特表 2023-502602 抗がん剤としてＴＡＣＣ３を標的とするイソオキサゾール誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-01-25

(54)【発明の名称】抗がん剤としてＴＡＣＣ３を標的とするイソオキサゾール誘導体

(51)【国際特許分類】

   C07D 413/12 20060101AFI20230118BHJP

   A61K 31/5377 20060101ALI20230118BHJP

   C07D 413/14 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 31/5386 20060101ALI20230118BHJP

   C07D 498/18 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 31/541 20060101ALI20230118BHJP

   C07D 491/107 20060101ALI20230118BHJP

   C07D 491/048 20060101ALI20230118BHJP

   C07D 471/18 20060101ALI20230118BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230118BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230118BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230118BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20230118BHJP

【ＦＩ】

C07D413/12 CSP

A61K31/5377

C07D413/14

A61K31/5386

C07D498/18

A61K31/541

C07D491/107

C07D491/048

C07D471/18

A61P35/00

A61P35/02

A61P43/00 105

A61P43/00 121

A61K45/00

A61P35/04

A61P43/00 111

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022527677

(86)(22)【出願日】2020-11-13

(85)【翻訳文提出日】2022-06-20

(86)【国際出願番号】 US2020060588

(87)【国際公開番号】W WO2021097352

(87)【国際公開日】2021-05-20

(31)【優先権主張番号】19209120.5

(32)【優先日】2019-11-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】521278243

【氏名又は名称】エーツーエー ファーマシューティカルズ インコーポレーテッド

(71)【出願人】

【識別番号】521278232

【氏名又は名称】オンコキューブ セラピューティクス エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】110002572

【氏名又は名称】弁理士法人平木国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】バノグル，エルデン

(72)【発明者】

【氏名】カリスカン，ブルク

(72)【発明者】

【氏名】サヒン，オズグル

(72)【発明者】

【氏名】レンゲルリ，デニズ

(72)【発明者】

【氏名】アクブルト，オズゲ

(72)【発明者】

【氏名】リム，チェミン

(72)【発明者】

【氏名】クルス，エマニュエル

(72)【発明者】

【氏名】ヴェンパティ，スリダー

(72)【発明者】

【氏名】イビス，クブラ

【テーマコード（参考）】

4C050

4C063

4C065

4C072

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C050AA01

4C050AA04

4C050BB02

4C050BB04

4C050BB07

4C050CC02

4C050CC15

4C050CC16

4C050EE01

4C050FF01

4C050GG01

4C050HH04

4C063AA01

4C063AA03

4C063BB01

4C063BB02

4C063BB09

4C063CC51

4C063CC54

4C063DD12

4C063DD29

4C063EE01

4C065AA09

4C065BB01

4C065CC09

4C065DD01

4C065EE02

4C065HH01

4C065JJ01

4C065KK01

4C065LL01

4C065PP03

4C065PP11

4C065PP16

4C072AA03

4C072BB03

4C072CC01

4C072CC11

4C072EE07

4C072FF03

4C072FF10

4C072GG01

4C072HH02

4C072HH07

4C084AA19

4C084MA52

4C084NA14

4C084ZB26

4C084ZB27

4C084ZC01

4C084ZC41

4C084ZC75

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086AA04

4C086BC67

4C086BC73

4C086BC88

4C086CB02

4C086CB22

4C086GA07

4C086GA08

4C086GA09

4C086GA12

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA52

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC01

4C086ZC41

4C086ZC75

(57)【要約】

一態様では、本開示は、ＴＡＣＣ３を阻害することができる化合物および組成物に関する。別の態様では、本開示は、ＴＡＣＣ３媒介性疾患および障害を治療する方法に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）の化合物、

【化1】

またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｘ_１が、ＮまたはＣＲ_６であり、
Ｘ_２が、ＮまたはＣＲ_３であり、
Ｒ_１が、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ_２が、Ｈまたはアルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_６が、各々独立してＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アシル、アセチル、エステル、チオエステル、アルコキシ、ホスホリル、アミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、アルキルチオ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、またはスルホンアミドであり、
Ｒ_５が、ヘテロシクリル、アルキル、またはアミノである、化合物。

【請求項2】

前記化合物が、

【化2】

ではない、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｒ_１が、アリール（例えば、フェニル）である、請求項１または２に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ_１が、ヘテロアリール（例えば、ベンゾフラン、またはピリミジニル）である、請求項１または２に記載の化合物。

【請求項5】

Ｒ_１が、ヘテロシクリル（例えば、ベンゾジオキソールまたはジヒドロベンゾフラン）である、請求項１または２に記載の化合物。

【請求項6】

Ｒ_１が、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アシル、アセチル、エステル、チオエステル、アルコキシ、ホスホリル、アミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、アルキルチオ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アルキルスルホニル、またはスルホンアミドで置換されている、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項7】

Ｒ_１が、アルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、フルオロエチル、またはトリフルオロメチル）、アルキルオキシ（例えば、メトキシ、トリフルオロメチルオキシ、ジフルオロメチルオキシ、エトキシ、またはプロピルオキシ）、アルキルチオ（例えば、メチルチオ）、アラルキルオキシ（例えば、ベンジルオキシ）、ヒドロキシル、ハロ（例えば、フルオロまたはクロロ）、またはアミノ（例えば、ジメチルアミノアルキル）で置換されている、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項8】

Ｒ_１が、ハロ（例えば、フルオロ）で置換されている、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項9】

Ｒ_１が、アルキルオキシ（例えば、メトキシ）で置換されている、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項10】

Ｒ_１が、アルキル（例えば、メチル、エチル、またはトリフルオロメチル）で置換されている、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項11】

Ｒ_１が、１つのハロ（例えば、Ｆ）で置換されている、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項12】

前記ハロ（例えば、Ｆ）が、イソオキサゾールに対してパラである、請求項１１に記載の化合物。

【請求項13】

前記ハロ（例えば、Ｆ）が、イソオキサゾールに対してオルトである、請求項１１に記載の化合物。

【請求項14】

前記ハロ（例えば、Ｆ）が、イソオキサゾールに対してメタである、請求項１１に記載の化合物。

【請求項15】

Ｒ_１が、２つのハロ（例えば、Ｆ）で置換されている、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項16】

１つのハロ（例えば、Ｆ）が、イソオキサゾールに対してメタであり、１つのハロ（例えば、Ｆ）が、前記イソオキサゾールに対してオルトである、請求項１５に記載の化合物。

【請求項17】

Ｒ_１が、アルコキシ（例えば、メトキシ）で置換されている、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項18】

前記アルコキシ（例えば、メトキシ）が、イソオキサゾールに対してパラである、請求項１７に記載の化合物。

【請求項19】

前記アルコキシ（例えば、メトキシ）が、イソオキサゾールに対してオルトである、請求項１７に記載の化合物。

【請求項20】

前記アルコキシ（例えば、メトキシ）が、イソオキサゾールに対してメタである、請求項１７に記載の化合物。

【請求項21】

Ｒ_１が、１つのアルコキシ（例えば、メトキシ）および１つのハロ（例えば、Ｆ）で置換されている、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項22】

前記アルコキシ（例えば、メトキシ）が、イソオキサゾールに対してパラであり、前記Ｆが、前記イソオキサゾールに対してメタである、請求項２１に記載の化合物。

【請求項23】

前記アルコキシ（例えば、メトキシ）が、イソオキサゾールに対してパラであり、前記Ｆが、前記イソオキサゾールに対してオルトである、請求項２１に記載の化合物。

【請求項24】

前記ハロ（例えば、Ｆ）が、イソオキサゾールに対してパラであり、前記アルコキシ（例えば、メトキシ）が、前記イソオキサゾールに対してメタである、請求項２１に記載の化合物。

【請求項25】

Ｒ_１が、アルコキシ（例えば、メトキシ）および２つのハロ（例えば、Ｆ）で置換されている、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項26】

前記アルコキシ（例えば、メトキシ）が、イソオキサゾールに対してパラであり、両方のハロ（例えば、Ｆ）が、前記イソオキサゾールに対してメタである、請求項２５に記載の化合物。

【請求項27】

前記アルコキシ（例えば、メトキシ）が、イソオキサゾールに対してパラであり、１つのハロ（例えば、Ｆ）が、前記イソオキサゾールに対してメタであり、１つのハロ（例えば、Ｆ）が、前記イソオキサゾールに対してオルトである、請求項２５に記載の化合物。

【請求項28】

Ｒ_２が、アルキル（例えば、メチルまたはエチル）である、請求項１～２７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項29】

Ｒ_２が、アミノ（例えば、ジメチルアミノまたはジエチルアミノ）、またはニトリルで置換されている、請求項１～２８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項30】

Ｒ_２が、Ｈである、請求項１～２７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項31】

Ｘ_１が、Ｎである、請求項１～３０のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項32】

Ｘ_１が、ＣＲ_６である、請求項１～３０のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項33】

Ｒ_６が、Ｈである、請求項３２に記載の化合物。

【請求項34】

Ｘ_２が、Ｎである、請求項１～３３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項35】

Ｘ_２が、ＣＲ_３である、請求項１～３３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項36】

Ｒ_３が、Ｈまたはハロ（例えば、フルオロまたはクロロ）である、請求項３５に記載の化合物。

【請求項37】

Ｒ_４が、アルキル（例えば、メチル）である、請求項１～３６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項38】

Ｒ_５が、ヘテロシクリル（例えば、アゼチジニル、モルホリノ、ピロリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、オキサアザビシクロオクタニル、オキサアザビシクロヘプトニル（ｏｘａａｚａｂｉｃｙｃｌｏｈｅｐｔｎｙｌ）、チオモルホリノ、チオモルホリノジオキシド、ヘキサヒドロフロピロリル、またはアザビシクロヘキサニル）である、請求項１～３７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項39】

Ｒ_５が、６員ヘテロシクリルであり、サイクルの骨格が、１つの窒素を含有する、請求項１～３８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項40】

Ｒ_５が、６員ヘテロシクリルであり、サイクルの骨格が、１つの窒素および１つの酸素を含有する、請求項１～３８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項41】

Ｒ_５が、７員ヘテロシクリルであり、サイクルの骨格が、１つの窒素を含有する、請求項１～３８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項42】

Ｒ_５が、７員ヘテロシクリルであり、サイクルの骨格が１つの窒素および１つの酸素を含有する、請求項１～３８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項43】

Ｒ_５が、８員ヘテロシクリルであり、サイクルの骨格が、１つの窒素を含有する、請求項１～３８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項44】

Ｒ_５が、８員ヘテロシクリルであり、サイクルの骨格が１つの窒素および１つの酸素を含有する、請求項１～３８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項45】

Ｒ_５が、窒素含有ヘテロシクリルであり、前記窒素が、Ｒ_４置換基を有するアリールまたはヘテロアリール環に直接結合している、請求項１～３８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項46】

Ｒ_５が、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アシル、アセチル、エステル、チオエステル、アルコキシ、ホスホリル、アミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、アルキルチオ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、またはスルホンアミドで置換されている、請求項１～４５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項47】

Ｒ_５が、エステル（例えば、エチルエステル）、カルボキシル、アルキル（例えば、メチルまたはトリフルオロメチル）、ヒドロキシアルキル（例えば、ヒドロキシエチル）、ハロ（例えば、フルオロ）、シクロアルキル（例えば、シクロプロピルまたはシクロブチル）、またはヘテロシクリル（例えば、オキセトニル（ｏｘｅｔｎｙｌ）またはテトラヒドロフラニル）で置換されている、請求項１～４６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項48】

Ｒ_５が、ハロ（例えば、フルオロ）で置換されている、請求項１～４７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項49】

Ｒ_５が、２つのアルキル部分（例えば、２つのメチル部分）で置換されている、請求項１～４８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項50】

Ｒ_５が、２，６－ジメチルモホリン（ｄｉｍｅｔｈｙｌｍｏｐｈｏｌｉｎｅ）、４－メチルピペリジン、または４－（トリフルオロメチル）ピペリジンである、請求項１～３８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項51】

Ｒ_５が、アミノである、請求項１～３７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項52】

Ｒ_５が、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アシル、アセチル、エステル、チオエステル、アルコキシ、ホスホリル、アミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、アルキルチオ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、スルホンアミド、シクロアルキル、またはヘテロシクリル）で置換されている、請求項５１に記載の化合物。

【請求項53】

Ｒ_５が、アルキル（例えば、ジフルオロエチル、またはイソブチル、アルキルオキシアルキル（例えば、メチルオキシエチル）、ヒドロキシアルキル（例えば、ヒドロキシエチル）、シクロアルキル（例えば、シクロプロピル）、またはヘテロシクリル（例えば、ピラニル）で置換されている、請求項５１または５２に記載の化合物。

【請求項54】

前記化合物が、式ＩＩによって表される構造を有し、

【化3】

式中、
Ｒ_１が、非置換フェニルもしくはｏ－、ｍ－、ｐ－ＣＨ_３、Ｃ_２Ｈ_５、ＣＨ（ＣＨ_３）_２、ＯＣＨ_３、ＯＣ_２Ｈ_５、ＯＣ_３Ｈ_７、ＳＣＨ_３、ＣＦ_２ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＯＣＨＦ_２、Ｎ（ＣＨ_３）_２、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ一置換もしくは二置換フェニル、ピリジル、ベンジルオキシまたはピペロニルからなる群から選択される環であり、
Ｒ_２が、ＨまたはＣＨ_３からなる群から選択され、
Ｒ_３が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌからなる群から選択され、
Ｒ_４が、ＨまたはＣＨ_３からなる群から選択され、
Ｒ_５が、モルホリン、２，６－ジメチルモルホリン、チオモルホリン、チオモルホリン１，１－ジオキシド、モルホリン－４－アミン、ピペリジン、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－アミン、ピペリジン－１－アミン、４－フルオロピペリジン、４，４－ジフルオロピペリジン、４－メチルピペリジン、４－（トリフルオロメチル）ピペリジン、ピペラジン、Ｎ－メチルピペラジン、ピロリジン、２－（４－ピペリジニル）エタノール、２－（１－ピペラジニル）エタノール、４－ピペリジンカルボン酸、エチル４－ピペリジンカルボキシレート、（１Ｒ，４Ｒ）－２－オキサ－５－アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン、（１Ｓ，４Ｓ）－２－オキサ－５－アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン、３－オキサ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタンまたは８－オキサ－３－アザビシクロ［３．２．１］オクタンからなる群から選択されルアミンであり、
Ｘ_１が、ＣＨもしくはＮである、
請求項１に記載の化合物、ならびに／またはその薬学的に許容される塩および／もしくは溶媒和物。

【請求項55】

Ｒ_１が、フェニルである、請求項５４に記載の化合物。

【請求項56】

Ｒ_１が、ピリジルである、請求項５４に記載の化合物。

【請求項57】

Ｒ_１が、ベンジルオキシである、請求項５４に記載の化合物。

【請求項58】

Ｒ_１が、ピペロニルである、請求項５４に記載の化合物。

【請求項59】

Ｒ_１が、ＣＨ_３、Ｃ_２Ｈ_５、ＣＨ（ＣＨ_３）_２、ＯＣＨ_３、ＯＣ_２Ｈ_５、ＯＣ_３Ｈ_７、ＳＣＨ_３、ＣＦ_２ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＯＣＨＦ_２、Ｎ（ＣＨ_３）_２、Ｆ、Ｃｌ、またはＯＨで置換されている、請求項５４～５８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項60】

Ｒ_１が、１つのＦで置換されている、請求項５４～５８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項61】

前記Ｆが、イソオキサゾールに対してパラである、請求項６０に記載の化合物。

【請求項62】

前記Ｆが、イソオキサゾールに対してオルトである、請求項６０に記載の化合物。

【請求項63】

前記Ｆが、イソオキサゾールに対してメタである、請求項６０に記載の化合物。

【請求項64】

Ｒ_１が、２つのＦで置換されている、請求項５４～５８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項65】

第１のＦが、イソオキサゾールに対してメタであり、第２のＦが、前記イソオキサゾールに対してオルトである、請求項６４に記載の化合物。

【請求項66】

Ｒ_１が、ＯＣＨ_３で置換されている、請求項５４～６５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項67】

前記ＯＣＨ_３が、イソオキサゾールに対してパラである、請求項６６に記載の化合物。

【請求項68】

前記ＯＣＨ_３が、イソオキサゾールに対してオルトである、請求項６６に記載の化合物。

【請求項69】

前記ＯＣＨ_３が、イソオキサゾールに対してメタである、請求項６６に記載の化合物。

【請求項70】

Ｒ_１が、１つのＯＣＨ_３および１つのＦで置換されている、請求項５４～５８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項71】

前記ＯＣＨ_３が、イソオキサゾールに対してパラであり、前記Ｆが、前記イソオキサゾールに対してメタである、請求項７０に記載の化合物。

【請求項72】

前記ＯＣＨ_３が、イソオキサゾールに対してパラであり、前記Ｆが、前記イソオキサゾールに対してオルトである、請求項７０に記載の化合物。

【請求項73】

前記Ｆが、イソオキサゾールに対してパラであり、前記ＯＣＨ_３が、前記イソオキサゾールに対してメタである、請求項７０に記載の化合物。

【請求項74】

Ｒ_１が、ＯＣＨ_３および２つのＦで置換されている、請求項５３～５８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項75】

前記ＯＣＨ_３が、イソオキサゾールに対してパラであり、両方のＦが、前記イソオキサゾールに対してメタである、請求項７４に記載の化合物。

【請求項76】

前記ＯＣＨ_３が、イソオキサゾールに対してパラであり、１つのＦが、前記イソオキサゾールに対してメタであり、１つのＦが、前記イソオキサゾールに対してオルトである、請求項７４に記載の化合物。

【請求項77】

Ｒ_２が、Ｈである、請求項５３～７６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項78】

Ｒ_２が、ＣＨ_３である、請求項５３～７６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項79】

Ｒ_３が、Ｈである、請求項５３～７６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項80】

Ｒ_３が、Ｆである、請求項５３～７６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項81】

Ｒ_３が、Ｃｌである、請求項５３～７６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項82】

Ｒ_５が、モルホリンである、請求項５３～８１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項83】

Ｒ_５が、ピペリジンである、請求項５３～８１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項84】

Ｒ_５が、４－フルオロピペリジンである、請求項５３～８１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項85】

Ｒ_５が、４，４－ジフルオロピペリジンである、請求項５３～８１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項86】

Ｒ_５が、３－オキサ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタンである、請求項５３～８１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項87】

Ｒ_５が、８－オキサ－３－アザビシクロ［３．２．１］オクタンである、請求項５３～８１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項88】

Ｘ_１が、Ｃである、請求項５３～８７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項89】

Ｘ_１が、Ｎである、請求項５３～８７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項90】

前記化合物が、
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（３－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）－３－フェニルイソオキサゾール－５－アミン
３－（４－エトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）－３－（４－プロポキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－フルオロフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－クロロフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）－３－（ｐ－トリル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－エチルフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－イソプロピルフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）－３－（４－（トリフルオロメチル）フェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－（１，１－ジフルオロエチル）フェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－（ジフルオロメトキシ）フェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）－３－（４－（トリフルオロメトキシ）フェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－（メチルチオ）フェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－（ジメチルアミノ）フェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（３，４－ジメトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２，３－ジフルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－イル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（６－メトキシピリジン－３－イル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
４－（５－（（２－モルホリノピリミジン－４－イル）アミノ）イソオキサゾール－３－イル）フェノール
３－（４－（ベンジルオキシ）フェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（３－オキサ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（８－オキサ－３－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（（１Ｓ，４Ｓ）－２－オキサ－５－アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－５－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（（１Ｒ，４Ｒ）－２－オキサ－５－アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－５－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（４－フルオロピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（４，４－ジフルオロピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－チオモルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
４－（４－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）チオモルホリン１，１－ジオキシド
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（ピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－メチルピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－（トリフルオロメチル）ピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（ピロリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
２－（１－（４－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－４－イル）エタン－１－オール
２－（４－（４－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オール
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（ピペラジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
エチル１－（４－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－４－カルボキシレート
１－（４－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－４－カルボン酸
Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）－Ｎ^２－モルホリノピリミジン－２，４－ジアミン
Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）－Ｎ^２－（ピペリジン－１－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン
Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）－Ｎ^２－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン
Ｎ－（５－クロロ－２－（４－フルオロピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（５－フルオロ－２－（４－フルオロピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（４－フルオロピペリジン－１－イル）－６－メチルピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－メチル－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－（ジメチルアミノ）フェニル）－Ｎ－（２－（４－フルオロピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－フルオロピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（３－オキサ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（ピロリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ^４－（３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）－Ｎ^２－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン
３－（２，３－ジヒドロベンゾフラン－５－イル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２，２－ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－イル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ^２－シクロプロピル－Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン
Ｎ^２－イソブチル－Ｎ^４－（３－（４^－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン
Ｎ^２－（２－メトキシエチル）－Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン
Ｎ^１，Ｎ^１－ジエチル－Ｎ^２－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）－Ｎ^２－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）エタン－１，２－ジアミン
Ｎ^１－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）－Ｎ^２，Ｎ^２－ジメチル－Ｎ１－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）エタン－１，２－ジアミン
２－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）（２－モルホリノピリミジン－４－イル）アミノ）アセトニトリル
３－（５－メトキシピリジン－２－イル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（４－モルホリノ－１，３，５－トリアジン－２－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ^２－（２，２－ジフルオロエチル）－Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン
２－（（４－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）アミノ）エタン－１－オール
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２，３－ジフルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（３，５－ジフルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）－３－（３，４，５－トリメトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（ベンゾフラン－５－イル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２，５－ジフルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２，５－ジフルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）－Ｎ^２－メチルピリミジン－２，４－ジアミン
３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－（トリフルオロメチル）ピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－メチルピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－（トリフルオロメチル）ピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－メチルピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（２，２，６，６－テトラメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（３，３－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（２，２－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（３，５－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（２－メチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（３－メチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（２－（トリフルオロメチル）モルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（テトラヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｃ］ピロール－５（３Ｈ）－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（３－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（７－アザスピロ［３．５］ノナン－７－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（４，４－ジメチルピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（２－オキサ－６－アザスピロ［３．３］ヘプタン－６－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（１－オキサ－７－アザスピロ［３．５］ノナン－７－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（６－アザスピロ［２．５］オクタン－６－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（３－メチル－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（２，２－ジフルオロモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（２－オキサ－５－アザビシクロ［２．２．２］オクタン－５－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（３－（トリフルオロメチル）モルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（６－オキサ－３－アザビシクロ［３．１．１］ヘプタン－３－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（２－オキサ－５－アザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－５－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（４－オキサ－７－アザスピロ［２．５］オクタン－７－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（７－オキサ－４－アザスピロ［２．５］オクタン－４－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（２－オキサ－８－アザスピロ［４．５］デカン－８－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（２－オキサ－６－アザスピロ［３．４］オクタン－６－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（２－オキサ－７－アザスピロ［３．５］ノナン－７－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（２－オキサ－７－アザスピロ［４．４］ノナン－７－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（２，２，６，６－テトラフルオロモルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（６－アザビシクロ［３．１．１］ヘプタン－６－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（３－メチル－６－アザビシクロ［３．１．１］ヘプタン－６－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（３，５－ジメチルピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－イソプロピルピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（４－（ジフルオロメチル）ピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（６－アザスピロ［３．５］ノナン－６－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
Ｎ－（２－（２－アザスピロ［３．５］ノナン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン
３－（２－クロロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン
ならびに／またはその薬学的に許容される塩および／もしくは溶媒和物からなる群から選択される、請求項１または５４に記載の化合物。

【請求項91】

前記化合物が、

【化4-1】

【化4-2】

【化4-3】

からなる群から選択される、請求項１または５４に記載の化合物。

【請求項92】

前記化合物が、

【化5-1】

【化5-2】

【化5-3】

【化5-4】

またはその薬学的に許容される塩から選択される、請求項１に記載の化合物。

【請求項93】

請求項１～９２のいずれか一項に記載の化合物、および薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。

【請求項94】

請求項１～９２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、前記対象におけるＴＡＣＣ３媒介性疾患または障害を治療する、方法。

【請求項95】

前記ＴＡＣＣ３媒介性疾患または障害が、がんである、請求項９４に記載の方法。

【請求項96】

前記がんが、乳がん、結腸がん、メラノーマがん、肺がん、中枢神経系がん、卵巣がん、白血病がん、腎がんまたは前立腺がんである、請求項９４または９５に記載の方法。

【請求項97】

前記がんが、ＮＣＩ－６０パネルから選択されるがんである、請求項９４～９６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項98】

前記化合物が、前記対象に経口投与される、請求項９４～９７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項99】

ＴＡＣＣ３媒介性疾患または障害の治療に使用するための、請求項１～９２のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項100】

前記ＴＡＣＣ３媒介性疾患または障害が、がんである、請求項９９に記載の使用のための化合物。

【請求項101】

前記がんが、乳がん、結腸がん、メラノーマがん、肺がん、中枢神経系がん、卵巣がん、白血病がん、腎がんまたは前立腺がんである、請求項９９または１００に記載の使用のための化合物。

【請求項102】

前記がんが、前記ＮＣＩ－６０パネルから選択されるがんである、請求項９９または１００に記載の使用のための化合物。

【請求項103】

前記化合物が、経口投与用である、請求項９９～１０２のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項104】

がんの治療に使用するための、請求項１～９２のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項105】

抗がん剤が、ＴＡＣＣ３を発現するがんを標的とする、請求項１０４に記載の抗がん剤。

【請求項106】

前記抗がん剤が、ＴＡＣＣ３タンパク質阻害剤である、請求項１０４または１０５に記載の化合物。

【請求項107】

ＴＡＣＣ３を発現する前記標的化がんが、前記ＮＣＩ－６０パネルに記載の乳がん、結腸がん、メラノーマがん、肺がん、中枢神経系がん、卵巣がん、白血病がん、腎がん、および前立腺がん細胞株である、請求項１０６に記載の抗がん剤。

【請求項108】

前記抗がん剤が、経口投与用である、請求項１０４～１０７のいずれか一項に記載の抗がん剤。

【請求項109】

前記化合物が、３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物５）である、請求項１０４に記載の化合物。

【請求項110】

前記化合物が、有糸分裂停止、アポトーシスおよびＤＮＡ損傷を誘発する構造を有することを特徴とする、請求項１０９に記載の使用のための化合物。

【請求項111】

請求項１１０に記載の化合物は、長期の有糸分裂、アポトーシス細胞死、およびＤＮＡ損傷をさらにもたらす重度の紡錘体欠損を誘発すると、ＳＡＣを活性化することによって機能する。

【請求項112】

請求項１１１に記載の化合物は、ＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３発がん性融合を保有するがん細胞の成長を阻害する。

【請求項113】

治療有効量の請求項１～９２に記載の化合物ならびに／またはその薬学的に許容される塩および／もしくは溶媒和物と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。

【請求項114】

請求項１１３に記載の化合物を含有し、組成物が、薬学的に許容される化学療法剤または標的療法剤をさらに含む、組成物。

【請求項115】

がん治療を必要とする個人のための化学療法剤もしくは標的療法剤または薬物の治療的組み合わせであって、請求項１～９２のいずれか一項に記載の抗がん剤が、この治療的組み合わせの一部である、治療的組み合わせ。

【請求項116】

薬剤として使用するための、請求項１～９２のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項117】

腫瘍の成長および転移の阻害および／または予防に使用するための、請求項１～９２のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項118】

前記がんが、ＴＡＣＣ３の阻害に応答するがんである、請求項１１７に記載の化合物。

【請求項119】

標的化がんが、乳がん、結腸がん、メラノーマがん、肺がん、中枢神経系の群から選択される、請求項１１８に記載の化合物。

【請求項120】

これに限定されないが本明細書に記載のアミン誘導体の、これに限定されないが表１からの中間体化合物との反応を含む、請求項１～９０のいずれか一項に記載の化合物を合成するための、方法。

【請求項121】

前記方法が、スキームＩによって表されるステップ、

【化6】

またはその薬学的に許容される塩を含み、式中、
Ｘ_１が、ＮまたはＣＲ_６であり、
Ｘ_２が、ＮまたはＣＲ_３であり、
Ｒ_１が、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ_２が、Ｈまたはアルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_６が、各々独立してＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アシル、アセチル、エステル、チオエステル、アルコキシ、ホスホリル、アミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、アルキルチオ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、またはスルホンアミドであり、
Ｒ_５が、ヘテロシクリル、アルキル、またはアミノであり、
Ｒ_５１が、ハロであり、
Ｒ_５２が、ヘテロシクリルまたはアルキルであり、
Ｘ^１０が、塩基あり、
Ｘ^１１が、貴金属触媒であり、
Ｘ^１２が、ホスフィンリガンドである、請求項１２０に記載の方法。

【請求項122】

スキームＩによって表される請求項１～９２のいずれか一項に記載の化合物、

【化7】

またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、式中、
Ｘ_１が、ＮまたはＣＲ_６であり、
Ｘ_２が、ＮまたはＣＲ_３であり、
Ｒ_１が、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ_２が、Ｈまたはアルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_６が、各々独立してＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アシル、アセチル、エステル、チオエステル、アルコキシ、ホスホリル、アミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、アルキルチオ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、またはスルホンアミドであり、
Ｒ_５が、ヘテロシクリル、アルキル、またはアミノであり、
Ｒ_５１が、ハロであり、
Ｒ_５２が、ヘテロシクリルまたはアルキルであり、
Ｘ^１０が、塩基であり、
Ｘ^１１が、貴金属触媒であり、
Ｘ^１２が、ホスフィンリガンドである、方法。

【請求項123】

前記塩基が、炭酸塩、酸化物、三級アミン、二級アミン、または水素化物である、請求項１２１または１２２に記載の方法。

【請求項124】

前記酸化物が、アルコキシド（例えば、ｔｅｒｔ－ブトキシド）である、請求項１２３に記載の方法。

【請求項125】

前記三級アミンが、三級アルキルアミン（例えば、ジイソプロピルエチルアミン）である、請求項１２３に記載の方法。

【請求項126】

前記水素化物が、金属水素化物（例えば、水素化ナトリウム）である、請求項１２３に記載の方法。

【請求項127】

前記炭酸塩が、金属炭酸塩（例えば、炭酸セシウム）である、請求項１２３に記載の方法。

【請求項128】

前記貴金属触媒が、パラジウム触媒（例えば、酢酸パラジウムＩＩ）である、請求項１２１～１２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項129】

ホスフィン触媒が、アリールホスフィン（例えば、トリフェニルホスフィン）である、請求項１２１～１２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項130】

ホスフィン触媒が、キサントホスである、請求項１２１～１２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項131】

