特表 2023-502712 抗ＰＤ－１／ＩＬ－１５免疫サイトカインによる新しいＰＤ－１標的免疫療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-01-25

(54)【発明の名称】抗ＰＤ－１／ＩＬ－１５免疫サイトカインによる新しいＰＤ－１標的免疫療法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/19 20060101AFI20230118BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230118BHJP

   C07K 14/54 20060101ALI20230118BHJP

   C07K 14/715 20060101ALI20230118BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20230118BHJP

   C07K 14/52 20060101ALI20230118BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20230118BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20230118BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230118BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230118BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230118BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230118BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230118BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230118BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230118BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230118BHJP

【ＦＩ】

C12N15/19

C07K19/00 ZNA

C07K14/54

C07K14/715

C07K16/00

C07K14/52

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61P43/00 107

A61P35/00

A61P31/00

A61K38/19

A61K39/00 A

A61K39/395 L

A61K39/395 C

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022529606

(86)(22)【出願日】2020-11-20

(85)【翻訳文提出日】2022-07-14

(86)【国際出願番号】 EP2020082892

(87)【国際公開番号】W WO2021099576

(87)【国際公開日】2021-05-27

(31)【優先権主張番号】19306499.5

(32)【優先日】2019-11-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．ＳＰＡＮ

(71)【出願人】

【識別番号】513246469

【氏名又は名称】インサーム（インスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル）

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＳＥＲＭ（ＩＮＳＴＩＴＵＴ ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＤＥＬＡ ＳＡＮＴＥ ＥＴ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ ＭＥＤＩＣＡＬＥ）

(71)【出願人】

【識別番号】507240336

【氏名又は名称】アシスターンス・ピュブリック－オピトー・ドゥ・パリ

(71)【出願人】

【識別番号】518322621

【氏名又は名称】ユニヴェルシテ・パリ・エ・クレテイユ・ヴァル・ドゥ・マルヌ

(71)【出願人】

【識別番号】509004712

【氏名又は名称】ベイラー リサーチ インスティテュート

【氏名又は名称原語表記】ＢＡＹＬＯＲ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ

(71)【出願人】

【識別番号】517036884

【氏名又は名称】マブクエスト エスエー

【氏名又は名称原語表記】ＭａｂＱｕｅｓｔ ＳＡ

(74)【代理人】

【識別番号】100121728

【弁理士】

【氏名又は名称】井関 勝守

(74)【代理人】

【識別番号】100165803

【弁理士】

【氏名又は名称】金子 修平

(74)【代理人】

【識別番号】100170900

【弁理士】

【氏名又は名称】大西 渉

(72)【発明者】

【氏名】レヴィ，イヴ

(72)【発明者】

【氏名】パンタレオ，ジュゼッペ

(72)【発明者】

【氏名】フェンウィック，クレイグ

(72)【発明者】

【氏名】ズラウスキ，サンドラ

(72)【発明者】

【氏名】ズラウスキ，ジェラルド

(72)【発明者】

【氏名】セディキ，ナビラ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA83X

4B065AA87X

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4C084AA01

4C084AA02

4C084AA07

4C084DA01

4C084NA14

4C084ZB071

4C084ZB072

4C084ZB221

4C084ZB222

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB321

4C084ZB322

4C085AA03

4C085AA25

4C085BA01

4C085BB11

4C085BB36

4C085BB42

4C085CC01

4C085CC08

4C085CC21

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA02

4H045DA50

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本発明者らは、新しいＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質を本明細書で提示する。さらに、本発明者らは、抗ＰＤ－１治療の補うものとして、免疫活性化プロセスにおける複数のステップを同時に標的とすることができる一連の抗ＰＤ－１／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）免疫サイトカインを開発した。上述の免疫サイトカインの開発により、個々に投与される抗ＰＤ－１抗体とＩＬ－１５とに関連する潜在的な利益にいくつかの特定の利点を与える。これらは、ＩＬ－１５治療に対する、ｉｎ ｖｉｖｏの半減期の有意な延長、ＩＬ－１５Ｒαトランス提示の必要性をなくし得る、予備形成したＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα複合体の投与、低い標的治療用量につながる高活性、及びオフターゲット有害事象を制限し得る、高ＰＤ－１細胞を有する領域へのＩＬ－１５の標的化送達を含む。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ１５－Ｒαｓｕｓｈｉ含有ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号２に示すアミノ酸配列を有するリンカー、及び（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－１５ポリペプチド、を含むＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質。

【請求項2】

配列番号４に示すアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質。

【請求項3】

請求項１に記載のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α融合タンパク質と融合させた抗体の重鎖。

【請求項4】

リンカーを介して前記ＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α融合タンパク質と融合させた請求項３に記載の重鎖。

【請求項5】

前記リンカーは、配列番号５に示すアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の重鎖。

【請求項6】

前記リンカーは、配列番号６に示すアミノ酸配列からなる、請求項５に記載の重鎖。

【請求項7】

ＰＤ－１への特異性を有する抗体由来である請求項３に記載の重鎖。

【請求項8】

配列番号７、８、又は９に示すＶＨドメインを含む、請求項７に記載の重鎖。

【請求項9】

ＩｇＧ４免疫グロブリンのＩｇＧ Ｆｃ領域を含む、請求項７に記載の重鎖。

【請求項10】

配列番号１０、１１、又は１２に示すアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の重鎖。

【請求項11】

配列番号１３、１４、又は１５に示すアミノ酸配列からなる、請求項７に記載の重鎖。

【請求項12】

請求項１に記載のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α融合タンパク質と融合させた抗体の重鎖を含む免疫サイトカイン。

【請求項13】

ＰＤ－１に特異性を有する請求項１２に記載の免疫サイトカイン。

【請求項14】

配列番号１３、１４、又は１５に示すアミノ酸配列からなる重鎖を含む、請求項１２に記載の免疫サイトカイン。

【請求項15】

配列番号１３に示す重鎖及び配列番号１６に示す軽鎖を含む、請求項１２に記載の免疫サイトカイン。

【請求項16】

配列番号１４に示す重鎖及び配列番号１７に示す軽鎖を含む、請求項１２に記載の免疫サイトカイン。

【請求項17】

配列番号１５に示す重鎖及び配列番号１８に示す軽鎖を含む、請求項１２に記載の免疫サイトカイン。

【請求項18】

請求項１に記載のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質をコードする核酸。

【請求項19】

請求項１に記載のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質と融合させた抗体の重鎖をコードする核酸。

【請求項20】

配列番号１９又は２０に示す核酸配列を含む、請求項１９に記載の核酸。

【請求項21】

請求項１２に記載の免疫サイトカインをコードする核酸。

【請求項22】

請求項１８、１９、又は２１に記載の核酸を含むベクター。

【請求項23】

請求項１８、１９、又は２１に記載の核酸によって遺伝子導入した、感染させた、又は形質転換した宿主細胞。

【請求項24】

薬剤としての使用のための請求項１に記載のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質。

【請求項25】

薬剤としての使用のための請求項１２に記載の免疫サイトカイン。

【請求項26】

治療を必要とする対象における治療の方法であって、治療有効量の請求項１３に記載の少なくとも１つの抗ＰＤ－１免疫サイトカインを前記対象に投与することを含み、前記投与は前記対象におけるＴ細胞の増殖性、遊走性、残留性、及び／又は活性を増強させる、方法。

【請求項27】

Ｔ細胞疲弊の低減を必要とする対象におけるＴ細胞疲弊を低減する方法であって、治療有効量の請求項１３に記載の少なくとも１つの抗ＰＤ－１免疫サイトカインを前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項28】

処置を必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、治療有効量の請求項１３に記載の抗ＰＤ－１免疫サイトカインを前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項29】

処置を必要とする対象における感染疾患を処置する方法であって、治療有効量の請求項１３に記載の抗ＰＤ－１免疫サイトカインを前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項30】

前記感染疾患は、レトロウイルス、ポックスウイルスなど、動物、ヒト、及び植物に感染する単鎖又は二本鎖のＲＮＡ及びＤＮＡウイルス、免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染、エコーウイルス感染、パルボウイルス感染、風疹ウイルス感染、パピローマウイルス、先天性風疹感染、エプスタイン・バーウイルス感染、流行性耳下腺炎、アデノウイルス、ＡＩＤＳ、水疱、サイトメガロウイルス、デング熱、ネコ白血病、家禽ペスト、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２、ブタコレラ、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、日本脳炎、麻疹、パラインフルエンザ、狂犬病、呼吸器合胞体ウイルス、ロタウイルス、いぼ、及び黄熱、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えばＨＳＶ－Ｉ、ＨＳＶ－ＩＩ、ＣＭＶ、若しくはＶＺＶ）、ポックスウイルス（例えば痘そう若しくはワクシニアなどのオルソポックスウイルス、若しくは伝染性軟属腫）、ピコルナウイルス（例えばライノウイルス若しくはエンテロウイルス）、オルソミクソウイルス（例えばインフルエンザウイルス）、パラミクソウイルス（例えばパラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ））、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ）、パポーバウイルス（例えば、性器いぼ、尋常性いぼ、若しくは足底いぼを引き起こすものなどのパピローマウイルス）、ヘパドナウイルス（例えばＢ型肝炎ウイルス）、フラビウイルス（例えばＣ型肝炎ウイルス若しくはデング熱ウイルス）、又はレトロウイルス（例えばＨＩＶなどのレンチウイルス）によって引き起こされるウイルス感染である、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

抗原又は複数の抗原に対するＢ細胞及び／又はＴ細胞応答の誘発及び／又は増強を必要とする対象における、抗原又は複数の抗原に対するＢ細胞及び／又はＴ細胞応答を誘発及び／又は増強する方法であって、前記抗原又は複数の抗原と組み合わせて治療有効量の請求項１３に記載の抗ＰＤ－１免疫サイトカインを前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項32】

前記抗原又は複数の抗原は、ＤＣ標的抗体、特に抗ＣＤ４０抗体にコンジュゲートされる、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

薬学的に許容される担体と共に請求項１に記載のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質を含む、医薬。

【請求項34】

薬学的に許容される担体と共に請求項１２に記載の免疫サイトカイン（例えば抗ＰＤ－１免疫サイトカイン）を含む、医薬。

【請求項35】

請求項１３に記載の抗ＰＤ－１免疫サイトカインを含む、ワクチン組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、医学、特に免疫学、腫瘍学、及びウイルス学の分野のものである。

【背景技術】

【0002】

ＰＤ－１を標的とする抗体は、腫瘍学においてゴールドスタンダードの免疫療法の方針であり、様々な形態のがんに対してより有効な及び／又はより広範に適用可能な組合せ治療を特定するため、数百の臨床試験が進行中である。治療は、３つの特定の免疫増強ステップで抗腫瘍効果に寄与することができる。それらは、一般に、（１）十分な数及び多様性の腫瘍刺激Ｔ細胞を活性化すること、（２）腫瘍への適切な輸送及び腫瘍の透過を確保すること、並びに（３）腫瘍特異的Ｔ細胞応答の阻害を抑止することである。免疫媒介抗腫瘍応答における様々な律速ステップを標的とする治療の組合せが、相乗治療効果を有すると予測される。この仮説は、抗原提示細胞を介してＴ細胞プライミングを増強させるＣＴＬＡ－４遮断を介して作用するイピリムマブによって腫瘍特異性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の機能的疲弊を軽減するため、ＯｐｄｉｖｏとＰＤ－１治療とを組み合せた試験において確認された。いくつかの形態のがんにおいて治療上の利益が観察されているが、患者はまた、この免疫療法の組合せの使用を制限する有害事象の少なからぬ増加に直面することとなる。ゆえに、免疫療法の組合せは、抗腫瘍免疫応答の増強において重大な可能性を有するが、これらの組合せの安全性が大きく配慮される。

【0003】

治療ワクチン及び免疫調節剤が、ＨＩＶ－１特異的細胞媒介免疫応答を増強するとともにウイルス複製を抑えるため、一般に使用されている。前者は、ＨＩＶ－１特異的Ｔ細胞応答の刺激に重要である一方、後者は、刺激されたウイルス特異性Ｔ細胞の増殖を支援し、ウイルスクリアランスのため、これらをより細胞傷害性にさせ得る。がんの分野におけるＰＤ－１を標的とする免疫療法の近年の成功は、増強された免疫応答がウイルス複製をより効果的に制御することができるように強力な組合せ治療法を開発するための科学的ベースをもたらすものである。

【0004】

特許文献１は、抗ＰＤ－１治療と比較して複数の別個の方策によって腫瘍クリアランスを促進することができる、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質を公開している。これらには、ＮＫ細胞の活性化及び増殖誘導、抗原特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖誘導、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の細胞溶解活性増強、並びに長期持続性抗原経験ＣＤ８^＋ＣＤ４４ｈｉメモリーＴ細胞の誘導を含む。さらなる利益は、ＩＬ－２と対照的に、ＩＬ－１５は、腫瘍特異性ＣＴＬの増殖において抑制性作用を及ぼすＴｒｅｇの増殖を誘導しないということである。上述のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質と組み合わせた抗ＰＤ－１Ａｂの使用の裏付けは、マウスのｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍モデルを使用して示されており、組合せ治療で処置した動物では、単独で投与したいずれの単剤治療に対しても腫瘍増殖速度が有意に低下し、生存期間が延長した（Ｄｅｓｂｏｉｓ，Ｍｅａｎｉｅ，ｅｔ ａｌ．“ＩＬ－１５ ｔｒａｎｓ－ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔ ＲＬＩ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｅｆｆｅｃｔｏｒ／ｍｅｍｏｒｙ ＣＤ８^＋Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｓ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＰＤ－１ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．” Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９７．１（２０１６）：１６８－１７８．）。この相乗作用と関連する機序は、部分的に、抗原特異的刺激、細胞増殖、及び細胞生存を促進するＴ細胞シグナリング経路の免疫増強によるものである。これらの利益にもかかわらず、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質の使用は、いくつかの制限のためクリニックにおける使用がごく限られている。これらは、（１）高いＣｍａｘ値をもたらすｉｎ ｖｉｖｏでの短い半減期（１時間未満、Ｓｔｏｋｌａｓｅｋ ｅｔ ａｌ．２００６）、（２）、血管漏出症候群を含む有害事象による低用量制限毒性、（３）腫瘍微小環境において多くの場合にダウンレギュレートされるＩＬ－１５Ｒαトランス提示の必要性、（４）単剤治療として使用する場合、自己制限性免疫応答をもたらす、Ｔ細胞におけるＰＤ－１の急速なアップレギュレート、並びに（５）使用する高治療用量による、重篤だが可逆的な好中球減少症を含む。

【0005】

特許文献２は、（ａ）コンジュゲート及び（ｂ）該コンジュゲートに共有原子価により直接的又は非直接的に結合した抗体又はそのフラグメントを含み、該コンジュゲートが、（ｉ）インターロイキン１５又はその誘導体のアミノ酸配列を含むポリペプチド、及びＩＬ－１５Ｒαのｓｕｓｈｉドメイン又はその誘導体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、免疫サイトカインを公開している。しかしながら、先行技術では、抗ＰＤ－１／ＩＬ－１５免疫サイトカインを開示していない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】国際公開第２００７／０４６００６号

【特許文献2】国際公開第２０１２／１７５２２２号

【発明の概要】

【0007】

特許請求の範囲によって規定されるように、本発明は、新しいＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質、該融合タンパク質を含む免疫サイトカイン、並びにがん及びウイルス感染の処置のための該免疫サイトカインの使用に関する。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1】図１は、機能的活性及びｉｎ ｖｉｖｏの薬物動態特性についてプロファイリングした抗ＰＤ－１／ＩＬ－１５／Ｒα免疫サイトカイン設計を示す。免疫サイトカインは、（Ａ）ＰＤ－１を標的とする１つのアーム、及びＩＬ－１５及びＩＬ－１５受容体αｓｕｓｈｉドメインを送達する第２のアームを含む、ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）二重特異性設計（ＩＣ：Ｋ－ｉｎ－Ｈ）、（Ｂ）Ｎ末端のコヘシンドメインを介してＩＬ－１５／Ｒα融合部と密に結合するＣ末端のドックリン融合部を含む、抗ＰＤ－１抗体（ＩＣ：Ｄｏｃ／Ｃｏｈ）、並びに（Ｃ）可動性ループを介して結合したＩＬ－１５及びＬ－１５ＲαのＣ末端融合部を含む、抗ＰＤ－１抗体（ＩＣ：Ｆｕｓｉｏｎ）からなる。

【図2】図２は、抗ＰＤ－１／ＩＬ－１５／Ｒα免疫サイトカインが、Ｋｅｙｔｒｕｄａに対して疲弊ＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖の回復を増強させることを示す。ＨＩＶ由来ペプチドでの刺激後、ＨＩＶ特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖の回復を示す。複数のＣＦＳＥ実験の結果では、各研究においてポジティブコントロール基準として使用したＫｅｙｔｒｕｄａに対して示した増殖増強を提示した。

【図3】図３は、従来の遮断（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）抗ＰＤ－１抗体又は非遮断（１３５Ｃ Ｈ１ｃＬ１ｃ）抗ＰＤ－１抗体のいずれかと直接的に融合させたＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα免疫サイトカインの比較を示す。ＨＩＶ由来ペプチドでの刺激後、ＨＩＶ特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖の回復を示す。

【図4】図４は、Ｋｅｙｔｒｕｄａ又は抗ＰＤ－１／ＩＬ－１５／Ｒα免疫サイトカインの存在下で刺激した細胞において観察される抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞増殖を示す。ウイルス血症ＨＩＶドナーのＰＢＭＣを、ＨＩＶ抗原ペプチドで刺激し、６日間培養させた後、五量体ＭＨＣ－ペプチド複合体で細胞を染色した。

【図5】図５は、様々な抗ＰＤ－１／ＩＬ－１５／Ｒα免疫サイトカインと比較した抗ＰＤ－１抗体Ｋｅｙｔｒｕｄａの薬物動態学的プロファイルを示す。全ヒトＩｇＧ抗体を、Ｋｅｙｔｒｕｄａ試料において測定し、ＩＬ－１５結合ヒトＩｇＧ抗体を免疫サイトカインに対してモニタリングした。

【図6】図６は実験設計を示す。ワクチン接種の１６週後のｃＡＲＴ患者のＰＢＭＣ（試料ｎ＝１５）を、αＰＤ１、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα、ａＰＤ１＋ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα、又はＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαと融合させたαＰＤ１（融合体）の存在下又は非存在下においてＧａｇ－Ｐ２４ペプチドプールで刺激した。４４時間の刺激の後、ＣＤ４^＋ＯＸ４０^＋ＣＤ２５^＋Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ３９^＋特異的Ｔｒｅｇ及びＣＤ４^＋ＯＸ４０^＋ＣＤ２５^＋Ｆｏｘｐ３^－ＣＤ３９^－特異的エフェクターを示すため、細胞を採取して染色してからフローサイトメトリーによって分析した。同時に、６日のｉｎ ｖｉｔｒｏ刺激の後、ＣＤ８^＋五量体^＋ＨＩＶ－１特異的細胞増殖及びサイトカイン産生を評価した。

【図7】図７は、ＣＤ４^＋ＨＩＶ－１特異的応答を示す。ワクチン接種の１６週後のｃＡＲＴ患者のＰＢＭＣ（試料ｎ＝１５）を、図２において説明した免疫サイトカインの存在下又は非存在下においてＧａｇ－Ｐ２４ペプチドプールで刺激した。４４時間の刺激の後、ＣＤ４^＋ＯＸ４０^＋ＣＤ２５^＋Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ３９^＋特異的Ｔｒｅｇ及びＣＤ４^＋ＯＸ４０^＋ＣＤ２５^＋Ｆｏｘｐ３^－ＣＤ３９^－特異的エフェクターを示すため、細胞をフローサイトメトリーによって分析した。

