特表 2023-501590 ＣＤ７０を標的化する遺伝子操作されたＴ細胞を使用する造血細胞悪性腫瘍のための療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-01-18

(54)【発明の名称】ＣＤ７０を標的化する遺伝子操作されたＴ細胞を使用する造血細胞悪性腫瘍のための療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/17 20150101AFI20230111BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20230111BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230111BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230111BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230111BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230111BHJP

   A61K 31/675 20060101ALI20230111BHJP

   A61K 31/7076 20060101ALI20230111BHJP

   C12N 5/10 20060101ALN20230111BHJP

   C07K 19/00 20060101ALN20230111BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20230111BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20230111BHJP

【ＦＩ】

A61K35/17 Z

A61P7/00

A61P35/00

A61P35/02

A61P43/00 121

A61K39/395 N

A61K31/675

A61K31/7076

C12N5/10 ZNA

C07K19/00

C12N15/12

C12N15/09 110

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022527744

(86)(22)【出願日】2020-11-13

(85)【翻訳文提出日】2022-07-07

(86)【国際出願番号】 IB2020060718

(87)【国際公開番号】W WO2021095009

(87)【国際公開日】2021-05-20

(31)【優先権主張番号】62/934,945

(32)【優先日】2019-11-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/034,510

(32)【優先日】2020-06-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】518370079

【氏名又は名称】クリスパー セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100138210

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 達則

(74)【代理人】

【識別番号】100134784

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 和美

(72)【発明者】

【氏名】ジョナサン アレクサンダー テレット

(72)【発明者】

【氏名】マリー－リー デケアン

(72)【発明者】

【氏名】マティーアス ビル

【テーマコード（参考）】

4B065

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA94X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065BA03

4B065CA24

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4C087ZB26

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4H045AA10

4H045AA11

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4H045DA50

4H045DA76

4H045EA22

4H045EA28

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本開示の態様は、ＣＤ７０に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する遺伝子操作されたＴ細胞の集団を含む組成物、及びＴ細胞及びＢ細胞悪性腫瘍の治療のためにそれらを使用する方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

造血細胞悪性腫瘍を治療するための方法であって、
（ｉ）造血細胞悪性腫瘍を有するヒト患者を第１のリンパ球枯渇治療にかけること；
（ｉｉ）工程（ｉ）の後に前記ヒト患者に遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量を投与することを含み、遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団が、ＣＤ７０に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、破壊されたＴＲＡＣ遺伝子、破壊されたβ２Ｍ遺伝子、及び破壊されたＣＤ７０遺伝子を発現するＴ細胞を含み、且つ前記ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列が、前記破壊されたＴＲＡＣ遺伝子に挿入される方法。

【請求項2】

工程（ｉ）における前記第１のリンパ球枯渇治療が、前記ヒト患者に１日当たり３０ｍｇ／ｍ^２のフルダラビン及び５００ｍｇ／ｍ^２のシクロホスファミドを３日間にわたって静脈内で同時投与することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

工程（ｉ）の前に、前記ヒト患者が、以下の特徴：
（ａ）パフォーマンス・ステータスのＥＣＯＧ＞１への変化、
（ｂ）臨床状態の著しい悪化、
（ｃ）９２％超の飽和レベルを維持するために酸素補給を必要とすること、
（ｄ）制御されない心不整脈、
（ｅ）血管収縮薬の支援を必要とする低血圧、
（ｆ）活動性感染症、及び
（ｇ）任意の急性神経毒性
の１つ以上を示さない、請求項１又は請求項２に記載の方法。

【請求項4】

工程（ｉ）が、工程（ｉｉ）の約２～７日前に実施される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

工程（ｉｉ）が、遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団を、約１×１０^７個のＣＡＲ^＋細胞～約１×１０^９個のＣＡＲ^＋細胞、任意選択により、約３×１０^７～約９×１０^８個のＣＡＲ＋細胞である前記第１の用量で前記ヒト患者の静脈内に投与することによって実施される、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

工程（ｉｉ）の前及び工程（ｉ）の後に、前記ヒト患者が、以下の特徴：
（ａ）パフォーマンス・ステータスの米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）＞１への変化、
（ｂ）活動性の制御されない感染症、
（ｃ）臨床状態の著しい悪化、及び
（ｄ）任意の急性神経毒性
の１つ以上を示さない、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）の後の急性毒性の発症について前記ヒト患者をモニターすることをさらに含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

急性毒性が、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、神経毒性、腫瘍溶解症候群、ＧｖＨＤ、オンターゲット・オフ腫瘍毒性、及び／又は制御されないＴ細胞増殖を含む、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

（ｉｖ）前記ヒト患者を第２のリンパ球枯渇治療にかけること、及び（ｖ）工程（ｉｉ）の後に、前記ヒト患者に遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団の第２の用量を投与することをさらに含み、任意選択により、前記第２の用量が、前記第１の用量の約８週～約２年後に投与され、且つ任意選択により、前記ヒト患者が、工程（ｉｉ）の後に、以下：
（ａ）用量規制毒性（ＤＬＴ）、
（ｂ）７２時間以内にグレード２に回復しないグレード４のＣＲＳ、
（ｃ）グレード＞１のＧｖＨＤ、
（ｄ）グレード≧３の神経毒性
（ｅ）活動性感染症、
（ｆ）血行動態的に不安定、及び
（ｇ）臓器不全
の１つ以上を示さない、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

工程（ｉｖ）における前記第２のリンパ球枯渇治療が、前記ヒト患者に１日当たり３０ｍｇ／ｍ^２のフルダラビン及び５００ｍｇ／ｍ^２のシクロホスファミドを１～３日間にわたって静脈内で同時投与することを含む、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

工程（ｖ）が、工程（ｉｖ）の２～７日後に実施される、請求項９又は請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

工程（ｖ）が、遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団を、約１×１０^７個のＣＡＲ^＋細胞～約１×１０^９個のＣＡＲ^＋細胞、任意選択により、約３×１０^７～約９×１０^８個のＣＡＲ＋細胞である前記第２の用量で前記ヒト患者の静脈内に投与することによって実施される、請求項９～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記方法がさらに、（ｖｉ）前記ヒト患者を第３のリンパ球枯渇治療にかけること、及び（ｖｉｉ）前記ヒト患者に遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団の第３の用量を投与することを含み、任意選択により、前記ヒト患者が、３ヶ月で遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団の前記第１、第２、及び第３の用量を受容し、且つ任意選択により、前記ヒト患者が、工程（ｖ）の後に以下：
（ａ）用量規制毒性（ＤＬＴ）、
（ｂ）７２時間以内にグレード２に回復しないグレード４のＣＲＳ、
（ｃ）グレード＞１のＧｖＨＤ、
（ｄ）グレード≧３の神経毒性
（ｅ）活動性感染症、
（ｆ）血行動態的に不安定、及び
（ｇ）臓器不全
の１つ以上を示さない、請求項９～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

工程（ｖｉ）における前記第３のリンパ球枯渇治療が、前記ヒト患者に１日当たり３０ｍｇ／ｍ^２のフルダラビン及び５００ｍｇ／ｍ^２のシクロホスファミドを１～３日間にわたって静脈内で同時投与することを含む、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

工程（ｖｉｉ）が、工程（ｖｉ）の２～７日後に実施される、請求項１３又は請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

工程（ｖｉｉ）が、遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団を、約１×１０^７個のＣＡＲ^＋細胞～約１×１０^９個のＣＡＲ^＋細胞、任意選択により、約３×１０^７～約９×１０^８個のＣＡＲ＋細胞である前記第３の用量で前記ヒト患者の静脈内に投与することによって実施される、請求項１３～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記ヒト患者が、安定な疾患又は疾患進行を示す、請求項９～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団の前記第１の用量、前記第２の用量、及び／又は前記第３の用量が、１×１０^７個のＣＡＲ^＋細胞、３×１０^７個のＣＡＲ^＋細胞、１×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞、３×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞、又は１×１０^９個のＣＡＲ^＋細胞であり、任意選択により、遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団の前記第１の用量、前記第２の用量、及び／又は前記第３の用量が、１．５×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞、４．５×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞、６×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞、７．５×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞、又は９×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団の前記第１の用量が、遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団の前記第２及び／又は前記第３の用量と同じである、請求項９～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団の前記第１の用量が、遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団の前記第２及び／又は前記第３の用量より少ない、請求項９～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記ヒト患者が、以前に抗癌療法を受けたことがある、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記ヒト患者が、再発性又は難治性造血細胞悪性腫瘍を有する、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記ヒト患者が、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、及びＴ細胞白血病からなる群から任意選択により選択されるＴ細胞悪性腫瘍を有する、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記ＣＴＣＬが、セザリー症候群（ＳＳ）又は菌状息肉症（ＭＦ）であり、任意選択により、前記ヒト患者が、ステージＩＩｂ以上のＭＦ、任意選択により転化した大細胞リンパ腫を有する、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記ＰＴＣＬが、血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、成人Ｔ細胞白血病又はリンパ腫（ＡＴＬＬ）、又はＰＴＣＬ非特定型（ＰＴＣＬ－ＮＯＳ）である、請求項２３に記載の方法。

【請求項26】

前記ヒト患者が、ＰＴＣＬ、ＡＴＬＬ、又はＡＩＴＬを有し、且つ第一選択の全身療法が無効であった、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記ヒト患者が、ＡＬＣＬを有し、且つブレウツキシマブベドチンを含む組み合わせ療法が無効であった、請求項２５又は請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

前記ヒト患者が、ＡＬＫ^＋ＡＬＣＬを有し、且つ一方がブレンツキシマブベドチンを含む前の２つの選択療法が無効であった、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記ヒト患者が、ＡＬＫ^－ＡＬＣＬを有し、且つ前の１つの選択療法が無効であった、請求項２７に記載の方法。

【請求項30】

前記ヒト患者が、ＭＦ又はＳＳを有し、且つ前の全身療法又は前のモガムリズマブ療法が無効であった、請求項２４に記載の方法。

【請求項31】

前記ヒト患者が、任意選択によりびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）であるＢ細胞悪性腫瘍を有する、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記ヒト患者が、ＤＬＢＣＬを有し、且つ前の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞療法が無効であった、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記ヒト患者が、任意選択により急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である骨髄細胞悪性腫瘍を有する、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記ヒト患者が、遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団の前記第１の用量の前に少なくとも３ヶ月間モガムリズマブ治療を受けていない、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記ヒト患者が、ＣＤ７０＋腫瘍細胞を有する、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記ヒト患者が、前記ヒト患者から得られる生体試料中に少なくとも１０％のＣＤ７０^＋腫瘍細胞を有する、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記生体試料が、腫瘍組織試料であり、ＣＤ７０＋腫瘍細胞のレベルが、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定される、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記生体試料が、血液試料又は骨髄試料であり、ＣＤ７０＋腫瘍細胞のレベルが、フローサイトメトリーによって決定される、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記方法がさらに、工程（ｉ）の前に、任意選択によりＴ細胞悪性腫瘍、Ｂ細胞悪性腫瘍、又は骨髄細胞悪性腫瘍である造血細胞悪性腫瘍に関与するＣＤ７０＋腫瘍細胞を有するヒト患者を同定することを含む、請求項３５～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記ヒト患者が、抗サイトカイン療法にかけられる、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

前記ヒト患者が、以下の特徴：
（ａ）十分な臓器機能、
（ｂ）以前に幹細胞移植（ＳＣＴ）がないこと、
（ｃ）以前に抗ＣＤ７０薬剤又は養子性Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞療法がないこと、
（ｄ）リンパ球枯渇療法に対して既知の禁忌がないこと、
（ｅ）症候性であるか又は症候性であった現在又は過去の悪性貯留液を伴うＴ細胞又はＢ細胞リンパ腫がないこと、
（ｆ）血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）がないこと、
（ｇ）中枢神経系悪性腫瘍又は障害がないこと、
（ｈ）不安定狭心症、不整脈、及び／又は心筋梗塞がないこと、
（ｉ）糖尿病がないこと、
（ｊ）制御されない感染症がないこと、
（ｋ）免疫抑制性の療法を必要とする免疫不全障害又は自己免疫障害がないこと、並びに
（ｌ）固形臓器移植がないこと
の１つ以上を有する、請求項１～４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

前記ヒト患者が、遺伝子操作されたＴ細胞の前記集団のそれぞれの投与の後に毒性の発症に関して少なくとも２８日間モニターされる、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

前記ヒト患者が、毒性の発症が観察される場合、毒性管理にかけられる、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記ヒト患者が、成人である、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

ＣＤ７０に結合する前記ＣＡＲが、細胞外ドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζ細胞質内シグナル伝達ドメインを含み、前記細胞外ドメインが、ＣＤ７０に結合する単鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

前記ｓｃＦｖが、配列番号４９を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号５０を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記ｓｃＦｖが、配列番号４８を含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記ＣＡＲが、配列番号４６を含む、請求項４５～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記破壊されたＴＲＡＣ遺伝子が、配列番号８又は９のスペーサー配列を含むガイドＲＮＡを含むＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集システムによって生成される、請求項１～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

前記破壊されたＴＲＡＣ遺伝子が、配列番号８又は９の前記スペーサー配列によって標的化される領域又はその一部の欠失を有する、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記破壊されたβ２Ｍ遺伝子が、配列番号１２又は１３のスペーサー配列を含むガイドＲＮＡを含むＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集システムによって生成される、請求項１～５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

前記破壊されたＣＤ７０遺伝子が、配列番号４又は５のスペーサー配列を含むガイドＲＮＡを含むＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集システムによって生成される、請求項１～５１のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１１月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／９３４，９４５号、及び２０２０年６月４日に出願された米国仮特許出願第６３／０３４，５１０号に対する優先権の利益を主張する。先行出願の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法は、遺伝子改変Ｔ細胞を使用して、癌細胞をより特異的且つ効率的に標的化して死滅させる。Ｔ細胞が血液から回収された後、この細胞は、その表面上にＣＡＲを含むように操作される。ＣＡＲは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集技術を使用してＴ細胞に導入され得る。これらの同種異系ＣＡＲ Ｔ細胞が患者に注射されるとき、受容体は、Ｔ細胞が癌細胞を死滅させることを可能にする。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0003】

本開示は、本明細書で開示されるＣＴＸ１３０細胞などの抗ＣＤ７０ＣＡＲ＋Ｔ細胞が、皮下Ｔ細胞リンパ腫異種移植モデルにおいて長期間の腫瘍消失をもたらしたという驚くべき発見に少なくとも部分的に基づく。例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）は、投与後の少なくとも９０日間完全な腫瘍消失をもたらした。腫瘍量の著しい減少はまた、追加の皮下Ｔ細胞リンパ腫異種移植モデルにおいても観察された。さらに、ＣＴＸ１３０細胞の分布、増殖、及び持続は、ＣＡＲ－Ｔ細胞を受容するヒト対象において観察された。優れた治療有効性はまた、ＣＴＸ１３０細胞治療を受けたヒトリンパ腫患者においても観察された。

【0004】

したがって、本開示は、いくつかの態様では、造血細胞悪性腫瘍（例えば、Ｔ細胞若しくはＢ細胞悪性腫瘍、又は骨髄細胞悪性腫瘍）を治療するための方法であって、（ｉ）造血細胞悪性腫瘍を有するヒト患者（例えば、ヒト成人患者）を、第１のリンパ球枯渇治療にかけること；及び（ｉｉ）工程（ｉ）の後にヒト患者に遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量を投与することを含む方法を提供する。遺伝子操作されたＴ細胞の集団は、ＣＤ７０に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、破壊されたＴＲＡＣ遺伝子、破壊されたβ２Ｍ遺伝子、及び破壊されたＣＤ７０遺伝子を発現するＴ細胞を含み、且つＣＡＲをコードするヌクレオチド配列は、破壊されたＴＲＡＣ遺伝子に挿入される。場合により、遺伝子操作されたＴ細胞の集団は、本明細書で開示されるとおりのＣＴＸ１３０細胞である。いくつかの実施形態では、工程（ｉ）は、工程（ｉｉ）の約２～７日前に実施され得る。

【0005】

いくつかの実施形態では、工程（ｉ）における第１のリンパ球枯渇治療は、ヒト患者に１日当たり３０ｍｇ／ｍ^２のフルダラビン及び５００ｍｇ／ｍ^２のシクロホスファミドを３日間にわたって静脈内で同時投与することを含む。或いは又は加えて、工程（ｉｉ）は、遺伝子操作されたＴ細胞の集団を、約１×１０^７個のＣＡＲ^＋細胞～約１×１０^９個のＣＡＲ^＋細胞であり得る第１の用量でヒト患者の静脈内に投与することによって実施される。場合により、第１の用量は、約３×１０^７～約９×１０^８個のＣＡＲ＋細胞の範囲であり得る。

【0006】

いくつかの実施形態では、工程（ｉ）前に、ヒト患者は、以下の特徴：（ａ）パフォーマンス・ステータスのＥＣＯＧ＞１への変化、（ｂ）臨床状態の著しい悪化、（ｃ）９２％超の飽和レベルを維持するために酸素補給を必要とすること、（ｄ）制御されない心不整脈、（ｅ）血管収縮薬の支援を必要とする低血圧、（ｆ）活動性感染症、及び（ｇ）任意の急性神経毒性（例えば、≧２の急性神経毒性）の１つ以上を示さない。

【0007】

いくつかの実施形態では、工程（ｉｉ）の前及び工程（ｉ）の後に、ヒト患者は、以下の特徴：（ａ）パフォーマンス・ステータスの米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）＞１への変化；（ｂ）活動性の制御されない感染症、（ｃ）臨床状態の著しい悪化、及び（ｄ）任意の急性神経毒性（例えば、≧２の急性神経毒性）の１つ以上を示さない。

【0008】

本明細書で開示される方法のいずれかはさらに、工程（ｉｉ）の後に急性毒性の発症に関してヒト患者をモニターすることを含む。例示的な急性毒性は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、神経毒性、腫瘍溶解症候群、ＧｖＨＤ、オンターゲット・オフ腫瘍毒性、制御されないＴ細胞増殖、又はそれらの組み合わせを含み得る。

【0009】

場合により、本明細書で開示される方法はさらに、ヒト患者を第２のリンパ球枯渇治療にかけること、及び工程（ｉｉ）の後にヒト患者に遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第２の用量を投与することを含み得る。場合により、第２の用量は、第１の用量の約８週～約２年後にヒト患者に投与される。いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の第２の用量に適格なヒト患者は、工程（ｉｉ）の後に以下の１つ以上を示さない：（ａ）用量規制毒性（ＤＬＴ）、（ｂ）グレード＞１のＧｖＨＤ、（ｃ）７２時間以内にグレード２に回復しないグレード４のＣＲＳ、（ｄ）グレード≧３の神経毒性；（ｅ）活動性感染症、（ｆ）血行動態的に不安定、及び（ｇ）臓器不全。いくつかの例では、工程（ｉｖ）における第２のリンパ球枯渇治療は、ヒト患者に１日当たり３０ｍｇ／ｍ^２のフルダラビン及び５００ｍｇ／ｍ^２のシクロホスファミドを１～３日間にわたって静脈内で同時投与することを含む。いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の第２の用量は、第２のリンパ球枯渇治療の２～７日後にヒト患者に投与され得る。いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第２の用量は、約１×１０^７個のＣＡＲ^＋細胞～約１×１０^９個のＣＡＲ^＋細胞でヒト患者の静脈内に投与され得る。例えば、第２の用量は、約３×１０^７～約９×１０^８個のＣＡＲ＋細胞の範囲であり得る。

【0010】

場合により、方法はさらに、ヒト患者を第３のリンパ球枯渇治療にかけること、及びヒト患者に遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第３の用量を投与することを含み得る。いくつかの例では、第３の用量は、第２の用量の約８週～約２年後にヒト患者に投与され得る。ヒト患者は、３ヶ月で遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１、第２、及び第３の用量を受容してもよく、遺伝子操作されたＴ細胞の第２の用量の後に以下の１つ以上を示さない：（ａ）用量規制毒性（ＤＬＴ）、（ｂ）７２時間以内にグレード２に回復しないグレード４のＣＲＳ、（ｃ）グレード＞１のＧｖＨＤ、（ｄ）グレード≧３の神経毒性、（ｅ）活動性感染症、（ｆ）血行動態的に不安定、及び（ｇ）臓器不全。いくつかの例では、第３のリンパ球枯渇治療は、ヒト患者に１日当たり３０ｍｇ／ｍ^２のフルダラビン及び５００ｍｇ／ｍ^２のシクロホスファミドを１～３日間にわたって静脈内で同時投与することを含み得る。場合により、遺伝子操作されたＴ細胞の第３の用量は、第３のリンパ球枯渇治療の２～７日後にヒト患者に投与され得る。いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第３の用量は、約１×１０^７個のＣＡＲ^＋細胞～約１×１０^９個のＣＡＲ^＋細胞でヒト患者の静脈内に投与され得る。例えば、第３の用量は、約３×１０^７～約９×１０^８個のＣＡＲ＋細胞の範囲であり得る。

【0011】

遺伝子操作されたＴ細胞の第２及び／又は第３の用量を受容するヒト患者のいずれかは、安定した疾患又は疾患進行を示し得る。

【0012】

いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量、第２の用量、及び／又は第３の用量は、１×１０^７個のＣＡＲ^＋細胞である。いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量、第２の用量、及び／又は第３の用量は、約３×１０^７個のＣＡＲ^＋細胞である。いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量、第２の用量、及び／又は第３の用量は、約１×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞である。いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量、第２の用量、及び／又は第３の用量は、約１．５×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞である。いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量、第２の用量、及び／又は第３の用量は、約３×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞である。いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量、第２の用量、及び／又は第３の用量は、約４．５×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞である。いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量、第２の用量、及び／又は第３の用量は、約６×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞である。いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量、第２の用量、及び／又は第３の用量は、約７．５×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞である。いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量、第２の用量、及び／又は第３の用量は、約９×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞である。いくつかの例では、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量、第２の用量、及び／又は第３の用量は、約１×１０^９個のＣＡＲ^＋細胞である。

【0013】

場合により、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量は、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第２及び／又は第３の用量と同じである。他の場合、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第１の用量は、遺伝子操作されたＴ細胞の集団の第２及び／又は第３の用量より少ない。

【0014】

本明細書で開示される方法のいずれかにおいて、ヒト患者は、以前に抗癌療法を受けていてもよい。或いは又は加えて、ヒト患者は、再発性又は難治性造血細胞悪性腫瘍を有してもよい。

【0015】

いくつかの実施形態では、ヒト患者は、Ｔ細胞悪性腫瘍、例えば、再発性又は難治性Ｔ細胞悪性腫瘍を有する。いくつかの例では、ヒト患者は、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）を有する。そのようなヒト患者は、菌状息肉症（ＭＦ）、例えば、転化した大細胞リンパ腫を含むステージＩＩｂ以上のものを有し得る。或いは、ヒト患者は、セザリー症候群（ＳＳ）を有し得る。他の例では、ヒト患者は、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）を有する。例としては、血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、Ａｌｋ陽性又はＡｌｋ陰性であり得る未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、くすぶり型サブタイプを除外し得る（非くすぶり型ＡＴＬＬ）成人Ｔ細胞白血病又はリンパ腫（ＡＴＬＬ）；及び末梢性Ｔ細胞リンパ腫非特定型（ＰＴＣＬ－ＮＯＳ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0016】

いくつかの例では、ヒト患者は、ＰＴＣＬ、ＡＴＬＬ、又はＡＩＴＬを有し、且つ第一選択の全身療法が無効であった。いくつかの例では、ヒト患者は、ＡＬＣＬを有し、且つブレウツキシマブベドチンを含む組み合わせ療法が無効であった。いくつかの例では、ヒト患者は、ＡＬＫ^＋ＡＬＣＬを有し、且つ一方がブレンツキシマブベドチンを含む、前の２つの選択療法が無効であった。他の例では、ヒト患者は、ＡＬＫ^－ＡＬＣＬを有し、且つ前の１つの選択療法が無効であった。さらに他の例では、ヒト患者は、ＭＦ又はＳＳを有し、且つ前の全身療法又は前のモガムリズマブ療法が無効であった。

【0017】

いくつかの実施形態では、ヒト患者は、Ｂ細胞悪性腫瘍、例えば、再発性又は難治性Ｂ細胞悪性腫瘍を有し得る。いくつかの例では、ヒト患者は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を有する。そのようなヒト患者は、前の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞療法が無効であった可能性がある。他の例では、ヒト患者は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を有する。

【0018】

さらに他の実施形態では、ヒト患者は、骨髄細胞悪性腫瘍、例えば、再発性又は難治性骨髄細胞悪性腫瘍を有し得る。いくつかの例では、ヒト患者は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有する。

【0019】

本明細書で開示される方法によって治療されることになるヒト患者のいずれかは、遺伝子改変Ｔ細胞の集団の第１の用量の前に少なくとも３ヶ月間モガムリズマブ治療を受けていない可能性がある。

【0020】

本明細書で開示される方法のいずれかにおいて、ヒト患者は、ＣＤ７０＋腫瘍細胞を有し得る。例えば、ヒト患者は、ヒト患者から得られる生体試料中に少なくとも１０％のＣＤ７０^＋腫瘍細胞を有し得る。場合により、生体試料は、腫瘍組織試料であり、ＣＤ７０＋腫瘍細胞のレベルは、免疫組織化学（ＩＣＨ）によって測定される。他の場合、生体試料は、血液試料又は骨髄試料であり、ＣＤ７０＋腫瘍細胞のレベルは、フローサイトメトリーによって決定される。本明細書で開示される方法のいずれかはさらに、工程（ｉ）の前に、Ｔ細胞又はＢ細胞悪性腫瘍に関与するＣＤ７０＋腫瘍細胞を有するヒト患者を同定することを含み得る。

【0021】

或いは又は加えて、本明細書で開示される方法によって治療されることになるヒト患者は、抗サイトカイン療法にかけられ得る。いくつかの例では、ヒト患者は、以下の特徴の１つ以上を有する：（ａ）十分な臓器機能、（ｂ）以前に幹細胞移植（ＳＣＴ）がないこと、（ｃ）以前に抗ＣＤ７０薬剤又は養子性Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞療法がないこと、（ｄ）リンパ球枯渇療法に対して既知の禁忌がないこと、（ｅ）症候性であるか又は症候性であった現在又は過去の悪性貯留液を伴うＴ細胞又はＢ細胞リンパ腫がないこと、（ｆ）血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）がないこと、（ｇ）中枢神経系悪性腫瘍又は障害がないこと、（ｈ）不安定狭心症、不整脈、及び／又は心筋梗塞がないこと、（ｉ）糖尿病がないこと、（ｊ）制御されない感染症がないこと、（ｋ）免疫抑制性の療法を必要とする免疫不全障害又は自己免疫障害がないこと、並びに（ｌ）固形臓器移植がないこと。

【0022】

本明細書で開示される方法のいずれかにおいて、ヒト患者は、遺伝子操作されたＴ細胞の集団のそれぞれの投与の後に毒性の発症に関して少なくとも２８日間モニターされ得る。毒性の発症が観察される場合、ヒト患者は、毒性管理にかけられ得る。

【0023】

遺伝子操作されたＴ細胞は、ＣＤ７０に結合するＣＡＲを発現し得る。ＣＡＲは、細胞外ドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζ細胞質内シグナル伝達ドメインを含み得る。場合により、細胞外ドメインは、ＣＤ７０に結合する単鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）である。いくつかの例では、ｓｃＦｖは、配列番号４９を含む重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び配列番号５０を含む軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む。いくつかの例では、ｓｃＦｖは、配列番号４８を含む。いくつかの特定の例では、ＣＡＲは、配列番号４６を含む。

【0024】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＴ細胞は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集システムによって生成され得る破壊されたＴＲＡＣ遺伝子を有する。いくつかの例では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集システムは、配列番号８又は９のスペーサー配列を含むガイドＲＮＡを含み得る。いくつかの例では、破壊されたＴＲＡＣ遺伝子は、配列番号８のスペーサーによって標的化される領域、又はその一部の欠失を有する。

【0025】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＴ細胞は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集システムによって生成され得る破壊されたβ２Ｍ遺伝子を有する。いくつかの例では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集システムは、配列番号１２又は１３のスペーサー配列を含むガイドＲＮＡを含み得る。

【0026】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＴ細胞は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集システムによって生成され得る破壊されたＣＤ７０遺伝子を有する。いくつかの例では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集システムは、配列番号４又は５のスペーサー配列を含むガイドＲＮＡを含み得る。

【0027】

本発明の１つ以上の実施形態の詳細が以下の説明に記載される。本発明の他の特徴又は利点は、以下の図面及びいくつかの実施形態の詳細な説明並びに添付の特許請求の範囲からも明白になるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0028】

【図1】ＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋（すなわち、３Ｘ ＫＯ（ＣＤ７０）、ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋）Ｔ細胞における効率的な多重遺伝子編集を示すグラフを含む。

【図2】ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の正常な集団が、ＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞集団の間で維持されることを示すグラフを含む。

【図3】ＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞における強い細胞増殖を示すグラフを含む。生存細胞の総数は、３Ｘ ＫＯ（ＴＲＡＣ－／β２Ｍ－／ＣＤ７０－）及び２Ｘ ＫＯ（ＴＲＡＣ－／β２Ｍ－）抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞において定量化された。３Ｘ ＫＯ細胞は、ＣＤ７０ ｓｇＲＮＡ Ｔ７又はＴ８のいずれかにより生成された。

【図4A】様々な癌細胞株における相対的なＣＤ７０発現を示すグラフを含む。図４Ａ：９種の異なる癌細胞株における相対的なＣＤ７０発現を示すグラフ。

【図4B】癌細胞株における相対的なＣＤ７０発現を示すグラフを含む。図４Ｂ：様々なエフェクター：標的比でＣＤ７０欠損慢性骨髄性白血病（Ｋ５６２）細胞に対する三重ノックアウトＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞（３ＫＯ（ＣＤ７０）、ＣＤ７０、ＣＡＲ＋）を使用して細胞死滅活性を示すグラフ。

【図4C】癌細胞株における相対的なＣＤ７０発現を示すグラフを含む。図４Ｃ：様々なエフェクター：標的比でのＣＤ７０発現多発性骨髄腫（ＭＭ．１Ｓ）細胞に対する同じ三重ノックアウトＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞（３ＫＯ（ＣＤ７０）、ＣＤ７０、ＣＡＲ＋）の細胞死滅活性を示すグラフ。

【図4D】癌細胞株における相対的なＣＤ７０発現を示すグラフを含む。図４Ｄ：様々なエフェクター：標的比でのＣＤ７０発現Ｔ細胞リンパ腫（ＨｕＴ７８）細胞に対する同じ三重ノックアウトＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞（３ＫＯ（ＣＤ７０）、ＣＤ７０、ＣＡＲ＋）の細胞死滅活性を示すグラフ。

【図4E】癌細胞株における相対的なＣＤ７０発現を示すグラフを含む。図４Ｅ：様々なエフェクター：標的比での高ＣＤ７０発現Ｔ細胞リンパ腫細胞（ＭＪ）、低ＣＤ７０発現Ｔ細胞リンパ腫細胞（ＨｕＴ７８）、及び非ＣＤ７０発現陰性対照細胞（Ｋ５６２）に対する同じ三重ノックアウトＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞（３ＫＯ（ＣＤ７０）、ＣＤ７０、ＣＡＲ＋）の細胞死滅活性を示すグラフ。

【図4F】ＭＶ４１１（図４Ｆ）、ＥＯＬ－１（図４Ｇ）、ＨＬ６０（図４Ｈ）、Ｋａｓｕｍｉ－１（図４Ｈ）、ＫＧ１（図４Ｊ）、及びＴＨＰ－１細胞（図４Ｋ）を含む様々な型の急性骨髄性白血病細胞株におけるＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０）の細胞死滅活性を示すグラフ。

【図4G】ＭＶ４１１（図４Ｆ）、ＥＯＬ－１（図４Ｇ）、ＨＬ６０（図４Ｈ）、Ｋａｓｕｍｉ－１（図４Ｈ）、ＫＧ１（図４Ｊ）、及びＴＨＰ－１細胞（図４Ｋ）を含む様々な型の急性骨髄性白血病細胞株におけるＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０）の細胞死滅活性を示すグラフ。

