特表 2023-502794 α－シヌクレインの凝集に関連する疾患の診断、治療および予防のための新規な化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-01-25

(54)【発明の名称】α－シヌクレインの凝集に関連する疾患の診断、治療および予防のための新規な化合物

(51)【国際特許分類】

   C07D 401/04 20060101AFI20230118BHJP

   A61P 39/02 20060101ALI20230118BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20230118BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20230118BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 51/04 20060101ALI20230118BHJP

   C07D 401/14 20060101ALI20230118BHJP

   C07D 403/04 20060101ALI20230118BHJP

   C07D 405/14 20060101ALI20230118BHJP

   C07D 491/056 20060101ALI20230118BHJP

   C07D 405/04 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 31/4439 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 31/4355 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 31/496 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 31/5377 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 31/497 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 31/501 20060101ALI20230118BHJP

   A61K 31/4545 20060101ALI20230118BHJP

【ＦＩ】

C07D401/04 CSP

A61P39/02

A61P25/28

A61P25/16

A61P25/00

A61K51/04 200

C07D401/14

C07D403/04

C07D405/14

C07D491/056

C07D405/04

A61K31/4439

A61K31/506

A61K31/4355

A61K31/496

A61K31/5377

A61K31/497

A61K31/501

A61K31/4545

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022554964

(86)(22)【出願日】2020-11-19

(85)【翻訳文提出日】2022-06-20

(86)【国際出願番号】 EP2020082778

(87)【国際公開番号】W WO2021099518

(87)【国際公開日】2021-05-27

(31)【優先権主張番号】19210073.3

(32)【優先日】2019-11-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522196065

【氏名又は名称】モダグ ゲーエムベーハー

(71)【出願人】

【識別番号】598165611

【氏名又は名称】マックス－プランク－ゲゼルシャフト・ツア・フェルデルング・デア・ヴィッセンシャフテン・エー・ファオ

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100196243

【弁理士】

【氏名又は名称】運 敬太

(72)【発明者】

【氏名】ギーゼ，アルミン

(72)【発明者】

【氏名】シュミット，フェリックス

(72)【発明者】

【氏名】ヴェックベッカー，ダニエル

(72)【発明者】

【氏名】レオノフ，アンドレイ

(72)【発明者】

【氏名】リャザノフ，セルゲイ

(72)【発明者】

【氏名】グリージンガー，クリスティアン

(72)【発明者】

【氏名】ピヒラー，ベルント

(72)【発明者】

【氏名】ヘルファート，クリスティナ

(72)【発明者】

【氏名】マウラー，アンドレアス

(72)【発明者】

【氏名】キューブラー，ラウラ

(72)【発明者】

【氏名】ブス，ザブリナ

【テーマコード（参考）】

4C050

4C063

4C085

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C050AA01

4C050BB07

4C050CC17

4C050EE01

4C050FF10

4C050GG01

4C050HH04

4C063AA01

4C063AA03

4C063BB01

4C063BB06

4C063CC22

4C063CC25

4C063CC28

4C063CC29

4C063CC34

4C063CC41

4C063CC81

4C063DD02

4C063DD10

4C063DD12

4C063DD22

4C063DD29

4C063EE01

4C085KA30

4C085KB56

4C085LL13

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC36

4C086BC38

4C086BC41

4C086BC42

4C086BC48

4C086BC50

4C086BC60

4C086BC73

4C086CB22

4C086GA02

4C086GA07

4C086GA08

4C086GA12

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA02

4C086ZA15

4C086ZC37

(57)【要約】

本発明は、一般式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（ＩＩａ）または（ＩＩｂ）で表される化合物に関する。これらの化合物は、α－シヌクレインをイメージングするのに、およびα－シヌクレインの凝集に関連する疾患を診断するのに好適である。化合物はまた、α－シヌクレインの凝集に関連する疾患を治療および予防するのに有用である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

一般式Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩａもしくはＩＩｂ

【化1】

（式中、Ｘ^１、Ｘ^２およびＸ^３は、ＣＲ^２、ＮおよびＮＲ^１から独立して選択され、但し、Ｘ^１、Ｘ^２およびＸ^３のうちの少なくとも２つは、ＮまたはＮＲ^１であり、
Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８はＣＲ^３およびＮから独立して選択され、但し、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８のうちの少なくとも１つはＮであり、
Ｒ^１は、水素、Ｃ_１～４アルキルおよび－（ＣＨ_２）－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）から独立して選択され、Ｃ_１～４アルキルは、１つまたは複数のハロゲンで任意選択で置換され得、
Ｒ^２は、水素、ハロゲンおよびＣ_１～４アルキルから独立して選択され、Ｃ_１～４アルキルは、１つまたは複数のハロゲンで任意選択で置換され得、
Ｒは水素またはカチオンであり、
Ｒ^３は、水素、ハロゲン、Ｃ_１～４アルキル、ＯＨおよびＣ_１～４アルコキシであり、Ｃ_１～４アルキルおよびＣ_１～４アルコキシは、１つまたは複数のハロゲンで任意選択で置換され得、
Ｒ^４およびＲ^５は、ＨおよびＣ_１～４アルキルから独立して選択され、Ｃ_１～４アルキルは、１つまたは複数のハロゲンで任意選択で置換され得るか、またはＲ^４およびＲ^５は、これらが結合する窒素原子と一緒になって、４～６員の飽和複素環を形成し、これは、Ｒ^４およびＲ^５が結合する窒素原子に加えて、ＯおよびＮから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を任意選択で含有し、前記４～６員の飽和複素環は、１つまたは複数のＲ^６で任意選択で置換され得、
Ｒ^６は、ハロゲン、Ｃ_１～４アルキル、ＯＨおよびＣ_１～４アルコキシから独立して選択され、Ｃ_１～４アルキルおよびＣ_１～４アルコキシは、１つまたは複数のハロゲンで任意選択で置換され得、
Ｈａｌはハロゲンである）
で表される化合物、またはそのプロドラッグ、溶媒和物もしくは塩。

【請求項2】

【化2】

が、

【化3】

であるか、または

【化4】

が、

【化5】

であり、
ここで、Ｒ^１およびＲ^２が、請求項１に定義された通りである、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

【化6】

が、

【化7】

であるか、または

【化8】

が、

【化9】

であり、
ここで、Ｒ^１およびＲ^２が、請求項１に定義された通りである、請求項２に記載の化合物。

【請求項4】

Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８のうちの１つ、２つまたは３つがＮである、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項5】

式ＩａもしくはＩｂ中、Ｙ^１がＮであり、Ｙ^３、Ｙ^４およびＹ^６のうちの少なくとも１つがＮであるか、または
式ＩＩａもしくはＩＩｂ中、Ｙ^１がＮであり、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８のうちの少なくとも１つがＮである、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項6】

Ｙ^１がＮであり、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８がＣＲ^３であり、好ましくはＹ^１がＮであり、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８がＣＨである、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項7】

Ｒ^２がＨである、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項8】

Ｒ^４およびＲ^５のうちの少なくとも１つが、Ｃ_１～４アルキルであり、Ｃ_１～４アルキルが、１つまたは複数のハロゲンで任意選択で置換され得る、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項9】

Ｒ^４およびＲ^５が、これらが結合する窒素原子と一緒になって、４～６員の飽和複素環を形成し、これは、Ｒ^４およびＲ^５が結合する窒素原子に加えて、ＯおよびＮから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を任意選択で含有し、前記４～６員の飽和複素環は、１つまたは複数のＲ^６で任意選択で置換され得る、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項10】

４～６員の飽和複素環が、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニルおよびピペラジニルから選択され、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニルおよびピペラジニルが、１つまたは複数のＲ^６で任意選択で置換され得る、請求項９に記載の化合物。

【請求項11】

化合物が検出可能に標識されており、好ましくは化合物が^１８Ｆ、^１１Ｃ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^１３１Ｉ、^７７Ｂｒおよび^７６Ｂｒにより検出可能に標識されており、より好ましくは化合物が^１８Ｆまたは^１１Ｃにより検出可能に標識されている、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物、またはそのプロドラッグ、溶媒和物もしくは塩。

【請求項12】

請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物、またはその溶媒和物もしくは塩、および任意選択で薬学的に許容される担体を含む診断組成物。

【請求項13】

請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物、またはそのプロドラッグ、溶媒和物もしくは塩、および任意選択で薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。

【請求項14】

α－シヌクレイン凝集と関係がある疾患の診断における使用のための、請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物、またはそのプロドラッグ、溶媒和物もしくは塩。

【請求項15】

α－シヌクレイン凝集と関係がある疾患の治療における使用のための、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物、またはそのプロドラッグ、溶媒和物もしくは塩。

【請求項16】

α－シヌクレイン凝集と関係がある疾患が、パーキンソン病、レビー小体型認知症および多系統萎縮症から選択される、請求項１４または１５に記載の使用のための化合物。

【請求項17】

α－シヌクレイン凝集をインビトロまたはエクスビボで阻害するための、請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物、またはそのプロドラッグ、溶媒和物もしくは塩の使用。

【請求項18】

α－シヌクレイン凝集のイメージングにおける使用のための、請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物、またはその溶媒和物もしくは塩。

【請求項19】

凝集したα－シヌクレインの沈着物をイメージングする方法であって、
（ｉ）検出可能な量の請求項１１に記載の検出可能に標識された化合物を対象に導入するステップと、
（ｉｉ）前記化合物が前記凝集したα－シヌクレインと会合するのに十分な時間をおくステップと、
（ｉｉｉ）前記凝集したα－シヌクレインと会合した前記化合物を検出するステップと、
を含む、方法。

【請求項20】

請求項１１に記載の検出可能に標識された化合物、またはその溶媒和物もしくは塩を調製するためのキットであって、請求項１１に記載の化合物、またはその溶媒和物もしくは塩を反応時に形成する少なくとも２つの前駆体化合物を含む、キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、α－シヌクレインをイメージングするのに、およびα－シヌクレインの凝集に関連する疾患を診断するのに好適な新規な化合物について言及する。化合物はまた、α－シヌクレインの凝集に関連する疾患を治療および予防するのに有用である。

【背景技術】

【0002】

多数の神経性および神経変性疾患が公知であり、これらの多くは現在治癒不可能であり、かつ診断が難しい。一般的な神経変性疾患はすべて、脳内の特定のタンパク質のミスフォールディング、凝集および沈着を特徴とする。これらの疾患としては、医学的状態、例えばパーキンソン病（ＰＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、アルツハイマー病、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、前頭側頭型認知症、クロイツフェルト－ヤコブ病および他の多くのものが挙げられる。