【図8】図８は、ＣＤ８^＋特異的応答を示す。Ｄａｌｉａ１試料のＰＢＭＣ（ｎ＝５だが、３つのみを示す）を、ＣＦＳＥ標識し、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＧａｇ－Ｐ２４ペプチドプールで刺激し、αＰＤ１単独又はα－ＰＤ１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体のいずれかの存在下（又は非存在下）で培養した。フローサイトメトリー染色は、ＣＤ８^＋五量体^＋特異的細胞（Ａ）、増殖（Ｂ）、及びサイトカイン産生（Ｃ）に対するゲート方法を示す。

【図9】図９は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの抗ＣＤ４０．ＨＩＶ５ｐｅｐ－ＤＣワクチンの実験設計を示す。ｃＡＲＴ患者のＰＢＭＣ（病態生理学的（Ｐｈｙｓｉｏｐｈ）コホート、Ｈｏｐｉｔａｌ Ｈｅｎｒｉ－Ｍｏｎｄｏｒ Ｃｒｅｔｅｉｌ）を使用した。試料（ｎ＝１０）を、Ｄａｌｉａ１試験に行ったように（図１）、ＣＤ１４^＋単球単離に使用し（Ｍｉｌｔｅｎｙｉビーズ）、分化、成熟、活性化させ、抗ＣＤ４０．ＨＩＶ５ｐｅｐ（ＤＣ－ワクチン）をロードした。α－ＰＤ１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体の存在下（又は非存在下）において、４４時間の間、Ｇａｇ－Ｐ２４ペプチドプールで刺激した、又は抗ＣＤ４０．ＨＩＶ５ｐｅｐと共培養したＰＢＭＣを使用して実験を行った。上述で適用したようなＣＤ４^＋ＯＸ４０^＋ＣＤ２５^＋エフェクター及びＴｒｅｇに対するゲート方法を使用した。

【図10】図１０は、ＣＤ４^＋ＨＩＶ特異的応答を示す。図９（上述）のリードアウト実験はＴｅｆｆ及びＴｒｅｇ特異的細胞の存在比率を示す。α－ＰＤ１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体の存在下（又は非存在下）において、４４時間の間、ＰＢＭＣを、Ｇａｇ－Ｐ２４ペプチドプールで刺激した、又は抗ＣＤ４０．ＨＩＶ５ｐｅｐと共培養した。図５で示したようなＣＤ４^＋ＯＸ４０^＋ＣＤ２５^＋エフェクター及びＴｒｅｇに対するゲート方法を適用した。

【図11】図１１は、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋ＨＩＶ－１特異的応答を示す。図９（上述）のリードアウト実験はエフェクターＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞のサイトカイン産生を示す。４４時間（ＯＸ４０アッセイ）終了の６時間前に、細胞内サイトカイン分泌を遮断するため、ブレフェルジンＡを添加した。ＩＬ－２／ＴＮＦα／ＩＦＮγの染色を行って、細胞をフローサイトメトリーによって分析した。青色のヒストグラムは、α－ＰＤ１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体をＰＢＭＣ／抗ＣＤ４０．ＨＩＶ５ｐｅｐ－ＤＣ共培養物に添加したときのサイトカイン産生の増加を示す。

【図12】図１２は、ｉｎ ｖｉｖｏのＰＤ－１ ＨｕＧＥＭＭ Ｐａｎｃ０２腫瘍モデルにおける腫瘍増殖の免疫療法誘導抑制を示す。ＰＤ－１ ｈｕＧＥＭＭマウスに、Ｐａｎｃ０２腫瘍細胞を移植し、平均腫瘍体積が１００ｍｍ^３に達した際、ＰＢＳ又は示す４つの免疫療法のうちの１つで週２回処置した。各グループに割り当てた１０匹のマウスは、週２回腫瘍体積についてモニタリングし、治療における日数に対する平均体積を示す。

【図13】図１３では、ＮＢ０１／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα免疫サイトカインが免疫療法開始後の７日目～２４日目にＰａｎｃ０２腫瘍増殖における有意な抑制を示す。様々な治療の抗腫瘍効果を、研究開始後の７日目～２４日目に曲線下面積（ＡＵＣ）を計算することによって評価した。ノンパラメトリックマン・ホイットニー検定を使用して、ＰＢＳコントロールと個々の治療との間の統計的差を判定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ８．３．０を用いて分析を行った。

【図14】図１４は、ＮＢ０１／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα免疫サイトカイン治療がＰａｎｃ０２移植ＰＤ－１ ＨｕＧＥＭＭマウスの生存を延長することを示す。Ｐａｎｃ０２移植マウスの治療開始後の経時におけるマウス生存のパーセンテージを、カプラン・マイヤー生存曲線分析によって評価した。ｌｏｇ順位検定により、ＮＢ０１／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα免疫サイトカイン単剤治療及びＫｅｙｔｒｕｄａ＋ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα ＡＬＴ－８０３スーパーアゴニスト二剤治療の両方がマウスの生存時間を増加させることを裏付けた。一方で、単独のＫｅｙｔｒｕｄａ単剤治療も、Ｋｅｙｔｒｕｄａ／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα免疫サイトカイン単剤治療も、Ｐａｎｃ０２移植マウスの生存を有意に延長させなかった。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ８．３．０を用いて分析を行った。

【発明を実施するための形態】

【0009】

本発明者らは、新しいＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質をここで提示する。さらに、本発明者らは、抗ＰＤ－１治療を補うものとして、免疫活性化プロセスにおける複数のステップを同時に標的とすることができる一連の抗ＰＤ－１／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）免疫サイトカインを開発した。上述の免疫サイトカインの開発により、個々に投与される抗ＰＤ－１抗体とＩＬ－１５とに関連する潜在的な利益にいくつかの特定の利点を与える。これらは、ＩＬ－１５治療に対する、ｉｎ ｖｉｖｏの半減期の有意な延長、ＩＬ－１５Ｒαトランス提示の必要性をなくし得る、予備形成したＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα複合体の投与、低い標的治療用量につながる高活性、及びオフターゲット有害事象を制限し得る、高ＰＤ－１細胞を有する領域へのＩＬ－１５の標的化送達を含む。

【0010】

最も重要な点として、本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質は、リンカーの特性において特許文献１に記載の融合タンパク質と異なる。本発明のリンカー配列（「フレックス（Ｆｌｅｘ）配列」）は、特許文献１の教示によって提示される特徴を考慮していない。実際に、特許文献１は、リンカー配列が、機能性タンパク質ドメインとの相互作用を促進するため、最小の疎水性又は荷電性を有し、好ましくは、グリシン（Ｇ）、アスパラギン（Ｎ）、及びセリン（Ｓ）を含むことを教示している。本発明者らは、ここで、主に疎水性（アラニンＡ、バリンＶ、プロリンＰ、及びロイシンＬなど）又は荷電（アスパラギン酸Ｄ及びグルタミン酸Ｅ）アミノ酸によって構成され、しかしながらグリシン（Ｇ）、アスパラギン（Ｎ）、及びセリン（Ｓ）を含まない本発明のリンカーが、機能性融合タンパク質の取得につながることを、驚いたことに示している。

【0011】

（主な定義）
本明細書において使用するように、「ＰＤ－１」という用語は当該技術分野におけるその一般的な意味を有し、プログラム細胞死タンパク質１（ＣＤ２７９としても知られる）を指す。ＰＤ－１は、そのリガンドＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２の一方と結合すると、Ｓｈｐ２にＣＤ２８の脱リン酸化をさせることができるとともに、Ｔ細胞の活性化を阻害する、免疫チェックポイントとして作用する。

【0012】

本明細書において使用するように、「ＣＤ４０」という用語は当該技術分野におけるその一般的な意味を有し、ヒトＣＤ４０ポリペプチド受容体を指す。一部の実施形態において、ＣＤ４０は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ２５９４２によって報告されているようなヒト標準配列のアイソフォーム（ヒトＴＮＲ５とも呼ばれる）である。

【0013】

本明細書において使用するように、「インターロイキン１５」という用語は当該技術分野におけるその一般的な意味を有し、ＩＬ－２と構造類似性を有するサイトカインを指す（ＧＲＡＢＳＴＥＩＮ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖｏｌ．２６４（５１６１），ｐ：９６５－９６８，１９９４）。また、このサイトカインは、ＩＬ－１５、ＩＬ１５、又はＭＧＣ９７２１としても知られている。このサイトカイン及びＩＬ－２は多くの生物学的活性を共有しており、共通のヘマトポエチン受容体サブユニットを結合することが分かった。したがって、これらは、同じ受容体に対して競合し、互いの活性の負の調節をし得る。ＩＬ－１５がＴ細胞及びナチュラルキラー細胞の活性化及び増殖を調節すること、並びにＣＤ８^＋メモリーＴ細胞の数がこのサイトカインとＩＬ２との間の平衡により制御されることが示されていることが証明されている。ＩＬ－１５活性は、ｋｉｔ２２５細胞株におけるその増殖誘導を判定することにより測定することができる（ＨＯＲＩ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ、ｖｏｌ．７０（４），ｐ：１０６９－７２、１９８７）。

【0014】

本明細書において使用するように、「ＩＬ－１５Ｒαのｓｕｓｈｉドメイン」という用語は、当該技術分野におけるその一般的な意味を有し、ＩＬ－１５Ｒαのシグナルペプチド後の第１のシステイン残基（Ｃ１）で開始し、該シグナルペプチド後の第４のシステイン残基（Ｃ４）で終了するドメインを指す。ＩＬ－１５Ｒαの細胞外領域の一部に対応する上述のｓｕｓｈｉドメインは、ＩＬ－１５とのその結合に必要である（ＷＥＩ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，ｖｏｌ．１６７（１），ｐ：２７７－２８２，２００１）。

【0015】

本明細書において使用するように、「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、互換的に使用され、ペプチド結合により共有結合したアミノ酸残基から構成される化合物を指す。ポリペプチドは、特定の長さに限定されず、少なくとも２個のアミノ酸を含む必要があり、ポリペプチド配列を構成することができるアミノ酸の最大数に制限は設けられない。ペプチド、オリゴペプチド、及びタンパク質はポリペプチドの定義内に含まれ、そうした用語は、特にその他に示さない限り本明細書において互換的に使用することができる。本明細書において使用するように、上述の用語は、当該技術分野において一般に、例えばペプチド、オリゴペプチド、及びオリゴマーとも呼ばれる短鎖、並びに当該技術分野において一般にタンパク質と呼ばれ、多くの種類が存在するより長い鎖の両方を指す。一実施形態において、本明細書において使用するように、「ペプチド」という用語は、ペプチド結合によって共に連結され、好ましくは、約５０個未満のアミノ酸残基の鎖長を有するアミノ酸の直鎖状重合体を指す。「ポリペプチド」は、ペプチド結合によって共に連結された、少なくとも５０個のアミノ酸の直鎖状重合体を指す。タンパク質は、任意でグリコシル化された、１つ以上のペプチド又はポリペプチド、及び任意で非ポリペプチド補因子から形成された、機能性実体を具体的に指す。また、この用語は、天然のもの、非天然のものを含め、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化など、並びに当該技術分野で知られるその他の修飾を除外する。ポリペプチドはタンパク質全体又はその部分配列とすることができる。「ポリペプチド」は、例えば、とりわけ、生物学的に活性のフラグメント、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異形、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質を含む。ポリペプチドは、天然のペプチド、組換えペプチド、又はその組合せを含む。本発明の文脈において目的とする特定のポリペプチドは、ＣＤＲを含み抗原と結合することができるアミノ酸部分配列である。

【0016】

本明細書において使用するように、「融合タンパク質」という用語は、遺伝子融合によって、例えば、別個のタンパク質の別々の機能性ドメインをコードする少なくとも２つの遺伝子フラグメントの遺伝子融合によって得られる又は得ることができる、少なくとも１つのポリペプチド鎖を含む組換えタンパク質を指す。したがって、「融合タンパク質」という用語は、２つのポリペプチドが直接的に又はリンカーを介して融合したコンストラクトを指す。本明細書において使用するように、「直接的に」という用語は、第１のポリペプチドの末端（Ｎ末端又はＣ末端）における（最初又は最後の）アミノ酸が、第２のポリペプチドの末端（Ｎ末端又はＣ末端）における（最初又は最後の）アミノ酸に融合していることを意味する。言い換えれば、この実施形態では、上述のポリペプチドのＣ末端の最後のアミノ酸は、上述の異種ポリペプチドのＮ末端の最初のアミノ酸に共有結合によって直接的に連結されているか、又は、該ポリペプチドのＮ末端の最初のアミノ酸は、該異種ポリペプチドのＣ末端の最後のアミノ酸に共有結合によって直接的に連結されている。

【0017】

本明細書において使用するように、「リンカー」という用語は、当該技術分野におけるその一般的な意味を有し、タンパク質の適切な二次及び三次構造の形成確保に十分な長さのアミノ酸配列を指す。一部の実施形態において、リンカーは、少なくとも１つだが、３０個未満のアミノ酸を含むペプチド性リンカー、例えば、２～３０個のアミノ酸、好ましくは１０～３０個のアミノ酸、より好ましくは１５～３０個のアミノ酸、なおより好ましくは１９～２７個のアミノ酸、最も好ましくは２０～２６個のアミノ酸のペプチド性リンカーである。一部の実施形態において、リンカーは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０個のアミノ酸残基を有する。典型的に、リンカーは、化合物が適切なコンフォメーション（すなわち、ＩＬ－１５Ｒβ／γシグナリング経路を介して適切なシグナル伝達活性を可能にするコンフォメーション）を採ることを可能にするものである。通常、最も適切なリンカー配列は、（１）可動性伸長コンフォメーションを採り得る、（２）融合タンパク質の機能性ドメインと相互作用し得る二次秩序構造を生じる傾向を示さない、及び（３）機能性タンパク質ドメインとの相互作用を促進し得る最小の疎水性又は荷電性を有し得る。

【0018】

本明細書において使用するように、「核酸」又は「ポリヌクレオチド」という用語は、単鎖又は二本鎖の形態のいずれかにおける、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）などの、リン酸ジエステル結合によって共有結合したヌクレオチドの重合体を指す。具体的に限定しない限り、上述の用語は、基準の核酸と同様の結合特性を有するともに、自然起源のヌクレオチドと同様の方法において代謝される天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む、核酸を包含する。典型的に、本発明の核酸はコドン最適化されている。本明細書において使用するように、「最適化」という用語は、生産細胞又は生物体、一般的には真核生物細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）又はヒト細胞で好ましいコドンを用いてアミノ酸配列をコードするようにヌクレオチド配列が改変されたことを意味する。最適化ヌクレオチド配列は、出発ヌクレオチド配列によって最初にコードされるアミノ酸配列を完全に又は可能な限り保持するように操作される。また、最適化ヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列は、最適化されていると呼ばれる。

【0019】

本明細書において使用するように、「コードする」という用語は、規定したヌクレオチド配列（例えばｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｍＲＮＡ）又は規定したアミノ酸配列のいずれか、及びそれらから得られる生物学的特性を有する生物学的プロセスにおける他の重合体及び高分子を合成するためのテンプレートとして機能するための、例えば、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡなどのポリヌクレオチドにおけるヌクレオチドの特定の配列における特有の特性を指す。したがって、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳が細胞又は他の生物学的システムにおいてタンパク質を作製する場合、タンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、通常配列表に示されるコード鎖と、遺伝子又はｃＤＮＡの転写のためのテンプレートとして使用される非コード鎖との両方を、タンパク質又は遺伝子若しくはｃＤＮＡの他の生成物をコードするとして指すことができる。その他に特定されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重タイプである、及び同じアミノ酸配列をコードするすべてのヌクレオチド配列を含む。また、「タンパク質をコードするヌクレオチド配列又はＲＮＡ」という表現は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列がいくつかのタイプにおいてイントロンを含み得るという程度にイントロンを含むことができる。

【0020】

本明細書において使用するように、「ベクター」、「クローニングベクター」、及び「発現ベクター」という用語は、ＤＮＡ又はＲＮＡ配列（例えば外来遺伝子）を宿主細胞に導入して、宿主を形質転換し、導入した配列の発現（例えば転写及び翻訳）を高めることができる媒体を意味する。

【0021】

本明細書において使用するように、「プロモーター／調節配列」という用語は、ポリヌクレオチド配列の特定の転写を開始するために必要とされ、それによってプロモーター／調節配列に作動可能に連結される遺伝子産物の発現を可能にする、細胞の合成機構によって認識される又は合成機構によって導入される核酸配列（例えばＤＮＡ配列）を指す。場合によっては、この配列はコアプロモーター配列とすることができ、他の場合には、この配列はまた、エンハンサー配列及び遺伝子産物の発現に必要とされる他の調節因子を含むことができる。プロモーター／調節因子は、例えば、組織特異的に遺伝子産物を発現するものとすることができる。

【0022】

本明細書において使用するように、「作動可能に連結される」又は「転写コントロール」という用語は、異種核酸配列の発現をもたらす、調節配列と異種核酸配列との機能性の連結を指す。例えば、第１の核酸配列は、該第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的な関係で配置されるとき、第２の核酸配列に作動可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響を与えるとき、プロモーターはコード配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されたＤＮＡ配列は互いに近接させることができ、例えば２つのタンパク質コード領域を結合する必要がある場合、同じリーディングフレームに存在する。

【0023】

本明細書において使用するように、「形質転換」という用語は、「外来性」（すなわち、外因性又は細胞外）遺伝子、ＤＮＡ、又はＲＮＡ配列を宿主細胞に導入することにより、宿主細胞が、導入した遺伝子又は配列を発現して、所望の物質、典型的には、導入した遺伝子又は配列によりコードされるタンパク質又は酵素を生成することを意味する。導入したＤＮＡ又はＲＮＡを受容して発現する宿主細胞は「形質転換」されている。

【0024】

本明細書において使用するように、「発現系」という用語は、例えば、ベクターに含まれ、宿主細胞に導入される外来性ＤＮＡによりコードされるタンパク質の発現のための、適切な条件下における宿主細胞及び適合するベクターを意味する。

【0025】

本明細書において使用するように、２配列間の「同一性パーセント」は、２配列の最適アラインメントのために導入される必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮したうえでの、配列が共有する同一位置の数の関数（すなわち、同一性％は、同一位置数／位置総数×１００に等しい）である。２配列間における配列比較及び同一性パーセントの測定は、以下に記載するように、数学的アルゴリズムを使用してなすことができる。２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ニードルマン・ウンシュアルゴリズム（ＮＥＥＤＬＥＭＡＮ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ）を使用して測定することができる。また、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の同一性パーセントは、例えば、ＥＭＢＯＳＳ Ｎｅｅｄｌｅ（対のアラインメント、ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋから利用可能）などのアルゴリズムを使用して決定することができる。例えば、ＥＭＢＯＳＳ Ｎｅｅｄｌｅは、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスを用いて、「ギャップオープンペナルティ」が１０、「ギャップ伸長ペナルティ」が０．５、偽の「エンドギャップペナルティ」、「エンドキャップオープンペナルティ」が１０、及び「エンドギャップ伸長ペナルティ」が０．５を使用してもよい。一般に、「パーセント同一性」は、一致する位置の数を、比較した位置の数で除算し、１００を乗算した関数である。例えば、アラインメント後に１０個のうちの６個の配列位置が２つの比較した配列間で同一である場合、同一性は６０％である。同一性％は、典型的には、分析を行うクエリ配列に全長にわたって決定する。同じ一次アミノ酸配列又は核酸配列を有する２つの分子は、任意の化学的及び／又は生物学的修飾にかかわらず同一である。