【図4H】ＭＶ４１１（図４Ｆ）、ＥＯＬ－１（図４Ｇ）、ＨＬ６０（図４Ｈ）、Ｋａｓｕｍｉ－１（図４Ｈ）、ＫＧ１（図４Ｊ）、及びＴＨＰ－１細胞（図４Ｋ）を含む様々な型の急性骨髄性白血病細胞株におけるＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０）の細胞死滅活性を示すグラフ。

【図4H】ＭＶ４１１（図４Ｆ）、ＥＯＬ－１（図４Ｇ）、ＨＬ６０（図４Ｈ）、Ｋａｓｕｍｉ－１（図４Ｈ）、ＫＧ１（図４Ｊ）、及びＴＨＰ－１細胞（図４Ｋ）を含む様々な型の急性骨髄性白血病細胞株におけるＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０）の細胞死滅活性を示すグラフ。

【図4J】ＭＶ４１１（図４Ｆ）、ＥＯＬ－１（図４Ｇ）、ＨＬ６０（図４Ｈ）、Ｋａｓｕｍｉ－１（図４Ｈ）、ＫＧ１（図４Ｊ）、及びＴＨＰ－１細胞（図４Ｋ）を含む様々な型の急性骨髄性白血病細胞株におけるＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０）の細胞死滅活性を示すグラフ。

【図4K】ＭＶ４１１（図４Ｆ）、ＥＯＬ－１（図４Ｇ）、ＨＬ６０（図４Ｈ）、Ｋａｓｕｍｉ－１（図４Ｈ）、ＫＧ１（図４Ｊ）、及びＴＨＰ－１細胞（図４Ｋ）を含む様々な型の急性骨髄性白血病細胞株におけるＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０）の細胞死滅活性を示すグラフ。

【図5A】抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞、例えば、ＣＴＸ１３０細胞の抗腫瘍活性を示すグラフを含む。図５Ａ：ＴＲＡＣ－／Ｂ２Ｍ－／ＣＤ７０－抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞、例えば、ＣＴＸ１３０細胞に暴露されたヒトＴ細胞リンパ腫異種移植モデル（例えば、ＨｕＴ７８腫瘍細胞）における腫瘍体積の減少を示すグラフ。

【図5B】抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞、例えば、ＣＴＸ１３０細胞の抗腫瘍活性を示すグラフを含む。図５Ｂ：ＴＲＡＣ－／Ｂ２Ｍ－／ＣＤ７０－抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞、例えば、ＣＴＸ１３０細胞に暴露されたヒトＴ細胞リンパ腫異種移植モデル（例えば、Ｈｈ腫瘍細胞）における腫瘍体積の減少を示すグラフ。

【図6】再発性又は難治性Ｔ細胞又はＢ細胞悪性腫瘍を有する成人対象へのＣＴＸ１３０細胞投与を評価する例示的な臨床試験デザインを示す模式図である。ＤＬＴ：用量規制毒性；Ｍ：月；ｍａｘ：最大；ｍｉｎ：最小。ＤＬＴ評価期間は、ＣＴＸ１３０注入後の最初の２８日である。

【発明を実施するための形態】

【0029】

本発明の１つ以上の実施形態の詳細が以下の説明に記載される。本発明の他の特徴又は利点は、以下の図面及びいくつかの実施形態の詳細な説明並びに添付の特許請求の範囲からも明白になるであろう。

【0030】

ＣＤ７０は、ＩＩ型膜タンパク質及び腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーメンバーＣＤ２７のためのリガンドであり、健康な組織発現分布は、ヒト及びマウスの両方において活性化リンパ球並びに樹状細胞及び胸腺上皮細胞のサブセットに限定される。

【0031】

その堅固に制御された正常組織発現とは対照的に、ＣＤ７０は一般的に、末梢性Ｔ細胞リンパ腫非特定型（ＰＴＣＬ－ＮＯＳ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、菌状息肉症（ＭＦ）を含むセザリー症候群（ＳＳ）、非くすぶり型急性成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ：ＰＴＣＬ－ＡＩＴＬとしても知られる）、及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を含む複数のＴ細胞及びＢ細胞悪性腫瘍において高いレベルで発現される。ＣＤ７０はまた、骨髄悪性腫瘍などの他の造血性悪性腫瘍においても発現される。

【0032】

Ｔ細胞及びＢ細胞悪性腫瘍などの造血細胞悪性腫瘍は、化学療法及び／又はチェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）などの従来の治療を使用して治療され得るが、患者は、治療後に十分に又は全く応答しないか、又は再発する場合がある。そのような患者は、延命効果が確立している治療選択肢がなく、新しい治療法の選択肢を必要としている。

【0033】

驚くべきことに、ＣＴＸ１３０細胞などの本明細書で開示される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞は、皮下Ｔ細胞リンパ腫異種移植モデルにおいて腫瘍量を順調に減少させ、長期間（例えば、治療後９０日）腫瘍増殖を消失させた長期のインビボ有効性を示した。

【0034】

したがって、本開示は、いくつかの態様では、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び骨髄細胞悪性腫瘍を治療するための抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の治療的使用を提供する。抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞、そのようなものを生成する方法（例えば、ＣＲＩＳＰＲ手法を介して）、並びに本明細書で開示される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞を作製するための構成要素及びプロセス（例えば、遺伝子編集のためのＣＲＩＳＰＲ手法及びそこで使用される構成要素）もまた、本開示の範囲内である。

【0035】

Ｉ．抗ＣＤ７０同種異系ＣＡＲ Ｔ細胞
本明細書では、Ｔ細胞悪性腫瘍、Ｂ細胞悪性腫瘍、又は骨髄細胞悪性腫瘍などの造血細胞悪性腫瘍を治療する際の使用のための抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）が開示される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞は、破壊されたＴＲＡＣ遺伝子、破壊されたＢ２Ｍ遺伝子、破壊されたＣＤ７０遺伝子、又はそれらの組み合わせを有する同種異系Ｔ細胞である。特定の例では、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞は、抗ＣＤ７０ ＣＡＲを発現し、内在性ＴＲＡＣ、Ｂ２Ｍ、及びＣＤ７０遺伝子が破壊されている。当技術分野で知られる任意の好適な遺伝子編集方法、例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、又はＲＮＡ誘導型ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９ヌクレアーゼ（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９；クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート関連９）を使用するヌクレアーゼ依存性標的化編集が、本明細書で開示される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞を作製するために使用され得る。

【0036】

抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の例示的な遺伝子改変は、Ｔ細胞受容体アルファ定常（ＴＲＡＣ）、β２Ｍ、ＣＤ７０、又はそれらの組み合わせの標的化された破壊を含む。ＴＲＡＣ座位を破壊することで、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の発現の減少がもたらされ、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の可能性を低減させることが意図される一方、β２Ｍ座位を破壊することで、主要組織適合複合体タイプＩ（ＭＨＣ Ｉ）タンパク質の発現の減少がもたらされ、宿主拒絶反応の可能性を低減させることによって持続性を向上させることが意図される。ＣＤ７０の破壊は、ＣＤ７０の発現の減少をもたらし、これはＣＤ７０ ＣＡＲの挿入の前に起こり得る細胞と細胞の兄弟殺しを妨げる。抗ＣＤ７０ ＣＡＲを加えることにより、改変Ｔ細胞がＣＤ７０発現腫瘍細胞に誘導される。

【0037】

抗ＣＤ７０ ＣＡＲは、ＣＤ７０に特異的な抗ＣＤ７０単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）に続いて、細胞内共シグナル伝達ドメイン（例えば、４－１ＢＢ共刺激ドメイン）及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインに融合されるヒンジドメイン及び膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ８ヒンジ及び膜貫通ドメイン）を含み得る。

【0038】

（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）とは、望ましくない細胞、例えば癌細胞などの疾患細胞によって発現される抗原を認識し、結合するように操作されている人工の免疫細胞受容体を指す。ＣＡＲポリペプチドを発現するＴ細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞と呼ばれる。ＣＡＲは、ＭＨＣに制限されない様式において、選択された標的に対するＴ細胞の特異性及び反応性を再誘導する能力を有する。ＭＨＣに制限されない抗原認識は、抗原プロセシングに非依存的な抗原を認識する能力をＣＡＲ－Ｔ細胞に与え、それにより腫瘍エスケープの主要な機構をバイパスする。さらに、ＣＡＲは、Ｔ細胞に発現する場合、有利には、内在性のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のアルファ鎖及びベータ鎖と二量体化しない。

【0039】

様々な世代のＣＡＲが存在し、その各々が異なる構成要素を含む。第一世代のＣＡＲは、ヒンジ及び膜貫通ドメインを介して抗体に由来するｓｃＦｖをＴ細胞受容体のＣＤ３ゼータ（ζ又はｚ）細胞内シグナル伝達ドメインに連結する。第二世代のＣＡＲは、共刺激シグナルを供給するための追加の共刺激ドメイン、例えばＣＤ２８、４－１ＢＢ（４１ＢＢ）又はＩＣＯＳを組み込んでいる。第三世代のＣＡＲは、ＴＣＲのＣＤ３ζ鎖と融合した２つの共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ又はＯＸ４０の組み合わせ）を含有する。（Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１５；１２５（２６）：４０１７－４０２３；Ｋａｋａｒｌａ ａｎｄ Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋ，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．２０１４；２０（２）：１５１－１５５）。様々な世代のＣＡＲコンストラクトは、いずれも本開示の範囲内である。

【0040】

一般に、ＣＡＲは、標的抗原（例えば、抗体の単鎖フラグメント（ｓｃＦｖ）又は他の抗体フラグメント）を認識する細胞外ドメインを含む融合ポリペプチドであり、細胞内ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体（例えば、ＣＤ３ζ）のシグナル伝達ドメインを含み、これは、ほとんどの場合に共刺激ドメインである。（Ｅｎｂｌａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ．２０１５；２６（８）：４９８－５０５）。ＣＡＲコンストラクトはさらに、細胞外ドメインと細胞内ドメインとの間にヒンジ及び膜貫通ドメインを含む場合があり、表面に発現するためにＮ末端にシグナルペプチドを含む場合がある。シグナルペプチドの例としては、ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰ（配列番号５２）及びＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号５３）が挙げられる。他のシグナルペプチドが使用されてもよい。

【0041】

（ａ）抗原結合細胞外ドメイン
抗原結合細胞外ドメインとは、ＣＡＲが細胞表面に発現すると、細胞外液にさらされるＣＡＲポリペプチドの領域のことである。場合により、細胞表面発現を促進するために、シグナルペプチドがＮ末端に位置し得る。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖであり、抗体重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と抗体軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを（いずれかの方向に）含み得る）であり得る。場合により、Ｖ_Ｈフラグメント及びＶ_Ｌフラグメントは、ペプチドリンカーを介して連結され得る。リンカーは、いくつかの実施形態では、可動性のために一続きのグリシン及びセリン並びに可溶性を付与するために一続きのグルタミン酸塩及びリシンを含んだ親水性残基を含む。ｓｃＦｖフラグメントは、親抗体の抗原結合特異性を保持しており、そこからｓｃＦｖフラグメントが誘導される。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒト化Ｖ_Ｈドメイン及び／又はＶ_Ｌドメインを含み得る。他の実施形態では、ｓｃＦｖのＶ_Ｈドメイン及び／又はＶ_Ｌドメインは、完全ヒト型である。

【0042】

抗原結合細胞外ドメインは、目的の標的抗原、例えば、腫瘍抗原などの病的抗原に特異的であり得る。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、通常、全く発現されない場合があるか、又は低レベルでのみ発現される場合がある非腫瘍細胞よりも腫瘍細胞中において高レベルで発現されるタンパク質などの免疫原性分子を指す「腫瘍関連抗原」である。いくつかの実施形態では、腫瘍を内部に持つ宿主の免疫系によって認識される腫瘍関連構造は、腫瘍関連抗原と称される。いくつかの実施形態では、腫瘍関連抗原は、ほとんどの種類の腫瘍によって広範に発現される場合、普遍的な腫瘍抗原である。いくつかの実施形態では、腫瘍関連抗原は、分化抗原、変異性抗原、過剰発現細胞抗原又はウイルス抗原である。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍細胞に固有のタンパク質などの免疫原性分子を指す「腫瘍特異抗原」又は「ＴＳＡ」である。腫瘍特異抗原は、腫瘍細胞中、例えば特定の種類の癌細胞中のみで発現される。

【0043】

いくつかの例では、本明細書で開示されるＣＡＲコンストラクトは、ＣＤ７０に結合することができるｓｃＦｖ細胞外ドメインを含む。抗ＣＤ７０ ＣＡＲの例は、下の実施例で提供される。

【0044】

（ｂ）膜貫通ドメイン
本明細書に開示されるＣＡＲポリペプチドは、膜にまたがる疎水性αヘリックスであり得る膜貫通ドメインを含有し得る。本明細書で使用する場合、「膜貫通ドメイン」とは、好ましくは、真核細胞膜である細胞膜内で熱力学的に安定な任意のタンパク質構造体を指す。膜貫通ドメインは、それ自体を含有するＣＡＲの安定性をもたらし得る。

【0045】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインであり得る。他の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインであり得る。さらに他の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８及びＣＤ２８膜貫通ドメインのキメラである。他の膜貫通ドメインが、本明細書に提供されるとおりに使用されてもよい。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳ ＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧ ＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲ（配列番号５４）又はＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹ（配列番号５５）の配列を含有するＣＤ８ａ膜貫通ドメインである。他の膜貫通ドメインを使用し得る。

【0046】

（ｃ）ヒンジドメイン
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＡＲの細胞外ドメイン（抗原結合ドメインを含む）と膜貫通ドメインとの間に位置し得るか、又はＣＡＲの細胞質ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置し得る。ヒンジドメインは、ポリペプチド鎖において膜貫通ドメインを細胞外ドメイン及び／又は細胞質ドメインに連結するように機能する任意のオリゴペプチド又はポリペプチドであり得る。ヒンジドメインは、ＣＡＲ若しくはそのドメインに可動性をもたらすか、又はＣＡＲ若しくはそのドメインの立体障害を防ぐように機能し得る。

【0047】

いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、最大で３００個のアミノ酸（例えば、１０～１００個のアミノ酸又は５～２０個のアミノ酸）を含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの他の領域に１つ以上のヒンジドメインが含まれ得る。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジドメインであり得る。他のヒンジドメインが使用されてもよい。

【0048】

（ｄ）細胞内シグナル伝達ドメイン
ＣＡＲコンストラクトのいずれも、受容体の機能的末端である１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ及び任意選択的に１つ以上の共刺激ドメイン）を含む。抗原認識後、受容体がクラスター化し、シグナルが細胞に伝達される。

【0049】

ＣＤ３ζは、Ｔ細胞受容体複合体の細胞質シグナル伝達ドメインである。ＣＤ３ζは、Ｔ細胞が同種抗原と会合した後にＴ細胞に活性化シグナルを伝達する３つの免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。多くの場合、ＣＤ３ζは、初代Ｔ細胞の活性化シグナルを提供するが、十分に適格な活性化シグナルではなく、共刺激シグナル伝達を必要とする。

【0050】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲポリペプチドはさらに、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。例えば、ＣＤ３ζによって媒介される一次シグナル伝達とともにＣＤ２８及び／又は４－１ＢＢの共刺激ドメインを使用して、十分な増殖／生存シグナルを伝達し得る。いくつかの例では、本明細書に開示されるＣＡＲは、ＣＤ２８共刺激分子を含む。他の例では、本明細書に開示されるＣＡＲは、４－１ＢＢ共刺激分子を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８共刺激ドメインを含む。他の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン及び４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。さらに他の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン及び４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。

【0051】

本明細書に記載される方法は、ＣＡＲを発現する遺伝子改変Ｔ細胞、例えば当技術分野において知られるか又は本明細書で開示される遺伝子改変Ｔ細胞を生成するために使用することができる２つ以上の好適なＣＡＲを包含すると理解されたい。実施例は、国際公開第２０１９／０９７３０５Ａ２号パンフレット及び国際公開第２０１９／２１５５００号パンフレットにおいて見出すことができ、以前の出願の各々の関連する開示は、本明細書で参照される目的及び主題に関して参照により本明細書に組み込まれる。

【0052】

例えば、ＣＡＲは、ＣＤ７０（「ＣＤ７０ ＣＡＲ」又は「抗ＣＤ７０ ＣＡＲ」としても知られる）に結合する。ＣＤ７０に結合する例示的なＣＡＲのアミノ酸配列は、配列番号４６において提供される。下の表１における例示的な抗ＣＤ７０ ＣＡＲコンストラクトにおける構成要素のアミノ酸配列及びコードヌクレオチド配列も参照されたい。

【0053】

【表1】

【0054】

【表2】

【0055】

【表3】

【0056】

【表4】

【0057】

【表5】

【0058】

【表6】

【0059】

【表7】

【0060】

（ｉｉ）ＴＲＡＣ、Ｂ２Ｍ、及び／又はＣＤ７０遺伝子のノックアウト
本明細書で開示される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ－Ｔ細胞はさらに、破壊されたＴＲＡＣ遺伝子、破壊されたＢ２Ｍ遺伝子、破壊されたＣＤ７０遺伝子、又はそれらの組み合わせを有し得る。ＴＲＡＣ座位を破壊することで、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の発現の減少がもたらされ、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の可能性を低減させることが意図される一方、β２Ｍ座位を破壊することで、主要組織適合複合体タイプＩ（ＭＨＣ Ｉ）タンパク質の発現の減少がもたらされ、宿主拒絶反応の可能性を低減させることによって持続性を向上させることが意図される。ＣＤ７０遺伝子の破壊は、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ－Ｔ細胞を生成する際の兄弟殺しの影響を最小化することになる。さらに、ＣＤ７０遺伝子の破壊は、結果として生じる操作されたＴ細胞の活力及び活性を予想外に増大させた。抗ＣＤ７０ ＣＡＲを加えることにより、改変Ｔ細胞がＣＤ７０発現腫瘍細胞に誘導される。

【0061】

本明細書で使用する場合、「破壊された遺伝子」という用語は、コードされている遺伝子産物の活性を実質的に減少させるか又は完全に排除するように、野生型の対応物に対して１つ以上の変異（例えば、挿入、欠失又はヌクレオチド置換など）を含む遺伝子を意味する。非コード領域、例えば、プロモーター領域、転写若しくは翻訳を調節する調節領域；又はイントロン領域に１つ以上の変異が位置し得る。或いは、コード領域に（例えば、エクソンに）１つ以上の変異が位置し得る。場合により、破壊された遺伝子は、コード化タンパク質を発現しないか、又は大幅に減少したレベルのコード化タンパク質を発現する。他の場合において、破壊された遺伝子は、機能的ではないか又は実質的に低減された活性を有する変異形態のコードされたタンパク質を発現する。いくつかの実施形態では、破壊された遺伝子は、機能性タンパク質をコードしない遺伝子である。いくつかの実施形態では、破壊された遺伝子を含む細胞は、この遺伝子によってコードされる検出可能なレベル（例えば、抗体による、例えばフローサイトメトリーによる）のタンパク質を（例えば、細胞表面で）発現しない。検出可能なレベルのタンパク質を発現しない細胞は、ノックアウト細胞と称され得る。例えば、β２Ｍ遺伝子編集を有する細胞は、β２Ｍタンパク質が、β２Ｍタンパク質に特異的に結合する抗体を使用して細胞表面で検出できない場合、β２Ｍノックアウト細胞とみなされ得る。

【0062】

いくつかの実施形態では、破壊された遺伝子は、野生型の対応物に対して変異したフラグメントを含むものと説明され得る。変異したフラグメントは、欠失、ヌクレオチド置換、付加又はこれらの組み合わせを含み得る。他の実施形態では、破壊された遺伝子は、野生型の対応物に存在するフラグメントに欠失があるものと説明することができる。場合により、欠失させたフラグメントの５’末端が、本明細書で開示されるような設計されたガイドＲＮＡ（オンターゲット配列として知られる）によって標的化される遺伝子領域内に位置してもよく、欠失させたフラグメントの３’末端が標的領域の範囲を超えてもよい。或いは、欠失させたフラグメントの３’末端が標的領域内に位置してもよく、欠失させたフラグメントの５’末端が標的領域の範囲を超えてもよい。

【0063】

場合により、本明細書で開示される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ－Ｔ細胞の破壊されたＴＲＡＣ遺伝子は、欠失、例えば、ＴＲＡＣ遺伝子座のエクソン１内のフラグメントの欠失を含み得る。いくつかの例では、破壊されたＴＲＡＣ遺伝子は、ＴＲＡＣのガイドＲＮＡ、ＴＡ－１の標的部位である、配列番号１７のヌクレオチド配列を含むフラグメントの欠失を含む。下記の配列表を参照されたい。いくつかの例では、配列番号１７のフラグメントは、抗ＣＤ７０ ＣＡＲをコードする核酸によって置換され得る。そのような破壊されたＴＲＡＣ遺伝子は、配列番号４４のヌクレオチド配列を含み得る。

【0064】

本明細書で開示される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ－Ｔ細胞の破壊されたＢ２Ｍは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ技術を使用して作製され得る。いくつかの例では、下記の配列表に示されるＢ２ＭのｇＲＮＡを使用することができる。破壊されたＢ２Ｍ遺伝子は、配列番号３１～３６のいずれか１つのヌクレオチド配列を含み得る。下記の表４を参照されたい。

【0065】

或いは又は加えて、本明細書で開示される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ－Ｔ細胞の破壊されたＣＤ７０遺伝子は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ技術を使用して作製され得る。いくつかの例では、下記の配列表で提供されるＣＤ７０ ｇＲＮＡを使用することができる。破壊されたＣＤ７０遺伝子は、配列番号３７～４２のいずれか１つのヌクレオチド配列を含み得る。下記の表５を参照されたい。

【0066】

（ｉｉｉ）例示的な抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞
いくつかの例では、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞は、破壊されたＴＲＡＣ遺伝子、Ｂ２Ｍ遺伝子、及びＣＤ７０遺伝子を有するＣＤ７０指向性Ｔ細胞であるＣＴＸ１３０細胞である。ＣＴＸ１３０細胞は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９（クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート／ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９）遺伝子編集構成要素（ｓｇＲＮＡ及びＣａｓ９ヌクレアーゼ）を使用するエクスビボでの遺伝子改変を介して生成され得る。

【0067】

また、本明細書で開示される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ並びに破壊されたＴＲＡＣ、Ｂ２Ｍ、及びＣＤ７０遺伝子を発現する遺伝子操作された細胞（例えば、ＣＲＳＰＲ－Ｃａｓ９に媒介されて遺伝子編集された）を含む抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞の集団）も本開示の範囲内であり；且つ抗ＣＤ７０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列は、ＴＲＡＣ遺伝子座に挿入される。

【0068】

遺伝子破壊は、遺伝子編集（例えば、１つ以上のヌクレオチドを挿入するか又は欠失させるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集を使用する）を介した遺伝子改変を包含するものと理解されたい。本明細書で使用する場合、用語「破壊された遺伝子」は、コードされた遺伝子産物の活性を実質的に低減するか又は完全に消失させるために野生型対応物に対して１つ以上の変異（例えば、挿入、欠失、又はヌクレオチド置換など）を含有する遺伝子を指す。非コード領域、例えば、プロモーター領域、転写若しくは翻訳を調節する調節領域；又はイントロン領域に１つ以上の変異が位置し得る。或いは、コード領域に（例えば、エクソンに）１つ以上の変異が位置し得る。場合により、破壊された遺伝子は、コード化タンパク質を発現しないか、又は大幅に減少したレベルのコード化タンパク質を発現する。他の場合において、破壊された遺伝子は、機能的ではないか又は実質的に低減された活性を有する変異形態のコードされたタンパク質を発現する。いくつかの実施形態では、破壊された遺伝子は、機能性タンパク質をコードしない遺伝子である。いくつかの実施形態では、破壊された遺伝子を含む細胞は、この遺伝子によってコードされる検出可能なレベル（例えば、抗体による、例えばフローサイトメトリーによる）のタンパク質を（例えば、細胞表面で）発現しない。検出可能なレベルのタンパク質を発現しない細胞は、ノックアウト細胞と称され得る。例えば、β２Ｍ遺伝子編集を有する細胞は、β２Ｍタンパク質が、β２Ｍタンパク質に特異的に結合する抗体を使用して細胞表面で検出できない場合、β２Ｍノックアウト細胞とみなされ得る。

【0069】

特定の場合において、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞は、標的化された遺伝子を破壊するＣＲＩＳＰＲ技術、及びＣＡＲコンストラクトを送達するアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）形質導入を使用して生成されるＣＴＸ１３０細胞である。ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９に媒介される遺伝子編集は、３つのガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を含む：ＣＤ７０遺伝子座を標的化するＣＤ７０－７ ｓｇＲＮＡ（配列番号２）、ＴＲＡＣ遺伝子座を標的化するＴＡ－１ ｓｇＲＮＡ（配列番号６）、及びβ２Ｍ遺伝子座を標的化するＢ２Ｍ－１ ｓｇＲＮＡ（配列番号１０）。ＣＴＸ１３０細胞の抗ＣＤ７０ ＣＡＲは、ＣＤ７０に特異的な抗ＣＤ７０単鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）に続く４－１ＢＢの細胞内共シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインに融合されるＣＤ８ヒンジ及び膜貫通ドメインで構成される。そのため、ＣＴＸ１３０は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集構成要素（ｓｇＲＮＡ及びＣａｓ９ヌクレアーゼ）を使用してエクスビボで遺伝子改変される同種異系のＴ細胞で構成されるＣＤ７０指向性Ｔ細胞免疫療法である。

【0070】

いくつかの実施形態では、ＣＴＸ１３０細胞の集団の少なくとも５０％は、検出可能なレベルのβ２Ｍ表面タンパク質を発現しない可能性がある。例えば、集団の少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％の操作されたＴ細胞は、検出可能なレベルのβ２Ｍ表面タンパク質を発現しない可能性がある。いくつかの実施形態では、集団のうちの５０％～１００％、５０％～９０％、５０％～８０％、５０％～７０％、５０％～６０％、６０％～１００％、６０％～９０％、６０％～８０％、６０％～７０％、７０％～１００％、７０％～９０％、７０％～８０％、８０％～１００％、８０％～９０％、又は９０％～１００％の操作されたＴ細胞は、検出可能なレベルのβ２Ｍ表面タンパク質を発現しない。

【0071】

或いは又は加えて、ＣＴＸ１３０細胞の集団の少なくとも５０％は、検出可能なレベルのＴＣＲ表面タンパク質を発現しない可能性がある。例えば、集団のうちの少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の操作されたＴ細胞は、検出可能なレベルのＴＲＡＣ表面タンパク質を発現しない可能性がある。いくつかの実施形態では、集団のうちの５０％～１００％、５０％～９０％、５０％～８０％、５０％～７０％、５０％～６０％、６０％～１００％、６０％～９０％、６０％～８０％、６０％～７０％、７０％～１００％、７０％～９０％、７０％～８０％、８０％～１００％、８０％～９０％、又は９０％～１００％の操作されたＴ細胞は、検出可能なレベルのＴＲＡＣ表面タンパク質を発現しない。

【0072】

いくつかの実施形態では、ＣＴＸ１３０細胞の集団の少なくとも５０％は、検出可能なレベルのＣＤ７０表面タンパク質を発現しない可能性がある。例えば、集団のうちの少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の操作されたＴ細胞は、検出可能なレベルのＣＤ７０表面タンパク質を発現しない可能性がある。いくつかの実施形態では、集団のうちの５０％～１００％、５０％～９０％、５０％～８０％、５０％～７０％、５０％～６０％、６０％～１００％、６０％～９０％、６０％～８０％、６０％～７０％、７０％～１００％、７０％～９０％、７０％～８０％、８０％～１００％、８０％～９０％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の操作されたＴ細胞は、検出可能なレベルのＣＤ７０表面タンパク質を発現しない。

【0073】

いくつかの実施形態では、かなりの割合のＣＴＸ１３０細胞の集団は、２つ以上の遺伝子編集を含んでもよく、これにより２つ以上の遺伝子及び／又はタンパク質を発現しない一定の割合の細胞がもたらされる。

【0074】

例えば、ＣＴＸ１３０細胞の集団の少なくとも５０％は、検出可能なレベルの２つの表面タンパク質を発現しない可能性があり、例えば、検出可能なレベルのβ２Ｍ及びＴＲＡＣタンパク質、β２Ｍ及びＣＤ７０タンパク質、又はＴＲＡＣ及びＣＤ７０タンパク質を発現しない。いくつかの実施形態では、集団のうちの５０％～１００％、５０％～９０％、５０％～８０％、５０％～７０％、５０％～６０％、６０％～１００％、６０％～９０％、６０％～８０％、６０％～７０％、７０％～１００％、７０％～９０％、７０％～８０％、８０％～１００％、８０％～９０％、又は９０％～１００％の操作されたＴ細胞は、検出可能なレベルの２つ表面タンパク質を発現しない。別の例では、ＣＴＸ１３０細胞の集団の少なくとも５０％は、検出可能なレベルの３つの標的表面タンパク質β２Ｍ、ＴＲＡＣ、及びＣＤ７０タンパク質の全てを発現しない可能性がある。いくつかの実施形態では、集団のうちの５０％～１００％、５０％～９０％、５０％～８０％、５０％～７０％、５０％～６０％、６０％～１００％、６０％～９０％、６０％～８０％、６０％～７０％、７０％～１００％、７０％～９０％、７０％～８０％、８０％～１００％、８０％～９０％、又は９０％～１００％の操作されたＴ細胞は、検出可能なレベルのβ２Ｍ、ＴＲＡＣ、及びＣＤ７０表面タンパク質を発現しない。

【0075】

いくつかの実施形態では、ＣＴＸ１３０細胞の集団は、本明細書に記載される編集であり得る２つ以上の遺伝子編集（例えば、２つ以上の遺伝子内における）を含み得る。例えば、ＣＴＸ１３０細胞の集団は、ガイドＲＮＡ ＴＡ－１（表２、配列番号６～７も参照のこと）を使用するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ技術を介して破壊されたＴＲＡＣ遺伝子を含み得る。或いは又は加えて、ＣＴＸ１３０細胞の集団は、Ｂ２Ｍ－１のガイドＲＮＡ（表２、配列番号１０～１１も参照のこと）を使用するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術を介して破壊されたβ２Ｍ遺伝子を含み得る。そのようなＣＴＸ１３０細胞は、β２Ｍ遺伝子内にインデルを含む場合があり、これらは表４に列挙されるヌクレオチド配列の１つ以上を含む。例えば、ＣＴＸ１３０細胞の集団は、ガイドＲＮＡ ＣＤ７０－７（表２、配列番号２～３も参照のこと）を使用するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ技術を介して破壊されたＣＤ７０遺伝子を含み得る。さらに、ＣＴＸ１３０細胞の集団は、ＣＤ７０遺伝子内にインデルを含む場合があり、これらは表５に列挙される１つ以上のヌクレオチド配列を含み得る。

【0076】

いくつかの実施形態では、ＣＴＸ１３０細胞は、未改変のＴ細胞と比較してＴＲＡＣ遺伝子内に欠失を含み得る。例えば、ＣＴＸ１３０細胞は、ＴＲＡＣ遺伝子、又はその一部においてフラグメントＡＧＡＧＣＡＡＣＡＧＴＧＣＴＧＴＧＧＣＣ（配列番号１７）、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、又は１９個の連続した塩基対を含む配列番号１７のフラグメントの欠失を含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＴＸ１３０細胞は、ＴＲＡＣ遺伝子内に配列番号１７のフラグメントを含む欠失を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、未改変のＴ細胞と比較して、ＴＲＡＣ遺伝子において、配列番号１７の欠失を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、未改変のＴ細胞と比較して、ＴＲＡＣ遺伝子において、配列番号１７を含む欠失を含む。

【0077】

さらに、ＣＴＸ１３０細胞の集団は、本明細書で開示されるもの（例えば、配列番号４６）などの抗ＣＤ７０ ＣＡＲを発現する細胞を含み得る。抗ＣＤ７０ ＣＡＲのコード配列は、例えば、ガイドＲＮＡ ＴＡ－１（表２、配列番号６～７も参照のこと）によって標的化される領域でＴＲＡＣ遺伝子座に挿入され得る。そのような場合において、例示的な抗ＣＤ７０ ＣＡＲのアミノ酸配列は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む。

【0078】

いくつかの実施形態では、ＣＴＸ１３０細胞の少なくとも３０％ 少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％は、抗ＣＤ７０ ＣＡＲを発現するＣＡＲ＋細胞である。本明細書で参照される主題及び目的に対してその各々の関連する開示が参照により組み込まれる、国際公開第２０１９／０９７３０５Ａ２号パンフレット及び国際公開第２０１９／２１５５００号パンフレットも参照されたい。