前記方法が、溶媒をさらに含む、請求項１２１～１３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項132】

前記溶媒が、三級ブタノール、ジメチルアセトアミド、またはジオキサンである、請求項１３１に記載の方法。

【請求項133】

前記方法が、加熱をさらに含む、請求項１２１～１３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項134】

前記方法が、不活性雰囲気下で行われる、請求項１２１～１３３のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、２０１９年１１月１４日に出願されたＥＰ特許出願第１９２０９１２０．５号の利益を主張し、前述の出願の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

本開示は、酸性コイルドコイルタンパク質３（ＴＡＣＣ３）阻害剤の形質転換として有用な式（Ｉ）の置換化合物、そのような化合物の医薬組成物、その調製方法および使用に関する。より具体的には、ＴＡＣＣ３阻害剤は、乳がん、白血病がん、肺がん、結腸がん、メラノーマがん、前立腺がん、卵巣がん、腎がんおよびＣＮＳがんを含むＴＡＣＣ３媒介性がんを治療するまたは回復させるのに有用である。

【化1】

【背景技術】

【0003】

がんは、制御されていない細胞分裂を特徴とする複雑な疾患である。がん型の中で、乳がんは女性の間で最も一般的ながんであり、がんによる死亡の主な理由の１つである。腫瘍生物学の理解により、患者の生存率を高めるために標的を定めた医学的治療法が継続的に開発されてきた。

【0004】

食品医薬品局（ＦＤＡ）は、乳がんの治療に使用する約２ダースの薬物を承認しているが、依然として世界中で毎年５０万人の乳がんによる死亡がある。特に、現在利用可能な化学療法剤の副作用を考慮すると、毒性の少ない標的療法の開発が近年の主要な焦点となっている。がんは、体の他の部分または悪性腫瘍に侵入または拡散する可能性のある異常で制御不能な細胞成長として特徴付けられるため、腫瘍細胞の増殖および生存に関与する特定の高分子の機能を標的にして阻害する薬物または物質は、乳がんを標的とした治療に使用される。

【0005】

微小管の再編成は、細胞分裂中の重要なステップであるため、このプロセスを妨害する薬物ががん研究の主要な焦点となっている。細胞分裂阻害剤は、中期から後期への移行を防ぐ紡錘体形成チェックポイント（ＳＡＣ）を活性化することにより、微小管の重合ダイナミクスを破壊する。その結果、細胞は分裂を停止し、これらの有糸分裂的に停止した細胞は最終的に死滅する。有糸分裂イベントのメカニズムの継続的な調査は、新しい標的タンパク質候補および／または経路につながることがあり得、がん患者により効果的な治療選択をもたらすために非常に重要である。ビンカアルカロイド、マイタンシノイド、タキサンなどの微小管阻害剤は、そのような薬物の例であり、様々な腫瘍の化学療法剤として広く使用されている（Ｍａｒｚｏ＆Ｎａｖａｌ，２０１３）。しかしながら、これらの薬物に関する重大な懸念は、深刻な副作用を引き起こす非腫瘍形成性細胞に対する薬物の毒性である。

【0006】

薬物耐性もまた、これらの薬物に対する患者の反応を非常に予測不可能なままにする別の大きな問題である（Ｇａｓｃｏｉｇｎｅ＆Ｔａｙｌｏｒ，２００９）。これらの問題を克服し、化学療法の反応を改善するために、有糸分裂特異的キナーゼおよび微小管モータータンパク質を標的とする抗有糸分裂、がん特異的治療法が特定された（Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ－Ｂｒａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。重要なことに、リン酸化は、細胞周期の調節および紡錘体形成における重要なステップであるため、これらのプロセスで役割を果たすキナーゼは、潜在的な標的として長い間研究されてきた。これらの中で、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）、オーロラキナーゼおよびポロ様キナーゼ（ＰＬＫ）に対する特異的阻害剤が開発され、臨床的に試験されている（Ｓａｎｃｈｅｚ－Ｍａｒｔｉｎｅｚ，Ｇｅｌｂｅｒｔ，Ｌａｌｌｅｎａ，＆ｄｅ Ｄｉｏｓ，２０１５、Ｓｔｒｅｂｈａｒｄｔ＆Ｕｌｌｒｉｃｈ，２００６、Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１７）。微小管阻害剤と比較して、これらの抗有糸分裂薬はいずれも、毒性プロファイルが低いにもかかわらず、目覚ましい臨床転帰を示さず、臨床効率が限定されていた（Ｃｈａｎ，Ｋｏｈ，＆Ｌｉ，２０１２）。したがって、分裂がん細胞を選択的かつ効果的に標的とする代替の標的分子は、解明および開発されていないままである。

【0007】

ＴＡＣＣメンバーの１つであるＴＡＣＣ３は、非キナーゼ微小管結合タンパク質であり、中心体の調節に重要な役割を果たし、微小管の安定性を確保する（Ｓｉｎｇｈ，Ｔｈｏｍａｓ，Ｇｉｒｅｅｓｈ，＆Ｍａｎｎａ，２０１４）。このＴＡＣＣ３遺伝子はまた、ＴＡＣＣ３中心体微小管の核形成において重要な役割を有する。そのレベル上昇は、前立腺がん、肝細胞がん、非小細胞肺がん、および乳がんなどを含む多くのがん型で観察されている。したがって、ＴＡＣＣ３のノックダウンは、腎細胞がん（ＲＣＣ）の腫瘍形成および細胞成長を抑制する（Ｇｕｏ＆Ｌｉｕ，２０１８）。ＴＡＣＣ３機能の破壊はまた、有糸分裂停止につながる多極紡錘体形成（Ｙａｏ ｅｔ ａｌ．，２０１２）、カスパーゼ依存性アポトーシスをもたらす染色体不整列（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００７）、および場合によっては、老化（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．，２０１０）を含む一連の異なる細胞転帰を生じさせる。これらの研究は、ＴＡＣＣ３ががん細胞の紡錘体形成に参加する重要な分子であることを示しており、これががん標的療法の重要かつ潜在的な標的となっている。

【0008】

小分子ＴＡＣＣ３阻害剤であるＫＨＳ１０１は、ラットにおける神経分化を促進することが最初に同定された（Ｗｕｒｄａｋ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。膠芽細胞腫（ＧＢＭ）異種移植片の腫瘍成長は、ＫＨＳ１０１治療によって抑制されたが（Ｐｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１８）、全身安定性が低く、作業量が多いため、診療所に移行するには薬理学的に最適化する必要がある（Ｗｕｒｄａｋ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。別のＴＡＣＣ３阻害剤であるＳＰＬ－Ｂは、卵巣がん細胞の中心体微小管核形成を阻害し、卵巣がん異種移植片の腫瘍成長を抑制することが示されている（Ｙａｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。結論として、現在利用可能な２種類のＴＡＣＣ３阻害剤、ＫＨＳ１０１およびＳＰＬ－Ｂは、それぞれ、膠芽細胞腫および卵巣がん異種移植片における腫瘍成長を低減することを示した。しかしながら、これらの阻害剤はいずれも、効力が低いかまたは全身安定性が低いため、いまだに臨床段階に達していない。

【0009】

上記の証拠はすべて、がんにおけるＴＡＣＣ３の重要な役割を裏づけており、ＴＡＣＣ３機能の阻害は、様々なヒトがんの治療または改善に効果的である。さらに、ヒト用医薬品としての使用に適した薬物動態学的および薬力学的特性を有するＴＡＣＣ３阻害剤化合物の必要性が依然として残っている。

【発明の概要】

【0010】

一態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物、

【化2】

またはその薬学的に許容される塩に関し、式中、
Ｘ_１は、ＮまたはＣＲ_６であり、
Ｘ_２は、ＮまたはＣＲ_３であり、
Ｒ_１は、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ_２は、Ｈまたはアルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_６は、各々独立してＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アシル、アセチル、エステル、チオエステル、アルコキシ、ホスホリル、アミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、アルキルチオ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、またはスルホンアミドであり、
Ｒ_５は、ヘテロシクリル、アルキル、またはアミノである。

【0011】

別の態様では、本開示は、本明細書に開示される化合物を用いるＴＡＣＣ３媒介性疾患および障害を治療する方法に関する。特定の実施形態では、ＴＡＣＣ３媒介性疾患または障害は、がんである。

【0012】

一態様では、本開示の目的は、がん治療において利用可能な特定の阻害剤よりも有糸分裂遮断薬として高い効力を有する少量のＴＡＣＣ３阻害剤を使用することによって、望ましくない副作用を低減することである。

【0013】

すべての化合物の一例として、化合物５は、正常の乳房細胞株に対してわずかな影響を有するが、様々なサブタイプの様々な乳がん細胞株において既知のＴＡＣＣ３阻害剤よりも優れた抗増殖効果を示した。乳がん細胞に加えて、化合物５は、ＮＣＩ－６０パネルにおける結腸、メラノーマ、肺、中枢神経系、卵巣、白血病、腎および前立腺のがん細胞を含む複数のがん型に対して、非常に効果的な細胞毒性（約９０％は１μＭ未満のＧＩ_５０値を有する）を示した。さらに、化合物５は、ＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合タンパク質を有する細胞に対して顕著な抗がん効果を示し、その活性は、これらの細胞のＴＡＣＣ３レベルと相関していた。化合物５はまた、有糸分裂停止およびアポトーシスの強力な誘導とともに、活性化されたＦＧＦＲシグナル伝達のマーカーであるＥＲＫ１／２リン酸化を減少させた。

【0014】

さらに、化合物５は、他の２つのＴＡＣＣ３阻害剤と比較して、低用量で有糸分裂停止、アポトーシス、およびＤＮＡ損傷を誘発することがわかった。化合物５はまた、用量依存的に異常な紡錘体形成を誘導した。重要なことに、化合物５の経口投与は、乳がんの免疫不全および免疫適格性マウスモデルの両方において腫瘍成長を抑制した。化合物５はまた、転移性増殖を損ない、非常に悪性度の高い乳がん転移を有するマウスの全生存率を著しく改善した。乳がん腫瘍モデルと同様に、化合物５は、結腸がん異種移植片および免疫適格性同系モデルの腫瘍成長を著しく抑制した。したがって、本開示は、原発性および転移性の両乳がん、ならびに潜在的に他のがんの治療のための有糸分裂遮断薬としての高い効力を有する新規のＴＡＣＣ３阻害剤を提供する。

【0015】

特定の態様では、本開示は、（ｉ）一般式Ｉによって表される群から選択される化合物をＴＡＣＣ３阻害剤として提供し、（ｉｉ）一般式Ｉによって表される群から選択される化合物を、ＴＡＣＣ３阻害に応答する抗がん剤として提供し、（ｉｉｉ）乳がん細胞株に対するすべての化合物の一例として化合物５の包括的な分析を提供し、（ｉｖ）この化合物が、有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷、他の利用可能なＴＡＣＣ３阻害剤に対するアポトーシスなどの様々な細胞プロセスに対して優れた効果を示すことを明らかにし、（ｖ）乳がんおよび結腸がんの動物モデルで経口投与した場合、観察可能な毒性を伴わない化合物５のインビボ抗腫瘍効果を示し、かつ（ｖｉ）転移性成長を損ない、転移を有するマウスの全生存率を改善するその能力を示し、ＴＡＣＣ３阻害に反応する乳がんおよび他のがんの治療のための有糸分裂遮断薬として使用できることを示唆する。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1A】概して、図１は、ＴＡＣＣ３がいくつかの異なるがん型において上方制御され、その高レベルが全生存率の悪化に関連していることを示す。図１Ａは、ＴＣＧＡ患者の腫瘍組織と正常組織との間のＴＡＣＣ３の差次的ｍＲＮＡ発現プロットであり、Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ Ｍｉｌｌｉｏｎ（ＲＰＫＭ）（ｌｏｇ２）値として表されている。＊＊＊：ｐ＜０．００１。（ＢＬＣＡ：膀胱尿路がん；ＢＲＣＡ：浸潤性乳房浸がん；ＥＳＣＡ：食道がん；ＨＮＳＣ：頭頸部扁平上皮がん；ＫＩＰＡＮ：汎腎臓コホート（ＫＩＣＨ＋ＫＩＲＣ＋ＫＩＲＰ）；ＫＩＲＣ：腎臓腎明細胞がん；ＬＩＨＣ：肝臓肝細胞がん；ＬＵＡＤ：肺腺がん；ＬＵＳＣ：肺扁平上皮がん；ＳＴＡＤ：胃腺がん；ＳＴＥＳ：胃および食道がん；ＵＣＥＣ：子宮内膜がん）。図１Ｂは、ＭＥＴＡＢＲＩＣ、ＫＭ Ｐｌｏｔｔｅｒデータベース、ＧＳＥ３１２１０、およびＴＣＧＡデータセットからそれぞれ検索された、乳がん（Ｂ－１）および胃（Ｂ－２）がん患者の全生存率、肺がん（Ｂ－３）患者の無再発生存率、ならびに前立腺（Ｂ－４）がん患者の無病生存率に対するＴＡＣＣ３レベルの効果を示すプロットである。統計分析にログランク検定を使用した。

【図1B】概して、図１は、ＴＡＣＣ３がいくつかの異なるがん型において上方制御され、その高レベルが全生存率の悪化に関連していることを示す。図１Ａは、ＴＣＧＡ患者の腫瘍組織と正常組織との間のＴＡＣＣ３の差次的ｍＲＮＡ発現プロットであり、Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ Ｍｉｌｌｉｏｎ（ＲＰＫＭ）（ｌｏｇ２）値として表されている。＊＊＊：ｐ＜０．００１。（ＢＬＣＡ：膀胱尿路がん；ＢＲＣＡ：浸潤性乳房浸がん；ＥＳＣＡ：食道がん；ＨＮＳＣ：頭頸部扁平上皮がん；ＫＩＰＡＮ：汎腎臓コホート（ＫＩＣＨ＋ＫＩＲＣ＋ＫＩＲＰ）；ＫＩＲＣ：腎臓腎明細胞がん；ＬＩＨＣ：肝臓肝細胞がん；ＬＵＡＤ：肺腺がん；ＬＵＳＣ：肺扁平上皮がん；ＳＴＡＤ：胃腺がん；ＳＴＥＳ：胃および食道がん；ＵＣＥＣ：子宮内膜がん）。図１Ｂは、ＭＥＴＡＢＲＩＣ、ＫＭ Ｐｌｏｔｔｅｒデータベース、ＧＳＥ３１２１０、およびＴＣＧＡデータセットからそれぞれ検索された、乳がん（Ｂ－１）および胃（Ｂ－２）がん患者の全生存率、肺がん（Ｂ－３）患者の無再発生存率、ならびに前立腺（Ｂ－４）がん患者の無病生存率に対するＴＡＣＣ３レベルの効果を示すプロットである。統計分析にログランク検定を使用した。

【図2】共変量としてＴＡＣＣ３レベル、腫瘍グレード、腫瘍ステージ、ＥＲ、ＰＲ、ＨＥＲ２の状態を選択することにより、ＭＥＴＡＢＲＩＣ患者において行われた多変量解析を示す図である。ＴＡＣＣ３発現は、２５パーセンタイルに基づいて分離される。

【図3A】概して、ＴＡＣＣ３阻害が有糸分裂停止、アポトーシスおよびＤＮＡ損傷を誘導することを示す図である。図３Ａは、ＴＡＣＣ３発現レベルに従って分離された、ＭＥＴＡＢＲＩＣ患者における有糸分裂およびＤＮＡ修復関連遺伝子セットを用いて行われたＧＳＥＡからの濃縮プロットである。データの有意性は、正規化された濃縮スコア（ＮＥＳ）およびＦＤＲ（ｑ）値として表されている。Ｎは、分析に使用された遺伝子の総数を示す。図３Ｂは、乳がん細胞株におけるＴＡＣＣ３特異的ｓｉＲＮＡのノックダウン効率を示すｑＲＴ－ＰＣＲ試験を示す。ＴＡＣＣ３に対する２つの異なるｓｉＲＮＡ ２０ｎＭを細胞にトランスフェクトし、トランスフェクションの４８時間後にＴＡＣＣ３ ｍＲＮＡレベルを調べた。グラフ上のパーセンテージは、ノックダウン効率を示す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図３Ｃは、２つの異なるｓｉＲＮＡを用いたＴＡＣＣ３ノックダウン時の乳がん細胞の成長阻害を示すグラフである。ＴＡＣＣ３を標的とするｓｉＲＮＡを細胞にトランスフェクトし、トランスフェクションの７２時間後に細胞生存率を測定した。図３Ｄは、ＴＡＣＣ３ノックダウン時の乳がん細胞における有糸分裂停止、アポトーシスおよびＤＮＡ損傷マーカーのウエスタンブロット分析を示す。ＧＡＰＤＨをタンパク質ローディング対照として使用した。

【図3B】概して、ＴＡＣＣ３阻害が有糸分裂停止、アポトーシスおよびＤＮＡ損傷を誘導することを示す図である。図３Ａは、ＴＡＣＣ３発現レベルに従って分離された、ＭＥＴＡＢＲＩＣ患者における有糸分裂およびＤＮＡ修復関連遺伝子セットを用いて行われたＧＳＥＡからの濃縮プロットである。データの有意性は、正規化された濃縮スコア（ＮＥＳ）およびＦＤＲ（ｑ）値として表されている。Ｎは、分析に使用された遺伝子の総数を示す。図３Ｂは、乳がん細胞株におけるＴＡＣＣ３特異的ｓｉＲＮＡのノックダウン効率を示すｑＲＴ－ＰＣＲ試験を示す。ＴＡＣＣ３に対する２つの異なるｓｉＲＮＡ ２０ｎＭを細胞にトランスフェクトし、トランスフェクションの４８時間後にＴＡＣＣ３ ｍＲＮＡレベルを調べた。グラフ上のパーセンテージは、ノックダウン効率を示す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図３Ｃは、２つの異なるｓｉＲＮＡを用いたＴＡＣＣ３ノックダウン時の乳がん細胞の成長阻害を示すグラフである。ＴＡＣＣ３を標的とするｓｉＲＮＡを細胞にトランスフェクトし、トランスフェクションの７２時間後に細胞生存率を測定した。図３Ｄは、ＴＡＣＣ３ノックダウン時の乳がん細胞における有糸分裂停止、アポトーシスおよびＤＮＡ損傷マーカーのウエスタンブロット分析を示す。ＧＡＰＤＨをタンパク質ローディング対照として使用した。

【図3C】概して、ＴＡＣＣ３阻害が有糸分裂停止、アポトーシスおよびＤＮＡ損傷を誘導することを示す図である。図３Ａは、ＴＡＣＣ３発現レベルに従って分離された、ＭＥＴＡＢＲＩＣ患者における有糸分裂およびＤＮＡ修復関連遺伝子セットを用いて行われたＧＳＥＡからの濃縮プロットである。データの有意性は、正規化された濃縮スコア（ＮＥＳ）およびＦＤＲ（ｑ）値として表されている。Ｎは、分析に使用された遺伝子の総数を示す。図３Ｂは、乳がん細胞株におけるＴＡＣＣ３特異的ｓｉＲＮＡのノックダウン効率を示すｑＲＴ－ＰＣＲ試験を示す。ＴＡＣＣ３に対する２つの異なるｓｉＲＮＡ ２０ｎＭを細胞にトランスフェクトし、トランスフェクションの４８時間後にＴＡＣＣ３ ｍＲＮＡレベルを調べた。グラフ上のパーセンテージは、ノックダウン効率を示す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図３Ｃは、２つの異なるｓｉＲＮＡを用いたＴＡＣＣ３ノックダウン時の乳がん細胞の成長阻害を示すグラフである。ＴＡＣＣ３を標的とするｓｉＲＮＡを細胞にトランスフェクトし、トランスフェクションの７２時間後に細胞生存率を測定した。図３Ｄは、ＴＡＣＣ３ノックダウン時の乳がん細胞における有糸分裂停止、アポトーシスおよびＤＮＡ損傷マーカーのウエスタンブロット分析を示す。ＧＡＰＤＨをタンパク質ローディング対照として使用した。

【図3D】概して、ＴＡＣＣ３阻害が有糸分裂停止、アポトーシスおよびＤＮＡ損傷を誘導することを示す図である。図３Ａは、ＴＡＣＣ３発現レベルに従って分離された、ＭＥＴＡＢＲＩＣ患者における有糸分裂およびＤＮＡ修復関連遺伝子セットを用いて行われたＧＳＥＡからの濃縮プロットである。データの有意性は、正規化された濃縮スコア（ＮＥＳ）およびＦＤＲ（ｑ）値として表されている。Ｎは、分析に使用された遺伝子の総数を示す。図３Ｂは、乳がん細胞株におけるＴＡＣＣ３特異的ｓｉＲＮＡのノックダウン効率を示すｑＲＴ－ＰＣＲ試験を示す。ＴＡＣＣ３に対する２つの異なるｓｉＲＮＡ ２０ｎＭを細胞にトランスフェクトし、トランスフェクションの４８時間後にＴＡＣＣ３ ｍＲＮＡレベルを調べた。グラフ上のパーセンテージは、ノックダウン効率を示す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図３Ｃは、２つの異なるｓｉＲＮＡを用いたＴＡＣＣ３ノックダウン時の乳がん細胞の成長阻害を示すグラフである。ＴＡＣＣ３を標的とするｓｉＲＮＡを細胞にトランスフェクトし、トランスフェクションの７２時間後に細胞生存率を測定した。図３Ｄは、ＴＡＣＣ３ノックダウン時の乳がん細胞における有糸分裂停止、アポトーシスおよびＤＮＡ損傷マーカーのウエスタンブロット分析を示す。ＧＡＰＤＨをタンパク質ローディング対照として使用した。

【図4A】概して、新規のＴＡＣＣ３阻害剤である化合物５が、ＴＡＣＣ３に結合することを示す図である。図４Ａは、無傷のＪＩＭＴ－１細胞におけるＴＡＣＣ３タンパク質への化合物５の標的エンゲージメントを示す。ＪＩＭＴ－１細胞をビヒクル、化合物５またはＳＰＬ－Ｂ（陽性対照として）（１μＭ）で６時間処置し、細胞を収集し、示された温度で加熱し、次いで溶解した。上清中の可溶性タンパク質をウエスタンブロットに供し、ＴＡＣＣ３タンパク質レベルを検出した。ポンソー染色をローディング対照として使用した。ＣＥＴＳＡ曲線は、ＴＡＣＣ３％相対バンド強度を示し、処置群間のシフトを示す。図４Ｂは、等温滴定熱量計（ＩＴＣ）を使用したＴＡＣＣ３と化合物５の相互作用の結合定数の決定を示すグラフである。上部のトレースは生データを示すが、下部のトレースはＴＡＣＣ３の化合物５への滴定からの統合データを示す。ＩＴＣ２００機器とともに提供されたＯｒｉｇｉｎ７ソフトウェアを使用して、単一相互作用モデルのモデルフィッティングを適用した。図４Ｃは、化合物５とＴＡＣＣ３との間の相互作用を確認するためにＪＩＭＴ－１細胞タンパク質抽出物を使用したＤＡＲＴＳアッセイのウエスタンブロット結果を示す。ＣＤＫ４は、処置群間でレベルが変化しない非標的タンパク質として使用された。１０μＭの薬物を使用した。ＳＰＬ－Ｂを結合の陽性対照として使用した。図４Ｄは、β－アクチンに正規化された処置群間のＴＡＣＣ３相対バンド強度の定量化を示すグラフであり、２つの独立した実験を代表している。データは、平均値±ＳＤとして表されている。＊＊ｐ＜０．０１

【図4B】概して、新規のＴＡＣＣ３阻害剤である化合物５が、ＴＡＣＣ３に結合することを示す図である。図４Ａは、無傷のＪＩＭＴ－１細胞におけるＴＡＣＣ３タンパク質への化合物５の標的エンゲージメントを示す。ＪＩＭＴ－１細胞をビヒクル、化合物５またはＳＰＬ－Ｂ（陽性対照として）（１μＭ）で６時間処置し、細胞を収集し、示された温度で加熱し、次いで溶解した。上清中の可溶性タンパク質をウエスタンブロットに供し、ＴＡＣＣ３タンパク質レベルを検出した。ポンソー染色をローディング対照として使用した。ＣＥＴＳＡ曲線は、ＴＡＣＣ３％相対バンド強度を示し、処置群間のシフトを示す。図４Ｂは、等温滴定熱量計（ＩＴＣ）を使用したＴＡＣＣ３と化合物５の相互作用の結合定数の決定を示すグラフである。上部のトレースは生データを示すが、下部のトレースはＴＡＣＣ３の化合物５への滴定からの統合データを示す。ＩＴＣ２００機器とともに提供されたＯｒｉｇｉｎ７ソフトウェアを使用して、単一相互作用モデルのモデルフィッティングを適用した。図４Ｃは、化合物５とＴＡＣＣ３との間の相互作用を確認するためにＪＩＭＴ－１細胞タンパク質抽出物を使用したＤＡＲＴＳアッセイのウエスタンブロット結果を示す。ＣＤＫ４は、処置群間でレベルが変化しない非標的タンパク質として使用された。１０μＭの薬物を使用した。ＳＰＬ－Ｂを結合の陽性対照として使用した。図４Ｄは、β－アクチンに正規化された処置群間のＴＡＣＣ３相対バンド強度の定量化を示すグラフであり、２つの独立した実験を代表している。データは、平均値±ＳＤとして表されている。＊＊ｐ＜０．０１

【図4C】概して、新規のＴＡＣＣ３阻害剤である化合物５が、ＴＡＣＣ３に結合することを示す図である。図４Ａは、無傷のＪＩＭＴ－１細胞におけるＴＡＣＣ３タンパク質への化合物５の標的エンゲージメントを示す。ＪＩＭＴ－１細胞をビヒクル、化合物５またはＳＰＬ－Ｂ（陽性対照として）（１μＭ）で６時間処置し、細胞を収集し、示された温度で加熱し、次いで溶解した。上清中の可溶性タンパク質をウエスタンブロットに供し、ＴＡＣＣ３タンパク質レベルを検出した。ポンソー染色をローディング対照として使用した。ＣＥＴＳＡ曲線は、ＴＡＣＣ３％相対バンド強度を示し、処置群間のシフトを示す。図４Ｂは、等温滴定熱量計（ＩＴＣ）を使用したＴＡＣＣ３と化合物５の相互作用の結合定数の決定を示すグラフである。上部のトレースは生データを示すが、下部のトレースはＴＡＣＣ３の化合物５への滴定からの統合データを示す。ＩＴＣ２００機器とともに提供されたＯｒｉｇｉｎ７ソフトウェアを使用して、単一相互作用モデルのモデルフィッティングを適用した。図４Ｃは、化合物５とＴＡＣＣ３との間の相互作用を確認するためにＪＩＭＴ－１細胞タンパク質抽出物を使用したＤＡＲＴＳアッセイのウエスタンブロット結果を示す。ＣＤＫ４は、処置群間でレベルが変化しない非標的タンパク質として使用された。１０μＭの薬物を使用した。ＳＰＬ－Ｂを結合の陽性対照として使用した。図４Ｄは、β－アクチンに正規化された処置群間のＴＡＣＣ３相対バンド強度の定量化を示すグラフであり、２つの独立した実験を代表している。データは、平均値±ＳＤとして表されている。＊＊ｐ＜０．０１

【図4D】概して、新規のＴＡＣＣ３阻害剤である化合物５が、ＴＡＣＣ３に結合することを示す図である。図４Ａは、無傷のＪＩＭＴ－１細胞におけるＴＡＣＣ３タンパク質への化合物５の標的エンゲージメントを示す。ＪＩＭＴ－１細胞をビヒクル、化合物５またはＳＰＬ－Ｂ（陽性対照として）（１μＭ）で６時間処置し、細胞を収集し、示された温度で加熱し、次いで溶解した。上清中の可溶性タンパク質をウエスタンブロットに供し、ＴＡＣＣ３タンパク質レベルを検出した。ポンソー染色をローディング対照として使用した。ＣＥＴＳＡ曲線は、ＴＡＣＣ３％相対バンド強度を示し、処置群間のシフトを示す。図４Ｂは、等温滴定熱量計（ＩＴＣ）を使用したＴＡＣＣ３と化合物５の相互作用の結合定数の決定を示すグラフである。上部のトレースは生データを示すが、下部のトレースはＴＡＣＣ３の化合物５への滴定からの統合データを示す。ＩＴＣ２００機器とともに提供されたＯｒｉｇｉｎ７ソフトウェアを使用して、単一相互作用モデルのモデルフィッティングを適用した。図４Ｃは、化合物５とＴＡＣＣ３との間の相互作用を確認するためにＪＩＭＴ－１細胞タンパク質抽出物を使用したＤＡＲＴＳアッセイのウエスタンブロット結果を示す。ＣＤＫ４は、処置群間でレベルが変化しない非標的タンパク質として使用された。１０μＭの薬物を使用した。ＳＰＬ－Ｂを結合の陽性対照として使用した。図４Ｄは、β－アクチンに正規化された処置群間のＴＡＣＣ３相対バンド強度の定量化を示すグラフであり、２つの独立した実験を代表している。データは、平均値±ＳＤとして表されている。＊＊ｐ＜０．０１

【図5A】概して、図５は、化合物５が現在利用可能なＴＡＣＣ３阻害剤、ＳＰＬ－ＢおよびＫＨＳ１０１よりも強力であることを示す図である。図５Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および乳がん細胞株の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである（ＩＣ_５０：阻害濃度５０％）。細胞生存率は、以下のすべての細胞生存率実験において、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイによって３連で測定した。図５Ｂは、３つの異なるＴＡＣＣ３阻害剤で１２日間処置されたＪＩＭＴ－１細胞のコロニー形成アッセイを示す。コロニーはクリスタルバイオレットで染色した。コロニーの数を計数し、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して分析した（下のパネル）。データは、平均値±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図５Ｃは、有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーに対する用量反応の効果を試験するために、化合物５、ＳＰＬ－ＢまたはＫＨＳ１０１で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のウエスタンブロット分析を示す。ウエスタンブロット実験では、同じ量のタンパク質および同じ曝露時間を使用して、これらのマーカーに対する３つの薬物の効果を比較した。図５Ｄは、化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のアネキシンＶ／ＰＩ染色を示すプロットである。アネキシンＶ／ＰＩ二重陽性細胞のパーセンテージをグラフに示す。図５Ｅは、化合物５で処置されたＪＩＭＴ－１細胞における異常な紡錘体形成の誘導を示す。細胞を２つの異なる用量の化合物５で１２時間処置し、メタノールで固定し、次いで抗α－チューブリン（緑色）抗体で染色した。ＤＮＡは、ＤＡＰＩ（青）で染色した。スケールバー：１０μｍ。図５Ｆは、Ｄに見られるような紡錘体異常の定量化を示すグラフである。データは、３つの独立した実験（ｔ検定）の平均値および標準偏差（ＳＤ）を表す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。有意性は、ビヒクル群との比較によって決定した。図５Ｇは、ビヒクル対化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞におけるＳＡＣマーカー、ＢｕｂＲ１（赤色）およびα－チューブリン（緑色）の免疫蛍光染色を示す。図５Ｈは、紡錘体チェックポイントキナーゼ（Ｍｐｓ１）阻害剤、ＴＣ Ｍｐｓ１で処置したときの化合物５で処置したＪＩＭＴ－１細胞における有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーのウエスタンブロット分析を示す。ＪＩＭＴ－１細胞を２００ｎＭの化合物５で２４時間処置した後、１μＭ ＴＣ Ｍｐｓ１で１２時間処置した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。