【0026】

本発明において、第２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する第１のアミノ酸配列は、第１の配列が、第２のアミノ酸配列と８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％の同一性を有するということを意味する。

【0027】

本明細書において使用するように、「抗体」という用語は、当該技術分野におけるその一般的な意味を有し、免疫グロブリン分子、及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性の部分、すなわち、抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を指す。げっ歯動物及び霊長類の自然抗体において、２つの重鎖はジスルフィド結合により互いに結合し、それぞれの重鎖はジスルフィド結合により１つの軽鎖と結合している。ラムダ（１）とカッパ（ｋ）の２つの種類の軽鎖がある。抗体分子の機能活性を決定する５つの主な重鎖のクラス（又はアイソタイプ）ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥがある。それぞれの鎖は、別個の配列ドメインを含む。典型的なＩｇＧ抗体において、軽鎖は可変ドメイン（ＶＬ）と定常ドメイン（ＣＬ）との２つのドメインを含む。重鎖は、可変ドメイン（ＶＨ）及び３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３、これらをまとめてＣＨという）の４つのドメインを含む。軽鎖（ＶＬ）及び重鎖（ＶＨ）の両方の可変領域が、抗原に対する結合認識及び特異性を決定する。軽鎖（ＣＬ）及び重鎖（ＣＨ）の定常領域ドメインは、抗体鎖会合、分泌、経胎盤移動、補体結合、及びＦｃ受容体（ＦｃＲ）との結合などの重要な生物学的特性を与える。Ｆｖフラグメントは、免疫グロブリンのＦａｂフラグメントのＮ末端部であり、１つの軽鎖及び１つの重鎖の可変部分からなる。抗体の特異性は、抗体結合部位と抗原決定基との間の構造的相補性にある。抗体結合部位は、主に高頻度可変領域又は相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基で構成されている。ときとして、非高頻度可変領域又はフレームワーク領域（ＦＲ）の残基が、抗体結合部位に関与し得る、又は全ドメイン構造、つまり結合部位に影響し得る。相補性決定領域又はＣＤＲは、共にネイティブ免疫グロブリン結合部位の自然Ｆｖ領域の結合親和性及び特異性を規定するアミノ酸配列を指す。免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖はそれぞれ、Ｌ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、及びＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３と呼ばれる３つのＣＤＲを有する。ゆえに、抗原結合部位は、典型的に、重鎖及び軽鎖におけるＶ領域のそれぞれのＣＤＲのセットを含む６つのＣＤＲを含む。フレームワーク領域（ＦＲ）は、ＣＤＲの間に配置されたアミノ酸配列を指す。したがって、軽鎖及び重鎖の可変領域は、典型的に、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４という配列の４つのフレームワーク領域と３つのＣＤＲとを含む。抗体可変ドメインの残基は、従来より、Ｋａｂａｔ等によって考案されたシステムに従って番号付けされている。このシステムは、Ｋａｂａｔ等、１９８７、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、米国保健福祉省、ＮＩＨ、米国（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、１９９２、以下「Ｋａｂａｔ等」）に述べられている。Ｋａｂａｔの残基名称は、配列番号の配列におけるアミノ酸残基の線形の番号付けに常に直接対応しているわけではない。実際の線形のアミノ酸配列は、基本の可変ドメイン構造のフレームワーク領域であっても相補性決定領域（ＣＤＲ）であっても、構造成分の短縮、又は構造成分への挿入に対応して、厳密なＫａｂａｔ番号付けよりも少ない又は多いアミノ酸を含み得る。残基の正しいＫａｂａｔ番号付けは、所定の抗体において、抗体の配列における相同性の残基を「標準的な」Ｋａｂａｔ番号付けした配列とアライメントすることによって定めることができる。重鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従うと、残基３１～３５（Ｈ－ＣＤＲ１）、残基５０～６５（Ｈ－ＣＤＲ２）、及び残基９５～１０２（Ｈ－ＣＤＲ３）に位置する。軽鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従うと、残基２４～３４（Ｌ－ＣＤＲ１）、残基５０～５６（Ｌ－ＣＤＲ２）、及び残基８９～９７（Ｌ－ＣＤＲ３）に位置する。以下に記載されるアゴニスト抗体では、ＣＤＲは、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋのＣＤＲ発見アルゴリズムを使用して決定されている。抗体のページ内の「配列を見ることでどのようにしてＣＤＲを同定するか（Ｈｏｗ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ＣＤＲｓ ｂｙ ｌｏｏｋｉｎｇ ａｔ ａ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」と題した章を参照されたい。

【0028】

本明細書において使用するように、「ＩｇＧ Ｆｃ領域」という用語は、自然配列のＦｃ領域及び変異体のＦｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するように使用する。ヒトのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、一般に、Ｃ２２６又はＰ２３０の位置からＩｇＧ抗体のカルボキシル末端までのアミノ酸残基を含むとして規定される。Ｆｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスのものである。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（残基Ｋ４４７）は、例えば抗体産生又は精製時に、除くことができる。したがって、本発明の抗体の組成物は、Ｋ４４７残基をすべて除いた抗体集団、Ｋ４４７残基を除いていない抗体集団、及びＫ４４７残基を有する又は有しない抗体の混合物を有する抗体集団を含むことができる。

【0029】

本明細書において使用するように、「モノクローナル抗体」、「モノクローナルＡｂ」、「モノクローナル抗体組成物」、「ｍＡｂ」などという用語は、本明細書において使用するとき、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体は、実質的に均一の抗体の集団から得られ、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、わずかな量で存在し得る自然起源の突然変異の可能性を除いて同一である。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性及び親和性を示す。モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎの方法（Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５，１９７５）を使用して作製することができる。本発明に有用なモノクローナル抗体を作製するため、マウス又はその他の適切な宿主動物を適切な間隔において（例えば、週２回、週１回、月２回、又は月１回）適切な形態の抗原（すなわち、ＰＤ－１ポリペプチド）で免疫化する。動物には、絶命させる前１週間以内に抗原による最後の「追加免疫」を投与してもよい。多くの場合、免疫化時に免疫アジュバントを使用することが望ましい。適切な免疫アジュバントは、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、ミョウバン、Ｒｉｂｉアジュバント、Ｈｕｎｔｅｒ’ｓ Ｔｉｔｅｒｍａｘ、ＱＳ２１若しくはＱｕｉｌＡなどのサポニンアジュバント、又はＣｐＧ含有免疫刺激オリゴヌクレオチドを含む。その他の適切なアジュバントが当該技術分野で周知である。動物は、皮下、腹腔内、筋肉内、静脈内、鼻腔内、又はその他の経路により免疫化することができる。所与の動物を複数の経路により複数の形態の抗原で免疫化してもよい。ただし、「モノクローナル」という修飾語は、何らかの特定の方法による抗体の作製を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、モノクローナル抗体はまた、最初にＫｏｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）が記載したハイブリドーマ法で調製してもよく、又は細菌、真核動物若しくは植物の細胞に組換えＤＮＡ法を用いて作製してもよい（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）。また、「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ等（Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１））及びＭａｒｋｓ等（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７（１９９１）に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離することができる。

【0030】

本明細書において使用するように、「キメラ抗体」という用語は、非ヒト抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメイン、並びにヒト抗体のＣＨドメイン及びＣＬドメインを含む抗体を指す。一実施形態において、「キメラ抗体」は、（ａ）定常領域（すなわち重鎖及び／若しくは軽鎖）若しくはそれらの一部を変化、置換、又は交換して、抗原結合部位（可変領域）が異なる若しくは変化させたクラス、エフェクター機能、及び／若しくは種の定常領域に結合する抗体分子、若しくは、例えば酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬剤などキメラ抗体に新たな特性を与える全面的に異なる分子、又は（ｂ）可変領域、若しくはその一部を、異なる又は変化させた抗原特異性を有する可変領域に変化、置換、又は交換した抗体分子である。また、キメラ抗体は、霊長類化抗体及び特にヒト化抗体を含む。さらに、キメラ抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体に見受けられない残基を含むことができる。これらの修飾は、抗体機能をさらに改良するためになされる。さらなる詳細について、Ｊｏｎｅｓ等、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ等、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）が参照される（米国特許第４，８１６，５６７号明細書；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１－６８５５（１９８４）参照）。

【0031】

本明細書において使用するように、「ヒト化抗体」という用語は、マウス抗体の６つのＣＤＲを有するが、ヒト抗体フレームワーク及び定常領域を有する抗体を含む。より具体的には、「ヒト化抗体」という用語は、本明細書において使用するように、マウスなどの他の哺乳動物種の生殖細胞系列由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフティングされている抗体を含むことができる。

【0032】

本明細書において使用するように、「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン配列由来の可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことを意図する。本発明のヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダム若しくは部位特異的突然変異誘発により、又はｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞突然変異により導入された突然変異）を含んでいてもよい。しかしながら、一実施形態において、「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、本明細書において使用するように、マウスなどの他の哺乳動物種の生殖細胞系列由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフティングされている抗体を含むことを意図しない。

【0033】

本明細書において使用するように、「Ｋ_{ａｓｓｏｃ}」又は「Ｋ_ａ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度を指すことを意図する一方、本明細書において使用するように、「Ｋ_ｄｉｓ」又は「Ｋ_ｄ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度を指すことを意図する。

【0034】

本明細書において使用するように、「Ｋ_Ｄ」という用語は、解離定数を指すことを意図し、これはＫ_ａに対するＫ_ｄの比（すなわちＫ_ｄ／Ｋ_ａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表す。抗体のＫ_Ｄを測定する方法は当該技術分野で周知であり、リガンドとして抗原の可溶形態及びアナライトとして抗体を使用したＢＩＡｃｏｒｅ３０００機器における表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）技術を限定することなく含む。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ピスカタウェイ、ニュージャージー州）は、モノクローナル抗体のエピトープビン群に慣例的に使用されている多様な表面プラズモン共鳴法アッセイフォーマットの１つである。抗体の親和性は、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ等（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ，５１：６６０（１９４９））によって記載されるものなどの他の従来技術を使用して容易に測定することができる。抗原、細胞、又は組織に対する抗体の結合特性は、一般に、例えば、免疫組織化学法（ＩＨＣ）及び／又は蛍光標識細胞分取法（ＦＡＣＳ）などの免疫蛍光法に基づくアッセイを含む、免疫検出方法を使用して測定及び評価することができる。典型的に、抗体は、所定の抗原と同一でない又は密接に関連しない非特異性抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合におけるＫ_Ｄよりも、少なくとも１０倍低い、例えば少なくとも１００倍低い、例えば少なくとも１０００倍低い、例えば少なくとも１０，０００倍低い、例えば少なくとも１００，０００倍低いＫ_Ｄに対応する親和性で、所定の抗原に結合する。抗体のＫ_Ｄが極めて低い（すなわち、抗体が高親和性を有する）と、抗体が抗原を結合するＫ_Ｄが、典型的に非特異性抗原に対するＫ_Ｄよりも少なくとも１０，０００倍低い。抗体は、そうした結合が検出できない（例えばプラズモン共鳴法（ＳＰＲ）技術を使用してＢＩＡｃｏｒｅ３０００機器においてリガンドとして抗原及びアナライトとして抗体の可溶形態を使用して）、又は、その抗体及び異なる化学構造若しくはアミノ酸配列を有する抗原若しくはエピトープによって検出される結合よりも１００倍、５００倍、１０００倍、若しくは１０００倍を超えて少ない場合、実質的に抗原又はエピトープを結合しないといえる。

【0035】

本明細書において使用するように、「結合特異性」という用語は、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）測定によって測定されるように、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下のＫ_Ｄで、組換えＰＤ－１ポリペプチドなどの抗原組換えポリペプチドを検出するように結合するという抗体の能力を指す。

【0036】

本明細書において使用するように、「特異性」という用語は、非ＰＤ－１又はＣＤ４０タンパク質に比較的小さい検出反応性を有しながら、ＰＤ－１又はＣＤ４０などの抗原に存在するエピトープを検出するように結合するという抗体の能力を指す。特異性は、本明細書の他の箇所に記載するように、例えばＢｉａｃｏｒｅ機器を使用して結合又は競合性結合アッセイによって、相対的に測定可能である。特異性は、例えば、他の無関係の分子への非特異的結合に対する特異的抗原への結合における親和性／結合力の約１０：１、約２０：１、約５０：１、約１００：１、１０．０００：１以上の比によって示すことができる（この場合、特異的抗原はＰＤ－１又はＣＤ４０である）。「親和性」という用語は、本明細書において使用するように、エピトープに対する抗体の結合の強さを意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［抗原］／［Ａｂ－抗原］として定義される解離定数Ｋｄによって与えられ、［Ａｂ－抗原］は、抗体－抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は非結合抗体のモル濃度であり、［抗原］は非結合抗原のモル濃度である。親和性定数Ｋａは１／Ｋｄによって定義される。ｍＡｂの親和性を測定するための好ましい方法は、Ｈａｒｌｏｗ等、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８８）、Ｃｏｌｉｇａｎ等、ｅｄｓ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．及びＷｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．（１９９２，１９９３）、及びＭｕｌｌｅｒ、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９－６０１（１９８３）に見受けられ、これらの参考文献は、参照することによって本明細書に全体的に援用される。ｍＡｂの親和性を測定するため、当該技術分野で周知である、１つの好ましい標準的な方法は、Ｂｉａｃｏｒｅ機器の使用である。

【0037】

本明細書において使用するように、「エピトープ」という用語は、抗体が結合するタンパク質に位置するアミノ酸の特定の配置を指す。エピトープは、多くの場合、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基からなり、特定の３次元構造特性及び特定の電荷特性を有する。エピトープは、直線状又は立体構造とすることができる、すなわち、必ずしも近接しない抗原の種々の領域における２つ以上のアミノ酸配列に関与する。

【0038】

本明細書において使用するように、「免疫サイトカイン」という用語は、サイトカイン又はその誘導体に共有原子価によって直接的又は非直接的に結合した抗体を指す。上述の抗体及び上述のサイトカインは、リンカーによって連結することができる。

【0039】

本明細書において使用するように、「Ｔ細胞」という用語は当該技術分野におけるその一般的な意味を有し、細胞媒介免疫における中心的役割を担う免疫系の重要な構成要素を表す。Ｔ細胞は、主要組織適合遺伝子複合体の分子による提示又は制限により、そのＴＣＲ（抗原のＴ細胞受容体）で抗原を認識するので、一般のリンパ球として知られている。ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、及びＴｒｅｇなど、それぞれ別個の機能を有するいくつかのＴ細胞のサブセットがある。

【0040】

本明細書において使用するように、「ＣＤ８^＋Ｔ細胞」という用語は当該技術分野におけるその一般的な意味を有し、表面にＣＤ８を発現するＴ細胞のサブセットを指す。これらは、ＭＨＣクラスＩ限定的であり、細胞傷害性Ｔ細胞として機能する。また、「ＣＤ８^＋Ｔ細胞」は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、Ｔキラー細胞、細胞溶解Ｔ細胞、又はキラーＴ細胞とも呼ばれる。ＣＤ８抗原は、免疫グロブリンスーパー遺伝子ファミリーの一員であり、主要組織適合遺伝子複合体のクラスＩ限定相互作用における関連認識要素である。本明細書において使用するように、「腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞」という用語は、血流から出て腫瘍に移動した患者のＣＤ８^＋Ｔ細胞のプールを指す。

【0041】

本明細書において使用するように、「ＣＤ４^＋Ｔ細胞」（Ｔヘルパー細胞又はＴＨ細胞とも呼ばれる）という用語は、表面にＣＤ４糖タンパク質を発現し、Ｂ細胞の形質細胞及びメモリーＢ細胞への成熟並びに細胞傷害性Ｔ細胞及びマクロファージの活性化を含む免疫プロセスにおける他の白血球を支援する、Ｔ細胞を指す。ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）表面に発現されるＭＨＣクラスＩＩ分子によってペプチド抗原を提示すると、活性化される。これは、活性化されると急速に分裂して、能動免疫応答を調節又は支援するサイトカインを分泌する。これらの細胞は、様々な種類の免疫応答を促進するように様々なサイトカインを分泌するＴＨ１、ＴＨ２、ＴＨ３、ＴＨ１７、ＴＨ９、ＴＦＨ、又はＴｒｅｇを含むいくつかのサブタイプの１つに分化することができる。ＡＰＣからのシグナリングにより、Ｔ細胞を特定のサブタイプに誘導する。ＣＤ４に加えて、当該技術分野で既知のＴＨ細胞表面バイオマーカーは、ＣＸＣＲ３（Ｔｈ１）、ＣＣＲ４、Ｃｒｔｈ２（Ｔｈ２）、ＣＣＲ６（Ｔｈ１７）、ＣＸＣＲ５（Ｔｆｈ）、並びにサイトカイン及びＴ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３、ＥＯＭＥＳ、ＲＯＲγＴ、ＢＣＬ６、及びＦｏｘＰ３を含む転写因子のサブタイプ特異的発現を含む。

【0042】

本明細書において使用するように、「γδＴ細胞」という用語は当該技術分野におけるその一般的な意味を有する。γδＴ細胞は通常、健康な個体（ヒト、サル）において末梢血リンパ球の１～５％を占める。これは防御免疫応答の開始に関与し、抗原提示細胞のＭＨＣ分子によって提示することなく、抗原と直接相互作用することで抗原リガンドを認識するということが示されている。γ９δ２Ｔ細胞（γ２δ２Ｔ細胞と呼ばれることもある）は、可変ドメインＶγ９及びＶδ２を有するＴＣＲ受容体を保持するγδＴ細胞である。これは、ヒト血液におけるγδＴ細胞の大部分を構成する。γδＴ細胞は、活性化されると、種々の種類の細胞、特に病原体細胞の殺傷に効果的である、強力な非ＭＨＣ制限細胞傷害活性を示す。それは、ウイルス（Ｐｏｃｃｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９７，６２：１－５）又はマイコバクテリアなどの他の細胞内寄生虫（Ｃｏｎｓｔａｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １９９５，ｖｏｌ．６３，ｎｏ．１２：４６２８－４６３３）又は原虫（Ｂｅｈｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１９９６，ｖｏｌ．６４，ｎｏ．８：２８９２－２８９６）に感染した細胞であり得る。また、それは、がん細胞であり得る（Ｐｏｃｃｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５９：６００９－６０１５； Ｆｏｕｒｎｉｅ ａｎｄ Ｂｏｎｎｅｖｉｌｌｅ，Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６６ｔｈ Ｆｏｒｕｍ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４７：３３８－３４７）。したがって、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、又はｉｎ ｖｉｖｏにおいて該細胞の活性を調節するという可能性により、感染疾患（特にウイルス又は寄生虫）、がん、アレルギー、並びにさらに自己免疫性及び／又は炎症性障害などの種々の病態の処置における新しく効果的な治療アプローチが得られ得る。

【0043】

本明細書において使用するとき、「ＣＡＲ－Ｔ細胞」という用語は、ＣＡＲを発現するように遺伝子学的に操作されたＴリンパ球を指す。ＣＡＲ－Ｔ細胞の定義は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、及びエフェクターＴ細胞、メモリーＴ細胞、及び制御性Ｔ細胞などを含むＴリンパ球のすべてのクラス及びサブクラスを包含する。遺伝子学的に改変されたＴリンパ球は、遺伝子学的に改変されたＴ細胞を使用して処置を受ける対象から「由来する」又は「取得する」ことができる、又は異なる対象から「由来する」又は「取得する」ことができる。