【0079】

特定の例において、本明細書で開示される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）は、≧３０％のＣＡＲ＋Ｔ細胞、≦０．４％のＴＣＲ＋Ｔ細胞、≦３０％のＢ２Ｍ＋Ｔ細胞、及び≦２％のＣＤ７０＋Ｔ細胞を有するＴ細胞の集団である。

【0080】

（ｖ）医薬組成物
いくつかの態様では、本開示は、本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作された抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の集団のいずれか、例えば、ＣＴＸ１３０細胞を含む医薬組成物、及び薬学的に許容される担体を提供する。そのような医薬組成物は、ヒト患者の癌治療に使用することができ、これも本明細書で開示される。

【0081】

本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容される」とは、適切な医学的判断の範囲内で、妥当な利益／リスク比に相当する、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、又はその他の問題若しくは合併症を伴わない、対象の組織、臓器、及び／又は体液と接触して使用するのに好適な化合物、材料、組成物、及び／又は剤形を指す。本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性の溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤、抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを指す。組成物としては、薬学的に許容される塩、例えば酸付加塩又は塩基付加塩を挙げることができる。例えば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ６６：１－１９を参照されたい。

【0082】

いくつかの実施形態では、医薬組成物はさらに、薬学的に許容される塩を含む。薬学的に許容される塩の非限定的な例としては、酸付加塩が挙げられる（無機酸（例えば、塩酸又はリン酸）、又は酢酸、酒石酸、マンデル酸などといった有機酸を含むポリペプチドの遊離アミノ基から形成される）。いくつかの実施形態では、遊離カルボキシル基で形成される塩は、無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、又は水酸化第二鉄）又は有機塩基、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導される）。

【0083】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示される医薬組成物は、凍結保存溶液（例えば、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）Ｃ５５）中に懸濁させた、遺伝子操作された抗ＣＤ７０ ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の集団を含む。本開示に使用される凍結保存溶液は、アデノシン、ブドウ糖、デキストラン４０、ラクトビオン酸、ショ糖、マンニトール、Ｎ－）２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（２－エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）などの緩衝剤、１つ以上の塩（例えば、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、塩化カリウム、炭酸水素カリウム、リン酸カリウムなど）、１つ以上の塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなど）又はこれらの組み合わせも含み得る。凍結保存溶液の構成成分は、滅菌水（注射品質）に溶解され得る。凍結保存溶液は、いずれも血清を実質的に含まない（常法では検出できない）ものであり得る。

【0084】

場合により、凍結保存溶液（例えば、血清を実質的に含まない）中に懸濁させた、ＣＴＸ１３０細胞などの遺伝子操作された抗ＣＤ７０ ＣＡＲ－Ｔ細胞の集団を含む医薬組成物は、保存バイアルに入れられ得る。

【0085】

本明細書で開示されるとおりの凍結保存溶液中に任意選択により懸濁され得る、本明細書でさらに開示されとおりの遺伝子操作された抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の集団を含む、本明細書で開示される医薬組成物のいずれも、Ｔ細胞の生存及び生理活性に実質的に影響を及ぼさない環境において、例えば、細胞及び組織を保存するのに一般的に適用される条件下において、将来使用するために保存され得る。いくつかの例では、医薬組成物は、≦－１３５℃の液体窒素の気相中で保存され得る。細胞をそのような条件で一定期間保存した後、外観、細胞数、生存率、％ＣＡＲ^＋Ｔ細胞、％ＴＣＲ^＋Ｔ細胞、％Ｂ２Ｍ^＋Ｔ細胞、及び％ＣＤ７０^＋Ｔ細胞に関する著しい変化は、観察されなかった。

【0086】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示される医薬組成物は、ＣＴＸ１３０細胞などの本明細書で開示される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む、注入のための懸濁液であり得る。いくつかの例では、懸濁液は、≧３０％のＣＡＲ＋Ｔ細胞、≦０．４％のＴＣＲ＋Ｔ細胞、≦３０％のＢ２Ｍ＋Ｔ細胞、及び≦２％のＣＤ７０＋Ｔ細胞とともに約２５～８５×１０^６細胞／ｍｌ（例えば、５０×１０^６細胞／ｍｌ）を含み得る。いくつかの例では、懸濁液は、約２５×１０^６個のＣＡＲ＋細胞／ｍＬを含み得る。特定の例では、医薬組成物は、それぞれＣＴＸ１３０細胞（例えば、生存細胞）などの約１．５×１０^８個のＣＡＲ＋Ｔ細胞を含むバイアル中に置かれ得る。他の例では、医薬組成物は、それぞれＣＴＸ１３０細胞（例えば、生存細胞）などの約３×１０^８個のＣＡＲ＋Ｔ細胞を含むバイアル中に置かれ得る。

【0087】

ＩＩ．抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の調製
当技術分野で知られる任意の好適な遺伝子編集方法、例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、又はＲＮＡ誘導型ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９ヌクレアーゼ（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９；クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート関連９）が、本明細書で開示される遺伝子操作された免疫細胞（例えば、ＣＴＸ１３０細胞などのＴ細胞）を作製するために使用され得る。特定の例では、ＣＴＸ１３０細胞などの遺伝子操作された免疫細胞は、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＶＶ）をドナー鋳型として使用する相同組換えと組み合わせたＣＲＩＳＰＲ技術によって生成される。

【0088】

（ｉ）遺伝子操作のためのＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９に媒介される遺伝子編集システム
ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９システムは、遺伝子編集のために使用されるＲＮＡ誘導型ＤＮＡ標的化プラットフォームとして転用されている、原核生物に天然に存在する防御機構である。ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９システムは、ＤＮＡヌクレアーゼであるＣａｓ９と、２つの非コードＲＮＡであるｃｒｉｓｐｒＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）及びトランス活性化型ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）とに依拠するものであり、ＤＮＡを切断することを目的としている。ＣＲＩＳＰＲは、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピートの略称であり、例えば原核生物を感染又は攻撃したウイルスによって細胞に以前暴露された外来ＤＮＡと類似性を有するＤＮＡのフラグメント（スペーサーＤＮＡ）を含有する細菌及び古細菌のゲノムに見られるＤＮＡ配列のファミリーである。例えば、同様のウイルスがその後の攻撃時に再導入すると、類似した外来ＤＮＡを検出及び破壊するために、これらのＤＮＡのフラグメントが原核生物によって使用される。ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座の転写によってスペーサー配列を含むＲＮＡ分子の形成がもたらされるが、このＲＮＡ分子は、外来の外因性ＤＮＡを認識して切断することができるＣａｓ（ＣＲＩＳＰＲ関連）タンパク質と結合し、標的となる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムの多数の種類及びクラスが記載されている（例えば、Ｋｏｏｎｉｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１７）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ３７：６７－７８を参照されたい）。

【0089】

ｃｒＲＮＡは、典型的には、標的ＤＮＡ内の２０個のヌクレオチド（ｎｔ）の配列とのワトソン－クリック塩基対形成を介して、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９複合体の配列認識及び特異性を促進する。ｃｒＲＮＡ内の５’ ２０ｎｔの配列を変更することにより、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９複合体を特定の遺伝子座に標的化させることが可能になる。ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９複合体は、標的配列がプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）と呼ばれる特定の短いＤＮＡモチーフ（配列ＮＧＧを有する）の後にある場合、ｃｒＲＮＡの最初の２０ｎｔと一致する配列を含むＤＮＡ配列のみに結合する。

【0090】

ＴｒａｃｒＲＮＡは、ｃｒＲＮＡの３’末端とハイブリダイズしてＲＮＡ二重鎖構造を形成し、このＲＮＡ二重鎖構造にＣａｓ９エンドヌクレアーゼが結合して、触媒活性のあるＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９複合体が形成され、次いでこのＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９複合体によって標的ＤＮＡを切断することができる。

【0091】

ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９複合体が標的部位でＤＮＡに結合すると、Ｃａｓ９酵素内の２つの独立したヌクレアーゼドメインがそれぞれＰＡＭ部位の上流でＤＮＡ鎖の一方を切断し、ＤＮＡの両鎖が塩基対で終端する（平滑末端）二本鎖切断（ＤＳＢ）を残す。

【0092】

ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９複合体が特定の標的部位でＤＮＡに結合し、部位特異的なＤＳＢが形成された後、次の重要な工程は、ＤＳＢの修復である。細胞は、ＤＳＢを修復するために、２つの主要なＤＮＡ修復経路、非相同末端連結（ＮＨＥＪ）及び相同組み換え修復（ＨＤＲ）を使用する。

【0093】

ＮＨＥＪは、非分裂細胞を含む大部分の細胞型において高度に活性であるように見える頑健な修復機構である。ＮＨＥＪは、誤りがちであり、多くの場合、ＤＳＢの部位において１～数百のヌクレオチド間で除去又は付加をもたらす可能性があるが、そのような修飾は、典型的には、＜２０ｎｔである。得られた挿入及び欠失（インデル）は、遺伝子のコード領域又は非コード領域を破壊する可能性がある。或いは、ＨＤＲは、内因的又は外因的に提供される長い一続きの相同性ドナーＤＮＡを使用して、高い忠実度でＤＳＢを修復する。ＨＤＲは、分裂細胞においてのみ活性であり、大部分の細胞型において相対的に低い頻度で生じる。本開示の多くの実施形態では、ＮＨＥＪが修復オペラントとして利用される。

【0094】

（ａ）Ｃａｓ９
いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９（ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９）エンドヌクレアーゼは、本明細書に開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞を作製するためのＣＲＩＳＰＲ法において使用される。Ｃａｓ９酵素は、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）に由来するものであり得るが、他のＣａｓ９相同体も使用することができる。本明細書で提供されるとおり、野生型Ｃａｓ９が使用され得るか、又はＣａｓ９の改変されたバージョン（例えば、Ｃａｓ９の進化させたバージョン又はＣａｓ９オルソログ若しくは変異体）が使用され得ると理解されたい。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９は、Ｃ末端及びＮ末端にＳＶ４０ ｌａｒｇｅ Ｔ抗原の核局在配列（ＮＬＳ）を含むように改変されているストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のＣａｓ９ヌクレアーゼタンパク質を含む。得られたＣａｓ９ヌクレアーゼ（ｓＮＬＳ－ｓｐＣａｓ９－ｓＮＬＳ）は、組換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）発酵によって生成され、クロマトグラフィーによって精製された１６２ｋＤａのタンパク質である。ｓｐＣａｓ９のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ９９ＺＷ２として見出すことができ、本明細書では配列番号１として示される。
Ｃａｓ９ヌクレアーゼのアミノ酸配列（配列番号１）：

【0095】

【化1】

【0096】

（ｂ）ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）
本明細書で記載されるとおりのＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９に媒介される遺伝子編集は、ガイドＲＮＡ、すなわちｇＲＮＡの使用を含む。本明細書で使用する場合、「ｇＲＮＡ」は、特定の標的配列で遺伝子を編集するために、Ｃａｓ９をＣＤ７０遺伝子又はＴＲＡＣ遺伝子又はβ２Ｍ遺伝子内の特定の標的配列に誘導することができるゲノム標的化核酸を指す。ガイドＲＮＡは、編集のための標的遺伝子内の標的核酸配列とＣＲＩＳＰＲ反復配列とにハイブリダイズする少なくとも１つのスペーサー配列を含む。

【0097】

ＣＤ７０遺伝子を標的化する例示的なｇＲＮＡは、配列番号２において提供される。本明細書で参照される主題及び目的に対してその関連する開示が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１９／２１５５００号パンフレットも参照されたい。他のｇＲＮＡ配列は、１９番染色体上に位置するＣＤ７０遺伝子配列を使用して設計され得る（ＧＲＣｈ３８：染色体１９：６，５８３，１８３－６，６０４，１０３；Ｅｎｓｅｍｂｌ；ＥＮＳＧ０００００１２５７２６）。いくつかの実施形態では、ＣＤ７０ゲノム領域を標的化するｇＲＮＡ及びＣａｓ９は、ＣＤ７０ゲノム領域に切断を生じさせてＣＤ７０遺伝子にインデルをもたらし、ｍＲＮＡ又はタンパク質の発現を破壊する。

【0098】

ＴＲＡＣ遺伝子を標的化する例示的なｇＲＮＡは、配列番号６において提供される。本明細書で参照される主題及び目的に対してその関連する開示が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１９／０９７３０５Ａ２号パンフレットを参照されたい。他のｇＲＮＡ配列は、１４番染色体上に位置するＴＲＡＣ遺伝子配列を使用して設計され得る（ＧＲＣｈ３８：１４番染色体：２２，５４７，５０６～２２，５５２，１５４；アンサンブル；ＥＮＳＧ０００００２７７７３４）。いくつかの実施形態では、ＴＲＡＣゲノム領域を標的化するｇＲＮＡ及びＣａｓ９は、ＴＲＡＣゲノム領域に切断を生じさせてＴＲＡＣ遺伝子にインデルをもたらし、ｍＲＮＡ又はタンパク質の発現を阻害する。

【0099】

β２Ｍ遺伝子を標的化する例示的なｇＲＮＡは、配列番号１０において提供される。本明細書で参照される目的及び主題に対してその関連する開示が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１９／０９７３０５Ａ２号パンフレットも参照されたい。他のｇＲＮＡ配列は、１５番染色体上に位置するβ２Ｍ遺伝子配列を使用して設計され得る（ＧＲＣｈ３８の座標：１５番染色体：４４，７１１，４７７～４４，７１８，８７７；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１６６７１０）。いくつかの実施形態では、β２Ｍゲノム領域を標的化するｇＲＮＡ及びＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼは、ｍＲＮＡ又はタンパク質の発現を破壊するβ２Ｍ遺伝子におけるインデルをもたらすβ２Ｍゲノム領域における切断をもたらす。

【0100】

【表8】

【0101】

【表9】

【0102】

ＩＩ型システムにおいて、ｇＲＮＡはまた、ｔｒａｃｒＲＮＡ配列と呼ばれる第２のＲＮＡを含む。ＩＩ型のｇＲＮＡでは、ＣＲＩＳＰＲ反復配列及びｔｒａｃｒＲＮＡ配列が互いにハイブリダイズして二重鎖を形成する。Ｖ型のｇＲＮＡでは、ｃｒＲＮＡが二重鎖を形成する。両方のシステムにおいて、二重鎖は、部位特異的ポリペプチドに結合し、その結果、ガイドＲＮＡと部位特異的ポリペプチドとが複合体を形成する。いくつかの実施形態では、ゲノム標的化核酸は、この部位特異的ポリペプチドとの会合による複合体に標的特異性をもたらす。そのため、ゲノム標的化核酸は、部位特異的ポリペプチドの活性を誘導する。

【0103】

当業者に理解されているように、各ガイドＲＮＡは、そのゲノム標的配列に相補的なスペーサー配列を含むように設計される。Ｊｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３３７，８１６－８２１（２０１２）及びＤｅｌｔｃｈｅｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４７１，６０２－６０７（２０１１）を参照されたい。

【0104】

いくつかの実施形態では、ゲノム標的化核酸（例えば、ｇＲＮＡ）は、二重分子ガイドＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ゲノム標的化核酸（例えば、ｇＲＮＡ）は、単一分子ガイドＲＮＡである。

【0105】

二重分子ガイドＲＮＡは、２つの鎖のＲＮＡ分子を含む。第１の鎖は、５’から３’の方向において、任意選択のスペーサー延長配列、スペーサー配列及び最小ＣＲＩＳＰＲ反復配列を含む。第２の鎖は、最小ｔｒａｃｒＲＮＡ配列（最小ＣＲＩＳＰＲ反復配列に相補的）、３’ｔｒａｃｒＲＮＡ配列及び任意選択のｔｒａｃｒＲＮＡ延長配列を含む。

【0106】

ＩＩ型システムにおける単一分子ガイドＲＮＡ（「ｓｇＲＮＡ」と呼ばれる）は、５’から３’方向において、任意選択のスペーサー延長配列、スペーサー配列、最小ＣＲＩＳＰＲ反復配列、単一分子ガイドリンカー、最小ｔｒａｃｒＲＮＡ配列、３’ｔｒａｃｒＲＮＡ配列及び任意選択のｔｒａｃｒＲＮＡ延長配列を含む。任意選択のｔｒａｃｒＲＮＡ延長は、ガイドＲＮＡに追加の機能性（例えば、安定性）を付与する要素を含み得る。単一分子ガイドリンカーは、最小ＣＲＩＳＰＲ反復と最小ｔｒａｃｒＲＮＡ配列とを連結して、ヘアピン構造を形成する。任意選択のｔｒａｃｒＲＮＡ延長は、１つ以上のヘアピンを含む。Ｖ型システムにおける単一分子ガイドＲＮＡは、５’から３’方向において、最小ＣＲＩＳＰＲ反復配列及びスペーサー配列を含む。

【0107】

「標的配列」とは、ＰＡＭ配列に隣接している標的遺伝子のことであり、Ｃａｓ９によって改変される配列のことである。「標的配列」は、ＰＡＭ鎖及び相補的な非ＰＡＭ鎖を含有する二本鎖分子である「標的核酸」内のいわゆるＰＡＭ鎖上にある。当業者は、ｇＲＮＡスペーサー配列が、目的の標的核酸の非ＰＡＭ鎖に位置する相補的配列にハイブリダイズすることを認識している。そのため、ｇＲＮＡスペーサー配列は、標的配列のＲＮＡ均等物である。

【0108】

例えば、ＣＤ７０標的配列が５’－ＧＣＴＴＴＧＧＴＣＣＣＡＴＴＧＧＴＣＧＣ－３’（配列番号１５）である場合、ｇＲＮＡスペーサー配列は、５’－ＧＣＵＵＵＧＧＵＣＣＣＡＵＵＧＧＵＣＧＣ－３’（配列番号５）である。別の例では、ＴＲＡＣ標的配列が５’－ＡＧＡＧＣＡＡＣＡＧＴＧＣＴＧＴＧＧＣＣ－３’（配列番号１７）である場合、ｇＲＮＡスペーサー配列は、５’－ＡＧＡＧＣＡＡＣＡＧＵＧＣＵＧＵＧＧＣＣ－３’（配列番号９）である。さらに別の例では、β２Ｍ標的配列が５’－ＧＣＴＡＣＴＣＴＣＴＣＴＴＴＣＴＧＧＣＣ－３’（配列番号１９）である場合、ｇＲＮＡスペーサー配列は、５’－ＧＣＵＡＣＵＣＵＣＵＣＵＵＵＣＵＧＧＣＣ－３’（配列番号１３）である。ｇＲＮＡのスペーサーは、ハイブリダイゼーション（すなわち、塩基対形成）を介して配列特異的な様式で目的の標的核酸と相互作用する。そのため、スペーサーのヌクレオチド配列は、目的の標的核酸の標的配列に応じて変化する。

【0109】

本明細書のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムでは、スペーサー配列は、このシステムで使用されるＣａｓ９酵素によって認識可能なＰＡＭの５’に位置する標的核酸の領域にハイブリダイズするように設計されている。スペーサーは、標的配列と完全に一致し得るか、又はミスマッチを有し得る。各Ｃａｓ９酵素は、標的ＤＮＡにおいて認識する特定のＰＡＭ配列を有する。例えば、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）は、標的核酸において、配列５’－ＮＲＧ－３’（ここで、Ｒは、Ａ又はＧのいずれかを含み、Ｎは、任意のヌクレオチドであり、Ｎは、スペーサー配列により標的化される標的核酸配列の３’の直近にある）を含むＰＡＭを認識する。

【0110】

いくつかの実施形態では、標的核酸配列は、２０個の長さのヌクレオチドを有する。いくつかの実施形態では、標的核酸は、２０個未満の長さのヌクレオチドを有する。いくつかの実施形態では、標的核酸は、２０個超の長さのヌクレオチドを有する。いくつかの実施形態では、標的核酸は、少なくとも５、１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０個又はそれを超える長さのヌクレオチドを有する。いくつかの実施形態では、標的核酸は、最大で５、１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０個又はそれを超える長さのヌクレオチドを有する。いくつかの実施形態では、標的核酸配列は、ＰＡＭの最初のヌクレオチドの５’の直近に２０個の塩基を有する。例えば、

【0111】

【化2】

【0112】

を含む配列では、標的核酸は、Ｎに対応する配列であってもよく、ここで、Ｎは、任意のヌクレオチドであってもよく、下線が引かれたＮＲＧ配列は、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）のＰＡＭである。

【0113】

ｇＲＮＡ中のスペーサー配列は、目的の標的遺伝子の標的配列（例えば、ゲノム標的配列などのＤＮＡ標的配列）を定義する配列（例えば、２０個のヌクレオチド配列）である。ＣＤ７０遺伝子を標的化するｇＲＮＡの例示的なスペーサー配列は、配列番号４において提供される。ＴＲＡＣ遺伝子を標的化するｇＲＮＡの例示的なスペーサー配列は、配列番号８において提供される。β２Ｍ遺伝子を標的化するｇＲＮＡの例示的なスペーサー配列は、配列番号１２において提供される。

【0114】

本明細書に開示されるガイドＲＮＡは、ｃｒＲＮＡ内のスペーサー配列によって目的の任意の配列を標的化し得る。いくつかの実施形態では、ガイドＲＮＡのスペーサー配列と標的遺伝子内の標的配列との間の相補性の程度は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％であり得る。いくつかの実施形態では、ガイドＲＮＡのスペーサー配列及び標的遺伝子内の標的配列は、１００％相補的である。他の実施形態では、ガイドＲＮＡのスペーサー配列と標的遺伝子内の標的配列は、最大で１０個のミスマッチ、例えば最大で９個、最大で８個、最大で７個、最大で６個、最大で５個、最大で４個、最大で３個、最大で２個、又は最大で１個のミスマッチを含有し得る。

【0115】

本明細書で提供されるとおりに使用され得るｇＲＮＡの非限定的な例は、本明細書で参照される目的及び主題に対して以前の出願の各々の関連する開示が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１９／０９７３０５Ａ２号パンフレット、及び国際公開第２０１９／２１５５００号パンフレットにおいて提供される。本明細書で提供されるｇＲＮＡ配列のいずれかに関して、修飾を明確に示していないものは、未修飾の配列と任意の好適な修飾を有する配列の両方を包含することを意味する。

【0116】

本明細書に開示されるｇＲＮＡのいずれかにおけるスペーサー配列の長さは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム及びさらに本明細書に開示される標的遺伝子のいずれかを編集するために使用される構成要素に依存し得る。例えば、異なる細菌種に由来する異なるＣａｓ９タンパク質は、様々な最適なスペーサー配列長を有する。したがって、スペーサー配列は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、又は５０個超の長さのヌクレオチドを有し得る。いくつかの実施形態では、スペーサー配列は、１８～２４個の長さのヌクレオチドを有し得る。いくつかの実施形態では、標的化配列は、１９～２１個の長さのヌクレオチドを有し得る。いくつかの実施形態では、スペーサー配列は、２０個の長さのヌクレオチドを含み得る。

【0117】

いくつかの実施形態では、ｇＲＮＡは、ｓｇＲＮＡであってもよく、ｓｇＲＮＡ配列の５’末端に２０個のヌクレオチドのスペーサー配列を含み得る。いくつかの実施形態では、ｓｇＲＮＡは、ｓｇＲＮＡ配列の５’末端に２０個未満のヌクレオチドのスペーサー配列を含み得る。いくつかの実施形態では、ｓｇＲＮＡは、ｓｇＲＮＡ配列の５’末端に２０超のヌクレオチドのスペーサー配列を含み得る。いくつかの実施形態では、ｓｇＲＮＡは、ｓｇＲＮＡ配列の５’末端に１７～３０個のヌクレオチドを有する可変長のスペーサー配列を含む。

【0118】

いくつかの実施形態では、ｓｇＲＮＡは、ｓｇＲＮＡ配列の３’末端にウラシルを含まない。他の実施形態では、ｓｇＲＮＡは、ｓｇＲＮＡ配列の３’末端に１つ以上のウラシルを含み得る。例えば、ｓｇＲＮＡは、ｓｇＲＮＡ配列の３’末端に１～８個のウラシル残基、例えばｓｇＲＮＡ配列の３’末端に１、２、３、４、５、６、７又は８個のウラシル残基を含むことができる。

【0119】

ｓｇＲＮＡのいずれかを含む、本明細書に開示されるｇＲＮＡのいずれも未修飾であり得る。或いは、１つ以上の修飾されたヌクレオチド及び／又は修飾された主鎖を含み得る。例えば、ｓｇＲＮＡなどの修飾ｇＲＮＡは、５’末端、３’末端のいずれか又は両方に位置し得る１つ以上の２’－Ｏ－メチルホスホロチオエートヌクレオチドを含むことができる。

【0120】

ある実施形態では、２つ以上のガイドＲＮＡをＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼシステムとともに使用することができる。各ガイドＲＮＡは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムが２つ以上の標的核酸を切断するように、異なる標的化配列を含有し得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のガイドＲＮＡは、Ｃａｓ９ ＲＮＰ複合体内での活性又は安定性などの同じ又は異なる特性を有し得る。２つ以上のガイドＲＮＡが使用される場合、各ガイドＲＮＡは、同じ又は異なるベクター上にコードされ得る。２つ以上のガイドＲＮＡの発現を駆動するために使用されるプロモーターは、同じであるか又は異なる。

【0121】

２つ以上の好適なＣａｓ９及び２つ以上の好適なｇＲＮＡが、本明細書に記載される方法、例えば、当技術分野において知られるか又は本明細書で開示される方法に使用され得ることは理解されたい。いくつかの実施形態では、方法は、当技術分野において知られるＣａｓ９酵素及び／又はｇＲＮＡを含む。例は、例えば、本明細書で参照される目的及び主題に対して以前の出願の各々の関連する開示が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１９／０９７３０５Ａ２号パンフレット及び国際公開第２０１９／２１５５００号パンフレットにおいて見出され得る。

【0122】

いくつかの実施形態では、ＴＲＡＣゲノム領域を標的化するｇＲＮＡは、表３の配列から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＴＲＡＣ遺伝子においてインデルを生成する。いくつかの実施形態では、ＴＲＡＣゲノム領域を標的化するｇＲＮＡ（例えば、配列番号６）は、表３の配列から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＴＲＡＣ遺伝子においてインデルを生成する。

【0123】

【表10】

【0124】

いくつかの実施形態では、β２Ｍゲノム領域を標的化するｇＲＮＡは、表４の配列から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むβ２Ｍ遺伝子においてインデルを生成する。いくつかの実施形態では、β２Ｍゲノム領域を標的化するｇＲＮＡ（例えば、配列番号１０）は、表４の配列から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むβ２Ｍ遺伝子においてインデルを生成する。

【0125】

【表11】

【0126】

いくつかの実施形態では、ＣＤ７０ゲノム領域を標的化するｇＲＮＡは、表５の配列から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＣＤ７０遺伝子においてインデルを生成する。いくつかの実施形態では、ＣＤ７０ゲノム領域を標的化するｇＲＮＡ（例えば、配列番号２）は、表５の配列から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＣＤ７０遺伝子においてインデルを生成する。

【0127】

【表12】

【0128】

（ｉｉｉ）ＣＡＲコンストラクトをＴ細胞に送達するためのＡＡＶベクター
ＣＡＲコンストラクトをコードする核酸は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を使用して細胞に送達され得る。ＡＡＶは、宿主ゲノムに部位特異的に組込み、したがって、ＣＡＲなどの導入遺伝子を送達することができる小型のウイルスである。逆位末端配列（ＩＴＲ）は、ＡＡＶゲノム及び／又は目的の導入遺伝子に隣接して存在し、複製開始点として機能する。また、ＡＡＶゲノム中には、転写されるとＡＡＶゲノムをカプセル化して標的細胞に送達するためのカプシドを形成するｒｅｐタンパク質及びｃａｐタンパク質も存在する。これらのカプシド上の表面受容体によってＡＡＶの血清型が付与され、カプシドがどの標的臓器に最初に結合するか、したがって、いずれの細胞にＡＡＶが最も効率的に感染するかが決定される。現在知られているヒトＡＡＶの血清型は、１２種類である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸を送達するのに使用するためのＡＡＶは、ＡＡＶ血清型６（ＡＡＶ６）である。

【0129】

アデノ随伴ウイルスは、いくつかの理由のために遺伝子療法に最も頻繁に使用されるウイルスの１つである。第一に、ＡＡＶは、ヒトを含む哺乳動物に投与する際、免疫応答を誘発しない。第二に、ＡＡＶは、特に適切なＡＡＶ血清型の選択を考慮に入れると、標的細胞に効率的に送達される。最後に、ＡＡＶは、ゲノムが組み込むことなしに宿主細胞中で残存し得ることから、分裂細胞及び非分裂細胞の両方に感染する能力を有する。この形質により、ＡＡＶは、遺伝子療法の理想的な候補となる。

【0130】

ＣＡＲをコードする核酸は、宿主Ｔ細胞内の目的のゲノム部位に挿入するように設計され得る。いくつかの実施形態では、標的ゲノム部位は、セーフハーバー遺伝子座内にあり得る。

【0131】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸は、（例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターなどのウイルスベクターによって運ぶことが可能なドナー鋳型を介して）遺伝子操作されたＴ細胞内のＴＲＡＣ遺伝子を破壊してＣＡＲポリペプチドを発現させるために、ＴＲＡＣ遺伝子内の位置に挿入できるように設計され得る。ＴＲＡＣの破壊により、内在性ＴＣＲの機能の喪失がもたらされる。例えば、本明細書に記載されるものなどのエンドヌクレアーゼ及び１つ以上のＴＲＡＣゲノム領域を標的化する１つ以上のｇＲＮＡにより、ＴＲＡＣ遺伝子における破壊を生じさせることができる。この目的のために、ＴＲＡＣ遺伝子及び標的部位に特異的なｇＲＮＡのいずれか、例えば本明細書で開示されるものを使用することができる。

【0132】

いくつかの例では、相同組換え修復、すなわちＨＤＲ（例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターなどのウイルスベクターの一部であり得るドナー鋳型を使用する）により、ＴＲＡＣ遺伝子内のゲノム欠失及びＣＡＲをコードするセグメントによる置換を生じさせることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるようなエンドヌクレアーゼ及び１つ以上のＴＲＡＣゲノム領域を標的化する１つ以上のｇＲＮＡにより、且つＣＡＲをコードするセグメントをＴＲＡＣ遺伝子に挿入することにより、ＴＲＡＣ遺伝子の破壊を生じさせることができる。

【0133】

本明細書に開示されるとおりのドナー鋳型は、ＣＡＲのコード配列を含有し得る。いくつかの例では、ＣＡＲをコードする配列は、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９遺伝子編集技術を使用して、目的のゲノム位置、例えば、ＴＲＡＣ遺伝子で効率的なＨＤＲを行うことができるように、２つの相同性領域に隣接し得る。この場合、標的遺伝子座に特異的なｇＲＮＡによって誘導されたＣＲＩＳＰＲ Ｃａｓ９酵素により、ＤＮＡの両方の鎖を標的遺伝子座で切断することができる。続いて、ＨＤＲが発生して二本鎖切断（ＤＳＢ）を修復し、ＣＡＲをコードするドナーＤＮＡを挿入する。これを正しく発生させるために、ドナー配列は、ＴＲＡＣ遺伝子などの標的遺伝子のＤＳＢ部位を取り囲む配列に相補的な隣接残基（以下では「相同性アーム」）を有するように設計されている。これらの相同性アームは、ＤＳＢ修復のための鋳型として機能し、ＨＤＲを本質的に誤りのない機構とすることを可能にする。相同組み換え修復（ＨＤＲ）の割合は、変異部位と切断部位との間の距離の関数であり、そのため、重複しているか又は近傍の標的部位を選択することが重要である。鋳型は、相同領域に隣接した余分な配列を含むことができるか、又はゲノム配列と異なる配列を含むことができ、これによって配列編集が可能になる。