【0003】

シヌクレイン病は、凝集およびミスフォールドしたα－シヌクレインタンパク質（αＳＹＮ）の蓄積および沈着を特徴とする疾患の一群である。シヌクレイン病としては、パーキンソン病（ＰＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）および多系統萎縮症（ＭＳＡ）が挙げられる。これらの疾患は、中枢神経系および末梢神経系における凝集およびミスフォールドしたα－シヌクレインタンパク質の蓄積および沈着の分布の点で異なる。神経病理学的に、これらは、凝集およびミスフォールドしたα－シヌクレインタンパク質の疾患特異的蓄積および沈着により、他の神経変性疾患と区別され得る一方で、他の神経変性疾患は、凝集およびミスフォールドした他のタンパク質の蓄積および沈着を特徴とする。例えばアルツハイマー病は、凝集およびミスフォールドしたＡベータ（Ａβ）およびタウタンパク質を特徴とし、進行性核上性麻痺および大脳皮質基底核変性症は、凝集およびミスフォールドしたタウタンパク質を特徴とし、同様に前頭側頭型認知症の一部の症例は、凝集およびミスフォールドしたタウタンパク質を特徴とする。クロイツフェルト－ヤコブ病は、凝集およびミスフォールドしたプリオンタンパク質を特徴とする。

【0004】

凝集およびミスフォールドしたタンパク質の疾患特異的蓄積および沈着は、これらの凝集およびミスフォールドしたタンパク質沈着物に結合する化合物による治療法のためと診断のための両方の標的を提供する。

【0005】

凝集およびミスフォールドしたタンパク質の疾患特異的蓄積および沈着の診断的検出のための１つの選択肢は、凝集したタンパク質の前記沈着物に特異的および選択的高親和性結合を示す検出可能に標識された化合物の使用である。これは、例えば好適な放射性同位元素で標識されている化合物を用いて、および検出のためのＰＥＴイメージングを用いて行われ得る。化合物は、ＡβおよびタウのＰＥＴイメージングのための臨床使用に利用できるが、シヌクレイン病におけるα－シヌクレイン沈着物の診断用ＰＥＴイメージングに使用できる化合物はこれまでに発明されていない（Ｋｏｔｚｂａｕｅｒ，Ｐ．Ｔ．、Ｔｕ，Ｚ．およびＭａｃｈ，Ｒ．Ｈ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＰＥＴ ｒａｄｉｏｔｒａｃｅｒｓ ｆｏｒ ｉｍａｇｉｎｇ ａｌｐｈａ ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ ｉｎ Ｌｅｗｙ ｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｌｅｗｙ ｎｅｕｒｉｔｅｓ． Ｃｌｉｎ． Ｔｒａｎｓｌ． Ｉｍａｇｉｎｇ、２０１７．５：ｐ．３～１４）。これまでに他のグループにより開発および試験された化合物は、凝集およびミスフォールドした他のタンパク質、とりわけＡβおよびタウと比較して、凝集およびミスフォールドしたα－シヌクレインに対する高い結合親和性、結合親和性における十分な選択性を含む特性の好適な組合せを欠いていた（凝集およびミスフォールドしたタンパク質の疾患特異的蓄積および沈着を特徴とする様々な疾患の鑑別診断に、ならびに同時に１種または複数種の疾患、すなわちレビー小体型認知症とアルツハイマー病を有する患者においても凝集およびミスフォールドしたα－シヌクレインの存在を正確に検出する能力に必要とされる）。さらに、必要とされる特性としては、血液脳関門を通過し、細胞内沈着物に結合する能力、脳組織への低い非特異的結合、および脳からの非結合化合物の急速な洗い流しが挙げられる。

【0006】

ＷＯ２００９／１４６３４３は、アルツハイマー病の診断を可能にするために、脳内のアミロイド沈着物をインビボで研究するための陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングのトレーサーである、特定のピラゾール、１，２，４－オキサジアゾールおよび１，３，４－オキサジアゾールについて言及する。アルツハイマー病は、Ａβおよびタウタンパク質の凝集を特徴とし、言及されたＰＥＴトレーサーは、これらのタンパク質の凝集体に結合する。対照的に、本発明は、α－シヌクレインの凝集を特徴とする疾患を標的とする。凝集したα－シヌクレインの選択的なイメージング診断では、α－シヌクレインへの選択的結合、ならびに凝集したＡβおよびタウへの結合がないまたは低いことが必要とされる。

【0007】

ＷＯ００／６６５７８は、ＮＰＹ媒介性疾患／状態、例えば肥満の治療に有用である、特定のＮＰＹアンタゴニストを記載する。ＷＯ００／６６５７８の化合物のＮＰＹ５サブタイプに対する「直接的」効果に加えて、体重減少から恩恵を受ける疾患／状態、例えばインシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、高血圧、高脂質症、心血管疾患、胆石、特定の癌、睡眠時無呼吸症候群などがあることを言及する。

【0008】

ＷＯ２０１０／０００３７２は、タンパク質凝集と関係がある疾患および／または神経変性疾患の治療または予防に有用である特定の化合物に関する。ＷＯ２０１０／０００３７２の化合物は、パーキンソン病を含む、タンパク質凝集と関係がある疾患を治療するのに特に好適である。該化合物は、Ａβおよびタウを含むいくつかの異なる凝集したタンパク質に結合することが示された。したがって、これらは、タンパク質凝集と関係がある障害を診断するのに使用できるが、α－シヌクレイン凝集と関係がある障害と、アミロイドタンパク質凝集と関係がある他の障害、例えばタウオパチーまたはアルツハイマー病とを確実に区別することができない。しかし、これは、タンパク質凝集と関係がある障害の臨床症状が酷似しているため重要であり、例えば様々な障害を区別して、それに応じて治療を適合させることは非常に望ましい。さらに、ＷＯ２０１０／０００３７２に記載された分子は、脂質および疎水性タンパク質への高い非特異的結合を有し、これは脳組織および他の組織における強力な非特異的結合につながる。したがって、該分子は、ＰＥＴトレーサーに必要とされる、α－シヌクレインに対する必要な特異的結合および信号対雑音比に達しない。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

前述を考慮して、診断用としての特性が改善された化合物が必要であった。特に、α－シヌクレインへの結合の特異性が改善される必要がある。脳組織および他の組織における非特異的結合は低減される必要があり、結合親和性は増加される必要があり、生理学的半減期は減少される必要がある。

【0010】

米国特許出願公開第２００５／００７５３７５号は、Ｃ型肝炎ウイルスを治療するための特定の複素環化合物を開示する。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】［３Ｈ］－化合物１を用いたレビー小体型認知症を患う患者のヒト脳組織を用いたオートラジオグラフィーを示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0012】

本発明は、一般式Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩａまたはＩＩｂ

【化1】

で表される化合物に関する。

【0013】

Ｘ^１、Ｘ^２およびＸ^３は、ＣＲ^２、ＮおよびＮＲ^１から独立して選択され、但し、Ｘ^１、Ｘ^２およびＸ^３のうちの少なくとも２つは、ＮまたはＮＲ^１である。ＮおよびＮＲ^１は、原子価が許す場合に存在し、すなわち、Ｎは、＝Ｘ^１－、＝Ｘ^２－または＝Ｘ^３－位にのみ存在でき、ＮＲ^１は、－Ｘ^１－または－Ｘ^２－位にのみ存在できることが理解される。

【0014】

【化2】

の例としては、

【化3】

が挙げられる。

【0015】

【化4】

の例としては、

【化5】

が挙げられる。

【0016】

好ましい実施形態において、

【化6】

は

【化7】

（より好ましくは、

【化8】

）であるか、または

【化9】

は

【化10】

（より好ましくは、

【化11】

）である。

【0017】

Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８は、ＣＲ^３およびＮから独立して選択され、但し、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８のうちの少なくとも１つはＮである。

【0018】

好ましい実施形態において、式ＩａまたはＩｂ中、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５およびＹ^６は、ＣＲ^３およびＮから独立して選択され、但し、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５およびＹ^６のうちの少なくとも１つは１つはＮである。より好ましい実施形態において、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５およびＹ^６のうちの１つ、２つまたは３つはＮであり、さらにより好ましくはＹ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５およびＹ^６のうちの１つまたは２つはＮであり、さらにより好ましくはＹ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５およびＹ^６のうちの１つはＮである。好ましい実施形態において、Ｙ^１はＮである。

【0019】

好ましい実施形態において、式ＩａまたはＩｂ中、Ｙ^１、Ｙ^３、Ｙ^４およびＹ^６のうちの少なくとも１つはＮである。さらに好ましい実施形態において、式ＩａまたはＩｂ中、Ｙ^１はＮであり、Ｙ^３、Ｙ^４およびＹ^６のうちの少なくとも１つはＮである。

【0020】

好ましい実施形態において、式ＩａまたはＩｂ中、Ｙ^１、Ｙ^３、Ｙ^４およびＹ^６のうちの少なくとも１つはＮであり、他のＹ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５およびＹ^６はＣＲ^３（例えばＣＨ）である。さらに好ましい実施形態において、式ＩａまたはＩｂ中、Ｙ^１はＮであり、Ｙ^３、Ｙ^４およびＹ^６のうちの少なくとも１つはＮであり、他のＹ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５およびＹ^６はＣＲ^３（例えばＣＨ）である。

【0021】

好ましい実施形態において、式ＩａまたはＩｂ中、Ｙ^１はＮであり、他のＹ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５およびＹ^６はＣＲ^３であり、より好ましくはＹ^１はＮであり、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５およびＹ^６はＣＨである。

【0022】

好ましい実施形態において、式ＩＩａまたはＩＩｂ中、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８は、ＣＲ^３およびＮから独立して選択され、但し、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８のうちの少なくとも１つはＮである。より好ましい実施形態において、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８のうちの１つ、２つまたは３つはＮであり、さらにより好ましくはＹ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８のうちの１つまたは２つはＮであり、さらにより好ましくはＹ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８のうちの１つはＮである。好ましい実施形態において、Ｙ^１はＮである。

【0023】

好ましい実施形態において、式ＩＩａまたはＩＩｂ中、Ｙ^１、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８のうちの少なくとも１つはＮである。好ましい実施形態において、式ＩＩａまたはＩＩｂ中、Ｙ^１、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５およびＹ^７のうちの少なくとも１つはＮである。さらに好ましい実施形態において、式ＩＩａまたはＩＩｂ中、Ｙ^１はＮであり、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８のうちの少なくとも１つはＮである。