【0044】

本明細書において使用するとき、「キメラ抗原受容体」あるいは「ＣＡＲ」という用語は、免疫エフェクター細胞において、標的細胞、典型的にがん細胞に対する特異性、及び細胞内シグナル生成を細胞に与える、セットのポリペプチド、典型的に最も単純な実施形態において２つのポリペプチドを指す。一部の実施形態において、ＣＡＲは、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、並びに以下に規定するような刺激分子及び／又は共刺激分子由来の機能的シグナリングドメインを含む細胞質シグナリングドメイン（本明細書において「細胞内シグナリングドメイン」とも呼ぶ）を含む。一部の態様において、セットのポリペプチドは互いに近接している。一部の実施形態において、セットのポリペプチドは、二量体化分子の存在下で、ポリペプチドを互いに結合することができる、例えば抗原結合ドメインを細胞内シグナリングドメインに結合することができる、二量体化スイッチを含む。一部の実施形態において、刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体に会合したζ鎖である。一部の実施形態において、細胞質シグナリングドメインは、以下に規定するような少なくとも１つの共刺激分子由来の１つ以上の機能的シグナリングドメインをさらに含む。一部の実施形態において、共刺激分子は、本明細書に記載する共刺激分子、例えば４－１ＢＢ（すなわちＣＤ１３７）、ＣＤ２７、及び／又はＣＤ２８から選ばれる。一部の実施形態において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、刺激分子由来の機能的シグナリングドメインを含む細胞内シグナリングドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激分子由来の機能的シグナリングドメインと刺激分子由来の機能的シグナリングドメインとを含む細胞内シグナリングドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の共刺激分子由来の２つの機能的シグナリングドメインと刺激分子由来の機能的シグナリングドメインとを含む細胞内シグナリングドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の共刺激分子由来の少なくとも２つの機能的シグナリングドメインと刺激分子由来の機能的シグナリングドメインとを含む細胞内シグナリングドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ末端）において任意のリーダー配列を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端においてリーダー配列をさらに含み、該リーダー配列は、任意で、細胞プロセス及びＣＡＲの細胞膜への局在化時に抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）から切断される。特定の態様において、ＣＡＲは、膜貫通ドメイン及び内部ドメインのＣＤ３－ζと融合させた、モノクローナル抗体由来の一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）の融合体を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲは、ＣＤ３－ζ、ＦｃＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＤＡＰ１０、及び／又はＯＸ４０などのさらなる共刺激シグナリングのドメインを含む。一部の実施形態において、共刺激分子、イメージングのためのレポーター遺伝子（例えば、陽電子放射断層撮影用）、プロドラッグの添加の際Ｔ細胞を条件的に除去する遺伝子産物、ホーミング受容体、ケモカイン、ケモカイン受容体、サイトカイン、及びサイトカイン受容体を含む分子を、ＣＡＲと共発現することができる。

【0045】

本明細書において使用するように、「Ｔ細胞疲弊」という用語はＴ細胞機能異常の状態を指す。Ｔ細胞疲弊は、一般に、多くの慢性感染症及びがんの際に生じる。Ｔ細胞疲弊は、エフェクター機能不良、阻害性受容体の持続的発現、及び／又は機能性のエフェクター若しくはメモリーＴ細胞のものとは異なる転写状態によって、規定することができる。Ｔ細胞疲弊は、一般に、感染及び腫瘍の最適な制御を妨げる。Ｔ細胞疲弊のさらなる情報については、例えばＷｈｅｒｒｙ Ｅ Ｊ，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１１） １２： ４９２－４９９が参照される。典型的に、Ｔ細胞疲弊は、ＰＤ－１がそのリガンドＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２に結合することから生じる。

【0046】

本明細書において使用するように、「樹状細胞」又は「ＤＣ」は、リンパ系組織または非リンパ系組織に見られる形態学的に類似する細胞型における多様な集団の任意のメンバーを指す。この細胞は、特有の形態及び高レベルの表面ＭＨＣ－クラスＩＩ発現を特徴とする。この細胞は、以下の実施例に記載するように、多くの組織源から、及び簡便に末梢血から単離することができる。

【0047】

本明細書において使用するように、「処置」又は「処置する」とは、臨床における結果を含む、有益な又は所望の結果を得るためのアプローチである。本発明の目的において、有益な又は所望の臨床における結果は、以下のうちの１つ以上を含むが、これらに限定しない：疾患から生じる１つ以上の症状を軽減すること、疾患の範囲を小さくすること、疾患を安定化させる（例えば、疾患の悪化を予防若しくは遅延させる）こと、疾患の広がり（例えば、転移）を予防若しくは遅延させること、疾患の再発を予防若しくは遅延させること、疾患の進行を遅延若しくは緩徐化すること、疾患状態を回復させること、疾患を寛解（部分的若しくは完全に）させること、疾患を処置するのに必要な１つ以上の他の医薬の用量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、クオリティオブライフを向上させること、並びに／又は生存期間を延長すること。また、「処置」には、がんの病的結果の軽減も包含される。本発明の方法は、これらの処置の態様のうちの任意の１つ以上を考慮するものである。 一実施形態において、「処置する」又は「処置」という用語は、治療的処置及び防止的又は予防的手段を指し、その目的は、標的の疾患を予防又は緩徐化（軽減）することである。したがって、一実施形態において、処置を必要とする者は、既に障害を有する者、及び障害を有する傾向にある者、又はその障害を予防する者を含むことができる。

【0048】

本明細書において使用するように、「がん」という用語は、当該技術分野におけるその一般的な意味を有し、固形腫瘍及び血液由来腫瘍を含むが、これらに限定されない。がんという用語は、皮膚、組織、器官、骨、軟骨、血液、及び血管の疾患を含む。「がん」という用語は、原発性及び転移性がんの両方をさらに含む。本発明の方法及び組成物によって処置され得るがんの例は、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、結腸、食道、胃腸管、歯肉、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頸部、卵巣、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌、又は子宮からのがん細胞を含むが、これらに限定されない。加えて、がんは、具体的には以下の組織型のものであってもよいが、これらに限定されない：悪性新生物；癌腫；未分化癌；巨細胞及び紡錘細胞癌；小細胞癌；乳頭癌；扁平上皮癌；リンパ上皮癌；基底細胞癌；石灰化上皮癌；移行上皮癌；乳頭状移行上皮癌；腺癌；悪性ガストリノーマ；胆管癌；肝細胞癌；肝細胞癌と胆管癌の混合型；索状腺癌；腺様嚢胞癌；腺腫性ポリープ中の腺癌；家族性大腸ポリポーシス腺癌；固形癌；悪性カルチノイド腫瘍；細気管支肺胞腺癌（ｂｒａｎｃｈｉｏｌｏ－ａｌｖｅｏｌａｒ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）；乳頭腺癌；色素嫌性癌；好酸球癌；好酸性腺癌；好塩基球癌；明細胞腺癌；顆粒細胞癌；濾胞腺癌；乳頭及び濾胞腺癌；非被包性硬化性癌；副腎皮質癌；類内膜癌（ｅｎｄｏｍｅｔｒｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）；皮膚付属器癌；アポクリン腺癌；皮脂腺癌；耳垢腺癌；粘液性類表皮癌；嚢胞腺癌；乳頭状嚢胞腺癌；乳頭状漿液性嚢胞腺癌；粘液性嚢胞腺癌；粘液腺癌；印環細胞癌；浸潤性導管癌；髄様癌；小葉癌；炎症性癌；乳房パジェット病；腺房細胞癌；腺扁平上皮癌；扁平上皮化生を伴う腺がん；悪性胸腺腫；悪性卵巣間質腫瘍；悪性莢膜腫瘍；悪性顆粒膜細胞腫；悪性神経芽細胞腫（ｒｏｂｌａｓｔｏｍａ）；セルトリ細胞癌；悪性ライディッヒ細胞腫；悪性脂質細胞腫；悪性傍神経節腫；悪性乳房外傍神経節腫；褐色細胞腫；グロムス血管肉腫；悪性メラノーマ；無色素性メラノーマ；表在拡大型メラノーマ；巨大色素性母斑中の悪性メラノーマ；類上皮細胞メラノーマ；悪性青色母斑；肉腫；線維肉腫；悪性線維性組織球腫；粘液肉腫；脂肪肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎児性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質肉腫；悪性混合腫瘍；ミュラー管混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；癌肉腫；悪性間葉腫；悪性ブレンナー腫瘍；悪性葉状腫瘍；滑膜肉腫；悪性中皮腫；未分化胚細胞腫；胚性癌；悪性奇形腫；悪性卵巣甲状腺種；絨毛癌；悪性中腎腫；血管肉腫；悪性血管内皮腫；カポジ肉腫；悪性血管外皮腫；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍骨性骨肉腫；軟骨肉腫；悪性軟骨芽細胞腫；間葉性軟骨肉腫；骨巨細胞腫；ユーイング肉腫；悪性歯原性腫瘍；エナメル上皮肉腫；悪性エナメル上皮腫；エナメル上皮線維肉腫；悪性松果体腫；脊索腫；悪性神経膠腫；上衣腫；星状細胞腫；原形質性星状細胞腫；線維性星状細胞腫；星状芽細胞腫；膠芽腫；乏突起膠腫；乏突起膠芽腫；原始神経外胚葉腫瘍（ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｅｃｔｏｄｅｒｍａｌ）；小脳肉腫；神経節芽細胞腫；神経芽細胞腫；網膜芽細胞腫；嗅神経原性腫瘍；悪性髄膜腫；神経線維肉腫；悪性神経鞘腫；悪性顆粒細胞腫；悪性リンパ腫；ＮＫ白血病又はＮＫリンパ腫、例えば節外性及び非節外性ＮＫ／Ｔリンパ腫；ＮＫ細胞由来悪性病変；及び急性ＮＫ白血病；ホジキン病；ホジキンリンパ腫；側肉芽腫；悪性小リンパ球性リンパ腫；悪性びまん性大細胞型リンパ腫；悪性濾胞性リンパ腫；菌状息肉腫；その他の特定されている非ホジキンリンパ腫；悪性組織球増殖症；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；白血病；リンパ性白血病；形質細胞性白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞性白血病；骨髄性白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；肥満細胞性白血病；巨核芽球性白血病；骨髄性肉腫；及び有毛細胞白血病。

【0049】

本明細書において使用するように、「感染疾患」という用語は、ウイルス、細菌、原虫、カビ、又は真菌に起因する任意の感染を含む。一部の実施形態において、ウイルス感染症は、アレナウイルス科、アストロウイルス科、ビルナウイルス科、ブロモウイルス科、ブニヤウイルス科、カリシウイルス科、クロステロウイルス科、コモウイルス科、シストウイルス科、フラビウイルス科、フレキシウイルス科、ヘペウイルス、レビウイルス科、ルテオウイルス科、モノネガウイルス目、モザイクウイルス、ニドウイルス目、ノダウイルス科、オルトミクソウイルス科、ピコビルナウイルス、ピコルナウイルス科、ポティウイルス科、レオウイルス科、レトロウイルス科、セキウイルス科、テヌイウイルス、トガウイルス科、トンブスウイルス科、トティウイルス科、ティモウイルス科、ヘパドナウイルス科、ヘルペスウイルス科、パラミクソウイルス科、又はパピローマウイルス科のウイルスからなる群より選択される１つ以上のウイルスによる感染を含む。ＲＮＡウイルスの関連する分類学的なファミリーは、アストロウイルス科、ビルナウイルス科、ブロモウイルス科、カリシウイルス科、クロステロウイルス科、コモウイルス科、シストウイルス科、フラビウイルス科、フレキシウイルス科、ヘペウイルス、レビウイルス科、ルテオウイルス科、モノネガウイルス目、モザイクウイルス、ニドウイルス目、ノダウイルス科、オルトミクソウイルス科、ピコビルナウイルス、ピコルナウイルス科、ポティウイルス科、レオウイルス科、レトロウイルス科、セキウイルス科、テヌイウイルス、トガウイルス科、トンブスウイルス科、トティウイルス科、及びティモウイルス科を含むが、限定されない。一部の実施形態において、ウイルス感染は、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザウイルス（ヒト、トリ、及びブタを含む）、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、ピキンデウイルス（ｐａｃｈｉｎｄａｅ ｖｉｒｕｓ）、アデノウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス及びＢ型インフルエンザウイルス（ヒト、トリ、及びブタを含む）、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルス及び黄熱病ウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マレーバレーウイルス、ポワッサンウイルス、ロシオウイルス、ルーピングイルウイルス、バンジウイルス、イレウスウイルス、ココベラウイルス、クンジンウイルス、アルファイ（Ａｌｆｕｙ）ウイルス、ウシ下痢ウイルス、並びにキャサヌール森林病ウイルス、からなる群より選択される１つ以上のウイルスによる感染を含む。本発明によって処置し得る細菌感染症は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）；連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓを含む）；腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｌ）；棹菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓを含む）；リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）；ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）；ガードネレラ菌（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ）（Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓを含む）；ノカルジア菌（Ｎｏｃａｒｄｉａ）；ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）；サーモアクチノミセス・ブルガリス（Ｔｈｅｒｍｏａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）；トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）；カンピロバクター菌（Ｃａｍｐｌｙｏｂａｃｔｅｒ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）（ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを含む）；レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）；ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ及びＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓを含む）；フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）（Ｆ．ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ及びＦ．ｏｄｏｒａｔｕｒｎを含む）；ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）；ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ及びＢ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａを含む）；エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）（Ｅ．ｃｏｌｉを含む）、クレブシエラ菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）；エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）（Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ及びＳ．ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓを含む）；エドワードシエラ（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ）；プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）（Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ及びＰ．ｖｕｌｇａｒｉｓを含む）；ストレプトバシラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）；リケッチア科（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａｅ）（Ｒ．ｆｉｃｋｅｔｔｓｆｉを含む）、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）（Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ及びＣ．ｔｒａｃｈｏｒｎａｔｉｓを含む）；マイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍ．ｆｏｌｌｕｉｔｕｒｎ、Ｍ．ｌａｐｒａｅ、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｂｏｖｉｓ、Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ、Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、及びＭ．ｌｅｐｒａｅｒｎｕｒｉｕｍを含む）；並びにノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）に起因する感染症を含むが、これらに限定されない。本発明によって処置し得る原虫感染症は、リーシュマニア、コクジディオア（ｋｏｋｚｉｄｉｏａ）、及びトリパノソーマに起因する感染を含むが、これらに限定されない。感染疾患の完全なリストは、疾病管理センター（ＣＤＣ）の国立感染症センター（ＮＣＩＤ）のウェブサイト（ワールドワイドウェブ（ｗｗｗ）ａｔ ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｎｃｉｄｏｄ／ｄｉｓｅａｓｅｓ／）において見ることができ、そのリストは言及することによって本明細書に援用される。こうした疾患のすべてが、本発明における組成物を使用した処置の候補となる。

【0050】

本明細書において使用するように、「抗原」又は「Ａｇ」という用語は、本明細書において使用するように、タンパク質、ペプチド、核酸、若しくは組織、又はＴ細胞応答を誘発可能な細胞調製物を指す。

【0051】

本明細書において使用するとき、「治療有効量」という用語は、所望の治療結果を得るため、必要な投与量及び期間において有効な量を指す。したがって、「治療有効量」という用語は、著しい負の又は有害な副作用を標的に引き起こすことなく、（１）標的疾患の発症を遅延若しくは予防すること、（２）標的疾患の１つ以上の症状の進行、増悪、若しくは悪化を緩徐化若しくは停止すること、（３）標的疾患の症状の回復を生じさせること、（４）標的疾患の重症度若しくは発症率を低下させること、又は（５）標的疾患を治癒することを狙いとする抗体のレベル又は量を意味し得る。治療有効量は、防止又は予防措置のため、標的疾患の発症前に投与することができる。あるいは又はさらに、治療有効量は、治療措置のため、標的疾患の発症後に投与することができる。

【0052】

本明細書において使用するように、「薬学的に許容される担体」という用語は、動物、好ましくはヒトに投与するとき、有害な、アレルギー性の、又は他の有害な反応を生じさせない賦形剤を指す。これは、任意及びすべての溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等を含む。ヒトへの投与において、調製物は、例えばＦＤＡ機関又はＥＭＡなどの規制機関によって要求される、滅菌性、発熱性、一般の安全性及び純度の標準を満たす必要がある。

【0053】

本明細書において使用するように、「ワクチン」という用語は、免疫応答を誘発するためヒト又は動物に投与可能な組成物を意味することを意図し、この免疫応答は、抗体の産生、又は単に所定の細胞、特に抗原提示細胞、Ｔリンパ球、及びＢリンパ球の活性化を生じさせることができる。一部の実施形態において、ワクチンは、該ワクチンが与える抗原に対する患者における中和抗体の産生につながる免疫応答を生じさせることができる。ワクチンは、防止目的又は治療目的又はその両方の目的の組成物とすることができる。

【0054】

本明細書において使用するように、「対象」という用語は、温血動物、好ましくは哺乳動物（ヒト、飼育動物及び家畜、並びに動物園、スポーツ用、又はペット用動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなど）、より好ましくはヒトを指す。一実施形態において、対象は、「患者」、すなわち、医療を受けることになっている、若しくは医療を受けている、又は医療手技の対象であった／医療手技の対象である／医療手技の対象となる、又は疾患の発症をモニタリングしている温血動物、より好ましくはヒトとすることができる。一実施形態において、対象は成人である（例えば１８歳より上の対象）。他の実施形態において、対象は小児である（例えば１８歳より下の対象）。一実施形態において、対象は男性である。他の実施形態において、対象は女性である。

【0055】

（本発明の新しいＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質）
本発明の第１の目的は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－１５Ｒαｓｕｓｈｉ含有ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号２に示すアミノ酸配列を有するリンカー、及び（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－１５ポリペプチド、を含むＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質に関する。
配列番号１＞ＩＬ－１５Ｒａ ｓｕｓｈｉ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰ
配列番号２＞Ｆｌｅｘ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ＤＴＴＥＰＡＴＰＴＴＰＶＴＴＰＴＴＴＤＤＬＤＡ
配列番号３＞ＩＬ－１５ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ＬＤＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

【0056】

本発明において、ＩＬ－１５Ｒαｓｕｓｈｉ含有ポリペプチド、リンカー、及びＩＬ－１５ポリペプチドは、ＩＬ－１５Ｒαｓｕｓｈｉ含有ポリペプチドのＣ末端をリンカーのＮ末端に融合し、リンカーのＣ末端をＩＬ－１５ポリペプチドのＮ末端に融合するように、フレームに融合する。

【0057】

一部の実施形態において、本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質は、配列番号４に示すアミノ酸配列からなる。
配列番号４＞（ＩＬ－１５Ｒａ ［Ｆｌｅｘ］）〔ＩＬ－１５ ｉｎ ＨＣ ｓｅｑｕｅｎｃｅ〕
（ＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰ［ＤＴＴＥＰＡＴＰＴＴＰＶＴＴＰＴＴＴＤＤＬＤＡ］）〔ＬＤＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ〕