【0134】

或いは、ドナー鋳型は、ＤＮＡの標的化された位置と相同性のある領域がなくてもよく、標的部位で切断された後にＮＨＥＪ依存的末端連結により組み込まれ得る。

【0135】

ドナー鋳型は、一本鎖及び／又は二本鎖のＤＮＡ又はＲＮＡであってもよく、直鎖状又は環状形態で細胞に導入することができる。直鎖状形態で導入される場合、ドナー配列の末端は、当業者に既知の方法により（例えば、エキソヌクレアーゼによる分解から）保護することができる。例えば、１つ以上のジデオキシヌクレオチド残基を直鎖状分子の３’末端に付加し、且つ／又は自己相補的オリゴヌクレオチドを一方若しくは両方の末端に連結する。例えば、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：４９５９－４９６３；Ｎｅｈｌｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７２：８８６－８８９を参照されたい。外因性のポリヌクレオチドを分解から保護するための追加の方法としては、末端アミノ基の付加、並びに、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロアミダート、及びＯ－メチルリボース又はデオキシリボース残基などの修飾されたヌクレオチド間結合の使用が挙げられるが、これらに限定されない。

【0136】

ドナー鋳型は、例えば、複製開始点、プロモーター及び抗生物質耐性コード遺伝子などの追加の配列を有するベクター分子の一部として細胞に導入され得る。さらに、ドナー鋳型は、裸の核酸として、リポソーム若しくはポロキサマーなどの薬剤と複合体を形成した核酸として細胞に導入することができるか、又はウイルス（例えば、アデノウイルス、ＡＡＶ、ヘルペスウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス及びインテグラーゼ欠損レンチウイルス（ＩＤＬＶ））により送達することができる。

【0137】

いくつかの実施形態では、ドナー鋳型は、その発現が内在性プロモーターによって駆動することができるように、内在性プロモーターの近傍の部位（例えば、下流又は上流）に挿入することができる。他の実施形態では、ドナー鋳型は、ＣＡＲ遺伝子の発現を制御するために、外因性プロモーター及び／又はエンハンサー、例えば構成的プロモーター、誘導性プロモーター又は組織特異的プロモーターを含み得る。いくつかの実施形態では、外因性プロモーターは、ＥＦ１αプロモーターである。他のプロモーターが使用されてもよい。

【0138】

さらに、外因性の配列は、転写又は翻訳制御配列、例えばプロモーター、エンハンサー、インスレーター、配列内リボソーム進入部位、２Ａペプチドをコードする配列及び／又はポリアデニル化シグナルも含み得る。

【0139】

ＩＩＩ．造血細胞悪性腫瘍の治療
いくつかの態様では、本明細書において、造血細胞悪性腫瘍（例えば、Ｔ細胞若しくはＢ細胞悪性腫瘍、又は骨髄細胞悪性腫瘍）を有するヒト患者を、本明細書で開示されるとおりのＣＴＸ１３０細胞などの抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞のいずれかの集団を使用して治療するための方法が提供される。同種異系抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、二段階の治療（ｉ）１回以上の用量の１つ以上のリンパ球枯渇剤を好適なヒト患者に与えることを含む、移植前処置（リンパ球枯渇治療）、及び（ｉｉ）本明細書で開示されるとおりのＣＴＸ１３０細胞などの抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の集団のヒト患者への投与を含む治療レジメン（抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞療法）を含み得る。該当する場合、複数の用量の抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞がヒト患者に与えられる場合があり、リンパ球枯渇治療は、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の各投与の前にヒト患者に適用され得る。

【0140】

（ｉ）患者集団
ヒト患者は、診断、治療又は療法が望まれる任意のヒト対象であり得る。ヒト患者は、任意の年齢であり得る。いくつかの実施形態では、ヒト患者は、成人である（例えば、少なくとも１８歳の人間）。いくつかの実施形態では、ヒト患者は、小児であり得る。いくつかの実施形態では、ヒト患者は、≧６０ｋｇの体重を有する。

【0141】

本明細書に記載される方法によって治療されることになるヒト患者は、造血細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ７０＋疾患細胞を含む）を有するか、それを有することが疑われるか、又はそれを有するリスクがあるヒト患者であり得る。いくつかの例では、ヒト患者は、Ｔ細胞悪性腫瘍を有するか、それを有すると疑われるか、又はそのリスクがある。いくつかの例では、ヒト患者は、Ｂ細胞悪性腫瘍を有するか、それを有すると疑われるか、又はそのリスクがある。いくつかの例では、ヒト患者は、骨髄細胞悪性腫瘍を有するか、それを有すると疑われるか、又はそのリスクがある。造血細胞悪性腫瘍を有すると疑われる対象は、造血細胞悪性腫瘍の１つ以上の症状、例えば、原因不明の体重減少、疲労、寝汗、息切れ、又は腫脹した腺を示し得る。造血細胞悪性腫瘍のリスクのある対象は、造血細胞悪性腫瘍のリスク因子、例えば、衰弱した免疫系、年齢、男性であること、又は感染症（例えば、エプスタイン・バーウイルス感染症）の１つ以上を有する対象であり得る。抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）治療を必要とするヒト患者は、定期検診、例えば、身体検査、臨床検査試験、生検（例えば、骨髄生検及び／又はリンパ節生検）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）スキャン又は超音波検査によって同定され得る。

【0142】

いくつかの実施形態では、ヒト患者は、Ｔ細胞悪性腫瘍、例えば、再発性又は難治性Ｔ細胞悪性腫瘍を有する。そのようなヒト患者は、ＣＤ７０＋疾患Ｔ細胞を有し得る。例としては、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、及びＴ細胞白血病が挙げられるが、これらに限定されない。場合により、Ｔ細胞悪性腫瘍は、菌状息肉症（ＭＦ）、例えば、転化した大細胞リンパ腫を含むステージＩＩｂ以上のもの、又はセザリー症候群（ＳＳ）を含み得るＣＴＣＬであり得る。

【0143】

場合により、Ｔ細胞悪性腫瘍は、ＰＴＣＬである。例としては、血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、Ａｌｋ陽性又はＡｌｋ陰性であり得る未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、くすぶり型サブタイプを除外し得る（非くすぶり型ＡＴＬＬ）成人Ｔ細胞白血病又はリンパ腫（ＡＴＬＬ）；及び末梢性Ｔ細胞リンパ腫非特定型（ＰＴＣＬ－ＮＯＳ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0144】

いくつかの実施形態では、ヒト患者は、Ｂ細胞悪性腫瘍、例えば、再発性又は難治性Ｂ細胞悪性腫瘍を有し得る。そのようなヒト患者は、ＣＤ７０＋疾患Ｂ細胞を有し得る。いくつかの例では、ヒト患者は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を有する。そのようなヒト患者は、前の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞療法が無効であった可能性がある。他の例では、ヒト患者は、不十分な予後と関連する進行性のＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であるマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を有する。

【0145】

さらに他の実施形態では、ヒト患者は、骨髄細胞悪性腫瘍、例えば、再発性又は難治性骨髄細胞悪性腫瘍を有し得る。いくつかの例では、ヒト患者は、急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ）（ＡＭＬ、急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ）とも称される）を有する。

【0146】

いくつかの実施形態では、ヒト患者は、ＣＤ７０＋白血病を有する。いくつかの実施形態では、ヒト患者は、ＣＤ７０＋Ｔ細胞白血病を有する。いくつかの実施形態では、ヒト患者は、ＣＤ７０＋リンパ腫を有する。いくつかの実施形態では、ヒト患者は、ＣＤ７０＋Ｔ細胞リンパ腫を有する。

【0147】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法によって治療されることになるヒト患者は、当技術分野で知られる任意の方法によって同定され得るＣＤ７０発現腫瘍細胞（ＣＤ７０発現腫瘍）を含む腫瘍を有するヒト患者であり得る。例えば、ＣＤ７０発現腫瘍は、代表的な腫瘍の切除生検又はコア生検によって回収される組織における免疫組織化学（ＩＨＣ）によって同定され得る。別の例では、ＣＤ７０発現腫瘍は、末梢血液又は骨髄において回収される免疫表現型検査によって定義される腫瘍細胞におけるフローサイトメトリーによって同定され得る。特定の例では、本明細書で開示される方法によって治療されることになるヒト患者は、生体試料（例えば、リンパ節試料、血液試料又は骨髄試料などの組織試料）における全癌細胞中に少なくとも１０％のＣＤ７０^＋腫瘍細胞を含む腫瘍を有し得る。

【0148】

本明細書で開示される方法のいずれかはさらに、患者におけるＣＤ７０＋腫瘍細胞の存在及び／又はレベルに基づく同種異系抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ療法に好適なヒト患者を同定する工程を含み得る。同定する工程は、例えば、ＩＨＣを介して、候補患者から得られる生検試料におけるＣＤ７０＋腫瘍細胞の存在及び／又はレベルを決定することによって実施され得る。或いは、同定する工程は、例えば、フローサイトメトリーを介して、候補患者から得られる血液試料又は骨髄試料におけるＣＤ７０＋腫瘍細胞の存在及び／又はレベルを決定することによって実施され得る。

【0149】

本明細書に記載される方法によって治療を受けるヒト患者は、治療後に再発し、且つ／又は治療に対して抵抗性になっており、且つ／又は治療に対して反応を示さないヒト患者であり得る。非限定的な例としては、（ａ）再発性若しくは難治性造血細胞悪性腫瘍（例えば、Ｔ細胞若しくはＢ細胞悪性腫瘍、又は骨髄細胞悪性腫瘍）、（ｂ）移植を必要とする場合があるステージＩＩＢ以上のＳＳ若しくは菌状息肉症（ＭＦ）、（ｃ）抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞療法に応答しない場合がある、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、（ｄ）ＰＴＣＬ、ＡＴＬＬ（例えば、白血病性ＡＴＬＬ、リンパ腫ＡＴＬＬ）、若しくはＡＩＴＬであって、第一選択の全身療法が無効であったもの、（ｅ）ＡＬＣＬであって、ブレウツキシマブベドチンを含む組み合わせ療法が無効であったもの、（ｆ）ＡＬＫ＋ＡＬＣＬであって、前の２つの選択療法（例えば、その一方は、ブレンツキシマブベドチンを含み得る）が無効であったもの、（ｇ）ＡＬＫ－ＡＬＣＬであって、前の１つの選択療法が無効であったもの、又は（ｈ）ＭＦ若しくはＳＳであって、場合により、前のモガムリズマブ療法を含み得る１つ以上の（例えば、少なくとも２つ）の前の全身療法が無効であったものを有する患者が挙げられる。

【0150】

本明細書に記載される方法によって治療されることになるヒト患者は、最近の前治療を有したヒト患者又は前治療を有しない患者であり得る。例えば、本明細書に記載されるとおりに治療されることになるヒト患者は、遺伝子改変Ｔ細胞の集団の第１の用量の前に少なくとも３ヶ月間モガムリズマブ治療を受けていない可能性がある。

【0151】

本明細書で開示される方法を使用して治療されるヒト患者のいずれかは、それに続く治療を受ける場合がある。例えば、ヒト患者は、抗サイトカイン療法にかけられる。別の例では、ヒト患者は、遺伝子操作されたＴ細胞の集団による治療の後に自系又は同種異系造血幹細胞移植にかけられる。

【0152】

患者が移植前処置（リンパ球枯渇治療）及び／又は治療レジメン（抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞療法）を受けるのに適格であるかどうかを判断するために、ヒト患者がスクリーニングされ得る。例えば、リンパ球枯渇治療に適格なヒト患者は、以下の特徴：（ａ）パフォーマンス・ステータスの米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）＞１への変化、（ｂ）臨床状態の著しい悪化（例えば、移植前処置及び／又は治療レジメンと関連するＡＥの潜在的なリスクを増大させ得る臨床状態の著しい悪化）、（ｃ）９２％超の飽和レベルを維持するために酸素補給を必要とすること、（ｄ）制御されない心不整脈、（ｅ）血管収縮薬の支援を必要とする低血圧、（ｆ）活動性感染症、及び（ｇ）任意の急性神経毒性（例えば、≧２の急性神経毒性）の１つ以上を示さない。

【0153】

別の例では、治療レジメンに適格なヒト患者は、以下の特徴の１つ以上を示さない：（ａ）パフォーマンス・ステータスの米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）＞１への変化、（ｂ）活動性の制御されない感染症、（ｃ）臨床状態の著しい悪化（例えば、同種異系ＣＡＲ Ｔ細胞注入と関連するＡＥの潜在的なリスクを増大させ得る臨床状態の著しい悪化）、及び（ｄ）任意の急性神経毒性（例えば、≧２の急性神経毒性）。

【0154】

移植前処置及び／又は治療レジメンと関連するＡＥの潜在的なリスクを増大させ得る臨床状態の著しい悪化としては、血球減少の臨床的に意義のある悪化、トランスアミナーゼレベルの臨床的に意義のある増大（例えば、＞３×ＵＬＮ）、総ビリルビンの臨床的に意義のある増加（例えば、＞２×ＵＬＮ）、及び血清クレアチニンの臨床的に意義のある増加が挙げられ得るが、これらに限定されない。

【0155】

ヒト患者をスクリーニングして、そのようなスクリーニング結果に基づいて移植前処置及び／又は治療レジメンから除外してもよい。例えば、患者が以下の除外基準のいずれかを満たす場合、ヒト患者は、移植前処置及び／又は治療レジメンから除外され得る：（ａ）以前の同種異系幹細胞移植（ＳＣＴ）、（ｂ）スクリーニング時に自系ＳＣＴから６０日未満であり且つ未回復の重篤な合併症を有すること、（ｃ）任意の抗ＣＤ７０標的化薬剤による以前の治療、（ｄ）自系ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞を除く任意のＣＡＲ Ｔ細胞又は任意の他の改変Ｔ若しくはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞による以前の治療、及び患者がＤＬＢＣＬを有すること、（ｅ）任意のリンパ球枯渇治療又は任意の治療レジメンの賦形剤のいずれかに対する既知の禁忌、（ｆ）症候性であるか又は症候性であった現在又は過去の悪性貯留液を伴うＴ細胞又はＢ細胞リンパ腫、（ｇ）血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）の臨床徴候、（ｈ）脳脊髄液（ＣＳＦ）からの検出可能な悪性細胞又は脳転移を示す核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、（ｉ）臨床的に意味のあるＣＮＳ病態の病歴又は存在、（ｊ）スクリーニング前の６ヶ月以内の不安定狭心症、不整脈、又は心筋梗塞、（ｋ）全身療法を必要とせずに１２ヶ月を超えて寛解している治癒手法で治療されたものを除く以前の又は同時的な悪性腫瘍（場合により、適切に切除された基底細胞又は扁平細胞皮膚癌、頸部の生体内原位置の癌、又は完全に切除され、３年を超えて寛解している以前の悪性腫瘍は許容され得る）、及び（ｌ）制御されない急性の生命を脅かす細菌、ウイルス、又は真菌感染症。

【0156】

リンパ球枯渇治療にかけられるヒト患者は、ＣＴＸ１３０細胞などの本明細書で開示される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の１つ以上の用量を受容することに対する適格性についてスクリーニングされ得る。例えば、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞治療にとって適格なリンパ球枯渇治療にかけられるヒト患者は、以下の特徴の１つ以上を示さない：（ａ）パフォーマンス・ステータスの米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）＞１への変化、（ｂ）活動性の制御されない感染症、（ｃ）臨床状態の著しい悪化（例えば、同種異系ＣＡＲ Ｔ細胞注入と関連するＡＥの潜在的なリスクを増大させ得る臨床状態の著しい悪化）、及び（ｄ）任意の急性神経毒性（例えば、≧２の急性神経毒性）。

【0157】

抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞のそれぞれの投与の後、ヒト患者は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、腫瘍溶解症候群（ＴＬＳ）、神経毒性（例えば、免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群又はＩＣＡＮＳ）、及び移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）などの急性毒性についてモニターされ得る。加えて、以下の有害作用の１つ以上がモニターされ得る：低血圧、腎不全（例えば、腎尿細管様上皮細胞の抑制によって引き起こされ得る）、血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）、遷延性血球減少症、及び／又は骨芽細胞の抑制。抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の各投与の後、ヒト患者は、毒性の発症に関して少なくとも２８日間モニターされ得る。

【0158】

ヒト患者が急性毒性の１つ以上の症状を示す場合、ヒト患者は毒性管理にかけられ得る。急性毒性の１つ以上の症状を示す患者に対する治療は、当技術分野において知られている。例えば、ＣＲＳの症状（例えば、心臓、呼吸器及び／又は神経的異常）を示すヒト患者に抗サイトカイン療法を施し得る。加えて、ＣＲＳの症状を示さないヒト患者に抗サイトカイン療法を施して、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の増殖を促進し得る。

【0159】

或いは又は加えて、ヒト患者が急性毒性の１つ以上の症状を示す場合、ヒト患者の治療を終了し得る。患者が１つ以上の有害事象（ＡＥ）の徴候を示す、例えば患者に異常な検査所見があり、且つ／又は患者が疾患進行の徴候を示す場合にも患者の治療を終了し得る。

【0160】

（ｉｉ）移植前処置（リンパ球枯渇療法）
本明細書で開示される治療方法に好適な任意のヒト患者は、対象の内在性リンパ球を減少又は枯渇させるためにリンパ球枯渇療法を受け得る。

【0161】

リンパ球枯渇は、内在性リンパ球及び／又はＴ細胞を破壊することを指し、一般に免疫移植療法及び免疫療法前に使用される。リンパ球枯渇は、放射線照射及び／又は化学療法によって達成することができる。「リンパ球枯渇剤」は、対象に投与したとき、内在性リンパ球及び／又はＴ細胞を減少、枯渇又は排除することが可能な任意の分子であり得る。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、薬剤を投与する前のリンパ球の数と比較して、リンパ球の数を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９６％、９７％、９８％又は少なくとも９９％だけ減少させるのに有効な量で投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、対象のリンパ球の数が検出限界以下となるような、リンパ球の数を減少させるのに有効な量で投与される。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１つの（例えば、２、３、４、５つ以上の）リンパ球枯渇剤が投与される。

【0162】

いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、特異的にリンパ球を死滅させる細胞傷害性薬剤である。リンパ球枯渇剤の例としては、フルダラビン、シクロホスファミド、ベンダムスチン、５－フルオロウラシル、ゲムシタビン、メトトレキサート、ダカルバジン、メルファラン、ドキソルビシン、ビンブラスチン、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、イリノテカン、リン酸エトポシド、ミトキサントロン、クラドリビン、デニロイキンジフチトクス、又はＤＡＢ－ＩＬ２が挙げられるが、これらに限定されない。場合により、リンパ球枯渇剤は、低線量の放射線照射と併用され得る。移植前処置のリンパ球枯渇効果は、通常の診療でモニターされ得る。

【0163】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、１つ以上のリンパ球枯渇剤、例えば、フルダラビン及びシクロホスファミドを含む移植前処置を含む。本明細書に記載される方法によって治療を受けるヒト患者は、複数用量の１つ以上のリンパ球枯渇剤を移植前段階の適切な期間（例えば、１～５日間）に受容し得る。患者は、リンパ球枯渇期間中、リンパ球枯渇剤の１つ以上を１日当たり１回受容し得る。一例において、ヒト患者は、１日当たり約２０～５０ｍｇ／ｍ^２（例えば、２０ｍｇ／ｍ^２又は３０ｍｇ／ｍ^２）のフルダラビンを２～４日間（例えば、３日間）及び１日当たり約３００～６００ｍｇ／ｍ^２（例えば、５００ｍｇ／ｍ^２）のシクロホスファミドを２～４日間（例えば、３日間）受容する。別の例において、ヒト患者は、１日当たり約２０～３０ｍｇ／ｍ^２（例えば、２５ｍｇ／ｍ^２）のフルダラビンを２～４日間（例えば、３日間）及び１日当たり約３００～５００ｍｇ／ｍ^２（例えば、３００ｍｇ／ｍ^２又は４００ｍｇ／ｍ^２）のシクロホスファミドを２～４日間（例えば、３日間）受容する。必要があれば、シクロホスファミドの用量は、例えば、１，０００ｍｇ／ｍ^２まで増加されてもよい。

【0164】

次に、ヒト患者は、本明細書で開示されるとおりのリンパ球枯渇療法後の適切な期間内において、ＣＴＸ１３０細胞などの抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞のいずれかを投与され得る。例えば、ヒト患者は、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞（例えば、例としてＣＴＸ１３０細胞）を投与する約２～７日（例えば、２、３、４、５、６、７日）前に１つ以上のリンパ球枯渇剤に晒され得る。

【0165】

ＣＴＸ１３０細胞などの同種異系抗ＣＤ７０ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、事前に調製することができるため、本明細書で開示されるとおりのリンパ球枯渇療法は、本明細書で開示される同種異系抗ＣＤ７０ ＣＡＲ－Ｔ細胞療法にヒト患者が好適であると同定された後の短い期間内（例えば、２週間以内）において、Ｔ細胞又はＢ細胞悪性腫瘍を有するヒト患者に適用され得る。

【0166】

本明細書に記載される方法は、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞を有するヒト患者に再投与することを包含する。そのような例において、ヒト患者は、再投与の前にリンパ球枯渇治療にかけられる。例えば、ヒト患者は、第１のリンパ球枯渇治療及びＣＴＸ１３０の第１の用量に続いて、第２のリンパ球枯渇治療及びＣＴＸ１３０の第２の用量にかけられ得る。別の例において、ヒト患者は、第１のリンパ球枯渇治療及びＣＴＸ１３０の第１の用量、第２のリンパ球枯渇治療及びＣＴＸ１３０の第２の用量、並びに第３のリンパ球枯渇治療及びＣＴＸ１３０の第３の用量にかけられ得る。

【0167】

リンパ球枯渇工程のいずれかの前に（例えば、最初のリンパ球枯渇工程の前又はＣＴＸ１３０細胞などの抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の再投与と関連するいずれかの後に続くリンパ球枯渇工程の前）、ヒト患者は、患者がリンパ球枯渇治療に適格であるかどうかを判断するための１つ以上の特徴についてスクリーニングされ得る。例えば、リンパ球枯渇前に、リンパ球枯渇治療に適格なヒト患者は、以下の特徴：（ａ）パフォーマンス・ステータスの米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）＞１への変化、（ｂ）臨床状態の著しい悪化（例えば、リンパ球枯渇治療と関連するＡＥの潜在的なリスクを増大させ得る臨床状態の著しい悪化）、（ｃ）９２％超の飽和レベルを維持するために酸素補給を必要とすること、（ｄ）制御されない心不整脈、（ｅ）血管収縮薬の支援を必要とする低血圧、（ｆ）活動性感染症、及び（ｇ）任意の急性神経毒性（例えば、≧２の急性神経毒性）の１つ以上を示さない。いくつかの例では、リンパ球枯渇治療と関連する有害事象の潜在的なリスクを増大させ得る臨床状態の著しい悪化としては、任意の血球減少の臨床的に意義のある悪化、トランスアミナーゼレベルの臨床的に意義のある増大（例えば、＞３×ＵＬＮ）、総ビリルビンの臨床的に意義のある増加（例えば、＞２×ＵＬＮ）、及び／又は血清クレアチニンの臨床的に意義のある増加が挙げられ得るが、これらに限定されない。

【0168】

リンパ球枯渇後、患者が抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞による治療に適格であるかどうかを判断するために、ヒト患者は、１つ以上の特徴についてスクリーニングされ得る。例えば、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞治療前及びリンパ球枯渇治療後、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞治療に適格なヒト患者は、以下の特徴：（ａ）パフォーマンス・ステータスの米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）＞１への変化、（ｂ）活動性の制御されない感染症、（ｃ）臨床状態の著しい悪化（例えば、同種異系ＣＡＲ Ｔ細胞注入と関連するＡＥの潜在的なリスクを増大させ得る臨床状態の著しい悪化）、及び（ｄ）任意の急性神経毒性（例えば、≧２の急性神経毒性）の１つ以上を示さない。

【0169】

（ｉｉｉ）抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の投与
本開示の態様は、Ｔ細胞又はＢ細胞悪性腫瘍を治療する方法であって、ヒト患者をリンパ球枯渇治療にかけること及びある用量の本明細書に記載される遺伝子操作されたＴ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の集団をヒト患者に投与することを含む方法を提供する。

【0170】

抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の投与は、所望の効果を生じさせることができるように、腫瘍部位などの所望の部位に遺伝子操作されたＴ細胞集団の少なくとも部分的な局在化をもたらす方法又は経路による、遺伝子操作されたＴ細胞集団のヒト患者への配置（例えば、移植）を含み得る。対象の所望の位置に送達をもたらす任意の適切な経路によって遺伝子操作されたＴ細胞集団を投与することができるが、この場合、移植された細胞又はこの細胞の構成要素の少なくとも一部は、生存したままである。対象への投与後の細胞の生存期間は、数時間（例えば、２４時間）という短い期間から数日、数年又はさらに対象の寿命（すなわち、長期の生着）という長さまでであり得る。例えば、本明細書に記載されるいくつかの態様では、有効量の遺伝子操作されたＴ細胞集団を、腹腔内又は静脈内経路などの全身性の投与経路を介して投与することができる。

【0171】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＴ細胞集団を全身に投与し、これは、細胞の集団を標的部位、組織又は臓器に直接投与するのではなく、代わりに対象の循環系に入り、それにより代謝及び他の同様のプロセスを受けるように投与することを指す。好適な投与の様式としては、注射、注入、点滴又は経口摂取が挙げられる。注射としては、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、脳室内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節腔内、被膜下、くも膜下、脊髄内、脳脊髄内、並びに胸骨内注射及び注入が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、経路は、静脈内である。

【0172】

有効量は、医学的状態（例えば、Ｔ細胞又はＢ細胞悪性腫瘍）の少なくとも１つ以上の徴候又は症状を予防又は軽減するのに必要な遺伝子操作されたＴ細胞集団の量を指し、所望の効果をもたらす、例えば、医学的状態を有する対象を治療するのに十分な量の遺伝子操作されたＴ細胞集団に関する。有効量としては、疾患の症状の発症を予防するか若しくは遅らせるか、疾患の症状の経過を変える（例えば、限定されないが、疾患の症状の進行を遅らせる）か、又は疾患の症状を逆転させるのに十分な量も挙げられる。任意の所与の場合に関して、適切な有効量は、通常の実験を使用して当業者により決定できることが理解される。

【0173】

遺伝子操作されたＴ細胞集団の有効量は、ＣＤ７０に結合するＣＡＲを発現する約１×１０^７個のＣＡＲ＋細胞～約１×１０^９個のＣＡＲ＋細胞、例えば、約３×１０^７個の細胞～約１×１０^９個の細胞を含み得る。

【0174】

遺伝子操作されたＴ細胞集団の有効量は、抗ＣＤ７０ ＣＡＲを発現する約３．０×１０^７個の細胞～約９×１０^８個の細胞（ＣＡＲ^＋細胞）、例えば、ＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞を含み得る。いくつかの実施形態では、有効量の遺伝子操作されたＴ細胞集団は、少なくとも３．０×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞、少なくとも４×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞、少なくとも４．５×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞、少なくとも５×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞、少なくとも５．５×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞、少なくとも６×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞、少なくとも６．５×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞、少なくとも７×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞、少なくとも７．５×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞、少なくとも８×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞、少なくとも８．５×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞、又は少なくとも９×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞を含み得る。いくつかの例では、ＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞の量は、１×１０^９個の細胞を超えない場合がある。

【0175】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の有効量は、約３．０×１０^７～約３×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞、例えば、約１×１０^７～約１×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞又は約１×１０^８～約３×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の有効量は、約１．５×１０^８～約３×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞の範囲であり得る。

【0176】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の有効量は、約３．０×１０^８～約９×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞、例えば、約３．５×１０^８～約６×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞又は約３．５×１０^８～約４．５×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の有効量は、約４．５×１０^８～約９×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の有効量は、約４．５×１０^８～約６×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の有効量は、約６×１０^８～約９×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の有効量は、約７．５×１０^８～約９×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞の範囲であり得る。

【0177】

特定の例では、有効量の本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）は、約３．０×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞を含み得る。例えば、有効量の本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）は、約４．５×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞を含み得る。他の例では、有効量の本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）は、約６×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞を含み得る。いくつかの例では、有効量の本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）は、約７．５×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞を含み得る。さらに他の例では、有効量の本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）は、約９×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞を含み得る。

【0178】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の有効量は、約３×１０^８～約９×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の有効量は、約３×１０^８～約７．５×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の有効量は、約３×１０^８～約６×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるとおりの遺伝子操作されたＴ細胞集団（例えば、ＣＴＸ１３０細胞）の有効量は、約３×１０^８～約４．５×１０^８個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞の範囲であり得る。

【0179】

いくつかの実施形態では、有効量の遺伝子操作されたＴ細胞集団は、ある用量の遺伝子操作されたＴ細胞集団、例えば、約３．０×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞～約９×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞を含む用量、例えば、本明細書で開示される任意の用量又は用量の範囲を含み得る。いくつかの例では、有効量は、４．５×１０^６個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞である。いくつかの例では、有効量は、６×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞である。いくつかの例では、有効量は、７．５×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞である。いくつかの例では、有効量は、９×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞である。

【0180】

いくつかの例では、ＣＴＣＬ、例えば、大細胞転化を伴う菌状息肉症（ＭＦ）を有する患者は、ＣＴＸ１３０細胞の好適な用量、例えば、約３×１０^７～約６×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞を与えられ得る。そのようなＭＦ患者は、約３×１０^７個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞が投与され得る。或いは、ＭＦ患者は、約１×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞が投与され得る。別の例では、ＭＦ患者は、約３×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞が投与され得る。別の例では、ＭＦ患者は、約４．５×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞が投与され得る。別の例では、ＭＦ患者は、約６×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞が投与され得る。別の例では、ＭＦ患者は、約７．５×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞が投与され得る。別の例では、ＭＦ患者は、約９×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞が投与され得る。

【0181】

いくつかの例では、ＣＴＣＬ、例えば、大細胞転化を伴う菌状息肉症（ＭＦ）を有する患者は、ＣＴＸ１３０細胞の好適な用量、例えば、約９×１０^９～約１×１０^９個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞を与えられ得る。そのようなＭＦ患者は、約９×１０^９個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞が投与され得る。或いは、ＭＦ患者は、約１×１０^９個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞が投与され得る。

【0182】

いくつかの実施形態では、ＣＴＸ１３０細胞の好適な用量は、各々が約１．５×１０^８個のＣＡＲ＋ＣＴＸ１３０細胞を含むバイアルである、医薬組成物の１つ以上のバイアルから投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＸ１３０細胞の好適な用量は、各々が約３×１０^８個のＣＡＲ＋ＣＴＸ１３０細胞を含むバイアルである、医薬組成物の１つ以上のバイアルから投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＸ１３０細胞の好適な用量は、１．５×１０^８の１倍以上のＣＡＲ＋ＣＴＸ１３０細胞、例えば、１．５×１０^８の１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、又は６倍のＣＡＲ＋ＣＴＸ１３０細胞において対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＸ１３０細胞の好適な用量は、医薬組成物の１つ以上の完全な又は部分的なバイアルから投与される。

【0183】

本明細書に記載される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞療法の有効性は、訓練された臨床医によって判断され得る。抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、一例ではあるが、任意の１つ又は全ての徴候又は症状のＣＤ７０のレベルが有利な様式で変化する（例えば、少なくとも１０％減少する）場合又はＴ細胞若しくはＢ細胞悪性腫瘍の他の臨床的に認められている症状又はマーカーが改善又は回復される場合、「有効」であるとみなされる。有効性は、入院又は医学的介入の必要性により評価されるとおり、対象が悪化しないことによっても測定され得る（例えば、Ｔ細胞又はＢ細胞悪性腫瘍の進行が止まるか又は少なくとも遅くなる）。これらの指標を測定する方法は、当業者に知られており、且つ／又は本明細書で記載される。治療は、ヒト患者におけるＴ細胞又はＢ細胞悪性腫瘍の任意の治療を含み、（１）疾患を阻害すること、例えば、症状の進行を止めるか若しくは遅くすること；又は（２）疾患を軽減すること、例えば、症状の退行をもたらすこと；及び（３）症状の発症を予防するか若しくはその可能性を減少させることを含む。