【0024】

好ましい実施形態において、式ＩＩａまたはＩＩｂ中、Ｙ^１、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８のうちの少なくとも１つはＮであり、他のＹ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８はＣＲ^３（例えばＣＨ）である。好ましい実施形態において、式ＩＩａまたはＩＩｂ中、Ｙ^１、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５およびＹ^７のうちの少なくとも１つはＮであり、他のＹ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８はＣＲ^３（例えばＣＨ）である。さらに好ましい実施形態において、式ＩＩａまたはＩＩｂ中、Ｙ^１はＮであり、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８のうちの少なくとも１つはＮであり、他のＹ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８はＣＲ^３（例えばＣＨ）である。好ましい実施形態において、式ＩＩａまたはＩＩｂ中、Ｙ^１はＮであり、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５およびＹ^７のうちの少なくとも１つはＮであり、他のＹ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８はＣＲ^３（例えばＣＨ）である。

【0025】

好ましい実施形態において、式ＩＩａまたはＩＩｂ中、Ｙ^１はＮであり、他のＹ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８はＣＲ^３であり、より好ましくは、Ｙ^１はＮであり、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８はＣＨである。

【0026】

Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８としての１つまたは複数の窒素原子の導入は、α－シヌクレインへの結合の選択性を強力に高め、したがってα－シヌクレイン凝集と関係がある対応する障害、例えばパーキンソン病、レビー小体型認知症および多系統萎縮症が、他のタンパク質の凝集による障害、例えば主にＡβおよびタウが凝集するアルツハイマー病と区別できることが、驚くべきことに見出された。さらに、信号対雑音比が改善される。

【0027】

Ｒ^１は、水素、Ｃ_１～４アルキルおよび－（ＣＨ_２）－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）から選択され、Ｃ_１～４アルキルは、１つまたは複数のハロゲンで任意選択で置換され得る。好ましい実施形態において、Ｒ^１は、水素、メチルまたは２－フルオロエチルである。存在する場合、－（ＣＨ_２）－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）は、Ｘ^１またはＸ^２に結合することが好ましい。

【0028】

Ｒは水素またはカチオンである。カチオンは、薬学的に許容される任意のカチオンであってよい。好ましくは、カチオンは一価カチオンである。例としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、アンモニウム、ならびにプロトン化形態のエタノールアミン、コリン、リジン、メグルミン、ピペラジンおよびトロメタミンがある。好ましくは、カチオンはナトリウムである。本発明の化合物において、Ｒはいずれも水素であり得るか、Ｒはいずれもカチオン（同じまたは異なるカチオン）であり得るか、または一方のＲが水素であり得、他方がカチオンであり得る。好ましくは、Ｒはいずれもナトリウムである。二価カチオン、例えばＣａ^２＋、Ｍｇ^２＋およびＺｎ^２＋、または三価カチオン、例えばＡｌ^３＋は、得られる塩の水溶性が低いため、可能であるが、好ましくはない。Ｒ^１が－（ＣＨ_２）－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ）である化合物およびその合成は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／１０２８９３に記載される。

【0029】

Ｒ^２は、水素、ハロゲンおよびＣ_１～４アルキルから独立して選択され、Ｃ_１～４アルキルは、１つまたは複数のハロゲンで任意選択で置換され得る。好ましい実施形態において、Ｒ^２は水素である。

【0030】

Ｒ^３は、水素、ハロゲン、Ｃ_１～４アルキル、ＯＨおよびＣ_１～４アルコキシであり、Ｃ_１～４アルキルおよびＣ_１～４アルコキシは、１つまたは複数のハロゲンで任意選択で置換され得る。好ましい実施形態において、Ｒ^３は水素またはフッ素である。さらにより好ましくは、Ｒ^３は水素である。

【0031】

Ｒ^４およびＲ^５は、ＨおよびＣ_１～４アルキルから独立して選択され、Ｃ_１～４アルキルは、１つもしくは複数のハロゲンで任意選択で置換され得るか、またはＲ^４およびＲ^５は、これらが結合する窒素原子と一緒になって、４～６員の飽和複素環を形成し、これは、Ｒ^４およびＲ^５が結合する窒素原子に加えて、ＯおよびＮから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を任意選択で含有し、４～６員の飽和複素環は、１つまたは複数のＲ^６で任意選択で置換され得る。

【0032】

一実施形態において、Ｒ^４およびＲ^５は、ＨおよびＣ_１～４アルキルから独立して選択され、Ｃ_１～４アルキルは、１つまたは複数のハロゲンで任意選択で置換され得る。好ましくは、Ｒ^４およびＲ^５は、ＨおよびＣ_１～４アルキルから独立して選択される。好ましい実施形態において、Ｒ^４およびＲ^５のうちの少なくとも１つは、Ｃ_１～４アルキルであり、Ｃ_１～４アルキルは、１つまたは複数のハロゲンで任意選択で置換され得る。より好ましい実施形態において、Ｒ^４は水素であり、Ｒ^５はＣ_１～４アルキルであり、Ｃ_１～４アルキルは、１つまたは複数のハロゲンで任意選択で置換され得る。より好ましい実施形態において、Ｒ^４およびＲ^５のうちの少なくとも１つは、Ｃ_１～４アルキルである。より好ましい実施形態において、Ｒ^４は水素であり、Ｒ^５はＣ_１～４アルキルである。

【0033】

さらなる実施形態において、Ｒ^４およびＲ^５は、これらが結合する窒素原子と一緒になって、４～６員の飽和複素環を形成し、これは、Ｒ^４およびＲ^５が結合する窒素原子に加えて、ＯおよびＮから選択される１つまたは複数の（例えば１つの）ヘテロ原子を任意選択で含有し、４～６員の飽和複素環は、１つまたは複数のＲ^６で任意選択で置換され得る。好ましい実施形態において、４～６員の飽和複素環は、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニルおよびピペラジニルから選択され、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニルおよびピペラジニルは、１つまたは複数のＲ^６で任意選択で置換され得る。より好ましくは、４～６員の飽和複素環は、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニルおよびピペラジニルから選択され、ピペラジニルのＮ原子は、Ｒ^６で任意選択で置換され得る。

【0034】

Ｒ^６は、ハロゲン、Ｃ_１～４アルキル、ＯＨおよびＣ_１～４アルコキシから独立して選択され、Ｃ_１～４アルキルおよびＣ_１～４アルコキシは、１つまたは複数のハロゲンで任意選択で置換され得、好ましくは、Ｒ^６はＣ_１～４アルキルまたはフッ素である。

【0035】

Ｈａｌはハロゲン、例えばＢｒ、ＣｌおよびＦであり、好ましくはＨａｌはＢｒまたはＦである。

【0036】

ｍは、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３およびＹ^４を含有する環の水素以外のＲ^３基の数である。ｍは、０～ｍ_最大の整数であり、ｍ_最大は、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３およびＹ^４を含有する環の炭素原子の数である。好ましくは、ｍは０である。

【0037】

ｎは、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８を含有する環の水素以外のＲ^３基の数である（式ＩＩａおよびＩＩｂ）。ｎは、０～ｎ_最大の整数であり、ｎ_ｍａｘは、Ｙ^５、Ｙ^６、Ｙ^７およびＹ^８を含有する環の炭素原子の数である。好ましくは、ｎは０である。

【0038】

ｐは、Ｙ^５およびＹ^６を含有する環中の水素以外のＲ^３基の数である（式ＩａおよびＩｂ）。ｐは、０～ｐ_最大の整数であり、ｐ_最大は、Ｙ^５およびＹ^６を含有する環の炭素原子の数である。好ましくは、ｐは０である。

【0039】

本発明の化合物はまた、そのプロドラッグ、溶媒和物または塩の形態で存在してもよい。

【0040】

本発明の化合物は塩を形成し、これも本発明の範囲内である。別段の指示がない限り、本明細書において、本発明の化合物への言及は、その塩への言及を含むことが理解される。薬学的に許容される（すなわち、非毒性の生理学的に許容される）塩が好ましいが、他の塩も、例えば調製中に用いられ得る単離または精製のステップでまたはインビトロ方法で有用である。本発明の化合物の塩は、例えば化合物をある量、例えば等量の酸と、媒体、例えば塩が沈殿する媒体中でまたは水性媒体中で反応させ、次いで凍結乾燥させることにより形成され得る。

【0041】

塩基部分を含有する化合物は、様々な有機および無機酸との塩を形成し得る。例示的な酸付加塩としては、酢酸塩（例えば酢酸またはトリハロ酢酸、例えばトリフルオロ酢酸により形成されるもの）、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩（例えば２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩（例えば２－ナフタレンスルホン酸塩）、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩（例えば３－フェニルプロピオン酸塩）、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩（例えば硫酸により形成されるもの）、スルホン酸塩（例えば本明細書に言及されるもの）、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、例えばトシル酸塩、ウンデカン酸塩などが挙げられる。

【0042】

本発明の化合物のプロドラッグおよび溶媒和物も本明細書において企図される。本明細書で使用する用語「プロドラッグ」は、対象に投与すると、代謝または化学的過程による化学変換を受けて、本発明の化合物またはその塩および／もしくは溶媒和物を生成する化合物を意味する。

【0043】

本発明の化合物の溶媒和物としては、例えば水和物が挙げられる。

【0044】

鏡像異性形態およびジアステレオ異性形態を含む、本発明の化合物のすべての立体異性体（例えば様々な置換基上の不斉炭素により存在し得るもの）は、本発明の範囲内で企図される。本発明の化合物の個々の立体異性体は、例えば他の異性体（例えば特定の活性を有する純粋または実質的に純粋な光学異性体）を実質的に含まない場合も、あるいは例えばラセミ体として、またはすべての他のもしくは選択された他の立体異性体と混合される場合もある。本発明の化合物のキラル中心は、ＩＵＰＡＣ １９７４年勧告により定義されるＳまたはＲ立体配置を有し得る。

【0045】

ラセミ形態は、物理的方法、例えば分別結晶化、ジアステレオ異性誘導体の分離もしくは結晶化、またはキラルカラムクロマトグラフィーによる分離によって分割され得る。個々の光学異性体は、光学的に活性な酸との塩の形成、次いで結晶化を含むが、これに限定されない任意の好適な方法により、ラセミ体から得られ得る。

【0046】

本発明の化合物のすべての立体配置異性体は、混合物または純粋もしくは実質的に純粋な形態のいずれかで企図される。本発明の化合物の定義は、シス（Ｚ）とトランス（Ｅ）の両方のアルケン異性体、ならびに環状炭化水素または複素環のシスおよびトランス異性体を包含する。

【0047】

特許請求される化合物の重水素化バージョンも提供され得る。重水素化が存在する位置は、特に限定されないが、例えばＲ^４およびＲ^５のＣ_１～４アルキルにあり得る。

【0048】

本明細書を通じて、基およびその置換基は、安定な部分および化合物を提供するように選択され得る。

【0049】

本発明の化合物は、任意選択で薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、診断または医薬組成物の形態で提供され得る。