【0058】

本発明において、本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α融合タンパク質は、従来の自動ペプチド合成法又は組換え発現によって作製される。タンパク質の設計及び作製についての一般的な原理は、当業者に周知である。本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α融合タンパク質は、従来の技術に従って溶液中又は固体支持体上で合成することができる。種々の自動合成機が市販されており、Ｓｔｅｗａｒｔ及びＹｏｕｎｇ、Ｔａｍ等、１９８３、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、１９８６、並びにＢａｒａｎｙ及びＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ｇｒｏｓｓ及びＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ、１９７９に記載されるような既知のプロトコールに従って使用することができる。また、本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃのモデル４３３Ａなどの例のペプチド合成機を使用して固相技術によって合成することができる。自動ペプチド合成又は組換え法によって作製された任意の所定のタンパク質の純度は、逆相ＨＰＬＣ分析を使用して測定することができる。各ペプチドの化学的品質は、当業者に周知の任意の方法で得ることができる。自動ペプチド合成の代わりとして、組換えＤＮＡ技術を使用することができ、該組換えＤＮＡ技術では、本明細書において以下に記載するように、選択したタンパク質をコードするヌクレオチド配列を発現ベクターに挿入し、適切な宿主細胞に形質転換又は遺伝子導入して、発現に適切な条件下で培養する。組換え法は、より長いポリペプチドの作製に特に好ましい。ペプチド又はタンパク質コード配列を含有及び発現させるため、多様な発現ベクター／宿主系を使用することができる。これらは、例えば組換えバクテリオファージ、プラスミド又はコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換した細菌；酵母発現ベクターで形質転換した酵母（Ｇｉｇａ－Ｈａｍａ ｅｔ ａｌ．、１９９９）などの微生物；ウイルス発現ベクター（例えばバキュロウイルス、Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．、２００２参照）を感染させた昆虫細胞系；ウイルス発現ベクター（例えばカリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）、タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ））を遺伝子導入した、若しくは細菌発現ベクター（例えばＴｉ又はｐＢＲ３２２プラスミド、例えばＢａｂｅ ｅｔ ａｌ．、２０００参照）で形質転換した植物細胞系；又は動物細胞系を含むが、これらに限定されない。当業者は、タンパク質の哺乳動物発現を最適化する種々の技術を認め、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ、２０００；Ｃｏｌｏｓｉｍｏ等、２０００が参照される。組換えタンパク質作製において有用な哺乳動物細胞は、ＶＥＲＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、ＣＯＳ細胞（ＣＯＳ－７など）、Ｗ１３８、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、３Ｔ３、ＲＩＮ、ＭＤＣＫ、Ａ５４９、ＰＣ１２、Ｋ５６２、及び２９３細胞を含むが、これらに限定されない。細菌、酵母、及び他の無脊椎動物におけるペプチド基質又は融合ポリペプチドの組換え発現のための例のプロトコールは、当業者に既知であり、本明細書において以下に簡単に記載する。また、組換えタンパク質の発現のための哺乳動物宿主系は、当業者に周知である。宿主細胞株は、発現タンパク質をプロセシングする、又はタンパク質活性を得るために有用であり得る所定の翻訳後修飾を生じさせるという、特定の能力から選択することができる。そうしたポリペプチドの修飾は、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、及びアシル化を含むが、これらに限定されない。また、タンパク質の「プリプロ」形態を切断する翻訳後プロセシングも、適切な挿入、フォールディング、及び／又は機能に重要であり得る。ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、２９３、及びＷＩ３８などの様々な宿主細胞は、そうした翻訳後活性のための特定の細胞機構及び特有の機序を有し、導入した外来性タンパク質の適切な修飾及びプロセシングを確保するように選択することができる。

【0059】

一部の実施形態において、本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α融合タンパク質はその治療有効性を高めるために修飾するということが考えられる。治療用化合物のそうした修飾は、毒性を低下させる、循環時間を増加させる、又は体内分布を改変するように使用することができる。例えば、重要である可能性がある治療用化合物の毒性を、体内分布を改変する多様な薬剤担体ビヒクルとの組合せによって有意に低下させることができる。薬剤の有効性を高める方策は、水溶性ポリマーの使用である。種々の水溶性ポリマーは、体内分布を改変し、細胞取り込みの様式を改善し、生理学的バリアを通じて透過性を変化させ、及び身体からのクリアランスの速度を改変することが示されている。標的化効果又は徐放効果のいずれかを得るため、末端基として、骨格の一部として、又はポリマー鎖上のペンダント基として薬物部分を含む水溶性ポリマーが合成されている。例えば、ペグ化は、種々のポリペプチドの修飾のため、十分に認知されるとともに検証されたアプローチである。その利益には、とりわけ、（ａ）糸球体濾過限界を超えるまで分子の見かけのサイズを増加させているポリマーの結果としての腎クリアランスの回避による、及び／又は細胞クリアランス機構の回避を通じてのｉｎ ｖｉｖｏでの循環半減期の著しい向上、（ｂ）ＰＥＧを結合した分子の抗原性及び免疫原性の低下、（ｃ）薬物動態の向上、（ｄ）コンジュゲートタンパク質のタンパク質分解抵抗性増強、（ｅ）ペグ化ポリペプチドの熱安定性及び機械的安定性の向上を含む。

【0060】

（本発明の免疫サイトカイン）
本発明のさらなる目的は、本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α融合タンパク質と融合させた抗体の重鎖に関する。

【0061】

一部の実施形態において、重鎖は、リンカーを介してＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α融合タンパク質に融合される。一部の実施形態において、リンカーは、配列番号５に示すアミノ酸配列を含む（すなわちＦｌｅｘＶ１リンカー）。一部の実施形態において、リンカーは、配列番号６に示すアミノ酸配列からなる。
配列番号５＞ＦｌｅｘＶ１ ｌｉｎｋｅｒ
ＱＴＰＴＮＴＩＳＶＴＰＴＮＮＳＴＰＴＮＮＳＮＰＫＰＮＰ
配列番号６＞ｌｉｎｋｅｒ
ＡＳＱＴＰＴＮＴＩＳＶＴＰＴＮＮＳＴＰＴＮＮＳＮＰＫＰＮＰＤＩＧＭ

【0062】

一部の実施形態において、重鎖は、ＰＤ－１への特異性を有する抗体由来である。一部の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は既に知られている抗体である、又は新しい抗体である。

【0063】

新しい抗ＰＤ－１抗体を選択するため、抗体をスクリーニングする多様な方法が当該技術分野において記載されている。そうした方法は、抗原免疫化の際に完全なヒト抗体を作製することができるトランスジェニックマウスなどのｉｎ ｖｉｖｏ系、並びに、抗体ＤＮＡコードライブラリーを作成すること、抗体作製のためにＤＮＡライブラリーを適切な系において発現すること、親和性選択条件で標的に結合する抗体候補物を発現するクローンを選択すること、及び、選択されたクローンの対応するコード配列を回収することからなるｉｎ ｖｉｔｒｏ系に分類され得る。これらのｉｎ ｖｉｔｒｏ技術は、ディスプレイ技術として知られ、ファージディスプレイ、ＲＮＡ又はＤＮＡディスプレイ、リボソームディスプレイ、酵母又は哺乳動物細胞ディスプレイを含むが、限定されない。それらは、当該技術分野において記載されている（参考のため、例えばＮｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０ Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｔｒｅｎｄｓ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”（Ａｄｖａｎｃｅ Ｏｎｌｉｎｅ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ）、及びＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７、Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００１参照）。１つの特定の態様において、ヒト組換え抗ＰＤ－１抗体は、ヒト組換え抗体ライブラリーのライブラリーをＰＤ－１結合でスクリーニングするファージディスプレイ法を使用して単離される。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ遺伝子又は関連するＣＤＲ領域のレパートリーを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングするか、又はＤＮＡ合成機により合成し、ファージライブラリー中で無作為に組換えた後、抗原結合クローンについてスクリーニングすることができる。ヒト抗体を単離するためのこのようなファージディスプレイ方法は、当該技術分野で認知されているか、又は以下の実施例に記載されている。例えば、Ｌａｄｎｅｒ等の米国特許第５，２２３，４０９号明細書、米国特許第５，４０３，４８４号明細書、及び米国特許第５，５７１，６９８号明細書、Ｄｏｗｅｒ等の米国特許第５，４２７，９０８号明細書及び米国特許第５，５８０，７１７号明細書、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ等の米国特許第５，９６９，１０８号明細書及び米国特許第６，１７２，１９７号明細書、並びにＧｒｉｆｆｉｔｈｓ等の米国特許第５，８８５，７９３号明細書、米国特許第６，５２１，４０４号明細書、米国特許第６，５４４，７３１号明細書、米国特許第６，５５５，３１３号明細書、米国特許第６，５８２，９１５号明細書、及び米国特許第６，５９３，０８１号明細書が参照される。

【0064】

一部の実施形態において、ＰＤ－１に対するヒト抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の一部を有するトランスジェニック又はトランス染色体マウスを使用して同定することができる。このトランスジェニック及びトランス染色体マウスは、本明細書においてそれぞれＨｕＭＡｂマウス及びＫＭマウスと呼ばれるマウスを含み、本明細書においてまとめて「ヒトＩｇマウス」と呼ばれる。ＨｕＭＡｂマウス（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）は、内在性μ及びκ鎖遺伝子座を不活性化する標的突然変異と共に、非再構成ヒト重鎖（μ及びγ）並びにκ軽鎖の免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座を含む（例えばＬｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｎａｔｕｒｅ ３６８（６４７４）：８５６－８５９参照）。他の実施形態において、ヒト抗ＰＤ－１抗体は、ヒト重鎖トランス遺伝子やヒト軽鎖トランス染色体を有するマウスなど、トランス遺伝子及びトランス染色体にヒト免疫グロブリン配列を有するマウスを使用して産生することができる。そうしたマウスは、本明細書において「ＫＭマウス」と呼ばれ、Ｉｓｈｉｄａ等の国際公開第０２／４３４７８号に詳細に記載されている。

【0065】

一部の実施形態において、抗体は、キメラ抗体、特にキメラマウス／ヒト抗体である。

【0066】

一部の実施形態において、抗体はヒト化抗体である。

【0067】

キメラ化又はヒト化抗体は、上述のように調製されたマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製することができる。重鎖及び軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、対象のマウスハイブリドーマから得られ、標準的な分子生物学的技術を用いて非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含むように操作することができる。例えば、キメラ抗体を作成するため、当該技術分野で既知の方法を用いて、マウスの可変領域をヒト定常領域に結合することができる（例えばＣａｂｉｌｌｙ等の米国特許第４，８１６，５６７号参照）。ヒト化抗体を作製するため、当該技術分野で既知の方法を用いて、マウスＣＤＲ領域をヒトのフレームワークに挿入することができる。例えば、Ｗｉｎｔｅｒ等の米国特許第５，２２５，５３９号明細書、並びにＱｕｅｅｎ等の米国特許第５，５３０，１０１号明細書、米国特許第５，５８５，０８９号明細書、米国特許第５，６９３，７６２号明細書、及び米国特許第６，１８０，３７０号明細書が参照される。

【0068】

一部の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＭＤＸ－１１０６（ニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ＭＤＸ－１１０６－０４、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８、及びＯｐｄｉｖｏ（登録商標）としても知られる）、Ｍｅｒｃｋ３４７５（ペムブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ＭＫ－３４７５、ω及びＳＣＨ－９００４７５としても知られる）、並びにＣＴ－０１１（ピディリズマブ（Ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）、ｈＢＡＴ、及びｈＢＡＴ－１としても知られる）からなる群より選択される。一部の実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ－２２４（Ｂ７－ＤＣＩｇとしても知られる）である。

【0069】

一部の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、国際公開第２０１６／０２０８５６号及びＦｅｎｗｉｃｋ，Ｃｒａｉｇ等、「Ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ａｎｔｉ-ＰＤ－１ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ＣＤ２８ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙ」 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１９）：ｊｅｍ－２０１８２３５９に公開されるような抗ＰＤ１Ｇｅｐｉ１３５ｃである。

【0070】

一部の実施形態において、本発明の重鎖は、配列番号７、８、又は９に示すＶＨドメインを含む。
配列番号７＞ＶＨ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号８＞ＶＨ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｎｉｖｏｌｕｍａｂ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＤＣＫＡＳＧＩＴＦＳＮＳＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＫＲＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＮＤＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号９＞ＶＨ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉ－ＰＤ１Ｇｅｐｉ １３５ｃ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＦＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＹＰＮＹＧＤＴＡＹＮＱＫＦＫＤＲＡＴＬＴＶＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0071】

一部の実施形態において、重鎖は、ＩｇＧ４免疫グロブリンのＩｇＧ Ｆｃ領域を含む。

【0072】

一部の実施形態において、重鎖は、配列番号１０、１１、又は１２に示すアミノ酸配列からなる。
配列番号１０＞ ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｏｆ ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＤＣＫＡＳＧＩＴＦＳＮＳＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＫＲＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＮＤＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号１１＞ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｏｆ ｎｉｖｏｌｕｍａｂ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号１２＞ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉ－ＰＤ１Ｇｅｐｉ １３５ｃ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＦＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＹＰＮＹＧＤＴＡＹＮＱＫＦＫＤＲＡＴＬＴＶＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ

【0073】

一部の実施形態において、本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α融合タンパク質に融合される抗体の重鎖は、配列番号１３、１４、又は１５に示すアミノ酸配列からなる。
配列番号１３＞Ｃ３７１１ ｏｒ Ｃ３７２１［ｈＫｅｙｔｒｕｄａ（ａｎｔｉ－ＰＤ－１）－ＨＣ－ＬＶ－ｈＩｇＧ４Ｈ－Ｃ－Ｆｌｅｘ－ｖ１－ｈＩＬ－１５Ｒａ－ｈＩＬ－１５］
ＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＡＳＱＴＰＴＮＴＩＳＶＴＰＴＮＮＳＴＰＴＮＮＳＮＰＫＰＮＰＤＩＧＭＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＤＴＴＥＰＡＴＰＴＴＰＶＴＴＰＴＴＴＤＤＬＤＡＬＤＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ
配列番号１４＞［ｎｉｖｏｌｕｍａｂ （ａｎｔｉ－ＰＤ－１）－ＨＣ－ＬＶ－ｈＩｇＧ４Ｈ－Ｃ－Ｆｌｅｘ－ｖ１－ｈＩＬ－１５Ｒａ－ｈＩＬ－１５］
ＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＡＳＱＴＰＴＮＴＩＳＶＴＰＴＮＮＳＴＰＴＮＮＳＮＰＫＰＮＰＤＩＧＭＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＤＴＴＥＰＡＴＰＴＴＰＶＴＴＰＴＴＴＤＤＬＤＡＬＤＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ
配列番号１５＞Ｃ３７８９［ｈＨＣ ａｎｔｉ‐ＰＤ１Ｇｅｐｉ １３５ｃ－ＬＶ－ｈＩｇＧ４Ｈ－Ｃ－Ｆｌｅｘ－ｖ１－ｈＩＬ－１５Ｒａ－ｈＩＬ－１５］
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＦＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＹＰＮＹＧＤＴＡＹＮＱＫＦＫＤＲＡＴＬＴＶＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＡＳＱＴＰＴＮＴＩＳＶＴＰＴＮＮＳＴＰＴＮＮＳＮＰＫＰＮＰＤＩＧＭＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＤＴＴＥＰＡＴＰＴＴＰＶＴＴＰＴＴＴＤＤＬＤＡＬＤＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

【0074】

本発明のさらなる目的は、本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α融合タンパク質と融合させた抗体の重鎖を含む免疫サイトカインに関する。

【0075】

一部の実施形態において、本発明の免疫サイトカインは、ＰＤ－１に特異性を有する。したがって、一部の実施形態において、本発明の免疫サイトカインは、上述のような重鎖を含む。

【0076】

一部の実施形態において、本発明の免疫サイトカインは、配列番号１３、１４、又は１５に示すアミノ酸配列からなる重鎖を含む。

【0077】

一部の実施形態において、本発明の免疫サイトカインは、配列番号１３に示す重鎖及び配列番号１６に示す軽鎖を含む。

【0078】

一部の実施形態において、本発明の免疫サイトカインは、配列番号１４に示す重鎖及び配列番号１７に示す軽鎖を含む。

【0079】

一部の実施形態において、本発明の免疫サイトカインは、配列番号１５に示す重鎖及び配列番号１８に示す軽鎖を含む。
配列番号１６＞ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ｏｆ ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＫＧＶＳＴＳＧＹＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＬＡＳＹＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＲＤＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１７＞ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ｏｆ ｎｉｖｏｌｕｍａｂ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＳＮＷＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１８＞ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｅ ａｎｔｉ－ＰＤ１Ｇｅｐｉ １３５ｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＧＩＳＧＤＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＨＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＹＹＳＫＤＬＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0080】

一部の実施形態において、配列番号１５に示す重鎖及び配列番号１８に示す軽鎖を含む本発明の免疫サイトカインは、ＰＤＬ－１相互作用の反対面に位置するＰＤ－１エピトープを認識する。したがって、この実施形態において、免疫サイトカインは、ＰＤ－１のそのリガンド（ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２）への結合を遮断しない。反対に、免疫サイトカインは、ペムブロリズマブ又はニボルマブ遮断抗ＰＤ－１抗体のいずれかに既に前結合した細胞におけるＰＤ－１を標的とすることができる。ゆえに、免疫サイトカインは、ＰＤ－１との結合と競合せずに、これらの市販の抗体のいずれかの組合せ治療に使用することができる。また、免疫サイトカインは、抗原提示細胞又は腫瘍細胞のいずれかに発現され得るＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２リガンドのいずれかと複合体を前形成した細胞におけるＰＤ－１と結合する可能性もある。免疫サイトカインの抗ＰＤ－１部分は、主に、ＡＫＴ経路へのシグナリング及びＴ細胞刺激時のカルシウム動員を回復するＣＤ２８共刺激受容体を介して作用する。

【0081】

（本発明の核酸、ベクター、及び宿主細胞）
本発明のさらなる目的は、本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質をコードする核酸に関する。

【0082】

本発明のさらなる目的は、本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質と融合させた抗体の重鎖をコードする核酸に関する。