【0184】

本明細書に記載される治療方法は、リンパ球枯渇を反復すること及び抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の再投与を包含する。抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞のそれぞれの再投与の前に、患者は、別のリンパ球枯渇治療にかけられる。抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の用量は、第１、第２、及び第３の用量に関して同じであり得る。例えば、第１、第２、及び第３の用量の各々は、１×１０^７個のＣＡＲ^＋細胞、３×１０^７個のＣＡＲ^＋細胞、１×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞、１．５×１０^８個のＣＡＲ＋細胞、３×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞、４．５×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞、６×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞、７．５×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞、又は９×１０^８個のＣＡＲ^＋細胞であり得る。他の場合、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の用量は、投与の数が増加するにつれてＣＡＲ＋細胞の数が増加する場合がある。例えば、第１の用量は、１×１０^７個のＣＡＲ＋細胞であり、第２の用量は、１×１０^８個のＣＡＲ＋細胞であり、第３の用量は、１×１０^９個のＣＡＲ＋細胞である。或いは、ＣＡＲ＋細胞の第１の用量は、ＣＡＲ＋細胞の第２及び／又は第３の用量より少なく、例えば、第１の用量は、１×１０^７個のＣＡＲ＋細胞であり、第２及び第３の用量は、１×１０^９個のＣＡＲ＋細胞である。いくつかの例では、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の用量は、それぞれのその後の用量に関して１．５×１０８個のＣＡＲ＋細胞だけ増加し得る。

【0185】

患者は、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞のそれぞれの投与の後に再投与について評価され得る。例えば、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の第１の用量の後、ヒト患者は、患者が以下の１つ以上を示さない場合、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の第２の用量を受容するのに適格であり得る：（ａ）用量規制毒性（ＤＬＴ）、（ｂ）７２時間以内にグレード２に回復しないグレード４のＣＲＳ、（ｃ）グレード＞１のＧｖＨＤ、（ｄ）グレード≧３の神経毒性、（ｅ）活動性感染症、（ｆ）血行動態的に不安定、及び（ｇ）臓器不全。別の例では、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の第２の用量の後、ヒト患者は、患者が以下の１つ以上を示さない場合、ＣＴＸ１３０の第３の用量を受容するのに適格であり得る：（ａ）用量規制毒性（ＤＬＴ）、（ｂ）７２時間以内にグレード２に回復しないグレード４のＣＲＳ、（ｃ）グレード＞１のＧｖＨＤ、（ｄ）グレード≧３の神経毒性、（ｅ）活動性感染症、（ｆ）血行動態的に不安定、及び（ｇ）臓器不全。

【0186】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるとおりのヒト患者は、複数の用量の抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本明細書で開示されるとおりのＣＴＸ１３０細胞）を与えられ得る、すなわち、再投与され得る。ヒト患者は、合計で最大３用量まで与えられ得る（すなわち、２回以下の再投与）。２つの連続した用量の間の間隔は、約８週～約２年であり得る。いくつかの例では、ヒト患者は、患者が、第１の用量（又は第２の用量）の後に部分奏効（ＰＲ）又は完全奏効（ＣＲ）に達し、その後最後の用量の２年以内に進行した場合、再投与され得る。他の例では、ヒト患者は、患者が最近の投与の後にＰＲ（ただしＣＲではない）又は安定な疾患（ＳＤ）に達したとき、再投与され得る。

【0187】

いくつかの場合、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の再投与は、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の第１の用量の１２週後までに行われ得る。ヒト患者は、１２週目に最大２回再投与され得る。患者が２つの用量を投与されるとき、第２の用量は、第１の用量の３～６週後又は９～１２週後に投与され得る。患者が３つの用量を投与されるとき、第３の用量は、第１の用量の９～１２週後に投与されてもよく、第２の用量は、第１の用量の３～６週後に投与されてもよい。

【0188】

抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の各投与の後、ヒト患者は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、腫瘍溶解症候群（ＴＬＳ）、神経毒性、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、及び／又はオンターゲット・オフ腫瘍毒性（例えば、活性化Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、樹状細胞、骨芽細胞、及び／若しくは腎尿細管様上皮に対する抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の活性に起因する）、並びに／又は制御されないＴ細胞増殖などの急性毒性についてモニターされ得る。加えて、以下の有害作用の１つ以上がモニターされ得る：低血圧、腎不全（例えば、腎尿細管様上皮細胞の抑制によって引き起こされ得る）、血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）、遷延性血球減少症、及び／又は骨芽細胞の抑制。抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の各投与の後、ヒト患者は、毒性の発症に関して少なくとも２８日間モニターされ得る。毒性の発症が観察される場合、ヒト患者は、毒性管理にかけられ得る。急性毒性の１つ以上の症状を示す患者に対する治療は、当技術分野において知られている。例えば、ＣＲＳの症状（例えば、心臓、呼吸器及び／又は神経的異常）を示すヒト患者に抗サイトカイン療法を施し得る。加えて、ＣＲＳの症状を示さないヒト患者に抗サイトカイン療法を施して、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の増殖を促進し得る。

【0189】

本明細書に記載される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞治療法は、以前の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞療法、以前の第一選択全身療法、以前の組み合わせ療法、又は以前のモガムリズマブ療法など、以前に抗癌療法を受けたことがあるヒト患者に対して使用され得る。

【0190】

本明細書に記載される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞治療法はまた、組み合わせ療法において使用され得る。例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞治療法は、Ｔ細胞又はＢ細胞悪性腫瘍を治療するか若しくは遺伝子操作されたＴ細胞集団の有効性を高めるために、且つ／又は遺伝子操作されたＴ細胞集団の副作用を低減するために他の治療剤とともに使用され得る。

【0191】

ＩＶ．造血細胞悪性腫瘍を治療するためのキット
本開示はまた、造血細胞悪性腫瘍、例えば、Ｔ細胞悪性腫瘍、Ｂ細胞悪性腫瘍、又は骨髄細胞悪性腫瘍を治療するための方法において、本明細書で記載されるとおりのＣＴＸ１３０細胞などの抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の集団の使用のためのキットを提供する。そのようなキットには、１つ以上のリンパ球枯渇剤を含む第１の医薬組成物、任意の核酸又は遺伝子操作されたＴ細胞の集団（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む第２の医薬組成物、及び薬学的に許容される担体を含む１つ以上の容器を含み得る。

【0192】

いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載される方法のいずれかにおける使用のための指示書を含み得る。添付される指示書は、ヒト患者において意図される活性を実現するために、第１及び／又は第２の医薬組成物を対象に投与することに関する説明を含み得る。キットはさらに、ヒト患者が治療を必要とするかどうかを同定することに基づいて、治療に好適なヒト患者を選択することに関する説明を含み得る。いくつかの実施形態では、指示書は、治療が必要なヒト患者に第１及び第２の医薬組成物を投与することに関する説明を含む。

【0193】

本明細書に記載されるＣＴＸ１３０細胞などの抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の集団の使用に関する指示書は、一般に、意図される治療に関する投与量、投与スケジュール、及び投与経路などの情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）又は副単位用量であり得る。本開示のキットにおいて与えられる指示書は通常、ラベル又は添付文書上に記載された指示書である。ラベル又は添付文書は、遺伝子操作されたＴ細胞の集団が、対象における造血細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、又は骨髄細胞）悪性腫瘍を治療し、発症を遅らせ、且つ／又は軽減するために使用されることを示す。

【0194】

本明細書で提供されるキットは、好適な包装の中にある。好適な包装としては、バイアル、ボトル、ジャー、柔軟な包装などが挙げられるが、これらに限定されない。吸入器、鼻腔投与器具、又は注入器具などの特定の器具と組み合わせて使用するための包装も考えられる。キットは、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針が貫通可能なストッパーのある静脈内溶液バッグ又はバイアルであり得る）。容器にも無菌のアクセスポートがあり得る。医薬組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書で開示されるようなＣＴＸ１３０細胞などの抗ＣＤ７０ ＣＡＲ－Ｔ細胞の集団である。

【0195】

キットは、任意選択により、緩衝剤及び解説情報などの追加の構成要素を提供し得る。通常、キットは、容器及び容器上の又は容器に付随したラベル又は添付文書を含む。いくつかの実施形態では、本開示は、上記のキットの内容物を含む製造物品を提供する。

【0196】

一般的技術
本開示の実施は、別段の指摘がない限り、当技術分野の範囲内にある分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学及び免疫学の従来技術を利用することになる。こうした技術は、例えば下記の文献で十分に説明されている：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９８９）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．１９９３－８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）：Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８８－１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）；Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄ Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ｅｄ．１９８５）；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｄｓ．（１９８５；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８６；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ｌＲＬ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６；ａｎｄ Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）。

【0197】

当業者であれば、さらなる詳述なしに、上記の説明に基づいて本発明を最大限に利用することができると考えられる。したがって、以下の特定の実施形態は、単なる例示として解釈すべきであり、決して以下の本開示を限定するものではない。本明細書で引用される全ての刊行物は、本明細書で参照される目的のために又は主題に対して参照により組み込まれる。

【実施例】

【0198】

記載される発明がより十分に理解され得るようにするために、以下の実施例が記載される。本出願で記載される実施例は、本明細書で提供される方法及び組成物を説明するために提供されるものであり、いかなる意味でもそれらの範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

【0199】

実施例１：多重遺伝子ノックアウトを有するＴ細胞の生成。
この実施例は、２つ又は３つの遺伝子の発現を同時に欠くヒトＴ細胞を生成するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集技術の使用を記載する。具体的には、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）遺伝子（ＴＣＲアルファ定常（ＴＲＡＣ）領域において編集された遺伝子）、β２－ミクログロブリン（β２Ｍ）遺伝子、及び表面抗原分類７０（ＣＤ７０）遺伝子が、列挙された遺伝子の２つ以上においてＴ細胞欠損を生成するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集によって編集された。以下の略称が、簡潔さ及び明確さのために使用される：
２Ｘ ＫＯ：ＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－
３Ｘ ＫＯ（ＣＤ７０）：ＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－

【0200】

活性化された初代ヒトＴ細胞は、Ｃａｓ９：ｇＲＮＡ ＲＮＰ複合体で電気穿孔された。ヌクレオフェクション混合物は、Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（商標）溶液、５×１０^６細胞、１μＭのＣａｓ９及び５μＭのｇＲＮＡ（Ｈｅｎｄｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１５；３３（９）：９８５－９８９，ＰＭＩＤ：２６１２１４１５に記載される）を含有した。二重ノックアウトＴ細胞（２Ｘ ＫＯ）の生成のために、細胞は、各々が上に示される濃度でＣａｓ９タンパク質並びに以下のｓｇＲＮＡ：ＴＲＡＣ（配列番号６）及びβ２Ｍ（配列番号１０）の１つを含有する２つの異なるＲＮＰ複合体で電気穿孔された。三重ノックアウトＴ細胞（３Ｘ ＫＯ）の生成のために、細胞は、各ＲＮＰ複合体がＣａｓタンパク質並びに以下のｓｇＲＮＡ：（ａ）ＴＲＡＣ（配列番号６）、β２Ｍ（配列番号１０）、及びＣＤ７０（配列番号２又は６６）の１つを含有する３つの異なるＲＮＰ複合体で電気穿孔された。ｇＲＮＡの未改変のバージョン（又は他の改変バージョン）もまた使用され得る（例えば、配列番号３、７、１１、及び／又は６７）。表６における配列も参照されたい。

【0201】

【表13】

【0202】

エレクトロポレーションの約１週間後、細胞は、未処理のままであるか又は酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ）／イオノマイシンで一晩処理された。翌日、細胞をフローサイトメトリーのために処理して（例えば、Ｋａｌａｉｔｚｉｄｉｓ Ｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２０１７；１２７（４）：１４０５－１４１３を参照のこと）、編集された細胞集団の細胞表面でＴＲＡＣ、β２Ｍ、及びＣＤ７０の発現レベルを評価した。以下の一次抗体が使用された（表７）。

【0203】

【表14】

【0204】

表８は、非常に効率的な多重遺伝子編集を示す。三重ノックアウト細胞に関して、生存細胞の８０％が、ＴＣＲ、β２Ｍ、及びＣＤ７０の発現を欠いた（表８）。

【0205】

【表15】

【0206】

Ｔ細胞における三重遺伝子編集が細胞の増殖に影響するかどうかを評価するため、細胞数を、二重及び四重遺伝子編集されたＴ細胞（未編集のＴ細胞が、対照として使用された）の間で編集後２週間にわたって数え上げた。５×１０^６細胞が生成され、Ｔ細胞の各遺伝子型について蒔かれた。

【0207】

細胞増殖（拡大）は、エレクトロポレーション後の期間の試験にわたって継続した。同様の細胞増殖は、生存細胞の数によって示されるとおり、二重（β２Ｍ－／ＴＲＡＣ－）及び三重（β２Ｍ－／ＴＲＡＣ－／ＣＤ７０－）ノックアウトＴ細胞の間で観察された（データは示さず）。これらのデータは、多重遺伝子編集が、Ｔ細胞増殖によって測定されるとおりのＴ細胞の活力に影響を及ぼさないことを示唆する。

【0208】

実施例２：多重ノックアウトを有する抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の生成。
この実施例は、ＴＣＲ遺伝子、β２Ｍ遺伝子、及び／又はＣＤ７０遺伝子の発現を欠き、且つＣＤ７０を標的化するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する同種異系ヒトＴ細胞の産生を記載する。これらの細胞は、ＴＣＲ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋又は３Ｘ ＫＯ（ＣＤ７０）ＣＤ７０ ＣＡＲ＋と呼ばれる。

【0209】

配列番号４３のヌクレオチド配列を含む（配列番号４６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ７０ ＣＡＲをコードする、配列番号４４におけるドナー鋳型を含む）組換えアデノ随伴アデノウイルスベクター、血清型６（ＡＡＶ６）（ＭＯＩ ５０，０００）が、Ｃａｓ９：ｓｇＲＮＡ ＲＮＰ（１μＭ Ｃａｓ９、５μＭ ｇＲＮＡ）とともに活性化された同種異系ヒトＴ細胞に送達された。以下のｓｇＲＮＡを使用した：ＴＲＡＣ（配列番号６）、β２Ｍ（配列番号１０）、及びＣＤ７０（配列番号２又は６６）。ｇＲＮＡの未改変のバージョン（又は他の改変バージョン）もまた使用され得る（例えば、配列番号３、７、１１、及び／又は６７）。エレクトロポレーションの約１週間後、細胞をフローサイトメトリーのために処理して、編集された細胞集団の細胞表面でのＴＲＡＣ、β２Ｍ、及びＣＤ７０発現レベルを評価した。以下の一次抗体が使用された（表９）。

【0210】

【表16】

【0211】

Ｔ細胞比率アッセイ。次に、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞の比率が、以下の抗体（表１０）を使用するフローサイトメトリーによって、編集されたＴ細胞集団において評価された。

【0212】

【表17】

【0213】

高効率の遺伝子編集及びＣＡＲ発現は、編集された抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞集団において達成された。加えて、編集は、ＣＤ４／ＣＤ８ Ｔ細胞集団を不利に変化させなかった。図１は、三重ノックアウトＣＡＲ Ｔ細胞における非常に効率的な遺伝子編集及び抗ＣＤ７０ ＣＡＲ発現を示す。５５％を超える生存細胞が、ＴＣＲ、β２Ｍ、及びＣＤ７０の発現を欠き、抗ＣＤ７０ ＣＡＲも発現した。図２は、ＣＤ４／ＣＤ８ Ｔ細胞サブセットの正常な比率が、ＴＲＡＣ－／β２Ｍ－／ＣＤ７０－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋細胞において維持されたことを示し、これは、これらの多重遺伝子編集が、ＣＤ４／ＣＤ８ Ｔ細胞サブセットの比率によって測定されるとおり、Ｔ細胞の生態に影響を及ぼさないことを示唆している。

【0214】

実施例３：インビトロでの抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の細胞増殖に対するＣＤ７０ ＫＯの効果
ＣＡＲ Ｔ細胞においてＣＤ７０遺伝子を破壊することの影響をさらに評価するため、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞が、実施例２に記載されるとおりに生成された。具体的には、ＴＲＡＣ－／β２Ｍ－／ＣＤ７０－抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞が、２つの異なるｇＲＮＡ（Ｔ７（配列番号２）及びＴ８（配列番号６６））を使用して生成された。エレクトロポレーションの後、細胞増殖は、編集後の２週間にわたって二重又は三重遺伝子編集されたＴ細胞を数え上げることによって評価された。５×１０^６細胞が生成され、Ｔ細胞の各遺伝子型について蒔かれた。増殖は、生存細胞の数を計数することによって決定された。図３は、Ｔ７又はＴ８ ｇＲＮＡのいずれかで生成された三重ノックアウトＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞が、二重ノックアウトＴＲＡＣ^－／β２Ｍ^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞と比較して高い細胞増殖を示したことを示す。これらのデータは、ＣＤ７０遺伝子をノックアウトすることが、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞に細胞増殖の優位性をもたらすことを示唆する。

【0215】

実施例４：ＣＤ７０ ＫＯは、複数の細胞型における細胞の死滅を増進する。
様々な癌細胞株におけるＣＤ７０発現。相対的なＣＤ７０発現を様々な癌細胞株において測定して、様々な癌型を死滅させる抗ＣＤ７０ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞の能力をさらに評価した。ＣＤ７０発現は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７抗ヒトＣＤ７０抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ Ｃａｔ．Ｎｏ．３５５１１５）を使用するフローサイトメトリー分析によって測定された。癌細胞株は、図４ＡにおけるＦＩＴＣ抗ヒトＣＤ７０抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ Ｃａｔ．Ｎｏ．３５５１０５）を使用するフローサイトメトリー分析（表１１Ａ、図４Ａ）によってＣＤ７０発現について評価された。ＳＫＯＶ－３（卵巣）、ＨｕＴ７８（リンパ腫）、ＮＣＩ－Ｈ１９７５（肺）及びＨｓ－７６６Ｔ（膵臓）細胞株は、ＡＣＨＮと同様であるか又はより高いが、Ａ４９８より低いＣＤ７０発現のレベルを示した（表２２、図４Ａ）。

【0216】

急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、高レベルのＣＤ７０を発現し得る。ＣＤ７０発現は、フローサイトメトリー分析によっていくつかの急性骨髄性白血病細胞株：ＴＨＰ－１、ＭＶ－４－１１、ＥＯＬ－１、ＨＬ－６０、Ｋａｓｕｍｉ－１、及びＫＧ１において測定された。表１１Ｂは、これらの細胞がＣＤ７０を発現し、本明細書に記載される細胞死滅データによって実証されるとおり、全てが抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞によって標的化され得ることを示す。

【0217】

【表18】

【0218】

【表19】

【0219】

細胞の死滅。ＣＤ７０発現細胞を選択的に死滅させる抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の能力が判定された。フローサイトメトリーアッセイを設計して、３Ｘ ＫＯ（ＣＤ７０）（ＴＲＡＣ^－／Ｂ２Ｍ^－／ＣＤ７０^－）抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞によって、癌細胞懸濁液株（例えば、「標的細胞」と呼ばれるＫ５６２、ＭＭ．１Ｓ、ＨｕＴ７８及びＭＪ癌細胞）の死滅を試験した。使用された標的細胞株のうちの３つは、ＣＤ７０発現癌細胞（例えば、ＭＭ．１Ｓ、ＨｕＴ７８、及びＭＪ）であったが、陰性対照癌細胞として使用された３つ目は、ＣＤ７０発現を欠く（例えば、Ｋ５６２）。ＴＲＡＣ^－／Ｂ２Ｍ^－／ＣＤ７０^－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞は、ＣＤ７０発現ＭＭ．１Ｓ、ＨｕＴ７８若しくはＭＪ細胞株又はＣＤ７０陰性Ｋ５６２細胞株のいずれかと共培養された。標的細胞は、５μＭ ｅｆｌｕｏｒ６７０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で標識され、洗浄され、９６ウェルＵ底プレートにおいて１ウェル当たり５０，０００標的細胞の密度で播種された。標的細胞は、様々な比（０．５：１、１：１、２：１及び４：１ ＣＡＲ＋Ｔ細胞対標的細胞）でＴＲＡＣ^－／Ｂ２Ｍ^－／ＣＤ７０^－抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞と共培養され、一晩インキュベートされた。標的細胞の死滅は、２４時間の共培養後に判定された。細胞は洗浄され、５ｍｇ／ｍＬ ＤＡＰＩ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）の１：５００希釈物を含有する２００μＬの培地が各ウェルに加えられた（死／瀕死細胞を数え上げるため）。次に、細胞は、フローサイトメトリーによって分析され、残留している生存標的細胞の量が定量化された。

【0220】

図４Ｂ、図４Ｃ、図４Ｄ、及び図４Ｅは、ＴＲＡＣ－／Ｂ２Ｍ－／ＣＤ７０－抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０）による選択的な標的細胞の死滅を実証している。３Ｘ ＫＯ（ＣＤ７０）ＣＡＲ＋Ｔ細胞との２４時間の共培養は、０．５：１の低いＣＡＲ＋Ｔ細胞とＣＤ７０発現標的細胞比でさえ、Ｔ細胞リンパ腫細胞（ＨｕＴ７８）のほぼ完全な死滅をもたらした（図４Ｄ）。同様に、２４時間の共培養は、試験された全てのＣＡＲ＋Ｔ細胞と標的細胞の比で多発性骨髄腫細胞（ＭＭ．１Ｓ）のほぼ完全な死滅をもたらした（図４Ｃ）。同様に、２４時間の共培養は、試験された全てのＣＡＲ＋Ｔ細胞と標的細胞の比で高ＣＤ７０発現Ｔ細胞リンパ腫細胞（ＭＪ）の効率的な細胞溶解をもたらした。図４Ｅは、低発現ＣＤ７０ Ｔ細胞リンパ腫細胞（ＨｕＴ７８）と比較した細胞溶解を示す。標的細胞の死滅は、ＴＲＡＣ－／Ｂ２Ｍ－ＣＤ７０－／抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞が、試験されたいずれのエフェクター：標的細胞比でも対照試料（例えば、癌細胞単独又はＲＮＰ Ｔ細胞を伴わない共培養物）のレベルを上回るＣＤ７０欠損Ｋ５６２細胞の死滅を誘導しなかったという点で選択的であることが見出された（図４Ｂ）。図４Ｆ～４Ｋは、ＴＲＡＣ－／Ｂ２Ｍ－／ＣＤ７０－抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞（例えば、ＣＴＸ１３０）が、様々なＣＤ７０発現ＡＭＬ細胞株を効率的に死滅させることができることを実証している。具体的には、２４時間の共培養は、ＭＶ４１１（図４Ｆ）、ＥＯＬ－１（図４Ｇ）、ＨＬ６０（図４Ｈ）、Ｋａｓｕｍｉ－１（図４Ｈ）、ＫＧ１（図４Ｊ）、及びＴＨＰ－１細胞（図４Ｋ）を含む様々な急性骨髄性白血病細胞株の効率的な死滅をもたらした。加えて、データは、急性骨髄性白血病細胞に対する抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の死滅効果が、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞の用量の増加とともに増大することを実証している。

【0221】

実施例５：ＣＴＸ１３０細胞の有効性：皮膚Ｔ細胞リンパ腫腫瘍異種移植モデルにおける治療。
Ｔ細胞リンパ腫を除去する抗ＣＤ７０ ＣＡＲを発現するＴ細胞の能力は、マウスにおける皮下Ｔ細胞リンパ腫（Ｈｕ Ｔ７８又はＨｈ）腫瘍異種移植モデルを使用してインビボで評価された。

【0222】

ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９及びＡＡＶ６を、上のとおりに使用して（例えば、実施例２を参照のこと）、ＣＤ７０を標的化するＣＡＲコンストラクト（配列番号４６）を使用してＴＲＡＣ遺伝子座からの同時の発現を伴ってＴＣＲ、β２Ｍ、ＣＤ７０の発現を欠くヒト抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞を作製した。この実施例において、活性化Ｔ細胞はまず、ＴＲＡＣ（配列番号６）、β２Ｍ（配列番号１０）、及びＣＤ７０（配列番号２）を標的化するｓｇＲＮＡを含有する３種の異なるＣａｓ９：ｓｇＲＮＡ ＲＮＰ複合体により電気穿孔された。ＴＲＡＣ座位でのＤＮＡ二重鎖切断は、キメラ抗原受容体カセット（遺伝子発現に関する－／＋調節エレメント）に隣接するＴＲＡＣ座位に対して右及び左の相同性アームを含有するＡＡＶ６に送達されるＤＮＡ鋳型（配列番号４３）（配列番号４６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ７０ ＣＡＲをコードする）による相同組換え修復によって修復された。

【0223】

得られた改変Ｔ細胞は、ＴＲＡＣ－／β２Ｍ－／ＣＤ７０－抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞（ＣＴＸ１３０）である。ＣＤ７０＋Ｔ細胞リンパ腫細胞株によって引き起こされる疾患を回復させるこれらの抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の能力は、Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＬＬＣ（Ｓｃｏｔｔｓｄａｌｅ、ＡＺ）によって利用される方法を使用して、ＮＯＧマウスにおいて評価された。簡潔には、１２頭の５～８週齢雌、ＣＩＥＡ ＮＯＧ（ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩ１２ｒｇ^{ｔｍ１Ｓｕｇ}／ＪｉｃＴａｃ）マウスは、試験の開始の５～７日前に病原体を含まない条件下で維持された、換気されたマイクロアイソレーターケージにおいて個別に飼育された。マウスは、右後側腹部において３×１０^６個のＴ細胞リンパ腫細胞（ＨｕＴ７８又はＨｈ）の皮下接種を受けた。平均腫瘍サイズが、２５～７５ｍｍ^３（約５０ｍｍ^３の標的）に達したとき、マウスはさらに、表１２に示されるとおりの２つの治療群に分けられた。１日目、治療群２は、表１２に従って、単回の２００μｌの静注投与量の抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞を受容した。

【0224】

【表20】

【0225】

腫瘍体積は、治療開始日から週に２回測定された。注射後１２日目までに、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ Ｔ細胞で治療されたＨｕＴ７８腫瘍は、５頭の治療されたマウスのうちの４頭において腫瘍体積の減少を示し始めた（図５Ａ）。さらなる腫瘍は、３０日目までに及び試験の残りの間に除去された（図５Ａ）。ＨｕＴ７８腫瘍の増殖は、９０日の試験期間にわたって著しく阻害された（図５Ａ） 。抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋Ｔ細胞による治療は、４５日の期間にわたって試験された全てのマウスにおいてＨｈ Ｔ細胞リンパ腫腫瘍の腫瘍増殖を効率的に遅らせた（図５Ｂ）。

【0226】

これらのデータは、抗ＣＤ７０ ＣＡＲ＋細胞（ＣＴＸ１３０）が、インビボでのヒトＣＤ７０＋Ｔ細胞リンパ腫腫瘍の増殖を阻害し、確立されたＨｕＴ７８及びＨｈ Ｔ細胞リンパ腫異種移植に対して強力な活性を有することを実証している。

【0227】

実施例６：Ｔ細胞又はＢ細胞悪性腫瘍を有する成人対象における同種異系ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９操作されたＴ細胞（ＣＴＸ１３０）の安全性及び有効性の第１相非盲検多施設用量漸増及びコホート拡大試験。
ＣＴＸ１３０は、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９（クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート／ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９）遺伝子編集構成要素（単一のガイドＲＮＡ［ｓｇＲＮＡ］及びＣａｓ９ヌクレアーゼ）を使用する、エクスビボで遺伝子改変された同種異系Ｔ細胞で構成されるＣＤ７０指向性Ｔ細胞免疫療法である。改変は、Ｔ細胞受容体アルファ定常（ＴＲＡＣ）、ベータ２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）、及びＣＤ７０遺伝子座の標的化された破壊並びにアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）発現カセットを介するＴＲＡＣ遺伝子座への抗ＣＤ７０キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）導入遺伝子の挿入を含む。抗ＣＤ７０ ＣＡＲ（配列番号４６）は、以前に特徴付けられた抗ＣＤ７０ハイブリドーマＩＦ６に由来する抗ＣＤ７０単鎖可変フラグメント（配列番号４８）、ＣＤ８膜貫通ドメイン（配列番号５４）、４－１ＢＢ共刺激ドメイン（配列番号５７）、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン（配列番号６１）で構成される。

【0228】

この試験では、適格なヒト患者は、リンパ球枯渇（ＬＤ）化学療法後にＣＴＸ１３０の静脈内（ＩＶ）注入を受ける。

【0229】

１．試験集団
用量漸増（パートＡ）は、以下の再発性／難治性Ｔ細胞又はＢ細胞悪性腫瘍を有する成人対象を含む：（ａ）末梢性Ｔ細胞リンパ腫非特定型（ＰＴＣＬ－ＮＯＳ）、（ｂ）未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、（ｃ）菌状息肉症（ＭＦ）を含むセザリー症候群（ＳＳ）、（ｄ）成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、白血病性及びリンパ腫のサブタイプ、（ｅ）血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、及び（ｆ）びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）。コホート拡大（パートＢ）は、ＤＬＢＣＬ並びにパートＡにおける登録のための同じ組み入れ及び除外基準を有する対象、並びに本明細書に記載されるＴ細胞リンパ腫を有する対象を含む。

【0230】

この試験において治療されることになる対象は、Ｔ又はＢ細胞リンパ腫、例えば、ＣＴＣＬ（大細胞リンパ腫、セザリー症候群への転化におけるものを含む、菌状息肉症ステージＩＩｂ以上を含む）；ＰＴＣＬ：ＡＩＴＬ、ＡＬＣＬ（Ａｌｋ陽性及び陰性）、ＡＴＬＬ（くすぶり型サブタイプを除く）、及びＰＴＣＬ－ＮＯＳ）；並びに自系ＣＤ１９指向性ＣＡＲ Ｔ細胞療法に失敗した後のＤＬＢＣＬを有するものを含んでもよい。

【0231】

２．試験目的及び理論的根拠
第１相用量漸増試験の目的は、再発性又は難治性Ｂ細胞悪性腫瘍を有する対象において抗ＣＤ７０同種異系ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９操作されたＴ細胞（ＣＴＸ１３０細胞）の安全性及び有効性を評価することである。

【0232】

選択された及び記載されたＴ又はＢ細胞リンパ腫（例えば、本明細書で開示されるもの）を有する対象においてアンメットメディカルニーズがある。選択されたＴ又はＢ細胞悪性腫瘍は、ＣＤ７０の高い発現を有することが報告されており、したがって、ＣＡＲ Ｔ細胞に誘導される療法のための潜在的な標的である（Ｂａｂａ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８２ ３８４３－５２；Ｌｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｂｒ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ １０６，４９１－５０３；ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ １０９，１１８５－９２；Ｓｈａｆｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｂｌｏｏｄ １１７，４３０４－１４）。

【0233】

ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、顕著な臨床的成功をもたらしたが、承認された製品は、自系であり、患者に特異的な細胞の回収及び製造を必要とする。これらの課題により、登録された対象のうち、自系ＣＡＲ Ｔ細胞製品を決して受容しなかった対象がかなりの割合（１試験でおよそ３０％）存在することになった（Ｓｃｈｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１９）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３８０，４５－５６）。加えて、それぞれの自系の製品の異質な性質は、研究される疾患徴候の大部分においてＣＡＲ Ｔ細胞の用量、毒性、及び／又は応答の間の相関を実証することを困難にした（Ｍｕｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１７）Ｂｌｏｏｄ １３０，２３１７－２３２５）。近年のデータは、出発材料、具体的には、単離されたＴ細胞の免疫表現型が、疾患応答に影響を及ぼす可能性があることを示唆している（Ｆｒａｉｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，（２０１８）Ｎａｔ Ｍｅｄ ２４，５６３－７１）。これらの知見は、緊急の腫瘍縮小療法が必要なときにそれらの患者に対する同種異系ＣＡＲ Ｔ治療手法の利点を支持する。

【0234】

ＣＴＸ１３０は、健康なドナーのＴ細胞から製造され、製造工程にわたって一貫したＣＡＲ発現及び免疫表現型をもたらすことが意図される。加えて、健康なドナー細胞から開始された製造プロセスは、治療中に悪性Ｔ細胞を意図せずに伝達するリスクを大幅に減少させる。ＣＡＲ Ｔ細胞で形質導入された悪性Ｂ細胞で再発したＡＬＬを有する対象の最近報告された症例はさらに、ＣＡＲの挿入がＴＣＲ破壊と連関しないレンチウイルスの手法のこの潜在的なリスクを強調している（Ｒｕｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．，（２０１８）Ｎａｔ Ｍｅｄ ２４，１４９９－５０３）。個々の対象の製造の失敗、スケジュール管理の複雑さ、ブリッジング化学療法と関連する毒性、及び対象に対する白血球除去のリスクは、同種異系ＣＡＲ Ｔ細胞製品に適用されない。ＣＴＸ１３０を直ちに投与する能力によって、対象は時宜を得て製品を受容することが可能になり、対象がブリッジング化学療法の必要性を回避する助けとなる。