【図5B】概して、図５は、化合物５が現在利用可能なＴＡＣＣ３阻害剤、ＳＰＬ－ＢおよびＫＨＳ１０１よりも強力であることを示す図である。図５Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および乳がん細胞株の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである（ＩＣ_５０：阻害濃度５０％）。細胞生存率は、以下のすべての細胞生存率実験において、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイによって３連で測定した。図５Ｂは、３つの異なるＴＡＣＣ３阻害剤で１２日間処置されたＪＩＭＴ－１細胞のコロニー形成アッセイを示す。コロニーはクリスタルバイオレットで染色した。コロニーの数を計数し、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して分析した（下のパネル）。データは、平均値±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図５Ｃは、有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーに対する用量反応の効果を試験するために、化合物５、ＳＰＬ－ＢまたはＫＨＳ１０１で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のウエスタンブロット分析を示す。ウエスタンブロット実験では、同じ量のタンパク質および同じ曝露時間を使用して、これらのマーカーに対する３つの薬物の効果を比較した。図５Ｄは、化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のアネキシンＶ／ＰＩ染色を示すプロットである。アネキシンＶ／ＰＩ二重陽性細胞のパーセンテージをグラフに示す。図５Ｅは、化合物５で処置されたＪＩＭＴ－１細胞における異常な紡錘体形成の誘導を示す。細胞を２つの異なる用量の化合物５で１２時間処置し、メタノールで固定し、次いで抗α－チューブリン（緑色）抗体で染色した。ＤＮＡは、ＤＡＰＩ（青）で染色した。スケールバー：１０μｍ。図５Ｆは、Ｄに見られるような紡錘体異常の定量化を示すグラフである。データは、３つの独立した実験（ｔ検定）の平均値および標準偏差（ＳＤ）を表す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。有意性は、ビヒクル群との比較によって決定した。図５Ｇは、ビヒクル対化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞におけるＳＡＣマーカー、ＢｕｂＲ１（赤色）およびα－チューブリン（緑色）の免疫蛍光染色を示す。図５Ｈは、紡錘体チェックポイントキナーゼ（Ｍｐｓ１）阻害剤、ＴＣ Ｍｐｓ１で処置したときの化合物５で処置したＪＩＭＴ－１細胞における有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーのウエスタンブロット分析を示す。ＪＩＭＴ－１細胞を２００ｎＭの化合物５で２４時間処置した後、１μＭ ＴＣ Ｍｐｓ１で１２時間処置した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。

【図5C】概して、図５は、化合物５が現在利用可能なＴＡＣＣ３阻害剤、ＳＰＬ－ＢおよびＫＨＳ１０１よりも強力であることを示す図である。図５Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および乳がん細胞株の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである（ＩＣ_５０：阻害濃度５０％）。細胞生存率は、以下のすべての細胞生存率実験において、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイによって３連で測定した。図５Ｂは、３つの異なるＴＡＣＣ３阻害剤で１２日間処置されたＪＩＭＴ－１細胞のコロニー形成アッセイを示す。コロニーはクリスタルバイオレットで染色した。コロニーの数を計数し、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して分析した（下のパネル）。データは、平均値±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図５Ｃは、有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーに対する用量反応の効果を試験するために、化合物５、ＳＰＬ－ＢまたはＫＨＳ１０１で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のウエスタンブロット分析を示す。ウエスタンブロット実験では、同じ量のタンパク質および同じ曝露時間を使用して、これらのマーカーに対する３つの薬物の効果を比較した。図５Ｄは、化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のアネキシンＶ／ＰＩ染色を示すプロットである。アネキシンＶ／ＰＩ二重陽性細胞のパーセンテージをグラフに示す。図５Ｅは、化合物５で処置されたＪＩＭＴ－１細胞における異常な紡錘体形成の誘導を示す。細胞を２つの異なる用量の化合物５で１２時間処置し、メタノールで固定し、次いで抗α－チューブリン（緑色）抗体で染色した。ＤＮＡは、ＤＡＰＩ（青）で染色した。スケールバー：１０μｍ。図５Ｆは、Ｄに見られるような紡錘体異常の定量化を示すグラフである。データは、３つの独立した実験（ｔ検定）の平均値および標準偏差（ＳＤ）を表す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。有意性は、ビヒクル群との比較によって決定した。図５Ｇは、ビヒクル対化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞におけるＳＡＣマーカー、ＢｕｂＲ１（赤色）およびα－チューブリン（緑色）の免疫蛍光染色を示す。図５Ｈは、紡錘体チェックポイントキナーゼ（Ｍｐｓ１）阻害剤、ＴＣ Ｍｐｓ１で処置したときの化合物５で処置したＪＩＭＴ－１細胞における有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーのウエスタンブロット分析を示す。ＪＩＭＴ－１細胞を２００ｎＭの化合物５で２４時間処置した後、１μＭ ＴＣ Ｍｐｓ１で１２時間処置した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。

【図5D】概して、図５は、化合物５が現在利用可能なＴＡＣＣ３阻害剤、ＳＰＬ－ＢおよびＫＨＳ１０１よりも強力であることを示す図である。図５Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および乳がん細胞株の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである（ＩＣ_５０：阻害濃度５０％）。細胞生存率は、以下のすべての細胞生存率実験において、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイによって３連で測定した。図５Ｂは、３つの異なるＴＡＣＣ３阻害剤で１２日間処置されたＪＩＭＴ－１細胞のコロニー形成アッセイを示す。コロニーはクリスタルバイオレットで染色した。コロニーの数を計数し、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して分析した（下のパネル）。データは、平均値±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図５Ｃは、有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーに対する用量反応の効果を試験するために、化合物５、ＳＰＬ－ＢまたはＫＨＳ１０１で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のウエスタンブロット分析を示す。ウエスタンブロット実験では、同じ量のタンパク質および同じ曝露時間を使用して、これらのマーカーに対する３つの薬物の効果を比較した。図５Ｄは、化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のアネキシンＶ／ＰＩ染色を示すプロットである。アネキシンＶ／ＰＩ二重陽性細胞のパーセンテージをグラフに示す。図５Ｅは、化合物５で処置されたＪＩＭＴ－１細胞における異常な紡錘体形成の誘導を示す。細胞を２つの異なる用量の化合物５で１２時間処置し、メタノールで固定し、次いで抗α－チューブリン（緑色）抗体で染色した。ＤＮＡは、ＤＡＰＩ（青）で染色した。スケールバー：１０μｍ。図５Ｆは、Ｄに見られるような紡錘体異常の定量化を示すグラフである。データは、３つの独立した実験（ｔ検定）の平均値および標準偏差（ＳＤ）を表す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。有意性は、ビヒクル群との比較によって決定した。図５Ｇは、ビヒクル対化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞におけるＳＡＣマーカー、ＢｕｂＲ１（赤色）およびα－チューブリン（緑色）の免疫蛍光染色を示す。図５Ｈは、紡錘体チェックポイントキナーゼ（Ｍｐｓ１）阻害剤、ＴＣ Ｍｐｓ１で処置したときの化合物５で処置したＪＩＭＴ－１細胞における有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーのウエスタンブロット分析を示す。ＪＩＭＴ－１細胞を２００ｎＭの化合物５で２４時間処置した後、１μＭ ＴＣ Ｍｐｓ１で１２時間処置した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。

【図5E】概して、図５は、化合物５が現在利用可能なＴＡＣＣ３阻害剤、ＳＰＬ－ＢおよびＫＨＳ１０１よりも強力であることを示す図である。図５Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および乳がん細胞株の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである（ＩＣ_５０：阻害濃度５０％）。細胞生存率は、以下のすべての細胞生存率実験において、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイによって３連で測定した。図５Ｂは、３つの異なるＴＡＣＣ３阻害剤で１２日間処置されたＪＩＭＴ－１細胞のコロニー形成アッセイを示す。コロニーはクリスタルバイオレットで染色した。コロニーの数を計数し、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して分析した（下のパネル）。データは、平均値±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図５Ｃは、有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーに対する用量反応の効果を試験するために、化合物５、ＳＰＬ－ＢまたはＫＨＳ１０１で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のウエスタンブロット分析を示す。ウエスタンブロット実験では、同じ量のタンパク質および同じ曝露時間を使用して、これらのマーカーに対する３つの薬物の効果を比較した。図５Ｄは、化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のアネキシンＶ／ＰＩ染色を示すプロットである。アネキシンＶ／ＰＩ二重陽性細胞のパーセンテージをグラフに示す。図５Ｅは、化合物５で処置されたＪＩＭＴ－１細胞における異常な紡錘体形成の誘導を示す。細胞を２つの異なる用量の化合物５で１２時間処置し、メタノールで固定し、次いで抗α－チューブリン（緑色）抗体で染色した。ＤＮＡは、ＤＡＰＩ（青）で染色した。スケールバー：１０μｍ。図５Ｆは、Ｄに見られるような紡錘体異常の定量化を示すグラフである。データは、３つの独立した実験（ｔ検定）の平均値および標準偏差（ＳＤ）を表す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。有意性は、ビヒクル群との比較によって決定した。図５Ｇは、ビヒクル対化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞におけるＳＡＣマーカー、ＢｕｂＲ１（赤色）およびα－チューブリン（緑色）の免疫蛍光染色を示す。図５Ｈは、紡錘体チェックポイントキナーゼ（Ｍｐｓ１）阻害剤、ＴＣ Ｍｐｓ１で処置したときの化合物５で処置したＪＩＭＴ－１細胞における有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーのウエスタンブロット分析を示す。ＪＩＭＴ－１細胞を２００ｎＭの化合物５で２４時間処置した後、１μＭ ＴＣ Ｍｐｓ１で１２時間処置した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。

【図5F】概して、図５は、化合物５が現在利用可能なＴＡＣＣ３阻害剤、ＳＰＬ－ＢおよびＫＨＳ１０１よりも強力であることを示す図である。図５Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および乳がん細胞株の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである（ＩＣ_５０：阻害濃度５０％）。細胞生存率は、以下のすべての細胞生存率実験において、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイによって３連で測定した。図５Ｂは、３つの異なるＴＡＣＣ３阻害剤で１２日間処置されたＪＩＭＴ－１細胞のコロニー形成アッセイを示す。コロニーはクリスタルバイオレットで染色した。コロニーの数を計数し、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して分析した（下のパネル）。データは、平均値±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図５Ｃは、有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーに対する用量反応の効果を試験するために、化合物５、ＳＰＬ－ＢまたはＫＨＳ１０１で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のウエスタンブロット分析を示す。ウエスタンブロット実験では、同じ量のタンパク質および同じ曝露時間を使用して、これらのマーカーに対する３つの薬物の効果を比較した。図５Ｄは、化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のアネキシンＶ／ＰＩ染色を示すプロットである。アネキシンＶ／ＰＩ二重陽性細胞のパーセンテージをグラフに示す。図５Ｅは、化合物５で処置されたＪＩＭＴ－１細胞における異常な紡錘体形成の誘導を示す。細胞を２つの異なる用量の化合物５で１２時間処置し、メタノールで固定し、次いで抗α－チューブリン（緑色）抗体で染色した。ＤＮＡは、ＤＡＰＩ（青）で染色した。スケールバー：１０μｍ。図５Ｆは、Ｄに見られるような紡錘体異常の定量化を示すグラフである。データは、３つの独立した実験（ｔ検定）の平均値および標準偏差（ＳＤ）を表す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。有意性は、ビヒクル群との比較によって決定した。図５Ｇは、ビヒクル対化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞におけるＳＡＣマーカー、ＢｕｂＲ１（赤色）およびα－チューブリン（緑色）の免疫蛍光染色を示す。図５Ｈは、紡錘体チェックポイントキナーゼ（Ｍｐｓ１）阻害剤、ＴＣ Ｍｐｓ１で処置したときの化合物５で処置したＪＩＭＴ－１細胞における有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーのウエスタンブロット分析を示す。ＪＩＭＴ－１細胞を２００ｎＭの化合物５で２４時間処置した後、１μＭ ＴＣ Ｍｐｓ１で１２時間処置した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。

【図5G】概して、図５は、化合物５が現在利用可能なＴＡＣＣ３阻害剤、ＳＰＬ－ＢおよびＫＨＳ１０１よりも強力であることを示す図である。図５Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および乳がん細胞株の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである（ＩＣ_５０：阻害濃度５０％）。細胞生存率は、以下のすべての細胞生存率実験において、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイによって３連で測定した。図５Ｂは、３つの異なるＴＡＣＣ３阻害剤で１２日間処置されたＪＩＭＴ－１細胞のコロニー形成アッセイを示す。コロニーはクリスタルバイオレットで染色した。コロニーの数を計数し、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して分析した（下のパネル）。データは、平均値±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図５Ｃは、有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーに対する用量反応の効果を試験するために、化合物５、ＳＰＬ－ＢまたはＫＨＳ１０１で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のウエスタンブロット分析を示す。ウエスタンブロット実験では、同じ量のタンパク質および同じ曝露時間を使用して、これらのマーカーに対する３つの薬物の効果を比較した。図５Ｄは、化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のアネキシンＶ／ＰＩ染色を示すプロットである。アネキシンＶ／ＰＩ二重陽性細胞のパーセンテージをグラフに示す。図５Ｅは、化合物５で処置されたＪＩＭＴ－１細胞における異常な紡錘体形成の誘導を示す。細胞を２つの異なる用量の化合物５で１２時間処置し、メタノールで固定し、次いで抗α－チューブリン（緑色）抗体で染色した。ＤＮＡは、ＤＡＰＩ（青）で染色した。スケールバー：１０μｍ。図５Ｆは、Ｄに見られるような紡錘体異常の定量化を示すグラフである。データは、３つの独立した実験（ｔ検定）の平均値および標準偏差（ＳＤ）を表す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。有意性は、ビヒクル群との比較によって決定した。図５Ｇは、ビヒクル対化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞におけるＳＡＣマーカー、ＢｕｂＲ１（赤色）およびα－チューブリン（緑色）の免疫蛍光染色を示す。図５Ｈは、紡錘体チェックポイントキナーゼ（Ｍｐｓ１）阻害剤、ＴＣ Ｍｐｓ１で処置したときの化合物５で処置したＪＩＭＴ－１細胞における有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーのウエスタンブロット分析を示す。ＪＩＭＴ－１細胞を２００ｎＭの化合物５で２４時間処置した後、１μＭ ＴＣ Ｍｐｓ１で１２時間処置した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。

【図5H】概して、図５は、化合物５が現在利用可能なＴＡＣＣ３阻害剤、ＳＰＬ－ＢおよびＫＨＳ１０１よりも強力であることを示す図である。図５Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および乳がん細胞株の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである（ＩＣ_５０：阻害濃度５０％）。細胞生存率は、以下のすべての細胞生存率実験において、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイによって３連で測定した。図５Ｂは、３つの異なるＴＡＣＣ３阻害剤で１２日間処置されたＪＩＭＴ－１細胞のコロニー形成アッセイを示す。コロニーはクリスタルバイオレットで染色した。コロニーの数を計数し、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して分析した（下のパネル）。データは、平均値±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図５Ｃは、有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーに対する用量反応の効果を試験するために、化合物５、ＳＰＬ－ＢまたはＫＨＳ１０１で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のウエスタンブロット分析を示す。ウエスタンブロット実験では、同じ量のタンパク質および同じ曝露時間を使用して、これらのマーカーに対する３つの薬物の効果を比較した。図５Ｄは、化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞のアネキシンＶ／ＰＩ染色を示すプロットである。アネキシンＶ／ＰＩ二重陽性細胞のパーセンテージをグラフに示す。図５Ｅは、化合物５で処置されたＪＩＭＴ－１細胞における異常な紡錘体形成の誘導を示す。細胞を２つの異なる用量の化合物５で１２時間処置し、メタノールで固定し、次いで抗α－チューブリン（緑色）抗体で染色した。ＤＮＡは、ＤＡＰＩ（青）で染色した。スケールバー：１０μｍ。図５Ｆは、Ｄに見られるような紡錘体異常の定量化を示すグラフである。データは、３つの独立した実験（ｔ検定）の平均値および標準偏差（ＳＤ）を表す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。有意性は、ビヒクル群との比較によって決定した。図５Ｇは、ビヒクル対化合物５（５００ｎＭ）で処置されたＪＩＭＴ－１細胞におけるＳＡＣマーカー、ＢｕｂＲ１（赤色）およびα－チューブリン（緑色）の免疫蛍光染色を示す。図５Ｈは、紡錘体チェックポイントキナーゼ（Ｍｐｓ１）阻害剤、ＴＣ Ｍｐｓ１で処置したときの化合物５で処置したＪＩＭＴ－１細胞における有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷およびアポトーシスマーカーのウエスタンブロット分析を示す。ＪＩＭＴ－１細胞を２００ｎＭの化合物５で２４時間処置した後、１μＭ ＴＣ Ｍｐｓ１で１２時間処置した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。

【図6A】概して、図６は、化合物５が、ＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合タンパク質を有する細胞株およびＮＣＩ－６０がん細胞株において顕著な抗がん活性を示す図である。図６Ａは、ＲＴ１１２およびＲＴ４細胞におけるＴＡＣＣ３タンパク質レベルのウエスタンブロット分析を示す。β－アクチンをローディング対照として使用した。図６Ｂは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、およびＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合発現細胞株、ＲＴ１１２およびＲＴ４の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである。細胞生存率は、３日間の薬物インキュベーションで試験し、ＳＲＢアッセイによって測定した。図６Ｃは、３つの阻害剤で処置した後のＳＲＢ染色した代表的なウェルを示す画像である。図６Ｄは、異なる用量のＴＡＣＣ３阻害剤で２４時間処置した直後の、ＲＴ１１２細胞における有糸分裂停止マーカー、ｐ－ヒストンＨ３ならびにＥＲＫリン酸化（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）のウエスタンブロット分析を示す。図６Ｅは、化合物５のＮＣＩ－６０ ５用量スクリーニングから決定された平均ＧＩ_５０値（Ｍ）を示すグラフである。黒色点線は、１μＭ閾値を示す。図６Ｆは、化合物５のＧＩ_５０値とＤｅｐＭａｐ．ｏｒｇから得られたＴＡＣＣ３依存性スコアとの間の相関を示すグラフである。スコアが低いということは、ＴＡＣＣ３が所与の細胞株に依存している可能性が高いことを意味する。

【図6B】概して、図６は、化合物５が、ＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合タンパク質を有する細胞株およびＮＣＩ－６０がん細胞株において顕著な抗がん活性を示す図である。図６Ａは、ＲＴ１１２およびＲＴ４細胞におけるＴＡＣＣ３タンパク質レベルのウエスタンブロット分析を示す。β－アクチンをローディング対照として使用した。図６Ｂは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、およびＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合発現細胞株、ＲＴ１１２およびＲＴ４の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである。細胞生存率は、３日間の薬物インキュベーションで試験し、ＳＲＢアッセイによって測定した。図６Ｃは、３つの阻害剤で処置した後のＳＲＢ染色した代表的なウェルを示す画像である。図６Ｄは、異なる用量のＴＡＣＣ３阻害剤で２４時間処置した直後の、ＲＴ１１２細胞における有糸分裂停止マーカー、ｐ－ヒストンＨ３ならびにＥＲＫリン酸化（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）のウエスタンブロット分析を示す。図６Ｅは、化合物５のＮＣＩ－６０ ５用量スクリーニングから決定された平均ＧＩ_５０値（Ｍ）を示すグラフである。黒色点線は、１μＭ閾値を示す。図６Ｆは、化合物５のＧＩ_５０値とＤｅｐＭａｐ．ｏｒｇから得られたＴＡＣＣ３依存性スコアとの間の相関を示すグラフである。スコアが低いということは、ＴＡＣＣ３が所与の細胞株に依存している可能性が高いことを意味する。

【図6C】概して、図６は、化合物５が、ＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合タンパク質を有する細胞株およびＮＣＩ－６０がん細胞株において顕著な抗がん活性を示す図である。図６Ａは、ＲＴ１１２およびＲＴ４細胞におけるＴＡＣＣ３タンパク質レベルのウエスタンブロット分析を示す。β－アクチンをローディング対照として使用した。図６Ｂは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、およびＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合発現細胞株、ＲＴ１１２およびＲＴ４の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである。細胞生存率は、３日間の薬物インキュベーションで試験し、ＳＲＢアッセイによって測定した。図６Ｃは、３つの阻害剤で処置した後のＳＲＢ染色した代表的なウェルを示す画像である。図６Ｄは、異なる用量のＴＡＣＣ３阻害剤で２４時間処置した直後の、ＲＴ１１２細胞における有糸分裂停止マーカー、ｐ－ヒストンＨ３ならびにＥＲＫリン酸化（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）のウエスタンブロット分析を示す。図６Ｅは、化合物５のＮＣＩ－６０ ５用量スクリーニングから決定された平均ＧＩ_５０値（Ｍ）を示すグラフである。黒色点線は、１μＭ閾値を示す。図６Ｆは、化合物５のＧＩ_５０値とＤｅｐＭａｐ．ｏｒｇから得られたＴＡＣＣ３依存性スコアとの間の相関を示すグラフである。スコアが低いということは、ＴＡＣＣ３が所与の細胞株に依存している可能性が高いことを意味する。

【図6D】概して、図６は、化合物５が、ＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合タンパク質を有する細胞株およびＮＣＩ－６０がん細胞株において顕著な抗がん活性を示す図である。図６Ａは、ＲＴ１１２およびＲＴ４細胞におけるＴＡＣＣ３タンパク質レベルのウエスタンブロット分析を示す。β－アクチンをローディング対照として使用した。図６Ｂは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、およびＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合発現細胞株、ＲＴ１１２およびＲＴ４の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである。細胞生存率は、３日間の薬物インキュベーションで試験し、ＳＲＢアッセイによって測定した。図６Ｃは、３つの阻害剤で処置した後のＳＲＢ染色した代表的なウェルを示す画像である。図６Ｄは、異なる用量のＴＡＣＣ３阻害剤で２４時間処置した直後の、ＲＴ１１２細胞における有糸分裂停止マーカー、ｐ－ヒストンＨ３ならびにＥＲＫリン酸化（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）のウエスタンブロット分析を示す。図６Ｅは、化合物５のＮＣＩ－６０ ５用量スクリーニングから決定された平均ＧＩ_５０値（Ｍ）を示すグラフである。黒色点線は、１μＭ閾値を示す。図６Ｆは、化合物５のＧＩ_５０値とＤｅｐＭａｐ．ｏｒｇから得られたＴＡＣＣ３依存性スコアとの間の相関を示すグラフである。スコアが低いということは、ＴＡＣＣ３が所与の細胞株に依存している可能性が高いことを意味する。

【図6E】概して、図６は、化合物５が、ＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合タンパク質を有する細胞株およびＮＣＩ－６０がん細胞株において顕著な抗がん活性を示す図である。図６Ａは、ＲＴ１１２およびＲＴ４細胞におけるＴＡＣＣ３タンパク質レベルのウエスタンブロット分析を示す。β－アクチンをローディング対照として使用した。図６Ｂは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、およびＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合発現細胞株、ＲＴ１１２およびＲＴ４の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである。細胞生存率は、３日間の薬物インキュベーションで試験し、ＳＲＢアッセイによって測定した。図６Ｃは、３つの阻害剤で処置した後のＳＲＢ染色した代表的なウェルを示す画像である。図６Ｄは、異なる用量のＴＡＣＣ３阻害剤で２４時間処置した直後の、ＲＴ１１２細胞における有糸分裂停止マーカー、ｐ－ヒストンＨ３ならびにＥＲＫリン酸化（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）のウエスタンブロット分析を示す。図６Ｅは、化合物５のＮＣＩ－６０ ５用量スクリーニングから決定された平均ＧＩ_５０値（Ｍ）を示すグラフである。黒色点線は、１μＭ閾値を示す。図６Ｆは、化合物５のＧＩ_５０値とＤｅｐＭａｐ．ｏｒｇから得られたＴＡＣＣ３依存性スコアとの間の相関を示すグラフである。スコアが低いということは、ＴＡＣＣ３が所与の細胞株に依存している可能性が高いことを意味する。

【図6F】概して、図６は、化合物５が、ＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合タンパク質を有する細胞株およびＮＣＩ－６０がん細胞株において顕著な抗がん活性を示す図である。図６Ａは、ＲＴ１１２およびＲＴ４細胞におけるＴＡＣＣ３タンパク質レベルのウエスタンブロット分析を示す。β－アクチンをローディング対照として使用した。図６Ｂは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、およびＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合発現細胞株、ＲＴ１１２およびＲＴ４の細胞生存率に対するそれらの効果を示すグラフである。細胞生存率は、３日間の薬物インキュベーションで試験し、ＳＲＢアッセイによって測定した。図６Ｃは、３つの阻害剤で処置した後のＳＲＢ染色した代表的なウェルを示す画像である。図６Ｄは、異なる用量のＴＡＣＣ３阻害剤で２４時間処置した直後の、ＲＴ１１２細胞における有糸分裂停止マーカー、ｐ－ヒストンＨ３ならびにＥＲＫリン酸化（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）のウエスタンブロット分析を示す。図６Ｅは、化合物５のＮＣＩ－６０ ５用量スクリーニングから決定された平均ＧＩ_５０値（Ｍ）を示すグラフである。黒色点線は、１μＭ閾値を示す。図６Ｆは、化合物５のＧＩ_５０値とＤｅｐＭａｐ．ｏｒｇから得られたＴＡＣＣ３依存性スコアとの間の相関を示すグラフである。スコアが低いということは、ＴＡＣＣ３が所与の細胞株に依存している可能性が高いことを意味する。

【図7A】概して、ＴＡＣＣ３レベルが化合物５の反応にとって重要であることを示す図である。図７Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および正常な乳房細胞株、ＭＣＦ－１２Ａの細胞生存率に対するそれらの効果を示す。図７Ｂは、化合物５ ＩＣ_５０レベルの乳房正常上皮細胞株、ＭＣＦ－１２Ａおよびがん細胞株が、それらのサブタイプに従って分離されたことを示す。図７Ｃは、これらの細胞株のＴＡＣＣ３タンパク質レベルを示す。ＴＡＣＣ３タンパク質レベルをウエスタンブロットにより分析した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。図７Ｄは、ＭＣＦ－１２Ａ細胞のコロニー形成アッセイを示す。対照またはＴＡＣＣ３ベクター（２５０ｎｇ）のいずれかで４８時間一過性に細胞をトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞は、後で１２ウェルプレートに播種した。１２日後、細胞をクリスタルバイオレットで染色した。図７Ｅは、コロニーの数が、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して計数および分析されたことを示す。データは、３回の独立した実験の平均±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。ｎ．ｓ：有意でない。図７Ｆは、ＴＡＣＣ３を過剰発現するＭＣＦ－１２Ａ細胞の化合物５処置時の細胞生存率アッセイを示すグラフである。図７Ｇは、ＭＣＦ－１２Ａおよび乳がん細胞株モデルの倍加時間評価を示す。細胞を低密度でプレーティングし、１週間成長させた。次に、細胞を毎日計数した。一元配置分散分析を使用した。

【図7B】概して、ＴＡＣＣ３レベルが化合物５の反応にとって重要であることを示す図である。図７Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および正常な乳房細胞株、ＭＣＦ－１２Ａの細胞生存率に対するそれらの効果を示す。図７Ｂは、化合物５ ＩＣ_５０レベルの乳房正常上皮細胞株、ＭＣＦ－１２Ａおよびがん細胞株が、それらのサブタイプに従って分離されたことを示す。図７Ｃは、これらの細胞株のＴＡＣＣ３タンパク質レベルを示す。ＴＡＣＣ３タンパク質レベルをウエスタンブロットにより分析した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。図７Ｄは、ＭＣＦ－１２Ａ細胞のコロニー形成アッセイを示す。対照またはＴＡＣＣ３ベクター（２５０ｎｇ）のいずれかで４８時間一過性に細胞をトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞は、後で１２ウェルプレートに播種した。１２日後、細胞をクリスタルバイオレットで染色した。図７Ｅは、コロニーの数が、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して計数および分析されたことを示す。データは、３回の独立した実験の平均±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。ｎ．ｓ：有意でない。図７Ｆは、ＴＡＣＣ３を過剰発現するＭＣＦ－１２Ａ細胞の化合物５処置時の細胞生存率アッセイを示すグラフである。図７Ｇは、ＭＣＦ－１２Ａおよび乳がん細胞株モデルの倍加時間評価を示す。細胞を低密度でプレーティングし、１週間成長させた。次に、細胞を毎日計数した。一元配置分散分析を使用した。

【図7C】概して、ＴＡＣＣ３レベルが化合物５の反応にとって重要であることを示す図である。図７Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および正常な乳房細胞株、ＭＣＦ－１２Ａの細胞生存率に対するそれらの効果を示す。図７Ｂは、化合物５ ＩＣ_５０レベルの乳房正常上皮細胞株、ＭＣＦ－１２Ａおよびがん細胞株が、それらのサブタイプに従って分離されたことを示す。図７Ｃは、これらの細胞株のＴＡＣＣ３タンパク質レベルを示す。ＴＡＣＣ３タンパク質レベルをウエスタンブロットにより分析した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。図７Ｄは、ＭＣＦ－１２Ａ細胞のコロニー形成アッセイを示す。対照またはＴＡＣＣ３ベクター（２５０ｎｇ）のいずれかで４８時間一過性に細胞をトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞は、後で１２ウェルプレートに播種した。１２日後、細胞をクリスタルバイオレットで染色した。図７Ｅは、コロニーの数が、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して計数および分析されたことを示す。データは、３回の独立した実験の平均±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。ｎ．ｓ：有意でない。図７Ｆは、ＴＡＣＣ３を過剰発現するＭＣＦ－１２Ａ細胞の化合物５処置時の細胞生存率アッセイを示すグラフである。図７Ｇは、ＭＣＦ－１２Ａおよび乳がん細胞株モデルの倍加時間評価を示す。細胞を低密度でプレーティングし、１週間成長させた。次に、細胞を毎日計数した。一元配置分散分析を使用した。