【0083】

一部の実施形態において、核酸は、配列番号１９又は２０に示す核酸配列を含む。
配列番号１９＞ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｆｏｒ Ｃ３７１１ ｏｒ Ｃ３７２１ ［ｈＫｅｙｔｒｕｄａ（ａｎｔｉ－ＰＤ－１）－ＨＣ－ＬＶ－ｈＩｇＧ４Ｈ－Ｃ－Ｆｌｅｘ－ｖ１－ｈＩＬ－１５Ｒａ－ｈＩＬ－１５］
ＡＴＧＧＡＴＣＣＧＡＡＡＧＧＴＴＣＴＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＧＴＡＴＴＣＴＧＣＴＧＴＴＣＣＴＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＴＴＣＧＡＡＣＴＧＴＣＴＴＡＴＧＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＴＴＧＡＡＧＴＧＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＧＣＧＣＧＴＣＴＧＴＴＡＡＡＧＴＴＴＣＴＴＧＣＡＡＡＧＣＧＴＣＴＧＧＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＧＴＡＣＴＧＧＧＴＴＣＧＴＣＡＧＧＣＧＣＣＧＧＧＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＧＧＴＡＴＣＡＡＣＣＣＧＴＣＴＡＡＣＧＧＴＧＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＣＧＡＡＡＡＡＴＴＣＡＡＡＡＡＣＣＧＴＧＴＴＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＣＣＧＡＴＡＧＣＡＧＣＡＣＣＡＣＣＡＣＣＧＣＧＴＡＴＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＡＡＴＣＴＣＴＧＣＡＧＴＴＣＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＣＧＣＣＧＣＧＡＣＴＡＣＣＧＴＴＴＣＧＡＣＡＴＧＧＧＣＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＧＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＡＧＴＴＡＣＣＧＴＡＴＣＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＧＡＡＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＡＡＡＧＣＴＡＧＣＣＡＧＡＣＣＣＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＣＣＣＡＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＣＣＣＡＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＡＡＧＣＣＣＡＡＣＣＣＣＧＡＴＡＴＣＧＧＧＡＴＧＴＧＣＣＣＴＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＣＣＧＴＧＧＡＡＣＡＣＧＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＴＧＴＡＣＴＣＣＡＧＧＧＡＧＣＧＧＴＡＣＡＴＴＴＧＴＡＡＣＴＣＴＧＧＴＴＴＣＡＡＧＣＧＴＡＡＡＧＣＣＧＧＣＡＣＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＧＡＧＴＧＣＧＴＧＴＴＧＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＧＡＡＴＧＴＣＧＣＣＣＡＣＴＧＧＡＣＡＡＣＣＣＣＣＡＧＴＣＴＣＡＡＡＴＧＣＡＴＴＡＧＡＧＡＣＣＣＴＧＣＣＣＴＧＧＴＴＣＡＣＣＡＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＣＣＡＣＣＣＧＡＴＡＣＡＡＣＡＧＡＡＣＣＴＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＡＣＡＣＣＴＧＴＡＡＣＡＡＣＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＡＧＡＴＧＡＴＣＴＧＧＡＴＧＣＡＣＴＣＧＡＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴＡＡＴＡＡＧＴＧＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＧＡＴＣＴＴＡＴＴＣＡＡＴＣＴＡＴＧＣＡＴＡＴＴＧＡＴＧＣＴＡＣＴＴＴＡＴＡＴＡＣＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＴＣＡＣＣＣＣＡＧＴＴＧＣＡＡＡＧＴＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＣＴＴＧＧＡＧＣＴＣＣＡＧＧＴＡＡＴＴＡＧＣＴＴＡＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＴＡＣＡＧＴＴＧＡＧＡＡＴＣＴＧＡＴＣＡＴＴＣＴＣＧＣＡＡＡＣＡＡＣＴＣＴＣＴＧＴＣＴＴＣＴＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＣＴＧＧＣＴＧＴＡＡＧＧＡＧＴＧＴＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＴＴＴＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＴＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＣＴＴＧＡ
配列番号２０＞ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｆｏｒ Ｃ３７８９ ［ｈＨＣ ａｎｔｉ‐ＰＤ１Ｇｅｐｉ １３５ｃ－ＬＶ－ｈＩｇＧ４Ｈ－Ｃ－Ｆｌｅｘ－ｖ１－ｈＩＬ－１５Ｒａ－ｈＩＬ－１５］
ＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＴＴＧＧＡＴＴＣＴＧＣＴＧＴＴＴＴＴＧＴＴＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＣＴＧＧＡＧＴＧＣＡＴＡＧＣＣＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＡＴＧＡＧＣＴＧＴＡＡＧＧＣＴＡＧＴＧＧＡＴＡＣＡＣＴＴＴＴＡＣＡＡＡＣＴＴＴＴＡＣＡＴＴＣＡＴＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＧＧＣＣＣＣＣＧＧＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＴＣＴＡＣＣＣＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＧＡＴＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＴＡＧＧＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＣＴＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＣＧＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧＧＧＧＣＴＡＣＡＧＣＴＡＣＧＣＴＡＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＧＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＧＡＡＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＡＡＡＧＣＴＡＧＣＣＡＧＡＣＣＣＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＣＣＣＡＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＣＣＣＡＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＡＡＧＣＣＣＡＡＣＣＣＣＧＡＴＡＴＣＧＧＧＡＴＧＴＧＣＣＣＴＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＣＣＧＴＧＧＡＡＣＡＣＧＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＴＧＴＡＣＴＣＣＡＧＧＧＡＧＣＧＧＴＡＣＡＴＴＴＧＴＡＡＣＴＣＴＧＧＴＴＴＣＡＡＧＣＧＴＡＡＡＧＣＣＧＧＣＡＣＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＧＡＧＴＧＣＧＴＧＴＴＧＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＧＡＡＴＧＴＣＧＣＣＣＡＣＴＧＧＡＣＡＡＣＣＣＣＣＡＧＴＣＴＣＡＡＡＴＧＣＡＴＴＡＧＡＧＡＣＣＣＴＧＣＣＣＴＧＧＴＴＣＡＣＣＡＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＣＣＡＣＣＣＧＡＴＡＣＡＡＣＡＧＡＡＣＣＴＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＡＣＡＣＣＴＧＴＡＡＣＡＡＣＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＡＧＡＴＧＡＴＣＴＧＧＡＴＧＣＡＣＴＣＧＡＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴＡＡＴＡＡＧＴＧＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＧＡＴＣＴＴＡＴＴＣＡＡＴＣＴＡＴＧＣＡＴＡＴＴＧＡＴＧＣＴＡＣＴＴＴＡＴＡＴＡＣＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＴＣＡＣＣＣＣＡＧＴＴＧＣＡＡＡＧＴＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＣＴＴＧＧＡＧＣＴＣＣＡＧＧＴＡＡＴＴＡＧＣＴＴＡＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＴＡＣＡＧＴＴＧＡＧＡＡＴＣＴＧＡＴＣＡＴＴＣＴＣＧＣＡＡＡＣＡＡＣＴＣＴＣＴＧＴＣＴＴＣＴＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＣＴＧＧＣＴＧＴＡＡＧＧＡＧＴＧＴＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＴＴＴＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＴＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＣＴＴＧＡ

【0084】

本発明のさらなる目的は、本発明の免疫サイトカインをコードする核酸に関する。

【0085】

典型的に、上記核酸はＤＮＡ又はＲＮＡ分子であり、これは、プラスミド、コスミド、エピソーム、人工染色体、ファージ、又はウイルスベクターなどの任意の適切なベクターに含ませることができる。

【0086】

したがって、本発明のさらなる目的は、本発明の核酸を含むベクターに関する。

【0087】

このようなベクターは、対象への投与の際、該抗体を発現させる又は発現を誘導するため、プロモーター、エンハンサー、ターミネーター等の調節因子を含むことができる。動物細胞用の発現ベクターに使用されるプロモーター及びエンハンサーの例は、ＳＶ４０の初期プロモーター及びエンハンサー、モロニーマウス白血病ウイルスのＬＴＲプロモーター及びエンハンサー、免疫グロブリンＨ鎖のプロモーター及びエンハンサー等を含む。動物細胞用の任意の発現ベクターは、ヒト抗体Ｃ領域をコードする遺伝子を挿入して発現させることができる限り、使用することができる。適切なベクターの例は、ｐＡＧＥ１０７、ｐＡＧＥ１０３、ｐＨＳＧ２７４、ｐＫＣＲ、及びｐＳＧ１ βｄ２－４などを含む。プラスミドの他の例は、複製起点を含む複製プラスミド、又は例えば、ｐＵＣ、ｐｃＤＮＡ、及びｐＢＲなどの組込みプラスミドを含む。ウイルスベクターの他の例は、アデノウイルス、レトロウイルス、ヘルペスウイルス、及びＡＡＶベクターを含む。そうした組換えウイルスは、当該技術分野において既知の方法により、例えば、パッケージ細胞に遺伝子導入することにより、又は、ヘルパープラスミド若しくはウイルスを一過性遺伝子導入することにより作製することができる。ウイルスパッケージ細胞の典型的な例は、ＰＡ３１７細胞、ＰｓｉＣＲＩＰ細胞、ＧＰｅｎｖ＋細胞、２９３細胞等を含む。そうした複製欠損組換えウイルスを作製するための詳細なプロトコールは、例えば、国際公開第９５／１４７８５号、国際公開第９６／２２３７８号、米国特許第５，８８２，８７７号明細書、米国特許第６，０１３，５１６号明細書、米国特許第４，８６１，７１９号明細書、米国特許第５，２７８，０５６号明細書、及び国際公開第９４／１９４７８号に見出すことができる。

【0088】

本発明のさらなる目的は、本発明における核酸及び／又はベクターによって遺伝子導入した、感染させた、又は形質転換した宿主細胞に関する。

【0089】

本発明の核酸は、適切な発現系において本発明の抗体を作製するために使用することができる。一般的な発現系は、Ｅ．ｃｏｌｉ宿主細胞とプラスミドベクター、昆虫宿主細胞とバキュロウイルスベクター、及び哺乳動物宿主細胞とベクターを含む。宿主細胞の他の例は、原核生物細胞（細菌など）及び真核生物細胞（酵母細胞、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞等）を限定することなく含む。特定の例は、Ｅ．ｃｏｌｉ、クルイベロマイセス酵母、又はサッカロマイセス酵母を含む。哺乳動物宿主細胞は、ＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用されるｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，１９８０に記載）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）、ＣＨＯＫ１ ｄｈｆｒ＋細胞株、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞、例えばＧＳ Ｘｃｅｅｄ遺伝子発現系（Ｌｏｎｚａ）を伴うＧＳ ＣＨＯ細胞株、又はＨＥＫ細胞を含む。

【0090】

また、本発明は、本発明におけるポリペプチドを発現する組換え宿主細胞を作製する方法に関し、該方法は、（ｉ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｅｘ ｖｉｖｏにおいて、上述のような組換え核酸又はベクターをコンピテント宿主細胞に導入するステップ、（ｉｉ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｅｘ ｖｉｖｏにおいて、得られた組換え宿主細胞を培養するステップ、及び、（ｉｉｉ）任意で、該抗体を発現し、及び／又は、分泌する細胞を選択するステップを含む。そうした組換え宿主細胞は、本発明の抗体を作製するために使用することができる。

【0091】

本明細書に開示する宿主細胞は、したがって、本発明のポリペプチドの作製に特に適切である。実際に、組換え発現を哺乳動物宿主細胞に導入すると、宿主細胞においてポリペプチドを発現するため、及び任意で宿主細胞を増殖させる培養液にポリペプチドを分泌するために十分な期間、宿主細胞を培養することで、ポリペプチドが作製される。ポリペプチドは、その分泌後、標準のタンパク質精製法を使用して、例えば培養液から回収及び精製することができる。

【0092】

（本発明の治療用途）
本発明のさらなる目的は、本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質の薬剤としての使用に関する。特に、上述の融合タンパク質は、がん又は感染疾患の処置に特に適する。したがって、本発明のさらなる目的は、治療を必要とする対象における治療の方法に関し、該方法は、治療有効量の本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質を患者に投与することを含む。

【0093】

本発明のさらなる目的は、本発明の免疫サイトカインの薬剤としての使用に関する。したがって、本発明のさらなる目的は、治療を必要とする対象における治療の方法に関し、該方法は、治療有効量の本発明の免疫サイトカインを患者に投与することを含む。

【0094】

特に、本発明における抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、増強を必要とする対象におけるＴ細胞の増殖性、遊走性、残留性、及び／又は活性の増強に特に適する。特に、本発明における抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖性、遊走性、残留性、及び／又は活性の増強に特に適する。特に、本発明における抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖性、遊走性、残留性、及び／又は活性の増強に特に適する。特に、本発明における抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、γδＴ細胞の増殖性、遊走性、残留性、及び／又は活性の増強に特に適する。特に、本発明における抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、ＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖性、遊走性、残留性、及び／又は活性の増強に特に適する。

【0095】

したがって、本発明のさらなる目的は、治療を必要とする対象における治療の方法を提供し、該方法は、治療有効量の少なくとも１つの抗ＰＤ－１免疫サイトカインを対象に投与することを含み、該投与は対象におけるＴ細胞の増殖性、遊走性、残留性、及び／又は活性を増強させる。

【0096】

より具体的には、本発明は、Ｔ細胞疲弊の低減を必要とする対象におけるＴ細胞疲弊を低減する方法を提供し、該方法は、治療有効量の本発明の少なくとも１つの抗ＰＤ－１免疫サイトカインを対象に投与することを含む。

【0097】

一部の実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、抗原に特異的なＴ細胞の増殖性、遊走性、残留性、及び／又は活性の増強に特に適する。

【0098】

一部の実施形態において、抗原は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。ＴＡＡの例は、黒色腫関連Ａｇ（黒色腫に関連するメラン－Ａ／ＭＡＲＴ－１、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＴＲＰ－２、メラノソーム膜糖タンパク質ｇｐ１００、ｇｐ７５、及びＭＵＣ－１（ムチン－１））；例えば卵巣がん、黒色腫、又は結腸がんに関連し得るＣＥＡ（癌胎児性抗原）；卵巣癌によって発現される葉酸受容体α；卵巣腫瘍、精巣腫瘍、及び骨髄腫を含むがこれらに限定されない多くの様々な腫瘍によって発現される遊離ヒト絨毛性ゴナドトロピンβ（ｈＣＧＰ）サブユニット；乳がんに関連するＨＥＲ－２／ｎｅｕ；小細胞肺がんに関連する脳脊髄炎抗原ＨｕＤ；神経芽細胞腫に関連するチロシンヒドロキシラーゼ；前立腺がんに関連する前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）；卵巣がんに関連するＣＡ１２５；並びに腫瘍特異的免疫（イディオタイプ特異的液性免疫応答に起因する）を生じさせることができるＢ細胞リンパ腫のイディオタイプ決定基；膵臓がん、卵巣がん、及び肺がんに関連するメソテリン；卵巣がん、結腸直腸がん、非小細胞肺がんに関連するＰ５３；精巣がん、卵巣がんに関連するＮＹ－ＥＳＯ－１；乳がん、前立腺がん、肺がんに関連するＥｐｈＡ２、結腸直腸癌に関連するＥｐｈＡ３、肺がん、乳がん、膵臓がん、卵巣がんに関連するサバイビン、子宮頸がんに関連するＨＰＶ Ｅ６及びＥ７、ＮＳＣＬがんに関連するＥＧＦＲを含むが、限定されない。さらに、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１型のＡｇは、特異的細胞傷害性Ｔ細胞応答及びウイルス誘導ヒト成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）に対する抗腫瘍免疫を誘導することが示されている。他の白血病のＡｇも同様に使用することができる。本発明において使用することができる腫瘍関連抗原は、「Ｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ Ａｎｔｉｇｅｎｓ」（Ｈａｓｓａｎｅ Ｍ．ｅｔ ａｌ Ｈｏｌｌａｎｄ－Ｆｒｅｉ Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ （２００３）．６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ．）という本及びｔｈｅ ｒｅｖｉｅｗ Ｇｒｅｇｏｒｙ Ｔ．等（「Ｎｏｖｅｌ ｃａｎｃｅｒ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｆｏｒ ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｉｅｓ： ｌａｔｅｓｔ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ」 Ｔｈｅｒ Ａｄｖ Ｍｅｄ Ｏｎｃｏｌ．２０１６；８（１）：４-３１）に公開されており、これらのすべてが本明細書において言及することによって援用される。一部の実施形態において、腫瘍関連抗原は黒色腫関連Ａｇである。

【0099】

一部の実施形態において、抗原は感染疾患抗原である。したがって、一部の実施形態において、抗原は、細菌抗原、ウイルス抗原、寄生虫抗原、及び真菌抗原から選択される感染疾患抗原から選択される。典型的に、抗原は少なくとも１つのウイルス抗原である。例えば、少なくとも１つのウイルス抗原は、アデノウイルス、レトロウイルス、ピコルナウイルス、ヘルペスウイルス、ロタウイルス、ハンタウイルス、コロナウイルス、トガウイルス、フラビウイルス（ｆｌａｖｉｒｖｉｒｕｓ）、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、オルソミクソウイルス、ブニヤウイルス、アレナウイルス、レオウイルス、パピローマウイルス（ｐａｐｉｌｏｍａｖｉｒｕｓ）、パルボウイルス、ポックスウイルス、ヘパドナウイルス、ロトウイルス（ｒｏｔｏｖｉｒｕｓ）、又は海綿状ウイルス（ｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍ ｖｉｒｕｓ）からのペプチドを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのウイルス抗原は、ＨＩＶウイルス、ＣＭＶウイルス、Ａ型、Ｂ型、及びＣ型肝炎ウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ポリオウイルス、天然痘ウイルス、風疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、単純ヘルペスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、日本脳炎ウイルス、狂犬病ウイルス、インフルエンザ（ｆｌｕ）ウイルス、又は感冒ウイルスの少なくとも１つからのペプチドを含む。一部の実施形態において、上述のウイルス抗原は、ＨＩＶ－１ Ｇａｇ ｐ２４、Ｎｅｆ、及びＧａｇ ｐ１７（ＧＮＧと呼ばれる３つの抗原の組合せを含む、以下のアミノ酸配列の詳細を参照）、又はＨＶＰ１６ Ｅ６及びＨＰＶ１６ Ｅ７抗原の組合せ（ＨＰＶ １６ Ｅ６／Ｅ７）（ＨＰＶとも呼ばれる、以下のアミノ酸配列の詳細を参照）の抗原ドメインの１つ以上から選択される。一部の実施形態において、上述のウイルス抗原は、Ｇａｇ ｐ１７（１７－３５）、Ｇａｇ ｐ１７－ｐ２４（２５３－２８４）、及びＮｅｆ（１１６－１４５）、Ｐｏｌ ３２５－３４４（ＲＴ１５８－１８８）、及びＮｅｆ（６６－９７）のＨＩＶ抗原ドメインの１つ以上から選択される。一部の実施形態において、上述のウイルス抗原は、Ｇａｇ ｐ１７（１７－３５）、Ｇａｇ ｐ１７－ｐ２４（２５３－２８４）、及びＮｅｆ（１１６－１４５）、Ｐｏｌ ３２５－３４４（ＲＴ１５８－１８８）、及びＮｅｆ（６６－９７）の５つのＨＩＶ抗原ドメインの組合せから選択される。

【0100】

本発明のさらなる目的は、がんの処置における使用のための本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインに関する。実際に、本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、腫瘍浸潤細胞傷害性Ｔリンパ球の増殖性、遊走性、残留性、及び／又は活性の増強に特に適する。

【0101】

一部の実施形態において、本発明の方法は、ＰＤ－１を発現する細胞傷害性Ｔリンパ球の高い腫瘍浸潤性によって特徴づけられるがんの処置に適する。典型的に、上述の細胞傷害性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤性は、当該技術における任意の従来の方法によって測定される。例えば、上述の測定は、患者から得た腫瘍試料におけるＰＤ－１を発現する細胞傷害性Ｔリンパ球の密度を定量化することを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの免疫チェックポイントタンパク質を発現する細胞傷害性Ｔリンパ球の密度の定量化は、免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）によって測定される。例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球の密度の定量化は、組織腫瘍組織試料を、該細胞の細胞表面マーカーに特異的な結合パートナー（例えば抗体）と接触させることによって行われる。典型的に、細胞傷害性Ｔリンパ球の密度の定量化は、組織腫瘍組織試料を、ＣＤ８及びＰＤ－１に特異的な結合パートナー（例えば抗体）一式と接触させることによって行われる。