【0050】

本発明に従って、用語「診断組成物」は、α－シヌクレイン凝集と関係がある疾患の根底にある凝集したα－シヌクレインの存在の決定のための組成物に関する。

【0051】

好ましい実施形態において、本発明の化合物は、検出可能であるか、または検出可能に標識されている。本発明に従って、化合物の存在が、従来の技術、例えばＮＭＲ分光法、単一光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、光検出、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、電子顕微鏡法、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、分光法、クロマトグラフィー、ＥＬＩＳＡアッセイ、放射性放出の検出により、好ましくはＰＥＴ、シンチレーションカウンティングまたはガンマカウンティングにより、より好ましくはＰＥＴにより監視できる場合、化合物は検出可能であるか、または検出可能に標識されていることが理解される。

【0052】

本発明の化合物が、凝集したα－シヌクレインをイメージングするためのプローブとして用いられる場合、これらは標識されている必要がある。標識の特定の性質は、イメージングに用いられる方法に依存する。典型的には、陽電子を放出し（ＰＥＴ）、短い半減期を有する放射性標識、例えば^１８Ｆ、^１１Ｃ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^１３１Ｉ、^７７Ｂｒおよび^７６Ｂｒ、特に^１８Ｆおよび^１１Ｃが有用である。その短い半減期により、本発明の標識化合物は、試験に用いられる直前に調製される必要がある。したがって、本発明の診断組成物はまた、反応させて本発明の所望の化合物を形成する、本発明の化合物の少なくとも２つの前駆体からなるキットの形態で提供されてもよい。

【0053】

当業者は、検出可能な標識を本発明の化合物に結合させることができる方法を考案することができるであろう。以下のスキームは、例示的な例として利用され得る。

【0054】

^１８Ｆによる標識
２－［^１８Ｆ］フルオロエチルトシレートは、化合物２３から出発する化合物２１および化合物２２の調製のためのＷＯ２０１０／０００３７２、３２頁、スキームＡに記載されるように、窒素、酸素および硫黄求核剤を含有する化合物のフルオロエチル化を介して^１８Ｆを取り込むのに有用な前駆体である。化合物ＡおよびＢは、同じ方式で調製され得る。別の方法としては、ＣのＤへの変換（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１３、５６、４５６８～４５７９、スキーム２を参照のこと）またはスキーム１における化合物２４の化合物１２への変換について示されるように、好適な脱離基の直接的な求核置換が挙げられる。

【化12】

【0055】

^１１Ｃによる標識
^１１Ｃにより標識された本発明の化合物は、化合物２３から出発する化合物２７および化合物２８の調製のためのＷＯ２０１０／０００３７２、３２頁、スキームＢに記載されるように、［^１１Ｃ］Ｍｅｌによる好適な前駆体の直接求核アルキル化により調製され得る。本発明の化合物１は、化合物２から出発して類似的に合成され得る。同じ方式で、化合物１８および化合物１９は、スキーム２に示されるように化合物９から出発して合成され得る。代替的には、比活性の損失なしに温和な条件下で［^１１Ｃ］ヨウ化メチルを［^１１Ｃ］ホルムアルデヒドに変換することによる、ジメチルホルムアミド中での溶液としての［^１１Ｃ］ホルムアルデヒドの生成の簡単かつ利用可能な方法（Ｊ．Ｍ．Ｈｏｏｋｅｒら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００８、４７、５９８９～５９９２）が、還元的アミノ化を介した化合物２の化合物１への変換に用いられてもよい。

【化13】

【0056】

本発明は、凝集したα－シヌクレインの沈着物をイメージングする方法であって、
（ｉ）本発明の検出可能に標識された化合物を含む検出可能な量の組成物を対象に導入するステップと、
（ｉｉ）化合物が凝集したα－シヌクレインと会合するのに十分な時間をおくステップと、
（ｉｉｉ）凝集したα－シヌクレインと会合した化合物を検出するステップと、
を含む、方法を提供する。

【0057】

検出可能に標識された化合物を含む組成物は、下記に記載される任意の投与経路、例えば経口または非経口などにより対象に導入され得る。標識化合物が患者に導入され得、化合物が凝集したα－シヌクレインと会合するようになるのに十分な期間の後、標識化合物は、患者の内部で非侵襲的に検出される。代替的には、標識化合物が患者に導入され得、化合物が凝集したα－シヌクレインと会合するようになるのに十分な時間がおかれ、次に患者の組織試料が採取され、標識化合物は、患者から離れた組織内で検出される。組織試料はまた、標識化合物を組織試料に導入する前に患者から除去されてもよい。化合物が凝集したα－シヌクレインに結合するようになるのに十分な時間をおいた後、化合物は検出され得る。

【0058】

凝集したα－シヌクレインのイメージングはまた、凝集したα－シヌクレインの量が決定され得るように定量的に実行されてもよい。

【0059】

本発明はさらに、α－シヌクレインの凝集と関係がある疾患の治療または予防における使用のための、本発明の化合物、およびそのプロドラッグ、溶媒和物または塩に関する。

【0060】

さらなる実施形態は、α－シヌクレインの凝集と関係がある疾患を治療または予防するための医薬組成物の調製のための本発明の化合物の使用、およびα－シヌクレインの凝集と関係がある疾患を治療または予防する方法であって、治療有効量の本発明の化合物をそれを必要とする患者に投与するステップを含む、方法である。これは、下記に記載される「医薬組成物」としての化合物の適用を含む。

【0061】

本発明に従って用語「凝集」は、α－シヌクレインのオリゴマまたは多量体複合体の形成を指し、これは炭水化物、核酸、脂質および／または金属イオンのような追加の生体分子の複合体への組込みを伴い得る。

【0062】

本明細書で使用する用語「α－シヌクレインの凝集と関係がある疾患」は、凝集したα－シヌクレインの存在を特徴とする疾患を指す。このような凝集したα－シヌクレインは、特定の組織に、より好ましくは神経組織または脳組織に沈着物を形成し得る。凝集の程度は、特定の疾患に依存する。

【0063】

本発明に従って、用語「医薬組成物」は、患者、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒト患者への投与のための組成物に関する。本発明の医薬組成物は、上に列挙した化合物、ならびに本発明の化合物の特性を変化させ、それにより例えばその機能を安定化、調節および／または活性化することができる任意選択のさらなる分子を含む。組成物は、固体、液体または気体の形態であってよく、とりわけ粉末、錠剤、溶液またはエアロゾルの形態であってよい。本発明の医薬組成物は、任意選択でおよびさらに、薬学的に許容される担体または賦形剤を含み得る。好適な医薬担体および賦形剤の例は当技術分野で周知であり、これらとしては、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、エマルジョン、例えば油／水エマルジョン、様々な種類の湿潤剤、滅菌溶液、ＤＭＳＯを含む有機溶媒などが挙げられる。このような担体を含む組成物は、周知の従来の方法により製剤化され得る。

【0064】

医薬組成物は、個々の患者の臨床状態、医薬組成物の送達部位、投与方法、投与スケジューリングおよび実務者に公知の他の要因を考慮して、良好な医療行為と一致したやり方で製剤化および服用される。したがって、本明細書の目的のための医薬組成物の「有効量」は、このような考慮により決定される。当業者は、個人に投与される医薬組成物の有効量が、とりわけ化合物の性質に依存することを公知である。

【0065】

本発明の医薬組成物は、経口、直腸、非経口、槽内、膣内、腹腔内、局所（粉末、軟膏、滴剤または経皮パッチによるような）、口腔内または経口もしくは経鼻スプレーとして投与され得る。好ましくは、これらは、診断のためのＰＥＴトレーサーとして用いられる場合は静脈内、疾患を治療または予防するために用いられる場合は経口投与される。

【0066】

「薬学的に許容される担体」は、非毒性の固体、半固体もしくは液体の充填剤、希釈剤、カプセル化物質、または任意の種類の製剤補助剤を意味する。

【0067】

本明細書で使用する用語「非経口」は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および関節内への注射および注入を含む、投与様式を指す。

【0068】

治療目的で、医薬組成物はまた、徐放系により好適に投与されてもよい。徐放性組成物の好適な例としては、成形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態の半透過性ポリマーマトリックスが挙げられる。徐放性マトリックスとしては、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ５８４８１）、Ｌ－グルタミン酸およびγ－エチル－Ｌ－グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ，Ｕ．ら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７～５５６（１９８３））、ポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリレート）（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７～２７７（１９８１）およびＲ．Ｌａｎｇｅｒ、Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８～１０５（１９８２））、エチレンビニルアセテート（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら、同文献）またはポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３９８８）が挙げられる。徐放性医薬組成物はまた、リポソームに封入された化合物を含んでいてもよい。医薬組成物を含有するリポソームは、それ自体公知の方法により調製される：ＤＥ３２１８１２１；Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８２：３６８８～３６９２（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７７：４０３０～４０３４（１９８０）；ＥＰ５２３２２；ＥＰ３６６７６；ＥＰ８８０４６；ＥＰ１４３９４９；ＥＰ１４２６４１；特開８３－１１８００８；米国特許第４，４８５，０４５号および第４，５４４，５４５号；ならびにＥＰ１０２３２４。通常、リポソームは、小さな（約２００～８００オングストローム）ユニラメラ型であり、脂質含有量は約３０ｍｏｌ％コレステロールを超え、選択された割合は、最適な治療法のために調整される。

【0069】

非経口投与のために、医薬組成物は、一般に、これを所望の程度の純度で、単位投与量の注射可能な形態（溶液、懸濁液またはエマルジョン）で、薬学的に許容される担体、すなわち、使用した投与量および濃度でレシピエントに非毒性であり、製剤の他の成分と適合するものと混合することにより製剤化される。

【0070】

一般に、製剤は、医薬組成物の成分を、液体担体もしくは微粉化した固体担体またはその両方と均一且つ密接に接触させることにより調製される。次に、必要な場合、生成物は、所望の製剤に成形される。好ましくは、担体は非経口担体、より好ましくは、レシピエントの血液と等張性である溶液である。このような担体ビヒクルの例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液およびデキストロース溶液が挙げられる。非水性ビヒクル、例えば固定油およびオレイン酸エチル、ならびにリポソームも、本明細書において有用である。担体は、好適には、微量の添加剤、例えば等張性および化学的安定性を高める物質を含有する。このような物質は、使用した投与量および濃度でレシピエントに非毒性であり、これらとしては、緩衝液、例えばリン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、酢酸および他の有機酸またはその塩；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸；低分子量（約１０残基未満の）（ポリ）ペプチド、例えばポリアルギニンまたはトリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸またはアルギニン；セルロースもしくはその誘導体、グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む、単糖、二糖および他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコール、例えばマンニトールまたはソルビトール；対イオン、例えばナトリウム；ならびに／あるいは非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート、ポロキサマーまたはＰＥＧが挙げられる。