【図7D】概して、ＴＡＣＣ３レベルが化合物５の反応にとって重要であることを示す図である。図７Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および正常な乳房細胞株、ＭＣＦ－１２Ａの細胞生存率に対するそれらの効果を示す。図７Ｂは、化合物５ ＩＣ_５０レベルの乳房正常上皮細胞株、ＭＣＦ－１２Ａおよびがん細胞株が、それらのサブタイプに従って分離されたことを示す。図７Ｃは、これらの細胞株のＴＡＣＣ３タンパク質レベルを示す。ＴＡＣＣ３タンパク質レベルをウエスタンブロットにより分析した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。図７Ｄは、ＭＣＦ－１２Ａ細胞のコロニー形成アッセイを示す。対照またはＴＡＣＣ３ベクター（２５０ｎｇ）のいずれかで４８時間一過性に細胞をトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞は、後で１２ウェルプレートに播種した。１２日後、細胞をクリスタルバイオレットで染色した。図７Ｅは、コロニーの数が、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して計数および分析されたことを示す。データは、３回の独立した実験の平均±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。ｎ．ｓ：有意でない。図７Ｆは、ＴＡＣＣ３を過剰発現するＭＣＦ－１２Ａ細胞の化合物５処置時の細胞生存率アッセイを示すグラフである。図７Ｇは、ＭＣＦ－１２Ａおよび乳がん細胞株モデルの倍加時間評価を示す。細胞を低密度でプレーティングし、１週間成長させた。次に、細胞を毎日計数した。一元配置分散分析を使用した。

【図7E】概して、ＴＡＣＣ３レベルが化合物５の反応にとって重要であることを示す図である。図７Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および正常な乳房細胞株、ＭＣＦ－１２Ａの細胞生存率に対するそれらの効果を示す。図７Ｂは、化合物５ ＩＣ_５０レベルの乳房正常上皮細胞株、ＭＣＦ－１２Ａおよびがん細胞株が、それらのサブタイプに従って分離されたことを示す。図７Ｃは、これらの細胞株のＴＡＣＣ３タンパク質レベルを示す。ＴＡＣＣ３タンパク質レベルをウエスタンブロットにより分析した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。図７Ｄは、ＭＣＦ－１２Ａ細胞のコロニー形成アッセイを示す。対照またはＴＡＣＣ３ベクター（２５０ｎｇ）のいずれかで４８時間一過性に細胞をトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞は、後で１２ウェルプレートに播種した。１２日後、細胞をクリスタルバイオレットで染色した。図７Ｅは、コロニーの数が、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して計数および分析されたことを示す。データは、３回の独立した実験の平均±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。ｎ．ｓ：有意でない。図７Ｆは、ＴＡＣＣ３を過剰発現するＭＣＦ－１２Ａ細胞の化合物５処置時の細胞生存率アッセイを示すグラフである。図７Ｇは、ＭＣＦ－１２Ａおよび乳がん細胞株モデルの倍加時間評価を示す。細胞を低密度でプレーティングし、１週間成長させた。次に、細胞を毎日計数した。一元配置分散分析を使用した。

【図7F】概して、ＴＡＣＣ３レベルが化合物５の反応にとって重要であることを示す図である。図７Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および正常な乳房細胞株、ＭＣＦ－１２Ａの細胞生存率に対するそれらの効果を示す。図７Ｂは、化合物５ ＩＣ_５０レベルの乳房正常上皮細胞株、ＭＣＦ－１２Ａおよびがん細胞株が、それらのサブタイプに従って分離されたことを示す。図７Ｃは、これらの細胞株のＴＡＣＣ３タンパク質レベルを示す。ＴＡＣＣ３タンパク質レベルをウエスタンブロットにより分析した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。図７Ｄは、ＭＣＦ－１２Ａ細胞のコロニー形成アッセイを示す。対照またはＴＡＣＣ３ベクター（２５０ｎｇ）のいずれかで４８時間一過性に細胞をトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞は、後で１２ウェルプレートに播種した。１２日後、細胞をクリスタルバイオレットで染色した。図７Ｅは、コロニーの数が、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して計数および分析されたことを示す。データは、３回の独立した実験の平均±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。ｎ．ｓ：有意でない。図７Ｆは、ＴＡＣＣ３を過剰発現するＭＣＦ－１２Ａ細胞の化合物５処置時の細胞生存率アッセイを示すグラフである。図７Ｇは、ＭＣＦ－１２Ａおよび乳がん細胞株モデルの倍加時間評価を示す。細胞を低密度でプレーティングし、１週間成長させた。次に、細胞を毎日計数した。一元配置分散分析を使用した。

【図7G】概して、ＴＡＣＣ３レベルが化合物５の反応にとって重要であることを示す図である。図７Ａは、３つの異なる阻害剤によるＴＡＣＣ３の薬理学的阻害、および正常な乳房細胞株、ＭＣＦ－１２Ａの細胞生存率に対するそれらの効果を示す。図７Ｂは、化合物５ ＩＣ_５０レベルの乳房正常上皮細胞株、ＭＣＦ－１２Ａおよびがん細胞株が、それらのサブタイプに従って分離されたことを示す。図７Ｃは、これらの細胞株のＴＡＣＣ３タンパク質レベルを示す。ＴＡＣＣ３タンパク質レベルをウエスタンブロットにより分析した。ＧＡＰＤＨをローディング対照として使用した。図７Ｄは、ＭＣＦ－１２Ａ細胞のコロニー形成アッセイを示す。対照またはＴＡＣＣ３ベクター（２５０ｎｇ）のいずれかで４８時間一過性に細胞をトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞は、後で１２ウェルプレートに播種した。１２日後、細胞をクリスタルバイオレットで染色した。図７Ｅは、コロニーの数が、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して計数および分析されたことを示す。データは、３回の独立した実験の平均±ＳＤとして表されている。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。ｎ．ｓ：有意でない。図７Ｆは、ＴＡＣＣ３を過剰発現するＭＣＦ－１２Ａ細胞の化合物５処置時の細胞生存率アッセイを示すグラフである。図７Ｇは、ＭＣＦ－１２Ａおよび乳がん細胞株モデルの倍加時間評価を示す。細胞を低密度でプレーティングし、１週間成長させた。次に、細胞を毎日計数した。一元配置分散分析を使用した。

【図8A】概して、化合物５がＳＰＬ－Ｂよりも腫瘍成長を著しく損なうことを示す図である。図８Ａは、ビヒクル、５ｍｇ／ｋｇの化合物５またはＳＰＬ－Ｂで３０日間経口的に処置されたＪＩＭＴ－１異種移植片の腫瘍体積変化を示す。腫瘍が９０～１００ｍｍ^３に達したときに処置を開始した。図８Ｂは、３０日間追跡されたＪＩＭＴ－１異種移植片のパーセント体重変化を示す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１；ｎ．ｓ：有意でない。

【図8B】概して、化合物５がＳＰＬ－Ｂよりも腫瘍成長を著しく損なうことを示す図である。図８Ａは、ビヒクル、５ｍｇ／ｋｇの化合物５またはＳＰＬ－Ｂで３０日間経口的に処置されたＪＩＭＴ－１異種移植片の腫瘍体積変化を示す。腫瘍が９０～１００ｍｍ^３に達したときに処置を開始した。図８Ｂは、３０日間追跡されたＪＩＭＴ－１異種移植片のパーセント体重変化を示す。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１；ｎ．ｓ：有意でない。

【図9A】概して、化合物５の異なる用量および投与経路が、マウスの体重に影響を与えることなく、インビボＪＩＭＴ－１異種移植片における腫瘍成長を阻害することを示す図である。図９Ａは、異なる投与量および投与経路で化合物５の３群すべての適用後の腫瘍体積の変化を示す。図９Ｂは、異なる投与量および投与方法での処置経過中のマウスの体重変化を示す。図９Ｃは、雌のヌードマウスにおけるビヒクルまたは２５ｍｇ／ｋｇの化合物５での処置後のＪＩＭＴ－１異種移植片の腫瘍体積変化を示す。腫瘍が９０～１００ｍｍ^３に達したときに処置を開始した。図９Ｄは、ビヒクルまたは化合物５のいずれかで処置されたマウスの腫瘍重量を示す。図９Ｅは、処置後のマウスの体重変化（％）を示す。

【図9B】概して、化合物５の異なる用量および投与経路が、マウスの体重に影響を与えることなく、インビボＪＩＭＴ－１異種移植片における腫瘍成長を阻害することを示す図である。図９Ａは、異なる投与量および投与経路で化合物５の３群すべての適用後の腫瘍体積の変化を示す。図９Ｂは、異なる投与量および投与方法での処置経過中のマウスの体重変化を示す。図９Ｃは、雌のヌードマウスにおけるビヒクルまたは２５ｍｇ／ｋｇの化合物５での処置後のＪＩＭＴ－１異種移植片の腫瘍体積変化を示す。腫瘍が９０～１００ｍｍ^３に達したときに処置を開始した。図９Ｄは、ビヒクルまたは化合物５のいずれかで処置されたマウスの腫瘍重量を示す。図９Ｅは、処置後のマウスの体重変化（％）を示す。

【図9C】概して、化合物５の異なる用量および投与経路が、マウスの体重に影響を与えることなく、インビボＪＩＭＴ－１異種移植片における腫瘍成長を阻害することを示す図である。図９Ａは、異なる投与量および投与経路で化合物５の３群すべての適用後の腫瘍体積の変化を示す。図９Ｂは、異なる投与量および投与方法での処置経過中のマウスの体重変化を示す。図９Ｃは、雌のヌードマウスにおけるビヒクルまたは２５ｍｇ／ｋｇの化合物５での処置後のＪＩＭＴ－１異種移植片の腫瘍体積変化を示す。腫瘍が９０～１００ｍｍ^３に達したときに処置を開始した。図９Ｄは、ビヒクルまたは化合物５のいずれかで処置されたマウスの腫瘍重量を示す。図９Ｅは、処置後のマウスの体重変化（％）を示す。

【図9D】概して、化合物５の異なる用量および投与経路が、マウスの体重に影響を与えることなく、インビボＪＩＭＴ－１異種移植片における腫瘍成長を阻害することを示す図である。図９Ａは、異なる投与量および投与経路で化合物５の３群すべての適用後の腫瘍体積の変化を示す。図９Ｂは、異なる投与量および投与方法での処置経過中のマウスの体重変化を示す。図９Ｃは、雌のヌードマウスにおけるビヒクルまたは２５ｍｇ／ｋｇの化合物５での処置後のＪＩＭＴ－１異種移植片の腫瘍体積変化を示す。腫瘍が９０～１００ｍｍ^３に達したときに処置を開始した。図９Ｄは、ビヒクルまたは化合物５のいずれかで処置されたマウスの腫瘍重量を示す。図９Ｅは、処置後のマウスの体重変化（％）を示す。

【図9E】概して、化合物５の異なる用量および投与経路が、マウスの体重に影響を与えることなく、インビボＪＩＭＴ－１異種移植片における腫瘍成長を阻害することを示す図である。図９Ａは、異なる投与量および投与経路で化合物５の３群すべての適用後の腫瘍体積の変化を示す。図９Ｂは、異なる投与量および投与方法での処置経過中のマウスの体重変化を示す。図９Ｃは、雌のヌードマウスにおけるビヒクルまたは２５ｍｇ／ｋｇの化合物５での処置後のＪＩＭＴ－１異種移植片の腫瘍体積変化を示す。腫瘍が９０～１００ｍｍ^３に達したときに処置を開始した。図９Ｄは、ビヒクルまたは化合物５のいずれかで処置されたマウスの腫瘍重量を示す。図９Ｅは、処置後のマウスの体重変化（％）を示す。

【図10A】概して、化合物５が腫瘍成長を著しく損ない、免疫適格マウスの生存を改善することを示す図である。図１０Ａは、非常に悪性度の高い同系マウス乳がんモデル、ＥＭＴ６異種移植片に対する化合物５の効果の腫瘍体積評価を示す。有意性は、ビヒクル対照と比較して、各日の各データポイントに対して複数のｔ検定を使用して計算した。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図１０Ｂは、ビヒクル（生存期間中央値１４日）または化合物５（生存期間中央値２２日）で処置されたＥＭＴ６異種移植片のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線である。Ｐ値は、ログランク検定を使用して計算した。図１０Ｃは、処置後のＥＭＴ６異種移植片のパーセント体重変化を示す。

【図10B】概して、化合物５が腫瘍成長を著しく損ない、免疫適格マウスの生存を改善することを示す図である。図１０Ａは、非常に悪性度の高い同系マウス乳がんモデル、ＥＭＴ６異種移植片に対する化合物５の効果の腫瘍体積評価を示す。有意性は、ビヒクル対照と比較して、各日の各データポイントに対して複数のｔ検定を使用して計算した。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図１０Ｂは、ビヒクル（生存期間中央値１４日）または化合物５（生存期間中央値２２日）で処置されたＥＭＴ６異種移植片のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線である。Ｐ値は、ログランク検定を使用して計算した。図１０Ｃは、処置後のＥＭＴ６異種移植片のパーセント体重変化を示す。

【図10C】概して、化合物５が腫瘍成長を著しく損ない、免疫適格マウスの生存を改善することを示す図である。図１０Ａは、非常に悪性度の高い同系マウス乳がんモデル、ＥＭＴ６異種移植片に対する化合物５の効果の腫瘍体積評価を示す。有意性は、ビヒクル対照と比較して、各日の各データポイントに対して複数のｔ検定を使用して計算した。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。図１０Ｂは、ビヒクル（生存期間中央値１４日）または化合物５（生存期間中央値２２日）で処置されたＥＭＴ６異種移植片のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線である。Ｐ値は、ログランク検定を使用して計算した。図１０Ｃは、処置後のＥＭＴ６異種移植片のパーセント体重変化を示す。

【図11A】概して、ＴＡＣＣ３を化合物５で標的とすると、結腸直腸がんマウスモデルにおいて腫瘍成長が著しく損なわれることを示す図である。図１１Ａは、免疫無防備状態（ＨＣＴ－１１６）および同系免疫適格性（ＣＴ－２６）マウスモデルの結腸直腸がん異種移植片に対する化合物５の効果の腫瘍体積評価を示す。マウスをビヒクルまたは化合物５（２５および／または５０ｍｇ／ｋｇ）で毎日経口投与した。腫瘍体積が９０～１００ｍｍ^３に達したときに治療を開始した。有意性は、スチューデントのｔ検定を使用して計算した。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１。図１１Ｂは、治療後のＨＣＴ－１１６およびＣＴ－２６異種移植片のパーセント体重変化を示す。

【図11B】概して、ＴＡＣＣ３を化合物５で標的とすると、結腸直腸がんマウスモデルにおいて腫瘍成長が著しく損なわれることを示す図である。図１１Ａは、免疫無防備状態（ＨＣＴ－１１６）および同系免疫適格性（ＣＴ－２６）マウスモデルの結腸直腸がん異種移植片に対する化合物５の効果の腫瘍体積評価を示す。マウスをビヒクルまたは化合物５（２５および／または５０ｍｇ／ｋｇ）で毎日経口投与した。腫瘍体積が９０～１００ｍｍ^３に達したときに治療を開始した。有意性は、スチューデントのｔ検定を使用して計算した。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１。図１１Ｂは、治療後のＨＣＴ－１１６およびＣＴ－２６異種移植片のパーセント体重変化を示す。

【図12A】概して、４Ｔ１．ｌｕｃ２モデルの転移性増殖に対する化合物５によるＴＡＣＣ３標的とする効果を示す図である。図１２Ａは、４Ｔ１．ｌｕｃ２細胞を尾静脈に注射したマウスの生物発光（ＢＬＩ）画像を示す。肺において転移が確立された後、マウスをビヒクルまたは化合物５（５０ｍｇ／ｋｇ）のいずれかで毎日経口的に処置した。転移性成長は、ＩＶＩＳ（インビボイメージングシステム）を用いて週に１回ＢＬＩによってモニターした。図１２Ｂは、ビヒクル（生存期間中央値１９日）または化合物５（生存期間中央値２８日）で処置された４Ｔ１．ｌｕｃ２同系モデルのＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線である。Ｐ値は、ログランク検定を使用して計算した。

【図12B】概して、４Ｔ１．ｌｕｃ２モデルの転移性増殖に対する化合物５によるＴＡＣＣ３標的とする効果を示す図である。図１２Ａは、４Ｔ１．ｌｕｃ２細胞を尾静脈に注射したマウスの生物発光（ＢＬＩ）画像を示す。肺において転移が確立された後、マウスをビヒクルまたは化合物５（５０ｍｇ／ｋｇ）のいずれかで毎日経口的に処置した。転移性成長は、ＩＶＩＳ（インビボイメージングシステム）を用いて週に１回ＢＬＩによってモニターした。図１２Ｂは、ビヒクル（生存期間中央値１９日）または化合物５（生存期間中央値２８日）で処置された４Ｔ１．ｌｕｃ２同系モデルのＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線である。Ｐ値は、ログランク検定を使用して計算した。

【図13A】概して、マウスの体重および内臓に対する高用量化合物５の効果を示す図である。図１３Ａは、１００ｍｇ／ｋｇの化合物５を７日間毎日経口投与した後のマウスの体重（ｇ）を示す。図１３Ｂは、化合物５（５００ｍｇ／ｋｇ）の単回投与後のマウスの体重（ｇ）を示す。異なる日にマウスを犠牲にした。図１３Ｃは、ビヒクルまたは５００ｍｇ／ｋｇの化合物５のいずれかで処置されたマウスおよびそれらの臓器（下のパネル）の写真である。マウスは、薬物治療の４８時間後に犠牲にした。

【図13B】概して、マウスの体重および内臓に対する高用量化合物５の効果を示す図である。図１３Ａは、１００ｍｇ／ｋｇの化合物５を７日間毎日経口投与した後のマウスの体重（ｇ）を示す。図１３Ｂは、化合物５（５００ｍｇ／ｋｇ）の単回投与後のマウスの体重（ｇ）を示す。異なる日にマウスを犠牲にした。図１３Ｃは、ビヒクルまたは５００ｍｇ／ｋｇの化合物５のいずれかで処置されたマウスおよびそれらの臓器（下のパネル）の写真である。マウスは、薬物治療の４８時間後に犠牲にした。

【図13C】概して、マウスの体重および内臓に対する高用量化合物５の効果を示す図である。図１３Ａは、１００ｍｇ／ｋｇの化合物５を７日間毎日経口投与した後のマウスの体重（ｇ）を示す。図１３Ｂは、化合物５（５００ｍｇ／ｋｇ）の単回投与後のマウスの体重（ｇ）を示す。異なる日にマウスを犠牲にした。図１３Ｃは、ビヒクルまたは５００ｍｇ／ｋｇの化合物５のいずれかで処置されたマウスおよびそれらの臓器（下のパネル）の写真である。マウスは、薬物治療の４８時間後に犠牲にした。

【図14】化合物５の薬物特異的物理化学的性質の要約を示す。^ａ２時間後の２５℃でｐＨ７．４のリン酸ナトリウム緩衝液中の動態学的溶解度（Ｂｕｔｔａｒ ｅｔ ａｌ．，２０１０）、^ｂＬｏｇＤ：オクタノール／リン酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．４）での分配係数（Ｕｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７８）、^ｃＰＰＢ：３７℃でヒトにおける平衡透析によって評価された血漿タンパク質結合（Ｂｕｔｔａｒ ｅｔ ａｌ．，２０１０）、^ｄＴ１／２：マウスおよびヒト肝ミクロソーム（それぞれＭＬＭおよびＨＬＭ）の半減期（Ｋａｌｖａｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００１）、^ｅＣｌｉｎｔ：ＭＬＭおよびＨＬＭにおける固有クリアランス（Ｋａｌｖａｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００１）、^ｆＣＹＰ：ＨＬＭにおいて評価された化合物５によるシトクロムＰ４５０アイソザイム阻害（Ｂｏｕｒｒｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９９６）、^ｇＰａｐｐ：Ｃａｃｏ－２細胞単層におけるみかけの透過係数（Ｃａｍｅｎｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，１９９８）。

【発明を実施するための形態】

【0017】

ＴＡＣＣ３レベルの上昇は多くの異なるがん型で観察されており、がん治療の非常に魅力的な標的となっている。ＴＡＣＣ３は、微小管および中心体を調節し、紡錘体の安定性を維持する上で重要な役割を果たす（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００７、Ｔｈａｋｕｒ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。

【0018】

異なる腫瘍型におけるＴＡＣＣ３レベルをさらに調べるために、本発明者らは、多くの異なるがん型およびそれらの正常組織対応物におけるＴＡＣＣ３レベルの分析を行った（図１Ａ）。ＴＡＣＣ３は、乳がんを含む多くの異なるがん型で著しく過剰発現していることがわかった。次に、異なるデータベース（ＭＥＴＡＢＲＩＣおよびＫＭ Ｐｌｏｔｔｅｒ）を使用した異なる患者生存データセットおよびデータセット（ＧＳＥ３１２１０およびＴＣＧＡ）を分析した。高いＴＡＣＣ３レベルは、乳がん（図１Ｂ－１）および胃がん（図１Ｂ－２）において全生存率の悪化と有意に相関することがわかった。さらに、高いＴＡＣＣ３レベルは、肺がん患者の無再発生存率の悪化（図１Ｂ－３）および前立腺がん患者の無病生存率（図１Ｂ－４）と関連している。重要なことに、多変量Ｃｏｘ回帰分析は、ＴＡＣＣ３発現が乳がんにおいて独立予後因子であることを示した（図２）。まとめると、これらの結果は、ＴＡＣＣ３が臨床的に関連する標的であり、いくつかの異なるがんにおいて強い予後であり、その発現レベルが疾患の重症度と患者の生存を定義する重要な要因であることを示す。したがって、ＴＡＣＣ３機能の阻害は、乳がんおよびその他のがん患者の生存を改善するための有望な治療戦略である。

【0019】

Ｈｅｌａ細胞におけるＴＡＣＣ３レベルの低下は、有糸分裂停止（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００７）およびカスパーゼ依存性アポトーシス（Ｋｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，２０１３）を引き起こすことが示されている。本開示において、高いＴＡＣＣ３レベルを発現する乳がん患者は、乳がん進展におけるＴＡＣＣ３の発がん性の役割を裏づける有糸分裂進行およびＤＮＡ修復遺伝子の促進を有することが見出された（図３Ａ）。次に、本発明者らは、異なる乳がん細胞株の細胞生存率に対するＴＡＣＣ３欠乏の影響を調べた。異なる分子サブタイプを有する４つの異なる乳がん細胞株モデルを利用した。ＨＥＲ２陽性乳がん細胞株であるＪＩＭＴ－１、およびルミナルＢサブタイプ乳がん細胞株であるＢＴ－４７４ Ｔ－ＤＭ１Ｒ（Ｔ－ＤＭ１耐性）は、ＴＡＣＣ３レベルが高いことが示された（Ｓａａｔｃｉ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。一方、ＭＤＡ－ＭＢ－４３６およびＭＤＡ－ＭＢ－１５７は、双方とも三種陰性乳がん（ＴＮＢＣ）細胞株である。本開示において、最初に、これらの細胞株におけるＴＡＣＣ３レベルを低下させるために、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を使用した。図３Ｂは、すべての細胞株において４８時間のｓｉＲＮＡ処置後に、全体的なＴＡＣＣ３レベルが約６０～７０％低下したことを示す。これと一致して、ＴＡＣＣ３ノックダウンが乳がん細胞の著しい成長阻害をもたらすことが観察された（図３Ｃ）。次に、ＴＡＣＣ３ノックダウンが引き起こす可能性のある関連メカニズムを調べた。試験したすべての乳がん細胞株におけるｓｉＲＮＡによるＴＡＣＣ３レベルの抑制は、有糸分裂停止、アポトーシス、およびＤＮＡ損傷を活性化した（図３Ｄ）。

【0020】

本発明者らは、ＴＡＣＣ３が異常に発現される乳がん細胞におけるそれらの抗増殖効果を試験することにより、一連の小分子の社内スクリーニングを行った（Ｍａ ｅｔ ａｌ．，２００３、Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。具体的には、ＪＩＭＴ－１細胞株は、他の試験された乳がん細胞株と比較してＴＡＣＣ３タンパク質レベルが高く、ならびにそのインビボ腫瘍形成能のため、細胞生存率における化合物の影響をスクリーニングするために選択した（Ｓａａｔｃｉ ｅｔ ａｌ．，２０１８、Ｔａｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００４）（それぞれ図７および８～９で説明する）。本発明者らは、培養細胞を用いた実験により、化合物５が細胞成長を抑制し（１９０ｎＭのＩＣ_５０）、抗腫瘍効果を示すことを明らかにした。したがって、この化合物を抗がん剤の医薬品有効成分（ＡＰＩ）として使用することにより、効果的な抗がん剤を開発することができる。したがって、高レベルのＴＡＣＣ３を発現するがん細胞に対して抗がん活性を有する新規の化合物を得るために、式（Ｉ）の基本構造を有する化合物を合成した。

【0021】

一態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物、

【化3】

またはその薬学的に許容される塩に関し、式中、
Ｘ_１は、ＮまたはＣＲ_６であり、
Ｘ_２は、ＮまたはＣＲ_３であり、
Ｒ_１は、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ_２は、Ｈまたはアルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_６は、各々独立してＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アシル、アセチル、エステル、チオエステル、アルコキシ、ホスホリル、アミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、アルキルチオ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、またはスルホンアミドであり、
Ｒ_５は、ヘテロシクリル、アルキル、またはアミノである。

【0022】

特定の実施形態では、化合物は、

【化4】

ではない。

【0023】

特定の実施形態では、Ｒ_１は、アリール（例えば、フェニル）である。他の実施形態では、Ｒ_１は、ヘテロアリール（例えば、ベンゾジオキソール、ジヒドロベンゾフラン、ベンゾフラン、またはピリミジニル）である。

【0024】

特定の実施形態では、Ｒ_１は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アシル、アセチル、エステル、チオエステル、アルコキシ、ホスホリル、アミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、アルキルチオ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アルキルスルホニル（例えばメチルスルホニル）またはスルホンアミドから選択される１つ以上の置換基で置換されている。特定の実施形態では、Ｒ_１は、アルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、フルオロエチル、またはトリフルオロメチル）、アルキルオキシ（例えば、メトキシ、トリフルオロメチルオキシ、ジフルオロメチルオキシ、エトキシ、またはプロピルオキシ）、アルキルチオ（例えば、メチルチオ）、アラルキルオキシ（例えば、ベンジルオキシ）、ヒドロキシル、ハロ（例えば、フルオロまたはクロロ）、またはアミノ（例えば、ジメチルアミノアルキル）で置換される。特定の好ましい実施形態では、Ｒ_１は、ハロ（例えば、フルオロ）で置換されている。特定の実施形態では、ハロ（例えば、Ｆ）は、イソオキサゾールに対してパラである。他の実施形態では、ハロ（例えば、Ｆ）は、イソオキサゾールに対してオルトである。他の実施形態では、ハロ（例えば、Ｆ）は、イソオキサゾールに対してメタである。特定の好ましい実施形態では、Ｒ_１は、２つのハロ（例えば、Ｆ）で置換されている。特定の実施形態では、１つのハロ（例えば、Ｆ）は、イソオキサゾールに対してメタであり、１つのハロ（例えば、Ｆ）は、イソオキサゾールに対してオルトである。他の好ましい実施形態では、Ｒ_１は、アルキルオキシ（例えば、メトキシ）で置換されている。特定の実施形態では、アルコキシ（例えば、メトキシ）は、イソオキサゾールに対してパラである。他の実施形態では、アルコキシ（例えば、メトキシ）は、イソオキサゾールに対してオルトである。特定の実施形態では、アルコキシ（例えば、メトキシ）は、イソオキサゾールのメタである。さらに他の好ましい実施形態では、Ｒ_１は、アルキル（例えば、メチル、エチル、またはトリフルオロメチル）で置換されている。さらに他の好ましい実施形態では、Ｒ_１は、ハロ（例えば、フルオロ）およびアルキルオキシ（例えば、メトキシ）で置換されている。さらに好ましい実施形態では、Ｒ_１は、メトキシ部分および１つまたは２つのフルオロ部分で置換されている。最も好ましい実施形態では、Ｒ_１は、メトキシ部分および２つのフルオロ部分で置換されている。特定の実施形態では、アルコキシ（例えば、メトキシ）は、イソオキサゾールに対してパラであり、Ｆは、イソオキサゾールに対してメタである。さらに他の修飾物では、アルコキシ（例えば、メトキシ）はイソオキサゾールに対してパラであり、Ｆはイソオキサゾールに対してオルトである。他の実施形態では、ハロ（例えば、Ｆ）はイソオキサゾールに対してパラであり、アルコキシ（例えば、メトキシ）はイソオキサゾールに対してメタである。さらに他の実施形態では、アルコキシ（例えば、メトキシ）は、イソオキサゾールに対してパラであり、１つのハロ（例えば、Ｆ）は、イソオキサゾールに対してメタであり、１つのハロ（例えば、Ｆ）はイソオキサゾールに対してオルトである。

【0025】

特定の実施形態では、Ｒ_２は、アルキル（例えば、メチルまたはエチル）である。特定の実施形態では、Ｒ_２は、アミノ（例えば、ジメチルアミノまたはジエチルアミノ）、またはニトリルで置換されている。他の実施形態では、Ｒ_２は、Ｈである。

【0026】

特定の実施形態では、Ｘ_１は、Ｎである。他の実施形態では、Ｘ_１は、ＣＲ_６である。特定の実施形態では、Ｒ_６は、Ｈである。

【0027】

特定の実施形態では、Ｘ_２は、Ｎである。他の実施形態では、Ｘ_２は、ＣＲ_３である。特定の実施形態では、Ｒ_３は、Ｈまたはハロ（例えば、フルオロまたはクロロ）である。