【0235】

進行性の再発性悪性腫瘍を有する患者から作製される自系ＣＡＲ Ｔ細胞は、早く枯渇する傾向がある可能性がある（Ｆｒａｉｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，（２０１８）Ｎａｔ Ｍｅｄ ２４，５６３－７１；Ｍａｃｋａｌｌ，（２０１９）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ＡＡＣＲ ａｎｎｕａｌ ｍｅｅｔｉｎｇ，Ａｂｓｔｒａｃｔ ＰＬ０１－０５；Ｒｉｃｈｅｓ ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ｂｌｏｏｄ １２１，１６１２－２１）。多重編集された同種異系ＣＡＲ Ｔ細胞に基づく健康なドナーのＴリンパ球の使用は、高度に正確な編集ツールであるＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９により可能になる。

【0236】

ＣＴＸ１３０に適用される４つの編集工程が、以下の様式において安全性及び有効性に対処する：
●安全性：内在性ＴＣＲを破壊するＴＲＡＣ遺伝子座の欠失及び移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）を抑制する宿主ＭＨＣシステムとその相互作用。
●Ｔ細胞活性：ＣＤ７０標的化ＣＡＲコンストラクトの挿入、Ｂ２Ｍ遺伝子座の欠失、及びＣＤ７０遺伝子座の欠失。

【0237】

ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９は、相同組換えを介して欠失された遺伝子座としてＣＡＲコンストラクトの導入の連関を可能にする。ＡＡＶで送達されるＤＮＡドナー鋳型及びＨＤＲを使用するＴＲＡＣゲノム遺伝子座でのＣＡＲの送達及び正確な挿入は、レンチウイルス及びレトロウイルス形質導入などの他の一般的な形質導入方法を使用するランダムな遺伝物質の挿入とは対照的である。ＴＲＡＣ遺伝子座でのＣＡＲ遺伝子の挿入は、ＣＡＲを発現するほぼ全ての細胞でのＴＣＲの除去をもたらす。内在性ＴＣＲのＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９に媒介される破壊は、ＧｖＨＤのリスクを著しく低減できるか又は除去できるが、ＭＨＣクラスＩタンパク質の破壊は、ＣＡＲ Ｔ細胞の持続を増大させると仮定される。ＣＤ７０遺伝子座の欠失は、ＣＴＸ１３０の持続を増大させ、活性化ＣＡＲ Ｔ細胞上での発現の上昇を介して潜在的な相互作用を低減することが意図される。

【0238】

３．試験の目的
主要目的、パートＡ（用量漸増）：再発性／難治性Ｔ又はＢ細胞悪性腫瘍を有する対象においてＣＴＸ１３０の用量漸増により安全性を評価すること及び推奨されるパートＢの用量（ＲＰＢＤ）を決定すること。

【0239】

主要目的、パートＢ（コホート拡大）：Ｌｕｇａｎｏ効果判定基準に従う奏効率（ＯＲＲ）によって測定されるとおり、ＤＬＢＣＬ（例えば、以前の自系ＣＤ１９指向性ＣＡＲ－Ｔ療法が無効であったもの）、及び上で開示されるＴ細胞リンパ腫の他の型を有する対象におけるＣＴＸ１３０の有効性を評価すること（Ｃｈｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３２，３０５９－６８）。

【0240】

副次的目的（パートＡ及びＢ）：経時的な奏効までの期間（ＴＴＲ）、奏効期間（ＤｏＲ）、無増悪生存（ＰＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）、病勢コントロール率（ＤＣＲ）、無増悪期間（ＴＴＰ）を含むＣＴＸ１３０の活性を評価すること；サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）及び移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）を含む目的の有害事象（ＡＥ）を記載し、評価すること；並びに血中のＣＴＸ１３０の薬物動態（増殖及び持続）を特徴付けること。

【0241】

探索的目的（パートＡ及びＢ）：疾患、臨床効果、抵抗性、又は安全性と関連するゲノム、代謝、及び／又はプロテオミクスバイオマーカーを同定すること；臨床効果に関連する可能性がある薬力学的活性を特徴付けること；さらにＣＴＸ１３０の有効性のキネティクスを記載すること、及び患者報告アウトカム（ＰＲＯ）に対するＣＴＸ１３０の影響を記載すること。

【0242】

４．試験適格性
４．１ 組み入れ基準
本試験に参加するのに適格であるとみなすには、対象は以下に列挙される組み入れ基準を満たさなければならない：
１．≧１８歳及び体重≧６０ｋｇ。
２．治験実施計画書に必要とされる試験手順を理解して遵守することができ、自発的に書面のインフォームドコンセント文書に署名することができる。
３．Ｔ細胞リンパ腫を有する対象については、以下のもののみが登録される：
●以下のサブセットを含むＴ細胞悪性腫瘍の確定診断：
ａ）ＰＴＣＬ－ＮＯＳ、
ｂ）ＡＬＣＬ、
ｃ）ＭＦ≧ステージＩＩＢを含むＳＳ（例えば、移植を必要とする場合がある）、
ｄ）ＡＴＬＬの白血病性及びリンパ腫のサブタイプ、
ｅ）血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）。場合により、スクリーニング期間の前又はその間に滲出を有した対象は除外され得る。
●ＰＴＣＬ－ＮＯＳ、ＡＴＬＬ、又はＡＩＴＬを有する対象は、１つ以上の選択全身療法が無効でなければならなかった。
●ＡＬＣＬを有する対象は、組み合わせ化学療法及び／若しくはブレンツキシマブベドチンの組み合わせ又は単剤での療法が無効であったか、不適格であったか、又は拒否されなければならなかった。
ｏ未分化リンパ腫キナーゼ陰性（ＡＬＫ^－）ＡＬＣＬを有する対象は、前の１つの選択療法が無効でなければならなかった。
ｏ未分化リンパ腫キナーゼ陽性（ＡＬＫ^＋）ＡＬＣＬを有する対象は、前の２つの選択療法が無効でなければならなかった。
●菌状息肉症（ＭＦ）又はセザリー症候群（ＳＳ）を有する対象は、少なくとも、以下の全身療法の少なくとも２つが無効でなければならなかった：ブレンツキシマブベドチン、ロミデプシン（又は他の指定のヒストンデアセチラーゼ［ＨＤＡＣ］阻害剤）、プララトレキサート、モガムリズマブ、又は化学療法。モガムリズマブが、登録の前の最後の療法であった場合、モガムリズマブの最後の投与とＣＴＸ１３０の注入の間が少なくとも３ヶ月でなければならない。
４．Ｂ細胞リンパ腫を有する対象に関して：自系ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞療法に適格であるが、それによる治療の試みが無効であった対象におけるＤＬＢＣＬ。
５．対象は、以下のいずれかの適用可能な現地の要件（例えば、臨床検査改善修正法案［ＣＬＩＡ］又は米国以外の場所において均等物）を満たす検査機関によって決定されるとおりのＣＤ７０発現腫瘍を有しなければならない：
●代表的な腫瘍病変の切除生検又はコア生検によって回収される組織における免疫組織化学（ＩＨＣ）によるＣＤ７０の陽性（細胞の≧１０％）。
●スクリーニング時に末梢血液又は骨髄において収集される免疫表現型検査によって定義される腫瘍細胞におけるフローサイトメトリーによるＣＤ７０の陽性（細胞の≧１０％）。
６．登録前の３ヶ月以内及び進行後の最後の全身療法又は標的化療法後に実施された生検が利用可能である場合を除いて、スクリーニング時に腫瘍病変の新たに得られたコア生検又は切除生検からの組織を提供すること。
７．０～１の米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンス・ステータス（表１３を参照のこと）。
８．本明細書に記載されるＬＤ化学療法及びＣＡＲ Ｔ細胞注入を受ける判定基準を満たす。
９．十分な臓器機能：
●腎臓：クレアチニンクリアランス（ＣｒＣｌ）≧５０ｍＬ／分
●肝臓：
ｏアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）又はアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＜３×正常範囲上限（ＵＬＮ）；
ｏ総ビリルビン＜２×ＵＬＮ（ジルベール症候群：総ビリルビン＜３ｍｇ／ｄＬ及び正常な抱合ビリルビンに関して）。
●心臓：血行動態的に安定しており、心エコー像による左室駆出率（ＬＶＥＦ）≧４５％。
●肺：パルスオキシメトリーによる室温での酸素飽和レベルが＞９２％であること。
●血液学：血小板数＞２５，０００／ｍｍ^３及び好中球絶対数＞５００／ｍｍ^３。
１０．妊娠可能な女性患者（初経後、正常な子宮及び少なくとも１つの卵巣を有し、閉経後１年未満である）は、登録からＣＴＸ１３０注入後の少なくとも１２ヵ月にわたって、高い効果のある許容可能な避妊方法を使用することに同意しなければならない。
１１．男性患者は、登録からＣＴＸ１３０注入後の少なくとも１２ヵ月にわたって、許容される高い効果のある避妊方法を使用することに同意しなければならない。

【0243】

【表21】

【0244】

４．２ 除外基準
本試験に参加するのに適格となるためには、対象は以下に列挙される除外基準のいずれも満たさないことが必要となる：
１．以前の同種異系幹細胞移植（ＳＣＴ）。
２．スクリーニングの時点で自系ＳＣＴから６０日未満及び未回復の重篤な合併症を有する。
３．抗ＣＤ７０標的化薬剤による以前の治療。
４．ＤＬＢＣＬを有する対象に関して、自系ＣＡＲ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞を除くＣＡＲ Ｔ細胞又は他の改変Ｔ若しくはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞による以前の治療。
５．いずれかのＬＤ化学療法剤又はＣＴＸ１３０製品の賦形剤のいずれかに対する既知の禁忌。
６．症候性であるか又は症候性であった現在又は過去の悪性貯留液を伴うＴ細胞又はＢ細胞リンパ腫。
７．血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）の臨床徴候：発熱、二系統血球減少、高トリグリセリド血症又は低フィブリノーゲン血症及びフェリチン＞５００μｇ／Ｌの組み合わせ。
８．スクリーニング画像診断における潜在的な疾患の中枢神経系（ＣＮＳ）の活動性の徴候。
９．てんかん発作、脳卒中、重度の脳損傷、小脳疾患、脊髄症（例えば、熱帯性痙性不全対麻痺症）、以前の療法による可逆性白質脳症（ＰＲＥＳ）の病歴、又はＣＡＲ Ｔに関連する毒性を増加させる可能性のある別の状態などの臨床的に意味のある中枢神経系（ＣＮＳ）病態の病歴又は存在。
１０．スクリーニング前の６ヵ月以内の不安定狭心症、不整脈、又は心筋梗塞。
１１．制御されない急性の生命を脅かす細菌、ウイルス、又は真菌感染症。
１２．ヒト免疫不全ウイルス１型若しくは２型（ＨＩＶ－１又はＨＩＶ－２）、又は活動性Ｂ型肝炎ウイルス若しくはＣ型肝炎ウイルス感染の存在について陽性である。ウイルス量が検出できない（定量的ポリメラーゼ連鎖反応又は核酸試験による）と記録されている、Ｂ型又はＣ型肝炎感染症の前病歴を有する対象は容認される。
１３．全身療法（許容される抗ホルモン療法）を必要としない治癒手法で治療され、１２ヶ月を超えて寛解しているものを除く、以前の又は同時的な悪性腫瘍。
１４．ステロイド及び／又は他の免疫抑制性の療法を必要とする原発性免疫不全障害又は活動性自己免疫疾患。
１５．以前の固形臓器移植。
１６．登録の１４日前に放射線療法を含む抗腫瘍薬剤の以前の使用。治験薬に関して、休薬時間は、メディカルモニターと協議する必要がある。ステロイドの生理的用量の使用は、以前にステロイドを使用した対象については許容される。必要であれば、ＡＴＬＬを有する対象については髄腔内予防が許容される。ＲＡＮＫＬ阻害剤であるデノスマブを受容するＡＴＬＬを有する対象は、少なくとも４週間療法を受けるべきであり、補正された血清カルシウムレベルを安定化しなければならなかった；血清カルシウムレベルが、＞１１．５ｍｇ／ｄＬ若しくは＞２．９ｍｍｏｌ／Ｌであるか、又はイオン化したカルシウムのレベルが、＞１．５ｍｍｏｌ／Ｌである場合除外される。モガムリズマブのようなＣＣＲ－４指向性の抗体の使用は、ＣＴＸ１３０注入の３ヶ月前に禁止される。
１７．患者が試験に参加する能力を深刻に妨害し得る重大な精神障害の診断。
１８．登録前２８日以内に生ワクチン又は漢方医学の一部として漢方薬を受容したか又は市販の漢方薬以外のものを受容した。
１９．妊娠中又は授乳中の女性。

【0245】

５．試験デザイン
５．１ 治験計画
これは、再発性又は難治性Ｔ又はＢ細胞悪性腫瘍を有する１８歳以上の対象における非盲検多コホート多施設用量漸増第１相試験である。試験は、用量漸増（パートＡ）、その後のコホート拡大（パートＢ）の２つのパートに分かれている。

【0246】

パートＡにおいて、用量漸増は、以下のうちの１つを有する成人対象において開始する：
１．Ｔ細胞悪性腫瘍：
●ＰＴＣＬ－ＮＯＳ、白血病性及びリンパ腫のＡＴＬＬ、又はＡＩＴＬを有する対象は、１つ以上の選択全身療法が無効でなければならなかった。
●ＡＬＣＬを有する対象は、組み合わせ化学療法及び／又はブレンツキシマブベドチンによる療法が無効であったか、不適格であったか、又は拒否されなければならなかった。
ｏＡＬＫ－ＡＬＣＬを有する対象は、前の１つの選択療法が無効でなければならなかった。
ｏＡＬＫ＋ＡＬＣＬを有する対象は、前の２つの選択療法が無効でなければならなかった。
●ＭＦ又はＳＳを有する対象は、少なくとも１つの前の療法が無効でなければならなかった。ＳＳを有する対象は、必要があれば、モガムリズマブ治療を含む前の全身療法が無効でなければならなかった。モガムリズマブが、登録の前の最後の療法であった場合、モガムリズマブの最後の投与とＣＴＸ１３０の注入の間が少なくとも３ヶ月の期間でなければならない。
２．Ｂ細胞悪性腫瘍：
●自系ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞療法による治療の試みが無効であった対象におけるＤＬＢＣＬ。

【0247】

用量漸増は、本明細書に記載される判定基準に従って実施される。

【0248】

パートＢにおいて、拡大コホートは、自系ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞による以前の治療の試みが無効であったＤＬＢＣＬを有する対象におけるＲＰＢＤでのＣＴＸ１３０の安全性及び有効性をさらに評価するために開始される。ＤＬＢＣＬを有する対象は、パートＡにおける登録に必要な同じ組み入れ及び除外基準に従ってパートＢに登録される。この拡大は、自系ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ療法後の患者において１８％未満のＯＲＲを拒絶するように設計される。

【0249】

５．１．１ 試験デザイン
試験は、用量漸増（パートＡ）、その後のコホート拡大（パートＢ）の２つのパートに分かれている。試験の両方のパートは、３つの主要な段階：スクリーニング、治療、及び追跡調査からなる。試験スキームの概略図を図６に示す。

【0250】

試験の３つの主要な段階は、以下のとおりである：
段階１－治療に対する適格性を判断するためのスクリーニング（最大１４日間）。
段階２－治療。
段階２Ａ－ＬＤ化学療法：１日当たりフルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２及びシクロホスファミド５００ｍｇ／ｍ^２ＩＶで３日間の同時投与。両方の薬剤は、同じ日に開始され、３日間連続して投与される。ＬＤ化学療法は、ＣＴＸ１３０注入の前に少なくとも４８時間（ただし７日以下）で完了されなければならない。
段階２Ｂ－ＣＴＸ１３０注入：ＬＤ化学療法の３日の過程の完了後に少なくとも４８時間（ただし７日以下）投与される。
臨床的適格性－ＬＤ化学療法の開始及びＣＴＸ１３０の注入の両方の前に、本明細書で提供される判定基準に従って対象の臨床的適格性を再確認する必要がある。
段階３－追跡調査（最後のＣＴＸ１３０注入の５年後）

【0251】

ＣＴＸ１３０注入期間後の間、対象は、ＣＲＳ、神経毒性、ＧｖＨＤ、及び他のＡＥを含む急性毒性（１～２８日目）についてモニターされる。毒性管理のガイドラインは、本明細書に記載される。パートＡ（用量増量）中、全対象は、ＣＴＸ１３０注入後最初の７日間入院するが、現地の規制又は現場の慣習により必要とされる場合、それより長期間入院する。パートＡ及びパートＢの両方において、対象は、ＣＴＸ１３０注入後の２８日間、治験現場の近辺の範囲内（すなわち、１時間の移動時間）に留まる必要がある。

【0252】

急性毒性の観察期間の後、対象は、ＣＴＸ１３０注入後の最大５年間、身体検査、定期臨床検査評価及び画像診断評価、並びにＡＥ評価によって引き続き追跡調査される。本試験の完了後、長期安全性及び生存期間を評価するために、対象はさらに１０年間、別の長期の追跡調査試験に参加することが必要となる。

【0253】

５．２ ＣＴＸ１３０用量漸増
ＣＴＸ１３０細胞は、ＣＡＲ＋Ｔ細胞の数に基づいて固定用量スキームを使用してＩＶ投与される。この試験において漸増される用量レベルは、表１４において示される。全ての用量レベルに１×１０^５個のＴＣＲ＋細胞／ｋｇの用量制限が課せられ得る。

【0254】

【表22】

【0255】

用量漸増は、標準的な３＋３デザインを使用して実施され、その中で３～６名の対象は、本明細書に記載されるとおり、用量規制毒性（ＤＬＴ）の発生に応じて各用量レベルで登録される。

【0256】

用量漸増は、以下の規則に従って実施される：
●３名の対象のうちの０名がＤＬＴを経験する場合、次の用量レベルに漸増する。
●３名の対象のうちの１名がＤＬＴを経験する場合、目下の用量レベルを６名の対象に拡大する。
ｏ６名の対象のうちの１名がＤＬＴを経験する場合、次の用量レベルに漸増する。
ｏ６名の対象のうちの２名以上がＤＬＴを経験する場合：
・用量レベル－１の場合、代替的な投薬計画を評価するか又はパートＢコホート拡大のための推奨用量を決定できないことを申告する。
・用量レベル１の場合、用量レベル－１に漸減する。
・用量レベル２～４の場合、以前の用量レベルを最大耐用量（ＭＴＤ）であると申告する。
●３名の対象のうちの２名以上がＤＬＴを経験する場合：
ｏ用量レベル－１の場合、代替的な投薬計画を評価するか又はパートＢコホート拡大のための推奨用量を決定できないことを申告する。
ｏ用量レベル１の場合、用量レベル－１に減少させる。
ｏ用量レベル２～４の場合、以前の用量レベルをＭＴＤであると申告する。
●ＤＬ２とＤＬ３の間の中間の用量、例えば、１．５×１０^８個のＣＡＲ^＋ＣＴＸ１３０細胞が許容されることになる。
●ＤＬ３とＤＬ４の間の中間の用量、例えば、４．５×１０^８、６×１０^８、又は７．５×１０^８個のＣＡＲ^＋ ＣＴＸ１３０細胞が許容されることになる。
●表１４に列挙される最も高い用量を超える用量漸増はない。

【0257】

５．２．１ 用量規制毒性（ＤＬＴ）の定義
ＤＬＴ評価期間は、ＣＴＸ１３０注入とともに開始し、２８日間継続する。全ての用量レベル（－１～４）において、対象１～３は、ずらされた様式で治療され、その結果、対象は、前の対象がＤＬＴ評価期間を完了してから（すなわち、少なくとも２８日間ずらされる）ＣＴＸ１３０を受容するだけである。各用量レベル間の投与はまた、少なくとも２８日ずつずらされ得る。

【0258】

対象は、ＤＬＴを評価するためにＣＴＸ１３０を受容する必要がある。ＣＴＸ１３０注入前の任意の時点で対象が毒性以外の理由のために試験を中断した場合、対象はＤＬＴの評価を受けることはなく、この中断した対象と同じ用量レベルで代替の対象が登録されることになる。ＤＬＴが評価可能な対象（すなわち、ＣＴＸ１３０を投与された対象）が、潜在的なＤＬＴの徴候又は症状を有する場合、ＤＬＴ評価期間は、ＤＬＴが申告される前に改善又は回復が可能になるように延長され得る。

【0259】

毒性は、ＣＲＳ（ＡＳＴＣＴ判定基準；米国移植細胞治療学会判定基準；Ｌｅｅ判定基準）、神経毒性（ＩＣＡＮＳ判定基準；免疫エフェクター細胞に関連する神経毒性症候群の判定基準、ＣＴＣＡＥバージョン５．０；Ｌｅｅ判定基準）、及びＧｖＨＤ（ＭＡＧＩＣ判定基準；Ｍｏｕｎｔ Ｓｉｎａｉ Ａｃｕｔｅ ＧｖＨＤ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ判定基準；Ｈａｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２２，４－１０）を除いて、ＮＣＩ有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）バージョン５．０に従って等級分けされ、記録される。ＣＴＸ１３０との妥当な因果関係のないＡＥは、ＤＬＴであるとみなさないことになる。

【0260】

ＤＬＴは、
Ａ．グレード４のＣＲＳ
Ｂ．ステロイド抵抗性のグレード≧２のＧｖＨＤ（例えば、ステロイド治療［例えば、１ｍｇ／ｋｇ／日］の３日後の進行性疾患、又は治療の７日後に応答を有しないこと）ステロイド抵抗性ではなく、且つ１４日以内にグレード１に回復するＧｖＨＤは、ＤＬＴとして定義されないことになる（ＧｖＨＤの等級分けは、表３４において提供される）
Ｃ．グレード３又は４の神経毒性（ＩＣＡＮＳ判定基準に基づく）
Ｄ．ＤＬＴ期間中の死亡（疾患進行に起因するものを除く）
Ｅ．２８日以内に≦グレード２に回復しない任意のグレード４の血液学的毒性
Ｆ．根底にある悪性腫瘍に関連しないか又はその進行が以下の例外を有してＤＬＴとみなされる任意の期間の任意のグレード≧３のＣＴＸ１３０治療により発現する重要臓器毒性（例えば、肺、心臓）
として定義される。

【0261】

【表23】

【0262】

６．試験手順
用量漸増及び試験の拡大パートの両方は、３つの別々の段階からなる：（１）スクリーニング及び適格性の確認、（２）ＬＤ化学療法及びＣＴＸ１３０注入、並びに（３）追跡調査。スクリーニング期間中、対象は、本明細書に記載される適格性の判定基準に従って評価される。登録の後、対象は、ＬＤ化学療法に続いてＣＴＸ１３０の注入を受ける。治療期間が完了した後、対象は、腫瘍応答、疾患進行、及び生存について評価される。全ての試験期間にわたって、対象は、安全性に関して定期的にモニターされる。

【0263】

評価の完全なスケジュールは、表１５及び表１６において提供される。欠損した評価は、予定を変更され、可能な限り最初に予定された日と近い日に実施されるべきである。ただし、予定の変更が、医師の見解により、次の評価予定日に近すぎるため、医学的に不必要又は安全でないと判断された場合は例外とする。その場合、欠損した評価は中止されるべきである。

【0264】

このプロトコルの目的のために、０日目はない。全ての来院日及び期間は、ＣＴＸ１３０注入の日としての１日目を使用して計算されることになる。

【0265】

６．２ 免疫エフェクター細胞関連脳症（ＩＣＥ）評価
認知神経科学的な評価は、ＩＣＥ評価を使用して実施されることになる。ＩＣＥ評価ツールは、ＣＡＲＴＯＸ－１０スクリーニングツールのわずかに改変されたバージョンであり、これは現在、受容性失語症に関する試験を含む（Ｎｅｅｌａｐｕ ｅｔ ａｌ．，（２０１８）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １５，４７－６２）。ＩＣＥ評価は、認知機能の様々な領域：見当識、命名、命令の追従、記述、及び注意力（表１７を参照のこと）を試験する。

【0266】

【表24】

【0267】

ＩＣＥ評価は、スクリーニング時、１日目のＣＴＸ１３０の投与前、並びに２日目、３日目、５日目、７日目、及び２８日目に実施される。対象がＣＮＳの症状を示す場合、症状が回復するまでＩＣＥ評価を約２日毎に継続して実施する必要がある。変動性を最小限に抑えるために、可能な限り、ＩＣＥ評価ツールの実施に精通しているか又は訓練を受けた同一の研究スタッフによって評価が実施されるべきである。

【0268】

６．３ 患者報告アウトカム
５つのＰＲＯ調査である欧州癌研究治療機関（ＥＯＲＴＣ）ＱＬＱ－Ｃ３０、ＥｕｒｏＱｏｌ ＥＱ－５Ｄ－５Ｌ質問票、癌治療の機能評価－一般（ＦＡＣＴ－Ｇ）、ＳＳ及びＭＦのためのＳｋｉｎｄｅｘ－２９質問票、並びにＳＳ及びＭＦのための皮膚科関連の日常生活の質に関する評価指標（ＤＬＱＩ）質問票が、表１５及び表１６におけるスケジュールに従って施される。質問票は、臨床評価が実施される前に完了されるべきである（対象が最も慣れ親しんでいる言語で自記式）。

【0269】

ＥＯＲＴＣ ＱＬＱ－Ｃ３０は、癌における生活の質を測定するために設計された質問票である。それは、５つの多項目機能尺度（身体、役割、社会、感情、及び認知機能）、３つの症状尺度（疲労、嘔気、痛み）、及び追加の単一症状項目（経済的影響、食欲不振、下痢、便秘、睡眠障害、及び生活の質）から構成される。ＥＯＲＴＣ ＱＬＱ－Ｃ３０は、検証され、癌患者の中で広く使用されてきた（Ｗｉｓｌｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ ９２，６０４－１３．；Ｗｉｓｌｏｆｆ ａｎｄ Ｈｊｏｒｔｈ，（１９９７）Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ ９７，２９－３７）。それは、４段階の尺度（１＝全くない、２＝少し、３＝かなり、４＝極度）でスコア化される。ＥＯＲＴＣ ＱＬＱ－Ｃ３０書類はまた、アンカーを伴う７段階の尺度を使用する２つの包括的尺度を含有する（１＝非常に悪い及び７＝良好）。

【0270】

ＥＱ－５Ｄ－５Ｌは、健康状態の一般的な尺度であり、移動性、自己ケア、日常生活、痛み／不快感、及び不安／抑うつを含む５つのドメインを評価する質問票と視覚的アナログスケールを含有する。ＥＱ－５Ｄ－５Ｌは、ＱＬＱ－Ｃ３０と組み合わせて使用されている（Ｍｏｒｅａｕ ｅｔ ａｌ．，（２０１９）Ｌｅｕｋｅｍｉａ ３３，１２：２９３４－２９４６）。

【0271】

ＦＡＣＴ－Ｇは、４つのドメインにおいて癌療法の影響を測定する検証された２７項目の書類である：身体的、社会的／家族、感情的、及び機能的幸福。ＦＡＣＴ－Ｇの総スコアは、全２７項目に基づき、０～１０８の範囲であり、スコアが高いほど生活の質がより良好であることを示す（Ｃｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １１，５７０－９）。

【0272】

Ｓｋｉｎｄｅｘ－２９は、３つのドメインにおいて生活の質に対する皮膚疾患の影響を測定するために設計される：症状（７項目）、感情（１０項目）、及び機能（１２項目）。全ての応答は、１００の線形尺度に変換され、０（影響なし）から１００（影響を常時経験した）までである。スコアは、３つのドメインに対応する３つの尺度スコアとして報告される；尺度スコアは、所与のドメインにおける項目に対する患者の応答の平均である（Ｃｈｒｅｎ，（２０１２）Ｄｅｒｍａｔｏｌ Ｃｌｉｎ ３０，２３１－６）。

【0273】

【表25】

【0274】

【表26】

【0275】

【表27】

【0276】

【表28】

【0277】

【表29】

【0278】

ＤＬＱＩは、生活の質に対する皮膚疾患の影響を測定するために使用される１０個の質問の質問票である。１０個の質問は、以下のトピックを網羅する：症状、機能障害、買い物及び在宅ケア、衣服、社会及びレジャー、スポーツ、仕事又は勉強、親密な関係、性、及び治療。各質問は、０～３にスコア化され、０（生活の質に対する皮膚疾患の影響がないことを意味する）から３０（生活の質に対する最大限の影響を意味する）の可能なスコア範囲を与える（Ｆｉｎｌａｙ ａｎｄ Ｋｈａｎ，（１９９４）Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １９，２１０－６）。

【0279】

６．４ Ｂ細胞及びＴ細胞リンパ腫疾患及び効果判定
疾患評価は、ＰＴＣＬ－ＮＯＳ、ＡＬＣＬ、白血病性及びリンパ腫のＡＴＬＬ、ＡＩＴＬ、及びＤＬＢＣＬを有する対象に関してはＬｕｇａｎｏ効果判定基準（Ｃｈｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３２，３０５９－６８；第６．１０節を参照のこと）に従う評価、及びＳＳ又はＭＦを有する対象に関してはＩＳＣＬ効果判定基準（Ｏｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２９，２５９８－６０７；第６．１１節を参照のこと）による評価に基づく。

【0280】

脳における疾患評価は、スクリーニング中の対象における脳障害を除外するためにＭＲＩによって実施されるべきである。

【0281】

（Ｏｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２９，２５９８－６０７）に従って、ＳＳを有する対象は必ず：
●Ｌｕｇａｎｏ判定基準に従って測定可能な疾患；体表面積の≧８０％を有するＳＳ及び血液障害に関する定義を満たす
●少なくとも８０％の体表面積を覆う紅斑として定義される紅皮症
●ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）又はサザンブロット分析により同定される血液中のクローンＴ細胞受容体（ＴＣＲ）再編成
●≧１０００／μＬの血液中のセザリー細胞の絶対数又は以下の２つの判定基準の１つ：
ｏ１０以上のＣＤ４とＣＤ８比を有するＣＤ４＋又はＣＤ３＋細胞の増加
ｏ異常な表現型を有するＣＤ４＋細胞の増加（ＣＤ４＋ＣＤ７－比≧４０％又はＣＤ４＋ＣＤ２６－比≧３０％など）
を有する。

【0282】

有効性分析のために、疾患転帰は、非ＦＤＧ（フルオロデオキシグルコース）要求性疾患のためのＰＥＴ／ＣＴイメージング又はＣＴイメージングに関して評価されるとおりの以下の腫瘍サブタイプに関するＬｕｇａｎｏ効果判定基準を使用して等級分けされる：
●ＰＴＣＬ－ＮＯＳ
●ＡＬＣＬ
●白血病性及びリンパ腫のＡＴＬＬ
●ＡＩＴＬ
●ＤＬＢＣＬ

【0283】

ＡＴＬＬ高カルシウム血症を有する対象に関して、紅斑は、活動性疾患が持続する限りＰＤとみなされず、施設のガイドラインに従って対症的に治療されるべきである。ＡＴＬＬ細胞の末梢血液レベルの変化は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ５２などのマーカーに基づく免疫表現型検査によってモニターされ、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１型（ＨＴＬＶ－１）プロウイルス量は、探索的評価項目になる。

【0284】

リンパ節測定値が減少した状況におけるリンパ球増加の増大は、ＰＤとみなされず、効果の指定は、リンパ節及びリンパ節外疾患の測定値に依存するべきである。

【0285】

非ＣＴＣＬにおける皮膚病変に関する疾患測定は、本明細書に記載されるとおりの皮膚病変の効果判定に関するガイドラインに従うべきである。

【0286】

ＩＳＣＬ効果判定基準は、ＣＴ（又は必要が示される場合、ＰＥＴ／ＣＴ）イメージングに関して評価されるとおりのＳＳ又はＭＦを有する対象について使用される。紅皮症紅斑は、最初の２ヶ月間は疾患進行とみなされない。

【0287】

Ｔ細胞リンパ腫疾患及び効果判定は、表１５及び表１６におけるスケジュールに従って実行されるべきであり、本明細書に記載される評価を含む。全ての応答カテゴリー（進行を含む）は、いずれかの新たな療法の開始の前の任意の時点で少なくとも１週間離れてなされた２つの連続した評価を必要とする。