【0071】

治療的投与に用いられる医薬組成物の成分は、滅菌でなければならない。滅菌性は、滅菌濾過膜（例えば０．２μｍの膜）を通す濾過により容易に達成される。医薬組成物の治療成分は、一般に、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静注用バッグまたはバイアル内に入れられる。

【0072】

医薬組成物の成分は、通常、単位または複数用量容器、例えば密封アンプルまたはバイアルに、水溶液としてまたは再構成のための凍結乾燥製剤として貯蔵される。凍結乾燥製剤の例として、１０ｍｌのバイアルに、５ｍｌの滅菌濾過した１％（ｗ／ｖ）水溶液が充填され、得られた混合物が凍結乾燥される。輸液は、注射用静菌水を用いて凍結乾燥した化合物を再構成することにより調製される。

【0073】

本発明はさらに、α－シヌクレイン凝集と関係がある疾患を治療または予防する方法であって、治療有効量の本発明の化合物をそれを必要とする患者に投与するステップを含む、方法に関する。

【0074】

本明細書で使用する用語「治療有効量」は、所望の生物学的応答を誘発するのに十分な量を指す。本発明において、所望の生物学的応答は、α－シヌクレイン凝集の阻害、および／または組織に存在する凝集したα－シヌクレインの量の減少である。

【0075】

本発明はまた、α－シヌクレイン凝集をインビトロまたはエクスビボで阻害するための上で定義した化合物の使用に関する。

【0076】

α－シヌクレイン凝集と関係がある疾患は特に限定されず、典型的にはパーキンソン病、レビー小体型認知症および多系統萎縮症から選択される。

【0077】

以下の実施例は、本発明を例示することを意図するものである。しかし、これらは、限定として解釈されるべきではない。

【実施例】

【0078】

実施例１：合成および試験
化学合成手順
以下の方法は、本発明の化合物の調製および例示的な実施例に関する詳細を提示する。本発明の化合物は、公知または市販の出発物質および試薬から有機合成の技術分野の当業者により調製され得る。

【0079】

すべての出発物質および溶媒和物は商用等級であり、別段明記されない限り、受け取った状態で使用した。

【0080】

薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌプレコートシート、０．２５ｍｍ ＡＬＵＧＲＡＭ（登録商標）ＳＩＬ Ｇ／ＵＶ２５４プレート、ＵＶによる検出を用いて、および／または１０重量％のエタノール性リンモリブデン酸試薬で焦がし、次いで２００℃で加熱することにより行った。

【0081】

フラッシュカラムクロマトグラフィーを、Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０（０．０６３～０．１００ｍｍ）を用いて実施した。

【0082】

分析用高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を、Ｗａｔｅｒｓ９９６フォトダイオードアレイ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ ＨＰＬＣシステムを用いて実施した。すべての分離は、水中の０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（ｖ／ｖ）およびアセトニトリル中の０．１％ＴＦＡの移動相を伴った。ＨＰＬＣを、流速１ｍＬ・分^－１で逆相（ＲＰ）カラムＥｕｒｏｓｐｈｅｒ ＲＰ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍを用いて実施した。

【0083】

エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ－ＭＳ）および液体クロマトグラフィー／質量分析（ＬＣ／ＭＳ）の分析を、上記のＷａｔｅｒｓ ＨＰＬＣ装置に連結したＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ４０００質量分析計を用いて得た。

【0084】

ＮＭＲスペクトルを、ＴＸＩ ＨＣＮ ｚ勾配プローブを備えた４００ＭＨｚ Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ分光計（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＧ、Ｒｈｅｉｎｓｔｅｔｔｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて記録した。すべてのスペクトルをＴＯＰＳＰＩＮ３．１（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＧ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて処理した。^１Ｈ ＮＭＲ化学シフト（δ）を、内部標準としてＣＨＣｌ_３、ＤＭＳＯ－ｄ５およびＴＦＡ－ｄ１に対する百分率（ｐｐｍ）で報告する。データを以下の通り報告する：化学シフト、多重度（ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｑｉ＝五重線、ｄｄ＝二重線の二重線、ｄｔ＝三重線の二重線、ｂ＝ブロード、ｍ＝多重線）、カップリング定数（Ｊ、Ｈｚで示す）、積分。^１３Ｃ ＮＭＲ化学シフト（δ）を、内部標準としてＣＤＣｌ_３、ＤＭＳＯ－ｄ６およびＴＦＡ－ｄ１に対する百分率（ｐｐｍ）で報告する。以下の実験を使用して、化合物の共鳴を記録した：^１Ｈ－１Ｄ、^１３Ｃ－１Ｄ ＮＭＲスペクトルおよび^１３Ｃ－ＡＰＴ（１／１４５秒の単一のＪ－展開時間での付属プロトン試験、スペクトルを、四級基およびメチレン基が正の符号を有し、メチル基およびメチン基が負の符号を有するように処理した）。^１ＨおよびＡＰＴスペクトルにおける共鳴の重なりを分解して、検出不可能な共鳴を復元するために、２Ｄ－［^１３Ｃ，^１Ｈ］－ＨＳＱＣ（異核種単一量子コヒーレンス）、２Ｄ－［^１３Ｃ，^１Ｈ］－ＨＭＢＣ（異核多結合相関）および２Ｄ－ＮＯＥＳＹをいくつかの化合物について記録した。

【0085】

選択された化合物（化合物１、化合物２、化合物１２、化合物１８）を、９９％トリチウムガス／Ｋｅｒｒの触媒によるＨ／Ｔ交換標識を用いたＲＣ ＴＲＩＴＥＣ ＡＧ、Ｔｅｕｆｅｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄによる結合アッセイのためにトリチウム標識した。化合物を、１８５ＭＢｑパッケージ、濃度３７ＭＢｑ／ｍＬおよび１．１～２．３ＧＢｑ／ｍｍｏｌの範囲の比活性でエタノール溶液として供給した。

【0086】

方法Ａ：１Ｈ－ピラゾールの合成
当業者は、下記に示した化合物１１Ａおよび化合物１１Ｂが、同じ化合物の２つの互変異性型であることを認識するであろう。このような互変異性型はすべて、本発明の一部と考えられる。例示として、例えば下記の化合物１１について示されたピラゾール部分の互変異性型はすべて、本発明に含まれる。関連した方式で、当業者は、本明細書に含有される化合物名が命名法の慣習に基づくものであり、互変異性体の立体配置が下記の化合物１１Ａに関するように示されることを認識するであろう。したがって、１，３－ベンゾジオキソール置換基は３位にある。代替的な命名法の慣習は、下記の互変異性化合物１１Ｂに基づくものであり、該慣習において、１，３－ベンゾジオキソール置換基は５位にある。

【化14】

【0087】

例示的な例：２－［３－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－１Ｈ－ピラゾール－５－イル］－６－フルオロピリジン化合物１１

【化15】

水素化ナトリウム（ＦＷ２４．００、油中６０％、３．９ｍｍｏｌ、１５６ｍｇ）を、ＤＭＳＯ（７．５ｍＬ）およびＴＨＦ（１．９ｍＬ）中の１－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）エタノン（ＦＷ１６４．１６、４９２ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）およびメチル６－フルオロピリジン－２－カルボキシレート（ＦＷ１５５．１３、６０５ｍｇ、３．９ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、反応混合物を２０℃で１５時間撹拌した。反応混合物をＡｃＯＨ（４５０μＬ）を含有する６０ｍＬの氷水に注入した。混合物を１時間撹拌した。得られた沈殿物を濾過除去し、水（１０ｍＬ）、ヘキサン：ＥｔＯＨ＝５：１（１０ｍＬ）、ヘキサン（１０ｍＬ）で洗浄し、風乾して、粗中間体１－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－３－（６－フルオロピリジン－２－イル）プロパン－１，３－ジオン（５９４ｍｇ）を黄色固体として得た。ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中のこの粗中間体の懸濁液に、ヒドラジン水和物（１４６μＬ、１５０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を７０℃で５時間撹拌し、冷却し、真空濃縮した。残渣をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に懸濁し、５分間撹拌しながら煮沸し、冷却し、濾過除去し、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）で洗浄し、２０℃で１５時間高真空乾燥して、純粋な生成化合物１１（４７１ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ、２ステップにわたって５５％）を白色固体として得た。

【0088】

方法Ｂ：１Ｈ－ピラゾールの合成
例示的な例：４－［３－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－１Ｈ－ピラゾール－５－イル］－２－ブロモピリジン化合物９

【化16】

乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）中のカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（ＦＷ１１２．２１、２８１ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液を、乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）中の１－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）エタノン（ＦＷ１６４．１６、３２８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）およびメチル２－ブロモピリジン－４－カルボキシレート（ＦＷ２１６．０３、５１８ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に窒素下で添加した。反応混合物を２０℃で１５時間撹拌した。２０μＬのアリコートをサンプリングし、１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出し、ＴＬＣにより分析した。ケトンの完全な変換が観察された。混合物を１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７（１５ｍＬ）および氷水（１５ｍＬ）に注入し、０℃で３０分間撹拌した。得られた黄色固体を濾過除去し、水（５×１０ｍＬ）で洗浄し、風乾して、６５６ｍｇ（１．８８ｍｍｏｌ、９４％）の粗中間体１－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－３－（２－ブロモピリジン－４－イル）プロパン－１，３－ジオンを得、これを精製せずに次のステップに使用した。ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のこの中間体およびヒドラジン一水和物（ＦＷ５０．０６、ｄ１．０３；２７４μＬ、２８２ｍｇ、５．６４ｍｍｏｌ）の混合物を５０℃で１５時間撹拌した。冷却した混合物を水（４０ｍＬ）に注入し、０℃で３０分間撹拌した。得られた沈殿物を濾過除去し、水で洗浄し、風乾した。粗生成物をｎ－ＢｕＯＨ（１０ｍＬ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）から結晶化して、純粋な生成化合物９（４５８ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、２ステップにわたって６７％）を白色粉末として得た。

【0089】

方法Ｃ：Ｂｏｃ保護基の除去
例示的な例：４－［５－（２－ブロモピリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］アニリン化合物７