【0028】

特定の実施形態では、Ｒ_３は、Ｈまたはハロ（例えば、フルオロまたはクロロ）である。

【0029】

特定の実施形態では、Ｒ_４は、アルキル（例えば、メチル）である。

【0030】

特定の実施形態では、Ｒ_５は、ヘテロシクリル（例えば、アゼチジニル、モルホリノ、ピロリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、オキサアザビシクロオクタニル、オキサアザビシクロヘプトニル（ｏｘａａｚａｂｉｃｙｃｌｏｈｅｐｔｎｙｌ）、チオモルホリノ、チオモルホリノジオキシド、ヘキサヒドロフロピロリル、またはアザビシクロヘキサニル）である。特定の実施形態では、Ｒ_５は、６員含有ヘテロシクリルであり、サイクルの骨格は、１つの窒素を含有する。特定の実施形態では、Ｒ_５は、６員含有ヘテロシクリルであり、サイクルの骨格は、１つの窒素および１つの酸素を含有する。他の実施形態では、Ｒ_５は、７員含有ヘテロシクリルであり、サイクルの骨格は、１つの窒素を含有する。特定の実施形態では、Ｒ_５は、７員含有ヘテロシクリルであり、サイクルの骨格は、１つの窒素および１つの酸素を含有する。他の実施形態では、Ｒ_５は、８員含有ヘテロシクリルであり、サイクルの骨格は、１つの窒素を含有する。特定の実施形態では、Ｒ_５は、８員含有ヘテロシクリルであり、サイクルの骨格は、１つの窒素および１つの酸素を含有する。特定の好ましい実施形態では、Ｒ_５は、ヘテロシクリルを含有する窒素であり、窒素は、Ｒ_４置換基を有するアリールまたはヘテロアリール環に直接結合している。特定の好ましい実施形態では、Ｒ_５は、２，６－ジメチルモホリン（ｄｉｍｅｔｈｙｌｍｏｐｈｏｌｉｎｅ）、４－メチルピペリジン、または４－（トリフルオロメチル）ピペリジンである。

【0031】

特定の実施形態では、Ｒ_５は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アシル、アセチル、エステル、チオエステル、アルコキシ、ホスホリル、アミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、アルキルチオ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、またはスルホンアミドで置換されている。特定の実施形態では、Ｒ_５は、エステル（例えば、エチルエステル）、カルボキシル、アルキル（例えば、メチルまたはトリフルオロメチル）、ヒドロキシアルキル（例えば、ヒドロキシエチル）、ハロ（例えば、フルオロ）、シクロアルキル（例えば、シクロプロピルまたはシクロブチル）、またはヘテロシクリル（例えば、オキセトニル（ｏｘｅｔｎｙｌ）またはテトラヒドロフラニル）で置換されている。特定の好ましい実施形態では、Ｒ_５は、ハロ（例えば、フルオロ）で置換されている。特定の好ましい実施形態では、Ｒ_５は、２つのアルキル部分で置換されている。さらに好ましい実施形態では、Ｒ_５は、２つのメチル部分で置換されている。

【0032】

他の実施形態では、Ｒ_５はアミノである。特定の実施形態では、Ｒ_５は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アシル、アセチル、エステル、チオエステル、アルコキシ、ホスホリル、アミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、アルキルチオ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、スルホンアミド、シクロアルキル、またはヘテロシクリル）で置換されている。特定の実施形態では、Ｒ_５は、アルキル（例えば、ジフルオロエチル、またはイソブチル、アルキルオキシアルキル（例えば、メチルオキシエチル）、ヒドロキシアルキル（例えば、ヒドロキシエチル）、シクロプロピル（例えば、シクロプロピル）、またはヘテロシクリル（例えば、ピラニル）で置換されている。

【0033】

特定の実施形態では、式Ｉの化合物は、式ＩＩによって表される構造を有する：

【化5】

【0034】

本開示の抗がん剤は、一般式（Ｉ）によって表される化合物を含み、式中、
Ｒ_１：非置換フェニル、またはｏ－、ｍ－もしくはｐ－ＣＨ_３、Ｃ_２Ｈ_５、ＣＨ（ＣＨ_３）_２、ＯＣＨ_３、ＯＣ_２Ｈ_５、ＯＣ_３Ｈ_７、ＳＣＨ_３、ＣＦ_２ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＯＣＨＦ_２、Ｎ（ＣＨ_３）_２、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ一置換もしくは二置換フェニル、ピリジル、ベンジルオキシもしくはピペロニル基；Ｒ_２：Ｈ、ＣＨ_３；Ｒ_３：Ｈ、Ｆ、Ｃｌ；Ｒ_４：Ｈ、ＣＨ_３；Ｘ_１：ＣＨ、Ｎ；Ｒ_５：モルホリン、２，６－ジメチルモルホリン、チオモルホリン、チオモルホリン１，１－ジオキシド、モルホリン－４－アミン、ピペリジン、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－アミン、ピペリジン－１－アミン、４－フルオロピペリジン、４，４－ジフルオロピペリジン、４－メチルピペリジン、４－（トリフルオロメチル）ピペリジン、ピペラジン、Ｎ－メチルピペラジン、ピロリジン、２－（４－ピペリジン）エタノール、２－（１－ピペラジニル）エタノール、４－ピペリジンカルボン酸、エチル４－ピペリジンカルボキシレート、（１Ｒ，４Ｒ）－２－オキサ－５－アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン、（１Ｓ，４Ｓ）－２－オキサ－５－アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン、３－オキサ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタンまたは８－オキサ－３－アザビシクロ［３．２．１］オクタン基。

【0035】

特定の実施形態では、Ｒ_１は、フェニルである。他の実施形態では、Ｒ_１は、ピリジルである。さらに他の実施形態では、Ｒ_１は、ベンジルオキシである。さらに他の実施形態では、Ｒ_１は、ピペロニルである。特定の実施形態では、Ｒ_１は、ＣＨ_３、Ｃ_２Ｈ_５、ＣＨ（ＣＨ_３）_２、ＯＣＨ_３、ＯＣ_２Ｈ_５、ＯＣ_３Ｈ_７、ＳＣＨ_３、ＣＦ_２ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＯＣＨＦ_２、Ｎ（ＣＨ_３）_２、Ｆ、Ｃｌ、またはＯＨで置換されている。特定の好ましい実施形態では、Ｒ_１は、ＣＨ_３で置換されている。他の好ましい実施形態では、Ｒ_１は、ＯＣＨ_３で置換されている。特定の実施形態では、ＯＣＨ_３は、イソオキサゾールに対してパラである。特定の実施形態では、ＯＣＨ_３は、イソオキサゾールに対してオルトである。特定の実施形態では、ＯＣＨ_３は、イソオキサゾールに対してメタである。さらに他の好ましい実施形態では、Ｒ_１は、Ｆで置換されている。特定の実施形態では、Ｒ_１は、１つのＦで置換されている。特定の実施形態では、Ｆは、イソオキサゾールに対してパラである。特定の実施形態では、Ｆは、イソオキサゾールに対してオルトである。特定の実施形態では、Ｆは、イソオキサゾールに対してメタである。特定の実施形態では、Ｒ_１は、２つのＦで置換されている。特定の実施形態では、第１のＦは、イソオキサゾールに対してメタであり、第２のＦは、イソオキサゾールに対してオルトである。さらに好ましい実施形態では、Ｒ_１は、ＯＣＨ_３およびＦで置換されている。特定の実施形態では、ＯＣＨ_３は、イソオキサゾールに対してパラであり、Ｆは、イソオキサゾールに対してメタである。特定の実施形態では、ＯＣＨ_３は、イソオキサゾールに対してパラであり、Ｆは、イソオキサゾールに対してオルトである。特定の実施形態では、Ｆは、イソオキサゾールに対してパラであり、ＯＣＨ_３は、イソオキサゾールに対してメタである。さらに好ましい実施形態では、Ｒ_１は、ＯＣＨ_３および２つのＦで置換されている。特定の実施形態では、ＯＣＨ_３は、イソオキサゾールに対してパラであり、両方のＦは、イソオキサゾールに対してメタである。特定の実施形態では、ＯＣＨ_３は、イソオキサゾールに対してパラであり、１つのＦは、イソオキサゾールに対してメタであり、１つのＦはイソオキサゾールに対してオルトである。

【0036】

特定の実施形態では、Ｒ_２は、Ｈである。他の実施形態では、Ｒ_２は、ＣＨ_３である。

【0037】

特定の実施形態では、Ｒ_３は、Ｈである。他の実施形態では、Ｒ_３は、Ｆである。さらに他の実施形態では、Ｒ_３は、Ｃｌである。

【0038】

特定の好ましい実施形態では、Ｒ_５は、モルホリンである。他の好ましい実施形態では、Ｒ_５は、ピペリジンである。さらに他の好ましい実施形態では、Ｒ_５は、４－フルオロピペリジンである。さらに他の好ましい実施形態では、Ｒ_５は、４，４－ジフルオロピペリジンである。さらに他の好ましい実施形態では、Ｒ_５は、３－オキサ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタンである。さらに他の好ましい実施形態では、Ｒ_５は、８－オキサ－３－アザビシクロ［３．２．１］オクタンである。さらに他の好ましい実施形態では、Ｒ_５は、２，６－ジメチルモルホリンである。さらに他の好ましい実施形態では、Ｒ_５は、４－メチルピペリジンである。さらに他の好ましい実施形態では、Ｒ_５は、４－メチルピペリジンである。

【0039】

特定の実施形態では、Ｘ_１は、Ｃである。他の実施形態では、Ｘ_１は、Ｎである。

【0040】

本開示の特定の最終的な成分を以下に示す。
３－（３－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物６）
３－（２－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物７）
Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）－３－フェニルイソオキサゾール－５－アミン（化合物８）
３－（４－エトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物９）
Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）－３－（４－プロポキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１０）
３－（４－フルオロフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１１）
３－（４－クロロフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１２）
Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）－３－（ｐ－トリル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１３）
３－（４－エチルフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１４）
３－（４－イソプロピルフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１５）
Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）－３－（４－（トリフルオロメチル）フェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１６）
３－（４－（１，１－ジフルオロエチル）フェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１７）
３－（４－（ジフルオロメトキシ）フェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１８）
Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）－３－（４－（トリフルオロメトキシ）フェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１９）
３－（４－（メチルチオ）フェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物２０）
３－（４－（ジメチルアミノ）フェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物２１）
３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物２２）
３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物２３）
３－（３，４－ジメトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物２４）
３－（２，３－ジフルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物２５）
３－（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－イル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物２６）
３－（６－メトキシピリジン－３－イル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物２７）
４－（５－（（２－モルホリノピリミジン－４－イル）アミノ）イソオキサゾール－３－イル）フェノール（化合物３０）
３－（４－（ベンジルオキシ）フェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物３２）
Ｎ－（２－（（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物３３）
Ｎ－（２－（３－オキサ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物３４）
Ｎ－（２－（８－オキサ－３－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物３５）
Ｎ－（２－（（１Ｓ，４Ｓ）－２－オキサ－５－アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－５－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物３６）
Ｎ－（２－（（１Ｒ，４Ｒ）－２－オキサ－５－アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－５－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物３７）
Ｎ－（２－（４－フルオロピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物３８）
Ｎ－（２－（４，４－ジフルオロピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物３９）
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－チオモルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４０）
４－（４－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）チオモルホリン１，１－ジオキシド（化合物４１）
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（ピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４２）
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－メチルピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４３）
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－（トリフルオロメチル）ピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４４）
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（ピロリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４５）
２－（１－（４－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－４－イル）エタン－１－オール（化合物４６）
２－（４－（４－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オール（化合物４７）
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４８）
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（ピペラジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４９）
エチル１－（４－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－４－カルボキシレート（化合物５０）
１－（４－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）ピペリジン－４－カルボン酸（化合物５１）
Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）－Ｎ^２－モルホリノピリミジン－２，４－ジアミン（化合物５２）
Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）－Ｎ^２－（ピペリジン－１－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン（化合物５３）
Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）－Ｎ^２－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン（化合物５４）
Ｎ－（５－クロロ－２－（４－フルオロピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物５９）
Ｎ－（５－フルオロ－２－（４－フルオロピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物６０）
Ｎ－（２－（４－フルオロピペリジン－１－イル）－６－メチルピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物６１）
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物６２）
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－メチル－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物６３）
３－（４－（ジメチルアミノ）フェニル）－Ｎ－（２－（４－フルオロピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物６４）
３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－フルオロピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物６５）
Ｎ－（２－（３－オキサ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物６６）
３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（ピロリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物６７）
３－（２，３－ジヒドロベンゾフラン－５－イル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物６９）
３－（２，２－ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－イル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物７０）
Ｎ^２－シクロプロピル－Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン（化合物７１）
Ｎ^２－イソブチル－Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン（化合物７２）
Ｎ^２－（２－メトキシエチル）－Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン（化合物７３）
Ｎ^１，Ｎ^１－ジエチル－Ｎ^２－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）－Ｎ^２－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）エタン－１，２－ジアミン（化合物７４）
Ｎ^１－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）－Ｎ^２，Ｎ^２－ジメチル－Ｎ１－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）エタン－１，２－ジアミン（化合物７５）
２－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）（２－モルホリノピリミジン－４－イル）アミノ）アセトニトリル（化合物７６）
３－（５－メトキシピリジン－２－イル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物７７）
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物７８）
３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物７９）
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（４－モルホリノ－１，３，５－トリアジン－２－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物８０）
Ｎ^２－（２，２－ジフルオロエチル）－Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン（化合物８１）
２－（（４－（（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）アミノ）エタン－１－オール（化合物８２）
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物８３）
３－（２，３－ジフルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物８４）
３－（３，５－ジフルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物８５）
Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）－３－（３，４，５－トリメトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物８６）
３－（ベンゾフラン－５－イル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物８７）
３－（２，５－ジフルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物８８）
３－（２，５－ジフルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（（２Ｒ、６Ｓ）－２，６－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物８９）
Ｎ^４－（３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－イル）－Ｎ^２－メチルピリミジン－２，４－ジアミン（化合物９０）
３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－（トリフルオロメチル）ピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物９１）
３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－メチルピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物９２）
Ｎ－（２－（（２Ｒ、６Ｓ）－２，６－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物９３）
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－（トリフルオロメチル）ピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物９４）
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－メチルピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物９５）
Ｎ－（２－（（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物９６）
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（２，２，６，６－テトラメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物９７）
Ｎ－（２－（３，３－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物９８）
Ｎ－（２－（２，２－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物９９）
Ｎ－（２－（３，５－ジメチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１００）
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（２－メチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１０１）
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（３－メチルモルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１０２）
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（２－（トリフルオロメチル）モルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１０３）
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（テトラヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｃ］ピロール－５（３Ｈ）－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１０４）
Ｎ－（２－（３－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１０５）
Ｎ－（２－（７－アザスピロ［３．５］ノナン－７－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１０６）
Ｎ－（２－（４，４－ジメチルピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１０７）
Ｎ－（２－（２－オキサ－６－アザスピロ［３．３］ヘプタン－６－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１０８）
Ｎ－（２－（１－オキサ－７－アザスピロ［３．５］ノナン－７－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１０９）
Ｎ－（２－（６－アザスピロ［２．５］オクタン－６－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１１０）
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（３－メチル－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１１１）
Ｎ－（２－（２，２－ジフルオロモルホリノ）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１１２）
Ｎ－（２－（２－オキサ－５－アザビシクロ￥［２．２．２］オクタン－５－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１１３）
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（３－（トリフルオロメチル）モルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１１４）
Ｎ－（２－（６－オキサ－３－アザビシクロ［３．１．１］ヘプタン－３－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１１５）
Ｎ－（２－（２－オキサ－５－アザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－５－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１１６）
Ｎ－（２－（４－オキサ－７－アザスピロ［２．５］オクタン－７－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１１７）
Ｎ－（２－（７－オキサ－４－アザスピロ［２．５］オクタン－４－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１１８）
Ｎ－（２－（２－オキサ－８－アザスピロ［４．５］デカン－８－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１１９）
Ｎ－（２－（２－オキサ－６－アザスピロ［３．４］オクタン－６－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１２０）
Ｎ－（２－（２－オキサ－７－アザスピロ［３．５］ノナン－７－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１２１）
Ｎ－（２－（２－オキサ－７－アザスピロ［４．４］ノナン－７－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１２２）
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（２，２，６，６－テトラフルオロモルホリノ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１２３）
Ｎ－（２－（６－アザビシクロ［３．１．１］ヘプタン－６－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１２４）
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（３－メチル－６－アザビシクロ［３．１．１］ヘプタン－６－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１２５）
Ｎ－（２－（３，５－ジメチルピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１２６）
３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（４－イソプロピルピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１２７）
Ｎ－（２－（４－（ジフルオロメチル）ピペリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１２８）
Ｎ－（２－（６－アザスピロ［３．５］ノナン－６－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１２９）
Ｎ－（２－（２－アザスピロ［３．５］ノナン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１３０）
３－（２－クロロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－モルホリノピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１３１）

【0041】

本開示の各元の中間体を以下に示す。
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ａ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（３－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｂ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（２－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｃ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－フェニルイソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｄ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（４－エトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｅ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（４－プロポキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｆ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（４－フルオロフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｇ）
３－（４－クロロフェニル）－Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｈ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（ｐ－トリル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｉ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（４－エチルフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｊ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（４－イソプロピルフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｋ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（４－（トリフルオロメチル）フェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｌ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（４－（１，１－ジフルオロエチル）フェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｍ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（４－（ジフルオロメトキシ）フェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｎ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（４－（トリフルオロメトキシ）フェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｏ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（４－（メチルチオ）フェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｐ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（４－（ジメチルアミノ）フェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｒ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｓ）
３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｔ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（３，４－ジメトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｕ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（２，３－ジフルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｖ）
３－（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－イル）－Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｙ）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（６－メトキシピリジン－３－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物４ｚ）
３－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２－（メチルチオ）ピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物２８）
４－（５－（（２－クロロピリミジン－４－イル）アミノ）イソオキサゾール－３－イル）フェノール（化合物２９）
３－（４－（ベンジルオキシ）フェニル）－Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物３１）
Ｎ－（２，５－ジクロロピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物５５）
Ｎ－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物５６）
Ｎ－（２－クロロ－６－メチルピリミジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物５７）
Ｎ－（２－クロロピリジン－４－イル）－３－（４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物５８）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（２－フルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１３２）
Ｎ－（２－クロロピリミジン－４－イル）－３－（２，５－ジフルオロ－４－メトキシフェニル）イソオキサゾール－５－アミン（化合物１３３）

【0042】

本開示の抗がん剤は、本開示の特定の最終化合物の以下の化学構造によって表される一般式（Ｉ）の化合物を含む。

【化6-1】

【化6-2】

【化6-3】

【化6-4】

【0043】

特定の実施形態では、化合物は、

【化7-1】

【化7-2】

【化7-3】

【化7-4】

またはその薬学的に許容される塩から選択される。

【0044】

上に示した化合物は、本発明者らによって合成された新規の化合物である。以下、これらの新規の化合物の合成方法について説明する。以下に記載する一般的な合成方法による本開示の代表的な化合物は、以下のスキームにおいてより具体的に示されている。スキームは例示であるため、開示は、表された化学反応および条件によって限定されると解釈されるべきではない。スキームで使用される様々な出発材料の調製は、当技術分野に精通した人の技能の範囲内である。以下のスキームで表される、式（Ｉ）の化合物またはその形態の置換基は、本明細書ですでに定義された通りである。

【0045】

別の態様では、本開示は、本明細書に開示される化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。

【0046】

さらに別の態様では、本開示は、請求項１～５３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、対象におけるＴＡＣＣ３媒介性疾患または障害を治療する方法を提供する。特定の実施形態では、ＴＡＣＣ３媒介性疾患または障害は、がんである。特定の実施形態では、がんは、乳がん、結腸がん、メラノーマがん、肺がん、中枢神経系がん、卵巣がん、白血病がん、腎がんまたは前立腺がんである。特定の実施形態では、がんは、ＮＣＩ－６０パネルから選択されるがんである。

【0047】

さらに別の態様では、本開示は、請求項１～５３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、対象のがんを治療する方法を提供する。特定の実施形態では、がんは、乳がん、結腸がん、メラノーマがん、肺がん、中枢神経系がん、卵巣がん、白血病がん、腎がんまたは前立腺がんである。特定の実施形態では、がんは、ＮＣＩ－６０パネルから選択されるがんである。

【0048】

さらに別の態様では、本開示は、方法がスキームＩによって表される本開示の化合物、

【化8】

またはその薬学的に許容される塩を作製する方法を提供し、式中、
Ｘ_１は、ＮまたはＣＲ_６であり、
Ｘ_２は、ＮまたはＣＲ_３であり、
Ｒ_１は、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ_２は、Ｈまたはアルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_６は、各々独立してＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アシル、アセチル、エステル、チオエステル、アルコキシ、ホスホリル、アミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、アルキルチオ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、またはスルホンアミドであり、
Ｒ_５は、ヘテロシクリル、アルキル、またはアミノであり、
Ｒ_５１は、ハロであり、
Ｒ_５２は、ヘテロシクリルまたはアルキルであり、
Ｘ^１０は、塩基であり、
Ｘ^１１は、貴金属触媒であり、
Ｘ^１２は、ホスフィンリガンドである。

【0049】

特定の実施形態では、塩基は、炭酸塩、酸化物、三級アミン、二級アミン、または水素化物である。特定の実施形態では、酸化物は、アルコキシド（例えば、ｔｅｒｔ－ブトキシド）である。特定の実施形態では、三級アミンは、三級アルキルアミン（例えば、ジイソプロピルエチルアミン）である。特定の実施形態では、水素化物は、金属水素化物（例えば、水素化ナトリウム）である。特定の実施形態では、炭酸塩は、金属炭酸塩（例えば、炭酸セシウム）である。

【0050】

特定の実施形態では、貴金属触媒は、パラジウム触媒（例えば、酢酸パラジウムＩＩ）である。

【0051】

特定の実施形態では、ホスフィン触媒は、アリールホスフィン（例えば、トリフェニルホスフィン）である。特定の実施形態では、ホスフィン触媒はキサントホスである。

【0052】

特定の実施形態では、この方法はさらに溶媒を含む。特定の実施形態では、溶媒は、三級ブタノール、ジメチルアセトアミド、またはジオキサンである。

【0053】

特定の実施形態では、この方法は、さらに加熱を含む。

【0054】

特定の実施形態では、この方法は、不活性雰囲気下で行われる。

【0055】

医薬組成物
本開示の組成物および方法は、治療を必要とする個体を治療するために利用することができる。特定の実施形態では、個体は、ヒトなどの哺乳動物、または非ヒト哺乳動物である。ヒトなどの動物に投与される場合、組成物または化合物は、好ましくは、例えば、本開示の化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与される。薬学的に許容される担体は、当技術分野で周知であり、例えば、水もしくは生理学的に緩衝された生理食塩水もしくは他の溶媒などの水溶液、またはグリコール、グリセロールなどのビヒクル、オリーブ油などの油、または注射可能な有機エステルが含まれる。好ましい実施形態では、そのような医薬組成物がヒト投与用、特に侵襲的投与経路（すなわち、上皮バリアを介した輸送または拡散を回避する注射または移植などの経路）用である場合、水溶液はパイロジェンフリーか、または実質的にパイロジェンフリーである。賦形剤は、例えば、薬剤の遅延放出をもたらすように、または１つ以上の細胞、組織または臓器を選択的に標的化するように選択することができる。医薬組成物は、錠剤、カプセル剤（スプリンクルカプセルおよびゼラチンカプセルを含む）、顆粒剤、再構成用の親液剤、散剤、液剤、シロップ剤、坐剤、注射剤などの投薬単位形態であり得る。組成物はまた、経皮送達システム、例えば、皮膚パッチ内に存在することができる。組成物はまた、ローション、クリーム、または軟膏などの局所投与に適した溶液中に存在することができる。

【0056】

薬学的に許容される担体は、例えば、本開示の化合物などの化合物の安定化、溶解度の増加、または吸収の増加に作用する生理学的に許容される薬剤を含むことができる。そのような生理学的に許容される薬剤には、例えば、グルコース、スクロースまたはデキストランなどの炭水化物、アスコルビン酸またはグルタチオンなどの抗酸化剤、キレート剤、低分子量タンパク質または他の安定剤もしくは賦形剤が含まれる。生理学的に許容される薬剤を含む、薬学的に許容される担体の選択は、例えば、組成物の投与経路に依存する。調製物または医薬組成物は、自己乳化型薬物送達システムまたは自己マイクロ乳化型薬物送達システムであり得る。医薬組成物（調製物）はまた、リポソームまたは他のポリマーマトリックスであり得、例えば、本開示の化合物をその中に組み込むことができる。例えば、リン脂質または他の脂質を含むリポソームは、無毒であり、生理学的に許容され、かつ代謝可能な担体であり、製造および投与が比較的容易である。

【0057】

「薬学的に許容される」という句は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、またはその他の問題および合併症なしに、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに適し、合理的な利益／リスク比に見合った化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すように本明細書で使用される。

【0058】

本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という句は、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化材料などの薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクルを意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性があり、患者に有害ではないという意味で「許容される」必要がある。薬学的に許容される担体として役立ち得る材料のいくつかの例には、（１）乳糖、グルコース、およびショ糖などの糖、（２）トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン、（３）カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体、（４）粉末トラガカント、（５）麦芽、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）カカオバターおよび坐剤ワックスなどの賦形剤、（９）落花生油、綿実油、紅花油、胡麻油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油などの油、（１０）プロピレングリコールなどのグリコール、（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール、（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル、（１３）寒天、（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、（１５）アルギン酸、（１６）パイロジェンフリー水、（１７）等張食塩水、（１８）リンガー溶液、（１９）エチルアルコール、（２０）リン酸緩衝溶液、ならびに（２１）医薬製剤で使用される他の非毒性適合性物質が挙げられる。

【0059】

医薬組成物（調製物）は、例えば、経口（例えば、液剤もしくは非液剤もしくは懸濁剤、錠剤、カプセル剤（スプリンクルカプセル剤およびゼラチンカプセル剤を含む）のような水薬、舌に適用するためのボーラス剤、散剤、顆粒剤、ペースト剤）；口腔粘膜を介した吸収（例えば、舌下）；皮下；経皮的（例えば、皮膚に適用されるパッチ剤として）；局所的（例えば、皮膚に塗布されるクリーム剤、軟膏またはスプレー剤として）を含むいくつかの投与経路のいずれかによって対象に投与することができる。化合物はまた、吸入用に調製され得る。特定の実施形態では、化合物は、滅菌水に単純に溶解または懸濁され得る。適切な投与経路およびそれに適した組成物の詳細は、例えば、米国特許第６，１１０，９７３号、第５，７６３，４９３号、第５，７３１，０００号、第５，５４１，２３１号、第５，４２７，７９８号、第５，３５８，９７０号および第４，１７２，８９６号、ならびにそこに引用されている特許に記載されている。

【0060】

製剤は、単位剤形で都合よく提示することができ、薬局の分野でよく知られている任意の方法によって調製することができる。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、治療される宿主、特定の投与様式に応じて変化する。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、一般に、治療効果を生じる化合物のその量である。一般に、１００パーセントのうち、この量は、有効成分の約１パーセント～約９９パーセント、好ましくは約５パーセント～約７０パーセント、最も好ましくは約１０パーセント～約３０パーセントの範囲である。

【0061】

これらの製剤または組成物を調製する方法は、本開示の化合物などの活性化合物を、担体および、任意選択で１つ以上の補助成分と結合させるステップを含む。一般に、製剤は、本開示の化合物を液体担体または細かく分割された固体担体、あるいはその両方と均一かつ密接に結合させ、次に必要に応じて生成物を成形することによって調製される。

【0062】

経口投与に適した本開示の製剤は、カプセル剤（スプリンクルカプセル剤およびゼラチンカプセル剤を含む）、カシェ剤、丸薬、錠剤、ロゼンジ剤（風味付けベース、通常はスクロースおよびアカシアまたはトラガカントを使用）、親液剤、散剤、顆粒剤で、または水性もしくは非水性液体中の液剤または懸濁剤として、または水中油型もしくは油中水型乳剤として、または舐剤もしくはシロップ剤として、またはトローチ剤として（ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアなどの不活性塩基を使用）および／または口腔洗浄薬などの形態であり得、各々本開示の化合物の所定量を有効成分として含有する。組成物または化合物はまた、ボーラス剤、舐剤またはペースト剤として投与され得る。

【0063】

経口投与用の固形剤形（カプセル剤（スプリンクルカプセル剤およびゼラチンカプセル剤を含む）、錠剤、丸薬、糖衣錠、散剤、顆粒剤など）を調製するために、有効成分を、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム、および／または以下のいずれかなどの１つ以上の薬学的に許容される担体と混合する：（１）充填剤または増量剤、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸など、（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシアなど、（３）保湿剤、グリセロールなど、（４）崩壊剤、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカ澱粉、アルギン酸、特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウムなど、（５）溶解遅延剤、パラフィンなど、（６）吸収促進剤、四級アンモニウム化合物など、（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなど、（８）吸収剤、カオリンおよびベントナイト粘土など、（９）潤滑剤、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物など、（１０）錯化剤、修飾および非修飾シクロデキストリンなど、ならびに（１１）着色剤。カプセル剤（スプリンクルカプセル剤およびゼラチンカプセル剤を含む）、錠剤および丸薬の場合、医薬組成物はまた、緩衝剤を含み得る。同様のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を使用して、軟質および硬質充填ゼラチンカプセルの充填剤として使用することもできる。

【0064】

錠剤は、圧縮または成形によって、任意選択で１つ以上の補助成分を用いて作製することができる。圧縮錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムまたは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤または分散剤を使用して調製することができる。湿製錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を適切な機械で成形することによって作製することができる。

【0065】

錠剤、および糖衣錠、カプセル剤（スプリンクルカプセル剤およびゼラチンカプセル剤を含む）、丸薬および顆粒剤などの医薬組成物の他の固形の剤形は、任意選択で、割線を入れるか、または腸溶コーティングおよび医薬製剤分野で知られている他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて調製することができる。それらはまた、例えば、所望の放出プロファイルをもたらすように様々な比率でのキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／またはミクロスフェアを使用して、その中の活性成分の徐放または制御放出を提供するように調製され得る。それらは、例えば、細菌保持フィルターによるろ過によって、または使用直前に滅菌水または他の滅菌注射用媒体に溶解することができる滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって滅菌することができる。これらの組成物はまた、任意選択で乳白剤を含み得、それらが活性成分のみ、または優先的に、消化管の特定の部分において、任意選択で、遅延様式で放出する組成物であり得る。使用できる埋め込み組成物の例には、高分子物質およびワックスが含まれる。有効成分はまた、適切な場合、上記の賦形剤のうちの１つ以上とともにマイクロカプセル化された形態であり得る。

【0066】

経口投与に有用な液体剤形には、薬学的に許容される乳剤、再構成用の親液剤、マイクロ乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。有効成分に加えて、液体剤形は、当技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、シクロデキストリンおよびその誘導体、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、油（特に綿実、落花生、トウモロコシ、胚芽、オリーブ、ヒマシ油、ゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物などを含み得る。