【0102】

本発明のさらなる目的は、処置を必要とする患者におけるがんの処置の方法に関し、該方法は、治療有効量の本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインと組み合わせた治療有効量のＣＡＲ－Ｔ細胞集団を患者に投与することを含む。したがって、本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、腫瘍関連抗原に特異的であるＣＡＲ－Ｔ細胞集団の疲弊を抑止し得る。

【0103】

本発明のさらなる目的は、感染疾患の処置における使用のための本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインに関する。より具体的には、本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、ウイルス感染の処置に特に適する。本発明によって処置可能なウイルス感染の例は、レトロウイルス、ポックスウイルスなど、動物、ヒト、及び植物に感染する単鎖又は二本鎖のＲＮＡ及びＤＮＡウイルス、免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染、エコーウイルス感染、パルボウイルス感染、風疹ウイルス感染、パピローマウイルス、先天性風疹感染、エプスタイン・バーウイルス感染、流行性耳下腺炎、アデノウイルス、ＡＩＤＳ、水疱、サイトメガロウイルス、デング熱、ネコ白血病、家禽ペスト、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２、ブタコレラ、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、日本脳炎、麻疹、パラインフルエンザ、狂犬病、呼吸器合胞体ウイルス、ロタウイルス、いぼ、及び黄熱、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えばＨＳＶ－Ｉ、ＨＳＶ－ＩＩ、ＣＭＶ、若しくはＶＺＶ）、ポックスウイルス（例えば痘そう若しくはワクシニアなどのオルソポックスウイルス、若しくは伝染性軟属腫）、ピコルナウイルス（例えばライノウイルス若しくはエンテロウイルス）、オルソミクソウイルス（例えばインフルエンザウイルス）、パラミクソウイルス（例えばパラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ））、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ）、パポーバウイルス（例えば、性器いぼ、尋常性いぼ、若しくは足底いぼを引き起こすものなどのパピローマウイルス）、ヘパドナウイルス（例えばＢ型肝炎ウイルス）、フラビウイルス（例えばＣ型肝炎ウイルス若しくはデング熱ウイルス）、又はレトロウイルス（例えばＨＩＶなどのレンチウイルス）によって引き起こされるものを含む。

【0104】

また、本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、ワクチン接種の目的に特に適する。特に、上述の免疫サイトカインは、ワクチン組成物によって誘発される免疫応答の増強に特に適する。したがって、本発明のさらなる目的は、ウイルス又は腫瘍関連抗原に対するＢ細胞及び／又はＴ細胞応答の誘発及び／又は増強を必要とする対象における、ウイルス又は腫瘍関連抗原に対するＢ細胞及び／又はＴ細胞応答を誘発及び／又は増強する方法に関し、該方法は、本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインを、誘発及び／又は増強を必要とする対象に投与することを含む。一部の実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、連続して又は同時にワクチンに加えられる。一部の実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、ワクチン組成物を対象に注射する前に、用時にワクチン組成物と混合する。

【0105】

したがって、一部の実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、ワクチン接種の目的で少なくとも１つの抗原と組み合わせて対象に投与される。典型的に、上述の抗原はウイルス抗原である。一部の実施形態において、上述のウイルス抗原は、ＨＩＶ－１ Ｇａｇ ｐ２４、Ｎｅｆ、及びＧａｇ ｐ１７（ＧＮＧと呼ばれる３つの抗原の組合せを含む、以下のアミノ酸配列の詳細を参照）、又はＨＶＰ１６ Ｅ６及びＨＰＶ１６ Ｅ７抗原の組合せ（ＨＰＶ １６ Ｅ６／Ｅ７）（ＨＰＶとも呼ばれる、以下のアミノ酸配列の詳細を参照）の抗原ドメインの１つ以上から選択される。一部の実施形態において、上述のウイルス抗原は、Ｇａｇ ｐ１７（１７－３５）、Ｇａｇ ｐ１７－ｐ２４（２５３－２８４）、及びＮｅｆ（１１６－１４５）、Ｐｏｌ ３２５－３４４（ＲＴ１５８－１８８）、及びＮｅｆ（６６－９７）のＨＩＶ抗原ドメインの１つ以上から選択される。一部の実施形態において、上述のウイルス抗原は、Ｇａｇ ｐ１７（１７－３５）、Ｇａｇ ｐ１７－ｐ２４（２５３－２８４）、及びＮｅｆ（１１６－１４５）、Ｐｏｌ ３２５－３４４（ＲＴ１５８－１８８）、及びＮｅｆ（６６－９７）の５つのＨＩＶ抗原ドメインの組合せから選択される。

【0106】

一部の実施形態において、抗原又は複数の抗原は、ＤＣ標的抗体、特に抗ＣＤ４０抗体にコンジュゲートされる。したがって、一部の実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインは、ワクチン接種の目的で、抗ＣＤ４０抗体とコンジュゲートした少なくとも１つの抗原と組み合わせて対象に投与される。典型的に、上述の抗ＣＤ４０抗体は、上述の抗体又はその抗原結合フラグメントにおける対応する重鎖又は軽鎖のいずれかに非共有結合することで融合又はコンジュゲート又は結合された１つ以上の抗原を含む。上述の抗原は、抗ＣＤ４０抗体のポリペプチド鎖に、例えば抗ＣＤ４０抗体のポリペプチド鎖のＣ末端において、直接的にコンジュゲートすることができ、任意で上述のようにＦｌｅｘＶ１などのペプチドリンカーを介してコンジュゲートすることができる。また、これは、例えばドックリンドメインと結合するためのコヘシン融合タンパク質に含まれるような、非共有結合によって結合することができる。

【0107】

さらに、本明細書に開示するワクチン接種方法はまた、１つ以上のアジュバントの投与を含み得る。アジュバントは、上述のような抗原又は抗ＣＤ４０抗体などのワクチン組成物の１つ以上に直接的又は非直接的に付着させる又はコンジュゲートすることができる。一部の実施形態において、アジュバントは、ワクチン組成物とは別に提供又は投与することができる。一部の実施形態において、アジュバントは、ポリＩＣＬＣ、ＣｐＧ、ＬＰＳ、Ｉｍｍｕｎｏｑｕｉｄ、ＰＬＡ、ＧＬＡ、又はＩＦＮαなどのサイトカインアジュバントである。一部の実施形態において、アジュバントは、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト（ＴＬＲ）であり得る。使用され得るＴＬＲアゴニストの例は、ＴＬＲ１アゴニスト、ＴＬＲ２アゴニスト、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ５アゴニスト、ＴＬＲ６アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、又はＴＬＲ９アゴニストを含む。

【0108】

一部の実施形態において、本発明のワクチン接種方法は、健康な対象が上述のウイルスに感染することを防ぐために使用され、本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインと組み合わせたウイルスワクチンを、例えば上述のウイルスに感染していない健康な対象に、投与することを含む（予防処置）。一部の実施形態において、本発明のワクチン接種方法は、ウイルス感染に罹患する患者を処置する方法に使用され、本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインと組み合わせたウイルスワクチンを患者に投与することを含む。

【0109】

（本発明の医薬組成物）
本発明のさらなる目的は、薬学的に許容される担体と共に本発明のＩＬ－１５／ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）融合タンパク質を含む医薬に関する。

【0110】

本発明のさらなる目的は、薬学的に許容される担体と共に本発明の免疫サイトカイン（例えば抗ＰＤ－１免疫サイトカイン）を含む医薬に関する。

【0111】

この組成物に使用することができる薬学的に許容される担体は、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばホスフェート、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、植物性飽和脂肪酸の部分的なグリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、及び羊毛脂を含むが、これらに限定されない。患者への投与における使用では、組成物は、患者への投与のために製剤化し得る。本発明の組成物は、経口、非経口、吸入スプレー、経局所、経直腸、経鼻、経口腔、経膣で、又は留置リザーバーを介して投与することができる。本明細書で使用されるものは、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝内、病変内、及び頭蓋内の注射又は注入技術を含む。本発明の組成物の滅菌注射剤形は、水性又は油性懸濁液とすることができる。これらの懸濁液は、適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を使用して、当該技術分野において既知の技術に従って製剤化することができる。また、滅菌注射調製物は、例えば、１，３－ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口に許容される希釈剤又は溶媒中の滅菌の注射可能な溶液又は懸濁液とすることができる。使用できる許容可能なビヒクル及び溶媒のなかには、水、リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌の固定油は、従来より、溶媒又は懸濁媒体として使用されている。この目的で、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む任意の刺激の少ない固定油を使用することができる。脂肪酸、例えばオレイン酸及びそのグリセリド誘導体は、オリーブ油又はヒマシ油などの天然の薬学的に許容される油、特にそれらのポリオキシエチル化タイプと同様に、注射剤の調製に有用である。また、これらの油溶液又は懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤又は分散剤、例えばエマルション及び懸濁液を含む薬学的に許容される投与剤形の製剤に一般的に使用されるカルボキシメチルセルロース若しくは同様の分散剤を含有することができる。また、Ｔｗｅｅｎ、Ｓｐａｎなどの他の一般的に使用される界面活性剤、及び薬学的に許容される固体、液体、又は他の投与剤形の製造に一般的に使用される他の乳化剤又は生物学的利用能増強剤も、製剤の目的で使用することができる。本発明の組成物は、カプセル剤、錠剤、水性懸濁液又は溶液を含むが、これらに限定されない、任意の経口に許容される投与剤形で経口投与することができる。経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用される担体としては、ラクトース及びコーンスターチを含む。また、滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウムが、典型的に添加される。カプセル剤形での経口投与では、有用な希釈剤としては、例えばラクトースを含む。経口使用に水性懸濁液を必要とするとき、活性成分は乳化剤及び懸濁剤と組み合わされる。望ましい場合、特定の甘味料、香味料、又は着色剤を添加することもできる。あるいは、本発明の組成物は、直腸投与のための坐剤の剤形で投与することができる。これらは、薬剤を、室温では固体であるが直腸温では液体であり、したがって直腸で融解して薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤と混合することによって、調製することができる。そうした材料としては、カカオバター、ミツロウ、及びポリエチレングリコールを含む。また、本発明の組成物は、特に、眼、皮膚、又は下部腸管の疾患を含む、局所の適用によって容易に到達可能である領域又は器官を処置の標的に含むとき、経局所で投与することができる。適切な局所用製剤は、これらの領域又は器官のそれぞれに対して容易に調製される。局所の適用では、組成物は、１つ以上の担体に懸濁又は溶解した活性成分を含有する適切な軟膏剤に製剤化することができる。本発明の化合物の局所投与のための担体は、鉱物油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス及び水を含むが、これらに限定されない。あるいは、組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体に懸濁又は溶解した活性成分を含有する適切なローション剤又はクリーム剤に製剤化することができる。適切な担体は、鉱物油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルズワックス、セテアリルアルコール、２－オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、及び水を含むが、これらに限定されない。下部腸管のための局所の適用は、直腸坐剤（上述を参照）又は適切な浣腸剤で行うことができる。また、貼付剤も使用することができる。また、本発明の組成物は、鼻エアロゾル又は吸入によって投与することができる。そうした組成物は、医薬製剤の分野において周知の技術に従って調製され、ベンジルアルコール若しくは他の適切な保存剤、生物学的利用能を増強させるための吸収促進剤、フルオロカーボン、及び／又は他の従来の可溶化剤若しくは分散剤を使用して、生理食塩水中の溶液として調製することができる。例えば、この発明の医薬組成物に存在する抗体は、１００ｍｇ（１０ｍＬ）又は５００ｍｇ（５０ｍＬ）の単回使用バイアルのいずれかにおいて１０ｍｇ／ｍＬの濃度で提供することができる。製品は、９．０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウムニ水和物、０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び滅菌注射用水中において静脈内投与用に製剤化する。ｐＨは６．５に調整する。この発明の医薬組成物における抗体の例示の適切な投与量範囲は、約１ｍｇ／ｍ^２～５００ｍｇ／ｍ^２とすることができる。しかしながら、これらの計画は例示であり、臨床試験において決定する必要のある医薬組成物における特定の抗体の親和性及び許容性を考慮して、最適な計画及びレジメンを適応させることができるということが理解される。注射（例えば筋肉内、静脈内）のための本発明の医薬組成物は、滅菌バッファー水（例えば筋肉内では１ｍｌ）、約１ｎｇ～約１００ｍｇ、例えば約５０ｎｇ～約３０ｍｇ以上、好ましくは約５ｍｇ～約２５ｍｇの本発明のポリペプチドを含有するように調製することができる。

【0112】

また、本開示は、本発明の抗ＰＤ－１免疫サイトカインを含むワクチン組成物に関する。一部の実施形態において、ワクチン組成物は、任意で上述のような抗ＣＤ４０抗体とコンジュゲートすることができる、上述のような少なくとも１つの抗原を含む。一部の実施形態において、本発明のワクチン組成物は、少なくとも１つのアジュバントをさらに含むことができる。有効であり得るアジュバントの例は、水酸化アルミニウム、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－トレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチル－ノル－ムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン、ＭＴＰ－ＰＥ、並びに、２％スクアレン／Ｔｗｅｅｎ８０エマルジョン中に細菌から抽出された３つの成分、モノホスホリル脂質Ａ、トレハロースジミコレート及び細胞壁骨格（ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳ）を含有するＲＩＢＩを含むが、これらに限定されない。アジュバントの他の例は、ＤＤＡ（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）、フロイントの完全アジュバント及び不完全アジュバント、並びにＱｕｉｌＡを含む。更に、リンホカイン（例えば、ＩＦＮ－［γ］、ＩＬ－２及びＩＬ－１２）などの免疫調節物質、又はポリＩ：Ｃ若しくはポリＩＣＬＣ（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ）などの合成ＩＦＮ－［γ］誘導物質を、本明細書に記載のアジュバントと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、アジュバントは、ポリＩＣＬＣ、ＣｐＧ、ＬＰＳ、Ｉｍｍｕｎｏｑｕｉｄ、ＰＬＡ、ＧＬＡ、又はＩＦＮαなどのサイトカインアジュバントから選択することができる。一部の実施形態において、アジュバントは、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト（ＴＬＲ）であり得る。使用され得るＴＬＲアゴニストの例は、ＴＬＲ１アゴニスト、ＴＬＲ２アゴニスト、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ５アゴニスト、ＴＬＲ６アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、又はＴＬＲ９アゴニストを含む。ワクチン製剤は、液剤又は懸濁剤としての注射剤として調製されるが、感染の前に液体内の溶解又は懸濁に適する固体形態も調製することができる。製剤を乳化し、リポソームに封入してもよい。活性免疫原性成分は、多くの場合、薬学的に許容されるとともに有効成分に適合する担体と混合される。

【0113】

本開示におけるワクチン又は医薬組成物の投与は、最大（又は場合によっては最小）免疫応答のため部位への抗原の送達を最大化するように、標的組織がその経路を介して利用可能である限り、任意の一般的な経路を介して行うことができる。ワクチンの投与は、一般的に、同所性、皮内、粘膜、皮下、筋肉内、腹腔内、又は静脈内注射によって行うことができる。他の送達領域は、経口、鼻腔、口腔、直腸、膣、又は局所を含む。本開示のワクチンは、好ましくは、非経口で注射によって、例えば、皮下又は筋肉内の注射のいずれかで投与される。

【0114】

本開示のワクチン又は医薬組成物は、投与剤形と適合する方法で、並びに予防的及び／又は治療的に有効な量で投与することができる。投与する量は、例えば、対象の免疫系が抗体を合成する能力、及び所望の防御又は処置の程度を含む、処置する対象によって決まる。好適な投与量範囲は、約０．１ｍｇ～１０００ｍｇの範囲、例えば、約１ｍｇ～３００ｍｇの範囲、又は約１０ｍｇ～５０ｍｇの範囲で、ワクチン接種あたり約数百マイクログラムの活性成分である。

【0115】

ワクチンは、典型的には、単回投与スケジュール又は複数回投与スケジュールで投与され得る。複数回投与スケジュールは、ワクチン接種の一次過程として、例えば１～１０回の別々の投与を含み、続いて、免疫応答を維持及び／又は強化するために必要なその後の時間間隔での他の投与、例えば、１～４ヵ月の２回目の投与、及び必要であれば、数ヵ月後のその後の投与を行い得るものである。望ましいレベルの防御免疫を維持するためには、１～５年、通常３年の間隔で定期的に追加免疫を行うことが望ましい。免疫化の過程は、抗原と共培養した末梢血リンパ球（ＰＢＬ）のｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖アッセイ、及びプライミングされたリンパ球から放出されるＩＦＮ－［γ］のレベルの測定が続いて行われ得る。アッセイは、放射性ヌクレオチド、酵素、及び蛍光標識等の従来の標識を使用して行うことができる。これらの技術は当業者に知られており、米国特許第３，７９１，９３２号、米国特許第４，１７４，３８４号、及び米国特許第３，９４９，０６４号に見出すことができる。

【0116】

ワクチンは、１つ以上の「単位用量」で提供することができる。単位用量は、その投与、すなわち、適切な経路及び処置レジメンに関連して所望の応答を生じるように計算された所定量のワクチンを含むものとして定義される。投与する量、及び特定の経路及び製剤は、臨床分野の当業者の技術の範囲内である。また、処置する対象は、特に、対象の免疫系の状態及び所望の防御について評価することができる。単位用量は、単回注射として投与する必要はないが、設定された期間にわたる持続注入を含み得る。送達されるワクチンの量は、約０．００１～約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重で変動し得、例えば、対象あたり０．１～５ｍｇである。

【0117】

本発明を以下の図面及び実施例によってさらに記載する。しかしながら、これらの実施例及び図面は、本発明の範囲を限定するとしていかようにも解釈されるべきでない。

【実施例】

【0118】

（実施例１）
免疫サイトカインの設計において、抗ＰＤ－１治療に対して抗原特異的Ｔ細胞増殖の増強の効力を高めるとともに、ｉｎ ｖｉｖｏの半減期が十分に長い治療剤を同定することに焦点を当てた。第２の考察点は、ｉｎ ｖｉｖｏの試験及び臨床前プロファイリングのため有望な候補を前に進ませ得るこれらの免疫サイトカインの産生量及び生物物理学的安定性であった。図１に示すように、３つの別々の免疫サイトカイン設計を評価した。新しい抗ＰＤ－１／ＩＬ－１５／Ｒαの免疫増強活性を、長期感染ＨＩＶ感染ドナーの血液単核細胞を使用して、高度に標準化されているＣＦＳＥ増殖アッセイにおいてｉｎ ｖｉｔｒｏで評価した。これらのドナーのＨＩＶ特異的Ｔ細胞は、長期間にわたって高レベルの抗原に曝露され、ゆえに機能的に疲弊し、高レベルのＰＤ－１免疫チェックポイント阻害剤を発現し、抗原特異的刺激の存在下で増殖応答不良となる。ＨＩＶ由来ペプチドでの血液単核細胞の刺激、その後の６日間の培養により、増殖を経たＣＦＳＥ低ＣＤ８Ｔ細胞の増加をもたらした。従来のＰＤＬ－１遮断抗ＰＤ－１ＡｂのＫｅｙｔｒｕｄａの添加により、ペプチド単独のコントロールに対して、増殖レベルの増加をもたらし、ゆえに抗ＰＤ－１ＡｂがＣＤ８^＋Ｔ細胞を疲弊から回復させることを示した（図２）。並行して試験した３つの異なる免疫サイトカインコンストラクトは、Ｋｅｙｔｒｕｄａのコントロール抗ＰＤ－１抗体に対して、最低限でＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖レベルの２～４倍の増加をもたらした。重要な点として、ＩＣ：Ｄｏｃ／Ｃｏｈ及びＩＣ：Ｆｕｓｉｏｎコンストラクトが、１００倍低いタンパク質濃度でも、Ｋｅｙｔｒｕｄａに対して免疫増強効果の有意な向上を示した。ＩＣ：Ｋ－ｉｎ－Ｈコンストラクトは、１μｇ／ｍｌにおいてＫｅｙｔｒｕｄａに対するＣＤ８Ｔ細胞増殖レベルの増加を誘導したが、ＩＣ：Ｋ－ｉｎ－Ｈは、ＩＣ：Ｄｏｃ／Ｃｏｈ及びＩＣ：Ｆｕｓｉｏｎコンストラクトよりも１０倍を超えて効力が小さかった。別の実験において、さらなる免疫サイトカインを、ＰＤ－１／ＰＤＬ－１相互作用を遮断しない１３５Ｃ Ｈ１ｃＬ１ｃ抗ＰＤ－１抗体と組み合わせてＩＣ：Ｆｕｓｉｏｎコンストラクト設計を使用して作製した（Ｆｅｎｗｉｃｋ ｅｔ ａｌ，２０１９）。ＣＦＳＥ増殖アッセイにおけるＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαに直接的に融合させた１３５Ｃの機能的活性は、Ｋｅｙｔｒｕｄａ－ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体であるＩＣ：Ｆｕｓｉｏｎと同等であると分かった（図３）。興味深い点として、このウイルス血症ＨＩＶ感染ドナーの血液単核細胞を用いて、０．１μｇ／ｍｌの２つの異なる免疫サイトカインが、５μｇ／ｍｌのＫｅｙｔｒｕｄａに対してＣＤ８Ｔ細胞増殖における最大２０倍の増加を誘導した。