【0288】

６．５ ＣＴＸ１３０前の生検
Ｔ細胞リンパ腫サブタイプの病理組織学的診断は、現地及び中央検査機関の評価に基づく。

【0289】

対象は、スクリーニング時に腫瘍生検を受ける必要があるか、又は登録前の３ヶ月以内及び最後の全身療法若しくは標的化された療法後に生検が実施された場合、保存用の組織が提供され得る。保存用の組織が、中央検査機関の要件を満たすのに不十分な体積又は質のものである場合、生検は、スクリーニング中に実施される必要がある。骨生検及び他の脱灰組織は、下流のアッセイとの干渉のために許容されない。組織生検の一部は、分析のために中央検査機関に提出される。

【0290】

保存用の腫瘍組織試料は、腫瘍に固有であり且つＴＭＥ特異的なバイオマーカーについて分析され得る（ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質、及び代謝産物の分析を含む）。

【0291】

６．６ 全身ＰＥＴ／ＣＴ放射線疾患評価
スクリーニング時（すなわち、ＣＴＸ１３０注入前の２８日以内）及び疑わしいＣＲ時に実施されることになる全身（頸部を含む）ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）／ＣＴ及びＭＲＩ脳スキャン。注入後スキャンは、表１５及び表１６における評価のスケジュールに従って、治験実施計画書に定義される効果判定基準（第６．１０節及び第６．１１節を参照のこと）に従って、並びに全てのベースラインのＦＤＧ要求性リンパ腫に関して臨床的に必要が示される場合、実施される。ＰＥＴ／ＣＴによる非ＦＤＧ要求性疾患は、ＣＴによって追跡可能である。

【0292】

造影によるＭＲＩは、ＣＴが臨床的に禁忌であるとき又は現地の規制によって要求される場合、ＣＴ部分について使用され得る。ＰＥＴを診断品質ＣＴとともに実施できない場合、別の診断ＣＴが実施されなければならない。

【0293】

可能な限り、放射線疾患評価のために使用される画像化モダリティ、装置、及びスキャンパラメーターは、試験の間一貫して保持されるべきである。有効性分析に関して、放射線疾患評価が、治験実施計画書に定義される効果判定基準に従って実施される。

【0294】

６．７ 皮膚評価
皮膚評価は、表１５及び表１６に指定されるとおりに実施される。最初の皮膚疾患評価は、ＬＤ化学療法の３回目の投与の後及びＣＴＸ１３０注入の前に実施されるべきである。ＭＦ及びＳＳの予後は、皮膚病変及び真皮外疾患の種類及び程度に依存する（Ｏｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２９，２５９８－６０７）。コンセンサスガイドライン（ＩＳＣＬ、米国皮膚リンパ腫コンソーシアム ＵＳＣＬＣ］）；皮膚、リンパ節、血液、及び内臓において腫瘍量を評価するためのスコア化方式を含むＥＯＲＴＣの皮膚リンパ腫タスクフォース；皮膚、リンパ節、血液、及び内臓における応答の定義；並びに複合性の包括的な応答スコアに基づく推奨は、第６．１１節において示される。効果判定は、代表的な領域の写真の記録によって支持されるべきである。

【0295】

６．８ 骨髄生検及び吸引
スクリーニング時の骨髄生検及び吸引回収は、全ての対象について実施される。対象がスクリーニング時のＢＭ浸潤に関して陰性である場合、２８日目にはＢＭ生検及び吸引回収のみが行われる。そうでなければ、スクリーニング時にＢＭ浸潤について陽性の対象に関するＣＲを確認するために追加のＢＭ生検及び吸引回収が行われる。ＰＥＴ／ＣＴスキャンで判定された際にＣＲを達成するＢＭ障害の病歴を有する対象は、効果判定を確認するためにＢＭ生検を有する。対象が再発の徴候を示す場合、生検は繰り返されるべきである。

【0296】

ＣＴＸ１３０の存在に関する試料（ＰＣＲを介して検出される）が、ＢＭ分析が実施されるときに任意の時点で中央検査機関評価のために送られるべきである。ＣＴＸ１３０注入後のＢＭ吸引からの試料は、ＣＴＸ１３０ ＰＫ及び探索的バイオマーカーのために送られるべきである。ＢＭ生検のための標準的な施設ガイドラインに従うべきである。余分な試料（入手可能であれば）は、探索的研究のために保管され得る。

【0297】

６．９ 腫瘍生検
対象は、スクリーニング時に腫瘍生検を受ける必要があるか、又は登録前の３ヶ月以内及び最後の全身療法若しくは標的化された療法後に進行後の生検が実施された場合、保存用の組織が提供され得る。保存用の組織が、中央検査機関の要件を満たすのに不十分な体積又は質のものである場合、生検は、本明細書に記載されるとおりのスクリーニング中に実施される必要がある。

【0298】

腫瘍生検は、７日目（＋２日；又は臨床的に実行可能である限りすぐ）及び２８日目（±２日）に実施される。対象が試験中に再発が発生する場合、再発した腫瘍の生検を得て、中央検査機関に送るようにあらゆる試みがなされるべきである。

【0299】

生検は、測定可能であるが標的ではない病変から得るべきである。複数の生検が得られるとき、同様の組織からそれらを得る試みがなされるべきである。肝臓転移は一般に、望ましくない。骨生検及び他の脱灰組織は、下流のアッセイとの干渉のために許容されない。この試料は、ＣＴＸ１３０の存在並びにＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質及び代謝産物の分析を含む腫瘍に固有の及びＴＭＥ特異的なバイオマーカーについて分析される。

【0300】

６．１０ Ｌｕｇａｎｏ効果判定基準、２０１４
以下のことが、Ｃｈｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３２，３０５９－６８から適応させられる。

【0301】

診断：穿刺吸引は、最初の診断にとって不十分である。切開性又は切除生検は、これらの試験のために十分な組織を提供することが好ましい。コア針生検は、切除生検が不可能であるとき及び再発を記録するために検討され得る；しかしながら、診断用ではない試料は、切開性又は切除生検によって追跡されなければならない。

【0302】

ベースラインの部位障害：部位障害のための判定基準は、表１８において要約される。

【0303】

【表30】

【0304】

画像診断：ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）－コンピューター断層撮影（ＣＴ）は、慣例上のフルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）要求性組織構造の段階分けのために使用されるべきである。スキャンは、リンパ節及びリンパ節外の部位における病巣の位置を記述する視覚評価とともに報告されるべきである。画像は、固定的な標準化された取り込み値及び色表に調整され；且つ分布及び／又はＣＴの特徴に従って、生理的取り込み及び疾患の他のパターンから区別されるべきである。

【0305】

ＰＥＴ－ＣＴスキャンは、以下のとおりに実施されるべきである：
●中間スキャンのために最後の化学療法投与後にできるだけ長く
●理想的には治療の終了時の化学療法後６～８週間（ただし、最低３週間）
●放射線療法後≧３ヶ月間

【0306】

造影ＣＴスキャンは、リンパ節サイズのより正確な測定のため、及び腸をリンパ節腫脹からより正確に区別するため；並びに中央／縦隔血管の圧縮／血栓症の状況において含まれ得る。造影ＣＴもまた、放射線計画のために好ましい。不定のＦＤＧ要求性組織構造は、ＣＴスキャンにより段階分けされるべきである。

【0307】

ＣＴにより段階分けされた対象に関して、疾患は、表１９に従って評価されるべきである。

【0308】

【表31】

【0309】

腫瘍塊：複数のより小さいリンパ節とは対照的なＣＴによって決定されるとおりの胸椎のいずれかのレベルでの経胸壁直径の３分の１より１０ｃｍ以上大きい単一のリンパ節腫瘤は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）に関する巨大腫瘤病変の定義である。胸部Ｘ線は、塊を判断するのに要求されない。ＨＬ及び非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に関して、ＣＴスキャンによる最長の測定値が記録されるべきである。

【0310】

総腫瘍体積の測定値は、ＰＥＴ及びＣＴにより潜在的な予後因子として探索されるべきである。

【0311】

脾臓肝臓及び骨髄障害：脾臓及び肝臓障害は、表２０に記載されるとおりのＰＥＴ－ＣＴによって判断するのが最もよい。

【0312】

【表32】

【0313】

骨髄障害は、以下のとおりに判断され得る：
●ＨＬ、ＰＥＴ－ＣＴが実施される場合、骨髄生検（ＢＭＢ）は要求されない。
●ＤＬＢＣＬ、ＰＥＴが陰性の場合、ＢＭＢであり、不調和な組織構造を同定することが対象の管理にとって重要である。
●他のサブタイプ、スクリーニング／ベースライン時の免疫組織化学及びフローサイトメトリーとともに約２．５ｃｍの片側ＢＭＢが推奨される。
●ベースライン時に障害がない場合、ＣＲに関しては正常であり、完全代謝効果（ＣＭＲ）に関しては骨髄におけるＦＤＧ要求性疾患のエビデンスがなければならない。

【0314】

段階分け方式：改変されたＡｎｎ Ａｒｂｏｒ段階分け方式が、疾患の程度の解剖学的な記述のために使用されるべきである（表２１）。

【0315】

【表33】

【0316】

効果判定：ＰＥＴ－ＣＴは、５点尺度を使用して、ＦＤＧ要求性組織構造における効果判定のために使用されるべきである；ＣＴは、低い又は可変のＦＤＧ要求性にとって好ましい。

【0317】

寛解後のサーベイランススキャンは、特に、ＤＬＢＣＬ及びＨＬのために阻止されるが、反復試験が、治療後の不確かな所見の後に検討されてもよい。

【0318】

追跡調査のスキャンの適切な判断の使用は、残存する腹腔内又は後腹膜疾患を有する低悪性度のリンパ腫において検討されてもよい。

【0319】

効果に関する判定基準は、表２２において要約される。

【0320】

【表34】

【0321】

【表35】

【0322】

【表36】

【0323】

６．１１ 皮膚リンパ腫効果判定基準に関する国際学会、２０１１
以下のことが、Ｏｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２９，１８：２５９８－６０７から適応させられる。

【0324】

定義：使用されることになる斑点、プラーク、及び腫瘍の定義は、表２３に概説される。

【0325】

【表37】

【0326】

【表38】

【0327】

診断：病理組織学的診断は、皮膚リンパ腫の専門知識を有する病理学者によって既存の疾患を表す皮膚生検において確認されるべきである。セザリー症候群（ＳＳ；Ｔ_４とＢ_２判定基準を満たすように定義される）に関して、紅皮症皮膚の生検が、示唆的な病理組織学的特徴のみを明らかにし得るが、診断的な病理組織学的特徴を明らかにし得ない場合、診断は、リンパ節生検又は血液中のクローンが皮膚のものと一致することを含むＢ_２判定基準の達成に基づき得る。初期の斑点段階の菌状息肉症（ＭＦ）に関して、光学顕微鏡検査による組織診断が確定しない場合、ＩＳＣＬによって推奨されている診断判定基準が使用されるべきである。

【0328】

評価：
●前治療評価及び応答パラメーターのスコア化は、スクリーニング時ではなく、ベースライン（治療の１日目）になされるべきである。
●全ての応答は、期間中少なくとも４週目に存在するはずである。

【0329】

皮膚評価、スコア化、及び応答の定義：
重症度加重評価法（ＳＷＡＴ）又は改変されたＳＷＡＴ（ｍＳＷＡＴ）が、皮膚スコア化のために使用されるべきである。

【0330】

応答の定義は、表２４に示される。

【0331】

【表39】

【0332】

リンパ節評価、スコア化、及び応答の定義：
末梢リンパ節：参加者の完全な腫瘍－リンパ節－転移－血液（ＴＮＭＢ）状態が特徴付けられるべきであり、コンピューター断層撮影（ＣＴ）イメージングが推奨され、考慮すべき観察者間の変動が存在することに注意する。核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）は、ＣＴの代替である。

【0333】

中心リンパ節：肥大した中心リンパ節のエビデンス（長軸における＞１．５ｃｍの直径又は短軸における＞１．０ｃｍの直径として定義される）、及び生検（すなわち、切除、穿刺吸引、又はコア生検）によるＭＦ／ＳＳを伴う障害の確証が存在する場合、全ての中心リンパ節が、末梢リンパ節と同じ方法でその後に追跡されるべきである（全ての肥大したリンパ節の最長の二次元測定値の積）。

【0334】

応答の定義は、表２５に示される。

【0335】

【表40】

【0336】

内臓疾患評価、スコア化、及び応答の定義：ベースライン時の生検確認は、画像検査によって診断され得る肝臓及び脾臓障害を除いて、内臓疾患の全ての形態に関して推奨される。注目すべきことに、骨髄吸引／トレフィン生検は、評価又は応答判定のいずれかに必須であるとみなされない。内臓におけるＣＲをＣＴのみで確証するには限界がある場合があり、それらの場合、確認生検が必要であり得るか又はこれを欠くとＣＲ判定を行うことができない。応答の定義は、表２６に示される。

【0337】

【表41】

【0338】

血液評価、スコア化、及び応答の定義：フローサイトメトリーによって決定されるＣＤ４^＋ＣＤ２６^－細胞の絶対数は、ＭＦ／ＳＳにおける潜在的な血液障害の最も合理的な数量化できる尺度である。ＣＤ２６^＋対象において、ＣＤ４^＋ＣＤ７^－Ｔ細胞は、モニターするための代替の集団になるであろう。

【0339】

血液中のＣＤ４細胞に関する１，６００／μＬの正常範囲上限値に基づいて、２５０／μＬ未満のＣＤ４^＋／ＣＤ２６^－又はＣＤ４^＋ＣＤ７^－細胞の絶対数は、これらのＣＤ４サブセットに関する正常値であると考えられ、血液障害の欠如又は正常化を定義するためにも使用され得る（Ｂ_０）。或いは、セザリー細胞数の絶対値は、良質な塗抹標本が１名の有資格読影者によって解釈され、セザリー細胞が２５０／μＬ未満及び１０００／μＬ超がＢ_０及びＢ_２の合理的な決定要因であるとき、任意選択の方法である。

【0340】

応答の定義は、表２７に示される。

【0341】

【表42】

【0342】

包括的な応答スコアの定義：ＭＦ／ＳＳに関するコンセンサスの包括的な応答スコアは、表２８に示される。

【0343】

【表43】

【0344】

７．治療
７．１ リンパ球枯渇化学療法
全ての対象は、ＣＴＸ１３０の注入の前にＬＤ化学療法を受ける。ＬＤ化学療法は、
●３回の投与に関して１日当たりフルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２ ＩＶ及び
●３回の投与に関して１日当たりシクロホスファミド５００ｍｇ／ｍ^２ ＩＶ
からなる。

【0345】

腎機能の中程度の障害（ＣｒＣｌ ５０～７０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２）を有する成人対象は、少なくとも２０％又は現地の添付文書に従って減らされたフルダラビンの用量を受容するべきである。

【0346】

両方の薬剤は、同じ日に開始され、３日間連続して投与される。対象は、試験登録の７日以内にＬＤ化学療法を開始するべきである。

【0347】

ＬＤ化学療法に関連する保管、調製、投与、支持療法の指示、及び毒性管理に関するガイダンスについてはフルダラビン及びシクロホスファミドに対する現行の完全な添付文書を参照されたい。

【0348】

ＬＤ化学療法は、以下の徴候又は症状のいずれかが存在する場合に遅延され得る：
●パフォーマンス・ステータスのＥＣＯＧ＞１への変化。
●ＬＤ化学療法に関連するＡＥの潜在的リスクを増大させる臨床状態の著しい悪化、例えば：
ｏ任意の血球減少の臨床的に意義のある悪化、
ｏトランスアミナーゼレベルの臨床的に意義のある増大（例えば、＞３×ＵＬＮ）、
ｏ総ビリルビンの臨床的に意義のある増加（例えば、＞２×ＵＬＮ）、又は
ｏ血清クレアチニンの臨床的に意義のある増加。
●飽和レベル＞９２％を維持するために酸素補給を必要とすること。
●新たな制御されない心不整脈。
●血管収縮薬の支援を必要とする低血圧。
●活動性感染症：治療に応答しない細菌、真菌、又はウイルスの血液培養が陽性であること。
●任意の急性神経毒性（例えば、≧２の急性神経毒性）。

【0349】

７．２．ＣＴＸ１３０の投与
ＣＴＸ１３０の注入は、以下の徴候又は症状のいずれかが存在する場合に遅延されることになる：
●パフォーマンス・ステータスのＥＣＯＧ＞１への変化。
●新たな活動性の制御されない感染症。
●同種異系ＣＡＲ Ｔ細胞注入に関連するＡＥの潜在的リスクを増大させる臨床状態の著しい悪化、例えば：
ｏトランスアミナーゼレベルの臨床的に意義のある増大（例えば、＞３×ＵＬＮ）、
ｏ総ビリルビンの臨床的に意義のある増加（例えば、＞２×ＵＬＮ）、又は
ｏ血清クレアチニンの臨床的に意義のある増加。
●任意の急性神経毒性（例えば、≧２の急性神経毒性）。

【0350】

ＣＴＸ１３０は、ＬＤ化学療法の完了後に少なくとも４８時間（ただし７日以内）投与される。

【0351】

反復投与に由来し得る潜在的な臨床的有用性を考慮すると、現行の試験は、ＣＴＸ１３０注入後の２ヶ月目に最大２回のＣＴＸ１３０の反復投与を可能にして、試験において最大３回の投与を有する。

【0352】

ＣＴＸ１３０後の３ヶ月目の反復投与は、以下のシナリオにおいて行われ得る：
●進行性疾患－ＣＴＸ１３０の注入後の２ヶ月目において、新規の病変又は＞２０％の増殖が観察される場合（Ｌｕｇａｎｏ及びＩＳＣＬ効果判定基準）、進行事象が臨床的に悪いシナリオとならない場合は再投与を検討する。
●安定した疾患又は部分奏効－再投与；完全寛解が３ヶ月目までに達成されていない場合は再投与が行われる。
●完全寛解－再投与なし。

【0353】

場合により、ＣＴＸ１３０細胞による対象の２回以下の再投与が許容され得る。再投与に関して検討されるために、対象は、１）最初又は２回目のＣＴＸ１３０注入後に部分奏効（ＰＲ）又は完全奏効（ＣＲ）を達成し、最後の投与から２年以内に、引き続いて進行していなければならなかったか、又は２）直近のＣＴＸ１３０注入の後の１ヶ月目の試験来院時に安定な疾患（ＳＤ）を達成しなければならなかった（再投与の決定は、局所的なＣＴスキャン／評価に基づくことになる）。対象が再投与され得る最も早い時点は、最初又は２回目のＣＴＸ１３０注入の６週後である。

【0354】

再投与に関して検討されるために、対象は、以下の判定基準を満たす必要がある：
ｏ用量漸増の間にＤＬＴがない（該当する場合）。
ｏＣＴＸ１３０注入後の７２時間以内にグレード≦２（例えば、２）に回復しなかったグレード≧３（例えば、４）のＣＲＳがない。
ｏＣＴＸ１３０注入後にグレード＞１のＧＶＨＤがない。
ｏＣＴＸ１３０注入後にグレード≧２（例えば、≧３）のＩＣＡＮＳがない。
ｏＬＤ化学療法及びＣＴＸ１３０注入に関する判定基準を満たすこと（例えば、血行動態的に安定、活動性感染症がない）。
ｏ組み入れ／除外基準のような全ての終末器官判定基準（例えば、肝臓、腎臓、心臓、肺、神経）を満たすこと。

【0355】

それぞれの投与イベントの前に、対象は、別の用量のＬＤ化学療法を受ける。パートＡ及びＢにおいて、対象は、試験において最大３用量を有するために、ＣＴＸ１３０注入後の３ヶ月目に最大２回再投与され得る。パートＡにおいて、対象が前の用量レベルでＤＬＴを経験しなかったか又はＤＬＴがＤＬＴ評価期間中に次のより高い用量レベルで観察されなかった場合、対象内の用量漸増が許容される。その用量が承認を得た場合、及び対象が利益を継続して有し、再投与の判定基準のいずれかに違反しない場合、対象内の用量漸増が次のより高い用量レベルまで１回のみ許容される。

【0356】

７．３．ＣＴＸ１３０の注入後のモニタリング
ＣＴＸ１３０注入の後、対象の生命徴候は、注入後及びいずれかの潜在的な臨床症状の回復まで２時間の間３０分毎にモニターされるべきである。

【0357】

パートＡの対象は、ＣＴＸ１３０注入後に最小で７日間入院させられる。パートＡ及びパートＢの両方において、対象は、ＣＴＸ１３０注入後の少なくとも２８日間、治験現場の近辺（すなわち、１時間の移動時間）に留まる必要がある。急性のＣＴＸ１３０関連毒性の管理は、試験現場でのみ行われるべきである。

【0358】

対象は、評価のスケジュールに従ってサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、腫瘍溶解症候群（ＴＬＳ）、神経毒性、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、及び他の有害事象（ＡＥ）の徴候についてモニターされる（表１５及び表１６）。ＣＡＲ Ｔ細胞関連毒性の管理に関するガイドラインは、第８節に記載される。対象は、ＣＴＸ１３０に関連する非造血系の毒性（例えば、発熱、低血圧、低酸素、進行中の神経毒性）がグレード１に戻るまで入院したままでなければならない。対象は、医療管理者によって必要であるとみなされる場合、さらに長い期間入院したままである可能性がある。

【0359】

７．４ 以前及び同時の薬物療法
７．４．１ 許容される薬物療法
本明細書に記載される禁止薬物を除く感染症を治療するためのＩＶ抗生物質、増殖因子、血液成分などを含む最適な医療のために必要な支援手段が、試験期間全体にわたって与えられる。

【0360】

ビホスホネート（ｂｉｐｏｓｐｈｏｎａｔｅ）又はＲＡＮＫＬ阻害剤などの骨吸収を阻害する薬物療法は、高カルシウム血症を含む対症療法のために医療管理者の指示に従って許容される。

【0361】

処方箋及び非処方箋薬物療法、並びに医療処置を含む全ての同時の療法が、ＣＴＸ１３０注入後の３ヶ月にわたって署名されたインフォームドコンセントの日から記録されなければならない。ＣＴＸ１３０注入後の最初の３ヶ月間、以下の選択された同時の薬物療法のみが収集される：ワクチン接種、抗癌治療（例えば、化学療法、放射線照射、免疫療法）、免疫抑制剤（ステロイドを含む）、及び任意の治験薬。

【0362】

７．４．２ 禁止される薬物療法
以下の薬物療法は、下記のとおりの一定の試験期間に禁止される：
ＣＴＸ１３０注入前の２８日以内及びＣＴＸ１３０注入後の３ヶ月の禁止事項
●生ワクチン。
●漢方医学の一部としての漢方薬又は市販の漢方薬以外のもの。
新規の抗癌療法の開始までの試験全体にわたる禁止事項
●ＣＲＳ又はＩＣＡＮＳを治療することが推奨されない限り又は以前に医療管理者と協議し、承認された場合、任意の免疫抑制性の療法。
●薬理学的用量のコルチコステロイド療法（＞１０ｍｇ／日のプレドニゾン又は同じ用量の他のコルチコステロイド）及び他の免疫抑制剤は、新たな毒性の治療のため又はＣＴＸ１３０と関連するＣＲＳ又は神経毒性の管理の一部として医学的に必要を示されない限り、ＣＴＸ１３０投与後に回避されるべきである。
●疾患進行前のＬＤ化学療法以外の任意の抗癌療法（例えば、化学療法、免疫療法、標的化療法、放射線照射、又は他の治験薬）症状管理のための対症的な放射線療法は、範囲、線量、及び部位に応じて許容される。部位、線量、及び範囲は、定義され、判断に関して医療管理者と協議されるべきである。
ＣＴＸ１３０注入後の最初の１ヶ月以内の禁止事項
●ＣＲＳの症状を悪化させる可能性に起因してＣＴＸ１３０注入後の顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）；ＣＴＸ１３０後の顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）の投与には注意が払われるべきである。
●ＤＬＴ評価期間（２８日）の間、解熱剤（例えば、アセトアミノフェン、アスピリン）を用いた対象による自己薬物療法。
ＣＴＸ１３０による治療前の３ヶ月及び治療中、並びにＣＴＸ１３０注入後の６ヶ月までの禁止事項
●ＧｖＨＤのリスクの増大に起因して、モガムリズマブのようなＣＣＲ－４指向性抗体。

【0363】

８．毒性管理
８．１ 一般的なガイダンス
ＣＴＸ１３０注入後、少なくとも２８日間は対象を注意深くモニターしなければならない。著しい毒性が、自系ＣＡＲ Ｔ細胞療法により報告されており、治験実施計画書ガイダンスに従って全ての有害事象（ＡＥ）の積極的なモニター及び治療が要求される。

【0364】

ＣＤ７０指向性自系ＣＡＲ Ｔ細胞療法での以前の経験に基づいて、以下の一般的な推奨事項が提供される：
●発熱はサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の最も一般的な初期症状である。しかしながら、対象は最初の症状として脱力感、低血圧又は錯乱を示す場合もある。
●ＣＲＳの診断は、臨床検査値ではなく臨床症状に基づいて行われるべきである。
●ＣＲＳに固有の管理に反応を示さない対象では、常に敗血症及び抵抗性感染症を考慮する。抵抗性又は緊急を要する細菌感染症並びに真菌又はウイルス感染症について対象を継続的に評価しなければならない。
●ＣＡＲ Ｔ細胞注入後、ＣＲＳ、ＨＬＨ、及びＴＬＳが同時に発生する可能性がある。全ての状態の徴候及び症状について対象を一貫して経過観察し、適切に管理しなければならない。
●ＩＣＡＮＳは、ＣＲＳの発症時、ＣＲＳの回復中、又はＣＲＳの回復後に発生する可能性がある。ＩＣＡＮＳの等級分け及び管理は、ＣＲＳとは別々に実施される。
●トシリズマブは指示を受けたときから２時間以内に投与されなければならない。

【0365】

ＣＴＸ１３０の安全性プロファイルは、試験全体にわたって継続的に評価される。

【0366】

８．２ 毒性に特有のガイダンス
８．２．１ 注入反応
投与後１２時間以内に最も一般的に発生する一過性の発熱、悪寒、及び／又は嘔気を含む注入に関連する反応が、自系Ｔ細胞治験において報告されている。輸注反応が発生した場合、必要に応じてアセトアミノフェン（パラセタモール）及びジフェンヒドラミン塩酸塩（又は別のＨ１－抗ヒスタミン）が、ＣＴＸ１３０注入後の６時間毎に繰り返し与えられ得る。対象にアセトアミノフェンによって緩和されない発熱が続く場合、必要に応じて非ステロイド系抗炎症薬が処方され得る。全身性ステロイドは、この介入によってＣＡＲ Ｔ細胞に有害な影響を及ぼす可能性があるため、生命を脅かす緊急事態の場合を除いて投与されるべきではない。

【0367】

８．２．２ 感染症予防及び発熱反応
感染症予防は、施設の標準治療に従ってＴ細胞又はＢ細胞悪性腫瘍を有する患者に対して管理されるべきである。発熱反応がある場合、感染症の評価を開始し、治療する医師が医学的に指示し、決定されたとおりの抗生物質、輸液及び他の支持療法によって対象を適切に管理しなければならない。発熱が持続する場合、対象の医学的管理の全体を通してウイルス及び真菌の感染を考慮すべきである。ＣＴＸ１３０注入後に対象が敗血症又は全身性菌血症を発症した場合、適切な培養及び医学的管理を開始しなければならない。さらに、ＣＴＸ１３０注入後の２８日以内に発熱したいずれの場合にもＣＲＳを考慮に入れるべきである。

【0368】

ウイルス性脳炎（例えば、ヒトヘルペスウイルス［ＨＨＶ］－６脳炎）は、ＣＴＸ１３０を受容した後に認知神経科学的症状を経験する対象のための鑑別診断において考慮されなければならない。腰椎穿刺（ＬＰ）は、いずれかのグレード３以上の認知神経科学的毒性に関して必要であり、グレード１及びグレード２の事象に関して強く推奨される。腰椎穿刺が実施される場合は常に、感染症研究班が、（最小でも）以下の評価からのデータを調査することになる：ＨＳＶ １及び２、エンテロウイルス、ヒトパレコウイルス、ＶＺＶ、ＣＭＶ、及びＨＨＶ－６に関する定量的試験。腰椎穿刺は、症状発症後４８時間以内に実施されなければならず、対象を適切に管理するために、ＬＰから４日以内に感染症研究班からの結果が入手可能にならなければならない。

【0369】

８．２．３ 腫瘍溶解症候群（ＴＬＳ）
ＣＡＲ Ｔ細胞療法を受ける対象は、ＴＬＳのリスクが高まる可能性がある。ＬＤ化学療法の開始からＣＴＸ１３０注入後２８日までは、臨床検査及び症状によりＴＬＳについて対象を注意深くモニターする必要がある。スクリーニング中及びＬＤ化学療法の開始前に、ＴＬＳのリスクが増大した対象は、予防的にアロプリノール（又はフェブキソスタットなどのアロプリノールでない代替薬）及び／又はラスブリカーゼを受容するべきであり、経口／ＩＶでの水分補給を増やす必要がある。ＣＴＸ１３０注入の２８日後又はＴＬＳのリスクが過ぎ去ってから予防を中止することができる。

【0370】

現場は、施設の標準治療により又は公表されたガイドラインに従ってＴＬＳをモニターし、ＴＬＳを治療するべきである（Ｃａｉｒｏ ａｎｄ Ｂｉｓｈｏｐ，（２００４）Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ，１２７，３－１１）。ラスブリカーゼの投与を含むＴＬＳの管理は、臨床的に必要である場合、直ちに開始すべきである。

【0371】

８．２．４ サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）
ＣＲＳは、ＣＡＲ Ｔ細胞を含む免疫療法と関連する毒性であり、サイトカイン、特に、ＩＬ－６及びＩＬ－１の放出により引き起こされる（Ｎｏｒｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。ＣＲＳは、ＣＡＲが標的抗原に結合したことに反応して免疫系が過剰に活性化するために生じるものであり、急激なＴ細胞の刺激及び増殖によりマルチサイトカインの上昇がもたらされる（Ｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．，２０１４ａ）。

【0372】

ＣＲＳの臨床症状は、軽度であり、体温の上昇に限定される場合があるか又は１つ若しくは複数の臓器系（例えば、心臓、胃腸管［ＧＩ］、肺、皮膚、中枢神経）及び複数の症状（例えば、高熱、疲労、食欲不振、嘔気、嘔吐、発疹、低血圧、低酸素、頭痛、せん妄、錯乱）を含み得る。ＣＲＳは、生命を脅かす場合がある。臨床的には、ＣＲＳは、全身性の感染症、又は重症の場合、敗血症性ショックと間違われる場合がある。多くの場合、最も早い徴候は体温の上昇であり、これは直ちに鑑別診断の精密検査及び適切な治療の時宜を得た開始を促すべきである。

【0373】

ＣＲＳの管理の目的は、ＣＴＸ１３０の抗癌効果の可能性を維持しながら、生命を脅かす状態及び続発症を予防することである。症状は通常、血液悪性腫瘍における自系ＣＡＲ Ｔ細胞療法の１～１４日後に発生する。

【0374】

ＣＲＳは、臨床検査での測定値ではなく、臨床症状に基づいて同定され、治療されるべきである。ＣＲＳが疑われる場合、等級分けは、ＡＳＴＣＴ（以前は米国骨髄移植学会議、ＡＳＢＭＴとして知られる）のコンセンサス勧告（表２９；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，（２０１９）Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２５，６２５－６３８）に従って適用されるべきであり、管理は、公表されているガイドラインから適応される表３０の勧告に従って実施されるべきである（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｂｌｏｏｄ １２４，１８８－９５；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，（２０１９）Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２５，６２５－６３８）。したがって、神経毒性の等級分けは、ＩＣＡＮＳに関するＡＳＴＣＴ判定基準により整列させられる。

【0375】

【表44】

【0376】

【表45】

【0377】

【表46】

【0378】

ＣＲＳの期間全体を通して、対象に解熱剤、ＩＶ輸液及び酸素からなる支持療法を施す必要がある。グレード≧２のＣＲＳを示す対象は、心電図テレメトリー及びパルスオキシメトリーによって継続的にモニターする必要がある。グレード３のＣＲＳを示す対象には、心機能を評価するために心エコー像の実施を検討する。グレード３又は４のＣＲＳに関しては、集中治療の支持療法を検討する。重度のＣＲＳの場合、症状（発熱、低血圧、低酸素）が類似しているため、潜在的な感染症の可能性が考慮されるべきである。ＣＲＳの回復は、発熱（体温≧３８℃）、低酸素、及び低血圧の回復として定義される（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，（２０１９）Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２５，６２５－６３８）。