【0067】

不活性希釈剤に加えて、経口組成物はまた、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、香味料、着色剤、香料剤および保存剤などの補助剤を含むことができる。

【0068】

懸濁剤は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタヒドロキシアルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカント、ならびにそれらの混合物などの懸濁化剤を含み得る。

【0069】

局所または経皮投与用の剤形には、散剤、スプレー剤、軟膏、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、液剤、パッチ剤および吸入剤が含まれる。活性化合物は、無菌条件下で、薬学的に許容される担体、および任意の保存剤、緩衝剤、または必要とされ得る噴射剤と混合され得る。

【0070】

軟膏、ペースト剤、クリーム剤およびゲル剤は、活性化合物に加えて、動植および物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはそれらの混合物などの賦形剤を含有し得る。

【0071】

散剤およびスプレー剤は、活性化合物に加えて、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物などの賦形剤を含有することができる。スプレー剤は、クロロフルオロ炭化水素などの通常の噴射剤および、ブタンやプロパンなどの揮発性の非置換炭化水素を追加で含有し得る。

【0072】

経皮パッチ剤は、本開示の化合物の身体への制御送達を提供するという追加の利点を有する。そのような剤形は、活性化合物を適切な媒体に溶解または分散させることによって作製することができる。吸収促進剤を使用して、皮膚を横切る化合物の流れを増加させることもできる。そのような流束の速度は、速度制御膜を提供するか、または化合物をポリマーマトリックスまたはゲルに分散させることによって制御することができる。

【0073】

本明細書で使用される「非経口投与」および「非経口的に投与される」という句は、通常は注射による経腸および局所投与以外の投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内髄腔内、嚢胞内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内および胸骨内の注射および注入を含むがこれらに限定されない。非経口投与に適した医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される滅菌等張水溶液もしくは非水溶液、分散液、懸濁液もしくは乳濁液、または使用直前に滅菌注射液もしくは分散液に再構成され得、抗酸化剤、緩衝剤、静菌薬、目的のレシピエントの血液もしくは懸濁剤もしくは増粘剤と製剤を等張にする溶媒を含有し得る、滅菌粉末と組み合わせた１つ以上の活性化合物を含む。

【0074】

本開示の医薬組成物に使用することができる適切な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物、オリーブ油などの植物油、ならびにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用、分散液の場合に必要とされる粒径の維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。

【0075】

これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤などの補助剤を含み得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによって確実にすることができる。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含めることも望ましいこともあり得る。さらに、注射可能な剤形の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅らせる薬剤を含めることによってもたらされ得る。

【0076】

場合によっては、薬物の効果を維持するために、皮下または筋肉内注射からの薬物の吸収を遅らせることが望ましい。これは、水溶性が低い結晶性またはアモルファス材料の液体懸濁液を使用することによって達成することができる。次に、薬物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、それは次に、結晶サイズおよび結晶形に依存し得る。あるいは、非経口的に投与された薬物形態の遅延吸収は、薬物を油性ビヒクルに溶解または懸濁することによって達成される。

【0077】

注射可能なデポ形態は、ポリラクチド－ポリグリコリドなどの生分解性ポリマーで対象化合物のマイクロカプセル化マトリックスを形成することによって作製される。ポリマーに対する薬物の比率、および使用される特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。デポ注射可能な製剤はまた、体組織と適合性のあるリポソームまたはマイクロ乳剤に薬物を閉じ込めることによって調製される。

【0078】

本開示の方法で使用するために、活性化合物は、それ自体で、または例えば、薬学的に許容される担体と組み合わせて０．１～９９．５％（より好ましくは０．５～９０％）の活性成分を含有する医薬組成物として与えることができる。

【0079】

導入の方法はまた、充電式または生分解性デバイスによって提供され得る。タンパク質性バイオ医薬品を含む薬物の制御された送達のために、近年、様々な徐放性ポリマーデバイスが開発され、インビボで試験されてきた。生分解性ポリマーおよび非分解性ポリマーの両方を含む、様々な生体適合性ポリマー（ヒドロゲルを含む）を使用して、特定の標的部位で化合物を持続放出するためのインプラントを形成することができる。

【0080】

医薬組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、特定の患者のための治療反応、組成物、および投与様式を、患者に毒性を及ぼすことなく達成するのに効果的な有効成分の量が得られるように変えることができる。

【0081】

選択される投与量レベルは、例えば、使用されている特定の化合物もしくは化合物の組み合わせ、またはそれらのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の排出速度、治療期間、使用されている特定の化合物と組み合わせて用いられている他の薬物、化合物および／または物質、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般的な健康状態、および以前の病歴など、医療分野でよく知られている要因を含む様々な要因に依存する。

【0082】

当技術分野で通常の技能を有する医師または獣医は、必要とされる治療有効量の医薬組成物を容易に決定および処方することができる。例えば、医師または獣医は、所望の治療効果を達成するために必要とされるレベルよりも低いレベルで医薬組成物または化合物の用量を開始し、所望の効果が達成されるまで用量を徐々に増加させることができる。「治療有効量」とは、所望の治療効果を引き出すのに十分な化合物の濃度を意味する。有効量の化合物は、対象の体重、性別、年齢、および病歴によって異なることが一般的に理解されている。有効量に影響を与える他の要因には、患者の状態の重症度、治療される障害、化合物の安定性、および必要に応じて、本開示の化合物とともに投与される別のタイプの治療薬が挙げられるが、これらに限定されない。薬剤の複数回投与により、多くの総用量を送達することができる。有効性および投薬量を決定する方法は、当業者に知られている（Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １３ ｅｄ．，１８１４－１８８２、参照により本明細書に組み入れられる）。

【0083】

一般に、本開示の組成物および方法で使用される活性化合物の適切な１日量は、治療効果を生み出すのに有効な最低用量である化合物の量である。このような有効量は、一般に上記の要因に依存する。

【0084】

必要に応じて、活性化合物の有効な１日量は、１日を通して適切な間隔で、任意選択で、単位剤形で別々に投与される１、２、３、４、５、６またはそれ以上のサブ用量として投与され得る。本開示の特定の実施形態では、活性化合物は、１日２回または３回投与され得る。好ましい実施形態では、活性化合物は、１日１回投与される。

【0085】

この治療を受けている患者は、霊長類、特にヒト、およびウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ネコ、イヌなどの他の哺乳動物、家禽、ならびに一般的なペットを含む、治療を必要とするあらゆる動物である。

【0086】

特定の実施形態では、本開示の化合物は、単独で使用され得るか、または別のタイプの治療薬と併用して投与され得る。

【0087】

本開示は、本開示の組成物および方法における本開示の化合物の薬学的に許容される塩の使用を含む。特定の実施形態では、本開示の企図される塩には、アルキル、ジアルキル、トリアルキルまたはテトラアルキルアンモニウム塩が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本開示の企図される塩には、Ｌ－アルギニン、ベネンタミン、ベンザチン、ベタイン、水酸化カルシウム、コリン、デアノール、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２－（ジエチルアミノ）エタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ－イミダゾール、リチウム、Ｌ－リジン、マグネシウム、４－（２－ヒドロキシエチル）モルホリン、ピペラジン、カリウム、１－（２－ヒドロキシエチル）ピロリジン、ナトリウム、トリエタノールアミン、トロメタミン、および亜鉛塩が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本開示の企図される塩には、Ｎａ、Ｃａ、Ｋ、Ｍｇ、Ｚｎまたは他の金属塩が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本開示の企図される塩には、１－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、２，２－ジクロロ酢酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、２－オキソグルタル酸、４－アセトアミド安息香酸、４－アミノサリチル酸、酢酸、アジピン酸、ｌ－アスコルビン酸、ｌ－アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、（＋）－カンフル酸、（＋）－カンフル－１０－スルホン酸、カプリン酸（デカン酸）、カプロン酸（ヘキサン酸）、カプリリン酸（オクタン酸）、炭酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン－１，２－ジスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、ｄ－グルコヘプトン酸、ｄ－グルコン酸、ｄ－グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、ヒプリン酸、臭化水素酸、塩酸、イソ酪酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、ｌ－リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、プロピオン酸、ｌ－ピログルタミン酸、サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、ｌ－酒石酸、チオシアン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、およびウンデシレン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。

【0088】

薬学的に許容される酸付加塩はまた、水、メタノール、エタノール、ジメチルホルムアミドなどとの様々な溶媒和物として存在することができる。そのような溶媒和物の混合物も調製することができる。そのような溶媒和物の供給源は、結晶化溶媒から、調製または結晶化溶媒に固有のもの、またはそのような溶媒に不定のものであり得る。

【0089】

ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなどの湿潤剤、乳化剤および潤滑剤、ならびに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味料、香味料および芳香剤、保存剤および抗酸化剤もまた、組成物中に存在し得る。

【0090】

薬学的に許容される抗酸化剤の例には、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤、（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α－トコフェロールなどの油溶性抗酸化剤、（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤が挙げられる。

【0091】

定義
本明細書で別段の定義がない限り、本出願で使用される科学的および技術的用語は、当技術分野の通常の技術者によって一般的に理解される意味を有するものとする。一般に、本明細書に記載の化学、細胞および組織培養、分子生物学、細胞およびがん生物学、神経生物学、神経化学、ウイルス学、免疫学、微生物学、薬理学、遺伝学およびタンパク質および核酸化学に関連して使用される命名法、およびそれらの技術は、当技術分野で周知であり、一般的に使用されているものである。

【0092】

本開示の方法および技術は、通常、他に示されない限り、当技術分野で周知であり、本明細書全体で引用および考察される様々な一般的かつより具体的な参考文献に記載の従来の方法に従い、行われる。例えば、“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｎｅｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ”，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（２０００）、Ｍｏｔｕｌｓｋｙ，“Ｉｎｔｕｉｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ”，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９９５）、Ｌｏｄｉｓｈ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．”，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（２０００）、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ，７ｔｈ ｅｄ．”，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．（１９９９）、およびＧｉｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．”，Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，ＭＡ（２０００）を参照されたい。

【0093】

本明細書で使用される化学用語は、本明細書で別段の定義がない限り、“Ｔｈｅ ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ”，Ｐａｒｋｅｒ Ｓ．，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃ．Ａ．（１９８５）に例示されるように、当技術分野での従来の使用法に従って使用される。

【0094】

上記のすべて、および本出願で言及されている他の刊行物、特許、および公開された特許出願は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。矛盾する場合は、特定の定義を含む本明細書が優先される。

【0095】

「薬剤」という用語は、本明細書では、化合物（有機または無機化合物、化合物の混合物など）、生物学的高分子（核酸、抗体、その一部、ならびにヒト化、キメラおよびヒト抗体およびモノクローナル抗体、タンパク質またはその一部、例えば、ペプチド、脂質、炭水化物）、または細菌、植物、真菌、もしくは動物（特に哺乳動物）の細胞もしくは組織などの生物学的材料から作製された抽出物を示すために使用される。薬剤には、例えば、構造がわかっている薬剤および構造がわかっていない薬剤が含まれる。ＡＲを阻害するかまたはＡＲ分解を促進するそのような薬剤の能力は、それらを本開示の方法および組成物における「治療薬」として適切にし得る。

【0096】

「患者」、「対象」、または「個人」は互換的に使用され、ヒトまたは非ヒト動物のいずれかを指す。これらの用語には、ヒト、霊長類、家畜（ウシ、ブタなどを含む）、コンパニオンアニマル（イヌ、ネコなど）、およびげっ歯類（マウス、ラットなど）などの哺乳動物が含まれる。

【0097】

状態または患者を「治療すること」とは、臨床結果を含む有益なまたは望ましい結果を得るための措置を講じることを指す。本明細書で使用される場合、当技術分野でよく理解されているように、「治療」は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。有益なまたは望ましい臨床結果には、検出可能または検出不可能にかかわらず、１つ以上の症状または状態の緩和または改善、疾患の程度の減少、疾患の安定した（すなわち悪化しない）状態、疾患の拡大の防止、疾患の進行の遅延または進行を遅らせること、病状の改善または一時的緩和、および寛解（部分的または全体的）が含まれ得るが、これらに限定されない。「治療」はまた、治療を受けていない場合に期待される生存と比較して生存を延長することを意味する場合がある。

【0098】

「予防する」という用語は、当技術分野で認識されており、局所再発（例えば、疼痛）、がんなどの疾患、心不全などの複合症候群、またはその他の病状などの状態に関連して使用される場合、当技術分野で十分に理解されており、組成物を受け取らない対象と比較して、対象における病状の症状の頻度を低減するか、または発症を遅らせる組成物の投与を含む。したがって、がんの予防には、例えば、未治療の対照集団と比較して予防的治療を受けている患者の集団における検出可能ながん性成長の数を低減すること、および／または未治療対照集団に対して治療集団における検出可能ながん性成長の出現を統計的および／または臨床的に有意な量によって遅らせることが含まれる。

【0099】

対象への物質、化合物または薬剤の「投与すること」または「投与」は、当技術分野で既知の様々な方法のうちの１つを使用して行うことができる。例えば、化合物または薬剤は、静脈内、動脈、皮内、筋肉内、腹腔内、皮下、眼、舌下、経口（摂取による）、鼻腔内（吸入による）、脊髄内、脳内、および経皮（吸収による、例えば、皮膚管を通して）に投与することができる。化合物または薬剤はまた、充電式もしくは生分解性ポリマーデバイスまたは他のデバイス、例えば、パッチおよびポンプ、または化合物または薬剤の持続、徐放または制御放出を提供する製剤によって適切に導入することができる。投与はまた、例えば、１回、複数回、および／または１期間以上の長期間にわたって行うことができる。

【0100】

物質、化合物または薬剤を対象に投与する適切な方法はまた、例えば、対象の年齢および／または身体的状態、ならびに化合物または薬剤の化学的および生物学的特性（例えば、溶解度、消化性、生物学的利用能、安定性および毒性）に依存する。いくつかの実施形態では、化合物または薬剤は、経口的に、例えば、摂取によって対象に投与される。いくつかの実施形態では、経口投与される化合物もしく薬剤は、持続放出または徐放性製剤であるか、またはそのような徐放性または持続放出のためのデバイスを使用して投与される。

【0101】

本明細書で使用される場合、「共同投与」という句は、以前に投与された治療薬が依然として体内で有効である間に第２の薬剤が投与されるような２つ以上の異なる治療薬の任意の形態の投与を指す（例えば、２つの薬剤は同時に患者に効果的であり、２つの薬剤の相乗効果が含まれ得る）。例えば、異なる治療用化合物は、同じ製剤で、または別々の製剤で、同時にまたは連続して投与することができる。したがって、そのような治療を受ける個人は、異なる治療薬の複合効果から恩恵を受けることができる。

【0102】

薬物または薬剤の「治療有効量」または「治療上有効な用量」は、対象に投与されたときに意図された治療効果を有する薬物または薬剤の量である。完全な治療効果は、必ずしも１回の投与で生じるわけではなく、一連の投与後にのみ生じ得る。したがって、治療有効量は、１回以上の投与で投与することができる。対象が必要とする正確な有効量は、例えば、対象のサイズ、健康および年齢、ならびにがんまたはＭＤＳなどの治療されている状態の性質および程度に依存する。当業者は、日常的な実験によって、所与の状況に対する有効量を容易に決定できる。

【0103】

本明細書で使用される場合、「任意選択」または「任意選択で」という用語は、後に記載するイベントまたは状況が発生する可能性がある、または発生しない可能性があることを意味し、説明には、イベントまたは状況が発生する場合と発生しない場合が含まれる。例えば、「任意選択で置換されたアルキル」は、アルキルが置換され得る場合、ならびにアルキルが置換されていない場合を指す。

【0104】

本開示の化合物上の置換基および置換パターンは、容易に入手可能な出発物質から当技術分野で既知の技術、ならびに以下に記載の方法によって、容易に合成され得る化学的に安定な化合物をもたらすように、当業者によって選択され得る。置換基自体が複数の基で置換されている場合、安定した構造が得られる限り、これらの複数の基は、同じ炭素上または異なる炭素上にあり得ることが理解される。

【0105】

本明細書で使用される場合、「任意選択で置換される」という用語は、所与の構造中の１～６個の水素ラジカルを、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ハロゲン、アルキル、ニトロ、シリル、アシル、アシルオキシ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アミノ、アミノアルキル、シアノ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、－ＯＣＯ－ＣＨ_２－Ｏ－アルキル、－ＯＰ（Ｏ）（Ｏ－アルキル）_２または－ＣＨ_２－ＯＰ（Ｏ）（Ｏ－アルキル）_２を含むがこれらに限定されない特定の置換基のラジカルで置換することを指す。好ましくは、「任意選択で置換された」とは、所与の構造中の１～４個の水素ラジカルを上記の置換基で置換することを指す。より好ましくは、１～３個の水素ラジカルは、上記の置換基によって置き換えられる。置換基をさらに置換することができることが理解される。

【0106】

本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、Ｃ_１～Ｃ_１０直鎖アルキル基またはＣ_１～Ｃ_１０分岐鎖アルキル基を含むがこれらに限定されない飽和脂肪族基を指す。好ましくは、「アルキル」基は、Ｃ_１～Ｃ_６直鎖アルキル基またはＣ_１～Ｃ_６分岐鎖アルキル基を指す。最も好ましくは、「アルキル」基は、Ｃ_１～Ｃ_４直鎖アルキル基またはＣ_１～Ｃ_４分岐鎖アルキル基を指す。「アルキル」の例には、メチル、エチル、１－プロピル、２－プロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、１－ペンチル、２－ペンチル、３－ペンチル、ネオ－ペンチル、１－ヘキシル、２－ヘキシル、３－ヘキシル、１－ヘプチル、２－ヘプチル、３－ヘプチル、４－ヘプチル、１－オクチル、２－オクチル、３－オクチルまたは４－オクチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。「アルキル」基は、任意選択で置換することができる。

【0107】

「アシル」という用語は、当技術分野で認識されており、一般式ヒドロカルビルＣ（Ｏ）－、好ましくはアルキルＣ（Ｏ）－によって表される基を指す。

【0108】

「アシルアミノ」という用語は、当技術分野で認識されており、アシル基で置換されたアミノ基を指し、例えば、式ヒドロカルビルＣ（Ｏ）ＮＨ－によって表すことができる。

【0109】

「アシルオキシ」という用語は、当技術分野で認識されており、一般式ヒドロカルビルＣ（Ｏ）Ｏ－、好ましくはアルキルＣ（Ｏ）Ｏ－によって表される基を指す。

【0110】

「アルコキシ」という用語は、それに酸素が結合しているアルキル基を指す。代表的なアルコキシル基としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシなどが挙げられる。

【0111】

「アルコキシアルキル」という用語は、アルコキシ基で置換されたアルキル基を指し、一般式アルキル－Ｏ－アルキルで表すことができる。

【0112】

「アルキル」という用語は、直鎖アルキル基、分岐鎖アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基、およびシクロアルキル置換アルキル基を含む飽和脂肪族基を指す。特定の実施形態では、直鎖または分岐鎖アルキルは、その骨格中に３０個以下（例えば、直鎖についてＣ_１～Ｃ_３０、分岐鎖についてＣ_３～Ｃ_３０）、より好ましくは２０個以下の炭素原子を有する。

【0113】

さらに、本明細書、実施例、および特許請求の範囲全体で使用される「アルキル」という用語は、非置換および置換アルキル基の両方を含むことを意図し、後者は、炭化水素骨格の１つ以上の炭素上の水素を置換する置換基を有するアルキル部分を指し、トリフルオロメチルおよび２，２，２－トリフルオロエチルなどのハロアルキル基を含む。

【0114】

「Ｃ_ｘ～ｙ」または「Ｃ_ｘ～Ｃ_ｙ」という用語は、アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシなどの化学部分と組み合わせて使用される場合、鎖にｘ～ｙ個の炭素を含有する基を含むことを意味する。Ｃ_０アルキルは、基が末端位置にある水素を示し、内部の場合は結合を示す。例えば、Ｃ_１～６アルキル基には、鎖に１～６個の炭素原子が含有されている。

【0115】

本明細書で使用される「アルキルアミノ」という用語は、少なくとも１つのアルキル基で置換されたアミノ基を指す。

【0116】

本明細書で使用される「アルキルチオ」という用語は、アルキル基で置換されたチオール基を指し、一般式アルキルＳ－で表すことができる。

【0117】

本明細書で使用される「アミド」という用語は、基

【化9】

を指し、
式中、Ｒ^９およびＲ^１０は、各々独立して、水素またはヒドロカルビル基を表すか、またはＲ^９およびＲ^１０は、それらが結合しているＮ原子と一緒になって、環構造に４～８個の原子を有する複素環を完成する。

【0118】

「アミン」および「アミノ」という用語は、当技術分野で認識されており、非置換および置換アミンの両方、その塩、例えば、式

【化10】

によって表され得る部分を指し、
を指し、式中、Ｒ^９、Ｒ^１０、およびＲ^１０‘は、各々独立して、水素またはヒドロカルビル基を表すか、またはＲ^９およびＲ^１０は、それらが結合しているＮ原子と一緒になって、環構造に４～８個の原子を有する複素環を完成する。

【0119】

本明細書で使用される「アミノアルキル」という用語は、アミノ基で置換されたアルキル基を指す。

【0120】

「アラルキル」という用語は、当技術分野で認識されており、アリール基で置換されたアルキル基を指す。

【0121】

本明細書で使用される「アリール」という用語は、環の各原子が炭素である置換または非置換の単一環芳香族基を含む。好ましくは、環は５～７員の環であり、より好ましくは６員の環である。「アリール」という用語には、２つ以上の環式環を有する多環式環系も含まれ、２つ以上の炭素は２つの隣接する環に共通であり、環の少なくとも１つは芳香族であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであり得る。アリール基には、ベンゼン、ナフタレン、フェナントレン、フェノール、アニリンなどが含まれる。

【0122】

「カルバメート」という用語は、当技術分野において認識されており、基

【化11】

を指し、
式中、Ｒ^９およびＲ^１０は、独立して水素またはヒドロカルビル基を表す。

【0123】

本明細書で使用される「カルボシクリルアルキル」という用語は、炭素環基で置換されたアルキル基を指す。

【0124】

「炭素環」という用語には、５～７員の単環式および８～１２員の二環式環が含まれる。二環式炭素環の各環は、飽和、不飽和、および芳香族環から選択することができる。炭素環には、１つ、２つ、または３つ以上の原子が２つの環の間で共有されている二環式分子が含まれる。「縮合炭素環」という用語は、各環が他の環と２つの隣接する原子を共有する二環式炭素環を指す。縮合炭素環の各環は、飽和、不飽和、および芳香族環から選択することができる。例示的な実施形態では、芳香環、例えば、フェニルは、飽和または不飽和環、例えば、シクロヘキサン、シクロペンタン、またはシクロヘキセンに縮合され得る。原子価が許す限り、飽和、不飽和、および芳香族の二環式環の任意の組み合わせが、炭素環式の定義に含まれる。例示的な「炭素環」には、シクロペンタン、シクロヘキサン、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、１，５－シクロオクタジエン、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン、ビシクロ［４．２．０］オクタ－３－エン、ナフタレンおよびアダマンタンが含まれる。例示的な縮合炭素環には、デカリン、ナフタレン、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン、ビシクロ［４．２．０］オクタン、４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－インデンおよびビシクロ［４．１．０］ヘプト－３－エンが含まれる。「炭素環」は、水素原子を保持することができる任意の１つ以上の位置で置換することができる。

【0125】

本明細書で使用される「カルボシクリルアルキル」という用語は、炭素環基で置換されたアルキル基を指す。

【0126】

「炭酸塩」という用語は、当技術分野で認識されており、基－ＯＣＯ_２－を指す。

【0127】

本明細書で使用される「カルボキシ」という用語は、式－ＣＯ_２Ｈによって表される基を指す。

【0128】

本明細書で使用される「エステル」という用語は、基－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^９を指し、式中、Ｒ^９は、ヒドロカルビル基を表す。

【0129】

本明細書で使用される「エーテル」という用語は、酸素を介して別のヒドロカルビル基に結合したヒドロカルビル基を指す。したがって、ヒドロカルビル基のエーテル置換基は、ヒドロカルビル－Ｏ－であり得る。エーテルは、対称または非対称のいずれかであり得る。エーテルの例には、複素環－Ｏ－複素環およびアリール－Ｏ－複素環が含まれるが、これらに限定されない。エーテルには「アルコキシアルキル」基が含まれ、これは一般式アルキル－Ｏ－アルキルで表すことができる。

【0130】

本明細書で使用される「ハロ」および「ハロゲン」という用語は、ハロゲンを意味し、クロロ、フルオロ、ブロモ、およびヨードを含む。

【0131】

本明細書で使用される「ヘタラルアルキル」および「ヘテロアラルキル」という用語は、ヘタリール基で置換されたアルキル基を指す。

【0132】

「ヘテロアリール」および「ヘタリール」という用語は、置換または非置換芳香族単環構造、好ましくは５～７員環、より好ましくは５～６員環を含み、その環構造は、少なくとも１つのヘテロ原子、好ましくは１～４個のヘテロ原子、より好ましくは１または２個のヘテロ原子を含む。「ヘテロアリール」および「ヘタリール」という用語には、２個以上の環式環を有する多環式環系も含まれ、２つ以上の炭素は２つの隣接する環に共通であり、環の少なくとも１つは複素芳香族環であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであり得る。ヘテロアリール基には、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、およびピリミジンなどが含まれる。

【0133】

本明細書で使用される「ヘテロ原子」という用語は、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄である。

【0134】

本明細書で使用される「複素環式アルキル」という用語は、複素環基で置換されたアルキル基を指す。

【0135】

「ヘテロシクリル」、「複素環」、および「複素環式」という用語は、置換または非置換非芳香族環構造、好ましくは３～１０員環、より好ましくは３～７員環を指し、その環構造は、少なくとも１つのヘテロ原子、好ましくは１～４個のヘテロ原子、より好ましくは１つまたは２つのヘテロ原子を含む。「ヘテロシクリル」および「複素環」という用語には、２つ以上の環式環を有する多環式環系も含まれ、２つ以上の炭素は２つの隣接する環に共通であり、環の少なくとも１つは芳香族であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであり得る。ヘテロシクリル基には、例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ラクトン、ラクタムなどが含まれる。

【0136】

本明細書で使用される「ヒドロカルビル」という用語は、＝Ｏまたは＝Ｓ置換基を有しない炭素原子を介して結合しており、典型的には少なくとも１つの炭素－水素結合および主に炭素骨格を有するが、任意選択でヘテロ原子を含めることができる基を指す。したがって、メチル、エトキシエチル、２－ピリジル、さらにはトリフルオロメチルなどの基は、本出願の目的ではヒドロカルビルとみなされるが、アセチル（結合炭素上に＝Ｏ置換基を有する）およびエトキシ（炭素ではなく酸素を介して結合する）などの置換基ではない。ヒドロカルビル基には、アリール、ヘテロアリール、炭素環、複素環、アルキル、アルケニル、アルキニル、およびそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

【0137】

本明細書で使用される「ヒドロキシアルキル」という用語は、ヒドロキシ基で置換されたアルキル基を指す。

【0138】

アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシなどの化学部分と組み合わせて使用される場合の「低級」という用語は、置換基に１０個以下、好ましくは６個以下の原子が存在する基を含むことを意味する。例えば、「低級アルキル」は、１０個以下、好ましくは６個以下の炭素原子を含むアルキル基を指す。特定の実施形態では、本明細書で定義されるアシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシ置換基は、例えば、引用においてヒドロキシアルキルおよびアラルキル（この場合、例えば、アルキル置換基の炭素原子を数えるときに、アリール基内の原子は数えられない）、それらが単独でまたは他の置換基と組み合わせて現れるかどうかにかかわらず、それぞれ低級アシル、低級アシルオキシ、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、または低級アルコキシである。

【0139】

「ポリシクリル」、「ポリサイクル」、および「多環式」という用語は、２つ以上の原子が２つの隣接する環（例えば、環は「縮合環」である）に共通である、２つ以上の環（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリル）を指す。多環の各環は、置換または非置換され得る。特定の実施形態では、多環の各環は、環中に３～１０個の原子、好ましくは５～７個の原子を含有する。

【0140】

「硫酸塩」という用語は、当技術分野で認識されており、基－ＯＳＯ_３Ｈ、またはその薬学的に許容される塩を指す。

【0141】

「スルホンアミド」という用語は、当技術分野で認識されており、一般式

【化12】

で表される基を指し、
式中、Ｒ^９およびＲ^１０は、独立して水素またはヒドロカルビルを表す。

【0142】

「スルホキシド」という用語は、当技術分野で認識されており、基－Ｓ（Ｏ）－を指す。

【0143】

「スルホン酸塩」という用語は、当技術分野で認識されており、基ＳＯ_３Ｈ、またはその薬学的に許容される塩を指す。

【0144】

「スルホン」という用語は当技術分野で認識されており、基－Ｓ（Ｏ）_２－を指す。

【0145】

「置換された」という用語は、骨格の１つ以上の炭素上の水素を置換する置換基を有する部分を指す。「置換」または「～で置換された」は、そのような置換が置換原子および置換基の許容原子価に従う、ならびに置換が、例えば、転位、環化、脱離などによるような変換を自発的に受けない、安定な化合物をもたらすという暗黙の条件を含むことが理解されるであろう。本明細書で使用される場合、「置換された」という用語は、有機化合物のすべての許容される置換基を含むことが企図される。広範な態様では、許容される置換基には、有機化合物の非環式および環式、分岐および非分岐、炭素環式および複素環式、芳香族および非芳香族置換基が含まれる。許容される置換基は、１つ以上であり、適切な有機化合物について同じであるか、または異なり得る。本開示の目的のために、窒素のようなヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たす本明細書に記載の有機化合物の水素置換基および／または任意の許容される置換基を有し得る。置換基は、本明細書に記載の任意の置換基、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、またはアシルなど）、チオカルボニル（チオエステル、チオアセテート、またはチオホルメートなど）、アルコキシル、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、サルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、または芳香族もしくはヘテロ芳香族部分を含むことができる。炭化水素鎖上で置換された部分は、適切な場合、それ自体で置換され得ることが当業者によって理解されるであろう。