【0119】

（実施例２）
様々な免疫サイトカインの存在下におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖レベルの増加は、抗ＰＤ－１治療単独に対する、その優れた機能的活性を明らかにするものである。しかしながら、ＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖が、刺激に使用したＨＩＶペプチド抗原に特異的であるということが、等しく重要である。免疫サイトカインの存在下におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖の増強の特異性を、五量体のＭＨＣ－ＨＩＶペプチド複合体によるＣＦＳＥ低の増殖ＣＤ８^＋Ｔ細胞の染色によって測定した。図４におけるフローサイトメトリーの結果は、Ｋｅｙｔｒｕｄａ、ＩＣ：Ｋ－ｉｎ－Ｈ、ＩＣ：Ｄｏｃ／Ｃｏｈ、及びＩＣ：Ｆｕｓｉｏｎを用いて、増殖ＣＤ８^＋Ｔ細胞の大多数（６０～８０％）が、ＭＨＣ五量体ポジティブであり、刺激に使用したＨＩＶペプチド抗原に特異的であることを示す。一方で、ＳＥＢ Ｔ細胞スーパー抗原による刺激により、増殖ＣＤ８^＋Ｔ細胞の２％のみが、ＭＨＣ－ＨＩＶペプチド複合体に対してポジティブとして染色される。これらの五量体染色研究により、免疫サイトカイン複合体が抗原刺激の存在下においてＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖を強力かつ特異的に誘導することを裏付ける。

【0120】

（実施例３）
これらの免疫サイトカインを治療剤としてさらに特徴づけるため、２ｍｇ／ｋｇの様々な薬剤を投与したＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて、薬物動態学的研究を行い、以後の７日にわたって、血清試料を採取した。Ｋｅｙｔｒｕｄａ及び３つの免疫サイトカインのＰＫ特性を、ルミネックスアッセイを使用して測定し、研究の経過におけるヒトＩｇＧ又はＩＬ－１５結合ヒトＩｇＧを検出した（図５）。他の免疫サイトカインに対して、よりネイティブの抗体構造を有するＩＣ：Ｋ－ｉｎ－Ｈコンストラクトは、Ｋｅｙｔｒｕｄａ抗体に最も近いｉｎ ｖｉｖｏの半減期（ｔ_１／２～５日）を有していた。しかしながら、その薬剤曝露もまた、同等の用量をマウスに投与して、Ｋｅｙｔｒｕｄａよりも１ｌｏｇ少ないものであった。ＩＣ：Ｋ－ｉｎ－ＨコンストラクトがＫｅｙｔｒｕｄａよりも単に約１０倍強力であることから、ＰＫが劣っていることで、この免疫サイトカインが与える任意の機能的利点を打ち消す可能性がある。ＩＣ：Ｄｏｃ／Ｃｏｈ及びＩＣ：Ｆｕｓｉｏｎの免疫サイトカインは、約１日の終末相半減期を有し、Ｋｅｙｔｒｕｄａと比較してマウスからより速く排除される。しかしながら、この半減期は、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＩＬ－１５に対して報告される１時間未満の半減期よりも有意に長く、７日目におけるこれらの２つの免疫サイトカインの薬剤レベルは、Ｋｅｙｔｒｕｄａと比較したＩＣ：Ｄｏｃ／Ｃｏｈ及びＩＣ：Ｆｕｓｉｏｎのｉｎ ｖｉｔｒｏの機能的効果の有意な向上に対してなお高い（０．０１μｇ／ｍｌを超える）ものである。評価した３つの免疫サイトカインの様々な特性を対比すると、ＩＣ：Ｆｕｓｉｏｎが、（１）２ｌｏｇ範囲の濃度において、Ｋｅｙｔｒｕｄａに対して一貫して２倍を超える機能的活性の向上、（２）ＭＨＣ五量体染色によって示すようなＣＤ８^＋Ｔ細胞の抗原特異的増殖増強、及び（３）週一回の投与レジメンに対応し得るＰＫプロファイルを伴う、最も良好な総合プロファイルを有している。ＩＣ：Ｄｏｃ／Ｃｏｈと比較したＩＣ：Ｆｕｓｉｏｎコンストラクトのさらなる利点は、免疫原性を増加させやすいものであり得、反復投与で処置した動物におけるＰＫプロファイルに好ましくないものであり得るドックリン及びコヘシンドメインを有しないことである。

【0121】

（実施例４）
これまでの結果に基づいて、治療用のＤＣに基づくワクチン接種を、Ｔ細胞応答を増加させるため、免疫チェックポイント阻害剤と融合させた免疫調節サイトカインと組み合わせることができ得るということを論じた。このため、がんの分野においてその効力が証明されたαＰＤ－１モノクローナル抗体（Ｋｅｙｔｒｕｄａ、臨床分子）、及びエフェクターＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖に影響を与えることが知られるサイトカインであるＩＬ－１５Ｒ／ＩＬ－１５Ｒαを使用した。

【0122】

ワクチン接種後１６週のＰＢＭＣ（Ｄａｌｉａ１，ｎ＝１５）を、αＰＤ－１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体、αＰＤ１単独、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα単独、又はαＰＤ－１＋ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαの存在下又は非存在下においてＧａｇ－Ｐ２４ペプチドプールでｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて刺激した（実験設計を参照、図６）。４４時間の刺激後、ＣＤ４^＋ＯＸ４０^＋ＣＤ２５^＋ＨＩＶ－１特異的細胞を分析した。

【0123】

α－ＰＤ－１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体の存在下で、ｃＡＲＴ ＨＩＶ－１^＋ワクチン接種患者のＧａｇ－Ｐ２４で刺激したＰＢＭＣが、他の条件と比較して、ＨＩＶ－１特異的Ｔ細胞応答の有意な増加をもたらすことを示した。図７のパネルＡにおいて、α－ＰＤ－１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体をＧａｇ－Ｐ２４で刺激したＰＢＭＣに添加したとき、エフェクター及び調節性細胞（Ｔｅｆｆ及びＴｒｅｇ）の両方を含むＣＤ４^＋ＯＸ４０^＋ＣＤ２５^＋ＨＩＶ－１特異的細胞の存在比率が、有意に増加したことを示す。αＰＤ－１の添加は、Ｇａｇ－Ｐ２４で刺激した細胞単独と比較したとき、ＣＤ４^＋特異的細胞の存在比率を増加させない一方、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα、又はＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα＋αＰＤ－１の添加は、わずかに良好であったが、α－ＰＤ－１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体で得た効力に届かなかった。図７のパネルＢにおいて、エフェクター（ＯＸ４０^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ３９^－Ｆｏｘｐ３^－）に注目したとき同様の傾向を示し、興味深い点として、α－ＰＤ－１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体を添加したとき、Ｔｒｅｇ（ＯＸ４０^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ３９^＋Ｆｏｘｐ３^＋）の有意な減少を観察した。これらのデータは、αＰＤ－１のＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαとの融合が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＨＩＶ－１特異的エフェクターＣＤ４^＋Ｔ細胞を増強する良好な方法であることを示す。

【0124】

（実施例５）
ＣＤ８^＋ＨＩＶ－１特異的細胞を示すため、ＨＬＡ制限ペプチドプールで刺激した６人の患者のＰＢＭＣ（Ｄａｌｉａ１、１６週）のｉｎ ｖｉｔｒｏの増殖の後、五量体染色（Ｐｒｏｉｍｍｕｎｅ，英国）及びフローサイトメトリー分析を使用した。６日のｉｎ ｖｉｔｒｏの増殖の後、特異的ペプチドで一晩の再刺激を行い、ＣＤ８^＋増殖及び細胞内サイトカイン産生（ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＩＦＮ－γ）を測定するためＣＦＳＥ染色及びフローサイトメトリーを行った。結果は、α－ＰＤ－１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体の存在下におけるＰＢＭＣの刺激が、αＰＤ１単独と比較したときＣＤ８^＋五量体^＋細胞増殖及びサイトカイン産生を有意に増加させ、これは、ペプチド刺激のみの条件と比較したとき同様の応答を示す、ということを示した（図８）。グラフは、５人のうち３人の患者から得た結果を示す。

【0125】

（実施例６）
αＰＤ－１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体が他のＤＣに基づくワクチン（抗ＣＤ４０．ＨＩＶ５ｐｅｐ－ＤＣ）とも使用できることを示すため、抗ＣＤ４０．ＨＩＶ５ｐｅｐコンストラクトを、以下の実験設計に示すように成熟及び分化したＣＤ１４^＋単球にロードした（図９及びＣｏｂｂ ｅｔ ａｌ．ＪＩＭ ２０１１）後、自己ＰＢＭＣと共培養する、ｉｎ ｖｉｔｒｏの実験を行った。図９の下部パネルに示すようにフローサイトメトリーによってＣＤ４^＋特異的Ｔ細胞を示すため、ＯＸ４０アッセイを使用した。

【0126】

留意点として、ＯＸ４０アッセイを使用するリードアウト実験のため、２つの条件を実施した。１つ目では、αＰＤ－１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体の存在下又は非存在下においてＧａｇ Ｐ２４で患者のＰＢＭＣを刺激し、２つ目の条件では、αＰＤ－１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体の存在下又は非存在下においてＰＢＭＣを抗ＣＤ４０．ＨＩＶ５ｐｅｐ－ＤＣと共培養した。図１０に示す結果は、両方の条件におけるαＰＤ－１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体の添加により、ＣＤ４^＋ＨＩＶ－１特異的エフェクター細胞（青色のヒストグラム）を増強するが、この増加は、抗ＣＤ４０．ＨＩＶ５ｐｅｐ－ＤＣでＰＢＭＣを刺激／共培養したときにより有意であることを示した。さらに、ＣＤ４^＋ＨＩＶ－１特異的Ｔｒｅｇの有意な減少を観察した（ヒストグラム、下部パネル）。

【0127】

最後に、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋細胞の両方において細胞内サイトカイン（ＩＬ－２／ＴＮＦα／ＩＦＮγ）を測定した（４４時間のＯＸ４０アッセイ終了の６時間前にブレフェルジンＡを添加）。図１１は、ＰＢＭＣをαＰＤ－１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体の存在下で抗ＣＤ４０．ＨＩＶ５ｐｅｐ－ＤＣと共培養したときのサイトカイン産生の有意な増加を示す。

【0128】

これらの結果は、併せて、（ｉ）ＤＣ標的化（抗ＣＤ４０．ＨＩＶ５ｐｅｐ－ＤＣと共培養したＰＢＭＣ）が、Ｇａｇ Ｐ２４刺激したＰＢＭＣと比較したとき、より良好なＴ細胞応答をもたらすこと、及び（ｉｉ）αＰＤ－１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体増強ＣＤ８^＋特異的応答（増殖及びサイトカイン産生）とＣＤ４^＋特異的Ｔｒｅｇの減少との組合せにより、αＰＤ－１＿ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合体が臨床に推し進められる良好なツールとなることが示唆されることを示している。

【0129】

（実施例７） ｉｎ ｖｉｖｏのＰａｎｃ０２マウス腫瘍モデルにおける抗ＰＤ－１／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα免疫サイトカインの有効性
この研究の目的は、ＨｕＧＥＭＭ ｈＰＤ－１メスマウスにおけるＰａｎｃ０２マウス膵臓がん皮下異種移植の処置において、この出願に記載する抗ＰＤ－１／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα免疫サイトカイン試験物質のｉｎ ｖｉｖｏの治療有効性を評価することであった。Ｐａｎｃ０２腫瘍細胞は、免疫原性が不良であり、大部分のがん免疫療法にとって難しい腫瘍モデルに相当する。

【0130】

ＨｕＧＥＭＭ ＰＤ－１モデルは、ＣｒｏｗｎＢｉｏによって作製され、マウスのＰＤ－１対応物を置き換えるようにヒトエクソン２をノックインすることで作製された。これにより、ヒト化ＰＤ－１受容体を認識するヒト治療抗体のｉｎ ｖｉｖｏの有効性評価を可能にする。６～８週齢のマウスに、０．１ｍＬのＰＢＳ中の３×１０^６Ｐａｎｃ０２腫瘍細胞を移植し、平均腫瘍サイズが約１００（７０～１３０）ｍｍ^３に達した７日後に、研究を開始した。すべての動物を、「一致分布（Ｍａｔｃｈｅｄ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）」方法（ＳｔｕｄｙＤｉｒｅｃｔｏｒソフトウエア、バージョン３．１．３９９．１９）に基づいて、グループにつき１０匹のマウスの５つの研究グループ群に無作為に割り当てた。５つの研究調査群は、（１）ＰＢＳ未処置コントロール、（２）ペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））抗ＰＤ－１の５ｍｇ／ｋｇでの週２回の処置、（３）５ｍｇ／ｋｇのペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））＋０．１ｍｇ／ｋｇのＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα ＡＬＴ－８０３スーパーアゴニスト、この両方を週２回投与、（４）ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα免疫サイトカイン（ＩＣ）と融合させたＫｅｙｔｒｕｄａを、２ｍｇ／ｋｇで週２回投与、並びに（５）ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα免疫サイトカイン（ＩＣ）と融合させたＮＢ０１ｂ抗ＰＤ－１抗体を、２ｍｇ／ｋｇで週２回投与、を含む。研究に使用したＫｅｙｔｒｕｄａは、ローザンヌ大学病院から購入した臨床用ロットの抗体であった。ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα ＡＬＴ－８０３スーパーアゴニスト及び免疫サイトカインは、ＣＨＯ発現又はＨＥＫ２９３Ｔ哺乳動物細胞株の一時的な遺伝子導入によって個別に作製した組換えタンパク質であった。上述のタンパク質を、遺伝子導入細胞からの分泌の際に切断されるシグナル配列と共に発現させた。その後、治療用タンパク質のそれぞれを、タンパク質Ａアフィニティーカラムを使用して細胞培地から精製した。ＰＢＳに対する透析によってバッファーを交換した後、治療剤を、チャールス・リバー社のリムルスアメボサイトライセート（ＬＡＬ）キットによって検証し、エンドトキシンレベルが１ＥＵ／ｍｌ未満であることを判定した。すべての治療剤を、ＰＢＳバッファー中の液剤として腹腔内に投与した。すべてのマウスにおける腫瘍体積を、ノギスを使用して２次元で週２回測定し、体積＝（長さ×幅×幅）／２の式を使用して、体積をｍｍ^３で表した。腫瘍体積の１５００ｍｍ^３のカットオフを、この研究においてマウスの生存基準を定めるために選択した。

【0131】

それぞれの研究群のマウスの腫瘍体積における長手方向の評価は、治療の１０日目において、すべての抗ＰＤ－１に基づく治療がＰＢＳ未処置コントロールマウスに対して腫瘍抑制の徴候を示すことを提示した（図１２）。Ｋｅｙｔｒｕｄａ単独及びＫｅｙｔｒｕｄａ／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα ＩＣの治療は、平均体積の増加が研究の１４日目に観察されるように、腫瘍増殖の一時的な抑制を示すのみであった。一方で、Ｋｅｙｔｒｕｄａ＋ＡＬＴ－８０３スーパーアゴニスト及びＮＢ０１／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα ＩＣの治療は、平均体積の増加が７日後に研究の２１日目において観察されるのみであるように、持続性のｉｎ ｖｉｖｏの機能的活性を示した。この後、Ｐａｎｃ０２細胞は、様々な免疫療法による抑制を逃れ、腫瘍増殖がすべての抗ＰＤ－１に基づく治療群において同様の速度で進行することが認められた。

【0132】

様々な治療群とＰＢＳ群と間の腫瘍抑制の相対レベルを、研究の７日目～２４日目の腫瘍体積の曲線下面積値を比較することによって評価した（図１３）。この期間における最も強力な腫瘍抑制は、Ｋｅｙｔｒｕｄａ＋スーパーアゴニスト及びＮＢ０１／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα ＩＣの研究群において観察した。ＰＢＳコントロールマウスに対して、Ｋｅｙｔｒｕｄａ＋スーパーアゴニスト（ｐ＝０．００２１）及びＮＢ０１／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα ＩＣ（ｐ＝０．００４１）の治療群において、有意な腫瘍抑制を観察し、Ｋｅｙｔｒｕｄａ単独の治療では腫瘍体積はさほど有意ではない減少を示した（ｐ＝０．０１８）。

【0133】

また、様々な治療における抗腫瘍の有効性を、カプラン・マイヤー生存曲線分析を使用して評価した（図１４）。ＮＢ０１／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαの免疫サイトカイン単剤治療は、ＰＢＳコントロールに対してマウスの生存における統計的に有意な１４日の増加を示し（Ｌｏｇ順位検定、ｐ＝０．０２９）、これは、Ｋｅｙｔｒｕｄａ＋ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαスーパーアゴニストの二剤治療の２剤組合せ治療における１２日の生存増加（Ｌｏｇ順位検定、ｐ＝０．０４９）よりもわずかに長いものであった。一方で、Ｋｅｙｔｒｕｄａ及びＫｅｙｔｒｕｄａ／ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα免疫サイトカイン単剤治療は、免疫原性不良のＰａｎｃ０２腫瘍細胞を移植したマウスの生存時間を有意に増加させなかった。

【0134】

全体として、これらの研究は、ＮＢ０１ｂ抗ＰＤ－１抗体のＩＬ－１５及びＩＬ－１５Ｒαとの免疫サイトカイン融合が、未処置マウスと比較してＰａｎｃ０２腫瘍増殖抑制とマウス生存延長との両方において有意な機能的活性を有することを示す。この示された免疫サイトカイン活性は、Ｋｅｙｔｒｕｄａ＋スーパーアゴニストの二剤治療と比較したとき有効性が等しいものであった。

【0135】

（参考文献）
本願において、種々の参考文献によって、本発明が属する技術の現状が記載されている。これらの参考文献の開示は、本明細書において言及によって本開示に援用される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【配列表】

2023502712000001.app

【国際調査報告】