【化17】

トリフルオロ酢酸（２ｍＬ、２．９６ｇ、２６ｍｍｏｌ）を、方法Ｂに従ってｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－アセチルフェニル）カルバメートおよびメチル２－ブロモピリジン－４－カルボキシレートから調製した粗ｔｅｒｔ－ブチル｛４－［５－（２－ブロモピリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］フェニル｝カルバメート（ＦＷ４１５．２８、８６５ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。混合物を室温で１５時間撹拌し、真空濃縮した。１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７（２０ｍＬ）を添加し、得られた沈殿物を濾過除去し、水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、風乾して、５４３ｍｇ（１．７２ｍｍｏｌ、３ステップにわたって６９％）の所望の生成物を黄色オレンジ色固体として得た。

【0090】

方法Ｄ：１Ｈ－ピラゾールの合成
例示的な例：４－［３－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－１Ｈ－ピラゾール－５－イル］－２－フルオロピリジン化合物１２

【化18】

ｉＰｒ_２ＮＥｔ（１．７９ｍＬ、１．３３ｇ、１０．２６ｍｍｏｌ）を、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３５ｍＬ）中の１－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）エタノン（５６１ｍｇ、３．４２ｍｍｏｌ）およびＭｇＢｒ_２・Ｅｔ_２Ｏ（１．５６ｇ、６．０４ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に添加した。得られた懸濁液を５分間撹拌し、次にＣＨ_２Ｃｌ_２（７ｍＬ）中のペンタフルオロフェニル２－フルオロピリジン－４－カルボキシレート（１．３７ｇ、４．４５ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を４８時間撹拌した。次に、１Ｎ水性ＨＣｌ（２０ｍＬ）を添加し、５分間撹拌を続けた。水層をＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ_４）して、真空濃縮した、残渣を、Ｅｔ_２Ｏ（１０ｍＬ）で粉砕し、濾過した。固体をＥｔ_２Ｏで洗浄し、風乾して、粗生成物（１．１４ｇ、オレンジ色固体）を得た。粗生成物を、ＥｔＯＡｃ（８ｍＬ）およびヘキサン（４ｍＬ）から再結晶化して、純粋な中間体１－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－３－（２－フルオロピリジン－４－イル）プロパン－１，３－ジオン（９００ｍｇ、３．１３ｍｍｏｌ、９２％）をオレンジ色固体として得た。この中間体をＴＨＦ（２０ｍＬ）に懸濁し、ヒドラジン一水和物（２９２μＬ、３００ｍｇ、６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を７０℃で５時間撹拌し、冷却し、真空濃縮した。残渣をＥｔ_２Ｏ（１０ｍＬ）に懸濁し、５分間撹拌しながら煮沸し、冷却し、濾過除去し、Ｅｔ_２Ｏ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、２０℃で１５時間高真空乾燥して、生成化合物１２（７２２ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ、２ステップにわたって７６％）を白色固体として得た。

【0091】

方法Ｅ：ペンタフルオロフェニルエステルの合成
例示的な例：ペンタフルオロフェニル２－フルオロピリジン－４－カルボキシレート化合物５９

【化19】

ＤＣＣ（ＦＷ２０６．３３、２．２７ｇ、１１ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（４０ｍＬ）中の２－フルオロピリジン－４－カルボン酸（１．４１ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびペンタフルオロフェノール（１．８４ｇ、１０ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に添加した。１５時間撹拌を続け、その時点までに無色の沈殿物が形成された。混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、蒸発させて、半固体を得た。シリカゲル上でのクロマトグラフィーにより、エステル化合物５９（２．２１ｇ、７．２ｍｍｏｌ、７２％）を純粋な無色の油として得た。

【0092】

方法Ｆ：１Ｈ－ピラゾールの合成
例示的な例：６－［３－（３－ブロモフェニル）－１Ｈ－ピラゾール－５－イル］－１，３－ジオキソロ［４，５－ｃ］ピリジン化合物２０

【化20】

【0093】

ステップ１
メタノール（０．７ｍＬ）中の１，３－ジオキソロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－カルボキシアルデヒド（ＷＯ／２０１９／２０８５０９）（３５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）および１－（３－ブロモフェニル）エタノン（４６ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｂａ（ＯＨ）_２ ^＊８Ｈ_２Ｏ（５ｍｇ）およびＮａＯＨ（０．５ｍｇ）を添加し、得られた混合物を室温（ＲＴ）で一晩撹拌した。メタノールの真空蒸発後、残渣を水（５ｍＬ）中で粉砕し、固体を濾過により回収し、冷メタノール（０．５ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、中間体化合物１－（３－ブロモフェニル）－３－（［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）プロパ－２－エン－１－オン（６７ｍｇ、８８％）を白色固体として得た。

【0094】

ステップ２
ＤＭＳＯ（０．８ｍＬ）中の１－（３－ブロモフェニル）－３－（［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）プロパ－２－エン－１－オン（６７ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の勢いよく撹拌した懸濁液に、Ｈ_２Ｏ_２（３０％、４５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）の水溶液を添加し、次いで水性ＮａＯＨ（１０％、１６μＬ、０．０４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。黄色混合物をＲＴで１．５時間撹拌し、冷リン酸緩衝液（２０ｍＬ、０．１Ｍ、ｐＨ７）に注入した。油性沈殿物を酢酸エチル（２^＊１５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機画分を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮して、残渣をトルエン（０．８ｍＬ）に再懸濁した。トルエン中の懸濁液をヒドラジン水和物（３５ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）およびＰＴＳＡ水和物（５ｍｇ）で処理し、混合物を還流下で１．５時間乾燥した。冷却した後、リン酸緩衝液（０．３Ｍ、２０ｍＬ）を添加し、生成物を酢酸エチル（２^＊２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機画分を塩水（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（１５ｇ、シリカゲル６３～１００、ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ＝１００／１）で精製して、黄色固体を得、これをＥｔ_２Ｏ（１ｍＬ）で洗浄して、化合物２０（２５ｍｇ、３６％）を白色固体として得た。

【0095】

方法Ｇ：１Ｈ－ピラゾールの合成
例示的な例：４－［４－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－１Ｈ－イミダゾール－２－イル］－２－ブロモピリジン化合物４８

【化21】

ＤＣＭ（５ｍＬ）中の１－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）エタノン（１３８ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）、ＭｇＢｒ_２・Ｅｔ_２Ｏ（５４２ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）の混合物をＤＩＰＥＡ（３２３ｍｇ、４２６μＬ、２．５ｍｍｏｌ）で処理し、ＲＴで１０分間撹拌した。次に、乾燥ＤＣＭ（５ｍＬ）中の３，６－ジクロロピリダジン－４－カルボン酸（２０３ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、ベンゾトリアゾール（１２５ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（２１６ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を２５℃で３時間撹拌することにより別に調製した１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル（３，６－ジクロロピリダジン－４－イル）メタノンの粗混合物を、５分間にわたって滴下添加した。得られた混合物を２５℃で１２時間撹拌し、次に水性０．５Ｍ ＨＣｌ（２ｍＬ）で処理し、２５℃でさらに１０分間撹拌した。水（２０ｍＬ）の添加後、混合物をＤＣＭ（２^＊１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機画分を塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、中間体１－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－３－（３，６－ジクロロピリダジン－４－イル）プロパン－１，３－ジオン（１９０ｍｇ、６７％）をオレンジ色固体として得、これをさらに精製せずに次のステップで使用した。この中間体をＴＨＦ（４ｍＬ）に懸濁して、ヒドラジン一水和物（４０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で一晩撹拌し、冷却し、真空濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６３～１００、２０ｇ、クロロホルム／メタノール＝１００／１）により精製して、化合物４８（１００ｍｇ、２ステップにわたって３６％）を薄黄色固体として得た。

【0096】

方法Ｈ：１Ｈ－イミダゾールの合成
例示的な例：４－［４－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－１Ｈ－イミダゾール－２－イル］－２－ブロモピリジン化合物３３

【化22】

【0097】

ステップ１
ＤＭＦ（６ｍＬ）中の１－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－２－ブロモエタノン（７２９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）、２－ブロモピリジン－４－カルボン酸（６０６ｍｇ、３ｍｍｏｌ）およびＫ_２ＣＯ_３（４１４ｍｇ、３ｍｍｏｌ）の懸濁液を、５５～６０℃で６時間撹拌した。冷却した後、混合物を水（６０ｍＬ）に注入し、１０分間撹拌し、得られた沈殿物を濾過により回収し、フィルター上で水（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、中間体化合物２－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－２－オキソエチル２－ブロモピリジン－４－カルボキシレート（８９９ｍｇ、８７％）を得、これをさらに精製せずに次のステップで使用した。

【0098】

ステップ２
トルエン（７ｍＬ）中の中間体化合物２－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－２－オキソエチル２－ブロモピリジン－４－カルボキシレート（３６４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびＡｃＯＮＨ_４（９２４ｍｇ、１２ｍｍｏｌ）の懸濁液を、４時間集中的に撹拌しながら１００℃で加熱した。冷却した後、反応混合物を、リン酸緩衝液（５０ｍＬ、０．２５Ｍ、ｐＨ７）で処理し、酢酸エチル（２^＊５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機画分を、塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６３～１００、３０ｇ、ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ＝１００／１→１００／３）により精製した。精製生成物を、水性エタノール（９０％）から再結晶化して、化合物３３（１４０ｍｇ、４１％）を淡固体として得た。

【0099】

方法Ｉ：１Ｈ－１，２，４－トリアゾールの合成
例示的な例：４－［３－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル］－２－ブロモピリジン化合物３０

【化23】

ｎ－ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中のｔ－ＢｕＯＫ（８４ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、ベンゾ［１，３］ジオキソール－５－カルボキサミジン塩酸塩（１００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、混合物をＲＴで２０分間撹拌した。２－ブロモイソニコチン酸ヒドラジド（１０８ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の添加後、黄色懸濁液を８５℃で３時間撹拌した。室温に冷却した後、エタノール（４ｍＬ）を添加し、ＣＯ_２を懸濁液に５分間バブリングした。溶媒を真空除去した後、残渣を水（１０ｍＬ）中で粉砕し、得られた沈殿物を濾過により回収し、水（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、化合物３０（８５ｍｇ、４９％）を灰色固体として得た。

【0100】

方法Ｊ：１Ｈ－１，２，４－トリアゾールの合成
例示的な例：４－［３－（２－ブロモピリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル］－Ｎ，Ｎ－ジメチルアニリン化合物４４

【化24】

ｎ－ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中の２－ブロモイソニコチン酸ヒドラジド（１５１ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）、４－（ジメチルアミノ）ベンゾニトリル（３０７ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）およびＫ_２ＣＯ_３（４８ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の混合物を１４５℃で８時間撹拌した。混合物を真空濃縮し、粗生成物を２回のカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６３～１００、２０ｇ、ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ＝１００／１）および（シリカゲル６３～１００、２０ｇ、アセトン／ヘキサン＝１／５）により精製して、化合物４４（２０ｍｇ、８％）をベージュ固体として得た。