【0146】

本明細書で使用される「チオアルキル」という用語は、チオール基で置換されたアルキル基を指す。

【0147】

本明細書で使用される「チオエステル」という用語は、基－Ｃ（Ｏ）ＳＲ^９または－ＳＣ（Ｏ）Ｒ^９を指し、
式中、Ｒ^９は、ヒドロカルビルを表す。

【0148】

本明細書で使用される「チオエーテル」という用語は、酸素が硫黄で置き換えられているエーテルと同等である。

【0149】

「尿素」という用語は、当技術分野で認識されており、一般式

【化13】

によって表すことができ、
式中、Ｒ^９およびＲ^１０は、独立して水素またはヒドロカルビルを表す。

【0150】

本明細書で使用される「調節する」という用語は、機能または活性（細胞増殖など）の阻害または抑制、ならびに機能または活性の増強を含む。

【0151】

「薬学的に許容される」という句は、当技術分野で認められている。特定の実施形態では、この用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、またはその他の問題および合併症なしに、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに適し、合理的な利益／リスク比に見合った組成物、賦形剤、アジュバント、ポリマーおよび他の材料および／または剤形を含む。

【0152】

「薬学的に許容される塩」または「塩」は、本明細書では、患者の治療に適しているかまたは適合性がある酸付加塩または塩基性付加塩を指すために使用される。

【0153】

本明細書で使用される「薬学的に許容される酸付加塩」という用語は、式Ｉによって表される任意の塩基化合物の任意の非毒性有機または無機塩を意味する。適切な塩を形成する例示的な無機酸には、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩およびリン酸塩、ならびにオルトリン酸一水素ナトリウムおよび硫酸水素カリウムなどの金属塩が挙げられる。適切な塩を形成する例示的な有機酸には、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、安息香酸、フェニル酢酸、桂皮酸およびサリチル酸などのモノカルボン酸、ジカルボン酸、およびトリカルボン酸、ならびにｐ－トルエンスルホン酸およびメタンスルホン酸などのスルホン酸が挙げられる。一酸塩または二酸塩のいずれかを形成することができ、そのような塩は、水和物、溶媒和、または実質的に無水の形態のいずれかで存在し得る。一般に、式Ｉの化合物の酸付加塩は、水および様々な親水性有機溶媒により可溶であり、一般に、それらの遊離塩基形態と比較してより高い融点を示す。適切な塩の選択は、当業者に知られている。他の非薬学的に許容される塩、例えばシュウ酸塩は、例えば、実験室での使用のための、またはその後の薬学的に許容される酸付加塩への変換のための式Ｉの化合物の単離において使用され得る。

【0154】

本明細書で使用される「薬学的に許容される塩基性付加塩」という用語は、式Ｉまたはそれらの中間体のいずれかによって表される任意の酸性化合物の任意の非毒性有機または無機塩基付加塩を意味する。適切な塩を形成する例示的な無機塩基には、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、または水酸化バリウムが挙げられる。適切な塩を形成する例示的な有機塩基には、メチルアミン、トリメチルアミンおよびピコリンまたはアンモニアなどの脂肪族、脂環式、または芳香族有機アミンが挙げられる。適切な塩の選択は、当業者に知られている。

【0155】

本開示の方法および組成物に有用な化合物の多くは、それらの構造中に少なくとも１つの立体中心を有する。この立体中心は、ＲまたはＳ配置で存在することがあり、当該ＲおよびＳ表記は、Ｐｕｒｅ Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．（１９７６），４５，１１－３０に記載の規則に対応して使用される。本開示は、化合物、塩、プロドラッグまたはそれらの混合物（立体異性体のすべての可能な混合物を含む）のエナンチオマーおよびジアステレオ異性体形態などのすべての立体異性体形態を企図する。例えば、ＷＯ０１／０６２７２６を参照されたい。

【0156】

さらに、アルケニル基を含む特定の化合物は、Ｚ（ツザメン）またはＥ（エントゲーゲン）異性体として存在する可能性がある。それぞれの場合において、本開示は、混合物および別個の個々の異性体の両方を含む。

【0157】

一部の化合物は、互変異性体の形態でも存在し得る。このような形態は、本明細書に記載の式には明示的に示されていないが、本開示の範囲内に含まれることを意図される。

【0158】

「プロドラッグ」または「薬学的に許容されるプロドラッグ」は、投与後に宿主中で代謝され、例えば、加水分解または酸化されて、本開示の化合物（例えば、式Ｉの化合物）を形成する化合物を指す。プロドラッグの典型的な例には、活性化合物の機能的部分に生物学的に不安定または切断可能な（保護）基を有する化合物が含まれる。プロドラッグには、酸化、還元、アミノ化、脱アミノ化、ヒドロキシル化、脱ヒドロキシル化、加水分解、脱加水分解、アルキル化、脱アルキル化、アシル化、脱アシル化、リン酸化、または脱リン酸化して活性化合物を生成することができる化合物が含まれる。生物学的に不安定または切断可能な（保護）基としてエステルまたはホスホロアミド酸を使用するプロドラッグの例は、米国特許第６，８７５，７５１号、第７，５８５，８５１号、および第７，９６４，５８０号に開示されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。本開示のプロドラッグは、代謝されて式Ｉの化合物を生成する。本開示は、その範囲内に、本明細書に記載の化合物のプロドラッグを含む。適切なプロドラッグの選択および調製のための従来の手順は、例えば、“Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”Ｅｄ．Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。

【0159】

本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という句は、薬用または治療用途の薬物を調製するのに有用な液体または固体のフィルター、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化材料などの薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクルを意味する。

【0160】

本明細書で使用される「溶解度の対数」、「ＬｏｇＳ」または「ｌｏｇＳ」という用語は、化合物の水溶性を定量化するために当技術分野で使用されている。化合物の水溶性は、その吸収および分布特性に著しく影響する。溶解度が低いと、吸収が不十分になることがよくある。ＬｏｇＳ値は、ｍｏｌ／リットルで測定された溶解度の単位ストリップ対数（１０進数）である。

【実施例】

【0161】

ここで、本発明を一般的に説明するが、本発明の特定の態様および実施形態の例示目的だけのために含まれ、本開示を限定することを意図しない以下の実施例を参照することにより、より容易に理解される。

【0162】

実施例１：開示の化合物の例示的な合成
式（Ｉ）においてＲ２、Ｒ３、およびＲ４がＨであり、Ｒ５がモルホリンである場合のＲ１修飾を伴う誘導体
化合物５～２７の合成方法をスキーム１に示す。これには、以下のプロセスステップが含まれる。
ｉ）適切な酸誘導体を、ＳＯＣｌ_２（塩化チオニル）の存在下でＥｔＯＨ（エタノール）中で還流することによりエステル化して、化合物１ａ～ｚを生成した。
ｉｉ）トルエン中の化合物１ａ－ｚの溶液を、ＮａＨ（水素化ナトリウム；６０％鉱油中分散物）の存在下でアセトニトリルとともに還流して、β－ケトニトリル誘導体２ａ～ｚを得た。
ｉｉｉ）化合物２ａ～ｚを１００℃のＮａＯＨ（水酸化ナトリウム）水溶液中のＨ_２Ｎ．ＯＨ ＨＣｌ（塩酸ヒドロキシルアミン）と反応させて、イソオキサゾール－５－アミン類似体３ａ～ｚを得た。
ｉｖ）化合物３ａ～ｚを、ｔ－ＢｕＯＫ（カリウム三級ブトキシド）の存在下、室温でｔ－ＢｕＯＨ（三級ブタノール）中の２，４－ジクロロピリミジンまたは４－クロロ－２－（メチルチオ）ピリミジン（化合物２８のみ）と反応させて、化合物４ａ～ｚおよび化合物２８を得た。
ｖ）ｎ－ＢｕＯＨ（ブタノール）中の化合物４ａ～ｚをモルホリンとともに還流して、化合物５～２７を生成した。

【化14】

スキーム１．化合物５～２８の合成。試薬および条件：（Ａ）ＳＯＣｌ_２、ＥｔＯＨ、還流、３時間、（Ｂ）ＮａＨ、ＭｅＣＮ、トルエン、還流、２時間、（Ｃ）Ｈ_２Ｎ．ＯＨ ＨＣｌ、ＮａＯＨ、Ｈ_２Ｏ、還流、４時間、（Ｄ）ｔ－ＢｕＯＫ、２，４－ジクロロピリミジン、ｔ－ＢｕＯＨ、室温、２４時間、（Ｅ）ｔ－ＢｕＯＫ、４－クロロ－２－（メチルチオ）ピリミジン、ｔ－ＢｕＯＨ、室温、２４時間、（Ｆ）モルホリン、ｎ－ＢｕＯＨ、還流、５時間。

【0163】

化合物３０の合成方法をスキーム２に示す。これには、以下のプロセスステップが含まれる。
ｉ）ＢＢｒ_３（三臭化ホウ素）の存在下、０℃でＤＣＭ（ジクロロメタン）中で化合物４ａの脱メチル化を行って、化合物２９を得た。
ｉｉ）ｎ－ＢｕＯＨ中の化合物２９をモルホリンとともに還流して、化合物３０を得た。

【0164】

化合物３２の合成方法をスキーム２に示す。これには、以下のプロセスステップが含まれる。
ｉ）ＤＩＡＤ（ジイソプロピルアゾジカルボキシレート）およびＰＰｈ_３（トリフェニルホスフィン）の存在下、０℃で乾燥ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）中の化合物２９とベンジルアルコールとの反応により、化合物３１を生成した。
ｉｉ）ｎ－ＢｕＯＨ中の化合物３１をモルホリンとともに還流して、化合物３２を得た。

【化15】

スキーム２．化合物３０および３２の合成。試薬および条件：（Ａ）ＢＢｒ_３、ＤＣＭ、０℃、２４時間、（Ｂ）ベンジルアルコール、ＤＩＡＤ、ＰＰｈ_３、ＴＨＦ、０℃、２４時間、（Ｃ）モルホリン、ｎ－ＢｕＯＨ、還流、５時間。

【0165】

Ｒ１が４－メトキシフェニルであり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、式（Ｉ）においてＨである場合のＲ５修飾を有する誘導体
Ｒ_５修飾を有する誘導体の合成には、スキーム３に概要を述べる合成手順を利用した。したがって、化合物４ａまたは化合物２８を出発中間体として使用し、次に様々なアミン、例えば、これらに限定されないが、二級アミン誘導体としてモルホリン、チオモルホリン、ピペラジン、ピペリジンおよびピロリジン、または一級アミンとしてアミノモルホリン、アミノピペリジンおよびアミノピラン誘導体で処置して、方法Ａ、Ｂ、またはＣにより最終化合物（３３～５４）をもたらした。アミン誘導体が、ＨＣｌ塩の形態である場合、方法Ｂを使用した（化合物３４～３９の場合）。アミン誘導体が一級アミンの場合、方法Ｃを使用した（化合物５２～５４の場合）。

【0166】

化合物３３～５４の合成方法をスキーム３に示す。これには、以下のプロセスステップが含まれる。
ｉ）化合物４ａと、ＨＣｌ（塩化水素）塩形態ではない適切なアミン誘導体とをＢｕＯＨ中で還流して、化合物３３、４０～５１（方法Ａ）を得た。
・化合物４９の場合、Ｎ－Ｂｏｃ保護ピペラジンを使用し、次にＤＣＭ中のＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）で保護基を加水分解して、最終化合物４９を得た。また、化合物５０を、ＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（水酸化リチウム一水和物）の存在下、還流下でＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ中で加水分解して、化合物５１を得た。
ｉｉ）アミン誘導体が塩の形態である場合、アミンの適切なＨＣｌ塩をＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）の存在下でＢｕＯＨに溶解し、遊離アミンを得た。
ｉｉｉ）これを、次に、還流下で化合物４ａと反応させて、最終化合物３４～３９（方法Ｂ）を得た。
ｉｖ）アミン誘導体が一級アミンの場合、化合物２８を出発物質として使用し、最初にＤＣＭ中のｍ－ＣＰＢＡ（メタクロロ過安息香酸）で処置し、次に得られたスルホン中間体を対応するアミン誘導体と反応させて、最終化合物５２～５４（方法Ｃ）を得た。

【化16】

スキーム３．化合物３３～５４の合成。試薬および条件：（Ａ）適切なアミン誘導体、ｎ－ＢｕＯＨ、還流、５時間、（Ｂ）適切なアミン誘導体、ＤＩＰＥＡ、ｎ－ＢｕＯＨ、還流、５時間、（Ｃ）ｉ）ｍ－ＣＰＢＡ、ＤＣＭ、０℃、２時間、ｉｉ）適切なアミン誘導体、ｎ－ＢｕＯＨ、還流、５時間。

【0167】

式（Ｉ）において、Ｒ１が４－フェニルメトキシ、Ｒ２がＨ、Ｒ５がモルホリンまたは４－フルオロピペリジンである場合のピリミジン環（Ｘ、Ｒ３、Ｒ４置換）修飾を有する誘導体
ピリミジン環修飾を有する誘導体には、スキーム４に概要を述べる合成手順を利用した。化合物３ａを出発物質として使用し、様々なピリミジン誘導体、例えば、２，４，５－トリクロロピリミジン、２，４－ジクロロ－５－フルオロピリミジン、２，４－ジクロロ－６－メチルピリミジン、または２，４－ジクロロピリジンとの求核芳香族置換反応を行い、最終化合物５９～６２を得た。

【0168】

化合物５９～６２の合成方法をスキーム４に示す。これには、以下のプロセスステップが含まれる。
ｉ）化合物３ａを、ｔ－ＢｕＯＫの存在下、室温で、ｔ－ＢｕＯＨ中の適切なピリミジン誘導体と反応させて、化合物５５～５７（方法Ａ）を得た。化合物３ａを、ＮａＨの存在下、室温で、ＤＭＡ（Ｎ、Ｎ－ジメチルアセトアミド）中の２，４－ジクロロピリジンと反応させて、化合物５８を得た（方法Ｂ）。
ｉｉ）化合物５５～５７を、ＤＩＰＥＡの存在下でｎ－ＢｕＯＨ中の４－フルオロピペリジンＨＣｌと反応させて、化合物５９～６１を生成した（方法Ｃ）。
ｉｉｉ）化合物５８を、電子レンジ中１００℃で３０分間、キサントホス（４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン）、Ｃｓ_２ＣＯ_３（炭酸セシウム）およびＰｄ（ＯＡｃ）_２（パラジウム（ＩＩ）アセテート）の存在下で、ジオキサン中のモルホリンで処置して、化合物６２（方法Ｄ）を得た。

【化17】

スキーム４．化合物５９～６２の合成。試薬および条件：（Ａ）適切なピリミジン誘導体、ｔ－ＢｕＯＫ、ｔ－ＢｕＯＨ、室温、２４時間、（Ｂ）２，４－ジクロロピリジン、ＮａＨ、ＤＭＡ、室温、２４時間、（Ｃ）４－フルオロピペリジンＨＣｌ、ＤＩＰＥＡ、ｎ－ＢｕＯＨ、還流、５時間、（Ｄ）モルホリン、Ｃｓ_２ＣＯ_３、キサントホス、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２、ジオキサン、１００℃、３０分、電子レンジ。

【0169】

Ｒ１が４－メトキシフェニル、Ｒ３およびＲ４がＨ、Ｒ５がモルホリンの場合の「Ｎ」ブリッジメチル化（Ｒ２置換）
化合物６３の合成には、スキーム５に概要を述べる合成手順を利用した。化合物５を出発物質として使用し、これをアルキル化してＮ－メチル化誘導体６３を得た。

【0170】

化合物６３の合成方法は、プロセスステップを含むスキーム５に示す。
ｉ）化合物５をＤＭＦ（Ｎ、Ｎ－ジメチルホルムアミド）に溶解し、Ｃｓ_２ＣＯ_３の存在下、室温でＣＨ_３Ｉ（ヨウ化メチル）と反応させて、化合物６３を得た。

【化18】

スキーム５．化合物６３の合成。試薬および条件：（Ａ）ＣＨ_３Ｉ、Ｃｓ_２ＣＯ_３、ＤＭＦ、室温、２時間。

【0171】

Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである場合の式（Ｉ）におけるＲ１およびＲ５の異なる組み合わせを有する化合物の合成
細胞毒性試験から得られた結果によると、強力な活性を有すいくつかの化合物のＲ_１およびＲ_２が新しい分子に結合され、新しい化合物が得られた。ハイブリッド化合物の合成には、スキーム６に概要を述べる合成手順を利用した。

【0172】

化合物６４～６７の合成方法をスキーム６に示す。これには、以下のプロセスステップが含まれる。
ｉ）化合物４ｒまたは４ｓおよびＢｕＯＨ中の適切なアミン誘導体を還流して、最終化合物を得た。アミン誘導体が塩の形態である場合、アミンの適切なＨＣｌ塩を、ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）の存在下でＢｕＯＨに溶解して遊離アミンを得、これを還流下で化合物４ｒまたは４ｓと反応させて、最終化合物６４～６６（方法Ａ）を得た。
ｉｉ）アミン誘導体がＨＣｌ塩の形態でない場合、化合物４ｓをｎ－ＢｕＯＨ中のアミン誘導体で処置して、最終化合物６７を得た（方法Ｂ）。

【化19】

スキーム６．化合物の合成６４～６７。試薬および条件：（Ａ）適切なアミン誘導体、ＤＩＰＥＡ、ｎ－ＢｕＯＨ、還流、５時間、（Ｂ）適切なアミン誘導体、ｎ－ＢｕＯＨ、還流、５時間。

【0173】

本開示の実施形態は、一般式（Ｉ）の化合物の合成のために本明細書に記載のアミン誘導体と反応する元の中間化合物の化学構造を含み、表１に列挙した化合物から選択することができる。

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【0174】

本開示の実施形態は、表２に列挙した特徴的な^１Ｈ ＮＭＲ／^１３Ｃ ＮＭＲ特性を有する化合物を含む。

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

【表2-4】

【表2-5】

【表2-6】

【0175】

実施例２：例示的な生物学的結果
ＴＡＣＣ３媒介性がん、または関連する症状もしくはその合併症を治療する本開示の化合物の能力を、以下の手順を使用して決定した。高レベルのＴＡＣＣ３を有する細胞株であるＪＩＭＴ－１細胞株を使用して、本開示の化合物の細胞死誘導に対するそれらの活性について試験した。細胞増殖の５０％最大阻害に必要な各化合物の濃度は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）によって計算した。以下の表３は、細胞成長に対する阻害効果の強さの順に化合物を示す。本開示の化合物５、９、１３、１４、２０～２４、２６、３３、３４、３７～４０、４２～４５、５９、６０および６３～６７は、細胞成長に対して顕著な阻害効果を有すると決定した。

【表3-1】

【表3-2】

【0176】

本開示のこれらの化合物は、細胞成長阻害効果を示したので、医薬組成物において抗がん剤として使用された場合、腫瘍の成長を阻害することが期待できる。したがって、本発明者らは、細胞成長でのその活性、特にＴＡＣＣ３および細胞分裂に対するその効果、ならびに関連する動物モデルにおける腫瘍成長に対するそのインビボ阻害効果のさらに詳細な分析のために化合物５を選択した。

【0177】

化合物５が、ＴＡＣＣ３を標的とするかどうかを決定するために、本開示では、温度上昇による薬物標的安定化（Ｍａｒｔｉｎｅｚ Ｍｏｌｉｎａ ｅｔ ａｌ．，２０１３）に基づく細胞熱シフトアッセイ（ＣＥＴＳＡ）を行った。この目的のために、ビヒクル、化合物５またはＳＰＬ－Ｂ（陽性対照として）を含むＪＩＭＴ－１細胞を６時間インキュベートし、次に細胞溶解物を収集した。化合物５によるＪＩＭＴ－１乳がん細胞の処置は、温度上昇時に細胞ＴＡＣＣ３をかなり安定化し、化合物５がＪＩＭＴ－１細胞においてＴＡＣＣ３と特異的に相互作用し得ることを示す（図４Ａ）。タンパク質の熱融解曲線は、ビヒクルおよび化合物５で処置されたバンド強度間の熱シフトも示す。この相互作用は、等温滴定熱量計（ＩＴＣ）でも確認した。化合物５へのＴＡＣＣ３の滴定を行い、熱量測定変化および熱変化を記録することによってモニターした。図４Ｂに示すように、２５℃でＴＡＣＣ３に結合する化合物５の熱力学パラメータ（Ｋ_ｄ：１．５ｎＭ；△Ｈ：４．９２９Ｅ７ｃａｌ／ｍｏｌ；△Ｓ：１．６５Ｅ５ｃａｌ／ｍｏｌ／ｄｅｇ、Ｎ：０．７０４）は、これら２つの分子間の相互作用を示す。化合物５のＴＡＣＣ３への結合は、薬物親和性応答性標的安定性（ＤＡＲＴＳ法）で最後に確認した。ＤＡＲＴＳは、小分子の潜在的な直接タンパク質標的を特定するためのラベルフリー戦略であり、小分子への結合直後の安定化および標的タンパク質のタンパク質分解からの保護に基づいている（Ｌｏｍｅｎｉｃｋ，Ｊｕｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１１、Ｐａｉ，Ｌｏｍｅｎｉｃｋ ｅｔ ａｌ．２０１５）。図６Ｃに示すように、ＴＡＣＣ３タンパク質は、プロナーゼの存在下で化合物５とのインキュベーション時に安定化した（図４Ｄ）。

【0178】

その後、ＴＡＣＣ３阻害剤である化合物５と利用可能なＴＡＣＣ３阻害剤ＫＨＳ１０１およびＳＰＬ－Ｂの細胞生存率に対する相対的効果を比較した。ＪＩＭＴ－１、ＭＤＡ－ＭＢ－４３６、ＭＤＡ－ＭＢ－１５７およびＢＴ－４７４ Ｔ－ＤＭ１Ｒ細胞株を、これら３つの薬物に対する反応に関して試験した。化合物５は、試験したすべての細胞株において、２つの利用可能なＴＡＣＣ３阻害剤よりも著しく低いＩＣ_５０値を有することが見出された（図５Ａ）。ＫＨＳ１０１およびＳＰＬ－Ｂと比較して、化合物５で処置された様々ながん細胞株の細胞生存率におけるこの著しい減少は、ＪＩＭＴ－１細胞を使用したコロニー形成アッセイでも確認された。結果として、化合物５で処置されたＪＩＭＴ－１細胞の平均コロニー数は、同じ用量で他の２つの阻害剤で処置されたものよりも著しく少なかった（図５Ｂ）。したがって、ＳＲＢアッセイで検出された細胞生存率が低く、ＪＩＭＴ－１細胞のコロニー数が少ないことは、化合物５が他の２つのＴＡＣＣ３阻害剤であるＫＨＳ１０１およびＳＰＬ－Ｂよりもインビトロで、より効果的かつ強力であることを示す。乳がん細胞株におけるｓｉＴＡＣＣ３治療の場合のように有糸分裂停止、アポトーシスおよびＤＮＡ損傷プロセスの誘導を、化合物５、ＳＰＬ－ＢおよびＫＨＳ１０１処置直後にさらに試験した。化合物５を用いた分析結果は、ｓｉＲＮＡを用いたＴＡＣＣ３発現の抑制に関する実験結果と非常に一致していることを示し、化合物５がＴＡＣＣ３を標的としていることがさらに示唆された。結果として、ｓｉＴＡＣＣ３に誘導される有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷、およびアポトーシスは、用量依存的に化合物５によって再現することができる（図５Ｃ）。他方、ＳＰＬ－ＢおよびＫＨＳ１０１処置によるこれらのマーカーの同様の誘導レベルは、化合物５で処置された細胞と比較してかなり高い用量で観察された。他の人（Ｃａｍｐｏ＆Ｂｒｅｕｅｒ，２０１８）が使用したよりも高いＫＨＳ１０１用量が含まれていたが、これらのマーカーの誘導は、非常に高用量でのみ観察された。明らかに、これらの結果は、３つの阻害剤での処置を通じて得られた細胞生存率データおよびＩＣ_５０値と一致している（図５Ａを参照）。さらに、ＪＩＭＴ－１細胞を化合物５で７２時間処置すると、アネキシンＶ／ＰＩ染色によって評価されるように、アポトーシス細胞の割合に顕著な増加（４．１％から４５．６％へ）が誘導された（図７Ｄ）。これらの結果により、１）ｎＭ範囲の作業用量に関する化合物５の高い効力、および２）ｓｉＲＮＡを使用したＴＡＣＣ３下方制御によって得られた同様の分子変化に関する特異性がさらに確認される。

【0179】

次に、本発明者らは、ＴＡＣＣ３阻害の結果としての有糸分裂紡錘体の潜在的な破壊を試験した。これは、重度の紡錘体欠損を引き起こすことが以前に実証された（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｅｓｓｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．２００７）。化合物５によるＴＡＣＣ３の阻害は、用量依存的に異常な紡錘体構造の形成をもたらした（図５Ｅ）。化合物５によるＴＡＣＣ３阻害時に見られた最も顕著な表現型は、ＪＩＭＴ－１細胞における中期プレートでの不適切に整列した染色体（最高用量での処置で７３．４％の頻度）を特徴とする多極紡錘体の形成であった（図５Ｆ）。紡錘体欠損が存在すると、紡錘体形成チェックポイント（ＳＡＣ）が活性化され、さらに有糸分裂が停止して、紡錘体欠損を修復するために必要な時間が提供される（Ｍｕｓａｃｃｈｉｏ ａｎｄ Ｓａｌｍｏｎ ２００７）。ＴＡＣＣ３阻害時のＳＡＣ活性化を実証するために、ＳＡＣ活性化のマーカーであるＢｕＢＲ１（Ｃｈｅｎ ２００２）の免疫蛍光染色を行った。化合物５で処置したＪＩＭＴ－１細胞において、化合物５処置直後に染色体へのＢｕＢＲ１の局在が増加することが観察された（図５Ｇ）。化合物５に誘導される有糸分裂停止、ＤＮＡ損傷、細胞死への活性ＳＡＣシグナル伝達の寄与をさらに試験するために、化合物５で処置された細胞において特定の阻害剤（ＴＣ Ｍｐｓ１（Ｃｈｏｉ，Ｍｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１７））を使用してＳＡＣキナーゼＭｐｓ１を阻害して、関連するマーカーの発現を分析した。図５Ｈに示すように、Ｍｐｓ１キナーゼを阻害すると、有糸分裂停止、アポトーシスおよびＤＮＡ損傷の顕著な減少が引き起こされ、重度の紡錘体欠損の誘導時にＳＡＣが活性化することによって、化合物５が機能し、さらに長期の有糸分裂、アポトーシス細胞死およびＤＮＡ損傷につながり得ることを示唆する。

【0180】

ＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３発がん性融合タンパク質は、多数の固形腫瘍で検出され、融合を有するがんの選択的標的化を可能にする魅力的な治療標的として浮上している（Ｃｏｓｔａ，Ｃａｒｎｅｉｒｏ ｅｔ ａｌ．２０１６）。化合物５処置が融合細胞株の成長を阻害できるかどうかを試験するために、ＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合タンパク質を有することが知られている２つのヒト膀胱がん細胞株ＲＴ１１２およびＲＴ４を利用した（Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｈｕｒｓｔ ｅｔ ａｌ．２０１３）。ＴＡＣＣ３のウエスタンブロット分析は、ＲＴ１１２細胞における低いＩＣ５０（図６ＢおよびＣ）によって示されるように、化合物５に対する強い反応をさらに伴ったＲＴ１１２細胞における高い発現（図６Ａ）を明らかにした。ＲＴ４細胞におけるＴＡＣＣ３阻害に対する感受性が比較的低いにもかかわらず（おそらくＴＡＣＣ３レベルが低いため）、化合物５は、ＳＰＬ－ＢおよびＫＨＳ１０１と比較して両モデルにおいて最も低いＩＣ５０値を得、化合物５が、ＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合を有する腫瘍を標的とする非常に関連性の高い治療機会であり得ることを示唆している（図６Ｂ）。さらに、化合物５は、他のＴＡＣＣ３阻害剤よりも少なくとも１０倍低い用量で、強力な有糸分裂停止（図６Ｄ）とともに活性化ＦＧＦＲシグナル伝達のマーカーであるＥＲＫ１／２リン酸化を減少させ、化合物５がＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３融合タンパク質の機能を特異的に遮断することを示唆している。

【0181】

乳がん細胞株におけるこれらの有望な結果に続いて、化合物５を他のがん型においても試験した。したがって、ＮＣＩ－６０ヒト細胞株での抗増殖活性について化合物５をスクリーニングした。５用量スクリーンの分析から、ほとんどすべての細胞株が１μＭ未満の５０％成長阻害（ＧＩ_５０）値で化合物５処置に感受性であることが見出されたことが明らかになり、他のがん型におけるその可能な適用を示唆している（図６Ｅ）。注目すべきことに、ＮＣＩ－６０細胞株のＧＩ５０値は、ＤｅｐＭａｐ．ｏｒｇ（ＭｃＦａｒｌａｎｄ，Ｈｏ ｅｔ ａｌ．２０１８）から得られたＴＡＣＣ３依存性スコアと正の相関を示すことがわかった（図６Ｆ）。これは、ＴＡＣＣ３への依存度が高い、すなわちＴＡＣＣ３依存性スコアが低い細胞は、化合物５に対して感受性がより高いことを示す。まとめると、これらのデータは、化合物５の強力な抗がん活性を示しており、様々ながん型におけるその潜在的な用途に光を当てている。

【0182】

次に、正常細胞よりもがん細胞株に対する化合物５の特異性を試験した。したがって、正常な乳房上皮細胞、ＭＣＦ－１２Ａ、および他のいくつかの乳がん細胞の化合物５に対する感受性を調べた。驚くべきことに、高用量の化合物５（５、１０μＭ）での処置でも細胞の５０％成長阻害には達しなかったが（図７Ａ）、化合物５は、ルミナル（ＭＣＦ７、Ｔ４７Ｄ、ＺＲ７５およびＢＴ－４７４）乳がん細胞株と比較して、低用量で三種陰性（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＤＡ－ＭＢ－４３６、ＣＡＬ５１およびＨＣＣ１１４３）およびＨＥＲ２陽性（ＪＩＭＴ－１およびＨＣＣ１９５４）の乳がん細胞株の生存度を阻害した（図７Ｂ）。言い換えれば、化合物５は、腫瘍細胞を特異的に標的とするが、正常な乳房細胞では効果がない。図６Ｃに示すように、化合物５に対してより応答する乳がん細胞株は、ＭＣＦ－１２Ａよりも高いＴＡＣＣ３レベルを発現し、ＴＡＣＣ３のがん特異的高発現をさらに裏づける。これは、化合物５に対する感受性ががん細胞における異常なＴＡＣＣ３発現レベルと相関していることを示す。加えて、ＴＡＣＣ３レベルが低いことは、ＭＣＦ－１２Ａ細胞が低用量でＴＡＣＣ３阻害剤のいずれにも反応しなかった理由を説明し得る。さらに、ルミナル細胞株と比較して、２つの最も悪性度の高い乳がんサブタイプであるＴＮＢＣおよびＨＥＲ２陽性においてＴＡＣＣ３発現が増加する傾向が観察され、ＴＡＣＣ３発現ががんの侵襲性と関連し得ることが示唆された。ＴＡＣＣ３の形質転換能、および生存するためのＴＡＣＣ３への細胞の依存性を試験するために、ＴＡＣＣ３を過剰発現させた後、ＭＣＦ－１２Ａ細胞でクローン原性成長アッセイを行った。図７Ｄおよび９Ｅに示すように、ＴＡＣＣ３の過剰発現は、正常な乳房細胞株、ＭＣＦ－１２Ａのコロニー形成能力を増加させた。重要なことに、ＭＣＦ－１２Ａ細胞におけるＴＡＣＣ３の過剰発現により、該細胞は、化合物５の細胞毒性効果に対して感受性になり、さらに、該細胞のＴＡＣＣ３への依存性および化合物５の特異性が示される（図７Ｆ）。観察されたがん細胞と正常細胞との相違がこれらの細胞の増殖速度の相違によるものである可能性を排除するために、細胞の倍加時間を計算した。図７Ｇに示すように、ＭＣＦ－１２Ａおよびがん細胞株の倍加時間の間に有意差はなく、化合物５に対する応答性が細胞分裂速度の増加によって決定されない可能性があることを示唆している。