【0379】

８．２．４．１ 低血圧及び腎不全
ＣＡＲ Ｔ細胞療法では、低血圧及び腎不全が報告されており、施設の診療ガイドラインに従って生理食塩水をＩＶでボーラス投与することによって治療する必要がある。適切であれば、透析を考慮する必要がある。

【0380】

８．２．５ 免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）
神経毒性は、自系ＣＡＲ Ｔ細胞療法で治療されるＢ細胞悪性腫瘍を有する対象において記録されている。神経毒性は、ＣＲＳの発症時、ＣＲＳの回復中、又はＣＲＳの回復後に発生する可能性があり、その病態生理は不明である。最近のＡＳＴＣＴ（以前はＡＳＢＭＴとして知られる）コンセンサスはさらに、ＩＣＡＮＳを内在性の若しくは注入されたＴ細胞及び／又は他の免疫エフェクター細胞の活性化又は関与をもたらす任意の免疫療法の後にＣＮＳに関係する病的プロセスによって特徴付けられる障害として定義した（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，（２０１９）Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２５，６２５－６３８）。徴候及び症状は進行性である可能性があり、失語症、意識レベルの変化、認知技能の機能障害、運動麻痺、てんかん発作、及び脳浮腫を含み得るが、これらに限定されない。ＩＣＡＮＳの等級分け（表３２）は、以前に自系ＣＡＲ Ｔ細胞の治験で使用されたＣＡＲ Ｔ ｃｅｌｌ－ｔｈｅｒａｐｙ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＴＯＸｉｃｉｔｙ（ＣＡＲＴＯＸ）ワーキンググループの判定基準に基づいて開発された（Ｎｅｅｌａｐｕ ｅｔ ａｌ．，（２０１８）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １５，４７－６２）。ＩＣＡＮＳでは、免疫エフェクター細胞関連脳症（ＩＣＥ）評価ツール（表１７）と呼ばれる改変されたツールを使用することにより、意識レベル、てんかん発作の有無、運動所見、脳浮腫の有無の評価及び神経性領域の全体的な評価を組み入れている。

【0381】

任意の新たに発症した神経毒性の評価は、神経学的検査（ＩＣＥ評価ツールを含む、表１７）、脳核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、及び臨床的に必要であればＣＳＦの検査を含むべきである。臨床的に実行可能である場合、神経毒性の間に実施される腰椎穿刺については、ＣＳＦ試料は、探索的バイオマーカー及びＣＴＸ１３０の存在（ＰＣＲによる）に関して中央検査機関に送られるべきである。脳ＭＲＩが可能ではない場合、脳内出血を除外するために、全ての対象に非造影コンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャンを受けさせる必要がある。臨床的に必要であれば、脳波も考慮に入れる必要がある。重症例では、気道保護のために気管内挿管が必要になる場合がある。

【0382】

ＣＴＸ１３０注入後の少なくとも２８日間又は神経学的症状が回復した時点で、特に、てんかん発作の病歴を有する対象に非鎮静性型の抗てんかん発作予防（例えば、レベチラセタム）が検討されるべきである（抗てんかん発作薬物療法が有害な症状に寄与しているとみなされない限り）。グレード≧２のＩＣＡＮＳを示す対象は、心電図テレメトリー及びパルスオキシメトリーによって継続的にモニターする必要がある。重度又は生命を脅かす神経毒性に対しては、集中治療の支持療法を施すべきである。神経内科の受診を常に考慮すべきである。血小板及び凝固障害の徴候をモニターし、脳内出血のリスクを低減させるために血液製剤を適切に輸液すること。表３２は、神経毒性の等級分けを提供し、表３３は、管理ガイダンスを提供する。

【0383】

積極的なステロイド処置を３日を超えて受ける対象には、長期間のステロイドの使用による重症感染のリスクを軽減するために、抗真菌及び抗ウイルス予防が推奨されている。抗微生物の予防も考慮に入れる必要がある。

【0384】

【表47】

【0385】

【表48】

【0386】

発熱状態又は化学療法後に生じる可能性のある頭痛は非特異的症状である。頭痛単独では必ずしもＩＣＡＮＳの症状ではない場合もあり、さらなる評価を行う必要がある。体調偏移及び筋力低下から生じる脱力感又は平衡感覚障害は、ＩＣＡＮＳの定義から除外されている。同様に、これらの対象では、随伴する浮腫の有無にかかわらず、凝固障害によって頭蓋内出血が発生する可能性があり、ＩＣＡＮＳの定義からも除外される。これらの及び他の神経毒性は、ＣＴＣＡＥ ｖ５．０に従って記録しなければならない。

【0387】

８．２．６ 血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）
ＨＬＨは、自家ＣＤ１９指向性ＣＡＲ Ｔ細胞による治療の後に報告されている（Ｂａｒｒｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｅｄｉａｔｒ，２６，４３－４９；Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，３７１，１５０７－１５１７；Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｂｌｏｏｄ，１２５，４０１７－４０２３；Ｐｏｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ，７，３０３ｒａ１３９；Ｔｅａｃｈｅｙ ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ｂｌｏｏｄ，１２１，５１５４－５１５７。ＨＬＨは、活性化Ｔ細胞からのサイトカインの産生によって過剰なマクロファージの活性化をもたらす、ＣＡＲ Ｔ細胞注入後の炎症反応の結果として生じる臨床症候群である。ＨＬＨの徴候及び症状には、発熱、血球減少、肝脾腫、高ビリルビン血症を伴う肝障害、フィブリノーゲンが著しく低下する凝固障害並びにフェリチン及びＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の顕著な上昇が含まれ得る。神経学的所見も観察されている（Ｊｏｒｄａｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｂｌｏｏｄ，１１８，４０４１－４０５２；Ｌａ Ｒｏｓｅｅ，（２０１５）Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｍ Ｓｏｃ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｅｄｕｃ Ｐｒｏｇｒａｍ，１９０－１９６。

【0388】

ＣＲＳ及びＨＬＨは、臨床的特徴及び病態生理が重複した、類似する臨床症候群を有し得る。ＨＬＨは、ＣＲＳの発症時又はＣＲＳが回復しているときに発生する可能性が高い。他のＣＲＳのエビデンスの有無にかかわらず、原因不明の肝機能検査値の上昇又は血球減少がある場合、ＨＬＨを考慮すべきである。ＣＲＰ及びフェリチンをモニターすることは、診断の支援し、臨床経過を明確にし得る。

【0389】

ＨＬＨが疑われる場合、
●フィブリノーゲンを含む凝固パラメーターを頻繁にモニターする。これらの試験は、評価スケジュールで指示されたものよりも頻繁に行われてもよく、検査所見に基づいて頻度を促進する必要がある。
●出血のリスクを低減するため、フィブリノーゲンは≧１００ｍｇ／ｄＬに維持しなければならない。
●血液製剤によって凝固障害を補正しなければならない。
●ＣＲＳとの重複を考慮して、対象をさらに表２９のＣＲＳ治療ガイダンスに従って管理するべきである。

【0390】

８．２．７ 遷延性血球減少症
場合によっては、ＣＡＲ Ｔ細胞注入後に２８日を超えて続くグレード３の好中球減少症及び血小板減少症が、自系ＣＡＲ Ｔ細胞製品で治療された対象において報告されている（Ｋｙｍｒｉａｈ ＵＳ ｐｒｅｓｃｒｉｂｉｎｇ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ［ＵＳＰＩ］，２０１８；Ｒａｊｅ ｅｔ ａｌ．，（２０１９）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３８０，１７２６－３７；Ｙｅｓｃａｒｔａ ＵＳＰＩ，２０１９）。したがって、ＣＴＸ１３０を受容する対象は、このような毒性についてモニターされ、適切な支援を受けなければならない。血小板及び凝固障害の徴候についてモニターし、内出血のリスクを低減させるために血液製剤を適切に輸液すること。長期間の好中球減少症の任意の対象に対して抗微生物及び抗真菌予防を検討しなければならない。

【0391】

活性化Ｔ及びＢリンパ球上でのＣＤ７０の一過性の発現に起因して、ウイルス再活性化などの日和見感染症が発生する可能性がある。日和見感染症は、臨床症状が生じるときに考慮されるものとする。

【0392】

用量漸増の間、Ｇ－ＣＳＦは、グレード４のＣＴＸ１３０注入後の好中球減少症の場合に考慮され得る。コホート拡大の間、Ｇ－ＣＳＦは、医師の判断に従って注意して投与され得る。

【0393】

８．２．８ 移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）
ＧｖＨＤは同種ＨＳＣＴの状態において見られるものであり、免疫適格性のドナーのＴ細胞（移植片）がレシピエント（宿主）を異物と認識した結果として生じるものである。その後の免疫反応では、ドナーのＴ細胞が活性化し、異物である抗原保有細胞を排除するためにレシピエントを攻撃する。ＧｖＨＤは、同種ＨＳＣＴからの時間及び臨床症状の両方に基づいて、急性症候群、慢性症候群及びオーバーラップ症候群に分けられる。急性ＧｖＨＤの徴候は、斑状丘疹状皮疹；胆汁うっ滞をもたらす小胆管の損傷に起因する黄疸を伴う高ビリルビン血症；悪心、嘔吐及び食欲不振；並びに水様性下痢又は血性下痢及び痙性腹痛を含み得る（Ｚｅｉｓｅｒ ａｎｄ Ｂｌａｚａｒ，（２０１７）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，３７７，２１６７－２１７９）。

【0394】

提案されている臨床試験を裏付けるために、非臨床のＧＬＰに準拠したＧｖＨＤ及び忍容性試験が、２つのＩＶ用量：マウス当たり４×１０^７個のＣＴＸ１３０細胞の高用量（およそ１．６×１０^９個の細胞／ｋｇ）及びマウス当たり２×１０^７個の細胞（およそ０．８×１０^９個の細胞／ｋｇ）の低用量で治療される免疫無防備状態のマウスにおいて実施された。両方の用量レベルが、体重に正規化した場合、提案された最も高い臨床用量を１０倍を超えて上回る。ＣＴＸ１３０で治療されたどのマウスも、１２週の試験の間に致死的なＧｖＨＤを発症しなかった。剖検時に、単核細胞の浸潤が、一部の動物の腸間膜のリンパ節及び胸腺において観察された。最小から軽度の血管周囲の炎症もまた、一部の動物の肺において観察された。これらの所見は、軽度のＧｖＨＤと一貫しているが、これらのマウスにおける臨床症状において顕在化しなかった。

【0395】

さらに、ＴＲＡＣ遺伝子座でのＣＡＲの挿入の特異性により、Ｔ細胞がＣＡＲ＋及びＴＣＲ＋の両方である可能性は極めて低い。残りのＴＣＲ＋細胞を、製造プロセス中に抗ＴＣＲ抗体カラムの免疫親和性クロマトグラフィーにより除去し、最終生成物中≦０．４％のＴＣＲ＋細胞を得る。全ての用量レベルに７×１０^４個のＴＣＲ＋細胞／ｋｇの用量制限が課せられる。この制限値は、ハプロタイプ一致ドナーによるＳＣＴ中に重篤なＧｖＨＤを引き起こす可能性のある同種細胞の数に関して公表された報告書に基づいた１×１０^５ＴＣＲ＋細胞／ｋｇの制限値よりも低い（Ｂｅｒｔａｉｎａ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｂｌｏｏｄ，１２４，８２２－８２６）。このような特定の編集、精製及び厳格な製品リリース基準によれば、ＣＴＸ１３０後のＧｖＨＤのリスクは低いはずであるが、真の発生率は未知である。しかしながら、ＣＡＲ Ｔ細胞の増殖は抗原に促進されるものであり、且つＴＣＲ－細胞でのみ起こる可能性が高いことを考えると、ＴＣＲ＋細胞の数が注入された数を上回り、認識可能な程度まで増加する可能性は低い。

【0396】

ＧｖＨＤの診断及び等級分けは、表３４に概説されるとおり、公表されている判定基準（Ｈａｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，２２，４－１０）に基づくべきである。

【0397】

【表49】

【0398】

全体的なＧｖＨＤのグレードは、最も重度の標的臓器障害に基づいて決定され得る。
●グレード０：ステージ１～４の臓器がまったくない。
●グレード１：肝臓、上部ＧＩ又は下部ＧＩ障害を伴わないステージ１～２の皮膚。
●グレード２：ステージ３の発疹及び／又はステージ１の肝臓及び／又はステージ１の上部ＧＩ及び／又はステージ１の下部ＧＩ。
●グレード３：ステージ０～３の皮膚及び／又はステージ０～１の上部ＧＩを伴うステージ２～３の肝臓及び／又はステージ２～３の下部ＧＩ。
●グレード４：ステージ０～１の上部ＧＩを伴うステージ４の皮膚、肝臓又は下部ＧＩ障害。

【0399】

感染症及び薬剤に対する反応性などの、ＧｖＨＤを模倣する可能性のある潜在的な交絡因子を除外しなければならない。確認のため、治療を開始する前又は治療を開始した直後に皮膚生検及び／又はＧＩ生検を入手する必要がある。肝臓障害がある場合、臨床的に実行可能であれば、肝生検を試みるべきである。

【0400】

急性ＧｖＨＤの管理に関する推奨事項は、表３５で概説される。治験終了時に対象間の比較ができるように、これらの推奨事項は、それらに従うことによって対象を危険にさらす恐れのある特定の臨床シナリオを除いて追従されるべきである。

【0401】

【表50】

【0402】

より重度のＧｖＨＤの対象に対して、第二選択療法を開始するという判断を直ちに下さなければならない。例えば、ＧｖＨＤの症状が進行して３日後、グレード３のＧｖＨＤが持続して１週間後、又はグレード２のＧｖＨＤが持続して２週間後に二次療法が指示され得る。高用量のグルココルチコイド治療に忍容性のない可能性のある対象には、より早期の第二選択全身療法が指示され得る（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，１８，１１５０－１１６３）。二次療法の選択及び開始時期は、臨床的判断及び現地における慣行に基づいてもよい。

【0403】

難治性の急性ＧｖＨＤ又は慢性ＧｖＨＤの管理は、施設のガイドラインに従ってもよい。免疫抑制剤（ステロイドを含む）によって対象を治療する場合、現地のガイドラインに従って抗感染症予防対策を導入する必要がある。

【0404】

８．２．９ オンターゲット・オフ腫瘍毒性
８．２．９．１ 活性化Ｔ及びＢリンパ球、樹状細胞に対するＣＴＸ１３０の活性
活性化Ｔ及びＢリンパ球は、一過的にＣＤ７０を発現し、樹状細胞、及び胸腺上皮細胞は、一定の程度までＣＤ７０を発現する。したがって、これらの細胞は、活性化ＣＴＸ１３０に対する標的となる可能性がある。

【0405】

８．２．９．２ 骨芽細胞に対するＣＴＸ１３０の活性
ＣＴＸ１３０の活性は、ヒト初代骨芽細胞の細胞培養における非臨床試験において検出された。したがって、骨代謝回転は、カルシウムレベル並びに骨形成の評価において最も有用なマーカーであるとみなされる２つの骨芽細胞特異的マーカーであるＩ型プロコラーゲンのアミノ末端プロペプチド（ＰＩＮＰ）及び骨特異的アルカリホスファターゼ（ＢＳＡＰ）を介してモニターされる（Ｆｉｎｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ １１，２９５－３０３）。血清中の両方のマーカーの評価に関する標準化されたアッセイが利用可能である。これらのペプチドマーカーの濃度は、骨芽細胞の活性及び新たな骨コラーゲンの形成を反映する。ＰＩＮＰ及びＢＳＡＰは、試験のスクリーニング時、ベースライン、７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目、並びに３ヶ月目、６ヶ月目、及び１２ヶ月目に中央検査機関の評価により測定される（表１５）。試料は、骨代謝回転に対する概日リズムの強い影響のために指定の回収日の同じ時間（±２時間）に回収されることになる。

【0406】

８．２．９．３ 腎尿細管様上皮に対するＣＴＸ１３０の活性
腎尿細管様上皮細胞に対するＣＴＸ１３０の活性は、初代ヒト腎臓上皮におけるＣＴＸ１３０の非臨床試験において検出された。したがって、対象は、４８時間にわたって少なくとも０．３ｍｇ／ｄＬ（２６．５μｍｏｌ／Ｌ）及び／又は前の７日以内のベースライン値の１．５倍以上の血清クレアチニンの増加についてモニターすることによって、急性尿細管損傷に関してモニターされる必要がある。血清クレアチニンは、ＣＴＸ１３０注入後の最初の７日間毎日、治療の８日目～１４日目に１日おきに、続いて２８日目まで１週間に２回評価される（表１４）。急性尿細管損傷が疑われる場合、尿沈渣分析及び尿中のナトリウムの排泄分画を含む追加の試験が実施される必要があり、腎臓病専門医による療法指導が開始される必要がある。

【0407】

９．統計方法
９．１ 対象数
パートＡ（用量漸増）において、対象数は、評価される用量レベルの数及びＤＬＴの発生率に応じておよそ６～２４名のＤＬＴが評価可能な対象である。

【0408】

パートＢ（コホート拡大）において、サイモン２段階ミニマックスデザインを使用することができ、ＤＬＢＣＬを有する最大２１名の対象を登録することができる。

【0409】

９．２ 解析セット
パートＡ（用量漸増）
●ＤＬＴが評価可能なセットは、ＣＴＸ１３０を受容し、注入後少なくとも２８日間又はＤＬＴを経験した後に追跡される全ての対象を含む。
パートＡ＋パートＢ
●安全性解析セット（ＳＡＳ）：登録され、試験治療の少なくとも１回の投与を受けた全ての対象。対象は、受けた治療に従って分類され、受けた治療は、少なくとも１回受けた場合はその割り当てられた用量レベル／スケジュール、又は割り当てられた治療が受けられなかった場合は受けた最初の用量レベル／スケジュールとして定義される。ＳＡＳは、安全性データの解析のための主要なセットである。
●最大の解析対象集団（ＦＡＳ）：登録され、ＣＴＸ１３０注入を受け、少なくとも１回のベースライン及び１回のベースライン後スキャン評価を有する全ての対象。ＦＡＳは、臨床効果評価のための主要解析セットである。

【0410】

９．３ 評価項目
９．３．１ 主要評価項目
●パートＡ（用量漸増）：用量規制毒性（ＤＬＴ）として定義される有害事象（ＡＥ）の発生率、及びＲＰＢＤの定義。
●パートＢ（コホート拡大）：中央の放射線関連の独立審査によって評価されるとおり、ＤＬＢＣＬを有する対象に関するＬｕｇａｎｏ効果判定基準（Ｃｈｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３２，３０５９－６８）による（完全奏効［ＣＲ］＋部分奏効［ＰＲ］）に従う奏効率（ＯＲＲ）。

【0411】

９．３．２ 副次的評価項目
８．３．２．１ 有効性
パートＡ：ＰＴＣＬ－ＮＯＳ、ＡＬＣＬ、白血病性及びリンパ腫のＡＴＬＬ、ＡＩＴＬ、及びＤＬＢＣＬを有する対象に関してはＬｕｇａｎｏ効果判定基準（Ｃｈｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３２，３０５９－６８）に従う有効性評価、並びにＳＳ又はＭＦを有する対象に関してはＩＳＣＬ効果判定基準（Ｏｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１）に従う有効性評価。
パートＢ：ＤＬＢＣＬを有する対象に関するＬｕｇａｎｏ効果判定基準（Ｃｈｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３２，３０５９－６８）に従う有効性評価：
●対象最良効果（完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、安定な疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）、又は評価不能（ＮＥ））。
●ＣＲ又はＰＲを達成した対象のパーセンテージとして定義される奏効率（ＯＲＲ）。
●ＣＴＸ１３０注入日から最初の記録された奏効（ＰＲ／ＣＲ）までの間の時間として定義される奏効までの期間（ＴＴＲ）。
●ＰＲ／ＣＲの最初の客観的応答といずれかの原因による疾患進行又は死亡の日の間の時間として定義される奏効期間（ＤｏＲ）。ＰＲ／ＣＲ事象を有した対象についてのみ報告される。
●ＣＴＸ１３０を注入した日と、疾患が進行した日又はいずれかの原因により死亡した日との間の差として定義される無増悪生存期間（ＰＦＳ）。
●ＣＴＸ１３０注入日といずれかの原因による死亡日の間の時間として定義される、全生存期間（ＯＳ）。
●ＣＲ、ＰＲ、又はＳＤを達成した対象のパーセンテージとして定義される、病勢コントロール率（ＤＣＲ）。
●ＣＴＸ１３０注入日とＰＤの日の間の差として定義される無増悪期間（ＴＴＰ）。

【0412】

９．３．２．２ 安全性
●ＡＥの発生率及び重症度並びに臨床的に意義のある臨床検査値異常。

【0413】

９．３．２．３ 薬物動態
●経時的な血中のＣＴＸ１３０のレベル。

【0414】

９．３．２．４ 探索的評価項目（パートＡ及びＢ）
●組織中のＣＴＸ１３０のレベル。
●血中のサイトカイン及び他の組織のレベル。
●抗ＣＴＸ１３０抗体の発生率。
●ＣＴＸ１３０増殖、ＣＲＳ、及び応答に対する抗サイトカイン療法の影響。
●ＣＴＸ１３０療法後の自系又は同種異系造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）の発生率。
●次の抗癌療法の発生率及び種類。
●ＣＴＸ１３０注入日から最初の記録されたＣＲまでの時間として定義される完全奏効（ＣＲ）までの期間。
●ＣＴＸ１３０注入日から疾患進行の最初のエビデンスまでの時間として定義される疾患進行（ＰＤ）までの時間。
●ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ５２などのマーカー、並びにＨＴＬＶ－１プロウイルス量に基づく免疫表現型検査によってモニターされるとおりのＡＴＬＬ細胞の末梢血液レベルの変化。
●効果判定及び中央審査との一致率。
●ＣＴＸ１３０注入日とその後の第１の療法又はいずれかの原因による死亡の日の間の時間として定義されるその後の第１の療法がない生存期間。
●欧州癌研究治療機関（ＥＯＲＴＣ）ＱＬＱ－Ｃ３０、ＥＱ－５Ｄ－５Ｌ質問票、ＦＡＣＴ－Ｇ、ＳＳ及びＭＦのためのＳｋｉｎｄｅｘ－２９質問票、並びにＳＳ及びＭＦのための皮膚科関連の日常生活の質に関する評価指標（ＤＬＱＩ）質問票によって測定されるとおりのＰＲＯにおけるベースラインからの変化。
●ＩＣＦによって評価されるとおりの認知転帰におけるベースラインからの変化。
●他のゲノム、タンパク質、代謝、又は薬力学的評価項目。

【0415】

結果
これまでに本試験に参加した対象全員が、１４日以内に段階１（適格性のスクリーニング）を完了している。適格性の判定基準を満たした後、２名の対象が、段階１を完了して２４時間以内にリンパ球枯渇療法を開始した。全ての適格な対象が、スクリーニング期間（段階１）を完了し、８日未満でＬＤ化学療法を開始し、１名の対象はスクリーニングを完了し、７２時間以内にＬＤ化学療法の投与を開始した。ＬＤ化学療法を受ける１名の対象が既に、ＬＤ化学療法の完了後の５日以内にＣＴＸ１３０のＤＬ１用量の受容まで進行した。

【0416】

これまでこの試験において治療されたどの対象もＤＬＴを示さなかった。同様に、ＤＴＬは、ＲＣＣを有する対象をＣＴＸ１３０を使用して治療する並行した試験において観察されなかった。例えば、２０１９年１１月１３日に出願された米国特許出願第６２／９３４，９６１号明細書及び２０２０年６月４日に出願された米国特許出願第６３／０３４，５５２号明細書を参照されたい。さらに、同種異系ＣＡＲ－Ｔ細胞療法は、治療を受けたヒト対象において、注入後にＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖及び持続を含む所望の薬物動態特性を示した。著しいＣＡＲ Ｔ細胞の分布、増殖及び持続が、ＤＬ１という早期に観察されている。Ｔ_０に対して末梢血液中のＣＴＸ１３０の最大２０倍の増殖が、現在まで評価された１名のＴ細胞リンパ腫対象において観察されており、ＣＴＸ１３０細胞の持続は、注入後の最大１４日までＤＬ１の対象において検出された。ＣＡＲ Ｔ細胞の分布、増殖及び持続の同様のパターンは、対応するＣＴＸ１３０ ＲＣＣ試験において観察され、ＣＴＸ１３０の８７倍の増殖が観察されており、ＣＴＸ１３０細胞は、注入後少なくとも２８日間検出されている。

【0417】

この試験における適格な対象は、大細胞転化を伴うＭＦを有する。最初のＴ細胞リンパ腫対象から得られる結果が下に要約される。
●ＤＬ１用量を受容する対象は、皮膚Ｔ細胞リンパ腫効果判定のためのＯｌｓｏｎ／ＩＳＣＬ判定基準による写真に従って記録されるとおりの皮膚病変の著しい減少を経験した。さらに、同じ対象におけるＣＴＸ１３０注入の４週後のＰＥＴ／ＣＴスキャンは、リンパ節及び皮膚病変の劇的な減少を明らかにし、ほとんどの病変が完全に消失したため、正式の部分代謝効果と認定した。

【0418】

他の実施形態
本明細書に開示される特徴の全ては、任意の組み合わせで組み合わせてもよい。本明細書に開示される各特徴は、同じ、均等な又は同様の目的に役立つ代替的な特徴へと置き換えてもよい。すなわち、明示的に別段の定めをした場合を除き、開示される各特徴は、一般的な一連の均等な又は同様の特徴の単なる一例である。

【0419】

上記の説明から、当業者は、本発明の本質的な特性を容易に把握することができ、その趣旨及び範囲から逸脱することなく、本発明を各種の用途及び条件に適合させるために本発明の種々の変更形態及び修正形態をなし得る。したがって、他の実施形態も請求項の範囲に含まれるものとする。

【0420】

均等物
いくつかの本発明の実施形態を本明細書で説明及び図示してきたが、当業者であれば、本明細書に記載される機能を実行し、且つ／又は結果及び／若しくは１つ以上の利点を得るために、様々な他の手段及び／又は構造を容易に想定するであろう。また、そのような変更形態及び／又は修正形態の各々は、本明細書に記載される本発明の実施形態の範囲内であるとみなされる。より一般的には、当業者であれば、本明細書で説明される全てのパラメーター、寸法、材料及び構成が例示的であることを意図し、実際のパラメーター、寸法、材料及び／又は構成が、本発明の教示が適用される特定の用途に依存することを容易に理解する。当業者は、本明細書に記載された特定の本発明の実施形態に対する多く均等物を、日常の実験のみを用いて認識するか又は確認することが可能である。したがって、上述の実施形態は、単に例として提示されており、また添付の特許請求の範囲及びその均等物の範囲内において、本発明の実施形態は、具体的に説明及び特許請求される以外の別の方法で実践され得ることを理解されたい。本開示の本発明の実施形態は、本明細書で説明される各個別の特徴、システム、物品、材料、キット及び／又は方法を対象とする。加えて、２つ以上のこうした特徴、システム、物品、材料、キット及び／又は方法の任意の組み合わせは、こうした特徴、システム、物品、材料、キット及び／又は方法が相互に矛盾しない場合、本開示の本発明の範囲内に含まれる。

【0421】

本明細書中で定義され、用いられる全ての定義は、辞書の定義、参照により組み込まれる文献中の定義及び／又は定義される用語の普通の意味を超えて優先されるものと理解されたい。

【0422】

本明細書に開示されている全ての参考文献、特許及び特許出願は、それぞれ引用されている主題に関して参照により組み込まれており、場合により文献の全体を包含する場合がある。

【0423】

不定冠詞「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」は、本明細書及び特許請求の範囲において使用される場合、反対に明確に示されない限り、「少なくとも１つ」を意味するものと理解されるべきである。

【0424】

本明細書及び特許請求の範囲で使用するとき、「及び／又は」という表現は、等位結合される要素、すなわち一部の場合に接続的に提示され、他の場合に離接的に提示される要素の「いずれか又は両方」を意味するものとして理解されたい。「及び／又は」とともに列挙される複数の要素は、同じように、すなわちそのように結合された要素の「１つ以上」と解釈されるべきである。「及び／又は」の節によって具体的に特定される要素以外に、具体的に特定された要素に関連するか又は関連しないに関わらず、他の要素が任意選択的に提示され得る。したがって、非限定的な例として、「Ａ及び／又はＢ」に対する参照は、「含む」などのオープンエンド用語とともに使用される場合、一実施形態ではＡのみ（任意選択的にＢ以外の要素を含む）、別の実施形態ではＢのみ（任意選択的にＡ以外の要素を含む）、さらに別の実施形態ではＡ及びＢの両方（任意選択的に他の要素を含む）などを指し得る。

【0425】

本明細書及び特許請求の範囲で使用するとき、「又は」は、上記で定義される「及び／又は」と同じ意味を有するものと理解されるべきである。例えば、リスト中の項目を分離する際、「又は」又は「及び／又は」は、包括的であり、すなわち要素のリストの少なくとも１つを含むが、２つ以上の数及び任意選択的に追加的な列挙されていない項目も含むものと解釈されるべきである。「～の１つのみ」若しくは「～の厳密に１つ」又は特許請求の範囲で使用されるときの「～からなる」などの反対を明らかに示す用語のみが、多数の要素又は要素のリストの厳密に１つの要素の包含を指す。一般に、本明細書で使用する時、用語「又は」は、「いずれか」、「～のうちの１つ」、「～のうち１つのみ」、又は「～のうちの厳密に１つ」などの排他性の用語が先行する場合のみ、排他的代替用語（すなわち、「一方又は他方であるが両方ではない」）を示すと解釈されるものとする。「本質的に～からなる（Ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、特許請求の範囲内で使用される時、特許法の分野で使用されるその通常の意味を有するものとする。

【0426】

本明細書で使用する場合、本明細書及び特許請求の範囲における、１つ以上の要素の列挙に関する「少なくとも１つ」という語句は、要素の列挙内の要素の任意の１つ以上から選択される少なくとも１つの要素であるが、要素の列挙内に具体的に列挙されたあらゆる要素の少なくとも１つを必ずしも含まず、且つ要素の列挙内の要素の任意の組み合わせを必ずしも除外しないことを意味するものと理解すべきである。この定義により、具体的に特定されるそれらの要素に関係するか否かに関わらず、「少なくとも１つ」という語句が意味する要素の列挙内に具体的に特定される要素以外の要素が任意選択的に存在し得ることも可能になる。したがって、非限定的な例として、「Ａ及びＢの少なくとも１つ」（換言すると「Ａ又はＢの少なくとも１つ」、換言すると「Ａ及び／又はＢの少なくとも１つ」は、一実施形態では、任意選択により２つ以上のＡを含み、Ｂが存在しない（及び任意選択によりＢ以外の要素を含む）少なくとも１つを指すことができ、別の実施形態では、任意選択により２つ以上のＢを含み、Ａが存在しない（及び任意選択によりＡ以外の要素を含む）少なくとも１つを指すことができ、さらに別の実施形態では、任意選択により２つ以上のＡを含む少なくとも１つ、且つ任意選択により２つ以上のＢを含む少なくとも１つ（及び任意選択により他の要素を含む）を指すなどであり得る。

【0427】

用語「約」又は「およそ」は、当業者によって決定される特定の値の許容誤差範囲内を意味し、これは、その値が測定又は決定される方法、すなわち測定系の限界に部分的に依存する。例えば、「約」は、当技術分野の慣習による許容標準偏差内にあることを意味し得る。或いは、「約」は、所与の値の最大±２０％、好ましくは最大±１０％、より好ましくは最大±５％、さらにより好ましくは最大±１％の範囲を意味し得る。或いは、特に生物学的系又はプロセスに関して、その用語は、１桁以内、好ましくは２倍以内の値を意味する場合がある。本出願及び特許請求の範囲に特定の値が記載されている場合、特に指示のない限り、用語「約」は、黙示的であり、これに関連して特定の値が許容誤差範囲内にあることを意味する。

【0428】

同様に、明確に反対に示されない限り、複数の工程又は行為を含む、本明細書で特許請求される任意の方法において、この方法の工程又は行為の順序は、必ずしもこの方法の工程又は行為が列挙される順序に限定されないことも理解されるべきである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図4F-4H】

【図4H-4K】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【配列表】

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【国際調査報告】