【0101】

方法Ｋ：４－クロロ－１Ｈ－ピラゾールの合成
４－［３－（１，３－ベンゾジオキソール－５－イル）－４－クロロ－１Ｈ－ピラゾール－５－イル］－２－ブロモピリジン、化合物２８

【化25】

水（３ｍＬ）中の化合物９（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）およびＮＣＳ（８０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の懸濁液を７０℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣは出発物質の消費を示した。ＲＴに冷却した後、沈殿物を濾過により回収し、水（２^＊５ｍＬ）で洗浄し、エタノール（８ｍＬ）から再結晶化して、化合物２８（５２ｍｇ、４７％）を灰色固体として得た。

【0102】

方法Ｌ：１－［４－（４－Ｒ－ピペラジン－１－イル）フェニル］エタノンの合成
例示的な例：１－｛４－［４－（２－メトキシエチル）ピペラジン－１－イル］フェニル｝エテノン

【化26】

ＤＭＦ（５ｍＬ）中の１－［４－（ピペラジン－１－イル）フェニル］エタノン（４０８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、１－ブロモ－２－メトキシエタン（４１７ｍｇ、３ｍｍｏｌ）およびＣｓ_２ＣＯ_３（１３０４ｍｇ、４ｍｍｏｌ）の混合物を、２５℃で一晩撹拌した。ＤＭＦの真空蒸発後、残渣を水（２５ｍＬ）と酢酸エチル（３５ｍＬ）とで分配し、水相を、酢酸エチル（２５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機画分を塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（３０ｇシリカゲル６３～１００、クロロホルム→クロロホルム／ＭｅＯＨ＝１００／２）により生成して、１－｛４－［４－（２－メトキシエチル）ピペラジン－１－イル］フェニル｝エテノン（５２５ｍｇ、９９％）を薄黄色固体として得た。

【0103】

２－メトキシエチル２，６－ジブロモピリジン－４－カルボキシレートおよび２－メトキシエチル２，６－ジクロロピリジン－４－カルボキシレートを、公表されたプロトコル（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１２）、５５、１０５６４～１０５７１）に従って調製した。

【0104】

ｔｅｒｔ－ブチル（４－アセチルフェニル）メチルカルバメート、ｔｅｒｔ－ブチル（４－アセチルフェニル）－Ｎ－（^２Ｈ_３）メチルカルバメート、ｔｅｒｔ－ブチル（４－アセチルフェニル）エチルカルバメートおよびｔｅｒｔ－ブチル（４－アセチルフェニル）（２－フルオロエチル）カルバメートを、公表されたプロトコル（Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ（２０２０）、２２、５５２２～５５２７）に従って調製した。

【0105】

１－［４－（４－フルオロピペリジン－１－イル）フェニル］エタノンおよび１－［４－（３－フルオロアゼチジン－１－イル）フェニル］エタノンを、公表されたプロトコル（ＷＯ２０１１０７１５７０Ａ１）に従って調製した。

【0106】

ペンタフルオロフェニル２－フルオロピリジン－４－カルボキシレートおよびペンタフルオロフェニル２－クロロピリジン－４－カルボキシレートを、方法Ｅに従って調製した。１－｛４－［４－（２－メトキシエチル）ピペラジン－１－イル］フェニル｝エテノンおよび１－｛４－［４－（２－フルオロエチル）ピペラジン－１－イル］フェニル｝エテノンを、方法Ｌに従って調製した。

【0107】

本発明の例示的な化合物を、表１および２に示す。表１は、特定の例示的な化合物の名称、構造式、ＩＵＰＡＣ名、調製のための出発物質、合成方法および化学収率を示す。表２は、特定の例示的な化合物の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）保持時間、ＨＰＬＣに加えて低分解能質量分析を用いた分子量実測値、およびプロトン核磁気共鳴（^１Ｈ－ＮＭＲ）を示す。

【0108】

【表1-1】

【0109】

【表1-2】

【0110】

【表1-3】

【0111】

【表1-4】

【0112】

【表1-5】

【0113】

【表1-6】

【0114】

【表2-1】

【0115】

【表2-2】

【0116】

【表2-3】

【0117】

【表2-4】

【0118】

【表2-5】

【0119】

実施例２：凝集したα－シヌクレイン、タウおよびＡβによる結合研究
化合物の結合親和性および標的選択性を分析するために、２種類のインビトロ線維結合アッセイ：飽和アッセイおよび競合アッセイを使用した。

【0120】

１）線維の調製
α－シヌクレインおよびタウ４６を、確立されたプロトコル（Ｎｕｓｃｈｅｒ Ｂら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２００４；２７９（２１）：２１９６６～７５）に従って大腸菌から精製し、Ａβ_１～４２をｒＰｅｐｔｉｄｅ、Ｗａｔｋｉｎｓｖｉｌｌｅ、ＧＡ、ＵＳＡから得た。線維を、絶えず撹拌して組換えタンパク質を凝集させることにより調製した。詳細には、５０ｍＭトリス、ｐＨ７．０＋０．０２％ＮａＮ_３中１００ｍＭのＮａＣｌと混合した７０μＭのα－シヌクレインを、１４００ｒｐｍ、３７℃で９６時間インキュベートした。１０μＭのタウ４６を、０．０３ｍｇ／ｍｌのヘパリンと、５０ｍＭトリス、ｐＨ＝７．０中で、１，０００ｒｐｍ、３７℃で７２時間インキュベートした。Ａβ_１～４２を、２０ｍＭ ＮａＰ_ｉ、ｐＨ＝８．０＋０．２ｍＭ ＥＤＴＡ＋０．０２％ＮａＮ_３に溶解した（Ｄｅｅｇ ＡＡら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、２０１５；１８５０（９）：１８８４～９０；Ｇｏｅｄｅｒｔ Ｍら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９６；３８３（６６００）：５５０～３）。

【0121】

２ａ）飽和結合アッセイ
ＰＢＳで希釈した超音波処理αＳＹＮ（０．０４μＭ）またはタウ４６（０．４μＭ）またはＡβ_１～４２（６μＭ）線維を、減少濃度の［^３Ｈ］－標識化合物（４８ｎＭまたは２４ｎＭ～２３ｐＭ）と、５０ｍＭトリス塩基、１０％エタノール、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４中でインキュベートした。非特異的結合を決定するために、各非標識化合物（４００ｎＭ）を、二連のセットの結合反応に添加した。

【0122】

アッセイプレートを、プラスチック箔（リシールテープ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）で覆い、３７℃で２時間撹拌しながらインキュベートした。採集前に、フィルター（プリントフィルターマットＢ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）を、５ｍｇ／ｍＬのポリエチレンイミン（ＰＥＩ、ポリ（エチレンイミン）溶液、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｅ ＧｍｂＨ、Ｔａｕｆｋｉｒｃｈｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）と４℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、結合および遊離リガンドを、採集器（Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ採集器、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）を用いて真空濾過により分離した。フィルターを、４℃に冷却した緩衝液で３回洗浄し、その後、電子レンジで中出力で２分間乾燥した。メルトオンシンチレータシート（ＭｅｌｔｉＬｅｘ（商標）Ｂ／ＨＳ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）を、１２０℃に設定した加熱プレートを用いてフィルターに溶け込ませた。室温で凝固させた後、フィルターをビニール袋（ＭｉｃｒｏＢｅｔａ（登録商標）用の試料袋、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）に密封した。トリチウムの蓄積を、液体シンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ ＭｉｃｒｏＢｅｔａ（登録商標）ＴｒｉＬｕｘ、１４５０ ＬＳＣ ＆ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｃｏｕｎｔｅｒ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）で迅速にカウントした。放射能を、増加トリチウム標識化合物またはコールド化合物濃度に対してプロットした。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、バージョン７．０３、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ、ＵＳＡ）において非線形回帰分析を用いてデータ点のフィッテングを行った。

【0123】

２ｂ）修正飽和結合アッセイ
飽和結合アッセイでは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で希釈した一定濃度の超音波処理ヒト組換えαＳＹＮ（１５ｎＭ／ウェル）またはタウ４６（２５０ｎＭ／ウェル）またはＡβ_１～４２（１μＭ／ウェル）線維を、低結合プレート（９６ウェルマイクロテストプレート、Ｒａｔｉｏｌａｂ ＧｍｂＨ、Ｄｒｅｉｅｉｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において、増加濃度（０．０５ｎＭ～１２ｎＭ／２４ｎＭ）の［^３Ｈ］－化合物１または［^３Ｈ］－化合物２と、２００μＬ／ウェルの全量での３０ｍＭトリスＨＣｌ、１０％エタノール、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４（以降、インキュベーション緩衝液と称する）中でインキュベートした。放射性トレーサーの非特異的結合を、４００ｎＭ非標識化合物１または化合物２との共インキュベーションにより決定した。最適な線維濃度を、濃度決定アッセイを用いて決定した。

【0124】

リムーバブル密封テープ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で覆われたプレートを、シェーカー（ＭａｘＱ（商標）６０００、軌道径１．９ｃｍ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、Ｍａｒｉｅｔｔａ、ＯＨ、ＵＳＡ）上で４５ｒｐｍで３７℃で２時間インキュベートした。インキュベーション後、結合および遊離放射性リガンドを、フィルターマット採集器（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いてガラス繊維フィルターマットＢ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を通す真空濾過により分離した。αＳＹＮおよびＡβ_１～４２線維を含有するプレートを採集するために、フィルターマットを、採集前に５ｍｇ／ｍＬのポリエチレンイミンと４℃で３０分間さらにインキュベートした。フィルターを１００ｍＬ（約１ｍＬ／ウェル）の冷たいインキュベーション緩衝液で３回洗浄し、その後電子レンジで中出力で２．５分間乾燥した。メルトオンシンチレータシート（ＭｅｌｔｉＬｅｘ（商標）Ｂ／ＨＳ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を、１２０℃に設定した加熱プレートを用いてフィルターに溶け込ませた。室温で硬化させた後、フィルターを、ビニール試料袋（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）に密封した。トリチウムの蓄積を、Ｗａｌｌａｃ ＭｉｃｒｏＢｅｔａ（登録商標）ＴｒｉＬｕｘ液体シンチレーションカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で迅速にカウントした。放射能を、^３Ｈ－標識化合物濃度に対してプロットした。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、バージョン７．０３、Ｌａ Ｊｏｌｌａ（ＣＡ）、ＵＳＡ）において非線形回帰分析を用いてデータ点のフィッテングを行った。

