI種レベルの中央値の比較を図16に示します。図13A～C、14Aに示すように-C、15、および16、MEDI5884の3か月の皮下（SC）投与後、ほとんどの血漿PI種は、プラセボと比較して用量依存的に増加しました。血漿PIの増加の持続時間は、MEDI5884曝露と相関しているように見えた。ほとんどのPI種では、PIレベルの増加はMEDI5884 350 mgの用量レベルで飽和に達し、MEDI5884500mgの用量レベルではベースラインと比較してそれ以上のPIの増加は生じませんでした。しかし、MEDI5884 200 mgの用量レベルで91日目に、PIの増加は、より高い用量のコホートで観察された飽和レベルに近づきました。各PI種のベースラインからの変化率は、CADと健康なボランティアの両方の被験者について、存在量の少ない種の約1000％から存在量の多い種の約100～200％まで変化しました。 （図17A-E、18、および19A-Eを参照してください。表18は、指定された用量と訪問日ですべてのPI種にわたって得られたデータをまとめたものです。また、表19A-19Dは、個々のPI種について得られたデータを示しています。） CAD患者のPI種全体の平均変化は、200 mg以上の用量で最大250～300％の増加に達しました。
* **
【表18】
【表19A】
【表19B】
【表19C】
【表19D】
【0143】
本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではない。実際、記載されたものに加えて本発明の様々な修正が、前述の説明および付随する図から当業者には明らかになるであろう。このような変更は、添付の特許請求の範囲内に含まれることを意図している。
【0144】
本明細書で引用されるすべての参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）は、個々の参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）が具体的にであるかのように、その全体およびすべての目的のために、参照により本明細書に組み込まれる。そして、すべての目的のためにその全体が参照により組み込まれることが個別に示されている。
【0145】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内にある。
【図1A】
【図1B】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13A】
【図13B】
【図13C】
【図14A】
【図14B】
【図14C】
【図15】
【図16】
【図17A】
【図17B】
【図17C】
【図17D】
【図17E】
【図18】
【図19A】
【図19B】
【図19C】
【図19D】
【図19E】
【配列表】
【国際調査報告】