【0183】

上記の結果は、高レベルのＴＡＣＣ３を発現する乳がん細胞が、新規の本開示ＴＡＣＣ３阻害剤である化合物５に対してインビトロでより感受性が高いことを示した。したがって、腫瘍形成性の高い乳がん細胞株ＪＩＭＴ－１（Ｂａｒｏｋ ｅｔ ａｌ．，２００７、Ｔａｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００４）の腫瘍成長についてＳＰＬ－Ｂと比較した化合物５の効果を免疫不全マウスで試験した。この目的のために、雌のヌードマウスにＪＩＭＴ－１細胞を乳腺脂肪パッド（ＭＦＰ）に注射し、続いてビヒクルで処置したか、または５ｍｇ／ｋｇ（経口）化合物５もしくはＳＰＬ－Ｂを１日おきに３０日間適用した。化合物５は、ＳＰＬ－Ｂと比較して腫瘍成長の著しい減少を示し、マウスの体重に大きな影響はなかったと結論づけられた（図８）。

【0184】

次に、ＪＩＭＴ－１異種移植片を使用して、低用量化合物５の様々な用量および投与経路を試験した。２ｍｇ／ｋｇ（経口または静脈内）または５ｍｇ／ｋｇ（経口）の用量の化合物５を２日ごとに３０日間マウスに投与した（図９）。３つの化合物５投与群すべての腫瘍成長率は、対照群と比較した場合、およびこれらの群の間で減少した（図９Ａ）。図９Ｂには、化合物５の投与がマウスの体重に悪影響を及ぼさなかったことが示されている。さらに、より良い抗腫瘍効果を得て、その忍容性を試験する以前の実験と比較して、腫瘍成長に対する化合物５の高い用量の効果を試験するために、雌のヌードマウスにＪＩＭＴ－１細胞を乳房脂肪パッド（ＭＦＰ）に注射し、続いてビヒクルまたは化合物５（２５ｍｇ／ｋｇ、経口）で２３日間処置した。化合物５は、ビヒクル処置マウスと比較して、腫瘍成長の極めて著しい減少を示した（図９Ｃ）。ビヒクル群のものと比較した場合、腫瘍重量は、著しく低かった（図９Ｄ）。重要なことに、治療はマウスの体重に影響を及ぼさなかったので、化合物５は十分に許容された（図９Ｅ）。また、ＴＡＣＣ３阻害の効果を、免疫適格性マウスモデルを使用してインビボで試験した（図１０）。マウスの三種陰性乳がん（ＴＮＢＣ）細胞株であるＥＭＴ６は、急速に成長し、非常に悪性度の高いモデルであり（Ｙａｎｇ，Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１７）、同系のＢａｌｂ／ｃマウスのＭＦＰに注入した。ビヒクル処置マウスと比較して、化合物５処置マウスにおいて、著しい腫瘍成長阻害（図１０Ａ）および５７．１％の寿命の延長（図１０Ｂ）が観察された。さらに、化合物５は、同系マウスモデルにおいて再び十分に許容された（図１０Ｃ）。

【0185】

乳がん異種移植モデルおよび同系モデルに加えて、結腸がん動物モデルで化合物５の抗腫瘍形成能を試験した（図１１）。雌のヌードマウスおよびＢａｌｂ／ｃマウスに、それぞれヒト結腸がん細胞株ＨＣＴ－１１６およびマウス結腸がん細胞株ＣＴ２６をマウスの側面領域に注射した。ビヒクルまたは２５～５０ｍｇ／ｋｇの化合物５のいずれかでマウスを毎日、経口的に処置した。乳がんモデルと同様に、化合物５は、腫瘍成長を著しく損ない（図１１Ａ）、両方のモデルで十分に耐容された（図１１Ｂ）。

【0186】

次に、転移性成長でのＴＡＣＣ３阻害の効果を調べるために、悪性度の高いマウス乳腺腫瘍細胞である４Ｔ１－Ｌｕｃ２（ルシフェラーゼ標識）を免疫適格性の雌マウスに静脈内注射した。ここでの目的は、臨床的に関連する転移モデルを使用して、転移性増殖および肺コロニー形成に対する化合物５の効果を決定することであった。マウスが肺に転移性病変を示した場合、それらをビヒクルまたは５０ｍｇ／ｋｇの化合物５のいずれかで毎日処置した。転移性増殖は、生物発光を測定することにより、インビボイメージングシステム（ＩＶＩＳ）でモニターした。化合物５は、ビヒクルと比較して転移性成長を損なうことが見出され（図１２Ａ）、マウスの全生存率を著しく改善した（図１２Ｂ）。

【0187】

最後に、最大耐用量を決定するために、雌のヌードマウスに１００ｍｇ／ｋｇの化合物５を７日間毎日投与し、体重を記録した（図１３Ａ）。化合物５は、体重に影響を与えず、この高用量で観察可能な毒性を生じなかった。別の実験では、マウスに５００ｍｇ／ｋｇの化合物５を１回だけ投与し、１～３日間モニターした。化合物５を投与されたマウスは、薬物処置の２４時間後に体重が１０％減少したが、それらの全身状態は安定していた（図１３Ｂ）。実験の終わりに臓器を収集し、臓器毒性は観察されなかったが、化合物５が十分に耐容されたことを示した（図１３Ｃ）。

【0188】

全体的なプロファイルに基づいて、化合物５の物理化学的特性および代謝安定性を評価した。化合物５は、ｌｏｇ Ｄ_７．４が２．３の中程度の親油性を有し、ヒトおよびマウスの両方の肝ミクロソームにおいて低溶解性ならびに低安定性を示し、血漿タンパク結合が比較的高い（非結合割合１．１３％）が、低い流出比で良好なＣａｃｏ－２透過性（ＡＢ＝１９０×１０^－６ｎｍ／秒、比＝＜２．０）（表１）を示した。それに応じて、潜在的な薬物間相互作用を評価するために、ヒト肝ミクロソームにおける化合物５によるシトクロムＰ４５０阻害も特徴付けた（Ｌｉｎ＆Ｌｕ，１９９８）（表１）。したがって、化合物５は、ＣＹＰ２Ｃ９（ＩＣ_５０＝２．６３μＭ）およびＣＹＰ３Ａ（基質としてのテストステロン；ＩＣ_５０＝８．５９μＭ）の中程度の阻害剤であったが、ＣＹＰ２ＣＤ６（ＩＣ_５０＝１８．４６μＭ）およびＣＹＰ３Ａ（ＩＣ_５０＝基質としてのミダゾラム；３０．０４μＭ）は、弱いか、または阻害剤ではなく、化合物５が試験したＰ４５０チトクロームで低い活性を有することを示す。

【0189】

生物学的材料および方法
細胞培養および試薬
ヒト乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４３６、ＭＤＡ－ＭＢ－１５７、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＢＴ－４７４、ＭＣＦ－７、ＺＲ－７５－１およびＴ－４７Ｄ、マウス乳がん細胞株ＥＭＴ６および４Ｔ１、ヒト膀胱がん細胞株ＲＴ１１２およびＲＴ４、マウス結腸がん細胞株ＣＴ－２６、ならびに正常なヒト乳がん上皮細胞株ＭＣＦ－１２ＡをＡＴＣＣから購入した。Ｔ－ＤＭ１耐性ＨＥＲ２陽性乳がん細胞株ＢＴ－４７４Ｔ－ＤＭ１Ｒは、以前に記載のように（Ｓａａｔｃｉ ｅｔ ａｌ．，２０１８）開発し、特性評価した。ヒト結腸がん細胞株ＨＣＴ－１１６は、ＢｉｌｋｅｎｔのＳｅｒｋａｎ Ｇｏｋｔｕｎａからの親切な贈り物であった。ＪＩＭＴ－１、ＨＣＣ１９５４、ＣＡＬ５１、およびＨＣＣ１１４３は、Ｂｉｌｋｅｎｔ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙのＡｌｉ Ｏｓｍａｙ Ｇｕｒｅから提供された。細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ，Ｌｏｎｚａ）、１％非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）、２ｍＭ Ｌ－グルタミン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ＭＯ，ＵＳＡ）および５０Ｕ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（Ｌｏｎｚａ、ＮＪ，ＵＳＡ）で培養した。ＢＴ－４７４ＷＴおよびＴ－ＤＭ１Ｒ細胞にも、０．１％インスリン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充した。さらに、ＭＣＦ－１２Ａ細胞には、２０ｎｇ／ｍｌの上皮成長因子（ＥＧＦ）および５００ｎｇ／ｍｌのヒドロコルチゾン含有培地を補充した。Ｔ－４７ＤおよびＭＣＦ－７細胞は、１０％ＦＢＳ、１％ＮＥＡＡ、１％Ｌ－グルタミン、５０Ｕ／ｍｌのＰ／Ｓ、および０．１％インスリンを含むフェノールレッドフリーＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で培養した。ＥＭＴ６、４Ｔ１、ＣＴ－２６およびＲＴ１１２細胞は、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｂｉｏｗｅｓｔ、Ｎｕａｉｌｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）中で維持したが、ＲＴ４およびＨＣＴ－１１６細胞は、ＦＢＳ、ＮＥＡＡ、Ｌ－グルタミンおよびＰ／Ｓを補充したＭｃＣｏｙ５Ａ（改変）（Ｇｉｂｃｏ）培地で培養した。すべての細胞株は、ＭｙｃｏＡｌｅｒｔ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｌｏｎｚａ）を使用して定期的に試験した。

【0190】

細胞熱シフトアッセイ（ＣＥＴＳＡ）
無傷の細胞における化合物５（５）とＴＡＣＣ３との間の相互作用を分析するために、ＣＥＴＳＡをわずかな変更を加えて以前に記載のように（Ｍａｒｔｉｎｅｚ Ｍｏｌｉｎａ ｅｔ ａｌ．，２０１３）行った。簡単に説明すると、ＪＩＭＴ－１細胞をビヒクル、１μＭ化合物５（５）またはＳＰＬ－Ｂとともに６時間インキュベートした。処置後、細胞ペレットをプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含むトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）に再懸濁した。細胞懸濁液を６本のＰＣＲチューブに分割し、４５、４６、４７、４８、４９、５０℃に５分間加熱した。続いて、液体窒素を用いた凍結融解サイクルを３回繰り返して細胞を溶解した。可溶性タンパク質を２０，０００ｇ、４℃で２０分間の遠心分離で収集し、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）とそれに続くウエスタンブロット分析で分析した。

【0191】

等温滴定熱量計（ＩＴＣ）
精製したＴＡＣＣ３組換えタンパク質（ＴＰ３１０７５４；Ｏｒｉｇｅｎｅ、ＭＤ，ＵＳＡ）および化合物５（５）を、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ．ＨＣｌ、ｐＨ７．３、１００ｍＭグリシン、１０％グリセロール溶液で調製した。化合物５（５）をサンプルセルに充填し、２連の実験で、ＴＡＣＣ３タンパク質（シリンジ中で１０倍高い濃度で）で滴定した。滴定は、Ｍｉｃｒｏｃａｌ２００装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ａｕｓｔｒｉａ）を使用して２５℃で行った。滴定ごとに、６分間隔で１０回の注入を行った。基準出力を２μｃａｌ／秒に設定し、サンプルセルを５００ｒｐｍで連続的に攪拌した。薬物とタンパク質との間の結合効率を評価するために、緩衝液のみに注入されたタンパク質によって得られたバックグラウンドデータを実験等温線から差し引いた。ＩＴＣ２００とともに提供されるＯｒｉｇｉｎ７ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用してデータを分析し、結合定数（Ｋａ）、結合部位の数（Ｎ）、エンタルピー（ΔＨ）などの結合パラメータを計算した。

【0192】

薬物親和性応答性標的安定性（ＤＡＲＴＳ）
ＤＡＲＴＳは、前述のように行った（２６）。簡単に説明すると、ＪＩＭＴ－１細胞を７０～８０％集密度まで成長させ、ＳＤＳおよびデオキシコール酸ナトリウムを含まないＲＩＰＡ溶解緩衝液に溶解した。タンパク質抽出物の濃度は、ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＩＬ，ＵＳＡ）を使用して決定し、溶解緩衝液に４μｇ／μｌで希釈した。細胞溶解物を９９μｌのアリコートに分割し、１０ｕＭの化合物５およびＳＰＬ－Ｂの１００×濃縮溶液１μｌと別々に混合した。細胞溶解物と薬物の混合物をシェーカー上で、室温で２０分間インキュベートして結合させた。その後、２０μｌの各サンプルを２μｌの８ｎｇ／μｌプロナーゼ溶液（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）または緩衝液のみ（未消化）と混合し、室温で１２分間インキュベートした。２μｌの２０×プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を添加し、氷上で１０分間インキュベートすることにより、タンパク質の消化を停止した。次に、溶解物を８μｌの４×ＳＤＳ添加液と混合し、７０℃で１０分間加熱した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥは、陰性対照として抗ＴＡＣＣ３および抗ＣＤＫ４抗体を用いて行った。

【0193】

阻害剤処置、細胞生存率アッセイ、およびアネキシンＶ／ＰＩ染色
ＫＨＳ１０１（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）およびＳＰＬ－Ｂ（Ａｘｏｎ ＭｅｄＣｈｅｍ、ＶＡ，ＵＳＡ）を１００％ＤＭＳＯに溶解して、５０ｍＭのストック濃度を得た。新たに合成した分子を１００％ＤＭＳＯに溶解し、１０ｍＭのストック濃度を得た。細胞生存率アッセイでは、ＪＩＭＴ－１（３×１０^３細胞／ウェル）、ＢＴ－４７４ＷＴおよびＴ－ＤＭ１Ｒ（６×１０^３）、ＭＤＡ－ＭＢ－４３６（４×１０^３）、ＭＤＡ－ＭＢ－１５７（３×１０^３）、ＨＣＣ１９５４（５×１０^３）、ＣＡＬ５１（５×１０^３）、ＨＣＣ１１４３（４．５×１０^３）、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（４．５×１０^３）、ＭＣＦ－７（７×１０^３）、Ｔ－４７Ｄ（６×１０^３）、ＲＴ１１２（６×１０^３）、ＲＴ４（６×１０^３）、およびＭＣＦ－１２Ａ（５×１０^３）細胞を９６ウェルプレートに播種し、細胞播種から２４時間後に阻害剤処置を様々な濃度で行った。細胞生存率は、製造元が推奨するスルホローダミンＢ（ＳＲＢ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）アッセイで処置してから７２時間後に測定した。ウエスタンブロッティングでは、異なる濃度のＫＨＳ１０１、ＳＰＬ－Ｂ、または化合物５をＪＩＭＴ－１（１．５×１０^５）およびＲＴ１１２（２×１０^５）細胞に２４時間与えた。アネキシンＶ／ＰＩ染色（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＵＳＡ）は、５００ｎＭの化合物５で４８時間処置したＪＩＭＴ－１細胞を使用して、製造元の指示に従って行った。

【0194】

ｓｉＲＮＡおよび過剰発現ベクターによる一過性トランスフェクション
細胞生存率アッセイでは、ＪＩＭＴ－１（３×１０^３細胞／ウェル）、ＢＴ－４７４ Ｔ－ＤＭ１Ｒ（６×１０^３）、ＭＤＡ－ＭＢ－４３６（４×１０^３）およびＭＤＡ－ＭＢ－１５７（３×１０^３）の細胞をＰ／Ｓフリー成長培地の９６ウェルプレートに播種した。播種の２４時間後、ＴＡＣＣ３（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ、ＣＯ，ＵＳＡ）を標的とする２つの異なるｓｉＲＮＡを最終濃度２０ｎＭ（ｓｉＴＡＣＣ３＃１：Ｄ－００４１５５－０３およびｓｉＴＡＣＣ３＃２：Ｄ－００４１５５－０２）で、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）トランスフェクション試薬を以前に記載のように（Ｍｕｔｌｕ ｅｔ ａｌ．，２０１６）使用して細胞にランスフェクトした。トランスフェクションの７２時間後、ＳＲＢアッセイを使用して細胞生存率を測定した。ｓｉＲＮＡトランスフェクション直後のＴＡＣＣ３ノックダウンレベルを評価するために、ＪＩＭＴ－１（１．５×１０^５）、ＢＴ－４７４ Ｔ－ＤＭ１Ｒ（２×１０^５）、ＭＤＡ－ＭＢ－４３６（１．５×１０^５）およびＭＤＡ－ＭＢ－１５７（１．５×１０^５）細胞に２つの異なるＴＡＣＣ３ ｓｉＲＮＡを４８時間トランスフェクトした。ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルでのノックダウン効率は、それぞれ定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）およびウエスタンブロッティングによって分析した。一過性のＴＡＣＣ３過剰発現のために、ＭＣＦ－１２Ａ細胞に２５０ｎｇの空またはＴＡＣＣ３ベクター（ＯＨｕ２１７５１；Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、ＮＪ，ＵＳＡ）を４８時間トランスフェクトした。

【0195】

コロニー形成アッセイ
単層培養では、ＪＩＭＴ－１細胞の単細胞懸濁液（３×１０^３細胞／ウェル）を１２ウェルプレートにプレーティングした。６時間のインキュベーション後、細胞を異なる用量の化合物５（５）、ＳＰＬ－ＢおよびＫＨＳ１０１で処置した。ＴＡＣＣ３過剰発現中のＭＣＦ－１２Ａ細胞のコロニー形成能を試験するために、ＭＣＦ－１２Ａ細胞（２×１０^５）を６ウェルプレートに播種し、翌日ＴＡＣＣ３トランスフェクションを行った。トランスフェクションの４８時間後、細胞を計数し、１×１０^３細胞／ウェルを１２ウェルプレートにプレーティングした。両実験設定で、培地を４日ごとに新たにし、細胞を１２日間インキュベートした。次に、細胞を２％パラホルムアルデヒドで１５分間固定し、１％クリスタルバイオレット（Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で、室温で１５分間染色した。生存コロニー（少なくとも５０個の細胞で構成されている）をＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ）で計数した。

【0196】

倍加時間の評価
倍加時間を評価するために、正常な乳房上皮細胞株ＭＣＦ－１２Ａおよび乳がん細胞株を６ウェルプレートにプレーティングした（３×１０^４細胞／ウェル）。トリプシン処理により細胞を収集し、２４時間ごとに１週間細胞数を計数した。これらの細胞の成長曲線は、播種後の日数に対する細胞数／ｃｍ^２として描いた。倍加時間は、以下の式を使用して計算した。

【数1】

式中、ｔは、細胞成長の対数期に費やされた時間であり、ＸｅおよびＸｂは、それぞれ対数期の終了時および開始時の細胞数である。

【0197】

免疫蛍光
ＪＩＭＴ－１細胞の免疫蛍光染色は、以前に記載されたように行った（Ｃｉｚｍｅｃｉｏｇｌｕ，Ａｒｎｏｌｄ ｅｔ ａｌ．２０１０）。基本的に、６ウェルプレートのガラスカバースリップ上に１．５×１０^５ＪＩＭＴ－１細胞／ウェルを播種した。翌日、細胞をビヒクル、２００ｎＭまたは５００ｎＭ化合物５のいずれかで１２時間処置した。次に、氷冷メタノールで、－２０℃で１０分間細胞を固定する。次に、細胞をＰＢＳ溶液中の３％ＢＳＡで、室温で１時間ブロックし、一次および二次抗体とともに室温で１時間インキュベートした。細胞をＤＡＰＩで５分間対比染色した（０．０１μｇ／ｍｌ）。最後に、ＩｍｍｕｎｏＨｉｓｔｏｍｏｕｎｔｈ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）を使用してカバースライドを取り付けた。ＤＩＣプリズムを備えた直立蛍光顕微鏡（直立）で画像を撮影した。

【0198】

ＮＣＩ－６０がん細胞株パネルスクリーニング
９つの異なるがん型由来の６０種のヒトがん細胞株からなる、ヒト腫瘍細胞株のＮＣＩ－６０パネルでのスクリーニングのために、化合物５（５）をＮａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに提出した（ＮＣＩ番号Ｓ８０７６２０）。最初に各細胞株で１０μＭの濃度の単一用量スクリーニングで化合物５（５）を試験した。単一用量アッセイの結果を得た後、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｐｒｏｇｒａｍ（ＤＴＰ）の分析を行い、所定の閾値阻害基準を満たす化合物５をＮＣＩフルパネル５用量アッセイに選択した。次に、化合物５を１０ｎＭ～１００μＭの範囲の用量で、５用量ＮＣＩ－６０スクリーニングで２回試験し、６０種の細胞株のＧＩ_５０（５０％成長阻害）値、ＴＧＩ（総成長阻害）値、およびＬＣ_５０（５０％の細胞死を誘発する致死量濃度）値を決定する。詳細なスクリーニング方法は、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｔｐ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ＿ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ／ｎｃｉ－６０／ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ．ｈｔｍ Ｗｅｂページからアクセスすることができる。簡単に説明すると、９６ウェルプレートに細胞を播種してから２４時間後、細胞を５ｌｏｇＭ濃度範囲の化合物で２日間処置した。細胞毒性はＳＲＢアッセイを使用して評価した。図に示したデータは、両実験の平均値である。

【0199】

マウス実験
６～８週齢の雌の無胸腺ヌードまたはＢａｌｂ／ｃマウスを、温度制御された１２時間の明期／１２時間の暗期サイクル環境で収容した。この試験は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｂｉｌｋｅｎｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙに従って行い、施設のガイドラインおよび動物研究の原則に従って行った。ヌードマウスにおけるインビボ乳がん腫瘍成長のために、４×１０^６ＪＩＭＴ－１細胞を１５０μｌの１：１ ＤＭＥＭおよびトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ，ＵＳＡ）、ｖ／ｖで調製し、雌のヌードマウスの乳腺脂肪体（ＭＦＰ）に注射した。マウスの体重および腫瘍の体積は、キャリパーを使用して毎日測定した。腫瘍体積は、長さ×幅^２×０．５として計算した。腫瘍体積が約９０～１００ｍｍ^３に達したら、異種移植片をランダム化して群に分けた。動物をビヒクル（ｄｄＨ２Ｏ中の０．０５％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）および２％Ｔｗｅｅｎ－８０）、または化合物５（隔日（ｑｏｄ．）で異なる用量－経口または静脈内投与および投与方法－２または５ｍｇ／ｋｇ）で処置した。別の実験では、動物をより高用量の化合物５（２５ｍｇ／ｋｇ）についても試験した。腫瘍成長に対する化合物５（５ｍｇ／ｋｇ、ｑｏｄ．、ｐｏ．）の効果も、ＪＩＭＴ－１細胞を使用してＳＰＬ－Ｂ（５ｍｇ／ｋｇ、隔日、経口）と比較した。処置開始から２０～３０日後にマウスを犠牲にし、腫瘍を収集してその後の分析のために保存した。免疫適格性の雌のＢａｌｂ／ｃマウスモデルで化合物５の効果を試験するために、悪性度の高いマウス乳がん細胞株を使用した。１×１０^６個のＥＭＴ－６細胞をＰＢＳ中で調製し、マウスのＭＦＰに注射した。同様に、腫瘍体積が９０～１００ｍｍ^３に達すると、マウスを２群にランダム化し、ビヒクルまたは２５ｍｇ／ｋｇの化合物５のいずれかを毎日経口投与した。生存度は、１５００ｍｍ^３の事前定義された腫瘍体積カットオフを使用して計算した。

【0200】

さらに、化合物５は、肺転移の誘発直後に試験した。非常に悪性度の高くかつ転移性の４Ｔ１－Ｌｕｃ２（ルシフェラーゼ標識）細胞をＰＢＳ中で１×１０^６細胞／マウスとして調製し、Ｂａｌｂ／ｃ雌マウスに静脈内注射した。転移発症は、インビボイメージングシステム（ＩＶＩＳ）を使用してモニターし、生物発光を定期的に定量化した。肺転移が発症すると、マウスをランダム化して２群に分け、ビヒクルまたは５０ｍｇ／ｋｇの化合物５のいずれかを毎日経口投与した。マウスが死亡したときの生存度を計算した。

【0201】

乳がんモデルに加えて、化合物５の抗腫瘍形成効果を、免疫不全ヌードマウス（ＨＣＴ－１１６の場合）と同系免疫適格性Ｂａｌｂ／ｃマウス（ＣＴ－２６の場合）との両結腸がん動物モデルで試験した。４×１０^６ＨＣＴ－１１６および１×１０^６細胞を、それぞれマトリゲル：ＰＢＳ中またはＰＢＳ中のいずれかで調製し、マウスの脇腹領域に皮下注射した。同様に、腫瘍体積が９０～１００ｍｍ^３に達したら、マウスを２群にランダム化し、ビヒクルまたは２５～５０ｍｇ／ｋｇの化合物５を毎日２０～２５日間経口投与した。マウスの体重を定期的に測定した。

【0202】

毒性分析のために、ヌード雌マウスに１００ｍｇ／ｋの化合物５を７日間投与するか、またはビヒクルもしくは５００ｍｇ／ｋｇの化合物５を１回経口投与した。マウスの体重を定期的に測定し、毒性の可能性を判断するために臓器を採取した。

【0203】

バイオインフォマティクス分析
異なる腫瘍組織と正常組織との間のＴＡＣＣ３差次的プロットは、Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）患者（Ａｋｂａｎｉ ｅｔ ａｌ．，２０１４）を使用して作成し、データはｈｔｔｐ：／／ｆｉｒｅｂｒｏｗｓｅ．ｏｒｇ／からダウンロードした。ＴＡＣＣ３の生存分析および予後の有意性については、様々な独立した公的に利用可能ながんデータセットを使用した。１つは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｏｆ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ（ＭＥＴＡＢＲＩＣ）データセットである（Ｃｕｒｔｉｓ、Ｓｈａｈ ｅｔ ａｌ．２０１２）。ＭＥＴＡＢＲＩＣ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ＶａｌｉｄａｔｉｏｎセットのＴＡＣＣ３発現レベルは、乳がん患者の全生存率に使用した。ＴＡＣＣ３レベルの２５番目および７５番目の四分位数の患者を使用し、それぞれ低ＴＡＣＣ３および高ＴＡＣＣ３として定義した。ＴＡＣＣ３発現と胃がん患者の全生存率との関連は、８７６人の胃がん患者の全生存率に関する情報を含むＫａｐｌａｎ Ｍｅｉｅｒプロッターデータベースを使用して分析した（Ｓｚａｓｚ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。１２２人の患者で構成される前立腺がん患者の無病生存データは、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｔｃｇａを使用してＴｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）データベースから取得し、患者は２５パーセンタイルおよび７５パーセンタイルに基づいて分離した。最後に、肺がん患者の無再発生存データをＧＳＥ３１２１０データセットから取得し、同様に、患者の２５パーセンタイルおよび７５パーセンタイルをこの分析に使用した（Ｏｋａｙａｍａ，Ｋｏｈｎｏ ｅｔ ａｌ．２０１２）。Ｂｒｏａｄ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＷｅｂサイト（ｈｔｔｐ：／／ｓｏｆｔｗａｒｅ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｇｓｅａ／ｉｎｄｅｘ．ｊｓｐ）で入手可能な有糸分裂およびＤＮＡ修復関連遺伝子セットの遺伝子セット濃縮分析（ＧＳＥＡ）分析は、乳がんを使用して行い、ＭＥＴＡＢＲＩＣ Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎデータセット（ｎ＝９９５）では、ＴＡＣＣ３の発現レベルに基づいて患者を２群（高対低）に分けた。ＮＣＩ－６０細胞株のＴＡＣＣ３依存性の分析には、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｅｐｍａｐ．ｏｒｇ／ｐｏｒｔａｌ／で入手可能なＢｒｏａｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ ａｎｄ Ｍａｒｃｏｔｔｅ ｅｔ ａｌ．（１３）のＲＮＡｉスクリーニングを組み合わせた依存性データを使用した。多変量Ｃｏｘ回帰分析は、ＳＰＳＳソフトウェアのＭＥＴＡＢＲＩＣデータセットを使用して行った。ＴＡＣＣ３レベル、腫瘍グレード、腫瘍ステージ、ＥＲ、ＰＲ、およびＨＥＲ２状態を共変量として選択した。ＴＡＣＣ３発現は、２５パーセンタイルに基づいて分離した。

【0204】

統計分析
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ）を使用してデータを分析し、特に明記されていない限り、３つの独立した実験からの平均±標準偏差として表した。２群比較の統計的有意性は、両側スチューデントのｔ検定によって決定した。異なる細胞株の倍加時間曲線を比較するために、一元配置分散分析を使用した。複数のｔ検定を使用して、ＥＭＴ６異種移植片の腫瘍体積の処置群間のペアワイズ有意性を決定した。０．０５未満のｐおよび補正ｐ（ｑ）値は、統計的に有意であるとみなした。Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線分析をログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定を使用して行った。

【0205】

実施例３：さらなる例示的な生物学的結果

【表4-1】

【表4-2】

【0206】

参照による組み込み
本明細書で言及するすべての刊行物および特許は、個々の刊行物または特許が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。矛盾する場合は、本明細書の定義を含め、本出願が優先する。

【0207】

均等物
主題の開示の特定の実施形態を議論してきたが、上記の明細書は、例示的なものであり、限定的なものではない。本明細書および以下の特許請求の範囲を検討すると、本開示の多くの変形が当業者に明らかになるであろう。本開示の全範囲は、均等物の全範囲とともに特許請求の範囲、およびそのような変形とともに明細書を参照することによって決定されるべきである。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図5E】

【図5F】

【図5G】

【図5H】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図6E】

【図6F】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図7F】

【図7G】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図9E】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図14】

【国際調査報告】