【0125】

３ａ）競合結合アッセイ
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で希釈した一定濃度の超音波処理ヒト組換えαＳＹＮ（２００ｎＭ／ウェル）またはタウ４６（２０８ｎＭ／ウェル）線維を、低結合プレート（９６ウェルマイクロテストプレート、Ｒａｔｉｏｌａｂ ＧｍｂＨ、Ｄｒｅｉｅｉｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において、１ｎＭ［^３Ｈ］－化合物１、および１μＭから出発して５０ｍＭトリス－塩基、１０％ＥｔＯＨ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４中で希釈した１：４連続希釈の目的のコールド化合物と共に、インキュベートした。Ｋ_ｉ値の計算のために、超音波処理ヒト組換えαＳＹＮ線維に対する化合物１のＫ_ｄ値を、３ｎＭに設定した。

【0126】

アッセイプレートをプラスチック箔（リシールテープ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）で覆い、３７℃で２時間撹拌しながらインキュベートした。採集前に、フィルター（プリントフィルターマットＢ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）を、５ｍｇ／ｍＬのポリエチレンイミン（ＰＥＩ、ポリ（エチレンイミン）溶液、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｅ ＧｍｂＨ、Ｔａｕｆｋｉｒｃｈｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）と４℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、結合および遊離リガンドを、採集器（Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ採集器、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）を用いて真空濾過により分離した。フィルターを、４℃に冷却した緩衝液で３回洗浄し、その後電子レンジ内で中出力で２分間乾燥した。フィルターを、追加されたシンチレータ（ＢＥＴＡＰＬＡＴＥ ＳＣＩＮＴ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）と共にビニール袋（ＭｉｃｒｏＢｅｔａ（登録商標）用の試料袋、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）に密封した。トリチウムの蓄積を、液体シンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ ＭｉｃｒｏＢｅｔａ（登録商標）ＴｒｉＬｕｘ、１４５０ ＬＳＣ ＆ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｃｏｕｎｔｅｒ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）で迅速にカウントした。放射能を、増加トリチウム標識化合物またはコールド化合物濃度に対してプロットした。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、バージョン７．０３、Ｌａ Ｊｏｌｌａ（ＣＡ）、ＵＳＡ）の非線形回帰分析を用いてデータ点のフィッテングを行った。

【0127】

３ｂ）修正競合結合アッセイ
競合結合実験では、一定濃度の組換えαＳＹＮ線維（超音波処理、１５ｎＭ／ウェル）を、１ｎＭ［^３Ｈ］－化合物１または［^３Ｈ］－化合物２および減少濃度の連続希釈の非標識競合物（連続希釈１：４または１：３．５または１：３はそれぞれ、非標識競合物の濃度範囲１μＭ～１ｐＭまたは１μＭ～４ｎＭまたは１μＭ～１７ｐＭを提供する）と、２００μＬ／ウェルの全量での３０ｍＭトリスＨＣｌ、１０％エタノール、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４中でインキュベートした。プレートをリムーバブル密封テープ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）で覆い、ＲＴで４．５時間インキュベートした。

【0128】

濾過および読み出しを、飽和結合アッセイについて記載したように実施した。［^３Ｈ］－標識リガンド結合［ＣＭＰ中］を、増加競合物濃度に対してプロットし、非線形回帰分析を用いてデータ点のフィッテングを行って、ＩＣ_５０およびＫ_ｉ値を計算した（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、バージョン７．０３、Ｌａ Ｊｏｌｌａ（ＣＡ）、ＵＳＡ）。超音波処理組換えαＳＹＮ線維による競合結合アッセイでは、Ｋ_ｉ値の計算を、化合物１および化合物２に対してそれぞれ０．６ｎＭおよび０．２ｎＭのＫ_Ｄ値に基づき行った。

【0129】

線維結合飽和アッセイはＫ_Ｄ値を提供する。このアッセイを、直接放射性標識された化合物（例えば^３Ｈ標識）で実施する。Ｋ_Ｄ値を表３ａおよび３ｂに示す。飽和結合アッセイを、それぞれ組換えヒトα－シヌクレイン、Ａβ_１－４２およびタウ４６から生成した線維凝集体を標的構造として用いて実施した。

【0130】

結果は、α－シヌクレイン線維に対する高い親和性を示す。化合物１、化合物２および化合物１２は非常に高い親和性を示し、Ｋ_Ｄ値は１０ｎＭ未満であった。化合物１および化合物２をＡβおよびタウ４６線維への結合に関しても試験し、これらは良好ないし優れた選択性を示し、このことは凝集したα－シヌクレインの診断的検出にこれらの化合物が好適であることを証明する。

【0131】

【表3】

【0132】

【表4】

【0133】

線維競合アッセイはＫ_ｉ値を提供する。Ｋ_ｉは、標的構造（１ｎＭ）、我々の場合には組換えα－シヌクレインおよびタウ４６線維に結合する、５０％の参照化合物、この場合は［^３Ｈ］－化合物１（１ｎＭ）または［^３Ｈ］－化合物２（１ｎＭ）を置き換えるのに必要とされる非放射性被験化合物（競合リガンド）の濃度を表す定量的尺度である。このアッセイは、非放射性リガンドのスクリーニングに好適である。被験化合物に対して得られたＫ_ｉ値を、表４ａ、４ｂおよび５に示す。

【0134】

【表5】

【0135】

【表6】

【0136】

【表7-1】

【0137】

【表7-2】

【0138】

【表7-3】

【0139】

様々な競合アッセイの結果は、α－シヌクレイン線維に対する被験化合物の高い結合親和性を示す（Ｋ_ｉ値が低いほど、高い結合親和性を示す）。化合物１に対する競合アッセイ（表４ａ）の場合、α－シヌクレインおよびタウ４６線維に対する同様のＫ_ｉ値は、化合物１と同様の選択性を示し、α－シヌクレイン線維よりタウ４６線維に対するＫ_ｉ値が高い化合物については、データは選択性のさらなる改善を示唆する。

【0140】

さらに、化合物６３、６４および６５を、フェニル環のうちの１つに窒素原子を有する対応する化合物との直接比較で試験した。化合物１についての表６において、０．４ｎＭのＫ_ｉ値が得られたが、化合物６５（フェニル環に窒素原子を欠く）のＫ_ｉ値は、はるかに高く（１．９ｎＭ）、化合物１の結合親和性の著しい改善を示す。Ｋ_ｉ値に基づく結合性の分析は、Ｎ含有化合物の結合親和性の著しい改善を明らかにした。参照リガンド［^３Ｈ］－化合物１（１ｎＭ）による競合結合アッセイにおいて被験化合物に対して得られたＫ_ｉ値を表６に示す。

【0141】

【表8】

【0142】

実施例３：細胞培養物の治療効果
潜在的に治療上有用な効果を同定するために、化合物を、Ｈ４細胞における凝集したα－シヌクレイン依存性毒性の２つの細胞モデルで試験した。これらの細胞モデルは、α－シヌクレインｈｅｍｉ－Ｖｅｎｕｓ融合構築物（Ｖ１Ｓ＋ＳＶ２）または全長α－シヌクレインの誘導性過剰発現を可能にする（モデルは、Ｂａｒｔｅｌｓ Ｍ、Ｗｅｃｋｂｅｃｋｅｒ Ｄ、Ｋｕｈｎ ＰＨ、Ｒｙａｚａｎｏｖ Ｓ、Ｌｅｏｎｏｖ Ａ、Ｇｒｉｅｓｉｎｇｅｒ Ｃ、Ｌｉｃｈｔｅｎｔｈａｌｅｒ ＳＦ、Ｂｏｔｚｅｌ Ｋ、Ｇｉｅｓｅ Ａ：Ｉｒｏｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ａ ｎｏｖｅｌ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｏｄｅｌ ｗｉｔｈ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ａｌｐｈａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．２０１９年６月２４日；９（１）：９１００に詳細に記載される）。さらに、ＤＭＳＯおよびＦｅＣｌ_３の添加は、細胞毒性の増加に関連するα－シヌクレインの凝集を促進する。細胞培養アッセイは、細胞数の変化およびアポトーシスを示す凝縮した核のパーセンテージの変化を決定することによりこれらの効果を使用して、どの化合物が最も有望な効果を示し、したがって治療上有用であり得るかについての情報を得る。

【0143】

データを下記の表７に要約する。これらの実験において、細胞を、陽性対象として１０μＭ ａｎｌｅ１３８ｃの存在下での１００μＭ ＦｅＣｌ_３および０．７５％ＤＭＳＯ、ならびに陰性対照として化合物１～１９（１０μＭ）またはＤＭＳＯとインキュベートした。４８時間後、細胞を、ＯＰＥＲＡハイスループットイメージングシステムでイメージングし、Ａｃａｐｅｌｌａソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて分析した。表は、ＤＭＳＯ対照と比較した細胞数の変化および凝縮した核を有する細胞（すなわちアポトーシス細胞）の画分の変化を示す。凝縮した核の画分の減少（細胞数の大幅な減少なし）は、有益な治療上の効果を示す。

【0144】

【表9】

【0145】

実施例４：［^１１Ｃ］－標識化合物１および化合物２のインビボ体内分布
［^１１Ｃ］－標識化合物１および化合物２をそれぞれ、マウスの尾静脈に静脈内注射した。次に、マウスを小動物ＰＥＴ装置でイメージングした。いずれの化合物でも、ＳＵＶ値＞１．５で良好な血液脳関門透過が観察された。さらに、脳からの迅速な洗い流しが見られた。［^１１Ｃ］－標識化合物１および化合物２のクリアランス半減期はそれぞれ１２分および９分であった。

【0146】

実施例５：ヒト脳組織を用いたオートラジオグラフィー
オートラジオグラフィーを、トリチウム標識された化合物１を用いた凍結脳組織、およびレビー小体型認知症を有する患者の帯状回に由来する脳組織の組織学的切片で実施した。［^３Ｈ］－化合物１を濃度３ｎＭで組織のインキュベーションに使用し、次いで洗浄するステップの場合、灰白質への優先的結合が観察でき、これは、凝集したα－シヌクレインの公知の分布と同一のパターンである（図１、左のパネル）。特異的結合が、過剰な非トリチウム標識（すなわち、「コールド」）化合物１により遮断される場合、化合物１の脳組織への非特異的結合がないか非常に低いことが分かる（図１、右のパネル）。

【0147】

これらの所見は、化合物１が、ヒトシヌクレイン病患者に存在する病理学的に凝集したα－シヌクレインに特異的に且つ高い親和性で結合し、凝集したα－シヌクレインの診断的検出を可能にすることを示す。

【図1】

【国際調査報告】